KR20230150843A - 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법 - Google Patents

안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법 Download PDF

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KR20230150843A
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루카스 디. 본더란트
마크 케이. 슐러겔
제프리 주버
로렌 블레어 우즈
타일러 치커링
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알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 유전자를 표적으로 하는 RNAi 제제, 예를 들어 이중 가닥 RNA(dsRNA) 제제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하기 위해 이러한 RNAi 제제를 사용하는 방법 및 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어 고지혈증 또는 고중성지방혈증과 같은 지질 대사 장애를 예방하고 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
관련 출원
본 출원은 2021년 3월 4일자로 출원된 미국 가출원 제63/156,476호 및 2022년 2월 10일자로 출원된 미국 가출원 제63/308,668호에 대한 우선권의 이익을 주장한다. 이전 출원의 각각의 전문은 본원에 참조로 통합된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자식으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 본원에 그 전체가 참조로서 통합된다. 2022년 2월 28일자로 생성된 상기 ASCII 복사본은 파일명이 121301_15120_SL.txt이며, 크기가 316,668 바이트이다.
안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)은 지질 대사를 조절하고 주로 간에서 발현되는 분비 인자의 안지오포이에틴-유사 계열의 구성원이다(문헌참조: Koishi, R. 등, (2002) Nat. Genet. 30(2):151~157). ANGPTL3은 중성지방의 가수분해를 촉매하는 지질단백질 리파아제(LPL) 및 고밀도 지질단백질(HDL) 인지질을 가수분해하는 내피 리파아제(EL)의 촉매 활성을 이중으로 억제한다. 고지혈증이 있으며 비만인 KK/Snk 마우스에서, ANGPTL3 발현의 감소가 중성지방의 제거를 촉진함으로써 고지혈증 및 죽상동맥경화증에 대한 보호 효과를 갖는다(문헌참조:Ando 등, (2003) J. Lipid Res., 44:1216~1223). 인간 ANGPTL3 혈장 농도는 혈장 HDL 콜레스테롤 및 HDL 인지질 수준과 양의 상관 관계가 있다(문헌참조: Shimamura 등, (2007) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 27:366~372).
지질 대사 장애는 중성지방 및/또는 콜레스테롤과 같은 혈청 지질의 수준을 상승시킬 수 있다. 혈청 지질의 상승은 고혈압, 심혈관 질환, 당뇨병 및 기타 병리학적 병태와 강력하게 연관된다. 고중성지방혈증은 높은 혈중 중성지방 수치를 특징으로 하는 지질 대사 장애의 일례이다. 이는 콜레스테롤 수치가 높지 않은 경우(고콜레스테롤혈증)에도 죽상동맥경화증과 연관이 있어 왔다. 중성지방 농도가 과도한 경우(즉, 1000mg/dl 또는 12mmol/l 초과), 고중성지방혈증은 췌장염을 초래할 수도 있다. 고지혈증은 임의의 하나 또는 모든 지질 및/또는 지질단백질의 혈중 수준이 상승하는 것을 특징으로 하는 지질 대사 장애의 또 다른 예이다. 식이요법, 운동 및 스타틴과 다른 약물을 사용하는 치료를 포함한 지질 대사 장애에 대한 현재의 치료가 항상 효과적인 것은 아니다. 따라서, 당업계에는 지질 대사 장애가 있는 대상체를 위한 대안적인 치료에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명은 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)을 암호화하는 유전자의 RNA 전사체의 RNA-유도 침묵 복합체(RISC)-매개 절단에 영향을 미치는 iRNA 조성물을 제공한다. ANGPTL3 유전자는 세포, 예를 들어, 인간 대상체와 같은 대상체 내 세포 내에 존재할 수 있다. 또한 본 발명은 ANGPL3 유전자의 발현을 억제하고/하거나 ANGPL3 유전자의 발현을 억제하거나 감소시키는 것이 이로울 대상체, 예를 들어, 지질 대사 장애를 앓고 있거나 이를 앓을 경향이 있는 대상체, 예컨대 고지혈증 또는 고중성지방혈증을 앓고 있거나 이를 앓을 경향이 있는 대상체를 치료하기 위한 본 발명의 iRNA 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.
따라서, 일 양태에서, 본 발명은 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제를 제공하며, 여기서 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열과 0, 1, 2, 또는 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개의 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열번호 2의 뉴클레오타이드 서열과 1, 2, 또는 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 구현예에서, dsRNA 제제는 적어도 하나의 열 불안정화 뉴클레오타이드 변형, 예를 들어 무염기 변형; 듀플렉스에서 반대 뉴클레오타이드와의 미스매치; 불안정화 당 변형 및 2'-데옥시 변형을 포함하고, 비환형 뉴클레오타이드, 잠김 해제된 핵산(UNA), 또는 글리세롤 핵산(GNA), 예를 들어 안티센스 가닥은 적어도 하나의 열 불안정화 뉴클레오타이드 변형을 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제를 제공하며, 여기서 dsRNA 제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 ANGPTL3을 암호화하는 mRNA에 상보성 영역을 포함하고, 상보성 영역은 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나의 안티센스 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제를 제공하며, 여기서 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 58-80, 73-102, 73-124, 80-114, 91-113, 92-114, 291-320, 291-342, 307-336, 540-567, 540-589 및 545-577의 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개의 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열번호 2의 상응하는 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제를 제공하며, 여기서 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 58-80, 80-102; 84-106; 87-109; 91-113; 92-114; 186-208; 307-329; 308-330; 310-332; 314-336; 545-567; 551-573; 553-575; 554-576; 555-577; 1133-1155; 또는 1140-1162의 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개의 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열번호 2의 상응하는 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제를 제공하며, 여기서 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 58-80, 91-113, 또는 92-114의 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개의 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열번호 2의 상응하는 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제를 제공하며, 여기서 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 58-80의 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개의 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열번호 2의 상응하는 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; AD-1331329.1; AD-1331237.1; AD-1331238.1; AD-1331240.1; AD-1331244.1; AD-1331256.1; AD-1331262.1; AD-1331264.1; AD-1331265.1; AD-1331266.1; AD-1331316.1; AD-1331338.1; 및 AD-1479372로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; AD-1331329.1; AD-1331240.1; AD-1331262.1; AD-1331264.1; AD-1331265.1 AD-1331266.1; 및 AD-1479372로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; 및 AD-1479372로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331212.1; AD-1331213.1; 및 AD-1479372로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1479372의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하, 예를 들어 3, 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일부 구현예에서, dsRNA 제제는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드; 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하거나; 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함한다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하고; 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하거나; 센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함한다.
일 구현예에서, 변형 뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 데옥시-뉴클레오타이드, 3’-말단 데옥시티미딘(dT) 뉴클레오타이드, 2’-O-메틸 변형 뉴클레오타이드, 2’-플루오로 변형 뉴클레오타이드, 2’-데옥시-변형 뉴클레오타이드, 잠김 뉴클레오타이드, 잠김 해제된 뉴클레오타이드, 입체적으로 제한된 뉴클레오타이드, 구속된 에틸 뉴클레오타이드, 무염기 뉴클레오타이드, 2’-아미노-변형 뉴클레오타이드, 2’-O-알릴-변형 뉴클레오타이드, 2’-C-알킬-변형 뉴클레오타이드, 2’-하이드록실-변형 뉴클레오타이드, 2’-메톡시에틸 변형 뉴클레오타이드, 2’-O-알킬-변형 뉴클레오타이드, 모르폴리노 뉴클레오타이드, 포스포라미데이트, 뉴클레오타이드를 포함하는 비-천연 염기, 테트라하이드로피란 변형 뉴클레오타이드, 1,5-안하이드로헥시톨 변형 뉴클레오타이드, 시클로헥세닐 변형 뉴클레오타이드, 포스포로티오에이트기를 포함하는 뉴클레오타이드, 메틸포스포네이트기를 포함하는 뉴클레오타이드, 5’-포스페이트를 포함하는 뉴클레오타이드, 5’-포스페이트 모방체를 포함하는 뉴클레오타이드, 열 불안정화 뉴클레오타이드, 글리콜 변형 뉴클레오타이드(GNA), 2’ 포스페이트를 포함하는 뉴클레오타이드, 및 2-O-(N-메틸아세트아미드) 변형 뉴클레오타이드; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 뉴클레오타이드 상에서의 변형은 LNA, HNA, CeNA, 2′-메톡시에틸, 2′-O-알킬, 2′-O-알릴, 2′-C-알릴, 2′-플루오로, 2′-데옥시, 2′-하이드록실, 및 글리콜; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 변형 뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 데옥시-뉴클레오타이드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오타이드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오타이드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오타이드, 글리콜 변형 뉴클레오타이드(GNA), 예를 들어 Ggn, Cgn, Tgn, 또는 Agn, 2’ 포스페이트를 갖는 뉴클레오타이드, 예를 들어 G2p, C2p, A2p 또는 U2p 및 비닐-포스포네이트 뉴클레오타이드; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 뉴클레오타이드 상에서의 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오타이드 변형이다.
일 구현예에서, 열 불안정화 뉴클레오타이드 변형은 무염기 변형; 듀플렉스에서 반대 뉴클레오타이드와의 미스매치; 및 불안정화 당 변형, 2'-데옥시 변형, 비환형 뉴클레오타이드, 잠김 해제된 핵산(UNA), 및 글리세롤 핵산(GNA)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 변형 뉴클레오타이드는 3'-말단 데옥시티미딘 뉴클레오타이드(dT)의 짧은 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, dsRNA 제제는 추가로 적어도 하나의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, dsRNA 제제는 6~8개 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 결합을 포함한다. 일 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥의 3'-말단에 존재한다. 선택적으로, 가닥은 안티센스 가닥이다. 또 다른 구현예에서, 가닥은 센스 가닥이다. 관련 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥의 5'-말단에 존재한다. 선택적으로, 가닥은 안티센스 가닥이다. 또 다른 구현예에서, 가닥은 센스 가닥이다. 또 다른 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥의 5'- 및 3'-말단 모두에 존재한다. 선택적으로, 가닥은 안티센스 가닥이다. 또 다른 구현예에서, 가닥은 센스 가닥이다.
이중 가닥 영역은 길이가 19~30개의 뉴클레오타이드 쌍; 길이가 19~25개의 뉴클레오타이드 쌍; 길이가 19~23개의 뉴클레오타이드 쌍; 길이가 23~27개의 뉴클레오타이드 쌍; 또는 길이가 21~23개의 뉴클레오타이드 쌍일 수 있다.
일 구현예에서, 각각의 가닥은 독립적으로 길이가 30개 이하의 뉴클레오타이드이다.
일 구현예에서, 센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오타이드이고 안티센스 가닥은 길이가 23개 뉴클레오타이드이다.
상보성 영역은 길이가 적어도 17개의 뉴클레오타이드; 길이가 19 내지 23개의 뉴클레오타이드; 또는 길이가 19개의 뉴클레오타이드일 수 있다.
일 구현예에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개 뉴클레오타이드의 3’ 오버행을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 2개 뉴클레오타이드의 3’ 오버행을 포함한다.
일 구현예에서, dsRNA 제제는 리간드를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 리간드는 dsRNA 제제의 센스 가닥의 3’ 말단에 접합된다.
일 구현예에서, 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체이다.
일 구현예에서, 리간드는 1가, 2가, 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체이다.
일 구현예에서, 리간드는 다음이다:
.
일 구현예에서, dsRNA 제제는 다음의 개략도에 도시된 것과 같이 리간드에 접합되고,
상기 식에서, X는 O 또는 S이다.
일 구현예에서, X는 O이다.
일 구현예에서, dsRNA 제제는 적어도 하나의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥, 예를 들어 안티센스 가닥 또는 센스 가닥의 3'-말단에 존재한다.
또 다른 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥, 예를 들어 안티센스 가닥 또는 센스 가닥의 5'-말단에 존재한다.
일 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥의 5'- 및 3'-말단 모두에 존재한다. 일 구현예에서, 가닥은 안티센스 가닥이다.
일 구현예에서, 듀플렉스의 안티센스 가닥의 5′-말단의 1 위치에서 염기쌍은 AU 염기쌍이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 18)와 4개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3’(서열번호 19)와 4개 이하의 염기가 상이하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 18)와 3개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3’(서열번호 19)와 3개 이하의 염기가 상이하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 18)와 2개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3’(서열번호 19)와 2개 이하의 염기가 상이하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 18)와 1개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3’(서열번호 19)와 1개 이하의 염기가 상이하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 18)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3’(서열번호 19)를 포함하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, dsRNA 제제는 리간드를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 리간드는 dsRNA 제제의 센스 가닥의 3’ 말단에 접합된다.
일 구현예에서, 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체이다.
일 구현예에서, 리간드는 1가, 2가, 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체이다.
일 구현예에서, 리간드는 다음이다:
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguuL96-3’(서열번호 20)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3’(서열번호 19)를 포함하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고, L96은 N-[트리스(GalNAc-알킬)-아미도데카노일)]-4-하이드록시프롤리놀이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 18)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3’(서열번호 19)를 포함하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고, 여기서 리간드는 다음의 개략도에 도시된 것과 같이 센스 가닥의 3’-말단에 접합되고
, 상기 식에서, X는 O이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 21)와 4개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa -3’(서열번호 22)와 4개 이하의 염기가 상이하거나; 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3’(서열번호 23)와 4개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa -3’(서열번호 24)와 4개 이하의 염기가 상이하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 21)와 3개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa -3’(서열번호 22)와 3개 이하의 염기가 상이하거나; 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3’(서열번호 23)와 3개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa -3(서열번호 24)와 3개 이하의 염기가 상이하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 21)와 2개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa -3’(서열번호 22)와 2개 이하의 염기가 상이하거나; 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3’(서열번호 23)와 2개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa -3’(서열번호 24)와 2개 이하의 염기가 상이하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 21)와 1개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa -3’(서열번호 22)와 1개 이하의 염기가 상이하거나; 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3’(서열번호 23)와 1개 이하의 염기가 상이하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa -3(서열번호 24)와 1개 이하의 염기가 상이하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 21)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa -3’(서열번호 22)를 포함하거나; 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3’(서열번호 23)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa -3(서열번호 24)를 포함하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 구현예에서, dsRNA 제제는 리간드를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 리간드는 dsRNA 제제의 센스 가닥의 3’ 말단에 접합된다.
일 구현예에서, 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체이다.
일 구현예에서, 리간드는 1가, 2가, 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체이다.
일 구현예에서, 리간드는 다음이다:
.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguuL96-3’(서열번호 25)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa -3’(서열번호 22)를 포함하거나; 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuuL96-3’(서열번호 281)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa -3’(서열번호 24)를 포함하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고, L96은 N-[트리스(GalNAc-알킬)-아미도데카노일)]-4-하이드록시프롤리놀이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 21)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa -3’(서열번호 22)를 포함하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고, 여기서 리간드는 다음의 개략도에 도시된 것과 같이 센스 가닥의 3’-말단에 접합되고
,
상기 식에서, X는 O이다.
일 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3’(서열번호 23)를 포함하고 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’- asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa -3(서열번호 24)를 포함하되, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C, 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고, 여기서 리간드는 다음의 개략도에 도시된 것과 같이 센스 가닥의 3’-말단에 접합되고
, 그리고
상기 식에서, X는 O이다.
본 발명은 또한 본 발명의 임의의 dsRNA 제제를 함유하는 세포 및 본 발명의 임의의 dsRNA 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 비완충 용액, 예를 들어, 식염수 또는 물 중의 dsRNA 제제를 포함할 수 있거나, 본 발명의 약제학적 조성물은 완충 용액, 예를 들어, 아세테이트, 시트레이트, 프로라민, 카보네이트, 또는 포스페이트, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 완충 용액; 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS) 중의 dsRNA 제제를 포함할 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 본 방법은 세포를 본 발명의 임의의 dsRNA 또는 본 발명의 임의의 약제학적 조성물과 접촉시켜, 세포에서 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 세포는 대상체, 예를 들어, 지질 대사 장애와 같은 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)-관련 장애가 있는 대상체, 예를 들어 인간 대상체 내에 존재한다. 특정 구현예에서, 지질 대사 장애는 고지혈증 또는 고중성지방혈증이다.
특정 구현예에서, ANGPTL3 발현은 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%만큼 억제된다. 일 구현예에서, ANGPTL3의 발현을 억제하는 단계는 대상체의 혈청 내 ANGPTL3 단백질 수준을 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%만큼 감소시킨다.
일 양태에서, 본 발명은 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 발현의 발현의 감소로 혜택을 받을 장애가 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 본 발명의 임의의 dsRNA 또는 본 발명의 임의의 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여함으로써, ANGPTL3 발현의 발현의 감소로 혜택을 받을 장애가 있는 대상체를 치료하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 발현의 발현의 감소로 혜택을 받을 장애가 있는 대상체에서 하나 이상의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 본 방법은 본 발명의 임의의 dsRNA 또는 본 발명의 임의의 약제학적 조성물의 예방학적 유효량을 대상체에게 투여함으로써, ANGPTL3 발현의 발현의 감소로 혜택을 받을 장애가 있는 대상체에서 하나 이상의 증상을 예방하는 단계를 포함한다.
특정 구현예에서, 해당 장애는 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)-관련 장애, 예를 들어, 지질 대사 장애이다. 특정 구현예에서, 지질 대사 장애는 고지혈증 또는 고중성지방혈증이다. 특정 구현예에서, 대상체에게 dsRNA를 투여하는 단계는 하나 이상의 혈청 지질의 감소 및/또는 ANGPTL3 단백질 축적의 감소를 야기한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 또한 대상체에서 ANGPTL3의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 본 방법은 본 명세서에 제공된 임의의 dsRNA의 치료적 유효량을 대상체에게 투여함으로써, 대상체에서 ANGPTL3의 발현을 억제하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 대상체는 인간이다.
일 구현예에서, dsRNA 제제는 약 0.01mg/kg 내지 약 50mg/kg의 용량으로 대상체에게 투여된다.
일 구현예에서, dsRNA 제제는 대상체에게 피하 투여된다.
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 대상체로부터의 시료(들)에서 ANGPTL3의 수준을 추가로 결정하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 대상체 시료(들)에서의 ANGPTL3의 수준은 혈액 또는 혈청 시료(들)에서의 ANGPTL3 단백질 수준이다.
특정 구현예에서, 본 발명의 방법은 추가 치료제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 임의의 dsRNA 또는 본 발명의 임의의 약제학적 조성물 및, 선택적으로, 사용 설명서를 포함하는 키트를 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 세포에서 ANGPTL3의 발현을 억제하는 데 효과적인 양으로 본 발명의 이중 가닥 RNAi 제제와 세포를 접촉시킴으로써 세포에서 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하는 방법을 수행하기 위한 키트를 제공한다. 본 키트는 RNAi 제제 및 사용 설명서 및, 선택적으로, RNAi 제제를 대상체에게 투여하기 위한 수단을 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 본 명세서의 RNAi 제제 각각의 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 나트륨 염, 칼슘 염, 리튬 염, 칼륨 염, 암모늄 염, 마그네슘 염, 이들의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 당업자는, RNAi 제제가, 선택적으로 변형된 포스포디에이터 골격의 유리산 기 당 1 양이온 및/또는 임의의 다른 산성 변형(예를 들어, 5'-말단 포스포네이트 기)을 갖는 다중양이온 염으로서 제공될 때, 이를 이해할 것이다. 예를 들어, 길이가 "n"개 뉴클레오타이드인 올리고뉴클레오타이드는 n-1개의 선택적으로 변형된 포스포디에스테르를 함유하므로, 길이가 21개의 뉴클레오타이드인 올리고뉴클레오타이드가 최대 20개의 양이온(예를 들어, 20개의 나트륨 양이온)을 갖는 염으로서 제공될 수 있다. 유사하게, 길이가 21개의 뉴클레오타이드인 센스 가닥 및 길이가 23개의 뉴클레오타이드인 안티센스 가닥을 갖는 RNAi 제제는 최대 42개의 양이온(예를 들어, 42개의 나트륨 양이온)을 갖는 염으로서 제공될 수 있다. RNAi 제제가 또한 5'-말단 포스페이트 또는 5'-말단 비닐포스포네이트 기를 포함하는 선행하는 예에서, RNAi 제제는 최대 44개의 양이온(예를 들어, 44개의 나트륨 양이온)을 갖는 염으로서 제공될 수 있다.
도 1a 및 도 1b는 표시된 dsRNA 듀플렉스의 단일 3mg/kg 투여량을 피하 투여받은 마우스(그룹 당 n = 3)의 혈청 시료 내 인간 ANGPTL3 단백질 수준을 보여주는 그래프이다. 혈청 시료는 투여 후 7일차 또는 14일차에 수집되었다. 인간 ANGPTL3 단백질 수준이 ELISA로 결정되었다. 도 1a는 표준 편차와 함께 그룹 평균을 나타낸다. 도 1b는 표준 편차와 함께 개별 점수를 나타낸다.
도 2는 표시된 dsRNA 듀플렉스의 단일 투여량을 피하 투여받은 마우스(그룹 당 n = 3)에서의 투여 후 14일차 인간 ANGPTL3 mRNA 수준을 보여주는 그래프이다. 인간 ANGPTL3 mRNA 수준이 PBS 처리로 검출된 대조군 수준과 비교하여 도시되어 있다.
도 3은 AD-1331212, AD-1331213 또는 AD-1479372의 단일 투여량 3mg/kg 또는 10mg/kg 투여량을 피하 투여받은 시노몰구스 원숭이(그룹 당 n=3)의 혈청 내 ANGPTL3 단백질의 수준을 보여주는 그래프이다. ANGPTL3의 수준이 0일차(투여일)와 비교한 변화율로서 도시되어 있다.
본 발명은 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 유전자의 RNA 전사체의 RNA-유도 침묵 복합체(RISC)-매개 절단에 영향을 미치는 iRNA 조성물을 제공한다. 해당 유전자는 세포, 예를 들어 인간과 같은 대상체 내 세포 내에 존재할 수 있다. 이들 iRNA의 사용은 포유류에서 상응하는 유전자(ANGPTL3)의 mRNA의 표적화된 분해를 가능하게 한다.
본 발명의 iRNA는 다른 포유동물 종의 ANGPTL3 오솔로그(ortholog)에 보존된 유전자의 일부를 포함하는 인간 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 유전자를 표적으로 하도록 설계되었다. 이론에 의해 제한하고자 하는 의도 없이, 이들 iRNA의 전술한 특성 및 특이적 표적 부위 또는 특이적 변형의 조합 또는 하위조합은 본 발명의 iRNA에 개선된 효능, 안정성, 효과, 내구성 및 안전성을 부여하는 것으로 사료된다.
따라서, 본 발명은 ANGPTL3 유전자의 RNA 전사체의 RNA-유도 침묵 복합체(RISC)-매개 절단에 영향을 미치는 iRNA 조성물을 사용하여, 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)-관련 장애, 예를 들어 고지혈증 또는 고중성지방혈증과 같은 지질 대사 장애를 치료하고 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명의 iRNA는 길이가 최대 약 30개 뉴클레오타이드 이하인, 예를 들어, 길이가 19~30, 19~29, 19~28, 19~27, 19~26, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~30, 20~29, 20~28, 20~27, 20~26, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~30, 21~29, 21~28, 21~27, 21~26, 21~25, 21~24, 21~23, 또는 21~22개의 뉴클레오타이드인 영역을 갖는 RNA 가닥(안티센스 가닥)을 포함하며, 이 영역은 실질적으로 ANGPTL3 유전자의 mRNA 전사체의 적어도 일부에 상보적이다.
특정 구현예에서, 본 발명의 이중가닥 RNAi 제제의 가닥 중 하나 또는 둘 모두는 길이가 최대 66개의 뉴클레오타이드, 예를 들어 길이가 36~66, 26~36, 25~36, 31~60, 22~43, 27~53개의 뉴클레오타이드이며, 적어도 19개 연속 뉴클레오타이드의 영역은 ANGPTL3 유전자의 mRNA 전사체의 적어도 일부에 실질적으로 상보적이다. 일부 구현예에서, 더 긴 길이의 안티센스 가닥을 갖는 이러한 iRNA 제제는, 예를 들어 길이가 20~60개의 뉴클레오타이드의 제2 RNA 가닥(센스 가닥)을 포함할 수 있고, 여기서 센스 및 안티센스 가닥은 18~30개 연속 뉴클레오타이드의 듀플렉스를 형성한다.
본 발명의 iRNA의 사용은 포유류에서 상응하는 유전자(ANGPTL3 유전자)의 mRNA의 표적화된 분해를 가능하게 한다. 시험관 내 검정을 사용하여, 본 발명자들은 ANGPTL3 유전자를 표적으로 하는 iRNA가 강력하게 RNAi를 매개하여, ANGPTL3 유전자의 발현을 상당히 억제할 수 있음을 입증하였다. 따라서, 이들 iRNA를 포함하는 방법 및 조성물은 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어, 고지혈증 또는 고중성지방혈증과 같은 지질 대사 장애가 있는 대상체를 치료하는 데 유용하다.
따라서, 본 발명은 ANGPTL3 유전자의 RNA 전사체의 RNA-유도 침묵 복합체(RISC)-매개 절단에 영향을 미치는 iRNA 조성물을 사용하여, ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하거나 감소시키는 것으로 혜택을 받을 장애, 예를 들어 지질 대사 장애와 같은 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)-관련 장애, 예를 들어 고지혈증 또는 고중성지방혈증을 앓는 대상체를 치료하기 위한 방법 및 병용 요법을 제공한다.
본 발명은 또한 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하거나 감소시키는 것으로 혜택을 받을 장애, 예를 들어 고지혈증 또는 고중성지방혈증과 같은 지질 대사 장애가 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 방법을 제공한다.
다음의 상세한 설명은 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하기 위한 iRNA를 함유하는 조성물을 제조하고 사용하는 방법 뿐만 아니라 ANGPTL3 유전자의 발현의 억제 및/또는 감소로 혜택을 받을 대상체, 예를 들어 ANGPTL3-관련 장애에 취약하거나 이를 진단받은 대상체를 치료하기 위한 조성물, 용도, 및 방법 들을 개시한다.
I. 정의
본 발명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록 하기 위해, 먼저 특정 용어를 정의한다. 또한, 파라미터의 값 또는 값의 범위가 인용될 때마다, 인용된 값의 중간 값 및 범위가 또한 본 발명의 일부로 의도된다는 점에 유의해야 한다.
단수형 관사("a" 및 "an")는 본 명세서에서 관사의 문법적인 대상 중 하나 또는 하나 이상(즉, 적어도 하나)을 지칭한다. 예로서, "일 요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소, 예를 들어, 복수의 요소를 의미한다.
용어 "포함하는(including)"은 본 명세서에서 문구 "~을 포함하지만, 이에 제한되지 않는"을 의미하기 위해 사용되고 이와 상호교환적으로 사용된다.
용어 "또는"은 본 명세서에서 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 이상, 용어 "및/또는"을 의미하기 위해 사용되고 이와 상호교환적으로 사용된다. 예를 들어, "센스 가닥 또는 안티센스 가닥"은 "센스 가닥 또는 안티센스 가닥, 또는 센스 가닥 및 안티센스 가닥"으로 이해된다.
용어 "약"은 본 명세서에서 당업계의 통상적인 허용 오차 범위 내에 있음을 의미하기 위해 사용된다. 예를 들어, "약"은 평균으로부터 약 2 표준 편차로서 이해될 수 있다. 특정 구현예에서, 약은 ±10%를 의미한다. 특정 구현예에서, 약은 ± 5%를 의미한다. 약이 일련의 수 또는 범위 앞에 존재하는 경우, "약"은 일련의 또는 범위 내의 각각의 수를 수식할 수 있는 것으로 이해된다.
수 또는 일련의 수들 앞의 용어 "적어도", "초과", 또는 "이상"은 용어 "적어도"에 근접한 수, 및 문맥으로부터 분명해지듯이 논리적으로 포함될 수 있는 모든 후속 수 또는 정수를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 핵산 분자 내 뉴클레오타이드의 수는 정수이어야 한다. 예를 들어, "21개 뉴클레오타이드 핵산 분자의 적어도 19개 뉴클레오타이드"는 19, 20, 또는 21개 뉴클레오타이드가 표시된 특성을 가짐을 의미한다. 적어도가 일련의 수 또는 범위 앞에 존재하는 경우, "적어도"는 일련의 또는 범위 내의 각각의 수를 수식할 수 있는 것으로 이해한다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "미만" 또는 "이하"는 문구에 인접한 값으로 이해되고, 논리적으로 더 낮은 값 또는 정수는 문맥상 논리적으로 0에 인접한 값으로 이해한다. 예를 들어, "2개 미만의 뉴클레오타이드"의 오버행을 갖는 듀플렉스는 2, 1, 또는 0개 뉴클레오타이드 오버행을 갖는다. "미만"이 일련의 수 또는 범위 앞에 존재하는 경우, "미만"은 일련의 또는 범위 내의 수 각각을 수식할 수 있는 것으로 이해된다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 범위는 상한 및 하한 모두를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 검출 방법은 존재하는 분석물의 양이 방법의 검출 수준 미만인 결정을 포함할 수 있다.
지정된 표적 부위와 센스 또는 안티센스 가닥에 대한 뉴클레오타이드 서열 사이에 모순이 있는 경우, 지정된 서열이 우선된다.
서열과 전사체 상의 그 지정된 부위 또는 다른 서열 사이에 모순이 있는 경우, 본 명세서에 인용된 뉴클레오타이드 서열이 우선된다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "ANGPTL3"과 상호교환적으로 사용되는 "안지오포이에틴-유사 3"은 혈관신생에서 기능하는 분비된 단백질 계열의 구성원을 암호화하는 잘 알려진 유전자를 지칭한다. 주로 간에서 발현되는 암호화된 단백질은 N-말단 휘감긴-나선형 도메인-함유 사슬 및 C-말단 피브리노겐 사슬로 추가 가공된다. N-말단 사슬은 지질 대사에 중요한 한편, C-말단 사슬은 혈관신생에 관여할 수 있다. 이 유전자의 돌연변이는 가족성 저베타지방단백혈증 2형을 유발한다.
인간 ANGPTL3 mRNA 전사체의 서열은, 예를 들어, GenBank 수탁번호 GI: 452408443(NM_014495.3; 서열번호 1; 역 보체, 서열번호 2) 또는 GenBank 수탁번호 GI: 41327750(NM_014495.2; 서열번호 3; 역 보체 서열번호 4)에서 찾을 수 있다. 마우스 ANGPTL3 mRNA의 서열은, 예를 들어, GenBank 수탁번호 GI: 142388354(NM_ 013913.3; 서열번호 5; 역 보체, 서열번호 6)에서 찾을 수 있다. 랫트 ANGPTL3 mRNA의 서열은, 예를 들어, GenBank 수탁번호 GI: 68163568(NM_001025065.1; 서열번호 7; 역 보체, 서열번호 8)에서 찾을 수 있다. 게잡이 원숭이 ANGPTL3 mRNA의 서열은, 예를 들어, GenBank 수탁번호 GI: 982227663(XM_005543185.2; 서열번호 9; 역 보체, 서열번호 10)에서 찾을 수있다. 붉은털 원숭이 ANGPTL3 mRNA의 서열은, 예를 들어, GenBank 수탁번호 GI: 297278846(XM_001086114.2; 서열번호 11; 역 보체, 서열번호 12)에서 찾을 수 있다.
ANGPTL3 mRNA 서열의 추가적인 예가 공개적으로 이용 가능한 데이터베이스, 예를 들어 GenBank, UniProt, OMIM 및 마카카(Macaca) 게놈 프로젝트 웹사이트를 통해 쉽게 이용 가능하다.
ANGPTL3에 대한 추가 정보는, 예를 들어 www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/?term=ANGPTL3에서 찾을 수 있다.
전술한 GenBank 수탁번호 및 유전자 데이터베이스 번호 각각의 내용이 본 출원을 제출한 날짜를 기준으로 본원에 참조로서 통합된다.
본 명세서에서 사용된 용어 ANGPTL3은 또한 SNP 데이터베이스에 제공된 변이체를 포함하는 ANGPTL3 유전자의 변이를 지칭한다. ANGPTL3 유전자 내 수많은 서열 변이가 확인되었고, 예를 들어, NCBI dbSNP 및 UniProt에서 찾을 수 있다(예를 들어, www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/?term=ANGPTL3를 참조하며, 이의 전문이 본 출원을 제출한 날짜를 기준으로 본원에 참조로서 통합된다). ANGPTL3 유전자 내의 SNP의 비제한적인 예는 NCBI dbSNP 수탁번호 rs193064039; rs192778191; rs192764027; rs192528948; rs191931953; rs191293319; rs191171206; rs191145608; rs191086880; rs191012841; 또는 rs190255403에서 찾을 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "표적 서열"은 1차 전사 생성물의 RNA 처리 생성물인 mRNA를 포함하는 ANGPTL3 유전자의 전사 동안 형성된 mRNA 분자의 뉴클레오타이드 서열의 연속 부분을 지칭한다. 일 구현예에서, 서열의 표적 부분은 ANGPTL3 유전자의 전사 동안 형성된 mRNA 분자의 뉴클레오타이드 서열 부분에서 또는 그 부분 근처에서 iRNA-지시된 절단을 위한 기질로 작용하기에 적어도 충분히 길 것이다.
표적 서열은 길이가 약 19~36개의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 길이가 약 19~30개의 뉴클레오타이드일 수 있다. 예를 들어, 표적 서열은 길이가 약 19~30개의 뉴클레오타이드, 19~30, 19~29, 19~28, 19~27, 19~26, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~30, 20~29, 20~28, 20~27, 20~26, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~30, 21~29, 21~28, 21~27, 21~26, 21~25, 21~24, 21~23, 또는 21~22개의 뉴클레오타이드일 수 있다. 특정 구현예에서, 표적 서열은 길이가 19~23개의 뉴클레오타이드, 선택적으로 길이가 21~23개의 뉴클레오타이드이다. 위에서 언급된 범위 및 길이의 중간 범위 및 길이가 또한 본 개시내용의 일부로 고려된다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "서열을 포함하는 가닥"은 표준 뉴클레오타이드 명명법을 사용하여 지칭된 서열에 의해 기술된 뉴클레오타이드의 사슬을 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다.
"G," "C," "A," "T," 및 "U"는 일반적으로 염기로서 각각 구아닌, 시토신, 아데닌, 티미딘 및 우라실을 함유하는 뉴클레오타이드를 각각 의미한다. 그러나, 용어 "리보뉴클레오타이드" 또는 "뉴클레오타이드"는 또한 하기에 추가로 상세히 설명되는 것과 같이 변형 뉴클레오타이드, 또는 대용 대체 모이어티(예를 들어, 표 1 참조)를 지칭할 수 있음이 이해될 것이다. 통상의 기술자는 구아닌, 시토신, 아데닌, 및 우라실이 이러한 대체 모이어티를 보유하는 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드의 염기쌍 형성 특성을 실질적으로 변경하지 않고 다른 모이어티에 의해 대체될 수 있음을 잘 알고 있다. 예를 들어, 비제한적으로, 이노신을 그 염기로 포함하는 뉴클레오타이드는 아데닌, 시토신, 또는 우라실을 함유하는 뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성할 수 있다. 따라서, 우라실, 구아닌, 또는 아데닌을 함유하는 뉴클레오타이드는 본 발명에서 특징화된 dsRNA의 뉴클레오타이드 서열에서, 예를 들어 이노신을 함유하는 뉴클레오타이드에 의해 대체될 수 있다. 또 다른 예에서, 올리고뉴클레오타이드의 어느 곳에서나 아데닌 및 시토신은 각각 구아닌 및 우라실로 대체되어 표적 mRNA와 G-U 워블 염기쌍을 형성할 수 있다. 이러한 대체 모이어티를 함유하는 서열은 본 발명에서 특징화된 조성물 및 방법에 적합하다.
본 명세서에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "iRNA", "RNAi 제제", "iRNA 제제", "RNA 간섭 제제"는 본 명세서에 정의된 용어와 같은 RNA를 함유하고, RNA-유도 침묵 복합체(RISC) 경로를 통한 RNA 전사체의 표적화된 절단을 매개하는 제제를 지칭한다. iRNA는 RNA 간섭(RNAi)으로 알려진 공정을 통해 mRNA의 서열-특이적 분해를 지시한다. iRNA는 세포, 예를 들어, 포유동물 대상체와 같은 대상체 내 세포에서 ANGPTL3 유전자의 발현을 조절, 예를 들어, 억제한다.
일 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 표적 RNA 서열, 예를 들어, ANGPTL3 표적 mRNA 서열과 상호작용하여 표적 RNA의 절단을 지시하는 단일 가닥 RNA를 포함한다. 이론에 얽매이고자 하는 것 없이 세포 내로 도입된 긴 이중 가닥 RNA는 다이서(Dicer)로 알려진 III형 엔도뉴클레아제에 의해 siRNA로 분해되는 것으로 사료된다(문헌참조: Sharp 등(2001) Genes Dev. 15:485). 리보뉴클레아제 III형 효소인 다이서는 dsRNA를 특징적인 2개의 염기 3' 오버행을 갖는 19~23개 염기쌍의 짧은 간섭 dsRNA로 처리한다(문헌참조: Bernstein, 등(2001) Nature 409:363). 그 다음 siRNA는 하나 이상의 헬리카제가 siRNA 듀플렉스를 푸는 RNA-유도 침묵 복합체(RISC)로 혼입되어, 상보적 안티센스 가닥이 표적 인식을 유도할 수 있도록 한다(문헌참조: Nykanen, 등(2001) Cell 107:309). 적절한 표적 mRNA에 결합하면, RISC 내의 하나 이상의 엔도뉴클레아제는 표적을 절단하여 침묵을 유도한다(문헌참조: Elbashir, 등(2001) Genes Dev. 15:188). 따라서, 일 양태에서, 본 발명은 세포 내에서 생성되고 RISC 복합체의 형성을 촉진하여 표적 유전자, 즉, ANGPTL3 유전자의 침묵에 영향을 미치는 단일 가닥 RNA(siRNA)에 관한 것이다. 따라서, 용어 "siRNA"는 또한 전술한 것과 같은 iRNA를 지칭하기 위해 본 명세서에서 사용된다.
특정 구현예에서, RNAi 제제는 표적 mRNA를 억제하기 위해 세포 또는 유기체 내로 도입되는 단일 가닥 siRNA(ssRNAi)일 수 있다. 단일 가닥 RNAi 제제는 RISC 엔도뉴클레아제, 아르고너트(Argonaute) 2에 결합하고, 이는 이어서 표적 mRNA를 절단한다. 단일 가닥 siRNA는 일반적으로 15~30개 뉴클레오타이드이고 화학적으로 변형된다. 단일 가닥 siRNA의 설계 및 시험은 미국 특허번호 제8,101,348호 및 문헌[Lima 등, (2012) Cell 150:883~894]에 기술되어 있고, 이의 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다. 본 명세서에 기술된 임의의 안티센스 뉴클레오타이드 서열은 본 명세서에 기술된 것과 같거나 문헌[Lima 등(2012) Cell 150:883~894]에 기술된 방법에 의해 화학적으로 변형된 것과 같은 단일 가닥 siRNA으로서 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 조성물, 용도, 및 방법에 사용하기 위한 "iRNA"는 이중 가닥 RNA이고, 본 명세서에서 "이중 가닥 RNA 제제", "이중 가닥 RNA(dsRNA) 분자", "dsRNA 제제" 또는 "dsRNA"로 지칭된다. 용어 "dsRNA"는 2개의 역평행 및 실질적으로 상보적인 핵산 가닥을 포함하는 듀플렉스 구조를 갖는 리보핵산 분자의 복합체를 지칭하고, 표적 RNA, 즉, ANGPTL3 유전자에 대해 "센스" 및 "안티센스" 배향을 갖는 것으로 지칭된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNA(dsRNA)는 본 명세서에서 RNA 간섭 또는 RNAi로 지칭되는 전사후 유전자-침묵 매커니즘을 통해 표적 RNA, 예를 들어 mRNA의 분해를 촉발한다.
일반적으로, dsRNA 분자의 각 가닥의 뉴클레오타이드의 대부분은 리보뉴클레오타이드지만, 본 명세서에서 상세히 기술된 것과 같이, 각각 또는 양쪽 가닥은 또한 하나 이상의 비-리보뉴클레오타이드, 예를 들어, 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "iRNA"는 화학적 변형을 갖는 리보뉴클레오타이드를 포함할 수 있고; iRNA는 다수의 뉴클레오타이드에서 실질적인 변형을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "변형 뉴클레오타이드"는 변형 당 모이어티, 변형 뉴클레오타이드 간 결합, 또는 변형 뉴클레오염기, 또는 이의 임의의 조합을 독립적으로 갖는 뉴클레오타이드를 지칭한다. 따라서, 용어 변형 뉴클레오타이드는, 예를 들어 뉴클레오사이드 간 결합, 당 모이어티 또는 뉴클레오염기에 대한 작용기 또는 원자의 치환, 추가 또는 제거를 포괄한다. 본 발명의 제제에 사용하기에 적합한 변형은 본 명세서에 개시되거나 당업계에 공지된 모든 유형의 변형을 포함한다. siRNA 유형의 분자에 사용된 것과 같은 임의의 이러한 변형은 본 명세서 및 청구범위의 목적을 위해 "iRNA" 또는 "RNAi 제제"에 의해 포괄된다.
본 개시내용의 특정 구현예에서, 데옥시-뉴클레오타이드의 포함은 RNAi 제제 내에 존재하는 경우 변형 뉴클레오타이드를 구성하는 것으로 간주될 수 있다.
듀플렉스 영역은 RISC 경로를 통해 바람직한 표적 RNA의 특이적 분해를 허용하는 임의의 길이일 수 있고, 길이가 약 19 내지 36개의 염기쌍, 예를 들어 길이가 약 19~30개의 염기쌍, 예를 들어 길이가 약 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 또는 36개의 염기쌍, 예컨대 길이가 약 19~30, 19~29, 19~28, 19~27, 19~26, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~30, 20~29, 20~28, 20~27, 20~26, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~30, 21~29, 21~28, 21~27, 21~26, 21~25, 21~24, 21~23, 또는 21~22개의 염기쌍 범위일 수 있다. 특정 구현예에서, 듀플렉스 영역은 길이가 19~21개의 염기쌍, 예를 들어, 길이가 21개의 염기쌍이다. 위에서 언급된 범위 및 길이의 중간 범위 및 길이는 또한 본 개시내용의 일부로 고려된다.
듀플렉스 구조를 형성하는 2개의 가닥은 하나의 더 큰 RNA 분자의 상이한 부분일 수 있거나, 이들은 별개의 RNA 분자일 수 있다. 2개의 가닥이 하나의 더 큰 분자의 일부이고, 따라서 듀플렉스 구조를 형성하는 하나의 가닥의 3'-말단과 별개의 다른 가닥의 5'-말단 사이에 뉴클레오타이드의 연속된 사슬에 의해 결합되어 있는 경우, 결합 RNA 사슬은 "헤어핀 루프"로서 지칭된다. 헤어핀 루프는 적어도 하나의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 23개 이상의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 10개 이하의 뉴클레오타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 8개 이하의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 4~10개의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 4~8개의 뉴클레오타이드일 수 있다.
dsRNA의 실질적으로 상보적인 2개의 가닥이 별개의 RNA 분자에 의해 포함된 경우, 이들 분자는 그럴 필요는 없지만 공유 결합될 수 있다. 2개의 가닥이 듀플렉스 구조를 형성하는 하나의 가닥의 3'-말단과 별개의 다른 가닥의 5'-말단 사이에 뉴클레오타이드의 연속적인 사슬 이외의 수단에 의해 공유적으로 결합되어 있는 경우, 결합 구조가 "링커"로 지칭된다. RNA 가닥은 동일하거나 상이한 수의 뉴클레오타이드를 가질 수 있다. 염기쌍의 최대 수는 dsRNA의 최단 가닥에서 듀플렉스 내에 존재하는 임의의 오버행을 제외한 뉴클레오타이드의 수이다. 듀플렉스 구조 이외에, RNAi는 하나 이상의 뉴클레오타이드 오버행을 포함할 수 있다. RNAi 제제의 일 구현예에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개 뉴클레오타이드의 3' 오버행을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 2개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 뉴클레오타이드의 3' 오버행을 포함한다. 다른 구현예에서, RNAi 제제의 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개 뉴클레오타이드의 5' 오버행을 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 2개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 뉴클레오타이드의 5' 오버행을 포함한다. 또 다른 구현예에서, RNAi 제제의 하나의 가닥의 3' 및 5' 말단 둘 모두는 적어도 1개 뉴클레오타이드의 오버행을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 iRNA 제제는 dsRNA이며, 이의 각각의 가닥은 표적 RNA 서열, 예를 들어, ANGPTL3 유전자와 상호작용하여 표적 RNA의 절단을 지향하는 19~23개 뉴클레오타이드를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 표적 RNA 서열, 예를 들어, ANGPTL3 표적 mRNA 서열과 상호작용하여 표적 RNA의 절단을 지향하는 24~30개 뉴클레오타이드의 dsRNA이다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "뉴클레오타이드 오버행"은 이중 가닥 iRNA의 듀플렉스 구조로부터 돌출된 적어도 하나의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오타이드를 지칭한다. 예를 들어, dsRNA의 하나의 가닥의 3'-말단이 다른 가닥의 5'-말단을 넘어 확장되거나, 또는 그 반대의 경우에 뉴클레오타이드 오버행이 존재한다. dsRNA는 적어도 하나의 뉴클레오타이드의 오버행을 포함할 수 있고; 대안적으로, 오버행은 적어도 2개 뉴클레오타이드, 적어도 3개 뉴클레오타이드, 적어도 4개 뉴클레오타이드, 적어도 5개 뉴클레오타이드 또는 그 이상을 포함할 수 있다. 뉴클레오타이드 오버행은 데옥시뉴클레오타이드/뉴클레오사이드를 포함하는 뉴클레오타이드/뉴클레오사이드 유사체를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 오버행(들)은 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 이들의 임의의 조합 상에 있을 수 있다. 또한, 오버행의 뉴클레오타이드(들)는 dsRNA의 안티센스 또는 센스 가닥의 5'-말단, 3'-말단 또는 양쪽 말단 상에 존재할 수 있다.
일 구현예에서, dsRNA의 안티센스 가닥은 3'-말단 또는 5'-말단에서 오버행된, 1~10개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 뉴클레오타이드를 갖는다. 일 구현예에서, dsRNA의 센스 가닥은 3'-말단 또는 5'-말단에서 오버행된, 1~10개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 구현예에서, 오버행에서 하나 이상의 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드 티오포스페이트로 대체된다.
특정 구현예에서, dsRNA의 안티센스 가닥은 3'-말단 또는 5'-말단에서 오버행된, 1~10개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 0~3, 1~3, 2~4, 2~5, 4~10, 5~10 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 뉴클레오타이드를 갖는다. 일 구현예에서, dsRNA의 센스 가닥은 3'-말단 또는 5'-말단에서 오버행된, 1~10개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 구현예에서, 오버행에서 하나 이상의 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드 티오포스페이트로 대체된다.
특정 구현예에서, dsRNA의 안티센스 가닥은 3'-말단 또는 5'-말단에서 오버행된, 1~10개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 뉴클레오타이드를 갖는다. 특정 구현예에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥, 또는 둘 모두 상의 오버행은 10개 뉴클레오타이드보다 더 긴, 예를 들어, 길이가 1~30개의 뉴클레오타이드, 2~30개의 뉴클레오타이드, 10~30개의 뉴클레오타이드, 10~25개의 뉴클레오타이드, 10~20개의 뉴클레오타이드, 또는 10~15개의 뉴클레오타이드보다 연장된 길이를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥 상에 존재한다. 특정 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥의 3' 말단 상에 존재한다. 특정 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥의 5' 말단 상에 존재한다. 특정 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥 상에 존재한다. 특정 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥의 3' 말단 상에 존재한다. 특정 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥의 5' 말단 상에 존재한다. 특정 구현예에서, 연장된 오버행에서 하나 이상의 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드 티오포스페이트로 대체된다. 특정 구현예에서, 오버행은 오버행이 생리학적 조건 하에서 안정한 헤어핀 구조를 형성할 수 있도록 자체 상보적인 부분을 포함한다.
"둔화(blunt)" 또는 "둔화 말단(blunt end)"은 이중 가닥 RNA 제제의 그 말단에 짝을 형성하지 않는 뉴클레오타이드가 없음을, 즉, 뉴클레오타이드 오버행이 없음을 의미한다. "둔화 말단" 이중 가닥 RNA 제제는 그 전체 길이에 걸친 이중 가닥으로, 즉, 분자의 양 말단에 뉴클레오타이드 오버행이 없다. 본 발명의 RNAi 제제는 하나의 말단에 뉴클레오타이드 오버행이 없거나(즉, 하나의 오버행 및 하나의 둔화 말단을 갖는 제제) 어느 한 말단에 뉴클레오타이드 오버행이 없는 RNAi 제제를 포함한다. 가장 흔하게, 그러한 분자는 그 전체 길이에 걸친 이중 가닥일 것이다.
용어 "안티센스 가닥" 또는 "가이드 가닥"은 iRNA, 예를 들어, dsRNA의 가닥을 지칭하며, 이는 표적 서열, 예를 들어, ANGPTL3 mRNA에 실질적으로 상보적인 영역을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "상보성 영역"은 서열, 예를 들어 본 명세서에 정의된 것과 같은 표적 서열, 예를 들어, ANGPTL3 뉴클레오타이드 서열에 실질적으로 상보적인 안티센스 가닥 상의 영역을 지칭한다. 상보성 영역이 표적 서열에 완전히 상보적이지 않은 경우, 미스매치는 분자의 내부 또는 말단 영역에 존재할 수 있다. 일반적으로, 가장 허용되는 미스매치는 말단 영역, 예를 들어, iRNA의 5'- 또는 3'-말단의 5, 4, 또는 3개 뉴클레오타이드 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 RNA 제제는 안티센스 가닥 내에 뉴클레오타이드 미스매치를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 RNA 제제의 안티센스 가닥은 표적 mRNA와 4개 이하의 미스매치를 포함하는데, 예를 들어, 안티센스 가닥은 표적 mRNA와 4, 3, 2, 1, 또는 0개 미스매치를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 안티센스 가닥 이중 가닥 RNA 제제는 센스 가닥과 4개 이하의 미스매치를 포함하고, 예를 들어, 안티센스 가닥은 센스 가닥과 4, 3, 2, 1, 또는 0개 미스매치를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 RNA 제제는 센스 가닥 내에 뉴클레오타이드 미스매치를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 RNA 제제의 센스 가닥은 안티센스 가닥과 4개 이하의 미스매치를 포함하고, 예를 들어, 센스 가닥은 안티센스 가닥과 4, 3, 2, 1, 또는 0개 미스매치를 포함한다. 일부 구현예에서, 뉴클레오타이드 미스매치는, 예를 들어, iRNA의 3'-말단으로부터 5, 4, 3개 뉴클레오타이드 내에 존재한다. 또 다른 구현예에서, 뉴클레오타이드 미스매치는, 예를 들어, iRNA 제제의 3'-말단 뉴클레오타이드 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 미스매치(들)는 씨드 영역 내에 있지 않다.
따라서, 본 명세서에 기술된 RNAi 제제는 표적 서열에 대해 하나 이상의 미스매치를 함유할 수 있다. 일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 RNAi 제제는 3개 이하의 미스매치(즉, 3, 2, 1, 또는 0개 미스매치)를 함유한다. 일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 RNAi 제제는 2개 이하의 미스매치를 함유한다. 일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 RNAi 제제는 1개 이하의 미스매치를 함유한다. 일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 RNAi 제제는 0개의 미스매치를 함유한다. 특정 구현예에서, RNAi 제제의 안티센스 가닥이 표적 서열에 대해 미스매치를 함유하는 경우, 미스매치는 선택적으로 상보성 영역의 5'-말단 또는 3'-말단으로부터 마지막 5개 뉴클레오타이드 내에 있는 것으로 제한될 수 있다. 예를 들어, 이러한 구현예에서, 23개 뉴클레오타이드 RNAi 제제의 경우, ANGPTL3 유전자의 영역에 상보적인 가닥은 일반적으로 중앙 13개 뉴클레오타이드 내에 임의의 미스매치를 함유하지 않는다. 본 명세서에 기술된 방법 또는 당업계에 공지된 방법을 사용하여, 표적 서열에 대해 미스매치를 함유하는 RNAi 제제가 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하는 데 효과적인지를 결정할 수 있다. 특히 ANGPTL3 유전자 내 특정 상보성 영역이 집단 내 다형성 서열 변화를 갖는 것으로 알려진 경우에 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하는 데 있어서 미스매치를 갖는 RNAi 제제의 효능을 고려하는 것이 중요하다.
본 명세서에서 사용된 용어 "센스 가닥" 또는 "패신저 가닥"은 그 용어가 본 명세서에 정의된 것과 같은 안티센스 가닥의 영역에 실질적으로 상보적인 영역을 포함하는 iRNA의 가닥을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 변형되는"은 대부분 변형되지만 전부 변형되지는 않으며, 5, 4, 3, 2, 또는 1개 이하의 미변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "절단 영역"은 절단 부위에 바로 근접하여 위치하는 영역을 지칭한다. 절단 부위는 절단이 일어나는 표적 상의 부위이다. 일부 구현예에서, 절단 영역은 절단 부위의 어느 하나의 말단 상에 있고 이에 바로 인접한 3개의 염기를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 영역은 절단 부위의 어느 하나의 말단 상에 있고 이에 바로 인접한 2개의 염기를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 부위는 구체적으로 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 10 및 11에 의해 결합되는 부위에서 발생하며, 절단 영역은 뉴클레오타이드 11, 12 및 13을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 그리고 달리 명시되지 않는 한, 용어 "상보적"은 제2 뉴클레오타이드 서열과 관련하여 제1 뉴클레오타이드 서열을 설명하는 데 사용될 때, 당업자에 의해 이해될 수 있는 것과 같이, 제1 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 제2 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드와 특정한 조건 하에서 듀플렉스 구조를 혼성화하고 형성하는 능력을 지칭한다. 이러한 조건은, 예를 들어, 엄격한 조건일 수 있으며, 여기서 엄격한 조건은 다음을 포함할 수 있다: 400mM NaCl, 40mM PIPES pH 6.4, 1mM EDTA, 세척 후 12~16시간 동안 50°C 또는 70°C(문헌참조: 예를 들어, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", Sambrook, 등(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press). 유기체 내에서 직면할 수 있는 생리학적으로 관련된 조건과 같은 다른 조건들이 적용될 수 있다. 당업자는 혼성화된 뉴클레오타이드의 궁극적인 적용에 따라 2개 서열의 상보성 시험에 가장 적합한 조건들의 세트를 결정할 수 있을 것이다.
iRNA 내의, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 것과 같은 dsRNA 내의 상보적인 서열은, 하나 또는 둘 모두의 뉴클레오타이드 서열의 전체 길이에 걸쳐 제2 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드에 대한 제1 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 염기쌍 형성을 포함한다. 그러한 서열은 본 명세서에서 서로에 대해 "완전한 상보적"인 것으로 지칭될 수 있다. 그러나, 제1 서열이 본 명세서의 제2 서열과 관련하여 "실질적으로 상보적"인 것으로 언급되는 경우, 2개의 서열은 완전히 상보적일 수 있거나, 이들은 최대 30개 염기쌍의 듀플렉스에 대한 혼성화 시, 하나 이상, 그러나 일반적으로 5, 4, 3, 또는 2개 이하의 미스매칭된 염기쌍을 형성할 수 있는 한편, 이들의 궁극적인 적용, 예를 들어, 시험관 내 또는 생체 내 유전자 발현의 억제와 가장 관련된 조건 하에서 혼성화하는 능력은 유지한다. 그러나, 2개의 올리고뉴클레오타이드가 혼성화 시, 하나 이상의 단일 가닥 오버행을 형성하도록 설계된 경우, 그러한 오버행은 상보성 결정과 관련하여 미스매치로서 간주되지 않을 것이다. 예를 들어, 보다 긴 올리고뉴클레오타이드가 보다 짧은 올리고뉴클레오타이드에 완전히 상보적인 21개 뉴클레오타이드의 서열을 포함하는, 길이가 21개의 뉴클레오타이드인 하나의 올리고뉴클레오타이드 및 길이가 23개의 뉴클레오타이드인 또 다른 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 dsRNA는 본 명세서에 기술된 목적을 위해 "완전히 상보적"인 것으로 지칭될 수 있다.
본 명세서에 사용된 "상보적" 서열은 또한 혼성화하는 이들의 능력과 관련하여 위의 요건이 충족되는 한, 비-왓슨-크릭(non-Watson-Crick) 염기쌍 또는 비-천연 및 변형 뉴클레오타이드로부터 형성된 염기쌍을 포함하거나 이들로부터 전적으로 형성될 수 있다. 이러한 비-왓슨-크릭 염기쌍은 G:U 워블(Wobble) 또는 후그슈타인(Hoogsteen) 염기쌍 형성을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
이들 사용의 문맥으로부터 이해되는 것과 같이, 본 명세서의 용어 "상보적인", "완전한 상보적인", 및 "실질적으로 상보적인"은 dsRNA의 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이, 또는 2개의 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 사이, 예컨대 이중 가닥 RNA 제제의 안티센스 가닥과 표적 서열 사이의 염기 매칭과 관련해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 것과 같이, 메신저 RNA(mRNA)의 “적어도 일부에 실질적으로 상보적"인 폴리뉴클레오타이드는 관심 mRNA(예를 들어, ANGPTL3 유전자를 암호화하는 mRNA)의 연속 부분에 실질적으로 상보적인 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는 서열이 ANGPTL3 유전자를 암호화하는 mRNA의 비-중단 부분에 실질적으로 상보적인 경우 ANGPTL3 mRNA의 적어도 일부에 상보적이다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 안티센스 폴리뉴클레오타이드는 표적 ANGPTL3 서열에 완전히 상보적이다. 다른 구현예에서, 본 명세서에 개시된 안티센스 폴리뉴클레오타이드는 표적 ANGPTL3 서열에 실질적으로 상보적이고, 그의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 또는 11 중 임의의 하나의 뉴클레오타이드 서열의 등가 영역, 또는 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 또는 11 중 임의의 하나의 단편에 적어도 80% 상보적인, 예컨대 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 상보적인 연속 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 안티센스 폴리뉴클레오타이드는 표적 ANGPTL3 서열의 단편에 실질적으로 상보적이고, 그의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1의 뉴클레오타이드 73-102, 73-124, 80-114, 291-320, 291-342, 307-336, 540-567, 540-589 및 545-577의 군으로부터 선택된 서열번호 1의 단편에 적어도 80% 상보적인, 예컨대 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 상보적인 연속 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 안티센스 폴리뉴클레오타이드는 표적 ANGPTL3 서열의 단편에 실질적으로 상보적이고, 그의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1의 뉴클레오타이드 80-102; 84-106; 87-109; 91-113; 92-114; 186-208; 307-329; 308-330; 310-332; 314-336; 545-567; 551-573; 553-575; 554-576; 555-577; 1133-1155; 또는 1140-1162 의 군으로부터 선택된 서열번호 1의 단편에 적어도 80% 상보적인, 예컨대 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 상보적인 연속 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 본 명세서에 개시된 안티센스 폴리뉴클레오타이드는 표적 ANGPTL3 서열에 실질적으로 상보적이고, 그의 전체 길이에 걸쳐 표 2~3 및 표7~8 중 임의의 하나의 센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나, 또는 표 2~3 및 표 7~8 중 임의의 하나의 센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나의 단편에 적어도 약 80% 상보적인, 예컨대 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 100% 상보적인 연속 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 RNAi 제제는 결국 표적 ANGPTL3 서열과 동일한 안티센스 폴리뉴클레오타이드에 실질적으로 상보적인 센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥 폴리뉴클레오타이드는 그의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 또는 12의 뉴클레오타이드 서열의 등가 영역, 또는 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 또는 12 중 임의의 하나의 단편에 적어도 80% 상보적인, 예컨대 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 100% 상보적인 연속 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 결국 표적 ANGPTL3 서열에 상보적인 안티센스 폴리뉴클레오타이드에 실질적으로 상보적인 센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥 폴리뉴클레오타이드는 그의 전체 길이에 걸쳐 표 2~3 및 표 7~8 중 임의의 하나의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나, 또는 표 2~3 및 표 7~8 중 임의의 하나의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나의 단편에 적어도 약 80% 상보적인, 예컨대 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 100% 상보적인 연속 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; AD-1331329.1; AD-1331237.1; AD-1331238.1; AD-1331240.1; AD-1331244.1; AD-1331256.1; AD-1331262.1; AD-1331264.1; AD-1331265.1; AD-1331266.1; AD-1331316.1; 및 AD-1331338.1로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 0, 1, 2, 또는 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; AD-1331329.1; AD-1331240.1; AD-1331262.1; AD-1331264.1; AD-1331265.1 및 AD-1331266.1로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 0, 1, 2, 또는 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; 및 AD-1331213.1로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 0, 1, 2, 또는 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일반적으로, "iRNA"는 화학적 변형을 갖는 리보뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 변형은 본 명세서에 개시되거나 당업계에 공지된 모든 유형의 변형을 포함할 수 있다. dsRNA 분자에 사용된 것과 같은 임의의 이러한 변형은 본 명세서 및 청구범위의 목적을 위해 "iRNA"에 의해 포괄된다.
본 개시내용의 특정 구현예에서, 데옥시-뉴클레오타이드의 포함은 RNAi 제제 내에 존재하는 경우 변형 뉴클레오타이드를 구성하는 것으로 간주될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 방법 및 조성물에 사용하기 위한 제제는 안티센스 억제 메커니즘을 통해 표적 mRNA를 억제하는 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오타이드 분자이다. 　 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오타이드 분자는 표적 mRNA 내의 서열에 상보적이다. 　 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 mRNA에 대한 염기쌍 형성 및 번역 기계를 물리적으로 방해함으로써 화학량론적 방식으로 번역을 억제할 수 있으며, 문헌[Dias, N. 등(2002) Mol Cancer Ther 1:347~355]을 참조한다. 　 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오타이드 분자는 길이가 약 14 내지 약 30개의 뉴클레오타이드일 수 있고, 표적 서열에 상보적인 서열을 가질 수 있다. 　 예를 들어, 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오타이드 분자는 본 명세서에 기술된 안티센스 서열 중 어느 하나와 적어도 약 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 인접 뉴클레오타이드인 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는, dsRNA와 같은 "iRNA와 세포를 접촉시키는 것"이라는 문구는 임의의 가능한 수단에 의해 세포를 접촉시키는 것을 포함한다. iRNA와 세포를 접촉시키는 것은 iRNA와 시험관 내 세포를 접촉시키는 것 또는 iRNA와 생체 내 세포를 접촉시키는 것을 포함한다. 접촉은 직접적으로 또는 간접적으로 수행될 수 있다. 따라서, 예를 들어, iRNA는 방법을 수행하는 개체에 의해 세포와 물리적 접촉에 놓일 수 있거나, 대안적으로, iRNA는 후속적으로 세포와 접촉하도록 허용하거나 이를 야기하는 상황에 놓일 수 있다.
시험관 내 세포와의 접촉은, 예를 들어, 세포를 iRNA로 항온처리함으로써 수행될 수 있다. 생체 내 세포와의 접촉은, 예를 들어, iRNA를 세포가 위치한 조직에 또는 이의 부근에 주사하여, 또는 iRNA를 또 다른 영역, 예를 들어, 혈류 또는 피하 공간으로 주사하여 제제가 후속적으로 접촉될 세포가 위치한 조직에 도달하도록함으로써 수행될 수 있다. 예를 들어, iRNA는 iRNA를 관심 부위, 예를 들어, 간으로 지시하는 리간드, 예를 들어, GalNAc를 함유하거나 이에 결합될 수 있다. 시험관 내 및 생체 내 접촉 방법의 조합도 가능하다. 예를 들어, 세포는 또한 iRNA와 시험관 내 접촉될 수 있고, 후속적으로 대상체로 이식될 수 있다.
특정 구현예에서, iRNA와 세포를 접촉시키는 것은 세포 내로의 취득(uptake) 또는 흡수(absorption)를 촉진하거나 초래함으로써 "iRNA를 세포 내로 도입" 또는 "전달하는 것"을 포함한다. iRNA의 흡수 또는 취득은 비보조 확산 또는 활성 세포 과정을 통해, 또는 보조제 또는 보조 장치에 의해 일어날 수 있다. iRNA의 세포 내로의 도입은 시험관 내 또는 생체 내일 수 있다. 예를 들어, 생체 내 도입을 위해, iRNA는 조직 부위로 주사되거나 전신 투여될 수 있다. 세포 내로의 시험관 내 도입은 전기천공 및 지질감염과 같은 당업계에 공지된 방법을 포함한다. 추가의 접근법은 본 명세서 하기에 기술되어 있거나 당업계에 공지되어 있다.
용어 "지질 나노입자" 또는 "LNP"는 핵산 분자, 예를 들어, iRNA 또는 iRNA가 전사되는 플라스미드와 같은 약제학적 활성 분자를 캡슐화하는 지질 층을 포함하는 소포이다. LNP는, 예를 들어, 미국 특허번호 제6,858,225호, 제6,815,432호, 제8,158,601호 및 제8,058,069호에 기술되어 있고, 이의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "대상체"는 영장류(예컨대, 인간, 비-인간 영장류, 예를 들어, 원숭이 및 침팬지), 비-영장류(예컨대, 소, 돼지, 말, 염소, 토끼, 양, 햄스터, 기니피그, 고양이, 개, 랫트 또는 마우스), 또는 내인성으로 또는 이종성으로 표적 유전자를 발현하는 조류를 포함하는 포유류와 같은 동물이다. 일 구현예에서, 대상체는 인간, 예컨대 ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 질환 또는 장애를 치료받거나 평가받는 인간, ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 질환 또는 장애의 위험이 있는 인간; ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 질환 또는 장애가 있는 인간; 또는 본 명세서에 기술된 ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 질환 또는 장애를 치료받는 인간이다. 일부 구현예에서, 대상체는 여성 인간이다. 다른 구현예에서, 대상체는 남성 인간이다. 일 구현예에서, 대상체는 성인 대상체이다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 소아 대상체이다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 유익하거나 바람직한 결과, 예컨대 대상체에서 ANGPTL3-관련 장애의 적어도 하나의 징후 또는 증상을 감소시키는 것을 지칭한다. 또한 치료는 원하지 않는 ANGPTL3 발현과 관련된 하나 이상의 징후 또는 증상의 감소; 원하지 않는 ANGPTL3 활성화 또는 안정화의 정도의 감소; 원하지 않는 ANGPTL3 활성화 또는 안정화의 완화 또는 경감을 포함한다. "치료"는 또한 치료의 부재 하에 예상되는 생존률과 비교하여 생존률을 연장시키는 것을 의미할 수 있다. 대상체의 ANGPTL3 수준 또는 질환 마커 또는 증상의 문맥에서 용어 "낮추다"는 그러한 수준의 통계적으로 유의미한 감소를 지칭한다. 감소는, 예를 들어, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, %, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상일 수 있다. 특정 구현예에서, 감소는 적어도 20%이다. 특정 구현예에서, 감소는 질환 마커, 예를 들어, 단백질 또는 유전자 발현 수준에서 적어도 50%이다. 대상체의 ANGPTL3 수준의 문맥에서 "낮추다"는 그러한 장애가 없는 개체에 대한 정상 범위 내에 있는 것으로서 허용되는 수준으로의 감소이다. 특정 구현예에서, "낮추다"는 질환을 앓고 있는 대상체에 대한 마커 또는 증상의 수준과 개체에 대한 정상 범위 내에서 허용되는 수준 사이의 차이의 감소, 예를 들어 비만인 개체와 정상 범위 내에서 허용되는 체중을 갖는 개체 사이 체중의 감소 수준이다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 질환, 장애 또는 이의 병태가 ANGPTL3 유전자의 발현의 감소에 의해 치료되거나 완화되는 것과 관련하여 사용될 때, "예방" 또는 "예방하는"은 대상체가 이러한 질환, 장애 또는 병태와 관련된 증상, 예를 들어 높은 중성지방 수준 또는 발진성 황색종과 같은 원하지 않거나 과도한 ANGPTL3 발현의 증상을 발병할 가능성의 감소를 지칭한다. 높은 중성지방 수치 또는 발진성 황색종이 발생할 가능성은, 예를 들어 높은 중성지방 수치 또는 발진성 황색종에 대한 하나 이상의 위험 인자를 갖는 개체가 높은 중성지방 수치 또는 발진성 황색종을 발생시키지 못하거나 높은 중성지방 수치 또는 발진성 황색종을 동일한 위험 인자를 가지며 본 명세서에 기술된 것과 같은 치료를 받지 않은 집단과 비교하여 더 낮은 중증도로 발생시키는 경우에 감소된다. 질환, 장애 또는 병태 발생의 실패 또는 그러한 질환, 장애 또는 병태와 관련된 증상의 발생 감소(예를 들어, 이러한 질환 또는 장애에 대한 임상적으로 허용되는 스케일에서 적어도 약 10% 감소, 또는 지연된 증상의 지연된 발현(예를 들어, 며칠, 몇 주, 몇 달 또는 몇 년)는 효과적인 예방으로 간주된다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "혈청 지질"은 혈액 내에 존재하는 임의의 주요 지질을 지칭한다. 혈청 지질은 유리 형태로 또는 단백질 복합체, 예를 들어 지질단백질 복합체의 일부로서 혈액 내에 존재할 수 있다. 혈청 지질의 비제한적인 예는 총 콜레스테롤(TG), 저밀도 지질단백질 콜레스테롤(LDL-C), 고밀도 지질단백질 콜레스테롤(HDL-C), 초저밀도 지질단백질 콜레스테롤(VLDL-C) 및 중간 밀도 지질단백질 콜레스테롤(IDL-C)과 같은 중성지방 및 콜레스테롤을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "안지오포이에틴-유사 3-관련 질환" 또는 "ANGPTL3-관련 질환"은 ANGPTL3 유전자 발현 또는 ANGPTL3 단백질 생산에 의해 야기되거나 이와 관련된 질환 또는 장애이다. 용어 "ANGPTL3-관련 질환"은 ANGPTL3 유전자 발현, 복제 또는 단백질 활성의 감소로 혜택을 받을 수 있는 질환, 장애 또는 병태를 포함한다. 일부 구현예에서, ANGPTL3-관련 질환은 지질 대사 장애이다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "지질 대사 장애"는 지질 대사의 장애와 관련되거나 이에 의해 야기되는 임의의 장애를 지칭한다. 예를 들어, 이 용어는 고지혈증으로 이어질 수 있는 임의의 장애, 질환 또는 병태, 또는 혈액 내 임의의 또는 모든 지질 및/또는 지질단백질 수준의 비정상적인 상승을 특징으로 하는 병태를 포함한다. 이 용어는, 가족성 고중성지방혈증, 가족성 부분 지방이영양증 1형(FPLD1)과 같은 유전적 장애, 또는 질환, 장애 또는 병태(예를 들어, 신부전), 식이요법, 또는 특정 약물의 섭취의 결과로서 (예를 들어, AIDS 또는 HIV 치료를 위해 사용된, 예를 들어, 고활성 항레트로바이러스 요법(HAART))의 결과로서) 유발된 또는 얻게된 장애와 같은 유발된 또는 후전적 장애를 지칭한다. 예시적인 지질 대사 장애는 동맥경화증, 이상지질혈증, 고중성지방혈증(약물-유발성 고중성지방혈증, 이뇨제-유발성 고중성지방혈증, 알코올-유발성 고중성지방혈증, β-아드레날린 차단제-유발성 고중성지방혈증, 에스트로겐-유발성 고중성지방혈증, 글루코코르티코이드-유발성 고중성지방혈증, 레티노이드-유발성 고중성지방혈증, 시메티딘-유발성 고중성지방혈증 및 가족성 고중성지방혈증), 고중성지방혈증과 관련된 급성 췌장염, 킬로미크론 증후군, 가족성 킬로미크론혈증, Apo-E 결핍 또는 내성, LPL 결핍 또는 활동 저하, 고지혈증(가족성 복합 고지혈증 포함), 고콜레스테롤혈증, 고콜레스테롤혈증과 관련된 통풍, 황색종증(피하 콜레스테롤 침전물), 이종 LPL 결핍을 동반한 고지혈증 및 높은 LDL 및 이종 LPL 결핍을 동반한 고지혈증을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 정의된 것과 같이, 지질 대사 장애와 관련된 심혈관 질환 또한 "지질 대사 장애"로 간주된다. 이러한 질환에는 관상동맥 질환(허혈성 심장 질환이라고도 함), 관상동맥 질환과 관련된 염증, 재협착증, 말초혈관질환 및 뇌졸중이 포함될 수 있다.
본 명세서에서 정의된 것과 같이, 체중과 관련된 장애 또한 "지질 대사 장애"로 간주된다. 이러한 장애에는, 비만, 대사 증후군의 독립적인 구성요소(예를 들어, 복부 비만, FBG/당뇨병 전단계/당뇨병, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증 및 고혈압), 갑상선기능저하증, 요독증 및 체중 증가(급속한 체중 증가 포함), 체중 감소, 체중 감소의 유지 또는 체중 감소 후 체중 회복의 위험과 관련된 기타 병태를 포함하는 대사 증후군이 포함될 수 있다.
혈당 장애는 본 명세서에서 정의된 것과 같이, "지질 대사 장애"로 추가적으로 간주된다. 이러한 장애에는 인슐린 저항성과 관련된 당뇨병, 고혈압 및 다낭성 난소 증후군이 포함될 수 있다. 지질 대사의 다른 예시적인 장애에는 신장 이식, 신증후군, 쿠싱 증후군, 말단비대증, 전신성 홍반루푸스, 디글로불린혈증, 지방이영양증, 글리코겐증 I형 및 애디슨병이 포함될 수도 있다.
본 명세서에서 사용된 "치료적 유효량"은 ANGPTL3-관련 질환을 앓고 있는 대상체에 투여되었을 때, (예를 들어, 기존 질환 또는 질환의 하나 이상의 증상을 감소, 완화 또는 유지함으로써) 질환의 치료를 수행하기에 충분한 RNAi 제제의 양을 포함하는 것으로 의도된다. "치료적 유효량"은 RNAi 제제, 제제가 투여되는 방식, 질환 및 그 중증도 및 치료 받을 대상체의 병력, 연령, 체중, 가족력, 유전적 구성, 경우에 따라 선행된 또는 병용되는 치료의 유형 및 기타 개별 특징에 따라 달라질 수 있다.
본 명세서에서 사용된 "예방학적 유효량"은 ANGPTL3-관련 장애를 앓고 있는 대상체에 투여되었을 때, 질환 또는 질환의 하나 이상의 증상을 예방하거나 완화시키기에 충분한 RNAi 제제의 양을 포함하는 것으로 의도된다. 질환의 완화는 질환 과정을 서행시키거나 후기-발병 질환의 중증도를 감소시키는 것을 포함한다. "예방학적 유효량"은 RNAi 제제, 제제가 투여되는 방식, 질환의 위험 정도 및 치료 받을 환자의 병력, 연령, 체중, 가족력, 유전적 구성, 경우에 따라 선행된 또는 병용되는 치료의 유형 및 기타 개별 특징에 따라 달라질 수 있다.
"치료적-유효량" 또는 "예방학적 유효량"은 또한 합리적인 이득/위험 비율로 임의의 치료에 적용 가능한 일부 바람직한 효과를 생성하는 RNAi 제제의 양을 포함한다. 본 발명의 방법에 사용되는 iRNA는 그러한 치료에 적용 가능한 합리적인 이득/위험 비율을 생성하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다.
문구 "약제학적으로 허용 가능한"은 본 명세서에서 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제나 합병증 없이 인간 대상체 및 동물 대상체의 조직과의 접촉에 사용하기에 적합하며, 합리적인 이득/위험 비율에 상응하는 화합물(염을 포함), 물질, 조성물 또는 투여 형태를 지칭하기 위해 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 문구 "약제학적으로-허용 가능한 캐리어"는 대상 화합물을 하나의 기관 또는 신체의 한 부분에서 또 다른 기관 또는 신체의 다른 부분으로 전달하거나 운반하는 데 관여하는, 약제학적으로-허용 가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 제조 보조제(예를 들어, 윤활제, 탈크 마그네슘, 칼슘 또는 아연 스테아레이트 또는 스테아르산), 또는 용매 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 캐리어는 제형의 다른 성분과 호환성이며 치료 받는 대상체에게 해를 끼치지 않는다는 관점에서 "허용 가능"해야만 한다. 이러한 캐리어는 당업계에 공지되어 있다. 약제학적으로 허용 가능한 캐리어는 주사에 의한 투여를 위한 캐리어를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "시료"는 대상체로부터 분리된 유사한 체액, 세포 또는 조직뿐만 아니라 대상체 내에 존재하는 체액, 세포 또는 조직의 집합체를 포함한다. 생물학적 유체의 예는 혈액, 혈청 및 장액, 혈장, 뇌척수액, 안액, 림프, 소변, 타액 등을 포함한다. 조직 시료는 조직, 기관, 또는 국소 영역으로부터의 시료를 포함할 수 있다. 예를 들어, 시료는 특정 기관, 기관의 일부 또는 해당 기관 내의 체액 또는 세포로부터 유래할 수 있다. 특정 구현예에서, 시료는 간(예를 들어, 전체 간 또는 간의 특정 부문 또는 예를 들어, 간세포와 같은 간 내 특정 유형의 세포)으로부터 유래할 수 있다. 일부 구현예에서, "대상체로부터 유래된 시료"는 대상체로부터 수득된 소변을 지칭한다. "대상체로부터 유래된 시료"는 대상체로부터의 혈액 또는 혈액 유래 혈청 또는 혈장을 지칭할 수 있다.
II. 본 발명의 iRNA
본 발명은 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하는 iRNA를 제공한다. 특정 구현예에서, iRNA는 대상체, 예를 들어 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어, 지질 대상 장애, 예를 들어 고지혈증 또는 고중성지방혈증을 발생시키기 쉬운 인간과 같은 포유 동물 내 세포와 같은 세포에서 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 분자를 포함한다. dsRNAi 제제는 ANGPTL3 유전자의 발현에서 형성된 mRNA의 적어도 일부에 상보적인 상보성 영역을 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 상보성 영역은 길이가 약 19~30개의 뉴클레오타이드(예를 들어, 길이가 약 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 또는 19개의 뉴클레오타이드)이다.
예를 들어, PCR 또는 분지형 DNA(bDNA) 기반 방법에 의해, 또는, 예를 들어, 웨스턴 블롯팅 또는 유동 세포측정 기술을 사용한 면역형광 분석과 같은 단백질 기반 방법에 의한 검정에 따라, ANGPTL3 유전자를 발현하는 세포와의 접촉 시, iRNA는 ANGPTL3 유전자(예를 들어, 인간, 영장류, 비-영장류, 또는 랫츠 ANGPTL3 유전자)의 발현을 적어도 약 50%만큼 억제한다. 특정 구현예에서, 발현의 억제는 본 명세서에 제공된 적절한 유기체 세포주에서 본 명세서의 예에 제공된 qPCR 방법에 의해, 예를 들어, 10nM 농도의 siRNA를 사용하여 결정된다. 특정 구현예에서, 생체 내 발현의 억제는 인간 유전자를 발현하는 설치류, 예를 들어, 인간 표적 유전자를 발현하는 마우스 또는 AAV-감염 마우스 내 인간 유전자의 녹다운에 의해, 예를 들어, RNA 발현 최하점에서, 예를 들어, 3mg/kg의 단일 투여량으로 투여될 때 결정된다.
dsRNA는 상보적이고, dsRNA가 사용될 조건 하에서 듀플렉스 구조를 형성하기 위해 혼성화하는 2개의 RNA 가닥을 포함한다. dsRNA의 하나의 가닥(안티센스 가닥)은 표적 서열과 실질적으로 상보적이고, 일반적으로 완전히 상보적인 상보성 영역을 포함한다. 표적 서열은 ANGPTL3 유전자의 발현 동안에 형성된 mRNA의 서열로부터 유래될 수 있다. 다른 가닥(센스 가닥)은 안티센스 가닥에 상보적인 영역을 포함하여, 2개의 가닥은 적합한 조건 하에서 조합되는 경우 혼성화하여 듀플렉스 구조를 형성한다. 본 명세서의 다른 곳에 기술되고 당업계에 공지된 것과 같이, dsRNA의 상보적 서열은 별개의 올리고뉴클레오타이드 상에 존재하는 것과는 달리, 단일 핵산 분자의 자체-상보적 영역으로서 또한 함유될 수 있다.
일반적으로, 듀플렉스 구조는 길이가 15 내지 30개의 염기쌍, 예를 들어 길이가 15~29, 15~28, 15~27, 15~26, 15~25, 15~24, 15~23, 15~22, 15~21, 15~20, 15~19, 15~18, 15~17, 18~30, 18~29, 18~28, 18~27, 18~26, 18~25, 18~24, 18~23, 18~22, 18~21, 18~20, 19~30, 19~29, 19~28, 19~27, 19~26, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~30, 20~29, 20~28, 20~27, 20~26, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~30, 21~29, 21~28, 21~27, 21~26, 21~25, 21~24, 21~23, 또는 21-22개의 염기쌍이다. 특정 구현예에서, 듀플렉스 구조는 길이가 18 내지 25개의 염기쌍, 예를 들어, 길이가 18~25, 18~24, 18~23, 18~22, 18~21, 18~20, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~25, 21~24, 21~23, 21~22, 22~25, 22~24, 22~23, 23~25, 23~24 또는 24~25개의 염기쌍, 예를 들어, 길이가 19~21개의 염기쌍이다. 위에서 언급된 범위 및 길이의 중간 범위 및 길이는 또한 본 개시내용의 일부로 고려된다.
유사하게, 표적 서열에 대한 상보성 영역은 길이가 15 내지 30개의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 길이가 15~29, 15~28, 15~27, 15~26, 15~25, 15~24, 15~23, 15~22, 15~21, 15~20, 15~19, 15~18, 15~17, 18~30, 18~29, 18~28, 18~27, 18~26, 18~25, 18~24, 18~23, 18~22, 18~21, 18~20, 19~30, 19~29, 19~28, 19~27, 19~26, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~30, 20~29, 20~28, 20~27, 20~26, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~30, 21~29, 21~28, 21~27, 21~26, 21~25, 21~24, 21~23, 또는 21~22개의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 길이가 19~23개의 뉴클레오타이드 또는 길이가 21~23개의 뉴클레오타이드이다. 위에서 언급된 범위 및 길이의 중간 범위 및 길이는 또한 본 개시내용의 일부로 고려된다.
일부 구현예에서, 듀플렉스 구조는 길이가 19 내지 30개의 염기쌍이다. 유사하게, 표적 서열에 대한 상보성 영역은 길이가 19 내지 30개의 뉴클레오타이드이다.
일부 구현예에서, dsRNA는 길이가 약 19 내지 약 23개의 뉴클레오타이드, 또는 길이가 약 25 내지 약 30개의 뉴클레오타이드이다. 일반적으로, dsRNA는 다이서 효소에 대한 기질로서 작용하기에 충분히 길다. 예를 들어, 길이가 약 21~23개의 뉴클레오타이드보다 긴 dsRNA가 다이서에 대한 기질로 작용할 수 있다는 것이 당업계에 널리 공지되어 있다. 당업자가 또한 인지하는 것과 같이, 절단을 위해 표적화된 RNA의 영역은 가장 흔히 보다 큰 RNA 분자, 종종 mRNA 분자의 일부일 것이다. 관련되는 경우, mRNA 표적의 "일부"는 그것이 RNAi-지시된 절단(즉, RISC 경로를 통한 절단)을 위한 기질이 되도록 하기에 충분한 길이의 mRNA 표적의 연속 서열이다.
당업자는 또한 듀플렉스 영역, 예를 들어, 약 19 내지 약 30개 염기쌍, 예를 들어, 약 19~30, 19~29, 19~28, 19~27, 19~26, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~30, 20~29, 20~28, 20~27, 20~26, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~30, 21~29, 21~28, 21~27, 21~26, 21~25, 21~24, 21~23, 또는 21~22개 염기쌍의 듀플렉스 영역이 dsRNA의 주요 기능적 부분임을 인지할 것이다. 따라서, 일 구현예에서, 절단을 위해 원하는 RNA를 표적으로 하는, 예를 들어, 15~30개 염기쌍의 기능성 듀플렉스로 가공되는 정도로, RNA 분자 또는 30개 초과의 염기쌍의 듀플렉스 영역을 갖는 RNA 분자의 복합체는 dsRNA이다. 따라서, 당업자는 일 구현예에서, miRNA가 dsRNA임을 인지할 것이다. 또 다른 구현예에서, dsRNA는 자연적으로 발생하는 miRNA가 아니다. 또 다른 구현예에서, ANGPTL3 유전자 발현을 표적으로 하는데 유용한 iRNA 제제는 더 큰 dsRNA의 절단에 의해 표적 세포에서 생성되지 않는다.
본 명세서에 기술된 dsRNA는 하나 이상의 단일 가닥 뉴클레오타이드 오버행, 예를 들어, 1~4, 2~4, 1~3, 2~3, 1, 2, 3, 또는 4개 뉴클레오타이드를 추가로 포함할 수 있다. 적어도 하나의 뉴클레오타이드 오버행을 갖는 dsRNA는 이들의 둔화-말단 대응체에 비해 우수한 억제 특성을 가질 수 있다. 뉴클레오타이드 오버행은 데옥시뉴클레오타이드/뉴클레오사이드를 포함하는 뉴클레오타이드/뉴클레오사이드 유사체를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 오버행(들)은 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 이들의 임의의 조합 상에 있을 수 있다. 또한, 오버행의 뉴클레오타이드(들)는 dsRNA의 안티센스 또는 센스 가닥의 5'-말단, 3'-말단 또는 양쪽 말단 상에 존재할 수 있다.
dsRNA는 당업계에 공지된 표준 방법에 의해 합성될 수 있다. 본 발명의 이중 가닥 RNAi 화합물은 2단계 과정을 사용하여 제조될 수 있다. 첫번째로, 이중 가닥 RNA 분자의 개별 가닥은 별도로 제조된다. 이어서, 성분 가닥이 어닐링된다. siRNA 화합물의 개별 가닥은 용액상 또는 고체상 유기 합성 또는 둘 모두를 사용하여 제조될 수 있다. 유기 합성은 비천연 또는 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 가닥이 용이하게 제조될 수 있다는 이점을 제공한다. 유사하게, 본 발명의 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드는 용액상 또는 고체상 유기 합성 또는 둘 모두를 사용하여 제조될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명의 dsRNA는 적어도 2개의 뉴클레오타이드 서열, 센스 서열 및 안티센스 서열을 포함한다. 센스 가닥은 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나에 제공된 서열 군으로부터 선택되고, 센스 가닥의 상응하는 안티센스 가닥은 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나의 서열 군으로부터 선택된다. 본 양태에서, 2개의 서열 중 하나는 2개의 서열 중 다른 하나에 상보적이고, 서열 중 하나는 ANGPTL3 유전자의 발현에서 생성된 mRNA의 서열에 실질적으로 상보적이다. 이와 같이, 본 양태에서, dsRNA는 2개의 올리고뉴클레오타이드를 포함할 것이고, 여기서 하나의 올리고뉴클레오타이드는 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나에서 센스 가닥으로서 기술되고, 제2 올리고뉴클레오타이드는 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나에서 센스 가닥의 상응하는 안티센스 가닥으로서 기술된다.
특정 구현예에서, dsRNA의 실질적으로 상보적인 서열은 별개의 올리고뉴클레오타이드 상에 함유된다. 또 다른 구현예에서, dsRNA의 실질적으로 상보적인 서열은 단일 올리고뉴클레오타이드 상에 함유된다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; AD-1331329.1; AD-1331237.1; AD-1331238.1; AD-1331240.1; AD-1331244.1; AD-1331256.1; AD-1331262.1; AD-1331264.1; AD-1331265.1; AD-1331266.1; AD-1331316.1; 및 AD-1331338.1로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 0, 1, 2, 또는 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; AD-1331329.1; AD-1331240.1; AD-1331262.1; AD-1331264.1; AD-1331265.1 및 AD-1331266.1로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 0, 1, 2, 또는 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
일 구현예에서, 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; 및 AD-1331213.1로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나와 0, 1, 2, 또는 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 연속 뉴클레오타이드를 포함한다.
예를 들어 표 3의 서열이 변형되거나 접합된 서열로서 기술되지 않았지만, 본 발명의 iRNA의 RNA, 예를 들어, 본 발명의 dsRNA는 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나에 제시된 서열 중 어느 하나를 포함할 수 있으며, 이는 변형되지 않거나, 접합되지 않거나, 또는 본 명세서에 기술된 것과 상이하게 접합된 것임을 이해할 것이다. 다시 말해, 본 발명은 변형되지 않거나, 접합되지 않거나, 본 명세서에 기술된 것과 같이 변형되거나, 또는 접합된 표 2~3 및 표 7~8의 dsRNA를 포함한다.
당업자는 약 20 내지 23개 염기쌍, 예를 들어, 21개 염기쌍의 듀플렉스 구조를 갖는 dsRNA가 RNA 간섭을 유도하는데 특히 효과적인 것으로 환영받고 있음을 잘 알고 있다(문헌참조: Elbashir 등, EMBO 2001, 20:6877~6888). 그러나, 다른 당업자들은 더 짧거나 더 긴 RNA 듀플렉스 구조 또한 효과적일 수 있음을 밝혀냈다(문헌참조: Chu 및 Rana(2007) RNA 14:1714~1719; Kim 등(2005) Nat Biotech 23:222~226). 전술된 구현예에서, 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나에 제공된 올리고뉴클레오타이드 서열의 특성에 의해, 본 명세서에 기술된 dsRNA는 최소 21개 뉴클레오타이드 길이의 적어도 하나의 가닥을 포함할 수 있다. 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나의 서열 중 어느 하나에서 하나 또는 양 말단 상의 단지 몇 개의 뉴클레오타이드를 뺀 것을 갖는 더 짧은 듀플렉스가 전술한 dsRNA와 비교하여 유사하게 효과적일 수 있음을 합리적으로 예상할 수 있다. 따라서, 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나의 서열 중 어느 하나로부터 유래된 적어도 19, 20개 이상의 연속 뉴클레오타이드의 서열을 갖고, ANGPTL3 유전자의 발현을 약 5, 10, 15, 20, 25, 또는 30%만큼 억제하는 이들이 능력이 전체 서열을 포함하는 dsRNA와 상이한, dsRNA가 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 고려된다.
또한, 표 2~3 및 표 7~8에 제공된 RNA는 ANGPTL3 전사체에서 RISC-매개 절단에 민감한 부위(들)를 식별한다. 이와 같이, 본 발명은 추가적으로 이들 부위 중 하나 내에서 표적으로 하는 iRNA를 특징으로 한다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, iRNA는 iRNA가 그 특정 부위 내 어느 곳에서의 전사체의 절단을 촉진시키는 경우, RNA 전사체의 특정 부위 내를 표적으로 하는 것으로 일컬어진다. 이러한 iRNA는 일반적으로 ANGPTL3 유전자에서 선택된 서열에 인접한 영역으로부터 취해진 추가 뉴클레오타이드 서열에 결합된, 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나에 제공된 서열 중 어느 하나로부터 적어도 약 19개의 연속 뉴클레오타이드를 포함할 것이다.
III. 본 발명의 변형 iRNA
특정 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 RNA, 예를 들어, dsRNA는 변형되지 않으며, 예를 들어, 당업계에 공지되고 본 명세서에 기술된 화학적 변형 또는 접합을 포함하지 않는다. 다른 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 RNA, 예를 들어, dsRNA는는 화학적으로 변형되어 안정성 또는 기타 이로운 특징을 증진시킨다. 본 발명의 특정 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 변형된다. 본 발명의 다른 구현예에서, iRNA의 모든 뉴클레오타이드 또는 iRNA의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 변형되고, 즉, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 미변형 뉴클레오타이드가 iRNA의 가닥 내에 존재한다.
본 발명에서 특징화된 핵산은 당업계에서 잘 확립된 방법, 예컨대 본원에 참조로서 통합된, 문헌["Current protocols in nucleic acid chemistry," Beaucage, S.L. 등(Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA]에 기술된 것과 같은 방법들에 의해 합성되거나 변형될 수 있다. 변형은, 예를 들어, 말단 변형, 예를 들어 5'-말단 변형(인산화, 접합, 역위 결합) 또는 3'-말단 변형(접합, DNA 뉴클레오타이드, 역위 결합, 등); 염기 변형, 예를 들어 안정화 염기, 불안정화 염기, 또는 파트너의 확장된 레퍼토리와 염기쌍을 형성하는 염기와의 대체, 염기(무염기 뉴클레오타이드), 또는 접합된 염기의 제거; 당 변형(예를 들어, 2'-위치 또는 4'-위치에서) 또는 당의 대체; 또는 포스포디에스테르 결합의 변형 또는 대체를 포함하는 골격 변형을 포함한다. 본 명세서에 기술된 구현예에 유용한 iRNA의 특정 예는 변형 골격을 함유하거나 어떠한 천연 뉴클레오타이드 간 결합을 함유하지 않는 RNA를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 변형된 골격을 갖는 RNA는 무엇보다 골격 내 인 원자를 갖지 않는 것들을 포함한다. 본 명세서의 목적을 위해서 그리고 당업계에서 때로 언급되는 것과 같이, 이들의 뉴클레오사이드 간 골격 내 인 원자를 갖지 않는 변형 RNA는 또한 올리고뉴클레오사이드인 것으로 고려될 수 있다. 일부 구현예에서, 변형 iRNA는 이의 뉴클레오사이드 간 골격 내 인 원자를 가질 것이다,
변형 RNA 골격은, 예를 들어, 포스포로티오에이트, 키랄 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬포스포트리에스테르, 메틸 및 3'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트를 포함하는 다른 알킬 포스포네이트, 포스피네이트, 3'-아미노 포스포라미데이트 및 아미노알킬포스포라미데이트를 포함하는 포스포라미데이트, 티오노포스포라미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르, 및 정상적인 3'-5' 결합을 갖는 보라노포스페이트, 이들의 2'-5'-결합 유사체, 및 인접한 뉴클레오사이드 단위의 쌍이 3'-5'에서 5'-3' 또는 2'-5'에서 5'-2'로 결합되는 역극성을 갖는 것들을 포함한다. 다양한 염, 혼합 염 및 유리산 형태가 또한 포함된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 본 발명의 dsRNA 제제는 유리산 형태로 존재한다. 본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명의 dsRNA 제제는 염 형태로 존재한다. 일 구현예에서, 본 발명의 dsRNA 제제는 나트륨 염 형태로 존재한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 dsRNA 제제가 나트륨 염 형태로 존재하는 경우, 나트륨 이온은 제제에 존재하는 실질적으로 모든 포스포디에스테르 및/또는 포스포로티오에이트 기에 대한 역이온으로서 제제에 존재한다. 실질적으로 모든 포스포디에스테르 및/또는 포스포로티오에이트 결합이 나트륨 역이온을 갖는 제제는 나트륨 역이온 없이 5, 4, 3, 2, 또는 1개 이하의 포스포디에스테르 및/또는 포스포로티오에이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 dsRNA 제제가 나트륨 염 형태로 존재하는 경우, 나트륨 이온은 제제에 존재하는 모든 포스포디에스테르 및/또는 포스포로티오에이트 기에 대한 역이온으로서 제제에 존재한다.
전술한 인-함유 결합의 제조를 교지하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허 번호 제3,687,808호; 제4,469,863호; 제4,476,301호; 제5,023,243호; 제5,177,195호; 제5,188,897호; 제5,264,423호; 제5,276,019호; 제5,278,302호; 제5,286,717호; 제5,321,131호; 제5,399,676호; 제5,405,939호; 제5,453,496호; 제5,455,233호; 제5,466,677호; 제5,476,925호; 제5,519,126호; 제5,536,821호; 제5,541,316호; 제5,550,111호; 제5,563,253호; 제5,571,799호; 제5,587,361호; 제5,625,050호; 제6,028,188호; 제6,124,445호; 제6,160,109호; 제6,169,170호; 제6,172,209호; 제6, 239,265호; 제6,277,603호; 제6,326,199호; 제6,346,614호; 제6,444,423호; 제6,531,590호; 제6,534,639호; 제6,608,035호; 제6,683,167호; 제6,858,715호; 제6,867,294호; 제6,878,805호; 제7,015,315호; 제7,041,816호; 제7,273,933호; 제7,321,029호; 및 미국 특허번호 RE39464호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이의 각각의 전문이 본원에 참조로서 통합된다.
그 안에 인 원자를 포함하지 않는 변형 RNA 골격은 단쇄 알킬 또는 시클로알킬 뉴클레오사이드 간 결합, 혼합 헤테로원자 및 알킬 또는 시클로알킬 뉴클레오사이드 간 결합, 또는 하나 이상의 단쇄 헤테로원자 또는 헤테로시클릭 뉴클레오사이드 간 결합에 의해 형성된 골격을 갖는다. 이들은 (부분적으로 뉴클레오사이드의 당 부분으로부터 형성된) 모르폴리노 결합; 실록산 골격; 설파이드, 설폭사이드 및 설폰 골격; 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격; 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격; 알켄 함유 골격; 설파메이트 골격; 메틸렌이미노 및 메틸렌하이드라지노 골격; 설포네이트 및 설폰아미드 골격; 아미드 골격을 갖는 것들; 및 혼합 N, O, S, 및 CH2 성분 부분을 갖는 기타를 포함한다.
앞서 말한 올리고뉴클레오사이드의 제조를 교지하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허번호 제5,034,506호; 제5,166,315호; 제5,185,444호; 제5,214,134호; 제5,216,141호; 제5,235,033호; 제5,64,562호; 제5,264,564호; 제5,405,938호; 제5,434,257호; 제5,466,677호; 제5,470,967호; 제5,489,677호; 제5,541,307호; 제5,561,225호; 제5,596,086호; 제5,602,240호; 제5,608,046호; 제5,610,289호; 제5,618,704호; 제5,623,070호; 제5,663,312호; 제5,633,360호; 제5,677,437호; 및 제5,677,439호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
적합한 RNA 모사체가 본 명세서에 제공된 iRNA에 사용하기 위해 고려되며, 뉴클레오타이드 단위의 당 및 뉴클레오사이드 간 결합, 즉, 골격 둘 모두가 신규 기로 대체된다. 염기 단위는 적당한 핵산 표적 화합물과의 혼성화를 위해 유지된다. 우수한 혼성화 특성을 갖는 것으로 나타난 RNA 모사체인 하나의 그러한 올리고머 화합물은 펩타이드 핵산(PNA)으로서 지칭된다. PNA 화합물에서, RNA의 당 골격은 아미드 함유 골격, 특히 아미노에틸글리신 골격으로 대체된다. 뉴클레오염기는 보유되고 직접적으로 또는 간접적으로 골격의 아미드 부분의 아자 질소 원자에 결합된다. PNA 화합물의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허번호 제5,539,082호; 제5,714,331호; 및 제5,719,262호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다. 본 발명의 iRNA에 사용하기에 적합한 추가 PNA 화합물이, 예를 들어, 문헌[Nielsen 등, Science, 1991, 254, 1497~1500]에 기술되어 있다.
본 발명에서 특징화된 일부 구현예는 포스포로티오에이트 골격을 갖는 RNA 및 헤테로원자 골격을 갖는 올리고뉴클레오사이드, 그리고 특히 위에서 참조된 미국 특허번호 제5,489,677호의--CH2--NH--CH2-, --CH2--N(CH3)--O--CH2--[메틸렌(메틸이미노) 또는 MMI 골격으로 공지됨], --CH2--O--N(CH3)--CH2--, --CH2--N(CH3)--N(CH3)--CH2-- 및 --N(CH3)--CH2--CH2-- 및 위에서 참조된 미국 특허번호 제5,602,240호의 아미드 골격을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 특징화된 RNA는 위에서 참조된 미국 특허번호 제5,034,506호의 모르폴리노 골격 구조를 갖는다. 천연 포스포디에스테르 골격은 O-P(O)(OH)-OCH2-로 나타낼 수 있다.
변형 RNA는 또한 하나 이상의 치환된 당 모이어티를 함유할 수 있다. iRNA, 예를 들어, 본 명세서에서 특징화된 dsRNA는 2'-위치에서 하기 중 하나를 포함할 수 있다: OH; F; O-, S-, 또는 N-알킬; O-, S-, 또는 N-알케닐; O-, S- 또는 N-알키닐; 또는 O-알킬-O-알킬로, 여기서 알킬, 알케닐 및 알키닐은 치환되거나 치환되지 않은 C1 내지 C10 알킬 또는 C2 내지 C10 알케닐 및 알키닐일 수 있다. 예시적인 적합한 변형은 O[(CH2)nO] mCH3, O(CH2).nOCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2) nCH3, O(CH2)nONH2, 및 O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2를 포함하고, 여기서, n 및 m은 1 내지 약 10이다. 다른 구현예에서, dsRNA는 2' 위치에서 하기 중 하나를 포함한다: C1 내지 C10 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 알크아릴, 아르알킬, O-알크아릴 또는 O-아르알킬, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알크아릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실릴, RNA 절단 군, 리포터 군, 삽입제, iRNA의 약동학 성질을 개선시키기 위한 군, 또는 iRNA의 약력학 성질을 개선시키기 위한 군, 및 유사한 성질을 갖는 기타 치환체. 일부 구현예에서, 변형은 2'-메톡시에톡시(2'-O--CH2CH2OCH3, 또한 2'-O-(2-메톡시에틸) 또는 2'-MOE로 공지됨)(문헌참조: Martin 등, Helv. Chim. Acta, 1995, 78:486~504), 즉, 알콕시-알콕시 기를 포함한다. 또 다른 예시적인 변형은 본 명세서의 하기 실시예에 기술된 것과 같은, 2'-디메틸아미노옥시에톡시, 즉, 2'-DMAOE로도 공지된 O(CH2)2ON(CH3)2 기, 및 2'-디메틸아미노에톡시에톡시(당업계에 2'-O-디메틸아미노에톡시에틸 또는 2'-DMAEOE로도 공지됨), 즉, 2'-O--CH2--O--CH2--N(CH3)2이다. 추가의 예시적인 변형은 다음을 포함한다: 5'-Me-2'-F 뉴클레오타이드, 5'-Me-2'-OMe 뉴클레오타이드, 5'-Me-2'-데옥시뉴클레오타이드(이 세 패밀리의 R 및 S 이성체 모두); 2'-알콕시알킬; 및 2'-NMA(N-메틸아세트아미드).
기타 변형은 2'-메톡시(2'-OCH3), 2'-아미노프로폭시(2'-OCH2CH2CH2NH2), 2'-플루오로(2'-F)를 포함한다. 유사한 변형은 또한 iRNA의 RNA 상의 다른 위치, 특히 3' 말단 뉴클레오타이드 상의 당의 3' 위치 또는 2'-5' 결합된 dsRNA 및 5' 말단 뉴클레오타이드의 5' 위치에서 이루어질 수 있다. iRNA는 또한 펜토푸라노실 당 대신에 시클로부틸 모이어티와 같은 당 모사체를 가질 수 있다. 이러한 변형된 당 구조의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허번호 제4,981,957호; 제5,118,800호; 제5,319,080호; 제5,359,044호; 제5,393,878호; 제5,446,137호; 제5,466,786호; 제5,514,785호; 제5,519,134호; 제5,567,811호; 제5,576,427호; 제5,591,722호; 제5,597,909호; 제5,610,300호; 제5,627,053호; 제5,639,873호; 제5,646,265호; 제5,658,873호; 제5,670,633호; 및 제5,700,920호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이 중 일부가 본 출원에 공통적으로 통합된다. 이전 문헌의 각각의 전문이 본원에 참조로서 통합된다.
iRNA는 또한 뉴클레오염기(종종 당업계에서 단순히 "염기"로서 지칭됨) 변형 또는 치환을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "미변형" 또는 "천연" 뉴클레오염기는 퓨린 염기 아데닌(A) 및 구아닌(G), 및 피리미딘 염기 티민(T), 시토신(C) 및 우라실(U)을 포함한다. 변형 뉴클레오염기는 합성 및 천연 뉴클레오염기, 예컨대 데옥시티미딘(dT), 5-메틸시토신(5-me-C), 5-하이드록시메틸 시토신, 크산틴, 하이포크산틴, 2-아미노아데닌, 6-메틸 및 아데닌 및 구아닌의 기타 알킬 유도체, 2-프로필 및 아데닌 및 구아닌의 기타 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 우라실 및 시토신, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 아날 기타 8-치환 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 기타 5-치환 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-다아자아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌을 포함한다. 추가 뉴클레오염기는 미국 특허번호 제3,687,808호에 개시된 것들, 문헌[Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008]에 개시된 것들, 문헌[The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, 페이지 858~859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990]에 개시된 것들, 문헌[Englisch 등, Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613]에 의해 개시된 것들, 및 문헌[Sanghvi, Y S., Chapter 15, dsRNA Research and Applications, 페이지 289~302, Crooke, S. T. 및 Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993]에 의해 개시된 것들을 포함한다. 이들 뉴클레오염기 중 일부는 특히 본 발명에서 특징화된 올리고머 화합물의 결합 친화도를 증가시키는 데 유용하다. 이들은 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신을 포함하는 5-치환 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 0-6 치환 퓨린을 포함한다. 5-메틸시토신 치환은 핵산 듀플렉스 안정성을 0.6~1.2°C 증가시키는 것으로 나타났으며(문헌참조: Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. 및 Lebleu, B., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276~278), 보다 특히 2'-O-메톡시에틸 당 변형과 조합될 때, 예시적인 염기 치환이다.
전술한 변형 뉴클레오염기뿐만 아니라 다른 변형 뉴클레오염기의 특정 제조를 교지하는 대표적인 미국 특허는 전술된 미국 특허번호 제3,687,808호, 제4,845,205호; 제5,130,30호; 제5,134,066호; 제5,175,273호; 제5,367,066호; 제5,432,272호; 제5,457,187호; 제5,459,255호; 제5,484,908호; 제5,502,177호; 제5,525,711호; 제5,552,540호; 제5,587,469호; 제5,594,121호, 제5,596,091호; 제5,614,617호; 제5,681,941호; 제5,750,692호; 제6,015,886호; 제6,147,200호; 제6,166,197호; 제6,222,025호; 제6,235,887호; 제6,380,368호; 제6,528,640호; 제6,639,062호; 제6,617,438호; 제7,045,610호; 제7,427,672호; 및 제7,495,088호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이의 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 RNAi 제제는 또한 하나 이상의 이환식 당 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. "이환식 당"은 인접하든 인접하지 않든, 2개의 탄소의 가교에 의해 형성된 고리에 의해 변형된 푸라노실 고리이다. "이환식 뉴클레오사이드"("BNA")는 인접하든 인접하지 않든, 당 고리의 2개의 탄소 원자의 가교에 의해 형성된 고리를 포함하는 당 모이어티를 가져 이환식 고리 시스템을 형성하는 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 가교는 당 고리의 4'-탄소 및 2'-탄소를, 선택적으로는 2'-비환식 산소 원자를 통해 결합한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 제제는 하나 이상의 잠김 핵산(LNA)을 포함할 수 있다. 잠김 핵산은 변형 리보스 모이어티를 갖는 뉴클레오타이드이고, 여기서 리보스 모이어티는 2' 및 4' 탄소를 결합하는 여분의 가교를 포함한다. 다시 말해, LNA는 4'-CH2-O-2' 가교를 포함하는 이환식 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오타이드이다. 본 구조는 3'-엔도 구조 형태에서 리보스를 효과적으로 "잠근다". siRNA로의 잠김 핵산의 첨가는 혈청에서 siRNA 안정성을 증가시키고 오프-표적 효과를 감소시키는 것으로 나타났다(문헌참조: Elmen, J. 등(2005) Nucleic Acids Research 33(1):439~447; Mook, OR. 등(2007) Mol Canc Ther 6(3):833~843; Grunweller, A. 등(2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185~3193). 본 발명의 폴리뉴클레오타이드에 사용하기 위한 이환식 뉴클레오사이드의 예는 4'와 2' 리보실 고리 원자 사이에 가교를 포함하는 뉴클레오사이드를 비제한적으로 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 안티센스 폴리뉴클레오타이드 제제는 4'에서 2'로의 가교를 포함하는 하나 이상의 이환식 뉴클레오사이드를 포함한다.
잠김 뉴클레오사이드는 구조식(입체화학 생략)으로 나타낼 수 있고,
여기서 B는 뉴클레오염기 또는 변형 뉴클레오염기이고, L은 2'-탄소를 리보오스 고리의 4'-탄소에 결합하는 결합기이다. 이러한 4′에서 2′로의 가교된 이환식 뉴클레오사이드의 예는 4′-(CH2)―O-2′ (LNA); 4′-(CH2)―S-2′; 4′-(CH2)2―O-2′ (ENA); 4′-CH(CH3)―O-2′ (또한 "제한된 에틸" 또는 "cEt"로도 지칭됨) 및 4′-CH(CH2OCH3)―O-2′ (및 이의 유사체; 예를 들어, 미국 특허번호 제7,399,845호를 참조함); 4′-C(CH3)(CH3)―O-2′(및 이의 유사체; 예를 들어, 미국 특허번호 제8,278,283호를 참조함); 4′-CH2―N(OCH3)-2′ (및 이의 유사체; 예를 들어, 미국 특허번호 제8,278,425호를 참조함); 4′-CH2―O―N(CH3)-2′ (예를 들어, 미국 공개번호 제2004/0171570호를 참조함); 4′-CH2―N(R)―O-2′, 여기서 R은 H, C1-C12 알킬, 또는 질소 보호기이고(예를 들어, 미국 특허번호 제7,427,672호를 참조함); 4′-CH2―C(H)(CH3)-2′ (문헌참조: 예를 들어, Chattopadhyaya 등, J. Org. Chem., 2009, 74, 118~134); 및 4′-CH2―C(-CH2)-2′ (및 이의 유사체; 예를 들어, 미국 특허번호 제8,278,426호를 참조함)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이전 문헌의 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
잠김 핵산 뉴클레오타이드의 제조를 교시하는 추가의 대표적인 미국 특허 및 미국 공보는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 미국 특허번호 제6,268,490호; 제6,525,191호; 제6,670,461호; 제6,770,748호; 제6,794,499호; 제6,998,484호; 제7,053,207호; 제7,034,133; 제7,084,125호; 제7,399,845호; 제7,427,672호; 제7,569,686호; 제7,741,457호; 제8,022,193호; 제8,030,467호; 제8,278,425호; 제8,278,426호; 제8,278,283호; 미국 특허 공개번호 제2008/0039618호; 및 미국 특허 공개번호 제2009/0012281호로, 이의 각각의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
예를 들어 α-L-리보푸라노스 및 β-D-리보푸라노스를 포함하는 하나 이상의 입체화학적 당 구성을 갖는 임의의 전술한 이환식 뉴클레오사이드가 제조될 수 있다(WO 99/14226를 참조함).
iRNA의 RNA는 또한 하나 이상의 제한된 에틸 뉴클레오타이드를 포함하도록 변형될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "제한된 에틸 뉴클레오타이드" 또는 "cEt"는 4'-CH(CH3)-O-2' 가교를 포함하는 이환식 당 모이어티를 포함하는 잠김 핵산이다(즉, L은 전술한 구조식에 있음). 일 구현예에서, 제한된 에틸 뉴클레오타이드는 본 명세서에서 "S-cEt"로 지칭되는 S 형태로 존재한다.
본 발명의 iRNA는 또한 하나 이상의 "형태적으로 제한된 뉴클레오타이드"("CRN")를 포함할 수 있다. CRN은 리보스의 C2' 및 C4' 탄소 또는 리보스의 C3 및 -C5' 탄소를 결합하는 링커를 갖는 뉴클레오타이드 유사체이다. CRN은 리보스 고리를 안정한 형태로 잠그고 mRNA에 대한 혼성화 친화성을 증가시킨다. 링커는 안정성과 친화성을 위한 최적의 위치에 산소를 배치하여 리보스 고리 퍼커링을 감소시키기에 충분한 길이이다.
전술된 CRN의 특정 제조를 교시하는 대표적인 공개 공보는 미국 공개번호 제2013/0190383호; 및 PCT 공개 WO 2013/036868을 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 UNA(잠김 해제된 핵산) 뉴클레오타이드인 하나 이상의 단량체를 포함한다. UNA는 잠김 해제된 비환형 핵산이고, 여기서 당의 임의의 결합은 제거되어 잠김 해제된 "당" 잔기를 형성한다. 일례에서, UNA는 또한 C1'-C4' 사이의 결합(즉, C1'과 C4' 탄소 사이의 공유 탄소-산소-탄소 결합)이 제거된 단량체를 포괄한다. 또 다른 예에서, 당의 C2'-C3' 결합(즉, C2'와 C3' 탄소 사이의 공유 탄소-탄소 결합)이 제거되었다(문헌참조: 본원에 참조로서 통합되는 Nuc. Acids Symp. Series, 52, 133~134 (2008) 및 Fluiter 등, Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039).
UNA의 제조를 교시하는 대표적인 미국 공개 공보는 미국 특허번호 제8,314,227호; 및 미국 특허 공개번호 제2013/0096289호; 제2013/0011922호; 및 제2011/0313020호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이의 각각의 전문이 본원에 참조로서 통합된다.
RNA 분자의 말단에 대한 잠재적인 안정화 변형은 N-(아세틸아미노카프로일)-4-하이드록시프롤리놀(Hyp-C6-NHAc), N-(카프로일-4-하이드록시프롤리놀(Hyp-C6), N-(아세틸-4-하이드록시프롤리놀(Hyp-NHAc), 티미딘-2'-O-데옥시티미딘(에테르), N-(아미노카프로일)-4-하이드록시프롤리놀(Hyp-C6-아미노), 2-도코사노일-우리딘-3'-포스페이트, 역 2'-데옥시-변형 리보뉴클레오타이드, 예컨대 역 dT(idT), 역 dA(idA), 및 역 무염기성 2'-데옥시리보뉴클레오타이드(iAb) 및 기타를 포함할 수 있다. 이 변형의 개시내용은 WO 2011/005861에서 찾을 수 있다.
일 실시예에서, 올리고뉴클레오타이드의 3' 또는 5' 말단 말단은 역 dT(idT), 역 dA(idA), 또는 역 무염기성 2'-데옥시리보뉴클레오타이드(iAb)와 같은 역 2'-데옥시-변형 리보뉴클레오타이드에 결합된다. 일 특정예에서, 역 2'-데옥시-변형 리보뉴클레오타이드는 본 명세서에 기술된 센스 가닥의 3' 말단과 같은 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단에 결합되고, 여기서 결합은 3'-3' 포스포디에스테르 결합 또는 3'-3'-포스포로티오에이트 결합을 통해 이루어진다.
또 다른 실시예에서, 센스 가닥의 3' 말단은 3'-3'-포스포로티오에이트 결합을 통해 역 무염기성 리보뉴클레오타이드(iAb)에 결합된다. 또 다른 실시예에서, 센스 가닥의 3' 말단은 3'-3'-포스포로티오에이트 결합을 통해 역 dA(idA)에 결합된다.
하나의 특정 구현예에서, 역 2'-데옥시-변형 리보뉴클레오타이드는 본 명세서에 기술된 센스 가닥의 3' 말단과 같은 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단에 결합되고, 여기서 결합은 3'-3' 포스포디에스테르 결합 또는 3'-3'-포스포로티오에이트 결합을 통해 이루어진다.
또 다른 실시예에서, 센스 가닥의 3'-말단 뉴클레오타이드는 역 dA(idA)이고, 3'-3'-결합(예를 들어, 3'-3'-포스포로티오에이트 결합)을 통해 선행 뉴클레오타이드에 결합된다.
본 발명의 iRNA의 뉴클레오타이드의 기타 변형은 iRNA의 안티센스 가닥 상의 5' 포스페이트 또는 5' 포스페이트 모방체, 예를 들어, 5'-말단 포스페이트 또는 포스페이트 모방체를 포함한다. 적합한 포스페이트 모방체는, 예를 들어, 미국 공개번호 제2012/0157511호에 개시되어 있고, 이의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
A. 본 발명의 모티프를 포함하는 변형 iRNA
본 발명의 특정 양태에서, 본 발명의 이중 가닥 RNA 제제는, 예를 들어, 이의 각각의 전문이 본원에 참조로서 통합된, WO2013/075035에 개시된 것과 같은 화학적 변형을 갖는 제제를 포함한다. 본 명세서 및 WO2013/075035에서 알 수 있듯이, 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 하나 이상의 모티프는 특히 절단 부위에서 또는 이의 부근에서 dsRNAi 제제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥으로 도입될 수 있다. 일부 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 다르게는 완전히 변형될 수 있다. 이들 모티프의 도입은 경우에 따라 센스 또는 안티센스 가닥의 변형 패턴을 방해한다. dsRNAi 제제는 예를 들어, 센스 가닥 상에서 선택적으로 GalNAc 유도체 리간드와 접합될 수 있다.
보다 구체적으로, 이중 가닥 RNA 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 dsRNAi 제제의 적어도 하나의 가닥의 절단 부위의 또는 그 부근의 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 동일한 변형의 하나 이상의 모티프를 갖도록 완전히 변형될 때, dsRNAi 제제의 유전자 침묵 활성이 관찰되었다.
따라서, 본 발명은 표적 유전자(즉, ANGPTL3 유전자)의 발현을 생체 내 억제할 수 있는 이중 가닥 RNA 제제를 제공한다. RNAi 제제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다. RNAi 제제의 각각의 가닥은, 예를 들어, 길이가 17~30개의 뉴클레오타이드, 길이가 25~30개의 뉴클레오타이드, 길이가 27~30개의 뉴클레오타이드, 길이가 19~25개의 뉴클레오타이드, 길이가 19~23개의 뉴클레오타이드, 길이가 19~21개의 뉴클레오타이드, 길이가 21~25개의 뉴클레오타이드, 또는 길이가 21~23개의 뉴클레오타이드일 수 있다.
센스 가닥 및 안티센스 가닥은 통상적으로 듀플렉스 이중 가닥 RNA("dsRNA")를 형성하며, 이는 본 명세서에서 "dsRNAi 제제"로도 지칭된다. dsRNAi 제제의 듀플렉스 영역은, 예를 들어, 길이가 27~30개의 뉴클레오타이드 쌍, 길이가 19~25개의 뉴클레오타이드 쌍, 길이가 19~23개의 뉴클레오타이드 쌍, 길이가 19~21개의 뉴클레오타이드 쌍, 길이가 21~25개의 뉴클레오타이드 쌍, 또는 길이가 21~23개의 뉴클레오타이드 쌍일 수 있는 듀플렉스 영역일 수 있다. 또 다른 예에서, 듀플렉스 영역은 길이가 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 및 27개의 뉴클레오타이드로부터 선택된다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제는 하나 또는 둘 모두의 가닥의 3'-말단, 5'-말단, 또는 둘 모두의 말단에서 하나 이상의 오버행 영역 또는 캡핑 군을 함유할 수 있다. 오버행은 독립적으로 길이가 1~6개의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 길이가 2~6개의 뉴클레오타이드, 길이가 1~5개의 뉴클레오타이드, 길이가 2~5개의 뉴클레오타이드, 길이가 1~4개의 뉴클레오타이드, 길이가 2~4개의 뉴클레오타이드, 길이가 1~3개의 뉴클레오타이드, 길이가 2~3개의 뉴클레오타이드, 또는 길이가 1~2개의 뉴클레오타이드일 수 있다. 특정 구현예에서, 오버행 영역은 위에서 제공된 것과 같이 연장된 오버행 영역을 포함할 수 있다. 오버행은 한 가닥이 다른 가닥보다 길거나 동일한 길이의 두 가닥이 엇갈려서 생긴 결과일 수 있다. 오버행은 표적 mRNA와 미스매치를 형성할 수 있거나 이것은 표적화된 유전자 서열에 상보적일 수 있거나 또 다른 서열일 수 있다. 제1 및 제2 가닥은 또한, 예를 들어, 추가 염기에 의해 결합되어 헤어핀을 형성하거나, 다른 비염기 링커에 의해 결합될 수 있다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제의 오버행 영역에서의 뉴클레오타이드는 각각 독립적으로 2'-당 변형된 것, 예컨대 2'-F, 2'-O-메틸, 티미딘(T), 2`-O-메톡시에틸-5-메틸우리딘(Teo), 2`-O-메톡시에틸아데노신(Aeo), 2'-O-메톡시에틸-5-메틸시티딘(m5Ceo), 및 이의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 변형 또는 미변형 뉴클레오타이드일 수 있다.
예를 들어, TT는 어느 한 가닥의 어느 한 말단에 대해 오버행 서열일 수 있 다. 오버행은 표적 mRNA와 미스매치를 형성할 수 있거나 이것은 표적화된 유전자 서열에 상보적일 수 있거나 또 다른 서열일 수 있다.
dsRNAi 제제의 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 가닥 둘 모두에서 5'- 또는 3'- 오버행은 인산화될 수 있다. 일부 구현예에서, 오버행 영역(들)은 2개의 뉴클레오타이드 사이에 포스포로티오에이트를 갖는 2개의 뉴클레오타이드를 함유하고, 여기서 2개의 뉴클레오타이드는 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 구현예에서, 오버행은 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 둘 모두의 가닥의 3'-말단에 존재한다. 일부 구현예에서, 이 3'-오버행은 안티센스 가닥에 존재한다. 일부 구현예에서, 이 3'-오버행은 센스 가닥에 존재한다.
dsRNAi 제제는 그 전체 안정성에 영향을 미치지 않으면서 RNAi의 간섭 활성을 강화할 수 있는 단일 오버행만을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단일 가닥 오버행은 센스 가닥의 3'-말단 또는, 대안적으로 안티센스 가닥의 3'-말단에 위치할 수 있다. RNAi는 또한 안티센스 가닥의 5'-말단(즉, 센스 가닥의 3'-말단) 또는 그 반대로 위치한 둔화 말단을 가질 수 있다. 일반적으로, dsRNAi 제제의 안티센스 가닥은 3'-말단에서 뉴클레오타이드 오버행을 갖고, 5'-말단은 둔화 말단이다. 이론에 의해 국한되고자 하는 것 없이, 안티센스 가닥의 5'-말단에서 및 안티센스 가닥의 3'-말단 오버행에서 비대칭 둔화 말단은 RISC 공정으로 로딩되는 가이드 가닥을 선호한다.
특정 구현예에서, dsRNAi는 길이가 19개의 뉴클레오타이드인 이중 둔화-말단이고, 여기서 센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 7, 8, 9에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다. 안티센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 및 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다.
또 다른 구현예에서, dsRNAi 제제는 길이가 20개의 뉴클레오타이드인 이중 둔화-말단이고, 여기서 센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 8, 9, 및 10에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다. 안티센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 및 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다.
또 다른 구현예에서, dsRNAi 제제는 길이가 21개의 뉴클레오타이드인 이중 둔화-말단이고, 여기서 센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 9, 10, 및 11에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다. 안티센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 및 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제는 21개 뉴클레오타이드 센스 가닥 및 23개 뉴클레오타이드 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 9, 10, 및 11에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함하고; 안티센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 및 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함하고, RNAi 제제의 하나의 말단은 둔화인 한편, 다른 말단은 2개의 뉴클레오타이드 오버행을 포함한다. 일 구현예에서, 2개의 뉴클레오타이드 오버행은 안티센스 가닥의 3'-말단에 존재한다.
2개의 뉴클레오타이드 오버행이 안티센스 가닥의 3'-말단에 존재하는 경우, 말단 3개의 뉴클레오타이드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 결합이 있을 수 있고, 여기서 3개의 뉴클레오타이드 중 2개는 오버행 뉴클레오타이드이고, 3번째 뉴클레오타이드는 오버행 뉴클레오타이드 옆에 쌍을 형성한 뉴클레오타이드이다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 추가로 센스 가닥의 5'-말단 및 안티센스 가닥의 5'-말단 둘 모두에서 말단 3개의 뉴클레오타이드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 결합을 갖는다. 특정 구현예에서, 모티프의 일부인 뉴클레오타이드를 포함하는 dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드는 변형 뉴클레오타이드이다. 특정 구현예에서, 각각의 잔기는 독립적으로, 예를 들어, 교호(alternating) 모티프에서 2'-O-메틸 또는 3'-플루오로로 변형된다. 선택적으로로, dsRNAi 제제는 리간드(예컨대, GalNAc3)를 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제는 센스 및 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 길이가 25~30개의 뉴클레오타이드 잔기이고, 5' 말단 뉴클레오타이드(위치 1)에서 시작하여 제1 가닥의 위치 1 내지 23은 적어도 8개 리보뉴클레오타이드를 포함하고; 안티센스 가닥은 길이가 36~66개의 뉴클레오타이드 잔기이고, 3' 말단 뉴클레오타이드에서 시작하여 센스 가닥의 위치 1~23과 쌍을 형성하는 위치에 적어도 8개의 리보뉴클레오타이드를 포함하여 듀플렉스를 형성하고; 안티센스 가닥의 적어도 3' 말단 뉴클레오타이드는 센스 가닥과 쌍을 형성하지 않고, 최대 6개의 연속 3' 말단 뉴클레오타이드는 센스 가닥과 쌍을 형성하지 않아 1~6개 뉴클레오타이드의 3' 단일 가닥 오버행을 형성하고; 안티센스 가닥의 5' 말단은 센스 가닥과 쌍을 형성하지 않는 10~30개 연속 뉴클레오타이드를 포함하여, 10~30개 뉴클레오타이드 단일 가닥 5' 오버행을 형성하고; 적어도 센스 가닥 5' 말단 및 3' 말단 뉴클레오타이드는 센스 및 안티센스 가닥이 최대 상보성을 위해 정렬되는 경우 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성하여, 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이에 실질적으로 듀플렉스된 영역을 형성하고; 안티센스 가닥은 이중 가닥 핵산이 포유류 세포 내로 도입되는 경우 표적 유전자 발현을 감소시키기 위해 안티센스 가닥 길이의 적어도 19개 리보뉴클레오타이드를 따라 표적 RNA에 충분히 상보적이고; 센스 가닥은 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함하며, 여기서 모티프의 적어도 하나는 절단 부위에서 또는 그 부근에서 일어난다. 안티센스 가닥은 절단 부위에 또는 그 부근에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제는 센스 및 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 dsRNAi 제제는 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프와 적어도 25 내지 최대 29개 뉴클레오타이드인 길이를 갖는 제1 가닥 및 최대 30개 뉴클레오타이드인 길이를 갖는 제2 가닥을 포함하고; 제1 가닥의 3' 말단 및 제2 가닥의 5' 말단은 둔화 말단을 형성하고 제2 가닥은 제1 가닥보다 이의 3' 말단에서 1~4개 뉴클레오타이드가 더 길고, 듀플렉스 영역은 길이가 적어도 25개의 뉴클레오타이드이고, 제2 가닥은 RNAi 제제가 포유류 세포 내로 도입되는 경우 표적 유전자 발현을 감소시키기 위해 제2 가닥 길이의 적어도 19개 뉴클레오타이드를 따라 표적 mRNA에 충분히 상보적이고, dsRNAi 제제의 다이서 절단이 제2 가닥의 3'-말단을 포함하는 siRNA를 생성하여 포유류에서 표적 유전자의 발현을 감소시킨다. 선택적으로로, dsRNAi 제제는 추가로 리간드를 포함한다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥은 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에서 3개의 동일한 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함하고, 여기서 모티프 중 하나는 센스 가닥 내 절단 부위에서 일어난다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제의 안티센스 가닥은 또한 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함하고, 여기서 모티프 중 하나는 안티센스 가닥 내 절단 부위에 또는 그 부근에서 일어난다.
길이가 19~23개의 뉴클레오타이드인 듀플렉스 영역을 갖는 dsRNAi 제제의 경우, 안티센스 가닥의 절단 부위는 통상적으로 5'-말단으로부터 10, 11 및 12 위치 주변에 있다. 따라서 3개의 동일한 변형의 모티프는 안티센스 가닥의 9, 10, 11 위치; 10, 11, 12 위치; 11, 12, 13 위치; 12, 13, 14 위치; 또는 13, 14, 15 위치에 일어날 수 있고, 계수는 안티센스 가닥의 5'-말단에서 첫 번째 뉴클레오타이드에서 시작하거나, 계수는 안티센스 가닥의 5'-말단에서 듀플렉스 영역 내 첫 번째 쌍을 형성하는 뉴클레오타이드에서 시작한다. 안티센스 가닥 내 절단 부위는 또한 5'-말단으로부터 dsRNAi 제제의 듀플렉스 영역의 길이에 따라 변화할 수 있다.
RNAi 제제의 센스 가닥은 가닥의 절단 부위에서 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 동일한 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함할 수 있고; 안티센스 가닥은 가닥의 절단 부위에서 또는 그 부근에서 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 동일한 변형의 적어도 하나의 모티프를 가질 수 있다. 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 dsRNA 듀플렉스를 형성할 때, 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 센스 가닥 상의 3개의 뉴클레오타이드 중 하나의 모티프와 안티센스 가닥 상의 3개의 뉴클레오타이드 중 하나의 모티프가 적어도 하나의 뉴클레오타이드 중복을 갖도록 정렬될 수 있고, 즉, 센스 가닥 내 모티프의 3개의 뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 안티센스 가닥 내 모티프의 3개의 뉴클레오타이드 중 적어도 하나와 염기쌍을 형성한다. 대안적으로, 적어도 2개의 뉴클레오타이드는 중복될 수 있거나, 모든 3개의 뉴클레오타이드는 중복될 수 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥은 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 동일한 변형의 하나 초과의 모티프를 포함할 수 있다. 제1 모티프는 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에 존재할 수 있고, 다른 모티프는 윙(wing) 변형일 수 있다. 본원에서 용어 "윙 변형"은 동일한 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에 모티프로부터 분리된 가닥의 또 다른 부분에 존재하는 모티프를 지칭한다. 윙 변형은 첫 번째 모티프에 인접하거나 적어도 하나 이상의 뉴클레오타이드에 의해 분리된다. 모티프가 서로 바로 인접해 있는 경우, 모티프의 화학적 작용은 서로 구별되며, 모티프가 하나 이상의 뉴클레오타이드에 의해 분리되어 있는 경우, 화학적 작용은 동일하거나 상이할 수 있다. 2개 이상의 윙 변형이 존재할 수 있다. 예를 들어, 2개의 윙 변형이 존재하는 경우, 각각의 윙 변형은 절단 부위에 또는 그 부근에 있는 첫 번째 모티프에 대해 하나의 말단에서 발생하거나 리드(lead) 모티프의 어느 한 측면 상에서 발생한다.
센스 가닥과 마찬가지로, dsRNAi 제제의 안티센스 가닥은 3개의 연속 뉴클레오타이드 상에 3개의 동일한 변형의 하나 초과의 모티프를 포함할 수 있으며, 모티프 중 적어도 하나는 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에서 발생한다. 이러한 안티센스 가닥은 또한 센스 가닥에 존재할 수 있는 윙 변형과 유사한 정렬로 하나 이상의 윙 변형을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의윙 변형은 통상적으로 가닥의 3'-말단, 5'-말단, 또는 양 말단에 첫 번째 하나 또는 두 개의 말단 뉴클레오타이드를 포함하지 않는다.
다른 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 윙 변형은 통상적으로 가닥의 3'-말단, 5'-말단, 또는 양 말단에서 듀플렉스 영역 내에 첫 번째 하나 또는 두 개의 쌍을 형성하는 뉴클레오타이드를 포함하지 않는다.
dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 각각 적어도 하나의 윙 변형을 포함하는 경우, 윙 변형은 듀플렉스 영역의 동일한 말단 상에 있을 수 있고, 1, 2 또는 3개 뉴클레오타이드의 중첩을 가질 수 있다.
dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 각각 적어도 2개의 윙 변형을 포함하는 경우, 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 정렬되어 하나의 가닥에서 각각 두 개의 변형이 1, 2 또는 3개 뉴클레오타이드의 중첩을 갖는 듀플렉스 영역의 하나의 말단 상에 있고; 하나의 가닥에서 각각 두 개의 변형이 1, 2 또는 3개 뉴클레오타이드의 중첩을 갖는 듀플렉스 영역의 다른 말단 상에 있고; 하나의 가닥에서 두 개의 변형이 리드 모티프의 양측 상에 있으며, 듀플렉스 영역에 1, 2 또는 3개 뉴클레오타이드의 중첩을 갖는다.
일부 구현예에서, 모티프의 일부인 뉴클레오타이드를 포함하는 dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드는 변형될 수 있다. 각각의 뉴클레오타이드는 동일하거나 상이한 변형으로 변형될 수 있으며, 이는 비-결합 포스페이트 산소 중 하나 또는 둘 모두 또는 결합 포스페이트 산소 중 하나 이상의 하나 이상의 변경; 리보스 당의 성분, 예를 들어, 리보스 당의 2′하이드록실의 변경; 포스페이트 모이어티를 "데포스포" 링커로 대량 대체; 천연 발생 염기의 변형 또는 대체; 및 리보스-포스페이트 골격의 대체 또는 변형을 포함할 수 있다.
핵산은 서브유닛의 중합체이므로, 많은 변형, 예를 들어, 염기, 또는 포스페이트 모이어티의 변형, 또는 포스페이트 모이어티의 비-결합 O의 변형이 핵산 내에서 반복되는 위치에서 발생한다. 일부 경우에, 변형은 핵산 내의 모든 대상체 위치에서 발생하지만, 많은 경우에 그렇지 않을 것이다. 예로서, 변형은 3'- 또는 5' 말단 위치에서만 발생할 수 있고, 말단 영역 내, 예를 들어, 말단 뉴클레오타이드 상의 위치에서 또는 가닥의 마지막 2, 3, 4, 5, 또는 10개 뉴클레오타이드에서만 발생할 수 있다. 변형은 이중 가닥 영역, 단일 가닥 영역 또는 둘 모두에서 발생할 수 있다. 변형은 RNA의 이중 가닥 영역에서만 발생할 수 있거나 RNA의 단일 가닥 영역에서만 발생할 수 있다. 예를 들어, 비-결합 O 위치에서 포스포로티오에이트 변형은 한쪽 또는 양쪽 말단에서만 발생할 수 있고, 말단 영역 내, 예를 들어, 말단 뉴클레오타이드 상의 위치에서 또는 가닥의 마지막 2, 3, 4, 5, 또는 10개 뉴클레오타이드에서만 발생할 수 있거나, 이중 가닥 및 단일 가닥 영역, 특히 말단에서 발생할 수 있다. 5'- 말단 또는 말단들은 인산화될 수 있다.
예를 들어, 안정성을 향상시키거나, 오버행에 특정 염기를 포함하거나, 변형 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 대리물을 단일 가닥 오버행에, 예를 들어, 5'- 또는 3'-오버행에, 또는 둘 모두에 포함하는 것이 가능할 수 있다. 예를 들어, 오버행에 퓨린 뉴클레오타이드를 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 일부 구현예에서 3' 또는 5' 오버행의 염기 모두 또는 일부는, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 변형으로 변형될 수 있다. 변형은, 예를 들어, 당업계에 공지된 변형을 갖는 리보스 당의 2' 위치에서의 변형의 사용, 예를 들어, 데옥시리보뉴클레오타이드, 2'-데옥시-2'-플루오로(2'-F) 또는 뉴클레오염기의 리보당 대신 변형 2'-O-메틸의 사용, 및 포스페이트 군에서의 변형, 예를 들어, 포스포로티오에이트 변형의 사용을 포함할 수 있다. 오버행은 표적 서열과 상동성일 필요는 없다.
일부 구현예에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 잔기는 LNA, CRN, cET, UNA, HNA, CeNA, 2'-메톡시에틸, 2'-O-메틸, 2'-O-알릴, 2'-C-알릴, 2'-데옥시, 2'-하이드록실, 또는 2'-플루오로로 독립적으로 변형된다. 가닥은 하나 초과의 변형을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 잔기는 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로로 독립적으로 변형된다.
적어도 2개의 상이한 변형은 통상적으로 센스 가닥 및 안티센스 가닥 상에 존재한다. 그러한 2개의 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형, 또는 기타일 수 있다.
특정 구현예에서, Na 또는 Nb는 교호 패턴의 변형을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "교호 모티프”는 하나 이상의 변형을 갖는 모티프를 지칭하며, 각각의 변형은 한 가닥의 교호 뉴클레오타이드 상에서 발생한다. 교호 뉴클레오타이드는 하나 걸러 뉴클레오타이드 당 하나 또는 3개 뉴클레오타이드 당 하나 또는 유사한 패턴을 지칭할 수 있다. 예를 들어, A, B 및 C 각각이 뉴클레오타이드에 대한 하나의 유형의 변형을 나타내는 경우, 교호 모티프는 “ABABABABABAB…,” “AABBAABBAABB…,” “AABAABAABAAB…,” “AAABAAABAAAB…,” “AAABBBAAABBB…,” 또는 “ABCABCABCABC…,” 등일 수 있다.
교호 모티프에 포함된 변형의 유형은 동일하거나 상이할 수 있다. 예를 들어, A, B, C, D 각각이 뉴클레오타이드 상에 한 유형의 변형을 나타내는 경우, 교호 패턴, 즉, 하나 걸러 뉴클레오타이드 상에서의 변형은 동일할 수 있지만, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 각각은 “ABABAB…”, “ACACAC…” “BDBDBD…” 또는 “CDCDCD…,” 등과 같은 교호 모티프 내 변형의 몇 가지 가능성으로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 dsRNAi 제제는 전환한 안티센스 가닥 상의 교호 모티프에 대한 변형 패턴에 비해 센스 가닥 상의 교호 모티프에 대한 변형 패턴을 포함한다. 전환(shift)은 센스 가닥의 뉴클레오타이드의 변형된 군이 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드의 상이하게 변형된 군에 상응하도록 할 수 있고 그 반대의 경우도 마찬가지일 수 있다. 예를 들어, 센스 가닥이 dsRNA 듀플렉스 내 안티센스 가닥과 쌍을 형성하는 경우, 센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 5'에서 3'로 "ABABAB"로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥 내 교호 모티프는 듀플렉스 영역 내 가닥의 5'에서 3'로 "BABABA"로 시작할 수 있다. 또 다른 예로서, 센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 5'에서 3'로 "AABBAABB"로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥 내 교호 모티프는 듀플렉스 영역 내 가닥의 5'에서 3'로 "BBAABBAA"로 시작할 수 있어 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이의 변형 패턴의 완전하거나 부분적인 전환이 있다.
하나의 특정예에서, 센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 5'에서 3'로 "ABABAB"이며, 여기서 각각의 A는 미변형 리보뉴클레오타이드이고 각각의 B는 2'-O메틸 변형 뉴클레오타이드이다.
하나의 특정예에서, 센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 5'에서 3'로 "ABABAB"이며, 여기서 각각의 A는 2'-데옥시-2'-플루오로 변형 뉴클레오타이드이고, 각각의 B는 2'-O메틸 변형 뉴클레오타이드이다.
또 다른 특정예에서, 안티센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 3'에서 5'로 "BABABA"이며, 여기서 각각의 A는 2'-데옥시-2'-플루오로 변형 뉴클레오타이드이고, 각각의 B는 2'-O메틸 변형 뉴클레오타이드이다.
하나의 특정예에서, 센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 5'에서 3'로 "ABABAB"이고, 안티센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 3'에서 5'로 "BABABA"이며, 여기서 각각의 A는 미변형 리보뉴클레오타이드이고 각각의 B는 2'-O메틸 변형 뉴클레오타이드이다.
하나의 특정예에서, 센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 5'에서 3'로 "ABABAB"이고, 안티센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 3'에서 5'로 "BABABA"이며, 여기서 각각의 A는 2'-데옥시-2'-플루오로 변형 뉴클레오타이드이고, 각각의 B는 2'-O메틸 변형 뉴클레오타이드이다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제는 센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형 및 2'-F 변형의 교호 모티프의 패턴을 포함하고, 이는 초기에 안티센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형 및 2'-F 변형의 교호 모티프의 변형에 대해 전환을 갖고, 초기에 즉, 센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형 뉴클레오타이드는 안티센스 가닥 상의 2'-F 변형 뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성하고, 그 반대도 마찬가지이다. 센스 가닥의 1 위치는 2'-F 변형으로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥의 1 위치는 2'-O-메틸 변형으로 시작할 수 있다.
센스 가닥 또는 안티센스 가닥에 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 하나 이상의 모티프를 도입하는 것은 센스 가닥 또는 안티센스 가닥에 존재하는 초기 변형 패턴을 방해한다. 센스 또는 안티센스 가닥에 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 하나 이상의 모티프를 도입함으로써 센스 또는 안티센스 가닥의 변형 패턴의 이러한 방해는 표적 유전자에 대한 유전자 침묵 활성을 향상시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프가 임의의 가닥에 도입될 때, 모티프 옆의 뉴클레오타이드의 변형은 모티프의 변형과 상이한 변형이다. 예를 들어, 모티프를 포함하는 서열의 부분은 "...NaYYYNb..."이며, 여기서 "Y"는 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프의 변형을 나타내고, "Na" 및 "Nb"는 Y의 변형과 상이한 모티프 "YYY" 옆의 뉴클레오타이드에 대한 변형을 나타내며, 여기서 Na 및 Nb는 동일하거나 상이한 변형일 수 있다. 대안적으로, 윙 변형이 존재할 때 Na 또는 Nb가 존재하거나 부재할 있다.
iRNA는 추가로 적어도 하나의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 연결을 포함할 수 있다. 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형은 가닥의 임의의 위치의 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 두 가닥 모두의 임의의 뉴클레오타이드 상에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 뉴클레오타이드 간 연결 변형은 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 모든 뉴클레오타이드에서 발생할 수 있고; 각각의 뉴클레오타이드 간 연결 변형은 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 교호 패턴으로 발생할 수 있고; 센스 가닥 또는 안티센스 가닥은 교호 패턴으로 뉴클레오타이드 간 연결 변형 둘 모두를 포함할 수 있다. 센스 가닥 상의 뉴클레오타이드 간 연결 변형의 교호 패턴은 안티센스 가닥과 동일하거나 상이할 수 있고, 센스 가닥 상의 뉴클레오타이드 간 연결 변형의 교호 패턴은 안티센스 가닥 상의 뉴클레오타이드 간 연결 변형의 교호 패턴에 상대적인 전환을 가질 수 있다. 일 구현예에서, 이중-가닥 RNAi 제제는 6-8개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 5'-말단에서 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결을 포함하고 3'-말단에서 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결을 포함하고, 센스 가닥은 5'-말단 또는 3'-말단에서 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결을 포함한다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제는 오버행 영역에 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형을 포함한다. 예를 들어, 오버행 영역은 2개의 뉴클레오타이드 사이에 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 연결을 갖는 2개의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 뉴클레오타이드 간 연결 변형은 또한 오버행 뉴클레오타이드를 듀플렉스 영역 내의 말단 쌍을 형성하는 뉴클레오타이드와 연결하기 위해 만들어질 수 있다. 예를 들어, 적어도 2, 3, 4개, 또는 모든 오버행 뉴클레오타이드는 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 연결을 통해 연결될 수 있고, 선택적으로, 오버행 뉴클레오타이드를 오버행 뉴클레오타이드 옆에 있는 쌍을 형성하는 뉴클레오타이드와 연결하는 추가의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 연결이 있을 수 있다. 예를 들어, 말단 3개의 뉴클레오타이드 사이에 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결이 있을 수 있고, 여기서 3개의 뉴클레오타이드 중 2개는 오버행 뉴클레오타이드이고, 세 번째는 오버행 뉴클레오타이드 옆의 쌍을 형성하는 뉴클레오타이드이다. 이들 말단 3개의 뉴클레오타이드는 안티센스 가닥의 3'-말단, 센스 가닥의 3'-말단, 안티센스 가닥의 5'-말단, 또는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 2개 뉴클레오타이드 오버행이 안티센스 가닥의 3'-말단에 있고, 말단 3개의 뉴클레오타이드 사이의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결이 있을 수 있고, 여기서 3개의 뉴클레오타이드 중 2개는 오버행 뉴클레오타이드이고, 3번째 뉴클레오타이드는 오버행 뉴클레오타이드 옆에 쌍을 형성하는 뉴클레오타이드이다. 선택적으로, dsRNAi 제제는 추가로 센스 가닥의 5'-말단 및 안티센스 가닥의 5'-말단 둘 모두에서 말단 3개의 뉴클레오타이드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결을 갖는다.
일 구현예에서, dsRNAi 제제는 듀플렉스 내에서 표적과 미스매치(들), 또는 이들의 조합을 포함한다. 미스매치는 오버행 영역 또는 듀플렉스 영역에서 발생할 수 있다. 염기쌍은 해리 또는 용융을 촉진하는 경향에 따라 순위가 매겨질 수 있다(예를 들어, 특정 쌍형성의 결합 또는 해리의 자유 에너지에 따라 가장 간단한 접근법은 개별 쌍을 기준으로 쌍을 검사하는 것이지만, 다음 이웃 또는 유사한 검정이 또한 사용될 수 있다). 해리를 촉진시키는 측면에서: A:U는 G:C 보다 바람직하고; G:U는 G:C 보다 바람직하고; I:C는 G:C 보다 바람직하다(I=이노신). 미스매치, 예를 들어, 비-카노니칼 또는 카노니칼 이외의 쌍형성(본 명세서의 다른 곳에 기술된 것과 같이)은 카노니칼(A:T, A:U, G:C) 쌍형성 보다 바람직하고; 범용 염기를 포함하는 쌍형성은 카노니칼 쌍형성보다 바람직하다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제는 듀플렉스의 5'-말단에서 안티센스 가닥의 해리를 촉진하기 위해, 하기를 포함하는 군으로부터 독립적으로 선택된 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내에서 처음 1, 2, 3, 4, 또는 5개 염기쌍 중 적어도 하나를 포함한다: A:U, G:U, I:C, 및 미스매치쌍, 예를 들어, 비-카노니칼 또는 카노니칼쌍 이외의 것 또는 범용 염기를 포함하는 쌍.
특정 구현예에서, 안티센스 가닥 내 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내의 1 위치에 있는 뉴클레오타이드는 A, dA, dU, U, 및 dT로부터 선택된다. 대안적으로, 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내의 처음 1, 2, 또는 3개 염기쌍 중 적어도 하나는 AU 염기쌍이다. 예를 들어, 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내의 처음 염기쌍은 AU 염기쌍이다.
또 다른 구현예에서, 센스 가닥의 3'-말단에서의 뉴클레오타이드는 데옥시티미딘(dT)이거나 안티센스 가닥의 3'-말단에서의 뉴클레오타이드는 데옥시티미딘(dT)이다. 예를 들어, 데옥시티미딘 뉴클레오타이드의 짧은 서열, 예를 들어, 센스, 안티센스, 또는 두 가닥 모두의 3'-말단 상의 2개의 dT 뉴클레오타이드가 있다.
특정 구현예에서, 센스 가닥 서열은 화학식 I로 나타낼 수 있다:
5' np-Na-(X X X )i-Nb-Y Y Y -Nb-(Z Z Z )j-Na-nq 3' (I)
여기서:
i 및 j는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
p 및 q는 각각 독립적으로 0~6이고;
각각의 Na는 독립적으로 0~25개 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형 뉴클레오타이드를 포함하고;
각각의 Nb는 독립적으로 0~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타내고;
각각의 np 및 nq는 독립적으로 오버행 뉴클레오타이드를 나타내고;
여기서 Nb 및 Y는 동일한 변형을 갖지 않고;
XXX, YYY, 및 ZZZ 각각은 독립적으로 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 하나의 모티프를 나타낸다. 일 구현예에서, YYY는 모두 2'-F 변형 뉴클레오타이드이다.
일부 구현예에서, Na 또는 Nb는 교호 패턴의 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, YYY 모티프는 센스 가닥의 절단 부위에 또는 이의 부근에서 존재한다. 예를 들어, dsRNAi 제제가 길이가 17~23개의 뉴클레오타이드인 듀플렉스 영역을 갖는 경우, YYY 모티프는 센스 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에서 발생할 수 있고(예를 들어, 위치 6, 7, 8; 7, 8, 9; 8, 9, 10; 9, 10, 11; 10, 11, 12; 또는 11, 12, 13에서 발생할 수 있음), 계수는 제1 뉴클레오타이드로부터, 5'-말단으로부터 시작하거나; 선택적으로, 계수는 듀플렉스 영역 내 제1 쌍형성 뉴클레오타이드에서 5'-말단으로부터 시작한다.
일 구현예에서, i는 1이고 j는 0이거나, i는 0이고 j는 1이거나, i 및 j 둘 모두는 1이다. 센스 가닥은 따라서 하기의 화학식으로 나타낼 수 있다:
5' np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Ib);
5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq 3' (Ic); 또는
5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Id).
센스 가닥을 화학식 Ib로 나타내는 경우, Nb는 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낼 수 있다.
센스 가닥을 화학식 Ic로 나타내는 경우, Nb는 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낼 수 있다.
센스 가닥을 화학식 Id로 나타내는 경우, 각각의 Nb는 독립적으로 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 일 구현예에서, Nb는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15, 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낼 수 있다.
X, Y 및 Z 각각은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
다른 구현예에서, i는 0이고, j는 0이고, 센스 가닥은 하기 화학식으로 나타낼 수 있다:
5' np- Na -YYY- Na-nq 3' (Ia).
센스 가닥을 화학식 Ia로 나타내는 경우, 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15, 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낼 수 있다.
일 구현예에서, RNAi의 안티센스 가닥 서열은 화학식 II로 나타낼 수 있다:
5'nq'-Na'-(Z'Z'Z')k-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-(X'X'X')l-N'a-np' 3' (II)
여기서:
k 및 l는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
p' 및 q'는 각각 독립적으로 0~6이고;
각각의 Na'는 독립적으로 0~25개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형 뉴클레오타이드를 포함하고;
각각의 Nb'는 독립적으로 0~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타내고;
각각의 np' 및 nq'는 독립적으로 오버행 뉴클레오타이드를 나타내고;
여기서 Nb' 및 Y'는 동일한 변형을 갖지 않고;
X′X′X′, Y′Y′Y′, 및 Z′Z′Z′는 각각 독립적으로 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 하나의 모티프를 나타낸다.
일부 구현예에서, Na' 또는 Nb'는 교호 패턴의 변형을 포함한다.
Y′Y′Y′ 모티프는 안티센스 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에 존재한다. 예를 들어, dsRNAi 제제가 길이가 17~23개의 뉴클레오타이드인 듀플렉스 영역을 갖는 경우, Y′Y′Y′ 모티프는 안티센스 가닥의 위치 9, 10, 11; 10, 11, 12; 11, 12, 13; 12, 13, 14; 또는 13, 14, 15에서 발생할 수 있고, 계수는 제1 뉴클레오타이드로부터, 5'-말단으로부터 시작하거나; 선택적으로, 계수는 듀플렉스 영역 내 제1 쌍형성 뉴클레오타이드에서 5'-말단으로부터 시작한다. 일 구현예에서, Y′Y′Y′ 모티프는 위치 11, 12, 13에서 발생한다.
특정 구현예에서, Y′Y′Y′ 모티프는 모든 2′-OMe 변형 뉴클레오타이드이다.
특정 구현예에서, k는 1이고 l은 0이거나, k는 0이고 l은 1이거나, k 및 l 둘 모두는 1이다.
안티센스 가닥은 따라서 하기의 화학식으로 나타낼 수 있다:
5′ nq′-Na′-Z′Z′Z′-Nb′-Y′Y′Y′-Na′-np′ 3′ (IIb);
5′ nq′-Na′-Y′Y′Y′-Nb′-X′X′X′-np′ 3′ (IIc); 또는
5′ nq′-Na′- Z′Z′Z′-Nb′-Y′Y′Y′-Nb′- X′X′X′-Na′-np′ 3′ (IId).
안티센스 가닥을 화학식 IIb로 나타내는 경우, Nb '는 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na'는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
안티센스 가닥을 화학식 IIc로 나타내는 경우, Nb'는 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na′는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
안티센스 가닥을 화학식 IId로 나타내는 경우, 각각의 Nb′는 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na′는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 일 구현예에서, Nb는 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
또 다른 구현예에서, k는 0이고 l는 0이고, 안티센스 가닥은 하기 화학식으로 나타낼 수 있다:
5' np'-Na'-Y'Y'Y'- Na'-nq' 3' (Ia).
안티센스 가닥을 화학식 IIa로 나타내는 경우, 각각의 Na'는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
안티센스 가닥을 화학식 IIa로 나타내는 경우, 각각의 Na'는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
X’, Y’ 및 Z’ 각각은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 뉴클레오타이드는 LNA, CRN, UNA, cEt, HNA, CeNA, 2'-메톡시에틸, 2'-O-메틸, 2'-O-알릴, 2’-C-알릴, 2'-하이드록실, 또는 2'-플루오로로 독립적으로 변형될 수 있다. 예를 들어, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 뉴클레오타이드는 독립적으로 2’-O-메틸 또는 2’-플루오로로 변형된다. 각각의 X, Y, Z, X′, Y′ 및 Z′는 특히 2’-O-메틸 변형 또는 2’-플루오로 변형을 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥은 듀플렉스 영역이 21개 뉴클레오타이드인 경우에 가닥의 9, 10, 및 11 위치에서 존재하는 YYY 모티프를 포함할 수 있고, 계수는 5’-말단으로부터 제1 뉴클레오타이드로부터 시작하거나, 선택적으로, 계수는 5’-말단으로부터 듀플렉스 영역 내에서 제1 쌍형성 뉴클레오타이드에서 시작하고; Y는 2’-F 변형을 나타낸다. 센스 가닥은 추가로 듀플렉스 영역의 반대 말단에 윙 변형으로서 XXX 모티프 또는 ZZZ 모티프를 포함할 수 있고; XXX 및 ZZZ는 각각 독립적으로 2’-OMe-변형 또는 2’-F 변형을 나타낸다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 가닥의 위치 11, 12, 13에서 존재하는 Y’Y’Y’ 모티프를 포함할 수 있고, 계수는 5’-말단으로부터 제1 뉴클레오타이드로부터 시작하거나, 선택적으로, 계수는 5’-말단으로부터 듀플렉스 영역 내에서 제1 쌍형성 뉴클레오타이드에서 시작하고; Y’는 2’-O-메틸 변형을 나타낸다. 안티센스 가닥은 추가로 듀플렉스 영역의 반대 말단에 윙 변형으로서 X’X’X’ 모티프 또는 Z’Z’Z’ 모티프를 포함할 수 있고; X’X’X’ 및 Z’Z’Z’는 각각 독립적으로 2’-OMe-변형 또는 2’-F 변형을 나타낸다.
위의 화학식 Ia, Ib, Ic, 및 Id 중 어느 하나에 의해 나타낸 센스 가닥은 듀플렉스를 형성하고, 여기서 안티센스 가닥은 각각 화학식 IIa, IIb, IIc, 및 IId 중 어느 하나에 의해 나타낸다.
따라서, 발명의 방법에 사용하기 위한 dsRNAi 제제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함할 수 있고, 각각의 가닥은 14 내지 30개 뉴클레오타이드를 갖고, iRNA 듀플렉스는 하기 화학식 III에 의해 나타낸다:
센스: 5' np -Na-(X X X)i -Nb- Y Y Y -Nb -(Z Z Z)j-Na-nq 3'
안티센스: 3' np '-Na '-(X'X'X')k-Nb '-Y'Y'Y'-Nb '-(Z'Z'Z')l-Na '-nq ' 5'
(III)
여기서:
i, j, k, 및 l는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
p, p', q, 및 q'는 각각 독립적으로 0~6이고;
각각의 Na 및 Na '는 독립적으로 0~25개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고;
각각의 Nb 및 Nb '는 독립적으로 0~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 나타내고;
여기서, 각각의 np', np, nq', 및 nq는 이의 각각이 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 독립적으로 오버행 뉴클레오타이드를 나타내고;
XXX, YYY, ZZZ, X’X’X’, Y’Y’Y’ 및 Z’Z’Z’는 각각 독립적으로 3개의 연속 뉴클레오타이드 상의 3개의 동일한 변형의 하나의 모티프를 나타낸다.
일 구현예에서, i는 0이고 j는 0이거나; i는 1이고 j는 0이거나; i는 0 이고 j는 1이거나; i 및 j 둘 모두는 0이거나; i 및 j 둘 모두는 1이다. 또 다른 구현예에서, k는 0이고 l는 0이거나; k는 1이고 l는 0이고; k는 0이고 l는 1이거나; k 및 I 둘 모두는 0이거나; k 및 I 둘 모두는 1이다.
iRNA 듀플렉스를 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 예시적인 조합은 하기 화학식을 포함한다:
5′ Np - Na -Y Y Y -Na-nq 3′
3′ np′-Na′-Y′Y′Y′ -Na′nq′ 5′
(IIIa)
5′ np -Na -Y Y Y -Nb -Z Z Z -Na-nq 3′
3' np′-Na′-Y′Y′Y′-Nb′-Z′Z′Z′-Na′nq′ 5′
(IIIb)
5′ np-Na- X X X -Nb -Y Y Y - Na-nq 3′
3′ np′-Na′-X′X′X′-Nb′-Y′Y′Y′-Na′nq′ 5′
(IIIc)
5′ np -Na -X X X -Nb-Y Y Y -Nb- Z Z Z -Na-nq 3′
3′ np′-Na′-X′X′X′-Nb′-Y′Y′Y′-Nb′-Z′Z′Z′-Na-nq′ 5′
(IIId)
dsRNAi 제제를 화학식 IIIa로 나타내는 경우, 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15, 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
dsRNAi 제제를 화학식 IIIb로 나타내는 경우, 각각의 Nb는 독립적으로 1~10, 1~7, 1~5, 또는 1~4개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
dsRNAi 제제를 화학식 IIIc로 나타내는 경우, 각각의 Nb, Nb'는 독립적으로 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
dsRNAi 제제를 화학식 IIId로 나타내는 경우, 각각의 Nb, Nb'는 독립적으로 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na, Na '는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 각각의 Na, Na', Nb, 및 Nb '는 독립적으로 교호 패턴의 변형을 포함한다.
화학식 III, IIIa, IIIb, IIIc, 및 IIId의 X, Y, 및 Z 각각은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
dsRNAi 제제를 화학식 III, IIIa, IIIb, IIIc, 및 IIId로 나타내는 경우, Y 뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 Y' 뉴클레오타이드 중 하나와 염기쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, Y 뉴클레오타이드 중 적어도 2개는 상응하는 Y' 뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성하거나; Y 뉴클레오타이드 중 3개 모두는 상응하는 Y' 뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성한다.
dsRNAi 제제를 화학식 IIIb 또는 화학식 IIId로 나타내는 경우, Z 뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 Z' 뉴클레오타이드 중 하나와 염기쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, Z 뉴클레오타이드 중 적어도 2개는 상응하는 Z' 뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성하거나; Z 뉴클레오타이드 중 3개 모두는 상응하는 Z' 뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성한다.
dsRNAi 제제를 화학식 IIIc 또는 화학식 IIId로 나타내는 경우, X 뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 X' 뉴클레오타이드 중 하나와 염기쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, X 뉴클레오타이드 중 적어도 2개는 상응하는 X'뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성하거나; X 뉴클레오타이드 중 3개 모두는 상응하는 X'뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성한다.
특정 구현예에서, Y 뉴클레오타이드 상에서의 변형은 Y' 뉴클레오타이드 상에서의 변형과 상이하거나, Z 뉴클레오타이드 상에서의 변형은 Z' 뉴클레오타이드 상에서의 변형과 상이하거나, X 뉴클레오타이드 상에서의 변형은 X' 뉴클레오타이드 상에서의 변형과 상이하다.
특정 구현예에서, dsRNAi 제제를 화학식 IIId로 나타내는 경우, Na 변형은 2′-O-메틸 또는 2′-플루오로 변형이다. 다른 구현예에서, RNAi 제제를 화학식 IIId로 나타내는 경우, Na 변형은 2′-O-메틸 또는 2′-플루오로 변형이고, np′ >0이고 적어도 하나의 np′는 인접 뉴클레오타이드에 포스포로티오에이트 결합을 통해 결합된다. 또 다른 구현예에서, RNAi 제제를 화학식 IIId로 나타내는 경우, Na 변형은 2′-O-메틸 또는 2′-플루오로 변형이고, np′>0이고 적어도 하나의 np′는 인접 뉴클레오타이드에 포스포로티오에이트 결합을 통해 결합되고, 센스 가닥은 2가 또는 3가 분지형 링커(후술됨)를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다. 다른 구현예에서, RNAi 제제를 화학식 IIId로 나타내는 경우, Na 변형은 2′-O-메틸 또는 2′-플루오로 변형이고, np′ >0이고 적어도 하나의 np′는 인접 뉴클레오타이드에 포스포로티오에이트 결합을 통해 결합되고, 센스 가닥은 적어도 하나의 포스포로티오에이트 결합을 포함하고, 센스 가닥은 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제를 화학식 IIIa로 나타내는 경우, Na 변형은 2′-O-메틸 또는 2′-플루오로 변형이고, np′ >0이고 적어도 하나의 np′는 인접 뉴클레오타이드에 포스포로티오에이트 결합을 통해 결합되고, 센스 가닥은 적어도 하나의 포스포로티오에이트 결합을 포함하고, 센스 가닥은 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제는 화학식 III, IIIa, IIIb, IIIc, 및 IIId로 나타낸 적어도 2개의 듀플렉스를 함유하는 다량체이고, 여기서 듀플렉스는 링커에 의해 결합된다. 링커는 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수 있다. 선택적으로, 다량체는 추가로 리간드를 포함한다. 듀플렉스 각각은 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 듀플렉스 각각은 2개의 상이한 표적 부위에서 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 화학식 III, IIIa, IIIb, IIIc, 및 IIId로 나타낸 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 듀플렉스를 함유하는 다량체이고, 여기서 듀플렉스는 링커에 의해 연결된다. 링커는 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수 있다. 선택적으로, 다량체는 추가로 리간드를 포함한다. 듀플렉스 각각은 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 듀플렉스 각각은 2개의 상이한 표적 부위에서 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.
일 구현예에서, 화학식 III, IIIa, IIIb, IIIc, 및 IIId 중 적어도 하나로 나타낸 2개의 dsRNAi 제제는 5' 말단, 및 3' 말단의 하나 또는 둘 모두에서 서로 연결되고, 선택적으로 리간드에 접합된다. 제제의 각각은 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 제제의 각각은 2개의 상이한 표적 부위에서 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.
특정 구현예에서, 발명의 RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 함유하는 적은 수의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 2'-플루오로 변형을 갖는 10개 이하의 뉴클레오타이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0개 뉴클레오타이드를 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, 발명의 RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 10개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 4개 뉴클레오타이드 및 안티센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 6개 뉴클레오타이드를 함유한다. 또 다른 특정 구현예에서, 발명의 RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 6개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 4개 뉴클레오타이드 및 안티센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 2개 뉴클레오타이드를 함유한다.
다른 구현예에서, 발명의 RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 함유하는 매우 낮은 수의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 2'-플루오로 변형을 함유하는 2개 이하의 뉴클레오타이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 0개의 뉴클레오타이드 중 2개, 1개를 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 2개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 센스 가닥에서 2-플루오로 변형을 갖는 0개 뉴클레오타이드 및 안티센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 2개 뉴클레오타이드를 함유할 수 있다.
다양한 공보는 발명의 방법에 사용될 수 있는 다량체 iRNA를 기술한다. 이러한 공개 공보는 WO2007/091269, 미국 특허 제7,858,769호, WO2010/141511, WO2007/117686, WO2009/014887, 및 WO2011/031520를 포함하고, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로 인용된다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 조성물 및 방법은 본 명세서에 기술된 것과 같은 RNAi 제제의 비닐 포스포네이트(VP) 변형을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 발명의 5'-비닐 포스포네이트 변형 뉴클레오타이드는 하기의 구조를 갖는다:
여기서 X는 O 또는 S이고;
R은 수소, 하이드록시, 플루오로, 또는 C1-20알콕시(예를 들어, 메톡시 또는 n-헥사데실옥시)이고;
R5'은 =C(H)-P(O)(OH)2이고, C5' 탄소와 R5' 사이의 이중 결합은 E 또는 Z 배향(예를 들어, E 배향)이고;
B는 뉴클레오염기 또는 변형 뉴클레오염기이고, 선택적으로 여기서 B는 아데닌, 구아닌, 시토신, 티민 또는 우라실이다.
본 발명의 비닐 포스포네이트는 발명의 dsRNA의 안티센스 또는 센스 가닥에 부착될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 비닐 포스포네이트는, 선택적으로, dsRNA의 안티센스 가닥의 5' 말단에서 dsRNA의 안티센스 가닥에 부착된다.
비닐 포스포네이트 변형은 또한 본 발명의 조성물 및 방법을 위해 고려된다. 예시적인 비닐 포스페이트 구조는 앞선 구조를 포함하며, 여기서 R5'는 =C(H)-OP(O)(OH)2이고, C5' 탄소와 R5' 사이의 이중 결합은 E 또는 Z 배향(예를 들어, E 배향)이다.
하기에서 더 상세히 기술된 것과 같이, 하나 이상의 탄수화물 모이어티의 iRNA로의 접합을 함유하는 iRNA는 iRNA의 하나 이상의 성질을 최적화할 수 있다. 많은 경우에, 탄수화물 모이어티는 iRNA의 변형된 서브유닛에 부착될 것이다. 예를 들어, iRNA의 하나 이상의 리보뉴클레오타이드 서브유닛의 리보스 당은 또 다른 모이어티, 예를 들어, 탄수화물 리간드가 부착된 비-탄수화물(예컨대, 환형) 캐리어로 대체될 수 있다. 서브유닛의 리보스 당이 그렇게 대체된 리보뉴클레오타이드 서브유닛은 본 명세서에서 리보스 대체 변형 서브유닛(RRMS)으로 지칭된다. 환형(cyclic) 캐리어는 카보사이클릭 고리 시스템일 수 있고, 즉, 모든 고리(ring) 원자는 탄소 원자, 또는 헤테로사이클릭(heterocyclic) 고리 시스템이고, 즉, 하나 이상의 환 원자는 헤테로원자, 예를 들어 질소, 산소, 황일 수 있다. 환형 캐리어는 모노사이클릭(monocyclic) 고리 시스템일 수 있거나, 2개 이상의 고리, 예를 들어, 융합된 고리를 함유할 수 있다. 환형 캐리어는 완전히 포화된 고리 시스템일 수 있거나, 이것은 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있다.
리간드는 캐리어를 통해 폴리뉴클레오타이드에 부착될 수 있다. 캐리어는 (i) 적어도 하나의 "골격 부착점", 예컨대 2개의 "골격 부착점" 및 (ii) 적어도 하나의 "테더링 부착점"을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 "골격 부착점"은 작용기, 예를 들어, 하이드록실 기, 또는 일반적으로 이를 위해 이용가능한 결합을 지칭하고, 이는 골격, 예를 들어, 리보핵산의 포스페이트, 또는 변형 포스페이트, 예를 들어 황 함유 골격으로의 캐리어의 혼입에 적합하다. 일부 구현예에서 "테더링 부착점"(TAP)은 선택된 모이어티를 연결하는, 환형 캐리어의 구성 고리 원자, 예를 들어, 탄소 원자 또는 헤테로원자(골격 부착점을 제공하는 원자와 구별됨)를 지칭한다. 모이어티는 예를 들어, 탄수화물, 예를 들어, 단당류, 이당류, 삼당류, 사당류, 올리고사카라이드, 또는 폴리사카라이드일 수 있다. 선택적으로, 선택된 모이어티는 환형 캐리어로의 삽입 테더에 의해 연결된다. 따라서, 환형 캐리어는 종종 작용기, 예를 들어, 아미노 기를 포함하거나, 일반적으로 또 다른 화학적 실체, 예를 들어, 구성 고리에 대한 리간드의 혼입 또는 테더링에 적합한 결합을 제공할 것이다.
iRNA는 캐리어를 통해 리간드에 접합될 수 있으며, 여기서 캐리어는 환형 기 또는 비환형(acyclic) 기일 수 있다. 일 구현예에서, 환형 기는 피롤리디닐, 파라졸리닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, [1,3]디옥솔란, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 퀴녹살리닐, 피리다지노닐, 테트라하이드로푸릴, 및 데칼린으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 비환형 기는 세리놀 골격 또는 디에탄올아민 골격이다.
i. 열 불안정화 변형
특정 구현예에서, dsRNA 분자는 안티센스 가닥의 시드 영역에 열 불안정화 변형을 혼입시킴으로써 RNA 간섭에 대해 최적화될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "시드 영역"은 참조된 가닥의 5'-말단의 위치 2~9에서를 의미한다. 예를 들어, 열 불안정화 변형은 안티센스 가닥의 시드 영역에 혼입되어 오프-타겟 유전자 침묵을 감소시키거나 억제할 수 있다.
용어 "열 불안정화 변형(들)"은 dsRNA이 그러한 변형(들)을 갖지 않는 dsRNA의 전체 용융 온도(Tm)보다 낮은 Tm을 갖도록 하는 변형(들)을 포함한다. 예를 들어, 열 불안정화 변형(들)은 dsRNA의 Tm을 1~4°C, 예컨대 1, 2, 3 또는 4도만큼 감소시킬 수 있다. 또한, 용어 "열 불안정화 뉴클레오타이드"는 하나 이상의 열 불안정화 변형을 포함하는 뉴클레오타이드를 지칭한다.
안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수하여 처음 9개 뉴클레오타이드 위치 내 듀플렉스의 적어도 하나의 열 불안정화 변형을 포함하는 안티센스 가닥을 갖는 dsRNA가 오프-표적 유전자 침묵 활성을 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 5' 영역의 처음 9개 뉴클레오타이드 위치 내 듀플렉스의 적어도 하나(예를 들어, 1, 2, 3, 4 또는 5개 이상)의 열 불안정화 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 듀플렉스의 하나 이상의 열 불안정화 변형(들)은 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 위치 2~9, 예컨대 위치 4~8에 위치한다. 일부 추가의 구현예에서, 듀플렉스의 열 불안정화 변형(들)은 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 위치 6, 7 또는 8에 위치한다. 또 일부 추가의 구현예에서, 듀플렉스의 열 불안정화 변형은 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 위치 7에 위치한다. 일부 구현예에서, 듀플렉스의 열 불안정화 변형은 안티센스 가닥의 5'-말단으로부 위치 2, 3, 4, 5 또는 9에 위치한다.
iRNA 제제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 각각의 가닥은 14 내지 40개 뉴클레오타이드를 갖는다. RNAi 제제는 화학식 L로 나타낼 수 있다:
화학식 L에서, B1, B2, B3, B1', B2', B3', 및 B4'는 각각 독립적으로 2'-O-알킬, 2'-치환 알콕시, 2'-치환 알킬, 2'-할로, ENA, 및 BNA/LNA로 이루어진 군으로부터 선택된 변형을 함유하는 뉴클레오타이드이다. 일 구현예에서, B1, B2, B3, B1', B2', B3', 및 B4'는 각각 2'-OMe 변형을 함유한다. 일 구현예에서, B1, B2, B3, B1', B2', B3', 및 B4'는 각각 2'-OMe 또는 2'-F 변형을 함유한다. 일 구현예에서, B1, B2, B3, B1', B2', B3', 및 B4' 중 적어도 하나는 2'-O-N-메틸아세트아미도(2'-O-NMA, 2'O-CH2C(O)N(Me)H) 변형을 함유한다.
C1은 안티센스 가닥의 시드 영역에 대향하는 부위(즉, 안티센스 가닥의 5'-말단의 위치 2~8)에 위치하는 열 불안정화 뉴클레오타이드이다. 예를 들어, C1은 안티센스 가닥의 5'-말단의 위치 2~8에서 뉴클레오타이드와 쌍을 이루는 센스 가닥의 위치에 있다. 일 실시예에서, C1은 센스 가닥의 5'-말단으로부터 위치 15에 있다. C1 뉴클레오타이드는 무염기성 변형; 듀플렉스에서 반대 뉴클레오타이드를 갖는 미스매치; 및 당 변형, 예컨대 2'-데옥시 변형 또는 비환형 뉴클레오타이드, 예를 들어, 잠김 해제된 핵산(UNA) 또는 글리세롤 핵산(GNA) 또는 2'-5'-결합 리보뉴클레오타이드("3'-RNA")를 포함할 수 있는 열 불안정화 변형을 갖는다. 일 구현예에서, C1은 i) 안티센스 가닥에서 반대 뉴클레오타이드를 갖는 미스매치; ii) 다음으로 이루어진 군:
으로부터 선택된 무염기성 변형; 및 iii) 다음으로 이루어진 군::
으로부터 선택된 당 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된 열 불안정화 변형을 갖고, 여기서 B는 변형 또는 미변형 않은 뉴클레오염기이고, R1 및 R2는 독립적으로 H, 할로겐, OR3, 또는 알킬이고; R3은 H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 또는 당이다. 일 구현예에서, C1에서의 열 불안정화 변형은 G:G, G:A, G:U, G:T, A:A, A:C, C:C, C:U, C:T, U:U, T:T, 및 U:T로 이루어진 군으로부터 선택된 미스매치이고; 선택적으로, 미스매치 쌍 내의 적어도 하나의 뉴클레오염기는 2'-데옥시 뉴클레오염기이다. 일 실시예에서, C1에서의 열 불안정화 변형은 GNA 또는 이다.
T1, T1', T2', 및 T3'은 각각 독립적으로 뉴클레오타이드에 2'-OMe 변형의 입체 벌크 이하인 입체 벌크를 제공하는 변형을 포함하는 뉴클레오타이드를 나타낸다. 입체 벌크는 변형의 입체 효과의 합을 지칭한다. 뉴클레오타이드의 변형의 입체 효과를 결정하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 변형은 뉴클레오타이드의 리보스 당의 2' 위치에 있을 수 있거나, 비-리보스 뉴클레오타이드, 비환형 뉴클레오타이드, 또는 리보스 당의 2' 위치와 유사하거나 동등한 뉴클레오타이드의 골격에 대한 변형일 수 있고, 뉴클레오타이드에 2'-OMe 변형의 입체 벌크보다 이하인 입체 벌크를 제공한다. 예를 들어, T1, T1', T2', 및 T3'은 DNA, RNA, LNA, 2'-F, 및 2'-F-5'-메틸로부터 각각 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, T1은 DNA이다. 일 구현예에서, T1'은 DNA, RNA 또는 LNA이다. 일 구현예에서, T2'는 DNA 또는 RNA이다. 일 구현예에서, T3'은 DNA 또는 RNA이다.
n1, n3, 및 q1은 독립적으로 길이가 4 내지 15개의 뉴클레오타이드이다.
n5, q3, 및 q7은 독립적으로 길이가 1~6개의 뉴클레오타이드(들)이다.
n4, q2, 및 q6은 독립적으로 길이가 1~3개의 뉴클레오타이드(들)이고; 대안적으로, n4는 0이다.
q5는 독립적으로 길이가 0~10개의 뉴클레오타이드(들)이다.
n2 및 q4는 독립적으로 길이가 0~3개의 뉴클레오타이드(들)이다.
대안적으로, n4는 길이가 0~3개의 뉴클레오타이드(들)이다.
일 구현예에서, n4는 0일 수 있다. 일 실시예에서, n4는 0이고, q2 및 q6은 1이다. 또 다른 예에서, n4는 0이고, q2 및 q6은 1이고, 센스 가닥의 위치 1~5 내에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5-말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, n4, q2, 및 q6은 각각 1이다.
일 구현예에서, n2, n4, q2, q4, 및 q6은 각각 1이다.
일 구현예에서, C1은 센스 가닥이 길이가 19~22개의 뉴클레오타이드인 경우, 센스 가닥의 5' 말단의 위치 14~17에 있고, n4는 1이다. 일 구현예에서, C1은 센스 가닥의 5'-말단의 위치 15에 있다.
일 구현예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2번에서 시작한다. 일 실시예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에 있고, q6은 1과 같다.
일 구현예에서, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에서 시작한다. 일 실시예에서, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에 있고, q2은 1과 같다.
예시적인 구현예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에서 시작하고, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에서 시작한다. 일 실시예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2번에서 시작하고, q6은 1과 같고, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에서 시작하고, q2는 1과 같다.
일 구현예에서, T1' 및 T3'는 길이가 11개의 뉴클레오타이드에 의해 분리된다(즉, T1' 및 T3' 뉴클레오타이드를 계수하지 않음).
일 구현예에서, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에 있다. 일 실시예에서, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에 있고, q2는 1과 같고, 변형은 2' 위치 또는 비-리보스 내 위치에 있고, 비환형 또는 골격은 2'-OMe 리보스보다 덜 입체적인 벌크를 제공한다.
일 구현예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에 있다. 일 실시예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에 있고, q6은 1과 같고, 변형은 2' 위치 또는 비-리보스 내 위치에 있고, 비환형 또는 골격은 2'-OMe 리보스 보다 덜 하거나 동등한 입체적인 벌크를 제공한다.
일 구현예에서, T1은 센스 가닥의 절단 부위에 있다. 일 실시예에서, T1은 센스 가닥이 길이가 19~22개의 뉴클레오타이드인 경우, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 11에 있고, n2는 1이다. 예시적인 구현예에서, T1은 센스 가닥이 길이가 19~22개의 뉴클레오타이드인 경우, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 11에 있는 센스 가닥의 절단 부위에 있고, n2는 1이다.
일 구현예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 6에서 시작한다. 일 실시예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 6~10에 있고, q4는 1이다.
예시적인 구현예에서, T1은, 예를 들어, 센스 가닥이 길이가 19~22개의 뉴클레오타이드인 경우, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 11에 있는 센스 가닥의 절단 부위에 있고, n2는 1이고; T1'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에 있고, q2는 1과 같고, T1'에 대한 변형은 리보스 당의 2' 위치에 또는 비-리보스 내의 위치에 있고, 비환형 또는 골격은 2'-OMe 리보스 보다 덜 입체적인 벌크를 제공하고; T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 6~10에 있고, q4는 1이고; T3'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에 있고, q6는 1과 같고, T3'에 대한 변형은 2' 위치에 또는 비-리보스 내 위치에 있고, 비환형 또는 골격은 2'-OMe 리보스 보다 덜 하거나 동등한 입체적인 벌크를 제공한다.
일 구현예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 8에서 시작한다. 일 실시예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 8에서 시작하고, q4는 2이다.
일 구현예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 9에서 시작한다. 일 실시예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 9에 있고, q4는 1이다.
일 구현예에서, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 6이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내에서 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 인터뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 6이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 6이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 7이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 6이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 7이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 6이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 6이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고,n2 는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 5이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 선택적으로, 안티센스 가닥의 3'-말단에 적어도 2개의 추가 TT를 갖는다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 5이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 선택적으로, 안티센스 가닥의 3' 말단에 적어도 2개의 추가 TT를 갖고; 센스 가닥의 위치 1~5 내에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 결합 변형(센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 결합 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 결합 변형(안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함)을 포함한다.
RNAi 제제는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 5'-말단에 인 함유 기를 포함할 수 있다. 5'-말단 인 함유 기는 5'-말단 포스페이트(5'-P), 5'-말단 포스포로티오에이트(5'-PS), 5'-말단 포스포로디티오에이트(5'-PS2), 5'-말단 비닐포스포네이트(5'-VP), 5'-말단 메틸포스포네이트(MePhos), 또는 5'-데옥시-5'-C-말로닐()일 수 있다. 5'-말단 인 함유 기가 5'-말단 비닐포스포네이트(5'-VP)인 경우, 5'-VP는 5'-E-VP 이성질체(즉, 트랜스-비닐포스페이트, (), 5'-Z-VP 이성질체(즉, 시스-비닐포스페이트, (), 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 센스 가닥의 5'-말단에 인 함유 기를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 5'-말단에 인 함유 기를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-P를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-PS를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-VP를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-VP를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-E-VP를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-Z-VP를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-PS2를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-PS2를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. dsRNA 제제는 또한 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'- PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'- VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. dsRNAi RNA 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'- PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'- VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-P는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP(예를 들어, 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합) 및 표적화 리간드를 포함한다.
일 구현예에서, 5'-VP는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- PS2 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS2는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-데옥시-5'-C-말로닐은 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-P는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP(예를 들어, 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합) 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-VP는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS2는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-데옥시-5'-C-말로닐은 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-P는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP(예를 들어, 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합) 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-VP는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS2는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18-23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-데옥시-5'-C-말로닐은 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-P는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- VP(예를 들어, 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합) 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-VP는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- PS2 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS2는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-데옥시-5'-C-말로닐은 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드; 및
(iii) 위치 1, 3, 5, 7, 9 내지 11, 13, 17, 19 및 21에서의 2'-F 변형 및 위치 2, 4, 6, 8, 12, 14 내지 16, 18 및 20에서의 2'-OMe 변형(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 5, 9, 11 내지 13, 15, 17, 19, 21, 및 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 4, 6 내지 8, 10, 14, 16, 18, 20, 및 22에서의 2'F 변형(5' 말단으로부터 계수함);
(iii) 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
여기서, dsRNA 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1, 3, 5, 7, 9 내지 11, 13, 15, 17, 19 및 21에서의 2'-F 변형 및 위치 2, 4, 6, 8, 12, 14, 16, 18 및 20에서의 2'-OMe 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 5, 7, 9, 11 내지 13, 15, 17, 19, 및 21 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 4, 6, 8, 10, 14, 16, 18, 및 20에서의 2'F 변형(5' 말단으로부터 계수함);
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 6, 8, 10 및 12 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 위치 7 및 9에서의 2'-F 변형, 및 위치 11에서의 데옥시-뉴클레오타이드(예를 들어, dT)(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17 및 19 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 4 내지 6, 8, 10, 12, 14, 16, 및 18에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 6, 8, 10, 12, 14, 및 16 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 7, 9, 11, 13, 및 15에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 및 21 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2 내지 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 및 20에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 9, 및 12 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 10 및 11에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 5, 7, 9, 11 내지 13, 15, 17, 19, 및 21 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 4, 6, 8, 10, 14, 16, 18, 및 20에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함);
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1, 3, 5, 7, 9 내지 11, 및 13에서의 2'-F 변형, 및 위치 2, 4, 6, 8, 12, 및 14 내지 21에서의 2'-OMe 변형; 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 5 내지 7, 9, 11 내지 13, 15, 17 내지 19, 및 21 내지 23에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 2, 4, 8, 10, 14, 16, 및 20에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1, 2, 4, 6, 8, 12, 14, 15, 17, 및 19 내지 21에서의 2'-OMe 변형 및 위치 3, 5, 7, 9 내지 11, 13, 16, 및 18에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 25개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 4, 6, 7, 9, 11 내지 13, 15, 17, 및 19 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 3, 5, 8, 10, 14, 16, 및 18에서의 2'-F 변형, 및 위치 24 및 25에서의 데옥시-뉴클레오타이드(예를 들어, dT)(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 4개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 6, 8 및 12 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 7 및 9 내지 11에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 3 내지 5, 7, 8, 10 내지 13, 15, 및 17 내지 23에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 2, 6, 9, 14, 및 16에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 6, 8 및 12 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 7 및 9 내지 11에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 3 내지 5, 7, 10 내지 13, 15, 및 17 내지 23에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 2, 6, 8, 9, 14, 및 16에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 19개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 4, 6 및 10 내지 19에서의 2'-OMe 변형 및 위치 5 및 7 내지 9에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오타이드의 길이;
(ii) 위치 1, 3 내지 5, 7, 10 내지 13, 15, 및 17 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 2, 6, 8, 9, 14, 및 16에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오타이드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오타이드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오타이드 위치 19와 20 사이, 및 뉴클레오타이드 위치 20과 21 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오타이드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
특정 구현예에서, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 iRNA는 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나에 열거된 제제로부터 선택된 제제이다. 이들 제제는 추가로 리간드를 포함할 수 있다.
III. 리간드에 접합된 iRNA
발명의 iRNA의 RNA의 또 다른 변형은, 예를 들어, 세포로의 iRNA의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 향상시키는 iRNA 하나 이상의 리간드, 모이어티 또는 접합체에 화학적으로 연결하는 것을 포함한다. 이러한 모이어티는 콜레스테롤 모이어티와 같은 지질 모이어티를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다(문헌참조: Letsinger 등, Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553~6556). 다른 구현예에서, 리간드는 콜산(문헌참조: Manoharan 등, Biorg. Med. Chem. Let., 1994, 4:1053~1060), 티오에테르, 예를 들어, 베릴-S-트리틸티올(문헌참조: Manoharan 등, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306~309; Manoharan 등, Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765~2770), 티오콜레스테롤(문헌참조: Oberhauser 등, Nucl. Acids Res., 1992, 20:533~538), 지방족 사슬, 예를 들어, 도데칸디올 또는 운데실 잔기(문헌참조: Saison-Behmoaras 등, EMBO J, 1991, 10:1111~1118; Kabanov 등, FEBS Lett., 1990, 259:327~330; Svinarchuk 등, Biochimie, 1993, 75:49~54), 인지질, 예를 들어, 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸-암모늄 1,2-디-O-헥사데실-rac-글리세로-3-포스포네이트(문헌참조: Manoharan 등, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651~3654; Shea 등, Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777~3783), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬(문헌참조: Manoharan 등, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969~973), 또는 아다만탄 아세트산(문헌참조: Manoharan 등, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651~3654), 또는 손바닥 모이어티(문헌참조: Mishra 등, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229~237), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐옥시콜레스테롤 모이어티(문헌참조: Crooke 등, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923~937)이다.
특정 구현예에서, 리간드는 이것이 도입되는 iRNA 제제의 분포, 표적화 또는 수명을 변경시킨다. 일부 구현예에서 리간드는, 예를 들어, 이러한 리간드가 부재하는 종과 비교하여 선택된 표적, 예를 들어, 분자, 세포 또는 세포 유형, 구획, 예를 들어 세포 또는 기관 구획, 조직, 기관 또는 신체의 영역에 대해 증진된 친화성을 제공한다. 일부 구현예에서, 리간드는 듀플렉스 핵산에서 듀플렉스 쌍형성에 관여하지 않는다.
리간드는 천연 발생 물질, 예컨대 단백질(예를 들어, 인간 혈청 알부민(HSA), 저밀도 지질단백질(LDL) 또는 글로불린); 탄수화물(예를 들어, 덱스트란, 풀루란, 키틴, 키토산, 이눌린, 사이클로덱스트린, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민 또는 히알루론산); 또는 지질을 포함할 수 있다. 리간드는 또한 재조합 또는 합성 분자, 예컨대 합성 중합체, 예를 들어 합성 폴리아미노산일 수 있다. 폴리아미노산의 예는 폴리라이신(PLL), 폴리 L-아스파르트산, 폴리 L-글루탐산, 스티렌-말레산 무수물 공중합체, 폴리(L- 락티드-코-글리콜화된) 공중합체, 디비닐 에테르-말레산 무수물 공중합체, N-(2-하이드록시프로필)메타크릴아미드 공중합체 (HMPA), 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리우레탄, 폴리(2-에틸아크릴산), N-이소프로필아크릴아미드 중합체 또는 폴리포스파진을 포함한다. 폴리아민의 예는 다음을 포함한다: 폴리에틸렌이민, 폴리리신(PLL), 스퍼민, 스퍼미딘, 폴리아민, 슈도펩타이드-폴리아민, 펩티도미메틱 폴리아민, 덴드리머 폴리아민, 아르기닌, 아미딘, 프로타민, 양이온성 지질, 양이온성 포르피린, 폴리아민의 4차 염 또는 알파 나선 펩타이드.
리간드는 또한 표적화 군, 예를 들어, 세포 또는 조직 표적화 제제, 예를 들어, 렉틴, 당단백질, 지질 또는 단백질, 예를 들어, 콩팥 세포와 같은 특정 세포 유형에 결합하는 항체를 포함할 수 있다. 표적화 군은 티로트로핀, 멜라노트로핀, 렉틴, 당단백질, 계면활성제 단백질 A, 뮤신 탄수화물, 다가 락토스, 다가 갈락토스, N-아세틸-갈락토사민, N-아세틸-글루코사민 다가 만노스, 다가 푸코스, 글리코실화된 폴리아미노산, 다가 갈락토스, 트랜스페린, 비스포스포네이트, 폴리글루타메이트, 폴리아스파르테이트, 지질, 콜레스테롤, 스테로이드, 담즙산, 폴레이트, 비타민 B12, 비타민 A, 비오틴, 또는 RGD 펩타이드 또는 RGD 펩타이드 모사체일 수 있다. 특정 구현예에서, 리간드는 다가 갈락토스, 예를 들어, N-아세틸-갈락토사민이다.
리간드의 다른 예는 염료, 중간증량제(예를 들어, 아크리딘), 가교제(예를 들어, 소랄렌, 미토마이신 C), 포르피린(TPPC4, 텍사피린, 삭피린), 다환 방향족 탄화수소(예를 들어, 페나진, 디히드로페나진), 인공 엔도뉴클레아제(예를 들어, EDTA), 친유성 분자, 예를 들어, 콜레스테롤, 콜산, 아다만탄 아세트산, 1-피렌 부티르산, 디하이드로테스토스테론, 1,3-Bis-O(헥사데실)글리세롤, 게라닐옥시헥실기, 헥사데실글리세롤, 보르놀, 멘톨, 1,3-프로판디올, 헵타데실기, 팔미트산, 미리스트산,O3-(올레오일)리소콜산, O3-(올레오일)콜레산, 디메톡시트리틸, 또는 페녹사진) 및 펩타이드 접합체(예를 들어, 안테나피디아 펩타이드, Tat 펩타이드), 알킬화제, 포스페이트, 아미노, 메르캅토, PEG(예를 들어, PEG-40K), MPEG, [MPEG]2, 폴리아미노, 알킬, 치환된 알킬, 방사성 표지된 마커, 효소, 합텐(예를 들어, 비오틴), 수송/흡수 촉진자(예를 들어, 아스피린, 비타민 E, 엽산), 합성 리보뉴클레아제(예를 들어, 이미다졸, 비스이미다졸, 히스타민, 이미다졸 클러스터, 아크리딘-이미다졸 접합체, 테트라아자마크로사이클의 Eu3+ 복합체), 디니트로페닐, HRP, 또는 AP를 포함한다.
리간드는 단백질, 예를 들어, 당단백질, 또는 펩타이드, 예를 들어, 공동-리간드에 대한 특이적 친화성을 갖는 분자, 또는 항체, 예를 들어, 간세포와 같은 특정 세포 유형에 결합하는 항체일 수 있다. 리간드는 또한 호르몬 및 호르몬 수용체를 포함할 수 있다. 이들은 또한 비-펩타이드 종, 예를 들어, 지질, 렉틴, 탄수화물, 비타민, 조인자, 다가 락토스, 다가 갈락토스, N- 아세틸-갈락토사민, N-아세틸-글루코사민 다가 만노스 또는 다가 푸코스를 포함할 수 있다. 리간드는, 예를 들어, 리포폴리사카라이드, p38 MAP 키나제의 활성화제 또는 NF-kB의 활성화제일 수 있다.
리간드는 예를 들어, 미세소관, 마이크로필라멘트 또는 중간 필라멘트를붕괴시킴에 의해 세포의 세포골격을, 예를 들어, 파괴함으로써 iRNA 제제의 세포로의 흡수를 증가시킬 수 있는 물질, 예를 들어 약물일 수 있다. 약물은, 예를 들어, 탁솔, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 시토칼라신, 노코다졸, 자플라키놀리드, 라트린쿨린 A, 팔로이딘, 스윈홀리드 A, 인다노신, 또는 미오세빈일 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 것과 같은 iRNA에 부착된 리간드는 약동학적 조절제(PK 조절제)로서 작용한다. PK 조절제는 친유성체, 담즙산, 스테로이드, 인지질 유사체, 펩타이드, 단백질 결합제, PEG, 비타민 등을 포함한다. 예시적인 PK 조절제는 콜레스테롤, 지방산, 콜산, 리토콜산, 디알킬글리세리드, 디아실글리세리드, 인지질, 스핑고지질, 나프록센, 이부프로펜, 비타민 E, 비오틴 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다수의 포스포로티오에이트 결합을 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 또한 혈청 단백질에 결합하는 것으로 공지되어 있고, 따라서, 짧은 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 골격 내 다수의 포스포로티오에이트 결합을 포함하는 약 5개 염기, 10개 염기, 15개 염기 또는 20개 염기의 올리고뉴클레오타이드도 본 발명에 리간드로서(예를 들어, PK 조절 리간드로서) 적용될 수 있다. 또한, 혈청 성분(예를 들어, 혈청 단백질)에 결합하는 압타머는 또한 본 명세서에 기술된 구현예에서 PK 조절 리간드로서 사용하기에 적합하다.
발명의 리간드-접합 iRNA는 (하기에서 기술하는 것과 같이) 올리고뉴클레오타이드 상으로의 결합 분자의 부착으로부터 유래된 것과 같은 펜던트 반응성 관능기를 함유하는 올리고뉴클레오타이드의 사용에 의해 합성될 수 있다. 이러한 반응성 올리고뉴클레오타이드는 상업적으로 이용가능한 리간드, 임의의 다양한 보호기를 보유하는 합성된 리간드, 또는 이에 부착된 결합 모이어티를 갖는 리간드와 직접 반응할 수 있다.
본 발명의 접합체에 사용되는 올리고뉴클레오타이드는 널리 공지된 고체상 합성 기술을 통해 편리하고 통상적으로 제조될 수 있다. 그러한 합성을 위한 기기는 여러 판매업자에 의해 시판되고 있고, 예를 들어, Applied Biosystems®(Foster City, Calif.)을 포함한다. 당업계에 공지된 그러한 합성을 위한 임의의 다른 방법은 추가로 또는 대안적으로 사용될 수 있다. 또한 다른 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 포스포로티오에이트 및 알킬화된 유도체를 제조하기 위한 유사한 기술을 사용하는 것이 공지되어 있다.
본 발명의 리간드-접합된 iRNA 및 리간드-분자 함유 서열-특이적 연결된 뉴클레오시드에서, 올리고뉴클레오타이드 및 올리고뉴클레오사이드는 표준 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오사이드 전구체, 또는 이미 연결 모이어티를 보유하는 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오사이드 접합 전구체, 이미 리간드 분자를 보유하는 리간드-뉴클레오타이드 또는 뉴클레오사이드-접합체 전구체, 또는 비-뉴클레오사이드 리간드-보유 빌딩 블록을 사용하여 적합한 DNA 합성기 상에서 제조될 수 있다.
이미 연결 모이어티를 보유하는 뉴클레오사이드 접합 전구체를 사용하는 경우, 서열-특이적 연결된 뉴클레오사이드의 합성은 통상적으로 완료되고, 리간드 분자는 연결 모이어티와 반응하여 리간드-접합 올리고뉴클레오타이드를 형성한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 연결된 뉴클레오사이드는 상업적으로 이용가능하고 올리고뉴클레오타이드 합성에 통상적으로 사용되는 표준 포스포르아미디트 및 비표준 포스포르아미디트에 추가하여 리간드-뉴클레오사이드 접합체로부터 유래된 포스포르아미디트를 사용하여 자동화된 합성기에 의해 합성된다.
A. 지질 접합체
특정 구현예에서, 리간드 또는 접합체는 지질 또는 지질 기반 분자이다. 일 구현예서, 그러한 지질 또는 지질 기반 분자는 혈청 단백질, 예를 들어 인간 혈청 알부민(HSA)에 결합한다. HSA 결합 리간드는 표적 조직, 예를 들어 신체의 비-콩팥 표적 조직으로의 접합체의 분포를 가능하게 한다. 예를 들어, 표적 조직은 간의 실질 세포를 포함하는 간일 수 있다. HSA에 결합할 수 있는 다른 분자는 또한 리간드로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 나프록센 또는 아스피린이 사용될 수 있다. 지질 또는 지질 기반 리간드는 (a) 접합체의 분해에 대한 내성을 증가시킬 수 있거나, (b) 표적 세포 또는 세포막으로의 표적화 또는 수송을 증가시킬 수 있거나, (c) 혈청 단백질, 예를 들어, HSA로의 결합을 조정하기 위해 사용될 수 있다.
지질 기반 리간드를 사용하여 접합체의 표적 조직으로의 결합을 억제, 예를 들어, 제어할 수 있다. 예를 들어, 보다 강하게 HSA에 결합하는 지질 또는 지질 기반 리간드는 콩팥으로 표적화될 가능성이 적고 따라서 신체로부터 제거될 가능성이 적다. HSA에 덜 강하게 결합하는 지질 또는 지질 기반 리간드를 사용하여 접합체를 콩팥에 표적화시킬 수 있다.
특정 구현예에서, 지질 기반 리간드는 HSA에 결합한다. 일 구현예에서, 이는 접합체가 비-콩팥 조직에 분포되기에 충분한 친화도로 HSA에 결합한다. 그러나, 친화도는 HSA-리간드 결합이 역행될 수 없을 정도로 강하지 않는 것이 바람직하다.
다른 구현예에서, 지질 기반 리간드는 HSA에 약하게 결합하거나 전혀 결합하지 않는다. 일 구현예에서, 접합체는 신장에 분포될 것이다. 콩팥 세포를 표적으로 하는 다른 모이어티는 또한 지질 기반 리간드 대신에 또는 이에 추가로 사용될 수 있다.
또 다른 양태에서, 리간드는 모이어티, 예를 들어, 표적 세포, 예를 들어, 증식 세포에 의해 흡수되는 비타민이다. 이들은 특히 예를 들어 악성 또는 비악성 유형의 원치 않는 세포 증식을 특징으로 하는 장애, 예를 들어 암세포를 치료하는 데 유용하다. 예시적인 비타민은 비타민 A, E, 및 K를 포함한다. 다른 예시적인 비타민은 B 비타민, 예를 들어, 엽산, B12, 리보플라빈, 비오틴, 피리독살 또는 간 세포와 같은 표적 세포에 의해 흡수되는 다른 비타민 또는 영양물을 포함한다. 또한 HSA 및 저밀도 지질단백질(LDL)이 포함된다.
B. 세포 투과 제제
또 다른 양태에서, 리간드는 세포 투과 제제, 예컨대 나선 세포 투과 제제이다. 일 구현예에서, 제제는 양친매성이다. 예시적인 제제는 tat 또는 안테노페디아와 같은 펩타이드이다. 제제가 펩타이드인 경우, 이는 펩티딜모사체, 인버토머, 비펩타이드 또는 슈도-펩타이드 결합 및 D-아미노산의 사용을 포함하여 변형될 수 있다. 일 구현예에서, 나선형 제제는 친유성 및 소유성 상을 갖는 알파-나선 제제이다.
리간드는 펩타이드 또는 펩티도모사체일 수 있다. (본원에서 올리고펩티도모사체라고도 지칭되는) 펩티도모사체는 천연 펩타이드와 유사한 한정된 3차원 구조로 폴딩할 수 있는 분자이다. iRNA 제제로의 펩타이드 및 펩티도모사체의 부착은 예를 들어, 세포 인지 및 흡착을 증진시킴에 의해 iRNA의 약동학적 분포에 영향을 미칠 수 있다. 펩타이드 또는 펩티도모사체 모이어티는 약 5~50개 아미노산 길이, 예를 들어, 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50개 아미노산 길이일 수 있다.
펩타이드 또는 펩티도모사체는 예를 들어, 세포 투과 펩타이드, 양이온성 펩타이드, 양친매성 펩타이드 또는 소수성 펩타이드(예를 들어, 주로 Tyr, Trp, 또는 Phe로 이루어진)일 수 있다. 펩타이드 모이어티는 덴드리머 펩타이드, 구속된 펩타이드 또는 가교결합된 펩타이드일 수 있다. 또 다른 대안에서, 펩타이드 모이어티는 소수성 막 전좌 서열(MTS)을 포함할 수 있다. 예시적인 소수성 MTS-함유 펩타이드는 아미노산 서열 AAVALLPAVLLALLAP(서열번호 14)를 갖는 RFGF이다. 소수성 MTS를 함유하는 RFGF 유사체(예를 들어, 아미노산 서열 AALLPVLLAAP(서열번호 15)는 또한 표적화 모이어티일 수 있다. 펩타이드 모이어티는 "전달" 펩타이드일 수 있으며, 이는 펩타이드, 올리고뉴클레오타이드, 및 단백질을 포함하는 큰 극성 분자를 세포막을 가로질러 운반할 수 있다. 예를 들어, HIV Tat 단백질(GRKKRRQRRRPPQ(서열번호 16) 및 드로소필라 안테나피디아 단백질(RQIKIWFQNRRMKWKK(서열번호 17)) 유래의 서열은 전달 펩타이드로서 기능할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 펩타이드 또는 펩티도모사체는 DNA의 무작위 서열, 예를 들어 파지-디스플레이 라이브러리, 또는 OBOC(one-bead-one-compound) 조합 라이브러리로부터 식별된 펩타이드(문헌참조: Lam 등, Nature, 354:82~84, 1991)에 의해 암호화될 수 있다. 세포 표적화 목표를 위해 혼입된 단량체 단위를 통해 dsRNA 제제에 테터링된 펩타이드 또는 펩티도모사체의 예는 아르기닌-글리신-아스파르트산(RGD)-펩타이드, 또는 RGD 모방체이다. 펩타이드 모이어티는 길이가 약 5개의 아미노산 내지 약 40개의 아미노산 범위일 수 있다. 펩타이드 모이어티는 예를 들어, 안정성을 증가시키거나 형태적 성질을 지시하기 위해 구조적 변형을 가질 수 있다. 하기 기술된 임의의 구조적 변형이 사용될 수 있다.
발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 RGD 펩타이드는 선형 또는 환형일 수 있고, 변형되어, 예를 들어, 글리코실화되거나 메틸화되어 특이적 조직(들)로의 표적화를 촉진시킬 수 있다. RGD-함유 펩타이드 및 펩티도모사체는 합성 RGD 모방체 뿐만 아니라 D-아미노산을 포함할 수 있다. RGD에 추가로, 당업자는 인테그린 리간드를 표적으로 하는 다른 모이어티, 예를 들어 PECAM-1 또는 VEGF를 사용할 수 있다.
"세포 투과 펩타이드"는 세포, 예를 들어, 미생물 세포, 예컨대, 세균 또는 진균류 세포, 또는 포유동물 세포, 예컨대, 인간 세포를 투과할 수 있다. 미생물 세포-투과 펩타이드는 예를 들어, α-나선 선형 펩타이드(예를 들어, LL-37 또는 세로핀 P1), 디설파이드 결합-함유 펩타이드(예를 들어, α-데펜신, β-데펜신 또는 박테네신), 또는 단지 하나 또는 2개의 주요 아미노산을 함유하는 펩타이드(예를 들어, PR-39 또는 인돌리시딘)일 수 있다. 세포 투과 펩타이드는 또한 핵 국소화 신호(NLS)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 세포 투과 펩타이드는 HIV-1 gp41의 융합 펩타이드 도메인 및 SV40 대형 T 항원의 NLS로부터 유래된 MPG와 같은 이분형 양친매성 펩타이드일 수 있다(문헌참조: Simeoni 등, Nucl. Acids Res. 31:2717~2724, 2003).
C. 탄수화물 접합체
본 발명의 조성물 및 방법의 일부 구현예에서, iRNA는 추가로 탄수화물을 포함한다. 탄수화물 접합된 iRNA는 본 명세서에 기술된 것과 같이 생체 내 치료학적 용도에 적합한 조성물 뿐만 아니라 핵산의 생체 내 전달에 유리하다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "탄수화물"은 각각의 탄소 원자에 결합된 산소, 질소 또는 황 원자와 함께 적어도 6개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 단당류 유닛(선형, 분지형 또는 환형일 수 있는)으로 이루어진 탄수화물 자체인 화합물; 또는 이의 일부로서 각각의 탄소 원자에 결합된 산소, 질소 또는 황 원자와 함께 각각 적어도 6개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 단당류 유닛(선형, 분지형 또는 환형일 수 있는)으로 이루어진 탄수화물 모이어티를 갖는 화합물을 지칭한다. 대표적인 탄수화물은 당(모노-, 디-, 트리-, 및 약 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 단당류 유닛을 함유하는 올리고사카라이드) 및 폴리사카라이드, 예를 들어, 전분, 글리코겐, 셀룰로스 및 폴리사카라이드 검을 포함한다. 특이적 단당류는 C5 이상(예를 들어, C5, C6, C7, 또는 C8) 당을 포함하고; 이당류 및 삼당류는 2개 또는 3개의 단당류 유닛(예를 들어, C5, C6, C7, 또는 C8)을 갖는 당을 포함한다.
특정 구현예에서, 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 탄수화물 접합체는 단당류이다.
특정 구현예에서, 단당류는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc)이다. 하나 이상의 N-아세틸갈락토스아민(GalNAc) 유도체를 포함하는 GalNAc 접합체는 예를 들어, 미국 특허번호 제8,106,022호에 기술되어 있고, 이의 전문은 본원에 참조로 인용된다. 일부 구현예에서, GalNAc 접합체는 iRNA를 특정 세포로 표적화하는 리간드로서 작용한다. 일부 구현예에서, GalNAc 접합체는 예를 들어, 간 세포(예를 들어, 간 세포(hepatocyte))의 아시알로당단백질(asialoglycoprotein) 수용체에 대해 리간드로서 작용함에 의해 iRNA를 간 세포로 표적화한다.
일부 구현예에서, 탄수화물 접합체는 하나 이상의 GalNAc 유도체를 포함한다. GalNAc 유도체는 링커, 예를 들어, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, GalNAc 접합체는 센스 가닥의 3' 말단에 접합된다. 일부 구현예에서, GalNAc 접합체는 링커, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 것과 같은 링커를 통해 iRNA 제제에 (예를 들어, 센스 가닥의 3' 말단에) 접합된다. 일부 구현예에서, GalNAc 접합체는 센스 가닥의 5' 말단에 접합된다. 일부 구현예에서, GalNAc 접합체는 링커, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 것과 같은 링커를 통해 iRNA 제제에 (예를 들어, 센스 가닥의 5' 말단에) 접합된다.
본 발명의 특정 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 1가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다. 일부 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 2가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 3가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다. 본 발명의 다른 구현에에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 4가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다.
특정 구현예에서, 발명의 이중 가닥 RNAi 제제는 iRNA 제제에 부착된 하나의 GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 포함한다. 특정 구현예에서, 발명의 이중 가닥 RNAi 제제는 다수의(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 또는 6개) GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 포함하고, 각각은 독립적으로 다수의 1가 링커를 통해 이중가닥 RNAi 제제의 다수의 뉴클레오타이드에 부착된다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 본 발명의 iRNA 제제의 2개의 가닥이 하나의 가닥의 3'-말단과 별개의 다른 가닥의 5'-말단 사이에 중단되지 않은 뉴클레오타이드 사슬에 의해 연결되어 다수의 쌍을 형성하지 않은 뉴클레오타이드를 포함하는 헤어핀 루프를 형성하는 하나의 더 큰 분자의 일부인 경우, 헤어핀 루프 내의 각각의 쌍을 형성하지 않은 뉴클레오타이드는 1가 링커를 통해 부착된 GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 독립적으로 포함할 수 있다. 헤어핀 루프는 또한 듀플렉스의 하나의 가닥에 연장된 오버행에 의해 형성될 수 있다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 본 발명의 iRNA 제제의 2개의 가닥이 하나의 가닥의 3'-말단과 별개의 다른 가닥의 5'-말단 사이에 중단되지 않은 뉴클레오타이드 사슬에 의해 연결되어 다수의 쌍을 형성하지 않은 뉴클레오타이드를 포함하는 헤어핀 루프를 형성하는 하나의 더 큰 분자의 일부인 경우, 헤어핀 루프 내의 각각의 쌍을 형성하지 않은 뉴클레오타이드는 1가 링커를 통해 부착된 GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 독립적으로 포함할 수 있다. 헤어핀 루프는 또한 듀플렉스의 하나의 가닥에 연장된 오버행에 의해 형성될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 탄수화물 접합체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
, 여기서, Y는 O 또는 S이고, n은 3~6이고(화학식 XXIV);
, 여기서, Y는 O 또는 S이고, n은 3~6이고(화학식 XXV);
여기서, Y는 O 또는 S이고(화학식 XXVII);
또 다른 구현예에서, 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 탄수화물 접합체는 단당류이다. 일 구현예에서, 단당류는 N-아세틸갈락토사민, 예컨대
화학식 II이다.
일부 구현예에서, RNAi 제제는 하기의 도식에 나타낸 것과 같이 링커를 통해 탄수화물 접합체에 부착되고, 여기서 X는 O 또는 S이다.
일부 구현예에서, RNAi 제제는 표 1에 정의된 것과 같이 L96에 접합되고 하기에 나타낸다:
본 명세서에 기술된 구현예에 사용하기 위한 또 다른 대표적인 탄수화물 접합체는 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않고,
(화학식 XXXVI), X 또는 Y 중 하나가 올리고뉴클레오타이드인 경우, 다른 하나는 수소이다.
일부 구현예에서, 적합한 리간드는 국제특허번호 제2019/055633호에 기술된 리간드이고, 이의 전문이 본원에 참조로 인용된다. 일 구현예에서, 리간드는 하기의 구조를 포함한다:
본 발명의 특정 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 1가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다. 일부 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 2가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 3가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다.
일 구현예에서, 발명의 이중 가닥 RNAi 제제는 iRNA 제제에 부착된 하나 이상의 GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 포함한다. GalNAc는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상에서 링커를 통해 임의의 뉴클레오타이드에 부착될 수 있다. GalNac는 센스 가닥의 5'-말단, 센스 가닥의 3'-말단, 안티센스 가닥의 5'-말단 또는 안티센스 가닥의 3'-말단에 부착될 수 있다. 일 구현예에서, GalNAc는 예를 들어, 3가 링커를 통해 센스 가닥의 3' 말단에 부착된다.
다른 구현예에서, 발명의 이중 가닥 RNAi 제제는 다수의(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 또는 6개) GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 포함하고, 각각은 독립적으로 다수의 링커, 예를 들어 1가 링커를 통해 이중가닥 RNAi 제제의 다수의 뉴클레오타이드에 부착된다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 본 발명의 iRNA 제제의 2개의 가닥이 하나의 가닥의 3'-말단과 별개의 다른 가닥의 5'-말단 사이에 중단되지 않은 뉴클레오타이드 사슬에 의해 결합되어 다수의 쌍을 형성하지 않은 뉴클레오타이드를 포함하는 헤어핀 루프를 형성하는 하나의 더 큰 분자의 일부인 경우, 헤어핀 루프 내의 각각의 쌍을 형성하지 않은 뉴클레오타이드는 1가 링커를 통해 부착된 GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 독립적으로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 탄수화물 접합체는 전술된 하나 이상의 추가 리간드, 예를 들어 PK 조절제 또는 세포 투과 펩타이드를 추가로 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 사용하기에 적합한 추가 탄수화물 접합체 및 링커는 PCT 공개번호 국제특허번호 제2014/179620호 및 국제특허번호 제2014/179627호에 기술된 것들을 포함하고, 이의 각각의 전문은 본원에 참조로 인용된다.
D. 링커
일부 구현예에서, 본원에 기술된 접합체 또는 리간드는 절단될 수 있거나 절단될 수 없는 다양한 링커로 iRNA 올리고뉴클레오타이에 부착될 수 있다.
용어 "링커" 또는 "결합 기"는 화합물의 두 부분을 연결하는, 예를 들어 화합물의 두 부분을 공유적으로 부착하는 유기 모이어티를 의미한다. 링커는 통상적으로 직접 결합 또는 산소 또는 황과 같은 원자, NR8, C(O), C(O)NH, SO, SO2, SO2NH와 같은 단위 또는 원자 사슬, 예를 들어, 하지만 비제한적으로, 치환되거나 비치환된 알킬, 치환되거나 비치환된 알케닐, 치환되거나 비치환된 알키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 헤테로아릴알킬, 헤테로아릴알케닐, 헤테로아릴알키닐, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로사이클릴알케닐, 헤테로사이클릴알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릴, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 알킬아릴알킬, 알킬아릴알케닐, 알킬아릴알키닐, 알케닐아릴알킬, 알케닐아릴알케닐, 알케닐아릴알키닐, 알키닐아릴알킬, 알키닐아릴알케닐, 알키닐아릴알키닐, 알킬헤테로아릴알킬, 알킬헤테로아릴알케닐, 알킬헤테로아릴알키닐, 알케닐헤테로아릴알킬, 알케닐헤테로아릴알케닐, 알케닐헤테로아릴알키닐, 알키닐헤테로아릴알킬, 알키닐헤테로아릴알케닐, 알키닐헤테로아릴알키닐, 알킬헤테로사이클릴알킬, 알킬헤테로사이클릴알케닐, 알킬헤테로사이클릴알키닐, 알케닐헤테로사이클릴알킬, 알케닐헤테로사이클릴알케닐, 알케닐헤테로사이클릴알키닐, 알키닐헤테로사이클릴알킬, 알키닐헤테로사이클릴알케닐, 알키닐헤테로사이클릴알키닐, 알킬아릴, 알케닐아릴, 알키닐아릴, 알킬헤테로아릴, 알케닐헤테로아릴, 알키닐헤테로아릴을 포함하고, 여기서 하나 이상의 메틸렌은 O, S, S(O), SO2, N(R8), C(O), 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릭에 의해 중단되거나 종결될 수 있고; 여기서 R8은 수소, 아실, 지방족 또는 치환된 지방족이다. 일 구현예에서, 링커는 약 1~24개 원자, 2~24, 3~24, 4~24, 5~24, 6~24, 6~18, 7~18, 8~18, 7~17, 8~17, 6~16, 7~17, 또는 8~16개 원자이다.
절단 가능한 결합 기는 세포 외부에서는 충분히 안정하지만, 표적 세포로 진입 시에 절단되어 링커가 함께 유지하고 있던 2개의 부분을 방출하는 기이다. 하나의 예시적인 구현예에서, 절단 가능한 결합 기는 대상체의 혈액에서 또는 제2 참조 조건 하(예를 들어, 혈액 또는 혈청 중에서 발견된 조건을 모방하거나 나타내도록 선택될 수 있는)에서 보다 표적 세포에서 또는 제1 참조 조건 하(예를 들어, 세포 내 조건을 모방하거나 나타내도록 선택될 수 있는)에서 적어도 약 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 이상 또는 적어도 약 100배 더 신속하게 절단된다.
절단 가능한 결합 기는 절단제, 예를 들어, pH, 산화환원 전위 또는 분해 분자의 존재에 민감하다. 일반적으로, 절단제는 혈청 또는 혈액에서 보다 세포 내부에서 보다 높은 수준 또는 활성인 상태로 보다 만연해 있거나 발견된다. 그러한 분해제의 예에는 다음이 포함된다: 예를 들어, 머캅탄과 같은 산화 또는 환원 효소 또는 환원제를 포함하며, 환원에 의해 산화환원 절단 가능한 결합 기를 분해시킬 수 있는 세포에 존재하는, 특정 기질에 대해 선택되거나 어떠한 기질 특이성을 갖지 않는 산화환원제; 에스테라제; 엔도좀 또는 산성 환경을 생성할 수 있는 제제, 예를 들어, 5 이하의 pH를 초래하는 것들; 일반산, (기질 특이적일 수 있는) 펩티다제 및 포스파타아제로서 작용함으로써 산 절단 가능한 결합 기를 가수분해하거나 분해할 수 있는 효소.
절단 가능한 결합 기, 예컨대 디설파이드 결합은 pH에 민감할 수 있다. 인간 혈청의 pH는 7.4이고, 평균 세포 내 pH는 약간 더 낮아 약 7.1~7.3 범위이다. 엔도좀은 5.5~6.0의 범위에서 보다 산성인 pH를 갖고, 리소좀은 약 5.0 근처에서 보다 더 산성인 pH를 갖는다. 일부 링커는 선택된 pH에서 절단되어 리간드로부터 세포 내부 또는 세포의 목적하는 구획으로 양이온성 지질을 방출하는 절단 가능한 결합 기를 갖는다.
링커는 특정 효소에 의해 절단될 수 있는 절단 가능한 결합 기를 포함할 수 있다. 링커로 혼입된 절단 가능한 결합 기의 유형은 표적이 되는 세포에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 간-표적화 리간드는 에스테르 기를 포함하는 링커를 통해 양이온성 지질에 결합될 수 있다. 간 세포는 에스테라제가 풍부하며, 따라서 링커는 에스테라제가 풍부하지 않은 세포 유형에서 보다 간 세포에서 보다 효율적으로 절단된다. 에스테라제가 풍부한 다른 세포 유형은 폐, 신피질 및 고환의 세포를 포함한다.
펩타이드 결합을 함유하는 링커는 간 세포 및 활막세포와 같은 펩티다아제가 풍부한 세포 유형을 표적으로 하는 경우에 사용될 수 있다.
일반적으로, 후보 절단 가능한 결합 기의 적합성은 후보 연결기를 절단하는 분해제의 능력(또는 조건)을 시험함으로써 평가될 수 있다. 또한 혈액 내에서 또는 다른 비표적 조직과 접촉할 때 절단에 저항하는 능력에 대해 후보 절단 가능한 결합 기를 테스트하는 것이 또한 바람직할 것이다. 따라서, 당업자는 제1 조건과 제2 조건 사이의 절단에 대한 상대적인 감수성을 결정할 수 있고, 여기서 제1 조건은 표적 세포에서의 절단을 나타내도록 선택되고, 제2 조건은 다른 조직 또는 생물학적 유체, 예를 들어 혈액 또는 혈청 내의 절단을 나타내도록 선택된다. 평가는 무세포 시스템, 세포, 세포 배양물, 기관 또는 조직 배양물 또는 전체 동물에서 수행될 수 있다. 무세포 또는 배양 조건에서 초기 평가를 수행하고 전체 동물에서의 추가적인 평가에 의해 확인하는 것이 유용할 수 있다. 특정 구현예에서, 유용한 후보 화합물은 혈액 또는 혈청(또는 세포외 조건을 모방하도록 선택된 시험관내 조건 하에서)과 비교하여, 세포(또는 세포내 조건을 모방하도록 선택된 시험관내 조건 하에서)에서 적어도 약 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100배 더 신속하게 절단된다.
i. 산화환원 절단 가능한 결합 기
특정 구현예에서, 절단 가능한 결합 기는 환원 또는 산화 시 절단되는 산화환원 절단 가능한 결합 기이다. 환원적으로 절단 가능한 결합 기의 예는 디설파이드 결합기(-S-S-)이다. 후보 절단 가능한 결합 기가 적합한 "환원적으로 절단 가능한 결합 기"인지 또는 예를 들어 특정 iRNA 모이어티 및 특정 표적화제와 사용하기에 적합한지의 여부를 결정하기 위해, 당업자는 본 명세서에 기술된 방법을 살펴볼 수 있다. 예를 들어, 후보물은 세포, 예를 들어 표적 세포에서 관찰되는 절단률을 모방하는, 당업계에 공지된 시약을 사용하여, 디티오트레이톨(DTT) 또는 기타 환원제를 사용한 항온처리에 의해 평가될 수 있다. 후보물은 또한 혈액 또는 혈청 조건을 모방하도록 선택된 조건 하에서 평가될 수 있다. 하나에서, 후보 화합물은 혈액에서 최대 약 10%만큼 절단된다. 다른 구현예에서, 유용한 후보 화합물은 혈액(또는 세포외 조건을 모방하도록 선택된 시험관내 조건 하에서)과 비교하여, 세포(또는 세포내 조건을 모방하도록 선택된 시험관내 조건 하에서)에서 적어도 약 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 약 100배 더 신속하게 분해된다. 후보 화합물의 절단률은 세포내 배지를 모방하도록 선택된 조건 및 세포외 배지를 모방하도록 선택된 조건과 비교하여 표준 효소 동역학 검정을 사용하여 결정될 수 있다.
ii. 포스페이트 기반 절단 가능한 결합 기
다른 구현예에서, 절단 가능한 링커는 포스페이트 기반 절단 가능한 결합 기를 포함한다. 표스페이트 기반 절단 가능한 결합 기는 포스페이트 기를 분해하거나 가수분해하는 제제에 의해 절단된다. 세포에서 포스페이트 기를 절단하는 제제의 예는 세포의 포스파타아제와 같은 효소이다. 포스파타아제 기반 결합 기의 예는 -O-P(O)(ORk)-O-, -O-P(S)(ORk)-O-, -O-P(S)(SRk)-O-, -S-P(O)(ORk)-O-, -O-P(O)(ORk)-S-, -S-P(O)(ORk)-S-, -O-P(S)(ORk)-S-, -S-P(S)(ORk)-O-, -O-P(O)(Rk)-O-, -O-P(S)(Rk)-O-, -S-P(O)(Rk)-O-, -S-P(S)(Rk)-O-, -S-P(O)(Rk)-S-, -O-P(S)( Rk)-S-이고, 여기서 Rk는 각 경우에 독립적으로 C1-C20 알킬, C1-C20 할로알킬, C6-C10 아릴 또는 C7-C12 아르알킬일 수 있다. 예시적인 구현예는 -O-P(O)(OH)-O-, -O-P(S)(OH)-O-, -O-P(S)(SH)-O-, -S-P(O)(OH)-O-, -O-P(O)(OH)-S-, -S-P(O)(OH)-S-, -O-P(S)(OH)-S-, -S-P(S)(OH)-O-, -O-P(O)(H)-O-, -O-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-O, -S-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-S-, 및 -O-P(S)(H)-S-를 포함한다. 특정 구현예에서, 포스페이트 기반 결합 기는 -O-P(O)(OH)-O-이다. 이들 후보물은 전술된 것들과 유사한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
iii. 산 절단 가능한 결합 기
다른 구현예에서, 절단 가능한 링커는 산 절단 가능한 결합 기를 포함한다. 산 절단 가능한 결합 기는 산성 조건 하에서 절단되는 결합 기이다. 특정 구현예에서, 산 절단 가능한 결합 기는 pH가 약 6.5 이하(예를 들어, 약 6.0, 5.5, 5.0 이하)인 산성 환경에서 또는 일반 산으로서 작용할 수 있는 효소와 같은 제제에 의해 절단된다. 세포에서, 엔도좀 및 리소좀과 같은 특정 낮은 pH 소기관은 산 절단 가능한 결합 기에 대한 절단 환경을 제공할 수 있다. 산 절단 가능한 결합 기의 예는 하이드라존, 에스테르, 및 아미노산의 에스테르를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 산 절단 가능한 기는 일반 화학식 -C=NN-, C(O)O, 또는 -OC(O)를 가질 수 있다. 예시적인 구현예는 에스테르의 산소에 부착된 탄소(알콕시 기)가 아릴 기, 치환된 알킬 기 또는 3급 알킬 기, 예컨대 디메틸 펜틸 또는 t-부틸인 경우이다. 이들 후보물은 전술된 것들과 유사한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
iv. 에스테르 기반 결합 기
다른 구현예에서, 절단 가능한 링커는 에스테르 기반 절단 가능한 결합 기를 포함한다. 에스테르 기반 절단 가능한 결합 기는 세포 내 에스테라제 및 아미다제와 같은 효소에 의해 절단된다. 에스테르 기반 절단 가능한 결합 기의 예는 알킬렌, 알케닐렌 및 알키닐렌 기의 에스테르를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 에스테르 절단 가능한 결합 기는 일반 화학식 -C(O)O- 또는 -OC(O)-를 갖는다. 이들 후보물은 전술된 것들과 유사한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
v. 펩타이드 기반 절단 기
또 다른 구현예에서, 절단 가능한 링커는 펩타이드 기반 절단 가능한 결합 기를 포함한다. 펩타이드 기반 절단 가능한 결합 기는 세포 내 펩티다아제 및 프로테아제와 같은 효소에 의해 절단된다. 펩타이드 기반 절단 가능한 결합 기는 아미노산 사이에 형성되어 올리고펩타이드(예를 들어, 디펩타이드, 트리펩타이드 등) 및 폴리펩타이드를 수득하는 펩타이드 결합이다. 펩타이드 기반 절단 가능한 기는 아미드 기(-C(O)NH-)를 포함하지 않는다. 아미드 기는 임의의 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키넬렌 사이에 형성될 수 있다. 펩타이드 결합은 아미노산 사이에 형성되어 펩타이드 및 단백질을 수득하는 특별한 유형의 아미드 결합이다. 펩타이드 기반 절단 기는 일반적으로, 아미노산 사이에 형성되어 펩타이드 및 단백질을 수득하고 전체 아미드 작용기를 포함하지 않는 펩타이드 결합(즉, 아미드 결합)으로 제한된다. 펩타이드 기반 절단 가능한 결합 기는 일반 화학식 - NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)을 갖고, 여기서 RA 및 RB는 2개의 인접한 아미노산의 R 기이다. 이들 후보물은 전술된 것들과 유사한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 링커를 통해 탄수화물에 접합된다. 본 발명의 조성물 및 방법의 링커를 갖는 iRNA 탄수화물 접합체의 비제한적인 예는 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다:
(화학식 XLIV), X 또는 Y 중 하나가 올리고뉴클레오타이드인 경우, 다른 하나는 수소이다.
발명의 조성물 및 방법의 특정 구현예에서, 리간드는 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 "GalNAc"(N-아세틸갈락토사민) 유도체이다.
일 구현예에서, 발명의 dsRNA는 화학식 (XLV) - (XLVI) 중 임의의 것에 나타낸 구조의 군으로부터 선택된 2가 또는 3가 분지형 링커에 접합된다:
여기서:
q2A, q2B, q3A, q3B, q4A, q4B, q5A, q5B 및 q5C는 각 경우에 독립적으로 0~20을 나타내고, 여기서 반복 단위는 동일하거나 상이할 수 있고;
P2A, P2B, P3A, P3B, P4A, P4B, P5A, P5B, P5C, T2A, T2B, T3A, T3B, T4A, T4B, T4A, T5B, T5C는 부재하는 각 경우에 각각 독립적으로 CO, NH, O, S, OC(O), NHC(O), CH2, CH2NH 또는 CH2O이고;
Q2A, Q2B, Q3A, Q3B, Q4A, Q4B, Q5A, Q5B, Q5C는 부재하는 각 경우에 독립적으로 알킬렌, 치환된 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌은 O, S, S(O), SO2, N(RN), C(R')=C(R''), C≡C 또는 C(O) 중 하나 이상에 의해 중단되거나 종결될 수 있고;
R2A, R2B, R3A, R3B, R4A, R4B, R5A, R5B, R5C는 부재하는 각 경우에 각각 독립적으로 NH, O, S, CH2, C(O)O, C(O)NH, NHCH(Ra)C(O), -C(O)-CH(Ra)-NH-, CO, CH=N-O, 또는 헤테로시클릴이고;
L2A, L2B, L3A, L3B, L4A, L4B, L5A, L5B 및 L5C는 리간드를 나타내고; 즉, 각각의 발생에 대해 각각 독립적으로 단당류(예컨대 GalNAc), 이당류, 삼당류, 사당류, 올리고당류 또는 다당류를 나타내고; Ra는 H 또는 아미노산 측쇄이다. 3가 결합 GalNAc 유도체는, 화학식 XLIX의 것과 같은 표적 유전자의 발현을 억제하기 위해 RNAi 제제와 함께 사용하기에 특히 유용하다:
여기서 L5A, L5B 및 L5C는 GalNAc 유도체와 같은 단당류를 나타낸다.
GalNAc 유도체를 접합시키는 적합한 2가 및 3가 분지형 링커 군의 예는 화학식 II, VII, XI, X, 및 XIII로서 앞서 언급된 구조를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
RNA 접합체의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허번호 제4,828,979호; 제4,948,882호; 제5,218,105호; 제5,525,465호; 제5,541,313호; 제5,545,730호; 제5,552,538호; 제5,578,717호, 제5,580,731호; 제5,591,584호; 제5,109,124호; 제5,118,802호; 제5,138,045호; 제5,414,077호; 제5,486,603호; 제5,512,439호; 제5,578,718호; 제5,608,046호; 제4,587,044호; 제4,605,735호; 제4,667,025호; 제4,762,779호; 제4,789,737호; 제4,824,941호; 제4,835,263호; 제4,876,335호; 제4,904,582호; 제4,958,013호; 제5,082,830호; 제5,112,963호; 제5,214,136호; 제5,082,830호; 제5,112,963호; 제5,214,136호; 제5,245,022호; 제5,254,469호; 제5,258,506호; 제5,262,536호; 제5,272,250호; 제5,292,873호; 제5,317,098호; 제5,371,241호, 제5,391,723호; 제5,416,203호, 제5,451,463호; 제5,510,475호; 제5,512,667호; 제5,514,785호; 제5,565,552호; 제5,567,810호; 제5,574,142호; 제5,585,481호; 제5,587,371호; 제5,595,726호; 제5,597,696호; 제5,599,923호; 제5,599,928호; 제5,688,941호; 제6,294,664호; 제6,320,017호; 제6,576,752호; 제6,783,931호; 제6,900,297호; 제7,037,646호; 및 제8,106,022호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이의 각각의 전문은 본원에 참조로 인용된다.
주어진 화합물의 모든 위치가 균일하게 변형될 필요는 없으며 실제로 앞서 언급한 변형 중 하나 이상이 단일 화합물 또는 심지어 iRNA 내의 단일 뉴클레오사이드에 도입될 수 있습니다. 본 발명은 또한 키메라 화합물인 iRNA 화합물을 포함한다.
본 발명의 문맥에서, "키메라" iRNA 화합물 또는 "키메라"는, 각각이 적어도 하나의 단량체 유닛, 즉 dsRNA 화합물의 경우에는 뉴클레오타이드로 구성된 2개 이상의 화학적으로 상이한 영역을 함유하는 dsRNAi 제제와 같은 iRNA 화합물이다. 이들 iRNA는 통상적으로 적어도 하나의 영역을 함유하고, 여기서 RNA는 iRNA에 뉴클레아제 분해에 대해 증가된 내성, 표적 핵산에 대한 증가된 세포 취득 또는 증가된 결합 친화성을 부여하도록 변형된다. iRNA의 추가의 영역은 RNA:DNA 또는 RNA:RNA 하이브리드를 절단할 수 있는 효소에 대한 기질로서 작용할 수 있다. 예를 들어, RNase H는 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단하는 세포 엔도뉴클레아제이다. RNase H의 활성화는 따라서 RNA 표적을 절단하여 유전자 발현의 iRNA 억제의 효율을 증진시킨다. 결과적으로, 상응하는 결과는 흔히 키메라 dsRNA가 사용되는 경우 동일한 표적 영역에 하이브리드화하는 포스포로티오에이트 데옥시 dsRNA와 비교하여, 보다 짧은 iRNA를 사용하여 수득될 수 있다. RNA 표적의 절단은 통상적으로 겔 전기영동 및 필요한 경우, 당업계에 공지된 연합된 핵산 하이브리드화 기술에 의해 검출될 수 있다.
특정 경우에, iRNA의 RNA는 비-리간드 군에 의해 변형될 수 있다. 다수의 비-리간드 분자는 iRNA에 접합되어 iRNA의 활성, 세포 분포 또는 세포 취득을 증진시키고, 이러한 접합을 수행하기 위한 과정은 과학 문헌에서 이용가능하다. 이러한 비-리간드 모이어티는 지질 모이어티, 예컨대 콜레스테롤(문헌참조: Kubo, T. 등, Biochem. Biophys. Res. Comm., 2007, 365(1):54~61; Letsinger 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553), 콜산(문헌참조: Manoharan 등, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053), 티오에테르, 예를 들어, 헥실-S-트리틸티올(문헌참조: Manoharan 등, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306; Manoharan 등, Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765), 티오콜레스테롤(문헌참조: Oberhauser 등, Nucl. Acids Res., 1992, 20:533), 지방족 사슬, 예를 들어 도데칸디올 또는 운데실 잔기(문헌참조: Saison-Behmoaras 등, EMBO J., 1991, 10:111; Kabanov 등, FEBS Lett., 1990, 259:327; Svinarchuk 등, Biochimie, 1993, 75:49), 인지질, 예를 들어 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 1,2-디-O-헥사데실-rac-글리세로-3-H-포스포네이트(문헌참조: Manoharan 등, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651; Shea 등, Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬(문헌참조: Manoharan 등, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969), 또는 아다만탄 아세트산(문헌참조: Manoharan 등, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651), 손바닥 모이어티(문헌참조: Mishra 등, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티(문헌참조: Crooke 등, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923)를 포함한다. 이러한 RNA 접합체의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 앞서 열거되었다. 통상적인 접합 프로토콜은 서열의 하나 이상의 위치에서 아미노링커를 함유하는 RNA의 합성을 포함한다. 아미노 군은 이어서 적당한 커플링 또는 활성화 시약을 사용하여 접합된 분자와 반응시킨다. 접합 반응은 고체 지지체에 여전히 결합된 RNA를 사용하거나 용액 상에서 RNA의 절단 후 수행될 수 있다. HPLC에 의한 RNA 접합체의 정제는 통상적으로 순수한 접합체를 제공한다.
IV. 본 발명의 iRNA의 전달
본 발명의 iRNA를 세포, 예를 들어 인간 대상체(예를 들어, 치료를 필요로 하는 대상체, 예컨대 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어 지질 대사 장애에 취약하거나 이를 진단받은 대상체)와 같은 대상체 내의 세포로 전달하는 것이 다수의 상이한 방식으로 달성될 수 있다. 예를 들어, 전달은 세포를 본 발명의 iRNA와 시험관내 또는 생체내 접촉시킴으로써 수행될 수 있다. 생체내 전달은 또한 iRNA, 예를 들어 dsRNA를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 직접적으로 수행될 수 있다. 대안적으로, 생체내 전달은 iRNA의 발현을 암호화하고 이를 지시하는 하나 이상의 벡터를 투여함으로써 간접적으로 수행될 수 있다. 이들 대안 방법들이 하기에서 추가적으로 논의된다.
일반적으로, (시험관내 또는 생체내) 핵산 분자를 전달하는 임의의 방법은 본 발명의 iRNA와 사용하기 위해 채택될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Akhtar S. 및 Julian RL. (1992) Trends Cell. Biol. 2(5):139~144 및 WO94/02595으로, 이의 전문은 본원에 참조로서 통합된다). 생체내 전달을 위해, iRNA 분자를 전달하기 위해 고려되는 인자들은 예를 들어, 전달된 분자의 생물학적 안정성, 비-특이적 효과의 예방, 및 표적 조직에서 전달된 분자의 축적을 포함한다. 또한 RNA 간섭은 직접 주사에 의한 CNS로의 국소 전달에 성공한 것으로 나타났다(문헌참조: Dorn, G., 등(2004) Nucleic Acids 32:e49; Tan, PH., 등(2005) Gene Ther. 12:59~66; Makimura, H., 등(2002) BMC Neurosci. 3:18; Shishkina, GT., 등(2004) Neuroscience 129:521~528; Thakker, ER., 등(2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:17270~17275; Akaneya,Y., 등(2005) J. Neurophysiol. 93:594~602). RNA 또는 약제학적 캐리어의 변형은 또한 iRNA를 표적 조직으로 표적화할 수 있게 하며, 바람직하지 않은 오프-표적 효과를 피할 수 있다. iRNA 분자는 콜레스테롤과 같은 친유성 기에 대한 화학적 접합에 의해 변형되어 세포 취득을 향상시키고 분해를 방지할 수 있다. 예를 들어, 친유성 콜레스테롤 모이어티에 접합된 ApoB에 대해 지시된 iRNA는 마우스에 전신 주사되었으며 간과 공장 둘 모두에서 apoB mRNA의 녹다운을 초래하였다(문헌참조: Soutschek, J., 등(2004) Nature 432:173~178).
대안적인 구현예에서, iRNA는 나노입자, 덴드리머, 중합체, 리포좀과 같은 약물 전달 시스템 또는 양이온성 전달 시스템을 사용하여 전달될 수 있다. 양으로 하전된 양이온성 전달 시스템은 iRNA 분자(음으로 하전된)의 결합을 촉진시키고 또한 음으로 하전된 세포막에서 상호작용을 증진시켜 세포에 의한 iRNA의 효율적인 흡수를 가능하게 한다. 양이온성 지질, 덴드리머 또는 중합체는 iRNA에 결합될 수 있거나 iRNA를 내장하는 소포 또는 마이셀을 형성하도록 유도될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Kim SH, 등(2008) Journal of Controlled Release 129(2):107~116). 소포 또는 마이셀의 형성은 전신 투여되는 경우 iRNA의 분해를 추가로 방지한다. 양이온성-iRNA 복합체를 제조하고 투여하기 위한 방법은 능히 당업자의 능력 범위 내에 있다(문헌참조: 예를 들어, Sorensen, DR, 등(2003) J. Mol. Biol 327:761~766; Verma, UN, 등(2003) Clin. Cancer Res. 9:1291~1300; Arnold, AS 등(2007) J. Hypertens. 25:197~205, 이의 전문이 본원에 참조로서 통합된다). iRNA의 전신 전달에 유용한 약물 전달 시스템의 비제한적인 예는 DOTAP(문헌참조: Sorensen, DR., 등(2003), 전술됨; Verma, UN, 등(2003), 전술됨), "고체 핵산 지질 입자"(문헌참조: Zimmermann, TS, 등(2006) Nature 441:111~114), 카디오리핀(문헌참조: PY, 등(2005) Cancer Gene Ther. 12:321~328; Pal, A, 등(2005) Int J. Oncol. 26:1087~1091), 폴리에틸렌이민(문헌참조: Bonnet ME, 등(2008) Pharm. Res. 인쇄 전 8월 16일 Epub; Aigner, A. (2006) J. Biomed. Biotechnol. 71659), Arg-Gly-Asp (RGD) 펩타이드(문헌참조: Liu, S. (2006) Mol. Pharm. 3:472~487), 및 폴리아미도아민(문헌참조: Tomalia, DA, 등(2007) Biochem. Soc. Trans. 35:61~67; Yoo, H., 등(1999) Pharm. Res. 16:1799~1804)을 포함한다. 일부 구현예에서, iRNA는 전신 투여를 위해 사이클로덱스트린과 복합체를 형성한다. iRNA 및 사이클로덱스트린의 투여 및 약제학적 조성물 위한 방법은 미국 특허번호 제7,427,605호에서 찾을 수 있고, 이의 전문이 본원에 참조로 인용된다.
A. 본 발명의 벡터 암호화된 iRNA
ANGPTL3 유전자를 표적으로 하는 iRNA는 DNA 또는 RNA 벡터에 삽입된 전사 유닛으로부터 발현될 수 있다(문헌참조:예를 들어, Couture, A, 등, TIG. (1996), 12:5~10; Skillern, A, 등, 국제 PCT 공개번호 WO 00/22113, Conrad, 국제 PCT 공개번호 WO 00/22114, 및 Conrad, 미국 특허번호 제6,054,299호). 발현은 사용된 특정 작제물 및 표적 조직 또는 세포 유형에 따라 일시적(수 시간 내지 수 주)이거나 지속될(수 주 내지 수 개월 또는 그 이상) 수 있다. 이들 전이유전자는 선형 작제물, 환형 플라스미드 또는 바이러스 벡터로서 도입될 수 있고, 이는 통합 또는 비-통합 벡터일 수 있다. 전이유전자는 또한 염색체외 플라스미드로서 유전될 수 있도록 구성될 수 있다(문헌참조: Gassmann, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:1292).
본 명세서에 기술된 방법 및 조성물과 사용될 수 있는 바이러스 벡터 시스템은 (a) 아데노바이러스 벡터; (b) 렌티바이러스 벡터, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 레트로바이러스 벡터; (c) 아데노 관련 바이러스 벡터; (d) 헤르페스 심플렉스 바이러스 벡터; (e) SV 40 벡터; (f) 폴리오마 바이러스 벡터; (g) 파필로마 바이러스 벡터; (h) 피코나바이러스 벡터; (i) 폭스 바이러스 벡터, 예컨대, 오르토폭스, 예를 들어 백시니아 바이러스 벡터 또는 아비폭스, 예를 들어 카나리 폭스 또는 파울 폭스; 및 (j) 헬퍼 의존성 또는 거트리스(gutless) 아데노바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 복제 결함 바이러스가 또한 유리할 수 있다. 상이한 벡터는 세포의 게놈에 도입되거나 도입되지 않는다. 작제물은 경우에 따라 형질감염을 위한 바이러스 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 작제물은 에피좀 복제가 가능한 벡터, 예를 들어 EPV 및 EBV 벡터에 통합될 수 있다. iRNA의 재조합 발현을 위한 작제물은 일반적으로 표적 세포 내 iRNA의 발현을 확실히 하기 위해 조절 요소, 예를 들어 프로모터, 증진제 등을 필요로 한다. 벡터 및 작제물을 위해 고려할 다른 양태는 당업계에 공지되어 있다.
V. 발명의 약제학적 조성물
본 발명은 또한 발명의 iRNA를 포함하는 약제학적 조성물 및 제형을 포함한다. 일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 것과 같은 iRNA를 함유하는 약제학적 조성물 및 약제학적으로 허용 가능한 캐리어가 본 명세서에 제공된다. iRNA를 함유하는 약제학적 조성물은 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어, 지질 대사 장애를 예방하거나 치료하는 데 유용하다. 이러한 약제학적 조성물은 전달 방식을 기준으로 제형화된다. 일례는, 예를 들어 피하(SC), 근육내(IM), 또는 정맥내(IV) 전달에 의한 비경구 전달을 통한, 전신 투여용으로 제형화된 조성물이다. 본 발명의 약제학적 조성물은 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하기에 충분한 용량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 멸균성이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 발열성 물질이 없다.
본 발명의 약제학적 조성물은 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하기에 충분한 용량으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 iRNA의 적합한 투여량은 하루에, 수용자의 체중 킬로그램 당 약 0.001 내지 약 200.0 밀리그램의 범위위로, 일반적으로 하루에 체중 킬로그램 당 약 1 내지 50mg의 범위일 것이다. 통상적으로, 본 발명의 iRNA의 적합한 투여량은 약 0.1mg/kg 내지 약 5.0mg/kg, 예컨대 약 0.3mg/kg 및 약 3.0mg/kg의 범위일 것이다. 반복 투여 용법은 치료학적 양의 iRNA를 정기적인 기준으로, 예컨대 매월, 3~6개월 마다 1회, 또는 1년에 1회로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, iRNA는 매월 약 1회 내지 6개월 마다 약 1회로 투여된다.
초기 치료 용법 후, 치료제는 덜 빈번한 기준으로 투여될 수 있다. 치료 기간은 질환의 중증도에 기초하여 결정될 수 있다.
다른 구현예에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 오래 지속되어, 용량은 1, 2, 3, 또는 4개월 이하의 간격으로 투여될 수 있다. 발명의 일부 구현예에서, 발명의 약제학적 조성물의 단일 용량은 1개월 마다 1회 투여 된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물의 단일 투여량은 분기마다(즉, 약 3개월마다) 투여된다. 본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물의 단일 투여량은 일년에 2번(즉, 약 6개월마다 1회) 투여된다.
당업자는 특정 요인들이 대상체를 효과적으로 치료하기 위해 요구되는 용량 및 타이밍에 영향을 줄 수 있음을 인지하며, 이는 대상체에 존재하는 돌연변이, 이전의 치료, 대상체의 일반 건강 및/또는 연령 및 존재하는 다른 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 적절한 예방학적 또는 치료학적 유효량의 조성물을 사용한 대상체의 치료는 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다.
iRNA는 특정 조직(예를 들어, 간세포)을 표적화하는 방식으로 전달될 수 있다.
발명의 약제학적 조성물은 용제, 에멀젼 및 리포좀 함유 제형을 포 함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 조성물은 미리 형성된 액체, 자가-유화 고체 및 자가-유화 반고체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 성분으로부터 생성 될 수 있다. 제형은 간을 표적으로 하는 것을 포함한다.
유닛 투여 형태로 편리하게 제시될 수 있는 발명의 약제학적 제형은 제약 산업에 잘 공지된 종래의 기술에 따라 제조될 수 있다. 그러한 기술들은 활성 성분을 약제학적 담체(들) 또는 부형제(들)과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 액체 담체와 활성 성분을 균일하게 및 친밀하게 연합시킴으로써 제조된다.
A. 추가의 제형
i. 에멀젼
본 발명의 조성물은 에멀젼으로 제조되고 제형화될 수 있다. 통상적으로 에멀젼은 일반적으로 직경이 0.1μm를 초과하는 액적 형태인 또 다른 액체에 분산된 하나의 액체의 이종성 시스템이다(문헌참조: 예를 들어, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301). 에멀젼은 종종 서로 밀접하게 혼합되고 분산된 2개의 비혼화성 액체 상을 포함하는 이상성 시스템이다. 일반적으로, 에멀졀은 유중수(w/o) 또는 수중유(o/w) 다양성 중 어느 하나일 수 있다. 수성상이 미세하게 나누어져 미세한 액적으로서 벌크 오일상으로 분산되는 경우, 생성된 조성물은 유중수(w/o) 에멀젼으로 불리운다. 대안적으로 오일상이 미세하게 나누어져 미세한 액적으로서 벌크 수성상으로 분산되는 경우, 생성된 조성물은 수중유(o/w) 에멀젼으로 불리운다. 에멀젼은 분산상 외에 추가 성분을 함유할 수 있으며, 수성상, 오일상 또는 별도의 상으로 자체적으로 용액으로 존재할 수 있는 활성 약물을 함유할 수 있다. 유화제, 안정화제, 염료 및 항산화제와 같은 약제학적 부형제는 또한 필요에 따라 에멀젼에 존재할 수 있다. 약제학적 에멀젼은 또한 예를 들어 유중수중유(o/w/o) 및 수중유중수 (w/o/w) 에멀젼의 경우에 2개 이상의 상으로 이루어진 다중 에멀젼일 수 있다. 이러한 복합 제형은 종종 단순 이원 에멀젼이 제공하지 않는 특정 이점을 제공한다. o/w 에멀젼의 개별 오일 액적이 작은 물 액적을 내포하는 다중 에멀젼은 w/o/w 에멀젼을 구성한다. 또한, 오일 연속 상으로 안정화된 물의 구체에 내포된 오일 액적 시스템은 o/w/o 에멀젼을 제공한다.
에멀젼은 거의 열역학 안정성이 없음을 특징으로 한다. 흔히, 에멀젼의 분산 또는 불연속 상은 외부 또는 연속 상으로 잘 분산되고 유화제 또는 제형의 점도를 통해 이러한 형태로 유지된다. 에멀젼을 안정화시키는 다른 수단은 에멀젼의 어느 하나의 상에 도입될 수 있는 유화제의 사용을 수반한다. 유화제는 광범위하게 4가지 범주: 합성 계면활성제, 천연 유화제, 흡수 기제, 및 미세 분산 고체(문헌참조: 예를 들어, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199)로 분류될 수 있다.
표면 활성제로도 공지된 합성 계면활성제는 에멀젼의 제형에서 광범위하게 적용할 수 있음을 발견했고, 문헌에서 검토되었다(문헌참조: 예를 들어, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199). 계면활성제는 통상적으로 양친매성이고 친수성 및 소수성 부분을 포함한다. 계면활성제의 친수성 대 소수성 특성의 비율을 친수성/친유성 균형(HLB)이라고 하며 제형의 제조에서 계면활성제를 분류하고 선택하는데 유용한 도구이다. 계면활성제는 친수성 기의 특성에 따라 비이온성, 음이온성, 양이온성 및 양쪽성의 상이한 부류로 분류될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285).
다양한 비-유화 물질은 또한 에멀젼 제형에 포함되고, 에멀젼의 성질에 기여한다. 이들은 지방, 오일, 왁스, 지방산, 지방 알코올, 지방 에스테르, 보습제, 친수성 콜로이드, 방부제 및 항산화제를 포함한다(문헌참조: Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
피부과, 경구 및 비경구 경로를 통한 에멀젼 제제의 적용 및 이들의 제조를 위한 방법이 문헌에서 검토되었다(문헌참조: 예를 들어, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
ii. 마이크로에멀젼
본 발명의 일 구현예에서, iRNA 조성물 및 핵산의 조성물은 마이크에멀젼으로 제형화되었다. 마이크로에멀젼은, 단일 광학적으로 등방성이며 열역학적으로 안정한 액체 용액인 물, 오일 및 양친매체의 시스템으로서 정의될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245). 통상적으로 마이크로에멀젼은 먼저 수성 계면활성제 용액에 오일을 분산시킨 다음 충분한 양의 제4 성분, 일반적으로 중간 쇄 길이의 알코올을 첨가하여 투명한 시스템을 형성함으로써 제조되는 시스템이다. 따라서, 마이크로에멀젼은 또한 표면 활성 분자의 계면 필름에 의해 안정화되는 두 개의 불혼화성 액체의 열역학적으로 안정하고 등방성으로 투명한 분산액으로 기술되었다(문헌참조: Leung and Shah, in: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215).
iii. 마이크로입자
발명의 iRNA는 입자, 예를 들어, 마이크로입자 내에 혼입될 수 있다. 마이크로입자는 분무 건조에 의해 생성될 수 있지만 또한 동결건조, 증발, 유동층 건조, 진공 건조 또는 이러한 기술의 조합을 비롯한 다른 방법에 의해 생성될 수도 있다.
iv. 투과 증진제
일 구현예에서, 본 발명은 핵산, 특히 iRNA를 동물의 피부에 효율적으로 전달하기 위해 다양한 투과 증진제를 사용한다. 대부분의 약물은 이온화된 및 비이온화된 형태 둘 모두로 용액 중에 존재한다. 그러나, 일반적으로 지용성 또는 친유성 약물만이 용이하게 세포막을 통과한다. 심지어 비친유성 약물이 통과될 막이 투과 증진제로 처리되는 경우 세포막을 통과할 수 있다는 것이 발견되었다. 세포막을 통한 비친유성 약물의 확산을 돕는 것 외에도 투과 증진제는 또한 친유성 약물의 투과성을 증진시킨다.
침투 증강제는 크게 다섯 가지 범주, 즉 계면활성제, 지방산, 담즙염, 킬레이트제 및 비킬레이트 비계면활성제 중 하나에 속하는 것으로 분류될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92). 전술한 침투 증강제의 부류 및 이들의 약제학적 조성물의 제조 및 약제학적 제제의 전달에 대한 용도 각각은 당업계에 잘 알려져 있다.
v. 부형제
담체 화합물과 대조적으로, "약제학적 담체" 또는 "부형제"는 하나 이상의 핵산을 동물에게 전달하기 위한 약제학적으로 허용되는 용매, 현탁제, 또는 임의의 다른 약리학적 불활성 비히클이다. 부형제는 액체 또는 고체일 수 있고 주어진 약제학적 조성물의 핵산 및 기타 성분과 조합될 때 목적하는 벌크, 일관성 등을 제공하기 위해 계획된 투여 방식을 염두에 두고 선택된다. 이러한 제제는 당업계에 잘 알려져 있다.
vi. 다른 성분
본 발명의 조성물은 약제학적 조성물에서 통상적으로 발견되는 다른 부가 성분을 당업계에 확립된 사용 수준으로 추가로 함유할 수 있다. 따라서, 예를 들어, 조성물은 예를 들어 항소양제, 수렴제, 국소 마취제 또는 항염증제와 같은 추가의 상용성 약제학적 활성 물질을 함유할 수 있거나 본 발명의 조성물의 다양한 투여 형태를 물리적으로 제형화하는 데 유용한 추가 물질, 예를 들어, 염료, 착향제, 방부제, 항산화제, 불투명화제, 증점제 및 안정제를 함유할 수 있다. 그러나, 이러한 물질은 첨가될 때 본 발명의 조성물의 성분의 생물학적 활성을 과도하게 방해해서는 안 된다. 제형은 멸균화될 수 있고, 바람직한 경우, 보조제, 예를 들어 윤활제, 방부제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치는 염, 완충제, 착색제, 향미제 또는 방향 물질 등과 혼합될 수 있고, 이들은 제형의 핵산(들)과 해롭게 상호 작용하지 않는다.
수성 현탁액은 예를 들어 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 소르비톨 또는 덱스트란을 포함하는 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 현탁액은 또한 안정화제를 함유할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에서 특징화된 약제학적 조성물은 (a) 하나 이상의 iRNA 및 (b) 비-RNAi 메커니즘에 의해 기능하고 ANGPTL33-관련 장애, 예를 들어 지질 대사 장애를 치료하는 데 유용한 하나 이상의 제제를 포함한다.
그러한 화합물의 독성 및 예방학적 효능은, 예를 들어 LD50(집단의 50%에게 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에 예방학적으로 효과적인 용량)을 결정하기 위한 세포 배양물 또는 실험 동물에서의 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성 및 치료학적 효과 사이의 용량비가 치료 지수이며, 이는 LD50/ED50 비율로 나타낼 수 있다. 높은 치료학적 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다.
세포 배양물 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에 사용하기 위한 용량의 범위를 정하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 본 명세서에서 특징화된 조성물의 투여량은 일반적으로 ED50, 예컨대 ED80 또는 ED90을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있으며, 독성은 거의 없거나 전혀 없다. 투여량은 사용된 투여 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 달라질 수 있다. 발명에서 특징화된 방법에 사용되는 임의의 화합물에 대해, 치료학적 유효량은 세포 배양 검정으로부터 초기에 평가될 수 있다. 용량은 동물 모델에서 제형화되어 화합물의 순환 혈장 농도 범위를 달성하거나, 적절한 경우, 세포 배양물 중에서 결정된 것과 같이 IC50 (즉, 증상의 절반-최대 억제를 달성하는 시험 화합물의 농도) 또는 그보다 높은 수준의 억제를 포함하는 (예를 들어, 폴리펩타이드의 감소된 농도를 달성하는) 표적 서열의 폴리펩타이드 생성물의 순환 혈장 농도 범위를 성취할 수 있다. 이러한 정보를 사용하여 인간에게 유용한 용량을 보다 정확하게 결정할 수 있다. 혈장 내 수준은 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다.
전술한 것과 같이, 이들의 투여 이외에, 본 발명에서 특징화된 iRNA는 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어 지질 대사 장애의 예방 또는 치료에 사용되는 다른 공지된 제제와 조합하여 투여될 수 있다. 어떠한 경우에도, 투여 의사는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기술된 효능의 표준 측정법을 사용하여 관찰된 결과에 기초하여 iRNA 투여의 양 및 타이밍을 조정할 수 있다.
VI. ANGPTL3 발현을 억제하는 방법
본 발명은 또한 세포에서 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 본 방법은 세포에서 ANGPTL3의 발현을 억제하는 데 효과적인 양의 RNAi 제제, 예를 들어, 이중 가닥 RNA 제제와 세포를 접촉시켜 세포에서 ANGPTL3의 발현을 억제하는 단계를 포함한다.
세포와 iRNA, 예를 들어 이중 가닥 RNA 제제의 접촉은 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있다. 세포와 iRNA 제제의 생체내 접촉은 대상체, 예를 들어 인간 대상체 내 세포 또는 세포군과 iRNA를 접촉시키는 단계를 포함한다. 세포를 접촉시키는 시험관내 및 생체내 방법의 조합도 가능하다. 세포와의 접촉은 앞서 논의된 것과 같이 직접적이거나 간접적일 수 있다. 또한, 세포와의 접촉은 본 명세서에 기술되거나 당업계에 공지된 임의의 리간드를 포함하는 표적화 리간드를 통해 성취될 수 있다. 일부 구현예에서, 표적화 리간드는 탄수화물 모이어티, 예를 들어 GalNAc3 리간드, 또는 RNAi 제제를 관심 부위로 지시하는 임의의 다른 리간드이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "억제하는(inhibiting)"은 "감소시키는(reducing)", "침묵시키는(silencing)" "하향조절하는(downregulating)", "억제하는(suppressing)", 및 기타 유사한 용어와 상호교환적으로 사용되고, 임의의 억제 수준을 포함한다.
문구 "ANGPTL3의 발현을 억제하는"은 (예를 들어, 마우스 ANGPTL3 3 유전자, 랫트 ANGPTL3 유전자, 원숭이 ANGPTL3 유전자, 또는 인간 ANGPTL3 유전자와 같은) 임의의 ANGPTL3 유전자뿐만 아니라 ANGPTL3 유전자의 변이체 또는 돌연변이의 발현의 억제를 지칭하도록 의도된다. 따라서, ANGPTL3 유전자는 유전적으로 조작된 세포, 세포군 또는 유기체의 맥락에서 야생형 ANGPTL3 유전자, 돌연변이 ANGPTL3 유전자, 또는 유전자이식 ANGPTL3 유전자일 수 있다.
"ANGPTL3 유전자의 발현 억제"는 ANGPTL3 유전자의 임의의 억제 수준, 예를 들어, ANGPTL3 유전자의 발현의 적어도 부분적인 억제를 포함한다. ANGPTL3 유전자의 발현은 ANGPTL3 유전자 발현과 관련된 임의의 변수의 수준 또는 수준의 변화, 예를 들어 ANGPTL3 mRNA 수준 또는 ANGPTL3 단백질의 수준에 기초하여 평가될 수 있다. ANGPTL3의 발현은 혈청 지질, 중성지방, 콜레스테롤(LDL-C, HDL-C, VLDL-C, IDL-C 및 총 콜레스테롤 포함), 또는 유리 지방산의 수준에 기초하여 간접적으로 평가될 수도 있다. 이 수준은, 예를 들어 대상체로부터 유래된 시료를 포함하는 개별 세포 또는 세포군에서 평가될 수 있다. ANGPTL3은 주로 간에서 발현되는 것으로 이해된다.
억제는 대조군 수준과 비교하여 ANGPTL3 발현과 관련된 하나 이상의 변수의 절대적 또는 상대적 수준의 감소에 의해 평가될 수 있다. 대조군 수준은 당업계에서 사용되는 임의의 유형의 대조군 수준, 예를 들어, 투여 전 베이스라인 수준, 또는 유사한 대상체, 세포, 또는 처리되지 않은 시료 또는 대조군으로 처리된 시료(예를 들어, 완충제로만 처리된 대조군 또는 불활성 제제 대조군)로부터 결정된 수준일 수 있다.
본 발명의 방법의 일부 구현예에서, ANGPTL3 유전자의 발현은 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%만큼, 또는 검정의 검출 수준 미만으로 억제된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 유전자의 발현은 적어도 70%만큼 억제된다. 또한, 다른 조직, 예를 들어, 뇌에서의 발현의 상당한 억제 없이, 특정 조직, 예를 들어, 간에서 ANGPTL3 발현의 억제가 바람직할 수 있음이 이해된다. 일부 구현예에서, 발현 수준은 종 일치 세포주에서 10nM siRNA 농도로 실시예 2에 제공된 검정 방법을 사용하여 결정된다.
특정 구현예에서, 생체내 발현의 억제는 인간 유전자를 발현하는 설치류, 예를 들어, 인간 표적 유전자(즉, ANGPTL3)를 발현하는 AAV-감염 마우스 내 인간 유전자의 녹다운에 의해, 예를 들어, RNA 발현 최하점에서, 예를 들어, 3mg/kg의 단일 투여량으로 투여될 때 결정된다. 예를 들어, RNA 발현 최하점에서, 예를 들어, 3mg/kg의 단일 투여량을 투여한 후, 모델 동물 시스템에서 내인성 유전자의 발현의 녹다운이 또한 결정될 수 있다. 이러한 시스템은 인간 유전자의 핵산 서열과 모델 동물 유전자가 충분히 근접해 인간 iRNA가 iRNA가 모델 동물 유전자의 효과적인 녹다운을 제공할 때 유용하다. 간에서의 RNA 발현은 실시예 2에 제공된 PCR 방법을 사용하여 결정된다.
ANGPTL3 유전자의 발현 억제는 제1 세포 또는 세포군(이러한 세포는 예를 들어 대상체로부터 유래된 시료에 존재)에 의해 발현된 mRNA 양의 감소에 의해 분명해질 수 있고, 여기서 ANGPTL3 유전자는 전사되고 (예를 들어, 세포 또는 세포들을 본 발명의 iRNA와 접촉시킴으로써, 또는 본 발명의 iRNA를 세포가 존재하거나 존재했던 대상체에게 투여함으로써) 처리되어, 제1 세포 또는 세포군과 실질적으로 동일하지만 그렇게 처리되지 않은 제2 세포 또는 세포군과 비교하여 ANGPTL3 유전자의 발현이 억제된다(대조군 세포(들)는 iRNA로 처리되지 않거나 관심 유전자에 대해 표적화된 iRNA로 처리되지 않음). 일부 구현예에서, 억제는, 예를 들어, 종 일치 세포주에서 10nM siRNA 농도를 사용하여 실시예 2에 제공된 방법에 의해 평가되어 처리된 세포에서의 mRNA의 수준을 다음 식을 사용하여, 대조군 세포 내 mRNA 수준의 백분율로서 표시한다:
다른 구현예에서, ANGPTL3 유전자의 발현 억제는 ANGPTL3 유전자 발현에 기능적으로 연결된 파라미터, 예를 들어, 대상체로부터의 혈액 또는 혈청 내 ANGPTL3 단백질 수준의 감소의 측면에서 평가될 수 있다. ANGPTL3 유전자 침묵은 발현 작제물로부터 내인성 또는 이종성인 ANGPTL3을 발현하는 임의의 세포에서, 그리고 당업계에 공지된 임의의 검정에 의해 결정될 수 있다.
ANGPTL3 단백질의 발현 억제는 세포 또는 세포군에 의해 또는 대상체 시료에서 발현되는 ANGPTL3 단백질의 수준(예를 들어, 대상체로부터 유래된 시료 내 단백질의 수준)의 감소에 의해 분명해질 수 있다. 위에서 설명한 것과 같이, mRNA 억제의 평가의 경우, 처리된 세포 또는 세포군 내 단백질 발현 수준의 억제는 대조군 세포 또는 세포군 내 단백질 수준의 백분율, 또는 대상체 시료, 예를 들어 혈액 또는 그로부터 유래된 혈청 내 단백질 수준의 변화로서 유사하게 표현될 수 있다.
ANGPTL3 유전자의 발현 억제를 평가하기 위해 사용될 수 있는 대조군 세포, 세포군, 또는 대상체 시료는 아직 본 발명의 RNAi 제제와 접촉되지 않은 세포, 세포군, 또는 대상체 시료를 포함한다. 예를 들어, 대조군 세포, 세포군, 또는 대상체 시료는 RNAi 제제를 사용한 대상체의 치료 전에 개별 대상체(예를 들어, 인간 또는 동물 대상체) 또는 적절하게 매칭된 집단 대조군으로부터 유래될 수 있다.
세포 또는 세포군에 의해 발현되는 ANGPTL3 mRNA의 수준은 mRNA 발현을 평가하기 위해 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 일 구현예에서, 시료 내 ANGPTL3의 발현 수준은 전사된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 일부, 예를 들어 ANGPTL3 유전자의 mRNA를 검출함으로써 결정된다. RNA는, 예를 들어 산 페놀/구아니딘 이소티오시아네이트 추출(RNAzol B; 생체발생), RNeasyTM RNA 제조 키트(Qiagen®) 또는 PAXgeneTM(PreAnalytixTM, 스위스) 사용을 포함하는 RNA 추출 기술을 사용하여 세포로부터 추출될 수 있다. 리보핵산 혼성화를 사용하는 통상적인 검정 포맷은 핵 런-온 검정, RT-PCR, RNase 보호 검정, 노던 블롯팅, 제자리 혼성화 및 마이크로어레이 분석을 포함한다.
일부 구현예에서, ANGPTL3의 발현 수준은 핵산 프로브를 사용하여 결정된다. 본 명세서에서 사용된 용어 "프로브"는 특정 ANGPTL3에 선택적으로 결합할 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 프로브는 당업자에 의해 합성될 수 있거나 적절한 생물학적 제조물로부터 유래될 수 있다. 프로브는 특이적으로 설계되어 표지될 수 있다. 프로브로서 사용될 수 있는 분자의 예는 RNA, DNA, 단백질, 항체 및 유기 분자를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
단리된 mRNA는 서던 또는 노던 분석, 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 분석 및 프로브 어레이를 포함하지만 이에 제한되지 않는 혼성화 또는 증폭 검정에 사용될 수 있다. mRNA 수준의 결정을 위한 한 가지 방법은 단리된 mRNA를 ANGPTL3 mRNA에 혼성화할 수 있는 핵산 분자(프로브)와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, mRNA가 고체 표면 상에 고정되고, 예를 들어 단리된 mRNA를 아가로스 겔 상에서 전개시키고 mRNA를 겔로부터 니트로셀룰로오스와 같은 막으로 전달함으로써 프로브와 접촉된다. 대안적인 구현예에서, 프로브(들)는 고체 표면 상에 고정되고, mRNA는, 예를 들어, Affymetrix® 유전자 칩 어레이에서 프로브(들)와 접촉된다. 당업자는 ANGPTL3 mRNA의 수준을 결정하는 데 사용하기 위한 공지된 mRNA 검출 방법을 용이하게 적용할 수 있다.
시료에서 ANGPTL3의 발현 수준을 결정하기 위한 대안적인 방법은, 예를 들어 RT-PCR(실험적 구현예가 Mullis, 1987, 미국 특허번호 제4,683,202호에 제시됨), 리가제 연쇄 반응(문헌참조: Barany (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:189~193), 자체 지속 시퀀스 복제(문헌참조: Guatelli 등(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874~1878), 전사 증폭 시스템(문헌참조: Kwoh 등(1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173~1177), Q-베타 레플리카제(문헌참조: Lizardi 등(1988) Bio/Technology 6:1197), 롤링 서클 복제(문헌참조: Lizardi 등, 미국 특허번호 제5,854,033호) 또는 임의의 다른 핵산 증폭 방법에 이어서 당업자에게 잘 공지된 기술을 사용한 증폭된 분자의 검출에 의한, 시료 중의, 예를 들어, mRNA의 핵산 증폭 또는 역전사 효소(cDNA를 제조하기 위해)의 공정을 포함한다. 핵산 분자가 매우 적은 수로 존재하는 경우, 이들 검출 체계는 핵산 분자의 검출에 특히 유용하다. 본 발명의 특정 양태에서, ANGPTL3의 발현 수준은 정량적 형광 RT-PCR(즉, TaqManTM 시스템)에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 발현 수준은, 종 일치 세포주에서 예를 들어, 10nM siRNA 농도를 사용하여, 실시예 2에 제공된 방법에 의해 결정된다.
ANGPTL3 mRNA의 발현 수준은 (노던, 서던, 도트 등과 같은 혼성화 분석에 사용된 것과 같은) 막 블롯, 또는 마이크로웰, 샘플 튜브, 겔, 비드 또는 섬유(또는 결합된 핵산을 포함하는 임의의 고체 지지체)를 사용하여 모니터링될 수 있다. 본원에 참조로서 통합된 미국 특허번호 제5,770,722호, 제5,874,219호, 제5,744,305호, 제5,677,195호 및 제5,445,934호를 참조한다. ANGPTL3 발현 수준의 결정은 또한 용액 중의 핵산 프로브를 사용하는 것을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, mRNA 발현의 수준은 분지형 DNA(bDNA) 검정 또는 실시간 PCR(qPCR)을 사용하여 평가된다. 이들 방법의 사용은 본 명세서에 제공된 실시예에서 기술되고 예시된다. 일부 구현예에서, 발현 수준은, 종 일치 세포주에서 10nM siRNA 농도를 사용하여, 실시예 2에 제공된 방법에 의해 결정된다.
ANGPTL3 단백질 발현의 수준은 단백질 수준의 측정을 위해 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어 전기영동, 모세관 전기영동, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 박층 크로마토그래피(TLC), 과확산 크로마토그래피, 유체 또는 겔 침전 반응, 흡수분광법, 비색 검정, 분광광도측정 검정, 유동세포측정, 면역확산(단일 또는 이중), 면역전기영동, 웨스턴 블롯팅, 방사선면역검정(RIA), 효소-결합된 면역흡착 검정(ELISA), 면역형광검정, 전기화학발광 검정 등을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법의 효능은 (예를 들어, 간 생검에서) ANGPTL3 mRNA 또는 단백질 수준의 감소에 의해 평가된다.
본 발명의 방법의 일부 구현예에서, iRNA가 대상체에게 투여되어 대상체 내의 특정 부위로 iRNA가 전달된다. ANGPTL3의 발현 억제는 대상체 내 특정 부위(예를 들어, 간 또는 혈액)로부터의 유체 또는 조직으로부터 유래된 시료에서 ANGPTL3 mRNA 또는 ANGPTL3 단백질의 수준 또는 수준 변화의 측정을 사용하여 평가될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 것과 같이, 용어 분석물 수준의 검출 또는 결정은 물질, 예를 들어 단백질, RNA가 존재하는지를 결정하는 단계를 수행하는 것을 의미하는 것으로 이해된다. 본 명세서에 사용되는 것과 같이, 검출 또는 결정 방법은 사용된 방법에 대한 검출 수준 미만인 분석물 수준의 검출 또는 측정을 포함한다.
VII. 본 발명의 예방 및 치료 방법
본 발명은 또한 ANGPTL3의 발현을 억제하여 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어 지질 대사 장애를 예방하거나 치료하기 위해 본 발명의 iRNA 또는 본 발명의 iRNA를 함유하는 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에서, 세포는 siRNA와 시험관내 또는 생체내 접촉될 수 있는데, 즉, 세포는 대상체 내에 있을 수 있다.
본 발명의 방법을 사용하는 치료에 적합한 세포는 ANGPTL3 유전자를 발현하는 임의의 세포, 예를 들어 간 세포일 수 있다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 세포는 포유류 세포, 예를 들어 영장류 세포(예컨대, 키메라 비-인간 동물 내 인간 세포를 포함하는 인간 세포 또는 비-인간 포유류 세포, 예를 들어 원숭이 세포 또는 침팬지 세포) 또는 비-영장류 세포일 수 있다. 특정 구현예에서, 세포는 인간 세포, 예를 들어 인간 간 세포이다. 본 발명의 방법에서, ANGPTL3 발현은 세포에서 적어도 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95만큼 또는 검정의 검출 수준 미만으로 억제된다.
본 발명의 생체내 방법은 대상체에게 iRNA를 함유하는 조성물을 투여하는 단계를 포함할 수 있고, 여기서 iRNA는 RNAi 제제가 투여될 포유류의 ANGPTL3 유전자의 RNA 전사체의 적어도 일부에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 조성물은 경구, 복강내 또는 두개내(예를 들어, 심실내, 실질내 및 척수강내), 정맥내, 근육내, 피하, 경피, 기도(에어로졸), 비강, 직장을 포함하는 비경구 경로 및 국소(협측 및 설하 포함) 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 임의의 수단에 의해 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 조성물은 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 특정 구현예에서, 조성물은 피하 주사에 의해 투여된다. 특정 구현예에서, 조성물은 근육내 주사에 의해 투여된다.
일 양태에서, 본 발명은 또한 포유류에서 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하기 위한 방법을 제공한다. 본 방법은 포유류에게 포유류의 세포 내 ANGPTL3 유전자를 표적으로 하는 dsRNA를 포함하는 조성물을 투여하는 단계 및 ANGPTL3 유전자의 mRNA 전사체의 분해를 수득하여 세포 내 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하기에 충분한 시간 동안 포유류를 유지하는 단계를 포함한다. 유전자 발현의 감소는 당업계에 공지된 임의의 방법 및 본 명세서, 예를 들어 실시예 2에 기술된 방법, 예를 들어 qRT-PCR에 의해 평가 될 수 있다. 단백질 생성의 감소는 당업계에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 ELISA에 의해 평가될 수 있다. 특정 구현예에서, 천공 간 생검 시료는 ANGPTL3 유전자 또는 단백질 발현의 감소를 모니터링하기 위한 조직 물질로서 기능한다. 다른 구현예에서, 혈액 시료는 ANGPTL3 단백질 발현의 감소를 모니터링하기 위한 대상체 시료로서 기능한다.
본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 지질 대사 장애와 같은 ANGPTL3-관련 장애를 진단받은 대상체에서 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 일 구현예에서, 지질 대사 장애가 있는 대상체는 고지혈증을 갖는다. 또 다른 구현예에서, 지질 대사 장애가 있는 대상체는 고중성지방혈증을 갖는다.
본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 예방하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명의 치료 방법은 본 발명의 iRNA를 대상체, 예를 들어 ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 받을 대상체에게 ANGPTL3 유전자를 표적으로 하는 dsRNA 또는 ANGPTL3 유전자를 표적으로 하는 dsRNA를 포함하는 약제학적 조성물의 예방학적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 장애, 예를 들어 지질 대사 장애, 예를 들어, 고지혈증 또는 고중성지방혈증과 같은 ANGPTL3-관련 질환을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. ANGPTL3 유전자 발현의 감소 및/또는 억제로 혜택을 받을 대상체의 치료는 치료적 치료(예를 들어, 대상체는 발진성 황색종을 앓고 있음) 및 예방적 치료(예를 들어, 대상체는 발진성 황색종을 앓고 있지 않거나 대상체는 발진성 황색종을 발생시킬 위험이 있을 수 있음)를 포함한다.
본 발명의 iRNA는 "유리 iRNA"로서 투여될 수 있다. 유리 iRNA는 약제학적 조성물의 부재 하에 투여된다. 나출된 iRNA는 적합한 완충 용액 중에 있을 수 있다. 완충 용액은 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카보네이트 또는 포스페이트, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 완충 용액은 포스페이트 완충 식염수(PBS)이다. iRNA를 함유하는 완충 용액의 pH 및 삼투압은 대상체에게 투여하기에 적합하도록 조정될 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 iRNA는 dsRNA 리포좀 제형과 같은 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다.
ANGPTL3 유전자 발현의 억제로 혜택을 받을 대상체는 지질 대사 장애와 같은 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어 고지혈증 또는 고중성지방혈증에 걸리기 쉽거나 이를 진단받은 대상체이다. 일 구현예에서, 본 방법은 표적 ANGPTL3 유전자의 발현이 예컨대 투여 당 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 1~6, 1~3, 또는 3~6개월 동안 감소되도록 본 명세서에서 특징화된 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 조성물은 3~6개월마다 1회 투여된다.
일 구현예에서, 본 명세서에서 특징화된 방법 및 조성물에 유용한 iRNA는 표적 ANGPTL3 유전자의 RNA(1차 또는 가공된)를 특이적으로 표적으로 한다. iRNA를 사용한 이들 유전자의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법은 본 명세서에 기술된 것과 같이 제조되고 수행될 수 있다.
본 발명의 방법에 따른 iRNA의 투여는 ANGPTL3-관련 장애, 예를 들어 지질 대사 장애, 예를 들어 고지혈증 또는 고중성지방혈증의 예방 또는 치료를 초래할 수 있다. 대상체는 치료적 양의 iRNA, 예컨대 약 0.01mg/kg 내지 약 200mg/kg을 투여받을 수 있다.
일 구현예에서, iRNA는 피하, 즉 피하 주사에 의해 투여된다. 하나 이상의 주사를 사용하여 목적하는 용량의 iRNA를 대상체에게 전달할 수 있다. 주사는 일정 기간 동안 반복될 수 있다.
투여는 정기적 주기로 반복될 수 있다. 특정 구현예에서, 초기 치료 용법 후, 치료는 덜 빈번한 주기로 투여될 수 있다. 반복 투여 용법은 정기적 주기로, 예를 들어, 매월 1회 내지 6개월 마다 1회로 치료학적 양의 iRNA의 투여를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, iRNA는 약 매월 1회 내지 약 3개월에 1회, 또는 약 3개월에 1회 내지 약 6개월에 1회 투여된다.
본 발명은 ANGPTL3 유전자 발현의 감소 및/또는 억제로 혜택을 받을 대상체, 예를 들어 ANGPTL3-관련 장애가 있는 대상체를 다른 약제 및/또는 다른 치료적 방법, 예를 들어 이들 장애를 치료하기 위해 현재 사용되는 것들과 같은 공지된 약제 및/또는 공지된 치료적 방법과 조합하여 치료하기 위한 iRNA 제제 또는 이의 약제학적 조성물의 방법 및 용도를 추가로 제공한다.
따라서, 본 발명의 일부 양태에서, 본 발명의 단일 iRNA 제제 중 하나를 포함하는 방법은 대상체에게 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
예를 들어, 특정 구현예에서, ANGPTL3을 표적으로 하는 iRNA는, 예를 들어 지질 대사 장애를 치료하는 데 유용한 제제와 조합하여 투여된다. 예를 들어, ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 대상체, 예를 들어 지질 대사 장애가 있는 대상체를 치료하기에 적합한 추가 제제는 하나 이상의 혈청 지질을 낮추는 제제를 포함할 수 있다. 이러한 제제의 비제한적인 예는 HMG-CoA 환원효소 억제제와 같은 콜레스테롤 합성 억제제, 예를 들어 스타틴을 포함할 수 있다. 스타틴은 아토르바스타틴(리피토), 플루바스타틴(레스콜), 로바스타틴(메바코르), 로바스타틴 서방형(알토프레브), 피타바스타틴(리발로), 프라바스타틴(프라바콜), 로수바스타틴(크레스토) 및 심바스타틴(조코르)을 포함할 수 있다. 지질 대사 장애의 치료에 유용한 다른 제제는 담즙 격리제, 예컨대 콜레스티라민 및 기타 수지; VLDL 분비 억제제, 예컨대 니아신; 친유성 항산화제, 예컨대 프로부콜; 아실-CoA 콜레스테롤 아실 전이효소 억제제; 파르네소이드 X 수용체 길항제; 스테롤 조절 결합 단백질 절단 활성화 단백질(SCAP) 활성화제; 미세소체 중성지방 전달 단백질(MTP) 억제제; ApoE-관련 펩티드; 및 ANGPTL3에 대한 치료 항체를 포함한다. 추가 치료제는 또한 콜레스테릴 에스테르 전달 단백질(CETP) 억제제와 같은 고밀도 지질단백질(HDL)을 증가시키는 제제를 포함할 수 있다. 또한, 추가 치료제는 식이 보충제, 예를 들어 어유를 포함할 수도 있다. iRNA 및 추가 치료제는 동시에 및/또는 동일한 조합으로, 예를 들어 비경구 투여될 수 있거나, 추가 치료제는 별도의 조성물의 일부로서 또는 별도의 시간에 및/또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기술된 또 다른 방법에 의해 투여될 수 있다.
iRNA 제제 및 추가 치료제 및/또는 치료제는 동시에 및/또는 동일한 조합으로, 예를 들어 비경구 투여될 수 있거나, 추가 치료제는 별도의 조성물의 일부로서 또는 별도의 시간에 및/또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기술된 또 다른 방법에 의해 투여될 수 있다.
VIII. 키트
특정 양태에서, 본 개시내용은 siRNA 화합물, 예를 들어, 이중 가닥 siRNA 화합물 또는 siRNA 화합물(예를 들어, 전구체, 예를 들어 siRNA 화합물로 가공될 수 있는 보다 큰 siRNA 화합물, 또는 siRNA 화합물, 예를 들어 이중 가닥 siRNA 화합물 또는 ssiRNA 화합물을 암호화하는 DNA 또는 이의 전구체)의 약제학적 제형을 함유하는 적합한 용기를 포함하는 키트를 제공한다.
이러한 키트는 하나 이상의 dsRNA 제제(들) 및 사용 설명서, 예를 들어 예방학적 또는 치료적 유효량의 dsRNA 제제(들)를 투여하기 위한 지침서를 포함한다. dsRNA 제제는 바이알 또는 미리-충전된 주사기에 존재할 수 있다. 키트는 선택적으로 dsRNA 제제를 투여하기 위한 수단(예를 들어, 사전 충전된 주사기와 같은 주사 장치), 또는 ANGPTL3의 억제를 측정하기 위한 수단(예를 들어, ANGPTL3 mRNA, ANGPTL3 단백질 및/또는 ANGPTL3 활성의 억제를 측정하기 위한 수단)을 추가로 포함할 수 있다. ANGPTL3의 억제를 측정하기 위한 이러한 수단은, 예를 들어 혈장 시료와 같은 대상체로부터의 시료를 수득하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 본 발명의 키트는 선택적으로 치료적 유효량 또는 예방학적 유효량을 결정하기 위한 수단을 추가로 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 제형의 개별 성분은 하나의 컨테이너, 예를 들어 바이알 또는 미리 충전된 주사기에 제공될 수 있다. 대안적으로, 약제학적 제형의 성분을 2개 이상의 컨테이너, 예를 들어 siRNA 화합물 제조를 위한 하나의 컨테이너 및 캐리어 화합물을 위한 적어도 또 다른 컨테이너에 별도로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 키트는 단일 박스에 하나 이상의 컨테이너와 같은 다양한 구성으로 패키징될 수 있다. 예를 들어 키트와 함께 제공된 지침에 따라 다양한 성분들이 조합될 수 있다. 성분들은 예를 들어 약제학적 조성물을 제조 및 투여하기 위해 본원에 기술된 방법에 따라 조합될 수 있다. 키트는 또한 전달 장치를 포함할 수 있다.
발명은 제한하는 것으로 해석되어서는 안되는 다음의 실시예에 의해 추가로 예시된다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참조, 특허 및 공개된 특허 출원의 전문뿐만 아니라 비공식적인 서열 목록 및 도면이 본원에 참조로서 인용된다.
실시예
실시예 1. iRNA 합성
시약 공급원
시약 공급원이 본원에 구체적으로 주어지지 않는 경우, 그러한 시약은 분자 생물학에 적용하기 위한 품질/순도 표준에서 분자 생물학용 시약 공급업체로부터 수득될 수 있다.
siRNA 설계
인간 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 유전자(인간: NCBI refseqID NM_014995.3 및 NM_014995.2, NCBI GeneID: 27329)을 표적으로 하는 siRNA가 맞춤형 R 및 파이톤 스크립트를 사용하여 설계되었다. 인가 NM_014995.3 REFSEQ mRNA는 2951개 염기의 길이를 갖는다. 인간 NM_014995.2 REFSEQ mRNA는 2126개 염기의 길이를 갖는다.
미변형 ANGPTL3 센스 및 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열의 상세한 목록이 표 2에 나타나 있다. 　 변형 ANGPTL3 센스 및 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열의 상세한 목록이 표 3에 나타나 있다.
본 출원 전체에 걸쳐, 소수가 없는 듀플렉스 명칭은 단지 듀플렉스의 배치 번호를 참조하는 소수를 갖는 듀플렉스 명칭과 동등하다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어,AD-959917은 AD-959917.1과 동등하다.
siRNA 합성
당업계에 공지된 방법을 사용하여 siRNA가 설계되고, 합성되고, 제조되었다.
간략하게, siRNA 서열이 고체 지지체 상의 포스포라미디트 화학작용을 갖는 Mermade 192 합성기(BioAutomation)를 사용하여 1μmol 규모로 합성되었다. 　 고형 지지체는 맞춤형 GalNAc 리간드(3'-GalNAc 접합체), 범용 고형 지지체(AM Chemicals) 또는 관심대상의 제1 뉴클레오타이드로 로딩된 제어된 기공 유리(500-1000 Å)였다. 보조 합성 시약 및 표준 2-시아노에틸 포스포라미다이트 단량체(2'-데옥시-2'-플루오로, 2'-O-메틸, RNA, DNA)는 Thermo-Fisher(위스콘신주 밀워키), 홍엔(중국), 또는 Chemgenes(미국 매사추세츠주 윌밍턴)로부터 수득하였다. 추가의 포스포라미다이트 단량체는 상업적 공급업체로부터 조달하거나, 자체적으로 제조하거나, 다양한 CMO로부터의 맞춤형 합성을 사용하여 조달하였다. 아세토나이트릴 또는 9:1 아세토니트릴:DMF 중 어느 하나에서 100 mM의 농도로 포스포라미다이트를 제조하고 5-에틸티오-1H-테트라졸(ETT, 아세토니트릴 중 0.25 M)을 사용해 400초의 반응 시간으로 결합시켰다. 무수 아세토니트릴/피리딘(9:1 v/v) 중 3-((디메틸아미노-메틸리덴) 아미노)-3H-1,2,4-디티아졸-3-티온(DDTT, Chemgenes(미국 매사추세츠주 윌밍턴)로부터 입수함)의 100 mM 용액을 사용하여 포스포로티오에이트 연결을 생성하였다. 산화 시간은 5분이었다. 모든 서열은 DMT 군의 최종 제거("DMT-Off")로 합성하였다.
고형상 합성의 완료 시, 고형 지지 올리고리보뉴클레오타이드를 실온에서 약 2시간 동안 96 웰 플레이트에서 300 μL의 메틸아민(40% 수성)으로 처리하여 고형 지지체로부터 절단하고 모든 추가의 염기 불안정 보호기를 후속 제거하였다. 털트-부틸 디메틸 실릴(TBDMS)기로 보호된 임의의 천연 리보뉴클레오타이드 연결(2'-OH)을 함유하는 서열의 경우, 제2 탈보호 단계를 TEA.3HF(트리에틸아민 트리하이드로플루오라이드)를 사용하여 수행하였다. 수성 메틸아민 중의 각각의 올리고뉴클레오타이드 용액에 200 μL의 디메틸 설폭시드(DMSO) 및 300 μL TEA.3HF를 첨가하고, 용액을 60°C에서 대략 30분 동안 항온처리하였다. 항온처리 후, 플레이트를 실온으로 옮겨 미정제 올리고뉴클레오타이드를 1 mL의 9:1 아세톤트리올:에탄올 또는 1:1 에탄올:이소프로판올의 첨가에 의해 침전하도록 하였다. 　 그런 다음, 플레이트를 4°C에서 45분 동안 원심분리하고, 다중 채널 피펫의 도움으로 상청액을 조심스럽게 디켄팅하였다. 올리고뉴클레오타이드 펠릿은 20 mM NaOAc에 재현탁하고, 이어서 자동샘플러, UV 검출기, 전도도 측정기, 및 분별 수집기가 구비된 Agilent LC 시스템 상에서 HiTrap 크기 배제 컬럼(5 mL, GE Healthcare)을 사용하여 탈염하였다. 탈염된 시료를 96 웰 플레이트에서 수집한 다음, LC-MS 및 UV 분광분석법으로 분석하여 각각 동일성을 확인하고 재료의 양을 정량화하였다.
단일 가닥의 듀플렉싱을 Tecan 액체 취급 로봇 상에서 수행하였다. 센스 및 안티센스 단일 가닥을 96웰 플레이트에서 1x PBS의 10 μM의 최종 농도에 대한 등몰 비율로 조합하고, 플레이트를 밀봉하고, 100°C에서 10분 동안 항온처리한 다음, 2~3시간에 걸쳐 서서히 실온으로 복귀시켰다. 각각의 듀플렉스의 농도 및 동일성을 확인한 다음 시험관 내 스크리닝 검정에 사용하였다.
실시예 2. 시험관 내 스크리닝 방법
세포 배양 및 384-웰 형질감염
형질감염의 경우, 트립신화에 의해 플레이트로부터 방출되기 전에, 1차 시노몰구스 간세포(PCH) 세포 또는 Hep3b 세포(ATCC, Manassas, VA)를 37°C의 5% CO2의 대기에서, 10% FBS(ATCC)로 보충된 Eagle의 최소 필수 배지(Gibco)에서 합류점 부근까지 성장시켰다. 형질감염이 웰당 7.5 ml의 Opti-MEM와 0.1 ml의 리포펙타민 RNAiMax(Invitrogen, Carlsbad CA. cat # 13778-150)를 384-웰 플레이트 내 개별 웰에 대한 각각의 siRNA 듀플렉스의 2.5 ml에 첨가함으로써 수행되었다. 이어서 혼합물이 실온에서 15분 동안 항온처리되었다. 이어서, 약 1.5 x104개 세포를 함유하는 무항생제의 40 ml의 완전 성장 배지를 siRNA 혼합물에 첨가하였다. 세포는 RNA 정제 전에 24시간 동안 항온처리되었다. 단일 용량 실험이 10nM, 1nM 및 0.1nM 최종 듀플렉스 농도에서 수행되었다.
DYNABEADS mRNA 단리 키트(Invitrogen??, 부품 #: 610-12)를 사용한 총 RNA 단리
세포는 웰당 3μL의 비드를 함유하는 75ml의 용해/결합 완충액에 용해되었고 정전기 쉐이커 상에서 10분 동안 혼합되었다. 자기 플레이트 지지체를 사용하여, 세척 단계가 Biotek EL406 상에서 자동화되었다. 비드를 (90mL에서)완충액 A에서 1회, 완충액 B에서 1회, 및 완충액 E에서 2회 세척하고, 그 사이에 흡입 단계를 두었다. 최종 흡입 후, 하기에서 기술되는 것과 같이, 완전 10mL RT 혼합물을 각 웰에 첨가하였다.
ABI 고용량 cDNA 역전사 키트(Applied Biosystems, Foster City, CA, Cat #4368813)를 사용한 cDNA 합성
반응물당 1μl 10X 완충액, 0.4ml 25X dNTP, 1ml 무작위 프라이머, 0.5ml 역전사 효소, 0.5ml RNase 억제제 및 6.6ml의 H2O의 마스터 혼합물이 웰당 첨가되었다. 플레이트를 밀봉하고, 정전기 쉐이커 상에서 10분 동안 교반한 다음, 37°C에서 2시간 동안 항온처리하였다. 그 후, 플레이트를 80°C에서 8분 동안 교반하였다.
실시간 PCR
웰당 384 웰 플레이트(Roche cat # 04887301001)에, 2 마이크로리터(μL)의 cDNA를 0.5μL의 인간 GAPDH TaqMan 프로브(4326317E), 0.5μl 인간 ANGPTL3, 2μl 뉴클레아제가 없는 물 및 5μl의 라이트사이클러 480 프로브 마스터 혼합물(Roche Cat # 04887301001)을 함유하는 마스터 혼합물에 첨가하였다. 실시간 PCR은 라이트사이클러480 실시간 PCR 시스템(Roche)에서 수행되었다.
상대적 배수 변화를 계산하기 위해, 데이터를 △△Ct 방법을 사용하여 분석하고 10nM AD-1955로 형질감염된 세포 또는 모방 형질감염된 세포로 수행된 검정에 대해 정규화하였다. XLFit를 사용하는 4 파라미터 피팅 모델을 사용하여 IC50을 계산하였고, AD-1955로 형질감염된 또는 모방 형질감염된 세포에 대해 정규화되었다. AD-1955의 센스 및 안티센스 서열은: 센스: cuuAcGcuGAGuAcuucGAdTsdT(서열번호 27) 및 안티센스 UCGAAGuACUcAGCGuAAGdTsdT(서열번호 28)이다.
표 2 및 표 3에 열거된 dsRNA 제제의 단일 용량 스크리닝의 1차 시노몰구스 간세포(PCH)에서의 결과가 표 4에 나타나 있다.
[표 1] 핵산 서열 제공에서 사용되는 뉴클레오타이드 단량체의 약어. 이들 단량체는, 올리고뉴클레오타이드에 존재할 때, 5'-3'-포스포디에스테르 결합에 의해 상호 연결되는 것을 이해할 것이고; 뉴클레오타이드가 2'-플루오로 변형을 함유하는 경우, 플루오로가 부모 뉴클레오타이드의 해당 위치에서 하이드록시를 대체한다는 것을 이해할 것이다(즉, 이는 2'-데옥시-2'-플루오로뉴클레오타이드임).
실시예 3. 마우스에서 dsRNA 듀플렉스의 생체내 스크리닝
전술된 시험관내 연구로부터 식별된 관심 듀플렉스가 생체내에서 평가되었다. 특히, 투여 전 -14일차에 야생형 마우스(C57BL/6)를 인간 ANGPTL3을 암호화하는 아데노-관련 바이러스 8(AAV8) 벡터의 2 x 1011 바이러스 입자의 정맥내 투여에 의해 형질도입하였다. 특히, 마우스에게 개방 해독 프레임을 암호화하는 AAV8 및 NM_014495.3으로 참조된 인간 ANGPTL3 mRNA의 3' UTR을 투여하였다.
0일차에, 3마리의 마우스로 이루어진 그룹에게 단일 3mg/kg 용량의 관심 제제(표 5 참조) 또는 PBS 대조군을 피하 투여하였다. 투여 후 7일차 또는 14일차에, 혈청 시료를 수집하고, 혈청 시료 내 ANGPTL3의 수준을 ELISA 검정에 의해 측정하였다. 결과가 그룹 평균 및 표준 편차(SD)(도 1a) 및 SD로 도표화된 개별 점(도 1b)으로 도시되어 있다. 양성 대조군인 AD-74757을 3mg/kg으로 치료한 결과, 예상한 대로 7일차와 14일차에 3ng/mL 이하로 나타났다. 여러 화합물의 군집은 벤치마크 그룹(점선)과 유사하거나 그 미만의 ANGPTL3 수준을 초래하였다. 구체적으로, 인간 ANGPTL3 전사체에서 뉴클레오타이드 80~114의 영역을 표적으로 하는 화합물, 예를 들어, AD-1331203.1, AD-1331206.1, AD-1331209.1, AD-1331212.1 및 AD-1331213.1의 대부분이 AD-74757과 유사한 KD를 나타냈다.
투여 후 14일차에, 동물을 희생시키고 간 시료를 수집하였으며, 액체 질소에서 급속 냉동시켰다. 조직 mRNA를 추출하고 RT-QPCR 방법에 의해 분석하였다. 인간 ANGPTL3 mRNA 수준을 하우스키핑 유전자 GAPDH와 비교하였다. 그런 다음, 값을 PBS 비히클 대조군의 평균으로 정규화하였다. 데이터는 베이스라인 값의 백분율로 표현되었고, 평균 + 표준 편차로 제시되었다. 도 2에 도시된 결과는 시험된 예시적인 듀플렉스 제제가 생체내에서 인간 ANGPTL3 메신저 RNA의 수준을 효과적으로 감소시킨다는 것을 입증한다.
[표 5] 생체내 스크리닝에 대한 관심 듀플렉스
실시예 4. 구조-활성 관계(SAR) 분석
시험관내 및 실시예 2 및 3에서의 생체내 분석에 기초하여, 구조-활성 관계(SAR) 분석을 선택된 듀플렉스에 대해 수행하였다(표 6 참조). 특히, 추가적인 듀플렉스를 시험관내 및 생체내에서 설계, 합성 및 분석하였다.
당업계에 공지되고 전술된 통상적인 방법을 사용하여 siRNA를 합성하고 어닐링하였다. 이들 siRNA를 이용한 PCH 세포 및 Hep3B 세포에서의 시험관내 스크리닝 검정을 전술한 것과 같이 수행하였다.
미변형 ANGPTL3 센스 및 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열의 상세한 목록이 표 7에 나타나 있다. 　 변형 ANGPTL3 센스 및 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열의 상세한 목록이 표 8에 나타나 있다.　
표 7~8에 열거된 dsRNA 제제의 단일 용량 스크리닝의 1차 시노몰구스 간세포(PCH)에서의 결과가 표 9에 나타나 있다.
표 7~8에 열거된 dsRNA 제제의 단일 용량 스크리닝의 Hep3B 세포에서의 결과가 표 10에 나타나 있다.
[표 6] SAR 분석에 대한 관심 듀플렉스
실시예 5. 마우스에서 dsRNA 듀플렉스의 생체내 스크리닝
전술된 시험관내 연구로부터 식별된 관심 듀플렉스가 생체내에서 평가되었다. 특히, 마우스 당 2e11 바이러스 입자에서 hANGPTL3(전장 인간)을 함유하는 AAV로 마우스를 형질도입하였다. 형질도입 후 4주차에, 마우스에게 단일 3mg/kg 용량의 관심 듀플렉스를 피하 투여하였다. 투여 후 7일차 및 14일차에, 혈청을 수집하고, ELISA(R&D 시스템 hANPTL3 ELISA, DANL30)에 의해 hANGPTL3 단백질의 수준을 결정하였다. 이들 분석의 결과는 아래 표 11에 제공되어 있다. 시점당 평균 3마리의 마우스를 사용하였고, 7일차 및 14일차의 PBS 대조군으로부터의 시료와 비교한 hANGPTL3 단백질의 백분율을 표 11로 나타냈다.
실시예 6. 생체내 선택된 dsRNA 듀플렉스의 SAR 분석
구조-활성-관계(SAR) 분석도 전술한 것과 유사하게 생체내에서 평가되었다. 간략하게, 마우스 당 2e11 바이러스 입자에서 hANGPTL3을 함유하는 AAV로 마우스를 형질도입하였다. 형질도입 후 2주차에, 마우스에게 관심 듀플렉스를 피하 투여하고, 0일차(투여일), 7일차, 14일차 및 28일차에 혈청을 수집하였다. 전술한 것과 같이, hANGPTL3 단백질 수준이 ELISA에 의해 결정되었다. 0일차와 비교하여 평균 백분율로서 제시된 결과를 표 12 및 표 13에 나타냈다.
실시예 7. 비-인간 영장류 연구에서 siRNA -GalNAC 접합체의 효과
전술한 생체내 연구, AD-1331212, AD-1331213 및 AD-1479372의 선도 후보물질을 비-인간 영장류에서의 이들의 효과에 대해 추가로 조사하였다. 구체적으로, 3mg/kg 또는 10mg/kg의 AD-1331212, AD-1331213 및 AD-1479372의 단일 용량을 시노몰구스 원숭이에게 피하 투여하였다. 매주 동물로부터 혈청을 수집하고, ELISA에 의해 ANGPTL3 단백질의 혈청 수준을 결정하였다. 투여일(0일차)의 수준과 비교하여 ANGPTL3의 변화율로서 제시된 결과를 도 3에 나타냈다.
균등물
당업자는 단지 통상적인 실험을 사용하여 본원에 기술된 특정 구현예 및 방법에 대한 많은 균등물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 다음의 청구범위의 범주에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> ALNYLAM PHARMACEUTICALS, INC. <120> ANGIOPOIETIN-LIKE 3 (ANGPTL3) IRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF <130> 121301-15120 <140> <141> <150> 63/156,476 <151> 2021-03-04 <150> 63/308,668 <151> 2022-02-10 <160> 986 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 2951 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atatatagag ttaagaagtc taggtctgct tccagaagaa aacagttcca cgttgcttga 60 aattgaaaat caagataaaa atgttcacaa ttaagctcct tctttttatt gttcctctag 120 ttatttcctc cagaattgat caagacaatt catcatttga ttctctatct ccagagccaa 180 aatcaagatt tgctatgtta gacgatgtaa aaattttagc caatggcctc cttcagttgg 240 gacatggtct taaagacttt gtccataaga cgaagggcca aattaatgac atatttcaaa 300 aactcaacat atttgatcag tctttttatg atctatcgct gcaaaccagt gaaatcaaag 360 aagaagaaaa ggaactgaga agaactacat ataaactaca agtcaaaaat gaagaggtaa 420 agaatatgtc acttgaactc aactcaaaac ttgaaagcct cctagaagaa aaaattctac 480 ttcaacaaaa agtgaaatat ttagaagagc aactaactaa cttaattcaa aatcaacctg 540 aaactccaga acacccagaa gtaacttcac ttaaaacttt tgtagaaaaa caagataata 600 gcatcaaaga ccttctccag accgtggaag accaatataa acaattaaac caacagcata 660 gtcaaataaa agaaatagaa aatcagctca gaaggactag tattcaagaa cccacagaaa 720 tttctctatc ttccaagcca agagcaccaa gaactactcc ctttcttcag ttgaatgaaa 780 taagaaatgt aaaacatgat ggcattcctg ctgaatgtac caccatttat aacagaggtg 840 aacatacaag tggcatgtat gccatcagac ccagcaactc tcaagttttt catgtctact 900 gtgatgttat atcaggtagt ccatggacat taattcaaca tcgaatagat ggatcacaaa 960 acttcaatga aacgtgggag aactacaaat atggttttgg gaggcttgat ggagaatttt 1020 ggttgggcct agagaagata tactccatag tgaagcaatc taattatgtt ttacgaattg 1080 agttggaaga ctggaaagac aacaaacatt atattgaata ttctttttac ttgggaaatc 1140 acgaaaccaa ctatacgcta catctagttg cgattactgg caatgtcccc aatgcaatcc 1200 cggaaaacaa agatttggtg ttttctactt gggatcacaa agcaaaagga cacttcaact 1260 gtccagaggg ttattcagga ggctggtggt ggcatgatga gtgtggagaa aacaacctaa 1320 atggtaaata taacaaacca agagcaaaat ctaagccaga gaggagaaga ggattatctt 1380 ggaagtctca aaatggaagg ttatactcta taaaatcaac caaaatgttg atccatccaa 1440 cagattcaga aagctttgaa tgaactgagg caaatttaaa aggcaataat ttaaacatta 1500 acctcattcc aagttaatgt ggtctaataa tctggtatta aatccttaag agaaagcttg 1560 agaaatagat tttttttatc ttaaagtcac tgtctattta agattaaaca tacaatcaca 1620 taaccttaaa gaataccgtt tacatttctc aatcaaaatt cttataatac tatttgtttt 1680 aaattttgtg atgtgggaat caattttaga tggtcacaat ctagattata atcaataggt 1740 gaacttatta aataactttt ctaaataaaa aatttagaga cttttatttt aaaaggcatc 1800 atatgagcta atatcacaac tttcccagtt taaaaaacta gtactcttgt taaaactcta 1860 aacttgacta aatacagagg actggtaatt gtacagttct taaatgttgt agtattaatt 1920 tcaaaactaa aaatcgtcag cacagagtat gtgtaaaaat ctgtaataca aatttttaaa 1980 ctgatgcttc attttgctac aaaataattt ggagtaaatg tttgatatga tttatttatg 2040 aaacctaatg aagcagaatt aaatactgta ttaaaataag ttcgctgtct ttaaacaaat 2100 ggagatgact actaagtcac attgacttta acatgaggta tcactatacc ttatttgtta 2160 aaatatatac tgtatacatt ttatatattt taacacttaa tactatgaaa acaaataatt 2220 gtaaaggaat cttgtcagat tacagtaaga atgaacatat ttgtggcatc gagttaaagt 2280 ttatatttcc cctaaatatg ctgtgattct aatacattcg tgtaggtttt caagtagaaa 2340 taaacctcgt aacaagttac tgaacgttta aacagcctga caagcatgta tatatgttta 2400 aaattcaata aacaaagacc cagtccctaa attatagaaa tttaaattat tcttgcatgt 2460 ttatcgacat cacaacagat ccctaaatcc ctaaatccct aaagattaga tacaaatttt 2520 ttaccacagt atcacttgtc agaatttatt tttaaatatg attttttaaa actgccagta 2580 agaaatttta aattaaaccc atttgttaaa ggatatagtg cccaagttat atggtgacct 2640 acctttgtca atacttagca ttatgtattt caaattatcc aatatacatg tcatatatat 2700 ttttatatgt cacatatata aaagatatgt atgatctatg tgaatcctaa gtaaatattt 2760 tgttccagaa aagtacaaaa taataaaggt aaaaataatc tataattttc aggaccacag 2820 actaagctgt cgaaattaac gctgattttt ttagggccag aataccaaaa tggctcctct 2880 cttcccccaa aattggacaa tttcaaatgc aaaataattc attatttaat atatgagttg 2940 cttcctctat t 2951 <210> 2 <211> 2951 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 aatagaggaa gcaactcata tattaaataa tgaattattt tgcatttgaa attgtccaat 60 tttgggggaa gagaggagcc attttggtat tctggcccta aaaaaatcag cgttaatttc 120 gacagcttag tctgtggtcc tgaaaattat agattatttt tacctttatt attttgtact 180 tttctggaac aaaatattta cttaggattc acatagatca tacatatctt ttatatatgt 240 gacatataaa aatatatatg acatgtatat tggataattt gaaatacata atgctaagta 300 ttgacaaagg taggtcacca tataacttgg gcactatatc ctttaacaaa tgggtttaat 360 ttaaaatttc ttactggcag ttttaaaaaa tcatatttaa aaataaattc tgacaagtga 420 tactgtggta aaaaatttgt atctaatctt tagggattta gggatttagg gatctgttgt 480 gatgtcgata aacatgcaag aataatttaa atttctataa tttagggact gggtctttgt 540 ttattgaatt ttaaacatat atacatgctt gtcaggctgt ttaaacgttc agtaacttgt 600 tacgaggttt atttctactt gaaaacctac acgaatgtat tagaatcaca gcatatttag 660 gggaaatata aactttaact cgatgccaca aatatgttca ttcttactgt aatctgacaa 720 gattccttta caattatttg ttttcatagt attaagtgtt aaaatatata aaatgtatac 780 agtatatatt ttaacaaata aggtatagtg atacctcatg ttaaagtcaa tgtgacttag 840 tagtcatctc catttgttta aagacagcga acttatttta atacagtatt taattctgct 900 tcattaggtt tcataaataa atcatatcaa acatttactc caaattattt tgtagcaaaa 960 tgaagcatca gtttaaaaat ttgtattaca gatttttaca catactctgt gctgacgatt 1020 tttagttttg aaattaatac tacaacattt aagaactgta caattaccag tcctctgtat 1080 ttagtcaagt ttagagtttt aacaagagta ctagtttttt aaactgggaa agttgtgata 1140 ttagctcata tgatgccttt taaaataaaa gtctctaaat tttttattta gaaaagttat 1200 ttaataagtt cacctattga ttataatcta gattgtgacc atctaaaatt gattcccaca 1260 tcacaaaatt taaaacaaat agtattataa gaattttgat tgagaaatgt aaacggtatt 1320 ctttaaggtt atgtgattgt atgtttaatc ttaaatagac agtgacttta agataaaaaa 1380 aatctatttc tcaagctttc tcttaaggat ttaataccag attattagac cacattaact 1440 tggaatgagg ttaatgttta aattattgcc ttttaaattt gcctcagttc attcaaagct 1500 ttctgaatct gttggatgga tcaacatttt ggttgatttt atagagtata accttccatt 1560 ttgagacttc caagataatc ctcttctcct ctctggctta gattttgctc ttggtttgtt 1620 atatttacca tttaggttgt tttctccaca ctcatcatgc caccaccagc ctcctgaata 1680 accctctgga cagttgaagt gtccttttgc tttgtgatcc caagtagaaa acaccaaatc 1740 tttgttttcc gggattgcat tggggacatt gccagtaatc gcaactagat gtagcgtata 1800 gttggtttcg tgatttccca agtaaaaaga atattcaata taatgtttgt tgtctttcca 1860 gtcttccaac tcaattcgta aaacataatt agattgcttc actatggagt atatcttctc 1920 taggcccaac caaaattctc catcaagcct cccaaaacca tatttgtagt tctcccacgt 1980 ttcattgaag ttttgtgatc catctattcg atgttgaatt aatgtccatg gactacctga 2040 tataacatca cagtagacat gaaaaacttg agagttgctg ggtctgatgg catacatgcc 2100 acttgtatgt tcacctctgt tataaatggt ggtacattca gcaggaatgc catcatgttt 2160 tacatttctt atttcattca actgaagaaa gggagtagtt cttggtgctc ttggcttgga 2220 agatagagaa atttctgtgg gttcttgaat actagtcctt ctgagctgat tttctatttc 2280 ttttatttga ctatgctgtt ggtttaattg tttatattgg tcttccacgg tctggagaag 2340 gtctttgatg ctattatctt gtttttctac aaaagtttta agtgaagtta cttctgggtg 2400 ttctggagtt tcaggttgat tttgaattaa gttagttagt tgctcttcta aatatttcac 2460 tttttgttga agtagaattt tttcttctag gaggctttca agttttgagt tgagttcaag 2520 tgacatattc tttacctctt catttttgac ttgtagttta tatgtagttc ttctcagttc 2580 cttttcttct tctttgattt cactggtttg cagcgataga tcataaaaag actgatcaaa 2640 tatgttgagt ttttgaaata tgtcattaat ttggcccttc gtcttatgga caaagtcttt 2700 aagaccatgt cccaactgaa ggaggccatt ggctaaaatt tttacatcgt ctaacatagc 2760 aaatcttgat tttggctctg gagatagaga atcaaatgat gaattgtctt gatcaattct 2820 ggaggaaata actagaggaa caataaaaag aaggagctta attgtgaaca tttttatctt 2880 gattttcaat ttcaagcaac gtggaactgt tttcttctgg aagcagacct agacttctta 2940 actctatata t 2951 <210> 3 <211> 2126 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 ttccagaaga aaacagttcc acgttgcttg aaattgaaaa tcaagataaa aatgttcaca 60 attaagctcc ttctttttat tgttcctcta gttatttcct ccagaattga tcaagacaat 120 tcatcatttg attctctatc tccagagcca aaatcaagat ttgctatgtt agacgatgta 180 aaaattttag ccaatggcct ccttcagttg ggacatggtc ttaaagactt tgtccataag 240 acgaagggcc aaattaatga catatttcaa aaactcaaca tatttgatca gtctttttat 300 gatctatcgc tgcaaaccag tgaaatcaaa gaagaagaaa aggaactgag aagaactaca 360 tataaactac aagtcaaaaa tgaagaggta aagaatatgt cacttgaact caactcaaaa 420 cttgaaagcc tcctagaaga aaaaattcta cttcaacaaa aagtgaaata tttagaagag 480 caactaacta acttaattca aaatcaacct gaaactccag aacacccaga agtaacttca 540 cttaaaactt ttgtagaaaa acaagataat agcatcaaag accttctcca gaccgtggaa 600 gaccaatata aacaattaaa ccaacagcat agtcaaataa aagaaataga aaatcagctc 660 agaaggacta gtattcaaga acccacagaa atttctctat cttccaagcc aagagcacca 720 agaactactc cctttcttca gttgaatgaa ataagaaatg taaaacatga tggcattcct 780 gctgaatgta ccaccattta taacagaggt gaacatacaa gtggcatgta tgccatcaga 840 cccagcaact ctcaagtttt tcatgtctac tgtgatgtta tatcaggtag tccatggaca 900 ttaattcaac atcgaataga tggatcacaa aacttcaatg aaacgtggga gaactacaaa 960 tatggttttg ggaggcttga tggagaattt tggttgggcc tagagaagat atactccata 1020 gtgaagcaat ctaattatgt tttacgaatt gagttggaag actggaaaga caacaaacat 1080 tatattgaat attcttttta cttgggaaat cacgaaacca actatacgct acatctagtt 1140 gcgattactg gcaatgtccc caatgcaatc ccggaaaaca aagatttggt gttttctact 1200 tgggatcaca aagcaaaagg acacttcaac tgtccagagg gttattcagg aggctggtgg 1260 tggcatgatg agtgtggaga aaacaaccta aatggtaaat ataacaaacc aagagcaaaa 1320 tctaagccag agaggagaag aggattatct tggaagtctc aaaatggaag gttatactct 1380 ataaaatcaa ccaaaatgtt gatccatcca acagattcag aaagctttga atgaactgag 1440 gcaaatttaa aaggcaataa tttaaacatt aacctcattc caagttaatg tggtctaata 1500 atctggtatt aaatccttaa gagaaagctt gagaaataga ttttttttat cttaaagtca 1560 ctgtctattt aagattaaac atacaatcac ataaccttaa agaataccgt ttacatttct 1620 caatcaaaat tcttataata ctatttgttt taaattttgt gatgtgggaa tcaattttag 1680 atggtcacaa tctagattat aatcaatagg tgaacttatt aaataacttt tctaaataaa 1740 aaatttagag acttttattt taaaaggcat catatgagct aatatcacaa ctttcccagt 1800 ttaaaaaact agtactcttg ttaaaactct aaacttgact aaatacagag gactggtaat 1860 tgtacagttc ttaaatgttg tagtattaat ttcaaaacta aaaatcgtca gcacagagta 1920 tgtgtaaaaa tctgtaatac aaatttttaa actgatgctt cattttgcta caaaataatt 1980 tggagtaaat gtttgatatg atttatttat gaaacctaat gaagcagaat taaatactgt 2040 attaaaataa gttcgctgtc tttaaacaaa tggagatgac tactaagtca cattgacttt 2100 aacatgaggt atcactatac cttatt 2126 <210> 4 <211> 2126 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 aataaggtat agtgatacct catgttaaag tcaatgtgac ttagtagtca tctccatttg 60 tttaaagaca gcgaacttat tttaatacag tatttaattc tgcttcatta ggtttcataa 120 ataaatcata tcaaacattt actccaaatt attttgtagc aaaatgaagc atcagtttaa 180 aaatttgtat tacagatttt tacacatact ctgtgctgac gatttttagt tttgaaatta 240 atactacaac atttaagaac tgtacaatta ccagtcctct gtatttagtc aagtttagag 300 ttttaacaag agtactagtt ttttaaactg ggaaagttgt gatattagct catatgatgc 360 cttttaaaat aaaagtctct aaatttttta tttagaaaag ttatttaata agttcaccta 420 ttgattataa tctagattgt gaccatctaa aattgattcc cacatcacaa aatttaaaac 480 aaatagtatt ataagaattt tgattgagaa atgtaaacgg tattctttaa ggttatgtga 540 ttgtatgttt aatcttaaat agacagtgac tttaagataa aaaaaatcta tttctcaagc 600 tttctcttaa ggatttaata ccagattatt agaccacatt aacttggaat gaggttaatg 660 tttaaattat tgccttttaa atttgcctca gttcattcaa agctttctga atctgttgga 720 tggatcaaca ttttggttga ttttatagag tataaccttc cattttgaga cttccaagat 780 aatcctcttc tcctctctgg cttagatttt gctcttggtt tgttatattt accatttagg 840 ttgttttctc cacactcatc atgccaccac cagcctcctg aataaccctc tggacagttg 900 aagtgtcctt ttgctttgtg atcccaagta gaaaacacca aatctttgtt ttccgggatt 960 gcattgggga cattgccagt aatcgcaact agatgtagcg tatagttggt ttcgtgattt 1020 cccaagtaaa aagaatattc aatataatgt ttgttgtctt tccagtcttc caactcaatt 1080 cgtaaaacat aattagattg cttcactatg gagtatatct tctctaggcc caaccaaaat 1140 tctccatcaa gcctcccaaa accatatttg tagttctccc acgtttcatt gaagttttgt 1200 gatccatcta ttcgatgttg aattaatgtc catggactac ctgatataac atcacagtag 1260 acatgaaaaa cttgagagtt gctgggtctg atggcataca tgccacttgt atgttcacct 1320 ctgttataaa tggtggtaca ttcagcagga atgccatcat gttttacatt tcttatttca 1380 ttcaactgaa gaaagggagt agttcttggt gctcttggct tggaagatag agaaatttct 1440 gtgggttctt gaatactagt ccttctgagc tgattttcta tttcttttat ttgactatgc 1500 tgttggttta attgtttata ttggtcttcc acggtctgga gaaggtcttt gatgctatta 1560 tcttgttttt ctacaaaagt tttaagtgaa gttacttctg ggtgttctgg agtttcaggt 1620 tgattttgaa ttaagttagt tagttgctct tctaaatatt tcactttttg ttgaagtaga 1680 attttttctt ctaggaggct ttcaagtttt gagttgagtt caagtgacat attctttacc 1740 tcttcatttt tgacttgtag tttatatgta gttcttctca gttccttttc ttcttctttg 1800 atttcactgg tttgcagcga tagatcataa aaagactgat caaatatgtt gagtttttga 1860 aatatgtcat taatttggcc cttcgtctta tggacaaagt ctttaagacc atgtcccaac 1920 tgaaggaggc cattggctaa aatttttaca tcgtctaaca tagcaaatct tgattttggc 1980 tctggagata gagaatcaaa tgatgaattg tcttgatcaa ttctggagga aataactaga 2040 ggaacaataa aaagaaggag cttaattgtg aacattttta tcttgatttt caatttcaag 2100 caacgtggaa ctgttttctt ctggaa 2126 <210> 5 <211> 1598 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 5 caggagggag aagttccaaa ttgcttaaaa ttgaataatt gagacaaaaa atgcacacaa 60 ttaaattatt cctttttgtt gttcctttag taattgcatc cagagtggat ccagaccttt 120 catcatttga ttctgcacct tcagagccaa aatcaagatt tgctatgttg gatgatgtca 180 aaattttagc gaatggcctc ctgcagctgg gtcatggact taaagatttt gtccataaga 240 ctaagggaca aattaacgac atatttcaga agctcaacat atttgatcag tctttttatg 300 acctatcact tcgaaccaat gaaatcaaag aagaggaaaa ggagctaaga agaactacat 360 ctacactaca agttaaaaac gaggaggtga agaacatgtc agtagaactg aactcaaagc 420 ttgagagtct gctggaagag aagacagccc ttcaacacaa ggtcagggct ttggaggagc 480 agctaaccaa cttaattcta agcccagctg gggctcagga gcacccagaa gtaacatcac 540 tcaaaagttt tgtagaacag caagacaaca gcataagaga actcctccag agtgtggaag 600 aacagtataa acaattaagt caacagcaca tgcagataaa agaaatagaa aagcagctca 660 gaaagactgg tattcaagaa ccctcagaaa attctctttc ttctaaatca agagcaccaa 720 gaactactcc ccctcttcaa ctgaacgaaa cagaaaatac agaacaagat gaccttcctg 780 ccgactgctc tgccgtttat aacagaggcg aacatacaag tggcgtgtac actattaaac 840 caagaaactc ccaagggttt aatgtctact gtgataccca atcaggcagt ccatggacat 900 taattcaaca ccggaaagat ggctcacagg acttcaacga aacatgggaa aactacgaaa 960 agggctttgg gaggctcgat ggagaatttt ggttgggcct agagaagatc tatgctatag 1020 tccaacagtc taactacatt ttacgactcg agctacaaga ctggaaagac agcaagcact 1080 acgttgaata ctcctttcac ctgggcagtc acgaaaccaa ctacacgcta catgtggctg 1140 agattgctgg caatatccct ggggccctcc cagagcacac agacctgatg ttttctacat 1200 ggaatcacag agcaaaggga cagctctact gtccagaaag ttactcaggt ggctggtggt 1260 ggaatgacat atgtggagaa aacaacctaa atggaaaata caacaaaccc agaaccaaat 1320 ccagaccaga gagaagaaga gggatctact ggagacctca gagcagaaag ctctatgcta 1380 tcaaatcatc caaaatgatg ctccagccca ccacctaaga agcttcaact gaactgagac 1440 aaaataaaag atcaataaat taaatattaa agtcctcccg atcactgtag taatctggta 1500 ttaaaatttt aatggaaagc ttgagaattg aatttcaatt aggtttaaac tcattgttaa 1560 gatcagatat caccgaatca acgtaaacaa aatttatc 1598 <210> 6 <211> 1598 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 6 caggagggag aagttccaaa ttgcttaaaa ttgaataatt gagacaaaaa atgcacacaa 60 ttaaattatt cctttttgtt gttcctttag taattgcatc cagagtggat ccagaccttt 120 catcatttga ttctgcacct tcagagccaa aatcaagatt tgctatgttg gatgatgtca 180 aaattttagc gaatggcctc ctgcagctgg gtcatggact taaagatttt gtccataaga 240 ctaagggaca aattaacgac atatttcaga agctcaacat atttgatcag tctttttatg 300 acctatcact tcgaaccaat gaaatcaaag aagaggaaaa ggagctaaga agaactacat 360 ctacactaca agttaaaaac gaggaggtga agaacatgtc agtagaactg aactcaaagc 420 ttgagagtct gctggaagag aagacagccc ttcaacacaa ggtcagggct ttggaggagc 480 agctaaccaa cttaattcta agcccagctg gggctcagga gcacccagaa gtaacatcac 540 tcaaaagttt tgtagaacag caagacaaca gcataagaga actcctccag agtgtggaag 600 aacagtataa acaattaagt caacagcaca tgcagataaa agaaatagaa aagcagctca 660 gaaagactgg tattcaagaa ccctcagaaa attctctttc ttctaaatca agagcaccaa 720 gaactactcc ccctcttcaa ctgaacgaaa cagaaaatac agaacaagat gaccttcctg 780 ccgactgctc tgccgtttat aacagaggcg aacatacaag tggcgtgtac actattaaac 840 caagaaactc ccaagggttt aatgtctact gtgataccca atcaggcagt ccatggacat 900 taattcaaca ccggaaagat ggctcacagg acttcaacga aacatgggaa aactacgaaa 960 agggctttgg gaggctcgat ggagaatttt ggttgggcct agagaagatc tatgctatag 1020 tccaacagtc taactacatt ttacgactcg agctacaaga ctggaaagac agcaagcact 1080 acgttgaata ctcctttcac ctgggcagtc acgaaaccaa ctacacgcta catgtggctg 1140 agattgctgg caatatccct ggggccctcc cagagcacac agacctgatg ttttctacat 1200 ggaatcacag agcaaaggga cagctctact gtccagaaag ttactcaggt ggctggtggt 1260 ggaatgacat atgtggagaa aacaacctaa atggaaaata caacaaaccc agaaccaaat 1320 ccagaccaga gagaagaaga gggatctact ggagacctca gagcagaaag ctctatgcta 1380 tcaaatcatc caaaatgatg ctccagccca ccacctaaga agcttcaact gaactgagac 1440 aaaataaaag atcaataaat taaatattaa agtcctcccg atcactgtag taatctggta 1500 ttaaaatttt aatggaaagc ttgagaattg aatttcaatt aggtttaaac tcattgttaa 1560 gatcagatat caccgaatca acgtaaacaa aatttatc 1598 <210> 7 <211> 1785 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <400> 7 gacgttccaa attgcttgaa attgaataat tgaaacaaaa atgcacacaa ttaagctgct 60 cctttttgtt gttcctctag taatttcgtc cagagttgat ccagaccttt cgccatttga 120 ttctgtaccg tcagagccaa aatcaagatt tgctatgttg gatgatgtca aaattttagc 180 caatggcctc ctgcagctgg gtcatggtct taaagatttt gtccataaga caaagggaca 240 aattaatgac atatttcaga agctcaacat atttgatcag tgtttttatg acctatcact 300 tcaaaccaat gaaatcaaag aagaggaaaa ggagctaaga agaaccacat ctaaactaca 360 agttaaaaac gaagaggtga agaatatgtc acttgaactg aactcaaagc ttgaaagtct 420 actggaggag aagatggcgc tccaacacag agtcagggct ttggaggaac 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DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide" <400> 28 ucgaaguacu cagcguaagt t 21 <210> 29 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 29 auaaaaaugu ucacaauuaa u 21 <210> 30 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 30 uaaaaauguu cacaauuaag u 21 <210> 31 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 31 aaaaauguuc acaauuaagc u 21 <210> 32 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 32 aaaauguuca caauuaagcu u 21 <210> 33 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 33 aaauguucac aauuaagcuc 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Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 71 cauauuugau cagucuuuuu u 21 <210> 72 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 72 auauuugauc agucuuuuua u 21 <210> 73 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 73 uauuugauca gucuuuuuau u 21 <210> 74 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 74 auuugaucag ucuuuuuaug u 21 <210> 75 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 75 uuugaucagu cuuuuuauga u 21 <210> 76 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 76 uugaucaguc uuuuuaugau u 21 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Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 98 cccagaagua acuucacuua a 21 <210> 99 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 99 ccagaaguaa cuucacuuaa a 21 <210> 100 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 100 cagaaguaac uucacuuaaa a 21 <210> 101 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 101 agaaguaacu ucacuuaaaa u 21 <210> 102 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 102 gaaguaacuu cacuuaaaac u 21 <210> 103 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 103 aaguaacuuc 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Synthetic oligonucleotide" <400> 232 uguctutcca gtcuuccaac uca 23 <210> 233 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide" <400> 233 ataatgtuug utgucuuucc agu 23 <210> 234 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide" <400> 234 utucgugauu ucccaaguaa aaa 23 <210> 235 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide" <400> 235 uagutgguuu cgugauuucc caa 23 <210> 236 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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Synthetic oligonucleotide" <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide" <400> 243 aguataguug gtuucgugau uuc 23 <210> 244 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 244 aaccaucuaa aauugauucc cac 23 <210> 245 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide" <400> 245 atuggatgga ucaacauuuu ggu 23 <210> 246 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide" <400> 246 ucgatgtuga atuaaugucc aug 23 <210> 247 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 264 auaaaaaugu ucacaauuaa u 21 <210> 265 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 265 uaaaaauguu cacaauuaag u 21 <210> 266 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 266 aaaaauguuc acaauuaagc u 21 <210> 267 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 267 aaaauguuca caauuaagcu u 21 <210> 268 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 268 aaauguucac aauuaagcuc u 21 <210> 269 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 269 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of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 280 uaagcuccuu cuuuuuauug u 21 <210> 281 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 281 agcuccuucu uuuuauuguu u 21 <210> 282 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 282 gcuccuucuu uuuauuguuc u 21 <210> 283 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 283 cuccuucuuu uuauuguucc u 21 <210> 284 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 284 uccuucuuuu uauuguuccu u 21 <210> 285 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 285 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of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 312 gaucagucuu uuuaugaucu a 21 <210> 313 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 313 aucagucuuu uuaugaucua u 21 <210> 314 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 314 ucagucuuuu uaugaucuau u 21 <210> 315 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 315 cagucuuuuu augaucuauc u 21 <210> 316 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 316 agucuuuuua ugaucuaucg u 21 <210> 317 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 317 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uuuuuauugu u 21 <210> 978 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 978 agcuccuucu uuuuauuguu c 21 <210> 979 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 979 ccagaaguaa cuucacuuaa a 21 <210> 980 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 980 uguucacaau uaagcuccuu c 21 <210> 981 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 981 cacaauuaag cuccuucuuu u 21 <210> 982 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 982 aauuaagcuc cuucuuuuua u 21 <210> 983 <211> 22 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 983 auuugaucag ucuuuuuaug au 22 <210> 984 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 984 cagaaguaac uucacuuaaa a 21 <210> 985 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 985 acccagaagu aacuucacuu a 21 <210> 986 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 986 agaaguaacu ucacuuaaaa c 21

Claims (102)

  1. 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제로서, 상기 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 상기 안티센스 가닥은 ANGPTL3을 암호화하는 mRNA에 대한 상보성 영역을 포함하고, 상기 상보성 영역은 표 2~3 및 표 7~8 중 어느 하나의 안티센스 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나와 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제.
  2. 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제로서, 상기 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 상기 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 58~80, 73~102, 73~124, 80~114, 291~320, 291~342, 307~336, 540~567, 540~589 및 545~577의 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나와 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 안티센스 가닥은 서열번호 2의 상응하는 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제.
  3. 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제로서, 상기 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 상기 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 58~80, 80~102; 84~106; 87~109; 91~113; 92~114; 186~208; 307~329; 308~330; 310~332; 314~336; 545~567; 551~573; 553~575; 554~576; 555~577; 1133~1155; 또는 1140~1162의 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나와 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 안티센스 가닥은 서열번호 2의 상응하는 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제.
  4. 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제로서, 상기 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 상기 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 58~80, 91~113, 또는 92~114의 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나와 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 안티센스 가닥은 서열번호 2의 상응하는 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제.
  5. 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제로서, 상기 dsRNA 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 상기 센스 가닥은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 58~80의 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 안티센스 가닥은 서열번호 2의 상응하는 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 제제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; AD-1331329.1; AD-1331237.1; AD-1331238.1; AD-1331240.1; AD-1331244.1; AD-1331256.1; AD-1331262.1; AD-1331264.1; AD-1331265.1; AD-1331266.1; AD-1331316.1; AD-1331338.1; 및 AD-1479372로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나와 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, dsRNA 제제.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; AD-1331329.1; AD-1331240.1; AD-1331262.1; AD-1331264.1; AD-1331265.1 AD-1331266.1; 및 AD-1479372로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나와 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, dsRNA 제제.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 AD-1331203.1; AD-1331206.1; AD-1331209.1; AD-1331212.1; AD-1331213.1; 및 AD-1479372로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나와 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, dsRNA 제제.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 AD-1331212.1; AD-1331213.1; 및 AD-1479372로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열 중 임의의 하나와 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, dsRNA 제제.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 AD-1479372의 안티센스 가닥 뉴클레오타이드 서열과 3개 이하의 뉴클레오타이드가 상이한 적어도 15개 연속 뉴클레오타이드를 포함하는, dsRNA 제제.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 dsRNA 제제는 적어도 하나의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는, dsRNA 제제.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하거나; 상기 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하거나; 상기 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드 및 상기 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하는, dsRNA 제제.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하거나; 상기 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하거나; 상기 센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드 및 상기 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오타이드는 변형을 포함하는, dsRNA 제제.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형 뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 데옥시-뉴클레오타이드, 3'-말단 데옥시티미딘(dT) 뉴클레오타이드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오타이드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오타이드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오타이드, 잠김 뉴클레오타이드, 잠김 해제된 뉴클레오타이드, 입체적으로 제한된 뉴클레오타이드, 구속된 에틸 뉴클레오타이드, 무염기 뉴클레오타이드, 2'-아미노-변형 뉴클레오타이드, 2'-O-알릴-변형 뉴클레오타이드, 2'-C-알킬-변형 뉴클레오타이드, 2'-하이드록실-변형 뉴클레오타이드, 2'-메톡시에틸 변형 뉴클레오타이드, 2'-O-알킬-변형 뉴클레오타이드, 모르폴리노 뉴클레오타이드, 포스포라미데이트, 뉴클레오타이드를 포함하는 비-천연 염기, 테트라하이드로피란 변형 뉴클레오타이드, 1,5-안하이드로헥시톨 변형 뉴클레오타이드, 시클로헥세닐 변형 뉴클레오타이드, 포스포로티오에이트기를 포함하는 뉴클레오타이드, 메틸포스포네이트기를 포함하는 뉴클레오타이드, 5'-포스페이트를 포함하는 뉴클레오타이드, 5'-포스페이트 모방체를 포함하는 뉴클레오타이드, 열 불안정화 뉴클레오타이드, 글리콜 변형 뉴클레오타이드(GNA), 2' 포스페이트를 포함하는 뉴클레오타이드 및 2-O-(N-메틸아세트아미드) 변형 뉴클레오타이드; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, dsRNA 제제.
  15. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 상에서의 변형은 LNA, HNA, CeNA, 2′-메톡시에틸, 2′-O-알킬, 2′-O-알릴, 2′-C-알릴, 2′-플루오로, 2′-데옥시, 2′-하이드록실 및 글리콜; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, dsRNA 제제.
  16. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형 뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 데옥시-뉴클레오타이드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오타이드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오타이드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오타이드, 글리콜 변형 뉴클레오타이드(GNA), 2' 포스페이트를 포함하는 뉴클레오타이드 및 비닐-포스포네이트 뉴클레오타이드; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, dsRNA 제제.
  17. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 상에서의 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오타이드 변형인, dsRNA 제제.
  18. 제17항에 있어서, 상기 열 불안정화 뉴클레오타이드 변형은 무염기 변형; 듀플렉스 내 반대 뉴클레오타이드와의 미스매치; 및 불안정화 당 변형, 2'-데옥시 변형, 비환형 뉴클레오타이드, 잠김 해제된 핵산(UNA) 및 글리세롤 핵산(GNA)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, dsRNA 제제.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 가닥 영역은 길이가 19~30개의 뉴클레오타이드 쌍인, dsRNA 제제.
  20. 제19항에 있어서, 상기 이중 가닥 영역은 길이가 19~25개의 뉴클레오타이드 쌍인, dsRNA 제제.
  21. 제19항에 있어서, 상기 이중 가닥 영역은 길이가 19~23개의 뉴클레오타이드 쌍인, dsRNA 제제.
  22. 제19항에 있어서, 상기 이중 가닥 영역은 길이가 23~27개의 뉴클레오타이드 쌍인, dsRNA 제제.
  23. 제19항에 있어서, 상기 이중 가닥 영역은 길이가 21~23개의 뉴클레오타이드 쌍인, dsRNA 제제.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 가닥은 독립적으로 길이가 30개 이하의 뉴클레오타이드인, dsRNA 제제.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥은 길이가 21개의 뉴클레오타이드이고 상기 안티센스 가닥은 길이가 23개의 뉴클레오타이드인, dsRNA 제제.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상보성 영역은 길이가 적어도 17개의 뉴클레오타이드인, dsRNA 제제.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상보성 영역은 길이가 19 내지 23개의 뉴클레오타이드인, dsRNA 제제.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상보성 영역은 길이가 19개 뉴클레오타이드인, dsRNA 제제.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개의 뉴클레오타이드의 3' 오버행을 포함하는, dsRNA 제제.
  30. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 2개의 뉴클레오타이드의 3' 오버행을 포함하는, dsRNA 제제.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드를 추가로 포함하는, dsRNA 제제.
  32. 제31항에 있어서, 상기 리간드는 상기 dsRNA 제제의 센스 가닥의 3' 말단에 접합되는, dsRNA 제제.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 상기 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체인, dsRNA 제제.
  34. 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리간드는 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체인, dsRNA 제제.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 리간드는 다음인, dsRNA 제제:
    .
  36. 제35항에 있어서, 상기 dsRNA 제제는 하기 개략도에서 볼 수 있는 것과 같은 리간드에 접합되고,

    상기 식에서, X는 O 또는 S인, dsRNA 제제.
  37. 제36항에 있어서, 상기 X는 O인, dsRNA 제제.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 dsRNA 제제는 적어도 하나의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합을 추가로 포함하는, dsRNA 제제.
  39. 제38항에 있어서, 상기 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥의 3'-말단에 존재하는, dsRNA 제제.
  40. 제39항에 있어서, 상기 가닥은 상기 안티센스 가닥인, dsRNA 제제.
  41. 제39항에 있어서, 상기 가닥은 상기 센스 가닥인, dsRNA 제제.
  42. 제38항에 있어서, 상기 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥의 5'-말단에 존재하는, dsRNA 제제.
  43. 제42항에 있어서, 상기 가닥은 상기 안티센스 가닥인, dsRNA 제제.
  44. 제42항에 있어서, 상기 가닥은 상기 센스 가닥인, dsRNA 제제.
  45. 제38항에 있어서, 상기 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드 간 결합은 하나의 가닥의 5'-말단 및 3'-말단 둘 모두에 존재하는, dsRNA 제제.
  46. 제45항에 있어서, 상기 가닥은 상기 안티센스 가닥인, dsRNA 제제.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 듀플렉스의 안티센스 가닥의 5′-말단의 1 위치에 존재하는 염기쌍은 AU 염기쌍인, dsRNA 제제.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 18)과 4개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3'(서열번호 19)과 4개 이하의 염기가 상이하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  49. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 18)과 3개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3'(서열번호 19)과 3개 이하의 염기가 상이하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  50. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 18)과 2개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3'(서열번호 19)과 2개 이하의 염기가 상이하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  51. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 18)과 1개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3'(서열번호 19)과 1개 이하의 염기가 상이하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  52. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3’(서열번호 18)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5’-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3’(서열번호 19)을 포함하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2’-플루오로(2’-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  53. 제48항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드를 추가로 포함하는, dsRNA 제제.
  54. 제53항에 있어서, 상기 리간드는 상기 dsRNA 제제의 센스 가닥의 3' 말단에 접합되는, dsRNA 제제.
  55. 제53항 또는 제54항에 있어서, 상기 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체인, dsRNA 제제.
  56. 제53항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리간드는 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체인, dsRNA 제제.
  57. 제53항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리간드는 다음인, dsRNA 제제.
  58. 제48항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguuL96-3'(서열번호 20)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3'(서열번호 19)을 포함하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고, L96은 N-[트리스(GalNAc-알킬)-아미도데카노일)]-4-하이드록시프롤리놀인, dsRNA 제제.
  59. 제47항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcuccuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 18)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asdAscadAudAaaaadGaAfggagcuusgsg-3'(서열번호 19)을 포함하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; dA 및 dG는 2′-데옥시 A 및 G이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고,
    리간드는 하기 개략도에서 나타낸 바와 같이 상기 센스 가닥의 3'-말단에 접합되고,
    , 상기 식에서, X는 O인, dsRNA 제제.
  60. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 21)과 4개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'- asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa -3'(서열번호 22)과 4개 이하의 염기가 상이하거나;
    상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3'(서열번호 23)과 4개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa-3'(서열번호 24)과 4개 이하의 염기가 상이하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  61. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 21)과 3개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa-3'(서열번호 22)과 3개 이하의 염기가 상이하거나;
    상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3'(서열번호 23)과 3개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa-3'(서열번호 24)과 3개 이하의 염기가 상이하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  62. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 21)과 2개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa-3'(서열번호 22)과 2개 이하의 염기가 상이하거나;
    상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3'(서열번호 23)과 2개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa-3'(서열번호 24)과 2개 이하의 염기가 상이하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  63. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 21)과 1개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa-3'(서열번호 22)과 1개 이하의 염기가 상이하거나;
    상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3'(서열번호 23)과 1개 이하의 염기가 상이하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa-3'(서열번호 24)과 1개 이하의 염기가 상이하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  64. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 21)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa-3'(서열번호 22)을 포함하거나;
    상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3'(서열번호 23)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa-3'(서열번호 24)을 포함하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합인, dsRNA 제제.
  65. 제60항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드를 추가로 포함하는, dsRNA 제제.
  66. 제65항에 있어서, 상기 리간드는 상기 dsRNA 제제의 센스 가닥의 3' 말단에 접합되는, dsRNA 제제.
  67. 제65항 또는 제66항에 있어서, 상기 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체인, dsRNA 제제.
  68. 제65항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리간드는 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체인, dsRNA 제제.
  69. 제65항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리간드는 다음인, dsRNA 제제.
  70. 제60항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguuL96-3'(서열번호 25)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa-3'(서열번호 22)을 포함하거나;
    상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuuL96-3'(서열번호 281)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa-3'(서열번호 24)을 포함하되,
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고, L96은 N-[트리스(GalNAc-알킬)-아미도데카노일)]-4-하이드록시프롤리놀인, dsRNA 제제.
  71. 제60항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asasgcucCfuUfCfUfuuuuauuguu-3'(서열번호 21)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfscaaUfaaaaagaAfgGfagcuusasa-3'(서열번호 22)을 포함하되;
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고,
    리간드는 하기 개략도에서 나타낸 바와 같이 상기 센스 가닥의 3'-말단에 접합되고,
    ,
    상기 식에서, X는 O인, dsRNA 제제.
  72. 제60항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asgscuccUfuCfUfUfuuuauuguuu-3'(서열번호 23)을 포함하고, 상기 안티센스 가닥의 뉴클레오타이드 서열은 뉴클레오타이드 서열 5'-asAfsacaAfuaaaaagAfaGfgagcususa-3'(서열번호 24)을 포함하되;
    여기서, a, g, c 및 u는 2′-O-메틸(2′-OMe) A, G, C 및 U이고; Cf 및 Uf는 2′-데옥시-2′-플루오로(2′-F) C 및 U이고; s는 포스포로티오에이트 결합이고,
    리간드는 하기 개략도에서 나타낸 바와 같이 상기 센스 가닥의 3'-말단에 접합되고,
    ,
    상기 식에서, X는 O인, dsRNA 제제.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 dsRNA 제제를 함유하는 세포.
  74. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 dsRNA 제제를 포함하는, 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)을 암호화하는 유전자의 발현을 억제하기 위한 약제학적 조성물.
  75. 제74항에 있어서, dsRNA 제제가 비완충 용액에 존재하는, 약제학적 조성물.
  76. 제75항에 있어서, 상기 비완충 용액은 식염수 또는 물인, 약제학적 조성물.
  77. 제74항에 있어서, 상기 dsRNA 제제가 완충 용액에 존재하는, 약제학적 조성물.
  78. 제77항에 있어서, 상기 완충 용액은 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카르보네이트 또는 포스페이트 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 약제학적 조성물.
  79. 제78항에 있어서, 상기 완충 용액은 포스페이트 완충 식염수(PBS)인, 약제학적 조성물.
  80. 세포에서 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 유전자의 발현을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 세포를 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 dsRNA 제제 또는 제74항 내지 제79항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물과 접촉시켜, 상기 세포에서 상기 ANGPTL3 유전자의 발현을 억제하는 단계를 포함하는, 방법.
  81. 제80항에 있어서, 상기 세포는 대상체 내에 존재하는, 방법.
  82. 제81항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
  83. 제82항에 있어서, 상기 대상체는 ANGPTL3-관련 장애를 갖고 있는, 방법.
  84. 제83항에 있어서, 상기 ANGPTL3-관련 장애는 지질 대사 장애인, 방법.
  85. 제84항에 있어서, 상기 지질 대사 장애는 고지혈증 또는 고중성지방혈증인, 방법.
  86. 제80항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포를 dsRNA 제제와 접촉시키는 단계는 ANGPTL3의 발현을 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%만큼 억제하는, 방법.
  87. 제80항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, ANGPTL3의 발현의 억제가 상기 대상체의 혈청 내 ANGPTL3 단백질 수준을 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%만큼 감소시키는, 방법.
  88. 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 발현의 감소로 혜택을 받을 장애를 갖고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 dsRNA 제제 또는 제74항 내지 제79항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 투여함으로써, ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 장애를 갖고 있는 상기 대상체를 치료하는 단계를 포함하는, 방법.
  89. 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3) 발현의 감소로 혜택을 받을 장애를 갖고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 dsRNA 제제 또는 제74항 내지 제79항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 예방학적 유효량을 투여함으로써, ANGPTL3 발현의 감소로 혜택을 받을 장애를 갖고 있는 상기 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 단계를 포함하는, 방법.
  90. 제88항 또는 제89항에 있어서, 상기 장애는 ANGPTL3-관련 장애인, 방법.
  91. 제90항에 있어서, 상기 ANGPTL3-관련 장애는 지질 대사 장애인, 방법.
  92. 제91항에 있어서, 상기 지질 대사 장애는 고지혈증 또는 고중성지방혈증인, 방법.
  93. 제88항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
  94. 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 제제를 투여하는 단계가 하나 이상의 혈청 지질의 감소 및/또는 ANGPTL3 단백질 축적의 감소를 유발하는, 방법.
  95. 제88항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 dsRNA 제제가 약 0.01mg/kg 내지 약 50mg/kg의 용량으로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
  96. 제88항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 dsRNA 제제가 상기 대상체에게 피하 투여되는, 방법.
  97. 제88항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체로부터의 시료(들)에서의 ANGPTL3의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  98. 제97항에 있어서, 상기 대상체 시료(들)에서의 ANGPTL3의 수준은 혈액 또는 혈청 시료(들) 내 ANGPTL3 단백질 수준인, 방법.
  99. 제88항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, ANGPTL3-관련 장애의 치료를 위해 추가 치료제를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  100. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 dsRNA 제제 또는 제74항 내지 제79항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 키트.
  101. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 dsRNA 제제 또는 제74항 내지 제79항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 바이알.
  102. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 dsRNA 제제 또는 제74항 내지 제79항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 주사기.
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX360782B (es) 2011-06-21 2018-11-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de arni similares a angiopoyetina 3 (angptl3) y metodos para su uso.
WO2023092102A1 (en) * 2021-11-19 2023-05-25 Sanegene Bio Usa Inc. Double stranded rna targeting angiopoietin-like 3 (angptl-3) and methods of use thereof

Family Cites Families (229)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
JP2828642B2 (ja) 1987-06-24 1998-11-25 ハワード フローレイ インスティテュト オブ イクスペリメンタル フィジオロジー アンド メディシン ヌクレオシド誘導体
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
JPH03503894A (ja) 1988-03-25 1991-08-29 ユニバーシィティ　オブ　バージニア　アランミ　パテンツ　ファウンデイション オリゴヌクレオチド　ｎ‐アルキルホスホラミデート
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5744101A (en) 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
US5143854A (en) 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
EP0497875B1 (en) 1989-10-24 2000-03-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2' modified oligonucleotides
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
CA2029273A1 (en) 1989-12-04 1991-06-05 Christine L. Brakel Modified nucleotide compounds
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US7037646B1 (en) 1990-01-11 2006-05-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5852188A (en) 1990-01-11 1998-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US6783931B1 (en) 1990-01-11 2004-08-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
WO1991013080A1 (en) 1990-02-20 1991-09-05 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
DK0455905T3 (da) 1990-05-11 1998-12-07 Microprobe Corp Dipsticks til nukleinsyrehybridiseringsassays og fremgangsmåde til kovalent immobilisering af oligonukleotider
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5614617A (en) 1990-07-27 1997-03-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
MY107332A (en) 1990-08-03 1995-11-30 Sterling Drug Inc Compounds and methods for inhibiting gene expression.
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
US5596086A (en) 1990-09-20 1997-01-21 Gilead Sciences, Inc. Modified internucleoside linkages having one nitrogen and two carbon atoms
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
EP0556301B1 (en) 1990-11-08 2001-01-10 Hybridon, Inc. Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides
GB9100304D0 (en) 1991-01-08 1991-02-20 Ici Plc Compound
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
EP0538194B1 (de) 1991-10-17 1997-06-04 Novartis AG Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
EP0624059A4 (en) 1991-11-22 1994-12-21 Affymax Technologies N.V. Combinatorial strategies for polymer synthesis.
US6235887B1 (en) 1991-11-26 2001-05-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation directed by oligonucleotides containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
KR940703846A (ko) 1991-12-24 1994-12-12 비. 린네 파샬 갭(gap)이 형성된 2′ 변성된 올리고뉴클레오티드(gapped 2′ modifed oligonucleotides)
US6277603B1 (en) 1991-12-24 2001-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
DE4203923A1 (de) 1992-02-11 1993-08-12 Henkel Kgaa Verfahren zur herstellung von polycarboxylaten auf polysaccharid-basis
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
EP0786522A2 (en) 1992-07-17 1997-07-30 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecules for treatment of stenotic conditions
US6346614B1 (en) 1992-07-23 2002-02-12 Hybridon, Inc. Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
AU6449394A (en) 1993-03-30 1994-10-24 Sterling Winthrop Inc. Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
JPH08508491A (ja) 1993-03-31 1996-09-10 スターリング ウインスロップ インコーポレイティド ホスホジエステル結合をアミド結合に置き換えたオリゴヌクレオチド
DE4311944A1 (de) 1993-04-10 1994-10-13 Degussa Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen
US5955591A (en) 1993-05-12 1999-09-21 Imbach; Jean-Louis Phosphotriester oligonucleotides, amidites and method of preparation
US6015886A (en) 1993-05-24 2000-01-18 Chemgenes Corporation Oligonucleotide phosphate esters
US6294664B1 (en) 1993-07-29 2001-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligonucleotides
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
CA2176256A1 (en) 1993-11-16 1995-05-26 Lyle John Arnold, Jr. Synthetic oligomers having chirally pure phosphonate internucleosidyl linkages mixed with non-phosphonate internucleosidyl linkages
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5599922A (en) 1994-03-18 1997-02-04 Lynx Therapeutics, Inc. Oligonucleotide N3'-P5' phosphoramidates: hybridization and nuclease resistance properties
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US6054299A (en) 1994-04-29 2000-04-25 Conrad; Charles A. Stem-loop cloning vector and method
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5556752A (en) 1994-10-24 1996-09-17 Affymetrix, Inc. Surface-bound, unimolecular, double-stranded DNA
US6608035B1 (en) 1994-10-25 2003-08-19 Hybridon, Inc. Method of down-regulating gene expression
ATE327244T1 (de) 1995-03-06 2006-06-15 Isis Pharmaceuticals Inc Verfahren zur synthese von 2'-0-substituierten pyrimidinen und oligomere davon
US6166197A (en) 1995-03-06 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions
US5545531A (en) 1995-06-07 1996-08-13 Affymax Technologies N.V. Methods for making a device for concurrently processing multiple biological chip assays
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US6160109A (en) 1995-10-20 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Preparation of phosphorothioate and boranophosphate oligomers
US5854033A (en) 1995-11-21 1998-12-29 Yale University Rolling circle replication reporter systems
US6444423B1 (en) 1996-06-07 2002-09-03 Molecular Dynamics, Inc. Nucleosides comprising polydentate ligands
US6576752B1 (en) 1997-02-14 2003-06-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy functionalized oligomers
US6639062B2 (en) 1997-02-14 2003-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy-modified nucleosidic compounds and oligomeric compounds prepared therefrom
US6172209B1 (en) 1997-02-14 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
DE69841002D1 (de) 1997-05-14 2009-09-03 Univ British Columbia Hochwirksame verkapselung von nukleinsäuren in lipidvesikeln
NZ503765A (en) 1997-09-12 2002-04-26 Exiqon As Bi-cyclic and tri-cyclic nucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6528640B1 (en) 1997-11-05 2003-03-04 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Synthetic ribonucleic acids with RNAse activity
US6617438B1 (en) 1997-11-05 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Oligoribonucleotides with enzymatic activity
US6320017B1 (en) 1997-12-23 2001-11-20 Inex Pharmaceuticals Corp. Polyamide oligomers
US7273933B1 (en) 1998-02-26 2007-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for synthesis of oligonucleotides
US7045610B2 (en) 1998-04-03 2006-05-16 Epoch Biosciences, Inc. Modified oligonucleotides for mismatch discrimination
US6531590B1 (en) 1998-04-24 2003-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Processes for the synthesis of oligonucleotide compounds
US6867294B1 (en) 1998-07-14 2005-03-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages
AU6430599A (en) 1998-10-09 2000-05-01 Cytogenix, Inc. Enzymatic synthesis of ssdna
BR9914773A (pt) 1998-10-09 2002-02-05 Ingene Inc Conjunto de elementos genéricos, método para a produção de dna de cordão único, transcrição de mrna, construção de ácido nucléico, transcrição de ssdna, vetor, sistema vetor, célula hospedeira, conjunto para a produção de uma sequência de ácido nucléico de cordão único, método para a produção in vivo ou in vitro de uma sequência de ácido nucléico de cordão único, transcrição de cdna de cordão único, ácido nucléico inibidor, molécula heteroduplex, e composição farmacêutica
US6465628B1 (en) 1999-02-04 2002-10-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for the synthesis of oligomeric compounds
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
CA2372085C (en) 1999-05-04 2009-10-27 Exiqon A/S L-ribo-lna analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6593466B1 (en) 1999-07-07 2003-07-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Guanidinium functionalized nucleotides and precursors thereof
US6147200A (en) 1999-08-19 2000-11-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers
WO2001053307A1 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Geron Corporation 2'-arabino-fluorooligonucleotide n3'→p5'phosphoramidates: their synthesis and use
EP1334109B1 (en) 2000-10-04 2006-05-10 Santaris Pharma A/S Improved synthesis of purine locked nucleic acid analogues
ES2728168T3 (es) 2000-12-01 2019-10-22 Max Planck Gesellschaft Moléculas pequeñas de ARN que median en la interferencia de ARN
WO2005078097A2 (en) 2004-02-10 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING MULTIFUNCTIONAL SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (Multifunctional siNA)
CA2489174C (en) 2002-07-10 2013-02-05 Thomas Tuschl Rna-interference by single-stranded rna molecules
US6878805B2 (en) 2002-08-16 2005-04-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide-conjugated oligomeric compounds
AU2003291753B2 (en) 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2003290596B2 (en) 2002-11-05 2011-05-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
EP2213738B1 (en) 2002-11-14 2012-10-10 Dharmacon, Inc. siRNA molecules targeting Bcl-2
ATE555118T1 (de) 2003-08-28 2012-05-15 Takeshi Imanishi Neue synthetische nukleidsäuren vom typ mit quervernetzter n-o-bindung
US7427605B2 (en) 2005-03-31 2008-09-23 Calando Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
EP1984381B1 (en) 2006-01-27 2010-09-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
WO2007091269A2 (en) 2006-02-08 2007-08-16 Quark Pharmaceuticals, Inc. NOVEL TANDEM siRNAS
ES2564303T3 (es) 2006-04-07 2016-03-21 Idera Pharmaceuticals, Inc. Compuestos de ARN inmunomodulador estabilizado (SIMRA) para TLR7 y TLR8
ES2389737T3 (es) 2006-05-11 2012-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en 5'
JP5484063B2 (ja) 2006-12-08 2014-05-07 レキシコン ファーマシューティカルズ インコーポレーテッド Ａｎｇｐｔｌ３に対するモノクローナル抗体
US20100105134A1 (en) 2007-03-02 2010-04-29 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting gene expression and uses thereof
MX2009012568A (es) 2007-05-22 2009-12-08 Mdrna Inc Oligonucleotidos de acido ribonucleico sustituidos con hidroximetilo y complejos de acido ribonucleico.
CA2688321A1 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
ATE538127T1 (de) 2007-07-05 2012-01-15 Isis Pharmaceuticals Inc 6-disubstituierte bicyclische nukleinsäureanaloga
CN101795715A (zh) 2007-07-09 2010-08-04 艾德拉药物股份有限公司 稳定化免疫调控性rna(simra)化合物
CA2708173C (en) 2007-12-04 2016-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Targeting lipids
WO2009134487A2 (en) 2008-01-31 2009-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Optimized methods for delivery of dsrna targeting the pcsk9 gene
NZ588583A (en) 2008-04-15 2012-08-31 Protiva Biotherapeutics Inc Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
CA2739170A1 (en) 2008-09-25 2010-04-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene
US8168775B2 (en) 2008-10-20 2012-05-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin
CN104673798B (zh) 2008-12-03 2018-03-20 阿克丘勒斯治疗公司 UsiRNA复合物
CA2746514C (en) 2008-12-10 2018-11-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
CA2764158A1 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof
TR201811076T4 (tr) 2009-06-10 2018-08-27 Arbutus Biopharma Corp Geliştirilmiş lipit formulasyonu.
EA201270019A1 (ru) 2009-06-15 2012-06-29 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. Двуцепочечная рнк, включенная в липидный состав и мишенью которой является ген pcsk9
WO2011005861A1 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
ES2538347T3 (es) 2009-08-27 2015-06-19 Idera Pharmaceuticals, Inc. Composiciones para inhibir expresión genética y usos de las mismas
DK2521556T3 (en) 2010-01-08 2018-08-13 Ionis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF ANGIOPOIETIN-LIKE 3 EXPRESSION
US20130190383A1 (en) 2010-04-26 2013-07-25 Marina Biotech, Inc. Nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers and uses thereof
MX360782B (es) * 2011-06-21 2018-11-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de arni similares a angiopoyetina 3 (angptl3) y metodos para su uso.
CA2863253A1 (en) 2011-09-07 2013-03-14 Marina Biotech, Inc. Synthesis and uses of nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers
CN104105790A (zh) 2011-11-18 2014-10-15 阿尔尼拉姆医药品有限公司 修饰的RNAi试剂
ES2800065T3 (es) 2011-11-18 2020-12-23 Alnylam Pharmaceuticals Inc Agentes de iARN, composiciones y métodos de uso de los mismos para tratar enfermedades asociadas con transtiretina (TTR)
EP3453762B1 (en) 2012-05-02 2021-04-21 Sirna Therapeutics, Inc. Short interfering nucleic acid (sina) compositions
US9708607B2 (en) 2012-08-03 2017-07-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified RNAi agents
CN105378085B (zh) 2013-05-01 2019-02-15 Ionis制药公司 用于调节hbv和ttr表达的组合物和方法
US10246708B2 (en) 2013-05-06 2019-04-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dosages and methods for delivering lipid formulated nucleic acid molecules
MX2016014102A (es) 2014-05-01 2017-05-03 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion de similar a la angiopoyetina tipo 3.
EP3186377A1 (en) 2014-08-20 2017-07-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified double-stranded rna agents
WO2016168286A1 (en) * 2015-04-13 2016-10-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
CN117701562A (zh) 2017-09-14 2024-03-15 箭头药业股份有限公司 用于抑制血管生成素-样3(ANGPTL3)的表达的RNAi剂和组合物以及使用方法
CN110945130B (zh) * 2017-12-01 2024-04-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途

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