KR20230131182A

KR20230131182A - 진통 효과를 유도하기 위한 디카르복실산 에스테르

Info

Publication number: KR20230131182A
Application number: KR1020237020625A
Authority: KR
Inventors: 로버트 티. 스트리퍼; 엘즈비에타 이지비카
Original assignee: 뉴 프런티어 랩스 엘엘씨
Priority date: 2020-12-16
Filing date: 2021-12-16
Publication date: 2023-09-12
Also published as: MX2023006728A; US11911358B2; US20220184023A1; CL2023001737A1; WO2022130288A1; JP2023553642A; IL303751A; CN116829141A; EP4262779A1; CO2023007903A2; AU2021400215A1; CA3202461A1

Abstract

본 개시는 진통 효과를 유도하는 조성물 및 방법을 제공한다. 특히, 방법은 디카르복실산 에스테르를 포함하는 약학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

Description

진통 효과를 유도하기 위한 디카르복실산 에스테르

관련 출원

[001] 이 특허 출원은 발명가 로버트 T. 스트리퍼(Robert T. STREEPER)와 엘즈비에타 이즈빅카(Elzbieta IZBICKA)의 "진통 효과를 유도하기 위한 디카르복실산 에스테르"라는 제목으로 2020년 12월 16일에 제출한 미국 특허 가출원 번호 63/126,387의 우선권을 주장한다. 상기 특허 출원의 전체 내용은 본원에 참조로서 포함된다.

발명의 분야

[002] 본 개시는 진통 효과를 유도하기 위한 디카르복실산 에스테르를 포함하는 방법 및 약학적 조성물에 관한 것이다.

서론

[003] 마취제 및 진통제는 통증 치료에 널리 이용된다.

[004] 최근, 파빌(Pavil) 등은 일반 마취제가 이들의 약리학적 효과를 발휘하는 생화학적 메커니즘을 상세히 기술한다. 파빌은 흡입 마취제가 지질 래프트의 순서를 파괴하고 이러한 파괴에 의해 마취를 유도함을 보여준다. 가장 잘 연구된 지질 래프트는 콜레라 독소 B(CTxB)에 결합하는 콜레스테롤 및 스핑고미엘린(예를 들어, 모노시알로테트라헥소실강글리오시드1 "GM1")이 풍부한 막 도메인이다. GM1 지질 래프트는 포스포리파제 D2(PLD2)를 함유한다. 흡입 마취제는 GM1 지질 래프트의 유동성을 증가시키고, 이에 의해 파괴되어 PLD2가 지질 래프트를 떠나 TREK1에 근접하게 전위되게 한다. 일단 거기에서, PLD2는 포스파티딜콜린(PC)을 가수분해하여 포스파티딘산(PA) 및 콜린을 생산한다. PA는 이후 TREK1에 결합하고 이를 활성화시킨다. TREK1이 활성화될 때, 생성된 칼륨 유입은 무의식 및 진통을 유도한다. 파빌 등은 또한 PLD2 전위가 또한 TREK-1의 마취제-비민감성 상동체인 TRAAK로 불리는 제2 유형의 채널을 활성화시킨다는 것을 보여준다. [M.A. Pavel, et al., PNAS, (2020) 117(24):13757-66].

[005] 본 발명자들은 본 개시의 디카르복실산 에스테르가 국소적으로 적용될 때 통증의 완화에 효과적임을 발견하였고, 데이터는 한 구체예에서, 디에틸 아젤레이트(DEA)가 또한 GM1 지질 래프트의 유동성을 증가시키고 이에 따라 콜레라 독소 B 서브유닛(CTxB) 및 탄저병 독소 보호 항원(PA) 둘 모두에 의한 막 공격 복합체의 형성을 방지함을 보여준다. 따라서, 발명자들은 DEA가 흡입 마취제와 유사한 방식으로 신경전달을 조절한다고 주장한다. 따라서, DEA로 예시되는 디카르복실산 에스테르는 막 유동성을 교란시키기 때문에 흡입 마취제와 유사한 진통 효과를 갖는다.

[006] 가장 기본적인 수준에서, 심인성 통증을 제외한 모든 유형의 통증은 구심성 신경을 통해 중추 신경계로의 유해 또는 유독 자극의 전달을 포함한다. 발생하는 신경 임펄스 전달은 신호 전달 사슬의 여러 지점에서 세포 원형질막을 가로질러야 한다[A. Basbaum, et al., Cell. (2009)139(2):267-84]. 통증 메커니즘에서 원형질막의 역할은 생체내에서 입증되었는데, 이에 의해 사이클로덱스트린에 의한 콜레스테롤의 고갈을 통해 지질 래프트 유동성을 증가시킴으로써 신경 신호전달의 파괴가 프로스타글란딘 E2(PGE2)에 의해 유도된 통각과민을 가역적으로 감소시켰다[Ferrari, L, et al. , J. Pain (2015)16(1):60-6].

[007] 통증의 생화학적 매개체는 사이토카인, 신경펩티드, 지질, 성장 인자 및 신경전달물질을 포함한다. 통증 조절에서 관심있는 추가적인 세포 신호 및 센서는 집락 자극 인자(CSF) 및 렙틴을 포함한다.

[008] CSF 슈퍼패밀리의 여러 구성원은 통증 완화에 유익한 역할을 한다. 초기 전신 과립구-집락 자극 인자(G-CSF) 처리는 말초 신경 손상 후 신경병증 통증을 약화시킨다[P. Chao, et al., (2012) 7(8):e43680]. G-CSF는 개선된 숙주 방어를 위해 호중구 과립구를 프라이밍하고 염증유도성 사이토카인의 방출을 감소시킨다[T. Hartung, et al., Blood. (1995) 85(9):2482-9]. 중추 신경계에서의 GM-CSF 작용은 음식 섭취 및 체중을 감소시킨다[J. Reed, et al., J. Clin. Invest. (2005) 115(11):3035-44]. 그러나, 상기 보고서에서 CSF는 생물학적 약물로서 외인성으로 투여되었다. G-CSF의 내인성 생산을 부스팅하는 것이 새로운 치료 전략으로서 제안되었으며[S. Von Aulock, et al., Curr. Opin. Investig. Drugs (2004) 5(11):1148-52], 지금까지 CSF를 유도하는 유일한 알려진 방법은 박테리아 또는 바이러스 항원 자극에 의한 것이다. 분비촉진제라고도 알려진 CSF의 소분자 유도제는 현재까지 확인되지 않았다.

[009] 렙틴은 만성 신경 손상에 의해 유도된 신경병증 통증을 완화시키는 것으로 나타났다[X. Li, et al., Mol. Pain (2013) 9:65].

[010] 발명자들은 또한 디카르복실산 에스테르가 치료학적으로 유용한 세포 및 유기체 신호전달에서 다수의 변화를 유도함을 입증하였다. 이들의 다른 약리학적 활성에 더하여, 디카르복실산 에스테르는 진통 특성을 갖는 신호전달 분자의 세포 방출 및/또는 생산을 유도한다. 반응성 세포 분자는 렙틴, 대식세포 집락 자극 인자(M-CSF), 과립구 집락 자극 인자(G-CSF), 및 과립구-대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF)를 포함한다. 또한, 발명자들은 포유동물 세포 및 조직을 디카르복실산 에스테르로 처리하면 유도성 산화질소 신타제(iNOS)[Y. Kwok, et al., PLoS One. 2012;7(8):e44232], 세포 단백질에서 S-니트로실화된 시스테인 잔기[J. Zhang, et al., Int. Anesthesiol. Clin. (2007) 45(2):27-37], 프로스타글란딘 E2 (PGE2) [A. Ahlawat, et al., Eur. J. Pharmacol. (2018) 818:419-28], 및 아데노신 트리포스페이트(ATP)[Mense, Dtsch Arztebl Int 2008; 105(12): 214-9]를 포함하는 통증 관련 마커의 생산을 억제할 수 있음을 발견하였다.

발명의 개요

[011] 본 개시의 양태는 대상체에서 진통 효과를 유도하기 위한 방법 및 화학식 I R₂OOC-(CH₂)_n-COOR₁ (여기에서 n은 4 내지 10이며, 각각의 R₁ 및 R₂는 독립적으로 저급 알킬임)의 디카르복실산 에스테르를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본원의 특정 구체예는 대상체에서 진통 효과를 유도하여, Toll-유사 수용체(TLR), 뉴클레오티드 올리고머화 도메인(NOD) 수용체 및/또는 덱틴 수용체를 포함하는 패턴 인식 수용체(PRR)의 활성화로 인한 통증을 억제하는 것에 관한 것이다.

[012] 본원의 특정 구체예는 진통 효과를 유도하고, 이에 의해 렙틴, 대식세포 집락-자극 인자(M-CSF), 과립구 대식세포 집락-자극 인자(GM-CSF) 및/또는 과립구 집락-자극 인자(G-CSF)의 분비를 촉진함으로써 대상체에서 국소화된 통증을 억제하는 것에 관한 것이다.

[013] 일부 양태에서, 본원의 구체예는 진통 효과를 유도하여 프로스타글란딘 E2(PGE2) 및 유도성 산화질소 신타제(iNOS) 및/또는 아데노신 트리포스페이트(ATP)의 발현 및 분비를 억제함에 의해 대상체에서 국소 통증을 억제하기 위한 방법 및 화학식 I의 디카르복실산 에스테르를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

[014] 일부 양태에서, 본원의 구체예는 진통 효과를 유도하여 대상체에서 국소 통증을 억제하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 화학식 I의 디카르복실산 에스테르를 진통 효과 유도를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 투여는 통증 상태와 관련된 증상 감소를 발생시킨다.

[015] 일부 양태에서, 본원의 구체예는 진통 효과를 유도하여 대상체에서 국소 통증을 억제하기 위한 의약의 제조에서의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르의 용도에 관한 것이다.

[016] 일부 양태에서, 본원의 구체예는 진통 효과를 유도하여 대상체에서 국소 통증을 억제하기 위한 화학식 I의 디카르복실산 에스테르의 용도에 관한 것이다.

[017] 일부 양태에서, 본원의 구체예는 대상체에서 진통 효과를 유도하여 대상체에서 국소 통증, 예컨대, 급성 통증, 만성 통증, 통각수용성 통증, 신경병증 통증 또는 침해성 통증을 억제하기 위한 의약의 제조에서의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르의 용도에 관한 것이다.

[018] 일부 양태에서, 본원의 구체예는 대상체에서 진통 효과를 유도하여 이를 필요로 하는 대상체에서 iNOS, ATP, 및 Toll 유사, NOD 및 덱틴 수용체를 포함하는 패턴 인식 수용체(PRR)로부터 선택되는 하나 이상의 수용체의 조절에 반응하는 국소 통증을 억제하기 위한 의약의 제조에서의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르의 용도에 관한 것이다.

[019] 일부 양태에서, 본원의 구체예는 렙틴, M-CSF, G-CSF 및 GM-CSF 중 하나 이상의 활성 및/또는 발현을 상향조절하여 또는 ATP, iNOS 및 PGE2 중 적어도 하나의 활성 및/또는 발현 또는 방출을 하향조절하여 대상체에서 국소 통증을 억제함으로써, 진통 효과를 유도하기 위한 의약의 제조에서 화학식 I의 디카르복실산 에스테르의 용도에 관한 것이다.

도면의 설명
[020] 하기 도면은 본 개시의 특정 양태를 입증한다. 본 개시는 본원에 제시된 특정 구체예의 상세한 설명과 함께 이러한 도면 중 하나 이상을 참조하여 더 잘 이해될 수 있다.
[021] 도 1은 본 개시의 특정 구체예에 따른 인간 형질세포양 수지상 세포에서 PRR 효능제 단독 및 디에틸 아젤레이트(DEA)의 존재에 의한 ATP 방출의 조절을 나타내는 막대 그래프이다.
[022] 도 2는 본 개시의 특정 구체예에 따른 생체내 핫 플레이트 테스트에서 뒷다리 반응 잠복기에 대한 국소 DEA의 효과를 보여준다.
[023] 도 3은 본 개시의 특정 구체예에 따라 DEA 처리 없이(좌측 컬럼) 및 DEA 처리된(우측 컬럼) 형광 표지된 콜레라 독소 B 서브유닛에 공동-노출된 인간 말초 혈액 단핵 세포의 이미지를 보여준다.

상세한 설명

[024] 본원에 인용된 모든 출원, 간행물, 특허 및 다른 참고문헌은 그 전체가 참조로서 포함된다.

[025] 본원에서 사용되는 단수 형태("a", "an" 및 "the")는 문맥에서 명백히 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 용어 "또는"은 문맥에서 명백히 달리 지시하지 않는 한, 언급된 대안적인 요소의 단일 요소 또는 둘 이상의 요소의 조합을 지칭한다. 본원에서 사용되는 "포함하다(comprise)"는 "포함하다(include)"를 의미한다. 따라서, "A 또는 B를 포함하는"은 추가적인 요소를 배제하지 않고 "A, B, 또는 A와 B를 포함하는"을 의미한다.

[026] 범위는 본원에서 "약" 하나의 특정 값, 및/또는 "약" 다른 특정 값으로 표현될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "약"은 오차 한계 내에서 가변적인 값을 나타내는, 수정되는 수치 값을 한정하는 것으로 의도된다. 데이터의 차트 또는 표에 제공된 평균 값에 대한 표준 편차와 같은 특정 오차 한계가 언급되지 않은 경우, 용어 "약"은 유효 숫자를 고려하여 해당 숫자로 반올림 또는 반내림하여 포함되는 범위 및 언급된 값을 포함하는 범위를 의미하는 것으로 이해되어야 한다.

[027] 본원에서 사용되는 모든 수치 값 또는 수치 범위는 문맥에서 명백하게 달리 지시하지 않는 한 이러한 범위 내의 정수 및 범위 내의 값 또는 정수의 분수를 포함한다. 또한, 이러한 범위는 또한 숫자 자체 및 이들 사이의 임의의 하위 범위를 포함하는 것으로 의도된다. 이 범위는 최종 값을 포함하여 이들 사이에서 정수이거나 연속적일 수 있다. 따라서, 예를 들어, 약 3시간 내지 약 10시간의 범위에 대한 언급은 3시간, 4시간, 5시간 등등 뿐만 아니라 3시간 1분, 3시간 및 2분, 3시간 4분, 등등, 4시간 1분, 4시간 2분, 4시간 4분 등등, 기타 등등을 포함한다. 90-100%의 범위에 대한 언급은 92.2% 내지 97.5%, 91.5 내지 94.5 등등을 포함한다. 1 내지 25일의 범위에 대한 언급은 1일 내지 5일, 또는 3일 내지 7일, 또는 5일 내지 25일의 하위 범위를 포함한다.

[028] 본원에서 사용되는 용어 "포함하는"은 약학적 조성물(또는 조성물) 및 방법이 인용된 요소를 포함하지만 다른 요소를 배제하지 않는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 본 구체예의 조성물에 적용되는 용어 "필수적 요소로 하여 구성되는"은 추가 요소가 조성물을 실질적으로 변경하지 않는 한, 조성물이 추가 요소를 함유할 수 있음을 의미한다. 조성물에 적용되는 용어 "물질적으로 변경된"은 인용된 요소로 구성된 조성물의 효과와 비교하여 조성물의 치료 효과의 증가 또는 감소를 지칭한다. 다시 말해서, 조성물을 정의하기 위해 사용될 때 "필수적 요소로 하여 구성되는"은 조성물에 대한 임의의 필수적 의미의 다른 성분을 배제하는 것을 의미할 것이다. 따라서, 본원에 정의된 바와 같은 성분을 필수적 요소로 하여 구성되는 조성물은 단리 및 정제 방법으로부터의 미량의 오염물 및 약학적으로 허용되는 담체를 배제하지 않을 것이다. "로 구성된"은 본 발명의 조성물을 투여하기 위한 다른 성분 및 실질적인 방법 단계의 미량 원소 초과를 배제하는 것을 의미할 것이다. 이러한 접속어 각각에 의해 정의된 구체예는 본 발명의 범위 내에 있다.

[029] 본원에서 사용되는 용어 "임의의" 또는 "임의적으로"는 후속하여 기재된 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생하지 않을 수 있고, 설명이 상기 사건 또는 상황이 발생하는 경우 및 발생하지 않는 경우를 포함함을 의미한다.

[030] 본원에서 사용되는 "대상체"는 한 구체예에서 인간과 같은 포유동물, 예컨대, 영장류를 지칭한다. 비인간 영장류는 몇 가지 예를 들면, 마모셋, 원숭이, 침팬지, 고릴라, 오랑우탄 및 긴팔원숭이를 포함한다. 용어 "대상체"는 고양이, 개, 흰족제비, 친칠라, 마우스, 토끼, 래트, 저빌, 기니피그, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 닭, 칠면조, 오리, 꿩, 비둘기, 도브, 패롯, 앵무새, 거위 등을 포함한다.

[031] 본원에서 사용되는 바와 같이, 본 개시의 방법의 "필요로 하는 대상체"는 통증 질환을 앓고 있는 대상체일 수 있다.

[032] 본원에서 사용되는 용어 "치료학적 유효량"은 대상체에서 국소 진통 효과를 유도하기에 충분한 활성 성분의 양을 지칭한다. 본 개시의 약학적 조성물의 치료학적 유효량은 지질 래프트를 파괴하는데 효과적일 수 있다. 본 개시의 약학적 조성물의 치료학적 유효량은 대상체의 세포로부터 렙틴, M-CSF, G-CSF, GM-CSF 등의 발현 및/또는 분비를 상향조절(예를 들어, 자극)하는데 효과적일 수 있다. 본 개시의 약학적 조성물의 치료학적 유효량은 또한 대상체의 세포로부터 ATP, iNOS, PGE2 등의 발현 및/또는 분비를 하향조절(예를 들어, 억제)하는데 효과적일 수 있다. 대안적으로, "치료학적 유효"량은 대상체에서 적어도 하나의 임상 증상에서 일부 완화, 경감, 감소 또는 안정화를 제공할 양이다. 당업자는 일부 이익이 대상체에게 제공되는 한 치료 효과가 완전하거나 치유적일 필요는 없음을 이해할 것이다. 유효량은 상처 또는 환부, 또는 치료되는 질병 또는 질환, 투여되는 특정 표적화된 작제물, 대상체의 크기, 또는 질병 또는 질환의 중증도와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 당업자는 과도한 실험을 필요로 하지 않고 특정 조성물의 유효량을 경험적으로 결정할 수 있다.

[033] 본원에서 사용되는 용어 "활성 성분"은 생물학적 활성 물질을 지칭한다. 구체예에서, 본 개시의 디카르복실산 에스테르는 약학적 조성물의 활성 성분이다. 구체예에서, 본 개시의 디카르복실산 에스테르는 약학적 조성물의 유일한 활성 성분이다. 구체예에서, 본 개시의 아젤라산 에스테르는 약학적 조성물 중 활성 성분이다. 구체예에서, 디에틸 아젤레이트는 약학적 조성물 중 활성 성분이다.

[034] 본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용되는 담체"는 임의의 적합한 애쥬번트, 담체, 부형제 또는 안정화제를 지칭하고, 정제, 캡슐, 분말, 용액, 현탁액 또는 에멀젼과 같은 고체 또는 액체 형태일 수 있으며, 이는 대상체에게 심각한 자극을 일으키지 않고 투여된 활성 성분의 생물학적 활성 및 특성을 방해하지 않는다.

[035] 본원에서 사용되는 용어 "질병"은 정상 기능을 손상시키며, 징후 및 증상을 구별함으로써 전형적으로 나타나며, 인간 또는 동물이 감소된 기간 또는 삶의 질을 갖도록 하는 인간 또는 동물 신체 또는 이의 일부 중 하나의 비정상적인 상태를 모두 반영한다는 점에서 용어 "장애" 및 "질환"(의학적 상태에서와 같이)과 일반적으로 동의어로 의도되며 상호교환적으로 사용된다.

[036] 본원에서 사용되는 바와 같이, 질병 또는 질환의 "치료하는" 또는 "치료"는 질병 또는 질환을 예방하거나, 질병 또는 질환의 발병 또는 발달 속도를 늦추거나, 질병 또는 질환을 발달시킬 위험을 감소시키거나, 질병 또는 질환과 관련된 증상의 발달을 예방 또는 지연하거나, 질병 또는 질환과 관련된 증상을 감소 또는 종결시키거나, 질병 또는 질환의 완전한 또는 부분적 퇴행을 발생시키거나, 이들의 일부 조합을 지칭한다. 치료는 또한 질병 또는 질환의 예방적 또는 예방적 치료를 의미할 수 있다.

[037] 본원에서 사용되는 용어 "억제하는"은 증상의 특정 작용, 기능, 상호작용, 출현의 감소, 저하, 제한 및/또는 차단을 지칭한다. 용어 "억제하는", "감소시키는" 및 "저하시키는"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 구체예에서, 용어는 대상체에서 특정 활동, 기능, 상호작용, 특정 증상의 출현의 수준(예를 들어, 조직 및 체액의 단백질성 또는 비단백질성 분자를 비제한적으로 포함하는 바이오마커의 수준)을 상응하는 대조군의 양보다 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 그 미만인 양으로 감소시키거나 예방하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 통증의 지표, 예를 들어, 프로스타글란딘 PGE2의 혈액 수준이 적어도 약 10%, 20%, 30%, 50%, 80% 또는 100% 감소하면 통증이 감소, 저하 또는 억제된다. 구체예에서, 통증은 본 발명의 디카르복실산 에스테르의 투여 전의 통증과 비교하여 적어도 약 1-배, 2-배, 3-배, 4-배, 또는 그 초과만큼 감소, 저하 또는 억제된다. 측정 가능한 변화는 객관적(예를 들어, 일부 테스트 또는 마커에 의해, 예를 들어, 시험관내 또는 생체내 검정 또는 테스트 또는 관찰에 의해 측정가능함) 또는 주관적(예를 들어, 대상체가 효과를 나타내거나 느낌)일 수 있다.

[038] 본원에서 사용되는 용어 "통증"은 실제 또는 잠재적 조직 손상과 관련된 불쾌한 감각 및 정서적 경험을 지칭하거나 이러한 손상의 관점에서 설명되며, 특수한 신경 종말의 자극으로 인해 발생하는 불편함, 괴로움 또는 고통의 다소 국소적 감각을 포함한다. 급성이든 만성이든, 통각수용성 통증, 신경병증 통증 또는 침해성 통증을 포함하나 이에 제한되지 않는 많은 유형의 통증이 있다. 대상체에서 진통 효과를 유도하는 목적은 대상체에 의해 인지되는 통증의 정도 또는 중증도를 감소시키는 것이다.

[039] 본원에서 사용되는 어구 "국소화된 통증"은 대상체의 신체의 특정 부분의 특정 위치 또는 영역에서 경험되는 비-전신성 통증을 지칭한다. 구체예에서, 통증 부위는 원발성 병변과 관련이 있다.

[040] 구체예에서, 본 개시는 화학식 I: R₂OOC-(CH₂)_n-COOR₁를 갖는 디카르복실산 에스테르를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 진통 효과를 유도하여 대상체에서 통증을 억제하기 위한 방법 및 약학적 조성물을 제공한다. 구체예에서, n은 4 내지 10, 6 내지 9, 또는 7 내지 8이다. 구체예에서, 각각의 R₁ 및 R₂는 독립적으로 저급 알킬이다. 본원에서 사용되는 용어 "저급 알킬"은 C1 내지 C6 포화된 직쇄형 또는 분지형 알킬 기를 지칭한다. 화학식 I에서 적합한 저급 알킬 기(R₁ 및 R₂)의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, sec-부틸, t-부틸 등의 기를 포함한다. 구체예에서, R₁ 및 R₂는 동일하다. 구체예에서, R₁ 및 R₂는 동일하다. 구체예에서, R₁ 및 R₂는 상이하다.

[041] 구체예에서, 디카르복실산 에스테르는 아젤라산 에스테르이다. 구체예에서, 아젤라산 에스테르는 디에틸 아젤레이트, 디메틸 아젤레이트 또는 이들의 혼합물이다. 구체예에서, 아젤라산 에스테르는 디에틸 아젤레이트이다.

[042] 구체예에서, 본 개시는 대상체에게 아젤라산 에스테르를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 진통 효과를 유도하여 대상체에서 통증을 억제하는 방법을 제공한다. 구체예에서, 본 개시는 대상체에게 디에틸 아젤레이트를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 진통 효과를 유도하여 대상체에서 통증을 억제하는 방법을 제공한다.

[043] 국소 진통 효과의 유도는 지질 래프트의 유동성을 파괴하거나 증가시킴으로써 달성될 수 있다. 지질 래프트(지질 마이크로도메인으로도 공지됨)는 원형질막의 외부 소엽에 존재하는 별개의 지질 도메인이다. 지질 래프트는 콜레스테롤, 스핑고미엘린, 강글리오시드, 및 스핑고리피드 예컨대, 모노시알로테트라헥소실강글리오시드1(GM1)이 풍부하다. 지질 래프트는 막 유동성 및 막 단백질 이동에 영향을 미치고, 이에 의해 신경전달 및 수용체 이동을 조절한다[Z. Korade, et al., Neuropharmacology (2008) 55 (8): 1265-73].

[044] 구체예에서, 진통 효과는 화학식 I의 디카르복실산 에스테르를 지질 래프트와 접촉시킴으로써 야기된 지질 래프트의 파괴로 인해 유도된다. 화학식 I의 디카르복실산 에스테르가 대상체에 국소적으로 적용될 때(예를 들어, 개방 상처, 상처 주변 부위, 건강한 피부, 점막, 구강 점막 상처), 디카르복실산 에스테르는 대상체의 원형질막에 위치한 지질 래프트와 접촉하여 지질 래프트를 파괴한다. 구체예에서, 지질 래프트는 GM1을 함유한다.

[045] 구체예에서, 지질 래프트는 포스포리파제 D2(PLD2)를 함유한다.

[046] 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 GM1을 함유하는 지질 래프트를 파괴한다.

[047] 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르에 의한 지질 래프트의 파괴는 PLD2가 지질 래프트를 떠나게 하여, TREK-1을 활성화시키고, 이어서 신호전달 지질 포스파티드산(PA)의 생산을 촉진시킨다.

[048] 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르에 의한 지질 래프트의 파괴는 지질 래프트의 막 유동성을 조절한다.

[049] 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르에 의한 지질 래프트의 파괴는 지질 래프트의 원형질막 유동성의 증가로 인한 것이다.

[050] 통증은 다양한 방식으로 유형별로 세분될 수 있다. 시간을 기준으로 통증은 만성 또는 급성으로 분류될 수 있다. 만성 통증은 일반적으로 3개월 초과 동안 정상 치유 시간을 초과하여 지속되는 통증으로 인식된다. 만성 통증은 전 세계적으로 약 20%의 사람들에게 영향을 미치고 의사 방문의 약 20%를 차지한다. [R. Treede, et al., Pain (2015) 156(6):1003-7]. 메커니즘에 기초하여, 통증은 침해수용성, 신경병증 또는 침해성일 수 있다. 통각수용성 통증은 기계적, 화학적 또는 열적 자극으로 인한 문제 손상에 대한 통증 수용체(통각수용기)의 자극으로부터 발생한다. 신경병증 통증은 신경계의 성분에 대한 손상으로부터 발생한다. 침해성 통증은 침해수용성 지각의 변경으로부터 발생한다.

[051] 구체예에서, 대상체는 통증을 앓고 있다. 구체예에서, 통증은 급성 또는 만성이다. 구체예에서, 통증은 통각수용성 통증, 신경병증 통증 또는 침해성 통증이다.

[052] 구체예에서, 통증은 급성이다. 구체예에서, 대상체는 급성 통증에 대한 치료를 필요로 할 수 있다. 급성 통증의 예는 비제한적으로, 외상성 통증, 시술(외과, 치과, 피부과 등) 통증, 상처 통증, 근골격 통증(예를 들어, 요통, 목 통증), 치통, 감염(예를 들어, 상처 감염), 및 독소(곤충, 동물, 박테리아, 진균 등)를 포함한다.

[053] 구체예에서, 통증은 만성이다. 일부 구체예에서, 대상체는 만성 통증에 대한 치료를 필요로 할 수 있다. 만성 통증의 예는 비제한적으로, 섬유근육통, 관절염 통증, 장경인대 증후군 통증, 테니스 엘보 통증, 암 통증, 근골격 통증(예를 들어, 요통, 목 통증), 측두하악 관절 장애, 삼차 신경통, 만성 두통, 신경 질환과 관련된 통증(MS, 당뇨병성 신경병증 등), 신경종, 골반 염증성 질환, 자궁내막증, 대상포진 및 대상포진후 신경통, 및 감염(예를 들어, HIV) 관련 만성 신경병증, 화학요법-유발 신경병증 통증, 수술-유도된 신경병증 통증, 외상-유발된 신경병증 통증, 외음부통, 비정형 두개안면 통증, 좌골신경통, 환상 사지, 치아통 및 구강 작열감 증후군을 포함한다.

[054] 구체예에서, 통증은 통각수용성 통증이다. 구체예에서, 대상체는 통각수용성 통증에 대한 치료를 필요로 할 수 있다. 통각수용성 통증은 일반적으로 급성이며, 특정 상황에 반응하여 발생한다. 통각수용성 통증의 예는 염좌, 화상, 타박상, 수술 절차 및 골절로부터의 통증을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 만성 통각수용성 통증은 통증이 6개월을 초과하여 연장되는 일부 상태로부터 발생한다. 만성 통각수용성 통증의 예는 암으로부터의 통증, 류마티스 관절염, 골관절염, 근골격 질환(예를 들어, 요통)을 포함한다.

[055] 구체예에서, 통증은 통각수용성 통증이다. 구체예에서, 대상체는 신경병증 통증에 대한 치료를 필요로 할 수 있다. 신경병증 통증은 신경계의 성분에 대한 손상으로부터 발생한다. 특정 질병 상태는 신경병증 통증의 근본 원인일 수 있다. 예를 들어, 대상체는 대사 질환(예를 들어, 당뇨병성 신경병증), 자가면역 질환(예를 들어, 다발성 경화증), 바이러스 감염(예를 들어, 대상포진 및 후유증, 대상포진 후 신경통), 혈관 질환(예를 들어, 뇌졸중), 외상 및/또는 암을 앓고 있을 수 있다. Campbell et al., Neuron (2006) 52(1):77-92; Dworkin et al., Arch Neurol (2003) 60; 1524-34. 구체예에서, 신경병증성 통증은 대사 질환, 외상, 허혈 또는 출혈, 염증, 신경독성, 신경변성, 신생물딸림, 비타민 결핍 또는 암으로부터 발생하는 신경 손상으로 인한 것이다. 신경병증 통증의 예는 헤르페스 후(또는 대상포진 후) 신경통, 반사 교감신경 이영양증/인과통(신경 외상), 암 통증의 성분, 환상 사지 통증, 포착 신경병증(예를 들어, 수근관 증후군) 및 말초 신경병증(광범위한 신경 손상)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

[056] 구체예에서, 통증은 침해성 통증이다. 구체예에서, 대상체는 침해성 통증에 대한 치료를 필요로 할 수 있다. 침해성 통증은 말초 통증수용기의 활성화를 유발하는 실제 또는 위협적인 조직 손상의 명백한 증거 또는 통증을 유발하는 체성감각 시스템의 질병 또는 병변에 대한 증거가 없음에도 불구하고 변경된 침해수용으로부터 발생하는 통증이다. Chimenti et al., . (2018) 98(5): 302-314.

[057] 구체예에서, 통증은 급성 통증, 만성 통증, 통각수용성 통증, 신경병증 통증, 침해성 통증, 외상성 통증, 화학적 통증, 화상 통증, 허혈성 통증, 벌레 물림 통증, 찌르는 듯한 통증, 근골격 통증(예를 들어, 요통, 목 통증), 류마티스 관절염 통증, 수술-후 통증, 골 통증(예를 들어, 골관절염), 다양한 피부 질환으로 인한 통증(예를 들어, 여드름, 건선, 화농한선염, 습진, 주사비)으로부터 선택된다.

[058] 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 대상체에서 진통 효과를 유도하기에 충분한 양으로 투여되어, 통증 반응을 감소시킨다. 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 예를 들어, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%만큼 통증 반응을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 대상체에서 진통 효과를 유도하기에 충분한 양으로 투여되어, 통증 반응을 예를 들어, 약 10% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 100%, 약 40% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 100%, 약 60% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 80%, 또는 약 60% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 70%, 또는 약 50% 내지 약 70% 범위로 감소시킨다.

[059] 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 대상체에서 진통 효과를 유도하기에 충분한 양으로 투여되어, 통각수용성 통증, 신경병증 통증 및 침해성 통증에 의해 매개되는 통증 반응을 감소시킨다. 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 예를 들어, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%만큼 통증 반응 즉, 통각수용성 통증, 신경병증 통증 및 침해성 통증을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 대상체에서 진통 효과를 유도하기에 충분한 양으로 투여되어, 예를 들어, 약 10% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 100%, 약 40% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 100%, 약 60% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 80%, 또는 약 60% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 70%, 또는 약 50% 내지 약 70% 범위로 통각수용성 통증, 신경병증 통증 및 침해성 통증에 의해 매개되는 통증 반응을 감소시킨다.

[060] 구체예에서, 본 개시는 하나 이상의 패턴 인식 수용체 신호전달, 예컨대, 뉴클레오티드 올리고머화 도메인(NOD) 수용체 및 덱틴 수용체를 포함하는 패턴 인식 수용체를 이의 조절을 필요로 하는 대상체에서 조절하는 방법으로서, 대상체에게 치료학적 유효량의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르를 투여하는 것을 포함하는, 방법을 제공한다. 구체예에서, 통증의 감소(또는 통증 반응의 감소)는 PRR 관련 통증 활성의 조절 때문이다.

[061] 구체예에서, 통증의 감소(또는 통증 반응의 감소)는 PRR 활성의 조절 때문이다.

[062] 구체예에서, 통증 반응의 감소(또는 통증 반응의 감소)는 NOD 수용체 활성의 조절 때문이다.

[063] 구체예에서, 통증 반응의 감소(또는 통증 반응의 감소)는 덱틴 수용체 활성의 조절 때문이다.

[064] 구체예에서, 본 개시는 치료학적 유효량의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하여 렙틴, 대식세포 집락-자극 인자(M-CSF), 과립구 집락-자극 인자(G-CSF), 과립구 대식세포 집락-자극 인자(GM-CSF) 중 하나 이상의 합성 또는 방출 또는 상향조절을 촉진함으로써, 진통 효과를 유도하여 이를 필요로 하는 대상체에서 통증을 조절하는 방법을 제공한다.

[065] 구체예에서, 본 개시는 치료학적 유효량의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하여 유도성 산화질소 신타제(iNOS), 아데노신 트리포스페이트(ATP) 및 프로스타글란딘 E2(PGE2) 중 적어도 하나의 활성 및/또는 발현의 합성 또는 방출 또는 하향조절을 억제함으로써, 진통 효과를 유도하여 이를 필요로 하는 대상체에서 통증을 조절하는 방법을 제공한다.

[066] 구체예에서, 본 개시는 대상체에서 투여 부위에서의 렙틴, M-CSF, G-CSF, GM-CSF 중 하나 이상의 국소 증가 또는 iNOS, ATP 및 PGE2의 감소를 촉진함으로써 진통 효과를 유도하여 통증을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법을 제공한다.

[067] 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 이를 필요로 하는 대상체에게 렙틴, M-CSF, G-CSF 및 GM-CSF 중 하나 이상의 방출을 유도하거나 활성 및/또는 발현을 상향조절하기에 충분한 양으로 투여된다.

[068] 구체예에서, 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 이를 필요로 하는 대상체에게 iNOS, ATP 및 PGE2 중 적어도 하나의 방출을 억제하거나 활성 및/또는 발현을 하향조절하기에 충분한 양으로 투여된다.

디카르복실산 에스테르의 합성

[069] 화학식 I의 디카르복실산 에스테르는 상업적으로 수득되거나 당 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 구체예에서, 디카르복실산 에스테르는 필요한 산 및 알콜로부터 에스테르의 직접 형성을 통해 제조될 수 있다. 이러한 축합은 반응 혼합물을 적합한 제제로 탈수시키거나 산과 알콜의 혼합물을 가열함으로써 달성될 수 있다. 구체예에서, 디카르복실산 에스테르는 알콜을 활성화된 형태의 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 산의 활성화된 형태는 산 할라이드, 호모 및 헤테로 무수물 둘 모두를 포함하는 산 무수물, 모산의 내부 무수물과 필수 알콜의 반응물, 필요한 산 또는 알콜과 p-톨루엔 설포닐 클로라이드의 반응에 의해 형성되어 토실 무수물 또는 에스테르를 생성하고, 이는 후속하여 각각 알콜 또는 산과 반응하여 요망되는 최종 에스테르를 생성하는 알콜 및 산 둘 모두의 에스테르 및 무수물을 포함한다. 유사하게, p-톨루엔 설포닐 클로라이드를 아세트산 무수물과 같은 단순한 유기산 무수물로 대체할 수 있다. 또한, 요망되는 물질 조성물로부터 선택된 하나의 에스테르로 출발하고, 적절한 산성 또는 염기성 촉매의 존재 하에 요망되는 알콜 중의 에스테르의 용액에 의해 산의 출발 에스테르의 에스테르로의 전환을 일으킬 수 있으며, 여기서 알콜은 반응이 수행되는 알콜이 되며, 방법은 또한 당 분야에 트랜스-에스테르화로 공지되어 있다.

[070] 예를 들어, 산의 디메틸 에스테르로 시작할 수 있고, 산 또는 염기의 존재 하에 에탄올 중 에스테르의 용액에 의해 산의 디에틸 에스테르의 용이한 형성을 유발할 수 있다. 또한, 산의 혼합 에스테르가 요망되는 경우, 본원에 기재된 임의의 방법에서 2개 이상의 요망되는 알콜의 적절하게 구성된 용액을 이용할 수 있다.

[071] 할로겐화된 중간체 또는 성분을 사용하여 필요한 에스테르를 형성시킬 수 있다. 예를 들어, 티오닐 클로라이드는 산 및 알콜 둘 모두를 염소화시켜, 아실 및 알킬 클로라이드를 생성할 것이다. 이들 아실 및 알킬 클로라이드는 이후 각각 요망되는 알콜 또는 산과 추가로 반응하여 요망되는 에스테르 생성물을 생성할 수 있다. 다른 통상적인 할로겐화제는 예를 들어, 옥살릴 클로라이드 및 인의 클로라이드 및 브로마이드 예컨대, 포스포러스 펜타 또는 트리브로마이드 또는 포스포러스 옥시클로라이드를 포함한다.

[072] 산과 알콜의 혼합물에 대한 강염기의 작용을 통해 에스테르를 형성시키는 것이 일반적으로 실시된다. 강염기의 예는 리튬 알루미늄 하이드라이드 및 다른 금속 하이드라이드, 알칼리 금속 알콕사이드, 예컨대, 소듐 에톡사이드 및 디이소부틸 알루미늄 하이드라이드 등을 포함한다.

투여 방법

[073] 본 개시의 약학적 조성물은 다양한 방식으로 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 약학적 조성물은 국소, 경피, 정맥내, 피하, 근육내 또는 경구 투여될 수 있다. 약학적 조성물은 표적 영역 또는 치료가 요망되는 영역에서 및/또는 그 주위에 국소적으로 적용될 수 있다.

[074] 치료 요법은 당업자에 의해 전형적으로 고려되는 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 이러한 인자는 투여 경로, 제형의 특성, 환자의 질병의 특성, 대상체의 크기, 체중, 표면적, 연령, 성별, 환자에게 투여되는 다른 약물, 및 주치의의 판단을 포함한다. 약학적 조성물은 염증성 질환 또는 통증 감소를 위한 다른 치료와 함께 또는 이에 추가하여 투여될 수 있다.

[075] 약학적 조성물은 통증 및/또는 염증의 치료를 위한 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가 치료제는 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가 치료제는 통증 완화제, 항염증제, 마취제, 항생제 및 항진균제를 포함할 수 있다.

[076] 구체예에서, 약학적 조성물은 대상체의 피부, 예를 들어, 치료가 요망되는 영역에 또는 적어도 그 부근에 위치한 영역에서 대상체에게 국소적으로 투여된다. 구체예에서, 약학적 조성물은 피부에 대해 국소적으로 문지름으로써 대상체에게 투여되는데, 이는 조성물(또는 적어도, 디카르복실산 에스테르)이 피부에 의해 흡수되도록 한다.

[077] 구체예에서, 예방적 치료를 위해, 약학적 조성물은 시술(또는 수술) 96시간 전부터 직전까지, 시술(또는 수술) 72시간 전부터 직전까지, 시술(또는 수술) 48시간 전부터 직전까지, 시술(또는 수술) 24시간 전부터 직전까지, 시술(또는 수술) 12시간 전부터 직전까지, 시술(또는 수술) 8시간 전부터 직전까지, 시술(또는 수술) 4시간 전부터 직전까지, 시술(또는 수술) 2시간 전부터 직전까지, 시술(또는 수술) 1시간 전부터 직전까지, 또는 시술(또는 수술) 0.5시간 전부터 직전까지, 또는 시술 직전의 이 안의 임의의 유도 가능한 범위의 기간에서 대상체에게 투여될 수 있다. 약학적 조성물은 예를 들어, 일 구체예에서, 하이킹 전에 임의의 시간에 건강한 피부의 영역에 국소적으로 적용될 수 있다.

[078] 구체예에서, 예방적 치료의 목적을 위해, 약학적 조성물은 정맥천자, 주사, 절개, 제모, 문신 적용 및 제거와 같은 시술 전에 대상체에게 국소적으로 또는 국부적으로 투여된다.

[079] 구체예에서, 약학적 조성물은 정맥천자, 주사, 절개, 제모, 문신 적용 및 제거와 같은 시술 동안 또는 후에 대상체에게 국소적으로 또는 국부적으로 투여된다.

[080] 구체예에서, 약학적 조성물은 대상체에게 1회, 또는 1회 초과로 적용된다. 예를 들어, 약학적 조성물은 소정의 간격으로 투여될 수 있다. 구체예에서, 예를 들어, 약학적 조성물은 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회, 1일 4회, 또는 1일 4회 초과, 또는 격일로, 3일마다 1회, 4일마다 1회 등으로 적용될 수 있다.

[081] 구체예에서, 약학적 조성물은 치료학적 유효량으로 대상체에게 투여된다. 대상체에게 투여될 때, 치료학적 유효량은 치료되는 특정 질환 및 요망되는 결과에 의존할 것이다.

[082] 약학적 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 약 1 내지 약 24시간마다, 약 1 내지 약 12시간마다, 약 2 내지 약 8시간마다, 약 2 내지 약 6시간마다, 약 4 내지 약 6시간마다, 약 4 내지 약 8시간마다, 약 12시간마다, 약 24시간마다, 약 48시간마다 또는 더 자주 투여될 수 있다. 구체예에서, 약학적 조성물은 1일 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 또는 더 자주, 또는 이들의 임의의 조합으로 투여될 수 있다. 구체예에서, 약학적 조성물은 또한 매일, 격일로, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 또는 덜 빈번하게, 또는 이들의 임의의 조합으로 투여될 수 있다. 구체예에서, 약학적 조성물은 1일 내지 30일, 1일 내지 25일, 1일 내지 20일, 1일 내지 15일, 또는 1일 내지 10일의 기간 동안 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다.

제형

[083] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 국소, 경피, 정맥내, 피하, 근육내, 또는 경구 투여를 포함하나 이에 제한되지 않는 당 분야에 공지된 임의의 투여 경로를 통한 전달을 위해 제형화될 수 있다.

[084] 적절한 제형은 선택된 투여 경로에 의존적이다. 당 분야에서 이해되는 바와 같은 임의의 잘 알려진 기술, 담체 및 부형제, 예를 들어, 참조로 본원에 포함된 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed, (Mack Publishing Company: Easton, Pa., 1990)]에 개시된 것들이 사용될 수 있다. 본원에 개시된 약학적 조성물은 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 레비게이팅, 유화, 캡슐화, 포획 또는 압축 공정과 같은 당 분야에 공지된 임의의 방식으로 제조될 수 있다.

[085] 약학적 조성물은 국소, 경피, 정맥내, 피하, 근육내 또는 경구 투여에 적합한 것들을 포함하지만, 가장 적합한 경로는, 예를 들어, 수용자의 상태 및 장애에 의존적일 수 있다.

[086] 구체예에서, 약학적 조성물은 국소 및 경피 투여에 적합하다. 본 개시의 아젤라산 에스테르의 국소 및 경피 투여는 가공된 겔, 크림, 로션, 용액, 연고, 현탁액 또는 에멀젼의 형태일 수 있다. 이러한 약학적 조성물은 본원에 개시된 하나 이상의 적합한 부형제를 추가로 포함할 수 있다.

[087] 화학식 I의 디카르복실산 에스테르의 정맥내, 피하, 근육내 투여와 같은 비경구 투여는 용액, 현탁액 또는 에멀젼의 형태일 수 있다. 한 구체예에서, 이러한 제형은 염수 용액에서 제조된다. 이러한 약학적 조성물은 본원에 개시된 하나 이상의 적합한 부형제를 추가로 포함할 수 있다.

[088] 구체예에서, 약학적 조성물은 경구 투여에 적합하다. 약학적 조성물은 편리하게는 단위 투여 형태로 제공될 수 있고, 약학 분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 전형적으로, 이러한 방법은 화학식 I의 디카르복실산 에스테르, 및 임의로 임의의 공동-투여된 활성 성분을 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 혼합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 약학적 조성물은 활성 성분을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 이 둘 모두와 균일하고 친밀하게 혼합한 다음, 필요에 따라 생성물을 요망되는 조성물로 형상화함으로써 제조된다. 경구 투여에 적합한 약학적 조성물 및 임의의 임의적 이차 활성 성분은 각각 소정량의 활성 성분(들)을 함유하는 캡슐, 카셰 또는 정제와 같은 개별 유닛으로서; 분말 또는 과립으로서; 수성 액체 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액으로서; 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼으로서 제공될 수 있다. 활성 성분(들)은 또한 볼루스(bolus), 엘렉츄어리(electuary) 또는 페이스트(paste)로 제공될 수 있다. 이러한 약학적 조성물은 본원에 개시된 하나 이상의 적합한 부형제를 추가로 포함할 수 있다.

부형제

[089] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 하나 이상의 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 부형제는 담체, 예를 들어, 수불용성 다당류 또는 올리고당류를 포함할 수 있다. 담체의 예는 비제한적으로, 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로스 아세테이트 프로피오네이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 키토산, β-사이클로덱스트린, 에틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트(HPMCP), 미세결정질 셀룰로스, 전분 및 이들의 임의의 조합을 포함한다.

[090] 부형제는 증점제, 예를 들어, 수용성 다당류를 포함할 수 있다. 증점제의 예는 비제한적으로, 하이드록시 프로필 메틸 셀룰로스(HPMC), 아카시아, 알긴산, 콜로이드 실리콘 디옥사이드, 카르복시메틸셀룰로스 칼슘, 젤라틴, 하이드록시 프로필 셀룰로스, 하이드록실 프로필 셀룰로스(하이프로멜로스), 메틸 셀룰로스, 수크로스, 소듐 알기네이트, 소듐 카르복시 메틸 셀룰로스, 및 이들의 임의의 조합을 포함한다.

[091] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 하나 이상의 약학적 부형제, 예를 들어, 아스코르브산, EDTA 디하이드레이트, 글리세린, 시트르산 모노하이드레이트, 소듐 시트레이트 디하이드레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 프로피오네이트, 70% 소르비톨 용액, 수크랄로스, FD&C Yellow #6, 인공 향미(예를 들어, 인공 페퍼민트 향미, 인공 과일 향미), 정제수, 또는 이들의 임의의 조합을 추가로 포함할 수 있다.

[092] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 보존제를 포함할 수 있으며, 적합한 보존제는 비제한적으로, 수은-함유 물질, 예컨대, 페닐수은 염(예를 들어, 페닐수은 아세테이트, 보레이트 및 니트레이트) 및 티메로살; 안정화된 클로린 디옥사이드; 4차 암모늄 화합물, 예컨대 벤잘코늄 클로라이드, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드 및 세틸피리디늄 클로라이드; 이미다졸리디닐 우레아; 파라벤, 예컨대 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤 및 부틸파라벤, 및 이들의 염; 페녹시에탄올; 클로로페녹시에탄올; 페녹시프로판올; 클로로부탄올; 클로로크레졸; 페닐에틸 알콜; 디소듐 EDTA; 벤조산, 벤질 알콜 및 소르브산 및 이들의 염을 포함한다.

[093] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 산, 예컨대 아세트산, 붕산, 시트르산, 락트산, 인산 및 염산; 염기, 예를 들어, 소듐 하이드록사이드, 소듐 포스페이트, 소듐 보레이트, 소듐 시트레이트, 소듐 아세테이트, 소듐 락테이트 및 트리스-하이드록시메틸아미노메탄; 및 완충제, 예컨대 시트레이트/덱스트로스, 소듐 바이카보네이트 및 암모늄 클로라이드를 포함하는 하나 이상의 허용되는 pH 조절제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. 이러한 산, 염기 및 완충제는 조성물의 pH를 약학적으로 허용되는 범위로 유지하는데 필요한 양으로 포함된다. 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물의 pH는 pH 4 내지 pH 7.5일 수 있다.

[094] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 당 알콜을 포함할 수 있다. 당 알콜의 예는 비제한적으로, 만니톨, 글리세롤, 갈락티톨, 푸시톨, 이노시톨, 볼레미톨, 말토트리톨, 말토에테트라톨, 폴리글리시톨, 에리트리톨, 트레이톨, 리비톨, 아라비톨, 자일리톨, 알리톨, 둘시톨, 글루시톨, 소르비톨, 알트리톨, 이디톨, 말티톨, 락티톨, 이소말트, 및 이들의 임의의 조합을 포함한다.

[095] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 첨가제를 포함할 수 있다. 첨가제의 예는 비제한적으로, 희석제, 결합제, 계면활성제, 윤활제, 활택제, 코팅 물질, 가소제, 착색제, 향미제, 또는 약학적으로 불활성인 물질을 포함한다. 희석제의 예는, 예를 들어, 셀룰로스; 셀룰로스 유도체, 예컨대 미정질 셀룰로스 등; 전분; 전분 유도체, 예컨대 옥수수 전분, 사이클로덱스트린 등; 당; 당 알콜, 예컨대 락토스, D-만니톨 등; 무기 희석제, 예컨대 건조된 알루미늄 하이드록사이드 겔, 침강성 탄산칼슘, 마그네슘 알루미노메타실리케이트, 이염기성 칼슘 포스페이트 등을 포함한다. 결합제의 예는 예를 들어, 하이드록시프로필셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스(하이드록시프로필 메틸셀룰로스), 포비돈, 덱스트린, 풀루란, 하이드록시프로필 전분, 폴리비닐 알콜, 스카시아, 한천, 젤라틴, 트라가칸트, 마크로골 등을 포함한다. 계면활성제의 예는 예를 들어, 지방산의 수크로스 에스테르, 폴리옥실 스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 수소화된 피마자유, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 글리콜, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 소르비탄 트리올레에이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 소르비탄 모노팔미테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 폴리소르베이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 소듐 라우릴 설페이트, 라우로마크로골, 4차 암모늄 염(예를 들어, 벤질디메틸테트라데실암모늄 클로라이드 하이드레이트, 벤제토늄 클로라이드, 벤질세틸디메틸암모늄 클로라이드 하이드레이트, 벤질디메틸스테아릴암모늄 클로라이드 하이드레이트, 벤질도데실디메틸암모늄 클로라이드 디하이드레이트, 벤질도데실디메틸암모늄 브로마이드) 등을 포함한다. 윤활제의 예는 예를 들어, 스테아르산, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 등을 포함한다. 활택제의 예는 예를 들어, 건조된 알루미늄 하이드록사이드 겔, 마그네슘 실리케이트 등을 포함한다. 코팅 물질의 예는 예를 들어, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 2910, 아미노알킬 메타크릴레이트 코폴리머 E, 폴리비닐아세탈 디에틸아미노아세테이트, 마크로골 6000, 티탄 옥사이드 등을 포함한다. 가소제의 예는 예를 들어, 트리에틸 시트레이트, 트리아세틴, 마크로골 6000 등을 포함한다.

[096] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 치료학적 유효량의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 구체예에서, 약학적 조성물은 제형의 총 중량을 기반으로 하여 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르의 치료학적 유효량을 포함한다. 구체예에서, 약학적 조성물은 제형의 총 중량을 기반으로하여 약 5 중량% 내지 약 100 중량%, 약 5 중량% 내지 약 95 중량%, 약 5 중량% 내지 약 90 중량%, 약 5 중량% 내지 약 85 중량%, 약 5 중량% 내지 약 80 중량%, 약 5 중량% 내지 약 75 중량%, 약 5 중량% 내지 약 70 중량%, 약 10 중량% 내지 약 100 중량%, 약 10 중량% 내지 약 95 중량%, 약 10 중량% 내지 약 90 중량%, 약 10 중량% 내지 약 85 중량%, 약 10 중량% 내지 약 80 중량%, 약 10 중량% 내지 약 75 중량%, 약 10 중량% 내지 약 70 중량%, 약 15 중량% 내지 약 100 중량%, 약 15 중량% 내지 약 95 중량%, 약 15 중량% 내지 약 90 중량%, 약 15 중량% 내지 약 85 중량%, 약 15 중량% 내지 약 80 중량%, 약 15 중량% 내지 약 75 중량%, 약 15 중량% 내지 약 70 중량%, 약 20 중량% 내지 약 100 중량%, 약 20 중량% 내지 약 95 중량%, 약 20 중량% 내지 약 90 중량%, 약 20 중량% 내지 약 85 중량%, 약 20 중량% 내지 약 80 중량%, 약 20 중량% 내지 약 75 중량%, 약 20 중량% 내지 약 70 중량% 약 25 중량% 내지 약 100 중량%, 약 25 중량% 내지 약 95 중량%, 약 25 중량% 내지 약 90 중량%, 약 25 중량% 내지 약 85 중량%, 약 25 % 내지 약 80 중량%, 약 25 중량% 내지 약 75 중량%, 약 25 중량% 내지 약 70 중량%, 약 30 중량% 내지 약 100 중량%, 약 30 중량% 내지 약 95 중량% 중량, 약 30 중량% 내지 약 90 중량%, 약 30 중량% 내지 약 85 중량%, 약 30 중량% 내지 약 80 중량%, 약 30 중량% 내지 약 75 중량%, 약 30 중량% 내지 약 70 중량%, 약 35 중량% 내지 약 100 중량%, 약 35 중량% 내지 약 95 중량%, 약 35 중량% 내지 약 90 중량%, 약 35 중량% 내지 약 85 중량%, 약 35 중량% 내지 약 80 중량%, 약 35 중량% 내지 약 75 중량%, 약 35 중량% 내지 약 70 중량%, 약 40 중량% 내지 약 100 중량%, 약 40 중량% 내지 약 95 중량%, 약 40 중량% 내지 약 90 중량%, 약 40 중량% 내지 약 85 중량%, 약 40 중량% 내지 약 80 중량%, 약 40 중량% 내지 약 75 중량%, 약 40 중량% 내지 약 70 중량%, 약 45 중량% 내지 약 100 중량%, 약 45 중량% 내지 약 95 중량%, 약 45 중량% 내지 약 90 중량%, 약 45 중량% 내지 약 85 중량%, 약 45 중량% 내지 약 80 중량%, 약 45 중량% 내지 약 75 중량%, 약 45 중량% 내지 약 70 중량%, 약 50 중량% 내지 약 100 중량%, 약 50 중량% 내지 약 95 중량%, 약 50 중량% 내지 약 90 중량%, 약 50 중량% 내지 약 85 중량%, 약 50 중량% 내지 약 80 중량%, 약 50 중량% 내지 약 75 중량%, 약 50 중량% 내지 약 70 중량%, 약 55 중량% 내지 약 100 중량%, 약 55 중량% 내지 약 95 중량%, 약 55 중량% 내지 약 90 중량%, 약 55 중량% 내지 약 85 중량%, 약 55 중량% 내지 약 80 중량%, 약 55 중량% 내지 약 75 중량%, 약 55 중량% 내지 약 70 중량%, 약 60 중량% 내지 약 100 중량%, 약 60 중량% 내지 약 95 중량%, 약 60 중량% 내지 약 90 중량%, 약 60 중량% 내지 약 85 중량%, 약 60 중량% 내지 약 80 중량%, 약 60 중량% 내지 약 75 중량%, 약 60 중량% 내지 약 70 중량%의 화학식 I의 디카르복실산 에스테르의 치료학적 유효량을 포함한다.

[097] 구체예에서, 본 개시의 약학적 조성물은 화학식 I의 디카르복실산 에스테르를 포함하며, 제형화되고 당업자에게 공지된 모든 약학적 투여 형태로 혼입될 수 있다. 이러한 약학적 조성물은 치료를 필요로 하고 광범위한 용량에 걸쳐 투여될 대상체의 세포, 조직 및 기관에 사용될 수 있다. 구체예에서, 본 개시의 디카르복실산 에스테르는 대상체에게 1일당 0.001 mg/kg 내지 1000 mg/kg 체중의 1일 투여량으로 경구, 비경구, 국소 및 국부 투여될 수 있다.

키트

[098] 구체예에서, 본 개시는 또한, 특히 국소 투여를 위한, 본 개시의 약학적 조성물, 부위를 세정하기 위한 와이프, 적용된 물질을 펴기 위한 면봉 또는 브러시, 부위를 덮기 위한 접착 드레싱을 포함하는 키트를 제공하며; 임의적으로, 키트는 폐기 백 또는 용기를 포함할 수 있고; 임의적으로, 키트는 흡수성 요소를 포함할 수 있고; 임의적으로, 키트는 한 쌍의 장갑(예를 들어, 멸균 니트릴 또는 라텍스 장갑)을 포함할 수 있다.

실시예

재료 및 방법

[099] 화학물질: 디에틸 아젤레이트(>99% 순도)를 산-촉매화된 에스테르화를 사용하여 아젤라산 및 에틸 알콜로부터 합성한 후, 가스 크로마토그래피-질량 분광법(GC-MS)에 의해 결정시 99% 순도로 분별 증류하였다. 달리 언급되지 않는 한, 화학물질은 Sigma Chemical(St. Louis, MO, USA) 및 Thermo Fisher Scientific(Waltham, MA)으로부터 공급받았다.

[0100] 세포 증식 및 세포독성 검정: CellTiter 96 비-방사성 세포 증식 검정(MTT), CellTiter 96 AQueous One Solution 세포 증식 검정(MTS) 및 CellTiter-Glo 발광 세포 생존(ATP) 키트를 Promega(Madison, WI)로부터 구입하였다. 단백질 농도는 Micro BCA 단백질 검정 키트(Pierce Biotechnology, Rockford, IL)를 사용하여 측정되었다.

[0101] 인간 말초 혈액 단핵 세포의 분리: 건강한 지원자로부터 신선한 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 표본을 수득하였다. 혈액을 BD Vacutainer CPT 세포 제조 튜브(Beckton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)에 수집하고, 실온에서 1,500 x g로 원심분리하고, PBMC를 공급자의 프로토콜에 따라 분리하였다. 트리판 블루 배제를 이용한 세포 수 및 생존력 평가를 혈구계를 사용하여 측정하였다.

[0102] 막 유동성 측정: 막 유동성은 Membrane Fluidity Kit(PN M0271, Marker Gene Technologies, Eugene, OR)를 사용하여 측정되었다. PBMC를 세척하고, 10% 우태아 혈청(FBS)을 갖는 페놀-레드 비함유 RPMI 세포 배양 배지에서 7x105개 세포/mL로 조정하였다. 웰 당 60,000개의 PBMC를 96-웰 Acrowell 필터 플레이트(Pall Corporation, Port Washington, NY)에 3중으로 플레이팅하고, 1 μM 피렌데칸산 단독으로 또는 시험 물품(100 μM 내지 0.1 μM의 DEA 또는 10 μM 콜레스테롤)의 존재하에 처리하면서 20분 동안 어둠 속에서 부드럽게 혼합하였다. 엑시머의 형광(355 nm에서의 여기, 460 nm에서의 방출)을 단량체(355 nm에서의 여기, 400 nm에서의 방출)에 대해 보정하였다.

[0103] 다중 면역검정: 인간 및 뮤린 사이토카인, 케모카인 및 성장 인자 패널(렙틴 및 집락-자극 인자 G-CSF, GM-CSF 및 M-CSF 포함)을 Affymetrix(Fremont, CA)로부터 입수하였다. 뮤린 검정[R. Streeper, et al., Current Topics in Nutraceutical Research (2011) 9:1-12] 및 인간 검정[E. Izbicka, et al., Cancer Genomics Proteomics (2012) 9(1):27-35]에 대해 기재된 바와 같이 표본을 이중 또는 삼중으로 검정하였다. Luminex 100 IS 시스템(Luminex Corporation, Austin, TX)을 사용하여 다중 면역검정을 수행하였다. Bio-Plex Manager 4.1.1(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)을 사용하여 표준 곡선으로부터 분석물 농도를 계산하였다.

[0104] 병원체-관련 분자 패턴 수용체 효능제 연구: PRR 효능제 키트; 인간 Toll-유사 수용체(TLR1-9; n=9 효능제), 뉴클레오티드 올리고머화 도메인(NOD) NOD1/NOD2(n=10 효능제, n1, n2, … n10으로 표시됨) 및 덱틴-1(단일 효능제)은 InvivoGen(San Diego, CA)로부터 구입하였다. 형질세포양 인간 수지상 세포(MatTek Corporation, Ashland, MA)를 1.6x10⁵개 세포/mL로 희석하고, DEA의 부재 하에 또는 0.5% DEA와 함께 공급자에 의해 권장된 중간 범위의 농도의 효능제와 함께 24시간 동안 인큐베이션하였다. 측정된 분석물의 수준을 생존 세포의 수로 표준화하였다.

결과

실시예 1

[0105] 이 실험은 DEA가 인간 EpiDerm 조직에서 통증 신호전달의 바이오마커를 조절함을 입증한다.

[0106] EpiDerm 생물검정: EpiDerm^TM 3-차원 피부 모델은 MatTek Corporation(Ashland, MA)에서 구입하였다. 시험 물품: 25% DEA, 25% 아젤라산 소듐 염, 1% 살리실산 소듐 염, 1% 녹차 추출물, 1 μg/mL 독시사이클린 하이클레이트(독소루비신), 1%, 4-에톡시벤즈알데하이드, 및 0.025% 올-트랜스 레티노산을 단독으로 또는 자극제로서 사용된 0.1% 크로톤 오일과 조합하여 24시간 동안 3중으로 시험하였다. 컨디셔닝된 배지를 수집하고, 나머지 세포를 프로테아제 및 포스파타제 억제제의 존재 하에 얼음 상에서 균질화하고, 용해물을 원심분리에 의해 정화하였다. 배지 및 세포 용해물을 -70℃에서 급속 동결시켰다. 단백질을 겔 전기영동에 의해 분해하고, 유도성 산화질소 신타제(iNOS), S-니트로소시스테인, 및 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 2(모두 Abcam, Cambridge, MA)에 대한 인간-특이적 항체로 면역블롯에서 시각화하였다.

[0107] EpiDerm은 인간 노출 경로를 모방하는 조직 표면에 국소 적용을 가능하게 하는 생체내-유사 형태 및 성장 특성을 나타내는 비형질전환된 인간 각질세포의 3차원 인간 조직 작제물이다.

[0108] EpiDerm 조직이 화학적 자극제로서 사용된 0.1% 크로톤 오일에 노출되었을 때, 25% DEA로의 처리는 증식 및 생존력 검정에서 크로톤 오일 자극제 독성을 무효화하고, 현미경 검사에 의해 평가된 바와 같이 조직 완전성을 보호하였다. 세포 신호전달 실험은 DEA 및 국소 제형에서 일반적으로 사용되는 다른 화합물의 효과를 비교하였다: 아젤라산, 살리실산, 녹차 추출물, 독소루비신, 4-에톡시벤즈알데하이드 및 올-트랜스 레티노산. 57개의 조사된 사이토카인, 케모카인 및 성장 인자 중에서, DEA는 대부분의 염증 유도성 마커를 하향조절하였다. 크로톤 오일(화학적 자극제)을 대조군으로 사용하였다. 결과는 시험 물품으로 처리된 조직과 크로톤 오일만으로 처리된 조직에서 마커 수준의 퍼센트 차이로 제시된다. (표 1). 표 1에 제시된 바와 같이, DEA는 항-염증성 사이토카인 IL-4, IL-10, IL-13 및 IL-1ra를 동시에 상향조절하였다. 게다가, DEA는 또한 PGE2를 억제하고 렙틴, GM-CSF 및 G-CSF의 수준을 증가시켰다. PGE2의 하향조절과 함께 조사된 마커의 이러한 탠덤 상향조절 패턴은 DEA에 대해 독특하였고, 임의의 다른 시험 물품에서는 관찰되지 않았다.

표 1: DEA는 항염증 마커, 렙틴 및 집락 자극 인자를 동시에 상향조절하고 크로톤 오일 손상에 노출된 EpiDerm 조직에서 PGE2를 하향조절한다(대조군). 결과는 대조군의 백분율로 표현된다.

실시예 2

[0109] 이 실험은 DEA가 패턴 인식 수용체로부터의 세포 신호전달을 조절함을 입증한다.

[0110] 본 개시의 발명자들은 U자형 용량 반응을 갖는 변경된 막 단백질 기능을 보여주었다. 0.5%의 농도에서 DEA는 콜레스테롤 대조군 수준보다 18% 높게 막 유동성을 증가시켰다. DEA 막 유동화 활성의 생리학적 결과는 TLR, NOD 및 덱틴-1 수용체를 포함하는 다중 PRR을 발현하는 인간 형질세포양 수지상 세포에서 추가로 조사되었다. 인간 형질세포양 수지상 세포를 수용체 효능제 단독으로 또는 0.5% DEA와 함께 자극하였다.

[0111] 인간 형질세포양 수지상 세포(1.6x10⁵/ml)를 각각의 효능제의 생리학적 범위 내의 농도로 20개의 상이한 PRR 효능제 단독에 또는 0.5% DEA의 존재하에 24시간 동안 노출시켰다. 결과는 PRR 수용체 효능제 및 DEA로 처리된 세포(처리군)로부터의 분비된 ATP 대 효능제 단독으로 처리된 세포(대조군)에 의해 분비된 ATP의 수준의 비율로 표현된다. 효능제는 세포 표면 또는 세포 내부의 이들 각각의 수용체 위치에 따라 배열된다. 세포외 수준을 측정하고, 결과를 세포 + 수용체 효능제 단독으로부터의 ATP에 대한 세포 + 수용체 효능제 + DEA로부터 방출된 ATP의 비로서 표현하였다. 도 1에 도시된 바와 같이, ATP 비율은 DEA가 ATP 신호전달에 뚜렷한 영향을 미치지는 않은 2개의 NOD 수용체 리간드(n9 및 n10)를 제외하고 모든 경우에서 1 미만이었으나, DEA의 존재 및 부재하에 차등 사이토카인 패턴에 기초하여 2개의 NOD 리간드와 효과적으로 경쟁하였다.

[0112] 도 1을 참조하면, DEA는 모든 조사된 PRR 효능제와 경쟁하였다. DEA의 효과는 세포 내부에 위치한 것보다 세포 표면 수용체에 대해 더 크고, 또한 단량체 NOD 수용체와 비교하여 다량체 수용체(TLR 및 덱틴-1)에 대해 더 컸다. DEA가 각각의 조사된 수용체 효능제에 대해 독특하고 별개의 패턴으로 조사된 모든 PRR로부터의 세포 신호전달을 하향조절한다는 것이 추가로 입증되었다.

[0113] 본원에 개시된 바와 같이, 세포 신호전달에 심대한 효과를 갖는 모든 조사된 PRR 효능제와 경쟁하는 DEA의 능력의 발견은 예상치 못한 전례가 없는 것이다.

실시예 3

[0114] 이 실험은 국소 DEA가 생체내 침해수용성 열 자극에 대한 반응의 잠복기를 증가시켰음을 입증한다.

[0115] 생체내 연구: 동물 연구 및 모든 절차는 New Frontier Labs LLC(San Antonio, Texas)에서 동물 복지법 규정(Animal Welfare Act Regulations)(9 CFR 3) 및 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 NIH 가이드라인에 따라 수행되었다. 체중이 대략 25 g인 8-10주령의 수컷 및 암컷 Balb/c 마우스 둘 모두를 Taconic Farms(Hudson, NY)로부터 구입하였다. 동물을 전달 후 적어도 72시간 동안 순응시켰다. 실험 전에 동물을 처리군 및 대조군으로 무작위화하였다. DEA의 침해수용성 효과의 평가를 위해, 수컷 마우스만을 사용하였다(군당 n=8). 핫 플레이트 테스트는 본원에 참조로 통합된 문헌[S. Hunskaar, et al., Eur. J. Pharmacol. 1985;111(2):221-6]에 기재된 바와 같이 42℃의 불변 온도에서 수행하였다. DEA를 뒷다리에 순수하게(100%) 또는 에탄올(비히클)에서 희석하여 투여하였다. 처리제는 열 시험 5분 전에 투여되었다. 동물이 뒷발을 핥는 첫 번째 발생까지 열 노출 사이의 시간을 스톱워치로 측정하였다.

[0116] 통계 분석: 스튜던트 t 통계량을 사용하여 통계 분석을 수행하였다; p 값 <0.05는 유의한 것으로 간주되었다. 모든 샘플/데이터가 분석에 포함되었다. 연속적으로 분포된 결과는 평균 및 표준 편차로 요약되었다. 모든 통계적 시험은 SAS 버전 9.2를 사용하여 5%의 명목 및 실험-별 유의 수준으로 양측이었다.

[0117] 침해수용성 열 자극은 통증을 유발할 수 있고, 40℃ 이상의 임계값은 문헌[S. Hunskaar, et al., Eur J Pharmacol. (1985) 111(2):221-6]에 기술된 바와 같이 설치류에서 치료용 진통제의 효과를 테스트하는데 사용된다. 도 2는 마우스에서 열 민감성에 대한 DEA의 효과의 결과를 요약한 것이다. 반응의 증가된 잠복기에 의해 입증되는 바와 같이, DEA의 보호 효과에서 명백한 용량 반응이 있었다. 100% DEA의 가장 높은 농도에서, 열 민감성은 33%만큼 감소하였고, 이러한 농도의 DEA와 처리되지 않은 대조군 사이의 차이는 통계적으로 유의하였다(p=0.03). 국소 DEA에 의해 유발되는 통증 보호의 정도는 복강내 적용되는 아세틸살리실산 및 파라세타몰과 비슷하다[Hunskaar, et al., Behav. Brain Res. (1986) 21(2):101-8].

[0118] 국소 진통제의 경피 흡착은 종종 이들의 효능을 제한한다[E. Beetge, et al., Int J Pharm. (2000) 193(2):261-4]. 탁월한 안전성 및 효능 프로파일과 조합된 DEA의 물리화학적 특성은 국소 통증 관리에서의 사용에 유리하다.

실시예 4

[0119] 이 실험은 DEA가 PBMC 원형질막에서 콜레라 독소 서브유닛의 조립을 파괴한다는 것을 입증한다.

[0120] 지질 래프트 시각화: 인간 PBMC에서 지질 래프트의 형광 표지화는 Vybrant Alexa Fluor 488 Lipid Rafts Labeling Kit(PN V-34403, Life Technologies, Grand Island, NY)를 사용하여 수행되었다. PBMC(0.5% DEA의 부재 또는 존재하에서 10% FBS를 갖는 0.2 mL RPMI 배지 중 1x10⁶개 세포, 4중 반복)를 4℃에서 10분 동안 형광 콜레라 독소 서브유닛 B(CT-B) 컨쥬게이트로 표지하였으며, 폴리-리신 코팅된 커버슬립으로 옮기고, 차가운 포스페이트 완충된 염수로 세척하고, 공급자의 지침에 따라 항-CT-B 항체와 가교시켰다. 세포를 4% 포름알데하이드에 고정시키고, 0.1% 소 혈청 알부민을 갖는 차가운 포스페이트 완충된 염수로 세척하고, 건조 Vectashield에 장착하였다. 이미지를 공초점 현미경으로 획득하고, 아르곤 레이저 조명을 사용하여 형광 이미징을 수행하고, ImageJ 소프트웨어 버전 1.53e(ImageJ.nih.gov)를 사용하여 분석하였다.

[0121] DEA에 의한 지질 래프트-관련 단백질의 조절은 비브리오 콜레라에 의해 생산된 다량체 AB₅ 독소인 콜레라 독소를 사용하여 조사되었다. 독소의 B 서브유닛은 세포 표면 GM1 강글리오시드 수용체에 결합한다. 수용체 결합된 B 서브유닛은 지질 래프트로 지칭되는 막 마이크로도메인에 국한되며, 여기서 이들은 오량체성 막 공격 복합체를 형성한다. 독소의 A 서브유닛은 막 수용체 결합된 B 서브유닛의 오량체에 결합하고, 복합체는 세포내이입을 통해 내재화되어 독성 A 서브유닛을 세포질로 방출한다. 지질 래프트의 완전성은 콜레라 독소가 이의 독성 활성을 발휘하는데 필요하다(S. Ray, et al., J. Biol. Chem. 2012;287(36):30395-405).

[0122] 막 공격 복합체의 형성에 대한 DEA의 효과를 조사하기 위해, 인간 PBMC를 DEA로 처리된(1) 및 DEA로 처리되지 않은(2) 형광 표지된 콜레라 독소 B 서브유닛(1)에 노출하였다. 위상차 현미경을 사용하여 개별 세포를 시각화한 반면, 형광 현미경은 세포-결합된 콜레라 독소 B 서브유닛을 시각화하였다. 도 3은 DEA 미처리(좌측 컬럼) 및 DEA 처리(우측 컬럼) 대조군 세포의 대표적인 이미지를 보여준다. 위상차 및 상응하는 형광 이미지는 각각 상부 및 하부 행에 제시되어 있다. 대부분의 대조군 세포(77%)는 강화된 형광의 초점을 갖는 이들의 주변에 형광 고리를 나타내었다. 대조적으로, DEA-처리된 PBMC는 원형질막의 표면에 고르게 퍼지는 희미한 확산 형광을 나타내었고, 향상된 형광의 초점은 검출가능하지 않았다.

[0123] 이러한 결과는 DEA가 B 서브유닛 오량체 형성 및/또는 GM1 수용체에 대한 B 서브유닛 결합을 파괴하고, DEA가 원형질막 마이크로도메인의 조직화를 방해함을 시사한다.

본원에서 사용되는 약어는 하기 의미를 갖는다(여기에 제시되지 않은 약어는 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 일반적으로 사용되는 의미를 갖는다):

Claims

대상체에서 국소 진통 효과를 유도하는 방법으로서, 방법은 대상체에게 치료학적 유효량의 화학식 R₂OOC-(CH₂)_n-COOR₁(여기서 각각의 R₁ 및 R₂는 독립적으로 저급 알킬이고, n은 4 내지 10임)을 갖는 디카르복실산 에스테르를 국소 투여하는 것을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 디카르복실산 에스테르가 아젤라산 에스테르인, 방법.
제2항에 있어서, 아젤라산 에스테르가 디에틸 아젤레이트인, 방법.
제1항에 있어서, 대상체가 급성 통증, 만성 통증, 통각수용성 통증(nociceptive pain), 신경병증 통증(neuropathic pain) 및 침해성 통증(nociplastic pain)으로 구성된 군으로부터 선택되는 통증을 앓고 있는, 방법.
제1항에 있어서, 통증이 외상성 통증, 화학적 통증, 화상 통증, 허혈성 통증, 벌레 물림 통증, 찌르는 듯한 통증, 근골격 통증, 류마티스 또는 골관절염 통증, 수술-후 통증, 골 통증 및 피부-관련 통증으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
제1항에 있어서, 국소 진통 효과를 유도하는 것이 디카르복실산 에스테르에 의해 대상체의 지질 래프트를 파괴함으로써 달성되는, 방법.
제6항에 있어서, 지질 래프트가 모노시알로테트라헥소실강글리오시드1(GM1)을 포함하는, 방법.
제6항에 있어서, 지질 래프트가 포스포리파제 D2(PLD2)를 포함하는, 방법.
제6항에 있어서, 지질 래프트 막의 파괴가 원형질막 유동성의 증가로부터 발생하는, 방법.
제1항에 있어서, 국소 진통 효과를 유도하여 대상체에서 통증을 억제하는 것이 패턴 인식 수용체(PRR), 뉴클레오티드 올리고머화 도메인(NOD) 수용체 및 덱틴 수용체로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 수용체를 활성화시키는 것을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 진통 효과를 유도하여 대상체에서 통증을 억제하는 것이 렙틴, 대식세포 집락-자극 인자(M-CSF), 과립구 집락-자극 인자(G-CSF), 과립구 대식세포 집락-자극 인자(GM-CSF) 중 하나 이상의 활성 및/또는 발현의 합성 또는 방출을 촉진하는 것을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 국소 진통 효과를 유도하여 대상체에서 통증을 억제하는 것이 아데노신 트리포스페이트(ATP), 유도성 산화질소 신타제(iNOS) 및 프로스타글란딘 E2(PGE2) 중 적어도 하나의 활성 및/또는 발현의 합성 또는 방출을 억제하는 것을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 투여가 약 4 내지 약 8시간마다 수행되는, 방법.
제1항에 있어서, 투여가 1일 내지 30일의 기간 동안 수행되는, 방법.
제1항에 있어서, 대상체가 인간인, 방법.
대상체에게 치료학적 유효량의 화학식 R₂OOC-(CH₂)_n-COOR₁ (여기서 각각의 R₁ 및 R₂는 독립적으로 저급 알킬이고, n은 4 내지 10임)을 갖는 디카르복실산 에스테르; 및 약학적으로 허용되는 담체를 투여하는 것을 포함하여 대상체에서 국소 진통 효과를 유도하기 위한 제형.
제16항에 있어서, 디카르복실산 에스테르가 아젤라산 에스테르인, 제형.
제17항에 있어서, 아젤라산 에스테르가 디에틸 아젤레이트인, 제형.
제16항에 있어서, 디카르복실산 에스테르가 제형의 활성 성분인, 제형.
제16항에 있어서, 디카르복실산 에스테르가 제형의 총 중량을 기준으로 하여 약 5 중량% 내지 약 100 중량%의 치료학적 유효량으로 존재하는, 제형.