JP2023128698A - 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット - Google Patents
変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023128698A JP2023128698A JP2022033238A JP2022033238A JP2023128698A JP 2023128698 A JP2023128698 A JP 2023128698A JP 2022033238 A JP2022033238 A JP 2022033238A JP 2022033238 A JP2022033238 A JP 2022033238A JP 2023128698 A JP2023128698 A JP 2023128698A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- fragment
- sars
- cov
- combination
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 65
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 15
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 title claims description 9
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 title claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 148
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims abstract description 98
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 47
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 36
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 34
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 19
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 16
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 7
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 6
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 5
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 4
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 4
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 11
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 92
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 34
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 24
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 14
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 12
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 9
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 244000309467 Human Coronavirus Species 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 6
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 6
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 6
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 6
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 5
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 4
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 4
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 4
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 4
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108091006197 SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein Proteins 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000003016 alphascreen Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- 108010065868 RNA polymerase SP6 Proteins 0.000 description 2
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 description 2
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000638154 Homo sapiens Transmembrane protease serine 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- 206010049190 Red blood cell agglutination Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- 101001024637 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000008910 Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102100031989 Transmembrane protease serine 2 Human genes 0.000 description 1
- 240000001417 Vigna umbellata Species 0.000 description 1
- 235000011453 Vigna umbellata Nutrition 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000003130 blood coagulation factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000011841 epidemiological investigation Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000005399 mechanical ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000012129 rapid antigen test Methods 0.000 description 1
- 239000002964 rayon Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【課題】本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するための、感度が高くかつ特異性が高い手段を提供することを課題とする。【解決手段】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に結合する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ、該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を試料から検出する方法、および該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するためのキット等により、上記課題が達成された。【選択図】なし
Description
本発明は、変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット等に関する。
２０１９年に発生が確認された新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の原因となるウイルスである。同ウイルス感染を判定する方法として、ウイルス遺伝子を検出するリアルタイムＰＣＲ法等の遺伝子検査と、抗原抗体反応を利用して、ウイルス抗原タンパク質を検出する抗原検査法がある（非特許文献１）。抗原検査法は遺伝子検査法と比べ、コストおよび検出時間の面でメリットがあるものの、感度に劣るという課題がある。
抗原抗体反応にて検出するウイルスの標的タンパク質としてはウイルス粒子内部に存在し、構成タンパク質の中で最も量の多い、ヌクレオカプシドタンパク質（ＮＰ）が主に用いられる。ＮＰは他のウイルスタンパク質と比べて、比較的変異は少ないものの、一部のアミノ酸配列には変異が認められており、ウイルスの変異によって抗原検査試薬の検出能が低下することや、ウイルスの株間で検出感度が異なることが報告されている。（非特許文献２、３）
また、抗原検査試薬に適用される検体として、鼻咽頭拭い液、鼻腔拭い液、唾液検体が挙げられる。これらの体液中では、ＮＰが分解されるため、感度が落ちることが問題とされる。この内、唾液検体は侵襲を伴わずに採取できるというメリットがあるが、鼻咽頭拭い液検体と比べるとさらに感度に劣るという課題が挙げられる（非特許文献４）。
その他、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮＰに対する抗体の作製に関する論文が公開されている（非特許文献５）。しかしながら、本発明の抗体とはエピトープが異なっており、感度が十分でなく、また、ＭＥＲＳやＳＡＲＳとの交差反応が認められており特異性が十分とは言えない。
病原体検出マニュアル ２０１９－ｎＣｏＶ Ｖｅｒ．２．９．１（国立感染症研究所、２０２０年３月１９日）
Yamayoshi S, Sakai-Tagawa Y, Koga M, et al. Comparison of Rapid Antigen Tests for COVID-19. Viruses 2020, Vol 12, Page 1420. 2020 Dec 10 ;12(12):1420
Bourassa L, Perchetti GA, Phung Q, et al. A SARS-CoV-2 Nucleocapsid Variant that Affects Antigen Test Performance. J Clin Virol. 2021 Aug 1;141:104900.
Antonios K, Giorgia C, Rene B, et al. Sensitivity of Rapid Antigen Testing and RT-PCR Performed on Nasopharyngeal Swabs versus Saliva Samples in COVID-19 Hospitalized Patients: Results of a Prospective Comparative Trial (RESTART). Microorganisms 2021, 9, 1910.
Li M., et al., medRxiv preprint. doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.20.20025999
２０１９－ｎＣｏＶ（新型コロナウイルス）感染を疑う患者の検体採取・輸送マニュアル（国立感染症研究所、２０２０年４月１６日）
本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するための、感度が高くかつ特異性が高い手段を提供することを課題とする。
本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質（ＮＰ）のＣ末端側（２０８－４１９）を除いた人工タンパク質を作製した。ここで、本発明者らは、ＮＰのＮ末端側が、唾液等の体液中でＣ末端側より安定であることを見出し、これに着目することによって、次に、作製した人工タンパク質をマウスに免疫し、常法に従ってＮＰのＮ末端側（アミノ酸配列：１－２０７）をエピトープとするモノクローナル抗体を作製した。そして、開発した抗体を用いて、ウイルスの抗原タンパク質を、検出したところ、驚くべきことに、ウイルスの株の変異によらずに、そして、既存の抗体よりも高感度かつ特異性高く、検出する方法を見出した。
さらに、唾液検体中においてＮＰがＣ末端側から分解を受けることを確認し、上述したエピトープの抗体を用いることで、唾液検体等の体液中であってもＮＰを高感度に検出できることを発見し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下に関する。
すなわち、本発明は以下に関する。
［１］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に結合する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせであって、該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせの認識するエピトープが、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～２０７番目にある、前記抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
［２］エピトープが、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～５０番目、５１～１０５番目、１０６～１６０番目、または１６１～２０７番目にある、［１］に記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
［３］エピトープが、配列番号１で表されるアミノ酸配列の５１～１０５番目にある、［１］に記載の抗体またはその断片と、１０６～１６０番目にある、［１］または［２］に記載の抗体またはその断片との組み合わせ。
［４］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に特異的に結合する、［１］～［３］のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
［５］抗体が、モノクローナル抗体である、［１］～［４］のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
［５］抗体が、モノクローナル抗体である、［１］～［４］のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
［６］その断片が、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ／ｃフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントである、［１］～［５］のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
［７］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を試料から検出する方法であって、試料を、［１］～［６］のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと接触させる工程を含む、前記方法。
［８］試料が、生体試料である、［７］に記載の方法。
［９］試料が、体液中の試料である、［７］または［８］に記載の方法。
［７］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を試料から検出する方法であって、試料を、［１］～［６］のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと接触させる工程を含む、前記方法。
［８］試料が、生体試料である、［７］に記載の方法。
［９］試料が、体液中の試料である、［７］または［８］に記載の方法。
［１０］ＥＬＩＳＡ法、ＣＬＥＩＡ法、イムノクロマト法およびフィルター抗原アッセイ法からなる群から選択される少なくとも１つの免疫学検査によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出する工程をさらに含む、［７］～［９］のいずれかに記載の方法。
［１１］［１］～［６］のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するためのキット。
［１２］イムノクロマトストリップの形態である、［１１］に記載のキット。
［１１］［１］～［６］のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するためのキット。
［１２］イムノクロマトストリップの形態である、［１１］に記載のキット。
本発明のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に結合する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ、該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を試料から検出する方法、および該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するためのキット等により、変異株に対しても反応性を有し、偽陰性と判定されるリスクが低下する。また、従来の抗体よりも高感度にウイルスタンパク質を検出可能である。さらに、唾液検体等の体液中のウイルスタンパク質の検出能が向上する。
すなわち本発明により、遺伝子検査法と比べ、コストおよび検出時間の面でメリットがあり、タンパク質の変異にかかわらず感度および特異性に優れ、かつ、鼻咽頭拭い液、鼻腔拭い液、咽頭拭い液、唾液検体等の体液中においても高い感度を有し、特に侵襲を伴わずに採取できるというメリットがある唾液検体においても、高い感度を維持できる抗原検査試薬を提供することが可能である。
本明細書において別様に定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術用語および科学用語は、当業者が通常理解しているものと同じ意味を有する。本明細書中で参照する全ての特許、出願および他の出版物や情報は、その全体を参照により本明細書に援用する。
［ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に結合する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合せ］
本発明の一側面は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に結合する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせであって、該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせの認識するエピトープが、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～２０７番目にある、前記抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ（以下、「本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ」と記す場合がある）に関する。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせの認識するエピトープは、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～５０番目、５１～１０５番目、１０６～１６０番目、または１６１～２０７番目にある。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に特異的に結合する。
本発明の一側面は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に結合する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせであって、該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせの認識するエピトープが、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～２０７番目にある、前記抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ（以下、「本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ」と記す場合がある）に関する。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせの認識するエピトープは、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～５０番目、５１～１０５番目、１０６～１６０番目、または１６１～２０７番目にある。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に特異的に結合する。
本発明において、「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２」は、中国武漢市付近で２０１９年に発生が初めて確認された、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに属するコロナウイルスを指し、「２０１９新型コロナウイルス」と互換的に用いられる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ヒトに対して病原性があり、急性呼吸器疾患（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こす。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、他のコロナウイルスと同様に、スパイク、ヌクレオカプシド、内在性膜タンパク質、エンベロープタンパク質、およびＲＮＡより構成されている。このうちヌクレオカプシドがＲＮＡと結合してＮＰを形成し、脂質と結合したスパイク、内在性膜タンパク質、エンベロープタンパク質がその周りを取り囲んでエンベロープを形成する。なお、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のゲノム配列はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３で公開されている。
本発明において、「ヌクレオカプシドを構成するタンパク質」は、ヌクレオカプシドおよびＲＮＡからなる複合体を構成するタンパク質を指し、「ＮＰ」と互換的に用いられる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰのアミノ酸配列は配列番号１で表される。
本発明において、「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片」は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰのアミノ酸配列（配列番号１）における、唾液の影響を受けやすいＣ末端側（２０８－４１９）を除いた領域（配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～２０７番目の領域）からなるタンパク質の断片を指す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片は、配列番号２で表されるアミノ酸配列に対して、９０％以上の配列同一性を有する。正確、簡便、かつ迅速にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点から、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片は、配列番号２で表されるアミノ酸配列に対して、９５％以上の配列同一性を有することが好ましく、９８％以上の配列同一性を有することが特に好ましく、１００％の配列同一性を有することがさらに好ましい。一態様において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片は、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるものである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰのアミノ酸配列と他のコロナウイルス由来ＮＰのアミノ酸配列との間で同一性が低いＣ末端側とは異なる部分を認識する抗体を得るために該断片を作製し、これを免疫原として常法に従って本発明の抗体またはその断片を得ることができる。
本発明の抗体は、例えば、完全な免疫グロブリン分子、好ましくはＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡまたはＩｇＧであり、より好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である。また、本発明の抗体は、キメラのおよびヒト化した抗体等の、修飾および／または変化した抗体で有り得る。また、本発明の抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、修飾または変化したモノクローナルまたはポリクローナル抗体、または組換えもしくは合成的に産生したまたは合成した抗体であり得る。本発明の抗体は、正確、簡便、かつ迅速にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点から、モノクローナル抗体であることが好ましい。
本発明の抗体の断片は、ＦａｂフラグメントまたはＶＬ－、ＶＨ－またはＣＤＲ－領域等の、かかる免疫グロブリン分子の部分であり得るが、本発明の抗体の断片も、本発明の抗体と同程度にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを特異的に認識し結合し得るものである。本発明の抗体の断片は、抗体フラグメント、ならびに、分離した軽鎖および重鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ／ｃ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２等の、それらの部分であり得る。一態様において、本発明の抗体の断片は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ／ｃフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。
また、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、二機能性抗体等の抗体派生物、または、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二重特異性ｓｃＦｖまたは抗体融合タンパク質等の抗体構築物であり得る。
本発明の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に結合する抗体もしくはその断片の組み合わせとは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質のいずれかのエピトープを認識する２以上の抗体もしくは断片の組み合わせであって、エピトープの位置は特に限定されないが、配列番号１で表されるアミノ酸配列のＮ末端側の１～２０７番目、特に１～５０番目、５１～１０５番目、１０６～１６０番目、または１６１～２０７番目のエピトープを認識する抗体もしくは断片の２以上の組み合わせ、または配列番号１で表されるアミノ酸配列のＮ末端側の１～２０７番目、特に１～５０番目、５１～１０５番目、１０６～１６０番目、または１６１～２０７番目のエピトープを認識する抗体もしくは断片と、それ以外のエピトープを認識する既存の抗体もしくは断片の組み合わせが好ましい。より好ましくは配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～５０番目のエピトープを認識する抗体またはその断片または、５１～２０７番目のエピトープを認識する抗体またはその断片と、５１～１６０番目のエピトープを認識する抗体またはその断片の組み合わせ、さらにより好ましくは、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～５０番目のエピトープを認識する抗体またはその断片と、５１～１６０番目のエピトープを認識する抗体またはその断片の組み合わせである。
本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に特異的に結合するものであってもよい。特異的に結合するとは、一般的な意味において、他のタンパク質に比較して、結合親和性が高いことを意味し、好ましい形態において、たとえば、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳのＮＰと比較して、結合親和性が高いことを意味する場合がある。
［ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を試料から検出する方法］
本発明の別の側面は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を試料から検出する方法であって、試料を、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと接触させる工程を含む、前記方法（以下、「本発明の方法」と記す場合がある）に関する。一態様において、本発明の方法において、試料は生体試料である。一態様において、本発明の方法は、ＥＬＩＳＡ法、ＣＬＥＩＡ法、イムノクロマト法およびフィルター抗原アッセイ法からなる群から選択される少なくとも１つの免疫学検査によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出する工程をさらに含む。
本発明の別の側面は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を試料から検出する方法であって、試料を、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと接触させる工程を含む、前記方法（以下、「本発明の方法」と記す場合がある）に関する。一態様において、本発明の方法において、試料は生体試料である。一態様において、本発明の方法は、ＥＬＩＳＡ法、ＣＬＥＩＡ法、イムノクロマト法およびフィルター抗原アッセイ法からなる群から選択される少なくとも１つの免疫学検査によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出する工程をさらに含む。
一態様において、本発明の方法は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程を含む。一態様において、本発明の方法は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程を複数回含む。一態様において、該工程の各回毎に本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせはエピトープが異なる。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、標識物質により標識されている。例えば、本発明の方法は、無標識の本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程、および標識物質により標識されている本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ（前記無標識の本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとはエピトープが異なる）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程を含む。
一態様において、本発明の方法は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程、および／または、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとの間で抗原抗体反応を行う工程をさらに含む。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ、および／または該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、標識物質により標識されている。
本発明において、「試料」は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰが含まれ得る任意の試料であり、特に限定されないが、例えば生体試料が挙げられる。本発明において、「試料」は「検体」と互換的に用いられる。
本発明において、「生体試料」は、ヒトまたは動物の血液、血漿、血清、尿、精液、髄液、唾液、口腔粘膜、鼻水、汗、涙、腹水、羊水、糞便、血管もしくは肝臓等の臓器、組織、細胞、またはそれらの抽出物等、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰが含まれ得る任意の試料であり、好ましくは、採取が容易である、口腔、扁桃腺、鼻腔、咽頭、喉頭、気管、気管支および肺等からの細胞および分泌液や、鼻腔ぬぐい液、鼻咽頭ぬぐい液、唾液、うがい液、喀痰、気管吸引液、気管支肺胞洗浄液等である。より好ましくは鼻咽頭拭い液、鼻腔拭い液、咽頭拭い液、唾液検体、もっとも好ましくは唾液検体が挙げられる。これらの検体を採取する方法は特に限定されず、公知の方法を採用することができる。具体的には、綿棒を用いた方法が多用される。動物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染し得るものであれば特に限定されず、例えば、イヌ、ネコ等が挙げられる。
生体試料は常法に従い採取することができる。
生体試料は常法に従い採取することができる。
例えば、血清は、非特許文献６に記載のとおり、分離後の血清を密栓できるプラスティックチューブに１～２ｍｌ入れ、蓋をした後、パラフィルムでシールする。凝固剤が入っていてもよく、血清分離剤入りの採血管を用いた場合は、遠心後の血清１～２ｍｌをプラスチックチューブ（滅菌チューブが望ましい）に移し蓋をした後、パラフィルムでシールする。
例えば、全血は、非特許文献６に記載のとおり、血液凝固阻止剤（ＥＤＴＡ－ＮａまたＫ）入りの採血管に採取し、１～２ｍｌを密栓できるプラスティックチューブに分注し、蓋をした後、パラフィルムでシールする。可能であれば、血球分離し、末梢血単核球を細胞保存液に懸濁して凍結保存する。末梢血単核球の分離はＢＤバキュテイナ（登録商標）ＣＰＴ（商標）単核球分離用採血管を使うと簡便である。また、採血後の分注や血球分離ができない場合は、ＰＡＸｇｅｎｅ（登録商標）ＲＮＡ採血管を用いて採血し、そのまま凍結保存しておいてもよい。
例えば、下気道由来液は、非特許文献６に記載のとおり、喀痰が出る場合喀痰を採取する。人工呼吸器管理下にある場合には、無菌的な操作のもとに、滅菌されたカテーテルを使って気管吸引液を採取する。臨床的に禁忌とならない場合は気管支肺胞洗浄液の採取も検討する。採取した喀痰または吸引液はスクリューキャップ付きプラスティックチューブに入れ蓋をし、パラフィルムでシールする。
例えば、鼻咽頭ぬぐい液は、非特許文献６に記載のとおり、滅菌綿棒（フロックスワブや材質にレーヨンやポリエステルを含む綿棒等、鼻腔用の細いもの）を鼻孔から挿入し、上咽頭を十分にぬぐい、綿棒を１～３ｍｌのウイルス輸送液（ＶＴＭ／ＵＴＭ）が入った滅菌スピッツ管に入れ蓋をし、パラフィルムでシールする。ウイルス輸送液が無い場合はＰＢＳや生理食塩水等を用いる。
例えば、唾液は、非特許文献６に記載のとおり、滅菌されたプラスティックチューブに１～２ｍｌを入れ、蓋をした後、パラフィルムでシールする。また、サリベット（登録商標）等の唾液採取用キットを用いて、コットンに唾液を吸い込ませた後、遠心処理によって分離採取したものも用いられる。
例えば、尿は、非特許文献６に記載のとおり、１～２ｍｌを試験管（ファルコンチューブ等）に入れ、蓋をした後、パラフィルムでシールする。
例えば、便は、０．１ｇ程度（小豆大）を密栓できるプラスティックチューブに採取して蓋をした後、パラフィルムでシールする。
例えば、便は、０．１ｇ程度（小豆大）を密栓できるプラスティックチューブに採取して蓋をした後、パラフィルムでシールする。
本発明において、「標識物質」は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ、および／または該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを標識する任意の物質を指し、抗原抗体反応を検出できるものであれば特に限定されない。正確、簡便、かつ迅速にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点から、標識物質は、酵素、色素、金属コロイド粒子、ラテックス粒子、セルロース粒子等から選択される１以上のものであることが好ましい。
本発明において、「本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ」は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせに特異的に結合し得る抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを指す。正確、簡便、かつ迅速にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点から、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥからなる群から選択される１以上のものであることが好ましく、ＩｇＧおよび／またはＩｇＭであることが特に好ましく、ＩｇＧであることがさらに好ましい。また、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体は、キメラのおよびヒト化した抗体等の、修飾および／または変化した抗体で有り得る。また、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、修飾または変化したモノクローナルまたはポリクローナル抗体、または組換えもしくは合成的に産生したまたは合成した抗体であり得る。
本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体の断片は、ＦａｂフラグメントまたはＶＬ－、ＶＨ－またはＣＤＲ－領域等の、かかる免疫グロブリン分子の部分であり得るが、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体の断片も、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体と同程度に本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを特異的に認識し結合し得るものである。本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体の断片は、抗体フラグメント、ならびに、分離した軽鎖および重鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ／ｃ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２等の、それらの部分であり得る。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体の断片は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ／ｃフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。
また、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、二機能性抗体等の抗体派生物、または、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二重特異性ｓｃＦｖまたは抗体融合タンパク質等の抗体構築物であり得る。
本発明において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰは、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの抗原抗体反応を検出できる任意の免疫学検査によって検出される。免疫学検査は、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、酵素抗体法、蛍光抗体法、イムノクロマトグラフィー法（イムノクロマト法）、フィルター抗原アッセイ法、免疫比濁法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応測定法、赤血球凝集反応法、または粒子凝集反応法等を含む。正確、簡便、かつ迅速にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点から、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰは、ＥＬＩＳＡ法、ＣＬＥＩＡ法および／またはイムノクロマト法によって検出されることが好ましい。また、所定量の本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの抗原抗体反応から検量線を作成し、測定値を検量線に内挿することによって試料中に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを定量することもできる。
［ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するためのキット］
本発明の別の側面は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するためのキット（以下、「本発明のキット」と記す場合がある）に関する。正確、簡便、かつ迅速にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点、医療従事者が感染現場、防疫現場および臨床現場等の設備が十分とはいえない場所でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点、疫学調査をする観点等から、本発明のキットは、イムノクロマトストリップの形態であることが好ましい。
本発明の別の側面は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するためのキット（以下、「本発明のキット」と記す場合がある）に関する。正確、簡便、かつ迅速にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点、医療従事者が感染現場、防疫現場および臨床現場等の設備が十分とはいえない場所でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出する観点、疫学調査をする観点等から、本発明のキットは、イムノクロマトストリップの形態であることが好ましい。
例えば、イムノクロマトストリップは、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせおよび抗マウス免疫グロブリン抗体をそれぞれ別の部位、すなわちテストラインおよびコントロールラインに固定化したものである。イムノクロマトストリップのサンプルパットには、金コロイド粒子、ラテックス粒子、蛍光粒子、磁気粒子等で標識された本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを予め含浸させておく。サンプルパットに滴下された試料は、毛細管現象により展開され、テストラインに到達すると試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰのみが反応し、コントロールラインに到達すると金コロイド等で標識された本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせのみが反応する。その他の試料中の成分は反応せずに吸水パッドまで移動する。テストラインおよびコントロールラインの色の濃さ、反射強度、吸光度、蛍光強度、または磁気強度等をイムノクロマトリーダーで測定することにより、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを検出できるだけでなく、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰを定量できる。
［ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するための組成物］
本発明の別の側面は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するための組成物（以下、「本発明の組成物」と記す場合がある）に関する。
本発明の別の側面は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するための組成物（以下、「本発明の組成物」と記す場合がある）に関する。
［ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の診断方法］
本発明の別の側面は、試料を本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと接触させる工程を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の診断方法（以下、「本発明の診断方法」と記す場合がある）に関する。一態様において、本発明の診断方法は、ＥＬＩＳＡ法、ＣＬＥＩＡ法、イムノクロマト法およびフィルター抗原アッセイ法からなる群から選択される少なくとも１つの免疫学検査によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出する工程をさらに含む。
本発明の別の側面は、試料を本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと接触させる工程を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の診断方法（以下、「本発明の診断方法」と記す場合がある）に関する。一態様において、本発明の診断方法は、ＥＬＩＳＡ法、ＣＬＥＩＡ法、イムノクロマト法およびフィルター抗原アッセイ法からなる群から選択される少なくとも１つの免疫学検査によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出する工程をさらに含む。
一態様において、本発明の診断方法は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程を含む。一態様において、本発明の診断方法は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程を複数回含む。一態様において、該工程の各回毎に本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせはエピトープが異なる。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、標識物質により標識されている。例えば、本発明の診断方法は、無標識の本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程、および標識物質により標識されている本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ（前記無標識の本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとはエピトープが異なる）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程を含む。
一態様において、本発明の診断方法は、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰとの間で抗原抗体反応を行う工程、および／または、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせとの間で抗原抗体反応を行う工程をさらに含む。一態様において、本発明の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ、および／または該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを認識する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせは、標識物質により標識されている。
例１ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片の調製
［免疫原の設計］
データベース上に公開された配列を元に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質のアミノ酸配列について、既存のヒトコロナウイルス（ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ、ＨＫＵ－１、ＯＣ４３、ＮＬ６３、２２９Ｅ）のＮタンパク質と相同性・類似性解析を行った（図１Ｂ）。その結果、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＮＰはＳＡＲＳと約９０％のアミノ酸配列が相同であり、ＭＥＲＳとは約４７％、その他の弱毒性ヒトコロナウイルスとは相同性が約３０％以下であることが分かった。そこで、ヒトコロナウイルス間で共通して保存されているモチーフ（ＦＹＹＬＧＴＧＰ）を除いた、Ｎタンパク質中のアミノ酸１２１～４１９の領域を特定した。
今回、その領域とは異なる部分を認識する抗体を得るためにＮ末端側の１～２０７の領域を免疫原として用いることとした（図１Ａ）。
［免疫原の設計］
データベース上に公開された配列を元に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質のアミノ酸配列について、既存のヒトコロナウイルス（ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ、ＨＫＵ－１、ＯＣ４３、ＮＬ６３、２２９Ｅ）のＮタンパク質と相同性・類似性解析を行った（図１Ｂ）。その結果、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＮＰはＳＡＲＳと約９０％のアミノ酸配列が相同であり、ＭＥＲＳとは約４７％、その他の弱毒性ヒトコロナウイルスとは相同性が約３０％以下であることが分かった。そこで、ヒトコロナウイルス間で共通して保存されているモチーフ（ＦＹＹＬＧＴＧＰ）を除いた、Ｎタンパク質中のアミノ酸１２１～４１９の領域を特定した。
今回、その領域とは異なる部分を認識する抗体を得るためにＮ末端側の１～２０７の領域を免疫原として用いることとした（図１Ａ）。
［ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片の合成］
配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片を以下の方法により調製した。なお、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰは配列番号２で表されるアミノ酸配列からなり、該アミノ酸配列に対応するＲＮＡ配列は配列番号３で表され、該ＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列は配列番号４で表される。なお、該ＤＮＡ配列は、アミノ酸配列に基づき真核細胞でのタンパク質合成用にコドン最適化させている。
配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片を以下の方法により調製した。なお、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰは配列番号２で表されるアミノ酸配列からなり、該アミノ酸配列に対応するＲＮＡ配列は配列番号３で表され、該ＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列は配列番号４で表される。なお、該ＤＮＡ配列は、アミノ酸配列に基づき真核細胞でのタンパク質合成用にコドン最適化させている。
まず、配列番号４で表されるＤＮＡ配列を人工合成し、該ＤＮＡ配列を鋳型とするＰＣＲ法により、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～２０７番目の領域（図１）に対応する配列番号４で表されるＤＮＡ配列の１～６２１番目の領域を増幅した。１μＭフォワードプライマー（配列番号５）５μＬ、１μＭリバースプライマー（配列番号６）５μＬ、配列番号４で表されるＤＮＡ配列が挿入された１０ｎｇ／μＬ ＤＮＡベクター（ｐＵＣ５７（ジーンウィズ社））１μＬ、ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ（登録商標）Ｍａｘ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（タカラバイオ社）２５μＬ、および超純水１４μＬを混合して全量５０μＬの反応液を調製した。ＰＣＲ法を表１に示すサーマルサイクラーの設定で行った。これにより、配列番号４で表されるＤＮＡ配列の１～６２１番目の領域を含むＤＮＡ配列を得た。そして、ｐＥＵ－Ｅ０１―ＭＣＳ－ＴＥＶ－Ｈｉｓ－Ｃベクター（セルフリーサイエンス社）を鋳型とするＰＣＲ法により、配列番号７および８に示したプライマーを用いて同様な手法でＤＮＡベクターを増幅した。
次に、前記ＰＣＲ法から得られたＤＮＡ配列およびＤＮＡベクターをアガロースゲル電気泳動により精製した後、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（タカラバイオ社）を用いることで、ＤＮＡを連結させてＤＮＡベクターを調製した。得られたＤＮＡベクターを大腸菌ＪＭ１０９株に形質転換し、形質転換後の大腸菌をアンピシリン含有ＬＢ培地に播種した。増殖後の大腸菌からプラスミド精製キット（プロメガ社）を使用してＤＮＡベクターを調製した。
次に、得られたＤＮＡベクターからＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼを用いてｍＲＮＡを転写し、セルフリーサイエンス社のＷＥＰＲＯ７２４０キットの使用説明書に従って、Ｈｉｓタグが付加されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片（配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～２０７番目の領域（図１Ａ））を小麦胚芽抽出液により無細胞タンパク質合成した。
［ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片の精製］
［ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片の精製］
無細胞タンパク質合成の反応液からＮｉカラムを用いてＨｉｓタグが付加されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片を精製した。転写、無細胞タンパク質合成、および精製の一連の工程は、自動合成装置（セルフリーサイエンス社）を用いて行った。Ｈｉｓタグが付加されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片を３回にわたって精製し、１～３回目の精製画分をそれぞれＥ１～Ｅ３とした。Ｅ１～Ｅ３を２×ＳＤＳサンプル緩衝液（１２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、４％ＳＤＳ、２０％グリセロール、０．０１％ブロモフェノールブルー、および１０％２－メルカプトエタノール）と混合して熱処理し、ポリアクリルアミドゲルに供して電気泳動し、Ｒａｐｉｄ ＣＢＢ ＫＡＮＴＯ ３Ｓ（関東化学株式会社）によって染色した。
その結果、精製前の溶液（Ｓ：可溶性画分）と比較してＥ１～Ｅ３では夾雑タンパク質の存在量が低減されたことから、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片が精製されたことを確認することができた（図２）。
例２ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片に対する抗体の作製
［マウスの免疫、ハイブリドーマ細胞の作製］
精製した３００μｇのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片をフロイントアジュバントと混合して乳化させ、ＢＡＬＢ／ｃマウスに複数回皮下注射して免疫した。免疫したマウスから１か月後にＢ細胞を回収し、ポリエチレングリコール溶液を用いてＳＰ２／０ミエローマ細胞と融合した。融合したハイブリドーマ細胞を選択培地と共に９６ウェルマイクロプレートに播種した。その結果、Ｗ１～２４、Ｗ’１～５９、Ｅ１～３５のクローンを得た。
［マウスの免疫、ハイブリドーマ細胞の作製］
精製した３００μｇのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片をフロイントアジュバントと混合して乳化させ、ＢＡＬＢ／ｃマウスに複数回皮下注射して免疫した。免疫したマウスから１か月後にＢ細胞を回収し、ポリエチレングリコール溶液を用いてＳＰ２／０ミエローマ細胞と融合した。融合したハイブリドーマ細胞を選択培地と共に９６ウェルマイクロプレートに播種した。その結果、Ｗ１～２４、Ｗ’１～５９、Ｅ１～３５のクローンを得た。
［ハイブリドーマ細胞のスクリーニングとクローニング］
次に、各ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片に対する反応性を、ＥＬＩＳＡ法、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ法、染色法、および結合定数により調べ、ＮＰと反応する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選別した（図３、図４）。
次に、各ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片に対する反応性を、ＥＬＩＳＡ法、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ法、染色法、および結合定数により調べ、ＮＰと反応する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選別した（図３、図４）。
ＥＬＩＳＡ法では、まず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片をＥＬＩＳＡプレート上に固定化した。プレートをブロッキングした後、プレートにハイブリドーマの培養上清を加えて反応させた後、ペルオキシダーゼ標識したヤギ抗マウス免疫グロブリン抗体を加えて反応させた。その後、ペルオキシダーゼ基質溶液を加えて発色させ、その吸光度を測定した。
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ法はメーカー推奨法に従って実施した。まずＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片について、ビオチン標識したタンパク質を例１に記載の方法と同様な手順で無細胞タンパク質合成した。その後、合成したビオチン標識タンパク質とハイブリドーマの培養上清をプレートに添加して混合した後、室温で３０分間インキュベートした。そして、アクセプタービーズ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇコーティング）１０μｌおよびドナービーズ（ストレプトアビジンコーティング）を加えた。さらに３０分間、室温でインキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）にて測定を行った。
染色法は、メーカー推奨法で実施した。具体的には、アフリカミドリザル腎由来細胞ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２（ＪＣＲＢ１８１９）に対し、国立感染症研究所から供与されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を、２４時間、３７℃で感染させた。次にハイブリドーマの培養上清を感染細胞の培養液に加えて反応させた後、蛍光標識したヤギ抗マウス免疫グロブリン抗体を加えて細胞を免疫染色した。その後、蛍光顕微鏡を用いて免疫染色した細胞をイメージングした。なお、非感染細胞をネガティブコントロールとした。
結合定数の測定は、ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６（ザルスタット）を用いたＢｉｏ－Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ（ＢＬＩ法）により、９６ウェル黒色マイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）を用いて１，０００ｒｐｍで撹拌しながら３０℃の条件でメーカー推奨法で実施した。具体的にはＡｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｃａｐｔｕｒｅバイオセンサーチップ（ＡＭＣ）に０．１％ＢＳＡと０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで５倍希釈したハイブリドーマの培養上清と５分間反応させた。そして、３００ｎＭのＮＰを用いて、結合時間３分間、解離時間５分間にて測定を行った。すべての測定値は、コントロールのウェルの値を差し引くことで、ベースラインドリフトを補正した。また、データは、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェアのローカルフィッティングアルゴリズムを用いた１：１結合モデルで解析した。
以上のスクリーニングで特定したハイブリドーマをクローニングすることにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片に高い反応性を示すモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞３７種を選択した。
例３ 各モノクローナル抗体が認識するエピトープの解析
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片のアミノ酸配列の各領域をそれぞれ欠損させた４種の組換えタンパク質（欠損変異体）を作製し、それらとの反応性を比較することで、各モノクローナル抗体が認識するエピトープを調べた。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ＮＰの断片のアミノ酸配列の各領域をそれぞれ欠損させた４種の組換えタンパク質（欠損変異体）を作製し、それらとの反応性を比較することで、各モノクローナル抗体が認識するエピトープを調べた。
各組換えタンパク質を調製するため、まず例１で作製した配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～２０７番目のアミノ酸配列をコードするコムギ無細胞系発現用ベクターｐＥＵ－Ｅ０１－ＴＥＶ－Ｈｉｓ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＮＰ（１－２０７）を鋳型として、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～５０番目（Δ１－５０）、５１～１０５番目（Δ５１－１０５）、１０６～１６０番目（Δ１０６－１６０）、および１６１～２０７番目（Δ１６１－２０７）のアミノ酸配列領域をそれぞれコードするｃＤＮＡ断片を欠損させた発現ベクターをそれぞれＰｒｉｍｅＳＴＡＲ（登録商標）Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｂａｓａｌ Ｋｉｔ（タカラバイオ社）の方法に従って作製した。作製したＤＮＡのベクターからＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼを用いてｍＲＮＡを合成し、セルフリーサイエンス社のＷＥＰＲＯ７２４０キットの使用方法に従って、各組換えタンパク質を例１に記載の方法と同様な手順で無細胞タンパク質合成した。
得られた各タンパク質を用いて、ＥＬＩＳＡ法によって各モノクローナル抗体のエピトープを解析した。まず、得られた各タンパク質をＥＬＩＳＡプレート上に固定化した。プレートをブロッキングした後、プレートにハイブリドーマの培養上清を加えて反応させた後、ペルオキシダーゼ標識したヤギ抗マウス免疫グロブリン抗体を加えて反応させた。その後、ペルオキシダーゼ基質溶液を加えて発色させ、その吸光度を測定した（図５）。
その結果、取得抗体は１－５０、５１付近、５１－１０５、１０６付近、１６１－２０７、５１－２０７の６種類に分類された（表２）。
その結果、取得抗体は１－５０、５１付近、５１－１０５、１０６付近、１６１－２０７、５１－２０７の６種類に分類された（表２）。
例４ 各モノクローナル抗体の、他のヒトコロナウイルス由来ＮＰに対する特異性の解析
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２およびＳＡＲＳ、ＭＥＲＳのＮＰを合成し、それらに対する抗体の反応性をＥＬＩＳＡ法にて測定した。
まず、他のヒトコロナウイルス（ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ）に由来する各ＮＰをコードする各ＤＮＡ配列を合成した（ジーンウィズ社に委託）（それぞれ配列番号９および１０で表される）。なお、各ＤＮＡ配列は、アミノ酸配列に基づき真核細胞でのタンパク質合成用にコドン最適化させている。
次に、他のヒトコロナウイルス（ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ）に由来する各ＮＰを、それぞれ例１に記載の方法と同様な手順で無細胞タンパク質合成した。
得られた各タンパク質を用いて、例３に記載したＥＬＩＳＡ法と同様に各モノクローナル抗体の特異性を解析した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２およびＳＡＲＳ、ＭＥＲＳのＮＰを合成し、それらに対する抗体の反応性をＥＬＩＳＡ法にて測定した。
まず、他のヒトコロナウイルス（ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ）に由来する各ＮＰをコードする各ＤＮＡ配列を合成した（ジーンウィズ社に委託）（それぞれ配列番号９および１０で表される）。なお、各ＤＮＡ配列は、アミノ酸配列に基づき真核細胞でのタンパク質合成用にコドン最適化させている。
次に、他のヒトコロナウイルス（ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ）に由来する各ＮＰを、それぞれ例１に記載の方法と同様な手順で無細胞タンパク質合成した。
得られた各タンパク質を用いて、例３に記載したＥＬＩＳＡ法と同様に各モノクローナル抗体の特異性を解析した。
その結果ＳＡＲＳおよびＭＥＲＳと反応せず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を特異的に認識する抗体が計１２種類得られた（図６）。また、ＳＡＲＳとは反応するものの、ＭＥＲＳとは反応しない抗体が計２２種類得られた。
例５ 各モノクローナル抗体またはそれらの組み合わせの反応性解析
本発明の抗体の反応性について調査するために、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いた検討を行った。初めにハイブリドーマ培養上清から精製した抗体をプレートに固相化し、洗浄後、２％スキムミルクにてブロッキングを行った。次に洗浄後、コムギ無細胞系を用いて合成したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮＰを２ｎｇ／ｍＬの濃度に調製し、プレートに添加した。洗浄後、ＨＲＰ標識を行った本発明の抗体を反応させた。その結果を図７に示す。その結果、これらの抗体のうち、Ｅ１５およびＥ１６では既存の抗体との組み合わせによって高い反応性を示した。
本発明の抗体の反応性について調査するために、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いた検討を行った。初めにハイブリドーマ培養上清から精製した抗体をプレートに固相化し、洗浄後、２％スキムミルクにてブロッキングを行った。次に洗浄後、コムギ無細胞系を用いて合成したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮＰを２ｎｇ／ｍＬの濃度に調製し、プレートに添加した。洗浄後、ＨＲＰ標識を行った本発明の抗体を反応させた。その結果を図７に示す。その結果、これらの抗体のうち、Ｅ１５およびＥ１６では既存の抗体との組み合わせによって高い反応性を示した。
次に反応性上位２０の組み合わせで検出限界について調査した。抗原の濃度を２ｎｇ／ｍＬから１２５ｐｇ／ｍＬまで２倍ずつ希釈し、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を行った。その結果、抗原濃度１２５ｐｇ／ｍＬにおいても既存の抗体同士の組み合わせよりも高い反応性を示した。本発明の抗体同士の組み合わせでは固相化にＥ５を用い、ＨＲＰ標識したＥ１５を用いた場合に高い反応性を示した（表３）。
例６ サンドイッチＥＬＩＳＡによる各変異株の培養ウイルス由来のＮＰの検出
各ＮＰ抗体を組み合わせたサンドイッチＥＬＩＳＡについて、Ｎ末端側を認識する抗体を用いることで、各種変異株ウイルス由来のＮＰの検出に差が生じるかどうか調べた。既存抗体として、（＃９×＃９８）の組み合わせをコントロールとして用いた。常法に従って抗体を固相化、洗浄および２％スキムミルクによりブロッキングした。そして、各種ウイルス培養液を１％ＮＰ４０／ＰＢＳを等量混合することで不活化し、その後、１０倍希釈したものを原液とし、５倍希釈系列を作製し、６０分間反応させた。その後、ＨＲＰ標識抗体と反応させて検出した。その結果、既存の抗体（＃９×＃９８）と比べて、Ｎ末端側に対する抗体を用いた場合では、各種変異株由来のＮＰに対して同等レベルの反応性を維持する組み合わせが確認された（図８）。
各ＮＰ抗体を組み合わせたサンドイッチＥＬＩＳＡについて、Ｎ末端側を認識する抗体を用いることで、各種変異株ウイルス由来のＮＰの検出に差が生じるかどうか調べた。既存抗体として、（＃９×＃９８）の組み合わせをコントロールとして用いた。常法に従って抗体を固相化、洗浄および２％スキムミルクによりブロッキングした。そして、各種ウイルス培養液を１％ＮＰ４０／ＰＢＳを等量混合することで不活化し、その後、１０倍希釈したものを原液とし、５倍希釈系列を作製し、６０分間反応させた。その後、ＨＲＰ標識抗体と反応させて検出した。その結果、既存の抗体（＃９×＃９８）と比べて、Ｎ末端側に対する抗体を用いた場合では、各種変異株由来のＮＰに対して同等レベルの反応性を維持する組み合わせが確認された（図８）。
例７ 唾液検体中におけるＮＰの分析
段階希釈した唾液検体に対して、全長のＮＰを混合して３７℃で３０分インキュベーションした後、ＳＤＳ－ＰＡＧＥとＣＢＢ染色により分析することで、ＮＰが分解されるかどうかを調べた（図９）。その結果、高濃度の唾液検体と混合したサンプルでは、ＮＰのバンドが消失しており唾液検体中においてＮＰは分解されると考えられた。また、唾液を１／５００、１／２５００倍に希釈した検体と混合したサンプルでは、全長のＮＰ（約５０ｋＤａ付近）と、分解途中産物と推定される、やや短い約４０ｋＤａ程度のバンドも認められた。同時に、唾液を９５℃で５分間加熱した後に使用したものでも試験したところ、加熱処理したサンプルでは、全長のＮＰのバンドは消失しなかった。次に、本サンプルについて各抗体を用いたウエスタンブロットで分析したところ、Ｃ末端側を認識する既存抗体＃６０や＃９８では、唾液の添加量依存的にＮＰが分解されるとバンドはほとんど検出できなかったのに対して、それ以外の抗体では、分解途中産物と推定される約４０ｋＤａ付近のバンドについても検出された（図１０）。したがって、ＮＰは唾液検体中においてＣ末端側から分解を受けると考えられた。
段階希釈した唾液検体に対して、全長のＮＰを混合して３７℃で３０分インキュベーションした後、ＳＤＳ－ＰＡＧＥとＣＢＢ染色により分析することで、ＮＰが分解されるかどうかを調べた（図９）。その結果、高濃度の唾液検体と混合したサンプルでは、ＮＰのバンドが消失しており唾液検体中においてＮＰは分解されると考えられた。また、唾液を１／５００、１／２５００倍に希釈した検体と混合したサンプルでは、全長のＮＰ（約５０ｋＤａ付近）と、分解途中産物と推定される、やや短い約４０ｋＤａ程度のバンドも認められた。同時に、唾液を９５℃で５分間加熱した後に使用したものでも試験したところ、加熱処理したサンプルでは、全長のＮＰのバンドは消失しなかった。次に、本サンプルについて各抗体を用いたウエスタンブロットで分析したところ、Ｃ末端側を認識する既存抗体＃６０や＃９８では、唾液の添加量依存的にＮＰが分解されるとバンドはほとんど検出できなかったのに対して、それ以外の抗体では、分解途中産物と推定される約４０ｋＤａ付近のバンドについても検出された（図１０）。したがって、ＮＰは唾液検体中においてＣ末端側から分解を受けると考えられた。
例８ 各組み合わせのサンドイッチＥＬＩＳＡによる唾液検体中のＮＰの検出
各ＮＰ抗体を組み合わせたサンドイッチＥＬＩＳＡについて、Ｎ末端側を認識する抗体を用いることで、唾液検体中での検出率に差が生じるかを調べた。既存抗体として、（＃９×＃９８）の組み合わせをコントロールとして用いた。常法に従って抗体を固相化、洗浄および２％スキムミルクによりブロッキングした。そして、唾液検体６種類をＰＢＳで１／５０、１／２５０、１／１２５０倍に希釈し、０．１％ＮＰ－４０を含むＰＢＳで１０ｎｇ／ｍＬとなるように希釈したＮＰと等量混合後、各ウェルに添加して３７℃で３０分間反応させた。その後、ＨＲＰ標識抗体と反応させて検出した。その結果、既存の抗体（＃９×＃９８）と比べて、Ｎ末端側に対する抗体を用いた場合では、唾液検体の添加による反応性の低下が改善された。カットオフをＯＤ４５０＝０．１とし、１／５０倍に希釈した唾液検体での検出率を比較したところ、既存の抗体の組み合わせの場合では、６検体中２検体のみが検出可能であった。一方で、既存抗体と新規抗体を組み合わせた場合（＃９×Ｅ１５）、反応性が向上し４検体の検出が可能となった。さらに新規抗体同士のＥ５×Ｅ１５では５検体、Ｗ１１×Ｅ５の組み合わせではすべての検体が検出可能であった（図１１）。
各ＮＰ抗体を組み合わせたサンドイッチＥＬＩＳＡについて、Ｎ末端側を認識する抗体を用いることで、唾液検体中での検出率に差が生じるかを調べた。既存抗体として、（＃９×＃９８）の組み合わせをコントロールとして用いた。常法に従って抗体を固相化、洗浄および２％スキムミルクによりブロッキングした。そして、唾液検体６種類をＰＢＳで１／５０、１／２５０、１／１２５０倍に希釈し、０．１％ＮＰ－４０を含むＰＢＳで１０ｎｇ／ｍＬとなるように希釈したＮＰと等量混合後、各ウェルに添加して３７℃で３０分間反応させた。その後、ＨＲＰ標識抗体と反応させて検出した。その結果、既存の抗体（＃９×＃９８）と比べて、Ｎ末端側に対する抗体を用いた場合では、唾液検体の添加による反応性の低下が改善された。カットオフをＯＤ４５０＝０．１とし、１／５０倍に希釈した唾液検体での検出率を比較したところ、既存の抗体の組み合わせの場合では、６検体中２検体のみが検出可能であった。一方で、既存抗体と新規抗体を組み合わせた場合（＃９×Ｅ１５）、反応性が向上し４検体の検出が可能となった。さらに新規抗体同士のＥ５×Ｅ１５では５検体、Ｗ１１×Ｅ５の組み合わせではすべての検体が検出可能であった（図１１）。
Claims (12)
- ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に結合する抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせであって、該抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせの認識するエピトープが、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～２０７番目にある、前記抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
- エピトープが、配列番号１で表されるアミノ酸配列の１～５０番目、５１～１０５番目、１０６～１６０番目、または１６１～２０７番目にある、請求項１に記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
- エピトープが、配列番号１で表されるアミノ酸配列の５１～１０５番目にある、請求項１に記載の抗体またはその断片と、１０６～１６０番目にある、請求項１または２に記載の抗体またはその断片の組み合わせ。
- ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質に特異的に結合する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
- 抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
- その断片が、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ／ｃフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントである、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせ。
- ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を試料から検出する方法であって、試料を、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせと接触させる工程を含む、前記方法。
- 試料が、生体試料である、請求項７に記載の方法。
- 試料が、体液中の試料である、請求項７または８に記載の方法。
- ＥＬＩＳＡ法、ＣＬＥＩＡ法、イムノクロマト法およびフィルター抗原アッセイ法からなる群から選択される少なくとも１つの免疫学検査によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出する工程をさらに含む、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、またはそれらの組み合わせを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシドを構成するタンパク質を検出するためのキット。
- イムノクロマトストリップの形態である、請求項１１に記載のキット。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2022033238A JP2023128698A (ja) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット |
| PCT/JP2023/008064 WO2023167317A1 (ja) | 2022-03-04 | 2023-03-03 | 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2022033238A JP2023128698A (ja) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2023128698A true JP2023128698A (ja) | 2023-09-14 |
Family
ID=87883879
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2022033238A Pending JP2023128698A (ja) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2023128698A (ja) |
| WO (1) | WO2023167317A1 (ja) |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20230348570A1 (en) * | 2020-03-10 | 2023-11-02 | Denka Company Limited | Epitope of antibody against structural protein of sars-cov-2, antibody reacting with epitope, method for detecting sars-cov-2 using antibody, detection kit for sars-cov-2 containing antibody, method for detecting anti-sars-cov-2 antibody containing polypeptide of epitope, detection kit for anti-sars-cov-2 antibody containing polypeptide of epitope, vaccine for sars-cov-2 containing polypeptide of epitope, and therapeutic agent for sars-cov-2 infection containing antibody |
| CN111647053A (zh) * | 2020-04-16 | 2020-09-11 | 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所 | 多肽及其在新型冠状病毒检测、抗体或疫苗筛选中的应用 |
| CN113234145A (zh) * | 2020-08-12 | 2021-08-10 | 中山大学附属第五医院 | 特异性结合新型冠状病毒的抗体 |
| WO2022092181A1 (ja) * | 2020-10-30 | 2022-05-05 | 東洋紡株式会社 | 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２のヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する抗体又はその断片、及びその用途 |
| JP2022174540A (ja) * | 2021-05-11 | 2022-11-24 | 富士レビオ株式会社 | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫学的検出方法および試薬 |
| CN117715931A (zh) * | 2021-06-30 | 2024-03-15 | 滋吾堂有限公司 | 针对SARS-CoV-2的核衣壳蛋白的抗体及其用途 |
-
2022
- 2022-03-04 JP JP2022033238A patent/JP2023128698A/ja active Pending
-
2023
- 2023-03-03 WO PCT/JP2023/008064 patent/WO2023167317A1/ja unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023167317A1 (ja) | 2023-09-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7260192B2 (ja) | マイコプラズマ・ニューモニエの免疫学的検出法およびキット | |
| EP4119575A1 (en) | Epitope of antibody against structural protein of sars-cov-2, antibody reacting with epitope, method for detecting sars-cov-2 using antibody, detection kit for sars-cov-2 containing antibody, method for detecting anti-sars-cov-2 antibody containing polypeptide of epitope, detection kit for anti-sars-cov-2 antibody containing polypeptide of epitope, vaccine for sars-cov-2 containing polypeptide of epitope, and therapeutic agent for sars-cov-2 infection containing antibody | |
| WO2022004622A1 (ja) | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法および該抗体を含むキット | |
| JP2017145246A (ja) | Ｍｅｒｓコロナウイルスに対する抗体、該抗体を用いてｍｅｒｓコロナウイルスを検出する方法および該抗体を含むキット | |
| JP2011191322A (ja) | ハンタウイルス感染の診断のための方法および試薬 | |
| JP7175147B2 (ja) | マイコプラズマ・ニューモニエの免疫学的検出法およびキット | |
| JP2022048268A (ja) | マイコプラズマ・ニューモニエの免疫学的検出法及びキット | |
| JP2024012473A (ja) | Ｒｓウイルスを検出するための検出用試薬又はキット及びｒｓウイルスを検出する方法 | |
| WO2022027703A1 (zh) | SARS-CoV-2的N抗原的单克隆抗体、检测方法及其用途 | |
| WO2022265065A1 (ja) | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫測定方法及び免疫測定キット、並びにモノクローナル抗体又はその抗体断片 | |
| WO2017065261A1 (ja) | ヒトパルボウイルスｂ１９抗原および抗体の同時検出方法及びキット | |
| WO2023167317A1 (ja) | 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット | |
| WO2021221082A1 (ja) | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシド断片および該断片を用いて抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を検出する方法およびキット | |
| WO2021210632A1 (ja) | アデノウイルスの免疫測定方法及び免疫測定器具 | |
| CN115362258A (zh) | 腺病毒的免疫测定方法及免疫测定器具 | |
| WO2022265066A1 (ja) | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫測定方法及び免疫測定キット | |
| CN112159797B (zh) | 杂交瘤细胞株3g7 1b10、抗gii.4型诺如病毒p蛋白单克隆抗体和应用 | |
| CN112175912B (zh) | 杂交瘤细胞株3g4 1d6、抗gii.4型诺如病毒p蛋白单克隆抗体和应用 | |
| CN115362257A (zh) | 腺病毒的免疫测定方法及免疫测定器具 |