CN1775287A - 一种sars流感二价联合疫苗及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种SARS流感二价联合疫苗，其含有H1N1、H3N2、B三型血凝素，灭活的SARS抗原，和药学可接受的载体。本发明还涉及所述联合疫苗的制备工艺。
Description
发明领域
本发明涉及一种SARS流感二价联合疫苗，其含有H1N1、H3N2、B三型血凝素，灭活的SARS抗原，和药学可接受的载体。本发明还涉及所述联合疫苗的制备工艺。
发明背景
为了有效控制重症急性呼吸综合症(Severe Acute RespiratorySyndrome，以下简称为SARS)的蔓延，目前迫切需要能够有效预防引起所述病症的SARS病毒疫苗。根据目前的临床实践，一般认为预防SARS可以从预防常见的流感病毒感染入手，通过接种流感疫苗，获得了较好的预防效果。
为了便于临床使用，以方便接种人群，本发明人在研制出含有灭活SARS病毒疫苗的基础上进一步开发出SARS流感病毒二价联合疫苗。
发明内容
本发明的一个方面涉及一种SARS流感病毒二价联合疫苗，其中分别含有免疫有效量的灭活的SARS病毒和裂解流感病毒，以及药学上可接受的载体，任选的，还含有合适量的佐剂。
在本发明中，所述免疫有效量是指能够在接种后有效产生免疫反应的量。本领域技术人员能够知晓如何依据疫苗接种的途径选择适当的接种量。在本发明所述二价联合疫苗中，含有H1N1、H3N2、B三型血凝素10-40ug/ml，SARS抗原16-128su/ml。优选的，所述的SARS流感二价联合疫苗，其中所述H1N1、H3N2、B三型血凝素含量为20-40ug/ml。在本发明中，所述SARS抗原的单位“su”用于表示样品中sars病毒抗原含量，其对应于用反向间接血凝试验检测样品中sars病毒抗原效价的倒数值。例如，某样品效价为1∶160，则称该样品sars抗原含量为160su.
本发明所述二价联合疫苗中可以不使用佐剂，或者使用疫苗制备领域中常用的佐剂氢氧化铝。
在本发明的一个实施方案中，所述二价联合疫苗中，所述H1N1、H3N2、B三型血凝素含量为10-30ug/ml，且还含有浓度为10-30mmol/L的氢氧化铝。
本发明还涉及一种制备所述二价联合疫苗的制备方法，包括：
1)制备SARS灭活病毒疫苗原液；
2)制备裂解流感病毒疫苗原液；
3)将步骤1)和2)中制备的两种疫苗原液按最终疫苗抗原含量2倍等体积混合后，用选自注射用水、0.01MPBS(pH6.8-7.2)和含有氢氧化铝的0.01MPBS(pH6.8-7.2)的溶液稀释，使最终H1N1、H3N2、B三型血凝素为10-40ug/ml，SARS抗原为16-128su/ml，其中任选的含有浓度为10-30mmol/L的氢氧化铝。
在本发明所述灭活SARS病毒疫苗原液中，可包含灭活的至少一种选自如下的SARS病毒的毒株：Sino1，Sino2，Sino3，Sino4，和Sino5。所述病毒毒株分别于2003年6月26日保藏在国际保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，中国北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏号分别为0962，0963，0964，0965和0966。
本发明还涉及预防哺乳动物尤其是人免受SARS病毒和流感病毒感染的方法，包括给需要的个体接种免疫有效量的本发明的二价联合疫苗。优选地，接种途径包括但不限于皮下、鼻内、口服、皮内、肌内、或肠胃外途径。
附图说明
图1显示不同浓度甲醛溶液对流感病毒灭活效果的比较。
图2显示流感病毒亲和层析纯化的示意图。
图3显示流感病毒分子筛纯化的示意图。
图4显示病毒纯化液的电镜照片。
图5显示单型疫苗原液的电镜照片。
实施例
实施例1 SARS病毒灭活
在本发明中，采用选自福尔马林溶液和β-丙内酯的灭活剂，对含有SARS病毒的样品进行灭活。
1)福尔马林溶液灭活
分别以等体积向待处理的SARS病毒样品中加入经1∶100(体积比)稀释的福尔马林溶液，在37℃下用工作浓度分别为1∶1000、1∶2000、1∶4000(体积比)稀释的福尔马林溶液处理SARS病毒液，得到SARS病毒推算灭活时间分别为2.9小时、6.0小时和12.5小时。
2)β-丙内酯溶液灭活
分别以等体积向待处理的SARS病毒样品中加入经1∶10(体积比)稀释的β-丙内酯溶液，在4℃下用工作浓度分别为1∶4000、1∶6000、1∶8000(体积比)稀释的β-丙内酯溶液处理SARS病毒液，得到SARS病毒推算灭活时间分别为2.9小时、7.2小时和11.6小时，在此基础上延长至少2倍时间即为首次灭活时间。
实施例2 在规模化制备SARS病毒的细胞工厂中原位灭活病毒
在本发明中还可以在规模化制备SARS病毒的细胞工厂中原位灭活病毒。
将制备好的灭活剂，即经1∶100(体积比)稀释的福尔马林溶液，等量加入盛有待灭活SARS病毒的细胞工厂(购自丹麦NUNC公司)内，混匀，在搅拌下，经37℃原位灭活2.9～12.5小时后收获。
或者当采用β-丙内酯溶液作为灭活剂时，将1∶10稀释后加入，使得β-丙内酯溶液与总样品体积比为1∶6000～1∶8000。灭活温度2～8℃ 16～24小时。
实施例3 SARS病毒超时灭活或二次灭活
1)对由实施例2所得采用福尔马林为灭活剂处理得到的灭活病毒液，将其在与如实施例2所述相同的灭活条件下以首次灭活时间的3倍进行超时灭活。
2)对由实施例2所得采用β-丙内酯为灭活剂处理得到的灭活病毒液，进行二次灭活。再次加入与病毒样品总体积比为1∶4000～1∶6000(为两次加β-丙内酯工作浓度之和)的量进行二次灭活，第二灭活条件是在2-8℃下灭活SARS病毒16-24小时，室温2天或37℃水浴作用2小时，以将SARS病毒彻底灭活。
实施例4 灭活SARS病毒的纯化
将如实施例3所得病毒灭活液进行如下操作，以纯化所得病毒灭活液：
1)离心澄清，即以2000～4000g离心力在2-8℃离心10～35分，吸上清，得到病毒澄清液；
2)超滤浓缩：将病毒澄清液用100-500kd(截留分子量)的膜包进行超滤浓缩10倍以上，等体积透析3-7次，透析液用0.01MPBS(pH7.0～7.6)，获得病毒超滤液；
3)柱层析：将病毒超滤液用Sepharose four fast flow进行层析，收集第一穿流峰即为病毒纯化液。洗脱液0.01M PBS。
或者，将如实施例3所得病毒灭活液进行如下操作，以纯化所得病毒灭活液：
1)将病毒灭活液进行离心澄清，具体的以2000～4000g离心力在2-8℃离心10～35分，吸上清，即为病毒澄清液；
2)超滤浓缩：将病毒澄清液用100-500kd(截留分子量)的膜包进行超滤浓缩10倍以上，等体积透析3-7次，透析液用0.01MPBS(pH7.0～7.6)获得病毒超滤液；
3)向步骤2)所的经纯化的灭活病毒液中加入终浓度10-100单位Benzonase(默克公司)，1-10mM Mg2+室温处理4小时以上，消化体系中Vero细胞残留DNA和体系的RNA；消化体系中Vero细胞残留DNA；
4)再次超滤；
5)柱层析：将病毒超滤液用Sepharose four fast flow进行层析，洗脱液0.01M PBS，收集第一穿流峰即为病毒精纯液。
或者，将如实施例3所得病毒灭活液进行如下操作，以纯化所得病毒灭活液：
1)将病毒灭活液进行离心澄清，具体的以2000～4000g离心力在2-8℃离心10～35分，吸上清，即为病毒澄清液；
2)超滤浓缩：将病毒澄清液用100-500kd(截留分子量)的膜包进行超滤浓缩10倍以上，等体积透析3-7次，透析液用0.01MPBS(pH7.0～7.6)获得病毒超滤液；
3)柱层析：将病毒超滤液用Sepharose 4 fast flow进行层析，洗脱液0.01M PBS，收集第一穿流峰；
4)向步骤3)中收集的经纯化的灭活病毒液中加入终浓度10-100单位Benzonase(默克公司)，1-10mM Mg2+室温处理4小时以上，消化体系中Vero细胞残留DNA和体系的RNA；
5)再次超滤，获得病毒精纯液。
实施例5 灭活SARS病毒疫苗原液的制备
将经过实施例1-3所述方法灭活的病毒灭活液依照上述方法纯化后，将所得病毒纯化液进一步将病毒精纯液用选自0.2μm滤器或4-10千戈瑞剂量的钴60照射样品(体积不限)60分，除菌，获得灭活SARS病毒疫苗原液。
实施例6 流感病毒的扩增和收获
1.三级种子批建立
原始种子批建立
流感病毒原始毒种自WHO或中检所引进，鉴于流感为全球监控的传染病，该毒种每年都改变的事实，采用来自WHO流感中心免费提供的当年毒株。
主种子批建立
主种子批从原始种子批扩增一代后制备而成。选用SPF种蛋，在一定温度和湿度下孵化9-11天。原始毒种按规定稀释后，接种鸡胚，0.2ml/胚，继续培养，在无菌条件下收获尿囊液，同一型别的混合在一起。然后分装，每安瓿1ml。检定合格后贴标签入库。主种子批仅用于工作种子批的制备。
工作种子批建立
选用SPF种蛋，在一定温度和湿度下孵化9-11天。主种子经适当稀释后，接种鸡胚，0.2ml/胚，继续培养，在无菌条件下收获尿囊液，同一型别的混合在一起。然后分装，每安瓿1ml，检定合格后贴标签入库。工作种子仅用于流感病毒的生产。
2.鸡胚孵化
选用健康鸡群所产的新鲜受精蛋。经新洁尔灭溶液浸泡消毒后，在一定温度和湿度下孵化9-11天，孵化期间检出无精蛋、终止胚和发育不良的胚。
3.病毒扩增和收获
取工作种子适当稀释后，用无菌注射器接种9-11日龄鸡胚，0.2ml/胚，石蜡封口。在一定的温度和湿度下培养48-72小时，无菌条件下收获尿囊液，即为单型病毒收获液。
实施例7 流感病毒的灭活方法及灭活效果比较
如实施例6所述制备的流感病毒收获液经澄清，缓慢加入1∶200福尔马林，使其终浓度为1∶2000，在2-8℃条件下搅拌至少16小时。流感病毒被灭活，此步产品称为流感病毒灭活液。流感病毒经灭活效果验证，要求达到完全灭活。
具体的，灭活效果验证方法如下：
将单型流感病毒灭活液按原液、1∶10、1∶100稀释液分别接种9-11日龄鸡胚，每组10个鸡胚，0.2ml/胚，33-35℃培养3天，每组鸡胚至少存活8个；从每个鸡胚取0.5ml尿囊液，按组混合后再盲传一代，即每组各接种10个胚，0.2ml尿囊液/胚，同样每组鸡胚至少存活8个，最后收获尿囊液进行血凝试验，结果不出现血凝反应，判为合格；否则判为不合格。实验中设阳性对照，接种5个鸡胚；阴性对照，接种5个鸡胚。
病毒灭活曲线研究
做灭活动力学曲线时，灭活后样品用亚硫酸氢钠中和游离甲醛。不同浓度甲醛溶液灭活效果比较：甲1型流感病毒分别用终浓度1∶2000、1∶4000和1∶6000的甲醛溶液在2-8℃下灭活。结果表明，甲1型流感病毒经1∶2000甲醛溶液灭活12小时后已完全灭活，1∶4000和1∶6000的甲醛溶液灭活时间需延长。
由于流感疫苗生产周期要求较短，因此选择1∶2000的甲醛溶液灭活流感病毒，并将灭活时间定为至少16小时，以保证流感病毒完全灭活。结果如图1所示。做灭活动力学曲线时，灭活后样品用亚硫酸氢钠中和游离甲醛。
不同批次流感病毒收获液灭活效果比较
流感病毒的灭活方法确定以后，通过多批流感病毒收获液的灭活实验和中试生产验证，表明甲1型、甲3型和乙型流感病毒均可完全灭活，病毒血凝效价基本没有下降，结果见表1。
表1 不同型别流感病毒收获液灭活结果
| 型别 | 批次 | 灭活结果 | 血凝效价 | |
| 灭活前 | 灭活后 | |||
| 甲1型 | 20010901 | 合格 | 1∶512 | 1∶448 |
| 20011203 | 合格 | 1∶640 | 1∶640 | |
| 20020105 | 合格 | 1∶512 | 1∶448 | |
| 甲3型 | 20010902 | 合格 | 1∶384 | 1∶448 |
| 20011205 | 合格 | 1∶320 | 1∶320 | |
| 20020106 | 合格 | 1∶320 | 1∶320 | |
| 乙型 | 20010903 | 合格 | 1∶320 | 1∶320 |
| 20011206 | 合格 | 1∶320 | 1∶320 | |
| 20020204 | 合格 | 1∶320 | 1∶320 | |
实施例8 灭活流感病毒液的纯化
如实施例7制备的灭活流感病毒液纯化工艺分为超滤浓缩、亲和层析和分子筛层析连续三个步骤。
1.超滤浓缩
超滤膜包：截留分子量100KD-1000KD(Pall公司)。
操作方法：
在超滤器贮液瓶内加入一定体积的单型病毒灭活液，启动蠕动泵，进行超滤浓缩。当贮液瓶内液体下降到一定体积时，注入与瓶内等体积0.01M PBS(pH7.2)进行透析。重复上步操作5次，排出贮液池内液体即为流感病毒单型病毒超滤液。
流感病毒灭活液经超滤浓缩后，病毒回收率在95％以上，杂蛋白去除率在70％以上，而且流感病毒被浓缩10倍左右。
2.亲和层析(Affinity chromatography)
材料
层析系统：YC-1层析试验冷柜，Millipore公司Masterflex C/L蠕动泵，Waters746积分仪，Waters486紫外检测器，Waters Fractioncollector收集器。层析柱：Pharmacia XK26/70。溶液：平衡缓冲液为0.01M PBS(pH7.2)溶液，洗脱液为加入高浓度NaCl(1.5M)的0.01MPB溶液(pH6-8)。层析填料：Matrex cellufine sulfate(密理博公司)
方法
将如前述制备的灭活流感病毒超滤液上亲和层析，层析过程中通过紫外监测器测定样品在280nm处的吸光(O.D)值。根据吸光值收集样品，然后检测血凝效价。亲和层析过程如图2所示，共有两个峰，第一个峰血凝效价经检测呈阴性，为杂蛋白峰；后一个峰为流感病毒峰。收集洗脱抗原峰。为单型流感病毒亲和层析液。
流感病毒超滤液经亲和层析后，病毒回收率在95％以上，杂蛋白去除率在95％以上，而且流感病毒被浓缩5倍左右。
3.分子筛层析(Molecular-sieve chromatography)
材料
层析系统：YC-1层析试验冷柜，Millipore公司Masterflex C/L蠕动泵，Waters74积分仪、Waters486检测器、Waters Fractioncollector。层析柱：Pharmacia XK26/100。溶液：平衡缓冲液为0.01MPBS(pH7.2)。层析填料：Sepharose4FF(Pharmacia)
方法
将介质匀浆装柱，用平衡液平衡完全后测柱效，柱效达到要求后上样，收集蛋白峰。
分子筛层析过程如图3所示，分子筛层析过程一般有两个以上蛋白峰。前一个峰为流感病毒峰(抗原峰命名为纯化液)，后面的峰为杂蛋白峰。
分子筛层析中流感病毒回收率较高，也可使流感病毒进一步纯化，而且可以脱盐，将纯化的流感病毒的缓冲液NaCl浓度调整为接近生理盐水浓度。经多次实验表明，分子筛层析工艺稳定，重复性好，可以用于流感病毒的纯化。
实施例9 单型流感疫苗原液制备
如实施例8制备的灭活流感病毒纯化液中加入1.0％Triton X-100裂解病毒1.5-4小时。裂解后用康林公司porzorb胶吸附去除裂解剂，再经高速8000-100,000g离心纯化，0.22μm滤膜除菌过滤即为单型流感疫苗原液。
实施例10 SARS流感二价联合疫苗的配制
将如上述实施例5和9中制备的两种单型灭活SARS病毒和流感病毒疫苗原液用注射用水或0.01MPBS(pH6.8-7.2)稀释，也可以采用含有氢氧化铝，0.01MPBS(pH6.8-7.2)释液稀释。
1)用注射用水或0.01MPBS(pH6.8-7.2)稀释疫苗原液
用注射用水或0.01MPBS(pH6.8-7.2)稀释疫苗原液，最终H1N1、H3N2、B三型血凝素分别20-40ug/ml，SARS抗原16-128su/ml，即为SARS、裂解流感病毒二价联合疫苗。
2)用含有氢氧化铝，0.01MPBS(pH6.8-7.2)释液稀释疫苗原液
用含有氢氧化铝，0.01MPBS(pH6.8-7.2)释液稀释疫苗原液，最终H1N1、H3N2、B三型血凝素分别10-30ug/ml，SARS抗原16-128su/ml，氢氧化铝浓度为10-30mmol/L，即为SARS、裂解流感病毒二价联合疫苗。
实施例11 联合疫苗的免疫原性实验
将如实施例10所述制备的联合疫苗，按照0.5-1.0ml剂量通过腹腔注射接种小鼠，进行疫苗的安全性、免疫原性和有效性试验。
结果接种疫苗组与未接种疫苗组(接种注射用水或0.01MPBS或10-30mmol/L氢氧化铝)的动物，经观察均无临床症状，其粪便、排泄物均未检测到SARS病毒、流感病毒，组织器官也无病理改变，动物试验结果初步验证了灭活疫苗的安全性。
疫苗接种后10、15、30天采血，采用常规EIA法检测SARS病毒IgG抗体及常规细胞中和试验法、血凝抑制法检测保护性中和抗体，其结果IgG总抗体10天均已阳转，表明该疫苗具有良好的免疫原性，结果详见表2。
用10、15、30天免疫血清与不同SARS毒株中和后进行细胞中和试验，结果证实其免疫血清对不同SARS毒株均有良好的中和作用，其中和抗体效价平均可达1∶16-1∶32，即疫苗的有效性得以初步证实，结果详见表3。
表2 联合疫苗免疫接种后10、15、30天两种抗原IgG总抗体检测结果
| 鼠号 | 免疫接种后抗体效价(EIA法检测) | ||
| 10天 | 15天 | 30天 | |
| 12345 | +++++ | +++++ | +++++ |
表3 联合疫苗免疫接种后10、15、30天SARS病毒中和抗体检测结果
| 鼠号 | 免疫后不同时间中和抗体效价(细胞中和试验) | ||
| 10天 | 15天 | 30天 | |
| 12345 | 1∶161∶161∶161∶161∶16 | 1∶16-321∶161∶161∶161∶16 | 1∶321∶16-321∶321∶321∶32 |
联合疫苗免疫接种小鼠30天后小鼠较对照疫苗抗体增长倍数大于4倍，见表4。
表4 联合疫苗免疫接种30天后流感病毒中和抗体检测结果
| 鼠号 | 免疫后不同时间中和抗体效价(血凝抑制) | ||
| H1N1 | H3N2 | B | |
| 12345 | 1∶20561∶18571∶12191∶11561∶1319 | 1∶5261∶5221∶3981∶3271∶332 | 1∶1281∶981∶651∶641∶68 |
动物预试验结果基本证实，该本发明所制备的联合疫苗，不仅具有良好的安全性和免疫原性，中和试验结果进一步证实了该疫苗的有效性。
Claims (4)
1.一种SARS流感二价联合疫苗，其中含有H1N1、H3N2、B三型血凝素10-40ug/ml，SARS抗原16-128su/ml，和任选的，药物可接受的载体。
2.权利要求1所述的SARS流感二价联合疫苗，其中所述H1N1、H3N2、B三型血凝素含量为20-40ug/ml。
3.权利要求1所述的SARS流感二价联合疫苗，其中，所述H1N1、H3N2、B三型血凝素含量为10-30ug/ml，且还含有浓度为10-30mmol/L的氢氧化铝。
4.权利要求1所述联合疫苗的制备方法，包括：
1)制备SARS灭活病毒疫苗原液；
2)制备裂解流感病毒疫苗原液；
3)将步骤1)和2)中制备的两种疫苗原液混合后，用选自注射用水、0.01MPBS(pH 6.8-7.2)和含有氢氧化铝的0.01MPBS(pH6.8-7.2)的溶液稀释，使最终H1N1、H3N2、B三型血凝素为10-40ug/ml，SARS抗原为16-128su/ml，其中任选的含有浓度为10-30mmol/L的氢氧化铝。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2596820A (en) * | 2020-07-07 | 2022-01-12 | Spicona Inc | Combination vaccine |
| CN113730566A (zh) * | 2021-11-08 | 2021-12-03 | 天津中逸安健生物科技有限公司 | 一种流感新冠联合疫苗及其制备方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |