KR20230156937A - 바이오-조작된 면역조절 융합 단백질 조성물 - Google Patents
바이오-조작된 면역조절 융합 단백질 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230156937A KR20230156937A KR1020237034682A KR20237034682A KR20230156937A KR 20230156937 A KR20230156937 A KR 20230156937A KR 1020237034682 A KR1020237034682 A KR 1020237034682A KR 20237034682 A KR20237034682 A KR 20237034682A KR 20230156937 A KR20230156937 A KR 20230156937A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cd40l
- fusion protein
- single chain
- seq
- cell
- Prior art date
Links
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 290
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 290
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 23
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title abstract description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 76
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 68
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 55
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 42
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 36
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 34
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 10
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 claims description 1218
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 claims description 1214
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 439
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 438
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 349
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 claims description 286
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 187
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 180
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 167
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 167
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 167
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 123
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 122
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 122
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 122
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 103
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 102
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 96
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 89
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 89
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims description 58
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 54
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 50
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 50
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 48
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 46
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 46
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 claims description 45
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 45
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 42
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 42
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 41
- 239000013638 trimer Substances 0.000 claims description 37
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 36
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 35
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 claims description 34
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 24
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 23
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 23
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 claims description 23
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 22
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 22
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 22
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 21
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 21
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 21
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 21
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 claims description 20
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 15
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 15
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 15
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 15
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 13
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 13
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims description 13
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 13
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 13
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 13
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 13
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 13
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 13
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims description 13
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims description 13
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 13
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 13
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 claims description 13
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 claims description 13
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 13
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 claims description 13
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 claims description 13
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 11
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 10
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 8
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 claims description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 7
- 239000013636 protein dimer Substances 0.000 claims description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 7
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 6
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 claims description 5
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 claims description 5
- 230000005890 cell-mediated cytotoxicity Effects 0.000 claims description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000037844 advanced solid tumor Diseases 0.000 claims description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 claims description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 claims description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 claims description 3
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 claims description 3
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 3
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 claims 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 478
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 50
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 43
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 42
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 30
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 29
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 16
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 15
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 description 9
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- -1 for example Chemical class 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 229940123189 CD40 agonist Drugs 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 2
- 101000611185 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000013628 high molecular weight specie Substances 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 239000013627 low molecular weight specie Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 108010000239 Aequorin Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N Dansyl Chloride Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(Cl)(=O)=O XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYHNNYVSQQEPJS-UHFFFAOYSA-N Gallium Chemical compound [Ga] GYHNNYVSQQEPJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-AKLPVKDBSA-N Molybdenum Mo-99 Chemical compound [99Mo] ZOKXTWBITQBERF-AKLPVKDBSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000008484 agonism Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000599 controlled substance Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029578 entry into host Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 229910052733 gallium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 230000007056 liver toxicity Effects 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- ZTLGJPIZUOVDMT-UHFFFAOYSA-N n,n-dichlorotriazin-4-amine Chemical compound ClN(Cl)C1=CC=NN=N1 ZTLGJPIZUOVDMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052716 thallium Inorganic materials 0.000 description 1
- BKVIYDNLLOSFOA-UHFFFAOYSA-N thallium Chemical compound [Tl] BKVIYDNLLOSFOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229910052724 xenon Inorganic materials 0.000 description 1
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical compound [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
본 명세서에서는, 일부 실시 형태에서, 바이오-조작된 면역조절 융합 단백질(bioengineered immunomodulatory fusion protein), 및 면역 반응을 조절하기 위한 것뿐만 아니라, 백신에 대한 대상체의 반응을 개선하거나, 또는 질병 또는 장애, 예컨대 암 또는 병원체 감염을 치료하기 위한 이의 용도가 제공된다.
Description
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2021년 3월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/160,686호; 2021년 3월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/160,688호; 2021년 3월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/160,691호; 2021년 3월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/160,693호; 2021년 3월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/160,694호의 이익을 주장하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 파일명이 "14620-628-228_SEQ_LISTING"이고, 작성일이 2022년 3월 6일이며, 크기가 150,953 바이트인 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-웹을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
기술분야
본 명세서에서는, 일부 실시 형태에서, 바이오-조작된 면역조절 융합 단백질(bioengineered immunomodulatory fusion protein)을 위한 재료 및 방법, 및 면역 반응 및/또는 면역 관련 질환을 검출, 조절하기 위한 이의 용도가 제공될 뿐만 아니라, 병원체 또는 백신에 대한 대상체의 반응을 스크리닝, 진단, 영향, 개선하기 위한, 또는 질병 또는 장애, 예컨대 신생물, 과형성, 암 또는 병원체 감염(들)을 치료하기 위한 재료 및 방법이 제공된다.
면역은 다양한 분자를 수반하는 다면적인 숙주 반응이다. 문헌[Manzoor Ahmad Mir, Chapter 1 - Introduction to Costimulation and Costimulatory Molecules, Editor(s): Manzoor Ahmad Mir, Developing Costimulatory Molecules for Immunotherapy of Diseases, Academic Press, 2015, Pages 1-43, ISBN 9780128025857]. 면역 반응에 관여하는 하나의 그러한 분자는 CD40 리간드(CD40L)(CD154)로서, 이는, 다양한 세포 및 조직 유형에 존재하고, CD4+ T 세포 상에서 고도로 발현되고 CD40 수용체 폴리펩티드와 상호작용하여 공동자극성 신호전달을 향상시키는 종양 괴사 인자(TNF) 슈퍼패밀리 구성원이다. CD40 수용체 폴리펩티드는 수지상 세포 및 B 세포를 포함한 다양한 선천 세포 및 적응 세포 상에서 발현된다. 문헌[Adv Drug Deliv Rev. 2019, 15;141:92-103; Immunol Rev. 2009 May; 229(1)]. CD40 효능작용(agonism)은 항원 제시를 향상시킬 수 있으며, 진단, 예후 및 요법과 같은 단일클론 항체 응용에 적합한 표적이다. 문헌[Cancers (Basel). 2021 Mar 15;13(6):1302].
특히 CD40 효능제(agonist) 단일클론 항체가 Fc 가교결합의 부재 하에서 불량하게 수행하고 임상 이익을 거의 나타내지 않았으며, 더욱이, CD40 효능제 항체의 전신 투여가 유해 사건 및 간 독성과 연관되어 있음을 이해하고 있는 본 발명의 발명자들은 면역 반응을 조절하기 위한 것뿐만 아니라 백신에 대한 대상체의 반응을 개선하거나 질병 또는 장애, 예컨대 암 또는 병원체 감염(예를 들어, 바이러스성 감염)을 치료하기 위한 조작된 CD40 효능제의 개선된 작제물에 대한 당업계에서의 충족되지 않은 요구를 확인하고 이에 대처하였다. 따라서, 일 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40 리간드 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더(tether)에 의해 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결된다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40 리간드 하위단위는 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체는 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체는 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG1 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG2 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 활성화를 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, CD40 폴리펩티드의 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, CD40 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD40 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 항종양 활성을 향상시킨다.
다른 태양에서, 본 명세서에 개시된 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 이량체는 동종이량체이다. 일부 실시 형태에서, 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성된다.
또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
또 다른 태양에서, 약제학적으로 허용되는 담체 및 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 키트가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다. 다른 태양에서, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일 태양에서, CD40 폴리펩티드를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 CD40 폴리펩티드를 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 결합 시에 상기 CD40 폴리펩티드를 활성화한다. 다른 태양에서, CD40 폴리펩티드를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 CD40 폴리펩티드를 본 명세서에 개시된 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 결합 시에 상기 CD40 폴리펩티드를 활성화한다. 또 다른 태양에서, T-세포를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 T-세포를 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 존재 하에서 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 항원-제시 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하고, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 T-세포를 활성화한다. 또 다른 태양에서, T-세포를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 T-세포를 본 명세서에 개시된 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 존재 하에서 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 항원-제시 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하고, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 T-세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 상기 항원-제시 세포는 T 세포에 항원을 제시한다. 또 다른 태양에서, 수지상 세포를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 CD40 폴리펩티드를 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 수지상 세포를 활성화한다. 또 다른 태양에서, 수지상 세포를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 CD40 폴리펩티드를 본 명세서에 개시된 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 수지상 세포를 활성화한다.
일부 실시 형태에서, 상기 방법은 시험관내(in vitro)에서 수행된다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 생체내(in vivo)에서 수행된다. 일부 실시 형태에서, 접촉시키는 단계는 약제학적으로 허용되는 담체 및 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 접촉은 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시킨다.
일 태양에서, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 다른 태양에서, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 및 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 치료는 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 제2 요법의 공동투여를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 암은 흑색종, 중피종, 진행성 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 (a) 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 단계; (b) 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 (c) 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 회수하는 단계를 포함한다. 다른 태양에서, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체를 생성하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 (a) 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 단계; (b) 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; (c) 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 회수하는 단계; 및 (d) 이량체화에 유리한 조건 하에서 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질들 또는 이들의 단편을 조합하는 단계를 포함한다. 또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편의 약제학적 조성물을 생성하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
일 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 펩티드 링커 중 적어도 하나는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커 중 적어도 2개는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커 중 적어도 2개는 동일한 서열을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 35 내지 38로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 CD40L로부터 유래되지 않는 펩티드 또는 폴리펩티드와 융합된다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 테더에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 N-말단에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 C-말단에 융합된다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 Fc 단량체 펩티드에 융합된다. 일부 실시 형태에서, Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG1 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG2 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 테더를 통해 Fc 단량체 펩티드에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체는 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체는 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 활성화를 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, CD40 폴리펩티드의 활성화는 T 세포 및/또는 B 세포의 면역-자극 기능을 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, CD40 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 B 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구 및/또는 호중구의 향상된 활성화를 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40 폴리펩티드의 활성화는 CD40 폴리펩티드의 증가하는 발현을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 항종양 활성을 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 전염증 활성을 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 감염성 병원체의 제거를 향상시킨다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 B 세포 집단의 항체 생성을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가시킨다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 T 세포 집단에 의한 전염증성 사이토카인의 분비를 증가시킨다. 일부 실시 형태에서, 전염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL 12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가된다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 대식세포 집단에서의 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%로 증가시킨다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 수지상 세포 집단에서의 항원-제시 수지상 세포의 최소 백분율을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%로 증가시킨다.
다른 태양에서, 폴리펩티드는 작용제(agent)에 접합된다. 일부 실시 형태에서, 작용제는 방사성 동위원소, 금속 킬레이트제, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물, 및 화학발광 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다.
다른 태양에서, 약제학적으로 허용되는 담체 및 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 키트가 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다.
다른 태양에서, CD40 폴리펩티드를 발현하는 표적 세포를 활성화하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 표적 세포를 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 표적 세포를 활성화한다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포의 활성화는 표적 세포의 증가된 증식 또는 성숙으로서 측정된다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포의 증식 또는 성숙은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900%, 또는 약 1000%만큼 증가된다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포의 활성화는 표적 세포의 연장된 생존 시간으로서 측정된다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900%, 또는 약 1000%만큼 증가된다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포는 항원-제시 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 자연 살해 세포, B 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 과립구, 호산구, 호중구, 또는 이들의 조합이다.
다른 태양에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성을 촉진하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 B 세포를 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900%, 또는 약 1000%만큼 증가된다.
다른 태양에서, B 세포는 항원 또는 상기 항원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 존재 하에서 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드와 접촉되며, 상기 B 세포에 의해 생성되는 항체는 상기 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 항원에 대한 반응에서 항체를 생성할 수 있는 기억 B 세포의 형성을 추가로 촉진한다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드는 백신 조성물 또는 애쥬번트 조성물 중에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 항원 또는 상기 항원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 백신 조성물 중에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 항원은 감염성 병원체로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시 형태에서, 항원은 질병 세포(diseased cell)로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시 형태에서, 항원은 항원-제시 세포에 의해 제시된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 수지상 세포이다. 일부 실시 형태에서, 항원은 MHC 클래스 I 또는 MHC 클래스 II 복합체와 회합된다.
다른 태양에서, T 세포 집단에 의한 전염증성 사이토카인의 분비를 증가시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량의 존재 하에서 상기 T 세포 집단을 항원-제시 세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL 12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가된다.
다른 태양에서, 대식세포 집단에 의한 질병 세포의 식세포작용을 증가시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 질병 세포, 상기 대식세포, 또는 상기 질병 세포 및 상기 대식세포 둘 모두를 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서의 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율이 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포에 의한 식세포작용은 제1 형광 염료로 표지된 대식세포와 제2 형광 염료로 표지된 질병 세포를 공동배양함으로써 측정되며, 여기서 제1 형광 염료와 제2 형광 염료는 상이하다. 일부 실시 형태에서, 식세포작용성 대식세포의 백분율은 질병 세포를 포함하는 대식세포의 백분율을 결정함으로써 측정된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포 또는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다.
다른 태양에서, 수지상 세포 집단에 의한 항원 제시를 증가시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 항원의 존재 하에서 상기 수지상 세포를 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포에 의한 항원 제시는 제1 형광 염료로 표지된 수지상 세포와 제2 형광 염료로 표지된 항원을 공동배양함으로써 측정되며, 여기서 제1 형광 염료와 제2 형광 염료는 상이하다. 일부 실시 형태에서, 항원을 제시하는 수지상 세포의 백분율은 수지상 세포 집단에서 항원과 공국재화(co-localizing)하는 수지상 세포의 백분율을 결정함으로써 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원은 감염성 병원체로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시 형태에서, 항원은 질병 세포로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드는 백신 조성물 또는 애쥬번트 조성물 중에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 항원 또는 상기 항원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 백신 조성물 중에 존재한다.
다른 태양에서, 표적 세포에 의한 CD40 폴리펩티드의 발현을 증가시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 표적 세포를 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포는 질병 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포는 면역 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 항원-제시 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 자연 살해 세포, B 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 과립구, 호산구, 호중구, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 감소된다.
다른 태양에서, 질병 세포 집단을 둘러싸는 조직에서 전염증성 환경(pro-inflammatory milieu)을 형성하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 조직을 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조직에서의 활성화된 B 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구 및/또는 호중구의 침윤이 증가된다.
일부 실시 형태에서, 전염증성 사이토카인의 농도가 조직에서 증가된다. 일부 실시 형태에서, 전염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL 12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포에 의한 질병 세포로부터 기원되거나 유래되는 항원의 제시가 조직에서 증가된다.
일부 실시 형태에서, 질병 세포의 식세포작용이 조직에서 증가된다.
일부 실시 형태에서, 세포-매개 세포독성에 의해 유도된 질병 세포의 아폽토시스가 조직에서 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항체-의존성 세포성 세포독성에 의해 유도된 질병 세포의 아폽토시스가 조직에서 증가된다.
일부 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 조직에서 감소된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 조직에서 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 감소된다.
일부 실시 형태에서, 상기 방법은 시험관내 또는 생체내에서 수행된다.
다른 태양에서, 대상체에서 질병 세포를 제거하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 질병 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현한다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다.
다른 태양에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 치료는 선천, 체액성 또는 세포-매개 항신생물성 면역 반응을 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 제2 요법의 공동투여를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 암은 흑색종, 중피종, 진행성 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 태양에서, 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 감염을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 - 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함함 - 을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 치료는 선천, 체액성 또는 세포-매개 항감염성 면역 반응을 향상시킨다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드는 대상체에서 감염을 예방하기 위해 백신 조성물과 공동투여된다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드는 백신 조성물과 동시에 또는 순차적으로 공동투여된다.
전술한 개요뿐만 아니라, 본 출원의 구체적인 실시 형태의 하기의 상세한 설명도 첨부 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 출원은 도면에 나타낸 정확한 실시 형태로 제한되지 않음이 이해되어야 한다.
도 1a 및 도 1b는 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 예의 개략도를 나타낸다. 도 1a는 CD40L 삼량체 설계 최적화의 예시를 나타내는데, 여기서는 테더 길이, 링커 길이, 및 융합 배향에 대처하도록 분자들을 설계하였다. 도 1b는 Fc 단량체 펩티드에 융합된 CD40L 삼량체(원으로 표시됨)를 함유하는 단일쇄 융합 단백질인 "모노(Mono) Fc" 분자의 예시를 나타내며, 여기서 Fc는 이의 CH3 도메인 내에, 이 분자의 이량체 형성을 제거하는 돌연변이를 함유한다.
도 2a 및 도 2b는 단백질 A 정제 후 Fc 상의 CD40L 삼량체의 단분산도(monodispersity)를 나타낸다. 도 2a는 TPP000161222의 SDS-PAGE 겔(좌측 패널) 및 SEC 크로마토그램(우측 패널)을 나타내는 반면, 도 2b는 TPP000182983의 SDS-PAGE 겔 및 SEC 크로마토그램을 나타낸다.
도 3은 분석용 초원심분리(AUC)에 의해 측정된 크기 배제 크로마토그래피 후의 TPP000182983의 단분산도를 나타낸다. 모든 샘플을 2회 반복하여 분석하였다(n=2). 단백질은 주로 약 7초에서 전개되며, 이때 주요 종 집단은 98%이다. 또한, 저분자량 종(LMWS) <1%, 이량체<2%, 그리고 고분자량 종(HMWS) <1%로 존재한다.
도 4a 내지 도 4c는 CD40에 대한 CD40 효능제의 결합을 나타낸다. 도 4a는 MSD(Meso Scale Discovery) 생물발광 검정을 사용하여 측정된 CD40R에 대한 CD40L 삼량체의 결합을 나타낸다. 도 4b는 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 측정된 CD40R에 대한 TPP000182983의 결합을 나타낸다. 도 4c는 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 측정된 CD40R에 대한 TPP000161222의 결합을 나타낸다.
도 5a 내지 도 5c는 하기 검정을 사용하여 시험된 CD40L 삼량체의 기능적 활성을 나타낸다: 도 5a에서는 HEK-Blue 리포터 검정, 도 5b에서는 단핵구 유래 수지상 세포 활성화 검정, 그리고 도 5c에서는 교차 결합 항체(cross linking antibody) 처리의 부재 하에서의 성숙 수지상 세포 활성화 검정.
도 6a 내지 도 6e는 하기 활성화 마커를 사용한 수지상 세포 활성화 검정에 의한 CD40L 삼량체 Fc의 기능적 활성의 평가를 나타낸다: CD86 활성화 마커(도 6a); CD40 활성화 마커(도 6b); CD83 활성화 마커(도 6c); HLA-DR 활성화 마커(도 6d), 및 PDL1 활성화 마커(도 6e).
도 7a 및 도 7b는 CD8+ T 세포(도 7a) 및 CD4+ T 세포(도 7b)에 대한 CD40 효능제 및 CEF 펩티드의 존재 하에서의 moDC로부터 생성된 T 세포 반응을 나타낸다.
도 1a 및 도 1b는 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 예의 개략도를 나타낸다. 도 1a는 CD40L 삼량체 설계 최적화의 예시를 나타내는데, 여기서는 테더 길이, 링커 길이, 및 융합 배향에 대처하도록 분자들을 설계하였다. 도 1b는 Fc 단량체 펩티드에 융합된 CD40L 삼량체(원으로 표시됨)를 함유하는 단일쇄 융합 단백질인 "모노(Mono) Fc" 분자의 예시를 나타내며, 여기서 Fc는 이의 CH3 도메인 내에, 이 분자의 이량체 형성을 제거하는 돌연변이를 함유한다.
도 2a 및 도 2b는 단백질 A 정제 후 Fc 상의 CD40L 삼량체의 단분산도(monodispersity)를 나타낸다. 도 2a는 TPP000161222의 SDS-PAGE 겔(좌측 패널) 및 SEC 크로마토그램(우측 패널)을 나타내는 반면, 도 2b는 TPP000182983의 SDS-PAGE 겔 및 SEC 크로마토그램을 나타낸다.
도 3은 분석용 초원심분리(AUC)에 의해 측정된 크기 배제 크로마토그래피 후의 TPP000182983의 단분산도를 나타낸다. 모든 샘플을 2회 반복하여 분석하였다(n=2). 단백질은 주로 약 7초에서 전개되며, 이때 주요 종 집단은 98%이다. 또한, 저분자량 종(LMWS) <1%, 이량체<2%, 그리고 고분자량 종(HMWS) <1%로 존재한다.
도 4a 내지 도 4c는 CD40에 대한 CD40 효능제의 결합을 나타낸다. 도 4a는 MSD(Meso Scale Discovery) 생물발광 검정을 사용하여 측정된 CD40R에 대한 CD40L 삼량체의 결합을 나타낸다. 도 4b는 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 측정된 CD40R에 대한 TPP000182983의 결합을 나타낸다. 도 4c는 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 측정된 CD40R에 대한 TPP000161222의 결합을 나타낸다.
도 5a 내지 도 5c는 하기 검정을 사용하여 시험된 CD40L 삼량체의 기능적 활성을 나타낸다: 도 5a에서는 HEK-Blue 리포터 검정, 도 5b에서는 단핵구 유래 수지상 세포 활성화 검정, 그리고 도 5c에서는 교차 결합 항체(cross linking antibody) 처리의 부재 하에서의 성숙 수지상 세포 활성화 검정.
도 6a 내지 도 6e는 하기 활성화 마커를 사용한 수지상 세포 활성화 검정에 의한 CD40L 삼량체 Fc의 기능적 활성의 평가를 나타낸다: CD86 활성화 마커(도 6a); CD40 활성화 마커(도 6b); CD83 활성화 마커(도 6c); HLA-DR 활성화 마커(도 6d), 및 PDL1 활성화 마커(도 6e).
도 7a 및 도 7b는 CD8+ T 세포(도 7a) 및 CD4+ T 세포(도 7b)에 대한 CD40 효능제 및 CEF 펩티드의 존재 하에서의 moDC로부터 생성된 T 세포 반응을 나타낸다.
본 발명은 향상된 T 세포 및 수지상 세포 활성화를 가져오는 향상된 CD40 활성화 및 유리한 생물물리학적 특성을 갖는 단일 CD40L Fc 융합 단백질의 놀라운 발견에 부분적으로 기초한다. 따라서, 본 발명의 조성물 및 방법은 CD40-CD40L 경로를 표적화하는 신규하고 개선된 치료 전략에 대한 방안을 제공한다.
다양한 간행물, 논문, 및 특허가 배경기술에 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되어 있거나 기재되어 있으며; 이들 참고문헌 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 장치, 물품 등에 대한 논의는 본 발명에 대한 상황을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성하는 것을 인정하는 것은 아니다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용되는 소정의 용어는 본 명세서에 제시된 바와 같은 의미를 갖는다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로 인용된 값의 ±10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10% (w/v)의 농도 범위는 0.9% (w/v) 내지 11% (w/v)를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한, 수치 범위의 사용은 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 예를 들어 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분율을 명시적으로 포함한다.
달리 지시되지 않는 한, 일련의 요소 앞의 용어 "적어도"는 일련 내의 각각의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다.
당업자는 단지 일반적인 실험을 사용하여, 본 명세서에서 설명된 본 발명의 구체적인 실시 형태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 그러한 등가물은 본 발명에 의해 포함되도록 의도된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하다", "포함하는", "구비하다", "구비하는", "갖는다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는", 또는 이들의 임의의 다른 변형은 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함을 내포하지만 임의의 다른 정수 또는 정수들의 군의 배제를 내포하지 않는 것으로 이해될 것이며, 비배타적 또는 개방형(open-ended)인 것으로 의도된다. 예를 들어, 요소들의 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치는 반드시 그러한 요소들만으로 제한되지는 않고, 그러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치에 고유하거나 명시적으로 열거되어 있지 않은 다른 요소들을 포함할 수 있다. 또한, 명시적으로 반대로 기재되어 있지 않는 한, "또는"은 배타적 '또는'이 아니라 포괄적 '또는'을 지칭한다. 예를 들어, 조건 A 또는 B는 하기 중 어느 하나에 의해 만족된다: A가 참(또는 존재함)이고 B가 거짓(또는 존재하지 않음)임, A가 거짓(또는 존재하지 않음)이고 B가 참(또는 존재함)임, A 및 B 둘 모두가 참(또는 존재함)임.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 다수의 언급된 요소들 사이의 접속 용어 "및/또는"은 개별 선택지 및 조합된 선택지 둘 모두를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 2개의 요소들이 "및/또는"에 의해 결합되는 경우, 제1 선택지는 제2 요소 없이 제1 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제2 선택지는 제1 요소 없이 제2 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제3 선택지는 제1 요소와 제2 요소가 함께 적용가능함을 지칭한다. 이들 선택지 중 어느 것이든 하나는 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 본 명세서에 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다. 이들 선택지 중 하나 초과의 동시 적용가능성 또한 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "~로 이루어진다", 또는 변형, 예컨대 "~로 이루어지다" 또는 "~로 이루어진"은, 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함을 나타내지만, 추가의 정수 또는 정수들의 군이 명시된 방법, 구조, 또는 조성물에 추가될 수 없다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "~로 본질적으로 이루어진다", 또는 변형, 예컨대 "~로 본질적으로 이루어지다" 또는 "~로 본질적으로 이루어진"은, 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함, 및 명시된 방법, 구조 또는 조성물의 기본적 또는 신규한 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 선택적인 포함을 나타낸다. 문헌[M.P.E.P. § 2111.03]을 참조한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "대상체"는 임의의 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "포유동물"은 임의의 포유동물을 포함한다. 포유동물의 예에는 소, 말, 양, 돼지, 고양이, 개, 마우스, 래트, 토끼, 기니 피그, 원숭이, 인간 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 대상체는 인간이다. 소정 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료", 또는 "치료하는"은 특정 질병, 장애, 및/또는 질환의 하나 이상의 증상 또는 특징을 부분적으로 또는 완전히 경감시키는 데, 호전시키는 데, 완화시키는 데, 억제하는 데, 예방하는 데, 이의 발병을 지연시키는 데, 이의 중증도를 감소시키는데, 그리고/또는 이의 발병률을 감소시키는 데 사용되는 임의의 방법을 지칭한다. 치료는, 질병과 관련된 병리가 발생될 위험을 감소시킬 목적으로, 질병의 징후를 나타내지 않고/않거나 단지 질병의 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 투여될 수 있다.
또한, 본 명세서에서 바람직한 발명의 구성요소의 치수 또는 특성을 언급할 때 사용되는 용어 "약", "대략", "대체로", "실질적으로" 및 유사한 용어들은 기재된 치수/특성이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니고, 그로부터 기능적으로 동일하거나 유사한 사소한 변동은 배제하지 않음을 나타낸다는 것이 이해되어야 하며, 이는 당업자에 의해 이해되는 바와 같을 것이다. 최소한으로, 수치 파라미터를 포함하는 그러한 언급은 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리(예를 들어, 반올림, 측정 오차 또는 다른 계통 오차, 제조 공차 등)를 사용하여, 최소 유효 숫자를 변화시키지 않게 될 변형을 포함할 것이다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여, 용어 "동일한" 또는 퍼센트 "동일성"은, 시각적 검사에 의해, 또는 하기 서열 비교 알고리즘들 중 하나를 사용하여 측정되는 바와 같이, 최대 일치도(maximum correspondence)에 대해 비교되고 정렬될 때, 동일하거나, 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 명시된 백분율을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다.
서열 비교를 위하여, 전형적으로 하나의 서열이 시험 서열의 비교 대상이 되는 참조 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 서열 및 참조 서열을 컴퓨터에 입력하고, 필요에 따라 하위서열 좌표를 지정하고, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터를 지정한다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여, 참조 서열과 대비하여 시험 서열(들)에 대한 퍼센트 서열 동일성을 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어 스미스 및 워터만(문헌[Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)])의 국부 상동성 알고리즘에 의해, 니들만 및 분쉬(문헌[Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)])의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 피어슨 및 립만(문헌[Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)])의 유사성 검색 방법에 의해, 이들 알고리즘의 전산화 구현(미국 위스콘신주 매디슨, 575 사이언스 드라이브 소재의 Genetics Computer Group의 Wisconsin Genetics Software Package의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 시각적 검사(전반적으로, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel)] 참조)에 의해 수행될 수 있다.
퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하기에 적합한 알고리즘의 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이며, 이들은 각각 문헌[Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410] 및 문헌[Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402]에 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 입수가능하다. 이 알고리즘은 먼저, 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어와 정렬될 때 일부 양성-값의 임계치 점수 T와 일치하거나 이를 만족하는, 질의 서열에서 길이 W의 짧은 단어를 식별함으로써 높은 점수의 서열 쌍(HSP: high scoring sequence pair)을 식별하는 단계를 수반한다. T는 이웃 단어 점수 임계치(문헌[Altschul et al, 상기 참조])로 지칭된다. 이들 초기 이웃 단어 히트는 검색을 개시하여 이들을 함유하는 더 긴 HSP를 찾기 위한 종자로서 작용한다. 이어서, 누적 정렬 점수가 증가될 수 있는 한, 각각의 서열을 따라 양 방향으로 단어 히트를 연장한다.
뉴클레오티드 서열의 경우, 누적 점수를 파라미터 M(일치하는 잔기 쌍에 대한 보상 점수; 항상 >0) 및 N(일치하지 않는 잔기에 대한 페널티 점수; 항상 <0)을 사용하여 계산한다. 아미노산 서열의 경우, 점수 매트릭스를 사용하여 누적 점수를 계산한다. 각 방향으로의 단어 히트의 연장은, 누적 정렬 점수가 이의 달성된 최대 값으로부터 X의 양만큼 떨어질 때; 누적 점수가 하나 이상의 음성-점수 잔기 정렬의 집적으로 인해 0 또는 그 아래가 될 때; 또는 서열의 말단에 도달할 때 중단된다. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T 및 X는 정렬의 감도와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열용)은 디폴트로 11의 단어 길이(W), 10의 기대치(E), M=5, N=-4 및 두 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로 3의 단어 길이(W), 10의 예상치(E) 및 BLOSUM62 점수 매트릭스를 사용한다(문헌[Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)] 참조).
퍼센트 서열 동일성을 계산하는 단계에 더하여, BLAST 알고리즘은 또한 2개의 서열 사이의 유사성의 통계적 분석을 수행한다(예를 들어, 문헌[Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)] 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 일 척도는 최소 합계 확률(P(N))이며, 이는 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 일치가 우연히 발생할 확률의 지표를 제공한다. 예를 들어, 참조 핵산에 대한 시험 핵산의 비교에서 최소 합계 확률이 약 0.1 미만, 더 바람직하게는 약 0.01 미만, 그리고 가장 바람직하게는 약 0.001 미만인 경우, 핵산은 참조 서열과 유사한 것으로 간주된다.
2개의 핵산 서열 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일하다는 추가의 지표는, 하기에 기재된 바와 같이, 제1 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드가 제2 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드와 면역학적으로 교차 반응성이라는 것이다. 따라서, 폴리펩티드가 전형적으로 제2 폴리펩티드와 실질적으로 동일한 경우는, 예를 들어 이들 2개의 펩티드가 보존적 치환에 의해서만 상이한 경우뿐이다. 2개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 다른 지표는 2개의 분자가 엄격한 조건 하에서 서로 혼성화되는 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 동의어로서 "핵산 분자", "뉴클레오티드", 또는 "핵산"으로 지칭되는 용어 "폴리뉴클레오티드"는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭하며, 이는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. "폴리뉴클레오티드"는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더 전형적으로는 이중-가닥일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하거나 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물을 포함하는 혼성(hybrid) 분자를 포함한다. 게다가, "폴리뉴클레오티드"는 RNA 또는 DNA 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA, 및 안정성 또는 다른 이유로 골격이 변형된 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트라이틸화(tritylated) 염기 및 통상이 아닌 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형이 실행될 수 있으며; 따라서, "폴리뉴클레오티드"는 천연에서 전형적으로 발견되는 바와 같은 폴리뉴클레오티드의 화학적으로, 효소적으로, 또는 대사적으로 변형된 형태뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 DNA 및 RNA의 화학적 형태도 포함한다. "폴리뉴클레오티드"는, 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 핵산 사슬을 또한 포함한다.
용어 "인코딩"은 뉴클레오티드(예를 들어, rRNA, tRNA 및 mRNA)의 정의된 서열 또는 아미노산의 정의된 서열 중 어느 하나를 갖는, 생물학적 과정에서 다른 중합체 및 거대분자의 합성을 위한 주형으로서의 역할을 하는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 유전자, cDNA, 또는 mRNA 내의 뉴클레오티드들의 특이적 서열의 고유 특성 및 그로부터 발생되는 생물학적 특성을 지칭한다. 따라서, 유전자, cDNA 또는 RNA는 그러한 유전자에 상응하는 mRNA의 전사 및 번역이 세포 또는 다른 생물학적 시스템에서 단백질을 생성한다면 단백질을 인코딩한다. mRNA 서열과 동일하고 서열 목록에 통상 제공되는 뉴클레오티드 서열을 갖는 코딩 가닥, 및 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 주형으로서 사용되는 비-코딩 가닥 둘 모두는 그러한 유전자 또는 cDNA의 단백질 또는 다른 생성물을 인코딩하는 것으로 지칭될 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열"(또는 등가적 어구)은 서로의 축퇴된 버전인 그리고 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 단백질 또는 RNA를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이라는 어구는 또한 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 어떤 버전에서 인트론(들)을 함유할 수 있는 정도까지 인트론을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "벡터"는 레플리콘이며, 그 안에는 세그먼트의 복제 또는 발현을 일으키도록 다른 핵산 세그먼트가 작동가능하게 삽입될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 세포를 지칭한다. "숙주 세포"는 임의의 유형의 세포, 예를 들어 초대 세포, 배양 중인 세포, 또는 세포주로부터의 세포일 수 있다. 일 실시 형태에서, "숙주 세포"는 본 명세서에 개시된 핵산 분자로 형질감염된 세포이다. 다른 실시 형태에서, "숙주 세포"는 그러한 형질감염된 세포의 자손 또는 잠재적 자손이다. 세포의 자손은, 예를 들어, 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈 내로의 핵산 분자의 통합으로 인해 모세포와 동일하거나 동일하지 않을 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "발현"은 유전자 산물의 생합성을 지칭한다. 이 용어는 RNA로의 유전자의 전사를 포함한다. 이 용어는 또한, 하나 이상의 폴리펩티드로의 RNA의 번역을 포함하고, 모든 천연 발생 전사후 및 번역후 변형을 추가로 포함한다. 발현된 분자는 숙주 세포의 세포질 내에 있거나, 세포 배양물의 성장 배지와 같은 세포외 환경 내에 있거나, 세포막에 고정될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "펩티드", "폴리펩티드", 또는 "단백질"은 아미노산으로 구성되고 당업자에 의해 단백질로서 인식될 수 있는 분자를 지칭할 수 있다. 아미노산 잔기에 대한 통상적인 1-문자 또는 3-문자 코드가 본 명세서에 사용된다. 용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 그것은 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 그것에는 비-아미노산이 개재될 수 있다. 이 용어는 또한 천연적으로 변형되었거나, 또는 개입에 의해, 예를 들어 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지화 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 유사체(예를 들어, 비천연 아미노산 등을 포함함)를 함유하는 폴리펩티드뿐만 아니라 당업계에 알려진 다른 변형이 정의 내에 또한 포함된다.
본 명세서에 기재된 펩티드 서열은 펩티드의 N-말단 영역은 좌측에 있고 C-말단 영역은 우측에 있다는 통상의 규약에 따라 표기된다. 아미노산의 이성질체 형태가 공지되어 있지만, 이는, 달리 명시적으로 지시되지 않는 한, 표현된 아미노산의 L-형태이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체" 또는 "면역글로불린"은 넓은 의미로 사용되며, 단일클론 또는 다중클론인 인간 항체, 인간화 항체, 복합 항체 및 키메라 항체 및 항체 단편을 포함한다. 일반적으로, 항체는 특정 항원에 대하여 결합 특이성을 나타내는 단백질 또는 펩티드 사슬이다. 자연 발생 항체는 불변 도메인 및 가변 도메인으로 접혀진 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄로 이루어진 Y자형 분자이다. 중쇄 및 경쇄를 포함할 뿐만 아니라, 각각의 중쇄 및 경쇄 내에 불변 영역 및 가변 영역을 포함하는 항체 구조는 잘 알려져 있다. 즉, 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 더하여, 항체는 경쇄 가변 영역(VL) 및 중쇄 가변 영역(VH)으로 구성된 항원-결합 영역을 함유하며, 이들 영역 각각은 3개의 도메인(즉, 상보성 결정 영역 1(CDR1), CDR2 및 CDR3)을 함유한다. "CDR"은 면역글로불린(Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(HCDR1, HCDR2 또는 HCDR3) 중 하나, 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(LCDR1, LCDR2 또는 LCDR3) 중 하나를 지칭한다. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5개의 주요 부류(즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM)로 정해질 수 있다. IgA 및 IgG는 동종형(isotype) IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 추가로 하위분류된다.
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은, 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 관여하지는 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단부를 지칭한다. 이들 용어는 항원-결합 부위를 함유하는 면역글로불린의 다른 부분, 즉 가변 영역에 비하여 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 일부분을 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
용어 "Fc 영역"은 항체의 불변 영역의 카르복시 말단 부분을 지칭하고 중쇄의 CH2 및 CH3 영역을 포함한다. 2개의 CH3 도메인은 서로 상호작용하여 동종이량체를 형성하며, 이는 Fc의 이량체화를 가져온다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "Fc 단량체" 또는 "mFc" 또는 "Fc 단량체 펩티드"는 중쇄의 CH2 및 CH3 영역 또는 이의 일부분으로 이루어진 단량체성 Fc 영역의 카르복시 말단 부분을 포함하는 분자를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG1 서열이다. 일부 실시 형태에서, IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 이의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, IgG1 서열은 서열 번호 31 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG 서열은 IgG2 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함한다.
본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 5개의 주요 부류 또는 상응하는 하위부류 중 임의의 것의 Fc 단량체 펩티드를 포함할 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 Fc 단량체 펩티드는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다. 추가의 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 Fc 단량체 펩티드는 인간 IgG1 및 인간 IgG2 동종형이다. 추가의 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 Fc 단량체 펩티드 성분은 침묵된 이펙터 기능을 갖는다.
따라서, 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인에 상응하는 Fc 단량체 펩티드를 함유할 수 있다. 특정 실시 형태에 따르면, 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 래트 또는 인간 항체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 갖는 Fc 단량체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 획득된 항체를 지칭하는데, 즉 집단을 구성하는 개별 항체들이, 소량으로 존재할 수 있는 천연 발생 돌연변이의 가능성을 제외하고는 동일하다. 본 명세서에 개시된 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 파지 디스플레이 기술, 단일 림프구 유전자 클로닝 기술에 의해, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체는 인간 중쇄 도입유전자 및 경쇄 도입유전자를 포함하는 게놈을 갖는 유전자도입 비인간 동물, 예컨대 유전자도입 마우스 또는 래트로부터 획득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성될 수 있다. 따라서, 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 단일클론 항체로부터의 Fc 단량체를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일쇄 항체"는 당업계에서의 통상적인 단일쇄 항체를 지칭하는 것으로, 이것은 약 15 내지 약 20개의 아미노산의 짧은 펩티드에 의해 연결된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 따라서, 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 단일쇄 항체로부터의 Fc 단량체를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 인간에 의해 생성되는 항체 또는 당업계에 알려진 임의의 기법을 사용하여 제조된, 인간에 의해 생성되는 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 지칭한다. 인간 항체의 이러한 정의는 온전한 항체 또는 전장(full-length) 항체, 이의 단편, 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 인간 항체로부터의 Fc 단량체를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간화 항체"는 인간 항체와의 서열 상동성을 증가시키도록 변형되어, 항체의 항원-결합 특성은 유지되지만, 인간 체내에서의 이의 항원성은 감소되도록 한 비-인간 항체를 지칭한다. 따라서, 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 인간화 항체로부터의 Fc 단량체를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "CD40 리간드" 또는 "CD40L"은 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 슈퍼패밀리의 공동자극성 구성원인 CD40/TNFRSF5에 대한 리간드로서 작용하는 단백질, 또는 단백질의 단편을 지칭한다. 특정 CD40L 서열은 공개적으로 접근가능한 데이터베이스, 예컨대 UniProt로부터, 예를 들어 UniProt 수탁 번호 P29965로 획득될 수 있다. CD40L은 세포외 도메인, 줄기 영역, 막관통 나선, 및 짧은 세포질 도메인으로 이루어진다. CD40L의 활성은 215-아미노산 세포외 도메인에 위치하며, 이는 β-시트, α-나선 루프, 및 β-시트로 구성된 샌드위치 구조를 특징으로 한다. 이 구조는 CD40L의 삼량체화를 가능하게 한다. 용어 CD40L은, 적어도 약 50, 적어도 55, 적어도 60, 적어도 65, 적어도 70, 적어도 75, 적어도 80, 적어도 85, 적어도 90, 적어도 95, 적어도 98 또는 적어도 99% 서열 동일성 및 CD40에 대한 리간드로서 작용하는 능력을 갖는 폴리펩티드 또는 이의 임의의 단편을 추가로 포함한다. 용어 CD40L은 전장 CD40L 및 이의 임의의 단편, 예를 들어 CD40L의 세포외 도메인 부분을 포함한다. 이 용어는 가용성 CD40L(sCD40L)을 추가로 포함하는데, 이는 각종 질병 환경에서 보고되어 있으며 단량체 및 다량체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질 또는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 관련하여, 개별 CD40L 성분은 "CD40L 하위단위"로 지칭된다. 함께 융합된 3개의 CD40L 하위단위로 이루어진 융합 단백질의 부분은 "CD40L 삼량체"로도 지칭될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "융합 단백질"은, 함께 연결되어 동일한 자연 발생 폴리펩티드에는 존재하지 않는 서열을 생성하는 2개 이상의 펩티드 세그먼트를 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질"은 3개의 CD40L 하위단위에, 일반적으로 (선택적으로, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 펩티드 테더를 통해) 연결된 단량체성 Fc 영역(mFc)을 포함하는 단백질을 지칭하는 것으로, 이는 본 명세서에 기재되고 도 1에 나타낸 바와 같다. 구체적으로는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은, 3개의 CD40L 세포외 도메인(ECD) 또는 이들의 단편이 가요성 펩티드 링커에 의해 서로 연결되어 선형 CD40L 삼량체를 형성하고, 이것이 펩티드 테더에 의해 Fc 단량체 펩티드의 N-말단 또는 C-말단 중 어느 하나에 연결되어 이루어진다. 따라서, 상이한 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 CD40L 삼량체의 C-말단 또는 N-말단 Fc 융합체 중 어느 하나일 수 있다.
일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체는 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 2를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 3을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 4를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 5를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 6을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 7을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 8을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 9를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 10을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 11을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 12를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 2의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 3의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 4의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 5의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 6의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 7의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 8의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 9의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 10의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 11의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 12의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체는 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 14를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 15를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 17을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 18을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 19를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 14의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 15의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 17의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 18의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 19의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40 리간드 하위단위는 CD40L 세포외 서열의 일부분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함한다.
일 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 20의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 21의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 22의 단편을 포함한다.
일 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 20을 포함한다. 다른 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 21을 포함한다. 다른 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 22를 포함한다.
일부 경우에, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 동종이량체성 Fc 융합 단백질 또는 이종이량체성 Fc 융합 단백질을 형성할 수 있으며, 이때 후자가 바람직하다. 일 실시 형태에서, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 동종이량체성 Fc 융합 단백질을 형성한다. 일 실시 형태에서, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 이종이량체성 Fc 융합 단백질을 형성한다. 일부 경우에, 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 하나의 단량체는 단지 Fc 단량체 펩티드 또는 이의 단편만을 포함하고, 나머지 다른 하나의 단량체는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 참조 또는 야생형 Fc 단량체와 대비하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 변이체 Fc 단량체를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 하나의 단량체는 Fc 단량체 펩티드 또는 이의 단편 및 CD40L 이외의 단백질 도메인, 예컨대 수용체, 리간드 또는 다른 결합 파트너를 포함한다. 따라서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 이중특이성 분자인 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 성분일 수 있다.
용어 "이중특이성 분자"는, 각각의 결합 도메인이 표적 단백질, 리간드 또는 이의 단편에 특이적으로 결합할 수 있는 2개의 결합 도메인을 갖는 분자를 지칭한다. 그러한 바와 같이, 이중특이성 분자는 다른 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 비항체 단백질, 리간드 및 이들의 단편인 결합 도메인을 포함할 수 있으며, 이에는 재조합 항원이 포함된다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 분자는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함할 수 있다.
용어 "결합한다" 또는 "결합하는"은, 예를 들어 복합체를 형성하는 것을 포함한 분자들 사이의 상호작용을 지칭한다. 용어 "결합 도메인"은 다른 분자 또는 리간드와의 특이적 결합 상호작용을 담당하는 분자의 일부분을 지칭한다. 상호작용은, 예를 들어 비공유 상호작용일 수 있으며, 이에는 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호작용, 및/또는 반데르 발스 상호작용이 포함된다. 복합체는 또한 공유 또는 비공유 결합, 상호작용, 또는 힘에 의해 함께 유지된 2개 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 항체 상의 단일 항원-결합 부위와 표적 분자, 예컨대 항원의 단일 에피토프 사이의 총 비공유 상호작용의 강도는 그 에피토프에 대한 항체 또는 기능성 단편의 친화도이다. 1가 항원에 대한 결합 분자(예를 들어, 항체)의 해리 속도(koff) 대 결합 속도(kon)의 비(koff/kon)는 해리 상수 KD이며, 이는 친화도와 역상관된다. KD 값이 낮을수록, 결합 분자의 친화도는 더 높다. KD의 값은 결합 분자와 이의 리간드(즉, 항체와 항원)의 상이한 복합체들에 대해 달라지며, kon 및 koff 둘 모두에 좌우된다. 결합 도메인은 1×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M 이하, 5×10-10 M 이하, 또는 1×10-10 M 이하의 KD로 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 본 명세서에 제공된 결합 분자에 대한 해리 상수 KD는 본 명세서에 제공된 임의의 방법 또는 당업자에게 잘 알려진 임의의 다른 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화도는 결합 분자와 이의 결합 파트너 사이의 상호작용의 진정한 강도(true strength)를 항상 반영하는 것은 아니다.
본 명세서에 기재된 결합 분자와 관련하여, "~에 결합하다", "~에 특이적으로 결합하는"과 같은 용어, 및 유사한 용어는 또한 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되며, 항원에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인의 결합 분자, 예컨대 폴리펩티드를 지칭한다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 관련 항원과 교차-반응성일 수 있다. 소정 실시 형태에서, 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 결합 분자 또는 항원-결합 도메인은 다른 항원과 교차-반응하지 않는다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 결합 분자 또는 항원-결합 도메인은, 예를 들어 면역검정, Octet®, Biacore®, 또는 당업자에게 알려진 다른 기법에 의해 확인될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 방사면역검정(RIA) 및 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)과 같은 실험 기법을 사용하여 결정될 때 임의의 교차-반응성 항원보다 더 높은 친화도로 항원에 결합하는 경우에, 결합 분자 또는 항원-결합 도메인은 항원에 결합하거나 특이적으로 결합한다. 전형적으로, 특이적이거나 선택적인 반응은 백그라운드 신호 또는 노이즈의 적어도 2배일 것이며 백그라운드의 10배 초과일 수 있다. 결합 특이성에 관한 논의에 대해서는, 예를 들어 문헌[Fundamental Immunology 332-36 (Paul, ed., 2d ed. 1989)]을 참조한다. 소정 실시 형태에서, 예를 들어 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석 또는 RIA에 의해 결정될 때, "비표적" 단백질에 대한 결합 분자 또는 항원-결합 도메인의 결합의 정도는 그의 특정 표적 항원에 대한 결합 분자 또는 항원-결합 도메인의 결합의 약 10% 미만이다. "특이적 결합", "~에 특이적으로 결합한다", 또는 "~에 특이적인"과 같은 용어에 관해서는, 비특이적 상호작용과는 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 예를 들어, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조 분자의 결합과 대비하여 분자의 결합을 결정함으로써, 특이적 결합을 측정할 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적과 유사한 대조 분자, 예를 들어 과량의 비표지된 표적과의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우에, 표지된 표적의 프로브에 대한 결합이 과량의 비표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제된다면 특이적 결합으로 명시된다. 예를 들어, 항원에 결합하는 결합 분자 또는 항원-결합 도메인에는, 결합 분자가, 예를 들어 항원을 표적화하는 데 진단제로서 유용하도록 충분한 친화도로 항원에 결합할 수 있는 것이 포함된다. 소정 실시 형태에서, 항원에 결합하는 결합 분자 또는 항원-결합 도메인은 800 nM, 600 nM, 550 nM, 500 nM, 300 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 결합 분자 또는 항원-결합 도메인은 상이한 종들로부터의 항원 사이(예를 들어, 인간 종과 사이노 종 사이)에 보존된 항원의 에피토프에 결합한다.
"결합 친화도"는 일반적으로 분자(예를 들어, 결합 단백질, 예컨대 CD40L)의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어, CD40/TNFRSF5) 사이의 비공유 상호작용들의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "결합 친화도"는 결합쌍의 구성원들(예를 들어, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 결합 분자 X의 그의 결합 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 평형 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 본 명세서에 기재된 것들을 포함한 당업계에 알려진 통상의 방법에 의해 친화도가 측정될 수 있다. 저친화성 항체는 일반적으로 항원에 천천히 결합하고 쉽게 해리되는 경향이 있는 반면에, 고친화성 항체는 일반적으로 항원에 더 빠르게 결합하고 더 길게 결합이 유지되는 경향이 있다. 결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 당업계에 알려져 있으며, 이들 중 임의의 것이 본 발명의 목적에 사용될 수 있다. 구체적인 예시적인 실시 형태는 하기를 포함한다. 일 실시 형태에서, "KD" 또는 "KD 값"은 당업계에 알려진 검정에 의해, 예를 들어 결합 검정에 의해 측정될 수 있다. KD는, 예를 들어 관심 항체의 Fab 버전 및 이의 항원으로 수행되는 RIA에서 측정될 수 있다(문헌[Chen et al., 1999, J. Mol Biol 293:865-81]). KD 또는 KD 값은 또한 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정을 사용함으로써 측정될 수 있으며, 이들은, 예를 들어 Octet®Red96 시스템을 사용하여 Octet®에 의해, 또는, 예를 들어 Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하여 Biacore®에 의해 측정될 수 있다. "온-속도" 또는 "결합의 속도" 또는 "결합 속도" 또는 "kon"이 또한, 예를 들어 Octet®Red96, Biacore®TM-2000, 또는 Biacore®TM-3000 시스템을 사용하는 전술된 것과 동일한 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기법으로 결정될 수 있다.
소정 실시 형태에서, 결합 분자 또는 항원-결합 도메인은, 천연 CDR 잔기가, 원하는 특이성, 친화도, 및 능력(capacity)을 갖는 낙타과, 마우스, 래트, 토끼, 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종의 상응하는 CDR(예를 들어, 공여자 항체)로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(예를 들어, 수용자 항체)로부터의 서열을 포함하는 비인간(예를 들어, 낙타과, 뮤린, 비인간 영장류) 항체의 "인간화" 형태의 부분을 포함할 수 있다. 일부 경우에는, 인간 면역글로불린 서열의 하나 이상의 FR 영역 잔기가 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 더욱이, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 추가로 개선하도록 이루어진다. 인간화 항체의 중쇄 또는 경쇄는 적어도 하나 이상의 가변 영역의 실질적으로 전부를 포함할 수 있으며, 여기서 CDR의 전부 또는 실질적으로 전부는 비인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 소정 실시 형태에서, 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부분을 포함할 것이다. 추가의 세부사항에 대해서는, 문헌[Jones et al., 1986, Nature 321:522-25]; 문헌[Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-29]; 문헌[Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-96]; 문헌[Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89]; 미국 특허 제6,800,738호; 제6,719,971호; 제6,639,055호; 제6,407,213호; 및 제6,054,297호를 참조한다.
본 명세서에 기재되거나 언급된 기법 및 절차는, 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3d ed. 2001)]; 문헌[Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., 2003)]; 문헌[Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed. 2009)]; 문헌[Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar ed. 2010)]; 및 문헌[Antibody Engineering Vols 1 and 2 (Kontermann and D
bel eds., 2d ed. 2010)]에 기재된 광범위하게 이용되는 방법론과 같은, 일반적으로 당업자에 의해 잘 이해되고/되거나 통상적인 방법을 사용하여 일반적으로 사용되는 것들을 포함한다.
본 명세서에 달리 정의되지 않는 한, 상세한 설명에 사용된 기술 용어 및 과학 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 본 명세서를 해석하려는 목적으로, 하기의 용어 설명이 적용될 것이며, 적절한 경우에는 언제든지, 단수로 사용되는 용어는 또한 복수형을 포함할 것이고, 역으로도 성립할 것이다. 제시된 용어의 임의의 설명이 본 명세서에 참고로 포함된 임의의 문헌과 상충되는 경우에는, 하기에 제시된 용어의 설명이 우선할 것이다.
일 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 가요성 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 3개의 CD40L ECD 도메인 또는 이들의 단편을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 각각의 CD40L 하위단위는 하기로부터 선택되는 어느 하나의 서열을 포함한다:
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 20 또는 이의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 21 또는 이의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 22 또는 이의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 33 또는 이의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 34 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 20을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 21을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 22를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 33을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 34를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 20의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 21의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 22의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 33의 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 CD40L 하위단위는 서열 번호 34의 단편을 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 CD40L 하위단위를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제1 CD40L 하위단위, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제2 CD40L 하위단위, 및 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 제3 CD40L 하위단위를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 3개의 CD40L 하위단위를 포함하며, 이들은 가요성 펩티드 링커에 의해 서로 연결되어 선형 CD40L 삼량체를 형성한다. 특정 실시 형태에서, 융합 단백질에서의 CD40L 하위단위들을 연결하는 가요성 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)n(서열 번호 39)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 서열을 포함하며, 여기서 n은 1 내지 20의 정수이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 1이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 2이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 3이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 4이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 5이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 6이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 7이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 8이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 9이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 10이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 11이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 12이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 13이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 14이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 15이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 16이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 17이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 18이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 19이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 20이다.
일부 실시 형태에서, 가요성 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가요성 링커는 (G3S)3(서열 번호 25)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 서열 번호 23을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 서열 번호 25를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 서열 EGKSSGSGS(서열 번호 23)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 50% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 55% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 60% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 65% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 70% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 75% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 98% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 서열 (G3S)n(서열 번호 39)을 포함하거나, 또는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 50% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 55% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 60% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 65% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 70% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 75% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 98% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 하기 표에 제시된 서열들로부터 선택되는 어느 하나의 서열을 포함하며, 여기서 밑줄친 부분은 링커 서열에 상응한다:
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 35를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 36을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 37을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 38을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 또한, 예를 들어 이종성 펩티드 또는 폴리펩티드(또는 이의 단편, 예를 들어 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 또는 약 100개의 아미노산의 폴리펩티드)에 재조합적으로 융합되어 더 큰 융합 단백질을 생성할 수 있다. 따라서, 일부 실시 형태에서, CD40L로부터 유래되지 않은 이종성 펩티드 또는 폴리펩티드(이는 본 출원에서 때때로 "비-CD40L" 펩티드 또는 폴리펩티드로 지칭됨)에 융합된 CD40L 삼량체를 포함하는 폴리펩티드가 본 명세서에 제공된다. CD40L 삼량체와 비-CD40L 펩티드 또는 폴리펩티드 사이의 연결은 직접 연결될 수 있거나 가요성 펩티드 테더를 통해 연결될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 비-CD40L 펩티드 또는 폴리펩티드는 CD40L 삼량체의 N-말단에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 비-CD40L 펩티드 또는 폴리펩티드는 CD40L 삼량체의 C-말단에 융합된다.
따라서, 일 태양에서, 비-CD40L 펩티드 또는 폴리펩티드에, 직접 또는 가요성 펩티드 테더를 통해 융합된 CD40L 삼량체를 포함하는 융합 단백질이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 융합 단백질의 비-CD40L 부분은 Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
본 명세서에 제공된 바와 같이, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 IgG 항체로부터의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체로부터의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 IgG1 항체로부터의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 IgG2 항체로부터의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 IgG3 항체로부터의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 IgG4 항체로부터의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은, Fc 수용체의 결합을 제거하고 항체-유도 세포성 세포독성(ADCC) 이펙터 기능을 소실시키는 주요 돌연변이를 갖도록 유전자 조작된 Fc 도메인을 갖는, 침묵 Fc 영역 또는 변형된 Fc 영역인 Fc 단량체를 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 융합 단백질의 삼량체성 CD40L 부분은 Fc 영역의 C-말단에 유전자적으로 융합되거나 화학적으로 접합된다. 일부 실시 형태에서, 융합 단백질의 삼량체성 CD40L 부분은 Fc 영역의 N-말단에 유전자적으로 융합되거나 화학적으로 접합된다.
일부 실시 형태에서, Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "테더" 또는 "펩티드 테더"는 융합 단백질의 삼량체성 CD40L 부분을 Fc 단량체 펩티드에 연결하는 아미노산 서열을 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산(종점을 포함함)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 0개 또는 1개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 0 내지 5개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 0 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 0 내지 15개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 5 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 5 내지 15개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 5 내지 20개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 10 내지 15개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 10 내지 20개의 아미노산을 포함한다. 대조적으로, 용어 "링커" 또는 "펩티드 링커"는 CD40L 하위단위들을 서로 연결하여 삼량체를 형성하는 아미노산 서열을 지칭한다.
일 실시 형태에서, 융합 단백질의 삼량체성 CD40L 부분을 Fc 단량체 펩티드에 연결시키는 펩티드 테더는 서열 (G4S)n(서열 번호 40)을 가지며, 여기서 n은 0 내지 20의 정수이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 1이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 2이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 3이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 4이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 5이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 6이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 7이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 8이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 9이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 10이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 11이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 12이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 13이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 14이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 15이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 16이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 17이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 18이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 19이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 20이다.
일 실시 형태에서, 가요성 테더는 (G4S)(서열 번호 28) 모티프를 포함하지 않는다. 일 실시 형태에서, 가요성 테더는 (G4S)1(서열 번호 28)을 포함한다. 일 실시 형태에서, 가요성 테더는 (G4S)2(서열 번호 26)를 포함한다. 일 실시 형태에서, 가요성 테더는 (G4S)3(서열 번호 24)을 포함한다. 일 실시 형태에서, 가요성 테더는 (G4S)4(서열 번호 27)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 서열 번호 24를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 서열 번호 26을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 서열 번호 27을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 서열 번호 28을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 펩티드 테더는 서열 (G4S)n(서열 번호 40)을 포함하거나, 또는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 50, 적어도 55, 적어도 60, 적어도 65, 적어도 70, 적어도 75, 적어도 80, 적어도 85, 적어도 90, 적어도 95, 적어도 98 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 50% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 55% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 60% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 65% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 70% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 75% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 98% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G4S)n(서열 번호 40)과 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시 형태에서, CD40L 하위단위들을 서로 연결하여 융합 단백질의 삼량체성 CD40L 부분을 형성하는 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)n(서열 번호 39)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 가요성 링커일 수 있으며, 여기서 n은 1 내지 20의 정수이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 1이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 2이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 3이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 4이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 5이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 6이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 7이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 8이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 9이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 10이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 11이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 12이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 13이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 14이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 15이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 16이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 17이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 18이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 19이다. 일부 실시 형태에서, 정수는 20이다. 일 실시 형태에서, 가요성 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)를 포함한다. 일 실시 형태에서, 가요성 링커는 (G3S)3(서열 번호 25)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 서열 번호 23을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 서열 번호 25를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 서열 EGKSSGSGS(서열 번호 23)를 포함하거나, 또는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 50, 적어도 55, 적어도 60, 적어도 65, 적어도 70, 적어도 75, 적어도 80, 적어도 85, 적어도 90, 적어도 95, 적어도 98 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 50% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 55% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 60% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 65% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 70% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 75% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 98% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23)와 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 서열 (G3S)n(서열 번호 39)을 포함하거나, 또는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 50, 적어도 55, 적어도 60, 적어도 65, 적어도 70, 적어도 75, 적어도 80, 적어도 85, 적어도 90, 적어도 95, 적어도 98 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 50% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 55% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 60% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 65% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 70% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 75% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 98% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 링커는 (G3S)n(서열 번호 39)과 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명에 따른 융합 단백질에서의 Fc 단량체는 하기로부터 선택되는 어느 하나의 서열을 포함한다:
일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체는 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다.
일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 2를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 3을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 4를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 5를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 6을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 7을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 8을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 9를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 10을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 11을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 12를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 2의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 3의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 4의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 5의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 6의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 7의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 8의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 9의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 10의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 11의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 12의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체는 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 14를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 15를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 17을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 18을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 19를 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 14의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 15의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 17의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 18의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 19의 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD40 리간드 하위단위는 CD40L 세포외 서열의 일부분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 20을 포함한다. 일 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 21을 포함한다. 일 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 22를 포함한다. 일 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 20의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 21의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, CD40L 하위단위는 서열 번호 22의 단편을 포함한다.
일부 경우에, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 동종이량체성 Fc 융합 단백질 또는 이종이량체성 Fc 융합 단백질을 형성할 수 있으며, 이때 후자가 바람직하다. 일 실시 형태에서, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 동종이량체성 Fc 융합 단백질을 형성한다. 일 실시 형태에서, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 이종이량체성 Fc 융합 단백질을 형성한다. 일부 경우에, 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 하나의 단량체는 단지 Fc 단량체 펩티드 또는 이의 단편만을 포함하고, 나머지 다른 하나의 단량체는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이다. 일 실시 형태에서, 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 하나의 단량체는 단지 Fc 단량체 펩티드만을 포함하고, 나머지 다른 하나의 단량체는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이다. 일 실시 형태에서, 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 하나의 단량체는 단지 Fc 단량체 펩티드의 단편만을 포함하고, 나머지 다른 하나의 단량체는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 참조 또는 야생형 Fc 단량체와 대비하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 변이체 Fc 단량체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 하나의 단량체는 Fc 단량체 펩티드 또는 이의 단편 및 CD40L 이외의 단백질 도메인, 예컨대 수용체, 리간드 또는 다른 결합 파트너를 포함한다. 일 실시 형태에서, 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 하나의 단량체는 Fc 단량체 펩티드 및 CD40L 이외의 단백질 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 하나의 단량체는 Fc 단량체 펩티드의 단편 및 CD40L 이외의 단백질 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, CD40L 이외의 단백질 도메인은 수용체이다. 일 실시 형태에서, CD40L 이외의 단백질 도메인은 리간드이다. 일 실시 형태에서, CD40L 이외의 단백질 도메인은 다른 결합 파트너이다. 따라서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 이중특이성 분자인 이종이량체성 Fc 융합 단백질의 성분일 수 있다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이중특이성 분자가 제공된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 CD40L 삼량체는 표적 항원에 재조합적으로 융합되거나 화학적으로 접합된다(공유적 또는 비공유적 접합). 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 CD40L 삼량체는 표적 항원에 재조합적으로 융합된다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 CD40L 삼량체는 표적 항원에 화학적으로 접합된다. 일 실시 형태에서, 화학적 접합은 공유적 접합이다. 일 실시 형태에서, 화학적 접합은 비공유적 접합이다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 CD40L 삼량체의 C-말단에 재조합적으로 융합된다. 다른 실시 형태에서, 표적 항원은 CD40L 삼량체의 N-말단에 재조합적으로 융합된다. 일부 실시 형태에서, CD40L 삼량체와 표적 항원은 펩티드 테더를 통해 공유적으로 연결된다.
구체적인 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L-표적 항원 융합 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L-표적 항원 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) 표적 항원을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 면역 반응을 이끌어내기 위한 것이다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 병원체 또는 질병 세포로부터 기원되거나 유래된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 병원체 또는 질병 세포로부터 "기원되는" 표적 항원은, 자연적으로 존재하거나 인공적으로 생성된 조건 하에서 병원체 또는 질병 세포에 의해 생성된 천연 항원을 지칭한다. 병원체 또는 질병 세포로부터 기원되는 항원의 예에는 생체내 또는 시험관내에서 병원체 또는 질병 세포에 의해 발현되는 천연 단백질이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 병원체 또는 질병 세포로부터 "유래되는" 표적 항원은 이로부터 기원되는 천연 항원의 변이체를 지칭한다. 예를 들어, 단백질 또는 펩티드의 변이체가, 그러한 단백질 또는 펩티드의 천연 또는 비변형된 서열의 아미노산 서열에 대한 하나 이상(예컨대, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개, 또는 약 1 내지 약 5개)의 변화로부터 발생될 수 있다. 천연 단백질의 변이체가 자연 발생될 수 있거나(예컨대, 대립유전자 변이체 또는 스플라이스 변이체, 또는 면역 세포에 의해 단편화되거나 처리됨), 또는 인공적으로 작제될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 병원체로부터 기원된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 질병 세포로부터 기원된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 병원체로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 질병 세포로부터 유래된다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 감염성 병원체, 예컨대 바이러스, 세균, 진균 또는 기생충에 의해 발현되는 단백질로부터 기원되거나 유래된다. 일 실시 형태에서, 표적 항원은 감염성 병원체에 의해 발현되는 단백질로부터 기원된다. 일 실시 형태에서, 표적 항원은 감염성 병원체에 의해 발현되는 단백질로부터 유래된다. 일 실시 형태에서, 병원체는 바이러스이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 세균이다. 일 실시 형태에서, 병원체는 진균이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 기생충이다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 감염성 병원체에 의해 감염된 질병 숙주 세포에 의해 발현되는 단백질로부터 기원되거나 유래된다. 일 실시 형태에서, 표적 항원은 질병 숙주 세포에 의해 발현되는 단백질로부터 기원된다. 일 실시 형태에서, 표적 항원은 질병 숙주 세포에 의해 발현되는 단백질로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, 질병 숙주 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된다. 일 실시 형태에서, 병원체는 바이러스이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 세균이다. 일 실시 형태에서, 병원체는 진균이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 기생충이다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 감염성 병원체에 의해 생성되는 단백질로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 감염성 병원체에 의해 생성되는 단백질로부터 기원된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 감염성 병원체에 의해 생성되는 단백질로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 병원체에 의한 숙주 침입을 매개한다. 일 실시 형태에서, 병원체는 바이러스이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 세균이다. 일 실시 형태에서, 병원체는 진균이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 기생충이다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 암 세포 또는 종양 간질 세포에 의해 생성되는 단백질로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 암 세포에 의해 생성되는 단백질로부터 기원된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 종양 간질 세포에 의해 생성되는 단백질로부터 기원된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 암 세포에 의해 생성되는 단백질로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 종양 간질 세포에 의해 생성되는 단백질로부터 유래된다.
구체적인 실시 형태에서, 표적 항원은 종양-관련 항원(TAA) 또는 이의 항원성 단편이다. 일 실시 형태에서, 표적 항원은 TAA이다. 일 실시 형태에서, 표적 항원은 TAA의 항원성 단편이다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 대상체의 선천 면역 시스템에 의해 인식된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 항원-제시 세포에 의해 처리되고 제시된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 시험관내에서 항원-제시 세포에 의해 처리되고 제시된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 생체내에서 시험관내에서 항원-제시 세포에 의해 처리되고 제시된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 B 세포, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구, 호중구, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 수지상 세포이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 B 세포이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 수지상 세포이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 대식세포이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 자연 살해 세포이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 단핵구이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 과립구이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 호산구이다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 호중구이다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 세포의 표면 상에서 발현되는 단백질로부터 유래되며, 여기서 발현은 (예를 들어, 세포-매개 세포독성 또는 항체-의존성 세포독성을 통한) 아폽토시스를 위한 세포를 마킹한다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 세포의 표면 상에서 발현되는 단백질로부터 유래된다. 소정 실시 형태에서, 세포의 표면 상에 마킹되는 단백질은 아폽토시스를 위한 세포를 마킹한다. 일부 실시 형태에서, 아폽토시스는 세포-매개 세포독성을 통해 이루어진다. 다른 실시 형태에서, 아폽토시스는 항체-의존성 세포독성을 통해 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 표적 항원은 세포의 표면 상에서 발현되는 단백질로부터 유래되며, 여기서 발현은 식세포작용을 위한 세포를 마킹한다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 대상체에서 순환 항체에 의해 특이적으로 인식되는 단백질로부터 유래된다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 또한, 예를 들어 진단제 또는 검출제(detectable agent)에 화학적으로 접합(공유적 또는 비공유적 접합)되거나 재조합적으로 융합될 수 있다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 다른 분자에 화학적으로 접합된다. 일 실시 형태에서, 접합은 공유적 접합이다. 다른 실시 형태에서, 접합은 비공유적 접합이다. 일 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 다른 분자에 재조합적으로 융합된다. 일부 실시 형태에서, 다른 분자는 진단제이다. 일부 실시 형태에서, 다른 분자는 검출제이다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 검출가능한 물질과 결합되며, 이에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: 다양한 효소, 예컨대 제한 없이, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제; 보결 분자단, 예컨대 제한 없이, 스트렙타비딘/비오틴 또는 아비딘/비오틴; 형광 물질, 예컨대 제한 없이, 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 아이소티오시네이트, 로다민, 다이클로로트라이아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드, 또는 피코에리트린; 발광 물질, 예컨대 제한 없이, 루미놀; 생물발광 물질, 예컨대 제한 없이, 루시페라제, 루시페린, 또는 에쿼린; 화학발광 물질, 예컨대 제한 없이, 아크리디늄계 화합물 또는 HALOTAG; 방사성 물질, 예컨대 제한 없이, 요오드(131I, 125I, 123I, 및 121I), 탄소(14C), 황(35S), 삼중수소(3H), 인듐(115In, 113In, 112In, 및 111In), 테크네튬(99Tc), 탈륨(201Ti), 갈륨(68Ga 및 67Ga), 팔라듐(103Pd), 몰리브덴(99Mo), 제논(133Xe), 불소(18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn, 또는 117Sn; 다양한 양전자 방출 토포그래피를 사용하는 양전자 방출 금속; 및 비방사성 상자성 금속 이온.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 융합 단백질은 정제를 용이하게 하기 위해 마커 또는 "태그" 서열, 예컨대 펩티드에 융합될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 마커 또는 태그 아미노산 서열은, 특히 헥사-히스티딘 펩티드, 예컨대 pQE 벡터(예를 들어, QIAGEN, Inc. 참조) 내에 제공된 상기 태그이며, 이들 중 다수는 구매가능하다. 예를 들어, 문헌[Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-24]에 기재된 바와 같이, 헥사-히스티딘은 융합 단백질의 편리한 정제를 제공한다. 정제에 유용한 다른 펩티드 태그는 헤마글루티닌("HA") 태그 - 이는 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프에 상응함 - (문헌[Wilson et al., 1984, Cell 37:767-78]) 및 "FLAG" 태그를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
모이어티(폴리펩티드를 포함함)를 융합시키거나 접합시키는 방법이 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Arnon et al., Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56 (Reisfeld et al. eds., 1985); 문헌[Hellstrom et al., Antibodies for Drug Delivery, in Controlled Drug Delivery 623-53 (Robinson et al. eds., 2d ed. 1987)]; 문헌[Thorpe, Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review, in Monoclonal Antibodies: Biological and Clinical Applications 475-506 (Pinchera et al. eds., 1985)]; 문헌[Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16 (Baldwin et al. eds., 1985)]; 문헌[Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58]; 미국 특허 제5,336,603호; 미국 특허 제5,622,929호; 미국 특허 제5,359,046호; 미국 특허 제5,349,053호; 미국 특허 제5,447,851호; 미국 특허 제5,723,125호; 미국 특허 제5,783,181호; 미국 특허 제5,908,626호; 제5,844,095호; 및 제5,112,946호; EP 307,434호; EP 367,166호; EP 394,827호; PCT 공개 WO 91/06570호, WO 96/04388호, WO 96/22024호, WO 97/34631호, 및 WO 99/04813호; 문헌[Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-39]; 문헌[Traunecker et al., 1988, Nature, 331:84-86]; 문헌[Zheng et al., 1995, J. Immunol. 154:5590-600]; 및 문헌[Vil et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-41] 참조).
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드는 CD40에 결합 시에 CD40을 조절할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드는 CD40에 결합 시에 CD40을 활성화할 수 있다.
일 태양에서, CD40은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질에 결합 시에 활성화된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 약 4 nM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 약 3 nM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 약 1 nM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 약 500 pM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 약 100 pM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다.
일 태양에서, CD40은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질에 결합 시에 활성화된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 약 4 nM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 약 3 nM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 약 1 nM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 약 500 pM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 약 100 pM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다.
소정 실시 형태에서, EC50은 약 1 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.9 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.8 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.7 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.6 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.5 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.4 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.300 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.2 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.19 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.18 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.17 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.16 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.15 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.14 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.13 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.12 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.11 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.1 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.09 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.08 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.07 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.06 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.05 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.04 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.03 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.02 nM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.01 nM 이하이다. 소정 실시 형태에서. 일 실시 형태에서, EC50은 약 1 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.9 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.8 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.7 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.6 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.5 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.4 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.300 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.2 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.19 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.18 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.17 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.16 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.15 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.14 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.13 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.12 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.11 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.1 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.09 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.08 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.07 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.06 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.05 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.04 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.03 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.02 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 0.01 pM 이하이다. 소정 실시 형태에서. 일 실시 형태에서, EC50은 약 1000 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 900 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 800 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 700 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 600 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 500 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 400 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 300 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 200 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 190 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 180 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 170 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 160 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 150 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 140 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 130 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 120 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 110 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 100 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 90 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 80 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 70 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 60 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 50 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 40 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 30 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 20 pM 미만이다. 일 실시 형태에서, EC50은 약 10 pM 미만이다.
CD40 폴리펩티드를 조절하는 방법이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 방법은 CD40 폴리펩티드를 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉시키는 단계를 포함한다. CD40 폴리펩티드를 활성화하는 방법이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 방법은 CD40 폴리펩티드를 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉시키는 단계를 포함한다.
CD40 폴리펩티드를 활성화하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 CD40 폴리펩티드를 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 결합 시에 상기 CD40 폴리펩티드를 활성화한다.
CD40 폴리펩티드를 발현하는 표적 세포를 활성화하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 표적 세포를 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉시켜 활성화된 표적 세포를 생성하는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 표적 세포와 접촉된 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하며, 여기서 폴리펩티드는 CD40에 결합 시에 표적 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 결과적으로 이어서 다른 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 T 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 T 세포 집단을 활성화한다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포는 항원-제시 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 면역 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 B 세포, 자연 살해 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 과립구, 호산구, 호중구, 또는 이들의 조합이다. 일 실시 형태에서, 표적 세포는 수지상 세포이다. 일 실시 형태에서, 표적 세포는 대식세포이다. 일 실시 형태에서, 표적 세포는 자연 살해 세포이다. 일 실시 형태에서, 표적 세포는 단핵구이다. 일 실시 형태에서, 표적 세포는 과립구이다. 일 실시 형태에서, 표적 세포는 호산구이다. 일 실시 형태에서, 표적 세포는 과립구이다. 일 실시 형태에서, 표적 세포는 호중구이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 랑게르한스 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 전립선 선세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 B 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 미감작() B 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 기억 B 세포이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 기저 호흡기 세포이다.
일부 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 다른 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하지 않는 다른 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 면역 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 T 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, MAIT, 자연 살해 세포, 호중구, 또는 이들의 조합을 활성화한다. 일 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 CD4+ T 세포를 활성화한다. 일 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 CD8+ T 세포를 활성화한다. 일 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 MAIT를 활성화한다. 일 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 자연 살해 세포를 활성화한다. 일 실시 형태에서, 활성화된 표적 세포는 호중구를 활성화한다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포의 활성화는 표적 세포의 증가된 증식 또는 성숙으로서 측정된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 활성화는 표적 세포의 증가된 증식으로서 측정된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 활성화는 표적 세포의 증가된 성숙으로서 측정된다. 특정 실시 형태에서, 표적 세포의 증식 또는 성숙은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% 또는 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 10 내지 100%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 100 내지 200%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 200 내지 300%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 300 내지 400%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 400 내지 500%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 500 내지 600%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 600 내지 700%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 700 내지 800%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 800 내지 900%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 900 내지 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 10%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 20%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 30%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 40%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 45%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 50%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 55%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 60%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 65%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 70%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 75%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 80%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 85%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 90%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 95%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 100%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 125%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 150%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 175%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 200%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 250%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 300%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 400%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 500%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 600%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 700%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 800%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 900%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 증식은 약 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 10 내지 100%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 100 내지 200%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 200 내지 300%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 300 내지 400%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 400 내지 500%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 500 내지 600%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 600 내지 700%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 700 내지 800%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 800 내지 900%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 900 내지 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 10%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 20%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 30%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 40%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 45%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 50%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 55%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 60%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 65%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 70%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 75%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 80%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 85%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 90%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 95%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 100%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 125%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 150%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 175%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 200%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 250%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 300%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 400%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 500%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 600%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 700%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 800%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 900%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 성숙은 약 1000%만큼 증가된다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포의 활성화는 표적 세포의 연장된 생존 시간으로서 측정된다. 특정 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% 또는 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 10 내지 100%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 100 내지 200%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 200 내지 300%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 300 내지 400%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 400 내지 500%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 500 내지 600%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 600 내지 700%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 700 내지 800%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 800 내지 900%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 900 내지 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 10%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 20%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 30%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 40%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 45%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 50%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 55%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 60%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 65%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 70%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 75%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 80%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 85%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 90%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 95%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 100%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 125%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 150%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 175%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 200%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 250%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 300%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 400%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 500%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 600%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 700%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 800%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 900%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 표적 세포의 생존 시간은 약 1000%만큼 증가된다.
T 세포를 활성화하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 존재 하에서 상기 T 세포를 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하고, 여기서 상기 항원-제시 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 T-세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 T 세포에 항원을 제시한다.
일부 실시 형태에서, T 세포 집단의 활성화는 T 세포에 의한 전염증성 사이토카인의 증가된 분비에 의해 측정된다. 일부 실시 형태에서, 전염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-1이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-2이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-6이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-12이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-17이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-22이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IFN-γ이다.
일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포는 T 세포에 항원을 제시한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질에 의한 항원-제시 세포의 활성화 시에, T 세포에 대한 항원-제시 세포에 의한 항원의 제시가 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 B 세포, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구, 호중구, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 B 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 대식세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 수지상 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 자연 살해 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 단핵구를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 과립구를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 호산구를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 호중구를 포함한다.
수지상 세포를 활성화하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 CD40 폴리펩티드를 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 CD40에 결합 시에 상기 수지상 세포 폴리펩티드를 활성화한다.
일부 실시 형태에서, 상기 방법은 CD40 폴리펩티드를 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성을 촉진하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 B 세포를 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉시키는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, B 세포 집단과 접촉된 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, B 세포는 표적 항원의 존재 하에서 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉되며, 여기서 B 세포에 의해 생성된 항체는 항원에 특이적으로 결합된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질에 화학적으로 접합되거나 재조합적으로 융합된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 항원-제시 세포에 의해 제시된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 MHC 클래스 I 복합체와 회합된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 MHC 클래스 II 복합체와 회합된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 감염성 병원체로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 질병 세포로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균 또는 기생충이다.
일부 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% 또는 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 10 내지 100%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 100 내지 200%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 200 내지 300%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 300 내지 400%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 400 내지 500%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 500 내지 600%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 600 내지 700%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 700 내지 800%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 800 내지 900%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 900 내지 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 10%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 20%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 30%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 40%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 45%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 50%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 55%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 60%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 65%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 70%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 75%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 80%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 85%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 90%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 95%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 100%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 125%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 150%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 175%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 200%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 250%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 300%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 400%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 500%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 600%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 700%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 800%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 900%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 10 내지 100%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 100 내지 200%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 200 내지 300%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 300 내지 400%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 400 내지 500%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 500 내지 600%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 600 내지 700%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 700 내지 800%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 800 내지 900%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 900 내지 1000%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 항원에 대한 반응에서 항체를 생성할 수 있는 기억 B 세포의 형성을 추가로 촉진한다.
일부 실시 형태에서, 면역 세포 집단에 의한 전염증성 사이토카인의 분비를 증가시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드의 존재 하에서 상기 면역 세포 집단을 항원-제시 세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단과 접촉된 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 면역 세포 집단에 항원을 제시한다. 일부 실시 형태에서, 면역 세포 집단은 T 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 면역 세포 집단은 T 세포 집단이다. 구체적인 실시 형태에서, 항원-제시 세포의 활성화 시에, 면역 세포 집단에 대한 항원-제시 세포 집단에 의한 항원의 제시는 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 10 내지 20%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 20 내지 30%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 30 내지 40%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 40 내지 50%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 50 내지 60%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 60 내지 70%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 70 내지 80%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 80 내지 90%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 90 내지 99%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 10%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 20%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 30%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 40%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 45%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 50%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 55%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 60%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 65%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 70%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 75%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 80%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 85%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 90%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 95%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단에서 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율은 약 또는 정확히 99%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 B 세포, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구, 호중구, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 B 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 대식세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 수지상 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 자연 살해 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 단핵구를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 과립구를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 호산구를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포 집단은 호중구를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ 또는 이들의 임의의 조합이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-1이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-2이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-6이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-12이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-17이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-22이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% 또는 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 10 내지 100%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 100 내지 200%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 200 내지 300%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 300 내지 400%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 400 내지 500%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 500 내지 600%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 600 내지 700%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 700 내지 800%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 800 내지 900%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 900 내지 1000%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 10 내지 1000%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 20%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 30%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 40%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 45%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 50%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 55%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 60%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 65%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 70%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 75%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 80%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 85%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 90%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 95%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 100%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 125%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 150%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 175%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 200%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 250%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 300%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 400%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 500%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 600%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 700%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 800%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 900%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 사이토카인 생성은 약 1000%만큼 증가된다.
일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에 의한 질병 세포의 식세포작용을 증가시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 질병 세포, 상기 대식세포, 또는 상기 질병 세포 및 상기 대식세포 둘 모두를 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉시키는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 대식세포 집단과 접촉된 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 10 내지 20%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 20 내지 30%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 30 내지 40%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 40 내지 50%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 50 내지 60%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 60 내지 70%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 70 내지 80%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 80 내지 90%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 90 내지 99%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 10%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 20%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 30%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 40%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 45%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 50%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 55%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 60%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 65%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 70%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 75%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 80%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 85%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 90%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 95%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포 집단에서 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율은 약 또는 정확히 99%만큼 증가된다.
일부 실시 형태에서, 대식세포에 의한 식세포작용은 제1 형광 염료로 표지된 대식세포와 제2 형광 염료로 표지된 질병 세포를 공동배양함으로써 측정되며, 여기서 제1 형광 염료와 제2 형광 염료는 상이하다. 일부 실시 형태에서, 식세포작용성 대식세포의 백분율은 질병 세포를 포함하는 대식세포의 백분율을 결정함으로써 측정된다. 구체적인 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 구체적인 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균 또는 기생충이다.
일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에 의한 항원 제시를 증가시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 수지상 세포를 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉시키는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 수지상 세포 집단과 접촉된 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원은 감염성 병원체로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 항원은 질병 세포로부터 기원되거나 유래된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시 형태에서, 항원은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드에 화학적으로 접합되거나 재조합적으로 융합된다.
일부 실시 형태에서, 수지상 세포에 의한 항원 제시는 제1 형광 염료로 표지된 수지상 세포와 제2 형광 염료로 표지된 항원을 공동배양함으로써 측정되며, 여기서 제1 형광 염료와 제2 형광 염료는 상이하다. 일부 실시 형태에서, 항원을 제시하는 수지상 세포의 백분율은 수지상 세포 집단에서 항원과 공국재화하는 수지상 세포의 백분율을 결정함으로써 측정된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99%만큼 증가된다. 일 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 10 내지 20%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 20 내지 30%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 30 내지 40%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 40 내지 50%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 50 내지 60%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 60 내지 70%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 70 내지 80%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 80 내지 90%만큼 증가된다. 다른 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 90 내지 99%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 10%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 20%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 30%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 40%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 45%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 50%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 55%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 60%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 65%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 70%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 75%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 80%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 85%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 90%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 95%만큼 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포 집단에서 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율은 약 또는 정확히 99%만큼 증가된다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포에 의한 CD40 폴리펩티드의 발현을 증가시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 표적 세포를 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉시키는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 표적 세포와 접촉된 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 표적 세포는 질병 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 면역 세포이며, 상기 면역 세포는 B 세포, 자연 살해 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 과립구, 호산구, 호중구, 또는 이들의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 10 내지 20%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 20 내지 30%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 30 내지 40%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 40 내지 50%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 50 내지 60%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 60 내지 70%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 70 내지 80%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 80 내지 90%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 90 내지 99%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 10%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 20%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 30%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 40%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 45%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 50%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 55%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 60%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 65%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 70%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 75%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 80%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 85%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 90%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 95%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 99%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 100%만큼 감소된다.
일부 실시 형태에서, 질병 세포 집단을 둘러싸는 조직에서 전염증성 환경을 형성하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 조직을 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 접촉시키는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 조직과 접촉된 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조직에서의 활성화된 B 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, MAIT, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구 및/또는 호중구의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, 활성화된 B 세포의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, CD4+ T 세포의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, CD8+ T 세포의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, 수지상 세포의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, 대식세포의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, 자연 살해 세포의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, 단핵구의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, 과립구의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, 호산구의 침윤이 증가된다. 일부 실시 형태에서, 호중구의 침윤이 증가된다.
일부 실시 형태에서, 전염증성 사이토카인의 농도가 조직에서 증가된다. 일부 실시 형태에서, 전염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-1이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-2이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-6이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-12이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-17이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-22이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IFN-γ이다.
일부 실시 형태에서, 항원-제시 세포에 의한 질병 세포로부터 기원되거나 유래되는 항원의 제시가 조직에서 증가된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포의 식세포작용이 조직에서 증가된다. 일부 실시 형태에서, 세포-매개 세포독성에 의해 유도된 질병 세포의 아폽토시스가 조직에서 증가된다. 일부 실시 형태에서, 항체-의존성 세포성 세포독성에 의해 유도된 질병 세포의 아폽토시스가 조직에서 증가된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 조직에서 감소된다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 조직에서 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 10 내지 20%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 20 내지 30%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 30 내지 40%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 40 내지 50%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 50 내지 60%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 60 내지 70%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 70 내지 80%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 80 내지 90%만큼 감소된다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 90 내지 99%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 10%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 20%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 30%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 40%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 45%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 50%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 55%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 60%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 65%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 70%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 75%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 80%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 85%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 90%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 95%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 99%만큼 감소된다. 일 실시 형태에서, 질병 세포 집단은 약 100%만큼 감소된다.
사용 방법
소정 실시 형태에 따르면, 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 저장 또는 사용을 위해 완충 조성물 중에 제공될 수 있다. 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 저장에 적합한 완충액은 이를 유지하는 역할을 할 것이다.
일 태양에서, 질병을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
요법에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이 본 명세서에 또한 제공된다. 그러한 요법은 본 명세서에 정의된 치료 방법 및 치료적 용도에 따른 것들 및 이의 모든 실시 형태를 포함한다.
질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이 본 명세서에 또한 제공된다. 그러한 방법은 본 명세서에 정의된 질병 또는 장애의 치료 방법에 따른 것들 및 이의 모든 실시 형태를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 대상체에서 질병 세포를 제거하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 대상체에게 투여되는 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현한다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 일부 실시 형태에서, 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이다. 일부 실시 형태에서, 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합이다.
대상체에서 질병 세포의 제거에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이 본 명세서에 또한 제공된다. 소정 실시 형태에서, 질병 세포는 암 세포이다. 다른 실시 형태에서, 질병 세포는 병원체로 감염된 세포이다.
일부 실시 형태에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 대상체에게 투여되는 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
대상체에서 암을 치료하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 동종이량체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 동종이량체를 투여하는 단계를 포함한다.
암의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드가 본 명세서에 또한 제공된다. 그러한 치료는 본 명세서에 정의된 암의 치료 방법에 따른 것들 및 이의 모든 실시 형태를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
암의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이 본 명세서에 또한 제공된다. 그러한 치료는 본 명세서에 정의된 암의 치료 방법에 따른 것들 및 이의 모든 실시 형태를 포함한다.
암의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체가 본 명세서에 또한 제공된다. 그러한 치료는 본 명세서에 정의된 암의 치료 방법에 따른 것들 및 이의 모든 실시 형태를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 암은 고형 암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 액성 암(liquid cancer)이다. 일부 실시 형태에서, 암은 흑색종, 중피종, 진행성 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 암은 흑색종이다. 일 실시 형태에서, 암은 중피종이다. 일 실시 형태에서, 암은 진행성 고형 종양이다. 일 실시 형태에서, 암은 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 및 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 동종이량체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 이종이량체를 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 상기 암 치료 방법은 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시킨다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "항신생물성 면역 반응"은 개체의 면역 세포, 예컨대 T 세포, B 세포, 또는 다른 항원-제시 세포(예를 들어, 수지상 세포(DC))가 특이적 종양 표적에 대한 면역 반응을 마운팅하도록 동원되고/되거나, 프라이밍되고/되거나, 활성화되는 것을 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드에 의해 활성화되는 항원-제시 세포는 결과적으로 이어서 추가의 세포 유형, 예컨대 T-세포를 활성화할 수 있다. 대안적으로, 항신생물성 면역 반응은 종양 부하(tumor burden)의 감소를 포함한다. 이 용어는 또한 사이토카인, 예컨대 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF)를 동원하여 면역 활성화를 증폭시키고/시키거나 프라이밍된 세포의 림프절로의 이동을 유도하는 것을 포함한다.
일 실시 형태에서, 질병은 암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 흑색종, 중피종, 진행성 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 암은 고형 종양 암이다. 다른 실시 형태에서, 암은 혈액암이다.
일부 실시 형태에서, 암은 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암이다.
일부 실시 형태에서, 부신암은 부신피질 암종(ACC), 부신 피질암, 크롬친화세포종, 또는 신경아세포종이다. 일부 실시 형태에서, 항문암은 편평 세포 암종, 총배출강성(cloacogenic) 암종, 선암종, 기저 세포 암종, 또는 흑색종이다. 일부 실시 형태에서, 맹장암은 신경내분비 종양(NET), 점액성 선암종, 배상 세포 카르시노이드, 장형(intestinal-type) 선암종, 또는 반지 세포 선암종이다. 일부 실시 형태에서, 담관암은 간외 담관암, 선암종, 폐문 담관암, 폐문주위 담관암, 원위부 담관암, 또는 간내 담관암이다. 일부 실시 형태에서, 방광암은 이행 세포 암종(TCC), 유두상 암종, 편평 암종, 편평 세포 암종, 선암종, 소세포 암종, 또는 육종이다. 일부 실시 형태에서, 골암은 원발성 골암, 육종, 골육종, 연골육종, 육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 골의 거대 세포 종양, 척삭종, 또는 전이성 골암이다. 일부 실시 형태에서, 뇌암은 성상세포종, 뇌간 신경아교종, 교아세포종, 수막종, 뇌실막종, 핍지교종, 혼합 신경교종, 뇌하수체 암종, 뇌하수체 선종, 두개인두종, 생식 세포 종양, 송과체 부위 종양, 수아세포종, 또는 원발성 CNS 림프종이다. 일부 실시 형태에서, 유방암은 유방 선암종, 침윤성 유방암, 비침윤성 유방암, 유방 육종, 화생성 암종, 선낭성 암종, 엽상 종양, 혈관육종, HER2-양성 유방암, 삼중-음성 유방암, 또는 염증성 유방암이다. 일부 실시 형태에서, 자궁경부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이다. 일부 실시 형태에서, 결직장암은 결직장 선암종, 원발성 결직장 림프종, 위장관 간질 종양, 평활근육종, 카르시노이드 종양, 점액성 선암종, 반지 세포 선암종, 위장관 카르시노이드 종양, 또는 흑색종이다. 일부 실시 형태에서, 식도암은 선암종 또는 편평 세포 암종이다. 일부 실시 형태에서, 담낭암은 선암종, 유두상 선암종, 선편평 세포 암종, 편평 세포 암종, 소세포 암종, 또는 육종이다. 일부 실시 형태에서, 임신성 영양아세포성 질병(GTD)은 포상 기태, 임신성 영양아세포성 신생물(GTN), 융모막암종, 태반-부위 영양아세포성 종양(PSTT), 또는 상피모양 영양아세포성 종양(ETT)이다. 일부 실시 형태에서, 두경부암은 후두암, 비인두암, 하인두암, 비강암, 부비동암, 타액선암, 구강암, 구인두암, 또는 편도선암이다. 일부 실시 형태에서, 호지킨 림프종은 고전적 호지킨 림프종, 결절성 경화증, 혼합 세포형, 림프구-풍부, 림프구-고갈, 또는 결절성 림프구-우세형 호지킨 림프종(NLPHL)이다. 일부 실시 형태에서, 장암은 소장암, 소장의 암, 선암종, 육종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 또는 림프종이다. 일부 실시 형태에서, 신장암은 신세포 암종(RCC), 투명 세포 RCC, 유두상 RCC, 혐색소성 RCC, 집합관 RCC, 미분류 RCC, 이행 세포 암종, 요로상피암, 신우 암종, 또는 신장 육종이다. 일부 실시 형태에서, 백혈병은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 모발상 세포 백혈병(HCL), 또는 골수이형성 증후군(MDS)이다. 구체적인 실시 형태에서, 백혈병은 AML이다. 일부 실시 형태에서, 간암은 간세포 암종(HCC), 섬유층판성 HCC, 담관암종, 혈관육종, 또는 간 전이이다. 일부 실시 형태에서, 폐암은 소세포 폐암, 소세포 암종, 복합형 소세포 암종, 비소세포 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐암, 대세포 미분화 암종, 폐 결절, 전이성 폐암, 선편평세포 암종, 대세포 신경내분비 암종, 타액선형 폐 암종, 폐 카르시노이드, 중피종, 폐의 육종모양 암종, 또는 악성 과립 세포 폐 종양이다. 일부 실시 형태에서, 흑색종은 표재성 확산성 흑색종, 결절성 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 악성 흑자 흑색종, 무멜라닌성 흑색종, 섬유조직형성 흑색종, 안구 흑색종, 또는 전이성 흑색종이다. 일부 실시 형태에서, 중피종은 흉막 중피종, 복막 중피종, 심막 중피종, 또는 고환 중피종이다. 일부 실시 형태에서, 다발성 골수종은 활동성 골수종 또는 무증상 골수종이다. 일부 실시 형태에서, 신경내분비 종양은 위장관 신경내분비 종양, 췌장 신경내분비 종양, 또는 폐 신경내분비 종양이다. 일부 실시 형태에서, 비호지킨 림프종은 역형성 대세포 림프종, 림프아구성 림프종, 말초 T 세포 림프종, 여포성 림프종, 피부 T 세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 변연부 B-세포 림프종, MALT 림프종, 소세포 림프구성 림프종, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소림프구성 림프종(SLL), 전구체 T-림프아구성 백혈병/림프종, 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 T 세포 림프종/백혈병(ATLL), 모발상 세포 백혈병, B-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 B-세포 림프종, 원발성 중추 신경계(CNS) 림프종, 외투 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종, 점막-관련 림프계 조직(MALT) 림프종, 림프절 변연부 B-세포 림프종, 비장 변연부 B-세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, B-세포 비호지킨 림프종, T 세포 비호지킨 림프종, 자연 살해 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 알리버트-바진(Alibert-Bazin) 증후군, 세자리(Sezary) 증후군, 원발성 피부 역형성 대세포 림프종, 말초 T 세포 림프종, 혈관면역아구성 T 세포 림프종(AITL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 전신 ALCL, 장병증형 T 세포 림프종(EATL), 또는 간비장 감마/델타 T 세포 림프종이다. 일부 실시 형태에서, 구강암은 편평 세포 암종, 사마귀모양 암종, 소타액선 암종, 림프종, 양성 구강 종양, 호산구성 육아종, 섬유종, 과립 세포 종양, 각질극세포종, 평활근종, 골연골종, 지방종, 슈반세포종, 신경섬유종, 유두종, 첨규 콘틸로마, 우췌상 황색종, 화농성 육아종, 횡문근종, 치원성 종양, 백반증, 홍반증, 편평 세포 구순암, 기저 세포 구순암, 입의 암, 치육암, 또는 혀암이다. 일부 실시 형태에서, 난소암은 난소 상피암, 점액성 상피 난소암, 자궁내막모양 상피 난소암, 투명 세포 상피 난소암, 미분화 상피 난소암, 난소 저악성도 잠복 종양, 원발성 복막 암종, 난관암, 생식 세포 종양, 기형종, 난소고환종, 난소 생식 세포암, 내배엽 동종양, 성삭-간질 종양, 성삭-생식선 간질 종양, 난소 간질 종양, 과립막 세포 종양, 과립막-난포막 종양, 세르톨리-라이디히(Sertoli-Leydig) 종양, 난소 육종, 난소 암육종, 난소 선육종, 난소 평활근육종, 난소 섬유육종, 크루켄베르크(Krukenberg) 종양, 또는 난소 낭포이다. 일부 실시 형태에서, 췌장암은 췌장 외분비선암, 췌장 내분비선암, 또는 췌장 선암종, 췌도 세포 종양, 또는 신경내분비 종양이다. 일부 실시 형태에서, 전립선암은 전립선 선암종, 전립선 육종, 이행 세포 암종, 소세포 암종, 또는 신경내분비 종양이다. 일부 실시 형태에서, 동암은 편평 세포 암종, 점막 세포 암종, 선양 낭포 세포 암종, 선방 세포 암종, 비동 미분화 암종, 비강암, 부비동암, 상악동암, 사골동암, 또는 비인두암이다. 일부 실시 형태에서, 피부암은 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 카포시 육종(KS), 광선 각화증, 피부 림프종, 또는 각질극세포종이다. 일부 실시 형태에서, 연조직암은 혈관육종, 피부섬유육종, 상피모양 육종, 유잉 육종, 섬유육종, 위장관 간질 종양(GIST), 카포시 육종, 평활근육종, 지질육종, 탈분화된 지질육종(DL), 점액모양/둥근 세포 지질육종(MRCL), 잘 분화된 지질육종(WDL), 악성 섬유성 조직구종, 신경섬유육종, 횡문근육종(RMS), 또는 활막 육종이다. 일부 실시 형태에서, 척수암은 척수 전이성 종양이다. 일부 실시 형태에서, 위암은 위 선암종, 위 림프종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 위 카르시노이드 종양, I형 ECL-세포 카르시노이드, II형 ECL-세포 카르시노이드, 또는 III형 ECL-세포 카르시노이드이다. 일부 실시 형태에서, 고환암은 정상피종, 비정상피종, 배아 암종, 난황낭 암종, 융모막암종, 기형종, 생식선 간질 종양, 라이디히 세포 종양, 또는 세르톨리 세포 종양이다. 일부 실시 형태에서, 인후암은 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 후두암, 인두암, 비인두암, 구인두암, 하인두암, 후두암, 후두 편평 세포 암종, 후두 선암종, 림프상피종, 방추 세포 암종, 사마귀모양 암, 미분화 암종, 또는 림프절암이다. 일부 실시 형태에서, 갑상선암은 유두상 암종, 여포성 암종, 휘르틀(Hrthle) 세포 암종, 수질성 갑상선 암종, 또는 역형성 암종이다. 일부 실시 형태에서, 자궁암은 자궁내막암, 자궁내막 선암종, 자궁내막모양 암종, 장액성 선암종, 선편평세포 암종, 자궁 암육종, 자궁 육종, 자궁 평활근육종, 자궁내막 간질 육종, 또는 미분화 육종이다. 일부 실시 형태에서, 질암은 편평 세포 암종, 선암종, 흑색종, 또는 육종이다. 일부 실시 형태에서, 외음부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이다.
일 태양에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 다른 태양에서, 대상체는 인간이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 대상체에서 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 도출하는 활성 성분 또는 성분의 양을 지칭한다. 이 용어는, 질병, 장애, 및/또는 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 대상체에게 투여될 때, 질병, 장애, 및/또는 질환의 증상(들)을 치료, 진단, 예방, 및/또는 이의 발병을 지연시키기에 충분한 양을 지칭한다. 치료적 유효량이 전형적으로 적어도 하나의 단위 용량을 포함하는 투여 계획(dosing regimen)을 통해 투여됨이 당업자에 의해 이해될 것이다.
특정 실시 형태에 따르면, 치료적 유효량은 하기 효과 중 하나 이상, 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상, 또는 다섯 이상을 달성하기에 충분한 요법의 양을 지칭한다: (i) 치료하고자 하는 질병, 장애, 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 중증도를 감소 또는 개선함; (ii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 지속기간을 감소시킴; (iii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 진행을 예방함; (iv) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 퇴행을 야기함; (v) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 발생 또는 발병을 예방함; (vi) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 재발을 예방함; (vii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 입원을 감소시킴; (viii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 입원 기간을 감소시킴; (ix) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 생존율을 증가시킴; (xi) 대상체에서 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 억제하거나 감소시킴; 및/또는 (xii) 다른 요법의 예방적 또는 치료적 효과(들)를 향상시키거나 개선함.
치료적 유효량 또는 투여량은 다양한 인자, 예컨대 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태(예를 들어, 연령, 체중, 건강을 포함함), 대상체가 인간인지 또는 동물인지의 여부, 투여되는 다른 약, 및 치료가 예방적인지 또는 치료적인지의 여부에 따라 변동될 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능(efficacy)을 최적화하기 위해 최적으로 적정된다.
특정 실시 형태에 따르면, 본 명세서에 기재된 조성물은 대상체에 대한 의도된 투여 경로에 적합하도록 제형화된다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물은 정맥내, 피하, 또는 근육내 투여에 적합하도록 제형화될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 모두 암과 관련된 하나 이상의 측정가능한 물리적 파라미터의 개선 또는 역전을 지칭하고자 하는 것이며, 이는 반드시 대상체에서 식별가능하지는 않지만, 대상체에서 식별가능할 수 있다. 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 또한, 퇴행을 야기하거나, 진행을 예방하거나, 적어도 질병, 장애 또는 질환의 진행을 둔화시키는 것을 지칭할 수 있다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애, 또는 질환, 예컨대 종양 또는 더 바람직하게는 암과 관련된, 경감, 발생 또는 발병의 예방, 또는 하나 이상의 증상의 지속기간의 감소를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애 또는 질환의 재발의 예방을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애 또는 질환을 갖는 대상체의 생존율의 증가를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 대상체에서 질병, 장애 또는 질환의 제거를 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 또는 이의 단편은 제2 요법과 병용하여 사용된다. 일부 실시 형태에서, 제2 요법은 수술, 방사선 요법, 화학요법, 면역요법, 표적화된 요법, 호르몬 요법, 골수 이식, 크라이오어블레이션(cryoablation), 및 고주파 어블레이션으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시 형태에서, 제2 요법은 면역요법이다. 일부 실시 형태에서, 면역요법은 단일클론 항체, 종양-효능적(tumor-agnostic) 치료제, 예컨대 관문(checkpoint) 억제제, T-세포 요법, 예컨대 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포 요법, 또는 암 백신을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 대상체에 대한 2가지 이상의 요법의 투여와 관련하여 용어 "병용하여"는 하나 초과의 요법의 사용을 지칭한다. 용어 "병용하여"의 사용은 요법이 대상체에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 대상체에게 제2 요법을 투여하기 전에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전에), 그와 동시에, 또는 그 후에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 제1 요법(예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물)이 투여될 수 있다.
다른 태양에서, 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 감염을 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 대상체에게 투여되는 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 치료는 선천, 체액성 또는 세포-매개 항감염성 면역 반응을 향상시킨다. 일 실시 형태에서, 치료는 선천 항감염성 면역 반응을 향상시킨다. 일 실시 형태에서, 치료는 체액성 항감염성 면역 반응을 향상시킨다. 일 실시 형태에서, 치료는 세포-매개 항감염성 면역 반응을 향상시킨다.
감염의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드가 본 명세서에 또한 제공된다. 그러한 치료는 본 명세서에 정의된 감염의 치료 방법에 따른 것들 및 이의 모든 실시 형태를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 감염의 치료에 사용하기 위한 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
감염의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이 본 명세서에 또한 제공된다. 그러한 치료는 본 명세서에 정의된 감염의 치료 방법에 따른 것들 및 이의 모든 실시 형태를 포함한다.
감염의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체가 본 명세서에 또한 제공된다. 그러한 치료는 본 명세서에 정의된 감염의 치료 방법에 따른 것들 및 이의 모든 실시 형태를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 감염은 감염성 병원체, 예컨대 바이러스, 세균, 진균 또는 기생충에 의해 야기된다. 일 실시 형태에서, 병원체는 바이러스이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 세균이다. 일 실시 형태에서, 병원체는 진균이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 기생충이다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드는 대상체에서 감염을 예방하기 위해 백신 조성물과 공동투여된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드는 백신 조성물과 동시에 또는 순차적으로 공동투여된다.
다른 태양에서, 백신에 대한 대상체의 반응을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 백신과 동시에 또는 순차적으로 대상체에 투여된다. 구체적인 실시 형태에서, 대상체에게 투여되는 폴리펩티드는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질이며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 치료는 백신에 대한 선천, 체액성, 또는 세포-매개 면역 반응을 향상시킨다. 일 실시 형태에서, 치료는 백신에 대한 선천 면역 반응을 향상시킨다. 일 실시 형태에서, 치료는 백신에 대한 체액성 면역 반응을 향상시킨다. 일 실시 형태에서, 치료는 백신에 대한 세포-매개 면역 반응을 향상시킨다.
일부 실시 형태에서, 백신은 감염성 병원체, 예컨대 바이러스, 세균, 진균 또는 기생충에 대한 것이다. 일 실시 형태에서, 병원체는 바이러스이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 세균이다. 일 실시 형태에서, 병원체는 진균이다. 다른 실시 형태에서, 병원체는 기생충이다. 다른 실시 형태에서, 백신은 암에 대한 것이다. 다른 실시 형태에서, 백신은 종양에 대한 것이다. 다른 실시 형태에서, 백신은 알레르겐에 대한 것이다. 다른 유형의 백신이 또한 고려된다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드는 대상체에서 백신에 대한 면역 반응을 향상시키기 위해 백신 조성물과 공동투여된다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드는 백신에 대한 애쥬번트로서 작용한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다. 또 다른 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 경구 전달, 협측 전달, 비강 전달 또는 흡입 전달을 통해 대상체에게 투여된다.
또 다른 실시 형태에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하기 위한 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 용도가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 치료용 분자는 경구 전달을 위해 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 치료용 분자는 협측 전달을 위해 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 치료용 분자는 비강 전달을 위해 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 치료용 분자는 흡입 전달을 위해 대상체에게 투여된다.
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템이 또한 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
다른 태양에서, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
또 다른 태양에서, 약제학적으로 허용되는 담체 및 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 제공하기 위한 수단을 제공하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
일 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 키트를 제공하는 시스템이 본 명세서에 제공되며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함한다.
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 핵산 분자뿐만 아니라, 본 명세서에 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 성분들을 인코딩하는 핵산 분자가 또한 제공된다. 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트가 또한 제공된다. 본 명세서에 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 핵산 분자를 함유하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다.
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 제조하기 위한 공정이 또한 제공된다.
일 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 (a) 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (i) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (ii) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 상기 단계; (b) 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 (c) 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 회수하는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체를 생성하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 (a) 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (i) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (ii) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 상기 단계; (b) 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; (c) 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 회수하는 단계; 및 (d) 이량체화에 유리한 조건 하에서 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질들 또는 이들의 단편을 조합하는 단계를 포함한다.
또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편의 약제학적 조성물을 생성하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
또 다른 태양에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 포함하는 백신 조성물을 생성하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 백신 항원과 배합하여 상기 백신 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편은 이종이량체화를 촉진시키는 상보적 CH3 도메인을 갖는 IgG-유사 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편은 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자를 포함하며, 여기서는 분자의 2개의 측 각각이 적어도 2개의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부를 함유한다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편은 IgG 융합 분자를 포함하며, 여기서는 전장 IgG 항체가 추가 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편은 Fc 융합 분자를 포함하며, 여기서는 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 다이아바디가 중쇄 불변-도메인, Fc-영역 또는 이들의 일부에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편은 Fab 융합 분자를 포함하며, 여기서는 상이한 Fab 단편들이 함께 융합된다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편은 ScFv- 및 다이아바디-기반 및 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)를 포함하며, 여기서는 상이한 단일쇄 Fv 분자들 또는 상이한 다이아바디들 또는 상이한 중쇄 항체들(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)이 서로 또는 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합된다.
일부 실시 형태에서, 상보적 CH3 도메인 분자를 갖는 IgG-유사 분자는 Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인투-홀(Knob-into-Hole) (Genentech), CrossMAb (Roche) 및 정전기적으로 일치된 항체(electrostatically-matched) (Amgen), LUZ-Y (Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody) (EMD Serono), Biclonic (Merus), AzymetricTM 플랫폼 (Zymeworks) 및 DuoBody (Genmab A/S)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화(Dual Targeting)(DT)-Ig (GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody) (Genentech), 가교결합된(Cross-linked) mAb (Karmanos Cancer Center), mAb2 (F-Star) 및 CovX-바디 (CovX/Pfizer)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인(Dual Variable Domain, DVD)-Ig (Abbott), IgG-유사 이중특이체 (InnClone/Eli Lilly), Ts2Ab (MedImmune/AZ) 및 BsAb (Zymogenetics), HERCULES (Biogen Idec) 및 TvAb (Roche)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체 (Academic Institution), SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART) (MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)2-Fab (National Research Center for Antibody Medicine-China)를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체화"는 2개의 동일한 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 Fc 단량체 펩티드들 사이의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체"는 동일한 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 갖는 분자를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체화"는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 Fc 단량체 펩티드와 이와 동일하지 않은 Fc 융합 펩티드 사이의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 지칭한다.
"노브-인-홀(knob-in-hole)" 전략(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2006/028936호 참조)이 전장 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 생성하는 데 사용될 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내에 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이화되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.
하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기를, 그리고 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 제2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 제2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 제2010/028637호; 또는 미국 특허 출원 공개 제2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 제2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0195849호에 기재된 바와 같이 하기의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405AY407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 약 1 pM 미만, 약 0.9 pM 미만, 약 0.8 pM 미만, 약 0.7 pM 미만, 약 0.6 pM 미만, 약 0.5 pM 미만, 약 0.4 pM 미만, 약 0.300 pM 미만, 약 0.2 pM 미만, 약 0.19 pM 미만, 약 0.18 pM 미만, 약 0.17 pM 미만, 약 0.16 pM 미만, 약 0.15 pM 미만, 약 0.14 pM 미만, 약 0.13 pM 미만, 약 0.12 pM 미만, 약 0.11 pM 미만, 약 0.1 pM 미만, 약 0.09 pM 미만, 약 0.08 pM 미만, 약 0.07 pM 미만, 약 0.06 pM 미만, 약 0.05 pM 미만, 약 0.04 pM 미만, 약 0.03 pM 미만, 약 0.02 pM 미만, 또는 약 0.01 pM 미만의 EC50으로 CD40을 활성화한다. 소정 실시 형태에서, EC50은 약 1000 pM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 190 pM 미만, 약 180 pM 미만, 약 170 pM 미만, 약 160 pM 미만, 약 150 pM 미만, 약 140 pM 미만, 약 130 pM 미만, 약 120 pM 미만, 약 110 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM 미만, 약 20 pM 미만, 또는 약 10 pM 미만이다.
소정 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 농도는 약 0.000005 ng/mL, 약 0.00005 ng/mL, 약 0.0005, 약 0.005 ng/mL, 약 0.01 ng/mL, 약 0.02 ng/mL, 약 0.03 ng/mL, 약 0.04 ng/mL, 약 0.05 ng/mL, 약 0.06 ng/mL, 약 0.07 ng/mL, 약 0.08 ng/mL, 약 0.09 ng/mL, 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1.0 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 또는 약 1000 ng/mL이다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 하나 이상의 성분은 인간 형태이다. 일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 하나 이상의 성분은 인간화 형태이다.
일부 실시 형태에서, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 Fc 단량체 펩티드는 IgG 항체로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG2 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG3 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG4 항체이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 플라스미드, 코스미드, 파지 벡터, 또는 바이러스 벡터와 같은, 본 발명을 고려하여 당업자에게 알려진 임의의 벡터가 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터는 재조합 발현 벡터, 예컨대 플라스미드이다. 벡터는 발현 벡터의 통상적인 기능을 확립하기 위한 임의의 요소, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 요소, 종결자, 인핸서, 선택 마커, 및 복제 기점을 포함할 수 있다. 프로모터는 구성적, 유도성 또는 억제성 프로모터일 수 있다. 세포에 핵산을 전달할 수 있는 다수의 발현 벡터가 당업계에 알려져 있으며, 세포에서의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생성을 위해 본 발명에 사용될 수 있다. 통상적인 클로닝 기법 또는 인공 유전자 합성이 본 명세서에 제공된 실시 형태에 따른 재조합 발현 벡터를 생성하는 데 사용될 수 있다. 그러한 기법은 본 발명을 고려하여 당업자에게 잘 알려져 있다.
다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명을 고려하여 당업자에게 알려진 임의의 숙주 세포가 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 재조합 발현에 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 E. 콜라이(E. coli) TG1 또는 BL21 세포(예를 들어, Fc 단량체 펩티드의 발현용), CHO-DG44 또는 CHO-K1 세포 또는 HEK293 세포(예를 들어, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 발현용)이다. 특정 실시 형태에 따르면, 재조합 발현 벡터는 통상적인 방법, 예컨대 화학적 형질감염, 열 충격, 또는 전기천공에 의해 숙주 세포 내로 형질전환되며, 여기서 그것은 재조합 핵산이 효과적으로 발현되도록 숙주 세포 게놈 내로 안정하게 통합된다.
다른 태양에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 전달하기 위한 수단 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
약제학적 조성물을 생성하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적 조성물"은 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 생성물을 의미한다. 따라서, 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함할 수 있으며, 이를 포함하는 조성물은 또한 본 명세서에 언급된 치료적 응용을 위한 약제의 제조에 유용한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "담체"는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정제, 가용화제, 오일, 지질, 지질 함유 베시클, 미소구체, 리포좀 캡슐화, 또는 약제학적 제형에 사용하기 위한 당업계에 잘 알려진 다른 물질을 지칭한다. 담체, 부형제, 또는 희석제의 특성은 특정 응용을 위한 투여 경로에 좌우될 것임이 이해될 것이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 본 발명에 따른 조성물의 유효성 또는 본 명세서에 제공된 조성물의 생물학적 활성을 방해하지 않는 비독성 물질을 지칭한다. 특정 실시 형태에 따르면, 본 개시내용을 고려하여, 활성 성분으로서 융합 단백질을 갖는 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 약제학적으로 허용되는 담체가 본 발명에 사용될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 약제학적으로 활성인 성분의 제형은 당업계에, 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy (e.g. 21st edition (2005), and any later editions)]에 알려져 있다. 추가의 성분의 비제한적인 예에는 완충제, 희석제, 용매, 장성 조절제, 방부제, 안정제, 및 킬레이트제가 포함된다. 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체가 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물을 제형화하는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 액체 제형이다. 액체 제형의 바람직한 예는 수성 제형, 즉, 물을 포함하는 제형이다. 액체 제형은 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 겔 등을 포함할 수 있다. 수성 제형은 전형적으로 적어도 50% w/w의 물, 또는 적어도 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 적어도 95% w/w의 물을 포함한다.
일 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, 예를 들어 주사 장치(예를 들어, 주사기 또는 주입 펌프)를 통해 주사될 수 있는 주사제로서 제형화될 수 있다. 주사는, 예를 들어 피하, 근육내, 복막내, 유리체강내, 또는 정맥내 전달될 수 있다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 고체 제형, 예를 들어 냉동-건조 또는 분무-건조된 조성물이며, 이것은 그대로 사용될 수 있거나, 또는 이것에 의사 또는 환자가 사용 전에 용매 및/또는 희석제를 첨가한다. 고체 투여 형태는 정제, 예컨대 압축 정제, 및/또는 코팅된 정제, 및 캡슐(예를 들어, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐)을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한, 예를 들어 사셰(sachet), 당의정, 분말, 과립, 로젠지(lozenge), 또는 재구성을 위한 분말의 형태일 수 있다.
투여 형태는 즉시 방출(이 경우에, 이들은 수용성 또는 수분산성 담체를 포함할 수 있음)일 수 있거나, 또는 이들은 지연 방출, 지속 방출, 또는 조절 방출(이 경우에, 이들은 위장관에서의 또는 피부 하에서의 투여 형태의 용해 속도를 조절하는 수불용성 중합체를 포함할 수 있음)일 수 있다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 비강내, 협측내, 또는 설하 전달될 수 있다.
수성 제형 중의 pH는 pH 3 내지 pH 10일 수 있다. 본 명세서에 제공된 일 실시 형태에서, 제형의 pH는 약 7.0 내지 약 9.5이다. 본 명세서에 제공된 다른 실시 형태에서, 제형의 pH는 약 3.0 내지 약 7.0이다.
본 명세서에 제공된 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 완충제를 포함한다. 완충제의 비제한적인 예에는 아르기닌, 아스파르트산, 바이신, 시트레이트, 인산수소이나트륨, 푸마르산, 글리신, 글리실글리신, 히스티딘, 라이신, 말레산, 말산, 소듐 아세테이트, 탄산나트륨, 인산이수소나트륨, 인산나트륨, 석시네이트, 타르타르산, 트라이신, 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 완충제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 완충제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 대안적인 실시 형태를 구성한다.
본 명세서에 제공된 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 방부제를 포함한다. 방부제의 비제한적인 예에는 벤제토늄 클로라이드, 벤조산, 벤질 알코올, 브로노폴, 부틸 4-하이드록시벤조에이트, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로로헥시딘, 클로르페네신, o-크레졸, m-크레졸, p-크레졸, 에틸 4-하이드록시벤조에이트, 이미드우레아, 메틸 4-하이드록시벤조에이트, 페놀, 2-페녹시에탄올, 2-페닐에탄올, 프로필 4-하이드록시벤조에이트, 소듐 데하이드로아세테이트, 티오메로살, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 방부제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 방부제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 대안적인 실시 형태를 구성한다.
본 명세서에 제공된 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 등장제(isotonic agent)를 포함한다. 등장제의 비제한적인 예에는 염(예컨대, 염화나트륨), 아미노산(예컨대, 글리신, 히스티딘, 아르기닌, 라이신, 아이소류신, 아스파르트산, 트립토판, 및 트레오닌), 알디톨(예컨대, 글리세롤, 1,2-프로판다이올 프로필렌글리콜, 1,3-프로판다이올, 및 1,3-부탄다이올), 폴리에틸렌글리콜(예를 들어, PEG400), 및 이들의 혼합물이 포함된다. 등장제의 다른 예는 당을 포함한다. 당의 비제한적인 예에는 단당류, 이당류, 또는 다당류, 또는 수용성 글루칸(예를 들어, 프룩토스, 글루코스, 만노스, 소르보스, 자일로스, 말토스, 락토스, 수크로스, 트레할로스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 알파 및 베타-HPCD, 가용성 전분, 하이드록시에틸 전분, 및 소듐 카르복시메틸-셀룰로스를 포함함)이 포함될 수 있다. 등장제의 다른 예는 당 알코올이며, 여기서 용어 "당 알코올"은 적어도 하나의 -OH 기를 갖는 C(4-8) 탄화수소로서 정의된다. 당 알코올의 비제한적인 예에는 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 갈락티톨, 둘시톨, 자일리톨, 및 아라비톨이 포함된다. 등장제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 등장제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 대안적인 실시 형태를 구성한다.
본 명세서에 제공된 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 킬레이트제(chelating agent)를 포함한다. 킬레이트제의 비제한적인 예에는 시트르산, 아스파르트산, 에틸렌다이아민테트라아세트산(EDTA)의 염, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 킬레이트제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 킬레이트제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 본 발명의 대안적인 실시 형태를 구성한다.
본 명세서에 제공된 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 안정제를 포함한다. 안정제의 비제한적인 예에는 하나 이상의 응집 억제제, 하나 이상의 산화 억제제, 하나 이상의 계면활성제, 및/또는 하나 이상의 프로테아제 억제제가 포함된다.
본 명세서에 제공된 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 안정제를 포함하며, 상기 안정제는 카르복시-/하이드록시셀룰로스 및 이의 유도체(예컨대, HPC, HPC-SL, HPC-L 및 HPMC), 사이클로덱스트린, 2-메틸티오에탄올, 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG 3350), 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 염(예컨대, 염화나트륨), 황-함유 물질, 예컨대 모노티오글리세롤), 또는 티오글리콜산이다. 안정제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 안정제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 대안적인 실시 형태를 구성한다.
본 명세서에 제공된 추가의 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 계면활성제, 바람직하게는 하나의 계면활성제, 적어도 하나의 계면활성제, 또는 2개의 상이한 계면활성제를 포함한다. 용어 "계면활성제"는 수용성(친수성) 부분 및 지용성(친유성) 부분으로 구성된 임의의 분자 또는 이온을 지칭한다. 계면활성제는, 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 및/또는 쯔비터이온성 계면활성제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 계면활성제는 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 집합체로 존재할 수 있다. 이들 특정 계면활성제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 대안적인 실시 형태를 구성한다.
본 명세서에 제공된 추가의 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 프로테아제 억제제, 예컨대 EDTA, 및/또는 벤즈아미딘 염산(HCl)을 포함한다. 프로테아제 억제제는 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 집합체로 존재할 수 있다. 이들 특정 프로테아제 억제제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 대안적인 실시 형태를 구성한다.
다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 생성하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
실시 형태
본 발명은 하기의 비제한적인 실시 형태를 제공한다.
일 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 A)에서, 다음이 제공된다:
A1.
(a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40 리간드(CD40L) 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A2.
실시 형태 A1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 상기 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A3.
실시 형태 A2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A4.
실시 형태 A1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A5.
실시 형태 A1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A6.
실시 형태 A5에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A7.
실시 형태 A1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A8.
실시 형태 A7에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A9.
실시 형태 A8에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A10.
실시 형태 A1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A11.
실시 형태 A1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A12.
실시 형태 A11에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A13.
실시 형태 A12에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A14.
실시 형태 A13에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A15.
실시 형태 A14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1 서열을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A16.
실시 형태 A15에 있어서, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A17.
실시 형태 A14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A18.
실시 형태 A17에 있어서, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A19.
실시 형태 A1에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A20.
실시 형태 A2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A21.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A20 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 활성화를 향상시키는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A22.
실시 형태 A21에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시키는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A23.
실시 형태 A22에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A24.
실시 형태 A23에 있어서, 상기 CD40L 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A25.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A24 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 항종양 활성을 향상시키는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A26.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체.
A27.
실시 형태 A26에 있어서, 상기 이량체는 동종이량체인, 이량체.
A28.
실시 형태 A26에 있어서, 상기 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 이량체.
A29.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
A30.
실시 형태 A29의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
A31.
실시 형태 A30의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
A32.
실시 형태 A29의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포.
A33.
약제학적으로 허용되는 담체 및 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물.
A34.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 키트.
A35.
요법에 사용하기 위한, 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 실시 형태 26 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이량체.
A36.
질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 실시 형태 26 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이량체.
A37.
대상체에서 질병 세포의 제거에 사용하기 위한, 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 실시 형태 26 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이량체.
A38.
실시 형태 A37에 있어서, 상기 질병 세포는 암 세포 또는 병원체로 감염된 세포인, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A39.
암의 치료에 사용하기 위한, 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 실시 형태 26 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이량체.
A40.
실시 형태 A39에 있어서, 상기 암은 고형 암 또는 액성 암인, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A41.
실시 형태 A39에 있어서, 상기 암은 흑색종, 중피종, 진행성 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A42.
감염의 치료에 사용하기 위한, 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 실시 형태 26 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이량체.
A43.
실시 형태 A42에 있어서, 상기 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균 또는 기생충인, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
A44.
백신 조성물의 투여에 사용하기 위한, 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 실시 형태 26 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이량체.
A43.
실시 형태 A44에 있어서, 상기 백신은 암, 감염성 병원체 또는 알레르겐에 대한 백신인, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
다른 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 B)에서, 다음이 제공된다:
B1.
(a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템.
B2.
실시 형태 B1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 상기 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결되는, 시스템.
B3.
실시 형태 B2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하는, 시스템.
B4.
실시 형태 B1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 시스템.
B5.
실시 형태 B1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결되는, 시스템.
B6.
실시 형태 B5에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 시스템.
B7.
실시 형태 B1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결되는, 시스템.
B8.
실시 형태 B7에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 시스템.
B9.
실시 형태 B8에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함하는, 시스템.
B10.
실시 형태 B1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 시스템.
B11.
실시 형태 B1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하는, 시스템.
B12.
실시 형태 B11에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하는, 시스템.
B13.
실시 형태 B12에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함하는, 시스템.
B14.
실시 형태 B13에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되는, 시스템.
B15.
실시 형태 B14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1 서열인, 시스템.
B16.
실시 형태 B15에 있어서, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하는, 시스템.
B17.
실시 형태 B14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하는, 시스템.
B18.
실시 형태 B17에 있어서, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 시스템.
B19.
실시 형태 B1에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택되는, 시스템.
B20.
실시 형태 B2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 시스템.
B21.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B20 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 활성화를 향상시키는, 시스템.
B22.
실시 형태 B21에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시키는, 시스템.
B23.
실시 형태 B22에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 포함하는, 시스템.
B24.
실시 형태 B22에 있어서, 상기 CD40L 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 포함하는, 시스템.
B25.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B24 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 항종양 활성을 포함하는, 시스템.
B26.
2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템으로서,
각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 시스템.
B27.
실시 형태 B26에 있어서, 상기 이량체는 동종이량체인, 시스템.
B28.
실시 형태 B26에 있어서, 상기 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 시스템.
B29.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템.
B30.
실시 형태 B29의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템.
B31.
실시 형태 B30의 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템.
B32.
실시 형태 B29의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템.
B33.
약제학적으로 허용되는 담체 및 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템.
B34.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B25 중 어느 하나의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 키트를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템.
다른 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 C)에서, 다음이 제공된다:
C1.
CD40 폴리펩티드를 활성화하는 방법으로서,
상기 CD40 폴리펩티드를 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 결합 시에 상기 CD40 폴리펩티드를 활성화하는, 방법.
C2.
실시 형태 C1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 상기 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결되는, 방법.
C3.
실시 형태 C2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
C4.
실시 형태 C1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 방법.
C5.
실시 형태 C1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결되는, 방법.
C6.
실시 형태 C5에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C7.
실시 형태 C1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결되는, 방법.
C8.
실시 형태 C7에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C9.
실시 형태 C8에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C10.
실시 형태 C1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C11.
실시 형태 C1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하는, 방법.
C12.
실시 형태 C11에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하는, 방법.
C13.
실시 형태 C12에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함하는, 방법.
C14.
실시 형태 C13에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되는, 방법.
C15.
실시 형태 C14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1 서열인, 방법.
C16.
실시 형태 C15에 있어서, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C17.
실시 형태 C14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하는, 방법.
C18.
실시 형태 C17에 있어서, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C19.
실시 형태 C1에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
C20.
실시 형태 C2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
C21.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C20 중 어느 하나에 있어서, 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화를 포함하는, 방법.
C22.
실시 형태 C21에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시키는, 방법.
C23.
실시 형태 C21에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 포함하는, 방법.
C24.
실시 형태 C21에 있어서, 상기 CD40L 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 포함하는, 방법.
C25.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C24 중 어느 하나에 있어서, 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 항종양 활성을 포함하는, 방법.
C26.
CD40 폴리펩티드를 활성화하는 방법으로서,
상기 CD40 폴리펩티드를 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 결합 시에 상기 CD40 폴리펩티드를 활성화하는, 방법.
C27.
실시 형태 C26에 있어서, 동종이량체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
C28.
실시 형태 C26에 있어서, 상기 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 방법.
C29.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C28 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 시험관내에서 수행되는, 방법.
C30.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C28 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 생체내에서 수행되는, 방법.
C31.
실시 형태 C30에 있어서, 추가로, 상기 접촉시키는 단계는 약제학적으로 허용되는 담체 및 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
C32.
실시 형태 C31에 있어서, 상기 접촉은 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시키는, 방법.
C33.
T 세포를 활성화하는 방법으로서,
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 존재 하에서 상기 T 세포를 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하고, 여기서 상기 항원-제시 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하고; 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 T-세포를 활성화하는, 방법.
C34.
실시 형태 C33에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 상기 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결되는, 방법.
C35.
실시 형태 C34에 있어서, 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
C36.
실시 형태 C33에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 방법.
C37.
실시 형태 C33에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결되는, 방법.
C38.
실시 형태 C37에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C39.
실시 형태 C33에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결되는, 방법.
C40.
실시 형태 C39에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C41.
실시 형태 C40에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C42.
실시 형태 C33에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C43.
실시 형태 C33에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하는, 방법.
C44.
실시 형태 C43에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하는, 방법.
C45.
실시 형태 C44에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함하는, 방법.
C46.
실시 형태 C45에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되는, 방법.
C47.
실시 형태 C46에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1 서열인, 방법.
C48.
실시 형태 C47에 있어서, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C49.
실시 형태 C46에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하는, 방법.
C50.
실시 형태 C49에 있어서, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C51.
실시 형태 C33에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
C52.
실시 형태 C34에 있어서, 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
C53.
실시 형태 C33 내지 실시 형태 C52 중 어느 하나에 있어서, 추가로, 야생형 CD40L과 대비하여 상기 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화를 포함하는, 방법.
C54.
실시 형태 C53에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시키는, 방법.
C55.
실시 형태 C53에 있어서, 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 추가로 포함하는, 방법.
C56.
실시 형태 C53에 있어서, 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 추가로 포함하는, 방법.
C57.
실시 형태 C33 내지 실시 형태 C56 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 항종양 활성을 포함하는, 방법.
C58.
T 세포를 활성화하는 방법으로서,
2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 존재 하에서 상기 CD40 폴리펩티드를 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하고, 여기서 상기 항원-제시 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하고, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 T-세포를 활성화하는, 방법.
C59.
실시 형태 C58에 있어서, 동종이량체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
C60.
실시 형태 C58에 있어서, 상기 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 방법.
C61.
실시 형태 C33 내지 실시 형태 C60 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 시험관내에서 수행되는, 방법.
C62.
실시 형태 C33 내지 실시 형태 C60 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 생체내에서 수행되는, 방법.
C63.
실시 형태 C62에 있어서, 추가로, 상기 접촉시키는 단계는 약제학적으로 허용되는 담체 및 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
C64.
실시 형태 C63에 있어서, 상기 접촉은 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시키는, 방법.
C65.
수지상 세포를 활성화하는 방법으로서,
상기 CD40 폴리펩티드를 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 수지상 세포를 활성화하는, 방법.
C66.
실시 형태 C65에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 상기 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결되는, 방법.
C67.
실시 형태 C66에 있어서, 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
C68.
실시 형태 C65에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 방법.
C69.
실시 형태 C65에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결되는, 방법.
C70.
실시 형태 C69에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C71.
실시 형태 C65에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결되는, 방법.
C72.
실시 형태 C71에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C73.
실시 형태 C72에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C74.
실시 형태 C65에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C75.
실시 형태 C65에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하는, 방법.
C76.
실시 형태 C75에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하는, 방법.
C77.
실시 형태 C76에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함하는, 방법.
C78.
실시 형태 C77에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되는, 방법.
C79.
실시 형태 C78에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1 서열인, 방법.
C80.
실시 형태 C79에 있어서, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C81.
실시 형태 C78에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하는, 방법.
C82.
실시 형태 C81에 있어서, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
C83.
실시 형태 C65에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
C84.
실시 형태 C66에 있어서, 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
C85.
실시 형태 C65 내지 실시 형태 C84 중 어느 하나에 있어서, 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화를 포함하는, 방법.
C86.
실시 형태 C85에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시키는, 방법.
C87.
실시 형태 C85에 있어서, 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 추가로 포함하는, 방법.
C88.
실시 형태 C85에 있어서, 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 추가로 포함하는, 방법.
C89.
실시 형태 C65 내지 실시 형태 C88 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 항종양 활성을 포함하는, 방법.
C90.
수지상 세포를 활성화하는 방법으로서,
상기 CD40 폴리펩티드를 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 상기 CD40 폴리펩티드에 결합 시에 상기 수지상 세포를 활성화하는, 방법.
C91.
실시 형태 C90에 있어서, 동종이량체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
C92.
실시 형태 C90에 있어서, 상기 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 방법.
C93.
실시 형태 C54 내지 실시 형태 C92 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 시험관내에서 수행되는, 방법.
C94.
실시 형태 C54 내지 실시 형태 C92 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 생체내에서 수행되는, 방법.
C95.
실시 형태 C94에 있어서, 추가로, 상기 접촉시키는 단계는 약제학적으로 허용되는 담체 및 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
C96.
실시 형태 C95에 있어서, 상기 접촉은 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시키는, 방법.
다른 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 D)에서, 다음이 제공된다:
D1.
대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
D2.
실시 형태 D1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 상기 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결되는, 방법.
D3.
실시 형태 D2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
D4.
실시 형태 D1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 방법.
D5.
실시 형태 D1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결되는, 방법.
D6.
실시 형태 D5에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
D7.
실시 형태 D1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결되는, 방법.
D8.
실시 형태 D7에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
D9.
실시 형태 D8에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
D10.
실시 형태 D1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
D11.
실시 형태 D1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하는, 방법.
D12.
실시 형태 D11에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하는, 방법.
D13.
실시 형태 D12에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함하는, 방법.
D14.
실시 형태 D13에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되는, 방법.
D15.
실시 형태 D14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1 서열인, 방법.
D16.
실시 형태 D15에 있어서, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
D17.
실시 형태 D14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하는, 방법.
D18.
실시 형태 D17에 있어서, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
D19.
실시 형태 D1에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
D20.
실시 형태 D2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
D21.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D20 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화를 포함하는, 방법.
D22.
실시 형태 D21에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시키는, 방법.
D23.
실시 형태 D22에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 포함하는, 방법.
D24.
실시 형태 D22에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 포함하는, 방법.
D25.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D24 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 항종양 활성을 포함하는, 방법.
D26.
대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
D27.
실시 형태 D26에 있어서, 동종이량체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
D28.
실시 형태 D26에 있어서, 상기 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 방법.
D29.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D28 중 어느 하나에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 및 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
D30.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D29 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료는 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시키는, 방법.
D31.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D30 중 어느 하나에 있어서, 제2 요법의 공동투여를 추가로 포함하는, 방법.
D32.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D31 중 어느 하나에 있어서, 상기 암은 흑색종, 중피종, 진행성 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
다른 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 E)에서, 다음이 제공된다:
E1.
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하기 위한 방법으로서,
(a) 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (i) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (ii) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 상기 단계; (b) 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 (c) 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
E2.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 상기 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결되는, 방법.
E3.
실시 형태 E2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
E4.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 방법.
E5.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결되는, 방법.
E6.
실시 형태 E5에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
E7.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결되는, 방법.
E8.
실시 형태 E7에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
E9.
실시 형태 E8에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
E10.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
E11.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하는, 방법.
E12.
실시 형태 E11에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하는, 방법.
E13.
실시 형태 E12에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함하는, 방법.
E14.
실시 형태 E13에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되는, 방법.
E15.
실시 형태 E14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1 서열인, 방법.
E16.
실시 형태 E15에 있어서, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
E17.
실시 형태 E14에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하는, 방법.
E18.
실시 형태 E17에 있어서, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
E19.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
E20.
실시 형태 E2에 있어서, 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
E21.
실시 형태 E1 내지 실시 형태 E20 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 활성화를 향상시키는, 방법.
E22.
실시 형태 E21에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시키는, 방법.
E23.
실시 형태 E22에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 포함하는, 방법.
E24.
실시 형태 E23에 있어서, 상기 CD40L 폴리펩티드의 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 포함하는, 방법.
E25.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 항종양 활성을 포함하는, 방법.
E26.
2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체를 생성하는 방법으로서,
(a) 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (i) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (ii) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 상기 단계; (b) 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; (c) 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 회수하는 단계; 및 (d) 이량체화에 유리한 조건 하에서 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질들 또는 이들의 단편을 조합하는 단계를 포함하는, 방법.
E27.
실시 형태 E26에 있어서, 상기 이량체는 동종이량체를 포함하는, 방법.
E28.
실시 형태 E26에 있어서, 상기 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 방법.
E29.
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편의 약제학적 조성물을 생성하는 방법으로서,
실시 형태 E1 내지 실시 형태 E25 중 어느 하나에 따라 생성된 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함하는, 방법.
다른 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 F)에서, 다음이 제공된다:
F1.
대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법으로서,
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
F2.
암을 갖는 대상체에서 암 항원에 대한 면역 반응을 증가시키는 방법으로서,
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
F3.
병원체로 감염된 대상체에서 상기 병원체에 대한 면역 반응을 증가시키는 방법으로서,
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
F4.
백신이 투여되는 대상체에서 백신 항원에 대한 면역 반응을 증가시키는 방법으로서,
단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하며, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
F5.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F4 중 어느 하나에 있어서, 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
F6.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F5 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 방법.
F7.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F6 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단에 연결되는, 방법.
F8.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F7 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
F9.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F8 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단에 연결되는, 방법.
F10.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F9 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
F11.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F10 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 16 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
F12.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F11 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
F13.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F12 중 어느 하나에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하는, 방법.
F14.
실시 형태 F13에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하는, 방법.
F15.
실시 형태 F14에 있어서, 상기 인간 Fc 서열은 IgG 서열을 포함하는, 방법.
F16.
실시 형태 F15에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되는, 방법.
F17.
실시 형태 F16에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG1 서열인, 방법.
F18.
실시 형태 F17에 있어서, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
F19.
실시 형태 F16에 있어서, 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하는, 방법.
F20.
실시 형태 F19에 있어서, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
F21.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F20 중 어느 하나에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
F22.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F20 중 어느 하나에 있어서, 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
F23.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F22 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화를 포함하는, 방법.
F24.
실시 형태 F23에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화는 수지상 세포, B 세포, 단핵구 및 대식세포의 면역-자극 기능을 향상시키는, 방법.
F25.
실시 형태 F24에 있어서, 상기 CD40 폴리펩티드의 향상된 활성화는 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 T 세포 활성화를 포함하는, 방법.
F26.
실시 형태 F22에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 수지상 세포 활성화를 포함하는, 방법.
F27.
실시 형태 F1 내지 실시 형태 F26 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 야생형 CD40L과 대비하여 향상된 항종양 활성을 포함하는, 방법.
F28.
대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법으로서,
2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
F29.
암을 갖는 대상체에서 암 항원에 대한 면역 반응을 증가시키는 방법으로서,
2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
F30.
병원체로 감염된 대상체에서 상기 병원체에 대한 면역 반응을 증가시키는 방법으로서,
2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
F31.
백신이 투여되는 대상체에서 백신 항원에 대한 면역 반응을 증가시키는 방법으로서,
2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하며, 각각의 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위; 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는, 방법.
F32.
실시 형태 F28 내지 실시 형태 F31 중 어느 하나에 있어서, 동종이량체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
F33.
실시 형태 F28 내지 실시 형태 F32 중 어느 하나에 있어서, 상기 이량체는 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 방법.
F34.
실시 형태 F28 내지 실시 형태 F33 중 어느 하나에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 및 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
F35.
실시 형태 F28 내지 실시 형태 F34 중 어느 하나에 있어서, 제2 요법의 공동투여를 추가로 포함하는, 방법.
본 발명의 특정 실시 형태가 본 명세서에 기재되어 있다. 전술한 설명을 읽을 때, 개시된 실시 형태들의 변형이 당업자에게 명백해질 수 있으며, 숙련자는 적절한 경우에 그러한 변형을 사용할 수 있을 것으로 예상된다. 따라서, 본 발명은 본 명세서에 구체적으로 기재된 것과 다른 방식으로 실시될 수 있으며, 본 발명은 적용가능한 법에 의해 허용되는 한 본 명세서에 첨부된 청구범위에 언급된 발명 요지의 모든 변형 및 등가물을 포함하는 것으로 의도된다. 더욱이, 본 명세서에서 달리 지시되거나 문맥에 의해 달리 명확하게 모순되지 않는 한, 이의 모든 가능한 변형 내의 전술된 요소들의 임의의 조합이 본 발명에 의해 포함된다. 본 발명의 다수의 실시 형태가 기재되어 있다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사상 및 범주로부터 벗어남이 없이 다양한 변형들이 이루어질 수 있다는 것은 이해될 것이다. 따라서, 실시예 섹션에서의 설명은 청구범위에 기재된 본 발명의 범주를 예시하지만 이를 제한하고자 하지 않는다.
실시예
실시예 1: 방법 및 재료
가용성 삼량체성 CD40L Fc 융합 작제물의 설계: CD40L은 세포외 도메인, 줄기 영역, 막관통 나선, 및 짧은 세포질 도메인으로 이루어진 막 단백질이다. CD40L의 활성은 세포외 도메인에 위치하고, 이 도메인을 Fc 융합 작제물 생성을 위해 선택하였다. CD40L ECD(Uniprot ID: P29965)를 가요성 링커 및 테더와 함께 융합하여 이펙터 기능 침묵된 인간 IgG1 및 인간 IgG2 동종형과의 N-말단 융합체를 형성하였다. CD40L 하위단위들 사이의 링커는 9개 또는 12개의 아미노산이고 가요성을 위해 선택되었지만, 다른 길이는 시험하지 않았다. 마지막 CD40L 하위단위와 Fc 사이의 테더는 가요성을 촉진시키도록 선택되었으며 0 내지 20개의 아미노산의 범위였다. 추가적으로, CD40L의 C-말단 Fc 융합체를 생성하였다. 5 내지 20개의 아미노산 범위의 가요성 테더를 Fc의 C-말단과 제1 CD40L 하위단위의 N-말단 사이에 배치하였다. 9개 또는 12개의 아미노산의 가요성 링커를 CD40L 하위단위들 사이에 사용하였다. C-말단 삼량체성 CD40L Fc 융합체를 이펙터 침묵된 인간 IgG1 및 IgG2A 동종형 상에 작제하였다. CD40L 삼량체 번들을 huIgG 분자에 융합하여 효능제 CD40L을 설계하려는 초기 시도는 단백질 A 정제 후에 고분자량 종(HMWS)을 가져왔으며, 추가의 전개에 부적합하였다. 단백질의 생물물리학적 및 기능적 특성을 구조 기반 근거(structure based rationale)를 사용하여 단백질을 재설계함으로써 최적화하였다. 단백질을 다양한 하위단위 내 링커, 테더 및 Fc 부착점을 사용하여 설계하였다(도 1a).
더욱이, CD40L 삼량체 융합 단백질이 스스로(즉, Fc 부분들 사이의 상호작용을 통해 CD40L 삼량체 융합 단백질의 2개의 카피의 이량체를 형성하지 않고서) 활성을 가졌다는 가설을 시험하기 위해, 이량체 형성을 제거한 CH3 도메인에 돌연변이를 갖는 Fc 단량체 펩티드에 융합된 CD40L 삼량체를 함유한 분자들을 또한 설계 및 작제하였다("모노 Fc" 분자, 예를 들어 도 1b 참조).
실시예 2: 발현 및 정제
Expi293F 세포를 무혈청 Expi293™ 발현 배지(Invitrogen) 중에서 성장시켰다. 세포를 회전식 진탕기 상에서 8% CO2 하에서 37℃에서 삼각 플라스크 내에 유지하였다. 3.0 × 106개의 세포/ml로 세포를 형질감염시켰다. 플라스미드 DNA를 Opti-MEM I 중에 희석시켰다. Expifectamine 293을 Opti-MEM I 중에 희석시키고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. DNA 혼합물을 Expifectamine 293과 함께 인큐베이션하고, 실온에서 20 내지 30분 동안 인큐베이션하였다. DNA/Expifectamine 293 복합체를 세포 배양물에 첨가하고, 인큐베이터에 다시 옮겼다. 형질감염 후 16 내지 18시간 시점에서, 적절한 부피의 인핸서(Enhancer)를 세포 배양물에 첨가하였다. 세포 배양 상층액을 일수 6에서 수집하고, 10분 동안 3000 g로 원심분리하여 세포를 펠릿화하였다. 정제 시까지 상층액을 4℃에서 저장하였다.
Tecan 액체 핸들러를 구비한 RoboColumn Eshmuno A, 0.6 ml(MERCK MILLIPORE, Cat. No. 1.25163.0001) 컬럼을 사용하여 단백질을 정제하였다. 상층액을 최대 포획을 위해 0.6 mL/분의 유량으로 컬럼에 적용하였다. UV A280에 의해 모니터링될 때 세정 기준선(clean baseline)이 얻어질 때까지, 컬럼을 8 컬럼 부피의 PBS를 사용하여 세척하였다. 단백질을 50 mM 시트레이트(Citrate)(pH 3.0)를 사용하여 컬럼으로부터 용리하고, 1 M Tris-HCl(pH 9.0)을 사용하여 중화하였다. Zebra Spin Desalting 컬럼을 사용하여 단백질을 탈염하여, 최종 완충액으로서 dPBS 중에 넣었다. 비변성 및 변성 SDS PAGE 겔을 사용하여 재조합 단백질의 존재에 대해 분획을 시험하고 풀링하였다. 정제된 단백질은 SDS PAGE 및 분석용 크기 교환 컬럼(aSEC)에 의해 순도가 80% 초과인 것으로 여겨졌다. 두 번째 단계인 크로마토그래피 최종정제(chromatographic polishing)를 PBS 이동상을 사용하여 Superdex200 겔 여과 크로마토그래피에 의해 달성하였다. 약 150 kDa에 상응하는 분획을 풀링하고, 사용 시까지 -80℃에서 저장하였다.
새로 설계된 삼량체는 HPLC(aSEC)(표 1, 하기), 및 SDS-PAGE 겔(도 2a 및 도 2b)을 사용하여 단분산 Fc 동종이량체의 수준에 의해 결정될 때 순도에 있어서 유의한 개선을 보여주었다.
[표 1]
원래의 분자는 aSEC에 의해 결정될 때 단백질 A 정제 후 38% 순도를 가졌으며(TPP000161222), SDS-PAGE 겔에서 우세한 고분자량 종 밴드를 나타내었다(도 2a 및 도 2b). 대조적으로, 새로 설계된 삼량체는 aSEC에 의해 결정될 때 65 내지 81%의 순도 범위를 나타내었다(표 1). 삼량체를 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 추가로 최종정제하였으며, 여기서 TPP000161222는 분석용 초원심분리(AUC)에 의해 측정될 때 98% 단분산도를 나타내었으며, 이때 고분자량 종 및 저분자량 종을 포함한 원치 않는 종은 2% 미만이었다(도 3).
작제물의 서열:
폰트 체계(Font Scheme): CD40L-링커-CD40L-링커-CD40L- 테더 -인간 IgG Fc
TPP000183311|OVTSB10|중쇄| hsctCD40LG2_EKWv2NPQ(서열 번호 1)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLVERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000183310|OVTSB9|중쇄| hsctCD40LG2_EKWv2NPQ_G4S3(서열 번호 2)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGSGGGGSGGGGS VERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182997|C4LW30|성숙_단백질|
NPQ_G3S3_sthCD40L_G4S2_IgG1_AAS(서열 번호 3)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGSGGGGS EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182996|C4LW29|성숙_단백질|
NPQ_G3S3_sthCD40L_G4S3_IgG1_AAS(서열 번호 4)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGSGGGGSGGGGS EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182995|C4LW28|성숙_단백질|
NPQ_G3S3_sthCD40L_G4S4_IgG1_AAS(서열 번호 5)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182994|C4LW27|성숙_단백질|
NPQ_G3S3_sthCD40L_G4S_IgG1_AAS(서열 번호 6)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGS EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182993|C4LW26|성숙_단백질| NPQ_G3S3_sthCD40L_IgG1_AAS(서열 번호 7)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182992|C4LW25|성숙_단백질| NPQ_sthCD40L_G4S2_IgG1_AAS(서열 번호 8)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGSGGGGS EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182991|C4LW24|성숙_단백질| NPQ_sthCD40L_G4S3_IgG1_AAS(서열 번호 9)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGSGGGGSGGGGS EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182990|C4LW23|성숙_단백질| NPQ_sthCD40L_G4S4_IgG1_AAS(서열 번호 10)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182989|C4LW22|성숙_단백질| NPQ_sthCD40L_G4S_IgG1_AAS(서열 번호 11)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL GGGGS EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>TPP000182988|C4LW21|성숙_단백질| NPQ_sthCD40L_IgG1_AAS(서열 번호 12)
NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
폰트 체계: 인간 IgG Fc- 테더 CD40L-링커-CD40L-링커-CD40L
>TPP000182986|C4LW19|성숙_단백질| IgG1_AAS_G4S2_NPQ_sthCD40L(서열 번호 13)
HTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGS NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL
>TPP000182985|C4LW18|성숙_단백질| IgG1_AAS_G4S3_NPQ_sthCD40L(서열 번호 14)
HTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGS NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL
>TPP000182984|C4LW17|성숙_단백질| IgG1_AAS_G4S4_NPQ_sthCD40L(서열 번호 15)
HTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL
>TPP000182983|C4LW16|성숙_단백질|
IgG1_AAS_G4S_NPQ_G3S3_sthCD40L(서열 번호 16)
HTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGS NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL
>TPP000182982|C4LW15|성숙_단백질|
IgG1_AAS_G4S2_NPQ_G3S3_sthCD40L(서열 번호 17)
HTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGS NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL
>TPP000182981|C4LW14|성숙_단백질|
IgG1_AAS_G4S3_NPQ_G3S3_sthCD40L(서열 번호 18)
HTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGS NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL
>TPP000182980|C4LW13|성숙_단백질|
IgG1_AAS_G4S4_NPQ_G3S3_sthCD40L(서열 번호 19)
HTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGGGSGGGSGGGSNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL
>TPP000161222|C40W33|성숙_단백질| JNJ75347415(서열 번호 32)
IAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLEGKSSGSGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLVERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
실시예 3: HEK-Blue 검정
이들 분자가 기능적으로 활성인 CD40 효능제임을 보장하기 위해, HEK-Blue 수용체 세포주(Invivogen)를 사용하여 천연 CD40 수용체를 활성화할 수 있는 삼량체 융합 단백질의 능력을 검정하였다.
Invivogen으로부터의 HEK-Blue CD40L 세포를 DMEM, 2 mM GlutaMAX, 10% 열 불활성화된 FBS, 100 ug/mL의 Normocin 및 100 ug/mL의 Pen-Strep을 함유한 성장 배지 중에서 배양하였다. 검정 셋업을 위해 시험 배지(DMEM + 10% 열 불활성화된 FBS + 100 ug/mL의 Pen-Strep) 중에 2.8 × 105개의 세포/ml로 세포를 준비하였다. 180 μl의 세포 현탁액을 5 × 104개의 세포/웰의 최종 밀도를 위해 96웰 플레이트에 첨가하였다. 20 uL의 시험 대상물을 웰당 200 μL의 총 부피를 위해 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 20 내지 24시간 동안 CO2 인큐베이터 내에서 37℃에서 인큐베이션하였다. Invivogen으로부터의 QUANTI-Blue 용액을 제조사의 프로토콜에 따라 제조하고, 180 μl의 용액을 96웰 편평바닥 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 20 uL의 유도된 HEK-Blue CD40L 세포 상층액을 검정 플레이트에 첨가하고, 37℃에서 인큐베이션하였다. 분광광도계(635 nm)를 사용하여 SEAP 수준을 결정하였다. HEK-Blue 리포터 검정을 사용하여 시험된 CD40L 삼량체의 기능적 활성이 도 5a에 나타나 있다. 단핵구 유래 수지상 세포 활성화 검정의 결과가 도 5b에 나타나 있다. 교차 결합 항체 처리의 부재 하에서의 성숙 수지상 세포 활성화 검정의 결과가 도 5c에 나타나 있다.
TPP000182983은 HEK-Blue 리포터 검정을 사용하였을 때 원래 분자 TPP000161222와 대비하여 활성에 있어서 100배 증가를 나타내었다(도 5a).
실시예 4: MSD 전기-화학발광 검출 검정
조작된 분자들의 결합 특성을 MSD(Meso Scale Discovery) 생물발광 검정을 사용하여 비교하여 재조합 CD40 수용체에 대한 융합 단백질의 결합을 측정하였다.
스트렙타비딘 센서 플레이트를 10 ug/ml의 비오티닐화 CD40으로 4℃에서 하룻밤 코팅하였다. 플레이트를 0.05% Tween 20을 함유하는 PBS(PBST)로 3회 세척하였다. 시험 대상물의 3배 연속 희석물을 0.2% 소혈청 알부민을 함유하는 PBS 중에 제조하고, 50 ul를 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 플레이트에 적용하였다. 플레이트를 PBST로 3회 세척하고, 2 ug/ml의 최종 농도의 항-인간 Fc 검출 시약을 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 적용하였다. 플레이트를 PBST로 3회 세척하고, 150 ul의 1X 판독 완충액을 플레이트에 첨가하고, MSD 기기 상에서 데이터를 수집하였다. 데이터를 GRAPHPAD Prism 8 소프트웨어로 불러와서 분석하고, 3개의 별개의 실험의 결과에 기초하여 플롯팅하였다.
새로 설계된 삼량체는 MSD 및 SPR 둘 모두를 사용하였을 때 원래의 설계된 삼량체와 대비하여 증가된 결합을 나타내었다(실시예 4 및 실시예 5에 기재됨)(도 4a 내지 도 4c).
실시예 5: CD40L에 대한 표면 플라즈몬 공명 분석
조작된 분자들의 결합 특성을 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정을 사용하여 비교하여 재조합 CD40 수용체에 대한 융합 단백질의 결합을 측정하였다.
Biacore의 기술을 사용하는 표면 플라즈몬 공명(SPR)은 하나의 상호작용물(interactant)이 센서 표면 상에 고정화되거나 포획될 것을 필요로 한다. 나머지 다른 하나의 상호작용물은 개질된 센서 표면 위로 유동한다. 센서 표면 상에서 일어나는 2개의 단백질의 상호작용은 기기 응답의 변화를 측정함으로써 실시간으로 모니터링된다. Biacore 8K 광학 바이오센서(GE Healthcare)를 사용하여 CD40L에 대한 SPR 실험을 수행하였다. 0.05% P20을 함유하는 HBS 완충액 중에 샘플을 제조하고, C1 센서 칩을 사용하여 25℃에서 실험을 수행하였다. 100 mM Gly pH 12 - 0.3% Triton을 사용하여 칩을 전처리하고, 이후에 염소 항-인간 Fc 항체의 공유적 고정화를 수행하였다. 염소 항-인간 IgG Fcγ 단편 특이적 항체를 10 mM 소듐 아세테이트 완충액 pH 4.5 중에 희석시키고, 약 600개의 반응 단위(RU)를 아민-커플링 화학을 사용하여 C1 칩의 카르복시메틸화 덱스트란 표면에 커플링하였다. 표면 상에 남아 있는 반응성 기를 에탄올아민-HCl을 사용하여 불활성화시켰다. 결합 실험을 수행하기 위하여, 50개 초과의 반응 단위(RU)의 CD40L-Fc 융합 작제물을 포획하고, 이후에 50 μL/분으로 4.7 nM부터 300 nM까지의 농도로 hu CD40을 주입하였다. 회합 단계를 3분 동안 모니터링하고, 해리 단계를 10분 동안 모니터링하였다. 센서 칩 표면을 0.85% H3PO4의 주입에 의해 재생시켰다. CD40L 작제물이 없는 플로우 셀(flow cell)을 참조로서 사용하였다. Insight 소프트웨어, 버전 2(GE Healthcare)를 사용하여 데이터를 처리하였다. 데이터의 이중 참조 감산(double reference subtraction)을 수행하여 신호 및 기기 노이즈에 대한 완충액 기여를 보정하였다.
흥미롭게도, 새로 설계된 삼량체는 MSD 및 SPR 둘 모두를 사용하였을 때 원래의 설계된 삼량체와 대비하여 증가된 결합을 나타내었다(도 4a 내지 도 4c).
실시예 6: CDc
+
수지상 세포 활성화 검정
인간 유래 면역 세포를 활성화할 수 있는 삼량체 융합체의 능력을 평가하기 위해, CMV 회상 검정(하기 실시예 7) 및 수지상 세포 교차 제시 검정을 사용하였다.
사전분류된 CD1c+ 수지상 세포를 해동시키고, 이어서 80 ng/mL의 GM-CSF 및 80 ng/mL의 IL-4(PeproTech, Inc)를 함유하는 완전 RPMI 1640(10% FBS, L-글루타민, 비필수 아미노산, 소듐 피루베이트, 및 Pen/Strep) 중 2 x 106개의 세포/ml로 37℃ 인큐베이터 내에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 다음날, 세포를 완전 RPMI로 세척하고, 96웰 둥근바닥 플레이트 내에서 1 x 105개의 세포/웰로 플레이팅하였다. 수지상 세포를 선택된 CD40 효능제 분자의 적정 농도로 활성화하고 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 세척하고, 세포외 수지상 세포 활성화 마커에 대해 유세포측정 분석을 수행하였다.
세포 표면 마커, 주로 CD80 및 CD86의 상대적 이동을 삼량체 융합 단백질의 존재 및 부재 하에서 측정하였다. 놀랍게도, TPP000182983은 다른 알려진 CD40L 효능제 삼량체들과 비교할 때 증가된 DC 활성화 및 T-세포 활성화를 나타내었다(하기 실시예 7)(도 6a 내지 도 6e 및 도 7a 및 도 7b).
CD40L 삼량체 융합 단백질이 스스로(즉, Fc 부분들 사이의 상호작용을 통해 CD40L 삼량체 융합 단백질의 2개의 카피의 이량체를 형성하지 않고서) 활성을 가졌다는 가설을 시험하기 위해, 이량체 형성을 제거한 CH3 도메인에 돌연변이를 갖는 Fc 단량체 펩티드에 융합된 CD40L 삼량체를 함유한 분자들을 설계 및 작제하였다("모노 Fc" 분자, 예를 들어 도 1b 참조). 이들 모노-Fc 분자를 2명의 별개의 공여자에 대해 24시간 인간 DC 활성화 검정에서 시험하였다. APC 활성화에 대한 마커인 CD86의 상향조절이 야생형 CD40L의 것과 유사한 수준으로 관찰되었는데(데이터는 제시되지 않음), 이는 CD40L 삼량체가 단독으로 활성임을 입증한다.
실시예 7: 단핵구-유래 수지상 세포를 사용한 T 세포 활성화 검정
사전분류된 단핵구를 해동시키고, 이어서 80 ng/mL의 GM-CSF 및 80 ng/mL의 IL-4(PeproTech, Inc)를 함유하는 완전 RPMI 1640(10% FBS, L-글루타민, 비필수 아미노산, 소듐 피루베이트, 및 Pen/Strep) 중 2 x 106개의 세포/ml로 5일 동안 37℃ 인큐베이터 내에서 단핵구-유래 수지상 세포로 분화시켰다. 일수 3에서, 160 ng/mL의 GM-CSF 및 160 ng/mL의 IL-4를 함유하는 동일 부피의 완전 RPMI를 첨가하였다. 일수 5에서, 세포를 완전 RPMI로 세척하고, 96웰 둥근바닥 플레이트 내에서 3 x 104개의 세포/웰로 플레이팅하였다. 단핵구-유래 DC를 사용하여 T 세포 활성화를 평가하기 위해, 적정량(titrating amount)의 선택된 CD40 효능제 분자를 첨가하고, 3 x 105개의 매칭된 공여자 T 세포, 1 ug/mL의 최종 농도의 CEF 펩티드(거대세포바이러스, 엡스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스, 및 인플루엔자 바이러스 펩티드; ImmunoSpot), 및 10 μg/mL의 최종 농도의 IL-15(PeproTech, Inc)를 첨가하였다. 일수 2에서, 배지의 절반을 20 μg/mL의 IL-15 및 20 IU/mL의 IL-2(R&D Systems)를 함유하는 완전 RPMI로 대체하였다. 일수 5에서, 배지의 절반을 20 ug/mL의 IL-15, 20 IU/mL의 IL-2, 1 ug/mL의 최종 농도의 CEF 펩티드, 1:200 최종 농도의 CD107a 항체(Biolegend), 및 1X 단백질 수송 억제제 칵테일(Thermo Fisher)을 함유하는 완전 RPMI로 대체하였다. 후속으로, 세포를 37℃ 인큐베이터 내에서 하룻밤 인큐베이션하고, 이어서 세포내 이펙터 사이토카인의 생성을 위해 유세포측정 분석을 진행하였다.
종합하면, 이들 실시예는 새로 최적화된 CD40L 삼량체, TPP000182983이 안정하고 기능적으로 월등한 CD40 작용제임을 입증한다.
실시예 8: 분석용 초원심분리
샘플을 1.2 cm Beckman 센터피스(centerpiece)(50K rpm 등급) 및 석영 윈도우가 구비된 원심분리 셀 내로 로딩하였다. 셀을 조립하고 130 lb까지 토크를 가한다. 원심분리 셀을 An-50(8 구멍(hole)) 또는 An-60(4 구멍) 회전자(rotor) 내로 넣고, Beckman Optima AUC 챔버 내에 넣었다. 회전자가 챔버 내에 있는 채로 AUC의 온도를 적어도 1시간 동안 20.5℃로 평형화한 후, 전개를 개시하였다. 스캔 카운트(250회 스캔), 스캔 수집의 빈도(90초), 데이터 분해능(10 μM)을 사용하여 mAb 샘플에 대해 40K rpm으로 전개를 수행하였다. 흡광도 데이터를 280 nm에서 수집하였다. 초기에, 메니스커스 위치를 결정하고 침강 분포 프로파일을 관찰하기 위해 소프트웨어 프로그램 DCDT(Philo 2006)를 사용하여 데이터를 분석하였다. 이어서, Direct Boundary Fitting 소프트웨어(문헌[Stafford and Sherwood, Biophys Chem 108(1-3): 231-243 (2004)])를 사용하여 데이터를 분석하였다. 메니스커스 위치를 DCDT+에 의해 결정하고, 기준선을 7.2로 설정하고, 적합 범위를 수동으로 선택하였다. 2종의 비-상호작용 모델을 사용하여 데이터를 적합화하였는데, 이때 제1 종은 단량체에 상응하고, 제2 종은 이량체에 상응하였다.
실시예 9: 항종양 활성
조작된 분자의 생체내 항종양 활성을 평가하기 위해, 조작된 분자 TPP000182983(C4LW16)으로 처리된 인간 CD40 녹인(knock-in) 마우스 모델에서 결장 선암종 종양 성장을 평가하였다. TPP000182983에 대한 투여량 및 계획을 (예를 들어, mRNA, 아데노-관련 바이러스, 또는 종양용해성 바이러스 등에 의해 인코딩된 형태의) 유전자 전달 플랫폼으로부터의 인코딩된 단백질의 발현을 모방하도록 선택하였으며, 이는 재조합 단백질 요법과 대비하여 준최적(sub-optimal)인 것으로 여겨진다.
인간 CD40 녹인 마우스에 5×105개의 MC38 5AG 세포를 이식하였다. 종양 부피가 대략 100 mm3에 도달하였을 때, 마우스를 치료군 및 대조군에 무작위 배정하였다. 이어서, 무작위 배정 후 일수 1, 4, 및 6에서 마우스에 20 μg의 TPP000182983 또는 음성 대조군 동종형 항체 중 어느 하나를 정맥내 투여하고, 종양 성장을 시간 경과에 따라 측정하였다.
치료 기간 동안, TPP000182983은 동종형 대조군과 대비하여 49.99%의 종양 성장 억제 및 0.036의 p 값을 가지면서 강한 항종양 활성을 입증하였다(데이터는 제시되지 않음).
이들 결과는 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질이 준최적의 낮은 투여량에서도 종양 성장을 효과적으로 억제할 수 있음을 입증한다.
실시예 10: 바이러스 제거
바이러스 제거를 향상시킬 수 있는 조작된 분자의 능력을 인간 CD40 녹인 마우스 모델에서 평가한다. 6주령 내지 12주령된 암컷 마우스의 군에 꼬리 정맥을 통해 1 × 107 pfu 인플루엔자 바이러스를 정맥내 주사한다. 접종된 마우스를 치료군 및 대조군에 무작위 배정한다. 이어서, 치료군 내의 마우스에 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드를 정맥내 주입한다. 대조군 내의 마우스에는 PBS 또는 음성 대조군 동종형 항체를 주입한다. 마우스에서의 바이러스 역가를 시간 경과에 따라 측정한다.
치료 기간 동안, 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질이 투여된 마우스는 음성 대조군 동종형 항체 또는 PBS가 투여된 마우스보다 더 낮은 바이러스 역가 및 더 신속한 바이러스 제거를 갖는다.
이들 결과는 본 발명에 따른 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질이 인플루엔자 바이러스의 제거를 효과적으로 향상시킨다는 것을 입증한다.
실시예 11: 백신 애쥬번트
조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 인간 CD40 녹인 마우스에서 백신 조성물에 대한 면역 반응을 향상시킬 수 있는 능력에 대해 평가한다.
인간 CD40 녹인 마우스를 군에 무작위 배정하고, 표적 바이러스 항원을 포함하는 백신 조성물을 투여한다. 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드를 마우스(치료군)에 백신 조성물과 병행적으로 또는 순차적으로 투여한다. 대조군에서는, 마우스에 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질 대신에 PBS를 투여한다. 치료군 및 대조군에서의 바이러스 항원에 대한 마우스의 면역 반응을 시간 경과에 따라 모니터링한다. 결과는 치료군에서의 마우스가 대조군에서의 마우스와 대비하여 바이러스 항원에 대해 유의하게 더 높은 면역 반응을 나타내었음을 보여준다. 특히, 표적 바이러스 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 역가는 유의하게 더 높으며, 치료군의 마우스에서의 항체-생성 혈장 세포의 농도는 대조군과 대비하여 치료군의 마우스에서 유의하게 더 높다.
치료군 및 대조군에서의 마우스를 관찰 기간의 종료 시점에서 희생시키고, 바이러스에 의해 감염되는 것으로 알려진 절개된 조직(예를 들어, 폐)을 단리하고 추가 분석을 위해 준비한다. 동소(in situ) 면역조직화학 연구에서, 수지상 세포에 대한 세포-특이적 마커를 AlexaTM Fluor 488을 사용하여 염색하고, 이로써 형광 현미경법 하에서 녹색 점으로서 조직 샘플 내의 수지상 세포를 시각화한다. 백신 조성물에 사용되는 표적 바이러스 항원을 AlexaTM Fluor 568로 염색하여, 적색 점으로서 항원 분자를 시각화한다. 바이러스 항원을 제시하는 수지상 세포를 2개의 형광 신호의 공국재화로서 시각화한다. 조직 샘플 내의 수지상 세포의 총수 및 바이러스 항원을 제시하는 수지상 세포의 백분율을 형광 현미경법을 사용하여 측정한다. 결과는, 단지 백신 조성물만을 제공받은 마우스(대조군)와 대비하여, 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질과 함께 백신 조성물을 제공받은 마우스(치료군)에서 바이러스 항원을 제시하는 성숙된 수지상 세포의 백분율의 유의한 증가를 보여준다.
항원-제시 세포에 의한 바이러스 항원의 제시에 대한 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 효과를 추가로 평가하기 위해, 면역침전 연구를 수행하여 바이러스 항원과 MHC 복합체 사이의 회합을 측정한다. 희생된 마우스로부터의 절개된 폐 조직의 균질액을 표준 프로토콜에 따라 제조한다. 균질액을 클래스 I MHC 또는 클래스 II MHC II 분자에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체로 코팅된 비드와 함께, 상기 항체와 조직 샘플 내의 이의 표적 단백질 및 단백질 복합체의 회합을 가능하게 하기에 적합한 조건 하에서 인큐베이션한다. 이어서, 비드를 원심분리에 의해 조직으로부터 분리하여, 코팅된 항체와 회합된 단백질 및 단백질 복합체를 함께 풀다운한다(pulling down). 이어서, 풀다운된 단백질 샘플을 웨스턴 블롯에 의해 이의 내용물을 분석하기 위해 처리한다. 표적 바이러스 항원에 특이적인 단일클론 항체를 사용한다. 결과는, 단지 백신 조성물만을 제공받은 마우스(대조군)와 대비하여, 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질과 함께 백신 조성물을 제공받은 마우스(치료군)로부터 단리된 샘플로부터의 MHC 분자(이 연구에서 조사된 클래스 I 및 클래스 II 분자 둘 모두)와 함께 면역침전된 바이러스 항원의 양의 유의한 증가를 보여준다.
이들 결과는 본 발명에 따른 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질이 애쥬번트로서 백신과 공동투여될 때 백신에 대한 면역 반응을 효과적으로 향상시킨다는 것을 입증한다. 증가된 면역 반응은 면역화된 동물에서 항원-제시 세포(예컨대, 수지상 세포)에 의한 바이러스 항원의 증가된 제시에 적어도 기인할 수 있다.
장기 면역 기억에 대한 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 효과를 모니터링하기 위해, 본 발명에 따른 삼량체성 CD40L 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드와 병용된 백신 조성물의 초기 용량을 일수 0에서 마우스에 투여한다(치료군). 이어서, 마우스를 부스팅된 마우스의 제1 군 및 부스팅되지 않은 마우스의 제2 군으로 나누는데, 여기서 부스팅된 마우스에는 일수 7에서 백신 조성물의 두 번째 투여가 제공되는 반면, 부스팅되지 않은 마우스에는 일수 7에서 PBS가 제공된다. 대조군에서는, 마우스에 일수 0에서 백신 조성물을 단독으로 투여하고, 일수 7에서 부스팅된 군 및 부스팅되지 않은 군으로 나누어서 각각 백신 조성물 또는 PBS의 두 번째 용량을 제공한다. 치료군 및 대조군에서의 바이러스 항원에 대한 마우스의 면역 반응을 시간 경과에 따라 모니터링한다.
결과는, 치료군 및 대조군 둘 모두에서의 마우스가 백신 조성물의 초기 용량을 제공받은 후에 표적 바이러스 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 생성한다는 것을 보여준다. 치료군에서의 마우스의 경우, 부스팅되지 않은 마우스에서의 항체 역가는 일수 14 및 일수 28에서 부스팅된 마우스에서의 항체 역가와 비견되는 높은 값을 유지한다. 대조군에서의 마우스의 경우, 부스팅되지 않은 마우스에서의 항체 역가는, 일수 28에서, 부스팅된 마우스보다 유의하게 더 낮다. 마우스를 일수 28에서 희생시키고, 대조군에서의 마우스가 기억 B 세포를 발생시키는 반면, 기억 B 세포 형성은 (부스팅된 또는 부스팅되지 않은) 대조군 마우스로부터 관찰되지 않는 것으로 관찰된다.
이들 결과는 본 발명에 따른 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질이 체액성 면역 반응 및 바이러스 항원을 표적화하는 항체 생성을 효과적으로 향상시키고, 바이러스에 대한 면역 기억의 더 신속한 형성을 촉진시킨다는 것을 나타낸다. 본 발명에 따른 조작된 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 대상체에서 표적 바이러스 감염의 예방을 위해 특이적으로 조정된 백신 조성물의 애쥬번트로서 사용될 수 있다.
실시예 12: Fc 단량체 펩티드 활성
Fc 단량체가 활성을 갖는다는 가설을 시험하기 위해 Fc 단량체 펩티드를 설계한다. Fc 단량체를 2명의 별개의 공여자에 대해 24시간 인간 DC 활성화 검정에서 시험한다. WT CD40L 활성과 유사하게, APC 활성화에 대한 마커인 CD86을 상향조절하는데, 이는 Fc 단량체가 활성임을 나타낸다.
실시예 13: 치료의 적합성을 결정하기 위한 예후 방법
본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질에 의한 치료로부터 이익을 얻을 암 또는 고형 종양을 갖는 환자들의 개개의 환자 또는 하위집단이, 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 투여 시에 예후 마커의 존재 또는 부재, 또는 이의 상승된 또는 감소된 수준을 모색하는 예후 검정을 사용하여 확인될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질에 의한 치료에 반응하는 것으로 확인된 대상체를 치료할 수 있다. 대안적으로, 이들은, 예를 들어 암 또는 고형 종양이 본 발명에 따른 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 투여를 포함하는 치료에 대해 더 반응성인지의 여부를 확인하기 위해, 생체외(ex vivo) 예후 검정을 사용하여 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질로부터의 잠재적인 이익을 위해 추가로 스크리닝될 수 있다.
생체외 예후 검정은 후보 대상으로부터의 시험 생물학적 샘플 및 대조 생물학적 샘플을 제공하는 단계 - 여기서, 이들 생물학적 샘플은 생체내 또는 생체외에서 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질로 자극된 CD40-발현 항원-제시 세포를 포함함 -; 시험 생물학적 샘플에서 적어도 하나의 바이오마커의 발현 수준을 검출하는 단계; 및 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질과 접촉되지 않은 대조 생물학적 샘플에서 검출된 상응하는 발현 수준을 갖는 바이오마커(들)의 발현 수준을 비교하는 단계를 포함한다. 이들 생체외 예후 검정에 사용하기 위한 바이오마커는 발현 수준이 치료 개입에 대한 반응성의 예후 지표인 단백질 및/또는 유전자를 포함한다.
* * * * *
당업자는 광범위한 본 발명의 개념으로부터 벗어나지 않고서 전술된 실시 형태에 변경이 이루어질 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 본 발명은 개시된 특정 실시 형태로 제한되는 것이 아니라, 본 명세서에 의해 한정되는 바와 같은 본 발명의 사상 및 범주 내의 변형들을 포함하도록 의도됨이 이해된다.
SEQUENCE LISTING
<110> Janssen Biotech, Inc.
<120> BIOENGINEERED IMMUNOMODULATORY FUSION PROTEIN COMPOSITIONS
<130> 14620-628-228 / JBI6455WOPCT1
<140>
<141>
<150> US 63/160,694
<151> 2021-03-12
<150> US 63/160,693
<151> 2021-03-12
<150> US 63/160,691
<151> 2021-03-12
<150> US 63/160,688
<151> 2021-03-12
<150> US 63/160,686
<151> 2021-03-12
<160> 40
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 672
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000183311 - OVTSB10 - heavy_chain - hsctCD40LG2_EKWv2NPQ
<400> 1
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Trp Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
145 150 155 160
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
165 170 175
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
180 185 190
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
195 200 205
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
210 215 220
Leu Trp Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
225 230 235 240
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
245 250 255
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
260 265 270
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
275 280 285
Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile
290 295 300
Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu
305 310 315 320
Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr
325 330 335
Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr
340 345 350
Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln
355 360 365
Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Trp Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu
370 375 380
Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys
385 390 395 400
Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly
405 410 415
Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly
420 425 430
Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Val Glu Arg Lys Ser
435 440 445
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
450 455 460
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
465 470 475 480
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
485 490 495
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
500 505 510
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
515 520 525
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
530 535 540
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
545 550 555 560
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
565 570 575
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
580 585 590
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
595 600 605
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
610 615 620
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
625 630 635 640
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
645 650 655
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
660 665 670
<210> 2
<211> 687
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000183310 - OVTSB9 - heavy_chain - hsctCD40LG2_EKWv2NPQ_G4S3
<400> 2
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Trp Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
145 150 155 160
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
165 170 175
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
180 185 190
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
195 200 205
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
210 215 220
Leu Trp Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
225 230 235 240
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
245 250 255
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
260 265 270
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
275 280 285
Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile
290 295 300
Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu
305 310 315 320
Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr
325 330 335
Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr
340 345 350
Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln
355 360 365
Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Trp Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu
370 375 380
Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys
385 390 395 400
Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly
405 410 415
Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly
420 425 430
Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Gly Ser
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Glu Arg Lys Ser Cys
450 455 460
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
465 470 475 480
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
485 490 495
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
500 505 510
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
515 520 525
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
530 535 540
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
545 550 555 560
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
565 570 575
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
580 585 590
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
595 600 605
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
610 615 620
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
625 630 635 640
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
645 650 655
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
660 665 670
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680 685
<210> 3
<211> 695
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182997 - C4LW30 - mature_protein -
NPQ_G3S3_sthCD40L_G4S2_IgG1_AAS
<400> 3
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala
145 150 155 160
Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln
165 170 175
Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu
180 185 190
Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile
195 200 205
Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala
210 215 220
Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg
225 230 235 240
Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly
245 250 255
Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala
260 265 270
Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr
275 280 285
Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly
290 295 300
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
305 310 315 320
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
325 330 335
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
340 345 350
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
355 360 365
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
370 375 380
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
385 390 395 400
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
405 410 415
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
420 425 430
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
435 440 445
Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
450 455 460
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
465 470 475 480
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
485 490 495
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
500 505 510
Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
515 520 525
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
530 535 540
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
545 550 555 560
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
565 570 575
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
580 585 590
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
595 600 605
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
610 615 620
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
625 630 635 640
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
645 650 655
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
660 665 670
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
675 680 685
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
690 695
<210> 4
<211> 700
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182996 - C4LW29 - mature_protein -
NPQ_G3S3_sthCD40L_G4S3_IgG1_AAS
<400> 4
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala
145 150 155 160
Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln
165 170 175
Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu
180 185 190
Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile
195 200 205
Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala
210 215 220
Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg
225 230 235 240
Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly
245 250 255
Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala
260 265 270
Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr
275 280 285
Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly
290 295 300
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
305 310 315 320
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
325 330 335
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
340 345 350
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
355 360 365
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
370 375 380
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
385 390 395 400
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
405 410 415
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
420 425 430
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
435 440 445
Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
465 470 475 480
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
485 490 495
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
500 505 510
Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
515 520 525
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
530 535 540
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
545 550 555 560
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
565 570 575
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
580 585 590
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
595 600 605
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
610 615 620
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
625 630 635 640
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
645 650 655
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
660 665 670
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
675 680 685
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
690 695 700
<210> 5
<211> 705
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182995 - C4LW28 - mature_protein -
NPQ_G3S3_sthCD40L_G4S4_IgG1_AAS
<400> 5
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala
145 150 155 160
Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln
165 170 175
Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu
180 185 190
Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile
195 200 205
Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala
210 215 220
Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg
225 230 235 240
Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly
245 250 255
Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala
260 265 270
Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr
275 280 285
Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly
290 295 300
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
305 310 315 320
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
325 330 335
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
340 345 350
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
355 360 365
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
370 375 380
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
385 390 395 400
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
405 410 415
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
420 425 430
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
435 440 445
Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
465 470 475 480
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
485 490 495
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
500 505 510
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp
515 520 525
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
530 535 540
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
545 550 555 560
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
565 570 575
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
580 585 590
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
595 600 605
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
610 615 620
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
625 630 635 640
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
645 650 655
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
660 665 670
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
675 680 685
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
690 695 700
Lys
705
<210> 6
<211> 690
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182994 - C4LW27 - mature_protein -
NPQ_G3S3_sthCD40L_G4S_IgG1_AAS
<400> 6
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala
145 150 155 160
Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln
165 170 175
Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu
180 185 190
Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile
195 200 205
Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala
210 215 220
Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg
225 230 235 240
Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly
245 250 255
Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala
260 265 270
Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr
275 280 285
Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly
290 295 300
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
305 310 315 320
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
325 330 335
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
340 345 350
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
355 360 365
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
370 375 380
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
385 390 395 400
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
405 410 415
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
420 425 430
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
435 440 445
Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp
450 455 460
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
465 470 475 480
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
485 490 495
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu
500 505 510
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
515 520 525
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
530 535 540
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
545 550 555 560
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
565 570 575
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
580 585 590
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
595 600 605
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
610 615 620
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
625 630 635 640
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
645 650 655
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
660 665 670
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675 680 685
Gly Lys
690
<210> 7
<211> 685
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182993 - C4LW26 - mature_protein -
NPQ_G3S3_sthCD40L_IgG1_AAS
<400> 7
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala
145 150 155 160
Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln
165 170 175
Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu
180 185 190
Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile
195 200 205
Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala
210 215 220
Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg
225 230 235 240
Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly
245 250 255
Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala
260 265 270
Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr
275 280 285
Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly
290 295 300
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
305 310 315 320
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
325 330 335
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
340 345 350
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
355 360 365
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
370 375 380
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
385 390 395 400
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
405 410 415
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
420 425 430
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
435 440 445
Gly Leu Leu Lys Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
450 455 460
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
465 470 475 480
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
485 490 495
Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
500 505 510
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
515 520 525
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
530 535 540
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
545 550 555 560
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
565 570 575
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
580 585 590
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
595 600 605
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
610 615 620
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
625 630 635 640
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
645 650 655
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
660 665 670
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680 685
<210> 8
<211> 689
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182992 - C4LW25 - mature_protein -
NPQ_sthCD40L_G4S2_IgG1_AAS
<400> 8
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val
145 150 155 160
Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu
165 170 175
Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly
180 185 190
Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln
195 200 205
Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile
210 215 220
Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu
225 230 235 240
Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser
245 250 255
Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe
260 265 270
Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr
275 280 285
Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
290 295 300
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
305 310 315 320
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
325 330 335
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
340 345 350
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
355 360 365
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
370 375 380
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
385 390 395 400
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
405 410 415
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
420 425 430
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
450 455 460
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
465 470 475 480
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
485 490 495
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp
500 505 510
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
515 520 525
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
530 535 540
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
545 550 555 560
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
565 570 575
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
580 585 590
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
595 600 605
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
610 615 620
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
625 630 635 640
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
645 650 655
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
660 665 670
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
675 680 685
Lys
<210> 9
<211> 694
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182991 - C4LW24 - mature_protein -
NPQ_sthCD40L_G4S3_IgG1_AAS
<400> 9
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val
145 150 155 160
Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu
165 170 175
Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly
180 185 190
Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln
195 200 205
Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile
210 215 220
Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu
225 230 235 240
Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser
245 250 255
Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe
260 265 270
Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr
275 280 285
Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
290 295 300
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
305 310 315 320
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
325 330 335
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
340 345 350
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
355 360 365
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
370 375 380
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
385 390 395 400
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
405 410 415
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
420 425 430
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro
450 455 460
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
465 470 475 480
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
485 490 495
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser
500 505 510
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
515 520 525
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
530 535 540
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
545 550 555 560
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
565 570 575
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
580 585 590
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
595 600 605
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
610 615 620
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
625 630 635 640
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
645 650 655
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
660 665 670
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
675 680 685
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
690
<210> 10
<211> 699
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182990 - C4LW23 - mature_protein -
NPQ_sthCD40L_G4S4_IgG1_AAS
<400> 10
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val
145 150 155 160
Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu
165 170 175
Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly
180 185 190
Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln
195 200 205
Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile
210 215 220
Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu
225 230 235 240
Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser
245 250 255
Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe
260 265 270
Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr
275 280 285
Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
290 295 300
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
305 310 315 320
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
325 330 335
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
340 345 350
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
355 360 365
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
370 375 380
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
385 390 395 400
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
405 410 415
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
420 425 430
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
450 455 460
Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
465 470 475 480
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
485 490 495
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
500 505 510
Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
515 520 525
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
530 535 540
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
545 550 555 560
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
565 570 575
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
580 585 590
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
595 600 605
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
610 615 620
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
625 630 635 640
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
645 650 655
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
660 665 670
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
675 680 685
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
690 695
<210> 11
<211> 684
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182989 - C4LW22 - mature_protein -
NPQ_sthCD40L_G4S_IgG1_AAS
<400> 11
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val
145 150 155 160
Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu
165 170 175
Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly
180 185 190
Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln
195 200 205
Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile
210 215 220
Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu
225 230 235 240
Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser
245 250 255
Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe
260 265 270
Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr
275 280 285
Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
290 295 300
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
305 310 315 320
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
325 330 335
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
340 345 350
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
355 360 365
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
370 375 380
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
385 390 395 400
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
405 410 415
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
420 425 430
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
450 455 460
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
465 470 475 480
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
485 490 495
Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
500 505 510
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
515 520 525
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
530 535 540
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
545 550 555 560
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
565 570 575
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
580 585 590
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
595 600 605
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
610 615 620
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
625 630 635 640
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
645 650 655
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
660 665 670
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680
<210> 12
<211> 679
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182988 - C4LW21 - mature_protein - NPQ_sthCD40L_IgG1_AAS
<400> 12
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val
145 150 155 160
Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu
165 170 175
Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly
180 185 190
Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln
195 200 205
Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile
210 215 220
Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu
225 230 235 240
Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser
245 250 255
Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe
260 265 270
Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr
275 280 285
Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
290 295 300
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
305 310 315 320
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
325 330 335
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
340 345 350
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
355 360 365
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
370 375 380
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
385 390 395 400
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
405 410 415
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
420 425 430
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
435 440 445
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
450 455 460
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
465 470 475 480
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
485 490 495
Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
500 505 510
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
515 520 525
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
530 535 540
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
545 550 555 560
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
565 570 575
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
580 585 590
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
595 600 605
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
610 615 620
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
625 630 635 640
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
645 650 655
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
660 665 670
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675
<210> 13
<211> 680
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182986 - C4LW19 - mature_protein -
IgG1_AAS_G4S2_NPQ_sthCD40L
<400> 13
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His
225 230 235 240
Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala
245 250 255
Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn
260 265 270
Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala
275 280 285
Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe
290 295 300
Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu
305 310 315 320
Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln
325 330 335
Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val
340 345 350
Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe
355 360 365
Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
370 375 380
Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys
385 390 395 400
Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser
405 410 415
Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg
420 425 430
Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg
435 440 445
Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser
450 455 460
Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser
465 470 475 480
Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe
485 490 495
Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser
500 505 510
Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
515 520 525
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His
530 535 540
Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala
545 550 555 560
Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn
565 570 575
Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala
580 585 590
Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe
595 600 605
Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu
610 615 620
Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln
625 630 635 640
Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val
645 650 655
Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe
660 665 670
Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
675 680
<210> 14
<211> 685
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182985 - C4LW18 - mature_protein -
IgG1_AAS_G4S3_NPQ_sthCD40L
<400> 14
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro
225 230 235 240
Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser
245 250 255
Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu
260 265 270
Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu
275 280 285
Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser
290 295 300
Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg
305 310 315 320
Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys
325 330 335
Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln
340 345 350
Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser
355 360 365
His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys
370 375 380
Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
385 390 395 400
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
405 410 415
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
420 425 430
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
435 440 445
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
450 455 460
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
465 470 475 480
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
485 490 495
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
500 505 510
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
515 520 525
Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro
530 535 540
Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser
545 550 555 560
Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu
565 570 575
Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu
580 585 590
Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser
595 600 605
Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg
610 615 620
Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys
625 630 635 640
Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln
645 650 655
Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser
660 665 670
His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
675 680 685
<210> 15
<211> 690
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182984 - C4LW17 - mature_protein -
IgG1_AAS_G4S4_NPQ_sthCD40L
<400> 15
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser
245 250 255
Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr
260 265 270
Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val
275 280 285
Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser
290 295 300
Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu
305 310 315 320
Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr
325 330 335
His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly
340 345 350
Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp
355 360 365
Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu
370 375 380
Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala
385 390 395 400
Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln
405 410 415
Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu
420 425 430
Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile
435 440 445
Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala
450 455 460
Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg
465 470 475 480
Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly
485 490 495
Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala
500 505 510
Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr
515 520 525
Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly
530 535 540
Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser
545 550 555 560
Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr
565 570 575
Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val
580 585 590
Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser
595 600 605
Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu
610 615 620
Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr
625 630 635 640
His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly
645 650 655
Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp
660 665 670
Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu
675 680 685
Lys Leu
690
<210> 16
<211> 681
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182983 - C4LW16 - mature_protein -
IgG1_AAS_G4S_NPQ_G3S3_sthCD40L
<400> 16
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala
225 230 235 240
Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr
245 250 255
Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr
260 265 270
Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys
275 280 285
Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys
290 295 300
Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn
305 310 315 320
Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly
325 330 335
Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr
340 345 350
Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu
355 360 365
Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn
370 375 380
Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr
385 390 395 400
Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn
405 410 415
Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly
420 425 430
Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala
435 440 445
Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly
450 455 460
Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala
465 470 475 480
Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu
485 490 495
Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val
500 505 510
Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly
515 520 525
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala
530 535 540
His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp
545 550 555 560
Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu
565 570 575
Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr
580 585 590
Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro
595 600 605
Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile
610 615 620
Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln
625 630 635 640
Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser
645 650 655
Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly
660 665 670
Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
675 680
<210> 17
<211> 686
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182982 - C4LW15 - mature_protein -
IgG1_AAS_G4S2_NPQ_G3S3_sthCD40L
<400> 17
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His
225 230 235 240
Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala
245 250 255
Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn
260 265 270
Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala
275 280 285
Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe
290 295 300
Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu
305 310 315 320
Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln
325 330 335
Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val
340 345 350
Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe
355 360 365
Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala
385 390 395 400
Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr
405 410 415
Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr
420 425 430
Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys
435 440 445
Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys
450 455 460
Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn
465 470 475 480
Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly
485 490 495
Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr
500 505 510
Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu
515 520 525
Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn
530 535 540
Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr
545 550 555 560
Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn
565 570 575
Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly
580 585 590
Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala
595 600 605
Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly
610 615 620
Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala
625 630 635 640
Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu
645 650 655
Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val
660 665 670
Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
675 680 685
<210> 18
<211> 691
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182981 - C4LW14 - mature_protein -
IgG1_AAS_G4S3_NPQ_G3S3_sthCD40L
<400> 18
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro
225 230 235 240
Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser
245 250 255
Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu
260 265 270
Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu
275 280 285
Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser
290 295 300
Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg
305 310 315 320
Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys
325 330 335
Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln
340 345 350
Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser
355 360 365
His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly
370 375 380
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His
385 390 395 400
Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala
405 410 415
Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn
420 425 430
Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala
435 440 445
Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe
450 455 460
Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu
465 470 475 480
Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln
485 490 495
Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val
500 505 510
Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe
515 520 525
Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
530 535 540
Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala
545 550 555 560
Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr
565 570 575
Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr
580 585 590
Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys
595 600 605
Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys
610 615 620
Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn
625 630 635 640
Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly
645 650 655
Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr
660 665 670
Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu
675 680 685
Leu Lys Leu
690
<210> 19
<211> 696
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000182980 - C4LW13 - mature_protein -
IgG1_AAS_G4S4_NPQ_G3S3_sthCD40L
<400> 19
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser
245 250 255
Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr
260 265 270
Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val
275 280 285
Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser
290 295 300
Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu
305 310 315 320
Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr
325 330 335
His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly
340 345 350
Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp
355 360 365
Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu
370 375 380
Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro
385 390 395 400
Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser
405 410 415
Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu
420 425 430
Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu
435 440 445
Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser
450 455 460
Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg
465 470 475 480
Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys
485 490 495
Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln
500 505 510
Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser
515 520 525
His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly
530 535 540
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His
545 550 555 560
Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala
565 570 575
Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn
580 585 590
Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala
595 600 605
Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe
610 615 620
Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu
625 630 635 640
Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln
645 650 655
Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val
660 665 670
Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe
675 680 685
Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
690 695
<210> 20
<211> 143
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L v.1
<400> 20
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Trp Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
130 135 140
<210> 21
<211> 141
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L v.2
<400> 21
Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser
1 5 10 15
Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu
20 25 30
Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu
35 40 45
Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser
50 55 60
Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Trp Leu Lys Ser Pro Gly Arg
65 70 75 80
Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys
85 90 95
Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln
100 105 110
Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser
115 120 125
His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
130 135 140
<210> 22
<211> 143
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L v.3
<400> 22
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
130 135 140
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 23
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
1 5
<210> 24
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 24
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 25
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 25
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 26
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 27
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 27
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 28
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 29
<211> 229
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fc Monomer v.1
<400> 29
Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro
1 5 10 15
Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala
100 105 110
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Pro Gly Lys
225
<210> 30
<211> 232
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fc Monomer v.2
<400> 30
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 31
<211> 223
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fc Monomer v.3
<400> 31
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
<210> 32
<211> 669
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TPP000161222 - C40W33 - mature_protein
<400> 32
Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val
1 5 10 15
Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val
20 25 30
Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr
35 40 45
Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser
50 55 60
Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe
65 70 75 80
Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro
85 90 95
Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro
100 105 110
Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His
115 120 125
Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser
130 135 140
Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser
145 150 155 160
Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr
165 170 175
Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val
180 185 190
Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser
195 200 205
Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu
210 215 220
Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr
225 230 235 240
His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly
245 250 255
Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp
260 265 270
Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu
275 280 285
Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile Ala Ala His
290 295 300
Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala
305 310 315 320
Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn
325 330 335
Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala
340 345 350
Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe
355 360 365
Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu
370 375 380
Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln
385 390 395 400
Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val
405 410 415
Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe
420 425 430
Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu
435 440 445
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
450 455 460
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
465 470 475 480
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
485 490 495
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
500 505 510
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
515 520 525
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
530 535 540
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
545 550 555 560
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
565 570 575
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
580 585 590
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
595 600 605
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
610 615 620
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
625 630 635 640
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
645 650 655
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
660 665
<210> 33
<211> 140
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L v.4
<400> 33
Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val
1 5 10 15
Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val
20 25 30
Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr
35 40 45
Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser
50 55 60
Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe
65 70 75 80
Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro
85 90 95
Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro
100 105 110
Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His
115 120 125
Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
130 135 140
<210> 34
<211> 141
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L v.5
<400> 34
Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser
1 5 10 15
Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu
20 25 30
Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu
35 40 45
Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser
50 55 60
Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg
65 70 75 80
Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys
85 90 95
Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln
100 105 110
Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser
115 120 125
His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
130 135 140
<210> 35
<211> 443
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L Trimer v.1
<400> 35
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Trp Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
145 150 155 160
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
165 170 175
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
180 185 190
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
195 200 205
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
210 215 220
Leu Trp Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
225 230 235 240
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
245 250 255
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
260 265 270
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
275 280 285
Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile
290 295 300
Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu
305 310 315 320
Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr
325 330 335
Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr
340 345 350
Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln
355 360 365
Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Trp Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu
370 375 380
Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys
385 390 395 400
Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly
405 410 415
Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly
420 425 430
Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
435 440
<210> 36
<211> 453
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L Trimer v.2
<400> 36
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala
145 150 155 160
Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln
165 170 175
Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu
180 185 190
Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile
195 200 205
Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala
210 215 220
Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg
225 230 235 240
Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly
245 250 255
Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala
260 265 270
Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr
275 280 285
Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly
290 295 300
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
305 310 315 320
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
325 330 335
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
340 345 350
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
355 360 365
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
370 375 380
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
385 390 395 400
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
405 410 415
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
420 425 430
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
435 440 445
Gly Leu Leu Lys Leu
450
<210> 37
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L Trimer v.3
<400> 37
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
1 5 10 15
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
35 40 45
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
50 55 60
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
65 70 75 80
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
85 90 95
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
100 105 110
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
115 120 125
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val
145 150 155 160
Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu
165 170 175
Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly
180 185 190
Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln
195 200 205
Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile
210 215 220
Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu
225 230 235 240
Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser
245 250 255
Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe
260 265 270
Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr
275 280 285
Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
290 295 300
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
305 310 315 320
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
325 330 335
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
340 345 350
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
355 360 365
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
370 375 380
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
385 390 395 400
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
405 410 415
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
420 425 430
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
435 440 445
<210> 38
<211> 440
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD40L Trimer v.4
<400> 38
Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val
1 5 10 15
Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val
20 25 30
Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr
35 40 45
Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser
50 55 60
Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe
65 70 75 80
Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro
85 90 95
Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro
100 105 110
Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His
115 120 125
Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu Glu Gly Lys Ser
130 135 140
Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser
145 150 155 160
Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr
165 170 175
Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val
180 185 190
Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser
195 200 205
Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu
210 215 220
Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr
225 230 235 240
His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly
245 250 255
Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp
260 265 270
Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu
275 280 285
Lys Leu Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gln Ile Ala Ala His
290 295 300
Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala
305 310 315 320
Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn
325 330 335
Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala
340 345 350
Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe
355 360 365
Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu
370 375 380
Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln
385 390 395 400
Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val
405 410 415
Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe
420 425 430
Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
435 440
<210> 39
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(4)
<223> GGGS can be repeated n times, wherein n is an integer from 1 to
20
<400> 39
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 40
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(5)
<223> GGGGS can be repeated n times, wherein n is an integer from 1 to
20
<400> 40
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
Claims (54)
- 단일쇄 삼량체성 CD40 리간드(CD40L) 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드로서,
상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체)를 포함하며,
선택적으로 상기 CD40L 하위단위는 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 폴리펩티드. - 제1항에 있어서, 상기 CD40L 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 폴리펩티드.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 펩티드 링커 중 적어도 하나는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 및 (G3S)3(서열 번호 25)로 이루어진 군으로부터 선택되며,
선택적으로 상기 펩티드 링커 중 적어도 2개는 동일한 서열을 갖는, 폴리펩티드. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 서열 번호 35 내지 38로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함하는, 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 CD40L로부터 유래되지 않는 펩티드 또는 폴리펩티드와 융합되는, 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 테더(tether)에 융합되며,
선택적으로 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되고/되거나;
선택적으로 상기 펩티드 테더는 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 N-말단 또는 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질의 C-말단에 융합되는, 폴리펩티드. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 Fc 단량체 펩티드에 융합되는, 폴리펩티드.
- 제7항에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하며;
선택적으로 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하고,
선택적으로 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되고,
선택적으로
(i) 상기 IgG 서열은 IgG1 서열을 포함하고, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하거나, 또는
(ii) 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하고, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 폴리펩티드. - 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 펩티드 테더를 통해 상기 Fc 단량체 펩티드에 융합되며;
선택적으로 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하고;
선택적으로 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 폴리펩티드. - 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 하기에 연결되는, 폴리펩티드:
(a) 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단
(선택적으로 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함함); 또는
(b) 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단
(선택적으로 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함함). - 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은
(a) 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 활성화를 향상시키고/시키거나
(선택적으로 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는
(i) T 세포 및/또는 B 세포의 향상된 면역-자극 기능;
(ii) 야생형 CD40L과 대비하여 B 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구 및/또는 호중구의 향상된 활성화; 및/또는
(iii) 상기 CD40 폴리펩티드의 증가된 발현을 포함함);
(b) 야생형 CD40L과 대비하여 항종양 활성을 향상시키고/시키거나;
(c) 야생형 CD40L과 대비하여 전염증 활성을 향상시키고/시키거나;
(d) 야생형 CD40L과 대비하여 감염성 병원체의 제거를 향상시키고/시키거나;
(e) B 세포 집단에 의한 항체 생성을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가시키고/시키거나;
(f) T 세포 집단에 의한 전염증성 사이토카인의 분비를 증가시키고/시키거나
(선택적으로 상기 전염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이고;
선택적으로 상기 사이토카인 생성은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가됨);
(g) 대식세포 집단에서의 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%로 증가시키고/시키거나;
(h) 수지상 세포 집단에서의 항원-제시 수지상 세포의 최소 백분율을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%로 증가시키는, 폴리펩티드. - 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 작용제(agent)에 접합되며;
선택적으로 상기 작용제는 방사성 동위원소, 금속 킬레이트제, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물, 또는 화학발광 화합물인, 폴리펩티드. - (a) 펩티드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결된 3개의 CD40L 하위단위(CD40L 삼량체); 및 (b) Fc 단량체 펩티드를 포함하는 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
- 제13항에 있어서, 상기 펩티드 링커는 EGKSSGSGS(서열 번호 23) 또는 (G3S)3(서열 번호 25)인, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
- 제113항 또는 제14항에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 펩티드 테더에 의해 상기 CD40L 삼량체에 공유적으로 연결되며,
선택적으로 상기 펩티드 테더는 0 내지 20개의 아미노산을 포함하고/하거나,
선택적으로 상기 펩티드 테더는 (G4S)3(서열 번호 24), (G4S)2(서열 번호 26), (G4S)4(서열 번호 27), 및 G4S(서열 번호 28)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질. - 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 상기 CD40L 세포외 도메인의 일부분을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
- 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD40L 삼량체는 하기에 연결되는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질:
(a) 상기 Fc 단량체 펩티드의 N-말단
(선택적으로 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 1 내지 12로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함함); 또는
(b) 상기 Fc 단량체 펩티드의 C-말단
(선택적으로 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 서열 번호 13 내지 19로부터 선택되는 어느 하나의 서열, 또는 이의 단편을 포함함). - 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD40 리간드 하위단위는 서열 번호 20 내지 22로부터 선택되는 서열들 중 어느 하나, 또는 이의 단편을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질.
- 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 단량체 펩티드는 인간 Fc 서열을 포함하며,
선택적으로 상기 인간 Fc 서열은 면역글로불린 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE로부터 선택되는 서열을 포함하고,
선택적으로 상기 IgG 서열은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되고,
선택적으로
(i) 상기 IgG 서열은 IgG1 서열을 포함하고, 상기 IgG1 서열은 서열 번호 30 또는 31, 또는 이의 단편을 포함하거나, 또는
(ii) 상기 IgG 서열은 IgG2 서열을 포함하고, 상기 IgG2 서열은 서열 번호 29 또는 이의 단편을 포함하는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질. - 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은
(a) 야생형 CD40L과 대비하여 CD40 폴리펩티드의 활성화를 향상시키고/시키거나
(선택적으로 상기 CD40 폴리펩티드의 활성화는
(i) T 세포 및/또는 B 세포의 향상된 면역-자극 기능;
(ii) 야생형 CD40L과 대비하여 B 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구 및/또는 호중구의 향상된 활성화; 및/또는
(iii) 상기 CD40 폴리펩티드의 증가된 발현을 포함함);
(b) 야생형 CD40L과 대비하여 항종양 활성을 향상시키고/시키거나;
(c) 야생형 CD40L과 대비하여 전염증 활성을 향상시키고/시키거나;
(d) 야생형 CD40L과 대비하여 감염성 병원체의 제거를 향상시키고/시키거나;
(e) B 세포 집단에 의한 항체 생성을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가시키고/시키거나;
(f) T 세포 집단에 의한 전염증성 사이토카인의 분비를 증가시키고/시키거나
(선택적으로 상기 전염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이고;
선택적으로 상기 사이토카인 생성은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가됨);
(g) 대식세포 집단에서의 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%로 증가시키고/시키거나;
(h) 수지상 세포 집단에서의 항원-제시 수지상 세포의 최소 백분율을 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%로 증가시키는, 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질. - 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체로서,
선택적으로
(i) 상기 이량체는 동종이량체이거나; 또는
(ii) 상기 이량체는 상기 Fc 단량체 펩티드들의 회합에 의해 형성되는, 이량체. - 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 제21항의 이량체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제22항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제22항의 폴리뉴클레오티드 또는 제23항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 약제학적 조성물로서,
(i) 약제학적으로 허용되는 담체, 및
(ii) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 제21항의 이량체를 포함하는, 약제학적 조성물. - 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 제21항의 이량체를 포함하는 키트.
- 하기 생성 방법:
(a) 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하기 위한 방법
- 상기 방법은
(i) 제8항 내지 제15항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 단계;
(ii) 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
(iii) 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 회수하는 단계를 포함함 -; 또는
(b) 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체를 생성하기 위한 방법 - 상기 방법은
(i) 제8항 내지 제15항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 단계;
(ii) 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 생성하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계;
(iii) 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 회수하는 단계; 및
(iv) 이량체화에 유리한 조건 하에서 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질들 또는 이들의 단편을 조합하는 단계를 포함함 -; 또는
(c) 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편의 약제학적 조성물을 생성하는 방법 - 상기 방법은 제8항 내지 제15항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 또는 이의 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함함. - 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 제21항의 이량체를 제공하기 위한 수단을 포함하는 시스템.
- 하기 활성화 방법:
(a) CD40 폴리펩티드를 활성화하는 방법 - 상기 방법은
(i) 상기 CD40 폴리펩티드를 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드와 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 결합 시에 상기 CD40 폴리펩티드를 활성화하는, 상기 단계;
(ii) 상기 CD40 폴리펩티드를 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 결합 시에 상기 CD40 폴리펩티드를 활성화하는, 상기 단계; 또는
(iii) 상기 CD40 폴리펩티드를 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체와 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 결합 시에 상기 CD40 폴리펩티드를 활성화하는, 상기 단계를 포함함 -;
(b) 표적 세포를 활성화하는 방법 - 상기 방법은
(i) 상기 표적 세포를 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드와 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 결합 시에 상기 표적 세포를 활성화하는, 상기 단계;
(ii) 상기 표적 세포를 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 결합 시에 상기 표적 세포를 활성화하는, 상기 단계; 또는
(iii) 상기 세포를 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체와 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 결합 시에 상기 표적 세포를 활성화하는, 상기 단계를 포함하며;
선택적으로 상기 표적 세포는 항원-제시 세포이고;
선택적으로 상기 표적 세포는 B 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 과립구, 또는 호산구, 또는 이들의 조합이고;
선택적으로 상기 표적 세포는 B 세포이고;
선택적으로 상기 표적 세포는 수지상 세포이고;
선택적으로 상기 표적 세포는 대식세포이고;
선택적으로, 활성화 시에, 상기 표적 세포는 제2 세포를 활성화하고; 선택적으로 상기 제2 세포는 T 세포, 호중구, 또는 이들의 조합이고; 선택적으로 상기 제2 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 점막 관련 불변 T(mucosal associated invariant T, MAIT) 세포, 자연 살해 세포, 호중구, 또는 이들의 조합임. - 제29항에 있어서, 상기 방법은 표적 세포를 활성화하는 방법이며, 상기 표적 세포의 활성화는 하기로서 측정되는, 방법:
(a) 상기 표적 세포의 증가된 증식 또는 성숙
(선택적으로 상기 표적 세포의 증식 또는 성숙은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가됨); 또는
(b) 상기 표적 세포의 연장된 생존 시간
(선택적으로 상기 표적 세포의 생존 시간은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가됨). - 제29항 또는 제30항에 있어서, 상기 접촉시키는 단계는 약제학적으로 허용되는 담체 및 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함하며;
선택적으로 상기 접촉은 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시키는, 방법. - 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드의 치료적 유효량,
(b) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 치료적 유효량, 또는
(c) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법. - 제32항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 및 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함하며,
선택적으로 상기 치료는 선천 항신생물성 면역 반응을 향상시키는, 방법. - 제32항 또는 제33항에 있어서, 제2 요법의 공동투여를 추가로 포함하는, 방법.
- 제32항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 흑색종, 중피종, 진행성 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- B 세포 집단에 의한 항체 생성을 촉진시키기 위한 방법으로서,
(a) 상기 B 세포 집단을 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드와 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 결합 시에 상기 B 세포를 활성화하는, 상기 단계;
(b) 상기 B 세포 집단을 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질과 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 결합 시에 상기 B 세포를 활성화하는, 상기 단계; 또는
(c) 상기 B 세포 집단을 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체와 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 결합 시에 상기 B 세포를 활성화하는, 상기 단계를 포함하며;
선택적으로 상기 B 세포 집단에 의한 항체 생성은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900%, 또는 약 1000%만큼 증가되는, 방법. - 제36항에 있어서, 상기 B 세포 집단은 항원의 존재 하에서 접촉되고, 상기 B 세포에 의해 생성되는 상기 항체는 상기 항원에 특이적으로 결합하며;
선택적으로 상기 방법은 상기 항원에 대한 반응에서 상기 항체를 생성할 수 있는 기억 B 세포의 형성을 추가로 촉진하는, 방법. - 수지상 세포 집단에 의한 항원 제시를 증가시키는 방법으로서,
상기 항원의 존재 하에서 상기 수지상 세포를 (i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하며;
선택적으로 상기 수지상 세포 집단에서 상기 항원을 제시하는 수지상 세포의 최소 백분율이 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 증가되는, 방법. - 제38항에 있어서, 상기 수지상 세포에 의한 항원 제시는 제1 형광 염료로 표지된 수지상 세포와 제2 형광 염료로 표지된 상기 항원을 공동배양함으로써 측정되며, 여기서 상기 제1 형광 염료와 상기 제2 형광 염료는 상이하며;
선택적으로 상기 항원을 제시하는 수지상 세포의 백분율은 상기 수지상 세포 집단에서 상기 항원과 공국재화(co-localizing)하는 수지상 세포의 백분율을 결정함으로써 측정되는, 방법. - 면역 세포 집단에 의한 전염증성 사이토카인의 분비를 증가시키는 방법으로서,
(a) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드의 존재 하에서 상기 면역 세포 집단을 항원-제시 세포 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L 융합 단백질은 결합 시에 상기 항원-제시 세포를 활성화하는, 상기 단계;
(b) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질의 존재 하에서 상기 면역 세포 집단을 항원-제시 세포 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질은 결합 시에 상기 항원-제시 세포를 활성화하는, 상기 단계; 또는
(c) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 존재 하에서 상기 면역 세포 집단을 항원-제시 세포 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질 이량체는 결합 시에 상기 항원-제시 세포를 활성화하는, 상기 단계를 포함하며;
여기서 활성화 시에, 상기 항원-제시 세포는 상기 면역 세포 집단을 활성화하고;
선택적으로 상기 항원-제시 세포는 면역 세포 집단에 항원을 제시하고;
선택적으로 상기 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이고;
선택적으로 상기 사이토카인 생성은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 250%, 약 300%, 약 400%, 약 500%, 약 600%, 약 700%, 약 800%, 약 900% 또는 약 1000%만큼 증가되고;
선택적으로 상기 항원-제시 세포의 활성화 시에, 상기 면역 세포 집단에 대한 상기 항원의 제시가 증가되고;
선택적으로 상기 항원-제시 세포 집단에서 상기 항원을 제시하는 항원-제시 세포의 최소 백분율이 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 증가되고;
선택적으로 상기 항원-제시 세포는 수지상 세포, 대식세포, B 세포, 또는 이들의 조합을 포함하고; 선택적으로 상기 면역 세포 집단은 T 세포, 호중구, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법. - 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩티드, 상기 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 상기 이량체는 백신 조성물 또는 애쥬번트(adjuvant) 조성물 중에 존재하는, 방법.
- 제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원은 백신 조성물 중에 존재하는, 방법.
- 제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원은
(a) 감염성 병원체
(선택적으로 상기 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합임);
(b) 질병 세포;
(c) 감염성 병원체에 의해 감염된 세포
(선택적으로 상기 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합임); 또는
(d) 암 세포로부터 기원되거나 유래되는, 방법. - 제36항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원은 항원-제시 세포에 의해 제시되며;
선택적으로 상기 항원-제시 세포는 수지상 세포이고;
선택적으로 상기 항원은 MHC 클래스 I 또는 MHC 클래스 II 복합체와 회합되는, 방법. - 대식세포 집단에 의한 질병 세포의 식세포작용을 증가시키는 방법으로서,
상기 질병 세포, 상기 대식세포, 또는 상기 질병 세포 및 상기 대식세포 둘 모두를 (i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하며;
선택적으로 상기 대식세포 집단에서의 식세포작용성 대식세포의 최소 백분율이 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 증가되고;
선택적으로 상기 대식세포에 의한 식세포작용은 제1 형광 염료로 표지된 대식세포와 제2 형광 염료로 표지된 질병 세포를 공동배양함으로써 측정되며, 여기서 상기 제1 형광 염료와 상기 제2 형광 염료는 상이한, 방법. - 제45항에 있어서, 상기 식세포작용성 대식세포의 백분율은 상기 질병 세포를 포함하는 대식세포의 백분율을 결정함으로써 측정되며;
선택적으로 상기 질병 세포는 암 세포 또는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이고;
선택적으로 상기 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합인, 방법. - 표적 세포에 의한 CD40 폴리펩티드의 발현을 증가시키는 방법으로서,
상기 표적 세포를 (i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법. - 제47항에 있어서, 상기 표적 세포는
(a) 질병 세포,
(b) 암 세포,
(c) 감염성 병원체에 의해 감염된 세포
(선택적으로 상기 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합임); 또는
(d) B 세포, 자연 살해 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 과립구, 호산구, 호중구, 또는 이들의 조합이며;
선택적으로 상기 질병 세포 집단은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 감소되는, 방법. - 질병 세포 집단을 둘러싸는 조직에서 전염증성 환경(pro-inflammatory milieu)을 형성하는 방법으로서,
상기 조직을 (i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하며;
선택적으로,
(a) 상기 조직에서의 활성화된 B 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 자연 살해 세포, 단핵구, 과립구, 호산구 및/또는 호중구의 침윤이 증가되고/되거나;
(b) 전염증성 사이토카인의 농도가 상기 조직에서 증가되고/되거나
(선택적으로 상기 전염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합임);
(c) 항원-제시 세포에 의한 상기 질병 세포로부터 기원되거나 유래되는 항원의 제시가 상기 조직에서 증가되고/되거나;
(d) 상기 질병 세포의 식세포작용이 상기 조직에서 증가되고/되거나;
(e) 세포-매개 세포독성에 의해 유도된 상기 질병 세포의 아폽토시스가 상기 조직에서 증가되고/되거나;
(f) 항체-의존성 세포성 세포독성에 의해 유도된 상기 질병 세포의 아폽토시스가 상기 조직에서 증가되고/되거나;
(g) 상기 질병 세포 집단은 상기 조직에서 감소되며;
선택적으로 상기 질병 세포 집단은 상기 조직에서 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%만큼 감소되는, 방법. - 대상체에서 질병 세포를 제거하는 방법으로서,
(i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며;
선택적으로,
(a) 상기 질병 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하지 않거나;
(b) 상기 질병 세포는 CD40 폴리펩티드를 발현하거나;
(c) 상기 질병 세포는 암 세포이거나; 또는
(d) 상기 질병 세포는 감염성 병원체에 의해 감염된 세포이며;
선택적으로 상기 감염성 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 기생충, 또는 이들의 조합인, 방법. - 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 암을 치료하는 방법으로서,
(i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며;
선택적으로,
(a) 상기 치료는 선천, 체액성 또는 세포-매개 항신생물성 면역 반응을 향상시키고/시키거나;
(b) 상기 방법은 제2 요법의 공동투여를 추가로 포함하고/하거나;
(c) 상기 암은 흑색종, 중피종, 진행성 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법. - 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 감염을 치료하는 방법으로서,
(i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며;
선택적으로,
(a) 상기 치료는 선천, 체액성, 또는 세포-매개 항감염성 면역 반응을 향상시키고;
(b) 상기 대상체에게는 상기 대상체에서 상기 감염을 예방하기 위해 백신 조성물과 공동투여되며;
선택적으로 상기 백신 조성물은 동시에 또는 순차적으로 공동투여되는, 방법. - 항원에 대한 반응의 증가를 필요로 하는 대상체에서 상기 항원에 대한 반응을 증가시키는 방법으로서,
(i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며;
선택적으로 상기 항원은 암, 종양, 병원체, 또는 알레르겐의 항원인, 방법. - 백신에 대한 반응의 증가를 필요로 하는 대상체에서 상기 백신에 대한 반응을 증가시키는 방법으로서,
상기 백신 및 (i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, (ii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질, 또는 (iii) 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항의 2개의 단일쇄 삼량체성 CD40L Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며;
선택적으로 상기 백신은 종양, 암, 병원체 또는 알레르겐에 대한 백신인, 방법.
Applications Claiming Priority (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202163160694P | 2021-03-12 | 2021-03-12 | |
| US202163160686P | 2021-03-12 | 2021-03-12 | |
| US202163160691P | 2021-03-12 | 2021-03-12 | |
| US202163160693P | 2021-03-12 | 2021-03-12 | |
| US202163160688P | 2021-03-12 | 2021-03-12 | |
| US63/160,688 | 2021-03-12 | ||
| US63/160,691 | 2021-03-12 | ||
| US63/160,686 | 2021-03-12 | ||
| US63/160,694 | 2021-03-12 | ||
| US63/160,693 | 2021-03-12 | ||
| PCT/US2022/019926 WO2022192657A2 (en) | 2021-03-12 | 2022-03-11 | Bioengineered immunomodulatory fusion protein compositions |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20230156937A true KR20230156937A (ko) | 2023-11-15 |
Family
ID=83228511
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020237034682A KR20230156937A (ko) | 2021-03-12 | 2022-03-11 | 바이오-조작된 면역조절 융합 단백질 조성물 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20240166720A1 (ko) |
| EP (1) | EP4304629A2 (ko) |
| JP (1) | JP2024512424A (ko) |
| KR (1) | KR20230156937A (ko) |
| AU (1) | AU2022232443A1 (ko) |
| BR (1) | BR112023018397A2 (ko) |
| CA (1) | CA3213285A1 (ko) |
| IL (1) | IL305837A (ko) |
| TW (1) | TW202302625A (ko) |
| WO (1) | WO2022192657A2 (ko) |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1067194A1 (en) * | 1999-04-16 | 2001-01-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Vectors containing a gene coding for CD40 and/or CD40L under the control of a cytokine-inducible promoter which is a human acute phase amyloid A gene promoter. Methods for their production and uses thereof |
| US20090074814A1 (en) * | 1999-10-14 | 2009-03-19 | Jeffrey A. Ledbetter | DNA Vaccines Encoding Antigen Linked to a Domain That Binds CD40 |
| US7601355B2 (en) * | 2005-06-01 | 2009-10-13 | Northwestern University | Compositions and methods for altering immune function |
| MA41460A (fr) * | 2015-02-03 | 2017-12-12 | Oncomed Pharm Inc | Agents de liaison à la tnfrsf et leurs utilisations |
| WO2018144514A2 (en) * | 2017-02-01 | 2018-08-09 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Tnf superfamily fusion polypeptides |
-
2022
- 2022-03-11 JP JP2023555605A patent/JP2024512424A/ja active Pending
- 2022-03-11 BR BR112023018397A patent/BR112023018397A2/pt unknown
- 2022-03-11 US US18/549,795 patent/US20240166720A1/en active Pending
- 2022-03-11 EP EP22768075.8A patent/EP4304629A2/en active Pending
- 2022-03-11 CA CA3213285A patent/CA3213285A1/en active Pending
- 2022-03-11 KR KR1020237034682A patent/KR20230156937A/ko unknown
- 2022-03-11 IL IL305837A patent/IL305837A/en unknown
- 2022-03-11 WO PCT/US2022/019926 patent/WO2022192657A2/en active Application Filing
- 2022-03-11 AU AU2022232443A patent/AU2022232443A1/en active Pending
- 2022-03-11 TW TW111109113A patent/TW202302625A/zh unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20240166720A1 (en) | 2024-05-23 |
| JP2024512424A (ja) | 2024-03-19 |
| AU2022232443A1 (en) | 2023-10-26 |
| AU2022232443A9 (en) | 2023-11-09 |
| EP4304629A2 (en) | 2024-01-17 |
| WO2022192657A3 (en) | 2022-10-20 |
| CA3213285A1 (en) | 2022-09-15 |
| IL305837A (en) | 2023-11-01 |
| TW202302625A (zh) | 2023-01-16 |
| BR112023018397A2 (pt) | 2023-12-12 |
| WO2022192657A2 (en) | 2022-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102646468B1 (ko) | 항-cd47 항체 및 이의 용도 | |
| JP7334177B2 (ja) | 抗ｃｄ７３抗体及びその使用 | |
| KR102427192B1 (ko) | 항-인간 4-1bb 항체 및 그의 용도 | |
| KR20200129116A (ko) | 항-클라우딘 18.2 항체 및 이의 용도 | |
| TW201718632A (zh) | Ｇｉｔｒｌ融合蛋白及其用途 | |
| TWI742054B (zh) | Ｇｉｔｒ抗體，方法及用途 | |
| JP2023540799A (ja) | 多重特異性免疫標的化分子及びその使用 | |
| EP4039274A1 (en) | Anti-tim-3 antibodies and uses thereof | |
| WO2023020621A1 (en) | Anti-ccr8 antibodies and uses thereof | |
| US20190233521A1 (en) | Anti-human cd69 antibody, and use thereof for medical purposes | |
| AU2014302028B2 (en) | IL-21 binding proteins and uses thereof | |
| JP2024056787A (ja) | 抗葉酸受容体１抗体及びその使用 | |
| CN115087670A (zh) | 包含ltbr和edb结合结构域的多特异性结合分子及其用途 | |
| JP2020536495A (ja) | 抗ｌａｇ−３抗体及びその使用 | |
| US20220306752A1 (en) | Epha2 antibodies | |
| US20240166720A1 (en) | Bioengineered immunomodulatory fusion protein compositions | |
| JP2022527541A (ja) | 抗ｈｌａ－ｃ抗体及びその使用 | |
| CN117561071A (zh) | 生物工程化的免疫调节融合蛋白组合物 | |
| RU2777573C2 (ru) | Антитела против 4-1bb человека и их применение | |
| JP2023518189A (ja) | デルタ鎖媒介性免疫を調節するための材料及び方法 | |
| TW202035440A (zh) | 新穎合理設計的蛋白質組合物 |