KR20230090584A - 다중구리 산화효소의 활성 도메인 펩타이드를 포함하는 구리대사 관련 신경계 질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 다중구리 산화효소 활성 도메인 펩타이드를 포함하는 구리대사 관련 신경계 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 다중구리 산화효소 활성 도메인 펩타이드는 구리 유도 신경계 질환 모델에서 신경계의 수초화 손상을 치료하는 효과가 우수한 것을 확인하였다. 이는 본 발명의 다중구리 산화효소 활성 도메인 펩타이드가 현저한 신경계 질환 치료 효과가 있음을 의미하는바, 신경계 질환의 예방, 개선 및 치료 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.

Description

다중구리 산화효소의 활성 도메인 펩타이드를 포함하는 구리대사 관련 신경계 질환의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating neurological disorders related to copper metabolism comprising multicopper oxidase active domain peptide}

본 발명은 다중구리 산화효소 활성 도메인 펩타이드를 포함하는 구리대사 관련 신경계 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

세룰로플라스민(ceruloplasmin)은 혈액에서 구리를 운반하는 주요 단백질로, 철 대사에 중요한 역할을 한다. 상기 세룰로플라스민은 단백질 구조에 6개의 구리 원자를 포함하며, 간에서 합성된다고 알려져 있다.

한편, 구리는 많은 효소에서 필수적인 촉매 및 구조 보조인자이며, 주요 생물학적 과정에 관여한다. 필수 미량 영양소인 구리는 내재화 및 배설의 항상성에 의해 체내에서 균형을 이룬다. 어류에서 체내에 구리가 과량 존재할 경우 아가미, 간, 내장 및 신경계가 손상된다. 인간에서 과량의 구리는 종양 촉진제로, 암세포의 증식을 자극하고, 행동학적 변화도 유도한다. 뿐만 아니라, 인간에서 과량의 구리는 알츠하이머병의 원인으로도 알려져 있으며, 윌슨병, 자폐 스펙트럼 및 급성 백혈병과도 관련성이 있다고 알려져 있다. 앞서 언급한 바와 같이, 체내에 과량 존재하는 구리는 독성을 나타내나, 이와 관련된 분자 매커니즘은 알려진 바가 없다.

이에 본 발명자들은 세룰로플라스민 유래 다중구리 산화효소 도메인으로부터다중구리 산화효소 활성 도메인 펩타이드를 제작하고, 이의 구리대사 관련 신경계 질환 치료 효과를 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명의 목적은, 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 신경계 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 제공한다.

또한 본 발명은 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 신경계 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 신경계 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 다중구리 산화효소 활성 도메인 펩타이드는 구리 유도 신경계 질환 모델에서 신경계의 수초화 손상을 치료하는 효과가 우수한 것을 확인하였다. 이는 본 발명의 다중구리 산화효소 활성 도메인 펩타이드가 현저한 신경계 질환 치료 효과가 있음을 의미하는바, 신경계 질환의 예방, 개선 및 치료 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.

도 1은 확보된 낙지 유래 세룰로플라스민의 cDNA를 전기영동을 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 혈구염색법 및 이를 통해 낙지 유래 세룰로플라스민 유전자의 과발현 표현형을 관찰한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 세룰로플라스민의 활성 도메인 검색 결과 및 다른 생물과의 상동성 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 펩타이드 CP001, CP002 및 CP002의 최적의 펩타이드 크기 및 활성 정보를 추가 분석한 결과를 나타낸 도이다.
도 5은 구리 과잉 노출 조건에서 본 발명의 CP002S 처리에 따른 부화율을 조사한 결과를 나타낸 도이다.
도 6A는 형광 현미경을 이용하여, 구리 과잉 노출 신경계 질환모델에서 신경계 수초화 세포 손상이 CP002S 펩타이드에 의해 치유 또는 예방됨을 관찰한 결과를 나타낸 도이다.
도 6B는 상기 도 6A의 형광 현미경 관찰 결과에 기초하여 작성된 그래프를 나타낸 도이다.
도 7A는 구리 과잉 노출 신경계 모델에서 CP002S 펩타이드 처리에 따른 심박수를 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 7B는 상기 도 7A의 심박수 측정 결과를 기반으로 정상군과 비교하여 심박수 저해율을 계산한 결과를 나타낸 도이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 제공한다.

본 발명에 있어서, 펩타이드는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다. 상기 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성방법에 따라 제조될 수 있으며, 바람직하게는 고체상 합성기술에 따라 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 범위에는 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드의 기능적 동등물을 포함한다.

상기 기능적 동등물이란 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과 서열번호 7의 아미노산으로 표시되는 펩타이드와 적어도 80％ 이상의, 바람직하게는 90％, 더욱 바람직하게는 95％이상의 서열 상동성(즉, 동일성)을 갖는 것으로 예를 들면, 80％, 81％, 82％, 83％, 84％, 85％, 86％, 87％, 88％, 89％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 100％의 서열 상동성을 갖는 것을 포함하며, 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드와 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 펩타이드를 말한다. 본 명세서에서 서열 상동성 및 동질성은 서열번호 7의 아미노산 서열과 후보 서열을 정렬하고 갭(gaps)을 도입한 후 서열번호 7의 아미노산 서열에 대한 후보 서열의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 필요한 경우, 최대 백분율 서열 동질성을 수득하기 위하여 서열 동질성의 부분으로서 보존적 치환은 고려하지 않는다. 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열의 N-말단, C-말단 또는 내부 신장, 결손 또는 삽입은 서열 동질성 또는 상동성에 영향을 주는 서열로서 해석되지 않는다.

또한 상기 서열 동질성은 두개의 폴리펩타이드의 아미노산 서열의 유사한 부분을 비교하기 위해 사용되는 일반적인 표준 방법에 의해 결정할 수 있다. BLAST 또는 FASTA와 같은 컴퓨터 프로그램은 두개의 폴리펩타이드를 각각의 아미노산이 최적으로 매칭(matching) 되도록 정렬한다(하나 또는 두 서열의 전장서열을 따라 또는 하나 또는 두 서열의 예측된 부분을 따라). 상기 프로그램은 디펄트 오프닝 패널티(default opening penalty) 및 디펄트 갭 페널티(default gap penalty)를 제공하며 컴퓨터 프로그램과 함께 연계되어 사용될 수 있는 PAM250(표준 스코링 매트릭스; Dayhoff et al., in Atlas of Protein Sequence and Structure, vol 5, supp. 3, 1978)와 같은 스코링 매트릭스를 제공한다. 예를 들어, 백분율 동질성은 다음과 같이 계산할 수 있다: 일치하는 서열(indentical matches)의 총 수에 100을 곱한 다음 대응되는 스팬(machted span) 내의 보다 긴 서열의 길이와 두 서열을 정렬하기 위해 보다 긴 서열내로 도입된 갭(gaps)의 수의 합으로 나눈다.

상기 실질적으로 동질의 생리활성은 본 발명의 펩타이드의 활성, 즉, 신경계 질환의 예방, 개선 또는 치료 활성을 의미한다. 본 발명의 기능적 동등물의 범위에는 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드의 기본골격과 신경계 질환 치료 활성을 유지하면서 펩타이드의 일부 화학 구조가 변형된 유도체가 포함된다. 예를 들어 펩타이드의 안정성, 저장성, 휘발성 또는 용해도 등을 변경시키기 위한 구조변경이 이에 포함된다.

본 발명에 따른 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드는 서열번호 4의 아미노산 서열로 표시되는CP002의 최적의 펩타이드 크기 및 활성 정보를 ExPASy prosite를 통해 예측한 결과를 토대로 결정된 것으로, CP002 유래 12개의 아미노산(서열번호 2의 1024-1035번째)으로 구성된다. 본 발명자들은 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 ‘CP002S’로 명명하였다.

본 발명의 구체예에서, 상기 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드는 세룰로플라스민 유래인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 낙지(Octopus minor)의 세룰로플라스민 유래이나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 따른 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드는 낙지의 세룰로플라스민 유래의 다중구리 산화효소인 CP002 펩타이드에 기초하여 설계된 것으로, 발생독성이 없을 뿐만 아니라 구리 유도 신경계 질환 모델에서 신경계의 수초화 손상을 치료하는 효과가 있음을 확인하였다. 따라서 상기 펩타이드는 신경계 질환의 예방, 개선 및 치료 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 신경계 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 약학적 조성물, 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물일 수 있다.

본 발명의 구체예에서, 상기 펩타이드는 농도가 0.01 내지 20 μM인 것이 바람직하다. 본 발명의 조성물에 포함된 펩타이드의 농도가 0.01 μM인 경우 신경계 질환 치료 효과가 미미하여 바람직하지 않으며, 20 μM를 초과하는 경우 발생독성을 나타내어 바람직하지 않다.

본 발명의 구체예에서, 상기 신경계 질환은 탈수초성 신경계 질환인 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 탈수초성 신경계 질환은 면역학적 기구 혹은 대사 이상 등으로 인한 수초가 손상됨으로써 발병되는 질환을 의미한다. 상기 수초의 손상은 축삭돌기를 피복하고 있는 수초가 수초 자체 또는 이를 생성하는 희소돌기신경교(중추신경계) 또는 시반세포(말초신경계)의 병적 변화에 의해 탈락되어 발생한다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 상기 탈수초성 신경계 질환은 다발성 경화증, 시신경 척수염 및 급성파종성 뇌척수염으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 구체예에서, 상기 신경계 질환은 구리(copper) 대사 장애에 의해 유도된 신경계 질환인 것이 바람직하다.

본 발명의 신경계 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물은 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드와 함께, 동질의 활성을 갖는 공지의 유효성분을 1 종 이상 더 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 상기 구리 대사 장애에 의해 유도된 신경계 질환은 파킨슨병, 알츠하이머병, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴병, 멘케스병, 윌슨병, 프라이온병, 후두각증후군, 선천성 철분 대사이상증(Aceruloplasminemia), 이상감각증상, 운동장애 및 시신경염으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 보다 바람직한 구체예에서, 상기 신경계 질환은 구리(copper) 대사 장애에 의해 유도된 수초화 결함에 의한 신경계 질환일 수 있으며, 예컨대, 다발성 경화증, 파킨슨병, 알츠하이머병, 멘케스병 및 윌슨병으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 언급된 신경계 질환은 구리 과잉 노출; 및 탈수초화 결함 회복 효과;와 연관성이 입증된 질환이다.

본 발명의 조성물은 약학적 조성물, 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물일 수 있다.

본 발명의 조성물이 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물인 경우 본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 실제 임상투여 시에 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있으며, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 이용하는 것이 바람직하다.

상기 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 또한, 상기 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

상기 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 상기 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 상기 약학적 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 예를 들어, 0.05 내지 5 mg/kg의 농도로 투여되는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 0.1 내지 0.4 mg/kg, 더욱 바람직하게는 0.2 내지 0.35 mg/kg, 더더욱 바람직하게는 0.25 mg/kg일 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로 및 투여 방식은 각각 독립적일 수 있으며, 그 방식에 있어 특별히 제한되지 아니하며, 목적하는 해당 부위에 상기 약학적 조성물이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다.

상기 약학적 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다. 상기 비경구 투여 방식으로는 예를 들어 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 경피 투여 또는 피하 투여 등이 포함된다.

본 발명의 약학적 조성물은 신경계 질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 신경계 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물일 수 있다.

본 발명에 있어서, 식품은 질병의 예방 및 개선, 생체방어, 면역, 병후의 회복, 노화 억제 등 생체조절 기능을 가지는 식품을 말하는 것으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해해야 한다.

본 발명의 식품 조성물이 식품 첨가물인 경우 상기 유효성분인 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 유효성분인 펩타이드는 원료에 대하여 15중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 건강음료 등 다양한 형태일 수 있다. 본 발명의 건강기능식품 조성물이 건강음료 형태인 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 내지 10 g, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.1 g이다.

상기 외에 본 발명의 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생략하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 낙지 유래 세룰로플라스민 분리

1-1. 낙지 유래 세룰로플라스민의 cDNA 확보

낙지로부터 다중구리 산화효소(multicopper oxidase 1, MCO1)를 암호화하는 세룰로플라스민(ceruloplasmin) 유전자를 분리하기 위하여, 성체 낙지의 부위별 시료 및 낙지의 발생 단계별 시료를 준비하였다. 준비된 시료로부터 total RNA를 추출하였다. 추출된 total RNA를 정량한 후 oligo dT 프라이머 및 역전사 효소(superscript IV first-strand synthesis system, invitrogen)를 이용하여 cDNA 라이브러리를 제작하였다. 상기 cDNA 라이브러리는 유전자 분리를 위한 주형으로 사용하였다.

상기 cDNA 라이브러리로부터 세룰로플라스민 증폭을 위한 프라이머를 제작하였고, 구체적인 서열은 표 1에 나타내었다.

유전자	정방향 프라이머(5` to 3`)	역방향 프라이머(5` to 3`)	증폭산물의 크기(bp)
세룰로플라스민	AATCGATATGTCTCACACTTTGTGGACG(서열번호 5)	CCTCGAGAGGGTTTCTTACAATCAAGTC(서열번호 6)	3178

세룰로플라스민 유전자를 분리하기 위하여, AccuPower PCR Premix & Master Mix kit(bioneer)로 PCR을 수행하였다. 구체적으로, 표 1의 정방향 및 역방향 프라이머 각 3 μl 및 cDNA 라이브러리 1 μl를 준비하였고, 멸균 3차 증류수로 최종 부피를 30 μl로 조절하였다. PCR은 표 2의 조건으로 수행하였다.

반복수	조건	온도(도)	시간(분)
1	Pre-denaturation	95	5
33	Denaturation	95	0.5
	Annealing	56	0.5
	Extension	72	1.5
1	Post-extension	72	7

PCR을 통해 얻은 증폭 산물을 아가로스 젤을 이용한 전기영동을 통해 확인하였다. 전기영동 결과는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 증폭 산물은 예상된 위치(즉, 3178 bp)에서 밴드를 확인하였다.

이후 실험을 위하여, 소독한 칼로 아가로스 젤의 밴드 부위를 분리하였고, gel extraction kit(Qiagen)을 이용하여 DNA를 정제하였다.

1-2. 낙지 유래 세룰로플라스민의 염기서열 및 아미노산 서열 분석

정제된 DNA의 염기서열을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 구체적으로, pGEM T-easy vector(Promega)를 이용하여 4℃에서 12시간 동안 라이게이션(ligation)시켰다. 형질전환(transformation) 방법으로 Competent cell(DH5α, RBC)에 라이게이션된 DNA를 삽입하였고, white colony 및 colony PCR 방법으로 목적하는 DNA가 삽입된 클론을 선별하였다. 선별된 클론을 LB 액체배지로 배양하였다. 배양액 8 ml을 취한 후 Plasmid DNA miniprep kit(Qiagen)을 이용하여 클로닝 벡터에 삽입된 DNA를 확보하였다. 확보된 DNA의 서열의 분석은 마크로젠 사(한국)에 의뢰하여 분석하였다.

서열 분석 결과, 확보된 DNA(즉, 세룰로플라스민 유전자)의 염기서열은 서열번호 1로 표시되는 것을 확인하였다.

또한 NCBI blastx, blastp로 reference 및 model organisms 데이터베이스로 정렬(alignment)하여, 위에서 확인된 세룰로플라스민 유전자(서열번호 1)는 서열번호 2의 아미노산 서열로 번역되는 것을 확인하였다.

실시예 2. 혈구염색법을 통한 조직 내 비정상적인 혈액 침착 확인

모델 동물인 제브라피쉬에서 낙지 유래 세룰로플라스민 유전자의 과발현(overepxression) 표현형을 관찰하였다. 구체적으로, 상기 실시예 1에서 확보된 낙지 유래 세룰로플라스민 유전자(서열번호 1)를 제한 효소 Cla 1 및 Xho 1을 처리하였고, pCS2+ 발현 벡터에 삽입하였다. 세룰로플라스민 유전자가 삽입된 pCS2+ 발현 벡터에 제한 효소 Sac II를 처리하여, 선형 DNA를 제작하였다. in vitro transcription(Sp6, Invitrogen) 방법으로 상기 선형 DNA를 주형으로 하는 mRNA를 합성하였다. 합성된 세룰로플라스민 mRNA를 phenol/chloroform 정제방법으로 분리한 후 -70℃에서 보관하였다.

야생형 제브라피쉬를 교미하여 수정란을 확보한 후, 1-4 세포 단계의 배아를 인젝션 플레이트에 정렬하였다. 미세유리관에 합성한 세룰로플라스민 mRNA를 마이크로로더 팁(microloder tip)으로 로딩한 후 미세주입장치, 피코펌프 및 현미경을 이용하여 배아에 일정 농도(180 pg 또는 350 pg)로 주입하였다. 세룰로플라스민 mRNA를 주입한 개체를 인큐베이터에서 배양하였으며, 주입 48시간 후 혈구염색시약(o-dianisidine(0.6mg/ml), 0.01M Sodium acetate(pH 4.5), 0.65% H₂O₂, 40% ethanol)으로 30분 동안 암처리한 후 수세하였다. 수세 후 세룰로플라스민 mRNA를 주입한 개체에 고정액(4% paraformaldehyde)을 처리하여 1시간 이상 반응시켰다. 고정된 세룰로플라스민 mRNA를 주입한 개체를 80% 글리세롤/20% PBS에 넣었고, 실체 현미경 하에서 사진을 촬영하였다. 현미경 관찰 결과는 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 세룰로플라스민 mRNA를 주입한 개체는 정상군에 비해 세룰로플라스민 단백질이 생체 내과발현에 의해 조직 내 비정상적인 혈액 침착 현상이 관찰되었다.

실시예 3. 낙지 유래 세룰로플라스민의 활성 도메인 검색

상기 실시예 1에서 확인한 낙지 유래 세룰로플라스민의 아미노산 서열(서열번호 2)에 기초하여, 세룰로플라스민의 활성 도메인을 검색하였다. 상기 활성 도메인 검색은 ExPASy prosite(https://prosite.expasy.org/) 및 MOTIF Search(https://www.genome.jp/tools/motif/)을 활용하였다.

검색된 세룰로플라스민의 활성 도메인 정보에 기초하여, 낙지 유래 세룰로플라스민의 활성 도메인과 인간, 생쥐, 물고기 유래 활성 도메인의 상동성을 분석하였다. 상기 상동성 분석은 ClustalW 프로그램(https://www.genome.jp/tools-bin/clustalw)을 활용하였다.

검색된 세룰로플라스민의 활성 도메인 및 다른 생물과의 상동성 분석 결과는 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 검색된 세룰로플라스민의 활성 도메인은 세룰로플라스민의 324 내지 344번째 아미노산; 및 1019 내지 1039번째 아미노산;인 것을 확인하였다. 상기 두 활성 도메인은 각각 CP001(324-344번, 서열번호 3) 및 CP002(1019-1039번, 서열번호 4)로 명명하였다. 상기 CP001 및 CP002 부위는 다른 생물(인간, 생쥐 및 물고기)과 상동성이 있으나, 일부 아미노산이 상이한 것을 확인하였다.

상기 펩타이드 CP001 및 CP002의 최적의 펩타이드 크기 및 활성 정보를 추가 분석하였다. 상기 분석은 활성도메인 검색사이트[ExPASy prosite (https://prosite.expasy.org/), MOTIF Search (https://www.genome.jp/tools/motif/)]를 활용하였다. 최적의 펩타이드 크기 및 활성 정보를 분석한 결과는 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, ExPASy prosite에서 활성을 예측한 결과, CP001은 21개에서 길이를 줄일 경우 다중구리 산화효소로의 활성 예측이 불가하였으며, CP002는 최대 12개의 길이에서도 활성이 예측되었다. MOTIF Search site에서 활성을 예측한 결과, CP001 및 CP002의 펩타이드 길이를 줄인 결과 두 펩타이드 모두 활성 예측이 불가하였다. 이에, 최적의 펩타이드 크기 및 활성 정보 분석프로그램(ExPASy prosite)를 이용한 활성 예측 결과를 토대로, CP002 유래 12개의 아미노산(서열번호 2의 1024-1035번째)를 바이오스템 업체에 의뢰하여 합성하였다. 상기 CP002 유래 12개 펩타이드는 CP002S로 명명하였으며, 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시된다.

후술되는 실시예에서는 상기 CP002S의 활성을 조사하였다.

실시예 4. 모델동물의 배아에서 CP002S의 처리농도 비교 분석

4-1. CP002 및 CP002S 처리 시간에 따른 생존율 분석

구리에 노출된 제브라피쉬의 배아에서 CP002S 처리에 따른 발생독성을 분석하였다. 구체적으로, 제브라피쉬 야생형(wild-type) 암수를 교미하여 확보한 수정란을 배양기(28.5도)에서 안전하게 발생과정을 유지하였다. 수정 후 24시간째 정상적으로 성장한 배아들을 24-well plate에 13개체씩 분주한 후 구리 과잉 노출 조건에서 유지하였다. 분주된 개체에 CP002(5, 10 uM) 또는 CP002S(5, 10 uM)를 처리하였다. 선행연구에서 CP002 단독처리에 의한 발생독성을 확인한 결과를 참조하여 CP002S에 대한 실험농도의 범위를 5 및 10 uM로 선택하였다. CP002S를 처리한 후 0, 4, 7, 12, 24(발생 24, 28, 31, 36 및 48시간째)의 생존 개체수를 현미경을 이용하여 확인하고, 그 결과에 기초하여 생존률을 계산하였다. 본 실험의 음성 대조군은 0.1% DMSO 처리군(정상군) 및 구리 과잉 노출군이고, 양성 대조군은 CP002 처리군; DPA(페니실라민/D-Penicillamine) 처리군; 및 TETA(트리엔틴/Trientine) 처리군;이다. 상기 DPA 및 TETA는 기존에 윌슨병 및 구리 과잉 노출 시 치료제로 사용되고 있는 약물이다.

CP002S 처리에 따른 생존율을 분석한 결과, 모든 그룹은 약 15% ~ 35%의 생존율 감소를 보였다. 이는 처리한 약물들에 대한 심각한 독성 유발보다는 개체별 차이에 의한 현상으로 사료되며, 각각의 약물별 처리 농도에서 발생독성을 유발하지는 않는 것으로 판단된다.

실시예 5. 구리 과잉 노출 조건에서 CP002 및 CP002S 처리에 따른 부화율 조사

부화율 조사를 통해, 구리에 노출된 제브라피쉬의 배아에서 CP002 및 CP002S의 활성을 분석하였다. 구체적으로, 제브라피쉬 야생형(wild-type) 암수를 교미하여 확보한 수정란을 배양기에서 안전하게 발생과정을 유지하였다. 수정 후 24시간째 정상적으로 성장한 배아들을 24-well plate에 13개체씩 분주한 후 구리 과잉 노출 조건에서 유지하였다. 분주된 개체에 CP002(5, 10 uM), CP002S(5, 10 uM), DPA(5, 10uM) 또는 TETA(5, 10uM)를 처리하였다. 부화가 시작되는 수정 후 48시간( 처리 후 24시간)부터 52, 56, 60, 72 및 80시간에 각 그룹의 부화 개체수를 조사하였다. 본 실험의 음성 대조군은 0.1% DMSO 처리군(정상군) 및 구리 과잉 노출군(4uM CuSO₄)이고, 양성 대조군은 CP002 처리군; DPA(페니실라민/D-Penicillamine) 처리군; 및 TETA(트리엔틴/Trientine) 처리군;이다. 상기 DPA 및 TETA는 기존에 윌슨병 및 구리 과잉 노출 시 치료제로 사용되고 있는 약물이다. 부화율을 조사한 결과는 도 5에 나타내었다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 정상군(0.1% DMSO)의 경우 부화가 시작되는 수정 후 48시간째 18%, 52시간째 54.5%, 56시간째 100%의 부화율이 관찰되었다. 구리 과잉 노출(4uM CuSO₄)군은 72시간째까지 0%였으며, 80시간째에는 부화율이 8%였다. CP002 처리군(5uM, 10uM)은 부화율이 60시간째 약 10~11%, 72시간째 100%임을 확인하였다. CP002S 5uM 처리군은 부화율이 48시간째 10%, 52시간째부터 20%를 유지하다가 72시간째 모두 부화(100%)되었다. CP002S 10uM 처리군은 부화율이 48시간째 80%였고, 52시간째에는 모두 부화(100%)했다. 양성 대조군 약물로 사용한 DPA 5uM 처리군은 부화율이 80시간째에 45.4%였고, DPA 10uM 처리군은 부화율이 72시간째 36.3%, 80시간째 81.8%였다. 또 다른 양성 대조군인 TETA 5uM 처리군은 부화율이 48시간째 12.5%, 52시간째 75%였고, 56시간에 모두 부화(100%)한 것을 확인하였다. 또한 TETA 10uM 처리군은 부화율이 48시간째 30.7%, 52시간째 84.6%, 72시간째 92.3%였고, 80시간에 모두 부화(100%)하였다.

다시 말해, 정상군과 비교하여 구리 과잉 노출 조건에서 80시간째 8%의 낮은 부화율이 CP002 처리군은 두 농도에서 72시간째 100%로 회복되었으며, CP002S 처리군은 5uM보다 10uM의 농도에서 48시간째 80%, 52시간째 100%로 빠른 시간내에 회복되었다. DPA 10uM 처리군은 72시간째 36%로 CP002 처리군 및 CP002S 처리군보다 늦게 회복되었다. TETA 5uM 처리군은 48시간째 12.5%로 시작하여 56시간째 100%로, CP002 처리군보다는 부화율 회복이 빨랐으나 CP002S 처리군과는 회복속도가 비슷한 것을 확인하였다.

결과적으로, 구리 과잉 현상에 의해 지연된 부화율이 CP002S 처리에 의해 회복되는 것을 확인하였으며, 이는 상기 CP002S가 체내 과잉 구리의 작용을 억제하는 효과가 우수하다는 것을 의미한다.

실시예 6. 구리 과잉 노출 신경계 모델에서 CP002S 펩타이드의 신경계 수초화 결함 치유 효과

제브라피쉬 야생형(wild-type) 암수를 교미하여 확보한 수정란을 배양기(28.5도)에서 안전하게 발생과정을 유지하였다. 수정 후 24시간째 정상적으로 성장한 배아들을 24-well plate에 10개체씩 분주한 후 구리 과잉 노출 조건에서 유지하였다. 구리 과잉 노출에 의한 신경계 수초화 세포의 발달 결함 및 다중구리 산화효소 펩타이드 처리에 따른 치유 효과를 조사하기 위하여, CP002S(10uM)를 처리하였다. 약물 처리 6일 후 개체를 tricaine으로 마취하고, 3% methylcellulose에 개체를 위치시켰다. 형광 현미경 관찰을 통해 두개골 신경절(cranial ganglia, Cg)의 수초화 결함 현상을 관찰하였고, 형광 단백질을 발현 정도에 따라 정상(normal) 및 결함(defect)으로 구분하였다. 본 실험의 음성 대조군은 0.1% DMSO 처리군(정상군) 및 구리 과잉 노출군이고, 양성 대조군은 CP002 처리군; DPA(페니실라민/D-Penicillamine) 처리군; 및 TETA(트리엔틴/Trientine) 처리군;이다. 형광 현미경으로 관찰한 결과는 도 6A에 나타내었고, 형광현미경 관찰 결과를 토대로 치유 효과를 분석한 결과는 도 6B에 나타내었다.

도 6A 및 B에 나타낸 바와 같이, 정상군(0.1% DMSO)은 두개골 신경절에서 모든 개체가 정상임을 확인하였다. 그러나, 구리 과잉 노출(4uM CuSO₄)군은 두개골 신경절의 형광 단백질 발현이 75% 감소한 것을 확인하였다. 구리와 함께 CP002S 10uM을 처리한 경우 모든 개체의 두개골 신경절에서 형광 단백질의 발현이 관찰되었다. 구리와 함께 DPA 또는 TETA를 처리한 결과, 형광 단백질을 발현하는 개체는 각각 100 및 80%임을 확인하였다. 상기 결과는 구리 과잉 노출 모델에서 CP002S가 치료제로 시판되고 있는 DPA 및 TETA처럼 구리 과잉에 의한 신경계 수초화 손상에 대한 치유 효과가 있음을 의미한다.

실시예 7. 구리 과잉 노출 신경계 모델에서 CP002 및 CP002S 펩타이드의 심장 독성 확인

제브라피쉬 야생형(wild-type) 암수를 교미하여 확보한 수정란을 배양기(28.5도)에서 안전하게 발생과정을 유지하였다. 수정 후 24시간째 정상적으로 성장한 배아들을 24-well plate에 20개체씩 분주한 후 구리 과잉 노출 조건에서 유지하였다. 처리 후 4.5일(수정 후 5.5일)째 그룹별로 7개체씩 무작위적으로 선별하고 홀 슬라이드 글라스(hole slide glass)에 3% methylcellulose를 넣고 위에 한 개체씩 심장을 실체현미경 렌즈를 통해 육안으로 관찰 가능하게 고정시켰다. 고정된 개체를 현미경하에서 관찰하였다. 심박수는 심방과 심실의 운동을 함께 그룹별 각각의 개체마다 20초 동안 측정하여 분당 심박수로 환산하여 그룹별 평균 심박수를 PRISM (Bonfferroni`s Multiple Comparison Test, One-way ANOVA)프로그램으로 비교하였다. 또한 심박수 저해율은 대조군 평균 심박수를 이용하여 아래와 같이 계산하였다.

심박수 저해율 = [(그룹별 평균 심박수 - 대조군 평균 심박수 )*100]/대조군 평균 심박수

본 실험의 음성 대조군은 0.1% DMSO 처리군(정상군) 및 구리 과잉 노출(4uM CuSO₄)군이고, 양성 대조군은 CP002 처리군; 및 TETA(트리엔틴/Trientine) 처리군;이다. 구리 과잉 노출 모델 동물에서 심박수를 측정한 결과는 도 7A에 나타내었고, 심박수 측정 결과를 토대로 계산한 심박수 저해율은 도 7B에 나타내었다.

도 7A 및 B에 나타낸 바와 같이, 정상군(nor)은 수정 후 5.5일째에 심박수가 분당 144회인 것을 확인하였다. 구리 과잉 노출군의 심박수는 분당 180회로 심장박동이 25% 증가한 것을 확인하였다. CP002S 10 uM 처리군은 심박수가 분당 135회로, 정상군보다 약 6% 감소한 것을 확인하였다. 양성 대조군인 CP002 처리군은 심박수가 정상군에 비해 7.7% 감소하였고(분당 132회), TETA 처리군은 대조군보다 3.5% 증가(분당 148회)한 것을 확인하였다. 상기 결과는 구리 과잉 노출에 의한 심박수의 비정상적 증가 현상이 구리 배출촉진제로 사용되고 있는 TETA 처리 개체에서 회복 효과를 보였으며, 또한 CP002 및 CP002S를 처리한 개체에서도 정상 범위로 회복된다는 것을 확인하였다.

이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> National Marine Biodiversity Institute of Korea <120> Composition for preventing or treating neurological disorders related to copper metabolism comprising multicopper oxidase active domain peptide <130> 1.12P <160> 7 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 3178 <212> DNA <213> Octopus minor <400> 1 aatcgatatg tctcacactt tgtggacggg attctttctc tgtatactag ggatagtttc 60 ccaagtgaag gcagataatg tggaatattt tatcgcagcc caagaagtta tctgggatta 120 tgccccgagt ggaaatgatt tggtcacagg aggcgatgat tacaaaacat tcttggagca 180 cacttctaat agaattggaa gtaagtacaa gaaagtcatc tatatgcagt atacagactt 240 cacgtttact aaagaaatac cgaagcctaa atcacttggt cttttgggac ctattataag 300 tggatctgtt gggcaatcac tccatgttta tttctttaac aatgccagtc gaccttatac 360 cattcaccca catggtcttt tctacacaaa aggaaatgaa ggagcattat atcgagatga 420 gacaaagcca tctgagaaag ctgatgattc tgttaaacct ggacaaacct tcaactatac 480 ttggataatc gaaccctttg atggcccaac aaaagatgat gctgattgtc tcccttggat 540 gtatcactct cacattgaac cagttaagga tatgaatgct 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Pro Val Lys Asp Met Asn Ala Gly 180 185 190 Leu Met Gly Met Leu Ile Leu Cys Lys Lys Ser Lys Thr Tyr Asn Pro 195 200 205 Glu Asn Thr Gln His Leu Leu Met Lys Val Met Asp Glu Asn Leu Ser 210 215 220 Trp Tyr Leu Glu Glu Asn Ile Gln Met Phe Ile Asn Asn Thr Val Asp 225 230 235 240 Lys Glu Asp Glu Asp Phe Gln Glu Ser Asn Lys Met His Ala Leu Asn 245 250 255 Gly Leu Met Tyr Gly Asn Leu Glu Leu Glu Ala Cys Ile Ala Asp Lys 260 265 270 Val Thr Trp Tyr Leu Met Gly Met Gly Asn Glu Val Asp Ile His Thr 275 280 285 Leu Asn Val Asn Gly His Ser Phe Glu Tyr Asn His His Arg Lys Glu 290 295 300 Ser Ile Asn Leu Tyr Pro Ala Glu Phe Ser Val Ala Glu Met Val Ile 305 310 315 320 Gly Ser Glu Gly Ser Trp Leu Val Lys Cys His Val His Asp His Tyr 325 330 335 Val Gly Gly Met Glu Thr Leu Leu Asn Val Phe Tyr Cys Asn Lys Thr 340 345 350 Asn Asn Tyr Asn Val Gly Ser Thr Ile Ile Asn Tyr Phe Ile Thr Ala 355 360 365 Glu Glu Val Glu Trp Ser Tyr Ser Arg Ser Gly Arg Asn Leu Tyr Asp 370 375 380 Gly Gly Ser Leu Thr Glu Pro Asp Ser Ala Ser Glu Val Phe Phe Lys 385 390 395 400 Lys Gly Lys His Arg Ile Gly Gly Lys Tyr Met Lys Ala Met Tyr Tyr 405 410 415 Gln Tyr Thr Asp Gly Ser Phe Thr Thr Lys Met Ser Arg Gly Thr Asp 420 425 430 Glu Glu His Leu Gly Asn Leu Gly Pro Val Ile Arg Ala Thr Val Gly 435 440 445 Asp Ile Ile Lys Val Val Phe Phe Asn Lys Ala Ser Gln Asn Tyr Ser 450 455 460 Ile His Pro Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Lys Pro Asp Glu Gly Ala Phe 465 470 475 480 Tyr Thr Asp Gly Lys Asp Lys Gly Ile Val Pro Pro Gln Thr Arg Lys 485 490 495 Thr Tyr Tyr Trp Tyr Ile Ser Arg Asp Met Gly Pro Leu Glu Lys Asp 500 505 510 Pro Asp Cys Leu Thr Ser Met Tyr Ala Ser Glu Val Asn Thr Met Lys 515 520 525 Asp Thr Tyr Ser Gly Leu Val Gly Pro Met Leu Ile Cys Lys Lys Gly 530 535 540 Ser Leu Asp Arg His Arg Lys Gln Lys Arg Val Asp Lys Glu Phe Phe 545 550 555 560 Leu Leu Phe Met Val Thr Asp Glu Asn Asn Ser Trp Tyr Leu Lys Glu 565 570 575 Asn Ile Lys Lys Tyr Ala Glu Asp Pro Glu Gly Val Asp Leu Glu Asp 580 585 590 Glu Asp Phe Met Glu Ser Asn Leu Met His Gly Ile Asn Gly Tyr Leu 595 600 605 Tyr Gly Asn Leu Tyr Glu Pro Glu Met Cys Met Asn Asp Lys Ile Ser 610 615 620 Trp His Ile Met Ala Leu Gly Asn Glu Val Asp Leu His Thr Val Tyr 625 630 635 640 Phe His Gly Asn Thr Phe Thr Val His Gln Asn His Lys Asp Thr Phe 645 650 655 Ser Val Leu Pro Gly Met Leu Gln Thr Leu Glu Met Lys Ala Ile Asn 660 665 670 Pro Gly Thr Trp Ala Leu Glu Cys Val Thr Asn Asp His Phe Asn Ala 675 680 685 Gly Thr Lys Ala Met Tyr Lys Val Gln Arg Cys Gly Arg Arg Gln Lys 690 695 700 Thr Ile Ser Arg Lys Ala Lys Val Ile Glu Tyr Phe Ile Gln Ala Glu 705 710 715 720 Glu Ile Glu Trp Asp Tyr Ala Pro Gly His Lys Asp Leu Ile Tyr Asn 725 730 735 Lys Ser Leu Asp Asp Pro Asp Asn Pro Gly Tyr Ala Phe Val Lys Ser 740 745 750 Ser Asp Tyr Leu Ile Gly Ser Lys Tyr Ile Lys Ala Val Tyr Arg Gly 755 760 765 Tyr Thr Asn Asp Ser Phe Leu Thr Pro Leu Asp His Pro Glu Ser Phe 770 775 780 Gly Ile Leu Gly Pro Leu Ile Lys Ala Glu Val Gly Asp Ile Ile Ser 785 790 795 800 Val Thr Phe Arg Asn Leu Ala Arg Tyr Asn Phe Ser Ile Leu Ala His 805 810 815 Gly Val Leu Tyr Glu Lys Ser Ser Glu Gly Thr Lys Tyr Ala Asp Leu 820 825 830 Asn Glu Asn Lys Gly Asn Ala Val Glu Lys Asp Asp Ile Tyr Thr Tyr 835 840 845 Thr Trp Thr Val Pro Lys Ser Ser Gly Pro Gly Pro Gly Asp Pro Asp 850 855 860 Cys Ile Asn Tyr Ala Tyr Tyr Ser Ala Val Asn Pro Ser Gln Asp Thr 865 870 875 880 Asn Ala Gly Leu Leu Gly Pro Leu Val Ile Cys Arg Lys Asn Lys Ser 885 890 895 Asp Phe Asn Asn Thr Ile Phe Phe Pro Leu Leu Phe Asn Val Phe Asp 900 905 910 Glu Asn Glu Ser Ile Tyr Leu Asp Asp Asn Ile Lys Lys Tyr Ala Glu 915 920 925 Lys Ala Asn Lys Glu Asp Asp Glu Phe Ile Glu Asn Asn Lys Asn His 930 935 940 Ala Ile Asn Gly Phe Leu Phe Gly Gly Leu Gln Gly Leu Asp Met Asn 945 950 955 960 Lys Gln Asp Lys Val Tyr Trp Phe Leu Ile Gly Thr Gly Thr Glu Val 965 970 975 Asp Ile His Ser Ile His Phe His Gly Asn Thr Phe Ile His Tyr Thr 980 985 990 Asp Tyr Lys His Arg Lys Asp Thr Leu Asp Leu Trp Pro Gly Ser Phe 995 1000 1005 Lys Thr Ile Phe Met Val Pro Glu Asn Pro Gly Lys Trp Leu Leu 1010 1015 1020 His Cys His Val Asp Asp His Ile Ile Gly Gly Met Ser Ala Ile 1025 1030 1035 Tyr Thr Val Asn Asp Ile Ser 1040 1045 <210> 3 <211> 21 <212> PRT <213> CP001 <400> 3 Gly Ser Trp Leu Val Lys Cys His Val His Asp His Tyr Val Gly Gly 1 5 10 15 Met Glu Thr Leu Leu 20 <210> 4 <211> 21 <212> PRT <213> CP002 <400> 4 Gly Lys Trp Leu Leu His Cys His Val Asp Asp His Ile Ile Gly Gly 1 5 10 15 Met Ser Ala Ile Tyr 20 <210> 5 <211> 28 <212> DNA <213> CP forward primer <400> 5 aatcgatatg tctcacactt tgtggacg 28 <210> 6 <211> 28 <212> DNA <213> CP reverse primer <400> 6 cctcgagagg gtttcttaca atcaagtc 28 <210> 7 <211> 12 <212> PRT <213> CP002S <400> 7 His Cys His Val Asp Asp His Ile Ile Gly Gly Met 1 5 10

Claims (12)

1. 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드.
2. 제1항에 있어서,
   상기 펩타이드는 세룰로플라스민 유래인, 펩타이드.
3. 제2항에 있어서,
   상기 세룰로플라스민은 낙지(Octopus minor) 유래인, 펩타이드.
4. 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
5. 제4항에 있어서,
   상기 펩타이드는 농도가 0.01 내지 20 μM인, 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
6. 제4항에 있어서,
   상기 신경계 질환은 탈수초성 신경계 질환인, 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
7. 제6항에 있어서,
   상기 탈수초성 신경계 질환은 다발성 경화증, 시신경 척수염 및 급성파종성 뇌척수염으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
8. 제4항에 있어서,
   상기 신경계 질환은 구리(copper) 대사 장애에 의해 유도된 신경계 질환인, 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
9. 제8항에 있어서,
   상기 신경계 질환은 파킨슨병, 알츠하이머병, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴병, 멘케스병, 윌슨병, 프라이온병, 후두각증후군, 선천성 철분 대사이상증(Aceruloplasminemia), 이상감각증상, 운동장애 및 시신경염으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
10. 제4항에 있어서,
    상기 신경계 질환은 다발성 경화증, 파킨슨병, 알츠하이머병, 멘케스병 및 윌슨병으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
11. 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 신경계 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
12. 서열번호 7의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 신경계 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
    

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