KR20230137374A - 경로 조절제, 이를 갖는 약학 조성물, 이의 용도 및 이를 이용한 치료 방법 - Google Patents

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Abstract

경로 조절제, 이를 갖는 약학 조성물, 이의 용도 및 이를 이용한 치료 방법이 개시된다. 상기 경로 조절제(도파민 β-하이드록실라제 억제제, 수용체 작용제 및 수용체 길항제 중 하나 이상을 포함함)는 면역조절에 의해 자가면역 질환의 발병을 억제할 수 있으므로 자가면역 질환 치료를 위한 잠재적인 치료 약물을 제공할 수 있다.

Description

경로 조절제, 이를 갖는 약학 조성물, 이의 용도 및 이를 이용한 치료 방법
본 발명은 경로 조절제, 이를 포함하는 약학 조성물, 이의 용도 및 이를 이용한 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명은 2021년 1월 26일에 출원된 중국 특허 출원(출원 번호 2021101034359)의 우선권을 주장한다.
도파민 β-하이드록실라제(이후 DBH로 불림)(또한 도파민 β-모노옥시게나제로도 공지됨)는 인체의 DBH 유전자에 의해 암호화되는 효소(EC 1.14.17.1)이다. DBH는 산소에 의한 도파민의 산화를 촉매반응시켜 다음과 같이 노르에피네프린과 에피네프린을 생성한다.
DBH는 4개의 동일한 서브유닛으로 구성된 약 290kDa의 구리-함유 옥시게나제이며, 그의 활성에는 보조인자로서 아스코르브산이 필요하다[1].
DBH는 소분자 막 결합 신경 전달 물질의 합성에 관여하는 유일한 효소로, 노르에피네프린을 소포 내에서 합성되는 유일한 전달 물질로 만든다. 노르에피네프린은 부신 수질의 크로마핀 세포뿐만 아니라 중추 및 말초 신경계의 노르아드레날린성 신경 말단에서 발현된다.
DBH는 주로 에피네프린(또는 아드레날린), 노르에피네프린(또는 노르아드레날린) 및 도파민을 포함한 미량 아민 및 카테콜아민의 생합성에 기여한다. 또한, 이들 물질과 관련된 외인성 바이오매스의 대사에 관여한다. 예를 들어, 인간 DBH는 암페타민과 p-하이드록시암페타민의 β-하이드록실화를 촉매반응시켜 노르에페드린과 p-하이드록시노레페드린을 각각 생성한다[2-4].
DBH는 알코올 중독[5] 및 흡연[6], 주의력 결핍 과잉 행동 장애[7], 정신분열증[8] 및 알츠하이머병[9]과 같은 의사 결정 사고 및 약물 중독 상태와 관련이 있는 것으로 생각된다. DBH의 부족은 도파민 β-하이드록실라제 결핍증이라고 한다.
20세기 말에서 21세기 초에, 네피카스타트[10], 에타미카스타트[11], 자미카스타트[12] 등의 고선택적 DBH 억제제가 연달아 개발되어 고혈압(폐동맥고혈압), 울혈성 심부전, 코카인 의존 또는 외상 후 스트레스 장애(PTSD) 등이 추가로 연구되었다.
네피카스타트는 울혈성 심부전 치료에 사용할 수 있으며 환자의 내약성이 우수한(well tolerated) 것으로 나타났다[13]. 추가 임상 연구 데이터에 따르면 네피카스타트는 심부전 치료에 효과가 없지만 안전하다.
네피카스타트 및 그 유사체(예: 에타미카스타트, 자미카스타트)는 고혈압 치료에 잠재적으로 사용된다. 네피카스타트에 의한 PTSD 및 코카인 의존성의 치료를 평가하는 임상 시험이 완료되었다. 연구에 따르면, 네피카스타트를 코카인과 함께 사용할 경우 네피카스타트는 안전하며 코카인의 긍정적인 효과를 억제할 수 있음이 밝혀졌다. 이 결과는 네피카스타트가 코카인 의존성에 대한 약물 요법으로 사용될 수 있음을 시사한다[14].
네피카스타트와 비교하여 에타미카스타트와 자미카스타트는 뇌-혈액-장벽 침투 수준이 낮고 말초 교감 신경 분포 조직에서 노르에피네프린 수준을 감소시킬 수 있지만 자발성 고혈압이 있는 래트의 뇌 조직에는 영향을 미치지 않는다[15]. 이러한 결과는 에타미카스타트 및 자미카스타트와 같은 DBH 억제제가 말초-관련 질환 치료에서 중추신경계의 부작용이나 합병증을 감소시킬 수 있음을 시사한다. 2상 임상 연구에서 에타미카스타트(200mg)은 치료 10일 후 용량-의존적으로 수축기 및 확장기 혈압을 감소시켰으며 우수한 내약성(tolerance)과 안전성을 보였다[16]. 자미카스타트(1200mg)도 10일 연속 투여 시 비교적 좋은 안전성을 보였다(NCT02151994). 폐동맥 고혈압에 대한 자미카스타트의 효능에 대한 임상 시험이 진행 중이다(NCT04316143).
이미 1998년 연구에서, DBH가 면역조절에 미치는 영향이 보고되었다. 연구에 따르면 병원균이 없는 경우 dbh-/- 마우스는 정상적인 백혈구 수, T 및 B 세포의 정상적인 발달을 가지며 이러한 세포는 시험관 내에서 정상적인 기능을 갖지만 dbh-/- 마우스는 병원균(예: Listeria monocytogenes 또는 Mycobacterium tuberculosis)에 의한 감염에 더 취약하고; 한편, 그 동물은 심각한 흉선 변성 및 Th1 사이토카인 생산을 포함한 손상된 T 세포 기능을 나타낸다. 이러한 결과는 카테콜아민이 정상적인 생리적 발달에 필요하지 않지만 감염의 면역조절에 중요한 역할을 한다는 것을 시사한다[17].
자율 신경의 일부로서 DBH는 노르아드레날린성 섬유를 통해 전체 뇌, 조직, 혈관 및 말초 혈액을 직간접적으로 침투한다. 노르아드레날린성 섬유 외에도, 단백질 발현 및 국소화는 특정 조직 특이성을 갖는다. 예를 들어, DBH는 부신 수질의 크로마핀 세포, 청반(locus coeruleus)의 노르아드레날린성 세포, 간 조직 및 장 조직에서 특정 수준으로 발현되며, 그 중 DBH는 부신 수질에서 가장 많이 발현된다.
한 연구에서는 조직에서 DBH의 높은 발현 또는 말초 혈액에서 높은 수준의 DBH 분비가 일부 신경계 또는 내분비 질환과 관련될 수 있음을 발견했다[18]. 예를 들어, 말초 혈액의 DBH 수치가 높으면 알츠하이머병, 양극성 장애, 헌팅턴병, 갑상선 기능 저하증 및 PTSD와 관련될 수 있다. 말초 혈액 내 DBH 수치가 신경 장애와 관련이 있을 수 있지만 DBH 억제제는 임상 시험에서 알츠하이머병 및 PTSD에 좋은 효능이 있는 것으로 나타나지 않았다(CLINICALTRIALS 데이터베이스 참조). 유사하게, 자가면역 장염 환자에서 염증 조직의 DBH 발현이 상향 조절된다는 연구 결과가 있었지만, 이 연구에서는 이들의 필수 연관성을 명확히 하지 않았다[19].
자가면역 학회에 따르면, 자가면역 질환에는 100가지 초과의 유형이 있다. 임상에서, 자가면역 질환 치료는 호르몬 및/또는 면역억제제와 같은 비표적 약물로 증상을 조절하는 데 초점을 맞추면서 환자에게 크고 돌이킬 수 없는 비가역적 유해 효과 및 손상을 가져온다.
자가면역 질환을 치료할 수 있는 안전한 치료제를 찾는 것이 이 분야의 시급한 기술 과제임을 알 수 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 기술적 과제는 경로 조절제, 이를 포함하는 약학 조성물, 이의 용도 및 이를 이용한 치료 방법을 제공하는 것을 포함한다.
본 발명자들은, 도파민 β-하이드록실라제 억제제(DBH 억제제로 지칭됨), 수용체 작용제 및 수용체 길항제 중 하나 이상을 포함하는 선행 기술의 경로 조절제가 면역조절(예를 들어, 특히, 체중 감소 완화, DAI 점수 개선 및 결장 밀도의 정상화)를 통해 자가면역 질환의 발달 및 진행을 억제하여 자가면역 질환의 치료를 위한 잠재적인 치료제를 제공할 수 있음을 예기치 못하게 발견하였다.
본 발명은 다음과 같은 기술적 솔루션을 통해 상기 기술적 문제를 해결한다.
본 발명의 제1 측면은, 자가면역 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 경로 조절제의 용도에 관한 것으로서, 상기 경로 조절제는 DBH 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 용도에서 경로 조절제는 바람직하게는 DBH 억제제이다.
상기 용도에서 DBH 억제제는 선행 기술에 개시된 DBH 억제제 또는 미래의 DBH 억제제일 수 있으며, 예를 들어 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합 중 하나 이상일 수 있다. DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 보다 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다. 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트 중 하나 이상을 자가면역 질환 치료에 사용하면 호르몬 및/또는 면역억제제와 같은 비표적 약물로 인해 환자에게 크고 비가역적인 유해 효과와 손상이 발생하지 않으며 이를 자가면역 질환 치료를 위한 안전한 치료제로 만든다.
상기 용도에서, DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 더욱 바람직하게는 네피카스타트이다. 네피카스타트를 이용한 자가면역 질환의 치료는 환자의 체중 감소를 현저하게 감소시키고, 환자의 결장 밀도를 현저하게 감소시킬 수 있다.
상기 용도에서, 예를 들면
경로 조절제는 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100mg/kg, 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100mg/kg, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 20-50mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이다.
맥락에서, 단위 용량은 정수 또는 분수가 될 수 있다. 예를 들어, "10 내지 100"은 간결한 표현이지만, 범위 내의 각 포인트 값을 나타내지는 않지만 문맥상 명시적으로 개시된 것으로 간주됨을 이해해야 한다.
상기 기술 솔루션은 자가면역 질환의 치료에 사용되며 환자의 체중 감소를 현저하게 감소시키고, 환자의 결장 밀도를 현저하게 감소시킬 수 있다.
상기 용도에 있어서, 상기 자가면역 질환은 선행 기술에 개시된 자가면역 질환 중 하나 이상일 수 있으며, 예를 들어 이완불능증, 애디슨병, 성인 스틸병, 무감마글로불린혈증, 원형 탈모증, 아밀로이드증, 강직성 척추염, 항-GBM/항-TBM 신염, 항인지질 증후군, 자가면역 혈관부종, 자가면역 자율신경실조증, 자가면역 뇌척수염, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환(AIED), 자가면역 심근염, 자가면역 난소염, 자가면역 고환염, 자가면역 췌장염, 자가면역 망막병증, 자가면역 두드러기, 축삭 신경병증(AMAN), 발로병, 베체트병, 양성 점막 유천포창, 수포성 유천포창, 캐슬만병(CD), 셀리악병, 샤가스병, 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(CIDP), 만성 재발성 다발성 골수염(CRMO), 호산구성 육아종증(EGPA), 반흔 유천포창, 코간 증후군, 냉응집소병, 선천성 심장 차단, 콕사키 심근염, CREST 증후군, 크론병, 포진성 피부염, 피부근염, 데빅병(시신경척수염), 원판상 루푸스, 드레슬러 증후군, 자궁내막증, 호산구성 식도염(EoE), 호산구성 근막염, 결절성 홍반, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 에반스 증후군, 섬유근육통, 섬유화 폐포염, 거대세포 동맥염, 거대세포 심근염, 사구체신염, 굿파스처 증후군, 다발혈관염을 동반한 육아종증, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 하시모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤노흐-쇤라인 자반병(HSP), 임신성 헤르페스 또는 임신 천포창양(PG), 화농땀샘염(HS), 저감마글로불린혈증, IgA 신장병증, IgG4-관련 경화성 질환, 면역성 혈소판감소성 자반병(ITP), 봉입체 근염(IBM), 간질성 방광염(IC), 소아 관절염, 소아 당뇨병 1형, 소아 근염(JM), 가와사키병, 람베르트-이튼 증후군, 백혈구파괴성 혈관염, 편평태선, 경화태선, 결막염, 선형 IgA병(LAD), 루푸스, 만성 라임병, 메니에르병, 현미경적 다발혈관염(MPA), 혼합 결합 조직병(MCTD), 무렌 궤양, 무하-하버만병, 다초점 운동 신경병증(MMN 또는 MMNCB), 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근염, 기면증, 신생아 루푸스, 호중구감소증, 안반흔 유천포창, 시신경염, 회문성 류머티즘(PR), PANDAS, 신생물딸림 소뇌 변성(PCD), 발작성 야간 혈색소뇨증(PNH), 패리 롬버그 증후군, 편평부염, 파소니지-터너 증후군, 천포창, 말초 신경병증, 정맥주위 뇌척수염, 악성 빈혈(PA), POEMS 증후군, 결절성 다발동맥염, 다선성 증후군 I형, 다선성 II형 증후군, 다선성 증후군 III형, 류마티스성 다발근통, 다발성 근염, 심근경색후 증후군, 심낭절개후 증후군, 원발성 담즙성 간경변, 원발성 경화성 담관염, 프로게스테론 피부염, 건선, 건선성 관절염, 순수적혈구 무형성증(PRCA), 괴저성 농피증, 레이노 현상, 반응성 관절염, 반사성 교감 신경 이영양증, 재발성 다발연골염, 하지 불안 증후군(RLS), 후복막 섬유증, 류마티스성 열, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 슈미트 증후군, 공막염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 정자 및 고환 자가면역, 강직인 증후군(SPS), 아급성 세균성 심내막염(SBE), 수삭 증후군, 교감신경 안염(SO), 타카야수 동맥염, 측두 동맥염/거대 세포 동맥염, 혈소판 감소성 자반병(TTP), 갑상선 안질환(TED), 톨로사-헌트 증후군(THS), 횡단 척수염, 제1형 당뇨병, 궤양성 대장염(UC), 미분화 결합 조직 질환(UCTD), 포도막염, 혈관염, 백반증 및 보그트-고야나기-하라다병으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있고; 바람직하게는 자가면역 대장염, 시신경척수염, 류마티스성 관절염, 경피증, 건선 또는 포도막염이다.
본 발명의 제2 측면은 자가면역 질환의 치료에 사용하기 위한 경로 조절제에 관한 것으로서, 상기 경로 조절제는 DBH 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 경로 조절제에서 경로 조절제는 바람직하게는 DBH 억제제이다.
상기 경로 조절제에서, DBH 억제제는 선행 기술에 개시된 DBH 억제제일 수 있고, 예를 들어 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합 중 하나 이상일 수 있다. DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 보다 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 경로 조절제에서 DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 더욱 바람직하게는 네피카스타트이다.
상기 경로 조절제에서, 예를 들면
경로 조절제는 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100mg/kg, 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100mg/kg, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 20-50mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이다.
상기 경로 조절제에서, 자가면역 질환의 정의는 앞서 정의한 바와 같다.
본 발명의 제3 측면은, 치료 유효량의 경로 조절제를 대상체(subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 자가면역 질환의 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 경로 조절제는 DBH 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 치료 방법에서, 경로 조절제는 바람직하게는 DBH 억제제이다.
상기 치료 방법에서, DBH 억제제는 선행 기술에 개시된 DBH 억제제일 수 있고, 예를 들어 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합 중 하나 이상일 수 있다. DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 보다 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 치료 방법에서, DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 더욱 바람직하게는 네피카스타트이다.
상기 치료 방법에서, DBH 억제제는 화학요법제, 표적 치료제, 면역요법제 및 항염증제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상과 병용 투여될 수 있다.
상기 치료 방법에서, 예를 들면
경로 조절제는 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100mg/kg, 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100mg/kg, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 20-50mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이다.
상기 치료 방법에서 자가면역 질환의 정의는 앞서 정의한 바와 같다.
본 발명의 제4 측면은 :
- 경로 조절제, 및
- 약학적으로 허용가능한 담체
를 포함하는 자가면역 질환 치료용 약학 조성물에 관한 것으로서,
상기 경로 조절제는 DBH 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 약학 조성물에서 경로 조절제는 바람직하게는 DBH 억제제이다.
상기 약학 조성물에서 DBH 억제제는 선행 기술에 개시된 DBH 억제제일 수 있으며, 예를 들어 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합 중 하나 이상일 수 있다. DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 보다 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 약학 조성물에서 DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 더욱 바람직하게는 네피카스타트이다.
상기 약학 조성물에서, 예를 들면
경로 조절제는 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100mg/kg, 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100mg/kg, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 20-50mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이다.
상기 약학 조성물에서 자가면역 질환의 정의는 앞서 정의한 바와 같다.
본 발명의 제5 측면은 약제의 제조에서 경로 조절제의 용도에 관한 것으로서, 상기 약제는 CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD8+ T 세포의 비율 증가, CD4+ 세포의 전 염증성 인자의 분비 감소, CD8+ T 세포의 전 염증성 인자의 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제; 말초 혈액에서 림프구, 호중구 및 단핵구의 함량 감소; 진피층에서 염증 세포 침윤 및 피하 모세혈관 과형성 감소; 피부 섬유증 완화; 포도막염 발병률 감소; 피부 염증 완화; 대변 형태 점수 개선, CW/CL 개선, CW/BW 개선, CW/CL/BW 개선, 결장 궤양 면적 증가 억제, 결장 염증 세포 침윤 점수 개선, 조직 손상 점수 개선; 질병 활성 점수 개선, 혈변 또는 잠혈 개선으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용도에 사용된다. 여기서, 경로 조절제는 DBH 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 용도에서 경로 조절제는 바람직하게는 DBH 억제제이다.
상기 용도에서 DBH 억제제는 선행 기술에 개시된 DBH 억제제일 수 있으며, 예를 들어 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합 중 하나 이상일 수 있다. DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 보다 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 용도에서 DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 더욱 바람직하게는 네피카스타트이다.
상기 용도에서, 예를 들면
경로 조절제는 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100mg/kg, 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100mg/kg, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 20-50mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이다.
상기 용도에 있어서, 상기 약제는 CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD4+ T 세포의 전-염증 인자의 분비 감소, B 세포 활성화의 억제, 및 NK 세포 활성화의 억제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 용도에 사용되는 것이 바람직하다.
상기 용도에서 CD4+ T 세포로부터 분비되는 전-염증 인자는 바람직하게는 IL-17A, IFN-γ 및 TNF-α 중 하나 이상이다.
상기 용도에서 CD8+ T 세포로부터 분비되는 염증유발 인자는 바람직하게는 IL-17A 및/또는 TNF-α이다.
상기 용도에서 조절 T 세포는 바람직하게는 CD25+FOXP3+ Treg 세포이다.
상기 용도에서 B 세포는 바람직하게는 B220+ 세포, 더욱 바람직하게는 CD69+B220+ B 세포이다.
상기 용도에서 NK 세포는 바람직하게는 NK1.1+ 세포, 보다 바람직하게는 NK1.1+CD107a+ NK 세포이다.
본 발명의 제6 측면은, CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD8+ T 세포의 비율 증가, CD4+ T 세포의 전-염증 인자의 분비 감소, CD8+ T 세포의 전-염증 인자의 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제; 말초 혈액에서 림프구, 호중구 및 단핵구의 함량 감소; 진피층에서 염증 세포 침윤 및 피하 모세혈관 과형성 감소; 피부 섬유증 완화; 포도막염 발병률 감소; 피부 염증 완화; 대변 형태 점수 개선, CW/CL 개선, CW/BW 개선, CW/CL/BW 개선, 결장 궤양 면적 증가 억제, 결장 염증 세포 침윤 점수 개선, 조직 손상 점수 개선; 질병 활성 점수 개선, 혈변 또는 잠혈 완화로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용도에서 사용하기 위한 경료 조절제에 관한 것이다. 여기서, 경로 조절제는 DBH 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 경로 조절제에서, 경로 조절제는 바람직하게는 DBH 억제제이다.
상기 경로 조절제에서, DBH 억제제는 선행 기술에 개시된 DBH 억제제일 수 있고, 예를 들어 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합 중 하나 이상일 수 있다. DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 보다 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 경로 조절제에서, DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 더욱 바람직하게는 네피카스타트이다.
상기 경로 조절제에서, 예를 들면
경로 조절제는 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100mg/kg, 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100mg/kg, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 20-50mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이다.
상기 경로 조절제에서, 약제는 바람직하게는 CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD4+ T 세포의 전-염증 인자의 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용도에 사용하기 위한 것이다.
상기 경로 조절제에서, CD4+ T 세포로부터 분비되는 염증 유발 인자는 바람직하게는 IL-17A, IFN-γ 및 TNF-α 중 하나 이상이다.
상기 경로 조절제에서 CD8+ T 세포로부터 분비되는 전-염증 인자는 바람직하게는 IL-17A 및/또는 TNF-α이다.
상기 경로 조절제에서 조절 T 세포는 바람직하게는 CD25+FOXP3+ Treg 세포이다.
상기 경로 조절제에서 B 세포는 바람직하게는 B220+ 세포, 더욱 바람직하게는 CD69+B220+ B 세포이다.
상기 경로 조절제에서 NK 세포는 바람직하게는 NK1.1+ 세포, 보다 바람직하게는 NK1.1+CD107a+ NK 세포이다.
본 발명의 제7 측면은, 유효량의 경로 조절제를 생체 내 또는 시험관 내에서 면역 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 생체 내 또는 시험관 내에서의 면역 세포 기능의 조절 방법에 관한 것으로서, 상기 면역 세포는 대상체로부터 유래하고; 상기 경로 조절제는 도파민 β-하이드록실라제 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
상기 면역 세포 기능의 조절은 CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD8+ T 세포의 비율 증가, CD4+ T 세포의 전-염증 인자의 분비 감소, CD8+ T 세포의 전-염증 인자의 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기능을 의미한다.
상기 방법에서 경로 조절제는 바람직하게는 DBH 억제제이다.
상기 방법에서 DBH 억제제는 선행기술에 개시된 DBH 억제제일 수 있으며, 예를 들어 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합 중 하나일 수 있다. DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 보다 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 방법에서 DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 더욱 바람직하게는 네피카스타트이다.
상기 방법에서, 예를 들면
경로 조절제는 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100mg/kg, 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100mg/kg, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 20-50mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이다.
상기 방법에서 DBH 억제제는 화학요법제, 표적치료제, 면역요법제 및 항염증제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상과 병용 투여될 수 있다.
상기 방법에서, 약제는 바람직하게는 CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD4+ T의 전-염증 인자 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용도에 사용하기 위한 것이다.
상기 방법에서 CD4+ T 세포에서 분비되는 염증유발 인자는 바람직하게는 IL-17A, IFN-γ 및 TNF-α 중 하나 이상이다.
상기 방법에서 CD8+ T 세포에서 분비되는 염증유발 인자는 바람직하게는 IL-17A 및/또는 TNF-α이다.
상기 방법에서 조절 T 세포는 CD25+FOXP3+ Treg 세포인 것이 바람직하다.
상기 방법에서 B 세포는 바람직하게는 B220+ 세포, 더욱 바람직하게는 CD69+B220+ B 세포이다.
상기 방법에서 NK 세포는 바람직하게는 NK1.1+ 세포이고, 보다 바람직하게는 NK1.1+CD107a+ NK 세포이다.
본 발명의 제8 측면은 경로 조절제 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것으로서, 상기 경로 조절제는 DBH 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
약학 조성물은 CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD8+ T 세포의 비율 증가, CD4+ T 세포의 전-염증 인자의 분비 감소, CD8+ T 세포의 전-염증 인자의 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제; 말초 혈액에서 림프구, 호중구 및 단핵구의 함량 감소; 진피층에서 염증 세포 침윤 및 피하 모세혈관 과형성 감소; 피부 섬유증 완화; 포도막염 발병률 감소; 피부 염증 개선; 대변 형태 점수 개선, CW/CL 개선, CW/BW 개선, CW/CL/BW 개선, 결장 궤양 면적 증가 억제, 결장 염증 세포 침윤 점수 개선, 조직 손상 점수 개선; 질병 활성 점수 개선, 혈변 또는 잠혈 개선으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기능을 갖는다.
상기 약학 조성물에서 경로 조절제는 바람직하게는 DBH 억제제이다.
상기 약학 조성물에서 DBH 억제제는 선행 기술에 개시된 DBH 억제제일 수 있으며, 예를 들어 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합 중 하나 이상일 수 있다. DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 보다 바람직하게는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 약학 조성물에서 DBH 억제제는 바람직하게는 네피카스타트, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. DBH 억제제는 더욱 바람직하게는 네피카스타트이다.
상기 약학 조성물에서, 예를 들면
경로 조절제는 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100mg/kg, 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100mg/kg, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 20-50mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이거나; 또는
경로 조절제는 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120mg/kg, 예를 들어 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 또는 상기 값들 중 임의의 두 값 사이의 범위, 바람직하게는 90-110mg/kg, 보다 바람직하게는 100mg/kg이다.
상기 약학 조성물에서, 상기 약학 조성물은 화학요법제, 표적치료제, 면역요법제 및 항염증제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 물질을 추가로 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물에서, 약제는 바람직하게는 CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD4+ T 세포의 전-염증 인자 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용도에 사용하기 위한 것이다.
상기 약학 조성물에서 CD4+ T 세포로부터 분비되는 염증 유발 인자는 바람직하게는 IL-17A, IFN-γ 및 TNF-α 중 하나 이상이다.
상기 약학 조성물에서 CD8+ T 세포에서 분비되는 염증 유발 인자는 바람직하게는 IL-17A 및/또는 TNF-α이다.
상기 약학 조성물에서 조절 T 세포는 바람직하게는 CD25+FOXP3+ Treg 세포이다.
상기 약학 조성물에서 B 세포는 바람직하게는 B220+ 세포, 더욱 바람직하게는 CD69+B220+ B 세포이다.
상기 약학 조성물에서 NK 세포는 바람직하게는 NK1.1+ 세포, 보다 바람직하게는 NK1.1+CD107a+ NK 세포이다.
본 발명의 유익한 효과는 다음과 같다: 본 발명자들은 DBH 억제제가 면역조절(예를 들어, 특히, 체중 감소를 완화시키고, DAI 점수를 개선하고, 결장 밀도의 정상화)에 의해 자가면역 질환의 발달 및 진행을 억제하여 자가면역 질환 치료를 위한 새로운 선택을 제공할 수 있음을 발견하였다.
도 1a는 실시예 1에 기술된 실험 절차에 따른 각 마우스 그룹에서의 체중 평가 결과를 보여준다.
도 1b는 실시예 1에 기술된 실험 절차에 따른 각 마우스 그룹에서의 DAI 점수의 결과를 보여준다.
도 1c는 실시예 1에 기술된 실험 절차에 따른 각 마우스 그룹에서의 결장 밀도의 결과를 보여준다.
도 2a 내지 2e는 실시예 4의 각 마우스 그룹의 장간막 림프절에서의 CD4+ T 세포 하위집단(도 2a), CD25+FOXP3+ Treg 세포 하위집단(도 2b), CD4+ T 세포 하위집단의 IL-17A(도 2c), CD4+ T 세포 하위집단의 IFN-γ(도 2d), 및 CD4+ T 세포 하위집단의 TNF-α(도 2e)에 대한 효과를 보여준다.
도 3a 내지 3d는 실시예 4의 각 마우스 그룹의 장간막 림프절에서의 CD8+ T 세포 하위집단(도 3a), CD8+ T 세포 하위집단의 IFN-γ(도 3b), CD8+ T 세포 하위집단의 IL-17A(도 3c) 및 CD8+ T 세포 하위집단의 TNF-α(도 3d)에 대한 효과를 보여준다.
도 4a 및 4b는 실시예 4의 각 마우스 그룹의 장간막 림프절에서의 CD69+B220+ B 세포 하위집단(도 4a) 및 NK1.1+CD107a+ NK 세포 하위집단(도 4b)에 대한 효과를 보여준다. 상기 도면에서, *는 p<0.05를 의미하고, **는 p<0.01을 의미하고, ***는 p<0.001을 의미하고, ****는 p<0.0001을 의미한다.
도 5는 실시예 5의 각 그룹의 체중 변화를 보여준다. 투-웨이 ANOVA: #p < 0.05, ###p < 0.001 대 용매 그룹.
도 6은 실시예 5의 각 그룹의 체중 변화율을 보여준다.
도 7은 실시예 5의 각 그룹의 비장 중량을 보여준다. 원-웨이 ANOVA: ***p < 0.001 대 정상 그룹, #p < 0.05, ## p < 0.01 대 용매 그룹.
도 8은 실시예 5의 각 그룹의 비장/체중 비율을 보여준다. 원-웨이 ANOVA: #p < 0.05, ##p < 0.01, ###p < 0.001 대 용매 그룹.
도 9는 실시예 5의 각 그룹의 말초 혈액의 적혈구(RBC) 수를 보여준다. 원-웨이 ANOVA: ***p < 0.001 대 정상 그룹, ##p < 0.01, ###p < 0.001 대 용매 그룹, &&&p < 0.001 대 이마티닙 그룹.
도 10은 실시예 5의 각 그룹의 말초 혈액의 헤모글로빈(HGB) 함량을 보여준다. 원-웨이 ANOVA: ***p < 0.001 대 정상 그룹, ##p < 0.01, ###p < 0.001 대 용매 그룹, &&&p < 0.001 대 이마티닙 그룹.
도 11은 실시예 5의 각 그룹의 말초 혈액의 백혈구(WBC) 수를 보여준다. 원-웨이 ANOVA: *p < 0.05, ***p < 0.001 대 정상 그룹, ##p < 0.01 대 용매 그룹.
도 12는 실시예 5의 각 그룹의 말초 혈액 내 림프구(LYMPH) 수를 보여준다. 원-웨이 ANOVA: #p < 0.05, ###p < 0.001 대 용매 그룹.
도 13은 실시예 5의 각 그룹의 말초 혈액의 단핵구(MONO)수를 보여준다. 원-웨이 ANOVA: ##p < 0.01 대 용매 그룹.
도 14는 실시예 5의 각 그룹의 말초 혈액의 호중구(NEUT) 수를 보여준다. 원-웨이 ANOVA: ***p < 0.001 대 정상 그룹.
도 15는 실시예 5의 각 그룹의 말초 혈액의 혈소판 함량을 보여준다. 원-웨이 ANOVA: ***p < 0.001 대 정상 그룹, ###p < 0.001 대 용매 그룹, &&p < 0.01, &&&p < 0.001 대 닌테다닙 그룹, $$p < 0.01 대 이마티닙 그룹.
도 16은 실시예 5의 각 그룹의 진피층의 염증 세포 침윤 점수를 보여준다. 일원 ANOVA: #p < 0.05 대 용매 그룹, $p < 0.05 대 네피카스타트-25mg/kg, qd, po.
도 17은 실시예 5의 각 그룹의 진피층의 모세혈관 밀도 점수를 보여준다. 원-웨이 ANOVA: # p < 0.05, ## p < 0.01 대 용매 그룹.
도 18은 실시예 5의 각 그룹의 진피 두께를 보여준다; 원-웨이 ANOVA: *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001 대 정상 그룹.
도 19는 실시예 6의 각 그룹의 임상 점수를 보여준다.
도 20a 내지 20d는 실시예 7의 각 그룹의 AQP4, GFAP, IBA1, CD45 양성 세포의 비율을 보여준다.
도 21은 실시예 8의 각 그룹의 동물의 체중을 보여준다.
도 22는 실시예 8의 각 그룹의 홍반 + 스케일 + 두께 총점의 AUC를 나타낸다. 평균 ± 표준 오차, 투-웨이 ANOVA, p* < 0.05, p** < 0.01, p*** < 0.001, p**** < 0.0001, 해당 용매 그룹과의 비교(주: 정상 그룹의 총점의 AUC는 도면에 도시되지 않음).
도 23은 실시예 8의 각 그룹의 비장 중량을 보여준다.
도 24는 실시예 9의 각 그룹의 동물의 체중을 보여준다.
도 25는 실시예 9의 각 그룹의 임상 점수를 보여준다.
도 26은 실시예 9의 각 그룹의 AUC를 보여준다.
도 27은 실시예 9의 각 그룹에서의 발병률을 보여준다.
도 28은 실시예 10의 각 그룹의 동물의 체중을 보여준다.
도 29는 실시예 10의 각 그룹의 동물의 체중 변화율을 보여준다.
도 30은 실시예 10의 각 그룹의 대변 점수를 보여준다.
도 31은 실시예 10의 각 그룹의 대변 점수의 AUC를 보여준다.
도 32는 실시예 11의 각 그룹의 체중 변화를 보여준다.
도 33은 실시예 11의 각 그룹의 DAI를 보여준다.
다양한 간행물 및 특허 출원이 본 발명의 배경 및 명세서 전반에 걸쳐 인용되며, 이들 각각의 참고문헌은 그 전체가 본원에 참고로 인용된다. 달리 정의되지 않는 한, 여기에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
용어
본원에서, "수용체 작용제"라는 용어는 도파민 β-하이드록실라제 촉매반응되는 기질(즉, 도파민)에 대한 수용체에 작용할 수 있는 물질로서 상승된 도파민과 동일한 메커니즘 및 효과를 발휘할 수 있는 물질을 의미한다. 수용체 작용제는 바람직하게는 도파민 수용체 작용제이다.
본원에서, "수용체 길항제"라는 용어는 도파민 β-하이드록실라제 촉매반응되는 생성물(즉, 노르에피네프린 및/또는 에피네프린)에 대한 수용체에 작용할 수 있고 환원된 노르에피네프린 및/또는 에피네프린과 동일한 메커니즘 및 효과를 발휘할 수 있는 수용체를 의미한다. 수용체 길항제는 바람직하게는 노르에피네프린 수용체 길항제 및/또는 에피네프린 수용체 길항제이다.
"자가면역 질환"이라는 용어는 자기/비-자기(non-self)를 식별하는 적응 면역 관용 메커니즘(adaptive immune tolerance mechanism)의 붕괴와 적응 면역 세포의 이상 반응을 특징으로 하는 자신의 면역 체계에 의한 신체에 대한 공격으로 인하여 자신의 신체 조직에 염증성 손상을 초래하는 질환이다.
용어 "도파민 β-하이드록실라제"는 인간 유래 도파민 β-하이드록실라제 및 이의 단편, 변이체, 전구체 및 기능적 도메인을 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "DBH 억제제"는 핵산 또는 단백질 수준에서 도파민 β-하이드록실라제의 구조, 발현 또는 활성에 영향을 미칠 수 있는(감소, 저하, 억제, 차단, 억압, 불활성화 또는 활성화 방지를 의미함) 임의의 천연 또는 인공 화합물을 의미한다. DBH 억제제는 선행 기술에 공지된 DBH 억제제뿐만 아니라 미래에 이용가능한 것을 포함한다. CN87103323A 및 WO9529165에 개시된 DBH 억제제 뿐만 아니라 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 시스테아민 유도체, 판테틴 및 판테틴 유도체가 포함된다.
"약학적으로 허용가능한 담체"라는 용어는 약학적으로 허용가능한 부형제를 의미한다.
용어 "약학적으로 허용가능한 염"은, 약학적으로 허용가능한 염이고 모 화합물의 예상되는 약리학적 활성을 갖는 하기 염을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 이러한 염에는 다음이 포함된다:
(1) 무기산으로 형성된 산부가염 또는 유기산으로 형성된 산부가염(여기서, 무기산은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산 및 인산 중 하나 이상일 수 있고; 유기산은 포름산, 옥살산, 숙신산, 아세트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포술폰산, 시트르산, 에탄술폰산, 푸마르산, 글루코헵톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 하이드록시나프토산, 2-하이드록시에탄술폰산, 젖산, 말레산, 말산, 만델산, 메탄술폰산, 뮤콘산, 2-나프탈렌술폰산, 프로피온산, 살리실산, 숙신산, 디벤조일-L-타르타르산, 타르타르산, p-톨루엔술폰산, 트리메틸아세트산 및 트리플루오로아세트산일 수 있음); 및
(2) 모 화합물에 존재하는 산 양성자가 금속 이온, 예를 들어 알칼리 금속 이온(예: Na+, K+ 또는 Li+), 알칼리 토금속 이온(예: Ca2+ 또는 Mg2+) 또는 알루미늄 이온으로 치환될 때 형성되는 염; 또는 유기 또는 무기 염기와 배위 결합될 때 형성되는 염(여기서, 유기 염기는 피리딘, 이미다졸, 피라진, 인돌, 퓨린, 3급 아민 및 아닐린 중 하나 이상의 유기 염기, 바람직하게는 피리딘, 메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 2-메틸-5-에틸피리딘, 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에탄아민, N,N-디메틸아닐린, 디에탄올아민, 에탄올아민, N-메틸글루코사민, 트리에탄올아민 및 트로메타민 중 하나 이상일 수 있고; 무기 염기는 수산화알루미늄, 수산화칼슘, 수산화칼륨, 탄산나트륨 및 수산화나트륨 중 하나 이상일 수 있음).
본 발명의 약학 조성물은 다양한 통상적인 투여 형태, 예를 들어 정제, 수성 현탁액, 오일 현탁액, 분산성 분말, 분산성 과립, 에멀젼, 경질 캡슐, 연질 캡슐, 멸균 주사용 수용액, 멸균 주사용 수중유 마이크로에멀젼 또는 좌약일 수 있다. 상기 제형 각각은 통상적인 제조 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 정제 내의 부형제는 충전제, 결합제, 윤활제, 유동 보조제 및 붕해제 중 하나 이상일 수 있다. 여기서 충전제는 미정질 셀룰로오스, 전분, 락토스 일수화물 및 인산이칼슘 중 하나 이상일 수 있다. 결합제는 전분, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 및 아라비아 검 중 하나 이상일 수 있다. 윤활제는 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 및 나트륨 라우릴 설페이트 중 하나 이상일 수 있다. 유동 보조제는 콜로이드성 이산화규소와 활석 분말 중 하나 또는 둘이 될 수 있다. 붕해제는 크로스포비돈, 나트륨 카복시메틸 전분, 저치환된 하이드록시프로필셀룰로오스 및 크로스카르멜로스 나트륨 중 하나 이상일 수 있다. 정제는 또한 코팅을 포함할 수 있다. 정제는 또한 서방성 제형으로 제조될 수 있으며, 서방성 제형의 서방성 물질은 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 잔탄 검 중 하나 또는 둘일 수 있다.
본 발명의 수성 현탁액 중의 부형제는 현탁화제, 분산제, 방부제 및 향미제 중 하나 이상일 수 있다. 여기서, 현탁제는 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈 및 검 아라빅 중 하나 이상일 수 있다. 분산제는 자연 발생 인지질(예: 레시틴), 지방산과 알킬렌 옥사이드의 축합 생성물(예: 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 장쇄 지방 알코올과 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물(예: 헵타데카에틸렌옥시 세탄올), 지방산 및 헥시톨로부터 유도된 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물(예: 폴리에틸렌 옥사이드 소르비톨 모노올레이트), 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물(예: 폴리에틸렌 옥사이드 소르비탄 모노올레이트) 중 하나 이상일 수 있다. 방부제는 에틸파라벤 및/또는 n-프로필파라벤일 수 있다. 향미제는 수크로스, 사카린 및 아스파탐 중 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 오일 현탁액 중의 부형제는 현탁화제, 증점제, 향미제 및 항산화제 중 하나 이상일 수 있다. 현탁제는 식물성 오일 및/또는 미네랄 오일일 수 있고, 식물성 오일은 땅콩 오일, 올리브 오일, 참기름 및 코코넛 오일 중 하나 이상일 수 있고, 미네랄 오일은 액체 파라핀일 수 있다. 증점제는 밀랍, 경질 파라핀 및 세틸 알코올 중 하나 이상일 수 있다. 향미제는 수크로스, 사카린 및 아스파탐 중 하나 이상일 수 있다. 항산화제는 부틸화 하이드록시아니솔, α-토코페롤 및 아스코르브산 중 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 분산성 분말 및 분산성 과립의 부형제는 현탁화제, 분산제, 방부제, 향미제 및 항산화제 중 하나 이상일 수 있다. 상기 성분의 구체적인 선택은 수성 현탁액의 부형제와 동일하다.
본 발명의 에멀젼의 부형제는 현탁화제, 유화제, 향미제, 방부제 및 항산화제 중 하나 이상일 수 있다. 현탁제는 식물성 오일 및/또는 미네랄 오일일 수 있고, 식물성 오일은 올리브 오일 및/또는 땅콩 오일일 수 있으며, 미네랄 오일은 액체 파라핀일 수 있다. 유화제는 천연 인지질(예: 대두 레시틴), 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 에스테르 또는 부분 에스테르(예: 소르비탄 모노올레이트), 및 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물(예: 폴리에틸렌 옥사이드 소르비톨 모노올레이트) 중 하나 이상일 수 있다. 향미제는 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 및 수크로스 중 하나 이상일 수 있다. 방부제는 에틸파라벤 및/또는 n-프로필파라벤일 수 있다. 항산화제는 부틸화 하이드록시아니솔, α-토코페롤 및 아스코르브산 중 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 경질 캡슐의 부형제는 통상적인 불활성 고체 희석제(thinner)일 수 있으며, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 및 카올린 중 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 연질 캡슐의 부형제는 통상적인 수용성 담체 및/또는 통상적인 오일 용매일 수 있으며, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 땅콩 오일, 액체 파라핀 및 올리브 오일 중 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 멸균 주사용 수용액의 부형제는 약학적으로 허용가능한 용매, 예를 들어 물, 링거액 또는 등장성 염화나트륨 용액일 수 있다.
본 발명의 멸균 주사용 수중유 마이크로에멀젼의 부형제는 유상 부형제 및 수상 부형제일 수 있으며, 유상 부형제는 대두유와 레시틴의 혼합물일 수 있으며, 수상 부형제는 물과 글리세롤의 혼합물일 수 있다.
본 발명의 좌약에서 부형제는 코코아 버터, 글리세롤, 젤라틴, 수소화된 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜의 지방산 에스테르 중 하나 이상일 수 있다.
용어 "대상체"는 동물, 바람직하게는 포유동물을 의미한다. 특정 실시양태에 따르면, 대상체는 예를 들어 낙타, 당나귀, 얼룩말, 소, 돼지, 말, 염소, 양, 고양이, 개, 쥐, 토끼, 기니피그, 마우스, 영장류(예를 들어, 인간)를 비롯한 포유동물이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 자가면역 질환에 걸리기 쉽거나, 걸린 것으로 의심되거나, 걸린 인간이다.
용어 "치료"는 질환을 제거하거나, 질환 진행을 예방하거나, 질환 진행을 늦추거나, 질환과 관련된 하나 이상의 증상의 기간을 줄이거나, 질환과 관련된 적어도 하나의 측정 가능한 매개변수를 개선 또는 역전시키거나, 질환을 가진 대상체의 생존을 증가시키는 것을 의미한다.
"유효량"이라는 용어는 대상체에서 원하는 효과를 이끌어내는 약물의 활성 성분의 양을 의미한다. 특정 실시양태에서, 당업자는 다양한 요인(예를 들어, 임상 시험을 통해)을 고려하여 유효량의 선택을 결정할 수 있으며, 상기 요인에는 치료할 질병, 관련된 증상, 투여 경로, 질환의 중증도, 환자의 체중, 환자의 면역 상태, 및 당업자에게 공지된 기타 요인이 포함된다. 특정 실시양태에서, 유효량은 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 얻어질 수 있으며, 의사의 의견 및 각 환자의 상황에 따라 결정될 수 있다. 여기서, 동물과 인간 용량 사이의 상관관계는 문헌[Freireich et al. 1966, Cancer Chemother Rep 50:219]에 기재되어 있고, 인간의 신체 표면적은 환자의 키와 체중에 의해 대략적으로 결정될 수 있다. 본 발명의 약물 화합물의 유효량은 0.5mg/kg 내지 500mg/kg, 바람직하게는 1mg/kg 내지 200mg/kg, 더욱 바람직하게는 10mg/kg 내지 100mg/kg일 수 있다.
본원에서, 동일한 약학적 활성 성분(단일 약물 화합물을 지칭함) 또는 상이한 약학적 활성 성분(2개 이상의 약물 화합물을 지칭함)을 한번에 투여할 수 있거나, 다수의 더 작은 단위 투여량으로 특정 시간 간격으로 분할하여 투여할 수 있다. 정확한 용량, 기간 및 치료 간격은 치료되는 질병의 함수이며, 동물 또는 임상 시험 데이터를 사용하여 추론하여 결정할 수 있음을 이해해야 한다. "투여하다", "투여되는", "투여하는" 또는 "투여"는 적절한 시간 간격으로 단일 투여 또는 2회 이상의 투여를 포함할 수 있다. 여기서, 2회 투여 사이의 시간 간격은 30분, 40분, 50분, 60분, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 하루 + 반일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 12개월일 수 있다.
본원에 언급된 각각의 약학적 활성 성분(각 약물 화합물)은, 알러지 반응과 같은 다른 부작용을 일으키지 않는 한, 유일한 활성 화합물로서 사용될 수 있거나, 또는 다른 활성 화합물(본원에 기술된 약물 화합물 이외의 화합물을 지칭함)과 조합하여 투여될 수 있다. "병용 투여" 또는 "조합 투여"는 각각의 활성 화합물의 동시 또는 순차적 투여를 포함한다.
"~와 병용 투여되는" 또는 "조합 투여"라는 용어는 치료 목적으로 2개 이상의 활성 화합물을 대상체에게 동시에 또는 순차적으로 제공하는 방법을 의미한다. "~와 병용 투여되는" 또는 "조합 투여"가 수반되는 경우, 각 투여 사이의 시간 간격은 투여되는 각 활성 화합물 사이의 상승 효과를 달성하기에 충분하다. 둘 이상의 활성 화합물은 동일하거나 다른 용기에 있다.
약어: QD: 하루에 한 번; BID: 하루에 두 번; PO: 경구; IP: 복강내 주사; IM: 근육내 주사.
실시예 1: 덱스트란 설페이트 나트륨(DSS)-유도 대장염에 대한 DBH 억제제의 억제
1. 물질 및 기기:
시약
시약 공급자 카탈로그 번호
Dulbecco's 포스페이트 완충 식염수(1× DPBS) Corning Incorporated 21-031-CVR
덱스트란 설페이트 나트륨(DSS) MP Biomedicals SR01606
사이클로스포린 A(CsA) Novartis /
생리 식염수 Ke Lun Pharmaceutical Co., Ltd /
PEG400 Sigma Aldrich 25322-68-3
30% Solutol HS15 Sigma Aldrich 70142-34-6
네피카스타트 Selleckchem S2695
에타미카스타트 Nanjing PharmaBlock 677773-32-9
자미카스타트 MCE 1080028-80-3
기기
기기 공급자 유형
전자 저울 Changzhou Tianzhiping YH-2000
전자 분석 저울 Mettle Toledo 585310
2. 약액의 제조 및 보관:
용매의 조성은 다음과 같았다: 20 v% PEG400 + 10 v% (30% Solutol HS15) + 70 v% 생리 식염수.
시험 물질 - 네피카스타트 용액: 네피카스타트 27mg을 용매 9mL에 완전히 용해시키고(이 농도는 시험 그룹 1#에 해당함), 3일마다 제조하고, 효과를 유지하기 위해 4℃에서 보관하였다.
시험 물질 - 에타미카스타트 용액: 에타미카스타트 9mg, 27mg, 90mg을 각각 9mL의 용매에 완전히 용해시키고(상기 3가지 농도는 각각 시험 그룹 2#, 시험 그룹 3#, 및 시험 그룹 4#에 해당함), 3일마다 제조하고, 효과를 유지하기 위해 4℃에서 보관하였다.
시험 물질 - 자미카스타트 용액: 자미카스타트 9mg, 27mg, 90mg을 각각 9mL의 용매에 완전히 용해시키고(상기 3가지 농도는 각각 시험 그룹 5#, 시험 그룹 6#, 및 시험 그룹 7#에 해당), 3일마다 제조하고, 효과를 유지하기 위해 4℃에서 보관하였다.
양성 약물 대조 그룹 - 사이클로스포린 A 용액: 사이클로스포린 A 200mg을 생리 식염수 10mL에 완전히 용해시키고, 20mg/mL 용액(양성 약물 대조 그룹에 해당함)으로 제조하고, 3일마다 제조하고, 효과를 유지하기 위해 4℃에서 보관하였다.
3. 각 그룹의 마우스의 처리:
Charles River Laboratories에서 구입한 8-10주령 암컷 C57BL/6J 마우스를 사용했다. 마우스는 12시간 명암 주기로 일정한 온도(20±2℃)(케이지당 5 마우스)에서 방에서 사육되었다. 모든 프로토콜은 WuXi AppTec의 Institutional Animal Care and Use Committee의 승인을 받았다. 이 마우스는 실험 전 적어도 3일 동안 WuXi AppTec의 동물 실험 센터에서 사육 조건에 적응되었다.
(1) 용매 그룹, 양성 약물 대조 그룹 및 시험 그룹
덱스트란 설페이트 나트륨-유도 대장염 모델을 수립하기 위해, 마우스에게 3% DSS 수용액(3g DSS를 물 100mL에 첨가하여 이 수용액을 제조하였으며, 여기서 DSS의 분자량은 36000-50000임)을 연속 7일 동안 음용수로서 자유롭게 사용하도록 하여 대장염(자가면역 대장염에 속함)을 유도하고, 9개의 군으로 나누고(표 3의 용매 그룹, 양성 약물 대조 그룹 및 시험 그룹 1# 내지 시험 그룹 7# 참조), 여기서 3% DSS 수용액은 매일 새로 제조하였다. 실험 종점(이하 참조)에서, 마우스를 안락사시키고, 종점 샘플을 수득하였다.
(2) 정상 그룹
정상 그룹의 마우스는 대장염을 유발하는 3% DSS 수용액을 제공하지 않았으며 블랭크 물(blank water)을 자유롭게 음용하였다. 실험 종점(이하 참조)에서, 마우스를 안락사시키고, 종점 샘플을 수득하였다.
그룹 및 투여 섭생법
그룹 마우스의 수 실험 시약 용량
(mg/kg)		 투여 섭생법
경로 빈도
정상 그룹 10 물 / - -
용매 그룹 10 용매 / PO QD Х 8일
양성 약물 대조 그룹 10 사이클로스포린 A 및 용매 50 IM QD Х 8일
시험 그룹 1# 10 네피카스타트 및 용매 30 PO QD Х 8일
시험 그룹 2# 10 에타미카스타트 및 용매 10 PO QD Х 8일
시험 그룹 3# 10 에타미카스타트 및 용매 30 PO QD Х 8일
시험 그룹 4# 10 에타미카스타트 및 용매 100 PO QD Х 8일
시험 그룹 5# 10 자미카스타트 및 용매 10 PO QD Х 8일
시험 그룹 6# 10 자미카스타트 및 용매 30 PO QD Х 8일
시험 그룹 7# 10 자미카스타트 및 용매 100 PO QD Х 8일
용매 그룹에서, 각 마우스에게 매일 10mL/kg 체중의 용매를 제공하였다.
4. 체중 평가 및 질환 활성 지수(DAI) 점수:
동물의 체중과 DAI 점수는 이중 맹검 조건에서 평가되었다. 즉, 그룹과 투여 섭생법을 알지 못한 채, 연구자들은 마우스의 체중 데이터를 수집하고, 매일 대변 특성과 혈변을 관찰하고, 채점하였다. DAI 점수는 체중 감소 점수, 대변 점수 및 출혈 점수의 합이었다. 채점 기준은 표 4와 같았다.
DAI 채점 시스템
채점 시스템
점수 중량 손실 대변의 경도 혈변
0 체중 감소 없음 정상 잠혈 음성
1 1-5% 부드럽지만 형상화됨 잠혈 약한 양성
2 5-10% 매우 부드러움 잠혈 양성
3 10-20% 설사 출혈
4 >20% 심한 설사 심한 출혈
5. 통계적 분석:
데이터는 특히 다음 과정을 사용하여 분산 분석에 의해 분석되었다: Graph Pad Prism 6.0 소프트웨어를 사용하여 사후(post-hoc) Dunnett's의 다중 비교 시험을 수행했다. 다른 그룹(정상 그룹, 양성 약물 대조 그룹, 시험 그룹 1# 내지 7#을 지칭함)은 용매 그룹과 비교하여 다른 그룹이 용매 그룹에 비해 유의성을 갖는지 여부를 분석하였다. p-값이 0.05 미만이면, 그룹들이 통계적으로 상이하고 유의성을 가졌다. 데이터는 평균 ± S.E.M으로 표시되었다.
실시예 2: 면역 세포 활성화 및 사이토카인에 대한 DBH 억제제의 효과
1. 물질:
유동 세포 계측용 항체 시약
번호 항체의 표적 염색약 공급자 카탈로그 번호 전체 명칭
1 CD45 APC-Cy7 BD bioscience 557659 APC-Cy™7 래트-항-마우스 CD45
2 CD3 BV510 BD bioscience 563024 BD Horizon™ BV510 햄스터-항-마우스 CD3e
3 CD4 BUV395 BD bioscience 563790 BD Horizon™ BUV395 래트-항-마우스 CD4
4 CD8 AF700 BD bioscience 557959 Alexa Fluor® 700 래트-항-마우스 CD8a
5 CD25 BV421 BD bioscience 562606 BV421 래트-항-마우스 CD25
6 IFN-γ BV650 BD bioscience 563854 BD Horizon™ BV650 래트-항-마우스 IFN-γ
7 IL-17A BV786 BD bioscience 564171 BD Horizon™ BV786 래트-항-마우스 IL-17A
8 Foxp3 FITC eBioscience 11-5773-82 FOXP3 단클론항체(FJK-16s), FITC, eBioscience™
9 TNF-α BB700 BD bioscience 566510 BD Horizon™ BB700 래트-항-마우스 TNF
10 생/사 세포 FVS620 BD bioscience 564996 BD Horizon™ 고착성 세포 생존성 스테인 620
11 CD45RO
/B220		 FITC BD bioscience 553087 BD Pharmingen™ FITC 래트-항-마우스 CD45R/B220
12 CD3 PE BD bioscience 553064 BD Pharmingen™ PE 햄스터-항-마우스 CD3e
13 NK1.1 BV421 BD bioscience 562921 BD Horizon™ BV421 마우스-항-래트 NK-1.1
14 CD69 BV786 BD bioscience 564683 BD Horizon™ BV786 햄스터-항-마우스 CD69
15 CD107a PECY7 BD bioscience 560647 BD Pharmingen™ PE-Cy™7 래트-항-마우스 CD107a
각각의 상기 시약은 사용당 2μL의 부피로 사용되었다.
기타 시약
시약/물질 공급자 카탈로그 번호
1640 배지 Invitrogen 22400-089
태아 소 혈청 Hyclone SV30087.03
FC 블록 BD bioscience 553141
세포 내 고정 및 투과 완충액(세포 고정 완충액, 세포 투과 완충액 및 세포 투과 세척 완충액으로 사용 가능) eBioscience 85-88-8824-00
세포 활성화 칵테일 Biolegend 423304
세포 계수 슬라이드 Invitrogen C10228
유동 세포 계측용 항체 염색 완충액 BD bioscience 563794
2. 방법:
실험 종점은 실시예 1의 양성 약물 대조 그룹 및 시험 그룹 1# 내지 시험 그룹 7#에 대해 투여 8일 후 24시간이었고; 정상 그룹과 용매 그룹의 실험 종점은 양성 약물 대조 그룹과 시험 그룹 1# 내지 시험 그룹 7#과 동일하였다.
실험 종점에서, 장간막 림프절을 수집하고, 다음과 같이 처리했다:
1) 장간막 림프절을 부드럽게 그라인딩하고, 70 μM 스트레이너(BD bioscience, 카탈로그 번호 352350)로 여과하여 세포 현탁액을 수득한 후, 세포를 계수하였다.
2) 세포를 현탁 용액에 현탁시키고(현탁 용액은 다음 과정에 의해 제조하였다: 세포 활성화 혼합물을 90 v% 1640 배지 및 10 v% 태아 소 혈청의 혼합물로 1X의 농도로 희석함), 세포 밀도는 2.5×107 /mL로 조절하였고, 세포를 37℃에서 5시간 동안 배양하였다.
3) 세포를 Dulbecco's 포스페이트 완충 식염수로 세척하고, 살아있는 세포와 죽은 세포를 구별하기 위해 실온에서 15분 동안 생/사 염색약(표 5의 염색약 번호 12)으로 염색하고; 세포를 염색 완충액(태아 소 혈청과 Dulbecco's 포스페이트 완충 식염수를 2:98의 부피비로 혼합하여 제조)으로 세척하고, Fc 블록 작업액(Fc 블록과 염색 완충액을 1:200의 부피비로 혼합하여 제조)을 첨가하고, 세포를 실온에서 15분 동안 배양하였다.
4) 세척 없이 유동 세포 계측을 위해 100μL의 항체 염색 용액으로 세포를 표면 표지하고, 4℃에서 30분 동안 배양하였다.
5) 세포를 염색 완충액으로 1회 세척하고, 100μL의 세포 고정액을 첨가하고, 세포를 4℃에서 밤새 배양하였다.
6) 200μL의 세포 투과화 용액을 첨가하고, 4℃에서 30분 동안 배양하였다.
7) 250μL의 세포 투과화 용액으로 세척한 후, 100μL의 염색 완충액으로 세포를 현탁하고, BD LSRFortessa 기기로 형광을 검출하였다.
8) 유동 세포 계측으로 분석한 세포 하위집단에는 CD4+ T 세포 하위집단, IL-17A+CD4+ T 세포 하위집단, IFN-γ+CD4+ T 세포 하위집단, TNF-α+CD4+ T 세포 하위집단, CD25+FOXP3+ Treg 세포 하위집단, CD8+ T 세포 하위집단, IL-17A+CD8+ T 세포 하위집단, IFN-γ+CD8+ T 세포 하위집단, TNF-α+CD8+ T 세포 하위집단; CD69+B220+ B 세포 하위집단 및 NK1.1+CD107a+ NK 세포 하위집단이 포함된다.
실시예 3: DBH 억제제는 DSS-유도 결장 손상을 개선함
실시예 1에 기술된 실험 절차에 따라 실험을 수행한 후, 각 마우스 그룹의 체중 평가 결과를 표 7 및 도 1a에 나타내고; 각 마우스 그룹의 DAI 점수 결과는 표 8 및 도 1b에 나타내고; 각 마우스 그룹의 결장 밀도 결과는 표 9 및 도 1c에 나타내었다.
Figure pct00002
Figure pct00003
시험 그룹 1#, 시험 그룹 4# 및 시험 그룹 7#의 마우스는 모두 용매 그룹과 비교하여 처리 7일째에 체중 감소가 현저히 적었다(도 1a, 표 7).
시험 그룹 1#, 시험 그룹 2#, 시험 그룹 3#, 시험 그룹 4#, 시험 그룹 5#, 시험 그룹 6# 및 시험 그룹 7#의 마우스는 모두 용매 그룹과 비교하여 처리 7일째에 DAI 점수가 현저히 낮았다(도 1b, 표 8).
마우스에 DSS를 투여하면 일반적으로 결장이 짧아지고 결장 밀도가 증가하는데, 이는 DSS-유도 대장염의 중증도를 반영할 수 있는 두 가지 지표이다. 시험 그룹 1#, 시험 그룹 4# 및 시험 그룹 7#의 결장 밀도는 용매 그룹에 비해 현저히 감소하였다(도 1c, 표 9). 이러한 데이터는 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트가 DSS-유도 대장염의 중증도를 완화시키고, 질병 활성을 감소시켰음을 시사한다.
요약하면, 시험 그룹 1#, 시험 그룹 4# 및 시험 그룹 7#에서 DSS-유도 대장염은 용매 그룹보다 경미하여 네피카스타트, 에타미카스타트 및 자미카스타트가 대장염에 잠재적인 치료 효과가 있음을 시사한다.
실시예 4: 면역 세포 및 사이토카인에 대한 네피카스타트 및 자미카스타트의 효과
실시예 2의 방법에 따라, 네피카스타트와 자미카스타트가 면역 세포와 사이토카인에 미치는 영향을 분석하였으며, 그 결과를 도 2a 내지 2e, 도 3a 내지 3d 및 도 4a 내지 4b에 나타내었다.
먼저, CD3+CD45+ 세포 하위집단으로부터 CD4+ T 세포 하위집단의 변화를 분석하였고, CD4+ 세포 하위집단으로부터 CD25+FOXP3+ Treg 세포 하위집단의 변화도 분석하였다. 결과는, 시험 그룹 1# 및 시험 그룹 7#이 용매 그룹과 비교하여 CD4+ T 세포 하위집단(도 2a)의 비율을 감소시키고, CD25+FOXP3+ Treg 세포 하위집단(도 2b)의 비율을 증가시킬 수 있음을 보여주었다. 상기 결과는, DBH 억제제가 염증 및 면역을 상당히 억제할 수 있음을 시사한다.
이어서, CD4+ T 세포 하위집단에 의해 분비된 사이토카인을 추가로 분석했다. 그 결과, 시험 그룹 1# 및 시험 그룹 7# 모두 용매 그룹과 비교하여 전-염증 인자 IL-17A(도 2c), IFN-γ(도 2d) 및 TNF-α(도 2E)의 분비를 감소시킬 수 있는 것으로 나타났고, 이는 또한, DBH 억제제가 CD4+ T 세포 하위집단에 의한 전-염증 인자의 분비를 감소시켜 염증과 면역을 억제함을 나타낸다.
또한, CD3+CD45+ 세포 하위집단으로부터의 CD8+ T 세포 하위집단 및 이들의 분비된 사이토카인을 유사하게 분석하였다. 결과는, DBH 억제제가, 용매 그룹과 비교하여 CD8+ T 세포 하위집단의 비율을 증가시켰고(도 3a), IFN-γ의 분비에 유의한 영향을 미치지 않았지만(도 3b), IL-17A(도 3c) 및 TNF-α(도 3d)의 분비를 억제했다. 상기 결과는, DBH 억제제가 CD8+ T 세포 하위집단에 의한 IL-17A 및 TNF-α의 분비를 감소시킴으로써 염증 및 면역을 억제함을 시사한다.
마지막으로, B 세포(CD3-세포 하위집단으로부터의 CD69+B220+ B 세포 하위집단을 지칭함) 및 NK 세포(CD3-B220-세포 하위집단으로부터의 NK1.1+CD107a+ NK 세포 하위집단을 지칭함)의 활성화를 평가했다. 결과는, 모든 DBH 억제제가 용매 그룹에 비해 B 세포(도 4a) 및 NK 세포(도 4b)의 활성화를 억제할 수 있음을 보여주었다. 상기 결과는, DBH 억제제가, 점막 조직의, 자가항체를 생성하는 B 세포 및 NK 세포 매개된 비특이적 살상 위험을 감소시켜 염증을 완화하고, 면역을 억제할 수 있음을 시사한다.
실시예 5: 수컷 C57 마우스에서 블레오마이신-유도 피부 섬유증에 대한 DBH 억제제의 억제
1. 물질 및 기기
시약
시약 공급자 카탈로그 번호
생리 식염수 Zhejiang Dubang Pharmaceuticals Co., Ltd. 2009240101
Solutol HS15 Sigma BCCF2234
PEG400 Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. 20181205
MC Sigma SLBT4343
Tween 80 Sigma WXBD2914v
이소플루란 RWD 20120101
블레오마이신 염산염 Nippon Kayaku Co., Ltd. 600700
기기
명칭 유형 및 제조사
마취 호흡기 AMS (Gene&I) Beijing GENE&I Technology Co., Ltd.
자동화된 혈액학 분석기 시스멕스 XS-800i
조직 프로세서 LEICA HistoCore Pearl
임베딩 기기 Leica Histocore Arcadia C&H
섹셔닝 기기 라이카, RM2235
자동 염색기 라이카, ST5020
슬라이드 스캐너 HAMAMATSU Nano Zoomer S210
CNC 초음파 클리너 KQ-100DE, Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd.
2. 약액의 제조 및 보관
용매의 조성: 20% PEG400 + 10%(30% Solutol HS15) + 70% 생리 식염수. 100mL의 PEG400 및 50mL의 30%(V/V) Solutol을 측정하고, 350mL의 생리 식염수에 첨가했다. 혼합물을 자기 교반기에 넣고, 완전히 혼합될 때까지 교반하고, 나중에 사용하기 위해 4℃에서 보관하였다.
시험 물질 - 네피카스타트 용액: 시험 물질 40mg을 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고, 0.8mL의 PEG400을 첨가하였다. 바이알을 볼텍스에서 볼텍싱하고, 15분 동안 초음파 처리하고, 40℃의 수조에서 15분 동안 가열하여 현탁액을 생성하였다. 이어서, 0.4mL의 30% Solutol HS15를 첨가하고, 바이알을 완전히 혼합될 때까지 볼텍스에서 볼텍싱했다. 이어서, 2.8mL의 생리 식염수를 첨가하고, 바이알을, 완전히 혼합되어 화합물 농도가 10mg/mL인 용액을 형성할 때까지 볼텍스에서 볼텍싱했다. 용액은 3일마다 제조하고, 나중에 사용하기 위해 4℃에서 보관했다.
기준 물질 - 닌테다닙 용액: 25mg의 닌테다닙(BIBF1120)을 정확하게 칭량하고, 5mL의 용매(0.5% MC + 0.2% Tween 80)에 첨가했다. 용액이 맑고 투명할 때까지 혼합물을 완전히 혼합하고, 약물 농도는 5mg/mL(투여 용량은 10mL/kg)이었다. 용액은 7일마다 제조되었다.
기준 물질 - 이마티닙 용액: 이마티닙 메실레이트 분말 15mg을 정확히 칭량하여 샘플 바이알에 넣고, 생리 식염수 3mL를 첨가하였다. 물질이 완전히 용해되고 약물 농도가 5mg/mL가 될 때까지 바이알을 볼텍스에서 볼텍싱시켰다. 용액은 사용 전에 새로 제조되었고, 30분 이내에 사용되었다.
3. 실험 방법
3.1 동물 하우징
70마리의 수컷 C57BL/6 마우스(체중 20 내지 22g)를, 온도, 습도, 조명 제어 시스템에 대한 국제 표준에 따라, 동물 사용 증명서 번호 SYXK (Su) 2017-0041 하에 KCI Biotechnology (Suzhou) Co., Ltd.의 SPF 장벽 시스템에서 사육했다.
이 실험의 동물 작업 프로토콜은 IACUC 위원회에 의해 승인되고 확인되었다. 운영 및 관리는 KCI Biotechnology (Suzhou) Co., Ltd.의 SOP를 엄격히 준수했다.
3.2 모델 수립
동물을 마취시키기 위해 이소플루란(2.0 내지 2.5%)을 사용하였다. 등의 털을 제거하고, 1 cm2 면적을 선택하여 블레오마이신(0.3mg/kg, 100μL)을 2일마다 피내 주사하여 피부 섬유증 모델을 수립하였다.
3.3 시험 그룹핑
동물의 체중에 따라, 표 12에 나타낸 바와 같이 동물을 정상 그룹, 용매 그룹, 닌테다닙 그룹(양성 대조 그룹), 이마티닙 그룹(양성 대조 그룹), 시험 그룹 1#, 시험 그룹2# 및 시험 그룹 3#으로 각 그룹당 10마리씩 7 그룹으로 나누었다.
시험 그룹핑 및 투여 섭생법
그룹 동물의 수 모델 수립 약물 투여량 투여 경로 투여 부피
정상 그룹 10 아니오 용매a NA PO, QD 10mL/kg
용매 그룹 10 예 용매a NA PO, QD 10mL/kg
닌테다닙 그룹 10 예 닌테다닙 50mg/kg PO, QD 10mL/kg
이마티닙 그룹 8 예 이마티닙 50mg/kg IP, QD 10mL/kg
시험 그룹 1# 10 예 네피카스타트 25mg/kg PO, QD 10mL/kg
시험 그룹 2# 10 예 네피카스타트 50mg/kg PO, QD 10mL/kg
시험 그룹 3# 10 예 네피카스타트 100mg/kg PO, QD 10mL/kg
주: a: 20% PEG400 + 10%(30% Solutol HS15) + 70% 생리 식염수.
3.4 실험 투여
투여는 모델 수립일에 시작하였다. 투여 부피를 계산하기 위해 투여 전 각 동물의 체중을 칭량하였으며, 투여 기간은 28일이었다. 투여 경로: 이마티닙 그룹의 경우 복강내 주사 및 다른 그룹의 경우 위관영양. 투여 빈도: 닌테다닙 그룹은 1일 2회, 다른 그룹은 1일 1회.
3.5 실험 동물의 생리학적 관찰
동물 체중의 변화는 모델 수립일로부터 주 2회 기록하였다. 숨가쁨 및 호흡곤란, 복부 흡입(abdominal suction), 활동 감소 및 권태감과 같은 동물의 임상 증상(clinical manifestation)을 면밀히 관찰했다.
3.6 국소 피부 관찰
실험 종점에서 과량의 펜토바르비탈 나트륨(100mg/kg)을 복강내 주사하여 동물을 안락사시킨 다음 국소 피부 사진을 찍었다.
3.7 실험 종점
실험 종점에서 동물의 체중을 측정하고, 투여 부피를 계산하기 위해 체중을 기록하였다. 투여 6시간 후, 먼저, 마우스의 안와 정맥총에서 전혈을 수집하고, 자동 혈액분석기(Sysmex XS-800i)를 이용하여 혈액 루틴 검사를 실시하였다. 구체적인 시험 단계는 다음과 같다: 시험 전에 시험 튜브의 혈액 샘플을 완전히 혼합하고, 샘플을 샘플링 니들 아래에 놓은 다음, 시작 버튼을 눌러 주입하고, 기기의 표시등이 꺼진 후에 제거하고, 기기가 자동으로 샘플을 시험하고, 결과를 출력하기 시작했다.
이어서, 펜토바르비탈 나트륨을 복강내 주사하여 동물을 안락사시켰다. 절제의 재료 및 순서는 다음과 같다: 비장을 채취하여 칭량하고, 기록하였다. 양측 사타구니 림프절을 급속 냉동하여 -80℃의 냉장고에 보관했다. 채취한 병변 피부 조직을 먼저 피부 영상 수집 후, 10% 포르말린 고정액에 담가 조직 대 포르말린의 비율을 1:10으로 고정하고, 48시간 고정 후 조직병리학적 검출을 실시하였다. 세부사항은 하기 표 13과 같았다.
실험 종점
명칭 내용 보관 조건
말초 전혈(100μL) 마지막 투여 후 6시간 후에 수집 실온
혈장 50μL×2 -80℃
50μL + 보호 용액
비장 칭량됨 NA
림프절 양측 겨드랑이 및 사타구니 림프절 -80℃
병변 피부 병변 피부의 1/2을 고정시켰다. 중성 완충 포르말린
병변 피부의 1/4을 드라이아이스에 동결시켜 보관하였다. -80℃
병변 피부의 1/4에 보호 용액을 첨가하였다.
3.8 조직병리학적 검출
병변 피부의 피부 조직을 병리학 SOP에 따라 탈수, 임베딩, 섹셔닝을 수행하고, 조직을 HE 및 Masson 염색으로 염색하였다. 조직병리학적 분석은 하기 방법에 따라 수행하였다:
3.8.1 피부 두께
Masson-염색된 절편을 Nanozomer S210을 사용하여 파노라마로 스캔하고, 스캔 이미지는 Visiopharm VIS6.0 소프트웨어를 사용하여 정량 분석했다. 섬유증 정도는 현재 Masson 염색 후 진피 두께로 표시된다.
3.8.2 진피층 내의 모세혈관 밀도 점수
병변 부위의 진피층에서 관찰 필드를 선택하고(선택된 필드 수는 병변 부위의 크기에 따라 결정됨), 해당 부위의 모세혈관이 차지하는 면적에 따라 채점하였다.
0: 모세혈관 형성 없음
1: 형성된 모세혈관의 비율은 25% 미만임;
2: 형성된 모세혈관의 비율은 25-50%임;
3: 형성된 모세혈관의 비율은 50-75%임;
4: 형성된 모세혈관의 비율은 75% 초과임.
3.8.3 진피층의 염증 세포 침윤 점수
병변 부위의 진피층에서 관찰 필드를 선택하고(선택한 필드 수는 병변 부위의 크기에 따라 결정됨), 염증 세포 침윤 정도에 따라 채점하였다:
0: 염증 세포 침윤 없음:
1: 소량의 국소 염증 세포 침윤;
2: 산발성 미만성(scattered diffuse) 염증 세포 침윤:
3: 다량의 미만성 염증 세포 침윤;
4: 다량의 응집된 염증 세포 침윤.
3.9 데이터 분석
평균 ± SEM은 Graphpad 프리즘 6.0 소프트웨어를 사용하여 계산되었다. 차이의 유의성 검정은 t-검정, 원-웨이 ANOVA 또는 투-웨이 ANOVA를 이용하여 수행하였고, p<0.05인 두 그룹 간의 차이를 유의한 것으로 간주하였다.
4 실험 결과
4.1 체중 변화
실험 중 정상 그룹의 동물 체중은 증가하는 경향을 보였고, 시험 그룹 1#, 시험 그룹 2#, 시험 그룹 3#의 체중은 안정적이며 정상 범위 내에서 변화하였다. 닌테다닙 그룹과 이마티닙 그룹의 체중만 투약 후 서서히 감소하는 경향을 보였고, 25일부터 28일까지 용매 그룹에 비해 지속적으로 유의한 차이를 보였다(하기 도 5 및 도 6 참조). 이마티닙 투여 그룹에서 1마리가 28일째 죽었으며, 죽은 당일 체중은 모델 수립 전 체중에 비해 23.7% 감소하였다.
4.2 비장 중량 및 비장/체중 비율
실험 종점에서 비장을 채취하여 무게를 측정하여 비장/체중 비율(비장/체중×100%)을 계산하였으며, 그 결과는 도 7에 도시된 바와 같다. 정상 그룹, 닌테다닙 그룹, 이마티닙 그룹, 시험 그룹 1#, 시험 그룹 2#, 시험 그룹 3#의 비장 중량도 용매 그룹에 비해 유의하게 감소하였다.
비장/체중 비율의 경우, 용매 그룹과 정상 그룹 사이에 명백한 차이가 없었으며, 이는 모델 수립이 마우스의 비장/체중 비율을 변화시킬 수 없음을 나타낸다. 닌테다닙 그룹, 시험 그룹 1#, 시험 그룹 2# 및 시험 그룹 3#만 용매 그룹과 비교하여 유의한 차이가 있었다(표 14, 도 8).
비장 중량 및 비장/체중 비율
그룹 비장(g) 비장/체중 비율(%)
정상 그룹 0.07±0.00 0.27±0.01
용매 그룹 0.05±0.00*** 0.24±0.01
닌테다닙 그룹 0.04±0.00## 0.20±0.01#
이마티닙 그룹 0.04±0.00# 0.22±0.01
시험 그룹 1# 0.04±0.00## 0.18±0.01###
시험 그룹 2# 0.04±0.00# 0.20±0.01##
시험 그룹 3# 0.04±0.00## 0.18±0.01###
***p < 0.001 대 정상 그룹, #p < 0.05, ##p < 0.01 대 용매 그룹.
4.3 혈액 루틴 검사
말초 혈액은 혈액 루틴 검사를 위해 실험 종점에서 수집되었다. 결과는, 이마티닙이 말초 혈액에서 적혈구와 헤모글로빈의 함량을 유의하게 감소시킴을 보여주며, 이는 실험 종점에서 이 동물 그룹의 빈혈 증상과도 일치했다. 또한 이마티닙은 말초 혈액 내 백혈구(림프구 및 호중구 포함)의 함량을 유의하게 감소시켰고, 단핵구를 감소시키는 경향을 보였으나 유의한 차이는 없었다.
시험 그룹 3#은 용매 그룹에 비해 림프구, 호중구, 및 단핵구 감소에 유의한 차이를 가졌고, 이는 시험 그룹 3#(100mg/kg)의 용량에서의 치료가 염증 감소 효과를 가짐을 나타냈으며, 이는 병리학적 결과(도 9 내지 도 15)와 일치하였다.
4.4 피부 병리학적 염색 결과
전신 경화증(SSc)은, 염증, 혈관 병변, 피부 및 기관의 섬유증을 특징으로 하는 자가면역 질환이다.
이 실시예에서, 블레오마이신(BLM)을 사용하여 마우스 섬유증 모델을 수립했다. 병리학적 HE 염색 결과는, 용매 그룹과 정상 그룹에 비해 유의한 염증 세포 침윤과 피하 모세혈관 과형성을 보였다. Masson 염색 결과는, 용매 그룹의 동물이 피부 섬유증 정도가 더 강했고, 진피 두께도 크게 증가한 것으로 나타났다. 닌테다닙 및 이마티닙의 치료는 병변 피부의 염증 세포 침윤 및 피하 모세혈관 증식을 가시적으로 감소시킬 수 있었고, 시험 그룹 2# 및 시험 그룹 3#은 병변 피부의 염증 세포 침윤 및 진피하 모세혈관 증식을 유의하게 감소시킬 수 있었다. 진피 두께의 통계적 결과에 따르면, 진피 두께를 감소시키는 시험 물질(네피카스타트)의 세 가지 다른 용량에 대한 효과는 용량 의존적이며, 용량이 높을수록 더 분명한 결과가 나타났지만, 모델 그룹과 비교 시에 유의한 차이는 없었다. 시험 그룹 3#이 시험 그룹 1# 및 시험 그룹 2#에 비해 피부 섬유증 완화 효과가 더 우수하였다(도 16 내지 도 18).
상기 실험 결과에서, 시험 그룹 2#와 시험 그룹 3#은 블레오마이신 자극 후 말초 혈액의 증가된 염증 세포의 수를 감소시키고, 병변 피부의 진피층의 염증 세포 침윤 및 모세혈관 증식을 감소시킬 수 있음을 알 수 있었다. 특히, 시험 그룹 3#에 해당하는 100mg/kg 용량이 가장 효과가 좋았고, 100mg/kg도 병변 피부의 섬유증 정도를 감소시킬 수 있었다.
실시예 6: 루이스 래트에서 소 IRBP R16-유도 실험적 자가면역 포도막염(EAU)에 대한 DBH 억제제의 효과
1. 물질 및 기기
시약
시약 공급자 배치 번호
PEG400 Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. 20190806
생리 식염수 Jiangxi Kelun Pharmaceutical Co, Ltd. C19070906
30% Solutol HS15 Sigma BCCB9630
덱사메타손 Shanghai Sine Pharmaceutical Laboratories Co., Ltd. 015191109
0.5% 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 Sinopharm Chemical Reagent 30036365 (카탈로그 번호)
IRBP 펩타이드 R16 GL Biochem Co., Ltd P191203-TL051092
완전 프로인트 보조제 Sigma-Aldrich SLCD6299
Mycobacterium tuberculosis H37Ra Difco Detroit, MI, USA 231141(카탈로그 번호)
졸레틸 50 Virbac S.A. BN 6ALU(카탈로그 번호)
데이비슨 고정액 PHYGENE PH0975
기기
기기 제조사 유형
조직 프로세서 Fisher/Thermo A78400006
조직 임베딩 기기 Fisher/Thermo B64100010
2. 약액의 제조 및 보관
시험 물질 - 네피카스타트 용액: 10mg/mL 네피카스타트 용액의 제조를 예시함: 네피카스타트 40mg의 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고, 0.8mL의 PEG400을 첨가했다. 바이알을 볼텍스에서 볼텍싱하고, 15분 동안 초음파 처리하고, 수조에서 40℃에서 15분 동안 가열하여 현탁액을 형성하였다. 이어서 0.4mL의 30% Solutol HS15를 첨가하고, 현탁액을 볼텍싱시켰다. 이어서 2.8mL의 생리 식염수를 첨가하고, 현탁액을 완전히 볼텍싱시켜 용액을 형성했다. 용액은 매일 새로 제조되었다.
기준 물질 - 덱사메타손 용액: 덱사메타손을 0.5% 질량 농도의 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 용액에 0.04mg/mL의 농도로 현탁시켰다. 용액은 매일 새로 제조되었다.
IRBP R16 용액: 소 IRBP R16 폴리펩티드를 생리 식염수에 최종 농도 300μg/mL로 용해시켰다.
완전 프로인트 보조제(CFA): Mycobacterium tuberculosis H37Ra 15mg을 CFA 10mL와 최종 농도 2.5mg/mL로 혼합하였다(CFA 자체에 1.5mg/mL의 H37Ra가 포함되어 있고, H37Ra 15mg을 10mL의 CFA에 첨가하여 2.5mg/mL의 최종 농도를 수득함).
에멀젼의 제조: 에멀젼은 수동 혼합 공정에 의해 제조되었다. 먼저, 두 개의 10mL 주사기를 사용했는데, 모두 기포가 제거되도록 하면서, 그 중 하나는 4mL의 300μg/mL IRBP R16 용액을 흡인(aspirate)하고 3방향 플러그 밸브에 연결되는 데 사용되었다. 이어서, 4mL의 CFA를 함유한 주사기를 연결하고, 빠르게 혼합을 시작했다. 5분 동안 플런저를 앞뒤로 밀어 수동으로 혼합을 수행했다. 마지막으로, 다른 10mL 주사기를 사용하여 8mL의 에멀젼을 흡인한 다음, 대구경 니들(예: 18g)을 부착하고, 이를 1mL 주사기 말단에 삽입하여 10개의 1mL 주사기에 에멀젼을 분주하고, 기포가 없는지 확인하면서 니들이 주사기에 부착될 때 플런저를 앞뒤로 밀 수 있다. 에멀젼은 제조 후 3시간 이내에 사용하였다.
3. 실험 방법
시험 래트는 Beijing Charles River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.에서 구입한 6 내지 8주령의 암컷 루이스 래트로서, 체중은 약 180 내지 220g이고, 실험 초기에는 특정 병원균이 없는(specific pathogen free; SPF) 상태였다. 마우스는 12/12시간의 명암 주기로 실온(20 내지 26℃, 상대 습도 40% 내지 70%)의 방에서 사육되었다(케이지당 2 내지 4마리). 모든 실험 프로토콜은 PharmaLegacy의 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았다. 시험 래트는 실험 전 7일 동안 PharmaLegacy의 실험실에서 사육 조건에 적응되었다.
(1) IRBP R16 에멀젼에 의한 래트의 면역화
-1일(즉, 면역 전날, 이하)에 60마리의 래트를 체중을 기준으로 6 그룹(n=10)으로 무작위로 나누었다(표 18 참조). 0일째, 그룹 2 내지 6의 래트를 이소플루란으로 마취시킨 후, 1:1 v/v 비율로 에멀젼화된 IRBP R16 및 CFA로부터의 총 200mL의 에멀젼을 양쪽 허벅지(각 부위에 50μL) 및 꼬리 헤드(100μL)에 피하 주사하였다.
여기서, 0일은 면역화 당일을 의미한다. 각 래트의 체중을 면역화 후에 일주일에 2회 모니터링하였다.
(2) 래트에서 EAU의 임상 평가
면역 후 0일째부터 매일 손전등을 이용하여 시험 래트의 위 눈꺼풀과 아래 눈꺼풀을 부드럽게 열어 래트의 눈을 확인하고, 질병의 발생을 기록하였다. 임상 증상은 표 17에 나열된 기준에 따라 질병의 발생부터 연구가 끝날 때까지 블라인드 방식으로 채점하였다.
래트에서의 EAU의 임상 점수
점수 기준
0 질병 없음; 빛이 반사되는 반투명 눈(적색 반사)
0.5(미량) 홍채의 혈관확장
1 홍채의 혈관 충전; 비정상적인 동공 수축
2 흐릿한 전방 챔버; 약화된 적색 반사
3 적당히 불투명한 전방 챔버, 동공은 여전히 가시적임; 암적색 반사
4 전방 챔버 불투명, 흐릿한 동공; 적색 반사의 부재; 안구돌출증
(3) 투여 섭생법
투여는 총 16일 동안 동물 체중에 따라 정확하게 0일부터 시작되었다. 시험 래트에 대한 투여 섭생법은 표 18에 나타내었다.
투여 섭생법
그룹 약물 래트의 수 투여 경로 원액의 농도 (mg/mL) 용량 투여 빈도
mL/kg mg/kg
1 블랭크 대조군a 10 PO N/A 10 N/A QD Х 16일
2 모델 대조군a 10 PO N/A 10 N/A QD Х 16일
3 덱사메타손b 10 PO 0.04 10 0.4 QD Х 16일
4 네피카스타트 (25 mpk) 10 PO 2.5 10 25 QD Х 16일
5 네피카스타트 (50 mpk) 10 PO 5 10 50 QD Х 16일
6 네피카스타트 (100 mpk) 10 PO 10 10 100 QD Х 16일
a: 20% PEG400 + 10%(30% Solutol HS15) + 70% 생리 식염수
b: 0.5% 나트륨 카복시메틸셀룰로오스.
(4) 실험 결과의 통계적 분석
결과는 "평균 ± 표준 오차"로 표현하였다. 통계적 분석은 Graphpad Prism 또는 SPSS를 사용하였으며, p<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다.
4. 실험 결과
(1) 래트 체중
시험 래트의 체중 변화는 구체적으로 하기 표 19에 도시된 바와 같으며, 각각 평균 및 표준 오차로 나타내었다.
래트 체중(g)
평균 -1일 2일 6일 9일 13일 16일
블랭크 대조군 195.89 198.20 209.00 215.42 216.80 221.80
모델 대조군 186.99 192.94 200.05 204.24 209.85 210.04
덱사메타손 188.46 174.65 166.65 164.05 162.10 161.29
네피카스타트(25mpk) 188.31 193.95 204.67 207.81 214.28 219.00
네피카스타트(50mpk) 189.34 194.04 202.28 206.07 216.20 218.42
네피카스타트(100mpk) 189.92 194.02 205.97 214.36 223.98 227.40
표준 오차 -1일 2일 6일 9일 13일 16일
블랭크 대조군 2.77 2.32 1.97 2.84 2.62 3.28
모델 대조군 2.49 1.87 2.47 2.33 2.98 2.84
덱사메타손 2.41 1.66 2.19 2.29 3.13 3.27
네피카스타트(25mpk) 2.55 2.13 2.94 2.31 2.50 3.23
네피카스타트(50mpk) 2.61 2.21 2.14 3.36 3.39 2.81
네피카스타트(100mpk) 2.72 3.82 3.38 3.85 3.28 3.86
(2) 체중 변화율
체중 변화율(%)
평균 -1일 2일 6일 9일 13일 16일
블랭크 대조군 0.00% 3.47% 7.84% 9.71% 11.59% 13.89%
모델 대조군 0.00% 3.25% 7.06% 9.26% 12.23% 12.36%
덱사메타손 0.00% -7.26% -11.53% -12.92% -13.99% -14.44%
네피카스타트(25mpk) 0.00% 3.25% 7.06% 9.26% 12.23% 12.36%
네피카스타트(50mpk) 0.00% 2.53% 6.90% 8.83% 14.24% 15.41%
네피카스타트(100mpk) 0.00% 2.11% 8.45% 12.84% 17.96% 19.77%
표준 오차 -1일 2일 6일 9일 13일 16일
블랭크 대조군 0.00% 0.61% 0.88% 0.78% 0.76% 0.81%
모델 대조군 0.00% 0.72% 1.24% 0.60% 0.75% 0.95%
덱사메타손 0.00% 0.92% 0.91% 0.91% 1.28% 1.18%
네피카스타트(25mpk) 0.00% 0.72% 0.84% 0.87% 1.20% 1.06%
네피카스타트(50mpk) 0.00% 0.61% 0.81% 0.87% 1.48% 1.05%
네피카스타트(100mpk) 0.00% 0.97% 0.88% 0.84% 0.89% 1.46%
(3) 임상 점수
도 19 및 표 21을 참조한다.
임상 점수의 곡선 하 면적(AUC)
블랭크 대조군 모델 대조군 덱사메타손 네피카스타트 (25 mpk) 네피카스타트 (50 mpk) 네피카스타트 (100 mpk)
AUC 0 49.60 7.68 45.30 39.65 37.65
표준 오차 0 3.80 0.85 4.27 4.30 5.14
억제율a N/A N/A 84.53% 8.67% 20.06% 24.09%
a: 억제율 = [AUC(모델 대조 그룹) - AUC(시험 그룹)]/AUC(모델 대조 그룹),
시험 그룹은 덱사메타손 그룹 및 네피카스타트 그룹을 포함하였다.
(4) 발병률
발병률(%)
일 블랭크
대조군		 모델
대조군		 덱사메타손 네피카스타트
(25mpk)		 네피카스타트
(50mpk)		 네피카스타트
(100mpk)
-1일 0 0 0 0 0 0
0일 0 0 0 0 0 0
1일 0 0 0 0 0 0
2일 0 0 0 0 0 0
3일 0 0 0 0 0 0
4일 0 0 0 0 0 0
5일 0 80 0 70 70 80
6일 0 100 0 100 100 80
7일 0 100 10 70 100 50
8일 0 100 20 100 100 100
9일 0 100 100 100 100 100
10일 0 100 100 100 100 100
11일 0 100 90 100 100 100
12일 0 100 90 100 100 100
13일 0 100 90 100 100 100
14일 0 100 90 100 100 100
15일 0 100 90 100 100 100
16일 0 100 90 100 100 100
EAU의 임상 점수 증가는 래트 포도막염 모델의 성공적인 수립을 증명할 수 있다. 네피카스타트에 의한 처리는 포도막염 증상을 적당히 개선하고, EAU 임상 점수와 임상 점수 AUC를 감소시킬 수 있었지만, 이 효과는 통계적으로 유의하지 않았다.
25, 50 및 100mg/kg 용량에서 임상 점수 AUC에 대한 네피카스타트의 억제율은 각각 8.67%, 20.06% 및 24.09%였다. 양성 대조 그룹으로서, 덱사메타손에 의한 처리는 포도막염의 임상 점수 및 임상 점수 AUC를 유의하게 감소시켰고, 임상 점수 AUC의 억제율은 84.53%였다.
실시예 7: 마우스에서의 NMO-IgG-유도 시신경척수염(NMO)에 대한 DBH 억제제의 효과
1. 물질 및 기기
시약
시약 공급자 배치 번호
PEG400 Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. 20190806
Normal saline Jiangxi Kelun Pharmaceutical Co, Ltd. C19070906
30% Solutol HS15 Sigma BCCB9630
덱사메타손 Shanghai Sine Pharmaceutical Laboratories Co., Ltd. 015191109
5% Chloral hydrate LEAGENE 0415A19
기기
기기 제조사 유형
RWD 뇌 정위 장치 RWD Life Science Co., Ltd. 68025
KD Scientific 주사기 펌프 Kd Scientific 레가토130
Hamilton 트레이스 주사기 Hamilton 기밀#1702
실이 있는 일회용 수술 봉합 니들 Ningbo Medical Needle Co., Ltd. 절단 니들 3/0단일 니들
2. 약액의 제조 및 보관
시험 물질 - 네피카스타트 용액: 5mg/mL 네피카스타트 용액의 제조를 예시함:
50mg의 네피카스타트를 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고, 1.98mL의 PEG400을 첨가하였다. 바이알을 볼텍스에서 볼텍싱하고, 15분 동안 초음파 처리하고, 수조에서 40℃에서 15분 동안 가열하여 현탁액을 형성하였다. 이어서 0.99mL의 30% Solutol HS15를 첨가하고, 2.97mL의 현탁액을 볼텍싱했다. 이어서 6.93mL의 생리 식염수를 첨가하고, 현탁액을 완전히 볼텍싱시켜 용액을 형성했다. 용액은 매일 새로 제조되었다.
기준 물질 - 덱사메타손 용액: 덱사메타손은 0.1mg/mL의 농도로 생리 식염수에 분산되었다. 용액은 매일 새로 제조되었다.
기준 물질 - 탄시논 IIa 용액: 탄시논 IIa를 0.0736mg/mL의 농도로 2% DMSO를 함유하는 PBS에 용해시켰다.
3. 실험 방법
시험 마우스는 Beijing Charles River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.에서 구입한 암컷 C57 마우스로서, 체중은 약 20 내지 22g이며, 실험 시작 시점에는 특정 병원균이 없는 상태였다.
(1) 모델 수립 단계
1) C57 암컷 마우스(6 내지 8주령)에 5% 클로랄 하이드레이트(70μL/10 g)를 복강내 주사하여 마취하였다.
2) 머리 상부의 털을 제거하여 두피를 노출시켰다. 마우스 머리는 두개골의 상단을 수평으로 유지하면서 뇌 정위 장치에 고정되었다. 두피를 요오도포르로 소독하였다.
3) 전방 천문 부위와 후방 천문 부위를 서치하기 위해 두피를 약 0.5cm 길이로 절단하였다. 정위 캘리퍼를 회전시켜 트레이스 주사기의 니들 팁을 전방 및 후방 천문 부위로 이동시키고, Bregma 및 Lambda로부터 니들 팁까지의 거리를 관찰하여 마우스 두개골을 수평으로 유지했다. 수평 조정 후, 니들 팁을 Bregma로 이동시킨 후, 오른쪽으로 2mm 이동하여 위치에 도달하였다.
4) 마우스 두개골의 표면에 위치를 표시하고, 이 위치에서 두개골 드릴로 구멍을 뚫었다. 드릴링 중에는 혈관을 피해야 하며 듀라마터(duramater)와 뇌 조직이 손상되지 않도록 조심스럽게 드릴링을 지속해야 한다.
5) 3mm의 수직 니들 깊이를 갖는 정위 장치를 사용하여 트레이스 주사기를 마우스 뇌 조직에 수직으로 도입하였다. 주사기를 제자리에 유지하고, 5분 동안 유지하였다.
6) 주사기 펌프를 켜고, Infuse Only 모드를 선택하고, 용액(2μL NMO-IgG + 3μL 인간 보체 + 5μL PBS/약물, 미리 잘 혼합 및 피펫팅하고, 얼음에 두었다)을 1μL/min의 속도로 주입하였다.
7) 주입 완료 후, 주사기를 10분간 유지하였다. 캘리퍼를 회전시켜 주사기를 천천히 위로 당기고, 1 mm 위로 이동한 후 주사기가 완전히 뽑힐 때까지 5분간 유지하였다. 피부를 봉합하고, 요오도포르로 다시 소독하였다.
(2) 투여 섭생법
투여는 모델 수립 3일 전에 시작하여 모델 수립 후 7일까지 연속 10일 동안 지속되었다. 구체적인 투여 섭생법은 하기 표 25에 나타낸 바와 같다.
그룹 약물 래트의 수 투여 경로 원액의 농도 (mg/mL) 용량 투여 빈도
mL/kg mg/kg
1 용매 15 PO N/A 10 N/A QD Х 10일
2 탄시논 II 15 IP 0.0736 10 736 μg/mL QD Х 10일
3 덱사메타손 15 IP 0.1 10 1 mg/kg QD Х 10일
4 네피카스타트 (50 mpk) 15 PO 5 10 50 QD Х 10일
5 네피카스타트 (100 mpk) 15 PO 10 10 100 QD Х 10일
(3) 샘플 수집
모델 수립 후 8일차(즉, 마지막 투여 다음날)에, 실험용 마우스를 안락사시키고, 뇌 조직을 동결 섹션으로 수집하였다. 이어서, 각 마우스 그룹에서 성상 세포(astrocyte) 마커의 면역 반응 영역을 결정하고, 평가했다(실험 방법에 대해 문헌[Ye Gong et al., Journal of Neuroinflammation, 17(1). doi:10.1186/s12974-020-01874-6] 참조).
4. 실험 결과
도 20a 내지 20d는, AQP4 및 GFAP의 병변 비율 측면에서 네피카스타트 그룹이 대조 그룹에 비해 병변 비율을 유의하게 감소시킬 수 있었으며, 그 효과는 양성 약물 그룹에 비해 적음을 나타내었다. 그러나, 면역 매개변수 CD45와 IBA1에는 유의한 영향이 없었다. 따라서, 네피카스타트는 마우스에서 NMO-IgG-유도 시신경 척수염에 특정한 억제 효과가 있었다.
실시예 8: 이미퀴모드(IMQ)-유도 건선에 대한 DBH 억제제의 치료 효과
1. 물질 및 기기
시약
시약 공급자 카탈로그 번호
5% 이미퀴모드 크림 Aldara, 3M Pharmaceuticals /
덱사메타손 크림 Sanjun Pharmaceuticals Co., Ltd. H44024170
토파시티닙 시트레이트 Dalian Meilunbio Co., Ltd. MB3358
PEG400 Sigma 202398
Solutol HS15 Sigma 42966
EtOH Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. A500737-0500
크레모포르 EL Sigma C5135
폴록사머 188 Sigma 9003-11-6
기기
기기 유형
전자 저울 MFC: 9092250
분석 저울 SECURA225D-1CN+YDP20-0CEV1
원심분리기 Eppendorf_5424
실험 동물
동물 종 및 스트레인: Balb/c 마우스
사육자/공급자: Beijing Charles River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.
성별, 연령: 암컷, 7-8주령
실험기관: WuXi AppTec Pharmaceutical Technology Co., Ltd. (Nantong)
적응 기간: 7 일
룸: SPF 등급
실내 온도: 20-26℃
상대 습도: 40-70%
명암 주기: 12/12시간 명/암 주기
하우징 밀도: 5마리/케이지
사료 및 물: 사료 및 물에 대한 자유 접근
이 프로토콜에서 수행된 모든 실험은 WuXi AppTec의 Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC)의 승인을 받았다.
2. 약액의 제조 및 보관
시험 물질 - 경구 투여용 네피카스타트 용액: 5mg/mL 농도의 경구 투여용 네피카스타트 용액 9.9mL를 제조하고, 네피카스타트 50mg을 칭량하고, PEG400 1.98mL를 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 초음파 처리하고, 수조에서 40℃에서 15분 동안 가열하고, 볼텍싱시켜 현탁액을 형성하였다. 0.99mL의 30% Solutol HS15를 1.98mL의 네피카스타트 현탁액에 첨가하고, 볼텍싱하여 현탁액을 형성했다. 6.93mL의 생리 식염수를 2.97mL의 네피카스타트 현탁액에 첨가하고, 볼텍싱하여 용액을 형성했다.
시험 물질 - 국소 투여용 네피카스타트 용액: 외용용 네피카스타트(50mg/mL) 1mL를 제조하고, 네피카스타트 50.13mg을 칭량하고, PG 100μL를 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 10분 동안 교반하여 균질한 불투명 현탁액을 수득하였다. 이어서 200μL의 에탄올을 첨가하고, 혼합물을 45℃에서 5분 동안 교반하여 균일한 불투명 현탁액을 수득하였다. 이어서 200μL의 Cremophor EL을 첨가하고, 혼합물을 45℃에서 5분 동안 교반하여 균질한 불투명 현탁액을 수득하였다. 그 다음 500μL의 5% 폴록사머 188을 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 45℃에서 30분 동안 교반하여 투명한 용액을 수득하였다.
기준 물질 - 토파시티닙 시트레이트 용액: 토파시티닙 시트레이트를 디메틸 설폭사이드에 용해시켜 5mg/mL 농도의 용액을 수득하였다. 상기 용액 50μL를 국소 적용을 위해 IMQ 연고에 첨가하였다.
3. 실험 방법
(1) 털 면도
모든 마우스는 실험 시작 하루 전에 애완용 면도기로 등을 2×3cm의 면적으로 면도하였다.
(2) 그룹핑
65마리의 동물을 체중에 따라 임의적으로 그룹으로 나누었고, 투여 섭생법은 다음과 같았다.
그룹핑 및 투여 섭생법
그룹 마우스의 수 실험 약물 국소 유도 처리 용량
(mg/kg)		 투여 섭생법
경로 빈도
1 5 정상 그룹 없음 N/A N/A N/A N/A
2 10 용매 그룹 A 62.5 mg 5% IMQQD Х 7일 10 mL/kg N/A 경구 투여 QD Х 7일
3 10 용매 그룹 B 62.5 mg 5% IMQ QD Х 7일 40 μL/마우스 N/A 국소 투여 QD Х 7일
4 10 양성 대조군 (덱사메타손) 62.5 mg 5% IMQQD Х 7일 70 mg 연고/마우스 2 국소 투여 QD Х 7일
5 10 양성 대조군 (토파시티닙) 62.5 mg 5% IMQQD Х 7일 5 mg/mL
50 μL/마우스		 12.5 국소 투여 QD Х 5일
BID Х 2일
6 10 네피카스타트 A 62.5 mg 5% IMQQD Х 7일 10 mL/kg 50 경구 투여 QD Х 7일
7 10 네피카스타트 B 62.5 mg 5% IMQQD Х 7일 40 μL/마우스 100 국소 투여 QD Х 7일
용매 A: 20% PEG400 + 10% (30% Solutol HS15) + 70% 생리 식염수;
용매 B: 10% PG/20% EtOH/20% 크레모포르 EL/50% (5% 폴록사머 188 수용액).
(3) IMQ 및 양성 대조 그룹 제형
이미퀴모드(IMQ) 크림: G2 내지 G7의 각 마우스에 대해 62.5mg의 IMQ 크림;
덱사메타손(DEX) 연고: G4의 각 마우스에 대해 연고 70mg;
토파시티닙: 토파시티닙을 디메틸 설폭사이드에 5mg/mL로 용해하고, 50μL를 IMQ 크림에 첨가하여 매일 치료했다.
(4) IMQ 민감화 및 투여
그룹 2 내지 7의 마우스는 0일부터 7일까지 면도한 등에 IMQ 크림 62.5mg을 매일 국소 투여했다.
연속 7일 동안 표 29에 따라 시험 화합물 및 기준 물질의 투여를 수행하였다.
(5) 질환 평가
등 피부 염증의 중증도를 평가하기 위해 등 피부를 표 30에 따라 채점하였다. 홍반, 스케일 및 두께는 0 내지 3의 스케일로 독립적으로 채점되었고, 이때, 0은 없음; 1은 경증; 2는 중등증; 3. 명확/중증을 의미한다.
임상 점수 매개변수
홍반 없음(0), 경증(1), 중등도(2), 중증(3)
두께 없음(0), 경증(1), 중등도(2), 중증(3)
스케일 없음(0), 경증(1), 중등도(2), 중증(3)
(6) 실험 종료 및 샘플 수집
실험 종료 시, 마우스를 CO2 흡입으로 안락사시켰다:
1) 심장 천공으로 채혈하였다. 혈장을 처리하고, 3개의 분취량으로 나부고, 이때 1개 분취량은 보호 용액에 첨가하고 2개 분취량은 급속 동결했다.
2) 각 그룹의 등 피부 샘플 5개를 채취하여 보호 용액에 넣고, 등 피부 샘플 5개는 PFA에 넣고, 등 피부 샘플 5개는 급속 동결하였다.
3) 림프절을 수집하고, 급속 동결하였다.
4) 비장 샘플을 수집하고, 칭량하였다(도 23).
(7) 데이터 통계
GraphPad Prism6.0 소프트웨어를 사용하여 원-웨이 ANOVA로 데이터의 통계적 분석을 수행했다.
4. 연구 결과
(1) 체중
체중은 연구 내내 매일 모니터링되었다. IMQ 크림을 지속적으로 사용하면 용매 그룹의 평균 체중을 줄일 수 있다. 이 외에도, 덱사메타손 처리 그룹(G4)에서 체중 감소가 더 컸다. 그러나, 처리 그룹과 용매 그룹 사이에 통계적으로 유의한 차이는 없었다(도 21).
(2) 임상 점수
등 피부의 홍반, 스케일 및 두께를 매일 채점하였다. 또한, 3가지의 합(홍반 + 두께 + 스케일)은 총점을 나타냈다. 덱사메타손 치료 그룹은 염증에 상당한 억제 효과가 있어 IMQ 크림 유발 건선 모델의 성공적인 수립을 시사한다.
네피카스타트 경구 투여 그룹은 5일차부터 7일차까지 홍반과 두께를 억제했다. 네피카스타트 국소 투여 그룹은 4일차부터 7일차까지 홍반을 억제했다. 토파시티닙은 용량을 두 배로 늘린 후 효능을 보였다. 네피카스타트 처리는 질환의 진행 및 발병률에 영향을 미치지 않았지만, 질환 경과의 후기 단계(5일차 내지 7일차)에서 효능을 보였다. 곡선 하 면적(AUC)은 각 동물 그룹의 전체 임상 점수 곡선을 기반으로 계산되었다(도 22).
억제율은 하기 공식에 따라 계산하였다:
억제율 = [AUC(용매) - AUC(처리)] / AUC(용매)×100%.
상기 식에서, 용매는 투여 경로에 해당하는 용매 그룹을 의미한다.
덱사메타손 처리 그룹의 억제율은 96.96%였다. 네피카스타트 50mpk 경구 처리 그룹은 피부의 임상 점수에 유의한 억제 효과를 나타냈으며, 억제율은 23.64%였다. 그러나, 네피카스타트 100 mpk 국소 처리 그룹은 유의한 효능이 없었다.
홍반 점수 결과
0일 1일 2일 3일 4일 5일 6일 7일
정상 그룹 0 0 0 0 0 0 0 0
용매 그룹 A 0 0.1 1.6 2 2.2 2.4 2.5 2.5
용매 그룹 B 0 0 1.5 2 2.2 2.2 2.2 2.3
양성 대조군
(덱사메타손)		 0 0 0 0.2 0.1 0.1 0 0
양성 대조군
(토파시티닙)		 0 0 1.4 1.9 2.2 2 1.8 1.7
네피카스타트 A 0 0 1.4 1.5 1.6 1.6 1.7 1.6
네피카스타트 B 0 0 1.5 1.8 1.8 1.7 1.5 1.2
스케일 점수 결과
0일 1일 2일 3일 4일 5일 6일 7일
정상 그룹 0 0 0 0 0 0 0 0
용매 그룹 A 0 0 0 0.1 0.9 2.1 2.7 2.3
용매 그룹 B 0 0 0 0 1 2.4 3 2.3
양성 대조군
(덱사메타손)		 0 0 0 0 0.2 0.2 0.2 0.1
양성 대조군
(토파시티닙)		 0 0 0 0.4 0.7 1.4 1.3 1.6
네피카스타트 A 0 0 0 0 1.1 1.6 1.9 2.1
네피카스타트 B 0 0 0 0 1.2 2.5 2.4 2.1
두께 점수 결과
0일 1일 2일 3일 4일 5일 6일 7일
정상 그룹 0 0 0 0 0 0 0 0
용매 그룹 A 0 0.9 1.1 1.6 1.8 2 2 2
용매 그룹 B 0 0.9 1.1 1.5 1.5 1.7 1.6 1.8
양성 대조군
(덱사메타손)		 0 0 0 0 0 0 0 0
양성 대조군
(토파시티닙)		 0 0.8 1.4 2.2 2 2.2 2 1.9
네피카스타트 A 0 0.6 1.2 1.6 1.4 1.3 1.4 1.4
네피카스타트 B 0 0.9 1.3 1.5 1.5 1.3 1.3 1.4
홍반 + 스케일 + 두께의 총점 결과
0일 1일 2일 3일 4일 5일 6일 7일
정상 그룹 0 0 0 0 0 0 0 0
용매 그룹 A 0 1 2.7 3.7 4.9 6.5 7.2 6.8
용매 그룹 B 0 0.9 2.6 3.5 4.7 6.3 6.8 6.4
양성 대조군
(덱사메타손)		 0 0 0 0 0.3 0.3 0.2 0.1
양성 대조군
(토파시티닙)		 0 0.8 2.8 4.5 4.9 5.6 5.1 5.2
네피카스타트 A 0 0.6 2.6 3.1 4.1 4.5 5 5.1
네피카스타트 B 0 0.9 2.8 3.3 4.5 5.5 5.2 4.7
5. 본 실시예의 목적은 IMQ-유도 건선 모델에 대한 시험 화합물의 효능을 연구하는 것이었다. 그 결과는, IMQ를 적용하면 심각한 피부 염증이 발생하는 것으로 나타났다. 네피카스타트 PO 처리 그룹은 용매 그룹 및 대조 그룹에 비해 임상 증상에 대해 경미한 치료 효과를 보였다.
실시예 9: 마우스에서 콜라겐-유도 관절염(CIA)에 대한 DBH 억제제의 치료 효과.
1. 실험 물질
소 유형 II 콜라겐, CII, Sichuan University;
아세트산, Sigma(St. Louis, MO, USA), 카탈로그 번호 A8976;
완전 프로인트 보조제, Sigma, 카탈로그 번호 F5881;
20% PEG400 + 10%(30% Solutol HS15) + 70% 생리 식염수;
토파시티닙, > 98%, Dalian Meilunbio Co., Ltd. MB3358.
2. 시험 화합물
화합물 명칭 네피카스타트
외형 백색 분말
순도 99.73%
염 계수 /
분자량 /
보관 조건 -20℃
제형화 공정 20% PEG400 + 10% (30% Solutol HS15) + 70% 생리 식염수
시험 물질 40mg을 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고, 0.8mL의 PEG400을 첨가하였다. 바이알을 볼텍스에서 볼텍싱하고, 15분 동안 초음파 처리하고, 40℃의 수조에서 15분 동안 가열하여 현탁액을 생성하였다. 이어서 0.4mL의 30% Solutol HS15를 첨가하고, 바이알을 완전히 혼합될 때까지 볼텍스에서 볼텍싱했다. 이어서 2.8mL의 생리 식염수를 첨가하고, 바이알을 완전히 혼합되어 화합물 농도가 10mg/mL인 용액을 형성할 때까지 볼텍스에서 볼텍싱했다. 용액은 3일마다 제조하고, 나중에 사용하기 위해 4℃에서 보관했다.
3. 실험 기기
마취기: Raymain, RM-HSIV-u;
고속 균질화기: IKA, T10 기본;
화합물 칭량 저울: Sartorius, CPA225D;
동물 칭량 저울: Changzhou Tianzhiping 전자 저울, YH2000.
4. 실험 동물 및 하우징 환경
Figure pct00005
본 실시예에서 보고되고 기술된 동물 작업은 Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) of WuXi AppTec에 의해 검토 및 승인되었다.
5. 실험 방법
1) II형 콜라겐/완전 프로인트 보조제에 의한 면역화
아세트산의 조제: 2N 아세트산을 100mM로 희석하고, 0.22㎛ 여과막으로 여과하여 4℃에서 보관하였다.
소 II형 콜라겐 용액: 소 II형 콜라겐(CII)을 100mM 아세트산 용액에 용해하고, 4℃에서 밤새 보관했다. 콜라겐의 최종 농도는 8mg/mL이었다.
에멀젼의 제조: 밤새 보관된 CII 용액을 동일한 부피의 완전 프로인트 보조제와 혼합하고, 용액이 안정한 에멀젼을 형성할 때까지 약 60분 동안 30,000rpm에서 고속 균질화기를 사용하여 얼음 위에서 균질화하였다.
2) 관절염 유도
DBA/1 마우스를 이소플루란으로 마취시키고, 제조된 콜라겐 에멀젼(200㎍의 CII 함유) 50μL를 꼬리에 피하 주사하였다. 1차 면역화 일자를 0일차로 기록하고, 이후 일자를 순차적으로 표시하였다. 21일차에 마우스 꼬리에 동 부피의 콜라겐 에멀젼을 주사했다.
3) 투여 및 투여량 설계
모델 마우스가 평균 0.5점(약 28일차)의 임상 증상을 보이면 체중과 점수에 따라 무작위로 각 그룹당 8마리씩 5개의 시험 그룹으로 나누었다. 투약은 연속 14일 동안 지속되었다. 화합물을 3일마다 제조하고, 4℃에서 보관했다.
그룹핑 및 투여량 설계
그룹 동물의 수 투여량(mg/kg) 투여 경로 투여 빈도 투여 기간
정상 그룹 5 - - - -
용매 그룹 8 NA PO QD 2주
양성 대조 그룹(토파시티닙) 8 10 PO BID 2주
네피카스타트 8 50 PO QD 2주
4) 관절염 발병 지표의 결정
28일차부터 일주일에 3회 마우스의 체중을 측정하고, 실험이 끝날 때까지 임상 점수를 기록했다.
임상 점수: 0-4점 스케일로 병변(발적 및 부종, 관절염)의 다양한 정도에 따라 점수가 부여되었으며, 가장 높은 점수는 각 발에서 4점, 각 동물에서 16점이었다.
관절염에 대한 임상 채점 기준
점수 임상 증상
0 홍반, 발적 또는 부종 없음
1 부절 근처 또는 발목 관절 또는 중족골의 홍반 또는 경미한 발적 및 부종, 및 한쪽 발가락의 발적 및 부종
2 발목 관절과 중족골에 약간의 홍반 및 부종 또는 두 개 초과의 발가락에 발적과 부종
3 발목과 손목 관절 및 중족골에 중등도의 홍반 및 부종
4 발목 및 손목 관절, 중족골 및 발가락에 심한 발적 및 부종
5) 관절염 발병 지표 결정
a. 마우스 뒷발을 수집하고, H&E 염색 및 병리 채점을 위해 PFA에 고정시켰다.
b. FACS 염색을 위해 마우스 비장을 수집했다.
6) 통계적 처리
실험 데이터는 평균 ± 표준 오차로 나타내었다. 체중과 임상 점수는 투-웨이 ANOVA로 분석하였고, p < 0.05의 차이를 유의한 것으로 간주하였다.
6. 실험 결과
도 24 내지 27로부터, 네피카스타트가 마우스에서 콜라겐-유도 관절염에 일부 알려진 효과를 가졌으나 양성 대조 그룹 약물만큼 뚜렷하지 않음을 알 수 있었다.
실시예 10: 래트의 2,4-디니트로벤젠설폰산(DNBS)-유도 장염에 대한 DBH 억제제의 치료 효과
1. 물질 및 기기
시약
시약 공급자 카탈로그 번호
프레드니손 아세테이트 정제
(프레드니손으로 지칭)		 Shanghai Sine Pharmaceutical Laboratories Co., Ltd. 017180604
나트륨 카복시메틸셀룰로오스 Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. 20180412
생리 식염수 Jiangxi Kelun Pharmaceutical Co, Ltd. C19070906
PEG400 Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. 20190806
30% Solutol HS15 Sigma Aldrich BCCB9630
2,4-디니트로벤젠설폰산 (DNBS) Tokyo Chemical Industry (TCI) LSMRO-RA
에탄올 Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. 20190313
졸레틸 Virbac S.A. N/A
자일라진 Tokyo Chemical Industry (TCI) X0059
글루코스 염화나트륨 주사 Shandong Hualu Pharmaceutical Co., Ltd. G18071503
기기
기기 공급자 유형
관장 호스 Vygon, France ACL 7157348
2. 약액의 제조 및 보관
시험 물질 - 네피카스타트 용액: 네피카스타트 12mg을 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고 0.8mL의 PEG400을 첨가하였다. 바이알을 15분 동안 볼텍싱하고, 초음파 처리하고, 40℃의 수조에서 15분 동안 가열하여 현탁액을 형성하였다. 이어서 0.4mL의 30% Solutol HS15를 첨가하고, 바이알을 볼텍싱시켰다. 이어서 2.8mL의 생리 식염수를 첨가하고, 바이알을 완전히 용해시키기 위해 볼텍싱시켰다.
기준 물질 - 프레드니손 용액: 프레드니손은 0.9mg/mL의 농도로 사용하였으며, 주 2회 0.5% 나트륨 카복시메틸셀룰로오스를 사용하여 현탁액으로 조제하였다.
DNBS 용액의 제조: DNBS 분말을 최종 농도 50mg/mL로 30% 에탄올에 용해시켰다.
3. 래트의 취급
동물 종 및 스트레인: Wistar 쥐;
투여 기록: 약물 이력 없음;
성별, 연령, 체중: 수컷, 5-6주령, 160-180g;
사육자/공급자: Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd.
실험 기관: PharmaLegacy의 동물실;
적응 기간: 7일;
룸: 통상 면적 룸;
실내 온도: 20 내지 26℃;
실내 상대 습도: 40 내지 70%;
조명: 조명용 형광등, 유조명 12시간 및 무조명 12시간;
동물 하우징: 케이지당 2 내지 4마리의 래트(동일 투여 그룹 내);
사료: 식이에 대한 자유 접근(방사선 멸균, Jiangsu Xietong Pharmaceutical Bio-engineering Co., Ltd., 중국);
물: 음용수(역삼투압 처리 또는 오토클레이브)에 대한 자유 접근.
총 90마리의 수컷 Wistar 래트를 Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd.에서 구입했으며, 모두 특정 병원균이 없고 PharmaLegacy의 동물실에 도착했을 때 약 4-5주령(140-150g)였다.
PharmaLegacy에 도착하자마자, 동물은 수송 패키지에서 래트 하우징으로 옮겨졌고 각 동물은 스태프가 확인했다. 검사에는 외형, 다리 및 충치, 동물이 가만히 있거나 움직일 때 이상 유무가 포함되었다. 적응 기간은 7일이었다.
동물에 적용하기 위해 설계된 실험 작동 프로토콜은 PharmaLegacy의 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았다.
90마리의 동물을 동물의 체중을 기준으로 -1일차(즉, 실험 전날)에 무작위로 그룹핑하여 각 동물 그룹의 체중이 유사하도록 하여 편견을 줄였다. 래트는 실험 전 40시간 동안 금식하였으며, 금식 중에는 5% 글루코스 생리 식염수(10mL/kg, 1일 1회)를 피하주사하였다.
실험적 그룹핑:
실험 1일째, 절식한 쥐에게 졸레틸(25mg/kg 틸레타민 및 25mg/kg 졸라제팜) 및 5mg/kg 자일라진을 복강내 주사하여 마취시켰다.
G2-G6군은 래트의 항문에서 좌측 산통 굴곡부(colic flexure)(항문으로부터 약 8cm)까지 호스를 삽입하고, DNBS 관장(0.5mL/동물)에 의해 대장염을 유도하였다. 정상 대조 그룹(G1)은 동일한 과정으로 30% 에탄올 관장을 받았다. 관장 후 동물의 머리를 15분 동안 낮추고, 관장액의 역류를 피하기 위해 동물이 일어날 때까지 Trendelenburg 자세를 유지하였다.
그룹핑 및 투여 섭생법
그룹 시험 물질 모델 동물 수 투여 경로 농도 투여량 투여 섭생법
mg/mL mL/kg mg/kg
G1 정상 대조 그룹 에탄올 15 PO N/A 10 N/A QD Х 7
G2 모델 대조 그룹 DNBS 15 PO N/A 10 N/A QD Х 7
G3 프레드니손 DNBS 15 PO 0.9 10 9 QD Х 7
G4 시험 그룹 1# DNBS 15 PO 0.3 10 3 QD Х 7
G5 시험 그룹 2# DNBS 15 PO 1 10 10 QD Х 7
G6 시험 그룹 3# DNBS 15 PO 3 10 30 QD Х 7
G1 정상 대조 그룹에서, 30% 에탄올 관장 4시간 후, 래트는 20% PEG400 + 10%(30% Solutol HS15) + 70% 생리 식염수 위관영양을 10mL/kg으로 연속 7일 동안 하루에 한 번 받았다.
G2 모델 대조 그룹에서, DNBS 유도 4시간 후, 래트는 용매 20% PEG400 + 10%(30% Solutol HS15) + 70% 생리 식염수 위관영양을 10mL/kg으로 연속 7일 동안 하루에 한 번 받았다.
G3 프레드니손 그룹에서, DNBS 유도 4시간 후, 래트는 프레드니손 위관영양을 9mg/kg으로 연속 7일 동안 하루에 한 번 받았다.
시험 물질의 G4 내지 G6 그룹에서, DNBS 유도 4시간 후, 래트는 시험할 물질 위관영양을 연속 7일 동안 하루에 한 번 다양한 용량으로 받았다.
4. 지표 검출
(1) 동물의 체중: 동물의 체중을 매일 측정하여 기록하고, 동물의 일상 활동을 관찰하여 비정상(abnormity)을 기록한다. 체중 퍼센트는 다음 공식에 따라 계산되었다: (X일차의 체중 - 초기 체중)/ 초기 체중]×100%.
(2) 대변 점수: 실험 동안, 래트의 대변 상태를 매일 채점하였다(0 = 정상, 1 = 습함/끈적임, 2 = 느슨함(loose), 3 = 액체).
(3) 결장 관찰: 실험 종료 후, 모든 동물을 졸레틸(정맥주사, 25mg/kg)로 마취하고, 복강을 개방하였다. EDTA 항응고제(원심분리 조건: 4℃, 2,000g, 10분)로 복부 대동맥에서 혈액을 채취했다. 동물을 사혈하여 희생시킨 후 결장(맹장에서 항문까지)을 해부하고, 결장 길이를 즉시 측정하였다. 결장을 세로로 절개하고, 깨끗해질 때까지 헹구었다. 그 후 결장 무게와 궤양 부위를 기록하고, 결장 전체를 촬영하여 세 부분으로 나누어 두 부분은 MPO와 사이토카인 검출을 위해 액체 질소로 급속 동결 후 -80℃에 보관하고, 다른 한 부분은 대장의 일부를 10% 중성완충포르말린으로 고정하였다. 궤양의 모양이 불규칙한 경우 직사각형으로 간주하여 길이와 너비를 측정하여 궤양 부위를 평가하였다. 궤양 면적(cm 2) = 궤양 길이(cm)×궤양 폭(cm).
(4) 대장 조직의 병리학적 분석
중성 완충 포르말린으로 고정된 결장 조직의 근위부, 궤양(궤양이 없는 경우 해당 부위 채취 가능) 및 원위부 조직을 파라핀으로 포매하고, 절편(두께 5 μm)하고, H&E 염색으로 조직병리학적 점수를 부여하였다.
염증 세포 침윤 조직 손상
0 간헐적이거나 염증 세포 침윤 없음 0 점막 손상 없음
1 점막 고유층(lamina propria)에서의 염증 세포 침윤 1 국소화된 소낭 병변
2 점막하층에서의 염증 세포 침윤 2 점막의 미란 또는 궤양
3 경벽(transmural) 염증 세포 침투 3 점막하층에 광범위한 손상
5. 통계적 분석
실험 데이터는 평균 ± 표준 오차로 나타내었다. 해당 통계 방법을 사용하여 Graphpad Prism으로 데이터를 분석했다. p < 0.05의 차이는 유의한 것으로 간주되었다.
6. 실험 결과
(1) 체중과 대변 점수는 도 28 내지 31에 나타내었다.
(2) 7일째 결장의 육안 평가
7일차 결장의 거시적 평가
그룹 BW 결장 길이 결장 중량 궤양 길이 궤양 폭 궤양 면적
(g) (cm) (g) (cm) (cm) (cm2)
G1: 정상 대조 그룹 평균 181.69 1.28 16.51 0.00 0.00 0.00
표준 오차 1.05 0.03 0.24 0.00 0.00 0.00
G2: 모델 대조 그룹 평균 161.79 2.05 10.70 1.71 1.21 2.09
표준 오차 2.18 0.11 0.42 0.08 0.04 0.14
G3: 프레드니손 평균 162.92 1.61 11.56 0.77 0.85 1.26
표준 오차 1.67 0.08 0.39 0.21 0.29 0.62
G4: 시험 그룹 1# 평균 168.65 1.76 11.15 1.08 0.87 1.36
표준 오차 2.91 0.09 0.36 0.21 0.15 0.33
G5: 시험 그룹 2# 평균 169.54 1.69 12.01 0.97 0.73 1.17
표준 오차 2.80 0.09 0.40 0.22 0.17 0.32
G6: 시험 그룹 3# 평균 164.62 1.72 10.55 1.09 0.95 1.35
표준 오차 2.06 0.08 0.23 0.20 0.15 0.30
7일차 결장의 거시적 평가
그룹 비율
CW/CL/BW IR1a (%) CW/BW IR2b (%) CW/CL IR3c (%)
Х 1000 Х 100 Х 10
G1: 정상 대조 그룹 평균 0.43 / 0.71 / 0.78 /
표준 오차 0.01 / 0.02 / 0.02 /
G2: 모델 대조 그룹 평균 1.22 / 1.28 / 1.96 /
표준 오차 0.09 / 0.07 / 0.13 /
G3: 프레드니손 평균 0.87 44.20 0.99 50.13 1.41 46.51
표준 오차 0.05 / 0.06 / 0.08 /
G4: 시험 그룹 1# 평균 0.96 32.98 1.05 40.24 1.60 30.82
표준 오차 0.06 / 0.06 / 0.09 /
G5: 시험 그룹 2# 평균 0.86 44.95 1.01 47.06 1.44 43.80
표준 오차 0.07 / 0.06 / 0.10 /
G6: 시험 그룹 3# 평균 1.00 27.12 1.05 39.85 1.64 26.68
표준 오차 0.05 / 0.05 / 0.08 /
BW: 체중;
CL: 결장 길이;
CW: 결장 무게;
a: IR1(억제율 1) = {[CW/CL/BW(모델 그룹) - CW/CL/BW(시험 약물 그룹)] / [CW/CL/BW(모델 그룹) - CW/CL/BW(정상 그룹)]}Х100%;
b: IR2(저해율 2) = {[CW/BW(모델 그룹) - CW/BW(시험 약물 그룹)] / [CW/BW(모델) - CW/BW(정상 그룹)]}Х100%;
c: IR3(저해율 3) = {[CW/CL(모델 그룹) - CW/CL(시험 약물 그룹)] / [CW/CL(모델 그룹) - CW/CL(정상 그룹)]}Х100%.
(3) 병리학적 점수
병리학적 점수
그룹 근위 말단 궤양 말단 원위 말단 총점
염증 손상 염증 손상 염증 손상 염증 손상
G1: 정상 대조 그룹 평균 0.87 0.67 1.13 0.87 0.80 0.53 2.80 2.07
표준 오차 0.09 0.13 0.09 0.09 0.11 0.13 0.17 0.25
G2: 모델 대조 그룹 평균 1.87 1.07 2.87 2.73 2.27 1.67 7.00 5.47
표준 오차 0.22 0.30 0.09 0.21 0.18 0.33 0.26 0.36
G3: 프레드니손 평균 1.73 0.80 2.33 1.87 2.00 1.33 6.07 4.00
표준 오차 0.18 0.26 0.19 0.31 0.28 0.33 0.49 0.61
G5: 시험 그룹 2# 평균 1.60 0.47 2.40 2.13 2.07 0.93 6.07 3.53
표준 오차 0.16 0.17 0.21 0.29 0.23 0.28 0.44 0.51
7. 결론
Wistar 래트는 염증성 대장염(inflammatory colitis)을 유발하기 위해 DNBS로 결장 내 관류되었다. 대장염은 동물 체중의 유의한 감소, 대변 형태 점수의 유의한 증가, 유의한 결장 길이 감소, 결장 중량, 및 결장 중량:결장 길이(즉, CW/CL), 결장 중량:체중(즉, CW/BW) 및 결장 중량:결장 길이:체중(즉, CW/CL/BW)의 비율의 유의한 증가, 결장 궤양 면적의 유의한 증가, 결장 염증 세포 침윤 점수 및 조직 손상 점수의 상당한 증가로서 나타난다.
본 실시예에서, 양성 대조 그룹 약물 프레드니손은 모델 래트의 대변 형태 점수 AUC, 결장 중량, CW/CL, CW/BW, CW/CL/BW 및 결장 궤양 말단의 염증 세포 침윤 점수를 상당히 감소시킬 수 있었고, 여기서 CW/CL/BW, CW/BW 및 CW/CL의 억제율은 각각 44.20%, 50.13% 및 46.51%에 도달했다.
시험 그룹 1#(3mg/kg)에서 CW/CL/BW, CW/BW 및 CW/CL의 억제율은 각각 32.98%, 40.24% 및 30.82%였다.
시험 그룹 2#(네피카스타트 10mg/kg)은 CW/CL, CW/CL/BW 및 결장 조직 손상의 총점을 상당히 감소시킬 수 있었고, CW/CL/BW, CW/BW 및 CW/CL의 억제율은 각각 44.95%, 47.06%, 43.80%였다.
시험 그룹 3#(30mg/kg)에서 CW/CL/BW, CW/BW 및 CW/CL의 억제율은 각각 27.12%, 39.85% 및 26.68%였다.
요약하면, 네피카스타트는 래트의 DNBS-유도 대장염에 대해 특정 예방 및 치료 효과를 나타냈다.
실시예 11: 덱스트란 설페이트 나트륨(DSS)-유도 대장염에 대한 DBH 억제제의 억제
1. 실험 물질
시약
시약 명칭 공급처 카탈로그 번호 배치 번호
Tween 80 Sigma P4780-100ML BCCB6908
PEG300 MedChemExpress HY-Y0873/CS-0015844 85948
PEG400 Sinopharm Chemical Reagent 30150828 /
Solutol HS 15 Sigma-Aldrich 42966-1KG BCCB9630
0.9% 염화나트륨 주사 Double-crane Pharmaceuticals / 190507
DMSO Sigma-Aldrich D4540-100ML BCCB6907
시험 물질
화합물 명칭 공급원 카탈로그 번호 배치 번호 순도
DSS MP Biomedicals 160110 S3045 /
네피카스타트 Asieris Pharmaceuticals 0002812-058-01 99.79%
사이클로스포린 A(CsA) MedChemExpress HY-BO579/CS-2761 31755 /
푸사르산 MedChemExpress HY-128483 536-69-6 98.1%
디설피람 MedChemExpress 97-77-8 97170 98.8%
푸마르산 MedChemExpress HY-W015883 110-17-8 98%
실험 동물: 스트레인 C57BL/6 마우스; 공급원: Zhejiang Charles River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.; 성별: 암컷. 주요 기기: 전자 저울: Sartorius, QUINTIX35-1CN.
2. 실험 방법
2.1 화합물의 제조 및 보관
사이클로스포린 A(CsA) 분말 적당량을 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고 2% DMSO, 30% PEG300, 5% Tween 80 및 63% 식염수를 적절한 비율로 첨가하고, 바이알을 진탕시켜 화합물을 용해시켰다. 용액은 매일 제조되었다.
네피카스타트 적당량을 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고, 20% PEG400, 10%(30% Solutol HS15), 70% 생리 식염수를 일정 비율로 연속적으로 첨가하였다. 혼합물을 완전히 혼합하고, 초음파 처리하여 화합물을 용해시켰다. 안정성을 유지하기 위해 3일마다 용액을 제조하였다.
푸사르산 적당량을 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고, 생리 식염수 적당량을 첨가하였다. 혼합물을 초음파 처리하여 화합물을 용해시켰다. 용액은 7일마다 제조되었다.
디설피람 적당량을 칭량하여 갈색 샘플 바이알에 넣고, 특정 비율의 50% PEG300 및 50% 생리 식염수를 연속적으로 첨가하였다. 혼합물을 초음파 처리하여 화합물을 용해시키고, 현탁액을 형성하였다. 현탁액은 투여 전에 잘 혼합되어야 하며, 7일마다 제조되었다.
푸마르산 적당량을 달아 갈색 샘플 바이알에 넣고 생리 식염수 적당량을 가하였다. 혼합물을 수조에서 가열하여 화합물을 용해시켰다. 용액은 매일 제조되었다.
투여 부피 및 약물 스톡 농도
그룹(n=10) 투여 부피(mL/kg) 투여량(mg/kg) 스톡 농도(mL/mg)
정상 그룹 ―― ―― ――
용매 그룹
사이클로스포린 A 10 50 5
네피카스타트 10 50 5
푸사르산 10 100 10
디설피람 10 100 10
푸마르산 10 100 10
2.2 동물 하우징
체중이 약 20g인 70마리의 8주령 암컷 C57BL/6 마우스를 12/12시간 명암 주기로 제어된 온도(20±2℃)에서 환기가 되는 케이지(IVC, 케이지당 5마리)에 개별적으로 사육했다. 실험에 앞서, 마우스는 적응을 위해 3일 동안 SPF 등급의 동물실에서 사육되었고, 이 기간 동안 적절한 물과 음식에 자유롭게 접근할 수 있었다.
2.3 그룹핑 및 투여 섭생법
실험용 마우스는 적응을 위해 3일 동안 SPF 등급 동물실에서 사육되었으며, 무작위로 각 그룹에서 10마리씩 7개 그룹(6개의 모델 그룹과 1개의 대조 그룹)으로 나누었다. 마우스의 투여는 0차일에 시작하여 7일차에 종료되었다.
동물 그룹핑 및 투여 섭생법
그룹 동물의 수 투여 빈도 투여 경로 투여 기간(일)
정상 그룹 10 ―― ―― ――
용매 그룹 10
사이클로스포린 A 10 QD PO 8
네피카스타트 10 QD PO 8
푸사르산 10 BID PO 8
디설피람 10 QD PO 8
푸마르산 10 QD PO 8
2.4 모델 수립
본 실시예의 마우스 장염 모델은 DSS 유도에 의해 수립되었다: 모델 그룹의 마우스는 0일부터 7일까지 3.1% DSS(덱스트란 설페이트 나트륨, 분자량 36,000-50,000) 수용액을 제공받았고, DSS 수용액은 분해를 방지하기 위해 매일 새로 제조한 용액으로 교체했다. 정상 대조 그룹의 마우스에게는 일반 물을 제공하였다. 실험 기간은 9일이었고, 마우스를 안락사시키고, 실험 종점에서 샘플을 수집하였다.
2.5 질병 활동도(DAI) 점수
DAI 점수는 매일 평가되었다. DAI 점수는 체중 변화, 대변 특성, 혈변(또는 잠혈) 점수의 3부분으로 구성되었으며, 구체적인 채점 기준은 표 49에 기재된 바와 같다. 모든 마우스의 DAI 채점은 실험 전체에 걸쳐 동일한 스태프에 의해 수행되었다.
DAI 채점 기준
점수 체중 감소 퍼센트 대변 특성 혈변 또는 잠혈
0 0 정상 잠혈 음성
1 1 내지 5% 부드러운 변 잠혈 약한 양성
2 6 내지 10% 느슨한 대변 잠혈 양성
3 11 내지 20% 습하고, 얇은 대변 소량의 혈액
4 >20 % 묽은 변 다량의 혈액
2.6 결장 조직 수집
실험 종점에서 마우스를 안락사시켰다. 마우스의 결장을 절개하고, 사진을 촬영하고, 길이를 측정한 후 내용물을 제거한 후 칭량하였다.
2.7 통계적 분석
데이터는 평균 ± 표준 오차(X±s)로 표현하였다. 체중 변화와 질환 활성 점수는 투-웨이 ANOVA로 통계적으로 분석하였고, 그룹간 비교는 Dunnett's 시험으로 하였다. 다른 데이터는 원-웨이 ANOVA으로 통계적으로 분석했고, 그룹 간 비교는 Dunnett's 시험으로 수행했다. 모든 분석은 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 수행되었다. * P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < 0.005, **** P < 0.0001 대 용매 그룹.
3. 실험 결과 및 분석
실험 동안 각 마우스 그룹의 체중 데이터를 수집하고, 해당 DAI 점수를 평가했다. 데이터는 투-웨이 ANOVA로 분석되었다.
도 32에 도시된 바와 같이, 양성 대조 그룹 CsA(50mg/kg, QD) 및 네피카스타트(50mg/kg, QD)는 용매 그룹과 비교하여 마우스에서 DSS-유도 체중 감소를 효과적으로 완화시켰다. 푸사르산(100mg/kg, bid) 및 디설피람(100mg/kg, qd)은 용매 그룹과 비교하여 마우스에서 DSS-유도 체중 감소를 효과적으로 완화시키지 못했다. 푸마르산(100mg/kg, qd)은 마우스에서 DSS-유도 체중 감소를 완화시키는 경향을 보였다.
도 33에 나타낸 바와 같이, 양성 대조 그룹 CsA(50mg/kg, QD) 및 네피카스타트(50mg/kg, QD) 그룹에서 마우스의 질병 활성도 점수(DAI)는 용매 그룹보다 현저히 낮았다. 투여 중, 푸사르산(100mg/kg, bid), 디설피람(100mg/kg, qd) 및 푸마르산(100mg/kg, qd) 그룹에서 마우스의 DAI는 용매 그룹에 비해 약간 개선될 수 있었고, 그 중 4일차와 5일차에 상대적으로 성능이 뚜렷하게 나타났으나 네피카스타트보다는 효과가 적었다.
체중 변화와 DAI 점수를 모두 고려할 때, 양성 대조 그룹 CsA(50mg/kg, QD)와 네피카스타트(50mg/kg, QD)가 DSS-유도 대장염으로 인해 발생되는 체중 감소, 설사 및 혈변 증상을 효과적으로 완화함을 알 수 있었다. 푸사르산(100mg/kg, bid), 디설피람(100mg/kg, qd) 및 푸마르산(100mg/kg, qd) 그룹은 마우스에서 DSS-유도 대장염으로 인한 설사 및 혈변 증상을 약간 완화할 수 있었다. 그러나, 마우스에서 DSS-유도 대장염으로 인한 체중 감소를 효과적으로 완화하지 못했다.
참고문헌

Claims (17)

  1. 자가면역 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 경로 조절제(pathway modulator)의 용도로서, 상기 경로 조절제는 도파민 β-하이드록실라제 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 경로 조절제가 도파민 β-하이드록실라제 억제제이고, 상기 도파민 β-하이드록실라제 억제제가 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 도파민 β-하이드록실라제 억제제는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 푸마르산, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 경로 조절제가 네피카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 10-100 mg/kg, 바람직하게는 20-50 mg/kg이거나; 또는
    상기 경로 조절제가 에타미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120 mg/kg, 바람직하게는 90-110 mg/kg, 보다 바람직하게는 100 mg/kg이거나; 또는
    상기 경로 조절제가 자미카스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120 mg/kg, 바람직하게는 90-110 mg/kg, 보다 바람직하게는 100 mg/kg이거나; 또는
    상기 경로 조절제가 푸사르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120 mg/kg, 바람직하게는 90-110 mg/kg, 보다 바람직하게는 100 mg/kg이거나; 또는
    상기 경로 조절제가 디설피람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120 mg/kg, 바람직하게는 90-110 mg/kg, 보다 바람직하게는 100 mg/kg이거나; 또는
    상기 경로 조절제가 푸마르산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 단위 용량은 80-120 mg/kg, 바람직하게는 90-110 mg/kg, 보다 바람직하게는 100 mg/kg인, 용도.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 자가면역 질환이 이완불능증, 애디슨병, 성인 스틸병(adult Still's disease), 무감마글로불린혈증, 원형 탈모증, 아밀로이드증, 강직성 척추염, 항-GBM/항-TBM 신장염, 항인지질 증후군, 자가면역 혈관부종, 자가면역 자율신경실조증, 자가면역 뇌척수염, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환, 자가면역 심근염, 자가면역 난소염, 자가면역 고환염, 자가면역 췌장염, 자가면역 망막병증, 자가면역 두드러기(autoimmune urticaria), 축삭신경병증(axonal & neuronal neuropathy), 발로병(Balo disease), 베체트병, 양성 점막 유천포창, 수포 유천포창, 캐슬만병(Castleman disease), 셀리악병, 샤가스병, 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증, 만성 재발성 다발성 골수염, 호산구성 육아종증, 반흔성 유천포창, 코간 증후군, 한랭응집소병, 선천성 심장 차단, 콕사키 심근염, CREST 증후군, 크론병, 포진성 피부염, 피부근염, 시신경척수염, 원판상 루푸스, 드레슬러 증후군, 자궁내막증, 호산구성 식도염, 호산구성 근막염, 결절성 홍반, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 에반스 증후군, 섬유근육통, 섬유화 폐포염, 거대세포 동맥염, 거대세포 심근염, 사구체신염, 굿파스쳐 증후군, 다발혈관염을 동반한 육아종증, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 하시모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤노흐-쇤라인 자반병(Henoch-Schonlein purpura), 임신 포진 또는 임신 천포창양, 화농한선염, 저감마글로불린혈증, IgA 신병증, IgG4-관련 경화성 질환, 면역성 혈소판감소성 자반증, 봉입체 근염, 간질성 방광염, 소아 관절염, 제1형 소아 당뇨병, 소아 근염, 가와사키병, 램버트-이튼 증후군, 백혈구파괴성 혈관염, 편평태선(lichen planus), 경화태선, 목질결막염, 선형 IgA병, 루푸스, 만성 라임병, 메니에르병, 현미경적 다발혈관염, 혼합결합조직병, 무렌궤양, 무하-하버만병, 다초점 운동 신경병증, 다발성 경화증, 중증근무력증, 근염, 기면증, 신생아 루푸스, 호중구감소증, 안 반흔성 유천포창, 시신경염, 회문성 류머티즘, PANDAS, 신생물성 소뇌 변성, 발작성 야간 혈색소뇨증, 패리 롬버그 증후군, 편평부염, 파르소니지-터너 증후군, 천포창, 말초 신경병증, 정맥주위 뇌척수염, 악성 빈혈, POEMS 증후군, 결절성 다발동맥염, I형 다선성 증후군, II형 다선성 증후군, III형 다선성 증후군, 류마티스성 다발성 근육통, 다발성근염, 심근경색 후 증후군, 심낭절개후 증후군, 원발성 담즙성 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 프로게스테론 피부염, 건선, 건선성 관절염, 순수 적혈구 무형성증, 괴저성 농피증, 레이노 현상, 반응성 관절염, 반사성 교감 신경 이영양증, 재발성 다발연골염, 하지 불안 증후군, 후복막 섬유증, 류마티스열, 류마티스 관절염, 유육종증, 슈미트 증후군, 공막염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 정자 및 고환 자가면역, 강직 인간 증후군, 아급성 세균성 심내막염, 수삭 증후군, 교감성 안염, 타카야수 동맥염, 측두 동맥염/거대 세포 동맥염, 혈소판 감소성 자반병, 갑상선 안 질환, 톨로사-헌트 증후군, 횡단 척수염, 제1형 당뇨병, 궤양성 대장염, 미분화 결합 조직 질환, 포도막염, 혈관염, 백반증 및 보그트-고야나기-하라다병으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 자가면역 대장염, 시신경 척수염, 류마티스 관절염, 경피증, 건선, 및 포도막염으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    상기 자가면역 대장염은 크론병, 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
  5. 치료 유효량의 경로 조절제를 대상체(subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 자가면역 질환의 치료 방법으로서, 상기 경로 조절제는 도파민 β-하이드록실라제 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 치료 방법.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 경로 조절제가 도파민 β-하이드록실라제 억제제이고, 상기 도파민 β-하이드록실라제 억제제가 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 도파민 β-하이드록실라제 억제제는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 푸마르산, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 치료 방법.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서,
    상기 자가면역 질환이 제4항에 정의된 바와 같은 것인, 치료 방법.
  8. 경로 조절제, 및
    약학적으로 허용가능한 담체
    를 포함하는 자가면역 질환 치료용 약학 조성물로서,
    상기 경로 조절제는 도파민 β-하이드록실라제 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 경로 조절제가 도파민 β-하이드록실라제 억제제이고, 상기 도파민 β-하이드록실라제 억제제가 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드랄라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 도파민 β-하이드록실라제 억제제는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 푸마르산, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학 조성물.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 자가면역 질환이 제4항에 정의된 바와 같은 것인, 약학 조성물.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 약제가, CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD8+ T 세포의 비율 증가, CD4+ T 세포의 전 염증 인자(pro-inflammatory factor)의 분비 감소, CD8+ T 세포의 전 염증 인자의 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제; 말초 혈액에서 림프구, 호중구 및 단핵구의 함량 감소; 진피층에서 염증 세포 침윤 및 피하 모세관 과형성의 감소; 피부 섬유증 완화; 포도막염 발병률 감소; 피부 염증 완화; 대변 형태 점수 개선, 결장 중량(CW; colon weight)/결장 길이(CL; colon length) 개선, CW/체중(BW; body weight) 개선, CW/CL/BW 개선, 결장 궤양 면적(colon ulcer area)의 증가 억제, 결장 염증 세포 침윤 점수 개선, 조직 손상 점수 개선; 질병 활성 점수 개선, 혈변 또는 잠혈의 완화로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 위해 사용되는, 용도.
  12. 제11항에 있어서,
    CD4+ T 세포의 전염증 인자가 IL-17A, IFN-γ 및 TNF-α 중 하나 이상이고;
    CD8+ T 세포의 전염증 인자가 IL-17A 및/또는 TNF-α인, 용도.
  13. 제11항에 있어서,
    상기 조절 T 세포가 CD25+FOXP3+ Treg 세포이고/이거나;
    상기 B 세포가 B220+ 세포, 바람직하게는 CD69+B220+ B 세포이고/이거나;
    상기 NK 세포가 NK1.1+ 세포, 바람직하게는 NK1.1+CD107a+ NK 세포인, 용도.
  14. 유효량의 경로 조절제를 생체 내 또는 시험관 내에서 면역 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 생체 내 또는 시험관 내에서의 면역 세포 기능의 조절 방법으로서,
    상기 면역 세포는 대상체로부터 유래하고;
    상기 경로 조절제는 도파민 β-하이드록실라제 억제제, 수용체 작용제, 수용체 길항제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    상기 면역 세포 기능의 조절은 CD4+ T 세포의 비율 감소, 조절 T 세포의 비율 증가, CD8+ T 세포의 비율 증가, CD4+ T 세포의 전 염증 인자의 분비 감소, CD8+ T 세포의 전 염증 인자의 분비 감소, B 세포의 활성화 억제 및 NK 세포의 활성화 억제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기능을 의미하는, 조절 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 도파민 β-하이드록실라제 억제제가 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 시스테아민, 판테틴, 구리 킬레이트제, 푸마르산, 하이드라라진, 2-티오펜-2-일알릴아민, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 도파민 β-하이드록실라제 억제제는 네피카스타트, 에타미카스타트, 자미카스타트, 푸사르산, 디설피람, 푸마르산, 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들의 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조절 방법.
  16. 제14항에 있어서,
    상기 CD4+ T 세포의 전염증 인자가 IL-17A, IFN-γ 및 TNF-α 중 하나 이상이고;
    상기 CD8+ T 세포의 전염증 인자가 IL-17A 및/또는 TNF-α인, 조절 방법.
  17. 제14항에 있어서,
    상기 조절 T 세포가 CD25+FOXP3+ Treg 세포이고/이거나;
    상기 B 세포가 B220+ 세포, 바람직하게는 CD69+B220+ B 세포이고/이거나;
    상기 NK 세포가 NK1.1+ 세포, 바람직하게는 NK1.1+CD107a+ NK 세포인, 조절 방법.
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CA3007641C (en) * 2015-12-09 2023-10-17 Brandeis University Dbh inhibitors for treating or preventing memory loss
WO2018022823A1 (en) * 2016-07-28 2018-02-01 Asieris Pharmaceutical Technologies Co., Ltd. Uses of dopamine beta-hydroxylase (dbh) inhibitors and serotonin receptor (5-ht) antagonists for the treatment of cancer
GB201810395D0 (en) * 2018-06-25 2018-08-08 Bial Portela & Ca Sa Formulations comprising dopamine-beta-hydroxylase inhibitors and methods for their preparation

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