KR20230049084A - Sars-cov-2 및 인플루엔자 조합 백신 - Google Patents

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스피코나 인크.
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Abstract

본 발명은 인플루엔자 및 COVID-19 둘 다에 대한 조합 백신에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 1종 이상의 인플루엔자 바이러스 항원 및 1종 이상의 SARS-CoV-2 (코로나바이러스 SARS-CoV-2) 항원, 특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항원을 포함하는 조합 백신, 뿐만 아니라 상기 항원을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 백신, 및 COVID-19 (SARS-CoV-2 감염) 및 인플루엔자 감염의 치료 또는 예방을 위한 이러한 백신에 관한 것이다.

Description

SARS-COV-2 및 인플루엔자 조합 백신
본 발명은 인플루엔자 및 COVID-19 둘 다에 대한 조합 백신에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 1종 이상의 인플루엔자 바이러스 항원 및 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원, 바람직하게는 적어도 1종의 SARS-CoV-2 (코로나바이러스 2019-nCoV) 스파이크 단백질 항원을 포함하는 조합 백신, 뿐만 아니라 상기 항원을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 백신, 및 COVID-19 (SARS-CoV-2 감염) 및 인플루엔자 감염의 치료 또는 예방을 위한 이러한 백신에 관한 것이다.
2020년 6월 29일 현재, 10,000,000명 초과의 사람들이 전세계적으로 COVID-19 (중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2, 또는 코로나바이러스 2019-nCoV)에 의해 유발된 질환)에 대해 양성인 것으로 확인되었다. 이 동일한 날짜까지, 500,000명 초과의 사망이 COVID-19로 인해 전세계적으로 기록되었다.
SARS-CoV-2에 감염된 대다수의 환자는 고열 또는 열, 기침, 숨가쁨, 피로, 및 개체의 후각 또는 미각 상실 또는 변화를 포함하는 경도 내지 중등도 증상을 경험한다. 일부 환자는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 시토카인 폭풍, 다기관 부전, 패혈성 쇼크 및 혈병을 수반할 수 있는 중증 질환으로 진행된다. 또한, SARS-CoV-2 감염에 대해 양성으로 검사된 일부 환자는 무증상이거나 또는 최소의 증상을 경험한다는 점에서 검사를 수행하지 않는 한 진단이 어렵다. 지금까지의 증거는 이들 무증상 환자가 SARS-CoV-2 바이러스 입자를 배출하므로 (종종 증후성 감염을 갖는 환자보다 더 오래) SARS-CoV-2 바이러스를 여전히 효율적으로 확산시킬 수 있다는 것을 나타낸다.
SARS-CoV-2 감염과 연관된 광범위한 증상, 및 무증상 환자의 존재는 COVID-19의 역학적 특징을 결정하는 것을 더욱 어렵게 만든다. 또한, 적어도 하나의 연구는 무증상 및 증후성 환자 둘 다의 대다수가 회복기로의 불과 8주만에 SARS-CoV-2에 대한 IgG 및 중화 항체의 수준이 감소하였음을 나타낸다. 일부 임상 데이터는 상당한 비율의 무증상 환자 (40%) 및 또한 보다 적은 수의 증상 감염 환자 (~13%)가 초기 회복기에 IgG에 대해 혈청음성이라는 것을 입증한다 (문헌 [Long et al. Nat. Med. 2020 https://doi.org/10.1038/s41591-020-0965-6]). 따라서, SARS-CoV-2에 대한 백신의 개발이 방대한 세계적인 연구 동력의 대상인 반면에, 이용가능한 증거는 SARS-CoV-2 감염에 대한 어떠한 결과적인 면역도 사실상 단기간일 가능성이 있다는 것을 시사한다. 따라서, SARS-CoV-2 감염 및 COVID-19 질환에 대해 방어 면역을 생성시키고 유지하기 위해 백신에서 사용될 수 있는 COVID-19용 백신의 개발이 지속적으로 필요하다. 또한, 기존의 공중 보건 백신접종 프로그램 및 스케줄 (백신 성분 억제와 관련된 문제를 고려함)에 용이하게 통합될 수 있는 백신을 제공하고, 규모 및 저렴하게 이러한 백신을 생산할 필요가 있다.
본 발명은 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 제공함으로써 상기 요구 중 하나 이상을 해결한다. 이들 조합된 백신은 1종 이상의 인플루엔자 바이러스 항원 및 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원, 바람직하게는 적어도 1종의 SARS-CoV-2 (코로나바이러스 2019-nCoV) 스파이크 단백질 항원, 또는 상기 항원을 코딩하는 1종 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하며, 이는 인플루엔자 바이러스에 대한 기존의 공중 보건 프로그램을 사용하여 SARS-CoV-2에 대한 면역의 연간 부스팅을 가능하게 한다.
지금까지, 개발 중인 및/또는 임상 시험에서 SARS-CoV-2에 대한 수많은 백신이 존재하지만, 일반적인 용도로 이용가능한 승인된 백신은 존재하지 않는다. 또한, 이용가능한 증거는 SARS-CoV-2에 대한 면역이 비교적 수명이 짧을 수 있음을 시사한다.
본 발명자들은 이전에 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 개발하였는 데, 상기 폴리뉴클레오티드는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 발현 수준 및 지속기간 증가를 제공하면서도 천연 스파이크 단백질의 입체형태를 유지한다.
본 발명자들은 본 발명에 이르러 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 포함하는 백신 조성물이 인플루엔자 바이러스 백신과 성공적으로 조합할 수 있고, 조합 백신 제품의 생산에서 통상적인 백신 성분 억제의 예상된 문제가 전혀 없다는 것을 입증하였다. 또한, 표준 인플루엔자 백신은 아주반트를 함유하지 않지만, 아주반트 아다박스(Addavax)®는 본 발명에 따른 SARS-CoV-2/인플루엔자 백신에 성공적으로 혼입될 수 있다. 인플루엔자에 대한 기존의 공중 보건 백신 프로그램 내에서 SARS-CoV-2 감염에 대해 연간 백신접종을 가능하게 하는 것은 우수한 환자 순응도를 달성하면서 SARS-CoV-2에 대해 면역을 부스팅하는 잠재력을 갖는다.
따라서, 본 발명은, (a) 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 또는 그의 면역원성 단편; 및 (b) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함하며, 여기서 항원은 인플루엔자 및 COVID-19 둘 다에 대해 면역 반응 및 보호를 도출할 수 있는 것인, 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 제공한다.
상기 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 인플루엔자 뉴라미니다제 (NA) 또는 그의 면역원성 단편을 추가로 포함할 수 있다. 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편은 (i) 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함되거나; (ii) 재조합 HA 또는 그의 면역원성 단편이거나; (iii) HA 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 융합 단백질이거나; 또는 (iv) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩될 수 있다. 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 (i) 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함되거나; (ii) 재조합 NA 또는 그의 면역원성 단편이거나; (iii) NA 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 융합 단백질이거나; 또는 (iv) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩될 수 있다. SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편은 (i) 적어도 1종의 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질; (iii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 바이러스-유사 입자 (VLP); (iv) 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 코딩하는 적어도 1종의 폴리뉴클레오티드; 또는 (v) 적어도 1종의 RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩되는 것일 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서, (i) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함될 수 있고; (ii) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편은 (i) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질, 또는 (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 바이러스-유사 입자 (VLP)일 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서: (a) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편은 생 약독화 인플루엔자 비리온에 포함될 수 있고/거나; (b) 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 생 약독화 인플루엔자 비리온에 포함될 수 있고/거나; (c) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편은 생 바이러스 벡터에 포함될 수 있다. SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 상기 생 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터; 홍역 바이러스 벡터; 볼거리 바이러스 벡터; 풍진 바이러스 벡터; 수두 바이러스 벡터; 소아마비 바이러스 벡터; 또는 황열 바이러스 벡터일 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 아주반트를 추가로 포함할 수 있다. 상기 아주반트는 전형적으로 세포성 (Th1) 및/또는 체액성 (Th2) 면역 반응, 바람직하게는 둘 다의 자극제이다. 상기 아주반트는 스쿠알렌 수중유 에멀젼, 알루미늄 염 또는 모노포스포릴 지질 A (MPL)를 포함할 수 있다.
SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원은 하기로부터 선택될 수 있다: (a) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편; (b) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함하는 융합 단백질; (c) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함하는 VLP; (d) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 또는 (e) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현하는 바이러스 벡터, RNA 백신 또는 DNA 플라스미드 (여기서 임의로 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 단편은 바람직하게는 서열식별번호: 15와 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD)을 포함하거나 또는 그로 이루어짐).
SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원은, SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하고, 추가로 (a) B형 간염 표면 항원, 또는 상기 B형 간염 표면 항원과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편; (b) HPV 18 L1 단백질, 또는 상기 HPV 18 L1 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편; (c) E형 간염 P239 단백질, 또는 상기 E형 간염 P239 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편; 및/또는 (e) HPV 16 L1 단백질, 또는 상기 HPV 16 L1 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 상기 융합 단백질은 (a) 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8, 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나와 적어도 90% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지고/거나; (b) 서열식별번호: 9, 10, 11, 12, 28, 31 또는 33 중 어느 하나와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다.
SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 VLP일 수 있으며, 여기서 상기 VLP는 본 발명의 융합 단백질을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 (a) 계절성 인플루엔자 백신, 특히 계절성 3가 인플루엔자 백신 또는 계절성 4가 인플루엔자 백신; (b) 1가 범유행성 인플루엔자 백신; 또는 (c) 범용 인플루엔자 백신에 포함될 수 있다.
본 발명은 또한 COVID-19 및 인플루엔자의 치료 및/또는 예방 방법에서 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 제공한다.
본 발명은 COVID-19 및 인플루엔자의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 의약의 제조에서의 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; 및 SARS-CoV-2로부터 유래된 항원 또는 그의 면역원성 단편, 및 임의로 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편의 용도를 추가로 제공하며, 여기서 상기 의약은 본원에 정의된 바와 같은 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신이다.
본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 투여하는 것을 포함하는, 인플루엔자 및 COVID-19 둘 다에 대해 상기 대상체를 면역화시키는 방법을 추가로 제공한다.
조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 10 내지 14개월의 간격으로 투여될 수 있고, 임의로는 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 약 12개월의 간격으로 투여된다.
도 1: 코로나바이러스의 구조 및 구조 단백질의 기능의 개략도.
도 2: 토끼-항 CoV-S (1:250, 중심) 및 마우스 항-HBSAg-(EAAAK)3-RBD (1:1000, 우측)를 사용한 HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S의 SDS Page (좌측) 및 웨스턴 블롯 (중심 및 우측).
도 3: 면역화 14일 후에 2종의 상이한 아주반트: Alu-280 및 아다박스와 함께 제제화된, HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S 단백질 단독 및 인플루엔자 백신 박시그립(VAXIGRIP)과 조합된 HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S 단백질로 면역화된 마우스 혈청에 대한 ELISA 검정에 의해 정량화된 항-HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S IgG 역가를 나타내는 그래프.
도 4: A 면역화 14일 후에 2종의 상이한 아주반트: Alu-280 및 아다박스와 함께 제제화된, HBSAg-(EAAAK)3-RBD로 면역화된 마우스 혈청 상에서 ELISA 검정에 의해 정량화된 항-HBSAg-(EAAAK)3-RBD IgG 역가를 나타내는 그래프. B 면역화 14일 후에 2종의 상이한 아주반트: Alu-280 및 아다박스와 함께 제제화된, HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S 또는 HBSAg-(EAAAK)3-RBD로 면역화된 마우스 혈청에 대한 ELISA 검정에 의해 정량화된 항-HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S IgG 및 항-HBSAg-(EAAAK)3-RBD IgG 역가의 비교.
도 5: 면역화 42일 후에 2종의 상이한 아주반트: Alu-280 및 아다박스와 함께 제제화된, HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S 단백질 단독 및 인플루엔자 백신 박시그립(VAXIGRIP)과 조합된 HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S 단백질로 면역화된 마우스 혈청에 대한 ELISA 검정에 의해 정량화된 항-HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S IgG 역가를 나타내는 그래프.
도 6: A 면역화 42일 후에 2종의 상이한 아주반트: Alu-280 및 아다박스와 함께 제제화된, HBSAg-(EAAAK)3-RBD로 면역화된 마우스 혈청에 대한 ELISA 검정에 의해 정량화된 항-HBSAg-(EAAAK)3-RBD IgG 역가를 나타내는 그래프. B 면역화 42일 후에 2종의 상이한 아주반트: Alu-280 및 아다박스와 함께 제제화된, HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S (단독으로 또는 인플루엔자 백신 박시그립과 조합하여) 또는 HBSAg-(EAAAK)3-RBD로 면역화된 마우스 혈청에 대한 ELISA 검정에 의해 정량화된 항-HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S IgG 및 항-HBSAg-(EAAAK)3-RBD IgG 역가의 비교.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 문헌 [Singleton, et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 20 ED., John Wiley and Sons, New York (1994), and Hale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991)]은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 개시내용에 사용된 많은 용어의 일반적 사전을 제공한다. 용어의 의미 및 범위는 명확해야 하지만; 임의의 잠재적 모호성이 있는 경우에 본원에 제공된 정의가 임의의 사전적 또는 외인적 정의보다 우선한다. 본 발명은 본원에 기재된 특정한 방법론, 프로토콜 및 시약 등으로 제한되지 않으며, 그 자체가 다양할 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
본 개시내용은 본원에 개시된 예시적인 방법 및 물질에 의해 제한되지 않고, 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 개시내용의 실시양태의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 본원에 사용된 용어는 특정한 실시양태만을 기재하기 위한 목적이며, 청구범위에 의해서만 규정되는 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 개시내용의 실시양태의 기재는 완전하거나 본 개시내용이 개시된 정확한 형태로 제한되도록 의도하지 않는다. 본 개시내용의 구체적 실시양태 및 그에 대한 실시예가 예시적 목적을 위해 본원에 기재되지만, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지하는 바와 같이, 본 개시내용의 범주 내에서 다양한 등가의 변형이 가능하다. 예를 들어, 방법 단계 또는 기능이 주어진 순서로 제시되지만, 대안적 실시양태는 기능을 상이한 순서로 수행할 수 있거나, 또는 기능이 실질적으로 동시에 수행될 수 있다. 본원에 제공된 개시내용의 교시는 적절하게 다른 절차 또는 방법에 적용될 수 있다. 본원에 기재된 다양한 실시양태는 조합하여 추가의 실시양태를 제공할 수 있다. 본 개시내용의 측면은, 필요한 경우, 상기 참고문헌 및 출원의 조성물, 기능 및 개념을 사용하여 본 개시내용의 추가 실시양태를 제공하도록 변형될 수 있다. 또한, 생물학적 기능적 동등성 고려사항으로 인해, 종류 또는 양에 있어서 생물학적 또는 화학적 작용에 영향을 미치지 않으면서 단백질 구조에서 일부 변화가 이루어질 수 있다. 이들 및 다른 변화는 상세한 설명에 비추어 본 개시내용에 대해 이루어질 수 있다. 이러한 모든 변형은 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.
수치 범위는 범위를 정의하는 수를 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 임의의 핵산 서열은 각각 좌측에서 우측으로 5'에서 3' 배향으로 기재되고; 아미노산 서열은 좌측에서 우측으로 아미노에서 카르복시 배향으로 기재된다.
본원에 제공된 표제는 본 개시내용의 다양한 측면 또는 실시양태의 제한이 아니다.
본원에 사용된 용어 "할 수 있는"은 동사와 함께 사용되는 경우, 상응하는 동사의 작용을 포괄하거나 의미한다. 예를 들어, "상호작용할 수 있는"은 또한 상호작용하는 것을 의미하고, "절단할 수 있는"은 또한 절단하는 것을 의미하고, "결합할 수 있는"은 또한 결합하는 것을 의미하고, "특이적으로 표적화할 수 있는..."은 또한 특이적으로 표적화하는 것을 의미한다.
용어의 다른 정의는 명세서 전반에 걸쳐 나타날 수 있다. 예시적 실시양태를 보다 상세하게 기재하기 전에, 본 개시내용은 기재된 특정한 실시양태로 제한되지 않으며, 이에 따라 달라질 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 개시내용의 범주는 첨부된 청구범위에 의해서만 정의될 것이기 때문에, 본원에 사용된 용어는 단지 특정한 실시양태를 기재하기 위한 목적이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는 것으로 이해되어야 한다.
값의 범위가 제공되는 경우, 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한, 그 범위의 상한치와 하한치 사이에 하한치의 단위의 1/10까지의 각각의 개재 값이 또한 구체적으로 개시되는 것으로 이해된다. 언급된 범위 내의 임의의 언급된 값 또는 개재 값과 그 언급된 범위 내의 임의의 다른 언급된 또는 개재 값 사이의 각각의 더 작은 범위가 본 개시내용 내에 포괄된다. 이들 보다 작은 범위의 상한치 및 하한치는 독립적으로 범위 내에 포함되거나 또는 배제될 수 있고, 한계치 중 어느 하나 또는 둘 다가 보다 작은 범위 내에 포함되거나 또는 둘 다 포함되지 않는 각각의 범위가 또한 언급된 범위 내의 임의의 구체적으로 배제된 한계치를 조건으로 본 개시내용 내에 포괄된다. 언급된 범위가 한계치 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 이들 포함된 한계치 중 하나 또는 둘 다를 배제하는 범위가 또한 본 개시내용에 포함된다.
본원에 사용된 단수형은 하나 또는 하나 초과 (예를 들어, 적어도 하나)의 관사의 문법적 대상을 지칭할 수 있다. 추가로, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함할 것이고, 복수 용어는 단수를 포함할 것이다. 본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 또한, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라 다른 형태, 예컨대 "포함하다" 및 "포함되다"의 사용은 제한적이지 않다.
"약"은 일반적으로 측정의 성질 또는 정밀도가 주어지면 측정된 양에 대한 허용되는 오차 정도를 의미할 수 있다. 예시적인 오차 정도는 주어진 값 또는 값의 범위의 20 퍼센트(%) 이내, 전형적으로 10% 이내, 보다 전형적으로 5% 이내이다. 바람직하게는, 용어 "약"은 본원에서 이와 함께 사용되는 수의 수치 값의 플러스 또는 마이너스 (±) 5%, 바람직하게는 ± 4%, ± 3%, ± 2%, ± 1%, ± 0.5%, ± 0.1%로서 이해되어야 한다.
본원에 사용된 용어 "포함하는" 또는 "포함하다"는 방법 또는 조성물에 필수적이지만 필수적이든 그렇지 않든 비명시된 요소의 포함에 대해서도 개방되어 있는 조성물, 방법, 및 그의 각각의 성분(들)과 관련하여 사용된다.
용어 "~로 이루어진"은 본원에 기재된 바와 같은 조성물, 방법, 및 그의 각각의 성분을 지칭하며, 이는 본 발명의 상기 설명에서 언급되지 않은 임의의 요소를 배제한다.
본원에 사용된 용어 "~로 본질적으로 이루어진"은 주어진 발명에 요구되는 요소를 지칭한다. 상기 용어는 본 발명의 기본적이고 신규한 또는 기능적 특징(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 요소의 존재를 허용한다.
하나 이상의 특색을 "포함하는" 것으로서 본원에 기재된 실시양태는 또한 이러한 특색으로 "이루어진" 및/또는 "본질적으로 이루어진" 상응하는 실시양태의 개시내용으로서 간주될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나, 또는 동물, 더욱 특히 인간에서의 사용에 대해 미국 약전, 유럽 약전 또는 다른 일반적으로 인식되는 약전에 열거된 것을 의미한다.
농도, 양, 부피, 백분율 및 다른 수치 값은 본원에서 범위 포맷으로 제시될 수 있다. 또한, 이러한 범위 포맷은 단지 편의성 및 간결성을 위해 사용되는 것으로 이해되며, 범위의 한계로서 명백하게 언급된 수치 값 뿐만 아니라 각각의 수치 값 및 하위-범위가 명백하게 언급된 것처럼 그 범위 내에 포괄된 모든 개별 수치 값 또는 하위-범위를 포함하는 것으로 융통성 있게 해석되어야 한다.
단백질과 관련하여 사용될 때, 용어 "변이체"는 아미노산 (예를 들어, 비천연 아미노산)의 하나 이상의 유사체, 또는 치환된 연결을 함유하는 단백질의 펩티드 또는 펩티드 단편을 의미한다.
단백질과 관련하여 사용될 때, 용어 "유도체"는 해당 단백질 및 추가의 펩티드 서열을 포함하는 단백질을 의미한다. 추가의 펩티드 서열은 바람직하게는 원래의 단백질의 기본 폴딩 및 이에 따른 입체형태적 구조를 방해하지 않아야 한다. 2개 이상의 펩티드 (또는 단편, 또는 변이체)는 함께 연결되어 유도체를 형성할 수 있다. 대안적으로, 펩티드 (또는 단편, 또는 변이체)는 비관련 분자 (예를 들어, 제2, 비관련 펩티드)에 연결될 수 있다. 유도체는 화학적으로 합성될 수 있지만, 전형적으로 재조합 핵산 방법에 의해 제조될 것이다. 추가의 성분, 예컨대 지질, 및/또는 폴리사카라이드, 및/또는 폴리펩티드 성분이 포함될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 인접한 잔기의 알파-아미노 및 카르복실 기 사이의 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 일련의 아미노산 잔기를 지정하기 위해 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 그의 크기 또는 기능에 상관없이, 변형된 아미노산 (예를 들어, 인산화, 당화, 글리코실화 등) 및 아미노산 유사체를 비롯한 아미노산의 중합체를 지칭한다. "단백질" 및 "폴리펩티드"는 종종 비교적 큰 폴리펩티드와 관련하여 사용되는 반면에, 용어 "펩티드"는 종종 작은 폴리펩티드와 관련하여 사용되지만, 관련 기술분야에서의 이들 용어의 용법은 중복된다. 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 유전자 산물 및 그의 단편을 지칭하는 경우에 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 따라서, 예시적인 폴리펩티드 또는 단백질은 유전자 산물, 자연 발생 단백질, 상동체, 오르토로그, 파라로그, 단편 및 상기의 다른 등가물, 변이체, 단편 및 유사체를 포함한다.
본 발명의 단백질은 한 종으로부터의 아미노산 잔기가 보존된 또는 비-보존된 위치에서 또 다른 종 내의 상응하는 잔기를 치환한 변이체를 포함할 수 있다. 본원에 개시된 단백질 분자의 변이체가 본 발명에서 생산되어 사용될 수 있다. 다변량 데이터 분석 기술을 구조/특성-활성 관계에 적용하는 데 있어서 선도적인 컴퓨터 화학에 따라 [예를 들어, 문헌 [Wold, et al. Multivariate data analysis in chemistry. Chemometrics-Mathematics and Statistics in Chemistry (Ed.: B. Kowalski); D. Reidel Publishing Company, Dordrecht, Holland, 1984 (ISBN 90-277-1846-6] 참조], 널리 공지된 수학적 기술, 예컨대 통계적 회귀, 패턴 인식 및 분류를 사용하여 단백질의 정량적 활성-특성 관계를 유도할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Norman et al. Applied Regression Analysis. Wiley-lnterscience; 3rd edition (April 1998) ISBN: 0471170828; Kandel, Abraham et al. Computer-Assisted Reasoning in Cluster Analysis. Prentice Hall PTR, (May 11, 1995), ISBN: 0133418847; Krzanowski, Wojtek. Principles of Multivariate Analysis: A User's Perspective (Oxford Statistical Science Series, No 22 (Paper)). Oxford University Press; (December 2000), ISBN: 0198507089; Witten, Ian H. et al. Data Mining: Practical Machine Learning Tools and Techniques with Java Implementations. Morgan Kaufmann; (October 11, 1999), ISBN:1558605525; Denison David G. T. (Editor) et al. Bayesian Methods for Nonlinear Classification and Regression (Wiley Series in Probability and Statistics). John Wiley & Sons; (July 2002), ISBN: 0471490369; Ghose, Arup K. et al. Combinatorial Library Design and Evaluation Principles, Software, Tools, and Applications in Drug Discovery. ISBN: 0-8247-0487-8] 참조]. 단백질의 특성은 단백질 서열, 기능적 및 3차원 구조의 실험적 및 이론적 모델 (예를 들어, 가능한 접촉 잔기의 분석 또는 계산된 물리화학적 특성)로부터 유도될 수 있고, 이들 특성은 개별적으로 및 조합하여 고려될 수 있다.
아미노산은 본원에서 아미노산의 명칭, 3-문자 약어 또는 단일 문자 약어를 사용하여 지칭된다. 본원에 사용된 용어 "단백질"은 단백질, 폴리펩티드 및 펩티드를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "아미노산 서열"은 용어 "폴리펩티드" 및/또는 용어 "단백질"과 동의어이다. 일부 예에서, 용어 "아미노산 서열"은 용어 "펩티드"와 동의어이다. 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 본 개시내용 및 청구범위에서, 아미노산 잔기에 대한 통상적인 1-문자 및 3-문자 코드가 사용될 수 있다. 아미노산에 대한 3-문자 코드는 IUPACIUB 생화학 명명법에 관한 연합 위원회(Joint Commission on Biochemical Nomenclature) (JCBN)에 따라 정의된다. 또한, 폴리펩티드는 유전자 코드의 축중성으로 인해 1개 초과의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있는 것으로 이해된다.
비-보존된 위치의 아미노산 잔기는 보존적 또는 비-보존적 잔기로 치환될 수 있다. 특히, 보존적 아미노산 대체가 고려된다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 또는 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산 또는 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 또는 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 또는 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 또는 히스티딘)를 포함한, 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 관련 기술분야에 정의되어 있다. 따라서, 폴리펩티드 내의 아미노산이 동일한 측쇄 패밀리로부터의 또 다른 아미노산으로 교체되면, 아미노산 치환은 보존적인 것으로 간주된다. 본 발명의 항체에서 보존적으로 변형된 변이체의 포함은 다른 형태의 변이체, 예를 들어 다형성 변이체, 종간 상동체 및 대립유전자를 배제하지 않는다.
"비-보존적 아미노산 치환"은 (i) 양전기 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Arg, His 또는 Lys)가 음전기 잔기 (예를 들어, Glu 또는 Asp)로 치환되거나 또는 그에 의해 치환되거나, (ii) 친수성 잔기 (예를 들어, Ser 또는 Thr)가 소수성 잔기 (예를 들어, Ala, Leu, Ile, Phe 또는 Val)로 치환되거나 또는 그에 의해 치환되거나, (iii) 시스테인 또는 프롤린이 임의의 다른 잔기로 치환되거나 또는 그에 의해 치환되거나, 또는 (iv) 벌키 소수성 또는 방향족 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Val, His, Ile 또는 Trp)가 보다 작은 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Ala 또는 Ser) 또는 측쇄가 없는 잔기 (예를 들어, Gly)로 치환되거나 또는 그에 의해 치환된 것들을 포함한다.
본 명세서에서 SARS-CoV-2 폴리뉴클레오티드 및/또는 단백질에 대한 언급은 그의 단편 및 변이체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 관련하여 용어 "단편"은 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하나 이상의 도메인 또는 부분-도메인을 포함할 수 있는 단백질의 부분을 지칭한다. 본 발명에 따른 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편은 전형적으로 본원에 기재된 바와 같은 면역원성 단편일 수 있다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 단편은 전형적으로 200개 초과의 아미노산 길이이다. 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편은 적어도 200개, 적어도 300개, 적어도 400개, 적어도 500개, 적어도 600개, 적어도 700개, 적어도 800개, 적어도 900개, 적어도 1000개, 적어도 1100개, 또는 그 초과의 아미노산 잔기 길이를 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 본 발명의 단편은 전형적으로 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는다 (이에 따라 면역원성 단편으로 지칭된다). SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편은 (i) SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD); (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 N-말단 도메인 (NTD); (iii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질, 예컨대 CTD1 및/또는 CTD2의 C-말단 도메인 (CTD) (이러한 CTD는 서브도메인 (SD)으로도 공지되고, CTD1은 SD1로도 공지되고, CTD2는 SD2로도 공지됨); 및/또는 (iv) 융합 펩티드 (FP); 및/또는 (v) FPPR 도메인; 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 단편은 RBD 도메인을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 비제한적 예로서, 본 발명에 따른 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 단편은 RBD 도메인으로 이루어질 수 있거나, 또는 NTD 도메인과 조합된 RBD 도메인을 포함할 수 있다.
변이체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 천연 스파이크 단백질의 1종 이상의 입체형태적 에피토프 및 중화 항체의 생산 및/또는 면역보호 반응을 도출하는 능력을 보유한다. 본 발명의 변이체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 폴리뉴클레오티드는 이러한 스파이크 단백질을 코딩한다. 예로서, 변이체는 참조 서열 (예를 들어, 본 발명의 SARS-CoV-2 폴리뉴클레오티드 및/또는 단백질, 특히 SARS-CoV-2 폴리뉴클레오티드 및/또는 단백질을 규정하는 본 명세서에 제시된 임의의 서열식별번호)과 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 가장 바람직하게는 적어도 97% 또는 적어도 99% 아미노산 서열 상동성을 가질 수 있다. 따라서, 변이체는 폴리뉴클레오티드의 하나 이상의 유사체 (예를 들어, 비천연 핵산), 또는 치환된 연결을 포함할 수 있다. 또한, 예로서, SARS-CoV-2 폴리뉴클레오티드 및/또는 단백질과 관련하여 사용될 때, 단편이라는 용어는 참조 SARS-CoV-2 폴리뉴클레오티드 및/또는 단백질의 적어도 10개, 바람직하게는 적어도 15개, 보다 바람직하게는 적어도 20개의 핵산 잔기를 갖는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 용어 단편은 또한 상기 언급된 변이체에 관한 것이다. 따라서, 예로서, 본 발명의 SARS-CoV-2 폴리뉴클레오티드 및/또는 단백질의 단편은 적어도 10, 20 또는 30개의 핵산을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 폴리뉴클레오티드 서열은 참조 SARS-CoV-2 폴리뉴클레오티드 및/또는 단백질 서열의 (인접한) 핵산의 상응하는 핵산 서열에 비해 적어도 80% 서열 상동성을 갖는다. 단편 및 변이체의 이들 정의는 또한 본 발명의 다른 폴리뉴클레오티드에도 적용된다. 펩티드 서열과 관련하여, 용어 단편은 참조 단백질의 적어도 10개, 바람직하게는 적어도 15개, 보다 바람직하게는 적어도 20개의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드를 의미한다. 용어 단편은 또한 상기 언급된 변이체에 관한 것이다. 따라서, 예로서, 단편은 적어도 10, 20 또는 30개의 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 아미노산 서열은 참조 서열의 (인접한) 아미노산의 상응하는 아미노산 서열에 비해 적어도 80% 서열 상동성을 갖는다.
바람직하게는, 변이체는 보존적 치환 변이체이다. 본원에서 지칭되는 "변이체"는 천연 또는 참조 폴리펩티드와 실질적으로 상동이지만, 하나 또는 복수의 결실, 삽입 또는 치환으로 인해 천연 또는 참조 폴리펩티드의 것과 상이한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드이다. 폴리펩티드-코딩 DNA 서열은 천연 또는 참조 DNA 서열에 비해 뉴클레오티드의 하나 이상의 부가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 참조 단백질에 비해 관련 생물학적 활성을 보유하는 변이체 단백질 또는 그의 단편, 예를 들어 야생형 참조 단백질의 적어도 50%를 코딩하는 서열을 포함한다. 아미노산 서열에 관하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 코딩된 서열에서 단일 아미노산 또는 작은 백분율 (즉, 5% 이하, 예를 들어 4% 이하, 또는 3% 이하, 또는 1% 이하)의 아미노산을 변경시키는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 서열에 대한 개별 치환, 결실 또는 부가가, 변경이 화학적으로 유사한 아미노산으로의 아미노산의 치환을 발생시키는 경우에 "보존적으로 변형된 변이체"이라는 것을 인식할 것이다. 일부 변화는 관련 활성을 잠재적으로 개선시켜, 변이체가 보존적이든 아니든 야생형 활성의 100% 초과, 예를 들어 110%, 125%, 150%, 175%, 200%, 500%, 1000% 또는 그 초과를 갖도록 할 수 있는 것으로 고려된다.
본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드는 적어도 1개의 펩티드 결합 대체를 포함할 수 있다. 단일 펩티드 결합 또는 다중 펩티드 결합, 예를 들어 2개의 결합, 3개의 결합, 4개의 결합, 5개의 결합, 또는 6개 이상의 결합, 또는 모든 펩티드 결합이 대체될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 단리된 펩티드는 1가지 유형의 펩티드 결합 대체 또는 다중 유형의 펩티드 결합 대체, 예를 들어 2가지 유형, 3가지 유형, 4가지 유형, 5가지 유형 또는 그 초과의 유형의 펩티드 결합 대체를 포함할 수 있다. 펩티드 결합 대체의 비제한적 예는 우레아, 티오우레아, 카르바메이트, 술포닐 우레아, 트리플루오로에틸아민, 오르토-(아미노알킬)-페닐아세트산, 파라-(아미노알킬)-페닐아세트산, 메타-(아미노알킬)-페닐아세트산, 티오아미드, 테트라졸, 보론산 에스테르, 올레핀계 기 및 그의 유도체를 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드는 살아있는 유기체에 의해 생산된 폴리펩티드 및/또는 단백질에서 통상적으로 발견되는 자연 발생 아미노산, 예를 들어 Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M), Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q), Asp (D), Glu (E), Lys (K), Arg (R), 및 His (H)를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드는 대안적 아미노산을 포함할 수 있다. 대안적 아미노산의 비제한적 예는 D 아미노산, 베타-아미노산, 호모시스테인, 포스포세린, 포스포트레오닌, 포스포티로신, 히드록시프롤린, 감마-카르복시글루타메이트; 히푸르산, 옥타히드로인돌-2-카르복실산, 스타틴, 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-3-카르복실산, 페니실라민 (3-메르캅토-D-발린), 오르니틴, 시트룰린, 알파-메틸-알라닌, 파라-벤조일페닐알라닌, 파라아미노페닐알라닌, p-플루오로페닐알라닌, 페닐글리신, 프로파르길글리신, 사르코신 및 tert-부틸글리신), 디아미노부티르산, 7-히드록시-테트라히드로이소퀴놀린 카르복실산, 나프틸알라닌, 비페닐알라닌, 시클로헥실알라닌, 아미노-이소부티르산, 노르발린, 노르류신, tert-류신, 테트라히드로이소퀴놀린 카르복실산, 피페콜산, 페닐글리신, 호모페닐알라닌, 시클로헥실글리신, 데히드로류신, 2,2-디에틸글리신, l-아미노-1-시클로펜탄카르복실산, l-아미노-1-시클로헥산카르복실산, 아미노-벤조산, 아미노-나프토산, 감마-아미노부티르산, 디플루오로페닐알라닌, 니페코트산, 알파아미노 부티르산, 티에닐-알라닌, t-부틸글리신, 트리플루오로발린; 헥사플루오로류신; 플루오린화 유사체; 아지드-변형된 아미노산; 알킨-변형된 아미노산; 시아노-변형된 아미노산; 및 그의 유도체를 포함한다.
폴리펩티드는, 예를 들어 펩티드를 구성하는 아미노산 중 하나 이상에 모이어티를 부가함으로써 변형될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드는 1개 이상의 모이어티 분자, 예를 들어 펩티드당 1개 이상의 모이어티 분자, 펩티드당 2개 이상의 모이어티 분자, 펩티드당 5개 이상의 모이어티 분자, 펩티드당 10개 이상의 모이어티 분자 또는 펩티드당 보다 많은 모이어티 분자를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드는 1가지 이상의 유형의 변형 및/또는 모이어티, 예를 들어 1가지 유형의 변형, 2가지 유형의 변형, 3가지 유형의 변형 또는 더 많은 유형의 변형을 포함할 수 있다. 변형 및/또는 모이어티의 비제한적 예는 PEG화; 글리코실화; HES화; ELP화; 지질화; 아세틸화; 아미드화; 말단-캡핑 변형; 시아노 기; 인산화; 알부민 및 고리화를 포함한다.
원래의 아미노산 서열의 변경은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다수의 기술 중 임의의 것에 의해 달성될 수 있다. 아미노산 치환은, 예를 들어 변화될 아미노산을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 코돈 변화를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 합성함으로써 특정한 위치에 도입될 수 있고, 이는 원래 서열의 단편에 대한 라이게이션을 허용하는 제한 부위에 의해 플랭킹된다. 라이게이션 후, 생성된 재구성된 서열은 목적하는 아미노산 삽입, 치환 또는 결실을 갖는 유사체를 코딩한다. 대안적으로, 올리고뉴클레오티드-지정 부위-특이적 돌연변이유발 절차를 이용하여, 요구되는 치환, 결실 또는 삽입에 따라 변경된 특정한 코돈을 갖는 변경된 뉴클레오티드 서열을 제공할 수 있다. 이러한 변경을 만드는 기술은 문헌 [Walder et al. (Gene 42:133, 1986); Bauer et al. (Gene 37:73, 1985); Craik (BioTechniques, January 1985, 12-19); Smith et al. (Genetic Engineering: Principles and Methods, Plenum Press, 1981)]; 및 미국 특허 번호 4,518,584 및 4,737,462 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 의해 개시된 것들을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드는 화학적으로 합성될 수 있고, 돌연변이는 화학적 합성 과정의 일부로서 혼입될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "폴리뉴클레오티드", "핵산" 및 "핵산 서열"은 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 그의 유사체의 단위를 포함하는 임의의 분자, 바람직하게는 중합체 분자를 지칭한다. 핵산은 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있다. 단일-가닥 핵산은 변성된 이중-가닥 DNA의 하나의 핵산 가닥일 수 있다. 대안적으로, 이는 임의의 이중-가닥 DNA로부터 유래되지 않은 단일-가닥 핵산일 수 있다. 한 측면에서, 핵산은 DNA일 수 있다. 또 다른 측면에서, 핵산은 RNA일 수 있다. 적합한 핵산 분자는 게놈 DNA 또는 cDNA를 비롯한 DNA이다. 다른 적합한 핵산 분자는 mRNA를 비롯한 RNA이다.
전형적인 항체는 적어도 2개의 "경쇄" (LC) 및 2개의 "중쇄" (HC)를 포함한다. 이러한 항체의 경쇄 및 중쇄는 여러 도메인으로 이루어진 폴리펩티드이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 "VH"로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역 (본원에서 "CH"로 약칭됨)을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 중쇄 불변 도메인 CH1, CH2 및 CH3 (항체 부류 IgA, IgD, 및 IgG) 및 임의로 중쇄 불변 도메인 CH4 (항체 부류 IgE 및 IgM)를 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 도메인 (본원에서 "VL"로 약칭됨) 및 경쇄 불변 도메인 (본원에서 "CL"로 약칭됨)을 포함한다. 가변 영역 VH 및 VL은 프레임워크 영역 (FR)으로 명명되는 더욱 보존된 영역이 산재되어 있는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명되는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 다음 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 배열되어 있다. 중쇄 및 경쇄의 "불변 도메인"은 표적에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지는 않지만, 다양한 이펙터 기능을 나타낸다.
항체와 그의 표적 항원 또는 에피토프 사이의 결합은 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 매개된다. CDR은 항체 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 내에 위치하는 서열 가변성이 높은 영역이며, 이들은 항원-결합 부위를 형성한다. CDR은 항원 특이성의 주요 결정인자이다. 전형적으로, 항체 중쇄 및 경쇄 각각은 비-연속적으로 배열된 3개의 CDR을 포함한다. 항체 중쇄 및 경쇄 CDR3 영역은 본 발명에 따른 항체의 결합 특이성/친화도에서 특히 중요한 역할을 하고, 따라서 본 발명의 추가 측면을 제공한다.
따라서, 본원에 사용된 용어 "항원 결합 단편"은 1, 2 또는 3개의 경쇄 CDR 및/또는 1, 2 또는 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항원-결합 폴리펩티드의 임의의 자연-발생 또는 인공적으로 구축된 배위를 포함하며, 여기서 폴리펩티드는 항원에 결합할 수 있다.
CDR의 서열은 관련 기술분야에 공지된 임의의 번호 시스템, 예를 들어 카바트(Kabat) 시스템 (문헌 [Kabat, E. A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]); 코티아(Chothia) 시스템 (문헌 [Chothia &, Lesk, "Canonical Structures for the Hypervariable Regions of Immunoglobulins," J. Mol. Biol. 196, 901-917 (1987)]); 또는 IMGT 시스템 (문헌 [Lefranc et al., "IMGT Unique Numbering for Immunoglobulin and Cell Receptor Variable Domains and Ig superfamily V-like domains," Dev. Comp. Immunol. 27, 55-77 (2003)])을 참조하여 확인될 수 있다.
본 발명에서 논의된 중쇄 불변 영역 아미노산 위치에 대해, 넘버링은 문헌 [Edelman, G.M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63 (1969) 78-85]에 처음 기재된 EU 인덱스에 따른다. 에델만(Edelman)의 EU 넘버링은 또한 문헌 [Kabat et al. (1991)] (상기 문헌)에 제시되어 있다. 따라서, 중쇄와 관련하여 용어 "카바트에 제시된 바와 같은 EU 인덱스", "EU 인덱스", "카바트의 EU 인덱스" 또는 "EU 넘버링"은 문헌 [Kabat et al. (1991)]에 제시된 바와 같은 에델만 등의 인간 IgG1 EU 항체에 기초한 잔기 넘버링 시스템을 지칭한다. 경쇄 불변 영역 아미노산 서열에 사용된 넘버링 시스템은 문헌 [Kabat et al.] (상기 문헌)에 유사하게 제시되어 있다. 따라서, 본원에 사용된 "카바트에 따라 넘버링된"은 문헌 [Kabat et al.] (상기 문헌)에 제시된 카바트 넘버링 시스템을 지칭한다.
용어 "감소시키다", "감소된", "감소" 또는 "억제하다"는 모두 본원에서 통계적으로 유의한 양만큼의 감소를 의미하는 것으로 사용된다. 용어 "감소시키다", "감소" 또는 "감소하다" 또는 "억제하다"는 전형적으로 참조 수준 (예를 들어, 주어진 치료의 부재)과 비교하여 적어도 10%만큼의 감소를 의미하고, 예를 들어 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 그 초과만큼의 감소를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "감소" 또는 "억제"는 참조 수준과 비교하여 완전한 억제 또는 감소를 포괄하지 않는다. "완전한 억제"는 참조 수준과 비교하여 100% 억제이다. 감소는 바람직하게는 소정의 장애를 갖지 않는 개체에 대해 정상 범위 내로서 허용되는 수준까지의 감소일 수 있다.
용어 "증가된", "증가시키다", "증진시키다" 또는 "활성화시키다"는 모두 본원에서 통계적으로 유의한 양만큼의 증가를 의미하는 것으로 사용된다. 용어 "증가된", "증가시키다", "증진시키다" 또는 "활성화시키다"는 참조 수준과 비교하여 적어도 10%의 증가, 예를 들어 참조 수준과 비교하여 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%, 또는 100%까지의 증가 또는 10-100% 사이의 임의의 증가, 또는 참조 수준과 비교하여 적어도 약 2배, 또는 적어도 약 3배, 또는 적어도 약 4배, 또는 적어도 약 5배 또는 적어도 약 10배 증가, 또는 2배 내지 10배 또는 그 초과의 임의의 증가를 의미할 수 있다. 마커 또는 증상과 관련하여, "증가"는 이러한 수준의 통계적으로 유의한 증가이다.
본원에 사용된 "대상체"는 인간 또는 동물을 의미한다. 통상적으로 동물은 척추동물, 예컨대 영장류, 설치류, 가축 또는 사냥 동물이다. 영장류는 침팬지, 시노몰구스 원숭이, 거미 원숭이 및 마카크, 예를 들어 레서스를 포함한다. 설치류는 마우스, 래트, 우드척, 페릿, 토끼 및 햄스터를 포함한다. 가축 및 사냥 동물은 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버팔로, 고양이 종, 예를 들어 집고양이, 개 종, 예를 들어 개, 여우, 늑대, 조류 종, 예를 들어 닭, 에뮤, 타조, 및 어류, 예를 들어 송어, 어류 및 연어를 포함한다. 바람직하게는, 대상체는 포유동물, 예를 들어 영장류, 예를 들어 인간이다. 용어 "개체", "환자" 및 "대상체"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
바람직하게는, 대상체는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비-인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말 또는 소일 수 있으나, 이들 예로 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 대상체는 인간이다. 대상체는 남성 또는 여성, 성인 또는 소아일 수 있다.
대상체는 치료를 필요로 하는 상태 또는 이러한 상태와 관련된 1종 이상의 합병증을 앓고 있거나 갖는 것으로 이전에 진단 또는 확인되었고, 임의로 본원에 정의된 바와 같은 상태 또는 상기 상태와 관련된 1종 이상의 합병증에 대해 이미 치료를 받는 대상체일 수 있다. 대안적으로, 대상체는 또한 본원에 정의된 바와 같은 상태 또는 상기 상태와 관련된 1종 이상의 합병증을 갖는 것으로 이전에 진단되지 않은 대상체일 수 있다. 예를 들어, 대상체는 상태 또는 상기 상태와 관련된 1종 이상의 합병증에 대한 하나 이상의 위험 인자를 나타내는 대상체 또는 위험 인자를 나타내지 않는 대상체일 수 있다.
특정한 상태에 대한 치료를 "필요로 하는 대상체"는 그 상태를 갖거나, 그 상태를 갖는 것으로 진단되거나, 또는 그 상태가 발생할 위험이 있는 대상체일 수 있다.
본원에서 특정한 분자의 수준에 대한 언급은 분자의 실제 양, 예컨대 분자의 질량, 몰량, 농도 또는 몰농도를 포괄한다. 예를 들어, 본 발명의 문맥에서, 특정한 분자의 수준에 대한 언급은 분자의 농도를 지칭할 수 있다.
분자의 수준은 임의의 적절한 생리학적 구획에서 결정될 수 있다. 바람직한 생리학적 구획은 혈장, 혈액 및/또는 혈청을 포함한다. 분자의 수준은 환자로부터의 임의의 적절한 샘플, 예를 들어 혈장 샘플, 혈액 샘플, 혈청 샘플, 조직 샘플, 기관지-폐포 세척 (BAL) 샘플 및/또는 CSF 샘플로부터 결정될 수 있다. 시험될 수 있는 샘플의 다른 비제한적 예는 조직 또는 유체 샘플 소변 및 생검 샘플이다. 따라서, 비제한적 예로서, 본 발명은 환자의 혈장 및/또는 BAL 중 분자의 수준 (예를 들어, 농도)을 지칭할 수 있다. 본 발명의 결합 구성원을 사용한 분자/바이오마커 전처리의 수준은 "기준선"으로 상호교환가능하게 언급될 수 있다.
본 발명의 백신을 사용한 치료 후의 분자의 수준은 백신을 사용한 환자 전처리에서의 분자의 수준과 비교될 수 있다. 분자의 수준은 직접적으로 또는 간접적으로 측정될 수 있고, 임의의 적절한 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 적합한 표준 기술, 예를 들어 웨스턴 블롯팅 및 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 SARS-CoV-2 및 2019-nCoV는 질환 COVID-19를 유발하는 바이러스 병원체를 지칭하는 데 상호교환가능하게 사용된다. SARS-CoV-2 감염에 대한 언급은 질환 COVID-19를 지칭한다. 용어 COVID-19 백신 (또는 COVID-19에 대한 백신)은 또한 용어 SARS-CoV-2 백신 (또는 SARS-CoV-2에 대한 백신)과 동의어이다.
본원에 사용된 용어 "백신"은 면역 반응을 유도하는 조성물을 지칭하는 데 사용된다. 예를 들어, 조성물은 투여되는 환자에서 면역 반응을 유도할 수 있다.
생 약독화 백신은 숙주 세포에서 감염 및 복제할 수 있지만 질환을 유발하지 않도록 일부 방식으로 변형된 전체 바이러스 입자 또는 비리온을 포함한다.
생 벡터 백신은, 그에 대해 면역 반응이 유발될 바이러스로부터 1종 이상의 항원을 발현하도록 변형된, 전형적으로 비-병원성 바이러스인 생 바이러스 벡터를 포함한다. 전형적으로, 1종 이상의 항원은 환자가 야생형 바이러스에 노출되거나 (즉, 질환에 감염됨) 또는 생 약독화 또는 불활성화 백신으로 백신접종된 경우에 그에 대해 면역 반응이 생성될 주요 항원이다. 항원은 단백질 항원 또는 그의 단편, 또는 폴리사카라이드 항원 또는 그의 단편일 수 있다. 항원은 재조합적으로 또는 접합체 또는 융합 단백질로서 발현될 수 있다.
불활성화 백신은 (예를 들어, 열 또는 화학물질 처리에 의해) 사멸되거나 불활성화 전체 바이러스 입자 또는 비리온을 포함한다. 불활성화 비리온은 숙주 세포에서 감염 또는 복제될 수 없고, 질환을 유발하지 않는다.
서브유닛 백신은 그에 대해 면역 반응이 유발될 바이러스의 1종 이상의 성분을 포함한다. 전형적으로, 1종 이상의 성분은 환자가 야생형 바이러스에 노출되었거나 (즉, 질환에 감염됨) 또는 생 약독화 또는 불활성화 백신으로 백신접종된 경우에 그에 대해 면역 반응이 생성될 주요 항원이다. 성분은 단백질 항원 또는 그의 단편, 또는 폴리사카라이드 항원 또는 그의 단편일 수 있다. 성분은 재조합적으로 또는 접합체 또는 융합 단백질로서 발현될 수 있다.
본원에 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 그의 개시내용에 대해서만 제공된다. 본원에서의 어떠한 것도 이러한 간행물이 본원에 첨부된 청구범위에 대한 선행 기술을 구성한다는 것을 인정하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
조합 백신
조합된 백신 조성물을 생성하고자 할 때의 통상적인 합병증은 성분 억제 (항원 조성물로도 알려져 있음)로 알려져 있는 현상이다. 성분 억제는, 전형적으로 상이한 병원체로부터의 2종 이상의 백신 또는 백신 항원이 동시에 투여되고, 백신 또는 백신 항원 중 1종 이상에 의해 도출된 면역 반응이 백신 또는 백신 항원이 개별적으로 투여될 때 도출된 면역 반응과 비교하여 손상되는 상황을 기재한다. 면역 반응은 여러 방식으로 손상될 수 있다. 예를 들어, 백신 또는 백신 항원 중 1종 이상에 의해 도출된 면역 반응은 백신 또는 백신 항원이 개별적으로 투여될 때 도출된 면역 반응과 비교하여 감소될 수 있다. 혈청전환 및/또는 혈청양성 또한 백신 또는 백신 항원이 개별적으로 투여될 때의 혈청전환 및/또는 혈청양성과 비교하여 감소될 수 있다. 성분 억제의 현상은 박테리아 병원체에 대한 백신 (예를 들어, 백일해-디프테리아-파상풍 (DTaP) 백신 및 헤모필루스 인플루엔자 b (Hib) 백신) 및 바이러스 병원체에 대한 백신 (예를 들어, 황열 백신 및 홍역-볼거리-풍진 (MMR) 백신)과 관련하여 관찰되었다. 성분 억제는 또한 백신 항원이 동일한 조성물로 투여되는 경우, 및 심지어 기존의 효과적인 백신 조성물이 동시에 투여되는 경우에도 관찰되었다. 성분 억제의 위험성은 조합 백신이 임상적으로 효과적일지 아닌지 여부, 또는 심지어 2종의 개별 백신 조성물이 함께 투여될 수 있는지 여부를 예측하는 것이 가능하지 않음을 의미한다. 성분 억제의 위험성은 면역학 분야에서 통상적으로 이해되고, 백신 스케줄링의 고려사항으로 고려되며, 성분 억제의 평가는 의료 규제 기관에 의한 요건이다.
본 발명자들은 인플루엔자 항원 및 SARS-CoV-2로부터 유래된 항원 모두를 포함하는 백신을 투여하여 인플루엔자 및 SARS-CoV-2 모두에 대해 우수한 면역원성을 달성하는 것이 가능하다는 것, 즉 인플루엔자 및 SARS-CoV-2와 관련하여 성분 억제가 발생하지 않는다는 것을 최초로 입증하였다.
따라서, 본 발명은 (a) 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 또는 그의 면역원성 단편; 및 (b) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신 (본원에서 조합 인플루엔자-COVID-19 백신으로도 상호교환가능하게 지칭됨)을 제공하며; 여기서 항원은 인플루엔자 및 COVID-19 (본원에 기재된 바와 같음) 둘 다에 대해 면역 반응 및 보호를 도출할 수 있다. 전형적으로, 상기 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 인플루엔자 뉴라미니다제 (NA) 또는 그의 면역원성 단편을 추가로 포함한다.
본원에 기재된 바와 같이, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 (i) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편; (iii) 임의적인 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편; 또는 그의 임의의 조합에 대해 성분 억제와 연관되지 않거나 또는 최소 성분 억제를 갖는다. 바람직하게는, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 (i) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편; 및 (iii) 임의적인 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편 각각에 대해 성분 억제와 연관되지 않거나 또는 최소 성분 억제를 갖는다.
본원에 사용된 용어 "성분 억제와 연관되지 않은"은 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 일부로서 투여된 (i) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편; (iii) 임의적인 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편; 또는 그의 임의의 조합에 대한 면역 반응이 (i) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2로부터 유래된 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편; 및/또는 (iii) 임의적인 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이 개별적으로 투여되는 경우에 달성되는 것과 본질적으로 동일한 면역 반응을 도출한다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "최소 성분 억제를 갖는"은 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 일부로서 투여된 (i) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편; (iii) 임의적인 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편; 또는 그의 임의의 조합에 대한 면역 반응이 (i) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편; 및/또는 (iii) 임의적인 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이 개별적으로 투여되는 경우에 달성되는 면역 반응의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과를 도출한다는 것을 의미한다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 또 다른 이점은 환자 순응도가 증가될 수 있다는 것이다. 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 환자가 인플루엔자 및 SARS-CoV-2 감염 둘 다에 면역을 제공할 단일 백신 투여를 받는 것을 가능하게 한다. 요구되는 백신접종의 횟수 및 요구되는 클리닉 방문의 횟수를 감소시키는 것은 백신 흡수 및 환자 순응도를 증가시킬 것이다. 또한, 많은 국가가 연간 인플루엔자 백신접종 프로그램을 위한 공중 보건 절차 및 스케줄을 잘 확립하였다. 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 SARS-CoV-2 감염에 대한 협응된 광범위한 백신접종을 허용하여 이들 기존 프로그램 및 절차를 이용하게 하며, 이는 또한 새로운 공중 보건 프로그램 또는 기반시설에 대한 필요 없이 SARS-CoV-2 감염에 대한 광범위한 백신접종을 용이하게 할 것이다. 또한, 일부 증거는 COVID-19 감염 및 확산과 기후 및 계절성의 잠재적 연관성을 시사한다. 따라서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 COVID-19에 대해 규칙적인 (예를 들어, 계절성 또는 연간) 백신접종을 허용하고, 따라서 계절성 감염 및 확산을 완화시키는 잠재력을 갖는다. 게다가, 이는 기존의 공중 보건 프로그램 및 절차, 특히 계절성 인플루엔자 백신접종을 위해 이미 준비된 것들을 사용하여 COVID-19 백신접종을 용이하게 함으로써 잠재적으로 달성될 수 있다.
인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 임의의 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 일상적인 기술을 사용하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 각각 쉽게 선택될 수 있다. 인플루엔자 HA (또는 그의 면역원성 단편) 및 인플루엔자 NA (또는 그의 면역원성 단편)의 비제한적 예가 본원에 기재된다.
1종 이상의 SARS-CoV-2 항원 또는 그의 면역원성 단편은 일상적인 기술을 사용하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 선택될 수 있다. SARS-CoV-2 항원 (또는 그의 면역원성 단편)의 비제한적 예가 본원에 기재된다. 전형적으로, 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원은 본원에 기재된 바와 같은 적어도 1종의 SARS-CoV-2 항원 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함한다.
인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및/또는 임의적인 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 기존의 인플루엔자 백신 조성물에 포함될 수 있다. 상기 인플루엔자 백신 조성물은 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원 (예를 들어, 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편, 또는 기존의 COVID-19 백신과 조합하여 본 발명에 따른 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 생산할 수 있다.
SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편은 기존의 COVID-19 백신 조성물에 포함될 수 있다. 상기 COVID-19 백신 조성물은 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및/또는 임의적인 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편, 또는 기존의 인플루엔자 백신과 조합하여 본 발명에 따른 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 생산할 수 있다. 전형적으로, 생 (약독화 또는 벡터화) COVID-19 백신이 사용되는 경우, 생 (약독화 또는 벡터화) 인플루엔자 백신이 사용된다. 전형적으로 불활성화 또는 서브유닛 COVID-19 백신이 사용되는 경우, 불활성화 또는 서브유닛 인플루엔자 백신이 사용된다. 바람직하게는, 서브유닛 (본원에 기재된 바와 같은 융합 단백질 및 VLP 포함) COVID-19 백신 또는 성분이 사용되고, 불활성화 인플루엔자 백신이 사용된다.
따라서, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함된 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편은 (i) 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함되거나; (ii) 재조합 HA 또는 그의 면역원성 단편이거나; (iii) HA 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 융합 단백질이거나; 또는 (iv) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩될 수 있다. 인플루엔자 HA, 그의 면역원성 단편, 및 HA를 포함하는 인플루엔자 백신의 비제한적 예가 본원에 기재된다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함된 (임의적인) 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 (i) 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함되거나; (ii) 재조합 NA 또는 그의 면역원성 단편이거나; (iii) NA 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 융합 단백질이거나; 또는 (iv) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩될 수 있다. 인플루엔자 NA, 그의 면역원성 단편, 및 NA를 포함하는 인플루엔자 백신의 비제한적 예가 본원에 기재된다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함된 SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편은 바람직하게는 (i) 적어도 1종의 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질; (iii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 바이러스-유사 입자 (VLP); (iv) 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 코딩하는 적어도 1종의 폴리뉴클레오티드; 또는 (v) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩되는 것이다. 이러한 SARS-CoV-2 항원, 특히 SARS-CoV-2 스파이크 단백질, 및 그의 면역원성 단편, 및 COVID-19 백신의 비제한적 예가 본원에 기재된다.
(i) 인플루엔자 HA, 그의 면역원성 단편, 및 HA를 포함하는 인플루엔자 백신; (ii) 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원, 특히 SARS-CoV-2 스파이크 단백질, 및 그의 면역원성 단편, 및 COVID-19 백신; 및 임의로 (iii) 인플루엔자 NA, 그의 면역원성 단편, 및 NA를 포함하는 인플루엔자 백신의 임의의 조합이 본 발명에 따른 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 사용될 수 있고, 단 HA, (임의적인) NA 및 SARS-CoV-2 항원은 인플루엔자 및 COVID-19 양쪽 모두에 대해 면역 반응 및 보호를 도출할 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분은 생 (약독화 또는 벡터화) 인플루엔자 백신, 불활성화 인플루엔자 백신 또는 서브유닛 인플루엔자 백신을 포함할 수 있다.
생 약독화 인플루엔자 백신의 비제한적 예는 계절성 인플루엔자 백신, 예컨대 계절성 4가 (4-가) 인플루엔자 백신을 포함한다. 구체적인 비제한적 예로서, 계절성 4가 인플루엔자 백신 (예를 들어, 2019-2020 계절)은 약독화된 인플루엔자 A H1N1 바이러스, 약독화된 인플루엔자 A H3N2 바이러스 및 2종의 인플루엔자 B 바이러스 (B/Colorado/06/2017-유사 (빅토리아 계통) 바이러스 및 B/Phuket/3073/2013-유사 바이러스 (야마가타 계통))를 포함할 수 있다.
불활성화 인플루엔자 백신의 비제한적 예는 계절성 인플루엔자 백신, 예컨대 계절성 3가 (3-가) 인플루엔자 백신 및 계절성 4가 (4-가) 인플루엔자 백신을 포함한다. 구체적인 비제한적 예로서, 계절성 3가 인플루엔자 백신 (예를 들어, 2019-2020 계절)은 약독화된 인플루엔자 A H1N1 바이러스, 약독화된 인플루엔자 A H3N2 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스 (B/Colorado/06/2017-유사 (빅토리아 계통))를 포함할 수 있다. 추가의 구체적인 비제한적 예로서 계절성 4가 인플루엔자 백신 (예를 들어, 2019-2020 계절)은 약독화된 인플루엔자 A H1N1 바이러스, 약독화된 인플루엔자 A H3N2 바이러스 및 2종의 인플루엔자 B 바이러스 (B/Colorado/06/2017-유사 (빅토리아 계통) 바이러스 및 B/Phuket/3073/2013-유사 바이러스 (야마가타 계통))를 포함할 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 사용될 수 있는 인플루엔자 백신의 다른 예는 1가 범유행성 인플루엔자 백신 (EMA에 의해 사전승인된 현행 범유행성 인플루엔자 백신은 생 약독화 또는 불활성화 백신을 포함함) 및 범용 인플루엔자 백신 (개발 중인 예는 서브유닛 백신, 및 프라이밍 DNA 백신 및 생 벡터화 백신을 포함하는 2-단계 백신을 포함함)을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분은 생 약독화 또는 불활성화 인플루엔자 백신이다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 SARS-CoV-2 성분은 생 (약독화 또는 벡터화) SARS-CoV-2/COVID-19 백신, 불활성화 SARS-CoV-2/COVID-19 백신 또는 서브유닛 SARS-CoV-2/COVID-19 백신을 포함할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 SARS-CoV-2 성분은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편을 포함하는 서브유닛 백신, 또는 상기 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편을 포함하는 융합 단백질 또는 VLP이다.
인플루엔자 성분이 약독화 생 또는 불활성화 인플루엔자 백신이고, SARS-CoV-2 성분이 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편을 포함하는 서브유닛 백신, 또는 상기 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편을 포함하는 융합 단백질 또는 VLP인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신이 특히 바람직하다.
전형적으로, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분이 생 (약독화 또는 벡터화) 인플루엔자 백신을 포함하는 경우, SARS-CoV-2 성분은 생 (약독화 또는 벡터화) SARS-CoV-2/COVID-19 백신을 포함한다.
전형적으로, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분이 불활성화 인플루엔자 백신을 포함하는 경우, SARS-CoV-2 성분은 불활성화 SARS-CoV-2/COVID-19 백신을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분이 불활성화 인플루엔자 백신을 포함하는 경우, SARS-CoV-2 성분은 서브유닛 SARS-CoV-2/COVID-19 백신을 포함하거나 또는 그 반대이다.
전형적으로, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분이 서브유닛 인플루엔자 백신을 포함하는 경우, SARS-CoV-2 성분은 서브유닛 SARS-CoV-2/COVID-19 백신을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분이 서브유닛 인플루엔자 백신을 포함하는 경우, SARS-CoV-2 성분은 불활성화 SARS-CoV-2/COVID-19 백신을 포함하거나 또는 그 반대이다.
전형적으로, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분이 핵산 (DNA 또는 RNA, 바람직하게는 DNA) 인플루엔자 백신을 포함하는 경우, SARS-CoV-2 성분은 핵산 (DNA 또는 RNA, 바람직하게는 DNA) SARS-CoV-2/COVID-19 백신을 포함한다.
본 발명은 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함되고, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편이 (i) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질; (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 바이러스-유사 입자 (VLP); 또는 불활성화 SARS-CoV-2 비리온인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 제공한다.
본 발명은 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 임의로 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이 서브유닛 백신에 포함되고, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편이 (i) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질; (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 바이러스-유사 입자 (VLP); 또는 불활성화 SARS-CoV-2 비리온인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 제공한다.
본 발명은 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편이 생 약독화 인플루엔자 비리온에 포함되고/거나; 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이 생 약독화 인플루엔자 비리온에 포함되고/거나; SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편이 생 바이러스 벡터 내에 (생 벡터화 백신 내에) 포함되는 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 제공한다. SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 생 바이러스 벡터는 백신용으로 임상적으로 사용되는 임의의 바이러스 벡터일 수 있다. 비제한적 예는 아데노바이러스 벡터, 홍역 바이러스 벡터, 볼거리 바이러스 벡터, 풍진 바이러스 벡터, 수두 바이러스 벡터, 소아마비 바이러스 벡터 및 황열 바이러스 벡터를 포함한다.
코로나바이러스 항원
코로나바이러스 (CoV)는 모든 RNA 바이러스 중에서 가장 큰 게놈을 가지며, 전형적으로 27 내지 32 kb 범위이다. CoV 게놈은 적어도 4종의 주요 구조 단백질: 스파이크 (S), 막 (M), 외피 (E), 뉴클레오캡시드 (N) 단백질, 및 복제 과정을 보조하고 세포 내로의 진입을 용이하게 하는 다른 보조 단백질을 코딩한다. 도 1은 코로나바이러스의 구조 및 구조 단백질의 기능을 요약한다. 간략하게, CoV 게놈은, 뉴클레오캡시드에 의해 형성되고 외피에 의해 추가로 둘러싸인 나선형 캡시드 내부에 패킹된다. 적어도 3종의 구조 단백질: 바이러스 조립에 수반되는 막 및 외피 단백질, 및 숙주 세포 내로의 바이러스 진입을 매개하는 스파이크 단백질이 바이러스 외피와 연관된다. 일부 코로나바이러스는 또한 외피-연관 헤마글루티닌-에스테라제 단백질 (HE)을 코딩한다. 스파이크 단백질은 바이러스 표면으로부터 큰 돌출부를 형성하여 코로나바이러스에 크라운을 갖는 외관을 제공하고, 이로부터 "코로나바이러스"라는 명칭이 유래되었다. 스파이크 단백질은 바이러스 진입을 매개할 뿐만 아니라 바이러스 숙주 범위 및 조직 향성 및 숙주 면역 반응의 주요 유도인자의 중요한 결정인자이다.
2019-nCoV (공식적으로 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2, SARS-CoV-2로 명명됨)는 코로나바이러스 질환 2019 (COVID-19)의 병원체이고, 인간 사이에서 전염성이다. SARS-CoV-2는 동물에서 기원한 것으로 여겨지며, SARS-CoV (79.5%) 및 박쥐 코로나바이러스 (96%)에 대한 SARS-CoV-2의 유전적 유사성을 고려할 때 박쥐가 공급원일 가능성이 있다. CoV에 관한 본원의 임의의 개시내용은 또한 직접적으로 및 제한 없이 SARS-CoV-2에 적용된다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편은 SARS-CoV-2 감염에 대해 면역 반응 및/또는 보호를 도출할 수 있는 임의의 SARS-CoV-2 항원(들)일 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 항원은 (i) 적어도 1종의 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질; (iii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 바이러스-유사 입자 (VLP); (iv) 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 코딩하는 적어도 1종의 폴리뉴클레오티드; 또는 (v) 적어도 1종의 RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩되는 것이다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 SARS-CoV-2 성분은 적어도 1종, 적어도 2종, 적어도 3종, 적어도 4종 또는 그 초과의 SARS-CoV-2 항원을 포함할 수 있다. 비제한적 예로서, 각각의 SARS-CoV-2 항원은 상이한 스파이크 단백질 항원, 예컨대 야생형 스파이크 단백질 항원 및/또는 본원에 기재된 변이체 스파이크 단백질 중 하나일 수 있다. 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함될 수 있는 SARS-CoV-2 항원의 기타 비제한적 예는 2019-CoV 캡시드, 막 단백질 또는 외피 단백질로부터의 이러한 항원을 포함한다. 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원 각각은 독립적으로 (i) 재조합 항원 또는 그의 면역원성 단편; (ii) 융합 단백질 또는 그의 면역원성 단편; (iii) 상기 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 바이러스-유사 입자 (VLP); 또는 (iv) 상기 항원 또는 그의 면역원성 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 형태로 제공될 수 있다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항원을 포함하는 재조합, 융합 단백질, VLP, 폴리뉴클레오티드 및 벡터에 관한 본원의 개시내용은 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함될 수 있는 다른 SARS-CoV-2 항원에 동등하게 적용가능하다.
스파이크 단백질
CoV 스파이크 단백질은 3개의 도메인을 포함한다: (i) 대형 엑토도메인; (ii) 막횡단 도메인 (단일 통과로 바이러스 외피를 통과함); 및 (iii) 짧은 세포내 꼬리. 엑토도메인은 3개의 수용체-결합 서브유닛 (3 x S1), 및 3개의 막-융합 서브유닛 (3 x S2)으로 제조된 삼량체 줄기로 이루어진다. 따라서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 동종삼량체이다. 바이러스 진입 동안, S1은 바이러스 부착을 위해 숙주 세포 표면 상의 수용체에 결합하고, S2는 숙주 및 바이러스 막을 융합시켜 바이러스 게놈이 숙주 세포에 진입하게 한다. 수용체 결합 및 막 융합은 코로나바이러스 감염 사이클에서 초기 및 결정적인 단계이다. 상이한 CoV에 의해 표적화된 수용체에서 유의한 차이가 있다.
SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 구조는, 예를 들어 문헌 [Cai et al. (Science (2020) 369:1586-1592))]에 기재되어 있고, 이는 전문이 본원에 참조로 포함된다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 각각의 S1 서브유닛은 N-말단 도메인 (NTD), 수용체 결합 도메인 (RBD), 2개의 C-말단 도메인 (CTD)을 포함한다. 숙주 세포 막과의 융합 전에, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 S1 서브유닛은 S2 서브유닛을 보호한다. ACE2에의 결합시, SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 "잭-나이프(jack-knife)" 방식으로 재폴딩되어 긴-중심 코일드 코일을 형성하고, 이는 궁극적으로 막 융합 및 숙주 세포로의 바이러스 진입을 일으킨다.
본 발명자들은 이전에 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 및 그의 면역원성 단편이 SARS-CoV-2/COVID-19 감염에 대한 백신용 항원으로서 치료 잠재력 (예방 잠재력 포함)을 갖는다는 것을 나타낸 바 있다.
따라서, 본원에 기재된 바와 같이, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 함유된 SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원은 바람직하게는 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편이다. 전형적으로, 상기 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 서열식별번호: 1과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖거나, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편 이다. 바람직하게는, SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질은 서열식별번호: 1과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖거나, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편이다. 보다 바람직하게는, SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질은 서열식별번호: 1과 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖거나, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편이다. SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질은 서열식별번호: 1, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편 (본원에서 면역원성 단편으로도 지칭됨)을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다.
본 발명에 따른 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 전형적으로 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 동일한 그의 수용체에 대한 결합 친화도를 보유한다. 본 발명의 문맥에서, 이는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 수용체에 대한 결합 친화도가 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 결합 친화도의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 그 초과임을 의미할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 결합 친화도가 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 결합 친화도의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 그 초과이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 2019-nCoV 스파이크 단백질 수용체에 대한 결합 친화도가 전장 단백질의 결합 친화도보다 크다. 예를 들어, 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 결합 친화도의 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 120% 또는 적어도 150% 또는 그 초과의 결합 친화도를 가질 수 있다.
다른 실시양태에서, 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 수용체에 대한 결합 친화도가 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 결합 친화도보다 작을 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 것의 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만 또는 그 미만의 결합 친화도를 가질 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 발현되는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편의 그의 수용체에 대한 결합 친화도는 해리 상수 (Kd)로 정량될 수 있다. Kd는 임의의 적절한 기술을 사용하여 결정될 수 있지만, 표면 플라즈몬 공명 (SPR)이 본 발명의 문맥에서 일반적으로 바람직하다.
1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역원성 단편은 전형적으로 200개 초과의 아미노산 길이이다. 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편은 적어도 200개, 적어도 300개, 적어도 400개, 적어도 500개, 적어도 600개, 적어도 700개, 적어도 800개, 적어도 900개, 적어도 1000개, 적어도 1100개, 또는 그 초과의 아미노산 잔기 길이를 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 본 발명의 단편은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는다 (이에 따라 면역원성 단편으로 지칭된다).
본 발명에 따르면, 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 천연 (야생형) SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 존재하는 1종 이상의 입체형태적 에피토프를 유지한다. 따라서, 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 면역보호 효과를 일으킬 수 있다. 전형적으로, 상기 면역보호 효과는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편의 1종 이상의 입체형태적 에피토프에 특이적으로 결합하는 중화 항체 (nAb)의 생산을 포함한다. CoV 스파이크 단백질의 입체형태적 에피토프는 CoV 스파이크 단백질의 3차 구조에서 발견되는 특이적인 3차원 구조를 갖는다. 상기 1종 이상의 입체형태적 에피토프는 전형적으로 스파이크 단백질의 엑토도메인 내에 있다. 바람직하게는, 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 내에 존재하는 모든 입체형태적 에피토프를 유지한다.
SARS-CoV-2 단백질의 면역원성 단편은 RBD, NTD, CTD1, CDT2, FP 및/또는 FPPR, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 바람직하게는, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역원성 단편은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 이러한 RBD는 숙주 세포에 대한 SARS-CoV-2 결합을 담당하고, 따라서 SARS-CoV-2 입자의 숙주 세포 내로의 진입을 용이하게 한다. RBD는 본원에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 319 내지 529에 상응하고, 서열식별번호: 15로 지칭된다. RBD는 SARS-CoV-2 바이러스 (진뱅크 수탁 번호 MN908947, 그의 버전 3 (MN908947.3)은 2020년 1월 17일에 기탁됨)의 게놈에서 위치 955 내지 1597에 상응하는 염기에 의해 코딩된다. 따라서, 본원에 기재된 바와 같이, 본 발명은 서열식별번호: 15와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD에 관한 것이다. 바람직하게는, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역원성 단편은 서열식별번호: 15와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD를 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 보다 바람직하게는, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역원성 단편은 서열식별번호: 15와 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD를 포함하거나 또는 그로 이루어진다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD는 서열식별번호: 15를 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 관련된 (예를 들어, 폴리뉴클레오티드, 바이러스 벡터, DNA 플라스미드, RNA 백신, 바이러스-유사 입자 (VLP), 융합 단백질, 항체, 조성물 및 제약 조성물, 제제 및 치료 적응증과 관련된) 본원의 임의의 및 모든 개시내용은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD에 동등하게 유보 없이 적용된다.
CoV는 큰 외피보유 단일 양성-센스 RNA 바이러스이다. RNA 바이러스의 돌연변이율은 DNA 바이러스보다 크며, 이는 생존을 위한 보다 효율적인 적응 프로세스를 시사한다. 따라서, 인플루엔자 바이러스에 대해 관찰된 것과 유사한 항원 소변이가 또한 SARS-CoV-2의 특색이 되거나, 또는 SARS-CoV-2가 범유행성이 진정되면 집단에서 풍토병이 될 위험성이 있다. 실제로, 지금까지의 연구는 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인 (RBD) 내의 돌연변이, 특히 G476S 및 V483A/G, 뿐만 아니라 S1/S2 부위 부근의 보편적인 D614G 돌연변이를 이미 확인하였고 (Saha et al., ChemRxivTM http://doi.org/10.26434/chemrxiv.12320567.v1), 증거는 SARS-CoV-2 비리온에 의한 세포 진입을 증진시키고, 또한 숙주 세포 향성을 확장시킬 수 있음을 시사한다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질에서 보고된 다른 돌연변이는 S943 (특히 S943P), L5 (특히 L5F), L8 (특히 L8F), V367 (특히 V367F), H49 (특히 H49Y), Y145 (특히 Y145H/del), Q239 (특히 Q239K), A831 (특히 A831V), D839 (특히 D839Y/N/E), 및 P1263 (특히 P1263L), 또는 그의 임의의 조합을 포함한다 (문헌 [Korber et al., BioRxivTM https://doi.org/10.1101/2020.04.29.069054]).
따라서, 본 발명은 유리하게는 SARS-CoV-2 백신 항원이 그것이 발생할 때 돌연변이된 스파이크 단백질을 갖는 균주에 대해 증진된 면역을 제공하기 위해 필요할 경우 변형되도록 한다. 비제한적 예로서, 본 발명에 따른 임의의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 (i) D614, (ii) V483, (iii) G476, (iv) K417, (v), E484, (vi) N501, (vii) A570, 및 (viii) P681, 또는 (i) 내지 (viii)의 임의의 조합 (임의의 2개, 임의의 3개, 임의의 4개, 임의의 5개, 임의의 6개, 임의의 7개 또는 8개 모두 포함)에서 (특히 치환에 의해) 변형될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 아미노산 잔기 69, 70 및/또는 144 중 하나 이상에서의 결실을 비롯한 결실 돌연변이를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 돌연변이/변형의 위치는 전형적으로 본 발명의 서열식별번호: 1에서의 아미노산의 넘버링에 상응한다.
위치 D614에서의 변형, 특히 D614G 치환이 바람직하다. 특히, 본 발명에 따른 임의의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 다음 치환 (i) G476S, (ii) V483A/G, (iii) D614G, (iv) K417N/T, (v), E484K, (vi) N501Y, (vii) A570D, 및 (viii) P681H, 또는 (i) 내지 (viii)의 임의의 조합 (임의의 2개, 임의의 3개, 임의의 4개, 임의의 5개, 임의의 6개, 임의의 7개 또는 8개 모두 포함)을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 변이체 SARS-CoV-2로부터의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 B.1.1.7 균주 (201/501Y.V1로도 알려져 있으며, 영국에서 최초로 검출되었고, 현재 알파 변이체로 알려져 있음); B.1.351 균주 (20H/501.V2로도 알려져 있으며, 남아프리카에서 최초로 검출되었고, 현재 베타 변이체로 알려져 있음), P1 균주 (20J/501Y.V3으로도 알려져 있으며, 일본 및 브라질에서 최초로 검출되었고, 현재 감마 변이체로 알려져 있음), B1.427 및 B1.429 균주 (캘리포니아에서 최초로 검출되었고, 현재 엡실론 변이체로 알려져 있음), 및/또는 B.1.617.2 균주 (인도에서 최초로 검출되었고, 현재 델타 변이체로 알려져 있음)로부터의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편에 관한 것일 수 있다. CDC (SARS-CoV-2 변이체 분류 및 정의 (cdc.gov))에 따르면, 알파 변이체는 다음 돌연변이를 포함하는 것으로 밝혀졌다: 69결실, 70결실, 144결실, (E484K*), (S494P*), N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A, D1118H, 및 (K1191N*). 알파 변이체의 주요 돌연변이는 잔기 69/70 및 144Y의 결실, 뿐만 아니라 N501Y, A570D, D614G 및 P681H 치환을 포함한다. CDC (SARS-CoV-2 변이체 분류 및 정의 (cdc.gov))에 따르면, 베타 변이체는 다음 돌연변이를 포함하는 것으로 밝혀졌다: D80A, D215G, 241결실, 242결실, 243결실, K417N, E484K, N501Y, D614G, 및 A701V. 베타 변이체의 주요 돌연변이는 K417N, E484K, N501Y 및 D614G 치환을 포함한다. CDC (SARS-CoV-2 변이체 분류 및 정의 (cdc.gov))에 따르면, 감마 변이체는 다음 돌연변이를 포함하는 것으로 밝혀졌다: L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y, T1027I. 감마 변이체의 주요 돌연변이는 E484K, K417N/T, N501Y 및 D614G를 포함한다. CDC (SARS-CoV-2 변이체 분류 및 정의 (cdc.gov))에 따르면, 델타 변이체는 다음 돌연변이를 포함하는 것으로 밝혀졌다: T19R, (G142D*), 156결실, 157결실, R158G, L452R, T478K, D614G, P681R, 및 D950N. 델타 변이체의 주요 돌연변이는 L452R, E484Q 및 T478K를 포함한다. CDC (SARS-CoV-2 변이체 분류 및 정의 (cdc.gov))에 따르면, 엡실론 변이체는 다음 돌연변이를 포함하는 것으로 밝혀졌다: S13I, W152C, L452R, D614G. 엡실론 변이체의 주요 돌연변이는 L452R이다.
조합 백신, 폴리뉴클레오티드, 스파이크 단백질 및 그의 단편, VLP, 융합 단백질 및 DNA/RNA 백신과 관련된 본원의 모든 개시내용은 명시적으로 언급되지 않는 한 SARS-CoV-2의 다양한 변이체 및 균주에 동등하게 적용된다.
따라서, 안전하게 반복해서 투여될 수 있는 백신 조성물의 개발은 (본원에 기재된 바와 같이 및 클리닉에서 관찰되는 바와 같이) 시간이 지남에 따라 상실되는 방어 면역 문제를 해결하기 위한 면역 반응의 부스팅을 가능케 할 뿐만 아니라, SARS-CoV-2 백신 항원이 발생할 때 돌연변이된 스파이크 단백질을 갖는 균주에 대해 증진된 면역을 제공하기 위해 필요할 경우 유리하게는 SARS-CoV-2 백신 항원이 변형되도록 할 것이다. 비제한적 예로서, 본 발명에 따른 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원으로서 사용되는 임의의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 (i) 417; (ii) 452; (iii) 478; (iv) 484; (v) 201; (vi) 570; (vii) 614; 및/또는 (viii) 681; 또는 그의 임의의 조합의 위치에서 (특히 치환에 의해) 변형될 수 있다. 추가의 비제한적 예로서, 본 발명에 따른 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원으로서 사용되는 임의의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 위치 (i) D614, (ii) V483, (iii) G476, (iv) G476 및 V483, (v) G476 및 D614, (vi) V483 및 D614, 또는 (vii) G476, V483 및 D614에서 (특히 치환에 의해) 변형될 수 있다. 위치 D614에서의 변형, 특히 D614G 치환이 바람직할 수 있다. 위치 L452에서의 변형, 특히 L452R 치환이 바람직할 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원으로서 사용되는 임의의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편은 다음 치환: (i) G476S, (ii) V483A/G, (iii) D614G, (iv) G476S 및 V483A/G, (v) G476S 및 D614G, (vi) V483A/G 및 D614G, (vii) G476S, V483A/G 및 D614G, (viii) L452R 및 E484Q, 및 임의로 T478K; 또는 (ix) L452R을 포함할 수 있다. 다중 변이체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 (본원에 기재된 형태 중 임의의 것, 특히 융합 단백질 또는 VLP)이 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함될 수 있다.
폴리뉴클레오티드
SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편은 1종 이상의 폴리뉴클레오티드 백신에 의해 코딩되거나 발현되어 (본원에서 "코딩하다" 및 "발현하다"라는 용어는 상호교환가능하게 사용됨) 항원(들) 또는 그의 면역원성 단편(들)을 생산할 수 있다. 용어 폴리뉴클레오티드는 DNA 및 RNA 서열 둘 다를 포괄한다. 본원에서, 용어 "핵산", "핵산 분자" 및 "폴리뉴클레오티드"는 상호교환가능하게 사용된다. 따라서, SARS-CoV-2로부터 유래된 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편은 DNA 또는 RNA 백신에 의해 코딩되거나 발현될 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 발현하는 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 1과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현할 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 1과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현한다. 보다 바람직하게는, 상기 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 1과 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현한다. 상기 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 1을 포함하거나 또는 그로 이루어진 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현할 수 있다. 다중 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질)이 폴리뉴클레오티드에 의해 또는 다중 폴리뉴클레오티드에 의해 또는 그의 조합에 의해 발현될 수 있다. 비제한적 예로서, 상기 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질)은 단일 폴리뉴클레오티드에 의해 발현될 수 있거나, 또는 상기 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 각각은 별도의 폴리뉴클레오티드에 의해 발현될 수 있다.
전형적으로, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편, 또는 본원에 기재된 바와 같은 그의 임의의 변이체를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD를 코딩할 수 있고, 바람직하게는 상기 RBD는 서열식별번호: 15와 적어도 90% 동일성을 갖는다. RBD를 코딩하는 예시적인 폴리뉴클레오티드가 서열식별번호: 13, 및 서열식별번호: 14의 코돈-최적화된 서열에 제시된다. 따라서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13의 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다.
본 발명은 상기 기재된 바와 같은 SARS-CoV-2로부터의 변이체 스파이크 단백질, 또는 상기 변이체 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 또한 포괄한다. 상기 변이체 스파이크 단백질은 전형적으로 서열식별번호: 1, 또는 그의 단편, 예컨대 서열식별번호: 15의 RBD와 적어도 90% 동일성을 갖는다.
1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 코딩하는 1종 이상의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, DNA 또는 RNA 백신)가 환자에서의 발현에 대해 최적화될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "최적화된"은 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편의 발현에 대한 최적화에 관한 것이고, 환자 내의 폴리뉴클레오티드로부터의 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 발현 수준 및/또는 지속기간을 증가시키거나, 또는 다르게는 DNA 또는 RNA 백신으로부터 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편을 발현할 때 이점을 제공하는 폴리뉴클레오티드에 대한 코돈 최적화 및/또는 다른 변형 둘 다를 포함한다 (핵산 서열 및 다른 변형 둘 다의 관점에서). 본 발명자들은 이전에 UK 특허 출원 번호 2002166.3 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에서 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 및 단편을 코딩하는 최적화된 폴리뉴클레오티드를 기재하였다.
따라서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편, 특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 서열식별번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 1종 이상의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, DNA 또는 RNA 백신)에 의해 코딩될 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함한다. 상기 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나의 핵산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 본원에 기재된 바와 같은 임의의 서열식별번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 26, 27, 29, 30 또는 32, 또는 그의 임의의 변이체에서 확인된 5' 클로닝 부위, 3' 클로닝 부위, 또는 5' 및 3' 클로닝 부위는 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, DNA 또는 RNA 백신)에서 결실될 수 있다. 따라서, 1종 이상의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, DNA 또는 RNA 백신)는 서열식별번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나를 포함하지만, 서열식별번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 26, 27, 29, 30 또는 32 중 임의의 것에서 확인된 5' 클로닝 부위, 3' 클로닝 부위, 또는 5' 및 3' 클로닝 부위가 결여될 수 있다. 대안적으로, 본원에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 26, 27, 29, 30, 또는 32 중 임의의 것 또는 그의 임의의 변이체에서 확인된 5' 클로닝 부위, 3' 클로닝 부위, 또는 5' 및 3' 클로닝 부위가 독립적으로 또 다른 적절한 클로닝 부위로 대체될 수 있다. 적합한 대안적 클로닝 부위는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
본 발명은 특히 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD를 포함하거나 또는 그로 이루어진 SARS-CoV-2로부터 유래된 항원 또는 그의 면역원성 단편에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13, 또는 서열식별번호: 14의 코돈-최적화된 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13, 또는 서열식별번호: 14의 코돈-최적화된 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13, 또는 서열식별번호: 14의 코돈-최적화된 서열에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13의 핵산 서열, 또는 서열식별번호: 14의 코돈-최적화된 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다.
본 발명에 따른 1종 이상의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, DNA 또는 RNA 백신)는 전형적으로 (a) 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 존재하는 입체형태적 에피토프를 보유하고/거나; (b) 상기 핵산이 환자에게 투여될 때 스파이크 단백질 또는 그의 단편에 대해 특이적인 중화 항체의 생산을 유발하는 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 코딩한다.
1종 이상의 폴리뉴클레오티드 (예컨대, DNA 또는 RNA 백신)는 통상적으로 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편, 특히 본원에 기재된 바와 같은 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편 (VLP 또는 융합 단백질 형태 포함)을 발현한다.
본 발명에 따른 1종 이상의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, DNA 또는 RNA 백신)는 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편의 발현을 용이하게 하기 위해 발현 구축물에 포함될 수 있다. 전형적으로, 이러한 발현 구축물에서 상기 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 적합한 프로모터(들)에 작동가능하게 연결된다. 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 적합한 종결인자 서열(들)에 연결될 수 있다. 1종 이상의 폴리뉴클레오티드는 프로모터(들) 및 종결인자(들) 둘 다에 연결될 수 있다. 적합한 프로모터 및 종결인자 서열은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
1종 이상의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, DNA 또는 RNA 백신)는 예를 들어 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편의 분비를 돕는 리더 서열(들)을 추가적으로 포함하는 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 코딩할 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 통상적인 리더 서열을 포함한 임의의 적합한 리더 서열이 사용될 수 있다. 적합한 리더 서열은 인간 조직 플라스미노겐 활성화제 리더 서열 (tPA)을 포함하며, 이는 바이러스 및 DNA 기반 백신, 및 포유동물 세포로부터의 분비를 보조하기 위한 단백질 백신에 통상적으로 사용된다.
적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은, 예를 들어 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편의 재조합 생산 및/또는 정제를 보조하기 위해 N- 또는 C-말단 태그를 추가적으로 포함할 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 통상적인 태그를 포함한 임의의 N- 또는 C-말단 태그가 사용될 수 있다. 적합한 태그 서열은 C-말단 헥사-히스티딘 태그 및 "C-태그" (C-말단의 4개의 아미노산 EPEA)를 포함하며, 이는 이종 발현 시스템, 예를 들어 곤충 세포, 포유동물 세포, 박테리아 또는 효모로부터의 정제를 보조하기 위해 관련 기술분야에서 통상적으로 사용된다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 정제 태그를 사용할 필요 없이 이종성 발현 시스템으로부터 정제된다.
본 발명의 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 본원에 정의된 바와 같은 리더 서열 및/또는 태그를 포함할 수 있다.
바이러스 벡터, DNA 플라스미드 및 RNA 백신
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편은 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신에 의해 코딩 또는 발현될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "벡터"는 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신을 지칭한다.
상기 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 본원에 기재된 바와 같은 SARS-CoV-2로부터 유래된 적어도 1종의 항원을 코딩하는 1종 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 본원에 기재된 바와 같은 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 코딩한다. 다중 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질)은 단일 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신, 또는 다중 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신 또는 그의 조합에 의해 발현될 수 있다. 비제한적 예로서, 상기 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질)은 단일 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신에 의해 발현될 수 있거나, 또는 상기 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 각각은 별도의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신에 의해 발현될 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 발현하는 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 서열식별번호: 1과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현할 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 서열식별번호: 1과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현한다. 보다 바람직하게는, 상기 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 서열식별번호: 1과 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현한다. 상기 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 서열식별번호: 1을 포함하거나 또는 그로 이루어진 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현할 수 있다. 일부 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 벡터에 의해 발현되는 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편은 본원에 정의된 바와 같은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD이며, 바람직하게는 상기 RBD는 서열식별번호: 15와 적어도 90% 동일성을 갖는다.
전형적으로, 상기 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편, 또는 본원에 기재된 바와 같은 그의 임의의 변이체를 발현한다. 바람직한 단편은 서열식별번호: 15에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 RBD이다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 발현하는 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 신호 펩티드(들)를 추가로 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 적어도 1종의 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 발현할 수 있다. 전형적으로, 상기 신호 펩티드는 관심 숙주 세포, 예컨대 치료될 환자 내 세포로부터 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편의 분비를 지시한다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 발현하는 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 1종 이상의 추가의 항원 또는 그의 단편을 추가로 발현할 수 있다. 스파이크 단백질 또는 그의 단편 및 1종 이상의 추가의 항원 또는 그의 단편은 융합 단백질로서 발현될 수 있다. 대안적으로, SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 단편 및 1종 이상의 추가의 항원 또는 그의 단편을 발현하는 별개의 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 경우, 상기 별개의 벡터는 조합하여, 바람직하게는 동시에 사용될 수 있다. 1종 이상의 추가의 항원은 SARS-CoV-2와 동일한 항원 또는 상이한 항원, 또는 그의 단편일 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 1종 이상의 추가의 항원은 SARS-CoV-2와 상이한 항원, 예컨대 2019-CoV 캡시드, 막 단백질 또는 외피 단백질로부터의 항원이다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 발현하는 1종 이상의 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신은 본원에 정의된 바와 같은 임의의 1종 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 발현 구축물, 또는 그의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
1종 이상의 벡터(들)는 바이러스 벡터일 수 있다. 이러한 바이러스 벡터는 아데노바이러스 (인간 혈청형, 예컨대 AdHu5, 원숭이 혈청형, 예컨대 ChAd63, ChAdOX1 또는 ChAdOX2, 또는 또 다른 형태), 아데노-관련 바이러스 (AAV), 또는 폭스바이러스 벡터 (예컨대, 변형된 백시니아 안카라 (MVA)), 또는 아데노 연관 바이러스 (AAV)일 수 있다. ChAdOX1 및 ChAdOX2는 WO2012/172277 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다. ChAdOX2는 BAC-유래 및 E4 변형된 AdC68-기반 바이러스 벡터이다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 바이러스 벡터는 AAV 벡터 아데노바이러스이다. 바이러스 벡터의 다른 비제한적 예는 홍역 바이러스 벡터, 볼거리 바이러스 벡터, 풍진 바이러스 벡터, 수두 바이러스 벡터, 소아마비 바이러스 벡터 및 황열 바이러스 벡터를 포함한다.
바이러스 벡터는 통상적으로 비-복제 또는 복제 손상 벡터이며, 이는 통상적인 수단에 의해 - 예를 들어 DNA 합성 및/또는 바이러스 역가를 측정하는 것을 통해 측정 시, 바이러스 벡터가 정상 세포 (예를 들어, 정상 인간 세포)에서 임의의 유의한 정도로 복제할 수 없다는 것을 의미한다. 비-복제 또는 복제 손상 벡터는 자연적으로 (즉, 자연으로부터 그 자체로 단리됨) 또는 인공적으로 (예를 들어, 시험관내 육종에 의해 또는 유전자 조작에 의해) 그렇게 될 수 있다. 일반적으로, 복제-손상 바이러스 벡터가 성장할 수 있는 적어도 1종의 세포-유형이 있을 것이다 - 예를 들어, 변형된 백시니아 앙카라 (MVA)는 CEF 세포에서 성장할 수 있다. 비제한적 예로서, 벡터는 인간 또는 원숭이 아데노바이러스 또는 폭스바이러스 벡터로부터 선택될 수 있다.
전형적으로, 1종 이상의 바이러스 벡터는 동물 대상체, 전형적으로 포유동물 대상체, 예컨대 인간 또는 다른 영장류에서 유의한 감염을 유발할 수 없다.
1종 이상의 벡터(들)는 DNA 벡터, 예컨대 DNA 플라스미드일 수 있다. 1종 이상의 벡터(들)는 RNA 벡터, 예컨대 mRNA 벡터 또는 자가-증폭 RNA 벡터일 수 있다. 본 발명의 1종 이상의 DNA 및/또는 RNA 벡터(들)는 전형적으로 진핵 세포, 특히 본원에 기재된 임의의 숙주 세포 유형에서, 또는 치료될 환자에서 발현될 수 있다.
전형적으로, DNA 및/또는 RNA 벡터(들)는 인간, 이. 콜라이(E. coli) 또는 효모 세포에서 발현될 수 있다.
1종 이상의 벡터는 파지 벡터, 예컨대 문헌 [Hajitou et al., Cell 2006; 125(2) pp. 385-398] (본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같은 AAV/파지 하이브리드 벡터일 수 있다.
본 발명의 핵산 분자 및 벡터는 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 따라서, 핵산 분자는 화학적 합성 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 핵산 분자 및 벡터는 분자 생물학 기술을 사용하여 제조될 수 있다.
본 발명의 벡터(들)는 인 실리코로 설계된 후, 통상적인 폴리뉴클레오티드 합성 기술에 의해 합성될 수 있다.
바이러스-유사 입자
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편은 바이러스-유사 입자 (VLP)에 포함될 수 있다.
바이러스-유사 입자 (VLP)는 바이러스와 유사하지만 바이러스 핵산을 함유하지 않는 입자이고, 따라서 비-감염성이다. 이들은 통상적으로, VLP를 형성하기 위해 자기-조립될 수 있는 하나 이상의 바이러스 캡시드 또는 외피 단백질을 함유한다. VLP는 매우 다양한 바이러스 패밀리의 성분으로부터 생성되었다 (문헌 [Noad and Roy (2003), Trends in Microbiology, 11:438-444; Grgacic et al., (2006), Methods, 40:60-65]). 일부 VLP, 예를 들어 엔게릭스(Engerix)-B (B형 간염용), 서바릭스(Cervarix) 및 가르다실(Gardasil) (인간 유두종 바이러스용)은 치료 백신으로서 승인되었다.
다중 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질)이 VLP 또는 그의 조합에 포함될 수 있다. 비제한적 예로서, 상기 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질)은 단일 VLP에 포함될 수 있거나, 또는 상기 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 각각은 별도의 VLP에 포함될 수 있다.
따라서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편은 1종 이상의 VLP에 포함될 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 1과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 1과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함한다. 더욱 바람직하게는, 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 1과 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함한다. 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 1을 포함하거나 또는 그로 이루어진 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함할 수 있다. 일부 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 VLP에 포함되는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역원성 단편은 본원에 정의된 바와 같은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD이고, 바람직하게는 여기서 상기 RBD는 서열식별번호: 15와 적어도 90% 동일성을 갖는다.
전형적으로, 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편, 또는 본원에 기재된 바와 같은 그의 임의의 변이체를 포함한다. 바람직한 단편은 서열식별번호: 15에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 RBD이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 VLP가 바이러스 구조 단백질의 개별 발현을 통해 합성될 수 있으며, 이어서 바이러스-유사 구조로 자기-조립될 수 있음을 이해할 것이다. 상이한 바이러스로부터의 구조적 캡시드 단백질의 조합을 사용하여 재조합 VLP를 생성할 수 있다. 또한, 항원 또는 그의 면역원성 단편은 VLP의 표면에 융합될 수 있다. 비제한적 예로서, 본 발명의 항원 또는 그의 면역원성 단편은 스파이캐처-스파이태그(SpyCatcher-SpyTag) 시스템 (브룬, 비스워스, 하워스(Brune, Biswas, Howarth)에 의해 기재된 바와 같음)을 사용하여 VLP에 커플링될 수 있다.
상기 1종 이상의 VLP는 1종 이상의 추가의 단백질 항원을 포함할 수 있다. 1종 이상의 추가의 항원은 SARS-CoV-2와 동일한 항원 또는 상이한 항원, 또는 그의 단편일 수 있다. 더욱 바람직하게는, 상기 1종 이상의 추가의 항원은 SARS-CoV-2와 상이한 항원, 예컨대 SARS-CoV-2 캡시드, 막 단백질 또는 외피 단백질로부터의 항원이다.
상기 1종 이상의 VLP는 본원에 기재된 적어도 1종의 융합 단백질을 포함할 수 있다. 상기 1종 이상의 VLP는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편과 B형 간염 표면 항원 (HBSAg), 인간 유두종바이러스 (HPV) 18 L1 단백질, HPV 16 L1 단백질 및/또는 E형 간염 P239, 바람직하게는 B형 간염 표면 항원의 융합 단백질을 포함할 수 있다.
따라서, 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8 중 어느 하나의 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다.
본 발명의 VLP는 서열식별번호: 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 VLP는 서열식별번호: 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 VLP는 서열식별번호: 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 본 발명의 VLP는 서열식별번호: 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나의 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다.
상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 바람직하게는, 상기 VLP는 서열식별번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 1종 이상의 VLP는 서열식별번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 상기 VLP는 서열식별번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다.
본 발명의 VLP는 서열식별번호: 28, 31 또는 33 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 VLP는 서열식별번호: 28, 31 또는 33 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 VLP는 서열식별번호: 28, 31 또는 33 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 본 발명의 VLP는 서열식별번호: 28, 31 또는 33 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다.
1종 이상의 VLP의 사용은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 면역원성 단편에 의해 유도된 면역보호 반응의 효능을 증가시킬 수 있고/거나 본원에 정의된 바와 같은 면역보호 반응의 지속기간을 증가시킬 수 있다.
융합 단백질
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편이 융합 단백질에 포함될 수 있다.
따라서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (예를 들어, 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편은 1종 이상의 융합 단백질에 포함될 수 있다.
다중 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질)이 융합 단백질 또는 그의 조합에 포함될 수 있다. 비제한적 예로서, 상기 1종 이상의 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질)은 단일 융합 단백질에 포함될 수 있거나, 또는 상기 SARS-CoV-2 항원 (특히 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 각각은 별도의 융합 단백질에 포함될 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에서 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 1과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 1과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 그 초과의 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함한다. 더욱 바람직하게는, 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 1과 적어도 98%, 적어도 99% 그 초과의 동일성를 갖는 SARS-CoV-2로부터의 1종 이상의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함한다. 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 1을 포함하거나 또는 그로 이루어진 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함할 수 있다.
전형적으로, 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 적어도 1종의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편, 또는 본원에 기재된 바와 같은 그의 임의의 변이체를 포함한다.
일부 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 융합 단백질에 포함되는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역원성 단편은 본원에 정의된 바와 같은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD이고, 바람직하게는 여기서 상기 RBD는 서열식별번호: 15와 적어도 90% 동일성을 갖는다.
본 발명의 융합 단백질은 통상적으로 비-SARS-CoV-2 도메인 또는 요소, 통상적으로 비-SARS-CoV-2 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드 도메인 또는 요소도 포함한다.
상기 1종 이상의 융합 단백질은 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편, 및 B형 간염 표면 항원 (HBSAg); 인간 유두종바이러스 (HPV) 18 L1 단백질; HPV 16 L1 단백질; 및/또는 E형 간염 P239, 바람직하게는 B형 간염 표면 항원 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 3, 5, 6 또는 8 중 어느 하나의 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다.
본 발명의 융합 단백질은 서열식별번호: 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 융합 단백질은 서열식별번호: 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 융합 단백질은 서열식별번호: 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다. 본 발명의 융합 단백질은 서열식별번호: 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나의 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다.
상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 바람직하게는, 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 상기 1종 이상의 융합 단백질은 서열식별번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다.
본 발명의 융합 단백질은 서열식별번호: 28, 31 또는 33 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 융합 단백질은 서열식별번호: 28, 31 또는 33 중 어느 하나에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 융합 단백질은 서열식별번호: 28, 31 또는 33 중 어느 하나에 대해 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. 본 발명의 융합 단백질은 서열식별번호: 28, 31 또는 33 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다.
상기 1종 이상의 융합 단백질은 바람직하게는 VLP의 형태를 취할 수 있다. 이론에 얽매이지는 않지만, 이는 HPSAg, HPV 18 L1 단백질, HPB 16 L1 단백질 및 E형 간염 P239 단백질이 재조합적으로 발현되는 경우에 VLP를 자발적으로 형성하는 것으로 공지되어 있고, 이러한 구조는 HPSAg, HPV 18 L1 단백질, HPB 16 L1 단백질 및/또는 E형 간염 P239 단백질이 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 (또는 그의 면역원성 단편)과 조합된 융합 단백질 형태로 존재하는 경우에 유지되기 때문이다.
본 발명의 융합 단백질은 링커 (본원에서 링커 펩티드, 스페이서 또는 스페이서 펩티드로도 상호교환가능하게 지칭됨)를 포함할 수 있다. 링커는 본 발명의 융합 단백질의 2개 이상의 기능적 도메인을 연결하는 데 사용될 수 있다. 전형적으로, 링커가 존재하는 경우, 이는 융합 단백질의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편 도메인을 융합 단백질의 비-SARS-CoV-2 스파이크 단백질 도메인에 연결하는 데 사용된다. 융합 단백질에서의 링커의 사용은 관련 기술분야에서 상용적이며, 생성된 융합 단백질이 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편의 목적하는 기능적 특성 및 비-2 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 도메인의 목적하는 기능 특성을 보유하는 한, 임의의 통상적인 링커 단백질이 본 발명의 융합 단백질에 사용될 수 있다.
링커는 약 30개 이하의 아미노산, 예컨대 약 5-30개 아미노산, 약 5-25개 아미노산, 약 5-20개 아미노산, 약 10-20개 아미노산, 약 5-15개 아미노산 또는 약 10-15개 아미노산 길이의 짧은 펩티드일 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 10개, 약 11개, 약 12개, 약 13개, 약 14개, 약 15개, 약 16개, 약 17개, 약 18개, 약 19개 또는 약 20개 아미노산 길이이다.
일부 실시양태에서, 강성 링커가 본 발명의 융합 단백질에 사용될 수 있다. 강성 링커는 융합 단백질의 상이한 도메인/부분 사이에 고정된 거리를 유지하고 그의 독립적인 기능을 유지하는 것이 필요한 경우에 통상적으로 사용된다. 강성 링커는 또한 융합 단백질 도메인의 공간적 분리가 융합 단백질의 안정성 또는 생물활성을 보존하는 데 중요한 경우에 사용될 수 있다. A(EAAAK)nA (n = 2-5) (서열식별번호: 16)의 서열을 갖는 실험적 강성 링커는 Glu--Lys+ 염 가교에 의해 안정화된 α-나선 입체형태를 나타냈다. 강성 링커의 비제한적인 예는 EAAAKEAAAKEAAAK ((EAAAK)3으로 또한 지칭됨, 서열식별번호: 18)이고, 이는 핵산 서열 (서열식별번호: 17)에 의해 코딩될 수 있다. 강성 링커는 바람직하게는 포유동물 세포, 예컨대 HEK 293 세포에서의 본 발명의 융합 단백질의 발현에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 가요성 링커가 본 발명의 융합 단백질에 사용될 수 있다. 가요성 링커는 연결된 도메인이 특정 정도의 이동 또는 상호작용을 필요로 하는 경우에 통상적으로 사용된다. 가요성 링커는 통상적으로 소형 아미노산 잔기, 예컨대 글리신, 트레오닌, 아르기닌, 세린, 아스파라긴, 글루타민, 알라닌, 아스파르트산, 프롤린, 글루탐산, 리신, 류신 및/또는 발린, 특히 글리신, 세린, 알라닌, 류신 및/또는 발린을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 글리신, 세린 및/또는 알라닌을 포함하거나 또는 그로 이루어진 가요성 링커가 바람직하고, 글리신 및 세린이 특히 바람직하다. 따라서, 가장 통상적으로 사용되는 가요성 링커는 주로 Gly 및 Ser 잔기의 스트레치로 이루어진 서열 ("GS" 링커)을 가지며, (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (서열식별번호: 19)의 서열을 포함한다. GS 링커의 비제한적 예는 GS5 또는 (GGGGS)1 (서열식별번호: 20); GS10 또는 (GGGGS)2 (서열식별번호: 21); GS15 또는 (GGGGS)3 (서열식별번호: 23); GS20 또는 (GGGGS)4 (서열식별번호: 24); 및 GS25 또는 (GGGGS)5 (서열식별번호: 25)를 포함한다. 바람직하게는, (서열식별번호: 22)에 의해 코딩될 수 있는 GS15가 사용될 수 있다. 가요성 링커는 바람직하게는 박테리아 세포, 예컨대 이. 콜라이 세포에서의 본 발명의 융합 단백질의 발현에 사용될 수 있다.
임의의 적절한 링커, 예컨대 본원에 기재된 예시적인 링커가 본 발명의 임의의 융합 단백질 (임의의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 면역원성 단편 도메인 및 임의의 비-SARS-CoV-2 스파이크 단백질 도메인을 포함함)과 함께 사용될 수 있다. 비제한적 예로서, 본 발명의 융합 단백질은 HBSAg-(EAAAK)3-RBD (서열식별번호: 28), 또는 그에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있으며, 이는 서열식별번호: 26 또는 27, 또는 그에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 코딩될 수 있다. 추가의 비제한적인 예로서, 본 발명의 융합 단백질은 HBSAg-(EAAAK)3-전장 2019-nCoV 스파이크 단백질 (서열식별번호: 33), 또는 그에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있으며, 이는 서열식별번호: 32, 또는 그에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 코딩될 수 있다. 추가의 비제한적 예로서, 본 발명의 융합 단백질은 HEV-GS15-RBD (서열식별번호: 31), 또는 그에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있으며, 이는 (서열식별번호: 29 또는 30), 또는 그에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 코딩될 수 있다.
융합 단백질은 바람직하게는 VLP의 형태를 취할 수 있다. 이론에 얽매이지는 않지만, 이는 HBSAg, HPV 18 L1 단백질, HPB 16 L1 단백질 및 E형 간염 P239 단백질이 재조합적으로 발현되는 경우에 VLP를 자발적으로 형성하는 것으로 공지되어 있고, 이러한 구조는 HBSAg, HPV 18 L1 단백질, HPB 16 L1 단백질 및/또는 E형 간염 P239 단백질이 본 발명의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 (또는 그의 면역원성 단편)과 조합된 융합 단백질 형태로 존재하는 경우에 유지되기 때문이다.
인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 및 뉴라미니다제 (NA) 항원
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 또는 그의 면역원성 단편을 포함한다. 임의로, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 인플루엔자 뉴라미니다제 (NA) 또는 그의 면역원성 단편을 추가로 포함할 수 있다.
HA의 면역원성 단편은 그것이 유래된 HA와 공통 항원 교차-반응성을 갖는다. 유사하게, NA의 면역원성 단편은 그것이 유래된 NA와 공통 항원 교차-반응성을 갖는다.
인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 (및 임의로 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편)은 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 임의의 적절한 형태로 존재할 수 있다.
인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및/또는 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 전형적으로 인플루엔자 비리온으로부터 제조될 것이지만, 대안적으로 이들 항원은 다른 형태, 예컨대 폴리뉴클레오티드, 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신, VLP 및 융합 단백질로 제공될 수 있다.
폴리뉴클레오티드, 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신, VLP 및 융합 단백질에 관한 본원의 일반적인 개시내용은 또한 본원에 기재된 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편에 적용가능하다. SARS-Cov-2로부터 유래된 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질)과 관련하여 폴리뉴클레오티드, 바이러스 벡터, DNA 벡터 (또는 DNA 플라스미드) 또는 RNA 백신, VLP 및 융합 단백질에 관한 본원의 임의의 일반적인 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편에 동등하게 제한 없이 적용된다.
본원에 기재된 바와 같이, (a) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편은 (i) 불활성화 인플루엔자 비리온; (ii) 재조합 HA 또는 그의 면역원성 단편; (iii) HA 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 융합 단백질에 포함될 수 있거나; 또는 (iv) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, (a) 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 (i) 불활성화 인플루엔자 비리온; (ii) 재조합 NA 또는 그의 면역원성 단편; (iii) NA 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 융합 단백질에 포함될 수 있거나; 또는 (iv) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩될 수 있다.
인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및/또는 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 기존 인플루엔자 백신의 형태를 취할 수 있다. 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및/또는 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편은 생 (약독화 또는 벡터화) 백신, 불활성화 백신 또는 서브유닛 백신의 형태를 취할 수 있다. 불활성화 인플루엔자 백신은 불활성화 전체 비리온 백신 및 불활성화 분할 비리온 백신 둘 다를 포함하고, 전체 비리온 불활성화 백신이 바람직하다. 분할 비리온은 비리온을 세제 (예를 들어, 에틸 에테르, 폴리소르베이트 80, 데옥시콜레이트, 트리-N-부틸 포스페이트, 트리톤 X-100, 트리톤 N101, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드, 테르기톨 NP9 등)로 처리하여 서브비리온 제제를 생산함으로써 수득된다. 인플루엔자 바이러스를 분할하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
불활성화 백신은 임의의 적절한 수단에 의해 생성될 수 있다. 인플루엔자 비리온을 불활성화하기 위한 통상적인 수단은 유효량의 다음 작용제 중 하나 이상을 사용한 처리를 포함한다: 세제, 포름알데히드, 포르말린, β-프로피오락톤 또는 UV 광. 불활성화를 위한 추가의 화학적 수단은 메틸렌 블루, 프소랄렌, 카르복시풀러렌 (C60) 또는 그의 임의의 조합으로의 처리를 포함한다. 바이러스 불활성화의 다른 방법, 예컨대 예를 들어 2원 에틸아민, 아세틸 에틸렌이민, 또는 감마선 조사가 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 임의의 상업적으로 입수가능한 인플루엔자 백신, 범용 인플루엔자 백신 및/또는 범유행성 인플루엔자 백신을 비롯한 임의의 인플루엔자 백신을 포함할 수 있거나 또는 이를 사용하여 생산될 수 있다.
전형적으로, 백신에 사용하기 위한 인플루엔자 바이러스 균주는 계절마다 변한다. 현재 인플루엔자간 범유행 기간에서, 백신은 전형적으로 2종의 인플루엔자 A 균주 (H1N1 및 H3N2) 및 1종의 인플루엔자 B 균주 (B/Colorado/06/2017-유사 (빅토리아 계통) 바이러스)를 포함하고, 계절성 인플루엔자에 대한 3가 백신 (계절성 3가 인플루엔자 백신)이 전형적이다. 계절성 인플루엔자에 대한 4가 백신 (계절성 4가 인플루엔자 백신)이 또한 통상적으로 사용된다. 현재 계절성 4가 인플루엔자 백신은 계절성 3가 인플루엔자 백신과 동일한 균주를 포함하며, 추가의 인플루엔자 B 균주 (B/Phuket/3073/2013-유사 바이러스 (야마가타 계통))가 포함된다. 계절성 3가 및 4가 인플루엔자 백신을 포함한 임의의 계절성 인플루엔자 백신이 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함되거나 이를 생산하는 데 사용될 수 있다. 규제 승인된 계절성 인플루엔자 백신은 웹사이트 질병 관리 예방 센터 (CDC) (CDC 2019-2020 목록은 https://www.cdc.gov/flu/professionals/acip/summary/summary-recommendations.htm#composition에서 제공됨) 및 유럽 의약품청 (EMA)에서 확인된다.
대안적으로, 범유행성 인플루엔자 백신이 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함되거나 이를 생산하는 데 사용될 수 있다. 범유행성 인플루엔자 백신은 백신 수용자 및 일반 인간 집단이 면역학적으로 나이브한 균주인 범유행성 인플루엔자 균주, 예컨대 H2, H5, H7 또는 H9 하위유형 균주 (특히 인플루엔자 A 바이러스)에 대해 생성된다. 범유행성 인플루엔자 바이러스 균주는 종종 비-인간 종에서 발생한 후, 종 장벽을 인간으로 점핑한다. 잠재적인 범유행성 인플루엔자 균주의 최근 예는 유전자형 4 (G4) 유라시안 조류-유사 (EA) H1N1 돼지 인플루엔자 균주이다. 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 이러한 종-점핑 범유행성 균주, 예컨대 G4 EA H1N1에 대해 지시된 인플루엔자 성분을 포함할 수 있다. 범유행성 인플루엔자 백신은 1가일 수 있거나, 또는 범유행성 균주에 의해 보충된 3가 백신을 기초로 할 수 있다. 1가 범유행성 인플루엔자 백신이 바람직할 수 있다.
범용 인플루엔자 백신이 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 포함되거나 이를 생산하는 데 사용될 수 있다. 개발 중인 범용 인플루엔자 백신의 예는 서브유닛 백신, 및 프라이밍 DNA 백신 및 생 벡터 백신을 포함하는 2-단계 백신을 포함한다.
계절 및 백신에 포함된 HA 및/또는 NA의 성질에 따라, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분은 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 또는 H16 중 1종 이상에 대해 보호할 수 있다. 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 NA 하위유형 N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8 또는 N9 중 1종 이상에 대해 보호할 수 있다.
본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분은 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 인플루엔자 B 바이러스를 비롯한 1종 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4종 또는 그 초과)의 인플루엔자 균주로부터의 HA 및/또는 NA (또는 그의 면역원성 단편)를 포함할 수 있다.
인플루엔자 HA 및/또는 NA 또는 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분을 형성하는 인플루엔자 백신의 공급원으로서 사용되는 바이러스는 난 또는 세포 배양물 상에서 성장시킬 수 있다. 인플루엔자 바이러스 성장을 위한 현행 표준 방법은 특정 병원체-무함유 (SPF) 발육란을 사용하며, 바이러스는 난 내용물 (요막액)로부터 정제된다. 그러나, 보다 최근에, 바이러스를 동물 세포 배양물에서 성장시켰고, 속도 및 환자 알레르기의 이유로 이러한 성장 방법이 바람직하다. 난-기반 바이러스 성장이 사용되면, 하나 이상의 아미노산이 바이러스와 함께 난의 요막액 내로 도입될 수 있다. 세포 배양이 사용되는 경우, 바이러스 성장 기질은 전형적으로 포유동물 기원의 세포주일 것이다. 적합한 기원의 포유동물 세포는 햄스터, 소, 영장류 (인간 및 원숭이 포함) 및 개 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다양한 세포 유형, 예컨대 신세포, 섬유모세포, 망막 세포, 폐 세포 등이 사용될 수 있다. 적합한 세포주는 MDCK; CHO; 293T; BHK; Vero; MRC-5; PER.C6; WI-38 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 인플루엔자 바이러스를 성장시키기 위한 바람직한 포유동물 세포주는, 예를 들어 아메리칸 유형 셀 컬쳐 (ATCC) 콜렉션으로부터 CCL-34로서 입수가능한 마딘 다르비(Madin Darby) 개 신장으로부터 유래된 MDCK 세포를 포함한다. MDCK 세포주의 유도체가 또한 사용될 수 있다.
바이러스가 포유동물 세포주 상에서 성장된 경우, 조성물은 유리하게는 난자 단백질 (예를 들어, 오브알부민 및 오보뮤코이드) 및 닭 DNA를 함유하지 않을 것이고, 이에 의해 알레르겐성이 감소될 것이다.
조성물 및 치료 적응증
본원에 기재된 바와 같이, 본 발명자들은 SARS-CoV-2 항원, 특히 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 포함하는 백신 조성물이 인플루엔자 바이러스 백신과 성공적으로 조합됨으로써 SARS-CoV-2 및 인플루엔자 둘 다에 대한 강건한 항체 반응을 생성시킬 수 있다는 것을 입증하였다. 따라서, 본 발명은 놀랍게도, 조합 백신 제품의 생산에서 통상적인 백신 성분 억제의 예상된 문제가 전혀 없는 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 생산하는 것이 가능하다는 것을 입증하였다.
따라서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 제공한다. 본 발명은 (i) 인플루엔자 HA 항원 또는 그의 면역원성 단편; (ii) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (특히 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편; 및 임의로 (iii) 인플루엔자 NA 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 SARS-CoV-2 (특히 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대해) 및 인플루엔자 (특히 인플루엔자 HA 및 임의로 NA)에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다. 본 발명은 또한 이러한 조성물의 백신으로서의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 (i) 인플루엔자 HA 항원 또는 그의 면역원성 단편; (iii) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 (특히 적어도 1종의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질) 또는 그의 면역원성 단편; 및 임의로 (iii) 인플루엔자 NA 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 백신 조성물을 제공한다. 백신 조성물은 임의로 제약상 허용되는 부형제, 희석제, 담체, 추진제, 염 및/또는 첨가제를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 백신 조성물은 본 발명에 따른 SARS-CoV-2로부터 유래된 적어도 2종의 상이한 항원 또는 그의 면역원성 단편, 및/또는 SARS-CoV-2로부터 유래된 적어도 2종의 상이한 항원 또는 면역원성 단편을 코딩하는 적어도 2종의 상이한 폴리뉴클레오티드 분자를 포함할 수 있다. 비제한적 예로서, 백신 조성물은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 SARS-CoV-2 막 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 백신 조성물은 본 발명에 따른 인플루엔자로부터 유래된 적어도 2종의 상이한 항원 또는 그의 면역원성 단편, 및/또는 인플루엔자로부터 유래된 적어도 2종의 상이한 항원 또는 면역원성 단편을 코딩하는 적어도 2종의 상이한 폴리뉴클레오티드 분자를 포함할 수 있다. 전형적으로, 백신 조성물은 인플루엔자 HA 항원 또는 그의 면역원성 단편 및 임의로 인플루엔자 NA 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함한다. 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 인플루엔자 성분은 전형적으로 전체 또는 분할 인플루엔자 비리온을 포함하는 생 (약독화 또는 벡터화) 또는 불활성화 인플루엔자 백신에 의해 제공되기는 하지만, 다른 인플루엔자 항원이 또한 포함될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신 또는 조성물 (상기 기재된 바와 같음)을 사용하여 환자에서 면역 반응을 자극하거나 유도하는 방법을 제공한다. 본 발명의 백신 및 조성물은 전형적으로 인플루엔자 및 COVID-19 둘 다에 대해 면역 반응 및/또는 보호를 자극하거나 유도한다.
대상체에서 면역 반응을 자극하거나 유도하는 상기 방법은 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신 또는 조성물 (상기 기재된 바와 같음)을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.
치료 용도 및 방법과 관련하여, "대상체"는 SARS-CoV-2 및 인플루엔자에 대한 면역보호 반응의 자극 또는 유도로부터 이익을 얻을 임의의 동물 대상체이다. 전형적인 동물 대상체는 포유동물, 예컨대 영장류, 예를 들어 인간이다.
따라서, 본 발명은 SARS-CoV-2 감염 (COVID-19) 및 인플루엔자 감염을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 전형적으로 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신 또는 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명은 또한 SARS-CoV-2 감염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신 또는 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 SARS-CoV-2 감염 및 인플루엔자 감염의 예방 또는 치료를 위한 의약의 제조를 위한, (i) 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 발현하는 1종 이상의 폴리뉴클레오티드, 발현 구축물, 바이러스 벡터, DNA 플라스미드 또는 RNA 백신, 또는 1종 이상의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편, 본 발명의 1종 이상의 SARS-CoV-2 백신 조성물; 및 (ii) 바람직하게는 본원에 기재된 바와 같은 인플루엔자 백신에 포함되는 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 (및 임의로 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편)의 용도를 제공한다.
본원에 사용된 용어 "치료" 또는 "치료하는"은 치료적 또는 방지적/예방적 조치를 포괄하고, SARS-CoV-2 감염 및 인플루엔자 감염의 감염후 요법 및 개선을 포함한다. 용어 "요법" 및 "치료적"은 예방 요법을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "예방하는"은 SARS-CoV-2 및 인플루엔자에 의한 감염의 개시를 예방하고/거나 SARS-CoV-2 및 인플루엔자에 의한 감염의 중증도 또는 강도를 감소시키는 것을 포함한다. 용어 "예방하는"은 SARS-CoV-2에 의한 감염 및 인플루엔자 감염에 대해 방어 면역을 유도하거나 제공하는 것을 포함한다. SARS-CoV-2에 의한 감염 및 인플루엔자 감염에 대한 면역성은 임의의 적절한 기술을 사용하여 정량화될 수 있으며, 그의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본 발명의 바람직한 조성물은 효능에 대한 CPMP 기준 중 1, 2 또는 3개를 충족시킨다. 성인 (18-60세)에서, 이들 기준은 (1) ≥70% 혈청보호; (2) ≥40% 혈청전환; 및/또는 (3) ≥2.5배의 GMT 증가이다. 노인 (>60세)에서, 이들 기준은 (1) ≥60% 혈청보호; (2) ≥30% 혈청전환; 및/또는 (3) ≥2배의 GMT 증가이다.
이들 기준은 적어도 50명의 환자를 사용한 개방 표지 연구에 기초한다.
본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신 또는 조성물은 이미 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염, SARS-CoV-2에 의한 감염 및/또는 인플루엔자 감염과 연관된 상태 또는 증상을 갖는 대상체 (전형적으로 포유동물 대상체, 예컨대 인간 또는 다른 영장류)에게 투여되어 SARS-CoV-2에 의한 감염 및/또는 인플루엔자를 치료 또는 예방할 수 있다. 예를 들어, 대상체는 SARS-CoV-2 또는 인플루엔자와 접촉한 것으로 의심될 수 있거나, 또는 SARS-CoV-2 또는 인플루엔자와 접촉한 것으로 알려졌지만, 아직 노출의 증상을 나타내지 않는다.
이미 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염을 앓고 있거나, 또는 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염과 연관된 증상을 보이고 있는 대상체 (예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간 또는 다른 영장류)에게 투여되었을 때, 본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신 또는 조성물은 1종 이상의 증상을 치유하거나, 지연시키거나, 그의 중증도를 감소시키거나, 또는 호전시킬 수 있고/거나, 이러한 치료의 부재 하에 예상되는 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시킬 수 있다.
대안적으로, 본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신 또는 조성물은 궁극적으로 SARS-CoV-2 및/또는 인플루엔자에 감염될 수 있는 대상체 (예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간 또는 다른 영장류)에게 투여되어 상기 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자의 1종 이상의 증상을 예방하거나, 치유하거나, 지연시키거나, 그의 중증도를 감소시키거나, 또는 호전시키거나, 또는 이러한 치료의 부재 하에 예상되는 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시키거나, 또는 대상체가 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염을 전파하는 것을 예방하는 데 도움이 될 수 있다.
본 발명의 치료 및 예방 요법은 상이한 연령의 다양한 상이한 대상체에게 적용가능하다. 인간과 관련하여, 요법은 소아 (예를 들어, 영아, 5세 미만의 소아, 더 큰 소아 또는 10대) 및 성인에게 적용가능하다. 다른 동물 대상체 (예를 들어, 포유동물, 예컨대 영장류)와 관련하여, 요법은 미성숙 대상체 및 성숙/성인 대상체에게 적용가능하다. 본원에 사용된 용어 "예방하는"은 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염의 개시를 예방하고/거나 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염의 중증도 또는 강도를 감소시키는 것을 포함한다. 용어 "예방하는"은 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염에 대해 방어 면역을 유도하거나 제공하는 것을 포함한다. SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염에 대한 면역성은 임의의 적절한 기술을 사용하여 정량화될 수 있으며, 그의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에서 사용된 "백신"은 동물 대상체, 예컨대 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 기타 영장류)에게 투여되었을 때 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염에 대해 보호성 면역 반응을 자극하는 제제이다. 면역 반응은 체액성 및/또는 세포-매개 면역 반응일 수 있다. 본 발명의 백신은 예를 들어 SARS-CoV-2 감염 및/또는 인플루엔자 감염의 영향으로부터 대상체를 보호하는 데 사용될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 지금까지 이용가능한 증거는 SARS-CoV-2 감염 이후의 면역이 상대적으로 수명이 짧을 수 있다는 것을 나타낸다. 따라서, 본 발명은 COVID-19/SARS-CoV-2 백신, 특히 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 규칙적인 반복 투여에 의해 SARS-CoV-2 감염에 대한 면역을 부스팅하는 수단을 제공한다. 이러한 반복 투여는 계절성 인플루엔자 백신접종을 위한 기존의 공중 보건 프로그램/스케줄을 사용하거나 또는 이에 통합될 수 있다.
따라서, 본 발명은 COVID-19 및 인플루엔자의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 제공하며, 여기서 상기 조합된 백신은 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 12개월, 약 13개월, 약 14개월 또는 약 15개월의 간격으로 투여된다. 바람직하게는, 조합된 백신은 약 11개월, 약 12개월, 약 13개월, 가장 바람직하게는 약 12개월의 간격으로 투여된다. 본 발명은 또한, 대상체에게 치료 유효량의 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 이들 동일한 간격으로 투여하는 것을 포함하는, 인플루엔자 및 COVID-19 둘 다에 대해 대상체를 면역화시키는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 COVID-19 및 인플루엔자의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 의약의 제조에서의 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; SARS-CoV-2로부터 유래된 항원 또는 그의 면역원성 단편, 및 임의로 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편의 용도를 제공하며, 여기서 상기 의약은 이들 동일한 간격으로 투여된다.
조합된 백신은 본원에 기재된 바와 같은 간격으로 적어도 2회, 적어도 5회, 적어도 10회, 적어도 15회, 적어도 20회 또는 그 초과로 투여될 수 있다.
조합된 백신은 환자의 수명까지 적어도 2년, 적어도 5년, 적어도 10년 또는 그 초과의 기간 동안 본원에 기재된 바와 같은 간격으로 투여될 수 있다.
제약 조성물 및 제제
용어 "백신"은 본원에서 용어 "치료/예방 조성물", "제제" 또는 "의약"과 상호교환가능하게 사용된다.
본 발명의 백신 (상기 정의된 바와 같음)은 제약상 허용되는 담체에 추가하여 조합되거나 투여될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 본 발명의 백신은 염, 부형제, 희석제, 아주반트, 면역조절제 및/또는 항미생물 화합물 중 하나 이상과 추가로 조합할 수 있다.
제약상 허용되는 염은 무기산, 예컨대 염산 또는 인산, 또는 유기산, 예컨대 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 말레산 등으로 형성된 산 부가염을 포함한다. 유리 카르복실 기로 형성된 염은 또한 무기 염기, 예컨대 예를 들어 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 수산화칼슘 또는 수산화제2철, 및 유기 염기, 예컨대 이소프로필아민, 트리메틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래될 수 있다.
면역원성 조성물, 치료 제제, 의약 및 예방 제제 (예를 들어, 백신)의 투여는 일반적으로 통상적인 경로, 예를 들어 정맥내, 피하, 복강내 또는 점막 (특히 비강) 경로에 의한 것이다. 투여는 비경구 주사, 예를 들어 피하, 피내 또는 근육내 주사에 의한 것일 수 있다.
따라서, 본 발명의 면역원성 조성물, 치료 제제, 의약 및 예방 제제 (예를 들어, 백신)는 전형적으로 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사제로서 제조된다. 주사 전에 액체 중에 용해 또는 현탁시키기에 적합한 고체 형태가 대안적으로 제조될 수 있다. 제제는 또한 유화되거나, 또는 펩티드를 리포솜 또는 마이크로캡슐 내에 캡슐화할 수 있다.
활성 면역원성 성분 (예컨대, SARS-CoV-2 스파이크 단백질, 그의 단편, 상기 스파이크 단백질을 코딩하는 핵산, 발현 벡터, 바이러스 벡터, DNA 플라스미드, RNA 백신, 융합 단백질 및 백신 조성물, 및 본원에 기재된 바와 같은 인플루엔자 HA 및/또는 NA 항원 또는 인플루엔자 백신)은 종종 제약상 허용되고 활성 성분과 상용성인 담체, 희석제, 부형제 또는 유사물과 혼합된다. 적합한 부형제는, 예를 들어 물, 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 및 그의 조합이다. 또한, 원하는 경우, 백신은 소량의 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 및/또는 백신의 유효성을 증진시키는 아주반트를 함유할 수 있다.
일반적으로, 담체, 희석제, 부형제 또는 유사물은 제약상 허용되는 담체이다. 제약상 허용되는 담체의 비제한적 예는 물, 염수 및 포스페이트-완충 염수를 포함한다. 그러나, 일부 실시양태에서, 조성물은 동결건조 형태이고, 이 경우에 안정화제, 예컨대 BSA를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 장기간 저장을 용이하게 하기 위해 조성물을 보존제, 예컨대 티오메르살 또는 아지드화나트륨과 함께 제제화하는 것이 바람직할 수 있다.
완충제의 예는 숙신산나트륨 (pH 6.5), 및 포스페이트 완충 염수 (PBS; pH 6.5 및 7.5)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
다른 투여 방식에 적합한 추가의 제제는 좌제, 및 일부 경우에, 경구 제제 또는 에어로졸로서의 분배에 적합한 제제를 포함한다. 좌제의 경우, 전통적인 결합제 및 담체는, 예를 들어 폴리알킬렌 글리콜 또는 트리글리세리드를 포함할 수 있고; 이러한 좌제는 활성 성분을 0.5% 내지 10%, 바람직하게는 1%-2%의 범위로 함유하는 혼합물로부터 형성될 수 있다.
경구 제제는, 예를 들어 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 사카린나트륨, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등과 같은 통상적으로 사용되는 부형제를 포함한다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 정제, 환제, 캡슐, 지속 방출 제제 또는 분말의 형태를 취한다.
아주반트
통상적인 인플루엔자 백신은 아주반트를 포함하지 않지만, 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신은 아주반트를 추가로 포함할 수 있다. 상기 아주반트는 세포성 (Th1) 및/또는 체액성 (Th2) 면역 반응의 자극제일 수 있다.
효과적일 수 있는 추가의 아주반트의 예는 완전 프로인트 아주반트 (CFA), 불완전 프로인트 아주반트 (IFA), 사포닌, 사포닌의 정제된 추출물 분획, 예컨대 퀼 A, 사포닌의 유도체, 예컨대 QS-21, 사포닌을 기재로 하는 지질 입자, 예컨대 이스콤/이스코매트릭스, 이. 콜라이 열 불안정성 독소 (LT) 돌연변이체, 예컨대 LTK63 및/또는 LTK72, 수산화알루미늄, N-아세틸-뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민 (thr-MDP), N-아세틸-노르-뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민 (CGP 11637, 노르-MDP로 지칭됨), N-아세틸뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'-디팔미토일-sn-글리세로-3-히드록시포스포릴 옥시)-에틸아민 (CGP 19835A, MTP-PE로 지칭됨), 및 박테리아로부터 추출된 3종의 성분을 함유하는 RIBI, 2% 스쿠알렌/트윈 80 에멀젼 중 모노포스포릴 지질 A, 트레할로스 디미콜레이트 및 세포벽 골격 (MPL+TDM+CWS), 노파르티스에 의해 개발된 MF59 제제, 및 GSK 바이올로지칼스 (벨기에 릭센사르트)에 의해 개발된 AS02, AS01, AS03 및 AS04 아주반트 제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신에 전형적으로 존재하는 아주반트는 스쿠알렌 수중유 에멀젼, 알루미늄 염 및 모노포스포릴 지질 A (MPL)로부터 선택될 수 있다. 특히 바람직한 아주반트는 아다박스®, 5% 스쿠알렌 (MF59), MPL 및 수산화알루미늄 및 인산알루미늄 겔을 포함한다.
키트
본 발명은 본 발명의 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 임의로 사용 지침서와 함께 포함하는 키트를 제공한다. 임의의 아주반트는 키트 내의 조합된 백신과 별개로 함유될 수 있거나 또는 조합된 백신과 조합할 수 있다. 키트 내의 조합된 백신은 즉시 사용 (예를 들어, 아주반트 포함)될 수 있거나, 또는 전달 시점에 즉석 제조 (예를 들어, 아주반트 혼입)가 준비될 수 있다. 이러한 즉석 배열은 아주반트 및 항원이 사용 시까지 개별적으로 유지되도록 하며, 이는 수중유 에멀젼 아주반트를 사용하는 경우에 특히 유용하다.
본 발명은 조합된 백신의 SARS-CoV-2 성분 및 조합된 백신의 인플루엔자 성분을 포함하는 부분들의 키트를 또한 제공한다. 두 성분은 키트 내에서 분리될 수 있다. 임의의 아주반트는 키트 내에 별도로 함유될 수 있거나, 또는 SARS-CoV-2 성분 또는 인플루엔자 성분과 조합할 수 있다. 이러한 경우, 성분은 환자에게 투여하기 전에 혼합될 수 있거나, 또는 성분은 별도로 유지될 수 있지만 실질적으로 동일한 시간에 또는 동시에 환자에게 투여될 수 있다.
본 발명은 또한 조합된 백신의 SARS-CoV-2 성분 및 아주반트, 바람직하게는 스쿠알렌 수중유 에멀젼, 알루미늄 염 또는 MPL, 더욱 바람직하게는 아다박스®, MF59, MPL 또는 수산화알루미늄 및 인산알루미늄 겔을 포함하는 부분들의 키트를 제공한다. 임의로, 부분들의 키트는 SARS-CoV-2 성분 및 아주반트를 기존 인플루엔자 백신 (그의 예가 본원에 기재됨)과 조합하고, 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 단일 단위로서 투여하거나, 또는 혼합된 SARS-CoV-2 및 아주반트를 인플루엔자 백신과 실질적으로 동일한 시간에 또는 동시에 환자에게 투여하는 것에 관한 설명서를 포함할 수 있다.
키트 내의 SARS-CoV-2 성분 및/또는 인플루엔자 성분은 즉시 사용될 수 있거나, 또는 전달 시점에 즉석 제조가 준비될 수 있다. 이러한 즉석 배열은 아주반트 및 SARS-CoV-2 및/또는 인플루엔자 성분이 사용 시까지 개별적으로 유지되도록 하며, 이는 수중유 에멀젼 아주반트를 사용하는 경우에 특히 유용하다.
백신이 즉석에서 제조되는 경우, 그의 성분은 키트 내에서 서로 물리적으로 분리되고, 이러한 분리는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 예를 들어, 2종의 성분은 2개의 개별 용기, 예컨대 바이알에 존재할 수 있다. 이어서, 예를 들어 하나의 바이알의 내용물을 제거하고 이를 다른 바이알에 첨가함으로써, 또는 두 바이알의 내용물을 개별적으로 제거하고 이를 제3 용기에서 혼합함으로써 2개의 바이알의 내용물을 혼합할 수 있다. 비제한적 예로서, 키트 성분 중 하나는 시린지 내에 있고, 다른 것은 용기, 예컨대 바이알 내에 있다. 시린지를 (예를 들어, 바늘과 함께) 사용하여 그의 내용물을 혼합을 위해 제2 용기 내로 삽입할 수 있고, 이어서 혼합물을 시린지 내로 취출할 수 있다. 이어서, 시린지의 혼합된 내용물을 전형적으로 새로운 멸균 바늘을 통해 환자에게 투여할 수 있다. 시린지 내에 하나의 성분을 패킹하는 것은 환자 투여를 위해 개별 시린지를 사용할 필요성을 제거한다. 추가의 비제한적 예로서, 백신의 2종의 성분은 동일한 시린지, 예를 들어 이중-챔버 시린지에서 함께 그러나 개별적으로 유지된다. 시린지가 작동될 때 (예를 들어, 환자에게 투여하는 동안), 2개의 챔버의 내용물이 혼합된다. 이 배열은 사용 시 별도의 혼합 단계가 필요하지 않도록 한다.
백신이 즉석에서 제조되는 경우 (조합된 백신을 아주반트와 혼합함으로써, 또는 SARS-CoV-2 성분 및 인플루엔자 성분을 임의로 아주반트와 혼합함으로써), 그의 성분은 일반적으로 수성 형태일 것이다. 일부 배열에서, 성분 (전형적으로 아주반트 성분보다는 조합된 백신 또는 SARS-CoV-2 성분 및/또는 상기 백신의 인플루엔자 성분)은 건조 형태 (예를 들어, 동결건조된 형태)이며, 다른 성분 중 1종 이상은 수성 형태이다. 건조 성분을 재활성화시키고 환자에게 투여하기 위한 수성 조성물을 제공하기 위해 성분을 혼합할 수 있다.
서열 상동성
전역 방법, 국부 방법 및 하이브리드 방법, 예컨대 예를 들어 분절 접근 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 다양한 서열 정렬 방법이 퍼센트 동일성을 결정하는 데 사용될 수 있다. 퍼센트 동일성을 결정하기 위한 프로토콜은 관련 기술분야의 통상의 기술자의 범주 내에 속하는 상용 절차이다. 전역 방법은 분자의 시작부터 끝까지 서열을 정렬하고, 개별 잔기 쌍의 점수를 합산하고 갭 페널티를 부과함으로써 최선의 정렬을 결정한다. 비-제한적인 방법은 예를 들어 CLUSTAL W (예를 들어, 문헌 [Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position-Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)] 참조); 및 반복 정밀화 (예를 들어, 문헌 [Osamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein. Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. Mol. Biol. 823-838 (1996)] 참조)를 포함한다. 국부 방법은 모든 입력 서열에 의해 공유되는 하나 이상의 보존된 모티프를 확인함으로써 서열을 정렬한다. 비제한적 방법은, 예를 들어 매치-박스(Match-box) (예를 들어, 문헌 [Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501 -509 (1992)] 참조); 깁스(Gibbs) 샘플링 (예를 들어, 문헌 [C. E. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals: A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131 ) Science 208-214 (1993)] 참조); 얼라인-M(Align-M) (예를 들어, 문헌 [Ivo Van Walle et al., Align-M - A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics: 1428-1435 (2004)] 참조)을 포함한다.
따라서, 퍼센트 서열 동일성은 통상적인 방법에 의해 결정된다. 예를 들어, 문헌 [Altschul et al., Bull. Math. Bio. 48: 603-16, 1986 and Henikoff and Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-19, 1992]을 참조한다. 간략하게, 갭 개방 페널티 10, 갭 연장 페널티 1, 및 하기 제시된 바와 같은 문헌 [Henikoff and Henikoff] (상기 문헌)의 "블로섬(blosum) 62" 점수화 매트릭스 (아미노산은 표준 1-문자 코드로 나타냄)을 사용하여 정렬 점수가 최적화되도록 2개의 아미노산 서열을 정렬한다.
서열 동일성을 결정하기 위한 정렬 점수
BLOSUM62 표
Figure pct00001
이어서, 퍼센트 동일성을 다음과 같이 계산한다:
Figure pct00002
실질적으로 상동성인 폴리펩티드는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 것을 특징으로 한다. 이들 변화는 바람직하게는 부차적인 성질의 것, 즉 보존적 아미노산 치환 (하기 참조) 및 폴리펩티드의 폴딩 또는 활성에 유의하게 영향을 미치지 않는 다른 치환; 소형 결실, 전형적으로 1 내지 약 30개의 아미노산의 결실; 및 소형 아미노- 또는 카르복실-말단 연장, 예컨대 아미노-말단 메티오닌 잔기, 약 20-25개 이하의 잔기의 소형 링커 펩티드, 또는 친화성 태그이다.
보존적 아미노산 치환
염기성: 아르기닌
리신
히스티딘
산성: 글루탐산
아스파르트산
극성: 글루타민
아스파라긴
소수성: 류신
이소류신
발린
방향족: 페닐알라닌
트립토판
티로신
소형: 글리신
알라닌
세린
트레오닌
메티오닌
20개의 표준 아미노산에 추가로, 비-표준 아미노산 (예컨대, 4-히드록시프롤린, 6-N-메틸 리신, 2-아미노이소부티르산, 이소발린 및 -메틸 세린)이 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 잔기를 치환할 수 있다. 제한된 수의 비-보존적 아미노산, 유전자 코드에 의해 코딩되지 않는 아미노산, 및 비천연 아미노산이 본 발명의 SARS-CoV-2 항원에서의 폴리펩티드 아미노산 잔기를 치환할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 또한 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.
비-자연 발생 아미노산은 비제한적으로 트랜스-3-메틸프롤린, 2,4-메타노-프롤린, 시스-4-히드록시프롤린, 트랜스-4-히드록시-프롤린, N-메틸글리신, 알로트레오닌, 메틸-트레오닌, 히드록시-에틸시스테인, 히드록시에틸호모-시스테인, 니트로글루타민, 호모글루타민, 피페콜산, tert-류신, 노르발린, 2-아자페닐알라닌, 3-아자페닐-알라닌, 4-아자페닐-알라닌, 및 4-플루오로페닐알라닌을 포함한다. 비-자연 발생 아미노산 잔기를 단백질 내로 혼입하기 위한 여러 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 화학적으로 아미노아실화된 억제인자 tRNA를 사용하여 넌센스 돌연변이가 억제되는 시험관내 시스템이 사용될 수 있다. 아미노산을 합성하고 tRNA를 아미노아실화시키는 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 넌센스 돌연변이를 함유하는 플라스미드의 전사 및 번역은 이. 콜라이 S30 추출물 및 상업적으로 입수가능한 효소 및 다른 시약을 포함하는 무세포 시스템에서 수행된다. 단백질은 크로마토그래피에 의해 정제된다. 예를 들어, 문헌 [Robertson et al., J. Am. Chem. Soc. 113:2722, 1991; Ellman et al., Methods Enzymol. 202:301, 1991; Chung et al., Science 259:806-9, 1993; and Chung et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 10145-9, 1993]을 참조한다. 제2 방법에서, 번역은 돌연변이된 mRNA 및 화학적으로 아미노아실화된 억제인자 tRNA의 미세주사에 의해 크세노푸스 난모세포에서 수행된다 (문헌 [Turcatti et al., J. Biol. Chem. 271:19991-8, 1996]). 제3 방법에서, 이. 콜라이 세포는 대체될 천연 아미노산 (예를 들어, 페닐알라닌)의 부재 하에 및 목적하는 비-자연 발생 아미노산(들) (예를 들어, 2-아자페닐알라닌, 3-아자페닐알라닌, 4-아자페닐알라닌 또는 4-플루오로페닐알라닌)의 존재 하에 배양된다. 비-자연 발생 아미노산이 그의 천연 대응물을 대신하여 폴리펩티드 내로 혼입된다. 문헌 [Koide et al., Biochem. 33:7470-6, 1994]을 참조한다. 자연 발생 아미노산 잔기가 시험관내 화학적 변형에 의해 비-자연 발생 종으로 전환될 수 있다. 화학적 변형을 부위-지정 돌연변이유발과 조합하여 치환 범위를 추가로 확장시킬 수 있다 (문헌 [Wynn and Richards, Protein Sci. 2:395-403, 1993]).
제한된 수의 비-보존적 아미노산, 유전자 코드에 의해 코딩되지 않는 아미노산, 비-자연 발생 아미노산, 및 비천연 아미노산이 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 잔기를 치환할 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드 내의 필수 아미노산은 관련 기술분야에 공지된 절차, 예컨대 부위-지정 돌연변이유발 또는 알라닌 스캐닝 돌연변이유발에 따라 확인될 수 있다 (문헌 [Cunningham and Wells, Science 244: 1081-5, 1989]). 생물학적 상호작용의 부위는 또한, 추정 접촉 부위 아미노산의 돌연변이와 함께 핵 자기 공명, 결정학, 전자 회절 또는 광친화성 표지화와 같은 기술에 의해 결정된 바와 같은, 구조의 물리적 분석에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [de Vos et al., Science 255:306-12, 1992; Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899-904, 1992; Wlodaver et al., FEBS Lett. 309:59-64, 1992]을 참조한다. 필수 아미노산의 정체는 또한 본 발명의 폴리펩티드의 관련 성분 (예를 들어, 전위 또는 프로테아제 성분)과의 상동성의 분석으로부터 추론될 수 있다.
다중 아미노산 치환은 공지된 돌연변이유발 및 스크리닝 방법, 예컨대 문헌 [Reidhaar-Olson and Sauer (Science 241 :53-7, 1988) or Bowie and Sauer (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2152-6, 1989)]에 개시된 것들을 사용하여 이루어지고 시험될 수 있다. 간략하게, 이들 저자는 폴리펩티드 내의 2개 이상의 위치를 동시에 무작위화하고, 기능적 폴리펩티드에 대해 선택한 후, 돌연변이유발된 폴리펩티드를 서열분석하여 각각의 위치에서 허용되는 치환의 스펙트럼을 결정하는 방법을 개시한다. 사용될 수 있는 다른 방법은 파지 디스플레이 (예를 들어, 문헌 [Lowman et al., Biochem. 30: 10832-7, 1991]; 라드너(Ladner) 등, 미국 특허 번호 5,223,409; 휴스(Huse), WIPO 공개공보 WO 92/06204) 및 영역-지정 돌연변이유발 (문헌 [Derbyshire et al., Gene 46:145, 1986; Ner et al., DNA 7:127, 1988])을 포함한다.
하기 실시예는 본 발명을 예시한다.
<실시예>
실시예 1: 3가 시판 플루 백신 (아다박스 아주반트화) 단독 및 COVID-19 백신 (HEK 세포에서 생산된 접합된 RBD-HB 및 아다박스 아주반트화) 단독과 조합된 플루-Covid-19 백신 (아다박스 아주반트화)의 면역원성의 비교
3종의 백신 제제를 제조하였다:
1. 시판 플루 백신 3 μg/ml (분할형) 아다박스 아주반트화 (20 μl/ml)
2. Covid-19 백신 (RBD-HB 접합됨, HEK 세포에서 생산됨) 3 μg/ml 아다박스 아주반트화 (20 μl/ml)
3. 조합된 플루-Covid-19 백신 (각 성분 3 μg/ml) 아다박스 아주반트화 (20 μl/ml)
5마리의 Balb/c 마우스의 3개의 군에 각각의 상기 백신 0.5 ml를 백신접종하였다 (제0일). 제0일 및 제14일에 마우스로부터 혈청 샘플을 채취하였다.
SARS-CoV-2 스파이크 단백질 (COVID-19 항원)의 수용체 결합 도메인 (RBD) 및 인플루엔자 바이러스의 H1N1, H3N2 및 B 항원에 대한 항체 역가를 ELISA에 의해 측정하였다. 인플루엔자 항원에 대한 항체 역가를 표 1에 나타낸다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 항체 역가를 표 2에서 나타낸다. 모든 백신은 강한 항체 반응을 도출하였다. 아주반트 함유 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신의 사용은 성분 억제의 증거 없이 인플루엔자 및 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 둘 다에 대해 강한 항체 반응을 도출할 수 있었다.
표 1: 인플루엔자 항원에 대한 항체 역가
Figure pct00003
표 2: SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 항체 역가
Figure pct00004
실시예 2: 시판 플루 백신 (백시그립) 단독 및 COVID-19 백신 (HBSAg에 접합된 전체-크기 스파이크 단백질) 단독과 조합된 플루-Covid-19 백신의 면역원성의 비교
HBSAg 및 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 ((EAAAK)3 링커를 가짐)의 융합 단백질을 HEK 세포에서 재조합적으로 발현시켰다. 2개의 독립적 실험에서 재조합 발현을 수행하였고, 도 2에 도시된 바와 같이 5개의 클론 (실험 1) 및 4개의 클론 (실험 2)으로부터의 배지를 풀링하고 융합 단백질 발현에 대해 평가하였다.
5개의 클론 (실험 1)으로부터 풀링된 배지를 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x) HBSAg로 지정하였다. 4개의 클론 (실험 2)으로부터의 풀링된 배지를 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-01-01 (4x) HBSAg로 지정하였다.
둘 다의 융합 단백질 풀의 총 단백질 함량을 브래드포드 검정에 의해 결정하고, 100 ml의 총 부피 중 1 mg/ml로 조정하였다.
Balb/c 마우스를 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x) HBSAg 또는 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-01-01 (4x) HBSAg 단독으로 또는 박시그립 인플루엔자 백신과 조합하여 면역화시켰다. COVID-19/'플루/조합 백신을 하기 표 3에 나타낸 바와 같이 아주반트 없이, Alu-280 아주반트 또는 아다-박스 아주반트와 함께 투여하였다.
HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x) 또는 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-01-01 (4x)로의 면역화를 50 μg/용량 (부피 100 μl)을 사용하여 수행하였다. 인플루엔자 백신으로의 면역화를 1.5 μg/용량 (부피 50 μl)을 사용하여 수행하였다. 어느 하나의 아주반트가 사용된 경우, 1:1 v/v 백신:아주반트 비를 사용하였다 (아주반트+1 백신에 대해 총 100 μl; 또는 아주반트+2 백신에 대해 총 150 μl). 마우스를 제0일에 면역화시키고, 제7일, 제14일 및 제28일에 부스팅하였다. 혈청 샘플을 제14일에 수득한 후, 제42일에 희생시켰다. 희생 후 면역화된 마우스의 비장을 또한 시험을 위해 단리하였다.
SARS-CoV-2 스파이크 단백질 (COVID-19 항원)의 수용체 결합 도메인 (RBD)에 대한 항체 역가를 ELISA에 의해 측정하였다. 하기 도 3에 도시된 바와 같이, 모든 실험군 (군 1, 3-9 및 11)에서, PBS 대조군 (군 10) 또는 인플루엔자 백신 단독 (군 2)과 비교하여 프라이밍 면역화 14일 후에 항-HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S IgG의 관찰가능한 역가가 존재하였다. 유의하게, HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S 융합 단백질이 인플루엔자 백신과 함께 투여되었을 때 인지가능한 성분 억제가 관찰되지 않았고, 이는 조합된 COVID-19/인플루엔자 백신의 잠재적인 임상 유용성을 지지한다. 또한 도 3에 도시된 바와 같이, 아주반트, 특히 아다-박스의 사용은 특히 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x) 및 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-01-01 (4x)과 박시그립의 조합물에 대해 IgG 생산을 추가로 증가시켰다.
ELISA를 사용하여 정량화된 항-COVID 스파이크 단백질 IgG (단독 또는 박시그립과 조합됨)의 역가를 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD)만을 함유하는 유사한 융합 단백질인 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S에 대해 생산된 IgG와 비교하였다. HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S 단독에 대한 데이터를 도 4A에 도시하고, HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x)과 비교한 데이터를 도 4B에 도시한다. 더 높은 역가가 RBD-융합체를 사용하여 수득되었다 (도 4B). 항체 역가를 프라이밍 면역화 42일 후에 다시 측정하였다. 다시, 제14일과 같이, 모든 실험군 (군 1, 3-9 및 11)에서, PBS 대조군 (군 10) 또는 인플루엔자 백신 단독 (군 2)과 비교하여 프라이밍 면역화 14일 후에 항-HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S IgG의 관찰가능한 역가가 존재하였다. 유의하게, HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S 융합 단백질이 인플루엔자 백신과 함께 투여되었을 때 인지가능한 성분 억제가 관찰되지 않았고, 이는 조합된 COVID-19/인플루엔자 백신의 잠재적인 임상 유용성을 지지한다. 실제로, 군 3 (HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x) 및 박시그립으로 면역화됨)에 대한 항-HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S IgG 역가는 군 1 (HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x) 단독으로 면역화됨)에 대한 것보다 컸다.
표 3: HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S, 인플루엔자 및 HBSAg-(EAAAK)3-CoV-S/인플루엔자 면역화
Figure pct00005
또한 도 5에 도시된 바와 같이, 아주반트, 특히 아다-박스의 사용은 특히 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x) 단독 또는 박시그립과의 조합에 대해 IgG 생산을 추가로 증가시켰다.
ELISA를 사용하여 정량화된 항-COVID 스파이크 단백질 IgG (단독 또는 박시그립과 조합됨)의 역가를 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD)만을 함유하는 유사한 융합 단백질인 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S에 대해 생산된 IgG와 비교하였다. 제42일의 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S 단독에 대한 데이터를 도 5A에 도시하고, HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-02-01 (5x) 및 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-01-01 (4x)과 비교한 데이터를 도 5B에 도시한다. 최고 역가는 RBD-융합체를 사용하여 수득되었지만 (도 5B), 높은 역가는 아다-박스와 함께 제제화될 때 백시그립과 조합된 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S D8-SA01-01-01 (4x)로 유지되었다.
이러한 실험들은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 융합체를 포함하는 백신 조성물이 인플루엔자 바이러스 백신과 성공적으로 조합할 수 있고, 조합 백신 제품의 생산에서 통상적인 백신 성분 억제의 예상된 문제가 전혀 없다는 것을 입증한다. 따라서, 상기 조합 백신을 사용한 중화 검정을 계획하였다.
실시예 3: 시판 플루 백신 (백시그립) 단독 및 COVID-19 백신 (HBSAg에 접합된 전체-크기 스파이크 단백질) 단독과 조합된 플루-Covid-19 백신을 비교하는 중화 검정
본 발명의 SARS-CoV-2 융합 단백질, '플루 백신 및 조합된 COVID-19-'플루 백신이 그의 각 항체에 대해 중화 항체를 생성하는 능력은 세포병변 효과를 기반으로 한 미세-중화 검정 (MN-CPE)을 사용하여 시험될 수 있다.
5마리의 Balb/c 마우스의 군에 각각의 상기 백신 0.5 ml를 백신접종하였다 (제0일). 제0일, 제14일 및 제42일에 마우스로부터 혈청 샘플을 채취하였다.
1. 상업용 플루 백신 (예를 들어, 박시그립)
2. Covid-19 백신 (예를 들어, HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S)
3. 조합된 플루-Covid-19 백신
이들은 아주반트 (예를 들어, 아다박스)의 존재 또는 부재 하에 반복될 수 있다.
Vero E6 세포를 96 웰 플레이트에 시딩하고, 배양하여 전면생장 미만을 달성한다.
SARS-CoV-2의 역가를 표준 적정 검정을 사용하여 계산하고, SARS-CoV-2의 10배 연속 희석물 (log10)을 제조한다. 대안적으로 3.16배 연속 희석 (0.5Log10)을 수행할 수 있다.
연속 희석된 SARS-CoV-2를 96 웰 플레이트에서 전면성장 Vero 세포에 적용한다. 플레이트의 한 칼럼을 세포 대조군으로서 SARS-CoV-2로 처리하지 않고 둔다. 또한, 공지된 SARS-CoV-2 특이적 중화 항체를 함유하는 샘플을 양성 대조군으로 사용할 수 있고, 인간 또는 동물 고갈 샘플을 음성 대조군으로 사용할 수 있다 (예를 들어, 인간 혈청 마이너스 IgA/IgM/IgG).
SARS-CoV-2의 첨가 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 3일 동안 인큐베이션한다 (인큐베이션 시간은 SARS-CoV-2 균주 및 변이체에 따라 달라질 수 있음). 인큐베이션 후, 플레이트를 도립 현미경 하에 관찰하고, 웰을 SARS-CoV-2에 대해 양성인 것 (즉, CPE가 관찰됨) 또는 SARS-CoV-2에 대해 음성인 것 (즉, 세포가 생존하고 CPE가 없음)으로 점수화한다.
50% 조직 배양 감염 용량 (TCID50)을 계산한 후, MN-CPE 검정을 수행할 수 있다.
MN-CPE를 위해, Vero E6 세포를 배양하고, 이전과 같이 96 웰 플레이트에 시딩한다. 백신접종된 마우스로부터의 혈청 샘플을 56 ± 1℃에서 30분 ± 10분 동안 열 처리한다. 처리된 마우스로부터의 혈청 샘플을 먼저 1:10으로 연속 희석한 후, 플레이트의 열에 걸쳐 2배 연속 희석을 수행한다. 목적하는 바이러스 역가 (SARS-CoV-2에 대해 하나의 플레이트, 인플루엔자에 대해 하나의 플레이트)를 플레이트의 각 웰에 첨가한 후, 플레이트를 37 ± 1℃, 5 ± 1% CO2에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 이어서, 바이러스-혈청 혼합물을 전면생장 미만의 사전-배양된 Vero E6 세포에 적용하고, 플레이트를 37 ± 1℃, 5 ± 1% CO2에서 3일 동안 인큐베이션한다 (인큐베이션 시간은 SARS-CoV-2 균주 및 변이체에 따라 달라질 수 있음).
미세중화 역가 (MNt)는 세포의 적어도 50%를 CPE로부터 보호하는 최고 샘플 희석률의 역수이다. 중화가 관찰되지 않는 경우, MNt는 <10인 것으로 가정되고, 이는 검출 하한치 미만이다.
HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S로 처리된 마우스로부터의 혈청은 Vero 세포에서 CPE의 효과적인 중화 및 억제를 입증한다. 유사하게, 인플루엔자 백신으로 처리된 마우스는 인플루엔자에 대해 중화 활성을 갖는 혈청을 생산한다. 마우스를 HBSAg-(EAAAK)3-Cov-S 및 인플루엔자 백신의 조합물로 처리하는 경우, 중화는 SARS-CoV-2 및 인플루엔자 둘 다에 대해 달성되며, 이는 조합된 SARS-CoV-2 및 인플루엔자 백신을 사용하는 경우에 성분 억제가 없음을 입증한다.
SARS-CoV-2 RBD 단편 백신 및 인플루엔자 백신의 조합을 사용하여 실험을 반복한다. 다시, 성분 억제는 관찰되지 않는다.
<서열 정보>
서열식별번호: 1 - SARS-CoV-2 스파이크 단백질 아미노산 서열
Figure pct00006
스파이크 단백질의 RDB 도메인 (잔기 319 내지 529)은 밑줄표시됨.
서열식별번호: 2 - SARS-CoV-2 스파이크 단백질 핵산 서열 - 이. 콜라이에서의 발현에 대해 최적화되고, SacI 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
5' SacI 단일 클로닝 부위는 단일-밑줄표시됨
3' NotI 단일 클로닝 부위는 파선-밑줄표시됨
ATG 개시 코돈은 볼드체 및 이탤릭체임
서열식별번호: 2의 핵산 서열을 번역하여 서열식별번호: 1의 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 제공함
서열식별번호: 3 - 융합 단백질 HEV-SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 코딩하는 핵산 - 이. 콜라이에서의 발현에 대해 최적화되고, SacI 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
5' SacI 단일 클로닝 부위는 단일-밑줄표시됨
HEV (p239 단편) 서열은 대문자로 나타냄
SARS-CoV-2 스파이크 단백질 코딩 서열은 소문자로 나타냄
3' NotI 단일 클로닝 부위는 파선-밑줄표시됨
서열식별번호: 4 - SARS-CoV-2 스파이크 단백질 핵산 서열 - 코마가타엘라 파스토리스(Komagataella pastoris)에서의 발현에 대해 최적화되고, BstB1 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
5' BstBI 단일 클로닝 부위는 단일-밑줄표시됨
3' NotI 단일 클로닝 부위는 파선-밑줄표시됨
5' BstBI 바로 다음은 ACG 코돈임 (코딩 서열이 ACG 바로 다음인 ATG 개시 코돈과 인-프레임일 필요가 있음). 이들 2개의 코돈은 볼드체로 이탤릭체로 나타냄.
서열식별번호: 4의 핵산 서열을 번역하여 서열식별번호: 1의 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 제공함
서열식별번호: 5 - 융합 단백질 HPV18L1/SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 코딩하는 핵산 - 케이. 파스토리스에서의 발현에 대해 최적화되고, BstB1 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
5' BstBI 단일 클로닝 부위는 단일-밑줄표시됨
HPV18L1 서열은 소문자로 나타냄
SARS-CoV-2 스파이크 단백질 코딩 서열은 대문자로 나타냄
3' NotI 단일 클로닝 부위는 파선-밑줄표시됨
5' BstBI 바로 다음은 ACG 코돈임 (코딩 서열이 ACG 바로 다음인 ATG 개시 코돈과 인-프레임일 필요가 있음). 이들 2개의 코돈은 볼드체로 이탤릭체로 나타냄.
서열식별번호: 6 - 융합 단백질 HPV16L1/SARS-CoV-2 스파이크 단백질 핵산을 코딩하는 핵산 - 케이. 파스토리스에서의 발현에 대해 최적화되고, BstB1 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
5' BstBI 단일 클로닝 부위는 단일-밑줄표시됨
HPV16L1 서열은 소문자로 나타냄
SARS-CoV-2 스파이크 단백질 코딩 서열은 대문자로 나타냄
3' NotI 단일 클로닝 부위는 파선-밑줄표시됨
5' BstBI 바로 다음은 ACG 코돈임 (코딩 서열이 ACG 바로 다음인 ATG 개시 코돈과 인-프레임일 필요가 있음). 이들 2개의 코돈은 볼드체로 이탤릭체로 나타냄.
서열식별번호: 7 - SARS-CoV-2 스파이크 단백질 핵산 서열 - 인간에서의 발현에 대해 최적화되고 (293F), NheI 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
5' NheI 단일 클로닝 부위는 단일-밑줄표시됨
3' NotI 단일 클로닝 부위는 파선-밑줄표시됨
5' NheI 바로 다음은 GAC 코돈임 (코딩 서열이 GAC 바로 다음인 ATG 개시 코돈과 인-프레임일 필요가 있음). 이들 2개의 코돈은 볼드체로 이탤릭체로 나타냄.
서열식별번호: 7의 핵산 서열을 번역하여 서열식별번호: 1의 천연 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 제공함
서열식별번호: 8 - 융합 단백질 HBSAg/SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 코딩하는 핵산 - 인간에서의 발현에 대해 최적화되고 (293F), NheI 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
5' NheI 단일 클로닝 부위는 단일-밑줄표시됨
HSBAg 서열은 소문자로 나타냄
SARS-CoV-2 스파이크 단백질 코딩 서열은 대문자로 나타냄
3' NotI 단일 클로닝 부위는 파선-밑줄표시됨
5' NheI 바로 다음은 GAC 코돈임 (코딩 서열이 GAC 바로 다음인 ATG 개시 코돈과 인-프레임일 필요가 있음). 이들 2개의 코돈은 볼드체로 이탤릭체로 나타냄.
서열식별번호: 9 - 서열식별번호: 3에 상응하는 아미노산 서열
(융합 단백질 HEV-SARS-CoV-2 스파이크 단백질 - 이. 콜라이에서의 발현에 대해 최적화되고, SacI 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.)
Figure pct00030
서열식별번호: 10 - 서열식별번호: 5에 상응하는 아미노산 서열
(융합 단백질 HPV18L1/SARS-CoV-2 스파이크 단백질 - 케이. 파스토리스에서의 발현에 대해 최적화되고, BstB1 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.)
Figure pct00031
서열식별번호: 11 - 서열식별번호: 6에 상응하는 아미노산 서열
(융합 단백질 HPV16L1/SARS-CoV-2 스파이크 단백질 핵산 - 케이. 파스토리스에서의 발현에 대해 최적화되고, BstB1 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.)
Figure pct00032
Figure pct00033
서열식별번호: 12 - 서열식별번호: 8에 상응하는 아미노산 서열
(융합 단백질 HBSAg/SARS-CoV-2 스파이크 단백질 - 인간에서의 발현에 대해 최적화되고 (293F), NheI 및 NotI 단일 클로닝 부위를 함유함.)
Figure pct00034
서열식별번호: 13 - RBD SARS-CoV-2 스파이크 단백질 핵산 서열
Figure pct00035
개시 ATG (볼드체) 앞에 부가된 KOZAC 서열 (gcc acc, 밑줄표시됨).
NotI 앞에 부가된 분비형 tga taa (이중 밑줄표시됨) - 상기 tga taa 서열은 단백질 합성을 방해하여 세포외 배지로의 분비를 용이하게 하는 "2개의 정지 코돈" 모티프임 (또한 하기 기재된 바와 같은 다른 서열에 포함됨).
고유한 제한 부위는 각각 5' 말단에 NheI 및 3' 말단에 NotI가 부가됨 (파선 밑줄표시됨)
서열식별번호: 14 - RBD SARS-CoV-2 스파이크 단백질 핵산 서열 - 293F (HEK) 세포 발현에 대해 인간 코돈 최적화됨.
Figure pct00036
개시 ATG (볼드체) 앞에 부가된 KOZAC 서열 (gcc acc, 밑줄표시됨).
NotI 앞에 부가된 분비형 tga taa (이중 밑줄표시됨)
고유한 제한 부위는 각각 5' 말단에 NheI 및 3' 말단에 NotI가 부가됨 (파선 밑줄표시됨)
서열식별번호: 15 - 서열식별번호: 13 및 14에 상응하는 RBD SARS-CoV-2 스파이크 단백질 아미노산 서열
Figure pct00037
서열식별번호: 16 - 강성 EAAAK 링커 컨센서스 아미노산 서열
A(EAAAK)nA (n = 2-5)
서열식별번호: 17 - 강성 (EAAAK)3 링커 핵산 서열
GAA GCC GCC GCT AAA GAG GCC GCT GCC AAA GAA GCT GCT GCT AAG
서열식별번호: 18 - 강성 (EAAAK)3 링커 아미노산 서열
EAAAKEAAAKEAAAK
서열식별번호: 19 - 가요성 GSn 링커 컨센서스 아미노산 서열
(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (n=1-6)
서열식별번호: 20 - 가요성 GS5 ((GGGGS)1) 링커 아미노산 서열
GGGGS
서열식별번호: 21 - 가요성 GS10 ((GGGGS)2) 링커 아미노산 서열
GGGGSGGGGS
서열식별번호: 22 - 가요성 GS15 ((GGGGS)3) 링커 핵산 서열
GGT GGT GGT GGT AGC GGT GGT GGC GGT TCA GGT GGC GGT GGT TCA
서열식별번호: 23 - 가요성 GS15 ((GGGGS)3) 링커 아미노산 서열
GGGGSGGGGSGGGGS
서열식별번호: 24 - 가요성 GS20 ((GGGGS)4) 링커 아미노산 서열
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
서열식별번호: 25 - 가요성 GS25 ((GGGGS)5) 링커 아미노산 서열
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
서열식별번호: 26 - HBSAg-(EAAAK)3-RBD 핵산 서열
Figure pct00038
개시 ATG (볼드체) 앞에 부가된 KOZAC 서열 (gcc acc, 밑줄표시됨).
NotI 앞에 부가된 분비형 tga taa (이중 밑줄표시됨)
고유한 제한 부위는 각각 5' 말단에 NheI 및 3' 말단에 NotI가 부가됨 (파선 밑줄표시됨)
볼드체 및 점선 밑줄표시된 서열은 (EAAAK)3 링커에 상응함.
서열식별번호: 27 - 293f (HEK) 세포 발현에 대해 인간 코돈 최적화된 HBSAg-(EAAAK)3-RBD 핵산 서열
Figure pct00039
Figure pct00040
개시 ATG (볼드체) 앞에 부가된 KOZAC 서열 (gcc acc, 밑줄표시됨).
NotI 앞에 부가된 분비형 tga taa (이중 밑줄표시됨)
고유한 제한 부위는 각각 5' 말단에 NheI 및 3' 말단에 NotI가 부가됨 (파선 밑줄표시됨)
볼드체 및 점선 밑줄표시된 서열은 (EAAAK)3 링커에 상응함.
서열식별번호: 28 - 서열식별번호: 26 및 27에 상응하는 HBSAg-(EAAAK)3-RBD 아미노산 서열
Figure pct00041
(EAAAK)3 링커는 밑줄표시됨.
서열식별번호: 29 - HEV-GS15-RBD 핵산 서열
Figure pct00042
Figure pct00043
개시 ATG (볼드체)
고유한 제한 부위는 각각 5' 말단에 SacI 및 3' 말단에 NotI가 부가됨 (파선 밑줄표시됨)
NotI 앞에 부가된 분비형 tga taa (이중 밑줄표시됨)
볼드체 및 점선 밑줄표시된 서열은 GS15 링커에 상응함.
서열식별번호: 30 - 이. 콜라이 발현에 대해 최적화된 HEV-GS15-RBD 핵산 서열
Figure pct00044
개시 ATG (볼드체)
NotI 앞에 부가된 분비형 tga taa (이중 밑줄표시됨)
고유한 제한 부위는 각각 5' 말단에 SacI 및 3' 말단에 NotI가 부가됨 (파선 밑줄표시됨)
볼드체 및 점선 밑줄표시된 서열은 GS15 링커에 상응함.
서열식별번호: 31 - 서열식별번호: 29 및 30에 상응하는 HEV-GS15-RBD 아미노산 서열
Figure pct00045
GS15 링커는 밑줄표시됨
서열식별번호: 32 - 293f (HEK) 세포 발현에 대해 인간 코돈 최적화된 HBSAg-(EAAAK)3-전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 핵산 서열
Figure pct00046
Figure pct00047
개시 ATG (볼드체) 앞에 부가된 KOZAC 서열 (gcc acc, 밑줄표시됨).
볼드체 및 점선 밑줄표시된 서열은 (EAAAK)3 링커에 상응함.
서열식별번호: 33 - 서열식별번호: 32에 상응하는 HBSAg-(EAAAK)3-전장 2019-nCoV 스파이크 단백질 아미노산 서열
Figure pct00048
(EAAAK)3 링커는 밑줄표시됨
SEQUENCE LISTING <110> Spicona Inc. <120> COMBINATION VACCINE <130> P67254WO <150> GB 2010425.3 <151> 2020-07-07 <160> 33 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1273 <212> PRT <213> SARS-CoV-2 <400> 1 Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val 1 5 10 15 Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe 20 25 30 Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu 35 40 45 His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp 50 55 60 Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp 65 70 75 80 Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu 85 90 95 Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser 100 105 110 Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile 115 120 125 Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr 130 135 140 Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr 145 150 155 160 Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu 165 170 175 Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe 180 185 190 Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr 195 200 205 Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu 210 215 220 Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr 225 230 235 240 Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser 245 250 255 Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro 260 265 270 Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala 275 280 285 Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys 290 295 300 Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val 305 310 315 320 Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys 325 330 335 Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala 340 345 350 Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu 355 360 365 Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro 370 375 380 Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe 385 390 395 400 Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly 405 410 415 Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys 420 425 430 Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn 435 440 445 Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe 450 455 460 Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 465 470 475 480 Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 485 490 495 Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 500 505 510 Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys 515 520 525 Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn 530 535 540 Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu 545 550 555 560 Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val 565 570 575 Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe 580 585 590 Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val 595 600 605 Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile 610 615 620 His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser 625 630 635 640 Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val 645 650 655 Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala 660 665 670 Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala 675 680 685 Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser 690 695 700 Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile 705 710 715 720 Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val 725 730 735 Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu 740 745 750 Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr 755 760 765 Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln 770 775 780 Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe 785 790 795 800 Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser 805 810 815 Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly 820 825 830 Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp 835 840 845 Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu 850 855 860 Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly 865 870 875 880 Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile 885 890 895 Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr 900 905 910 Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn 915 920 925 Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala 930 935 940 Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn 945 950 955 960 Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val 965 970 975 Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln 980 985 990 Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val 995 1000 1005 Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn 1010 1015 1020 Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys 1025 1030 1035 Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro 1040 1045 1050 Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val 1055 1060 1065 Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His 1070 1075 1080 Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn 1085 1090 1095 Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln 1100 1105 1110 Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val 1115 1120 1125 Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro 1130 1135 1140 Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn 1145 1150 1155 His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn 1160 1165 1170 Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu 1175 1180 1185 Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu 1190 1195 1200 Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu 1205 1210 1215 Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met 1220 1225 1230 Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys 1235 1240 1245 Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro 1250 1255 1260 Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 1265 1270 <210> 2 <211> 3839 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SARS-CoV2 spike protein nucleic acid - optimised for E. coli expression <400> 2 gagctcatgt ttgtttttct ggttctgctg ccgctggtta gcagccagtg tgttaatctg 60 accacacgta cccagctgcc tccggcatat accaatagct ttacccgtgg tgtttattat 120 ccggacaaag tttttcgtag cagcgttctg catagcaccc aggacctgtt tctgccgttt 180 tttagcaatg ttacctggtt tcatgccatt catgttagcg gcaccaatgg caccaaacgt 240 tttgataatc cggtgctgcc gtttaatgat ggtgtgtatt ttgcaagcac cgaaaaaagc 300 aacattattc gcggttggat ttttggtaca accctggata gcaaaaccca gagcctgctg 360 attgttaata atgccaccaa tgtggtgatc aaagtgtgcg aatttcagtt ttgcaatgat 420 ccgtttctgg 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ttgttacaca gcgcaacttt tatgaaccgc agattattac aaccgacaac 4080 acctttgtta gcggtaactg tgatgttgtg attggcattg tgaataacac cgtttatgat 4140 ccactgcagc cggaactgga tagctttaaa gaagaactgg acaaatattt caaaaaccac 4200 accagtccgg atgttgatct gggtgatatt tcaggtatta atgccagcgt ggtgaacatc 4260 cagaaagaaa ttgatcgcct gaatgaagtg gccaaaaatc tgaatgaaag cctgattgat 4320 ctgcaagaac tggggaaata tgagcagtat atcaaatggc cgtggtatat ttggctgggt 4380 tttattgcag gcctgattgc aattgttatg gtgaccatta tgctgtgttg tatgaccagc 4440 tgttgtagct gtctgaaagg ttgttgcagc tgcggtagct gttgcaaatt tgatgaagat 4500 gatagcgaac cggtgctgaa aggtgttaaa ctgcattata cctaatgagc ggccgc 4556 <210> 4 <211> 3839 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SARS-CoV-2 spike protein nucleic acid sequence - optimised for expression in Komagataella pastoris <400> 4 ttcgaaacga tgttcgtgtt cttggtcctg ttgccattgg tttcttccca gtgtgttaac 60 ctgaccacta gaactcaatt gcctccagcc tacaccaatt ccttcaccag aggtgtttac 120 tacccagaca aggtgttcag atcttccgtc ttgcactcca ctcaggactt gttcttgcca 180 ttcttctcca acgttacctg gttccacgct attcacgttt ccggaactaa cggtactaag 240 agattcgaca acccagtcct gccattcaac gatggtgtct acttcgcttc taccgagaag 300 tccaacatca tcagaggttg gatcttcggt actaccctgg actctaagac tcagtccttg 360 ctgatcgtta acaacgccac caacgttgtc atcaaggttt gcgagttcca gttctgcaac 420 gacccattct tgggtgtgta ctaccacaag aacaacaagt cttggatgga atccgagttc 480 agagtttact cctccgccaa caactgtacc ttcgagtacg tttcccagcc attcttgatg 540 gacttggagg gtaagcaggg taacttcaag aacctgagag agttcgtttt caagaacatc 600 gacggttact tcaagatcta ctccaagcac accccaatca acctggttag agatttgcca 660 caaggtttct ccgctttgga gcctttggtt gacttgccaa tcggtatcaa catcaccaga 720 ttccagacct tgttggcctt gcacagatcc tacttgactc caggtgattc ttcttccggt 780 tggactgctg gtgctgctgc ttactatgtt ggttacttgc agccaagaac cttcctgctg 840 aagtacaacg agaacggaac tatcactgac gctgttgact gtgctttgga cccattgtct 900 gagactaagt gcaccttgaa gtccttcacc gttgagaagg gtatctacca gacctccaac 960 ttcagagttc agccaactga gtccatcgtc agattcccaa acatcactaa cttgtgccca 1020 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caactacttc attggttgac 1260 acttacagat tcgttcagtc cgttgctatc acttgtcaaa aggacgctgc tccagctgaa 1320 aacaaggacc catacgacaa gttgaagttc tggaacgttg acttgaaaga gaagttctcc 1380 ttggacttgg accaataccc attgggtaga aagtttttgg ttcaggctgg attgagaaga 1440 aagccaacta tcggtccaag aaagagatca gctccatccg ctactacttc atccaagcca 1500 gctaagagag ttagagttag agctagaaag ttcgtgttct tggtcctgtt gccattggtt 1560 tcttcccagt gtgttaacct gaccactaga actcaattgc ctccagccta caccaattcc 1620 ttcaccagag gtgtttacta cccagacaag gtgttcagat cttccgtctt gcactccact 1680 caggacttgt tcttgccatt cttctccaac gttacctggt tccacgctat tcacgtttcc 1740 ggaactaacg gtactaagag attcgacaac ccagtcctgc cattcaacga tggtgtctac 1800 ttcgcttcta ccgagaagtc caacatcatc agaggttgga tcttcggtac taccctggac 1860 tctaagactc agtccttgct gatcgttaac aacgccacca acgttgtcat caaggtttgc 1920 gagttccagt tctgcaacga cccattcttg ggtgtgtact accacaagaa caacaagtct 1980 tggatggaat ccgagttcag agtttactcc tccgccaaca actgtacctt cgagtacgtt 2040 tcccagccat tcttgatgga cttggagggt aagcagggta 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gggtgtactt tgcctccacc 1020 gagaagtcca acatcatcag aggctggatc ttcggcacaa ccctggacag caagacccag 1080 agcctgctga tcgtgaacaa cgccaccaac gtggtcatca aagtgtgcga gttccagttc 1140 tgcaacgacc ccttcctggg cgtctactac cacaagaaca acaagtcctg gatggaatcc 1200 gagttccggg tgtactcctc cgccaacaac tgcaccttcg aatacgtgtc ccagcctttc 1260 ctgatggacc tggaaggcaa gcagggcaac ttcaagaacc tgcgcgagtt cgtgttcaag 1320 aacatcgacg gctacttcaa gatctactcc aagcacaccc ctatcaacct cgtgcgggat 1380 ctgcctcagg gcttctctgc tctggaaccc ctggtggatc tgcccatcgg catcaacatc 1440 acccggtttc agaccctgct ggccctgcac cggtcttatt tgacccctgg cgactcctct 1500 tctggctgga ctgctggcgc cgctgcttac tatgtgggct acctgcagcc tcggaccttt 1560 ctgctgaagt acaacgagaa tggcaccatc accgacgccg tggactgtgc tctggatcct 1620 ctgtccgaga caaagtgcac cctgaagtcc ttcaccgtgg aaaagggcat ctaccagacc 1680 tccaacttcc gggtgcagcc caccgagtct atcgtgcggt tccctaacat caccaacctg 1740 tgtcctttcg gcgaggtgtt caatgccacc agattcgcct ctgtgtacgc ctggaaccgg 1800 aagcggatct ctaactgcgt ggccgactac agcgtgctgt acaactccgc ctccttcagc 1860 accttcaagt gctacggcgt gtcccctaca aagctgaacg acctgtgctt cacaaacgtg 1920 tacgccgaca gcttcgtgat ccggggagat gaagtgcggc agatcgctcc tggacagacc 1980 ggcaagatcg ccgattacaa ctacaagctg cccgacgact tcaccggctg tgtgatcgct 2040 tggaactcca acaacctgga ctccaaagtc ggcggcaact acaactacct gtaccggctg 2100 ttccggaagt ctaacctgaa gcctttcgag cgggacatca gcaccgagat ctaccaggct 2160 ggcagcaccc cttgtaacgg cgtggaaggc ttcaactgct acttcccact gcagtcctac 2220 ggctttcagc ctaccaatgg cgtgggctat cagccctaca gagtggtggt gctgtccttc 2280 gagctgctgc atgctcctgc taccgtgtgc ggccctaaga aatctaccaa cctggtcaag 2340 aacaaatgcg tgaacttcaa cttcaacggc ctgaccggca ccggcgtgct gacagagtcc 2400 aacaagaagt tcctgccatt ccagcagttc ggccgggata tcgccgatac cacagatgcc 2460 gtcagggacc ctcagacact ggaaatcctg gacatcaccc cttgctcctt cggcggagtg 2520 tctgtgatca ccccaggcac caacacctct aaccaggtgg ccgtgctgta tcaggacgtg 2580 aactgtaccg aggtgcccgt ggctatccat gccgatcagc tgacccctac atggcgcgtg 2640 tactccaccg gctctaacgt gttccagaca agagctggct gtctgatcgg cgctgagcac 2700 gtgaacaatt cctacgagtg cgacatcccc atcggagccg gaatctgcgc ctcttatcag 2760 acccagacca actctcccag acgggccaga tctgtggcca gccagtctat cattgcttac 2820 accatgagcc tgggcgccga gaactctgtg gcctacagca acaactctat cgctatcccc 2880 accaacttca ccatctccgt gaccacagag atcctgccag tgtccatgac caagaccagc 2940 gtggactgca ccatgtacat ctgcggcgac tctaccgagt gctccaacct gctgctccag 3000 tacggctcct tctgcaccca gctgaataga gccctgaccg gaatcgccgt ggaacaggac 3060 aagaacaccc aagaggtgtt cgcccaagtg aagcagatct acaagacccc tcctatcaag 3120 gacttcggcg gcttcaattt ctcccagatt ctgcccgatc ctagcaagcc ctccaagcgg 3180 tctttcatcg aggacctgct gttcaacaaa gtgacactgg ccgacgccgg cttcatcaag 3240 cagtacggcg actgtctggg cgacattgcc gctagggatc tgatctgcgc ccagaagttt 3300 aacggactga cagtgctgcc tcctctgctg accgatgaga tgatcgccca gtacacctcc 3360 gcactgctgg ctggcacaat cacctctgga tggacatttg gcgctggcgc tgctctgcaa 3420 atcccattcg ctatgcaaat ggcctaccgg ttcaacggca tcggcgtgac ccagaatgtg 3480 ctgtacgaga accagaagct gatcgccaac cagttcaaca gcgccatcgg aaagatccag 3540 gacagcctgt ccagcaccgc ttctgccctg ggaaagctgc aggatgtggt caaccagaac 3600 gctcaggccc tgaacaccct cgtgaagcag ctgtctagca acttcggcgc catctcctct 3660 gtgctgaacg atatcctgag ccggctggac aaggtggaag ccgaggtgca gatcgacaga 3720 ctgatcaccg gacggctgca gtccctgcag acctatgtta cccagcagct gatccgggct 3780 gccgagatta gagcctctgc caatctggcc gcaaccaaga tgtctgagtg tgtgctggga 3840 cagtccaaga gagtggactt ctgcggcaag ggctaccacc tgatgagctt ccctcagtct 3900 gctcctcacg gcgtggtgtt tctgcacgtg acctacgtgc ccgctcaaga gaagaacttt 3960 accaccgctc ctgccatctg ccacgacggc aaggctcact ttcctagaga aggcgtgttc 4020 gtgtctaacg gcacccattg gttcgtgaca cagcggaact tctacgagcc ccagatcatc 4080 accaccgaca acaccttcgt gtccggcaac tgcgacgtcg tgatcggaat tgtgaacaat 4140 accgtgtacg accctctgca gcccgagctg gactccttca aagaggaact ggacaagtac 4200 tttaagaacc acacaagccc cgacgtggac ctgggagaca tctctggcat caacgcctcc 4260 gtggtcaaca tccagaaaga gatcgaccgg ctgaacgagg tggccaagaa tctgaacgag 4320 tccctgatcg acctgcaaga actggggaag tacgagcagt acatcaagtg gccctggtac 4380 atctggctgg gctttatcgc tggcctgatc gctatcgtga tggtcacaat catgctgtgc 4440 tgtatgacct cctgttgctc ctgcctgaag ggctgctgct cttgcggctc ttgctgcaag 4500 ttcgacgagg acgactctga gcccgtgctg aaaggcgtga agctgcacta tacctgatga 4560 ctcgag 4566 <210> 33 <211> 1513 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HBSAg-(EAAAK)3-full-length SARS-CoV-2 spike protein <400> 33 Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln 1 5 10 15 Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu 20 25 30 Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys 35 40 45 Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser 50 55 60 Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe 65 70 75 80 Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val 85 90 95 Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly 100 105 110 Ser Thr Thr Thr Asn Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala 115 120 125 Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp 130 135 140 Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys 145 150 155 160 Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu 165 170 175 Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu 180 185 190 Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr Ser Ile 195 200 205 Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val 210 215 220 Tyr Ile Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala 225 230 235 240 Lys Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val 245 250 255 Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe 260 265 270 Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu 275 280 285 His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp 290 295 300 Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp 305 310 315 320 Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu 325 330 335 Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser 340 345 350 Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile 355 360 365 Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr 370 375 380 Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr 385 390 395 400 Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu 405 410 415 Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe 420 425 430 Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr 435 440 445 Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu 450 455 460 Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr 465 470 475 480 Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser 485 490 495 Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro 500 505 510 Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala 515 520 525 Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys 530 535 540 Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val 545 550 555 560 Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys 565 570 575 Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala 580 585 590 Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu 595 600 605 Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro 610 615 620 Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe 625 630 635 640 Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly 645 650 655 Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys 660 665 670 Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn 675 680 685 Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe 690 695 700 Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 705 710 715 720 Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 725 730 735 Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 740 745 750 Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys 755 760 765 Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn 770 775 780 Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu 785 790 795 800 Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val 805 810 815 Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe 820 825 830 Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val 835 840 845 Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile 850 855 860 His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser 865 870 875 880 Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val 885 890 895 Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala 900 905 910 Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala 915 920 925 Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser 930 935 940 Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile 945 950 955 960 Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val 965 970 975 Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu 980 985 990 Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr 995 1000 1005 Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala 1010 1015 1020 Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly 1025 1030 1035 Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser 1040 1045 1050 Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu 1055 1060 1065 Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp 1070 1075 1080 Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu 1085 1090 1095 Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr 1100 1105 1110 Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe 1115 1120 1125 Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala 1130 1135 1140 Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu 1145 1150 1155 Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys 1160 1165 1170 Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu 1175 1180 1185 Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val 1190 1195 1200 Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn 1205 1210 1215 Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile 1220 1225 1230 Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val 1235 1240 1245 Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn 1250 1255 1260 Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys 1265 1270 1275 Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro 1280 1285 1290 Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val 1295 1300 1305 Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His 1310 1315 1320 Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn 1325 1330 1335 Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln 1340 1345 1350 Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val 1355 1360 1365 Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro 1370 1375 1380 Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn 1385 1390 1395 His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn 1400 1405 1410 Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu 1415 1420 1425 Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu 1430 1435 1440 Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu 1445 1450 1455 Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met 1460 1465 1470 Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys 1475 1480 1485 Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro 1490 1495 1500 Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 1505 1510

Claims (18)

  1. 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신으로서,
    (a) 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 또는 그의 면역원성 단편; 및
    (b) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편
    을 포함하고,
    여기서 항원은 인플루엔자 및 COVID-19 둘 다에 대해 면역 반응 및 보호를 도출할 수 있는 것인
    조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  2. 제1항에 있어서, 인플루엔자 뉴라미니다제 (NA) 또는 그의 면역원성 단편을 추가로 포함하는 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    (a) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편이
    (i) 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함되거나;
    (ii) 재조합 HA 또는 그의 면역원성 단편이거나;
    (iii) HA 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 융합 단백질이거나; 또는
    (iv) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩되고/거나;
    (b) 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이
    (i) 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함되거나;
    (ii) 재조합 NA 또는 그의 면역원성 단편이거나;
    (iii) NA 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 융합 단백질이거나; 또는
    (iv) RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩되고/거나;
    (c) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편이
    (i) 적어도 1종의 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편이거나;
    (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질이거나;
    (iii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 바이러스-유사 입자 (VLP)이거나;
    (iv) 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 코딩하는 적어도 1종의 폴리뉴클레오티드이거나; 또는
    (v) 적어도 1종의 RNA 또는 DNA 백신에 의해 코딩되는 것인
    조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이 불활성화 인플루엔자 비리온에 포함되고, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편이 (i) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질이거나, 또는 (ii) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 적어도 1종의 바이러스-유사 입자 (VLP)인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    (a) 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편이 생 약독화 인플루엔자 비리온에 포함되고/거나;
    (b) 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이 생 약독화 인플루엔자 비리온에 포함되고/거나;
    (c) SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편이 생 바이러스 벡터에 포함되는 것인
    조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  6. 제5항에 있어서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 생 바이러스 벡터가
    (a) 아데노바이러스 벡터;
    (b) 홍역 바이러스 벡터;
    (c) 볼거리 바이러스 벡터;
    (d) 풍진 바이러스 벡터;
    (e) 수두 바이러스 벡터;
    (f) 소아마비 바이러스 벡터; 또는
    (g) 황열 바이러스 벡터
    인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 아주반트를 추가로 포함하는 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  8. 제7항에 있어서, 상기 아주반트가 세포성 (Th1) 및 체액성 (Th2) 면역 반응의 자극제인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아주반트가 스쿠알렌 수중유 에멀젼, 알루미늄 염 또는 모노포스포릴 지질 A (MPL)를 포함하는 것인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원이
    (a) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편;
    (b) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함하는 융합 단백질;
    (c) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 포함하는 VLP;
    (d) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 또는
    (e) 서열식별번호: 1과 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2로부터의 스파이크 단백질, 또는 상기 스파이크 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편을 발현하는 바이러스 벡터, RNA 백신 또는 DNA 플라스미드
    로부터 선택되고,
    여기서 임의로 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 단편은 바람직하게는 서열식별번호: 15와 적어도 90% 동일성을 갖는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD)을 포함하거나 또는 그로 이루어진 것인
    조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원이, SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하고 추가로 하기를 포함하는 융합 단백질인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신:
    (a) B형 간염 표면 항원, 또는 상기 B형 간염 표면 항원과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편;
    (b) HPV 18 L1 단백질, 또는 상기 HPV 18 L1 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편;
    (c) E형 간염 P239 단백질, 또는 상기 E형 간염 P239 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편; 및/또는
    (d) HPV 16 L1 단백질, 또는 상기 HPV 16 L1 단백질과 공통 항원 교차-반응성을 갖는 그의 단편.
  12. 제11항에 있어서,
    (a) 융합 단백질이 서열식별번호: 3, 5, 6, 8, 26, 27, 29, 30 또는 32 중 어느 하나와 적어도 90% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되고/거나;
    (b) 융합 단백질이 서열식별번호: 9, 10, 11, 12, 28, 31 또는 33 중 어느 하나와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 것인
    조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, SARS-CoV-2로부터 유래된 1종 이상의 항원이 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 그의 면역원성 단편을 포함하는 VLP이고, 여기서 상기 VLP가 제11항 또는 제12항에 정의된 바와 같은 융합 단백질을 포함하거나 또는 그로 이루어진 것인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편 및 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편이
    (a) 계절성 인플루엔자 백신, 특히 계절성 3가 인플루엔자 백신 또는 계절성 4가 인플루엔자 백신;
    (b) 1가 범유행성 인플루엔자 백신; 또는
    (c) 범용 인플루엔자 백신
    에 포함되는 것인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, COVID-19 및 인플루엔자의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신.
  16. COVID-19 및 인플루엔자의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 의약의 제조에서의, 인플루엔자 HA 또는 그의 면역원성 단편; 및 SARS-CoV-2로부터 유래된 항원 또는 그의 면역원성 단편, 및 임의로 인플루엔자 NA 또는 그의 면역원성 단편의 용도로서, 상기 의약이 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신인 용도.
  17. 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신을 투여하는 것을 포함하는, 인플루엔자 및 COVID-19 둘 다에 대해 대상체를 면역화시키는 방법.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신이 10 내지 14개월의 간격으로 투여되고, 임의로는 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신이 약 12개월의 간격으로 투여되는 것인 조합된 인플루엔자-COVID-19 백신, 용도 또는 방법.
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