KR20230107050A - 꽃양귀비 추출물을 포함하는 기능성 식품 조성물 및 이의 제조 방법 - Google Patents
꽃양귀비 추출물을 포함하는 기능성 식품 조성물 및 이의 제조 방법 Download PDFInfo
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Abstract
꽃양귀비 추출물(Papaver Rhoeas L.)을 포함하는 항산화, 면역 활성 및 진통 효과를 가지는 기능성 식품 조성물 및 이의 제조 방법이 개시된다. 또한, 천연자원인 꽃양귀비에서 추출한 생리활성물질을 이용하여 일상생활에서 부작용 없이 안전하고 간편하게 섭취할 수 있다.
Description
본 발명은 꽃양귀비(Papaver Rhoeas L.) 추출물을 포함하는 통증 완화 등을 위한 기능성 식품 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.
우리 주변 도로변이나 공원 등에 관상용으로 재배되는 꽃양귀비는 개양귀비라고도 불리며, 잎에 자루가 있고 줄기는 털이 많으며 열매가 갸름한 형태로 마약 성분이 없는 안전한 식물이다.
최근 연구에 따르면, 꽃양귀비 잎에 크립토핀(cryptopine) 등과 같은 유용한 생리활성 물질이 존재하는 것으로 보고되고 있는데, 이는 암세포를 억제하고 경련을 가라앉히는 켈리도닌(chelidonine)과 항암, 소염, 관절염 등에 효능이 있는 것으로 알려진 프로토핀(protopine) 등의 물질로 최면제나 염증치료제 또는 진통제 등으로 사용되고 있다.
또한, 인공적인 화학물질보다 부작용이 적은 천연자원은 여러 치료제의 선도 물질로서 개발되어 제약 산업의 소중한 자원으로서 이용되고 있다.
이에 본 발명자는 천연자원인 꽃양귀비에서 항산화, 면역 활성 및 진통의 효능이 우수한 생리활성물질을 추출하여, 안전하면서도 간편하게 섭취할 수 있는 식품조성물 및 이의 제조 방법을 개발하여 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명은 꽃양귀비(Papaver Rhoeas L.) 추출물을 포함하는 기능성 식품 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 부작용 없이 안전하고 간편하게 섭취가 가능할 뿐만 아니라 항산화, 면역 활성 및 진통의 효능이 우수한 기능성 식품 조성물과 이의 제조방법을 제공하고자 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면 꽃양귀비(Papaver Rhoeas L.) 추출물을 포함하는 기능성 식품 조성물이 제공된다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비 추출물은 꽃양귀비 전초로부터 추출된 식품 조성물일 수 있다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비 추출물은 꽃양귀비의 꽃잎으로부터 추출된 식품 조성물일 수 있다.
본 발명에서 상기 식품 조성물은 비트 추출물, 백봉령 추출물, 백련초 추출물, 히비스커스 추출물, 창출 추출물, 천궁 추출물 및 자소엽 추출물로 이루어진 그룹에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 식픔 조성물은 백련초 추출물 및 자소엽 추출물을 포함할 수 있고, 상기 꽃양귀비 추출물, 상기 백련초 추출물 및 상기 자소엽 추출물은 2:1:1(w/w)로 혼합되는 식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에 따르면 꽃양귀비(Papaver Rhoeas L.)를 분쇄하는 단계; 및 분쇄된 상기 꽃양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계를 포함하는 항산화, 면역 활성 및 진통 효능이 우수한 식품 조성물의 제조 방법이 제공된다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비를 분쇄하는 단계는, 0.1 내지 5 mm의 직경을 갖는 입자들로 상기 꽃양귀비를 분쇄하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계는, 비트, 백봉령, 백련초, 히비스커스, 창출, 천궁 및 자소엽으로 이루어진 그룹에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함하여 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비를 분쇄하는 단계 이후에, 상기 꽃양귀비를 로스팅하는 단계를 더 포함하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비를 로스팅하는 단계는, 200 내지 220
의 온도에서 10 내지 20분간 수행하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있다.
본 발명에서 상기 꽃 양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계는,
상기 로스팅된 꽃양귀비를 상기 물 또는 상기 알코올 수용액 중 어느 하나이거나 이들의 혼합물에 넣어 80 ~ 120℃에서 0.5분 ~ 24시간 가열하여 열수 추출되거나, 1 ~ 20℃에서 0.5분 ~ 24시간 냉침하여 냉수 추출하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있다.
본 발명에서 기능성 식품 조성물의 제조방법은 상기 꽃양귀비 추출물의 농축 공정 또는 동결 건조 공정 중 어느 하나 이상을 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 제공하는 항산화, 면역 활성 및 진통의 효능이 우수한 기능성 식품 조성물 및 이의 제조 방법은 꽃양귀비 추출물을 포함하여 항산화, 면역 활성 및 진통 효능을 증진시키고 일상 생활에서 섭취하기 간편한 식품 조성물로서의 기능성을 가진다.
또한, 천연 자원을 활용하는 본 발명의 실시예들은 인공적인 화학물질보다 부작용이 적거나 거의 없으며, 식품 뿐만 아니라 화장품, 의약품 건강기능식품 등에 적용이 용이하다.
도 1 은 실시예 및 비교예의 항산화능 실험에 대한 평가결과를 막대 그래프로 나타낸 이미지이다.
도 2 는 실시예 3 내지 4 및 비교예 2의 NO assay 실험결과를 막대 그래프로 나타낸 이미지이다.
도 2 는 실시예 3 내지 4 및 비교예 2의 NO assay 실험결과를 막대 그래프로 나타낸 이미지이다.
이하, 보다 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 하기 실시예는 예시적인 것으로, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 꽃양귀비(Papaver Rhoeas L.) 추출물을 포함하는 항산화, 면역 활성 및 진통 효능이 우수한 식품 조성물에 관한 것이다.
상기 꽃양귀비는 일반적으로 개양귀비를 지칭하는 용어로 사용되고 있고, 법적으로 재배, 유통을 금지한 양귀비를 제외하고 원예용이나 길꽃용으로 사용이 가능한 양귀비를 지칭하기도 하며 흔히 길꽃으로 볼 수 있는 조경용 양귀비는 대부분 '꽃양귀비', '개양귀비', '애기아편꽃' 등의 이름으로 불리고 있다.
또한, 국가표준식물목록에서 '꽃양귀비'는 양귀비과(Papaveraceae), 양귀비속(Papaver L.)으로, 그 학명이 파파베르 누디카울레(Papaver Rhoeas L.)인 것으로 기록되어 있다.
본 발명에서 용어, "추출물"은 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액에 있어 특정의 성분을 농축하여 얻는 것으로서, 특정의 활성 성분을 적당한 용매로 분리하고, 용매를 완전히 또는 대부분 증발시켜 남은 덩어리나 분말을 기준에 따라서 조정한 것을 의미할 수 있으며, 본 명세서에 있어서 추출물은 세 가지 형, 즉 반유동체(半流動體) 또는 시럽상, 환약상(丸藥狀) 또는 고형(固形), 건조된 분말 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
상기 '추출물'은 당업계에 공지된 추출, 분리 및 분획하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출, 분리 및 분획하여 수득한 것일 수 있고, 다양한 추출 또는 분획 용매와 추출 방법에 따라 추출될 수 있고, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함하며, 그 중에서도 극성용매 가용 추출물인 것이 적합하다. 더욱이 상기 극성 용매 가용 추출물은 물 또는 유기용매, 예를 들어, 상기 용매로는 물, 저급 알코올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매일 수 있다. 또한, 일반적인 추출물을 모두 포함하는 개념으로 열수추출물과 에탄올추출물을 포함하는 개념이 사용되고, 특히 '열수추출물'은 증류수 또는 정제수를 이용하여 열수추출방식에 의하여 추출된 것을 지칭하고, '에탄올추출물'은 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매, 바람직하게는 에탄올을 이용하여 추출된 것을 지칭한다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비 추출물은 꽃양귀비 전초로부터 추출된 식품 조성물일 수 있고 꽃양귀비의 전체 또는 일부분, 적합하게 꽃, 줄기, 잎, 뿌리, 씨앗, 전초, 또는 이들의 혼합물일 수 있으며 항산화, 면역 활성 및 진통의 효능을 증진시키는 측면에서 가장 적합하게는 꽃양귀비의 꽃잎으로부터 추출된 식품 조성물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 꽃양귀비는 시중에서 통상적으로 사용되는 꽃양귀비라면 품종의 제한이 없으며, 달리 정의하지 않는 한 발아 후 약 60일 초과 120일 미만, 75일 내지 105일, 80일 내지 100일, 적합하게는 85일 내지 95일 경과시 채취한 것을 의미한다.
상기 꽃양귀비를 발아 후 약 60일 초과 120일 미만에 채취시, 꽃 양귀비에서 생합성된 알칼로이드의 총량이 부족할 수 있고, 또 활성 물질들의 종류와 생합성량(예컨대, 발아 후 약 90 일경에 생합성량이 최고로 나타나는, Berberine, Chelidonine, Allocrytopine, Protopine, Dihydrosanguinarine, DL-Demethylcoclaurine, Tetrahydroberberine, Noscapine, Tetrahydropapaverine 등; 데이터 미제시)이 적거나 그로 인해 활성도가 저하될 수 있어 추출 후의 추출물에서 목적하는 수준의 항산화, 면역 활성 및 진통의 효과를 나타낼 수 없는 문제점이 있다.
본 발명에서 상기 식품 조성물은 비트 추출물, 백봉령 추출물, 백련초 추출물, 히비스커스 추출물, 창출 추출물, 천궁 추출물 및 자소엽 추출물로 이루어진 그룹에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 비트(Beta vulgaris)는 쌍떡잎식물 중심자목 명아주과의 두해살이풀의 뿌리채소로, 빨간 무라고도 불리고, 비트의 뿌리(무) 또는 잎을 분쇄 또는 세절하거나 건조한 것일 수 있고, 이들을 단독으로 사용하여도 좋고, 혼합하여 사용하여도 좋으며, 식물의 종류로서 비트라고 통용되는 것이라면 특별한 제한은 없다. 상기 비트는 베타인(Betaine)이라는 색소가 포함되어 있어 세포 손상을 억제하고 우수한 항산화 작용으로 폐암, 폐렴 등 암을 예방하며 염증을 완화하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
상기 백봉령은 복령(Poria cocas Wolf.)의 균핵을 말린 것으로, 복령은 소나무 뿌리에 기생하는 버섯을 의미한다. 상기 백봉령을 분쇄 또는 세절하거나 건조한 것일 수 있고, 이들을 단독으로 사용하여도 좋고, 혼합하여 사용하여도 좋으며, 식물의 종류로서 백봉령이라고 통용되는 것이라면 특별한 제한은 없다. 예로부터 백봉령은 백출과 더불어 심, 비, 신, 폐경에 작용하여 비장을 보하고 정신을 안정시키며, 체내 수액대사를 원활하게 하여 이뇨작용과 진정장용, 혈당강하작용, 강장제로 활용된 약재로서 아로니아, 한약재의 흡수와 소통을 담당하였고 실제로 동의보감에서 복령은 위를 보호하고, 부종을 완화하며 담음치료 등의 효능이 있다고 기록되어 있다. 또한 최근 연구에 의하면 이뇨작용과 혈당량을 낮추는 작용 및 진정작용 등을 하여 면역 증진작용 및 염증 치료의 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 특히 파키만(pachyman) 성분은 안정적인 체온유지와 혈액순환을 촉진시켜 면역력 향상에 도움을 주는 것으로 알려져 있다.
상기 백련초는 선인장목 선인장과에 속하는 선인장의 한 무리로 부채선인장 또는 백년초(Opuntia) 라고도 불리고, 백련초의 줄기, 뿌리, 잎, 꽃, 꽃잎, 종실(씨앗), 과육, 열매 껍질 또는 열매를 분쇄 또는 세절하거나 건조한 것일 수 있고, 이들을 단독으로 사용하여도 좋고, 혼합하여 사용하여도 좋으며, 식물의 종류로서 백련초라고 통용되는 것이라면 특별한 제한은 없다.
예로부터 백련초는 소염 및 해열진통제로 사용되어 왔는데, 실제로 본초강목에는 불로장생에 도움을 준다고 기록하고 있고 중약대사전에 따르면 열을 식히고 체내의 독을 풀어준다고 기록되어 있다. 최근 연구에 의하면 백련초는 소화기관에 존재하는 유익한 박테리아를 증진시켜 면역력의 증진 및 항염에 우수한 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
상기 히비스커스는(Hibiscus)는 쌍떡잎식물 아욱목 아욱과 무궁화속에 속한 식물을 총칭하는 것으로, 히비스커스의 줄기, 뿌리, 잎, 꽃, 꽃잎, 종실(씨앗), 과육, 열매 껍질 또는 열매를 분쇄 또는 세절하거나 건조한 것일 수 있고, 이들을 단독으로 사용하여도 좋고, 혼합하여 사용하여도 좋으며, 식물의 종류로서 히비스커스라고 통용되는 것이라면 특별한 제한은 없다. 상기 히비스커스는 아미노산,미네랄, 비타민C 및 A등이 풍부하게 함유되어 있어 피부노화방지는 물론 면역력을 증진시키고, 체내 활성산소를 줄여주는 폴리페놀(polyphenol)과 항염 및 항암작용에 효과적인 플라보노이드(Flavonoids)가 다량 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.
상기 창출은 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 여러해살이풀인 삽주(Atractylodes japonica)의 뿌리열매로, 뿌리열매를 분쇄 또는 세절하거나 건조한 것일 수 있고, 이들을 단독으로 사용하여도 좋고, 혼합하여 사용하여도 좋으며, 식물의 종류로서 삽주라고 통용되는 것의 뿌리열매라면 특별한 제한은 없다. 상기 창출은 위장과 비장을 튼튼하게 하고 신장을 따뜻하게 하여 피로와 갈증을 없애고, 노폐물의 배출에 효과적이며 체내의 염증(독)과 통증을 없애는 효과가 있다.
상기 천궁(Cnidium officinale)은 쌍떡잎식물 이판화군 산형화목 미나리과의 여러해살이풀로, 천궁의 줄기, 뿌리, 잎, 꽃, 꽃잎, 종실(씨앗), 과육, 열매 껍질 또는 열매를 분쇄 또는 세절하거나 건조한 것일 수 있고, 이들을 단독으로 사용하여도 좋고, 혼합하여 사용하여도 좋으며, 식물의 종류로서 천궁이라고 통용되는 것이라면 특별한 제한은 없다. 상기 천궁은 진정, 진통, 강장 등에 효능이 있어 두통 ·빈혈증 ·부인병 등을 치료하는데 사용하는 것으로 알려져 있다.
상기 자소엽(Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo)은 차즈기 또는 주름소엽(꿀풀과 Labiatae)의 잎 및 끝가지로, 항산화, 항염, 면역조절, 진정, 항균에 효과적이며, 특히 피부에 대해 강한 항염 효과와 면역증강 효과가 있다. 또한, 본초강목에서는 체내의 독과 냉기를 풀어준다고 기록되어 있다.
본 발명에서 상기 식품 조성물은 백련초 추출물 및 자소엽 추출물을 포함하며, 상기 꽃양귀비 추출물, 백련초 추출물 및 자소엽 추출물은 세포독성을 발생시키지 않으면서 항산화, 면역 활성 및 진통의 효능을 우수하게 유지시키는 측면에서 2:1:1(w/w)로 혼합될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
예를 들어, 상기 꽃양귀비 추출물, 상기 백련초 추출물 및 상기 자소엽 추출물의 혼합비가 2:1:1(w/w)를 벗어나는 경우, 세포독성이 발생하거나 면역 활성 효과가 저해되는 문제점이 발생할 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에 따르면, 꽃양귀비(Papaver Rhoeas L.)을 분쇄하는 단계; 및 분쇄된 상기 꽃양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계를 포함하는 항산화, 면역 활성 및 진통 효능이 우수한 기능성 식품 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비를 분쇄하는 단계는 상기 꽃양귀비를 0. 1 내지 5 mm, 0.1 내지 4.7 mm, 0.1 내지 4.4 mm 의 직경을 갖는 입자들로 분쇄할 수 있고 목적하는 추출물의 농도를 수득하기 위한 측면에서 적합하게는 0.1 내지 4 mm 의 직경을 갖는 입자들로 상기 꽃양귀비를 분쇄하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계는, 비트, 백봉령, 백련초, 히비스커스, 창출, 천궁 및 자소엽으로 이루어진 그룹에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함하여 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계인 식품 조성물의 제조 방법 제조 방법일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비를 분쇄하는 단계 이후에 상기 꽃양귀비를 로스팅하는 단계를 더 포함하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비를 로스팅하는 단계는 200 내지 220℃, 200 내지 215℃ 적합하게는 205 내지 215℃의 온도에서 10 내지 20분. 11내지 19분간 로스팅 하는 단계 일 수 있고 목적하는 추출물의 농도를 수득하기 위한 측면에서 가장 적합하게는 12 내지 18분간 로스팅하는 단계일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 꽃양귀비를 로스팅하는 단계는 로스팅기계 또는 가향기에서 이루어질 수 있고, 통상적으로 사용하는 로스팅 가능한 기계라면 제한이 없다.
본 발명에서 상기 꽃 양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계는 상기 로스팅된 꽃양귀비를 상기 물 또는 상기 알코올 수용액 중 어느 하나이거나 이들의 혼합물에 넣어 열수 추출 또는 냉수 추출하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있으며 통상적으로 사용하는 추출방법이라면 특별한 제한은 없다.
상기 열수 추출은 80 ~ 120℃, 85 ~ 115℃의 온도에서 수행될 수 있고, 목적하는 농도의 꽃양귀비 추출물 수득하기 위한 측면에서 적합하게는 85 ~ 110℃의 온도에서 0.5분 ~ 24시간 가열하여 열수 하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 냉수 추출은 1 ~ 20℃, 1 ~ 15℃의 온도에서 수행될 수 있고, 목적하는 농도의 꽃양귀비를 수득하기 위한 측면에서 적합하게는 1 ~ 10℃의 온도에서 0.5분 ~ 24시간 냉침하여 냉수 추출하는 것인 식품 조성물의 제조 방법일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 상기 꽃양귀비 추출물의 농축 공정 또는 동결 건조 공정 중 어느 하나 이상을 더 포함하는 항산화, 면역 활성 및 진통 효능이 우수한 식품 조성물의 제조방법일 수 있다.
상기 농축 공정 또는 동결 건조 공정은 통상적으로 사용되는 공정과정일 수 있고, 상기 꽃양귀비의 추출물을 농축 또는 동결하여 사용의 편리성을 증진시키는 공정과정이라면 특별한 제한은 없다.
본 발명의 상기 꽃양귀비 추출물을 포함하는 항산화, 면역 활성 및 진통 효능이 우수한 식품 조성물은 체내의 활성산소를 줄이고 항산화 효과가 우수하며, 면역 활성을 증대시키고 통증을 억제, 완화 또는 개선함으로써 진통 효능이 우수한 효과가 있다.
본 발명에 따른 상기 꽃양귀비 추출물을 포함하는 식품 조성물은 항산화, 면역 활성 및 진통 효능이 우수한 건강기능식품으로 포함될 수 있다.
이하, 본 발명의 꽃양귀비 추출물을 포함하는 항산화, 면역 활성 및 진통 효능이 우수한 식품 조성물에 관한 실시예를 통하여 보다 상세히 설명하도록 한다.
실시예
제조예1. 시료 추출물의 제조
건조된 꽃양귀비의 꽃잎, 백련초의 전초 및 자소엽을 각각 0.1 내지 4 mm 의 직경으로 잘게 분쇄한 후, 210℃의 온도에서 15분간 로스팅(덖음)과정을 수행하여 3종의 시료를 준비하였다. 준비된 상기 3종의 시료를 70% 에탄올 추출 및 열수 추출을 각각 수행하여 추출물을 제조하였다.
구체적으로 70% 에탄올 추출은 상기 3종의 시료 50g에 각각 70% 에탄올 100ml를 가하여 12시간 동안 추출한 후 감압 농축하고, 열수 추출은 상기 3종의 시료 50g에 각각 100ml 증류수를 가하여 90℃의 온도에서 2시간 동안 추출한 후 동결 건조하였다.
상기 3종의 시료를 이용한 배합비율에 따른 각각의 추출물을 표 1에 나타내었다.
| 추출법 | 원료 배합 비율 | 1ml 당 추출물 용질의 양(mg/ml) | |
| 70% 에탄올 추출 |
실시예1 | 꽃양귀비 100% | 125 |
| 실시예2 | 꽃양귀비 50% : 백련초 25% : 자소엽 25% | 76.923 | |
| 비교예1 | 백련초 50% : 자소엽 50% | 62.5 | |
| 열수 추출 | 실시예3 | 꽃양귀비 100% | 100 |
| 실시예4 | 꽃양귀비 50% : 백련초 25% : 자소엽 25% | 100 | |
| 비교예2 | 백련초 50% : 자소엽 50% | 125 | |
제조예2. RAW264.7 세포의 배양
실험에 사용한 세포주 RAW264.7 cell은 한국세포주은행(KCLB)에서 분양 받아 사용하였다. 배지는 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Hyclone) 및 5% Antibiotics/antimycotics (Sigma Aldrich)을 함유한 DMEM 성장배지를 사용하였고, 세포주는 5% CO2, 37℃및 습도가 조절된 배양기에서 배양하였다. 세포가 배양 접시에 80% 정도 차게 되면 Pohsphate-buffered saline (PBS)로 세척하여 1ml Trypsin/EDTA (Sigma Aldrich)를 배양 접시에 넣고 37℃에서 5분 동안 반응시킨 후 성장배지로 10배 희석하여 centrifuge한 뒤에 계대 배양하였다. 배지는 48시간마다 교환하여 세포를 배양하였다.
실험예1. 항산화능 평가 (ABTS assay 및 DPPH assay)
상기 표 1의 실시예 및 비교예의 추출물을 바탕으로 ABTS assay 및 DPPH assay를 수행하여 항산화능을 평가한 결과를 평균값으로 내어 도 1에 나타내었다.
구체적으로 ABTS assay 및 DPPH assay는 하기와 같이 수행하였다.
1) ABTS assay
① 실시예 및 비교예의 추출물 각각과 gallic acid를 메탄올에 연속 희석하여 시험검체 시험액을 제조한다.
② ABTS는 7mM ABTS와 2.4mM Ammonium persulfate를 20% Methanol에 녹여서 vortexing후 2시간 차광조건에서 incubation한 후 흡광값을 측정한 뒤 사용한다.
③ 96 well plate에 ①의 시험검체 시험액 및 ABTS를 세 번 반복하여 넣는다.
④ 실온 및 암실에서 30분간 반응시키며 중간중간 inverting한다.
⑤ 반응액은 microplate reader를 이용하여 734 nm 파장 흡광도를 측정한다.
⑥ 결과산출은 저해율 (radical scavenging activity) (%)로 나타내며 하기의 수식으로 계산한다.
Abs(control): 대조군으로 시험검체 시험액을 포함하지 않는 ABTS의 흡광도, Abs(sample): 시험검체 시험액 및 ABTS로 이루어진 시료의 흡광도
2) DPPH assay
① 실시예 및 비교예의 추출물 각각과 gallic acid를 에탄올에 연속희석하여 시험검체 시험액을 제조한다.
② DPPH는 2mg/ml 농도로 100% ethanol에 녹여서 vortexing한 후 흡광값을 측정한 뒤 사용한다.
③ 96 well plate에 ①의 시험검체 시험액 및 DPPH를 세 번 반복하여 넣는다.
④ 실온 및 암실에서 30분간 반응시키며 중간중간 inverting한다.
⑤ 반응액은 microplate reader를 이용하여 517 nm 파장 흡광도를 측정한다.
⑥ 결과산출은 저해율 (radical scavenging activity) (%)로 나타내며 하기의 방법으로 계산한다.
Abs(control): 대조군으로 시험검체 시험액을 포함하지 않는 DPPH의 흡광도, Abs(sample): 시험검체 시험액 및 DPPH로 이루어진 시료의 흡광도
또한, EC50의 값은 sample의 농도별(x) 저해율(y)을 사용하여 curve를 그려서 추세선에서 산출된 equation을 이용하여 sample의 저해율(y)에 50을 대입하여 해당되는 x값을 계산하여 구한다.
도 1에 따르면, 에탄올 추출물에서 보다 열수 추출물에서 모두 EC50의 값이 0.15mg/ml 이하로 항산화 효과가 현저하게 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 에탄올 추출물에서는 꽃양귀비 100%인 실시예 1이, 열수 추출물에서는 꽃양귀비 100%인 실시예3의 항산화 효능이 가장 높았으며, 꽃양귀비와 백련초 및 자소엽의 열수추출물을 혼합한 실시예 4의 경우 꽃양귀비 100%만을 에탄올 추출한 실시예 1에 대비하여 항산화 효능이 더욱 높은 것을 보아, 꽃양귀비를 포함하는 열수 추출물의 경우 항산화 효능이 뛰어난 것을 알 수 있었다.
실험예2. 세포독성 실험 (WST-1 assay)
RAW264.7 세포를 이용하여 상기 표 1의 실시예 및 비교예에 대한 세포독성 실험을 수행한 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
구체적으로, DMEM성장배지에 현탁 된 RAW264.7 세포를 96 well microplate에 3 Х 104 cells/200 ㎕ 성장배지/well(well 당 200 ㎕씩 세 번 반복)로 분주 하여, CO2 배양기에서 24 시간 배양한 후 플레이트의 배양액을 제거한다. 그 후 각 well에 실시예 3 내지 4 및 비교예 2에 따라 준비된 추출물을 200 ㎕ 씩 처리 하여 CO2 배양기(37℃ humidified)에서 24 시간 배양한다. (대조군으로는 아무 처리하지 않은 공시험액을 사용하며, 처리 배양액은 성장배지로 한다) 그 후 배양액 또는 시험액을 제거하고 WST-1 배지를 각 well에 처리 하여 CO2 배양기에서 30분 이상 반응한다. 반응 완료된 배지를 Microplate reader를 이용하여 420 nm 파장 흡광도로 측정한다.
결과산출값은 세포생존율(%)로, (시험군 OD420/ 공시험액 대조군 OD420) Х 100으로 계산하여 IC50(mg/mL)으로 하기 표2에 나타내었다.
| 구분 | IC50(mg/mL) |
| 실시예3 | 1.90 |
| 실시예4 | 최고 처리농도인 2mg/ml에서 세포독성 없음 |
| 비교예2 | 2.23 |
상기 표 2를 참조하면, 꽃 양귀비 열수추출물 100%인 실시예3의 경우 IC50 값이 1.9 mg/ml로 백련초와 자소엽의 열수 추출물 혼합물인 비교예 2에 대비하여 높은 세포독성을 나타내었고, 꽃양귀비와 백련초 및 자소엽의 열수 추출물을 혼합한 실시예 4는 최고 처리농도인 2mg/ml에서도 세포독성이 나타나지 않았다.
따라서, 꽃양귀비와 백련초 및 자소엽의 열수추출물을 혼합할 경우 세포독성이 나타나지 않는 것을 알 수 있었다.
실험예3. NO assay
면역활성효과 실험
상기 표 1의 실시예3 내지 4 및 비교예2의 배합비율에 따른 추출물을 이용하여 세포독성이 없는 농도 범위인 0.75mg/ml농도의 추출물로 각각 대식세포주에 처리하여 생성된 Nitric oxide함량을 배양액에서 측정하였다.
구체적으로 DMEM성장배지에 현탁한 RAW264.7 세포를 6 well plate에 1 Х 106 cells/2 ml 성장배지/well로 분주하여 CO2 배양기(37℃ humidified)에서 24 시간 배양한 후 plate의 배양액을 제거하였다. 그리고 실시예3 내지4 및 비교예2의 추출물 0.75mg/ml을 DMEM성장배지에 각각 희석하여 상기 plate의 각 well당 2ml로 처리한 후, 24시간 배양한 배양액을 회수하여 시료로 준비한다. 그리고 96well microplate를 준비하여 Griess reagent system (Promega) 프로토콜에 따라 Nitrite standard solution을 100~0uM 사이 농도구간에서 2배씩 연속 희석하여 측정한다. 반응 시약 첨가 후, 10분간 암소에서 반응시킨 후, 520nm 파장에서 흡광도를 측정한다.
또한, 추출물의 처리를 하지 않은 공시험액(처리배양액은 성장배지)을 비교예 3으로 나타내었다.
또한, 결과산출은 Nitrite standard curve 작성 후 산출된 수식의 y값에 시료의 흡광도 산입 후 x값(nitrite concentration)의 계산하여 도 2에 나타내었다.
도 2에 따르면, 꽃양귀비의 열수 추출물을 함유한 실시예 3 및 4는 어떤 물질도 처리하지 않은 공시험액인 비교예 3과 대비하여 NO생성량이 증가되었음을 확인할 수 있고, 구체적으로 양귀비, 백련초 및 자소엽의 열수 추출물 모두를 함유한 실시예 4의 경우 NO생성량이 현저히 높은 것을 확인할 수 있었다. 또한, 백련초 및 자소엽의 열수 추출물만을 함유한 비교예 2의 경우 공시험액인 비교예 3과 대비하여 NO생성량이 현저히 낮은 것을 확인 할 수 있었다.
따라서 실험예3 및 도 2에 따르면, 꽃 양귀비 열수추출물 100%인 실시예 3의 경우 비교예 3과 대비하여 면역활성의 효능이 높은 것을 알 수 있고, 백련초 및 자소엽의 열수 추출물을 혼합한 비교예 2의 경우 비교예 3과 대비하여 면역활성의 효능이 낮은 것을 알 수 있었다. 그러나 양귀비와 백련초 및 자소엽의 열수 추출물을 모두 혼합한 실시예 4의 경우 비교예 3뿐만 아니라, 실시예 3과 대비하여도 면역활성 효과가 현저히 높은 것을 확인할 수 있으므로, 양귀비 열수 추출물의 면역활성효과를 백련초 및 자소엽의 열수 추출물이 증대시키는 것을 알 수 있었다.
이에 따라, 상기 실험예 1을 참조하면, 꽃양귀비를 포함한 열수 추출물의 경우 항산화 효능이 현저하게 높은 것을 확인할 수 있고, 상기 실험예 2를 참조하면, 꽃양귀비의 열수 추출물에 백련초 및 자소엽의 열수 추출물을 혼합할 경우 세포독성이 발생하지 않는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 실험예 3을 참조하면, 꽃양귀비의 열수 추출물은 면역활성의 효능이 우수하고, 이러한 꽃양귀비의 열수 추출물에 백련초 및 자소엽의 열수 추출물을 혼합할 경우 면역활성 효과가 증대되는 것을 확인할 수 있었다.
실험예4. 진통 효과 실험데이터 (관능평가)
30~70대 남성 30명, 여성 30명을 대상으로, 꽃양귀비 추출물을 포함하는 조성물을 물 100중량부에 대하여 2중량부의 비율로 혼합하여 매일 1회씩 30일간 복용하였으며, 통증 완화 효능에 대한 관능 평가를 수행하였다. 구체적으로, 실시예 1 내지 4, 비교예 1 및 2의 추출물을 바탕으로 제조된 혼합물 각각에 대하여 남성 5명 및 여성 5명을 그룹화 하여 블라인드로 복용하게 하였다.
1~5점의 구간으로 나누어, 5점: 통증이 완전히 사라짐, 4점: 통증이 다소 사라짐, 3점: 보통, 2점: 통증이 거의 사라지지 않음, 1점: 통증이 동일한 수준으로 유지됨으로 평가하였다.
| 실시예1 | 실시예2 | 실시예3 | 실시예4 | 비교예1 | 비교예2 | |
| 결과 | 3.3 | 3.6 | 3.8 | 4.2 | 2.3 | 2.7 |
상기 표 3에 따르면, 꽃양귀비 추출물을 포함하는 실시예 1 내지 4는 모두 3.3점 이상으로 진통효과가 보통이상이나, 백련초 및 자소엽의 추출물만을 혼합한 비교예 1 및 2의 경우 진통효과가 현저히 낮은 것을 확인할 수 있어 꽃양귀비 추출물을 포함하는 경우 진통효과가 있는 것을 알 수 있었다.
구체적으로, 꽃양귀비 추출물만을 포함한 실시예 1 및 실시예 3과 대비하여 꽃양귀비, 백련초 및 자소엽의 추출물을 모두 혼합한 실시예 2 및 실시예 4의 진통효능이 더 높은 것을 확인할 수 있고, 꽃양귀비, 백련초 및 자소엽의 열수 추출물로 혼합한 실시예 4의 경우 4.2점으로 진통효과가 현저하게 우수한 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 꽃양귀비 추출물을 포함하는 경우 진통효과가 있으며. 백련초 및 자소엽 추출물을 혼합하는 경우 꽃양귀비 추출물의 진통효과가 증진되는 것을 알 수 있었다. 또한 에탄올 추출에서보다 열수 추출에서 진통효과가 현저하게 우수한 것을 알 수 있었다.
상술한 바에 있어서, 본 발명의 예시적인 실시예들을 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되지 않으며 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 다음에 기재하는 특허청구범위의 개념과 범위를 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 변경 및 변형이 가능함을 이해할 수 있을 것이다.
Claims (12)
- 꽃양귀비(Papaver Rhoeas L.) 추출물을 포함하는 기능성 식품 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 꽃양귀비 추출물은 꽃양귀비 전초로부터 추출된 기능성 식품 조성물. - 청구항 1에 있어서,
상기 꽃양귀비 추출물은 꽃양귀비의 꽃잎으로부터 추출된 기능성 식품 조성물. - 청구항 1 에 있어서,
비트 추출물, 백봉령 추출물, 백련초 추출물, 히비스커스 추출물, 창출 추출물, 천궁 추출물 및 자소엽 추출물로 이루어진 그룹에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함하는 기능성 식품 조성물. - 청구항 4에 있어서,
백련초 추출물 및 자소엽 추출물을 포함하며,
상기 꽃양귀비 추출물, 상기 백련초 추출물 및 상기 자소엽 추출물은 2:1:1(w/w)로 혼합되는 기능성 식품 조성물. - 꽃양귀비(Papaver Rhoeas L.)를 분쇄하는 단계; 및
분쇄된 상기 꽃양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계를 포함하는 기능성 식품 조성물의 제조 방법. - 청구항 6에 있어서,
상기 꽃양귀비를 분쇄하는 단계는,
0.1 내지 5 mm의 직경을 갖는 입자들로 상기 꽃양귀비를 분쇄하는 것인 기능성 식품 조성물의 제조 방법. - 청구항 6에 있어서,
상기 꽃양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계는,
비트, 백봉령, 백련초, 히비스커스, 창출, 천궁 및 자소엽으로 이루어진 그룹에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함하여 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계인 기능성 식품 조성물의 제조 방법. - 청구항 6에 있어서,
상기 꽃양귀비를 분쇄하는 단계 이후에,
상기 꽃양귀비를 로스팅하는 단계를 더 포함하는 것인 기능성 식품 조성물의 제조 방법. - 청구항 9에 있어서,
상기 꽃양귀비를 로스팅하는 단계는,
200 내지 220℃의 온도에서 10 내지 20분간 수행하는 것인 기능성 식품 조성물의 제조 방법. - 청구항 6에 있어서,
상기 꽃 양귀비를 물 또는 알코올 수용액으로 추출하는 단계는,
상기 로스팅된 꽃양귀비를 상기 물 또는 상기 알코올 수용액 중 어느 하나이거나 이들의 혼합물에 넣어 80 ~ 120℃에서 0.5분 ~ 24시간 가열하여 열수 추출되거나, 1 ~ 20℃에서 0.5분 ~ 24시간 냉침하여 냉수 추출하는 것인 기능성 식품 조성물의 제조 방법. - 청구항 6에 있어서,
상기 꽃양귀비 추출물의 농축 공정 또는 동결 건조 공정 중 어느 하나 이상을 더 포함하는, 기능성 식품 조성물의 제조방법.
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| KR20210074807A (ko) | 2019-12-12 | 2021-06-22 | 대한민국(농촌진흥청장) | 흰꽃 개양귀비 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 완화용 조성물 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210074807A (ko) | 2019-12-12 | 2021-06-22 | 대한민국(농촌진흥청장) | 흰꽃 개양귀비 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 완화용 조성물 |
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