KR20220154190A - 델타 사슬 매개 면역을 조절하기 위한 물질 및 방법 - Google Patents

델타 사슬 매개 면역을 조절하기 위한 물질 및 방법 Download PDF

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라즈쿠마르 가네산
이크발 에스. 그루얼
산자야 싱
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얀센 바이오테크 인코포레이티드
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Abstract

항-TRDV2 다중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 기재되어 있다. 또한, 상기 항체를 인코딩하는 핵산, 상기 항체를 포함하는 조성물, 상기 항체를 생성하는 방법, 및 질병을 치료 또는 예방하기 위하여 상기 항체를 사용하는 방법이 기재된다.

Description

델타 사슬 매개 면역을 조절하기 위한 물질 및 방법
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2020년 3월 13일자로 출원된 미국 특허 출원 제62/989,111호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이의 내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은 특히 T 세포 수용체(TCR) 재유도(redirection) 기술, 예컨대 TRDV2(T cell Receptor Delta Variable 2) 분자를 표적화하는 기술에 관한 것이다. 소정 태양에서, TRDV2에 결합하는 분자, 예컨대 단일클론 TRDV2 다중특이성 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편 - 이중특이성 항체를 포함함 -, 상기 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 상기 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 상기 항체를 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공된다. 상기 TRDV2에 결합하는 분자, 예컨대 항체의 제조 방법, 및 상기 항체를 사용하여 암 세포에 대한 면역 반응을 조절하는 방법이 또한 제공된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 파일명이 "14620-109-228_SL"이고, 작성일이 2021년 3월 8일이며, 크기가 22,942 바이트인 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-웹을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
T 세포는 가장 풍부하고(혈액 림프구의 약 75%) 강력한 면역 살해 세포이다. 항암 면역 반응에서 이펙터 T 세포의 역할은 시험관내 연구, 및 몇몇 유형의 암에서의 CD8+ T 세포의 높은 침윤이 유리한 임상 예후와 상관된다는 관찰에 의해 강력하게 지지된다. T 세포를 재유도하여 암 세포를 용해시키기 위한 몇몇 다양한 전략이 현재 임상 시험에서 조사 중이지만, 이들 모두는 유의한 제한 또는 부작용을 갖는다. 개선된 T 세포 재유도 분자 및 방법에 대한 필요성이 당업계에 여전히 존재한다.
일 태양에서, TRDV2에 결합하는 분자, 예컨대 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 분자는 (a) TRDV2 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포의 표면 상의 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재하고, 암 세포의 표면 상에서 발현되는 항원은 암 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 γδ T 세포의 표면 상의 TRDV2 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 때 사멸된다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간화되거나, 제2 결합 도메인은 인간화되거나, 또는 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두가 인간화된다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 항체이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, EC50은 γδ T 이펙터 세포와 암 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가된다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 다가 형태이다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다.
다른 태양에서, 이중특이성 항체가 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 γδ T 세포의 표면 상의 TRDV2에 결합할 수 있는 제1 수단; 및 암 항원에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 암 세포의 표면 상에 존재한다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체를 인코딩하는 핵산이 제공된다. 일부 실시 형태에서, 핵산을 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트가 또한 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물을 생성하는 방법이 제공된다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 이중특이성 항체를 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, 하나 초과의 표적 분자에 결합하는 항체를 제조하는 공정이 제공되며, 상기 분자는 γδ T 세포 상의 TRDV2 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 γδ T 세포 상의 TRDV2 항원 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 항체를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계는 n회 반복되고, γδ T 세포 상의 TRDV2 항원 및 n개의 표적 분자에 결합할 수 있는 결합 도메인을 제공하는 기능을 수행하기 위한 n회의 단계를 추가로 포함하며, 여기서 n은 적어도 2이다.
다른 태양에서, TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 접촉시키는 단계는 상기 γδ T 세포를 상기 암 세포로 유도한다.
다른 태양에서, 세포 표면 상에서 암 항원을 발현하는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 암 세포를 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체와 접촉하고 있는 동안에 TRDV2를 발현하는 γδ T 세포의 존재 하에 있다.
다른 태양에서, 대상체에서 암 세포를 제거하거나 암을 치료하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
다른 태양에서, TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 활성화하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 접촉시키는 단계는 TRDV2를 발현하는 대조 γδ T 세포와 대비하여, CD69, CD25, 및/또는 그랜자임 B 발현의 증가를 가져온다.
일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-특이적 항원, 종양-관련 항원, 또는 신생항원이다.
일부 실시 형태에서, 암 세포는 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암(intestinal cancer), 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암(sinus cancer), 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암의 세포이다.
일부 실시 형태에서, 암은 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암이다.
일부 실시 형태에서, 부신암은 부신피질 암종(ACC), 부신 피질암, 크롬친화세포종, 또는 신경아세포종이다.
일부 실시 형태에서, 항문암은 편평 세포 암종, 총배출강성(cloacogenic) 암종, 선암종, 기저 세포 암종, 또는 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 맹장암은 신경내분비 종양(NET), 점액성 선암종, 배상 세포 카르시노이드, 장형(intestinal-type) 선암종, 또는 반지 세포 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 담관암은 간외 담관암, 선암종, 폐문 담관암, 폐문주위 담관암, 원위부 담관암, 또는 간내 담관암이다.
일부 실시 형태에서, 방광암은 이행 세포 암종(TCC), 유두상 암종, 편평 암종, 편평 세포 암종, 선암종, 소세포 암종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 골암은 원발성 골암, 육종, 골육종, 연골육종, 육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 골의 거대 세포 종양, 척삭종, 또는 전이성 골암이다.
일부 실시 형태에서, 뇌암은 성상세포종, 뇌간 신경아교종, 교아세포종, 수막종, 뇌실막종, 핍지교종, 혼합 신경교종, 뇌하수체 암종, 뇌하수체 선종, 두개인두종, 생식 세포 종양, 송과체 부위 종양, 수아세포종, 또는 원발성 CNS 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 유방암은 유방 선암종, 침윤성 유방암, 비침윤성 유방암, 유방 육종, 화생성 암종, 선낭성 암종, 엽상 종양, 혈관육종, HER2-양성 유방암, 삼중-음성 유방암, 또는 염증성 유방암이다.
일부 실시 형태에서, 자궁경부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 결직장암은 결직장 선암종, 원발성 결직장 림프종, 위장관 간질 종양, 평활근육종, 카르시노이드 종양, 점액성 선암종, 반지 세포 선암종, 위장관 카르시노이드 종양, 또는 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 식도암은 선암종 또는 편평 세포 암종이다.
일부 실시 형태에서, 담낭암은 선암종, 유두상 선암종, 선편평세포 암종, 편평 세포 암종, 소세포 암종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 임신성 영양아세포성 질병(GTD)은 포상 기태, 임신성 영양아세포성 신생물(GTN), 융모막암종, 태반-부위 영양아세포성 종양(PSTT), 또는 상피모양 영양아세포성 종양(ETT)이다.
일부 실시 형태에서, 두경부암은 후두암, 비인두암, 하인두암, 비강암, 부비동암, 타액선암, 구강암, 구인두암, 또는 편도선암이다.
일부 실시 형태에서, 호지킨 림프종은 고전적 호지킨 림프종, 결절성 경화증, 혼합 세포형, 림프구-풍부, 림프구-고갈, 또는 결절성 림프구-우세형 호지킨 림프종(NLPHL)이다.
일부 실시 형태에서, 장암은 소장암, 소장의 암, 선암종, 육종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 또는 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 신장암은 신세포 암종(RCC), 투명 세포 RCC, 유두상 RCC, 혐색소성 RCC, 집합관 RCC, 미분류 RCC, 이행 세포 암종, 요로상피암, 신우 암종, 또는 신장 육종이다.
일부 실시 형태에서, 백혈병은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 모발상 세포 백혈병(HCL), 또는 골수이형성 증후군(MDS)이다. 구체적인 실시 형태에서, 백혈병은 AML이다.
일부 실시 형태에서, 간암은 간세포 암종(HCC), 섬유층판성 HCC, 담관암종, 혈관육종, 또는 간 전이이다.
일부 실시 형태에서, 폐암은 소세포 폐암, 소세포 암종, 복합형 소세포 암종, 비소세포 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐암, 대세포 미분화 암종, 폐 결절, 전이성 폐암, 선편평세포 암종, 대세포 신경내분비 암종, 타액선형 폐 암종, 폐 카르시노이드, 중피종, 폐의 육종모양 암종, 또는 악성 과립 세포 폐 종양이다.
일부 실시 형태에서, 흑색종은 표재성 확산성 흑색종, 결절성 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 악성 흑자 흑색종, 무멜라닌성 흑색종, 섬유조직형성 흑색종, 안구 흑색종, 또는 전이성 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 중피종은 흉막 중피종, 복막 중피종, 심막 중피종, 또는 고환 중피종이다.
일부 실시 형태에서, 다발성 골수종은 활동성 골수종 또는 무증상 골수종이다.
일부 실시 형태에서, 신경내분비 종양은 위장관 신경내분비 종양, 췌장 신경내분비 종양, 또는 폐 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 비호지킨 림프종은 역형성 대세포 림프종, 림프아구성 림프종, 말초 T 세포 림프종, 여포성 림프종, 피부 T 세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 변연부 B-세포 림프종, MALT 림프종, 소세포 림프구성 림프종, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소림프구성 림프종(SLL), 전구체 T-림프아구성 백혈병/림프종, 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 T 세포 림프종/백혈병(ATLL), 모발상 세포 백혈병, B-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 B-세포 림프종, 원발성 중추 신경계(CNS) 림프종, 외투 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종, 점막-관련 림프계 조직(MALT) 림프종, 림프절 변연부 B-세포 림프종, 비장 변연부 B-세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, B-세포 비호지킨 림프종, T 세포 비호지킨 림프종, 자연 살해 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 알리버트-바진(Alibert-Bazin) 증후군, 세자리(Sezary) 증후군, 원발성 피부 역형성 대세포 림프종, 말초 T 세포 림프종, 혈관면역아구성 T 세포 림프종(AITL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 전신 ALCL, 장병증형 T 세포 림프종(EATL), 또는 간비장 감마/델타 T 세포 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 구강암은 편평 세포 암종, 사마귀모양 암종, 소타액선 암종, 림프종, 양성 구강 종양, 호산구성 육아종, 섬유종, 과립 세포 종양, 각질극세포종, 평활근종, 골연골종, 지방종, 슈반세포종, 신경섬유종, 유두종, 첨규 콘틸로마, 우췌상 황색종, 화농성 육아종, 횡문근종, 치원성 종양, 백반증, 홍반증, 편평 세포 구순암, 기저 세포 구순암, 입의 암, 치육암, 또는 혀암이다.
일부 실시 형태에서, 난소암은 난소 상피암, 점액성 상피 난소암, 자궁내막모양 상피 난소암, 투명 세포 상피 난소암, 미분화 상피 난소암, 난소 저악성도 잠복 종양, 원발성 복막 암종, 난관암, 생식 세포 종양, 기형종, 난소고환종, 난소 생식 세포암, 내배엽 동종양, 성삭-간질 종양, 성삭-생식선 간질 종양, 난소 간질 종양, 과립막 세포 종양, 과립막-난포막 종양, 세르톨리-라이디히(Sertoli-Leydig) 종양, 난소 육종, 난소 암육종, 난소 선육종, 난소 평활근육종, 난소 섬유육종, 크루켄베르크(Krukenberg) 종양, 또는 난소 낭포이다.
일부 실시 형태에서, 췌장암은 췌장 외분비선암, 췌장 내분비선암, 또는 췌장 선암종, 췌도 세포 종양, 또는 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 전립선암은 전립선 선암종, 전립선 육종, 이행 세포 암종, 소세포 암종, 또는 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 동암은 편평 세포 암종, 점막 세포 암종, 선양 낭포 세포 암종, 선방 세포 암종, 비동 미분화 암종, 비강암, 부비동암, 상악동암, 사골동암, 또는 비인두암이다.
일부 실시 형태에서, 피부암은 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 카포시 육종(KS), 광선 각화증, 피부 림프종, 또는 각질극세포종이다.
일부 실시 형태에서, 연조직암은 혈관육종, 피부섬유육종, 상피모양 육종, 유잉 육종, 섬유육종, 위장관 간질 종양(GIST), 카포시 육종, 평활근육종, 지질육종, 탈분화된 지질육종(DL), 점액모양/둥근 세포 지질육종(MRCL), 잘 분화된 지질육종(WDL), 악성 섬유성 조직구종, 신경섬유육종, 횡문근육종(RMS), 또는 활막 육종이다.
일부 실시 형태에서, 척수암은 척수 전이성 종양이다.
일부 실시 형태에서, 위암은 위 선암종, 위 림프종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 위 카르시노이드 종양, I형 ECL-세포 카르시노이드, II형 ECL-세포 카르시노이드, 또는 III형 ECL-세포 카르시노이드이다.
일부 실시 형태에서, 고환암은 정상피종, 비정상피종, 배아 암종, 난황낭 암종, 융모막암종, 기형종, 생식선 간질 종양, 라이디히 세포 종양, 또는 세르톨리 세포 종양이다.
일부 실시 형태에서, 인후암은 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 후두암, 인두암, 비인두암, 구인두암, 하인두암, 후두암, 후두 편평 세포 암종, 후두 선암종, 림프상피종, 방추 세포 암종, 사마귀모양 암, 미분화 암종, 또는 림프절암이다.
일부 실시 형태에서, 갑상선암은 유두상 암종, 여포성 암종, 휘르틀(H
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rthle) 세포 암종, 수질성 갑상선 암종, 또는 역형성 암종이다.
일부 실시 형태에서, 자궁암은 자궁내막암, 자궁내막 선암종, 자궁내막모양 암종, 장액성 선암종, 선편평세포 암종, 자궁 암육종, 자궁 육종, 자궁 평활근육종, 자궁내막 간질 육종, 또는 미분화 육종이다.
일부 실시 형태에서, 질암은 편평 세포 암종, 선암종, 흑색종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 외음부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 암 항원은 안지오포이에틴, BCMA, CD19, CD20, CD22, CD25(IL2-R), CD30, CD33, CD37, CD38, CD52, CD56, CD123(IL-3R), cMET, DLL/노치, EGFR, EpCAM, FGF, FGF-R, GD2, HER2, 메소텔린, 넥틴-4, PDGFRα, RANKL, SLAMF7, TROP2, VEGF, 또는 VEGF-R이다.
일부 실시 형태에서, 암 항원은 CEA, 미성숙 라미닌 수용체, TAG-72, HPV E6, HPV E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2(calcium-activated chloride channel 2), 사이클린-B1, 9D7, EpCAM, EphA3, Her2/neu, 텔로머라제, 메소텔린, SAP-1, 생존 형태(surviving), BAGE 패밀리 항원, CAGE 패밀리 항원, GAGE 패밀리 항원, MAGE 패밀리 항원, SAGE 패밀리 항원, XAGE 패밀리 항원, NY-ESO-1/LAGE-1, PRAME, SSX-2, 멜란(Melan)-A, MART-1, Gp100, pmel17, 티로시나제, TRP-1, TRP-2, P. 폴리펩티드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, 피브로넥틴, MART-2, p53, Ras, TGF-βRII, 또는 MUC1이다.
다른 태양에서, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
a. 제1 중쇄(HC1);
b. 제2 중쇄(HC2);
c. 제1 경쇄(LC1); 및
d. 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다.
일 실시 형태에서, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 제1 항원에 대한 결합 부위는 γδ T 세포 상의 TRDV2에 결합한다.
다른 실시 형태에서, 제2 항원에 대한 결합 부위는 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합한다.
다른 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2에 결합하고, 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원의 결합은 암 세포의 사멸을 가져온다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체는 인간화 HC1 및 인간화 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 항체의 HC2 및 LC2는 CD33에 결합한다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 항체의 HC2 및 LC2는 CD33의 C2 도메인에 결합한다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 항체의 HC2 및 LC2는 CD33의 V 도메인에 결합한다.
다른 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형(isotype)이다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형이다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
일 실시 형태에서, EC50은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물로 평가된다.
다른 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다.
또 다른 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다.
구체적인 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다가 형태이다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다.
단리된 γδ T 세포 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 또한 제공되며, 상기 단리된 γδ T 세포 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고,
HC1과 LC1은 γδ T 세포 상의 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고,
HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다.
이중특이성 항체가 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 T 세포 수용체 감마 사슬과 특이적으로 결합할 수 있는 제1 수단; 및 T 세포 수용체 감마 사슬이 아닌 표적 분자와 특이적으로 결합할 수 있는 제2 수단을 포함한다.
하나 초과의 표적 분자에 특이적으로 결합할 수 있는 분자를 제조하는 공정이 또한 제공되며, 상기 분자는 T 세포 수용체 감마 사슬에 결합할 수 있는 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 표적에 결합할 수 있는 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 T 세포 수용체 감마 사슬 및 표적 분자에 특이적으로 결합할 수 있는 분자를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함하는, 공정.
일 실시 형태에서, 상기 공정에서 표적에 결합할 수 있는 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 얻는 기능을 수행하기 위한 단계는 n회 반복되고, T 세포 수용체 감마 사슬 및 n개의 표적 분자에 특이적으로 결합할 수 있는 분자를 제공하는 기능을 수행하기 위한 n회의 단계를 추가로 포함하며, 여기서 n은 적어도 2이다.
다른 태양에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, Vδ2에 특이적으로 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2는 서열 번호 9, 서열 번호 10, 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC2는 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, CD33에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다.
소정 실시 형태에서, CD33의 C2 도메인에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위가 형성된다. 다른 실시 형태에서, CD33의 V 도메인에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위가 형성된다.
일 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HC2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LC2를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LC2를 포함한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재한다.
다른 실시 형태에서, CD33은 종양 세포 또는 CD34+ 줄기 세포의 표면 상에 존재한다.
다른 실시 형태에서, γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 암 세포의 표면 상의 CD33에 대한 이중특이성 항체의 결합은 암 세포의 사멸을 가져온다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 HC1 및 인간화 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 인간화 HC2 및 인간화 LC2를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형이다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 IgG4 동종형이다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
일 실시 형태에서, EC50은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물로 평가된다.
다른 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다.
또 다른 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다.
구체적인 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
본 명세서에 제공된 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편을 제조하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건 하에서 배양하는 단계, 및 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원 에피토프-결합 단편이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원 에피토프-결합 단편은 제1 항원에 대한 결합 부위 및 제2 항원에 대한 결합 부위를 포함하며, 상기 제1 항원에 대한 결합 부위는 γδ T 세포 상의 TRDV2 에피토프에 결합하고, 상기 제2 항원에 대한 결합 부위는 표적 세포의 표면 상의 상기 제2 항원의 에피토프에 결합하고, 상기 γδ T 세포 상의 TRDV2 에피토프의 결합과 상기 표적 세포 상의 제2 항원 에피토프의 결합은 상기 표적 세포의 사멸을 가져온다.
일 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 인간화 HC1 및 인간화 LC를 포함한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 CD33 에피토프에 결합한다.
소정 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 CD33 C2 도메인 에피토프에 결합한다. 다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 CD33 V 도메인 에피토프에 결합한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HC2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LC2를 포함한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LC2를 포함한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형이다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형이다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
일 실시 형태에서, EC50은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물로 평가된다.
다른 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 다른 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 구체적인 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
단리된 γδ T 세포 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 또한 제공되며, 상기 단리된 γδ T 세포 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제1 항원 에피토프에 대한 결합 부위 및 제2 항원 에피토프에 대한 결합 부위를 포함하며, 상기 제1 항원 에피토프에 대한 결합 부위는 γδ T 세포 상의 제1 항원에 결합하고, 상기 제2 항원 에피토프에 대한 결합 부위는 표적 세포의 표면 상의 상기 제2 항원 에피토프에 결합하고, 상기 γδ T 세포 상의 제1 항원 에피토프의 결합과 상기 표적 세포 상의 제2 항원 에피토프의 결합은 상기 표적 세포의 사멸을 가져온다.
다른 태양에서, TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다.
일 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 상기 TRDV2 이중특이성 항체는 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, TRDV2 이중특이성 항체는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, TRDV2 이중특이성 항체는 γδ T 세포 상의 TRDV2에 결합하는 제1 항원을 포함하는 결합 부위를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, TRDV2 이중특이성 항체는 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 여기서 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 대한 이중특이성 항체의 결합은 암 세포의 사멸을 가져온다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 여기서 HC1 및 LC1은 인간화 형태이다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 여기서 HC2 및 LC2는 CD33에 결합한다. 소정 실시 형태에서, HC2 및 LC2는 CD33 C2 도메인 에피토프에 결합한다. 소정 실시 형태에서, HC2 및 LC2는 CD33 V 도메인 에피토프에 결합한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형이다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형이다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 여기서 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 여기서 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 여기서 EC50은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물로 평가된다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 여기서 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 또 다른 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다가 형태이다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 단리된 핵산은 TRDV2 이중특이성 항체를 인코딩하며, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다.
본 명세서에 제공된 단리된 핵산을 포함하는 벡터가 또한 제공된다.
본 명세서에 제공된 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다.
본 명세서에 제공된 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트가 또한 제공된다.
다른 태양에서, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다.
일 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 이중특이성 항체는 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 이중특이성 항체는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 LC1을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 이중특이성 항체는 γδ T 세포 상의 TRDV2에 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 여기서 제2 항원에 대한 결합 부위는 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 여기서 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 대한 이중특이성 항체의 결합은 암 세포의 사멸을 가져온다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 여기서 HC1 및 LC1은 인간화 형태이다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 여기서 HC2 및 LC2는 CD33에 결합한다. 소정 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 여기서 HC2 및 LC2는 CD33 C2 도메인 에피토프에 결합한다. 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 여기서 HC2 및 LC2는 CD33 V도메인 에피토프에 결합한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 이중특이성 항체를 포함하며, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형이다.
Vδ2-발현 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 Vδ2-발현 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 Vδ2-발현 γδ T 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 Vδ2-발현 γδ T 세포를 암 세포로 유도한다.
세포 표면 상에서 암 항원을 발현하는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 암 세포를 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다.
일 실시 형태에서, 암 세포는 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉해 있는 동안에 Vδ2-발현 γδ T 세포의 존재 하에 있다.
암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은
a. 암 치료를 필요로 하는 대상체를 확인하는 단계; 및
b. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물을 상기 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며,
상기 약제학적 조성물을 상기 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계는 상기 대상체에서 상기 암을 치료하는, 방법.
Vδ2-발현 γδ T 세포를 활성화하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 Vδ2-발현 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 Vδ2-발현 γδ T 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 대조 Vδ2-발현 γδ T 세포와 대비하여 CD69, CD25, 및/또는 그랜자임 B 발현의 증가를 가져온다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물을 생성하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
전술한 개요뿐만 아니라, 본 출원의 구체적인 실시 형태의 하기의 상세한 설명도 첨부 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 출원은 도면에 나타낸 정확한 실시 형태로 제한되지 않음이 이해되어야 한다.
도 1은 예시적인 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체의 결합이 γδ T-세포를 CD33+인 암 세포로 동원하여 암 세포 사멸을 유도하는 것을 입증하는 개략도를 나타낸다.
도 2는 SDS-PAGE(환원성 및 비환원성) 겔에 의해 평가될 때의 VG56 이중특이성 항체의 완전성을 나타낸다.
도 3은 졸레드론산이 전체 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 유래되는 Vγ9Vδ2 세포를 선택적으로 증폭시킨다는 것을 입증하는 그래프를 나타낸다.
도 4는 FACS에 의해 측정된 바와 같은 MOLM-13 종양 세포주에 대한 항-CD33 항체(클론 C33B904)의 결합을 나타낸다. MOLM-13(높은 수용체 밀도)에 대한 EC50은 134.3 nM이었다.
도 5는 FACS에 의해 측정된 바와 같은 Kasumi-1 종양 세포주에 대한 항-CD33 항체(클론 C33B904)의 결합을 나타낸다. Kasumi-1(중간 밀도)에 대한 EC50은 82.2 nM이었다.
도 6은 FACS에 의해 측정된 바와 같은 OCI-AML-3 종양 세포주에 대한 항-CD33 항체(클론 C33B904)의 결합을 나타낸다. OCI-AML-3(낮은 표면 밀도)에 대한 EC50은 16.4 nM이었다.
도 7은 1:1의 E:T 비에서의 Kasumi-3 세포에 대한 Vδ2xCD33 이중특이성 항체-매개 전체 PBMC-기반 세포독성을 나타낸다. Vδ2xCD33(VG56)에 대한 EC50 값은 92.8 pM이었다.
도 8은 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체가 1:1 이펙터 대 표적 세포 비로 CD33 발현 Kasumi-3 세포에 대한 γδ T 세포 세포독성을 매개하였음을 입증하는 그래프를 나타낸다. 이펙터 세포는 PBMC로부터 단리된 풍부화된 γδ T 세포였다.
도 9는 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체가 1:1 이펙터 대 표적 세포 비로 CD33 발현 Kasumi-3 세포에 대한 γδ T 세포 세포독성을 매개하였음을 입증하는 그래프를 나타낸다. 이펙터 세포는 PBMC로부터 단리된 풍부화된 γδ T 세포였다.
T 세포는 가장 풍부하고(혈액 림프구의 약 75%) 강력한 면역 살해 세포이다. 항암 면역 반응에서 이펙터 T 세포의 역할은 시험관내 연구, 및 몇몇 유형의 암에서의 CD8+ T 세포의 높은 침윤이 유리한 임상 예후와 상관된다는 관찰에 의해 강력하게 지지된다.
최근에, 암 치료를 위한 T 세포의 치료적 잠재력을 이용하기 위한 실질적인 진보가 이루어져 왔다. 암 세포를 용해시키도록 T 세포를 재유도하기 위한 다음 2가지의 상이한 전략이 현재 임상 시험에서 조사 중이다: 1) 암 세포에 결합하는 항체 단편을 사용함으로써 키메라 항원 수용체(CAR)로 생체외(ex vivo)에서 조작된 공여자 T 세포, 및 2) T 세포 상의 CD3에 결합하는 하나의 아암(arm)과 동시에, 암-관련 항원에 결합하는 제2 아암으로 이루어진 재조합 이중특이성 단백질 치료제. 후자에 초점을 맞추면, 이중특이성 단백질은 T 세포와 암 세포의 효율적인 결합을 가능하게 한다. 이는 암-결합된 이중특이성 분자에 의해 유도된 CD3 공동수용체 자극을 가져오며, 이러한 자극은 MHC-비의존성 다중클론 T 세포 활성화 및 강력한 암 세포 용해를 이끌어낸다. 이 접근법은 암 특이적 내성 기전의 일부를 우회하고, 동원된 T 세포가 암 세포를 사멸시킬 수 있게 한다.
실제로, CD3 이중특이성 단백질들 중 하나인, 블리나투모맙, 즉, CD3/CD19 이중특이성 T 세포 인게이저(BiTE)가 불응성 B-급성 림프아구성 백혈병(ALL)의 치료에 대해 FDA에 의해 승인되었다. BiTE 유사 분자가 어떻게 작용하는지에 대한 작용 기전이 여전히 충분히 이해되어 있지는 않지만, 그것은 이중특이성 시약이 2개의 세포 사이에 인공 용해 시냅스(artificial lytic synapse)의 형성을 유도할 수 있다는 증거를 제공하는데, 이때 인공 용해 시냅스는 T 세포에 의한 암 세포의 천연 발생 용해 매개 사멸을 모방한다. 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포 및 블리나투모맙에 의한 전임상 실험은 개념을 검증하고 이러한 접근법에 대한 강력한 이론적 근거를 제공하였으며, 임상 시험은 인간 환자에서 개념 증명(POC)을 이제 제공하기에 이르렀다. 이러한 접근법의 임상적 성공으로 인해, CD3-유도 이중특이체의 분야는 빠르게 성장하고 있으며, 다수의 암 항원을 표적화하는 치료제를 생성하기 위해 다양한 항체 포맷이 사용되고 있다. 이들 포맷 중 일부는 블리나투모맙에 대해 관찰되는 주요 문제 - 예를 들어, 블리나투모맙은 순환으로부터 급속하게 제거되고, 4주 치료 사이클 동안 연속적인 i.v. 주입을 필요로 함 - 의 완화의 가능성이 기대된다. 더 긴 혈청 반감기 - 그럼으로써 연속 주입을 피함 - 를 위해 새로운 포맷이 설계된다.
T 세포-매개 반응이 극히 강력하기 때문에, 사이토카인 폭풍을 유도하거나 T 세포를 낮은 수준의 표적 항원을 발현하는 건강한 조직을 향해 유도함으로써 심각한 부작용이 초래될 수 있다. 현재 임상 시험에 있는 대부분의 CD3 이중특이성 단백질은 발현이 조혈 계통(CD19, CD20, CD123 등)에 국한된 수용체, 또는 고도로 특이적인 암 항원, 예컨대 CEA, PSMA, 및 MHCI-gp100을 표적화하고 있다. 따라서, CD3-기반 재유도의 적용가능성이 암 특이성을 갖는 항원 또는 혈액암으로 제한될 수 있었는데, 이는 많은 고형 암 유형에 대한 적용을 방해한다. 게다가, 현재 이용가능한 기술에 의한 CD3-유도 T 세포 재유도는 다양한 이유(예를 들어, 미성숙, CD4+, Treg, Pan CD8(CTL 없음), 탈진된 T 세포 등을 포함한 모든 유형의 CD3+ T 세포의 동원 - 이는 비효율적인 암 제거로 이어질 수 있음 -; 좁은 치료 지수를 가져올 수 있는 조기 T 세포 활성화; 최적에 못 미치는(suboptimal) T 세포 활성화; T 세포 탈진 또는 T 세포의 활성화-유도 사멸; 최적의 투여 수준을 제한할 수 있는 사이토카인 방출 증후군의 유도; 암 세포 아포톱시스의 억제; 항암 적응 면역 반응의 더 적은 활성화; 다른 면역요법과 병용하는 데 있어서 제한된 능력 등)로 인해 고형 암에서 많은 효능을 나타내지 못하였다.
CD3을 통한 T 세포의 재유도가 매력적이긴 하지만, 그것은 고전적인 항원-특이적 T 세포 반응을 우회하는 다중클론 세포독성 반응을 가져오기 때문에, 다음 2가지 주요 문제를 야기한다: 1) 면역 회피에서 적극적 역할을 하는 것으로 기재되어 있는 다양한 면역조절성 및 면역억제성 T 세포를 포함한 CD3+ T 세포가 무차별적으로 자극될 수 있다는 문제, 및 2) 심각한 부작용을 가져올 수 있는 Pan T 세포 활성화가 사이토카인 폭풍을 유도함으로써 야기될 수 있다는 문제. 따라서, CD3을 통한 재유도는 잠재적으로 최적에 못 미치는 효능 및 좁은 치료 지수를 가져올 수 있다. CD3-재유도 제한들 중 일부를 경감시키기 위해, T 세포를 암 세포로 재유도하기 위한 대안적인 전략이 모색되어야 한다. 한 가지 접근법은 Pan-T 세포를 무차별적으로 자극하고 동원하기보다 암 세포를 용해시킬 수 있는 세포독성 세포(하위세트)만의 재유도를 선택하는 것이 될 것이다.
T 세포를 동원하는 다른 방법은 T 세포들의 특정 하위세트를 표적화하는 것이다. 최근에, γδ T 세포가 암 면역요법 분야에서 큰 관심을 제공해 왔다. 선천 면역에 대해 잘 알려진 이들 비통상적인 T 세포는 말초 CD3+ T 세포의 단지 소량의 비율(1% 내지 5%)을 나타내지만, 상피 조직 내의 T 세포의 주요 하위세트(20% 내지 50%)를 구성한다.
순환 γδ T 세포는 Vγ9(TRGV9) 및 Vδ2(TRDV2) 사슬의 이종이량체를 주로 발현하는 반면, 조직 γδ T 세포는 상이한 Vγ 사슬들과 관련된 Vδ1 사슬을 우선적으로 발현한다.
인간에서, γδ T 세포는 강력한 항암 기능(높은 세포독성 및 인터페론 γ 분비)을 갖는다. 더욱이, γδ T 세포는, 이전에는 선천 골수계 계통 세포에만 한정되었던 기능인 식세포작용이 가능하며, αβ T 세포에 대한 효율적인 항원-제시 세포로서 거동하고 적응 면역 반응을 유도한다. γδ T 세포는 암을 침윤시키는 것으로 밝혀져 있지만, 이들 존재의 임상적 관련성은 여전히 논쟁 중이다. 지금까지, 모든 연구 노력은 Vγ9Vδ2 T 세포에 초점이 맞추어져 왔으며, 입양 전달을 위하여 생체내 또는 생체외에서 γδ T 세포를 활성화하는 데 주로 목적을 두어 왔다. 임상 연구가 아직 풍부하지는 않지만, 예비 데이터는 T 세포-기반 면역요법에서 γδ T 세포 하위세트를 고려하는 것의 중요성을 강조한다.
따라서, 이러한 상황을 배경으로, CD3-기반 재유도의 제한을 극복하고, T 세포의 Pan 활성화를 피하고, γδ T 세포를 선택적으로 동원함으로써 강력한 암 용해를 유도하는 것을 돕는 접근법이 모색된다. 구체적으로는, 암-관련 항원에 결합하는 한쪽 아암 및 γδ T 세포를 동원하고 활성화하기 위하여 γδ T 세포 발현되는 TRDV2 수용체에 결합하는 다른 한쪽 아암을 갖는 이중특이성 항체 요법에 중점을 둔 전략이, 암의 치료 시에 진실한 세포독성 T 세포 상의 항원 및 암 세포 상에서 발현되는 항원에 결합하는 이중특이성 항체를 가짐으로써 이러한 충족되지 않은 의학적 요구를 해결할 수 있었다.
다양한 간행물, 논문, 및 특허가 배경기술에 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되어 있거나 기재되어 있으며; 이들 참고문헌 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 장치, 물품 등에 대한 논의는 본 발명에 대한 상황을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성하는 것을 인정하는 것은 아니다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용되는 소정의 용어는 본 명세서에 제시된 바와 같은 의미를 갖는다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로 인용된 값의 ±10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10% (w/v)의 농도 범위는 0.9% (w/v) 내지 11% (w/v)를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한, 수치 범위의 사용은 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 예를 들어 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분율을 명시적으로 포함한다.
달리 지시되지 않는 한, 일련의 요소 앞의 용어 "적어도"는 일련 내의 각각의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는 단지 일반적인 실험을 사용하여, 본 명세서에서 설명된 본 발명의 구체적인 실시 형태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 그러한 등가물은 본 발명에 의해 포함되도록 의도된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하다", "포함하는", "구비하다", "구비하는", "갖는다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는", 또는 이들의 임의의 다른 변형은 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함을 내포하지만 임의의 다른 정수 또는 정수들의 군의 배제를 내포하지 않는 것으로 이해될 것이며, 비배타적 또는 개방형(open-ended)인 것으로 의도된다. 예를 들어, 요소들의 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치는 반드시 그러한 요소들만으로 제한되지는 않고, 그러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치에 고유하거나 명시적으로 열거되어 있지 않은 다른 요소들을 포함할 수 있다. 또한, 명시적으로 반대로 기재되어 있지 않는 한, "또는"은 배타적 '또는'이 아니라 포괄적 '또는'을 지칭한다. 예를 들어, 조건 A 또는 B는 하기 중 어느 하나에 의해 만족된다: A가 참(또는 존재함)이고 B가 거짓(또는 존재하지 않음)임, A가 거짓(또는 존재하지 않음)이고 B가 참(또는 존재함)임, A 및 B 둘 모두가 참(또는 존재함)임.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 다수의 언급된 요소들 사이의 접속 용어 "및/또는"은 개별 선택지 및 조합된 선택지 둘 모두를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 2개의 요소들이 "및/또는"에 의해 결합되는 경우, 제1 선택지는 제2 요소 없이 제1 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제2 선택지는 제1 요소 없이 제2 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제3 선택지는 제1 요소와 제2 요소가 함께 적용가능함을 지칭한다. 이들 선택지 중 어느 것이든 하나는 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 본 명세서에 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다. 이들 선택지 중 하나 초과의 동시 적용가능성 또한 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "~로 이루어진다", 또는 변형, 예컨대 "~로 이루어지다" 또는 "~로 이루어진"은, 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함을 나타내지만, 추가의 정수 또는 정수들의 군이 명시된 방법, 구조, 또는 조성물에 추가될 수 없다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "~로 본질적으로 이루어진다", 또는 변형, 예컨대 "~로 본질적으로 이루어지다" 또는 "~로 본질적으로 이루어진"은, 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함, 및 명시된 방법, 구조 또는 조성물의 기본적 또는 신규한 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 선택적인 포함을 나타낸다. 문헌[M.P.E.P. § 2111.03]을 참조한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "대상체"는 임의의 동물, 예컨대 포유동물, 예컨대 인간을 의미한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "포유동물"은 임의의 포유동물을 포함한다. 포유동물의 예에는 소, 말, 양, 돼지, 고양이, 개, 마우스, 래트, 토끼, 기니 피그, 원숭이, 인간 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 포유동물은 인간이다.
또한, 본 명세서에서 바람직한 발명의 구성요소의 치수 또는 특성을 언급할 때 사용되는 용어 "약", "대략", "대체로", "실질적으로" 및 유사한 용어들은 기재된 치수/특성이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니고, 그로부터 기능적으로 동일하거나 유사한 사소한 변동은 배제하지 않음을 나타낸다는 것이 이해되어야 하며, 이는 당업자에 의해 이해되는 바와 같을 것이다. 최소한으로, 수치 파라미터를 포함하는 그러한 언급은 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리(예를 들어, 반올림, 측정 오차 또는 다른 계통 오차, 제조 공차 등)를 사용하여, 최소 유효 숫자를 변화시키지 않게 될 변형을 포함할 것이다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열(예를 들어, 항-TRDV2/항-암-관련 항원 이중특이성 항체 및 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 및 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, TRDV2 폴리펩티드 및 이를 인코딩하는 TRDV2 폴리뉴클레오티드, CD33 폴리펩티드 및 이를 인코딩하는 CD33 폴리뉴클레오티드)과 관련하여, 용어 "동일한" 또는 퍼센트 "동일성"은, 시각적 검사에 의해, 또는 하기 서열 비교 알고리즘들 중 하나를 사용하여 측정되는 바와 같이, 최대 일치도(maximum correspondence)에 대해 비교되고 정렬될 때, 동일하거나, 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 명시된 백분율을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다.
서열 비교를 위하여, 전형적으로 하나의 서열이 시험 서열의 비교 대상이 되는 참조 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 서열 및 참조 서열을 컴퓨터에 입력하고, 필요에 따라 하위서열 좌표를 지정하고, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터를 지정한다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여, 참조 서열과 대비하여 시험 서열(들)에 대한 퍼센트 서열 동일성을 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어 스미스 및 워터만(문헌[Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)])의 국부 상동성 알고리즘에 의해, 니들만 및 분쉬(문헌[Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)])의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 피어슨 및 립만(문헌[Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)])의 유사성 검색 방법에 의해, 이들 알고리즘의 전산화 구현(미국 위스콘신주 매디슨, 575 사이언스 드라이브 소재의 Genetics Computer Group의 Wisconsin Genetics Software Package의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 시각적 검사(전반적으로, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel)] 참조)에 의해 수행될 수 있다.
퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하기에 적합한 알고리즘의 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이며, 이들은 각각 문헌[Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410] 및 문헌[Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402]에 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 입수가능하다. 이 알고리즘은 먼저, 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어와 정렬될 때 일부 양성-값의 임계치 점수 T와 일치하거나 이를 만족하는, 질의 서열에서 길이 W의 짧은 단어를 식별함으로써 높은 점수의 서열 쌍(HSP: high scoring sequence pair)을 식별하는 단계를 수반한다. T는 이웃 단어 점수 임계치(문헌[Altschul et al, 상기 참조])로 지칭된다. 이들 초기 이웃 단어 히트는 검색을 개시하여 이들을 함유하는 더 긴 HSP를 찾기 위한 종자로서 작용한다. 이어서, 누적 정렬 점수가 증가될 수 있는 한, 각각의 서열을 따라 양 방향으로 단어 히트를 연장한다.
뉴클레오티드 서열의 경우, 누적 점수를 파라미터 M(일치하는 잔기 쌍에 대한 보상 점수; 항상 >0) 및 N(일치하지 않는 잔기에 대한 페널티 점수; 항상 <0)을 사용하여 계산한다. 아미노산 서열의 경우, 점수 매트릭스를 사용하여 누적 점수를 계산한다. 각 방향으로의 단어 히트의 연장은, 누적 정렬 점수가 이의 달성된 최대 값으로부터 X의 양만큼 떨어질 때; 누적 점수가 하나 이상의 음성-점수 잔기 정렬의 집적으로 인해 0 또는 그 아래가 될 때; 또는 서열의 말단에 도달할 때 중단된다. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T 및 X는 정렬의 감도와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열용)은 디폴트로 11의 단어 길이(W), 10의 기대치(E), M=5, N=-4 및 두 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로 3의 단어 길이(W), 10의 예상치(E) 및 BLOSUM62 점수 매트릭스(문헌[Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)] 참조)를 사용한다.
퍼센트 서열 동일성을 계산하는 단계에 더하여, BLAST 알고리즘은 또한 2개의 서열 사이의 유사성의 통계적 분석을 수행한다(예를 들어, 문헌[Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)] 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 일 척도는 최소 합계 확률(P(N))이며, 이는 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 일치가 우연히 발생할 확률의 지표를 제공한다. 예를 들어, 참조 핵산에 대한 시험 핵산의 비교에서 최소 합계 확률이 약 0.1 미만, 예컨대 약 0.01 미만, 또는 약 0.001 미만인 경우, 핵산은 참조 서열과 유사한 것으로 간주된다.
2개의 핵산 서열 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일하다는 추가의 지표는, 하기에 기재된 바와 같이, 제1 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드가 제2 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드와 면역학적으로 교차 반응성이라는 것이다. 따라서, 폴리펩티드가 전형적으로 제2 폴리펩티드와 실질적으로 동일한 경우는, 예를 들어 이들 2개의 펩티드가 보존적 치환에 의해서만 상이한 경우뿐이다. 2개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 다른 지표는 2개의 분자가 엄격한 조건 하에서 서로 혼성화되는 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 동의어로서 "핵산 분자", "뉴클레오티드", 또는 "핵산"으로 지칭되는 용어 "폴리뉴클레오티드"는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭하며, 이는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. "폴리뉴클레오티드"는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더 전형적으로는 이중-가닥일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하거나 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물을 포함하는 혼성(hybrid) 분자를 포함한다. 게다가, "폴리뉴클레오티드"는 RNA 또는 DNA 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA, 및 안정성 또는 다른 이유로 골격이 변형된 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트리틸화(tritylated) 염기 및 통상이 아닌 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형이 실행될 수 있으며; 따라서, "폴리뉴클레오티드"는 천연에서 전형적으로 발견되는 바와 같은 폴리뉴클레오티드의 화학적으로, 효소적으로, 또는 대사적으로 변형된 형태뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 DNA 및 RNA의 화학적 형태도 포함한다. "폴리뉴클레오티드"는, 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 핵산 사슬을 또한 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "벡터"는 레플리콘이며, 그 안에는 세그먼트의 복제 또는 발현을 일으키도록 다른 핵산 세그먼트가 작동가능하게 삽입될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 본 명세서에 제공된 핵산 분자를 포함하는 세포를 지칭한다. "숙주 세포"는 임의의 유형의 세포, 예를 들어 초대 세포, 배양 중인 세포, 또는 세포주로부터의 세포일 수 있다. 일 실시 형태에서, "숙주 세포"는 본 명세서에 제공된 핵산 분자로 형질감염된 세포이다. 다른 실시 형태에서, "숙주 세포"는 그러한 형질감염된 세포의 자손 또는 잠재적 자손이다. 세포의 자손은, 예를 들어, 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈 내로의 핵산 분자의 통합으로 인해 모세포와 동일하거나 동일하지 않을 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "발현"은 유전자 산물의 생합성을 지칭한다. 이 용어는 RNA로의 유전자의 전사를 포함한다. 이 용어는 또한, 하나 이상의 폴리펩티드로의 RNA의 번역을 포함하고, 모든 천연 발생 전사후 및 번역후 변형을 추가로 포함한다. 발현된 이중특이성 항체는 숙주 세포의 세포질 내에 있거나, 세포 배양물의 성장 배지와 같은 세포외 환경 내에 있거나, 세포막에 고정될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "펩티드", "폴리펩티드", 또는 "단백질"은 아미노산으로 구성되고 당업자에 의해 단백질로서 인식될 수 있는 분자를 지칭할 수 있다. 아미노산 잔기에 대한 통상적인 1-문자 또는 3-문자 코드가 본 명세서에 사용된다. 용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 그것은 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 그것에는 비-아미노산이 개재될 수 있다. 이 용어는 또한 천연적으로 변형되었거나, 또는 개입에 의해, 예를 들어 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지화 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 유사체(예를 들어, 비천연 아미노산 등을 포함함)를 함유하는 폴리펩티드뿐만 아니라 당업계에 알려진 다른 변형이 정의 내에 또한 포함된다.
본 명세서에 기재된 펩티드 서열은 펩티드의 N-말단 영역은 좌측에 있고 C-말단 영역은 우측에 있다는 통상의 규약에 따라 표기된다. 아미노산의 이성질체 형태가 공지되어 있지만, 이는, 달리 명시적으로 지시되지 않는 한, 표현된 아미노산의 L-형태이다.
항체
소정 태양에서, 단리된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 상기 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 상기 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 상기 항체를 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공된다.
소정 실시 형태에서, 단리된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 상기 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 상기 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 상기 이중특이성 항체를 포함하는 조성물이 제공된다. 상기 항체의 제조 방법, 및 상기 항체를 사용하여 질병을 치료하기 위한 방법이 또한 제공된다. 본 명세서에 개시된 항체는 TRDV2에 대한 고친화성 결합 또는 TRDV2에 대한 높은 특이성을 포함하지만 이로 한정되지 않는 하나 이상의 바람직한 기능적 특성을 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 대상체에게 단독으로 또는 다른 요법과 병용하여 투여될 때 질병 또는 장애를 치료하거나 예방하는 능력을 갖는다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 항체는 TRDV2 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 TRDV2 항원-결합 단편으로 이루어진다. 다른 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 TRDV2 항체이다. 또 다른 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 이중특이성 TRDV2 항체이다. TRDV2 항체가 본 명세서에 예시되어 있지만, TRDV2에 결합하는 다른 분자가 또한 고려된다는 것이 이해된다. 그러한 분자는 본 명세서에 제공된 항체 및 다른 항체-결합 단편의 등가물을 포함한 다른 대안적인 결합제를 포함한다. 게다가, TRDV2 이중특이성 항체가 본 명세서에 예시되어 있지만, TRDV2 다중특이성 항체가 또한 고려된다는 것이 이해된다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 이중특이성 항체는 TRDV2 다중특이성 항체에 포함된다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 다중특이성 항체는 TRDV2 이중특이성 항체이다.
다른 태양에서, 단리된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 상기 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 상기 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 상기 이중특이성 항체를 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공된다. 상기 항체의 제조 방법, 및 상기 항체를 사용하여 암을 포함한 질병을 치료하기 위한 방법이 또한 제공된다. 본 명세서에 개시된 항체는 하나 이상의 바람직한 기능적 특성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 TRDV2에 대한 고친화성 결합을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 제2 표적 항원에 대한 고친화성 결합을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 TRDV2에 대한 높은 특이성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 제2 표적 항원에 대한 높은 특이성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 단독으로 투여될 때 질병 또는 장애를 치료하거나 예방하는 능력을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 다른 요법과 병용하여 투여될 때 질병 또는 장애를 치료하거나 예방하는 능력을 갖는다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 넓은 의미로 사용되며, 단일클론 또는 다중클론인 인간 항체, 인간화 항체, 복합 항체 및 키메라 항체 및 항체 단편을 포함한 면역글로불린 또는 항체 분자를 포함한다. 일반적으로, 항체는 특정 항원에 대하여 결합 특이성을 나타내는 단백질 또는 펩티드 사슬이다. 항체 구조는 잘 알려져 있다. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5개의 주요 부류(즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM)로 정해질 수 있다. IgA 및 IgG는 동종형 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 추가로 하위분류된다. 따라서, 본 명세서에 제공된 항체는 5개의 주요 부류 또는 상응하는 하위부류 중 임의의 것일 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다. 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 2개의 명확하게 구별되는 유형, 즉 카파 및 람다 중 하나로 정해질 수 있다. 따라서, 본 명세서에 제공된 항체는 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인을 함유할 수 있다. 특정 실시 형태에 따르면, 본 명세서에 제공된 항체는 래트 또는 인간 항체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 더하여, 항체는 경쇄 가변 영역(VL) 및 중쇄 가변 영역(VH)으로 구성된 항원-결합 영역을 함유하며, 이들 영역 각각은 3개의 도메인(즉, 상보성 결정 영역 1(CDR1), CDR2 및 CDR3)을 함유한다. "CDR"은 면역글로불린(Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(HCDR1, HCDR2 또는 HCDR3) 중 하나, 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(LCDR1, LCDR2 또는 LCDR3) 중 하나를 지칭한다. 따라서, CDR은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다. CDR 영역은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어 카바트(Kabat)에 의하면, 항체 가변(V) 도메인 내의 가장 초가변성인 영역으로서 정의되어 있다(문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)]; 문헌[Kabat, Adv. Prot. Chem. 32:1-75 (1978)]). CDR 영역 서열은 또한 초티아(Chothia)에 의하면, 보존된 β-시트 프레임워크의 일부가 아니며, 이에 따라 상이한 입체구조에 적응할 수 있는 잔기로서 구조적으로 정의되어 있다(문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]). 두 용어 모두 당업계에 잘 인식되어 있다. CDR 영역 서열은 또한 AbM, Contact 및 IMGT에 의해 정의되어 있다. 예시적인 CDR 영역 서열은 본 명세서에, 예를 들어 서열 목록, 및 하기 실시예에 제공된 표에 예시되어 있다. 표준 항체 가변 영역 내의 CDR의 위치는 다수의 구조의 비교에 의해 결정되어 있다(문헌[Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997)]; 문헌[Morea et al., Methods 20:267-279 (2000)]). 초가변 영역 내의 잔기의 수는 상이한 항체들에서 다양하기 때문에, 표준 위치에 대한 추가의 잔기는 통상적으로 표준 가변 영역 넘버링 체계에서 잔기 번호 바로 옆에 a, b, c 등으로 번호가 매겨진다(문헌[Al-Lazikani et al., (1997), 상기 참조]). 그러한 명명법은 마찬가지로 당업자에게 잘 알려져 있다.
경쇄 가변 영역 CDR1 도메인은 본 명세서에서 LCDR1 또는 VL CDR1로 상호교환 가능하게 지칭된다. 경쇄 가변 영역 CDR2 도메인은 본 명세서에서 LCDR2 또는 VL CDR2로 상호교환 가능하게 지칭된다. 경쇄 가변 영역 CDR3 도메인은 본 명세서에서 LCDR3 또는 VL CDR3으로 상호교환 가능하게 지칭된다. 중쇄 가변 영역 CDR1 도메인은 본 명세서에서 HCDR1 또는 VH CDR1로 상호교환 가능하게 지칭된다. 중쇄 가변 영역 CDR2 도메인은 본 명세서에서 HCDR2 또는 VH CDR2로 상호교환 가능하게 지칭된다. 중쇄 가변 영역 CDR1 도메인은 본 명세서에서 HCDR3 또는 VH CDR3으로 상호교환 가능하게 지칭된다.
본 명세서에서 사용될 때, 용어 "초가변 영역", 예컨대 VH 또는 VL은 서열 내에서 초가변성이고/이거나, 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체 가변 영역의 영역들을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 VH 내에 3개(HCDR1, HCDR2, HCDR3), 그리고 VL 내에 3개(LCDR1, LCDR2, LCDR3)의 6개의 초가변 영역을 포함한다. 다수의 초가변 영역 표기법이 사용되고 있으며 이들은 본 명세서에 포함된다. "카바트" CDR은 서열 가변성에 기초하며, 가장 일반적으로 사용된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)] 참조). "초티아"는 대신에 구조적 루프의 위치를 나타낸다(예를 들어, 문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)] 참조). 카바트 넘버링 규약을 사용하여 넘버링될 때 초티아 CDR-HCDR1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변동된다(이는 카바트 넘버링 체계가 H35A 및 H35B에 삽입을 위치시키기 때문이며; 35A 또는 35B 어느 것도 존재하지 않는 경우, 루프는 32에서 종료하고; 단지 35A만이 존재하는 경우, 루프는 33에서 종료하고; 35A 및 35B 둘 모두가 존재하는 경우, 루프는 34에서 종료한다). "AbM" 초가변 영역은 카바트 CDR과 초티아 구조적 루프 사이의 절충을 나타내며, Oxford Molecular's AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다(예를 들어, 문헌[Martin, in Antibody Engineering, Vol. 2, Chapter 3, Springer Verlag] 참조). "Contact" 초가변 영역은 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기초한다.
최근에, 범용 넘버링 체계, ImMunoGeneTics (IMGT) Information System®이 개발되었으며 널리 채택되고 있다(문헌[Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77 (2003)]). IMGT는 인간 및 다른 척추동물의 면역글로불린(IG), T 세포 수용체(TR) 및 주요 조직적합성 복합체(MHC)에 특화된 통합 정보 시스템이다. 여기서, CDR은 아미노산 서열 및 경쇄 또는 중쇄 내의 위치 둘 모두의 관점에서 나타낸다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 내의 CDR의 "위치"는 종들 사이에서 보존되고 루프로 불리는 구조에 존재하기 때문에, 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열들을 정렬하는 넘버링 체계를 사용함으로써, CDR 및 프레임워크 잔기가 용이하게 확인된다. 이러한 정보는 하나의 종의 면역글로불린으로부터의 CDR 잔기를, 전형적으로 인간 항체로부터의 수용체 프레임워크 내로 그래프팅 및 대체하는 데 사용될 수 있다. 추가의 넘버링 체계(AHon)가 Honegger 및 Pl
Figure pct00002
ckthun(문헌[Honegger and Pl
Figure pct00003
ckthun, J. Mol. Biol. 309: 657-670 (2001)])에 의해 개발되어 있다. 예를 들어, 카바트 넘버링 및 IMGT 고유 넘버링 체계를 포함한 넘버링 체계 사이의 상응성은 당업자에게 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Kabat, 상기 참조]; 문헌[Chothia and Lesk, 상기 참조]; 문헌[Martin, 상기 참조]; 문헌[Lefranc et al., 상기 참조] 참조). 본 명세서에 나타낸 예시적인 체계는 카바트와 초티아를 조합한다.
Figure pct00004
초가변 영역은 다음과 같은 "연장된 초가변 영역"을 포함할 수 있다: VL 내의 24 내지 36 또는 24 내지 34(LCDR1), 46 내지 56 또는 50 내지 56(LCDR2) 및 89 내지 97 또는 89 내지 96(LCDR3) 및 VH 내의 26 내지 35 또는 26 내지 35A(HCDR1), 50 내지 65 또는 49 내지 65(HCDR2) 및 93 내지 102, 94 내지 102, 또는 95 내지 102(HCDR3). 상기 넘버링 체계 각각을 반영하는 CDR 서열이 서열 목록에 포함된 것을 비롯하여 본 명세서에 제공되어 있다.
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은, 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 관여하지는 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단부를 지칭한다. 이들 용어는 항원-결합 부위를 함유하는 면역글로불린의 다른 부분, 즉 가변 영역에 비하여 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 일부분을 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
용어 "프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 CDR을 플랭킹하는 가변 영역 잔기이다. FR 잔기는, 예를 들어 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 도메인 항체, 다이아바디, 선형 항체, 및 이중특이성 항체 내에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체들이 실질적으로 없는 항체를 지칭한다(예를 들어, TRDV2에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 Vδ2에 결합하지 않는 항체가 실질적으로 없으며; 예를 들어 제2 표적(CD33)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는, 예를 들어 제2 표적(CD33)에 결합하지 않는 항체가 실질적으로 없다). 게다가, 단리된 항체에는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 획득된 항체를 지칭하는데, 즉 집단을 구성하는 개별 항체들이, 소량으로 존재할 수 있는 천연 발생 돌연변이의 가능성을 제외하고는 동일하다. 본 명세서에 제공된 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 파지 디스플레이 기술, 단일 림프구 유전자 클로닝 기술에 의해, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체는 인간 중쇄 도입유전자 및 경쇄 도입유전자를 포함하는 게놈을 갖는 유전자도입 비인간 동물, 예컨대 유전자도입 마우스 또는 래트로부터 획득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항원-결합 단편"은 항체 단편, 예컨대 다이아바디(diabody), Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 이황화물 안정화된 Fv 단편(dsFv), (dsFv)2, 이중특이성 dsFv(dsFv-dsFv'), 이황화물 안정화된 다이아바디(ds 다이아바디), 단일쇄 항체 분자(scFv), 단일 도메인 항체(sdAb), scFv 이량체(2가 다이아바디), 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부분으로부터 형성된 다중특이성 항체, 낙타화(camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원에 결합하지만 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편을 지칭한다. 항원-결합 단편은 모 항체 또는 모 항체 단편이 결합하는 것과 동일한 항원에 결합할 수 있다. 특정 실시 형태에 따르면, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 중쇄의 Fd 세그먼트를 포함한다. 다른 특정 실시 형태에 따르면, 항원-결합 단편은 Fab 및 F(ab')을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일쇄 항체"는 당업계에서의 통상적인 단일쇄 항체를 지칭하는 것으로, 이것은 약 15 내지 약 20개의 아미노산의 짧은 펩티드에 의해 연결된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일 도메인 항체"는 당업계에서의 통상적인 단일 도메인 항체를 지칭하는 것으로, 이것은 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 포함하거나, 또는 단지 중쇄 가변 영역만을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 인간에 의해 생성되는 항체 또는 당업계에 알려진 임의의 기법을 사용하여 제조된, 인간에 의해 생성되는 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 지칭한다. 인간 항체의 이러한 정의는 온전한 항체 또는 전장(full-length) 항체, 이의 단편, 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간화 항체"는 인간 항체와의 서열 상동성을 증가시키도록 변형되어, 항체의 항원-결합 특성은 유지되지만, 인간 체내에서의 이의 항원성은 감소되도록 한 비-인간 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "키메라 항체"는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 2개 이상의 종으로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 경쇄 및 중쇄 둘 모두의 가변 영역은 종종, 원하는 특이성, 친화도, 및 능력을 갖는 포유동물의 하나의 종(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 등)으로부터 유래되는 항체의 가변 영역에 상응하며, 한편 불변 영역은 포유동물의 다른 종(예를 들어, 인간)으로부터 유래되는 항체의 서열에 상응하는데, 이는 그러한 종에서의 면역 반응의 유도를 피하기 위함이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "다중특이성 항체"는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들을 포함하는 항체를 지칭하며, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들의 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 가지며, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들의 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않거나 실질적으로 중첩되지 않는다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 제3, 제4, 또는 제5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체 분자, 삼중특이성 항체 분자, 또는 사중특이성 항체 분자이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "이중특이성 항체"는 2개 이하의 에피토프 또는 2개 이하의 항원에 결합하는 다중특이성 항체를 지칭한다. 이중특이성 항체는 제1 에피토프(예를 들어, TRDV2 항원 상의 에피토프)에 대한 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 하프 항체(half antibody) 또는 이의 단편 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 하프 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 제1 에피토프는 TRDV2 상에 위치하고, 제2 에피토프는 CD33 상에 위치한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "하프 항체"는 하나의 면역글로불린 중쇄가 하나의 면역글로불린 경쇄와 회합된 것을 지칭한다. 예시적인 하프-항체가 서열 번호 17에 제시되어 있다. 당업자는 하프 항체가 이의 단편을 포함할 수 있고, 또한, 예를 들어 낙타과에서 기원되는 단일 가변 도메인으로 이루어진 항원 결합 도메인을 가질 수 있음을 용이하게 이해할 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "TRDV2"는 γδ T 세포의 표면 상에서 발현될 때 T 세포 수용체를 형성할 수 있는 폴리펩티드를 지칭한다. TRDV2-발현 γδ T 세포는 인간 태아에서 발달하게 될 제1 T 세포들 중에 있고, 건강한 성인 말초 혈액 세포에서 우세한 γδ T 세포 하위세트이다. 용어 "TRDV2"는 임의의 TRDV2 변이체, 아이소형(isoform), 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포(T 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, TRDV2는 인간 TRDV2이다. 예시적인 인간 TRDV2 아미노산 서열은 GenBank 수탁 번호 NG_001332.3에 의해 제공된다.
용어 "CD33"은 67 kD 단회 통과 막관통 당단백질을 지칭하며, 시알산-결합 면역글로불린-유사 렉틴(Siglec) 패밀리의 구성원이다. 그의 정확한 생물학적 기능은 불명확하지만, 정상 개체에서, 골수계 분화 항원인 것으로 주로 여겨지며, 골수계 선조체, 호중구 및 대식세포에서는 낮은 발현을 갖지만, 순환 단핵구 및 수지상 세포에서는 고도로 발현된다. CD33은 급성 골수성 백혈병(AML)을 제시하는 환자의 85 내지 90%의 아세포 및 백혈병 줄기 세포에서 검출되었다. 용어 "CD33"은, 달리 기재되지 않는 한, 임의의 CD33 변이체, 아이소형, 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있으며, "CD33"은 인간 CD33이다. 인간 CD33 아미노산 서열은 GenBank 수탁 번호 BC028152.1에 의해 제공된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "TRDV2에 특이적으로 결합하는" 항체는 1×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M 이하, 5×10-10 M 이하, 또는 1×10-10 M 이하의 KD로 TRDV2, 예컨대 인간 TRDV2에 결합하는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "제2 표적 항원에 특이적으로 결합하는" 항체는 1×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M 이하, 5×10-10 M 이하, 또는 1×10-10 M 이하의 KD로 제2 표적 항원에 결합하는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "종양-관련 항원에 특이적으로 결합하는" 항원-결합 도메인 또는 항원-결합 단편은 1×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M 이하, 5×10-10 M 이하, 또는 1×10-10 M 이하의 KD로 종양-관련 항원에 결합하는 항원-결합 도메인 또는 항원-결합 단편을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "CD33에 특이적으로 결합하는" 항체는 1×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M 이하, 5×10-10 M 이하, 또는 1×10-10 M 이하의 KD로 CD33, 예컨대 인간 CD33에 결합하는 항체를 지칭한다. 소정 실시 형태에서, 항체는 CD33의 C2 도메인에 특이적으로 결합한다. 다른 실시 형태에서, 항체는 CD33의 V 도메인에 특이적으로 결합한다.
용어 "KD"는 해리 상수를 지칭하며, 이는 Kd 대 Ka의 비(즉, Kd/Ka)로부터 구해지고, 몰농도(M)로 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 본 발명을 고려하여 당업계의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체의 KD는 표면 플라즈몬 공명을 사용함으로써, 예컨대 바이오센서 시스템, 예를 들어 Biacore® 시스템을 사용함으로써, 또는 바이오층 간섭법 기술, 예컨대 Octet RED96 시스템을 사용함으로써 결정될 수 있다. 항체의 KD 값이 작을수록, 항체가 표적 항원에 결합하는 친화도는 더 높다.
일 태양에서, TRDV2에 결합하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 인간화 항체이다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 포함하는 TRDV2 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역을 포함하는 항-TRDV2 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 포함하는 항-TRDV2 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 포함하는 TRDV2 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 TRDV2 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 TRDV2 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3; 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 TRDV2 항체가 본 명세서에 제공된다. 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체의 대표적인 VH 및 VL 아미노산 서열 - VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함함 - 이 서열 목록뿐만 아니라 표 1 및 표 2에 제공되어 있다.
일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 이중특이성 TRDV2 항체이다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 (a) TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) TRDV2가 아닌 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
소정 실시 형태에서, TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 TRDV2 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 TRDV2 항체들 중 어느 하나의 VH 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 TRDV2 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 TRDV2 항체들 중 어느 하나의 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 TRDV2 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 TRDV2 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 TRDV2 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체의 대표적인 VH 및 VL 아미노산 서열 - VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함함 - 이 서열 목록뿐만 아니라 표 1 및 표 2에 제공되어 있다.
일부 실시 형태에서, 제2 표적은 CD33이다. 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 본 명세서에 제공된 CD33 항체의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 갖는다. 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 본 명세서에 제공된 CD33 항체의 VH 영역을 갖는다. 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 본 명세서에 제공된 CD33 항체의 VL 영역을 갖는다. 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 본 명세서에 제공된 CD33 항체의 VH 영역 및 VL 영역을 갖는다. 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 본 명세서에 제공된 CD33 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 갖는다. 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 본 명세서에 제공된 CD33 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는다. 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 본 명세서에 제공된 CD33 항체의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는다. 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체의 대표적인 VH 및 VL 아미노산 서열 - VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함함 - 이 서열 목록뿐만 아니라 표 3 및 표 4에 제공되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체는 TRDV2에 특이적으로 결합한다. 다른 실시 형태에서, TRDV2는 T 세포의 표면 상에 존재한다.
일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 키메라 형태이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 인간 형태이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 인간화 형태이다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 항체는 단리된 TRDV2 항체이다. 소정 실시 형태에서, 온전한 항체인 TRDV2 항체가 제공된다.
일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 IgG1 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 IgG2 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 IgG3 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 IgG4 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 카파 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 람다 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 단일클론 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다가 형태이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 적어도 4개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 삼중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 사중특이성 항체이다.
다른 실시 형태에서, TRDV2 항체로서 TRDV2 항체의 항원-결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체의 항원-결합 단편은 기능성 단편이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항원-결합 단편은 키메라 형태이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항원-결합 단편은 인간 형태이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항원-결합 단편은 인간화 형태이다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 항원-결합 단편은 단리된 TRDV2 항원-결합 단편이다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 다이아바디이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fab이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fab'이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 F(ab')2이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fv 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이황화물 안정화된 Fv 단편(dsFv)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 (dsFv)2이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이중특이성 dsFv(dsFv-dsFv')이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이황화물 안정화된 다이아바디(ds 다이아바디)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 단일쇄 항체 분자(scFv)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 단일 도메인 항체(sdAb)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 scFv 이량체(2가 다이아바디)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부분으로부터 형성된 다중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 낙타화 단일 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 나노바디이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 2가 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은, 항원에 결합하지만 완전 항체 구조를 포함하지 않는 항체 단편이다.
일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 항체이다. 다른 실시 형태에서, TRDV2 항체는 이중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 효능적(agonistic) 항체이다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 항체는 T 세포를 활성화시킨다. 다른 실시 형태에서, TRDV2 항체는 길항적 항체이다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 항체는 T 세포를 불활성화시킨다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 T 세포의 활성화를 차단한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 T 세포의 활성을 조절한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 γδ T 세포의 활성을 활성화시키지도 불활성화시키지도 않는다. 구체적인 실시 형태에서, T 세포는 γδ T 세포이다.
구체적인 실시 형태에서, γδ T 세포는 인간 γδ T 세포이다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀(knob-in-hole) 포맷으로 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체를 포함하는 이중특이성 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체는 이중특이성 항체 내에 포함될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 TRDV2 이중특이성 항체는 다중특이성 항체 내에 포함될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 제1 TRDV2 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 TRDV2 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체를 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 TRDV2 에피토프와 제2 TRDV2 에피토프는 동일하지 않다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 TRDV2에 특이적으로 결합한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Vδ2의 에피토프에 결합하지 않는다.
일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 예시적인 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 소정 항체 실시 형태의 6개의 CDR(VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3)의 예시적인 세트가 본 명세서에 제공된다. CDR의 다른 세트가 고려되며 본 명세서에 제공된 항체 실시 형태의 범주 내에 있다.
일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 항체이다. 다른 실시 형태에서, TRDV2 항체는 이중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 제1 TRDV2 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인 및 제2 TRDV2 에피토프에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 제1 TRDV2 에피토프와 제2 TRDV2 에피토프는 상이하다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 TRDV2가 아닌 표적에 결합하는 제3 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체의 제1 결합 도메인은 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체의 제2 결합 도메인은 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다.
특정 태양에 따르면, 단리된 TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) HC1; (b) HC2; (c) LC1; 및 (d) LC2를 포함한다. HC1은 LC1과 회합될 수 있고, HC2는 LC2와 회합될 수 있다. HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함할 수 있고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함할 수 있다. HC1과 LC1은 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 제1 항원에 대한 결합 부위는, 예를 들어 γδ T 세포 상의 TRDV2에 결합할 수 있다.
항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항-TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 제2 표적 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) HC1; (b) HC2; (c) LC1; 및 (d) LC2를 포함하며, HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합된다. HC1은, 예를 들어, 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함할 수 있고, LC1은, 예를 들어, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함할 수 있어서, TRDV2에 특이적으로 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성할 수 있다. HC2는, 예를 들어 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있고, LC2는, 예를 들어 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있어서, 제2 표적 항원에 특이적으로 결합하는 제2 표적 항원에 대한 결합 부위를 형성할 수 있다. 소정 실시 형태에서, TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, 제2 표적 항원은 제2 표적 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 제2 표적 세포의 표면 상에 존재하는 제2 표적 항원에 대한 TRDV2 이중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 제2 세포의 사멸을 가져올 수 있다.
소정 실시 형태에서, 항-TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 TRDV2 상에 위치된 제1 에피토프 및 암 세포의 제2 에피토프에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) TRDV2 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) TRDV2 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) TRDV2 항원 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포 항원 상의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) TRDV2 항원 상의 제1 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포 항원 상의 제2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
본 명세서에 기재된 이중특이성 항체의 실시 형태에서, 제1 에피토프는 TRDV2 상에 위치하고, 제2 에피토프는 암 세포의 표면 상에 위치한다. 일부 실시 형태에서, 제2 에피토프는 암 세포 항원 상에 위치한다. 본 명세서에 기재된 이중특이성 항체의 실시 형태에서, 제1 에피토프는 TRDV2 상에 위치하고, 제2 에피토프는 종양 상에 위치한다. 본 명세서에 기재된 이중특이성 항체의 실시 형태에서, 제1 에피토프는 TRDV2 상에 위치하고, 제2 에피토프는 종양-특이적 항원 상에 위치한다. 본 명세서에 기재된 이중특이성 항체의 실시 형태에서, 제1 에피토프는 TRDV2 상에 위치하고, 제2 에피토프는 종양-관련 항원 상에 위치한다. 본 명세서에 기재된 이중특이성 항체의 실시 형태에서, 제1 에피토프는 TRDV2 상에 위치하고, 제2 에피토프는 신생항원 상에 위치한다.
일부 실시 형태에서, 암 세포는 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암의 세포이다. 일부 실시 형태에서, 암은 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 부신암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 항문암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 맹장암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 담관암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 방광암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 골암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 뇌암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 유방암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 자궁경부암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 결직장암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 식도암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 담낭암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 임신성 영양아세포성 질병이다. 일부 실시 형태에서, 암은 두경부암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 호지킨 림프종이다. 일부 실시 형태에서, 암은 장암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 신장암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 백혈병이다. 일부 실시 형태에서, 암은 간암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시 형태에서, 암은 중피종이다. 일부 실시 형태에서, 암은 다발성 골수종이다. 일부 실시 형태에서, 암은 신경내분비 종양이다. 일부 실시 형태에서, 암은 비-호지킨 림프종이다. 일부 실시 형태에서, 암은 구강암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 난소암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 췌장암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 전립선암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 동암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 피부암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 연조직 육종, 척수암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 위암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 고환암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 인후암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 갑상선암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 자궁암, 자궁내막암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 질암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 외음부암이다.
일부 실시 형태에서, 부신암은 부신피질 암종(ACC), 부신 피질암, 크롬친화세포종, 또는 신경아세포종이다.
일부 실시 형태에서, 항문암은 편평 세포 암종, 총배출강성 암종, 선암종, 기저 세포 암종, 또는 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 맹장암은 신경내분비 종양(NET), 점액성 선암종, 배상 세포 카르시노이드, 장형 선암종, 또는 반지 세포 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 담관암은 간외 담관암, 선암종, 폐문 담관암, 폐문주위 담관암, 원위부 담관암, 또는 간내 담관암이다.
일부 실시 형태에서, 방광암은 이행 세포 암종(TCC), 유두상 암종, 편평 암종, 편평 세포 암종, 선암종, 소세포 암종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 골암은 원발성 골암, 육종, 골육종, 연골육종, 육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 골의 거대 세포 종양, 척삭종, 또는 전이성 골암이다.
일부 실시 형태에서, 뇌암은 성상세포종, 뇌간 신경아교종, 교아세포종, 수막종, 뇌실막종, 핍지교종, 혼합 신경교종, 뇌하수체 암종, 뇌하수체 선종, 두개인두종, 생식 세포 종양, 송과체 부위 종양, 수아세포종, 또는 원발성 CNS 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 유방암은 유방 선암종, 침윤성 유방암, 비침윤성 유방암, 유방 육종, 화생성 암종, 선낭성 암종, 엽상 종양, 혈관육종, HER2-양성 유방암, 삼중-음성 유방암, 또는 염증성 유방암이다.
일부 실시 형태에서, 자궁경부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 결직장암은 결직장 선암종, 원발성 결직장 림프종, 위장관 간질 종양, 평활근육종, 카르시노이드 종양, 점액성 선암종, 반지 세포 선암종, 위장관 카르시노이드 종양, 또는 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 식도암은 선암종 또는 편평 세포 암종이다.
일부 실시 형태에서, 담낭암은 선암종, 유두상 선암종, 선편평세포 암종, 편평 세포 암종, 소세포 암종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 임신성 영양아세포성 질병(GTD)은 포상 기태, 임신성 영양아세포성 신생물(GTN), 융모막암종, 태반-부위 영양아세포성 종양(PSTT), 또는 상피모양 영양아세포성 종양(ETT)이다.
일부 실시 형태에서, 두경부암은 후두암, 비인두암, 하인두암, 비강암, 부비동암, 타액선암, 구강암, 구인두암, 또는 편도선암이다.
일부 실시 형태에서, 호지킨 림프종은 고전적 호지킨 림프종, 결절성 경화증, 혼합 세포형, 림프구-풍부, 림프구-고갈, 또는 결절성 림프구-우세형 호지킨 림프종(NLPHL)이다.
일부 실시 형태에서, 장암은 소장암, 소장의 암, 선암종, 육종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 또는 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 신장암은 신세포 암종(RCC), 투명 세포 RCC, 유두상 RCC, 혐색소성 RCC, 집합관 RCC, 미분류 RCC, 이행 세포 암종, 요로상피암, 신우 암종, 또는 신장 육종이다.
일부 실시 형태에서, 백혈병은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 모발상 세포 백혈병(HCL), 또는 골수이형성 증후군(MDS)이다. 구체적인 실시 형태에서, 백혈병은 AML이다.
일부 실시 형태에서, 간암은 간세포 암종(HCC), 섬유층판성 HCC, 담관암종, 혈관육종, 또는 간 전이이다.
일부 실시 형태에서, 폐암은 소세포 폐암, 소세포 암종, 복합형 소세포 암종, 비소세포 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐암, 대세포 미분화 암종, 폐 결절, 전이성 폐암, 선편평세포 암종, 대세포 신경내분비 암종, 타액선형 폐 암종, 폐 카르시노이드, 중피종, 폐의 육종모양 암종, 또는 악성 과립 세포 폐 종양이다.
일부 실시 형태에서, 흑색종은 표재성 확산성 흑색종, 결절성 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 악성 흑자 흑색종, 무멜라닌성 흑색종, 섬유조직형성 흑색종, 안구 흑색종, 또는 전이성 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 중피종은 흉막 중피종, 복막 중피종, 심막 중피종, 또는 고환 중피종이다.
일부 실시 형태에서, 다발성 골수종은 활동성 골수종 또는 무증상 골수종이다.
일부 실시 형태에서, 신경내분비 종양은 위장관 신경내분비 종양, 췌장 신경내분비 종양, 또는 폐 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 비호지킨 림프종은 역형성 대세포 림프종, 림프아구성 림프종, 말초 T 세포 림프종, 여포성 림프종, 피부 T 세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 변연부 B-세포 림프종, MALT 림프종, 소세포 림프구성 림프종, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소림프구성 림프종(SLL), 전구체 T-림프아구성 백혈병/림프종, 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 T 세포 림프종/백혈병(ATLL), 모발상 세포 백혈병, B-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 B-세포 림프종, 원발성 중추 신경계(CNS) 림프종, 외투 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종, 점막-관련 림프계 조직(MALT) 림프종, 림프절 변연부 B-세포 림프종, 비장 변연부 B-세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, B-세포 비호지킨 림프종, T 세포 비호지킨 림프종, 자연 살해 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 알리버트-바진 증후군, 세자리 증후군, 원발성 피부 역형성 대세포 림프종, 말초 T 세포 림프종, 혈관면역아구성 T 세포 림프종(AITL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 전신 ALCL, 장병증형 T 세포 림프종(EATL), 또는 간비장 감마/델타 T 세포 림프종이다.
구체적인 실시 형태에서, 암은 다발성 골수종(MM)이다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 암은 만성 림프구성 백혈병이다. 다른 실시 형태에서, 암은 급성 B-림프아구성 백혈병이다. 또 다른 실시 형태에서, 암은 비호지킨 림프종(NHL)이다. 일부 실시 형태에서, 암은 호지킨 림프종이다. 일부 실시 형태에서, 구강암은 편평 세포 암종, 사마귀모양 암종, 소타액선 암종, 림프종, 양성 구강 종양, 호산구성 육아종, 섬유종, 과립 세포 종양, 각질극세포종, 평활근종, 골연골종, 지방종, 슈반세포종, 신경섬유종, 유두종, 첨규 콘틸로마, 우췌상 황색종, 화농성 육아종, 횡문근종, 치원성 종양, 백반증, 홍반증, 편평 세포 구순암, 기저 세포 구순암, 입의 암, 치육암, 또는 혀암이다.
일부 실시 형태에서, 난소암은 난소 상피암, 점액성 상피 난소암, 자궁내막모양 상피 난소암, 투명 세포 상피 난소암, 미분화 상피 난소암, 난소 저악성도 잠복 종양, 원발성 복막 암종, 난관암, 생식 세포 종양, 기형종, 난소고환종, 난소 생식 세포암, 내배엽 동종양, 성삭-간질 종양, 성삭-생식선 간질 종양, 난소 간질 종양, 과립막 세포 종양, 과립막-난포막 종양, 세르톨리-라이디히 종양, 난소 육종, 난소 암육종, 난소 선육종, 난소 평활근육종, 난소 섬유육종, 크루켄베르크 종양, 또는 난소 낭포이다.
일부 실시 형태에서, 췌장암은 췌장 외분비선암, 췌장 내분비선암, 또는 췌장 선암종, 췌도 세포 종양, 또는 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 전립선암은 전립선 선암종, 전립선 육종, 이행 세포 암종, 소세포 암종, 또는 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 동암은 편평 세포 암종, 점막 세포 암종, 선양 낭포 세포 암종, 선방 세포 암종, 비동 미분화 암종, 비강암, 부비동암, 상악동암, 사골동암, 또는 비인두암이다.
일부 실시 형태에서, 피부암은 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 카포시 육종(KS), 광선 각화증, 피부 림프종, 또는 각질극세포종이다.
일부 실시 형태에서, 연조직암은 혈관육종, 피부섬유육종, 상피모양 육종, 유잉 육종, 섬유육종, 위장관 간질 종양(GIST), 카포시 육종, 평활근육종, 지질육종, 탈분화된 지질육종(DL), 점액모양/둥근 세포 지질육종(MRCL), 잘 분화된 지질육종(WDL), 악성 섬유성 조직구종, 신경섬유육종, 횡문근육종(RMS), 또는 활막 육종이다.
일부 실시 형태에서, 척수암은 척수 전이성 종양이다.
일부 실시 형태에서, 위암은 위 선암종, 위 림프종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 위 카르시노이드 종양, I형 ECL-세포 카르시노이드, II형 ECL-세포 카르시노이드, 또는 III형 ECL-세포 카르시노이드이다.
일부 실시 형태에서, 고환암은 정상피종, 비정상피종, 배아 암종, 난황낭 암종, 융모막암종, 기형종, 생식선 간질 종양, 라이디히 세포 종양, 또는 세르톨리 세포 종양이다.
일부 실시 형태에서, 인후암은 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 후두암, 인두암, 비인두암, 구인두암, 하인두암, 후두암, 후두 편평 세포 암종, 후두 선암종, 림프상피종, 방추 세포 암종, 사마귀모양 암, 미분화 암종, 또는 림프절암이다.
일부 실시 형태에서, 갑상선암은 유두상 암종, 여포성 암종, 휘르틀 세포 암종, 수질성 갑상선 암종, 또는 역형성 암종이다.
일부 실시 형태에서, 자궁암은 자궁내막암, 자궁내막 선암종, 자궁내막모양 암종, 장액성 선암종, 선편평세포 암종, 자궁 암육종, 자궁 육종, 자궁 평활근육종, 자궁내막 간질 육종, 또는 미분화 육종이다.
일부 실시 형태에서, 질암은 편평 세포 암종, 선암종, 흑색종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 외음부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이다.
일 실시 형태에서, 암은 고형암이다. 일 실시 형태에서, 암은 고형 종양이다. 일 실시 형태에서, 암은 액성 암이다. 일 실시 형태에서, 암은 액성 종양이다. 일부 실시 형태에서, 암은 혈액학적 악성 종양이다. 소정 실시 형태에서, 암은 양성이다. 일부 실시 형태에서, 암은 악성이다. 일부 실시 형태에서, 암은 전이성이다.
일부 실시 형태에서, 제2 에피토프는 암 항원에 위치한다.
일부 실시 형태에서, 암 항원은 안지오포이에틴, BCMA, CD19, CD20, CD22, CD25(IL2-R), CD30, CD33, CD37, CD38, CD52, CD56, CD123(IL-3R), cMET, DLL/노치, EGFR, EpCAM, FGF, FGF-R, GD2, HER2, 메소텔린, 넥틴-4, 전립선 산성 포스파타제(PAP), PDGFRα, 전립선-특이적 항원(PSA), PSA3, 전립선-특이적 막 항원(PSMA), RANKL, SLAMF7, STEAP1, T 세포 수용체 감마 대체 리딩 프레임 단백질(TARP), TROP2, VEGF, 또는 VEGF-R이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 안지오포이에틴이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 BCMA이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD19이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD20이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD22이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD25(IL2-R)이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD30이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD33이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD37이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD38이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD52이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD56이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CD123(IL-3R)이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 cMET이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 DLL/노치이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 EGFR이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 EpCAM이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 FGF이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 FGF-R이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 GD2이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 HER2이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 메소텔린이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 넥틴-4이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 PAP이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 PDGFRα이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 PSA이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 PSA3이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 PSCA이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 PSMA이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 RANKL이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 SLAMF7이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 STEAP1이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 TARP이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 TROP2이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 VEGF이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 VEGF-R이다.
일부 실시 형태에서, 암 항원은 CEA, 미성숙 라미닌 수용체, TAG-72, HPV E6, HPV E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2, 사이클린-B1, 9D7, EpCAM, EphA3, Her2/neu, 텔로머라제, 메소텔린, SAP-1, 생존 형태, BAGE 패밀리 항원, CAGE 패밀리 항원, GAGE 패밀리 항원, MAGE 패밀리 항원, SAGE 패밀리 항원, XAGE 패밀리 항원, NY-ESO-1/LAGE-1, PRAME, SSX-2, 멜란-A, MART-1, Gp100, pmel17, 티로시나제, TRP-1, TRP-2, P. 폴리펩티드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, 피브로넥틴, MART-2, p53, Ras, TGF-βRII, 또는 MUC1이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CEA이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 미성숙 라미닌 수용체이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 TAG-72이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 HPV E6이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 HPV E7이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 BING-4이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 사이클린-B1이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 9D7이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 EpCAM이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 EphA3이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 Her2/neu이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 텔로머라제이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 메소텔린이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 SAP-1이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 생존 형태이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 BAGE 패밀리 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CAGE 패밀리 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 GAGE 패밀리 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 MAGE 패밀리 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 SAGE 패밀리 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 XAGE 패밀리 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 NY-ESO-1/LAGE-1이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 PRAME이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 SSX-2이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 멜란-A이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 MART-1이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 Gp100이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 pmel17이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 티로시나제이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 TRP-1이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 TRP-2이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 P. 폴리펩티드이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 MC1R이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 전립선-특이적 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 β-카테닌이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 BRCA1이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 BRCA2이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CDK4이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CML66이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 피브로넥틴이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 MART-2이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 p53이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 Ras이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 TGF-βRII이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 MUC1이다.
γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 암 세포의 표면 상에 존재하는 종양-관련 항원에 대한 TRDV2 이중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 암 세포의 사멸을 가져올 수 있다.
본 명세서에 기재된 이중특이성 항체의 실시 형태에서, 제1 에피토프는 TRDV2 상에 위치하고, 제2 에피토프는 CD33 상에 위치한다. 소정 실시 형태에서, 제2 에피토프는 CD33의 C2 도메인 내의 에피토프를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 제2 에피토프는 CD33의 V 도메인 내의 에피토프를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 제2 에피토프는 CD33의 C2 도메인 내의 에피토프로 이루어진다. 다른 실시 형태에서, 제2 에피토프는 CD33의 V 도메인 내의 에피토프로 이루어진다.
본 명세서에 제공된 이중특이성 항체의 실시 형태에서, 제1 에피토프는 TRDV2 상에 위치하고, 제2 에피토프는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD3 및/또는 다른 암 관련 면역 억제인자 또는 표면 항원 상에 위치한다.
용어 "CD33"은 67 kD 단회 통과 막관통 당단백질을 지칭하며, 시알산-결합 면역글로불린-유사 렉틴(Siglec) 패밀리의 구성원이다. 그의 정확한 생물학적 기능은 불명확하지만, 정상 개체에서, 골수계 분화 항원인 것으로 주로 여겨지며, 골수계 선조체, 호중구 및 대식세포에서는 낮은 발현을 갖지만, 순환 단핵구 및 수지상 세포에서는 고도로 발현된다. CD33은 급성 골수성 백혈병(AML)을 제시하는 환자의 85 내지 90%의 아세포 및 백혈병 줄기 세포에서 검출되었다. 용어 "CD33"은, 달리 기재되지 않는 한, 임의의 CD33 변이체, 아이소형, 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있으며, "CD33"은 인간 CD33이다. 인간 CD33 아미노산 서열은 GenBank 수탁 번호 BC028152.1에 의해 제공된다.
항-TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 항-CD33 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 또한 제공된다. 소정 실시 형태에서, 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) HC1; (b) HC2; (c) LC1; 및 (d) LC2를 포함하며, HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합된다. HC1은, 예를 들어, 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함할 수 있고, LC1은, 예를 들어, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함할 수 있어서, TRDV2에 특이적으로 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성할 수 있다. HC2는, 예를 들어, 서열 번호 9, 서열 번호 10, 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC2는, 예를 들어, 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, CD33에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성할 수 있다. 소정 실시 형태에서, TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, CD33은 암 세포(예를 들어, 백혈병 세포)의 표면 상에 존재한다.
소정 실시 형태에서, 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공되며, 상기 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항-TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 항-CD33 C2 도메인 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공되며, 상기 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항-TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 항-CD33 V 도메인 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
제2 항원에 대한 결합 부위는, 예를 들어 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합할 수 있다. γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 암 세포의 표면 상에 존재하는 종양-관련 항원에 대한 TRDV2 이중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 암 세포의 사멸을 가져올 수 있다.
CD33의 발현은 조혈 세포로 제한되는 경향이 있지만, 정상 조혈 줄기 세포 상에는 부재하는데, 이는 CD33이 AML 세포를 표적화한다는 것을 나타낸다.
CD33의 구조는 그의 세포외 부분에서 시알산 결합을 매개하는 아미노-말단 V-세트 lg-유사 도메인(CD33의 엑손 2에 의해 코딩됨) 및 C2-세트 Ig-유사 도메인(엑손 3 및 4에 의해 코딩됨)으로 이루어진다(문헌[Laszlo et al., 2016]). CD33 RNA의 대체 스플라이싱은 세포 표면 상에서 발현되는 더 짧은 아이소형으로 이어질 수 있으며, 이는 V-세트 lg-유사 도메인은 결여되어 있지만 C2-세트 Ig-유사 도메인은 유지한다(문헌[Laszlo, Estey, & Walter, 2014]; 문헌[Laszlo et al., 2016]). 이러한 스플라이싱 과정의 생물학적 관련성은 최근 연구가 단일 뉴클레오티드 다형(SNP) rs12459419가 AML 집단의 50%에 존재하였다는 것과, SNP는 CD33의 엑손 2의 스킵핑으로 이어지고, 이는 CD33의 V 도메인의 결실을 가져온다는 것을 밝혀낼 때까지 대체로 알려지지 않았다(문헌[Lamba et al., 2017]).
본 명세서에 제공된 TRDV2 다중특이성 항체에 사용될 수 있는 추가의 CD33 항체는 AMG330 및 AMG673(Amgen; 문헌[Friedrich et al., 2014]), AMV564(Amphivena; 미국 특허 제9,803,029호), IMGN779(Immunogen; 미국 특허 제9,359,442호), BI836858(Boehringer Ingelheim; 문헌[Vasu et al., 2016]), Actimab(Actinium Pharma), 겜투주맙(문헌[Godwin, Gale, & Walter, 2017]), 및 SGN33A(Seattle Genetics)를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 AMG330의 VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 AMG673의 VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 AMV564의 VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 IMGN779의 VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 BI836858의 VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 Actimab의 VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 겜투주맙의 VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 일부 실시 형태에서, CD33에 결합하는 제2 결합 도메인은 SGN33A의 VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3을 포함한다.
TRDV2xCD33 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 임의의 TRDV2 항체를 포함하는 제1 결합 도메인을 포함할 수 있다. TRDV2xCD33 다중특이성 항체는, 본 명세서에 제공된 임의의 CD33 항체를 포함한, 임의의 CD33 항체를 포함하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 다이아바디, 크로스-바디(cross-body), 또는 본 명세서에 기재된 것들로서의 제어된 Fab 아암 교환을 통해 획득된 이중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 이종이량체화를 강제로 일으키는 상보적 CH3 도메인을 갖는 IgG-유사 분자; 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자 - 여기서는, 분자의 2개의 측 각각이 적어도 2개의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부를 함유함 -; IgG 융합 분자 - 여기서는, 전장 IgG 항체가 추가 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부에 융합됨 -; Fc 융합 분자 - 여기서는, 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 다이아바디가 중쇄 불변-도메인, Fc-영역 또는 이들의 일부에 융합됨 -; Fab 융합 분자 - 여기서는, 상이한 Fab-단편들이 함께 융합됨 -; ScFv- 및 다이아바디-기반 및 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디) - 여기서는, 상이한 단일쇄 Fv 분자들 또는 상이한 다이아바디들 또는 상이한 중쇄 항체들(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)이 서로 또는 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합됨 - 를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 상보적 CH3 도메인 분자를 갖는 IgG-유사 분자는 Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인투-홀(Knob-into-Hole) (Genentech), CrossMAb (Roche) 및 정전기적-매칭(electrostatically-matched) (Amgen), LUZ-Y (Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody) (EMD Serono), Biclonic (Merus) 및 DuoBody (Genmab A/S)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화(Dual Targeting)(DT)-Ig (GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody) (Genentech), 가교결합된(Cross-linked) Mab (Karmanos Cancer Center), mAb2 (F-Star) 및 CovX-바디 (CovX/Pfizer)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인(Dual Variable Domain, DVD)-Ig (Abbott), IgG-유사 이중특이체 (InnClone/Eli Lilly), Ts2Ab (MedImmune/AZ) 및 BsAb (Zymogenetics), HERCULES (Biogen Idec) 및 TvAb (Roche)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체 (Academic Institution), SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART) (MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)2-Fab (National Research Center for Antibody Medicine--China)를 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, Fab 융합 이중특이성 항체는 F(ab)2 (Medarex/AMGEN), 이중-작용체(Dual-Action) 또는 Bis-Fab (Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock, DNL) (ImmunoMedics), 2가 이중특이체(Bivalent Bispecific) (Biotecnol) 및 Fab-Fv (UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 다이아바디-기반 및 도메인 항체는 이중특이성 T 세포 인게이저(BiTE) (Micromet), 탠덤 다이아바디(Tandab) (Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART) (MacroGenics), 단일쇄 다이아바디(Academic), TCR-유사 항체(AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Merrimack) 및 COMBODY(Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 제공된 전장 이중특이성 항체는, 예를 들어 2개의 단일특이성 2가 항체들 사이에서의 Fab 아암 교환(또는 하프 분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있는데, 이는 공발현을 사용하거나 또는 무세포 환경에서의 시험관내에서, 각각의 하프 분자 내의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 하프 분자의 이종이량체 형성을 유리하게 함으로써 행해진다. Fab 아암 교환 반응은 이황화-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리-회합의 결과이다. 모 단일특이성 항체의 힌지 영역 내의 중쇄 이황화물 결합은 환원된다. 모 단일특이성 항체들 중 하나의, 생성된 유리 시스테인은, 제2 모 단일특이성 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인이 해리-회합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화에 비하여 이종이량체화에 유리하도록 조작될 수 있다. 생성된 산물은, 각각이 별개의 에피토프, 즉 TRDV2 상의 에피토프 및 제2 표적 항원(예를 들어, TRDV2가 아님) 상의 에피토프에 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 하프 분자를 갖는 이중특이성 항체이다. 다중특이성 항체를 제조하는 다른 방법이 알려져 있으며 고려된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체화"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체화"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
어딘가 다른 곳에 언급된 바와 같이, 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인-홀 (Genentech), CrossMAb (Roche) 및 정전기적-매칭 (Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed), LUZ-Y (Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(SEEDbody) (EMD Serono), Biclonic (Merus) 및 DuoBody (Genmab A/S)와 같은 설계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 TRDV2 다중특이성 항체는 노브-앤드-홀 포맷이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 TRDV2 다중특이성 항체는 DuoBody 포맷이다.
Triomab Quadroma 기술이 본 명세서에 제공된 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. Triomab 기술은 2개의 모 키메라 항체들 사이의 Fab 아암 교환을 촉진시키는데, 이때 하나의 모 mAb는 IgG2a를 갖고, 제2 모 mAb는 래트 IgG2b 불변 영역을 가져서, 키메라 이중특이성 항체를 생성한다.
"노브-인-홀" 전략(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2006/028936호 참조)이 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내에 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이화되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.
CrossMAb 기술이 본 명세서에 제공된 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. Fab 아암 교환을 촉진하기 위하여 "노브-인-홀" 전략을 이용하는 것에 더하여, CrossMAb는 하프 아암들 중 하나에서, CH1 및 CL 도메인이 교환되어 있어서, 생성된 이중특이성 항체의 올바른 경쇄 쌍형성을 보장한다(예를 들어, 미국 특허 제8,242,247호 참조).
한쪽 또는 양쪽 아암에서, 중쇄와 경쇄 사이에서 또는 이중특이성 항체 내의 중쇄 내에서 가변 또는 불변 도메인, 또는 두 도메인 모두를 교환함으로써 본 명세서에 제공된 전장 이중특이성 항체를 생성하기 위하여 다른 크로스-오버 전략이 사용될 수 있다. 이들 교환은, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2009/080254호, WO2009/080251호, WO2009/018386호 및 WO2009/080252호에 기재된 바와 같이 VH-CH1을 VL-CL로, VH를 VL로, CH3을 CL로 그리고 CH3을 CH1로 교환하는 것을 포함한다.
하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기를, 그리고 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 제2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 제2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 제2010/028637호 또는 미국 특허 출원 공개 제2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 제2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0195849호에 기재된 바와 같이 하기의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405AY407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
LUZ-Y 기술이 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체를 생성하는 데 이용될 수 있다. 이 기술에서는, 류신 지퍼가 CH3 도메인의 C 말단 내로 첨가되어 모 mAb로부터 이종이량체 조립을 유도하고, 이것을 정제 후에 제거하는데, 이는 문헌[Wranik et al., (2012) J Biol Chem 287(52): 42221-9]에 기재된 바와 같다.
SEEDbody 기술이 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체를 생성하는 데 이용될 수 있다. SEEDbody는, 그의 불변 도메인에서, 선택된 IgG 잔기가 IgA 잔기로 치환되어 있어서, 이종이량체화를 촉진시키는데, 이는 미국 특허 출원 공개 제20070287170호에 기재된 바와 같다.
전술된 방법에 더하여, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는, 2개의 단일특이성 동종이량체성 항체의 CH3 영역 내에 비대칭 돌연변이를 도입시키고, 이황화물 결합 이성질화를 가능하게 하는 환원성 조건에서 2개의 모 단일특이성 동종이량체성 항체로부터 이중특이성 이종이량체성 항체를 형성함으로써 무세포 환경에서 시험관내에서 생성될 수 있는데, 이는 국제 특허 출원 공개 WO2011/131746호에 기재된 방법에 따른 것이다. 이들 방법에서, 제1 단일특이성 2가 항체 및 제2 단일특이성 2가 항체는 CH3 도메인에서 이종이량체 안정성을 촉진하는 소정의 치환을 갖도록 조작되며; 이들 항체는 힌지 영역 내의 시스테인이 이황화물 결합 이성질화를 거칠 수 있게 하기에 충분한 환원성 조건 하에서 함께 인큐베이션되고; 그럼으로써 Fab 아암 교환에 의해 이중특이성 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 선택적으로 비환원성 조건으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인 및 베타-메르캅토에탄올이며, 예를 들어 2-메르캅토에틸아민, 다이티오트레이톨 및 트리스(2-카르복시에틸)포스핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 환원제이다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재하고, 암 세포의 표면 상에서 발현되는 항원은 암 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 γδ T 세포의 표면 상의 TRDV2 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 때 사멸된다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, EC50은 γδ T 이펙터 세포와 암 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가된다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
소정 실시 형태에서, 항-TRDV2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 및 6의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고; 항-CD33 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열 번호 9, 10, 11, 12, 13, 및 14의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 링커(linker)를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 천연 발생 아미노산을 포함한다. 링커 내로 포함될 수 있는 예시적인 아미노산은 Gly, Ser Pro, Thr, Glu, Lys, Arg, Ile, Leu, His 및 The이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 VH와 VL을, 이들이 서로에 대해 올바른 입체구조를 형성하여 표적(예를 들어, TRDV2)에 대한 결합과 같은 원하는 활성을 보유하도록 하는 방식으로 연결하기에 충분한 길이를 갖는다.
소정 실시 형태에서, 링커는 약 5 내지 50개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 40개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 35개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 15 내지 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 6개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 7개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 8개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 9개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 10개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 11개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 12개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 13개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 14개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 15개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 16개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 17개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 18개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 19개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 21개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 22개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 23개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 24개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 26개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 27개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 28개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 29개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 31개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 32개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 33개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 34개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 35개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 36개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 37개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 38개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 39개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 40개의 아미노산 길이이다. 사용될 수 있는 예시적인 링커는 Gly 풍부 링커, Gly 및 Ser 함유 링커, Gly 및 Ala 함유 링커, Ala 및 Ser 함유 링커, 및 다른 가요성 링커이다.
본 명세서에서 확인된 VH 및 VL 도메인들(예를 들어, TRDV2에 결합하는 것들) 중 임의의 것은 scFv 포맷으로 조작될 수 있다. 일부 실시 형태에서, scFv 포맷은 VH-링커-VL 배향이다. 다른 실시 형태에서, scFv 포맷은 VL-링커-VH 배향이다. 본 명세서에서 확인된 VH 및 VL 도메인들 중 임의의 것이 또한 sc(Fv)2 구조를 생성하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, sc(Fv)2 구조는 VH-링커-VL-링커-VL-링커-VH이다. 일부 실시 형태에서, sc(Fv)2 구조는 VH-링커-VL-링커-VH-링커-VL이다. 일부 실시 형태에서, sc(Fv)2 구조는 VH-링커-VH-링커-VL-링커-VL이다. 일부 실시 형태에서, sc(Fv)2 구조는 VL-링커-VH-링커-VH-링커-VL이다. 일부 실시 형태에서, sc(Fv)2 구조는 VL-링커-VH-링커-VL-링커-VH이다. 일부 실시 형태에서, sc(Fv)2 구조는 VL-링커-VL-링커-VH-링커-VH이다. 일부 실시 형태에서, scFv는, N-말단에서 C-말단으로, VH, 제1 링커(L1) 및 VL(VH-L1-VL)을 포함한다. 다른 실시 형태에서, scFv는, N-말단에서 C-말단으로, VL, L1 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 2개의 링커를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 3개의 링커를 포함한다. 또 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 4개 이상의 링커를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체는 이의 항원-결합 단편이다.
다른 특정 태양에 따르면, 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공된다. 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 시험관내에서 ADCC를 유도할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1:1의 이펙터 대 표적 세포 비로 시험관내에서 평가될 때, 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 그러한 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물을 사용하여 시험관내에서 평가될 때, 약 160 pM 미만의 EC50을 나타내는 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, 여기서 그러한 세포들은 약 1:1의 이펙터 대 표적 세포 비로 존재하고, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 30 ng/mL의 농도로 존재한다.
다른 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, 상기 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) HC1; (b) HC2; (c) LC1; 및 (d) LC2를 포함하며, HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, TRDV2에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위를 형성하고, HC2는 서열 번호 9, 서열 번호 10, 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC2는 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, CD33에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위를 형성하고, 상기 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물을 사용하여 시험관내에서 평가될 때, 약 160 pM 미만의 EC50을 나타내며, 여기서 그러한 세포들은 약 1:1의 이펙터 대 표적 세포 비로 존재하고, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 30 ng/mL의 농도로 존재한다.
소정 실시 형태에서, 제2 항원-결합 부위는 CD33의 C2 도메인에 특이적으로 결합한다. 다른 실시 형태에서, 제2 항원-결합 부위는 CD33의 V 도메인에 특이적으로 결합한다.
소정 실시 형태에서, EC50은 약 1000 pM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 190 pM 미만, 약 180 pM 미만, 약 170 pM 미만, 약 160 pM 미만, 약 150 pM 미만, 약 140 pM 미만, 약 130 pM 미만, 약 120 pM 미만, 약 110 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM 미만, 약 20 pM 미만, 또는 약 10 pM 미만이다.
소정 실시 형태에서, 이펙터 대 표적 세포 비는, 예를 들어 0.01:1, 0.02:1, 0.03:1, 0.04:1, 0.05:1, 0.06:1, 0.07:1, 0.08:1, 0.09:1, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 또는 10:1일 수 있다.
소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 농도는 약 0.000005 ng/mL, 약 0.00005 ng/mL, 약 0.0005, 약 0.005 ng/mL, 약 0.01 ng/mL, 약 0.02 ng/mL, 약 0.03 ng/mL, 약 0.04 ng/mL, 약 0.05 ng/mL, 약 0.06 ng/mL, 약 0.07 ng/mL, 약 0.08 ng/mL, 약 0.09 ng/mL, 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1.0 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 또는 약 1000 ng/mL이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체의 면역 이펙터 특성이 당업자에게 알려진 기법에 의해 Fc 변형을 통해 향상되거나 또는 침묵될 수 있다. 예를 들어, Fc 이펙터 기능, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), ADCC, 항체-의존성 세포-매개 식세포작용(ADCP), 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등이, 이들 활성을 담당하는 Fc 내의 잔기를 변형시킴으로써 제공 및/또는 제어될 수 있다.
"항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포(예를 들어, 천연 살해(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적 세포 상에 결합된 항체를 인식하고 후속적으로 표적 세포의 용해를 야기하는 세포-매개 반응을 지칭한다.
ADCC를 유도하는 항체의 능력은 그의 올리고당 성분을 조작함으로써 향상될 수 있다. 인간 IgG1 또는 IgG3은 잘 알려진 바이안테나리(biantennary) G0, G0F, G1, G1F, G2 또는 G2F 형태의 글리칸의 대부분에 의해 Asn297에서 N-글리코실화된다. 조작되지 않은 CHO 세포에 의해 생성된 항체는 전형적으로 약 85% 이상의 글리칸 푸코스 함량을 갖는다. Fc 영역에 부착된 바이안테나리 복합형(complex-type) 올리고당으로부터의 코어(core) 푸코스의 제거는, 항원 결합 또는 CDC 활성을 변경시키지 않고서, 개선된 FcγRIIIa 결합을 통해 항체의 ADCC를 향상시킨다. 그러한 Ab는 바이안테나리 복합형의 Fc 올리고당을 담지하는 비교적 고도로 탈푸코실화된 항체의 성공적인 발현으로 이어지는 것으로 보고된 상이한 방법들을 사용하여 달성될 수 있는데, 이러한 방법에는, 예컨대 하기와 같은 것이 있다: 배양물 오스몰랄 농도(osmolality)의 제어(문헌[Konno et al., Cytotechnology 64:249-65, 2012]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 Lec13의 적용(문헌[Shields et al., J Biol Chem 277:26733-26740, 2002]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 EB66의 적용(문헌[Olivier et al., MAbs; 2(4), 2010; Epub ahead of print; PMID:20562582]), 숙주 세포주로서의 래트 하이브리도마 세포주 YB2/0의 적용(문헌[Shinkawa et al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003]), 특이적으로 α-1,6-푸코실트랜스퍼라제(FUT8) 유전자에 대한 짧은 간섭(small interfering) RNA의 도입(문헌[Mori et al., Biotechnol Bioeng 88:901-908, 2004]), 또는 β-1,4-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III과 골지(golgi) α-만노시다제 II 또는 강력한 알파-만노시다제 I 억제제인 키푸넨신(kifunensine)의 공발현(문헌[Ferrara et al., J Biol Chem 281:5032-5036, 2006], 문헌[Ferrara et al., Biotechnol Bioeng 93:851-861, 2006]; 문헌[Xhou et al., Biotechnol Bioeng 99:652-65, 2008]).
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체에 의해 유도되는 ADCC는 또한 항체 Fc 내에서의 소정의 치환에 의해 향상될 수 있다. 예시적인 치환은, 예를 들어 미국 특허 제6,737,056호에 기재된 바와 같은 아미노산 위치 256, 290, 298, 312, 356, 330, 333, 334, 360, 378 또는 430(잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따름)에서의 치환이다.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공되며, 상기 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 키메라 형태이다.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공되며, 상기 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 형태 또는 인간화 형태이다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간 형태이다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 인간 형태이다. 다른 실시 형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두는 인간 형태이다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간화 형태이다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 인간화 형태이다. 다른 실시 형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두는 인간화 형태이다. 다른 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간 형태이고, 제2 결합 도메인은 인간화 형태이다. 다른 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간화 형태이고, 제2 결합 도메인은 인간 형태이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG2 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG3 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG4 항체이다. 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 TRDV2 항원-결합 단편이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 다가 형태이다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 다중특이성 항체의 일부이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 TRDV2 항원에 결합하는 제1 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는, 본 명세서에 제공된 바와 같이, TRDV2 항원에 결합하는 제1 결합 도메인을 포함하고, 제2 표적 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 TRDV2 항원, 제2 표적 항원, 및 하나 이상의 추가의 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다양한 항체의 일부 실시 형태에서, 항체는 주어진 항원의 에피토프에 결합한다.
일 태양에서, 다중특이성 항체가 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포의 표면 상의 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 예시적인 넘버링 체계에 따른다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 TRDV2에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 TRDV2 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 TRDV2 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 TRDV2의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 TRDV2의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다.
일부 실시 형태에서, TRDV2는 T 세포의 표면 상에 존재한다.
일부 실시 형태에서, 암 세포는 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암의 세포이다.
일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 안지오포이에틴, BCMA, CD19, CD20, CD22, CD25(IL2-R), CD30, CD33, CD37, CD38, CD52, CD56, CD123(IL-3R), cMET, DLL/노치, EGFR, EpCAM, FGF, FGF-R, GD2, HER2, 메소텔린, 넥틴-4, PAP, PDGFRα, PSA, PSA3, PSMA, RANKL, SLAMF7, STEAP1, TARP, TROP2, VEGF, 또는 VEGF-R이다.
일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 CEA, 미성숙 라미닌 수용체, TAG-72, HPV E6, HPV E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2, 사이클린-B1, 9D7, EpCAM, EphA3, Her2/neu, 텔로머라제, 메소텔린, SAP-1, 생존 형태, BAGE 패밀리 항원, CAGE 패밀리 항원, GAGE 패밀리 항원, MAGE 패밀리 항원, SAGE 패밀리 항원, XAGE 패밀리 항원, NY-ESO-1/LAGE-1, PRAME, SSX-2, 멜란-A, MART-1, Gp100, pmel17, 티로시나제, TRP-1, TRP-2, P. 폴리펩티드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, 또는 BRCA1이다.
일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 CD33이다.
일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 예시적인 넘버링 체계에 따른다.
일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 CD33의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 CD33에 대한 에피토프를 형성한다.
일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 암 세포의 표면 상의 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 다가 형태이거나, 제2 결합 도메인은 다가 형태이거나, 또는 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두가 다가 형태이다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 다가 형태이다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 다가 형태이다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두는 다가 형태이다.
일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 적어도 2개의 항원에 결합할 수 있거나, 또는 제2 결합 도메인은 적어도 2개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 적어도 2개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 적어도 2개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있거나, 또는 제2 결합 도메인은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 적어도 4개의 항원에 결합할 수 있거나, 또는 제2 결합 도메인은 적어도 4개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 적어도 4개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 적어도 4개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있거나, 또는 제2 결합 도메인은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 사중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 카파 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 람다 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 단일클론 항체이다.
다른 태양에서, 다중특이성 항체가 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 T 세포의 표면 상의 TRDV2에 결합할 수 있는 제1 수단; 및 암 항원에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함한다. 소정 실시 형태에서, T 세포는 γδ T 세포이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 암 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 명세서에 제공된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이 본 명세서에 제공된다. 다른 일반적인 태양에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이 본 명세서에 제공된다. 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 단백질의 코딩 서열을 변화시킬(예를 들어, 대체, 결실, 삽입 등을 할) 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 따라서, 본 명세서에 제공된 단일클론 항체 및/또는 이중특이성 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 변경시킬 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터가 본 명세서에 제공된다. 다른 일반적인 태양에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터가 본 명세서에 제공된다. 플라스미드, 코스미드, 파지 벡터, 또는 바이러스 벡터와 같은, 본 발명을 고려하여 당업자에게 알려진 임의의 벡터가 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터는 재조합 발현 벡터, 예컨대 플라스미드이다. 벡터는 발현 벡터의 통상적인 기능을 확립하기 위한 임의의 요소, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 요소, 종결자, 인핸서, 선택 마커, 및 복제 기점을 포함할 수 있다. 프로모터는 구성적, 유도성 또는 억제성 프로모터일 수 있다. 세포에 핵산을 전달할 수 있는 다수의 발현 벡터가 당업계에 알려져 있으며, 세포에서의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생성을 위해 본 발명에 사용될 수 있다. 통상적인 클로닝 기법 또는 인공 유전자 합성이 본 명세서에 제공된 실시 형태에 따른 재조합 발현 벡터를 생성하는 데 사용될 수 있다. 그러한 기법은 본 발명을 고려하여 당업자에게 잘 알려져 있다.
다른 일반적인 태양에서, 본 명세서에 제공된 단일클론 항체 및/또는 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 숙주 세포가 본 명세서에 제공된다. 본 발명을 고려하여 당업자에게 알려진 임의의 숙주 세포가 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 재조합 발현에 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 E. 콜라이(E. Coli) TG1 또는 BL21 세포(예를 들어, scFv 또는 Fab 항체의 발현용), CHO-DG44 또는 CHO-K1 세포 또는 HEK293 세포(예를 들어, 전장 IgG 항체의 발현용)이다. 특정 실시 형태에 따르면, 재조합 발현 벡터는 통상적인 방법, 예컨대 화학적 형질감염, 열 충격, 또는 전기천공에 의해 숙주 세포 내로 형질전환되며, 여기서 그것은 재조합 핵산이 효과적으로 발현되도록 숙주 세포 게놈 내로 안정하게 통합된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체를 인코딩하는 핵산이 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터가 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트가 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 다중특이성 항체를 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, 하나 초과의 표적 분자에 결합하는 항체를 제조하는 공정이 제공되며, 상기 분자는 γδ T 세포 상의 TRDV2 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 γδ T 세포 상의 TRDV2 항원 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 항체를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계는 n회 반복되고, γδ T 세포 상의 TRDV2 항원 및 n개의 표적 분자에 결합할 수 있는 결합 도메인을 제공하는 기능을 수행하기 위한 n회의 단계를 추가로 포함하며, 여기서 n은 적어도 2이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 명세서에 개시된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 상기 방법은 본 명세서에 개시된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건 하에서 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하는 단계, 및 세포 또는 세포 배양물로부터(예를 들어, 상층액으로부터) 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함한다. 발현된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 세포로부터 수합되고, 당업계에 알려져 있고 본 명세서에 기재된 바와 같은 통상적인 기법에 따라 정제될 수 있다.
약제학적 조성물
다른 일반적인 태양에서, 단리된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적 조성물"은 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 본 명세서에 제공된 항체를 포함하는 생성물을 의미한다. 본 명세서에 제공된 항체, 및 상기 항체를 포함하는 조성물은 또한 본 명세서에 언급된 치료적 응용을 위한 약제의 제조에 유용하다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "담체"는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정제, 가용화제, 오일, 지질, 지질 함유 베시클, 미소구체, 리포좀 캡슐화, 또는 약제학적 제형에 사용하기 위한 당업계에 잘 알려진 다른 물질을 지칭한다. 담체, 부형제, 또는 희석제의 특성은 특정 응용을 위한 투여 경로에 좌우될 것임이 이해될 것이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 본 명세서에 제공된 조성물의 유효성 또는 본 명세서에 제공된 조성물의 생물학적 활성을 방해하지 않는 비독성 물질을 지칭한다. 특정 실시 형태에 따르면, 본 개시내용을 고려하여, 항체 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 약제학적으로 허용되는 담체가 본 발명에 사용될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 약제학적으로 활성인 성분의 제형은 당업계에, 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy (e.g. 21st edition (2005), and any later editions)]에 알려져 있다. 추가의 성분의 비제한적인 예에는 완충제, 희석제, 용매, 장성 조절제, 방부제, 안정제, 및 킬레이트제가 포함된다. 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체가 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물을 제형화하는 데 사용될 수 있다.
일 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 액체 제형이다. 예시적인 액체 제형은 수성 제형, 즉, 물을 포함하는 제형이다. 액체 제형은 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 겔 등을 포함할 수 있다. 수성 제형은 전형적으로 적어도 50% w/w의 물, 또는 적어도 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 적어도 95% w/w의 물을 포함한다.
일 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, 예를 들어 주사 장치(예를 들어, 주사기 또는 주입 펌프)를 통해 주사될 수 있는 주사제로서 제형화될 수 있다. 주사는, 예를 들어 피하, 근육내, 복막내, 유리체강내, 또는 정맥내 전달될 수 있다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 고체 제형, 예를 들어 냉동-건조 또는 분무-건조된 조성물이며, 이것은 그대로 사용될 수 있거나, 또는 이것에 의사 또는 환자가 사용 전에 용매 및/또는 희석제를 첨가한다. 고체 투여 형태는 정제, 예컨대 압축 정제, 및/또는 코팅된 정제, 및 캡슐(예를 들어, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐)을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한, 예를 들어 사셰(sachet), 당의정, 분말, 과립, 로젠지(lozenge), 또는 재구성을 위한 분말의 형태일 수 있다.
투여 형태는 즉시 방출(이 경우에, 이들은 수용성 또는 수분산성 담체를 포함할 수 있음)일 수 있거나, 또는 이들은 지연 방출, 지속 방출, 또는 조절 방출(이 경우에, 이들은 위장관에서의 또는 피부 하에서의 투여 형태의 용해 속도를 조절하는 수불용성 중합체를 포함할 수 있음)일 수 있다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 비강내, 협측내, 또는 설하 전달될 수 있다.
수성 제형 중의 pH는 pH 3 내지 pH 10일 수 있다. 일 실시 형태에서, 제형의 pH는 약 7.0 내지 약 9.5이다. 다른 실시 형태에서, 제형의 pH는 약 3.0 내지 약 7.0이다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 완충제를 포함한다. 완충제의 비제한적인 예에는 아르기닌, 아스파르트산, 바이신, 시트레이트, 인산수소이나트륨, 푸마르산, 글리신, 글리실글리신, 히스티딘, 라이신, 말레산, 말산, 소듐 아세테이트, 탄산나트륨, 인산이수소나트륨, 인산나트륨, 석시네이트, 타르타르산, 트라이신, 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 완충제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 완충제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 대안적인 실시 형태를 구성한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 방부제를 포함한다. 방부제의 비제한적인 예에는 벤제토늄 클로라이드, 벤조산, 벤질 알코올, 브로노폴, 부틸 4-하이드록시벤조에이트, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로로헥시딘, 클로르페네신, o-크레졸, m-크레졸, p-크레졸, 에틸 4-하이드록시벤조에이트, 이미드우레아, 메틸 4-하이드록시벤조에이트, 페놀, 2-페녹시에탄올, 2-페닐에탄올, 프로필 4-하이드록시벤조에이트, 소듐 데하이드로아세테이트, 티오메로살, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 방부제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 방부제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 대안적인 실시 형태를 구성한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 등장제(isotonic agent)를 포함한다. 등장제의 비제한적인 예에는 염(예컨대, 염화나트륨), 아미노산(예컨대, 글리신, 히스티딘, 아르기닌, 라이신, 아이소류신, 아스파르트산, 트립토판, 및 트레오닌), 알디톨(예컨대, 글리세롤, 1,2-프로판다이올 프로필렌글리콜, 1,3-프로판다이올, 및 1,3-부탄다이올), 폴리에틸렌글리콜(예를 들어, PEG400), 및 이들의 혼합물이 포함된다. 등장제의 다른 예는 당을 포함한다. 당의 비제한적인 예에는 단당류, 이당류, 또는 다당류, 또는 수용성 글루칸(예를 들어, 프룩토스, 글루코스, 만노스, 소르보스, 자일로스, 말토스, 락토스, 수크로스, 트레할로스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 알파 및 베타-HPCD, 가용성 전분, 하이드록시에틸 전분, 및 소듐 카르복시메틸-셀룰로스를 포함함)이 포함될 수 있다. 등장제의 다른 예는 당 알코올이며, 여기서 용어 "당 알코올"은 적어도 하나의 -OH 기를 갖는 C(4-8) 탄화수소로서 정의된다. 당 알코올의 비제한적인 예에는 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 갈락티톨, 둘시톨, 자일리톨, 및 아라비톨이 포함된다. 등장제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 등장제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 대안적인 실시 형태를 구성한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 킬레이트제(chelating agent)를 포함한다. 킬레이트제의 비제한적인 예에는 시트르산, 아스파르트산, 에틸렌다이아민테트라아세트산(EDTA)의 염, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 킬레이트제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 킬레이트제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 대안적인 실시 형태를 구성한다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 안정제를 포함한다. 안정제의 비제한적인 예에는 하나 이상의 응집 억제제, 하나 이상의 산화 억제제, 하나 이상의 계면활성제, 및/또는 하나 이상의 프로테아제 억제제가 포함된다.
다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 안정제를 포함하며, 상기 안정제는 카르복시-/하이드록시셀룰로스 및 이의 유도체(예컨대, HPC, HPC-SL, HPC-L 및 HPMC), 사이클로덱스트린, 2-메틸티오에탄올, 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG 3350), 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 염(예컨대, 염화나트륨), 황-함유 물질, 예컨대 모노티오글리세롤), 또는 티오글리콜산이다. 안정제는 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 안정제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 대안적인 실시 형태를 구성한다.
추가의 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 계면활성제, 예컨대 하나의 계면활성제, 적어도 하나의 계면활성제, 또는 2개의 상이한 계면활성제를 포함한다. 용어 "계면활성제"는 수용성(친수성) 부분 및 지용성(친유성) 부분으로 구성된 임의의 분자 또는 이온을 지칭한다. 계면활성제는, 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 및/또는 쯔비터이온성 계면활성제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 계면활성제는 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 계면활성제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 대안적인 실시 형태를 구성한다.
추가의 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 프로테아제 억제제, 예컨대 EDTA, 및/또는 벤즈아미딘 염산(HCl)을 포함한다. 프로테아제 억제제는 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 개별적으로 또는 응집체로 존재할 수 있다. 이들 특정 프로테아제 억제제 각각을 포함하는 약제학적 조성물은 대안적인 실시 형태를 구성한다.
다른 일반적인 태양에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 생성하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
대안적인 결합제
TRDV2 항체가 본 명세서에 예시되어 있지만, TRDV2(TRDV2 분자)에 결합하는 다른 분자가 또한 고려된다는 것이 이해된다. 그러한 TRDV2 분자는 본 명세서에 제공된 항체의 등가물을 포함한 대안적인 결합제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 TRDV2 분자는 비-면역글로불린 결합제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 비-면역글로불린 결합제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 비-면역글로불린 결합제를 포함한다.
소정 실시 형태에서, 그러한 비-면역글로불린 결합제는 본 명세서에 예시된 동일한 표적에 결합할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 비-면역글로불린 결합제는 본 명세서에 개시된 항체와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 비-면역글로불린 결합제는 경쟁적 결합 검정에서 본 발명의 항체를 대체하거나 그에 의해 대체되는 작용제(agent)로서 확인된다. 이들 대안적인 결합제는, 예를 들어 당업계에 알려진 임의의 조작된 단백질 스캐폴드를 포함할 수 있다. 그러한 스캐폴드는, 예를 들어, 리간드 결합 부위를 형성하는 4개의 초가변 루프를 지지하는 강성 베타-배럴을 특징으로 하는 단백질 구조인, 리포칼린 스캐폴드를 기반으로 하는 안티칼린을 포함한다. 신규한 결합 특이성은, 기능적 디스플레이 및 유도된 선택과 조합하여, 루프 영역에서의 표적화된 무작위 돌연변이생성에 의해 조작될 수 있다(예를 들어, 문헌[Skerra, 2008, FEBS J. 275:2677-83] 참조). 다른 적합한 스캐폴드는, 예를 들어 하기를 포함할 수 있다: 애드넥틴, 또는 모노바디: 인간 피브로넥틴 III의 10번째 세포외 도메인을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Koide and Koide, 2007, Methods Mol. Biol. 352: 95-109] 참조); 아피바디: 스타필로콕쿠스 단백질 A의 Z 도메인을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Nygren et al., 2008, FEBS J. 275:2668-76] 참조); DARPin: 안키린 반복 단백질을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Stumpp et al., 2008, Drug. Discov. Today 13:695-701] 참조); 피노머: 인간 Fyn 단백질 키나제의 SH3 도메인을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Grabulovski et al., 2007, J. Biol. Chem. 282:3196-204] 참조); 아피틴: 술폴로부스 아시돌라리우스(Sulfolobus acidolarius)로부터 유래되는 Sac7d를 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Krehenbrink et al., 2008, J. Mol. Biol. 383:1058-68] 참조); 아필린: 인간 y-B-크리스탈린을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Ebersbach et al., 2007, J. Mol. Biol. 372:172-85] 참조); 아비머: 막 수용체 단백질의 A 도메인을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Silverman et al., 2005, Biotechnol. 23:1556-61] 참조); 시스테인-풍부 노틴 펩티드(예를 들어, 문헌[Kolmar, 2008, FEBS J. 275:2684-90] 참조); 및 조작된 쿠니츠-유형 억제제(예를 들어, 문헌[Nixon and Wood, 2006, Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9:261-68] 참조). 검토를 위해, 예를 들어 문헌[Gebauer and Skerra, 2009, Curr. Opin. Chem. Biol. 13:245-55]을 참조한다.
사용 방법
암 세포의 표면 상의 항원을 표적화하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 암 세포를 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 노출시키는 단계를 포함한다. 암 세포의 표면 상의 항원을 표적화하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 암 세포를 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물에 노출시키는 단계를 포함한다.
TRDV2 또는 암 항원에 결합하는 이중특이성 항체 및 이의 항원-결합 단편의 기능적 활성은 당업계에 알려져 있고 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법에 의해 특성화될 수 있다. TRDV2 또는 암 항원에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하기 위한 방법은 Biacore, ELISA, 및 OCTETRED 분석을 포함한 친화성 및 특이성 검정; FACS에 의해 암 세포에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 결합 검정; γδ T 세포 상의 TRDV2에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 결합 검정을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 특정 실시 형태에 따르면, TRDV2 또는 암 항원에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하기 위한 방법은 하기에 기재된 것들을 포함한다.
일 태양에서, TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 접촉시키는 단계는 상기 γδ T 세포를 상기 암 세포로 유도한다. 다른 태양에서, 세포 표면 상에서 암 항원을 발현하는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 암 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 다중특이성 항체와 접촉하고 있는 동안에 TRDV2를 발현하는 γδ T 세포의 존재 하에 있다.
일 태양에서, 대상체에서 암 세포를 제거하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 다른 태양에서, 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
일 태양에서, TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 활성화하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 접촉시키는 단계는 TRDV2를 발현하는 대조 γδ T 세포와 대비하여, CD69, CD25, 및/또는 그랜자임 B 발현의 증가를 가져온다.
Vδ2-발현 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 Vδ2-발현 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Vδ2-발현 γδ T 세포를 암으로 유도한다. TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 접촉시키는 단계는 상기 γδ T 세포를 상기 암 세포로 유도한다.
암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 Vδ2-발현 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 암 세포를 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 조성물과 접촉시키는 단계는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다. 세포 표면 상에서 암 항원을 발현하는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 암 세포를 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체와 접촉하고 있는 동안에 TRDV2를 발현하는 γδ T 세포의 존재 하에 있다.
다른 일반적인 태양에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된, TRDV2 및 암 세포의 표면 상에 제시되는 암 항원에 특이적으로 결합하는 단리된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 대상체에서 암 항원을 발현하는 암 세포를 제거하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 대상체에서 암 항원을 발현하는 암 세포에 의해 전부 또는 부분적으로 야기되는 질병을 치료하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다. 일부 실시 형태에서, 질병은 암이다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 TRDV2 및 암 항원에 결합한다. 소정 실시 형태에서, 암은 CD33-발현 암이다.
일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-특이적 항원, 종양-관련 항원, 또는 신생항원이다.
일부 실시 형태에서, 암 세포는 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암의 세포이다.
일부 실시 형태에서, 부신암은 부신피질 암종(ACC), 부신 피질암, 크롬친화세포종, 또는 신경아세포종이다.
일부 실시 형태에서, 항문암은 편평 세포 암종, 총배출강성 암종, 선암종, 기저 세포 암종, 또는 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 맹장암은 신경내분비 종양(NET), 점액성 선암종, 배상 세포 카르시노이드, 장형 선암종, 또는 반지 세포 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 담관암은 간외 담관암, 선암종, 폐문 담관암, 폐문주위 담관암, 원위부 담관암, 또는 간내 담관암이다.
일부 실시 형태에서, 방광암은 이행 세포 암종(TCC), 유두상 암종, 편평 암종, 편평 세포 암종, 선암종, 소세포 암종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 골암은 원발성 골암, 육종, 골육종, 연골육종, 육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 골의 거대 세포 종양, 척삭종, 또는 전이성 골암이다.
일부 실시 형태에서, 뇌암은 성상세포종, 뇌간 신경아교종, 교아세포종, 수막종, 뇌실막종, 핍지교종, 혼합 신경교종, 뇌하수체 암종, 뇌하수체 선종, 두개인두종, 생식 세포 종양, 송과체 부위 종양, 수아세포종, 또는 원발성 CNS 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 유방암은 유방 선암종, 침윤성 유방암, 비침윤성 유방암, 유방 육종, 화생성 암종, 선낭성 암종, 엽상 종양, 혈관육종, HER2-양성 유방암, 삼중-음성 유방암, 또는 염증성 유방암이다.
일부 실시 형태에서, 자궁경부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 결직장암은 결직장 선암종, 원발성 결직장 림프종, 위장관 간질 종양, 평활근육종, 카르시노이드 종양, 점액성 선암종, 반지 세포 선암종, 위장관 카르시노이드 종양, 또는 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 식도암은 선암종 또는 편평 세포 암종이다.
일부 실시 형태에서, 담낭암은 선암종, 유두상 선암종, 선편평세포 암종, 편평 세포 암종, 소세포 암종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 임신성 영양아세포성 질병(GTD)은 포상 기태, 임신성 영양아세포성 신생물(GTN), 융모막암종, 태반-부위 영양아세포성 종양(PSTT), 또는 상피모양 영양아세포성 종양(ETT)이다.
일부 실시 형태에서, 두경부암은 후두암, 비인두암, 하인두암, 비강암, 부비동암, 타액선암, 구강암, 구인두암, 또는 편도선암이다.
일부 실시 형태에서, 호지킨 림프종은 고전적 호지킨 림프종, 결절성 경화증, 혼합 세포형, 림프구-풍부, 림프구-고갈, 또는 결절성 림프구-우세형 호지킨 림프종(NLPHL)이다.
일부 실시 형태에서, 장암은 소장암, 소장의 암, 선암종, 육종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 또는 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 신장암은 신세포 암종(RCC), 투명 세포 RCC, 유두상 RCC, 혐색소성 RCC, 집합관 RCC, 미분류 RCC, 이행 세포 암종, 요로상피암, 신우 암종, 또는 신장 육종이다.
일부 실시 형태에서, 백혈병은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 모발상 세포 백혈병(HCL), 또는 골수이형성 증후군(MDS)이다.
일부 실시 형태에서, 간암은 간세포 암종(HCC), 섬유층판성 HCC, 담관암종, 혈관육종, 또는 간 전이이다.
일부 실시 형태에서, 폐암은 소세포 폐암, 소세포 암종, 복합형 소세포 암종, 비소세포 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐암, 대세포 미분화 암종, 폐 결절, 전이성 폐암, 선편평세포 암종, 대세포 신경내분비 암종, 타액선형 폐 암종, 폐 카르시노이드, 중피종, 폐의 육종모양 암종, 또는 악성 과립 세포 폐 종양이다.
일부 실시 형태에서, 흑색종은 표재성 확산성 흑색종, 결절성 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 악성 흑자 흑색종, 무멜라닌성 흑색종, 섬유조직형성 흑색종, 안구 흑색종, 또는 전이성 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 중피종은 흉막 중피종, 복막 중피종, 심막 중피종, 또는 고환 중피종이다.
일부 실시 형태에서, 다발성 골수종은 활동성 골수종 또는 무증상 골수종이다.
일부 실시 형태에서, 신경내분비 종양은 위장관 신경내분비 종양, 췌장 신경내분비 종양, 또는 폐 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 비호지킨 림프종은 역형성 대세포 림프종, 림프아구성 림프종, 말초 T 세포 림프종, 여포성 림프종, 피부 T 세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 변연부 B-세포 림프종, MALT 림프종, 소세포 림프구성 림프종, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소림프구성 림프종(SLL), 전구체 T-림프아구성 백혈병/림프종, 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 T 세포 림프종/백혈병(ATLL), 모발상 세포 백혈병, B-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 B-세포 림프종, 원발성 중추 신경계(CNS) 림프종, 외투 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종, 점막-관련 림프계 조직(MALT) 림프종, 림프절 변연부 B-세포 림프종, 비장 변연부 B-세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, B-세포 비호지킨 림프종, T 세포 비호지킨 림프종, 자연 살해 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 알리버트-바진 증후군, 세자리 증후군, 원발성 피부 역형성 대세포 림프종, 말초 T 세포 림프종, 혈관면역아구성 T 세포 림프종(AITL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 전신 ALCL, 장병증형 T 세포 림프종(EATL), 또는 간비장 감마/델타 T 세포 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 구강암은 편평 세포 암종, 사마귀모양 암종, 소타액선 암종, 림프종, 양성 구강 종양, 호산구성 육아종, 섬유종, 과립 세포 종양, 각질극세포종, 평활근종, 골연골종, 지방종, 슈반세포종, 신경섬유종, 유두종, 첨규 콘틸로마, 우췌상 황색종, 화농성 육아종, 횡문근종, 치원성 종양, 백반증, 홍반증, 편평 세포 구순암, 기저 세포 구순암, 입의 암, 치육암, 또는 혀암이다.
일부 실시 형태에서, 난소암은 난소 상피암, 점액성 상피 난소암, 자궁내막모양 상피 난소암, 투명 세포 상피 난소암, 미분화 상피 난소암, 난소 저악성도 잠복 종양, 원발성 복막 암종, 난관암, 생식 세포 종양, 기형종, 난소고환종, 난소 생식 세포암, 내배엽 동종양, 성삭-간질 종양, 성삭-생식선 간질 종양, 난소 간질 종양, 과립막 세포 종양, 과립막-난포막 종양, 세르톨리-라이디히 종양, 난소 육종, 난소 암육종, 난소 선육종, 난소 평활근육종, 난소 섬유육종, 크루켄베르크 종양, 또는 난소 낭포이다.
일부 실시 형태에서, 췌장암은 췌장 외분비선암, 췌장 내분비선암, 또는 췌장 선암종, 췌도 세포 종양, 또는 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 전립선암은 전립선 선암종, 전립선 육종, 이행 세포 암종, 소세포 암종, 또는 신경내분비 종양이다.
일부 실시 형태에서, 동암은 편평 세포 암종, 점막 세포 암종, 선양 낭포 세포 암종, 선방 세포 암종, 비동 미분화 암종, 비강암, 부비동암, 상악동암, 사골동암, 또는 비인두암이다.
일부 실시 형태에서, 피부암은 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 카포시 육종(KS), 광선 각화증, 피부 림프종, 또는 각질극세포종이다.
일부 실시 형태에서, 연조직암은 혈관육종, 피부섬유육종, 상피모양 육종, 유잉 육종, 섬유육종, 위장관 간질 종양(GIST), 카포시 육종, 평활근육종, 지질육종, 탈분화된 지질육종(DL), 점액모양/둥근 세포 지질육종(MRCL), 잘 분화된 지질육종(WDL), 악성 섬유성 조직구종, 신경섬유육종, 횡문근육종(RMS), 또는 활막 육종이다.
일부 실시 형태에서, 척수암은 척수 전이성 종양이다.
일부 실시 형태에서, 위암은 위 선암종, 위 림프종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 위 카르시노이드 종양, I형 ECL-세포 카르시노이드, II형 ECL-세포 카르시노이드, 또는 III형 ECL-세포 카르시노이드이다.
일부 실시 형태에서, 고환암은 정상피종, 비정상피종, 배아 암종, 난황낭 암종, 융모막암종, 기형종, 생식선 간질 종양, 라이디히 세포 종양, 또는 세르톨리 세포 종양이다.
일부 실시 형태에서, 인후암은 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 후두암, 인두암, 비인두암, 구인두암, 하인두암, 후두암, 후두 편평 세포 암종, 후두 선암종, 림프상피종, 방추 세포 암종, 사마귀모양 암, 미분화 암종, 또는 림프절암이다.
일부 실시 형태에서, 갑상선암은 유두상 암종, 여포성 암종, 휘르틀 세포 암종, 수질성 갑상선 암종, 또는 역형성 암종이다.
일부 실시 형태에서, 자궁암은 자궁내막암, 자궁내막 선암종, 자궁내막모양 암종, 장액성 선암종, 선편평세포 암종, 자궁 암육종, 자궁 육종, 자궁 평활근육종, 자궁내막 간질 육종, 또는 미분화 육종이다.
일부 실시 형태에서, 질암은 편평 세포 암종, 선암종, 흑색종, 또는 육종이다.
일부 실시 형태에서, 외음부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 암 항원은 안지오포이에틴, BCMA, CD19, CD20, CD22, CD25(IL2-R), CD30, CD33, CD37, CD38, CD52, CD56, CD123(IL-3R), cMET, DLL/노치, EGFR, EpCAM, FGF, FGF-R, GD2, HER2, 메소텔린, 넥틴-4, PDGFRα, RANKL, SLAMF7, TROP2, VEGF, 또는 VEGF-R이다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CEA, 미성숙 라미닌 수용체, TAG-72, HPV E6, HPV E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2, 사이클린-B1, 9D7, EpCAM, EphA3, Her2/neu, 텔로머라제, 메소텔린, SAP-1, 생존 형태, BAGE 패밀리 항원, CAGE 패밀리 항원, GAGE 패밀리 항원, MAGE 패밀리 항원, SAGE 패밀리 항원, XAGE 패밀리 항원, NY-ESO-1/LAGE-1, PRAME, SSX-2, 멜란-A, MART-1, Gp100, pmel17, 티로시나제, TRP-1, TRP-2, P. 폴리펩티드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, 피브로넥틴, MART-2, p53, Ras, TGF-βRII, 또는 MUC1이다.
다른 일반적인 태양에서, 암 세포의 표면 상의 CD33을 표적화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 암 세포를 본 명세서에 제공된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물에 노출시키는 단계를 포함한다.
소정 실시 형태에서, CD33의 C2 도메인이 표적화된다. 다른 실시 형태에서, CD33의 V 도메인이 표적화된다.
TRDV2 및/또는 CD33에 결합하는 이중특이성 항체 및 이의 항원-결합 단편의 기능적 활성은 당업계에 알려져 있고 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법에 의해 특성화될 수 있다. TRDV2 및/또는 CD33에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하기 위한 방법은 Biacore, ELISA, 및 OCTETRED 분석을 포함한 친화성 및 특이성 검정; FACS에 의해 암 세포 상의 CD33에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 결합 검정; γδ T 세포 상의 TRDV2에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 결합 검정을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 특정 실시 형태에 따르면, TRDV2 및/또는 CD33에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하기 위한 방법은 하기에 기재된 것들을 포함한다.
다른 일반적인 태양에서, Vδ2-발현 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 상기 방법은 Vδ2-발현 γδ T 세포를 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Vδ2-발현 γδ T 세포를 표면 상에 CD33을 갖는 암 세포로 유도한다.
다른 일반적인 태양에서, 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법이 본 명세서에 제공된다. 상기 방법은 Vδ2-발현 γδ T 세포를 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 암 세포를 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 조성물과 접촉시키는 단계는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다.
다른 일반적인 태양에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된, TRDV2 및 종양 세포의 표면 상에 제시되는 종양-관련 항원(예를 들어, CD33)에 특이적으로 결합하는 단리된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 암은, 예를 들어 CD33-발현 암일 수 있다. 암은, 예를 들어 CD33-발현 암일 수 있다. 암은, 예를 들어 혈액암일 수 있다. 혈액암은, 예를 들어 백혈병, 림프종, 및 골수종일 수 있다. 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML) 또는 급성 림프구성 백혈병(ALL)일 수 있다.
특정 실시 형태에 따르면, 암의 치료에 사용되는 조성물이 제공된다. 암 요법에 있어서, 조성물은 화학요법, 항-CD20 mAb, 항-TIM-3 mAb, 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, PD-1/PD-L1 요법, IDO, 항-OX40 항체, 항-GITR 항체, 항-CD40 항체, 항-CD38 항체, 사이토카인, 종양용해성 바이러스, TLR 효능제(agonist), STING 효능제, 다른 면역-항암 약물, 항혈관생성제, 방사선 요법, 항체-약물 접합체(ADC), 표적화된 요법, 또는 다른 항암 약물을 포함하지만 이로 한정되지 않는 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다.
TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 활성화하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 γδ T 세포를 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 접촉시키는 단계는 TRDV2를 발현하는 대조 γδ T 세포와 대비하여, CD69, CD25, 및/또는 그랜자임 B 발현의 증가를 가져온다.
본 명세서에 제공된 방법의 다양한 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 TRDV2 및 CD33의 C2 도메인에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 방법의 다른 다양한 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 TRDV2 및 CD33의 V 도메인에 특이적으로 결합한다.
소정 실시 형태에 따르면, 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량"은 대상체에서 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 도출하는 활성 성분 또는 성분의 양을 지칭한다.
특정 실시 형태에 따르면, 유효량은 하기 효과 중 하나, 둘, 셋, 넷, 또는 그 이상을 달성하기에 충분한 요법의 양을 지칭한다: (i) 치료하고자 하는 질병, 장애, 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 중증도를 감소 또는 개선함; (ii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 지속기간을 감소시킴; (iii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 진행을 예방함; (iv) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 퇴행을 야기함; (v) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 발생 또는 발병을 예방함; (vi) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 재발을 예방함; (vii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 입원을 감소시킴; (viii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 입원 기간을 감소시킴; (ix) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 생존율을 증가시킴; (xi) 대상체에서 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 억제하거나 감소시킴; 및/또는 (xii) 다른 요법의 예방적 또는 치료적 효과(들)를 향상시키거나 개선함.
유효량 또는 투여량은 다양한 인자, 예컨대 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태(예를 들어, 연령, 체중, 건강을 포함함), 대상체가 인간인지 또는 동물인지의 여부, 투여되는 다른 약, 및 치료가 예방적인지 또는 치료적인지의 여부에 따라 변동될 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능(efficacy)을 최적화하기 위해 최적으로 적정된다.
특정 실시 형태에 따르면, 본 명세서에 기재된 조성물은 대상체에 대한 의도된 투여 경로에 적합하도록 제형화된다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물은 정맥내, 피하, 또는 근육내 투여에 적합하도록 제형화될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 모두 암과 관련된 하나 이상의 측정가능한 물리적 파라미터의 개선 또는 역전을 지칭하고자 하는 것이며, 이는 반드시 대상체에서 식별가능하지는 않지만, 대상체에서 식별가능할 수 있다. 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 또한, 퇴행을 야기하거나, 진행을 예방하거나, 적어도 질병, 장애 또는 질환의 진행을 둔화시키는 것을 지칭할 수 있다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애, 또는 질환, 예컨대 종양 또는 암과 관련된, 경감, 발생 또는 발병의 예방, 또는 하나 이상의 증상의 지속기간의 감소를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애 또는 질환의 재발의 예방을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애 또는 질환을 갖는 대상체의 생존율의 증가를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 대상체에서 질병, 장애 또는 질환의 제거를 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항-TRDV2 이중특이성 항체는 보충 요법과 병용하여 사용된다.
특정 실시 형태에 따르면, 암의 치료에 사용되는 조성물이 제공된다. 암 요법에 있어서, 조성물은 화학요법, 항-CD20 mAb, 항-TIM-3 mAb, 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, PD-1/PD-L1 요법, IDO, 항-OX40 항체, 항-GITR 항체, 항-CD40 항체, 항-CD38 항체, 사이토카인, 종양용해성 바이러스, TLR 효능제, STING 효능제, 다른 면역-항암 약물, 항혈관생성제, 방사선 요법, 항체-약물 접합체(ADC), 표적화된 요법, 또는 다른 항암 약물을 포함하지만 이로 한정되지 않는 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 대상체에 대한 2가지 이상의 요법의 투여와 관련하여 용어 "병용하여"는 하나 초과의 요법의 사용을 지칭한다. 용어 "병용하여"의 사용은 요법이 대상체에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 대상체에게 제2 요법을 투여하기 전에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전에), 그와 동시에, 또는 그 후에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 제1 요법(예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물)이 투여될 수 있다.
본 명세서에 제공된 TRDV2 항체는 또한 TRDV2를 발현하는 세포를 검출하기 위한 작용제로서 사용될 수 있다. 따라서, 다른 태양에서, TRDV2를 발현하는 세포를 검출하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 세포는 세포 집단 내에 존재한다. 소정 실시 형태에서, 검출은 ELISA에 의해 행해진다. 일부 실시 형태에서, 검출은 FACS 분석에 의해 행해진다. 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체, 및 사용설명서를 포함하는 키트가 또한 제공된다.
풍부화 및 검출 방법
일 태양에서, 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체는 TRDV2-발현 세포를 검출하기 위한 작용제로서 사용된다. 따라서, 다른 방법에서, TRDV2를 발현하는 세포를 검출하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 검출은 ELISA에 의해 행해진다. 일부 실시 형태에서, 검출은 FACS 분석에 의해 행해진다. 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체, 및 사용설명서를 포함하는 키트가 또한 제공된다.
풍부화, 단리, 분리, 정제, 분류, 선택, 포획 또는 검출, 또는 이들의 임의의 조합은 비드, 미소유체(microfluidic), 고체 지지체, 컬럼 등과 같은 알려진 기술을 사용하여 행해질 수 있다. 예를 들어, TRDV2 세포는 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체에 결합될 때 알려진 방법을 사용하여 분리 또는 시각화될 수 있다.
본 명세서에 제공된 TRDV2 항체 또는 다중특이성 TRDV2 항체는 TRDV2-발현 세포를 선택적으로 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나 또는 검출하는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체 또는 다중특이성 TRDV2 항체는, 예를 들어 TRDV2에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 도메인 및 제2 표적에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 함유하는, 이중특이성 포맷으로 이용될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체는 (예를 들어, 삼중특이성 항체에서) 제3 항원에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 도메인을 추가로 도입시킨 포맷으로 이용될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체는 (예를 들어, 사중특이성 항체로서) 제4 항원에 특이적으로 결합하는 제4 항원-결합 도메인을 추가로 도입시킨 포맷으로 이용될 수 있다.
일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 풍부화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 TRDV2-발현 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 풍부화하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 단리하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 TRDV2-발현 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 단리하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 분리하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 TRDV2-발현 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 분리하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 정제하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 TRDV2-발현 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 정제하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 분류하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 TRDV2-발현 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 분류하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 선택하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 TRDV2-발현 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 선택하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 포획하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 TRDV2-발현 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 포획하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 검출하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 TRDV2-발현 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 검출하는 단계를 포함한다.
일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 풍부화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 풍부화하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 단리하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 단리하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 분리하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 분리하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 정제하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 정제하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 분류하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 분류하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 선택하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 선택하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 포획하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 포획하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 검출하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 결합된 상기 TRDV2-발현 세포를 검출하는 단계를 포함한다.
일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 풍부화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 대한 상기 TRDV2-발현 세포의 결합에 기초하여 상기 TRDV2-발현 세포를 풍부화하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 단리하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 대한 상기 TRDV2-발현 세포의 결합에 기초하여 상기 TRDV2-발현 세포를 단리하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 분리하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 대한 상기 TRDV2-발현 세포의 결합에 기초하여 상기 TRDV2-발현 세포를 분리하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 정제하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 대한 상기 TRDV2-발현 세포의 결합에 기초하여 상기 TRDV2-발현 세포를 정제하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 분류하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 대한 상기 TRDV2-발현 세포의 결합에 기초하여 상기 TRDV2-발현 세포를 분류하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 선택하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 대한 상기 TRDV2-발현 세포의 결합에 기초하여 상기 TRDV2-발현 세포를 선택하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 포획하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 대한 상기 TRDV2-발현 세포의 결합에 기초하여 상기 TRDV2-발현 세포를 포획하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, TRDV2-발현 세포를 검출하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 TRDV2-발현 세포를 본 명세서에 제공된 TRDV2 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 TRDV2 항체에 대한 상기 TRDV2-발현 세포의 결합에 기초하여 상기 TRDV2-발현 세포를 검출하는 단계를 포함한다.
상기 방법들의 소정 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 T 세포이다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 세포 집단 내에 존재한다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 림프구 집단 내에 존재한다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 T 세포 집단 내에 존재한다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 세포 집단으로서 제공된다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 림프구 집단으로서 제공된다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 T 세포 집단으로서 제공된다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 세포 집단을 포함하는 샘플로서 제공된다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 림프구 집단을 포함하는 샘플로서 제공된다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2-발현 세포는 T 세포 집단을 포함하는 샘플로서 제공된다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, 샘플은 혈액 샘플이다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, 샘플은 조직 샘플이다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, 샘플은 조직 배양 샘플이다.
상기 방법의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체이다. 상기 방법의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 본 명세서에 제공된 이중특이성 TRDV2 항체이다. 상기 방법의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 본 명세서에 제공된 삼중특이성 TRDV2 항체이다. 상기 방법의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 본 명세서에 제공된 사중특이성 TRDV2 항체이다. 소정 실시 형태에서, TRDV2 항체는 TRDV2에 특이적으로 결합한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 (a) TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 (a) TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 (a) TRDV2에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인, (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 (d) 제4 표적에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 (a) TRDV2에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 (a) TRDV2에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인, 및 (c) 제3 표적에 특이적으로 결합하는 제3 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 TRDV2 항체는 (a) TRDV2에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인, (c) 제3 표적에 특이적으로 결합하는 제3 결합 도메인, 및 (d) 제4 표적에 특이적으로 결합하는 제4 결합 도메인을 포함한다.
상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 TRDV2 항체이며, 여기서 제2 표적은 CD123이다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 TRDV2 항체이며, 여기서 제2 표적은 CD33이다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 TRDV2 항체이며, 여기서 제2 표적은 TRBC1이다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 TRDV2 항체이며, 여기서 제2 표적은 BCMA이다. 상기 방법들의 일부 실시 형태에서, TRDV2 항체는 다중특이성 TRDV2 항체이며, 여기서 제2 표적은 PSMA이다.
본 명세서에 제공된 방법들의 구체적인 실시 형태에서, 상기 방법은 다중-마커 검출을 사용한다. 일부 실시 형태에서, 다중-마커 검출은 본 명세서에 제공된 다중특이성 TRDV2 항체를 사용한다. 일부 실시 형태에서, 다중-마커 검출은 본 명세서에 제공된 이중특이성 TRDV2 항체를 사용한다. 일부 실시 형태에서, 다중-마커 검출은 본 명세서에 제공된 삼중특이성 TRDV2 항체를 사용한다. 일부 실시 형태에서, 다중-마커 검출은 본 명세서에 제공된 사중특이성 TRDV2 항체를 사용한다.
본 명세서에 제공된 방법들의 소정 실시 형태에서, 상기 방법들은 T 세포 제조 공정에서 단계로서 포함된다. 소정 실시 형태에서, 세포는 CAR-T 세포이다. 본 명세서에 제공된 방법들의 소정 실시 형태에서, 상기 방법들은 T 세포 변형 공정에서 단계로서 포함된다.
본 명세서에 제공된 방법들의 소정 실시 형태에서, 상기 방법들은 진단 방법에서 단계로서 포함된다. 본 명세서에 제공된 방법들의 소정 실시 형태에서, 상기 방법들은 TRDV2-발현 T 세포를 정량화하는 방법에서 단계로서 포함된다.
본 명세서에 제공된 방법들의 소정 실시 형태에서, 상기 방법은 풍부화되거나, 단리되거나, 분리되거나, 정제되거나, 분류되거나, 선택되거나, 포획되거나 또는 검출된 TRDV2-발현 세포를 증폭시키는 단계를 추가로 포함한다. 소정 실시 형태에서, 증폭은 시험관내에서 수행된다. 소정 실시 형태에서, 증폭은 생체내에서 수행된다. 본 명세서에 제공된 방법들의 소정 실시 형태에서, 상기 방법은 풍부화되거나, 단리되거나, 분리되거나, 정제되거나, 분류되거나, 선택되거나, 포획되거나 또는 검출된 TRDV2-발현 세포를 성장시키는 단계를 추가로 포함한다. 소정 실시 형태에서, 성장은 시험관내에서 수행된다. 소정 실시 형태에서, 성장은 생체내에서 수행된다. 본 명세서에 제공된 방법들의 소정 실시 형태에서, 상기 방법은 풍부화되거나, 단리되거나, 분리되거나, 정제되거나, 분류되거나, 선택되거나, 포획되거나 또는 검출된 TRDV2-발현 세포를 정량화하는 단계를 추가로 포함한다.
실시 형태
하기의 비제한적인 실시 형태가 본 명세서에 제공된다.
일 세트의 실시 형태에서, 다음이 제공된다:
1. 이중특이성 항체로서,
(a) TRDV2 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및
(b) 암 세포의 표면 상의 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 이중특이성 항체.
2. 실시 형태 1에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 VH; 및
(ii) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함하는, 이중특이성 항체.
3. 실시 형태 2에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는, 이중특이성 항체.
4. 실시 형태 2에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 이중특이성 항체.
5. 실시 형태 2에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 이중특이성 항체.
6. 실시 형태 1 내지 실시 형태 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-특이적 항원, 종양-관련 항원, 또는 신생항원인, 이중특이성 항체.
7. 실시 형태 1 내지 실시 형태 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 암 세포는 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암의 세포인, 이중특이성 항체.
8. 실시 형태 1 내지 실시 형태 7 중 어느 하나에 있어서,
(i) 상기 부신암은 부신피질 암종(ACC), 부신 피질암, 크롬친화세포종, 또는 신경아세포종이거나;
(ii) 상기 항문암은 편평 세포 암종, 총배출강성 암종, 선암종, 기저 세포 암종, 또는 흑색종이거나;
(iii) 상기 맹장암은 신경내분비 종양(NET), 점액성 선암종, 배상 세포 카르시노이드, 장형 선암종, 또는 반지 세포 선암종이거나;
(iv) 상기 담관암은 간외 담관암, 선암종, 폐문 담관암, 폐문주위 담관암, 원위부 담관암, 또는 간내 담관암이거나;
(v) 상기 방광암은 이행 세포 암종(TCC), 유두상 암종, 편평 암종, 편평 세포 암종, 선암종, 소세포 암종, 또는 육종이거나;
(vi) 상기 골암은 원발성 골암, 육종, 골육종, 연골육종, 육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 골의 거대 세포 종양, 척삭종, 또는 전이성 골암이거나;
(vii) 상기 뇌암은 성상세포종, 뇌간 신경아교종, 교아세포종, 수막종, 뇌실막종, 핍지교종, 혼합 신경교종, 뇌하수체 암종, 뇌하수체 선종, 두개인두종, 생식 세포 종양, 송과체 부위 종양, 수아세포종, 또는 원발성 CNS 림프종이거나;
(viii) 상기 유방암은 유방 선암종, 침윤성 유방암, 비침윤성 유방암, 유방 육종, 화생성 암종, 선낭성 암종, 엽상 종양, 혈관육종, HER2-양성 유방암, 삼중-음성 유방암, 또는 염증성 유방암이거나;
(ix) 상기 자궁경부암은 편평 세포 암종 또는 선암종이거나;
(x) 상기 결직장암은 결직장 선암종, 원발성 결직장 림프종, 위장관 간질 종양, 평활근육종, 카르시노이드 종양, 점액성 선암종, 반지 세포 선암종, 위장관 카르시노이드 종양, 또는 흑색종이거나;
(xi) 상기 식도암은 선암종 또는 편평 세포 암종이거나;
(xii) 상기 담낭암은 선암종, 유두상 선암종, 선편평세포 암종, 편평 세포 암종, 소세포 암종, 또는 육종이거나;
(xiii) 상기 임신성 영양아세포성 질병(GTD)은 포상 기태, 임신성 영양아세포성 신생물(GTN), 융모막암종, 태반-부위 영양아세포성 종양(PSTT), 또는 상피모양 영양아세포성 종양(ETT)이거나;
(xiv) 상기 두경부암은 후두암, 비인두암, 하인두암, 비강암, 부비동암, 타액선암, 구강암, 구인두암, 또는 편도선암이거나;
(xv) 상기 호지킨 림프종은 고전적 호지킨 림프종, 결절성 경화증, 혼합 세포형, 림프구-풍부, 림프구-고갈, 또는 결절성 림프구-우세형 호지킨 림프종(NLPHL)이거나;
(xvi) 상기 장암은 소장암, 소장의 암, 선암종, 육종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 또는 림프종이거나;
(xvii) 상기 신장암은 신세포 암종(RCC), 투명 세포 RCC, 유두상 RCC, 혐색소성 RCC, 집합관 RCC, 미분류 RCC, 이행 세포 암종, 요로상피암, 신우 암종, 또는 신장 육종이거나;
(xviii) 상기 백혈병은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 모발상 세포 백혈병(HCL), 또는 골수이형성 증후군(MDS)이거나;
(xix) 상기 간암은 간세포 암종(HCC), 섬유층판성 HCC, 담관암종, 혈관육종, 또는 간 전이이거나;
(xx) 상기 폐암은 소세포 폐암, 소세포 암종, 복합형 소세포 암종, 비소세포 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐암, 대세포 미분화 암종, 폐 결절, 전이성 폐암, 선편평세포 암종, 대세포 신경내분비 암종, 타액선형 폐 암종, 폐 카르시노이드, 중피종, 폐의 육종모양 암종, 또는 악성 과립 세포 폐 종양이거나;
(xxi) 상기 흑색종은 표재성 확산성 흑색종, 결절성 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 악성 흑자 흑색종, 무멜라닌성 흑색종, 섬유조직형성 흑색종, 안구 흑색종, 또는 전이성 흑색종이거나;
(xxii) 상기 중피종은 흉막 중피종, 복막 중피종, 심막 중피종, 또는 고환 중피종이거나;
(xxiii) 상기 다발성 골수종은 활동성 골수종 또는 무증상 골수종이거나;
(xxiv) 상기 신경내분비 종양은 위장관 신경내분비 종양, 췌장 신경내분비 종양, 또는 폐 신경내분비 종양이거나;
(xxv) 상기 비호지킨 림프종은 역형성 대세포 림프종, 림프아구성 림프종, 말초 T 세포 림프종, 여포성 림프종, 피부 T 세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 변연부 B-세포 림프종, MALT 림프종, 소세포 림프구성 림프종, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소림프구성 림프종(SLL), 전구체 T-림프아구성 백혈병/림프종, 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 T 세포 림프종/백혈병(ATLL), 모발상 세포 백혈병, B-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 B-세포 림프종, 원발성 중추 신경계(CNS) 림프종, 외투 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종, 점막-관련 림프계 조직(MALT) 림프종, 림프절 변연부 B-세포 림프종, 비장 변연부 B-세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, B-세포 비호지킨 림프종, T 세포 비호지킨 림프종, 자연 살해 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 알리버트-바진 증후군, 세자리 증후군, 원발성 피부 역형성 대세포 림프종, 말초 T 세포 림프종, 혈관면역아구성 T 세포 림프종(AITL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 전신 ALCL, 장병증형 T 세포 림프종(EATL), 또는 간비장 감마/델타 T 세포 림프종이거나;
(xxvi) 상기 구강암은 편평 세포 암종, 사마귀모양 암종, 소타액선 암종, 림프종, 양성 구강 종양, 호산구성 육아종, 섬유종, 과립 세포 종양, 각질극세포종, 평활근종, 골연골종, 지방종, 슈반세포종, 신경섬유종, 유두종, 첨규 콘틸로마, 우췌상 황색종, 화농성 육아종, 횡문근종, 치원성 종양, 백반증, 홍반증, 편평 세포 구순암, 기저 세포 구순암, 입의 암, 치육암, 또는 혀암이거나;
(xxvii) 상기 난소암은 난소 상피암, 점액성 상피 난소암, 자궁내막모양 상피 난소암, 투명 세포 상피 난소암, 미분화 상피 난소암, 난소 저악성도 잠복 종양, 원발성 복막 암종, 난관암, 생식 세포 종양, 기형종, 난소고환종, 난소 생식 세포암, 내배엽 동종양, 성삭-간질 종양, 성삭-생식선 간질 종양, 난소 간질 종양, 과립막 세포 종양, 과립막-난포막 종양, 세르톨리-라이디히 종양, 난소 육종, 난소 암육종, 난소 선육종, 난소 평활근육종, 난소 섬유육종, 크루켄베르크 종양, 또는 난소 낭포이거나;
(xxviii) 상기 췌장암은 췌장 외분비선암, 췌장 내분비선암, 또는 췌장 선암종, 췌도 세포 종양, 또는 신경내분비 종양이거나;
(xxix) 상기 전립선암은 전립선 선암종, 전립선 육종, 이행 세포 암종, 소세포 암종, 또는 신경내분비 종양이거나;
(xxx) 상기 동암은 편평 세포 암종, 점막 세포 암종, 선양 낭포 세포 암종, 선방 세포 암종, 비동 미분화 암종, 비강암, 부비동암, 상악동암, 사골동암, 또는 비인두암이거나;
(xxxi) 상기 피부암은 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 카포시 육종(KS), 광선 각화증, 피부 림프종, 또는 각질극세포종이거나;
(xxxii) 상기 연조직암은 혈관육종, 피부섬유육종, 상피모양 육종, 유잉 육종, 섬유육종, 위장관 간질 종양(GIST), 카포시 육종, 평활근육종, 지질육종, 탈분화된 지질육종(DL), 점액모양/둥근 세포 지질육종(MRCL), 잘 분화된 지질육종(WDL), 악성 섬유성 조직구종, 신경섬유육종, 횡문근육종(RMS), 또는 활막 육종이거나;
(xxxiii) 상기 척수암은 척수 전이성 종양이거나;
(xxxiv) 상기 위암은 위 선암종, 위 림프종, 위장관 간질 종양, 카르시노이드 종양, 위 카르시노이드 종양, I형 ECL-세포 카르시노이드, II형 ECL-세포 카르시노이드, 또는 III형 ECL-세포 카르시노이드이거나;
(xxxv) 상기 고환암은 정상피종, 비정상피종, 배아 암종, 난황낭 암종, 융모막암종, 기형종, 생식선 간질 종양, 라이디히 세포 종양, 또는 세르톨리 세포 종양이거나;
(xxxiv) 상기 인후암은 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 후두암, 인두암, 비인두암, 구인두암, 하인두암, 후두암, 후두 편평 세포 암종, 후두 선암종, 림프상피종, 방추 세포 암종, 사마귀모양 암, 미분화 암종, 또는 림프절암이거나;
(xxxv) 상기 갑상선암은 유두상 암종, 여포성 암종, 휘르틀 세포 암종, 수질성 갑상선 암종, 또는 역형성 암종이거나;
(xxxvi) 상기 자궁암은 자궁내막암, 자궁내막 선암종, 자궁내막모양 암종, 장액성 선암종, 선편평세포 암종, 자궁 암육종, 자궁 육종, 자궁 평활근육종, 자궁내막 간질 육종, 또는 미분화 육종이거나;
(xxxvii) 상기 질암은 편평 세포 암종, 선암종, 흑색종, 또는 육종이거나; 또는
(xxxviii) 상기 외음부암은 편평 세포 암종 또는 선암종인, 이중특이성 항체.
9. 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 암 항원은 안지오포이에틴, BCMA, CD19, CD20, CD22, CD25(IL2-R), CD30, CD33, CD37, CD38, CD52, CD56, CD123(IL-3R), cMET, DLL/노치, EGFR, EpCAM, FGF, FGF-R, GD2, HER2, 메소텔린, 넥틴-4, PDGFRα, RANKL, SLAMF7, TROP2, VEGF, VEGF-R인, 이중특이성 항체.
10. 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 암 항원은 CEA, 미성숙 라미닌 수용체, TAG-72, HPV E6, HPV E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2, 사이클린-B1, 9D7, EpCAM, EphA3, Her2/neu, 텔로머라제, 메소텔린, SAP-1, 생존 형태, BAGE 패밀리 항원, CAGE 패밀리 항원, GAGE 패밀리 항원, MAGE 패밀리 항원, SAGE 패밀리 항원, XAGE 패밀리 항원, NY-ESO-1/LAGE-1, PRAME, SSX-2, 멜란-A, MART-1, Gp100, pmel17, 티로시나제, TRP-1, TRP-2, P. 폴리펩티드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, 피브로넥틴, MART-2, p53, Ras, TGF-βRII, 또는 MUC1 항원인, 이중특이성 항체.
11. 실시 형태 1 내지 실시 형태 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는, 이중특이성 항체.
12. 실시 형태 1 내지 실시 형태 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재하고, 상기 암 세포의 표면 상에서 발현되는 항원은 암 항원인, 이중특이성 항체.
13. 실시 형태 12에 있어서, 상기 암 세포는 상기 이중특이성 항체가 상기 γδ T 세포의 표면 상의 TRDV2 및 상기 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 때 사멸되는, 이중특이성 항체.
14. 실시 형태 1 내지 실시 형태 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 인간화 형태이거나, 상기 제2 결합 도메인은 인간화 형태이거나, 또는 상기 제1 결합 도메인 및 상기 제2 결합 도메인 둘 모두가 인간화 형태인, 이중특이성 항체.
15. 실시 형태 1 내지 실시 형태 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 IgG 항체인, 이중특이성 항체.
16. 실시 형태 15에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 항체인, 이중특이성 항체.
17. 실시 형태 12 내지 실시 형태 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 상기 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 이중특이성 항체.
18. 실시 형태 17에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 상기 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 이중특이성 항체.
19. 실시 형태 18에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 상기 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 이중특이성 항체.
20. 실시 형태 17 내지 실시 형태 19 중 어느 하나에 있어서, 상기 EC50은 γδ T 이펙터 세포와 상기 암 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 이중특이성 항체.
21. 실시 형태 20에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 이중특이성 항체.
22. 실시 형태 21에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 이중특이성 항체.
23. 실시 형태 22에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 이중특이성 항체.
24. 실시 형태 1 내지 실시 형태 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 다가 형태인, 이중특이성 항체.
25. 실시 형태 24에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있는, 이중특이성 항체.
26. 실시 형태 25에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있는, 이중특이성 항체.
27. 이중특이성 항체로서, γδ T 세포의 표면 상의 TRDV2에 결합할 수 있는 제1 수단; 및 암 항원에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함하는, 이중특이성 항체.
28. 실시 형태 27에 있어서, 상기 암 항원은 암 세포의 표면 상에 존재하는, 이중특이성 항체.
29. 실시 형태 1 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이중특이성 항체를 인코딩하는 핵산.
30. 실시 형태 29의 핵산을 포함하는 벡터.
31. 실시 형태 30의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
32. 실시 형태 30의 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
33. 실시 형태 1 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이중특이성 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
34. 실시 형태 33의 약제학적 조성물을 생성하는 방법으로서, 상기 이중특이성 항체를 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함하는, 방법.
35. 하나 초과의 표적 분자에 결합하는 항체를 제조하는 공정으로서, 상기 분자는 γδ T 세포 상의 TRDV2 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 γδ T 세포 상의 TRDV2 항원 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 항체를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함하는, 공정.
36. 실시 형태 35에 있어서, 상기 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계는 n회 반복되고, γδ T 세포 상의 TRDV2 항원 및 n개의 표적 분자에 결합할 수 있는 결합 도메인을 제공하는 기능을 수행하기 위한 n회의 단계를 추가로 포함하며, 여기서 n은 적어도 2인, 공정.
37. TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법으로서, 상기 γδ T 세포를 실시 형태 1 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 접촉시키는 단계는 상기 γδ T 세포를 상기 암 세포로 유도하는, 방법.
38. 세포 표면 상에서 암 항원을 발현하는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법으로서, 상기 암 세포를 실시 형태 1 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는, 방법.
39. 실시 형태 38에 있어서, 상기 암 세포는 상기 이중특이성 항체와 접촉하고 있는 동안에 TRDV2를 발현하는 γδ T 세포의 존재 하에 있는, 방법.
40. 대상체에서 암 세포를 제거하거나 암을 치료하기 위한 방법으로서, 실시 형태 1 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
41. 실시 형태 40에 있어서, 상기 대상체는 상기 암 세포의 제거 또는 암의 치료를 필요로 하는 대상체인, 방법.
42. 실시 형태 40 또는 실시 형태 41에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
43. TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 활성화하는 방법으로서, 상기 γδ T 세포를 실시 형태 1 내지 실시 형태 28 중 어느 하나의 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
44. 실시 형태 43에 있어서, 상기 접촉시키는 단계는 TRDV2를 발현하는 대조 γδ T 세포와 대비하여, CD69, CD25, 및/또는 그랜자임 B 발현의 증가를 가져오는, 방법.
45. 실시 형태 38 또는 실시 형태 39에 있어서,
(i) 상기 암 세포는 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암의 세포이고/이거나;
(ii) 상기 암 항원은 안지오포이에틴, BCMA, CD19, CD20, CD22, CD25(IL2-R), CD30, CD33, CD37, CD38, CD52, CD56, CD123(IL-3R), cMET, DLL/노치, EGFR, EpCAM, FGF, FGF-R, GD2, HER2, 메소텔린, 넥틴-4, PDGFRα, RANKL, SLAMF7, TROP2, VEGF, 또는 VEGF-R이고/이거나;
(iii) 상기 암 항원은 CEA, 미성숙 라미닌 수용체, TAG-72, HPV E6, HPV E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2, 사이클린-B1, 9D7, EpCAM, EphA3, Her2/neu, 텔로머라제, 메소텔린, SAP-1, 생존 형태, BAGE 패밀리 항원, CAGE 패밀리 항원, GAGE 패밀리 항원, MAGE 패밀리 항원, SAGE 패밀리 항원, XAGE 패밀리 항원, NY-ESO-1/LAGE-1, PRAME, SSX-2, 멜란-A, MART-1, Gp100, pmel17, 티로시나제, TRP-1, TRP-2, P. 폴리펩티드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, 또는 BRCA1인, 방법.
46. 실시 형태 40 내지 실시 형태 44 중 어느 하나에 있어서, 상기 암은 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암, 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암, 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암인, 방법.
47. 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
a. 제1 중쇄(HC1);
b. 제2 중쇄(HC2);
c. 제1 경쇄(LC1); 및
d. 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
48. 실시 형태 47에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
49. 실시 형태 48에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
50. 실시 형태 47 내지 실시 형태 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원에 대한 결합 부위는 γδ T 세포 상의 TRDV2에 결합하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
51. 실시 형태 47 내지 실시 형태 50 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원에 대한 결합 부위는 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
52. 실시 형태 51에 있어서, 상기 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 상기 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 대한 상기 이중특이성 항체의 결합은 상기 암 세포의 사멸을 가져오는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편.
53. 실시 형태 47 내지 실시 형태 52 중 어느 하나에 있어서, HC1 및 LC1은 인간화 형태인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편.
54. 실시 형태 47 내지 실시 형태 53 중 어느 하나에 있어서, HC2 및 LC2는 CD33에 결합되는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
55. 실시 형태 47 내지 실시 형태 54 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
56. 실시 형태 47 내지 실시 형태 55 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
57. 실시 형태 47 내지 실시 형태 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
58. 실시 형태 57에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
59. 실시 형태 57에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
60. 실시 형태 57 내지 실시 형태 59 중 어느 하나에 있어서, 상기 EC50은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
61. 실시 형태 60에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
62. 실시 형태 61에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
63. 실시 형태 62에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
64. 실시 형태 47 내지 실시 형태 63 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다가 형태인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
65. 실시 형태 64에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
66. 실시 형태 64에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
67. 단리된 γδ T 세포 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고,
HC1과 LC1은 γδ T 세포 상의 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고,
HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성하는, 단리된 γδ T 세포 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
68. 이중특이성 항체로서, T 세포 수용체 감마 사슬과 특이적으로 결합할 수 있는 제1 수단; 및 T 세포 수용체 감마 사슬이 아닌 표적 분자와 특이적으로 결합할 수 있는 제2 수단을 포함하는, 이중특이성 항체.
69. 하나 초과의 표적 분자에 특이적으로 결합할 수 있는 분자를 제조하는 공정으로서, 상기 분자는 T 세포 수용체 감마 사슬에 결합할 수 있는 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 표적에 결합할 수 있는 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 T 세포 수용체 감마 사슬 및 표적 분자에 특이적으로 결합할 수 있는 분자를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함하는, 공정.
70. 실시 형태 69에 있어서, 상기 표적에 결합할 수 있는 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 얻는 기능을 수행하기 위한 단계는 n회 반복되고, T 세포 수용체 감마 사슬 및 n개의 표적 분자에 특이적으로 결합할 수 있는 분자를 제공하는 기능을 수행하기 위한 n회의 단계를 추가로 포함하며, 여기서 n은 적어도 2인, 공정.
71. 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, Vδ2에 특이적으로 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고;
HC2는 서열 번호 9, 서열 번호 10, 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC2는 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, CD33에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
72. 실시 형태 71에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
73. 실시 형태 72에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
74. 실시 형태 71 내지 실시 형태 73 중 어느 하나에 있어서, HC2는 서열 번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열 번호 16의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
75. 실시 형태 74에 있어서, HC2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
76. 실시 형태 71 내지 실시 형태 75 중 어느 하나에 있어서, 상기 TRDV2는 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
77. 실시 형태 73 내지 실시 형태 76 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD33은 종양 세포 또는 CD34+ 줄기 세포의 표면 상에 존재하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
78. 실시 형태 71 내지 실시 형태 77 중 어느 하나에 있어서, 상기 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 상기 암 세포의 표면 상의 CD33에 대한 상기 이중특이성 항체의 결합은 상기 암 세포의 사멸을 가져오는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
79. 실시 형태 71 내지 실시 형태 78 중 어느 하나에 있어서, HC1 및 LC1은 인간화 형태인, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
80. 실시 형태 71 내지 실시 형태 79 중 어느 하나에 있어서, HC2 및 LC2는 인간화 형태인, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
81. 실시 형태 71 내지 실시 형태 80 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
82. 실시 형태 71 내지 실시 형태 81 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형인, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
83. 실시 형태 71 내지 실시 형태 82 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
84. 실시 형태 83에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
85. 실시 형태 83에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
86. 실시 형태 83 내지 실시 형태 85 중 어느 하나에 있어서, 상기 EC50은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
87. 실시 형태 86에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
88. 실시 형태 87에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
89. 실시 형태 88에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
90. 실시 형태 71 내지 실시 형태 89 중 어느 하나의 단리된 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제조하는 방법으로서, 상기 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건 하에서 배양하는 단계, 및 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
91. 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원 에피토프-결합 단편으로서, 제1 항원에 대한 결합 부위 및 제2 항원에 대한 결합 부위를 포함하며, 상기 제1 항원에 대한 결합 부위는 γδ T 세포 상의 TRDV2 에피토프에 결합하고, 상기 제2 항원에 대한 결합 부위는 표적 세포의 표면 상의 상기 제2 항원의 에피토프에 결합하고, 상기 γδ T 세포 상의 TRDV2 에피토프의 결합과 상기 표적 세포 상의 제2 항원 에피토프의 결합은 상기 표적 세포의 사멸을 가져오는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원 에피토프-결합 단편.
92. 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고,
HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원 에피토프에 대한 결합 부위를 형성하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
93. 실시 형태 92에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
94. 실시 형태 93에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
95. 실시 형태 92 내지 실시 형태 94 중 어느 하나에 있어서, HC1 및 LC1은 인간화 형태인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편.
96. 실시 형태 92 내지 실시 형태 95 중 어느 하나에 있어서, HC2 및 LC2는 CD33 에피토프에 결합되는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
97. 실시 형태 96에 있어서, HC2는 서열 번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열 번호 16의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
98. 실시 형태 97에 있어서, HC2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
99. 실시 형태 91 내지 실시 형태 98 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
100. 실시 형태 91 내지 실시 형태 99 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
101. 실시 형태 91 내지 실시 형태 100 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
102. 실시 형태 101에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
103. 실시 형태 102에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
104. 실시 형태 101 내지 실시 형태 103 중 어느 하나에 있어서, 상기 EC50은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
105. 실시 형태 104에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
106. 실시 형태 105에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
107. 실시 형태 106에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
108. 단리된 γδ T 세포 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 제1 항원 에피토프에 대한 결합 부위 및 제2 항원 에피토프에 대한 결합 부위를 포함하며, 상기 제1 항원 에피토프에 대한 결합 부위는 γδ T 세포 상의 제1 항원에 결합하고, 상기 제2 항원 에피토프에 대한 결합 부위는 표적 세포의 표면 상의 상기 제2 항원 에피토프에 결합하고, 상기 γδ T 세포 상의 제1 항원 에피토프의 결합과 상기 표적 세포 상의 제2 항원 에피토프의 결합은 상기 표적 세포의 사멸을 가져오는, 단리된 γδ T 세포 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
109. TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산으로서, 상기 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고,
HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성하는, 단리된 핵산.
110. 실시 형태 109에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 핵산.
111. 실시 형태 110에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 핵산.
112. 실시 형태 109 내지 실시 형태 111 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원에 대한 결합 부위는 γδ T 세포 상의 TRDV2에 결합하는, 단리된 핵산.
113. 실시 형태 109 내지 실시 형태 112 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원에 대한 결합 부위는 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합하는, 단리된 핵산.
114. 실시 형태 113에 있어서, 상기 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 상기 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 대한 상기 이중특이성 항체의 결합은 상기 암 세포의 사멸을 가져오는, 단리된 핵산.
115. 실시 형태 109 내지 실시 형태 114 중 어느 하나에 있어서, HC1 및 LC1은 인간화 형태인, 단리된 핵산.
116. 실시 형태 109 내지 실시 형태 115 중 어느 하나에 있어서, HC2 및 LC2는 CD33에 결합하는, 단리된 핵산.
117. 실시 형태 109 내지 실시 형태 116 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 단리된 핵산.
118. 실시 형태 109 내지 실시 형태 117 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형인, 단리된 핵산.
119. 실시 형태 109 내지 실시 형태 118 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 핵산.
120. 실시 형태 119에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 핵산.
121. 실시 형태 119에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 160 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 암 세포의 γδ T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 핵산.
122. 실시 형태 119 내지 실시 형태 121 중 어느 하나에 있어서, 상기 EC50은 γδ T 이펙터 세포와 Kasumi3 AML 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 단리된 핵산.
123. 실시 형태 122에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 단리된 핵산.
124. 실시 형태 123에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 단리된 핵산.
125. 실시 형태 124에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 단리된 핵산.
126. 실시 형태 109 내지 실시 형태 125 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다가 형태인, 단리된 핵산.
127. 실시 형태 126에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있는, 단리된 핵산.
128. 실시 형태 126에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있는, 단리된 핵산.
129. 실시 형태 109 내지 실시 형태 128 중 어느 하나의 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
130. 실시 형태 129의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
131. 실시 형태 129의 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
132. 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 단리된 TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
a. HC1;
b. HC2;
c. LC1; 및
d. LC2를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성하는, 약제학적 조성물.
133. 실시 형태 132에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
134. 실시 형태 133에 있어서, HC1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
135. 실시 형태 132 내지 실시 형태 134 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원에 대한 결합 부위는 γδ T 세포 상의 TRDV2에 결합하는, 약제학적 조성물.
136. 실시 형태 132 내지 실시 형태 135 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원에 대한 결합 부위는 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합하는, 약제학적 조성물.
137. 실시 형태 136에 있어서, 상기 γδ T 세포의 표면 상에 존재하는 TRDV2 및 상기 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 대한 상기 이중특이성 항체의 결합은 상기 암 세포의 사멸을 가져오는, 약제학적 조성물.
138. 실시 형태 132 내지 실시 형태 137 중 어느 하나에 있어서, HC1 및 LC1은 인간화 형태인, 약제학적 조성물.
139. 실시 형태 132 내지 실시 형태 138 중 어느 하나에 있어서, HC2 및 LC2는 CD33에 결합하는, 약제학적 조성물.
140. 실시 형태 132 내지 실시 형태 139 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 약제학적 조성물.
141. Vδ2-발현 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법으로서, Vδ2-발현 γδ T 세포를 실시 형태 132 내지 실시 형태 140 중 어느 하나의 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 Vδ2-발현 γδ T 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 Vδ2-발현 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는, 방법.
142. 세포 표면 상에서 암 항원을 발현하는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법으로서, 상기 암 세포를 실시 형태 132 내지 실시 형태 140 중 어느 하나의 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는, 방법.
143. 실시 형태 142에 있어서, 상기 암 세포는 항-TRDV2 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉해 있는 동안에 Vδ2-발현 γδ T 세포의 존재 하에 있는, 방법.
144. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서,
a. 암 치료를 필요로 하는 대상체를 확인하는 단계; 및
b. 실시 형태 132 내지 실시 형태 140 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 상기 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며,
상기 약제학적 조성물을 상기 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계는 상기 대상체에서 상기 암을 치료하는, 방법.
145. Vδ2-발현 γδ T 세포를 활성화하는 방법으로서, 상기 Vδ2-발현 γδ T 세포를 실시 형태 132 내지 실시 형태 140 중 어느 하나의 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하며, Vδ2-발현 γδ T 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 대조 Vδ2-발현 γδ T 세포와 대비하여 CD69, CD25, 및/또는 그랜자임 B 발현의 증가를 가져오는, 방법.
146. 실시 형태 132 내지 실시 형태 140 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 생성하는 방법으로서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함하는, 방법.
TRDV2 및 CD33에 결합하는 예시적인 다중특이성(이중특이성) 항체가 본 명세서의 실시예에 제공된다. 이들 실시예는 대상체에서 다양한 세포 및 조직을 효과적으로 표적화할 수 있는 예시적인 이중특이성 항체를 예시한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) TRDV2 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) TRDV2 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) TRDV2 항원 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원 상의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) TRDV2 항원 상의 제1 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원 상의 제2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 제2 표적 항원은 CD33이다.
TRDV2에 결합하는 예시적인 결합제뿐만 아니라, CD33에 결합하는 예시적인 결합제가 본 명세서의 어딘가 다른 곳에서, 예를 들어, 실시예뿐만 아니라 표 1.1, 표 1.2, 및 표 1 내지 표 8에서도 제공된다.
본 발명의 특정 실시 형태가 본 명세서에 기재되어 있다. 전술한 설명을 읽을 때, 개시된 실시 형태들의 변형이 당업자에게 명백해질 수 있으며, 숙련자는 적절한 경우에 그러한 변형을 사용할 수 있을 것으로 예상된다. 따라서, 본 발명은 본 명세서에 구체적으로 기재된 것과 다른 방식으로 실시될 수 있으며, 본 발명은 적용가능한 법에 의해 허용되는 한 본 명세서에 첨부된 청구범위에 언급된 발명 요지의 모든 변형 및 등가물을 포함하는 것으로 의도된다. 더욱이, 본 명세서에서 달리 지시되거나 문맥에 의해 달리 명확하게 모순되지 않는 한, 이의 모든 가능한 변형 내의 전술된 요소들의 임의의 조합이 본 발명에 의해 포함된다. 본 발명의 다수의 실시 형태가 기재되어 있다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사상 및 범주로부터 벗어남이 없이 다양한 변형들이 이루어질 수 있다는 것은 이해될 것이다. 따라서, 실시예 섹션에서의 설명은 청구범위에 기재된 본 발명의 범주를 예시하지만 이를 제한하고자 하지 않는다.
실시예
실시예 1: γδ T 세포에 결합하는 이중특이성 항체의 생성
1.1: γδ T 세포 항원에 결합하는 mAb의 생성
γδ T 세포에 특이적인 항원 또는 항원의 일부분을 사용하여 동물(예를 들어, 마우스 또는 토끼)을 면역화한다. γδ T 세포 단일클론 항체를 생성하기 위하여, 말초 혈액 단핵 세포를 면역화된 동물의 전혈로부터 단리하고, 항원 특이적 B 세포를 성장시킨다. γδ T 세포 항원에 대한 반응성 항체를 분비하는 B 세포가 B 세포 배양 상층액의 항원-결합 ELISA 스크리닝에 의해 확인된다. 고결합 ELISA 플레이트를 γδ T 세포 항원으로 하룻밤 코팅한다. ELISA 플레이트를 블로킹하고, 희석된 B 세포 배양 상층액을 플레이트에 첨가한다. 플레이트를 실온에서 인큐베이션하고, 인큐베이션 후에는, γδ T 세포 항원 항체를 인식하는 데 있어서 특이적인 2차 항체를 플레이트에 첨가하여 γδ T 세포 항원 항체가 γδ T 세포 항원에 결합하는지를 결정한다. 항체의 결합은 2차 항체 상의 기질의 반응에 의해 결정된다.
γδ T 세포 항원에 결합할 수 있는 단일클론 항체의 확인 후에, γδ T 세포 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 서열분석한다. γδ T 세포 항체의 중쇄 및 경쇄의 발현을 위해 작제물을 생성한다. 작제물을 숙주 세포 내로 형질감염시켜 중쇄 및 경쇄를 발현시키고, γδ T 세포 항체를 상층액으로부터 단리한다.
1.2: γδ T 세포 이중특이성 항체의 생성
관심 표적 세포 상의 표적 항원에 결합할 수 있는 γδ T 세포 단일클론 항체 및 제2 단일클론 항체의 가변 영역 서열을 사용하여 표적 세포의 γδ T 세포 재유도 사멸에 대해 시험할 이중특이성 항체를 생성한다. 관심 표적 항원은 문헌[Zhang et al., Nucleic Acids Research 47(D1):D721-D728 (2019)]에 기재된 항원으로부터 선택될 수 있지만 이로 한정되지 않는다. γδ T 세포 이중특이성 항체를 앞서 기재된 바와 같이 인간 IgG4로서 노브-인투-홀 포맷으로 전장 항체로서 생성한다(문헌[Atwell et al., J. Mol. Biol. 270:26-35 (1997)]). 가변 영역을 인코딩하는 핵산 서열을 표준 PCR 제한 효소 기반 클로닝 기법을 사용하여 IgG4 발현 카세트의 불변 영역을 함유하는 맞춤형 포유류 발현 벡터 내로 하위클로닝한다. 이중특이성 항체를 중국 햄스터 난소 세포주에서 일시적 형질감염에 의해 발현시킨다. 항체를 초기에 MAB SELECT SURE 단백질 A 컬럼(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 GE Healthcare)으로 정제한다(문헌[Brown, Bottomley et al. Biochem Soc Trans. 1998 Aug;26(3):S249]). 컬럼을 인산염 완충 식염수(PBS)(pH 7.2)로 평형화시키고, 2 mL/분의 유량으로 발효 상층액을 로딩한다. 로딩 후에, 컬럼을 PBS(4 컬럼 부피(CV))로 세척한 후, 30 mM 소듐 아세테이트(pH 3.5) 중에 용리시킨다. Akta Explorer(GE Healthcare)에서 280 nm에서의 흡광도에 의해 모니터링된 바와 같은 단백질 피크를 함유하는 분획들을 함께 풀링하고, 1%의 3 M 소듐 아세테이트(pH 9.0)를 첨가함으로써 pH 5.0으로 중화시킨다. 폴리싱 단계로서, 항체를 SUPERDEX 200 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 분취용 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 상에서 정제한다. 내독소 측정 및 환원성 조건 및 비환원성 조건 하에서의 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동에 의해 샘플의 완전성을 평가한다. 최종 단백질 농도를 결정한다.
1.3: 항-TRDV2 이중특이성 항체의 생성
관심 표적 세포 상의 표적 항원에 결합할 수 있는 항-TRDV2 단일클론 항체 및 제2 단일클론 항체의 가변 영역 서열을 사용하여 표적 세포의 γδ T 세포 재유도 사멸에 대해 시험할 이중특이성 항체를 생성한다. 관심 표적 항원은 문헌[Zhang et al., Nucleic Acids Research 47(D1):D721-D728 (2019)]에 기재된 항원으로부터 선택될 수 있지만 이로 한정되지 않는다. 항-TRDV2 이중특이성 항체를 앞서 기재된 바와 같이 인간 IgG1로서 노브-인투-홀 포맷으로 전장 항체로서 생성한다(문헌[Atwell et al., J. Mol. Biol. 270:26-35 (1997)]). 가변 영역을 인코딩하는 핵산 서열을 표준 PCR 제한 효소 기반 클로닝 기법을 사용하여 IgG1 발현 카세트의 불변 영역을 함유하는 맞춤형 포유류 발현 벡터 내로 하위클로닝한다. 이중특이성 항체를 중국 햄스터 난소 세포주에서 일시적 형질감염에 의해 발현시킨다. 항체를 초기에 Mab Select SuRe 단백질 A 컬럼(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 GE Healthcare)으로 정제한다(문헌[Brown, Bottomley et al. Biochem Soc Trans. 1998 Aug;26(3):S249]). 컬럼을 인산염 완충 식염수(PBS)(pH 7.2)로 평형화시키고, 2 mL/분의 유량으로 발효 상층액을 로딩한다. 로딩 후에, 컬럼을 PBS(4 컬럼 부피(CV))로 세척한 후, 30 mM 소듐 아세테이트(pH 3.5) 중에 용리시킨다. Akta Explorer(GE Healthcare)에서 280 nm에서의 흡광도에 의해 모니터링된 바와 같은 단백질 피크를 함유하는 분획들을 함께 풀링하고, 1%의 3 M 소듐 아세테이트(pH 9.0)를 첨가함으로써 pH 5.0으로 중화시킨다. 폴리싱 단계로서, 항체를 SUPERDEX 200 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 분취용 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 상에서 정제한다. 내독소 측정 및 환원성 조건 및 비환원성 조건 하에서의 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동에 의해 샘플의 완전성을 평가한다. 최종 단백질 농도를 결정한다.
실시예 2 - TRDV2 및 암 항원에 결합하는 이중특이성 항체
실시예 2.1 내지 실시예 2.4는 TRDV2 사슬과 Vδ2 사슬의 이종이량체를 주로 발현하는 γδ T 세포가 강력한 항-종양 기능을 나타낸다는 전제에 기초한다. 이들 세포는 TCR-TRDV2를 발현하고, 전부는 아니지만 이들 세포의 대부분은 종양 표적 세포의 효율적인 세포독성을 나타낸다. 이어서, 이러한 능력은, 하나의 아암은 TRDV2 구조에 결합하고 다른 하나의 아암은 종양 세포에 의해 발현되는 종양-관련 항원에 결합하도록 작제된 이중특이성 항체를 사용하여 이용된다. 따라서, 이중특이성 항체는 이펙터와 표적 세포를 함께 가교하여 종양 세포 사멸을 가져온다. 이러한 작용 기전은 도 1에 개략적으로 설명된 개략도에 나타나 있다.
후속 실시예들은 하기 카테고리로 세분될 수 있다: (1) γδ T 세포 상에서 발현되는 TRDV2 아암 및 암 세포 상의 암 항원(예를 들어, CD33)에 결합할 수 있는 이중특이성 항체의 생성 및 특성화(실시예 2.1, 실시예 2.2, 및 실시예 2.3); 및 (2) 시험관내에서 증폭된 γδ T 세포에 의한 이중특이성 항체-가능(bispecific antibody-enabled) 표적 세포 사멸에 대한 증거(실시예 2.4).
실시예 2.1: 항-TRDV2 mAb의 생성
마우스 IgG1 항-인간 T 세포 수용체 TRDV2 클론 B6을 상업적으로 공급받았다. 샘플 제조 및 LC/MSMS 분석을 Lake Pharma.(미국 캘리포니아주 산 카를로스 소재)에 의해 수행하였다 샘플을 환원시키고 알킬화하고, 7개의 분취물로 나누고, 트립신/LysC, 키모트립신, LysC, 펩신, 및 AspN, 엘라스타제, 및 프로테이나제 K 효소로 단백질 분해적으로 분해시켰다. 생성된 펩티드를 ZIPTIP C18 피펫 팁을 사용하여 탈염하고, 역상 크로마토그래피를 사용하여 온라인으로 분리하였다. HCD 단편화를 사용하여 Thermo Q-EXACTIVE 분광계에서 질량 분석을 수행하였다. 드 노보(de novo) 서열 태그를 IMGT-기반 항체 서열 데이터베이스에 매칭시킴으로써, MS 데이터 세트를 PEAKS 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 서열 내의 갭을 드 노보로 확인된 펩티드의 콘티그 서열 어셈블리를 사용하여 배정하였다. 모든 CDR 및 초돌연변이를 MS/MS 스펙트럼을 조사함으로써 확인하였다.
획득된 서열이 표 1 및 표 2에 나타나 있다.
[표 1]
Figure pct00005
[표 2]
Figure pct00006
실시예 2.2: 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체의 제조
B6(항-TRDV2) 및 C33B904(항-CD33 항체)의 가변 영역 서열(표 3에서의 HCDR 및 LCDR, 표 4에서의 HC 및 LC)을 사용하여 급성 골수성 백혈병(AML) 세포의 T 세포 재유도 사멸에 대해 시험할 이중특이성 항체를 생성하였다. 이중특이성 항체: VG56(항-TRDV2 x CD33) 및 VG53(항-TRDV2 x 널)을 앞서 기재된 바와 같이 인간 IgG1로서 노브-인투-홀 포맷으로 전장 항체로서 생성하였다(문헌[Atwell et al. J. Mol. Biol. 270: 26-35, 1997]). 가변 영역을 인코딩하는 핵산 서열을 표준 PCR 제한 효소 기반 클로닝 기법을 사용하여 IgG1 발현 카세트의 불변 영역을 함유하는 맞춤형 포유류 발현 벡터 내로 하위클로닝하고, 서열분석하여 검증하였다. 이중특이성 항체를 중국 햄스터 난소 세포주에서 일시적 형질감염에 의해 발현시켰다. 항체를 초기에 Mab Select SuRe 단백질 A 컬럼(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 GE Healthcare)으로 정제하였다(문헌[Brown, Bottomley et al. Biochem Soc Trans. 26(3):S249, 1998]). 컬럼을 인산염 완충 식염수(PBS)(pH 7.2)로 평형화시키고, 2 mL/분의 유량으로 발효 상층액을 로딩하였다. 로딩 후에, 컬럼을 PBS(4 컬럼 부피(CV))로 세척한 후, 30 mM 소듐 아세테이트(pH 3.5) 중에 용리시켰다. Akta Explorer(GE Healthcare)에서 280 nm에서의 흡광도에 의해 모니터링된 바와 같은 단백질 피크를 함유하는 분획들을 함께 풀링하고, 1%의 3 M 소듐 아세테이트(pH 9.0)를 첨가함으로써 pH 5.0으로 중화시켰다. 폴리싱 단계로서, 항체를 SUPERDEX 200 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 분취용 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 상에서 정제하였다. 내독소 측정 및 환원성 조건 및 비환원성 조건 하에서의 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동에 의해 샘플의 완전성을 평가하였다. VG56에 대한 대표적인 겔이 도 2에 나타나 있다. 최종 단백질 농도는 항-TRDV2/항-CD33에 대해서는 1.0 mg/ml였고, 항-TRDV2/널에 대해서는 1.0 mg/mL였다. 이들에 기초한 항-TRDV2/항-CD33 및 항-TRDV2/널의 최종 EU 수준은 3.0 EU/mg 미만이었다.
[표 3]
Figure pct00007
[표 4]
Figure pct00008
[표 5]
Figure pct00009
실시예 2.3: Vδ2 + ( γδ ) T 세포 및 Pan T 세포의 특성화
졸레드론산은 전체 PBMC로부터의 Vδ2+ γδ T 세포를 선택적으로 증폭시킨다. 제조자 설명서에 따라 EasySepTM 인간 γδ T 세포 단리 키트(Stem Cell Technologies; 캐나다 밴쿠버 소재)를 사용하여 신선한 전체 PBMC로부터 PBMC를 단리하였다. 단리된 PBMC를 1000 IU/mL의 최종 농도가 되게 하는 재조합 인간 IL-2(rhIL-2) 및 10 ng/mL의 최종 농도가 되게 하는 재조합 인간 IL-15(rhIL-15) 및 5 μM의 최종 농도가 되는 하는 졸레드론산과 함께 14일 동안 RPMI-10(10% FBS가 보충된 RPMI, 1x Pen/Strep) 배지 중에서 배양하였다.
대표적인 점 도표에서의 수치는 졸레드론산 + IL-2 + IL-15와 함께 배양된 총 PBMC 중의 Vδ2+ 및 Vδ2- TCR γδ T 세포의 빈도(평균 ± SEM)를 나타낸다(우측). 나타낸 데이터는 단일 실험으로부터의 5명의 공여자(n=5)의 평균(± SEM)이다(도 3).
실시예 2.4: Kasumi -3 세포 및 인간 γδ T 세포를 사용한 항- TRDV2 /항-CD33 이중특이성 항체의 결합 및 세포독성 특성의 평가
패널 CD33+ 세포주에 대한 항-CD33 클론 C33B904의 결합을 FACS에 의해 측정하였다. EC50 및 EC90을 MOLM-13(도 4), Kasumi-1(도 5) 및 OCI-AML-3(도 6)에 대해 계산하였다.
도 7은 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체가 시험관내에서 CD33 발현 MOLM-13 세포에 대한 (전체 PBMC로부터의) γδ T 세포 세포독성을 매개함을 나타낸다. 12일 동안 졸레드론산 + IL-2 + IL-15와 함께 배양된 건강한 공여자 유래 PBMC(이펙터)를 다양한 농도의 이중특이성 항체의 존재 하에서 24시간 동안, CFSE 표지된 MOLM-13 세포(표적)와 1:1의 E:T 비로 공동배양하였다. 용량 반응 곡선은 용량 의존적 방식으로의 CD33 발현 Kasumi-3 세포에 대한 항-TRDV2/항-CD33 및 항-TRDV2/항-널 이중특이성 항체 매개 γδ T 세포 세포독성을 나타낸다(도 7). 본 명세서에 나타낸 세포독성 값은 이중특이성 항체의 부재 하에서 관찰된 기저 세포독성 값을 차감한 값이다. EC50 값을 방법에 기재된 바와 같이 계산하였다. 여기에 나타낸 대표적인 데이터는 단일 실험으로부터의 것이다.
도 8 및 도 9는 항-TRDV2/항-CD33 이중특이성 항체가 시험관내에서 CD33 발현 Kasumi-3 세포에 대한 γδ T 세포 세포독성을 매개함을 나타낸다. 14일 동안 졸레드론산 + IL-2 + IL-15와 함께 배양된 PBMC로부터 단리된, 풍부화된 γδ T 세포(이펙터)를 다양한 농도의 이중특이성 항체의 존재 하에서 24시간 동안, CFSE 표지된 Kasumi-3 세포(표적)와 1:1 E:T 비로 공동배양하였다. 용량 반응 곡선은 1:1 E:T 비에서 용량 의존적 방식으로의 CD33 발현 Kasumi-3 세포에 대한 항-TRDV2/항-CD33 및 항-TRDV2/항-널 이중특이성 항체 매개 γδ T 세포 세포독성을 나타낸다(도 8 및 도 9). 본 명세서에 나타낸 세포독성 값은 이중특이성 항체의 부재 하에서 관찰된 기저 세포독성 값을 차감한 값이다. EC50 값을 방법에 기재된 바와 같이 계산하였다. 여기에 나타낸 대표적인 데이터는 단일 실험으로부터의 것이다.
실시예 3: TRDV2 및 암 세포 항원에 결합하는 이중특이성 항체
실시예 3.1: TRDV2 및 암 세포 항원에 결합하는 이중특이성 항체의 제조
관심 T 세포 상의 항원에 결합할 수 있는 항-TRDV2 단일클론 항체 및 제2 단일클론 항체의 가변 영역 서열을 사용하여 표적 T 세포의 γδ T 세포 재유도 사멸에 대해 시험할 이중특이성 항체를 생성한다.
예시적인 TRDV2 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 서열은 표 1에 제공되어 있고; 예시적인 VH 도메인 및 VL 도메인 서열은 표 2에 제공되어 있다. 그러나, 임의의 TRDV2 항체가 이중특이성 항체의 제조에 사용될 수 있다.
T 세포 항원에 결합하는 제2 단일클론 항체는, 본 명세서의 어딘가 다른 곳에 제공된 바와 같은, 암 항원에 결합하는 항체이다. CD33에 더하여, 예시적인 암 항원은 안지오포이에틴, BCMA, CD19, CD20, CD22, CD25(IL2-R), CD30, CD37, CD38, CD52, CD56, CD123(IL-3R), cMET, DLL/노치, EGFR, EpCAM, FGF, FGF-R, GD2, HER2, 메소텔린, 넥틴-4, PDGFRα, RANKL, SLAMF7, TROP2, VEGF, 또는 VEGF-R을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 암 항원은 CEA, 미성숙 라미닌 수용체, TAG-72, HPV E6, HPV E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2, 사이클린-B1, 9D7, EpCAM, EphA3, Her2/neu, 텔로머라제, 메소텔린, SAP-1, 생존 형태, BAGE 패밀리 항원, CAGE 패밀리 항원, GAGE 패밀리 항원, MAGE 패밀리 항원, SAGE 패밀리 항원, XAGE 패밀리 항원, NY-ESO-1/LAGE-1, PRAME, SSX-2, 멜란-A, MART-1, Gp100, pmel17, 티로시나제, TRP-1, TRP-2, P. 폴리펩티드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, 피브로넥틴, MART-2, p53, Ras, TGF-βRII, 또는 MUC1이다.
항-TRDV2 이중특이성 항체를 앞서 기재된 바와 같이 인간 IgG1로서 노브-인투-홀 포맷으로 전장 항체로서 생성한다(문헌[Atwell et al., J. Mol. Biol. 270:26-35 (1997)]).
가변 영역을 인코딩하는 핵산 서열을 표준 PCR 제한 효소 기반 클로닝 기법을 사용하여 IgG1 발현 카세트의 불변 영역을 함유하는 맞춤형 포유류 발현 벡터 내로 하위클로닝한다.
이중특이성 항체를 CHO 세포주에서 일시적 형질감염에 의해 발현시킨다. 항체를 초기에 MAB SELECT SURE 단백질 A 컬럼(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 GE Healthcare)으로 정제한다(문헌[Brown, Bottomley et al. Biochem Soc Trans. 1998 Aug;26(3):S249]). 컬럼을 PBS(pH 7.2)로 평형화시키고, 2 mL/분의 유량으로 발효 상층액을 로딩한다. 로딩 후에, 컬럼을 PBS(4 컬럼 부피(CV))로 세척한 후, 30 mM 소듐 아세테이트(pH 3.5) 중에 용리시킨다. Akta Explorer(GE Healthcare)에서 280 nm에서의 흡광도에 의해 모니터링된 바와 같은 단백질 피크를 함유하는 분획들을 함께 풀링하고, 1%의 3 M 소듐 아세테이트(pH 9.0)를 첨가함으로써 pH 5.0으로 중화시킨다. 폴리싱 단계로서, 항체를 SUPERDEX 200 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 분취용 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 상에서 정제한다. 내독소 측정 및 환원성 조건 및 비환원성 조건 하에서의 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동에 의해 샘플의 완전성을 평가한다. 최종 단백질 농도를 결정한다.
실시예 3.2: TRDV2 및 암 항원에 결합하는 이중특이성 항체의 결합 및 평가
Vδ2+ γδ T 세포 및 T 세포 항원을 발현하는 표적 세포에 대한 이중특이성 항체의 결합, 및 그 결과 얻어지는 세포독성의 평가가 시험관내에서 결정될 것이다.
12일 동안 졸레드론산, IL-2, 및 IL-15와 함께 배양된 PBMC로부터 단리된, 풍부화된 γδ T 세포(이펙터)를 다양한 농도의 이중특이성 항체의 존재 하에서 24시간 동안, T 세포 항원을 발현하는 CFSE-표지된 세포(표적)와 1:1, 5:1 및 10:1의 E:T 비로 공동배양한다. 항-TRDV2/항-널 이중특이성 항체가 대조군으로서 사용될 것이다. 세포독성 값은 이중특이성 항체의 부재 하에서 관찰된 기저 세포독성 값을 차감함으로써 결정된다. 용량 반응 곡선은, 1:1, 5:1, 및 10:1 E:T 비로 용량 의존적 방식으로, T 세포 항원을 발현하는 표적 세포에 대해 이중특이성 항체 매개 γδ T 세포 세포독성이 일어나는지를 결정하여 계산된다.
게다가, 37℃에서 72시간 동안 다양한 농도의 항-TRDV2/항-T 세포 항원 이중특이성 항체의 존재 하에서, 전체 신선한 PBMC를 T 세포 항원을 발현하는 표적 세포와 공동배양함으로써 Vδ2+ γδ T 세포의 선택적 활성화를 평가한다. 양성 대조군 및 음성 대조군으로서, 공동배양된 세포를 37℃에서 72시간 동안 항-CD3/항-T 세포 항원 및 항-TRDV2/항-널 이중특이체로 자극하였다. CD69, CD25 표면 발현 및 세포내 그랜자임 B 발현에 대해 양성인 Vδ2+, Vδ2- γδ T 세포 및 비-γδ T 세포의 빈도를 결정한다.
* * * * *
당업자는 광범위한 본 발명의 개념으로부터 벗어나지 않고서 전술된 실시 형태에 변경이 이루어질 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 본 발명은 개시된 특정 실시 형태로 제한되는 것이 아니라, 본 명세서에 의해 한정되는 바와 같은 본 발명의 사상 및 범주 내의 변형들을 포함하도록 의도됨이 이해된다.
SEQUENCE LISTING <110> Janssen Biotech, Inc. Rajkumar Ganesan Iqbal S. Grewal Sanjaya Singh <120> MATERIALS AND METHODS FOR MODULATING DELTA CHAIN MEDIATED IMMUNITY <130> 14620-109-228/JBI6271WOPCT1 <140> <141> <150> US 62/989,111 <151> 2020-03-13 <160> 20 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 Sequence of anti-TRDV2 mAb for antibody B6 <400> 1 Glu Asn Pro Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 Sequence of anti-TRDV2 mAb for antibody B6 <400> 2 Ile Ile Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Glu Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 Sequence of anti-TRDV2 mAb for antibody B6 <400> 3 Glu Gly Gly Ser His Trp Tyr Leu Asp Val 1 5 10 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 Sequence of anti-TRDV2 mAb of antibody B6 <400> 4 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Lys Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 Sequence of anti-TRDV2 mAb of antibody B6 <400> 5 Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 Sequence of anti-TRDV2 mAb of antibody B6 <400> 6 Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Arg Thr 1 5 <210> 7 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain sequence of anti-TRDV2 mAb of antibody B6 <400> 7 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Asn 20 25 30 Pro Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Tyr Ile Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Glu Gly Gly Ser His Trp Tyr Leu Asp Val Trp Gly Thr Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain sequence of anti-TRDV2 mAb of antibody B6 <400> 8 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Lys Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 9 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 Sequence of anti-CD33 mAb of antibody C33B904 <400> 9 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 Sequence of anti-CD33 mAb of antibody C33B904 <400> 10 Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 Sequence of anti-CD33 mAb of antibody C33B904 <400> 11 Asp Ser Pro Tyr Gly Asp Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 Sequence of anti-CD33 mAb of antibody C33B904 <400> 12 Lys Ser Ser Gln Thr Val Phe Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 Sequence of anti-CD33 mAb of antibody C33B904 <400> 13 Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 Sequence of anti-CD33 mAb of antibody C33B904 <400> 14 Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 15 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain sequence of anti-CD33 mAb of antibody C33B904 <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Pro Tyr Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 16 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain sequence of anti-CD33 mAb of antibody C33B904 <400> 16 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val Phe Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Val Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 17 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ANTI-TRDV2 (light chain) sequence expressed in CHO Cells <400> 17 Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gln Ala Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val 20 25 30 Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val 35 40 45 Asp Lys Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly 50 55 60 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly 65 70 75 80 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu 85 90 95 Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln 100 105 110 Gln Ser Lys Glu Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 115 120 125 Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser 130 135 140 Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 145 150 155 160 Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 165 170 175 Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys 180 185 190 Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 195 200 205 Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu 210 215 220 Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 18 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ANTI-TRDV2 ('hole' arm) sequence expressed in CHO Cells <400> 18 Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe 35 40 45 Thr Glu Asn Pro Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe 50 55 60 Lys Trp Met Gly Ile Ile Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala 65 70 75 80 Ala Glu Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Tyr Ile Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr 100 105 110 Tyr Phe Cys Val Arg Glu Gly Gly Ser His Trp Tyr Leu Asp Val Trp 115 120 125 Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 210 215 220 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 245 250 255 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Gly Lys 465 <210> 19 <211> 503 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ANTI-CD33 scFv ('knob' arm) sequence expressed in CHO Cells <400> 19 Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gln Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val 20 25 30 Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val 35 40 45 Phe Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Lys 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser 130 135 140 Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly 145 150 155 160 Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 165 170 175 Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala 180 185 190 Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly 195 200 205 Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg 210 215 220 Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala 225 230 235 240 Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser Pro Tyr Gly Asp 245 250 255 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu 260 265 270 Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 275 280 285 Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 290 295 300 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 305 310 315 320 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 325 330 335 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 340 345 350 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 355 360 365 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 370 375 380 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 385 390 395 400 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 405 410 415 Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 420 425 430 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 435 440 445 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 450 455 460 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 465 470 475 480 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 485 490 495 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 500 <210> 20 <211> 502 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ANTI-RSV scFv ('knob' arm) sequence expressed in CHO Cells <400> 20 Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gln Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val 20 25 30 Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val 35 40 45 Asp Tyr Asn Gly Ile Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 50 55 60 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Pro Glu Ser Gly 65 70 75 80 Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 85 90 95 Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln 100 105 110 Gln Ile Ile Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 115 120 125 Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser 130 135 140 Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr 145 150 155 160 Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly 165 170 175 Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro 180 185 190 Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp 195 200 205 Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp 210 215 220 Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val 225 230 235 240 Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Tyr Gly Phe Thr Tyr Gly 245 250 255 Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Pro 260 265 270 Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 275 280 285 Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 290 295 300 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 305 310 315 320 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 325 330 335 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 340 345 350 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 355 360 365 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 370 375 380 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 385 390 395 400 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 405 410 415 Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 420 425 430 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 435 440 445 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 450 455 460 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 465 470 475 480 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 485 490 495 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 500

Claims (33)

  1. 다중특이성 항체로서,
    (a) TRDV2(T Cell Receptor Delta Variable 2)에 결합하는 제1 결합 도메인, 및
    (b) 암 세포의 표면 상의 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 다중특이성 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
    (i) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및
    (ii) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
  3. 제2항에 있어서,
    (i) 상기 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계(Kabat numbering system)에 따르거나;
    (ii) 상기 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아(Chothia) 넘버링 체계에 따르거나;
    (iii) 상기 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따르거나;
    (iv) 상기 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따르거나;
    (v) 상기 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따르거나; 또는
    (vi) 상기 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 예시적인 넘버링 체계에 따른, 다중특이성 항체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
    (i) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 VH; 및
    (ii) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
  5. 제2항에 있어서,
    (i) 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하거나;
    (ii) 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나; 또는
    (iii) 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3은 상기 TRDV2의 항원 또는 상기 TRDV2의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성하는, 다중특이성 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TRDV2는 T 세포의 표면 상에 존재하는, 다중특이성 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 세포는 부신암, 항문암, 맹장암, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결직장암, 식도암, 담낭암, 임신성 영양아세포성 질병, 두경부암, 호지킨 림프종, 장암(intestinal cancer), 신장암, 백혈병, 간암, 폐암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 신경내분비 종양, 비호지킨 림프종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 동암(sinus cancer), 피부암, 연조직 육종, 척수암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 자궁내막암, 질암, 또는 외음부암의 세포인, 다중특이성 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 세포의 표면 상의 항원은 안지오포이에틴, BCMA, CD19, CD20, CD22, CD25(IL2-R), CD30, CD33, CD37, CD38, CD52, CD56, CD123(IL-3R), cMET, DLL/노치, EGFR, EpCAM, FGF, FGF-R, GD2, HER2, 메소텔린, 넥틴-4, PAP, PDGFRα, PSA, PSA3, PSMA, RANKL, SLAMF7, STEAP1, TARP, TROP2, VEGF, VEGF-R, CEA, 미성숙 라미닌 수용체, TAG-72, HPV E6, HPV E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2(calcium-activated chloride channel 2), 사이클린-B1, 9D7, EpCAM, EphA3, Her2/neu, 텔로머라제, 메소텔린, SAP-1, 생존 형태(surviving), BAGE 패밀리 항원, CAGE 패밀리 항원, GAGE 패밀리 항원, MAGE 패밀리 항원, SAGE 패밀리 항원, XAGE 패밀리 항원, NY-ESO-1/LAGE-1, PRAME, SSX-2, 멜란(Melan)-A, MART-1, Gp100, pmel17, 티로시나제, TRP-1, TRP-2, P. 폴리펩티드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, 또는 BRCA1인, 다중특이성 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 세포의 표면 상의 항원은 CD33인, 다중특이성 항체.
  11. 제10항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은
    (i) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및
    (ii) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
  12. 제11항에 있어서,
    (i) 상기 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따르거나;
    (ii) 상기 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따르거나;
    (iii) 상기 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따르거나;
    (iv) 상기 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따르거나;
    (v) 상기 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따르거나; 또는
    (vi) 상기 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 예시적인 넘버링 체계에 따른, 다중특이성 항체.
  13. 제10항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은
    (i) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 VH; 및
    (ii) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
  14. 제13항에 있어서,
    (i) 상기 제2 결합 도메인은 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하거나;
    (ii) 상기 제2 결합 도메인은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나; 또는
    (iii) 상기 제2 결합 도메인은 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
  15. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3은 상기 CD33의 항원 또는 상기 CD33의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성하는, 다중특이성 항체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 상기 제1 결합 도메인은 다가 형태이거나, 상기 제2 결합 도메인은 다가 형태이거나, 또는 상기 제1 결합 도메인 및 상기 제2 결합 도메인 둘 모두가 다가 형태이거나;
    (ii) 상기 제1 결합 도메인은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있거나, 또는 상기 제2 결합 도메인은 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있거나;
    (iii) 상기 제1 결합 도메인은 적어도 4개의 항원에 결합할 수 있거나, 또는 상기 제2 결합 도메인은 적어도 4개의 항원에 결합할 수 있거나; 또는
    (iv) 상기 제1 결합 도메인은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있거나, 또는 상기 제2 결합 도메인은 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있는, 다중특이성 항체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 이중특이성 항체, 삼중특이성 항체, 또는 사중특이성 항체인, 다중특이성 항체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는
    (i) 인간화 항체이거나,
    (ii) IgG 항체 - 선택적으로 상기 IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체임 - 이거나,
    (iii) 카파 경쇄 또는 람다 경쇄를 포함하거나, 또는
    (iv) 단일클론 항체인, 다중특이성 항체.
  19. 다중특이성 항체로서,
    γδ T 세포의 표면 상의 TRDV2에 결합할 수 있는 제1 수단; 및 암 항원에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함하는, 다중특이성 항체.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 다중특이성 항체를 인코딩하는 핵산.
  21. 제20항의 핵산을 포함하는 벡터.
  22. 제21항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  23. 제13항의 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
  24. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 다중특이성 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  25. 하나 초과의 표적 분자에 결합하는 항체를 제조하는 공정으로서,
    상기 분자는 γδ T 세포 상의 TRDV2 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 γδ T 세포 상의 TRDV2 항원 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 항체를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함하는, 공정.
  26. 제25항에 있어서, 상기 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계는 n회 반복되고, γδ T 세포 상의 TRDV2 항원 및 n개의 표적 분자에 결합할 수 있는 결합 도메인을 제공하는 기능을 수행하기 위한 n회의 단계를 추가로 포함하며, 여기서 n은 적어도 2인, 공정.
  27. TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법으로서,
    상기 γδ T 세포를 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 접촉시키는 단계는 상기 γδ T 세포를 상기 암 세포로 유도하는, 방법.
  28. 세포 표면 상에서 암 항원을 발현하는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법으로서,
    상기 암 세포를 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 암 세포는 상기 다중특이성 항체와 접촉하고 있는 동안에 TRDV2를 발현하는 γδ T 세포의 존재 하에 있는, 방법.
  30. 대상체에서 암 세포를 제거하기 위한 방법으로서,
    제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 다중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  31. 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서,
    제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 다중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 상기 대상체는 상기 암 세포의 제거를 필요로 하거나 또는 상기 암의 치료를 필요로 하는 대상체인, 방법.
  33. TRDV2를 발현하는 γδ T 세포를 활성화하는 방법으로서,
    상기 γδ T 세포를 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
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