KR20230130248A

KR20230130248A - 장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물

Info

Publication number: KR20230130248A
Application number: KR1020220027165A
Authority: KR
Inventors: 변의홍; 유보경; 홍준표
Original assignee: 공주대학교 산학협력단
Priority date: 2022-03-03
Filing date: 2022-03-03
Publication date: 2023-09-12

Abstract

본 발명의 일 양태에서, 장수풍뎅이 유충(Allomyrina dichotoma larvae) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 면역 증강용 조성물을 제공한다.

Description

장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물{Composition for enhancing immunity comprising Allomyrina dichotoma larvae extracts as an active ingredient}

본 발명은 장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물에 관한 것이다.

인구증가로 인한 식량부족, 가축사육에 의한 환경오염 등 가축을 사육하는 것에 대한 문제들이 제기되며 기존 축산물을 대체할 식량자원으로써, 양질의 단백질과 지방산, 각종 무기질 함량이 우수한 식용곤충이 주목받고 있다.

국내에서는 갈색거저리 유충, 쌍별 귀뚜라미, 장수풍뎅이 유충, 흰점박이꽃무지 유충, 백강잠, 식용 누에, 메뚜기, 아메리카 왕거저리 유충, 수벌 번데기, 풀무치까지 총 10종류의 곤충이 식품의약품안전처로부터 식품 원료로 지정되어 있다. 그 중 장수풍뎅이(Allomyrina dichotoma)는 딱정벌레목 장수풍뎅이 과에 속하는 곤충으로 한국, 일본, 중국, 인도에 분포한다. 장수풍뎅이 유충은 탄수화물, 지방, 단백질을 포함한 세 가지 필수 영양소를 고르게 함유하고 있을 뿐 아니라 다른 식용곤충에 비해 트레오닌, 히스티딘 등의 필수아미노산과 철, 마그네슘과 같은 무기질 성분을 다량 함유하고 있어, 이를 활용해 기능성 식품 소재로서 개발하려는 연구들이 활발하게 진행되고 있다. 지금까지 장수풍뎅이 유충은 항산화 효능, 항비만, 간 보호 효과, 항염증 효과 등에 대한 연구들이 보고되어 있지만, 아직 면역 활성 기능성 식품 소재로 활용될 수 있는지에 관한 연구는 보고된 바 없다.

면역계는 항원과 같은 외부인자로부터 신체를 보호하고, 생체 내 환경의 변화에 대응하여 항상성을 유지하는 중요한 생물학적 방어 수단 중 하나로, 다양한 면역세포의 상호작용을 통해 이루어진다. 이 중 대식세포는 신체의 모든 주요 기관에 분포하여 체내에 침입하는 병원체와 이물질을 탐식, 제거하고 면역조절 인자들을 통해 면역 활성을 유도하는 선천성 면역의 주요 구성 요소이며, 전문 항원 제시 세포(Professional antigen presenting cell)로서 선천성 면역계와 후천성 면역계를 연결하는 핵심 면역세포로 알려져 있다. 활성화된 대식세포는 Mitogen activated protein kinases(MAPKs)의 활성과 Nuclear factor-κB(NF-κB)의 전사 등에 의해 사이토카인 생성 및 세포표면 활성인자의 발현인자 증가 등을 포함하는 면역 반응을 일으킨다. 대식세포의 활성으로 인한 선천면역체계의 자극은 T세포와 같은 후천면역 세포들을 활성화하여 여러 질병 위협에 대한 숙주 내성을 증가시킨다는 것이 널리 알려졌다. 최근 선천면역 반응 조절기능을 이용한 감염질환의 예방, 항암 면역치료법 등이 화제가 되면서 면역력을 강화하는 천연물을 비롯한 건강기능 식품 소재에 관한 연구들이 활발하게 진행되고 있다.

본 발명자들은 장수풍뎅이 유충 열수 추출물(Allomyrina dichotoma larvae hot-water extract; 이하 'ADLE'로 약칭함)을 처리하여 대식세포의 세포 생존율, NO와 염증성 사이토카인 분비능과 세포표면 활성인자(Cluster of differentiation; CD80/86, Major histocompatibility cmplex; MHC clsssⅠ/Ⅱ)의 발현, MAPKs 인산화 및 NF-κB의 발현에 미치는 영향을 관찰함으로써 ADLE의 대식세포 내 작용 기전과 면역 활성효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.

대한민국 등록특허 제10-1533600호(2015.07.10. 공고)

본 발명이 해결하고자 하는 과제는 장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물, 면역 조절 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물, 면역 증강용 건강기능식품 및 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 양태에서, 장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는, 면역 증강용 조성물을 제공한다.

장수풍뎅이 유충 추출물은, 열수 추출물일 수 있다.

장수풍뎅이 유충 열수 추출물은 50~90℃의 온도에서 추출될 수 있다.

면역 증강용 조성물은, 장수풍뎅이 유충 추출물을 100~200㎍/mL의 농도로 포함할 수 있다.

면역 증강용 조성물은, 산화질소(Nitric oxide, NO) 생성의 증가, 면역반응 관련 인자의 발현 증가, 핵인자-카파B(Nuclear factor-kappa B, NF-κB) 전사 활성 또는 유사분열 활성 단백질 인산화효소(Mitogen-activated protein kinas, MAPKs)의 인산화를 증가시킴으로써, 면역반응을 활성화할 수 있다.

면역반응 관련 인자는 종양괴사인자-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α) 및 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6)일 수 있다.

본 발명의 다른 양태에서, 장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 조절 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

면역 조절 관련 질환은 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 루프스(Lupus), 류마티스 관절염(Reumatoid Arthritis), 건선(Psoriasis), 염증성 장질환(Inflammatory Bowel Diseases), 알러지성 비염(Allergic Rhinitis), 천식(Asthma), 신장 섬유증(Renal Fibrosis), 심장 염증(Carditis), B 세포 림프종(B cell Lymphoma), 고혈압(Hypertension), 종양(Tumor), 암(Cancer), 호흡기 감염, 조류 독감, 베체트병, 다발성 근육염, 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피 피부염, 천식, 일차성 간경변, 피부근염, 굿 파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 류마티스열, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 미토콘드리아 관련 증후군 및 궤양 성 대장염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상의 질병일 수 있다.

본 발명의 또다른 양태에서, 장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는, 면역 증강용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은, 관절염, 천식, 변비, 위궤양, 위염, 위암, 피부질환 및 각종 암으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 질병을 예방 또는 개선할 수 있다.

본 발명의 또다른 양태에서, 장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 면역 증강용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 장수풍뎅이 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물은 산화질소를 생성시키고, 면역반응 관련 인자의 발현을 증가시키며, NF-κB 전사 및 MAPK 신호 전달 경로의 단백질 인산화를 활성화시키는 효과가 있어 면역 조절 관련 질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.

도 1은 대식세포 세포주(RAW264.7 세포)에 대한 장수풍뎅이 유충 열수 추출물(ADLE)의 효과를 나타낸 것이다(RAW264.7 세포에 ADLE를 0, 1, 10, 25, 50, 100 및 200μg/mL 농도로 처리하고, 양성 대조군으로 지질다당류(LPS)를 200ng/mL의 농도로 처리하여 24시간 후 세포 생존율을 분석한결과. 결과는 평균±SD로 표시 n=3).
도 2A 및 도 2B는 대식세포주(RAW264.7cells)의 사이토카인(TNF-α, IL-6) 생산 활성에 대한 장수풍뎅이 유충 열수 추출물(ADLE)의 효과를 나타낸 것이다(ADLE를 0, 1, 10, 25, 50, 100 및 200μg/mL 농도로 처리하고, 양성 대조군으로 지질다당류(LPS)를 200ng/mL의 농도로 처리하여 24시간 후, 배양 상등액에서 사이토카인 생성을 ELISA 키트를 사용하여 측정한 결과. 통계적 분석은 일원 분산 분석(one-way ANOVA)에 이어 Tukey의 사후 검정을 사용하여 수행. ***P<0.001 대조군(CON)군과 비교).
도 3은 대식세포주(RAW264.7cells)의 산화질소(NO) 생산 활성에 대한 장수풍뎅이 유충 열수 추출물(ADLE)의 효과를 나타낸 것이다(RAW264.7 세포에 100, 200㎍/mL 농도의 ADLE를 처리하고, 24시간 후, 배양 상등액의 NO 생성을 Griess 시약 분석으로 분석. 결과는 평균±SD로 표시 n = 3. 통계적 분석은 일원 분산 분석(one-way ANOVA)에 이어 Tukey의 사후 검정을 사용하여 수행. ***P<0.001 대조군(CON)군과 비교).
도 4A 및 도 5B는 RAW264.7 세포에서 추출 온도별 장수풍뎅이 유충 열수 추출물(ADLE)의 세포 생존율 및 THF-α 유도능을 나타낸 것이다((A) 온도별 세포 생존율 (B) 온도별 THF-α 유도능)
도 5는 RAW264.7 세포의 표면 분자에 대한 장수풍뎅이 유충 열수 추출물(ADLE)의 효과를 나타낸 것이다(ADLE 또는 LPS 처리 24시간 후, 세포를 anti-CD80, anti-CD86, anti-MHC-I 및 anti-MHC-II로 30분 동안 염색한 후 유세포 분석기를 이용하여 표면 마커 발현을 측정. 통계적 분석은 일원 ANOVA에 이어 Tukey의 사후 검정을 사용하여 수행. ***P<0.001 대조군(CON)군과 비교).
도 6A 내지 도 6C는 RAW264.7 대식세포에서 MAPK 인산화 및 NF-κB 전사 활성에 대한 ADLE의 효과를 나타낸 것이다(PLW는 30분 동안 100 및 200㎍/mL의 농도로 처리하였으며, LPS(200ng/mL)를 양성 대조군으로 사용. (A)는 phospho-p38, phospho-38, phospho-JNK, JNK, phospho-ERK, ERK (B)는 phospho-IκB-α, IκB-α 및 (C)는 NF-κB p65에 대한 특이적 항체를 사용하여 웨스턴 볼트 분석. 결과는 평균±SD로 표시 n=3. 통계분석은 대조군(CON)군과 비교하여 유의수준 *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001로 다중 Tukey 검정 수행).

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시형태에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 실시형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시형태에 한정되지 않는다. 명세서 전체를 통하여 유사한 부분에 대해서는 동일한 도면 부호를 붙였다.

본 발명에서 사용되는 용어 “장수풍뎅이 유충(Allomyrina dichotoma larvae)”은 딱정벌레목 장수풍뎅이 과에 속하는 곤충의 유충으로, 한국, 일본, 중국, 인도에 분포한다.

본 발명에서 용어 "추출물"은 장수풍뎅이 유충의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액이나 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.

본 발명에서 용어 "면역증강"은, 피부, 장기 등을 포함하는 생체에서 발생하는 비정상적인 상태, 또는 염증, 양성 또는 악성 신생물, 암 등 다양한 질환에 대한 신체 방어기전을 강화하거나 보조하는 모든 현상을 의미하는 것으로, 바람직하게는 대식세포와 같은 면역세포의 활성을 증강시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명에서 용어 “대식세포”는 전문 항원제시세포(Professional antigen-presenting cell)로써, 항원을 펩타이드 형태로 분해하여 주조직적합성복합체(MHC class I/II)에 제시하며, 미감작 도움 T세포(Th cells)의 수용체(T cell receptor)를 통해 제시된 항원을 인식함으로써 T세포의 증식과 활성을 유도한다. 이러한 T세포의 증식에는 항원제시세포의 CD80, CD86과 같은 공동자극인자(Co-stimulatory molecules)와 T세포가 발현하는 CD28의 결합을 통한 IL-2의 분비 또한 필수적이며, 효과 도움 T림프구(Effector helper T lymphocytes)로 분화하는 과정에서도 항원제시세포로부터 생성되는 사이토카인이 필요하다고 알려져 있다(Unanue, 1984; Liu와 Janeway, 1992; Guerriero, 2019). 대식세포가 활성화되어 있는 상태에서는 주조직적합성복합체, 공동자극인자의 발현 및 사이토카인 생성이 증가하며, 결과적으로 T림프구 증식과 효과 도움 T림프구 분화가 효과적으로 유도된다고 볼 수 있기 때문에, 대식세포 활성 유도 여부를 평가하는 것이 면역증진 기능성 소재개발 분야에서 효과적인 실험방법으로 널리 사용되고 있다(Geum 등, 2020). 이때, 대식세포의 활성화에 관여하는 신호체계 중, 가장 중요한 전사인자 중 하나로 알려진 NF-κB는 세포 자극에 의해 IκB로부터 분리되어 핵막으로 들어가, 사이토카인 유전자 전사를 활성시키며, 주조직적복합체 발현에도 관여한다(Chae, 2005). 또한, MAPKs의 인산화는 대식세포 활성화 과정 중 일어나는 탄소 물질대사, 세포 이동, 분화에서 중요하게 관여하며, 산화질소와 사이토카인 유전자 발현을 촉진시켜, 활성 대식세포로 유도하는데 필수적이라고 알려져 있다(Traves 등, 2012; Yang 등, 2014; Himes 등, 2006).

장수풍뎅이 유충 추출물은, 수증기증류법, 열수추출법, 용매추출법, 압착법, 탄산가스추출법, 환류냉각 추출법, 냉침법 및 용출법 등 천연물로부터 추출하는 방법으로서, 당업계에 알려진 다양한 방법을 통해 제조된 것일 수 있다.

장수풍뎅이 유충 추출물은 물, 탄소수 1~4의 알코올로 이루어진 군 중에서 선택된 1 종 이상의 추출용매로 추출된 것일 수 있으며, 바람직하게는 물 추출물(열수 추출물)일 수 있다.

장수풍뎅이 유충 열수 추출물은 50~90℃의 온도에서 추출될 수 있으며, 바람직하게는 70℃±5℃일 수 있다.

예를 들어, 장수풍뎅이 유충과 물을 1:5~20 중량비로 투입하고 열수(70℃±5℃의 온도)추출하여 제조될 수 있다. 또한, 추출된 추출물은 진공 여과 및 동결건조할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 면역 증강용 조성물은, 장수풍뎅이 유충 추출물을 100~200㎍/mL의 농도로 포함할 수 있으며, 농도가 100㎍/mL 미만이면, 면역 증진 효과가 미미하고, 200㎍/mL를 초과하면 복용 순응도, 제형화 측면에서 불리할 수 있다.

본 발명의 면역 증강용 조성물은, 산화질소(Nitric oxide, NO) 생성의 증가, 면역반응 관련 인자의 발현 증가, 핵인자-카파B(Nuclear factor-kappa B, NF-κB) 전사 활성 또는 유사분열 활성 단백질 인산화효소(Mitogen-activated protein kinas, MAPKs)의 인산화를 증가시킴으로써, 면역반응을 활성화시키는 효과를 나타낸다.

산화질소는 대식세포 활성화 지표 중 하나이며 사이토카인이나 미생물의 영향을 받아 대식세포에서 생성되는 반응 질소 중간체로, 세포 내 감염을 일으키는 미생물과 암세포를 제어하는 것으로 보고되는, 면역반응의 증감을 판단하기에 매우 좋은 표지 인자이다(Choo 등, 2017).

본 발명에서 면역반응 관련 인자는 종양괴사인자-α(Tumor necrosis factor-α, THF-α) 및 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6)일 수 있다.

활성화된 대식세포는 면역반응을 조절하기 위해 여러 사이토카인을 분비하는데 대식세포가 분비하는 대표적인 사이토카인에는 TNF-α 및 IL-6가 있다. TNF-α는 T세포 매개 면역반응에서 중요한 역할을 하고, IL-6는 B 림프구의 항체 생성 활성화에 중요한 역할을 한다고 알려져 있다(Ryu, 2008).

본 발명의 실시형태에서는, 장수풍뎅이 유충 열수 추출물이 대식세포 RAW264.7 세포에서 NO 생성을 농도의존적으로 증가시키고, 면역반응 관련 유전자 IL-6 및 TNF-α의 발현을 증가시키며, MAPK 및 NF-κB 신호 전달 경로를 활성화시키는 효과가 있음을 실험적으로 입증하였다.

따라서, 본 발명의 면역 증강용 조성물은 대식세포에서 MAPKs 또는 NF-κB의 신호 전달 경로를 활성화시킴으로써 면역 증강 활성을 나타내는 것일 수 있다.

본 발명에서 약학 조성물은 면역증강이 필요한 증상이 나타나는 질병에 사용되는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 면역 조절 관련 질환일 수 있으며, 면역 조절 관련 질환은 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 루프스(Lupus), 류마티스 관절염(Reumatoid Arthritis), 건선(Psoriasis), 염증성 장질환(Inflammatory Bowel Diseases), 알러지성 비염(Allergic Rhinitis), 천식(Asthma), 신장 섬유증(Renal Fibrosis), 심장 염증(Carditis), B 세포 림프종(B cell Lymphoma), 고혈압(Hypertension), 종양(Tumor), 암(Cancer), 호흡기 감염, 조류 독감, 베체트병, 다발성 근육염, 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피 피부염, 천식, 일차성 간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 류마티스열, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 미토콘드리아 관련 증후군 및 궤양성 대장염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상의 질병일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 미리세틴을 포함하는 약학조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 장수풍뎅이 유충 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사가 능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(Witepsol), 마크로골, 트윈(Tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에 함유되는 장수풍뎅이 유충 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 장수풍뎅이 유충 추출물은 1일 기준으로 0.0001~100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001~100mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.

본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 (Intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에서 “건강기능식품”이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.

본 발명에서 건강기능식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.

“식품 첨가물 공전”에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등일 수 있다.

예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품 조성물은 본 발명의 유효성분인 장수풍뎅이 유충 추출물을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한, 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.

본 발명에서 건강기능식품 조성물은 정제, 캡슐제, 환제, 과립제 또는 액제 형태로 제조될 수 있으며, 예로 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등의 형태로 사용할 수 있고, 통상적인 의미에서의 건강기능식품 조성물을 모두 포함한다.

본 발명에서 캡슐 형태의 건강기능식품 조성물 중 경질 캡슐제는 통상의 경질 캡슐에 본 발명의 유효성분인 장수풍뎅이 유충 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캡슐제는 사간 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캡슐기제에 충진하여 제조할 수 있다. 연질 캡슐제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.

본 발명에서 환 형태의 건강기능식품 조성물은 본 발명의 유효성분인 장수풍뎅이 유충 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다.

본 발명에서 과립 형태의 건강기능식품 조성물은 본 발명의 유효성분인 장수풍뎅이 유충 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.

본 발명에서 건강기능식품 조성물은, 액상 형태로 제형화할 경우, 장수풍뎅이 유충 추출물을 건강기능식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.1~20중량%, 바람직하게는 0.3~13중량%의 양으로 포함할 수 있고, 또한 고상 형태로 제형화할 경우, 건강기능식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.001∼15중량%, 바람직하게는 0.01~11중량%의 양으로 포함할 수 있다.

본 발명에서 건강기능식품은 면역 조절 관련 질환을 예방 또는 개선할 수 있고, 예를 들어, 관절염, 천식, 변비, 위궤양, 위염, 위암, 피부질환 및 각종 암으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 질병을 예방 또는 개선할 수 있다.

본 발명에서 면역 증강용 화장료 조성물은 피부 면역력을 향상시켜 피부염, 알레르기, 아토피, 피부 자극에 따른 홍반 및 부종 등을 효과적으로 억제할 수 있다.

본 발명에서 화장료 조성물은 피부 외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클린저 등의 제형을 가질 수 있다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로 플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명에서 화장료 조성물은, 액상으로 제형화하는 경우, 장수풍뎅이 유충 추출물을 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001~10중량%, 바람직하게는 0.01~1.5중량%의 양으로 포함할 수 있고, 또한 반고상 또는 고상으로 제형화하는 경우, 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001∼5중량%, 바람직하게는 0.01∼3중량%의 양으로 포함할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

<실시예 1> 재료 및 방법

<1-1> 장수풍뎅이 유충의 열수 추출물의 준비

장수풍뎅이 유충은 ㈜퓨처푸드랩(Busan, Korea)에서 구매하여 사용하였다. 장수풍뎅이 유충을 동결건조한 후, 실험실용 분쇄기(NSG-1002SS, Hanil, Seoul, Korea)로 분쇄하여 분말화하였다. 장수풍뎅이 유충 30g에 증류수를 600mL 가하고 온도별(50℃, 65℃, 70℃ 및 90℃)로 각각 3시간 동안 500rpm으로 교반 및 가열하였다. 추출물을 거름종이(No. 4, Whatman, Kent, UK)로 여과 후 이를 2,250×g에서 10분간 2회 원심분리하여 상등액을 획득하였다. 이 추출 상등액을 회전증발 농축기를 이용해 농축한 후 동결 건조하여 -70℃에서 보관하여 본 발명에 사용하였다.

<1-2> 세포 배양

마우스 유래의 대식세포주인 RAW264.7 cell은 한국 세포주은행(Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다. 세포 배양을 위해 10% Fetal bovine serum(FBS, Gibco, Carlsbad, CA, USA), 1% Antibiotics(100 unit/mL penicillin and 100 unit/mL streptomycin)가 포함된 Roswell Park Memorial Institute(RPMI)-1640 배지(Life Technology, Carlsbad, CA, USA)를 사용하였고, 이는 37℃, 5% CO₂인큐베이터(Incubator, Thermo, Waltham, MA, USA)에서 배양하였다.

<1-3> 세포 생존율 평가

96 Well plate에 2×10⁴cell/well의 농도로 RAW264.7 cell을 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 12시간 동안 배양하여 세포를 완전히 부착시켰다. 200ng/mL 농도의 Lipopolysaccharide(LPS)와 농도별(1, 10, 25, 50, 100 및 200㎍/mL) ADLE를 처리한 뒤 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 5mg/mL 농도의 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA) 용액을 well 당 20μL 첨가하여 2시간 동안 반응시키고 배양 상등액을 제거하였다. MTT 시약의 첨가로 생성된 Formazan을 녹이기 위해 Dimethyl sulfoxide(DMSO, Sigma-Aldrich Co.)를 100μL씩 첨가한 뒤 Microplate reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 Control(Medium only)의 흡광도 값을 기준으로 세포 생존율을 비교하였다.

<1-4> 사이토카인 분비 유도능 평가

48 Well plate에 5×10⁴cell/well이 되도록 RAW264.7 cell을 분주한 후 37℃, 5% CO₂ incubator에서 12시간 배양해 세포를 완전히 부착시켰다. 200ng/mL 농도의 LPS와 농도별(1, 10, 25, 50, 100 및 200㎍/mL) ADLE를 처리한 후 24시간 동안 배양하고 배양 상등액을 분리하였다. 분리된 배양 상등액을 사용하여 TNF-α와 IL-6의 함량을 측정하였다. 사이토카인의 함량은 ELISA kit(eBioscience Co., San Diego, CA, USA)를 사용하여 측정하였으며, 흡광도는 450nm에서 측정하였다. 이때 사이토카인의 농도는 kit에 포함되어 있던 TNF-α와 IL-6의 표준 용액(2,000pg/mL 및 1,000pg/mL)으로부터 산출된 표준 곡선을 이용하여 계산하였다.

<1-5> NO 유도능 평가

사이토카인 분비 유도능 평가에서 사용한 배양 상등액 중 세포독성이 나타나지 않으면서 사이토카인이 분비되는 농도(100, 200㎍/mL)를 사용하여 NO 분비량을 확인하였다. 상등액 100μL에 동량의 Griess(Sigma-Aldrich Co.) 시약을 처리하고 암실에서 10분 동안 반응시킨 후 Microplate reader를 이용해 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 NO의 농도는 Sodium nitrite(NaNO₂, Sigma-Aldrich Co.)를 통해 얻은 표준 직선을 이용하여 계산하였다.

<1-6> 세포 표면 활성 인자 평가

RAW 264.7 cell을 각 48 well plate에 5 × 10⁴ cell/well 농도로 분주하고 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 12시간 배양하여 완전히 부착시켰다. ADLE를 100, 200㎍/mL의 농도, LPS를 200ng/mL 농도로 처리한 후 24시간 동안 반응시키고 각각의 세포를 회수하였다. 항체의 비특이적인 결합을 방지하기 위하여 회수된 세포에 1㎍/mL의 Fcγ I/III(BD Biosciences, San Diego, CA, USA)을 처리하여 4℃에서 20분간 반응시킨 후, 대식세포 표면 활성 인자 분석을 위하여 Anti-cluster of differentiation(CD) 80-PE, Anti-CD86-PE, Anti-major histocompatibility complex(MHC)Ⅰ 및 II-PE(BD Biosciences)와 같은 세포 표면 항체를 1,000배씩 희석하여 각각의 세포에 처리하고 30분 동안 반응시켰다. 이를 유세포 분석기(FACS callibur, BD Biosciences)를 이용하여 분석하였다.

<1-7> 웨스턴 블롯 분석

6 Well plate에 1×10⁵cell/well의 농도로 RAW264.7 cell을 분주하여 12시간 동안 완전히 부착시키고 LPS를 200ng/mL의 농도로, ADLE를 100, 200㎍/mL의 농도로 처리한 뒤, 30분 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 반응시켰다. 배양이 끝난 후 세포를 수집하여 PBS로 3회 세척하고, RIPA Buffer(Rockford, IL, USA)를 첨가한 뒤 13,000 rpm에서 30분간 원심분리해서 Cell lysate를 분리하였다. 핵 내의 단백질을 분리하기 위하여 수집한 세포에 저장성 완충액[10mM N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(2-ethanesulfonic acid)(HEPES), pH 7.9, 1.5mM magnesium chloride(MgCl₂), 10mM potassium chloride(KCl), 0.5mM dithiothreitol(DTT), 1μM leupeptin과 0.2mM phenylmethylsulfonyl fluoride(PMSF)]을 20분간 처리한 후 12,000×g에서 1분간 원심분리하여 세포질과 핵을 분리하였다. 분리한 핵을 고장성 용액[20mM HEPES, pH7.9, 25% glycerol, 420mM ethylenediaminetetraacetic acid, 0.5mM DTT, 1μM leupeptin, 0.2mM PMSF]으로 처리하여 10,000×g에서 20분간 원심분리하여 핵단백질을 추출하였다. BCA protein detection kit(Thermo Fisher Scientific Inc., Rockford, IL, USA)을 사용하여 단백질을 정량하고, Well 당 20㎍의 Cell lysate를 10% Polyacrylamide gel에 각각 Loading하여 SDS-PAGE로 변성 분리하였다. 이를 Polyvin ylidene difluoride membrane(Millipore, Merck KGaA, Darmstadt, Germany)으로 Transfer하였고, Membrane은 Anti-body의 비특이적 결합을 방지하기 위해 Blocking solution(5% skim milk) 20mL로 1시간 동안 방치하였다. 이후 TBST(20mM, tris-HCl, 150mM NaCl, 0.05% Tween-20, pH 7.5)로 10분씩 3회 세척한 뒤 p-p38, p-ERK, p-JNK, p-IκB-α 및 NF-κB의 발현량을 측정하기 위해 1차 항체(Cell Signaling Technology, Danvers, MN, USA)를 1:3,000으로 희석하여 2시간 동안 반응시키고 TBST로 5분간 3회 세척하였다. 이후 2차 항체(Goat-anti rabbit lgG, Calbiochem, La Jolla, CA, USA)를 1:3,000으로 희석하여 1시간 동안 반응시키고 TBST로 15분간 4회 세척하고 electrochemiluminescence(Millipore Merck KGaA) reagent를 사용하여 인화하였다.

<1-8> 통계 분석

본 발명에서 얻어진 결과는 GraphPad Prism 5.0 프로그램(GraphPad Prism Software, San Diego, CA, USA)을 이용하여 일원 배치 분산분석(one-way ANOVA test)으로 분석하였고, 시료 간의 유의성은 Multiple Tukey's test를 이용하여 *P<0.05, **P<0.01 및 ***P<0.001 수준에서 비교하였다.

<실시예 2> ADLE의 세포 생존율, 사이토카인 분비능 및 NO 분비능 미치는 영향 분석

먼저 ADLE가 대식세포의 세포독성에 미치는 영향을 평가하기 위하여 RAW 264.7 cell에서 ADLE를 처리하고 24시간이 지난 후 생존율을 MTT assay를 통해 확인하였다. ADLE를 농도별(1, 10, 25, 50, 100 및 200㎍/mL)로 처리하고, 양성대조군으로 톨-유사수용체4(Toll-like receptor 4) 자극 리간드로써 염증반응을 유도하는 LPS(200ng/mL)를 사용하였을 때, 모든 농도에서 세포독성이 나타나지 않은 것을 관찰하였다(도 1). 이어서, ADLE 면역 활성을 평가하기 위해 사이토카인 분비능을 확인하였다.

대식세포에 농도별(1, 10, 25, 50, 100 및 200㎍/mL)로 ADLE와 LPS(200ng/mL)를 처리하였다. 그 결과, 100 및 200 μg/mL 농도의 ADLE 처리군에서 TNF-α 및 IL-6의 분비가 효과적으로 유도되는 것을 확인하였다(도 2). 따라서, 이후의 ADLE의 농도를 100 및 200㎍/mL로 고정하여 NO 생성능을 평가하였다. RAW264.7 cell에 100, 200㎍/mL로 처리된 ADLE와 200ng/mL 농도의 LPS 처리 그룹 모두에서 NO 분비능이 효과적으로 유도되었다(도 3). 결과적으로, ADLE는 100, 200㎍/mL 농도에서 사이토카인과 NO 생성을 유도하여 대식세포에서 면역 활성 효능을 갖는 것을 확인하였다.

<실시예 3> 온도에 따른 ADLE의 세포 생존율, THF-α 유도능 분석

대식세포 중 하나인 RAW264.7 cell에서 추출 온도별(50℃, 65℃, 70℃, 90℃) ADLE(100, 200㎍/mL)을 처리하고 세포 생존율, THF-α 유도능을 분석하였다(도 4).

그 결과, 모든 온도의 장수풍뎅이 유충 열수 추출물(ADLE)은 세포 사멸을 일으키지 않는 것을 확인하였으며, 70℃에서 많은 사이토카인(TNF-α)을 분비하는 것을 확인하였다.

즉, 세포독성이 없고, TNF-α의 분비량이 가장 많은 70℃ 장수풍뎅이 유충 열수추출물이 가장 우수한 것을 확인하였다.

<실시예 4> ADLE의 대식세포 세포 표면 활성 인자에 미치는 영향 분석

CD는 세포를 분리하고 분석하는 연구에서 매우 유용하게 사용되며, 대표적인 공동자극인자(costimulatory molecules)인 CD80 및 CD86의 발현은 T세포의 증식 및 활성화의 꼭 필요한 요소라고 알려져 있다(Byun과 Byun, 2015). 대식세포는 병원체를 탐식 후 표면에 존재하는 주조직적합성복합체(MHC)를 통하여 항원을 제시함으로써, T세포를 활성화하여 후천성 면역 반응의 활성화에 기여한다(Geum과 Jung, 2021). 따라서, ADLE 처리가 대식세포의 CD80, CD86 및 MHC class I과 II 발현에 미치는 영향을 유세포 분석기를 이용하여 확인하였다. 분석결과, 100, 200㎍/mL로 처리된 ADLE와 양성대조군인 200ng/mL 농도의 LPS 처리 그룹 모두에서 CD80, CD86, MHC-class I 및 MHC class II의 발현이 유의적으로 증가하였다(도 5). 따라서, ADLE는 대식세포의 세포 표면 활성 인자들의 발현을 증가시켜 면역세포의 활성화를 유도하는 것으로 확인된다.

<실시예 5> ADLE가 MAPKs 및 NF-κB의 인산화에 미치는 영향 분석

대식세포 초기면역반응은 세포 밖 신호 조절 인산화효소(extracellular signal-regulated kinase; ERK), c-Jun N-말단 인산화효소(c-Jun N-terminal kinase; JNK)와 세린/트레오닌 단백질 인산화효소(serine/threonine protein kinase; p38)를 포함하는 MAPKs의 인산화와 NF-kB가 중요하게 관여한다고 알려져 있다(Byun, 2013). 실시예 2를 통해 ADLE의 처리가 사이토카인과 NO의 분비를 증가시켜 대식세포의 활성화를 유도하는 것을 확인할 수 있었다. ADLE의 대식세포 면역 활성능이 MAPKs(ERK, JNK, p38)의 인산화와 NF-κB의 전사에 의한 것인지 확인하기 위하여, RAW264.7 대식세포에 100, 200㎍/mL의 농도의 ADLE와 양성대조군인 LPS를 처리하고, MAPKs와 NF-κB의 인산화 정도를 확인하였다. 그 결과, 100, 200㎍/mL로 처리된 ADLE와 LPS 처리 그룹 모두에서 ERK, JNK, p38의 인산화(도 6A)와 NF-κB의 핵 내 전사(도 6B 및 6C)가 효과적으로 유도된 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명에서 ADLE의 처리에 의해 유도되는 대식세포의 면역 활성은 MAPKs 및 NF-κB 활성과 연관된 것임을 알 수 있었다.

종합하면, 본 발명의 장수풍뎅이 유충 열수 추출물(ADLE)를 RAW264.7 세포에 처리한 결과, 사이토카인(TNF-α, IL-6)과 면역과정 항상성에 필요한 산화질소 생성이 유도되었고, 주조직적합성복합체 및 공동자극인자의 발현이 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, ADLE 처리로 RAW264.7 세포 내 MAPKs 인산화와 NF-κB의 핵 내 전사가 유도된 것을 확인하였으며, 이러한 결과는 ADLE가 MAPKs와 NF-κB 신호전달을 통해 대식세포 활성을 유도하여 면역 증진에 탁월한 효과가 있다는 것을 알 수 있다.

Claims

장수풍뎅이 유충(Allomyrina dichotoma larvae) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 면역 증강용 조성물.
제1항에 있어서,
장수풍뎅이 유충 추출물은 열수 추출물인, 면역 증강용 조성물.
제2항에 있어서,
장수풍뎅이 유충 열수 추출물은 50~90℃의 온도에서 추출된 것인, 면역 증강용 조성물.
제1항에 있어서,
면역 증강용 조성물은 장수풍뎅이 유충 추출물의 유효농도는 100~200㎍/mL인, 면역 증강용 조성물.
제1항에 있어서,
면역 증강용 조성물은 산화질소(Nitric oxide) 생성의 증가, 면역반응 관련 인자의 발현 증가, 핵인자-카파B(Nuclear factor-kappa B) 전사 활성의 증가, 또는 유사분열 활성 단백질 인산화효소(Mitogen-activated protein kinas)의 인산화를 증가시킴으로써, 면역반응을 활성화하는 것인, 면역 증강용 조성물.
제5항에 있어서,
면역반응 관련 인자는 종양괴사인자-α(Tumor necrosis factor-α) 및 인터루킨-6(Interleukin-6)인, 면역 증강용 조성물.
장수풍뎅이 유충(Allomyrina dichotoma larvae) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 면역 조절 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제7항에 있어서,
면역 조절 관련 질환은 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 루프스(Lupus), 류마티스 관절염(Reumatoid Arthritis), 건선(Psoriasis), 염증성 장질환(Inflammatory Bowel Diseases), 알러지성 비염(Allergic Rhinitis), 천식(Asthma), 신장 섬유증(Renal Fibrosis), 심장 염증(Carditis), B 세포 림프종(B cell Lymphoma), 고혈압(Hypertension), 종양(Tumor), 암(Cancer), 호흡기 감염, 조류 독감, 베체트병, 다발성 근육염, 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피 피부염, 천식, 일차성 간경변, 피부근염, 굿 파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 류마티스열, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 미토콘드리아 관련 증후군 및 궤양 성 대장염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상의 질병인, 약학 조성물.
장수풍뎅이 유충(Allomyrina dichotoma larvae) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 면역 증강용 건강기능식품 조성물.
제9항에 있어서,
건강기능식품 조성물은 관절염, 천식, 변비, 위궤양, 위염, 위암, 피부질환 및 각종 암으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 질병을 예방 또는 개선하는 것인 건강기능식품.
장수풍뎅이 유충(Allomyrina dichotoma larvae) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 면역 증강용 화장료 조성물.