JP2023518189A

JP2023518189A - デルタ鎖媒介性免疫を調節するための材料及び方法

Info

Publication number: JP2023518189A
Application number: JP2022554920A
Authority: JP
Inventors: ガネサン，ラジクマール; グレワル，イクバル，エス．; シン，サンジャヤ
Original assignee: ヤンセンバイオテツク，インコーポレーテツド
Priority date: 2020-03-13
Filing date: 2021-03-12
Publication date: 2023-04-28
Also published as: IL296358A; EP4118121A1; KR20220154190A; AU2021234327A1; CA3175134A1; CN115605512A; EP4118121A4; TW202144416A; US20210284730A1; WO2021183845A1; UY39127A

Abstract

抗ＴＲＤＶ２多重特異性抗体及びその抗原結合フラグメントについて記載する。当該抗体をコードしている核酸、当該抗体を含む組成物、当該抗体を生成する方法、及び疾患を治療又は予防するために当該抗体を使用する方法についても記載する。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２０年３月１３日出願の米国出願第６２／９８９，１１１号に対する優先権の利益を主張し、その内容全体を参照により本明細書に援用する。

（分野）
本発明は、とりわけ、Ｔ細胞受容体デルタ可変部２（T cell Receptor Delta Variable 2、ＴＲＤＶ２）分子を標的とするものなどのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）リダイレクション技術に関する。特定の態様において、二重特異性抗体、当該抗体をコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物を含む、モノクローナルＴＲＤＶ２多重特異性抗体又はそのエピトープ結合フラグメントなどの、ＴＲＤＶ２に結合する分子が、本明細書に提供される。抗体などのＴＲＤＶ２に結合する分子を作製する方法、及び癌細胞に対する免疫応答を調節するために抗体を使用する方法も提供される。

（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、「１４６２０－１０９－２２８＿ＳＬ」というファイル名の、２０２１年３月８日に作成された、２２，９４２バイトのサイズを有するＡＳＣＩＩ形式の配列表として、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出された配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

（背景）
Ｔ細胞は、最も多量に存在し（血液リンパ球の約７５％）かつ強力な免疫キラー細胞である。抗癌免疫応答におけるエフェクターＴ細胞の役割は、インビトロ研究、及びいくつかの種類の癌におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の高い浸潤が良好な臨床予後と相関するという所見によって強く裏付けられている。癌細胞を溶解するためにＴ細胞をリダイレクトするいくつかの異なるストラテジが現在臨床試験で研究されているが、全て重大な制限又は副作用を有する。

改善されたＴ細胞リダイレクト分子及び方法が当該技術分野において依然として必要とされている。

（概要）
一態様では、（ａ）ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）癌細胞の表面上の抗原に結合する第２の結合ドメインと、を含む、二重特異性抗体などのＴＲＤＶ２に結合する分子が、本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。

いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２は、γδＴ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２は、γδＴ細胞の表面上に存在し、癌細胞の表面上で発現する抗原は、癌抗原である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が、γδ Ｔ細胞の表面上のＴＲＤＶ２及び癌細胞の表面上の抗原に結合すると、癌細胞は死滅する。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒト化されているか、第２の結合ドメインは、ヒト化されているか、又は第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒト化されている。

いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４抗対である。

いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。いくつかの実施形態では、γδＴエフェクター細胞及び癌抗原を発現している標的細胞の混合物を用いて、ＥＣ_５０を評価する。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約５：１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１：１～約２：１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。

いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、多価である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、少なくとも３つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、少なくとも５つの抗原に結合することができる。

別の態様では、γδＴ細胞の表面上でＴＲＤＶ２に結合することができる第１の手段と、癌抗原に結合することができる第２の手段と、を含む二重特異性抗体が提供される。いくつかの実施形態では、癌抗原は、癌細胞の表面上にある。

別の態様では、本明細書に提供される二重特異性抗体をコードしている核酸が提供される。いくつかの実施形態では、核酸を含むベクターも提供される。いくつかの実施形態では、ベクターを含む宿主細胞も提供される。いくつかの実施形態では、ベクター及びそのためのパッケージを含むキットも提供される。

別の態様では、本明細書に提供される二重特異性抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物を生成する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、二重特異性抗体を医薬的に許容される担体と合わせて医薬組成物を得ることを含む。

別の態様では、１つを超える標的分子に結合する抗体を作製するプロセスであって、当該分子が、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、癌細胞の表面上の抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原及び癌細胞の表面上の抗原に結合することができる抗体を提供する機能を実行する工程と、を含むプロセスが提供される。いくつかの実施形態では、癌細胞の表面上の抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程がｎ回繰り返され、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原及びｎ個の標的分子に結合することができる結合ドメインを提供する機能を実行するｎ個の工程を更に含み、ｎは少なくとも２である。

別の態様では、ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を癌細胞に方向付ける方法であって、当該γδＴ細胞を、本明細書に提供される二重特異性抗体と接触させることを含み、当該接触させることによって当該γδＴ細胞を当該癌細胞に方向付ける方法が提供される。

別の態様では、細胞表面上で癌抗原を発現している癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、当該癌細胞を本明細書に提供される二重特異性抗体と接触させることを含み、当該癌細胞を医薬組成物と接触させることによって当該癌細胞の成長又は増殖を阻害する、方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、癌細胞は、二重特異性抗体と接触している間、ＴＲＤＶ２を発現するγδ Ｔ細胞の存在下にある。

別の態様では、対象における癌細胞を排除する又は癌を治療する方法であって、有効量の本明細書に提供される二重特異性抗体を当該対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、その方法を必要とする対象である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

別の態様では、ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を活性化する方法であって、当該γδＴ細胞を本明細書に提供される二重特異性抗体と接触させることを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、接触させることは、ＴＲＤＶ２を発現する対照γδ Ｔ細胞と比較して、ＣＤ６９、ＣＤ２５、及び／又はグランザイムＢ発現の増加をもたらす。

いくつかの実施形態では、癌細胞の表面上の抗原は、腫瘍特異的抗原、腫瘍関連抗原、又は新抗原である。

いくつかの実施形態では、癌細胞は、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌の細胞である。

いくつかの実施形態では、癌は、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌である。

いくつかの実施形態では、副腎癌は、副腎皮質性癌腫（adrenocortical carcinoma、ＡＣＣ）、副腎皮質癌、褐色細胞腫、又は神経芽細胞腫である。

いくつかの実施形態では、肛門癌は、扁平上皮細胞癌腫、総排泄腔癌腫、腺癌腫、基底細胞癌腫、又は黒色腫である。

いくつかの実施形態では、虫垂癌は、神経内分泌腫瘍（neuroendocrine tumor、ＮＥＴ）、粘液性腺癌腫、杯細胞カルチノイド、腸型腺癌腫、又は印環細胞腺癌腫である。

いくつかの実施形態では、胆管癌は、肝外胆管癌、腺癌腫、門胆管癌、門周囲胆管癌、遠位胆管癌、又は肝内胆管癌である。

いくつかの実施形態では、膀胱癌は、移行細胞癌腫（transitional cell carcinoma、ＴＣＣ）、乳頭状癌腫、扁平癌腫、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。

いくつかの実施形態では、骨癌は、原発性骨癌、肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、骨の巨細胞腫瘍、脊索腫、又は転移性骨癌である。

いくつかの実施形態では、脳癌は、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、上衣腫、乏突起膠腫、混合神経膠腫、下垂体癌、下垂体腺腫、頭蓋咽頭腫、胚細胞腫瘍、松果体部腫瘍、髄芽腫、又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。

いくつかの実施形態では、乳癌は、乳腺癌腫、侵襲性乳癌、非侵襲性乳癌、乳肉腫、化生性癌腫、腺嚢癌腫、葉状腫瘍、血管肉腫、ＨＥＲ２陽性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、又は炎症性乳癌である。

いくつかの実施形態では、子宮頸癌は、扁平上皮細胞癌腫又は腺癌腫である。

いくつかの実施形態では、結腸直腸癌は、結腸直腸腺癌腫、原発性結腸直腸リンパ腫、消化管間質腫瘍、平滑筋肉腫、カルチノイド腫瘍、粘液性腺癌腫、印環細胞腺癌腫、消化管カルチノイド腫瘍、又は黒色腫である。

いくつかの実施形態では、食道癌は、腺癌腫又は扁平上皮細胞癌腫である。

いくつかの実施形態では、胆嚢癌は、腺癌腫、乳頭状腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、扁平上皮細胞癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。

いくつかの実施形態では、妊娠性絨毛性疾患（gestational trophoblastic disease、ＧＴＤ）は、胞状奇胎、妊娠性絨毛性新生物（gestational trophoblastic neoplasia、ＧＴＮ）、絨毛癌腫、胎盤性絨毛性腫瘍（placental-site trophoblastic tumor、ＰＳＴＴ）、又は類上皮絨毛性腫瘍（epithelioid trophoblastic tumor、ＥＴＴ）である。

いくつかの実施形態では、頭頸部癌は、喉頭癌、鼻咽頭癌、下咽頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、口腔癌、中咽頭癌、又は扁桃癌である。

いくつかの実施形態では、ホジキンリンパ腫は、古典的ホジキンリンパ腫、結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、リンパ球減少型、又は結節性リンパ球優位型のホジキンリンパ腫（nodular lymphocyte-predominant Hodgkin lymphoma、ＮＬＰＨＬ）である。

いくつかの実施形態では、腸癌は、小腸癌（small intestine cancer）、小腸癌（small bowel cancer）、腺癌腫、肉腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、又はリンパ腫である。

いくつかの実施形態では、腎臓癌は、腎細胞癌（renal cell carcinoma、ＲＣＣ）、明細胞ＲＣＣ、乳頭状ＲＣＣ、嫌色素性ＲＣＣ、集合管ＲＣＣ、未分類ＲＣＣ、移行細胞癌、尿路上皮癌、腎盂癌腫、又は腎肉腫である。

いくつかの実施形態では、白血病は、急性リンパ球性白血病（acute lymphocytic leukemia、ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（acute myeloid leukemia、ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（chronic lymphocytic leukemia、ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（chronic myeloid leukemia、ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（hairy cell leukemia、ＨＣＬ）、又は骨髄異形成症候群（myelodysplastic syndrome、ＭＤＳ）である。特定の実施形態では、白血病は、ＡＭＬである。

いくつかの実施形態では、肝臓癌は、肝細胞癌腫（hepatocellular carcinoma、ＨＣＣ）、線維層板型ＨＣＣ、胆管細胞癌腫、血管肉腫、又は肝転移である。

いくつかの実施形態では、肺癌は、小細胞肺癌、小細胞癌腫、複合型小細胞癌腫、非小細胞肺癌、肺腺癌腫、扁平上皮細胞肺癌、大細胞未分化型癌腫、肺結節、転移性肺癌、腺扁平上皮癌腫、大細胞神経内分泌癌腫、唾液腺型肺癌腫、肺カルチノイド、中皮腫、肺の肉腫様癌腫、又は悪性顆粒細胞肺腫瘍である。

いくつかの実施形態では、黒色腫は、表在拡大型黒色腫、結節性黒色腫、末端黒子型黒色腫、悪性黒子由来黒色腫、無色素性黒色腫、線維形成性黒色腫、眼黒色腫、又は転移性黒色腫である。

いくつかの実施形態では、中皮腫は、胸膜中皮腫、腹膜中皮腫、心膜中皮腫、又は精巣中皮腫である。

いくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、活動型又はくすぶり型の多発性骨髄腫である。

いくつかの実施形態では、神経内分泌腫瘍は、消化管神経内分泌腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、又は肺神経内分泌腫瘍である。

いくつかの実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、未分化大細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（small lymphocytic lymphoma、ＳＬＬ）、前駆Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（adult T cell lymphoma/leukemia、ＡＴＬＬ）、ヘアリーセル白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（diffuse large B-cell lymphoma、ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系（central nervous system、ＣＮＳ）リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（mantle cell lymphoma、ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（mucosa-associated lymphoid tissue、ＭＡＬＴ）リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、ナチュラルキラー細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アリベール－バザン症候群、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（angioimmunoblastic T cell lymphoma、ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（anaplastic large-cell lymphoma、ＡＬＣＬ）、全身性ＡＬＣＬ、腸症型Ｔ細胞リンパ腫（enteropathy-type T cell lymphoma、ＥＡＴＬ）、又は肝脾ガンマ／デルタＴ細胞リンパ腫である。

いくつかの実施形態では、口腔癌は、扁平上皮細胞癌腫、疣状癌腫、小唾液腺癌腫、リンパ腫、良性口腔腫瘍、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫瘍、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローマ、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫、歯原性腫瘍、白板症、紅板症、扁平上皮細胞口唇癌、基底細胞口唇癌、口癌、歯肉癌、又は舌癌である。

いくつかの実施形態では、卵巣癌は、卵巣上皮癌、粘液性上皮卵巣癌、子宮内膜上皮卵巣癌、明細胞上皮卵巣癌、未分化型上皮卵巣癌、卵巣低悪性度腫瘍、原発性腹膜癌、卵管癌、胚細胞腫瘍、奇形腫、未分化卵巣胚細胞癌、内胚葉洞腫瘍、性索間質性腫瘍、性索性腺間質腫瘍、卵巣間質腫瘍、顆粒膜細胞腫瘍、顆粒膜卵胞膜腫瘍、セルトリ－ライディッヒ腫瘍、卵巣肉腫、卵巣癌肉腫、卵巣腺肉腫、卵巣平滑筋肉腫、卵巣線維肉腫、クルケンベルグ腫瘍、又は卵巣嚢胞である。

いくつかの実施形態では、膵臓癌は、膵外分泌腺癌、膵内分泌腺癌、又は膵腺癌腫、膵島細胞腫瘍、又は神経内分泌腫瘍である。

いくつかの実施形態では、前立腺癌は、前立腺腺癌腫、前立腺肉腫、移行細胞癌腫、小細胞癌腫、又は神経内分泌腫瘍である。

いくつかの実施形態では、洞癌は、扁平上皮細胞癌腫、粘膜細胞癌腫、腺様嚢胞細胞癌腫、腺房細胞癌腫、副鼻腔未分化癌腫、鼻腔癌、副鼻腔癌、上顎洞癌、篩骨洞癌、又は鼻咽頭癌である。

いくつかの実施形態では、皮膚癌は、基底細胞癌、扁平上皮癌腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫（Kaposi sarcoma、ＫＳ）、日光角化症、皮膚リンパ腫、又は角化棘細胞腫である。

いくつかの実施形態では、軟部組織癌は、血管肉腫、皮膚線維肉腫、上皮性肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（gastrointestinal stromal tumor、ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、脱分化型脂肪肉腫（dedifferentiated liposarcoma、ＤＬ）、粘液性／円形細胞脂肪肉腫（myxoid/round cell liposarcoma、ＭＲＣＬ）、高分化型脂肪肉腫（well-differentiated liposarcoma、ＷＤＬ）、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫（rhabdomyosarcoma、ＲＭＳ）、又は滑膜肉腫である。

いくつかの実施形態では、脊髄癌は、脊髄転移性腫瘍である。

いくつかの実施形態では、胃癌は、胃腺癌腫、胃リンパ腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃カルチノイド腫瘍、Ｉ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、ＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、又はＩＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイドである。

いくつかの実施形態では、精巣癌は、セミノーマ、非セミノーマ、胚性癌腫、卵黄嚢癌腫、絨毛癌腫、奇形腫、性腺間質腫瘍、ライディッヒ細胞腫瘍、又はセルトリ細胞腫瘍である。

いくつかの実施形態では、咽頭癌は、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、肉腫、喉頭癌、咽頭癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、喉頭扁平上皮細胞癌、喉頭腺癌腫、リンパ上皮腫、紡錘細胞癌腫、疣状癌、未分化癌腫、又はリンパ節癌である。

いくつかの実施形態では、甲状腺癌は、乳頭状癌腫、濾胞状癌腫、ハースル細胞癌腫、甲状腺髄様癌腫、又は未分化癌腫である。

いくつかの実施形態では、子宮癌は、子宮内膜癌、子宮内膜腺癌腫、類子宮内膜癌腫、漿液性腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、子宮癌肉腫、子宮肉腫、子宮平滑筋肉腫、子宮内膜間質肉腫、又は未分化肉腫である。

いくつかの実施形態では、膣癌は、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、黒色腫、又は肉腫である。

いくつかの実施形態では、外陰部癌は、扁平上皮細胞癌腫又は腺癌腫である。

いくつかの実施形態では、癌抗原は、アンジオポエチン、ＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、ＰＤＧＦＲα、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、又はＶＥＧＦ－Ｒである。

いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－βＲＩＩ、又はＭＵＣ１である。

別の態様では、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。

一実施形態では、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ１を含み、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣ１を含み、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、第１の抗原に対する結合部位は、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に結合する。

別の実施形態では、第２の抗原に対する結合部位は、癌細胞の表面上に存在する癌抗原に結合する。

別の実施形態では、二重特異性抗体は、γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に結合し、癌細胞の表面上に存在する癌抗原の結合が、癌細胞の死滅をもたらす。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体は、ヒト化ＨＣ１及びヒト化ＬＣ１を含む。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体のＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３に結合する。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体のＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３のＣ２ドメインに結合する。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体のＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３のＶドメインに結合する。

別の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。

特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプである。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

一実施形態では、γδＴエフェクター細胞及びＫａｓｕｍｉ３ＡＭＬ標的細胞の混合物を用いて、ＥＣ_５０を評価する。

別の実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約５：１である。

更に別の実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１：１～約２：１である。

特定の実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、多価である。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、少なくとも３つの抗原に結合することができる。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、少なくとも５つの抗原に結合することができる。

また、単離されたγδＴ細胞二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、
ＨＣ１及びＬＣ１が、γδＴ細胞上の第１の抗原に対する結合部位を形成し、
ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離されたＴ細胞二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。

また、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖に特異的に結合することができる第１の手段と、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖ではない標的分子に特異的に結合することができる第２の手段とを含む、二重特異性抗体が本明細書に提供される。

また、２つ以上の標的分子に特異的に結合することができる分子を作製するためのプロセスであって、分子は、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖に結合することができるオリゴペプチド又はポリペプチドを得る機能を果たす工程と、標的に結合することができるオリゴペプチド又はポリペプチドを得る機能を果たすための工程と、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖及び標的分子に特異的に結合することができる分子を提供する機能を果たす工程と、を含む、プロセスが提供される。

一実施形態では、標的に結合することができるオリゴペプチド又はポリペプチドを得る機能を果たすための工程は、ｎ回繰り返され、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖及びｎ個の標的分子に特異的に結合することができる分子を提供する機能を果たすためのｎ個の工程を更に含み、ｎは、少なくとも２である。

別の態様では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、Ｖδ２に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２が、それぞれ、配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２が、それぞれ、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ３３に特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。

特定の実施形態では、ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位が形成される。他の実施形態では、ＣＤ３３のＶドメインに特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位が形成される。

一実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ１を含み、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣ１を含み、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ２を含み、ＬＣ２は、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣ２を含み、ＬＣ２は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２は、γδＴ細胞の表面上にある。

別の実施形態では、ＣＤ３３は、腫瘍細胞又はＣＤ３４＋幹細胞の表面上にある。

別の実施形態では、γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対する二重特異性抗体の結合及び癌細胞の表面上のＣＤ３３の結合が、癌細胞の死滅をもたらす。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト化ＨＣ１及びヒト化ＬＣ１を含む。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒト化ＨＣ２及びヒト化ＬＣ２を含む。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプである。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

別の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

また、本明細書に提供される単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントを作製する方法であって、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを生成する条件下で、当該抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントをコードしている核酸を含む細胞を培養することと、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを回収することと、を含む方法が提供される。

別の態様では、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原エピトープ結合フラグメントであって、第１の抗原に対する結合部位及び第２の抗原に対する結合部位を含み、当該第１の抗原に対する結合部位が、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２エピトープに結合し、当該第２の抗原に対する結合部位が、標的細胞の表面上の第２の抗原のエピトープに結合し、当該γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２エピトープの結合及び当該標的細胞上の第２の抗原エピトープの結合が、標的細胞の死滅をもたらす、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原エピトープ結合フラグメントが、本明細書に提供される。

一実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２は、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１は、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、第２の抗原エピトープに対する結合部位を形成する。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ１を含み、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣ１を含み、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒト化ＨＣ１及びヒト化ＬＣを含む。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＤ３３エピトープに結合する。

特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＤ３３Ｃ２ドメインエピトープに結合する。他の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＤ３３Ｖドメインエピトープに結合する。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ２を含み、ＬＣ２は、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣ２を含み、ＬＣ２は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントそのフラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプである。

別の実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約５：１である。別の実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１：１～約２：１である。特定の実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。

また、単離されたγδＴ細胞二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、第１の抗原エピトープに対する結合部位及び第２の抗原エピトープに対する結合部位を含み、当該第１の抗原エピトープに対する結合部位が、γδＴ細胞上の第１の抗原に結合し、当該第２の抗原エピトープに対する結合部位が、標的細胞の表面上の第２の抗原エピトープに結合し、当該γδＴ細胞上の第１の抗原エピトープの結合及び当該標的細胞上の第２の抗原エピトープの結合が、標的細胞の死滅をもたらす、単離されたγδＴ細胞二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。

別の態様では、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントをコードしている単離核酸であって、当該単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成する単離核酸が、本明細書に提供される。

一実施形態では、単離核酸は、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ１を含むＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、単離核酸は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣ１を含むＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、単離核酸は、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に結合する第１の抗原を含む結合部位を含むＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしている。

別の実施形態では、単離核酸は、癌細胞の表面上に存在する癌抗原に結合する第２の抗原に対する結合部位を含むＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしている。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対する二重特異性抗体の結合及び癌細胞の表面上に存在する癌抗原の結合が、癌細胞の死滅をもたらす。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、ＨＣ１及びＬＣ１は、ヒト化されている。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３に結合する。特定の実施形態では、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３Ｃ２ドメインエピトープに結合する。特定の実施形態では、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３Ｖドメインエピトープに結合する。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、ＥＣ_５０は、γδＴエフェクター細胞及びＫａｓｕｍｉ３ＡＭＬ標的細胞の混合物を用いて評価される。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約５：１である。一実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１：１～約２：１である。更に別の実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、多価である。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、少なくとも３つの抗原に結合することができる。

別の実施形態では、単離核酸は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体をコードしており、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、少なくとも５つの抗原に結合することができる。

また、本明細書に提供される単離核酸を含む、ベクターが提供される。

また、本明細書に提供されるベクターを含む、宿主細胞が提供される。

また、本明細書に提供されるベクターと、そのためのパッケージとを含む、キットが提供される。

別の態様では、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。

一実施形態では、医薬組成物は、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ１と、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＬＣ１と、を含む二重特異性抗体を含む。

別の実施形態では、医薬組成物は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣ１とを含む、二重特異性抗体を含む。

別の実施形態では、医薬組成物は、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に結合する第１の抗原に対する結合部位を含む二重特異性抗体を含む。

別の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性抗体を含み、第２の抗原に対する結合部位は、癌細胞の表面上に存在する癌抗原に結合する。

別の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性抗体を含み、γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対する当該二重特異性抗体の結合及び癌細胞の表面上に存在する癌抗原の結合が、癌細胞の死滅をもたらす。

別の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性抗体を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は、ヒト化されている。

別の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性抗体を含み、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３に結合する。特定の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性抗体を含み、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３Ｃ２ドメインエピトープに結合する。他の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性抗体を含み、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３３Ｖドメインエピトープに結合する。

別の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。

また、Ｖδ２発現γδＴ細胞を癌細胞に方向付ける方法であって、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を本明細書に提供される医薬組成物と接触させることを含み、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を当該医薬組成物と接触させることによって当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を癌細胞に方向付ける方法も提供される。

また、細胞表面上で癌抗原を発現する癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法が提供され、方法は、癌細胞を本明細書に提供される医薬組成物と接触させることを含み、癌細胞を医薬組成物と接触させることは、癌細胞の成長又は増殖を阻害する。

一実施形態では、癌細胞は、抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触している間、Ｖδ２発現γδＴ細胞の存在下にある。

また、癌の治療を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、
ａ．癌治療を必要とする対象を特定することと、
ｂ．本明細書に提供される医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することと、を含み、
当該医薬組成物を、それを必要とする当該対象に投与することが、当該対象における当該癌を治療する、方法が提供される。

また、Ｖδ２発現γδＴ細胞を活性化する方法であって、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を本明細書に提供される医薬組成物と接触させることを含み、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を当該医薬組成物と接触させることによって、対照Ｖδ２発現γδＴ細胞と比較してＣＤ６９、ＣＤ２５、及び／又はグランザイムＢの発現が増加する、方法も提供される。

また、本明細書に提供される医薬組成物を生成する方法であって方法は、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを、医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む方法が提供される。

前述の発明の概要、並びに本出願の特定の実施形態の以下の詳細な説明は、添付図面と共に読んだときにより深く理解されるであろう。しかしながら、本出願は、図面に示される実施形態そのものに限定されないことを理解するべきである。
ＣＤ３３＋である癌細胞にγδＴ細胞を動員し、癌細胞の死を誘導するための、例示的な抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体の結合を示す概略図である。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（還元及び非還元）ゲルによって評価したときのＶＧ５６二重特異性抗体の完全性を示す図である。ゾレドロン酸が、全末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からＶγ９Ｖδ２細胞を選択的に拡大することを示すグラフを示す図である。ＦＡＣＳによって測定したときの抗ＣＤ３３抗体（クローンＣ３３Ｂ９０４）のＭＯＬＭ－１３腫瘍細胞株への結合を示す図である。ＭＯＬＭ－１３（高受容体密度）のＥＣ_５０は、１３４．３ｎＭであった。ＦＡＣＳによって測定したときの抗ＣＤ３３抗体（クローンＣ３３Ｂ９０４）のＫａｓｕｍｉ－１腫瘍細胞株への結合を示す図である。Ｋａｓｕｍｉ－１（中受容体密度）のＥＣ_５０は、８２．２ｎＭであった。ＦＡＣＳによって測定したときの抗ＣＤ３３抗体（クローンＣ３３Ｂ９０４）のＯＣＩ－ＡＭＬ－３腫瘍細胞株への結合を示す図である。ＯＣＩ－ＡＭＬ－３（低受容体密度）のＥＣ_５０は、１６．４ｎＭであった。１：１のＥ：Ｔ比での、Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対するＶδ２×ＣＤ３３二重特異性媒介性全ＰＢＭＣベースの細胞傷害を示す図である。Ｖδ２×ＣＤ３３（ＶＧ５６）のＥＣ_５０値は、９２．８ｐＭであった。１：１のエフェクター対標的細胞の比での、ＣＤ３３発現Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対する抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体媒介性γδＴ細胞の細胞傷害を示すグラフを示す図である。エフェクター細胞は、ＰＢＭＣから単離された、濃縮されたγδ Ｔ細胞であった。１：１のエフェクター対標的細胞の比での、ＣＤ３３発現Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対する抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体媒介性γδＴ細胞の細胞傷害を示すグラフを示す図である。エフェクター細胞は、ＰＢＭＣから単離された、濃縮されたγδ Ｔ細胞であった。

（詳細な記述）
Ｔ細胞は、最も多量に存在し（血液リンパ球の約７５％）かつ強力な免疫キラー細胞である。抗癌免疫応答におけるエフェクターＴ細胞の役割は、インビトロ研究、及びいくつかの種類の癌におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の高い浸潤が良好な臨床予後と相関するという所見によって強く裏付けられている。

最近、癌を治療するためにＴ細胞の治療可能性を利用することが実質的に進歩している。癌細胞を溶解するためにＴ細胞をリダイレクトする２つの異なるストラテジ、すなわち、１）癌細胞に結合する抗体フラグメントを使用することによってエクスビボでキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）によって操作されたドナーＴ細胞、及び２）一方のアームはＴ細胞上のＣＤ３に結合するが、第２のアームは癌関連抗原に結合するアームからなる組換え二重特異性タンパク質治療薬、が、現在臨床試験で研究されている。後者に焦点を当てると、二重特異性タンパク質によって、Ｔ細胞と癌細胞とが効率的に係合することが可能になる。これにより、癌に結合した二重特異性分子によって誘導されるＣＤ３共受容体刺激が生じ、これが、ＭＨＣ非依存性ポリクローナルＴ細胞の活性化及び強力な癌細胞溶解を惹起する。このアプローチは、癌特異的耐性機序のいくつかを迂回し、動員されたＴ細胞に癌細胞を死滅させる。

実際、ＣＤ３二重特異性タンパク質の１つであるブリナツモマブ、ＣＤ３／ＣＤ１９二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）は、難治性Ｂ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療についてＦＤＡによって承認されている。ＢｉＴＥのような分子がいかに機能するかという作用機序は依然として完全には理解されていないが、二重特異性試薬が、Ｔ細胞による癌細胞の天然溶解媒介性殺傷を模倣する人工溶解シナプスの形成を２つの細胞間で誘導することができるという証拠を提示している。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞及びブリナツモマブを用いた前臨床実験によってこの概念が検証され、このアプローチについての強力な理論的根拠が提供されており、現在、臨床試験によって、ヒト患者における概念証明（ＰＯＣ）が提供されている。このアプローチの臨床的成功から、ＣＤ３に方向付けられた二重特異性抗体の分野が急速に成長しており、多数の癌抗原を標的とするための治療薬を作製するために様々な抗体フォーマットが使用されている。これらのフォーマットのうちのいくつかは、ブリナツモマブでみられる重大な問題を軽減する可能性を秘めており、例えば、ブリナツモマブは、循環から急速にクリアされるので、４週間の治療サイクルの間、連続静脈内注入を必要とする。新たなフォーマットは、血清半減期がより長くなるように設計され、それによって連続注入が回避される。

Ｔ細胞媒介性応答は非常に強力であるため、サイトカインストームを誘導するか又は低レベルの標的抗原しか発現していない健常組織にＴ細胞を方向付けることによって、重度の副作用が生じる場合がある。現在臨床試験中のほとんどのＣＤ３二重特異性タンパク質は、発現が造血系に限定される受容体（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ１２３など）、又は高度に特異的な癌抗原、例えば、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、及びＭＨＣＩ－ｇｐ１００を標的としている。したがって、ＣＤ３ベースのリダイレクションの適用範囲は、癌特異性を有する抗原又は血液癌に限定される可能性があり、このことが多くの種類の固形癌への適用を妨げている。更に、現在利用可能な技術を用いたＣＤ３に方向付けられたＴ細胞のリダイレクションは、様々な理由から、固形癌において大きな有効性を示したことがない（例えば、未成熟、ＣＤ４＋、Ｔｒｅｇ、汎ＣＤ８（ＣＴＬなし）、消耗Ｔ細胞などを含む、全ての種類のＣＤ３＋Ｔ細胞が動員され、これが非効率的な癌の除去につながる場合があった；Ｔ細胞の活性化が早すぎて、治療指数が狭くなる場合があった；Ｔ細胞の活性化が最適以下であった；Ｔ細胞の消耗又は活性化によってＴ細胞の死が誘導された；最適な用量レベルを制限する可能性のあるサイトカイン放出症候群が誘導された；癌細胞のアポトーシスが阻害された；抗癌適応免疫応答の活性化が少なかった；他の免疫療法と組み合わせる能力が制限されていた、など）。

ＣＤ３を介してＴ細胞をリダイレクトすることは魅力的であるが、古典的な抗原特異的Ｔ細胞応答を迂回するポリクローナル細胞傷害性応答を生じさせるので、次の２つの重要な懸念が生じる：１）免疫回避において積極的な役割を果たすと報告されている様々な免疫調節及び免疫抑制Ｔ細胞を含むＣＤ３＋Ｔ細胞が無差別に刺激される可能性がある、並びに２）サイトカインストームを誘導することにより、重度の副作用につながり得る汎Ｔ細胞の活性化。したがって、ＣＤ３を介したリダイレクションでは、潜在的に、有効性が最適以下になり、治療指数が狭くなる場合がある。ＣＤ３リダイレクションの制約のうちのいくつかを軽減するために、Ｔ細胞を癌細胞にリダイレクトするための代替ストラテジを探索しなければならない。１つのアプローチは、汎Ｔ細胞を無差別に刺激及び動員するのではなく、癌細胞を溶解することができる細胞傷害性細胞（サブセット）のみのリダイレクションを選択することであろう。

Ｔ細胞を動員する別の方法は、Ｔ細胞の特異的サブセットを標的とすることである。近年、癌免疫療法分野では、γδＴ細胞が大きな関心を集めている。その自然免疫について周知であるこれらの特殊なＴ細胞は、末梢ＣＤ３＋Ｔ細胞のうちわずかな比率（１％～５％）しか占めないが、上皮組織ではＴ細胞の主要なサブセット（２０％～５０％）を構成する。

循環γδＴ細胞は、主にＶγ９（ＴＲＧＶ９）及びＶδ２（ＴＲＤＶ２）鎖のヘテロ二量体を発現するが、組織γδＴ細胞は、異なるＶγ鎖に関連するＶδ１鎖を優先的に発現する。

ヒトにおいて、γδＴ細胞は、強力な抗癌機能（高い細胞傷害性及びインターフェロンγ分泌）に恵まれている。更に、γδＴ細胞は、これまで自然骨髄系細胞のみが有していた機能である食作用が可能であり、αβＴ細胞のための効率的な抗原提示細胞として挙動し、適応免疫応答を誘導する。γδＴ細胞は、癌に浸潤することが示されているが、その存在の臨床的関連性は依然として議論中である。現在まで、全ての研究努力がＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞に焦点を当てており、主に、養子移入のためにインビボ又はエクスビボでγδ Ｔ細胞を活性化させることを目的としていた。臨床研究はまだ多くないが、予備データは、Ｔ細胞ベースの免疫療法におけるγδＴ細胞サブセットの検討の重要性を強調している。

したがって、この背景に対して、ＣＤ３ベースのリダイレクションの制約を克服し、Ｔ細胞の汎活性化を回避し、γδＴ細胞を選択的に動員することによって強力な癌溶解を誘導するのに役立つアプローチが求められている。具体的には、γδ Ｔ細胞を動員及び活性化するために、一方のアームが癌関連抗原に結合し、他方のアームがＴＲＤＶ２受容体を発現しているγδＴ細胞に結合する二重特異性抗体療法を中心とするストラテジは、癌の治療において、真の細胞傷害性Ｔ細胞上の抗原及び癌細胞上で発現している抗原に結合する二重特異性抗体を有することによって、このアンメットメディカルニーズに対処することができる。

背景技術において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載し、これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を構成することを容認するものではない。

特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意する必要がある。

特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、「約」という用語によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用するとき、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。

別途記載のない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、一連の全ての要素を指すと理解されるべきである。当業者であれば、単なる通常の実験手順を使用するだけで、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態に対して多くの均等物を認識するか、又は確認することができよう。かかる均等物は、本発明によって包含されることが意図される。

本明細書で使用するとき、用語「備える（comprises）、「備える（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する（has）」、「有する（having）」、「含有する（contains）」、若しくは「含有する（containing）」、又はこれらの任意の他の変形形態は、述べられている整数又は整数群を含むことが意図されるが、これら以外の他の整数又は整数群を除外するものではなく、非排他的又は非制限的であることが意図されることが理解されよう。例えば、一連の要素を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されない、又はそのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置に本来存在しない他の要素を含んでもよい。更に、明示的に反対に明記されない限り、「又は」は包括的な「又は」を指すものであり、排他的な「又は」を指すものではない。例えば、条件Ａ又はＢは、Ａが真であり（又は存在する）かつＢが偽である（又は存在しない）場合、Ａが偽であり（又は存在しない）かつＢが真である（又は存在する）場合、並びにＡ及びＢの両方が真である（又は存在する）場合、のいずれか１つによって充足される。

本明細書で使用するとき、複数の列挙された要素間の「及び／又は」という接続的な用語は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素が適用可能であることを指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、意味に含まれ、したがって、本明細書で使用するとき、「及び／又は」という用語の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含まれ、したがって、「及び／又は」という用語の要件を満たすことが理解される。

本明細書で使用するとき、用語「からなる（consists of）」、又は「からなる（consist of）」若しくは「からなる（consisting of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用するとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含するが、追加の整数又は整数群が、指定の方法、構造、又は組成物に追加されることはないことを示す。

本明細書で使用するとき、用語「から本質的になる（consists essentially of）」、又は「から本質的になる（consist essentially of）」若しくは「から本質的になる（consisting essentially of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用するとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含し、任意選択で、指定の方法、構造、又は組成物の基本的又は新規の特性を実質的に変化させない任意の列挙された整数又は整数群も包含することを示す。Ｍ．Ｐ．Ｅ．Ｐ．§２１１１．０３を参照されたい。

本明細書で使用するとき、「対象」は、任意の動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトを意味する。本明細書で使用するとき、「哺乳動物」という用語は、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなどが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。

好ましい発明の構成要素の寸法又は特徴を指すときに本明細書で使用される用語「約」、「およそ」、「概ね」、「実質的に」などの用語は、当業者には理解されるように、記載の寸法／特徴が厳密な境界又はパラメータではなく、機能的に同じ又は類似する、それらからのわずかな相違を除外するものではないことを示すことも理解すべきである。最小値では、数値パラメータを含むこのような参照は、当該技術分野において受け入れられている数学的及び工業的原理（例えば、四捨五入、測定、又は他の系統誤差、製作公差など）を使用すると、最下位の桁は変化しない変形形態を含むであろう。

「同一」又はパーセント「同一性」という用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列（例えば、抗ＴＲＤＶ２／抗癌関連抗原二重特異性抗体及びそれをコードしているポリヌクレオチド、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体及びそれをコードしているポリヌクレオチド、ＴＲＤＶ２ポリペプチド及びそれをコードしているＴＲＤＶ２ポリヌクレオチド、ＣＤ３３ポリペプチド及びそれをコードしているＣＤ３３ポリヌクレオチド）に関連して、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して測定したとき又は目視検査によって、一致が最大になるように比較及びアラインメントした場合に同一であるか、又は特定のパーセントの同一アミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する２つ以上の配列又は部分配列を指す。

配列比較のために、典型的には１つの配列は、試験配列がそれに対して比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて、サブ配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。

比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）のホモロジーアラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅ，ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、又は目視検査（全般的には、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ，ａｊｏｉｎｔｖｅｎｔｕｒｅｂｅｔｗｅｅｎＧｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，（１９９５Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）（Ａｕｓｕｂｅｌ）を参照されたい）によって行うことができる。

配列同一性パーセント及び配列類似性を求めるのに好適なアルゴリズムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，（１９９７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－３４０２にそれぞれ記載されているＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分析を行うソフトウェアは、国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）を通じて公的に入手可能である。このアルゴリズムは、最初に、データベース配列における同じ長さのワードと位置合わせしたときに一致するか、又はいくつかの正の値の閾値スコアＴを満たすかのいずれかの、クエリー配列における長さＷの短いワードを同定することによって、高スコア配列対（ＨＳＰ）を同定することを含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、上記）と称される。これらの初期隣接ワードヒットは、それを含有するより長いＨＳＰを見つけるために検索を開始するためのシードとして機能する。次いで、累積位置合わせスコアを増加させることができる限り、各配列に沿ってワードヒットを両方向に延長する。

ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一致する残基の対についてのリワードスコア、常に０より大きい値である）及びパラメータＮ（不一致の残基についてのペナルティスコア、常に０より小さい値である）を使用して累積スコアを計算する。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスを使用して累積スコアを計算する。累積位置合わせスコアがその最大獲得値から量Ｘだけ低下したとき、１つ以上の負のスコアリング残基の位置合わせの蓄積により、累積スコアがゼロ以下になったとき、又はいずれかの配列の末端に達したときに、各方向におけるワードヒットの延長を停止する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、及びＸが、位置合わせの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１０９１５（１９８９）を参照）。

配列同一性パーセントを計算することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計解析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７３－５７８７（１９９３）を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド配列間又は２つのアミノ酸配列間の一致が偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が、約０．１未満、例えば、約０．０１未満又は約０．００１未満である場合、核酸は参照配列に類似しているとみなされる。

２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることの更なる指標は、以下に記載されるように、第１核酸によりコード化されるポリペプチドが、第２核酸によりコード化されるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、第２ポリペプチドと実質的に同一であり、例えば、２つのペプチドは保存的置換によってのみ異なる。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、２つの分子がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。

本明細書で使用するとき、用語「ポリヌクレオチド」は、同義的に、「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」とも称され、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡであってよい、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」としては、これらに限定されるものではないが、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖又はより典型的には二本鎖又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であってよいＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられる。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ、又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語には、１つ以上の改変された塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由により改変された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「改変された」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な修飾をＤＮＡ及びＲＮＡに行うことができる。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的に天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に改変された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと呼ばれる）も包含する。

本明細書で使用するとき、用語「ベクター」は、別の核酸セグメントを機能的に挿入することによってそのセグメントの複製又は発現を行うことができるレプリコンのことである。

本明細書で使用するとき、用語「宿主細胞」は、本明細書に提供される核酸分子を含む細胞を指す。「宿主細胞」は、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞のいずれの種類の細胞であってもよい。一実施形態では、「宿主細胞」は、本明細書に提供される核酸分子をトランスフェクトした細胞である。別の実施形態では、「宿主細胞」は、かかるトランスフェクトされた細胞の子孫又は潜在的な子孫である。細胞の後代は、例えば、後続の世代で生じる可能性のある変異若しくは環境の影響、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みによって、親細胞と同一である場合もあり、同一ではない場合もある。

本明細書で使用するとき、用語「発現」は、遺伝子産物の生合成を指す。かかる用語には、遺伝子のＲＮＡへの転写が含まれる。また、かかる用語には、ＲＮＡの１つ以上のポリペプチドへの翻訳も含まれ、全ての天然に生じる、転写後及び翻訳後修飾も更に含まれる。発現される二重特異性抗体は、宿主細胞の細胞質内、細胞培養の成長培地などの細胞外環境中に存在し得るか、又は細胞膜に固定され得る。

本明細書で使用するとき、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、又は「タンパク質」は、アミノ酸から構成される分子を指すことができ、当業者によってタンパク質として認識され得る。本明細書では、アミノ酸残基の従来の１文字又は３文字コードが使用される。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために、本明細書において互換的に使用することができる。ポリマーは、直鎖又は分枝鎖であってよく、修飾されたアミノ酸を含むことができ、かつ非アミノ酸により中断されてもよい。本用語はまた、自然に修飾されているか、又は介入によって修飾されているアミノ酸ポリマーを包含する。介入の例としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは修飾、例えば、標識構成成分とのコンジュゲートが挙げられる。また、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含有するポリペプチド、並びに当該技術分野において既知の他の修飾も定義に含まれる。

本明細書に記載のペプチド配列は、通常の慣習に従って記載され、ペプチドのＮ末端領域は左側にあり、Ｃ末端領域は右側にある。アミノ酸の異性体形態は既知であるが、別途明示的に示されない限り、示されるのはアミノ酸のＬ型である。

抗体
特定の態様では、単離された抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント、当該抗体をコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物が、本明細書に提供される。

特定の実施形態では、単離された抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント、当該抗体をコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該二重特異性抗体を含む組成物が提供される。当該抗体を作製する方法及び疾患を治療するために当該抗体を使用する方法も提供される。本明細書に開示される抗体は、ＴＲＤＶ２への高親和性結合又はＴＲＤＶ２に対する高い特異性を含むがこれらに限定されない、１つ以上の望ましい機能的特性を有する。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、単独で又は他の療法と組み合わせて対象に投与されたとき、疾患又は障害を治療又は予防する能力を有する。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＴＲＤＶ２抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＴＲＤＶ２抗原結合フラグメントからなる。他の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、二重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。更に他の実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、二重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。ＴＲＤＶ２抗体が本明細書に例示されるが、ＴＲＤＶ２に結合する他の分子も企図されることが理解される。そのような分子は、本明細書に提供される抗体及び他の抗体結合フラグメントの等価物を含む他の代替結合剤を含む。更に、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体が本明細書に例示されるが、他のＴＲＤＶ２多重特異性抗体も企図されることが理解される。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２二重特異性は、ＴＲＤＶ２多重特異性抗体に含まれる。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２多重特異性は、ＴＲＤＶ２二重特異性抗体である。

他の態様では、単離された抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント、当該抗体をコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該二重特異性抗体を含む組成物が、本明細書に提供される。当該抗体を作製する方法、及び癌を含む疾患を治療するために当該抗体を使用する方法も提供される。本明細書に開示される抗体は、１つ以上の望ましい機能的特性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２への高親和性結合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、第２の標的抗原への高親和性結合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２に対する高い特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、第２の標的抗原に対する高い特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、単独で投与されたときに疾患又は障害を治療又は予防する能力を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、他の療法と組み合わせて投与されたときに疾患又は障害を治療又は予防する能力を有する。特定の実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、その抗原結合フラグメントを含む。

本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、広義で使用され、免疫グロブリン、又はモノクローナル又はポリクローナルである、ヒト、ヒト化、複合、及びキメラ抗体を含む抗体分子並びに抗体フラグメントを含む。全般的には、抗体とは、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。抗体の構造は、公知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ）に割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。したがって、本明細書に提供される抗体は、５つの主要なクラス又は対応する下位クラスのいずれかのものであることができる。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。脊椎動物種の抗体軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの一方に割り当てることができる。したがって、本明細書に提供される抗体は、カッパ又はラムダ軽鎖定常ドメインを含有することができる。特定の実施形態によれば、本明細書に提供される抗体は、ラット又はヒト抗体由来の重鎖及び／又は軽鎖定常領域を含む。

重鎖及び軽鎖定常ドメインに加えて、抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）で構成される抗原結合領域を含有し、これらの領域はそれぞれ３つのドメイン（すなわち、相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含有する。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇ又は抗体）ＶＨ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、若しくはＨＣＤＲ３）、又は抗体ＶＬ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、若しくはＬＣＤＲ３）を指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は、当業者に周知であり、例えば、Ｋａｂａｔによって、抗体可変（Ｖ）ドメイン内の最も可変性の高い領域として定義されている（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔ，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５（１９７８））。ＣＤＲ領域配列はまた、保存されたβ－シートフレームワークの一部ではないので、様々な高次構造に適応することができる残基として、Ｃｈｏｔｈｉａによって構造的に定義されている（ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。両方の用語は、当該技術分野において十分に認識されている。ＣＤＲ領域配列はまた、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、及びＩＭＧＴによって定義されている。例示的なＣＤＲ領域配列は、本明細書に、例えば、配列表、及び以下の実施例に提供される表に例示される。標準的な抗体可変領域内のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較によって決定されている（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（１９９７）；Ｍｏｒｅａｅｔａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ２０：２６７－２７９（２０００））。超可変領域内の残基の数は異なる抗体では変化するため、標準的な位置に対する追加の残基には、従来、標準的な可変領域付番スキーム（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ（１９９７））における残基番号の次に、ａ、ｂ、ｃなどを付けて付番される。そのような命名法は、当業者には周知である。

軽鎖可変領域ＣＤＲ１ドメインは、本明細書において、ＬＣＤＲ１又はＶＬＣＤＲ１と互換的に呼ばれる。軽鎖可変領域ＣＤＲ２ドメインは、本明細書において、ＬＣＤＲ２又はＶＬＣＤＲ２と互換的に呼ばれる。軽鎖可変領域ＣＤＲ３ドメインは、本明細書において、ＬＣＤＲ３又はＶＬＣＤＲ３と互換的に呼ばれる。重鎖可変領域ＣＤＲ１ドメインは、本明細書において、ＨＣＤＲ１又はＶＨＣＤＲ１と互換的に呼ばれる。重鎖可変領域ＣＤＲ２ドメインは、本明細書において、ＨＣＤＲ２又はＶＨＣＤＲ２と互換的に呼ばれる。重鎖可変領域ＣＤＲ１ドメインは、本明細書において、ＨＣＤＲ３又はＶＨＣＤＲ３と互換的に呼ばれる。

本明細書で使用するとき、ＶＨ又はＶＬなどの用語「超可変領域」は、配列において超可変である、及び／又は構造的に定義されるループを形成する、抗体可変領域の領域を指す。概して、抗体は、６つの超可変領域、すなわちＶＨ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）の３つ、及びＶＬ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）の３つを含む。多数の超可変領域の描写が使用されており、本明細書に包含される。「Ｋａｂａｔ」ＣＤＲは、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照されたい）。「Ｃｈｏｔｈｉａ」は、それに代えて、構造ループの位置を指す（例えば、ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照されたい）。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番されたときのＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ－ＨＣＤＲ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２からＨ３４まで変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームが、Ｈ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終わる）。「ＡｂＭ」超可変領域は、ＫａｂａｔＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協案を表し、ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている（例えば、Ｍａｒｔｉｎ，ｉｎＡｎｔｉｂｏｄｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌ．２，Ｃｈａｐｔｅｒ３，ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇを参照されたい）。「Ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、利用可能な複合結晶構造の分析に基づく。

最近、ユニバーサル付番システムが開発され、広く採用されている、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌａｆｒａｎｃｅｔａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３））。ＩＭＧＴは、免疫グロブリン（immunoglobulin、ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（T cell receptor、ＴＲ）、並びにヒト及び他の脊椎動物の主要組織適合複合体（major histocompatibility complex、ＭＨＣ）専門の統合情報システムである。本明細書において、ＣＤＲは、アミノ酸配列と、軽鎖又は重鎖における位置との両方の観点において言及される。免疫グロブリン可変部ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は、種の間で保存され、ループと称される構造で存在するため、可変部ドメイン配列を構造的特徴に従って整合する付番システムを使用することにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基は容易に特定される。この情報は、１つの種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体からのアクセプターフレームワーク内に移植及び置き換えるのに使用され得る。ＨｏｎｅｇｇｅｒａｎｄＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７－６７０（２００１）によって、更なる付番システム（ＡＨｏｎ）が開発されている。例えば、Ｋａｂａｔ付番及びＩＭＧＴ固有の付番システムを含む付番システム間の対応関係は、当業者に周知である（例えば、Ｋａｂａｔ、上記；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、上記；Ｍａｒｔｉｎ、上記；Ｌｅｆｒａｎｃら、上記）。本明細書に示される例示的なシステムは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａを組み合わせている。

超可変領域は、次のような「拡張超可変領域」を含んでもよい：ＶＬ内の２４～３６又は２４～３４（ＬＣＤＲ１）、４６～５６又は５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７又は８９～９６（ＬＣＤＲ３）、並びにＶＨ内の２６～３５又は２６～３５Ａ（ＨＣＤＲ１）、５０～６５又は４９～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、又は９５～１０２（ＨＣＤＲ３）。配列表に含まれる、上記の番号付けスキームのそれぞれを反映するＣＤＲ配列が、本明細書に提供される。

用語「定常領域」又は「定常ドメイン」は、抗原に対する抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示す軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含有する可変領域である免疫グロブリンの他の部分と比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、並びに軽鎖のＣＬ領域を含有してもよい。

用語「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、ＣＤＲに隣接する可変領域残基である。ＦＲ残基は、例えば、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒトドメイン抗体、ダイアボディ、直鎖抗体、及び二重特異性抗体中に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基又はＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

本明細書で使用するとき、用語「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する単離された抗体は、Ｖδ２に結合しない抗体を実質的に含まず、第２の標的（例えば、ＣＤ３３）に特異的に結合する単離された抗は、第２の標的（例えば、ＣＤ３３）に結合しない抗体を実質的に含まない）。更に、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない。

本明細書で使用するとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在し得る自然発生変異を除いて同一である。本明細書に提供されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ技術、単一リンパ球遺伝子クローニング技術、又は組換えＤＮＡ法によって作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウス又はラットから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成され得、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する。

本明細書で使用するとき、用語「抗原結合フラグメント」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の部分から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントなどの抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体又は親抗体フラグメントが結合する同じ抗原に結合することができる。特定の実施形態によれば、抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖のＦｄフラグメントを含む。他の特定の実施形態によれば、抗原結合フラグメントはＦａｂ及びＦ（ａｂ’）を含む。

本明細書で使用するとき、用語「単鎖抗体」は、約１５～約２０アミノ酸の短いペプチドによって接続された重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、当該技術分野における従来の単鎖抗体を指す。本明細書で使用するとき、用語「単一ドメイン抗体」は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むか、又は重鎖可変領域のみを含む、この分野において従来既知の単一ドメイン抗体を指す。

本明細書で使用するとき、用語「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体、又は当該技術分野において既知の任意の技術を用いて作製される、ヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義は、インタクトな若しくは完全長の抗体、そのフラグメント、並びに／又は少なくとも１つのヒト重鎖及び／若しくは軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。

本明細書で使用するとき、用語「ヒト化抗体」とは、抗体の抗原結合特性が保持されるが、人体における抗体の抗原性が低下するように、改変によりヒト抗体への配列相同性を増加させた非ヒト抗体を意味する。

本明細書で使用するとき、用語「キメラ抗体」は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ又は３つ以上の種に由来する抗体を指す。軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、多くの場合、所望の特異性、親和性、及び能力を有する１つの種の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に対応するが、定常領域は、その種における免疫応答の惹起を回避するために、別の種の哺乳動物（例えば、ヒト）に由来する抗体の配列に対応する。

本明細書で使用するとき、用語「多重特異性抗体」は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を指し、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、重複しないか、又は実質的に重複しない。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、多重特異性抗体は、第３、第４、又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。一実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、又は四重特異性抗体分子である。

本明細書で使用するとき、用語「二重特異性抗体」は、２つ以下のエピトープ又は２つ以下の抗原に結合する多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体は、第１のエピトープ（例えば、ＴＲＤＶ２抗原上のエピトープ）に対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメントと、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメントとを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメントと、第２のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメントとを含む。ある実施形態では、第１のエピトープはＴＲＤＶ２に位置し、第２のエピトープはＣＤ３３に位置する。

本明細書で使用するとき、用語「半抗体」は、１つの免疫グロブリン軽鎖に関連する１つの免疫グロブリン重鎖を指す。例示的な半抗体は、配列番号１７に示される。当業者であれば、半抗体がそのフラグメントを包含することができ、例えばラクダ科を起源とする単一の可変ドメインからなる抗原結合ドメインを有することもできることを容易に理解するであろう。

本明細書で使用するとき、用語「ＴＲＤＶ２」は、γδＴ細胞の表面上で発現したときにＴ細胞受容体を形成することができるポリペプチドを指す。ＴＲＤＶ２発現γδＴ細胞は、ヒト胎児で発生する第１のＴ細胞の中にあり、健常成人末梢血細胞において優勢なγδＴ細胞サブセットである。「ＴＲＤＶ２」という用語は、細胞（Ｔ細胞を含む）によって天然に発現されるか、又はそのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡでトランスフェクトされた細胞上に発現され得る、任意のＴＲＤＶ２バリアント、アイソフォーム、及び種相同体を含む。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２は、ヒトＴＲＤＶ２である。例示的なヒトＴＲＤＶ２アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＧ＿００１３３２．３によって提供される。

用語「ＣＤ３３」は、６７ｋＤの１回膜貫通型糖タンパク質を指し、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（シグレック）ファミリーのメンバーである。その正確な生物学的機能は不明であるが、正常な個体では、主に骨髄分化抗原であると考えられ、骨髄前駆細胞、好中球、及びマクロファージでは低発現であるが、循環単球及び樹状細胞では高度に発現する。ＣＤ３３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を発症している患者の８５～９０％の芽球及び白血病幹細胞で検出されている。用語「ＣＤ３３」は、天然で細胞が発現するか、又はそのポリペプチドをコードしている遺伝子若しくはｃＤＮＡでトランスフェクトされた細胞上で発現し得る、任意のＣＤ３３バリアント、アイソフォーム、及び種ホモログを含み、特に断りのない限り、「ＣＤ３３」は、ヒトＣＤ３３である。ヒトＣＤ３３アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＣ０２８１５２．１によって提供される。

本明細書で使用するとき、「ＴＲＤＶ２に特異的に結合する」抗体は、１×１０^－７Ｍ以下、例えば、１×１０^－８Ｍ以下、５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫＤでＴＲＤＶ２、例えばヒトＴＲＤＶ２に結合する抗体を指す。

本明細書で使用するとき、「第２の標的抗原に特異的に結合する」抗体は、１×１０^－７Ｍ以下、例えば、１×１０^－８Ｍ以下、５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫＤで第２の標的抗原に結合する抗体を指す。

本明細書で使用するとき、「腫瘍関連抗原に特異的に結合する」抗原結合ドメイン又は抗原結合フラグメントは、１×１０^－７Ｍ以下、例えば、１×１０^－８Ｍ以下、５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫＤで腫瘍関連抗原に結合する抗原結合ドメイン又は抗原結合フラグメントを指す。

本明細書で使用するとき、「ＣＤ３３に特異的に結合する」抗体は、１×１０^－７Ｍ以下、例えば、１×１０^－８Ｍ以下、５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫＤでＣＤ３３、例えばヒトＣＤ３３に結合する抗体を指す。特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する。他の実施形態では、抗体は、ＣＤ３３のＶドメインに特異的に結合する。

「ＫＤ」という用語は、ＫｄのＫａに対する比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指す。抗体のＫＤ値は、本開示を考慮して当該技術分野における方法を用いて決定することができる。例えば、抗体のＫＤは、表面プラズモン共鳴を使用することによって、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサシステムを使用することによって、又はＯｃｔｅｔＲＥＤ９６システムなどのバイオレイヤインターフェロメトリー技術を使用することによって求めることができる。抗体のＫＤの値が小さいほど、抗体が標的抗原に結合する親和性が高い。

一態様では、ＴＲＤＶ２に結合する抗体が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ヒト化抗体である。

特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及び／又はＶＬＣＤＲ３を含むＴＲＤＶ２抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域を含むＴＲＤＶ２抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域を含むＴＲＤＶ２抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域と、を含むＴＲＤＶ２抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＴＲＤＶ２抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＴＲＤＶ２抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３と、を含むＴＲＤＶ２抗体が、本明細書に提供される。本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、代表的なＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列は、配列表並びに表１及び２に提供される。

いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、二重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。一実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（ａ）ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＴＲＤＶ２ではない第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、を含む。

特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインは、本明細書に記載されるＴＲＤＶ２抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及び／又はＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインは、本明細書に記載されるＴＲＤＶ２抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインは、本明細書に記載されるＴＲＤＶ２抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインは、本明細書に記載されるＴＲＤＶ２抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインは、本明細書に記載されるＴＲＤＶ２抗体のうちのいずれか１つのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインは、本明細書に記載されるＴＲＤＶ２抗体のうちのいずれか１つのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインは、本明細書に記載されるＴＲＤＶ２抗体のうちのいずれか１つのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む。本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、代表的なＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列は、配列表並びに表１及び２に提供される。

いくつかの実施形態では、第２の標的は、ＣＤ３３である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、本明細書に提供されるＣＤ３３抗体のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及び／又はＶＬＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、本明細書に提供されるＣＤ３３抗体のＶＨ領域を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、本明細書に提供されるＣＤ３３抗体のＶＬ領域を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、本明細書に提供されるＣＤ３３抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、本明細書に提供されるＣＤ３３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、本明細書に提供されるＣＤ３３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、本明細書に提供されるＣＤ３３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を有する。本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、代表的なＶＨ及びＶＬアミノ酸配列は、配列表並びに表３及び４に提供される。

いくつかの実施形態では、抗体は、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する。他の実施形態では、ＴＲＤＶ２は、Ｔ細胞の表面上に存在する。

いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、キメラである。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ヒトである。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、単離されたＴＲＤＶ２抗体である。特定の実施形態では、インタクトな抗体であるＴＲＤＶ２抗体が提供される。

いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＩｇＧ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＩｇＧ３抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、カッパ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、多価である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、少なくとも３つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、少なくとも４つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、少なくとも５つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、四重特異性抗体である。

他の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体の抗原結合フラグメントであるＴＲＤＶ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体の抗原結合フラグメントは、機能的フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗原結合フラグメントは、キメラである。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗原結合フラグメントは、ヒトである。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗原結合フラグメントは、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗原結合フラグメントは、単離されたＴＲＤＶ２抗原結合フラグメントである。

いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ダイアボディである。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ’である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）_２である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆｖフラグメントである。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（disulfide stabilized Fv、ｄｓＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、（ｄｓＦｖ）_２である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、単鎖抗体分子（single-chain antibody molecule、ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、単一ドメイン抗体（single domain antibody、ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、１つ又は２つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ラクダ化単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ナノボディである。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、二価ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、抗原に結合するが、完全な抗体構造を含まない抗体フラグメントである。

いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、多重特異性抗体である。他の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、二重特異性抗体である。特定の実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体の抗原結合フラグメントを含む。他の実施形態では、二重特異性抗体は、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体の抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、アゴニスト抗体である。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、Ｔ細胞を活性化させる。他の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、Ｔ細胞を不活化する。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、Ｔ細胞の活性化をブロックする。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、Ｔ細胞の活性を調節する。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、γδＴ細胞を活性化することも、活性を不活化することもない。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、γδＴ細胞である。

特定の実施形態では、γδ Ｔ細胞は、ヒトγδ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ノブインホール（knob-in-hole）形式で本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体を含む、二重特異性抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体は、二重特異性抗体に含まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２二重特異性抗体は、多重特異性抗体に含まれ得る。特定の実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、第１のＴＲＤＶ２エピトープに結合する本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のＴＲＤＶ２エピトープに結合する本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体を含む第２の結合ドメインと、を含み、当該第１のＴＲＤＶ２エピトープ及び当該第２のＴＲＤＶ２エピトープは、同じではない。特定の実施形態では、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｖδ２のエピトープに結合しない。

いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、Ｋａｂａｔ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、例示的な付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、ＩＭＧＴ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、ＡｂＭ付番システムに従う。特定の抗体実施形態の６つのＣＤＲ（ＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３）の例示的なセットが本明細書に提供される。他のＣＤＲセットも企図され、本明細書に提供される抗体実施形態の範囲内である。

いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、多重特異性抗体である。他の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、二重特異性抗体である。特定の実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体の抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、第１のＴＲＤＶ２エピトープに結合する第１の結合ドメインと、第２のＴＲＤＶ２エピトープに結合する第２のドメインとを含み、第１のＴＲＤＶ２エピトープ及び第２のＴＲＤＶ２エピトープは異なる。特定の実施形態では、多重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２ではない標的に結合する第３の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体の第１の結合ドメインは、単一ドメイン抗体でもナノボディでもない。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体の第２の結合ドメインは、単一ドメイン抗体でもナノボディでもない。

特定の態様によれば、（ａ）ＨＣ１と、（ｂ）ＨＣ２と、（ｃ）ＬＣ１と、（ｄ）ＬＣ２とを含む、単離されたＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメントが本明細書に提供される。ＨＣ１は、ＬＣ１に関連し得、ＨＣ２は、ＬＣ２に関連し得る。ＨＣ１は、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み得、ＬＣ１は、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み得る。ＨＣ１及びＬＣ１は、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、第２の抗原に対する結合部位を形成する。第１の抗原に対する結合部位は、例えば、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に結合することができる。

また、抗ＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメント及び第２の標的抗原に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントも、本明細書に提供される。特定の実施形態では、抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、（ａ）ＨＣ１と、（ｂ）ＨＣ２と、（ｃ）ＬＣ１と、（ｄ）ＬＣ２と、を含み、ＨＣ１は、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２は、ＬＣ２に関連する。ＨＣ１は、例えば、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み得、ＬＣ１は、例えば、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し得る。ＨＣ２は、例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み得、ＬＣ２は、例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の標的抗原に対する結合部位を形成し得る。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２は、γδＴ細胞の表面上にある。特定の実施形態では、第２の標的抗原は、第２の標的細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対するＴＲＤＶ２二重特異性抗体の結合及び第２の標的細胞の表面上に存在する第２の標的抗原の結合は、例えば、第２の細胞の死滅をもたらすことができる。

特定の実施形態では、抗ＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＴＲＤＶ２上に位置する第１のエピトープ及び癌細胞の第２のエピトープに結合する。

いくつかの実施形態では、（ａ）ＴＲＤＶ２抗原に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）癌細胞抗原に結合する第２の結合ドメインと、を含む二重特異性抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＴＲＤＶ２抗原に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）癌細胞抗原に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む二重特異性抗体が、本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、（ａ）ＴＲＤＶ２抗原上の第１のエピトープに結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）癌細胞抗原上の第２のエピトープに結合する第２の結合ドメインと、を含む二重特異性抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＴＲＤＶ２抗原上の第１のエピトープに特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）癌細胞抗原上の第２のエピトープに特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む二重特異性抗体が、本明細書に提供される。

本明細書に提供される二重特異性抗体の実施形態では、第１のエピトープは、ＴＲＤＶ２上に位置し、第２のエピトープは、癌細胞の表面上に位置する。いくつかの実施形態では、第２のエピトープは、癌細胞抗原上に位置する。本明細書に提供される二重特異性抗体の実施形態では、第１のエピトープはＴＲＤＶ２上に位置し、第２のエピトープは腫瘍上に位置する。本明細書に提供される二重特異性抗体の実施形態では、第１のエピトープは、ＴＲＤＶ２上に位置し、第２のエピトープは、腫瘍特異的抗原上に位置する。本明細書に提供される二重特異性抗体の実施形態では、第１のエピトープは、ＴＲＤＶ２上に位置し、第２のエピトープは、腫瘍関連抗原上に位置する。本明細書に提供される二重特異性抗体の実施形態では、第１のエピトープは、ＴＲＤＶ２上に位置し、第２のエピトープは、新抗原上に位置する。

いくつかの実施形態では、癌細胞は、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌の細胞である。いくつかの実施形態では、癌は、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌である。いくつかの実施形態では、癌は、副腎癌である。いくつかの実施形態では、癌は、肛門癌である。いくつかの実施形態では、癌は、虫垂癌である。いくつかの実施形態では、癌は、胆管癌である。いくつかの実施形態では、癌は、膀胱癌である。いくつかの実施形態では、癌は、骨癌である。いくつかの実施形態では、癌は、脳癌である。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は、子宮頸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、結腸直腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、食道癌である。いくつかの実施形態では、癌は、胆嚢癌である。いくつかの実施形態では、癌は、妊娠性絨毛性である。いくつかの実施形態では、癌は、頭頸部癌である。いくつかの実施形態では、癌は、ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、癌は、腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、腎臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、白血病である。いくつかの実施形態では、癌は、肝臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は、中皮腫である。いくつかの実施形態では、癌は、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、癌は、神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、癌は、口腔癌である。いくつかの実施形態では、癌は、卵巣癌である。いくつかの実施形態では、癌は、膵臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は前立腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、洞癌である。いくつかの実施形態では、癌は、皮膚癌である。いくつかの実施形態では、癌は、軟部組織肉腫脊髄癌である。いくつかの実施形態では、癌は、胃癌である。いくつかの実施形態では、癌は、精巣癌である。いくつかの実施形態では、癌は、咽頭癌である。いくつかの実施形態では、癌は、甲状腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、子宮癌子宮内膜癌である。いくつかの実施形態では、癌は、膣癌である。いくつかの実施形態では、癌は、外陰部癌である。

いくつかの実施形態では、副腎癌は、副腎皮質性癌腫（ＡＣＣ）、副腎皮質癌、褐色細胞腫、又は神経芽細胞腫である。

いくつかの実施形態では、虫垂癌は、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、粘液性腺癌腫、杯細胞カルチノイド、腸型腺癌腫、又は印環細胞腺癌腫である。

いくつかの実施形態では、膀胱癌は、移行細胞癌腫（ＴＣＣ）、乳頭状癌腫、扁平癌腫、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。

いくつかの実施形態では、妊娠性絨毛性疾患（ＧＴＤ）は、胞状奇胎、妊娠性絨毛性新生物（ＧＴＮ）、絨毛癌腫、胎盤性絨毛性腫瘍（ＰＳＴＴ）、又は類上皮絨毛性腫瘍（ＥＴＴ）である。

いくつかの実施形態では、ホジキンリンパ腫は、古典的ホジキンリンパ腫、結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、リンパ球減少型、又は結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）である。

いくつかの実施形態では、腎臓癌は、腎細胞癌（ＲＣＣ）、明細胞ＲＣＣ、乳頭状ＲＣＣ、嫌色素性ＲＣＣ、集合管ＲＣＣ、未分類ＲＣＣ、移行細胞癌、尿路上皮癌、腎盂癌腫、又は腎肉腫である。

いくつかの実施形態では、白血病は、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。特定の実施形態では、白血病は、ＡＭＬである。

いくつかの実施形態では、肝臓癌は、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、線維層板型ＨＣＣ、胆管細胞癌腫、血管肉腫、又は肝転移である。

いくつかの実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、未分化大細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、前駆Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬＬ）、ヘアリーセル白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、ナチュラルキラー細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アリベール－バザン症候群、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、全身性ＡＬＣＬ、腸症型Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、又は肝脾ガンマ／デルタＴ細胞リンパ腫である。

特定の実施形態では、癌は、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。別の特定の実施形態では、癌は、慢性リンパ球性白血病である。他の実施形態では、癌は、急性Ｂリンパ芽球性白血病である。更に他の実施形態では、癌は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。いくつかの実施形態では、癌は、ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、口腔癌は、扁平上皮細胞癌腫、疣状癌腫、小唾液腺癌腫、リンパ腫、良性口腔腫瘍、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫瘍、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローマ、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫、歯原性腫瘍、白板症、紅板症、扁平上皮細胞口唇癌、基底細胞口唇癌、口癌、歯肉癌、又は舌癌である。

いくつかの実施形態では、皮膚癌は、基底細胞癌、扁平上皮癌腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫（ＫＳ）、日光角化症、皮膚リンパ腫、又は角化棘細胞腫である。

いくつかの実施形態では、軟部組織癌は、血管肉腫、皮膚線維肉腫、上皮性肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、脱分化型脂肪肉腫（ＤＬ）、粘液性／円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬ）、高分化型脂肪肉腫（ＷＤＬ）、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫（ＲＭＳ）、又は滑膜肉腫である。

一実施形態では、癌は、固形癌である。一実施形態では、癌は、固形腫瘍である。一実施形態では、癌は、液性癌である。一実施形態では、癌は、液性腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、血液悪性腫瘍である。特定の実施形態では、癌は、良性である。いくつかの実施形態では、癌は、悪性である。いくつかの実施形態では、癌は、転移性である。

いくつかの実施形態では、第２のエピトープは、癌抗原上に位置する。

いくつかの実施形態では、癌抗原は、アンジオポエチン、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ＰＤＧＦＲα、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＡ３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＴＥＡＰ１、Ｔ細胞受容体ガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、又はＶＥＧＦ－Ｒである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、アンジオポエチンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ２０である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ２２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ３０である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ３３である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ３７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ３８である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ５２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ５６である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ｃＭＥＴである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＥＧＦＲである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＥｐＣＡＭである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＦＧＦである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＦＧＦ－Ｒである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＧＤ２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＨＥＲ２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、メソテリンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ネクチン－４である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＡＰである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＤＧＦＲαである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＳＡである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＳＡ３である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＳＣＡである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＳＭＡである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＲＡＮＫＬである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＬＡＭＦ７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＴＥＡＰ１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＡＲＰである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＲＯＰ２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＶＥＧＦである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＶＥＧＦ－Ｒである。

いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－βＲＩＩ、又はＭＵＣ１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＥＡである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、未成熟ラミニン受容体である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＡＧ－７２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＨＰＶＥ６である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＨＰＶＥ７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＩＮＧ－４である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、カルシウム活性化クロリドチャネル２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、サイクリン－Ｂ１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、９Ｄ７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＥｐＣＡＭである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＥｐｈＡ３である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、テロメラーゼである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、メソテリンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＡＰ－１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、サバイビンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＧＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＸＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＲＡＭＥである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＳＸ－２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｍｅｌａｎ－Ａである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＡＲＴ－１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｇｐ１００である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ｐｍｅｌ１７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、チロシナーゼである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＲＰ－１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＲＰ－２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｐ．ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＣ１Ｒである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、前立腺特異的抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、β－カテニンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＲＣＡ１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＲＣＡ２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤＫ４である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＭＬ６６である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、フィブロネクチンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＡＲＴ－２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ｐ５３である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｒａｓである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＧＦ－βＲＩＩである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＵＣ１である。

γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対するＴＲＤＶ２二重特異性抗体の結合及び癌細胞の表面上に存在する腫瘍関連抗原の結合は、例えば、癌細胞の死滅をもたらすことができる。

本明細書に提供される二重特異性抗体の実施形態では、第１のエピトープは、ＴＲＤＶ２上に位置し、第２のエピトープは、ＣＤ３３上に位置する。特定の実施形態では、第２のエピトープは、ＣＤ３３のＣ２ドメインにおけるエピトープを含む。他の実施形態では、第２のエピトープは、ＣＤ３３のＶドメインにおけるエピトープを含む。特定の実施形態では、第２のエピトープは、ＣＤ３３のＣ２ドメインにおけるエピトープからなる。他の実施形態では、第２のエピトープは、ＣＤ３３のＶドメインにおけるエピトープからなる。

本明細書に提供される二重特異性抗体の実施形態では、第１のエピトープは、ＴＲＤＶ２上に位置し、第２のエピトープは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３、及び／又は他の癌関連免疫抑制因子若しくは表面抗原上に位置する。

また、抗ＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメントと、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合フラグメントとを含む、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントも本明細書に提供される。特定の実施形態では、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、（ａ）ＨＣ１と、（ｂ）ＨＣ２と、（ｃ）ＬＣ１と、（ｄ）ＬＣ２と、を含み、ＨＣ１は、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２は、ＬＣ２に関連する。ＨＣ１は、例えば、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み得、ＬＣ１は、例えば、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し得る。ＨＣ２は、例えば、それぞれ、配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、並びにＨＣＤＲ３を含むことができ、ＬＣ２は、例えば、それぞれ、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、並びにＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ３３に特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位を形成することができる。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２は、γδＴ細胞の表面上にある。特定の実施形態では、ＣＤ３３は、癌細胞（例えば、白血病細胞）の表面上にある。

特定の実施形態では、抗ＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメントと、抗ＣＤ３３Ｃ２ドメイン抗体又はその抗原結合フラグメントと、を含む抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。他の実施形態では、抗ＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメントと、抗ＣＤ３３Ｖドメイン抗体又はその抗原結合フラグメントと、を含む抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。

第２の抗原に対する結合部位は、例えば、癌細胞の表面上に存在する癌抗原に結合することができる。γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対するＴＲＤＶ２二重特異性抗体の結合及び癌細胞の表面上に存在する腫瘍関連抗原の結合は、例えば、癌細胞の死滅をもたらすことができる。

ＣＤ３３の発現は、造血細胞に制限される傾向があるが、正常な造血幹細胞には存在せず、これは、ＣＤ３３がＡＭＬの細胞を標的とすることを示す。

ＣＤ３３の構造は、シアル酸結合を媒介するアミノ末端ＶセットＩｇ様ドメイン（ＣＤ３３のエキソン２によりコードされている）と、その細胞外部分におけるＣ２セットＩｇ様ドメイン（エキソン３及び４によりコードされている）からなる（Ｌａｓｚｌｏｅｔａｌ．，２０１６）。ＣＤ３３ＲＮＡのオルタナティブスプライシングにより、ＶセットＩｇ様ドメインは欠失しているが、Ｃ２セットＩｇ様ドメインは保持されている、細胞表面で発現するより短いアイソフォームが生じ得る（Ｌａｓｚｌｏ，Ｅｓｔｅｙ，＆Ｗａｌｔｅｒ，２０１４；Ｌａｓｚｌｏｅｔａｌ．，２０１６）。一塩基多型（ＳＮＰ）ｒｓ１２４５９４１９が、ＡＭＬ集団の約５０％に存在し、ＣＤ３３のエキソン２のスキッピングを引き起こし、その結果、ＣＤ３３のＶドメインが欠失することが最近の研究（Ｌａｍｂａｅｔａｌ．，２０１７）によって示されるまで、このスプライシングプロセスの生物学的関連性はほとんど不明であった。

本明細書に提供されるＴＲＤＶ２多重特異性抗体に使用することができる追加のＣＤ３３抗体としては、ＡＭＧ３３０及びＡＭＧ６７３（Ａｍｇｅｎ；Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈｅｔａｌ．，２０１４）、ＡＭＶ５６４（Ａｍｐｈｉｖｅｎａ；米国特許第９，８０３，０２９号）、ＩＭＧＮ７７９（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ；米国特許第９，３５９，４４２号）、ＢＩ８３６８５８（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ；Ｖａｓｕｅｔａｌ．，２０１６）、アクチマブ（ＡｃｔｉｎｉｕｍＰｈａｒｍａ）、ゲムツズマブ（Ｇｏｄｗｉｎ，Ｇａｌｅ，＆Ｗａｌｔｅｒ，２０１７）、及びＳＧＮ３３Ａ（ＳｅａｔｔｌｅＧｅｎｅｔｉｃｓ）が挙げられる。本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、ＡＭＧ３３０のＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３を含む。本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、ＡＭＧ６７３のＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３を含む。本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、ＡＭＶ５６４のＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３を含む。本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、ＩＭＧＮ７７９のＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３を含む。本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、ＢＩ８３６８５８のＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３を含む。本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、アクチマブのＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３を含む。本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、ゲンツジマブのＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３を含む。本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第２の結合ドメインは、ＳＧＮ３３ＡのＶＨＣＤＲ１～３及びＶＬＣＤＲ１～３を含む。

ＴＲＤＶ２×ＣＤ３３多重特異性抗体は、本明細書に提供される任意のＴＲＤＶ２抗体を含む第１の結合ドメインを含み得る。ＴＲＤＶ２×ＣＤ３３多重特異性抗体は、本明細書に提供される任意のＣＤ３３抗体を含む、任意のＣＤ３３抗体を含む第２の結合ドメインを更に含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、本発明に記載されるものなどの、制御されたＦａｂアーム交換を介して得られたダイアボディ、クロスボディ、又は二重特異性抗体である。

いくつかの実施形態では、二重特異性抗体には、ヘテロ二量体形成を強制する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、組換えＩｇＧ様二重標的化分子（この分子の２つの側面はそれぞれ、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部を含む）、ＩｇＧ融合分子（全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部に融合されている）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化されたダイアボディが、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合されている）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂフラグメントが一緒に融合されている）、異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるダイアボディ又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている、ＳｃＦｖ及びダイアボディベースの並びに重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子には、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（ＴｒｉｏｎＰｈａｒｍａ／ＦｒｅｓｅｎｉｕｓＢｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤＳｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（ＧｅｎｍａｂＡ／Ｓ）が挙げられる。

いくつかの実施形態において、組換えＩｇＧ様二重標的化分子としては、ＤｕａｌＴａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅＡｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄＭａｂｓ（ＫａｒｍａｎｏｓＣａｎｃｅｒＣｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。

いくつかの実施形態において、ＩｇＧ融合分子としては、ＤｕａｌＶａｒｉａｂｌｅＤｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅＢｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／ＥｌｉＬｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（ＢｉｏｇｅｎＩｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合分子には、ＳｃＦｖ／Ｆｃ融合体（ＡｃａｄｅｍｉｃＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（ＥｍｅｒｇｅｎｔＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、二重親和性リターゲティング技術（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及び二重（ＳｃＦｖ）_２－Ｆａｂ（ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＡｎｔｉｂｏｄｙＭｅｄｉｃｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）が含まれ得る。

いくつかの実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体としては、Ｆ（ａｂ）_２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ又はＢｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、ＢｉｖａｌｅｎｔＢｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ抗体、ダイアボディに基づく抗体、及びドメイン抗体には、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、二重親和性再標的技術（ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、一本鎖ダイアボディ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ様抗体（ＡＩＴ、ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合体（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（ＥｐｉｇｅｎＢｉｏｔｅｃｈ）、二重標的ナノボディ（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的重鎖のみドメイン抗体が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書に提供される完全長二重特異性抗体は、無細胞環境でインビトロにおいて又は共発現を使用して異なる特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体を形成するのに好都合になるように、各半分子において重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することによって、例えば、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を用いて生成することができる。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。単一特異性親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は、低減される。単一特異性親抗体のうち１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異性親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりヘテロ二量体形成を有利にするように操作され得る。得られる生成物は、それぞれが異なるエピトープ、即ち、ＴＲＤＶ２上のエピトープ及び第２の標的抗原（例えば、ＴＲＤＶ２ではない）上のエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。多重特異性抗体を作製する他の方法は、既知であり、企図される。

本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を指す。

本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を指す。本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。

他の箇所で言及した通り、いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（ＴｒｉｏｎＰｈａｒｍａ／ＦｒｅｓｅｎｉｕｓＢｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的適合（Ｃｈｕｇａｉ，Ａｍｇｅｎ，ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ，Ｏｎｃｏｍｅｄ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、鎖交換操作ドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤＳｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（ＧｅｎｍａｂＡ／Ｓ）などの設計を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２多重特異性抗体は、ノブアンドホールフォーマットである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２多重特異性抗体は、ＤｕｏＢｏｄｙフォーマットである。

Ｔｒｉｏｍａｂｑｕａｄｒｏｍａ技術を使用して、本明細書に提供される完全長二重特異性抗体を生成することができる。Ｔｒｉｏｍａｂ技術は、２つの親キメラ抗体、ＩｇＧ２ａを有する１つの親ｍＡｂと、ラットＩｇＧ２ｂ定常領域を有する第２の親ｍＡｂとの間のＦａｂアーム交換を促進し、キメラ二重特異性抗体をもたらす。

「ノブインホール」ストラテジ（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照）を使用して、完全長二重特異性抗体を生成することができる。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するように、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）。

ＣｒｏｓｓＭＡｂ技術を使用して、本明細書に提供される完全長二重特異性抗体を生成することができる。ＣｒｏｓｓＭＡｂは、「ノブ－イン－ホール」ストラテジを利用してＦａｂアーム交換を促進することに加えて、得られる二重特異性抗体に確実に正しく軽鎖対を形成させるために、半アームのうちの一方に、交換されたＣＨ１及びＣＬドメインを有する（例えば、米国特許第８，２４２，２４７号を参照）。

他のクロスオーバーストラテジを使用して、一方又は両方のアームのいずれかにおいて、二重特異性抗体の重鎖と軽鎖との間で又は重鎖内で可変若しくは定常ドメイン、又は両ドメインを交換することによって、本明細書に提供される完全長二重特異性抗体を生成することができる。これらの交換としては、例えば、国際公開第２００９／０８０２５４号、同第２００９／０８０２５１号、同第２００９／０１８３８６号、及び同第２００９／０８０２５２号に記載されるＶＨ－ＣＨ１とＶＬ－ＣＬ、ＶＨとＶＬ、ＣＨ３とＣＬ、及びＣＨ３とＣＨ１が挙げられる。

他のストラテジ、例えば、１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、同第２００９／０１８２１２７号、同第２０１０／０２８６３７号、又は同第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用され得る。他のストラテジでは、ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は同第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５ＡＹ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６ＶＫ４０９ＦＹ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５ＡＹ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）により促進され得る。

ＬＵＺ－Ｙ技術を利用して、本明細書に提供される二重特異性抗体を生成することができる。この技術では、Ｗｒａｎｉｋｅｔａｌ．，（２０１２）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２８７（５２）：４２２２１－９に記載の通り、精製後に除去される親ｍＡｂからのヘテロ二量体の組み立てを駆動するために、ロイシンジッパーをＣＨ３ドメインのＣ末端に付加する。

ＳＥＥＤｂｏｄｙ技術を利用して、本明細書に提供される二重特異性抗体を生成することができる。ＳＥＥＤｂｏｄｙは、米国特許出願公開第２００７０２８７１７０号に記載の通りヘテロ二量体化を促進するためにＩｇＡ残基で置換された選択ＩｇＧ残基を、その定常ドメインに有する。

上記の方法に加えて、本明細書に提供される二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従って、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させるための還元条件下において２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することによって、無細胞環境でインビトロにおいて生成することができる。この方法において、第１の単一特異性二価抗体及び第２の単一特異性二価抗体は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおいてある特定の置換を有するように操作されるが、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるために十分な還元条件下において共にインキュベーションされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻され得る。使用することができる例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びベータ－メルカプトエタノールであり、例えば、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度で、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えばｐＨ７．０又はｐＨ７．４で、少なくとも９０分間のインキュベートが使用され得る。

いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２は、γδＴ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２は、γδＴ細胞の表面上に存在し、癌細胞の表面上で発現する抗原は、癌抗原である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が、γδ Ｔ細胞の表面上のＴＲＤＶ２及び癌細胞の表面上の抗原に結合すると、癌細胞は死滅する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。いくつかの実施形態では、γδＴエフェクター細胞及び癌抗原を発現している標的細胞の混合物を用いて、ＥＣ_５０を評価する。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約５：１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１：１～約２：１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。

特定の実施形態では、抗ＴＲＤＶ２抗体又はその抗原結合フラグメントは、それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、及び６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合フラグメントは、それぞれ、配列番号９、１０、１１、１２、１３、及び１４のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、リンカーを含む。特定の実施形態では、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、天然アミノ酸を含む。リンカーに含まれ得る例示的なアミノ酸は、Ｇｌｙ、ＳｅｒＰｒｏ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、及びＴｈｅである。いくつかの実施形態では、リンカーは、標的（例えば、ＴＲＤＶ２）への結合などの所望の活性を保持するように、互いに対して正確な高次構造を形成するような方法でＶＨ及びＶＬを連結させるのに適切な長さを有する。

特定の実施形態では、リンカーは、約５～５０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～４０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～３５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～３０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～２５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～２０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１５～２０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、９アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１１アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１２アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１３アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１４アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１９アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２１アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２２アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２３アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２４アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２９アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３１アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３２アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３３アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３４アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３９アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、４０個のアミノ酸長である。使用することができる例示的なリンカーは、Ｇｌｙリッチリンカー、Ｇｌｙ及びＳｅｒ含有リンカー、Ｇｌｙ及びＡｌａ含有リンカー、Ａｌａ及びＳｅｒ含有リンカー、並びに他の柔軟なリンカーである。

本明細書で特定されるＶＨ及びＶＬドメインのいずれか（例えば、ＴＲＤＶ２に結合するもの）を操作してｓｃＦｖフォーマットにしてもよい。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖフォーマットは、ＶＨ－リンカー－ＶＬ配向である。他の実施形態では、ｓｃＦｖフォーマットは、ＶＬ－リンカー－ＶＨ配向である。本明細書で特定されたＶＨ及びＶＬドメインのいずれかを使用してｓｃ（Ｆｖ）２構造を生成することもできる。いくつかの実施形態では、ｓｃ（Ｆｖ）２構造は、ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨである。いくつかの実施形態では、ｓｃ（Ｆｖ）２構造は、ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬである。いくつかの実施形態では、ｓｃ（Ｆｖ）２構造は、ＶＨ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＬである。いくつかの実施形態では、ｓｃ（Ｆｖ）２構造は、ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬである。いくつかの実施形態では、ｓｃ（Ｆｖ）２構造は、ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨである。いくつかの実施形態では、ｓｃ（Ｆｖ）２構造は、ＶＬ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＨである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）、及びＶＬを含む（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、Ｌ１、及びＶＨを含む（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、２つのリンカーを含む。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、３つのリンカーを含む。更に他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、４つ以上のリンカーを含む。特定の実施形態では、抗体は、その抗原結合フラグメントである。

別の特定の態様によれば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity、ＡＤＣＣ）を誘導する、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、インビトロでＡＤＣＣを誘導することができる。

特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、１：１のエフェクター対標的細胞の比でインビトロにおいて評価したとき、約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０でインビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。そのような一実施形態では、二重特異性抗体は、γδＴエフェクター細胞とＫａｓｕｍｉ３ＡＭＬ標的細胞との混合物を用いてインビトロにおいて評価したときに約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０を示す、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであり、そのような細胞は、約１：１のエフェクター対標的細胞の比で存在し、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。

別の実施形態では、二重特異性抗体は、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、（ａ）ＨＣ１と、（ｂ）ＨＣ２と、（ｃ）ＬＣ１と、（ｄ）ＬＣ２と、を含み、ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２が、それぞれ、配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２が、それぞれ、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ３３に特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、当該抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、γδＴエフェクター細胞とＫａｓｕｍｉ３ＡＭＬ標的細胞との混合物を用いてインビトロにおいて評価したときに約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０を示し、そのような細胞は、約１：１のエフェクター対標的細胞の比で存在し、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、約３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する、単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントである。

特定の実施形態では、第２の抗原結合部位は、ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する。他の実施形態では、第２の抗原結合部位は、ＣＤ３３のＶドメインに特異的に結合する。

特定の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１０００ｐＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１９０ｐＭ未満、約１８０ｐＭ未満、約１７０ｐＭ未満、約１６０ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１４０ｐＭ未満、約１３０ｐＭ未満、約１２０ｐＭ未満、約１１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、又は約１０ｐＭ未満である。

特定の実施形態では、エフェクター対標的細胞の比は、例えば、０．０１：１、０．０２：１、０．０３：１、０．０４：１、０．０５：１、０．０６：１、０．０７：１、０．０８：１、０．０９：１、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、又は１０：１であり得る。

特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントの濃度は、約０．０００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０００５、約０．００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０１ｎｇ／ｍＬ、約０．０２ｎｇ／ｍＬ、約０．０３ｎｇ／ｍＬ、約０．０４ｎｇ／ｍＬ、約０．０５ｎｇ／ｍＬ、約０．０６ｎｇ／ｍＬ、約０．０７ｎｇ／ｍＬ、約０．０８ｎｇ／ｍＬ、約０．０９ｎｇ／ｍＬ、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約約３０ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、又は約１０００ｎｇ／ｍＬである。

本明細書に記載のいくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体の免疫エフェクター特性は、当業者に既知の技術によるＦｃの改変を通して増強又はサイレンシングすることができる。例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（complement dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）、ＡＤＣＣ、抗体依存性細胞媒介性食作用（antibody-dependent cell-mediated phagocytosis、ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）のダウンレギュレーションなどのＦｃエフェクター機能は、これらの活性を担うＦｃの残基を改変することによって提供及び／又は制御することができる。

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現している非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞が媒介する反応を指す。

ＡＤＣＣを誘導する抗体の能力は、そのオリゴ糖成分を操作することにより増強され得る。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７においてＮ－グリコシル化される。ここで、グリカンの大部分は、公知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆの形態である。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞により生成される抗体は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に結合した二分岐の複雑なタイプのオリゴ糖からコアフコースを除去すると、抗原結合もＣＤＣ活性も変化させることなく、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ結合を介して抗体のＡＤＣＣが増強される。このようなＡｂは、二分岐の複雑なタイプのＦｃオリゴ糖を有する、比較的高度に脱フコシル化された抗体の発現を成功させることが報告されている様々な方法、例えば、培養浸透圧の制御（Ｋｏｎｎｏｅｔａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６４：２４９－６５，２０１２）、宿主細胞株としてのバリアントＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適用（Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３－２６７４０，２００２）、宿主細胞株としてのバリアントＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉｅｒｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０；印刷に先立つ電子公開、ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、宿主細胞株としてのラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の適用（Ｓｈｉｎｋａｗａｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：３４６６３４７３，２００３）、α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉｅｔａｌ．，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ８８：９０１９０８，２００４）、又はβ－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ及びゴルジα－マンノシダーゼＩＩ若しくは強力なアルファ－マンノシダーゼＩ阻害剤であるキフネンシンの共発現（Ｆｅｒｒａｒａｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２８１：５０３２－５０３６，２００６、Ｆｅｒｒａｒａｅｔａｌ．，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ９３：８５１－８６１，２００６；Ｘｈｏｕｅｔａｌ．，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ９９：６５２－６５，２００８）を使用して達成され得る。

本明細書に記載のいくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体により惹起されるＡＤＣＣは、抗体Ｆｃにおける特定の置換によっても増強され得る。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されたように、アミノ酸位置２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０（ＥＵインデックスに従った残基番号付け）における置換である。

別の特定の態様によれば、単離された抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、キメラである抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。

別の特定の態様によれば、単離された抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、ヒトであるか又はヒト化されている抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ヒトである。他の実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒトである。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ヒト化されている。他の実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒト化されている。他の実施形態では、第１の結合ドメインがヒトであり、かつ第２の結合ドメインがヒト化されている。他の実施形態では、第１の結合ドメインがヒト化されており、かつ第２の結合ドメインがヒトである。

いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ３抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＴＲＤＶ２抗原結合フラグメントである。

特定の実施形態では、本明細書に提供される二重特異性抗体は、多重特異性抗体の一部である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２抗原に結合する第１の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される通り、多重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２抗原に結合する第１の結合ドメインを含み、第２の標的抗原に結合する第２の結合ドメインを含む。特定の実施形態では、多重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２抗原、第２の標的抗原、及び１つ以上の追加の抗原に結合する。本明細書に提供される様々な抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、所与の抗原のエピトープに結合する。

一態様では、（ａ）ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）癌細胞の表面上の抗原に結合する第２の結合ドメインと、を含む多重特異性抗体が提供される。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、例示的な付番システムに従う。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＴＲＤＶ２抗原に結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＴＲＤＶ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、ＴＲＤＶ２の抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、ＴＲＤＶ２のエピトープに対する結合部位を形成する。

いくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２は、Ｔ細胞の表面上に存在する。

いくつかの実施形態では、癌細胞の表面上の抗原は、アンジオポエチン、ＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、ＰＡＰ、ＰＤＧＦＲα、ＰＳＡ、ＰＳＡ３、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＲＰ、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、又はＶＥＧＦ－Ｒである。

いくつかの実施形態では、癌細胞の表面上の抗原は、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、又はＢＲＣＡ１である。

いくつかの実施形態では、癌細胞の表面上の抗原は、ＣＤ３３である。

いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、それぞれ配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、それぞれ配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、例示的な付番システムに従う。

いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１と、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１と、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２と、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。

いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。

いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、ＣＤ３３の抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、ＣＤ３３のエピトープを形成する。

いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、癌細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、多価である、第２の結合ドメインは、多価である、又は第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、多価である。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、多価である。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、多価である。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、多価である。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、少なくとも２つの抗原に結合することができる、又は第２の結合ドメインは、少なくとも２つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、少なくとも２つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、少なくとも２つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、少なくとも３つの抗原に結合することができる、又は第２の結合ドメインは、少なくとも３つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、少なくとも３つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、少なくとも３つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、少なくとも４つの抗原に結合することができる、又は第２の結合ドメインは、少なくとも４つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、少なくとも４つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、少なくとも４つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、少なくとも５つの抗原に結合することができる、又は第２の結合ドメインは、少なくとも５つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、少なくとも５つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、少なくとも５つの抗原に結合することができる。

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、四重特異性抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの実施形態では、抗体は、カッパ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。

別の態様では、Ｔ細胞の表面上でＴＲＤＶ２に結合することができる第１の手段と、癌抗原に結合することができる第２の手段と、を含む多重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、γδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、癌細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。

別の一般的な態様では、本明細書に提供されるモノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントをコードしている単離核酸が、本明細書に提供される。別の一般的な態様では、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントをコードしている単離核酸が、本明細書に提供される。タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、タンパク質のコード配列を変更する（例えば、置換する、欠失させる、挿入するなど）ことができることが、当業者には理解されるであろう。したがって、タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、本明細書に提供されるモノクローナル抗体及び／又は二重特異性抗体をコードしている核酸配列を変更できることが当業者には理解されるであろう。

別の一般的な態様では、モノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントをコードしている単離核酸を含むベクターが、本明細書に提供される。別の一般的な態様では、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントをコードしている単離核酸を含むベクターが、本明細書に提供される。本開示を鑑みると、当業者に知られている任意のベクター、例えばプラスミド、コスミド、ファージベクター、又はウイルスベクターなどを使用することができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、例えばプラスミドなどの組換え発現ベクターである。ベクターは、例えば、プロモータ、リボソーム結合エレメント、ターミネータ、エンハンサ、選択マーカー、及び複製起点という、発現ベクターの従来の機能を確立するための任意のエレメントを含むことができる。プロモータは、常時発現型、誘導型、又は再形成可能なプロモータであり得る。細胞に核酸を送達することができる多数の発現ベクターが当該技術分野において知られており、細胞内で抗体又はその抗原結合フラグメントを生成するために、本明細書で使用することができる。従来のクローニング技術又は人工遺伝子合成を使用して、本明細書に提供される実施形態による組換え発現ベクターを生成することができる。このような技術は、本開示の観点から、当業者に周知である。

別の一般的な態様では、本明細書に提供されるモノクローナル抗体及び／若しくは二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントをコードしている単離核酸を含む宿主細胞が、本明細書に提供される。本開示の観点から、当業者に知られている任意の宿主細胞を、本明細書に提供される抗体又はその抗原結合フラグメントの組換え発現に使用することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、大腸菌（E. coli）ＴＧ１若しくはＢＬ２１細胞（例えば、ｓｃＦｖ又はＦａｂ抗体の発現の場合）、ＣＨＯ－ＤＧ４４若しくはＣＨＯ－Ｋ１細胞、又はＨＥＫ２９３細胞（例えば、完全長ＩｇＧ抗体の発現の場合）である。特定の実施形態によれば、組み換え発現ベクターは、組み換え核酸が効果的に発現するように宿主細胞ゲノムに安定的に組み込まれる、化学的トランスフェクション、熱ショック、又はエレクトロポレーションなどの従来の方法によって宿主細胞に形質転換される。

別の態様では、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体をコードしている核酸が提供される。別の態様では、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体をコードしている核酸を含むベクターが提供される。別の態様では、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体をコードしている核酸を含むベクターを含む宿主細胞が提供される。別の態様では、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体をコードしている核酸を含むベクターと、そのためのパッケージと、を含むキットが提供される
別の態様では、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物が提供される。

別の一般的な態様では、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体を含む医薬組成物を生成する方法であって、当該多重特異性抗体を医薬的に許容される担体と合わせて医薬組成物を得ることを含む方法が提供される。

別の一般的な態様では、本明細書に開示される二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを生成する方法が、本明細書に提供される。方法は、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントをコードしている核酸を含む細胞を、本明細書に開示される二重特異性又はその抗原結合フラグメントを生成する条件下で培養することと、細胞又は細胞培養物（例えば、上清）から当該抗体又はその抗原結合フラグメントを回収することと、を含む。発現した抗体又はその抗原結合フラグメントを細胞から収集し、当該技術分野において公知の従来の技術に従って、そして、本明細書に記載の通り精製することができる。

医薬組成物
別の一般的な態様では、単離された二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。本明細書で使用するとき、用語「医薬組成物」は、医薬的に許容される担体と一緒に本明細書に提供される抗体を含む製造物を意味する。本明細書に提供される抗体及び当該抗体を含む組成物は、本明細書で言及される治療用途のための医薬の製造においても有用である。

本明細書で使用するとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野において周知の他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書で使用するとき、用語「医薬的に許容される担体」とは、本明細書に提供される組成物の効果にも本明細書に提供される組成物の生物活性にも干渉しない非毒性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示を考慮して、抗体の医薬組成物での使用に好適ないずれの医薬的に許容される担体も、本明細書で使用され得る。

医薬的に許容される担体を有する医薬的活性成分の製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（例えば、第２１版（２００５年）及びそれ以降の任意の版）など、当該技術分野において既知である。追加成分の非限定的な例としては、緩衝剤、希釈剤、溶媒、張度調節剤、防腐剤、安定剤、及びキレート剤が挙げられる。１つ又は２つ以上の医薬的に許容される担体が、本明細書に提供される医薬組成物の製剤化において使用され得る。

一実施形態では、医薬組成物は、液体製剤である。例示的な液体製剤は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。液体製剤は、溶液、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、ゲルなどを含んでいてよい。水性製剤は、典型的には、少なくとも５０重量％の水、又は少なくとも６０重量％、７０重量％、７５重量％、８０重量％、８５重量％、９０重量％、又は少なくとも９５重量％の水を含む。

一実施形態では、医薬組成物は、例えば、注射デバイス（例えば、シリンジ又は注入ポンプ）を介して注射することができる注射液として製剤化され得る。注射は、例えば、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、硝子体内に、又は静脈内に送達され得る。

別の実施形態では、医薬組成物は、そのまま使用することができるか、又は医師若しくは患者が使用前に溶媒及び／若しくは希釈剤を加える固体製剤、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物である。固体剤形としては、圧縮錠剤及び／又はコーティング錠剤などの錠剤、並びにカプセル剤（例えば、硬又は軟ゼラチンカプセル）を挙げることができる。医薬組成物はまた、例えば、サッシェ、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチ、又は再構成用の粉末の形態であってもよい。

剤形は即時放出であってもよく、その場合、水溶性若しくは水分散性担体を含んでいてよく、又は剤形は遅延放出、持続放出、若しくは調節放出であってもよく、その場合、胃腸管若しくは皮下における剤形の溶解速度を制御する非水溶性ポリマーを含んでいてよい。

他の実施形態では、医薬組成物は、鼻腔内に、口内に、又は舌下に送達され得る。

水性製剤のｐＨは、ｐＨ３～ｐＨ１０であり得る。一実施形態では、製剤のｐＨは、約７．０～約９．５である。別の実施形態では、製剤のｐＨは、約３．０～約７．０である。

別の実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤を含む。緩衝剤の非限定的な例としては、アルギニン、アスパラギン酸、ビシン、シトレート、リン酸一水素二ナトリウム、フマル酸、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リジン、マレイン酸、リンゴ酸、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、コハク酸塩、酒石酸、トリシン、及びトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン、及びこれらの混合物が挙げられる。緩衝剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的な緩衝剤の各１つを含む医薬組成物は、代替実施形態を構成する。

別の実施形態では、医薬組成物は、防腐剤を含む。防腐剤の非限定的な例としては、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、ブロノポール、ブチル４－ヒドロキシベンゾエート、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロヘキシジン、クロルフェネシン、ｏ－クレゾール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、エチル４－ヒドロキシベンゾエート、イミド尿素、メチル４－ヒドロキシベンゾエート、フェノール、２－フェノキシエタノール、２－フェニルエタノール、プロピル４－ヒドロキシベンゾエート、デヒドロ酢酸ナトリウム、チオメロサール、及びこれらの混合物が挙げられる。防腐剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的な防腐剤の各１つを含む医薬組成物は、代替実施形態を構成する。

別の実施形態では、医薬組成物は、等張剤を含む。等張剤の非限定的な例としては、塩（塩化ナトリウムなど）、アミノ酸（グリシン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、及びスレオニンなど）、アルジトール（グリセロール、１，２－プロパンジオールプロピレングリコールなど）、１，３－プロパンジオール、及び１，３－ブタンジオール）、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、並びにこれらの混合物が挙げられる。等張剤の別の例としては、糖が挙げられる。糖の非限定的な例は、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、アルファ及びベータ－ＨＰＣＤ、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウムを含む、単糖類、二糖類、若しくは多糖類、又は水溶性グルカンを含み得る。等張剤の別の例は、糖アルコールであり、用語「糖アルコール」は、少なくとも１つの－ＯＨ基を有するＣ（４～８）炭化水素として定義される。糖アルコールの非限定的な例としては、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールが挙げられる。等張剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的な等張剤の各１つを含む医薬組成物は、代替実施形態を構成する。

別の実施形態では、医薬組成物は、キレート剤を含む。キレート剤の非限定的な例としては、クエン酸、アスパラギン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の塩、及びこれらの混合物が挙げられる。キレート剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的なキレート剤の各１つを含む医薬組成物は、代替実施形態を構成する。

別の実施形態では、医薬組成物は、安定剤を含む。安定剤の非限定的な例としては、１種類以上の凝集阻害剤、１種類以上の酸化阻害剤、１種類以上の界面活性剤、及び／又は、１種類以上のプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。

別の実施形態では、医薬組成物は、安定剤を含み、当該安定剤は、カルボキシ／ヒドロキシセルロース及びその誘導体（ＨＰＣ、ＨＰＣ－ＳＬ、ＨＰＣ－Ｌ、及びＨＰＭＣなど）、シクロデキストリン、２－メチルチオエタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ３３５０など）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、塩（塩化ナトリウムなど）、硫黄含有物質（例えばモノチオグリセロール）、又はチオグリコール酸である。安定剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的な安定剤の各１つを含む医薬組成物は、代替実施形態を構成する。

更なる実施形態では、医薬組成物は、１種類若しくは２種類以上の界面活性剤、例えば、界面活性剤、少なくとも１種類の界面活性剤、又は２種類の異なる界面活性剤を含む。「界面活性剤」という用語は、水溶性（親水性）部分及び脂溶性（親油性）部分から構成される任意の分子又はイオンを指す。界面活性剤は、例えば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、及び／又は双性界面活性剤からなる群から選択され得る。界面活性剤は、個々に又は全体に、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的な界面活性剤の各１つを含む医薬組成物は、代替実施形態を構成する。

更なる実施形態では、医薬組成物は、１つ以上のプロテアーゼ阻害剤、例えば、ＥＤＴＡ、及び／又はベンズアミジン塩酸（ＨＣｌ）などを含む。プロテアーゼ阻害剤は、個々に又は全体に、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的なプロテアーゼ阻害剤の各１つを含む医薬組成物は、代替実施形態を構成する。

別の一般的な態様では、本明細書に提供される二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を生成する方法であって、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを医薬的に許容される担体と合わせて医薬組成物を得ることを含む方法が、本明細書に提供される。

代替結合剤
ＴＲＤＶ２抗体が本明細書に例示されるが、ＴＲＤＶ２に結合する他の分子（ＴＲＤＶ２分子）も企図されることが理解される。そのようなＴＲＤＶ２分子は、代替結合剤を含み、本明細書に提供される抗体の等価物を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＴＲＤＶ２分子は、非免疫グロブリン結合剤を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、非免疫グロブリン結合剤を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、非免疫グロブリン結合剤を含む。

特定の実施形態では、そのような非免疫グロブリン結合剤は、本明細書に例示される同じ標的に結合することができる。例えば、いくつかの実施形態では、非免疫グロブリン結合剤は、本明細書に開示される抗体と同じエピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、非免疫グロブリン結合剤は、競合結合アッセイにおいて本開示の抗体を置き換える又は本開示の抗体によって置き換えられる剤として同定される。これらの代替結合剤は、例えば、当該技術分野において既知の操作されたタンパク質スカフォールドのいずれかを含み得る。そのようなスカフォールドとしては、例えば、リガンド結合部位を形成する４つの超可変ループを支持する剛性ベータバレルを特徴とするタンパク質構造である、リポカリンスカフォールドに基づく抗カリンが挙げられる。新規の結合特異性は、機能的ディスプレイ及び誘導選択（guided selection）と組み合わせて、ループ領域における標的ランダム突然変異誘発によって操作され得る（例えば、Ｓｋｅｒｒａ，２００８，ＦＥＢＳＪ．２７５：２６７７－８３を参照）。他の好適なスカフォールドとしては、例えば、ヒトフィブロネクチンＩＩＩの１０番目の細胞外ドメインに基づくアドネクチン又はモノボディ（例えば、ＫｏｉｄｅａｎｄＫｏｉｄｅ，２００７，ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５２：９５－１０９を参照）、ブドウ球菌タンパク質ＡのＺドメインに基づくアフィボディ（例えば、Ｎｙｇｒｅｎｅｔａｌ．，２００８，ＦＥＢＳＪ．２７５：２６６８－７６を参照）、アンキリン反復タンパク質に基づくＤＡＲＰｉｎ（例えば、Ｓｔｕｍｐｐｅｔａｌ．，２００８，Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ１３：６９５－７０１を参照）、ヒトＦｙｎタンパク質キナーゼのＳＨ３ドメインに基づくフィノマー（例えば、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉｅｔａｌ．，２００７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：３１９６－２０４を参照）、スルフォロブス・アシドラリウス（Sulfolobus acidolarius）のＳａｃ７ｄに基づくアフィチン（例えば、Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋｅｔａｌ．，２００８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８３：１０５８－６８を参照）、ヒトｙ－Ｂ－クリスタリンに基づくアフィリン（例えば、Ｅｂｅｒｓｂａｃｈｅｔａｌ．，２００７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７２：１７２－８５を参照）、膜受容体タンパク質のＡドメインに基づくアビマー（例えば、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎｅｔａｌ．，２００５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１５５６－６１を参照）、システインリッチノッチンペプチド（例えば、Ｋｏｌｍａｒ，２００８，ＦＥＢＳＪ．２７５：２６８４－９０を参照）、及び操作されたクニッツ型阻害剤（例えば、ＮｉｘｏｎａｎｄＷｏｏｄ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｄｅｖ．９：２６１－６８）を挙げることができる。概説については、例えば、ＧｅｂａｕｅｒａｎｄＳｋｅｒｒａ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：２４５－５５を参照されたい。

使用方法
また、癌細胞の表面上の抗原をターゲティングする方法であって、本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントに当該癌細胞を曝露することを含む方法も提供される。また、癌細胞の表面上の抗原をターゲティングする方法であって、本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物に当該癌細胞を曝露することを含む方法も提供される。

ＴＲＤＶ２又は癌抗原に結合する二重特異性抗体及びその抗原結合フラグメントの機能的活性は、当該技術分野において既知の方法により、そして、本明細書に記載の通り特性評価され得る。ＴＲＤＶ２又は癌抗原に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを特性評価する方法としては、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、及びＯＣＴＥＴＲＥＤ分析を含む親和性及び特異性アッセイ、ＦＡＣＳによって癌細胞に対する抗体の結合を検出するための結合アッセイ、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に対する抗体の結合を検出するための結合アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態によれば、ＴＲＤＶ２又は癌抗原に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを特性評価する方法としては、以下に記載するものが挙げられる。

一態様では、ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を癌細胞に方向付ける方法であって、当該γδＴ細胞を本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体と接触させることを含み、当該接触させることによって当該γδＴ細胞を当該癌細胞に方向付ける方法が提供される。別の態様では、細胞表面上で癌抗原を発現している癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、当該癌細胞を本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体と接触させることを含み、当該癌細胞を医薬組成物と接触させることによって、当該癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態では、癌細胞は、多重特異性抗体と接触している間、ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞の存在下にある。

一態様では、対象における癌細胞を排除する方法であって、有効量の本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体を当該対象に投与することを含む方法が提供される。別の態様では、対象における癌を治療する方法であって、有効量の本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体を当該対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、その方法を必要とする対象である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

一態様では、ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を活性化する方法であって、当該γδＴ細胞を本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体と接触させることを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、接触させることは、ＴＲＤＶ２を発現する対照γδ Ｔ細胞と比較して、ＣＤ６９、ＣＤ２５、及び／又はグランザイムＢ発現の増加をもたらす。

Ｖδ２発現γδＴ癌細胞を癌細胞に方向付ける方法も提供される。方法は、Ｖδ２発現γδＴ細胞を本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることを含み得、当該抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を癌に方向付ける。また、ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を癌細胞に方向付ける方法であって、当該γδＴ細胞を本明細書に提供される二重特異性抗体と接触させることを含み、当該接触させることによって、当該γδＴ細胞を当該癌細胞に方向付ける方法も提供される。

また、癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法も提供される。方法は、Ｖδ２発現γδＴ細胞を本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることを含み得、癌細胞を当該抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることによって、当該癌細胞の成長又は増殖を阻害する。また、細胞表面上で癌抗原を発現している癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、当該癌細胞を本明細書に提供される二重特異性抗体と接触させることを含み、当該癌細胞を医薬組成物と接触させることによって、当該癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法も提供される。いくつかの実施形態では、癌細胞は、二重特異性抗体と接触している間、ＴＲＤＶ２を発現するγδ Ｔ細胞の存在下にある。

別の一般的な態様では、治療を必要とする対象における癌を治療する方法であって、ＴＲＤＶ２及び癌細胞の表面上に提示される癌抗原に特異的に結合する単離された二重特異性抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は本明細書に開示される医薬組成物を当該対象に投与することを含む方法が、本明細書に提供される。いくつかの態様では、対象における癌抗原を発現している癌細胞を排除する方法であって、有効量の本明細書に提供される二重特異性抗体を当該対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの態様では、対象における癌抗原を発現している癌細胞によって全て又は部分的に引き起こされる疾患を治療する方法であって、有効量の本明細書に提供される二重特異性抗体を当該対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、その方法を必要とする対象である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、疾患は、癌である。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２及び癌抗原に結合する。特定の実施形態では、癌は、ＣＤ３３発現癌である。

いくつかの実施形態では、白血病は、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。

いくつかの実施形態では、癌抗原は、アンジオポエチン、ＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、ＰＤＧＦＲα、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、又はＶＥＧＦ－Ｒである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－βＲＩＩ、又はＭＵＣ１である。

別の一般的な態様では、癌細胞の表面上のＣＤ３３をターゲティングする方法であって、本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は医薬組成物に当該癌細胞を曝露することを含む方法が、本明細書に提供される。

特定の実施形態では、ＣＤ３３のＣ２ドメインをターゲティングする。他の実施形態では、ＣＤ３３のＶドメインをターゲティングする。

ＴＲＤＶ２及び／又はＣＤ３３に結合する二重特異性抗体及びその抗原結合フラグメントの機能的活性は、当該技術分野において既知の方法により、かつ本明細書に記載される通り特性評価され得る。ＴＲＤＶ２及び／又はＣＤ３３に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを特性評価する方法としては、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、及びＯＣＴＥＴＲＥＤ分析を含む親和性及び特異性アッセイ、ＦＡＣＳによる癌細胞上のＣＤ３３に対する抗体の結合を検出する結合アッセイ、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に対する抗体の結合を検出するための結合アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態によればＴＲＤＶ２／及び／又はＣＤ３３に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを特性評価するための方法としては、以下に記載するものが挙げられる。

別の一般的な態様では、Ｖδ２発現γδＴ癌細胞を癌細胞に方向付ける方法が、本明細書に提供される。方法は、Ｖδ２発現γδＴ細胞を抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることを含み、当該抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を、その表面上にＣＤ３３を有する癌細胞に方向付ける。

別の一般的な態様では、癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法が、本明細書に提供される。方法は、Ｖδ２発現γδＴ細胞を抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることを含み、癌細胞を当該抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることによって、当該癌細胞の成長又は増殖を阻害する。

別の一般的な態様では、治療を必要とする対象における癌を治療する方法であって、ＴＲＤＶ２及び腫瘍細胞の表面上に提示される腫瘍関連抗原（例えば、ＣＤ３３）に特異的に結合する単離された二重特異性抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は本明細書に開示される医薬組成物を、当該対象に投与することを含む方法が、本明細書に提供される。癌は、例えば、ＣＤ３３発現癌であり得る。癌は、例えば、ＣＤ３３発現癌であり得る。癌は、例えば、血液癌であり得る。血液癌は、例えば、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫であり得る。白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又は急性リンパ性白血病（acute lymphocytic leukemia、ＡＬＬ）であり得る。

特定の実施形態によれば、癌の治療に使用される組成物が提供される。癌治療のために、組成物を、化学療法、抗ＣＤ２０ｍＡｂ、抗ＴＩＭ－３ｍＡｂ、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法、ＩＤＯ、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ３８抗体、サイトカイン、腫瘍溶解性ウイルス、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、他の免疫癌薬、抗血管新生剤、放射線療法、抗体－薬物コンジュゲート（antibody-drug conjugate、ＡＤＣ）、標的療法、又は他の抗癌剤が挙げられるがこれらに限定されない別の治療と併用してもよい。

また、ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を活性化する方法であって、当該γδＴ細胞を本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体と接触させることを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、接触させることは、ＴＲＤＶ２を発現する対照γδ Ｔ細胞と比較して、ＣＤ６９、ＣＤ２５、及び／又はグランザイムＢ発現の増加をもたらす。

本明細書に提供される方法の様々な実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２、及びＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する。本明細書に提供される方法の他の様々な実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＲＤＶ２、及びＣＤ３３のＶドメインに特異的に結合する。

特定の実施形態によれば、医薬組成物は、有効量の本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。

本明細書で使用するとき、用語「有効量」は、対象において所望の生物学的又は医薬的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。

特定の実施形態によれば、有効量は、次の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を達成するのに十分な治療の量を指す：（ｉ）治療される疾患、障害若しくは病態又はそれに関連する症状の重症度を軽減又は改善すること、（ｉｉ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の期間を短縮すること、（ｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の進行を防止すること、（ｉｖ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の退縮を生じさせること、（ｖ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状の進行又は発症を予防すること、（ｖｉ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状の再発を防止すること、（ｖｉｉ）治療される疾患、障害、若しくは病態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院を減少させること、（ｖｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院期間を短縮させること、（ｉｘ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状を有する対象の生存率を高めること、（ｘｉ）治療される対象の疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状を阻害又は軽減すること、及び／又は（ｘｉｉ）別の治療の予防又は治療効果を強化又は改善すること。

有効量又は薬用量は、治療される疾患、障害、又は病態、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬、及び処置が予防的なものであるか治療的なものであるか、などの様々な要因に従って異なり得る。治療用量は、安全性及び有効性を最適化するために最適に漸増される。

特定の実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与経路に好適であるように製剤化される。例えば、本明細書に記載される組成物は、静脈内投与、皮下投与、又は筋肉内投与に好適であるように製剤化することができる。

本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は全て、癌に関連する少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの改善又は回復を指し、これは対象において必ずしも認識されるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は、腫瘍若しくは癌などの疾患、障害、若しくは病態に関連する１つ又は２つ以上の症状の緩和、進行若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体は、補充療法と併用される。

特定の実施形態によれば、癌の治療に使用される組成物が提供される。癌治療のために、組成物を、化学療法、抗ＣＤ２０ｍＡｂ、抗ＴＩＭ－３ｍＡｂ、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法、ＩＤＯ、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ３８抗体、サイトカイン、腫瘍溶解性ウイルス、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、他の免疫癌薬、抗血管新生剤、放射線療法、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、標的療法、又は他の抗癌剤が挙げられるがこれらに限定されない別の治療と併用してもよい。

本明細書で使用するとき、対象への２種類以上の治療薬の投与との関連において用いられる用語「併用」とは、２種類以上の治療薬の使用を指す。用語「併用」の使用は、治療薬を対象に投与する順序について限定しない。例えば、第１の治療薬（例えば、本明細書に記載される組成物）は、対象に第２の治療薬を投与する前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）に、同時に、又は後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に投与してよい。

本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体は、ＴＲＤＶ２を発現している細胞を検出するための剤として使用してもよい。したがって、別の態様では、ＴＲＤＶ２を発現している細胞を検出する方法であって、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体を当該細胞と接触させることを含む方法が提供される。特定の実施形態では、細胞は、細胞の集団である。特定の実施形態では、検出は、ＥＬＩＳＡによるものである。いくつかの実施形態では、検出は、ＦＡＣＳ分析によるものである。本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と、使用説明書とを含むキットも提供される。

濃縮及び検出方法
一態様では、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体は、ＴＲＤＶ２発現細胞を検出するための剤として使用される。したがって、他の方法では、ＴＲＤＶ２を発現している細胞を検出する方法であって、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体を当該細胞と接触させることを含む方法が提供される。特定の実施形態では、検出は、ＥＬＩＳＡによるものである。いくつかの実施形態では、検出は、ＦＡＣＳ分析によるものである。本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と、使用説明書とを含むキットも提供される。

濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、若しくは検出、又はそれらの任意の組み合わせは、ビーズ、マイクロ流体、固体支持体、カラムなどの既知の技術を使用して行うことができる。例えば、ＴＲＤＶ２細胞は、本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体に結合したときに既知の方法を使用して分離又は可視化することができる。

本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体又は多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、ＴＲＤＶ２発現細胞を選択的に濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、又は検出するために使用することができる。本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体又は多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、例えば、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、第２の標的に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、を含有する二重特異性フォーマットで利用され得る。他の実施形態では、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（例えば、三重特異性抗体で）第３の抗原に特異的に結合する第３の抗原結合ドメインを更に組み込んだフォーマットで利用することができる。他の実施形態では、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（例えば、四重特異性抗体として）第４の抗原に特異的に結合する第４の抗原結合ドメインを更に組み込んだフォーマットで利用することができる。

一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を濃縮する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を含むサンプルを提供することと、当該サンプルを本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を濃縮することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を単離する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を含むサンプルを提供することと、当該サンプルを本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を単離することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を分離する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を含むサンプルを提供することと、当該サンプルを本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を分離することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を精製する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を含むサンプルを提供することと、当該サンプルを本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を精製することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を選別する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を含むサンプルを提供することと、当該サンプルを本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を選別することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を選択する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を含むサンプルを提供することと、当該サンプルを本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を選択することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を捕捉する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を含むサンプルを提供することと、当該サンプルを本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を捕捉することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を検出する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を含むサンプルを提供することと、当該サンプルを本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を検出することと、を含む方法が、本明細書に提供される。

一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を濃縮する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を濃縮することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を単離する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を単離することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を分離する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を分離することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を精製する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を精製することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を選別する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を選別することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を選択する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を選択することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を捕捉する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を捕捉することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を検出する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に結合している当該ＴＲＤＶ２発現細胞を検出することと、を含む方法が、本明細書に提供される。

一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を濃縮する方法であって、ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に対する当該ＴＲＤＶ２発現細胞の結合に基づいて当該ＴＲＤＶ２発現細胞を濃縮することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を単離する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に対する当該ＴＲＤＶ２発現細胞の結合に基づいて当該ＴＲＤＶ２発現細胞を単離することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を分離する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に対する当該ＴＲＤＶ２発現細胞の結合に基づいて当該ＴＲＤＶ２発現細胞を分離することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を精製する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に対する当該ＴＲＤＶ２発現細胞の結合に基づいて当該ＴＲＤＶ２発現細胞を精製することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を選別する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に対する当該ＴＲＤＶ２発現細胞の結合に基づいて当該ＴＲＤＶ２発現細胞を選別することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を選択する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に対する当該ＴＲＤＶ２発現細胞の結合に基づいて当該ＴＲＤＶ２発現細胞を選択することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を捕捉する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に対する当該ＴＲＤＶ２発現細胞の結合に基づいて当該ＴＲＤＶ２発現細胞を捕捉することと、を含む方法が、本明細書に提供される。一態様では、ＴＲＤＶ２発現細胞を検出する方法であって、当該ＴＲＤＶ２発現細胞を本明細書に提供されるＴＲＤＶ２抗体と接触させることと、当該ＴＲＤＶ２抗体に対する当該ＴＲＤＶ２発現細胞の結合に基づいて当該ＴＲＤＶ２発現細胞を検出することと、を含む方法が、本明細書に提供される。

方法の特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、Ｔ細胞である。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、細胞の集団中にある。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、リンパ球の集団中にある。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、Ｔ細胞の集団中にある。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、細胞の集団として提供される。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、リンパ球の集団として提供される。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、Ｔ細胞の集団として提供される。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、細胞の集団を含むサンプルとして提供される。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、リンパ球の集団を含むサンプルとして提供される。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２発現細胞は、Ｔ細胞の集団を含むサンプルとして提供される。方法のいくつかの実施形態では、サンプルは、血液サンプルである。方法のいくつかの実施形態では、サンプルは、組織サンプルである。方法のいくつかの実施形態では、サンプルは、組織培養サンプルである。

方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、本明細書に提供される二重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、本明細書に提供される三重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、本明細書に提供される四重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。特定の実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、ＴＲＤＶ２に特異的に結合する。一実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（ａ）ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（ａ）ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に結合する第３の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（ａ）ＴＲＤＶ２に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に結合する第３の結合ドメインと、（ｄ）第４の標的に結合する第４の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（ａ）ＴＲＤＶ２に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（ａ）ＴＲＤＶ２に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に特異的に結合する第３の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体は、（ａ）ＴＲＤＶ２に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に特異的に結合する第３の結合ドメインと、（ｄ）第４の標的に特異的に結合する第４の結合ドメインと、を含む。

方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、第２の標的がＣＤ１２３である、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、第２の標的がＣＤ３３である、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、第２の標的がＴＲＢＣ１である、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、第２の標的がＢＣＭＡである、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。方法のいくつかの実施形態では、ＴＲＤＶ２抗体は、第２の標的がＰＳＭＡである、多重特異性ＴＲＤＶ２抗体である。

本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、方法は、マルチマーカー検出を使用する。いくつかの実施形態では、マルチマーカー検出は、本明細書に提供される多重特異性ＴＲＤＶ２抗体を使用する。いくつかの実施形態では、マルチマーカー検出は、本明細書に提供される二重特異性ＴＲＤＶ２抗体を使用する。いくつかの実施形態では、マルチマーカー検出は、本明細書に提供される三重特異性ＴＲＤＶ２抗体を使用する。いくつかの実施形態では、マルチマーカー検出は、本明細書に提供される四重特異性ＴＲＤＶ２抗体を使用する。

本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、方法は、Ｔ細胞製造プロセスにおける工程として含まれる。特定の実施形態では、細胞は、ＣＡＲ－Ｔ細胞である。本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、方法は、Ｔ細胞改変プロセスにおける工程として含まれる。

本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、方法は、診断方法における工程として含まれる。本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、方法は、ＴＲＤＶ２発現Ｔ細胞を定量する方法における工程として含まれる。

本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、方法は、濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、又は検出されたＴＲＤＶ２発現細胞を拡大することを更に含む。特定の実施形態では、インビトロで拡大する。特定の実施形態では、インビボで拡大する。本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、方法は、濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、又は検出されたＴＲＤＶ２発現細胞を成長させることを更に含む。特定の実施形態では、インビトロで成長させる。特定の実施形態では、インビボで成長させる。本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、方法は、濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、又は検出されたＴＲＤＶ２発現細胞を定量することを更に含む。

実施形態
以下の非限定的な実施形態が、本明細書に提供される。

１組の実施形態では、以下が提供される。
１．二重特異性抗体であって、
（ａ）ＴＲＤＶ２抗原に結合する第１の結合ドメインと、
（ｂ）癌細胞の表面上の抗原に結合する第２の結合ドメインと、
を含む抗体。
２．当該第１の結合ドメインが、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、
を含む、実施形態１に記載の二重特異性抗体。
３．当該第１の結合ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、実施形態２に記載の二重特異性抗体。
４．当該第１の結合ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態２に記載の二重特異性抗体。
５．当該第１の結合ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態２に記載の二重特異性抗体。
６．当該癌細胞の表面上の抗原が、腫瘍特異的抗原、腫瘍関連抗原、又は新抗原である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
７．当該癌細胞が、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌の細胞である、実施形態１～６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
８．実施形態１～７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体であって、
（ｉ）当該副腎癌が、副腎皮質性癌腫（ＡＣＣ）、副腎皮質癌、褐色細胞腫、若しくは神経芽細胞腫である、
（ｉｉ）当該肛門癌が、扁平上皮細胞癌腫、総排泄腔癌腫、腺癌腫、基底細胞癌腫、若しくは黒色腫である、
（ｉｉｉ）当該虫垂癌が、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、粘液性腺癌腫、杯細胞カルチノイド、腸型腺癌腫、若しくは印環細胞腺癌腫である、
（ｉｖ）当該胆管癌が、肝外胆管癌、腺癌腫、門胆管癌、門周囲胆管癌、遠位胆管癌、若しくは肝内胆管癌である、
（ｖ）当該膀胱癌が、移行細胞癌腫（ＴＣＣ）、乳頭状癌腫、扁平癌腫、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、小細胞癌腫、若しくは肉腫である、
（ｖｉ）当該骨癌が、原発性骨癌、肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、骨の巨細胞腫瘍、脊索腫、若しくは転移性骨癌である、
（ｖｉｉ）当該脳癌が、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、上衣腫、乏突起膠腫、混合神経膠腫、下垂体癌、下垂体腺腫、頭蓋咽頭腫、胚細胞腫瘍、松果体部腫瘍、髄芽腫、若しくは原発性ＣＮＳリンパ腫である、
（ｖｉｉｉ）当該乳癌が、乳腺癌腫、侵襲性乳癌、非侵襲性乳癌、乳肉腫、化生性癌腫、腺嚢癌腫、葉状腫瘍、血管肉腫、ＨＥＲ２陽性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、若しくは炎症性乳癌である、
（ｉｘ）当該子宮頸癌が、扁平上皮細胞癌腫若しくは腺癌腫である、
（ｘ）当該結腸直腸癌が、結腸直腸腺癌腫、原発性結腸直腸リンパ腫、消化管間質腫瘍、平滑筋肉腫、カルチノイド腫瘍、粘液性腺癌腫、印環細胞腺癌腫、消化管カルチノイド腫瘍、若しくは黒色腫である、
（ｘｉ）当該食道癌が、腺癌腫若しくは扁平上皮細胞癌腫である、
（ｘｉｉ）当該胆嚢癌が、腺癌腫、乳頭状腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、扁平上皮細胞癌腫、小細胞癌腫、若しくは肉腫である、
（ｘｉｉｉ）当該妊娠性絨毛性疾患（ＧＴＤ）が、胞状奇胎、妊娠性絨毛性新生物（ＧＴＮ）、絨毛癌腫、胎盤性絨毛性腫瘍（ＰＳＴＴ）、若しくは類上皮絨毛性腫瘍（ＥＴＴ）である、
（ｘｉｖ）当該頭頸部癌が、喉頭癌、鼻咽頭癌、下咽頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、口腔癌、中咽頭癌、若しくは扁桃癌である、
（ｘｖ）当該ホジキンリンパ腫が、古典的ホジキンリンパ腫、結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、リンパ球減少型、若しくは結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）である、
（ｘｖｉ）当該腸癌が、小腸癌（small intestine cancer）、小腸癌（small bowel cancer）、腺癌腫、肉腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、若しくはリンパ腫である、
（ｘｖｉｉ）当該腎臓癌が、腎細胞癌（ＲＣＣ）、明細胞ＲＣＣ、乳頭状ＲＣＣ、嫌色素性ＲＣＣ、集合管ＲＣＣ、未分類ＲＣＣ、移行細胞癌、尿路上皮癌、腎盂癌腫、若しくは腎肉腫である、
（ｘｖｉｉｉ）当該白血病が、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、若しくは骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、
（ｘｉｘ）当該肝臓癌が、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、線維層板型ＨＣＣ、胆管細胞癌腫、血管肉腫、若しくは肝転移である、
（ｘｘ）当該肺癌が、小細胞肺癌、小細胞癌腫、複合型小細胞癌腫、非小細胞肺癌、肺腺癌腫、扁平上皮細胞肺癌、大細胞未分化型癌腫、肺結節、転移性肺癌、腺扁平上皮癌腫、大細胞神経内分泌癌腫、唾液腺型肺癌腫、肺カルチノイド、中皮腫、肺の肉腫様癌腫、若しくは悪性顆粒細胞肺腫瘍である、
（ｘｘｉ）当該黒色腫が、表在拡大型黒色腫、結節性黒色腫、末端黒子型黒色腫、悪性黒子由来黒色腫、無色素性黒色腫、線維形成性黒色腫、眼黒色腫、若しくは転移性黒色腫である、
（ｘｘｉｉ）当該中皮腫が、胸膜中皮腫、腹膜中皮腫、心膜中皮腫、若しくは精巣中皮腫である、
（ｘｘｉｉｉ）当該多発性骨髄腫が、活動型若しくはくすぶり型多発性骨髄腫である、
（ｘｘｉｖ）当該神経内分泌腫瘍が、消化管神経内分泌腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、若しくは肺神経内分泌腫瘍である、
（ｘｘｖ）当該非ホジキンリンパ腫が、未分化大細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、前駆Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬＬ）、ヘアリーセル白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、ナチュラルキラー細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アリベール－バザン症候群、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、全身性ＡＬＣＬ、腸症型Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、若しくは肝脾ガンマ／デルタＴ細胞リンパ腫である、
（ｘｘｖｉ）当該口腔癌が、扁平上皮細胞癌腫、疣状癌腫、小唾液腺癌腫、リンパ腫、良性口腔腫瘍、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫瘍、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローマ、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫、歯原性腫瘍、白板症、紅板症、扁平上皮細胞口唇癌、基底細胞口唇癌、口癌、歯肉癌、若しくは舌癌である、
（ｘｘｖｉｉ）当該卵巣癌が、卵巣上皮癌、粘液性上皮卵巣癌、子宮内膜上皮卵巣癌、明細胞上皮卵巣癌、未分化型上皮卵巣癌、卵巣低悪性度腫瘍、原発性腹膜癌、卵管癌、胚細胞腫瘍、奇形腫、未分化卵巣胚細胞癌、内胚葉洞腫瘍、性索間質性腫瘍、性索性腺間質腫瘍、卵巣間質腫瘍、顆粒膜細胞腫瘍、顆粒膜卵胞膜腫瘍、セルトリ－ライディッヒ腫瘍、卵巣肉腫、卵巣癌肉腫、卵巣腺肉腫、卵巣平滑筋肉腫、卵巣線維肉腫、クルケンベルグ腫瘍、若しくは卵巣嚢胞である、
（ｘｘｖｉｉｉ）当該膵臓癌が、膵外分泌腺癌、膵内分泌腺癌、又は膵腺癌腫、膵島細胞腫瘍、若しくは神経内分泌腫瘍である、
（ｘｘｉｘ）当該前立腺癌が、前立腺腺癌腫、前立腺肉腫、移行細胞癌腫、小細胞癌腫、若しくは神経内分泌腫瘍である、
（ｘｘｘ）当該洞癌が、扁平上皮細胞癌腫、粘膜細胞癌腫、腺様嚢胞細胞癌腫、腺房細胞癌腫、副鼻腔未分化癌腫、鼻腔癌、副鼻腔癌、上顎洞癌、篩骨洞癌、若しくは鼻咽頭癌である、
（ｘｘｘｉ）当該皮膚癌が、基底細胞癌、扁平上皮癌腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫（ＫＳ）、日光角化症、皮膚リンパ腫、若しくは角化棘細胞腫である、
（ｘｘｘｉｉ）当該軟部組織癌が、血管肉腫、皮膚線維肉腫、上皮性肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、脱分化型脂肪肉腫（ＤＬ）、粘液性／円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬ）、高分化型脂肪肉腫（ＷＤＬ）、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫（ＲＭＳ）、若しくは滑膜肉腫である、
（ｘｘｘｉｉｉ）当該脊髄癌が、脊髄転移性腫瘍である、
（ｘｘｘｉｖ）当該胃癌が、胃腺癌腫、胃リンパ腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃カルチノイド腫瘍、Ｉ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、ＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、若しくはＩＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイドである、
（ｘｘｘｖ）当該精巣癌が、セミノーマ、非セミノーマ、胚性癌腫、卵黄嚢癌腫、絨毛癌腫、奇形腫、性腺間質腫瘍、ライディッヒ細胞腫瘍、若しくはセルトリ細胞腫瘍である、
（ｘｘｘｉｖ）当該咽頭癌が、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、肉腫、喉頭癌、咽頭癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、喉頭扁平上皮細胞癌、喉頭腺癌腫、リンパ上皮腫、紡錘細胞癌腫、疣状癌、未分化癌腫、若しくはリンパ節癌である、
（ｘｘｘｖ）当該甲状腺癌が、乳頭状癌腫、濾胞状癌腫、ハースル細胞癌腫、甲状腺髄様癌腫、若しくは未分化癌腫である、
（ｘｘｘｖｉ）当該子宮癌が、子宮内膜癌、子宮内膜腺癌腫、類子宮内膜癌腫、漿液性腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、子宮癌肉腫、子宮肉腫、子宮平滑筋肉腫、子宮内膜間質肉腫、若しくは未分化肉腫である、
（ｘｘｘｖｉｉ）当該膣癌が、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、黒色腫、若しくは肉腫である、又は
（ｘｘｘｖｉｉｉ）当該外陰部癌が、扁平上皮細胞癌腫又は腺癌腫である、二重特異性抗体。
９．当該癌抗原が、アンジオポエチン、ＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、ＰＤＧＦＲα、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｒである、実施形態１～８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１０．当該癌抗原が、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－βＲＩＩ、又はＭＵＣ１抗原である、実施形態１～８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１１．当該ＴＲＤＶ２が、γδＴ細胞の表面上に存在する、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１２．当該ＴＲＤＶ２が、γδＴ細胞の表面上に存在し、当該癌細胞の表面上で発現する抗原が、癌抗原である、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１３．二重特異性抗体が、γδ Ｔ細胞の表面上のＴＲＤＶ２及び癌細胞の表面上の抗原に結合すると、癌細胞が死滅する、実施形態１２に記載の二重特異性抗体。
１４．当該第１の結合ドメインがヒト化されている、当該第２の結合ドメインがヒト化されている、又は当該第１の結合ドメイン及び当該第２の結合ドメインの両方がヒト化されている、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１５．ＩｇＧ抗体である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１６．当該ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４抗体である、実施形態１５に記載の二重特異性抗体。
１７．約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態１２～１６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１８．約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態１７に記載の二重特異性抗体。
１９．約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態１８に記載の二重特異性抗体。
２０． γδＴエフェクター細胞と当該癌抗原を発現している標的細胞との混合物を用いてＥＣ_５０を評価する、実施形態１７～１９のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
２１．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１：１～約５：１である、実施形態２０に記載の二重特異性抗体。
２２．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１：１～約２：１である、実施形態２１に記載の二重特異性抗体。
２３．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態２２に記載の二重特異性抗体。
２４．多価である、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
２５．少なくとも３つの抗原に結合することができる、実施形態２４に記載の二重特異性抗体。
２６．少なくとも５つの抗原に結合することができる、実施形態２５に記載の二重特異性抗体。
２７． γδＴ細胞の表面上でＴＲＤＶ２に結合することができる第１の手段と、癌抗原に結合することができる第２の手段と、を含む二重特異性抗体。
２８．当該癌抗原が、癌細胞の表面上にある、実施形態２７に記載の二重特異性抗体。
２９．実施形態１～２８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体をコードしている、核酸。
３０．実施形態２９に記載の核酸を含む、ベクター。
３１．実施形態３０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
３２．実施形態３０に記載のベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キット。
３３．実施形態１～２８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
３４．実施形態３３に記載の医薬組成物を生成する方法であって、二重特異性抗体を医薬的に許容される担体と合わせて医薬組成物を得ることを含む、方法。
３５．１つを超える標的分子に結合する抗体を作製するプロセスであって、当該分子が、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、癌細胞の表面上の抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原及び癌細胞の表面上の抗原に結合することができる抗体を提供する機能を実行する工程と、
を含むプロセス。
３６．当該癌細胞の表面上の抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程がｎ回繰り返され、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原及びｎ個の標的分子に結合することができる結合ドメインを提供する機能を実行するｎ個の工程を更に含み、ｎが少なくとも２である、実施形態３５に記載のプロセス。
３７．ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を癌細胞に方向付ける方法であって、当該γδＴ細胞を実施形態１～２８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体と接触させることを含み、当該接触させることによって、当該γδＴ細胞を当該癌細胞に方向付ける、方法。
３８．細胞表面上で癌抗原を発現している癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、当該癌細胞を実施形態１～２８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体と接触させることを含み、当該癌細胞を医薬組成物と接触させることによって、当該癌細胞の成長又は増殖を阻害する、方法。
３９．癌細胞が、二重特異性抗体と接触している間、ＴＲＤＶ２を発現するγδ Ｔ細胞の存在下にある、実施形態３８に記載の方法。
４０．対象における癌細胞を排除するか又は癌を治療する方法であって、有効量の実施形態１～２８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体を当該対象に投与することを含む、方法。
４１．当該対象が、治療を必要としている対象である、実施形態４０に記載の方法。
４２．当該対象が、ヒトである、実施形態４０又は４１に記載の方法。
４３．ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を活性化する方法であって、当該γδＴ細胞を実施形態１～２８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体と接触させることを含む、方法。
４４．接触させることが、ＴＲＤＶ２を発現する対照γδ Ｔ細胞と比較して、ＣＤ６９、ＣＤ２５、及び／又はグランザイムＢ発現の増加をもたらす、実施形態４３に記載の方法。
４５．実施形態３８又は３９に記載の方法であって、
（ｉ）当該癌細胞が、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、若しくは外陰部癌の細胞である、
（ｉｉ）当該癌抗原が、アンジオポエチン、ＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、ＰＤＧＦＲα、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、若しくはＶＥＧＦ－Ｒである、及び／又は
（ｉｉｉ）当該癌抗原が、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、若しくはＢＲＣＡ１である、方法。
４６．当該癌が、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌である、実施形態４０～４４のいずれか１つに記載の方法。
４７．単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、当該単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
４８．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態４７に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
４９．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態４８に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
５０．第１の抗原に対する結合部位が、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に結合する、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
５１．第２の抗原に対する結合部位が、癌細胞の表面上に存在する癌抗原に結合する、実施形態４７～５０のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
５２．当該γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対する二重特異性抗体の結合及び当該癌細胞の表面上に存在する癌抗原の結合が、当該癌細胞の死滅をもたらす、実施形態５１に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメント。
５３．ＨＣ１及びＬＣ１が、ヒト化されている、実施形態４７～５２のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメント。
５４．ＨＣ２及びＬＣ２が、ＣＤ３３に結合する、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
５５．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態４７～５４のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
５６．ＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態４７～５５のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
５７．約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態４７～５６のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
５８．約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態５７に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
５９．約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態５７に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６０． γδＴエフェクター細胞とＫａｓｕｍｉ３ＡＭＬ標的細胞との混合物を用いてＥＣ_５０を評価する、実施形態５７～５９のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６１．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１：１～約５：１である、実施形態６０に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６２．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１：１～約２：１である、実施形態６１に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６３．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態６２に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６４．多価である、実施形態４７～６３のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６５．少なくとも３つの抗原に結合することができる、実施形態６４に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６６．少なくとも５つの抗原に結合することができる、実施形態６４に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６７．単離されたγδＴ細胞二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、
ＨＣ１及びＬＣ１が、γδＴ細胞上の第１の抗原に対する結合部位を形成し、
ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離されたγδＴ細胞二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
６８．Ｔ細胞受容体ガンマ鎖に特異的に結合することができる第１の手段と、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖ではない標的分子に特異的に結合することができる第２の手段と、を含む、二重特異性抗体。
６９．２つ以上の標的分子に特異的に結合することができる分子を作製するためのプロセスであって、当該分子が、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖に結合することができるオリゴペプチド又はポリペプチドを得る機能を果たす工程と、標的に結合することができるオリゴペプチド又はポリペプチドを得る機能を果たすための工程と、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖及び標的分子に特異的に結合することができる分子を提供する機能を果たす工程と、を含む、プロセス。
７０．標的に結合することができるオリゴペプチド又はポリペプチドを得る機能を実行する工程がｎ回繰り返され、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖及びｎ個の標的分子に特異的に結合することができる分子を提供する機能を実行するｎ個の工程を更に含み、ｎが少なくとも２である、実施形態６９に記載のプロセス。
７１．単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、Ｖδ２に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し、
ＨＣ２が、それぞれ、配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、並びにＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２が、それぞれ、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、並びにＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ３３に特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離された抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
７２．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７１に記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
７３．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態７２に記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
７４．ＨＣ２が、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７１～７３のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
７５．ＨＣ２が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態７４に記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
７６．当該ＴＲＤＶ２が、γδＴ細胞の表面上にある、実施形態７１～７５のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
７７．ＣＤ３３が、腫瘍細胞又はＣＤ３４＋幹細胞の表面上にある、実施形態７３～７６のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
７８．当該γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対する二重特異性抗体の結合及び当該癌細胞の表面上のＣＤ３３の結合が、当該癌細胞の死滅をもたらす、実施形態７１～７７のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
７９．ＨＣ１及びＬＣ１が、ヒト化されている、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８０．ＨＣ２及びＬＣ２が、ヒト化されている、実施形態７１～７９のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８１．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態７１～８０のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８２．ＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態７１～８１のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８３．約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態７１～８２のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８４．約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態８３に記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８５．約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態８３に記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８６． γδＴエフェクター細胞とＫａｓｕｍｉ３ＡＭＬ標的細胞との混合物を用いてＥＣ_５０を評価する、実施形態８３～８５のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８７．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１：１～約５：１である、実施形態８６に記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８８．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１：１～約２：１である、実施形態８７に記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
８９．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態８８に記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
９０．実施形態７１～８９のいずれか１つに記載の単離された抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを生成する条件下で、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む細胞を培養することと、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを回収することと、を含む、方法。
９１．単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原エピトープ結合フラグメントであって、第１の抗原に対する結合部位と、第２の抗原に対する結合部位とを含み、当該第１の抗原に対する結合部位が、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２エピトープに結合し、当該第２の抗原に対する結合部位が、標的細胞の表面上の第２の抗原のエピトープに結合し、当該γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２エピトープの結合及び当該標的細胞上の第２の抗原エピトープの結合が、当該標的細胞の死滅をもたらす、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原エピトープ結合フラグメント。
９２．単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントであって、当該単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、
ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原エピトープに対する結合部位を形成する、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
９３．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９２に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
９４．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態９３に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
９５．ＨＣ１及びＬＣ１が、ヒト化されている、実施形態９２～９４のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又は抗原結合フラグメント。
９６．ＨＣ２及びＬＣ２が、ＣＤ３３エピトープに結合する、実施形態９２～９５のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
９７．ＨＣ２が、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９６に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
９８．ＨＣ２が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態９７に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
９９．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態９１～９８のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１００．ＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態９１～９９のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０１．約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態９１～１００のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０２．約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態１０１に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０３．約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態１０２に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０４． γδＴエフェクター細胞とＫａｓｕｍｉ３ＡＭＬ標的細胞との混合物を用いてＥＣ_５０を評価する、実施形態１０１～１０３のいずれか１つに記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０５．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１：１～約５：１である、実施形態１０４に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０６．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１：１～約２：１である、実施形態１０５に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０７．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態１０６に記載の単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０８．第１の抗原エピトープに対する結合部位と、第２の抗原エピトープに対する結合部位とを含み、当該第１の抗原エピトープに対する結合部位が、γδＴ細胞上の第１の抗原に結合し、当該第２の抗原エピトープに対する結合部位が、標的細胞の表面上の第２の抗原エピトープに結合し、当該γδＴ細胞上の第１の抗原エピトープの結合及び当該標的細胞上の第２の抗原エピトープの結合が、標的細胞の死滅をもたらす、単離されたγδＴ細胞二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメント。
１０９．ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする単離核酸であって、当該単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、
ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離核酸。
１１０．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０９に記載の単離核酸。
１１１．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１１０に記載の単離核酸。
１１２．当該第１の抗原に対する結合部位が、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に結合する、実施形態１０９～１１１のいずれか１つに記載の単離核酸。
１１３．当該第２の抗原に対する結合部位が、癌細胞の表面上に存在する癌抗原に結合する、実施形態１０９～１１２のいずれか１つに記載の単離核酸。
１１４．当該γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対する二重特異性抗体の結合及び当該癌細胞の表面上に存在する癌抗原の結合が、当該癌細胞の死滅をもたらす、実施形態１１３に記載の単離核酸。
１１５．ＨＣ１及びＬＣ１が、ヒト化されている、実施形態１０９～１１４のいずれか１つに記載の単離核酸。
１１６．ＨＣ２及びＬＣ２が、ＣＤ３３に結合する、実施形態１０９～１１５のいずれか１つに記載の単離核酸。
１１７．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１０９～１１６のいずれか１つに記載の単離核酸。
１１８．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１０９～１１７のいずれか１つに記載の単離核酸。
１１９．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、約５００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態１０９～１１８のいずれか１つに記載の単離核酸。
１２０．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、約３００ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態１１９に記載の単離核酸。
１２１．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、約１６０ｐＭ未満のＥＣ_５０で、インビトロにおいて癌細胞のγδＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態１１９に記載の単離核酸。
１２２． γδＴエフェクター細胞とＫａｓｕｍｉ３ＡＭＬ標的細胞との混合物を用いてＥＣ_５０を評価する、実施形態１１９～１２１のいずれか１つに記載の単離核酸。
１２３．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１：１～約５：１である、実施形態１２２に記載の単離核酸。
１２４．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１：１～約２：１である、実施形態１２３に記載の単離核酸。
１２５．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態１２４に記載の単離核酸。
１２６．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、多価である、実施形態１０９～１２５のいずれか１つに記載の単離核酸。
１２７．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、少なくとも３つの抗原に結合することができる、実施形態１２６に記載の単離核酸。
１２８．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、少なくとも５つの抗原に結合することができる、実施形態１２６に記載の単離核酸。
１２９．実施形態１０９～１２８のいずれか１つに記載の単離核酸を含む、ベクター。
１３０．実施形態１２９に記載のベクターを含む、宿主細胞。
１３１．実施形態１２９に記載のベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キット。
１３２．単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物であって、
ａ．ＨＣ１と、
ｂ．ＨＣ２と、
ｃ．ＬＣ１と、
ｄ．ＬＣ２と、を含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１に関連し、ＨＣ２が、ＬＣ２に関連し、ＨＣ１が、それぞれ、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、それぞれ、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成する、単離されたＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと、
医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
１３３．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３２に記載の医薬組成物。
１３４．ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１３３に記載の医薬組成物。
１３５．当該第１の抗原に対する結合部位が、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２に結合する、実施形態１３２～１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１３６．当該第２の抗原に対する結合部位が、癌細胞の表面上に存在する癌抗原に結合する、実施形態１３２～１３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１３７．当該γδＴ細胞の表面上に存在するＴＲＤＶ２に対する二重特異性抗体の結合及び当該癌細胞の表面上に存在する癌抗原の結合が、当該癌細胞の死滅をもたらす、実施形態１３６に記載の医薬組成物。
１３８．ＨＣ１及びＬＣ１が、ヒト化されている、実施形態１３２～１３７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１３９．ＨＣ２及びＬＣ２が、ＣＤ３３に結合する、実施形態１３２～１３８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１４０．当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１３２～１３９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１４１．Ｖδ２発現γδＴ細胞を癌細胞に方向付ける方法であって、Ｖδ２発現γδＴ細胞を実施形態１３２～１４０のいずれか１つに記載の医薬組成物と接触させることを含み、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を当該医薬組成物と接触させることによって、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を癌細胞に方向付ける、方法。
１４２．細胞表面上で癌抗原を発現している癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、当該癌細胞を実施形態１３２～１４０のいずれか１つに記載の医薬組成物と接触させることを含み、当該癌細胞を当該医薬組成物と接触させることによって、当該癌細胞の成長又は増殖を阻害する、方法。
１４３．当該癌細胞が、抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触している間、Ｖδ２発現γδＴ細胞の存在下にある、実施形態１４２に記載の方法。
１４４．癌の治療を必要とする対象において癌を治療するための方法であって、
ａ．癌治療を必要とする対象を特定することと、
ｂ．実施形態１３２～１４０のいずれか１つに記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することと、
を含み、
当該医薬組成物を、それを必要とする当該対象に投与することが、当該対象における当該癌を治療する、方法。
１４５．Ｖδ２発現γδＴ細胞を活性化する方法であって、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を実施形態１３２～１４０のいずれか１つに記載の医薬組成物と接触させることを含み、当該Ｖδ２発現γδＴ細胞を当該医薬組成物と接触させることによって、対照Ｖδ２発現γδＴ細胞と比較してＣＤ６９、ＣＤ２５、及び／又はグランザイムＢの発現が増加する、方法。
１４６．実施形態１３２～１４０のいずれか１つに記載の医薬組成物を生成する方法であって、当該二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを医薬的に許容される担体と合わせて医薬組成物を得ることを含む、方法。

ＴＲＤＶ２及びＣＤ３３に結合する例示的な多重特異性（二重特異性）抗体が、本明細書の実施例に提供される。これらの実施例は、対象における様々な細胞及び組織を効果的に標的とすることができる例示的な二重特異性抗体の例示である。

いくつかの実施形態では、（ａ）ＴＲＤＶ２抗原に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原に結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＴＲＤＶ２抗原に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＴＲＤＶ２抗原上の第１のエピトープに結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原上の第２のエピトープに結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＴＲＤＶ２抗原上の第１のエピトープに特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原上の第２のエピトープに特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書に提供される。特定の実施形態では、第２の標的抗原は、ＣＤ３３である。

ＴＲＤＶ２に結合する例示的な結合剤、並びにＣＤ３３に結合する例示的な結合剤は、本明細書の他の箇所、例えば、実施例、並びに表１．１、表１．２、及び表１～８に提供される。

本発明の特定の実施形態が本明細書に記載される。前述の説明を読むと、開示された実施形態の変形形態は、当業者に明らかになり得、必要に応じてそのような変形形態を採用し得ることが予想される。したがって、本発明が、本明細書に具体的に記載されるもの以外の方法で実施されること、並びに本発明が、適用法によって許可されるように、本明細書に添付の特許請求の範囲に列挙される主題の全ての修正物及び同等物を含むことが意図される。また、全ての可能性のあるこれらの変形形態における上記要素の任意の組み合わせは、本明細書において別途記載のない限り、又は文脈が明らかに矛盾しない限り、本明細書に包含される。本発明の多くの実施形態が説明されてきた。しかしながら、様々な修正が、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく実行され得ることが、理解されるであろう。したがって、実施例のセクションにおける説明は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するのではなく、例示することを意図するものである。

実施例１：γδＴ細胞に結合する二重特異性抗体の生成
１．１：γδＴ細胞抗原に結合するＭＡＢの生成
γδＴ細胞に特異的な抗原又は抗原の一部を使用して、動物（例えば、マウス又はウサギ）を免疫する。γδＴ細胞モノクローナル抗体を生成するために、免疫した動物の全血から末梢血単核細胞を単離し、抗原特異的Ｂ細胞を成長させる。γδＴ細胞抗原に対する反応性抗体を分泌するＢ細胞を、Ｂ細胞培養上清の抗原結合ＥＬＩＳＡスクリーニングによって同定する。高結合ＥＬＩＳＡプレートを、γδＴ細胞抗原で一晩コーティングする。ＥＬＩＳＡプレートをブロッキングし、希釈したＢ細胞培養上清をプレートに添加する。プレートを室温でインキュベートし、インキュベートした後、γδＴ細胞抗原抗体の認識に特異的な二次抗体をプレートに添加して、γδＴ細胞抗原抗体がγδＴ細胞抗原に結合したかどうかを判定する。抗体の結合を、二次抗体上の基質の反応によって判定する。

γδＴ細胞抗原に結合することができるモノクローナル抗体の同定後、γδＴ細胞抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域の配列を決定する。γδＴ細胞抗体の重鎖及び軽鎖を発現させるためのコンストラクトを作製する。重鎖及び軽鎖を発現するように宿主細胞にコンストラクトをトランスフェクトし、γδＴ細胞抗体を上清から単離する。

１．２：γδＴ細胞二重特異性抗体の生成
γδＴ細胞モノクローナル抗体及び目的の標的細胞上の標的抗原に結合することができる第２のモノクローナル抗体の可変領域配列を使用して二重特異性抗体を生成して、γδＴ細胞リダイレクトによる標的細胞の死滅について試験する。目的の標的抗原は、限定するものではないが、Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ４７（Ｄ１）：Ｄ７２１－Ｄ７２８（２０１９）に記載される抗原から選択され得る。γδＴ細胞二重特異性抗体は、既に記載されている通り（Ａｔｗｅｌｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６－３５（１９９７））、ヒトＩｇＧ４としてノブイントゥーホールフォーマットの完全長抗体として生成する。可変領域をコードする核酸配列を、標準的なＰＣＲ制限酵素ベースのクローニング技術を使用して、ＩｇＧ４発現カセットの定常領域を含有するカスタム哺乳動物発現ベクターにサブクローニングする。二重特異性抗体を、チャイニーズハムスター卵巣細胞株における一過性トランスフェクションによって発現する。最初に、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴＳＵＲＥＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ）（Ｂｒｏｗｎ，Ｂｏｔｔｏｍｌｅｙｅｔａｌ．ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ．１９９８Ａｕｇ；２６（３）：Ｓ２４９．）によって、抗体を精製する。カラムをリン酸緩衝生理食塩水（Phosphate Buffer Saline、ＰＢＳ）、ｐＨ７．２で平衡化し、２ｍＬ／分の流速で発酵上清を装填する。装填後、カラムをＰＢＳ（４カラム容量（ＣＶ））で洗浄し、続いて、３０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５で溶出する。ＡｋｔａＥｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において２８０ｎｍでの吸光度によってモニターされるようなタンパク質ピークを含有する画分を一緒にプールし、１％の３Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ９．０を添加することによってｐＨ５．０に中和する。最終精製工程として、ＳＵＰＥＲＤＥＸ２００カラム（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、抗体を分取サイズ排除クロマトグラフィー（size exclusion chromatography、ＳＥＣ）で精製する。試料の完全性を、エンドトキシン測定、並びに還元及び非還元条件下でのＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動によって評価する。最終的なタンパク質濃度を決定する。

１．３：抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体の生成
抗ＴＲＤＶ２モノクローナル抗体及び目的の標的細胞上の標的抗原に結合することができる第２のモノクローナル抗体の可変領域配列を使用して二重特異性抗体を生成して、γδＴ細胞のリダイレクトによる標的細胞の死滅について試験する。目的の標的抗原は、限定するものではないが、Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ４７（Ｄ１）：Ｄ７２１－Ｄ７２８（２０１９）に記載される抗原から選択され得る。抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体を、既に記載されている通り（Ａｔｗｅｌｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６－３５（１９９７））、ヒトＩｇＧ１としてノブイントゥーホールフォーマットの完全長抗体として生成する。可変領域をコードする核酸配列を、標準的なＰＣＲ制限酵素ベースのクローニング技術を使用して、ＩｇＧ１発現カセットの定常領域を含有するカスタム哺乳動物発現ベクターにサブクローニングする。二重特異性抗体を、チャイニーズハムスター卵巣細胞株における一過性トランスフェクションによって発現する。最初に、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ）（Ｂｒｏｗｎ，Ｂｏｔｔｏｍｌｅｙｅｔａｌ．ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ．１９９８Ａｕｇ；２６（３）：Ｓ２４９）によって、抗体を精製する。カラムをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．２で平衡化し、２ｍＬ／分の流速で発酵上清を装填する。装填後、カラムをＰＢＳ（４カラム容量（ＣＶ））で洗浄し、続いて、３０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５で溶出する。ＡｋｔａＥｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において２８０ｎｍでの吸光度によってモニターされるようなタンパク質ピークを含有する画分を一緒にプールし、１％の３Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ９．０を添加することによってｐＨ５．０に中和する。最終精製工程として、ＳＵＰＥＲＤＥＸ２００カラム（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、抗体を分取サイズ排除クロマトグラフィー（ｓＳＥＣ）で精製する。試料の完全性を、エンドトキシン測定、並びに還元及び非還元条件下でのＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動によって評価する。最終的なタンパク質濃度を決定する。

実施例２－ＴＲＤＶ２及び癌抗原に結合する二重特異性抗体
実施例２．１～２．４は、ＴＲＤＶ２及びＶδ２鎖のヘテロ二量体を主に発現するγδＴ細胞が、強力な抗腫瘍機能を示すという前提に基づく。これらの細胞は、ＴＣＲ－ＴＲＤＶ２を発現し、これらの細胞の全てではないが大部分が、腫瘍標的細胞の効率的な細胞傷害を示す。次いで、一方のアームがＴＲＤＶ２構造に結合し、もう一方のアームが腫瘍細胞によって発現される腫瘍関連抗原に結合するように構築された二重特異性抗体を使用して、この能力を利用する。したがって、二重特異性抗体は、エフェクター及び標的細胞を一緒に架橋し、腫瘍細胞死滅をもたらす。この作用機序は、図１に概要が示されている概略図に記載されている。

後続の実施例は、以下の分類に分けることができる：（１）γδＴ細胞上で発現するＴＲＤＶ２アーム及び癌細胞上の癌抗原（例えば、ＣＤ３３）に結合することができる二重特異性抗体の生成及び特性評価（実施例２．１、２．２、及び２．３）；並びに（２）インビトロで拡大されたγδＴ細胞による、二重特異性抗体によって可能になる標的細胞の死滅についての証拠（実施例２．４）。

実施例２．１：抗ＴＲＤＶ２ＭＡＢの生成
マウスＩｇＧ１抗ヒトＴ細胞受容体ＴＲＤＶ２クローンＢ６は、商業的に供給された。試料調製及びＬＣ／ＭＳＭＳ分析を、ＬａｋｅＰｈａｒｍａ．（ＳａｎＣａｒｌｏｓ，ＣＡ）によって実施した。試料を還元し、アルキル化し、７つのアリコートに分割し、トリプシン／ＬｙｓＣ、キモトリプシン、ＬｙｓＣ、ペプシン、及びＡｓｐＮ、エラスターゼ、及びプロテイナーゼＫ酵素でタンパク質分解によって消化した。得られたペプチドを、ＺＩＰＴＩＰＣ１８ＰｉｐｅｔｔｅＴｉｐを使用して脱塩し、逆相クロマトグラフィーを使用してオンラインで分離した。ＨＣＤフラグメント化を使用して、ＴｈｅｒｍｏＱ－ＥＸＡＣＴＩＶＥ分光計で質量分析を実施した。デノボ配列タグをＩＭＧＴベースの抗体配列データベースにマッチさせることによって、ＰＥＡＫＳソフトウェアを使用してＭＳデータセットを分析した。デノボ同定されたペプチドのコンティグ配列アセンブリを使用して、配列中のギャップを割り当てた。全てのＣＤＲ及び超変異を、ＭＳ／ＭＳスペクトルを検査することによって確認した。

得られた配列を表１及び２に示す。

実施例２．２：抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体の調製
Ｂ６（抗ＴＲＤＶ２）及びＣ３３Ｂ９０４（抗ＣＤ３３抗体）の可変領域配列（表３のＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ、表４のＨＣ及びＬＣ）を使用して二重特異性抗体を生成して、Ｔ細胞のリダイレクトによる急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞の死滅について試験した。既に記載されている通り（Ａｔｗｅｌｌｅｔａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６－３５，１９９７）、二重特異性抗体：ＶＧ５６（抗ＴＲＤＶ２×ＣＤ３３）及びＶＧ５３（抗ＴＲＤＶ２×Ｎｕｌｌ）を、ヒトＩｇＧ１としてノブイントゥーホールフォーマットの完全長抗体として生成した。可変領域をコードしている核酸配列を、標準的なＰＣＲ制限酵素ベースのクローニング技術を使用して、ＩｇＧ１発現カセットの定常領域を含有するカスタム哺乳動物発現ベクターにサブクローニングし、配列決定し、検証した。二重特異性抗体を、チャイニーズハムスター卵巣細胞株における一過性トランスフェクションによって発現した。最初に、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ）（Ｂｒｏｗｎ，Ｂｏｔｔｏｍｌｅｙｅｔａｌ．ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ．２６（３）：Ｓ２４９，１９９８．）によって、抗体を精製した。カラムをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．２で平衡化し、２ｍＬ／分の流速で発酵上清を充填した。装填後、カラムをＰＢＳ（４カラム容量（ＣＶ））で洗浄し、続いて、３０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５で溶出した。ＡｋｔａＥｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において２８０ｎｍにおける吸光度によってモニタリングしたときのタンパク質ピークを含有する画分を一緒にプールし、１％の３Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ９．０を添加することによってｐＨ５．０に中和した。最終精製工程として、ＳＵＰＥＲＤＥＸ２００カラム（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、抗体を分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で精製した。試料の完全性を、エンドトキシン測定、並びに還元及び非還元条件下でのＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動によって評価した。ＶＧ５６の代表的なゲルを、図２に示す。最終タンパク質濃度は、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３について１．０ｍｇ／ｍＬ、抗ＴＲＤＶ２／Ｎｕｌｌについて１．０ｍｇ／ｍＬであった。これらに基づく抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３及び抗ＴＲＤＶ２／Ｎｕｌｌの最終ＥＵ濃度は、３．０ＥＵ／ｍｇ未満であった。

実施例２．３：Ｖδ２＋（γδ）Ｔ細胞及び汎Ｔ細胞の特性評価
ゾレドロン酸は、全ＰＢＭＣからＶδ２^＋γδＴ細胞を選択的に拡大する。ＰＢＭＣを、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ γδ Ｔ細胞単離キット（ＳｔｅｍｃｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＣＡ）を製造業者の指示に従って使用して、全新鮮ＰＢＭＣから単離した。単離されたＰＢＭＣを、ＲＰＭＩ－１０（１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ、１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）培地中で、１０００ＩＵ／ｍＬの最終濃度になるように組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）と共に、１０ｎｇ／ｍＬの最終濃度になるように組換えヒトＩＬ－１５（ｒｈＩＬ－１５）と共に、そして、５μＭの最終濃度になるようにゾレドロン酸と共に、１４日間培養した。

代表的なドットプロット中の数字は、ゾレドロン酸＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５（右）と共に培養した全ＰＢＭＣのうちのＶδ２^＋及びＶδ２^－ＴＣＲγδＴ細胞の頻度（平均±ＳＥＭ）を示す。表されたデータは、１回の実験からの５人のドナー（ｎ＝５）の平均（±ＳＥＭ）である（図３）。

実施例２．４：ＫＡＳＵＭＩ－３細胞及びヒトγδＴ細胞を使用した抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体の結合及び細胞傷害特性の評価
抗ＣＤ３３クローンＣ３３Ｂ９０４のパネルＣＤ３３＋細胞株への結合を、ＦＡＣＳによって測定した。ＭＯＬＭ－１３（図４）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図５）、及びＯＣＩ－ＡＭＬ－３（図６）について、ＥＣ５０及びＥＣ９０を計算した。

図７は、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体が、インビトロにおいてＣＤ３３発現ＭＯＬＭ－１３細胞に対するγδＴ細胞細胞傷害性（全ＰＢＭＣから）を媒介することを示す。ゾレドロン酸＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５と共に１２日間培養した健常ドナー由来のＰＢＭＣ（エフェクター）を、ＣＦＳＥ標識ＭＯＬＭ－１３細胞（標的）と、１：１のＥ：Ｔ比において、様々な濃度の二重特異性抗体の存在下で、２４時間共培養した。用量反応曲線は、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３及び抗ＴＲＤＶ２／抗ＮＵＬＬ二重特異性が、用量依存的に、ＣＤ３３発現ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対するγδＴ細胞細胞傷害性を媒介したことを示す（図７）。ここで表される細胞傷害値は、二重特異性抗体の非存在下で観察された基礎細胞傷害値を引いたものである。方法に記載の通り、ＥＣ５０値を計算した。本明細書に示される代表的なデータは、単一の実験からのものである。

図８～図９は、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３二重特異性抗体が、インビトロでＣＤ３３発現Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対するγδＴ細胞細胞傷害性を媒介することを示す。ゾレドロン酸＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５と共に１４日間培養したＰＢＭＣから単離した濃縮γδＴ細胞（エフェクター）を、ＣＦＳＥ標識Ｋａｓｕｍｉ－３細胞（標的）と、１：１のＥ：Ｔ比において、様々な濃度の二重特異性抗体の存在下で、２４時間共培養した。用量反応曲線は、抗ＴＲＤＶ２／抗ＣＤ３３及び抗ＴＲＤＶ２／抗ＮＵＬＬ二重特異性が、１：１（図８～図９）のＥ：Ｔ比で、用量依存的に、ＣＤ３３発現ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対するγδＴ細胞細胞傷害性を媒介したことを示す。ここで表される細胞傷害値は、二重特異性抗体の非存在下で観察された基礎細胞傷害値を引いたものである。方法に記載の通り、ＥＣ５０値を計算した。本明細書に示される代表的なデータは、単一の実験からのものである。

実施例３－ＴＲＤＶ２及び癌細胞抗原に結合する二重特異性抗体
実施例３．１：ＴＲＤＶ２及び癌細胞抗原に結合する二重特異性抗体の調製
抗ＴＲＤＶ２モノクローナル抗体及び目的のＴ細胞上の抗原に結合することができる第２のモノクローナル抗体の可変領域配列を使用して二重特異性抗体を生成して、γδＴ細胞のリダイレクトによる標的Ｔ細胞の死滅について試験する。

例示的なＴＲＤＶ２ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３の配列を表１に提供し、例示的なＶＨドメイン及びＶＬドメインの配列を表２に提供する。しかし、任意のＴＲＤＶ２抗体を二重特異性抗体の調製に使用してよい。

Ｔ細胞抗原に結合する第２のモノクローナル抗体は、本明細書の他の箇所に提供される通り、癌抗原に結合する抗体である。ＣＤ３３に加えて、例示的な癌抗原としては、アンジオポエチン、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、ＰＤＧＦＲα、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、又はＶＥＧＦ－Ｒが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－βＲＩＩ、又はＭＵＣ１である。

抗ＴＲＤＶ２二重特異性抗体を、既に記載されている通り（Ａｔｗｅｌｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６－３５（１９９７））、ヒトＩｇＧ１としてノブイントゥーホールフォーマットの完全長抗体として生成する。

可変領域をコードする核酸配列を、標準的なＰＣＲ制限酵素ベースのクローニング技術を使用して、ＩｇＧ１発現カセットの定常領域を含有するカスタム哺乳動物発現ベクターにサブクローニングする。

二重特異性抗体を、ＣＨＯ細胞株における一過性トランスフェクションによって発現させる。最初に、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴＳＵＲＥＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ）（Ｂｒｏｗｎ，Ｂｏｔｔｏｍｌｅｙｅｔａｌ．ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ．１９９８Ａｕｇ；２６（３）：Ｓ２４９）によって、抗体を精製する。カラムをＰＢＳｐＨ７．２で平衡化し、２ｍＬ／分の流速で発酵上清をロードする。装填後、カラムをＰＢＳ（４カラム容量（ＣＶ））で洗浄し、続いて、３０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５で溶出する。ＡｋｔａＥｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において２８０ｎｍでの吸光度によってモニターされるようなタンパク質ピークを含有する画分を一緒にプールし、１％の３Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ９．０を添加することによってｐＨ５．０に中和する。最終精製工程として、ＳＵＰＥＲＤＥＸ２００カラム（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、抗体を分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で精製する。試料の完全性を、エンドトキシン測定、並びに還元及び非還元条件下でのＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動によって評価する。最終的なタンパク質濃度を決定する。

実施例３．２：ＴＲＤＶ２及び癌抗原に結合する二重特異性抗体の評価及び結合
二重特異性抗体のＶδ２＋γδＴ細胞及びＴ細胞抗原を発現する標的細胞への結合、並びに結果として生じる細胞傷害の評価を、インビトロで判定する。

ゾレドロン酸、ＩＬ－２、及びＩＬ－１５と共に１２日間培養したＰＢＭＣから単離した濃縮γδＴ細胞（エフェクター）を、Ｔ細胞抗原を発現しているＣＦＳＥ標識細胞（標的）と、１：１、５：１、及び１０：１のＥ：Ｔ比において、様々な濃度の二重特異性抗体の存在下で、２４時間共培養した。抗ＴＲＤＶ２／抗ＮＵＬＬ二重特異性抗体を対照として使用する。細胞傷害値は、二重特異性抗体の非存在下で観察された基礎細胞傷害値を減じることによって求める。二重特異性が媒介するγδＴ細胞細胞傷害が、１：１、５：１、及び１０：１のＥ：Ｔ比で、用量依存的に、Ｔ細胞抗原を発現している標的細胞に対して生じるかどうかを判定するために、用量応答曲線を計算する。

更に、３７^°Ｃで７２時間、様々な濃度の抗ＴＲＤＶ２／抗Ｔ細胞抗原二重特異性抗体の存在下で、Ｔ細胞抗原を発現している標的細胞と共に全新鮮ＰＢＭＣを共培養することによって、Ｖδ２＋γδＴ細胞の選択的活性化を評価する。陽性及び陰性対照として、共培養した細胞を、３７℃で７２時間、抗ＣＤ３／抗Ｔ細胞抗原及び抗ＴＲＤＶ２／抗ＮＵＬＬ二重特異性で刺激した。ＣＤ６９、ＣＤ２５の表面発現、及び細胞内グランザイムＢ発現について陽性であるＶδ２^＋、Ｖδ２^－、γδＴ細胞、及び非γδＴ細胞の頻度を求める。
＊＊＊＊＊

当業者は、広い発明概念から逸脱することなく、上で説明される実施形態に変更を行うことができることを理解するであろう。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に制限されず、本説明によって定義されるように本発明の趣旨及び範囲内の修正を包含することを意図するものと理解される。

Claims

多重特異性抗体であって、
（ａ）Ｔ細胞受容体デルタ可変部２（T Cell Receptor Delta Variable 2、ＴＲＤＶ２）に結合する第１の結合ドメインと、
（ｂ）癌細胞の表面上の抗原に結合する第２の結合ドメインと、
を含む、多重特異性抗体。
前記第１の結合ドメインが、
（ｉ）それぞれ、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、
を含む、請求項１に記載の多重特異性抗体。
（ｉ）前記第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、Ｋａｂａｔ付番システムに従う、
（ｉｉ）前記第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、Ｃｈｏｔｈｉａ付番システムに従う、
（ｉｉｉ）前記第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、ＡｂＭ付番システムに従う、
（ｉｖ）前記第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、Ｃｏｎｔａｃｔ付番システムに従う、
（ｖ）前記第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、ＩＭＧＴ付番システムに従う、又は
（ｖｉ）前記第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、例示的付番システムに従う、請求項２に記載の多重特異性抗体。
前記第１の結合ドメインが、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、
を含む、請求項１に記載の多重特異性抗体。
（ｉ）前記第１の結合ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、
（ｉｉ）前記第１の結合ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、又は
（ｉｉｉ）前記第１の結合ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項２に記載の多重特異性抗体。
前記第１の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３が、前記ＴＲＤＶ２の抗原又は前記ＴＲＤＶ２のエピトープに対する結合部位を形成する、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
前記ＴＲＤＶ２が、Ｔ細胞の表面上に存在する、請求項１～６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
前記癌細胞が、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌の細胞である、請求項１～７のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
前記癌細胞の表面上の前記抗原が、アンジオポエチン、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、ＰＡＰ、ＰＤＧＦＲα、ＰＳＡ、ＰＳＡ３、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＲＰ、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｒ、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、又はＢＲＣＡ１である、請求項１～８のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
前記癌細胞の表面上の前記抗原が、ＣＤ３３である、請求項１～９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
前記第２の結合ドメインが、
（ｉ）それぞれ、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬと、
を含む、請求項１０に記載の多重特異性抗体。
（ｉ）前記第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、Ｋａｂａｔ付番システムに従う、
（ｉｉ）前記第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、Ｃｈｏｔｈｉａ付番システムに従う、
（ｉｉｉ）前記第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、ＡｂＭ付番システムに従う、
（ｉｖ）前記第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、Ｃｏｎｔａｃｔ付番システムに従う、
（ｖ）前記第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、ＩＭＧＴ付番システムに従う、又は
（ｖｉ）前記第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、例示的付番システムに従う、請求項１１に記載の多重特異性抗体。
前記第２の結合ドメインが、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含む、ＶＬと、を含む、請求項１０に記載の多重特異性抗体。
（ｉ）前記第２の結合ドメインが、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、
（ｉｉ）前記第２の結合ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、又は
（ｉｉｉ）前記第２の結合ドメインが、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項１３に記載の多重特異性抗体。
前記第２の結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３が、前記ＣＤ３３の抗原又は前記ＣＤ３３のエピトープに対する結合部位を形成する、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
（ｉ）前記第１の結合ドメインが多価である、前記第２の結合ドメインが多価である、又は前記第１の結合ドメイン及び前記第２の結合ドメインの両方が多価である、
（ｉｉ）前記第１の結合ドメインが、少なくとも３つの抗原に結合することができる、又は前記第２の結合ドメインが、少なくとも３つの抗原に結合することができる、
（ｉｉｉ）前記第１の結合ドメインが、少なくとも４つの抗原に結合することができる、又は前記第２の結合ドメインが、少なくとも４つの抗原に結合することができる、又は
（ｉｖ）前記第１の結合ドメインが、少なくとも５つの抗原に結合することができる、又は前記第２の結合ドメインが、少なくとも５つの抗原に結合することができる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体、三重特異性抗体、又は四重特異性抗体である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
前記抗体が、
（ｉ）ヒト化抗体である、
（ｉｉ）任意選択で、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４抗体である、ＩｇＧ抗体である、
（ｉｉｉ）カッパ軽鎖もしくはラムダ軽鎖を含む、又は
（ｉｖ）モノクローナル抗体である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
γδＴ細胞の表面上のＴＲＤＶ２に結合することができる第１の手段と、癌抗原に結合することができる第２の手段と、を含む多重特異性抗体。
請求項１～１９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体をコードする、核酸。
請求項２０に記載の核酸を含む、ベクター。
請求項２１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
請求項１３に記載のベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キット。
請求項１～１９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
１つを超える標的分子に結合する抗体を作製するプロセスであって、前記分子が、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、癌細胞の表面上の抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原及び癌細胞の表面上の抗原に結合することができる抗体を提供する機能を実行する工程と、
を含む、プロセス。
癌細胞の表面上の抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程がｎ回繰り返され、γδＴ細胞上のＴＲＤＶ２抗原及びｎ個の標的分子に結合することができる結合ドメインを提供する機能を実行するｎ個の工程をさらに含み、ｎが少なくとも２である、請求項２５に記載のプロセス。
ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞を癌細胞に方向付ける方法であって、前記γδＴ細胞を請求項１～１９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体と接触させることを含み、前記接触させることによって前記γδＴ細胞を前記癌細胞に方向付ける、方法。
細胞表面上で癌抗原を発現している癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、前記癌細胞を請求項１～１９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体と接触させることを含み、前記癌細胞を医薬組成物と接触させることによって前記癌細胞の成長又は増殖を阻害する、方法。
前記癌細胞が、前記多重特異性抗体と接触している間、ＴＲＤＶ２を発現しているγδＴ細胞の存在下にある、請求項２８に記載の方法。
対象における癌細胞を排除する方法であって、有効量の請求項１～１９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
対象における癌を治療する方法であって、有効量の請求項１～１９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
前記対象が、前記治療を必要としている対象である、請求項３０又は３１に記載の方法。
ＴＲＤＶ２を発現するγδＴ細胞を活性化する方法であって、前記γδＴ細胞を請求項１～１９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体と接触させることを含む、方法。