KR20230135087A - 항-mcl1 항체를 투여하여 암을 모니터링하기 위한 물질및 방법 - Google Patents

항-mcl1 항체를 투여하여 암을 모니터링하기 위한 물질및 방법 Download PDF

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아그니에츠카 키엘체프스카
브라이언 찬
마이클 씨. 보일
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암젠 인크
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Abstract

본 개시내용은 Mcl-1에 대한 예상외로 높은 결합으로 항원에 결합하는 임의의 형태의 항-Mcl-1 항체 및 이의 단편을 제공하고, Mcl-1을 발현하는 암 세포를 모니터링하는 방법 및 이러한 암 세포를 포함하는 암, 특히 혈액-매개 암을 치료하는 방법에 유용한 도구를 제공한다.

Description

항-MCL1 항체를 투여하여 암을 모니터링하기 위한 물질 및 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국 특허법(35 U.S.C. § 119(e)) 하에 2021년 1월 29일자로 출원된 미국 가출원 특허 제63/143,682호에 대한 우선권 이익을 주장하며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
전자적으로 제출된 자료의 참조에 의한 포함
본 개시내용의 일부인 서열목록은 텍스트 파일로서 명세서와 동시에 제출된다. 서열목록을 포함하는 텍스트 파일의 명칭은 "55149_Seqlisting.txt"이며, 이는 2022년 1월 28일자로 생성되었고, 파일 사이즈는 16,178 바이트이다. 서열목록의 내용은 본 명세서에 그 전체가 참조로 포함된다.
기술분야
본 개시내용은 면역요법 모니터링, 특히 암 면역요법 모니터링과 관련된 물질 및 방법을 제공한다.
유도 골수성 백혈병 단백질 1(Mcl-1)의 과발현은 인간 암의 일반적인 특징이다. Mcl-1 과발현은 암세포가 세포자멸사(아폽토시스)를 겪는 것을 방지하여, 넓게 퍼진 유전적 손상에도 불구하고 암세포가 생존할 수 있도록 한다. Mcl-1은 Bcl-2 단백질 계열의 구성원이다. Bcl-2 계열은 활성화 시, 기공 형성 및 미토콘드리아 내용물의 누출, 즉, 세포자멸사를 촉발하는 단계를 야기하는 외부 미토콘드리아 막에서 동종-올리고머를 형성하는 세포자멸사 유발(pro-apoptotic) 구성원(예컨대, BAX 및 BAK)을 포함한다. Bcl-2 계열(예컨대 Bcl-2, Bcl-xL 및 Mcl-1)의 항세포자멸사 구성원은 BAX 및 BAK의 활성을 차단한다. 다른 단백질(예컨대 BID, BIM, BIK 및 BAD)은 추가적인 조절 기능을 나타낸다.
연구에 따르면 Mcl-1 억제제는 암 치료에 유용할 수 있다. Mcl-1은 다수의 암에서 과발현된다. 문헌[Beroukhim et al., Nature 463:899-890 (2010)]을 참조한다. Mcl-1 및 Bc1-2-1-1 항세포자멸사 유전자를 둘러싸는 증식을 함유하는 암세포는 생존을 위해 이들 유전자의 발현에 의존한다. (Beroukhim 등. Mcl-1은 수많은 암세포에서 세포자멸사의 재개시를 위한 적절한 표적이다. 문헌[Lessene et al., Nat. Rev. Drug. Discov., 7:989-1000 (2008)]; [Akgul, Cell. Mol. Life Sci. 66 (2009)]; 및 [Mandelin et al., Expert Opin. Ther. Targets 11:363-373 (2007)]을 참조한다.
척추동물 면역계는 정확한 항원에 특이적으로 결합하거나 이를 인식하는 항체의 생성을 특징으로 하는 면역 반응을 생성할 수 있는 것으로 알려져 있다. 단클론 항체의 개발과 항체 형태의 증식으로 인해 항체 기법은 비특이적 치료제와 일반적으로 관련된 부작용을 최소화하면서 특정 질환 및 장애를 퇴치하려는 노력에서 중요한 무기가 되었다. 화합물 [8,16,18,24]테트라엔]-15'-온 13',13'-디옥시드(AMG 176)는 골수성 세포 백혈병 1(Mcl-1)의 저해제로서 유용하다. 이 화합물은 하기 화학식 I을 갖는다:
[화학식 I]
.
화합물 (1S,3'R,6'R,7'R,8'E,11'S,12'R)-6-클로로-7'-메톡시-11',12'-디네틸-7'-((9aR)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일메틸)-3,4-디하이드로-2H,15'H-스피로[나프탈렌-1,22'-[20]옥사[13]티아[1,14]디아자테트라시클로 [14.7.2.03,6.019,24]펜타코사[8,16,18,24]테트라엔]-15'-온 13',13'-디옥시드 (AMG 397) 또한 골수성 세포 백혈병 1(Mcl-1)의 저해제로서 유용하다. 이 화합물은 하기 화학식 II를 갖는다:
[화학식 II]
.
본 명세서에 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제9,562,061호에는 Mcl-1 저해제로서의 AMG 176이 개시되어 있고, 이의 제조 방법이 제공되어 있다.
본 명세서에 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제10,300,075호에는 Mcl-1 저해제로서의 AMG 397이 개시되어 있고, 이의 제조 방법이 제공되어 있다.
Mcl-1을 조절하는 새로운 화합물은 개시되어 있지만, 예를 들어 항암 요법에서 MCL-1을 억제하기 위한 노력의 진행을 모니터링하기 위해서는 새로운 항체 및 항체 제형이 필요하다.
본 개시내용은 Mcl-1 항원에 대해 예기치 않게 높은 결합 특성(예를 들어, 친화도, 결합력 및 민감도)을 나타내는 임의의 형태의 항체 및 이의 단편과 같은 항원 결합 단백질을 제공한다. 비교 테스트에서 Mcl-1에 대한 다양한 상업용 면역조직화학(IHC) 항체가 암 치료 모니터링에 유용한 Mcl-1 수준을 감지하지 못하는 것으로 나타났다. Mcl-1은 다양한 혈액암 및 장기-기반 암에서 과발현되는 것으로 밝혀진 Bcl-2 계열의 유도 골수성 백혈병 세포 분화 단백질이다. 본 개시내용의 항원 결합 단백질로, 시간 경과에 따른 Mcl-1의 수준을 측정함으로써 암 치료를 모니터링하는 방법이 가능해졌다. Mcl-1을 과발현하는 세포를 특징으로 하는 암의 치료를 모니터링하는 개시된 방법은 이러한 암을 표적으로 하는 임의의 암 치료를 모니터링하는 데 유용할 것으로 생각된다. 그러한 암을 표적으로 하는 예시적인 암 치료제는 AMG 176 또는 AMG 397을 포함하며, 이들 모두는 Mcl-1 억제제이다. Mcl-1 발현의 검출은 AMG 176의 투여와 같은 암 치료에 대한 약리학적 반응의 지표를 제공할 수 있다. AMG 176은 화학식 I의 핵심 구조를 갖는다:
[화학식 I]
.
또 다른 Mcl-1 억제제인, AMG 397의 구조는 화학식 II에 나타나 있다:
[화학식 II]
.
일 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 4의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 5의 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 서열번호 6의 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3), 서열번호 16의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 17의 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 18의 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함하거나, 서열번호 10의 LCDR1, 서열번호 11의 LCDR2, 서열번호 12의 LCDR3, 서열번호 22의 HCDR1, 서열번호 23의 HCDR2, 및 서열번호 24의 HCDR3을 포함하는 항-Mcl-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 27 또는 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 28 또는 서열번호 32의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 중쇄 가변 영역 서열이 서열번호 28로 제시된 경우 항체가 서열번호 27의 경쇄 가변 영역 서열을 추가로 포함하거나, 중쇄 가변 영역 서열이 서열번호 32로 제시된 경우, 항체가 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 서열을 추가로 포함하는 일부 실시형태를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 단편은 단일쇄 항체 또는 단편이며, 항체 단편이 단일쇄 가변 단편(scFv)에 함유되는 실시형태를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 단편은 (a) scFv; (b) Fab; 또는 (c) (Fab')2이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 완전히 인간이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 면역글로불린 G(IgG) 이소형 항체 또는 단편이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 단클론 항체의 형태로 되어 있다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 이중특이성 항체, 삼중특이성 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이황화결합-안정화 단일쇄 가변 단편(ds-scFv), 단일 도메인 항체(sdAb), 단일쇄 Fab 단편(scFab), 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, Fab, F(ab')2, VHH/VH 단편, 펩티바디, 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 이중특이성 T-세포 인게이저(BiTE)의 형태로 되어 있다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 본원에 개시된 약제학적으로 허용가능한 담체 및 치료적 유효량의 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 면역학적 기능성 면역글로불린 단편을 포함하는 약제학적 조성물이다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 (a) 대상체의 세포를 제1항의 항체 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계; (b) 세포 또는 그 내용물에 대한 항체 또는 이의 단편의 결합을 검출하는 단계; (c) 세포 내 Mcl-1의 수준을 결정하는 단계; 및 (d) 세포 내 Mcl-1의 수준을 대조군과 비교하는 단계를 포함하는 대상체의 암 세포 치료를 모니터링하는 방법이며, 여기서 대조군은 비-암 세포의 공지된 수준의 Mcl-1 특징, 대상체의 비-암 세포 내 Mcl-1 수준, 또는 다른 시점에서의 대상체의 암 세포 내 Mcl-1 수준이다. 일부 실시형태에서, 모니터링은 ELISA, 경쟁적 ELISA, 표면 플라스몬 공명 분석, 시험관 내 중화 검정, 생체 내 중화 검정, FACS 분류를 이용한 면역조직화학적 검정 또는 FACS 분류가 없는 면역조직화학적 검정인, 검정을 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 백혈병 세포, 림프종 세포 또는 골수종 세포이다. 일부 실시형태에서, 암 치료는 화학식 I의 AMG 176의 투여를 포함한다:
[화학식 I]
.
일부 실시형태에서, 암 치료는 화학식 II의 AMG 397의 투여를 포함한다:
[화학식 II]
.
일부 실시형태에서, 암 세포는 골수성 백혈병 세포이다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 기관 암 세포이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 4의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 5의 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 서열번호 6의 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3), 서열번호 16의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 17의 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 18의 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함하는 단클론 항체 또는 이의 단편이거나, 또는 항체 또는 이의 단편은 서열번호 10의 LCDR1, 서열번호 11의 LCDR2, 서열번호 12의 LCDR3, 서열번호 22의 HCDR1, 서열번호 23의 HCDR2, 및 서열번호 24의 HCDR3을 포함하는 단클론 항체 또는 이의 단편이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 27의 경쇄 가변 영역 서열, 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열, 또는 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 및 서열번호 32의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 단일쇄 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), scFv, Fab, F(ab')2, 이중특이성 항체, 삼중특이성 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이황화결합-안정화 단일쇄 가변 단편(ds-scFv), 단일 도메인 항체(sdAb), 단일쇄 Fab 단편(scFab), 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, Fab, F(ab')2, VHH/VH 단편, 펩티바디, 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 이중특이성 T-세포 인게이저(BiTE)의 형태로 되어 있다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 본원에 개시된 치료적 유효량의 항-Mcl-1 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 암 치료 방법이다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 백혈병 세포, 림프종 세포 또는 골수종 세포이다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 골수성 백혈병 세포이다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 기관 암 세포이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 4의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 5의 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 서열번호 6의 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3), 서열번호 16의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 17의 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 18의 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함하는 단클론 항체 또는 이의 단편이거나, 또는 항체 또는 이의 단편은 서열번호 10의 LCDR1, 서열번호 11의 LCDR2, 서열번호 12의 LCDR3, 서열번호 22의 HCDR1, 서열번호 23의 HCDR2, 및 서열번호 24의 HCDR3을 포함하는 단클론 항체 또는 이의 단편이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 27의 경쇄 가변 영역 서열, 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열, 또는 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 및 서열번호 32의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 단일쇄 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), scFv, Fab, F(ab')2, 이중특이성 항체, 삼중특이성 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이황화결합-안정화 단일쇄 가변 단편(ds-scFv), 단일 도메인 항체(sdAb), 단일쇄 Fab 단편(scFab), 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, Fab, F(ab')2, VHH/VH 단편, 펩티바디, 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 이중특이성 T-세포 인게이저(BiTE)의 형태로 되어 있다.
본 개시내용의 다른 특징 및 이점은 도면을 포함하는 하기의 상세한 설명을 통해 명백해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 구체적인 실시예는 바람직한 실시형태를 나타내되, 본 발명의 사상 및 범주 내에서 다양한 변경 및 수정이 상세한 설명을 통해 당업자에게 명백해질 것이기 때문에, 단지 예시적인 목적으로만 제공된다는 것을 이해해야 한다.
도 1. Mcl-1 면역원에 대한 토끼 항체 면역 반응. ELISA 검정은 비오틴-표지 Mcl-1 단백질로 코팅된 384-웰 플레이트에서 연속적으로 희석된 토끼 혈청에 의해 실행되었다. 샘플 흡광도 값은 표시된 곡선을 산출했다. A) 토끼 J3643의 초기 채혈로부터의 Mcl-1 면역 반응. B) 토끼 J3643의 후기 채혈에서 얻은 Mcl-1 면역 반응.
도 2. 토끼 단클론 항체의 재조합 구제를 가능하게 하기 위한 전장 Mcl-1 상의 클론 배양 플레이트로의 토끼 B-세포의 FACS 분류.
도 3. 제한된 항원 결합 스크린의 결과가 제시되며, 이는 Mcl-1에 대한 상대적 친화도에 의해 순위가 매겨진 항체의 패널로 이어졌다. 상이한 항원 코팅 농도에서의 비드 멀티플렉스. 평형을 이루기 위해 18시간 인큐베이션이 사용되었다.
도 4. 고처리량 에피토프 비닝은 5개의 빈을 확인하였다. 도 3에서 확인된 항-Mcl-1 항체 패널은 개념적 에피토프 공간 지도를 생성하기 위해 서로에 대해 비닝되었다.
도 5. Mcl-1 억제제인 AMG176의 바이오마커 개발을 지원하는 토끼 클론 확장 직접 구제(CEDR) 워크플로우. 당업계에 공지된 표준 프로토콜을 사용하여 토끼가 면역화되었다. 간단히 말해서, 동물 비장을 수확하고, 해리하고, 단일-세포 현탁액을 동결시켰다. 해동된 토끼 비장세포를 FACS Aria III에서 비오티닐화된 Mcl-1 단백질 상의 384-웰 플레이트로 단일 세포 분류하고 Alexa Fluor 647에 접합된 스트렙타비딘 및 Alexa Fluor 488에 접합된 항토끼 IgG 항체에 의해 검출했다. 세포를 FBS, 10% 활성화된 토끼 비장세포 상층액(TSN) 및 피더 세포 배양액이 보충된 100 μl/웰 RPMI 배지로 분류했다. 단클론 배양 및 B-세포 확장에서 7일 후, 후속 검정을 위해 배양 상청액을 수집하고, 항체 서열의 시퀀싱 및 재조합 구제를 위해 토끼 B-세포를 용해시켰다. 클로닝 및 발현을 위해 각각의 에피토프 빈으로부터의 가장 높은 친화도, Mcl-1-선택적, 대표적인 항체를 선택하였다. 이들 항체를 면역조직화학적으로(IHC) 분석하였고, 항체 리드 화합물 11P5 및 11B14를 확인하였다. Companion Diagnostics(CDx) 검정 개발을 위한 방향으로 11P5가 선택되었다.
도 6. 토끼 이소형 대조군은 Mcl-1로 면역화되지 않은 토끼의 IgG 항체를 함유했다. 이들 토끼 이소형 대조군 항체는 본원에 개시된 방법에 의해 생성된 항-Mcl-1 항체를 평가하는데 유용하였다. 패널 A-H에 나타낸 바와 같이 8개의 세포 유형을 프로빙하기 위해 5 μg/ml의 토끼 이소형 대조군 항체를 사용하였다. A) AMO1, B) DMS-23, C) RPMI8226, D) AGS, E) QPM2, F) G361, G) Colo205, 및 H) SKMM2.
도 7. 패널 A-H에 나타낸 바와 같이 8개의 세포 유형을 프로빙하기 위해 1 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 4019를 사용하였다. A) AMO1, B) DMS-23, C) RPMI8226, D) AGS, E) QPM2, F) G361, G) Colo205, 및 H) SKMM2.
도 8. 패널 A-H에 나타낸 바와 같이 8개의 세포 유형을 프로빙하기 위해 5 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 5H16을 사용하였다. A) AMO1, B) DMS-23, C) RPMI8226, D) AGS, E) QPM2, F) G361, G) Colo205, 및 H) SKMM2.
도 9. 패널 A-H에 나타낸 바와 같이 8개의 세포 유형을 프로빙하기 위해 1 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 6A3을 사용하였다. A) AMO1, B) DMS-23, C) RPMI8226, D) AGS, E) QPM2, F) G361, G) Colo205, 및 H) SKMM2.
도 10. 종양 세포주의 면역조직화학적 분석. 항-Mcl-1 단클론 항체 11P5를 1 μg/ml으로 사용하여, 8개의 상이한 종양 세포주, 즉, AMO1, DMS-23, RPMI8226, AGS, OPM2, G361, Colo205, 및 SKMM2를 프로빙하였다. 프로빙된 세포는 면역조직화학적 염색 및 현미경 검사 전에 기존의 기법을 사용하여 포르말린-고정 및 파라핀-포매(FFPE)되었다. 결과는 항체 11P5가 각각의 시험된 종양 세포주의 특이적 세포질 염색을 나타냄을 보여준다.
도 11. 패널 A-H에 나타낸 바와 같이 8개의 세포 유형을 프로브하기 위해 1 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 11B14를 사용하였다. A) AMO1, B) DMS-23, C) RPMI8226, D) AGS, E) QPM2, F) G361, G) Colo205, 및 H) SKMM2.
도 12. 비교 항체 결합. A) 환자 07H-3971의 편도선 세포에 1 μg/ml의 토끼 이소형 대조군 항체로 면역조직화학적 염색을 수행하였고; B) 환자 07H-3971의 편도선 세포에 0.5 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 11P5로 면역조직화학적 염색을 수행하였고; C) 환자 07H-3971의 편도선 세포에 0.5 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 11B14로 면역조직화학적 염색을 수행하였다.
도 13. 환자 07H-3971의 편도선 세포는 1.0 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 4019로 면역조직화학적 염색을 받았다.
도 14. 비교 항체 결합. 왼쪽 패널: 환자 04H-391의 골수 세포에 1 μg/ml의 토끼 이소형 대조군 항체로 면역조직화학적 염색을 수행하였고; B) 환자 04H-391의 골수 세포에 0.5 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 11P5로 면역조직화학적 염색을 수행하였다.
도 15. 비교 항체 결합. 왼쪽 패널: 환자 04H-391의 골수 세포에 1 μg/ml의 토끼 이소형 대조군 항체로 면역조직화학적 염색을 수행하였고; B) 환자 04H-391의 골수 세포에 0.5 μg/ml의 항-Mcl-1 항체 11B14로 면역조직화학적 염색을 수행하였다.
도 16. 발현 분석. Mcl-1, Bcl-2 및 Bcl-xL의 발현 수준은 실시예 6에서 확인된 단클론 항체를 사용하여 8개의 종양 세포주에서 측정되었다. 도면에 표시된 결과는 단일 분석에서 모든 세포주를 비교하는 데 사용된 기법을 나타내며, 세포주에서 Mcl-1, Bcl-2 및 Bcl-xL의 발현 수준을 순위순으로 나타낸다.
도 17. 항-Mcl-1 항체에 의한 세포내 구조의 면역조직화학적 염색. 왼쪽 패널: 환자 145676의 편도선 조직이 항-Mcl-1 단클론 항체 11B14로 프로빙되었다. 오른쪽 패널: 환자 145676의 편도선 조직이 항-Mcl-1 단클론 항체 11P5로 프로빙되었다. IHC 결과는 두 항-Mcl-1 항체 모두 배 중심 림프구를 우세하게 염색함을 보여줬다.
도 18. 골수내 골수종 세포의 차등적 염색. 왼쪽 패널: 환자 145676의 골수 세포가 항-Mcl-1 항체 11B14로 프로빙되었다. 오른쪽 패널: 환자 145676의 골수 세포가 항-Mcl-1 항체 11P5로 프로빙되었다. 결과는 단클론 항-Mcl-1 항체 11B14가 아닌 단클론 항-Mcl-1 항체 11P5가 골수 골수종 세포의 특정 세포질 염색을 나타냄을 보여주었다.
도 19. 골수내 골수종 세포의 차등적 염색. 왼쪽 패널: 환자 145676의 골수 세포가 항-Mcl-1 항체 11B14로 프로빙되었다. 오른쪽 패널: 환자 145676의 골수 세포가 항-Mcl-1 항체 11P5로 프로빙되었다. 결과는 단클론 항-Mcl-1 항체 11B14가 아닌 단클론 항-Mcl-1 항체 11P5가 골수 골수종 세포의 특정 세포질 염색을 나타냄을 보여주었다.
도 20. 탈석회화된 골수내 골수종 세포의 차등적 염색. 왼쪽 패널: 환자 16863의 탈석회화된 골수 세포를 항-Mcl-1 항체 11B14로 프로빙하고, 생성된 FFPE-처리된 골수종 세포로 IHC 분석을 수행하였다. 오른쪽 패널: 환자 16863의 탈석회화된 골수 세포를 항-Mcl-1 항체 11P5로 프로빙하고, 생성된 FFPE-처리된 골수종 세포로 IHC 분석을 수행하였다. 결과는 단클론 항-Mcl-1 항체 11B14가 아닌 단클론 항-Mcl-1 항체 11P5가 탈석회화된 FFPE-처리된 골수내 골수종 세포의 특정 세포질 염색을 나타냄을 보여주었다.
도 21. IHC 검정에 대한 음성 대조군의 평가. 왼쪽 패널: 환자 390527의 고환 조직의 세포를 IHC 검정에서 항-Mcl-1 단클론 항체 11P5로 프로빙하였다. 중앙 패널: 환자 390527의 고환 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Bcl-2 단클론 항체(Agilent DAKO 카탈로그 번호 M0887)로 프로빙하였다. 오른쪽 패널: 환자 390527의 고환 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Bcl-xL 단클론 항체(Cell Signaling Technology 카탈로그 번호 2764)로 프로빙하였다. 인간 고환의 세포가 Bcl-xL이 아닌, Mcl-1 및 Bcl-2에 대한 IHC 검정에 대한 적절한 음성 대조군을 제공한다는 결과가 확립되었다.
도 22. IHC 검정에 대한 음성 대조군의 평가. 왼쪽 패널: 환자 5692의 자궁 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Mcl-1 단클론 항체 11P5로 프로빙하였다. 중앙 패널: 환자 5692의 자궁 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Bcl-2 단클론 항체(Agilent DAKO 카탈로그 번호 M0887)로 프로빙하였다. 오른쪽 패널: 환자 5692의 자궁 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Bcl-xL 단클론 항체(Cell Signaling Technology 카탈로그 번호 2764)로 프로빙하였다. 인간 자궁의 세포가 Bcl-2가 아닌, Mcl-1에 대한 IHC 검정에 대한 적절한 음성 대조군을 제공한다는 결과가 확립되었다. Bcl-xL에 대한 결과는 Bcl-xL이 내부 음성을 가지고 있음을 보여주었다.
도 23. IHC 검정에 대한 음성 대조군의 평가. 왼쪽 패널: 환자 12209의 난소 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Mcl-1 단클론 항체 11P5로 프로빙하였다. 중앙 패널: 환자 12209의 난소 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Bcl-2 단클론 항체(Agilent DAKO 카탈로그 번호 M0887)로 프로빙하였다. 오른쪽 패널: 환자 12209의 난소 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Bcl-xL 단클론 항체(Cell Signaling Technology 카탈로그 번호 2764)로 프로빙하였다. 인간 난소 조직의 세포가 Mcl-1, Bcl-2, 또는 Bcl-xL에 대한 IHC 검정에 대한 적절한 음성 대조군을 제공하지 않는다는 결과가 확립되었다.
도 24. IHC 검정에 대한 음성 대조군의 평가. 왼쪽 패널: 환자 12400의 뇌 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 토끼 음성 대조군으로 프로빙하였다. 중앙 패널: 환자 12400의 뇌 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 마우스 음성 대조군으로 프로빙하였다. 오른쪽 패널: 환자 12400의 뇌 조직으로부터의 세포를 IHC 검정에서 항-Mcl-1 단클론 항체 11P5로 프로빙하였다. 인간 뇌의 세포가 백그라운드 염색으로 인해 음성 대조군으로 사용하기에 부적절하다는 결과가 입증되었다.
특정 항-Mcl-1 항체를 발견하게 된 면역화 요법, B 세포 스크리닝 노력 및 재조합 항체 구제 노력이 본원에 기술되어 있다. 이러한 노력으로부터 생성된 항체는 당업계에 공지된 항체와 비교하여 놀랍도록 우수한 결합 친화도 및 특이성을 입증하였으며, 이는 예를 들어 암 치료의 모니터로서 시험관 내 및 생체 내에서 Mcl-1 수준을 모니터링하기 위한 스크리닝 검정을 개발하기 위한 기초를 제공하였다.
재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 조직 배양 및 형질변환에 통상적인 기법(예를 들어 전기천공법, 리포펙션(lipofection))이 사용될 수 있다. 효소 반응 및 정제 기법은 제조업체의 사양에 따라, 또는 당업계에서 보편적으로 달성되는 바와 같이 또는 본 명세서에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 상기 기법 및 절차는 일반적으로, 당업계에 잘 공지된 방법에 따라, 및 본 명세서 전체를 통해 인용되고 고찰된 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참조문헌에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.]을 참조하며, 이는 임의의 목적을 위해 참고로 본원에 포함된다.
구체적인 정의가 제공되지 않는 한, 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의학적 및 약제학적 화학과 관련되어 이용된 명명법, 및 실험적 절차 및 기법은 당업계에 잘 공지되고 보편적으로 사용되는 것이다. 마찬가지로, 화학 합성, 화학 분석, 약제학적 제제, 제형 및 전달, 및 환자의 치료에 대한 통상적인 기법들이 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약(about)"은 실험 오차에 기인하는 변화를 설명하고자 하는 것이다. 본원에 보고된 모든 측정 값은 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, 용어 "약"이 명확하게 사용되는지 여부에 상관없이 해당 용어에 의해 변형되는 것으로 이해된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 달리 명시적으로 표시되지 않는 한, 복수의 지시 대상을 포함한다. 용어 "예를 들어(for example)" 및 "예컨대(such as)" 및 이의 문법적 동의어의 경우, 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, "제한 없이(and without limitation)"라는 어구가 이어지는 것으로 이해된다.
본 개시내용의 항체와 관련하여 "생물학적 특성", "생물학적 특징"이라는 어구 및 용어 "활성"은 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 에피토프 친화성 및 특이성(예를 들어, 인간 Mcl-1에 대한 항-인간 Mcl-1 인간 항체 결합), 표적화된 폴리펩티드의 활성(예를 들어, Mcl-1 활성)을 길항하는 능력, 항체의 생체 내 안정성 및 항체의 면역원성 특성을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 당업계에서 인식되는 항체의 다른 확인 가능한 생물학적 특성 또는 특징은 예를 들어 (Mcl-1의 비인간 상동체 또는 일반적으로 다른 단백질 또는 조직과의) 교차-반응성 및 포유류 세포에서 단백질의 높은 발현 수준을 보존하는 능력을 포함한다. 상기 특성 또는 특징은 ELISA, 경쟁적 ELISA, 표면 플라스몬 공명 분석, 시험관 내 및 생체 내 중화 검정, 및 인간, 영장류 또는 임의의 기타 적절한 공급원을 포함하는 상이한 공급원으로부터의 조직 절편을 사용한 면역조직화학을 포함하나 이에 제한되지 않는 당 분야에서 인정된 기법을 사용하여 관찰 또는 측정될 수 있다. 항-인간 Mcl-1 인간 항체의 특정 활성 및 생물학적 특성은 하기 실시예에서 더 상세히 기술된다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "생물학적 시료"는 살아 있는 것 또는 이전에 살아 있던 것으로부터의 임의의 양의 성분을 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 이러한 살아 있는 것으로는, 인간, 마우스, 원숭이, 래트, 토끼, 말, 소, 양, 염소 및 다른 동물이 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다. 이러한 성분으로는, 혈액, 혈청, 소변, 세포, 기관, 조직, 뼈, 골수, 림프절 및 피부가 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다.
본원에서 사용되는 용어 "표지" 또는 "표지된"은, 예를 들어, 방사성 표지된 아미노산의 혼입에 의한 또는 표지된 아비딘(예를 들어, 광학 또는 비색 방법에 의해 검출될 수 있는 형광 마커, 화학발광 마커 또는 효소 활성과 같은 검출 가능한 마커를 포함하는 스트렙타비딘)에 의해 검출될 수 있는 비오틴 모이어티의 폴리펩티드에 대한 부착에 의한 검출 가능한 마커의 혼입을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 표지는 또한 치료적일 수 있다. 폴리펩티드 및 당단백질을 표지하는 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 본원에 개시된 방법에서 유리하게 사용될 수 있다. 폴리펩티드에 대한 표지의 예는 방사성동위원소 또는 방사성핵종, 예컨대, 3H, 14C, 15N, 35S, 90U, 99mTc, 111In, 125I, 및 131I, 형광 라벨(예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트 또는 FITC, 로다민, 또는 란탄족 인광체), 효소 라벨(예를 들어, 겨자무과산화효소, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광 라벨, 합텐 라벨, 예컨대 바이오틴일기, 및 2차 리포터(예를 들어, 류신 지퍼쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 또는 에피토프 태그)에 의해 인식되는 사전결정된 폴리펩티드 에피토프를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 표지는 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 암(예컨대 (CH2)n, 여기서 n은 약 20 미만임)에 의해 부착된다.
본원에서 사용되고 대상에 적용되는 "자연 발생" 또는 "천연"이라는 용어는 대상이 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 의미한다. 예를 들어, 천연의 공급원으로부터 단리될 수 있고 인간에 의해 의도적으로 변형되지 않은 유기체(바이러스 포함)에 존재하는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열은 자연 발생적이다. 본원에서 사용되는 용어 "비자연 발생" 또는 "비천연"은 자연계에 존재하지 않거나 인간에 의해 구조적으로 변형 또는 합성된 물질을 의미한다. 예를 들어, "비-자연 발생"은 당업계에 공지된 돌연변이유발 기법을 사용하여 생성될 수 있는 폴리뉴클레오티드 변이체와 같은 변이체 또는 그러한 폴리뉴클레오티드 변이체에 의해 생성된 폴리펩티드 변이체를 지칭할 수 있다. 이러한 변이체는 예를 들어 하나 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있는 뉴클레오티드 치환, 결실 또는 부가에 의해 생성된 것을 포함한다. 폴리뉴클레오티드 변이체는 암호화 또는 비-암호화 영역 또는 둘 다에서 변경될 수 있다. 암호화 영역의 변경은 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 생성할 수 있다. 이들 중 특히 항-Mcl-1 항체의 특성 및 활성을 변경하지 않는 사일런트 치환, 부가, 결실 및 보존적 치환을 들 수 있다. 당업자는 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 그러한 변이체를 생성하는 방법을 쉽게 결정할 수 있다. 용어 "자연 발생 뉴클레오티드"는 데옥시리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드를 포함한다. 용어 "변형된 뉴클레오티드"는 변형되거나 치환된 당 그룹 등을 갖는 뉴클레오티드를 포함한다. 용어 "올리고뉴클레오티드 결합"은 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포라닐라데이트 및 포스포로아미데이트 결합 등을 포함한다. 예를 들어, 문헌[LaPlanche et al., Nucl Acids Res., 14:9081 (1986)]; [Stec et al., J Am. Chem. Soc., 106:6077 (1984)]; [Stein et al., Nucl. Acid. Res., 16:3209 (1988)]; [Zon et al., Anti-Cancer Drug Design, 6:539 (1991)]; [Zon et al., OLIGONUCLEOTIDES AND ANALOGUES: A PRACTICAL APPROACH, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed.; 1991), Oxford University Press, Oxford England]; Stec et al., 미국 특허 제5,151,510호; [Uhlmann et al., Chemical Reviews, 90:543 (1990)]을 참조하며, 이의 개시내용은 임의의 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다. 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드의 검출 또는 이의 혼성화를 가능하게 하는 검출가능한 표지를 포함할 수 있다.
용어 "단리된 단백질"은 대상 단백질은 (1) 그것과 함께 천연에서 발견되는 적어도 일부의 다른 단백질이 없거나, (2) 동일한 공급원으로부터의, 예를 들어 동일한 종으로부터의 다른 단백질이 본질적으로 없거나, (3) 상이한 종의 세포에 의해 발현되거나, (4) 천연에서 그와 결합된 폴리뉴클레오티드, 지질, 탄수화물 또는 다른 물질의 적어도 약 50%로부터 분리되었거나, (5) "단리된 단백질"이 자연적으로 결합된 단백질 부분과 (공유 또는 비공유 상호작용에 의해) 결합되지 않거나, (6) 그것이 천연에서 결합되지 않은 폴리펩티드와 작동 가능하게 (공유 또는 비공유 상호작용에 의해) 결합되거나, 또는 (7) 천연에서 생기지 않는다는 것을 의미한다. 이러한 단리된 단백질은 합성 기원의 게놈 DNA, cDNA, mRNA 또는 다른 RNA, 또는 이들의 임의의 조합으로 암호화될 수 있다. 일 실시형태에서, 단리된 단백질은 그의 사용을 방해하는 천연 환경에서 발견되는 단백질 또는 폴리펩티드 또는 다른 오염물질이 실질적으로 없다.
용어 "폴리펩티드" 또는 "단백질"은 천연 단백질, 즉 자연 발생 세포 및 구체적으로 비-재조합 세포, 또는 유전자 조작된 세포 또는 재조합 세포에 의해 생산되는 단백질의 서열을 갖는 분자를 의미하고, 천연 단백질의 아미노산 서열을 갖는 분자, 또는 천연 서열의 하나 이상의 아미노산으로부터의 결실, 이에 대한 부가, 및/또는 이의 치환을 갖는 분자를 포함한다. 용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 구체적으로는 항-Mcl-1 항체의 하나 이상의 아미노산으로부터의 결실, 이에 대한 부가 및/또는 이의 치환을 갖는 항-Mcl-1 항체 또는 서열을 포함한다.
용어 "폴리펩티드 단편"은 아미노-말단 결실, 카복실-말단 결실 및/또는 내부 결실을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 단편은 적어도 5 내지 약 500개의 아미노산 길이이다. 특정 실시형태에서, 단편은 적어도 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 또는 450개 아미노산 길이임을 알 것이다. 특히 유용한 폴리펩티드 단편은 결합 도메인, 특히 항원-결합 도메인을 포함하는 기능적 도메인을 포함하며, 특히 항원은 인간 Mcl-1의 에피토프이다. 항-Mcl-1 항체의 경우, 유용한 단편은 CDR 영역, 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인, 항체 사슬의 일부 또는 2개의 CDR을 포함하는 바로 이의 가변 영역, 등을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다.
용어 "항원"은 선택적인 결합제, 예컨대 항체에 의해 결합될 수 있고, 추가적으로 해당 항원의 에피토프에 결합할 수 있는 항체를 생성하기 위해 동물에서 사용될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.
"항원 결합 단백질"은 항원에 특이적으로 결합하는 단백질이다. 예시적인 항원 결합 단백질은 임의의 형태의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 상의 임의의 부위를 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프 결정소는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기 또는 설폰일기와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹화를 포함할 수 있고, 특정 실시형태에서, 특정 3차원 구조적 특징 및/또는 특정 하전 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이다. 특정 실시형태에서, 항체는 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물에서 그의 표적 항원을 우선적으로 인식할 때 항원에 특이적으로 결합한다고 한다. 특정 실시형태에서, 항체는 평형 해리 상수가 약 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 10-12 M, 또는 약 10-12 M 미만일 때 항원에 특이적으로 결합한다고 한다.
항체가 기준 항체와 "본질적으로 동일한 에피토프"에 결합하는 것은 두 항체가 동일하거나 입체적으로 중첩하는 에피토프를 인식하는 경우이다. 2개의 항체가 동일하거나 입체적으로 중첩하는 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하기 위한 가장 널리 사용되고 신속한 방법은 표지된 항원 또는 표지된 항체를 사용하여 다양한 형식으로 구성될 수 있는 경쟁 분석이다. 일반적으로, 항원을 기재에 고정시키고, 표지된 항체의 결합을 차단하는 표지되지 않은 항체의 능력을 방사성 에피토프 또는 효소 표지를 사용하여 측정한다.
본 발명에 따른 항체 결합 및 특이성을 평가함에 있어서, 과량의 항체가 수용체에 결합되는 리간드의 양을 적어도 약 20%, 40%, 60%, 80%, 85%, 또는 그 이상(예를 들어, 시험관 내 경쟁적 결합 검정을 사용하여 측정됨) 만큼 감소시킬 때 항체는 수용체에 대한 리간드의 부착을 실질적으로 억제한다.
"항체" 또는 "항체 펩티드(들)"는 온전한 항체 또는 특이적 결합을 위해 온전한 항체와 경쟁하는 그의 결합 단편을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 결합 단편은 재조합 DNA 기법에 의해 생성된다. 추가적인 실시형태에서, 결합 단편은 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성된다. 결합 단편은 F(ab), F(ab'), F(ab')2, Fv, 및 단일 쇄 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"단리된" 항체는 자연 환경의 성분으로부터 확인되어 분리 및/또는 회수된 것이다. 자연 환경의 오염 물질은 분석, 진단 또는 치료에서 항체 사용을 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 물질을 포함할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 항체는 (1) Lowry 방법에 의해 측정시 95 중량% 초과, 또는 99 중량% 초과의 항체까지, (2) 스피닝 컵 서열분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시 블루(Coomassie blue) 또는 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건에서 SDS-PAGE에 의해 균질하게 정제된다. 단리된 항체는 항체의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않기 때문에 재조합 세포 내의 제자리(in situ) 항체를 포함한다.
"중화 항체"는 그것이 결합하는 표적 항원의 이펙터 기능을 차단하거나 실질적으로 감소시킬 수 있는 항체 분자이다. 따라서, "중화" 항-Mcl-1 항체는 Mcl-1의 이펙터 기능을 차단하거나 실질적으로 감소시킬 수 있다. "실질적으로 감소시킨다"는 표적 항원(예를 들어, 인간 Mcl-1)의 이펙터 기능의 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 또는 적어도 약 90% 감소를 의미하는 것으로 의도된다.
용어 "특이적 결합제"는 표적에 특이적으로 결합하는 자연 발생 또는 비-자연 발생 분자를 의미한다. 특이적 결합제의 예는 단백질, 펩티드, 핵산, 탄수화물 및 지질을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 특이적 결합제는 항체이다.
용어 "Mcl-1에 대한 특이적 결합제"는 Mcl-1의 임의의 부분에 특이적으로 결합하는 특이적 결합제를 지칭한다. 특정 실시형태에서, Mcl-1에 대한 특이적 결합제는 Mcl-1에 특이적으로 결합하는 항체이다.
예를 들어, 항체가 표지되었을 때 항체가 상응하는 비-표지 항체에 의해 그의 표적으로부터 멀리 경쟁될 수 있다면 항체는 표적에 "특이적으로 결합한다".
본원에서 사용되는 용어 "면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편"은 적어도 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 CDR을 함유하는 폴리펩티드 단편을 지칭한다. 본 개시내용의 면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편은 항원에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, 항원은 수용체에 특이적으로 결합하는 리간드이다. 이들 실시형태에서, 본 개시내용의 면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편의 결합은 리간드가 그의 수용체에 결합하는 것을 방지하여, 수용체와 리간드의 결합으로 인한 생물학적 반응을 방해한다. 한 실시형태에서, 본 개시내용의 면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편은 Mcl-1에 특이적으로 결합한다. 바람직하게는, 단편은 인간 Mcl-1에 특이적으로 결합한다.
용어 "작동 가능하게 연결된"은 용어가 적용되는 구성성분이 적합한 조건 하에 그들의 고유한 기능을 수행하거나, 또는 예상되거나 의도된대로 작동하도록 허용하는 관계에 있음을 의미한다. 예를 들어, 단백질 암호화 서열에 "작동가능하게 연결된" 제어 서열은 단백질 암호화 서열의 발현이 제어 서열에 의해 적어도 부분적으로 제어되도록 거기에 결찰되며, 이는 전형적으로 제어 서열(들)의 전사 활성과 양립할 수 있는 조건 하에서 암호화 서열의 발현을 초래한다.
용어 "약제학적 제제", "제제" 또는 "약물"은 대상체, 예를 들어 환자에게 적절하게 투여될 때 원하는 치료 효과를 유도할 수 있는 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대분자 또는 생물학적 물질로부터 제조된 추출물을 지칭한다. 본원에 개시된 항체 중 하나 또는 다수를 포함하는 약제학적 조성물과 관련하여 표현 "약제학적 유효량"은 환자와 같은 대상체에서, 건강한 대상체에서 관찰되는 것과 비슷한 수준으로 외부 자극에 대한 민감도 역치를 반환하여 이러한 민감도 역치의 감소를 없앨 수 있는 상기 약제학적 조성물의 양을 의미하는 것으로 이해된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "부형제(excipient)"는 활성 약제학적 성분(active pharmaceutical ingredient: API) 이외의 임의의 약제학적으로 허용 가능한 첨가제, 담체, 희석제, 보조제 또는 기타 성분을 의미하며, 이는 제형화를 위해 및/또는 환자에 대한 투여를 위해 일반적으로 포함된다. Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th Edition, Rowe, et al., eds., Pharmaceutical Press, 2005, Hardback, 928, 0853696187.
본원에서 사용되는 용어 "폴리뉴클레오티드"는 길이가 적어도 10개 뉴클레오티드인 단일가닥 또는 이중가닥 핵산 중합체를 의미한다. 특정 실시형태에서, 폴리뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유형 중 하나의 변형된 형태일 수 있다. 변형은 염기 변형, 예컨대 브롬유리딘, 리보스 변형, 예컨대 아라비노시드 및 2',3'-디데옥시리보스, 및 뉴클레오티드간 결합 변형, 예컨대 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포라닐라데이트 및 포스포로아미데이트를 포함한다. 용어 "폴리뉴클레오티드"는 구체적으로 단일가닥 및 이중가닥 형태의 DNA 또는 RNA를 포함한다.
본원에 사용되는 용어 "올리고뉴클레오티드"는 자연 발생 및/또는 비-자연 발생 올리고뉴클레오티드 결합에 의해 함께 연결된 자연 발생 및 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 올리고뉴클레오티드는 일반적으로 단일가닥이고 길이가 200개 이하의 뉴클레오티드인 구성원을 포함하는 폴리뉴클레오티드 하위집합이다. 특정 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 길이가 10 내지 60개의 뉴클레오티드이다. 특정 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 길이가 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 내지 40개의 뉴클레오티드이다. 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어 유전적 돌연변이체의 구성에서 사용하기 위해 단일가닥 또는 이중가닥일 수 있다. 본 개시내용의 올리고뉴클레오티드는 단백질-암호화 서열과 관련하여 센스 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드일 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "제어 서열"은 이들이 작동가능하게 연결된 암호화 서열의 발현, 프로세싱 및/또는 세포내 국소화에 영향을 미칠 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 이러한 제어 서열의 특성은 숙주 유기체에 의존할 수 있다. 특정 실시형태에서, 원핵생물에 대한 제어 서열은 프로모터, 리보솜 결합 부위, 및 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 다른 특정 실시형태에서, 진핵생물에 대한 제어 서열은 전사 인자, 전사 인핸서 서열, 전사 종결 서열 및 폴리아데닐화 서열에 대한 하나 또는 복수의 인식 부위를 포함하는 프로모터를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, "제어 서열"은 리더 서열 및/또는 융합 상대 서열을 포함할 수 있다.
용어 "벡터"는 그것이 연결된 또 다른 핵산을 세포 내로 운반할 수 있는 핵산 분자를 포함한다. 벡터의 한 가지 유형은 "플라스미드"이며, 이는 추가적인 DNA 세그먼트가 결찰될 수 있는 원형의 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 벡터의 다른 유형은 바이러스 벡터이되, 추가적인 DNA 세그먼트는 바이러스 게놈에 결찰될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자율적인 복제를 할 수 있다(예를 들어, 박테리아 복제기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유류 벡터)가 숙주 세포에 도입 시 숙주 세포 게놈에 통합될 수 있으며, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 또한, 특정 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결되는 유전자 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 "재조합 발현 벡터"(또는 단순히, "발현 벡터")로서 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법의 실시에 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드이다. 본 명세서에서, 플라스미드가 벡터의 가장 통상적으로 사용되는 형태이기 때문에 "플라스미드"와 "벡터"는 상호 호환 가능하게 사용될 수 있다. 그러나, 동등한 기능을 제공하는 바이러스 벡터(예를 들어, 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스)와 같은 다른 형태의 발현 벡터도 본 개시내용에서 고려된다.
"재조합 숙주 세포"(또는 간단히 "숙주 세포")라는 어구는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 포함한다. 당업자는 이러한 용어가 특정 대상체 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손을 지칭하는 것으로 의도됨을 이해할 것이다. 특정 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향에 기인하여 다음 세대에서 일어날 수 있기 때문에, 이러한 자손은 사실 모 세포와 동일하지 않을 수도 있지만, 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주 세포"의 범주 내에 여전히 포함된다. 박테리아, 효모, 바큘로바이러스 및 포유동물 발현 시스템(뿐만 아니라 파지 디스플레이 발현 시스템)을 포함하는 다양한 숙주 발현 시스템을 사용하여 본 개시내용의 항체를 발현시킬 수 있다. 적합한 박테리아 발현 벡터의 예는 pUC19이다. 항체를 재조합적으로 발현시키기 위해, 항체의 면역글로불린 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 DNA 단편을 운반하는 하나 이상의 재조합 발현 벡터로 숙주 세포를 형질감염시켜, 경쇄 및 중쇄가 숙주 세포에서 발현되고 숙주 세포가 배양되어 조건화 배지가 생성되는 배지 내로 분비될 수 있도록 한다. 항체는 당업계에 잘 알려진 기법을 사용하여 조건화된 배지로부터 회수될 수 있다. 표준 재조합 DNA 방법론을 사용하여 항체 중쇄 및 경쇄 유전자를 얻고, 이들 유전자를 재조합 발현 벡터에 통합하고, 벡터를 문헌[Sambrook et al., 2001, MOLECULAR CLONING, LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratories, Ausubel, F. M. et al., (eds.), CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Associates, (1989)] 및 미국 특허 제4,816,397호에 기재된 것과 같은 숙주 세포에 도입한다.
용어 "형질도입"은 일반적으로 파지에 의해 하나의 박테리아에서 다른 박테리아로 유전자를 전달하는 것을 지칭하는 데 사용된다. "형질도입"은 또한 레트로바이러스에 의한 진핵 세포 서열의 획득 및 전달을 지칭한다.
용어 "형질감염"은 세포에 의한 외래 또는 외인성 DNA의 흡수를 지칭하기 위해 사용되며, 외인성 DNA가 세포막 내부에 도입되었을 때 세포는 "형질감염"된 것이다. 다수의 형질감염 기법이 당업계에 잘 알려져 있으며, 본원에 개시되어 있다. 예를 들어, 문헌[Graham et al., 1973, Virology 52-456; Sambrook et al., 2001, MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratories; Davis et at, 1986, BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Elsevier; and Chu et al., 1981, Gene 13: 197]을 참조한다. 이러한 기법은 하나 이상의 외인성 DNA 모이어티를 적합한 숙주 세포에 도입하기 위해 사용될 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "형질전환"은 세포의 유전적 특징의 변화를 지칭하며, 세포는 새로운 DNA를 포함하도록 변형될 때 형질전환되었다고 한다. 예를 들어, 세포는 그의 원래의 상태에서 유전적으로 변형된 곳에서 형질전환된다. 형질감염 또는 형질도입 후, 형질전환 DNA는 세포의 염색체 내로 물리적으로 통합되어 세포로부터의 DNA와 재조합될 수 있거나, 복제되지 않고 일시적으로 에피솜 요소로서 유지될 수 있거나, 플라스미드로서 독립적으로 복제할 수 있다. DNA가 세포 분열과 함께 복제될 때 세포는 안정적으로 형질전환된 것으로 간주된다.
모든 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 물 및 용매와 같은 다른 물질과 함께 존재할 수 있다(예를 들어, 수화물 및 용매화물).
항원 결합 단백질
Mcl-1에 결합하는 항원-결합 단백질이 본원에 제공된다. 다양한 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 Mcl-1의 이소형 1에 결합하여 아폽토시스를 억제함으로써 세포 생존을 향상시킨다. 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 당해 분야에 알려진 많은 형태의 항원-결합 단백질 중 임의의 하나일 수 있다. 다양한 실시형태에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 항체, 항원-결합 항체 단편, 항체 단백질 생성물, 또는 항체 유도체의 형태를 취한다.
다양한 실시형태에서, 항원-결합 단백질은 항체를 포함하거나, 항체로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다. 본원에서 사용되는 용어 "항체"는, 중쇄와 경쇄를 포함하고 가변 영역과 불변 영역을 포함하는 통상적인 면역글로불린 형태를 갖는 단백질을 지칭한다. 예를 들어, 항체는 2개의 동일한 폴리펩티드 사슬 쌍의 "Y형" 구조인 IgG일 수 있으며, 각 쌍은 (일반적으로 약 25 kDa의 분자량을 갖는) 하나의 "경"쇄 및 (일반적으로 약 50~70 kDa의 분자량을 갖는) 하나의 "중"쇄를 갖는다. 항체는 가변 영역 및 불변 영역을 갖는다. IgG 형식에서, 가변 영역은 일반적으로 약 100~110개 이상의 아미노산 길이이며, 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 항원 인식을 주로 담당하고, 상이한 항원에 결합하는 다른 항체들 사이에서 실질적으로 다르다. 불변 영역은 항체가 면역 체계의 세포와 분자를 모집할 수 있도록 한다. 가변 영역은 자연 발생 경쇄 및 중쇄의 N-말단 영역에서 발견되는 반면, 불변 영역은 자연 발생 중쇄 및 경쇄의 C-말단부로 제조된다. (문헌[Janeway et al., "Structure of Antibody Molecule and the Immunoglobulin Genes", Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 4th ed. Elsevier Science Ltd./Garland Publishing, (1999) 참조).
항체의 CDR의 일반적인 구조 및 특성은 잘 알려져 있다. 간략하게, 항체 스캐폴드에서, CDR은 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 내에 포함되어 항원 결합 및 인식을 주로 담당하는 영역을 구성한다. 가변 영역은 전형적으로 적어도 3개의 중쇄 또는 경쇄 CDR(문헌[Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, Md.]; 또한 문헌[Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917]; 문헌[Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-883] 참고)을 프레임워크 영역(문헌[Kabat et al., 1991]에 의하면, 프레임워크 영역 1~4, FR1, FR2, FR3, 및 FR4로 표기됨; 또한 상기 문헌[Chothia and Lesk, 1987] 참고) 내에 포함한다. 관련된 실시형태에서, 프레임워크의 잔기가 변경된다. 변경될 수 있는 중쇄 프레임워크 영역은 중쇄 CDR 잔기를 둘러싸는 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4로 지정된 영역 내에 있으며, 변경될 수 있는 경쇄 프레임워크 영역의 잔기는 경쇄 CDR 잔기를 둘러싸는 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4로 지정된 영역 내에 있다. 프레임워크 영역 내의 아미노산은 예를 들어 인간 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크에서 확인된 임의의 적합한 아미노산으로 대체될 수 있다.
항체는 당해 분야에 알려진 임의의 불변 영역을 포함할 수 있다. 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되며, 항체의 이소형을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 정의한다. IgG에는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하는(이에 한정되지 않음) 여러 서브클래스가 있다. IgM에는 IgM1 및 IgM2를 포함하는(이에 한정되지 않음) 서브클래스가 있다. 본 발명의 실시형태는 항체의 이러한 모든 클래스 또는 이소형을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 예를 들어 카파형 또는 람다형 경쇄 불변 영역, 예를 들어 인간 카파형 또는 람다형 경쇄 불변 영역일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 예를 들어 알파형, 델타형, 엡실론형, 감마형, 또는 뮤형 중쇄 불변 영역, 예를 들어 인간 알파형, 델타형, 엡실론형, 감마형, 또는 뮤형 중쇄 불변 영역일 수 있다. 따라서, 다양한 실시형태에서, 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 중 어느 하나를 포함하는 이소형 IgA, IgD, IgE, IgM, 또는 IgG의 항체이다. 다양한 양태에서, 항체는 반감기/안정성을 향상시키거나 항체를 발현/상업적 생산에 더 적합하도록 하기 위해 자연 발생적 대응물에 비해 하나 이상의 아미노산 변형을 포함하는 불변 영역을 포함한다. 다양한 경우에, 항체는 자연 발생 대응물에 존재하는 C-말단 Lys 잔기가 제거되거나 절단된 불변 영역을 포함한다.
항체는 단클론 항체일 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 포유류, 예를 들어 마우스, 토끼, 염소, 말, 닭, 햄스터, 인간 등에 의해 생성된 자연 발생 항체와 실질적으로 유사한 서열을 포함한다. 이와 관련하여, 항체는 포유류 항체, 예를 들어 마우스 항체, 토끼 항체, 염소 항체, 말 항체, 닭 항체, 햄스터 항체, 인간 항체 등으로 간주될 수 있다. 특정 양태에서, 항원-결합 단백질은 인간 항체와 같은 항체이다. 특정 양태에서, 항원-결합 단백질은 키메라 항체 또는 인간화 항체이다. 용어 "키메라 항체"는 2개 이상의 상이한 항체로부터의 도메인을 포함하는 항체를 지칭한다. 키메라 항체는 예를 들어, 한 종으로부터의 불변 도메인 및 제2 종으로부터의 가변 도메인을 포함할 수 있거나, 보다 일반적으로는, 적어도 2개의 종으로부터의 아미노산 서열의 스트레치를 포함할 수 있다. 키메라 항체는 또한, 동일한 종 내에 2개 이상의 상이한 항체의 도메인을 포함할 수 있다. 항체와 관련하여 사용될 때 용어 "인간화"는 인간 항체 영역과 더욱 유사하도록 조작된 영역을 가져서 인간화 형태의 항체의 면역원성을 감소시키는 항체를 지칭한다. 전형적으로, 조작은 항체의 프레임워크 영역 및 불변 영역과 같은 CDR 이외의 영역에 초점을 맞춘다. 이 조작은 원래 비인간 항체의 결합 특성을 유지하면서 면역원성을 감소시킨다. 예를 들어, 인간화는 마우스 항체와 같은 비인간 항체로부터의 CDR을 인간 항체에 이식하는 것을 포함할 수 있다. 인간화는 또한, 비인간 서열을 인간 서열과 더 유사하게 하기 위해 선택적 아미노산 치환을 수반할 수 있다. 인간 항체 중쇄 및 경쇄 불변 영역에 대한 서열 정보를 포함하는 정보는 Uniprot 데이터베이스뿐만 아니라 항체 조작 및 생성 분야에 잘 알려진 다른 데이터베이스를 통하여 공개적으로 입수 가능하다. 예를 들어, IgG2 불변 영역은 본원에 참조로 포함된 Uniprot 데이터베이스로부터 Uniprot 번호 P01859로 입수 가능하다.
항체는 파파인 및 펩신과 같은 효소에 의해 단편으로 절단될 수 있다. 파파인은 항체를 절단하여 2개의 Fab 단편 및 단일 Fc 단편을 생성한다. 펩신은 항체를 절단하여 F(ab')2 단편 및 pFc' 단편을 생성한다. 본 개시내용의 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 항체의 항원-결합 단편(즉, 항원-결합 항체 단편, 항원-결합 단편, 또는 항원-결합 부분)이다. 다양한 예에서, 항원-결합 항체 단편은 Fab 단편 또는 F(ab')2 단편이다.
항체의 구조는 적어도 약 12~150 kDa의 분자량 범위에 걸친 점점 더 다양한 대체 항체 형태를 생성하기 위해 활용되어 왔고, 단량체(n = 1)에서 이량체(n = 2), 삼량체(n = 3), 사량체(n = 4), 및 가능하게는 그 이상에 이르기까지의 결합가(n) 범위를 가지며, 이러한 대체 항체 형태는 본원에서 "항체 단백질 생성물"로 지칭된다. 항체 단백질 생성물은 전체 항체 구조에 기반한 것 및 완전 항원-결합 능력을 보유하는 항체 단편을 모방하는 것, 예를 들어, scFv, Fab 및 VHH/VH를 포함한다. 동족 항체의 완전한 항원 결합 부위를 보유하는 비교적 작은 항원-결합 단편은 Fv 단편으로, 이는 전적으로 가변(V) 영역으로 구성된다. 가용성의 플렉서블 아미노산 펩티드 링커를 사용하여 분자의 안정화를 위해 scFv(단일쇄 단편 가변, 또는 더 일반적으로, 단일쇄 가변 단편)를 형성할 때 VL 및 VH 영역을 연결하거나, V 영역에 불변(C) 도메인을 추가하여 Fab 단편(단편, 항원 결합)을 생성한다. scFv 및 Fab 단편은 둘 다 숙주 세포, 예를 들어 원핵생물 숙주 세포에서 쉽게 생성될 수 있다. 다른 항체 단백질 생성물은 이황화 결합 안정화 scFv(ds-scFv), 단일쇄 Fab(scFab), 뿐만 아니라 올리고머화 도메인에 연결된 scFv로 구성된 다양한 형식을 포함하는 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디 또는 미니바디(miniAb)와 같은 이량체 및 다량체 항체 형식을 포함한다. 가장 작은 단편은 낙타 중쇄 항체 및 단일 도메인 항체(sdAb)의 VHH/VH 영역이다. 새로운 항체 형식을 생성하는 데 가장 흔히 사용되는 빌딩 블록은 약 15개 아미노산 잔기의 펩티드 링커에 의해 연결된 중쇄 및 경쇄로부터의 V 도메인(VH 및 VL 도메인)을 포함하는 단일쇄 가변(V) 도메인 항체 단편(scFv)이다. 펩티바디 또는 펩티드-Fc 융합체는 또 다른 항체 단백질 생성물이다. 펩티바디의 구조는 Fc 도메인 상에 이식된 생물 활성 펩티드로 구성된다. 펩티바디는 당해 분야에 알려져 있다. 본 개시내용의 항원-결합 단백질의 다른 형태인 융합 단백질은 키메라 항원 수용체(CAR) 및 이중특이성 T-세포 인게이저(BiTES)를 포함한다.
본 개시내용에 따른 또 다른 항체 단백질 생성물은 단일쇄 항체(SCA); 상기 언급된 디아바디; 트리아바디; 및 테트라바디; 이중특이성 또는 삼중특이성 항체 등을 포함한다. 이중특이성 항체는 여러 가지 주요한 부류로 나눌 수 있다: BsIgG, 부가형 IgG(appended IgG), 이중특이성 항체(BsAb) 단편, 이중특이성 융합 단백질 및 BsAb 접합체. 예를 들어, 문헌[Spiess et al., Molecular Immunology 67(2) Part A: 97-106 (2015)]를 참조한다.
다양한 양태에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 이들 항체 단백질 생성물 중 임의의 하나를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 구성된다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 scFv, Fab VHH/VH, Fv 단편, ds-scFv, scFab, 이량체 항체, 다량체 항체(예를 들어, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디), miniAb, 낙타과 중쇄 항체의 펩티바디 VHH/VH, sdAb, 이중특이성 또는 삼중특이성 항체, BsIgG, 부가형 IgG, BsAb 단편, 이중특이성 융합 단백질 또는 BsAb 접합체 중 임의의 하나를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 구성된다.
다양한 예에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 단량체 형태, 또는 폴리머(예를 들어, 올리고머, 또는 다량체) 형태의 항체 단백질 생성물이다. 항체가 2개 이상의 별개의 항원 결합 영역 단편을 포함하는 특정 실시형태에서, 항체는 항체에 의해 인식되고 결합되는 별개의 에피토프의 수에 따라 이중특이성, 삼중특이성, 또는 다중특이성, 또는 2가, 3가, 또는 다가로 간주된다. 특정 실시형태에서, "다중특이성" 또는 "다기능성" 항체 이외의 2가 항체는 동일한 항원 특이성을 갖는 결합 부위를 포함하는 것으로 이해된다.
다양한 실시형태에서, 항-Mcl-1 항체 또는 이의 항체 변이체는 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단클론 항체, 재조합 항체, 항원-결합 항체 단편, 단쇄 항체, 단량체성 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, scFab 단편, IgG1 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, 및 IgG4 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다양한 양태에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 치료제에 연결된다. 치료제는 화학요법제, 사이토카인 및 성장 인자, 세포독성제 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 임의의 치료제일 수 있다.
친화도 및 결합력
본원에서 제공되는 항원-결합 단백질은 비공유적이고 가역적인 방식으로 Mcl-1에 결합한다. 다양한 실시형태에서, Mcl-1에 대한 항원-결합 단백질의 결합 강도는 Mcl-1 에피토프와 항원-결합 단백질의 결합 부위간 상호작용 강도의 척도인 그의 친화도의 관점에서 기술될 수 있다. 다양한 양태에서, 본원에 제공되는 항원-결합 단백질은 Mcl-1에 대해 높은 친화도를 가지므로, 친화도가 낮은 항원-결합 단백질보다 더 짧은 기간에 더 많은 양의 Mcl-1에 결합할 것이다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 적어도 105 mol-1, 적어도 106 mol-1, 적어도 107 mol-1, 적어도 108 mol-1, 적어도 109 mol-1, 또는 적어도 1010 mol-1 또는 적어도 1010 mol-1 적어도 1010 mol-1인 평형 결합 상수 KA를 갖는다. 당업자가 이해하는 바와 같이, KA는 pH, 온도, 및 완충제 조성을 포함하는 인자에 의해 영향을 받을 수 있다.
다양한 실시형태에서, Mcl-1에 대한 항원-결합 단백질의 결합 강도는 민감성의 관점에서 기술될 수 있다. KD는 항원 결합 단백질과 Mcl-1 간의 평형 해리 상수, 즉 koff/kon의 비이다. KD와 KA는 반비례한다. KD 값은 항원-결합 단백질의 농도(특정 실험에 필요한 항원-결합 단백질의 양)와 관계가 있으므로, KD 값이 낮을수록(농도가 낮을수록) 항원-결합 단백질의 친화도가 높다. 다양한 양태에서, Mcl-1에 대한 항원-결합 단백질의 결합 강도는 KD의 관점에서 기술될 수 있다. 다양한 양태에서, 본원에 제공되는 항원-결합 단백질의 KD는 약 10-1, 약 10-2, 약 10-3, 약 10-4, 약 10-5, 약 10-6, 또는 그 이하이다. 다양한 양태에서, 본원에 제공된 항원-결합 단백질의 KD는 마이크로몰, 나노몰, 피코몰 또는 펨토몰이다. 다양한 양태에서, 본원에 제공된 항원-결합 단백질의 KD는 약 10-4 내지 10-6 또는 10-7 내지 10-9 또는 10-10 내지 10-12 또는 10-13 내지 10-15 또는 10-9 내지 10-12 또는 10-9 내지 10-15의 범위 내에 있다. 다양한 양태에서, 본원에 제공된 항원-결합 단백질의 KD는 약 1.0 x 10-12 M 내지 약 1.0 x 10-8 M의 범위 내에 있다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질의 KD는 약 1.0 x 10-11 M 내지 약 1.0 x 10-9 M의 범위 내에 있다.
다양한 양태에서, 항원-결합 단백질의 친화도는 유세포 분석법- 또는 형광-활성화 세포 분류 (FACS)-기반 검정을 사용하여 측정되거나 등급이 매겨진다. 유세포 분석법-기반 결합 검정은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Cedeno-Arias et al., Sci Pharm 79(3): 569-581 (2011)]; [Rathanaswami et al., Analytical Biochem 373: 52-60 (2008)]; 및 [Geuijen et al., J Immunol Methods 302(1-2): 68-77 (2005)]를 참조한다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질의 친화도는 문헌[Trikha et al., Int J Cancer 110: 326-335 (2004)] 및 [Tam et al., Circulation 98(11): 1085-1091 (1998)]에 기재된 바와 같은 경쟁 검정을 사용하여 측정되거나 등급이 매겨진다. 문헌[Trikh et al.]에서, 항원을 발현하는 세포가 방사능 검정에 사용되었다. 세포 표면 항원에 대한 125I-표지된 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체)의 결합은 현탁액 중의 세포로 측정된다. 다양한 양태에서, Mcl-1 항체의 상대적 친화도는 형광단에 접합된 상이한 농도의 Mcl-1 항체가 Mcl-1을 발현하는 세포와 함께 인큐베이션되고 방출된 형광(이는 항체-항원 결합의 직접적인 척도임)이 결정되는 FACS-기반 검정을 통해 결정된다. 각 용량 또는 농도에 대한 형광을 플로팅하는 곡선이 생성된다. 최대 값은 결합 포화가 발생할 때 형광이 정체되거나 최대에 도달하는 최저 농도이다. 최대 값의 절반은 EC50 또는 IC50으로 간주되며, EC50/IC50이 가장 낮은 항체는 동일한 방식으로 테스트된 다른 항체에 비해 가장 높은 친화도를 갖는 것으로 간주된다.
다양한 양태에서, IC50 값은 경쟁적 결합 억제 분석에서 결정된 바와 같이, 항원-결합 단백질의 KD에 근접한다. 다양한 예에서, 경쟁 검정은 참조 항체, 형광단-접합 2차 항체, 및 Mcl-1을 발현하는 세포를 사용하여 수행되는 FACS-기반 검정이다. 다양한 양태에서, 세포는 Mcl-1을 과발현하도록 유전자 조작된다. 일부 양태에서, 세포는 Mcl-1을 발현하도록 바이러스 벡터로 형질도입된 HEK293T 세포이다. 대안적 양태에서, 세포는 Mcl-1을 내인성으로 발현한다. FACS-기반 검정의 수행 전에, 일부 양태에서, Mcl-1을 내인성으로 발현하는 세포는 Mcl-1 저발현 세포 또는 Mcl-1 고발현 세포로서 미리 결정된다. 일부 양태에서, 세포는 암 또는 종양 세포이다. 다양한 양태에서, 세포는 세포주, 예를 들어 혈액 세포주, 난소 세포주, 자궁내막 세포주, 방광 세포주, 폐 세포주, 위장관(GI) 세포주, 간 세포주, 폐 세포주 등으로부터의 세포이다. 본 개시내용의 항원-결합 단백질의 다양한 검정에서, 항원-결합 단백질은 인간 Mcl-1에 결합하기 위해 참조 항체와 경쟁한다. 참조 항체의 결합 감소는 시험관 내 경쟁적 결합 검정에 의해 결정된 바와 같이, Mcl-1에 대한 개시내용의 항원-결합 단백질의 결합의 존재, 강도 및/또는 정도를 나타낸다. 다양한 양태에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 인간 Mcl-1과 참조 항체 간의 결합 상호작용을 억제하며, 억제는 IC50에 의해 특성화된다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 인간 Mcl-1과 참조 항체 간의 결합 상호작용 억제에 대해 약 2500 nM 미만의 IC50을 나타낸다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 약 2000 nM 미만, 약 1500 nM 미만, 약 1000 nM 미만, 약 900 nM 미만, 약 800 nM 미만, 약 700 nM 미만, 약 600 nM 미만, 약 500 nM 미만, 약 400 nM 미만, 약 300 nM 미만, 약 200 nM 미만, 또는 약 100 nM 미만의 IC50을 나타낸다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 약 90 nM 미만, 약 80 nM 미만, 약 70 nM 미만, 약 60 nM 미만, 약 50 nM 미만, 약 40 nM 미만, 약 30 nM 미만, 약 20 nM 미만, 또는 10 nM 미만의 IC50을 나타낸다. 다양한 예에서, 본 개시내용의 항원 결합 단백질은 Mcl-1에 결합하는 것으로 알려진 참조 항체(이 참조 항체는 본 개시내용의 임의의 항원-결합 단백질과 상이함)와 Mcl-1에 결합하기 위해 경쟁한다.
결합력은 항체-항원 복합체의 전반적인 강도의 척도를 제공한다. 그것은 세 가지 주요 매개변수에 따라 달라진다: 에피토프에 대한 항원-결합 단백질의 친화도, 항원-결합 단백질과 Mcl-1 모두의 원자가, 및 상호작용하는 부분의 구조적 배열. 항원-결합 단백질의 원자가(항원 결합 부위의 수)가 클수록 결합할 수 있는 항원(Mcl-1)의 양이 많아진다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 Mcl-1에 대해 강한 결합력을 갖는다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 다가이다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 2가이다. 다양한 예에서, 항원 항원-결합 단백질은 1가이다.
교차-반응성
다양한 실시형태에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 Mcl-1에 결합하고, Bcl-2 계열의 임의의 다른 구성원과 결합하지 않는다. (즉 Bcl-2 계열의 임의의 다른 구성원과 교차-반응하지 않는다). 다양한 예에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 Mcl-1-특이적이다. 다양한 실시형태에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 Bcl-2 계열의 다른 단백질에 대한 항원-결합 단백질의 선택성보다 적어도 10배, 5배, 4배, 3배, 2배 더 큰 Mcl-1에 대한 선택성을 갖는다. 다양한 실시형태에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 임의의 다른 Bcl-2 계열 단백질에 대한 항원-결합 단백질의 선택성보다 적어도 10배, 5배, 4배, 3배, 2배 더 큰 Mcl-1에 대한 선택성을 갖는다. 선택성은 Mcl-1 또는 Bcl-2 계열 구성원에 대한 항원 결합 단백질에 의해 나타나는 KD를 기반으로 할 수 있으며, 여기서 KD는 표면 플라스몬 공명 또는 FACS-기반 친화도 검정과 같은 당업계에 공지된 기법에 의해 결정될 수 있다.
경쟁 분석법
다양한 실시형태에서, 항원-결합 단백질은 인간 Mcl-1과 참조 항체 간의 결합 상호작용을 억제하며, 참조 항체는 Mcl-1에 결합하는 것으로 알려져 있지만 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 아니다. 다양한 예에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 인간 Mcl-1에 대한 결합에 대해 참조 항체와 경쟁함으로써, 시험관 내 경쟁 결합 검정으로 측정시, 참조 항체에 결합되는 인간 Mcl-1의 양을 감소시킨다. 다양한 양태에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 인간 Mcl-1과 참조 항체 간의 결합 상호작용을 억제하며, 억제는 IC50에 의해 특성화된다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 인간 Mcl-1과 참조 항체 간의 결합 상호작용 억제에 대해 약 2500 nM 미만의 IC50을 나타낸다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 약 2000 nM 미만, 약 1500 nM 미만, 약 1000 nM 미만, 약 900 nM 미만, 약 800 nM 미만, 약 700 nM 미만, 약 600 nM 미만, 약 500 nM 미만, 약 400 nM 미만, 약 300 nM 미만, 약 200 nM 미만, 또는 약 100 nM 미만의 IC50을 나타낸다. 다양한 양태에서, 항원-결합 단백질은 약 90 nM 미만, 약 80 nM 미만, 약 70 nM 미만, 약 60 nM 미만, 약 50 nM 미만, 약 40 nM 미만, 약 30 nM 미만, 약 20 nM 미만, 또는 10 nM 미만의 IC50을 나타낸다.
다양한 예에서, 본 개시내용의 항원-결합 단백질은 인간 Mcl-1에 대한 결합에 대해 참조 항체와 경쟁함으로써, 시험관 내 경쟁 결합 검정으로 측정시, 참조 항체에 결합되는 인간 Mcl-1의 양을 감소시킨다. 다양한 양태에서, 시험관 내 경쟁적 결합 검정은 특정 양의 본 개시내용의 항원-결합 단백질의 부재 또는 존재 하에 참조 항체의 Fc에 결합하는 형광단-접합된 2차 항체의 형광을 측정하는 FACS-기반 검정이다. 다양한 양태에서, FACS-기반 검정은 참조 항체, 형광단-접합 2차 항체, 및 Mcl-1을 발현하는 세포를 사용하여 수행된다. 다양한 양태에서, 세포는 Mcl-1을 과발현하도록 유전자 조작된다. 일부 양태에서, 세포는 Mcl-1을 발현하도록 바이러스 벡터로 형질도입된 HEK293T 세포이다. 대안적 양태에서, 세포는 Mcl-1을 내인성으로 발현한다. FACS-기반 검정의 수행 전에, 일부 양태에서, Mcl-1을 내인성으로 발현하는 세포는 Mcl-1 저발현 세포 또는 Mcl-1 고발현 세포로서 미리 결정된다. 일부 양태에서, 세포는 암 또는 종양 세포이다. 다양한 양태에서, 세포는 세포주, 예를 들어 혈액 세포주, 난소 세포주, 자궁내막 세포주, 방광 세포주, 폐 세포주, 위장관(GI) 세포주, 간 세포주, 폐 세포주 등으로부터의 세포이다. 다양한 예에서, 본 개시내용의 항원 결합 단백질은 Mcl-1을 내인성으로 발현하는 하나 이상의 세포에 의해 내인성으로 발현되는 Mcl-1에 높은 친화도로 결합한다. 다양한 양태에서, 항원 결합 단백질은 FACS-기반 경쟁적 결합 억제 검정에서 측정된 바와 같이 약 3000 nM 미만의 IC50을 나타낸다. 다양한 양태에서, 항원 결합 단백질은 FACS-기반 경쟁적 결합 억제 검정에서 측정된 바와 같이 약 2500 nM 미만, 약 2000 nM 미만, 약 1750 nM 미만, 약 1500 nM 미만, 약 1250 nM 미만, 약 1000 nM 미만, 약 750 nM 미만, 또는 약 500 nM 미만의 IC50을 나타낸다. 다양한 양태에서, 항원 결합 단백질은 FACS-기반 경쟁적 결합 억제 검정에서 측정된 바와 같이 약 400 nM 미만, 약 300 nM 미만, 약 200 nM 미만, 약 100 nM 미만, 약 75 nM 미만, 약 50 nM 미만, 약 25 nM 미만, 또는 약 10 nM 미만의 IC50을 나타낸다.
항원 또는 이의 에피토프에 대한 결합에 대해 제2 항체와 경쟁하는 항체의 능력을 테스트하는 다른 결합 검정, 예컨대 경쟁 결합 검정 또는 경쟁 검정은 당해 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Trikha et al., Int J Cancer 110: 326-335 (2004)]; [Tam et al., Circulation 98(11): 1085-1091 (1998)]. 미국 특허 출원 공개 번호 US20140178905, 문헌[Chand et al., Biologicals 46: 168171 (2017)]; [Liu et al., Anal Biochem 525: 89-91 (2017)]; 및 [Goolia et al., J Vet Diagn Invest 29(2): 250-253 (2017)]을 참고한다. 또한, 2개의 항체를 비교하는 다른 방법이 당해 분야에 알려져 있으며, 예를 들어 표면 플라스몬 공명(SPR)을 포함한다. SPR은 본 개시내용의 항원-결합 단백질 및 참조 항체의 결합 상수를 구하기 위해 사용될 수 있으며, 두 결합 상수는 비교될 수 있다.
항체 생산 방법 및 관련 방법
항원 결합 단백질(예를 들어, 항체, 항원 결합 항체 단편 및 항체 단백질 생성물)을 제조하기 적합한 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 항체를 생산하기 위한 표준 하이브리도마 방법은 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988)], 및 [CA. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001)]에 기재되어 있다.
숙주 종에 따라, 면역학적 반응을 증가시켜 숙주에 의해 더 큰 항체 제조를 야기하기 위해 다양한 아주반트가 사용될 수 있다. 이러한 아주반트에는 프로인트 완전 아주반트 및 불완전 아주반트, 미네랄 겔, 예컨대 알루미늄 하이드록사이드, 및 표면 활성 성분, 예컨대 라이소레시틴, 플루로닉 폴리올, 폴리음이온, 펩티드, 오일 에멀젼, 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌, 및 디니트로페놀이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. BCG(바실리 칼메트-게린(Calmette-Guerin)) 및 코리네박테리움 파르붐(Corynebacterium parvum)은 잠재적으로 유용한 인간 아주반트이다.
항체 제조의 다른 방법이 표 1에 요약되어 있다.
[표 1]
항체가 어떻게 제조되는지와 무관하게 Mcl-1의 에피토프에 결합하는 능력에 대해 항체를 평가하는 방법은 당분야에 알려져 있으며, 임의의 항체-항원 결합 검정, 예컨대, 방사선면역검정(RIA), ELISA, 웨스턴 블롯, 면역침전, SPR, 및 경쟁적 억제 검정(예를 들어, 문헌[Janeway et al.], 및 미국 특허 출원 공개 번호 2002/0197266 참조)을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체 변이체는 글리코실화 변이체를 포함하는데, 여기에서 글리코실화 부위(들)의 수 및/또는 유형은 모 폴리펩티드의 아미노산 서열과 비교하여 변경된다. 특정 실시형태에서, 단백질 변이체는 본래의 단백질보다 더 많거나 더 적은 수의 N-결합 글리코실화 부위를 포함한다. N-연결된 글리코실화 부위는 하기 서열을 특징으로 한다: Asn-Xaa-Ser 또는 Asn-Xaa-Thr, 여기서 Xaa로 지정된 아미노산 잔기는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 이 서열을 생성하기 위한 아미노산 잔기의 치환은 N-연결된 탄수화물 사슬의 부가를 위한 잠재적인 새로운 부위를 제공한다. 대안적으로, 이 서열을 제거하는 치환은 기존의 N-결합 탄수화물 사슬을 제거할 것이다. N-결합 탄수화물 사슬의 재배열이 또한 제공되며, 하나 이상의 N-결합 글리코실화 부위(전형적으로, 자연 발생 부위)가 제거되고, 하나 이상의 새로운 N-결합 부위가 생성된다. 추가의 항체 변이체는 시스테인 변이체를 포함하며, 하나 이상의 시스테인 잔기가 모 아미노산 서열과 비교하여 결실되거나 또 다른 아미노산(예를 들어, 세린)으로 치환된다. 시스테인 변이체는 항체가 불용성 봉입체의 단리 후와 같이 생물학적으로 활성인 입체형태로 재폴딩되어야 할 때 유용할 수 있다. 시스테인 변이체는 일반적으로 본래의 단백질보다 더 적은 시스테인 잔기를 갖고, 전형적으로 쌍을 이루지 않은 시스테인으로부터 야기되는 상호작용을 최소화하기 위해 짝수를 갖는다.
추가 실시형태에서, 항체 변이체는 변형된 Fc 단편 또는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체를 포함할 수 있다. "결정화하는 단편"을 나타내는 Fc 단편 또는 중쇄 불변 영역은 돌연변이에 의해 변형되어 항체에 변경된 결합 특성을 부여할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Burton and Woof 1992, Advances in Immunology 51: 1-84]; [Ravetch and Bolland, 2001, Annu. Rev. 19: 275-90], [Shields et al., 2001, Journal of Biol. Chem 276: 6591-6604]; [Telleman and Junghans, 2000, Immunology 100: 245-251]; [Medesan et al., 1998, Eur. J. Immunol. 28: 2092-2100]을 참조하며, 이들은 모두 본원에 참고로 포함된다). 이러한 돌연변이는 치환, 부가, 결실 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있고, 전형적으로 본원에 기술된 방법뿐만 아니라 당업계에 공지된 방법에 따라 하나 이상의 돌연변이유발성 올리고뉴클레오티드(들)를 사용하여 부위-지정 돌연변이유발에 의해 생성된다(예를 들어, Sambrook et al., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 3rd Ed., 2001, Cold Spring Harbor, N.Y. and Berger et al., METHODS IN ENZYMOLOGY, Volume 152, Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, Inc., San Diego, Calif. 참조, 이들은 본원에 참고로 포함됨).
특정 실시형태에 따르면, 아미노산 치환은 (1) 단백질분해에 대한 민감성을 감소시키고/시키거나, (2) 산화에 대한 민감성을 감소시키고/시키거나, (3) 결합 친화도를 변경하고/하거나, (4) 다른 물리화학적 또는 기능적 특성을 그러한 폴리펩티드에 부여하거나 변형시킬 수 있다. 특정 실시형태에 따르면, 단일 또는 다중 아미노산 치환(특정 실시형태에서, 보존적 아미노산 치환)은 자연 발생 서열에서 (특정 실시형태에서, 분자간 접촉을 형성하는 도메인(들) 밖의 폴리펩티드의 부분에서) 이루어질 수 있다. 특정 실시형태에서, 보존적 아미노산 치환은 전형적으로 모 서열의 구조적 특징을 실질적으로 변화시키지 않는다(예를 들어, 보존적 대체 아미노산은 나선과 같은 모 서열을 특징짓는 2차 구조를 파괴하지 않거나 파괴하는 경향이 없다). 당업계에 인식된 폴리펩티드 2차 및 3차 구조의 예는 문헌[PROTEINS, STRUCTURES AND MOLECULAR PRINCIPLES, (Creighton, Ed.), 1984, W. H. Freeman and Company, New York; INTRODUCTION TO PROTEIN STRUCTURE (C. Branden and J. Tooze, eds.), 1991, Garland Publishing, New York, N.Y.; 및 Thornton et al., 1991, Nature 354:105]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다.
본 개시내용은 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체를 제공하며, 여기서 중쇄 및 경쇄는 함께 Mcl-1에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 결합 구조를 형성한다. 전장 중쇄는 가변 영역 도메인 VH, 및 3개의 불변 영역 도메인 CH1, CH2, 및 CH3을 포함한다. 전형적으로, VH 도메인은 폴리펩티드의 아미노-말단에 있고, CH 도메인은 카복실-말단에 있다. 본원에서 사용되는 용어 "중쇄"는 전장 중쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 경쇄는 가변 영역 도메인 VL, 및 불변 영역 도메인 CL을 포함한다. 중쇄와 마찬가지로, 경쇄의 가변 영역 도메인은 전형적으로 폴리펩티드의 아미노-말단에 있다. 본원에서 사용되는 용어 "경쇄"는 전장 경쇄 및 이의 단편을 포함한다. F(ab) 단편은 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄의 CH1 및 가변 영역으로 구성된다. F(ab) 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와 이황화 결합을 형성할 수 없다. F(ab') 단편은 하나의 경쇄, 및 CH1 및 CH2 도메인 사이에 오히려 불변 영역을 함유하는 하나의 중쇄를 함유하여, 쇄간 이황화 결합이 두 개의 중쇄 사이에서 형성되어 F(ab')2 분자를 형성할 수 있다. Fv 영역은 불변 영역이 없는 중쇄와 경쇄 둘 다로부터 형성된 가변 영역을 포함한다. 단일쇄 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 가요성 링커에 의해 연결되어 항원-결합 영역을 형성하는 단일 폴리펩티드쇄를 형성하는 Fv 분자이다. 단일쇄 항체는 WO 88/01649 및 미국 특허 번호 제4,946,778호 및 제5,260,203호에 상세히 논의되어 있으며, 이들은 본원에 참조로 포함된다.
다음 실시예는 예시로서 제공되며, 본원에 개시된 주제의 범주를 제한하고자 하는 것이 아니다.
실시예
실시예 1
토끼 면역화 - 토끼 클론 확장 직접 구제(CEDR): 수확, 분류, 상청액, 및 용해물 생성
당업계의 표준 프로토콜을 사용하여 Mcl-1로 토끼를 면역화하였다. 동물 비장을 수확하고, 해리하고, 동결시켰다. 해동된 토끼 면역 세포는 Mcl-1 항체를 발현하는 세포를 확인하기 위해 Alexa Fluor 647에 접합된 비오티닐화된 Mcl-1 및 스트렙타비딘 뿐만 아니라 Alexa Fluor 488에 접합된 항-토끼 IgG 항체로 프로빙되었다. 그런 다음, 검출된 세포를 FBS, 10% 활성화된 토끼 비장세포 상층액(TSN) 및 피더 세포 배양액이 보충된 100 μl/웰 RPMI 배지를 함유하는 384 웰 플레이트로 FACS Aria III에서 분류하였다. 단클론 배양 및 B-세포 확장에서 7일 후, 후속 검정을 위해 배양 상청액을 수집하고, 항체 서열의 시퀀싱 및 재조합 구제를 위해 토끼 B-세포를 용해시켰다.
클로닝 및 발현을 위해 각각의 에피토프 빈으로부터의 가장 높은 친화도, Mcl-1-선택적 대표 항체(도 4 참조)를 선택하였다. 이들 항체를 면역조직화학적으로(IHC) 검정하여, 항-Mcl-1 항체 리드 11P5 및 11B14를 확인하였다.
용해된 B-세포로부터 항체를 재조합적으로 구제하기 위해, 용해물을 mRNA Catcher PLUS 정제 키트(Invitrogen/Thermo Fisher)를 사용하여 초기에 정제하였다. 이 정제 단계 후, cDNA를 합성하고 토끼 IgG-특이적 프라이머를 사용하여 항체 서열을 증폭했다. 항체 서열을 분석하고, 클로닝을 위해 고유한 서열을 선택했다. 서열을 발현 벡터 pTT5로 클로닝하고 제조업체(Thermo Fisher)가 제공한 절차에 따라 293fectin 일시적 형질감염 시스템을 사용하여 HEK293T 세포에서 발현시켰다. IHC 검정을 사용하여 정제된 항체가 Mcl-1 단백질에 선택적으로 결합하는지 확인했다. 동반 진단(CDx) 개발을 위해 11P5 항-Mcl-1 항체를 선택하였다.
[표 2]
실시예 2
Mcl-1 단백질 상에서의 ELISA
토끼 단클론 항체를 포함하는, 면역 토끼로부터 단리된 B-세포로부터의 세포 배양 상청액을 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 Mcl-1 단백질에 대한 결합에 대해 스크리닝하였다. 배지-결합 플레이트의 웰을 4℃에서 밤새 뉴트라비딘(Neutravidin)으로 먼저 코팅하고 BioTek 플레이트 세척기를 사용하여 90 μL PBS로 3회 세척한 다음, 1% 우유/1xPBS 검정 희석액으로 차단했다. 그런 다음, 비오티닐화된 Mcl-1을 뉴트라비딘-코팅된 배지-결합 플레이트의 웰에 고정시키고, PBS로 3회 세척하였다. 그런 다음 토끼 CEDR 상청액을 실온(RT)에서 1시간 동안 50 μL 검정 부피에 1:5 희석하여 첨가했다. 그런 다음 결합된 항체는 겨자무과산화효소(HRP)-접합된 염소-항-토끼 2차 항체(Jackson ImmunoResearch) 및 3,,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB)(Neogen) 기질로 제조업체에서 설정한 프로토콜에 따라 확인하였다. 플레이트 웰은 플레이트 리더에서 450 nm에서 흡광도 측정을 받았다. 이 검정에서 고정된 Mcl-1에 대한 결합에 대한 역치는 무관한(즉, 대조군) 토끼 상청액이 첨가된 웰에서 측정된 흡광도에 비해 흡광도가 3배 증가했다.
실시예 3
Bcl-2/Bcl-xL 카운터 스크린
ELISA에 의해 Bcl-2 및 Bcl-xL에 대한 교차 반응성에 대해 Mcl-1에 결합하는 항체를 평가하였다. 요약하면, Bcl-2 및 Bcl-xL 단백질을 배지-결합 플레이트의 웰에서 37℃에서 1시간 동안 별도로 코팅하고, BioTek 플레이트 세척기를 사용하여 90 μL PBS로 3회 세척한 다음, 1% 우유/1xPBS 분석 희석액으로 차단했다. 그런 다음 토끼 CEDR 상청액을 실온에서 1시간 동안 웰에 첨가했다. 그런 다음 결합된 항체는 겨자무과산화효소(HRP)-접합된 염소-항-토끼 2차 항체(Jackson ImmunoResearch) 및 TMB 기질로 제조업체에서 설정한 프로토콜에 따라 확인하였다. 플레이트 웰은 플레이트 리더에서 450 nm에서 흡광도 측정을 받았다. 이 검정에서 고정된 Bcl-2 또는 Bcl-xL에 대한 결합에 대한 역치는 무관한(즉, 대조군) 토끼 상청액이 첨가된 웰에서 측정된 흡광도에 비해 흡광도가 3배 증가했다.
실시예 4
에피토프 비닝(상대적 에피토프 비닝/프로파일링)
에피토프를 특성화하는 일반적인 방법은 경쟁 실험을 통하는 것이다. 서로 경쟁하는 항체는 표적 상의 동일하거나 중복되는 부위에 결합하는 것으로 생각할 수 있다. 본 실시예는 Mcl-1에 결합하기 위한 경쟁을 결정하는 방법을 기술하고, 다수의 항체에 적용될 때 방법의 결과를 기술한다.
비닝 실험은 다양한 방법으로 수행될 수 있으며, 사용된 방법은 검정 결과에 영향을 미칠 수 있다. 본원에 개시된 비닝 실험에서, Mcl-1은 하나의 참조 항체에 의해 결합되었고, 또 다른 것에 의해 프로빙되었다. 참조 항체가 프로브 항체의 결합을 방해하는 경우, 항체를 동일한 빈으로 분류했다. 항체가 사용된 순서가 중요하다. 항체 A가 참조 항체로 사용되어 항체 B의 결합을 차단하는 경우, 그 반대가 항상 사실인 것은 아니다: 참조 항체로 사용되는 항체 B는 항체 A가 표적에 결합하는 것을 반드시 차단하는 것은 아니다. 여기에는 여러 가지 요인이 작용한다: 항체의 결합은 제2 항체의 결합을 방지하는 표적의 구조적 변화를 유발할 수 있거나, 또는 중복되지만 서로를 완전히 차단하지 않는 에피토프는 제2 항체가 여전히 결합을 허용하기에 충분한 표적과의 고친화성 상호작용을 가질 수 있다. 일반적으로, 어느 순서로든 경쟁이 관찰되면, 항체는 함께 비닝(binning)된다고 하며, 두 항체가 서로 차단할 수 있다면 에피토프가 더 완전히 중복될 가능성이 있다.
본 실시예에 기재된 실험을 위해, Mcl-1-특이적 항체의 상대적인 에피토프 비닝 프로파일을 높은 처리량 방식으로 결정하기 위해, 변형된 항체-항체 경쟁 검정을 사용하였다. 간략하게, 각각의 개별 항체는 다양한 서열의 초기 Mcl-1 CEDR 캠페인에서 선택된 참조 항체 패널과의 결합에 대해 경쟁하는 능력에 대해 테스트되었다. 그런 다음, 각 시험 항체와 참조 항체 패널의 경쟁/결합 패턴을 결정하고, 다른 시험 항체로부터 생성된 패턴과 비교했다. 그런 다음, 개별 시험 항체 경쟁/결합 프로파일 사이의 상관 정도를 비교하였다. 유사한 경쟁/결합 프로파일을 나타낸 항체를 함께 비닝(그룹화)하였다(예를 들어, 비닝 프로파일 A, B 등).
비오티닐화된 Mcl-1 단백질을 스트렙타비딘 코팅되고 고유하게 바코드가 부착된 LumAvidin 비드(Luminex Corporation)에 실온의 암실에서 30분 동안 커플링하고, 원심분리로 비드를 펠렛화하여 PBS + 2% FBS(FACS 완충액)로 2회 세척했다. 참조 항체 상청액 샘플을 항원-코팅된 비드와 함께 실온의 암실에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 3회 세척했다. StabilGuard®(Surmodics)를 함유하는 FACS 버퍼에 비드를 재현탁하여, 비특이적 결합 부위를 차단하였다. 참조 항체가 결합된 항원-코팅된 비드를 풀링한 다음, 테스트 항체(CEDR 상청액) 샘플(또는 음성 대조군)을 함유하는 개별 샘플 웰로 나누었다. 비드 및 시험 항체를 실온의 암실에서 1시간 동안 인큐베이션하고 2회 세척했다. 그런 다음, 샘플을 실온의 암실에서 15분 동안 Alexa Fluor® 488 IgG 단편-특이적 검출 항체와 함께 인큐베이션하고, 1회 세척하고, FACS 완충액에 재현탁했다. 샘플은 iQueTM 스크리너 플랫폼(Intellicyt)을 사용하여 분석했다.
개별 시험 항체의 항체 경쟁/결합 프로파일을 결정하기 위해, 각각의 경쟁/결합 반응에 대해(즉, 전체 참조 항체 세트에 걸쳐) 참조 항체 신호와 시험 항체 신호를 더한 것에서 참조-전용 항체 결합 신호를 뺐다. 개별 항체 결합 프로파일은 각 경쟁/결합 반응에 대한 순 결합 값의 집합으로 정의되었다. 그런 다음 개별 프로파일 간의 유사성 정도는 각각의 시험 항체 프로파일 간의 상관 계수를 계산하여 평가했다. 서로 더 높은 정도의 유사성을 보이는 시험 항체는 공통 비닝 프로파일로 그룹화되었다. 별도의 비닝 프로파일은 낮은 상관도를 나타냈다. 이 방법을 사용하여, Mcl-1-결합 항체를 5개의 고유한 비닝 프로파일로 세분했다.
실시예 5
제한된 항원 검정(친화도 등급)
항체 및 항원 상호작용 강도(상대적 결합 친화도)를 평가하기 위해, Mcl-1-특이적 CEDR 상청액을 제한 항원-결합 검정으로 시험하였다. 적정된 소량의 비오티닐화된 Mcl-1 단백질을 스트렙타비딘-코팅된 LumAvidin Beads®(Luminex Corporation)와 실온의 암실에서 30분 동안 인큐베이션한 다음, FACS 완충액으로 2회 세척하여, 원심분리로 비드를 펠릿화했다. StabilGuard®(Surmodics)를 함유하는 FACS 버퍼에 비드를 재현탁하였다. 그런 다음, 항원-결합 비드를 CEDR 상청액 샘플과 함께 실온의 암실에서 18시간 동안 인큐베이션하고, FACS 완충액으로 2회 세척하고, Alexa Fluor® 488 IgG 단편-특이적 검출 항체와 함께 실온의 암실에서 15분 동안 인큐베이션하고, 1회 세척하고, 마지막으로 FACS 완충액에 재현탁했다. 샘플은 iQueTM 스크리너 플랫폼(Intellicyt)을 사용하여 분석했다. 이 검정 방법에서, 표적(Mcl-1)에 대한 항체 결합 신호의 정도는 측정된 형광 강도와 상관 관계가 있으므로 패널 전체에서 친화도를 상대적으로 비교할 수 있다.
본 명세서에 인용된 각각의 참고문헌은 이의 전문이 또는 관련 부분이 본 명세서에 참조에 의해 원용되며, 이는 인용 내용으로부터 명백하다.
청구된 대상이 이의 상세한 설명과 관련하여 기재되었지만, 앞서 언급한 설명은 첨부된 청구범위의 범주로 한정되는 청구된 대상의 범위를 예시하기 위함이고 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다. 다른 양태, 이점, 및 변형은 하기 청구범위의 범위 내에 있다.
실시예 6
면역조직화학적 검정
IHC에 의한 Bcl-2 및 Bcl-xL 발현을 평가하기 위해 상업용으로 입수가능한 면역조직화학적(IHC) 시약을 사용하였다. 본원에 개시된 항-Mcl-1 단클론 항체 11P5는 예컨대 종양 세포주, 전체 조직 및 탈석회화된 뼈 샘플에서 Mcl-1에 민감하고 특이적으로 결합하는 것으로 나타났다. Bcl-2의 발현 수준 측정은 10 μg/mL의 항-Bcl-2 단클론 항체(카탈로그 번호 MO887) 클론 124 마우스 IgG1(Agilent DAKO)을 사용하여 달성되었다. 고환 조직을 프로빙하여 적격 음성 대조군을 얻었다. Bcl-xL의 발현 수준은 항-Bcl-xL 단클론 항체(카탈로그 번호 2764) 클론 54H6 토끼 IgG(Cell Signaling Technology)를 1:400 희석으로 사용하여 측정되었다. 적격한 음성 대조군은 자궁의 자궁근층 조직을 프로빙하는 것을 수반하였다. Mcl-1 발현의 측정은 0.25 μg/mL의 항-Mcl-1 토끼 IgG 항체(Amgen)를 사용하여 얻었다. 적격한 음성 대조군은 고환 및 자궁 조직뿐만 아니라 SKMM2 세포주를 프로빙하는 것을 수반하였다.
항-Mcl-1 단클론 항체를 사용하여 8개의 종양 세포주를 분석하여, 면역조직화학에 의해 Mcl-1의 발현 수준을 평가하였다. 도 6~11에 나타낸 결과는 항-Mcl-1 항체 4019, 5H16, 6A3, 11P5 및 11B14가 종양 세포주에서 Mcl-1에 대해 면역반응성을 갖는다는 것을 입증한다. 또한, 항-Mcl-1 항체는 종양 세포주에서 Mcl-1의 발현 수준에 비해 다양한 정도의 면역반응성을 가지며, 세포주 AMO1(도면에서 A)에서 발현이 가장 높고 세포주 SKMM2(도면에서 H)에서 발현이 가장 낮다(Mcl-1 발현은 도 16에서 등급순임). 도 10 및 11은 항체 4019, 11P5 및 11B14가 항체 5H16 및 6A3에 비해 더 강한 면역반응성을 나타내므로 전체 조직에서 추가 특성화를 위해 선택되었음을 입증한다. 도 12 및 13은 4019(도 13)가 아닌 11P5 및 11B14(도 12)가 편도선 림프구를 적절하게 면역염색함을 입증한다. 도 14 및 15는 항체 11P5가 항체 11B14(도 15)보다 골수 세포(도 14)에서 Mcl-1에 대해 더 강한 면역염색을 나타낸다는 것을 입증한다. 도 17, 18, 19, 및 20은 항체 11P5가 림프 조직(편도선 및 골수, 도 17~19) 및 탈석회화된 조직(골수, 도 20)에서 면역조직화학에 의해 Mcl-1을 검출하는데 있어서 11B14보다 우수함을 입증한다.
SEQUENCE LISTING <110> Amgen Inc. <120> Materials and Methods for Treating Cancer by Administering an Anti-MCL1 Antibody <130> 32328/55149A <150> US 63/143,682 <151> 2021-01-29 <160> 39 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 caagctagcc agtctttata caacaacaac tatttaggc 39 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 caagctagca agctggccag c 21 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 gccggtttag acaacgacga catcttcagc 30 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Gln Ala Ser Gln Ser Leu Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Gly 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Ala Gly Leu Asp Asn Asp Asp Ile Phe Ser 1 5 10 <210> 7 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial 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<222> (227)..(246) <223> Peptide Design 5 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (252)..(271) <223> BH1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (252)..(271) <223> BH1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (271)..(271) <223> End of Isoform 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (302)..(319) <223> Peptide Design 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (303)..(316) <223> BH2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (328)..(348) <223> Transmembrane <400> 33 Met Phe Gly Leu Lys Arg Asn Ala Val Ile Gly Leu Asn Leu Tyr Cys 1 5 10 15 Gly Gly Ala Gly Leu Gly Ala Gly Ser Gly Gly Ala Thr Arg Pro Gly 20 25 30 Gly Arg Leu Leu Ala Thr Glu Lys Glu Ala Ser Ala Arg Arg Glu Ile 35 40 45 Gly Gly Gly Glu Ala Gly Ala Val Ile Gly Gly Ser Ala Gly Ala Ser 50 55 60 Pro Pro Ser Thr Leu Thr Pro Asp Ser Arg Arg Val Ala Arg Pro Pro 65 70 75 80 Pro Ile Gly Ala Glu Val Pro Asp Val Thr Ala Thr Pro Ala Arg Leu 85 90 95 Leu Phe Phe Ala Pro Thr Arg Arg Ala Ala Pro Leu Glu Glu Met Glu 100 105 110 Ala Pro Ala Ala Asp Ala Ile Met Ser Pro Glu Glu Glu Leu Asp Gly 115 120 125 Tyr Glu Pro Glu Pro Leu Gly Lys Arg Pro Ala Val Leu Pro Leu Leu 130 135 140 Glu Leu Val Gly Glu Ser Gly Asn Asn Thr Ser Thr Asp Gly Ser Leu 145 150 155 160 Pro Ser Thr Pro Pro Pro Ala Glu Glu Glu Glu Asp Asp Leu Tyr Arg 165 170 175 Gln Ser Leu Glu Ile Ile Ser Arg Tyr Leu Arg Glu Gln Ala Thr Gly 180 185 190 Ala Lys Asp Thr Lys Pro Met Gly Arg Ser Gly Ala Thr Ser Arg Lys 195 200 205 Ala Leu Glu Thr Leu Arg Arg Val Gly Asp Gly Val Gln Arg Asn His 210 215 220 Glu Thr Ala Phe Gln Gly Met Leu Arg Lys Leu Asp Ile Lys Asn Glu 225 230 235 240 Asp Asp Val Lys Ser Leu Ser Arg Val Met Ile His Val Phe Ser Asp 245 250 255 Gly Val Thr Asn Trp Gly Arg Ile Val Thr Leu Ile Ser Phe Gly Ala 260 265 270 Phe Val Ala Lys His Leu Lys Thr Ile Asn Gln Glu Ser Cys Ile Glu 275 280 285 Pro Leu Ala Glu Ser Ile Thr Asp Val Leu Val Arg Thr Lys Arg Asp 290 295 300 Trp Leu Val Lys Gln Arg Gly Trp Asp Gly Phe Val Glu Phe Phe His 305 310 315 320 Val Glu Asp Leu Glu Gly Gly Ile Arg Asn Val Leu Leu Ala Phe Ala 325 330 335 Gly Val Ala Gly Val Gly Ala Gly Leu Ala Tyr Leu Ile Arg 340 345 350 <210> 34 <211> 12 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 34 ccaggtgacg gt 12 <210> 35 <211> 24 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 35 aggaacccag catggacact cgaa 24 <210> 36 <211> 30 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 36 ggatcaggat atttattctg ccacgacaca 30 <210> 37 <211> 12 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 37 tgcccgagtt cc 12 <210> 38 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 38 agacgactca ccatggagac t 21 <210> 39 <211> 17 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 39 actggctccg ggaggta 17

Claims (29)

  1. 서열번호 4의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 5의 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 서열번호 6의 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3), 서열번호 16의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 17의 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 18의 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함하거나, 서열번호 10의 LCDR1, 서열번호 11의 LCDR2, 서열번호 12의 LCDR3, 서열번호 22의 HCDR1, 서열번호 23의 HCDR2, 및 서열번호 24의 HCDR3을 포함하는, 항-Mcl-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    서열번호 27 또는 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 항체.
  3. 제1항에 있어서,
    서열번호 28 또는 서열번호 32의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 항체.
  4. 제3항에 있어서,
    중쇄 가변 영역 서열이 서열번호 28로 제시된 경우, 서열번호 27의 경쇄 가변 영역 서열을 추가로 포함하거나, 중쇄 가변 영역 서열이 서열번호 32로 제시된 경우, 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 서열을 추가로 포함하는, 항체.
  5. 제1항에 있어서,
    항체 또는 단편은 단일쇄 항체 또는 단편인, 항체 또는 단편.
  6. 제5항에 있어서,
    단일쇄 가변 단편(scFv)에 함유되는, 항체 단편.
  7. 제5항에 있어서,
    항체 단편은
    (a) scFv;
    (b) Fab; 또는
    (c) (Fab')2인, 항체 단편.
  8. 제1항에 있어서,
    완전한 인간인, 항체 또는 이의 단편.
  9. 제1항에 있어서,
    면역글로불린 G(IgG) 이소형 항체 또는 단편인, 항체 또는 이의 단편.
  10. 제1항에 있어서,
    단클론 항체의 형태인, 항체 또는 이의 단편.
  11. 제1항에 있어서,
    이중특이성 항체, 삼중특이성 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이황화결합-안정화 단일쇄 가변 단편(ds-scFv), 단일 도메인 항체(sdAb), 단일쇄 Fab 단편(scFab), 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, Fab, F(ab')2, VHH/VH 단편, 펩티바디, 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 이중특이성 T-세포 인게이저(BiTE)의 형태인, 항체 또는 이의 단편.
  12. 약제학적으로 허용가능한 담체 및 치료적 유효량의 제1항의 항체 또는 이의 항원-결합 또는 면역학적 기능성 면역글로불린 단편을 포함하는, 약제학적 조성물.
  13. 대상체에서 암 세포의 치료를 모니터링하는 방법으로서,
    (a) 대상체의 세포를 제1항의 항체 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계;
    (b) 세포 또는 그의 내용물에 대한 항체 또는 이의 단편의 결합을 검출하는 단계;
    (c) 세포내 Mcl-1의 수준을 결정하는 단계; 및
    (d) 세포내 Mcl-1의 수준을 대조군과 비교하는 단계로서, 여기서 대조군은 비-암성 세포의 알려진 Mcl-1 특징 수준, 대상체의 비-암성 세포 내 Mcl-1 수준, 또는 상이한 시점에서 대상체의 암세포 내 Mcl-1 수준인, 단계를 포함하는, 방법.
  14. 제13항에 있어서,
    모니터링은 ELISA, 경쟁적 ELISA, 표면 플라스몬 공명 분석, 시험관 내 중화 검정, 생체 내 중화 검정, FACS 분류를 이용한 면역조직화학적 검정 또는 FACS 분류가 없는 면역조직화학적 검정인, 검정을 포함하는, 방법.
  15. 제13항에 있어서,
    암 세포는 백혈병 세포, 림프종 세포 또는 골수종 세포인, 방법.
  16. 제13항에 있어서,
    암 치료는 화학식 I의 AMG 176의 투여를 포함하는, 방법:
    [화학식 I]
    .
  17. 제13항에 있어서,
    암 치료는 화학식 II의 AMG 397의 투여를 포함하는, 방법:
    [화학식 II]
    .
  18. 제13항에 있어서,
    암 세포는 골수성 백혈병 세포인, 방법.
  19. 제13항에 있어서,
    암 세포는 기관 암 세포인, 방법.
  20. 제13항에 있어서,
    항체 또는 이의 단편은 서열번호 4의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 5의 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 서열번호 6의 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3), 서열번호 16의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 17의 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 18의 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함하는 단클론 항체 또는 이의 단편이거나, 또는 항체 또는 이의 단편은 서열번호 10의 LCDR1, 서열번호 11의 LCDR2, 서열번호 12의 LCDR3, 서열번호 22의 HCDR1, 서열번호 23의 HCDR2, 및 서열번호 24의 HCDR3을 포함하는 단클론 항체 또는 이의 단편인, 방법.
  21. 제13항에 있어서,
    항체 또는 이의 단편은 서열번호 27의 경쇄 가변 영역 서열, 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열, 또는 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 및 서열번호 32의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  22. 제13항에 있어서,
    항체 또는 이의 단편은 단일쇄 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), scFv, Fab, F(ab')2, 이중특이성 항체, 삼중특이성 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이황화결합-안정화 단일쇄 가변 단편(ds-scFv), 단일 도메인 항체(sdAb), 단일쇄 Fab 단편(scFab), 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, Fab, F(ab')2, VHH/VH 단편, 펩티바디, 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 이중특이성 T-세포 인게이저(BiTE)의 형태인, 방법.
  23. 제1항의 치료적 유효량의 항-Mcl-1 항체 또는 이의 단편을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 암 치료 방법.
  24. 제23항에 있어서,
    암 세포는 백혈병 세포, 림프종 세포 또는 골수종 세포인, 방법.
  25. 제23항에 있어서,
    암 세포는 골수성 백혈병 세포인, 방법.
  26. 제23항에 있어서,
    암 세포는 기관 암 세포인, 방법.
  27. 제23항에 있어서,
    항체 또는 이의 단편은 서열번호 4의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 5의 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 서열번호 6의 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3), 서열번호 16의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 17의 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 18의 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함하는 단클론 항체 또는 이의 단편이거나, 또는 항체 또는 이의 단편은 서열번호 10의 LCDR1, 서열번호 11의 LCDR2, 서열번호 12의 LCDR3, 서열번호 22의 HCDR1, 서열번호 23의 HCDR2, 및 서열번호 24의 HCDR3을 포함하는 단클론 항체 또는 이의 단편인, 방법.
  28. 제23항에 있어서,
    항체 또는 이의 단편은 서열번호 27의 경쇄 가변 영역 서열, 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열, 또는 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 및 서열번호 32의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  29. 제23항에 있어서,
    항체 또는 이의 단편은 단일쇄 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), scFv, Fab, F(ab')2, 이중특이성 항체, 삼중특이성 항체, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이황화결합-안정화 단일쇄 가변 단편(ds-scFv), 단일 도메인 항체(sdAb), 단일쇄 Fab 단편(scFab), 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, Fab, F(ab')2, VHH/VH 단편, 펩티바디, 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 이중특이성 T-세포 인게이저(BiTE)의 형태인, 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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US20020086321A1 (en) * 1993-02-02 2002-07-04 Craig Ruth W. Myeloid cell leukemia associated gene MCL-1
WO2007101441A1 (en) * 2006-03-06 2007-09-13 Symphogen A/S Recombinant polyclonal antibody for treatment of respiratory syncytial virus infections
KR101829776B1 (ko) * 2007-05-21 2018-02-19 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 Ｉｌ-６에 대한 항체 및 이의 용도
EP3851452A1 (en) * 2014-01-06 2021-07-21 F. Hoffmann-La Roche AG Monovalent blood brain barrier shuttle modules
JP7466442B2 (ja) * 2018-02-14 2024-04-12 中外製薬株式会社 抗原結合分子および組合せ
JP7205691B2 (ja) * 2019-01-23 2023-01-17 ウシオ電機株式会社 抗イヌプロカルシトニン抗体及びこれを用いた検査用キット

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