WO2023277143A1 - ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体及びその用途 - Google Patents

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体及びその用途 Download PDF

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憲司 齋藤
幸子 鈴木
一紗 宮谷
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株式会社タウンズ
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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention provides an antibody against the nucleocapsid protein of SARS (severe acute respiratory syndrome) coronavirus 2 and uses thereof, for example, an immunological detection method for SARS-CoV-2 using the antibody, and using the antibody. Immunochromatographic test strips and kits containing same.
  • coronaviruses that infect animals are also known, and the coronavirus that infects humans from animals is the SARS (Severe Acute Respiratory Syndrome) coronavirus that spread in Guangdong, China in 2002. and the MARS (Middle East Respiratory Syndrome) coronavirus reported in the Arabian Peninsula in 2012.
  • SARS severe Acute Respiratory Syndrome
  • MARS Middle East Respiratory Syndrome
  • SARS-CoV-2 infections continue, it is still difficult to supply antiviral drugs against SARS-CoV-2.
  • Early detection of SARS-CoV-2-infected persons through rapid testing is extremely important in order to prevent complications from becoming severe.
  • Accurate detection of SARS-CoV-2 infection is also very important in order to distinguish COVID-19 from other diseases presenting cold-like symptoms.
  • nucleic acid detection methods using real-time reverse transcription PCR, etc. have become mainstream.
  • the nucleic acid detection method has high detection sensitivity, it has problems such as a long test time, the need for personnel skilled in the use and operation of dedicated equipment, and high costs. Therefore, a simple, rapid, and highly sensitive detection method is desired for early detection of infected persons. Therefore, an antigen detection method using immunochromatography is mentioned as a simpler and faster detection method than the nucleic acid detection method.
  • Non-Patent Document 1 among the nucleocapsid proteins of SARS-CoV-2, a nucleocapsid protein of the C-terminal region formed by the 121st to 419th amino acids is produced, and by immunizing mice, SARS-CoV-2 have obtained antibodies against the nucleocapsid protein of Two of the three antibodies obtained have identified epitopes at amino acids 210 to 231 and amino acids 382 to 397 of the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2. On the other hand, the epitope of the remaining one type of antibody has not been specified, but it is presumed to recognize the 335th to 348th amino acids because it does not have cross-reactivity with SARS coronavirus. Using this obtained antibody, an immunochromatographic test strip was prepared and evaluated. It is described that it reacted up to 1.
  • Non-Patent Document 2 discloses a non-specific reaction by a product using an immunochromatographic method that detects SARS-CoV-2, which is already on the market. Nucleic acid testing was performed on 57 hospitalized patients and 12 hospital staff, including three who tested positive by antigen detection, and all tested negative. In addition, the test results of the 3 subjects who were confirmed to be positive were still positive by the antigen detection method and negative by the nucleic acid detection method from the next day onwards. It has been reported that For these reasons, antigen detection methods are useful for screening, but in view of the frequency of false positives, it is reported that nucleic acid detection methods are desirable for SARS-CoV-2 detection.
  • the present invention can detect SARS-CoV-2, which is the causative virus of COVID-19, simply, rapidly, and with high sensitivity, and also provides an immunological detection method using an antibody that reacts with sufficient specificity. , to provide an immunochromatographic test strip containing the antibody and a kit containing the test strip.
  • the present invention includes the following aspects.
  • a method for detecting the presence of SARS-CoV-2 contained in a test sample which is performed by immunoassay using an antibody or fragment thereof that reacts with the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 , said method for the detection of SARS-CoV-2.
  • the method for detecting SARS-CoV-2 according to [1], wherein the immunoassay method comprises contacting the test sample with the antibody or fragment thereof.
  • the immunoassay method is a sandwich method using two different antibodies or fragments thereof.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 2, 3 and 4, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are set forth in SEQ ID NOs: 5, 6 and 7, respectively; an antibody or fragment thereof comprising an amino acid sequence;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are set forth in SEQ ID NOs: 11, 12 and 13, respectively; an antibody or fragment thereof comprising an amino acid sequence;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 14, 15 and 16, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are set forth in SEQ ID NOs: 17, 18 and 19, respectively; an antibody or fragment thereof comprising an amino acid sequence;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set
  • a SARS-CoV-2 detection immunochromatography test strip which is prepared to be chromatographically developed in a laboratory.
  • the immunochromatographic test strip of [7] wherein at least one of the first and second antibodies or fragments thereof is a monoclonal antibody or fragment thereof.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 2, 3 and 4, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are set forth in SEQ ID NOs: 5, 6 and 7, respectively; an antibody or fragment thereof comprising an amino acid sequence;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are set forth in SEQ ID NOs: 11, 12 and 13, respectively; an antibody or fragment thereof comprising an amino acid sequence;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 14, 15 and 16, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are set forth in SEQ ID NOs: 17, 18 and 19, respectively; an antibody or fragment thereof comprising an amino acid sequence;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set
  • a kit for detecting SARS-CoV-2 comprising at least the SARS-CoV-2 detection immunochromatographic test strip of [7] and a developing solvent for developing a test sample.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 2, 3 and 4, respectively;
  • the antibody or fragment thereof of [12] which comprises the amino acid sequences shown in 6 and 7.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 of SEQ ID NO: 11, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 14, 15 and 16, respectively;
  • the antibody or fragment thereof of [12] which comprises the amino acid sequences shown in 18 and 19.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 20, 21 and 22, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 26, 27 and 28, respectively;
  • the antibody or fragment thereof of [12] which comprises the amino acid sequences of 30 and 31.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 32, 33 and 34, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 38, 39 and 40, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are SEQ ID NOs: 41 and 41, respectively;
  • the antibody or fragment thereof of [12] which comprises the amino acid sequences shown by 42 and 43.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 44, 45 and 46, respectively; The antibody or fragment thereof of [12], which comprises the amino acid sequences shown in 48 and 49.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 50, 51 and 52, respectively; The antibody or fragment thereof of [12], which comprises the amino acid sequences shown in 54 and 55.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 56, 57 and 58, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 62, 63 and 64, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 68, 69 and 70, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are SEQ ID NOs: 71 and 71, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 74, 75 and 76, respectively;
  • the antibody or fragment thereof of [12] which comprises the amino acid sequences represented by 78 and 79.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 80, 81 and 82, respectively; The antibody or fragment thereof of [12], which comprises the amino acid sequences represented by 84 and 85.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 86, 87 and 88, respectively; The antibody or fragment thereof of [12], which comprises the amino acid sequences shown by 90 and 91.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 92, 93 and 94, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 98, 99 and 100, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are SEQ ID NO: 101, respectively;
  • the antibody or fragment thereof of [12] which comprises the amino acid sequences of 102 and 103.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 104, 105 and 106, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are SEQ ID NO: 107, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprises the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 110, 111 and 112, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are SEQ ID NO: 113, respectively;
  • the antibody or fragment thereof of [12] which comprises the amino acid sequences shown by 114 and 115.
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the antibody or fragment thereof comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 116, 117 and 118, respectively;
  • the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein can be detected using an antibody against the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein. Moreover, in immunological detection, SARS-CoV-2 can be detected with high sensitivity while suppressing non-specific reactions. Furthermore, an immunochromatographic test strip capable of specifically and highly sensitively detecting SARS-CoV-2 and a kit containing the same can be provided.
  • a is a plan view of an immunochromatography test strip
  • b is a longitudinal sectional view of the immunochromatography test strip indicated by a.
  • each step in the antibody production and the detection method using the antibody is carried out in accordance with known immunological techniques.
  • the antibody of the present invention specifically binds to the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein, and may be either a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • a polyclonal antibody specific to the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 is, for example, a nucleocapsid protein extracted and purified from SARS-CoV-2, or a nucleocapsid protein gene introduced into E. coli or the like and expressed by genetic engineering.
  • An animal can be immunized with an extracted and purified nucleocapsid protein or a polypeptide constituting a part of the nucleocapsid protein as an immunizing antigen, and obtained from the antiserum.
  • a monoclonal antibody specific for the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein can be obtained, for example, by the following method.
  • the nucleocapsid protein extracted and purified from SARS-CoV-2 in the same manner as described above, or the nucleocapsid protein expressed by genetic engineering and extracted and purified, or a polypeptide constituting a part of the nucleocapsid protein is used as an antigen for immunization. It is used to immunize animals such as mice, rats, rabbits and chickens. When mice are immunized, the fused cells obtained by fusing the spleen cells and myeloma cells of the immunized animal are selected in HAT-containing medium and grown.
  • Anti-SARS-CoV-2 antibody-producing strains are selected by allowing the culture supernatant of the proliferated cells to react with the nucleocapsid protein obtained by the above-described method, for example, by an enzyme-labeled immunoassay.
  • an antibody library is prepared by extracting lymph tissue from the animal immunized with the antigen for immunization and amplifying the antibody gene. After that, it is introduced into E. coli and positive clones are selected.
  • RNA is extracted from fused cells or B cells, and heavy and light chain cDNAs of antibody genes are synthesized based on the extracted RNA.
  • the synthesized cDNA may express portions of immunoglobulin molecules such as CDR regions. Thereafter, the heavy chain-expressing clone and the light chain-expressing clone are co-introduced into mammalian cells to co-express the heavy chain and light chain in the cells, and the culture supernatant can be collected to produce the antibody. .
  • the antibodies of the present invention may be antibodies per se, or antibody fragments and modified antibodies against the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 that have substantially the same performance as the antibodies.
  • the above antibody fragments include Fab fragments, Fab′ fragments, F(ab′) 2 fragments, scFv fragments, etc., as long as they specifically recognize the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein in the same or equivalent manner as the antibody of the present invention. , or parts of immunoglobulin molecules such as V regions, VH regions or CDR regions.
  • the modified antibody may be any antibody that specifically recognizes the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein equivalent to the antibody of the present invention. Specific examples thereof include chimeric or humanized antibodies. modified antibodies, subtype modified antibodies, isotype modified antibodies, genetically engineered or synthetic antibodies, and any of two antigens or two different antigenic determinants Antibodies that have been genetically engineered to enable
  • the antibody of the present invention can recognize the nucleocapsid protein formed from the full-length 419 amino acids of SARS-CoV-2 (SEQ ID NO: 1).
  • the antibody of the present invention only needs to be able to recognize the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2, and recognizes the N-terminal domain (NTD) formed by the 41st to 186th amino acids of the nucleocapsid protein. It may be something to do.
  • the antibody of the present invention may recognize the region formed by the 247th amino acid to the 419th amino acid, which is the C-terminal domain (CTD).
  • Antibodies that recognize the N-terminal domain (NTD) of the present invention include (1) heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprising the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 2, 3 and 4, respectively, and light chain CDR1 and CDR2; and CDR3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 5, 6 and 7, respectively; (2) the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively; (3) an antibody in which the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOS: 11, 12 and 13, respectively; and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 17, 18 and 19, respectively; , 21 and 22, wherein the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 23, 24 and 25, respectively; (5) the heavy chain CDR1, CDR2 and C
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 38, 39 and 40, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 are set forth in SEQ ID NOs: 41, 42 and 43, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOS: 44, 45 and 46, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 each comprise SEQ ID NO: 47 , 48 and 49
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 50, 51 and 52, respectively, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR
  • an antibody in which heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 56, 57 and 58, respectively;
  • the heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 are shown in SEQ ID NOs: 62,
  • Antibodies that recognize the C-terminal domain (CTD) of the present invention are (12) heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprising the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 68, 69 and 70, respectively, and light chain CDR1 and CDR2 and CDR3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 71, 72 and 73, respectively; (16) an antibody in which the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs:83, 84 and 85, respectively; and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 95, 96 and 97, respectively; , 111 and 112, and the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 113, 114 and 115, respectively.
  • Antibodies that recognize the region located between the N-terminal domain and the C-terminal domain of the present invention include (15) heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprising the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 86, 87 and 88, respectively. , an antibody in which the light chain CDR1, CDR2 and CDR3 comprise the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs:89, 90 and 91, respectively.
  • the second antibody is an antibody recognizing the N-terminal domain, an antibody recognizing the C-terminal domain, located between the N-terminal domain and the C-terminal domain. Any antibody that recognizes the region may be used.
  • the first antibody is an antibody recognizing the C-terminal domain
  • the second antibody is an antibody recognizing the N-terminal domain, an antibody recognizing the C-terminal domain, located between the N-terminal domain and the C-terminal domain. Any antibody that recognizes the region may be used.
  • the second antibody is an antibody that recognizes the N-terminal domain, an antibody that recognizes the C-terminal domain, an antibody that recognizes the C-terminal domain, an antibody that recognizes the N-terminal Any antibody that recognizes the region located between the domain and the C-terminal domain.
  • the present invention also provides a method for detecting the presence of SARS-CoV-2 contained in a test sample by an immunoassay method using an antibody or fragment thereof that specifically reacts with the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2. Also provide.
  • the immunoassay method preferably includes contacting a test sample with the antibody or fragment thereof of the present invention. According to the detection method of the present invention, when the test sample contains SARS-CoV-2, a complex is formed between the antibody or fragment thereof and SARS-CoV-2 in the contacting step.
  • the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein and thus SARS-CoV-2 can be detected by quantitatively or qualitatively measuring the complex.
  • the detection of the complex in the detection method of the present invention can be carried out by employing any conventional immunoassay method.
  • immunoassay methods include enzyme immunoassay (ELISA method or EIA method), fluorescence immunoassay (FIA), radioimmunoassay (RIA), luminescence immunoassay (LIA), and enzyme antibody method.
  • fluorescent antibody method immunochromatographic method (immunochromatographic method), flow-through method, immunoturbidimetric method, latex nephelometry method, latex agglutination assay method, hemagglutination method, or particle agglutination method.
  • Particularly preferred immunoassay methods for the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein in the present invention are ELISA, immunochromatography and flow-through, which are sandwich methods using two antibodies or fragments thereof.
  • ELISA ELISA
  • immunochromatography immunochromatography
  • flow-through sandwich methods using two antibodies or fragments thereof.
  • the immunochromatographic method is inferior to the ELISA method in sensitivity and quantification, but can be detected quickly and easily.
  • the flow-through method is more complicated in operation than the immunochromatography method, but it is comparable in sensitivity and quantification to the ELISA method, and allows rapid detection.
  • Two antibodies or fragments thereof used in the sandwich method preferably recognize different epitopes in order to avoid competitive reaction between antibodies and have high reactivity.
  • a membrane carrier having a capture site formed by immobilizing a first antibody capable of antigen-antibody reaction with a first antigenic determinant of an antigen at a predetermined position in advance is prepared. Then, a mixture of a second antibody capable of antigen-antibody reaction with the second antigenic determinant of the antigen and labeled and a predetermined amount of the test sample is directed toward the capture site on the membrane carrier.
  • the first antibody and the second can be performed by using the antibody of the present invention or a fragment thereof as the antibody of
  • test sample in the present invention is not particularly limited, but SARS-CoV-2 may be present in nasal aspirate, nasal swab, nasopharyngeal swab, pharyngeal swab, sputum, saliva, bronchoalveolar lavage fluid, etc.
  • examples include biological samples.
  • These specimen collection methods are not particularly limited, and are collected by known methods. For example, in the case of nasal swab, nasopharyngeal swab, and pharyngeal swab, a method using a cotton swab is often used.
  • the collected test sample may be added to the membrane carrier as it is, or may be diluted with an appropriate diluent such as a developing solvent and then added to the membrane carrier.
  • the collected test sample may be added to the membrane carrier after being filtered using a filter in order to remove sticky substances and solids derived from biological components contained in the test sample.
  • a test sample containing blood particularly when a color labeling substance such as colloidal gold is used as the labeling substance for the labeled antibody, it is preferable to place a blood cell trapping member on the sample addition member. This prevents the erythrocytes from developing on the membrane carrier, making it easier to confirm the accumulation of the color label at the capture site of the membrane carrier.
  • a carboxymethyl cellulose membrane is used as the blood cell trapping membrane member.
  • ion-exchange filter paper CM (trade name) sold by Advantech Toyo Co., Ltd. and ion-exchange cellulose paper sold by Whatman Japan Co., Ltd. etc. can be used.
  • the detection method of the present invention can be carried out in accordance with immunoassay, but is preferably carried out in accordance with immunochromatography, which can be performed quickly and easily. Immunochromatography can be easily carried out according to the configuration of a known immunochromatography test strip.
  • immunochromatographic test strips are composed of a first antibody capable of antigen-antibody reaction at the first antigenic determinant of the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2, which is an antigen, and a second antigenic determinant of the antigen.
  • a labeled second antibody capable of antigen-antibody reaction is arranged so as to be capable of chromatographic development on the membrane carrier at a position separated from the capture site.
  • the first antibody and the second antibody may each be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody, but one of them is preferably a monoclonal antibody, and both are monoclonal antibodies. It is more preferable to have Generally, the first antigenic determinant and the second antigenic determinant differ in both position and structure on the antigen, and the first antibody and the second antibody are used in a "hetero" combination. In addition, many nucleocapsid proteins are present together with the RNA in the virus. Antibodies that recognize different antigenic determinants present on the CoV-2 nucleocapsid protein are preferred.
  • immunochromatographic test strips examples include those shown in FIG. FIG. 1 is an example, and the shape, configuration, type of members used, and structure of the strip are not limited to these.
  • numeral 1 indicates an adhesive sheet
  • 2 an impregnated member
  • 3 a membrane carrier
  • 4 an absorbent member
  • 5 a sample addition member
  • 31 a capture site
  • 32 a control capture site.
  • the membrane carrier 3 uses a strip-shaped nitrocellulose membrane filter with a width of 5 mm and a length of 36 mm, and the first antibody is immobilized at a position 7.5 mm from the end on the chromatographic development starting point side. , and a subject capture site 31 is formed.
  • a control capture site 32 is provided at a position 15 mm from the end of the membrane carrier 3 on the chromatographic development starting point side, and it is confirmed that the chromatographic development of the test sample was performed normally regardless of the presence or absence of the subject. I am making it possible.
  • the control capture site 32 can be formed by immobilizing a substance (excluding the subject) that immunologically specifically binds to the second antibody on the membrane carrier 3 .
  • a substance excluding the subject
  • the control capture site 32 can be formed by using an antibody against the mouse antibody.
  • a nitrocellulose membrane filter is used as the membrane carrier 3.
  • the membrane carrier 3 is capable of chromatographically developing the test sample and immobilizing the first antibody.
  • Other cellulose membranes, nylon membranes, glass fiber membranes, etc. can be used as long as they can form the portion 32 .
  • the impregnated member 2 is a member impregnated with a second antibody that reacts antigen-antibody with the antigen at a second antigenic determinant located at a site different from the first antigenic determinant to which the first antibody binds. and the second antibody is pre-labeled with a suitable labeling substance.
  • a glass fiber nonwoven fabric having a width of 5 mm and a length of 15 mm is used as the impregnated member 2, but it is not limited to this, and cellulose cloth (filter paper, nitrocellulose membrane, etc.), polyethylene, etc. Porous plastic cloth such as polypropylene and the like can also be used for the impregnation member 2 .
  • the labeling substance for the second antibody may be any substance as long as it can be used, and examples thereof include color labeling substances, enzyme labeling substances, fluorescence labeling substances, radiolabeling substances, and the like. Among these, it is preferable to use a color labeling substance because it can be determined quickly and simply by observing the change in color at the capture site 31 with the naked eye.
  • color labeling substances include metal colloids such as colloidal gold and colloidal platinum, composite metal colloids thereof, synthetic latexes such as polystyrene latex colored with red and blue pigments, and latexes such as natural rubber latex. . Among these, metal colloids such as gold colloids are particularly preferred.
  • the impregnated member 2 can be produced by impregnating a member such as a glass fiber nonwoven fabric with a suspension of the second antibody labeled with the labeling substance and drying the impregnated member.
  • the chromatographic development starting point side is defined as "upstream”, and the direction in which the developing solvent flows (absorbing member 4 side) is defined as downstream.
  • the membrane carrier 3 is attached to the middle of the adhesive sheet 1 , and the downstream end of the impregnated member 2 is superimposed and connected to the upstream end of the membrane carrier 3 , and the upstream portion of the impregnated member 2 is attached to the adhesive sheet 1 .
  • the immunochromatographic test strip of the present invention can be produced by sticking to.
  • the upstream end of the absorbent member 4 is superimposed on the upper surface of the downstream portion of the membrane carrier 3 and connected, and the downstream portion of the absorbent member 4 is adhered to the adhesive sheet 1 .
  • the upper surface of the impregnation member 2 is arranged so as to be covered with the downstream portion of the sample addition member 5 , and the upstream portion of the sample addition member 5 is adhered to the adhesive sheet 1 .
  • the absorbent member 4 may be any member as long as it can quickly absorb and retain liquid, and includes cotton cloth, filter paper, and porous plastic nonwoven fabric made of polyethylene, polypropylene, etc., but filter paper is most suitable.
  • porous synthetic resin sheets or films such as porous polyethylene and porous polypropylene, and cellulose paper such as filter paper and cotton cloth, or woven or non-woven fabric can be used.
  • the immunochromatographic test strip of FIG. 1 can be provided housed in a suitable plastic case in which a test sample injection part and a determination part are opened above the sample addition member 5 and the capture site 31, respectively. can.
  • the immunochromatographic test strip is preferably provided in a plastic case.
  • the immunochromatographic kit of the present invention preferably contains a developing solvent for developing the analyte in addition to the immunochromatographic test strips described above.
  • the developing solvent can also be used as a sample diluent, and usually contains water as a solvent.
  • One or more selected from agents, chelating agents and the like may be added.
  • Surfactants, proteins, polymer compounds, and polyanions may also be added to promote antigen-antibody reactions or suppress non-specific reactions.
  • the envelope consisting of the lipid bilayer membrane that constitutes the SARS-CoV-2 particle is dissolved, the underlying nucleocapsid protein is released, and the antigen recognition site of the anti-SARS-CoV-2 antibody is exposed.
  • a nonionic surfactant include, for example, polyethylene glycol mono-p-isooctylphenyl ether, polyoxyethylene sorbitan monolaurate, Brij (trademark) 35 (trade name) and the like, and one or more of them may be used. may be added.
  • the mixed solution is added to the immunochromatographic test strip shown in FIG.
  • the mixed solution passes through the sample addition member 5 and mixes with the labeled second antibody in the impregnation member 2 .
  • the analyte is present in the mixture, a complex between the analyte and the second antibody is formed by antigen-antibody reaction.
  • This complex is chromatographed in the membrane carrier 3, reaches the capture site 31, and is captured by antigen-antibody reaction with the first antibody immobilized there.
  • color-developing labeling substance such as colloidal gold
  • accumulation of the color-developing labeling substance causes the capturing site 31 to develop a color, so that the analyte can be immediately qualitatively measured.
  • optically reading the coloration intensity of the coloration substance accumulated in the capture site 31 of the immunochromatographic test strip with an immunochromatographic reader the coloration intensity can be quantified and quantitatively measured.
  • the second antibody that did not undergo antigen-antibody reaction with the specimen is captured by the antibody against the second antibody immobilized on the control capturing site 32, and the capturing site 31 It is confirmed that the chromatographic development was performed normally because the color develops in the same manner as in . On the other hand, if the control capture site 32 does not develop color, it is confirmed that a problem has occurred, such as the second antibody not being developed.
  • the second antibody is impregnated in the impregnation member 2 and placed on the membrane carrier 3, and is prepared so as to be developed on the membrane carrier 3 at a position separated from the capture site 31. and is not limited to the illustrated form.
  • the second antibody is prepared in order to mix the test sample and the developing solvent, is prepackaged in a container such as a tube, and is the same as the test strip consisting of the membrane carrier 3 on which the first antibody is preliminarily immobilized. may be packaged.
  • Example 1 Expression and purification of recombinant nucleocapsid protein
  • pcMV3-2019-nCov-NP-His (Sino bio)
  • a plasmid implementing the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein gene was transformed into E. coli.
  • the plasmid was amplified by introducing into E. coli DH5 ⁇ Competent Cells (Takara Bio) and culturing overnight in Terrific broth containing kanamycin.
  • This amplified plasmid was transfected into 293T cells and the cells were harvested and lysed after 7 days. After sonicating the cell lysate, it was purified using an affinity column.
  • This purified protein was dialyzed against phosphate-buffered saline (hereinafter referred to as PBS) to obtain the desired recombinant nucleocapsid protein.
  • PBS phosphate-buffered saline
  • SARS-CoV-2 coronavirus nucleocapsid protein NP manufactured by CUSABIO
  • SARS-CoV-2 recombinant NP SARS-CoV-2 coronavirus nucleocapsid protein NP
  • SARS-CoV-2 recombinant NP SARS-CoV-2 coronavirus nucleocapsid protein NP
  • SARS-CoV-2 recombinant NP SARS-CoV-2 coronavirus nucleocapsid protein NP
  • SARS-CoV-2 recombinant NP SARS-CoV-2 coronavirus nucleocapsid protein NP
  • SARS-CoV-2 recombinant NP SARS-CoV-2 recombinant nucleocapsid protein prepared in Example 1
  • Antigens for immunizing mice were prepared in advance by mixing the recombinant protein with an equal amount of adjuvant (Japan BD). Mice (BALB/c, 6 weeks old, Japan SLC) were immunized multiple times with a mixture of recombinant protein and adjuvant so that the amount of antigen was 100 ⁇ g, and the spleen cells were used for cell fusion. Mouse myeloma cells, Sp2/0-Ag14 cells (Shulman et al., 1987), were used for cell fusion. Cell fusion was performed by mixing mouse spleen cells and Sp2/0-Ag14 cells and adding Polyethylene glycol solution (Sigma).
  • the fused cells were cultured in HAT-RPMI [serum-added RPMI containing 0.1 mM sodium hypoxanthine, 0.4 ⁇ M Aminopterin and 0.1 mM Thymidine], and antibody production in the culture supernatant was confirmed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). .
  • Antibody production-positive cells were cultured in HT-RPMI [serum-added RPMI containing 0.1 mM sodium hypoxanthine and 0.1 mM Thymidine], and further cultured in serum-added medium.
  • Example 3 Preparation of monoclonal antibody
  • mice BALB/c, Retired, Charles River Laboratories Japan
  • 2,6,10,14-Tetramethylpentadecane Kishida Chemical
  • ascites was collected from the mouse and applied to a protein G column to purify the monoclonal antibody.
  • 83 clones of monoclonal antibody-producing cells against the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 were obtained.
  • Example 4 Amino acid analysis of anti-SARS-CoV-2 antibody
  • the monoclonal antibody-producing cells prepared in Example 2 were cultured, and RNA was purified from a predetermined number of cells.
  • cDNA was synthesized using oligo dT primers and SuperScriptTM III reverse transcriptase (ThermoFisher SCIENTIFIC). After that, using an antibody constant region-specific sequence 3' reverse primer, the sequences of the variable regions were amplified, and sequence analysis was performed.
  • Example 5 Anti-SARS-CoV-2 antibody reactivity test
  • the reactivity of the anti-SARS-CoV-2 antibody obtained in Example 3 was tested.
  • the recombinant protein SARS-CoV-2 recombinant NP, human coronavirus 229E (VR-740 strain obtained from ATCC), human coronavirus OC43 (VR-1558 strain obtained from ATCC ) was immobilized at a predetermined concentration to prepare a microplate. Each antibody prepared in Example 3 was added to each immobilized microplate, and reacted at room temperature for 1 hour.
  • the anti-SARS-CoV-2 antibody produced in Example 3 showed high reactivity to the recombinant protein SARS-CoV-2 recombinant NP, and human coronavirus 229E and OC43 as negative controls. was found not to cross-react. Thus, the obtained anti-SARS-CoV-2 antibodies were shown to specifically bind to the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2.
  • CUSABIO recombinant nucleocapsid protein
  • SEQ ID NO: 1 a recombinant nucleocapsid protein consisting of the 41st to 186th amino acids located at the N-terminus of the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein shown in SEQ ID NO: 1, and 220th to 419th located at the C-terminus Reactivity was tested by the method described above using a recombinant nucleocapsid protein (CUSABIO) consisting of amino acids. Table 3 shows the results.
  • Example 3 From Table 3, it was confirmed that the antibody produced in Example 3 reacts with the recombinant nucleocapsid protein consisting of the 41st to 186th amino acids located at the N-terminus. From this, the obtained anti-SARS-CoV-2 antibody recognizes an epitope located in the N-terminal region of the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein, particularly in the region consisting of the 41st to 186th amino acids from the N-terminus. was shown.
  • Example 6 Calculation of dissociation rate constant of antibody against anti-SARS-CoV-2)
  • Kd dissociation constant for the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein of each of the antibodies produced according to Example 3
  • the Kd value was calculated by biolayer interferometry using Fortebio's BLitz System (trade name).
  • a biosensor chip on which an anti-mouse IgG Fv antibody was immobilized was used. As preparation for measurement, the sensor chip was hydrated by immersing the biosensor chip in 200 ⁇ L of buffer solution for 10 minutes. To measure the dissociation constant of the antibody, the biosensor chip was washed with buffer for 30 seconds and calibrated to the initial value.
  • Example 3 Thereafter, the antibody solution obtained in Example 3 was prepared to 100 nM, 4 ⁇ L of the antibody solution was reacted with the biosensor chip, and the anti-SARS-CoV-2 antibody was immobilized on the surface of the biosensor chip over 120 seconds. turned into It was then washed with buffer for 30 seconds to remove unbound antibody. Subsequently, the anti-SARS-CoV-2 antibody immobilized on the surface of the biosensor chip is allowed to interact with 4 ⁇ L of SARS-CoV-2 recombinant NP prepared to 100 nM for 120 seconds to perform an antigen-antibody reaction. Antibody binding capacity was determined by washing with buffer for 120 seconds. After the measurement was completed, the dissociation constant was calculated. Table 4 shows the calculated binding rate constant, dissociation rate constant and dissociation constant of each antibody.
  • Table 4 shows that the antibodies obtained this time had a dissociation constant of 2.0 nM for the antibody with the weakest binding strength and a dissociation constant of 38 pM for the antibody with the strongest binding strength. This indicates that the antibody obtained this time has a dissociation constant of 2.0 nM or less for SARS-CoV-2 recombinant NP.
  • Example 7 Preparation of immune cell samples against SARS-CoV-2 from rabbits
  • SARS-CoV-2 recombinant NP as a SARS-CoV-2 nucleocapsid protein
  • immune cells were obtained by collecting blood from rabbits.
  • Antigens for immunizing rabbits were prepared in advance by mixing the recombinant protein with an equal amount of adjuvant (Japan BD). Rabbits were immunized multiple times with a mixture of SARS-CoV-2 recombinant NP and an adjuvant to give an antigen amount of 500 ⁇ g, and blood was collected and spleen was removed.
  • a PBMC sample was prepared by separating and collecting only peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from the collected whole blood by centrifugation.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • the excised spleen was subjected to cellularization by filtration and used as a rabbit spleen sample.
  • Example 8 Acquisition of rabbit-derived anti-SARS-CoV-2 antibody gene
  • Example 7 specific gravity centrifugation was performed using a separation solution, Lymphocyte Separation Medium 1077 (PromoCell), to separate lymphocytes from the rabbit spleen sample. Lymphocyte samples were prepared by sorting the sphere fraction. In order to separate B cells that react with SARS-CoV-2 recombinant NPs from PBMC samples and lymphocyte samples, each sample was reacted with fluorescence-labeled SARS-CoV-2 nucleocapsid protein.
  • a cell sorter (Sony) was used to measure B cells that reacted with the fluorescently labeled nucleocapsid protein, and the cells confirmed to be reactive were sorted into microplates one by one by single cell sorting. Single-cell RT-PCR was performed on the sorted cells to obtain the gene of the monoclonal antibody. As a result, a total of 200 clones of antibody genes were obtained.
  • Example 9 Sequence analysis of Fab antibody gene
  • the heavy chain and light chain DNA sequences of 10 clones of the antibody genes obtained in Example 8 were analyzed.
  • a cDNA encoding each variable region was introduced into a pRSET vector, and its DNA sequence was analyzed by the Sanger method.
  • the amino acid sequence and CDR of the Fab antibody were analyzed.
  • CDRs were analyzed from the analyzed DNA sequence using three programs, IMGT/V-QUEST, VBASE2, and IGBLAST, and it was confirmed that the identified CDRs matched each other.
  • Table 5 shows the analysis results of the CDR sequences.
  • the CDR sequences of each antibody shown in Table 5 have one or several amino acids deleted, substituted or added as long as they recognize the same or equivalent SARS-CoV-2 nucleocapsid protein. It will be clear to those skilled in the art that
  • Example 10 Preparation and reactivity test of Fab antibody by cell-free expression system
  • a template was prepared by adding a promoter sequence for cell-free expression and a ribosome binding sequence to the 10 clones of antibody genes obtained in Example 8.
  • Protein expression of the anti-SARS-CoV-2 Fab antibody was performed by performing cell-free transcription-translation coupling reaction with PUREfrexTM 2.0 (Gene Frontier) using each template. At this time, DsbC Set (Gene Frontier) was added to optimize conditions for forming disulfide bonds.
  • Anti-SARS-CoV-2 Fab antibodies were thus obtained. Then, the obtained anti-SARS-CoV-2 Fab antibody was evaluated for reactivity.
  • the antibody used had the H chain labeled with an HA tag.
  • a microplate was prepared on which the obtained SARS-CoV-2 recombinant NPs were immobilized at a predetermined concentration. This microplate was reacted with a predetermined concentration of anti-SARS-CoV-2 Fab antibody labeled with HA tag, and then reacted with an anti-HA tag antibody labeled with horseradish peroxidase against HA tag of the antibody. Thereafter, a 3,3',5,5'-tetramethylbenzine solution was added as a color-developing substrate to react, and the reaction was terminated with 2N sulfuric acid.
  • the absorbance at 450 nm of each well of the microplate after stopping the reaction was measured.
  • the expression level of anti-SARS-CoV-2 Fab antibody was evaluated.
  • the obtained HA-tagged anti-SARS-CoV-2 Fab antibody was immobilized on a microplate at a concentration 5 times the predetermined concentration used in the reactivity evaluation.
  • a horseradish peroxidase-labeled anti-HA tag antibody was reacted with the HA tag added to the H chain of the immobilized antibody. Thereafter, a 3,3',5,5'-tetramethylbenzine solution was added as a color-developing substrate to react, and the reaction was terminated with 2N sulfuric acid.
  • the absorbance at 450 nm of each well of the microplate after stopping the reaction was measured. Then, the reactivity per expression level was calculated as a percentage as a reaction rate. Since the concentration of the antibody used differs between the reactivity evaluation and the expression level evaluation, the reaction rate was calculated by correcting the measurement results with the antibody concentration. Table 6 shows the results.
  • a recombinant nucleocapsid protein consisting of the 41st to 186th amino acids located at the N-terminus of the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein shown in SEQ ID NO: 1, and 220th to 419th located at the C-terminus Reactivity was tested using a recombinant nucleocapsid protein (CUSABIO) consisting of amino acids.
  • Each expressed Fab antibody was added to a microplate on which each recombinant nucleocapsid protein was immobilized, and reacted at room temperature for 1 hour.
  • TN01, TN03, TN07, TN08 and TN10 reacted with the recombinant nucleocapsid protein consisting of the 41st to 186th amino acids located at the N-terminus. Therefore, it was shown to recognize an epitope located in the region of the 41st to 186th amino acid sequence of SEQ ID NO:1.
  • TN04 and TN09 reacted with the recombinant nucleocapsid protein consisting of the 220th to 419th amino acids located at the C-terminus, and thus the epitope located in the region of the 220th to 419th amino acids sequence of SEQ ID NO: 1. shown to be aware.
  • TN05 did not react with either recombinant nucleocapsid protein. Therefore, it was suggested that it recognizes an epitope at a position that does not belong to either amino acid sequence, that is, the 187th to 219th amino acid sequences.
  • Example 11 Preparation of immunochromatographic test strip using anti-SARS-CoV-2 antibody
  • the anti-SARS-CoV-2 antibody purified in Example 3 and the anti-SARS-CoV-2 Fab antibody prepared in Example 10 were used to prepare immunochromatographic test strips.
  • (1) Preparation of platinum-gold colloidal particle solution All glassware used was washed with aqua regia. 390 mL of ultrapure water is placed in a flask and boiled, 30 mL of a chloroauric acid aqueous solution (1 g of gold per liter of aqueous solution, manufactured by Katayama Chemical Co., Ltd.) is added to the boiling water, and then a 1% by weight sodium citrate aqueous solution is added.
  • platinum-gold colloid labeled anti-SARS- A CoV-2 antibody solution was prepared. Thereafter, this solution was centrifuged (5600 ⁇ g, 25 minutes) to precipitate the platinum-gold colloidal labeled antibody, and the supernatant was removed to obtain the platinum-gold colloidal labeled antibody.
  • the obtained platinum-gold colloidal labeled antibody was suspended in 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4) containing 10% sucrose, 1% BSA and 0.5% Triton-X100 to prepare a platinum-gold colloidal labeled antibody solution. and
  • the glass fiber non-woven fabric was impregnated with 37.5 ⁇ L of the platinum-gold colloid labeled antibody solution and freeze-dried to prepare a platinum-gold colloid labeled antibody-impregnated member.
  • An immunochromatographic test strip similar to that in FIG. 1 was prepared using the membrane carrier for chromatography development, labeled antibody-impregnated member, sample addition member, and absorption member prepared above.
  • Example 12 Reactivity test against recombinant SARS-CoV-2 nucleocapsid protein using immunochromatographic test strips
  • the anti-SARS-CoV-2 antibody obtained in Example 3 was combined with a first antibody (immobilized antibody) immobilized on a membrane carrier and a second antibody (labeled Antibodies), immunochromatographic test strips used in various combinations were prepared by the method described in Example 11, and reactivity tests were performed.
  • the evaluation of the test strip was carried out based on the presence or absence of coloration in the determination area after 15 minutes. The results of coloration were shown in 4 grades of no coloration (-), weak coloration ( ⁇ ), sufficient coloration (+), and marked coloration (++).
  • Example 11 Reactivity test of immunochromatographic test strips using TAU004 as the second antibody (labeled antibody) and TAU001, TAU002, TAU003, TAU005, and TAU006 as the first antibody (immobilized antibody) Described in Example 11
  • the anti-SARS-CoV-2 antibody TAU004 was labeled with colloidal platinum-gold by the method of . Then, TAU001, TAU002, TAU003, TAU005 or TAU006 was immobilized on the membrane carrier. Using these, an immunochromatographic test strip was prepared, and 90 ⁇ L of 4 ng/mL SARS-CoV-2 recombinant NP as an antigen was added dropwise to the prepared test strip to evaluate reactivity. Table 10 shows the results.
  • TAU004 when used as the platinum-gold colloid-labeled antibody, coloration was obtained by immobilizing any anti-SARS-CoV-2 antibody on the membrane carrier. It was shown that the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 can also be detected in . In addition, it was shown that by using TAU004 as a platinum-gold colloid-labeled antibody, it can be used in combination with various antibodies. Compared to Table 9 above, which was tested in a similar manner, it was shown that by using TAU004 as a labeled antibody, it is possible to combine it with various antibodies while improving the detection sensitivity.
  • Example 12 From the results shown in Example 12, when immunochromatographic test strips were prepared by selecting two types of antibodies from the anti-SARS-CoV-2 antibodies obtained in Example 3, coloration was observed in various combinations of antibodies. was confirmed. It was also shown that the combination of antibodies enables detection of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein with higher sensitivity. Furthermore, by using TAU004 as either the first antibody that is the immobilized antibody or the second antibody that is the labeled antibody, it is possible to combine with various antibodies, and highly sensitive SARS-CoV-2 was shown to be detectable.
  • Example 13 Reactivity evaluation of immunochromatographic test strip using specimen
  • the anti-SARS-CoV-2 antibody prepared in Example 10 is platinum-colloidally labeled with gold, and different anti-SARS-CoV-2 antibodies are immobilized on a membrane carrier, immunochromatography.
  • a test strip was made. Reactivity was evaluated by dropping 90 ⁇ L of a positive specimen as a biological sample onto the prepared test strip. At this time, nasopharyngeal swab samples and saliva samples were used as sample types.
  • the SARS-CoV-2 antibodies produced in Examples 3 and 10 were used in various combinations, and the performance of immunochromatographic test strips was evaluated by measuring by immunochromatographic method.
  • the evaluation of the test strip was performed by the presence or absence of coloration in the judgment part after 15 minutes, and the results of coloration were: no coloration (-), weak coloration ( ⁇ ), sufficient coloration (+), It was judged in 4 stages of remarkable coloration (++).
  • the results are shown in Tables 15 to 23.
  • the specimen used was a SARS-CoV-2 positive nasopharyngeal specimen.
  • the first antibody is preferably TAU008, TN03, TN05, TN07, TN08 and TN09.
  • the first antibody is preferably TAU007, TN01, TN03, TN04, TN05, TN07, TN08, TN09 and TN10.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN04, TN05, TN09 and TN10.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN04, TN05, TN09 and TN10.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN05, TN07, TN08, TN09 and TN10.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN07, TN08 and TN10.
  • preferred first antibodies are TAU007, TAU008, TN04, TN05 and TN09.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN07, TN08 and TN10.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN05, TN07 and TN09. From these results, it was shown that antigens contained in nasopharyngeal specimens can be detected with various combinations of the obtained antibodies.
  • SARS-CoV-2 antibodies produced in Examples 3 and 8 are used in various combinations and measured by immunochromatographic method to immunochromatographic test.
  • the performance of the strips on saliva specimens was evaluated.
  • the evaluation of the test strip was performed by the presence or absence of coloration in the judgment part after 15 minutes, and the results of coloration were: no coloration (-), weak coloration ( ⁇ ), sufficient coloration (+), It was judged in 4 stages of remarkable coloration (++).
  • the results are shown in Tables 24 to 32.
  • the first antibody is preferably TAU008, TN03, TN05, TN07, TN08 and TN09.
  • the first antibody is preferably TAU007, TN01, TN03, TN04, TN05, TN07, TN08, TN09 and TN10.
  • the first antibody is preferably TN04, TN05, TN09 or TN10.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN04, TN05, TN09 and TN10.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN05, TN07, TN08, TN09 and TN10.
  • the first antibody is preferably TAU008, TN01, TN03, TN04, TN07, TN08 and TN10.
  • preferred first antibodies are TAU007, TAU008, TN04, TN05 and TN09.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN07, TN08 and TN10.
  • the first antibody is preferably TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN05, TN07 and TN09.
  • SARS-CoV-2 nucleocapsid protein contained in the samples could be detected with all the antibody combinations described, regardless of the sample species. Therefore, by combining the antibodies of the present invention, the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein contained in nasopharyngeal specimens and saliva specimens can be detected with high sensitivity.
  • Example 14 Non-specific reactivity evaluation of immunochromatographic test strips using negative specimens
  • the anti-SARS-CoV-2 antibody TAU004 is labeled as a second antibody with colloidal gold, and TAU005 is immobilized as a first antibody on a membrane carrier to prepare an immunochromatographic test strip. did.
  • the reactivity was evaluated by dropping 90 ⁇ L of a negative sample, which is a biological sample, onto the prepared test strip.
  • nasopharyngeal swab samples and saliva samples were used as specimen types, and 50 specimens each were tested.
  • the evaluation of the test strip was carried out based on the presence or absence of coloration in the judgment area after 15 minutes.
  • the results of coloration are shown in four stages of no coloration (-), weak coloration ( ⁇ ), sufficient coloration (+), and marked coloration (++), and weak coloration is obtained. It was judged as a non-specific reaction.
  • the results are shown in Table 33.
  • Example 15 Reactivity evaluation of immunochromatographic test strips using clinical specimens
  • nasopharyngeal swabs were collected by scraping the patient's nasopharynx with a sterile cotton swab.
  • a test sample was prepared by extracting the swab from which the nasopharyngeal swab was taken into the specimen extract. Then, by using an immunochromatographic test strip prepared in the same manner as in Example 14, the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein in the test sample was detected.
  • Immunoace (trademark) SARS-CoV-2 (antigen qualitative detection kit, Towns), which is commercially available using an antibody different from the antibody of the present invention, was used.
  • the collected clinical specimens were subjected to the nucleic acid amplification method (PCR method) based on the genetic testing method (SARS-CoV-2 gene detection and virus isolation manual Ver.1.1) developed by the National Institute of Infectious Diseases. , confirmed the presence of SARS-CoV-2.
  • Table 34 shows the visual determination results of immunochromatography using each test sample and the Ct value of the test sample in the PCR method.
  • test strip The evaluation of the test strip was performed based on the presence or absence of coloration in the judgment part after 15 minutes, and the results of coloration were: no coloration (-), weak coloration ( ⁇ ), sufficient coloration (+), It was shown in 4 stages of remarkable coloration (++).
  • results of the PCR method those that could not be detected were indicated as ND, and those that could be detected were indicated as Ct values.
  • Example 16 Reactivity evaluation of immunochromatographic test strip using saliva sample
  • the anti-SARS-CoV-2 antibody TAU008 is labeled as a second antibody with colloidal gold, and TAU007 is immobilized as a first antibody on a membrane carrier to prepare an immunochromatographic test strip.
  • the patient's exhaled saliva is collected by absorbing it into a sterile cotton swab, and the saliva-collected swab is extracted with the specimen extract. It was used as a test sample of an immunochromatographic test strip.
  • a nasopharyngeal swab was collected from the same patient by scraping the nasopharynx with a sterile cotton swab.
  • a cotton swab from which a nasopharyngeal swab was collected was extracted with a sample extract to obtain a test sample of Immunoace (trademark) SARS-CoV-2 (Towns).
  • Immunoace (trademark) SARS-CoV-2 (Towns) and SARS-CoV-2 contained in the test sample of the prepared immunochromatographic test strip Performance evaluation for the nucleocapsid protein. Carried out.
  • Immunoace (trademark) SARS-CoV-2 (Towns) was used as a control.
  • the collected clinical specimens were subjected to the nucleic acid amplification method (PCR method) based on the genetic testing method (SARS-CoV-2 gene detection and virus isolation manual Ver.1.1) developed by the National Institute of Infectious Diseases. , confirmed the presence of SARS-CoV-2.
  • Table 35 shows the visual determination results of immunochromatography using each test sample and the Ct value of the test sample in the PCR method.
  • an antibody against the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 an immunological detection method for SARS-CoV-2 using this antibody, and a kit are provided. This allows rapid and specific detection of SARS-CoV-2 infection without the need for specialized equipment and skilled techniques.

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Abstract

ＣＯＶＩＤ－１９の原因ウイルスであるＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２を簡便かつ迅速で高感度に検出することができ、非特異的な反応を抑制できる抗体、さらに前記抗体を含む免疫学的検出法およびキットを提供することを目的とする。 ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に結合する抗体またはその断片、特に、当該タンパク質の特定の領域を認識する抗体またはその断片を用いることで、特異的で高感度な免疫学的検出法およびキット、特に、イムノクロマトグラフィー法またはＥＬＩＳＡ法等のサンドイッチ法による検出法の他、当該抗体を含むイムノクロマトグラフィーテストストリップおよび当該テストストリップを含むキットが提供される。

Description

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体及びその用途
　本発明は、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）コロナウイルス２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体及びその用途、例えば、該抗体を用いたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫学的検出方法、並びに、該抗体を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップおよびそれを含むキットに関する。
　ヒト由来のコロナウイルスは、ＮＬ６３、２２９Ｅ、ＯＣ４３、ＨＫＵ１の４種類が同定されており、感冒原因の１０％～１５％を占めている。この他にも、動物に感染するコロナウイルスも知られており、動物からヒトに感染するコロナウイルスは、２００２年に中国の広東省にて感染が拡大したＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）コロナウイルスと、２０１２年にアラビア半島で報告されたＭＡＲＳ（中東呼吸器症候群）コロナウイルスが既に知られている。
　２０１９年１２月には、中国の湖北省武漢市にて新型コロナウイルスが原因である肺炎が発生した。この新型コロナウイルスは、ＳＡＲＳコロナウイルスやＭＡＲＳコロナウイルスと同じ動物由来のβコロナウイルスであることが判明した。２０１９年２月に、この新型コロナウイルスは国際ウイルス分類委員会によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と命名され、このウイルスによって生じる疾患をＷＨＯ（世界保健機関）は、ＣＯＶＩＤ－１９（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　２０１９）と命名した。
　ＣＯＶＩＤ－１９の初期症状は、インフルエンザや感冒に似ており、発熱、咳嗽、咽頭痛、頭痛、倦怠感、呼吸困難などの症状を示す。また、味覚障害や嗅覚障害といった臨床像も初期症状として報告されている。発症から１週間程度で回復する患者が多い一方で、基礎疾患がない症例と比較すると、高齢者、悪性腫瘍、慢性閉塞性肺疾患、慢性腎臓病、肝疾患、肥満、脂質異常症、高血圧、糖尿病を有する患者は重症化する割合が高い傾向にある。さらに、心疾患、慢性肺疾患、脳血管障害、慢性腎臓病を有する症例は死亡する割合が高い傾向にある。
　後遺症として一部の患者には、ＣＯＶＩＤ－１９の発症から６０日経過した後も嗅覚異常、味覚異常、呼吸困難、倦怠感、咳嗽の症状があり、１２０日経過しても前記の症状が継続することが報告されている。
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染は、依然として続いているが、いまだにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗ウイルス薬の供給は困難な状況にある。合併症による重症化を抑制するためにも迅速な検査によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染者を早期に発見することが極めて重要となる。また、感冒様症状を呈する他の疾病とＣＯＶＩＤ－１９とを判別するためにも、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を的確に検出することは非常に重要である。
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法として、リアルタイム逆転写ＰＣＲ法などを用いた核酸検出法が主流となっている。しかし、核酸検出法は検出感度が高い一方で、検査時間が長いこと、専用の機器の使用や操作に熟練した人材が必要であること、コストが高いことなどの問題が挙げられる。そのため、簡便かつ迅速で、高感度な検出方法が、感染者の早期発見に望まれている。そこで、核酸検出法よりも簡便かつ迅速な検出方法として、イムノクロマトグラフィー法を用いた抗原検出法が挙げられる。
　非特許文献１では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質のうち、１２１番目から４１９番のアミノ酸により形成されるＣ末端領域のヌクレオカプシドタンパク質を作製し、マウスに免疫することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体を取得したことか開示されている。得られた抗体3種類のうち２種類のエピトープは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質の２１０番目から２３１番目のアミノ酸、および、３８２番目から３９７番目のアミノ酸であると特定されている。一方で、残りの１種類の抗体のエピトープは特定されていないが、ＳＡＲＳコロナウイルスとの交差反応性がないことから、３３５番目から３４８番目のアミノ酸を認識していると推察されている。この取得した抗体を用いて、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製し、評価した結果、ｒＮＰでは１００ ｐｇ／ｍＬ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２では５．５×１０５ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ、ＰＣＲのＣｔ値では２７．１まで反応したことが記載されている。
　非特許文献２では、すでに販売されているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する、イムノクロマトグラフィー法を用いた製品による非特異的な反応について開示されている。抗原検出法で陽性が確認された３人を含む５７人の入院患者と１２人の施設スタッフを対象に、核酸検出法を実施した結果、すべての人で陰性と判定された。また、陽性が確認された３人の検査結果は、翌日以降も、抗原検出法が陽性であり核酸検出法が陰性であったことから、抗原検出法の非特異的な反応による偽陽性であったことが報告されている。これらのことから、抗原検出法はスクリーニングとして有用ではあるが、その擬陽性の発生頻度を鑑み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出には核酸検出法を実施することが望ましいと報告されている。
A. Ryo, et al., Highly specific monoclonal antibodies against SARS-CoV-2 nucleocapsid antigen for accurate diagnosis of COVID-19, Cell Reports Medicine, 29 Oct. 2020, p.33 K. Itoh, H. Tsutani, et ai., False positive results in severe acute respiratory coronavirus 2 (SARS-CoV-2) rapid antigen tests for inpatients, Journal of Infection and Chemotherapy, 22 Mar. 2021
　しかしながら、スクリーニング検査なども踏まえると、より一層、高感度で信頼性が高く、簡便な抗原検査が求められている。
　本発明は、ＣＯＶＩＤ－１９の原因ウイルスであるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を簡便に迅速かつ高感度に検出することができると共に、十分に特異的に反応する抗体を用いた免疫学的検出法の他、当該抗体を含むイムノクロマトグラフィーテストストリップおよび当該テストストリップを含むキットを提供することを目的とする。
　本発明者は、前述のような背景を鑑みて鋭意検討した結果、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体を取得し、本発明を完成するに至った。
　本発明は、以下の態様を含む。
〔１〕被検試料に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存在を検出する方法であって、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に反応する抗体またはその断片を用いた免疫学的測定法により行う、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
〔２〕前記免疫学的測定法が、前記被検試料を、前記抗体またはその断片に接触させることを含む、〔１〕に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
〔３〕前記免疫学的測定法が、２つの異なる前記抗体またはその断片を用いたサンドイッチ法である、〔２〕に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
〔４〕前記サンドイッチ法がイムノクロマトグラフィー法またはＥＬＩＳＡ法のいずれかである、〔３〕に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
〔５〕前記抗体またはその断片は、下記（１）乃至（２０）に記載される抗体またはその断片から選ばれたものである、〔１〕～〔４〕の何れか１項に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
（１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３および４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５、６および７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８、９および１０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１、１２および１３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２３、２４および２５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２６、２７および２８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２９、３０および３１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３２、３３および３４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３５、３６および３７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３８、３９および４０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４１、４２および４３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４４、４５および４６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４７、４８および４９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５０、５１および５２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５３、５４および５５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５６、５７および５８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５９、６０および６１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６２、６３および６４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６５、６６および６７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６８、６９および７０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７１、７２および７３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７４、７５および７６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７７、７８および７９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８０、８１および８２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８３、８４および８５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８６、８７および８８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８９、９０および９１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９２、９３および９４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９５、９６および９７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９８、９９および１００で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０１、１０２および１０３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０４、１０５および１０６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０７、１０８および１０９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１０、１１１および１１２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１３、１１４および１１５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（２０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１６、１１７および１１８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１９、１２０および１２１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片。
〔６〕前記被検試料が生体試料である、〔１〕乃至〔４〕の何れか１項に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
〔７〕ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に反応可能な第一の抗体またはその断片と、前記ヌクレオカプシドタンパク質に反応する第二の抗体またはその断片と、膜担体とを備え、前記第一の抗体またはその断片は前記膜担体の所定位置に予め固定されて捕捉部位を形成し、前記第二の抗体またはその断片は標識物質で標識され、かつ、前記捕捉部位から離隔した位置で前記膜担体にてクロマト展開可能なように用意されてなる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出イムノクロマトグラフィーテストストリップ。
〔８〕前記第一および第二の抗体またはその断片の少なくとも何れか一方がモノクローナル抗体またはその断片である、〔７〕に記載のイムノクロマトグラフィーテストストリップ。
〔９〕前記モノクローナル抗体またはその断片が、下記（１）乃至（２０）に記載される抗体またはその断片から選ばれたものである、〔７〕または〔８〕に記載のイムノクロマトグラフィーテストストリップ。
（１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３および４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５、６および７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８、９および１０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１、１２および１３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２３、２４および２５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２６、２７および２８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２９、３０および３１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３２、３３および３４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３５、３６および３７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３８、３９および４０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４１、４２および４３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４４、４５および４６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４７、４８および４９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５０、５１および５２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５３、５４および５５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５６、５７および５８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５９、６０および６１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６２、６３および６４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６５、６６および６７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６８、６９および７０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７１、７２および７３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７４、７５および７６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７７、７８および７９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８０、８１および８２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８３、８４および８５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８６、８７および８８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８９、９０および９１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９２、９３および９４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９５、９６および９７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９８、９９および１００で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０１、１０２および１０３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０４、１０５および１０６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０７、１０８および１０９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（１９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１０、１１１および１１２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１３、１１４および１１５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
（２０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１６、１１７および１１８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１９、１２０および１２１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片。
〔１０〕〔７〕に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出イムノクロマトグラフィーテストストリップと、被検体を展開するための展開溶媒とを少なくとも含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出用キット。
〔１１〕被検試料に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存在を検出するための抗体またはその断片であって、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に結合する抗体またはその断片。
〔１２〕前記抗体がモノクローナル抗体である、〔１１〕に記載の抗体またはその断片。
〔１３〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３および４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５、６および７で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔１４〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８、９および１０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１、１２および１３で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔１５〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔１６〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２３、２４および２５で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔１７〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２６、２７および２８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２９、３０および３１で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔１８〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３２、３３および３４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３５、３６および３７で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔１９〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３８、３９および４０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４１、４２および４３で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２０〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４４、４５および４６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４７、４８および４９で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２１〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５０、５１および５２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５３、５４および５５で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２２〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５６、５７および５８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５９、６０および６１で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２３〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６２、６３および６４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６５、６６および６７で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２４〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６８、６９および７０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７１、７２および７３で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２５〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７４、７５および７６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７７、７８および７９で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２６〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８０、８１および８２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８３、８４および８５で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２７〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８６、８７および８８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８９、９０および９１で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２８〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９２、９３および９４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９５、９６および９７で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔２９〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９８、９９および１００で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０１、１０２および１０３で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔３０〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０４、１０５および１０６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０７、１０８および１０９で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔３１〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１０、１１１および１１２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１３、１１４および１１５で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
〔３２〕前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１６、１１７および１１８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１９、１２０および１２１で示されるアミノ酸配列を含む、〔１２〕に記載の抗体またはその断片。
　本発明によれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体を用いて、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質を検出することができる。また、免疫学的検出において、非特異的な反応を抑制しつつ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を高感度に検出することができる。更に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を特異的かつ高感度に検出可能なイムノクロマトグラフィーテストストリップ、及び、それを含むキットを提供することができる。
ａはイムノクロマトグラフィーテストストリップの平面図、ｂはａで示されたイムノクロマトグラフィーテストストリップの長手方向断面図。
　本発明において、抗体の製造およびその抗体を使用する検出法における各ステップはそれぞれ、それ自体、公知の免疫学的手法に準拠して行われる。
（抗体）
　本発明の抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合するものであり、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の何れであってもよい。
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に特異的なポリクローナル抗体は、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２から抽出精製したヌクレオカプシドタンパク質、または、ヌクレオカプシドタンパク質の遺伝子を大腸菌などに導入し、遺伝子工学的に発現させて抽出精製したヌクレオカプシドタンパク質、あるいは、ヌクレオカプシドタンパク質の一部を構成するポリペプチドを免疫用抗原として動物に免疫し、その抗血清から得ることができる。
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に特異的なモノクローナル抗体は、例えば、次の方法で得ることができる。まず、前記と同様にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２から抽出精製したヌクレオカプシドタンパク質、または、遺伝子工学的に発現させて抽出精製したヌクレオカプシドタンパク質、あるいは、ヌクレオカプシドタンパク質の一部を構成するポリペプチドを免疫用抗原として使用し、マウス、ラット、ウサギおよびニワトリなどの動物に免疫する。マウスに免疫した場合、免疫された動物の脾臓細胞とミエローマ細胞を融合して得られた融合細胞をＨＡＴ含有培地で選択した後に増殖させる。増殖した細胞の培養上清を、例えば、酵素標識免疫法などにより、前記の方法で得られたヌクレオカプシドタンパク質と反応させることで、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体産生株を選別する。マウス以外の動物に免疫した場合、前記免疫用抗原を免疫された動物からリンパ組織を摘出し、抗体遺伝子を増幅することで抗体ライブラリーを作製する。その後、大腸菌に導入し、陽性クローンを選別する。
　また、融合細胞やＢ細胞からＲＮＡを抽出し、抽出したＲＮＡに基づき抗体遺伝子の重鎖および軽鎖のｃＤＮＡを合成する。この際、合成するｃＤＮＡはＣＤＲ領域などの免疫グロブリン分子の部分を発現するものでもよい。その後、重鎖発現クローンおよび軽鎖発現クローンを哺乳動物細胞に共導入することで、細胞中で重鎖および軽鎖を共発現させ、培養上清を回収することで抗体を作製することもできる。
　本発明の抗体は、抗体自体、ならびに当該抗体と実質的に同等の性能のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体断片および改変抗体の何れであってもよい。上記抗体断片は、本発明の抗体と同じまたは同等にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を特異的に認識するものであれば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖフラグメントなど、または、Ｖ領域、ＶＨ領域もしくはＣＤＲ領域などの免疫グロブリン分子の部分であってよい。また、上記改変抗体は、本発明の抗体と同等にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を特異的に認識するものであればよく、その具体例としては、キメラまたはヒト化した抗体のように動物種を改変した抗体、サブタイプを改変した抗体、アイソタイプを改変した抗体、遺伝子工学的に組換えもしくは合成された抗体、および、２種類の抗原または異なる２種類の抗原決定基の何れにも結合することが可能なように遺伝子工学的に組換えられた抗体などが挙げられる。
　本発明の抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の全長４１９アミノ酸（配列番号１）から形成されるヌクレオカプシドタンパク質を認識することができる。また、本発明の抗体はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質を認識することが可能であればよく、ヌクレオカプシドタンパク質の４１番目のアミノ酸から１８６番目のアミノ酸により形成されるＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）を認識するものであってもよい。さらには、本発明の抗体はＣ末端ドメイン（ＣＴＤ）である２４７番目のアミノ酸から４１９番目のアミノ酸により形成される領域を認識するものであってもよい。
　本発明におけるＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）を認識する抗体は、（１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３および４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５、６および７で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８、９および１０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１、１２および１３で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２３、２４および２５で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２６、２７および２８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２９、３０および３１で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３２、３３および３４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３５、３６および３７で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３８、３９および４０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４１、４２および４３で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４４、４５および４６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４７、４８および４９で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５０、５１および５２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５３、５４および５５で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（１０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５６、５７および５８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５９、６０および６１で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（１１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６２、６３および６４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６５、６６および６７で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（１３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７４、７５および７６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７７、７８および７９で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（１７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９８、９９および１００で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０１、１０２および１０３で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（１８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０４、１０５および１０６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０７、１０８および１０９で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（２０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１６、１１７および１１８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１９、１２０および１２１で示されるアミノ酸配列を含む抗体である。
　本発明におけるＣ末端ドメイン（ＣＴＤ）を認識する抗体は、（１２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６８、６９および７０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７１、７２および７３で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（１４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８０、８１および８２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８３、８４および８５で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（１６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９２、９３および９４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９５、９６および９７で示されるアミノ酸配列を含む抗体、（１９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１０、１１１および１１２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１３、１１４および１１５で示されるアミノ酸配列を含む抗体である。
　本発明におけるＮ末端ドメインおよびＣ末端ドメインの間に位置する領域を認識する抗体は、（１５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８６、８７および８８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８９、９０および９１で示されるアミノ酸配列を含む抗体である。
　第一の抗体がＮ末端ドメインを認識する抗体である場合、第二の抗体は、Ｎ末端ドメインを認識する抗体、Ｃ末端ドメインを認識する抗体、Ｎ末端ドメインおよびＣ末端ドメインの間に位置する領域を認識する抗体のいずれであってもよい。
　第一の抗体がＣ末端ドメインを認識する抗体である場合、第二の抗体は、Ｎ末端ドメインを認識する抗体、Ｃ末端ドメインを認識する抗体、Ｎ末端ドメインおよびＣ末端ドメインの間に位置する領域を認識する抗体のいずれであってもよい。
　第一の抗体がＮ末端ドメインおよびＣ末端ドメインの間に位置する領域を認識する抗体である場合、第二の抗体は、Ｎ末端ドメインを認識する抗体、Ｃ末端ドメインを認識する抗体、Ｎ末端ドメインおよびＣ末端ドメインの間に位置する領域を認識する抗体のいずれであってもよい。
（検出方法）
　本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に特異的に反応する抗体またはその断片を用いた免疫学的測定法により、被検試料に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存在を検出する方法もまた提供する。上記免疫学的測定方法は、好ましくは、被検試料を、上記本発明の抗体またはその断片と接触させることを含む。本発明の検出方法によれば、被検試料がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む場合、上記接触工程において上記抗体又はその断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２との複合体が形成されるので、例えば、この複合体を定量的又は定性的に測定することにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質、延いてはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出できる。
　本発明の検出方法における上記複合体の検出は、通常の免疫学的測定法であればいずれを採用しても行うことができる。免疫学的測定法の具体例としては、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法又はＥＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、酵素抗体法、蛍光抗体法、イムノクロマトグラフィー法（イムノクロマト法）、フロースルー法、免疫比濁法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応測定法、赤血球凝集反応法、または粒子凝集反応法などが挙げられる。特に本発明におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質の免疫学的測定法には、２つの抗体またはその断片を用いたサンドイッチ法であるＥＬＩＳＡ法、イムノクロマト法およびフロースルー法が好ましい。ＥＬＩＳＡ法は判定時間を必要とするが、感度と定量性に優れ、多検体を同時に処理することが可能である。イムノクロマト法は、感度と定量性がＥＬＩＳＡ法に劣るが、迅速かつ簡便に検出することができる。フロースルー法は、イムノクロマト法に比べると操作が煩雑であるが、ＥＬＩＳＡ法に感度と定量性は匹敵し、かつ迅速に検出することができる。
　サンドイッチ法に使用する２つの抗体またはその断片は、抗体同士の競合反応を回避し、高い反応性を有するために、2つの抗体のそれぞれが異なるエピトープを認識することが好ましい。
　本発明のイムノクロマト法は、代表的には、抗原の第一の抗原決定基にて抗原抗体反応可能な第一の抗体を予め所定位置に固定せしめて形成された捕捉部位を備える膜担体を用意し、前記抗原の第二の抗原決定基にて抗原抗体反応可能でかつ標識された第二の抗体と所定量の被検試料との混合液を、前記捕捉部位に向けて前記膜担体にてクロマト展開せしめ、前記被検試料中に前記抗原が含まれる場合に、前記抗原と前記第二の抗体との複合体を前記捕捉部位に捕捉させるイムノクロマト法において、前記第一の抗体及び前記第二の抗体として、本発明の抗体又はその断片を使用することよって実施することができる。
　本発明における被検試料は、特に制限はないが、鼻腔吸引液、鼻腔拭い液、鼻咽頭拭い液、咽頭拭い液、喀痰、唾液、気管支肺胞洗浄液など、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が存在し得る生体試料が挙げられる。これらの検体採取方法は特に限定されず、公知の方法にて採取される。例えば、鼻腔拭い液、鼻咽頭拭い液、咽頭拭い液の場合には綿棒を用いた方法が多用される。採取された被検試料は、例えばイムノクロマト法の場合には、そのまま膜担体に添加されてもよいが、展開溶媒などの適当な希釈液で希釈してから膜担体に添加されてもよい。さらには、採取された被検試料は、被検試料に含まれる生体成分に由来する粘着物や固形物を除去するために、フィルターを用いてろ過した後に膜担体に添加してもよい。
　血液が混入した被検試料を用いるときで、特に標識抗体の標識物質として金コロイドなどの呈色標識物質が用いられる場合、試料添加用部材に血球捕捉部材を配置しておくことが好ましい。これにより、赤血球が膜担体に展開されることが阻止されるので、膜担体の捕捉部位における呈色標識の集積の確認が容易となる。血球捕捉膜部材としてはカルボキシメチルセルロース膜が用いられ、具体的には、アドバンテック東洋株式会社から販売されているイオン交換濾紙ＣＭ（商品名）や、ワットマンジャパン株式会社から販売されているイオン交換セルロースペーパーなどを用いることができる。
（検出キット）
　本発明の検出方法は、免疫学的測定法に従う形態で実施できるが、迅速かつ簡便に実施できるイムノクロマト法に従う形態で実施することが好ましい。イムノクロマト法は、公知のイムノクロマトグラフィーテストストリップの構成に準拠して容易に実施できる。
　一般に、イムノクロマトグラフィーテストストリップは、抗原であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質の第一の抗原決定基にて抗原抗体反応可能な第一の抗体と、前記抗原の第二の抗原決定基にて抗原抗体反応可能でかつ標識された第二の抗体と、膜担体とを備え、前記第一の抗体は前記膜担体の所定の位置に予め固定されて捕捉部位を形成し、前記第二の抗体は前記捕捉部位から離隔した位置で前記膜担体にてクロマト展開可能なように配置されて構成される。第一の抗体および第二の抗体は、上述のように、それぞれポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよいが、何れか一方がモノクローナル抗体であることが好ましく、何れもがモノクローナル抗体であることがより好ましい。通常、第一の抗原決定基および第二の抗原決定基は、抗原上の位置および構造のいずれもが異なり、第一の抗体および第二の抗体は「ヘテロ」の組み合わせで用いられる。
　また、ヌクレオカプシドタンパク質は、ウイルス内のＲＮＡと共に多数存在しているが、抗体同士の競合反応を回避し、高い反応性を達成するためにも、第一の抗体と第二の抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に存在する異なる抗原決定基を認識する抗体であることが好ましい。
　イムノクロマトグラフィーテストストリップの例として、図１に示されるものが挙げられる。図１は例示であり、ストリップの形状、構成、使用する部材の種類、構造はこれらに限定されない。図１において、数字１は粘着シート、２は含浸部材、３は膜担体、４は吸収用部材、５は試料添加用部材、３１は捕捉部位、３２は対照捕捉部位を示している。
　例えば、膜担体３は、幅５ｍｍ、長さ３６ｍｍの細長い帯状のニトロセルロース製メンブレンフィルターが使用されており、そのクロマト展開開始点側の末端から７．５ｍｍの位置に、第一の抗体が固定され、被検体の捕捉部位３１が形成されている。さらに、膜担体３のクロマト展開開始点側の末端から１５ｍｍの位置に対照捕捉部位３２が設けられており、被検体の存否に関わらず被検試料のクロマト展開が正常に行われたことを確認できるようにしている。通常、前記第二の抗体と免疫学的に特異的に結合する物質（被検体を除く）を膜担体３に固相化することで対照捕捉部位３２を形成することができる。例えば、第二の抗体としてマウス由来の抗体を用いた場合には、マウス抗体に対する抗体を用いることで対照捕捉部位３２を形成できる。
　膜担体３として、ニトロセルロース製メンブレンフィルターを用いているが、膜担体３は被検試料をクロマト展開可能で、かつ、第一の抗体の固定が可能であり、前記捕捉部位３１および前記対照捕捉部位３２を形成できるものであればよく、他のセルロース製膜、ナイロン製膜、ガラス繊維膜などを使用することができる。
　含浸部材２は、前記第一の抗体が結合する第一の抗原決定基と異なる部位に位置する第二の抗原決定基にて前記抗原と抗原抗体反応する第二の抗体を含浸せしめた部材からなり、当該第二の抗体は、適当な標識物質によりあらかじめ標識される。
　例えば、図示の例では、含浸部材２として、幅５ｍｍ、長さ１５ｍｍのガラス繊維不織布を用いているが、これに限定されるものではなく、セルロース類布（濾紙、ニトロセルロース膜など）、ポリエチレンやポリプロピレンなどの多孔質プラスチック類布なども含侵部材２に使用できる。
　第二の抗体の標識物質としては、使用可能なものであればいかなる物質であってもよく、呈色標識物質、酵素標識物質、蛍光標識物質、放射線標識物質などが挙げられる。このうち、捕捉部位３１での色の変化を肉眼で観察することにより迅速かつ簡便に判定できる点から、呈色標識物質を用いることが好ましい。
　呈色標識物質としては、金コロイドおよび白金コロイドなどの金属コロイド、またそれらの複合金属コロイド、赤色および青色などの顔料で着色されたポリスチレンラテックスなどの合成ラテックス、天然ゴムラテックスなどのラテックスが挙げられる。これらのうち、金コロイドなどの金属コロイドが特に好ましい。
　当該含浸部材２は、前記標識物質により標識された第二の抗体の懸濁液をガラス繊維不織布などの部材に含浸し、乾燥させることなどにより作製することができる。
　図１において、クロマト展開開始点側を「上流」とし、展開溶媒が流れる方向（吸収部材４側）を下流とする。膜担体３を粘着シート１の中程に貼着し、該膜担体３の上流末端の上に、含浸部材２の下流末端を重ね合わせて連接するとともに、含浸部材２の上流部分を粘着シート１に貼着することで、本発明のイムノクロマトグラフィーテストストリップを作製することができる。
　また、膜担体３の下流部分の上面に吸収用部材４の上流末端を重ね合わせて連接するとともに、該吸収用部材４の下流側部分を粘着シート１に貼着する。さらに、含浸部材２の上面が試料添加用部材５の下流部分により被覆されるように配置するとともに、該試料添加用部材５の上流部を粘着シート１に貼着する。
　吸収用部材４は、液体を速やかに吸収し、保持できる部材であればよく、綿布、濾紙、および、ポリエチレンやポリプロピレンなどからなる多孔質プラスチック不織布などが挙げられるが、濾紙が最適である。
　試料添加用部材５は、多孔質ポリエチレンおよび多孔質ポリプロピレンなどの多孔質合成樹脂のシートまたはフィルム、ならびに、濾紙及び綿布などのセルロース製紙または織布もしくは不織布を用いることができる。
　さらに、図１のイムノクロマトグラフィーテストストリップは、試料添加用部材５と捕捉部位３１の上方にそれぞれ被検試料注入部と判定部が開口された適当なプラスチック製ケース内に収容されて提供することができる。なお、使用者の二次感染を防ぐ目的からイムノクロマトグラフィーテストストリップは、プラスチック製ケース内に収容されて提供されることが好ましい。
　本発明のイムノクロマトキットは、前記のイムノクロマトグラフィーテストストリップに加えて、被検体を展開するための展開溶媒を含むことが好ましい。
　展開溶媒は、検体希釈液としても使用することが可能であり、通常溶媒として水を含み、この溶媒に、緩衝液、無機塩、有機塩、界面活性剤、タンパク質、高分子化合物、ポリアニオン、抗菌剤、キレート剤等々から選ばれた1種または2種以上を加えてもよい。
 また、界面活性剤、タンパク質、高分子化合物、及びポリアニオンは、抗原抗体反応を促進するためまたは非特異的反応を抑制するために加えてもよい。
　特に本発明を実施する上では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２粒子を構成する脂質二重膜からなるエンベロープを溶解させ、内在するヌクレオカプシドタンパク質を遊離し、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体の抗原認識部位を露出させるために効果的なものとして、非イオン性界面活性剤を展開溶媒に含有させることが好ましい。非イオン性界面活性剤として、例えば、ポリエチレングリコールモノ－ｐ－イソオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、Ｂｒｉｊ（商標）３５（商品名）などが挙げられ、１種もしくは２種以上を加えてもよい。
　かくして、生体試料などからなる被検試料を必要に応じて展開溶媒と混合することでクロマト展開可能な混合液を得た後、当該混合液を図１に示されるイムノクロマトグラフィーテストストリップの試料添加用部材５に当該混合液を添加すると、該混合液は、該試料添加用部材５を通過して含浸部材２において、標識された第二の抗体と混合する。その際、該混合液中に被検体が存在すると、抗原抗体反応により被検体と第二の抗体との複合体が形成される。
　この複合体は、膜担体３の中をクロマト展開されて捕捉部位３１に到達し、そこに固定された第一の抗体と抗原抗体反応することで捕捉される。標識物質として金コロイドなどの呈色標識物質を使用する場合、当該呈色標識物質の集積により捕捉部位３１が発色するため、直ちに、被検体を定性的に測定することができる。さらに、イムノクロマトグラフィーテストストリップの捕捉部位３１に集積した当該呈色物質の呈色強度をイムノクロマトリーダーにより光学的に読み取ることで、呈色強度を数値化し、定量的に測定することができる。
　また、正常にクロマト展開された場合には、被検体と抗原抗体反応しなかった第二の抗体が、対照捕捉部位３２に固定化された第二の抗体に対する抗体により捕捉され、前記捕捉部位３１と同様に発色するため、正常にクロマト展開されたことが確認される。一方で、対照捕捉部位３２が発色しなかった場合、第２の抗体が展開なされていないなどの問題が発生したことが確認される。
　図示のイムノクロマトグラフィーテストストリップにおいて、第二の抗体は含浸部材２に含浸させ膜担体３上に配置されているが、捕捉部位３１から離隔した位置で膜担体３に展開可能なように用意されていればよく、図示の形態に限定されない。例えば、第二の抗体は、被検試料と展開溶媒を混合するために用意されチューブなどの容器内にあらかじめ包入され、第一の抗体があらかじめ固定された膜担体３からなるテストストリップと同梱されていてもよい。
　下記の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
（実施例１：組換えヌクレオカプシドタンパク質の発現および精製）
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質遺伝子を実装したプラスミドである、ｐｃＭＶ３－２０１９－ｎＣｏｖ－ＮＰ－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ　ｂｉｏ）をＥ．ｃｏｌｉ　ＤＨ５α　Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ　Ｃｅｌｌｓ（タカラバイオ）に導入し、カナマイシンを添加したＴｅｒｒｉｆｉｃ　ｂｒｏｔｈにて一晩培養することで、当該プラスミドを増幅した。この増幅したプラスミドを２９３Ｔ細胞にトランスフェクションし、７日後に細胞の回収および溶解を実施した。細胞溶解液を超音波処理した後に、アフィニティーカラムを用いて精製した。この精製タンパク質をリン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと称する）に対して透析し、目的の組換えヌクレオカプシドタンパク質とした。
（実施例２：組換えヌクレオカプシドタンパク質に対するモノクローナル抗体の作出）
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオプロテインとしてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ　ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＮＰ（ＣＵＳＡＢＩＯ社製）（以下、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰという）および前記実施例１にて作製した組換えヌクレオカプシドタンパク質を使用した。それぞれの組換えタンパク質を免疫用抗原として、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対するモノクローナル抗体を作出した。マウスに免疫する抗原は、事前に組換えタンパク質と等量のアジュバント（日本ＢＤ）を混合することで調製した。１００μｇの抗原量となるように組換えタンパク質とアジュバントの混合物をマウス（ＢＡＬＢ／ｃ、６週齢、日本ＳＬＣ）に複数回免疫し、その脾臓細胞を細胞融合に用いた。細胞融合には、マウスの骨髄腫細胞であるＳｐ２／０－Ａｇ１４細胞（Ｓｈｕｌｍａｎら、１９８７）を用いた。細胞融合は、マウスの脾臓細胞とＳｐ２／０－Ａｇ１４細胞混合し、Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｌ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｓｉｇｍａ）を添加することで行った。融合細胞はＨＡＴ－ＲＰＭＩ［０．１ｍＭ　Ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ、０．４μＭ　Ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎおよび０．１ｍＭ　Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅを含む血清加ＲＰＭＩ］で培養し、酵素結合抗体法（ＥＬＩＳＡ）により培養上清中の抗体産生を確認した。抗体産生陽性の細胞をＨＴ－ＲＰＭＩ［０．１ｍＭ　Ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅおよび０．１ｍＭ　Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅを含む血清加ＲＰＭＩ］にて培養し、さらに血清加培地で培養を続けた。
（実施例３：モノクローナル抗体の調製）
　実施例２にてクローニングされた細胞は、事前に２，６，１０，１４－Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｅｎｔａｄｅｃａｎｅ（キシダ化学）を接種されたマウス（ＢＡＬＢ／ｃ、リタイア、日本チャールス・リバー）の腹腔内に接種された。その後、マウスより腹水を採取し、プロテインＧカラムに供して、モノクローナル抗体を精製した。
　最終的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対するモノクローナル抗体産生細胞が８３クローン取得された。
（実施例４：抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体のアミノ酸解析）
　実施例３にて得られた抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体のうち１０クローンの相補性決定領域（ＣＤＲ）の解析を行った。実施例２にて作製されたモノクローナル抗体産生細胞を培養し、所定量の細胞数からＲＮＡを精製した。精製したＲＮＡを鋳型として、オリゴｄＴプライマーおよびＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩＩ逆転写酵素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ　ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を用いて、ｃＤＮＡを合成した。その後、抗体定常領域特異的配列３’リバースプライマーを用いて、可変部位の配列を増幅後、シークエンス解析を実施した。軽鎖の配列はＴベクターに挿入後、トランスフォーメーションされ、Ｔプラスミドを精製することで、シークエンス解析を実施した。シークエンス解析により解読したＤＮＡ配列をＩＭＧＴ／Ｖ－ＱＵＥＳＴ、ＶＢＡＳＥ２、ＩＧＢＬＡＳＴの３つのプログラムを用いて解析し、ＣＤＲの同定が一致することを確認した。ＣＤＲ配列の解析結果を表１に示す。なお、本発明において、表１に示される各抗体のＣＤＲ配列は、同じまたは同等にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を認識する限り、１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されてもよいことは当業者には明らかである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
（実施例５：抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体の反応性試験）
　実施例３にて得られた抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体の反応性を試験した。抗体の反応性を評価するために、リコンビナントタンパク質であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰ、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＡＴＣＣより取得したＶＲ－７４０株）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＡＴＣＣより取得したＶＲ－１５５８株）を所定濃度にて固相化したマイクロプレートを作製した。それぞれの固相化したマイクロプレートに、実施例３にて作製した各抗体を添加し、室温にて１時間反応させた。反応終了後、ウェル内の溶液を吸引除去した後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識された抗マウス抗体を添加し、１時間反応させた。その後、発色基質として３，３’，５，５’－テトラメチルベンジン溶液を添加し反応させ、２規定の硫酸により反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを用いて、反応停止後のマイクロプレートの各ウェルにおける４５０ｎｍ吸光度を測定した。その結果を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　表２より、実施例３にて作製された抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、リコンビナントタンパク質であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰに高い反応性を示し、陰性対照であるヒトコロナウイルス２２９ＥおよびＯＣ４３とは交差反応しないことが確認された。したがって、取得された抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合することが示された。
　さらに、配列番号１に示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質のＮ末端に位置する４１番目から１８６番目のアミノ酸からなる組換えヌクレオカプシドタンパク質（ＣＵＳＡＢＩＯ）および、Ｃ末端に位置する２２０番目から４１９番目のアミノ酸からなる組換えヌクレオカプシドタンパク質（ＣＵＳＡＢＩＯ）を用いて上記の方法により反応性を試験した。その結果を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　表３より、実施例３にて作製された抗体は、Ｎ末端に位置する４１番目から１８６番目のアミノ酸からなる組換えヌクレオカプシドタンパク質に反応することが確認された。このことから、取得された抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質のＮ末端領域、特に、Ｎ末端から４１番目乃至１８６番目のアミノ酸からなる領域に位置するエピトープを認識することが示された。
（実施例６：抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体の解離速度定数の算出）
　実施例３により作製された抗体それぞれのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する解離定数（Ｋｄ）の算出を実施した。Ｋｄ値は、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ社製のＢＬＩｔｚ　Ｓｙｓｔｅｍ（商品名）を使用し、バイオレイヤー干渉法により算出した。バイオセンサーチップとして、抗マウスＩｇＧ　Ｆｖ抗体が固相化されたものを使用した。
　測定準備として、上記バイオセンサーチップを２００μＬの緩衝液に１０分間浸漬することで、センサーチップの水和を実施した。
　抗体の解離定数を測定するため、当該バイオセンサーチップを緩衝液にて３０秒間洗浄し、初期値に校正した。その後、実施例３にて取得された抗体溶液を１００ｎＭに調製し、当該抗体溶液４μＬをバイオセンサーチップに反応し、１２０秒かけてバイオセンサーチップの表面に抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を固相化した。その後、結合していない抗体を除去するために、緩衝液で３０秒間洗浄した。続いて、バイオセンサーチップ表面に固相化した抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体に対して、１００ｎＭに調製したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰ４μＬを１２０秒間相互作用させることで抗原抗体反応を実施した後、緩衝液により１２０秒間洗浄することで抗体の結合能を測定した。測定終了後、解離定数を算出した。算出された各抗体の結合速度定数、解離速度定数および解離定数を表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　表４より、今回得られた抗体は、最も結合力の弱い抗体の解離定数が２．０ｎＭであり、最も結合力の強い抗体の解離定数が３８ｐＭであることが示された。このことから、今回取得された抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰに対して２．０ｎＭ以下の解離定数を有していることが示された。
（実施例７：ウサギ由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫細胞試料の調製）
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質としてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰを免疫用抗原として使用し、ウサギから採血を行うことで免疫細胞を取得した。ウサギに免疫する抗原は、事前に組換えタンパク質と等量のアジュバント（日本ＢＤ）を混合することで調製した。５００μｇの抗原量となるようにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰとアジュバントの混合物をウサギに複数回免疫し、採血および脾臓の摘出を行った。採血した全血から、遠心分離により末梢血単核球（ＰＢＭＣ）のみを分離して回収することで、ＰＢＭＣ試料を作製した。また、摘出した脾臓は濾過することで細胞化を行い、ウサギ脾臓試料とした。
（実施例８：ウサギ由来の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体遺伝子の取得）
　実施例７で調製したウサギ脾臓試料から、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するリンパ球を分離するため、分離溶液であるＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　Ｍｅｄｉｕｍ　１０７７（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ社）を用いて比重遠心法を行い、ウサギ脾臓試料よりリンパ球分画の分取を行うことで、リンパ球試料を調製した。ＰＢＭＣ試料およびリンパ球試料からＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰに反応するＢ細胞を分取するため、それぞれの試料と蛍光標識したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を反応させた。セルソーター（ソニー社）を用いて、蛍光標識したヌクレオカプシドタンパク質に反応するＢ細胞を測定し、反応性が確認された細胞をシングルセルソーティングによってマイクロプレートに１細胞ずつ分取した。分取した細胞に対してシングルセルＲＴ－ＰＣＲを行い、モノクローナル抗体の遺伝子取得を行った。これにより、合計２００クローンの抗体遺伝子を取得した。
（実施例９：Ｆａｂ抗体遺伝子の配列解析）
　実施例８で取得された抗体遺伝子のうち１０クローンの抗体遺伝子の重鎖および軽鎖のＤＮＡ配列を解析した。それぞれの可変領域をコードするｃＤＮＡをｐＲＳＥＴベクターに導入し、そのＤＮＡ配列をサンガー法により解析した。その後、得られたＤＮＡ配列をもとに、アミノ酸配列およびＦａｂ抗体のＣＤＲの解析を行った。解析したＤＮＡ配列からＩＭＧＴ／Ｖ－ＱＵＥＳＴ、ＶＢＡＳＥ２、ＩＧＢＬＡＳＴの３つのプログラムを用いてＣＤＲを解析し、特定されたＣＤＲが一致することを確認した。ＣＤＲ配列の解析結果を表５に示す。なお、本発明において、表５に示される各抗体のＣＤＲ配列は、同じまたは同等にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を認識する限り、１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されてもよいことは当業者には明らかである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　表５より、ＴＮ０２、ＴＮ０６、ＴＮ０９のＣＤＲ配列が１から２アミノ酸の違いしかなく、重鎖および軽鎖ＣＤＲが類似していることから、これらの抗体は抗原の認識するエピトープが同一となると判断した。
（実施例１０：無細胞発現系によるＦａｂ抗体の作製および反応性試験）
　実施例８で取得された１０クローンの抗体遺伝子に、無細胞発現用のプロモーター配列およびリボソーム結合配列を付加して鋳型を作製した。それぞれの鋳型を用いて、ＰＵＲＥｆｒｅｘ（商標）２．０（ジーンフロンティア社）により無細胞転写翻訳共役反応を行うことで、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｆａｂ抗体のタンパク質発現を行った。この際、ジスルフィド結合を形成するための最適な条件とするためにＤｓｂＣ　Ｓｅｔ（ジーンフロンティア社）を添加した。これにより、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｆａｂ抗体を取得した。そして、得られた抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｆａｂ抗体について反応性評価を行った。この際、抗体はＨ鎖をＨＡタグで標識されたものを使用した。抗体の反応性を評価するために、取得したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰを所定濃度にて固相化したマイクロプレートを作製した。このマイクロプレートに、ＨＡタグ標識された所定濃度の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｆａｂ抗体を反応させた後、抗体のＨＡダグに対するホースラディッシュペルオキシダーゼ標識された抗ＨＡタグ抗体を反応させた。その後、発色基質として３，３‘，５，５‘－テトラメチルベンジン溶液を添加し反応させ、２規定の硫酸により反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを用いて、反応停止後のマイクロプレートの各ウェルの４５０ｎｍ吸光度を測定した。
　また、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｆａｂ抗体の発現量を評価した。具体的には、得られたＨＡタグ標識された抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｆａｂ抗体を反応性評価で用いた所定濃度の５倍濃度にてマイクロプレートに固相化した。固相化した抗体のＨ鎖に付加したＨＡダグに対するホースラディッシュペルオキシダーゼ標識された抗ＨＡタグ抗体を反応させた。その後、発色基質として３，３‘，５，５‘－テトラメチルベンジン溶液を添加し反応させ、２規定の硫酸により反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを用いて、反応停止後のマイクロプレートの各ウェルの４５０ｎｍ吸光度を測定した。そして、発現量当たりの反応性を反応率として百分率で算出した。使用した抗体の濃度が反応性評価と発現量評価で異なることから、測定結果を抗体濃度で補正して反応率を算出した。その結果を表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　表６より、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰに対する吸光度が高い抗体であっても、抗体の発現量が多く、反応率が低い抗体が確認された。一方で、ヌクレオカプシドタンパク質に対する吸光度が低い抗体では、抗体発現量が少なく高い反応率を有している抗体も確認された。実際に、反応率の低い抗体であっても抗体の発現量が多い場合には、反応性が見かけ上高くなってしまう。
　また、表５で類似と判断したＴＮ０２、ＴＮ０６、ＴＮ０９の中で反応率が最も高い抗体はＴＮ０９であったため、３つの抗体のうちＴＮ０９を選択して、以降の試験を実施した。
　さらに、配列番号１に示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質のＮ末端に位置する４１番目から１８６番目のアミノ酸からなる組換えヌクレオカプシドタンパク質（ＣＵＳＡＢＩＯ）および、Ｃ末端に位置する２２０番目から４１９番目のアミノ酸からなる組換えヌクレオカプシドタンパク質（ＣＵＳＡＢＩＯ）を用いて反応性を試験した。それぞれの組換えヌクレオカプシドタンパク質を固相化したマイクロプレートに、発現させた各Ｆａｂ抗体を添加し、室温にて１時間反応させた。反応終了後、ウェル内の溶液を吸引除去した後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識された抗ウサギ抗体を添加し、１時間反応させた。その後、発色基質として３，３‘，５，５‘－テトラメチルベンジン溶液を添加し反応させ、２規定の硫酸により反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを用いて、反応停止後のマイクロプレートの各ウェルの４５０ｎｍ吸光度を測定した。実施例９の表５に示すように、ＴＮ０２およびＴＮ０６のＣＤＲ配列がＴＮ０９のＣＤＲ配列と類似していることから、これら３種類の抗体は同じエピトープに結合すると示唆された。そのため、本試験では反応率の最も高いＴＮ０９についてのみ反応領域を評価した。その結果を表７に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　表７より、ウサギ由来の遺伝子を用いて発現させた抗体のうち、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０７、ＴＮ０８およびＴＮ１０は、Ｎ末端に位置する４１番目から１８６番目のアミノ酸からなる組換えヌクレオカプシドタンパク質に反応したので、配列番号１の４１番目から１８６番目のアミノ酸配列の領域に位置するエピトープを認識していることが示された。一方で、ＴＮ０４およびＴＮ０９は、Ｃ末端に位置する２２０番目から４１９番目のアミノ酸からなる組換えヌクレオカプシドタンパク質に反応したので、配列番号１の２２０番目から４１９番目のアミノ酸配列の領域に位置するエピトープを認識していることが示された。ＴＮ０５は、どちらの組換えヌクレオカプシドタンパク質にも反応しなかった。そのため、どちらのアミノ酸配列にも属さない位置のエピトープ、すなわち、１８７番目から２１９番目のアミノ酸配列を認識していることが示唆された。
（実施例１１：抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの作製）
　実施例３にて精製された抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体および実施例１０にて作製された抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｆａｂ抗体をイムノクロマトグラフィーテストストリップの作製に用いた。
（１）白金－金コロイド粒子溶液の調製
　使用するガラス器具をすべて王水にて洗浄した。３９０ｍＬの超純水をフラスコに入れて沸騰させ、この沸騰水に塩化金酸水溶液（水溶液１リットル当たり金として１ｇ、片山化学工業株式会社製）３０ｍＬを加え、その後、１重量％クエン酸ナトリウム水溶液６０ｍＬを添加した。クエン酸ナトリウム水溶液の添加から６分４５秒後に、塩化白金酸水溶液（水溶液１リットル当たり白金として１ｇ、和光純薬工業株式会社製）３０ｍＬを加えた。さらにその５分後に、１重量％クエン酸ナトリウム水溶液６０ｍＬを加え、4時間還流を行い、白金－金コロイド懸濁液を得た。
（２）白金－金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体溶液の調製
　実施例３で得られたそれぞれの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体に対して、以下の手順で白金－金コロイド標識を行った。
　抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体のタンパク質換算重量１μｇ（以下、タンパク換算重量を示すときは、その精製タンパク質の重量分析による重量数値で示す）と上記（１）で調製した白金－金コロイド懸濁液１ｍＬを混合し、４分間室温で静置することで白金－金コロイド粒子の表面に抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を結合させた。その後、全体液量に対して最終濃度が０．５％となるように５％ＢＳＡ水溶液を加え、白金－金コロイド粒子の残余表面をＢＳＡでブロッキングすることで、白金－金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体溶液を調製した。その後、この溶液を遠心分離（５６００×ｇ、２５分間）し、白金－金コロイド標識抗体を沈殿させ、上清を除去することで白金－金コロイド標識抗体を取得した。取得した白金－金コロイド標識抗体を１０％サッカロース・１％ＢＳＡ・０．５％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００を含有する５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に懸濁することで白金－金コロイド標識抗体溶液とした。
（３）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出イムノクロマトグラフィーテストストリップの作製
　イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製するにあたり、クロマト展開用膜担体としてニトロセルロース膜、白金－金コロイド標識抗体含浸部材としてガラス繊維不織布、試料添加用部材である綿布、吸収用部材である濾紙を用意した。イムノクロマト用メンブレンは、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体１．０ｍｇ／ｍＬが含有された溶液を０．５μＬとなるように、クロマト展開用膜担体におけるクロマト展開開始点側の末端から７．５ｍｍの位置に抗体塗布装置（武蔵エンジニアリング）により、線状に塗布し、室温で乾燥させることで作製した。
　次に、ガラス繊維不織布には、白金－金コロイド標識抗体溶液を３７．５μＬとなるように含浸せしめ、凍結乾燥させることで、白金－金コロイド標識抗体含浸部材を作製した。
　上記で作製したクロマト展開用膜担体および標識抗体含浸部材、試料添加用部材、吸収用部材を用いて、図１と同様のイムノクロマトグラフィーテストストリップを作製した。
（実施例１２：イムノクロマトグラフィーテストストリップを用いた組換えＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に対する反応性試験）
　実施例３にて得られた抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を、膜担体に固相化された第一の抗体（固相化抗体）および白金－金コロイド標識抗体である第二の抗体（標識抗体）として様々な組み合わせで使用したイムノクロマトグラフィーテストストリップを実施例１１に記載の方法で作製し、反応性試験を実施した。テストストリップの評価は、１５分後における判定部への呈色の有無により行った。呈色の結果は、呈色なし（－）、微弱な呈色（±）、十分な呈色（＋）、顕著な呈色（＋＋）の４段階にて示した。一般的に、微弱な呈色が得られた場合には目視で呈色が確認できるレベルである。
（１）第二の抗体（標識抗体）にＴＡＵ００２、第一の抗体（固相化抗体）にＴＡＵ００１またはＴＡＵ００４を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの反応性試験
　実施例１１に記載の方法で、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＴＡＵ００２は白金－金コロイド標識され、ＴＡＵ００１またはＴＡＵ００４は膜担体に固相化された。これらを用いて、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製し、作製されたテストストリップに抗原として４ｎｇ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰを９０μＬ滴下することで、反応性を評価した。その結果を表８に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　表８の結果より、白金－金コロイド標識抗体としてＴＡＵ００２を用いた場合、ＴＡＵ００１およびＴＡＵ００４を膜担体に固相化することで呈色が得られたことから、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質を検出できることが示された。さらに、標識抗体及び固相化抗体の組み合わせにより、反応性にわずかな違いが生じることが確認された。
（２）第二の抗体（標識抗体）にＴＡＵ００３、第一の抗体（固相化抗体）にＴＡＵ００１またはＴＡＵ００４を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの反応性試験
　実施例１１に記載の方法で、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＴＡＵ００３は白金－金コロイド標識され、ＴＡＵ００１またはＴＡＵ００４は膜担体に固相化された。これらを用いて、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製し、作製されたテストストリップに抗原として４ｎｇ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰを９０μＬ滴下することで、反応性を評価した。その結果を表９に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　表９の結果より、白金－金コロイド標識抗体としてＴＡＵ００３を用いた場合、ＴＡＵ００１およびＴＡＵ００４を膜担体に固相化することで呈色が得られたことから、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質を検出できることが示された。同様の方法にて試験を実施した表８と比較すると、ＴＡＵ００３を標識抗体として利用することで、検出感度を向上できることが示された。
（３）第二の抗体（標識抗体）にＴＡＵ００４、第一の抗体（固相化抗体）にＴＡＵ００１、ＴＡＵ００２、ＴＡＵ００３、ＴＡＵ００５、ＴＡＵ００６を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの反応性試験
　実施例１１に記載の方法で、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＴＡＵ００４は白金－金コロイド標識された。そして、ＴＡＵ００１、ＴＡＵ００２、ＴＡＵ００３、ＴＡＵ００５またはＴＡＵ００６を膜担体に固相化した。これらを用いて、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製し、作製されたテストストリップに抗原として４ｎｇ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰを９０μＬ滴下することで、反応性を評価した。その結果を表１０に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　表１０の結果より、白金－金コロイド標識抗体としてＴＡＵ００４を用いた場合、いずれの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を膜担体に固相化することでも呈色が得られたことから、いずれの組み合わせにおいてもＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質を検出できることが示された。また、ＴＡＵ００４を白金－金コロイド標識抗体として使用することで、様々な抗体と組み合わせて使用することができることが示された。同様の方法にて試験を実施した上記表９に比べて、ＴＡＵ００４を標識抗体として利用することで、検出感度を向上したまま、様々な抗体と組み合わせることが可能であることが示された。
（４）第二の抗体（標識抗体）にＴＡＵ００５、第一の抗体（固相化抗体）にＴＡＵ００１またはＴＡＵ００４を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの反応性試験
　実施例１１に記載の方法で、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＴＡＵ００５は白金－金コロイド標識され、ＴＡＵ００１またはＴＡＵ００４は膜担体に固相化された。これらを用いて、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製し、作製されたテストストリップに抗原として４ｎｇ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰを９０μＬ滴下することで、反応性を評価した。その結果を表１１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　表１１の結果より、白金－金コロイド標識抗体としてＴＡＵ００５を用いた場合、ＴＡＵ００１およびＴＡＵ００４を膜担体に固相化することで呈色が得られたことから、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質を検出できることが示された。しかし、前記表９に示したＴＡＵ００３を用いた場合と同程度であった。
（５）第二の抗体（標識抗体）にＴＡＵ００６、第一の抗体（固相化抗体）にＴＡＵ００１またはＴＡＵ００４を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの反応性試験
　実施例１１に記載の方法で、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＴＡＵ００５は白金－金コロイド標識され、ＴＡＵ００１またはＴＡＵ００４は膜担体に固相化された。これらを用いて、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製し、作製されたテストストリップに抗原として４ｎｇ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リコンビナントＮＰを９０μＬ滴下することで、反応性を評価した。その結果を表１２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　表１２の結果より、白金－金コロイド標識抗体としてＴＡＵ００６を用いた場合、ＴＡＵ００１およびＴＡＵ００４を膜担体に固相化することで呈色が得られたことから、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質を検出できることが示され、ＴＡＵ００６を用いた場合では、標識抗体として前記ＴＡＵ００２を用いた場合と同様の結果がえられた。
　実施例１２に示した結果より、実施例３にて得られた抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体から２種類の抗体を選択してイムノクロマトグラフィーテストストリップを作製した場合、様々な抗体の組み合わせにおいて呈色が確認された。また、抗体の組み合わせにより、より高感度にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質を検出することができることが示された。さらに、ＴＡＵ００４を固相化抗体である第一の抗体または標識抗体である第二の抗体のいずれかに用いることで、様々な抗体と組み合わせることが可能であり、高感度にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出できることが示された。
（実施例１３：検体を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの反応性評価）
　実施例１１に記載の方法で、実施例１０で作製された抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を白金－金コロイド標識し、異なる抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を膜担体に固相化して、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製した。作製したテストストリップに生体試料として陽性検体９０μＬを滴下することで反応性を評価した。この際、検体種として鼻咽頭拭い液検体および唾液検体を使用した。テストストリップの評価は、１５分後における判定部への呈色の有無により行い、呈色の結果は、呈色なし（－）、微弱な呈色（±）、十分な呈色（＋）、顕著な呈色（＋＋）の４段階にて判定した。その結果を表１３および表１４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
　表１３および表１４より、どちらの検体種を用いた場合でも多くの組み合わせで呈色が確認された。一般的に、唾液検体を用いると鼻咽頭検体よりも検出が困難であることが言われている。しかし、唾液検体を用いた場合でも、本発明の抗体を組み合わせることで、検体に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を検出することができた。このことから、実施例１０で得られた抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップでは、唾液検体を用いた場合でも、鼻咽頭検体と同様にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を検出する性能を有していると示された。
　上記と同様の方法により、実施例３および実施例１０で作製されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を様々な組み合わせで使用し、イムノクロマトグラフィー法で測定することでイムノクロマトグラフィーテストストリップの性能を評価した。テストストリップの評価は、１５分後における判定部への呈色の有無により行い、呈色の結果は、呈色なし（－）、微弱な呈色（±）、十分な呈色（＋）、顕著な呈色（＋＋）の４段階にて判定した。その結果を表１５から表２３に示す。この際、使用した検体はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２陽性鼻咽頭検体を用いた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
　表１５から表２３の結果より、いずれの抗体を第二の抗体として用いたとしても様々な抗体の組み合わせで呈色が確認された。ＴＡＵ００７を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００８、ＴＮ０３、ＴＮ０５、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ０９が好ましい。
　ＴＡＵ００８を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ０９、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０１を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０９、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０３を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０９、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０４を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０５、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ０９、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０５を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０４、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０８を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０９が好ましい。
　ＴＮ０９を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０４、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ１０を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０７、ＴＮ０９が好ましい。
　これらのことから、得られた抗体の様々な組み合わせで鼻咽頭検体に含まれる抗原を検出できることが示された。
さらに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２陽性唾液検体に対して、実施例３および実施例８で作製されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を様々な組み合わせで使用し、イムノクロマトグラフィー法で測定することでイムノクロマトグラフィーテストストリップの唾液検体に対する性能を評価した。テストストリップの評価は、１５分後における判定部への呈色の有無により行い、呈色の結果は、呈色なし（－）、微弱な呈色（±）、十分な呈色（＋）、顕著な呈色（＋＋）の４段階にて判定した。その結果を表２４から表３２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000029
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000030
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000031
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000032
　表２４から表３２の結果より、唾液検体を用いた場合でも、いずれの抗体を第二の抗体として用いたとしても、様々な抗体の組み合わせで呈色が確認された。ＴＡＵ００７を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００８、ＴＮ０３、ＴＮ０５、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ０９が好ましい。
　ＴＡＵ００８を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ０９、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０１を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０９、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０３を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０９、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０４を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０５、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ０９、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０５を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００８、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０４、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ０８を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０９が好ましい。
　ＴＮ０９を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０４、ＴＮ０７、ＴＮ０８、ＴＮ１０が好ましい。
　ＴＮ１０を第二の抗体として用いた場合には、第一の抗体はＴＡＵ００７、ＴＡＵ００８、ＴＮ０１、ＴＮ０３、ＴＮ０４、ＴＮ０５、ＴＮ０７、ＴＮ０９が好ましい。
これらのことから、得られた抗体の様々な組み合わせで唾液検体に含まれる抗原を検出できることが示された。また、抗体の組み合わせによる呈色強度は、鼻咽頭検体を用いた場合と唾液検体を用いた場合で差が見られる組み合わせも示された。しかし、検体種に関わらず記載したすべての抗体の組み合わせで、検体に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を検出することができた。このことから、本発明の抗体を組み合わせることで、鼻咽頭検体および唾液検体に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を高感度に検出することができる。
（実施例１４：陰性検体を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの非特異的な反応性評価）
　実施例１１に記載の方法で、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＴＡＵ００４を第二の抗体として白金－金コロイド標識し、ＴＡＵ００５を第一の抗体として膜担体に固相化し、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製した。作製したテストストリップに生体試料である陰性検体９０μＬを滴下することで反応性を評価した。この際、検体種として鼻咽頭拭い液検体および唾液検体を使用し、それぞれ５０例実施した。テストストリップの評価は、１５分後における判定部への呈色の有無により行った。呈色の結果は、呈色なし（－）、微弱な呈色（±）、十分な呈色（＋）、顕著な呈色（＋＋）の４段階にて示し、微弱な呈色が得られた場合には非特異的な反応として判定した。その結果を表３３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000033
　表３３の結果より、作製したイムノクロマトグラフィーテストストリップに様々な検体種の陰性検体を滴下した場合、５０検体全てにおいて呈色が確認されなかった。このことから、検体種に関係なく、ＴＡＵ００４およびＴＡＵ００５を使用したイムノクロマトグラフィーテストストリップは、検体成分との交差反応による非特異的な反応が確認されなかった。
　これらの検体において、国立感染症研究所が開発した遺伝子検査法（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２遺伝子検出・ウイルス分離マニュアルＶｅｒ．１．１）に基づく核酸増幅法（ＰＣＲ法）を実施した結果、５０検体全てにおいて陰性が確認された。
（実施例１５：臨床検体を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの反応性評価）
　臨床的にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染が疑われる患者を対象として、患者の鼻咽頭を滅菌綿棒により擦過することで、鼻咽頭拭い液を採取した。鼻咽頭拭い液を採取した綿棒を検体抽出液に抽出して、被検試料を調製した。そして、実施例１４と同様に作製したイムノクロマトグラフィーテストストリップを用いることにより、被検試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質の検出を実施した。なお、対照として、本発明の抗体とは別の抗体を使用して製品販売されているイムノエース（商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（抗原定性検出キット、タウンズ）を用いた。加えて、採取した臨床検体は、国立感染症研究所が開発した遺伝子検査法（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２遺伝子検出・ウイルス分離マニュアルＶｅｒ．１．１）に基づく核酸増幅法（ＰＣＲ法）を実施し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存在を確認した。各被検試料を用いたイムノクロマトグラフィーの目視判定結果、および、被検試料のＰＣＲ法におけるＣｔ値を表３４に示す。テストストリップの評価は、１５分後における判定部への呈色の有無により行い、呈色の結果は、呈色なし（－）、微弱な呈色（±）、十分な呈色（＋）、顕著な呈色（＋＋）の４段階にて示した。ＰＣＲ法の結果は、検出できなかったものに関しては、ＮＤと記載し、検出できたものに関してはＣｔ値を記載した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000034
　表３４の結果より、イムノエース（商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２では１０検体中３検体で呈色が確認された。一方で、実施例１４にて作製したテストプレートを用いて、同一の検体を反応させたところ、５検体にて呈色が確認された。イムノエース（商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２にて検出することができなかった２検体のＣｔ値は３３．６３および２４．０８であった。このことから、実施例１４にて作製したテストプレートは、既に製品として販売されている抗原検出キットよりも検出感度が上昇していることが示された。また、臨床検体３においても呈色強度が上昇していることから、検出感度が向上していることが示された。ＰＣＲにて検出されていない臨床検体１および９に関しては、どちらのテストプレートを用いた場合でも呈色が確認されていないことから、検体に含まれるその他の成分とは交差反応性が低いことが推察された。
（実施例１６：唾液検体を用いたイムノクロマトグラフィーテストストリップの反応性評価）
　実施例１２に記載の方法で、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＴＡＵ００８を第二の抗体として白金－金コロイド標識し、ＴＡＵ００７を第一の抗体として膜担体に固相化し、イムノクロマトグラフィーテストストリップを作製した。臨床的にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染が疑われる患者を対象として、患者の吐出した唾液を滅菌綿棒に吸収することで採取し、唾液を採取した綿棒を検体抽出液にて抽出して、作製したイムノクロマトグラフィーテストストリップの被検試料とした。同時に、同一患者の鼻咽頭を滅菌綿棒により擦過することで、鼻咽頭拭い液を採取した。鼻咽頭拭い液を採取した綿棒を検体抽出液にて抽出することで、イムノエース（商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（タウンズ）の被検試料とした。調製したそれぞれの被検試料を用いて、イムノエース（商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（タウンズ）および作製したイムノクロマトグラフィーテストストリップの被検試料に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する性能評価を実施した。この際に対照としてイムノエース（商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（タウンズ）を用いた。加えて、採取した臨床検体は、国立感染症研究所が開発した遺伝子検査法（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２遺伝子検出・ウイルス分離マニュアルＶｅｒ．１．１）に基づく核酸増幅法（ＰＣＲ法）を実施し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存在を確認した。各被検試料を用いたイムノクロマトグラフィーの目視判定結果、および、被検試料のＰＣＲ法におけるＣｔ値を表３５に示す。テストストリップの評価は、１５分後における判定部への呈色の有無により行い、呈色の結果は、呈色なし（－）、微弱な呈色（±）、十分な呈色（＋）、顕著な呈色（＋＋）の４段階にて示した。ＰＣＲ法の結果は、検出できなかったものに関しては、ＮＤと記載し、検出できたものに関してはＣｔ値を記載した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000035
　表３５より、鼻咽頭検体を用いたイムノエース（商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２では、３０検体中１８検体で呈色が確認された。一方で、実施例１６で作製したテストストリップを用いて、同一被験者の唾液検体を反応させたところ、３０検体のうち２１検体にて呈色が確認された。このことから、唾液検体を用いた場合でも鼻咽頭検体を用いた場合と同様に検出することができた。また、鼻咽頭に含まれるウイルス量が多く、唾液に含まれるウイルス量が少ない被験者２５および３０において、本実施例で作製したテストストリップでは呈色が強くなった。これらのことから、本実施例で作製したテストストリップは、既に製品として販売されている抗原検出キットよりも検出感度が向上していることが示された。また、ＰＣＲで検出されていない検体において、本実施例で作製したイムノクロマトグラフィーテストストリップを用いた場合でも呈色が確認されなかったことから、検出感度が向上しつつ非特異的な呈色を抑制できたことが推察された。
　本発明によれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体、この抗体を用いたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫学的検出法およびキットが提供される。これにより、特殊な機器および熟練した技術を必要とせずに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を迅速かつ特異的に検出することが可能となる。
１　粘着シート
２　含浸部材
３　膜担体
３１　捕捉部位
３２　対照捕捉部位
４　吸収用部材
５　試料添加用部材

Claims (32)

  1. 被検試料に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存在を検出する方法であって、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に反応する抗体またはその断片を用いた免疫学的測定法により行う、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
  2. 前記免疫学的測定法が、前記被検試料を、前記抗体またはその断片に接触させることを含む、請求項１に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
  3. 前記免疫学的測定法が、２つの異なる前記抗体またはその断片を用いたサンドイッチ法である、請求項２に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
  4. 前記サンドイッチ法がイムノクロマトグラフィー法またはＥＬＩＳＡ法のいずれかである、請求項３に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
  5. 前記抗体またはその断片は、下記（１）乃至（２０）に記載される抗体またはその断片から選ばれたものである、請求項１～４の何れか１項に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
    （１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３および４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５、６および７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８、９および１０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１、１２および１３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２３、２４および２５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２６、２７および２８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２９、３０および３１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３２、３３および３４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３５、３６および３７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３８、３９および４０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４１、４２および４３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４４、４５および４６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４７、４８および４９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５０、５１および５２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５３、５４および５５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５６、５７および５８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５９、６０および６１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６２、６３および６４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６５、６６および６７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６８、６９および７０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７１、７２および７３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７４、７５および７６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７７、７８および７９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８０、８１および８２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８３、８４および８５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８６、８７および８８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８９、９０および９１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９２、９３および９４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９５、９６および９７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９８、９９および１００で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０１、１０２および１０３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０４、１０５および１０６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０７、１０８および１０９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１０、１１１および１１２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１３、１１４および１１５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （２０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１６、１１７および１１８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１９、１２０および１２１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片。
  6. 前記被検試料が生体試料である、請求項１乃至４の何れか１項に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法。
  7. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に反応可能な第一の抗体またはその断片と、前記ヌクレオカプシドタンパク質に反応する第二の抗体またはその断片と、膜担体とを備え、前記第一の抗体またはその断片は前記膜担体の所定位置に予め固定されて捕捉部位を形成し、前記第二の抗体またはその断片は標識物質で標識され、かつ、前記捕捉部位から離隔した位置で前記膜担体にてクロマト展開可能なように用意されてなる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出イムノクロマトグラフィーテストストリップ。
  8. 前記第一および第二の抗体またはその断片の少なくとも何れか一方がモノクローナル抗体またはその断片である、請求項７に記載のイムノクロマトグラフィーテストストリップ。
  9. 前記モノクローナル抗体またはその断片が、下記（１）乃至（２０）に記載される抗体またはその断片から選ばれたものである、請求項７または８に記載のイムノクロマトグラフィーテストストリップ。
    （１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３および４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５、６および７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８、９および１０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１、１２および１３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２３、２４および２５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２６、２７および２８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２９、３０および３１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３２、３３および３４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３５、３６および３７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３８、３９および４０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４１、４２および４３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４４、４５および４６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４７、４８および４９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５０、５１および５２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５３、５４および５５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５６、５７および５８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５９、６０および６１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１１）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６２、６３および６４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６５、６６および６７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１２）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６８、６９および７０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７１、７２および７３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１３）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７４、７５および７６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７７、７８および７９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１４）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８０、８１および８２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８３、８４および８５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１５）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８６、８７および８８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８９、９０および９１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１６）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９２、９３および９４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９５、９６および９７で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１７）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９８、９９および１００で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０１、１０２および１０３で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１８）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０４、１０５および１０６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０７、１０８および１０９で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （１９）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１０、１１１および１１２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１３、１１４および１１５で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片、
    （２０）重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１６、１１７および１１８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１９、１２０および１２１で示されるアミノ酸配列を含む抗体またはその断片。
  10. 請求項７に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出イムノクロマトグラフィーテストストリップと、被検体を展開するための展開溶媒とを少なくとも含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出用キット。
  11. 被検試料に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存在を検出するための抗体またはその断片であって、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質に結合する抗体またはその断片。
  12. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
  13. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３および４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５、６および７で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  14. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８、９および１０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１、１２および１３で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  15. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  16. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２３、２４および２５で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  17. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２６、２７および２８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２９、３０および３１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  18. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３２、３３および３４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３５、３６および３７で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  19. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３８、３９および４０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４１、４２および４３で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  20. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４４、４５および４６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４７、４８および４９で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  21. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５０、５１および５２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５３、５４および５５で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  22. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５６、５７および５８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号５９、６０および６１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  23. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６２、６３および６４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６５、６６および６７で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  24. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６８、６９および７０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７１、７２および７３で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  25. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７４、７５および７６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７７、７８および７９で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  26. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８０、８１および８２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８３、８４および８５で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  27. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８６、８７および８８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号８９、９０および９１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  28. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９２、９３および９４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９５、９６および９７で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  29. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号９８、９９および１００で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０１、１０２および１０３で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  30. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０４、１０５および１０６で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０７、１０８および１０９で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  31. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１０、１１１および１１２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１３、１１４および１１５で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
  32. 前記抗体またはその断片の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１６、１１７および１１８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１１９、１２０および１２１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその断片。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023167317A1 (ja) * 2022-03-04 2023-09-07 公立大学法人横浜市立大学 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021221082A1 (ja) * 2020-04-30 2021-11-04 公立大学法人横浜市立大学 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシド断片および該断片を用いて抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を検出する方法およびキット
WO2022004622A1 (ja) * 2020-06-29 2022-01-06 公立大学法人横浜市立大学 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法および該抗体を含むキット
WO2022107737A1 (ja) * 2020-11-17 2022-05-27 富士フイルム株式会社 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出キットおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021221082A1 (ja) * 2020-04-30 2021-11-04 公立大学法人横浜市立大学 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシド断片および該断片を用いて抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を検出する方法およびキット
WO2022004622A1 (ja) * 2020-06-29 2022-01-06 公立大学法人横浜市立大学 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法および該抗体を含むキット
WO2022107737A1 (ja) * 2020-11-17 2022-05-27 富士フイルム株式会社 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出キットおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A. RYO ET AL.: "Highly specific monoclonal antibodies against SARS-CoV-2 nucleocapsid antigen for accurate diagnosis of COVID-19", CELL REPORTS MEDICINE, 29 October 2020 (2020-10-29), pages 33
K. ITOHH. TSUTANI: "False positive results in severe acute respiratory coronavirus 2 (SARS-CoV-2) rapid antigen tests for inpatients", JOURNAL OF INFECTION AND CHEMOTHERAPY, 22 March 2021 (2021-03-22)
SANO, TAKESHI : "Comparison of novel coronavirus rapid antigen test kits", JAPANESE JOURNAL OF MEDICINE AND PHARMACEUTICAL SCIENCE, vol. 78, no. 5, 27 April 2021 (2021-04-27), JP , pages 627 - 632, XP009542282, ISSN: 0389-3898 *
山川賢太郎ほか, イムノクロマト法を用いた新型コロナウイルスSARS-CoV-2抗原検出試薬の開発, 医学と薬学, 27 May 2020, vol. 77, no. 6, pages 937-944, (Japanese Journal of Medicine and Pharmaceutical Science.), non-official translation (YAMAKAWA, Kentaro et al. Development of Novel Coronavirus SARS-CoV-2 Antigen Detection Reagent Using Immunochromatography.) *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023167317A1 (ja) * 2022-03-04 2023-09-07 公立大学法人横浜市立大学 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット

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