KR20230068535A - 장류 제조 시에 식중독균 Bacillus cereus의 성장을 억제하는 신규한 곰팡이 Aspergillus luchuensis M2096 - Google Patents
장류 제조 시에 식중독균 Bacillus cereus의 성장을 억제하는 신규한 곰팡이 Aspergillus luchuensis M2096 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주에 관한 것으로, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)를 이용한 장류 제조 시에 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주에 대한 억제능을 갖는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주를 제공한다.
Description
본 발명은 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주에 관한 것이다.
한국의 장류에 속하는 식품인 청국장, 된장, 및 간장 등은 예로부터 수백 년 동안 섭취해온 음식으로서, 항산화, 혈전 용해, 및 혈압강하 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
그러나, 전통 방식에 의해 제조되는 장류는 필연적으로 자연 환경에 노출되는 상태로 발효가 진행되기 때문에 발효나 숙성과정 동안 토양이나 대기의 유해 미생물들에 의해 독소가 생성될 수 있다. 상기 유해 미생물의 예시로, 식중독을 일으키는 균주인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)가 대표적이다.
세계 각국의 보건 당국은 이러한 바실러스 세레우스 균주의 수를 규제하고 있으며, 한국의 식품의약품안전청에서도 2007년부터 모든 시판 장류 제품에서 허용되는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)의 균수를 관리하고 있다.
그러나, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)는 포자를 형성하여 열에 잘 견디고, 장류에서 잘 자라기 때문에 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주의 수를 일정 수치 이하로 관리하기가 쉽지 않다.
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 대표적인 식중독 균 중 하나인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주의 성장을 억제하는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주 및 이러한 균주를 이용하여 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주에 대해 항균성을 갖는 조성물 및 이를 이용한 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주에 대해 항균성을 갖는 장류를 제공하는 것이다.
본 발명은 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주에 관한 것으로, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주에 대한 억제능을 갖는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주는 서열번호 1로 표시되는 베타-튜불린(β-tubulin) DNA 염기서열을 갖을 수 있다.
본 발명은 미생물 제제에 관한 것으로, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주 및 제1 항에 따른 아스페르길루스 루추엔시스 균주, 상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주의 배양물, 상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주의 발효물, 및 상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주, 상기 배양물, 또는 상기 발효물의 추출물 중 적어도 하나를 포함한다.
본 발명은 식품 조성물에 관한 것으로, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주 및 제1 항에 따른 아스페르길루스 루추엔시스 균주, 상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주의 배양물, 상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주의 발효물, 및 상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주, 상기 배양물, 또는 상기 발효물의 추출물 중 적어도 하나를 포함하는 미생물 제제를 유효성분으로 포함한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 식품은 메주, 간장, 한식간장, 양조간장, 혼합간장, 한식된장, 된장, 조미된장, 고추장, 조미고추장, 춘장, 막장, 및 혼합장으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 식품은 메주일 수 있다.
본 발명은 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) 균주를 이용한 장류 제조 시 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주를 포함하여 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)를 억제할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 다양한 균주를 단일로 접종하여 제조된 각각의 메주에 포함된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수를 확인한 결과를 도시한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 다양한 균주 및 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주를 동시에 접종하여 제조된 각각의 메주에 포함된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 수를 확인한 결과를 도시한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 다양한 균주 및 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주를 동시에 접종하여 제조된 각각의 메주에 포함된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 수를 확인한 결과를 도시한 그래프이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)의 성장을 억제하는 신규한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주를 상세히 설명하기로 한다.
이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어는 사전적인 의미로 한정 해석되어서는 아니되며, 발명자는 자신의 발명을 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절히 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여, 본 발명의 기술적 사상에 부합되는 의미와 개념으로 해석되어야 한다.
상세한 설명, 도면들, 및 청구항들에서 상술하는 예시적인 실시 예들은 한정을 위한 것이 아니며, 다른 실시 예들이 이용될 수 있으며, 여기서 개시되는 기술의 사상이나 범주를 벗어나지 않는 한 다른 변경들도 가능하다.
따라서, 본 명세서에 기재된 실시 예 및 도면에 도시된 구성은 본 발명의 바람직한 실시 예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 표현하는 것은 아니므로, 본 출원 시점에 있어 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 존재할 수 있음을 이해하여야 한다.
당업자는 본 개시의 구성요소들, 즉 여기서 일반적으로 기술되고, 도면에 기재되는 구성요소들을 다양하게 다른 구성으로 배열, 구성, 결합, 및 도안할 수 있으며, 이것들의 모두는 명백하게 고안되며, 본 개시의 일부를 형성하고 있음을 용이하게 이해할 수 있을 것이다.
본 발명은 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주에 대한 억제능을 갖는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주를 제공한다. 또한, 상기 균주는 서열번호 1로 표시되는 베타-튜불린(β-tubulin) DNA 염기서열을 가진다.
바실러스 세레우스(Bacillus cereus)는 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 바실러스 튜렌지엔시스(Bacillus thuringiensis)와 함께 바실러스 서브 그룹 I에 속하는 그램 양성균으로 토양 및 공기 부유 미생물로서 전통 장류 제조 시 쉽게 오염되어 구토형 독소인 세레울라이드(cereulide)와 설사나 장염을 일으키는 독소인 Nhe(Non-hemolytic enterotoxin), Hbl(Hemolytic enterotoxin), CytK(Cytotoxin K)를 분비한다.
이들 중 D-형 아미노산을 함유하여 사이클릭 펩타이드(cyclic peptide)의 구조를 가지는 세레울라이드(cereulide)는 단백질로 구성된 설사 독소들과는 달리 열이나 단백질 가수분해에 대해 강한 저항성을 가지고 있다. 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)의 설사 독소 유전자는 염색체 상에 위치하는 반면 구토형 독소 유전자는 플라스미드에 위치하기 때문에 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)는 구토 및 설사를 동시에 일으키는 종과 설사만 일으키는 종으로 구분할 수 있다. 설사형 독소 균주의 경우 외부 환경에 따라 전사 조절 단백질인 PlcR(Phospholipase C Regulator)가 전사인자인 PapR과 결합하여 독소 발현량을 조절하기 때문에 발효 상태에 따라 독소 분비량은 달라진다.
아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis)는 검은누룩곰팡이(흑국균)으로, 전분 당화력이 강하고 당에서 구연산, 수산, 글루콘산 등을 다량으로 생산할 수 있어 유기산 발효 공업에 이용된다.
본 발명은 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 발효물, 및 상기 균주, 상기 배양물, 또는 상기 발효물의 추출물 중 적어도 하나를 포함하는 미생물 제제를 제공한다.
또한, 상기 발효물은 상기 균주, 또는 상기 균주의 배양물을 발효한 물질일 수 있고, 상기 배양물, 상기 발효물 또는 상기 추출물은 제균된 것을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 “배양액”은 균주를 배지에 접종하고 일정 시간 배양하여 얻은 결과물로서, 본 발명에 따른 균주를 적합한 액체 배지에서 배양한 배양액 자체, 상기 배양액을 여과 또는 원심분리하여 균주를 제거한 여액(여과액 또는 원심분리한 상등액), 상기 배양액을 초음파 처리하거나 상기 배양액에 용해효소(lysozyme)를 처리하여 수득한 세포 파쇄액, 및 상기 배양액, 여액, 및 파쇄액 등을 농축한 농축액 등을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 배양액은 고체배지 배양물, 및 상기 배양액의 건조물 또는 추출물 등의 배양물을 함유할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 미생물 제제는 통상적인 미생물 제제 제조방법에 따라 제조될 수 있다. 또한, 주성분인 상기 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주, 또는 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 발효물, 및 상기 균주, 상기 배양물, 및 상기 발효물의 추출물 중 적어도 하나의 유효량에 1종 또는 2종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 통상적인 담체 또는 1종 또는 2종 이상의 첨가제를 선택하여 통상적인 제형의 조성물로 제조할 수 있다.
예를 들어, 담체는 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제, 및 방부제 중 적어도 하나를 포함할 수 있고, 첨가제로는 향로, 비타민류, 및 항산화제 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
더 자세하게, 희석제로는 유당(lactose monohydrate), 옥수수 전분, 콩기름, 미결정 셀룰로오스, 및 만니톨(D-mannitorl) 중 적어도 하나를 사용할 수 있고, 활택제로는 스테아린산 마그네슘(magnesiumstearate) 및 탈크(talc) 중 적어도 하나를 사용할 수 있으며, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈(PVP; polyvinylpyrolidone) 및 하이드록시프로필셀룰로오스(HPC; hydroxypropylcellulose) 중 적어도 하나를 사용할 수 있다.
또한, 붕해제로는 카르복시메칠셀룰로오스칼슘(Ca-CMC; Carboxymethylcellulose calcium), 전분글리콜산나트륨(sodium starchglycolate), 폴라크릴린칼륨(polacrylin potassium), 및 크로스포비돈(corss-linked polyvinylpyrrolidone) 중 적어도 하나일 수 있고, 감미제로는 백당, 과당, 소르비톨(sorbitol), 및 아스파탐(aspartame) 중 적어도 하나를 사용할 수 있고, 안정제로는 카르복시메칠셀룰로오스나트륨(Na-CMC; CarboxyMethylCellulose sodium), 베타-싸이크로덱스트린(β-cyclodextrin), 백납(white bee`s wax), 및 잔탄검(xanthan gum) 중 적어도 하나를 사용할 수 있고, 방부제로는 파라옥시안식향산메틸(methyl p-hydroxybenzoate, methlparaben), 파라옥시안식향산프로필(propyl p-hydroxybenzoate, propylparaben), 및 소르빈산칼륨(potassium sorbate) 중 적어도 하나를 사용할 수 있다.
또한, 상기 미생물 제제는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주를 억제할 수 있는 다른 균주를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 바실러스 속, 락토바실러스 속, 류코노스톡 속, 브레비바실러스 속, 아스페르길루스 속 등 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주를 억제할 수 있는 다른 균주를 더 포함할 수 있다.
또한, 예를 들어, 바실러스 리케니포미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 퍼밀러스(Bacillus pumilus), 바실러스 사펜시스(Bacillus safensis), 바실러스 벨레젠시스(Bacillus velezensis), 바실러스 테퀄엔시스(Bacillus tequilensis), 바실러스 튜린지엔시스(Bacillus thuringiensis), 락토바실러스 플란타륨(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 페로렌스(Lactobacillus perolens), 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 타이완엔시스(Lactobacillus taiwanensis), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 젠세니(Lactobacillus jensenii), 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides), 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) 균주 등 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주를 억제할 수 있는 다른 균주를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 미생물 제제는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주를 억제할 수 있는 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) 균주를 더 포함할 수 있다.
아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)는 용이하게 구할 수 있다면 이를 제한하지 않는다. 예를 들어, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)는 기탁 또는 특허기탁된 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) 균주를 사용할 수 있다. 또한 예를 들어, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)는 시중에 판매 중인 제품을 구매하여 사용할 수 있다.
바람직하게, 상기 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)는 충무발효에서 된장용 황국균으로 제작된 제품(CF1001)을 구입하여 사용할 수 있다. 상기 제품(CF1001)은 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주이다.
아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)는 자낭균류 누룩곰팡이속에 속하고, 동아시아권 국가에서 쌀, 고구마, 보리 등의 알코올 음료 제조 시, 간장 및 된장 등 대두의 발효식품 제조 시, 쌀 식초 제조 시 많이 사용되는 곰팡이다. 생성되는 유기산은 코지산, 글루콘산 등이고, 효소는 아밀라아제, 말타아제, 인베르타아제, 셀룰라아제, 이눌리나아제, 그 밖의 단백질 분해효소 등이다.
본 발명은 상기 미생물 제제를 유효성분으로 포함하는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)가 억제된 식품 조성물을 제공한다.
상기 식품 식품 조성물은 그 종류에 특별한 제한이 없다. 예를 들어, 식품 조성물은 메주, 장류(된장, 간장, 고추장 등), 육류, 소시지, 빵류, 초콜릿, 사탕류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 김치, 젓갈, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료, 또는 비타민 복합제일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 식품 조성물은 메주, 한식간장, 양조간장, 혼합간장, 한식된장, 된장, 조미된장, 고추장, 조미고추장, 춘장, 막장, 또는 혼합장일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 식품 조성물은 대표적인 식중독 균 중 하나인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주를 억제할 수 있는 본 발명의 미생물 제제를 포함하고 있으므로, 상기 식품 조성물 내에서 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주 감소하여 검출 시험 시 생균수가 적게 검출될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주의 생육억제능이 우수한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) 균주를 선별하고 이를 이용하여 메주를 제조하였다.
실시예 1: 균주 선별
대두의 수분함량이 48wt%가 되도록 물을 가하고 이를 20g 취해 삼각플라스크에 넣었다. 이를 오토클레이브(autoclave)를 사용하여 121℃ 15분동안 증자를 실시하였다. 이렇게 제조된 증자 대두에 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 배양액을 초기 생균수가 104 cfu/g이 되도록 접종하고 여기에 각각의 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) 균주 또는 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) sp23 균주를 접종한 후 이를 35℃ 에서 3일 동안 메주 발효를 실시하여 선별을 진행하였다. 상기 아스페르길루스 오리제(Asperillus oryzae) SP23 균주는 충무발효에서 시판 중인 된장용 황국균(CF1001)을 구입하여 사용하였다.
앞서 메주 발효가 끝난 시료의 5g을 취하여 이를 순차적 희석법으로 희석한 후 PCA(Plate Count Agar) 배지를 사용하여 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수를 분석하였다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주 또는 다양한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) 균주들을 단일로 접종하여 제조된 각각의 메주에 포함된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수를 확인한 결과를 도시한 그래프이다.
또한, 하기 표 1은 상기 도 1의 도시된 생균수 분석 결과의 표이다.
구분 | B. cereus 생균수(CFU/g) | |
평균 | 표준편차 | |
Bacillus cereus (발효전) | 4.3.E+04 | 2.3.E+04 |
Bacillus cereus (발효후) | 3.6.E+09 | 1.1.E+09 |
Aspergillus oryzae SP23 | 2.0.E+07 | 5.7.E+06 |
Aspergillus luchuensis M2106 | 1.4.E+09 | 6.6.E+08 |
Aspergillus luchuensis M2113 | 2.6.E+08 | 3.4.E+08 |
Aspergillus luchuensis M2099 | 6.6.E+07 | 3.9.E+07 |
Aspergillus luchuensis M2009 | 4.5.E+07 | 2.8.E+07 |
Aspergillus luchuensis M2103 | 3.5.E+07 | 3.4.E+07 |
Aspergillus luchuensis M2104 | 6.3.E+06 | 5.3.E+04 |
Aspergillus luchuensis M0532 | 1.1.E+06 | 1.2.E+06 |
Aspergillus luchuensis M0029 | 8.3.E+05 | 5.6.E+05 |
Aspergillus luchuensis M2093 | 6.2.E+05 | 7.2.E+05 |
Aspergillus luchuensis M2102 | 4.5.E+05 | 2.0.E+05 |
Aspergillus luchuensis M2098 | 3.3.E+05 | 2.5.E+05 |
Aspergillus luchuensis M2097 | 2.7.E+05 | 3.2.E+05 |
Aspergillus luchuensis M2105 | 1.5.E+05 | 2.0.E+05 |
Aspergillus luchuensis M2096 | 6.4.E+04 | 7.3.E+04 |
Aspergillus luchuensis M1003 | 5.7.E+03 | 1.2.E+03 |
상기 도 1 및 상기 표 1을 참조하면, 선별된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생육억제능이 우수한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주들을 확인할 수 있다.
선별된 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M0029, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M0532, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M1003, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2009, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2093, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2096, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2097, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2098, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2099, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2102, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2103, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2104, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2105, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2106, 및 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2113이고, 상기 선별된 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주 및 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) sp23 균주는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주만을 접종한 대조군에 비해 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수가 감소했음을 확인하였다.
그 중에서도 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2105, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2096, 및 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M1003 균주가 각각 첨가된 메주에서는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수가 현저히 감소하였다.
또한, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) 균주는 동속 동종임에도 불구하고 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) 균주마다 (Bacillus cereus) KCTC 3624 균주 억제능이 현저한 차이가 나타남을 확인하였다. 따라서, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) 균주 내에서도 염기서열의 차이에 따라 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수를 감소시키는 효과가 현저히 차이날 수 있음을 확인하였다.
실시예 2: 장류 제조 시 아스페르길루스 루추엔시스의 바실러스 세레우스 억제능
아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)를 이용한 장류 제조 과정에 있어서, 앞서 선별에서 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생육억제능이 우수한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주들을 접종하였다.
대두의 수분함량이 48wt%가 되도록 물을 가하고 이를 20g 취해 삼각플라스크에 넣었다. 이를 오토클레이브를 사용하여 121℃ 15분동안 증자를 실시하였다. 이렇게 제조된 증자 대두에 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 배양액을 초기 생균수가 104 cfu/g이 되도록 접종하고 여기에 각각의 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주와 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주를 접종하고 이를 35℃에서 2일 동안 메주 발효를 실시하여 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)를 이용한 메주를 제조하였다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 다양한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주 및 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주를 동시에 접종하여 제조된 각각의 메주에 포함된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수를 확인한 결과를 도시한 그래프이다.
또한, 하기 표 2는 상기 도 2의 도시된 생균수 분석 결과의 표이다.
구분 | B. cereus 생균수 (CFU/g) | |
평균 | 표준편차 | |
Bacillus cereus (발효전) | 5.75.E+03 | 2.04.E+03 |
Bacillus cereus (발효후) | 4.50.E+09 | 2.97.E+09 |
Aspergillus oryzae SP23 | 2.35.E+07 | 2.47.E+07 |
Aspergillus luchensis M2104+Aspergillus oryzae SP23 | 5.70.E+07 | 3.00.E+07 |
Aspergillus luchensis M1003+Aspergillus oryzae SP23 | 1.95.E+07 | 8.70.E+06 |
Aspergillus luchensis M2015+Aspergillus oryzae SP23 | 1.57.E+06 | 7.88.E+05 |
Aspergillus luchensis M2097+Aspergillus oryzae SP23 | 2.90.E+05 | 9.09.E+04 |
Aspergillus luchensis M2096+Aspergillus oryzae SP23 | 1.80.E+05 | 1.04.E+05 |
상기 도 2 및 상기 표 2를 참조하면, 실시된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생육억제능이 우수한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주 및 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주의 조합을 확인할 수 있다.
앞서 실시한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주 및 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주의 조합은 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2104+아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M1003+아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2015+아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2097+아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주, 및 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096+아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주로 구성되어 있다.
상기 실시된 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) 균주 및 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주의 조합으로 메주를 제조하는 경우, 어느 균주도 접종하지 않은 대조군에 비해 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수가 감소했음을 확인하였다.
그 중에서도 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2105+ 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23, 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2097+아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23, 및 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2096+아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주가 각각 첨가된 메주에서는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 생균수가 현저히 감소하였다.
상기 도 1 및 도 2를 참조하면, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주 억제능이 가장 우수한 균주는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M1003 균주였고, 그 뒤를 이어 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096 균주가 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주의 억제능이 우수함을 확인하였다.
또한, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주와 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) 균주가 함께 사용된 메주에서는 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주 및 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096 균주가 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주 억제능이 가장 우수하였고, 그 뒤를 이어 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주 및 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2097 균주가 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주 억제능이 우수함을 확인하였다.
이에 따라, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주 억제능이 우수하고, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주와 함께 사용한 경우에서 우수한 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 3624 균주 억제능 효과가 나타난 균주는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096 균주임을 확인하였다.
실시예 3: 균주 기탁
상기 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchensis) M2096 균주를 농촌진흥청 국립농업과학원 미생물 은행에 기탁하여 수탁번호 KACC 93369P를 부여받았다.
상술한 바와 같이 본 발명에서는 장류의 대량 생산 시에는 일반적으로 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)만을 이용하여 메주를 만드는데, 본 발명의 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁 번호: KACC 93369P) 균주를 사용하여 함께 발효한다면 식품 내에 포함된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주의 생균수를 현저히 낮출 수 있고 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주에 의해 나타날 수 있는 질병의 발생 및 식품의 오염을 줄일 수 있다
이에 따라, 본 발명은 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)를 이용하여 장류를 제조할 때, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 억제능 효과가 우수한 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁 번호: KACC 93369P) 균주를 사용하여 메주를 제조하는 것을 바람직한 실시예로 제안하는 바이다.
이상 설명한 내용을 통해 당업자라면 본 발명의 기술 사상을 일탈하지 아니하는 범위에서 다양한 변경 및 수정이 가능함을 알 수 있을 것이다. 따라서 본 발명의 기술적 범위는 명세서의 상세한 설명에 기재된 내용으로 한정되는 것이 아니며 특허 청구의 범위에 의해 정해져야만 할 것이다.
기탁기관명 : 농업생명공학연구원
수탁번호 : KACC93369P
수탁일자 : 20210902
<110> REPUBLIC OF KOREA(RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION)
SEMPIO FOODS COMPANY
<120> NOVEL ASPERGILLUS LUCHUENSIS M2096 TO INHIBIT GROWTH OF FOOD
POISONING BACTERIA BACILLUS CEREUS DURING SOYBEAN FERMENTATION
<130> FP-2102006-KR
<160> 1
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 410
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> beta-tubulin of Aspergillus luchuensis M2096
<400> 1
tggtacgtat tcactgccac tggattgggg atggataaca tcatctctca agctatctcg 60
gcttgagttc agatgttatt tatcgggtat atagctatcg ggttaagaac acgtctaaca 120
actcaacagg cagaccatct ytggcgagca cggccytgac ggctccggtg tgtaagtgca 180
actttttcac acctctcaat tggtcgacaa tgtggaaagg attgggtttc ctgacacgca 240
ggatagttac aatggcacct ccgacctcca gctggagcgc atgaacgtct acttcaacga 300
ggktagatca caccgtccct gagttttttc acgacaatat catcaatgtc ctgaccactt 360
cagcaggcta gcggtaacaa gtatgtcccc cgtgccgtcc tcgtcgatct 410
Claims (6)
- 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주에 대한 억제능을 갖는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주.
- 제1 항에 있어서,
상기 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주는 서열번호 1로 표시되는 베타-튜불린(β-tubulin) DNA 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) M2096(수탁번호: KACC 93369P) 균주. - 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) SP23 균주 및 제1 항에 따른 아스페르길루스 루추엔시스 균주,
상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주의 배양물,
상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주의 발효물, 및
상기 아스페르길루스 루추엔시스 균주 및 상기 아스페르길루스 오리제 균주, 상기 배양물, 또는 상기 발효물의 추출물 중 적어도 하나를 포함하는 미생물 제제. - 제3 항에 따른 미생물 제제를 유효성분으로 포함하는 식품 조성물.
- 제4 항에 있어서,
상기 식품은 메주, 간장, 한식간장, 양조간장, 혼합간장, 한식된장, 된장, 조미된장, 고추장, 조미고추장, 춘장, 막장, 및 혼합장으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 식품 조성물. - 제4 항에 있어서,
상기 식품은 메주인 식품 조성물.
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KR101736324B1 (ko) | 장류의 유해 미생물에 대한 항균 활성, 항산화 활성 및 세포외 효소 분비능이 있고, 바이오제닉 아민을 생성하지 않는 전통장류 유래의 바실러스 서틸리스 scm121 균주 및 이의 용도 | |
KR20170015688A (ko) | 유해 미생물에 대한 항균 활성, 항생제 내성, 항산화 활성, β-글루코시다제 및 세포외 효소 분비능이 우수하고, 바이오제닉 아민을 생성하지 않는 전통장류 유래의 락토바실러스 브레비스 SCML458 균주 및 이의 용도 | |
KR101575878B1 (ko) | 메주로부터 분리된 바실러스 서브틸리스 및 이를 포함하는 항균 조성물 | |
KR101498272B1 (ko) | 김치에서 분리되고 항균물질생성 및 면역활성 효능을 가진 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 이용한 생균제 조성물 | |
KR101956759B1 (ko) | 항균활성, 항산화활성, 세포외 효소 분비능 및 플라보노이드 생성능이 있고, 유해물질 및 유해효소를 생성하지 않는 바실러스 벨레젠시스 srcm102752 균주 및 이의 용도 | |
KR101956760B1 (ko) | 항균활성, 항산화활성, 세포외 효소 분비능 및 페놀 생성능이 있고, 유해물질 및 유해효소를 생성하지 않는 바실러스 서틸리스 srcm102754 균주 및 이의 용도 | |
KR102044365B1 (ko) | 장 부착능이 우수하고, 항균 물질을 합성하는 유전자를 보유하며, 프로바이오틱스 특성을 가지는 바실러스 서틸리스 scdb 291 균주 및 이의 용도 | |
KR102074895B1 (ko) | 새로운 락토바실러스 파라카제이(lactobacillus paracasei) 균주 및 이를 이용한 식품 | |
KR102159379B1 (ko) | 장 부착능 및 세포외 효소 분비능이 우수하고, 프로바이오틱스 특성을 가지는 바실러스 서틸리스 srcm101371 균주 및 이의 용도 | |
KR20210109365A (ko) | 항균 활성, 항산화 활성, 혈전 분해 활성, 항생제 내성, β-글루코시다제 및 세포외 효소 분비능이 있고, 유해물질 및 유해효소를 생성하지 않는 바실러스 서브틸리스 SRCM102027 균주 및 이의 용도 | |
KR101960355B1 (ko) | 항균활성, 항산화활성, 세포외 효소 분비능 및 페놀 생성능이 있고, 유해물질 및 유해효소를 생성하지 않는 바실러스 벨레젠시스 srcm102755 균주 및 이의 용도 | |
KR101926183B1 (ko) | 안전성이 검증된 장류 발효 균주 및 이를 이용하여 제조된 장 | |
KR20230068535A (ko) | 장류 제조 시에 식중독균 Bacillus cereus의 성장을 억제하는 신규한 곰팡이 Aspergillus luchuensis M2096 | |
KR102095246B1 (ko) | 식중독균에 대한 항균활성을 갖는 락토바실러스 사케이 균주 및 이의 용도 | |
KR102056331B1 (ko) | 식중독균에 대한 항균활성을 갖는 바실러스 서브틸러스 균주 및 이의 용도 | |
KR101859679B1 (ko) | 내산성, 내당성 및 내알코올성 유산균 | |
KR101816121B1 (ko) | 혈전용해 활성 및 유해 미생물에 대한 항균 활성이 있고, 바이오제닉 아민을 생산하지 않는 바실러스 서틸리스 scdb 240 균주 및 이의 용도 | |
KR101816129B1 (ko) | 리파아제 저해활성, 글루타메이트 생산능 및 유해 미생물에 대한 항균 활성이 있고, 바이오제닉 아민을 생산하지 않는 바실러스 서틸리스 scdb 352 균주 및 이의 용도 | |
KR101719780B1 (ko) | 신규 페니실리움 폴로니컴 m2445 균주 및 이의 용도 | |
KR101719778B1 (ko) | 신규 페니실리움 솔리텀 m2439 균주 및 이의 용도 | |
KR102488052B1 (ko) | 류코노스톡 메센테로이드 WiKim0121 및 이를 이용한 김치제조 |
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