KR20230147082A - 균류 유래 조성물, 그의 생산 방법 및 용도 - Google Patents

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리카 린나코스키
바르푸 마르조마키
페트리 킬페라이넨
다닉 레삼와라
헨리 반하넨
피리 베텔리
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내츄럴 리소시스 인스티튜트 핀란드 (엘유케이이)
유니버시티 오브 이위베스퀼레
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Abstract

살바이러스 조성물, 그의 제조 방법, 관련 용도 및 최종 소비자 제품이 본 명세서에 제공된다. 상기 조성물은 본질적으로 교반을 배제한 조건에서 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 상기 균류를 배양함으로써 가노더마 루시덤(MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23)의 선택된 균류 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 물질의 혼합물을 포함한다. 생물학적 활성 물질은 위에서 나타낸 G. 루시덤 균주의 균사체에 의해 배출된 생성물로서 수득되고 가노데르산 및 그의 유도체와 같은 2차 대사산물을 함유한다. 상기 조성물은 바이러스 감염의 확산을 방지하는 데 효율적인 것으로 입증되었다. 상기 조성물은 피부 및 무생물 표면용 소독제 및/또는 퍼스널 케어 제품의 제조 성분으로서 사용될 수 있다.

Description

균류 유래 조성물, 그의 생산 방법 및 용도
본 발명은 일반적으로 가노더마 루시덤 균류(Ganoderma lucidum fungi)로부터 유래된 물질을 포함하는 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 선택된 G. 루시덤 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함하는 조성물, 상기 조성물의 생산 방법 및, 특히, 바이러스 감염의 확산 방지, 소독 및 퍼스널 케어 제품의 생산에서의 그의 용도에 관한 것이다.
바이러스 감염은 전세계적으로 사람들에게 영향을 미치는 가장 흔한 질병 중 하나이다. 높은 돌연변이율과 바이러스 복제에 대한 낮은 정확도(fidelity)로 인해 바이러스 군에서 새로운 혈청형이 출현하므로 바이러스 감염과의 싸움은 끊임없이 도전받고 있다.
엔테로바이러스, 로타바이러스 및 노로바이러스와 같은 비외피성 바이러스는 안정적이며 수주 그리고 심지어 수개월 동안 표면에 머문 후에도 감염성을 유지한다. 이러한 바이러스는 화학 소독제에 대해 민감성이 거의 없고 현재로선 언급된 병원체에 감염된 지역의 오염 제거의 무독성 수단은 없다. 코비드19 대유행의 원인 물질인 SARS-CoV2를 포함한, 바이러스 지카 및 코로나바이러스와 같은, 외피성 바이러스는 일반적으로 특정 소독제로 처리할 때 덜 안정적이며 분해되기 쉽다. 그럼에도 불구하고, 이러한 바이러스 종 중 어느 하나는 전세계적으로 심각한 발병을 일으켜 어려운 증상과 높은 사망률을 초래하고 세계 경제에 상당한 손실을 야기할 수 있다.
예를 들어, 엔테로바이러스(EV)는 세계에서 가장 널리 퍼진 바이러스를 나타낸다. 이것은 소아마비, 수족구병(HFMD), 수막염, 심근염, 뇌염 및 급성 이완 마비(AFP)와 같은 급성 감염을 포함하여 경증에서 중증에 이르는 다양한 전염성 질병을 유발한다. 또한, 엔테로바이러스는 제1형 당뇨병(T1D), 천식 및 알레르기와 같은 만성 질환 발병의 환경적 요인이다. 소아마비를 제외하고, 엔테로바이러스에 대해 널리 이용가능한 백신은 없으며, 새로운 엔테로바이러스 혈청형이 지속적으로 출현한다는 사실로 인해 백신 개발은 복잡 다단하다.
전반적으로, 백신 개발은 새로운 바이러스가 출현하는 속도보다 뒤쳐져 있다. 바이러스 감염의 확산을 방지하기 위한 추가적이거나 대안적인 방법에는 손 및 표면의 소독, 다양한 생물안전 수준에 따라 설정된 요구사항을 충족하도록 설계된 보호 장비 착용이 포함된다.
한편, 균류는 생체 활성 분자의 방대한 공급원을 제공하는 반면, 일부 균류의 종은 보고된 항바이러스 활성이 있는 화합물을 함유하고 및/또는 배출한다. 특히, 담자균류(basidiomycetes) 가노더마, 특히 영지버섯(Lingzhi mushroom) 또는 영지(Reishi mushroom)라고도 지칭되는 G. 루시덤은 동아시아에서 의료 목적으로 널리 사용된다. 가노더마 종은 트리테르페노이드, 스테로이드, 알칼로이드 및 다당류를 함유하고, 트리테르페노이드는 가노더마 종으로부터 수득된 화합물의 가장 풍부한 부류이다.
G. 루시덤 트리테르페노이드(150개 이상의 화합물)의 경우, 항염증, 항산화, 항히스타민 및 콜레스테롤 저하 효과와 같은 다양한 치료 효과가 예를 들어 US 2013/184244 A1 (Minto et al)에 보고되어 있다. G. 루시덤에서 유래된 추출물의 약용 특성은 US 6,726,911 B (Julich et al)에 추가로 언급되어 있다. JP 2016-044155A (Takeshi et al)는 인플루엔자 바이러스에 대한 G. 루시덤 트리테르페노이드의 항바이러스 활성을 논의한다. 후자의 문헌에서는 다양한 가노데르산을 포함한, 트리테르페노이드 화합물의 혼합물이 클로로포름과 같은 유기 용매를 사용하거나, 또는 열수 추출에 의해 균류로부터 추출되었다.
그럼에도 불구하고, 많은 경우에, 선택된 균주가 예상되는 생물학적 활성을 갖는지 여부를 결정하기 위해 동일한 종 내의 다양한 분리주를 스크리닝하는 것은 종종 필수적이다. 나아가, 균사체상진균의 산업적 규모의 생산은 액체 배양 조건의 신중한 최적화 뿐만 아니라 원하는 화합물의 과잉 생산을 피하기 위해 균주 선택을 필요로 한다.
새로운 혈청형을 동반한 매년있는 인플루엔자 전염병, 코로나바이러스 대유행 그리고 에볼라 및 치쿤구니아와 같은 최근의 전염병 발병으로 인해 효율적인 표면 소독제에 대한 수요가 증가하고 있다. 많은 바이러스는 일반적으로, 무증상으로 감염원을 운반하는 바이러스를 포함하는 감염된 개체의 분비물과 접촉하게 됨으로써 직간접적인 접촉에 의해 퍼지기 때문에, 바이러스 감염에 맞서기 위해서 안전하고 광범위하게 작용하는 살생물제에 대한 필요가 명백히 존재한다.
상기한 바와 같이, 신규하고 신뢰할 수 있는 무독성 항바이러스 화합물, 특히 외용을 위한 것의 개발과 관련된 기술 분야를 보완하고 업데이트하는 것이 바람직해 보인다. 그런 의미에서, 가노더마 종은 상기 균류 및 그에 의해 생성된 물질의 생물학적 잠재력을 추가로 탐색하기 위한 매력적인 표적을 제공한다.
본 발명의 목적은 관련 기술의 한계 및 단점에서 발생하는 각각의 문제를 적어도 완화하는 것이다. 목적은 살바이러스 조성물, 그의 생산 방법 및 관련된 용도의 다양한 구현예에 의해 달성된다. 따라서, 본 발명의 일 측면에서 독립항인 청구항 제1항에 정의된 바에 따라 살바이러스 조성물이 제공된다.
구현예에서, 살바이러스 조성물은 본질적으로 교반(agitation)을 배제한 조건에서 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 상기 균류를 배양함으로써 가노더마 루시덤의 선택된 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함한다. 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 상기 조성물의 활성 성분을 구성한다.
구현예에서, 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 수탁 번호 CBS 147377, CBS 147378, CBS 147379, CBS 147380, 또는 이의 임의의 조합으로 부다페스트 조약의 규정에 따라 기탁된 단리된 G. 루시덤 균주 중 어느 하나로부터 수득가능하다.
구현예에서, 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 G. 루시덤의 균사체에 의해 배출된 생성물로서 액상으로 수득가능하고, 여기서 균류는 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 성장한다.
구현예에서, G. 루시덤으로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 가노데르산 및 이의 유도체를 포함한다.
구현예에서, 활성 성분을 구성하는 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 조성물이 차지하는 총 부피의 약 10% 내지 약 99.9% 범위 내의 양으로 상기 조성물에 존재한다.
구현예에서, 조성물은 헤미셀룰로스를 추가로 포함한다. 구현예에서, 헤미셀룰로스는 리그노셀룰로스 바이오매스로부터 생산된다. 구현예에서, 리그노셀룰로스 바이오매스는 목재 유래 바이오매스이다.
또 다른 측면에서, 독립항인 청구항 제9항에 정의된 바에 따라, 가노더마 루시덤의 선택된 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함하는 살바이러스 조성물의 생산 방법이 제공된다.
구현예에서, 상기 방법은 (a) 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 G. 루시덤 종을 배양하는 단계; 및 (b) 단계 (a)에서 수득된 바와 같은 배지를 수확하고 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 G. 루시덤의 균사체에 의해 배출된 생성물로서 액상으로 분리하고 선택적으로 상기 생성물을 농축 또는 희석하는 단계를 포함하고, 여기서 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 G. 루시덤 종을 배양하는 단계는 본질적으로 교반을 배제한 조건에서 구현된다.
구현예에서, 배양은 침지 발효에 의해 수행된다.
구현예에서, 본질적으로 액체 배양 배지에서 G. 루시덤 종을 배양하는 단계는, 단계 (a)에서, 4주 내지 10주 범위의 기간 동안, 바람직하게는, 약 6주 내지 8주의 기간 동안 수행된다.
구현예에서, 상기 방법은, 단계 (c)에서, 단계 (b)에서 수득된 생성물에 헤미셀룰로스를 첨가하는 단계를 추가로 포함한다. 구현예에서, 헤미셀룰로스는, 단계 (c)에서, 조성물이 차지하는 총 부피의 약 0.1% 내지 약 75% 범위 내, 바람직하게는, 약 5% 내지 약 50% 범위 내의 양으로 첨가된다.
추가의 측면에서, 독립항인 청구항 제15항에 정의된 바에 따라, 일부 이전 측면에 따른 조성물을 포함하는, 인간 또는 비인간 동물 대상체의 외용을 위한 제형물이 제공된다.
또 다른 추가 측면에서, 독립항인 청구항 제16항에 정의된 바에 따라, 바이러스 감염의 확산을 방지하는 데 있어서 일부 이전 측면에 따른 조성물 및/또는 제형물의 비치료적 용도가 제공된다. 구현예에서, 상기 용도는 피코르나비리대(Picornaviridae) 및 코로나비리대(Coronaviridae) 과 중 어느 하나의 하나 이상의 구성원에 의해 야기되는 바이러스 감염의 확산을 방지하는 데에 제공된다.
추가 측면에서, 일부 이전 측면에 따른 조성물 및/또는 제형물의 용도는 독립항인 청구항 제18항 및 제19항 각각에서 정의된 바에 따라, 소독, 살균 및/또는 세정에서, 및 퍼스널 케어 제품 또는 스킨케어 제품의 제조에서 제공된다.
추가 측면에서, 독립항인 청구항 제20항에 정의된 바에 따라 피부 또는 무생물 표면용 소독제가 제공된다.
추가 측면에서, 독립항인 청구항 제21항에 정의된 바에 따라 가노더마 루시덤 균주가 제공된다.
또 다른 측면에서, 독립항인 청구항 제22항에 정의된 바에 따라, 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV2)에 의해 야기되는 감염의 확산 방지에서의 선택된 가노더마 루시덤 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함하는 조성물의 비치료적 용도가 제공된다.
본 발명의 유용성은 각각의 특정 구현예에 따라 다양한 이유에서 발생한다.
먼저, 본 발명은 현저한 살생, 특히 살바이러스 특성을 갖는 무독성 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 피부 및 표면 소독과 같은 외용에 특히 적합하다. 조성물은 손 소독제 및 범용 소독제, 비누, 다양한 보습제, 클렌징 패드, 물티슈 및 티슈, 안면 마스크, 병원용 및 일반용 직물, 에어 필터 등과 같은, 다양한 퍼스널 케어 용품 및 기타 최종 사용자 제품을 제조하는 데 그 자체로 또는 성분으로서 사용될 수 있다. 본질적으로 액체 형태로 수득되는 조성물은 그 자체로 세정제 및/또는 소독제/제형물로서 사용될 수 있거나 후처리되어 분말 제형물 또는 예를 들어 비누 바와 같은 본질적으로 고체의 제형물을 형성할 수 있다. 액체 조성물/제형물은 용액으로 또는 스프레이/에어로졸로서 제공될 수 있고; 예를 들어, 안면 라이너 또는 안면 마스크와 같은 용품의 제조에 추가로 사용될 수 있다. 반고체 제형물(에멀젼, 크림 등과 같은 스킨케어/화장품)이 추가로 제조될 수 있다. 따라서 조성물은 다용도이며 최종 사용자의 요구에 따라 광범위하게 조정가능하다.
본 발명에 따른 조성물의 활성 성분을 형성하는 균류 유래의, 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 상이한 유형의 일반적인 엔테로바이러스, 코로나바이러스, 및 로타바이러스를 포함하는 다수의 바이러스 종에 대해 현저한 살바이러스 활성을 입증하였다. 따라서 본 발명은 예를 들어 병원, 학교, 주간보호소, 몰, 공항 등과 같은 공적 환경에서 통상의 바이러스의 확산을 실질적으로 제한하기 위해, 표면 및 물체의 처리를 위한 것뿐만 아니라 손 소독을 위한 것과 같은, 외용을 위한 광범위 스펙트럼의 항바이러스제를 제공한다.
또한, 균류의 통상적인 발효에 사용되는 생물반응기 시스템 및 관련 방법과 비교하여, 본 발명은 덜 에너지 집약적인 방식의 생산 방법을 가능하게 한다. 이는 휘저음(stirring) 및/또는 교반 수단을 갖는 배양 탱크/생물반응기의 필요성을 제거함으로써 달성된다. 고정식 탱크 또는 생물반응기(여기서 고정식은 휘젓개(들)/교반기(들)가 장착되지 않은 탱크 또는 생물반응기를 지칭함)에서 생산 방법을 구현함으로써, 본 명세서에 개시된 방법은 장비 비용 뿐만 아니라 에너지, 물 및 첨가제 소비와 관련된 비용을 절감할 수 있게 하므로, 생산 방법의 전반적인 비용 효율성을 개선하고 파일럿 규모에서 상업 생산으로의 전환을 용이하게 한다. 추가적으로, 본 발명은 사상성진균의 성장 형태를 최적화하는 것을 목표로 하는 조치를 피하거나 적어도 최소화하는 것을 허용한다. 복잡하고 비용이 많이 들지만, 성장 최적화 절차는 기존의 휘젓는 생물반응기 시스템에서 균류를 배양하는 데 필수적이다.
"살생물"이라는 용어는 일반적으로 임의의 유해한 유기체를 파괴하고, 억제하고, 무해하게 만들거나 이것에 대한 제어 효과를 발휘하는 물질을 지칭한다.
"살바이러스"라는 용어는 일반적으로 바이러스를 생존할 수 없게 만드는(바이러스를 중화 또는 파괴하는) 물질을 지칭한다. "항바이러스"라는 용어는 일반적으로 세포 수용체에 대한 결합을 억제하거나 중요한 생물학적 과정을 방해함으로써, 그렇지 않았다면 세포에서 생존가능한 바이러스의 복제를 억제하고 및/또는 바이러스 입자가 세포에 들어가는 것을 방지하는 물질을 일반적으로 지칭한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "살바이러스" 및 "항바이러스"는 상호교환적으로 사용되고, 여기서 용어 "항바이러스"는 달리 명시적으로 나타내지 않는 한 바이러스를 파괴하거나 중화시키는 물질의 능력을 강조하기 위해 "살바이러스"의 일반적인 의미로 주로 할당된다.
"균주"라는 용어는 예를 들어 동일한 종 내의 다른 균류와, 특정 유전 요소의 측면에서, 특징적으로 상이한 균류의 하위유형을 나타내기 위해 사용된다; 반면 용어 "분리주"는 하나의 균류 균주로부터 다수의 분리주를 수득할 수 있음을 추가로 강조하기 위해 본 명세서에서 활용된다.
"제1" 및 "제2"라는 용어는 달리 명시적으로 언급되지 않는 한 어떠한 특정 순서 또는 중요성을 나타내지 않고 요소를 다른 요소와 단순히 구별하기 위해 사용된다.
본 발명의 상이한 구현예는 상세한 설명을 고려함으로써 명백해질 것이다.
도 1은 세포변성 효과(cytopathic effect, CPE) 억제 분석을 사용하여 그 항바이러스 활성을 평가하기 위해, 감염원인 콕사키바이러스 B3(CVB3)에 대한 초기 가노더마 루시덤 샘플(2-27)을 스크리닝한 결과를 나타낸다.
도 2는 CPE 억제 분석을 사용하여 CVB3에 대해 선택된 G. 루시덤 샘플의 항바이러스 효능을 확인한 결과를 나타낸다.
도 3은 CPE 억제 분석을 사용하여 CVB3의 상이한 희석액에 대해 선택된 G. 루시덤 균주(MUS12)의 항바이러스 활성을 평가하기 위한 실험적 시도의 결과를 나타낸다.
도 4는 CPE 억제 분석을 사용하여 항바이러스 활성을 평가하기 위해, 감염원인 콕사키바이러스 B1(CVB1)에 대해 초기 G. 루시덤 샘플(2-27)을 스크리닝한 결과를 보여준다.
도 5는 CPE 억제 분석을 사용하여 항바이러스 활성을 평가하기 위해, 감염원인 콕사키바이러스 A9(CVA9)에 대해 초기 G. 루시덤 샘플(2-27)을 스크리닝한 결과를 보여준다.
도 6은 역전사 정량적 PCR(RT-qPCR) 분석을 사용하여 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV2)에 대해 선택된 G. 루시덤 샘플의 항바이러스 효능을 평가하기 위한 실험적 시도의 결과를 보여준다.
도 7은 CPE 억제 분석을 사용하여, 감염원(CVA9)에 대한 균류 유래 생성물의 항바이러스 활성에 대해 상기 균류 유래 생성물로 감염원을 (전)처리하는 동안 사용된 처리 매개변수(시간 및 온도)의 효과를 평가한 결과를 보여준다.
도 8은 감염원(CVA9)에 대한 G. 루시덤 샘플의 항바이러스 활성에 대해 지속적인 교반의 효과를 보여준다.
도 9a는 CPE 억제 분석을 사용하여 감염원(CVA9)에 대한 선택된 G. 루시덤 샘플(모든 MUS18)의 항바이러스 활성에 대해 헤미셀룰로스 화합물(HEM)의 잠재적인 효과를 평가하는 것을 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 나타낸다.
도 9b는 CPE 억제 분석을 사용하여 감염원(CVA9)에 대해 선택된 G. 루시덤 샘플이 여전히 항바이러스 활성을 나타내는, 희석 역치를 결정하는 것을 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 나타낸다.
도 10a 및 10b는 시판되는 가노데르산 A, TQ, Y 및 TR을 감염원(CVA9)에 대해 스크리닝한 결과를 나타낸다.
도 11A-F는 CPE 억제 분석을 사용하여 감염원(CVA9)에 대한 선택된 G. 루시덤 샘플의 항바이러스 활성에 대한 헤미셀룰로스 화합물의 잠재적인 효과를 평가하는 것을 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 나타낸다.
도 12a 및 12b는 CPE 억제 분석을 사용하여 감염원(CVA9)에 대한 선택적으로 헤미셀룰로스 화합물의 존재 하에서의 선택된 G. 루시덤 샘플의 항바이러스 활성에 대한 인큐베이션 기간 및 온도의 영향을 평가하는 것을 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 예시한다. 도 12c는 선택적으로 헤미셀룰로스의 존재 하에서 선택된 G. 루시덤 샘플의 세포독성 평가를 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 나타낸다.
본 발명은 가노더마 루시덤 균류의 선택된 균주, 상기 선택된 G. 루시덤 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 물질의 혼합물을 포함하는 균류 유래 살바이러스 조성물, 상기 조성물의 제조 방법, 그의 관련된 용도 및 최종 사용자 제품의 제공에 관한 것이다.
상기 조성물은 활성 성분으로서 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함하고, 이는 또한 균류 유래 생성물로서 지칭된다. 이 생성물은 본질적으로 액체 배양 배지에서 선택된 G. 루시덤 균주를 배양함으로써 수득할 수 있다. 본 명세서에서 제어된 조건(생산 주기)에서의 상기 액체 배지 내 균류 성장 단계를 정의하는, 배양은 유리하게는 교반 및/또는 휘저음 없이 수행되는 것이 필수적이다. 배양은 유리하게는 예를 들어 침지 발효와 같은 액체 발효 방법을 사용하여 수행된다.
일부 구현예에서, 활성 성분에 더하여, 조성물은 추가로 헤미셀룰로스를 포함한다.
핀란드에서 유래한 G. 루시덤 분리주를 스크리닝해 본 결과, 발명자들은 제한된 수의 G. 루시덤 균주가 특정 배양 조건에서 강력한 항병원성 효과(들)를 갖는 대사산물 용액을 생산하는 데 효과적이라는 놀라운 결과에 도달했다(도 1, 4 및 5의 스크리닝 결과 참조). 생물학적 활성에 대해 스크리닝된 균주는 썩은 그루터기에서 성장하는 가노더마 균류의 자실체로부터 단리되었다. 본 발명의 기초가 되는 연구 동안, 특정 성장 조건 하에서, 선택된 이배체 G. 루시덤 균주에 의해 성장/발효 배지로 배출된 생성물은 현저한 항병원성 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 특히, 언급된 균류 유래 생성물은 바이러스 과 피코르나비리대(엔테로바이러스) 및 코로나비리대(코로나바이러스)의 구성원을 비제한적으로 포함하는 인간 바이러스 병원체의 감염성을 광범위하게 억제했다. 또한 균류 유래 생성물은 레오비리대(로타바이러스), 플라비비리대(지카 바이러스) 및 칼리시비리대(노로바이러스)에 효과적인 것으로 나타난다.
현저한 항바이러스 활성을 갖는, 가노데르산 및 그의 유도체와 같은, 생물학적 활성 화합물/대사산물의 혼합물을 생성하는 것으로 관찰된 G. 루시덤 균주는 참조 번호 MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23을 부여받았다. 이들 균주는 본 발명에서 선택된 G. 루시덤 균주로서 지칭된다.
가노더마 루시덤 균주 MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23은 특허 절차의 목적으로 미생물 기탁의 국제 인정에 관한 부다페스트 조약의 규정에 따라 국제 기탁 기관(IDA)으로서 웨스터다이크 균류의 생물다양성 연구소(Westerdijk Fungal Biodiversity Institute)(CBS, 네덜란드)에 2020년 12월 17일 기탁되었다. 기탁 번호는 다음과 같다: 균주 MUS12에 대해 CBS 147377; 균주 MUS15에 대해 CBS 147378; 균주 MUS18에 대해 CBS 147379 및 균주 MUS23에 대해 CBS 147380.
균주 MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23의 식별은 여러 유전자 영역의 DNA 시퀀싱을 이용하여 구현되었다. 계통 유전체학적 분석(도시되지 않음)은 핀란드에서 수집된 가노더마 루시덤 균류가 예로서 이전에 중국에서 발견된 G. 루시덤과 분명히 구별된다는 것을 밝혀냈다.
생물학적 활성 화합물의 혼합물은 균류가 배양 탱크 또는 생물반응기의 상기 배지에서 성장할 때, 생산 주기 동안 상기 선택된 G. 루시덤 균주의 균사체에 의해 (액체) 배양 배지로 배출되는 생성물로서 액상으로 수득된다. 균류 대사에서 유래하는 이 생물학적 활성 생성물은 2차 대사산물의 그룹, 특히 트리테르페노이드 계열의 화합물에 속하는 생합성 물질을 포함한다. 생산 주기의 끝에서, 액체 배지로 배출된 균류 유래 생성물은 예로서 균류 세포 및 임의의 다른 불용성 잔류물을 제거하기 위해 여과에 의해 분리된 다음, 선택적으로 농축 또는 희석된다.
2차 대사산물은 일반적으로 숙주의 기본 성장 및 발달(1차 대사산물과 대조적으로)에 필수적이지는 않지만 환경에서 생존과 경쟁에 필수적인 역할을 하는 화학적 화합물로서 정의된다.
선택된 G. 루시덤 균주로부터 수득된 생물학적 활성 생성물은 가노데르산(GA) 및 그의 유도체의 그룹을 포함한다. 가노데르산은 밀접하게 관련된 트리테르페노이드의 계열로, 라노스테롤의 유도체이며 가노더마 종에 널리 존재한다. 상기 생성물 및 이를 포함하는 조성물의 생물학적 활성 또는 활성들은 주로 가노데르산 및 관련 트리테르페노이드에 내재된 관련 활성에 기초하는 것으로 추정된다. 그러나, G. 루시덤 종 내에서 선택된 균주만이 현저한 살바이러스 활성을 갖는다는 것이 실험적으로 입증되었다(자세한 내용은 아래에서 추가로 설명됨).
균류 유래 생성물의 화학적 조성은 순수한 가노데르산 A(중국 켐페이스에서 구입한 가노데르산 A; 카탈로그 번호 CFN92051)를 표준으로 하는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 분석하였다. (2차) 대사산물 혼합물에 동시에 존재하는 것으로 확인된 화합물은 서로 다른 형태의 테르페노이드였고, 이는 가노데르산 A 표준에 할당된 것에 상응하는 HPLC 피크를 제공했다(도시되지 않음). 본 명세서에 기술된 균류 유래 생성물의 항바이러스 효과는 이러한 테르페노이드 및 선택적으로 성장 배지로 배출되는 다른 화합물(예로서, 스테로이드, 다당류 등)의 조합에 할당되었다. 실험적 시도는 다수의 가노더마 루시덤 균주만이 항바이러스 대사산물을 생성하고(도 1, 4 및 5), 표준으로서 사용된 순수한 가노데르산은 어떠한 항바이러스 활성도 갖지 않는다는 것을 확인하였다(도 10a, 10b).
G. 루시덤 균주 MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23에서 수득된 균류 유래 생성물은 비외피성 바이러스(예컨대 엔테로바이러스, 로타바이러스), 및 외피성 바이러스(예컨대 코로나바이러스, 지카 바이러스)에 대한 살바이러스 활성을 입증하였다. 위에서 언급한 균주로부터 수득된 대사산물은 인간 세포에 어떠한 독성도 나타내지 않으면서, 개별 바이러스 종 또는 바이러스 종의 조합에 대해 살바이러스 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다.
상기 언급된 G. 루시덤 균주로부터 수득된 생성물의 살바이러스 활성을 입증하는 실험적 시도의 결과를 도 1-6을 참조하여 설명한다. 대조군에는 모의 감염(바이러스도 G. 루시덤 유래 샘플도 포함하지 않는 세포를 갖는 음성 대조군) 및 대조군 감염(바이러스에 감염되었지만 G. 루시덤 유래 샘플로 처리되지 않은 세포를 갖는 양성 대조군)이 포함되었다. 음성 대조군은 도면에 "대조군 바이러스"로 표시되어 있다.
세포변성 효과(CPE) 억제 분석을 사용하여 샘플의 항바이러스 활성을 평가하기 위해 다수의 감염원에 대해 초기 가노더마 루시덤 샘플(2-27)을 스크리닝한 결과를 나타내는 도 1, 4 및 5를 참조한다. 도 1, 4 및 5에 나타낸 시도에서, 감염원은 각각 콕사키바이러스 B3, B1 및 A9(CVB3, CVB1 및 CVA9; ATCC)였다. 이들 콕사키바이러스는 피코르나비리대 과(엔테로바이러스 속)에 속하는 엔테로바이러스이다. 샘플 2-27은 아래에서 추가로 설명된 절차에 따라 배양된 상이한 G. 루시덤 분리주로부터 수득된 균류 유래 대사산물 용액이었다.
도 1은 CVB3에 대한 선택된 G. 루시덤 균주의 항바이러스 활성을 평가한 결과를 나타낸다. 시판되는 세포주 A549(인간 선암 폐포 기저 상피 세포)를 사용하여 시험관 내 시험을 수행하였고, 여기서 세포는 20,000개 세포/웰의 밀도로 37℃에서 24시간 동안 96-웰 편평한 바닥 마이크로타이터 플레이트에서 배양되었다. 7E+06 PFU/㎖(플라크 형성 단위/㎖)의 감염성 역가를 갖는 CVB3(10% v/v)를 G. 루시덤 샘플(90% v/v)로 37℃에서 1시간 동안 세포 감연 전에 전처리하였다. 바이러스의 최종 희석은 세포에서 1:50,000이었고 그 결과 MOI(감염 다중도) 값은 2.3이었다. 감염은 37℃에서 24시간 동안 진행되도록 허용되었다.
인큐베이션 후, 세포를 중성 완충액(인산염 완충 식염수, PBS를 사용함)으로 세척하고 CPE 염료(CPE 염료: 0.03% 크리스탈 바이올렛, 2% 에탄올, 및 36.5% 포름알데히드)를 사용하여 염색하였다. 염색된 세포를 물로 더 세척하고 용해 완충액(47.5% 에탄올 중 0.8979g의 나트륨 시트레이트 및 1N HCl) 용액으로 처리하였다. 세포 생존율(%)은 다중 라벨 플레이트 판독기 장치(퍼킨 엘머 VICTOR X4)에서 570㎚에서 흡광도를 측정하여 분광광도측정법으로 결정하였다. 각각의 시험 및 대조군 샘플을 3회 반복하여 시험하고 값은 평균값 +/- 평균의 표준 오차(평균 ± SEM)로 표시된다. 시험 샘플 및 양성 대조군을 모의 감염(음성 대조군)에 대해 정규화하였다.
도 4는 콕사키바이러스 B1(CVB1)에 대한 선택된 G. 루시덤 균주(2-27)의 항바이러스 활성을 평가한 결과를 나타낸다. 균류-바이러스 믹스에서 CVB1 감염 역가가 5E+06 PFU/㎖이고 바이러스의 최종 희석이 세포에서 1:30,000인 결과 MOI가 1.6인 것을 제외하고 도 1과 관련하여 설명한 것과 동일한 실험 설정을 활용하였다.
도 5는 콕사키바이러스 A9(CVA9)에 대한 선택된 G. 루시덤 균주(2-27)의 항바이러스 활성을 평가한 결과를 나타낸다. CVA9 감염 역가가 3.2E+08 PFU/㎖이고 세포에서 최종 희석이 1:5,000인 결과 MOI가 106인 점을 제외하고 도 1 및 4와 관련하여 설명한 것과 동일한 실험 설정이 활용되었다.
도 1, 4 및 5에 제시된 결과는 균주 MUS12(기탁 번호 CBS 147377; 샘플 식별 번호 10A), MUS23(CBS 147380; 샘플 식별 번호 17A), MUS15(CBS 147378; 샘플 식별 번호 20B) 및 MUS18(CBS 147379; 샘플 식별 번호 26A-B)에 의해 생산된 생물학적 활성 생성물이 다른 감염원에 의해 유도된 바이러스 감염으로부터 세포를 보호할 수 있음을 명백히 나타낸다.
G. 루시덤 균주 MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23에서 유래된 생물학적 활성 생성물의 항바이러스 활성을 확인하기 위해, 이들 균주를 도 1과 관련하여 설명한 것과 동일한 실험 설정을 사용하여 CVB3에 대해 추가로 시험하였다. 결과는 도 2에 요약되어 있다. 도 2의 결과는 2번의 독립적인 실험의 평균값(평균±SEM)을 나타내고, 여기서 각 샘플(번호 10A, 17A, 20B, 26A 및 26B)은 5회 반복 시험되었다. 감염 역가 및 MOI 값은 도 1에 보고된 것과 동일하였고, 즉, 균류-바이러스 믹스의 CVB3 역가는 7E+06 PFU/㎖였고 바이러스의 최종 희석이 세포에서 1:50,000인 결과 MOI는 2.3이었다. 도 2의 실시예는 균류 유래 생성물 샘플로 처리된 감염된 세포(세포주 A549)의 세포 생존율이 비처리 감염 세포에 비해 상당히 더 높다는 것을 입증한다.
G. 루시덤 균주 MUS12(기탁 번호 CBS 147377; 샘플 식별 번호 10A)는 상기한 바와 동일한 설정을 사용하여 CVB3의 다양한 희석액에 대한 항바이러스 활성을 평가하기 위해 추가로 선택되었고 이러한 시도의 결과는 도 3에 요약되어 있다. 도 3의 결과는 실험의 평균±SEM 값을 나타내고, 각 샘플은 5회 반복 시험되었다. 이러한 결과는 균류 유래 생성물이 1:3,000("10A+CVB3 1:3k")의 희석에서도 바이러스 퇴치에 효과적이어서 약 30%의 생존 세포를 초래하는 한편, 균류 유래 생성물 샘플이 없는 동일한 바이러스 희석액은 세포의 약 90%를 사멸시킨다는 것("CVB3 1:3k"로 표시된 대조군 샘플 참조)을 입증한다. 감염된 세포 샘플에서 약 75%의 세포가 생존가능한 상태로 유지되고, 여기서 균류 유래 생성물로 처리된 바이러스는 1:30,000 및 최대 1:50,000의 비율로 희석되었다(각각 "10A+CVB3 1:30k" 및 "10A+CVB3 1:50k" 참조). 대조적으로, 양성 대조군으로 제공된 감염된 세포 샘플은 오직 대략 15%의 생존율을 보여주었다(각각 "CVB3 1:30k" 및 "CVB3 1:50k").
균류 유래 생성물의 항병원성 효과가 다양한 바이러스 병원체에 걸쳐 보존되는지 여부를 밝히기 위해, 코로나비리대 과에 속하고 코로나바이러스 질병 2019(코비드-19)의 원인 인자로 정의된 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV2)에 대해 유사한 실험을 수행하였다. 결과는 도 6에 요약되어 있다.
도 6에 참조된 시도는 상업적으로 이용가능한 베로 세포주(Vero E6)로 수행되었다. SARS-CoV2 바이러스(핀란드 환자로부터 단리됨)는 균주 MUS18 및 MUS23(1시간, 34℃)에서 수득된 선택된 G. 루시덤 균류 샘플로 전처리되었다. 전처리된 바이러스는 이후 Vero E6 세포와 함께 3일 동안 인큐베이션되었고; 그 후 역전사 정량적 PCR(RT-qPCR) 분석을 사용하여 세포 샘플을 분석하였다. 간단히 말해서, 상업적 RNA 추출 키트를 사용하여 상청액 샘플에서 바이러스 RNA를 추출하고 코비드19 진단 시험 키트를 사용하여 검출을 실시하였다. 두 키트 모두 퍼킨 엘머에서 구입하였다. 세로축을 따라 표시된 정량화 주기(Cq) 값(도 6)은 샘플에 있는 표적 핵산의 양과 반대이고; 따라서, Cq 값이 낮을수록 샘플 내 표적 핵산의 양이 많고 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 도 6으로부터, 대조군 샘플(Virus Control, "VC 1:50k"로 정의된 샘플 참조)에서 RNA의 양이 많은 반면, 바이러스를 균류로 전처리한 시험 샘플(MUS18, MUS23)에서 표적 RNA의 양은 크게 감소된 것을 관찰할 수 있다(더 높은 Cq 값). 실험은 선택된 G. 루시덤 균주가 SARS-CoV2 바이러스에 대해 효과적인 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 생성한다는 것을 분명히 나타냈다.
조성물의 항병원성, 특히 항바이러스 활성이 본 명세서에 기재된 바와 같이 소정의 조건에서 배양된 선택된 G. 루시덤 균주에 의해 생성된 가노데르산 및 그의 유도체의 혼합물과 관련됨을 확인하기 위해, 다수의 시판되는 가노데르산, 즉, 중국 켐페이스에서 구입한 가노데르산 A, TQ, Y 및 TR(GA A의 경우 카탈로그 번호 CFN92051, GA TQ의 경우 카탈로그 번호 CFN92237, GA Y의 경우 카탈로그 번호 CFN90294, 및 GA TR의 경우 카탈로그 번호 CFN92235)을 감염원에 대해 시험하였다. 결과는 도 10a 및 10b에 요약되어 있고, 도 10a는 가노데르산 A를 이용한 실험을 나타내고, 도 10b는 가노데르산 TQ, Y 및 TR을 이용한 실험을 나타낸다.
상업용 GA를 CVA9에 대해 스크리닝하여 다양한 농도(GA A의 경우 100μM, 500μM, 1mM, 5mM 및 10mM; GA TQ, Y 및 TR의 경우 12.5μM, 25μM, 50μM, 100μM, 및 500μM)에서 항바이러스 활성을 결정하였다. 바이러스와 GA TQ, Y, TR의 혼합물 및 바이러스와 GA A의 혼합물에 대한 감염 역가는 각각 2E+08 PFU/㎖ 및 1.6E+08 PFU/㎖였고, 그 결과 MOI 값은 각각 100 및 66.7이었다. CVA9는 세포(세포주 A549)를 감염시키기 전에 37℃에서 1시간 동안 GA 샘플로 처리되었다. 상기 결과는 상업용 가노데르산 생성물이 감염원에 대해 어떠한 항바이러스 활성도 나타내지 못함을 보여준다.
도 7을 참조하면, 감염원에 대한 균류 유래 생성물의 살바이러스 활성에 대하여 균류 유래 생성물로 감염원을 (전)처리하는 동안 사용된 처리 매개변수(처리 기간 및 온도)의 효과를 평가한 결과를 보여준다. 세포주 A549를 사용하여 시험관 내 시험을 수행하였고, 여기서 12,000개 세포/웰의 밀도로 세포를 37℃에서 24시간 동안 96-웰 편평한 바닥 마이크로타이터 플레이트에서 배양하였다. 3.2E+08 PFU/㎖의 바이러스 역가를 갖는 감염원인 CVA9(10% v/v)를 G. 루시덤 유래 샘플(90% v/v)로 (전)처리하였다. 실험에서, 균류 유래 생성물은 균주 MUS18(CBS 147379; 샘플 식별 번호 140B)에서 생산되었다. 처리는 상이한 시간 간격(5분 및 60분) 및 상이한 온도, 즉 37℃ 및 실온(RT, 23-24℃)에서 수행되었다. 바이러스-샘플 혼합물을 10배 더 희석하여 MOI 값 130에 도달하였고 세포를 균류 처리된 바이러스로 감염시킨 후 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다.
인큐베이션 후, 세포를 PBS로 세척하고 CPE 염료를 사용하여 염색하였다. 염색된 세포를 물로 세척하고 용해 완충 용액으로 처리하였다. 세포 생존율(%)은 다중 라벨 플레이트 판독기 장치(퍼킨 엘머 VICTOR X4)에서 570㎚에서 흡광도를 측정하여 분광광도측정법으로 결정하였다. 결과는 2개의 독립적인 실험에서 얻은 평균±SEM 값이다. 시험 샘플 및 양성 대조군 간의 차이의 통계적 유의성은 일원 ANOVA 검정에 이어 본페로니 검정을 이용하여 평가되었다. 상기 결과로부터, 선택된 G. 루시덤 균주로부터 수득된 균류 유래 생성물(이하, G. 루시덤 유래 샘플)은 균류 유래 추출물을 이용한 상기 감염원의 처리가 짧은 시간 간격(5분)으로 수행된 경우에도 상기 감염원에 대해 현저한 살바이러스 활성을 나타냄이 명백하다. 선택된 G. 루시덤 균주의 살바이러스 활성은 상온(23-24℃) 또는 37℃에서 균류 유래 생성물로 감염원을 처리했는지 여부에 관계없이 본질적으로 변하지 않고 유지되었다.
다음은 선택된 가노더마 루시덤 균주로부터 수득가능한 균류 유래 생성물을 포함하는 조성물을 제조하는 방법을 기술한다.
이 방법은 선택된 G. 루시덤 균주를 배양 탱크 또는 생물반응기 중 본질적으로 액체 배양 배지에서 배양하는 것을 포함한다. 균류 배양물은 인큐베이션 온도, 성장 배지 관련 매개변수, (일)광의 존재/부재 등을 포함하는 특정 조건에서 소정 시간의 기간 동안 배양 탱크에서 성장하도록 허용된다. 상기 특정 조건에서 소정 시간의 기간 동안의 균류 성장을 생산 주기라고 지칭한다. 생산 공정은 예로서 2L(2리터) 탱크의 범위 내에서부터 10-100L 이상의 부피를 갖는 산업 규모 반응기까지 완전히 확장가능하다. 2L 미만의 용량은 제외되지 않지만, 일반적으로 산업 배양에 적합하지 않다. 생산 주기는 동일한 액체 배양 배지를 사용하여 더 작은 부피로 균류 균주를 전배양하는 것이 선행될 수 있다. 예로서, 잘 정립된 절차에 따라 0.1L 에를렌마이어 플라스크에서 성장한 전배양물을 2L 탱크에 접종하였다.
이에 따라, 예시적인 성장(발효) 배지는 D-글루코스(35g), 펩톤(5g), 효모 추출물(2.5g), 염 및 비타민, 예컨대 인산일칼륨 KH2PO4(1g), 황산마그네슘 칠수화물 MgSO4 x 7H2O(0.5g), 및 티아민(0.05g)을 함유한다. 상기 함량은 물 1000㎖에 대해 주어진 것이다. 용액 pH는 5.5이다. 다른 적절한 성장 배지의 사용은 배제되지 않는다.
현저한 항바이러스 활성을 갖는 조성물을 생산하기 위해, 생산 주기 동안(단계 a에서) 균류 균주의 배양이 본질적으로 교반을 배제하는 조건에서 실행되는 것(도 8에 대한 설명 참조)이 추가로 필수적이다. 4주 내지 10주, 바람직하게는 약 6주 내지 약 8주의 기간 동안 정지 상태에서 성장하도록 허용된 균류 균주는 최적의 항병원성 거동을 나타내는 것으로 드러났다. 원하는 생성물을 생산하는 측면에서 더 긴 배양 기간(최대 6개월)이 가능하다; 그러나, 그러한 긴 기간은 산업적 구현에서 실현가능하지 않을 수 있다. 최적의 성장 조건은 20-25℃ 범위의 온도와 (일)광의 부재를 포함하였다. 예시적인 8주의 생산 주기에 앞서 1주의 전배양 기간이 있었다. 숙련된 기술자는 상기 확인된 한계 내에서 전배양 기간 대 생산 주기의 기간을 조정하는 데 어떠한 어려움도 겪지 않을 것이라고 추정된다.
생산 주기 동안, 균류는 유리하게는 예를 들어 침지 발효와 같은 액체 발효 방법에 의해 배양된다. 임의의 다른 적절한 방법은 배제되지 않는다.
생산 방법을 다시 참조하면, 배양 탱크 또는 생물반응기 중 본질적으로 액체 배양 배지에서 배양된 선택된 G. 루시덤 균주(MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23)는 본질적으로 교반을 배제하는 조건에서만 현저한 항병원성 특성을 갖는 생물학적 활성 생성물을 생산한다는 것이 확립되었다.
기존 시스템에서, 가노더마 종과 같은 사상성진균은 휘젓는 생물반응기에서 성장한다. 그러나, 본 발명의 기초가 되는 연구는 휘젓개 또는 다른 교반 수단이 장착된 특수 생물반응기/발효기를 포함하는 통상의 생산 설비에서 항바이러스 화합물의 배출이 억제된다는 예상치 못한 결과로 발명자들을 이끌었다.
특히, 종래의 생물반응기 설정(예를 들어, 휘젓개가 장착된 통상의 발효기와 같은 생물반응기)에서 선택적으로 수행되는 전체 생산 주기에 걸친 지속적인 휘저음 조건은 본 발명의 개념에 따른 항바이러스 화합물의 생산에 적합하지 않음이 입증되었다. 이러한 종래의 휘젓는 발효기에서 생산된 균류 유래 화합물은 항바이러스 활성을 입증하지 못했고, 따라서 교반 및/또는 휘저음을 포함하는 조건이 항바이러스 조성물의 제조에 적합하지 않음을 나타낸다.
감염원에 대한 G. 루시덤(균주 MUS18)에서 수득된 생물학적 활성 생성물의 항바이러스 활성에 대한 지속적인 교반의 효과는 도 8에 설명되어 있다. 균류 성장/발효 과정은 휘젓는 반응기(휘젓개 수단이 장착된 반응기)에서 위에 설명된 지침에 따라 수행되었다. 간단히 말해서, 실험은 2개월(약 8주) 생산 주기의 2L 배치식(batch) 발효기에서 수행되었다. 실험은 0.1L 에를렌마이어 플라스크(암실에서 25℃, 120rpm)에서 균주를 7일 동안 전배양한 후에 시행되었다. 성장/생산 주기 동안 MUS18 샘플을 정기적인 시간 간격(8주 동안 일주일에 한 번)으로 수확하고 콕사키바이러스 A9(바이러스 역가 3.2E+08 PFU/㎖; MOI 133)에 대해 시험하여 CPE 억제 분석을 이용하여 항바이러스 활성을 평가하였다. 배치식 발효기의 조건은 다음과 같다: 일(광)의 부재 하에 실온 +25℃ 및 지속적인 휘저음(120rpm). 정지 발효를 위해 동일한 성장 배지를 사용하였다. 배양 동안 pH 및 산소(O2) 수준을 모니터링(조정하지 않음)하였다; 그러나 유의미한 변화는 관찰되지 않았다.
성장 주기 내내 지속적인 교반 조건에서 수집된 샘플은 교반을 제외한 배양 동안 수집된 샘플과 달리, 항바이러스 활성을 입증하지 못했다. 따라서, 선택된 G. 루시덤 균주가 교반 조건에서 휘젓는 생물반응기에서 배양/발효될 때, 형성된 화합물(대사산물)의 혼합물이 항병원성, 즉 항바이러스 활성을 갖지 않는다는 것이 실험적으로 입증되었다.
전배양 중 성장 배지의 교반은 균류 유래 대사산물의 항병원성 활성에 영향을 미치지 않았다. 설명된 설정에서, 0.1L 플라스크는 중간 속도(120rpm)로 오비탈 진탕기에서 인큐베이션되도록 허용되었다.
여기서 생산 주기를 정의한 성장 기간 동안, 즉 약 4-10주, 바람직하게는 약 6-8주의 기간 동안 배양된 균류 균주가 최적량의 관심있는 생물학적 화합물/대사산물을 액체 성장 배지로 방출하는 것이 관찰되었다. 생산 주기 후 예를 들어 배양 탱크 또는 배치식 반응기에서 배지를 제거하여 배지를 수확하고, G. 루시덤의 균사체에 의해 액상으로 배출된 조 생성물은 원심분리 및/또는 (멸균) 여과와 같은 통상적인 기술에 의해 균류 세포 및 불용성 파편으로부터 분리된다. 생산 주기에 이은 수확 및 분리 단계를 생산 방법 단계 b라고 지칭한다. 분리하는 동안, 조질의 대사산물은 정제되어 구현예에 따른 조성물을 위한 활성 성분을 산출한다. 분리/정제된 생성물은 선택적으로 추가로 농축 또는 희석될 수 있다. 농축은 예를 들어 동결 건조에 의해 수행될 수 있다. 희석은 임의의 적절한 희석 매체로 수행할 수 있다. 예시적인 희석 매체는 선택적으로 염화마그네슘(MgCl2)을 함유하는 PBS와 같은, 인산염 및 염화물 기반 완충 용액을 포함한다. 일부 특정 예에서, 2mM 염화마그네슘을 함유하는 PBS가 사용되었다.
구현예에서, 균류 유래 조성물은 상기 기술된 방법의 단계 b에서 수득되고 균류 유래 생물학적 활성 생성물로 지칭되는 생물학적 활성 화합물/대사산물의 혼합물로 구성된다. 일부 다른 구현예에서, 조성물은 적어도 하나의 헤미셀룰로스 화합물 또는 상이한 헤미셀룰로스 화합물의 혼합물을 추가로 포함한다.
상기 생물학적 활성 균류 대사산물에 의해 바이러스 입자에 미치는 영향은 바이러스 입자를 안정화시키고 강하게 클러스터링함으로써 나타난다. 선택된 G. 루시덤 균류 균주의 대사 경로에서 생합성된 생물학적 활성 생성물에 헤미셀룰로스를 첨가함으로써, 생성된 조성물에 항산화 능력 및 향상된 기계적 안정성과 같은 추가적인 생물학적 능력이 부여된다. 일반적으로, 헤미셀룰로스는 담체/안정화제로서 작용한다.
헤미셀룰로스 화합물(들)은 상기 개시된 방법의 단계 b에서 수득된 분리되고 선택적으로 농축되거나 희석된 균류 유래 생물학적 활성 생성물에 혼합된다. 헤미셀룰로스(들)의 혼합은 균류 유래 생성물의 분리/정제 (및 선택적인 농축 또는 희석) 후에 직접 실현되어 조성물을 생성할 수 있다. 상기 균류 유래 생성물은 헤미셀룰로스를 첨가할 때, 특히, 첨가된 헤미셀룰로스를 용액으로 제공할 때 어느 정도 희석된다.
대안적으로, 헤미셀룰로스는 사용 직전에 균류 유래 생성물에 혼합될 수 있다. 따라서 제1 성분으로서 균류 유래 생물학적 활성 생성물 및 제2 성분으로서 적어도 하나의 헤미셀룰로스 화합물을 포함하는 키트가 제공되며, 상기 제1 성분 및 제2 성분은 집합적으로 사용하기 전 임의의 시점에서 서로 조합될 수 있다. 키트에서, 균류 유래 활성 성분 및 헤미셀룰로스 화합물 사이의 비율은 본질적으로 조성물에 대해 개시된 것과 동일하게 유지된다.
적어도 하나의 헤미셀룰로스 화합물은 유리하게는 리그노셀룰로스 바이오매스로부터 생산된다. 헤미셀룰로스 화합물은 목재 또는 비목재 바이오매스 중 어느 하나로부터 생산될 수 있고; 다만 일부 예에서는, 목재 유래 바이오매스가 선호된다. 본 발명의 목적을 위해, 리그노셀룰로스 바이오매스는 낙엽수/견목(예로서, 자작나무, Betula ssp.), 침엽수/연목(가문비나무, Picea ssp.; 소나무, Pinus ssp.) 및/또는 이들의 혼합물로부터 생산될 수 있다. 예시적인 생산 시도에서, 헤미셀룰로스 화합물은 자작나무 및 가문비나무, 자작나무 및 소나무, 가문비나무 및 소나무의 혼합물 및 자작나무, 가문비나무 및 소나무의 혼합물로부터 제조되었다.
일부 예에서, 헤미셀룰로스 화합물(들)은 만난, 자일란 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 만난 다당류는 주로 갈락토글루코만난(GGM) 및 글루코만난(GM)으로 대표되는 반면, 자일란은 주로 글루쿠로노자일란(GX) 및 글루쿠로노아라비노자일란(GAX)으로 대표된다. 자일란은 일반적으로 견목에서 발생하는 한편, 연목의 주요 헤미셀룰로스 다당류는 글루코만난 또는 갈락토글루코만난으로 언급됨에 유의한다.
헤미셀룰로스 화합물(들)은 증기 추출, 열수 추출 또는 임의의 다른 적절한 방법과 같은 적합한 추출 방법으로 수득될 수 있다.
일부 예에서, 조성물은 갈라투론산 및/또는 람노스와 같은 펙틴을 추가로 포함한다.
조성물 중 균류 유래 생물학적 활성 생성물의 부분은 조성물이 차지하는 총 부피의 약 10% 내지 약 99.9% 범위 내, 일부 구현예에서, 약 50% 내지 약 75% 범위 내이고, 이때 조성물은 용액 또는 현탁액과 같이, 본질적으로 액상으로 제공된다. 일부 예에서, 조성물 중 균류 유래 활성 생성물의 부분은 조성물이 차지하는 총 부피의 적어도 25%이다.
헤미셀룰로스 화합물의 부분은 상기 조성물이 차지하는 총 부피의 약 0.1% 내지 약 75% 범위, 바람직하게는 약 5% 내지 약 50% 범위 내이다.
따라서 헤미셀룰로스 성분은 조성물에서 균류 유래 생물학적 활성 생성물을 위한 희석 매체로서 작용한다. 헤미셀룰로스에 더하여 또는 헤미셀룰로스 대신에, 조성물은 인산염 및/또는 염화물 기반 완충액 또는 완충액들(PBS, MgCl2), 물 또는 깨끗한 성장 배지 용액과 같은 일부 다른 희석 매체를 포함한다.
헤미셀룰로스는 에멀젼으로서 우수한 특성을 가지고 있다. 이들은 조성물의 구조적 특성(예를 들어 일관성 등)을 향상시킨다. 또한, 헤미셀룰로스는 강력한 항산화 특성과 긴 저장 수명을 가지고 있다. 실험적 시도는 헤미셀룰로스가 균류 유래 생물학적 활성 생성물의 생물학적(본 명세서에서 항바이러스) 활성을 방해하지 않는다는 것을 보여주었다. 사실, 헤미셀룰로스는 상기 항바이러스 활성을 지원하고 안정화시킨다. 균류 유래 생물학적 활성 생성물이 헤미셀룰로스로 반으로 희석된(50:50의 비율로) 조성물은 항병원성/항바이러스 활성을 잃지 않는다(도 9a).
CPE 억제 분석을 사용하여 감염원(CVA9)에 대해 선택된 G. 루시덤 샘플(도 9a에 지칭된 모든 균류 샘플은 MUS18, CBS 147379임)의 항바이러스 활성에 대한 헤미셀룰로스 화합물(HEM)의 잠재적인 효과를 평가하는 것을 목적으로 한 실험적 시도의 결과를 나타내는 도 9a를 참조한다. 상기 시도에서, 헤미셀룰로스 화합물은 자작나무 유래 헤미셀룰로스였고 감염원은 CVA9(감염 역가 1.6E+09 PFU/㎖)였다. 시험 샘플 및 대조군은 3회 반복 시험되었고 값은 평균±SEM으로 표시된다. 상기 결과는 각각 75:25 내지 50:50의 백분율로 헤미셀룰로스와 혼합된 G. 루시덤 유래 생성물을 포함하는 조성물이 우수한 항바이러스 활성을 보유하고 감염원(들)에 대항해 세포를 보호할 수 있음을 나타낸다.
도 9b는 선택된 G. 루시덤 유래 샘플이 여전히 항병원성 활성을 나타내는 희석 역치의 결정을 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 나타낸다. 2mM MgCl2를 함유하는 PBS 완충액으로 선택된 G. 루시덤 샘플(균주 MUS18)의 일련의 희석액을 제조하고 세포변성 효과(CPE) 억제 분석을 이용하여 감염원(여기서 CVA9)에 대해 시험하였다. 감염원(CVA9 바이러스 역가 2x108 PFU/㎖ 및 MOI 100)을 일련의 희석된 여러 균류 유래 샘플(10% v/v, 1% v/v, 0.1% v/v)로 전처리한 것을 제외하고 상기 기술된 것과 동일한 실험 설정을 활용하였다. 세포주 A549를 활용하였다. 각각의 시험 및 대조군 샘플은 3회 반복 시험되었고 값은 평균 ± SEM으로 표시된다. 상기 결과는 약 10 부피%의 균류 유래 물질(나머지는 희석 완충액임)을 포함하는 조성물이 100% 세포 생존율을 나타냄을 보여준다. 보다 적은 양(예로서, 1% v/v)에서도 균류 유래 활성 생성물은 항바이러스 활성(약 75%의 생존 세포를 초래함) 및 바이러스 감염으로부터 세포를 보호하는 그의 능력을 확실히 입증한다.
도 11A-11F는 CPE 억제 분석을 이용하여 감염원(CVA9)에 대한 G. 루시덤 샘플(MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23)의 항바이러스 활성에 대하여 배양 탱크 또는 생물반응기 중 액체 배양 배지에 첨가된 헤미셀룰로스 화합물의 잠재적인 효과를 평가하는 것을 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 도시한다. 모든 실험에서, 헤미셀룰로스 화합물은 1.5%(v/v)의 농도로 첨가되었다. 하기 대조군을 이용하였다: 바이러스로 감염되었지만 시험된 샘플로 처리되지 않은 세포를 포함하는 양성 대조군("ctrl CVA9"로 표시됨); 바이러스가 없고 시험된 샘플이 없는 세포를 포함하는 음성 대조군("모의 감염"으로 표시됨); 및 바이러스로 시험된 성장 배지만을 포함하는 추가 대조군("모의 샘플"로 표시됨).
도 11A 및 11B는 CVA9에 대한 헤미셀룰로스 유무에 따른 G. 루시덤 샘플의 항바이러스 활성을 평가하기 위한 비교 결과를 보여준다. 따라서 균류 균주는 표준 배지(헤미셀룰로스가 첨가되지 않음; 도 11A) 및 헤미셀룰로스 화합물이 첨가된 표준 배지(1.5% v/v; 견목 헤미셀룰로스, 즉 자작나무 자일란이 활용됨; 도 11B)에서 성장하였다. 감염원 및 헤미셀룰로스 화합물을 포함하는 혼합물(바이러스-화합물 믹스)에서 균류 유래 생성물의 농도는 80% v/v였다. CVA9 바이러스 역가는 2x106 PFU/㎖이고 MOI는 1이었다. 샘플을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 결과는 평균 ± SEM으로 표시된다. 상기 결과는 헤미셀룰로스 화합물이 균류 균주의 항바이러스 활성을 지원한다는 것을 입증한다.
도 11C-11F는 균류 유래 생성물과 함께 헤미셀룰로스를 사용한 것에 관련된다.
도 11C는 CVA9에 대한 G. 루시덤 균주 MUS18 및 MUS23의 항바이러스 활성을 평가하기 위한 실험적 시도의 결과를 나타낸다. 균류 균주는 헤미셀룰로스 화합물(1.5% v/v; 자작나무 자일란)이 보충된 표준 배지에서 성장하였다. 감염원 및 헤미셀룰로스 화합물을 포함하는 혼합물에서 균류 유래 생성물의 농도는 80% v/v였다. CVA9 바이러스 역가는 2x106 PFU/㎖이고 MOI는 1이었다. 샘플을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 각각의 시험 및 대조군 샘플은 5회 반복 시험되었고 값은 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 11D는 CVA9에 대한 G. 루시덤 균주 MUS12, MUS18 및 MUS23의 항바이러스 활성을 평가하기 위한 실험적 시도의 결과를 나타낸다. 이 실험에서, 헤미셀룰로스 화합물은 성장 배지에 1.5% v/v의 양으로 첨가된, 연목 헤미셀룰로스(소나무 및 가문비나무에서 수득된 헤미셀룰로스 화합물의 혼합물)였다. 감염원 및 헤미셀룰로스 화합물을 포함하는 혼합물 중 균류 유래 생성물의 농도는 80% v/v였다. CVA9 바이러스 역가는 2x106 PFU/㎖이고 MOI는 1이었다. 샘플을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 결과는 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 11E는 CVA9에 대한 G. 루시덤 균주 MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23의 항바이러스 활성을 평가하기 위한 실험적 시도의 결과를 나타낸다. 헤미셀룰로스 화합물은 1.5% v/v의 양으로 성장 배지에 첨가된, 견목 헤미셀룰로스(자작나무 자일란)였다. 감염원 및 헤미셀룰로스 화합물을 포함하는 혼합물(바이러스-화합물 믹스)에서 균류 유래 생성물의 농도는 80% v/v였다. CVA9 바이러스 역가는 2x106 PFU/㎖이고 MOI는 1이었다. 샘플을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 결과는 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 11F는 CVA9에 대한 G. 루시덤 균주 MUS12, MUS15, MUS18 및 MUS23의 항바이러스 활성을 평가하기 위한 실험적 시도의 결과를 나타낸다. 헤미셀룰로스 화합물은 1.5% v/v의 양으로 성장 배지에 첨가된, 연목 헤미셀룰로스(소나무 및 가문비나무에서 수득된 헤미셀룰로스 화합물의 혼합물)였다. 감염원 및 헤미셀룰로스 화합물을 포함하는 혼합물(바이러스-화합물 믹스)에서 균류 유래 생성물의 농도는 80% v/v였다. CVA9 바이러스 역가는 2x108 PFU/㎖이고 MOI는 100이었다. 샘플을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션했다. 결과는 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 11C-11F의 결과는 생산 공정에 첨가된 견목(자작나무, 도 11C, 11E) 및 연목(소나무-가문비나무, 도 11D, 11F) 모두에서 수득된 헤미셀룰로스 화합물이 균류 유래 생성물의 항바이러스 활성 및 바이러스 감염으로부터 세포를 보호하는 능력을 지원함을 나타낸다.
헤미셀룰로스 화합물이 균류 유래 생성물의 항바이러스 특성에 대한 안정화 효과를 갖는다는 것은 도 12a 및 도 11B에 나타낸 결과에 의해 추가로 입증된다.
도 12a 및 12b는 CPE 억제 분석을 사용하여 엔테로바이러스 콕사키바이러스 A9(CVA9)에 대한 선택적으로 헤미셀룰로스 화합물의 존재하에서의 선택된 G. 루시덤 샘플의 항바이러스 활성에 대하여 인큐베이션 기간 및 온도의 효과를 평가하는 것을 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 나타낸다. 헤미셀룰로스와 혼합되었을 때의 균류 유래 생성물의 안정성을 평가하였다.
상기 시도에서, G. 루시덤 균주 MUS12 및 MUS18은 단독으로 그리고 견목 및 연목(일반적으로 각각 "HEM 자작나무" 및 "HEM 소나무-가문비나무"로 표시됨)으로부터 수득된 헤미셀룰로스 화합물로 시험되었다. 인큐베이션 조건은 헤미셀룰로스에서 잠재적으로 발생하는 임의의 추가적인 효과를 감지하기 위해 균류 유래 생성물에 의해 발현되는 항바이러스 효과를 비교적 낮은 수준으로 유지하도록 선택되었다. 이러한 조건에는 예를 들어 2×106 PFU/㎖의 높은 감염 역가 및 선택적으로 짧은 인큐베이션 시간(1분, rf. 도 12a)이 포함된다.
균류 유래 생성물 샘플, 헤미셀룰로스 샘플 및 이들의 혼합물은 2주 동안 다양한 온도 체제(실온 및 54℃)에서 사전 인큐베이션되었다. 감염원(CVA9)을 다음 레시피에 따라 상기 샘플에 혼합하였다: 총 부피 100마이크로리터의 완충액(PBS-MgCl2) 중에 균류 유래 생성물 10%, 헤미셀룰로스 화합물 25%, 및 CVA9.
세포(세포주 A549, ATCC)를 96-웰 플레이트(12,000개 세포/웰)에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 2일째에, 전술한 바와 같이 감염원(CVA9) 및 화합물(선택적으로 헤미셀룰로스가 보충된 균류 유래 생성물)의 혼합물을 적합한 완충액(예로서, PBS-MgCl2) 중에서 제조하고 실온(RT)에서 1분 및 15분 동안 인큐베이션하였다. 이 혼합물을 10% DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)을 사용하여 10배 희석하고 최종 MOI 값 1을 달성하도록 세포에 첨가하였다. 세포변성 효과는 37℃에서 2일 동안 발생하도록 허용되었다. 따라서, 48시간 후, 세포를 PBS로 2회 세척한 후, 고정하고 CPE 염료(0.03% 크리스탈 바이올렛, 2% 에탄올 및 36.5% 포름알데히드)를 사용하여 10분 동안 염색하였다. 웰을 염색하고 물로 세척한 후, 세포를 용해 완충액(47.5% 에탄올 중 0.8979g의 나트륨 시트레이트 및 1N HCl)을 사용하여 용해시켜 크리스탈 바이올렛을 용출시켰다. 생존 세포의 흡광도는 퍼킨엘머 VICTORTM X4 다중 라벨 판독기를 사용하여 570㎚에서 분광광도측정법으로 측정하였다.
3 ㎍/㎖ 양의 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)를 추가 양성 대조군으로서 사용하였다.
실온에서 1분 동안 바이러스-화합물 혼합물로 세포를 처리한 실험 결과를 도 12a에 나타낸다.
짧은 인큐베이션 기간(1분) 후, 균류 유래 생성물(10%)을 단독으로 함유하는 샘플뿐만 아니라 견목(HEM 자작나무) 및 연목(HEM 소나무-가문비나무)에서 유래한 헤미셀룰로스를 함유하는 샘플은 높은 감염 역가로 CVA9 감염을 효과적으로 예방할 수 없었다. 또한, 균류 유래 생성물을 단독으로 및 헤미셀룰로스 화합물을 단독으로 함유한 샘플의 결과에서도 차이가 나타나지 않았다. 대조적으로, 균류 유래 생성물에 첨가된 헤미셀룰로스 화합물은 바이러스 감염에 대한 높은 보호 수준을 입증하였다(일반적으로 "MUS18 + HEM"으로 지정된 샘플 그룹 참조).
54℃에서 2주 동안 사전 인큐베이션된 균류 유래 생성물 및 헤미셀룰로스 화합물은 바이러스 감염에 대항한 보호 특성을 가지고 있지 않다. 그러나, 54℃에서 2주 동안 사전 인큐베이션된 균류 유래 생성물 및 헤미셀룰로스 화합물의 혼합물은 우수한 항바이러스 보호 효과를 입증하였다.
1분 처리에서 얻은 결과는 스톡에서 갓 취했을 때 상이한 헤미셀룰로스 종 간에 통계적으로 유의미한 차이가 없음을 보여준다. 그러나, 연목 헤미셀룰로스 종(소나무-가문비나무)은 RT(** = p < 0.01) 및 54℃(* = p < 0.05)에서 견목 헤미셀룰로스 종(자작나무)보다 통계적으로 더 나은 결과를 입증하였다. 예상한 바와 같이, 양성 대조군은 배양된 세포의 높은 생존율을 입증한 반면, 대조군 감염(ctrl CVA9)은 세포의 낮은 생존율을 입증하였다. "ns"로 지칭한 것은 "지정되지 않음"을 나타낸다.
도 12b의 결과는 균류 유래 생성물의 항바이러스 효능에 대한 헤미셀룰로스에 의한 안정화 효과가 바이러스와의 더 긴(15분) 인큐베이션 기간 동안에도 유지됨을 입증한다.
실험 조건은 일반적으로 도 12a와 관련하여 기술된 것과 동일하다. 도 12b의 결과는 균류 유래 생성물 단독인 경우 RT에서 이미 효과적임을 입증한다. 그러나, 54℃(2주 동안)에서 전처리된 균류 유래 생성물 단독 및 헤미셀룰로스 종 단독은 낮은 항바이러스 효능을 가졌다(샘플 MUS 12 54℃, MUS 18 54℃, HEM 자작나무 54℃ 및 HEM 소나무-가문비나무 54℃ 참조). 대조적으로, 균류 유래 생성물에 헤미셀룰로스를 첨가한 경우 54℃ 처리 후에도 바이러스 감염에 대한 탁월한 보호가 입증되었다. 본 실험에서, 연목(소나무-가문비나무)에서 유래된 헤미셀룰로스 화합물은 54℃에서(* = p < 0.05) 및 신선 사용되었을 때(** = p < 0.01) 견목(자작나무)에서 유래된 것보다 통계적으로 더 나았지만, RT에서는 유의미한 차이를 나타내지 않았다.
도 12c는 선택적으로 헤미셀룰로스의 존재 하에서 선택된 G. 루시덤 샘플의 세포독성 평가를 목적으로 하는 실험적 시도의 결과를 나타낸다. 이러한 결과는 균류 유래 생성물 및 헤미셀룰로스가 세포에 대해 세포독성을 보이지 않음을 나타낸다.
G. 루시덤 균주 MUS12 및 MUS18에서 유래된 생성물 및 견목(자작나무) 및 연목(소나무-가문비나무)에서 유래된 헤미셀룰로스 화합물, 및 이들의 조합은 상이한 온도에서 수행된 처리 후 세포의 잠재적인 세포 독성을 평가하기 위해 세포에 직접 시험되었다. 도 12c의 결과는 샘플 중 어느 것도 세포독성이 없었음을 입증한다.
도 9a, 11A-F 및 12a-b의 결과는 헤미셀룰로스 화합물이 선택된 G. 루시덤 균주로부터 유래된 생물학적 활성 생성물의 항바이러스 활성을 지원하고 균류 유래 생성물에 안정화 효과를 발휘하여, 생성된 조성물이 액체 형태에서 안정적이도록 함(이것은 외용에 특히 적합하다)을 명확하게 입증한다.
또 다른 측면에서, 인간 또는 비인간 동물 대상체에서의 외용을 위한 제형물이 제공되고, 상기 제형물은 상기 조성물을 포함하거나 이것으로 구성되며, 상기 조성물은 전술한 구현예에 따라 가노더마 루시덤 균류의 선택된 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함한다.
조성물을 구성하는 성분 이외에, 제형물은 용매, 첨가제, 보존제, 증점제, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 추가로 포함할 수 있다. 제형물은 본질적으로 액체 형태(용액, 현탁액), 반고체 형태(에멀젼, 크림) 또는 고체 형태(예로서, 비누 바)로 제공될 수 있다. 또한, 제형물은 분말, 스프레이 또는 에어로졸로서 제공될 수 있다. 분말화된 제형물은 장식용 화장품에 사용되는 품목을 형성하기 위해 추가로 압착될 수 있다.
일부 바람직한 구성에서, 제형물은 스킨케어 제품(크림, 세럼 등)과 같은 화장품 또는 장식용 화장품 품목으로서 제공된다. 언급된 화장품(들)에는 바람직하게는 예를 들어 항-노화 기능과 같은 적어도 하나의 추가 기능이 부여된다.
다양한 구성에서, 제형물은 피부 또는 무생물 표면용 소독제, 세정제, 살균제 등으로서 제공된다.
일 측면에서, 본 발명은 소독, 살균 및/또는 세정에 있어서 상기 조성물 및 제형물 중 어느 하나의 용도에 관한 것이다. 따라서, (비생물) 표면 및 물체의 처리뿐만 아니라, 인간 및 비인간 동물 대상체의 피부 및 모발 소독에 있어서 조성물 및/또는 제형물의 용도가 제공된다. 일부 구성에서, 상기 조성물 및/또는 제형물의 용도는 공기 정화 적용, 특히, 공기 교환기 및/또는 공기 컨디셔닝 시스템에 사용되는 것과 같은, 공기 필터를 처리하기 위한 용도로서 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 퍼스널 케어 제품 및/또는 스킨케어 제품의 제조에 있어서 상기 조성물 및 제형물 중 어느 하나의 용도에 관한 것이다. 퍼스널 케어 제품(들)은 비제한적으로 클렌징 패드, 면 패드, 물티슈 및 티슈, 안면 라이너, 안면 마스크, 유아용 케어 제품, 직물, 예컨대 병원 직물 및/또는 개인용 직물, 개인용 공기 필터 등을 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 바이러스 감염의 확산을 예방하는 데 있어서 기재된 구현예에 따른 조성물 및/또는 제형물의 비치료적 용도에 관한 것이다.
특히, 조성물 및 관련 제형물은 피코르나비리대, 코로나비리대, 레오비리대 및 플라비비리대 중 어느 하나의 하나 이상의 구성원에 의해 야기되는 바이러스 감염의 확산을 방지하는 데 유익하다. 도 1-6 및 도 9a, 9b를 참조하여 설명한 바와 같이 균류 유래 추출물 및 선택적으로 헤미셀룰로스 화합물(들)을 포함하는 조성물은 상이한 유형의 콕사키바이러스 및 코로나바이러스와 관련된 SARS-CoV2에 대해 현저한 살바이러스 활성을 입증한다.
피코르나바이러스(엔테로바이러스를 포함함), 및 코로나바이러스에 대한 균류 유래 트리테르페노이드 함유 생성물의 기능의 메커니즘은 아마도 비리온에 대한 상기 생성물의 직접적인 작용을 기반으로 한다. 본 명세서에 개시된 선택된 G. 루시덤 균주에 의해 전달되는 일부 트리테르페노이드계 화합물은, 일부 문헌 출처에 따르면, 바이러스성 프로테아제에 공통적인 특징적인 부위 또는 보존된 아미노산 영역에 작용하고 이를 통해 억제 작용을 발휘하는 것으로 추정된다. 본 발명에 따른 균류 유래 생성물은 외피성 바이러스와 비외피성 바이러스의 구조적 유사성에 기초하여 로타바이러스 및 플라비바이러스에도 살바이러스 활성을 발휘하는 것으로 보인다.
추가 측면에서, 가노더마 루시덤 균주가 제공되며, 상기 균주는 수탁 번호 CBS 147377, CBS 147378, CBS 147379 및 CBS 147380 하에 부다페스트 조약의 규정에 따라 기탁된 균주로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 수탁 번호 CBS 147377, CBS 147378, CBS 147379, CBS 147380 하에 부다페스트 조약의 규정에 따라 기탁된 단리된 가노더마 루시덤 균주 중 어느 하나, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함하는 조성물의 비치료적 용도는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV2)에 의해 야기되는 감염의 확산을 예방하는 데 제공된다.
기술의 발전에 따라 본 발명의 기본 사상이 다양한 방식으로 구현되고 조합될 수 있음은 본 기술분야의 숙련자에게 자명하다. 따라서, 본 발명 및 그의 구현예는 전술한 실시예에 제한되지 않으며, 대신 일반적으로 청구범위의 범위 내에서 달라질 수 있다.
Westerdijk Fungal Biodiversity Institute CBS147377 20201217 Westerdijk Fungal Biodiversity Institute CBS147378 20201217 Westerdijk Fungal Biodiversity Institute CBS147379 20201217 Westerdijk Fungal Biodiversity Institute CBS147380 20201217

Claims (22)

  1. 본질적으로 교반을 배제한 조건에서 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 균류를 배양함으로써 가노더마 루시덤의 선택된 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함하는 살바이러스 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 수탁 번호 CBS 147377, CBS 147378, CBS 147379, CBS 147380, 또는 이의 임의의 조합으로 기탁된 단리된 G. 루시덤 균주 중 어느 하나로부터 수득가능한 조성물.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 G. 루시덤의 균사체에 의해 배출된 생성물로서 액상으로 수득가능하고, 상기 균류는 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 성장하는 것인 조성물.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서,
    G. 루시덤으로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 가노데르산 및 이의 유도체를 포함하는 조성물.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 생물학적 활성 화합물의 혼합물은 조성물이 차지하는 총 부피의 약 10% 내지 약 99.9% 범위 내의 양으로 존재하는 조성물.
  6. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
    헤미셀룰로스를 추가로 포함하는 조성물.
  7. 청구항 6에 있어서,
    상기 헤미셀룰로스는 리그노셀룰로스 바이오매스로부터 생성되는 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서,
    상기 리그노셀룰로스 바이오매스는 목재 유래 바이오매스인 조성물.
  9. 가노더마 루시덤의 선택된 균주로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함하는 살바이러스 조성물의 생산 방법으로서, 상기 방법은:
    a. 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 G. 루시덤 종을 배양하는 단계; 및
    b. 단계 (a)에서 수득된 배지를 수확하고 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 G. 루시덤의 균사체에 의해 배출된 생성물로서 액상으로 분리하는 단계;를 포함하고,
    여기서 상기 배양 탱크 또는 생물반응기에서 본질적으로 액체 배양 배지에서 G. 루시덤 종을 배양하는 단계는 본질적으로 교반을 배제한 조건에서 실행되는 방법.
  10. 청구항 9에 있어서,
    가노더마 루시덤의 선택된 균주는 수탁 번호 CBS 147377, CBS 147378, CBS 147379, CBS 147380, 또는 이의 임의의 조합으로 기탁된 단리된 G. 루시덤 균주 중 어느 하나인 방법.
  11. 청구항 9에 있어서,
    상기 배양은 침지 발효에 의해 수행되는 방법.
  12. 청구항 9 내지 청구항 11 중 어느 한 항에 있어서,
    본질적으로 액체 배양 배지에서 G. 루시덤 종을 배양하는 단계는 4주 내지 10주 범위의 기간 동안, 바람직하게는, 약 6-8주의 기간 동안 수행되는 방법.
  13. 청구항 9 내지 청구항 12 중 어느 한 항에 있어서,
    단계 (c)에서, 단계 (b)에서 수득된 생성물에 헤미셀룰로스를 첨가하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  14. 청구항 13에 있어서,
    상기 헤미셀룰로스는 조성물이 차지하는 총 부피의 약 0.1% 내지 약 75%의 범위, 바람직하게는, 약 5% 내지 약 50% 범위의 양으로 첨가되는 방법.
  15. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 정의된 조성물을 포함하는, 인간 또는 비인간 동물 대상체에서의 외용을 위한 제형물.
  16. 바이러스 감염의 확산을 방지하기 위한 청구항 1 내지 청구항 8에 정의된 조성물 또는 청구항 15에 정의된 제형물의 비치료적 용도.
  17. 청구항 16에 있어서,
    상기 바이러스 감염은 피코르나비리대 및 코로나비리대 중 어느 하나의 하나 이상의 구성원에 의해 야기되는 용도.
  18. 소독, 살균 및/또는 세정에서의 청구항 1 내지 청구항 8에 정의된 조성물 및/또는 청구항 15에 정의된 제형물의 용도.
  19. 퍼스널 케어 제품 또는 스킨케어 제품의 제조에서의 청구항 1 내지 청구항 8에 정의된 조성물 및/또는 청구항 15에 정의된 제형물의 용도.
  20. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 정의된 조성물 및/또는 청구항 15에 정의된 제형물을 포함하는, 피부 또는 무생물 표면용 소독제.
  21. 수탁 번호 CBS 147377, CBS 147378, CBS 147379 및 CBS 147380으로 기탁된 균주로 이루어진 군으로부터 선택되는 가노더마 루시덤 균주.
  22. 수탁 번호 CBS 147377, CBS 147378, CBS 147379, CBS 147380, 또는 이의 임의의 조합으로 기탁된 단리된 가노더마 루시덤 균주 중 어느 하나로부터 수득가능한 생물학적 활성 화합물의 혼합물을 포함하는 조성물의 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV2)로 인한 감염의 확산 방지에서의 비치료적 용도.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE243042T1 (de) 1999-03-09 2003-07-15 Ganomycin Ges Fuer Biomedizini Biologisch aktive verbindungen aus ganoderma pfeifferi dms 13239
CN1375557A (zh) * 2002-03-29 2002-10-23 华东理工大学 生物反应器中灵芝细胞两阶段培养生产灵芝酸的方法
KR20070057803A (ko) * 2004-07-16 2007-06-07 메디머쉬 에이/에스 진균류로부터의 면역 조절 화합물
WO2012044817A2 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Indiana University Research And Technology Corporation Process for preparing delta-7,9(11) steroids from ganoderma lucidum and analogs thereof
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