KR20230143140A - 키메라 수용체 요법 - Google Patents

키메라 수용체 요법 Download PDF

Info

Publication number
KR20230143140A
KR20230143140A KR1020237026326A KR20237026326A KR20230143140A KR 20230143140 A KR20230143140 A KR 20230143140A KR 1020237026326 A KR1020237026326 A KR 1020237026326A KR 20237026326 A KR20237026326 A KR 20237026326A KR 20230143140 A KR20230143140 A KR 20230143140A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
variant
certain embodiments
functional fragment
amino acid
Prior art date
Application number
KR1020237026326A
Other languages
English (en)
Inventor
헬렌 삽제바리
셰릴 보링어
루툴 샤
창훙 첸
비노드바부 쿠렐라
에이미 웨사
Original Assignee
프레시전 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 프레시전 인코포레이티드 filed Critical 프레시전 인코포레이티드
Publication of KR20230143140A publication Critical patent/KR20230143140A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4636—Immune checkpoint inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464469—Tumor associated carbohydrates
    • A61K39/46447—Mucins, e.g. MUC-1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5443—IL-15
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/26—Universal/off- the- shelf cellular immunotherapy; Allogenic cells or means to avoid rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/27—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by targeting or presenting multiple antigens
    • A61K2239/28—Expressing multiple CARs, TCRs or antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/49—Breast
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/54—Pancreas
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/59—Reproductive system, e.g. uterus, ovaries, cervix or testes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/31—Combination therapy

Abstract

면역 체크포인트 단백질의 발현을 억제하는 miRNA를 암호화하는 비-자연 발생 폴리뉴클레오티드. 폴리뉴클레오티드는 키메라 수용체, 사이토카인, 및/또는 세포 태그를 추가로 암호화할 수 있다. 전술된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터. 전술된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 변형된 면역 효과기 세포. 전술된 폴리뉴클레오티드 및/또는 세포를 포함하는 조성물 및 키트. 전술된 세포를 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법. 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 전술된 세포의 용도. 대상체에서 항원의 과발현과 연관된 질환 또는 장애를 검출하는 방법. 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 또는 이를 포함하는 세포의 연속 투여를 포함하는 질환 또는 장애의 치료 방법.

Description

키메라 수용체 요법
서열 목록에 대한 참조
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 함유하며 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 2022년 1월 10일에 생성된 상기 ASCII 사본의 명칭은 75594-348568_SL.txt이고 크기가 579,627 바이트이다.
키메라 항원 수용체(CAR-T) 세포 및 T 세포 수용체(TCR) 요법은 최근에 급속한 개발을 거쳐 종양 세포의 사멸을 성공적으로 지시하는 것으로 나타났다. 이러한 요법은 예를 들어, 자가면역 질환 및 암을 치료하는 데 유용하다. 실제로, CD19, CD33, BCMA, CD44, α-엽산 수용체, CAIX, CD30, ROR1, CEA, EGP-2, EGP-40, HER2, HER3, 엽산-결합 단백질, GD2, GD3, IL-13R-a2, KDR, EDB-F, 메소텔린, CD22, EGFR, 엽산 수용체 α, MUC1, MUC4 또는 MUC16과 같은 뮤신, MAGE-A1, h5T4, PSMA, TAG-72, EGFR, CD20, EGFRvIII, CD123 또는 VEGF-R2를 포함하나 이에 제한되지 않는 이러한 요법에 대한 여러 표적이 현재까지 식별되었다. 이들 중에서, CD19, CD33, MUC1, MUC16, 및 ROR1은 면역요법에 대한 표적으로서 특히 유망한 것으로 나타났다.
CD19는 여러 요인으로 인해 면역요법에 대한 매력적인 표적이다. 그것은 다양한 B 세포 림프종 및 백혈병, 및 정상 B 세포 상에서 발현되지만, 조혈 줄기 세포, 형질 세포, 및 다른 건강한 조직에서 발견되지 않는다. 게다가, CD19는 리툭시맙(rituximab)과 같은 모노클로날 항체 요법의 표적인 CD20보다 더 광범위한 발현 프로파일을 가지고 있으며, 비효율적인 내재화로 고통받는 CD20과 비교하여 항체-약물 접합체(ADC)에 대한 더 나은 표적으로 생각된다. CD19는 또한 모노클로날 항체 치료(예를 들어, 리툭시맙)가 CD20 하향조절 또는 다른 요인으로 인해 효과가 없는 경우 발현되는 것으로 나타났다. 추가로, CD19-표적화 제제는 항-CD20 항체의 것과 다른 작용 모드를 가지고 있기 때문에, 그들은 기존 모노클로날 항체 레지멘을 보완할 수 있다.
CD33은 암에서의 높은 발현 및 건강한 성인 조직에서의 최소 발현으로 인해 면역요법에 대한 매력적인 표적이다. CD33은 골수성 백혈병 및 백혈병 줄기 세포 상에서 과발현된다. CD33은 성인에서 가장 흔한 급성 백혈병인 급성 골수성 백혈병(AML)에서 과발현된다. AML 환자의 85 내지 90%는 아세포(blast cell) 상에서 CD33의 발현을 보여준다. CD33은 또한 일반적으로 70대 성인에서 발견되는 골수의 암성 병태인 골수이형성 증후군(MDS)에서 과발현된다.
MUC1은 유방암에서 과발현되고, 정상 유선에서 부재하거나 낮은 수준으로 발현되기 때문에 면역요법에 대한 매력적인 표적이다. 게다가, MUC1은 암에서 대부분 비정상적으로 저글리코실화되고 암 표면 상의 항원은 정상 세포 상의 항원과 상이하다. 따라서 암 면역요법을 위해 MUC1을 표적하는 것은 암성 세포와 정상 세포 사이의 차이를 이용할 수 있다.
MUC16은 암에서의 높은 발현 및 건강한 성인 조직에서의 최소 발현으로 인해 면역요법에 대한 매력적인 표적이다. MUC16은 난소암, 유방암, 췌장암, 흡열성 암(endothermal cancer), 및 폐암에서 비정상적으로 발현된다. 예를 들어, MUC16은 부인병적 악성종양 중 가장 치명적인 난소 종양의 80% 초과에서 과발현된다. 한편, MUC16의 제한된 발현은 건강한 조직에서 발견되었다. 난소암에 대한 현재 치료 기준(standard of care)은 수술에 이어 백금제 및 탁산의 조합을 사용한 화학요법이다. 그러나, 질환의 재발은 초기 치료 후 대부분의 환자에서 발생하여, 반복된 수술 주기 및 추가 라운드의 화학요법을 초래한다.
수용체 티로신 키나제-유사 고아 수용체 1(ROR1)은 암에서의 높은 발현 및 건강한 성인 조직에서의 최소 발현으로 인해 면역요법에 대한 매력적인 표적이다. ROR1은 만성 림프구성 백혈병(CLL), 외투 세포 림프종(MCL), 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 및 미만성 B-세포 림프종(DLBCL)을 포함하는 다수의 혈액학적 종양 및 삼중 음성 유방암(TNBC)을 포함하는 유방 선암종, 췌장암, 난소암, 및 폐 선암종을 포함하는 고형 종양에서 비정상적으로 발현된다.
많은 환자가 CAR-T 및 TCR 요법으로 지속적인 반응을 보이지만, 일부 환자의 경우 이러한 요법의 항-종양 효과는 수명이 짧거나 효과적이지 않다. 유망하게 보인 또 다른 면역요법은 T 세포의 스위치 오프(switch off)를 방지하고 이들 세포의 활성을 촉진할 수 있는 면역 체크포인트 억제이다. 체크포인트 억제제 표적의 예는 PD1, PD-L1, CTLA-4, TIGIT, 4-1BB, PIK3IP1, CD27, CD28, CD40, CD70, CD122, CD137, OX40(CD134), GITR, ICOS, A2AR, B7-H3(CD276), B7-H4(VTCN1), BTLA, IDO, KIR, LAG3, TIM-3, 또는 VISTA를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이들 중에서, CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM3, TIGIT, LAG3, 및/또는 PIK3IP1을 표적하는 것은 가장 유망한 것으로 나타났다. 가장 연구된 체크포인트 억제 경로 중 하나는 PD-1/프로그램화 사멸 리간드 1(PD-L1) 경로이며, 이는 종양 세포가 면역 반응을 피하는 방법에서 중요한 역할을 한다. PD-1/PD-L1 차단 항체를 활용하는 면역요법은 임상에서 광범위하게 평가되었고, 특히 CAR-T 세포와 함께 투여될 때 다수의 악성종양에 걸쳐 종양 퇴행을 개선하는 것으로 나타났다. 그러나, 체크포인트 억제제 차단 항체는 암 유형에 걸쳐 일관되게 수행되지 않았고, 종양 미세환경에 대한 접근이 제한될 수 있고, 반복 투여를 필요로 하며, 시간 경과에 따라 효과가 상실될 수 있다. 게놈 편집은 PD-1 매개 CAR-T 세포 고갈을 제거하기 위한 대체 접근법이며, PD-1 차단을 조작된 CAR-T 세포로만 제한하다는 이점이 있다. 그러나, 유전자 편집은 제조 공정에 복잡성을 더해, 세포 요법의 호전 시간 및 비용을 증가시킨다.
따라서 CAR-T 및/또는 TCR 요법을 전신 체크포인트 억제와 조합하는 치료를 포함하여, 항원-연관 질환 및 병태에 대해 더 안전하고, 보다 효과적이고, 저렴한 요법을 수득하기 위한 당업계의 지속적인 요구가 있다.
또한 면역학적 감시 상실, 종양 항원 조성의 유전적 변경 및 종양 이질성(암 세포 표현형 차이를 야기)과 같은 복잡한 생체내 생물학적 문제를 해결하기 위해 항원의 다면적인 표적화를 제공하는 다양한 치료 레지멘의 방식을 고안할 필요가 있다.
본 발명은 부분적으로 면역 체크포인트 단백질의 발현을 억제하는 miRNA를 암호화하는 비-자연 발생 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 특정 구현예에서, miRNA는 CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM3, TIGIT, LAG3, GITR, 또는 PIK3IP1을 표적한다. 특정 구현예에서, miRNA는 PD-1을 표적한다.
특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호: 72-87 중 임의의 하나와 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 72-87 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호: 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 및 86 중 임의의 하나와 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 72, 74, 76, 78, 80, 82, 704, 705, 709, 및 710 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호: 179 또는 180과 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 179 또는 180의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호: 267과 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 267의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 a) 서열번호: 292와 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 291의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열; 및 b) 서열번호: 292와 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 292의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 키메라 수용체를 추가로 암호화한다. 특정 구현예에서, 키메라 수용체는 T-세포 수용체 또는 키메라 항원 수용체이다.
특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 CD19, CD33, MUC1, MUC16, 또는 ROR1 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 ROR1 상의 에피토프에 결합한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 347, 351, 355, 359, 363, 367, 371, 375, 379, 383, 387, 391, 395, 399, 403, 407, 411, 415, 419, 423, 427, 431, 435, 439, 443, 447, 451, 455, 459, 및 463 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 가변 경쇄 도메인은 서열번호: 387의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 349, 353, 357, 361, 365, 369, 373, 377, 381, 385, 389, 393, 397, 401, 405, 409, 413, 417, 421, 425, 429, 433, 437, 441, 445, 449, 453, 457, 및 461 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 중쇄 도메인을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 가변 중쇄 도메인은 서열번호: 349의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 스페이서(spacer)를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 스페이서는 CD8α 힌지 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체인 줄기 영역을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 줄기 영역은 서열번호: 467의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 스페이서는 줄기 확장 영역을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 서열번호: 473의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 막관통 도메인을 추가로 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 막관통 도메인은 CD8α 막관통 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 막관통 도메인은 서열번호: 475의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포내 신호전달 도메인을 추가로 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD3ζ 신호전달 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호: 479의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 공자극 도메인을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD28 신호전달 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호: 481의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 사이토카인을 추가로 암호화한다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-15 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체이다. 이러한 특정 구현예에서, 사이토카인은 서열번호: 519의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 막 결합된다. 이러한 특정 구현예에서, IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 IL-15Rα, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 또한 포함하는 융합 단백질의 일부를 형성한다. 이러한 특정 구현예에서, 융합 단백질은 서열번호: 523의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 융합 단백질은 서열번호: 525의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 세포 태그를 추가로 암호화한다. 특정 구현예에서, 세포 태그는 절두된 HER1, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 절두된 HER1은 HER1 도메인 III, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체, 및 절두된 HER1 도메인 IV, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 절두된 HER1은 서열번호: 565의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체, 및 서열번호: 567의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포 태그는 CD28 막관통 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 추가로 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 세포 태그는 서열번호: 571의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
본 발명은 또한 전술된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 벡터는 바이러스 또는 비바이러스일 수 있다. 특정 구현예에서, 벡터는 잠자는 숲속의 미녀(Sleeping Beauty) 트랜스포존(transposon)을 포함한다.
본 발명은 추가로 전술된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 변형된 면역 효과기 세포에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 세포는 T-세포이다.
본 발명은 추가로 전술된 폴리뉴클레오티드 및/또는 세포를 포함하는 조성물 및 키트에 관한 것이다.
본 발명의 추가 측면은 전술된 세포를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법이다. 본 발명은 또한 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 전술된 세포의 용도에 관한 것이다. 질환 또는 장애는 항원, 예를 들어, CD19, CD33, ROR1, MUC1, 또는 MUC16의 과발현과 연관된 것일 수 있다. 특정 구현예에서, 질환 또는 장애는 ROR1의 과발현과 연관된 것이다.
특정 구현예에서, 질환 또는 장애는 암이다. 특정 구현예에서, 질환 또는 장애는 만성 림프구성 백혈병, 외투 세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병, 또는 미만성 거대 B-세포 림프종, 삼중 음성 유방암을 포함하는 유방 선암종, 췌장암, 난소암, 또는 폐 선암종이다.
본 발명의 또 다른 측면은 a) 대상체로부터의 샘플을 항체, 또는 이의 항원-결합 단편 중 하나 이상과 접촉시키는 단계; 및 b) 질환이 없는 대조군 샘플에 대한 이러한 결합과 비교하여 샘플에 대한 항체 또는 이의 단편의 증가된 결합 수준을 검출하여, 대상체에서 질환을 검출하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항원의 과발현과 연관된 질환 또는 장애를 검출하는 방법이다.
본 발명의 또 다른 추가 측면은 항원 표적의 어레이에 대한 상이한 구조적 조성 및 결합 특이성을 갖는 키메라 항원 수용체의 집합체로부터 선택된 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포, 핵산, 바이러스 벡터, 또는 비바이러스 벡터의 일련의 투여를 포함하는, 암 및 자가면역 질환 또는 장애와 같은, 질환 또는 장애를 치료하는 방법이다. 이러한 특정 구현예에서, 방법은 집합체로부터의 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 제1 투여 이어서 집합체로부터의 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 제2 투여를 포함하며, 상기 제1 투여와 제2 투여 사이에 시간이 경과한다.
도 1a는 하나 이상의 체크포인트 억제제 miRNA와 키메라 수용체의 조합(SD= 스플라이스 공여자; SA= 스플라이스 수용자)을 포함하는 벡터의 예시적인 묘사이다. 도 1b는 다양한 5' 또는 3' 위치에서 표적 miRNA 및 상보적 서열을 포함하는 다양한 프리- miRNA의 헤어핀 및 루프 설계의 예시적인 묘사이다. 도 1c는 이식유전자 카세트에서의 위치를 포함하는 다양한 프리- miRNA의 헤어핀 및 루프 설계의 예시적인 묘사이다.
도 2는 MUC16-특이적 CAR의 존재 또는 부재 하에 miRNA 작제물의 다양한 조합의 형질감염 후 PD1 상대적 RNA 발현을 도시하는 그래프이다. X-축 상에 도시된 바와 같은 작제물 #1-8은 표 10에 개략적으로 제시되어 있다.
도 3a, 3b 및 3c는 CD3/CD28 비드-자극된 CD33 CAR-T 세포와 함께 Nanostring 인간 유전자 패널 코드 세트를 사용하여 >700 개 유전자의 유전자 분석으로부터 수득된 정규화된 절대 전사체 카운트를 도시하는 그래프이다. 도 3a에서, Y-축은 PD-1 및 TIGIT를 표적하는 2 개의 체크포인트 억제제 miRNA를 코딩하는 인트론을 함유하는 CAR-T 세포(CD33 CAR-mbIL15-HER1t + miRNA(PD-1 + TIGIT))로부터의 전사체 카운트를 플롯하고, X-축은 CAR-T 세포 단독(임의의 체크포인트 억제 miRNA를 함유하지 않음)으로부터의 전사체를 플롯한다. 원은 관심 유전자를 표시한다. 도 3b에서, Y-축은 CAR-T 세포를 함유하는 PD-1 miRNA(CD33 CAR-mbIL15-HER1t + miRNA(PD-1 + PD-1))로부터의 전사체 카운트를 플롯하고 X-축은 CAR-T 세포 단독으로부터의 전사체를 플롯한다. 도 3c는 Y-축 상의 비-표적화 miRNA 대조군(CD33 CAR-mbIL15-HER1t + miRNA 스크램블*) 및 X-축 상의 miRNA 함유 인트론이 없는 CAR-T 세포를 플롯한다. 원은 관심 유전자를 표시하고 체크포인트 억제제 miRNA 설계의 표적 특이성을 도시하는 데 사용된다. 3 개 그룹은 모두 하나의 공여자로부터 유래되었다. * 스크램블 대조군은 비-표적화 miRNA이다.
도 4a-c는 CD3/CD28 비드 자극된 MUC16-특이적 CAR-T 세포와 함께 Nanostring 인간 유전자 패널 코드 세트를 사용하여 >700 개 유전자의 유전자 분석으로부터 수득된 정규화된 절대 전사체 카운트를 도시하는 그래프이다. 도 4a에서, Y-축은 PD-1 내의 2 개의 상이한 서열을 표적하는 miRNA를 코딩하는 인트론 및 TIGIT에 대한 서열을 함유하는 CAR-T 세포(MUC16CAR-mbIL15-HER1t(일괄하여 "MUC16CAR"로도 언급됨)+miRNA(PD-1/PD-1/TIGIT))로부터의 전사체 카운트를 플롯하고, X-축은 miRNA-함유 인트론이 없는 CAR-T 세포(MUC16CAR-mbIL15-HER1t)로부터의 전사체를 플롯한다. 검은색 원은 관심 유전자를 표시한다. 도 4b에서, X-축은 동일하고, Y-축은 CAR-T 세포를 함유하는 이중 PD-1 표적화 miRNA(MUC16CAR-mbIL15-HER1t +miRNA(PD-1/PD-1))로부터의 전사체 카운트를 플롯한다. 도 4c는 Y-축 상의 비-표적화 miRNA 대조군(MUC16CAR-mbIL15-HER1t +miRNA(스크램블)) 및 X-축 상의 miRNA-함유 인트론이 없는 CAR-T 세포를 플롯한다. 3 개 그룹은 모두 하나의 공여자로부터 유래된다.
도 5a는 시간 경과에 따른 MUC16을 발현하는 GFP+ K562 세포의 수를 도시하는 그래프이다. 각 시점에서 검은색 원으로 채원진 점이 있는 선은 CAR-T 세포가 없는 웰에서 GFP+ 표적 세포의 수를 나타낸다. 정사각형 열린 포인트가 있는 선은 miRNA-함유 인트론이 없는 MUC16 CAR-mbIL15-HER1t CAR-T 세포, (("CAR-T 세포 함유"))가 있는 웰에서 표적 세포 카운트를 나타낸다. 회색 원으로 채원진 포인트가 있는 선은 합성 인트론과 이중 PD-1 표적화 miRNA를 함유하는 CAR-T 세포(MUC16 CAR-mbIL15-HER1t+ miRNA(PD-1/PD-1)("CAR-T + miRNA 세포 함유")가 있는 웰에서 표적 세포 카운트를 나타낸다. 데이터는 하나의 공여자로부터 유래되며, 삼중 웰의 평균 + SD가 플롯된다. *** P<0.001은 Dunnett의 다중 비교 사후 검정을 사용한 2원 ANOVA를 기반으로 한다.
도 5b는 시간 경과에 따른 GFP+ K562/MUC16+/PD-L1+/CD155+ 세포의 수를 도시하는 그래프이다. 각 시점에서 정사각형으로 채원진 점이 있는 선은 웰에서 GFP+ 표적 세포 단독의 수를 나타낸다. 열린 원 포인트가 있는 선은 miRNA-함유 인트론이 없는 MUC16-특이적 CAR-T 세포(MUC16 CAR-mbIL15-HER1t(CAR-T 세포 함유))가 있는 웰에서 표적 세포 카운트를 나타낸다. 열린 원으로 채워진 포인트가 있는 선은 합성 인트론과 이중 PD-1 및 TIGIT 표적화 miRNA를 함유하는 CAR-T 세포(MUC16CAR-mbIL15-HER1t +miRNA(PD-1/PD-1/TIGIT)(CAR-T + miRNA 세포 함유))가 있는 웰에서 표적 세포 카운트를 나타낸다. 데이터는 하나의 공여자로부터 유래되며, 삼중 웰의 평균 + SD가 플롯된다.
도 6a-b는 종양 표적 세포(K562/MUC16t)와 공배양 후 하나 이상의 체크포인트 억제제 miRNA의 조합을 갖는 MUC16 CAR-T 세포에서 IFN 감마 및 GM-CSF의 사이토카인 발현 수준을 도시한다. 도 6c-d는 종양 표적 세포와 공배양 없이 하나 이상의 체크포인트 억제제 miRNA의 조합을 갖는 MUC16 CAR-T 세포에서 IFN 감마 및 GM-CSF의 사이토카인 발현 수준을 도시한다. X-축 상에 도시된 바와 같은 작제물 # 1-11은 표 11에 개략적으로 제시된 바와 같다.
도 7은 다양한 miRNA와 조합된 MUC16 CAR+mbIL-15+HER1t("MUC16 CAR"으로 제시됨)로 처리된 마우스에서의 종양 부담을 도시한다.
도 8a는 MUC16CAR+mbIL15+HER1t(CAR 단독) 및 MUC16CAR+mbIL15+HER1t+miRNA(PD1/PD-1)(CAR+miRNA(PD-1/PD-1)) 처리된 마우스의 혈액에서 hCD45/CD3+/HER1t+ 발현을 게이팅한 후 세포 집단에서 PD-1 수준을 입증한다. 도 8b는 CAR 및 CAR+miRNA(PD-1/PD-1) 처리된 마우스에서 중간 형광 강도(MFI)에 의해 측정된 바와 같은 PD-1 수준을 도시한다.
도 9a 및 9b는 다양한 CAR 및 CAR+miRNA 처리된 마우스의 혈액에서 hCD45/CD3+/HER1t+ 발현을 게이팅한 후 세포 집단에서 PD-1 및 TIGIT MFI 수준을 입증한다. X-축 상에 도시된 바와 같은 그룹 # 1-9는 표 12에 개략적으로 제시된 바와 같다.
도 10a는 PD1 사일런서 모듈(silencer module)이 가이드 miRNA를 생산하고 5 개의 T 세포 공여자로부터 생성된 UltraCAR-T 세포에서 PD1 mRNA 발현의 상응하는 감소를 생산함을 입증한다. PD1-표적화 가이드 miRNA의 RT-qPCR 결과가 도시되어 있다.
도 10b는 PD1 사일런서 모듈이 가이드 miRNA를 생산하고 5 개의 T 세포 공여자로부터 생성된 ultraCAR-T 세포에서 PD1 mRNA 발현의 상응하는 감소를 생산함을 입증한다. PD1 mRNA의 RT-qPCR 결과가 도시되어 있다.
도 11은 PD1 침묵 모듈(silencing module)이 비-표적화 패신저(passenger) miRNA에 비해 PD1-표적화 가이드 miRNA를 우선적으로 생산함을 입증한다.
도 12a-e는 가이드 miRNA가 PD1 사일런서 모듈로부터 기원하는 우세한 작은 RNA 종임을 입증한다.
도 13은 전체 small RNAseq 판독의 백분율로서 PD1 사일런서 모듈에 맵핑하는 성숙 miRNA의 정량화를 도시한다.
도 14a 및 b는 ROR1 UltraCAR-T 대조군 세포와 비교하여 ROR1+PD1 사일런서 세포에서 차등 유전자 발현을 도시한다.
도 15a-d는 전사체 로그 배수 변화에 대한 예측된 miRNA 결합 강도의 비교를 도시한다.
도 16은 본 개시내용의 유전적 작제물에 대한 예시적인 체계를 제공한다.
도 17은 본 개시내용의 경로 및 요소의 개략도를 제공한다.
도 18은 본 개시내용의 치료 레지멘이 진행될 수 있는 경로의 예를 제공한다.
도 19는 본 개시내용의 추가 구현예의 표시를 제공한다.
도 20은 본 개시내용의 추가 구현예의 표시를 제공한다.
하기 설명 및 예는 본 개시내용의 구현예를 상세하게 예시한다.
본 개시내용은 본원에 기재된 특정 구현예에 제한되지 않고 이와 같이 변경될 수 있음이 이해되어야 한다. 당업자는 본 발명의 범위 내에 포함되는, 본 개시내용의 변경 및 변형이 있음을 인식할 것이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 개시내용이 속하는 분야의 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
본원에 사용되는 섹션 제목은 구성적 목적만을 위한 것이고 기재된 주제를 제한하려는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 개시내용의 다양한 특징은 단일 구현예의 맥락에서 기재될 수 있지만, 특징은 또한 별도로 또는 임의의 적합한 조합으로 제공될 수 있다. 역으로, 본 개시내용은 명확성을 위해 별개의 구현예의 맥락에서 본원에 기재될 수 있지만, 본 개시내용은 또한 단일 구현예로 구현될 수 있다.
하기 정의는 기술 분야의 정의를 보완하고 현재 출원에 관한 것이며 예를 들어, 임의의 공동 소유의 특허 또는 출원에 임의의 관련되거나 관련되지 않은 경우에 귀속되지 않는다. 본원에 사용되는 전문용어는 단지 특정 구현예를 설명하려는 목적을 위한 것이며, 제한하려는 것으로 의도되지 않는다.
I. 정의
본 출원에서, 단수의 사용은 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 복수를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 명확하게 달리 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.
본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "및/또는" 및 "이의 임의의 조합" 및 그들의 문법적 등가물은 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 이들 용어는 임의의 조합이 구체적으로 고려됨을 전달할 수 있다. 단지 예시적 목적으로, 다음 어구 "A, B, 및/또는 C" 또는 "A, B, C, 또는 이의 임의의 조합"은 "A 개별적으로; B 개별적으로; C 개별적으로; A 및 B; B 및 C; A 및 C; 및 A, B, 및 C를 의미할 수 있다." 용어 "또는"은 문맥이 구체적으로 분리적 용법을 지칭하지 않는 한, 결합적으로 또는 분리적으로 사용될 수 있다.
또한, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라 다른 형태, 예컨대 "포함하다," "포함한다," 및 "포함된"의 사용은 제한되지 않는다.
명세서에서 "일부 구현예," "구현예," "하나의 구현예" 또는 "다른 구현예"에 대한 언급은 구현예와 관련하여 기재된 특정 특징, 구조, 또는 특성이 본 개시내용의 적어도 일부 구현예에 포함되지만, 모든 구현예가 반드시 그런 것은 아님을 의미한다.
본 명세서 및 청구범위(들)에 사용된 바와 같이, 단어 "포함하는"(및 포함하는의 임의의 형태, 예컨대 "포함하다" 및 "포함한다"), "갖는"(및 갖는의 임의의 형태, 예컨대 "갖다" 및 "갖는다"), "포함하는"(및 포함하는의 임의의 형태, 예컨대 "포함한다" 및 "포함하다") 또는 "함유하는"(및 함유하는의 임의의 형태, 예컨대 "함유한다" 및 "함유하다")은 포괄적이거나 개방형이고 추가의 언급되지 않은 요소 또는 방법 단계를 제외하지 않는다. 본 명세서에서 논의된 임의의 구현예는 개시내용의 임의의 방법 또는 조성물과 관련하여 구현될 수 있고, 그 반대도 가능함이 고려된다. 또한, 본 개시내용의 조성물은 본 개시내용의 방법을 달성하는 데 사용될 수 있다.
용어 "약" 또는 "대략"은 당업자에 의해 결정된 바와 같은 특정 값에 대한 허용가능한 오차 범위 이내를 의미하며, 부분적으로 값이 측정되거나 결정되는 방식, 즉, 측정 시스템의 한계에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, "약"은 관련 기술분야의 관행에 따라, 1 또는 1 초과의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약"은 주어진 값의 최대 20%, 최대 10%, 최대 5%, 또는 최대 1%의 범위를 의미할 수 있다. 또 다른 예에서, "약 10"의 양은 10 및 9 내지 11의 임의의 양을 포함한다. 또 다른 예에서, 참조 수치 값과 관련하여 용어 "약"은 또한 해당 값으로부터 플러스 또는 마이너스 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 값의 범위를 포함할 수 있다. 대안적으로, 특히 생물학적 시스템 또는 과정과 관련하여, 용어 "약"은 값의 자릿수 이내, 바람직하게는 5-배 이내, 보다 바람직하게는 2-배 이내를 의미할 수 있다. 특정 값이 출원 및 청구범위에 기재되어 있는 경우, 달리 명시되지 않는 한 용어 "약"은 특정 값에 대한 허용가능한 오차 범위 내를 의미하는 것으로 가정되어야 한다.
"치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 용량"은 원하는 치료 결과를 달성하기 위해 필요한 기간 동안 효과적인 양 또는 용량을 지칭한다. 양은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 도출하는 본 발명의 핵산 서열의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다.
"폴리뉴클레오티드" 또는 "올리고뉴클레오티드"는 임의의 길이의 뉴클레오티드 또는 핵산의 중합체성 형태인 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드를 지칭한다. 이 용어는 분자의 기본 구조만을 지칭한다. 따라서, 이 용어는 이중 및 단일 가닥 DNA, 삼중 DNA, 뿐만 아니라 이중 및 단일 가닥 RNA를 포함한다. 또한 예를 들어, 폴리뉴클레오티드의 메틸화 및/또는 캡핑에 의해 변형된 형태, 및 비변형된 형태를 포함한다. 용어는 또한 비-자연 발생 또는 합성 뉴클레오티드 뿐만 아니라 뉴클레오티드 유사체를 포함하는 분자를 포함하는 것을 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 본 명세서의 본문에서 핵산 서열은 왼쪽에서 오른쪽으로 읽을 때 5'에서 3' 방향으로 주어진다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "형질감염," "형질전환," "뉴클레오펙션," 또는 "형질도입"은 하나 이상의 외인성 폴리뉴클레오티드를 물리적, 화학적, 및/또는 전기적 방법을 사용함으로써 숙주 세포 또는 유기체로 도입하는 것을 지칭한다. 본원에 개시된 핵산 서열 및 벡터는 예를 들어, 전기천공, 인산칼슘 공침전, 스트론튬 포스페이트 DNA 공침전, 리포솜 매개-형질감염, DEAE 덱스트란 매개-형질감염, 다양이온성 매개-형질감염, 텅스텐 입자-촉진 미립자 충격, 바이러스, 및/또는 비바이러스 매개 형질감염에 의한 것을 포함하여, 임의의 이러한 방법에 의해 세포 또는 유기체로 도입될 수 있다. 일부 경우에, 핵산을 세포 또는 유기체로 도입하는 방법은 바이러스, 레트로바이러스, 렌티바이러스, 또는 트랜스포존, 또는 전이가능한 요소-매개(예를 들어, 잠자는 숲속의 미녀) 벡터의 사용을 수반한다.
본원에 사용된 바와 같은 "폴리펩티드," "펩티드," 및 그들의 문법적 등가물은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭한다. 폴리펩티드는 임의적으로 주어진 세포 환경에서 주어진 단백질에 전형적인 글리코실화 또는 다른 변형을 포함할 수 있다. 본원에 개시된 폴리펩티드 및 단백질(이의 기능적 단편 및 기능적 변이체 포함)은 하나 이상의 자연 발생 아미노산 대신에 합성 아미노산을 포함할 수 있다. 이러한 합성 아미노산은 당업계에 알려져 있고, 예를 들어, 아미노사이클로헥산 카르복실산, 노르류신, α-아미노 n-데칸산, 호모세린, S-아세틸아미노메틸-시스테인, 트랜스-3- 및 트랜스-4-하이드록시프롤린, 4-아미노페닐알라닌, 4-니트로페닐알라닌, 4-클로로페닐알라닌, 4-카르복시페닐알라닌, β-페닐세린 β-하이드록시페닐알라닌, 페닐글리신, α-나프틸알라닌, 사이클로헥실알라닌, 사이클로헥실글리신, 인돌린-2-카르복실산, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-3-카르복실산, 아미노말론산, 아미노말론산 모노아미드, N'-벤질-N'-메틸-리신, N',N'-디벤질-리신, 6-하이드록시리신, 오르니틴, α-아미노사이클로펜탄 카르복실산, α-아미노사이클로헥산 카르복실산, α-아미노사이클로헵탄 카르복실산, α-(2-아미노-2-노르보르난)-카르복실산, α,γ-디아미노부티르산, α,β-디아미노프로피온산, 호모페닐알라닌, 및 α-tert-부틸글리신을 포함한다. 본 개시내용은 조작된 세포에서 본원에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질의 발현이 폴리펩티드 또는 단백질의 하나 이상의 아미노산의 번역후 변형과 연관될 수 있음을 추가로 고려한다. 번역후 변형의 비제한적인 예는 인산화, 아세틸화 및 포름일화를 포함하는 아실화, 글리코실화(N-연결 및 O-연결 포함), 아미드화, 하이드록실화, 메틸화 및 에틸화를 포함하는 알킬화, 유비퀴틴화, 피롤리돈 카르복실산의 첨가, 이황화 가교의 형성, 황산화, 미리스토일화, 팔미토일화, 이소프레닐화, 파르네실화, 게라닐화, 글리피화, 리포일화 및 요오드화를 포함한다.
용어 "보존적 아미노산 치환" 또는 "보존적 돌연변이"는 하나의 아미노산을 공통 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 대체하는 것을 지칭한다. 개별 아미노산 사이의 공통 특성을 정의하는 기능적 방식은 상동 유기체의 상응하는 단백질 사이의 아미노산 변화의 정규화된 빈도를 분석하는 것이다(Schulz, G. E. and Schirmer, R. H., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York(1979)). 이러한 분석에 따르면, 그룹 내의 아미노산이 서로 우선적으로 교환되고, 따라서 전반적인 단백질 구조에 대한 그들의 영향이 서로 가장 유사한 아미노산 그룹이 정의될 수 있다(Schulz, G. E. and Schirmer, R. H., 상기). 보존적 돌연변이의 예는 하기 하위 그룹 내의 아미노산의 아미노산 치환, 예를 들어, 아르기닌을 리신으로 치환 및 양전하가 유지될 수 있도록 그 반대도 가능; 아스파르트산을 글루탐산으로 치환 및 음전하가 유지될 수 있도록 그 반대도 가능; 유리 -OH가 유지될 수 있도록 트레오닌을 세린으로 치환; 및 유리 -NH2가 유지될 수 있도록 아스파라긴을 글루타민으로 치환을 포함한다. 예시적인 보존적 아미노산 치환은 하기 차트에 제시되어 있다:
보존적 아미노산 치환에 의해서만 참조 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열은 본원에서 참조 서열의 "보존적으로-치환된 변이체"로 언급될 것이다.
일부 구현예에서, 기능적 변이체는 적어도 하나의 비-보존적 아미노산 치환을 갖는 참조 단백질의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 용어 "비-보존적 돌연변이"는 상이한 그룹 사이의 아미노산 치환, 예를 들어, 트립토판을 리신으로 치환, 또는 세린을 페닐알라닌으로 치환 등을 수반한다. 이 경우, 기능적 변이체의 생물학적 활성을 방해하거나 억제하지 않는 비-보존적 아미노산 치환이 바람직하다. 비-보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성을 향상시킬 수 있어, 기능적 변이체의 생물학적 활성이 상동 모체 단백질과 비교하여 증가되도록 한다. 아미노산 치환성은 예를 들어, L. Y. Yampolsky and A. Stoltzfus, "The Exchangeability of Amino acids in Proteins," Genetics 2005 Aug.; 170(4):1459-1472에 보다 상세하게 논의되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "동일한" 및 그의 문법적 등가물 또는 폴리펩티드의 2 개의 핵산 서열 또는 아미노산 서열의 맥락에서 "서열 동일성"은 명시된 비교 창에 걸쳐 최대 상응도에 대해 정렬될 때 동일한 두 서열에서의 잔기를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 "비교 창"은 두 서열이 최적으로 정렬된 후 서열이 인접한 위치의 동일한 수의 참조 서열과 비교될 수 있는 적어도 약 20 개의 인접한 위치, 일반적으로 약 50 내지 약 200 개, 보다 일반적으로 약 100 내지 약 150 개의 분절을 지칭한다. 비교를 위한 서열 정렬 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 비교를 위한 최적 서열 정렬은 Smith and Waterman, Adv. Appl. Math., 2:482(1981)의 국소 상동성 알고리즘; Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol., 48:443(1970)의 정렬 알고리즘; Pearson and Lipman, Proc. Nat. Acad. Sci U.S.A., 85:2444(1988)의 유사성 검색 방법; 이들 알고리즘의 계산된 구현(캘리포니아주 마운티뷰 소재의 Intelligentics의 PC/Gene 프로그램에서 CLUSTAL, 미국 위스콘신주 매디슨 575 사이언스 드라이브 소재의 Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group(GCG)의 GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA, 및 TFASTA를 포함하나 이에 제한되지 않음)에 의해 수행될 수 있으며; CLUSTAL 프로그램은 Higgins and Sharp, Gene, 73:237-244(1988) 및 Higgins and Sharp, CABIOS, 5:151-153(1989); Corpet 등, Nucleic Acids Res., 16:10881-10890(1988); Huang 등, Computer Applications in the Biosciences, 8:155-165(1992); 및 Pearson 등, Methods in Molecular Biology, 24:307-331(1994)에 의해 잘 기재되어 있다. 정렬은 또한 검사 및 수동 정렬에 의해 수행된다. 한 부류의 구현예에서, 본원의 폴리펩티드는 예를 들어, 기본 매개변수를 사용하여 BLASTP(또는 CLUSTAL, 또는 임의의 다른 이용가능한 정렬 소프트웨어)에 의해 측정될 때, 참조 폴리펩티드(즉, 이의 전장), 또는 이의 단편과 적어도 80%, 85%, 90%, 98% 99% 또는 100% 동일하다. 유사하게, 핵산은 또한 출발 핵산과 관련하여 기재될 수 있으며, 예를 들어, 그들은 예를 들어, 기본 매개변수를 사용하여 BLASTN(또는 CLUSTAL, 또는 임의의 다른 이용가능한 정렬 소프트웨어)에 의해 측정될 때, 참조 핵산(즉, 이의 전장) 또는 이의 단편과 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 98%, 99% 또는 100% 동일할 수 있다. 하나의 분자가 더 큰 분자와 일정 백분율의 서열 동일성을 갖는다고 하는 경우, 2 개의 분자가 최적으로 정렬될 때, 더 작은 분자에서 잔기의 백분율이 2 개의 분자가 최적으로 정렬되는 순서에 따라 더 큰 분자에서 일치하는 잔기를 찾는다는 것을 의미한다.
본 명세서 및 청구범위의 목적을 위해, 참조 서열과 "적어도 50% 동일성을 갖는"이라는 어구, 또는 그 안의 임의의 범위를 언급하는 것(예를 들어, "와 적어도 80% 서열 동일성")은 참조 서열 자체를 포함하는 것으로 이해된다. 따라서, 예를 들어, "서열번호: 0과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 핵산"을 인용하는 청구범위는 서열번호: 0 자체를 포함한다.
핵산 또는 아미노산 서열에 적용되는 바와 같은 용어 "실질적으로 동일한" 및 그의 문법적 등가물은 핵산 또는 아미노산 서열이 표준 매개변수를 사용하는 상기 기재된 프로그램, 예를 들어, BLAST를 사용하여 참조 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함함을 의미한다.
"상동성"은 일반적으로 2 개 이상의 핵산 또는 단백질(또는 이의 서열) 사이의 서열 동일성으로부터 추론된다. 상동성을 확립하는 데 유용한 서열 사이의 동일성의 정확한 백분율은 문제가 되는 핵산 및 단백질에 따라 달라지지만, 25% 정도의 서열 동일성이 상동성을 확립하는 데 일상적으로 사용된다. 더 높은 수준의 서열 동일성, 예를 들어, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 이상이 또한 상동성을 확립하는 데 사용될 수 있다. 서열 동일성 백분율을 결정하는 방법(예를 들어, 기본 매개변수를 사용하는 BLASTP 및 BLASTN)이 본원에 기재되어 있고 일반적으로 이용가능하다. 핵산 및/또는 핵산 서열은 공통 조상 핵산 또는 핵산 서열로부터 자연적으로 또는 인공적으로 유래될 때 "상동"이다. 단백질 및/또는 단백질 서열은 그들의 암호화 DNA가 공통 조상 핵산 또는 핵산 서열로부터 자연적으로 또는 인공적으로 유래될 때 "상동"이다. 상동 분자는 "상동체"로 명명될 수 있다. 예를 들어, 임의의 자연 발생 단백질은 임의의 이용가능한 돌연변이생성 방법에 의해 변형될 수 있다. 발현될 때, 이 돌연변이화된 핵산은 원래 핵산에 의해 암호화된 단백질에 상동인 폴리펩티드를 암호화한다.
또한 개시된 서열에 혼성화하는 핵산 분자가 본원에서 고려되고 포함된다. 혼성화 조건은 보증된 바와 같이, 온화하거나, 중간정도이거나, 엄격할 수 있다.
DNA 혼성화를 촉진하는 적절한 엄격성 조건, 예를 들어, 약 45℃에서 6x 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC), 이어서 50℃에서 2x SSC로 세척은 알려져 있거나 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y.(1989), 6.3.1-6.3.6에서 찾을 수 있다. "엄격한 혼성화 조건"은 4 내지 12 시간 동안 37℃의 온도에서 50% 포름아미드 중 1.0 M NaCl의 염 농도, 이어서 60-65℃에서 0.1X SSC로 세척을 포함하는 것이다.
숙련자에 의해 이해되는 바와 같이, 핵산 서열의 약간의 변화가 암호화된 폴리펩티드의 아미노산 서열을 반드시 변경하지는 않는다. 본 개시내용은 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 코돈 용법의 축퇴성을 포괄한다. 예를 들어, 당업계에서 알려진 바와 같이, 상이한 코돈은 하기 차트에 예시된 것과 동일한 아미노산을 코딩할 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "코돈 퇴화 변이체"는 핵산 서열과 관련하여 사용될 때 참조 서열과 상이하지만, 참조 서열에 의해 암호화된 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열을 의미한다.
추가로, 부분 서열은 종종 전장 버전만큼 효과적으로 작동한다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 뉴클레오티드 서열이 변경되거나 단축될 수 있는 방식은 변경된 유전자의 적합성 또는 유효성을 테스트하는 방식과 같이, 당업자에게 잘 알려져 있다. 특정 구현예에서, 변경된 유전자의 적합성 및/또는 유효성은 예를 들어, 통상적인 기체 크로마토그래피에 의해 용이하게 테스트될 수 있다. 따라서 유전자의 이러한 변경은 모두 본 개시내용의 일부로서 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "단리된" 및 그의 문법적 등가물은 자연 환경으로부터 핵산을 제거하는 것을 지칭한다. 그러나, 핵산 및 단백질은 희석제 또는 애쥬번트(adjuvants)로 제형화될 수 있고 여전히 실용적 목적을 위해 단리될 수 있음이 이해되어야 한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "정제된" 및 그의 문법적 등가물은 자연으로부터 제거(게놈 DNA 및 mRNA 포함) 또는 합성(cDNA 포함) 및/또는 실험실 조건 하에 증폭되든, 순도가 증가된 분자 또는 조성물을 지칭하며, 여기서 "순도"는 "절대 순도"가 아니라 상대적 용어이다. 예를 들어, 핵산은 전형적으로 세포로 도입하기 위해 사용될 때 허용되는 담체 또는 희석제와 혼합된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "실질적으로 정제된" 및 그의 문법적 등가물은 본질적으로 없는 핵산 서열, 폴리펩티드, 단백질 또는 다른 화합물을 지칭하며, 즉, 핵산, 폴리펩티드, 단백질 또는 다른 화합물이 자연적으로 연관되는 폴리뉴클레오티드, 단백질, 폴리펩티드 및 다른 분자의 약 50% 초과가 없거나, 약 70% 초과가 없거나, 약 90% 초과가 없다.
본원에 사용된 바와 같은 "T 세포" 또는 "T 림프구"는 세포 매개 면역에서 중심 역할을 하는 림프구 유형이다. 그들은 세포 표면 상의 T-세포 수용체(TCR)의 존재에 의해 B 세포 및 자연 살해 세포(NK 세포)와 같은 다른 림프구와 구별될 수 있다.
"트랜스포존," "전이가능한 요소" 또는 "TE"는 게놈 내에서 위치를 바꿀 수 있는 벡터 DNA 서열을 지칭하며, 때때로 돌연변이를 생성하거나 역전시키고 세포의 게놈 크기를 변경한다. 전위(Transposition)는 종종 트랜스포존의 복제를 초래한다. 클래스 I 트랜스포존은 2 단계로 복제된다: 먼저, DNA에서 RNA로 전사된 다음, 생성된 RNA는 DNA로 역 전사된다. 그런 다음 이 복사된 DNA는 새로운 위치에서 게놈으로 삽입된다. 역 전사 단계는 트랜스포존 자체에 의해 암호화될 수 있는 역 전사효소에 의해 촉매된다. 레트로트랜스포존의 특성은 HIV와 같은 레트로바이러스와 유사하다. 클래스 II 트랜스포존의 절단 및 붙이기(cut-and-paste) 전위 메커니즘은 RNA 중간체를 수반하지 않는다. 전위는 여러 트랜스포사제 효소에 의해 촉매된다. 일부 트랜스포사제는 DNA 내의 임의의 표적 부위에 비특이적으로 결합하는 반면, 다른 것은 특이적 DNA 서열 표적에 결합한다. 트랜스포사제는 표적 부위에서 엇갈린 절단을 만들어 단일 가닥 5' 또는 3' DNA 행오버(점착 말단)를 생성한다. 이 단계는 DNA 트랜스포존을 절단한 다음, 새로운 표적 부위로 결찰되며; 이 과정은 갭을 채우는 DNA 폴리머라제의 활성 및 당-포스페이트 백본을 닫는 DNA 리가제의 활성을 수반한다. 이것은 표적 부위의 복제를 초래한다. DNA 트랜스포존의 삽입 부위는 표적 DNA에서 엇갈린 절단 및 DNA 폴리머라제에 의한 채움에 의해 생성될 수 있는 짧은 직접 반복부, 이어서 트랜스포사제에 의한 트랜스포존 절제에 중요한 일련의 도립된 반복부에 의해 식별될 수 있다. 절단 및 붙이기 트랜스포존은 공여자 부위가 이미 복제되었지만, 표적 부위가 아직 복제되지 않았을 때 그들의 전위가 세포 주기의 S 단계 동안 발생하는 경우 복제될 수 있다. 전위는 클래스 I 및 클래스 II 트랜스포존 둘 다에서 "자율적" 또는 "비-자율적"으로 분류될 수 있다. 자율적 트랜스포존은 스스로 움직일 수 있는 반면 비-자율적 트랜스포존은 움직이기 위해 또 다른 트랜스포존의 존재를 필요로 한다. 이것은 종종 비-자율적 트랜스포존이 트랜스포사제(클래스 II의 경우) 또는 역 전사효소(클래스 I의 경우)가 없기 때문이다.
"트랜스포사제"는 트랜스포존의 말단에 결합하고 절단 및 붙이기 메커니즘 또는 복제 전위 메커니즘에 의해 게놈의 또 다른 부분으로 트랜스포존의 이동을 촉매하는 효소를 지칭한다. 일부 구현예에서, 트랜스포사제의 촉매 활성은 유전자(들)를 벡터에서 게놈으로 이동시키는 데 활용될 수 있다.
"발현 벡터" 또는 "벡터"는 세포 내에서 폴리뉴클레오티드 복제의 자율적 단위로서 행동하거나. (즉 자체 제어 하에 복제할 수 있음) 또 다른 폴리뉴클레오티드 분절에 부착되어, 부착된 분절의 복제 및/또는 발현을 유발하기 위해 숙주 세포 염색체로 삽입하여 복제할 수 있게 하는, 임의의 유전적 요소, 예를 들어, 플라스미드, 미니-서클(mini-circle), 나노플라스미드, 염색체, 바이러스, 트랜스포존이다. 적합한 벡터는 플라스미드, 트랜스포존, 박테리오파지 및 코스미드(cosmid)를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 벡터는 원하는 숙주 세포로 벡터의 결찰 또는 삽입에 영향을 미치고 부착된 분절의 발현에 영향을 미치는 데 필요한 폴리뉴클레오티드 서열을 함유할 수 있다. 이러한 서열은 숙주 유기체에 따라 상이하며; 그들은 전사에 영향을 미치는 프로모터 서열, 전사를 증가시키는 인핸서 서열, 리보솜 결합 부위 서열 및 전사 및 번역 종결 서열을 포함한다. 대안적으로, 발현 벡터는 숙주 세포 DNA 서열로 벡터의 결찰 또는 통합 없이 그 안에 암호화된 핵산 서열 생성물을 직접 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 "에피솜 발현 벡터" 또는 "에피솜"이며, 이는 숙주 세포에서 복제할 수 있고, 적절한 선택 압력의 존재 하에 숙주 세포 내에서 DNA의 염색체외 분절로서 지속된다(예를 들어, Conese 등, Gene Therapy, 11:1735-1742(2004) 참조). 대표적인 상업적으로 이용가능한 에피솜 발현 벡터는 엡스타인 바 핵 항원 1(EBNA1) 및 엡스타인 바 바이러스(EBV) 복제 기점(oriP)을 활용하는 에피솜 플라스미드를 포함하나 이에 제한되지 않는다. Invitrogen(캘리포니아주 칼즈배드)의 벡터 pREP4, pCEP4, pREP7, 및 pcDNA3.1 및 Stratagene(캘리포니아주 라호이아)의 pBK-CMV는 EBNA1 및 oriP 대신에 T-항원 및 SV40 복제 기점을 사용하는 에피솜 베터의 비제한적인 예를 나타낸다. 벡터는 또한 선택가능한 마커 유전자를 포함할 수 있다. 나노 플라스미드가 활용되는 특정 구현예에서, 안티센스 RNA 선택 마커(예를 들어 수크로스 내성)를 활용하는 R6K와 같은 균주가 사용될 수 있다.
용어 "선택가능한 마커 유전자"는 핵산 서열을 발현하는 세포가 상응하는 선택제의 존재 하에 특이적으로 선택되도록 하는 핵산 서열을 지칭한다. 적합한 선택가능한 마커 유전자는 당업계에 알려져 있으며 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 1992/08796 및 WO 1994/28143; Wigler 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 3567(1980); O'Hare 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 1527(1981); Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 2072(1981); Colberre-Garapin 등, J. Mol. Biol., 150:1(1981); Santerre 등, Gene, 30: 147(1984); Kent 등, Science, 237: 901-903(1987); Wigler 등, Cell, 11: 223(1977); Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48: 2026(1962); Lowy 등, Cell, 22: 817(1980); 및 미국 특허 번호 5,122,464 및 5,770,359에 기재되어 있다.
용어 "코딩 서열"은 단백질 또는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 분절을 지칭한다. 영역 또는 서열은 시작 코돈에 의해 5' 단부에 더 가깝게 결합되고 정지 코돈으로 3' 단부에 더 가깝게 결합된다. 코딩 서열은 또한 오픈 리딩 프레임(open reading frame)으로 언급될 수 있다.
용어 "작동가능하게 연결된"은 분절이 의도된 방식으로 기능하게 하는 방식으로 DNA 분절을 또 다른 DNA 분절에 물리적 및/또는 기능적 연결하는 것을 지칭하는 것을 지칭한다. 유전자 산물을 암호화하는 DNA 서열은 예를 들어, 프로모터, 인핸서 및/또는 사일런서와 같은 조절 서열에 연결될 때 직접적으로 또는 간접적으로 DNA 서열의 전사 조절을 허용하는 방식으로 조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 예를 들어, DNA 서열은 DNA 서열을 통해 전사 신장이 진행되도록 하기 위해 프로모터의 전사 개시 부위와 관련하여 프로모터 하류 및 전사 개시 부위와 관련하여 올바른 리딩 프레임에서 결찰될 때 프로모터에 작동가능하게 연결된다. 인핸서(enhancer) 또는 사일런서는 DNA 서열에 결찰될 때 DNA 서열의 전사를 각각 증가시키거나 감소시키는 방식으로 유전자 산물을 코딩하는 DNA 서열에 작동가능하게 연결된다. 인핸서 및 사일런서는 DNA 서열의 코딩 영역의 상류 또는 하류에 위치하거나 그 안에 내포될 수 있다. 신호 서열에 대한 DNA는 신호 서열이 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전구단백질(pre-protein)로서 발현되는 경우 폴리펩티드를 코딩하는 DNA에 작동가능하게 연결된다. 조절 서열에 DNA 서열의 연결은 전형적으로 적합한 제한 부위에서 결찰에 의해 또는 당업자에게 알려진 제한 엔도뉴클레아제를 사용하여 서열에 삽입된 어댑터 또는 링커를 통해 달성된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "유도하다," "유도" 및 그들의 문법적 등가물은 전사의 일부 기본 수준에 비해, 전사 조절인자에 의해 유발된 핵산 서열 전사, 프로모터 활성 및/또는 발현의 증가를 지칭한다.
용어 "전사 조절인자"는 특정 환경적 조건 하에 프로모터-구동된 DNA 서열의 전사를 방지 또는 억제하거나(예를 들어, 억제자 또는 핵 억제 단백질), 특정 환경적 조건 하에 프로모터-구동된 DNA 서열의 전사를 허용 또는 자극하도록(예를 들어, 유도인자 또는 인핸서) 작용하는 생화학적 요소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인핸서"는 예를 들어, 작동가능하게 연결된 핵산 서열의 전사를 증가시키는 DNA 서열을 지칭한다. 인핸서는 핵산 서열의 코딩 영역으로부터 수 킬로베이스 떨어져 위치할 수 있고 조절 인자의 결합, DNA 메틸화 패턴, 또는 DNA 구조의 변화를 매개할 수 있다. 다양한 상이한 종으로부터의 많은 수의 인핸서가 당업계에 잘 알려져 있으며 클로닝된 폴리뉴클레오티드(예를 들어, ATCC와 같은 기탁소 뿐만 아니라 다른 상업적 또는 개인적 공급처로부터 유래)로서 또는 그 안에서 이용가능하다. 프로모터(예컨대 통상적으로 사용되는 CMV 프로모터)를 포함하는 다수의 폴리뉴클레오티드는 또한 인핸서 서열을 포함한다. 인핸서는 코딩 서열의 상류 또는 하류 또는 코딩 서열 내에 위치할 수 있다. 용어 "Ig 인핸서"는 면역글로불린(Ig) 유전자좌 내에 맵핑된 인핸서 영역으로부터 유래된 인핸선 요소를 지칭한다(이러한 인핸서는 예를 들어, 중쇄(뮤) 5' 인핸서, 경쇄(카파) 5' 인핸서, 카파 및 뮤 인트론 인핸서, 및 3' 인핸서를 포함한다(일반적으로 Paul W. E.(ed), Fundamental Immunology, 3rd Edition, Raven Press, New York(1993), 353-363 페이지; 및 미국 특허 번호 5,885,827 참조).
용어 "프로모터"는 코딩 서열의 전사를 개시하는 폴리뉴클레오티드의 영역을 지칭한다. 프로모터는 유전자의 전사 시작 부위 근처, 동일한 가닥 및 DNA의 상류(센스 가닥의 5' 영역 방향)에 위치한다. 일부 프로모터는 세포의 모든 환경에서 활성이므로 구성적이지만, 다른 것들, 예를 들어 유도성 프로모터는 특이적 자극에 반응하여 활성이 되도록 조절된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "프로모터 활성" 및 그의 문법적 등가물은 활성이 측정되는 프로모터에 작동가능하게 연결된 뉴클레오티드 서열의 발현 정도를 지칭한다. 프로모터 활성은 예를 들어 노던 블롯(Northern blot) 분석에 의해 생성된 RNA 전사체의 양을 결정함으로써 직접적으로 또는 프로모터에 연결된 리포터 핵산 서열과 같은 연결된 핵산 서열에 의해 코딩되는 생성물의 양을 결정함으로써 간접적으로 측정될 수 있다.
"유도성 프로모터"는 전사 조절인자, 예를 들어, 생물적 또는 비생물적 인자의 존재 또는 부재에 의해 활성으로 유도되는 프로모터를 지칭한다. 유도성 프로모터는 이들에 작동가능하게 연결된 유전자의 발현이 유기체의 특정 발달 단계에서 또는 특정 조직에서 켜지거나 꺼질 수 있기 때문에 유용하다. 유도성 프로모터의 비제한적인 예는 알코올-조절 프로모터, 테트라사이클린-조절 프로모터, 스테로이드-조절 프로모터, 금속-조절 프로모터, 발병기전-조절 프로모터, 온도-조절 프로모터 및 빛-조절 프로모터를 포함한다. 유도성 프로모터는 유전자 스위치 또는 유전적 스위치의 일부일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "T 세포" 또는 "T 림프구"는 세포 매개 면역에서 중심 역할을 하는 림프구 유형이다. 그들은 세포 표면 상에서 T-세포 수용체(TCR)의 존재에 의해, B 세포 및 자연 살해 세포(NK 세포)와 같은 다른 림프구와 구별될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "기능적 단편"은 폴리펩티드와 관련하여 사용될 때 참조 폴리펩티드의 주된 기능을 보유하는 이러한 폴리펩티드의 단편을 지칭한다. 예를 들어, 막관통 도메인으로서 작용하는 폴리펩티드의 기능적 단편은 막관통 도메인으로서도 작용하는 해당 폴리펩티드의 단편이다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드의 기능적 단편은 참조 폴리펩티드보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 핵산과 관련하여 사용될 때, 어구 "기능적 단편"은 참조 핵산에 의해 암호화된 폴리펩티드와 동일한 주된 기능을 갖는 폴리펩티드를 암호화하는 참조 핵산의 단편을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "기능적 변이체"는 폴리펩티드와 관련하여 사용될 때 참조 폴리펩티드와 상이하지만 참조 폴리펩티드의 주된 기능을 보유하는 폴리펩티드를 지칭한다. 예를 들어, 막관통 도메인으로서 작용하는 폴리펩티드의 기능적 변이체는 막관통 도메인으로서도 작용하는 해당 폴리펩티드의 단편이다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 참조 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나 참조 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다. 핵산과 관련하여 사용될 때, 어구 "기능적 변이체"는 참조 핵산과 상이하지만 참조 핵산에 의해 암호화된 폴리펩티드와 동일한 주된 기능을 갖는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산을 지칭한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 참조 핵산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 참조 핵산 서열의 보체와 혼성화하거나, 핵산 서열의 코돈 퇴화 변이체이다.
면역글로불린(Ig)으로도 알려진 본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 모노클로날 또는 폴리클로날 항체를 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는 B-세포의 단일 클론에 의해 생산되고 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다. 대조적으로, "폴리클로날 항체"는 상이한 B-세포에 의해 생산되고 동일한 항원의 상이한 에피토프에 결합하는 항체 집단을 지칭한다. 항체는 임의의 동물 기원일 수 있다. 항체는 IgG(IgGl, IgG2, IgG3, 및 IgG4 포함), IgA(IgA1 및 IgA2 포함), IgD, IgE, 또는 IgM, 및 IgY일 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 단일 쇄 전체 항체일 수 있다. 항체는 전형적으로 4 개의 폴리펩티드, 즉 중쇄(H) 폴리펩티드의 2 개의 동일한 사본 및 경쇄(L) 폴리펩티드의 2 개의 동일한 사본으로 이루어진다. 각각의 중쇄는 1 개의 N-말단 가변(VH) 영역 및 3 개의 C-말단 불변(CH1, CH2 및 CH3) 영역을 함유하고, 각각의 경쇄는 1 개의 N-말단 가변(VL) 영역 및 1 개의 C-말단 불변(CL) 영역을 함유한다. 경쇄 및 중쇄의 각 쌍의 가변 영역은 항체의 항원-결합 부위를 형성한다. VH 및 VL 영역은 유사한 일반 구조를 가지며, 각각의 영역은 4 개의 프레임워크 영역을 포함하고, 그들의 서열은 상대적으로 보존된다. 프레임워크 영역은 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 연결된다. CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 알려진 3 개의 CDR은 항원 결합을 담당하는 항체의 "초가변 영역"을 형성한다. 이러한 특정 영역은 Kabat 등, J. Biol. Chem. 252, 6609-6616(1977) 및 Kabat 등, Sequences of protein of immunological interest.(1991), Chothia 등, J. Mol. Biol. 196:901-917(1987), 및 MacCallum 등, J. Mol. Biol. 262:732-745(1996)에 의해 기재되었으며, 여기서 정의는 서로 비교할 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 하위집합을 포함한다. 바람직하게는, 용어 "CDR"은 서열 비교에 기반하여 Kabat에 의해 정의된 바와 같은 CDR이다. CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 중쇄 CDR을 나타내고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 경쇄 CDR을 나타낸다.
용어 "항체의 단편," "항체 단편," "항체의 단편," "항원-결합 부분" 및 그들의 문법적 등가물은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 유지하는 항체의 하나 이상의 단편 또는 부분을 의미하기 위해 본원에서 상호교환가능하게 사용된다(일반적으로, Holliger 등, Nat. Biotech., 23(9):1126-1129(2005) 참조). 항체 단편은 바람직하게는 예를 들어, 하나 이상의 CDR, 가변 영역(또는 이의 부분), 불변 영역(또는 이의 부분), 또는 이의 조합을 포함한다. 항체 단편의 비제한적인 예는 (1) VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (2) 줄기 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2 개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (3) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (4) 2 개의 도메인이 단일 폴리펩티드 쇄로서 합성되게 할 수 있는 링커에 의해 연결된 Fv 단편의 2 개의 도메인(즉, VL 및 VH)으로 이루어진 1가 분자인 단일 쇄 Fv(scFv)(예를 들어, Bird 등, Science, 242: 423-426(1988); Huston 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883(1988); 및 Osbourn 등, Nat. Biotechnol., 16: 778(1998) 참조) 및 (5) 폴리펩티드 쇄의 이량체인 디아바디(diabody)를 포함하며, 여기서 각각의 폴리펩티드 쇄는 너무 짧아서 동일한 폴리펩티드 쇄 상의 VH와 VL 사이의 쌍형성을 허용하지 않아, 상이한 VH-VL 폴리펩티드 쇄 상의 상보적 도메인 사이의 쌍형성을 구동하여 2 개의 기능적 항원-결합 부위를 갖는 이량체성 분자를 생성하는, 펩티드 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 포함한다. 항체 단편은 당업계에 알려져 있고 예를 들어, 미국 특허 8,603,950에 보다 상세하게 기재되어 있다.
용어 "항원 인식 모이어티," "항원 인식 도메인," "항원 결합 도메인," 및 "항원 결합 영역"은 항원에 특이적으로 결합하는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 일 구현예에서, 항원 인식 모이어티는 항체, 항체 유사 분자 또는 이의 단편이다.
용어 "증식성 질환"은 세포의 과도한 증식 및/또는 세포 기질의 전환이 암을 포함하는 질환의 발병기전에 유의하게 기여한다는 통일된 개념을 지칭한다. 일부 구현예에서, 증식성 질환은 암이다.
"환자" 또는 "대상체"는 암과 같은 증식성 장애를 갖거나 발생하는 것으로 진단되거나 의심되는 포유류 대상체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 용어 "환자"는 암과 같은 증식성 장애의 발생 가능성이 평균보다 더 높은 포유류 대상체를 지칭한다. 예시적인 환자는 인간, 유인원, 개, 돼지, 소, 고양이, 말, 염소, 양, 설치류 및 본원에 개시된 요법으로부터 이익을 받을 수 있는 다른 포유류일 수 있다. 예시적인 인간 환자는 남성 및/또는 여성일 수 있다. "이를 필요로 하는 환자" 또는 "이를 필요로 하는 대상체"는 예를 들면, 암에 국한되지 않는 질환 또는 장애로 진단되거나 의심되는 환자를 의미한다.
"투여하는"은 환자 또는 대상체에게 본원에 기재된 하나 이상의 조성물을 제공하는 것으로 본원에서 지칭한다. 예로서 제한 없이, 조성물 투여, 예를 들어, 주사는 정맥내(i.v.) 주사, 피하(s.c.) 주사, 피내(i.d.) 주사, 복강내(i.p.) 주사, 또는 근육내(i.m.) 주사에 의해 수행될 수 있다. 하나 이상의 이러한 경로가 이용될 수 있다. 비경구 투여는 예를 들어, 볼루스 주사 또는 시간 경과에 따른 점진적 관류에 의한 것일 수 있다. 대안적으로, 또는 동시에, 투여는 경구 경로에 의한 것일 수 있다. 추가로, 투여는 또한 세포의 볼루스 또는 펠릿의 외과적 침착, 또는 의료 장치의 배치에 의한 것일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료," "치료하는," 및 그들의 문법적 등가물은 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 수득하는 것을 지칭한다. 일부 구현예에서, 효과는 치료적이며, 즉, 효과는 질환 및/또는 질환에 기인할 수 있는 불리한 증상을 부분적으로 또는 완전히 치유한다. 일부 구현예에서, 용어 "치료하는"은 질환 또는 병태를 "예방하는" 것을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "치료 간격"은 치료 주기, 예를 들어, 정기적인 일정에 따라 예를 들어 반복될 수 있는 치료제의 투여 과정을 지칭한다. 일부 구현예에서, 투여량 레지멘은 치료 간격 사이에 치료제의 투여가 없는 하나 이상의 기간을 가질 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "조합하여 투여된," "공동투여," "공동투여하는," 및 "공동제공하는"은 2 가지(또는 그 이상)의 상이한 치료가 장애로 고통받는 대상체의 과정 동안 대상체에게 전달되는 것, 예를 들어, 대상체가 장애 진단을 받은 후 및 장애가 치유되거나 제거되거나 치료가 다른 이유로 중단되기 전에 2 가지 이상의 치료가 전달되는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 하나의 치료의 전달은 제2 전달이 시작될 때 여전히 발생하고 있으므로, 투여 측면에서 중첩이 있다. 이것은 때때로 "동시" 또는 "동시 전달"로서 본원에서 언급된다. 다른 구현예에서, 하나의 치료의 전달은 다른 치료의 전달이 시작되기 전에 종료된다. 어느 한 경우의 일부 구현예에서, 치료는 조합 투여로 인해 더 효과적이다. 예를 들어, 제2 치료는 더 효과적인 데, 예를 들어, 제2 치료가 적을 경우 동등한 효과가 나타나거나, 제1 치료가 없는 상태로 투여된 경우에 나타난 것보다 더 큰 정도로 제2 치료가 증상을 감소시키거나, 유사한 상황이 제1 치료를 사용하여 나타난다. 일부 구현예에서, 전달은 증상, 또는 장애와 관련된 다른 매개변수의 감소가 다른 치료 없이 전달된 하나의 치료로 관찰되는 것보다 더 크도록 한다. 2 가지 치료의 효과는 부분적으로 첨가되거나, 완전히 첨가되거나, 첨가보다 더 클 수 있다. 전달은 전달된 제1 치료의 효과가 제2 치료가 전달될 때 여전히 검출가능하도록 할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 치료 및 제2 치료는 동시에(예를 들어, 같은 시간에), 동일하거나 별개의 조성물로, 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적 투여는 추가의, 예를 들어, 2차 치료의 투여 전(예를 들어, 직전, 5, 10, 15, 30, 45, 60 분 미만; 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24, 48, 72, 96 시간 이상; 4, 5, 6, 7, 8, 9 일 이상; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 주 이상 전)에 하나의 치료의 투여를 지칭한다. 또한 1차 및 2차 치료의 투여 순서는 역전될 수 있다.
용어 "치료적 유효량," 치료량," "면역학적 유효량," "항-종양 유효량," "종양-억제 유효량," 및 그들의 문법적 등가물은 원하는 치료 결과를 달성하기 위해 필요한 기간 동안 투여량에서 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중과 같은 인자, 및 하나 이상의 대상체에서 원하는 반응을 도출하는 본원에 기재된 조성물의 능력에 따라 달라질 수 있다. 투여되는 본 개시내용의 조성물의 정확한 양은 연령, 체중, 종양 크기, 감염 또는 전이 정도, 및 환자(대상체)의 상태에서 개인차를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다.
대안적으로, 환자 또는 대상체에게 본원에 기재된 하나 이상의 조성물의 투여에 대한 약리학적 및/또는 생리학적 효과는 "예방적"일 수 있으며, 즉, 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다. "예방적 유효량"은 원하는 예방적 결과(예를 들어, 질환 발병 방지)를 달성하기 위해 필요한 기간 동안 투여량에서 효과적인 양을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "면역 체크포인트 단백질"은 억제 신호를 전달하거나 면역억제 기능을 갖는 분자를 지칭한다. 이러한 면역 체크포인트 단백질의 예는 CTLA-4, PD-1, PD-L1(프로그램화 세포 사멸 리간드 1), PD-L2(프로그램화 세포 사멸 리간드 2), LAG-3(림프구 활성화 유전자 3), TIM3(T 세포 면역글로불린 및 뮤신-3), BTLA(B 및 T 림프구 감쇠인자), B7H3, B7H4, CD160, CD39, CD70, CD73, A2aR(아데노신 A2a 수용체), KIR(살해 억제 수용체), VISTA(T 세포 활성화의 V-도메인 Ig-함유 억제인자), IDO1(인돌레아민 2,3-디옥시게나제), 아르기나제 I, TIGIT(T 세포 면역글로불린 및 ITIM 도메인), CD115 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다(Nature Reviews Cancer, 12, p. 252-264, 2012 및 Cancer Cell, 27, p. 450-461, 2015 참조).
본원에 사용된 바와 같이, 생물학적 모이어티의 식별에 사용되는 용어는 용어 내에 대시 " - "를 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있다. 대시의 존재 또는 부재는 생물학적 모이어티의 의도된 의미 또는 식별을 변경하지 않는다.　이러한 생물학적 모이어티에 대한 단지 예로서, 제한 없이, 다음 쌍을 이룬 용어(대시 포함/미포함) 각각은 동일한 생물학적 실체(entity)를 나타내고 식별한다: CCR-4/CCR4, CD-3/CD3, CD-4/CD4, CD-33/CD33, EGFR-2/EGFR2, FLT-1/FLT1, HER-1/HER1, HER-1t/HER1t, IL-12/IL12, IL-15/IL15, IL-15Rα/IL15Rα MUC-1/MUC1, MUC-16/MUC16, ROR-1/ROR1, ROR-1R/ROR1R, TGF-베타/TGF베타, VEGF-1/VEGF1, VEGF-R2/VEGFR2."
II. 조합
특정 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 miRNA(들) 또는 miRNA(들)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 각각 키메라 수용체와 조합하여 사용될 수 있거나 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 서열을 추가로 포함할 수 있다. 일부 경우에, 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 경우에, CAR은 패턴-인식 수용체를 포함한다. 다른 경우에, 키메라 수용체는 조작된 T-세포 수용체(TCR)를 포함한다. miRNA(들)는 특이적 CAR, 사이토카인, 및 세포 태그와 조합하여 사용될 수 있으며, 예를 들어 IL15 및 IL-15Rα(mbIL15) 및 절두된 HER1(HER1t)을 포함하는 융합 단백질을 갖는 MUC16-특이적 CAR, mbIL15 및 HER1t를 갖는 MUC1-특이적 CAR, 또는 mbIL15 및 HER1t를 갖는 CD33-특이적 CAR로 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 유전적 작제물은 5' 비번역 영역(5'UTR) 및/또는 3' 비번역 영역(3'UTR)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, miRNA(들)를 암호화하는 서열은 5'UTR 및/또는 3'UTR에 위치할 수 있다. 일부 구현예에서, 5'UTR 및/또는 3'UTR은 인트론을 함유하지 않는다.
특정 구현예에서, 체크포인트 억제제 miRNA를 갖는 합성 인트론을 암호화하는 핵산 서열은 키메라 수용체를 암호화하는 것과 동일한 유전적 작제물(예를 들어, 키메라 수용체를 암호화하는 mRNA의 5'UTR에 상응하는 작제물의 일부)로 삽입된다. 폴리뉴클레오티드 서열의 순서에 대한 예시적인 묘사는 도 1a에서 찾을 수 있다. 일 구현예에서, 5'UTR은 하나 이상의 성숙 miRNA를 함유한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 성숙 miRNA(들)는 동일한 면역 체크포인트 단백질 표적, 예를 들어 PD-1에 대해 지시될 수 있다. 다른 특정 구현예에서, 성숙 miRNA는 하나 초과의 면역 체크포인트 단백질 표적, 예를 들어 PD-1 및 TIGIT, PD1 및 CTLA4, 또는 TIGIT 및 CTLA4에 대해 지시될 수 있다.
III. miRNA(들)
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "miR," "mir" 및 "miRNA"는 그로부터 전사되는 메신저 RNA의 번역을 조절(유전자의 발현 증가 또는 감소)하고/하거나 이러한 메신저 RNA를 탈안정화시킴으로써 유전자("표적 유전자")의 발현에 영향을 줄 수 있는 작은 비-코딩 RNA 분자의 부류인 microRNA를 지칭하는 데 사용된다.
miRNA는 비-자연 발생일 수 있다. 본원에서 miRNA(들)를 기재하는 데 사용된 바와 같은 용어 "비-자연 발생," "합성," 및 "인공"은 상호교환가능하게 사용되고 자연에서 발생하지 않는 서열을 갖는 miRNA를 지칭한다. 일부 구현예에서, 비-자연 발생 miRNA는 자연 발생 miRNA를 효과적으로 모방한다. 비-자연 발생 miRNA는 자연 발생 성숙 miRNA 서열이 특이적 전사체를 표적하도록 설계된 합성 서열로 대체될 때 상응하는 자연 발생 miRNA의 원하는 헤어핀 또는 루프가 유지되도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 비-자연 발생 miRNA는 자연 발생 miRNA와 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 더 큰 서열 동일성을 가질 수 있고/있거나 엄격한 혼성화 조건 하에 자연 발생 miRNA와 혼성화할 수 있다. 용어 "miRNA"는 달리 나타내지 않는 한, 일반적으로 특정 microRNA의 성숙, 프리- 및 전구 형태 및 이의 기능적 단편 및 변이체를 지칭한다.
용어 "프리-miRNA"는 적어도 하나의 RNA 헤어핀을 함유하는 1차 miRNA 전사체를 지칭한다. 프리-miRNA의 예시적인 묘사는 도 1b에 예시되어 있다. RNA 헤어핀(들)은 세포 핵에서 프리-miRNA로부터 절단되어 하나 이상의 전구체 miRNA("전구-miRNA)를 형성한다. 이 전구-miRNA는 줄기 루프 구조가 절단되는 세포질로 유출되어 헤어핀 루프의 이전 5' 아암으로부터 miRNA-5p 가닥 및 헤어핀 루프의 이전 3' 아암으로부터 miRNA-3p 가닥을 포함하는 이중 가닥 miRNA를 생산한다. 그런 다음 아르고노트(Argonaute) 단백질이 이중 가닥 miRNA에 결합하고 가닥 중 하나(miRNA-5p 서열 또는 miRNA-3p 서열)가 방출된다. 나머지 결합된 가닥은 "가이드 가닥"이 되는 반면 방출된 가닥은 "패신저 가닥"으로 알려져 있고 바람직하게는 분해된다. 그런 다음 가이드 가닥은 표적 유전자로부터 유래된 메신저 RNA와 상호작용을 시작하여, 번역에 영향을 미친다.
miRNA-5p 및 miRNA-3p 가닥 서열은 둘 다 "성숙 miRNA" 서열로서 본원에서 지칭될 것이다. 프리-miRNA의 나머지 부분(miRNA-5p 서열에 대한 이의 5' 부분, miRNA-3p 서열에 대한 이의 3' 부분, 및 miRNA-5p와 miRNA-3p 서열 사이의 줄기 루프 서열)은 일괄하여 miRNA 백본 서열로서 지칭될 것이다. 용어 "5' 백본 서열"은 프리-miRNA에서, miRNA-5p 서열의 5'인 백본 서열을 지칭하기 위해 본원에서 사용될 것이다. 용어 "3' 백본 서열"은 프리-miRNA에서, miRNA-3p 서열의 3'인 백본 서열을 지칭하기 위해 본원에서 사용될 것이다. 용어 "줄기 루프 서열"은 프리-miRNA에서, miRNA-5p와 miRNA-3p 서열 사이에 있는 백본 서열을 지칭한다.
본 발명의 프리-miRNA는 천연 성숙 miRNA 서열을 제거하고 이들을 비-천연 성숙 miRNA 서열로 대체함으로써 자연 발생 프리-miRNA로부터 생산될 수 있으며 여기서 서열 중 하나는 관심 유전자를 표적하는 가이드 miRNA로서 역할을 할 수 있다. 비-자연 발생 프리-miRNA의 설계에서, 백본 miRNA 핵산 서열은 마우스, 래트, 또는 인간 miRNA 서열로부터 유래될 수 있다. 비제한적인 예로서, 백본 miRNA 서열은 miR150, miR206, miR204, miR17, miR16, miR30a, miR126, miR122, miR213, miR29b1 또는 miR133a1로부터 유래될 수 있다.
본 발명의 실시에 사용될 수 있는 백본 서열의 예는 하기 표 1에 나열된 DNA 서열에 의해 암호화된 것들을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 표 1에서 "X" 및 "Y" 기호는 각각 가이드 miRNA(miRNA-5p 또는 miRNA-3p일 수 있음) 및 패신저 miRNA(miRNA-5p 또는 miRNA-3p일 수 있음)를 암호화하는 핵산 서열을 나타내는 반면, "n" 기호는 이러한 서열에서 뉴클레오티드의 수, 예를 들어 16-30 개, 바람직하게는 18-25 개를 나타낸다. 일부 구현예에서, n은 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35 개 뉴클레오티드일 수 있다. 특정 구현예에서, 백본 miRNA 서열은 엄격한 혼성화 조건 하에 표 1에 나열된 서열 중 임의의 하나의 보체와 혼성화하는 서열에 의해 암호화된 것들이다.
표 1: miRNA 백본 서열을 암호화하는 핵산
miRNA-5p 및 miRNA-3p 서열은 서로 혼성화할 수 있지만, 그들이 반드시 정확하게 상보적인 것은 아니다. 비-자연 발생 miRNA의 설계에서, 보상 돌연변이는 RNA 접힘 및 천연 miRNA의 자유 에너지를 유지하기 위해 miRNA-5p 및/또는 miRNA-3p 서열에 만들어질 수 있다. 특정 구현예에서, miRNA-3p 서열을 암호화하는 서열은 miRNA-5p 서열을 암호화하는 서열에 대한 보체와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 miRNA-5p 서열을 암호화하는 서열과 혼성화할 수 있다.
특정 구현예에서, 표적 유전자는 체크포인트 억제제 단백질을 암호화한다. 따라서, 본 발명은 부분적으로 면역 체크포인트 단백질의 발현을 억제하는 비-자연 발생 miRNA를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 이러한 특정 구현예에서, 표적 유전자는 CTLA4, PD-1, PD-L1, TIGIT, TIM3, LAG3, GITR, 또는 PIK3IP1을 암호화한다. 이러한 체크포인트 억제제를 암호화하는 가이드 miRNA 표적화 유전자를 암호화하는 핵산 서열의 비제한적인 예는 표 2에 나열되어 있다. 표 2는 또한 패신저 가닥을 암호화하는 서열을 나열한다. 이전에 논의된 바와 같이, 가이드 및 패신저 가닥이 반드시 상보적인 것은 아니다. 패신저 가닥은 또한 표적 유전자와 연관된 메신저 RNA를 표적하는 역할을 할 수 있는 것으로 고려된다. 또한 엄격한 혼성화 조건 하에 표 2에 나열된 서열의 보체와 혼성화하는 서열이 또한 사용될 수 있는 서열임이 고려된다. 사용되는 성숙 miRNA 서열은 특이적 프리-miRNA 백본과 조합될 수 있다. 표 2는 또한 그 안에 나열된 가이드 및 패신저 miRNA와 조합될 수 있는 백본을 나열한다.
표 2: 성숙 miRNA 서열을 암호화하는 핵산 서열
특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 64-83, 85, 87-171, 및 704-713 중 임의의 하나와 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 64-83, 85, 87-171, 및 704-713 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 이러한 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 704, 705, 709, 및 710 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 704, 705, 709, 및 710 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
특정 구현예에서, miRNA를 PD-1을 표적한다. 이러한 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 72-83, 85, 87, 및 704-713 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 72-83, 85, 87, 및 704-713 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 72, 74, 76, 78, 80, 82, 704, 705, 709, 및 710 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 72, 74, 76, 78, 80, 82, 704, 705, 709, 및 710 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 72-75 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 72-75 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 이러한 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 72 또는 74와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 72 또는 74의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
특정 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다:
a) 5' miRNA 백본 서열을 암호화하는 서열;
b) 가이드 miRNA 서열을 암호화하는 서열;
c) 줄기 루프 서열을 암호화하는 서열;
d) 패신저 miRNA 서열을 암호화하는 서열; 및
e) 3' 백본 서열을 암호화하는 서열.
특정 구현예에서, 가이드 miRNA 서열을 암호화하는 서열은 서열번호: 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 704, 705, 709, 및 710 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 이러한 서열 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있다.
특정 구현예에서, 패신저 miRNA 서열을 암호화하는 서열은 서열번호: 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 706-708, 및 711-713 중 임의의 하나에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 이러한 서열 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있다.
특정 구현예에서, 프리-miRNA를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 다음을 암호화한다:
a) 서열번호: 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 704, 705, 709, 및 710 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 이러한 서열 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 가이드 miRNA 서열; 및
b) 각각 서열번호: 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 706-708, 및 711-713 중 임의의 하나에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 이러한 서열 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 패신저 서열.
임의의 전술한 구현예에서, 5' miRNA 백본 서열, 줄기 루프 서열, 및 3' miRNA 백본 서열을 암호화하는 서열은 각각 다음을 포함할 수 있다:
각각 서열번호: 1, 서열번호: 2, 및 서열번호: 3;
각각 서열번호: 4, 서열번호: 5, 및 서열번호: 6;
각각 서열번호: 7, 서열번호: 8, 및 서열번호: 9;
각각 서열번호: 10, 서열번호: 11, 및 서열번호: 12;
각각 서열번호: 13, 서열번호: 14, 및 서열번호: 15;
각각 서열번호: 16, 서열번호: 17, 및 서열번호: 18;
각각 서열번호: 19, 서열번호: 20, 및 서열번호: 21;
각각 서열번호: 22, 서열번호: 23, 및 서열번호: 24;
각각 서열번호: 25, 서열번호: 26, 및 서열번호: 27;
각각 서열번호: 28, 서열번호: 29, 및 서열번호: 30;
각각 서열번호: 31, 서열번호: 32, 및 서열번호: 33;
각각 서열번호: 34, 서열번호: 35, 및 서열번호: 36;
각각 서열번호: 37, 서열번호: 38, 및 서열번호: 39;
각각 서열번호: 40, 서열번호: 41, 및 서열번호: 42;
각각 서열번호: 43, 서열번호: 44, 및 서열번호: 45;
각각 서열번호: 46, 서열번호: 47, 및 서열번호: 48;
각각 서열번호: 49, 서열번호: 50, 및 서열번호: 51;
각각 서열번호: 52, 서열번호: 53, 및 서열번호: 54;
각각 서열번호: 55, 서열번호: 56, 및 서열번호: 57;
각각 서열번호: 58, 서열번호: 59, 및 서열번호: 60; 또는
각각 서열번호: 61, 서열번호: 62, 및 서열번호: 63;
또는 이러한 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 이러한 서열의 보체에 혼성화할 수 있는 서열.
특이적 체크포인트 억제제를 표적하는 예시적인 비-자연 발생 프리-miRNA 서열을 암호화하는 핵산은 표 3에 기재되어 있다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 프리-miRNA 서열은 엄격한 혼성화 조건 하에 표 3에 나열된 서열 중 임의의 하나의 보체와 혼성화할 수 있는 서열일 수 있다.
표 3: 비-자연 발생 프리-miRNA 서열을 암호화하는 핵산 서열
이러한 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 178-263 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 178-263 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
특정 구현예에서, miRNA는 PD-1을 표적한다. 이러한 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 179, 180, 및 241-249 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 서열번호: 179, 180, 및 241-249 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 179 또는 180 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 179 또는 180 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
본 발명의 특정 구현예는 적어도 2 개의 프리-miRNA를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 2 개 이상의 프리-miRNA는 동일한 표적 유전자를 표적하는 가이드 miRNA 서열을 함유할 수 있거나 다양한 가이드 miRNA는 상이한 유전자를 표적할 수 있다. 다중 프리-miRNA의 경우, 각 설계는 하나의 miRNA가 또 다른 것과 잘못접힘할 가능성을 감소시키기 위해 상이한 천연 miRNA 백본에 기반할 수 있다. 표 4는 하나 이상의 프리-miRNA를 암호화하는 핵산 서열의 예를 제공한다.
표 4: 2 개 이상의 프리-miRNA를 포함하는 비-자연 발생 miRNA 서열
이러한 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 267-290 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 267-290 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
이러한 특정 구현예에서, 프리-miRNA는 PD-1을 표적하는 적어도 2 개의 전구-miRNA를 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 267 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 267 중 임의의 하나의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
특정 구현예에서, 프리-miRNA(들)를 암호화하는 핵산은 관심 단백질(들)을 암호화하는 하나 이상의 유전자(예를 들어, 키메라 항원 수용체, 사이토카인, 또는 세포 태그)를 포함하는 것과 동일한 유전적 작제물에 함유된다. 특정 구현예에서, 이러한 유전적 작제물은 관심 유전자(들)의 바로 상류에 있는 5' 비번역 영역(5'UTR)을 암호화하는 핵산 서열을 포함하고 miRNA를 암호화하는 서열은 5'UTR에 포함된다. 특정 구현예에서, 이러한 유전적 작제물은 관심 유전자(들)의 바로 하류에 있는 3' 비번역 영역(3'UTR)을 암호화하는 핵산 서열을 포함하고 miRNA를 암호화하는 서열은 3'UTR에 포함된다.
프리-miRNA를 암호화하는 서열이 5'UTR에 상응하는 서열에 포함되는 구현예에서, 전사된 RNA는 스플라이스 공여자, 분기점 및/또는 수용자 부위 서열과 같은 추가의 서열을 포함할 수 있다. 스플라이스 공여자, 분기점, 및 수용자 부위의 포함은 전사된 RNA로부터 miRNA의 스플라이싱에 중요하다. 스플라이싱이 없으면, 고도로 구조화된 miRNA 서열은 관심 유전자에 관한 번역 개시 서열에 대한 리보솜 스캐닝을 방해할 가능성이 있다. 이러한 스플라이스 공여자/수용자 부위를 암호화하는 서열의 예는 서열번호: 291 및 292, 이러한 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열 및 엄격한 혼성화 조건 하에 이러한 서열의 보체와 혼성화할 수 있는 서열을 포함한다.
따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 a) 서열번호: 291과 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 291의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열; 및 b) 서열번호: 292와 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 292의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 추가로 포함한다.
IV. 키메라 항원 수용체(CAR)
임의의 전술한 구현예에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드는 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 키메라 수용체를 추가로 암호화할 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 바와 같은 miRNA(들) 및 CAR을 암호화할 수 있다. 본 개시내용의 임의의 구현예에서, 변형된 면역 효과기 세포는 본원에 기재된 바와 같은 키메라 수용체를 포함할 수 있다.
CAR은 외인성 특이성을 면역 효과기 세포에 접목시키는 조작된 수용체이다. 일부 경우에, CAR은 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내(엔도도메인) 도메인을 포함하는 세포외 도메인(엑토도메인)을 포함한다. 세포내 도메인은 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포외 도메인은 항원 결합 도메인과 막관통 도메인 사이에 스페이서를 추가로 포함한다.
A. 항원 결합 도메인
항원 결합 도메인은 모노클로날 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편의 상보성 결정 영역을 포함할 수 있다. 상보성 결정 영역(CDR)은 항원에 결합하여 해당 특정 항원에 대한 특이성을 갖는 수용체를 제공하는 항원 수용체(예를 들어, 면역글로불린 및 T-세포 수용체) 단백질의 가변 도메인에서 발견된 짧은 아미노산 서열이다. 항원 수용체의 각각의 폴리펩티드 쇄는 3 개의 CDR(CDR1, CDR2, 및 CDR3)을 함유할 수 있다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 표적 항원에 결합하는 항체, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 기능적 단편 또는 변이체는 항체의 중쇄의 가변 도메인(VH) 및/또는 항체의 경쇄의 가변 도메인(VL), 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 항체의 Fv, Fab, Fab2, Fab', F(ab')2, 또는 F(ab')3 단편을 포함한다. 특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 scFv, sc(Fv)2, dsFv, 디아바디, 미니바디(minibody), 나노바디(nanobody), 또는 이의 결합 단편을 포함한다. 특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 항체의 Fc 단편을 추가로 포함하며, 예를 들어 Fc 단편과 연결된 scFv를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, CAR은 암 세포, 자가면역 세포, 또는 바이러스, 박테리아 또는 기생충에 의해 감염된 세포에서 상승된 항원을 표적한다. 표적될 수 있는 병원체는 제한 없이, 말라리아원충(Plasmodium), 트리파노소마(trypanosome), 아스페르길루스(Aspergillus), 칸디다(Candida), A형 간염, B형 간염, C형 간염, HSV, HPV, RSV, EBV, CMV, JC 바이러스, BK 바이러스, 또는 에볼라(Ebola) 병원체를 포함한다. 자가면역 질환은 이식편대숙주병(graft-versus-host disease), 류마티스 관절염, 루푸스, 셀리악병(celiac disease), 크론병(Crohn's disease), 쇼그렌 증후군(Sjogren Syndrome), 류마티스 다발성 근통(polymyalgia rheumatic), 다발성 경화증, 시신경 척수염(neuromyelitis optica), 강직성 척추염(ankylosing spondylitis), 1형 당뇨병, 원형 탈모증(alopecia areata), 맥관염(vasculitis), 측두 동맥염(temporal arteritis), 수포성 유사천포창(bullous pemphigoid), 건선, 심상성 천포창(pemphigus vulgaris), 및 자가면역 포도막염을 포함할 수 있다.
CAR에 의해 인식되는 병원체는 본질적으로 임의의 종류의 병원체일 수 있지만, 일부 구현예에서, 병원체는 진균, 박테리아, 또는 바이러스이다. 예시적인 바이러스 병원체는 아데노비리다에(Adenoviridae) 과, 엡스타인 바 바이러스(EBV), 사이토메갈로바이러스(CMV), 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), JC 바이러스, BK 바이러스, HPV, HSV, HHV 바이러스 과, 간염 바이러스 과, 피코르나비리다에(Picornaviridae), 헤르페스비리다에(Herpesviridae), 헤파드나비리다에(Hepadnaviridae), 플라비비리다에(Flaviviridae), 레트로비리다에(Retroviridae), 오르토믹소비리다에(Orthomyxoviridae), 파라믹소비리다에(Paramyxoviridae), 파포바비리다에(Papovaviridae), 폴리오마바이러스(Polyomavirus), 랍도비리다에(Rhabdoviridae), 및 토가비리다에(Togaviridae)의 것들을 포함한다. 예시적인 병원성 바이러스는 천연두, 인플루엔자, 볼거리, 홍역, 수두, 에볼라, 및 풍진을 유발한다. 예시적인 병원성 진균은 칸디다, 아스페르길루스, 크립토코쿠스(Cryptococcus), 히스토플라스마(Histoplasma), 뉴모사이스티스(Pneumocystis), 및 스타키보트리스(Stachybotrys)를 포함한다. 예시적인 병원성 박테리아는 스트렙토코쿠스(Streptococcus), 슈도모나스(Pseudomonas), 시겔라(Shigella), 캄필로박터(Campylobacter), 스타필로코쿠스(Staphylococcus), 헬리코박터(Helicobacter), 이. 콜라이(E. coli), 리케차(Rickettsia), 바실루스(Bacillus), 보르데텔라(Bordetella), 클라미디아(Chlamydia), 스피로헤테스(Spirochetes), 및 살모넬라(Salmonella)를 포함한다. 일부 구현예에서, 병원체 수용체 Dectin-1은 아스페르길루스와 같은 진균의 세포 벽 상의 탄수화물 구조를 인식하는 CAR을 생성하는 데 사용될 수 있다. 또 다른 구현예에서, CAR은 바이러스 감염 및 병리학을 방해하는 바이러스 결정인자(예를 들어, CMV 및 에볼라로부터의 당단백질)를 인식하는 항체에 기반하여 만들어질 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 B7H4, BCMA, BTLA, CAIX, CA125, CCR4, CD3, CD4, CD5, CD7, CD16, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD28, CD30, CD33, CD38, CD40, CD44, CD44v6, CD44v7/v8, CD47, CD52, CD56, CD70, CD79b, CD80, CD81, CD86, CD123, CD133, CD137, CD138, CD151, CD171, CD174, CD276, CEA, CEACAM6, CLL-1, c-MET, CS1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, EDB-F, EGFR, EGFR2, EGFRvIII, EGP-2, EGP-40, EphA2, FAP, FLT1, FLT4, 엽산-결합 단백질, 엽산 수용체, 엽산 수용체 α, α-엽산 수용체, Frizzled, GD2, GD3, GHR, GHRHR, GITR, GPC3, Gp100, gp130, HBV 항원, HER1, HER2, HER3, HER4, HER1/HER3, h5T4, HPV 항원, HVEM, IGF1R, Ig카파, IL-1-RAP, IL-2R, IL6R, IL-11Rα, IL-13R-a2, KDR, KRASG12V, LewisA, LewisY, L1-CAM, LIFRP, LRP5, LTPR, MAGE-A, MAGE-A1, MAGE-A10, MAGE-A3, MAGEA3/A6, MAGE-A4, MAGE-A6, MART-1, MCAM, 메소텔린, PSCA, MUC1, MUC-4 또는 MUC16과 같은 뮤신, NGFR, NKG2D, Notch-1-4, NY-ESO-1, O-아세틸GD2, O-아세틸GD3, OX40, P53, PD1, PDE10A, PD-L1, PD-L2, PMSA, PRAME, PSCA, PSMA, PTCH1, RANK, Robol, ROR1, ROR1R, ROR-2, TACI, TAG-72, TCRa, TCRp, TGF, TGF베타, TGF베타-II, TGFBR1, TGFBR2, Titin, TLR7, TLR9, TNFR1, TNFR2, TNFRSF4, TRBC1, TWEAK-R, VEGF, VEGF-R2, 또는 WT-1에 대한 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 CD19, CD33, MUC1, MUC16, 또는 ROR1 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD19 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD33 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 MUC1 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 MUC16 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 ROR1 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 추가 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 HLA-A2, 마이엘린 올리고덴드로사이트 당단백질(MOG), 인자 VIII(FVIII), MAdCAM1, SDF1, 또는 콜라겐 유형 II 상의 에피토프에 결합하는 자가항원 또는 항원 결합 도메인을 포함한다.
항원 결합은 유세포 분석 또는 세포 기반 검정 또는 임의의 다른 동등한 검정에 의해 평가될 수 있다. 세포 기반 검정은 항원-결합을 평가하기 위해 표면 상의 관심 항원을 발현하는 세포 유형을 활용할 수 있다. 가용성 단백질로서 발현되는 항원 또는 이의 단편은 유세포 분석 또는 유사한 검정을 사용하여 항원-결합을 평가하기 위해 활용될 수 있다. 항원-결합의 개선은 항원 결합 도메인 또는 키메라 수용체의 기능적 측정에 의해 간접적으로 평가될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 키메라 수용체 또는 CAR의 개선된 항원-결합은 항원을 발현하는 표적 세포에 대한 증가된 특이적 세포독성에 의해 측정될 수 있다.
본 개시내용의 폴리펩티드의 세포 표면 발현 수준은 예를 들어, 유세포 분석 기반 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 항원-결합 폴리펩티드의 개선된 발현은 상기 항원-결합 폴리펩티드를 발현하는 분석된 세포의 백분율 또는 대안적으로 세포 표면 상의 상기 항원-결합 폴리펩티드의 평균 밀도로서 측정될 수 있다. 본원에 기재된 항원-결합 폴리펩티드의 세포 표면 발현을 평가하기 위해 사용될 수 있는 추가의 적합한 방법은 웨스턴 블롯팅(western blotting) 또는 임의의 다른 동등한 검정을 포함한다.
1. CD19-특이적 항원 결합 도메인
CD19는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 세포 표면 당단백질이며 악성 B-계통 세포에서 우세하게 발견된다. 일부 경우에, CD19는 또한 췌장암, 간암, 및 전립선암과 같은 고형 종양에서 검출되었다.
일부 구현예에서, CAR은 CD19-특이적 항원 결합 도메인을 포함하며, 여기서 항원 결합 도메인은 F(ab')2, Fab', Fab, Fv, 또는 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 FMC63에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다. 일부 구현예에서 scFv 및/또는 VH/VL 도메인은 FMC63으로부터 유래된다. FMC63은 일반적으로 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-l 및 -16 세포에 대해 생성된 마우스 모노클로날 IgGl 항체를 지칭한다(Ling, N. R., 등(1987). Leucocyte typing III. 302).
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 JCAR014, JCAR015, JCAR017, 또는 19-28z CAR(Juno Therapeutics)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 JCAR014, JCAR015, JCAR017, 또는 19-28z CAR(Juno Therapeutics)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식하는 scFv 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 2016/0152723에 기재된 항-CD19 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2015/123642에 기재된 항-CD19 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 클론 FMC63으로부터 유래된 항-CD19 scFv를 포함한다(Nicholson 등, Construction and characterization of a functional CD19 specific single chain Fv fragment for immunotherapy of B lineage leukemia and lymphoma., Mol. Immunol. 34:1157-1165 (1997)).
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 KTE-C19(Kite Pharma, Inc.)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 scFv 항원 결합 도메인을 포함하고, 항원 결합 도메인은 KTE-C19에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2015/187528에 기재된 항-CD19 항체 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 CTL019(Novartis)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 scFv 항원 결합 도메인을 포함하고, 항원 결합 도메인은 CTL019에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 UCART19(Cellectis)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 scFv 항원 결합 도메인을 포함하고, 항원 결합 도메인은 UCART19에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 BPX-401(Bellicum)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 scFv 항원 결합 도메인을 포함하고, 항원 결합 도메인은 BPX-401에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 경우에, 항원 결합 도메인은 블리나투모맙(blinatumomab)(Amgen), 콜툭시마브라브탄신(coltuximabravtansine)(ImmunoGen Inc./Sanofi-aventis), MOR208(Morphosys AG/Xencor Inc.), MEDI-551(Medimmune), 데닌투주맙마포도틴(denintuzumabmafodotin)(Seattle Genetics), B4(또는 DI-B4)(Merck Serono), 타플리투모맵팝톡스(taplitumomabpaptox)(National Cancer Institute), XmAb 5871(Amgen/Xencor, Inc.), MDX-1342(Medarex) 또는 AFM11(Affimed)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 F(ab')2, Fab', Fab, Fv, 또는 scFv를 포함하고, 항원 결합 도메인은 블리나투모맙(Amgen), 콜툭시마브라브탄신(ImmunoGen Inc./Sanofi-aventis), MOR208(Morphosys AG/Xencor Inc.), MEDI-551(Medimmune), 데닌투주맙마포도틴(Seattle Genetics), B4(또는 DI-B4)(Merck Serono), 타플리투모맵팝톡스(National Cancer Institute), XmAb 5871(Amgen/Xencor, Inc.), MDX-1342(Medarex) 또는 AFM11(Affimed)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
일부 경우에, 항원 결합 도메인은 scFv 항원 결합 도메인을 포함하고, 항원 결합 도메인은 FMC63, 블리나투모맙(Amgen), 콜툭시마브라브탄신(ImmunoGen Inc./Sanofi-aventis), MOR208(Morphosys AG/Xencor Inc.), MEDI-551(Medimmune), 데닌투주맙마포도틴(Seattle Genetics), B4(또는 DI-B4)(Merck Serono), 타플리투모맵팝톡스(National Cancer Institute), XmAb 5871(Amgen/Xencor, Inc.), MDX-1342(Medarex) 또는 AFM11(Affimed)에 의해 또한 인식되는 CD19 상의 에피토프를 인식한다.
2. CD33-특이적 항원 결합 도메인
"CD33"은 67kDa 단일 통과 막관통 당단백질이며 시알산-결합 면역글로불린-유사 렉틴(Siglecs) 슈퍼-패밀리의 구성원이다. CD33은 시알산 결합을 담당하는 V-세트 Ig-유사 도메인 및 세포외 도메인의 C2-세트 Ig-유사 도메인을 특징으로 한다. CD33은 골수성 계통 세포에서 발현되고 림프계 세포에서도 검출되었다. CD33 mRNA의 대안적 스플라이싱은 V-세트 Ig-유사 도메인 뿐만 아니라 V- 및 C2-세트 Ig-유사 도메인을 연결하는 이황화 결합이 없는 더 짧은 이소형(CD33m)을 야기한다. 건강한 대상체에서, CD33은 주로 정상 만능 골수성 전구체, 단능 콜로니-형성 세포, 단핵구 및 성숙 과립구 상에서 발견되는 골수성 분화 항원으로서 발현된다. CD33은 골수성 백혈병 세포의 80% 초과에서 발현되지만 정상 조혈 줄기 세포 또는 성숙 과립구에서는 발현되지 않는다. (Andrews, R. 등, The L4F3 antigen is expressed by unipotent and multipotent colony-forming cells but not by their precursors, Blood, 68(5):1030-5 (1986)). CD33은 악성 골수성 세포, 활성화된 T 세포 및 활성화된 NK 세포 상에서 발현되는 것으로 보고되었으며 대다수 AML 환자의 적어도 아세포의 하위집합에서 발견된다(Pollard, J. 등, Correlation of CD33 expression level with disease characteristics and response to gemtuzumab ozogamicin containing chemotherapy in childhood AML, Blood, 119(16):3705-11 (2012)). AML 아세포에 대한 광범위한 발현 외에도, CD33은 AML의 기저에 있는 줄기 세포 상에서 발현될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR의 항원 결합 도메인은 CD33에 특이적이다(CD33 CAR). CD33-특이적 CAR은 세포 표면 상에서 발현될 때 T 세포의 특이성을 인간 CD33으로 재지시한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 글리신-세린 링커 또는 위트로우(Whitlow) 링커와 같은 가요성 링커에 의해 연결된 표적 항원 특이적 모노클로날 항-CD33 항체의 가변 도메인 경쇄(VL) 및 가변 도메인 중쇄(VH)를 포함하는 단일 쇄 항체 단편(scFv)을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 M195, m2H12, DRB2, 및/또는 My9-6이다. 일부 구현예에서, scFv는 인간화되며, 예를 들어, hM195이다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 예를 들어, N 말단에서 C 말단으로, VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH로 방향적으로 연결된 VH 및 VL을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하는 F(ab')2, Fab', Fab, Fv, 또는 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 영역은 린투주맙(Lintuzumab)(Seattle Genetics), BI 836858(Boehringer Ingelheim)에 의해 또한 인식되는 CD33 상의 에피토프를 인식한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 VL 폴리펩티드를 포함하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 293(hM195 VL 도메인), 서열번호: 296(M2H12 VL 도메인), 서열번호: 298(DRB2 VL 도메인), 서열번호: 300(My9-6 VL 도메인)의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 전술된 서열 중 임의의 하나보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 293, 296, 298, 및 300 중 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 이러한 서열 중 임의의 하나의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 301에 의해 암호화된 VL 도메인(hM195에 대한 VL 도메인을 암호화하는 핵산)을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 301과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 301의 핵산 서열의 보체와 혼성화하거나; 서열번호: 301의 코돈 퇴화 변이체이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 VH 폴리펩티드를 포함하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 294(hM195 VH 도메인), 서열번호: 295(M2H12 VH 도메인), 서열번호: 297(DRB2 VH 도메인), 서열번호: 299(My9-6 VH 도메인)의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 전술된 서열 중 임의의 하나보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 294, 295, 297, 또는 299 중 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 294, 295, 297, 또는 299 중 임의의 하나의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 302에 의해 암호화된 VH 도메인(hM195에 대한 VH 도메인을 암호화하는 핵산), 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 302와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 302의 핵산 서열의 보체와 혼성화하거나; 서열번호: 302의 코돈 퇴화 변이체이다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 예를 들어, N 말단에서 C 말단으로, VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH로 방향적으로 연결된 VH 및 VL을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 임의의 링커는 VH 및 VL 도메인을 연결하는 데 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 도메인은 서열번호: 303의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 전술된 서열 중 임의의 하나보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 303의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 303의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 304, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 304와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 304의 핵산 서열의 보체와 혼성화하거나; 서열번호: 304의 코돈 퇴화 변이체이다.
3. MUC1-특이적 항원 결합 도메인
일 구현예에서, 항원 결합 도메인은 MUC1 상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-MUC1 항체 단편은 항-MUC1의 Fab, Fab2, (Fab')2, Fv, (Fv)2, scFv, scFv-FC, FC, 디아바디, 트리아바디(triabody), 또는 미니바디이다. 일부 구현예에서, 항-MUC1 항체 단편은 항-MUC1 항체의 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 단일 도메인 항체는 항-MUC1 항체의 VNAR 또는 VHH 단편이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 MUC1의 VL 폴리펩티드를 포함하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 310-314 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 310-314 중 임의의 하나의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 310-314 중 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 310-314 중 임의의 하나의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 MUC1의 VH 폴리펩티드를 포함하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 305-309 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 305-309 중 임의의 하나의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 305-309 중 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 305-309 중 임의의 하나의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
일부 구현예에서, 항원 결합 모이어티는 예를 들어, N 말단에서 C 말단으로, VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH로 방향적으로 연결된 VH 및 VL을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 임의의 링커는 VH 및 VL 도메인을 연결하는 데 사용될 수 있다.
4. MUC16-특이적 항원 결합 도메인
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR의 항원 결합 모이어티는 MUC16에 특이적이다(MUC16 CAR). MUC16-특이적 CAR은 세포 표면 상에서 발현될 때, T 세포의 특이성을 인간 MUC16으로 재지시한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 662, 664, 666, 668, 670, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 및 700 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 전술된 서열 중 임의의 하나의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 662, 664, 666, 668, 670, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 및 700 중 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나; 서열번호: 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 662, 664, 666, 668, 670, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 및 700 중 임의의 하나의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 663, 665, 667, 669, 671, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 및 701 중 임의의 하나에 의해 암호화된 VL 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 663, 665, 667, 669, 671, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 및 701 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 663, 665, 667, 669, 671, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 및 701 중 임의의 하나의 보체와 혼성화한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 692의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 692보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 692의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나; 서열번호: 692의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 693에 의해 암호화된 VL 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 693과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 693의 보체와 혼성화한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 및 686 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 전술된 서열 중 임의의 하나의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 및 686 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나; 서열번호: 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 및 686 중 임의의 하나의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 및 687 중 임의의 하나에 의해 암호화된 VH 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 및 687 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 및 687 중 임의의 하나의 보체와 혼성화한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 676의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 676보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 676의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나; 서열번호: 676의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 677에 의해 암호화된 VH 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 677과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 677의 보체와 혼성화한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 모이어티는 예를 들어, N 말단에서 C 말단으로, VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH로 방향적으로 연결된 VH 및 VL을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 임의의 링커는 VH 및 VL 도메인을 연결하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 글리신-세린 링커 또는 위트로우 링커와 같은 가요성 링커에 의해 연결된 표적 항원 특이적 모노클로날 항-MUC16 항체의 가변 도메인 경쇄(VL) 및 가변 도메인 중쇄(VH)를 포함하는 단일 쇄 항체 단편(scFv)을 포함한다. 특정 구현예에서, scFv는 MUC16-3으로부터의 VH 및 VL 및 링커를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, scFv는 서열번호: 343의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 343의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 343의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나; 서열번호: 343의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 344에 의해 암호화된 scFv, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 344와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 344의 보체와 혼성화한다.
5. ROR1-특이적 항원 결합 도메인
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 항-ROR1 항체의 VL 도메인을 포함하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
이러한 특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 347, 351, 355, 359, 363, 367, 371, 375, 379, 383, 387, 391, 395, 399, 403, 407, 411, 415, 419, 423, 427, 431, 435, 439, 443, 447, 451, 455, 459, 및 463 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 전술된 서열 중 임의의 하나보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 347, 351, 355, 359, 363, 367, 371, 375, 379, 383, 387, 391, 395, 399, 403, 407, 411, 415, 419, 423, 427, 431, 435, 439, 443, 447, 451, 455, 459, 및 463 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 347, 351, 355, 359, 363, 367, 371, 375, 379, 383, 387, 391, 395, 399, 403, 407, 411, 415, 419, 423, 427, 431, 435, 439, 443, 447, 451, 455, 459, 및 463 중 임의의 하나의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 348, 352, 356, 360, 364, 368, 372, 376, 380, 384, 388, 392, 396, 400, 404, 408, 412, 416, 420, 424, 428, 432, 436, 440, 444, 448, 452, 456, 460, 및 464 중 임의의 하나에 의해 암호화된 VL 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 348, 352, 356, 360, 364, 368, 372, 376, 380, 384, 388, 392, 396, 400, 404, 408, 412, 416, 420, 424, 428, 432, 436, 440, 444, 448, 452, 456, 460, 및 464 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 348, 352, 356, 360, 364, 368, 372, 376, 380, 384, 388, 392, 396, 400, 404, 408, 412, 416, 420, 424, 428, 432, 436, 440, 444, 448, 452, 456, 460, 및 464 중 임의의 하나의 보체와 혼성화하거나; 서열번호: 348, 352, 356, 360, 364, 368, 372, 376, 380, 384, 388, 392, 396, 400, 404, 408, 412, 416, 420, 424, 428, 432, 436, 440, 444, 448, 452, 456, 460, 및 464 중 임의의 하나의 코돈 퇴화 변이체이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 항-ROR1 항체의 VH 도메인을 포함한다.
이러한 특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 349, 353, 357, 361, 365, 369, 373, 377, 381, 385, 389, 393, 397, 401, 405, 409, 413, 417, 421, 425, 429, 433, 437, 441, 445, 449, 453, 457, 및 461 중 임의의 하나의 아미노산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 전술된 서열 중 임의의 하나보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 349, 353, 357, 361, 365, 369, 373, 377, 381, 385, 389, 393, 397, 401, 405, 409, 413, 417, 421, 425, 429, 433, 437, 441, 445, 449, 453, 457, 및 461 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 349, 353, 357, 361, 365, 369, 373, 377, 381, 385, 389, 393, 397, 401, 405, 409, 413, 417, 421, 425, 429, 433, 437, 441, 445, 449, 453, 457, 및 461 중 임의의 하나의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 350, 354, 358, 362, 366, 370, 374, 378, 382, 386, 390, 394, 398, 402, 406, 410, 414, 418, 422, 426, 430, 434, 438, 442, 446, 450, 454, 458, 및 462 중 임의의 하나에 의해 암호화된 VH 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 350, 354, 358, 362, 366, 370, 374, 378, 382, 386, 390, 394, 398, 402, 406, 410, 414, 418, 422, 426, 430, 434, 438, 442, 446, 450, 454, 458, 및 462 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 350, 354, 358, 362, 366, 370, 374, 378, 382, 386, 390, 394, 398, 402, 406, 410, 414, 418, 422, 426, 430, 434, 438, 442, 446, 450, 454, 458, 및 462 중 임의의 하나의 보체와 혼성화하거나; 서열번호: 350, 354, 358, 362, 366, 370, 374, 378, 382, 386, 390, 394, 398, 402, 406, 410, 414, 418, 422, 426, 430, 434, 438, 442, 446, 450, 454, 458, 및 462 중 임의의 하나의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 ROR1에 결합하는 CDR 중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 것들로부터 선택된 적어도 하나의 CDR을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 715-725 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 전술된 서열 중 임의의 하나의 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 715-725 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 715-725 중 임의의 하나의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 715, 서열번호: 716, 및 서열번호: 717의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 718, 서열번호: 719, 및 서열번호: 720의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 721, 서열번호: 722, 및 서열번호: 723의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 724, 서열번호: 725, 및 서열번호: 723의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 전술된 VH 및 VL 도메인을 둘 다 포함한다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 349의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 중쇄 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 349보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 349와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 349의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 350에 의해 암호화된 VH 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 350과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 보체 서열번호: 350과 혼성화하거나; 서열번호: 350의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 387의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 387보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 387과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 387의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 388에 의해 암호화된 VL 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 388과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 보체 서열번호: 388과 혼성화하거나; 서열번호: 388의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 349의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 중쇄 도메인을 포함하며, 여기서 가변 중쇄 도메인은 N-말단에서 C-말단 순서로, 서열번호: 715, 서열번호: 716, 및 서열번호: 717의 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 349보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 349와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 349의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 349의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 중쇄 도메인을 포함하며, 여기서 가변 중쇄 도메인은 N-말단에서 C-말단 순서로, 서열번호: 718, 서열번호: 719, 및 서열번호: 720의 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 349보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 349와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 349의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 387의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하며, 여기서 가변 중쇄 도메인은 N-말단에서 C-말단 순서로, 서열번호: 721, 서열번호: 722, 및 서열번호: 723의 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 387보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 387과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 387의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 387의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하며, 여기서 가변 중쇄 도메인은 N-말단에서 C-말단 순서로, 서열번호: 724, 서열번호: 725, 및 서열번호: 723의 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 387보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 387과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 387의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 726의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 중쇄 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 726보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 726과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 726의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 727의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 727보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 727과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 727의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 728의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 중쇄 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 728보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 728과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 728의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 729의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 729보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 729와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 729의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 VH 및 VL 도메인을 연결하는 링커를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 링커는 (a) 서열번호: 424의 아미노산 서열((G4S)3) 또는 이의 보존적으로-치환된 변이체; 또는 (b) 서열번호: 424와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 링커는 서열번호: 425에 의해 암호화되거나, 엄격한 조건 하에 서열번호: 425의 보체에 혼성화하거나, 서열번호: 425의 코돈 퇴행 버전이다. 본원에 기재된 바와 같은 임의의 링커는 VH 및 VL 도메인을 연결하는 데 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 도메인은 서열번호: 465의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 465보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 465와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 465의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열번호: 466에 의해 암호화된 scFv, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 466과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일을 갖거나; 엄격한 혼성화 조건 하에 보체 서열번호: 466과 혼성화하거나; 서열번호: 466의 코돈 퇴화 변이체이다.
6. EGFRvIII-특이적 항원 결합 도메인
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 CAR은 EGFRvIII-특이적 CAR이다. "EGFRvIII", "EGFR 변이체 III", "EGFR 유형 III 돌연변이체", "EGFR.D2-7" 또는 "de2-7EGFR"은 인간 및 비-인간 대상체에서 세포외 단백질 리간드의 표피 성장 인자(EGF) 패밀리의 구성원에 대한 수용체인 막관통 단백질인 표피 성장 인자 수용체(EGFR; ErbB-1; HER1)의 돌연변이된 형태이다. EGFRvIII은 야생형 EGFR 유전자의 엑손 2-7의 결실을 특징으로 하여, 전장 야생형 EGFR 단백질의 세포외 도메인에서 267 개 아미노산의 인프레임(in-frame) 결실을 초래한다. EGFRvIII은 또한 야생형 EGFR과 비교하여 융합 접합부에 삽입된 신규 글리신 잔기를 함유한다. 절두된 수용체 EGFRvIII은 임의의 알려진 EGFR 리간드에 결합할 수 없지만; 구성적 티로신 키나제 활성을 나타낸다. 이 구성적 활성화는 프로-종양형성 효과에 중요하다. 키나제-결핍 EGFRvIII은 유사한 종양형성 이점을 부여할 수 없다. EGFRvIII은 교모세포종(GBM)에서 고도로 발현되고 일부 다른 고형 종양 유형에서 검출될 수 있지만 정상 조직에서는 검출되지 않을 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 CAR의 항원 결합 모이어티는 EGFRvIII에 특이적이다(EGFRvIII CAR). EGFRvIII-특이적 CAR은 세포 표면 상에서 발현될 때 T 세포의 특이성을 인간 EGFRvIII으로 재지시한다. 구현예에서, 항원 결합 도메인은 글리신-세린 링커 또는 위트로우 링커와 같은 가요성 링커에 의해 연결된 표적 항원 특이적 모노클로날 항-EGFRvIII 항체의 가변 도메인 경쇄(VL) 및 가변 도메인 중쇄(VH)를 포함하는 단일 쇄 항체 단편(scFv)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 모이어티는 예를 들어, N에서 C 말단으로, VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH로 방향적으로 연결된 VH 및 VL을 포함할 수 있다.
B. 스페이서
일부 구현예에서, 본 개시내용의 키메라 항원 수용체는 항원 결합 도메인을 막관통 도메인에 연결하는 데 사용되는 스페이서를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 항원 결합 도메인이 항원 인식을 용이하게 하도록 상이한 방향으로 배향되게 하기에 충분히 유연하다.
특정 구현예에서, 스페이서를 포함하는 키메라 항원 수용체는 스페이서가 없는 달리 동일한 항원-결합 폴리펩티드와 비교하여 개선된 기능적 활성을 갖는다. 특정 구현예에서, 스페이서를 포함하는 키메라 항원 수용체는 스페이서가 없는 달리 동일한 폴리펩티드와 비교하여 세포 표면 상에서 증가된 발현을 갖는다. 구현예에서, 스페이서를 포함하는 키메라 항원 수용체는 스페이서가 없었다면 세포 막 표면 상에서 발현되지 않고/않거나 근접성 부족 또는 입체 장애로 인해 그의 표적에 결합할 수 없는 폴리펩티드이다.
특정 구현예에서, 스페이서는 줄기 영역, 예를 들어 항체로부터의 힌지 영역을 포함한다. 일부 경우에, 줄기 영역은 IgG, 예를 들어 IgG1로부터의 힌지 영역을 포함한다. 대안적인 예에서, 줄기 영역은 면역글로불린의 CH2CH3 영역 및, 임의적으로, CD3의 일부를 포함한다. 일부 경우에, 줄기 영역은 WO2016/073755에 기재된 바와 같은 CD8α 힌지 영역(서열번호: 426), IgG4-Fc 12 아미노산 힌지 영역(서열번호: 631), 또는 IgG4 힌지 영역을 포함한다. 줄기 영역은 항원 결합 도메인을 세포 표면 및/또는 막관통 영역에 연결하는 CAR의 세포외 부분일 수 있다.
일부 구현예에서, 줄기 영역은 약 20 내지 약 300 개 아미노산 길이일 수 있다. 일부 경우에, 줄기 영역은 약 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 개 또는 그 이상의 아미노산 길이일 수 있다. 다른 경우에, 줄기 영역은 약 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275 또는 300 개 아미노산 길이일 수 있다. 일부 경우에 줄기 영역은 20 개 미만의 아미노산 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 줄기 영역은 CD8α 힌지 도메인, CD28 힌지 도메인 또는 CTLA-4 힌지 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 줄기 영역은 CD8α 힌지 영역, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 스페이서는 서열번호: 426의 아미노산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 467의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 467의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 467의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, CD8α 힌지 영역, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 468, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 468과 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 468의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 468의 코돈 퇴화 변이체이다.
일부 구현예에서, 줄기 영역은 제2 CAR의 상동 줄기 영역과 이량체화할 수 있다.
특정 구현예에서, 줄기 영역 외에도, 스페이서는 하나 이상의 줄기 확장 영역(들)을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 줄기 영역과 상동인 폴리펩티드이다. 예를 들어, 줄기 영역과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 잔기 치환을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 줄기 영역은 부착된 줄기 영역, 예를 들어 CD8α 힌지 도메인, CD28 힌지 도메인, 또는 CTLA-4 힌지 도메인에 대해 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 스페이서는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 개의 줄기 확장 영역을 포함한다.
특정 구현예에서, 줄기 영역은 링커에 의해 줄기 확장 영역에 연결될 수 있다.
특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 아미노산 수에 의해 측정될 때 줄기 영역 길이의 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 배를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 줄기 영역은 적어도 하나의 이량체화 부위를 포함한다. 특정 구현예에서, 줄기 영역은 동종이량체화 또는 이종이량체화 키메라 폴리펩티드를 형성하기 위해 하나 이상의 이량체화 부위를 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 줄기 영역 또는 하나 이상의 줄기 확장 영역은 이량체화 부위를 함께 제거하는 돌연변이를 함유할 수 있다.
특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 줄기 영역과 비교하여 적어도 하나의 더 적은 이량체화 부위를 갖는다. 예를 들어, 줄기 영역이 2 개의 이량체화 부위를 포함하는 경우, 줄기 확장 영역은 1 또는 0 개의 이량체화 부위를 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, 줄기 영역이 하나의 이량체화 부위를 포함하는 경우, 줄기 확장 영역은 0 개의 이량체화 부위를 포함할 수 있다. 일부 예에서, 줄기 확장 영역은 이량체화 부위가 없다. 일부 경우에, 하나 이상의 이량체화 부위(들)는 막 근위일 수 있다. 다른 경우에, 하나 이상의 이량체화 부위(들)는 막 원위일 수 있다.
특정 구현예에서, 이량체화 부위는 이황화 결합을 형성할 수 있는 시스테인 잔기이다. 특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 줄기 영역과 비교하여 더 적은 이황화 결합(들)을 형성할 수 있다. 예를 들어, 줄기 영역이 2 개의 이황화 결합을 형성할 수 있는 경우, 줄기 확장 영역은 1 개의 이황화 결합을 형성하거나 형성하지 않을 수 있다. 또 다른 예로서, 줄기 영역이 1 개의 이황화 결합을 형성할 수 있는 경우, 줄기 확장 영역은 이러한 결합을 형성하지 않을 수 있다.
각각의 줄기 확장 영역은 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 개 또는 그 이상의 아미노산 길이일 수 있다.
특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 CD8α 힌지 영역에 상동이다. 이러한 특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 서열번호: 469의 아미노산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 469의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 469의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 469의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 서열번호: 470-472 중 임의의 하나, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 470-472 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 470-472 중 임의의 하나의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 470-472 중 임의의 하나의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 스페이서는 줄기 영역 및 1 내지 3 개의 줄기 확장 영역을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 스페이서는 줄기 영역 및 2 개의 줄기 확장 영역, 예를 들어 CD8α 힌지 영역 및 2 개의 줄기 확장 영역을 포함하며 여기서 각각의 줄기 확장 영역은 CD8α 힌지 영역에 상동이다.
일부 구현예에서, 줄기 영역 및 줄기 확장 영역(들) 각각은 CD8α 힌지 도메인, CD28 힌지 도메인, CTLA-4 힌지 도메인, LNGFR 세포외 도메인, IgG1 힌지, IgG4 힌지 및 CH2-CH3 도메인 중 적어도 하나로부터 유래될 수 있다. 줄기 및 줄기 확장 영역(들)은 CD8α 힌지 도메인, CD28 힌지 도메인, CTLA-4 힌지 도메인, LNGFR 세포외 도메인, IgG1 힌지, IgG4 힌지 또는 CH2-CH3 도메인의 임의의 조합으로부터 별도로 유래될 수 있다. 예로서, 줄기 영역은 CD8α 힌지 도메인으로부터 유래될 수 있고 적어도 하나의 줄기 확장 영역은 CD28 힌지 도메인으로부터 유래되어 하이브리드 스페이서를 생성할 수 있다. 또 다른 예로서, 줄기 영역은 IgG1 힌지 또는 IgG4 힌지로부터 유래될 수 있고 적어도 하나의 줄기 확장 영역은 IgG의 CH2-CH3 도메인으로부터 유래될 수 있다.
이러한 특정 구현예에서, 스페이서는 서열번호: 473의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 473의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 473의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 473의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 스페이서는 서열번호: 474, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 474와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 474의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 474의 코돈 퇴화 변이체이다.
C. 막관통 도메인
막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 예를 들어, 임의의 막 결합 단백질 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 적합한 막관통 도메인은 TCR-알파 쇄, TCR-베타 쇄, TCR-γ1 쇄, TCR-δ 쇄, TCR-제타 쇄, CD28, CD3 엡실론, CD3ζ, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, ICOS, GITR, CD152(CTLA-4), 또는 CD154, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체로부터의 막관통 도메인을 포함한다. 대안적으로, 막관통 도메인은 합성일 수 있고, 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중항은 합성 막관통 도메인의 한쪽 또는 양쪽 말단에서 발견된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 CD8α 막관통 도메인, CD152(CTLA-4), TCRγ1, TCRδ 또는 CD3ζ 막관통 도메인을 포함한다.
임의적으로, 일부 구현예에서 2 내지 10 개 아미노산 길이의 짧은 올리고뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 링커는 막관통 도메인을 CAR의 세포내 신호전달 도메인과 연결할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 글리신-세린 링커이다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 CD8α 막관통 도메인 또는 CD3ζ 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 막관통 도메인은 CD8α 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 막관통 도메인은 서열번호: 475의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 475의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 475와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 475의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, CD8α 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 476 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 476과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 476의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 476의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 막관통 도메인은 서열번호: 477의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 477의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 477과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 477의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, CD28 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 478 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 478과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 478의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 438의 코돈 퇴화 변이체이다.
D. 세포내 신호전달 도메인
CAR의 세포내 신호전달 도메인은 CAR이 배치된 면역 세포의 정상 효과기 기능 중 적어도 하나의 활성화를 담당할 수 있다. 용어 "효과기 기능"은 세포의 특화된 기능을 지칭한다. 예를 들어, T 세포의 효과기 기능은 사이토카인의 분비를 포함하는 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다. 일반적으로 전체 세포내 신호전달 도메인이 이용될 수 있지만, 많은 경우에 반드시 전체 쇄를 사용할 필요는 없다. 세포내 신호전달 도메인의 절두된 부분이 사용되는 한, 이러한 절두된 부분은 효과기 기능 신호를 형질도입하는 한 온전한 쇄 대신에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 T-세포 활성화를 위한 신호전달 도메인을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 세포 신호전달 도메인은 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 세포독성 T 림프구(CTL), 또는 조절 T 세포와 상호작용한다.
세포내 도메인은 FCER1G, CD19, CD40, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR2DL3, KIR2DL4, KIR2DL5, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR3DL3, SIRPA, FCRL1, FCRL2, FCRL3, FCRL4, FCRL5, FCRL6, FCGR1A, FCGR2A, FCGR2B, FCGR3A, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, PILRB, NCR1, NCR2, NCR3, NKG2A, NKG2C, NKG2D, DAP12, FCER1G, DAP10, CD84, CD19, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DL4, KIR2DL5, KIR3DL2, KIR3DL3, SIRPA, FCRL1, FCRL2, FCRL3, FCRL4, FCRL5, FCRL6, CD4, CD8A, CD8B, LAT, FCGR1A, FCGR2A, FCGR2B, FCGR3A, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, NCR1, NCR2, NCR3, LY9, NKG2C, TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3ζ, CD5, CD22, CD79a, CD79b 또는 CD66d, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체로부터 유래된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 경우에, T-세포 활성화를 위한 신호전달 도메인은 CD3ζ로부터 유래된 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD3ζ 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호: 479의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 479보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 479와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 479의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, CD3ζ 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 480을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 480과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 480의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 480의 코돈 퇴화 변이체이다.
세포내 신호전달 도메인은 하나 이상의 공자극 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 공자극 도메인은 CD8, CD27, CD28, 4-1BB(CD137), ICOS, DAP10, DAP12, OX40(CD134), 및 CD3-제타 공자극 도메인 및 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하거나 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD8, CD27, CD28, 4-1BB(CD137), ICOS, DAP10, DAP12, 및 OX40(CD134) 공자극 도메인 및 이의 기능적 단편 또는 변이체로부터 선택된 공자극 도메인 중 하나 이상, 또는 2 개 이상을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD27, CD28, 4-1BB(CD137), ICOS, 및 OX40(CD134) 공자극 도메인 및 이의 기능적 단편 또는 변이체로부터 선택된 공자극 도메인 중 하나 이상, 또는 2 개 이상을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD8, CD28, 4-1BB(CD137), DAP10, 및 DAP12 공자극 도메인 및 이의 기능적 단편 또는 변이체로부터 선택된 공자극 도메인 중 하나 이상, 또는 2 개 이상을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD28 및 4-1BB(CD137) 공자극 도메인 및 이의 기능적 단편 또는 변이체로부터 선택된 하나 이상, 또는 2 개 이상의 공자극 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD28 및 4-1BB(CD137) 공자극 도메인 또는 그들의 각각의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD28 및 OX40(CD134) 공자극 도메인 또는 그들의 각각의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD8 및 CD28 공자극 도메인 또는 그들의 각각의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD28 공자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 4-1BB(CD137) 공자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 OX40(CD134) 공자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 CD8 공자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 DAP10 공자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 CAR은 DAP12 공자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD28 공자극 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호: 481의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 481의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 481의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 481의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, CD28 공자극 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 482를 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 482와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 482의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 442의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB 공자극 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호: 483의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 483의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 483과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 483의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 4-1BB 공자극 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 484 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 484와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 484의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 484의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 DAP10 공자극 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호: 485의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 485의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 485와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 485의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, DAP10 공자극 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 486의 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 486과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 486의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 486의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 DAP12 공자극 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호: 487의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 487의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 487과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 487의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, DAP12 공자극 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 488의 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 488과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 488의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 488의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 상기 기재된 바와 같이, CD28 공동-신호전달 도메인 및 4-1BB 공동-신호전달 도메인 둘 다, 또는 이의 각각의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
E. 신호 펩티드
구현예에서, 신호 펩티드는 초기 CAR 단백질을 소포체로 지시한다. 즉, 예를 들어, 수용체가 글리코실화되고 세포막에 고정되는 경우이다. 임의의 진핵생물 신호 펩티드 서열은 기능적일 것으로 예상된다. 일반적으로, 단백질에 고유하게 부착된 신호 펩티드, 또는 융합 단백질의 경우, N-말단에 가장 가까운 구성요소가 사용된다(예를 들어, N-말단에 가장 가까운 VL 구성요소가 있는 scFv에서, 경쇄의 천연 신호가 사용된다). 일부 구현예에서, 신호 펩티드는 GM-CSFRa(서열번호: 489) 또는 IgK(서열번호: 491), IgE(서열번호: 493) 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 대해 고유하다. 사용될 수 있는 다른 신호 펩티드는 CD8α(서열번호: 495) 및 CD28에 고유한 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 신호 펩티드는 마우스 Ig VH 영역 3(서열번호: 497), β2M 신호 펩티드(서열번호: 499), 아주로시딘(Azurocidin)(서열번호: 501), 인간 혈청 알부민 신호 펩티드(서열번호: 503), A2M 수용체 연관 단백질 신호 펩티드(서열번호: 505), IGHV3-23(서열번호: 507), IGKV1-D33(HuL1)(서열번호: 509), IGKV1-D33(L14F)(HuH7)(서열번호: 511), 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 고유한 것이다.
특정 구현예에서, CAR은 GM-CSFRa 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, GM-CSFRa 신호 펩티드는 서열번호: 489의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 489보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 489와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 489의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, GM-CSFRa 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 490을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 490과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 490의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 490의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 Igκ 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, Igκ 신호 펩티드는 서열번호: 491의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 491보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 491과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 491의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, Igκ 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 492를 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 492와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 492의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 492의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 IgE에 고유한 IgE 신호 펩티드("IgE 신호 펩티드"), 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, IgE 신호 펩티드 서열번호: 493의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 493보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 493과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 493의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, IgE 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 494를 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 494와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 494의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 494의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 CD8α에 고유한 CD8α 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, CD8α 신호 펩티드는 서열번호: 495의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 495보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 495와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 495의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, CD8α 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 496을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 496과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 496의 보체와 혼성화하거나 서열번호: 496의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 마우스 Ig VH 영역 3 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, 마우스 Ig VH 영역 3 신호 펩티드는 서열번호: 497의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 497보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 497과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 497의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 마우스 Ig VH 영역 3 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 498을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 498과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 498의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 498의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 β2M 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, β2M 신호 펩티드는 서열번호: 499의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 499보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 499와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 499의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, β2M 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 500을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 500과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 500의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 500의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 아주로시딘 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, 아주로시딘 신호 펩티드는 서열번호: 501의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 501보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 501과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 501의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 아주로시딘 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 502를 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 502와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 502의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 502의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 인간 혈청 알부민 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, 인간 혈청 알부민 신호 펩티드는 서열번호: 503의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 503보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 503과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 503의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 인간 혈청 알부민 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 504를 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 504와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 504의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 504의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 A2M 수용체 연관 단백질 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, A2M 수용체 연관 단백질 신호 펩티드는 서열번호: 505의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 505보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 505와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 505의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, A2M 수용체 연관 단백질 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 506을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 506과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 506의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 506의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 IGHV3-23 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, IGHV3-23 신호 펩티드는 서열번호: 507의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 507보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 507과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 507의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, IGHV3-23 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 508을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 508과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 508의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 508의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 IGKV1-D33 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, IGKV1-D33 신호 펩티드는 서열번호: 509의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 509보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 509과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 509의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, IGKV1-D33 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 510을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 510과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 510의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 510의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 IGHV3-33(L14F) 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, IGHV3-33(L14F) 신호 펩티드는 서열번호: 511의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 511보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 511과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 511의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, IGHV3-33(L14F) 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 512를 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 512와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 512의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 512의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 TVB2(T21A) 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, TVB2(T21A) 신호 펩티드는 서열번호: 513의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 513보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 513과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 513의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, TVB2(T21A) 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 514를 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 514와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 514의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 514의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 CD52 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, CD52 신호 펩티드는 서열번호: 515의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 515보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 515와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 515의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, CD52 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 516을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 516과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 516의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 516의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, CAR은 LNGFR 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 연결된다. 이러한 특정 구현예에서, LNGFR 신호 펩티드 서열번호: 517의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 517보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 517과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 517의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, LNGFR 신호 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 518을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 518과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 518의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 518의 코돈 퇴화 변이체이다.
F. 예시적인 CAR 작제물
비제한적인 예로서, CAR은 서열번호: 591, 593, 595, 597, 599, 601, 603, 605, 607, 609, 611, 613, 615, 617, 619, 621, 623, 625, 627, 및 629 중 임의의 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 또는 이의 보존적으로-치환된 변이체를 포함할 수 있다. 비제한적인 추가의 예로서, CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호: 592, 594, 596, 598, 600, 602, 604, 606, 608, 610, 612, 614, 616, 618, 620, 622, 624, 626, 628, 및 630 중 임의의 하나의 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열; 엄격한 혼성화 조건 하에 이러한 서열 중 임의의 하나의 보체와 혼성화하는 서열; 또는 이러한 서열 중 임의의 하나의 코돈 퇴화 변이체를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, CAR은 서열번호: 623과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 또는 이의 보존적으로-치환된 변이체를 포함할 수 있다. 이러한 특정 구현예에서, CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호: 624의 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열 이러한 서열 중 임의의 하나의 보체와 혼성화하는 서열; 또는 이러한 서열 중 임의의 하나의 코돈 퇴화 변이체를 포함할 수 있다.
CAR 및 CAR 구성 뿐만 아니라 조성물은 예를 들어, 다음에 기재되어 있다:
ㆍ 암에 대한 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포 요법: 실행 가이드, 편집: Daniel W. Lee and Nirali N. Shah, 2020(ISBN 978-0-323-66181-2; DOI https://doi.org/10.1016/C2017-0-04066-1);
ㆍ 2세대 세포 및 유전자-기반 요법, 생물학적 진보, 임상 결과 및 투자 전략, 편집위원장: Alain A. Devyn M. Smith, Nathan J. Dowden, 2020(ISBN 978-0-12-812034-7; DOI https://doi.org/10.1016/C2016-0-02070-3);
ㆍ 키메라 항원 수용체(CAR) 면역요법의 기초, 저자: Mumtaz Yaseen Balkhi, 2020(ISBN 978-0-12-819573-4, DOI https://doi.org/10.1016/C2018-0-05356-6);
ㆍ 키메라 항원 수용체의 조작 및 설계, 저자: Sonia Guedan, Hugo Calderon, Avery D. Posey, Jr., and Marcela V. Maus, Molecular Therapy: Methods & Clinical Development, Vol. 12, March(2019)(https://www.cell.com/molecular-therapy-family/methods/pdf/S2329-0501(18)30133-5.pdf);
ㆍ 한눈에 보는 키메라 항원 수용체 T 세포 요법 파이프라인: Clinicaltrials.Gov의 후향적이고 체계적인 분석, 저자: Eider F Moreno Cortes, Caleb K Stein, Paula A Lengerke Diaz, Cesar A Ramirez-Segura, Januario E. Castro, MD, Blood(2019) 134(Supplement_1): 5629(https://doi.org/10.1182/blood-2019-132273);
ㆍ WO2020209934(PCT/US2020/017794) - 신규 키메라 항원 수용체 및 라이브러리(MIT);
ㆍ WO2020037142(PCT/US2019/046691) - t 세포 효과기 기능을 부스트하기 위한 고처리량 활성화 스크리닝을 위한 조성물 및 방법(Yale);
ㆍ WO2015123642(PCT/US2015/016057) - 키메라 항원 수용체 및 제조 방법(Univ. TX);
ㆍ WO2020014366(PCT/US2019/041213) - Ror-1 특이적 키메라 항원 수용체 및 이의 용도(Precigen);
ㆍ WO2019236577(PCT/US2019/035384) - Muc16 특이적 키메라 항원 수용체 및 이의 용도(Precigen)
ㆍ WO2019079486(PCT/US2018/056334) - 스페이서를 포함하는 폴리펩티드 조성물(Precigen)
ㆍ WO2017214333(PCT/US2017/036440) - Cd33 특이적 키메라 항원 수용체(Precigen)
V. 사이토카인
일부 구현예에서, 본 발명의 변형된 면역 효과기 세포는 사이토카인을 포함할 수 있다. 사이토카인은 예를 들어, 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화될 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 miRNA(들), CAR 및 사이토카인, 또는 miRNA(들)와 사이토카인을 암호화할 수 있다.
일부 경우에, 사이토카인은 적어도 하나의 케모카인, 인터페론, 인터류킨, 림포카인, 종양 괴사 인자, 또는 이의 변이체 또는 조합을 포함한다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 인터페론, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-베타, TNF-알파, 성장 인자, hGH, 및/또는 인간 Toll-유사 수용체의 리간드 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, IFN-알파, IFN-베타, 또는 IFN-감마이다.
특정 구현예에서, 사이토카인은 인터류킨이다. 일부 경우에 인터류킨은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-35, 또는 이의 기능적 변이체 또는 단편이다.
특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-12, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체일 수 있다. 일부 구현예에서, IL-12는 단일 쇄 IL-12(scIL-12), 프로테아제 민감성 IL-12, 탈안정화된 IL-12, 막 결합된 IL-12, 삽입된 IL-12이다. 일부 경우에, IL-12 변이체는 WO2015/095249, WO2016/048903, WO2017/062953에 기재된 바와 같다.
특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체일 수 있다. 특정 구현예에서, IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 막 결합된다. 이는 IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체가 막 결합된 IL-15Rα, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 결합될 때 발생할 수 있다. 따라서, 본 발명의 특정 구현예는 IL-15 및 IL-15Rα를 포함하는 융합 단백질, 또는 그들의 각각의 기능적 단편 또는 변이체를 수반할 수 있다.
특정 구현예에서, IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 519의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 519의 아미노산보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 519의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 519의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 520의 서열을 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 520과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 520의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 520의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, IL-15Rα, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 521의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 521의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 521의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 521의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, IL-15Rα, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 522를 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 522와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 522의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 522의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 링커에 의해 IL-15Rα, 또는 이의 기능적 단편에 연결된다.
특정 구현예에서, 링커는 서열번호: 529의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 529보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 529와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 529의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 링커는 서열번호: 530을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 530과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 530과 혼성화하거나, 서열번호: 530의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, IL-15 및 IL-15Rα를 포함하는 융합 단백질은 서열번호: 523의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 523의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 523의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 523의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, IL-15 및 IL-15Rα를 포함하는 융합 단백질은 서열번호: 524를 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 524와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 524의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 603의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 사이토카인은 신호 펩티드에 연결된다. CAR와 함께 사용하기 위해 상기 기재된 것들을 포함하여, 진핵생물 세포에서 사용하기 위한 임의의 신호는 사이토카인에 연결될 수 있다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IgE 신호 펩티드에 연결된다.
특정 구현예에서, IL-15 및 IL-15Rα를 포함하는 융합 단백질은 서열번호: 525의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 525의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 525의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 525의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, IL-15 및 IL-15Rα를 포함하는 융합 단백질은 서열번호: 526을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 526과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 526의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 526의 코돈 퇴화 변이체이다.
VI. 세포 태그
일부 구현예에서, 본 발명의 변형된 면역 효과기 세포는 세포 태그를 포함할 수 있다. 세포 태그는 예를 들어, 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화될 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 miRNA(들), CAR 및/또는 사이토카인 뿐만 아니라 세포 태그를 암호화할 수 있다. 일부 측면에서, 세포 태그는 사멸 스위치, 선택 마커, 바이오마커, 또는 이의 조합으로 사용된다.
특정 구현예에서, 세포 태그는 미리 결정된 결합 파트너에 의해 결합될 수 있다. 이러한 특정 구현예에서, 세포 태그는 비-면역원성이다. 이러한 특정 구현예에서, 세포 태그는 비-면역원성이 되도록 절두된 폴리펩티드를 포함한다.
특정 구현예에서, 미리 결정된 결합 파트너의 투여는 주입된 CAR-T 세포의 고갈을 허용한다. 예를 들어, 세툭시맙(cetuximab) 또는 HER1을 인식하는 임의의 항체의 투여는 절두된 비-면역원성 HER1을 포함하는 세포 태그를 발현하는 세포의 제거를 허용한다. HER1 서열의 절두는 세툭시맙-결합 능력을 온전하게 유지하면서 EGF 리간드 결합, EGFR의 동종이량체화 및 이종이량체화, 및/또는 EGFR-매개 신호전달에 대한 가능성을 제거한다(Ferguson, K., 2008. A structure-based view of Epidermal Growth Factor Receptor regulation. Annu Rev Biophys, Volume 37, pp. 353-373).
특정 구현예에서, 세포 태그는 절두된 비-면역원성 HER1 폴리펩티드, 절두된 비-면역원성 LNGFR 폴리펩티드, 절두된 비-면역원성 CD20 폴리펩티드, 또는 절두된 비-면역원성 CD52 폴리펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체 중 적어도 하나를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포 태그는 HER1 도메인 III 및 절두된 HER1 도메인 IV를 포함하는 절두된 비-면역원성 HER1 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 도메인 및 이를 암호화하는 핵산 서열은 WO 2018/226897에 기재된 것들을 포함한다.
특정 구현예에서, HER1 도메인 III은 서열번호: 604의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 565의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 565의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 565의 서열의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, HER1 도메인 III, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 566을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 566과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 566의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 566의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 절두된 HER1 도메인 IV는 서열번호: 567의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 567의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 567의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 567의 서열의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 절두된 HER1 도메인 IV, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 568을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 568과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 568의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 568의 코돈 퇴화 변이체이다.
이러한 특정 구현예에서, 절두된 비-면역원성 HER1은 서열번호: 569의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 569의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 569의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 569의 서열의 아미노산 서열 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 절두된 비-면역원성 HER1, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 570을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 570과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 570의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 570의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포 태그는 절두된 비-면역원성 CD20, 또는 CD20t-1, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 세포 태그는 서열번호: 573, 서열번호: 575의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 573 또는 서열번호: 575의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 573 또는 서열번호: 575와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 573 또는 서열번호: 575의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 절두된 비-면역원성 CD20, 또는 CD20t-1, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 574 또는 서열번호: 576을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 574 또는 서열번호: 576과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 574 또는 서열번호: 576의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 574 또는 서열번호: 576의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포 태그는 막관통 도메인을 추가로 포함한다. 막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 예를 들어, 임의의 막 결합된 단백질 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 적합한 막관통 도메인은 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄의 막관통 도메인(들); 또는 CD28, CD3 엡실론, CD3ζ, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 또는 CD154로부터의 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 대안적으로, 막관통 도메인은 합성일 수 있고, 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중항은 합성 막관통 도메인의 한쪽 또는 양쪽 말단에서 발견된다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 막관통 도메인은 서열번호: 477의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 477의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 477의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 477의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, CD28 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 478을 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 478과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 478의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 478의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포 태그는 절두된 HER1, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체, 및 막관통 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 서열번호: 571의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 571의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 571의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 571의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포 태그는 서열번호: 572를 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 572와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 572의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 572의 코돈 퇴화 변이체이다.
특정 구현예에서, 세포 태그는 신호 펩티드와 연결된다. 신호 펩티드는 본원의 CAR에 대해 기재된 것들을 포함하여, 진핵생물 세포에서 사용하기에 적합한 임의의 신호 펩티드일 수 있다. 특정 구현예에서, 신호 펩티드는 서열번호: 491의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 Igκ 신호 펩티드이다.
VII. 유전적 작제물
도 16에 제시된 바와 같이, 세포에서 다양한 유전자 및 다른 조절 요소의 발현을 위한 주형으로서 사용될 수 있는 예시적인 폴리펩티드가 제공된다. 다양한 요소는 폴리뉴클레오티드에 포함되거나 생략될 수 있고 상이한 옵션은 폴리뉴클레오티드에서 다양한 예시적인 부위에 대해 제시됨이 이해되어야 한다.
제시된 바와 같이, 폴리뉴클레오티드는 박테리아 게놈으로 폴리뉴클레오티드의 attP/attB 파지 통합을 위한 통합 신호를 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 5' 상동성 아암 또는 5' 말단 반복부 및 3' 상동성 아암 또는 3' 말단 반복부를 추가로 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 5' 상동성 아암 또는 5' 말단 반복부에 인접한 3' 및 3' 상동성 아암 또는 3' 말단 반복부에 인접한 5'에 위치된 절연체, 경계 요소 및 S/MAR을 추가로 포함할 수 있다. 절연체, 경계 요소, 또는 S/MAR 사이에서, 폴리뉴클레오티드는 5'에서 3'까지, 사일런서, 인핸서, TF 결합 모듈 및 코어 프로모터를 포함할 수 있는 프로모터; 안정성 모듈, 번역 제어 요소, 및 miRNA 암호화된 서열과 같은 인트론 내장된 요소를 포함할 수 있는 5' 비번역 영역; 신호 펩티드, 세포외 도메인, 막관통 도메인, 신호전달 도메인, 항체 도메인, 펩티드 링커, 인테인 및 에피토프 태그를 포함할 수 있는 하나 이상의 유전자; 및 안정성 모듈, 번역 제어, 3' 단부 처리 신호 및 전사 종결인자를 포함할 수 있는 3' 비번역 영역을 포함할 수 있다. 발현될 유전자는 IRES, 절단 펩티드, 또는 리보솜 스킵핑 펩티드에 의해 분리될 수 있음이 이해되어야 한다.
CAR은 miRNA, 사이토카인, 및/또는 세포 태그와 동일한 유전적 작제물에 암호화될 수 있다. 하나의 유전적 작제물을 사용하여 발현되는 이러한 구성요소 중 2 개 이상을 갖는 것의 이점은 이러한 구성요소의 화학량론적 발현이다.
A. 링커
특정 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드(예를 들어, CAR, 사이토카인, 및 세포 태그)는 링커 폴리펩티드(들)에 의해 연결된다. 링커는 또한 폴리펩티드의 도메인(예를 들어, CAR의 VH 및 VL 도메인, 세포 태그의 절두된 HER1 및 막관통 도메인, 및 IL-15 및 IL-15Rα 도메인)을 연결하는 데 사용될 수 있다.
본 발명에 적합한 링커는 가요성 링커, 강성 링커, 및 생체내에서 절단가능한 링커를 포함한다. 일부 경우에, 링커는 기능적 도메인을 함께 연결하거나(가요성 및 강성 링커에서와 같이) 생체내에서 절단가능한 링커에서와 같이 생체내에서 자유 기능적 도메인을 방출하는 역할을 한다.
언급된 바와 같이, 일부 경우에, 링커 서열은 가요성 링커를 포함할 수 있다. 가요성 링커는 연결된 도메인이 일정 정도의 이동 또는 상호작용을 필요로 할 때 적용될 수 있다. 가요성 링커는 작은 비극성(예를 들어, Gly) 또는 극성(예를 들어, Ser 또는 Thr) 아미노산으로 구성될 수 있다. 가요성 링커는 주로 Gly 및 Ser 잔기의 스트레치로 이루어진 서열을 가질 수 있다("GS" 링커). 가요성 링커의 예는 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n의 서열을 가질 수 있다. 사본 수 "n"을 조정함으로써, 이 예시적인 GS 링커의 길이는 기능적 도메인의 적절한 분리를 달성하거나, 필요한 도메인간 상호작용을 유지하도록 최적화될 수 있다. 예를 들어, n이 4인 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n은 서열번호: 608 또는 이의 보존적으로 치환된 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 (G4S)4 링커이다. GS 링커 이외에, 다른 가요성 링커가 재조합 융합 단백질에 활용될 수 있다. 일부 경우에, 가요성 링커는 가요성을 유지하기 위해 Thr 및 Ala와 같은 추가 아미노산을 함유할 수 있다. 다른 경우에, Lys 및 Glu와 같은 극성 아미노산이 용해도를 개선하기 위해 사용될 수 있다.
가요성 링커는 특정 이동 또는 상호작용이 융합 단백질 도메인에 대해 바람직한 경우 적합한 선택일 수 있다. 게다가, 가요성 링커는 강성 구조를 갖지 않지만, 일부 경우에 그들은 기능적 도메인 사이의 거리를 유지하기 위해 수동 링커로서 역할을 할 수 있다. 가요성 링커의 길이는 적절한 접힘을 허용하거나 융합 단백질의 최적의 생물학적 활성을 달성하도록 조정될 수 있다.
강성 링커는 폴리펩티드의 도메인 사이의 고정된 거리를 유지하기 위해 활용될 수 있다. 강성 링커의 예는 몇 가지 예를 들면 알파 나선-형성 링커, Pro-풍부 서열, (XP)n, X-Pro 백본, A(EAAAK)nA(n = 2-5)(서열번호: 563) 및 이의 기능적 단편 및 변이체를 포함한다. 강성 링커는 α-나선 구조를 채택하거나 일부 경우에 다수의 Pro 잔기를 함유함으로써 상대적으로 단단한 구조를 나타낼 수 있다.
본 발명에 유용한 링커는 일부 경우에 절단가능할 수 있다. 다른 경우에, 링커는 절단가능하지 않다. 절단가능하지 않는 링커는 기능적 도메인을 함께 공유적으로 연결하여 생체내 과정 또는 생체외 과정 전반에 걸쳐 하나의 분자로서 작용할 수 있다. 링커는 또한 생체내에서 절단가능할 수 있다. 절단가능한 링커는 생체내에서 자유 기능적 도메인을 방출하도록 도입될 수 있다.
절단가능한 링커는 몇 가지 예를 들면 환원 시약, 프로테아제의 존재에 의해 절단될 수 있다. 예를 들어, 이황화 결합의 환원은 절단가능한 링커를 생성하기 위해 활용될 수 있다. 이황화 링커의 경우, 글루타티온과 같은 티올과의 이황화 교환을 통한 절단 이벤트는 절단을 생성할 수 있다. 일부 경우에, 절단가능한 링커는 표적화된 절단을 허용할 수 있다. 예를 들어, 재조합 융합 단백질에서 링커의 생체내 절단은 또한 특이적 세포 또는 조직에서 병리학적 조건(예를 들어, 암 또는 염증) 하에 생체내에서 발현되거나, 특정 세포 구획 내에서 제한될 수 있는 프로테아제에 의해 수행될 수 있다. 절단가능한 링커는 하이드라존, 펩티드, 이황화물, 또는 티오에스테르를 포함할 수 있다. 예를 들어, 하이드라존은 혈청 안정성을 부여할 수 있다. 다른 경우에, 하이드라존은 산성 구획에서 절단을 허용할 수 있다. 산성 구획은 최대 7의 pH를 가질 수 있다. 링커는 또한 티오에테르를 포함할 수 있다. 티오에테르는 환원가능하지 않을 수 있다. 티오에테르는 세포내 단백질 분해를 위해 설계될 수 있다. 절단가능한 링커의 예는 퓨린링크(Furinlink), fmdv, 및 2A 링커(예를 들어, P2A, GSG-P2A, FP2A, T2A, 및 퓨린-T2A), 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
fmdv 링커는 서열번호: 539의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 539의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 539의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 539의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, fmdv 링커는 서열번호: 540을 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 540과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 540의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 540의 코돈 퇴화 변이체이다.
P2A 링커는 서열번호: 547의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 547의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 547의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 547의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, P2A 링커는 서열번호: 548을 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 548과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 548의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 548의 코돈 퇴화 변이체이다.
GSG-P2A 링커는 서열번호: 549의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 549의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 549의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 549의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, GSG-P2A 링커는 서열번호: 550을 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 550과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 550의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 550의 코돈 퇴화 변이체이다.
FP2A 링커는 서열번호: 555의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 555의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 555의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 555의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, FP2A 링커는 서열번호: 556, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 핵산에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 556과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 556의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 556의 코돈 퇴화 변이체이다.
T2A 링커는 서열번호: 541의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 541의 아미노산 서열보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 541의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 541의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, T2A 링커는 서열번호: 475428을 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 542와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 54의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 542의 코돈 퇴화 변이체이다.
일부 구현예에서, 링커는 퓨린 폴리펩티드 및 2A 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 퓨린 폴리펩티드 및 2A 폴리펩티드는 적어도 3 개의 소수성 아미노산을 포함하는 폴리펩티드 링커에 의해 연결된다. 이러한 링커는 "퓨린-T2A" 링커라고 한다. 일부 경우에, 적어도 3 개의 소수성 아미노산은 글리신(Gly)(G), 알라닌(Ala)(A), 발린(Val)(V), 류신(Leu)(L), 이소류신(Ile)(I), 프롤린(Pro)(P), 페닐알라닌(Phe)(F), 메티오닌(Met)(M), 트립토판(Trp)(W)으로 이루어진 목록으로부터 선택된다. 일부 경우에, 폴리펩티드 링커는 하나 이상의 GS 링커 서열, 예를 들면 (GS)n, (SG)n, 및(GSG)n을 포함할 수 있으며, 여기서 n은 0 내지 30의 임의의 수일 수 있다.
퓨린-T2A 링커는 서열번호: 543 또는 545의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 단편은 서열번호: 543 또는 545의 아미노산보다 N- 및/또는 C-말단에서 최대 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 개 아미노산 잔기만큼 더 짧다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 543 또는 545의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖고/갖거나, 서열번호: 543 또는 545의 아미노산 서열의 보존적으로-치환된 변이체이다.
특정 구현예에서, 퓨린-T2A 링커는 서열번호: 544 또는 546을 포함하는 핵산, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 544 또는 546과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 544 또는 546의 보체와 혼성화하거나, 서열번호: 544 또는 546의 코돈 퇴화 변이체이다.
링커는 조작된 링커일 수 있다. 예를 들어, 링커는 소수성과 같은 화학적 특성을 포함하도록 설계될 수 있다. 링커를 설계하는 방법은 계산적일 수 있다. 일부 경우에, 계산적 방법은 그래픽 기술을 포함할 수 있다. 계산 방법은 데이터베이스로부터 유래된 3차원 펩티드 구조의 라이브러리로부터 적합한 펩티드를 검색하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, Brookhaven 단백질 데이터 뱅크(PDB)는 링커의 선택된 아미노산 사이의 공간 내 거리에 걸쳐 사용될 수 있다.
추가의 예시적인 링커는 서열 목록에 제공되어 있다.
일부 경우에, 적어도 2 개의 링커 서열이 동일한 단백질에 포함될 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질 내의 관심 폴리펩티드는 적어도 2 개의 링커에 의해 분리될 수 있다. 일부 경우에, 폴리펩티드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 개, 또는 최대 10 개의 링커에 의해 분리될 수 있다.
본 발명의 CAR, 세포 태그, 및/또는 사이토카인은 융합 단백질로서 발현될 수 있다. 이러한 구현예에서, 이러한 구성요소는 자기 절단 펩티드, 예를 들어 2A 펩티드를 사용하여 함께 연결될 수 있다.
특정 구현예에서, 자기 절단 펩티드는 T2A 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체이다.
특정 구현예에서, 자기 절단 펩티드는 퓨린-T2A 펩티드, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체이다.
이러한 특정 구현예에서, CAR, 사이토카인, 및 세포 태그는 자기 절단 링커, 예를 들어 퓨린-T2A를 포함하는 것에 의해 연결된 CAR 및 사이토카인, 및 자기 절단 링커, 예를 들어 T2A를 포함하는 것에 의해 연결된 사이토카인 및 세포 태그와의 융합 단백질로서 발현된다.
B. 프로모터
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 프로모터와 작동하능하게 연결되어 작제물에 존재할 수 있다. 적절한 프로모터는 숙주 세포 및 추구하는 효과에 기반하여 선택될 수 있다. 적합한 프로모터는 구성적 및 유도성 프로모터를 포함한다. 프로모터는 조직 특이적일 수 있으며, 이러한 프로모터는 당업계에 잘 알려져 있다.
본 발명에 사용하기 위한 구성적 프로모터의 예는 급초기 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터; 인간 신장 성장 인자 1 알파 1(hEF1A1); 시미안 바이러스 40(SV40) 초기 프로모터; 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV); 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 긴 말단 반복부(LTR) 프로모터; MoMuLV 프로모터; 조류 백혈병 바이러스 프로모터; 엡스타인 바 바이러스 급초기 프로모터; 라우스 육종 바이러스 프로모터; 및 액틴 프로모터, 미오신 프로모터, 헤모글로빈 프로모터, 및 크레아틴 키나제 프로모터와 같으나 이에 제한되지 않는 인간 유전자 프로모터; 및 이의 기능적 단편 및 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 프로모터는 hEF1A1 프로모터이다. hEF1A1 프로모터는 서열번호: 577의 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 577과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 577의 보체와 혼성화한다. 특정 구현예에서, 프로모터는 CMV 프로모터이다. CMV 프로모터는 서열번호: 578의 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 578과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 578의 보체와 혼성화한다.
구성적 프로모터와 대조적으로, 유도성 프로모터의 사용은 폴리뉴클레오티드 서열의 발현이 바람직할 때 작동적으로 연결된 이러한 서열의 발현을 켜거나, 발현이 바람직하지 않을 때 발현을 끌 수 있는 분자 스위치를 제공한다. 유도성 프로모터의 예는 메탈로티오닌 프로모터, 글루코코르티코이드 프로모터, 프로게스테론 프로모터, 및 테트라사이클린 프로모터를 포함하나 이제 제한되지 않는다. 일 측면에서, 유도성 프로모터는 유전자 스위치 리간드 유도성 프로모터일 수 있다. 일부 경우에, 유도성 프로모터는 RHEOSWITCH®　유전자 스위치와 같은 소분자 리간드-유도성 2 개의 폴리펩티드 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치일 수 있다.
VIII. 벡터 및 전달 시스템
특정 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 비바이러스 및 바이러스 전달 시스템을 포함하는 임의의 적합한 전달 시스템에 의해 표적 세포에 전달될 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 miRNA, CAR, 사이토카인, 세포 태그, 또는 이의 임의의 조합을 암호화하는 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
특정 경우에, miRNA(들), CAR, 사이토카인, 및/또는 세포 태그는 별개의 벡터에서 발현된다. 다른 측면에서, miRNA(들), CAR, 사이토카인, 및/또는 세포 태그는 하나의 단일 벡터로부터 발현된다. 특정 경우에, CAR 및 miRNA(들)는 별개의 벡터에서 발현된다. 다른 측면에서, miRNA(들), CAR 및 사이토카인은 하나의 단일 벡터로부터 발현된다. 특이적 경우에, 벡터는 렌티바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존 또는 세린 재조합효소 매개 통합을 위한 서열을 함유하는 벡터일 수 있다. 일부 측면에서, 벡터는 플라스미드, 미니-서클 DNA 또는 나노플라스미드이다.
특정 구현예에서, 벡터가 플라스미드, 미니-서클 DNA 또는 나노플라스미드인 경우, 플라스미드, 미니-서클 DNA 또는 나노플라스미드는 박테리아 복제 기점을 추가로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 박테리아 복제 기점은 ColE1 플라스미드로부터 유래될 수 있다. 특정 구현예에서, 박테리아 복제 기점은 서열번호: 579의 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 579와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 579의 보체와 혼성화한다.
하나 이상의 miRNA(들) 및 본원에 기재된 CAR 또는 이의 일부의 발현을 평가하기 위해, 세포에 도입될 발현 벡터는 또한 바이러스 벡터 또는 비바이러스 벡터를 통해 형질감염 또는 감염시키려는 세포 집단으로부터 발현 세포의 식별 및 선택을 용이하게 하기 위한 선택가능한 마커 유전자 또는 리포터 유전자 또는 둘 다를 함유할 수 있다. 다른 측면에서, 선택가능한 마커는 DNA의 별개의 조각으로 운반되고 공동-형질감염 절차에 사용될 수 있다. 선택가능한 마커 및 리포터 유전자는 둘 다 숙주 세포에서 발현을 가능하게 하는 적절한 조절 서열과 함께 측면에 있을 수 있다. 유용한 선택가능한 마커는 예를 들어, 네오마이신 내성 유전자(neo) 및 암피실린 내성 유전자 등과 같은 항생제 내성 유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, 절두된 표피 성장 인자 수용체(HER1t 또는 HER1t-1) 태그는 선택가능한 마커 유전자로서 사용될 수 있다.
리포터 유전자는 잠재적으로 형질감염된 세포를 식별하고 조절 서열의 기능을 평가하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, 리포터 유전자는 수용 유기체 또는 조직에 존재하지 않거나 이에 의해 발현되지 않고 발현이 일부 용이하게 검출가능한 특성, 예를 들어, 효소 활성에 의해 나타나는 폴리펩티드를 암호화하는 유전자이다. 리포터 유전자의 발현은 DNA가 수용 세포로 도입된 후 적합한 시간에 검정된다. 적합한 리포터 유전자는 루시퍼라제, 베타-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제, 분비된 알칼리 포스파타제, 또는 녹색 형광 단백질 유전자를 암호화하는 유전자를 포함한다(예를 들어, Ui-Tei 등, FEBS Letters 479: 79-82(2000)). 적합한 발현 시스템은 잘 알려져 있고 알려진 기술을 사용하여 제조되거나 상업적으로 수득될 수 있다. 일반적으로, 리포터 유전자의 가장 높은 발현 수준을 나타내는 최소 5' 측면 영역을 갖는 작제물은 프로모터로서 식별된다. 이러한 프로모터 영역은 리포터 유전자에 연결되고 프로모터-구동된 전사를 조절하는 능력에 대한 제제를 평가하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 바이러스 벡터는 이식유전자의 발현을 구동하는 hEF1A1 프로모터, 전사를 향상시키는 소 성장 호르몬 polyA 서열, 우드척 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE), 뿐만 아니라 pFUGW 플라스미드로부터 유래된 LTR 서열을 포함할 수 있다.
A. 핵산을 세포로 도입하는 방법
유전자를 세포로 도입하고 발현시키는 방법은 잘 알려져 있다. 발현 벡터의 맥락에서, 벡터는 당업계의 임의의 방법에 의해 숙주 세포, 예를 들어, 포유류, 박테리아, 효모, 또는 곤충 세포로 용이하게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적, 또는 생물학적 수단에 의해 숙주 세포로 전달될 수 있다.
1. 물리적 방법
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포, 예를 들면 면역 효과기 세포로 도입하기 위한 물리적 방법은 인산칼슘 침전, 리포펙션, 입자 충격, 미세주사, 전기천공 등을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포를 생산하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, Sambrook 등(Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York(2001))을 참조한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포로 도입하기 위한 방법은 인산칼슘 형질감염 또는 폴리에틸렌이민(PEI) 형질감염이다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포로 도입하기 위한 방법은 전기천공이다.
a. 전기천공(EP) 완충액
다양한 완충액이 전기천공에 사용될 수 있다. 본원에 개시된 완충액은 이들 완충액이 다른 알려진 전기천공 완충액과 비교하여 더 적은 구성요소를 포함함에도 불구하고, 향상된 형질감염 능력을 포함하여 개선된 특성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
표 4는 완충제로서 사용되는 상이한 양의 일염기성 및 이염기성 포스페이트를 제공한다. 표 5는 완충제 및 글루코스를 함유하는 완충액 1-20을 제공한다. 표 Z는 완충제 및 만니톨을 함유하는 완충액 21-37을 제공한다. 표 7은 대조군 완충액(Mirus Bio™ IngenioTM 전기천공 용액, 카탈로그 번호 MIR-50117; 미국 위스콘신주 매디슨 소재 Mirus Bio LLC)("대조군 1")과 비교하여 완충액 1, 2 및 3에 대한 pH, 전도성, 및 삼투압 농도를 제공한다.
표 4: 완충제로서 사용되는 상이한 양의 일염기성 및 이염기성 포스페이트
표 5: 완충액 1 내지 20 - 완충제 및 글루코스
표 6: 완충액 21 내지 37 - 완충제 및 만니톨
표 7: 대조군 1과 비교하여 완충액 1, 2, 및 3의 조성, pH, 전도성, 및 삼투압 농도
일부 구현예에서, 완충액은 물과 같은 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, 물은 정제되고/되거나 멸균될 수 있다. 예를 들어, 물은 탈이온화(예를 들어, 용량성 탈이온화 또는 전기탈이온화), 역삼투, 탄소 여과, 미세여과, 한외여과, 및/또는 자외선 멸균에 적용될 수 있다. 일부 구현예에서, 물은 탈이온화된다. 일부 구현예에서, 물은 "주사용수"로 지정된 품질의 것이며; "주사용 멸균수"로도 알려져 있다. 주사용수는 일반적으로 증류 또는 역삼투에 의해 제조된다. 주사용수는 화학적으로 "H2O"로 지정되고 약 5.0 내지 약 7.0, 바람직하게는 약 5.5의 pH를 갖는 물의 멸균, 비발열성, 무용질 제제이다.
일부 구현예에서, 용매는 총 완충액 부피의 부피 기준 0.1% 내지 99.9%를 포함한다. 예를 들어, 용매는 총 완충액 부피의 부피 기준 적어도 약 0.1%, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 99.1%를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 완충액은 용질, 예를 들어 당 또는 당으로부터 유래된 유기 화합물, 예를 들어 당 알코올을 포함한다. 완충액이 당을 포함하는 구현예에서, 당은 단당류, 이당류, 및/또는 다당류를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 당은 단당류, 예를 들어 글루코스, 프럭토스, 및/또는 갈락토스를 포함한다. 일부 구현예에서, 당은 이당류, 예를 들어 수크로스, 락토스, 및 말토스를 포함한다. 일부 구현예에서, 당은 다당류, 예를 들어 셀룰로스 또는 전분을 포함한다. 완충액이 당 알코올을 포함하는 구현예에서, 당 알코올은 만니톨, 소르비톨, 크실리톨, 락티톨, 이소말트, 말티톨, 및/또는 수소화 전분 가수분해물(HSH)을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 당은 약 50 밀리몰(mM) 미만의 양으로 존재한다. 예를 들어, 당은 약 45 mM, 40 mM, 35 mM, 30 mM, 25 mM, 20 mM, 15 mM, 10 mM, 또는 5 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, 당은 약 10 mM 내지 약 50 mM, 약 10 mM 내지 약 40 mM, 약 10 mM 내지 약 20 mM, 또는 약 25 mM 내지 약 35 mM 범위의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 당은 약 25mM, 26mM, 27mM, 28mM, 29mM, 30mM, 31mM, 32mM, 33mM, 34mM, 또는 35mM의 양으로 존재한다.
일부 구현예에서, 당은 글루코스이다. 이들 구현예에서, 글루코스는 약 50 밀리몰(mM) 미만의 양으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 글루코스는 약 45 mM, 40 mM, 35 mM, 30 mM, 25 mM, 20 mM, 15 mM, 10 mM, 또는 5 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, 글루코스는 약 10 mM 내지 약 50 mM, 약 10 mM 내지 약 40 mM, 약 10 mM 내지 약 20 mM, 또는 약 25 mM 내지 약 35 mM 범위의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 글루코스는 약 25 mM, 26 mM, 27 mM, 28 mM, 29 mM, 30 mM, 31 mM, 32 mM, 33 mM, 34 mM, 또는 35 mM의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, 글루코스는 약 30 mM 또는 31 mM의 양으로 존재한다.
일부 구현예에서, 당은 만니톨이다. 이들 구현예에서, 만니톨은 약 50 밀리몰(mM) 미만의 양으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 만니톨은 약 45 mM, 40 mM, 35 mM, 30 mM, 25 mM, 20 mM, 15 mM, 10 mM, 또는 5 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, 만니톨은 약 10 mM 내지 약 50 mM, 약 10 mM 내지 약 40 mM, 약 10 mM 내지 약 20 mM, 또는 약 25 mM 내지 약 35 mM 범위의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 만니톨은 약 25 mM, 26 mM, 27 mM, 28 mM, 29 mM, 30 mM, 31 mM, 32 mM, 33 mM, 34 mM, 또는 35 mM의 양으로 존재한다.
일부 구현예에서, EP 완충액은 하나 이상의 염화물 염, 예를 들어 염화칼륨(KCl) 및/또는 염화마그네슘(MgCl2)을 포함한다. 일부 구현예에서, 완충액은 하나 이상의 완충제, 예를 들어, Na2HPO4, NaH2PO4, 또는 Na2HPO4/NaH2PO4를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 완충액은 HEPES 및/또는 DMSO 중 하나 이상을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 완충액은 상업적인 전기천공(EP) 완충액에서 통상적으로 발견되는 하나 이상의 완충제를 구체적으로 제외한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 완충액은 DMSO 및/또는 HEPES 중 하나 또는 둘 다를 제외한다.
일부 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, 및 Na2HPO4/NaH2PO4를 포함한다. 일부 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, Na2HPO4/NaH2PO4, 및 HEPES를 포함한다. 다른 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, Na2HPO4/NaH2PO4, HEPES, 및 DMSO를 포함한다.
일부 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, 및 Na2HPO4/NaH2PO4로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, Na2HPO4/NaH2PO4, 및 HEPES로 본질적으로 이루어진다. 다른 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, Na2HPO4/NaH2PO4, HEPES, 및 DMSO로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, 및 Na2HPO4/NaH2PO4로 이루어진다. 일부 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, Na2HPO4/NaH2PO4, 및 HEPES로 이루어진다. 다른 구현예에서, 완충액은 물(H2O), 글루코스, KCl, MgCl2, Na2HPO4/NaH2PO4, HEPES, 및 DMSO로 이루어진다.
일부 구현예에서, 완충제는 약 6.0 내지 8.0, 6.5 내지 8.0, 7.0 내지 8.0, 7.5 내지 8.0, 6.0 내지 7.5, 6.0 내지 7.0, 6.0 내지 6.5, 6.5 내지 7.5, 또는 6.5 내지 7.0 범위의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 완충제는 약 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7., 7.8, 7.9, 또는 8.0의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 완충제를 포함하는 완충액은 약 6.0 내지 8.0, 6.5 내지 8.0, 7.0 내지 8.0, 7.5 내지 8.0, 6.0 내지 7.5, 6.0 내지 7.0, 6.0 내지 6.5, 6.5 내지 7.5, 또는 6.5 내지 7.0 범위의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 완충액은 약 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7., 7.8, 7.9, 또는 8.0의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 완충액은 Na2HPO4 및/또는 NaH2PO4 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 완충액이 두 완충제를 포함하는 구현예에서, 2 개(즉, Na2HPO4/NaH2PO4)의 비율은 약 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 또는 2:3일 수 있다. 일부 구현예에서, Na2HPO4/NaH2PO4의 비율은 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 또는 7.9의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, Na2HPO4 및 NaH2PO4의 혼합물("Na2HPO4/NaH2PO4" 또는 "인산나트륨"으로도 언급됨)은 약 50 mM 내지 160 mM, 60 mM 내지 150 mM, 70 mM 내지 140 mM, 75 mM 내지 130 mM, 80 mM 내지 125 mM, 90 mM 내지 125 mM, 90 mM 내지 120 mM, 90 mM 내지 115 mM, 또는 90 mM 내지 105 mM 범위의 양으로 완충액에 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, Na2HPO4/NaH2PO4는 적어도 50 mM, 60 mM, 70 mM, 80 mM, 90 mM, 또는 100 mM의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, Na2HPO4/NaH2PO4는 80 mM, 81 mM, 82 mM, 83 mM, 84 mM, 85 mM, 86 mM, 87 mM, 88 mM, 89 mM, 90 mM, 91 mM, 92 mM, 93 mM, 94 mM, 95 mM, 96 mM, 97 mM, 98 mM, 99 mM, 100 mM, 101 mM, 102 mM, 103 mM, 104 mM, 105 mM, 106 mM, 107 mM, 108 mM, 109 mM, 110 mM, 111 mM, 112 mM, 113 mM, 114 mM, 115 mM, 116 mM, 117 mM, 118 mM, 119 mM, 또는 120 mM의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, Na2HPO4/NaH2PO4는 90 mM 또는 105 mM의 양으로 존재한다.
완충액이 KCl을 포함하는 구현예에서, KCl은 약 30 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 예를 들어, KCl은 약 25 mM, 20 mM, 15 mM, 10 mM, 또는 5 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, KCl은 약 1 mM 내지 약 30 mM, 약 2 mM 내지 약 25 mM, 약 3 mM 내지 약 20 mM, 약 4 mM 내지 약 15 mM, 약 5 mM 내지 약 10 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 15 mM 범위의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, KCl은 약 1 mM, 2 mM, 3 mM, 4 mM, 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 또는 15mM의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, KCl은 약 5 mM 또는 10 mM의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, KCl은 약 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 또는 7.9의 pH를 갖는다.
완충액이 MgCl2를 포함하는 구현예에서, MgCl2는 약 50 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 예를 들어, MgCl2는 약 45 mM, 35 mM, 30 mM 25 mM, 20 mM, 15 mM, 10 mM, 또는 5 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, MgCl2는 약 5 mM 내지 약 50 mM, 약 6 mM 내지 약 45 mM, 약 7 mM 내지 약 40 mM, 약 8 mM 내지 약 35 mM, 약 9 mM 내지 약 30 mM, 약 10 mM 내지 약 25 mM, 또는 약 15 mM 내지 약 25 mM 범위의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, MgCl2는 약 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 15 mM, 16 mM, 17 mM, 18 mM, 19 mM, 20 mM, 21 mM, 22 mM, 23 mM, 24 mM, 25mM, 26 mM, 27 mM, 28 mM, 29 mM, 또는 30 mM의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, MgCl2는 약 15 mM 또는 20 mM의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, MgCl2는 약 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 또는 7.9의 pH를 갖는다.
완충액이 HEPES를 포함하는 구현예에서, HEPES는 약 30 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 예를 들어, HEPES는 약 25 mM, 20 mM, 15 mM, 10 mM, 5 mM, 4 mM, 3 mM, 2 mM, 1 mM, 0.5 mM, 또는 0.1 mM 미만의 양으로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, HEPES는 약 1 mM 내지 약 30 mM, 약 2 mM 내지 약 25 mM, 약 3 mM 내지 약 20 mM, 약 4 mM 내지 약 15 mM, 약 5 mM 내지 약 10 mM 범위의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, HEPES는 약 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, 2 mM, 3 mM, 4 mM, 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 또는 15mM의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, HEPES는 0 mM, 5 mM, 또는 10 mM의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, HEPES는 약 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 또는 7.9의 pH를 갖는다.
완충액이 DMSO를 포함하는 구현예에서, DMSO는 총 완충액 부피의 부피 기준 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 또는 0.1% 이하의 양으로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, DMSO는 총 완충액 부피의 부피 기준 약 0% 내지 약 2.5%로 존재한다. 일부 구현예에서, DMSO는 총 완충액 부피의 부피 기준 약 0.1% 내지 5%, 1% 내지 5 %, 2% 내지 5%, 3% 내지 5%, 또는 4% 내지 5% 범위의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, DMSO는 약 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 또는 7.9의 pH를 갖는다. 다른 구현예에서, DMSO는 완충액에 전혀 포함되지 않는다.
특정 구현예에서, 완충액은 50 mM 이하의 양의 당; 25 mM 이하의 양의 HEPES; 160 mM 이하의 양의 Na2HPO4/NaH2PO4; 10 mM 이하의 양의 KCl; 20 mM 이하의 양의 MgCl2; 및 총 완충액 부피의 부피 기준 5% 이하의 양의 DMSO를 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 단당류 및/또는 당 알코올을 포함할 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 만니톨 및/또는 글루코스이다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 글루코스이다. 일부 구현예에서, 완충액은 DMSO를 포함하지 않는다.
특정 구현예에서, 완충액은 적어도 약 15 mM의 양의 당; 25 mM 이하의 양의 HEPES; 적어도 약 90 mM의 양의 Na2HPO4/NaH2PO4; 적어도 약 2 mM의 양의 KCl; 적어도 15 mM의 양의 MgCl2; 및 총 완충액 부피의 부피 기준 5% 이하의 DMSO를 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 단당류 및/또는 당 알코올을 포함할 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 만니톨 및/또는 글루코스이다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 글루코스이다. 일부 구현예에서, 완충액은 DMSO를 포함하지 않는다.
특정 구현예에서, 완충액은 약 15 mM 내지 약 35 mM 범위의 양의 당; 약 5 mM 내지 약 10 mM 범위의 양의 KCl; 약 10.5 mM 내지 약 20 mM 범위의 양의 MgCl2; 약 90 mM 내지 약 105 mM 범위의 양의 Na2HPO4/NaH2PO4; 25 mM 이하의 양의 HEPES; 및 총 완충액 부피의 부피 기준 5% 이하의 양의 DMSO를 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 단당류 및/또는 당 알코올을 포함할 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 만니톨 및/또는 글루코스이다. 이들 구현예 중 일부에서, 당은 글루코스이다. 일부 구현예에서, 완충액은 DMSO를 포함하지 않는다.
특정 구현예에서, 완충액은 약 15 mM의 양의 글루코스; 약 6 mM의 양의 KCl; 약 10.5 mM의 양의 MgCl2 약 105 mM의 양의 Na2HPO4/NaH2PO4; 약 15 mM 범위의 양의 HEPES; 및 총 완충액 부피의 부피 기준 약 2.5%의 양의 DMSO를 포함한다.
특정 구현예에서, 완충액은 약 30 mM의 양의 글루코스; 약 10 mM의 양의 KCl; 약 20 mM의 양의 MgCl2; 약 105 mM의 양의 Na2HPO4/NaH2PO4; 및 약 5 mM의 양의 HEPES를 포함한다. 일부 구현예에서, DMSO는 완충액으로부터 구체적으로 제외된다.
특정 구현예에서, 완충액은 약 31 mM의 양의 글루코스; 약 5 mM의 양의 KCl; 및 약 15 mM의 양의 MgCl2; 및 약 90 mM의 양의 Na2HPO4/NaH2PO4를 포함한다. 일부 구현예에서, HEPES 및 DMSO 중 하나 이상은 완충액으로부터 구체적으로 제외된다.
특정 구현예에서, 완충액은 약 30 mM의 양의 글루코스; 약 5 mM의 양의 KCl; 및 약 15 mM의 양의 MgCl2; 약 90 mM의 양의 Na2HPO4/NaH2PO4; 및 약 10 mM의 양의 HEPES를 포함한다. 일부 구현예에서, DMSO는 완충액으로부터 구체적으로 제외된다.
특정 구현예에서, 완충액은 약 25 mM의 양의 글루코스; 약 15 mM의 양의 KCl; 및 약 25 mM의 양의 MgCl2; 약 120 mM의 양의 Na2HPO4/NaH2PO4; 및 약 10 mM의 양의 HEPES를 포함한다. 일부 구현예에서, DMSO는 완충액으로부터 구체적으로 제외된다.
특정 구현예에서, 완충액의 pH는 조정될 수 있다. 일부 구현예에서, 완충액은 6.5 내지 8의 pH로 조정된다. 일부 구현예에서, 완충액은 약 7.0 내지 7.6의 pH로 조정된다. 일부 구현예에서, 완충액은 약 6.9 내지 7.2, 또는 약 7.0 내지 7.1의 pH로 조정된다. 일부 구현예에서, 완충액은 약 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 또는 8.0의 pH로 조정된다. 특정 구현예에서, 완충액은 약 7.0 또는 7.1의 pH로 조정된다.
특정 구현예에서, 완충액의 전도성은 약 7.0 ms/cm 내지 약 16.0 ms/cm, 약 9.0 ms/cm 내지 약 16.0 ms/cm, 약 11.0 ms/cm 내지 약 16.0 ms/cm, 또는 약 13.0 ms/cm 내지 약 16.0 ms/cm이다. 일부 구현예에서, 완충액의 전도성은 약 7.0 ms/cm 내지 약 15.0 ms/cm, 약 9.0 ms/cm 내지 약 15.0 ms/cm, 약 11.0 ms/cm 내지 약 15.0 ms/cm, 또는 약 13.0 ms/cm 내지 약 15.0 ms/cm이다. 일부 구현예에서, 완충액의 전도성은 약 7.0 ms/cm, 약 7.1 ms/cm, 약 7.2 ms/cm, 약 7.3 ms/cm, 약 7.4 ms/cm, 약 7.5 ms/cm, 약 7.6 ms/cm, 약 7.7 ms/cm, 약 7.8 ms/cm, 약 7.9 ms/cm, 약 8.0 ms/cm, 약 8.1 ms/cm, 약 8.2 ms/cm, 약 8.3 ms/cm, 약 8.4 ms/cm, 약 8.5 ms/cm, 약 8.6 ms/cm, 약 8.7 ms/cm, 약 8.8 ms/cm, 약 8.9 ms/cm, 약 9.0 ms/cm, 약 9.1 ms/cm, 약 9.2 ms/cm, 약 9.3 ms/cm, 약 9.4 ms/cm, 약 9.5 ms/cm, 약 9.6 ms/cm, 약 9.7 ms/cm, 약 9.8 ms/cm, 약 9.9 ms/cm, 약 10.0 ms/cm, 약 10.1 ms/cm, 약 10.2 ms/cm, 약 10.3 ms/cm, 약 10.4 ms/cm, 약 10.5 ms/cm, 약 10.6 ms/cm, 약 10.7 ms/cm, 약 10.8 ms/cm, 약 10.9 ms/cm, 약 11.0 ms/cm, 약 11.1 ms/cm, 약 11.2 ms/cm, 약 11.3 ms/cm, 약 11.4 ms/cm, 약 11.5 ms/cm, 약 11.6 ms/cm, 약 11.7 ms/cm, 약 11.8 ms/cm, 약 11.9 ms/cm, 약 12.0 ms/cm, 약 12.1 ms/cm, 약 12.2 ms/cm, 약 12.3 ms/cm, 약 12.4 ms/cm, 약 12.5 ms/cm, 약 12.6 ms/cm, 약 12.7 ms/cm, 약 12.8 ms/cm, 약 12.9 ms/cm, 약 13.0 ms/cm, 약 13.1 ms/cm, 약 13.2 ms/cm, 약 13.3 ms/cm, 약 13.4 ms/cm, 약 13.5 ms/cm, 약 13.6 ms/cm, 약 13.7 ms/cm, 약 13.8 ms/cm, 약 13.9 ms/cm, 약 14.0 ms/cm, 약 14.1 ms/cm, 약 14.2 ms/cm, 약 14.3 ms/cm, 약 14.4 ms/cm, 약 14.5 ms/cm, 약 14.6 ms/cm, 약 14.7 ms/cm, 약 14.8 ms/cm, 약 14.9 ms/cm, 약 15.0 ms/cm, 약 15.1 ms/cm, 약 15.2 ms/cm, 약 15.3 ms/cm, 약 15.4 ms/cm, 약 15.5 ms/cm, 약 15.6 ms/cm, 약 15.7 ms/cm, 약 15.8 ms/cm, 약 15.9 ms/cm, 또는 약 16.0 ms/cm이다. 특정 구현예에서, 완충액의 전도성은 약 11.6, 12.8, 또는 14.3이다.
일부 구현예에서, 완충액의 삼투압 농도는 형질감염되는 세포의 삼투압 농도(즉, "세포내 삼투압 농도"로도 알려짐)보다 적다. 일부 구현예에서, 완충액의 삼투압 농도는 약 250 mOsm/kg H2O 내지 약 1255 mOsm/kg H2O, 약 250 mOsm/kg H2O 내지 약 1100 mOsm/kg H2O, 약 250 mOsm/kg H2O 내지 약 900 mOsm/kg H2O, 약 250 mOsm/kg H2O 내지 약 700 mOsm/kg H2O, 약 250 mOsm/kg H2O 내지 약 500 mOsm/kg H2O, 약 250 mOsm/kg H2O 내지 약 400 mOsm/kg H2O, 또는 약 250 mOsm/kg H2O 내지 약 360 mOsm/kg H2O 범위이다. 일부 구현예에서, 삼투압 농도는 약 360 mOsm/kg H2O 내지 약 1255 mOsm/kg H2O, 약 360 mOsm/kg H2O 내지 약 1100 mOsm/kg H2O, 약 360 mOsm/kg H2O 내지 약 900 mOsm/kg H2O, 약 360 mOsm/kg H2O 내지 약 700 mOsm/kg H2O, 약 360 mOsm/kg H2O 내지 약 500 mOsm/kg H2O, 약 360 mOsm/kg H2O 내지 약 400 mOsm/kg H2O이다. 일부 구현예에서, 삼투압 농도는 약 250 mOsm/kg H2O, 255 mOsm/kg H2O, 260 mOsm/kg H2O, 270 mOsm/kg H2O, 275 mOsm/kg H2O, 약 280 mOsm/kg H2O, 약 285 mOsm/kg H2O, 약 290 mOsm/kg H2O, 약 300 mOsm/kg H2O, 약 305 mOsm/kg H2O, 약 310 mOsm/kg H2O, 약 315 mOsm/kg H2O, 약 320 mOsm/kg H2O, 약 325 mOsm/kg H2O, 약 330 mOsm/kg H2O, 약 335 mOsm/kg H2O, 약 340 mOsm/kg H2O, 약 345 mOsm/kg H2O, 약 350 mOsm/kg H2O, 약 355 mOsm/kg H2O, 약 360 mOsm/kg H2O, 약 365 mOsm/kg H2O, 약 370 mOsm/kg H2O, 약 375 mOsm/kg H2O, 약 380 mOsm/kg H2O, 약 385 mOsm/kg H2O, 약 390 mOsm/kg H2O, 약 395 mOsm/kg H2O, 또는 약 400 mOsm/kg H2O이다. 특정 구현예에서, 삼투압 농도는 약 280 mOsm/kg H2O, 약 292 mOsm/kg H2O, 약 340 mOsm/kg H2O, 또는 약 362 mOsm/kg H2O이다.
일부 구현예에서, 완충액은 표 5 및 6에 제시된 예시적인 완충액 중 하나 이상으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 완충액은 완충액 1, 완충액 2, 또는 완충액 3으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 완충액은 UltraPorator™ 전기천공 장치 및 카트리지(또는, 카세트)와 함께 사용되며; PCT/US20/59984(2020년 11월 11일 출원) 및 미국 특허 출원 일련 번호 17/095,028(2020년 11월 11일 출원)을 참조한다. 이 장치는 다양한 유전자 및 세포 요법을 위한 신속한 제조가 가능하도록 설계된다. UltraPorator™은 단일 작동으로 다량의 세포의 전기천공을 위한 고처리량 반폐쇄 전기천공 시스템이다. UltraPorator™ 시스템은 처리 시간 및 오염 위험을 유의하게 감소시킴으로써 현재 전기천공 장치보다 발전한 것이다. 예를 들어, UltraPorator는 생체내에서 암 항원을 표적하도록 재프로그램화된 T-세포의 UltraCAR-T™ 제조에서와 같은 탈중앙화된 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포 제조를 위한 확장 및 상용화 해결책으로서 활용될 수 있다.
본 발명의 완충액은 놀랍게도 전기천공이 UltraPorator™ 전기천공 장치 및/또는 카트리지(또는, 카세트)에서 완충액을 사용하여 수행될 때 높은 세포 형질감염 효율을 생성하는 데 효과적이며; PCT/US20/59984(2020년 11월 11일 출원) 및 미국 특허 출원 일련 번호 17/095,028을 참조한다.
b. EP 완충액을 활용하는 방법 및 이러한 방법을 사용하여 생산된 재조합 세포
본 발명의 또 다른 측면에서, 생물학적 활성 물질(예를 들어, DNA 또는 RNA)을 전류(즉, 전기천공)을 통해 세포로 도입하기 위해 본 발명에 따른 완충액을 활용하는 방법이 제공된다. 방법은 인간으로부터 수득된 세포와 함께 외인성 생물학적 물질을 본 발명의 완충액으로 조합함으로써 현탁액을 형성한 다음, 현탁액에 전압 펄스 형태의 전류를 인가하여, 생물학적 물질을 세포로 도입하는 것을 용이하게 하는 것을 포함한다.
특정 구현예에서, 전압 펄스는 최대 1 내지 10 kV*cm-1의 전계 강도 및 5 내지 250 μs의 지속시간 및 적어도 2 A*cm-2의 전류 밀도를 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 전압 펄스는 생물학적 활성 물질(예를 들어, DNA)이 동물 및 인간 세포의 세포 핵으로 직접 형질감염되게 한다. 특정 구현예에서, 2 내지 14 A*cm-2, 바람직하게는 최대 5 A*cm-2의 전류 밀도, 및 1 내지 100 ms의 지속시간을 갖는, 중단 없이 전압 펄스를 따르는 전류 흐름이 또한 인가될 수 있다.
본 발명에 따른 방법을 사용하여, 생물학적 활성 물질을 동물 세포의 핵을 포함하는 세포로 형질감염시키는 것은 최적화될 수 있다. 이 경우, 생물학적 활성 물질(예를 들어, 핵산, 폴리펩티드 등)은 휴지기 또는 분열중인 동물 세포로 고효율로 도입될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 10 분 미만 동안 완충액에 노출된다. 예를 들어, 세포는 9 분 미만, 8 분 미만, 7 분 미만, 6 분 미만, 5 분 미만, 4 분 미만, 3 분 미만, 2 분 미만, 또는 1 분 미만 동안 완충액에 노출될 수 있다.
일부 구현예에서, 방법은 생물학적 활성 물질을 1차 인간 혈액 세포, 인간 혈액의 만능 전구체 세포, 뿐만 아니라 1차 인간 섬유아세포 및 내피 세포로 도입하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, 세포는 인간 혈액 세포, 예를 들어 면역 세포이다. 특정 구현예에서, 면역 세포는 호중구, 호산구, 호염구, 비만 세포, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 자연 살해 세포, 및 림프구(B 세포 및 T 세포), 또는 이의 일부 조합이다. 일부 구현예에서, 림프구는 T-세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 환자로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 생물학적 물질은 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 효소, RNP, 또는 이의 일부 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 생물학적 물질은 세포에 대해 이종이다. 일부 구현예에서, 생물학적 물질은 부분적으로 또는 완전히 합성적이다.
일부 구현예에서, 핵산은 DNA 또는 RNA로부터 선택된다. 일부 구현예에서, DNA는 cDNA를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, RNA는 mRNA, tRNA, rtRNA, lncRNA, sRNA, 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산은 재조합 핵산이다. 일부 구현예에서, 펩티드는 폴리펩티드, 단백질, 효소, 항체, 항체 단편, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드는 재조합이다.
본 발명의 완충액을 활용하는 방법은 특히 다른 전기천공 완충액을 활용하는 방법과 비교하여 바람직하게는 높은 형질감염 수율을 초래한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 완충액을 이용한 형질감염 수율은 대조군(선행 기술) 완충액을 이용한 형질감염 수율의 적어도 약 1.1 배이다. 예를 들어, 본 발명의 완충액을 이용한 형질감염 수율은 대조군(선행 기술) 완충액의 수율보다 약 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 2.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 또는 5.0 배 더 높을 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 완충액을 이용한 형질감염 수율은 대조군(선행 기술) 완충액의 수율보다 5 배 초과, 예컨대 6, 7, 8, 9, 또는 10 배 더 높을 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 완충액을 이용한 형질감염 수율은 대조군(선행 기술) 완충액의 수율보다 1.35, 1.41, 1.46, 1.97, 1.98, 2.05, 2.12, 2.40, 또는 2.44 배 더 높다.
본 발명의 완충액을 활용하는 방법은 특히 다른 전기천공 완충액을 활용하는 방법과 비교하여 바람직하게는 높은 형질감염된 세포 회수 수율을 초래한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 완충액을 이용한 형질감염된 세포 회수 수율은 대조군(선행 기술) 완충액을 이용한 형질감염된 세포 회수 수율의 적어도 약 1.1 배이다. 예를 들어, 본 발명의 완충액을 이용한 형질감염된 세포 회수 수율은 대조군(선행 기술) 완충액의 수율보다 약 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 2.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 또는 5.0 배 더 높을 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 완충액을 이용한 형질감염된 세포 회수 수율은 대조군(선행 기술) 완충액의 수율보다 5 배 더 높을 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 완충액을 이용한 형질감염된 세포 회수 수율은 대조군(선행 기술) 완충액의 수율보다 1.53, 1.66, 1.72, 1.80, 2.06, 2.17, 2.23, 2.34, 또는 2.61 배 더 높을 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 재조합 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 재조합 면역 세포는 본 발명의 방법을 사용하여 생산된다. 특정 구현예에서, 재조합 면역 세포는 변형된 T-세포이다. 일부 구현예에서, 변형된 T-세포는 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포이다. 일부 구현예에서, CAR-T 세포는 치료 목적을 위해 환자에게 투여된다.
c. 전기천공 장치 및 그들의 사용 방법
예시적인 전기천공 장치는 전기천공 공정 동안 완충액 및 세포를 저장하도록 구성된 하나 이상의 챔버; 각각의 전계가 하나의 챔버에 상응하는, 전기천공 공정 동안 하나 이상의 챔버 내에서 전계를 생성하도록 구성된 전극의 하나 이상의 쌍; 및 전기천공 공정 후 세포 수집 공정 동안 세포를 수송하도록 구성된 유동 채널을 포함한다.
일부 구현예에서, 장치는 1 개의 챔버, 2 개의 챔버, 3 개의 챔버, 4 개의 챔버, 5 개의 챔버, 6 개의 챔버, 7 개의 챔버, 8 개의 챔버, 9 개의 챔버, 10 개의 챔버, 또는 10 개 이상의 챔버를 포함한다. 특정 구현예에서, 장치는 연속 유동 또는 미세유체 시스템을 활용한다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치는 수집 공정 동안 액체 매질을 유동 채널로부터 챔버 중 적어도 하나로 펌핑하기 위한 펌프를 추가로 포함하며, 여기서 액체 매질은 유입 포트에서 수득된다. 일부 구현예에서, 펌프는 하나 이상의 챔버를 유동 채널에 연결하는 밸브 또는 밸브들을 포함한다. 일부 구현예에서, 밸브 또는 밸브들은 하나씩 개방된다. 일부 구현예에서, 밸브 또는 밸브들은 유체의 한방향 흐름만 허용한다. 일부 구현예에서, 각 밸브는 하나의 챔버에 상응한다. 일부 구현예에서, 챔버 밸브에 상응하는 각각의 밸브는 핀치-밸브(pinch-valve) 또는 핀치형 밸브이다. 일부 구현예에서, 각각의 밸브는 스프링 운동, 레버 운동, 또는 피스톤 운동을 사용하여 작동한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 챔버는 주어진 챔버를 포함하며; 전극 쌍의 각각의 전극은 주어진 챔버의 반대편에 위치하고; 전극 쌍의 각각의 전극은 주어진 챔버의 내부의 내부 부분 및 주어진 챔버에 외부인 외부 부분을 둘 다 포함한다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치는 유입 포트; 유출 포트; 및 유입 포트 및 유출 포트를 유동 채널에 연결하는 하나 이상의 측면 유동 채널을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치는 수집 공정 동안 액체 매질을 유동 채널로부터 챔버 중 적어도 하나로 펌핑하기 위한 펌프를 추가로 포함하며, 여기서 액체 매질은 유입 포트에서 수득된다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치는 하나 이상의 챔버로 이어지는 하나 이상의 개구부를 포함하는 표면; 및 개구부 아래에서 챔버 사이의 공기유동을 연결하는 공기유동 채널을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치는 공기유동 채널을 전기천공 장치의 외부에 연결하는 통풍구 또는 공기 필터를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치는 하나 이상의 개구부를 덮도록 구성된 밀봉 물질(seal)을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 전기천공 장치에서 각각의 챔버는 각각의 밸브(들)을 향해 좁아지는 형상을 포함한다. 일부 구현예에서, 전기천공 장치는 한 쌍의 전극을 추가로 포함하며 여기서 전극 쌍의 각각의 전극은 각 챔버의 반대편에 위치한다. 전극 쌍의 2 개의 전극 사이의 거리는 "간격 거리(gap distance)" 또는 "분리 거리(separation distance)"로 언급된다. 이 거리는 챔버의 너비에 걸쳐 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 챔버 각각은 약 0.1 mm 내지 약 20 mm, 약 0.5 mm 내지 약 10 mm, 약 1 mm 내지 약 7 mm, 또는 약 1 mm 내지 약 4 mm의 간격 거리를 포함한다. 일부 구현예에서, 간격 거리는 약 0.5 mm, 1.0 mm, 1.5 mm, 2.0 mm, 2.5 mm, 3.0 mm, 3.5 mm, 4.0 mm, 4.5 mm, 5.0 mm, 5.5 mm, 6.0 mm, 6.5 mm, 7.0 mm, 7.5 mm, 또는 8.0 mm이다. 일부 구현예에서, 약 2.5 mm, 2.6 mm, 2.7 mm, 2.8 mm, 2.9 mm, 3.0 mm, 3.1 mm, 3.2 mm, 3.3 mm, 3.4 mm, 3.5 mm, 3.6 mm, 3.7 mm, 3.8 mm, 3.9 mm, 또는 4.0 mm의 간격 거리. 일부 구현예에서, 간격 거리는 약 4 mm 미만, 약 3.5 mm 미만, 약 3.0 mm 미만, 약 2.5 mm 미만, 약 2.0 mm 미만, 약 1.5 mm 미만, 또는 약 1.0 mm 미만이다. 일부 구현예에서, 약 4.0 mm 미만의 간격 거리는 본원에 제공된 완충액의 전기천공 성능을 개선한다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치의 한 쌍의 전극의 각각의 전극은 주어진 챔버 내부의 내부 부분; 및 주어진 챔버에 외부인 외부 부분을 포함하며, 여기서 전극의 각 쌍은 전기 회로에 연결되도록 구성된다. 일부 구현예에서, 주어진 챔버 내부의 내부 부분은 타원형 면을 가지며 금 코팅을 포함한다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치의 각각의 챔버는 적어도 약 50 μL, 적어도 약 100 μL, 적어도 약 150 적어도 약 μL, 적어도 약 200 μL, 적어도 약 250 μL, 적어도 약 300 μL, 적어도 약 350 μL, 적어도 약 400 μL, 적어도 약 450 μL, 적어도 약 150 μL, 적어도 약 500 μL, 적어도 약 550 μL, 적어도 약 600 μL, 적어도 약 650 μL, 적어도 약 700 μL, 적어도 약 750 μL, 적어도 약 800 μL, 적어도 약 850 μL, 적어도 약 900 μL, 적어도 약 950 μL, 또는 적어도 약 1000 μL(1.0 mL)의 부피를 저장하도록 구성된다.
일부 구현예에서, 전기천공 장치의 챔버는 조합하여 전기천공을 위한 액체 현탁액에 적어도 약 500 μL, 적어도 약 1.0 mL, 적어도 약 1.2 mL, 적어도 약 1.4 mL, 적어도 약 1.6 mL, 적어도 약 1.8 mL, 적어도 약 2.0 mL, 적어도 약 2.2 mL, 적어도 약 2.4 mL, 적어도 약 2.6 mL, 적어도 약 2.8 mL, 적어도 약 3.0 mL, 적어도 약 3.2 mL, 적어도 약 3.4 mL, 적어도 약 3.6 mL, 적어도 약 3.8 mL, 적어도 약 4.0 mL, 적어도 약 4.2 mL, 적어도 약 4.4 mL, 적어도 약 4.6 mL, 적어도 약 4.8 mL, 적어도 약 5.0 mL, 적어도 약 5.2 mL, 적어도 약 5.4 mL, 적어도 약 5.6 mL, 적어도 약 5.8 mL, 적어도 약 6.0 mL, 적어도 약 6.2 mL, 적어도 약 6.4 mL, 적어도 약 6.6 mL, 적어도 약 6.8 mL, 또는 적어도 약 7.0 mL의 세포를 저장하도록 구성된다.
일부 구현예에서, 전기천공 공정에 수반되는 세포는 적어도 1x108 개 세포, 적어도 2x108 개 세포, 적어도 3x108 개 세포, 적어도 4x108 개 세포, 적어도 5x108 개 세포, 적어도 6x108 개 세포, 적어도 7x108 개 세포, 적어도 8x108 개 세포, 적어도 9x108 개 세포, 적어도 1x109 개 세포, 적어도 2x109 개 세포, 적어도 3x109 개 세포, 적어도 4x109 개 세포, 적어도 5x109 개 세포, 적어도 6x109 개 세포, 적어도 7x109 개 세포, 적어도 8x109 개 세포, 적어도 9x109 개 세포, 적어도 1x1010 개 세포, 적어도 2x1010 개 세포, 적어도 3x1010 개 세포, 적어도 4x1010 개 세포, 적어도 5x1010 개 세포, 적어도 6x1010 개 세포, 적어도 7x1010 개 세포, 적어도 8x1010 개 세포, 적어도 9x1010 개 세포, 적어도 1x1011 개 세포, 적어도 2x1011 개 세포, 적어도 3x1011 개 세포, 적어도 4x1011 개 세포, 적어도 5x1011 개 세포, 적어도 6x1011 개 세포, 적어도 7x1011 개 세포, 적어도 8x1011 개 세포, 적어도 9x1011 개 세포, 적어도 1x1012 개 세포, 적어도 2x1012 개 세포, 적어도 3x1012 개 세포, 적어도 4x1012 개 세포, 적어도 5x1012 개 세포, 적어도 6x1012 개 세포, 적어도 7x1012 개 세포, 적어도 8x1012 개 세포 세포, 또는 적어도 9x1012 개로 이루어진 군으로부터 선택된 집단을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 장치는 UltraPorator™ 전기천공 장치 및 카트리지를 포함한다(PCT/US20/59984 및 미국 특허 출원 일련 번호 17/095,028 참조). 상기 언급된 바와 같이, UltraPorator™ 전기천공 장치는 다양한 유전자 및 세포 요법을 위한 신속한 제조를 가능하게 하도록 설계된다. 장치는 생체내에서 암 항원을 표적하도록 재프로그램화된 T-세포의 UltraCAR-T™ 제조에서와 같이, 탈중앙화된 CAR T-세포 제조를 위한 확장 및 상용화 해결책으로서 활용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 장치는 전기천공 방법에 사용되며, 상기 방법은 한 쌍의 전극을 사용하여 챔버 내에서 전계를 생성함으로써 전기천공 공정을 실행하되, 상기 챔버는 전기천공 공정 동안 완충액 및 세포를 저장하도록 구성된 것인, 단계; 및 챔버에 연결된 밸브를 개방하고; 완충액 및 세포를 밸브에 연결된 유동 채널을 사용하여 유출 포트로 수송함으로써 세포 수집 공정을 실행하되, 상기 챔버, 전극 쌍, 밸브, 유출 포트, 및 유동 채널은 각각 전기천공 장치 내에 위치하는 것인, 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 수집 공정을 실행하는 단계는 펌프의 사용을 통해, 액체 매질을 유동 채널로부터 챔버로 펌핑하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 액체 매질은 유입 포트에서 수득되고, 여기서 유입 포트 및 유출 포트는 전기천공 장치 내의 측면 유동 채널에 의해 유동 채널에 연결된다.
일부 구현예에서, 세포 수집 공정은 챔버를 유동 채널로 배수하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 챔버 내 압력은 챔버와 또 다른 챔버 사이를 흐르는 공기 유동 채널에 연결된 통풍구 또는 공기 필터를 통해 유지된다.
일부 구현예에서, 전기천공 방법은 세포를 완충액을 보유하는 챔버로 이어지는 개구부에 침착시키는 단계; 밀봉 물질을 개구부에 적용하는 단계; 및 예를 들어, 전기천공 장치를 도킹 스테이션으로 삽입함으로써 전극 쌍을 적어도 하나의 회로에 연결하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 표 5 및 6에 제시된 예시적인 완충액 중 하나 이상을 활용한다. 특정 구현예에서, 방법은 완충액 1, 완충액 2, 또는 완충액 3을 활용한다.
일부 구현예에서, 방법은 UltraPorator™ 전기천공 장치(PCT/US20/59984 및 미국 특허 출원 일련 번호 17/095,028 참조)에서 수행된다. 특정 구현예에서, 방법은 UltraPorator™ 전기천공 장치에서 수행되고 표 5 및 6에 제시된 예시적인 완충액 중 하나 이상을 활용한다. 특정 구현예에서, 방법은 UltraPorator™ 전기천공 장치에서 수행되고 완충액 1, 완충액 2, 또는 완충액 3(표 5에 제시됨)을 활용한다.
d. 전기천공 시스템
본 발명의 또 다른 측면에서, 전기천공을 위한 시스템이 제공된다. 일부 구현예에서, 전기천공을 위한 시스템은 본원에 기재된 바와 같은 전기천공 장치, 및 본원에 기재된 바와 같은 전기천공 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 전기천공 시스템은 UltraPorator™ 전기천공 장치 및 카트리지를 포함한다(PCT/US20/59984 및 미국 특허 출원 일련 번호 17/095,028 참조). 상기 언급된 바와 같이, UltraPorator™ 전기천공 장치는 다양한 유전자 및 세포 요법을 위한 신속한 제조가 가능하도록 설계된다. 장치는 생체내에서 암 항원을 표적하도록 재프로그래밍화된 T-세포의 UltraCAR-T™ 제조에서와 같이, 탈중앙화된 CAR T-세포 제조를 위한 확장 및 상용화 해결책으로서 활용될 수 있다.
일부 구현예에서, 전기천공을 위한 시스템은 표 5 및 6에 제시된 예시적인 완충액 중 하나 이상으로부터의 완충액을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 전기천공을 위한 시스템은 완충액 1, 완충액 2, 또는 완충액 3으로부터 선택된 완충액을 포함한다. UltraPorator™ 장치 및 완충액 1, 2, 또는 3 중 하나를 포함하는 시스템은 UltraPorator™ 장치 및 대조군 완충액을 포함하는 시스템과 비교하여 놀랍게도 높은 세포 형질감염 효율을 초래하는 것으로 밝혀졌다.
e. 전기천공을 위한 키트
본 발명의 또 다른 측면에서, 전기천공을 위한 키트가 제공된다. 키트는 본원에 기재된 바와 같은 임의의 완충액을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 표 5 및 6에 제시된 예시적인 완충액 중 하나 이상을 포함한다. 특정 구현예에서, 키트는 완충액 1, 완충액 2, 또는 완충액 3으로부터 선택된 완충액을 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 본 발명에 따른 완충액 및 다른 적합한 시약 및/또는 장치로 채워진 하나 이상의 용기를 포함한다. 예를 들어, 키트는 관심 핵산을 포함하는 벡터를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 점적기, 피펫, 및/또는 큐벳을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 완충액은 분취 용기에 또는 스톡 용액으로서 포장될 수 있다.
일부 구현예에서, 키트는 완충액 및 임의의 추가 시약 및/또는 장치를 안전하게 수송하기 위한 포장을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 완충액 및 임의의 추가 시약의 내용물에 관한 정보를 포함한다. 또한, 시약은 서면 자료, 예를 들어 사용자 매뉴얼 또는 자주 묻는 질문에 대한 답변을 포함할 수 있다.
2 . 화학적 방법
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포로 도입하기 위한 화학적 방법은 거대분자 복합체, 나노캡슐, 미소구체, 비드, 및 수중유 에멀젼, 미셸(micelle), 혼합 미셸, 및 리포솜을 포함하는 액체-기반 시스템과 같은 콜로이드 분산 시스템을 포함한다. 시험관내 및 생체내에서 전달 비히클로서 사용하기 위한 예시적인 콜로이드 시스템은 리포솜(예를 들어, 인공 막 소포)이다.
3 . 바이러스 벡터 및 전달 방법
바이러스 전달 시스템이 활용되는 경우, 예시적인 전달 비히클은 리포솜이다. 지질 제형은 핵산을 숙주 세포(시험관내, 생체외, 또는 생체내)로 도입하는 데 사용될 수 있다. 또 다른 측면에서, 핵산은 지질과 연관될 수 있다. 지질과 연관된 핵산은 리포솜의 수성 내부에 캡슐화되거나, 리포솜의 지질 이중층 내에 산재되거나, 리포솜 및 올리고뉴클레오티드 둘 다와 연관된 연결 분자를 통해 리포솜에 부착되거나, 리포솜에 포획되거나, 리포솜과 복합체화되거나, 지질을 함유하는 용액에 분산되거나, 지질과 혼합되거나, 지질과 조합되거나, 지질에 분산액으로서 함유되거나, 미셸과 복합체화되거나 함유되거나, 달리 지질과 연관될 수 있다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터 연관 조성물은 용액에서 임의의 특정 구조로 제한되지 않는다. 예를 들어, 그들은 이중층 구조, 미셸, 또는 "붕괴된" 구조로 존재할 수 있다. 그들은 또한 단순히 용액에 산재되어, 아마도 크기 또는 모양이 균일하지 않은 응집체를 형성할 수 있다. 지질은 자연 발생 또는 합성 지질일 수 있는 지방 물질이다. 예를 들어, 지질은 세포질에서 자연적으로 발생하는 지방 액적 뿐만 아니라 지방산, 알코올, 아민, 아미노 알코올, 및 알데하이드와 같은 장쇄 지방족 탄수화물 및 그들의 유도체를 함유하는 화합물의 부류를 포함한다.
사용하기에 적합한 지질은 상업적 공급처로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 디미리스틸 포스파티딜콜린("DMPC")은 미주리주 세인트루이스 소재의 Sigma로부터 수득될 수 있고; 디세틸 포스페이트("DCP")는 K & K Laboratories(뉴욕주 플레인뷰)로부터 수득될 수 있고; 콜레스테롤("Chol")은 Calbiochem-Behring으로부터 수득될 수 있고; 디미리스틸 포스파티딜글리세롤("DMPG") 및 다른 지질은 Avanti Polar Lipids, Inc.(앨라배마주 버밍햄)로부터 수득될 수 있다. 클로로포름 또는 클로로포름/메탄올 중 지질의 스톡 용액은 약 -20℃에서 저장될 수 있다. 클로로포름은 메탄올보다 더 용이하게 증발되므로 유일한 용매로서 사용된다. "리포솜"은 둘러싸인 지질 이중층 또는 응집체의 생성에 의해 형성된 다양한 단일 및 다중판 지질 비히클을 포함하는 일반적인 용어이다. 리포솜은 인지질 이중층 막 및 내부 수성 매질이 있는 소포 구조를 갖는 것을 특징으로 할 수 있다. 다중판 리포솜은 수성 매질에 의해 분리되는 다중 지질 층을 갖는다. 그들은 인지질이 과량의 수용액에 현탁될 때 자발적으로 형성된다. 지질 구성요소는 폐쇄 구조의 형성 전에 자기 재배열을 거치고 지질 이중층 사이에 물 및 용해된 용질을 포획한다(Ghosh 등, Glycobiology 5: 505-10(1991)). 그러나, 정상 소포 구조와 상이한 용액 중 구조를 갖는 조성물이 또한 포함된다. 예를 들어, 지질은 미셸 구조를 가정하거나 단지 지질 분자의 불균일한 응칩체로서 존재할 수 있다. 또한 리포펙타민-핵산 복합체가 고려된다.
또한 본원에는 본 발명의 핵산이 삽입된 바이러스-기반 전달 시스템이 제공된다. 대표적인 바이러스 발현 벡터는 아데노바이러스-기반 벡터(예를 들어, Crucell, Inc.(네덜란드 레이덴)로부터 입수가능한 아데노바이러스-기반 Per.C6 시스템), 아데노-연관 바이러스 기반 벡터, 렌티바이러스-기반 벡터(예를 들어, Life Technologies(캘리포니아주 칼즈배드)의 렌티바이러스-기반 pLPI), 레트로바이러스 벡터(예를 들어, pFB-ERV 플러스 pCFB-EGSH), 및 헤르페스 바이러스-기반 벡터를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 구현예에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 렌티바이러스와 같은 레트로바이러스로부터 유래된 벡터는 이식유전자의 장기간 안정한 통합 및 딸 세포에서의 증식을 허용하므로 장기간 유전자 전달을 달성하는 데 적합한 도구이다. 렌티바이러스 벡터는 간세포와 같은 비증식 세포를 형질도입할 수 있다는 점에서 뮤린 백혈병 바이러스와 같은 종양-레트로바이러스로부터 유래된 벡터에 비해 추가 이점을 갖는다. 그들은 또한 낮은 면역원성의 추가 이점을 갖는다. 일반적으로, 그리고 구현예에서, 적합한 벡터는 적어도 하나의 유기체에서 기능적인 복제 기점, 프로모터 서열, 편리한 제한 엔도뉴클레아제 부위, 및 하나 이상의 선택가능한 마커를 함유한다(예를 들어, WO 01/96584; WO 01/29058; 및 미국 특허 번호 6,326,193).
일부 구현예에서, 백본 및 하나 이상의 miRNA(들) 및 CAR을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 렌티바이러스 벡터가 제공된다. 임의적으로, 벡터는 절두된 HER1, CD20t-1 또는 전장 CD20과 같은 사이토카인 및 세포 태그를 암호화하는 핵산을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들) 및 CAR을 암호화하는 핵산은 렌티바이러스 백본 구성요소를 포함하는 벡터로 클로닝된다. 예시적인 백본 구성요소는 pFUGW, 및 pSMPUW를 포함하나 이에 제한되지 않는다. pFUGW 렌티바이러스 벡터 백본은 자기-비활성화(SIN) 렌티바이러스 벡터 백본이며 불필요한 HIV-1 바이러스 서열이 제거되어 신생물 발달, 유해한 돌연변이, 및 감염성 입자의 재생 가능성의 감소를 초래한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들) 및 CAR을 암호화하는 벡터는 또한 단일 작제물에서 사이토카인을 암호화한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들) 및 CAR 및 사이토카인은 2 개의 별개의 렌티바이러스 벡터에 암호화된다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 세포 태그로 발현된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들) 및 CAR은 단일 렌티바이러스 벡터로부터의 사이토카인 및 세포 태그와 공발현될 수 있다. 추가 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들) 및 CAR은 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 일 측면에서, 유도성 프로모터는 유전자 스위치 리간드 유도성 프로모터일 수 있다. 일부 경우에, 유도성 프로모터는 RHEOSWITCH® 유전자 스위치와 같은 소분자 리간드-유도성 2 개의 폴리펩티드 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치일 수 있다.
다른 적합한 벡터는 숙주 세포의 DNA로 무작위로 통합될 수 있거나, 발현 벡터와 숙주 세포의 염색체 사이의 특이적 재조합을 가능하게 하는 재조합 부위를 포함할 수 있는 통합 발현 벡터를 포함한다. 이러한 통합 발현 벡터는 숙주 세포의 염색체의 내인성 발현 제어 서열을 활용하여 원하는 단백질의 발현에 영향을 미칠 수 있다. 부위 특이적 방식으로 통합하는 벡터의 예는 예를 들어, Invitrogen(캘리포니아주 칼즈배드)의 flp-in 시스템의 구성요소(예를 들어, pcDNATM5/FRT), 또는 Stratagene(캘리포니아주 라호이아)의 pExchange-6 Core 벡터에서 발견될 수 있는 것과 같은 cre-lox 시스템을 포함한다. 숙주 세포 염색체로 무작위로 통합하는 벡터의 예는 예를 들어, Invitrogen(캘리포니아주 칼즈배드)의 pcDNA3.1(T-항원의 부재 하에 도입될 때), 및 Promega(위스콘신주 매디슨)의 pCI 또는 pFN10A(ACT) FLEXITM을 포함한다. 추가 프로모터 요소, 예를 들어, 인핸서는 전사 개시 빈도를 조절한다. 전형적으로, 이들은 시작 부위의 상류에 있는 영역 30-110 bp에 위치하지만, 다수의 프로모터가 최근에 시작 부위의 하류에 있는 기능적 요소 또한 함유하는 것으로 나타났다. 프로모터 요소 사이의 간격은 빈번하게 유연하여, 요소가 반전되거나 서로에 대해 이동할 때 프로모터 기능이 보존되도록 한다. 티미딘 키나제(tk) 프로모터에서, 프로모터 요소 사이의 간격은 활성이 감소하기 시작하기 전에 50 bp 간격으로 증가될 수 있다. 프로모터에 따라, 개별 요소가 협력적으로 또는 독립적으로 기능하여 전사를 활성화시킬 수 있는 것으로 보인다.
일부 구현예에서, 세포 태그 유전자는 CAR 유전자와 프레임 내 렌티바이러스 플라스미드 백본으로 클로닝된다. 다른 구현예에서, 세포 태그는 별개의 렌티바이러스 벡터로 클로닝된다.
4. 비바이러스 벡터 및 전달 시스템
a . 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존 시스템
하나 이상의 miRNA(들) 단독을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 또는 하나 이상의 miRNA(들) 및 본원에 기재된 바와 같은 키메라 수용체, 사이토카인, 및/또는 세포 태그를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 DNA 서열을 척추동물의 염색체로 도입하기 위한 합성 DNA 트랜스포존 시스템을 지칭하는 "잠자는 숲속의 미녀(SB) 트랜스포존 시스템"과 같은 비바이러스 기반 전달 시스템을 사용하여 면역 효과기 세포로 도입될 수 있다. 예시적인 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존 시스템은 예를 들어, 미국 특허 번호 6,489,458 및 8,227,432에 기재되어 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존 시스템은 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포사제 폴리펩티드 뿐만 아니라 이의 유도체, 기능적 단편, 및 변이체, 및 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존 폴리뉴클레오티드, 이의 유도체, 및 기능적 변이체 및 단편을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포사제는 mRNA에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, mRNA는 SB10, SB11, SB100x 또는 SB110 트랜스포사제를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 캡(cap) 및 폴리-A 꼬리를 포함한다.
DNA 트랜스포존은 간단한 절단 및 붙이기 방식으로 하나의 DNA 부위에서 또 다른 부위로 전위된다. 전위는 정의된 DNA 분절이 하나의 DNA 분자로부터 절제되어 동일하거나 상이한 DNA 분자 또는 게놈에서 또 다른 부위로 이동하는 정확한 과정이다. 다른 Tc1/mariner-유형 트랜스포사제와 마찬가지로, SB 트랜스포사제는 트랜스포존을 수용자 DNA 서열 내 TA 디뉴클레오티드 염기쌍으로 삽입한다. 삽입 부위는 동일한 DNA 분자, 또는 또 다른 DNA 분자(또는 염색체)의 다른 곳에 있을 수 있다. 인간을 포함하는 포유류 게놈에서, 대략 2억 개의 TA 부위가 있다. TA 삽입 부위는 트랜스포존 통합 과정에서 복제된다. TA 서열의 이러한 복제는 전위의 특징이며 일부 실험에서 메커니즘을 학인하는 데 사용된다. 트랜스포사제는 트랜스포존 내에서 암호화될 수 있거나 트랜스포사제는 또 다른 공급처에 의해 공급될 수 있으며, 이 경우 트랜스포존은 비-자율적 요소가 된다. 비-자율적 트랜스포존은 삽입 후 독립적으로 계속 절제하고 재삽입할 수 없기 때문에 유전적 도구로서 가장 유용하다. 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존은 유전자를 척추동물의 게놈으로 도입하고 유전자 요법을 위한 비바이러스 벡터로서 사용될 것으로 예상된다.
간단히 말해서, 잠자는 숲속의 미녀 시스템(Hackett 등, Mol Ther 18:674-83, (2010))은 면역 효과기 세포를 유전적으로 변형시키기 위해 채택되었다(Cooper 등, Blood 105:1622-31, (2005)). 일 구현예에서, 이것은 2 단계를 수반한다: (i) 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존(Jin 등, Gene Ther 18:849-56, (2011); Kebriaei 등, Hum Gene Ther 23:444-50, (2012)) 및 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포사제를 발현하는 DNA 플라스미드의 전기-전달 및 (ii) K562 세포주로부터 유래된 디자이너 인공 항원-제시 세포(AaPC)(AaPC(활성화 및 증식 세포)로도 알려짐 상의 통합체를 안정하게 발현하는 T 세포의 증식 및 확장. 또 다른 구현예에서, 2번째 단계 (ii)는 제거되고 유전적으로 변형된 T 세포는 동결보존되고 환자에게 즉시 주입된다.
일 구현예에서, 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존 시스템은 예를 들어 Hudecek 등, Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology, 52:4, 355-380(2017), Singh 등, Cancer Res(8):68(2008). April 15, 2008 및 Maiti 등, J Immunother. 36(2): 112-123(2013)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들), CAR, 사이토카인, 및 세포 태그는 단일 트랜스포존 DNA 플라스미드 벡터에 의해 암호화될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들), CAR, 사이토카인, 및 세포 태그는 상이한 트랜스포존 DNA 플라스미드 벡터에 의해 암호화될 수 있다. 추가 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들) 및 CAR은 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 하나의 측면에서, 유도성 프로모터는 유전자 스위치 리간드 유도성 프로모터일 수 있다. 일부 경우에, 유도성 프로모터는 아래에 추가로 기재된 RHEOSWITCH® 유전자 스위치와 같은 소분자 리간드-유도성 2 개의 폴리펩티드 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치일 수 있다. 특정 구현예에서, CAR, 사이토카인, 및 세포 태그는 1, 2 개 또는 그 이상의 트랜스포존으로 구성될 수 있다.
일부 구현예에서, MUC16, CD33, 또는 ROR1-특이적 CAR 및 다른 유전적 요소는 SB11 트랜스포존 시스템, SB100X 트랜스포존 시스템, SB110 트랜스포존 시스템, piggyBac 트랜스포존 시스템(예를 들어, 미국 특허 번호 6,489,458; 8,227,432, 9,228,180, Wilson 등, "PiggyBac Transposon-mediated Gene Transfer in Human Cells," Molecular Therapy 15:139-145(2007) 및 WO 2016/145146 참조) 및/또는 piggyBat 트랜스포존 시스템(예를 들어, Mitra 등, "Functional characterization of piggyBat from the bat Myotis lucifugus unveils an active mammalian DNA transposon," Proc. Natl. Acad. Sci USA 110:234-239(2013) 참조을 사용하여 세포에 전달된다. 추가의 트랜스포사제 및 트랜스포존 시스템은 미국 특허 번호; 7,148,203; 8,227,432; 미국 특허 공개 번호 2011/0117072; Mates 등, Nat Genet, 41(6):753-61(2009). doi: 10.1038/ng.343. Epub 2009 May 3, Gene Ther., 18(9):849-56(2011). doi: 10.1038/gt.2011.40. Epub 2011 Mar 31 및 Ivics 등, Cell. 91(4):501-10, (1997)에 제공되어 있다.
특정 구현예에서, 벡터는 왼쪽 트랜스포존 반복 영역 및 오른쪽 트랜스포존 반복 영역을 포함하는 잠자는 숲속의 미녀 플라스미드이다. 특정 구현예에서, 왼쪽 트랜스포존 반복 영역은 서열번호: 580을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 580과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 580의 보체와 혼성화한다. 특정 구현예에서, 오른쪽 트랜스포존 반복 영역은 서열번호: 581을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 기능적 변이체는 서열번호: 581과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖거나, 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 581의 보체와 혼성화한다.
b. 재조합효소-기반 전달 시스템
다른 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들), CAR, 사이토카인, 및/또는 세포 태그를 암호화하는 핵산은 재조합효소 및 통합 발현 벡터를 통해 면역 효과기 세포의 DNA로 통합될 수 있다. 이러한 벡터는 숙주 세포의 DNA로 무작위로 통합될 수 있거나, 발현 벡터와 숙주 세포의 염색체 사이의 특이적 재조합을 가능하게 하는 재조합 부위를 포함할 수 있다. 이러한 통합 발현 벡터는 숙주 세포의 염색체의 내인성 발현 제어 서열을 활용하여 원하는 단백질의 발현에 영향을 미칠 수 있다. 일부 구현예에서, 표적화된 통합은 통합 부위 측면에 있는 서열에 상동인 공여자 폴리뉴클레오티드 상의 서열의 존재에 의해 촉진된다. 예를 들어, 본원에 기재된 공여자 폴리뉴클레오티드를 사용하여 표적화된 통합은 통상적인 형질감염 기술, 예를 들어 상동 재조합에 의해 유전자 녹아웃(knockout) 또는 녹인(knockin)을 생성하는 데 사용되는 기술에 따라 달성될 수 있다. 다른 구현예에서, 표적화된 통합은 통합 부위 측면에 있는 서열에 상동인 공여자 폴리뉴클레오티드 상의 서열의 존재, 및 부위-특이적 재조합효소의 존재 하에 세포와 공여자 폴리뉴클레오티드의 접촉에 의해 촉진된다. 부위-특이적 재조합효소, 또는 간단히 재조합효소란 호환가능한 재조합 부위 사이의 보존적 부위-특이적 재조합을 촉매하는 폴리펩티드를 의미한다. 본원에 사용된 바와 같이, 부위-특이적 재조합효소는 천연 폴리펩티드 뿐만 아니라 활성을 유지하는 유도체, 변이체 및/또는 단편, 및 천연 폴리뉴클레오티드, 활성을 유지하는 재조합효소를 암호화하는 유도체, 변이체, 및/또는 단편을 포함한다.
재조합효소는 표적화 벡터의 도입 전에, 동시에, 또는 후에 표적 세포로 도입될 수 있다. 재조합효소는 예를 들어, 리포솜, 코팅된 입자, 또는 미세주사를 사용하여, 단백질로서 세포로 직접 도입될 수 있다. 대안적으로, 재조합효소를 암호화하는 DNA 또는 메신저 RNA인 폴리뉴클레오티드는 적합한 발현 벡터를 사용하여 세포로 도입될 수 있다. 상기 기재된 표적화 벡터 구성요소는 관심 재조합효소를 암호화하는 서열을 함유하는 발현 카세트의 구성에 유용하다. 그러나, 재조합효소의 발현은 다른 방식으로, 예를 들어, 조절가능한 프로모터(즉, 발현이 선택적으로 유도되거나 억제될 수 있는 프로모터)의 제어 하에 재조합효소의 발현을 배치함으로써 조절될 수 있다.
재조합효소는 인테그라제(Integrase) 또는 레졸바제(Resolvase) 계열로부터 유래될 수 있다. 재조합효소의 인테그라제 계열은 100 개 이상의 구성원이 있으며, 예를 들어, FLP, Cre, 및 람다 인테그라제를 포함한다. 티로신 계열 또는 람다 인테그라제 계열로도 언급되는 인테그라제 계열은 DNA의 포스포디에스테르 결합에 대한 친핵체 공격을 위해 촉매 티로신의 하이드록실 기를 사용한다. 전형적으로, 티로신 계열의 구성원은 초기에 DNA에 닉(nick)을 생성하고, 나중에 이중 가닥 파손을 형성한다. 티로신 계열 인테그라제의 예는 Cre, FLP, SSV1, 및 람다(λ) 인테그라제를 포함한다. 세린 재조합효소 계열로도 알려진 레졸바제 계열에서, 보존된 세린 잔기는 DNA 표적 부위에 대한 공유 연결을 형성한다(Grindley, 등, (2006) Ann Rev Biochem 16:16).
일 구현예에서, 재조합효소는 SPβc2 재조합효소, SF370.1 재조합효소, Bxb1 재조합효소, A118 재조합효소 및 ΦRv1 재조합효소로 이루어진 군으로부터 선택하는 재조합효소를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열이다. 세린 재조합효소의 예는 미국 특허 번호 9,034,652에 상세하게 기재되어 있다.
본 발명의 실시에 사용하기 위한 재조합효소는 이전에 기재된 바와 같이 재조합적으로 생산되거나 정제될 수 있다. 원하는 재조합효소 활성을 갖는 폴리펩티드는 크기 분획화, 친화성 크로마토그래피, HPLC, 이온 교환 크로마토그래피, 헤파린 아가로즈 친화성 크로마토그래피를 포함하나 이에 제한되지 않는, 단백질 황산암모늄 침전, 정제 분야에 알려진 방법에 의해 원하는 순도로 정제될 수 있다(예를 들어, Thorpe & Smith, Proc. Nat. Acad. Sci. 95:5505-5510, 1998.)
일 구현예에서, 재조합효소는 임의의 적합한 방법에 의해 재조합이 요구되는 재조합 부착 부위를 함유하는 진핵생물 세포로 도입될 수 있다. 예를 들어, 미세주사 또는 다른 방법에 의해 기능적 단백질을 세포로 도입하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 정제된 재조합효소 단백질의 도입은 단백질의 일시적 존재 및 그의 기능을 보장하며, 이는 종종 바람직한 구현예이다. 대안적으로, 재조합효소를 암호화하는 유전자는 세포를 형질전환하기 위해 사용되는 발현 벡터에 포함될 수 있으며, 여기서 재조합효소-암호화 폴리뉴클레오티드는 진핵생물 세포에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 매개하는 프로모터에 작동가능하게 연결된다. 재조합효소 폴리펩티드는 또한 재조합효소 폴리펩티드를 암호화하는 메신저 RNA에 의해 진핵생물 세포로 도입될 수 있다. 핵산 단편을 변형되는 게놈으로 삽입하는 데 필요한 것과 같은 이러한 시간 동안만 재조합효소가 존재하는 것이 일반적으로 바람직하다. 따라서, 대부분의 발현 벡터와 연관된 영속성의 부족은 해로운 것으로 예상되지 않는다. 관심 외인성 폴리뉴클레오티드의 도입 전, 후, 또는 동시에 재조합효소 유전자를 세포로 도입할 수 있다. 일 구현예에서, 재조합효소 유전자는 삽입될 폴리뉴클레오티드를 운반하는 벡터 내에 존재하며; 재조합효소 유전자는 심지어 폴리뉴클레오티드 내에 포함될 수도 있다.
일 구현예에서, 부위-특이적 재조합 방법은 제1 재조합 부위 및 제2 재조합 부위를 제공하는 단계; 제1 및 제2 재조합 부위를 원핵생물 재조합효소 폴리펩티드와 접촉시켜, 재조합 부위 사이에 재조합을 초래하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합효소 폴리펩티드는 제1 및 제2 재조합 부위 사이의 재조합을 매개할 수 있고, 제1 재조합 부위는 attP 또는 attB이고, 제2 재조합 부위는 attB 또는 attP이고, 재조합효소는 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes) 파지 재조합효소, 스트렙토코쿠스 피오게네스(Streptococcus pyogenes) 파지 재조합효소, 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 파지 재조합효소, 마이코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis) 파지 재조합효소 및 마이코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis) 파지 재조합효소로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단 제1 재조합 부착 부위가 attB인 경우, 제2 재조합 부착 부위는 attP이고, 제1 재조합 부착 부위가 attP인 경우, 제2 재조합 부착 부위는 attB이다.
추가 구현예는 게놈이 변형될 세포로 부위-특이적 재조합효소의 도입을 제공한다. 하나의 구현예는 제1 재조합 부착 부위 및 제2 재조합 부착 부위를 포함하는 진핵생물 세포를 제공하는 단계; 제1 및 제2 재조합 부착 부위를 원핵생물 재조합효소 폴리펩티드와 접촉시켜, 재조합 부착 부위 사이에 재조합을 초래하는 단계를 포함하는, 진핵생물 세포에서 부위-특이적 재조합을 수득하는 방법에 관한 것이며, 여기서 재조합효소 폴리펩티드는 제1 및 제2 재조합 부착 부위 사이의 재조합을 매개할 수 있고, 제1 재조합 부착 부위는 파지 게놈 재조합 부착 부위(attP) 또는 박테리아 게놈 재조합 부착 부위(attB)이고, 제2 재조합 부착 부위는 attB 또는 attP이고, 재조합효소는 리스테리아 모노사이토게네스 파지 재조합효소, 스트렙토코쿠스 피오게네스 파지 재조합효소, 바실루스 서브틸리스 파지 재조합효소, 마이코박테리움 투베르쿨로시스 파지 재조합효소 및 마이코박테리움 스메그마티스 파지 재조합효소로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단 제1 재조합 부착 부위가 attB인 경우, 제2 재조합 부착 부위는 attP이고, 제1 재조합 부착 부위가 attP인 경우, 제2 재조합 부착 부위는 attB이다. 구현예에서 재조합효소는 A118 재조합효소, SF370.1 재조합효소, SPβc2 재조합효소, ΦRv1 재조합효소, 및 Bxb1 재조합효소로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서 재조합은 통합을 초래한다.
c. 다른 비바이러스 전달 시스템
다른 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들), CAR, 사이토카인, 및/또는 세포 태그를 암호화하는 핵산은 CRISPR, TALEN 또는 아연-핑거 뉴클레아제를 활용하는 유전자 편집 시스템을 통해 면역 효과기 세포의 DNA로 통합될 수 있다.
외인성 핵산을 숙주 세포로 도입하는 데 사용되는 방법에도 불구하고, 숙주 세포에서 재조합 DNA 서열의 존재를 확인하기 위해, 다수의 검정이 수행될 수 있다. 이러한 검정은 예를 들어, 서던(Southern) 및 노던 블롯팅, RT-PCR 및 PCR과 같은 당업자에게 잘 알려진 "분자 생물학적" 검정; 예를 들어, 면역학적 수단(ELISA 및 웨스턴 블롯) 또는 본 발명의 범위 내에 속하는 펩티드 또는 단백질 또는 핵산을 식별하기 위한 본원에 기재된 검정에 의해 특정 펩티드의 존재 또는 부재를 검출하는 것과 같은 "생화학적" 검정을 포함한다.
IX. 조작된 T-세포 수용체(TCR)
일부 구현예에서, 키메라 수용체는 조작된 T-세포 수용체를 포함한다. T 세포 수용체(TCR)는 T 세포의 표면 상에서 쌍을 이루어 이종이량체성 수용체를 형성하는 2 개의 쇄(αβ 또는 γδ)로 구성된다. 일부 경우에, αβ TCR은 신체 내 대부분의 T 세포 상에서 발현되고 특이적 MHC-제한 항원의 인식에 관여되는 것으로 알려져 있다. 각각의 α 및 β 쇄는 다음 2 개의 도메인으로 구성된다: 단백질을 세포 막에 고정시키고 CD3 신호전달 장치의 불변 서브유닛과 연관된 불변 도메인(C); 및 상보성 결정 영역(CDR)으로 언급되는 6 개의 루프를 통해 항원 인식을 부여하는 가변 도메인(V). 일부 경우에, 각각의 V 도메인은 3 개의 CDR; 예를 들어, 초가변 영역으로서 CDR3을 갖는 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 이들 CDR은 주요 조직적합성 복합체(pepMHC)에 의해 암호화된 단백질에 결합된 항원성 펩티드 사이에 형성된 복합체(예를 들어, HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DPA1, HLA-DPB1, HLA-DQA1, HLA-DQB1, HLA-DRA, 또는 HLA-DRB1 복합체)와 상호작용한다. 일부 경우에, 불변 도메인은 불변 도메인을 가변 도메인에 연결하는 결합 영역을 추가로 포함한다. 일부 경우에, 베타 쇄는 결합 영역의 일부를 구성하는 짧은 다양성 영역을 추가로 포함한다.
T-세포 수용체 α 쇄는 불변(보존된 영역), 즉, Va24-Ja18 접합부(아미노산 서열 GSTLGR 또는 이의 보존적으로 치환된 아미노산 서열)를 함유하지만, α 및 β 쇄는 둘 다 매우 가변적이다.
일부 경우에, 이러한 TCR은 특이적 종양 항원, 예를 들어 NY-ESO, Mage A3, Titin, MART-1, HPV, HBV, MAGE-A4, MAGE-A10, MAGE A3/A6, gp100, MAGE-A1, 또는 PRAME에 반응성이다. 다른 경우에, 이러한 TCR은 환자의 종양 내에서 발현되는 특이적 신생항원(즉, 종양에 의해 발현되는 환자-특이적, 체세포, 비대칭 돌연변이)에 반응성이다. 일부 경우에, 조작된 TCR은 친화성-향상될 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 국제 면역유전학(IMGT) TCR 명명법을 사용하여 기재되며, TCR 서열의 IMGT 공개 데이터베이스에 연결된다. 예를 들어, 프레임워크, CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열에 의해 구별되는 여러 유형의 알파 쇄 가변(Vα) 영역 및 여러 유형의 베타 쇄 가변(Vβ) 영역이 있을 수 있다. 이와 같이, Vα 유형은 고유한 TRAV 번호에 의해 IMGT 명명법에서 언급될 수 있다. 예를 들어, "TRAV21"은 고유한 프레임워크 및 CDR1 및 CDR2 서열, 및 TCR에서 TCR까지 보존되지만 TCR에서 TCR까지 달라지는 아미노산 서열도 포함하는 아미노산 서열에 의해 부분적으로 정의되는 CDR3 서열을 갖는 TCR Vα 영역을 정의한다. 유사하게, "TRBV5-1"은 고유한 프레임워크 및 CDR1 및 CDR2 서열을 갖지만, 부분적으로 정의된 CDR3 서열만 있는 TCR Vβ 영역을 정의한다.
일부 경우에, 베타 쇄 다양성 영역은 약어 TRBD에 의해 IMGT 명명법에서 언급된다.
일부 경우에, IMGT 명명법에 의해 정의되는 고유한 서열은 광범위하게 알려져 있고 TCR 분야에서 작업하는 이들에게 접근가능하다. 예를 들어, IMGT 공개 데이터베이스 및 "T cell Receptor Factsbook", (2001) LeFranc and LeFranc, Academic Press, ISBN 0-12-441352-8에서 찾을 수 있다.
일부 구현예에서, αβ 이종이량체성 TCR은 예를 들어, 세포질 및 막관통 도메인을 모두 갖는 전장 쇄로서 형질감염된다. 일부 경우에, TCR은 예를 들어, WO 2006/000830에 기재된 바와 같이 각각의 불변 도메인의 잔기 사이에 도입된 이황화 결합을 함유한다.
일부 경우에, 본원에 기재된 TCR은 단일 쇄 형식이며, 예를 들어 WO 2004/033685를 참조한다. 단일 쇄 형식은 Vα-L-Vβ, Vβ-L-Vα, Vα-Cα-L-Vβ, Vα-L-Vβ-Cβ, Vα-Cα-L-Vβ-Cβ 유형의 αβ TCR 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 Vα 및 Vβ는 각각 TCR α 및 β 가변 영역이고, Cα 및 Cβ는 각각 TCR α 및 β 불변 영역이고, L은 링커 서열이다. 특정 구현예에서 본 발명의 단일 쇄 TCR은 WO 2004/033685에 기재된 바와 같이 각각의 불변 도메인의 잔기 사이에 도입된 이황화 결합을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 αβ TCR일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 γδ TCR일 수 있다. 본 개시내용의 TCR은 본원에 기재된 항원 표적 중 임의의 것에 결합할 수 있음이 이해되어야 한다.
일부 구현예에서, TCR은 Vδ1, Vδ2, 및 Vδ1negVδ2neg TCR 하위집합 중 임의의 하나일 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 Vδ1, Vδ2, Vδ3, Vδ5, Vδ7, 또는 Vδ8 TCR 쇄와 Vγ2, Vγ3, Vγ7, Vγ8, Vγ9, Vγ10, 또는 Vγ11 TCR 쇄의 임의의 조합을 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 본질적으로 동일한 유전적 물질을 가질 수 있다. 일 측면에서, 조작된 세포는 키메라 항원 수용체를 함유하지 않을 수 있다.
본원에 기재된 TCR은 검출가능한 표지, 치료제 또는 PK 변형 모이어티와 연관될 수 있다. 진단 목적을 위한 예시적인 검출가능한 표지는 형광 표지, 방사선표지, 효소, 핵산 프로브 및 조영제를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 본원에 개시된 TCR의 각각의 쇄, 예를 들어 αβ 또는 γδ는 TCR 쇄의 불변 영역을 막관통 영역에 연결하는 변형된 스페이스 영역을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 개시된 TCR의 각각의 쇄의 스페이서 영역은 1) 줄기 영역 및 상기 줄기 영역에 인접한 1 개 이상의 줄기 확장 영역(들)을 포함한다. 줄기 및 줄기 확장 영역은 예를 들어, 키메라 항원 수용체에서 사용하기 위해 이전에 기재된 것과 같은 것들일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 TCR의 각각의 쇄는 줄기 영역(들) 및 최대 20 개의 줄기 확장 영역을 포함하는 스페이서를 혼입한다.
일부 경우에, 줄기 영역은 TCRα 또는 TCRβ 쇄로부터의 세포외 힌지 영역을 포함하거나 줄기 영역은 TCRα 또는 TCRβ 쇄로부터의 세포외 힌지 영역에 대해 적어도 80% 상동성을 갖는 서열을 포함한다. 대안적인 예에서, 줄기 영역은 각각 TCRα 또는 TCRβ 불변 영역의 세포외 영역에 대해 적어도 80% 상동성을 갖는 TCRα 또는 TCRβ 불변 영역의 세포외 영역의 임의의 부분을 포함한다. 예를 들어, 줄기 영역은 TCRα 또는 TCRβ 불변 영역의 세포외 영역의 임의의 부분에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과의 상동성을 갖는 서열을 포함할 수 있다.
TCR 쇄 이종이량체는 α 및 β 쇄의 세포외 힌지 영역에서 쇄간 이황화 결합에 의해 형성된다. 일부 구현예에서, 줄기 영역은 이량체화 부위를 포함한다. 이량체화 부위는 이황화 결합 형성 부위를 포함할 수 있다. 이량체화 부위는 시스테인 잔기(들)를 포함할 수 있다. 줄기 영역은 이황화 결합을 형성할 수 있다. 이러한 이황화 결합은 이황화 결합 형성 부위 또는 이량체화 부위에서 형성될 수 있다. 일부 예에서, 이량체화는 TCR의 α와 β 쇄 사이에서 발생한다.
일부 구현예에서, 줄기 확장 영역은 줄기 영역을 막관통 영역 TCR α 및 β 쇄에 연결하는 데 사용된다. 특정 구현예에서, 줄기 확장 영역은 줄기 영역을 TCR α 및 β 쇄의 불변 영역에 연결하는 데 사용된다. 특정 구현예에서, 줄기 영역 및 줄기 확장 영역(들)은 링커를 통해 연결될 수 있다.
일부 경우에, 줄기 확장 도메인은 줄기 영역에 부분적으로 상동인 서열을 포함한다. 일부 경우에, 각각의 줄기 확장 영역은 줄기 확장 영역이 줄기 영역의 이량체화 부위가 없다는 점을 제외하고, 줄기 영역에 상동인 서열을 포함한다. 일부 경우에, 각각의 줄기 확장 영역은 줄기 영역과 동일한 서열을 포함한다. 다른 경우에, 각각의 줄기 확장 영역은 줄기 영역에 비해 적어도 하나의 아미노산 잔기 치환을 갖는 줄기 영역과 동일한 서열을 포함한다. 일부 경우에, 각각의 줄기 확장 영역은 이황화 결합을 형성할 수 없거나 상동 줄기 확장 영역과 이량체화할 수 없다.
다른 구현예에서, 하나의 줄기 확장 영역은 링커를 통해 또 다른 줄기 확장 영역에 연결될 수 있다. 이러한 링커의 예는 글리신-세린 풍부 링커를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 줄기 확장 영역(들)의 첨가는 유전자이식 TCR α 및 β 쇄와 유전적으로 변형된 T 세포에 의해 발현되는 천연 TCR α 및 β 쇄의 쌍형성오류를 방지한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 변형된 면역 효과기 세포는 본 개시내용의 TCR 및 본 개시내용의 사이토카인을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 변형된 면역 효과기 세포는 TCR 및 IL-15 및 IL-15Rα를 포함하는 융합 단백질, 또는 이러한 도메인의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 융합 단백질을 포함할 수 있다.
X. 면역 체크포인트 억제제
일부 구현예에서, 본 개시내용의 조작된 세포는 면역 체크포인트 억제제를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드는 면역 체크포인트 억제제를 추가로 암호화할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 개시내용의 조작된 세포는 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항체 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체일 수 있다. 특정 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD1, PD-L1, CTLA-4, TIGIT, 4-1BB, PIK3IP1, CD27, CD28, CD40, CD70, CD122, CD137, OX40(CD134), GITR, ICOS, A2AR, B7-H3(CD276), B7-H4(VTCN1), BTLA, IDO, KIR, LAG3, TIM-3, 또는 VISTA와 같은 면역 체크포인트 단백질의 활성을 억제할 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체일 수 있다. 항-CTLA-4 항체(예를 들어, 이필리무맙(ipilimumab))는 진행성 흑색종이 있는 참가자에서 지속적인 항-종양 활성 및 생존 연장을 보여, 2011년에 미국 식품의약국(FDA) 승인을 받았다. Hodi 등, Improved survival with ipilimumab in patients with metastatic melanoma. N Engl J Med. (2010) Aug 19; 363(8):711-23을 참조한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 전장 아테졸리주맙(atezolizumab)(항-PD-L1), 아벨루맙(avelumab)(항-PD-L1), 더발루맙(durvalumab)(항-PD-L1), 또는 이의 단편 또는 변이체일 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 체크포인트 억제제는 CD27 억제제, CD28 억제제, CD40 억제제, CD122 억제제, CD137 억제제, OX40(CD134으로도 알려짐) 억제제, GITR 억제제, ICOS 억제제, 또는 이의 임의의 조합 중 임의의 하나 이상일 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 체크포인트 억제제는 A2AR 억제제, B7-H3(CD276으로도 알려짐) 억제제, B7-H4(VTCN1로도 알려짐) 억제제, BTLA 억제제, IDO 억제제, KIR 억제제, LAG3 억제제, TIM-3 억제제, VISTA 억제제, 또는 이의 임의의 조합 중 임의의 하나 이상일 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-CD28 항체, 항-TIGIT 항체, 항-LAG3 항체, 항-TIM3 항체, 항-GITR 항체, 항-4-1BB 항체, 또는 항-OX-40 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 항-TIGIT 항체이다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 BMS935559(MDX-1105), 아텍솔리주맙(atexolizumab)(MPDL3280A), 더발루맙(MEDI4736), 및 아벨루맙(MSB0010718C)으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-PD-L1 항체이다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 이필리무맙(YERVOY) 및 트레멜리무맙(tremelimumab)으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-CTLA-4 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 BMS-986016 및 LAG525로 이루어진 군으로부터 선택된 항-LAG-3 항체이다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 MEDI6469, MEDI0562, 및 MOXR0916으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-OX-40 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 PF-05082566으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-4-1BB 항체이다.
일부 구현예에서, 조작된 세포는 PD1-결합 모이어티를 포함하는 면역 체크포인트 억제제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PD1-결합 모이어티(본원에서 "항-PD-1"로서 지칭됨)는 표 8(하기)에서 식별된 항체, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체로부터 선택된다.
표 8: PD-1 항체
XI. 유전자 스위치
본원에는 유전자 스위치 폴리펩티드, 리간드-유도성 유전자 스위치 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 및 이러한 폴리펩티드 및/또는 폴리뉴클레오티드를 혼입하는 방법 및 시스템이 제공된다. 용어 "유전자 스위치"는 프로모터와 연관된 반응 요소, 및 예를 들면, 하나 이상의 리간드의 존재 하에, 반응 요소 및 프로모터가 혼입되는 유전자의 발현을 조절하는 엑디손 수용체(EcR) 기반 시스템의 조합을 지칭한다. 엄격하게 조절되는 유도성 유전자 발현 시스템 또는 유전자 스위치는 유전자 요법, 세포 내 단백질의 대규모 생산, 세포 기반 고처리량 스크리닝 검정, 기능적 유전체학 및 유전자이식 식물 및 동물에서 특성 조절과 같은 다양한 적용에 유용하다. 이러한 유도성 유전자 발현 시스템은 리간드 유도성 이종 유전자 발현 시스템을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 또는 추가 폴리뉴클레오티드는 이종 유전자 발현의 리간드-유도성 제어를 위한 유전자 스위치 시스템에 대한 폴리펩티드를 암호화하며, 여기서 유전자 스위치 폴리펩티드는 (a) 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 DNA 결합 도메인을 포함하는 제1 유전자 스위치 폴리펩티드; 및 (b) 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 전사활성화 도메인을 포함하는 제2 유전자 스위치 폴리펩티드를 포함하며; 여기서 제1 유전자 스위치 폴리펩티드 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 링커에 의해 연결된다.
일부 구현예에서, 유전자 스위치 시스템은 (a) 전사활성화 도메인을 포함하는 제1 유전자 스위치 폴리펩티드; (b) 리간드 결합 도메인에 융합된 DNA 결합 도메인을 포함하는 제2 유전자 스위치 폴리펩티드; 및 (c) 적어도 하나의 이종 폴리펩티드를 포함하며; 여기서 상기 제1 유전자 스위치 폴리펩티드, 상기 제2 유전자 스위치 폴리펩티드 및 상기 이종 폴리펩티드 중 하나는 상기 제1 유전자 스위치 폴리펩티드, 상기 제2 유전자 스위치 폴리펩티드 및 상기 이종 폴리펩티드 중 또 다른 하나에 링커에 의해 연결되고, 여기서 상기 폴리펩티드 링커는 절단가능한 링커 또는 리보솜 스킵핑 링커 서열을 포함한다.
이종 폴리펩티드는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 키메라 수용체(예를 들어, CAR), 세포 태그, 또는 사이토카인일 수 있다.
특정 구현예에서, 유전자 스위치 시스템은 WO 2018/132494에 기재된 유형의 것이다.
일부 구현예에서, DNA 결합 도메인은 GAL4(GAL4 DBD), LexA DBD, 전사 인자 DBD, 스테로이드/갑상선 호르몬 핵 수용체 슈퍼패밀리 구성원 DBD, 박테리아 LacZ DBD, 및 효모 DBD 중 적어도 하나를 포함한다. 다른 구현예에서, DNA 결합 도메인은 서열번호: 638의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 전사활성화 도메인은 VP16 전사활성화 도메인 및 B42 산성 활성인자 전사활성화 도메인 중 적어도 하나를 포함한다. 다른 경우에, 전사활성화 도메인은 서열번호: 632에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인 및 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인 중 적어도 하나는 엑디손 수용체(EcR), 유비퀴틴 수용체, 고아 수용체 1, NER-1, 스테로이드 호르몬 핵 수용체 1, 레티노이드 X 수용체 상호작용 단백질-15, 간 X 수용체 β, 스테로이드 호르몬 수용체 유사 단백질, 간 X 수용체, 간 X 수용체 α, 파르네소이드 X 수용체, 수용체 상호작용 단백질 14, 및 파르네솔 수용체, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 및 리간드 결합 도메인 중 적어도 하나는 서열번호: 640 또는 642의 엑디손 수용체 폴리펩티드 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 핵 수용체 리간드 결합 도메인은 서열번호: 634의 RxR 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체이다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 GAL4(GAL4 DBD), LexA DBD, 전사 인자 DBD, 스테로이드/갑상선 호르몬 핵 수용체 슈퍼패밀리 구성원 DBD, 박테리아 LacZ DBD, 및 효모 DBD, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체 중 적어도 하나를 암호화한다. 다른 구현예에서, DNA 결합 도메인은 서열번호: 639에 제시된 바와 같은 뉴클레오티드 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 VP16 전사활성화 도메인 및 B42 산성 활성인자 전사활성화 도메인 중 적어도 하나를 암호화한다. 다른 경우에, 전사활성화 도메인은 서열번호: 633에 제시된 바와 같은 뉴클레오티드 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 및 리간드 결합 도메인 중 적어도 하나는 서열번호: 641 또는 643 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 및 리간드 결합 도메인 중 적어도 하나는 서열번호: 635 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다.
또 다른 구현예에서, 제1 유전자 스위치 폴리펩티드는 EcR 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 융합된 GAL4 DBD, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하고, 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 레티노이드 수용체 X(RXR) 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 융합된 VP16 전사활성화 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 제1 유전자 스위치 폴리펩티드 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 2A, GSG-2A, GSG 링커(서열번호: 531), SGSG 링커(서열번호: 533), 퓨린링크 이의 변이체 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 링커에 의해 연결된다.
일부 경우에, 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인 및 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인 중 적어도 하나는 서열번호: 640 또는 642에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체 중 임의의 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 유전자 스위치 폴리펩티드는 EcR 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 융합된 GAL4 DBD, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하고, 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 레티노이드 수용체 X(RXR) 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 융합된 VP16 전사활성화 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, EcR 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 융합된 Gal4 DBD, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 644 또는 646에 제시된 바와 같은 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하고, 레티노이드 수용체 X(RXR) 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 융합된 VP16 전사활성화 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는는 서열번호: 636에 제시된 바와 같은 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
일부 경우에, 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인 및 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인 중 적어도 하나는 서열번호: 641 또는 643에 제시된 바와 같은 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, EcR 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 융합된 Gal4 DBD, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 645 또는 647에 제시된 바와 같은 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화되고, 레티노이드 수용체 X(RXR) 핵 수용체 리간드 결합 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 융합된 VP16 전사활성화 도메인, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체는 서열번호: 637의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다.
임의의 전술한 유전자 스위치 구현예에서, 링커는 절단가능한 링커, 리보솜 스킵핑 링커 서열 또는 IRES 링커일 수 있다. 일부 경우에, 링커는 IRES 링커이고 서열번호: 702 또는 703의 서열을 포함하는 핵산 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체에 의해 암호화된다. 다른 경우에, 링커는 절단가능한 링커 또는 리보솜 스킵핑 링커 서열이다. 일부 구현예에서, 절단가능한 링커 또는 리보솜 스킵핑 링커 서열은 2A 링커, p2A 링커, T2A 링커, F2A 링커, E2A 링커, GSG-2A 링커, GSG 링커, SGSG 링커, 퓨린링크 링커 이의 변이체 및 유도체 중 하나 이상을 포함한다. 다른 구현예에서, 절단가능한 링커 또는 상기 리보솜 스킵핑 링커 서열은 서열번호: 527, 529, 531, 533, 535, 537, 539, 541, 543, 545, 547, 549, 551, 553, 555, 557 및 559 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 서열을 갖거나 서열번호: 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 542, 544, 546, 548, 550, 552, 554, 556, 558, 및 560 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 서열에 의해 암호화된다.
임의의 유전자 스위치 구현예에서, 본원에 제공된 바와 같은 임의의 조성물의 제1 유전자 스위치 폴리펩티드, 제2 유전자 스위치 폴리펩티드, 항원-결합 폴리펩티드, 및 이종 폴리펩티드 중 적어도 하나의 발현은 프로모터에 의해 조절될 수 있으며, 여기서 프로모터는 조직-특이적 프로모터 또는 EF1A 프로모터 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체이다. 일부 경우에, 프로모터는 WO 2018/132494의 서열번호: 58 및 59의 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 다른 경우에, 프로모터는 T-세포-특이적 반응 요소를 포함하는 조직-특이적 프로모터이다. 또 다른 경우에, 조직-특이적 프로모터는 하나 이상의 NFAT 반응 요소(들)를 포함한다. 또 다른 경우에, NFAT 반응 요소는 WO 2018/132494의 서열번호: 51 내지 57 중 임의의 하나의 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다.
구현예에서, 적어도 하나의 이종 폴리펩티드의 발현은 유도성 프로모터에 의해 변형된다. 일부 구현예에서, 유도성 프로모터는 WO 2018/132494의 서열번호: 40 내지 64 중 임의의 하나의 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다. 다른 구현예에서, 유도성 프로모터는 제1 유전자 스위치 폴리펩티드 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드 중 적어도 하나에 의해 조절된다.
임의의 전술한 폴리뉴클레오티드가 본원에 기재된 바와 같은 벡터에 포함될 수 있음이 이해되어야 한다.
또한 본원에는 효과기 세포에서 이종 유전자의 발현을 조절하는 방법이 제공되며, 방법은 (a) 본원에 기재된 바와 같은 제1 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드의 폴리펩티드 및 이종 폴리펩티드를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 효과기 세포로 도입하는 단계; 및 (b) 효과기 세포를 이종 폴리펩티드를 암호화하는 유전자의 발현을 유도하기에 충분한 양의 리간드와 접촉시키는 단계를 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 바와 같은 효과기 세포에서 이종 유전자의 발현을 조절하는 방법에서 리간드는 다음 중 적어도 하나를 포함한다: (2S,3R,5R,9R,10R,13R,14S,17R)-17-[(2S,3R)-3,6-디하이드록시-6-메틸헵탄-2-일]-2,3,14-트리하이드록시-10,13-디메틸- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-데카하이드로- 1H-사이클로펜타[a]페난트렌-6-온; N'-(3,5-디메틸벤조일)-N'-[(3R)-2,2-디메틸-3-헥사닐]-2-에틸-3-메톡시벤조하이드라지드; 5-메틸-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 N'-(3,5-디메틸-벤조일)-N'-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-하이드라지드; 5-메틸-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 N'-(3,5-디메톡시-4-메틸-벤조일)-N'-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-하이드라지드; 5-메틸-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 N'-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(3,5-디메틸-벤조일)-하이드라지드; 5-메틸-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 N'-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(3,5-디메톡시-4-메틸-벤조일)-하이드라지드; 5-에틸-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 N'-(3,5-디메틸-벤조일)-N'-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-하이드라지드; 5-에틸-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 N'-(3,5-디메톡시-4-메틸-벤조일)-N'-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-하이드라지드; 5-에틸-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 N'-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(3,5-디메틸-벤조일)-하이드라지드; 5-에틸-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 N'-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(3,5-디메톡시-4-메틸-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메틸-벤조산 N-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-N'-(3-메톡시-2-메틸-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메톡시-4-메틸-벤조산 N-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-N'-(3-메톡시-2-메틸-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메틸-벤조산 N-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(3-메톡시-2-메틸-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메톡시-4-메틸-벤조산 N-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(3-메톡시-2-메틸-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메틸-벤조산 N-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-N'-(2-에틸-3-메톡시-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메톡시-4-메틸-벤조산 N-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-N'-(2-에틸-3-메톡시-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메틸-벤조산 N-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(2-에틸-3-메톡시-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메톡시-4-메틸-벤조산 N-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(2-에틸-3-메톡시-벤조일)-하이드라지드; 2-메톡시-니코틴산 N-(1-tert-부틸-펜틸)-N'-(4-에틸-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메틸-벤조산 N-(2,2-디메틸-1-페닐-프로필)-N'-(4-에틸-벤조일)-하이드라지드; 3,5-디메틸-벤조산 N-(1-tert-부틸-펜틸)-N'-(3-메톡시-2-메틸-벤조일)-하이드라지드; 및 3,5-디메톡시-4-메틸-벤조산 N-(1-tert-부틸-펜틸)-N'-(3-메톡시-2-메틸-벤조일)-하이드라지드.
일부 경우에, 본원에 제공된 바와 같은 효과기 세포에서 폴리펩티드를 암호화하는 유전자의 발현은 리간드의 존재 하에 발현과 비교하여, 리간드의 부재 하에 감소되거나 제거된다. 특정 경우에, 상기 이종 폴리펩티드의 발현은 추가 양의 리간드를 제공함으로써 회복된다.
일부 구현예에서, 유전자 스위치 시스템의 하나 이상의 발현 카세트는 다음 중 하나 이상을 추가로 포함한다: (a) 하나 이상의 재조합효소 부착 부위; 및 (b) 세린 재조합효소를 암호화하는 서열. 다른 구현예에서, 하나 이상의 발현 카세트는 다음 중 하나 이상을 추가로 포함한다: (a) 비-유도성 프로모터; 및 (b) 유도성 프로모터.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드 중 하나는 링커에 의해 이종 폴리펩티드에 연결될 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 IRES 링커인 폴리펩티드 링커에 의해 연결된다.
일부 구현예에서, 발현 카세트는 제2 이종 폴리펩티드를 암호화하는 제2 유전자를 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 바와 같은 유전자 스위치 시스템은 숙주 세포에 이종 유전자를 통합하기 위한 것이며, 여기서 숙주 세포와 세린 재조합효소 및 하나 이상의 재조합효소 부착 부위의 존재 하에 하나 이상의 발현 카세트의 접촉 시, 이종 유전자는 숙주 세포에 통합된다. 특정 구현예에서, 유전자 스위치 시스템은 리간드를 추가로 포함하며, 여기서 이종 유전자는 리간드에 의한 숙주 세포의 접촉 시 숙주 세포에서 발현된다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 재조합효소 부착 부위는 파지 게놈 재조합 부착 부위(attP) 또는 박테리아 게놈 재조합 부착 부위(attB)를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 세린 재조합효소는 SF370일 수 있다.
일부 경우에, 발현 카세트는 WO 2018/132494의 서열번호: 131 내지 126 중 임의의 하나의 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 갖는다.
특정 구현예에서, 유전자 스위치 시스템의 유도성 프로모터는 전사활성화 도메인에 의해 활성화될 수 있다. 유전자 스위치 시스템은 단일 벡터 또는 다중 벡터에 포함될 수 있음이 이해되어야 한다.
EcR-기반 유전자 스위치의 초기 버전은 드로소필라 멜라노가스테르(Drosophila melanogaster) EcR(DmEcR) 및 무스 무스쿨루스(Mus musculus) RXR(MmRXR) 폴리펩티드를 사용하였고 스테로이드인 포나스테론A(ponasteroneA)의 존재 하에 이들 수용체가 포유류 세포주 및 유전자이식 마우스에서 리포터 유전자를 전사활성화시킴을 나타내었다(Christopherson 등, 1992; No 등, 1996). 나중에, Suhr 등, 1998은 비-스테로이드성 엑디손 작용제인 테부페노지드(tebufenozide)가 외인성 이종이량체 파트너의 부재 하에 봄빅스 모리(Bombyx mori) EcR(BmEcR)을 통해 포유류 세포에서 리포터 유전자의 높은 수준의 전사활성화를 유도하였음을 나타내었다.
국제 특허 출원 번호 PCT/US97/05330(WO 97/38117) 및 PCT/US99/08381(WO99/58155)은 외인성 유전자 및 엑디손 수용체를 포함하는 DNA 작제물이 그에 대한 리간드의 존재, 및 임의적으로 침묵 파트너로서 작용할 수 있는 수용체의 존재 하에, 엑디손 반응 요소에 결합하여 유전자 발현을 유도하는 엑디손 수용체를 포함하는 제2 DNA 작제물에 의해 활성화되는 외인성 유전자의 발현을 조절하는 방법을 개시한다. 이 예에서, 엑디손 수용체는 드로소필라 멜라노가스테르로부터 단리되었다. 전형적으로, 이러한 시스템은 최적의 활성화를 제공하기 위해 침묵 파트너, 바람직하게는 레티노이드 X 수용체(RXR)의 존재를 필요로 한다. 포유류 세포에서, 곤충 엑디손 수용체(EcR)는 포유류 레티노이드 X 수용체(RXR)와 이종이량체화할 수 있으며, 이에 의해, 리간드 의존적 방식으로 표적 유전자 또는 이종 유전자의 발현을 조절하는 데 사용될 수 있다. 국제 특허 출원 번호 PCT/US98/14215(WO 99/02683)는 누에나방 봄빅스 모리로부터 단리된 엑시손 수용체가 외인성 이량체 파트너에 대한 필요 없이 포유류 시스템에서 기능적임을 개시한다.
미국 특허 번호 6,265,173은 수용체의 스테로이드/갑상선 슈퍼패밀리의 다양한 구성원이 드로소필라 멜라노가스테르 울트라스피라클(ultraspiracle) 수용체(USP) 또는 유전자 발현 시스템에서 사용하기 위한 USP의 적어도 이량체화 도메인을 포함하는 이의 단편과 조합할 수 있음이 개시된다. 미국 특허 번호 5,880,333은 전사활성화 도메인 및 DNA 결합 도메인이 2 개의 상이한 하이브리드 단백질 상에 위치된 식물에서 사용되는 드로소필라 멜라노가스테르 EcR 및 울트라스피라클(USP) 이종이량체 시스템을 개시한다. 이들 경우 각각에서, 전사활성화 도메인 및 DNA 결합 도메인(국제 특허 출원 번호 PCT/US98/14215에서와 같이 천연 EcR 또는 국제 특허 출원 번호 PCT/US97/05330에서와 같이 변형된 EcR)은 단일 분자로 통합되었고 다른 이종이량체성 파트너인 USP 또는 RXR은 천연 상태에서 사용되었다.
국제 특허 출원 번호 PCT/US01/0905는 전사활성화 및 DNA 결합 도메인을 2 개의 상이한 단백질에 배치함으로써 서로 분리하여 리간드의 부재 하에 배경 활성을 크게 감소시키고 리간드의 존재 하에 배경에 비해 활성을 유의하게 증가시키는 엑디손 수용체-기반 유도성 유전자 발현 시스템을 개시한다. 이 2-하이브리드 시스템은 출원 PCT/US97/05330 및 PCT/US98/14215에 개시된 2 개의 시스템과 비교하여 유의하게 개선된 유도성 유전자 발현 조절 시스템이다. 2-하이브리드 시스템은 DNA 결합 도메인이 유전자 상의 DNA 결합 부위에 결합할 때, 전사활성화 도메인이 프로모터를 보다 효과적으로 활성화시키도록 전사 활성화 도메인을 DNA 결합 도메인에 비해 보다 유리한 위치로 가져오는 한 쌍의 상호작용 단백질의 능력을 이용하는 것으로 여겨진다(예를 들어, 미국 특허 번호 5,283,173 참조). 2-하이브리드 유전자 발현 시스템은 2 개의 유전자 발현 카세트를 포함하며; 첫번째는 핵 수용체 폴리펩티드에 융합된 DNA 결합 도메인을 암호화하고, 두번째는 상이한 핵 수용체 폴리펩티드에 융합된 전사활성화 도메인을 암호화한다. 리간드의 존재 하에, 항체와 TGF-β 사이토카인 트랩의 상호작용을 촉진하여, DNA 결합 도메인 및 전사활성화 도메인의 이량체화를 초래하는 형태 변화가 유도되는 것으로 여겨진다. DNA 결합 및 전사활성화 도메인은 2 개의 상이한 분자 상에 상주하므로, 리간드의 부재 하에 배경 활성이 크게 감소된다.
2-하이브리드 시스템의 특정 변형은 또한 스테로이드성 리간드 예를 들어, 포나스테론 A("PonA") 또는 무리스테론 A(muristerone A)("MurA")와 비교할 때, 비-스테로이드성 리간드 예를 들어, 디아실하이드라진에 대한 개선된 민감성을 제공할 수 있다. 즉, 스테로이드와 비교할 때, 비-스테로이드성 리간드는 더 낮은 리간드 농도에서 더 높은 유전자 전사 활성을 제공하였다. 또한, 2-하이브리드 시스템은 비변형된 RXR이 스위칭 파트너로서 사용될 때 발생할 수 있는 RXR의 과발현으로 인해 일부 부작용을 피한다. 바람직한 2-하이브리드 시스템에서, EcR 또는 RXR의 천연 DNA 결합 및 전사활성화 도메인은 제거되고 결과적으로, 이들 하이브리드 분자는 세포에 존재하는 다른 스테로이드 호르몬 수용체와 상호작용할 기회가 적어, 부작용 감소를 초래한다.
엑디손 수용체(EcR)는 핵 수용체 슈퍼패밀리의 구성원이며 슈퍼패밀리 1, 그룹 H(본원에서 "그룹 H 핵 수용체"로 언급됨)로 분류된다. 각 그룹의 구성원은 E(리간드 결합) 도메인에서 40-60% 아미노산 동일성을 공유한다(Laudet 등, Unified Nomenclature System for the Nuclear Receptor Subfamily, 1999; Cell 97: 161-163). 엑디손 수용체 외에도, 이 핵 수용체 슈퍼패밀리 1, 그룹 H의 다른 구성원은 다음을 포함한다: 유비쿼터스 수용체(UR), 고아 수용체 1(OR-1), 스테로이드 호르몬 핵 수용체 1(NER-1), RXR 상호작용 단백질-15(RIP-15), 간 x 수용체 β(LXRβ), 스테로이드 호르몬 수용체 유사 단백질(RLD-1), 간 x 수용체(LXR), 간 x 수용체 α(LXRα), 파르네소이드 x 수용체(FXR), 수용체 상호작용 단백질 14(RIP-14), 및 파르네솔 수용체(HRR-1).
일부 경우에, 유도성 프로모터("IP")는 Intrexon Corporation의 RHEOSWITCH® 유전자 스위치와 같은 소분자 리간드-유도성 2 개의 폴리펩티드 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치일 수 있다. 일부 경우에, 유전자 스위치는 다음에 기재된 시스템 중 임의의 것에 기재되나 이에 제한되지 않는 엑디손-기반 수용체 구성요소로부터 선택될 수 있다: PCT/US2001/009050(WO 2001/070816); 미국 특허 번호 7,091,038; 7,776,587; 7,807,417; 8,202,718; PCT/US2001/030608(WO 2002/029075); 미국 특허 번호 8,105,825; 8,168,426; PCT/US52002/005235(WO 2002/066613); 미국 출원 번호 10/468,200(미국 공개 번호 20120167239); PCT/US2002/005706(WO 2002/066614); 미국 특허 번호 7,531,326; 8,236,556; 8,598,409; PCT/U52002/005090(WO 2002/066612); 미국 특허 번호 8,715,959(미국 공개 번호 20060100416); PCT/US2002/005234(WO 2003/027266); 미국 특허 번호 7,601,508; 7,829,676; 7,919,269; 8,030,067; PCT/U52002/005708(WO 2002/066615); 미국 출원 번호 10/468,192(미국 공개 번호 20110212528); PCT/US2002/005026(WO 2003/027289); 미국 특허 번호 7,563,879; 8,021,878; 8,497,093; PCT/US2005/015089(WO 2005/108617); 미국 특허 번호 7,935,510; 8,076,454; PCT/U52008/011270(WO 2009/045370); 미국 출원 번호 12/241,018(미국 공개 번호 20090136465); PCT/US2008/011563(WO 2009/048560); 미국 출원 번호 12/247,738(미국 공개 번호 20090123441); PCT/US2009/005510(WO 2010/042189); 미국 출원 번호 13/123,129(미국 공개 번호 20110268766); PCT/US2011/029682(WO 2011/119773); 미국 출원 번호 13/636,473(미국 공개 번호 20130195800); PCT/US2012/027515(WO 2012/122025); WO 2018/132494(PCT/US2018/013196); 및 미국 특허 번호 9,402,919.
본원에 사용된 바와 같이, 리간드-활성화 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치에 적용된 바와 같은 용어 "리간드"는 유전자 발현을 자극하기 위해 유전자 스위치를 활성화하는 능력(즉, 내부에 폴리뉴클레오티드(예를 들어, mRNA, miRNA 등) 및/또는 폴리펩티드의 리간드 유도성 발현을 제공)을 갖는 다양한 용해도의 소분자(예컨대 디아실하이드라진 화합물)이다. 이러한 리간드의 예는 다음에 기재된 것들을 포함하나 이에 제한되지 않는다: WO 2004/072254(PCT/US2004/003775); WO 2004/005478(PCT/US2003/021149); WO 2005/017126(PCT/US2004/005149); WO 2004/078924(PCT/US2004/005912); WO 2008/153801(PCT/US2008/006757); WO 2009/114201(PCT/US2009/001639); WO 2013/036758(PCT/US2012/054141); WO 2014/144380(PCT/US2014/028768); 및, WO 2016/044390(PCT/US2015/050375).
리간드의 예는 또한 미국 특허 번호: 6,258,603; 6,013,836; 5,117,057; 5,530,028; 5,378,726; 7,304,161; 7,851,220; 8,748,125; 9,272,986; 7,456,315; 7,563,928; 8,524,948; 9,102,648; 9,169,210; 9,255,273; 및, 9,359,289에 개시된 것들과 같은 엑디손, 20-하이드록시엑디손, 포나스테론 A, 무리스테론 A 등과 같은 엑디스테로이드, 9-시스-레티노산, 레티노산의 합성 유사체, N,N'-디아실하이드라진; 미국 특허 번호: 8,669,072; 및, 8,895,306에 기재된 바와 같은 옥사디아졸린; 유럽 출원 번호 2,461,809에 개시된 것들과 같은 디벤조일알킬 시아노하이드라진; 미국 특허 번호 5,225,443에 개시된 것들과 같은 N-알킬-N,N'-디아로일하이드라진; 유럽 출원 번호 234,994에 개시된 것들과 같은 N-아실-N-알킬카르보닐하이드라진; 미국 특허 번호 4,985,461에 기재된 것들과 같은 N-아로일-N-알킬-N'-아로일하이드라진; 미국 특허 번호: 7,375,093; 8,129,355; 및, 9,802,936에 기재된 것들과 같은 아미도케톤; 및 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시-N-이소부틸-벤즈아미드, 8-O-아세틸하르파지드, 옥시스테롤, 22(R) 하이드록시콜레스테롤, 24(S) 하이드록시콜레스테롤, 25-에폭시콜레스테롤, T0901317, 5-알파-6-알파-에폭시콜레스테롤-3-술페이트(ECHS), 7-케토콜레스테롤-3-술페이트, 파메솔, 담즙산, 1,1-비포스포네이트 에스테르, 유충 호르몬 III 등을 포함하는 다른 유사한 물질을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본 발명에 유용한 디아실하이드라진 리간드의 예는 RG-115819(3,5-디메틸-벤조산 N-(1-에틸-2,2-디메틸-프로필)-N'-(2-메틸-3-메톡시벤조일)-하이드라지드), RG-115932((R)-3,5-디메틸-벤조산 N-(1-tert-부틸-부틸)N'-(2-에틸-3-메톡시-벤조일)-하이드라지드), 및 RG-115830(3,5-디메틸-벤조산 N-(1-tert-부틸-부틸)-N'-(2-에틸-3-메톡시-벤조일)-하이드라지드)을 포함한다. 예를 들어, WO 2008/153801(PCT/US2008/006757); 및, WO 2013/036758(PCT/US2012/054141)을 참조한다.
예를 들어, 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치에 대한 리간드는 임의의 적합한 리간드로부터 선택될 수 있다. 자연 발생 엑디손 또는 엑디손 유사체(예를 들어, 20-하이드록시엑디손, 무리스테론 A, 포나스테론 A, 포나스테론 B, 포나스테론 C, 26-요오도포나스테론 A, 이노코스테론 또는 26-메실이노코스테론) 및 비-스테로이드 유도인자는 모두 본 발명의 유전자 스위치에 대한 리간드로서 사용될 수 있다. 미국 특허 번호 6,379,945는 스테로이드 및 특정 비-스테로이드성 유도인자 모두에 반응성인 유전자 스위치로서 작용할 수 있는 헬리오티스 비레센스(Heliothis virescens)("HEcR")로부터 단리된 곤충 스테로이드 수용체를 기재한다. 비-스테로이드성 유도인자는 예를 들어: 낮은 제조 비용, 대사 안정성, 곤충, 식물, 또는 포유류의 부재, 및 환경 수용성을 포함하는 여러 이유로 인해, 스테로이드 및 비-스테로이드 유도인자 모두에 반응성인 이 시스템 및 많은 다른 시스템에서 스테로이드에 비해 뚜렷한 이점을 갖는다. 미국 특허 번호 6,379,945는 엑디손-기반 유전자 스위치를 위한 리간드로서 2 개의 디벤조일하이드라진, 1,2-디벤조일-1-tert-부틸-하이드라진 및 테부페노지드(N-(4-에틸벤조일)-N'-(3,5-디메틸벤조일)-N'-tert-부틸-하이드라진)의 유용성을 기재한다. 또한 미국 특허 번호 5,117,057에 기재된 것들과 같은 다른 디벤조일하이드라진이 리간드로서 본 발명에 포함된다. 드로소필라 멜라노가스테르로부터의 엑디손 수용체에 대한 화학적 리간드로서 테부페노지드의 사용이 또한 미국 특허 번호 6,147,282에 개시되어 있다. 엑디손 리간드의 추가의 비제한적인 예는 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시-N-이소부틸-벤즈아미드, 8-O-아세틸하르파지드, 1,2-디아실 하이드라진, N'-치환된-N,N'-이치환된 하이드라진, 디벤조일알킬 시아노하이드라진, N-치환된-N-알킬-N,N-디아로일 하이드라진, N-치환된-N-아실-N-알킬, 카르보닐 하이드라진 또는 N-아로일-N'-알킬N'-아로일 하이드라진이다. (미국 특허 번호 6,723,531 참조).
일 구현예에서, 엑디손-기반 유전자 스위치 시스템을 위한 리간드는 디아실하이드라진 리간드 또는 키랄 디아실하이드라진 리간드이다. 유전자 스위치 시스템에 사용되는 리간드는 화학식 I의 화합물일 수 있으며:
여기서 A는 알콕시, 아릴알킬옥시 또는 아릴옥시이고; B는 임의적으로 치환된 아릴 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이고; R1 및 R2는 독립적으로 임의적으로 치환된 알킬, 아릴알킬, 하이드록시알킬, 할로알킬, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 알케닐, 임의적으로 치환된 알키닐, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로, 임의적으로 치환된 아릴 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 결정질 형태 또는 무정형 형태이다.
또 다른 구현예에서, 리간드는 화학식 II의 거울상이성질체적으로 풍부한 화합물일 수 있으며:
여기서 A는 알콕시, 아릴알킬옥시, 아릴옥시, 아릴알킬, 임의적으로 치환된 아릴 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이고; B는 임의적으로 치환된 아릴 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이고; R1 및 R2는 독립적으로 임의적으로 치환된 알킬, 아릴알킬, 하이드록시알킬, 할로알킬, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 알케닐, 임의적으로 치환된 알키닐, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로, 임의적으로 치환된 아릴 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이되; 단, R1은 R2와 동일하지 않고; 여기서 R1 및 R2를 보유하는 비대칭 탄소 원자에서 절대 배열은 주로 S이거나; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 결정질 형태 또는 무정형 형태이다.
특정 구현예에서, 리간드는 화학식 III의 거울상이성질체적으로 풍부한 화합물일 수 있으며:
여기서 A는 알콕시, 아릴알킬옥시, 아릴옥시, 아릴알킬, 임의적으로 치환된 아릴 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이고; B는 임의적으로 치환된 아릴 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이고; R1 및 R2는 독립적으로 임의적으로 치환된 알킬, 아릴알킬, 하이드록시알킬, 할로알킬, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 알케닐, 임의적으로 치환된 알키닐, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로, 임의적으로 치환된 아릴 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이되; 단, R1은 R2와 동일하지 않고; 여기서 R1 및 R2를 보유하는 비대칭 탄소 원자에서 절대 배열은 주로 R이거나; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 결정질 형태 또는 무정형 형태이다.
일 구현예에서, 리간드는 적어도 95%의 거울상이성질체 과잉을 갖는 (R)-3,5-디메틸-벤조산 N-(1-tert부틸-부틸)-N'-(2-에틸-3-메톡시-벤조일)-하이드라지드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 결정질 형태 또는 무정형 형태일 수 있다.
화학식 I의 디아실하이드라진 리간드 및 화학식 II 또는 III의 키랄 디아실하이드라진 리간드는, 엑디손-기반 유전자 스위치 시스템과 함께 사용될 때, 본 발명의 치료적 폴리펩티드 또는 치료적 폴리뉴클레오티드의 발현의 외부 일시적 조절 수단을 제공한다. 미국 특허 번호: 8,076,517; 8,884,060; 및, 9,598,355를 참조한다.
본 발명에 사용되는 리간드는 염을 형성할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "염(들)"은 무기 및/또는 유기 산 및 염기로 형성된 산성 및/또는 염기성 염을 나타낸다. 게다가, 화학식 I, II 또는 III의 화합물이 염기성 모이어티 및 산성 모이어티를 둘 다 함유하는 경우, 쌍성이온("내부 염")이 형성될 수 있고 본원에 사용된 바와 같은 용어 "염(들)"에 포함된다. 약제학적으로 허용되는(즉, 무독성, 생리학적으로 허용되는) 염이 사용되지만, 다른 염이 또한 예를 들어, 제조 동안 이용될 수 있는 단리 또는 정제 단계에 유용하다. 화학식 I, II 또는 III의 화합물의 염은 예를 들어, 화합물을 염이 침전되는 것과 같은 매질 또는 수성 매질에서 등가량과 같은 양의 산 또는 염기와 반응시킨 후 동결건조시킴으로써 형성될 수 있다.
염기성 모이어티를 함유하는 리간드는 다양한 유기 및 무기 산으로 염을 형성할 수 있다. 예시적인 산 부가 염은 아세테이트(예컨대 아세트산 또는 트리할로아세트산, 예를 들어, 트리플루오로아세트산으로 형성된 것들), 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 하이드로클로라이드(염산으로 형성됨), 하이드로브로마이드(브롬화수소로 형성됨), 하이드로요오다이드, 2-하이드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레에이트(말레산으로 형성됨), 메탄술포네이트(메탄술폰산으로 형성됨), 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 숙시네이트, 술파네이트(예컨대 술푸르산으로 형성된 것들), 술포네이트(예컨대 본원에 언급된 것들), 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트 예컨대 토실레이트, 운데카노에이트 등을 포함한다.
산성 모이어티를 함유하는 리간드는 다양한 유기 및 무기 염기로 염을 형성할 수 있다. 예시적인 염기성 염은 암모늄 염, 나트륨, 리튬, 및 칼륨 염과 같은 알칼리 금속 염, 칼슘 및 마그네슘 염과 같은 알칼린 토 금속 염, 벤자틴, 디사이클로헥실아민, 하이드라바민(N,N-비스(데하이드로아비에틸)에틸렌디아민으로 형성됨), N-메틸-D-글루카민, N-메틸-D-글루카미드, t-부틸 아민과 같은 유기 염기(예를 들어, 유기 아민)를 갖는 염, 및 아르기닌, 리신 등과 같은 아미노산을 갖는 염을 포함한다.
유도성 유전자 발현 시스템을 위한 리간드의 비제한적인 예는 또한 FK506 결합 도메인을 활용하는 것들을 포함하며 FK506, 사이클로스포린 A, 또는 라파마이신(Rapamycin)이다. FK506, 라파마이신, 및 그들의 유사체는 미국 특허 번호: 6,649,595; 6,187,757; 7,276,498; 및 7,273,874에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 유도성 유전자 발현을 위한 디아실하이드라진 리간드는 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 또는 120 mg의 단위 일일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 디아실하이드라진 리간드는 약 5 mg의 단위 일일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 디아실하이드라진 리간드는 약 10 mg의 단위 일일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 디아실하이드라진 리간드는 약 15 mg의 단위 일일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 디아실하이드라진 리간드는 약 20 mg의 단위 일일 용량으로 매일 투여된다.
일부 구현예에서, 사이토카인, 세포 태그 및/또는 CAR은 유전자 전사를 위한 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 일 측면에서, 유도성 프로모터는 유전자 스위치 리간드 유도성 프로모터일 수 있다. 일부 경우에, 유도성 프로모터는 RHEOSWITCH® 유전자 스위치와 같은 소분자 리간드-유도성 2 개의 폴리펩티드 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치일 수 있다. 일부 경우에, 사용되는 유전자 스위치 시스템은 WO 2018/132494에 기재된 것일 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 기재된 사이토카인은 유전자 전사를 위한 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 일 측면에서, 유도성 프로모터는 유전자 스위치 리간드 유도성 프로모터일 수 있다. 일부 경우에, 유도성 프로모터는 RHEOSWITCH® 유전자 스위치와 같은 소분자 리간드-유도성 2 개의 폴리펩티드 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치일 수 있다. 일부 경우에, 사용되는 유전자 스위치 시스템은 WO 2018/132494에 기재된 것일 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 변형된 면역 효과기 세포는 유전자 전사를 위한 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 일 측면에서, 유도성 프로모터는 유전자 스위치 리간드 유도성 프로모터일 수 있다. 일부 경우에, 유도성 프로모터는 WO2018/132494에 기재된 바와 같은 RHEOSWITCH® 유전자 스위치와 같은 소분자 리간드-유도성 2 개의 폴리펩티드 엑디손 수용체-기반 유전자 스위치일 수 있다.
XII. 변형된 면역 효과기 세포
본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 miRNA, CAR, 사이토카인, 및/또는 세포 태그를 발현하는 변형된 면역 효과기 세포가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 변형된 면역 효과기 세포는 변형된 T 세포 및/또는 자연 살해(NK) 세포이다. T 세포 또는 T 림프구는 세포 매개 면역에 관여하는 백혈구의 하위유형이다. 예시적인 T 세포는 T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, TH17 세포, 줄기 기억 T 세포(TSCM), 나이브() T 세포, 기억 T 세포, 효과기 T 세포, 조절 T 세포, 또는 자연 살해 T 세포를 포함한다. 특정 측면에서, 본원에 기재된 구현예는 변형된 면역 효과기 세포(예를 들어, T-세포, Treg, NK-세포 또는 NK T-세포)를 제조 및/또는 확장하는 것을 포함한다. 이는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 miRNA, CAR, 사이토카인, 및/또는 세포 태그를 암호화하는 DNA(또는 RNA) 작제물을 함유하는 발현 벡터로 세포를 형질감염시킴으로써 달성될 수 있다. 본 개시내용의 세포는 인간 또는 동물 세포일 수 있음이 이해되어야 한다.
T 헬퍼 세포(TH 세포)는 B 세포의 형질 세포 및 기억 B 세포로의 성숙, 및 세포독성 T 세포 및 대식세포의 활성화를 포함하는, 면역학적 과정에서 다른 백혈구를 돕는다. 일부 경우에, TH 세포는 세포 표면 상의 CD4 당단백질의 발현으로 인해 CD4+ T 세포로 알려져 있다. T 헬퍼 세포는 항원-제시 세포(APC)의 표면 상에서 발현되는, MHC 클래스 II 분자에 의해 펩티드 항원과 함께 제시될 때 활성화된다. 일단 활성화되면, 그들은 빠르게 분열하여 활성 면역 반응을 조절하거나 돕는 사이토카인이라 불리는 작은 단백질을 분비한다. 이들 세포는 TH1, TH2, TH3, TH17, Th9, 또는 TFH를 포함하는 여러 하위유형 중 하나로 분화할 수 있으며, 이는 상이한 유형의 면역 반응을 용이하게 하기 위해 상이한 사이토카인을 분비한다. APC로부터의 신호전달은 T 세포를 특정 하위유형으로 지시한다.
세포독성 T 세포(TC 세포 또는 CTL)는 바이러스-감염된 세포 및 종양 세포를 파괴하고, 또한 이식 거부에 연루된다. 이들 세포는 표면 상의 CD8 당단백질을 발현하므로 CD8+ T 세포로도 알려져 있다. 이들 세포는 모든 유핵 세포 상에 존재하는 MHC 클래스 I 분자와 연관된 항원에 결합함으로써 그들의 표적을 인식한다. IL-10, 아데노신, 및 조절 T 세포에 의해 분비되는 다른 분자를 통해, CD8+ 세포는 자가면역질환을 예방하는 알레르기 상태로 비활성화될 수 있다.
기억 T 세포는 감염이 해결된 후 장시간 지속되는 항원-특이적 T 세포의 하위집합이다. 그들은 동족 항원에 재노출 시 많은 수의 효과기 T 세포로 빠르게 확장하여, 면역계에 과거 감염에 대한 "기억"을 제공한다. 기억 T 세포는 다음 하위유형을 포함한다: 줄기 기억 T 세포(TSCM), 중추 기억 T 세포(TCM 세포) 및 2 가지 유형의 효과기 기억 T 세포(TEM 세포 및 TEMRA 세포). 기억 세포는 CD4+ 또는 CD8+일 수 있다. 기억 T 세포는 세포 표면 단백질 CD45RO, CD45RA 및/또는 CCR7을 발현할 수 있다.
이전에 억제인자 T 세포로 알려진 조절 T 세포(Treg 세포)는 면역학적 관용을 유지하는 역할을 한다. 그들의 주요 역할은 면역 반응이 끝날 무렵 T 세포 매개 면역을 차단하고 흉선에서 음성 선택 과정을 피한 자가반응 T 세포를 억제하는 것이다.
자연 살해 T 세포(NKT 세포)는 적응 면역계와 선천적 면역계를 연결한다. 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자에 의해 제시된 펩티드 항원을 인식하는 통상적인 T 세포와 달리, NKT 세포는 CD1d라고 불리는 분자에 의해 제시된 당지질 항원을 인식한다. 일단 활성화되면, 이들 세포는 Th 및 Tc 세포 둘 다에 대해 주어진 기능(즉, 사이토카인 생산 및 세포용해/세포 사멸 분자의 방출)을 수행할 수 있다. 그들은 또한 일부 종양 세포 및 헤르페스 바이러스로 감염된 세포를 인식하고 제거할 수 있다.
자연 살해(NK) 세포는 선천적 면역계의 세포독성 림프구 유형이다. 일부 경우에, NK 세포는 바이러스 감염 및/또는 종양 형성에 대한 1차 방어선을 제공한다. NK 세포는 감염된 세포 또는 암성 세포에 제시된 MHC를 검출하고, 사이토카인 방출을 촉발하고, 후속적으로 용해 및 세포자멸사를 유도할 수 있다. NK 세포는 항체 및/또는 MHC의 부재 하에 스트레스 받은 세포를 추가로 검출하여, 빠른 면역 반응을 허용할 수 있다.
A. 면역 효과기 세포 공급원
특정 측면에서, 본원에 기재된 구현예는 CAR을 암호화하는 DNA(또는 RNA) 작제물을 함유하는 발현 벡터로 세포를 형질감염시킨 다음, 임의적으로, 먹이 세포, 재조합 항원, 또는 수용체에 대한 항체로 세포를 자극하여 세포가 증식하도록 하는 것을 포함하는 변형된(항원-특이적 재지시된) 면역 효과기 세포(예를 들어, T-세포, Treg, NK-세포 또는 NK T-세포)를 제조 및/또는 확장하는 방법을 포함한다. 특정 측면에서, CAR을 발현하도록 조작된 세포(또는 세포 집단)는 줄기 세포, CD34+ 제대혈 세포, iPS 세포, iPS 세포로부터 분화된 T 세포, 면역 효과기 세포 또는 이들 세포의 전구체이다.
면역 효과기 세포의 공급원은 동종이계 공급원 및 자가 공급원을 모두 포함할 수 있다. 일부 경우에 면역 효과기 세포는 줄기 세포 또는 유도 만능 줄기 세포(iPSC)로부터 분화될 수 있다. 따라서, 구현예에 따라 조작하기 위한 세포는 제대혈, 말초 혈액, 인간 배아 줄기 세포, 또는 iPSC로부터 단리될 수 있다. 예를 들어, 동종이계 T 세포는 키메라 항원 수용체를 포함하도록(임의적으로, 기능적 TCR이 없도록) 변형될 수 있다. 일부 측면에서, 면역 효과기 세포는 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 유래된 T 세포와 같은 1차 인간 T 세포이다. PBMC는 말초 혈액으로부터 또는 G-CSF(과립구 콜로니 자극 인자)로 자극 후 골수, 또는 제대혈로부터 수집될 수 있다. 일 측면에서, 면역 효과기 세포는 Pan T 세포이다. 형질감염 또는 형질도입(예를 들어, CAR 발현 작제물 사용) 후, 세포는 즉시 주입될 수 있거나 동결 보존될 수 있다. 특정 측면에서, 형질감염 또는 형질도입 후, 세포는 주입 준비가 될 때까지 IL-2 및/또는 IL-21을 포함할 수 있는 사이토카인 바스(bath)에서 보존될 수 있다. 특정 측면에서, 형질감염 후, 세포는 세포로의 유전자 전달 후 약 1, 2, 3, 4, 5 일 또는 그 이상 이내에 벌크 집단으로서 생체외에서 수일, 수주, 또는 수개월 동안 증식될 수 있다. 추가 측면에서, 형질감염 후, 형질감염체가 클로닝되고 클론은 단일 통합되거나 에피솜으로 유지된 발현 카세트 또는 플라스미드의 존재를 입증하며, 키메라 항원 수용체의 발현이 생체외에서 확장된다. 확장을 위해 선택된 클론은 항원-발현 표적 세포를 특이적으로 인식하고 용해하는 능력을 입증한다. 재조합 T 세포는 IL-2, 또는 공통 감마-쇄에 결합하는 다른 사이토카인(예를 들어, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, 및 기타)으로의 자극에 의해 확장될 수 있다. 재조합 T 세포는 인공 항원 제시 세포로 자극하여 확장될 수 있다. 재조합 T 세포는 인공 항원 제시 세포 상에서 또는 T 세포 표면 상에서 CD3을 가교하는 OKT3과 같은 항체로 확장될 수 있다. 재조합 T 세포의 하위집합은 자기 비드 기반 단리 방법 및/또는 형광 활성화 세포 분류 기술을 사용하여 추가로 선택되고 AaPC와 함께 추가로 배양될 수 있다. 추가 측면에서, 유전적으로 변형된 세포는 동결보존될 수 있다. 일부 구현예에서, 유전적으로 변형된 세포는 동결보존되지 않는다.
T 세포는 또한 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위의 조직, 복수, 흉막 삼출액, 비장 조직, 및 종양을 포함하는 다수의 공급원으로부터 수득될 수 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, 당업계에서 이용가능한 임의의 수의 T 세포주가 사용될 수 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, T 세포는 Ficoll® 분리와 같은 당업자에게 알려진 임의의 수의 기술을 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액 단위로부터 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 성분채집술(apheresis)에 의해 수득된다. 성분채집술 생성물은 전형적으로 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구, 및 혈소판을 포함하는 림프구를 함유한다. 일 구현예에서, 성분채집술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고 후속 처리 단계를 위한 적절한 완충액 또는 배지에 세포를 넣을 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 세포를 포스페이트 완충 염수(PBS)로 세척한다. 대안적인 구현에에서, 세척 용액은 칼슘이 없고 마그네슘이 없을 수 있거나 전부는 아니지만 많은 2가 양이온이 없을 수 있다. 칼슘의 부재 하에 초기 활성화 단계는 확대된 활성화로 이어진다. 당업자는 세척 단계가 제조업체의 지침에 따라 반자동 "유동형(flow-through)" 원심분리(예를 들어, Cobe 2991 세포 처리기, Baxter CytoMate, 또는 Haemonetics Cell Saver 5)를 사용하는 것과 같은 당업자에게 알려진 방법에 의해 달성될 수 있음을 용이하게 이해할 것이다. 세척 후, 세포를 예를 들어, Ca2+-무함유, Mg2+- 무함유 PBS, PlasmaLyte A, 또는 완충액이 있거나 없는 다른 식염수 용액과 같은 다양한 생체적합성 완충액에 재현탁할 수 있다. 대안적으로, 성분채집술 샘플의 바람직하지 않은 구성요소를 제거할 수 있고 세포를 배양 배지에 직접 재현탁할 수 있다.
또 다른 구현예에서, T 세포는 예를 들어, PERCOLL® 구배를 통한 원심분리 또는 역류 원심분리 용출법에 의해 적혈구 세포를 용해시키고 단핵구를 고갈시킴으로써 말초 혈액 림프구로부터 단리된다. CD3+, CD28+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및 CD45RO+ T 세포와 같은 T 세포의 특이적 하위집단은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다. 또 다른 구현예에서, CD14+ 세포는 T-세포 집단으로부터 고갈된다. 예를 들어, 일 구현예에서, T 세포는 원하는 T 세포의 양성 선택에 충분한 시간 동안 DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T와 같은 항-CD3/항-CD28(즉, 3x28)-접합된 비드와 함께 인큐베이션함으로써 단리된다. 일 구현예에서, 시간은 약 30 분이다. 추가 구현예에서, 시간은 30 분 내지 36 시간 또는 그 이상의 범위 및 그 사이의 모든 정수 값이다. 추가 구현예에서, 시간은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 시간이다. 또 다른 구현예에서, 시간은 10 내지 24 시간이다. 일 구현예에서, 인큐베이션 시간은 24 시간이다. 백혈병 환자로부터 T 세포의 단리를 위해, 24 시간과 같은 더 긴 인큐베이션 시간의 사용은 세포 수율을 증가시킬 수 있다. 더 긴 인큐베이션 시간은 종양 조직 또는 면역 손상된 개체로부터 종양 침윤 림프구(TIL)를 단리하는 것과 같이, 다른 세포 유형과 비교하여 T 세포가 거의 없는 임의의 상황에서 T 세포를 단리하는 데 사용될 수 있다. 또한, 더 긴 인큐베이션 시간의 사용은 CD8+ T 세포 포획의 효율성을 증가시킬 수 있다. 따라서, T 세포가 CD3/CD28 비드에 결합하게 하는 시간을 단순히 단축 또는 연장하고/하거나 비드 대 T 세포의 비율을 증가 또는 감소시킴으로써(본원에 추가로 기재된 바와 같음), T 세포의 하위집단은 배양 시작 시 또는 과정 동안 다른 시점에서 우선적으로 선택될 수 있다. 추가로, 비드 또는 다른 표면 상의 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체의 비율을 증가 또는 감소시킴으로써, T 세포의 하위집단은 배양 시작 시 또는 다른 원하는 시점에서 우선적으로 선택될 수 있다. 당업자는 여러 선택 차례가 또한 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있음을 인식할 것이다. 특정 구현예에서, 선택 절차를 수행하고 활성화 및 확장 과정에서 "선택되지 않은" 세포를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. "선택되지 않은" 세포는 또한 추가 선택 차례에 적용될 수 있다.
음성 선택에 의한 T 세포 집단의 풍부화는 음성으로 선택된 세포에 고유한 표면 마커에 대해 지시된 항체의 조합으로 달성될 수 있다. 한 가지 방법은 음성으로 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커에 대해 지시된 모노클로날 항체의 칵테일을 사용하는 음성 자기 면역부착 또는 유세포 분석을 통한 세포 분류 및/또는 선택이다. 예를 들어, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 풍부화하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 전형적으로 CD4+, CD25+, CD62Lhi, GITR+, 및 FoxP3+를 발현하는 조절 T 세포에 대해 풍부화하거나 양성으로 선택하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 특정 구현예에서, T 조절 세포는 항-CD25 접합된 비드 또는 다른 유사한 선택 방법에 의해 고갈된다.
양성 또는 음성 선택에 의해 원하는 세포 집단을 단리하기 위해, 세포 및 표면(예를 들어, 비드와 같은 입자)의 농도가 달라질 수 있다. 특정 구현예에서, 세포 및 비드의 최대 접촉을 보장하기 위해 비드 및 세포가 함께 혼합되는 부피를 유의하게 감소시키는 것(즉, 세포의 농도를 증가시키는 것)이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 20억 개 세포/ml의 농도가 사용된다. 일 구현예에서, 10억 개 세포/ml의 농도가 사용된다. 추가 구현예에서, 1억 개 초과의 세포/ml가 사용된다. 추가 구현예에서, 1000만, 1500만, 2000만, 2500만, 3000만, 3500만, 4000만, 4500만, 또는 5000만 개 세포/ml의 세포 농도가 사용된다. 또 다른 구현예에서, 7500만, 8000만, 8500만, 9000만, 9500만, 또는 1억 개 세포/ml의 농도가 사용된다. 추가 구현예에서, 1억 2500만 또는 1억 5000만 개 세포/ml의 농도가 사용될 수 있다. 고농도를 사용하면 세포 수율, 세포 활성화, 및 세포 확장의 증가를 초래할 수 있다. 또한, 높은 세포 농도의 사용은 CD28-음성 T 세포와 같은 관심 표적 항원을 약하게 발현할 수 있는 세포, 또는 종양 세포가 많이 존재하는 샘플(즉, 백혈병 혈액, 종양 조직 등)의 보다 효율적인 포획을 허용한다. 이러한 세포 집단은 치료적 가치를 가질 수 있고 수득하는 것이 바람직할 것이다. 예를 들어, 고농도의 세포를 사용하면 정상적으로 CD28 발현이 더 약한 CD8+ T 세포의 보다 효율적인 선택을 허용한다.
관련 구현예에서, 더 낮은 농도의 세포를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. T 세포 및 표면(예를 들어, 비드와 같은 입자)의 혼합물을 유의하게 희석함으로써, 입자와 세포 사이의 상호작용이 최소화된다. 이것은 입자에 결합될 다량의 원하는 항원을 발현하는 세포를 선택한다. 예를 들어, CD4+ T 세포는 높은 수준의 CD28을 발현하고 희석 농도에서 CD8+ T 세포보다 더 효율적으로 포획된다. 일 구현예에서, 사용되는 세포의 농도는 5x106/ml이다. 다른 구현예에서, 사용되는 농도는 약 1x105/ml 내지 1x106/ml, 및 그 사이의 임의의 정수 값일 수 있다.
다른 구현예에서, 세포는 2-10℃ 또는 실온에서 다양한 속도로 다양한 시간 동안 회전기에서 인큐베이션될 수 있다.
자극을 위한 T 세포는 또한 세척 단계 후에 동결될 수 있다. 혈장 및 혈소판을 제거하는 세척 단계 후에, 세포는 동결 용액에 현탁될 수 있다. 많은 동결 용액 및 매개변수가 당업계에 알려져 있고 이 맥락에서 유용할 것이지만, 한 가지 방법은 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민을 함유하는 PBS, 또는 10% 덱스트란 40 및 5% 덱스트로스를 함유하는 배양 배지, 20% 인간 혈청 알부민 및 7.5% DMSO, 또는 31.25% Plasmalyte-A, 31.25% 덱스트로스 5%, 0.45% NaCl, 10% 덱스트란 40 및 5% 덱스트로스, 20% 인간 혈청 알부민, 및 7.5% DMSO 또는 예를 들어, Hespan 및 PlasmaLyte A를 함유하는 다른 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 수반하며, 이어서 세포를 분 당 1℃의 속도로 -80℃로 동결시키고 액체 질소 저장 탱크의 증기상에 저장한다. -20℃ 또는 액체 질소에서 즉시 제어되지 않은 동결 뿐만 아니라 다른 제어된 동결 방법이 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 동결보존된 세포는 본원에 기재된 바와 같이 해동 및 세척되고 본 발명의 방법을 사용하여 활성화하기 전에 실온에서 1 시간 동안 방치되게 한다.
또한 특정 구현예에서 본원에 기재된 바와 같은 확장된 세포가 필요할 수 있기 전 시기에 대상체로부터 혈액 샘플 또는 성분채집술 생성물을 수집하는 것이 제공된다. 이와 같이, 확장될 세포의 공급원은 필요한 임의의 시점에 수집될 수 있고, T 세포와 같은 원하는 세포는 본원에 기재된 것들과 같은 T 세포 요법으로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 수의 질환 또는 병태에 대한 T 세포 요법에서 나중에 사용하기 위해 단리 및 동결된다. 일 구현예에서 혈액 샘플 또는 성분채집술은 일반적으로 건강한 대상체로부터 취해진다. 특정 구현예에서, 혈액 샘플 또는 성분채집술은 질환이 발생할 위험이 있지만, 아직 질환이 발생하지 않은 일반적으로 건강한 대상체로부터 취해지고, 관심 세포는 나중에 사용하기 위해 단리 및 동결된다. 특정 구현예에서, T 세포는 확장되고, 동결되고, 나중에 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 샘플은 본원에 기재된 바와 같은 특정 질환의 진단 직후 그러나 임의의 치료 전에 환자로부터 수집된다. 추가 구현예에서, 세포는 제제 예컨대 나탈리주맙(natalizumab), 에팔리주맙(efalizumab), 항바이러스제, 화학요법, 방사선, 면역억제제, 예컨대 사이클로스포린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 마이코페놀레이트, 및 FK506, 항체, 또는 다른 면역절제제 예컨대 CAMPATH, 항-CD3 항체, 사이톡산, 플루다라빈, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신, 마이코페놀산, 스테로이드, FR901228, 및 방사선 조사를 사용한 치료를 포함하나 이에 제한되지 않는, 임의의 수의 관련 치료 양식 전에 대상체로부터의 혈액 샘플 또는 성분채집술로부터 단리된다. 이들 약물은 칼슘 의존적 포스파타제 칼시뉴린을 억제하거나(사이클로스포린 및 FK506) 성장 인자 유도 신호전달에 중요한 p70S6 키나제를 억제한다(라파마이신)(Liu 등, Cell 66:807-815, (1991); Henderson 등, Immun 73:316-321, (1991); Bierer 등, Curr. Opin. Immun 5:763-773, (1993)). 추가 구현예에서, 세포는 환자를 위해 단리되고 골수 또는 줄기 세포 이식, 화학요법제 예컨대, 플루다라빈을 사용하는 T 세포 절제 요법, 외부-빔 방사선 요법(XRT), 사이클로포스파미드, 또는 항체 예컨대 OKT3 또는 CAMPATH와 함께(예를 들어, 전에, 동시에 또는 후에) 나중에 사용하기 위해 동결된다. 또 다른 구현예에서, 세포는 CD20, 예를 들어, 리툭산(Rituxan)과 반응하는 제제와 같은 B-세포 절제 요법 후 치료를 위해 이전에 단리되고 나중에 사용하기 위해 동결될 수 있다.
본 발명의 추가 구현예에서, T 세포는 치료 직후에 환자로부터 수득된다. 이와 관련하여, 특정 암 치료, 특히 면역계를 손상시키는 약물로 치료 후, 환자가 정상적으로 치료로부터 회복하는 기간 동안 치료 직후에, 수득된 T 세포의 품질은 생체외에서 확장하는 능력에 대해 최적이거나 개선될 수 있음이 관찰되었다. 마찬가지로, 본원에 기재된 방법을 사용하여 생체외 조작 후, 이들 세포는 향상된 생착 및 생체내 확장을 위한 바람직한 상태에 있을 수 있다. 따라서, 이 회복 단계 동안, T 세포, 수지상 세포, 또는 조혈 계통의 다른 세포를 포함하는 혈액 세포를 수집하는 것이 본 발명의 맥락 내에서 고려된다. 추가로, 특정 구현예에서, 동원(예를 들어, GM-CSF를 사용한 동원) 및 조건화 레지멘은 대상체에서 특히 요법 후 정의된 시간 창 동안 특정 세포 유형의 재증식, 재순환, 재생, 및/또는 확장이 선호되는 조건을 생성하는 데 사용된다. 예시적인 세포 유형은 T 세포, B 세포, 수지상 세포, 및 면역계의 다른 세포를 포함한다.
B. 면역 효과기 세포의 활성화 및 확장
본원에 기재된 CAR을 발현하기 위한 면역 효과기 세포의 조작 전이든 이후든, 세포는 일반적으로 예를 들어, 미국 특허 번호 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; 및 미국 특허 출원 공개 번호 20060121005에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 활성화 및 확장될 수 있다.
일반적으로, 본원에 기재된 면역 효과기 세포는 CD3/TCR 복합체 연관 신호를 자극하는 제제 및 세포의 표면 상에서 공자극 분자를 자극하는 리간드에 부착된 표면과의 접촉에 의해 확장된다. 특히, 세포 집단은 본원에 기재된 바와 같이, 예컨대 항-CD3 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 표면 상에 고정화된 항-CD2 항체와의 접촉, 또는 칼슘 이오노포어와 함께 단백질 키나제 C 활성인자(예를 들어, 브리오스타틴)와의 접촉에 의해 자극될 수 있다. 세포 표면 상의 보조 분자의 공자극을 위해, 보조 분자에 결합하는 리간드가 사용된다. 예를 들어, T 세포 집단은 T 세포의 증식을 자극하기에 적절한 조건 하에 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와 접촉될 수 있다. CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포의 증식을 자극하기 위해, 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체. 항-CD28 항체의 예는 9.3, B-T3, XR-CD28(Diaclone, 프랑스 브장송)을 포함하며 당업계에 통상적으로 알려진 다른 방법이 사용될 수 있다(Berg 등, Transplant Proc. 30(8):3975-3977, (1998); Haanen 등, J. Exp. Med. 190(9):13191328, (1999); Garland 등, J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, (1999)).
특정 구현예에서, 면역 효과기 세포에 대한 1차 자극 신호 및 공자극 신호는 상이한 프로토콜에 의해 제공될 수 있다. 예를 들어, 각 신호를 제공하는 제제는 용액 내에 있거나 표면에 결합될 수 있다. 표면에 결합될 때, 제제는 동일한 표면(즉, "시스" 형성) 또는 별개의 표면(즉,"트랜스" 형성)에 결합될 수 있다. 대안적으로, 하나의 제제는 표면 및 용액 내 다른 제제에 결합될 수 있다. 일 구현예에서, 공자극 신호를 제공하는 제제는 세포 표면에 결합되고 1차 활성화 신호를 제공하는 제제는 용액 내에 있거나 표면에 결합된다. 특정 구현예에서, 두 제제는 용액 내에 있을 수 있다. 또 다른 구현예에서, 제제는 가용성 형태일 수 있고, 이어서 Fc 수용체를 발현하는 세포 또는 항체 또는 제제에 결합할 다른 결합제와 같은 표면에 가교될 수 있다. 이와 관련하여, 예를 들어, 본 발명에서 T 세포를 활성화하고 확장하는 데 사용하기 위해 고려되는 인공 항원 제시 세포(aAPC)에 대해 미국 특허 출원 공개 번호 20040101519 및 20060034810을 참조한다.
일 구현예에서, 2 개의 제제는 동일한 비드, 즉, "시스"로, 또는 별개의 비드, 즉, "트랜스"로 비드 상에 고정화된다. 예로서, 1차 활성화 신호를 제공하는 제제는 항-CD3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고 공자극 신호를 제공하는 제제는 항-CD28 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고; 두 제제는 동등한 분자량으로 동일한 비드에 공동 고정화된다. 일 구현예에서, CD4+ T 세포 확장 및 T 세포 성장을 위해 비드에 결합된 각 항체의 1:1 비율이 사용된다. 본 발명의 특정 측면에서, 1:1의 비율을 사용하여 관찰된 확장과 비교하여 T 세포 확장의 증가가 관찰되도록 하는 비드에 결합된 항 CD3:CD28 항체의 비율이 사용된다. 일 특정 구현예에서 1:1의 비율을 사용하여 관찰된 확장과 비교하여 약 1 내지 약 3 배 증가가 관찰된다. 일 구현예에서, 비드에 결합된 CD3:CD28 항체의 비율은 100:1 내지 1:100 범위 및 그 사이의 모든 정수 값이다. 본 발명의 일 측면에서, 항-CD3 항체보다 더 많은 항-CD28 항체가 입자에 결합되며, 즉, CD3:CD28의 비율은 1 미만이다. 본 발명의 특정 구현예에서, 비드에 결합된 항 CD28 항체 대 항 CD3 항체의 비율은 2 초과:1이다. 일 특정 구현예에서, 비드에 결합된 항체의 1:100 CD3:CD28 비율이 사용된다. 또 다른 구현예에서, 비드에 결합된 항체의 1:75 CD3:CD28 비율이 사용된다. 추가 구현예에서, 비드에 결합된 항체의 1:50 CD3:CD28 비율이 사용된다. 또 다른 구현예에서, 비드에 결합된 항체의 1:30 CD3:CD28 비율이 사용된다. 일부 구현예에서, 비드에 결합된 항체의 1:10 CD3:CD28 비율이 사용된다. 또 다른 구현예에서, 비드에 결합된 항체의 1:3 CD3:CD28 비율이 사용된다. 또 다른 구현예에서, 비드에 결합된 항체의 3:1 CD3:CD28 비율이 사용된다.
1:500 내지 500:1의 입자 대 세포의 비율 및 그 사이의 임의의 정수 값이 T 세포 또는 다른 표적 세포를 자극하는 데 사용될 수 있다. 당업자가 용이하게 이해할 수 있는 바와 같이, 입자 대 세포의 비율은 표적 세포에 대한 입자 크기에 의존할 수 있다. 예를 들어, 작은 크기의 비드는 몇 개의 세포에만 결합할 수 있는 반면, 더 큰 비드는 많은 세포에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서 세포 대 입자의 비율은 1:100 내지 100:1 범위 및 그 사이의 임의의 정수 값이고 추가 구현예에서 비율은 1:9 내지 9:1 및 그 사이의 임의의 정수 값을 포함하고, 또한 T 세포를 자극하는 데 사용될 수 있다. T 세포 자극을 초래하는 항-CD3-결합된 입자 및 항-CD28-결합된 입자 대 T 세포의 비율은 상기 언급된 바와 같이 달라질 수 있지만, 특정 값은 1:100, 1:50, 1:40, 1:30, 1:20, 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 및 15:1을 포함하며 하나의 비율은 T 세포 당 적어도 1:1 입자이다. 일 구현예에서, 1:1 또는 그 이하의 입자 대 세포의 비율이 사용된다. 일 특정 구현예에서, 입자:세포 비율은 1:5이다. 추가 구현예에서, 입자 대 세포의 비율은 자극 일수에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 입자 대 세포의 비율은 첫째 날에 1:1 내지 10:1이고 1:1 내지 1:10의 최종 비율(첨가 일의 세포 카운트 기준)로 이후에 최대 10 일 동안 추가 입자가 매일 또는 격일로 세포에 첨가된다. 일 특정 구현예에서, 입자 대 세포의 비율은 자극 첫째 날에 1:1이고 자극 셋째 날 및 다섯째 날에 1:5로 조정된다. 또 다른 구현예에서, 입자는 자극 첫째 날에 1:1, 및 자극 셋째 날 및 다섯째 날에 1:5의 최종 비율에 근거하여 매일 또는 격일로 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 입자 대 세포의 비율은 자극 첫째 날에 2:1이고 자극 셋째 날 및 다섯째 날에 1:10으로 조정된다. 또 다른 구현예에서, 입자는 자극 첫째 날에 1:1, 및 자극 셋째 날 및 다섯째 날에 1:10의 최종 비율에 근거하여 매일 또는 격일로 첨가된다. 당업자는 다양한 다른 비율이 본 발명에 사용하기에 적합할 수 있음을 이해할 것이다. 특히, 비율은 입자 크기 및 세포 크기와 유형에 따라 달라질 것이다.
본원에 기재된 추가 구현예에서, T 세포와 같은 면역 효과기 세포는 제제 코팅된 비드와 조합되고, 비드 및 세포는 후속적으로 분리된 다음, 세포가 배양된다. 대안적인 구현예에서, 배양 전에, 제제 코팅된 비드 및 세포는 분리되지 않지만 함께 배양된다. 추가 구현예에서, 비드 및 세포는 먼저 자기력과 같은 힘의 적용에 의해 농축되어, 세포 표면 마커의 증가된 결찰을 초래하여 세포 자극을 유도한다.
예로서, 세포 표면 단백질은 항-CD3 및 항-CD28이 부착된 상자성 비드(3x28 비드)가 T 세포와 접촉하게 함으로써 결찰될 수 있다. 일 구현예에서 세포(예를 들어, 104 내지 109 개의 T 세포) 및 비드(예를 들어, 1:1 비율로 DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T 상자성 비드, 또는 Miltenyi Biotec의 MACS® MicroBeads)는 완충액, 예를 들어, PBS(칼슘 및 마그네슘과 같은 2가 양이온 불포함)에서 조합된다. 다시, 당업자는 임의의 세포 농도가 사용될 수 있음을 용이하게 이해할 수 있다. 예를 들어, 표적 세포는 샘플에서 매우 드물 수 있고 샘플의 0.01%만 포함하거나 또는 전체 샘플(즉, 100%)이 관심 표적 세포를 포함할 수 있다. 따라서, 임의의 세포 수는 본 발명의 맥락 내에 있다. 특정 구현예에서, 세포 및 입자의 최대 접촉을 보장하기 위해, 입자 및 세포가 함께 혼합되는 부피를 유의하게 감소시키는 것(즉, 세포의 농도를 증가시키는 것)이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 약 20억 개 세포/ml의 농도가 사용된다. 또 다른 구현예에서, 1억 개 초과의 세포/ml가 사용된다. 추가 구현예에서, 1000만, 1500만, 2000만, 2500만, 3000만, 3500만, 4000만, 4500만, 또는 5000만 개 세포/ml의 농도가 사용된다. 또 다른 구현예에서, 7500만, 8000만, 8500만, 9000만, 9500만, 또는 1억 개 세포/ml의 세포 농도가 사용된다. 추가 구현예에서, 1억 2500만 또는 1억 5000만 개 세포/ml의 농도가 사용될 수 있다. 고농도를 사용하면 세포 수율, 세포 활성화, 및 세포 확장의 증가를 초래할 수 있다. 추가로, 높은 세포 농도의 사용은 CD28-음성 T 세포와 같은 관심 표적 항원을 약하게 발현할 수 있는 세포의 보다 효율적인 포획을 허용한다. 이러한 세포 집단은 치료적 가치를 가질 수 있고 특정 구현예에서 수득하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 고농도의 세포를 사용하면 정상적으로 CD28 발현이 더 약한 CD8+ T 세포의 보다 효율적인 선택을 허용한다.
본원에 기재된 일 구현예에서, 혼합물은 수 시간(약 3 시간) 내지 약 14 일 또는 그 사이의 임의의 시간당 정수 값 동안 배양될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 혼합물은 21 일 동안 배양될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서 비드 및 T 세포는 약 8 일 동안 함께 배양된다. 또 다른 구현예에서, 비드 및 T 세포는 2-3 일 동안 함께 배양된다. T 세포의 배양 시간이 60 일 이상일 수 있도록 여러 주기의 자극이 또한 바람직할 수 있다. T 세포 배양에 적합한 조건은 혈청(예를 들어, 소 태아 또는 인간 혈청), 인터류킨-2(IL-2), 인슐린, IFN-.감마., IL-4, IL-7, GM-CSF, IL-10, IL-12, IL-15, TGF베타, 및 TNF-알파 또는 당업자에게 알려진 세포의 성장을 위한 임의의 다른 첨가제를 포함하는, 증식 및 생존력에 필수인 인자를 함유할 수 있는 적절한 배지(예를 들어, 최소 필수 배지 또는 RPMI Media 1640 또는, X-vivo 15, (Lonza))를 포함한다. 세포의 성장을 위한 다른 첨가제는 계면활성제, 플라스마네이트(plasmanate), 및 환원제 예컨대 N-아세틸-시스테인 및 2-메르캅토에탄올을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 배지는 아미노산, 피루브산나트륨, 및 비타민이 첨가되어 있으며, 혈청이 없거나 적절한 양의 혈청(또는 혈장) 또는 정의된 호르몬 세트, 및/또는 T 세포의 성장 및 확장에 충분한 양의 사이토카인(들)이 보충된, RPMI 1640, AIM-V, DMEM, MEM, 알파-MEM, F-12, X-Vivo 15, 및 X-Vivo 20, Optimizer를 포함할 수 있다. 항생제, 예를 들어, 페니실린 및 스트렙토마이신은 대상체에게 주입될 세포의 배양물이 아니라 실험 배양물에만 포함된다. 표적 세포는 성장을 지원하는데 필요한 조건, 예를 들어, 적절한 온도(예를 들어, 37℃) 및 분위기(예를 들어, 공기 + 5% CO2) 하에 유지된다.
생체외 절차는 잘 알려져 있고 하기에서 보다 완전히 논의된다. 간단히 말해서, 세포는 포유류(예를 들어, 인간)로부터 단리되고 본원에 개시된 CAR을 발현하는 벡터로 유전적으로 변형된다(즉, 시험관내에서 형질도입 또는 형질감염된다). CAR-변형된 세포는 포유류 수용자에게 투여되어 치료적 이익을 제공할 수 있다. 포유류 수용자는 인간일 수 있고 CAR-변형된 세포는 수용자에 대하여 자가일 수 있다. 대안적으로, 세포는 수용자에 대하여 동종이계, 동계 또는 이종일 수 있다.
조혈 줄기 및 전구 세포의 생체외 확장을 위한 절차는 미국 특허 번호 5,199,942에 기재되어 있으며, 본 발명이 세포에 적용될 수 있다. 다른 적합한 방법은 당업계에 알려져 있고, 따라서 본 발명은 세포의 생체외 확장의 임의의 특정한 방법에 제한되지 않는다. 간단히 말해서, 효과기 세포의 생체외 배양 및 확장은 다음을 포함한다: (1) 말초 혈액 수확물 또는 골수 외식편으로부터 포유류의 CD34+ 조혈 줄기 및 전구 세포를 수집하는 단계; 및 (2) 이러한 세포를 생체외에서 확장하는 단계. 미국 특허 번호 5,199,942에 기재된 세포 성장 인자 외에도, flt3-L, IL-1, IL-3 및 c-kit 리간드와 같은 다른 인자가 세포의 배양 및 확장을 위해 사용될 수 있다.
다양한 자극 시간에 노출된 효과기 세포는 상이한 특성을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 전형적인 혈액 또는 성분채집된 말초 혈액 단핵 세포 생성물은 세포독성 또는 억제인자 T 세포 집단(TC, CD8+)보다 더 큰 헬퍼 T 세포 집단(TH, CD4+)을 갖는다. CD3 및 CD28 수용체의 자극에 의한 T 세포의 생체외 확장은 약 8-9 일 전에 주로 TH 세포로 이루어진 T 세포 집단을 생산하는 반면, 약 8-9 일 후에, T 세포 집단은 점점 더 많은 TC 세포 집단을 포함한다. 따라서, 치료 목적에 따라, 주로 TH 세포를 포함하는 T 세포 집단을 대상체에 주입하는 것이 유리할 수 있다. 유사하게, TC 세포의 항원-특이적 하위집합이 단리된 경우 이 하위집합을 더 큰 정도로 확장하는 것이 유익할 수 있다.
또한, CD4 및 CD8 마커 외에도, 다른 표현형 마커가 세포 확장 과정 동안 유의하지만, 대부분, 재현가능하게 달라진다. 따라서, 이러한 재현성은 특이적 목적을 위한 활성화된 T 세포 생성물을 맞춤화하는 능력을 가능하게 한다.
일부 경우에, 구현예의 면역 효과기 세포(예를 들어, T-세포)는 세포 확장을 돕기 위해 활성화 및 증식 세포(AaPC)와 공배양된다. AaPC는 또한 인공 항원 제시 세포(aAPC)로 언급될 수 있다. 예를 들어, 항원 제시 세포(APC)는 구현예의 치료 조성물 및 세포 요법 생성물을 제조하는 데 유용하다. 일 측면에서, AaPC는 유전적으로 변형된 K562 세포일 수 있다. 항원-제시 시스템의 제조 및 사용에 관한 일반적인 지침에 대해, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,225,042, 6,355,479, 6,362,001 및 6,790,662; 미국 특허 출원 공개 번호 2009/0017000 및 2009/0004142; 및 국제 공개 번호 WO2007/103009를 참조한다. 구현예의 추가 측면에서, 유전적으로 변형된 CAR 세포를 배양하는 것은 수지상 세포 및 CAR-발현 면역 효과기 세포의 확장을 자극하는 활성화 및 증식 세포(AaPC)의 존재 하에 유전적으로 변형된 CAR 세포를 배양하는 것을 포함한다. 추가 측면에서, AaPC는 AaPC의 표면 상에서 발현되는 CAR-결합 항체 또는 이의 단편을 포함한다. AaPC는 일부 경우에 T-세포를 활성화하거나 공자극하는 추가 분자를 포함할 수 있다. 추가 분자는 일부 경우에, 막-결합된 Cγ 사이토카인을 포함할 수 있다. 또 다른 추가 측면에서, AaPC는 비활성화 또는 조사되거나, 감염성 물질이 없는 것으로 테스트되고 확인된다. 추가 측면에서, AaPC의 존재 하에 유전적으로 변형된 CAR 세포를 배양하는 것은 IL-15, IL-21 및/또는 IL-2와 같은 가용성 사이토카인을 포함하는 배지에서 유전적으로 변형된 CAR 세포를 배양하는 것을 포함한다. 세포는 약 10:1 내지 약 1:10; 약 3:1 내지 약 1:5; 약 1:1 내지 약 1:3(면역 효과기 세포 대 AaPC)의 비율; 또는 그 안에서 유도가능한 임의의 범위에서 배양될 수 있다. 예를 들어, T 세포 및 AaPC의 공배양은 약 1:1, 약 1:2 또는 약 1:3의 비율일 수 있다.
일 측면에서, AaPC는 CD137L을 발현할 수 있다. 일부 측면에서, AaPC는 CAR 세포에 의해 표적화된 항원, 예를 들어 MUC16, CD33, 또는 ROR1(전장, 절두체 또는 이의 임의의 변이체)을 추가로 발현할 수 있다. 다른 측면에서, AaPC는 CD64, CD86, 또는 mIL15를 추가로 발현할 수 있다. 특정 측면에서, AaPC는 예를 들어, OKT3 및/또는 UCHT1과 같은 적어도 하나의 항-CD3 항체 클론을 발현할 수 있다. 일 측면에서, AaPC는 비활성화될 수 있다(예를 들어, 방사선 조사될 수 있다). 일 측면에서, AaPC는 감염성 물질이 없는 것으로 테스트되고 확인되었다. 이러한 AaPC를 생산하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 일 측면에서, CAR-변형된 T 세포 집단을 AaPC와 함께 배양하는 것은 약 10:1 내지 약 1:10; 약 3:1 내지 약 1:5; 약 1:1 내지 약 1:3(T 세포 대 AaPC)의 비율; 또는 그 안에서 유도가능한 임의의 범위에서 세포를 배양하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, T 세포 및 AaPC의 공배양은 약 1:1, 약 1:2 또는 약 1:3의 비율일 수 있다. 일 측면에서, 배양 단계는 아미노비스포스포네이트(예를 들어, 졸레드론산)와 함께 배양하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
일 측면에서, 유전적으로 변형된 CAR 세포 집단은 대상체로 즉시 주입되거나 동결건조된다. 또 다른 측면에서, 유전적으로 변형된 CAR 세포 집단은 대상체로 주입 전에 사이토카인 배스에 배치된다. 추가 측면에서, 유전적으로 변형된 CAR 세포 집단은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21, 28, 35 42 일, 49, 56, 63 또는 70 일 이하 동안 배양 및/또는 자극된다. 일부 구현예에서, CAR-T 세포 집단은 적어도 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 일 또는 그 이상 동안 배양 및/또는 자극된다. 일부 구현예에서, CAR-T 세포 집단은 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 일 또는 그 이상 동안 배양 및/또는 자극된다. 일부 구현예에서, CAR 발현 효과기 세포 집단은 적어도 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63 일 또는 그 이상 동안 배양 및/또는 자극된다. 구현예에서, 자극은 CAR 양성 T 세포의 성장을 촉진하기 위해 유전적으로 변형된 CAR-T 세포와 AaPC의 공배양을 포함한다. 또 다른 측면에서, 유전적으로 변형된 CAR 세포 집단은 1X 자극, 2X 자극, 3X 자극, 4X 자극, 5X 자극, 5X 자극, 6X 자극, 7X 자극, 8X 자극, 9X 자극 또는 10X 자극 이하 동안 자극된다. 일부 경우에, 유전적으로 변형된 세포는 AaPC의 존재 하에 생체외에서 배양되지 않는다. 일부 특이적 예에서, 구현예의 방법은 형질감염 및/또는 배양 단계 후에 CAR-발현 면역 효과기 세포(예를 들어, T-세포)에 대한 세포 집단을 풍부화하는 것을 추가로 포함한다. 풍부화는 CAR-발현 세포에 대해 분류하기 위해 형광-활성화 세포 분류(FACS)를 포함할 수 있다. 추가 측면에서, CAR-발현 세포에 대한 분류는 CAR-결합 항체의 사용을 포함한다. 풍부화는 또한 CD56+ 세포의 고갈을 포함할 수 있다. 구현예의 또 다른 추가 측면에서, 방법은 유전적으로 변형된 CAR 세포 집단의 샘플을 동결보존하는 것을 추가로 포함한다.
일부 경우에, AaPC는 추가 처리 없이 MHC 분자에 펩티드의 직접 결합을 허용하는 최적 길이의 펩티드와 함께 인큐베이션된다. 대안적으로, 세포는 관심 항원을 발현할 수 있다(즉, MHC-독립적 항원 인식의 경우). 또한, 일부 경우에, APC는 특이적 CAR 폴리펩티드 또는 일반적으로 CAR 폴리펩티드(예를 들어, 범용 활성화 및 증식 세포(uAPC)에 결합하는 항체를 발현할 수 있다. 이러한 방법은 WO2014/190273에 개시되어 있다. 펩티드-MHC 분자 또는 관심 항원 외에도, AaPC 시스템은 또한 적어도 하나의 외인성 보조 분자를 포함할 수 있다. 보조 분자의 임의의 적합한 수 및 조합이 이용될 수 있다. 보조 분자는 공자극 분자 및 부착 분자와 같은 보조 분자로부터 선택될 수 있다. 예시적인 공자극 분자는 CD70 및 B7.1(B7.1은 이전에 B7로 알려졌고 CD80으로도 알려짐)을 포함하며, 특히 T 세포 표면 상의 CD28 및/또는 CTLA-4 분자에 결합하여, 예를 들어, T-세포 확장, Th1 분화, 단기 T-세포 생존, 및 인터류킨(IL)-2와 같은 사이토카인 분비에 영향을 미친다. 부착 분자는 셀렉틴과 같은 탄수화물-결합 당단백질, 인터그린과 같은 막관통 결합 당단백질, 카드헤린과 같은 칼슘-의존적 단백질, 및 예를 들어, 세포 대 세포 또는 세포 대 매트릭스 접촉을 촉진하는 세포내 부착 분자(ICAM)와 같은 단일 통과 막관통 면역글로불린(Ig) 슈퍼패밀리 단백질을 포함할 수 있다. 예시적인 부착 분자는 LFA-3 및 ICAM, 예컨대 ICAM-1을 포함한다. 공자극 분자 및 부착 분자를 포함하는 예시적인 보조 분자의 선택, 클로닝, 제조, 및 발현에 유용한 기술, 방법, 및 시약은 예를 들어, 미국 특허 번호 6,225,042, 6,355,479, 및 6,362,001에 예시되어 있다.
AaPC가 되도록 선택된 세포는 바람직하게는 세포내 항원-처리, 세포내 펩티드 이송, 및/또는 세포내 MHC 클래스 I 또는 클래스 II 분자-펩티드 부하에 결합이 있거나, 변온성이거나(즉, 포유류 세포주보다 온도 변화에 덜 민감함), 결핍 및 변온성 특성을 모두 보유한다. 바람직하게는, AaPC가 되도록 선택된 세포는 또한 세포로 도입된 외인성 MHC 클래스 I 또는 클래스 II 분자 및 보조 분자 구성요소에 대한 적어도 하나의 내인성 대응부(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 내인성 MHC 클래스 I 또는 클래스 II 분자 및/또는 내인성 보조 분자)를 발현하는 능력이 없다. 또한, AaPC는 바람직하게는 AaPC를 생성하기 위한 변형 전에 세포에 의해 보유된 결함 및 변온성 특성을 유지한다. 예시적인 AaPC는 곤충 세포주와 같은 항원 제시(TAP)-결핍 세포주와 연관된 수송체를 구성하거나 이로부터 유도된다. 예시적인 변온성 곤충 세포주는 드로소필라(Drosophila) 세포주, 예컨대 Schneider 2 세포주이다(예를 들어, Schneider 1972 참조 Schneider 2 세포의 제조, 성장, 및 배양을 위한 예시적인 방법은 미국 특허 번호 6,225,042, 6,355,479, 및 6,362,001에 제공되어 있다.
일 구현예에서, AaPC는 또한 동결-해동 주기에 적용된다. 예시적인 동결-해동 주기에서, AaPC는 AaPC를 함유하는 적합한 용기를 적절한 양의 액체 질소, 고체 이산화탄소(즉, 드라이 아이스), 또는 유사한 저온 물질과 접촉시킴으로써 동결될 수 있으며, 동결이 신속하게 수행되도록 한다. 그런 다음 동결된 APC는 저온 물질로부터 AaPC를 제거하고 주위 실온 조건에 노출시키거나, 더 짧은 해동 시간을 용이하게 하기 위해 미지근한 수조 또는 따뜻한 손을 이용하는 촉진된 해동 과정에 의해 해동된다. 추가로, AaPC는 해동 전에 장기간 동안 동결 및 저장될 수 있다. 동결된 AaPC는 또한 해동된 다음 추가 사용 전에 동결건조될 수 있다. 바람직하게는, 디메틸 술폭시드(DMSO), 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 및 다른 방부제와 같은 동결-해동 절차에 유해한 영향을 미칠 수 있는 방부제는 동결-해동 주기를 겪은 AaPC를 함유하는 배지로부터 부재하거나, 이러한 방부제가 본질적으로 없는 배지에 AaPC를 옮기는 것과 같이 본질적으로 제거된다.
추가 구현예에서, 이종 핵산 및 AaPC에 내인성인 핵산은 가교에 의해 비활성화될 수 있어서, 비활성화 후에 본질적으로 세포성장, 복제 또는 핵산 발현이 발생하지 않는다. 일 구현예에서, AaPC는 외인성 MHC 및 보조 분자의 발현, AaPC 표면 상에 이러한 분자의 제시, 및 선택된 펩티드 또는 펩티드들과 함께 제시된 MhC 분자의 부하에 후속하는 시점에 비활성화된다. 따라서, 이러한 비활성화 및 선택된 펩티드 부하된 AaPC는 본질적으로 증식 또는 복제할 수 없게 되지만, 선택된 펩티드 제시 기능을 유지한다. 바람직하게는, 가교는 또한 AaPC의 항원-제시 세포 기능을 실질적으로 감소시키지 않으면서, 박테리아 및 바이러스와 같은 오염 미생물이 본질적으로 없는 AaPC를 산출한다. 따라서 가교는 AaPC를 사용하여 개발된 세포 요법 생성물의 안전성에 대한 우려를 완화시키는 데 도움을 주면서 중요한 AaPC 기능을 유지한다. 가교 및 AaPC에 관련된 방법에 대해, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 20090017000을 참조한다.
특정 구현예에서 조작된 항원 제시 세포(APC)가 추가로 제공된다. 이러한 세포는 예를 들어, 생체외에서 면역 효과기 세포를 증식하기 위해 상기 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 추가 측면에서, 조작된 APC는 그 자체로 환자에게 투여될 수 있고 이에 의해 생체내에서 면역 효과기 세포의 확장을 자극할 수 있다. 구현예의 조작된 APC는 그 자체로 치료제로서 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 조작된 APC는 표적 항원에 특이적인 내인성 면역 효과기 세포의 활성화를 자극할 수 있고/있거나 표적 항원에 특이적인 입양 전달된 면역 효과기 세포의 활성 또는 지속성을 증가시킬 수 있는 치료제로서 사용될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "조작된 APC"는 적어도 제1 이식유전자를 포함하는 세포(들)를 지칭하며, 여기서 제1 이식유전자는 HLA를 암호화한다. 이러한 조작된 APC는 항원의 발현을 위한 제2 이식유전자를 추가로 포함할 수 있어서, 항원이 HLA와의 복합체로 APC 상의 표면에 제시되도록 한다. 일부 측면에서, 조작된 APC는 제시된 항원의 세포 유형(예를 들어, 수지상 세포)일 수 있다. 추가 측면에서, 조작된 APC는 T-세포 또는 T-세포 전구체와 같은 항원을 정상적으로 제시하지 않는 세포 유형("T-APC"로 언급됨)으로부터 생성될 수 있다. 따라서, 일부 측면에서, 구현예의 조작된 APC는 표적 항원을 암호화하는 제1 이식유전자 및 인간 백혈구 항원(HLA)을 암호화하는 제2 이식유전자를 포함하여, HLA가 표적 항원의 에피토프와의 복합체로 조작된 APC의 표면 상에서 발현되도록 한다. 특정 특이적 측면에서, 조작된 APC에서 발현되는 HLA는 HLA-A2이다.
일부 측면에서, 구현예의 조작된 APC는 공자극 분자를 암호화하는 적어도 제3 이식유전자를 추가로 포함할 수 있다. 공자극 분자는 막-결합된 Cγ 사이토카인일 수 있는 공자극 사이토카인일 수 있다. 특정 측면에서, 공자극 사이토카인은 막-결합된 IL-15와 같은 IL-15이다. 일부 추가 측면에서, 조작된 APC는 편집된(또는 결실된) 유전자를 포함할 수 있다. 예를 들어, PD-1, LIM-3, CTLA-4 또는 TCR과 같은 억제 유전자는 유전자의 발현을 감소시키거나 제거하도록 편집될 수 있다. 구현예의 조작된 APC는 임의의 관심 표적 항원을 암호화하는 이식유전자를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 표적 항원은 감염성 질환 항원 또는 종양-연관 항원(TAA)일 수 있다.
C. 신속한 제조
본 개시내용의 일 구현예에서, 본원에 기재된 면역 효과기 세포는 현장 의료(point-of-care) 장소에서 변형된다. 본 개시내용의 일 구현예에서, 본원에 기재된 면역 효과기 세포는 현장 의료 장소 또는 근처에서 변형된다. 일부 경우에, 변형된 면역 효과기 세포는 또한 조작된 T 세포로 언급된다. 일부 경우에, 시설 또는 치료 장소는 병원, 시설(예를 들어, 의료 시설), 또는 치료를 필요로 하는 대상체 근처의 치료 장소에 있다. 대상체는 성분채집술을 겪고 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 PBMC의 하위 집단은 예를 들어, 용출법(elutriation) 또는 Ficoll 분리에 의해 풍부화될 수 있다. 풍부화된 PBMC 또는 PBMC의 하위집단은 추가 처리 전에 임의의 적절한 동결보존 용액에 동결보존될 수 있다. 일 예에서, 용출법 과정은 인간 혈청 알부민을 함유하는 완충 용액을 사용하여 수행된다. T 세포와 같은 면역 효과기 세포는 본원에 기재된 선택 방법에 의해 단리될 수 있다. 일 예에서, T 세포에 대한 선택 방법은 CD3에 특이적인 비드 또는 T 세포 상의 CD4 및 CD8에 특이적인 비드를 포함한다. 하나의 경우에, 비드는 상자성 비드일 수 있다. 수확된 면역 효과기 세포는 변형 전에 임의의 적절한 동결보존 용액에 동결보존될 수 있다. 면역 효과기 세포는 주입보다 최대 24 시간, 36 시간, 48 시간, 72 시간 또는 96 시간 전에 해동될 수 있다. 해동된 세포는 변형 전에 세포 배양 완충액, 예를 들어 소 혈청 알부민(FBS) 또는 인간 혈청 AB가 보충된 완충액(예를 들어 RPMI)에 넣을 수 있거나 IL-2 및 IL-21과 같은 사이토카인을 포함하는 완충액에 넣을 수 있다. 또 다른 측면에서, 수확된 면역 효과기 세포는 동결보존에 대한 필요성 없이 즉시 변형될 수 있다. 일 측면에서, 용출법 단계는 완전히 제거된다.
일부 경우에, 면역 효과기 세포는 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 수용체, 하나 이상의 세포 태그(들), 및/또는 사이토카인(들)을 면역 효과기 세포로 조작/도입하여 변형된 다음 대상체로 신속하게 주입된다. 일부 경우에, 면역 효과기 세포의 공급원은 동종이계 및 자가 공급원을 모두 포함할 수 있다. 하나의 경우에, 면역 효과기 세포는 T 세포 또는 NK 세포일 수 있다. 하나의 경우에, 키메라 수용체는 CAR일 수 있다. 또 다른 경우에, 사이토카인은 IL-15(예를 들어, IL-15Rα와의 융합 단백질의 일부로서) 또는 IL-12일 수 있다. 또 다른 경우에, 사이토카인의 발현은 본원에 기재된 리간드 유도성 유전자-스위치 발현 시스템에 의해 조절된다. 예를 들어, 벨레디멕스(veledimex)와 같은 리간드는 사이토카인의 발현을 조절하기 위해 대상체에게 전달될 수 있다.
또 다른 측면에서, 벨레디멕스는 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg 또는 100 mg으로 제공된다. 추가 측면에서, 더 낮은 용량의 벨레디멕스, 예를 들어, 0.5 mg, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg 또는 20 mg이 제공된다. 일 구현예에서, 벨레디멕스는 변형된 면역 효과기 세포의 주입 전 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 일에 대상체에게 투여된다. 추가 구현예에서, 벨레디멕스는 변형된 면역 효과기 세포의 주입 후 대상체에게 유효 기간 동안 약 12 시간마다 1 회, 약 24 시간마다 1 회, 약 36 시간마다 1 회 또는 약 48 시간마다 1 회 투여된다. 일 구현예에서, 벨레디멕스 투여의 유효 기간은 약 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 일이다. 다른 구현예에서, 벨레디멕스는 휴지기 후, 휴약기 후 또는 대상체가 재발을 경험할 때 재투여될 수 있다.
특정 경우에, 대상체에 대한 부작용이 관찰된 경우 또는 치료가 필요하지 않은 경우, 세포 태그는 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 절두된 표피 성장 인자 수용체 태그와 같은 세포 태그를 포함하는 변형된 면역 효과기 세포의 조건부 생체내 절제를 위해 세툭시맙을 통해 활성화될 수 있다.
일부 구현예에서, 이러한 면역 효과기 세포는 전기천공을 통해 본원에 기재된 바와 같은 작제물에 의해 변형된다. 일 예에서, 전기천공은 Lonza의 Nucleofector™ 전기천공기와 같은 전기천공기로 수행된다. 다른 구현예에서, 상기 언급된 작제물을 포함하는 벡터는 비바이러스 또는 바이러스 벡터이다. 하나의 경우에, 비바이러스 벡터는 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존-트랜스포사제 시스템을 포함한다. 일 예에서, 면역 효과기 세포는 특이적 서열을 사용하여 전기천공된다. 예를 들어, 면역 효과기 세포는 하나의 트랜스포존 이어서 트랜스포사제를 암호화하는 DNA 이어서 두번째 트랜스포존으로 전기천공될 수 있다. 또 다른 예에서, 면역 효과기 세포는 동시에 모든 트랜스포존 및 트랜스포사제로 전기천공될 수 있다. 또 다른 예에서, 면역 효과기 세포는 트랜스포사제 이어서 한번에 두 트랜스포존 또는 하나의 트랜스포존으로 전기천공될 수 있다. 순차적 전기천공 겪는 동안, 면역 효과기 세포는 다음 전기천공 단계 전에 일정 기간 동안 휴지될 수 있다.
일부 경우에, 변형된 면역 효과기 세포는 증식 및 활성화 단계를 겪지 않는다. 일부 경우에, 변형된 면역 효과기 세포는 인큐베이션 또는 배양 단계(예를 들어 생체외 증식)를 겪지 않는다. 일부 경우에, 변형된 면역 효과기 세포는 PBS/EDTA 완충액에 넣는다. 특정 경우에, 변형된 면역 효과기 세포는 주입 전에 IL-2 및 IL-21을 포함하는 완충액에 넣는다. 다른 예에서, 변형된 면역 효과기 세포는 주입 전에 세포 배양 완충액, 예를 들어 소 태아 혈청(FBS)이 보충된 세포 배양 완충액(예를 들어 RPMI)에 넣거나 휴지된다. 주입 전에, 변형된 면역 효과기 세포는 수확되고, 세척되고, 대상체로 주입하기 위한 준비로서 식염수 완충액에서 제형화될 수 있다.
일 예에서, 대상체는 주입 전에 림프구고갈(lymphodeplete)되었다. 다른 예에서, 림프구고갈은 필요하지 않고 변형된 면역 효과기 세포는 대상체로 신속하게 주입된다.
추가 예에서, 대상체는 최소 림프구고갈을 겪는다. 여기서 최소 림프구고갈은 림프구고갈 레지멘 후 1 일, 2 일 또는 3 일 이내에 대상체로 주입될 수 있도록 감소된 림프구고갈 프로토콜을 지칭한다. 일 예에서, 감소된 림프구고갈 프로토콜은 더 낮은 용량의 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드를 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 감소된 림프구고갈 프로토콜은 림프구고갈의 단축된 기간, 예를 들어 1 일 또는 2 일을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 주입 전에 림프구고갈되지 않는다.
일 구현예에서, 면역 효과기 세포는 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 수용체 및 사이토카인을 상기 면역 효과기 세포로 조작/도입함으로써 변형된 다음 대상체로 신속하게 주입된다. 다른 경우에, 면역 효과기 세포는 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 수용체 및 사이토카인을 상기 세포로 조작/도입함으로써 변형된 다음 대상체로 적어도: 0, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23,24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50 시간 이내에 주입된다. 다른 경우에, 면역 효과기 세포는 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 수용체 및 사이토카인을 면역 효과기 세포로 조작/도입함으로써 변형된 다음 대상체로 0 일, <1 일, <2 일, <3 일, <4 일, <5 일, <6 일 또는 <7 일에 주입된다.
다른 구현예에서, 조작된 세포의 증식 및/또는 생존을 자극하는 방법은 대상체로부터 세포의 샘플을 수득하는 단계, 및 세포 샘플의 세포를 하나 이상의 트랜스포존을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드로 형질감염시키는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 트랜스포존은 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 항원 수용체(CAR), 사이토카인, 하나 이상의 세포 태그, 및 상기 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 상기 세포의 게놈으로 통합하는 데 효과적인 트랜스포사제를 암호화하여 조작된 세포 집단을 제공한다. 구현예에서, 트랜스포존은 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 항원 수용체(CAR), 사이토카인, 하나 이상의 세포 태그, 사이토카인의 리간드-유도성 제어를 위한 유전자 스위치 폴리펩티드 및 상기 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 상기 세포의 게놈으로 통합하는 데 효과적인 트랜스포사제를 암호화하여 조작된 세포 집단을 제공한다. 구현예에서, 유전자 스위치 폴리펩티드는 i) 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 DNA 결합 도메인을 포함하는 제1 유전자 스위치 폴리펩티드, 및 ii) 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 전사활성화 도메인을 포함하는 제2 유전자 스위치 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 유전자 스위치 폴리펩티드 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 링커에 의해 연결된다. 일 예에서, 림프구고갈은 대상체에게 조작된 세포의 투여 전에 필요하지 않다.
일 예에서, 조작된 세포의 생체내 증식 방법은 대상체로부터 세포의 샘플을 수득하는 단계, 및 세포 샘플의 세포를 하나 이상의 트랜스포존을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드로 형질감염시키는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 트랜스포존은 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 항원 수용체(CAR), 사이토카인, 하나 이상의 세포 태그, 및 상기 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 상기 세포의 게놈으로 통합하는 데 효과적인 트랜스포사제를 암호화하여 조작된 세포 집단을 제공한다. 구현예에서, 트랜스포존은 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 항원 수용체(CAR), 사이토카인, 하나 이상의 세포 태그, 사이토카인의 리간드-유도성 제어를 위한 유전자 스위치 폴리펩티드 및 상기 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 상기 세포의 게놈으로 통합하는 데 효과적인 트랜스포사제를 암호화하여 조작된 세포 집단을 제공한다. 구현예에서, 유전자 스위치 폴리펩티드는 i) 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 DNA 결합 도메인을 포함하는 제1 유전자 스위치 폴리펩티드, 및 ii) 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 전사활성화 도메인을 포함하는 제2 유전자 스위치 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 유전자 스위치 폴리펩티드 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 링커에 의해 연결된다. 일 예에서, 림프구고갈은 대상체에게 조작된 세포의 투여 전에 필요하지 않다.
또 다른 구현예에서, 이를 필요로 하는 대상체에서 조작된 세포의 생체내 지속성을 향상시키는 방법은 대상체로부터 세포의 샘플을 수득하는 단계, 및 세포 샘플의 세포를 하나 이상의 트랜스포존을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드로 형질감염시키는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 하나 이상의 트랜스포존은 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 항원 수용체(CAR), 사이토카인, 하나 이상의 세포 태그, 및 DNA를 상기 세포의 게놈으로 통합하는 데 효과적인 트랜스포사제를 암호화하여 조작된 세포 집단을 제공한다. 일부 경우에, 하나 이상의 트랜스포존은 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 항원 수용체(CAR), 사이토카인, 하나 이상의 세포 태그, 사이토카인의 리간드-유도성 제어를 위한 유전자 스위치 폴리펩티드 및 상기 세포의 게놈으로 통합하는 데 효과적인 트랜스포사제를 암호화하여 조작된 세포 집단을 제공한다. 일부 경우에, 유전자 스위치 폴리펩티드는 i) 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 DNA 결합 도메인을 포함하는 제1 유전자 스위치 폴리펩티드, 및 ii) 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 전사활성화 도메인을 포함하는 제2 유전자 스위치 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 제1 유전자 스위치 폴리펩티드 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 링커에 의해 연결된다. 일 예에서, 림프구고갈은 대상체에게 조작된 세포의 투여 전에 필요하지 않다.
XIII. 키트 및 조성물
개시내용의 일 측면은 CAR, 사이토카인, 세포 태그, 및/또는 이전에 기재된 바와 같은 하나 이상의 miRNA, 또는 이를 암호화하는 핵산을 포함하는 키트 및 조성물에 관한 것이다. 또 다른 측면에서, 키트 및 조성물은 RHEOSWITCH® 유전자 스위치 구성요소를 포함할 수 있다. 이들 키트 및 조성물은 상이한 단백질 또는 단백질의 하위집합을 각각 암호화하는 다중 벡터를 포함할 수 있다. 이들 벡터는 바이러스, 비바이러스, 에피솜, 또는 통합일 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 트랜스포존, 예를 들어, 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존이다. 다른 구현예에서, 벡터는 세린 재조합효소-매개 통합을 위한 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 키트 및 조성물은 벡터 뿐만 아니라 세포 및 제제 예컨대 인터류킨, 사이토카인, 인터류킨 및 화학요법제, 애쥬번트, 습윤제, 또는 유화제를 포함한다. 일 구현예에서 세포는 T 세포이다. 일 구현예에서 키트 및 조성물은 IL-2를 포함한다. 일 구현예에서, 키트 및 조성물은 IL-21을 포함한다. 일 구현예에서, 키트 및 조성물은 Bcl-2, STAT3 또는 STAT5 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 예를 들어 IL-15Rα와의 융합 단백질의 일부로서 IL-15를 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 하나 이상의 방법과 함께 사용하기 위한 키트 및 제조품이 본원에 개시된다. 이러한 키트는 바이알, 튜브 등과 같은 하나 이상의 용기를 수용하도록 구분된 캐리어, 패키지, 또는 용기를 포함하며, 각각의 용기(들)는 본원에 기재된 방법에 사용될 개별 요소 중 하나를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, 및 테스트 튜브를 포함한다. 일 구현예에서, 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로부터 형성된다.
본원에 제공된 제조품은 포장 재료를 함유한다. 약제학적 포장 재료의 예는 블리스터 팩, 병, 튜브, 백, 용기, 병, 및 선택된 제형 및 의도된 투여 및 치료 방식에 적합한 임의의 포장 재료를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
예를 들어, 용기(들)는 CAR-T 세포(예를 들어, 본원에 기재된 MUC16-, CD33-, 및 ROR1-특이적 CAR-T 세포), 및 임의적으로 추가로 본원에 개시된 사이토카인 및/또는 화학치료제를 포함한다. 이러한 키트는 임의적으로 본원에 기재된 방법에서의 사용과 관련한 식별 설명 또는 라벨 또는 설명서를 포함한다.
키트는 전형적으로 라벨 목록 내용물 및/또는 사용 설명서, 및 사용 설명서가 있는 패키지 삽입물을 포함한다. 일련의 설명서가 또한 전형적으로 포함될 것이다.
일부 구현예에서, 라벨은 용기 위에 있거나 관련되어 있다. 일 구현예에서, 라벨은 라벨을 형성하는 문자, 숫자 또는 다른 특징이 용기 자체에 부착되거나, 몰딩되거나 에칭될 때 용기 위에 있고; 라벨은 또한 예를 들어, 패키지 삽입물로서 용기를 보유하는 그릇 또는 캐리어 내에 존재할 때 용기와 연관된다. 일 구현예에서, 라벨은 내용물이 특이적 치료 적용에 사용되어야 함을 나타내는 데 사용된다. 라벨은 또한 본원에 기재된 방법에서와 같이, 내용물의 사용에 대한 지침을 나타낸다.
본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 변형된 면역 효과기 세포를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 miRNA(들), CAR, 하나 이상의 세포 태그, 및/또는 하나 이상의 사이토카인 및 임의적으로 본원에 기재된 바와 같은 유전자 스위치 시스템의 구성요소를 포함하는 서열로 변형된 면역 효과기 세포(예를 들어, T 세포)를 포함하는 조성물. 특정 구현예에서, 면역 효과기 세포는 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존(들) 및 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포사제로 변형된다. 예를 들어, 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존 또는 트랜스포존들은 하나 이상의 miRNA(들), CAR, 하나 이상의 세포 태그, 하나 이상의 사이토카인 및 임의적으로 본원에 기재된 바와 같은 유전자 스위치 시스템의 구성요소를 포함할 수 있다. 따라서, 일부 경우에, 변형된 T-세포는 CAR-매개 T-세포 반응을 도출할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이 활성화되고 확장된 세포는 면역 손상된 개체에서 일어나는 질환의 치료 및 예방에 활용될 수 있다. 특히, 본 발명의 변형된 T 세포는 악성종양의 치료에 사용된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 세포는 악성종양이 발생할 위험이 있는 환자의 치료에 사용된다. 따라서, 치료적 유효량의 본 발명의 변형된 T 세포를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 악성 종양의 치료 또는 예방 방법. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같이 활성화되고 확장된 세포는 악성종양의 치료에 활용될 수 있다.
생체외 면역화 측면에서 세포-기반 백신을 사용하는 것 외에도, 본 발명은 또한 환자에서 항원에 대해 지시된 면역 반응을 도출하기 위한 생체내 면역화를 위한 조성물 및 방법을 제공한다.
간단히 말해서, 본원에 기재된 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 또는 생리학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 조합하여, 본원에 기재된 바와 같은 변형된 면역 효과기 세포를 포함하는 집단을 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 중성 완충 염수, 포스페이트 완충 염수 등과 같은 완충액; 글루코스, 만노스, 수크로스 또는 덱스트란, 만니톨과 같은 탄수화물; 단백질; 폴리펩티드 또는 글리신과 같은 아미노산; 산화방지제; EDTA 또는 글루타티온과 같은 킬레이트화제; 애쥬번트(예를 들어, 수산화알루미늄); 및 방부제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 정맥내 투여를 위해 제형화된다.
본원에 기재된 약제학적 조성물은 치료될(또는 예방될) 질환에 적절한 방식으로 투여될 수 있다. 투여량 또는 빈도는 환자의 상태, 환자의 질환 유형 및 중증도와 같은 이러한 인자에 의해 결정될 것이다.
"면역학적 유효량", 또는 "치료량"이 표시되는 경우, 투여될 본원에 기재된 조성물의 정확한 양은 환자(대상체)의 연령, 체중, 및 상태의 개인차를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로 본원에 기재된 T 세포를 포함하는 약제학적 조성물은 범위 내의 모든 정수 값을 포함하여 104 내지 109 개 세포/kg 체중, 105 내지 106 개 세포/kg 체중의 투여량으로 투여될 수 있음이 언급될 수 있다. T 세포 조성물은 또한 이러한 투여량으로 여러 번 투여될 수 있다. 세포는 면역요법에 통상적으로 알려진 주입 기술을 사용함으로써 투여될 수 있다(예를 들어, Rosenberg 등, New Eng. J. of Med. 319:1676, (1988) 참조). 특정 환자에 대한 최적의 투여량 및 치료 레지멘은 질환 징후에 대해 환자를 모니터링하고 이에 따라 치료를 조정함으로써 의학 분야의 숙련자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
특정 구현예에서, 대상체에게 활성화된 T 세포를 투여한 다음 후속적으로 다시 채혈하고(또는 성분채집술 수행), 그로부터 T 세포를 활성화하고, 이러한 활성화되고 확장된 T 세포를 환자에게 재주입하는 것이 바람직할 수 있다. 이 과정은 몇 주마다 여러 번 수행될 수 있다. 특정 구현예에서, T 세포는 10 cc 내지 400 cc의 채혈로부터 활성화될 수 있다. 특정 구현예에서, T 세포는 20 cc, 30 cc, 40 cc, 50 cc, 60 cc, 70 cc, 80 cc, 90 cc, 또는 100 cc의 채혈로부터 활성화된다. 이론에 얽매이지 않고, 이 다중 채혈/다중 재주입 프로토콜을 사용하여 T 세포의 특정 집단을 선택하는 역할을 할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 방사선 또는 화학요법을 통해 환자의 림프구고갈 후 대상 조성물의 활성화된 T 세포를 투여하는 것이 바람직할 수 있다.
본원에 기재된 제형은 산화방지제, 금속 킬레이트화제, 티올 함유 화합물 및 다른 일반적인 안정화제로부터 이익을 얻을 수 있다. 이러한 안정화제의 예는 (a) 약 0.5% 내지 약 2% w/v 글리세롤, (b) 약 0.1% 내지 약 1% w/v 메티오닌, (c) 약 0.1% 내지 약 2% w/v 모노티오글리세롤, (d) 약 1 mM 내지 약 10 mM EDTA, (e) 약 0.01% 내지 약 2% w/v 아스코르브산, (f) 0.003% 내지 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, (g) 0.001% 내지 약 0.05% w/v. 폴리소르베이트 20, (h) 아르기닌, (i) 헤파린, (j) 덱스트란 술페이트, (k) 사이클로덱스트린, (l) 펜토산 폴리술페이트 및 다른 헤파리노이드, (m) 마그네슘 및 아연과 같은 2가 양이온; 또는 (n) 이의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
"담체" 또는 "담체 물질"은 약제학에서 임의의 통상적으로 사용되는 부형제를 포함하고 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드, 벡터, 및/또는 세포와의 호환성, 및 원하는 투여 형태의 방출 프로파일 특성을 기준으로 선택되어야 한다. 예시적인 담체 물질은 예를 들어, 결합제, 현택제, 붕해제, 충전제, 계면활성제, 가용화제, 안정화제, 윤활제, 습윤제, 희석제 등을 포함한다. "약제학적으로 호환성인 담체 물질"은 아카시아, 젤라틴, 콜로이드성 이산화규소, 칼슘 글리세로포스페이트, 칼슘 락테이트, 말토덱스트린, 글리세린, 마그네슘 실리케이트, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 카제인나트륨, 대두 레시틴, 타우로콜산, 포스포티딜콜린, 염화나트륨, 인산삼칼슘, 인산이칼륨, 셀룰로스 및 셀룰로스 접합체, 당 나트륨 스테아로일 락틸레이트, 카라기난, 모노글리세리드, 디글리세리드, 예비겔화된 전분 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed(Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; 및 Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed.(Lippincott Williams & Wilkins 1999)를 참조한다.
"분산제," 및/또는 "점도 조절제"는 액체 매질 또는 과립화 방법 또는 블렌드 방법을 통해 약물의 확산 및 균질성을 제어하는 물질을 포함한다. 일부 구현예에서, 이들 제제는 또한 코팅 또는 침식성 매트릭스의 효과를 용이하게 한다. 예시적인 확산 촉진제/분산제는 예를 들어, 친수성 중합체, 전해질, Tween ® 60 또는 80, PEG, 폴리비닐피롤리돈(PVP; Plasdone®로서 상업적으로 알려짐), 및 탄수화물-기반 분산제 예컨대, 예를 들어, 하이드록시프로필 셀룰로스(예를 들어, HPC, HPC-SL, 및 HPC-L), 하이드록시프로필 메틸셀룰로스(예를 들어, HPMC K100, HPMC K4M, HPMC K15M, 및 HPMC K100M), 카르복시메틸셀룰로스 나트륨, 메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스 프탈레이트, 하이드록시프로필메틸셀룰로스 아세테이트 스테아레이트(HPMCAS), 비결정질 셀룰로스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 트리에탄올아민, 폴리비닐 알코올(PVA), 비닐 피롤리돈/비닐 아세테이트 공중합체(S630), 4-(1,1,3,3-테트라메틸부틸)-페놀 중합체와 에틸렌 옥사이드 및 포름알데하이드(틸록사폴로도 알려짐), 폴록사머(예를 들어, Pluronics F68®, F88®, 및 F108®, 이는 에틸렌 옥사이드 및 프로필렌 옥사이드의 블록 공중합체임); 및 폴록사민(예를 들어, Tetronic 908®, Poloxamine 908®로도 알려져 있으며, 에틸렌디아민에 프로필렌 옥사이드 및 에틸렌 옥사이드의 순차적 첨가로부터 유도된 4기능성 블록 공중합체(BASF Corporation, 뉴저지주 파시패니)임), 폴리비닐피롤리돈 K12, 폴리비닐피롤리돈 K17, 폴리비닐피롤리돈 K25, 또는 폴리비닐피롤리돈 K30, 폴리비닐피롤리돈/비닐 아세테이트 공중합체(S-630), 폴리에틸렌 글리콜, 예를 들어, 약 300 내지 약 6000, 또는 약 3350 내지 약 4000, 또는 약 7000 내지 약 5400의 분자량을 가질 수 있는 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 폴리소르베이트-80, 나트륨 알기네이트, 검, 예컨대, 예를 들어 검 타르가칸트 및 검 아카시아, 구아 검, 잔탄 검을 포함하는 잔탄, 당, 셀룰로스계, 예컨대, 예를 들어, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 폴리소르베이트-80, 나트륨 알기네이트, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 포비돈, 카르보머, 폴리비닐 알코올(PVA), 알기네이트, 키토산 및 이의 조합을 포함한다. 셀룰로스 또는 트리에틸 셀룰로스와 같은 가소화제가 또한 분산제로서 사용될 수 있다. 리포솜 분산액 및 자기-유화 분산액에 특히 유용한 분산제는 디미리스토일 포스파티딜 콜린, 달걀로부터의 천연 포스파티딜 콜린, 달갈로부터의 천연 포스파티딜 글리세롤, 콜레스테롤 및 이소프로필 미리스테이트이다.
하나 이상의 침식 촉진제와 하나 이상의 확산 촉진제의 조합이 또한 본 조성물에 사용될 수 있다.
용어 "희석제"는 전달 전에 관심 화합물을 희석하는 데 사용되는 화학적 화합물을 지칭한다. 희석제는 보다 안정한 환경을 제공할 수 있기 때문에 화합물을 안정화하는데도 사용될 수 있다. 포스페이트 완충 염수 용액을 포함하나 이에 제한되지 않는, 완충 용액에 용해된 염(이는 또한 pH 제어 또는 유지를 제공할 수 있음)은 당업계에서 희석제로서 활용된다. 특정 구현예에서, 희석제는 조성물의 규모를 증가시켜 압축을 용이하게 하거나 캡슐 충전을 위한 균질한 블렌드를 위한 충분한 규모를 생성한다. 이러한 화합물은 예를 들어, 락토스, 전분, 만니톨, 소르비톨, 덱스트로스, 미세결정질 셀룰로스 예컨대 Avicel®; 이염기성 인산칼슘, 인산이칼슘 이수화물; 인산삼칼슘, 인산칼슘; 무수 락토스, 분무 건조된 락토스; 예비겔화된 전분, 압축성 당, 예컨대 Di-Pac®(Amstar); 만니톨, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스 아세테이트 스테아레이트, 수크로스-기반 희석제, 제빵용 당; 일염기성 황산칼슘 일수화물, 황산칼슘 이수화물; 젖산칼슘 삼수화물, 덱스트레이트; 가수분해된 곡물 고체, 아밀로스; 분말화된 셀룰로스, 탄산칼슘; 글리신, 카올린; 만니톨, 염화나트륨; 이노시톨, 벤토나이트 등을 포함한다.
"충전제"는 락토스, 탄산칼슘, 인산칼슘, 이염기성 인산칼슘, 황산칼슘, 미세결정질 셀룰로스, 셀룰로스 분말, 덱스트로스, 덱스트레이트, 덱스트란, 전분, 예비겔화된 전분, 수크로스, 크실리톨, 락티톨, 만니톨, 소르비톨, 염화나트륨, 폴리에틸렌 글리콜 등과 같은 화합물을 포함한다.
"윤활제" 및 "활주제"는 물질의 부착 또는 마찰을 방지, 감소 또는 억제하는 화합물이다. 예시적인 윤활제는 예를 들어, 스테아르산, 수산화칼슘, 활석, 나트륨 스테아릴 푸메레이트, 광유와 같은 탄화수소, 또는 수소화 대두유(Sterotex®)와 같은 수소화 식물성 오일, 고급 지방산 및 그들의 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 염, 예컨대 알루미늄, 칼슘, 마그네슘, 아연, 스테아르산, 스테아르산나트륨, 글리세롤, 활석, 왁스, Stearowet®, 붕산, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 류신, 폴리에틸렌 글리콜(예를 들어, PEG-4000) 또는 메톡시폴리에틸렌 글리콜 예컨대 Carbowax™, 올레산나트륨, 벤조산나트륨, 글리세릴 베헤네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 마그네슘 또는 나트륨 라우릴 술페이트, 콜로이드성 실리카 예컨대 Syloid™, Cab-O-Sil®, 전분 예컨대 옥수수 전분, 실리콘 오일, 계면활성제 등을 포함한다.
"가소화제"는 마이크로캡슐화 재료 또는 필름 코팅을 부드럽게 하여 덜 부서지게 만드는 데 사용되는 화합물이다. 적합한 가소화제는 예를 들어, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 1450, PEG 3350, 및 PEG 800과 같은 폴리에틸렌 글리콜, 스테아르산, 프로필렌 글리콜, 올레산, 트리에틸 셀룰로스 및 트리아세틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 가소화제는 분산제 또는 습윤제로서도 기능할 수 있다.
"가용화제"는 트리아세틴, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 나트륨 라우릴 술페이트, 나트륨 도큐세이트, 비타민 E TPGS, 디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, N-하이드록시에틸피롤리돈, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 사이클로덱스트린, 에탄올, n-부탄올, 이소프로필 알코올, 콜레스테롤, 담즙산 염, 폴리에틸렌 글리콜 200-600, 글리코푸롤, 트랜스큐톨, 프로필렌 글리콜, 및 디메틸 이소소르비드 등과 같은 화합물을 포함한다.
"안정화제"는 임의의 항산화제, 완충제, 산, 방부제 등과 같은 화합물을 포함한다.
"현탁제"는 폴리비닐피롤리돈, 예를 들어, 폴리비닐피롤리돈 K12, 폴리비닐피롤리돈 K17, 폴리비닐피롤리돈 K25, 또는 폴리비닐피롤리돈 K30, 비닐 피롤리돈/비닐 아세테이트 공중합체(S630), 폴리에틸렌 글리콜, 예를 들어, 약 300 내지 약 6000, 또는 약 3350 내지 약 4000, 또는 약 7000 내지 약 5400의 분자량을 가질 수 있는 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시메틸셀룰로스 아세테이트 스테아레이트, 폴리소르베이트-80, 하이드록시에틸셀룰로스, 나트륨 알기네이트, 검, 예컨대, 예를 들어, 검 타르가칸트 및 검 아카시아, 구아 검, 잔탄 검을 포함하는 잔탄, 당, 셀룰로계, 예컨대, 예를 들어, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 폴리소르베이트-80, 나트륨 알기네이트, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 포비돈 등과 같은 화합물을 포함한다.
"계면활성제"는 나트륨 라우릴 술페이트, 나트륨 도큐세이트, Tween 60 또는 80, 트리아세틴, 비타민 E TPGS, 소르비탄 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트, 폴리소르베이트, 폴락소머, 담즙산 염, 글리세릴 모노스테아레이트, 에틸렌 옥사이드와 프로필렌 옥사이드의 공중합체, 예를 들어, Pluronic®(BASF) 등과 같은 화합물을 포함한다. 일부 다른 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 지방산 글리세리드 및 식물성 오일, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌(60) 경화 피마자유; 및 폴리옥시에틸렌 알킬에테르 및 알킬페닐 에테르, 예를 들어, 옥톡시놀 10, 옥톡시놀 40을 포함한다. 일부 구현예에서, 계면활성제는 물리적 안정성을 향상시키기 위해 또는 다른 목적을 위해 포함될 수 있다.
"점도 향상제"는 예를 들어, 메틸 셀룰로스, 잔탄 검, 카르복시메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 아세테이트 스테아레이트, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트, 카르보머, 폴리비닐 알코올, 알기네이트, 아카시아, 키토산 및 이의 조합을 포함한다.
"습윤제"는 올레산, 글리세릴 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레에이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 나트륨 도큐세이트, 올레산나트륨, 나트륨 라우릴 술페이트, 나트륨 도큐세이트, 트리아세틴, Tween 80, 비타민 E TPGS, 암모늄 염 등과 같은 화합물을 포함한다.
XIV. 치료 방법
본 발명은 또한 본 개시내용의 변형된 면역 효과기 세포를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 세포는 치료적 유효량으로 투여된다.
본 발명은 또한 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 본 개시내용의 변형된 면역 효과기 세포의 용도에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 질환은 암일 수 있다. 특정 측면에서, 암은 혈액학적 또는 고형 종양일 수 있다. 다른 예에서, 암은 혈액학적 악성종양이다. 일부 경우에, 암은 전이성 암이다. 일부 경우에, 암은 재발성 또는 불응성 암이다. 특정 측면에서, 암은 B 세포암, 예를 들어, 다발성 골수종, 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 예를 들어 알파 쇄 질환, 감마 쇄 질환, 및 뮤 쇄 질환과 같은 중쇄 질환, 양성 모노클로날 감마글로불린혈증, 및 면역세포성 아밀로이드증(immunocytic amyloidosis), 흑색종, 유방암, 폐암, 기관지암, 결장직장암, 전립선암(예를 들어, 전이성, 호르몬 불응성 전립선암), 췌장암, 위암, 난소암, 비뇨기 방광암, 뇌 또는 중추신경계 암, 말초신경계 암, 식도암, 자궁경부암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 침샘암, 갑상샘암, 부신암, 골육종, 연골육종, 혈액학적 조직의 암 등으로부터 선택된다. 본 개시내용의 방법에 의해 치료될 수 있는 암 유형의 다른 비제한적인 예는 인간 육종 및 암종, 예를 들어, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척삭종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 육종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 유방 선암종 예를 들어 삼중 음성 유방암, 난소암, 편평상피 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘 암종, 피지샘 암종, 유두 암종, 유두 선암종, 낭샘암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신세포 암종, 간종양, 담관 암종, 간암, 간세포 암종(HCC), 융모막암종, 정상피종, 배아 암종, 빌름스 종양(Wilms's tumor), 자궁경부암, 골암, 뇌 종양, 고환암, 폐암종, 소세포 폐암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경집종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 망막아종; 백혈병, 예를 들어, 급성 골수구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 외투 세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병, 및 급성 골수성 백혈병(골수모구성, 전골수성, 골수단핵구성, 단핵구성 및 적백혈병); 만성 백혈병(만성 골수구성(과립구성) 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병); 미만성 거대 B-세포 림프종; 및 진성다혈구증, 림프종(호지킨병 및 비-호지킨병), 다발성 골수종, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 및 중쇄 질환을 포함한다.
일부 경우에, 암은 고형 종양이다. 예시적인 고형 종양은 항문암; 충수암; 담관암(즉, 담관암종); 방광암; 뇌 종양; 유방암; 자궁경부암; 결장암; 미지의 원발성 암(CUP); 식도암; 안암; 나팔관암; 위장관암; 신장암; 간암; 폐암; 수모세포종; 흑색종; 구강암; 난소암; 췌장암; 부갑상선 질환; 음경암; 뇌하수체 종양; 전립선암; 직장암; 피부암; 위암; 고환암; 후두암; 갑상선암; 자궁암; 질암; 또는 외음부암을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 암은 혈액학적 악성종양이다. 일부 경우에, 혈액학적 악성종양은 림프종, 백혈병, 흑색종, 또는 B-세포 악성종양을 포함한다. 일부 경우에, 혈액학적 악성종양은 림프종, 백혈병 또는 흑색종을 포함한다. 일부 경우에, 예시적인 혈액학적 악성종양은 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소림프구성 림프종(SLL), 고위험 CLL, 비-CLL/SLL 림프종, 전림프구성 백혈병(PLL), 여포성 림프종(FL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 외투 세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 다발성 골수종, 외부결절성 변연부 B 세포 림프종, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비-버킷 고등급 B 세포 림프종, 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBL), 면역모세포성 거대 세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질 세포 골수종, 형질세포종, 종격(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출액 림프종, 또는 림프종양 육아종증을 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액학적 악성종양은 골수성 백혈병을 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액학적 악성종양은 급성 골수성 백혈병(AML) 또는 만성 골수성 백혈병(CML)을 포함한다.
일부 경우에, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소림프구성 림프종(SLL), 고위험 CLL, 비-CLL/SLL 림프종, 전림프구성 백혈병(PLL), 여포성 림프종(FL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 외투 세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 다발성 골수종, 외부결절성 변연부 B 세포 림프종, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비-버킷 고위험 B 세포 림프종, 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBL), 면역모세포성 거대 세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질 세포 골수종, 형질세포종, 종격(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출액 림프종, 또는 림프종양 육아종증으로부터 선택된 혈액학적 악성종양이 있는 대상체에게 본원에게 기재된 변형된 효과기 세포를 투여하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 경우에, AML 또는 CML로부터 선택된 혈액학적 악성종양이 있는 대상체에게 변형된 효과기 세포를 대상체에게 투여하는 방법이 본원에 개시된다.
또 다른 구현예에서, 상피암은 비소세포 폐암, 비유두상 신세포 암종, 자궁경부 암종, 난소 암종(예를 들어, 장액성 난소 암종), 또는 유방 암종이다. 상피암은 장액성, 자궁내막양, 점액성, 투명 세포, 브렌너(brenner), 또는 미분화를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 다른 방식을 특징으로 할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법 및 조성물은 외투 세포 림프종을 포함하나 이에 제한되지 않는 림프종 또는 이의 하위유형의 치료, 진단, 및/또는 예후에 사용된다.
일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 항원의 과발현과 연관된다. 특정 구현예에서, 항원은 CD19, CD33, ROR1, MUC1, 또는 MUC16이다. 일부 구현예에서, 질환은 난소암, 골수이형성 증후군(MDS)이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 폴리펩티드를 포함하는 변형된 효과기 세포를 장애, 예를 들면 암을 갖는 대상체에게 투여하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 경우에, 암은 CD19, CD20, CD33, CD44, BCMA, CD123, EGFRvIII, α-엽산 수용체, CAIX, CD30, ROR1, CEA, EGP-2, EGP-40, HER2, HER3, 엽산-결합 단백질, GD2, GD3, IL-13R-a2, KDR, EDB-F, 메소텔린, GPC3, CSPG4, HER1/HER3, HER2, CD44v6, CD44v7/v8, CD20, CD174, CD138, L1-CAM, FAP, c-MET, PSCA, CS1, CD38, IL-11Rα, EphA2, CLL-1, CD22, EGFR, 엽산 수용체 α, MUC1 또는 MUC16과 같은 뮤신, MAGE-A1, h5T4, PSMA, CSPG4, TAG-72 또는 VEGF-R2의 발현과 연관된 암이다.
일부 구현예에서, 질환은 MUC16의 과발현과 연관된다. 이러한 특정 구현예에서, 질환은 난소암, 유방암, 췌장암, 자궁내막암, 또는 폐암이다.
일부 구현예에서, 질환은 CD33의 과발현과 연관된다. 이러한 특정 구현예에서, 질환은 급성 골수성 백혈병(AML) 또는 골수이형성 증후군(MDS)이다.
일부 구현예에서, 질환은 ROR1의 과발현과 연관된다. 이러한 특정 구현예에서, 질환은 혈액학적 종양, 예를 들어 만성 림프구성 백혈병(CLL), 외투 세포 림프종(MCL), 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 및 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)을 수반한다. 이러한 특정 구현예에서, 질환은 고형 종양, 예를 들어 삼중 음성 유방암을 포함하는 유방 선암종(TNBC), 췌장암, 난소암, 및 폐 선암종을 수반한다.
또 다른 구현예에서, 고형 종양이 있는 대상체를 치료하는 방법은 대상체로부터 세포의 샘플을 수득하는 단계, 샘플의 세포를 하나 이상의 트랜스포존을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드로 형질감염시키는 단계, 및 조작된 세포 집단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 예에서, 림프구고갈은 조작된 세포를 대상체에게 투여하기 전에 필요하지 않다. 일부 구현예에서, 유전적으로 변형된 T 세포는 잘 알려진 프로토콜에 따라 전조건화된 림프구고갈이 있거나 없이 치료된 환자로 확장되고 전달될 수 있다. 일부 경우에, 하나 이상의 트랜스포존은 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 항원 수용체(CAR), 사이토카인, 하나 이상의 세포 태그, 및 DNA를 세포의 게놈으로 통합하는 데 효과적인 트랜스포사제를 암호화한다. 일부 경우에, 하나 이상의 트랜스포존은 하나 이상의 miRNA(들), 키메라 항원 수용체(CAR), 사이토카인, 하나 이상의 세포 태그, 사이토카인의 리간드-유도성 제어를 위한 유전자 스위치 폴리펩티드 및 DNA를 세포의 게놈으로 통합하는 데 효과적인 트랜스포사제를 암호화한다. 일부 경우에, 유전자 스위치 폴리펩티드는 i) 제1 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 DNA 결합 도메인을 포함하는 제1 유전자 스위치 폴리펩티드, 및 ii) 제2 핵 수용체 리간드 결합 도메인에 융합된 전사활성화 도메인을 포함하는 제2 유전자 스위치 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 제1 유전자 스위치 폴리펩티드 및 제2 유전자 스위치 폴리펩티드는 링커에 의해 연결된다. 일부 경우에, 세포는 전기천공을 통해 형질감염된다. 일부 경우에, 유전자 스위치 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 프로모터에 의해 조절된다. 일부 경우에, 프로모터는 조직-특이적 프로모터 또는 EF1A 프로모터 또는 이의 기능적 변이체이다. 일부 경우에, 조직-특이적 프로모터는 T 세포 특이적 반응 요소 또는 NFAT 반응 요소를 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-15, IL-12, IL-21, IL-15의 융합, IL-15R 또는 IL-15 변이체 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인은 분비된 형태이다. 일부 경우에, 사이토카인은 막-결합된 형태이다. 일부 경우에, 세포는 NK 세포, NKT 세포, T-세포 또는 T-세포 전구 세포이다. 일부 경우에, 세포는 대상체에게 투여된다(예를 들어 대상체에게 조작된 세포를 주입함으로써). 일부 경우에, 방법은 사이토카인의 발현을 유도하기 위해 유효량의 리간드(예를 들어 벨레디멕스)를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 경우에, 트랜스포사제는 연어과-유형 Tc1-유사 트랜스포사제이다. 일부 경우에, 트랜스포사제는 SB11 또는 SB100x 트랜스포사제이다. 다른 경우에, 트랜스포사제는 PiggyBac이다. 일부 경우에, 세포 태그는 HER1 절두된 변이체 또는 CD20 절두된 변이체 중 적어도 하나를 포함한다.
전이성 흑색종이 있는 환자에서 수행된 연구는 입양 세포 전달 전에 림프구고갈이 시험관내 확장된 종양-침윤 림프구(TIL)를 사용한 요법의 효능을 극적으로 향상시킴을 입증하였다. Muranski P, 등, "Increased intensity lymphodepletionand adoptive immunotherapy―how far can we go?" Nat Clin Pract Oncol. 2006;3(12):668-681. 림프구고갈은 인터류킨-2(IL-2), IL-7, 및 IL-15와 같은 항상성 사이토카인에 대한 침하물 제거, 조절 T 세포 및 골수성-유래 억제인자 세포와 같은 면역억제 요소 제거, 종양 세포에서 공자극 분자 유도 및 인돌아민 2,3-디옥시게나제 하향조절, 및 입양 전달된 T 세포의 확장, 기능, 및 지속성 촉진을 포함하는 다중 메커니즘에 의해 작동할 가능성이 있다. 이러한 경험은 CAR T-세포 요법을 사용한 임상 시험에서 림프구고갈의 사용으로 이어졌다. Kochenderfer 등은 림프구고갈 후 혈청 IL-15 수준의 증가와 항-CD19 CAR T-세포 요법 후 임상 반응 사이의 연관성을 나타내었다. Kochenderfer JN, 등, "Lymphoma remissions caused by anti-CD19 chimeric antigen receptor T cells are associated with high serum interleukin-15 levels," J Clin Oncol. 2017; 35(16):1803-1813. Turtle과 동료들은 림프고갈 레지멘에서 사이클로포스파미드(Cy/Flu)에 플루다라빈의 첨가가 비-호지킨 림프종이 있는 환자에서 비-Flu 림프고갈 레지멘과 비교하여 개선된 항-CD19 CAR T-세포 확장 및 지속성 및 더 나은 임상 결과와 연관되었음을 나타내었다. Turtle CJ, 등, "Immunotherapy of non-Hodgkin's lymphoma with a defined ratio of CD8+ and CD4+ CD19-specific chimeric antigen receptor-modified T cells," Sci Transl Med. 2016; (8)355-355ra116. 다른 연구는 첫 달에 걸쳐 피크 및 곡선하 면적 둘 다에 대한 생체내 CAR T-세포 확장 규모가 반응 및/또는 지속성과 연관될 수 있음을 나타내었다. Neelapu SS, 등, "Axicabtagene ciloleucel CAR T-cell therapy in refractory large B-cell lymphoma," N Engl J Med. 2017;377(26):2531-2544.
일부 구현예에서, 대상체는 변형된 면역 효과기 세포를 대상체에게 투여하는 단계 전에 림프구고갈을 겪는다. 본원에 사용된 바와 같이, "림프구고갈"은 예를 들어 림프구고갈제의 투여에 의해 대상체에서 림프구 수를 감소시키는 방법을 수반한다. 림프구고갈의 예는 비골수제거성 림프구고갈 화학요법, 골수제거성 림프구고갈 화학요법을 포함한다. 림프구고갈은 또한 부분 신체 또는 전신 분획화 방사선 요법에 의해 획득될 수 있다. 림프구고갈제는 포유류에게 투여될 때 포유류에서 기능적 림프구의 수를 감소시킬 수 있는 화학적 화합물 또는 조성물일 수 있다. 이러한 제제의 하나의 예는 하나 이상의 화학치료제이다. 이러한 제제 및 투여량은 알려져 있고, 치료될 대상체에 따라 치료 의사에 의해 선택될 수 있다. 림프구고갈제의 예는 플루다라빈, 사이클로포스파미드, 클라드리빈(cladribine), 데닐류킨 디프티톡스(denileukin diftitox), 또는 이의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체는 변형된 면역 효과기 세포를 대상체에게 투여하는 단계 전에 림프구고갈을 겪지 않는다.
일부 구현예에서, 림프구고갈은 약 10 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 바람직하게는 약 40 mg/kg 내지 약 80 mg/kg, 예를 들어 약 60 mg/kg의 용량으로 사이클로포스파미드의 투여에 의해 수행된다. 이러한 구현예에서, 사이클로포스파미드는 약 10 mg/m2 내지 약 50 mg/m2, 바람직하게는 약 20 mg/m2 내지 약 40 mg/m2, 예를 들어 약 30 mg/m2의 용량으로 플루다라빈과 부수적으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 림프구고갈은 약 10 mg/m2 내지 약 50 mg/m2, 바람직하게는 약 20 mg/m2 내지 약 40 mg/m2, 예를 들어 약 30 mg/m2의 용량으로 플루다라빈의 투여에 의해 수행된다. 이러한 구현예에서, 플루다라빈은 약 200 mg/m2 내지 약 900 mg/m2, 바람직하게는 약 400 내지 약 600 mg/m2, 예를 들어 500 mg/m2의 용량으로 사이클로포스파미드와 부수적으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 환자 또는 대상체는 자가 변형된 면역 효과기 세포를 생산하기 위해 혈액을 회수하기 전에 림프구고갈되지 않는다.
일부 구현예에서, 변형된 면역 효과기 세포는 대상체에 대해 자가이다. 일부 구현예에서, 변형된 면역 효과기 세포는 대상체에 대해 동종이계이다.
일부 구현예에서, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 변형된 면역 효과기 세포의 양 및 양은 사이토카인-연관 독성을 유도하는 효능 및 잠재력에 기반하여 결정된다.
본원에 기재된 조성물의 투여는 에어로졸 흡입, 주사, 섭취, 수혈, 주입 및 이식을 포함하는 임의의 편리한 방식으로 수행될 수 있다. 본원에 기재된 조성물은 피하, 피내, 종양내, 결절내, 골수내, 근육내, 정맥내(i.v.) 주사에 의해, 또는 복강내로 환자에게 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 T 세포 조성물은 피내 또는 피하 주사에 의해 환자에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 면역 효과기 세포 조성물은 i.v. 주사에 의해 투여된다. T 세포의 조성물은 림프절, 또는 원발성 종양 또는 전이 부위에 직접 주사될 수 있다.
환자에게 투여될 상기 치료의 투여량은 치료되는 병태의 정확한 속성 및 치료 수용자에 따라 달라질 것이다. 인간 투여를 위한 투여량 규모는 당업계에서 허용되는 관행에 따라 수행될 수 있다. 예를 들어, 상기 치료의 용량은 1x104 개 CAR+ 세포/kg 내지 5x106 개 CAR+ 세포/kg의 범위일 수 있다. 예시적인 용량은 1x102 개 CAR+ 세포/kg, 1x103 개 CAR+ 세포/kg, 1x104 개 CAR+ 세포/kg, 1x105 개 CAR+ 세포/kg, 3x105 개 CAR+ 세포/kg, 1x106 개 CAR+ 세포/kg, 5x106 개 CAR+ 세포/kg, 1x107 개 CAR+ 세포/kg, 1x108 개 CAR+ 세포/kg 또는 1x109 개 CAR+ 세포/kg일 수 있다. 적절한 용량은 성인 또는 소아 환자에 따라 조정될 수 있다.
대안적으로, 포유류(예를 들어, 인간)에게 투여되는 면역 효과기 세포의 전형적인 양은 예를 들어, 100, 1000, 1만, 10만, 100만 내지 1000억 개 세포의 범위일 수 있지만; 이 예시적인 범위 미만 또는 초과의 양이 본 발명의 범위 내에 있다. 예를 들어, 본 발명의 숙주 세포의 용량은 약 100만 내지 약 500억 개 세포(예를 들어, 약 500만 개 세포, 약 2500만 개 세포, 약 5억 개 세포, 약 10억 개 세포, 약 50억 개 세포, 약 200억 개 세포, 약 300억 개 세포, 약 400억 개 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 2 개에 의해 정의된 범위), 약 1000만 내지 약 1000억 개 세포(예를 들어, 약 2000만 개 세포, 약 3000만 개 세포, 약 4000만 개 세포, 약 6000만 개 세포, 약 7000만 개 세포, 약 8000만 개 세포, 약 9000만 개 세포, 약 100억 개 세포, 약 250억 개 세포, 약 500억 개 세포, 약 750억 개 세포, 약 900억 개 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 2 개에 의해 정의된 범위), 약 1억 개 세포 내지 약 500억 개 세포(예를 들어, 약 1억 200만 개 세포, 약 2억 5000만 개 세포, 약 3억 5000만 개 세포, 약 4억 5000만 개 세포, 약 6억 5000만 개 세포, 약 8000억 개 세포, 약 9000억 개 세포, 약 30억 개 세포, 약 300억 개 세포, 약 450 억 개 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 2 개에 의해 정의된 범위)일 수 있다.
치료적 또는 예방적 효능은 치료된 환자의 주기적 평가에 의해 모니터링될 수 있다. 수일 이상에 걸쳐 반복 투여하는 경우, 병태에 따라, 치료는 원하는 질환 증상 억제가 발행할 때까지 반복된다. 그러나, 다른 투여량 레지멘이 유용할 수 있고 본 발명의 범위 내에 있다. 원하는 투여량은 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여, 또는 조성물의 연속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
일부 구현예에서, 변형된 효과기 세포의 양은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되고 양은 사이토카인-연관 독성을 유도하는 효능 및 잠재력에 기반하여 결정된다. 또 다른 구현예에서, 변형된 효과기 세포는 CAR+ 및 CD3+ 세포이다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 104 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 104 내지 약 105 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 >104 개지만 ≤105 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 >105 개지만 ≤106 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 >106 개지만 ≤107 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함한다.
일 구현예에서, 변형된 면역 효과기 세포는 종양 조직에 직접 국소 전달을 통해 암을 표적한다. 예를 들어, 난소암에서, 변형된 면역 효과기 세포는 복부 또는 복강으로 복강내(IP)로 전달될 수 있다. 이러한 IP 전달은 화학요법 약물의 전달을 위해 배치된 포트 또는 기존 포트를 통해 수행될 수 있다. 변형된 면역 효과기 세포의 국소 전달의 다른 방법은 절제 공동으로 카테터 주입, 초음파 가이드 종양내 주사, 간 동맥 주입 또는 흉막내 전달을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 이를 필요로 하는 대상체는 IP를 통해 전달된 변형된 면역 효과기 세포의 제1 용량 이어서 IV를 통해 전달된 변형된 면역 효과기 세포의 제2 용량으로 요법을 시작할 수 있다. 추가 구현예에서, 변형된 면역 효과기 세포의 제2 용량은 IV 또는 IP를 통해 전달될 수 있는 후속 용량이 뒤따를 수 있다. 일 구현예에서, 제1 용량과 제2 용량 또는 추가 후속 용량 사이의 기간은 약 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 일일 수 있다. 일 구현예에서, 제1 용량과 제2 용량 또는 추가 후속 용량 사이의 기간은 약 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 또는 36 개월일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 제1 용량과 제2 용량 또는 추가 후속 용량 사이의 기간은 약 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 년일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 카테터는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 회 용량의 변형된 면역 효과기 세포의 추가 투여를 위해 종양 또는 전이 부위에 배치될 수 있다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 용량은 약 102 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함할 수 있다. 독성이 관찰된 경우, 변형된 효과기 세포의 용량은 약 102 내지 약 105 개의 변형된 효과기 세포/kg을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 용량은 약 102 개의 변형된 효과기 세포/kg에서 시작할 수 있고 후속 용량은 약 104, 105, 106, 107, 108 또는 109 개의 변형된 효과기 세포/kg로 증가될 수 있다.
개시된 핵산 서열을 발현하는 면역 효과기 세포, 또는 이러한 핵산 서열을 포함하는 벡터는 포유류에게 공동투여될 수 있는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 투여될 수 있다. "공동투여"란 하나 이상의 추가 치료제 및 본 발명의 숙주 세포 또는 본 발명의 벡터를 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시키기에 충분히 가까운 시간에 투여하거나, 그 반대의 경우를 의미한다. 이와 관련하여, 본원에 기재된 면역 효과기 세포 또는 본원에 기재된 벡터는 하나 이상의 추가 치료제와 동시에, 또는 먼저 투여될 수 있고, 하나 이상의 추가 치료제는 두번째로 투여될 수 있거나 그 반대의 경우일 수 있다. 대안적으로, 개시된 면역 효과기 세포 또는 본원에 기재된 벡터 및 하나 이상의 추가 치료제는 동시에 투여될 수 있다.
본 발명의 숙주 세포 및/또는 본 발명의 벡터에 포함되거나 공동투여될 수 있는 치료제의 예는 인터류킨, 사이토카인, 인터페론, 애쥬번트 및 화학치료제이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 IFN-알파, IFN-베타, IFN-감마, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-베타, TNF-알파, 성장 인자, 및 hGH, 인간 Toll-유사 수용체의 리간드 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, 및 TLR10이다.
A. 변형된 면역 효과기 세포 용량
일부 구현예에서, 투여되는 변형된 면역 효과기 세포의 양은 약 102 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여되는 변형된 면역 효과기 세포의 양은 약 103 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여되는 변형된 면역 효과기 세포의 양은 약 104 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 105 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 105 내지 약 108 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 105 내지 약 107 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 106 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 106 내지 약 108 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 107 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 107 내지 약 108 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 108 내지 약 109 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 109 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 108 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 107 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 106 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 105 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 104 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 103 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 효과기 세포의 양은 약 102 개의 변형된 효과기 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 면역 효과기 세포는 변형된 CAR-T 세포이다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 miRNA(들)를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 104 내지 약 109 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 109 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 108 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 107 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 109 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 108 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 109 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 108 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 108 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 109 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 108 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 107 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 106 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 변형된 CAR-T 세포의 양은 약 105 개의 변형된 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 CAR-T 세포는 CD19-특이적 CAR-T 세포이다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD19-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 CAR-T 세포는 CD33-특이적 CAR-T 세포이다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, CD33-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 CAR-T 세포는 MUC1-특이적 CAR-T 세포이다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 CAR-T 세포는 MUC16-특이적 CAR-T 세포이다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, MUC16-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 CAR-T 세포는 ROR1-특이적 CAR-T 세포이다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 내지 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 내지 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 109 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 108 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 107 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 106 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, ROR1-특이적 CAR-T 세포의 양은 약 105 개의 CAR-T 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 T 세포는 조작된 TCR T-세포이다. 일부 경우에, 조작된 TCR T- 세포의 양은 약 105 내지 약 109 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 105 내지 약 108 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 105 내지 약 107 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 106 내지 약 109 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 106 내지 약 108 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 107 내지 약 109 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 105 내지 약 106 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 106 내지 약 107 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 107 내지 약 108 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 약 108 내지 약 109 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 내지 약 109 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 내지 약 108 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 내지 약 107 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 내지 약 106 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다. 일부 경우에, 조작된 TCR 세포의 양은 내지 약 105 개의 TCR 세포/대상체의 체중 kg을 포함한다.
투여량 값은 완화될 병태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있음에 주목해야 한다. 임의의 특정 대상체에 대해, 특이적 투여량 레지멘은 개체의 필요성 및 조성물의 투여를 관리하거나 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간에 따라 조정되어야 하고, 본원에 제시된 투여량 범위는 단지 예시적이고 청구된 조성물의 범위 또는 실행을 제한하려는 것으로 의도되지 않음이 추가로 이해되어야 한다.
일부 구현예에서, 표현형이 본 개시내용의 방법에 의해 결정되는 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 부인과 암, 신암, 후두암, 폐암, 구강암, 두경부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 또는 피부암과 같으나 이에 제한되지 않는 상피암이다. 다른 구현예에서, 암은 유방암, 전립선암, 폐암, 또는 결장암이다.
B. 조합 요법
특정 구현예에서, 본원에 기재된 변형된 면역 효과기 세포 및 이의 조성물은 요법 단독으로 또는 다른 요법과 함께, 표준 요법(화학요법, 화학요법 및 현재 임상 시험 요법을 포함하나 이에 제한되지 않음)에 대한 약 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 평균 반응률을 갖는 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 암은 호지킨 림프종, 흑색종, 비소세포 폐암(NSCLC), 현미부수체 불안정성(MSI)-고빈도 또는 불일치 복구(MMR)-결합 고형 종양, CSCC, RCC, CRC, 흑색종, 메르켈 세포암, 방광암, RCC, 간세포 암종(HCC), 두경부암(H&N), 자궁경부암, 위암, 소세포 폐암(SCLC), 자궁내막암, 중피종, 난소암, 삼중 음성 유방암(TNBC), 유방암, 결장직장암(CRC), 췌장암, 전립선암을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 추가 치료제와 함께 조합 요법으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 항체와 같은 생물학적 분자를 포함한다. 예를 들어, 치료는 EGFR, HER2/ErbB2, 및/또는 VEGF에 결합하는 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는 종양-연관 항원에 대한 항체와 함께 본원에 기재된 바와 같은 변형된 면역 효과기 세포의 조합 투여를 수반할 수 있다. 특정 구현예에서, 추가 치료제는 암 줄기 세포 마커에 특이적인 항체이다. 특정 구현예에서, 추가 치료제는 혈관형성 억제제인 항체(예를 들어, 항-VEGF 또는 VEGF 수용체 항체)이다. 특정 구현예에서, 추가 치료제는 베바시주맙(AVASTIN), 라무시루맙, 트라스투주맙(HERCEPTIN), 페르투주맙(OMNITARG), 파니투무맙(VECTIBIX), 니모투주맙, 잘루투무맙, 또는 세툭시맙(ERBITUX)이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 소분자와 같은 제제를 포함한다. 예를 들어, 치료는 EGFR, HER2(ErbB2), 및/또는 VEGF를 포함하나 이에 제한되지 않는 종양-연관 항원에 대한 억제제로서 작용하는 소분자와 함께 본원에 기재된 바와 같은 변형된 면역 효과기 세포의 조합 투여를 수반할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 변형된 면역 효과기 세포는 제피티닙(IRESSA), 에를로티닙(TARCEVA), 수니티닙(SUTENT), 라파타닙, 반데타닙(ZACTIMA), AEE788, CI-1033, 세디라닙(RECENTIN), 소라페닙(NEXAVAR), 및 파조파닙(GW786034B)으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질 키나제 억제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 mTOR 억제제를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 추가 치료제는 화학요법 또는 TREG 세포의 수를 감소시키는 다른 억제제이다. 특정 구현예에서, 치료제는 사이클로포스파미드 또는 항-CTLA4 항체이다. 또 다른 구현예에서, 추가 치료제는 골수성-유래 억제인자 세포의 존재를 감소시킨다. 추가 구현예에서, 추가 치료제는 카르보탁솔이다. 추가 구현예에서, 추가 치료제는 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 항-PD-1 또는 항-PDL1 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 본원에 기재된 바와 같은 변형된 면역 효과기 세포와 조합하여 하나 이상의 체크포인트 억제제를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체일 수 있다. 항-CTLA-4 항체(예를 들어, 이필리무맙)는 진행성 흑색종이 있는 참가자에서 지속적인 항-종양 활성 및 연장된 생존을 나타내어, 2011년 미국 식품의약국(FDA) 승인을 받았다. Hodi 등, Improved survival with ipilimumab in patients with metastatic melanoma. N Engl J Med. (2010) Aug 19; 363(8):711-23 참조. 일부 구현예에서, 하나 이상의 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 전장 아테졸리주맙(항-PD-L1), 아벨루맙(항-PD-L1), 더발루맙(항-PD-L1), 또는 이의 단편 또는 변이체일 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 체크포인트 억제제는 CD27 억제제, CD28 억제제, CD40 억제제, CD122 억제제, CD137 억제제, OX40(CD134로도 알려짐) 억제제, GITR 억제제, ICOS 억제제, 또는 이의 임의의 조합 중 임의의 하나 이상일 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 체크포인트 억제제는 A2AR 억제제, B7-H3(CD276으로도 알려짐) 억제제, B7-H4(VTCN1로도 알려짐) 억제제, BTLA 억제제, IDO 억제제, KIR 억제제, LAG3 억제제, TIM-3 억제제, VISTA 억제제, 또는 이의 임의의 조합 중 임의의 하나 이상일 수 있다.
특정 구현예에서, 추가 치료제는 제2 면역치료제를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 면역치료제는 콜로니 자극 인자, 인터류킨, 면역억제 기능을 차단하는 항체(예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 항-CD28 항체, 항-CD3 항체, 항-PD-L1 항체, 항-TIGIT 항체), 면역 세포 기능을 향상시키는 항체(예를 들어, 항-GITR 항체, 항-OX-40 항체, 항-CD40 항체, 또는 항-4-1BB 항체), toll-유사 수용체(예를 들어, TLR4, TLR7, TLR9), 가용성 리간드(예를 들어, GITRL, GITRL-Fc, OX-40L, OX-40L-Fc, CD40L, CD40L-Fc, 4-1BB 리간드, 또는 4-1BB 리간드-Fc), 또는 B7 패밀리의 구성원(예를 들어, CD80, CD86)을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 추가 면역치료제는 CTLA-4, CD28, CD3, PD-L1, TIGIT, GITR, OX-40, CD-40, 또는 4-1BB를 표적한다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 추가 면역 체크포인트 억제제이다. 본원에 사용된 바와 같이, "면역 체크포인트 억제제"는 면역 체크포인트 단백질의 활성을 억제하는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-CD28 항체, 항-TIGIT 항체, 항-LAG3 항체, 항-TIM3 항체, 항-GITR 항체, 항-4-1BB 항체, 또는 항-OX-40 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 항-TIGIT 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 BMS935559(MDX-1105), 아텍솔리주맙(MPDL3280A), 더발루맙(MEDI4736), 및 아벨루맙(MSB0010718C)으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-PD-L1 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 이필리무맙(YERVOY) 및 트레멜리무맙으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-CTLA-4 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 BMS-986016 및 LAG525로 이루어진 군으로부터 선택된 항-LAG-3 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 MEDI6469, MEDI0562, 및 MOXR0916으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-OX-40 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 PF-05082566으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-4-1BB 항체이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 변형된 면역 효과기 세포는 사이토카인, 아드레노메듈린(AM), 안지오포이에틴(Ang), BMP, BDNF, EGF, 에리트로포이에틴(EPO), FGF, GDNF, 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF), 줄기 세포 인자(SCF), GDF9, HGF, HDGF, IGF, 이동-자극 인자, 미오스타틴(GDF-8), NGF, 뉴로트로핀, PDGF, 트롬보포이에틴, TGF-α, TGF-β, TNF-α, VEGF, PlGF, 감마-IFN, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, 및 IL-18로 이루어진 군으로부터 선택된 생물학적 분자와 조합하여 투여될 수 있다.
XVI. 개인맞춤형 요법
구현예에서, 본 발명은 대상체에서 항원의 과발현과 연관된 질환 또는 장애의 검출을 수반한다. 검출 방법은 a) 대상체로부터의 샘플을 본원에 기재된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편 중 하나 이상과 접촉시키는 단계; 및 b) 질환이 없는 대조군 샘플에 대한 이러한 결합과 비교하여 샘플에 대한 항체 또는 이의 단편의 증가된 결합 수준을 검출하여, 대상체에서 질환을 검출하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 질환은 암이다. 이러한 특정 구현예에서, 암은 난소암 및 유방암의 군으로부터 선택된다. 검출 방법을 제한하려는 의도는 아니지만, 일 구현예에서 결합의 검출은 면역조직화학적이며, 예를 들어 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), 형광 활성화 세포 분류(FACS), 웨스턴 블롯, 면역침전, 및/또는 방사선 영상화에 의해서이다.
본 발명의 구현예에서, 수집 접근법은 암 환자를 포함하는 환자를 위한 개인맞춤형 세포 요법 환경을 변환하는 데 사용된다. 접근법은 종양-연관 항원을 표적하기 위한 비바이러스 플라스미드 집합체의 개발되고 검증된 사용을 포함한다. 이러한 설계 및 제조 이점은 UltraPorator™ 전기천공 시스템의 역량과 결합된 유전적으로 변형된 세포의 생성을 위한 UltraCAR-T™ 기술의 사용을 포함한다. 이러한 방법, 화합물 및 조성물은 암 센터 및 의사가 개인맞춤형, 자가 유전적으로 변형된 세포 치료제를 암 환자에게 밤새 제조하여 전달할 수 있도록 지원하는 요법 및 치료 옵션을 허용한다. 환자의 암 적응증 및/또는 바이오마커 프로파일에 기반하여, 하나 이상의 비바이러스 플라스미드가 라이브러리로부터 선택되어 개인맞춤형 UltraCAR-T 세포 치료를 구축할 수 있다. 초기 치료 후, 이 접근법은 치료 반응 및 환자 종양의 항원 발현의 변화에 기반하여 동일하거나 새로운 종양 항원(들)을 표적하는 UltraCAR-T 세포의 재투여를 허용할 가능성이 있다. 진보된 UltraVectorTM DNA 구성 플랫폼 및 밤새 제조 용이성의 조합으로 이 라이브러리 접근법은 기존 T-세포 요법에 비해 유리하다.
본원에는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 또는 이를 포함하는 세포의 연속 투여를 포함하는 질환 또는 장애의 치료 방법이 제공된다. 질환 또는 장애는 예를 들어, 암 또는 자가면역 질환 또는 장애일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 바이러스 또는 비바이러스 벡터에 존재할 수 있다. 키메라 항원 수용체는 항원 표적 배열에 대한 상이한 구조적 조성 및 결합 특이성을 갖는 키메라 항원 수용체의 집합체로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체의 집합체는 다음 항원 중 적어도 하나를 표적하는 키메라 항원 수용체를 포함한다: BCMA, CAIX, CA125, CCR4, CD3, CD4, CD5, CD7, CD16, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD28, CD30, CD33, CD38, CD40, CD44, CD44v6, CD44v7/v8, CD47, CD52, CD56, CD70, CD79b, CD80, CD81, CD86, CD123, CD133, CD138, CD151, CD171, CD174, CD276, CEA, CEACAM6, CLL-1, c-MET, CS1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, EDB-F, EGFR, EGFR2, EGFRvIII, EGP-2, EGP-40, EphA2, FAP, FLT1, FLT4, 엽산-결합 단백질, 엽산 수용체, 엽산 수용체 α, α-엽산 수용체, Frizzled, GD2, GD3, GHR, GHRHR, GITR, GPC3, Gp100, gp130, HBV 항원, HER1, HER2, HER3, HER4, h5T4, HVEM, IGF1R, Ig카파, IL-1-RAP, IL-2R, IL6R, IL-11Rα, IL-13R-a2, KDR, KRASG12V, LewisA, LewisY, L1-CAM, LIFRP, LRP5, LTPR, MAGE-A, MAGE-A1, MAGE-A10, MAGE-A3, MAGEA3/A6, MAGE-A4, MAGE-A6, MART-1, MCAM, 메소텔린, PSCA, MUC1, MUC4 또는 MUC16과 같은 뮤신, NGFR, NKG2D, Notch-1-4, NY-ESO-1, O-아세틸GD2, O-아세틸GD3, OX40, P53, PD1, PDE10A, PD-L1, PD-L2, PRAME, PSMA, PTCH1, RANK, Robol, ROR1, ROR1R, ROR-2, TACI, TAG-72, TCRa, TCRp, TGF, TGF베타, TGF베타-II, TGFBR1, TGFBR2, Titin, TLR7, TLR9, TNFR1, TNFR2, TNFRSF4, TRBC1, TWEAK-R, VEGF, VEGF-R2, 및 WT-1. 특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체의 집합체는 다음 항원 중 적어도 하나를 표적하는 키메라 항원 수용체를 포함한다: B7H4, BCMA, BTLA, CA125, CAIX, CCR4, CD123, CD133, CD137, CD138, CD151, CD16, CD171, CD174, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD276, CD28, CD3, CD30, CD33, CD38, CD4, CD40, CD44, CD44v6, CD44v7/v8, CD47, CD5, CD52, CD56, CD7, CD70, CD79b, CD80, CD81, CD86, CEA, CEACAM6, CLL-1, c-MET, CS1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, EDB-F, EGFR, EGFR2, EGFRvIII, EGP-2, EGP-40, EphA2, HER1, HER2, HER3, HER4, FAP, FLT1, FLT4, 엽산 수용체 α, 엽산-결합 단백질, 엽산 수용체, Frizzled, GD2, GD3, GHR, GHRHR, GITR, Gp100, gp130, GPC3, h5T4, HBV 항원, HER1/HER3, HPV 항원, HVEM, IGF1R, Ig카파, IL-11Rα, IL-13R-α2, IL-1-RAP, IL-2R, IL6R, KDR, KRASG12V, L1-CAM, LewisA, LewisY, LIFRP, LRP5, LTPR, MAGE-A, MAGE-A1, MAGE-A10, MAGE-A3, MAGEA3/A6, MAGE-A4, MAGE-A6, MART-1, MCAM, 메소텔린, MUC1 및 MUC16과 같은 뮤신, NGFR, NKG2D, Notch 1-4, NY-ESO-1, O-아세틸GD2, O-아세틸GD3, OX40, P53, PD1, PDE10A, PD-L1, PD-L2, PMSA, PRAME, PSCA, PSMA, PTCH1, RANK, Robol, ROR1, ROR1R, ROR-2, TACI, TAG-72, TCRα, TCRp, TGF, TGFβ, TGFβ-II, TGFBR1, TGFBR2, Titin, TLR7, TLR9, TNFR1, TNFR2, TNFRSF4, TRBC1, TWEAK-R, VEGF, VEGF-R2, 및 WT-1.
특정 구현예에서, 방법은 집합체로부터의 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 제1 투여 이어서 집합체로부터의 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 제2 투여를 포함하며, 여기서 제1 투여와 제2 투여 사이에 시간이 경과한다. 특정 구현예에서, 제1 투여에서 동일한 하나 이상의 CAR은 다시 투여된다. 다른 특정 구현예에서, 제2 투여에서 세포에 의해 발현되는 CAR 중 적어도 하나는 제1 투여에서의 CAR과 상이하다. 특정 구현예에서, 본 발명은 집합체로부터 선택된 CAR을 발현하는 세포의 3차, 4차, 5차, 6차, 7차, 8차, 9차, 10차, 또는 임의의 추가 차수의 투여를 포함하며, 여기서 각각의 후속 투여 차수에서 이전 치료 차수에 투여되지 않은 상이한 CAR이 투여된다.
특정 구현예에서, 세포의 용량은 자가이다. 특정 구현예에서, 세포의 용량은 동종이계이다. 특정 구현예에서, 세포의 하나의 용량은 자가이고 또 다른 용량은 동종이계이다.
특정 구현예에서, CAR 또는 CAR들의 2차 또는 후속 투여 전에, 이전 투여에서 하나 이상의 CAR의 생물학적 또는 치료적 활성이 피크 생물학적 또는 치료적 활성으로부터 감소되거나, 무시할 수 있게 되거나 검출되지 않게 되기에 충분한 시간이 경과되게 한다. 특정 구현예에서, CAR의 후속 투여는 CAR의 이전 투여 후 적어도 1 일 후에 발생한다.
CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 바이러스 형질도입, 비바이러스 형질감염 또는 전기천공 전달 방법에 의해 대상체의 세포로 도입될 수 있다.
특정 구현예에서, CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 것들과 같은 벡터의 일부로서 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, CAR을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드는 이전에 기재된 바와 같은 사이토카인, 세포 태그, 및/또는 유전자 스위치를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 벡터는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 및 사이토카인, 세포 태그, 및/또는 유전자 스위치를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
특정 구현예에서, 벡터는 "규제 승인 벡터"이며, 규제 당국, 국가, 초국가적(예를 들어, 미국 식품의약국(FDA), 유럽 집행위원회 또는 EU 이사회), 지역, 주 또는 지역 규제 기관, 부서, 국(bureau), 위원회, 이사회 또는 다른 정부 단체에 의해 승인되었음을 의미하며, 여기서 이러한 승인은 규제 관할 구역에서 벡터의 제조, 유통, 사용 또는 판매에 필요하거나 충분하다. 특정 구현예에서, 이러한 "규제 승인 벡터"는 최소한 규제 관할 구역에서 인간 임상 안전성 시험(때때로 "1상 임상 시험"으로 언급됨)에 사용하기 위해 승인된 벡터를 의미한다. "임상 안전성" 또는 "1상" 시험은 테스트 물품과 연관된 부작용의 분석을 위해 적어도 안전성을 평가하고, 임의적으로 안전성 및 투여량을 평가하고, 임의적으로 다양한 투여량과 관련하여 부작용을 평가하는 시험을 의미한다. 특정 구현예에서, "규제 승인 벡터"는 최소한, "2상" 연구에서 사용하기 위해 승인된 벡터를 의미한다. "2상" 연구는 테스트 물품이 개발된 질환, 장애 또는 병태가 있는 더 큰 환자 그룹(전형적으로 최대 수백 명)의 평가를 위해 테스트 물품을 (더 작은 1상 대상체 그룹과 비교하여) 더 큰 인간 대상체 그룹에게 투여하여, 초기에 효과를 평가하고 안전성을 추가로 연구하는 것이다. 특정 구현예에서, 2상 연구는 위험을 최소화하면서, 이익을 최대화하기 위한 테스트 물품의 최적 용량 또는 용량들을 평가하는 것이다. 특정 구현예에서, "규제 승인 벡터"는 최소한, "3상" 연구에 사용하기 위해 승인된 벡터를 의미한다. 3상 연구(때때로 "중추 시험"으로 언급됨)는 전형적으로 테스트 항목을 사용하도록 의도된 환자 집단으로부터 약 300 내지 3,000 명의 참가자를 참여시킨다. 3상 연구에서 참가자는 전형적으로 테스트 물품 또는 위약(치료 효과가 없는 물질)을 받도록 할당된다. 3상 연구는 테스트 물품이 특이적 집단에 치료 이점을 제공하는지 여부를 입증하고 보다 상세한 안전성 데이터를 제공하고, 테스트 물품이 사용될 수 있는 질환 또는 병태와 관련하여 제품 라벨링에 대한 기초로서 제공되도록 의도된다. 특정 구현예에서, "규제 승인 벡터"는 규제 관할 구역에서 규제 당국에 의해 인간에서 질환, 장애 또는 병태의 치료를 위한 상업적 제조, 사용 또는 판매에 대해 승인된 벡터를 의미한다(예를 들어, 미국에서 제조, 사용 또는 판매에 대한 미국 FDA의 승인). 특정 구현예에서, "규제 승인 벡터"는 규제 승인 렌티바이러스 벡터, 규제 승인 레트로바이러스 벡터, 또는 규제 승인 비바이러스 벡터이다. 일부 구현예에서, 규제 승인 벡터는 잠자는 숲속의 미녀 벡터인 비바이러스 벡터이다.
특정 구현예에서, 규제 당국은 다음으로부터 선택된 국가에서 의약품, 생물제제, 또는 다른 의학 또는 의학적 치료의 승인을 관장한다: 아랍에미리트 연합국, 앤티카 바부다, 알바니아, 아르메니아, 앙골라, 오스트리아, 호주, 아제르바이잔, 보스니아 헤르체고비나, 바베이도스, 벨기에, 부르키나 파소, 불가리아, 바레인, 베냉, 브루나이, 브라질, 보츠와나, 벨라루스, 벨리즈, 캐나다, 중앙아프리카 공화국, 콩고, 스위스, 코트디부아르, 칠레, 카메룬, 중국(중화인민공화국(PCR)), 콜롬비아, 코스타리카, 쿠바, 키푸로스, 체코, 독일, 지부티, 덴마크, 도미니카, 도미니카 공화국, 알제리, 에콰도르, 에스토니아, 이집트, 스페인, 핀란드, 프랑스, 가봉, 영국, 그레나다, 조지아, 가나, 감비아, 기니, 적도 기니, 그리스, 과테말라, 기니비사우, 온두라스, 크로아티아, 헝가리, 인도네시아, 아일렌드, 이스라엘, 인도, 이란(이슬람 공화국), 아이슬란드, 이탈리아, 요르단, 일본, 케냐, 키르기스스탄, 캄보디아, 코모로, 세인트키츠 네비스, 조선민주주의인민공화국, 대한민국, 쿠웨이트, 카자흐스탄, 라오스, 세인트루시아, 리히텐슈타인, 스리랑카, 라이베리아, 레소토, 리투아니아, 룩셈부르크, 라트비아, 리비아, 모로코, 모나코, 몰도바 공화국, 몬테네그로, 마다가스카르, 북마케도니아, 말리, 몽골, 모리타니, 몰타, 말라위, 멕시코, 말레이시아, 모잠비크, 나미비아, 니제르, 나이지리아, 니카라과, 네덜란드, 노르웨이, 뉴질랜드, 오만, 파나마, 페루, 파푸아뉴기니, 필리핀, 폴란드, 포르투칼, 카타르, 루마니아, 세르비아, 러시아, 르완다, 사우디아라비아, 세이셸, 수단, 스웨덴, 싱가포르, 슬로베니아, 슬로바키아, 시에라리온, 산마리노, 세네갈, 상투메 프린시페, 엘살바도르, 시리아, 에스와티니, 차드, 토고, 태국, 타지키스탄, 투르크메니스탄, 튀니지, 터키, 트리니다드 토바고, 탄자니아, 우크라이나, 우간다, 미국, 우즈베키스탄, 세인트빈센트 그레나딘, 베트남, 사모아, 남아프리카, 잠비아, 짐바브웨, 아프가니스탄, 안도라, ARIPO, 방글라데시, 볼리비아, 케이맨 제도, 에티오피아, 피지, 지브롤터, 괌, 아이티, 이라크, 레바논, 마르티니크, 미크로네시아, 미크로네시아 연방, 나우루, OAPI, 팔레스타인 영토, 자치구(가자), 핏케언 제도, 생바르텔레미, 소말리아, 대만, 통가, 바누아투, 예멘, 올란드 제도, 앵귈라, 아루바, 버뮤다, 부룬디, 콩고(민주공화국), 유라시아 특허 기구, 프랑스령 기아나, 그린란드, 건지, 교황청(바티칸), 자메이카, 마카오, 모리셔스, 몬세라트, 네팔, 파키스탄, 팔레스타인 영토, 자치구(웨스트 뱅크), 푸에르토리코, 세인트헬레나, 남수단, 동티모르, 투발루, 베네수엘라, 아메리칸사모아, 아르헨티나, 바하마, 부탄, 카보베르데, 에리트레아, 유럽 연합, 프랑스령 폴리네시아, 과들루프, 가이아나, 홍콩, 키리바시, 몰디브, 마요트, 미얀마, 뉴칼레도니아, 팔라우, 파라과이, 레위니옹, 생피에르 미클롱, 수리남, 토켈라우, 우르과이, 및 서사하라.
특정 구현예에서, 규제 당국은 다음과 같은 다국적 조직으로부터 선택된다: 세계보건기구(World Health Organization), 범미보건기구(Pan-American Health Organization), 세계무역기구(WTO), 국제의약품규제조화위원회(ICH), 및 세계지식재산권기구(WIPO); 및 국가 보건 당국, 예컨대, 아시아 태평양 지역에서, 호주 정부: 보건부(Department of Health and Ageing), 호주 정부: 의약품규제기관(TGA), 브루나이: 보건부(Ministry of Health), 중화인민공화국: 국가 식약품감독관리총국(State Food and Drug Administration), 중화인민공화국: 보건부(Ministry of Health), 중화인민공화국: 국가약품감독관리국(National Medical Products Administration), 중화인민공화국: 약품생물제품검정소(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products), 중화인민공화국: 농업부(Ministry of Agriculture), 피지: 보건부(Ministry of Health), 홍콩: 위생서(Department of Health), 인도: 소비유통부(Ministry of Consumer Affairs, Food & Public Distribution), 인도: 중앙의약품표준관리기구(CDSCO), 인도: 소비자부(Ministry of Food and Consumer Affairs), 인도네시아: 보건부(Ministry of Health), 일본: 후생노동성(Ministry of Health, Labor and Welfare), 일본: 의약품의료기기종합기구(Pharmaceuticals and Medical Devices Evaluation Agency), 한국: 식품의약품안전처(Food and Drug Administration), 말레이시아: 보건부(Ministry of Health), 말레이시아: 국립의약품규제기관(National Pharmaceutical Regulatory Agency), 뉴질랜드: 보건부(Ministry of Health), 뉴질랜드: 의약품의료기기안전청(Medicines and Medical Devices Safety Authority), 뉴질랜드: 식품안전청(Food Safety Authority), 파푸아뉴기니: 보건부(Department of Health), 필리핀: 보건부(Department of Health), 필리핀: 식품관리청(National Food Authority), 싱가포르: 보건부(Ministry of Health), 싱가포르: 보건과학청(Health Sciences Authority), 스리랑카: 보건부(Ministry of Health), 대만: 보건부(Department of Health), 대만: 국립식품의약품연구소(National Laboratories of Foods and Drugs), 태국: 보건부(Ministry of Public Health), 태국: 식품의약품청(Food and Drug Administration), 태국: 농업협동조합부(Ministry of Agriculture and Co-operatives), 유럽에서, 유럽의약품기구(EMA), 유럽 위원회 에너지 총국: 동물용의약품(Medicinal Products for Veterinary Use), 안도라: 보건복지부(Ministry of Health and Welfare), 아르메니아: 보건부(Ministry of Health), 아르메니아: 의약품의료기술기관(Drug and Medical Technology Agency), 오스트리아: 보건부(Secretariat of Health), 벨기에: 보건식품안전환경부(Health, Food Chain Safety and Environment), 벨기에: 의약품감시청(Pharmaceutical Inspectorate), 벨기에: 연방식품안전청(Federal Agency for the Safety of the Food Chain), 불가리아: 보건부(Ministry of Health), 불가리아: 의약청(Drug Agency), 크로아티아: 보건사회복지부(Ministry of Health and Social Care), 체코: 보건부(Ministry of Health), 체코: 의약통제청(State Institute for Drug Control), 덴마크: 보건부(Ministry of Health), 덴마크: 의약품청(Danish Medicines Agency), 덴마크: 수의식품청(Veterinary and Food Administration), 에스토니아: 의약품관리국(State Agency of Medicines), 핀란드: 사회보건부(Ministry of Social Affairs and Health, Finnish Medicines Agency), 프랑스: 보건부(Ministry of Health), 프랑스: 국립수의의약품청(National Agency for Veterinary Medicinal Products), 조지아: 노동건강사회부(Ministry of Labor, Health and Social Affairs), 독일: 보건부(Ministry of Health), 독일: 연방의약품의료기기관기기관(Federal Institute for Drugs and Medical Devices), 독일: 로베르트 코흐 연구소(Robert Koch Institute), 독일: 파울 에를리히 연구소(Paul Ehrlich Institute), 독일: 연방위해평가원(Federal Institute for Risk Assessment), 독일: 농림식품부(Ministry of Consumer Protection, Food and Agriculture), 그리스: 보건사회연대부(Ministry of Health and Social Solidarity), 그리스: 식품의약청(National Organization for Medicines), 헝가리: 보건사회가족부(Ministry of Health, Social and Family Affairs), 헝가리: 식약청(National Institute of Pharmacy), 아이슬란드: 보건사회보장부 아이슬란드 의약품청(Ministry for Health and Social Security, Icelandic Medicines Agency), 아이슬란드: 환경청(The Environment Agency), 아일랜드: 보건아동부 아일랜드 의약품위원회(Department of Health and Children, Irish Medicines Board), 이탈리아: 보건부(Ministry of Health), 이탈리아: 국립보건연구소(National Institute of Health), 라트비아: 주립의약품청(State Agency of Medicines), 리투아니아: 보건부(Ministry of Health), 리투아니아: State Medicines Control Agency, 룩셈부르크: 보건부(Ministry of Health), 말타: 보건노인사회복지부(Ministry of Health, Elderly and Community Care), 네덜란드: 보건복지체육부(Ministry of Health, Welfare and Sport), 네덜란드: 의약품평가이사회(Medicines Evaluation Board), 네덜란드: 의약품실사상호협력기구(Inspectorate for Health Protection and Veterinary Public Health), 노르웨이: 보건부(Ministry of Health and Care Services), 노르웨이: 보건국(Norwegian Board of Health Supervision), 노르웨이: 의약품청(Norwegian Medicines Agency), 노르웨이: 농림식품부(Ministry of Agriculture and Food), 폴란드: 보건사회보장부(Ministry of Health and Social Security), 폴란드: 약물연구소(Drug Institute), 포르투갈: 보건부(Ministry of Health), 포르투갈: 의약품규제협회(National Authority of Medicines and Health Products), 루마니아: 보건가족부(Ministry of Health and the Family), 러시아: 의약품 전문가 평가를 위한 과학 센터(Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products), 러시아: 주립약물우수관행연구소(State Institute of Drugs and Good Practices), 산마리노, 보건사회보장부 국민보험 양성평등부(Ministry of Health and Social Security, National Insurance and Gender Equality)(이탈리아어), 슬로바키아: 보건부(Ministry of Health), 슬로바키아: 주립의약품관리소(State Institute for Drug Control), 슬로바키아: 가축식품안전청(State Veterinary and Food Administration), 슬로베니아: 보건부(Ministry of Health), 슬로베니아: 공중보건연구소(Institute of Public Health), 스페인: 보건부(Ministry of Health and Consumption; Spanish Agency for Medicines and Health Products), 스웨덴: 의약청(Medical Products Agency), 스웨덴: 보건복지위원회(National Board of Health and Welfare), 스웨덴: 국립식품청(National Food Administration), 스위스: 연방공중보건청(Federal Office of Public Health), 스위스: 의료제품청(Agency for Therapeutic Products), 스위스: 수의사무국(Federal Veterinary Office), 터키: 보건부(Ministry of Health)(터키어), 우크라이나: 보건부(Ministry of Health), 영국: 보건부(Department of Health), 영국: 보건보호청(Health Protection Agency), 영국: 의약품규제청(MHRA), 영국: 국립생물표준통제연구원(National Institute for Biological Standards and Control), 영국: 수의약품부(Veterinary Medicines Directorate), 중동에서, 바레인: 보건부(Ministry of Health), 이스라엘: 보건부(Ministry of Health), 이스라엘: 산업통상노동부(Ministry of Industry, Trade and Labor), 요르단: 보건부(Ministry of Health), 레바논: 보건부(Ministry of Public Health), 팔레스타인 자치정부: 보건부(Ministry of Health), 사우디 아라비아: 보건부(Ministry of Health), 아랍에미리트 연합국: 보건부(Ministry of Health), 아랍에미리트 연합국: 연방약품부(Federal Department of Pharmacies), 예멘: 보건인구부(Ministry of Public Health & Population), 아프리카에서, 베냉: 보건부(Ministry of Health), 보츠와나: 보건부(Ministry of Health), 이집트: 농업개발부(Ministry of Agriculture and Land Reclamation), 가나: 보건부(Ministry of Health), 가나: 식품농업부(Ministry of Food and Agriculture), 케냐: 보건부(Ministry of Health), 몰디브: 보건부(Ministry of Health), 모리셔스: 보건부(Ministry of Health & Quality of Life), 모리셔스: 농업산업식품안전부(Ministry of Agro Industry and Food Security), 모로코: 보건부(Ministry of Public Health), 나미비아: 보건사회복지부(Ministry of Health and Social Services), 세네갈: 보건부(Ministry of Health and Prevention), 남아프리카 공화국: 보건부(Department of Health), 에스와티니: 보건사회복지부(Ministry of Health and Social Welfare), 탄자니아: 보건부(Ministry of Health), 튀니지: 보건국(Ministry of Public Health), 튀니지: 의약품국(Office of Pharmacy and Medicines,) 우간다: 보건부(Ministry of Health), 짐바브웨: 보건아동복지부(Ministry of Health and Child Welfare), 및 아메리카에서, 아르헨티나: 보건부(Ministry of Health), 아르헨티나: 국립의약식품의료기술청(National Administration of Drugs, Foods and Medical Technology), 벨리즈: 보건부(Ministry of Health), 볼리비아: 보건사회복지부(Ministry of Health and Social Welfare), 브라질: 보건부(Ministry of Health), 브라질: 국립보건감시원(National Health Surveillance Agency), 브라질: 오즈와우두 크루스 재단(Fundacao Oswaldo Cruz), 캐나다: 보건성(Health Canad), 캐나다: 시판후 조사국(Health Products and Food Branch), 칠레: 보건부(Health Ministry), 칠레: 공중보건원(Institute of Public Health), 콜롬비아: 보건부(Ministry of Health), 콜롬비아: INVIMA 식품의약안전청(Instituto Nacional de Vigilancia de Medicamentos y Alimentos), 코스타리카: 보건부(Ministry of Health), 도미니카 공화국: 농업부(Ministry of Agriculture), 에콰도르: 보건부(Ministry of Public Health), 엘살바도르: 공중보건사회지원부(Ministry of Public Health and Social Assistance), 엘살바도르: 농업부(Ministry of Agriculture), 과테말라: 보건부(Ministry of Health), 가이아나: 보건부(Ministry of Health), 가이아나: 국립표준국(National Bureau of Standards), 자메이카: 보건부(Ministry of Health), 멕시코: 보건부(Ministry of Health), 멕시코: 연방위생보호위원회(Federal Commission for the Protection Against Sanitary Risks), 네덜란드령 안틸레스: 공중보건환경보호국(Department of Public Health and Environmental Protection), 니카라과: 보건부(Ministry of Health), 파나바: 보건부(Ministry of Health), 페루: 보건부(Ministry of Health), 페루: 의약품총국(General Directorate of Medicines, Supplies and Drugs), 세인트루시아: 농림수산부(Ministry of Agriculture, Lands Forestry and Fisheries), 트리니다드 토바고: 보건부(Ministry of Health), 트리니다드 토바고: 표준국(Bureau of Standards, 미국(USA/U.S.): 식품의약국(FDA), 우루과이: 보건부(Ministry of Public Health), 및 베네수엘라: 보건사회개발부(Ministry of Health and Social Development). 다른 예시적인 규제 당국은 https://iaocr.com/clinical-research-regulations/regulatory-authority-links/ 및 https://www.pda.org/scientific-and-regulatory-resources/global-regulatory-authority-websites에서 찾을 수 있다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 CAR을 발현하는 세포는 지속적인 생체외 확장을 위해 단리되고/되거나 향후 사용을 위해 동결보존된다.
본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 키메라 항원 수용체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 CAR을 암호화하는 제1 벡터 및 상기 기재된 바와 같은 CAR을 암호화하는 제2 벡터를 포함하는 키트에 관한 것이다.
실시예
이들 실시예는 예시적 목적만을 위해 제공되며 본원에 제공된 청구범위의 범위를 제한하지 않는다. 하기 표는 실시예에만 적용되는 약어 및 특수 용어를 포함한다. 이러한 약어 및 특수 용어는 달리 제한하지 않으며, 청구범위에 계속 적용될 상기 제시된 더 넓은 정의를 대체하지도 좁히지도 않는다.
표 9: 실시예에서 사용하기 위한 약어 및 특수 용어
실시예 1. PD1 모듈 설계
miRNA-발현 ROR1 UltraCAR-T 세포의 PD1-침묵 모듈은 다른 내인성 전사체의 표적외 침묵을 피하면서 UltraCAR-T 세포 내에서 PD-1 mRNA의 발현을 특이적으로 감소시키도록 설계된 2 개의 인공 miRNA를 암호화한다. miRNA-발현 ROR1 UltraCAR-T 세포의 2 개의 인공 miRNA는 UltraCAR-T 이식유전자 카세트의 5' UTR 스플라이스 단위 내에 배치된 이중 1차 miRNA(프리-miRNA) 서열 내에서 암호화된다(도 1b). 이중 프리-miRNA는 PD1 표적 전사체 내에서 특이적 서열에 상동인 2 개의 고유한 21-24 개 뉴클레오티드 성숙 가이드 miRNA를 생성하기 위해 세포 복합체에 의해 인식되고 처리되는 줄기-루프 구조를 형성한다. 가이드 miRNA와 PD1 표적 서열의 상호작용은 RNA 분해 유도 또는 번역 억제에 의해 PD1의 침묵을 촉발할 것으로 예상된다(Guo 등, 2010).
miRNA-발현 ROR1 UltraCAR-T 세포 내에서 암호화된 가이드 miRNA를 3가지 검증된 규칙-기반 siRNA 예측 알고리즘에 기반한 21 개의 순위 매개변수의 조합을 사용하여 내부적으로 설계된 계산적 작업흐름의 구현에 의해 PD1 표적 전사체 NM_005018.3에 매우 특이적이도록 설계하였다(Amarzguioui and Prydz, 2004; Reynolds 등, 2004; Ui-Tei 등, 2004). 성숙 miRNA가 PD1 표적 유전자에 매우 특이적임을 보장하기 위해 인간 참조 엑솜(RefSeq) 및 활성화된 T-세포 전사체(Zhao 등, 2014)에 대해 다단계 특이성 프로파일링을 수행하였다. 비-PD1 표적화 패신저 가닥 miRNA에 의한 표적외 침묵 위험을 추가로 감소시키기 위해, 높은 비율의 가이드:패신저 miRNA를 생성하는 프리-miRNA 스캐폴드를 선택하였다(Miniarikova 등, 2016). PD1-표적화 가이드 miRNA PD1_1843을 인간 miRNA hsa-miR-204(수탁 번호 MI0000284)에 기반한 프리-miRNA 스캐폴드로 혼입한 반면 PD1_2061 가이드 miRNA를 hsa-miR-206(수탁 번호 MI0000490) 스캐폴드로 혼입하였다. 특이적 miRNA 구조가 유지되고 열역학적 안정성이 실질적으로 변경되지 않았음을 보장하기 위해 각 프리-miRNA의 패신저 가닥 측에 돌연변이를 생성하였다. CLC Main Workbench 소프트웨어를 사용하여 RNA 구조를 예측하였다. PD1 침묵 모듈은 CAR-T 이식유전자 발현 카세트의 5' UTR의 합성 스플라이스 단위 내에서 miR206 PD1_2061 프리-miRNA의 바로 상류에 배치된 miR204 PD1_1843 프리-miRNA를 함유한다. 스플라이스 단위는 IDT로부터 gBlock으로 주문하였고 잠자는 숲속의 미녀 CAR 벡터로 클로닝할 수 있고 임의의 다른 잠자는 숲속의 미녀 CAR 벡터의 5'UTR로 클로닝하기 위해 ClaI/NheI를 사용하여 절단할 수 있다.
실시예 2. miRNA에 의한 PD1 전사체 발현의 감소
1차 인간 T 세포를 표 10에 나열된 작제물로 형질감염시키고 큰 배치에서 성장시킨 다음 분취량으로 동결시킨 동족 항원을 발현하는 AaPC 세포를 사용하여 시험관내에서 확장하였다. 그런 다음 생성된 CAR-T 세포를 RNA 단리를 위한 세포를 수확하기 전에 48 시간 동안 1:1의 비드:T 세포 비율 및 1 x 106 개의 T 세포/mL로 항-CD3/항-CD28을 사용하여 추가로 활성화시켰다. 제조업체의 권장된 프로토콜(Qiagen)에 따라 RNA 단리를 수행한 다음 ezDNase(Invitrogen)가 포함된 SuperScript VILO Master Mix 및 qPCR용 TaqMan FAST Advanced 마스터 믹스를 사용한 RT-qPCR 분석에 적용하여 특이적 프라이머/프로브(인간 PD1: Hs00169472_m1; 인간 TIGIT: Hs00545087_m1; 및 인간 ACTb: Hs99999903_m1)를 사용하여 PD-1 발현 수준을 평가하였다. 모든 샘플을 또한 베타-액틴 발현 수준으로 정규화하였다. 상대 발현 값은 작제물 #1(MUC16 CAR-T 세포 단독)에 대해 정규화함으로써 ΔΔCT 방법에 기반한다. 결과는 도 2에 제시되어 있다. 3 명의 공여자로부터의 평균 ± SD가 제시된다.
표 10: miRNA의 도 2 서열에서 활용된 작제물 1-8의 설명은 표 4에 기재된 바와 같다)
데이터는 의도된 서열을 표적화하는 PD-1 체크포인트 억제제 miRNA의 특이성을 입증한다. mbIL-15를 발현하는 않은 CAR 작제물(작제물 #8)과 함께 스크램블 miRNA를 발현한 CAR 작제물(작제물 2 및 3)은 PD-1 발현의 임의의 감소를 나타내지 않았던 반면, PD-1 miRNA(작제물 4) 또는 PD-1 및 TIGIT miRNA의 조합(작제물 6 및 7)을 함유하는 CAR 작제물은 PD-1 발현의 감소를 나타내었다. 반면에, TIGIT miRNA 서열만을 함유하는 CAR 작제물(작제물 5)은 PD-1 mRNA 발현 수준의 임의의 감소를 나타내지 않았으며, 추가로 표적화의 특이성을 입증한다.
실시예 3. 표적화된 mRNA의 하향조절
1차 인간 T 세포를 CD33-특이적 CAR을 암호화하는 벡터 또는 MUC16-특이적 CAR을 암호화하는 벡터로 형질감염시켰다. 벡터는 PD-1, PD-1 및/또는 TIGIT를 표적하는 miRNA 서열을 함유하는 합성 인트론 또는 비-표적화 스크램블 대조군 miRNA를 포함한다. T 세포 배양물을 CD33 또는 MUC16 + 다른 공자극 분자("클론 1"에 기반함)를 1:1(AaPC:T 세포)의 비율로 발현하도록 변형된 K562 세포인 동족 종양 항원을 갖는 항원 제시 세포를 사용하여 시험관내 확장하였다. 그런 다음 생성된 CAR+ 세포를 48 시간 동안 사이토카인의 부재 하에 항-CD3/항-CD28 비드(1:1 비드:T 세포 비율)로 자극하였다. RNA를 제조업체의 프로토콜에 따라 Qiagen 키트(AllPrep Universal DNA/RNA/miRNA 키트 #80224)를 사용하여 단리하고 Nanostring의 Human PanCancer Immune 유전자 세트 패널 키트에 활용하였다. 간단히 말해서, RNA를 포획 및 리포터 프로브 세트와 혼성화한 다음 처리된 샘플을 nCounter Prep Station을 사용하여 슬라이드에 혼성화하고 전사체 카운트를 제조업체의 프로토콜에 따라 nCounter Digital Analyzer에 의해 생성하였다. 데이터 검증, QC 및 정규화는 nSolver 소프트웨어(Nanostring Technologies)에 의해 수행하였다.
샘플이 동일한 경우 그래프에서 전사체 카운트 데이터의 분포는 기울기가 1인 선(왼쪽 아래에서 오른쪽 위 모서리까지)이 된다. 이 선에서 떨어지는 데이터 포인트는 2 개 샘플 사이의 전사체 카운트의 변동을 나타낸다. 주요 선 아래에서 발견된 카운트는 감소된 발현을 나타내는 반면 주요 선 위의 카운트는 비교되는 샘플에 대한 증가된 발현을 나타낸다. CAR-T 세포에서 발현되는 PD-1 또는 TIGIT인 miRNA에 의해 표적화된 전사체는 구체적으로 miRNA가 없는 CAR-T 세포와 비교하여 각각의 표적화된 유전자의 전사체의 더 낮은 발현을 나타내었다. 도 3a-b 참조. 게다가, 표적화의 특이성을 추가로 입증하기 위해, 스크램블 대조군 miRNA가 있는 CAR-T 세포는 PD-1 또는 TIGIT의 전사체 수준의 변동이 없었는 데, 이 그래프에서 데이터 분포가 전사체 수준에서 변동이 거의 없음을 나타내는 대각선에 가깝게 유지되었기 때문이다. 도 3c 참조. PD-1, PD-1 및/또는 TIGIT를 표적하는 miRNA 서열을 함유하는 합성 인트론을 포함하는 MUC16 CAR 벡터로 형질감염된 T 세포에서 유사한 결과를 관찰하였다(도 4a-c 참조).
실시예 4. miRNA MUC16 CAR-T 세포의 종양 세포 세포독성 효과의 향상
1차 인간 T 세포를 MUC16-특이적 CAR을 암호화하는 벡터 및 PD-1 전사체 내에서 2 개의 서열을 표적하는 miRNA 서열, 또는 MUC16-특이적 CAR을 암호화하지만 miRNA를 암호화하지 않는 벡터로 형질감염시켰다. 이 검정에서 사용되는 CAR-T 세포를 시험관내 확장하고, CAR 발현에 대해 정규화한 다음 MUC16을 발현하는 GFP+ K562 세포("종양 세포")를 96 웰 플레이트에 3:1 E:T 비율로 삼중으로 시딩하였다. 플레이트를 IncuCyteS3 기기로 로딩하고 웰 당 4 개의 이미지를 7 일 동안 2 시간마다 촬영하였다. IncuCyte Software를 사용하여 데이터를 분석하고 GFP+ 세포 카운트/이미지를 0 시간 시점으로 정규화하였다.
결과물 검정은 배양물에서 7 일 과정에 걸쳐 CAR-T 세포의 존재 또는 부재 하에 표적 세포 성장 속도를 결정한다. CAR-T 세포를 함유하는 배양물에서 더 낮은 표적 세포 카운트는 CAR-T 세포용해 활성을 나타낸다. 도 5a는 종양 표적 세포 단독(채원진 검은색 원)과 MUC16-특이적 CAR만을 발현하는 세포(열린 사각형) 사이의 차이를 도시하며, 이는 MUC16 CAR-T 세포의 사멸 능력을 입증한다. PD-1을 표적하는 miRNA를 추가로 발현하는 세포(채원진 회색 원)는 MUC16 특이적 CAR만을 발현하는 세포(개방 사각형)와 비교하여, 시간 경과 평가에 걸쳐 지속된 낮는 GFP+ 카운트에 기반하여, 개선된 세포용해 활성을 추가로 입증한다. 이 데이터는 PD-1 표적화 miRNA를 함유하는 CAR-T 세포의 향상된 세포용해 활성을 입증한다.
MUC16, PD-L1, 및 CD155를 발현하는 GFP+ K562 세포를 활용하여 유사한 실험을 수행하였다. 도 5b에 나타낸 바와 같이, 종양 표적 세포 단독(채워진 사각형)과 CAR만을 발현하는 세포(개방 원) 사이의 차이는 MUC16 CAR-T 세포의 사멸 능력을 입증한다. PD-1 및 TIGIT를 모두 표적하는 miRNA를 혼입한 CAR-T 세포(채원진 원)는 MUC16 CAR-T 세포 단독(채원진 원)과 비교하여, 시간 경과 평가에 걸쳐 지속된 낮은 GFP+ 카운트에 기반하여, 개선된 세포용해 활성을 추가로 입증한다. 이 데이터는 단일 작제물에서 3 개의 표적화 miRNA(PD-1에 대해 2 개 및 TIGIT에 대해 1 개)를 함유하는 CAR-T 세포의 향상된 세포용해 활성을 입증한다.
실시예 5. 사이토카인 발현 개선
1차 인간 T 세포를 MUC16-특이적 CAR을 암호화하지만 miRNA 표적화 서열은 암호화하지 않는 벡터, 및 MUC16-특이적 CAR 및 PD-1 및 TIGIT의 miRNA 표적화 서열의 단일 또는 조합을 암호화하는 벡터로 형질감염시켰다(표 11 참조). 시험관내 확장된 CAR-T 세포를 시험관내 확장하고, CAR 발현에 대해 정규화한 다음 절두된 MUC16을 발현하는 K562 종양 표적 세포 9MUC16t)를 1:1의 효과기 대 표적 비율로 96 웰 플레이트에 삼중으로 시딩하거나 CAR-T 세포를 배지 단독에 배양하였다. 3 일 동안 공배양 후 배양 상청액을 수집하였다. 배양 상청액을 수집하고 인터페론-감마(IFNγ) 및 과립구/대식세포-콜로니 자극 인자(GM-CSF)를 제조업체의 프로토콜에 따라 멀티플렉스 사이토카인 분석(Luminex)에 의해 평가하였다. 도 6에는 중복 웰의 평균 ± SD가 제시되어 있다.
CAR-T 세포의 경우 배지 단독에서 배양된 작제물은 기본 수준의 IFNγ 및 GM-CSF가 검출되었다. 표적 세포 또는 배지 단독을 사용한 경우 사이토카인이 관찰되지 않았다. MUC16 CAR-T 세포 단독(벡터 1)과 종양 세포의 공배양 후 상청액은 IFNγ 및 GM-CSF의 발현 수준에 대한 기준선 값을 제공하였다. 체크포인트 억제제 miRNA를 CAR 작제물로 포함시키면, 특히 PD-1 경로를 통한 억제를 통해 개선된 사이토카인 발현이 관찰될 수 있다. 이중 PD-1(작제물 #3) 또는 단일 PD-1 및 TIGIT miRNA의 조합(작제물 #6) 또는 이중 PD-1 및 TIGIT miRNA(작제물 #10 및 11)가 함유된 작제물에서 더 높은 수준의 사이토카인 발현이 제공되었다.
표 11: 도 6a-d의 작제물 #1-11의 설명(miRNA의 서열은 표 4에 기재된 바와 같다)
실시예 6. 처리된 마우스에서 종양 부담
비-비만 당뇨병/중증 복합 면역결핍(NOD/SCID) 감마 마우스(NSG) 마우스에 0 일째에 MUCt를 발현하는 fLUC-GFP+ SK-OV-3 종양 세포를 복강내로 이식하였다. 종양 부담은 IVIS Spectrum 기기(Perkin Elmer)를 사용한 발광에 의해 생체내 이미징 시스템(IVIS)을 사용하여 연구 전반에 걸쳐 이들 마우스에서 모니터링하였다. IVIS 데이터는 총 플럭스 값(광자/초)을 수득하기 위해 정의된 관심 영역에 기반하여 Living Image Software(버전 4.1)를 사용하여 분석하였다. CAR-T 세포의 투여 전에, 마우스를 종양 부담 및 체중에 기반하여 상이한 그룹으로 무작위 배정한 다음 6 일째에 테스트 물품을 투여하였다 테스트된 모든 CAR은 mbIL15 및 HER1t와 함께 MUC16-특이적 CAR을 발현하였고 MUC16 CAR로 언급된다. 모든 테스트 물품을 0.5x106 개의 CAR-T 세포/마우스로 정규화하고 복강내로 투여하였다. IVIS 이미징을 주 당 2 회 수행하여 마우스에서 전반적인 종양 부담을 모니터링하였다. 제시된 데이터는 그룹 당 n=4-8 마리 마우스의 평균±SEM이다.
도 7에 제시된 바와 같이, 식염수만 주어진 마우스(회색으로 채워진 원)는 연구 과정 전반에 걸쳐 관찰된 증가하는 총 플럭스 수준에 의해 입증된 바와 같이 지속적인 종양 성장을 가졌다. 결국, 이들 마우스는 종양 부담에 굴복하였고 안락사시켰다. MUC16 CAR만 주어진 마우스(검은색으로 채워진 사각형)는 종양 부담을 제어할 수 있었다. 작제물 내에서 PD-1 및 TIGIT에 대한 체크포인트 억제제 miRNA를 발현하는 CAR-T 세포(열린 사각형 및 원)는 배경 수준에 대한 종양 플럭스 값의 감소에 기반하여, 항-종양 활성을 유지하는 것으로 밝혀졌다. 게다가, PD-1 및 TIGIT에 대한 체크포인트 억제제 miRNA를 발현하는 CAR-T 세포는 MUC16 CAR 단독 작제물과 비교하여 더 빠른 시간 프레임 및 종양 부담 감소율을 나타내었다.
실시예 7. 생체내 표현형 실험
SKOV-3/MUC16 종양 보유 마우스에 연구 6 일째에 CAR 단독 또는 CAR과 PD-1/PD-1 miRNA의 CAR-T 세포(MUC16-특이적 CAR, mbIL15 및 HER1t 발현)를 투여하였다. 투여된 CAR-T 세포의 유세포 분석에 의한 표현형 평가를 위해 연구 31 일째에 마우스로부터 전혈을 취하였다. 간단히 말해서, 형광으로 접합된 항체의 칵테일을 사용하여 전혈 샘플을 염색한 다음 1-단계 Fix/Lyse 완충액을 사용하여 적혈구 용해와 함께 동시에 고정시켰다. 고정된 샘플을 유세포 분석기(BD LSRFortessaX-20) 기기에서 판독하였다. CAR-T 세포를 hCD45/CD3+/HER1t+ 발현의 게이팅에 기반하여 식별하였다. 도 8a에서, CAR 단독 샘플(점선)은 높은 PD-1 발현을 나타낸 반면, PD-1/PD-1 miRNA를 함유하는 CAR(실선)은 검출된 PD-1 발현 수준의 유의한 감소를 나타낸다. CAR+ miRNA(PD-1/PD-1) 그룹에서 검출된 PD-1의 감소된 발현을 추가로 정량화하기 위해, 중간 형광 강도(MFI)를 검사하였다(도 8b). CAR-T 세포만 주어진 마우스(줄무의 막대)에서 PD1 발현의 평균 MFI는 ~709였던 반면 PD-1/PD-1 miRNA를 함유하는 CAR-T 세포(속이 꽉 찬 막대)의 평균 MFI는 ~236까지 감소하였다. 5-8 마리 마우스의 평균 ± SEM이 제시된다.
실시예 8. 특이적 PD-1 및 TIGIT 하향조절
SKOV-3 종양 보유 마우스에 연구 6 일째에 CAR 단독 또는 CAR과 상이한 체크포인트 miRNA 억제제(PD-1 및 TIGIT)의 CAR-T 세포(MUC16-특이적 CAR("MUC16 CAR"), mbIL15 및 HER1t 발현)를 투여하였다. 표 12 참조.
표 12: 도 9a-b의 그룹 #1-9의 설명
투여된 CAR-T 세포의 유세포 분석에 의한 표현형 평가를 위해 마우스의 전혈을 연구 45 일째(D45)에 취하였다. 간단히 말해서, 인간 PD-1 및 인간 TIGIT에 대한 특이적 항체가 포함된 형광으로 접합된 항체의 칵테일을 사용하여 전혈 샘플을 염색한 다음 1 단계 Fix/Lyse 완충액을 사용하여 고정시켰다. 고정된 샘플을 유세포 분석기(BD LSRFortessaX-20) 기기에서 판독하였다. CAR-T 세포를 hCD45/CD3+/HER1t+ 발현의 게이팅에 기반하여 마우스에서 식별하였다. 체크포인트 억제제에 대한 CAR 벡터에서 사용된 miRNA의 특이성을 추가로 평가하기 위해, PD-1 및 TIGIT의 발현에 대한 중간 형광 강도(MFI)를 분석하였다(도9a 및 b). 동일한 벡터 세트에 대한 발현 수준의 정량적 평가를 위해 PD-1에 대한 MFI는 왼쪽에 제시되어 있고 TIGIT에 대한 MFI는 오른쪽에 제시되어 있다. 도 9a에 제시된 바와 같이, PD-1에 대한 감소된 발현은 CAR 벡터 단독과 비교할 때, PD-1 miRNA를 갖는 작제물(단일, 이중 또는 또 다른 miRNA 체크포인트 억제제와 조합)인, 아래쪽 화살표(PD-1에 대해 실선)로 표시된 그룹에 대한 CAR-T 세포에서 볼 수 있었다. 오른쪽(하향 실선 화살표)은 CAR-T 세포에서 보이는 TIGIT 발현의 감소된 발현을 갖는 세포 집단을 강조한다. TIGIT의 하향조절된 발현은 TIGIT에 대한 miRNA를 함유하는 샘플(단일 또는 다른 체크포인트 miRNA 억제제와 조합)에 상응하였다. 5-8 마리 마우스의 평균 ± SEM이 제시된다.
실시예 9. ROR1-표적화 CAR-T 세포에서 PD-1 표적화 miRNA의 발현.
간단히 말해서, miRNA-발현 ROR1 UltraCAR-T 세포 또는 대조군 ROR1 UltraCAR-T 세포를 5 명의 공여자로부터의 T 세포에서 생성하였다. 5 명의 건강한 공여자로부터의 PanT 세포를 표시된 트랜스포존 벡터(VVN-5355 또는 VVN-5351) + SB11 트랜스포사제 벡터로 형질감염시키고, ROR1 항원 제시 세포로 4 주 동안(비드 첨가 전 ~35일) 매주 자극하여 확장하였다. 7-8 일의 휴지기 후, UltraCAR-T 세포를 마지막 AaPC 자극 후 7-8 일인 RNA 수확 전 48 시간 동안 CD3/CD28 dynabeads(1:1 비드: T 세포 비율, 1 x 106 개 세포/mL의 T 세포)로 활성화시켰다. PD1-표적화 가이드 miRNA의 발현 및 PD1 mRNA 발현에 대한 영향을 RT-qPCR에 의해 검증하였다. 프리-miRNA로부터 발생할 수 있는 예측 및 대체 miRNA 서열을 식별하는 확립된 방법인 Small RNAseq(Borel 등, 2018; Miniarikova 등, 2016)를 수행하여 PD1 사일런서 모듈로부터 생성될 수 있는 패신저 miRNA와 같은 추가의 작은 RNA 종에 대한 PD1-표적화 가이드 miRNA의 발현 수준을 비교하였다. Small RNAseq를 또한 사용하여 전반적 내인성 miRNA 발현에 대한 잠재적 변화를 평가하였다(Mueller 등, 2012). RNAseq 분석을 수행하여 전반적 전사체 발현을 평가하고 PD1 사일런서에 기인한 분자 경로 신호전달 또는 표적외 유전자 침묵의 변화를 식별하였다. miRanda 알고리즘을 사용하여 인 실리코(In silico) miRNA 표적 예측을 수행하여 PD1 사일런서 모듈로부터 생성된 miRNA의 가장 가능성있는 표적을 식별하였다. 예측된 표적 유전자의 발현을 RNAseq에 의해 평가하였다. 각 방법의 세부사항은 하기 섹션에 포함되어 있다.
PD1 사일런서에 의해 암호화된 miRNA의 발현 및 PD1 전사체 수준에 대한 영향을 특성화하기 위해, RT-qPCR 및 small RNAseq를 수행하였다. 특이적 유전자 또는 세포 경로의 변화를 특성화하기 위해, RNAseq를 수행하였다.
핵산을 제조업체 프로토콜에 따라 Qiagen의 AllPrep DNA/RNA/miRNA Universal 키트(Cat#80224)를 사용하여 세포 펠릿으로부터 정제하였다. 총 RNA를 50uL 뉴클레아제-무함유 물에 용출시키고 NanodropTM 2000 분광 광도계에서 농도를 측정하였다.
PD1 가이드 및 패신저 miRNA의 발현을 정량화하기 위해, 총 RNA를 Qiagen의 miRCURY LNA RT Kit(#339340)를 사용하여 cDNA 합성을 위한 입력으로 사용하였다. 제조업체의 프로토콜에 따라, cDNA를 뉴클레아제-무함유 물과 1:60으로 희석하고 희석된 cDNA 3μL를 2 개의 PD1 가이드 miRNA에 특이적인 주문형 miRCURY LNA 프라이머와 함께 miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit(Qiagen # 339345)를 사용하여 qPCR을 위한 입력으로 사용하였다. hsa-let-7a-5p인 내인성 miRNA를 참조 작은 RNA로서 정량화하여 입력 정규화를 허용하였다(주문형 #YP00205727을 포함한 Qiagen 제품 #339306). 샘플을 QuantStudio 6 Flex 기기에서 384 웰 형식으로 실행하였다. 상대 정량화(dCT) 계산을 Microsoft Excel에서 수행하고 데이터를 GraphPad Prism 9에서 그래프로 작성하였다. dCT에 대한 계산을 다음과 같이 각 기술적 복제에 대해 수행하였다:
VVN-5355 ROR1 UltraCAR-T 대조군 샘플은 각 공여자 세트 내에서 miRNA 발현 ROR1 UltraCAR-T 세포와 비교하기 위한 참조 대조군 샘플로서 제공된다. 기술적 복제의 평균 배수 변화 및 표준 편차를 계산하고 도 10a에 보고하였다.
PD1 침묵 모듈에서 유래하는 가이드 및 패신저 miRNA의 생산을 정량화 및 비교하기 위해, 이 두번째 실험에 패신저 miRNA 뿐만 아니라 추가의 내인성 참조 작은 RNA인 RNU1A1을 검출하기 위한 프라이머 검정이 포함된 것을 제외하고, RT-qPCR을 상기 기재된 바와 같이 수행하였다. 발현 계산을 수행하여 다음과 같이 내인성 대조군 작은 RNA의 평균에 대한 각 가이드 또는 패신저 가닥 성숙 miRNA의 발현을 비교하였다:
평균 배수 변화를 3 회 기술적 복제로부터 계산하였다. 이들 값은 테스트된 공여자 샘플 세트에 대해 제시된 평균 및 표준 편차와 함께 도 11에 플롯팅된다.
내인성 PD1 mRNA의 발현을 정량화하기 위해, ezDNase 효소 키트(#11766050)와 함께 Invitrogen의 SuperScript IV VILO Master Mix를 사용하여 5ng/μL의 최종 RNA 농도를 사용하여 cDNA 합성을 수행하였다. 1 마이크로리터의 cDNA와 함께 Invitrogen의 TaqMan MastAdvanced Master Mix(#4444963) 및 Invitrogen(ThermoFisher Scientific) Taqman 검정을 사용하여 Multiplex Taqman qPCR을 수행하였다. 인간 PD1 Taqman 검정(Invitrogen# Hs00169472_m1)을 FAM 표지하였고 내부 정규화 유전자인 ACTb(Invitrogen# Hs99999903_m1)를 VIC-표지하였다. 샘플을 QuantStudio 6 Flex 기기에서 384 웰 형식으로 실행하였다. 상대 정량화(dCT) 계산을 상기 기재된 바와 같이 Microsoft Excel에서 수행하였고 데이터를 GraphPad Prism 9에서 그래프로 작성하였다.
표 13: 테스트 및 대조군 물품
PD1 사일런서 모듈은 PD1 발현을 침묵시키기 위해 PD1 전사체에 결합하는 2 개의 성숙 가이드 mRNA를 생성하도록 설계한다. PD1_1843 및 PD1_2061로 언급되는 2 개의 PD1-표적화 가이드 miRNA의 발현을 다중 공여자로부터 생성된 miRNA 발현 ROR1 UltraCAR-T 세포에서 확인하였다(도 10a). PD1 mRNA 발현에서 상응하는 감소를 테스트된 모든 공여자로부터의 miRNA-발현 ROR1 UltraCAR-T 세포에서 확인하였다(도 10b). 이 결과는 PD1 사일런서 모듈이 의도된 가이드 miRNA를 생성하고 설계된 대로 기능함을 입증하였다.
PD1 이외의 침묵 유전자의 위험을 감소시키기 위해, 비-표적화 패신저 miRNA에 비해 PD1-표적화 가이드 miRNA를 우선적으로 생성하는 프리-miRNA 스캐폴드를 사용하여 PD1 사일런서 모듈을 설계하였다. 가이드 및 패신저 성숙 miRNA를 모두 RT-qPCR에 의해 miRNA 발현 ROR1 UltraCAR-T 세포로부터 정량화하였으며, 이는 PD1 표적화 가이드 miRNA를 비-표적화 패신저 가닥 miRNA와 비교하여 우세한 종으로서 확인하였다(도 4). PD1 표적화된 가이드 miRNA에 대한 강한 처리 선호도를 small RNAseq에 의해 확인하였으며, 판독의 99.7%가 의도된 PD1 표적화 가이드 miRNA와 일치하는 PD1 사일런서 모듈에 맵핑된다(도 12 a-e). 또한, miRNA의 시작 및 정지 위치가 예상되었으며, 5' 단부에서 동일하고 3' 단부에서 가변 길이를 갖는 21-23 개의 뉴클레오티드의 miRNA가 검출되었다(도 12 a-e). 패신저 가닥 miRNA의 극단적으로 낮은 발생률 및 비정상적인 RNA 처리에 의해 생성된 예기치 않은 작은 RNA의 부족은 표적외 유전자 침묵에 대한 위험을 실질적으로 감소시켰다.
PD1 사일런서 모듈의 발현이 내부 세포 RNAi 기계를 압도하지 않는다는 것을 보장하기 위해, 내인성 miRNA 카운트를 miRNA 발현 ROR1 UltraCAR-T 세포 대 대조군 ROR1 UltraCAR-T 세포와 비교하였다. 상위 20 개의 발현된 내인성 miRNA의 검사는 샘플에 걸친 발현에서 통계적으로 유의한 변화가 없음을 입증하였다(표 15). 또한, PD1 사일런서 모듈로부터 생성된 성숙 miRNA는 모든 정량화된 작은 RNA의 대략 4%를 차지하였다(도 13). 데이터는 PD1 사일런서 모듈로부터 miRNA의 발현이 세포 RNAi 기계를 포화시키지 않았고 전반적 내인성 miRNA 발현에 검출가능한 영향을 미치지 않았음을 나타내었다.
표 14: 가이드 및 패신저 miRNA 카운트의 Small RNAseq 비교
표 15: Small RNAseq에 의해 검출된 상위 20 개의 발현된 내인성 성숙 miRNA
실시예 10: PD1 사일런서 모듈은 PD-1의 발현을 특이적으로 감소시킨다.
인 실리코 miRNA 표적 예측 알고리즘인 miRanda(Betel 등, 2008; Betel 등, 2010)를 사용하여 PD1 사일런서 모듈로부터 생성된 가이드 및 패신저 miRNA에 대한 가장 가능성 있는 표적 전사체를 예측하였다. 알고리즘은 각각의 잠재적 miRNA 표적 유전자에 대한 점수를 할당하였으며, 점수가 높을수록 입력 miRNA 서열에 의한 침묵 가능성이 높다는 것을 나타낸다. PD1 침묵 모듈로부터 생성된 각각의 성숙 miRNA에 대한 상위 10 개 히트(hit)의 요약이 표 16에 나열되어 있다. PD1은 임의의 가이드 및 패신저 miRNA에 대한 완벽한 상동성을 갖는 유일한 유전자이며 임의의 잠재적 표적 유전자의 가장 높은 예측된 miRanda 점수를 갖는다. 각각의 예측된 표적 유전자의 발현을 RNAseq 차등 발현 데이터 세트로부터 특성화하였다. PD1은 -2.63의 log2 배수 변화(LFC)(대조군 ROR1 CAR-T 세포와 비교하여 miRNA 발현 ROR1 UltraCAR-T 세포에서 ~84% PD1 감소) 및 매우 유의한 조정된 p-값으로 모든 예측된 표적 유전자 중 가장 하향조절되었다. 다른 예측된 표적 유전자의 발현은 변하지 않았으며; 0.05 미만의 조정된 p-값을 갖는 이들 유전자는 -0.33 내지 0.22의 범위에서 LFC를 가졌고, 이는 <20%의 발현 감소 또는 증가이다. 한 가지 예외는 -1.51의 LFC를 갖는 PD1_2061 가이드 miRNA의 약하게 예측된 표적 유전자인 HDAC9이다. HDAC9는 BCL6을 통해 PD1 발현에 기계적으로 연결된 전사 억제자이다(Xie 등, 2017; Gil 등, 2016). HDAC9는 PD1_2061 가이드 miRNA에 의해 직접 표적되지 않으며, HDAC9의 감소는 감소된 PD1 발현의 간접적 효과일 가능성이 있다.
표 16: 인 실리코 예측된 miRNA 표적 유전자
PD1 발현의 변화는 하류 경로에서 다른 유전자의 발현에 영향을 미칠 것으로 예상된다. 예상된 바와 같이, RNAseq 데이터의 분석은 대조군 ROR1 UltraCAR-T 세포와 비교하여 miRNA 발현 ROR1 UltraCAR-T 세포에서 여러 유전자의 차등 발현을 확인하였다(도 14 a 및 b, 표 17). 유전자 발현에서 직접 대 간접 변화를 설명하기 위해, 대조군 ROR1 CAR-T 세포와 비교하여 miRNA 발현 ROR1 UltraCAR-T 세포에서 차등 발현(LFC)을 잠재적 PD1 miRNA 표적으로서 인 실리코 예측된 유전자에 대한 PD1 miRNA의 예측된 결합 잠재력(예측된 자유 에너지)에 대해 플롯팅하였다(도 15 a-d). 자유 에너지가 매우 음수이고 통계적으로 유의한 발현 감소가 있는 유전자는 miRNA에 의해 직접 표적화될 가능성이 있는 반면, 자유 에너지가 약한 하향조절된 유전자는 miRNA에 의해 간접적으로 영향을 받을 가능성이 있다. PD1은 강한 발현 감소 및 높은 miRNA 결합 잠재력으로 플롯의 모든 다른 유전자로부터 명백하게 분리되며, 이는 PD1 사일런서 miRNA에 의해 다른 유전자가 아니라 PD1의 강하고 우선적인 직접 표적화를 시사한다.
표 17: 대조군 ROR1 UltraCAR-T 세포에 비해 ROR1+PD1 사일런서 세포에서 상위 10 개의 하향조절 및 상향조절 유전자
실시예 11
일 예에서 환자는 특정 암으로 진단된다. 이 예에서 환자는 유방암으로 진단된다. 환자는 특정 키메라 항원 수용체 요법을 받는 것으로 식별된다. 환자는 원하는 세포 유형의 단리를 위해 초기 혈액 샘플을 제공한다. 이 예에서, 단리된 세포 유형은 T-세포이다. 이 예에서 단리된 T-세포의 일부만이 CAR의 집합체로부터 선택된 원하는 초기 CAR로 형질감염된다. 나머지 T-세포는 코드화되어 환자에 의한 잠재적 향후 사용을 위해 적절한 조건 하에 저장된다. 나머지 T-세포는 적절한 수단을 통해 형질감염된다. 이 예에서, 형질감염은 비바이러스 수단을 통해 발생한다. 특히, 비바이러스 수단은 적어도 선택된 CAR, T-세포 확장 사이토카인, 및 종결 스위치를 암호화하는 단일 잠자는 숲속의 미녀 벡터를 활용한다. 환자는 초기 T-세포 단리로부터 48 시간 이내에 치료받는다.
일단 상기 치료 차례를 완료하면 환자를 모니터링 프로토콜에 따라 추적한다. 암의 확장이 있는 경우, 유방암인 이 예에서, 환자를 재평가한다. 환자에게 초기 CAR을 재투여할 수 있지만, 평가가 초기 또는 잠재적 재투여 후 항원 회피가 있음을 입증하는 경우 프로토콜은 CAR 집합체로부터 새로운 CAR의 투약을 요구할 것이다. 이 경우, 환자의 저장된 T-세포가 새로 선태된 CAR의 형질감염에 사용하기 위해 선택될 것이다. 환자는 적시에 재투여 받을 수 있을 것이다. 또한 환자가 새로 선택된 CAR을 제외한 후속 요법의 각 부분을 이미 받았기 때문에, 독성 및 또는 부작용 위험이 감소된다. 또한 이 환자에 대한 이전 T-세포 확장의 지식은 초기 CAR 선택으로부터 확장 수준에 의해 알려진다. 이것은 초기 용량보다 많던 적던, 투여량 크기의 잠재적 변화를 추가로 허용한다.
실시예 12
일 예에서 환자는 특정 암으로 진단되지 않고, 오히려 특징적 항원이 바람직하지 않은 세포 증식 또는 감염 인자 확장을 유발하는 것으로 식별되었다. 초기 CAR은 환자에 제시되는 항원에 기반하여 선택한다. 환자는 원하는 세포 유형의 단리를 위해 초기 혈액 샘플을 제공한다. 이 예에서, 단리된 세포 유형은 T-세포이다. 이 예에서 모든 단리된 T-세포는 CAR의 집합체로부터 선택된 원하는 초기 CAR로 형질감염된다. T-세포는 적절한 수단을 통해 형질감염된다. 이 예에서, 형질감염은 비바이러스 수단을 통해 발생한다. 특히, 비바이러스 수단은 적어도 선택된 CAR, T-세포 확장 사이토카인, 및 사멸 스위치를 암호화하는 단일 잠자는 숲속의 미녀 벡터를 활용한다. 환자는 초기 T-세포 단리로부터 48 시간 이내에 치료받는다.
일단 상기 치료 차례를 완료하면 환자를 모니터링 프로토콜에 따라 추적한다. 추가 평가 후 환자는 항원 회피가 있음을 입증한다. 그런 다음 환자는 새로운 T-세포를 수집한 후 CAR 집합체로부터 새로운 CAR을 투여받는다. 또한 환자가 새로 선택된 CAR을 제외한 후속 요법의 각 부분을 이미 받았기 때문에, 독성 및 또는 부작용 위험이 감소된다. 또한 이 환자에 대한 이전 T-세포 확장의 지식은 초기 CAR 선택으로부터 확장 수준에 의해 알려진다. 이것은 초기 용량보다 많던 적던, 투여량 크기의 잠재적 변화를 추가로 허용한다.
실시예 13
임상의는 CAR 집합체로부터 초기 CAR의 사용을 수반하는 환자를 위한 치료 계획을 개발한다. 치료 계획은 항원 회피를 방지하기 위해 연속 방식으로 집합체로부터 상이한 CAR의 투약을 포함한다.
실시예 14
일 예에서 환자는 특정 암으로 진단된다. 이 예에서 환자는 췌장암으로 진단된다. 환자는 특정 키메라 항원 수용체 요법을 받는 것으로 식별된다. 환자는 원하는 세포 유형의 단리를 위해 초기 혈액 샘플을 제공한다. 이 예에서, 단리된 세포 유형은 T-세포이다. 이 예에서 단리된 T-세포는 CAR의 집합체로부터 선택된 원하는 초기 CAR로 형질감염된다. T-세포는 적어도 선택된 CAR, T-세포 확장 사이토카인, 및 사멸 스위치를 암호화하는 단일 잠자는 숲속의 미녀 벡터를 활용하는 비바이러스 수단을 통해 형질감염된다. 환자는 초기 T-세포 단리로부터 48 시간 이내에 치료받는다.
일단 상기 치료 차례를 완료하면 환자를 모니터링 프로토콜에 따라 추적한다. 이 경우, 재평가를 통해 환자는 항원 회피를 겪는다는 것에 주목한다. 이 경우 환자는 새로운 CAR의 투약을 필요로 한다. 그러나, 환자의 상태로 인해 자가 T-세포의 충분한 샘플이 수득되지 않을 수 있다. 결과적으로 방법은 요법에 혼입될 동종이계 T-세포의 포함을 허용한다. 라이브러리로부터의 CAR은 동종이계 T-세포로 형질도입되고 환자는 적시에 투여받는다. 또한 환자가 후속 요법의 각각의 부분을 이미 받았기 때문에, 독성 및 부작용 위험이 감소된다.
실시예 15
일 예에서 환자는 특정 암으로 진단되지 않고, 오히려 특이적 항원이 바람직하지 않은 세포 증식 또는 감염 인자 확장을 유발하는 것으로 식별되었다. 초기 CAR은 환자에 제시된 항원에 기반하여 선택된다. 환자는 환자의 현재 건강으로 인해 원하는 세포 유형을 단리하기 위한 초기 혈액 샘플을 제공할 수 없다. 이와 같이, 동종이계 T-세포는 CAR의 집합체로부터 선택된 원하는 초기 CAR로 형질감염된다. T-세포는 적어도 선택된 CAR, T-세포 확장 사이토카인, 및 종결 스위치를 암호화하는 단일 att부위 벡터를 활용하는 적절한 수단을 통해 형질감염된다.
일단 상기 치료 차례를 완료하면 환자를 모니터링 프로토콜에 따라 추적한다. 추가 평가 후 환자는 항원 회피가 있음을 입증한다. 그런 다음 환자에게 동종이계 T-세포의 동일한 공급원을 사용하여 새로운 CAR을 투여한다. 또한 환자가 새로 선택된 CAR을 제외하고 후속 요법의 각각의 부분을 이미 받았기 때문에, 독성 및 또는 부작용 위험이 감소된다. 또한 이 환자에 대한 이전 T-세포 확장의 지식은 초기 CAR 선택으로부터 확장 수준에 의해 알려진다. 이것은 또한 초기 용량보다 많던 적던, 투여량 크기의 잠재적 변화를 허용한다.
실시예 16
임상의는 CAR 집합체로부터의 초기 CAR의 사용을 수반하는 환자를 위한 치료 계획을 개발한다. 치료 계획은 항원 회피를 방지하기 위해 연속적 방식으로 집합체로부터 상이한 CAR의 투약을 포함한다. 이 치료 계획은 자가 세포 및 동종이계 세포 둘 다의 사용을 포함할 수 있다.
실시예 17
일 예에서 환자는 바람직하지 않은 세포 증식 또는 감염 인자 확장을 유발하는 것으로 식별된 특이적 항원으로 진단된다. 초기 CAR은 환자에 제시된 항원에 기반하여 선택된다. 환자는 환자의 현재 건강으로 인해 원하는 세포 유형의 단리를 위한 초기 혈액 샘플을 제공할 수 없다. 이와 같이, 동종이계 세포는 CAR의 집합체로부터 선택된 원하는 초기 CAR로 형질감염된다. 세포는 적어도 선택된 CAR 및 종결 스위치를 암호화하는 단일 잠자는 숲속의 미녀 벡터를 활용하는 적절한 수단을 통해 형질감염된다.
일단 상기 치료 차례를 완료하면 환자를 모니터링 프로토콜에 따라 추적한다. 추가 평가 후 환자는 항원 회피가 있음을 입증한다. 그런 다음 동종이계 T-세포의 공급원을 사용하거나 환자가 동종이계 T-세포에서 충분한 개선을 보이는 경우 환자에게 새로운 CAR을 투여한다.
실시예 18
일 예에서 환자는 특정 암으로 진단되지 않고, 오히려 특이적 항원이 바람직하지 않은 세포 증식 또는 감염 인자 확장을 유발하는 것으로 식별되었다. 초기 CAR은 환자에 제시된 항원에 기반하여 선택된다. 환자는 T-세포의 단리를 위해 초기 혈액 샘플을 제공한다. T-세포는 선택된 CAR, T-세포 확장 사이토카인, 및 사멸 스위치를 암호화하는 단일 잠자는 숲속의 미녀 벡터를 활용하여 CAR의 집합체로부터 선택된 원하는 초기 CAR로 형질감염된다. 환자는 초기 T-세포 단리로부터 48 시간 이내에 치료받는다.
일단 상기 치료 차례를 완료하면 환자를 모니터링 프로토콜에 따라 추적한다. 추가 평가 후 환자는 항원 회피가 있음을 입증한다. 그런 다음 환자에게 동일한 CAR 및 CAR 집합체로부터의 새로운 CAR을 투여한다.
실시예 19
일 예에서 환자는 특정 암으로 진단된다. 이 예에서 환자는 AML로 진단된다. 환자는 특정 키메라 항원 수용체 요법을 받는 것으로 식별된다. 환자는 원하는 세포 유형의 단리를 위해 초기 혈액 샘플을 제공한다. 세포는 CAR의 집합체로부터 선택된 원하는 2 개의 상이한 CAR로 형질감염된다. 세포는 선택된 CAR 및 사멸 스위치 둘 다를 암호화하는 단일 벡터를 활용하는 비바이러스 수단을 통해 형질감염된다.
일단 상기 치료 차례를 완료하면 환자를 모니터링 프로토콜에 따라 추적한다. 이 경우, 재평가를 통해 환자는 항원 회피를 겪는다는 것에 주목한다. 이 경우 환자는 새로운 CAR의 투약을 필요로 한다. 그러나, 환자의 상태로 인해 자가 세포의 충분한 샘플이 수득되지 않을 수 있다. 결과적으로 방법은 요법에 혼입될 동종이계 T 세포의 포함을 허용한다. 라이브러리로부터의 CAR은 동종이계 세포로 형질도입되고 환자는 적시에 투여받는다.
스플라이스 공여자 및 스플라이스 수용자 부위 서열
추가의 miRNA 서열
예시적인 항-CD33 VH 및 VL 서열
예시적인 항-MUC1 VH 및 VL 서열
예시적인 항-MUC16 서열
예시적인 항-ROR1 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 서열
항-ROR1 CDR
ROR1-특이적 항원 결합 도메인 부분
예시적인 스페이서 서열
예시적인 막관통 도메인 서열
예시적인 세포내 신호전달 도메인 서열
예시적인 신호 펩티드 서열
예시적인 사이토카인 서열
예시적인 링커 서열
예시적인 세포 태그 서열
예시적인 벡터 서열
예시적인 대조군 서열
표 14: 추가의 서열
SEQUENCE LISTING <110> PRECIGEN, INC. <120> CHIMERIC RECEPTOR THERAPY <130> 75594-348568 <140> <141> <150> 63/263,508 <151> 2021-11-03 <150> 63/263,001 <151> 2021-10-25 <150> 63/136,611 <151> 2021-01-12 <150> 63/136,074 <151> 2021-01-11 <160> 729 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 82 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 1 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg ac 82 <210> 2 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2 gagaatatat gaagg 15 <210> 3 <211> 70 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 3 gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac catcatcaaa tgcattggga 60 taaccatgac 70 <210> 4 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 4 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 gg 62 <210> 5 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 5 tatggattac tttgcta 17 <210> 6 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 6 tttcggcaag tgcctcctcg ctggccccag ggtaccaccc ggagcacagg tttggtgacc 60 tt 62 <210> 7 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 7 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgt 63 <210> 8 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 8 tgatatgtgc at 12 <210> 9 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 9 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 60 atgt 64 <210> 10 <211> 74 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 10 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctg 74 <210> 11 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 11 ctgggctcag 10 <210> 12 <211> 79 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 12 cagggacctg gggaccccgg caccggcagg ccccaagggg tgaggtgagc gggcattggg 60 acctcccctc cctgtactc 79 <210> 13 <211> 71 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 13 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc c 71 <210> 14 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 14 tgctgggctc agacc 15 <210> 15 <211> 76 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 15 ggacctgggg accccggcac cggcaggccc caaggggtga ggtgagcggg cattgggacc 60 tcccctccct gtactc 76 <210> 16 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 16 cttctgaaga aaatatattt ctttttattc atagctctta tgatagcaat gtcagcagtg 60 cct 63 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 17 ttaagattct aaaattatct 20 <210> 18 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 18 aagtaaggtt gaccatactc tacagttgtg ttttaatgta tattaatgtt actaatgtgt 60 ttt 63 <210> 19 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 19 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgac 55 <210> 20 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 20 ctgtgaagcc acagatggg 19 <210> 21 <211> 53 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 21 tgcctactgc ctcggacttc aaggggctac tttaggagca attatcttgt tta 53 <210> 22 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 22 ccggggtcct gtctgcatcc agcgcagcat tctggaagac gccacgcctc cgctggcgac 60 gg 62 <210> 23 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 23 ctgtgacact tcaaac 16 <210> 24 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 24 ccgtccacgg caccgcatcg aaaacgccgc tgagacctca gccttgacct ccctcagcgt 60 gg 62 <210> 25 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 25 caatggtgga atgtggaggt gaagttaaca ccttcgtggc tacagagttt ccttagcaga 60 gctg 64 <210> 26 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 26 tgtctaaact at 12 <210> 27 <211> 92 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 27 tagctactgc taggcaatcc ttccctcgat aaatgtcttg gcatcgtttg ctttgagcaa 60 gaaggttcat ctgatatcag tcttctcaat ct 92 <210> 28 <211> 77 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 28 acaggctgat tgtatctgtc tatgagcaaa ggaaacctga aggaaccaag ggcctggctg 60 gacagagttg tcatgtg 77 <210> 29 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 29 gcagaacatc cgctcacctg t 21 <210> 30 <211> 68 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 30 cacatgacaa cccagcctga atgacaacca gccattgaaa gaaagcagcc ctcacaccat 60 agcatcta 68 <210> 31 <211> 79 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 31 acaggctgat tgtatctgtc tatgagcaaa ggaaacctga aggaaccaag ggcctggctg 60 gacagagttg tcatgtgtc 79 <210> 32 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 32 agaacatccg ctcacct 17 <210> 33 <211> 68 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 33 cacatgacaa cccagcctga atgacaacca gccattgaaa gaaagcagcc ctcacaccat 60 agcatcta 68 <210> 34 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 34 gggtttattg taagagagca ttatgaagaa aaaaatagat cataaagctt cttcagg 57 <210> 35 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 35 gatttaaata gtgattgtc 19 <210> 36 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 36 cttgggggag accagctgcg ctgcactacc aacagcaaaa gaagtgaatg ggacagct 58 <210> 37 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 37 gggtttattg taagagagca ttatgaagaa aaaaatagat cataaagctt cttcaggaa 59 <210> 38 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 38 tttaaatagt gattg 15 <210> 39 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 39 gttcttgggg gagaccagct gcgctgcact accaacagca aaagaagtga atgggacagc 60 t 61 <210> 40 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 40 tttaccaatg aaaagcattt aactgttttg gattccaaac tagcagcact acaatgcttt 60 gcta 64 <210> 41 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 41 tcgcctcttc aatgga 16 <210> 42 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 42 tagctatgca ttgattacta cgggacaacc aacgttttca tttgtgaata tcaattactt 60 gcca 64 <210> 43 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 43 tgaagccaca ggagccaaga gcaggaggac caaggccctg gcgaaggccg tggcctcg 58 <210> 44 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 44 gtgcaggtcc caatg 15 <210> 45 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 45 cggggacgcg ggcctggacg ccggcatccg ggctcaggac ccccctctct gccagaggc 59 <210> 46 <211> 68 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 46 gtcttggagg ctggggcacc tcggggaagg acgccggcat cagcaccatt ctggggtacg 60 gggatgga 68 <210> 47 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 47 gtttct 6 <210> 48 <211> 70 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 48 gccgtccgta tccgctgcag cctgtggggc ctgcgggccg gggagccgat cgcgcttcag 60 ctcagcgcct 70 <210> 49 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 49 ccaataattc aagccaagca agtatatagg tgttttaata gtttttgttt gcagtcctct 60 g 61 <210> 50 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 50 tacaagaaga atgtagt 17 <210> 51 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 51 tggtggcctg ctatttcctt caaatgaatg atttttacta attttgtgta cttttattgt 60 g 61 <210> 52 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 52 tgtctgcttg ttttgcctac catcgtgaca tctccatggc tgtaccacct tgtcggg 57 <210> 53 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 53 ctgttgaatc tcatgg 16 <210> 54 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 54 tctgacattt tggtatcttt catctgacca tccatatcca atgttctcat ttaaaca 57 <210> 55 <211> 65 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 55 ggagtcagga ggcctgggca gcctgaagag tacacgccga cggacagaca gacagtgcag 60 tcacc 65 <210> 56 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 56 aacagcactg gaggg 15 <210> 57 <211> 65 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 57 gatgagtgta ctgtgggctt cggagatcac gccactgctg ccgcccgctg cccgccacca 60 tcttc 65 <210> 58 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 58 cagttctgtt ttgatttttt ttgtttgttt tttgatcagt gctaatcttc gatactcgaa 60 gga 63 <210> 59 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 59 tctttattta tga 13 <210> 60 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 60 ttttttagta tcaaatccca ccctggaggc acttcctgtt cctgatgcag ccttcaggga 60 gg 62 <210> 61 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 61 cggaccacgg tgtccccttc tctccagctg ggggtctcgg gtcctggcgc tgagaggccg 60 c 61 <210> 62 <211> 11 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 62 gtgcacccgt g 11 <210> 63 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 63 gcggccctag cgacctgcgg cggcgccggg aaagccctgc ctctgcagcg ggtcccaggg 60 gtc 63 <210> 64 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 64 aatatagtct tctccctcgc tt 22 <210> 65 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 65 aagcagggac aggactatat t 21 <210> 66 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 66 aatatagtct tctccctcgc tt 22 <210> 67 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 67 gagcgaggga taggactata ct 22 <210> 68 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 68 aatatagtct tctccctcgc tg 22 <210> 69 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 69 cagtgaggga agactatgtt 20 <210> 70 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 70 aatatagtct tctccctcgc tg 22 <210> 71 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 71 cagcgaggga gaagattacc att 23 <210> 72 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 72 ttcaggaatg ggttccaagg at 22 <210> 73 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 73 atcctggaag ctattcctga c 21 <210> 74 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 74 tataatataa tagaaccaca gg 22 <210> 75 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 75 cctgtggttc tgttatatcc ata 23 <210> 76 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 76 ttcaggaatg ggttccaagg ag 22 <210> 77 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 77 ctccttggac cattcctgaa 20 <210> 78 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 78 ttcaggaatg ggttccaagg aatt 24 <210> 79 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 79 aatgtcctga agccattcat gga 23 <210> 80 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 80 ttcaggaatg ggttccaagg ag 22 <210> 81 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 81 ctccttggaa cacattccta ca 22 <210> 82 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 82 ttcaggaatg ggttccaagg aag 23 <210> 83 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 83 cttcttggta cacgttcctg ctca 24 <210> 84 <400> 84 000 <210> 85 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 85 acgtgtggtt tatcctgttg ta 22 <210> 86 <400> 86 000 <210> 87 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 87 ccagcttgtg gttctattat gttata 26 <210> 88 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 88 agatccacgt tactcaccct ag 22 <210> 89 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 89 ctagggtgtg tcatgtggat gaa 23 <210> 90 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 90 agatccacgt tactcacccg tg 22 <210> 91 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 91 acccgggtga taatatggat ct 22 <210> 92 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 92 agatccacgt tactcacccc ct 22 <210> 93 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 93 aggggtgaga agcgtggatc c 21 <210> 94 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 94 agatccacgt tactcaccct ta 22 <210> 95 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 95 taggtgagtt acgtggatct gtt 23 <210> 96 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 96 agatccacgt tactcaccct gc 22 <210> 97 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 97 gtagggtgag actcgtggat ct 22 <210> 98 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 98 accacgatga ctgctgtgca ga 22 <210> 99 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 99 tctgcgtagc agtcatcgcc ggt 23 <210> 100 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 100 accacgatga ctgctgtgca ga 22 <210> 101 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 101 tctgatggcc gtcatcgtgg c 21 <210> 102 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 102 accacgatga ctgctgtgca ga 22 <210> 103 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 103 tctgtacagc agcatcgatg gt 22 <210> 104 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 104 accacgatga ctgctgtgca ga 22 <210> 105 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 105 tgcgcagctg ttcatcgtgg t 21 <210> 106 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 106 accacgatga ctgctgtgca ga 22 <210> 107 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 107 ctgcgaagca gcatcgtggc 20 <210> 108 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 108 accacgatga ctgctgtgca ga 22 <210> 109 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 109 tctgcaacgc agtctcgctg g 21 <210> 110 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 110 accacgatga ctgctgtgca ga 22 <210> 111 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 111 gatgcacagc aatcatcgtg gt 22 <210> 112 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 112 accacgatga ctgctgtgca gat 23 <210> 113 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 113 atctgcacag cagttcgtgg 20 <210> 114 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 114 accacgatga ctgctgtgca ga 22 <210> 115 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 115 tctgccaata gctgtaatcg tgg 23 <210> 116 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 116 tatcgttcac ggtcagcgac tg 22 <210> 117 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 117 cagtcgttga ctgtggactt ata 23 <210> 118 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 118 tatcgttcac ggtcagcgac tg 22 <210> 119 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 119 cagtgctgaa cgtgaacgat c 21 <210> 120 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 120 tatcgttcac ggtcagcgac tg 22 <210> 121 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 121 tagtcgctga cttgaacaga ta 22 <210> 122 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 122 tatcgttcac ggtcagcgac t 21 <210> 123 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 123 tgtcgctgac agtgaacgat a 21 <210> 124 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 124 tatcgttcac ggtcagcgac tg 22 <210> 125 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 125 gtcgctgagc gctgaacgat g 21 <210> 126 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 126 taactcagga cattgaagta gt 22 <210> 127 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 127 actacttcaa tgtcctgacc tta 23 <210> 128 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 128 taactcagga cattgaagta gt 22 <210> 129 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 129 actattcaga gtcctgagtt c 21 <210> 130 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 130 taactcagga cattgaagta gt 22 <210> 131 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 131 ctactccaat gcctgagttg 20 <210> 132 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 132 taactcagga cattgaagta gt 22 <210> 133 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 133 actactgtaa tgtctgacgt t 21 <210> 134 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 134 taactcagga cattgaagta gtc 23 <210> 135 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 135 gactacttca atgttgagtt 20 <210> 136 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 136 agatccacgt tactcaccct ag 22 <210> 137 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 137 ctaggcagtg agcaaagtgg atc 23 <210> 138 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 138 agatccacgt tactcaccct ag 22 <210> 139 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 139 ctaggtgaga aacgtggatc g 21 <210> 140 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 140 agatccacgt tactcaccct ag 22 <210> 141 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 141 ctagggtgag taacgtggcc tct 23 <210> 142 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 142 agatccacgt tactcaccct ag 22 <210> 143 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 143 tagggcgagt acgtggatcg 20 <210> 144 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 144 agatccacgt tactcaccct ag 22 <210> 145 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 145 ctagggtgag tacgtggcat ct 22 <210> 146 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 146 cattatgcct gggatttgga tc 22 <210> 147 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 147 gatcagatcg caggcataat t 21 <210> 148 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 148 cattatgcct gggatttgga tc 22 <210> 149 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 149 gatccggatc ctaggtatcc atg 23 <210> 150 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 150 cattatgcct gggatttgga tcg 23 <210> 151 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 151 cggccagaac caaggcataa gta 23 <210> 152 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 152 cattatgcct gggatttgga tc 22 <210> 153 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 153 actccaaatc ccgtgcataa tcg 23 <210> 154 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 154 cattatgcct gggatttgga tc 22 <210> 155 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 155 gattcgaatc caaggcatat gg 22 <210> 156 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 156 taattcacat ccctttcatc ag 22 <210> 157 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 157 atgatgaaag gacagtgaat ta 22 <210> 158 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 158 tagtcgttgg gtaaagtcgc ca 22 <210> 159 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 159 tggtgacttc tcaacgatta 20 <210> 160 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 160 gttgctttcc gctaagtggt ga 22 <210> 161 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 161 tcaccactta gaggaaagcc tc 22 <210> 162 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 162 tttgcagtgg ccttcgtggc cc 22 <210> 163 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 163 gggctatgaa ggccattgag aaa 23 <210> 164 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 164 agcctcccgt cctaagaccc cac 23 <210> 165 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 165 gtgggtctta ggtcgggagc tgct 24 <210> 166 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 166 tgaacgacca gtgtttaacc gg 22 <210> 167 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 167 ccggttgaac attggttgcc tca 23 <210> 168 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 168 ttctccttgg agttcatccg cg 22 <210> 169 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 169 atgaacttag aggagacg 18 <210> 170 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 170 ttctccttgg agttcatccg cg 22 <210> 171 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 171 cgcggatgat ccaaggagga 20 <210> 172 <400> 172 000 <210> 173 <400> 173 000 <210> 174 <400> 174 000 <210> 175 <400> 175 000 <210> 176 <400> 176 000 <210> 177 <400> 177 000 <210> 178 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 178 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acaatatagt cttctccctc gcttgagaat atatgaagga 120 agcagggaca ggactatatt gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 179 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 179 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acttcaggaa tgggttccaa ggatgagaat atatgaagga 120 tcctggaagc tattcctgac gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 180 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 180 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg attactttgc tatataatat aatagaacca 120 caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 181 <211> 184 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 181 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtagatcca cgttactcac cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa 120 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 180 atgt 184 <210> 182 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 182 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgagatcc acgttactca cccgtgctgg gctcagaccc gggtgataat 120 atggatctca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactc 207 <210> 183 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 183 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acagatccac gttactcacc ccctgagaat atatgaagga 120 ggggtgagaa gcgtggatcc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 184 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 184 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggtctgcgta gcagtcatcg ccggttatgg attactttgc taaccacgat gactgctgtg 120 cagatttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 185 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 185 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acaccacgat gactgctgtg cagagagaat atatgaaggt 120 ctgatggccg tcatcgtggc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 186 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 186 cattttccct ccctttccct taggagcctg ttcctctcac gccctcacct ggctgagccg 60 catctgtaca gcagcatcga tggttatgtc ctgacccagc taaccacgat gactgctgtg 120 cagatgccct ctgcccctgg cttcgaggag gaggaggagc tgctttcccc atcatctgga 180 aggtg 185 <210> 187 <211> 188 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 187 cttctgaaga aaatatattt ctttttattc atagctctta tgatagcaat gtcagcagtg 60 cctaccacga tgactgctgt gcagattaag attctaaaat tatcttgcgc agctgttcat 120 cgtggtagta aggttgacca tactctacag ttgtgtttta atgtatatta atgttactaa 180 tgtgtttt 188 <210> 188 <211> 189 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 188 cttctgaaga aaatatattt ctttttattc atagctctta tgatagcaat gtcagcagtg 60 cctaccacga tgactgctgt gcagattaag attctaaaat tatcttgcgc agctgttcat 120 cgtggtaagt aaggttgacc atactctaca gttgtgtttt aatgtatatt aatgttacta 180 atgtgtttt 189 <210> 189 <211> 172 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 189 tgtctgcttg ttttgcctac catcgtgaca tctccatggc tgtaccacct tgtcgggacc 60 acgatgactg ctgtgcagac tgttgaatct catggctgcg aagcagcatc gtggctctga 120 cattttggta tctttcatct gaccatccat atccaatgtt ctcatttaaa ca 172 <210> 190 <211> 181 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 190 cagttctgtt ttgatttttt ttgtttgttt tttgatcagt gctaatcttc gatactcgaa 60 ggatctgcaa cgcagtctcg ctggtcttta tttatgaacc acgatgactg ctgtgcagat 120 tttttagtat caaatcccac cctggaggca cttcctgttc ctgatgcagc cttcagggag 180 g 181 <210> 191 <211> 187 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 191 ggagtcagga ggcctgggca gcctgaagag tacacgccga cggacagaca gacagtgcag 60 tcaccaccac gatgactgct gtgcagaaca gcactggagg gatgcacagc aatcatcgtg 120 gtgatgagtg tactgtgggc ttcggagatc acgccactgc tgccgcccgc tgcccgccac 180 catcttc 187 <210> 192 <211> 182 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 192 ccaataattc aagccaagca agtatatagg tgttttaata gtttttgttt gcagtcctct 60 gatctgcaca gcagttcgtg gtacaagaag aatgtagtac cacgatgact gctgtgcaga 120 ttggtggcct gctatttcct tcaaatgaat gatttttact aattttgtgt acttttattg 180 tg 182 <210> 193 <211> 180 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 193 cggaccacgg tgtccccttc tctccagctg ggggtctcgg gtcctggcgc tgagaggccg 60 caccacgatg actgctgtgc agagtgcacc cgtgtctgcc aatagctgta atcgtgggcg 120 gccctagcga cctgcggcgg cgccgggaaa gccctgcctc tgcagcgggt cccaggggtc 180 <210> 194 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 194 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcagtcgtt gactgtggac ttatatatgg attactttgc tatatcgttc acggtcagcg 120 actgtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 195 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 195 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg actatcgttc acggtcagcg actggagaat atatgaaggc 120 agtgctgaac gtgaacgatc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 196 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 196 cattttccct ccctttccct taggagcctg ttcctctcac gccctcacct ggctgagccg 60 catagtcgct gacttgaaca gatatatgtc ctgacccagc tatatcgttc acggtcagcg 120 actgtgccct ctgcccctgg cttcgaggag gaggaggagc tgctttcccc atcatctgga 180 aggtg 185 <210> 197 <211> 187 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 197 ggagtcagga ggcctgggca gcctgaagag tacacgccga cggacagaca gacagtgcag 60 tcacctatcg ttcacggtca gcgactaaca gcactggagg gtgtcgctga cagtgaacga 120 tagatgagtg tactgtgggc ttcggagatc acgccactgc tgccgcccgc tgcccgccac 180 catcttc 187 <210> 198 <211> 189 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 198 cttctgaaga aaatatattt ctttttattc atagctctta tgatagcaat gtcagcagtg 60 ccttatcgtt cacggtcagc gactgttaag attctaaaat tatctgtcgc tgagcgctga 120 acgatgaagt aaggttgacc atactctaca gttgtgtttt aatgtatatt aatgttacta 180 atgtgtttt 189 <210> 199 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 199 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggactacttc aatgtcctga ccttatatgg attactttgc tataactcag gacattgaag 120 tagttttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 200 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 200 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg actaactcag gacattgaag tagtgagaat atatgaagga 120 ctattcagag tcctgagttc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 201 <211> 172 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 201 tgtctgcttg ttttgcctac catcgtgaca tctccatggc tgtaccacct tgtcgggtaa 60 ctcaggacat tgaagtagtc tgttgaatct catggctact ccaatgcctg agttgtctga 120 cattttggta tctttcatct gaccatccat atccaatgtt ctcatttaaa ca 172 <210> 202 <211> 181 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 202 cagttctgtt ttgatttttt ttgtttgttt tttgatcagt gctaatcttc gatactcgaa 60 ggaactactg taatgtctga cgtttcttta tttatgataa ctcaggacat tgaagtagtt 120 tttttagtat caaatcccac cctggaggca cttcctgttc ctgatgcagc cttcagggag 180 g 181 <210> 203 <211> 182 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 203 ccaataattc aagccaagca agtatatagg tgttttaata gtttttgttt gcagtcctct 60 ggactacttc aatgttgagt ttacaagaag aatgtagtta actcaggaca ttgaagtagt 120 ctggtggcct gctatttcct tcaaatgaat gatttttact aattttgtgt acttttattg 180 tg 182 <210> 204 <211> 180 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 204 cggaccacgg tgtccccttc tctccagctg ggggtctcgg gtcctggcgc tgagaggccg 60 cagatccacg ttactcaccc taggtgcacc cgtgctaggc agtgagcaaa gtggatcgcg 120 gccctagcga cctgcggcgg cgccgggaaa gccctgcctc tgcagcgggt cccaggggtc 180 <210> 205 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 205 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acagatccac gttactcacc ctaggagaat atatgaaggc 120 taggtgagaa acgtggatcg gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 206 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 206 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggctagggtg agtaacgtgg cctcttatgg attactttgc taagatccac gttactcacc 120 ctagtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 207 <211> 172 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 207 tgtctgcttg ttttgcctac catcgtgaca tctccatggc tgtaccacct tgtcgggaga 60 tccacgttac tcaccctagc tgttgaatct catggtaggg cgagtacgtg gatcgtctga 120 cattttggta tctttcatct gaccatccat atccaatgtt ctcatttaaa ca 172 <210> 208 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 208 cattttccct ccctttccct taggagcctg ttcctctcac gccctcacct ggctgagccg 60 cactagggtg agtacgtggc atcttatgtc ctgacccagc taagatccac gttactcacc 120 ctagtgccct ctgcccctgg cttcgaggag gaggaggagc tgctttcccc atcatctgga 180 aggtg 185 <210> 209 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 209 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg accattatgc ctgggatttg gatcgagaat atatgaaggg 120 atcagatcgc aggcataatt gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 210 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 210 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgcattat gcctgggatt tggatcctgg gctcagacct ccaaatccac 120 acatagtgca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactc 207 <210> 211 <211> 171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 211 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgaccatta 60 tgcctgggat ttggatcctg tgaagccaca gatggggatc cagatcaggc atagtggctg 120 cctactgcct cggacttcaa ggggctactt taggagcaat tatcttgttt a 171 <210> 212 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 212 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 gggatccgga tcctaggtat ccatgtatgg attactttgc tacattatgc ctgggatttg 120 gatctttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 213 <211> 189 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 213 cttctgaaga aaatatattt ctttttattc atagctctta tgatagcaat gtcagcagtg 60 cctcattatg cctgggattt ggatcttaag attctaaaat tatcttccga atcacatggc 120 ataatgaagt aaggttgacc atactctaca gttgtgtttt aatgtatatt aatgttacta 180 atgtgtttt 189 <210> 214 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 214 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtcattatg cctgggattt ggatcgtgat atgtgcatcg gccagaacca aggcataagt 120 agcattatgg tgacagctgc ctcgggaagc caagttgggc tttaaagtgc agggcctgct 180 gatgt 185 <210> 215 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 215 ccggggtcct gtctgcatcc agcgcagcat tctggaagac gccacgcctc cgctggcgac 60 ggactccaaa tcccgtgcat aatcgctgtg acacttcaaa ccattatgcc tgggatttgg 120 atcccgtcca cggcaccgca tcgaaaacgc cgctgagacc tcagccttga cctccctcag 180 cgtgg 185 <210> 216 <211> 212 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 216 caatggtgga atgtggaggt gaagttaaca ccttcgtggc tacagagttt ccttagcaga 60 gctgcattat gcctgggatt tggatctgtc taaactatga ttcgaatcca aggcatatgg 120 tagctactgc taggcaatcc ttccctcgat aaatgtcttg gcatcgtttg ctttgagcaa 180 gaaggttcat ctgatatcag tcttctcaat ct 212 <210> 217 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 217 acaggctgat tgtatctgtc tatgagcaaa ggaaacctga aggaaccaag ggcctggctg 60 gacagagttg tcatgtgatg atgaaaggac agtgaattag cagaacatcc gctcacctgt 120 taattcacat ccctttcatc agcacatgac aacccagcct gaatgacaac cagccattga 180 aagaaagcag ccctcacacc atagcatcta 210 <210> 218 <211> 181 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 218 gggtttattg taagagagca ttatgaagaa aaaaatagat cataaagctt cttcaggacg 60 atggaagggt tgtgaacgtt agatttaaat agtgattgtc taattcacat ccctttcatc 120 agtcttgggg gagaccagct gcgctgcact accaacagca aaagaagtga atgggacagc 180 t 181 <210> 219 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 219 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg actaattcac atccctttca tcaggagaat atatgaaggc 120 tgaggaagag gtgtgaattc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 220 <211> 188 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 220 tttaccaatg aaaagcattt aactgttttg gattccaaac tagcagcact acaatgcttt 60 gctagtgatg aataggctgc gaattatcgc ctcttcaatg gataattcac atccctttca 120 tcagtagcta tgcattgatt actacgggac aaccaacgtt ttcatttgtg aatatcaatt 180 acttgcca 188 <210> 221 <211> 171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 221 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgactagtc 60 gttgggtaaa gtcgccactg tgaagccaca gatgggtggt gacttctcaa cgattagctg 120 cctactgcct cggacttcaa ggggctactt taggagcaat tatcttgttt a 171 <210> 222 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 222 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggtggcgatt ttacccaatg ctctatatgg attactttgc tatagtcgtt gggtaaagtc 120 gccatttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 223 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 223 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg actagtcgtt gggtaaagtc gccagagaat atatgaaggt 120 ggcactttcc tcaacgactc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 224 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 224 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgtagtcg ttgggtaaag tcgccactgg gctcagaccg cgacttacca 120 cacgactaca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactc 207 <210> 225 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 225 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtgttgctt tccgctaagt ggtgagtgat atgtgcatct cccactcaga ggaaagcact 120 agcattatgg tgacagctgc ctcgggaagc caagttgggc tttaaagtgc agggcctgct 180 gatgt 185 <210> 226 <211> 212 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 226 caatggtgga atgtggaggt gaagttaaca ccttcgtggc tacagagttt ccttagcaga 60 gctggttgct ttccgctaag tggtgatgtc taaactattc accacttaga ggaaagcctc 120 tagctactgc taggcaatcc ttccctcgat aaatgtcttg gcatcgtttg ctttgagcaa 180 gaaggttcat ctgatatcag tcttctcaat ct 212 <210> 227 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 227 ccggggtcct gtctgcatcc agcgcagcat tctggaagac gccacgcctc cgctggcgac 60 gggaaccact tagcgcgaag caaggctgtg acacttcaaa cgttgctttc cgctaagtgg 120 tgaccgtcca cggcaccgca tcgaaaacgc cgctgagacc tcagccttga cctccctcag 180 cgtgg 185 <210> 228 <211> 171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 228 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgactttgc 60 agtggccttc gtggcccctg tgaagccaca gatggggggt cacgagccac tgcgaagctg 120 cctactgcct cggacttcaa ggggctactt taggagcaat tatcttgttt a 171 <210> 229 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 229 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 gggggctatg aaggccattg agaaatatgg attactttgc tatttgcagt ggccttcgta 120 gccctttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 230 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 230 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgttttgcag tggccttcgt ggcccgtgat atgtgcatcg gtcacgtaga ctactgcact 120 cgcattatgg tgacagctgc ctcgggaagc caagttgggc tttaaagtgc agggcctgct 180 gatgt 185 <210> 231 <211> 212 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 231 caatggtgga atgtggaggt gaagttaaca ccttcgtggc tacagagttt ccttagcaga 60 gctgtttgca gtggccttcg tggccctgtc taaactatgg gtcacgaaga ccactgccca 120 tagctactgc taggcaatcc ttccctcgat aaatgtcttg gcatcgtttg ctttgagcaa 180 gaaggttcat ctgatatcag tcttctcaat ct 212 <210> 232 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 232 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgagcctc ccgtcctaag accccactgg gctcagacag ggtcttggaa 120 aggaggctca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactc 207 <210> 233 <211> 181 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 233 gggtttattg taagagagca ttatgaagaa aaaaatagat cataaagctt cttcagggtg 60 ggtcttaggt cgggagctgc tgatttaaat agtgattgtc agcctcccgt cctaagaccc 120 caccttgggg gagaccagct gcgctgcact accaacagca aaagaagtga atgggacagc 180 t 181 <210> 234 <211> 209 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 234 tctcccatcc ccttcagata cttacagata ctgtaaagtg agtagaattc tgagttttga 60 ggttgcttca gtgagcctcc cgtcctaaga ccccacttgg aattaaaatc aagtgggtct 120 tgacgggtgg caccctatgg ctaaccatca tctactccat ggtgctcaga attcgctgaa 180 gacaggaaac caaaggtgga cacaccagg 209 <210> 235 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 235 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggccagggtg agtaacgtgg cctcttatgg attactttgc taagatccac gttactcacc 120 ctggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 236 <211> 171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 236 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgacagatc 60 cacgttactc acccaagctg tgaagccaca gatgggcttg ggtgagacgt ggatctgctg 120 cctactgcct cggacttcaa ggggctactt taggagcaat tatcttgttt a 171 <210> 237 <211> 188 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 237 tttaccaatg aaaagcattt aactgttttg gattccaaac tagcagcact acaatgcttt 60 gctagagggg tgtataccgc ggatcttcgc ctcttcaatg gaagatccac gttactcacc 120 cctgtagcta tgcattgatt actacgggac aaccaacgtt ttcatttgtg aatatcaatt 180 acttgcca 188 <210> 238 <211> 212 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 238 caatggtgga atgtggaggt gaagttaaca ccttcgtggc tacagagttt ccttagcaga 60 gctgagatcc acgttactca cccttgtgtc taaactatca agggtgagtc acgtggagat 120 tagctactgc taggcaatcc ttccctcgat aaatgtcttg gcatcgtttg ctttgagcaa 180 gaaggttcat ctgatatcag tcttctcaat ct 212 <210> 239 <211> 181 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 239 gggtttattg taagagagca ttatgaagaa aaaaatagat cataaagctt cttcaggaaa 60 gatccacgtt actcaccctt agatttaaat agtgattgtc taggtgagtt acgtggatct 120 gttcttgggg gagaccagct gcgctgcact accaacagca aaagaagtga atgggacagc 180 t 181 <210> 240 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 240 acaggctgat tgtatctgtc tatgagcaaa ggaaacctga aggaaccaag ggcctggctg 60 gacagagttg tcatgtgtca gatccacgtt actcaccctg cagaacatcc gctcacctgt 120 agggtgagac tcgtggatct gtcacatgac aacccagcct gaatgacaac cagccattga 180 aagaaagcag ccctcacacc atagcatcta 210 <210> 241 <211> 171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 241 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgacttcag 60 gaatgggttc caaggagctg tgaagccaca gatgggctcc ttggaccatt cctgaagctg 120 cctactgcct cggacttcaa ggggctactt taggagcaat tatcttgttt a 171 <210> 242 <211> 191 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 242 gtcttggagg ctggggcacc tcggggaagg acgccggcat cagcaccatt ctggggtacg 60 gggatggatt caggaatggg ttccaaggaa ttgtttctaa tgtcctgaag ccattcatgg 120 agccgtccgt atccgctgca gcctgtgggg cctgcgggcc ggggagccga tcgcgcttca 180 gctcagcgcc t 191 <210> 243 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 243 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtttcagga atgggttcca aggaagtgat atgtgcatct tcttggtaca cgttcctgct 120 cacattatgg tgacagctgc ctcgggaagc caagttgggc tttaaagtgc agggcctgct 180 gatgt 185 <210> 244 <211> 212 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 244 caatggtgga atgtggaggt gaagttaaca ccttcgtggc tacagagttt ccttagcaga 60 gctgttcagg aatgggttcc aaggagtgtc taaactatct ccttggaaca cattcctaca 120 tagctactgc taggcaatcc ttccctcgat aaatgtcttg gcatcgtttg ctttgagcaa 180 gaaggttcat ctgatatcag tcttctcaat ct 212 <210> 245 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 245 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgtataat ataatagaac cacaggctgg gctcagacgt gtggtttatc 120 ctgttgtaca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactc 207 <210> 246 <211> 168 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 246 tgtggtgctg ggggcttcag cggccggctc tgatctccat cctccctggg gcatataata 60 taatagaacc acagggccct tcatgctgcc cagcttgtgg ttctattatg ttataactcg 120 gggtgggagt cagcaggagg tgagggggca tggtggcccc agtgcagc 168 <210> 247 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 247 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcgtgctga actggtatcg aaatgtatgg attactttgc tacatgcggt accagtttag 120 cacgtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 248 <211> 212 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 248 caatggtgga atgtggaggt gaagttaaca ccttcgtggc tacagagttt ccttagcaga 60 gctgcatgcg gtaccagttt agcacgtgtc taaactatcg tgctagactt gtactgtcag 120 tagctactgc taggcaatcc ttccctcgat aaatgtcttg gcatcgtttg ctttgagcaa 180 gaaggttcat ctgatatcag tcttctcaat ct 212 <210> 249 <211> 171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 249 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgaccatgc 60 ggtaccagtt tagcacgctg tgaagccaca gatgggcgtg ctagaggtgt cgcatggctg 120 cctactgcct cggacttcaa ggggctactt taggagcaat tatcttgttt a 171 <210> 250 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 250 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcagcgagg gagaagatta ccatttatgg attactttgc taaatatagt cttctccctc 120 gctgtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 251 <211> 176 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 251 tgaagccaca ggagccaaga gcaggaggac caaggccctg gcgaaggccg tggcctcgaa 60 tatagtcttc tccctcgctt gtgcaggtcc caatggagcg agggatagga ctatactcgg 120 ggacgcgggc ctggacgccg gcatccgggc tcaggacccc cctctctgcc agaggc 176 <210> 252 <211> 171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 252 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgacaatat 60 agtcttctcc ctcgctgctg tgaagccaca gatgggcagt gagggaagac tatgttgctg 120 cctactgcct cggacttcaa ggggctactt taggagcaat tatcttgttt a 171 <210> 253 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 253 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggccggttga acattggttg cctcatatgg attactttgc tatgaacgac cagtgtttaa 120 ccggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 254 <211> 185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 254 ccggggtcct gtctgcatcc agcgcagcat tctggaagac gccacgcctc cgctggcgac 60 gggacggatg aacttagagg agacgctgtg acacttcaaa cttctccttg gagttcatcc 120 gcgccgtcca cggcaccgca tcgaaaacgc cgctgagacc tcagccttga cctccctcag 180 cgtgg 185 <210> 255 <211> 171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 255 caggttaacc caacagaagg ctaaagaagg tatattgctg ttgacagtga gcgacttctc 60 cttggagttc atccgcgctg tgaagccaca gatgggcgcg gatgatccaa ggaggagctg 120 cctactgcct cggacttcaa ggggctactt taggagcaat tatcttgttt a 171 <210> 256 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 256 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgatacac atcagaatcc ttactgctgg gctcagaccg taaggatctc 120 ctgtgtatca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggcgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactc 207 <210> 257 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 257 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acatacacat cagaatcctt acttgagaat atatgaagga 120 ggtaggatac tgatgtgtac gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 258 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 258 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcggtaagg attctgatgt aatattatgg attactttgc taatacacat cagaatcctt 120 actgtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 259 <211> 176 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 259 tgaagccaca ggagccaaga gcaggaggac caaggccctg gcgaaggccg tggcctcgat 60 acacatcaga atccttactt gtgcaggtcc caatggagta aggatcctga tgtgtctcgg 120 ggacgcgggc ctggacgccg gcatccgggc tcaggacccc cctctctgcc agaggc 176 <210> 260 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 260 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgttgttg aaggcgtttg cacatgctgg gctcagacct gtgcaatgcg 120 atcaatagca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggcgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactc 207 <210> 261 <211> 189 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 261 cttctgaaga aaatatattt ctttttattc atagctctta tgatagcaat gtcagcagtg 60 cctttgttga aggcgtttgc acatgttaag attctaaaat tatcttgtgc ggaagcactt 120 caataaaagt aaggttgacc atactctaca gttgtgtttt aatgtatatt aatgttacta 180 atgtgtttt 189 <210> 262 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 262 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcgtgtgtg aacgccttca cataatatgg attactttgc tattgttgaa ggcgtttgca 120 catgtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 263 <211> 176 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 263 tgaagccaca ggagccaaga gcaggaggac caaggccctg gcgaaggccg tggcctcgtt 60 gttgaaggcg tttgcacatt gtgcaggtcc caatgggtgt gcaaaggtct tcaatcacgg 120 ggacgcgggc ctggacgccg gcatccgggc tcaggacccc cctctctgcc agaggc 176 <210> 264 <400> 264 000 <210> 265 <400> 265 000 <210> 266 <400> 266 000 <210> 267 <211> 396 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 267 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acttcaggaa tgggttccaa ggatgagaat atatgaagga 120 tcctggaagc tattcctgac gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc 240 gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg 300 attactttgc tatataatat aatagaacca caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc 360 ccagggtacc acccggagca caggtttggt gacctt 396 <210> 268 <211> 417 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 268 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acttcaggaa tgggttccaa ggatgagaat atatgaagga 120 tcctggaagc tattcctgac gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc 240 ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc tccccatggc cctgagatcc acgttactca 300 cccgtgctgg gctcagaccc gggtgataat atggatctca gggacctggg gaccccggca 360 ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg gcattgggac ctcccctccc tgtactc 417 <210> 269 <211> 393 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 269 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg attactttgc tatataatat aatagaacca 120 caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gaccttaggg actgggccca cggggaggca gcgtccccga ggcagcagcg gcagcggcgg 240 ctcctctccc catggccctg agatccacgt tactcacccg tgctgggctc agacccgggt 300 gataatatgg atctcaggga cctggggacc ccggcaccgg caggccccaa ggggtgaggt 360 gagcgggcat tgggacctcc cctccctgta ctc 393 <210> 270 <211> 394 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 270 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtagatcca cgttactcac cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa 120 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 180 atgtaggagg gtgggggtgg aggcaagcag aggacttcct gatcgcgtac ccatggctac 240 agtctttctt catgtgactc gtggacttca ggaatgggtt ccaaggatga gaatatatga 300 aggatcctgg aagctattcc tgacgttcaa ttgtcatcac tggcatcttt tttgatcatt 360 gcaccatcat caaatgcatt gggataacca tgac 394 <210> 271 <211> 370 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 271 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtagatcca cgttactcac cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa 120 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 180 atgtgatgct acaagtggcc cacttctgag atgcgggctg cttctggatg acactgcttc 240 ccgaggcctg tggttctgtt atatccatat atggattact ttgctatata atataataga 300 accacaggtt tcggcaagtg cctcctcgct ggccccaggg taccacccgg agcacaggtt 360 tggtgacctt 370 <210> 272 <211> 396 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 272 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acagatccac gttactcacc ccctgagaat atatgaagga 120 ggggtgagaa gcgtggatcc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc 240 gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg 300 attactttgc tatataatat aatagaacca caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc 360 ccagggtacc acccggagca caggtttggt gacctt 396 <210> 273 <211> 417 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 273 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgagatcc acgttactca cccgtgctgg gctcagaccc gggtgataat 120 atggatctca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactcagg agggtggggg tggaggcaag cagaggactt 240 cctgatcgcg tacccatggc tacagtcttt cttcatgtga ctcgtggact tcaggaatgg 300 gttccaagga tgagaatata tgaaggatcc tggaagctat tcctgacgtt caattgtcat 360 cactggcatc ttttttgatc attgcaccat catcaaatgc attgggataa ccatgac 417 <210> 274 <211> 393 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 274 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgagatcc acgttactca cccgtgctgg gctcagaccc gggtgataat 120 atggatctca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactcgat gctacaagtg gcccacttct gagatgcggg 240 ctgcttctgg atgacactgc ttcccgaggc ctgtggttct gttatatcca tatatggatt 300 actttgctat ataatataat agaaccacag gtttcggcaa gtgcctcctc gctggcccca 360 gggtaccacc cggagcacag gtttggtgac ctt 393 <210> 275 <211> 580 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 275 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtagatcca cgttactcac cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa 120 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 180 atgtaggagg gtgggggtgg aggcaagcag aggacttcct gatcgcgtac ccatggctac 240 agtctttctt catgtgactc gtggacttca ggaatgggtt ccaaggatga gaatatatga 300 aggatcctgg aagctattcc tgacgttcaa ttgtcatcac tggcatcttt tttgatcatt 360 gcaccatcat caaatgcatt gggataacca tgacgatgct acaagtggcc cacttctgag 420 atgcgggctg cttctggatg acactgcttc ccgaggcctg tggttctgtt atatccatat 480 atggattact ttgctatata atataataga accacaggtt tcggcaagtg cctcctcgct 540 ggccccaggg taccacccgg agcacaggtt tggtgacctt 580 <210> 276 <211> 748 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 276 ttaggatgag ttgagatccc agtgatcttc tcgctaagag tttcctgcct gggcaaggag 60 gaaattagca ggaaaaaaga gaacatcacc ttgtaaaact gaagattgtg accagtcaga 120 ataatgtaga tccacgttac tcaccctagt gatatgtgca tctagggtgt gtcatgtgga 180 tgaagcatta tggtgacagc tgcctcggga agccaagttg ggctttaaag tgcagggcct 240 gctgatgtag gagggtgggg gtggaggcaa gcagaggact tcctgatcgc gtacccatgg 300 ctacagtctt tcttcatgtg actcgtggac ttcaggaatg ggttccaagg atgagaatat 360 atgaaggatc ctggaagcta ttcctgacgt tcaattgtca tcactggcat cttttttgat 420 cattgcacca tcatcaaatg cattgggata accatgacga tgctacaagt ggcccacttc 480 tgagatgcgg gctgcttctg gatgacactg cttcccgagg cctgtggttc tgttatatcc 540 atatatggat tactttgcta tataatataa tagaaccaca ggtttcggca agtgcctcct 600 cgctggcccc agggtaccac ccggagcaca ggtttggtga ccttcttcct catcagggct 660 ttgtgccagc aaatgactcc ctcaccaagg aagcaagagc ctctgaatcc catctgggct 720 cttcctgaac acccctatct ccccctct 748 <210> 277 <211> 761 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 277 ttagggatta tgctgaattt gtatggttta tagttgttag agtttgaggt gttaattcta 60 attatctatt tcaaatttta gcaggaaaaa agagaacatc accttgtaaa actgaagatt 120 gtgaccagtc agaataatgt agatccacgt tactcaccct agtgatatgt gcatctaggg 180 tgtgtcatgt ggatgaagca ttatggtgac agctgcctcg ggaagccaag ttgggcttta 240 aagtgcaggg cctgctgatg taggagggtg ggggtggagg caagcagagg acttcctgat 300 cgcgtaccca tggctacagt ctttcttcat gtgactcgtg gacttcagga atgggttcca 360 aggatgagaa tatatgaagg atcctggaag ctattcctga cgttcaattg tcatcactgg 420 catctttttt gatcattgca ccatcatcaa atgcattggg ataaccatga cgatgctaca 480 agtggcccac ttctgagatg cgggctgctt ctggatgaca ctgcttcccg aggcctgtgg 540 ttctgttata tccatatatg gattactttg ctatataata taatagaacc acaggtttcg 600 gcaagtgcct cctcgctggc cccagggtac cacccggagc acaggtttgg tgaccttctt 660 cctcatcagg gctttgtgcc agcaaatgac tccctcacca aggaagcaag agcctctgaa 720 tcccatctgg gctcttcctg aacaccccta tctccccctc t 761 <210> 278 <211> 580 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 278 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acttcaggaa tgggttccaa ggatgagaat atatgaagga 120 tcctggaagc tattcctgac gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc 240 gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg 300 attactttgc tatataatat aatagaacca caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc 360 ccagggtacc acccggagca caggtttggt gaccttttag caggaaaaaa gagaacatca 420 ccttgtaaaa ctgaagattg tgaccagtca gaataatgta gatccacgtt actcacccta 480 gtgatatgtg catctagggt gtgtcatgtg gatgaagcat tatggtgaca gctgcctcgg 540 gaagccaagt tgggctttaa agtgcagggc ctgctgatgt 580 <210> 279 <211> 748 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 279 ttaggatgag ttgagatccc agtgatcttc tcgctaagag tttcctgcct gggcaaggag 60 gaaaaggagg gtgggggtgg aggcaagcag aggacttcct gatcgcgtac ccatggctac 120 agtctttctt catgtgactc gtggacttca ggaatgggtt ccaaggatga gaatatatga 180 aggatcctgg aagctattcc tgacgttcaa ttgtcatcac tggcatcttt tttgatcatt 240 gcaccatcat caaatgcatt gggataacca tgacgatgct acaagtggcc cacttctgag 300 atgcgggctg cttctggatg acactgcttc ccgaggcctg tggttctgtt atatccatat 360 atggattact ttgctatata atataataga accacaggtt tcggcaagtg cctcctcgct 420 ggccccaggg taccacccgg agcacaggtt tggtgacctt ttagcaggaa aaaagagaac 480 atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa tgtagatcca cgttactcac 540 cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa gcattatggt gacagctgcc 600 tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg atgtcttcct catcagggct 660 ttgtgccagc aaatgactcc ctcaccaagg aagcaagagc ctctgaatcc catctgggct 720 cttcctgaac acccctatct ccccctct 748 <210> 280 <211> 756 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 280 tggagaggag ggtgggggtg gaggcaagca gaggacctcc tgatcatgta cccataggac 60 agggtgatgg aaaggagggt gggggtggag gcaagcagag gacttcctga tcgcgtaccc 120 atggctacag tctttcttca tgtgactcgt ggacttcagg aatgggttcc aaggatgaga 180 atatatgaag gatcctggaa gctattcctg acgttcaatt gtcatcactg gcatcttttt 240 tgatcattgc accatcatca aatgcattgg gataaccatg acgatgctac aagtggccca 300 cttctgagat gcgggctgct tctggatgac actgcttccc gaggcctgtg gttctgttat 360 atccatatat ggattacttt gctatataat ataatagaac cacaggtttc ggcaagtgcc 420 tcctcgctgg ccccagggta ccacccggag cacaggtttg gtgacctttt agcaggaaaa 480 aagagaacat caccttgtaa aactgaagat tgtgaccagt cagaataatg tagatccacg 540 ttactcaccc tagtgatatg tgcatctagg gtgtgtcatg tggatgaagc attatggtga 600 cagctgcctc gggaagccaa gttgggcttt aaagtgcagg gcctgctgat gtcttcctca 660 tcagggcttt gtgccagcaa atgactccct caccaaggaa gcaagagcct ctgaatccca 720 tctgggctct tcctgaacac ccctatctcc ccctct 756 <210> 281 <211> 386 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 281 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acttcaggaa tgggttccaa ggatgagaat atatgaagga 120 tcctggaagc tattcctgac gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac tgaagccaca ggagccaaga gcaggaggac 240 caaggccctg gcgaaggccg tggcctcgaa tatagtcttc tccctcgctt gtgcaggtcc 300 caatggagcg agggatagga ctatactcgg ggacgcgggc ctggacgccg gcatccgggc 360 tcaggacccc cctctctgcc agaggc 386 <210> 282 <211> 396 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 282 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acttcaggaa tgggttccaa ggatgagaat atatgaagga 120 tcctggaagc tattcctgac gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc 240 gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg 300 attactttgc tatataatat aatagaacca caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc 360 ccagggtacc acccggagca caggtttggt gacctt 396 <210> 283 <211> 362 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 283 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg attactttgc tatataatat aatagaacca 120 caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctttgaa gccacaggag ccaagagcag gaggaccaag gccctggcga aggccgtggc 240 ctcgaatata gtcttctccc tcgcttgtgc aggtcccaat ggagcgaggg ataggactat 300 actcggggac gcgggcctgg acgccggcat ccgggctcag gacccccctc tctgccagag 360 gc 362 <210> 284 <211> 396 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 284 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg attactttgc tatataatat aatagaacca 120 caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gaccttagga gggtgggggt ggaggcaagc agaggacttc ctgatcgcgt acccatggct 240 acagtctttc ttcatgtgac tcgtggacaa tatagtcttc tccctcgctt gagaatatat 300 gaaggaagca gggacaggac tatattgttc aattgtcatc actggcatct tttttgatca 360 ttgcaccatc atcaaatgca ttgggataac catgac 396 <210> 285 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 285 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtagatcca cgttactcac cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa 120 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 180 atgttgaagc cacaggagcc aagagcagga ggaccaaggc cctggcgaag gccgtggcct 240 cgaatatagt cttctccctc gcttgtgcag gtcccaatgg agcgagggat aggactatac 300 tcggggacgc gggcctggac gccggcatcc gggctcagga cccccctctc tgccagaggc 360 <210> 286 <211> 394 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 286 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtagatcca cgttactcac cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa 120 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 180 atgtaggagg gtgggggtgg aggcaagcag aggacttcct gatcgcgtac ccatggctac 240 agtctttctt catgtgactc gtggacaata tagtcttctc cctcgcttga gaatatatga 300 aggaagcagg gacaggacta tattgttcaa ttgtcatcac tggcatcttt tttgatcatt 360 gcaccatcat caaatgcatt gggataacca tgac 394 <210> 287 <211> 394 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 287 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtagatcca cgttactcac cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa 120 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 180 atgtaggagg gtgggggtgg aggcaagcag aggacttcct gatcgcgtac ccatggctac 240 agtctttctt catgtgactc gtggacttca ggaatgggtt ccaaggatga gaatatatga 300 aggatcctgg aagctattcc tgacgttcaa ttgtcatcac tggcatcttt tttgatcatt 360 gcaccatcat caaatgcatt gggataacca tgac 394 <210> 288 <211> 370 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 288 ttagcaggaa aaaagagaac atcaccttgt aaaactgaag attgtgacca gtcagaataa 60 tgtagatcca cgttactcac cctagtgata tgtgcatcta gggtgtgtca tgtggatgaa 120 gcattatggt gacagctgcc tcgggaagcc aagttgggct ttaaagtgca gggcctgctg 180 atgtgatgct acaagtggcc cacttctgag atgcgggctg cttctggatg acactgcttc 240 ccgaggcctg tggttctgtt atatccatat atggattact ttgctatata atataataga 300 accacaggtt tcggcaagtg cctcctcgct ggccccaggg taccacccgg agcacaggtt 360 tggtgacctt 370 <210> 289 <211> 386 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 289 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acagatccac gttactcacc ccctgagaat atatgaagga 120 ggggtgagaa gcgtggatcc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac tgaagccaca ggagccaaga gcaggaggac 240 caaggccctg gcgaaggccg tggcctcgaa tatagtcttc tccctcgctt gtgcaggtcc 300 caatggagcg agggatagga ctatactcgg ggacgcgggc ctggacgccg gcatccgggc 360 tcaggacccc cctctctgcc agaggc 386 <210> 290 <211> 396 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 290 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acagatccac gttactcacc ccctgagaat atatgaagga 120 ggggtgagaa gcgtggatcc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc 240 gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga ggcctgtggt tctgttatat ccatatatgg 300 attactttgc tatataatat aatagaacca caggtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc 360 ccagggtacc acccggagca caggtttggt gacctt 396 <210> 291 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 291 aggtaagagt cgatcg 16 <210> 292 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 292 acgcgttact aactggtacc tctttttttt ttttgatatc ctgcaggc 48 <210> 293 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 293 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 294 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 294 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 295 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 295 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 296 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 296 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 100 105 <210> 297 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 297 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 298 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 298 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asp Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro 100 105 110 Thr Val Ser 115 <210> 299 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 299 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 300 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 300 Asn Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser 20 25 30 Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln 85 90 95 Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 301 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 301 gacattcaga tgacccagtc tccgagctct ctgtccgcat cagtaggaga cagggtcacc 60 atcacatgca gagccagcga aagtgtcgac aattatggca ttagctttat gaactggttc 120 caacagaaac ccgggaaggc tcctaagctt ctgatttacg ctgcatccaa ccaaggctcc 180 ggggtaccct ctcgcttctc aggcagtgga tctgggacag acttcactct caccatttca 240 tctctgcagc ctgatgactt cgcaacctat tactgtcagc aaagtaagga ggttccgtgg 300 acgttcggtc aagggaccaa ggtggagatc aaa 333 <210> 302 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 302 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctgggagctc agtgaaggtt 60 tcctgcaaag cttctggcta caccttcact gactacaaca tgcactgggt gaggcaggct 120 cctggccaag gcctggaatg gattggatat atttatcctt acaatggtgg taccggctac 180 aaccagaagt tcaagagcaa ggccacaatt acagcagacg agagtactaa cacagcctac 240 atggaactct ccagcctgag gtctgaggac actgcagtct attactgcgc aagagggcgc 300 cccgctatgg actactgggg ccaagggact ctggtcactg tctcttca 348 <210> 303 <211> 242 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 303 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val 115 120 125 Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val 130 135 140 Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met 145 150 155 160 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr 165 170 175 Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ser 180 185 190 Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu 195 200 205 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 210 215 220 Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 225 230 235 240 Ser Ser <210> 304 <211> 726 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 304 gacattcaga tgacccagtc tccgagctct ctgtccgcat cagtaggaga cagggtcacc 60 atcacatgca gagccagcga aagtgtcgac aattatggca ttagctttat gaactggttc 120 caacagaaac ccgggaaggc tcctaagctt ctgatttacg ctgcatccaa ccaaggctcc 180 ggggtaccct ctcgcttctc aggcagtgga tctgggacag acttcactct caccatttca 240 tctctgcagc ctgatgactt cgcaacctat tactgtcagc aaagtaagga ggttccgtgg 300 acgttcggtc aagggaccaa ggtggagatc aaaggtggcg gtggctcggg cggtggtggg 360 tcgggtggcg gcggatctca ggttcagctg gtgcagtctg gagctgaggt gaagaagcct 420 gggagctcag tgaaggtttc ctgcaaagct tctggctaca ccttcactga ctacaacatg 480 cactgggtga ggcaggctcc tggccaaggc ctggaatgga ttggatatat ttatccttac 540 aatggtggta ccggctacaa ccagaagttc aagagcaagg ccacaattac agcagacgag 600 agtactaaca cagcctacat ggaactctcc agcctgaggt ctgaggacac tgcagtctat 660 tactgcgcaa gagggcgccc cgctatggac tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 720 tcttca 726 <210> 305 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 305 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Arg Ser Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 306 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 306 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Arg Ser Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 307 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 307 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Arg Ser Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 308 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 308 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Arg Ser Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Arg 115 <210> 309 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 309 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Arg Ser Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Leu 115 <210> 310 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 310 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 311 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 311 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 312 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 312 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 313 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 313 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 314 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 314 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Thr Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Glu Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Cys Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 315 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 315 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Leu Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 316 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 316 caggtgcaac tgcaggaatc aggtccaggc ttggtcaagc catcgcagac tcttagtctg 60 acatgcaccg tgagtggcta tagcatcgtg tcgcactatt attggtcttg gatcaggcag 120 catccaggaa agggactgga gtggatcggg tacattagca gcgatgggag caactattac 180 aacccatctc tgaagtccct ggtaactatt agcgtggata caagcaaaaa tcagttttca 240 ttaaagctct cttcagtgac cgcagctgat accgccgtct attattgcgt gcggggggtg 300 gactactggg gtcagggcac catggttact gtgtcatca 339 <210> 317 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 317 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 318 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 318 caggtacagc tgcaggagag tggccctggt ttagtaaagc catcagatac actttcactt 60 acctgcgccg tgtctggtta ttctatcgtg agccactatt actggggatg gatccgccag 120 ccccctggca aaggtcttga gtggattggc tatataagtt cggatggcag taactattac 180 aatccttctc tgaagagccg tgtcactatg agcgtggaca ctagcaaaaa ccagttcagc 240 ctgaagctgt cctccgtcac cgccgtagac accgctgtct actattgtgt taggggggtg 300 gactactggg gccaaggcac catggtcacg gtgagcagc 339 <210> 319 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 319 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 320 <400> 320 000 <210> 321 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 321 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ser Ala Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 322 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 322 gaggtgcagc tcgtcgagtc cggaggcggt ctggtgcaac ccggccgttc tttgcggctg 60 agttgcgctg ccagtgggta tagcatcgtg agtcactatt acatgcattg ggttcgtcaa 120 gcccctggca agggactaga gtgggtgtcc gccatctcct cagacggtag taatgagtac 180 gcggacagcg tagagggtag attcaccatt tctcgggaca atgccaaaaa tagtctatac 240 ctccaaatga attcccttag ggccgaagac actgccgtgt actactgtgt tcggggcgtg 300 gactactggg ggcaggggac attggtgact gtgagctca 339 <210> 323 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 323 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Leu Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 324 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 324 caggtccaac tgcaggaatc tggccccgga ctggttaaac catctcagac actctccctg 60 acctgcaccg tgtctggata cagcatcgtt tctcattatt actggtcatg gattaggcag 120 catcccggaa aagggcttga atggattggc tacatctcct ccgacggctc caatgagtac 180 aacccatcac ttaaatctct ggtcacgata agcgtagaca catctaaaaa tcagttctca 240 ttaaagctca gctctgttac agctgccgac accgctgtgt acttctgtgt gcgaggggtt 300 gactactggg ggcagggcac aatggtgaca gtgtcttcc 339 <210> 325 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 325 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 326 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 326 caggttcaac tggttcagtc cggagccgag gtcaaaaagc ctggatcctc tgtgaaggtg 60 tcatgtaagg cttctggcta cagcatcgtc tcacattatt acatatcttg ggtgcgacag 120 gcccccggcc aggggctcga gtggatggga ggtatttcct ccgacgggag taacaattac 180 gctcagaaat ttcagggccg ggtgaccatt accgccgacg aaagtacaag caccgcttat 240 atggaattaa gctctttaag atcagaggac acggctgtgt actactgtgt aaggggcgtg 300 gattactggg gtcaggggac gctcgtcacc gtctcgagc 339 <210> 327 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 327 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 328 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 328 caggtccagc tccaggaatc cggcccaggg ttggtgaagc cttcggagac cctgtctctg 60 acatgcacag tcagcggcta tagtatcgtc tcccactatt attggtcttg gattcggcaa 120 cctccaggca aggggttaga atggattgga tacatctcaa gcgatgggtc caataactac 180 aacccaagtc tcaaaagtag agtgactatc tctgtggata ccagtaaaaa ccagttttca 240 ctcaagttga gttccgtcac cgccgccgac acagccgttt actactgtgt tcggggagtg 300 gactactggg gccaaggtac cacggttacc gtgagcagc 339 <210> 329 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 329 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 330 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 330 gacatacaga tgactcagag cccctcctca ctctcggcat cagtcggcga cagggtcaca 60 attacctgtc aggcttctcg cgacattaat aacttcctga attggtatca gcaaaagccc 120 gggaaggccc ctaagctgtt gatttataga gcaaataatc tcgaaaccgg cgtgcccagt 180 aggtttagcg ggtccgggag cggaacagac ttcacattca ccatttctag tttgcagccc 240 gaagacattg ctacatattt ttgcctgcag tacggggatc tctacacttt cgggggcgga 300 acaaaggttg agataaaa 318 <210> 331 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 331 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 332 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 332 gatattcaaa tgacgcagtc accctcatcg ctctctgcgt cagtagggga tcgtgtcacg 60 ataacctgtc aagcatcaag ggacatcaac aacttcctca actggtacca acagaagcct 120 ggcaaggcac ctaaactcct gatctaccgg gctaacaacc tagaaaccgg ggttccgagc 180 cgattcagtg ggtctggaag cgggacagac tttacgttca ctattagttc gctacagccc 240 gaagacattg cgacatatta ctgtcttcag tatggggatt tgtatacctt tgggggaggc 300 accaaggtag agataaag 318 <210> 333 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 333 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 334 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 334 gacatccaga tgactcagag cccgtcttct ctatccgcaa gtgtaggcga tcgtgtcacc 60 atcacatgcc gggcttcccg ggatatcaac aacttccttg ggtggtatca gcagaagccc 120 ggaaaagccc ccaaacggct catctacaga gcgaattccc tgcagtcagg tgtccccagt 180 aggttcagcg gatcaggctc ggggaccgaa ttcactctga ccattagctc actgcagcct 240 gaggatttcg ctacttacta ttgcctgcaa tacggcgatc tgtacacttt cgggcagggc 300 accaaggtgg aaataaaa 318 <210> 335 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 335 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 336 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 336 gaaatcgtac tgacccagtc tcccggaacc ctgagtctct cacccggcga gcgcgcaaca 60 ctgtcgtgta gggccagtag ggacataaat aacttcctag cctggtacca acaaaaaccg 120 ggtcaggctc caagactgtt gatctataga gctaactcca gggccaccgg catcccagac 180 cgattctcag gctccggatc tggaaccgac ttcacgctca ccattagccg actagaacct 240 gaggactttg ctgtatacta ttgcctgcag tacggcgacc tgtatacctt tggacagggt 300 accaaggtcg agatcaag 318 <210> 337 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 337 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 338 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 338 gagatcgtac ttacgcagag cccagcaact ctgtctctgt cccccggaga acgggccacc 60 ctgtcgtgcc gggccagccg tgatattaat aatttcctgg cctggtatca acaaaaaccg 120 gggcaggctc ctcgactgtt gatctaccgg gccaacaata gagcaactgg tatccctgct 180 cgcttctccg gcagtgggcc aggtacagac ttcaccctga ctatttcgtc actcgaacca 240 gaagactttg ccgtgtatta ttgcttacaa tacggggatc tgtacacttt cggaggagga 300 actaaggtcg aaattaag 318 <210> 339 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 339 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Arg Ala Asn Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 340 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 340 gagatcgtgc tgacccagag ccccgacttc cagagcgtga cccccaagga gaaggtgacc 60 atcacctgca gagccagcag agacatcaac aacttcctgc actggtacca gcagaagccc 120 gaccagagcc ccaagctgct gatcaagaga gccaaccaga gcttcagcgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcaacag cctggaggcc 240 gaggacgccg ccacctacta ctgcctgcag tacggcgacc tgtacacctt cggccagggc 300 accaaggtgg agatcaag 318 <210> 341 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 341 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 342 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 342 gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgca gagccagcag agacatcaac aacttcctgg cctggttcca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagagcct gatctacaga gccaacagcc tgcagagcgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacttcg ccacctacta ctgcctgcag tacggcgacc tgtacacctt cggcggcggc 300 accaaggtgg agatcaag 318 <210> 343 <211> 234 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 343 Asp Ile Lys Met Ala Gln Ser Pro Ser Ser Val Asn Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ser Trp Phe His Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser 115 120 125 Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser 130 135 140 Val Thr Gly Tyr Ser Ile Val Ser His Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg 145 150 155 160 Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Ser Asp 165 170 175 Gly Ser Asn Glu Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Ser 180 185 190 Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys Phe Asp Phe Val Thr 195 200 205 Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 225 230 <210> 344 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 344 gacatcaaga tggctcagtc cccttctagc gtgaatgctt cgctagggga gcgtgtgacc 60 atcacatgta aagcatcacg cgacataaat aatttccttt cctggtttca tcagaaaccg 120 ggcaagtcgc ctaagacgct gatttacaga gcaaatcggt tggtagatgg agtgccaagc 180 agattcagcg ggagcggaag tggacaggat tatagcttca ctatttcatc cctggaatac 240 gaggacgtag gtatctatta ttgcctccag tatggcgatc tttacacatt tggtgggggg 300 actaagctgg agattaaggg cggaggcgga agcggaggcg gaggctccgg cggaggcgga 360 agcgacgtgc aacttctgga gagcgggcca gggctagtca ggccctccca gtcgctttca 420 ctgacttgca gtgtgaccgg ttactctatt gtgagtcact actattggaa ctggattcgg 480 cagttcccag gcaacaaact ggaatggatg gggtacatat cttccgatgg ctcgaatgaa 540 tataacccat cattgaaaaa tcgtatttcc atcagtctgg atacgagtaa aaaccagttt 600 ttcctcaaat tcgatttcgt gactacagca gatactgcca catacttctg tgtacgaggt 660 gtcgattatt ggggacaggg cacaacgctg accgtaagtt ct 702 <210> 345 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 345 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 346 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 346 gaggtgcagc tcgtggaatc cggcggtggc ctggtgcagc cgggcggcag tcttcgactc 60 tcctgtgcgg cgtcaggctt tacgttcagt tcttatgcca tgagctgggt gaggcaagct 120 cccggtaagg gactggagtg ggtctctgct atcagccggg gaggtacgac ctactacgct 180 gactccgtaa aaggaagatt taccataagt cgtgacaatt ccaaaaacac tctatactta 240 cagatgaact cgctcagggc cgaagatacc gcagtctact attgtgggag atacgattac 300 gacggctact atgctatgga ttattggggt cagggtacgc tcgtgacggt gtcctcc 357 <210> 347 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 347 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 348 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 348 gatattcaaa tgacgcaaag tcccagcagc ctctccgcct ccgttggaga cagggtgact 60 attacatgcc aagccagccc cgatattaat agctacttaa attggtatca gcagaaacct 120 gggaaggcac ctaaacttct catctaccgc gctaacaatc tggagaccgg cgtgccgtct 180 agattttccg gctctggatc agggaccgat tttactctga caattagttc cctgcaaccc 240 gaagacatcg ccacttatta ttgcctgcaa tatgatgagt ttccttacac atttggtcag 300 ggaactaaac tagagattaa g 321 <210> 349 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 349 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 350 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 350 gaagtgcaac tggtcgagtc tgggggcggc cttgtgcaac ctggaggcag ccttcgactc 60 agttgcgccg cgtctggttt taccttctcc tcttacgcga tgagctgggt tcgccaggcc 120 cccggcaagg gacttgagtg ggttagttcg atctcccgcg gaggcaccac atattatcct 180 gactcggtta agggacgctt cactatctct agggacaatt caaagaacac actgtatctc 240 caaatgaact ccttgcgggc cgaggacact gctgtgtatt attgcggacg atacgactac 300 gatgggtatt acgccatgga ttactggggg caaggtacac tggtcactgt gagttcg 357 <210> 351 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 351 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 352 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 352 gatattcaga tgacccagtc accttcgagt ctgagcgcat ccgtgggcga cagagtgacc 60 attacctgta aggccagccc ggacattaac agctacctat cgtggtatca gcaaaagcct 120 ggtaaggccc ctaaactcct tatctacagg gctaataggt tggtagacgg ggtgcctagc 180 cggttctctg gttccggcag cggtacggac tttactctga ccataagctc tctgcaacca 240 gaagacatcg caacatacta ctgtttacaa tacgacgaat ttccttatac ctttggccag 300 gggaccaagt tagagatcaa g 321 <210> 353 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 353 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Glu Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 354 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 354 gaggttcagc tggtcgagtc cgggggaggc ttagtgcagc caggaggcag tctgcggctc 60 tcttgcgctg caagtggctt cacattcagt tcatacgcaa tcatctgggt tcgacaggct 120 cctggtaagg gcctcgaatg ggtcgcaagg atatcacgag gtggaaccac tagatacgca 180 gactctgtta agggcaggtt cacaattagc gcggatacct ccaaggagac tgcttattta 240 cagatgaact ctctgagagc cgaggacact gctgtttact actgcggccg atacgattac 300 gacggatatt acgcaatgga ttactggggc cagggcacgc tggtgacagt ttcatcg 357 <210> 355 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 355 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 356 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 356 gatatccaga tgactcagag tcccagtagc ctgtcggcaa gcgtcggaga tcgggtcaca 60 attacctgca aagctagtcc tgatattaat tcttacttgt cctggtatca gcagaagcct 120 ggtaaggccc ctaagttgct catctatcgg gctaaccggc tggtggacgg tgttccctct 180 agattctcag ggagtggaag cggcactgac ttcaccctga ctatatcgag ccttcagcca 240 gaggacattg ccacatacta ctgtctgcaa tatgatgaat ttccatatac attcggacaa 300 ggtacaaagt tagaaattaa g 321 <210> 357 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 357 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Glu Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 358 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 358 gaagtccaac tggtggagtc tggcgggggc ttggtgcagc ccggtggctc ccttaggctg 60 tcttgcgctg ccagcgggtt cacattcagc tcctatgcga ttatatgggt ccgacaggca 120 cccggcaagg gattggagtg ggtggctcgc atcagcagag gcggcactac tcgttacgcc 180 gactccgtga aaggcagatt caccatcagt gcagacacat ccaaggaaac cgcatatctt 240 cagatgaata gcctgcgagc ggaggatacc gccgtctatt attgcggacg ctatgattac 300 gacggttatt atgctatgga ctactggggc cagggcacac ttgtgaccgt cagtagc 357 <210> 359 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 359 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Phe Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 360 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 360 gacattcaaa tgacgcaaag ccctagtagc ttgtcagctt ctgtggggga ccgtgtcaca 60 atcacttgtc gggcctctcc agatataaac tcctacgttg cttggtatca gcagaagccc 120 ggaaaggctc cgaaattgtt gatttatcgc gctaatttct tagagtcagg agtgcccagc 180 cggttctcag ggtctcgctc tggaaccgac ttcacactca ctatttctag cctacagcct 240 gaggattttg caacttacta ctgtctacag tacgacgagt ttccgtacac tttcggacag 300 gggaccaagg tggagatcaa g 321 <210> 361 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 361 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ile Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 362 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 362 caagtacagc tcgtgcagag cggcggtggc ctggtgaagc caggaggtag tcttagactg 60 agctgtgcgg cttctggttt cacgttcagc agttatgcta tgtcctgggt taggcaaatc 120 cccggcaaag gattggagtg ggttagcagt atctcaaggg ggggaaccac atattatcct 180 gactctgtca aaggacggtt tacaatcagc cgcgataacg ttaaaaatac cctctacctc 240 cagatgtctt cgctccgcgc tgaagataca gcggtttact actgtggcag atacgactac 300 gacggttatt acgccatgga ctactgggga cagggaacta tggtcacagt tagctct 357 <210> 363 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 363 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 364 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 364 gacatcaaaa tgacgcagtc acctagtagc ctctccgcct cggttggcga tcgggtaacc 60 attacctgca aagcatctcc agacataaat agttatctta gttggtatca acagaaacct 120 ggcaaagctc ctaagaccct catctaccgc gctaaccgcc tcgtggatgg tgttccaagt 180 cggttctcag gaagcggcag tggcacagac tttacactga caattagttc cctccagtat 240 gaggatatgg ccatatatta ctgccttcag tatgatgagt ttccatacac attcggagac 300 ggtacaaagg tggagatcaa g 321 <210> 365 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 365 Gln Val Ser Leu Arg Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr His Phe Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asp Asn Val Arg Asp Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 366 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 366 caagtgagcc tccgggagag tgggggcggt ctggtccaac caggacggtc actgcggctg 60 tcatgcactg ccagcggctt cacatttagc tcttacgcca tgacttgggt ccgccaagct 120 cccggtaagg gactggagtg ggtggccagc attagcaggg gtggtacaac ccacttcgcg 180 gattcagtta aggggagatt cactatctcc agggataatt ccaacaacac gctgtacctt 240 cagatggata acgtgagaga cgaggatacc gcgatatact actgtggccg ctatgactac 300 gatggttatt atgctatgga ttactggggg cggggcaccc tggtgactgt gtcctcg 357 <210> 367 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 367 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys 100 105 <210> 368 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 368 gatatcgtga tgacacagtc acctagctcc ctgagcgcaa gcgtggggga tagggttacc 60 ataacttgca gggccagtcc cgacatcaat agttatttgg cctggtatca acagaagcct 120 gggaaggcac ctaagttgct tatttatagg gctaactcgt tacagagcgg tgtgccaagt 180 cggttctcag gctcagggtc cgggaccgag ttcaccctga ccatcagtag cttgcagcca 240 gaagattttg ccacctacta ctgtcttcaa tacgatgagt ttccttacac ttttggacag 300 ggcaccaaac tagagatgaa g 321 <210> 369 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 369 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Ala Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ile Ile Ser Arg Gly Gly Thr Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 370 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 370 caggttcaac tggtagaatc cggcggaggt gtagtgcagc ctggaaggtc attacggtta 60 agttgcgccg cctccgggtt cacatttagc agctatgcta tgaactgggt gcgccaggcc 120 cctgcgaaag gactcgaatg ggttgccatc atcagccgag gaggcacaca gtattatgcc 180 gattctgtga agggtcgttt tactatttcc agagacaaca gtaaaaatac gctgtacctg 240 caaatgaacg gattgagggc tgaggatacc gccgtgtact actgtggacg ctacgactat 300 gatgggtact acgcgatgga ctattggggg caaggaaccc ttgtaaccgt tagttca 357 <210> 371 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 371 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Arg Ala Asn Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 372 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 372 gagatcgttt tgacacagag ccccgatttc cagagcgtca cgcccaagga gaaggtcacc 60 atcacctgcc gagccagccc cgacatcaac agttatcttt catggtatca acagaaacct 120 gatcagagcc ctaagctgct gattaagcgc gccaaccaga gcttctcagg ggttccttca 180 cggttttccg ggtcaggcag cgggactgac ttcacgttga ccattaactc tttggaggct 240 gaggatgctg ctgcctatta ctgccttcag tacgacgagt tcccctatac atttggtcct 300 ggaacaaaag tggatataaa g 321 <210> 373 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 373 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Glu Lys Phe Lys 50 55 60 Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 374 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 374 caggtgcagc tcgtccagag cggagccgaa gtgaagaagc cgggagcatc agtgaaagtt 60 tcctgcaaag caagtggctt cactttcagc agttacgcga tgcactgggt gcggcaggca 120 ccaggtcagg gactggaatg gatggggaac atctctcgcg gcggaacaac caattacgca 180 gagaagttta agaatcgcgt tacgatgacc agagacactt ctattagtac agcctatatg 240 gagttgtcgc gtctgagaag cgacgatacc gctgtctact attgcggccg gtacgattat 300 gacggctact atgcaatgga ttactgggga cagggcacac ttgtgacagt gtctagt 357 <210> 375 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 375 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Asp Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 376 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 376 gacattgtga tgactcagtc tccactcagc ctgcctgtca cgcccggcga acccgcttct 60 atctcttgta ggagtagccc tgatatcaac agctacctcg aatggtatct ccagaaacct 120 ggtcagagcc cccagctctt gatctataga gcaaacgaca ggttctctgg cgtgcctgat 180 aggttttccg gtagtggcag cggaaccgac ttcacactta agatttcaag ggtcgaggcc 240 gaggacgtgg gggtgtatta ctgcttacag tacgatgagt ttccgtatac attcgggcaa 300 ggcacaaagg tggaaattaa g 321 <210> 377 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 377 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Leu Arg Gln Val Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Arg Gly Gly Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Lys Thr Leu Ser Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 378 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 378 gaagtgcaac tggtcgaaag tggaggggga ctagtgcagc ccggagggtc actgaggcta 60 tcatgcaccg gctctggttt tactttttcc agctatgcca tgcactggct cagacaggtt 120 ccgggggaag gactggagtg ggttagcgga atctccagag gcggaactat tgactacgca 180 gacagcgtga aaggtaggtt taccatcagc agggacgatg ctaaaaagac cctgtcactt 240 caaatgaata gcctgagagc tgaggatacg gccgtgtatt actgtggacg ctatgactac 300 gatggatatt acgcaatgga ctactggggc cagggaacaa tggtgaccgt ctcaagc 357 <210> 379 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 379 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Phe 35 40 45 Ser Arg Ala Asn Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 380 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 380 gagatcgtcc tgacccagag cccagctact ttgtcagttt cgccaggcga gcgggccaca 60 ctgagctgta gggcttctcc tgatatcaat tcttacctgg cctggtatca acagaaaccg 120 ggacaggccc ctcgcctgct gttctcccgc gccaacaata gggcgactgg cataccagct 180 cggtttactg ggagtgggtc aggcactgat ttcacgctta caatcagtag cctggagccc 240 gaagacttcg ccatctacta ctgtttacaa tacgatgagt tcccctatac cttcggccaa 300 gggaccaagg tggagatcaa g 321 <210> 381 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 381 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 382 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 382 gaagtgcagc tagtagaaag tggtggtggg gtcgtgcagc caggccgctc gctcaggctg 60 tcttgcgctg cgagtggttt cacattctct tcatacgcca tgagctgggt gagacaggct 120 cccggcaagg gcctcgaatg ggtcgcatct ataagcagag gcggaaccca gtactacgct 180 gacagtgtga agggtcgctt tacaatctca cgggacaaca gtaaaaacac cctctatcta 240 cagatgaatg gcttgcgagc tgaagacacg gctgtgtatt attgcgggcg ctatgactat 300 gatggttact acgctatgga ttactggggc cagggcaccc tggttactgt ttcatca 357 <210> 383 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 383 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Pro Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Arg Ala Asn Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 384 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 384 gaaatagtcc tgacccagag cccagacttc cagtccgtga cccctaagga gaaggttact 60 atcacttgca gggcaagccc tgacataaat tcatacctgc catggtatca gcagaagcca 120 gaccagtcgc cgaagctatt aatcaaacgc gccaaccagt cttttagcgg cgtaccatcc 180 cgattctcag gttcggggtc cgggaccgat ttcacactca cgataaactc ccttgaggca 240 gaggatgcag cggcttacta ctgtttacag tacgacgagt ttccatatac gttcggcccc 300 ggcacgaagg tagatatcaa g 321 <210> 385 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 385 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 386 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 386 gaagtgcagc tggtggagtc tggcggcggt ctggtgcagc ccggcggctc tctgcgcctc 60 tcctgtgcca cctctggttt tacattctcc tcctacgcta tgtcctggat gcggcaagcc 120 cccggcaagg gcctagagtg ggtcgcctca atcagcaggg gcgggacgac ttattatgcc 180 gattcagtta aggggagatt cacaatttcc gtggataaat ccaagaatac cttatacctc 240 cagatgaact ctctgcgggc cgaagatacg gccgtatatt attgtgggag gtatgactac 300 gacggatatt acgccatgga ttattggggg caggggacac ttgttacagt gagttcc 357 <210> 387 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 387 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 388 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 388 gatatacaga tgacacagag cccttcaagt ttatctgcaa gcgtcggcga tcgtgttaca 60 ataacttgca aggcatctcc cgacatcaat tcctacctca actggtatca gcagaagcct 120 gggaaggctc ctaagctgct tatttacaga gcaaatcgcc tggtggacgg cgtgcccagt 180 cggttttccg ggtctgggag cggaacggat tacacactga ccatctcaag cctgcaaccc 240 gaagacttcg ctacatatta ctgccttcag tatgatgagt tcccatatac cttcggcgct 300 gggaccaagg tggagataaa g 321 <210> 389 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 389 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Arg Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gly Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 390 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 390 gaggtccagc tcgtcgaatc tggcggaggt ttagtgcaac caggcgggtc gctccgatta 60 agttgtgcgt ccagtggctt caccttctcc agctacgcca tgtcgtggag gcgacaggct 120 cctggcaaag gcttggagtg ggttgctggt atctcccgag gaggcaccac tagttacgct 180 gacagtgtaa aaggacgttt cactatttcc tctgacgaca gcaagaacac actctatctg 240 caaatgaata gtctccgtgc tgaggacaca gccgtgtatt attgcgggcg gtatgattac 300 gacggctact acgctatgga ctactggggc cagggaactc tggtcactgt gagctct 357 <210> 391 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 391 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Ile Glu Ile Lys 100 105 <210> 392 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 392 gatatacaga tgactcaaag tcctagctcc ttgagcgcct cagtgggaga tcgggtcact 60 ataacttgta gagcctcacc agatataaac tcctatctct cttggtatca gcagaagccc 120 ggcaaagcac caaagctctt gatctataga gctaatacgc tagagagcgg agtgccttca 180 cggttttctg gttccgggag cggaaccgac tttaccctta caatttctag cctccagcca 240 gaggacttcg caacttacta ttgtctccag tatgatgaat ttccttacac cttcggccaa 300 gggaccaaga tcgagataaa g 321 <210> 393 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 393 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gly Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 394 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 394 gaggtgcagc tcgttgagtc cggtgggggg ctggtgcagc ctggcgggtc tctccgcctc 60 tcttgtgcct cctccggctt taccttcagc agctatgcta tgtcatgggt gcggcaggca 120 ccaggcaaag gtctggaatg ggtcgctggg atcagtagag gcggcacaac ctcctatgcc 180 gacagcgtta aggggaggtt cacaatctcg gctgatacaa gcaagaacac tctgtatctc 240 caaatgaaca gtctccgggc agaggacacc gcggtctatt actgcggccg gtacgactac 300 gacgggtact acgcaatgga ctattgggga cagggaactc tggttactgt cagctct 357 <210> 395 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 395 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 396 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 396 gatatccaga tgactcaaag cccatcttct ctcagcgcaa gcgtgggtga ccgagtgacc 60 atcacctgcc gggcgtctcc tgatatcaac tcatacctgt cctggtatca gcagaagccc 120 ggaaaggccc ctaagctgct gatctaccgc gcaaatacac tggagagcgg ggtcccaagc 180 agattcagtg ggtccggcag tggtacggac tttactctga ccatcagctc cctgcaaccg 240 gaggactttg ctacttatta ctgtctccag tacgacgagt tcccatacac tttcggaaca 300 ggcactaagc tggagatcaa a 321 <210> 397 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 397 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 398 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 398 gaggttcaac ttgtggaatc cggcggcggg ttagtccagc ccggcgggag cttgcggctg 60 tcctgcgccg cctctggatt cacttttagc tcctatgcta tgtcttgggt aaggcaggcc 120 cctggtaaag gactagagtg ggtggcctcg atctcccgtg gtggcactac atactacgcc 180 gactccgtta aaggccggtt taccatctcc cgtgacaact ctaaaaatac tttgtacctg 240 caaatgaact ccctgcgggc agaagacaca gccgtgtact attgcgggcg ttacgattac 300 gacggatatt acgcaatgga ctactggggc cagggcacac tggtcaccgt gagcagc 357 <210> 399 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 399 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 400 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 400 gatatacaaa tgactcagtc ccctagtagc cttagtgcta gtgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgca aagcatctcc tgatatcaat tcctacctta actggtatca acagaagcct 120 ggcaaagctc caaagctcct gatttatcgc gcgaacagat tggtcgatgg ggtcccttcc 180 agattcagcg gctcagggtc agggaccgat ttcaccctca caattagttc acttcagccc 240 gaggacatcg ccacgtatta ttgccttcag tacgatgagt tcccttacac ctttggcggg 300 ggaactaaag tcgaaattaa g 321 <210> 401 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 401 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 402 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 402 gaagtgcagc ttgtggagtc aggaggaggg ctagttcagc caggcggctc tctgagacta 60 tcttgtgctg cctccggctt cacatttagc tcttatgcaa tgtcctgggt ccgccaggcc 120 cctggtaaag gcctggaatg ggttgcttct atctctagag gcggaaccac ttactaccct 180 gattcagtga aggggagatt cacaattagt agggacaacg tgcggaacat cctctaccta 240 cagatgtcaa gtttacgcag tgaggacact gcgatgtatt actgcggtcg atacgattat 300 gatggatatt atgcaatgga ttattggggc cagggcactc tggtcacagt atcttcc 357 <210> 403 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 403 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 404 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 404 gacatccaga tgacccaatc accatcgagt cttagtgcat ccgttgggga tagagtgaca 60 atcacttgta aggcatcccc ggacatcaac tcatatctta attggtatca gcaaaagccg 120 ggcaaggccc ctaagctcct gatttatagg gccaaccgcc ttgtggatgg agtcccctcc 180 cgctttagtg gaagcggctc tggcacagac tacaccctga ctatcagctc cttgcagcct 240 gaggattttg ctacctacta ctgtcttcag tacgatgaat ttccatacac tttcggtgct 300 gggacaaaag tggagatcaa a 321 <210> 405 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 405 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Met Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 406 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 406 gaagtccagc tggttgagtc tggcggaggc ctcgtgcagc ccggtggttc cttgcgactg 60 tcatgcgcta ccagcgggtt cacattcagc tcttatgcaa tgtcctggat gcggaaggca 120 ccgggtaagg gcctggagta tgtggcctca atctcccgag gaggcaccac atactatgcc 180 gattctgtga aaggccgatt caccatttct gtggataagt ctaaaaacac tctctacctc 240 cagatgaact ccctacgtgc cgaagacaca gccgtgtatt attgcgggcg atacgattat 300 gacggttatt atgcgatgga ttactggggt caaggcacac tggtaacagt gtcttcc 357 <210> 407 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 407 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 408 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 408 gatattcaga tgacacaatc acctagctca ctgtcagcga gcgtcggtga ccgggttact 60 atcacatgca aagcctcacc cgatatcaat tcatacctta actggtatca acaaaaacca 120 ggaaaggctc caaagctgct aatttatcgg gccaatcggt tggtggatgg cgtcccgtcg 180 aggtttagtg gctccgggag cgggacagac tacactctta caatttcttc tctccagcca 240 gaggacttcg caacctacta ctgcttgcag tacgatgaat ttccatatac cttcggcgca 300 gggacaaaag tggaaatcaa a 321 <210> 409 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 409 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 410 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 410 gaggtgcagc ttgtagaaag cggggggggc ctggtgcaac ctggcgggtc cctgcggctt 60 agttgcgtta cgagcggatt tacattttcc agttatgcca tgtcttgggt gagacaagcc 120 cccggtaagg gtctggagtg ggtggcaagc attagccgag gcggcactac atactacagt 180 gatagtgtga aaggccgttt cacaatcagt agagataatt ctaaaaacac cctgtacttg 240 cagatgaaca gcctgcgcgc cgaggataca gccgtgtact actgtggaag atacgactac 300 gatggatatt atgcgatgga ttactgggga cagggaaccc ttgtcaccgt ttcctct 357 <210> 411 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 411 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 412 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 412 gacatagtgt tgacgcagtc ccctgccacc ctgagcctga gccccggaga gcgagcaacg 60 ttaagttgca aggccagtcc agatattaac tcatacatga attggtatca acagaaacca 120 ggccaggctc ctagacttct catatctcgg gcaaatcgac tggtggatgg agtacccgca 180 agattcagcg gcagcggcag cggaacggat ttcacgctca ccatctcttc ccttgagcct 240 gaggactttg cagtctatta ttgcttgcag tatgatgagt tcccctacac attcgggcaa 300 ggcacaaaag tggaaattaa g 321 <210> 413 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 413 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 50 55 60 Asp Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 414 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 414 gaggtgcagc tggtggagag cggagggggc cttgtccaac caggaggtag cctcaggctg 60 tcttgcgctg cctcaggatt tactttttca tcctacgcaa tgagctgggt gcggcaagcc 120 ccagggaagg gattagaatg ggttgccagc atttctaggg gggggacgac ctactacgat 180 ccgaagtttc aggatcgcgc cactatctca gccgataact ccaagaatac tgcctactta 240 cagatgaaca gcctgcgggc cgaagacacg gccgtctact attgcggccg atatgattac 300 gacggctatt acgccatgga ttactggggg caagggactc tggtcacagt gagctct 357 <210> 415 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 415 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 416 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 416 gatattcaga tgacccagtc gcccagcagt ctctcggcct cagtgggcga ccgggtcact 60 atcacttgca aagcaagtcc tgatataaac tcctatctta attggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggcac ctaaggttct gatatatcgc gcaaatcggc tcgtggatgg agtacccagc 180 cgattttccg gcagcggctc aggcactgac tacacactga caatcagcag cttgcagcct 240 gaagatttcg ccacatacta ttgtctacag tacgacgagt tcccttatac attcggccag 300 gggaccaagg tcgagatcaa g 321 <210> 417 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 417 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Leu Arg Gln Val Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Lys Thr Leu Ser Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 418 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 418 gaggtccaac tcgtggagag cggagggggg ctagtgcaac caggtggctc cctccgcttg 60 tcctgtacgg gctcggggtt cacattttca tcctatgcca tgagctggct gagacaggtg 120 cctggcgagg gcctggaatg ggtgtctagt atcagcagag ggggtacaac tgattacgca 180 gattccgtca agggacgttt taccatctca agagacgatg ccaagaagac attatcactc 240 caaatgaact cactgagggc cgaggacacc gctgtgtact attgtgggag atacgactac 300 gacggatact atgccatgga ctattgggga caaggcacga tggtgacggt atctagc 357 <210> 419 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 419 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Phe 35 40 45 Ser Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 420 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 420 gagatagtgc taacccagtc tcccgcaacc ctgtctgtgt cccccggaga gcgcgctact 60 ctgagctgca aagccagccc ggacattaat tcctaccttg cctggtatca gcagaagcct 120 ggacaggccc caagattgct cttttcacgc gccaaccgcc tggtagatgg tattccagct 180 aggtttacgg gctcaggcag cggaacagac ttcactctca ctattagctc attggagcct 240 gaggactttg caatttacta ttgtcttcag tacgacgagt tcccatatac tttcggccag 300 ggcacaaaag tagagatcaa g 321 <210> 421 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 421 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Ile 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg 50 55 60 Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Glu Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 422 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 422 gaggttcaac tcgtggagtc tggaggcggg ctagtgcagc ctggcggctc cctgcgactg 60 tcttgcagcg catcaggctt tacattcagt tcttatgcca tgagctgggt gaggcaggtg 120 cccggcaagg gtctggtgtg gatcagctca atctccaggg gcgggactac atattacgcc 180 gattcggtca ggggtcgttt tatcattagc agggataatg ccaagaacac cttgtatttg 240 gagatgaaca acctaagagg cgaagacacc gctgtgtact attgtgcccg ttacgactac 300 gatgggtact acgccatgga ctattggggc cagggaacct tggtgactgt gtcaagt 357 <210> 423 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 423 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 His Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 424 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 424 gacatacagt tgactcagtc accggattcg ctggcagttt cgctgggtga gagagcaacc 60 atcaactgca aagcatctcc cgatatcaac tcttatctgt cttggtatca gcagcgtccg 120 ggacaacccc ctaggctgct tattcaccga gccaacaggc tggtggacgg ggtgccagac 180 cgcttctcgg gatcaggatt tggaaccgat tttaccctaa caattactag tctccaagcg 240 gaagacgtgg cgatctatta ttgtctacaa tatgacgagt tcccctacac cttcggccag 300 ggcacgaagt tggagatcaa g 321 <210> 425 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 425 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 426 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 426 gaggtccagc tcgtcgaatc cggtggaggg ctagttcagc caggcggctc attgcgtttg 60 tcttgtgccg cctccggttt cacattctct tcttacgcta tgtcctgggt ccgacaagcc 120 ccaggaaaag gcttggaatg ggtggccagt atcagtagag gtgggactac atattatgcc 180 gactccgtga agggcagatt caccatctca gctgacacca gtaagaacac tgcctaccta 240 cagatgaaca gccttcgggc cgaggacacc gctgtgtatt actgtgcccg gtacgattat 300 gatggatatt atgctatgga ctattggggt caggggacct tggtgaccgt ctctagc 357 <210> 427 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 427 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 428 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 428 gacattcaga tgactcaatc gccgagttct cttagcgctt ctgttgggga ccgggtgaca 60 atcacatgca aggcctctcc cgatataaac tcctatctaa gctggtatca gcagaagcca 120 gggaaggccc ccaagttgtt aatctatcgc gccaacagac tggtggatgg ggtgccctct 180 cgattctccg ggagtggcag tgggactgat tttacactga ccatttcctc attgcagccc 240 gaagacttcg ctacctatta ctgcttgcag tacgatgagt tcccatatac attcggtcag 300 gggactaaag tggagataaa a 321 <210> 429 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 429 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 430 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 430 gaggtacagc tgctggaatc tggtgggggg ctggtccagc caggggggtc actacgactg 60 agctgcgctg cctccggttt tacattcagc agctatgcaa tgtcatgggt cagacaggca 120 ccaggtaaag gcctcgaatg ggtatcctcc atctcacgtg gtgggaccac ttactatgcc 180 gatagtgtga agggcaggtt cacgatctca agagataatt caaagaatac actctatcta 240 caaatgaaca gtttaagggc cgaggacacc gctgtttact attgtgccag atatgactac 300 gacggttatt atgctatgga ttactgggga caaggaacgc tggtaactgt tagctct 357 <210> 431 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 431 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 432 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 432 gacatccaaa tgacccagtc gccttcctcc ttgtctgcat ctgtcggaga tcgggtgacg 60 atcacttgca aagcgagtcc agacatcaac tcatatctgt cctggtatca gcagaagccg 120 ggagaggcac ctaagctcct gatctacaga gcaaacagat tagtggatgg tgtgccctca 180 cggttttctg gctccgggtc cggcaccgat ttcaccttga ccatctcatc cctacagccc 240 gaggatttcg ctacttacta ttgcttacag tatgatgagt ttccatacac cttcggtcaa 300 ggcaccaagg ttgagattaa g 321 <210> 433 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 433 Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp His Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Leu Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 434 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 434 gaagttcaac tgcttgagac cggaggcggc ctggtaaaac ctgggggctc actgaggctg 60 agttgtgccg cttctgggtt caccttttca tcctatgcga tgtcatggat acggcaggct 120 cctgggaagg ggcttgagtg ggttgcatca atttcacgag gtgggacaac ttattatggg 180 gattccgtta aaggtagatt tacgatctct agagaccatg ccaaaaattc tctctatctc 240 cagatgaata gtcttagggt ggaggacacc gctgtgtact actgtgtccg gtacgactat 300 gatgggtact atgctatgga ctattggggg ctcggcactc tggtcactgt tagctct 357 <210> 435 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 435 Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 436 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 436 gccatccgca tgacacaatc tccctccttc ctttctgcca gtgtcgggga cagagtgact 60 atcacatgca aagccagccc agatattaat tcgtacctgt cttggtatca gcagaggccc 120 ggcaaggcac caaagctgtt gatatatcgg gccaaccgct tagtggacgg tgtcccctct 180 cgattcagcg gaggcggtag cgggacggac tttacactga ccatctccag tctccaaccc 240 gaggatattg ccacttacta ttgtcttcag tatgacgagt tcccctacac atttggacag 300 ggcaccaagc tagaaattaa g 321 <210> 437 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 437 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Leu Glu 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 438 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 438 gaggttcagc tggtggagtc tggtgggggg ctcgtacagc cgggtggctc cctaaggctg 60 agttgcgctg cctcaggctt taccttctca agctacgcga tgtcctgggt gagacaggcc 120 cctggcaaag gactggagtg ggtggcaagc attagccggg gcggaactac ctattacgct 180 gagtcgttag aggggcggtt tactatctcc agagacgatt caaagaactc gttatacttg 240 cagatgaaca gcctcaagac cgaggacacc gccgtgtact actgcgcccg gtacgactat 300 gacgggtact atgctatgga ttattgggga caaggcaccc tcgtgaccgt ctctagc 357 <210> 439 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 439 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 440 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 440 gacatccaga tgacacagtc cccttcttca ctttccgctt ctgtgggcga cagggtgacg 60 atcacgtgta aggcctcgcc agacattaat tcgtacttat cgtggtatca gcagaaaccg 120 ggtaaagctc cgaagactct gatctataga gcaaataggc tcgtagacgg tgtcccatct 180 agatttagtg ggagcggcag cggaaccgac ttcactctca ccatctcatc cctgcaaccg 240 gaggatttcg ctacttacta ttgcttgcag tatgacgagt ttccatatac gtttggtcag 300 ggaaccaaat tagagatcaa a 321 <210> 441 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 441 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ala Asn Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 442 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 442 caggtaacac tccgagagag tgggccagct ctcgtgaagc ccacgcagac tttaacacta 60 acgtgtgcgg caagcggctt tacattttcg agctacgcga tgagctggat aaggcaacct 120 cctgggaagg cgttggagtg gttggcctca attagccggg gtggcaccac ttactacaat 180 cctagtctta aggacagact tactatttca aaagatacgt ccgccaacca ggtggtactg 240 aaggtcacaa atatggaccc agctgacact gctacttact actgcgcccg gtacgattac 300 gatggttact acgctatgga ttactggggt caaggaacca cagtgaccgt cagttca 357 <210> 443 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 443 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 444 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 444 gatatccaga tgacgcagtc cccttcaacc ctcagtgcca gcgttggtga ccgggttact 60 atcacctgta aggctagtcc cgatataaat tcctatttgt cttggtatca gcagaagcca 120 ggcaaggctc ctaagctgct catctaccgg gctaacaggt tagttgacgg tgtgccctcc 180 cgattttccg gcagtggcag cgggaccgct ttcactctta caatctcatc tcttcaaccg 240 gacgacttcg ctacgtacta ctgcctccaa tatgatgagt ttccatacac attcggagga 300 ggcacaaaag tcgaaatcaa g 321 <210> 445 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 445 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Glu Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 446 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 446 gaagtccagc tggtggagtc cggcggaggc ttggttcagc ccggaggatc tttgcgactg 60 tcttgcgccg ccagcggttt cactttcagc agctatgcca tgagttgggt tagacaagct 120 cccggcaagg ggctggaatg ggttagtgct attagccggg gagggacaac atattacgct 180 gactctgtca aaggccgatt caccatctct gctgacacga gcaaagaaac cgcctacctc 240 caaatgaaca gcctgcgagc tgaggacact gccgtctact attgtggtcg atatgattat 300 gatgggtact atgcaatgga ctattggggg cagggcacac tggtgaccgt gagctct 357 <210> 447 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 447 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 448 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 448 gatattcaga tgacgcagag tccctcctcc ctatctgcct ctgttggaga tcgagtcacc 60 attacgtgta aagcgtctcc cgatatcaac agctacctct cttggtatca gcagaaacca 120 gggaaggccc ccaagctgct gatctataga gctaatcgct tagtggatgg agtgccaagc 180 aggttctccg ggtccggcag tggaaccgat ttcaccttga caataagtag cttgcaacct 240 gaggatattg caacatacta ctgtctacag tacgacgagt tcccctacac cttcggccaa 300 gggacaaagc tggagattaa g 321 <210> 449 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 449 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 450 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 450 gaagtgcagc tcgtggagag cggcggcggt ctggtacagc caggggggtc actgcgtctc 60 tcatgtgctg cgagtggctt tacgttctct tcctacgcta tgtcctgggt caggcaggca 120 ccggggaagg gcttagagtg ggttagtgca atctctaggg gcggtacaac ctactatgcc 180 gactctgtca agggcaggtt tacaatttca agagataatt ctaagaatac tctttaccta 240 cagatgaata gcttgcgggc ggaagacaca gcagtctatt attgtggccg ctatgactac 300 gacggatact atgccatgga ctactggggc caaggcactt tggtcacggt gagctct 357 <210> 451 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 451 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 452 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 452 gacatccaga tgacccagag ccctagttca ttgtctgcca gtgtggggga tagggtcact 60 atcacgtgta aggcttcccc tgacatcaat tcatacctgt catggtatca gcagaagcct 120 ggaaaagccc ctaaactgct gatctaccgc gcgaataggc ttgtggacgg cgttccaagc 180 cgcttctctg gctctggatc agggaccgac ttcaccctca cgatctccag cctccaaccc 240 gaggatatcg ccacctatta ttgccttcag tacgatgagt tcccctatac attcggccag 300 gggacaaagc tggaaatcaa a 321 <210> 453 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 453 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Glu Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 454 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 454 gaggtccagc tcgtcgagtc gggtgggggc ttggtgcaac ccggtggcag tttgcgcctg 60 agctgcgccg cgagcgggtt cactttcagt tcgtatgcca tgagttgggt gcgacaagcg 120 cccggcaaag gactggagtg ggtgtcagcc attagccggg gcggtactac ctactatgcg 180 gactcggtca agggaagatt caccatcagc gctgatacca gtaaggaaac cgcttatctt 240 cagatgaact ccctgcgtgc cgaggataca gcagtctact attgcgggcg ctacgattat 300 gacggatatt atgccatgga ttactggggg cagggcactc tggtcacagt cagctct 357 <210> 455 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 455 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 456 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 456 gatattcaga tgacgcagtc tccctcttcc ctgagcgcct ccgtcggcga tagagttacg 60 atcacctgtc aggccagccc agatatcaac tcctatctga attggtatca gcaaaagcct 120 gggaaggctc ccaagttgct gatctacaga gccaataact tagagactgg cgtgccgtct 180 cggttcagcg ggtccggcag tggaaccgac tttacactga ccatttccag cctccaacct 240 gaggatatcg ccacatatta ttgtctccag tatgacgagt tcccttacac atttggtcaa 300 ggaactaaac tggaaatcaa a 321 <210> 457 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 457 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Glu Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 458 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 458 gaggtgcagc tggtcgaaag tggaggcgga ctcgtgcagc ccggcggtag tctgcgattg 60 agctgtgccg cgtccggctt tactttctca tcttacgcta tgagttgggt ccgccaggcc 120 ccaggcaaag gactggagtg ggtatcagcc atcagtaggg ggggaactac ctattacgca 180 gattctgtga agggacgctt caccatcagc gcggacacta gcaaggagac tgcctacctg 240 caaatgaata gtctgagagc cgaggatacc gccgtgtact attgtggcag gtatgactac 300 gatggctatt atgctatgga ttactggggc caggggacgt tagtgacagt aagctct 357 <210> 459 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 459 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Phe Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 460 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 460 gatattcaga tgacccaatc cccttcttct ctgagcgctt ctgtgggcga tagagttaca 60 ataacctgtc gggcgtcccc agacattaac tcttatgtag catggtatca gcaaaagcct 120 ggaaaggcac caaagttact gatctaccgg gccaattttc tggagtcggg cgtgccctca 180 cgatttagcg gtagcagatc aggcacagac tttactctga ccattagctc tctgcaaccc 240 gaggacttcg ccacctacta ctgtttgcag tatgacgagt ttccatacac ttttggtcaa 300 ggaaccaaag tcgaaatcaa a 321 <210> 461 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 461 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Phe Lys Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ser Ala Asp Phe Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Ala Ile Thr Lys Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 462 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 462 cagatacagc tggtgcagtc tggtgccgag gttaaaaagc ccggagcctc ggttaaagtg 60 agttgtgcgg caagcggatt cacgttcagt tcctacgcta tgtcctgggt gcggcaggct 120 cctggcaagt catttaagtg gatggggtcg atctcacggg gtggaaccac ctattactct 180 gccgacttca aggggagatt tgcgattaca aaagatacaa gcgcctctac ggcctacatg 240 gagttaagta gccttagaag cgaagacacg gcggtgtact actgcgccag atatgactat 300 gacggctact acgccatgga ctactggggc cagggcacac tggttacagt cagctct 357 <210> 463 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 463 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 464 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 464 gatatcgtga tgacacaaag cccagacagt ctggcagtgt ccctcggcga gcgcgctacc 60 atctcatgca aagctagtcc cgacatcaat tcctatctgt cctggtatca gcaaaaacca 120 ggccaacccc ccaagctgct tatctatcgg gctaaccgat tagtcgatgg ggtgccagat 180 agattttcag gctctggttc ccggacagat tttactctca cgatctcctc actacaggca 240 gaagatgttg cagtgtatta ctgcctgcaa tacgacgagt tcccctacac cttcggccaa 300 ggcacgaaag tggagatcaa g 321 <210> 465 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 465 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 130 135 140 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 145 150 155 160 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 210 215 220 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile 225 230 235 240 Lys <210> 466 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 466 gaagtgcaac tggtcgagtc tgggggcggc cttgtgcaac ctggaggcag ccttcgactc 60 agttgcgccg cgtctggttt taccttctcc tcttacgcga tgagctgggt tcgccaggcc 120 cccggcaagg gacttgagtg ggttagttcg atctcccgcg gaggcaccac atattatcct 180 gactcggtta agggacgctt cactatctct agggacaatt caaagaacac actgtatctc 240 caaatgaact ccttgcgggc cgaggacact gctgtgtatt attgcggacg atacgactac 300 gatgggtatt acgccatgga ttactggggg caaggtacac tggtcactgt gagttcgggg 360 ggcggcggaa gtggtggagg gggaagtggt ggaggaggaa gcgatataca gatgacacag 420 agcccttcaa gtttatctgc aagcgtcggc gatcgtgtta caataacttg caaggcatct 480 cccgacatca attcctacct caactggtat cagcagaagc ctgggaaggc tcctaagctg 540 cttatttaca gagcaaatcg cctggtggac ggcgtgccca gtcggttttc cgggtctggg 600 agcggaacgg attacacact gaccatctca agcctgcaac ccgaagactt cgctacatat 660 tactgccttc agtatgatga gttcccatat accttcggcg ctgggaccaa ggtggagata 720 aag 723 <210> 467 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 467 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 1 5 10 15 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala 20 25 30 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 35 40 45 <210> 468 <211> 141 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 468 aagcccacca ccacccctgc ccctagacct ccaaccccag cccctacaat cgccagccag 60 cccctgagcc tgaggcccga agcctgtaga cctgccgctg gcggagccgt gcacaccaga 120 ggcctggatt tcgcctgcga c 141 <210> 469 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 469 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 1 5 10 15 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 20 25 30 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 35 40 45 <210> 470 <211> 141 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 470 aagcctacca ccacccccgc acctcgtcct ccaacccctg cacctacgat tgccagtcag 60 cctctttcac tgcggcctga ggccagcaga ccagctgccg gcggtgccgt ccatacaaga 120 ggactggact tcgcgtccga t 141 <210> 471 <211> 141 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 471 aaacctacta ccactccagc cccaaggccc ccaaccccag caccgactat cgcatcacag 60 cctttgtcac tgcgtcctga agccagccgg ccagctgcag ggggggccgt ccacacaagg 120 ggactcgact ttgcgagtga t 141 <210> 472 <211> 141 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 472 aaacctacta caactcctgc cccccggcct cctacaccag ctcctactat cgcctcccag 60 ccactcagtc tcagacccga ggcttctagg ccagcggccg gaggcgcggt ccacacccgc 120 gggctggact ttgcatccga t 141 <210> 473 <211> 141 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 473 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 1 5 10 15 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 20 25 30 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 35 40 45 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 50 55 60 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala Ala 65 70 75 80 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys Pro 85 90 95 Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 100 105 110 Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 115 120 125 Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 130 135 140 <210> 474 <211> 423 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 474 aagcctacca ccacccccgc acctcgtcct ccaacccctg cacctacgat tgccagtcag 60 cctctttcac tgcggcctga ggccagcaga ccagctgccg gcggtgccgt ccatacaaga 120 ggactggact tcgcgtccga taaacctact accactccag ccccaaggcc cccaacccca 180 gcaccgacta tcgcatcaca gcctttgtca ctgcgtcctg aagccagccg gccagctgca 240 gggggggccg tccacacaag gggactcgac tttgcgagtg ataagcccac caccacccct 300 gcccctagac ctccaacccc agcccctaca atcgccagcc agcccctgag cctgaggccc 360 gaagcctgta gacctgccgc tggcggagcc gtgcacacca gaggcctgga tttcgcctgc 420 gac 423 <210> 475 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 475 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn 20 25 <210> 476 <211> 84 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 476 atctacatct gggcccctct ggccggcacc tgtggcgtgc tgctgctgag cctggtcatc 60 accctgtact gcaaccaccg gaat 84 <210> 477 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 477 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 20 25 30 <210> 478 <211> 96 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 478 ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg 60 gcctttatta ttttctgggt gaggagtaag aggagc 96 <210> 479 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 479 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 480 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 480 cgggtgaagt tcagccggag cgccgacgcc cctgcctacc agcagggcca gaaccagctg 60 tacaacgagc tgaacctggg ccggagggag gagtacgacg tgctggacaa gcggagaggc 120 cgggaccctg agatgggcgg caagccccgg agaaagaacc ctcaggaggg cctgtataac 180 gaactgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggcatgaa gggcgagcgg 240 cggaggggca agggccacga cggcctgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc 300 tacgacgccc tgcacatgca ggccctgccc cccaga 336 <210> 481 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 481 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 482 <211> 123 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 482 aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc ccggaggcct 60 ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg 120 agc 123 <210> 483 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 483 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 484 <211> 126 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 484 aagagaggcc ggaagaaact gctgtacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 60 accacccagg aagaggacgg ctgcagctgc cggttccccg aggaagagga aggcggctgc 120 gaactg 126 <210> 485 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 485 Leu Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln Glu Asp Gly Lys Val 1 5 10 15 Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly 20 <210> 486 <211> 72 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 486 ctgtgcgcac gcccacgccg cagccccgcc caagaagatg gcaaagtcta catcaacatg 60 ccaggcaggg gc 72 <210> 487 <211> 52 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 487 Tyr Phe Leu Gly Arg Leu Val Pro Arg Gly Arg Gly Ala Ala Glu Ala 1 5 10 15 Ala Thr Arg Lys Gln Arg Ile Thr Glu Thr Glu Ser Pro Tyr Gln Glu 20 25 30 Leu Gln Gly Gln Arg Ser Asp Val Tyr Ser Asp Leu Asn Thr Gln Arg 35 40 45 Pro Tyr Tyr Lys 50 <210> 488 <211> 156 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 488 tacttcctgg gccggctggt ccctcggggg cgaggggctg cggaggcagc gacccggaaa 60 cagcgtatca ctgagaccga gtcgccttat caggagctcc agggtcagag gtcggatgtc 120 tacagcgacc tcaacacaca gaggccgtat tacaaa 156 <210> 489 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 489 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro 20 <210> 490 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 490 atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60 atcccc 66 <210> 491 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 491 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Ser Gly 20 <210> 492 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 492 atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtcccagg atccagtggg 60 <210> 493 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 493 Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 1 5 10 15 His Ser <210> 494 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 494 atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagc 54 <210> 495 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 495 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro 20 <210> 496 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 496 atggcgctgc ccgtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccg 63 <210> 497 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 497 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser <210> 498 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 498 atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggctaccg ccaccggcgt gcacagc 57 <210> 499 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 499 Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser 1 5 10 15 Gly Leu Glu Ala 20 <210> 500 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 500 atgtctcgct ccgtggcctt agctgtgctc gcgctactct ctctttctgg cctggaggct 60 <210> 501 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 501 Met Thr Arg Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu Ala Gly Leu Leu Ala Ser 1 5 10 15 Ser Arg Ala <210> 502 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 502 atgacccggc tgacagtcct ggccctgctg gctggtctgc tggcgtcctc gagggcc 57 <210> 503 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 503 Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala 1 5 10 15 Tyr Ser <210> 504 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 504 atgaagtggg taacctttat ttcccttctt tttctcttta gctcggctta ttcc 54 <210> 505 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 505 Met Gly Lys Asn Lys Leu Leu His Pro Ser Leu Val Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Val Leu Leu Pro Thr Asp Ala 20 <210> 506 <211> 69 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 506 atggggaaga acaaactcct tcatccaagt ctggttcttc tcctcttggt cctcctgccc 60 acagacgcc 69 <210> 507 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 507 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys <210> 508 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 508 atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgt 57 <210> 509 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 509 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Ser Gly Ala Arg Cys 20 <210> 510 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 510 atggacatga gggtccctgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctggct ctcaggtgcc 60 agatgt 66 <210> 511 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 511 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Phe Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys <210> 512 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 512 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt ttagaggtgt ccagtgt 57 <210> 513 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 513 Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Asp His Ala Asp Ala 20 <210> 514 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 514 atgggcacca gcctcctctg ctggatggcc ctgtgtctcc tgggggcaga tcacgcagat 60 gct 63 <210> 515 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 515 Met Lys Arg Phe Leu Phe Leu Leu Leu Thr Ile Ser Leu Leu Val Met 1 5 10 15 Val Gln Ile Gln Thr Gly Leu Ser 20 <210> 516 <211> 72 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 516 atgaagcgct tcctcttcct cctactcacc atcagcctcc tggttatggt acagatacaa 60 actggactct ca 72 <210> 517 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 517 Met Gly Ala Gly Ala Thr Gly Arg Ala Met Asp Gly Pro Arg Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Ser Leu Gly Gly Ala 20 25 <210> 518 <211> 84 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 518 atgggggcag gtgccaccgg ccgcgccatg gacgggccgc gcctgctgct gttgctgctt 60 ctgggggtgt cccttggagg tgcc 84 <210> 519 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 519 Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 20 25 30 Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 35 40 45 Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 50 55 60 Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 65 70 75 80 Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 85 90 95 Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 100 105 110 Thr Ser <210> 520 <211> 342 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 520 aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60 attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120 aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180 gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240 acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300 cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gc 342 <210> 521 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 521 Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val 1 5 10 15 Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly 20 25 30 Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn 35 40 45 Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile 50 55 60 Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val 65 70 75 80 Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly 85 90 95 Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr 100 105 110 Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro 115 120 125 Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr 130 135 140 Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser 145 150 155 160 His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val 165 170 175 Ala Ile Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser 180 185 190 Leu Leu Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser 195 200 205 Val Glu Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser 210 215 220 Ser Arg Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu 225 230 235 <210> 522 <211> 711 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 522 attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 60 ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 120 tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 180 ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 240 acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 300 gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 360 cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 420 tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 480 caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacagtggc catcagcaca 540 tctacagtgc tgctgtgtgg actgtctgcc gtgtctctgc tggcctgtta cctgaagtct 600 agacagacac ctcctctggc ctctgtggag atggaggcca tggaagccct gcctgtgaca 660 tggggaacaa gcagcagaga tgaggacctg gagaattgtt ctcaccacct g 711 <210> 523 <211> 377 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 523 Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 20 25 30 Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 35 40 45 Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 50 55 60 Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 65 70 75 80 Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 85 90 95 Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 100 105 110 Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro 130 135 140 Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser 145 150 155 160 Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys 165 170 175 Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn 180 185 190 Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala 195 200 205 Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly 210 215 220 Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala 225 230 235 240 Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile 245 250 255 Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr 260 265 270 Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr 275 280 285 Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro 290 295 300 Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile Ser Thr 305 310 315 320 Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu Ala Cys 325 330 335 Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu Met Glu 340 345 350 Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg Asp Glu 355 360 365 Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu 370 375 <210> 524 <211> 1131 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 524 aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60 attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120 aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180 gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240 acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300 cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gctctggcgg aggatctgga 360 ggaggcggat ctggaggagg aggcagtgga ggcggaggat ctggcggagg atctctgcag 420 attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480 ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540 tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600 ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660 acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720 gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780 cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840 tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900 caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacagtggc catcagcaca 960 tctacagtgc tgctgtgtgg actgtctgcc gtgtctctgc tggcctgtta cctgaagtct 1020 agacagacac ctcctctggc ctctgtggag atggaggcca tggaagccct gcctgtgaca 1080 tggggaacaa gcagcagaga tgaggacctg gagaattgtt ctcaccacct g 1131 <210> 525 <211> 395 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 525 Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 1 5 10 15 His Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp 20 25 30 Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp 35 40 45 Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu 50 55 60 Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr 65 70 75 80 Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly 85 90 95 Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys 100 105 110 Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe 115 120 125 Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr 145 150 155 160 Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser 165 170 175 Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys 180 185 190 Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala 195 200 205 Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp 210 215 220 Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr 225 230 235 240 Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu 245 250 255 Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala 260 265 270 Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr 275 280 285 Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser 290 295 300 Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln 305 310 315 320 Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile 325 330 335 Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu 340 345 350 Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu 355 360 365 Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg 370 375 380 Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu 385 390 395 <210> 526 <211> 1185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 526 atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagcaactgg 60 gtgaatgtga tcagcgacct gaagaagatc gaggatctga tccagagcat gcacattgat 120 gccaccctgt acacagaatc tgatgtgcac cctagctgta aagtgaccgc catgaagtgt 180 tttctgctgg agctgcaggt gatttctctg gaaagcggag atgcctctat ccacgacaca 240 gtggagaatc tgatcatcct ggccaacaat agcctgagca gcaatggcaa tgtgacagag 300 tctggctgta aggagtgtga ggagctggag gagaagaaca tcaaggagtt tctgcagagc 360 tttgtgcaca tcgtgcagat gttcatcaat acaagctctg gcggaggatc tggaggaggc 420 ggatctggag gaggaggcag tggaggcgga ggatctggcg gaggatctct gcagattaca 480 tgccctcctc caatgtctgt ggagcacgcc gatatttggg tgaagtccta cagcctgtac 540 agcagagaga gatacatctg caacagcggc tttaagagaa aggccggcac ctcttctctg 600 acagagtgcg tgctgaataa ggccacaaat gtggcccact ggacaacacc tagcctgaag 660 tgcattagag atcctgccct ggtccaccag aggcctgccc ctccatctac agtgacaaca 720 gccggagtga cacctcagcc tgaatctctg agcccttctg gaaaagaacc tgccgccagc 780 tctcctagct ctaataatac cgccgccaca acagccgcca ttgtgcctgg atctcagctg 840 atgcctagca agtctcctag cacaggcaca acagagatca gcagccacga atcttctcac 900 ggaacacctt ctcagaccac cgccaagaat tgggagctga cagcctctgc ctctcaccag 960 cctccaggag tgtatcctca gggccactct gatacaacag tggccatcag cacatctaca 1020 gtgctgctgt gtggactgtc tgccgtgtct ctgctggcct gttacctgaa gtctagacag 1080 acacctcctc tggcctctgt ggagatggag gccatggaag ccctgcctgt gacatgggga 1140 acaagcagca gagatgagga cctggagaat tgttctcacc acctg 1185 <210> 527 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 527 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 528 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 528 ggcagcacct ccggcagcgg caagcctggc agcggcgagg gcagcaccaa gggc 54 <210> 529 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 529 Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln 20 25 <210> 530 <211> 78 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 530 tctggcggag gatctggagg aggcggatct ggaggaggag gcagtggagg cggaggatct 60 ggcggaggat ctctgcag 78 <210> 531 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 531 Gly Ser Gly 1 <210> 532 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 532 ggaagcgga 9 <210> 533 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 533 Ser Gly Ser Gly 1 <210> 534 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 534 agtggcagcg gc 12 <210> 535 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 535 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 536 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 536 ggtggcggtg gctcgggcgg tggtgggtcg ggtggcggcg gatct 45 <210> 537 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 537 Arg Ala Lys Arg 1 <210> 538 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 538 cgtgcaaagc gt 12 <210> 539 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 539 Arg Ala Lys Arg Ala Pro Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu 1 5 10 15 Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 25 <210> 540 <211> 84 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 540 agagccaaga gggcaccggt gaaacagact ttgaattttg accttctgaa gttggcagga 60 gacgttgagt ccaaccctgg gccc 84 <210> 541 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 541 Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro 1 5 10 15 Gly Pro <210> 542 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 542 gagggcagag gaagtctgct aacatgcggt gacgtcgagg agaatcctgg acct 54 <210> 543 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 543 Arg Ala Lys Arg Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys 1 5 10 15 Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 25 <210> 544 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 544 agagctaaga ggggaagcgg agagggcaga ggaagtctgc taacatgcgg tgacgtcgag 60 gagaatcctg gacct 75 <210> 545 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 545 Arg Ala Lys Arg Ser Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr 1 5 10 15 Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 25 <210> 546 <211> 78 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 546 agggccaaga ggagtggcag cggcgagggc agaggaagtc ttctaacatg cggtgacgtg 60 gaggagaatc ccggccct 78 <210> 547 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 547 Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn 1 5 10 15 Pro Gly Pro <210> 548 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 548 gcaacgaact tctctctcct aaaacaggct ggtgatgtgg aggagaatcc tggtcca 57 <210> 549 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 549 Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 550 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 550 ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct 60 ggacct 66 <210> 551 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 551 Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20 <210> 552 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 552 cagtgtacta attatgctct cttgaaattg gctggagatg ttgagagcaa ccctggacct 60 <210> 553 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 553 Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <210> 554 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 554 gtcaaacaga ccctaaactt tgatctgcta aaactggccg gggatgtgga aagtaatccc 60 ggcccc 66 <210> 555 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 555 Arg Ala Lys Arg Ala Pro Val Lys Gln Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe 1 5 10 15 Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 25 30 <210> 556 <211> 93 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 556 cgtgcaaagc gtgcaccggt gaaacaggga agcggagcta ctaacttcag cctgctgaag 60 caggctggag acgtggagga gaaccctgga cct 93 <210> 557 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 557 Ala Pro Val Lys Gln Gly Ser Gly 1 5 <210> 558 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 558 gcaccggtga aacagggaag cgga 24 <210> 559 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 559 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser <210> 560 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 560 ggtggcggtg gctcgggcgg tggtgggtcg ggtggcggcg gatctggtgg cggtggctcg 60 <210> 561 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 561 Ala Pro Val Lys Gln 1 5 <210> 562 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 562 gcaccggtga aacag 15 <210> 563 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> SITE <222> (2)..(26) <223> This region may encompass 2-5 "Glu Ala Ala Ala Lys" repeating units <400> 563 Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys 1 5 10 15 Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 20 25 <210> 564 <400> 564 000 <210> 565 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 565 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln 165 170 <210> 566 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 566 cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 60 acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 120 gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 180 attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 240 aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 300 ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 360 aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 420 acaataaact ggaaaaaact gtttgggacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 480 agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc cag 513 <210> 567 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 567 Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro 1 5 10 15 Arg Asp Cys Val Ser 20 <210> 568 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 568 gtctgccatg ccttgtgctc ccccgagggc tgctggggcc cggagcccag ggactgcgtc 60 tct 63 <210> 569 <211> 335 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 569 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu 165 170 175 Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser 180 185 190 Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu 195 200 205 Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln 210 215 220 Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly 225 230 235 240 Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro 245 250 255 His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr 260 265 270 Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His 275 280 285 Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro 290 295 300 Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala 305 310 315 320 Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met 325 330 335 <210> 570 <211> 1005 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 570 cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 60 acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 120 gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 180 attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 240 aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 300 ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 360 aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 420 acaataaact ggaaaaaact gtttgggacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 480 agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc caggtctgcc atgccttgtg ctcccccgag 540 ggctgctggg gcccggagcc cagggactgc gtctcttgcc ggaatgtcag ccgaggcagg 600 gaatgcgtgg acaagtgcaa ccttctggag ggtgagccaa gggagtttgt ggagaactct 660 gagtgcatac agtgccaccc agagtgcctg cctcaggcca tgaacatcac ctgcacagga 720 cggggaccag acaactgtat ccagtgtgcc cactacattg acggccccca ctgcgtcaag 780 acctgcccgg caggagtcat gggagaaaac aacaccctgg tctggaagta cgcagacgcc 840 ggccatgtgt gccacctgtg ccatccaaac tgcacctacg gatgcactgg gccaggtctt 900 gaaggctgtc caacgaatgg gcctaagatc ccgtccatcg ccactgggat ggtgggggcc 960 ctcctcttgc tgctggtggt ggccctgggg atcggcctct tcatg 1005 <210> 571 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 571 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu 165 170 175 Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser 180 185 190 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 195 200 205 Gly Gly Ser Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys 210 215 220 Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser 225 230 235 240 Lys Arg Ser <210> 572 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 572 cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 60 acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 120 gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 180 attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 240 aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 300 ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 360 aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 420 acaataaact ggaaaaaact gtttgggacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 480 agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc caggtctgcc atgccttgtg ctcccccgag 540 ggctgctggg gcccggagcc cagggactgc gtctctggtg gcggtggctc gggcggtggt 600 gggtcgggtg gcggcggatc tggtggcggt ggctcgtttt gggtgctggt ggtggttggt 660 ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg 720 agtaagagga gctaa 735 <210> 573 <211> 297 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 573 Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro 1 5 10 15 Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg 20 25 30 Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu 35 40 45 Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile 50 55 60 Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile 65 70 75 80 Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile 85 90 95 Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu 100 105 110 Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile 115 120 125 Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser 130 135 140 His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro 145 150 155 160 Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn 165 170 175 Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly 180 185 190 Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile 195 200 205 Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys 210 215 220 Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile 225 230 235 240 Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro 245 250 255 Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu Ile Ile Pro Ile Gln Glu Glu Glu Glu 260 265 270 Glu Glu Thr Glu Thr Asn Phe Pro Glu Pro Pro Gln Asp Gln Glu Ser 275 280 285 Ser Pro Ile Glu Asn Asp Ser Ser Pro 290 295 <210> 574 <211> 891 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 574 atgacaacac ccagaaattc agtaaatggg actttcccgg cagagccaat gaaaggccct 60 attgctatgc aatctggtcc aaaaccactc ttcaggagga tgtcttcact ggtgggcccc 120 acgcaaagct tcttcatgag ggaatctaag actttggggg ctgtccagat tatgaatggg 180 ctcttccaca ttgccctggg gggtcttctg atgatcccag cagggatcta tgcacccatc 240 tgtgtgactg tgtggtaccc tctctgggga ggcattatgt atattatttc cggatcactc 300 ctggcagcaa cggagaaaaa ctccaggaag tgtttggtca aaggaaaaat gataatgaat 360 tcattgagcc tctttgctgc catttctgga atgattcttt caatcatgga catacttaat 420 attaaaattt cccatttttt aaaaatggag agtctgaatt ttattagagc tcacacacca 480 tatattaaca tatacaactg tgaaccagct aatccctctg agaaaaactc cccatctacc 540 caatactgtt acagcataca atctctgttc ttgggcattt tgtcagtgat gctgatcttt 600 gccttcttcc aggaacttgt aatagctggc atcgttgaga atgaatggaa aagaacgtgc 660 tccagaccca aatctaacat agttctcctg tcagcagaag aaaaaaaaga acagactatt 720 gaaataaaag aagaagtggt tgggctaact gaaacatctt cccaaccaaa gaatgaagaa 780 gacattgaaa ttattccaat ccaagaagag gaagaagaag aaacagagac gaactttcca 840 gaacctcccc aagatcagga atcctcacca atagaaaatg acagctctcc t 891 <210> 575 <211> 263 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 575 Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro 1 5 10 15 Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg 20 25 30 Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu 35 40 45 Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile 50 55 60 Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile 65 70 75 80 Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile 85 90 95 Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu 100 105 110 Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile 115 120 125 Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser 130 135 140 His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro 145 150 155 160 Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn 165 170 175 Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly 180 185 190 Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile 195 200 205 Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys 210 215 220 Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile 225 230 235 240 Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro 245 250 255 Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu 260 <210> 576 <211> 789 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 576 atgaccacac cacggaactc tgtgaatggc accttcccag cagagccaat gaagggacca 60 atcgcaatgc agagcggacc caagcctctg tttcggagaa tgagctccct ggtgggccca 120 acccagtcct tctttatgag agagtctaag acactgggcg ccgtgcagat catgaacgga 180 ctgttccaca tcgccctggg aggactgctg atgatcccag ccggcatcta cgcccctatc 240 tgcgtgaccg tgtggtaccc tctgtggggc ggcatcatgt atatcatctc cggctctctg 300 ctggccgcca cagagaagaa cagcaggaag tgtctggtga agggcaagat gatcatgaat 360 agcctgtccc tgtttgccgc catctctggc atgatcctga gcatcatgga catcctgaac 420 atcaagatca gccacttcct gaagatggag agcctgaact tcatcagagc ccacacccct 480 tacatcaaca tctataattg cgagcctgcc aacccatccg agaagaattc tccaagcaca 540 cagtactgtt attccatcca gtctctgttc ctgggcatcc tgtctgtgat gctgatcttt 600 gccttctttc aggagctggt catcgccggc atcgtggaga acgagtggaa gaggacctgc 660 agccgcccca agtccaatat cgtgctgctg tccgccgagg agaagaagga gcagacaatc 720 gagatcaagg aggaggtggt gggcctgacc gagacatcta gccagcctaa gaatgaggag 780 gatatcgag 789 <210> 577 <211> 404 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 577 gccgcaataa aatatcttta ttttcattac atctgtgtgt tggttttttg tgtgaatcgt 60 aactaacata cgctctccat caaaacaaaa cgaaacaaaa caaactagca aaataggctg 120 tccccagtgc aagtgcaggt gccagaacat ttctctatcg aaggatctgc gatcgctccg 180 gtgcccgtca gtgggcagag cgcacatcgc ccacagtccc cgagaagttg gggggagggg 240 tcggcaattg aaccggtgcc tagagaaggt ggcgcggggt aaactgggaa agtgatgtcg 300 tgtactggct ccgccttttt cccgagggtg ggggagaacc gtatataagt gcagtagtcg 360 ccgtgaacgt tctttttcgc aacgggtttg ccgccagaac acag 404 <210> 578 <211> 205 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 578 gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt 60 ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac 120 tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg 180 tgggaggtct atataagcag agctc 205 <210> 579 <211> 674 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 579 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt 60 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc 120 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct 180 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg 240 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca 300 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact 360 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta 420 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta 480 actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct 540 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt 600 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga 660 tcttttctac gggg 674 <210> 580 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 580 ctacagttga agtcggaagt ttacatacac ttaagttgga gtcattaaaa ctcgtttttc 60 aactactcca caaatttctt gttaacaaac aatagttttg gcaagtcagt taggacatct 120 actttgtgca tgacacaagt catttttcca acaattgttt acagacagat tatttcactt 180 ataattcact gtatcacaat tccagtgggt cagaagttta catacactaa gttgactgtg 240 cctttaaaca gcttggaaaa ttccagaaaa tgatgtcatg gctttag 287 <210> 581 <211> 299 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 581 gtggaaggct actcgaaatg tttgacccaa gttaaacaat ttaaaggcaa tgctaccaaa 60 tactaattga gtgtatgtta acttctgacc cactgggaat gtgatgaaag aaataaaagc 120 tgaaatgaat cattctctct actattattc tgatatttca cattcttaaa ataaagtggt 180 gatcctaact gaccttaaga cagggaatct ttactcggat taaatgtcag gaattgtgaa 240 aaagtgagtt taaatgtatt tggctaaggt gtatgtaaac ttccgacttc aactgtagg 299 <210> 582 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 582 gatgctacaa gtggcccact tctgagatgc gggctgcttc tggatgacac tgcttcccga 60 ggcatttcgc cctatctgca agtactatgg attactttgc tagtggtgta gatagggtga 120 aatgtttcgg caagtgcctc ctcgctggcc ccagggtacc acccggagca caggtttggt 180 gacctt 186 <210> 583 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 583 agggactggg cccacgggga ggcagcgtcc ccgaggcagc agcggcagcg gcggctcctc 60 tccccatggc cctgtcacaa cctcctagaa agagtactgg gctcagaccc tctttcaggc 120 cgttgtgaca gggacctggg gaccccggca ccggcaggcc ccaaggggtg aggtgagcgg 180 gcattgggac ctcccctccc tgtactc 207 <210> 584 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 584 aggagggtgg gggtggaggc aagcagagga cttcctgatc gcgtacccat ggctacagtc 60 tttcttcatg tgactcgtgg acttgtacta cacaaaagta ctgtgagaat atatgaagga 120 caggctttag tgtagtatgc gttcaattgt catcactggc atcttttttg atcattgcac 180 catcatcaaa tgcattggga taaccatgac 210 <210> 585 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 585 ggtaagtcat gactccctac aatggacatg atcatagtag gtactataag gcacctagct 60 ataccctcct atagagagtt tgagtctatt gtagcaagtc tttcttttag ggcctaggac 120 tcttcccact ctcttccatc gcctaagctc taactcttcc ttgtagtaga aataagtcac 180 ttctaaggct gggaccctcc tagaccctaa 210 <210> 586 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 586 ttaggatgag ttgagatccc agtgatcttc tcgctaagag tttcctgcct gggcaaggag 60 gaaagatgct acaagtggcc cacttctgag atgcgggctg cttctggatg acactgcttc 120 ccgaggcatt tcgccctatc tgcaagtact atggattact ttgctagtgg tgtagatagg 180 gtgaaatgtt tcggcaagtg cctcctcgct ggccccaggg taccacccgg agcacaggtt 240 tggtgacctt cttcctcatc agggctttgt gccagcaaat gactccctca ccaaggaagc 300 aagagcctct gaatcccatc tgggctcttc ctgaacaccc ctatctcccc ctct 354 <210> 587 <211> 926 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 587 Pro Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala 1 5 10 15 Ala Ala Gln Glu Thr Glu Leu Ser Val Ser Ala Glu Leu Val Pro Thr 20 25 30 Ser Ser Trp Asn Ile Ser Ser Glu Leu Asn Lys Asp Ser Tyr Leu Thr 35 40 45 Leu Asp Glu Pro Met Asn Asn Ile Thr Thr Ser Leu Gly Gln Thr Ala 50 55 60 Glu Leu His Cys Lys Val Ser Gly Asn Pro Pro Pro Thr Ile Arg Trp 65 70 75 80 Phe Lys Asn Asp Ala Pro Val Val Gln Glu Pro Arg Arg Leu Ser Phe 85 90 95 Arg Ser Thr Ile Tyr Gly Ser Arg Leu Arg Ile Arg Asn Leu Asp Thr 100 105 110 Thr Asp Thr Gly Tyr Phe Gln Cys Val Ala Thr Asn Gly Lys Glu Val 115 120 125 Val Ser Ser Thr Gly Val Leu Phe Val Lys Phe Gly Pro Pro Pro Thr 130 135 140 Ala Ser Pro Gly Tyr Ser Asp Glu Tyr Glu Glu Asp Gly Phe Cys Gln 145 150 155 160 Pro Tyr Arg Gly Ile Ala Cys Ala Arg Phe Ile Gly Asn Arg Thr Val 165 170 175 Tyr Met Glu Ser Leu His Met Gln Gly Glu Ile Glu Asn Gln Ile Thr 180 185 190 Ala Ala Phe Thr Met Ile Gly Thr Ser Ser His Leu Ser Asp Lys Cys 195 200 205 Ser Gln Phe Ala Ile Pro Ser Leu Cys His Tyr Ala Phe Pro Tyr Cys 210 215 220 Asp Glu Thr Ser Ser Val Pro Lys Pro Arg Asp Leu Cys Arg Asp Glu 225 230 235 240 Cys Glu Ile Leu Glu Asn Val Leu Cys Gln Thr Glu Tyr Ile Phe Ala 245 250 255 Arg Ser Asn Pro Met Ile Leu Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Cys Glu 260 265 270 Asp Leu Pro Gln Pro Glu Ser Pro Glu Ala Ala Asn Cys Ile Arg Ile 275 280 285 Gly Ile Pro Met Ala Asp Pro Ile Asn Lys Asn His Lys Cys Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Gly Val Asp Tyr Arg Gly Thr Val Ser Val Thr Lys Ser Gly 305 310 315 320 Arg Gln Cys Gln Pro Trp Asn Ser Gln Tyr Pro His Thr His Thr Phe 325 330 335 Thr Ala Leu Arg Phe Pro Glu Leu Asn Gly Gly His Ser Tyr Cys Arg 340 345 350 Asn Pro Gly Asn Gln Lys Glu Ala Pro Trp Cys Phe Thr Leu Asp Glu 355 360 365 Asn Phe Lys Ser Asp Leu Cys Asp Ile Pro Ala Cys Asp Ser Lys Asp 370 375 380 Ser Lys Glu Lys Asn Lys Met Glu Ile Leu Tyr Ile Leu Val Pro Ser 385 390 395 400 Val Ala Ile Pro Leu Ala Ile Ala Leu Leu Phe Phe Phe Ile Cys Val 405 410 415 Cys Arg Asn Asn Gln Lys Ser Ser Ser Ala Pro Val Gln Arg Gln Pro 420 425 430 Lys His Val Arg Gly Gln Asn Val Glu Met Ser Met Leu Asn Ala Tyr 435 440 445 Lys Pro Lys Ser Lys Ala Lys Glu Leu Pro Leu Ser Ala Val Arg Phe 450 455 460 Met Glu Glu Leu Gly Glu Cys Ala Phe Gly Lys Ile Tyr Lys Gly His 465 470 475 480 Leu Tyr Leu Pro Gly Met Asp His Ala Gln Leu Val Ala Ile Lys Thr 485 490 495 Leu Lys Asp Tyr Asn Asn Pro Gln Gln Trp Thr Glu Phe Gln Gln Glu 500 505 510 Ala Ser Leu Met Ala Glu Leu His His Pro Asn Ile Val Cys Leu Leu 515 520 525 Gly Ala Val Thr Gln Glu Gln Pro Val Cys Met Leu Phe Glu Tyr Ile 530 535 540 Asn Gln Gly Asp Leu His Glu Phe Leu Ile Met Arg Ser Pro His Ser 545 550 555 560 Asp Val Gly Cys Ser Ser Asp Glu Asp Gly Thr Val Lys Ser Ser Leu 565 570 575 Asp His Gly Asp Phe Leu His Ile Ala Ile Gln Ile Ala Ala Gly Met 580 585 590 Glu Tyr Leu Ser Ser His Phe Phe Val His Lys Asp Leu Ala Ala Arg 595 600 605 Asn Ile Leu Ile Gly Glu Gln Leu His Val Lys Ile Ser Asp Leu Gly 610 615 620 Leu Ser Arg Glu Ile Tyr Ser Ala Asp Tyr Tyr Arg Val Gln Ser Lys 625 630 635 640 Ser Leu Leu Pro Ile Arg Trp Met Pro Pro Glu Ala Ile Met Tyr Gly 645 650 655 Lys Phe Ser Ser Asp Ser Asp Ile Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp 660 665 670 Glu Ile Phe Ser Phe Gly Leu Gln Pro Tyr Tyr Gly Phe Ser Asn Gln 675 680 685 Glu Val Ile Glu Met Val Arg Lys Arg Gln Leu Leu Pro Cys Ser Glu 690 695 700 Asp Cys Pro Pro Arg Met Tyr Ser Leu Met Thr Glu Cys Trp Asn Glu 705 710 715 720 Ile Pro Ser Arg Arg Pro Arg Phe Lys Asp Ile His Val Arg Leu Arg 725 730 735 Ser Trp Glu Gly Leu Ser Ser His Thr Ser Ser Thr Thr Pro Ser Gly 740 745 750 Gly Asn Ala Thr Thr Gln Thr Thr Ser Leu Ser Ala Ser Pro Val Ser 755 760 765 Asn Leu Ser Asn Pro Arg Tyr Pro Asn Tyr Met Phe Pro Ser Gln Gly 770 775 780 Ile Thr Pro Gln Gly Gln Ile Ala Gly Phe Ile Gly Pro Pro Ile Pro 785 790 795 800 Gln Asn Gln Arg Phe Ile Pro Ile Asn Gly Tyr Pro Ile Pro Pro Gly 805 810 815 Tyr Ala Ala Phe Pro Ala Ala His Tyr Gln Pro Thr Gly Pro Pro Arg 820 825 830 Val Ile Gln His Cys Pro Pro Pro Lys Ser Arg Ser Pro Ser Ser Ala 835 840 845 Ser Gly Ser Thr Ser Thr Gly His Val Thr Ser Leu Pro Ser Ser Gly 850 855 860 Ser Asn Gln Glu Ala Asn Ile Pro Leu Leu Pro His Met Ser Ile Pro 865 870 875 880 Asn His Pro Gly Gly Met Gly Ile Thr Val Phe Gly Asn Lys Ser Gln 885 890 895 Lys Pro Tyr Lys Ile Asp Ser Lys Gln Ala Ser Leu Leu Gly Asp Ala 900 905 910 Asn Ile His Gly His Thr Glu Ser Met Ile Ser Ala Glu Leu 915 920 925 <210> 588 <211> 2811 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 588 atgcaccggc cgcgccgccg cgggacgcgc ccgccgctcc tggcgctgct ggccgcgctg 60 ctgctggccg cacgcggggc tgctgcccaa gaaacagagc tgtcagtcag tgctgaatta 120 gtgcctacct catcatggaa catctcaagt gaactcaaca aagattctta cctgaccctc 180 gatgaaccaa tgaataacat caccacgtct ctgggccaga cagcagaact gcactgcaaa 240 gtctctggga atccacctcc caccatccgc tggttcaaaa atgatgctcc tgtggtccag 300 gagccccgga ggctctcctt tcggtccacc atctatggct ctcggctgcg gattagaaac 360 ctcgacacca cagacacagg ctacttccag tgcgtggcaa caaacggcaa ggaggtggtt 420 tcttccactg gagtcttgtt tgtcaagttt ggcccccctc ccactgcaag tccaggatac 480 tcagatgagt atgaagaaga tggattctgt cagccataca gagggattgc atgtgcaaga 540 tttattggca accgcaccgt ctatatggag tctttgcaca tgcaagggga aatagaaaat 600 cagatcacag ctgccttcac tatgattggc acttccagtc acttatctga taagtgttct 660 cagttcgcca ttccttccct gtgccactat gccttcccgt actgcgatga aacttcatcc 720 gtcccaaagc cccgtgactt gtgtcgcgat gaatgtgaaa tcctggagaa tgtcctgtgt 780 caaacagagt acatttttgc aagatcaaat cccatgattc tgatgaggct gaaactgcca 840 aactgtgaag atctccccca gccagagagc ccagaagctg cgaactgtat ccggattgga 900 attcccatgg cagatcctat aaataaaaat cacaagtgtt ataacagcac aggtgtggac 960 taccggggga ccgtcagtgt gaccaaatca gggcgccagt gccagccatg gaattcccag 1020 tatccccaca cacacacttt caccgccctt cgtttcccag agctgaatgg aggccattcc 1080 tactgccgca acccagggaa tcaaaaggaa gctccctggt gcttcacctt ggatgaaaac 1140 tttaagtctg atctgtgtga catcccagcg tgcgattcaa aggattccaa ggagaagaat 1200 aaaatggaaa tcctgtacat actagtgcca agtgtggcca ttcccctggc cattgcttta 1260 ctcttcttct tcatttgcgt ctgtcggaat aaccagaagt catcgtcggc accagtccag 1320 aggcaaccaa aacacgtcag aggtcaaaat gtagagatgt caatgctgaa tgcatataaa 1380 cccaagagca aggctaaaga gctacctctt tctgctgtac gctttatgga agaattgggt 1440 gagtgtgcct ttggaaaaat ctataaaggc catctctatc tcccaggcat ggaccatgct 1500 cagctggttg ctatcaagac cttgaaagac tataacaacc cccagcaatg gacggaattt 1560 caacaagaag cctccctaat ggcagaactg caccacccca atattgtctg ccttctaggt 1620 gccgtcactc aggaacaacc tgtgtgcatg ctttttgagt atattaatca gggggatctc 1680 catgagttcc tcatcatgag atccccacac tctgatgttg gctgcagcag tgatgaagat 1740 gggactgtga aatccagcct ggaccacgga gattttctgc acattgcaat tcagattgca 1800 gctggcatgg aatacctgtc tagtcacttc tttgtccaca aggaccttgc agctcgcaat 1860 attttaatcg gagagcaact tcatgtaaag atttcagact tggggctttc cagagaaatt 1920 tactccgctg attactacag ggtccagagt aagtccttgc tgcccattcg ctggatgccc 1980 cctgaagcca tcatgtatgg caaattctct tctgattcag atatctggtc ctttggggtt 2040 gtcttgtggg agattttcag ttttggactc cagccatatt atggattcag taaccaggaa 2100 gtgattgaga tggtgagaaa acggcagctc ttaccatgct ctgaagactg cccacccaga 2160 atgtacagcc tcatgacaga gtgctggaat gagattcctt ctaggagacc aagatttaaa 2220 gatattcacg tccggcttcg gtcctgggag ggactctcaa gtcacacaag ctctactact 2280 ccttcagggg gaaatgccac cacacagaca acctccctca gtgccagccc agtgagtaat 2340 ctcagtaacc ccagatatcc taattacatg ttcccgagcc agggtattac accacagggc 2400 cagattgctg gtttcattgg cccgccaata cctcagaacc agcgattcat tcccatcaat 2460 ggatacccaa tacctcctgg atatgcagcg tttccagctg cccactacca gccaacaggt 2520 cctcccagag tgattcagca ctgcccacct cccaagagtc ggtccccaag cagtgccagt 2580 gggtcgacta gcactggcca tgtgactagc ttgccctcat caggatccaa tcaggaagca 2640 aatattcctt tactaccaca catgtcaatt ccaaatcatc ctggtggaat gggtatcacc 2700 gtttttggca acaaatctca aaaaccctac aaaattgact caaagcaagc atctttacta 2760 ggagacgcca atattcatgg acacaccgaa tctatgattt ctgcagaact g 2811 <210> 589 <211> 437 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 589 Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Leu Leu Ala Leu 1 5 10 15 Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Ala Ala Gln Glu Thr 20 25 30 Glu Leu Ser Val Ser Ala Glu Leu Val Pro Thr Ser Ser Trp Asn Ile 35 40 45 Ser Ser Glu Leu Asn Lys Asp Ser Tyr Leu Thr Leu Asp Glu Pro Met 50 55 60 Asn Asn Ile Thr Thr Ser Leu Gly Gln Thr Ala Glu Leu His Cys Lys 65 70 75 80 Val Ser Gly Asn Pro Pro Pro Thr Ile Arg Trp Phe Lys Asn Asp Ala 85 90 95 Pro Val Val Gln Glu Pro Arg Arg Leu Ser Phe Arg Ser Thr Ile Tyr 100 105 110 Gly Ser Arg Leu Arg Ile Arg Asn Leu Asp Thr Thr Asp Thr Gly Tyr 115 120 125 Phe Gln Cys Val Ala Thr Asn Gly Lys Glu Val Val Ser Ser Thr Gly 130 135 140 Val Leu Phe Val Lys Phe Gly Pro Pro Pro Thr Ala Ser Pro Gly Tyr 145 150 155 160 Ser Asp Glu Tyr Glu Glu Asp Gly Phe Cys Gln Pro Tyr Arg Gly Ile 165 170 175 Ala Cys Ala Arg Phe Ile Gly Asn Arg Thr Val Tyr Met Glu Ser Leu 180 185 190 His Met Gln Gly Glu Ile Glu Asn Gln Ile Thr Ala Ala Phe Thr Met 195 200 205 Ile Gly Thr Ser Ser His Leu Ser Asp Lys Cys Ser Gln Phe Ala Ile 210 215 220 Pro Ser Leu Cys His Tyr Ala Phe Pro Tyr Cys Asp Glu Thr Ser Ser 225 230 235 240 Val Pro Lys Pro Arg Asp Leu Cys Arg Asp Glu Cys Glu Ile Leu Glu 245 250 255 Asn Val Leu Cys Gln Thr Glu Tyr Ile Phe Ala Arg Ser Asn Pro Met 260 265 270 Ile Leu Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Cys Glu Asp Leu Pro Gln Pro 275 280 285 Glu Ser Pro Glu Ala Ala Asn Cys Ile Arg Ile Gly Ile Pro Met Ala 290 295 300 Asp Pro Ile Asn Lys Asn His Lys Cys Tyr Asn Ser Thr Gly Val Asp 305 310 315 320 Tyr Arg Gly Thr Val Ser Val Thr Lys Ser Gly Arg Gln Cys Gln Pro 325 330 335 Trp Asn Ser Gln Tyr Pro His Thr His Thr Phe Thr Ala Leu Arg Phe 340 345 350 Pro Glu Leu Asn Gly Gly His Ser Tyr Cys Arg Asn Pro Gly Asn Gln 355 360 365 Lys Glu Ala Pro Trp Cys Phe Thr Leu Asp Glu Asn Phe Lys Ser Asp 370 375 380 Leu Cys Asp Ile Pro Ala Cys Asp Ser Lys Asp Ser Lys Glu Lys Asn 385 390 395 400 Lys Met Glu Ile Leu Tyr Ile Leu Val Pro Ser Val Ala Ile Pro Leu 405 410 415 Ala Ile Ala Leu Leu Phe Phe Phe Ile Cys Val Cys Arg Asn Asn Gln 420 425 430 Lys Ser Ser Ser Ala 435 <210> 590 <211> 1311 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 590 atgcaccggc cgcgccgccg cgggacgcgc ccgccgctcc tggcgctgct ggccgcgctg 60 ctgctggccg cacgcggggc tgctgcccaa gaaacagagc tgtcagtcag tgctgaatta 120 gtgcctacct catcatggaa catctcaagt gaactcaaca aagattctta cctgaccctc 180 gatgaaccaa tgaataacat caccacgtct ctgggccaga cagcagaact gcactgcaaa 240 gtctctggga atccacctcc caccatccgc tggttcaaaa atgatgctcc tgtggtccag 300 gagccccgga ggctctcctt tcggtccacc atctatggct ctcggctgcg gattagaaac 360 ctcgacacca cagacacagg ctacttccag tgcgtggcaa caaacggcaa ggaggtggtt 420 tcttccactg gagtcttgtt tgtcaagttt ggcccccctc ccactgcaag tccaggatac 480 tcagatgagt atgaagaaga tggattctgt cagccataca gagggattgc atgtgcaaga 540 tttattggca accgcaccgt ctatatggag tctttgcaca tgcaagggga aatagaaaat 600 cagatcacag ctgccttcac tatgattggc acttccagtc acttatctga taagtgttct 660 cagttcgcca ttccttccct gtgccactat gccttcccgt actgcgatga aacttcatcc 720 gtcccaaagc cccgtgactt gtgtcgcgat gaatgtgaaa tcctggagaa tgtcctgtgt 780 caaacagagt acatttttgc aagatcaaat cccatgattc tgatgaggct gaaactgcca 840 aactgtgaag atctccccca gccagagagc ccagaagctg cgaactgtat ccggattgga 900 attcccatgg cagatcctat aaataaaaat cacaagtgtt ataacagcac aggtgtggac 960 taccggggga ccgtcagtgt gaccaaatca gggcgccagt gccagccatg gaattcccag 1020 tatccccaca cacacacttt caccgccctt cgtttcccag agctgaatgg aggccattcc 1080 tactgccgca acccagggaa tcaaaaggaa gctccctggt gcttcacctt ggatgaaaac 1140 tttaagtctg atctgtgtga catcccagcg tgcgattcaa aggattccaa ggagaagaat 1200 aaaatggaaa tcctgtacat actagtgcca agtgtggcca ttcccctggc cattgcttta 1260 ctcttcttct tcatttgcgt ctgtcggaat aaccagaagt catcgtcggc a 1311 <210> 591 <211> 654 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 591 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 165 170 175 Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190 Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser 195 200 205 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp 210 215 220 Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 245 250 255 Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 260 265 270 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 275 280 285 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 290 295 300 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 305 310 315 320 Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 325 330 335 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 340 345 350 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 355 360 365 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 370 375 380 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 385 390 395 400 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 405 410 415 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 420 425 430 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 435 440 445 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 450 455 460 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val 465 470 475 480 Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe 485 490 495 Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp 500 505 510 Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr 515 520 525 Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val 530 535 540 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn 545 550 555 560 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 565 570 575 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 580 585 590 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 595 600 605 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 610 615 620 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 625 630 635 640 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 645 650 <210> 592 <211> 1962 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 592 gacatcaaga tgacccagag ccccagctct atgtacgcca gcctgggcga gcgcgtgacc 60 atcacatgca aggccagccc cgacatcaac agctacctgt cctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaaccggc tggtggacgg cgtgccaagc 180 agattttccg gcggaggcag cggccaggac tacagcctga ccatcaacag cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa gggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gaaacctggc 420 ggcagcctga agctgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 480 tgggtccgac agatccccga gaagcggctg gaatgggtgg ccagcatcag caggggcggc 540 accacctact accccgacag cgtgaagggc cggttcacca tcagccggga caacgtgcgg 600 aacatcctgt acctgcagat gagcagcctg cggagcgagg acaccgccat gtactactgc 660 ggcagatacg actacgacgg ctactacgcc atggattact ggggccaggg caccagcgtg 720 accgtgtcta gcgagagcaa gtacggccct ccctgccccc cttgccctgc ccccgagttc 780 gagggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc cccaagccca aggacaccct gatgatcagc 840 cggacccccg aggtgacctg tgtggtggtg gacgtgtccc aggaggaccc cgaggtccag 900 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggag 960 cagttccaga gcacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 1020 aacggcaagg aatacaagtg taaggtgtcc aacaagggcc tgcccagcag catcgagaaa 1080 accatcagca aggccaaggg ccagcctcgg gagccccagg tgtacaccct gccccctagc 1140 caagaggaga tgaccaagaa tcaggtgtcc ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc 1200 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1260 ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc ttcctgtaca gcaggctgac cgtggacaag 1320 agccggtggc aggagggcaa cgtctttagc tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1380 cactacaccc agaagagcct gtccctgagc ctgggcaaga tgttctgggt gctggtcgtg 1440 gtgggtggcg tgctggcctg ctacagcctg ctggtgacag tggccttcat catcttttgg 1500 gtgaggagca agcggagcag aggcggccac agcgactaca tgaacatgac cccccggagg 1560 cctggcccca cccggaagca ctaccagccc tacgcccctc ccagggactt cgccgcctac 1620 cggagccggg tgaagttcag ccggagcgcc gacgcccctg cctaccagca gggccagaac 1680 cagctgtaca acgagctgaa cctgggccgg agggaggagt acgacgtgct ggacaagcgg 1740 agaggccggg accctgagat gggcggcaag ccccggagaa agaaccctca ggagggcctg 1800 tataacgaac tgcagaaaga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg catgaagggc 1860 gagcggcgga ggggcaaggg ccacgacggc ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag 1920 gatacctacg acgccctgca catgcaggcc ctgcccccca ga 1962 <210> 593 <211> 663 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 593 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 165 170 175 Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190 Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser 195 200 205 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp 210 215 220 Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys 245 250 255 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly 260 265 270 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 275 280 285 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 290 295 300 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 305 310 315 320 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 325 330 335 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 340 345 350 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 355 360 365 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 370 375 380 Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 385 390 395 400 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 405 410 415 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 420 425 430 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp 435 440 445 Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 450 455 460 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu 465 470 475 480 Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys 485 490 495 Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser 500 505 510 Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg 515 520 525 Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg 530 535 540 Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 545 550 555 560 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 565 570 575 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 580 585 590 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 595 600 605 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 610 615 620 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 625 630 635 640 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 645 650 655 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 <210> 594 <211> 1989 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 594 gacatcaaga tgacccagag ccccagctct atgtacgcca gcctgggcga gcgcgtgacc 60 atcacatgca aggccagccc cgacatcaac agctacctgt cctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaaccggc tggtggacgg cgtgccaagc 180 agattttccg gcggaggcag cggccaggac tacagcctga ccatcaacag cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa gggcagcacc agcggcagcg gcaagcctgg aagcggcgag 360 ggctccacca agggcgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gaaacctggc 420 ggcagcctga agctgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 480 tgggtccgac agatccccga gaagcggctg gaatgggtgg ccagcatcag caggggcggc 540 accacctact accccgacag cgtgaagggc cggttcacca tcagccggga caacgtgcgg 600 aacatcctgt acctgcagat gagcagcctg cggagcgagg acaccgccat gtactactgc 660 ggcagatacg actacgacgg ctactacgcc atggattact ggggccaggg caccagcgtg 720 accgtgtcta gccagggaac ctccgtgaca gtgtccagcg agtccaaata tggtccccca 780 tgcccaccat gcccagcacc tgagttcctg gggggaccat cagtcttcct gttcccccca 840 aaacccaagg acactctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 900 gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat 960 aatgccaaga caaagccccg ggaggagcag ttcaatagca cctaccgggt ggtgtccgtg 1020 ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggaat acaagtgtaa ggtgtccaac 1080 aagggcctgc ccagcagcat cgagaaaacc atcagcaagg ccaagggcca gcctcgggag 1140 ccccaggtgt acaccctgcc ccctagccaa gaggagatga ccaagaatca ggtgtccctg 1200 acctgcctgg tgaagggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc 1260 cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc cctgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc 1320 ctgtacagca ggctgaccgt ggacaagagc cggtggcagg agggcaacgt ctttagctgc 1380 tccgtgatgc acgaggccct gcacaaccac tacacccaga agagcctgtc cctgagcctg 1440 ggcaagatgt tctgggtgct ggtcgtggtg ggtggcgtgc tggcctgcta cagcctgctg 1500 gtgacagtgg ccttcatcat cttttgggtg aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1560 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1620 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1680 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1740 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1800 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1860 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1920 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1980 ccccccaga 1989 <210> 595 <211> 472 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 595 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 165 170 175 Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190 Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser 195 200 205 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp 210 215 220 Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 245 250 255 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 260 265 270 Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 275 280 285 Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val 290 295 300 Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg 305 310 315 320 Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro 325 330 335 Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro 340 345 350 Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 355 360 365 Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 370 375 380 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 385 390 395 400 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 405 410 415 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 420 425 430 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 435 440 445 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 450 455 460 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 <210> 596 <211> 1416 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 596 gacatcaaga tgacccagag ccccagctct atgtacgcca gcctgggcga gcgcgtgacc 60 atcacatgca aggccagccc cgacatcaac agctacctgt cctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaaccggc tggtggacgg cgtgccaagc 180 agattttccg gcggaggcag cggccaggac tacagcctga ccatcaacag cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa gggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gaaacctggc 420 ggcagcctga agctgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 480 tgggtccgac agatccccga gaagcggctg gaatgggtgg ccagcatcag caggggcggc 540 accacctact accccgacag cgtgaagggc cggttcacca tcagccggga caacgtgcgg 600 aacatcctgt acctgcagat gagcagcctg cggagcgagg acaccgccat gtactactgc 660 ggcagatacg actacgacgg ctactacgcc atggattact ggggccaggg caccagcgtg 720 accgtgtcta gcaagcccac caccacccct gcccctagac ctccaacccc agcccctaca 780 atcgccagcc agcccctgag cctgaggccc gaagcctgta gacctgccgc tggcggagcc 840 gtgcacacca gaggcctgga tttcgcctgc gacatctaca tctgggcccc tctggccggc 900 acctgtggcg tgctgctgct gagcctggtc atcaccctgt actgcaacca ccggaatagg 960 agcaagcgga gcagaggcgg ccacagcgac tacatgaaca tgaccccccg gaggcctggc 1020 cccacccgga agcactacca gccctacgcc cctcccaggg acttcgccgc ctaccggagc 1080 cgggtgaagt tcagccggag cgccgacgcc cctgcctacc agcagggcca gaaccagctg 1140 tacaacgagc tgaacctggg ccggagggag gagtacgacg tgctggacaa gcggagaggc 1200 cgggaccctg agatgggcgg caagccccgg agaaagaacc ctcaggaggg cctgtataac 1260 gaactgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggcatgaa gggcgagcgg 1320 cggaggggca agggccacga cggcctgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc 1380 tacgacgccc tgcacatgca ggccctgccc cccaga 1416 <210> 597 <211> 519 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 597 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 165 170 175 Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190 Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser 195 200 205 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp 210 215 220 Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 245 250 255 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 260 265 270 Ser Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 275 280 285 Ala Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 290 295 300 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 305 310 315 320 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 325 330 335 Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 340 345 350 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser 355 360 365 Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg 370 375 380 Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg 385 390 395 400 Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 405 410 415 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 420 425 430 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 435 440 445 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 450 455 460 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 465 470 475 480 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 485 490 495 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 500 505 510 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 515 <210> 598 <211> 1557 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 598 gacatcaaga tgacccagag ccccagctct atgtacgcca gcctgggcga gcgcgtgacc 60 atcacatgca aggccagccc cgacatcaac agctacctgt cctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaaccggc tggtggacgg cgtgccaagc 180 agattttccg gcggaggcag cggccaggac tacagcctga ccatcaacag cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa gggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gaaacctggc 420 ggcagcctga agctgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 480 tgggtccgac agatccccga gaagcggctg gaatgggtgg ccagcatcag caggggcggc 540 accacctact accccgacag cgtgaagggc cggttcacca tcagccggga caacgtgcgg 600 aacatcctgt acctgcagat gagcagcctg cggagcgagg acaccgccat gtactactgc 660 ggcagatacg actacgacgg ctactacgcc atggattact ggggccaggg caccagcgtg 720 accgtgtcta gcaaacctac tacaactcct gccccccggc ctcctacacc agctcctact 780 atcgcctccc agccactcag tctcagaccc gaggcttcta ggccagcggc cggaggcgcg 840 gtccacaccc gcgggctgga ctttgcatcc gataagccca ccaccacccc tgcccctaga 900 cctccaaccc cagcccctac aatcgccagc cagcccctga gcctgaggcc cgaagcctgt 960 agacctgccg ctggcggagc cgtgcacacc agaggcctgg atttcgcctg cgacatctac 1020 atctgggccc ctctggccgg cacctgtggc gtgctgctgc tgagcctggt catcaccctg 1080 tactgcaacc accggaatag gagcaagcgg agcagaggcg gccacagcga ctacatgaac 1140 atgacccccc ggaggcctgg ccccacccgg aagcactacc agccctacgc ccctcccagg 1200 gacttcgccg cctaccggag ccgggtgaag ttcagccgga gcgccgacgc ccctgcctac 1260 cagcagggcc agaaccagct gtacaacgag ctgaacctgg gccggaggga ggagtacgac 1320 gtgctggaca agcggagagg ccgggaccct gagatgggcg gcaagccccg gagaaagaac 1380 cctcaggagg gcctgtataa cgaactgcag aaagacaaga tggccgaggc ctacagcgag 1440 atcggcatga agggcgagcg gcggaggggc aagggccacg acggcctgta ccagggcctg 1500 agcaccgcca ccaaggatac ctacgacgcc ctgcacatgc aggccctgcc ccccaga 1557 <210> 599 <211> 566 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 599 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 165 170 175 Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190 Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser 195 200 205 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp 210 215 220 Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 245 250 255 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 260 265 270 Ser Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 275 280 285 Ala Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 290 295 300 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser 305 310 315 320 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 325 330 335 Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala 340 345 350 Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg 355 360 365 Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys 370 375 380 Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu 385 390 395 400 Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys 405 410 415 Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg 420 425 430 Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp 435 440 445 Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 450 455 460 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 465 470 475 480 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 485 490 495 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 500 505 510 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 515 520 525 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 530 535 540 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 545 550 555 560 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 565 <210> 600 <211> 1698 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 600 gacatcaaga tgacccagag ccccagctct atgtacgcca gcctgggcga gcgcgtgacc 60 atcacatgca aggccagccc cgacatcaac agctacctgt cctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaaccggc tggtggacgg cgtgccaagc 180 agattttccg gcggaggcag cggccaggac tacagcctga ccatcaacag cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa gggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gaaacctggc 420 ggcagcctga agctgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 480 tgggtccgac agatccccga gaagcggctg gaatgggtgg ccagcatcag caggggcggc 540 accacctact accccgacag cgtgaagggc cggttcacca tcagccggga caacgtgcgg 600 aacatcctgt acctgcagat gagcagcctg cggagcgagg acaccgccat gtactactgc 660 ggcagatacg actacgacgg ctactacgcc atggattact ggggccaggg caccagcgtg 720 accgtgtcta gcaagcctac caccaccccc gcacctcgtc ctccaacccc tgcacctacg 780 attgccagtc agcctctttc actgcggcct gaggccagca gaccagctgc cggcggtgcc 840 gtccatacaa gaggactgga cttcgcgtcc gataaaccta ctaccactcc agccccaagg 900 cccccaaccc cagcaccgac tatcgcatca cagcctttgt cactgcgtcc tgaagccagc 960 cggccagctg cagggggggc cgtccacaca aggggactcg actttgcgag tgataagccc 1020 accaccaccc ctgcccctag acctccaacc ccagccccta caatcgccag ccagcccctg 1080 agcctgaggc ccgaagcctg tagacctgcc gctggcggag ccgtgcacac cagaggcctg 1140 gatttcgcct gcgacatcta catctgggcc cctctggccg gcacctgtgg cgtgctgctg 1200 ctgagcctgg tcatcaccct gtactgcaac caccggaata ggagcaagcg gagcagaggc 1260 ggccacagcg actacatgaa catgaccccc cggaggcctg gccccacccg gaagcactac 1320 cagccctacg cccctcccag ggacttcgcc gcctaccgga gccgggtgaa gttcagccgg 1380 agcgccgacg cccctgccta ccagcagggc cagaaccagc tgtacaacga gctgaacctg 1440 ggccggaggg aggagtacga cgtgctggac aagcggagag gccgggaccc tgagatgggc 1500 ggcaagcccc ggagaaagaa ccctcaggag ggcctgtata acgaactgca gaaagacaag 1560 atggccgagg cctacagcga gatcggcatg aagggcgagc ggcggagggg caagggccac 1620 gacggcctgt accagggcct gagcaccgcc accaaggata cctacgacgc cctgcacatg 1680 caggccctgc cccccaga 1698 <210> 601 <211> 613 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 601 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 165 170 175 Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190 Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser 195 200 205 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp 210 215 220 Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 245 250 255 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 260 265 270 Ser Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 275 280 285 Ala Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 290 295 300 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser 305 310 315 320 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 325 330 335 Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala 340 345 350 Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg 355 360 365 Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser 370 375 380 Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 385 390 395 400 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro 405 410 415 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 420 425 430 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 435 440 445 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg 450 455 460 Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro 465 470 475 480 Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe 485 490 495 Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro 500 505 510 Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly 515 520 525 Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro 530 535 540 Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr 545 550 555 560 Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 565 570 575 Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln 580 585 590 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln 595 600 605 Ala Leu Pro Pro Arg 610 <210> 602 <211> 1839 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 602 gacatcaaga tgacccagag ccccagctct atgtacgcca gcctgggcga gcgcgtgacc 60 atcacatgca aggccagccc cgacatcaac agctacctgt cctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaaccggc tggtggacgg cgtgccaagc 180 agattttccg gcggaggcag cggccaggac tacagcctga ccatcaacag cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa gggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gaaacctggc 420 ggcagcctga agctgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 480 tgggtccgac agatccccga gaagcggctg gaatgggtgg ccagcatcag caggggcggc 540 accacctact accccgacag cgtgaagggc cggttcacca tcagccggga caacgtgcgg 600 aacatcctgt acctgcagat gagcagcctg cggagcgagg acaccgccat gtactactgc 660 ggcagatacg actacgacgg ctactacgcc atggattact ggggccaggg caccagcgtg 720 accgtgtcta gcaagcctac caccaccccc gcacctcgtc ctccaacccc tgcacctacg 780 attgccagtc agcctctttc actgcggcct gaggccagca gaccagctgc cggcggtgcc 840 gtccatacaa gaggactgga cttcgcgtcc gataaaccta ctaccactcc agccccaagg 900 cccccaaccc cagcaccgac tatcgcatca cagcctttgt cactgcgtcc tgaagccagc 960 cggccagctg cagggggggc cgtccacaca aggggactcg actttgcgag tgataaacct 1020 actacaactc ctgccccccg gcctcctaca ccagctccta ctatcgcctc ccagccactc 1080 agtctcagac ccgaggcttc taggccagcg gccggaggcg cggtccacac ccgcgggctg 1140 gactttgcat ccgataagcc caccaccacc cctgccccta gacctccaac cccagcccct 1200 acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga 1260 gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc 1320 ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat 1380 aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc ccggaggcct 1440 ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg 1500 agccgggtga agttcagccg gagcgccgac gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag 1560 ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga 1620 ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc cggagaaaga accctcagga gggcctgtat 1680 aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag 1740 cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 1800 acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg ccccccaga 1839 <210> 603 <211> 647 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 603 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 165 170 175 Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190 Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser 195 200 205 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp 210 215 220 Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser Lys Glu Ala Cys Pro Thr Gly Leu Tyr Thr His Ser 245 250 255 Gly Glu Cys Cys Lys Ala Cys Asn Leu Gly Glu Gly Val Ala Gln Pro 260 265 270 Cys Gly Ala Asn Gln Thr Val Cys Glu Pro Cys Leu Asp Ser Val Thr 275 280 285 Phe Ser Asp Val Val Ser Ala Thr Glu Pro Cys Lys Pro Cys Thr Glu 290 295 300 Cys Val Gly Leu Gln Ser Met Ser Ala Pro Cys Val Glu Ala Asp Asp 305 310 315 320 Ala Val Cys Arg Cys Ala Tyr Gly Tyr Tyr Gln Asp Glu Thr Thr Gly 325 330 335 Arg Cys Glu Ala Cys Arg Val Cys Glu Ala Gly Ser Gly Leu Val Phe 340 345 350 Ser Cys Gln Asp Lys Gln Asn Thr Val Cys Glu Glu Cys Pro Asp Gly 355 360 365 Thr Tyr Ser Asp Glu Ala Asn His Val Asp Pro Cys Leu Pro Cys Thr 370 375 380 Val Cys Glu Asp Thr Glu Arg Gln Leu Arg Glu Cys Thr Arg Trp Ala 385 390 395 400 Asp Ala Glu Cys Glu Glu Ile Pro Gly Arg Trp Ile Thr Arg Ser Thr 405 410 415 Pro Pro Glu Gly Ser Asp Ser Thr Ala Pro Ser Thr Gln Glu Pro Glu 420 425 430 Ala Pro Pro Glu Gln Asp Leu Ile Ala Ser Thr Val Ala Gly Val Val 435 440 445 Thr Thr Val Met Gly Ser Ser Gln Pro Val Val Thr Arg Gly Thr Thr 450 455 460 Asp Asn Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 465 470 475 480 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser 485 490 495 Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg 500 505 510 Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg 515 520 525 Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 530 535 540 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 545 550 555 560 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 565 570 575 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 580 585 590 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 595 600 605 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 610 615 620 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 625 630 635 640 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 645 <210> 604 <211> 1941 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 604 gacatcaaga tgacccagag ccccagctct atgtacgcca gcctgggcga gcgcgtgacc 60 atcacatgca aggccagccc cgacatcaac agctacctgt cctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaaccggc tggtggacgg cgtgccaagc 180 agattttccg gcggaggcag cggccaggac tacagcctga ccatcaacag cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa gggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gaaacctggc 420 ggcagcctga agctgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 480 tgggtccgac agatccccga gaagcggctg gaatgggtgg ccagcatcag caggggcggc 540 accacctact accccgacag cgtgaagggc cggttcacca tcagccggga caacgtgcgg 600 aacatcctgt acctgcagat gagcagcctg cggagcgagg acaccgccat gtactactgc 660 ggcagatacg actacgacgg ctactacgcc atggattact ggggccaggg caccagcgtg 720 accgtgtcta gcaaggaggc atgccccaca ggcctgtaca cacacagcgg tgagtgctgc 780 aaagcctgca acctgggcga gggtgtggcc cagccttgtg gagccaacca gaccgtgtgt 840 gagccctgcc tggacagcgt gacgttctcc gacgtggtga gcgcgaccga gccgtgcaag 900 ccgtgcaccg agtgcgtggg gctccagagc atgtcggcgc cgtgcgtgga ggccgacgac 960 gccgtgtgcc gctgcgccta cggctactac caggatgaga cgactgggcg ctgcgaggcg 1020 tgccgcgtgt gcgaggcggg ctcgggcctc gtgttctcct gccaggacaa gcagaacacc 1080 gtgtgcgagg agtgccccga cggcacgtat tccgacgagg ccaaccacgt ggacccgtgc 1140 ctgccctgca ccgtgtgcga ggacaccgag cgccagctcc gcgagtgcac acgctgggcc 1200 gacgccgagt gcgaggagat ccctggccgt tggattacac ggtccacacc cccagagggc 1260 tcggacagca cagcccccag cacccaggag cctgaggcac ctccagaaca agacctcata 1320 gccagcacgg tggcaggtgt ggtgaccaca gtgatgggca gctcccagcc cgtggtgacc 1380 cgaggcacca ccgacaacat ctacatctgg gcccctctgg ccggcacctg tggcgtgctg 1440 ctgctgagcc tggtcatcac cctgtactgc aaccaccgga ataggagcaa gcggagcaga 1500 ggcggccaca gcgactacat gaacatgacc ccccggaggc ctggccccac ccggaagcac 1560 taccagccct acgcccctcc cagggacttc gccgcctacc ggagccgggt gaagttcagc 1620 cggagcgccg acgcccctgc ctaccagcag ggccagaacc agctgtacaa cgagctgaac 1680 ctgggccgga gggaggagta cgacgtgctg gacaagcgga gaggccggga ccctgagatg 1740 ggcggcaagc cccggagaaa gaaccctcag gagggcctgt ataacgaact gcagaaagac 1800 aagatggccg aggcctacag cgagatcggc atgaagggcg agcggcggag gggcaagggc 1860 cacgacggcc tgtaccaggg cctgagcacc gccaccaagg atacctacga cgccctgcac 1920 atgcaggccc tgccccccag a 1941 <210> 605 <211> 567 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 605 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro 115 120 125 Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser 130 135 140 Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys 145 150 155 160 Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val 180 185 190 Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr 195 200 205 Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr 210 215 220 Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 225 230 235 240 Leu Glu Met Lys Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 245 250 255 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 260 265 270 Ser Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 275 280 285 Ala Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 290 295 300 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser 305 310 315 320 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 325 330 335 Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala 340 345 350 Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg 355 360 365 Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys 370 375 380 Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu 385 390 395 400 Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Lys Arg Gly 405 410 415 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 420 425 430 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 435 440 445 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 450 455 460 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 465 470 475 480 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 485 490 495 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 500 505 510 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 515 520 525 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 530 535 540 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 545 550 555 560 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 565 <210> 606 <211> 1701 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 606 gaagtgaagc tggtggaaag cggcggaggc ctggtgaaac ctggcggcag cctgaagctg 60 agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgacagatc 120 cccgagaagc ggctggaatg ggtggccagc atcagcaggg gcggcaccac ctactacccc 180 gacagcgtga agggccggtt caccatcagc cgggacaacg tgcggaacat cctgtacctg 240 cagatgagca gcctgcggag cgaggacacc gccatgtact actgcggcag atacgactac 300 gacggctact acgccatgga ttactggggc cagggcacca gcgtgaccgt gtctagcggc 360 agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc ggcgagggca gcaccaaggg cgacatcaag 420 atgacccaga gccccagctc tatgtacgcc agcctgggcg agcgcgtgac catcacatgc 480 aaggccagcc ccgacatcaa cagctacctg tcctggttcc agcagaagcc cggcaagagc 540 cccaagaccc tgatctaccg ggccaaccgg ctggtggacg gcgtgccaag cagattttcc 600 ggcggaggca gcggccagga ctacagcctg accatcaaca gcctggaata cgaggacatg 660 ggcatctact actgcctgca gtacgacgag ttcccctaca ccttcggagg cggcaccaag 720 ctggaaatga agaagcctac caccaccccc gcacctcgtc ctccaacccc tgcacctacg 780 attgccagtc agcctctttc actgcggcct gaggccagca gaccagctgc cggcggtgcc 840 gtccatacaa gaggactgga cttcgcgtcc gataaaccta ctaccactcc agccccaagg 900 cccccaaccc cagcaccgac tatcgcatca cagcctttgt cactgcgtcc tgaagccagc 960 cggccagctg cagggggggc cgtccacaca aggggactcg actttgcgag tgataagccc 1020 accaccaccc ctgcccctag acctccaacc ccagccccta caatcgccag ccagcccctg 1080 agcctgaggc ccgaagcctg tagacctgcc gctggcggag ccgtgcacac cagaggcctg 1140 gatttcgcct gcgacatcta catctgggcc cctctggccg gcacctgtgg cgtgctgctg 1200 ctgagcctgg tcatcaccct gtactgcaac caccggaata agagaggccg gaagaaactg 1260 ctgtacatct tcaagcagcc cttcatgcgg cccgtgcaga ccacccagga agaggacggc 1320 tgcagctgcc ggttccccga ggaagaggaa ggcggctgcg aactgcgggt gaagttcagc 1380 cggagcgccg acgcccctgc ctaccagcag ggccagaacc agctgtacaa cgagctgaac 1440 ctgggccgga gggaggagta cgacgtgctg gacaagcgga gaggccggga ccctgagatg 1500 ggcggcaagc cccggagaaa gaaccctcag gagggcctgt ataacgaact gcagaaagac 1560 aagatggccg aggcctacag cgagatcggc atgaagggcg agcggcggag gggcaagggc 1620 cacgacggcc tgtaccaggg cctgagcacc gccaccaagg atacctacga cgccctgcac 1680 atgcaggccc tgccccccag a 1701 <210> 607 <211> 656 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 607 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro 115 120 125 Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser 130 135 140 Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys 145 150 155 160 Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val 180 185 190 Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr 195 200 205 Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr 210 215 220 Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 225 230 235 240 Leu Glu Met Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 245 250 255 Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 260 265 270 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 275 280 285 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 290 295 300 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 305 310 315 320 Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 325 330 335 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 340 345 350 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 355 360 365 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 370 375 380 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 385 390 395 400 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 405 410 415 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 420 425 430 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 435 440 445 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 450 455 460 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Ile Tyr Ile Trp Ala Pro 465 470 475 480 Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu 485 490 495 Tyr Cys Asn His Arg Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 500 505 510 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 515 520 525 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 530 535 540 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 545 550 555 560 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 565 570 575 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 580 585 590 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 595 600 605 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 610 615 620 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 625 630 635 640 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 645 650 655 <210> 608 <211> 1968 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 608 gaagtgaagc tggtggaaag cggcggaggc ctggtgaaac ctggcggcag cctgaagctg 60 agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgacagatc 120 cccgagaagc ggctggaatg ggtggccagc atcagcaggg gcggcaccac ctactacccc 180 gacagcgtga agggccggtt caccatcagc cgggacaacg tgcggaacat cctgtacctg 240 cagatgagca gcctgcggag cgaggacacc gccatgtact actgcggcag atacgactac 300 gacggctact acgccatgga ttactggggc cagggcacca gcgtgaccgt gtctagcggc 360 agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc ggcgagggca gcaccaaggg cgacatcaag 420 atgacccaga gccccagctc tatgtacgcc agcctgggcg agcgcgtgac catcacatgc 480 aaggccagcc ccgacatcaa cagctacctg tcctggttcc agcagaagcc cggcaagagc 540 cccaagaccc tgatctaccg ggccaaccgg ctggtggacg gcgtgccaag cagattttcc 600 ggcggaggca gcggccagga ctacagcctg accatcaaca gcctggaata cgaggacatg 660 ggcatctact actgcctgca gtacgacgag ttcccctaca ccttcggagg cggcaccaag 720 ctggaaatga aggagagcaa gtacggccct ccctgccccc cttgccctgc ccccgagttc 780 gagggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc cccaagccca aggacaccct gatgatcagc 840 cggacccccg aggtgacctg tgtggtggtg gacgtgtccc aggaggaccc cgaggtccag 900 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggag 960 cagttccaga gcacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 1020 aacggcaagg aatacaagtg taaggtgtcc aacaagggcc tgcccagcag catcgagaaa 1080 accatcagca aggccaaggg ccagcctcgg gagccccagg tgtacaccct gccccctagc 1140 caagaggaga tgaccaagaa tcaggtgtcc ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc 1200 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1260 ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc ttcctgtaca gcaggctgac cgtggacaag 1320 agccggtggc aggagggcaa cgtctttagc tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1380 cactacaccc agaagagcct gtccctgagc ctgggcaaga tgatctacat ctgggcccct 1440 ctggccggca cctgtggcgt gctgctgctg agcctggtca tcaccctgta ctgcaaccac 1500 cggaataaga gaggccggaa gaaactgctg tacatcttca agcagccctt catgcggccc 1560 gtgcagacca cccaggaaga ggacggctgc agctgccggt tccccgagga agaggaaggc 1620 ggctgcgaac tgcgggtgaa gttcagccgg agcgccgacg cccctgccta ccagcagggc 1680 cagaaccagc tgtacaacga gctgaacctg ggccggaggg aggagtacga cgtgctggac 1740 aagcggagag gccgggaccc tgagatgggc ggcaagcccc ggagaaagaa ccctcaggag 1800 ggcctgtata acgaactgca gaaagacaag atggccgagg cctacagcga gatcggcatg 1860 aagggcgagc ggcggagggg caagggccac gacggcctgt accagggcct gagcaccgcc 1920 accaaggata cctacgacgc cctgcacatg caggccctgc cccccaga 1968 <210> 609 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 609 Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys 100 105 <210> 610 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 610 gacgtgcaga tcacccagag ccccagcagc ctgtatgcca gcctgggcga gagagtgacc 60 attacctgca aggccagccc cgacatcaac agctacctga gctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaacagac tggtggatgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcggaggctc tggccaggac tacagcctga ccatcaactc cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa g 321 <210> 611 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 611 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 612 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 612 gaagtgaagc tggtggaatc tggcggcgga ctcgtgaagc ctggcggctc tctgaagctg 60 tcttgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gcggcagatc 120 cccgagaagc ggctggaatg ggtggccagc atcagcagag gcggaaccac ctactacccc 180 gactctgtga agggccggtt caccatcagc cgggacaacg tgcggaacat cctgtacctg 240 cagatgagca gcctgcggag cgaggacacc gccatgtact actgtggcag atacgactac 300 gacggctact atgccatgga ttactggggc cagggcacca gcgtgaccgt gtcatct 357 <210> 613 <211> 566 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 613 Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 165 170 175 Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190 Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser 195 200 205 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp 210 215 220 Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 245 250 255 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 260 265 270 Ser Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 275 280 285 Ala Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 290 295 300 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser 305 310 315 320 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 325 330 335 Ser Asp Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala 340 345 350 Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg 355 360 365 Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys 370 375 380 Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu 385 390 395 400 Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys 405 410 415 Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg 420 425 430 Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp 435 440 445 Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 450 455 460 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 465 470 475 480 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 485 490 495 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 500 505 510 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 515 520 525 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 530 535 540 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 545 550 555 560 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 565 <210> 614 <211> 1698 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 614 gacgtgcaga tcacccagag ccccagcagc ctgtatgcca gcctgggcga gagagtgacc 60 attacctgca aggccagccc cgacatcaac agctacctga gctggttcca gcagaagccc 120 ggcaagagcc ccaagaccct gatctaccgg gccaacagac tggtggatgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcggaggctc tggccaggac tacagcctga ccatcaactc cctggaatac 240 gaggacatgg gcatctacta ctgcctgcag tacgacgagt tcccctacac cttcggaggc 300 ggcaccaagc tggaaatgaa gggcagcaca agcggcagcg gcaagcctgg atctggcgag 360 ggaagcacca agggcgaagt gaagctggtg gaatctggcg gcggactcgt gaagcctggc 420 ggctctctga agctgtcttg tgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 480 tgggtgcggc agatccccga gaagcggctg gaatgggtgg ccagcatcag cagaggcgga 540 accacctact accccgactc tgtgaagggc cggttcacca tcagccggga caacgtgcgg 600 aacatcctgt acctgcagat gagcagcctg cggagcgagg acaccgccat gtactactgt 660 ggcagatacg actacgacgg ctactatgcc atggattact ggggccaggg caccagcgtg 720 accgtgtcat ctaagcctac caccaccccc gcacctcgtc ctccaacccc tgcacctacg 780 attgccagtc agcctctttc actgcggcct gaggccagca gaccagctgc cggcggtgcc 840 gtccatacaa gaggactgga cttcgcgtcc gataaaccta ctaccactcc agccccaagg 900 cccccaaccc cagcaccgac tatcgcatca cagcctttgt cactgcgtcc tgaagccagc 960 cggccagctg cagggggggc cgtccacaca aggggactcg actttgcgag tgataagccc 1020 accaccaccc ctgcccctag acctccaacc ccagccccta caatcgccag ccagcccctg 1080 agcctgaggc ccgaagcctg tagacctgcc gctggcggag ccgtgcacac cagaggcctg 1140 gatttcgcct gcgacatcta catctgggcc cctctggccg gcacctgtgg cgtgctgctg 1200 ctgagcctgg tcatcaccct gtactgcaac caccggaata ggagcaagcg gagcagaggc 1260 ggccacagcg actacatgaa catgaccccc cggaggcctg gccccacccg gaagcactac 1320 cagccctacg cccctcccag ggacttcgcc gcctaccgga gccgggtgaa gttcagccgg 1380 agcgccgacg cccctgccta ccagcagggc cagaaccagc tgtacaacga gctgaacctg 1440 ggccggaggg aggagtacga cgtgctggac aagcggagag gccgggaccc tgagatgggc 1500 ggcaagcccc ggagaaagaa ccctcaggag ggcctgtata acgaactgca gaaagacaag 1560 atggccgagg cctacagcga gatcggcatg aagggcgagc ggcggagggg caagggccac 1620 gacggcctgt accagggcct gagcaccgcc accaaggata cctacgacgc cctgcacatg 1680 caggccctgc cccccaga 1698 <210> 615 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 615 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 130 135 140 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 145 150 155 160 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 210 215 220 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile 225 230 235 240 Lys Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 275 280 285 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 290 295 300 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 305 310 315 320 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 325 330 335 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 340 345 350 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 355 360 365 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 370 375 380 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg 405 410 415 Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 420 425 430 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 435 440 445 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 450 455 460 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 465 470 475 480 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 485 490 495 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 500 505 510 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 515 520 525 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 530 535 540 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 545 550 555 560 Pro Pro Arg <210> 616 <211> 1689 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 616 gaagtgcagc tggtggagtc tggcggcggt ctggtgcagc ccggcggctc tctgcgcctc 60 tcctgtgcca cctctggttt tacattctcc tcctacgcta tgtcctggat gcggcaagcc 120 cccggcaagg gcctagagtg ggtcgcctca atcagcaggg gcgggacgac ttattatgcc 180 gattcagtta aggggagatt cacaatttcc gtggataaat ccaagaatac cttatacctc 240 cagatgaact ctctgcgggc cgaagatacg gccgtatatt attgtgggag gtatgactac 300 gacggatatt acgccatgga ttattggggg caggggacac ttgttacagt gagttccggt 360 ggtggggggt ctggaggcgg gggcagtgga ggcggagggt ctgatataca gatgacacag 420 agcccttcaa gtttatctgc aagcgtcggc gatcgtgtta caataacttg caaggcatct 480 cccgacatca attcctacct caactggtat cagcagaagc ctgggaaggc tcctaagctg 540 cttatttaca gagcaaatcg cctggtggac ggcgtgccca gtcggttttc cgggtctggg 600 agcggaacgg attacacact gaccatctca agcctgcaac ccgaagactt cgctacatat 660 tactgccttc agtatgatga gttcccatat accttcggcg ctgggaccaa ggtggagata 720 aagaagccta ccaccacccc cgcacctcgt cctccaaccc ctgcacctac gattgccagt 780 cagcctcttt cactgcggcc tgaggccagc agaccagctg ccggcggtgc cgtccataca 840 agaggactgg acttcgcgtc cgataaacct actaccactc cagccccaag gcccccaacc 900 ccagcaccga ctatcgcatc acagcctttg tcactgcgtc ctgaagccag ccggccagct 960 gcaggggggg ccgtccacac aaggggactc gactttgcga gtgataagcc caccaccacc 1020 cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 1080 cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 1140 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 1200 gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1260 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1320 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1380 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1440 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1500 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1560 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1620 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1680 ccccccaga 1689 <210> 617 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 617 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 130 135 140 Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg 145 150 155 160 Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Arg Gly 165 170 175 Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser 180 185 190 Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg 195 200 205 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly 210 215 220 Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 225 230 235 240 Ser Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 275 280 285 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 290 295 300 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 305 310 315 320 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 325 330 335 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 340 345 350 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 355 360 365 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 370 375 380 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg 405 410 415 Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 420 425 430 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 435 440 445 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 450 455 460 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 465 470 475 480 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 485 490 495 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 500 505 510 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 515 520 525 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 530 535 540 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 545 550 555 560 Pro Pro Arg <210> 618 <211> 1692 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 618 gatattcaga tgacccagtc accttcgagt ctgagcgcat ccgtgggcga cagagtgacc 60 attacctgta aggccagccc ggacattaac agctacctat cgtggtatca gcaaaagcct 120 ggtaaggccc ctaaactcct tatctacagg gctaataggt tggtagacgg ggtgcctagc 180 cggttctctg gttccggcag cggtacggac tttactctga ccataagctc tctgcaacca 240 gaagacatcg caacatacta ctgtttacaa tacgacgaat ttccttatac ctttggccag 300 gggaccaagt tagagatcaa ggggggcggc ggaagtggtg gagggggaag tggtggagga 360 ggaagcgaag tgcaactggt cgagtctggg ggcggccttg tgcaacctgg aggcagcctt 420 cgactcagtt gcgccgcgtc tggttttacc ttctcctctt acgcgatgag ctgggttcgc 480 caggcccccg gcaagggact tgagtgggtt agttcgatct cccgcggagg caccacatat 540 tatcctgact cggttaaggg acgcttcact atctctaggg acaattcaaa gaacacactg 600 tatctccaaa tgaactcctt gcgggccgag gacactgctg tgtattattg cggacgatac 660 gactacgatg ggtattacgc catggattac tgggggcaag gtacactggt cactgtgagt 720 tcgaagccta ccaccacccc cgcacctcgt cctccaaccc ctgcacctac gattgccagt 780 cagcctcttt cactgcggcc tgaggccagc agaccagctg ccggcggtgc cgtccataca 840 agaggactgg acttcgcgtc cgataaacct actaccactc cagccccaag gcccccaacc 900 ccagcaccga ctatcgcatc acagcctttg tcactgcgtc ctgaagccag ccggccagct 960 gcaggggggg ccgtccacac aaggggactc gactttgcga gtgataagcc caccaccacc 1020 cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 1080 cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 1140 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 1200 gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1260 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1320 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1380 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1440 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1500 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1560 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1620 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1680 ccccccagat ga 1692 <210> 619 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 619 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 130 135 140 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 145 150 155 160 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 210 215 220 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 225 230 235 240 Lys Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 275 280 285 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 290 295 300 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 305 310 315 320 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 325 330 335 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 340 345 350 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 355 360 365 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 370 375 380 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg 405 410 415 Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 420 425 430 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 435 440 445 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 450 455 460 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 465 470 475 480 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 485 490 495 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 500 505 510 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 515 520 525 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 530 535 540 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 545 550 555 560 Pro Pro Arg <210> 620 <211> 1689 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 620 gaggttcaac ttgtggaatc cggcggcggg ttagtccagc ccggcgggag cttgcggctg 60 tcctgcgccg cctctggatt cacttttagc tcctatgcta tgtcttgggt aaggcaggcc 120 cctggtaaag gactagagtg ggtggcctcg atctcccgtg gtggcactac atactacgcc 180 gactccgtta aaggccggtt taccatctcc cgtgacaact ctaaaaatac tttgtacctg 240 caaatgaact ccctgcgggc agaagacaca gccgtgtact attgcgggcg ttacgattac 300 gacggatatt acgcaatgga ctactggggc cagggcacac tggtcaccgt gagcagcggg 360 ggcggaggaa gtggaggagg cggtagtggt gggggaggaa gcgatataca aatgactcag 420 tcccctagta gccttagtgc tagtgtggga gacagagtga ccatcacctg caaagcatct 480 cctgatatca attcctacct taactggtat caacagaagc ctggcaaagc tccaaagctc 540 ctgatttatc gcgcgaacag attggtcgat ggggtccctt ccagattcag cggctcaggg 600 tcagggaccg atttcaccct cacaattagt tcacttcagc ccgaggacat cgccacgtat 660 tattgccttc agtacgatga gttcccttac acctttggcg ggggaactaa agtcgaaatt 720 aagaagccta ccaccacccc cgcacctcgt cctccaaccc ctgcacctac gattgccagt 780 cagcctcttt cactgcggcc tgaggccagc agaccagctg ccggcggtgc cgtccataca 840 agaggactgg acttcgcgtc cgataaacct actaccactc cagccccaag gcccccaacc 900 ccagcaccga ctatcgcatc acagcctttg tcactgcgtc ctgaagccag ccggccagct 960 gcaggggggg ccgtccacac aaggggactc gactttgcga gtgataagcc caccaccacc 1020 cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 1080 cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 1140 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 1200 gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1260 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1320 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1380 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1440 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1500 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1560 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1620 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1680 ccccccaga 1689 <210> 621 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 621 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 130 135 140 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 145 150 155 160 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 210 215 220 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile 225 230 235 240 Lys Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 275 280 285 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 290 295 300 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 305 310 315 320 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 325 330 335 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 340 345 350 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 355 360 365 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 370 375 380 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg 405 410 415 Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 420 425 430 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 435 440 445 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 450 455 460 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 465 470 475 480 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 485 490 495 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 500 505 510 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 515 520 525 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 530 535 540 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 545 550 555 560 Pro Pro Arg <210> 622 <211> 1689 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 622 gaagtgcagc ttgtggagtc aggaggaggg ctagttcagc caggcggctc tctgagacta 60 tcttgtgctg cctccggctt cacatttagc tcttatgcaa tgtcctgggt ccgccaggcc 120 cctggtaaag gcctggaatg ggttgcttct atctctagag gcggaaccac ttactaccct 180 gattcagtga aggggagatt cacaattagt agggacaacg tgcggaacat cctctaccta 240 cagatgtcaa gtttacgcag tgaggacact gcgatgtatt actgcggtcg atacgattat 300 gatggatatt atgcaatgga ttattggggc cagggcactc tggtcacagt atcttccggc 360 ggcggtggtt ctggcggtgg tggaagcgga gggggggggt ccgacatcca gatgacccaa 420 tcaccatcga gtcttagtgc atccgttggg gatagagtga caatcacttg taaggcatcc 480 ccggacatca actcatatct taattggtat cagcaaaagc cgggcaaggc ccctaagctc 540 ctgatttata gggccaaccg ccttgtggat ggagtcccct cccgctttag tggaagcggc 600 tctggcacag actacaccct gactatcagc tccttgcagc ctgaggattt tgctacctac 660 tactgtcttc agtacgatga atttccatac actttcggtg ctgggacaaa agtggagatc 720 aaaaagccta ccaccacccc cgcacctcgt cctccaaccc ctgcacctac gattgccagt 780 cagcctcttt cactgcggcc tgaggccagc agaccagctg ccggcggtgc cgtccataca 840 agaggactgg acttcgcgtc cgataaacct actaccactc cagccccaag gcccccaacc 900 ccagcaccga ctatcgcatc acagcctttg tcactgcgtc ctgaagccag ccggccagct 960 gcaggggggg ccgtccacac aaggggactc gactttgcga gtgataagcc caccaccacc 1020 cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 1080 cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 1140 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 1200 gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1260 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1320 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1380 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1440 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1500 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1560 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1620 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1680 ccccccaga 1689 <210> 623 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 623 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 130 135 140 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 145 150 155 160 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 210 215 220 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile 225 230 235 240 Lys Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 275 280 285 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 290 295 300 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 305 310 315 320 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 325 330 335 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 340 345 350 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 355 360 365 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 370 375 380 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg 405 410 415 Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 420 425 430 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 435 440 445 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 450 455 460 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 465 470 475 480 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 485 490 495 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 500 505 510 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 515 520 525 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 530 535 540 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 545 550 555 560 Pro Pro Arg <210> 624 <211> 1689 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 624 gaagtgcaac tggtcgagtc tgggggcggc cttgtgcaac ctggaggcag ccttcgactc 60 agttgcgccg cgtctggttt taccttctcc tcttacgcga tgagctgggt tcgccaggcc 120 cccggcaagg gacttgagtg ggttagttcg atctcccgcg gaggcaccac atattatcct 180 gactcggtta agggacgctt cactatctct agggacaatt caaagaacac actgtatctc 240 caaatgaact ccttgcgggc cgaggacact gctgtgtatt attgcggacg atacgactac 300 gatgggtatt acgccatgga ttactggggg caaggtacac tggtcactgt gagttcgggg 360 ggcggcggaa gtggtggagg gggaagtggt ggaggaggaa gcgatataca gatgacacag 420 agcccttcaa gtttatctgc aagcgtcggc gatcgtgtta caataacttg caaggcatct 480 cccgacatca attcctacct caactggtat cagcagaagc ctgggaaggc tcctaagctg 540 cttatttaca gagcaaatcg cctggtggac ggcgtgccca gtcggttttc cgggtctggg 600 agcggaacgg attacacact gaccatctca agcctgcaac ccgaagactt cgctacatat 660 tactgccttc agtatgatga gttcccatat accttcggcg ctgggaccaa ggtggagata 720 aagaagccta ccaccacccc cgcacctcgt cctccaaccc ctgcacctac gattgccagt 780 cagcctcttt cactgcggcc tgaggccagc agaccagctg ccggcggtgc cgtccataca 840 agaggactgg acttcgcgtc cgataaacct actaccactc cagccccaag gcccccaacc 900 ccagcaccga ctatcgcatc acagcctttg tcactgcgtc ctgaagccag ccggccagct 960 gcaggggggg ccgtccacac aaggggactc gactttgcga gtgataagcc caccaccacc 1020 cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 1080 cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 1140 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 1200 gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1260 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1320 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1380 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1440 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1500 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1560 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1620 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1680 ccccccaga 1689 <210> 625 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 625 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 130 135 140 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 145 150 155 160 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 210 215 220 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 225 230 235 240 Lys Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 275 280 285 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 290 295 300 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 305 310 315 320 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 325 330 335 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 340 345 350 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 355 360 365 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 370 375 380 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg 405 410 415 Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 420 425 430 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 435 440 445 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 450 455 460 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 465 470 475 480 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 485 490 495 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 500 505 510 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 515 520 525 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 530 535 540 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 545 550 555 560 Pro Pro Arg <210> 626 <211> 1689 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 626 gaagtgcaac tggtcgagtc tgggggcggc cttgtgcaac ctggaggcag ccttcgactc 60 agttgcgccg cgtctggttt taccttctcc tcttacgcga tgagctgggt tcgccaggcc 120 cccggcaagg gacttgagtg ggttagttcg atctcccgcg gaggcaccac atattatcct 180 gactcggtta agggacgctt cactatctct agggacaatt caaagaacac actgtatctc 240 caaatgaact ccttgcgggc cgaggacact gctgtgtatt attgcggacg atacgactac 300 gatgggtatt acgccatgga ttactggggg caaggtacac tggtcactgt gagttcgggg 360 ggcggcggaa gtggtggagg gggaagtggt ggaggaggaa gcgatattca gatgacccag 420 tcgcccagca gtctctcggc ctcagtgggc gaccgggtca ctatcacttg caaagcaagt 480 cctgatataa actcctatct taattggtat cagcagaagc ccggcaaggc acctaaggtt 540 ctgatatatc gcgcaaatcg gctcgtggat ggagtaccca gccgattttc cggcagcggc 600 tcaggcactg actacacact gacaatcagc agcttgcagc ctgaagattt cgccacatac 660 tattgtctac agtacgacga gttcccttat acattcggcc aggggaccaa ggtcgagatc 720 aagaagccta ccaccacccc cgcacctcgt cctccaaccc ctgcacctac gattgccagt 780 cagcctcttt cactgcggcc tgaggccagc agaccagctg ccggcggtgc cgtccataca 840 agaggactgg acttcgcgtc cgataaacct actaccactc cagccccaag gcccccaacc 900 ccagcaccga ctatcgcatc acagcctttg tcactgcgtc ctgaagccag ccggccagct 960 gcaggggggg ccgtccacac aaggggactc gactttgcga gtgataagcc caccaccacc 1020 cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 1080 cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 1140 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 1200 gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1260 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1320 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1380 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1440 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1500 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1560 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1620 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1680 ccccccaga 1689 <210> 627 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 627 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Ile 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg 50 55 60 Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Glu Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 130 135 140 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser 145 150 155 160 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Asn Leu Glu Thr Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 210 215 220 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 225 230 235 240 Lys Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 275 280 285 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 290 295 300 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 305 310 315 320 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 325 330 335 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 340 345 350 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 355 360 365 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 370 375 380 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg 405 410 415 Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 420 425 430 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 435 440 445 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 450 455 460 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 465 470 475 480 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 485 490 495 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 500 505 510 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 515 520 525 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 530 535 540 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 545 550 555 560 Pro Pro Arg <210> 628 <211> 1689 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 628 gaggttcaac tcgtggagtc tggaggcggg ctagtgcagc ctggcggctc cctgcgactg 60 tcttgcagcg catcaggctt tacattcagt tcttatgcca tgagctgggt gaggcaggtg 120 cccggcaagg gtctggtgtg gatcagctca atctccaggg gcgggactac atattacgcc 180 gattcggtca ggggtcgttt tatcattagc agggataatg ccaagaacac cttgtatttg 240 gagatgaaca acctaagagg cgaagacacc gctgtgtact attgtgcccg ttacgactac 300 gatgggtact acgccatgga ctattggggc cagggaacct tggtgactgt gtcaagtggc 360 gggggcggca gcggaggcgg tggcagcgga ggcggcggtt ctgatattca aatgacgcaa 420 agtcccagca gcctctccgc ctccgttgga gacagggtga ctattacatg ccaagccagc 480 cccgatatta atagctactt aaattggtat cagcagaaac ctgggaaggc acctaaactt 540 ctcatctacc gcgctaacaa tctggagacc ggcgtgccgt ctagattttc cggctctgga 600 tcagggaccg attttactct gacaattagt tccctgcaac ccgaagacat cgccacttat 660 tattgcctgc aatatgatga gtttccttac acatttggtc agggaactaa actagagatt 720 aagaagccta ccaccacccc cgcacctcgt cctccaaccc ctgcacctac gattgccagt 780 cagcctcttt cactgcggcc tgaggccagc agaccagctg ccggcggtgc cgtccataca 840 agaggactgg acttcgcgtc cgataaacct actaccactc cagccccaag gcccccaacc 900 ccagcaccga ctatcgcatc acagcctttg tcactgcgtc ctgaagccag ccggccagct 960 gcaggggggg ccgtccacac aaggggactc gactttgcga gtgataagcc caccaccacc 1020 cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 1080 cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 1140 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 1200 gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1260 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1320 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1380 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1440 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1500 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1560 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1620 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1680 ccccccaga 1689 <210> 629 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 629 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Ile 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg 50 55 60 Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Glu Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 130 135 140 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 145 150 155 160 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 210 215 220 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile 225 230 235 240 Lys Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp 275 280 285 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 290 295 300 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ser Arg Pro Ala 305 310 315 320 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Ser Asp Lys 325 330 335 Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 340 345 350 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 355 360 365 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 370 375 380 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg 405 410 415 Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 420 425 430 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 435 440 445 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 450 455 460 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 465 470 475 480 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 485 490 495 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 500 505 510 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 515 520 525 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 530 535 540 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 545 550 555 560 Pro Pro Arg <210> 630 <211> 1689 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 630 gaggttcaac tcgtggagtc tggaggcggg ctagtgcagc ctggcggctc cctgcgactg 60 tcttgcagcg catcaggctt tacattcagt tcttatgcca tgagctgggt gaggcaggtg 120 cccggcaagg gtctggtgtg gatcagctca atctccaggg gcgggactac atattacgcc 180 gattcggtca ggggtcgttt tatcattagc agggataatg ccaagaacac cttgtatttg 240 gagatgaaca acctaagagg cgaagacacc gctgtgtact attgtgcccg ttacgactac 300 gatgggtact acgccatgga ctattggggc cagggaacct tggtgactgt gtcaagtggc 360 gggggcggca gcggaggcgg tggcagcgga ggcggcggtt ctgatataca gatgacacag 420 agcccttcaa gtttatctgc aagcgtcggc gatcgtgtta caataacttg caaggcatct 480 cccgacatca attcctacct caactggtat cagcagaagc ctgggaaggc tcctaagctg 540 cttatttaca gagcaaatcg cctggtggac ggcgtgccca gtcggttttc cgggtctggg 600 agcggaacgg attacacact gaccatctca agcctgcaac ccgaagactt cgctacatat 660 tactgccttc agtatgatga gttcccatat accttcggcg ctgggaccaa ggtggagata 720 aagaagccta ccaccacccc cgcacctcgt cctccaaccc ctgcacctac gattgccagt 780 cagcctcttt cactgcggcc tgaggccagc agaccagctg ccggcggtgc cgtccataca 840 agaggactgg acttcgcgtc cgataaacct actaccactc cagccccaag gcccccaacc 900 ccagcaccga ctatcgcatc acagcctttg tcactgcgtc ctgaagccag ccggccagct 960 gcaggggggg ccgtccacac aaggggactc gactttgcga gtgataagcc caccaccacc 1020 cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 1080 cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 1140 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 1200 gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 1260 gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 1320 gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 1380 gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 1440 gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 1500 cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 1560 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 1620 taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1680 ccccccaga 1689 <210> 631 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 631 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 632 <211> 86 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 632 Gly Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Ala Pro Pro Thr Asp Val Ser Leu 1 5 10 15 Gly Asp Glu Leu His Leu Asp Gly Glu Asp Val Ala Met Ala His Ala 20 25 30 Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Asp Gly Asp Ser 35 40 45 Pro Gly Pro Gly Phe Thr Pro His Asp Ser Ala Pro Tyr Gly Ala Leu 50 55 60 Asp Met Ala Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly 65 70 75 80 Ile Asp Glu Tyr Gly Gly 85 <210> 633 <211> 258 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 633 ggccccaaga agaaaaggaa ggtggccccc cccaccgacg tgagcctggg cgacgagctg 60 cacctggacg gcgaggacgt ggccatggcc cacgccgacg ccctggacga cttcgacctg 120 gacatgctgg gcgacggcga cagccccggc cccggcttca ccccccacga cagcgccccc 180 tacggcgccc tggacatggc cgacttcgag ttcgagcaga tgttcaccga cgccctgggc 240 atcgacgagt acggcggc 258 <210> 634 <211> 235 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 634 Glu Met Pro Val Asp Arg Ile Leu Glu Ala Glu Leu Ala Val Glu Gln 1 5 10 15 Lys Ser Asp Gln Gly Val Glu Gly Pro Gly Gly Thr Gly Gly Ser Gly 20 25 30 Ser Ser Pro Asn Asp Pro Val Thr Asn Ile Cys Gln Ala Ala Asp Lys 35 40 45 Gln Leu Phe Thr Leu Val Glu Trp Ala Lys Arg Ile Pro His Phe Ser 50 55 60 Ser Leu Pro Leu Asp Asp Gln Val Ile Leu Leu Arg Ala Gly Trp Asn 65 70 75 80 Glu Leu Leu Ile Ala Ser Phe Ser His Arg Ser Ile Asp Val Arg Asp 85 90 95 Gly Ile Leu Leu Ala Thr Gly Leu His Val His Arg Asn Ser Ala His 100 105 110 Ser Ala Gly Val Gly Ala Ile Phe Asp Arg Val Leu Thr Glu Leu Val 115 120 125 Ser Lys Met Arg Asp Met Arg Met Asp Lys Thr Glu Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Arg Ala Ile Ile Leu Phe Asn Pro Glu Val Arg Gly Leu Lys Ser Ala 145 150 155 160 Gln Glu Val Glu Leu Leu Arg Glu Lys Val Tyr Ala Ala Leu Glu Glu 165 170 175 Tyr Thr Arg Thr Thr His Pro Asp Glu Pro Gly Arg Phe Ala Lys Leu 180 185 190 Leu Leu Arg Leu Pro Ser Leu Arg Ser Ile Gly Leu Lys Cys Leu Glu 195 200 205 His Leu Phe Phe Phe Arg Leu Ile Gly Asp Val Pro Ile Asp Thr Phe 210 215 220 Leu Met Glu Met Leu Glu Ser Pro Ser Asp Ser 225 230 235 <210> 635 <211> 705 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 635 gagatgcccg tggacaggat tctggaggcc gaactcgccg tggagcagaa aagcgaccag 60 ggcgtggagg gccccggcgg aaccggcggc agcggcagca gccccaacga ccccgtgacc 120 aacatctgcc aggccgccga caagcagctg ttcaccctgg tggagtgggc caagaggatt 180 ccccacttca gcagcctgcc cctggacgac caggtgatcc tgctgagggc cggatggaac 240 gagctgctga tcgccagctt cagccacagg agcatcgacg tgagggacgg catcctgctg 300 gccaccggcc tgcacgtcca taggaacagc gcccacagcg ccggagtggg cgccatcttc 360 gacagggtgc tgaccgagct ggtgagcaag atgagggaca tgaggatgga caagaccgag 420 ctgggctgcc tgagggccat catcctgttc aaccccgagg tgaggggcct gaaaagcgcc 480 caggaggtgg agctgctgag ggagaaggtg tacgccgccc tggaggagta caccaggacc 540 acccaccccg acgagcccgg cagattcgcc aagctgctgc tgaggctgcc cagcctgagg 600 agcatcggcc tgaagtgcct ggagcacctg ttcttcttca ggctgatcgg cgacgtgccc 660 atcgacacct tcctgatgga gatgctggag agccccagcg acagc 705 <210> 636 <211> 323 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 636 Gly Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Ala Pro Pro Thr Asp Val Ser Leu 1 5 10 15 Gly Asp Glu Leu His Leu Asp Gly Glu Asp Val Ala Met Ala His Ala 20 25 30 Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Asp Gly Asp Ser 35 40 45 Pro Gly Pro Gly Phe Thr Pro His Asp Ser Ala Pro Tyr Gly Ala Leu 50 55 60 Asp Met Ala Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly 65 70 75 80 Ile Asp Glu Tyr Gly Gly Glu Phe Glu Met Pro Val Asp Arg Ile Leu 85 90 95 Glu Ala Glu Leu Ala Val Glu Gln Lys Ser Asp Gln Gly Val Glu Gly 100 105 110 Pro Gly Gly Thr Gly Gly Ser Gly Ser Ser Pro Asn Asp Pro Val Thr 115 120 125 Asn Ile Cys Gln Ala Ala Asp Lys Gln Leu Phe Thr Leu Val Glu Trp 130 135 140 Ala Lys Arg Ile Pro His Phe Ser Ser Leu Pro Leu Asp Asp Gln Val 145 150 155 160 Ile Leu Leu Arg Ala Gly Trp Asn Glu Leu Leu Ile Ala Ser Phe Ser 165 170 175 His Arg Ser Ile Asp Val Arg Asp Gly Ile Leu Leu Ala Thr Gly Leu 180 185 190 His Val His Arg Asn Ser Ala His Ser Ala Gly Val Gly Ala Ile Phe 195 200 205 Asp Arg Val Leu Thr Glu Leu Val Ser Lys Met Arg Asp Met Arg Met 210 215 220 Asp Lys Thr Glu Leu Gly Cys Leu Arg Ala Ile Ile Leu Phe Asn Pro 225 230 235 240 Glu Val Arg Gly Leu Lys Ser Ala Gln Glu Val Glu Leu Leu Arg Glu 245 250 255 Lys Val Tyr Ala Ala Leu Glu Glu Tyr Thr Arg Thr Thr His Pro Asp 260 265 270 Glu Pro Gly Arg Phe Ala Lys Leu Leu Leu Arg Leu Pro Ser Leu Arg 275 280 285 Ser Ile Gly Leu Lys Cys Leu Glu His Leu Phe Phe Phe Arg Leu Ile 290 295 300 Gly Asp Val Pro Ile Asp Thr Phe Leu Met Glu Met Leu Glu Ser Pro 305 310 315 320 Ser Asp Ser <210> 637 <211> 969 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 637 ggccccaaga agaaaaggaa ggtggccccc cccaccgacg tgagcctggg cgacgagctg 60 cacctggacg gcgaggacgt ggccatggcc cacgccgacg ccctggacga cttcgacctg 120 gacatgctgg gcgacggcga cagccccggc cccggcttca ccccccacga cagcgccccc 180 tacggcgccc tggacatggc cgacttcgag ttcgagcaga tgttcaccga cgccctgggc 240 atcgacgagt acggcggcga attcgagatg cccgtggaca ggattctgga ggccgaactc 300 gccgtggagc agaaaagcga ccagggcgtg gagggccccg gcggaaccgg cggcagcggc 360 agcagcccca acgaccccgt gaccaacatc tgccaggccg ccgacaagca gctgttcacc 420 ctggtggagt gggccaagag gattccccac ttcagcagcc tgcccctgga cgaccaggtg 480 atcctgctga gggccggatg gaacgagctg ctgatcgcca gcttcagcca caggagcatc 540 gacgtgaggg acggcatcct gctggccacc ggcctgcacg tccataggaa cagcgcccac 600 agcgccggag tgggcgccat cttcgacagg gtgctgaccg agctggtgag caagatgagg 660 gacatgagga tggacaagac cgagctgggc tgcctgaggg ccatcatcct gttcaacccc 720 gaggtgaggg gcctgaaaag cgcccaggag gtggagctgc tgagggagaa ggtgtacgcc 780 gccctggagg agtacaccag gaccacccac cccgacgagc ccggcagatt cgccaagctg 840 ctgctgaggc tgcccagcct gaggagcatc ggcctgaagt gcctggagca cctgttcttc 900 ttcaggctga tcggcgacgt gcccatcgac accttcctga tggagatgct ggagagcccc 960 agcgacagc 969 <210> 638 <211> 150 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 638 Met Lys Leu Leu Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Lys Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu 20 25 30 Lys Asn Asn Trp Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro 35 40 45 Leu Thr Arg Ala His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu 50 55 60 Glu Gln Leu Phe Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile 65 70 75 80 Leu Lys Met Asp Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu 85 90 95 Phe Val Gln Asp Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala 100 105 110 Ser Val Glu Thr Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser 115 120 125 Ala Thr Ser Ser Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu 130 135 140 Thr Val Ser Pro Glu Phe 145 150 <210> 639 <211> 450 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 639 atgaagctgc tgagcagcat cgagcaggct tgcgacatct gcaggctgaa gaagctgaag 60 tgcagcaagg agaagcccaa gtgcgccaag tgcctgaaga acaactggga gtgcagatac 120 agccccaaga ccaagaggag ccccctgacc agggcccacc tgaccgaggt ggagagcagg 180 ctggagaggc tggagcagct gttcctgctg atcttcccca gggaggacct ggacatgatc 240 ctgaagatgg acagcctgca agacatcaag gccctgctga ccggcctgtt cgtgcaggac 300 aacgtgaaca aggacgccgt gaccgacagg ctggccagcg tggagaccga catgcccctg 360 accctgaggc agcacaggat cagcgccacc agcagcagcg aggagagcag caacaagggc 420 cagaggcagc tgaccgtgag ccccgagttt 450 <210> 640 <211> 336 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 640 Ile Arg Pro Glu Cys Val Val Pro Glu Thr Gln Cys Ala Met Lys Arg 1 5 10 15 Lys Glu Lys Lys Ala Gln Lys Glu Lys Asp Lys Leu Pro Val Ser Thr 20 25 30 Thr Thr Val Asp Asp His Met Pro Pro Ile Met Gln Cys Glu Pro Pro 35 40 45 Pro Pro Glu Ala Ala Arg Ile His Glu Val Val Pro Arg Phe Leu Ser 50 55 60 Asp Lys Leu Leu Val Thr Asn Arg Gln Lys Asn Ile Pro Gln Leu Thr 65 70 75 80 Ala Asn Gln Gln Phe Leu Ile Ala Arg Leu Ile Trp Tyr Gln Asp Gly 85 90 95 Tyr Glu Gln Pro Ser Asp Glu Asp Leu Lys Arg Ile Thr Gln Thr Trp 100 105 110 Gln Gln Ala Asp Asp Glu Asn Glu Glu Ser Asp Thr Pro Phe Arg Gln 115 120 125 Ile Thr Glu Met Thr Ile Leu Thr Val Gln Leu Ile Val Glu Phe Ala 130 135 140 Lys Gly Leu Pro Gly Phe Ala Lys Ile Ser Gln Pro Asp Gln Ile Thr 145 150 155 160 Leu Leu Lys Ala Cys Ser Ser Glu Val Met Met Leu Arg Val Ala Arg 165 170 175 Arg Tyr Asp Ala Ala Ser Asp Ser Ile Leu Phe Ala Asn Asn Gln Ala 180 185 190 Tyr Thr Arg Asp Asn Tyr Arg Lys Ala Gly Met Ala Glu Val Ile Glu 195 200 205 Asp Leu Leu His Phe Cys Arg Cys Met Tyr Ser Met Ala Leu Asp Asn 210 215 220 Ile His Tyr Ala Leu Leu Thr Ala Val Val Ile Phe Ser Asp Arg Pro 225 230 235 240 Gly Leu Glu Gln Pro Gln Leu Val Glu Glu Ile Gln Arg Tyr Tyr Leu 245 250 255 Asn Thr Leu Arg Ile Tyr Ile Leu Asn Gln Leu Ser Gly Ser Ala Arg 260 265 270 Ser Ser Val Ile Tyr Gly Lys Ile Leu Ser Ile Leu Ser Glu Leu Arg 275 280 285 Thr Leu Gly Met Gln Asn Ser Asn Met Cys Ile Ser Leu Lys Leu Lys 290 295 300 Asn Arg Lys Leu Pro Pro Phe Leu Glu Glu Ile Trp Asp Val Ala Asp 305 310 315 320 Met Ser His Thr Gln Pro Pro Pro Ile Leu Glu Ser Pro Thr Asn Leu 325 330 335 <210> 641 <211> 1008 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 641 atcaggcccg agtgcgtggt gcccgagacc cagtgcgcca tgaaaaggaa ggagaagaag 60 gcccagaagg agaaggacaa gctgcccgtg agcaccacca ccgtcgatga ccacatgccc 120 cccatcatgc agtgcgagcc cccccccccc gaggccgcca ggattcacga ggtcgtgccc 180 aggttcctga gcgacaagct gctggtgacc aacaggcaga agaacatccc ccagctgacc 240 gccaaccagc agttcctgat cgccaggctg atctggtatc aggacggcta cgagcagccc 300 agcgacgagg acctgaaaag gatcacccag acctggcagc aggccgacga cgagaacgag 360 gagagcgaca cccccttcag gcagatcacc gagatgacca tcctgaccgt gcagctgatc 420 gtggagttcg ccaagggcct gcccggattc gccaagatca gccagcccga ccagatcacc 480 ctgctgaagg cttgcagcag cgaggtgatg atgctgaggg tggccaggag gtacgacgcc 540 gccagcgaca gcatcctgtt cgccaacaac caggcttaca ccagggacaa ctacaggaag 600 gctggcatgg ccgaggtgat cgaggacctc ctgcacttct gcagatgtat gtacagcatg 660 gccctggaca acatccacta cgccctgctg accgccgtgg tgatcttcag cgacaggccc 720 ggcctggagc agccccagct ggtggaggag atccagaggt actacctgaa caccctgagg 780 atctacatcc tgaaccagct gagcggcagc gccaggagca gcgtgatcta cggcaagatc 840 ctgagcatcc tgagcgagct gaggaccctg ggaatgcaga acagcaatat gtgtatcagc 900 ctgaagctga agaacaggaa gctgcccccc ttcctggagg agatttggga cgtggccgac 960 atgagccaca cccagccccc ccccatcctg gagagcccca ccaacctg 1008 <210> 642 <211> 335 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 642 Arg Pro Glu Cys Val Val Pro Glu Thr Gln Cys Ala Met Lys Arg Lys 1 5 10 15 Glu Lys Lys Ala Gln Lys Glu Lys Asp Lys Leu Pro Val Ser Thr Thr 20 25 30 Thr Val Asp Asp His Met Pro Pro Ile Met Gln Cys Glu Pro Pro Pro 35 40 45 Pro Glu Ala Ala Arg Ile His Glu Val Val Pro Arg Phe Leu Ser Asp 50 55 60 Lys Leu Leu Val Thr Asn Arg Gln Lys Asn Ile Pro Gln Leu Thr Ala 65 70 75 80 Asn Gln Gln Phe Leu Ile Ala Arg Leu Ile Trp Tyr Gln Asp Gly Tyr 85 90 95 Glu Gln Pro Ser Asp Glu Asp Leu Lys Arg Ile Thr Gln Thr Trp Gln 100 105 110 Gln Ala Asp Asp Glu Asn Glu Glu Ser Asp Thr Pro Phe Arg Gln Ile 115 120 125 Thr Glu Met Thr Ile Leu Thr Val Gln Leu Ile Val Glu Phe Ala Lys 130 135 140 Gly Leu Pro Gly Phe Ala Lys Ile Ser Gln Pro Asp Gln Ile Thr Leu 145 150 155 160 Leu Lys Ala Cys Ser Ser Glu Val Met Met Leu Arg Val Ala Arg Arg 165 170 175 Tyr Asp Ala Ala Ser Asp Ser Ile Leu Phe Ala Asn Asn Gln Ala Tyr 180 185 190 Thr Arg Asp Asn Tyr Arg Lys Ala Gly Met Ala Glu Val Ile Glu Asp 195 200 205 Leu Leu His Phe Cys Arg Cys Met Tyr Ser Met Ala Leu Asp Asn Ile 210 215 220 His Tyr Ala Leu Leu Thr Ala Val Val Ile Phe Ser Asp Arg Pro Gly 225 230 235 240 Leu Glu Gln Pro Gln Leu Val Glu Glu Ile Gln Arg Tyr Tyr Leu Asn 245 250 255 Thr Leu Arg Ile Tyr Ile Leu Asn Gln Leu Ser Gly Ser Ala Arg Ser 260 265 270 Ser Val Ile Tyr Gly Lys Ile Leu Ser Ile Leu Ser Glu Leu Arg Thr 275 280 285 Leu Gly Met Gln Asn Ser Asn Met Cys Ile Ser Leu Lys Leu Lys Asn 290 295 300 Arg Lys Leu Pro Pro Phe Leu Glu Glu Ile Trp Asp Val Ala Asp Met 305 310 315 320 Ser His Thr Gln Pro Pro Pro Ile Leu Glu Ser Pro Thr Asn Leu 325 330 335 <210> 643 <211> 1008 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 643 cggcctgagt gcgtagtacc cgagactcag tgcgccatga agcggaaaga gaagaaagca 60 cagaaggaga aggacaaact gcctgtcagc acgacgacgg tggacgacca catgccgccc 120 attatgcagt gtgaacctcc acctcctgaa gcagcaagga ttcacgaagt ggtcccaagg 180 tttctctccg acaagctgtt ggtgacaaac cggcagaaaa acatccccca gttgacagcc 240 aaccagcagt tccttatcgc caggctcatc tggtaccagg acgggtacga gcagccttct 300 gatgaagatt tgaagaggat tacgcagacg tggcagcaag cggacgatga aaacgaagag 360 tcggacactc ccttccgcca gatcacagag atgactatcc tcacggtcca acttatcgtg 420 gagttcgcga agggattgcc agggttcgcc aagatctcgc agcctgatca aattacgctg 480 cttaaggctt gctcaagtga ggtaatgatg ctccgagtcg cgcgacgata cgatgcggcc 540 tcagacagta ttctgttcgc gaacaaccaa gcgtacactc gcgacaacta ccgcaaggct 600 ggcatggccg aggtcatcga ggatctactg cacttctgcc ggtgcatgta ctctatggcg 660 ttggacaaca tccattacgc gctgctcacg gctgtcgtca tcttttctga ccggccaggg 720 ttggagcagc cgcaactggt ggaagagatc cagcggtact acctgaatac gctccgcatc 780 tatatcctga accagctgag cgggtcggcg cgttcgtccg tcatatacgg caagatcctc 840 tcaatcctct ctgagctacg cacgctcggc atgcaaaact ccaacatgtg catctccctc 900 aagctcaaga acagaaagct gccgcctttc ctcgaggaga tctgggatgt ggcggacatg 960 tcgcacaccc aaccgccgcc tatcctcgag tcccccacga atctctag 1008 <210> 644 <211> 488 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 644 Met Lys Leu Leu Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Lys Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu 20 25 30 Lys Asn Asn Trp Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro 35 40 45 Leu Thr Arg Ala His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu 50 55 60 Glu Gln Leu Phe Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile 65 70 75 80 Leu Lys Met Asp Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu 85 90 95 Phe Val Gln Asp Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala 100 105 110 Ser Val Glu Thr Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser 115 120 125 Ala Thr Ser Ser Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu 130 135 140 Thr Val Ser Pro Glu Phe Pro Gly Ile Arg Pro Glu Cys Val Val Pro 145 150 155 160 Glu Thr Gln Cys Ala Met Lys Arg Lys Glu Lys Lys Ala Gln Lys Glu 165 170 175 Lys Asp Lys Leu Pro Val Ser Thr Thr Thr Val Asp Asp His Met Pro 180 185 190 Pro Ile Met Gln Cys Glu Pro Pro Pro Pro Glu Ala Ala Arg Ile His 195 200 205 Glu Val Val Pro Arg Phe Leu Ser Asp Lys Leu Leu Val Thr Asn Arg 210 215 220 Gln Lys Asn Ile Pro Gln Leu Thr Ala Asn Gln Gln Phe Leu Ile Ala 225 230 235 240 Arg Leu Ile Trp Tyr Gln Asp Gly Tyr Glu Gln Pro Ser Asp Glu Asp 245 250 255 Leu Lys Arg Ile Thr Gln Thr Trp Gln Gln Ala Asp Asp Glu Asn Glu 260 265 270 Glu Ser Asp Thr Pro Phe Arg Gln Ile Thr Glu Met Thr Ile Leu Thr 275 280 285 Val Gln Leu Ile Val Glu Phe Ala Lys Gly Leu Pro Gly Phe Ala Lys 290 295 300 Ile Ser Gln Pro Asp Gln Ile Thr Leu Leu Lys Ala Cys Ser Ser Glu 305 310 315 320 Val Met Met Leu Arg Val Ala Arg Arg Tyr Asp Ala Ala Ser Asp Ser 325 330 335 Ile Leu Phe Ala Asn Asn Gln Ala Tyr Thr Arg Asp Asn Tyr Arg Lys 340 345 350 Ala Gly Met Ala Glu Val Ile Glu Asp Leu Leu His Phe Cys Arg Cys 355 360 365 Met Tyr Ser Met Ala Leu Asp Asn Ile His Tyr Ala Leu Leu Thr Ala 370 375 380 Val Val Ile Phe Ser Asp Arg Pro Gly Leu Glu Gln Pro Gln Leu Val 385 390 395 400 Glu Glu Ile Gln Arg Tyr Tyr Leu Asn Thr Leu Arg Ile Tyr Ile Leu 405 410 415 Asn Gln Leu Ser Gly Ser Ala Arg Ser Ser Val Ile Tyr Gly Lys Ile 420 425 430 Leu Ser Ile Leu Ser Glu Leu Arg Thr Leu Gly Met Gln Asn Ser Asn 435 440 445 Met Cys Ile Ser Leu Lys Leu Lys Asn Arg Lys Leu Pro Pro Phe Leu 450 455 460 Glu Glu Ile Trp Asp Val Ala Asp Met Ser His Thr Gln Pro Pro Pro 465 470 475 480 Ile Leu Glu Ser Pro Thr Asn Leu 485 <210> 645 <211> 1467 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 645 atgaagctac tgtcttctat cgaacaagca tgcgatattt gccgacttaa aaagctcaag 60 tgctccaaag aaaaaccgaa gtgcgccaag tgtctgaaga acaactggga gtgtcgctac 120 tctcccaaaa ccaaaaggtc tccgctgact agggcacatc tgacagaagt ggaatcaagg 180 ctagaaagac tggaacagct atttctactg atttttcctc gagaagacct tgacatgatt 240 ttgaaaatgg attctttaca ggatataaaa gcattgttaa caggattatt tgtacaagat 300 aatgtgaata aagatgccgt cacagataga ttggcttcag tggagactga tatgcctcta 360 acattgagac agcatagaat aagtgcgaca tcatcatcgg aagagagtag taacaaaggt 420 caaagacagt tgactgtatc gccggaattc ccggggatcc ggcctgagtg cgtagtaccc 480 gagactcagt gcgccatgaa gcggaaagag aagaaagcac agaaggagaa ggacaaactg 540 cctgtcagca cgacgacggt ggacgaccac atgccgccca ttatgcagtg tgaacctcca 600 cctcctgaag cagcaaggat tcacgaagtg gtcccaaggt ttctctccga caagctgttg 660 gtgacaaacc ggcagaaaaa catcccccag ttgacagcca accagcagtt ccttatcgcc 720 aggctcatct ggtaccagga cgggtacgag cagccttctg atgaagattt gaagaggatt 780 acgcagacgt ggcagcaagc ggacgatgaa aacgaagagt cggacactcc cttccgccag 840 atcacagaga tgactatcct cacggtccaa cttatcgtgg agttcgcgaa gggattgcca 900 gggttcgcca agatctcgca gcctgatcaa attacgctgc ttaaggcttg ctcaagtgag 960 gtaatgatgc tccgagtcgc gcgacgatac gatgcggcct cagacagtat tctgttcgcg 1020 aacaaccaag cgtacactcg cgacaactac cgcaaggctg gcatggccga ggtcatcgag 1080 gatctactgc acttctgccg gtgcatgtac tctatggcgt tggacaacat ccattacgcg 1140 ctgctcacgg ctgtcgtcat cttttctgac cggccagggt tggagcagcc gcaactggtg 1200 gaagagatcc agcggtacta cctgaatacg ctccgcatct atatcctgaa ccagctgagc 1260 gggtcggcgc gttcgtccgt catatacggc aagatcctct caatcctctc tgagctacgc 1320 acgctcggca tgcaaaactc caacatgtgc atctccctca agctcaagaa cagaaagctg 1380 ccgcctttcc tcgaggagat ctgggatgtg gcggacatgt cgcacaccca accgccgcct 1440 atcctcgagt cccccacgaa tctctag 1467 <210> 646 <211> 487 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 646 Met Lys Leu Leu Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Lys Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu 20 25 30 Lys Asn Asn Trp Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro 35 40 45 Leu Thr Arg Ala His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu 50 55 60 Glu Gln Leu Phe Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile 65 70 75 80 Leu Lys Met Asp Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu 85 90 95 Phe Val Gln Asp Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala 100 105 110 Ser Val Glu Thr Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser 115 120 125 Ala Thr Ser Ser Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu 130 135 140 Thr Val Ser Pro Glu Phe Pro Gly Arg Pro Glu Cys Val Val Pro Glu 145 150 155 160 Thr Gln Cys Ala Met Lys Arg Lys Glu Lys Lys Ala Gln Lys Glu Lys 165 170 175 Asp Lys Leu Pro Val Ser Thr Thr Thr Val Asp Asp His Met Pro Pro 180 185 190 Ile Met Gln Cys Glu Pro Pro Pro Pro Glu Ala Ala Arg Ile His Glu 195 200 205 Val Val Pro Arg Phe Leu Ser Asp Lys Leu Leu Val Thr Asn Arg Gln 210 215 220 Lys Asn Ile Pro Gln Leu Thr Ala Asn Gln Gln Phe Leu Ile Ala Arg 225 230 235 240 Leu Ile Trp Tyr Gln Asp Gly Tyr Glu Gln Pro Ser Asp Glu Asp Leu 245 250 255 Lys Arg Ile Thr Gln Thr Trp Gln Gln Ala Asp Asp Glu Asn Glu Glu 260 265 270 Ser Asp Thr Pro Phe Arg Gln Ile Thr Glu Met Thr Ile Leu Thr Val 275 280 285 Gln Leu Ile Val Glu Phe Ala Lys Gly Leu Pro Gly Phe Ala Lys Ile 290 295 300 Ser Gln Pro Asp Gln Ile Thr Leu Leu Lys Ala Cys Ser Ser Glu Val 305 310 315 320 Met Met Leu Arg Val Ala Arg Arg Tyr Asp Ala Ala Ser Asp Ser Ile 325 330 335 Leu Phe Ala Asn Asn Gln Ala Tyr Thr Arg Asp Asn Tyr Arg Lys Ala 340 345 350 Gly Met Ala Glu Val Ile Glu Asp Leu Leu His Phe Cys Arg Cys Met 355 360 365 Tyr Ser Met Ala Leu Asp Asn Ile His Tyr Ala Leu Leu Thr Ala Val 370 375 380 Val Ile Phe Ser Asp Arg Pro Gly Leu Glu Gln Pro Gln Leu Val Glu 385 390 395 400 Glu Ile Gln Arg Tyr Tyr Leu Asn Thr Leu Arg Ile Tyr Ile Leu Asn 405 410 415 Gln Leu Ser Gly Ser Ala Arg Ser Ser Val Ile Tyr Gly Lys Ile Leu 420 425 430 Ser Ile Leu Ser Glu Leu Arg Thr Leu Gly Met Gln Asn Ser Asn Met 435 440 445 Cys Ile Ser Leu Lys Leu Lys Asn Arg Lys Leu Pro Pro Phe Leu Glu 450 455 460 Glu Ile Trp Asp Val Ala Asp Met Ser His Thr Gln Pro Pro Pro Ile 465 470 475 480 Leu Glu Ser Pro Thr Asn Leu 485 <210> 647 <211> 1464 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 647 atgaagctgc tgagcagcat cgagcaggct tgcgacatct gcaggctgaa gaagctgaag 60 tgcagcaagg agaagcccaa gtgcgccaag tgcctgaaga acaactggga gtgcagatac 120 agccccaaga ccaagaggag ccccctgacc agggcccacc tgaccgaggt ggagagcagg 180 ctggagaggc tggagcagct gttcctgctg atcttcccca gggaggacct ggacatgatc 240 ctgaagatgg acagcctgca agacatcaag gccctgctga ccggcctgtt cgtgcaggac 300 aacgtgaaca aggacgccgt gaccgacagg ctggccagcg tggagaccga catgcccctg 360 accctgaggc agcacaggat cagcgccacc agcagcagcg aggagagcag caacaagggc 420 cagaggcagc tgaccgtgag ccccgagttt cccgggcggc ctgagtgcgt agtacccgag 480 actcagtgcg ccatgaagcg gaaagagaag aaagcacaga aggagaagga caaactgcct 540 gtcagcacga cgacggtgga cgaccacatg ccgcccatta tgcagtgtga acctccacct 600 cctgaagcag caaggattca cgaagtggtc ccaaggtttc tctccgacaa gctgttggtg 660 acaaaccggc agaaaaacat cccccagttg acagccaacc agcagttcct tatcgccagg 720 ctcatctggt accaggacgg gtacgagcag ccttctgatg aagatttgaa gaggattacg 780 cagacgtggc agcaagcgga cgatgaaaac gaagagtcgg acactccctt ccgccagatc 840 acagagatga ctatcctcac ggtccaactt atcgtggagt tcgcgaaggg attgccaggg 900 ttcgccaaga tctcgcagcc tgatcaaatt acgctgctta aggcttgctc aagtgaggta 960 atgatgctcc gagtcgcgcg acgatacgat gcggcctcag acagtattct gttcgcgaac 1020 aaccaagcgt acactcgcga caactaccgc aaggctggca tggccgaggt catcgaggat 1080 ctactgcact tctgccggtg catgtactct atggcgttgg acaacatcca ttacgcgctg 1140 ctcacggctg tcgtcatctt ttctgaccgg ccagggttgg agcagccgca actggtggaa 1200 gagatccagc ggtactacct gaatacgctc cgcatctata tcctgaacca gctgagcggg 1260 tcggcgcgtt cgtccgtcat atacggcaag atcctctcaa tcctctctga gctacgcacg 1320 ctcggcatgc aaaactccaa catgtgcatc tccctcaagc tcaagaacag aaagctgccg 1380 cctttcctcg aggagatctg ggatgtggcg gacatgtcgc acacccaacc gccgcctatc 1440 ctcgagtccc ccacgaatct ctag 1464 <210> 648 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 648 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Asp Phe Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 649 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 649 caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagcgacac cctgagcctg 60 acctgcgccg tgagcggcta cagcatcgtg agccactact actggcactg gatcagacag 120 ccccccggca agggcctgga gtggatgggc tacatcagca gcgacggcag caacgacttc 180 aaccccagcc tgaagaccag aatcaccatc agcagagaca ccagcaagaa ccagttcagc 240 ctgaagctga gcagcgtgac cgccgtggac accgccgtgt actactgcgt gagaggcgtg 300 gactactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcagc 339 <210> 650 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 650 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 651 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 651 caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagccagac cctgagcctg 60 acctgcgccg tgtacggcta cagcatcgtg agccactact actggagctg gatcagacag 120 ccccccggca agggcctgga gtggatcggc gagatcagca gcgacggcag caacaactac 180 aaccccagcc tgaagagcag agtgaccatc agcgtggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240 ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgac accgccgtgt actactgcgt gagaggcgtg 300 gactactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcagc 339 <210> 652 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 652 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Ser Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 653 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 653 caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagcgagac cctgagcctg 60 acctgcgccg tgagcggcta cagcatcgtg agccactact actggggctg gatcagacag 120 ccccccggca agggcctgga gtggatcggc agcatcagca gcgacggcag caactactac 180 aaccccagcc tgaagagcag agtgaccatc agcgtggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240 ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgac accgccgtgt actactgcgt gagaggcgtg 300 gactactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcagc 339 <210> 654 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 654 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 655 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 655 caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60 agctgcgccg ccagcggcta cagcatcgtg agccactact actggaactg ggtgagacag 120 gcccccggca agggcctgga gtgggtggcc tacatcagca gcgacggcag caacgagtac 180 aaccccagcc tgaagaacag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgt gagaggcgtg 300 gactactggg gccagggcac caccgtgacc gtgagcagc 339 <210> 656 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 656 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Leu Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 657 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 657 caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagccagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggcta cagcatcgtg agccactact actggaactg gatcagacag 120 caccccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcagca gcgacggcag caacgagtac 180 aaccccagcc tgaagaacct ggtgaccatc agcgtggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240 ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgac accgccgtgt actactgcgt gagaggcgtg 300 gactactggg gccagggcac catggtgacc gtgagcagc 339 <210> 658 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 658 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 659 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 659 caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagcgacac cctgagcctg 60 acctgcgccg tgagcggcta cagcatcgtg agccactact actggaactg gatcagacag 120 ccccccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcagca gcgacggcag caacgagtac 180 aaccccagcc tgaagaacag agtgaccatg agcgtggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240 ctgaagctga gcagcgtgac cgccgtggac accgccgtgt actactgcgt gagaggcgtg 300 gactactggg gccagggcac catggtgacc gtgagcagc 339 <210> 660 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 660 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ser Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 661 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 661 gaggtgcagc tgctggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60 agctgcgccg ccagcggcta cagcatcgtg agccactact actggaactg ggtgagacag 120 gcccccggca agggcctgga gtgggtgagc tacatcagca gcgacggcag caacgagtac 180 aaccccagcc tgaagaacag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgt gagaggcgtg 300 gactactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcagc 339 <210> 662 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 662 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 663 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 663 gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgca gagccagcag agacatcaac aacttcctgg cctggtacca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gctgtacaga gccaacagac tggagagcgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac tacaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacttcg ccacctacta ctgcctgcag tacggcgacc tgtacacctt cggcggcggc 300 accaaggtgg agatcaag 318 <210> 664 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 664 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 665 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 665 gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgca aggccagcag agacatcaac aacttcctga gctggtacca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaga gccaacagac tggtggacgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacatcg ccacctacta ctgcctgcag tacggcgacc tgtacacctt cggcggcggc 300 accaaggtgg agatcaag 318 <210> 666 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 666 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 667 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 667 gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgca aggccagcag agacatcaac aacttcctga gctggtacca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaga gccaacagac tggtggacgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacttcg ccacctacta ctgcctgcag tacggcgacc tgtacacctt cggccagggc 300 accaaggtgg agatcaag 318 <210> 668 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 668 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 669 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 669 gagatcgtgc tgacccagag ccccggcacc ctgagcctga gccccggcga gagagccacc 60 ctgagctgca aggccagcag agacatcaac aacttcctga gctggtacca gcagaagccc 120 ggccaggccc ccagactgct gatctacaga gccaacagac tggtggacgg catccccgac 180 agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag actggagccc 240 gaggacttcg ccgtgtacta ctgcctgcag tacggcgacc tgtacacctt cggccagggc 300 accaaggtgg agatcaag 318 <210> 670 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 670 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 671 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 671 gagatcgtgc tgacccagag ccccgccacc ctgagcctga gccccggcga gagagccacc 60 ctgagctgca aggccagcag agacatcaac aacttcctga gctggtacca gcagaagccc 120 ggccaggccc ccagactgct gatctacaga gccaacagac tggtggacgg catccccgcc 180 agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctggagccc 240 gaggacttcg ccgtgtacta ctgcctgcag tacggcgacc tgtacacctt cggccagggc 300 accaaggtgg agatcaag 318 <210> 672 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 672 Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Lys Pro Gly Gly Ser 1 5 10 15 Leu Lys Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Leu Ser Pro Glu Met Arg Leu Glu Trp Val Ala 35 40 45 Thr Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Asp Ser Val Gln 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu His Leu 65 70 75 80 Gln Met Gly Ser Leu Arg Ser Gly Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gln Gly Phe Gly Asn Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 673 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 673 gtgaagctgc aagagtccgg cggaggcttt gtgaagcctg gcggctctct gaaagtgtcc 60 tgtgccgcca gcggcttcac ctttagcagc tacgccatga gctgggtccg actgagccct 120 gagatgagac tggaatgggt cgccaccatc agtagcgcag gcggctacat cttctacagc 180 gactctgtgc agggcagatt caccatcagc cgggacaacg ccaagaacac cctgcacctc 240 cagatgggca gtctgagaag cggcgatacc gccatgtact actgcgccag acaaggcttc 300 ggcaactacg gcgactacta tgccatggat tactggggcc agggcaccac cgtgacagtc 360 tcttct 366 <210> 674 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 674 Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Lys Pro Gly Gly Ser 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr Ala 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Leu Ser Pro Glu Met Arg Leu Glu Trp Val Ala 35 40 45 Thr Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Asp Ser Val Gln 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr His Leu Gln 65 70 75 80 Met Gly Ser Leu Arg Ser Gly Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gln Gly Phe Gly Asn Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 675 <211> 365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 675 gtgaagctgg aagagtccgg cggaggcttt gtgaagcctg gcggaagcct gaagatcagc 60 tgtgccgcca gcggcttcac cttcagaaac tacgccatga gctgggtccg actgagcccc 120 gagatgagac tggaatgggt cgccacaatc agcagcgcag gcggctacat cttctacagc 180 gatagcgtgc agggcagatt caccatcagc cgggacaacg ccaagaacac cctgcacctc 240 cagatgggca gtctgagatc tggcgacacc gccatgtact actggccaga caaggcttcg 300 gcaactacgg cgactactat gccatggatt actggggcca gggcaccacc gtgacagtct 360 cttct 365 <210> 676 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 676 Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Val Ser His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Phe Asp Phe Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 677 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 677 gacgtgcaac ttctggagag cgggccaggg ctagtcaggc cctcccagtc gctttcactg 60 acttgcagtg tgaccggtta ctctattgtg agtcactact attggaactg gattcggcag 120 ttcccaggca acaaactgga atggatgggg tacatatctt ccgatggctc gaatgaatat 180 aacccatcat tgaaaaatcg tatttccatc agtctggata cgagtaaaaa ccagtttttc 240 ctcaaattcg atttcgtgac tacagcagat actgccacat acttctgtgt acgaggtgtc 300 gattattggg gacagggcac aacgctgacc gtaagttct 339 <210> 678 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 678 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Asn Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu His Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Gly Gly Leu Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala 115 <210> 679 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 679 gacgttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaatc ctagccagag cctgagcctg 60 acatgtaccg tgaccggcta cagcatcacc aacgactacg cctggaactg gatcagacag 120 ttccccggca acaagctgga atggatgggc tacatcaact acagcggcta caccacctac 180 aatcccagcc tgaagtcccg gatctccatc accagagaca ccagcaagaa ccagttcttc 240 ctgcacctga acagcgtgac caccgaggat accgccacct actactgcgc tagatgggat 300 ggcggcctga catattgggg ccagggaaca ctggtcaccg tgtctgct 348 <210> 680 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 680 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Gly Gly Leu Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 681 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 681 gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgaggctg 60 agctgcgccg ccagcggcta cagcatcacc aacgactacg cctggaactg ggtgaggcag 120 gcccccggca agggcctgga gtgggtgggc tacatcaact acagcggcta caccacctac 180 aaccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caggtgggac 300 ggcggcctga cctactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagc 348 <210> 682 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 682 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Phe Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Gly Gly Leu Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 683 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 683 gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgaggctg 60 agctgcgccg ccagcggcta cagcatcacc aacgactacg cctggaactg ggtgaggcag 120 gcccccggca agggcctgga gtgggtgggc tacatcaact acagcggcta caccacctac 180 aaccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccttctac 240 ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caggtgggac 300 ggcggcctga cctactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagc 348 <210> 684 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 684 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Val Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Asp Tyr Tyr Gly His Thr Tyr Gly Phe Ala Phe Cys Asp Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 685 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 685 gaggttcagc tgcagcagtc tggcgccgaa cttgtgaaac ctggcgcctc tgtgaagctg 60 agctgtaccg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tgcactgggt caagcagagg 120 cctgagcagg gcctcgaatg gatcggaaga gtggatcccg ccaacggcaa caccaaatac 180 gaccccaagt tccagggcaa agccacactg accgccgaca cctctagcaa cacagcctac 240 ctgcagctgt ccagcctgac ctctgaagat accgccgtgt acttctgcgt gcgggactac 300 tacggccata cctacggctt cgccttctgc gaccaaggca caaccctgac agtgtctgct 360 <210> 686 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 686 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Val Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Asp Tyr Tyr Gly His Thr Tyr Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 687 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 687 gaggtgcagc tggttgaatc tggcggagga ctggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tgcactgggt ccgacaggcc 120 cctggcaaag gacttgagtg ggttggaaga gtggaccccg ccaacggcaa caccaaatac 180 gaccccaagt tccagggcag attcaccatc agcgccgaca ccagcaagaa caccgcctac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actattgcgt gcgggattac 300 tacggccata cctacggctt cgccttttgg ggccagggca cactggttac cgttagctct 360 <210> 688 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 688 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Thr Arg Lys Asn Gln Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Glu Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Gln Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys 100 105 110 Arg <210> 689 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 689 gacatcgagc tgacacagag cccatctagc ctggctgtgt ctgccggcga gaaagtgacc 60 atgagctgca agagcagcca gagcctgctg aacagccgga ccagaaagaa tcagctggcc 120 tggtatcagc agaagcccgg ccaatctcct gagctgctga tctactgggc cagcacaaga 180 cagagcggcg tgcccgatag attcacagga tctggcagcg gcaccgactt caccctgaca 240 atcagttctg tgcaggccga ggacctggcc gtgtactact gtcagcagag ctacaacctg 300 ctgaccttcg gacccggcac caagctggaa gtgaagaga 339 <210> 690 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 690 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Thr Arg Lys Asn Gln Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Glu Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Gln Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 691 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 691 gacatcgagc tgacacagag cccatctagc ctggctgtgt ctgccggcga gaaagtgacc 60 atgagctgca agagcagcca gagcctgctg aacagccgga ccagaaagaa tcagctggcc 120 tggtatcagc agaaaaccgg acagagcccc gagctgctga tctactgggc cagcacaaga 180 cagagcggcg tgcccgatag attcacagga tctggcagcg gcaccgactt caccctgaca 240 atcagttctg tgcaggccga ggacctggcc gtgtactact gtcagcagag ctacaacctg 300 ctgaccttcg gacccggcac caagctggaa atcaagaga 339 <210> 692 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 692 Asp Ile Lys Met Ala Gln Ser Pro Ser Ser Val Asn Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Ser Trp Phe His Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 693 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 693 gacatcaaga tggctcagtc cccttctagc gtgaatgctt cgctagggga gcgtgtgacc 60 atcacatgta aagcatcacg cgacataaat aatttccttt cctggtttca tcagaaaccg 120 ggcaagtcgc ctaagacgct gatttacaga gcaaatcggt tggtagatgg agtgccaagc 180 agattcagcg ggagcggaag tggacaggat tatagcttca ctatttcatc cctggaatac 240 gaggacgtag gtatctatta ttgcctccag tatggcgatc tttacacatt tggtgggggg 300 actaagctgg agattaag 318 <210> 694 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 694 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Phe Leu Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gly Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp Leu Ile His Asn Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Asn Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Ala Ser Leu Gln Thr 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Thr Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 695 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 695 gacatccaga tgacccagag cagcagcttc ctgagcgtgt cccttggcgg cagagtgacc 60 atcacctgta aagccagcga cctgatccac aactggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaacgctc ccagactgct gattagcggc gccacctctc tggaaacagg cgtgccaagc 180 agattttccg gcagcggctc cggcaacgac tacacactgt ctattgccag cctgcagacc 240 gaggatgccg ccacctatta ctgccagcag tactggacca cacctttcac ctttggcagc 300 ggcaccaagc tggaaatcaa g 321 <210> 696 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 696 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp Leu Ile His Asn Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Thr Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 697 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 697 gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca aggccagcga cctgatccac aactggctgg cctggtacca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatcagcggc gccaccagcc tggagaccgg cgtgcccagc 180 aggttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tactggacca cccccttcac cttcggccag 300 ggcaccaagg tggagatcaa gagg 324 <210> 698 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 698 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu 65 70 75 80 Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 699 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 699 gacatcgtgc tgacacagag ccctgccatc atgtctgcca gcctcggcga gcgagtgacc 60 atgacatgta cagccagcag cagcgtgtcc agcagctacc tgcattggta tcagcagaag 120 cccggcagca gccccaagct gtggatctac agcacaagca atctggccag cggcgtgcca 180 ggcagatttt ctggttctgg cagcggcacc agctacagcc tgacaatcag cagcatggaa 240 gccgaggatg ccgccaccta ctactgccac cagtaccaca gaagccccta cacctttggc 300 ggaggcacca aggtggaaat caagcgg 327 <210> 700 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 700 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 701 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 701 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta cagccagcag cagcgtgtcc agcagctacc tgcattggta tcagcagaag 120 cccggcaagg cccctaagct gctgatctac agcaccagca atctggccag cggcgtgcca 180 agcagatttt ctggctctgg cagcggcacc gacttcaccc tgaccatatc tagcctgcag 240 cctgaggact tcgccaccta ctactgccac cagtaccaca gaagccccta cacctttggc 300 cagggcacca aggtggaaat caagcgg 327 <210> 702 <211> 570 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 702 ccccctctcc ctcccccccc cctaacgtta ctggccgaag ccgcttggaa taaggccggt 60 gtgcgtttgt ctatatgtta ttttccacca tattgccgtc ttttggcaat gtgagggccc 120 ggaaacctgg ccctgtcttc ttgacgagca ttcctagggg tctttcccct ctcgccaaag 180 gaatgcaagg tctgttgaat gtcgtgaagg aagcagttcc tctggaagct tcttgaagac 240 aaacaacgtc tgtagcgacc ctttgcaggc agcggaaccc cccacctggc gacaggtgcc 300 tctgcggcca aaagccacgt gtataagata cacctgcaaa ggcggcacaa ccccagtgcc 360 acgttgtgag ttggatagtt gtggaaagag tcaaatggct ctcctcaagc gtattcaaca 420 aggggctgaa ggatgcccag aaggtacccc attgtatggg atctgatctg gggcctcggt 480 gcacatgctt tacatgtgtt tagtcgaggt taaaaaacgt ctaggccccc cgaaccacgg 540 ggacgtggtt ttcctttgaa aaacacgatc 570 <210> 703 <211> 73 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 703 actagtttta taatttcttc ttccagaatt tctgacattt tataatttct tcttccagaa 60 gactcacaac ctc 73 <210> 704 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 704 ttcaggaatg ggttccaagg a 21 <210> 705 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 705 ttcaggaatg ggttccaagg atg 23 <210> 706 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 706 tcctggaagc tattcctgac g 21 <210> 707 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 707 tcctggaagc tattcctgac gt 22 <210> 708 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 708 tcctggaagc tattcctgac gtt 23 <210> 709 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 709 tataatataa tagaaccaca g 21 <210> 710 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 710 tataatataa tagaaccaca gga 23 <210> 711 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 711 tgtggttctg ttatatccat a 21 <210> 712 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 712 tgtggttctg ttatatccat at 22 <210> 713 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 713 tgtggttctg ttatatccat ata 23 <210> 714 <400> 714 000 <210> 715 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 715 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 716 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 716 Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr 1 5 <210> 717 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 717 Gly Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 718 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 718 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 719 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 719 Ala Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 720 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 720 Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 721 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 721 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr 1 5 <210> 722 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 722 Arg Ala Asn 1 <210> 723 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 723 Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 724 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 724 Arg Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 725 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 725 Arg Ala Asn Thr Leu Glu Ser 1 5 <210> 726 <211> 83 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 726 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro 1 5 10 15 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr 20 25 30 Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn 35 40 45 Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 50 55 60 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Met Asp Tyr <210> 727 <211> 73 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 727 Ala Ser Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 1 5 10 15 Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp 20 25 30 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr 35 40 45 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 50 55 60 Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr 65 70 <210> 728 <211> 78 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 728 Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 1 5 10 15 Trp Val Ser Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser 20 25 30 Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 35 40 45 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 50 55 60 Cys Gly Arg Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 65 70 75 <210> 729 <211> 71 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 729 Pro Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 1 5 10 15 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val 20 25 30 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 35 40 45 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 50 55 60 Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr 65 70

Claims (25)

  1. (a) 면역 체크포인트 단백질의 발현을 억제하는 miRNA; 및 (b) 키메라 수용체를 암호화하는 비-자연 발생 폴리뉴클레오티드.
  2. 제1항에 있어서, 상기 miRNA가 PD-1의 발현을 억제하는 것인, 폴리뉴클레오티드.
  3. 제2항에 있어서, 서열번호: 267과 적어도 80% 서열 동일성을 갖거나 엄격한 혼성화 조건 하에 서열번호: 267의 보체에 혼성화할 수 있는 핵산 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
  4. 제1항에 있어서, 상기 키메라 수용체가 T-세포 수용체인, 폴리뉴클레오티드.
  5. 제1항에 있어서, 상기 키메라 수용체가 키메라 항원 수용체인, 폴리뉴클레오티드.
  6. 제5항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체가 ROR1 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 것인, 폴리뉴클레오티드.
  7. 제6항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체가 서열번호: 465의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 것인, 폴리뉴클레오티드.
  8. 제5항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체가 서열번호: 467의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 줄기 영역, 및 서열번호: 473의 아미노산 서열, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 줄기 확장 영역을 포함하는 스페이서를 포함하는 것인, 폴리뉴클레오티드.
  9. 제1항에 있어서, 사이토카인을 추가로 암호화하는, 폴리뉴클레오티드.
  10. 제9항에 있어서, 상기 사이토카인이 IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체이고, 막 결합되는 것인, 폴리뉴클레오티드.
  11. 제10항에 있어서, IL-15, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체, 및 IL-15Rα, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는, 폴리뉴클레오티드.
  12. 제11항에 있어서, 상기 융합 단백질이 서열번호: 523의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 것인, 폴리뉴클레오티드.
  13. 제1항에 있어서, 세포 태그를 추가로 암호화하는, 폴리뉴클레오티드.
  14. 제13항에 있어서, 상기 절두된 HER1이 HER1 도메인 III, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체, 및 절두된 HER1 도메인 IV, 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는 것인, 폴리뉴클레오티드.
  15. 제14항에 있어서, 상기 세포 태그가 CD28 막관통 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 추가로 포함하는 것인, 폴리뉴클레오티드.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  17. 제16항에 있어서, 잠자는 숲속의 미녀(Sleeping Beauty) 트랜스포존을 포함하는, 벡터.
  18. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 변형된 면역 효과기 세포.
  19. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 또는 제18항의 세포를 포함하는 조성물.
  20. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 또는 제18항의 세포를 포함하는 키트.
  21. 제18항의 세포를 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법.
  22. 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 제18항의 변형된 면역 효과기 세포의 용도.
  23. 대상체에서 항원의 과발현과 연관된 질환 또는 장애를 검출하는 방법으로서, a) 대상체로부터의 샘플을 항체, 또는 이의 항원-결합 단편 중 하나 이상과 접촉시키는 단계; 및 b) 질환이 없는 대조군 샘플에 대한 이러한 결합과 비교하여 샘플에 대한 항체 또는 이의 단편의 증가된 결합 수준을 검출하여, 대상체에서 질환을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  24. 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 또는 이를 포함하는 세포의 연속 투여를 포함하는 질환 또는 장애의 치료 방법으로서, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체가 항원 표적 어레이에 대한 상이한 구조적 조성 및 결합 특이성을 갖는 키메라 항원 수용체의 집합체로부터 선택되는 것인, 방법.
  25. 제23항에 있어서, 집합체로부터의 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 제1 투여에 이어 집합체로부터의 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 제2 투여를 포함하며, 상기 제1 투여와 제2 투여 사이에 시간이 경과하는 것인, 방법.
KR1020237026326A 2021-01-11 2022-01-10 키메라 수용체 요법 KR20230143140A (ko)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163136074P 2021-01-11 2021-01-11
US63/136,074 2021-01-11
US202163136611P 2021-01-12 2021-01-12
US63/136,611 2021-01-12
US202163263001P 2021-10-25 2021-10-25
US63/263,001 2021-10-25
US202163263508P 2021-11-03 2021-11-03
US63/263,508 2021-11-03
PCT/US2022/011878 WO2022150732A2 (en) 2021-01-11 2022-01-10 Chimeric receptor therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230143140A true KR20230143140A (ko) 2023-10-11

Family

ID=82322745

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237026326A KR20230143140A (ko) 2021-01-11 2022-01-10 키메라 수용체 요법

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20220220187A1 (ko)
EP (1) EP4274898A2 (ko)
JP (1) JP2024502479A (ko)
KR (1) KR20230143140A (ko)
AU (1) AU2022205683A1 (ko)
CA (1) CA3204211A1 (ko)
IL (1) IL304292A (ko)
WO (1) WO2022150732A2 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2018352984B2 (en) * 2017-10-18 2024-02-01 Precigen, Inc. Polypeptide compositions comprising spacers
GB202201927D0 (en) * 2022-02-14 2022-03-30 Kings College Artificial microrna construct
WO2024015724A1 (en) * 2022-07-10 2024-01-18 Precigen, Inc. POLYCISTRONIC miRNA CONSTRUCTS FOR IMMUNE CHECKPOINT INHIBITION

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102238226B1 (ko) * 2013-05-14 2021-04-09 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 가공된 키메라 항원 수용체 (ｃａｒ) ｔ-세포의 인간 적용
EP4094780A3 (en) * 2016-02-12 2023-02-08 University of Massachusetts Anti-angiogenic mirna therapeutics for inhibiting corneal neovascularization
KR20230115343A (ko) * 2017-06-07 2023-08-02 프레시전 인코포레이티드 신규의 세포 태그의 발현
AU2018352984B2 (en) * 2017-10-18 2024-02-01 Precigen, Inc. Polypeptide compositions comprising spacers
CA3133899A1 (en) * 2018-03-30 2019-10-03 University Of Geneva Micro rna expression constructs and uses thereof
CN112714769A (zh) * 2018-07-10 2021-04-27 普瑞赛格恩公司 Ror-1特异性嵌合抗原受体及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
AU2022205683A1 (en) 2023-07-06
JP2024502479A (ja) 2024-01-19
WO2022150732A3 (en) 2022-08-25
CA3204211A1 (en) 2022-07-14
IL304292A (en) 2023-09-01
EP4274898A2 (en) 2023-11-15
US20220220187A1 (en) 2022-07-14
WO2022150732A2 (en) 2022-07-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102652827B1 (ko) Cd33 특이적 키메라 항원 수용체
US20200283778A1 (en) Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems
EP3397756B1 (en) Immune effector cell therapies with enhanced efficacy
KR102557834B1 (ko) 신규의 세포 태그의 발현
AU2022231783A1 (en) Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells
KR20220104217A (ko) Cd19 및 cd22 키메라 항원 수용체 및 이의 용도
AU2017250304A1 (en) Compositions and methods for selective protein expression
KR20200005596A (ko) 세포를 엔지니어링하기 위한 물질 및 방법, 및 면역-종양학에서의 그의 용도
US20230074800A1 (en) Car-t cell therapies with enhanced efficacy
KR20200089285A (ko) Bcma-표적화 키메라 항원 수용체, cd19-표적화 키메라 항원 수용체, 및 병용 요법
KR20180118175A (ko) 다중 키메라 항원 수용체 (car) 분자를 발현하는 세포 및 그에 따른 용도
KR20210043562A (ko) Ror-1 특이적 키메라 항원 수용체 및 그의 용도
AU2016297014A1 (en) Methods for improving the efficacy and expansion of immune cells
KR20230143140A (ko) 키메라 수용체 요법
CN111511391A (zh) 包含间隔区的多肽组合物
KR20190130608A (ko) 면역종양학을 위한 조성물 및 방법
KR20210021493A (ko) Muc16 특이적 키메라 항원 수용체 및 그의 용도
TW202306577A (zh) 表現ｃ－Ｊｕｎ之ＮＲ４Ａ缺陷型細胞及其用途
EP3723787A1 (en) Daric interleukin receptors
JP2022513372A (ja) シアリルルイスａを標的とするキメラ抗原受容体およびその使用
RU2795198C2 (ru) Специфичные к muc16 химерные антигенные рецепторы и их применения
CN110191898B (zh) Cd33特异性嵌合抗原受体
TW202307210A (zh) Ｃｄ１９和ｃｄ２２嵌合抗原受體及其用途
CN118055944A (zh) 调节Bcl-2增强嵌合抗原受体癌症免疫疗法功效