KR20230151356A - 모새나무추출물을 함유하는 피지분비 억제 및 모공 수축용 화장료 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 모새나무(Vaccinium bracteatum)를 추출하여 농축한 추출물을 함유하는 피지분비 억제 및 모공 수축용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 피지 생성 조절인자의 발현 억제를 통해 뛰어난 피지분비 억제 효과를 나타내며, 단백질 응집력 및 세포 결합력 증가를 통해 모공 수축에 뛰어난 효과를 발휘한다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 천연물 소재를 이용하여 인체에 무해하며, 안정성이 우수하다.
Description
본 발명은 모새나무추출물을 유효성분으로 함유하는 피지분비 억제 및 모공 수축에 효과적인 화장료 조성물에 관한 것이다.
모공은 형태, 분포 및 크기가 환경적 요인과 유전적 요인에 의해 사람마다 다르게 나타난다. 또한 모공은 털피지샘 단위의 피부 개구부로 피지선에서 생산되는 피지를 운반하는 모낭관에 연결되어 있고 피지막을 형성하도록 유분이 분비되는 작고 좁은 관으로 되어 있으며 이 관에 털이 있어 모공이라 한다.
모공은 모발 및 털이 자라는 통로이면서 피지 및 땀 배출, 유수분막을 형성하여 피부장벽 형성, 수분 증발 억제, 외부 미생물 및 유해물질 방어작용 및 살균 작용 등을 수행한다. 다양한 외부 및 내부 요인에 의해 모공은 확장되게 된다. 모공에 영향을 미치는 요인에는 크게 피지선, 피부 노화, 유전적 요인 및 과도한 스트레스 등이 있다. 첫번째로 피지선은 피지를 생성하여 피부를 보호하는 역할을 하는 반면 호르몬, UV 등에 의해 과도하게 활성화되면 피지의 양이 늘어나면서 모공이 늘어나게 되는 원인이 된다. 두번째로 피부에 노화가 진행되면 피지 분비량이 떨어질 뿐만 아니라 모공의 개수도 늘어나고 콜라겐 섬유 및 탄력 섬유가 감소· 변성되어 피부 탄력도가 감소하게 되면서 모공이 커지게 된다. 세 번째로 유전적으로 피지샘의 크기가 크거나 피지샘을 자극하는 안드로겐 호르몬에 의해 영향을 받게 된다. 안드로겐 호르몬은 사춘기가 시작되면서 생성되는 호르몬으로 남성의 정소 및 부신에서 분비되는데 이 호르몬이 과량 분비될 경우, 피지선을 자극하여 피지분비가 많아지게 된다. 또한 모공 속 각질층의 각화된 세포가 탈락하지 못하게 하여 모낭벽의 각질층이 두꺼워져 모공을 막아 피지가 배출되지 못하게 됨으로써 모공 속에 피지와 각질의 혼합물이 화이트헤드, 블랙헤드 등의 면포나 구진 등의 염증을 유발하기도 한다. 이 외에도 스트레스, 여드름, 잘못된 식습관 및 생활 습관 등이 모공 확장의 원인이 될 수 있다.
모공이 커지게 되는 원인중의 하나인 피지는 피지선세포(sebocytes) 및 지방세포(adipocyte)에서 분비되는데, 피부 외부의 유해물질의 침투를 막아주고 유수분을 조절하는 순기능도 있다. 그러나 사춘기 호르몬의 변화, 스트레스 등에 의해 피지가 과잉으로 분비될 경우, 역기능을 초래하여 다양한 피부장애를 야기하게 된다. 피지선은 주로 얼굴, 앞가슴, 등, 목 등에 주로 분포하며 피지선에 존재하는 피지선 세포에서 피지(지질)가 생성되어 모공을 통해 분비된다. 이러한 피지를 생성하는 전사인자들의 활성을 조절함으로써 피지 분비를 억제하는 연구가 활발히 진행되고 있다.
확장된 모공을 개선시키기 위해 화장품, 팩 및 피부과시술 등의 다양한 방법이 이용되고 있다. 그 중에서, 수렴작용이라고 하여 체내 조직의 단백질을 변성(침전, 응고)시켜 조직이 혈관을 수축시키는 작용을 말하며 피부나 신체 내에서 살균, 진정, 지혈, 진통 등의 효과가 있어 화장품이나 의약품으로서 이용되고 있다. 수렴작용은 크게 물리적 수렴작용과 화학적 수렴작용이 있다. 물리적 수렴작용은 물리적 작용에 의해 피부를 수렴시키는 것으로 차가운 물이나 에탄올의 휘발성으로 인해 피부 온도를 저하시켜 땀샘과 모공을 일시적으로 수축시키는 것을 말한다. 화학적 수렴작용은 타닌과 같이 단백질 응고작용을 하는 물질을 수렴제로 사용하여 땀샘과 모공을 일시적으로 수축시키는 것을 말한다. 현재 사용되어지고 있는 천연 수렴제로는 타닌, 구연산, 주석산, 카테킨 등이 있다. 모공 수축 효과를 위한 약품의 사용이나 피부과의 레이저 등의 의학적 시술은 심한 피부 자극과 개인마다 효과가 차이가 있고 여러 가지 부작용이 발생할 수 있는 가능성이 있어 안전성 및 모공 수축에 효과적인 천연물의 개발이 활발히 진행되고 있다.
본 발명은 인체에 무해하고 안정성이 우수하며 피지분비 억제 및 모공 수축에 효과적인 천연물 소재의 화장료 조성물을 개발하여 제공하고자 한다.
본 발명은 모새나무(Vaccinium bracteatum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피지분비 억제용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 피지분비 억제용 화장료 조성물에 있어서, 상기 피지분비 억제는, 피지 생성 조절인자인 PPAR-γ 또는 SREBP-1를 억제함으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
본 발명은 모새나무(Vaccinium bracteatum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 모공 수축용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 피부 모공 수축용 화장료 조성물에 있어서, 상기 모공 수축은, 단백질 응집력 또는 세포 결합력의 증가로 이루어지는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
본 발명의 피부 모공 수축용 화장료 조성물에 있어서, 상기 세포 결합력의 증가는, claudin-1 또는 desmoglein-2의 발현을 증가시킴으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 추출은, 용매 추출법, 초임계 추출법 및 초음파 추출법 중 선택되는 어느 하나의 추출법을 통해 추출하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 모새나무추출물은, 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01 내지 30.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 피지분비 억제 및 모공 수축에 뛰어난 효과를 발휘한다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 천연물 소재를 이용하여 인체에 무해하며, 안정성이 우수하다.
도 1은 모새나무추출물이 세포에 미치는 독성을 측정한 결과이다.
도 2은 모새나무추출물의 PPAR-γ 발현 억제를 통해 피지(Sebum) 합성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 3은 모새나무추출물 SREBP-1 발현 억제를 통해 피지(Sebum) 합성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 4는 모새나무추출물이 알부민 단백질 응집을 통해 모공 수축 효과를 확인한 결과이다.
도 5은 모새나무추출물이 Claudin-1, Desmoglein-2 발현 조절을 통해 세포간 결합력을 증가시켜 모공 수축 효과를 확인한 결과이다.
도 2은 모새나무추출물의 PPAR-γ 발현 억제를 통해 피지(Sebum) 합성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 3은 모새나무추출물 SREBP-1 발현 억제를 통해 피지(Sebum) 합성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 4는 모새나무추출물이 알부민 단백질 응집을 통해 모공 수축 효과를 확인한 결과이다.
도 5은 모새나무추출물이 Claudin-1, Desmoglein-2 발현 조절을 통해 세포간 결합력을 증가시켜 모공 수축 효과를 확인한 결과이다.
본 발명은 모새나무(Vaccinium bracteatum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피지분비 억제용 또는 모공 수축용 화장료 조성물을 제공한다.
모새나무(Vaccinium bracteatum)는 진달래목의 쌍떡잎 속씨식물로 해변의 산지에서 자란다. 높이가 1∼3m로, 작은가지는 회갈색에서 회색이고 거의 털이 없다. 잎은 어긋나고 두꺼우며 타원형 또는 긴 타원형으로 두꺼운 가죽같은 질감을 갖는다. 가장자리에 잔 톱니가 있으며 뒷면 밑에 작은 선점(腺點)이 있으며, 꽃은 6월에 피고 홍백색이 돌며 밑으로 처지는 총상꽃차례[總狀花序]에 종처럼 생긴 꽃이 10여 개씩 달리고 포(苞)가 남아 있다. 열매는 장과로 둥글고 흰가루로 덮이며 지름 6mm 정도로 10월에 익으며 먹을 수 있다.
한편, 지질 합성은 SREBP-1(sterol regulatory element-binding protein 1), PPARs(peroxisome proliferator-activated receptors) 및 FAS(fatty acid synthase) 등의 전자인자에 의해 조절되며, 피지는 피지(지질)를 생성하는 피지선 세포의 증식을 조절하고, 피지의 생성을 조절함으로써 억제시킬 수 있다. SREBP-1은 콜레스테롤, 지방산 및 인지질의 합성을 조절하는 전사인자이고, PPAR는 -α, -β/δ, -γ의 3가지 유형이 존재하며 그 중에서 PPAR-γ는 피지선 세포의 증식과 지질 생성을 촉진하는 전사인자이다.
피부 모공 수축은 체내 조직의 단백질을 침전 및 응고시켜 조직이나 혈관을 수축시키는 수렴작용으로 일어나는데, 주로 수렴제인 단백질 응고작용을 하는 물질이 모공을 수축시킬 수 있다. 또한, 피부층을 구성하는 주된 세포인 각질형성세포 간의 연접(junction)이 모공 수축에 중요한 요인으로 작용하고 있다. 연접은 세포 간 부착을 연계하여 인체 내부의 수분 손실 및 외부 유해 물질의 침입을 막는 역할을 수행하고, 표피의 과립세포층 세포간격에 위치하여 인접한 세포들을 접합시켜 단단히 결합할 수 있도록 하며 피부 장벽을 튼튼하게 하는 역할을 한다. 연접에는 밀착연접(tight junction), 접착연접(desmosome), 간극연접(gap junction), 및 부착연접(adherens junction)이 있다. 각 연접에 관여하는 단백질로는 밀착연접의 claudin과 occludin, 접착연접의 desmoglein과 plakophilin, 간극연접의 connexin, ZO-1, 부착연접의 cadherin, β-catenin 등이 알려져 있다. 이러한 세포 간 연접을 통해 결합력을 증가시켜 피부 모공을 수축하는 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명자들은 예의 노력한 결과, 본 발명의 모새나무 추출물이 농도의존적으로 피지 생성 조절인자인 PPAR-γ 및 SREBP-1의 발현을 억제시키며, 단백질 응집력을 증가시키며, 연접단백질인 claudin-1 및 desmoglein-2의 발현을 증가시킴을 확인하였고, 상기 모새나무 추출물을 유효성분으로 함유하여 피지분비 억제 또는 피부 모공 축소에 탁월한 효과를 발휘하는 화장료 조성물을 완성하였다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 피지분비 억제는, 피지 생성 조절인자인 PPAR-γ 또는 SREBP-1 중 선택되는 어느 하나를 억제함으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 모공 수축은, 단백질 응집력 또는 세포 결합력의 증가로 이루어지는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 세포 결합력의 증가는, claudin-1 또는 desmoglein-2 중 선택되는 어느 하나의 발현을 증가시킴으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 추출은, 바람직하게 용매 추출법, 초임계 추출법 및 초음파 추출법 중 선택되는 어느 하나의 추출법을 통해 추출하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다. 이때, 상기 용매 추출법은, 바람직하게 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출용매를 이용하는 것이 좋다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 모새나무 추출물은, 바람직하게 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001~30.0중량%가 함유되는 것이 좋다. 더욱 바람직하게는 화장료 조성물 전체 중량에 대해서 0.01~10중량% 함유되는 것이 좋다. 이때, 모새나무 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피지분비 억제 및 모공 수축 효과가 미미하고, 30.0중량% 초과할 경우 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과가 나타나지 않을 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 본 발명의 모새나무 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.
이하, 본 발명의 구성을 하기 실시예 및 실험예를 통해 구체적으로 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[실시예 1: 모새나무 추출물의 제조]
음건한 모새나무 전초 100 g을 분쇄하여, 이 분쇄물에 70% 에탄올 500 ㎖를 첨가한 다음 60℃ 온도에서 24시간 동안 추출하였다. 이후, 상기 추출물을 400 메쉬(mesh) 여과포로 여과한 후, 여과지 No.2(Whatman)로 다시 한번 여과하였다. 그 후, 감압 농축하여 모새나무 추출물을 제조하였다.
[실험예 1: 세포 생존율 측정]
본 실험에서는 상기 실시예 1의 모새나무추출물이 세포에 미치는 독성을 측정하고자 하였다. MTT(3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyl tetrazolium bromide) 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하였다.
인간각질형성세포(HaCaT, keratinocyte) 및 피지선 세포(Sebocyte)를 96웰 플레이트에 2×104 cells/well의 농도로 분주하여, 37℃, 5% CO2 조건에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 배지를 제거하고, 상기 실시예 1을 농도별로 희석하여 24 시간 동안 배양하였다. 그 후, 5 ㎎/㎖로 녹인 MTT 시약을 20 ㎕ 넣고, 37℃, 5% CO2 조건에서 2 시간 동안 반응시켰다. 배지를 완전히 제거한 뒤, 생성된 포르마잔(formazan)을 DMSO 100 ㎕를 넣어 완전히 녹아준 뒤, 550 nm에서 흡광도를 측정하였다.
실험 결과, 실시예 1의 추출물은 인간각질형성세포 및 피지선세포에서 100 ㎍/㎖의 농도까지 세포독성을 보이지 않았다 (도 1).
[실험예 2 : 모새나무추출물의 PPAR-γ 발현 억제 효과]
본 실험에서는 모새나무추출물의 피지 생성 억제 효과를 확인하기 위하여, 피지선 세포를 이용하여 피지 조절 인자인 PPAR-γ에 대한 본 발명 추출물의 영향을 확인하였다.
이를 위하여, 피지선 세포를 6웰 플레이트에 3 x 105 cell/well로 분주하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 하루 동안 세포를 안정화시켰다. 피지 생성을 촉진하기 위해 자극제로 리놀레산(linoleic acid)을 200μM의 농도로 처리하고 실시예 1을 농도별로 희석하여 처리하였다.
이후, 24 시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 반응시킨 후 단백질을 분리하였다. 상층액을 제거하고 1× PBS로 한 번 세척한 후, 스크레퍼(scraper)로 긁어 세포를 수집하였다. 그 후, 세포용해버퍼(Cell lysis buffer)를 이용하여 단백질을 분리하고 BCA 어세이(assay)로 단백질을 정량한 후 일정량의 단백질을 10% SDS-PAGE 겔에서 전기영동시켰다.
겔 상의 분리된 단백질을 PVDF 멤브레인에 전이(transfer)시키고, 5% 스킴밀크(skim milk)를 이용하여 1시간 동안 블로킹(blocking)하였다. 이후, 1× TTBS 용액으로 3회 세척하고 1차 항체를 4℃에서 오버나잇(over night) 반응시킨 후, HRP가 결합된 2차 항체를 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 그 후, 1× TTBS로 3회 세척하고 ECL용액을 반응시켜 Chemi Doc 기기로 밴드를 검출하였다. 이는, Image J 1.47 software를 이용하여 수치화하였으며 베타-액틴(β-actin)의 발현을 기준으로 정량하여 PPAR-γ의 발현 억제율(%)을 계산하여 하기 표 1에 나타내었다.
| 시료 | PPAR-γ 발현 억제율(%) | |
| 실시예1 (㎍/㎖) (모새나무추출물) |
10 | 3.58 |
| 30 | 42.32 | |
| 100 | 78.35 | |
실험 결과, 본 발명의 모새나무추출물은 농도의존적으로 PPAR-γ의 발현을 억제하였다. 30 ㎍/㎖의 농도부터 42%로 유의한 억제율을 보였으며, 100 ㎍/㎖의 농도에서 최대 78%의 높은 PPAR-γ의 발현 억제 효과를 나타내었다 (도 2). 도 2는 모새나무추출물의 PPAR-γ의 발현 억제 효과를 확인한 결과이다.
[실험예 3 : 모새나무추출물의 SREBP-1 발현 억제 효과]
본 실험에서는 본 발명의 모새나무추출물의 피지 생성 억제 효과를 확인하기 위하여, 피지선 세포를 이용하여 피지 조절 인자인 SREBP-1에 대한 본 발명 추출물의 영향을 확인하였다.
이를 위하여, 피지선 세포를 6웰 플레이트에 3 x 105 cell/well로 분주하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 하루 동안 세포를 안정화시켰다. 피지 생성을 촉진하기 위해 자극제로 리놀레산(linoleic acid)을 200μM의 농도로 처리하고 실시예 1을 농도별로 희석하여 처리하였다.
이후, 24 시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 반응시킨 후 단백질을 분리하였다. 상층액을 제거하고 1× PBS로 한 번 세척한 후, 스크레퍼(scraper)로 긁어 세포를 수집하였다. 그 후, 세포용해버퍼(Cell lysis buffer)를 이용하여 단백질을 분리하고 BCA 어세이(assay)로 단백질을 정량한 후 일정량의 단백질을 10% SDS-PAGE 겔에서 전기영동시켰다.
겔 상의 분리된 단백질을 PVDF 멤브레인에 전이(transfer)시키고, 5% 스킴밀크(skim milk)를 이용하여 1시간 동안 블로킹(blocking)하였다. 이후, 1× TTBS 용액으로 3회 세척하고 1차 항체를 4℃에서 오버나잇(over night) 반응시킨 후, HRP가 결합된 2차 항체를 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 그 후, 1× TTBS로 3회 세척하고 ECL용액을 반응시켜 Chemi Doc 기기로 밴드를 검출하였다. 이는, Image J 1.47 software를 이용하여 수치화하였으며 베타-액틴(β-actin)의 발현을 기준으로 정량하여 SREBP-1의 발현 억제율(%)을 계산하여 하기 표 2에 나타내었다.
| 시료 | SREBP-1 발현 억제율(%) | |
| 실시예1 (㎍/㎖) (모새나무추출물) |
10 | 5.31 |
| 30 | 31.90 | |
| 100 | 63.25 | |
실험 결과, 본 발명의 모새나무추출물은 농도의존적으로 SREBP-1의 발현을 억제하였다. 30 ㎍/㎖의 농도부터 31%로 유의적인 억제율을 보였으며, 100 ㎍/㎖의 농도에서 최대 63%의 높은 SREBP-1의 발현 억제 효과를 나타내었다 (도 3). 도 3은 모새나무추출물의 SREBP-1의 발현 억제 효과를 확인한 결과이다.
[실험예 4: 알부민 응집법을 이용한 모공 수축 효과 확인]
피부를 대신할 단백질로 알부민을 이용하여 모공 수축 효과 실험을 진행하였다. 양성 대조군으로는 타닌산(tannic acid)을 사용하였다.
0.3% 알부민을 0.05 M 구연산 완충용액(pH 4.5)에 용해시킨 후, 0.3% 알부민 100 ㎕에 실시예 1을 농도별로 혼합하였다. 대조군은 알부민 대신 구연산 완충용액을 첨가하였고 양성대조군으로는 tannic acid를 첨가하였다. 상온에서 5 분 동안 반응시키고 650 nm에서 흡광도를 측정하였고 대조군을 대비하여 백분율로 나타내었다(표 3). 흡광도의 값이 증가할수록 모공 수축 효과가 높다는 것을 나타낸다.
| 시료 | 단백질 응집율(%) | |
| Tannic acid (500uM) | 138.84 | |
| 실시예1 (㎍/㎖) (모새나무추출물) |
10 | 8.64 |
| 30 | 66.91 | |
| 100 | 106.75 | |
실험 결과, 양성대조군인 tannic acid는 대조군과 비교하여 138% 단백질이 응집되었고, 실시예 1인 모새나무추출물은 농도의존적으로 단백질 응집율이 증가하여 100 ㎍/㎖ 농도에서 최대 106% 단백질이 응집하였다(표 3, 도 4). 이를 통해 모새나무추출물이 단백질 응집을 증가시킴으로써 모공 수축에 우수한 효과를 발휘하는 것을 확인하였다.
[실험예 5: Claudin-1, Desmoglein-2 발현 확인을 통한 피부 모공 수축 효과 확인]
피부의 결합력에 관여하는 claudin-1, desmoglein-2에 대한 영향을 확인하여 실시예 1의 모공 수축 효과를 평가하였다.
HaCaT 세포를 6웰 플레이트에 3×105 cells/well의 농도로 분주하여, 37℃, 5% CO2 조건에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 배지를 제거하고, 상기 실시예 1을 농도별로 희석하여 6 시간 동안 반응시켰다. 1 x PBS로 한번 세척한 후 세포를 수집하고 1×세포 용해 버퍼(cell lysis buffer)를 이용하여 단백질을 분리하였다. 그 후, BCA 정량법으로 단백질을 정량하여 일정량의 단백질을 10% SDS-PAGE 겔에서 100 V로 3 시간 동안 전기영동 시켰다. PVDF 멤브레인에 전이(transfer)시킨 후 5% skim milk를 이용하여 1시간 동안 블록킹(blocking)하였다. 1차 항체를 4℃에서 오버나잇(over night) 반응시키고 HRP가 결합된 2차 항체를 실온에서 2 시간 동안 반응시켰다. 그 후, 1 × TBS/T로 3-4회 세척하고 ECL 시약과 반응시켜 Chemi Doc기기로 밴드를 확인하였다. 각 밴드는 베타-액틴(β-actin)의 발현을 기준으로 정량하여 계산하였다(표 4).
| 시료 | Claudin-1 증가율(%) | Desmoglein-2 증가율(%) | |
| Untreated | 100 | 100 | |
| 실시예1 (㎍/㎖) (모새나무추출물) |
10 | 103.04 | 126.75 |
| 30 | 143.21 | 167.58 | |
| 100 | 160.38 | 199.95 | |
실험 결과, 상기 표 4와 같이 실시예 1의 모새나무추출물은 농도의존적으로 claudin-1, desmoglein-2의 발현을 증가시켰다. Claudin-1의 경우, 30 ㎍/㎖ 농도부터 유의적인 효능을 보이며 100 ㎍/㎖ 농도에서 최대 160% 발현이 증가하였다. Desmoglein-2의 경우, 30 ㎍/㎖ 농도부터 유의적인 효능을 보이며 100 ㎍/㎖ 농도에서 최대 199% 발현이 증가하였다. 이를 통해 모새나무추출물이 세포 간 연접(junction)에 관여하는 claudin-1, desmoglein-2의 발현을 증가시켜 세포 결합력을 증가시킴으로써 모공 수축에 우수한 효과를 나타냄을 확인하였다.
Claims (7)
- 모새나무(Vaccinium bracteatum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피지분비 억제용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 피지분비 억제는,
피지 생성 조절인자인 PPAR-γ 또는 SREBP-1를 억제함으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 피지분비 억제용 화장료 조성물.
- 모새나무(Vaccinium bracteatum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 모공 수축용 화장료 조성물.
- 제3항에 있어서,
상기 모공 수축은,
단백질 응집력 또는 세포 결합력의 증가로 이루어지는 것을 특징으로 하는 피부 모공 수축용 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서,
상기 세포 결합력의 증가는,
claudin-1 또는 desmoglein-2의 발현을 증가시킴으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 피부 모공 수축용 화장료 조성물.
- 제1항 또는 제3항에 있어서,
상기 추출은,
용매 추출법, 초임계 추출법 및 초음파 추출법 중 선택되는 어느 하나의 추출법을 통해 추출하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항 또는 제3항에 있어서,
상기 모새나무추출물은,
화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01 내지 30.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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Citations (2)
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| KR101230644B1 (ko) | 2012-02-16 | 2013-02-06 | 주식회사 더마프로 | 모새나무 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물 |
| KR101838442B1 (ko) | 2017-06-29 | 2018-03-15 | 재단법인 전남생물산업진흥원 | 모새나무 열매 추출물을 함유하는 안면홍조 개선용 건강식품 조성물 |
-
2022
- 2022-04-25 KR KR1020220050962A patent/KR20230151356A/ko unknown
Patent Citations (2)
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| KR101230644B1 (ko) | 2012-02-16 | 2013-02-06 | 주식회사 더마프로 | 모새나무 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물 |
| KR101838442B1 (ko) | 2017-06-29 | 2018-03-15 | 재단법인 전남생물산업진흥원 | 모새나무 열매 추출물을 함유하는 안면홍조 개선용 건강식품 조성물 |
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