KR20230048481A - 새로운 갑상선 호르몬 β 수용체 효능제 - Google Patents

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이첸 왕
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쳉두 캉홍 파마슈티칼 코., 엘티디.
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Abstract

본원은 화학식 I로 표시되는 활성, 선택성 또는 안전성이 보다 우수한 새로운 갑상선 호르몬 β 수용체 효능제를 제공하며, β 수용체 효능제 작용과 관련된 질환을 예방 또는 치료하는데 사용된다. 질환은 예를 들어, 비만, 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 간 질환 (지방간, NASH, NAFLD 등), 심혈관 질환 (죽상동맥경화증 등), 갑상선 질환 (갑상선기능저하증, 갑상선암 등을 포함한다.
Figure pct00137

Description

새로운 갑상선 호르몬 β 수용체 효능제
본원은 비만, 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 간 질환 (지방간, NASH, NAFLD, 등), 심혈관 질환 (죽상동맥경화증, 등) 및 갑상선 질환 (갑상선기능저하증, 갑상선암, 등)의 치료에 사용될 수 있는 새로운 갑상선 호르몬 β 수용체 효능제에 관한 것이다.
갑상선 호르몬은 갑상선에서 분비되는 호르몬으로 인체의 거의 모든 세포에 작용한다. 갑상선 호르몬은 티록신(T4)과 트리요오드티로닌(T3)을 포함한다. T4는 효과가 있도록 특정 탈요오드효소에 의해 T3로 탈요오드화될 수 있다. T3는 작용이 빠르고 강하며 지속 시간이 T4보다 짧은 반면, T4는 작용이 느리고 약하고 지속 시간이 길다. 특정 탈요오드효소는 모든 조직에 존재하지만 간과 신장에서 더 많이 발견된다.
갑상선 호르몬은 인체의 정상적인 성장과 발달에 필요하다. 갑상선 호르몬이 부족하거나 과도하게 분비되면 질환이 발생할 수 있다. 갑상선 호르몬이 부족하면 신체적, 정신적 발달에 영향을 미쳐 크레틴병을 유발할 수 있다. 갑상선 호르몬이 부족한 성인은 점액부종을 앓을 수 있으며, 갑상선 기능항진증의 경우 조바심, 초조, 떨림, 심박수 증가, 심박출량 증가 등의 현상이 나타난다. 갑상선 호르몬은 물질 산화를 촉진하고, 산소 소비를 늘리고, 기초 대사량을 높이고, 열 생산을 향상시킬 수 있다.
정상적으로, 중추신경계는 샘뇌하수체에 의한 갑상선 자극 호르몬(TSH)의 분비를 조절하는 시상하부로부터의 갑상선자극호르몬 방출 호르몬(TRH)의 방출을 조절하고, TSH는 갑상선 세포를 자극하여 T4와 T3을 분비하게 한다. 혈중 T4, T3의 농도가 증가하면 음성 피드백에 의해 샘뇌하수체에서 TSH의 합성 및 방출이 억제되고, TRH에 대한 샘뇌하수체의 반응성이 감소하여, TSH 분비가 감소하여 갑상선 분비 호르몬이 너무 높지 않다. 그러나 혈중 T4와 T3의 농도가 감소하면 샘뇌하수체에 대한 음성 피드백 작용이 감소한다. TSH 분비의 증가는 T4와 T3의 분비를 증가시킨다. 요컨대, 시상하부-샘뇌하수체-갑상선 조절 루프는 상대적으로 일정한 갑상선 호르몬 분비를 유지할 수 있다.
갑상선 호르몬의 생물학적 활성은 갑상선 호르몬 수용체(TR)에 의해 매개된다. 이는 핵 수용체의 수퍼패밀리(superfamily)에 속한다. TR은 리간드 결합 도메인, DNA 결합 도메인 및 아미노 말단 도메인을 갖는다. TR에는 각각 TRα1, TRα2, TRβ1 및 TRβ2의 4가지 하위유형이 있다. TRα1은 주로 심장에서 발견되고 TRβ1은 주로 간에서 발견된다. TRβ2의 mRNA 발현은 대부분 샘뇌하수체와 시상하부로 제한된다. 갑상선 호르몬은 TRα1, TRβ1 및 TRβ2에 결합하여 상응하는 생리적 효과를 생성한다. 갑상선 호르몬은 TRα2에 결합하지 않는다.
비만 치료와 같은 치료적 이점은 대사량, 산소 소비 및 열 방출을 증가시키는 갑상선 호르몬의 이점을 최대한 활용함으로써 달성될 수 있다. 갑상선기능항진증은 종종 음식 섭취를 유발하지만, 전반적인 기초 대사량(BMR)도 증가시킨다. 갑상선기능항진증은 종종 약 15%의 체중 감소를 동반하는 반면, 갑상선기능저하증은 종종 25%~30%의 체중 증가를 동반한다. 갑상선기능저하증 치료에 T3을 사용하면 대부분의 환자에서 체중이 증가한다.
또한, 갑상선 호르몬은 혈청 저밀도 지질단백질(LDL)을 감소시킬 수도 있다(Journal of Molecular and Celluar Cardiology 37(2004): 1137-1146). 기존 연구에 따르면 갑상선기능항진증은 총 혈청 콜레스테롤을 크게 감소시키는 것으로 나타났고, 이는 주로 갑상선 호르몬이 간에서 LDL 수용체의 발현을 증가시켜 콜레스테롤의 담즙산 대사 과정을 촉진하기 때문이고; 갑상선기능저하증은 고콜레스테롤혈증과 연관된다. 따라서 갑상선 호르몬은 죽상동맥경화증 및 기타 심혈관 질환의 발병률을 감소시킬 수 있다.
갑상선 호르몬으로 질환을 치료할 때 개인차로 인해, 심장 문제(주로 빈맥을 지칭함), 근육 쇠약, 과도한 체중 손실 등 과도한 생리학적 용량의 부작용이 종종 나타나고, 갑상선호르몬 장기간 사용은 골 손실이 발생할 수 있다. 따라서, 비만, 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 간 질환 (지방간, NASH, NAFLD, 등), 심혈관 질환 (죽상동맥경화증, 등), 갑상선 질환 (갑상선기능저하증, 갑상선암, 등), 및 다른 관련된 질환과 같은 관련 질환 치료를 위해 갑상선 호르몬의 유익한 효과를 유지하고 부작용을 줄이기 위해 구조 변형을 통한 신약 개발이 절실히 요구되고 있다.
구조 MGL3196으로 표시되는 피리다지논 갑상선 호르몬 유사체는 Madrigal Pharmaceuticals(CN101228135B)에 의해 특허를 받았으며 현재 NASH 및 NAFLD 치료에 대한 3상 임상 시험에 있다. 활성이 낮고 투과성이 좋지 않기 때문에 1일 80 내지 100mg의 경구 투여량이 필요하다. 투여량은 동일한 표적에 대한 다른 제품보다 훨씬 높다.
Figure pct00001
Viking Therapeutics(CN1882327C)에서 특허를 받은 화합물 VK2809는 NASH 치료를 위한 2b 임상 시험에 있다. 1상 임상 데이터에 따르면 이 화합물은 안전성 문제와 상대적으로 좁은 치료 윈도우(window)를 가지고 있었다. 간 손상의 상징인 간 효소 증가가 관찰되었다. 동시에 전임상 독물학 연구에서 연골 손상이 발견되었다(J. Med. Chem. 2014, 57, 3912-3923). Bristol-Myers Squibb Co(CN1216857C)에 의해 특허를 받은 에프로티롬(eprotirome)은 3상 임상 시험에서 종료되었다. 보고된 임상 데이터에 따르면 간 효소도 증가하였다. 전임상 독물학 연구에서도 연골 손상이 발견되었다. 피리딘 유도체(CN102459185) 및 인돌 유도체(WO2002051805)와 같은 다른 특허의 경우 추가 연구가 진행되지 않고 보고된 활성 데이터만 있다. 임상 시험으로 진행된 제품은 없다.
기존 보고의 문제점을 해결하기 위해, 본원은 보다 우수한 활성, 선택성 또는 안전성을 갖는 새로운 갑상선 호르몬 β 수용체 효능제를 제공한다.
본원의 한 측면은 하기 화학식 I의 새로운 갑상선 호르몬 β 수용체 효능제, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구약물을 제공하는 데 있다:
Figure pct00002
화학식 I
식 중,
R1은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 카바모일 또는 -COR10이고;
X는 선택적으로 치환된 메틸렌, -O-, -S- 또는 -SO2-이고;
Ra는 수소, 할로겐, C1-6 선형 및 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬로부터 선택되거나; 또는 2개의 인접한 Ra가 결합하여 탄소환 고리 또는 복소환형 고리를 형성하거나;
L1은 단일 결합, 메틸렌, -CH=CH-, -O-, -CO-, -NR3-, -NR3CO-, -CONR3-, -CH2NR3-, 또는 -S-이고;
L2는 단일 결합 또는 - (CR4R5)p이고;
R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
또는
Figure pct00006
으로 표시되는 기이고;
R3은 수소, 또는 선택적으로 치환된 알킬이고;
R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 할로겐 또는 선택적으로 치환된 알킬로부터 선택되거나, 또는 R4 및 R5는 결합되어 사이클로알킬을 형성하고;
R6은 수소, 시아노, 아미노, COOH, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 CC3-6 할로사이클로알킬이고;
R8은 수소, 시아노, COOH, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 CC3-6 할로사이클로알킬이고;
R7 및 R9는 수소, C1-3 알킬, 또는 C1-3 할로알킬이고;
R10은 선택적으로 치환된 알킬, 아미노, 하이드록실, 선택적으로 치환된 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴, 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 그리고
p는 0, 1 또는 2이다.
일부 바람직한 구현예에서, R1은 수소, 또는 -COR10, 또는 수소, 중수소, 삼중수소, C1-6 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN에 의해 선택적으로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 아미노, 또는 카바모일이다 일부 바람직한 구현예에서, R1은 -COR10, 또는 C1-10 알킬, 수소, 중수소, 삼중수소, C1-6 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN에 의해 선택적으로 치환된 C3-10 사이클로알킬, C3-10 사이클로알킬C1 -6 알킬, C5-10 아릴, C5-10 아릴C1-6 알킬, 5-10 원 헤테로사이클릴, 5-10 원 헤테로아릴, 아미노, 또는 카바모일이다. 일부 바람직한 구현예에서, R1은 -COR10, 또는 C1-8 알킬, 수소, 중수소, 삼중수소, C1-6 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN에 의해 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, C3-8 사이클로알킬C1 -6 알킬, C5-10 아릴, C5-10 아릴C1-6 알킬, 5-10 원 헤테로사이클릴, 또는 5-10 원 헤테로아릴이다.
일부 측면에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물은 화학식 II로 나타낸다:
Figure pct00007
화학식 II
식 중, Rb, Rc, Rd 및 Re는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이거나; 또는 Rb 및 Rc는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하거나; 또는 Rd 및 Re는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성한다.
다른 치환기는 상기 화학식 I에서와 같이 정의된다.
일부 측면에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 II의 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00008
화학식 II
식 중, R1은 선택적으로 치환된 C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 C3-8 사이클로알킬이고;
X는 O, S 또는 -CH2-이고;
Rb, Rc, Rd 및 Re는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이거나; 또는 Rb 및 Rc는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하거나; 또는 Rd 및 Re는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하고;
L1은 단일 결합, -NR3-, -O 또는 -S-이고;
L2는 단일 결합 또는 -CH2-이고;
R2는 하기 화학식:
Figure pct00009
Figure pct00010
또는
Figure pct00011
으로 표시되는 기이고;
R3은 수소, 또는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이고;
R6은 수소, 시아노, 아미노, COOH, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 CC3-6 할로사이클로알킬이고;
R8은 수소, 시아노, COOH, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 CC3-6 할로사이클로알킬이고; 그리고
R7 및 R9는 수소, C1-3 알킬, 또는 C1-3 할로알킬이다.
일부 측면에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 II의 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00012
화학식 II
식 중, R1은 선택적으로 치환된 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고;
Rb, Rc, Rd 및 Re는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이거나; 또는 Rb 및 Rc는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하거나; 또는 Rd 및 Re는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하고;
X는 O, S 또는 -CH2-이고;
L1은 단일 결합, -O-, -S- 또는 -NH-이고;
L2는 단일 결합이고;
R2는 하기 화학식:
Figure pct00013
또는
Figure pct00014
으로 표시되는 기이고;
R6은 수소, 시아노, C1-6 알킬, 또는 C1-6 할로알킬이고;
R8은 수소, 시아노, C1-6 알킬, 또는 C1-6 할로알킬이고; 그리고
R7 및 R9는 수소, C1-3 알킬, 또는 C1-3 할로알킬이다.
일부 측면에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 II의 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00015
화학식 II
식 중, R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 벤질, 또는 수소, 중수소, 삼중수소, C1-6 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN로 선택적으로 치환된 C5-6 사이클로알킬메틸렌, 더욱 바람직하게는 이소프로필 또는 벤질이고;
Rb 및 Rd는 할로겐이고, Rc 및 Re는 수소이고, 그리고 Rb 및 Rd는 추가로 바람직하게는 염소이고;
X는 O, S 또는 -CH2-이고;
L1은 단일 결합, -O, -S- 또는 -NH-이고;
L2는 단일 결합 또는 -CH2-이고;
R2는 하기 화학식:
Figure pct00016
또는
Figure pct00017
으로 표시되는 기이고;
R6, R7, R8 및 R9는 수소, 또는 C1-6 알킬, 또는 C3-8 사이클로알킬이다.
일부 측면에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물은 화학식 II로 나타낸다:
Figure pct00018
화학식 III
식 중,
Rb 및 Rc는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이고; 그리고
A는 O 또는 메틸렌이다.
다른 치환기는 화학식 I에서와 같이 정의된다.
다른 바람직한 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물에서, R1은 하기로부터 선택된다:
1) 선택적으로 치환된 C1-6 선형 및 분지형 알킬;
2) 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬;
3) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C3-8 비-방향족 헤테로사이클릴;
4) 선택적으로 치환된 페닐; 또는
5) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C5-6 헤테로아릴.
다른 바람직한 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물에서, R1은 -(CR11R12)mR13로부터 선택되고; R11 및 R12는 수소, 중수소, 할로겐, 하이드록실, 아미노, 카복실 또는 선택적으로 치환된 C1-4 알킬로부터 선택되고; 그리고 R13은 하기로부터 선택된다:
1) 수소 또는 중수소;
2) 할로겐,
3) 하이드록실;
4) 아미노;
5) 카복실;
6) 선택적으로 치환된 C1-4 알킬, 또는 C1-4 알콕시;
7) 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬;
8) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C3-8 비-방향족 헤테로사이클릴;
9) 선택적으로 치환된 페닐; 또는
10) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C5-6 헤테로아릴로부터 선택되고; 그리고
m은 1, 2 또는 3이다.
다른 바람직한 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물에서, R1은 -COR10으로부터 선택되고, 여기서 R10은 하기로부터 선택된다:
1) 아미노;
2) 하이드록실;
3) 선택적으로 치환된 C1-4 알킬, 또는 C1-4 알콕시;
4) 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬;
5) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C3-8 비-방향족 헤테로사이클릴;
6) 선택적으로 치환된 페닐; 또는
7) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C5-6 헤테로아릴.
다른 바람직한 구현예에서, 화학식 I의 화합물에서, R1은 수소, C1-10 알킬 (바람직하게는 C1-5 알킬), C3-10 사이클로알킬 (바람직하게는 C3-8 사이클로알킬), C3-10 사이클로알킬C1-6 알킬 (바람직하게는 C3-8 사이클로알킬C1 -4 알킬), C5-10 아릴 (바람직하게는 C5-8 아릴), C5-10 아릴C1 -6 알킬 (바람직하게는 C5-8 아릴C1 -4 알킬), 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로사이클릴, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로아릴, 아미노, 또는 -COR10이고, 그리고 C1-10 알킬 (바람직하게는 C1-5 알킬), C3-10 사이클로알킬 (바람직하게는 C3-8 사이클로알킬), C3-10 사이클로알킬C1 -6 알킬 (바람직하게는 C3-8 사이클로알킬C1 -4 알킬), C5-10 아릴 (바람직하게는 C5-8 아릴), C5-10 아릴C1 -6 알킬 (바람직하게는 C5-8 아릴C1 -4 알킬), 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로사이클릴, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로아릴, 또는 아미노는 비치환되거나, 중수소, 삼중수소, C1-6 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN에 의해 치환될 수 있고;
X는 메틸렌, -O-, -S- 또는 -SO2-이고;
Ra는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이거나; 또는 2개의 인접한 Ra는 결합하여 5-10 원 탄소환 고리, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 복소환형 고리를 형성하고;
L1은 단일 결합, 메틸렌, -O-, -CO-, -NR3-, -NR3CO-, -CONR3-, -CH2NR3-, 또는 -S-이고;
L2는 단일 결합 또는 C1-6 알킬(바람직하게는 C1-4 알킬)이고;
R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
Figure pct00019
Figure pct00020
또는
Figure pct00021
으로 표시되는 기이고;
R3은 수소, 또는 C1-6 알킬이고;
R6은 수소, 시아노, 아미노, COOH, C1-6 알킬, 또는 C1-6 할로알킬이고;
R8은 수소, 시아노, COOH, C1-6 알킬, 또는 C1-6 할로알킬이고;
R7 및 R9는 수소, C1-3 알킬, 또는 C1-3 할로알킬이고;
R10은 C3-10 사이클로알킬 (바람직하게는 C3-8 사이클로알킬), C5-10 아릴 (바람직하게는 C5-8 아릴), 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로사이클릴, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로아릴이고; 그리고
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
다른 바람직한 구현예에서, 화학식 I의 화합물에서, R1은 C1-8 알킬 (바람직하게는 C1-5 알킬), C3-8 사이클로알킬 (바람직하게는 C3-6 사이클로알킬), C3-8 사이클로알킬C1 -5 알킬 (바람직하게는 C3-6 사이클로알킬C1 -3 알킬), C5-8 아릴 (바람직하게는 C5-6 아릴), C5-8 아릴C1 -5 알킬 (바람직하게는 C5-6 아릴-C1-3 알킬), 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-8 원 헤테로사이클릴, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-8 원 헤테로아릴, 아미노, 또는 -COR10이고, 그리고 C1-8 알킬 (바람직하게는 C1-5 알킬), C3-8 사이클로알킬 (바람직하게는 C3-6 사이클로알킬), C3-8 사이클로알킬C1 -5 알킬 (바람직하게는 C3-6 사이클로알킬C1-3 알킬), C5-8 아릴 (바람직하게는 C5-6 아릴), C5-8 아릴C1 -5 알킬 (바람직하게는 C5-6 아릴C1 -3 알킬), 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-8 원 헤테로사이클릴, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-8 원 헤테로아릴, 또는 아미노는 비치환되거나, 중수소, 삼중수소, C1-6 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN에 의해 치환될 수 있고;
X는 메틸렌, -O-, -S- 또는 -SO2-이고;
Ra는 할로겐, 또는 C1-4 선형 또는 분지형 알킬이거나; 또는 2개의 인접한 Ra는 결합하여 5-7 원 탄소환 고리, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-7 원 복소환형 고리를 형성하고;
L1은 단일 결합, -O-, -NR3-, -NR3CO-, -CONR3-, -CH2NR3-, 또는 -S-이고;
L2는 단일 결합 또는 C1-5 알킬(바람직하게는 C1-3 알킬)이고;
R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
Figure pct00022
Figure pct00023
또는
Figure pct00024
으로 표시되는 기이고;
R3은 수소, 또는 C1-3 알킬이고;
R6은 수소, 시아노, COOH 또는 C1-4 알킬이고;
R8은 수소, 또는 C1-4 알킬이고;
R7 및 R9는 수소 또는 C1-3 알킬이고;
R10은 C5-8 아릴 (바람직하게는 C5-6 아릴), 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-8 원 헤테로아릴 (바람직하게는 5-6 원 헤테로아릴)이고; 그리고
n은 1, 2 또는 3이다.
다른 바람직한 구현예에서, 화학식 I의 화합물에서, R1은 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로프로판메틸, 사이클로부탄메틸, 사이클로펜탄메틸, 사이클로헥산메틸, 페닐, 벤질, 또는 -COR10이고, 그리고 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로프로판메틸, 사이클로부탄메틸, 사이클로펜탄메틸, 사이클로헥산메틸, 페닐, 또는 벤질은 비치환되거나, 중수소, C1-3 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN에 의해 치환될 수 있고;
X는 메틸렌, -O-, -S- 또는 -SO2-이고;
Ra는 할로겐이거나; 또는 2개의 인접한 Ra는 결합하여 5 원 탄소환 고리, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유하는 5 원 복소환형 고리를 형성하고;
L1은 단일 결합, -O-, -NH-, -NHCO-, -CONH-, -CH2NH-, 또는 -S-이고;
L2는 단일 결합, 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
Figure pct00025
Figure pct00026
또는
Figure pct00027
으로 표시되는 기이고;
R6은 수소, 시아노, COOH, 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
R8은 수소, 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
R7 및 R9는 수소 또는 메틸이고;
R10은 페닐이고; 그리고
n은 2 또는 3이다.
다른 바람직한 구현예에서, 화학식 I의 화합물에서, R1은 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로프로판메틸, 사이클로부탄메틸, 사이클로펜탄메틸, 사이클로헥산메틸, 페닐, 또는 벤질이고, 그리고 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로프로판메틸, 사이클로부탄메틸, 사이클로펜탄메틸, 사이클로헥산메틸, 페닐, 또는 벤질은 비치환되거나, 중수소, C1-3 알킬, 하이드록실, F, Cl, Br, 또는 CN, 또는 CN에 의해 치환될 수 있고;
X는 메틸렌, -O- 또는 -S-이고;
Ra는 F, Cl, 또는 Br이거나; 또는 2개의 인접한 Ra는 결합하여 5 원 탄소환 고리, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유하는 5 원 복소환형 고리를 형성하고;
L1은 단일 결합, -O-, -NH- 또는 -NHCO-이고;
L2는 단일 결합, 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
Figure pct00028
또는
Figure pct00029
으로 표시되는 기이고;
R6은 수소, 시아노 또는 메틸이고;
R7은 수소이고; 그리고
n은 2 또는 3이다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물에서, R1은하기로부터 선택된다:
Figure pct00030
Figure pct00031
또는
Figure pct00032
일부 특정 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물에서, Rb, Rc, Rd 및 Re는 수소, 중수소 또는 할로겐으로부터 선택된다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물에서, L1은 단일 결합, -O-, -NH-, -NHCO- 또는 -NHCH2-로부터 선택된다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물에서, L2는 단일 결합 또는 메틸렌(-CH2-)으로부터 선택된다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물에서, R2는 카복실, 또는
Figure pct00033
Figure pct00034
또는
Figure pct00035
로부터 선택된다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 의해 제공되는 화학식 I의 화합물은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
또는
Figure pct00039
본원의 또 다른 측면은 본원의 화학식 I의 화합물, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물, 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본원의 또 다른 측면은 THR-β 효능제 작용과 관련된 질환(예컨대 비만, 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 지방간염, 비-알코올성 지방간염, 비알코올성 지방 간 질환, 죽상동맥경화증, 갑상선암, 갑상선기능저하증)을 예방하거나 치료하는 데 있어서 본 발명의 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물의 용도를 제공하는 데 있다. 대안적으로, 본원은 β 수용체 효능제 작용과 관련된 질환을 예방 또는 치료하기 위한 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구약물을 제공한다. 대안적으로, 본원은 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물을 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, THR β 효능작용과 관련된 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, β 수용체 효능제 작용과 관련된 질환은 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고중성지질혈증, 가족성 고콜레스테롤혈증, 이상지질혈증, 갑상선암, 갑상선기능저하증, 근본 갑상선기능저하증, 죽상동맥경화증, 대사 증후군, 비만, 당뇨병, 심혈관 질환, 관상 동맥 질환, 심근경색증, 심실 결핍, 심부전, 지방간, 간경변증, 비-알코올성 지방간염 (NASH), 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD), 우울증, 치매, 골다공증, 탈모증, 네일 질환, 피부 질환, 신장 질환, 만성 신부전 및/또는 암, 등, 특히 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고중성지질혈증, 가족성 고콜레스테롤혈증, 이상지질혈증, 죽상동맥경화증, 갑상선기능저하증, 및/또는 기저 갑상선기능저하증을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
정의
이하에서 달리 정의하지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서 사용된 기술적 의도는 당업자에게 자명한 그러한 기술적 변경 또는 동등한 기술적 대체를 포함하는 당업계에서 일반적으로 이해되는 기술을 지칭한다. 하기 용어는 당업자에 의해 잘 이해되는 것으로 생각되지만, 본원을 더 잘 설명하기 위해 하기 정의가 여전히 제시된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "포함하는(comprising)", "포함하는(including)", "갖는", "함유하는" 또는 "연루하는"이라는 용어 및 이들의 다른 변형은 포괄적이거나 개방적이며 기타 나열되지 않은 요소 또는 방법 단계가 배제되지 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "수소" 및 각 그룹의 수소는 프로튬(P), 중수소(D) 또는 삼중수소(T)와 같은 천연 발생 동위원소를 포함한다.
"알킬"은 탄소 원자 및 수소 원자만을 함유하는 선형 또는 분지형 사슬형 유기 기이다. 알킬의 예는 C1-10, 바람직하게는 C1-6, 보다 바람직하게는 C1-4의 선형 또는 분지형 알킬, 예컨대 C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, 또는 C10 알킬, 구체적으로는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 1-메틸프로필, 펜틸, 헥실 등을 포함한다.
"할로겐"은 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자 및 요오드 원자를 포함한다.
"사이클로알킬"은 C3-14, 바람직하게는 C3-10, 보다 바람직하게는 C6-10의 단환형, 이환형, 또는 삼환형 비-방향족 탄소환 고리를 포함하며, 이는 선택적으로 부분적으로 또는 완전히 포화된다.
"헤테로사이클릴"은 단환형, 이환형, 또는 삼환형 비-방향족 탄소환 고리, 또는 인 원자, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 (예컨대 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2) 헤테로원자 (특히 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자)를 함유하는 사이클로알칸을 포함한다. 예시적으로, "헤테로사이클릴"은 부분적으로 또는 완전히 선택적으로 포화된 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 5-12 원 단환형, 또는 이환형 비-방향족 탄소환 고리, 또는 사이클로알칸을 포함한다.
"아릴"은 공액 π 전자 시스템을 갖는 모든 탄소 단환형, 또는 융합된 고리 다환형 방향족 기를 지칭한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "C6-14 아릴"은 페닐 또는 나프틸과 같은 6 내지 14개의 탄소 원자를 포함하는 방향족 기를 지칭한다. 아릴은 1개 이상(예를 들어 1 내지 3개)의 적합한 치환기(예를 들어 할로겐, -OH, -CN, -NO2, C1-6 알킬 등)에 의해 선택적으로 치환된다.
"헤테로아릴"은 적어도 하나의 헤테로원자(질소, 산소 또는 황) 및 탄소 원자를 함유하는 방향족 환형 기이고, 5-, 또는 6-원 단환형 화합물, 동일하거나 상이한 단환형 헤테로방향족 고리가 융합된 8-10 원 이환형 기, 및 단환형 헤테로방향족 고리가 벤젠과 융합된 8-10 원 이환형 기를 포함한다. 헤테로아릴의 특정 예는 퓨릴, 티에닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이속사졸릴, 이소티아졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 인돌릴, 인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 퓨리닐, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 나프티리디닐, 퀴녹살릴, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 벤조푸라닐, 벤조티에닐, 벤족사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤즈이소티아졸릴 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치환"은 명시된 원자 상의 1개 이상(예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개)의 수소가 지정된 기로부터의 선택에 의해 치환되는 것을 의미하며, 단, 현재 상황에서 명시된 원자의 정상적인 원자가는 초과되지 않고 치환이 안정적인 화합물을 형성한다. 치환기 및/또는 변수의 조합은 이러한 조합이 안정한 화합물을 형성하는 경우에만 허용된다.
치환기가 "선택적으로 치환된" 것으로 기재된 경우, 치환기는 (1) 비치환되거나 (2) 치환될 수 있다. 치환기의 탄소가 치환기 목록에서 하나 이상에 의해 선택적으로 치환되는 것으로 기재된 경우, 탄소 상의 하나 이상의 수소(임의의 수소가 존재하는 정도까지)는 개별적으로 및/또는 공동으로 독립적으로 선택된 치환기에 의해 선택적으로 치환될 수 있다. 치환기의 질소가 치환기 목록에서 하나 이상에 의해 선택적으로 치환되는 것으로 기재된 경우, 질소 상의 하나 이상의 수소(임의의 수소가 존재하는 정도까지)는 각각 독립적으로 선택된 치환기에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
"선택적으로 치환된"은 1 내지 5개, 바람직하게는 1 내지 3개의 치환기에 의한 치환을 의미할 수 있고, 치환기는 (1) 할로겐, 하이드록실, 카복실, 아미노, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환된 알킬, (2) 알킬, 할로겐, 하이드록실, 카복실, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 알카노일 및 시아노로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환된 카보사이클릴, (3) 알킬, 할로겐, 하이드록실, 카복실, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 알카노일 및 시아노로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환된 헤테로사이클릴, (4) 알킬, 할로겐, 하이드록실, 카복실, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 알카노일 및 시아노로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환된 아릴, (5) 알킬, 할로겐, 하이드록실, 카복실, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 알카노일 및 시아노로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기에 의해 치환된 헤테로아릴, (6) 하이드록실, (7) 알콕시, (8) 할로겐, (9) 1 또는 2개의 알킬에 의해 선택적으로 치환된 아미노 그룹, 및 (10) 옥시를 포함한다.
본원은 하나 이상의 원자가 동일한 원자 번호를 갖지만 원자 질량, 또는 질량수가 자연에서 우세한 것으로부터 상이한 원자로 치환된 것을 제외하고는 본원의 화합물과 동일한 모든 약제학적으로 허용되고 동위원소 표지된 화합물을 추가로 포함한다. 본원의 화합물에 함유되기에 적합한 동위원소의 예는 수소의 동위원소(예컨대 중수소(2H) 및 삼중수소(3H)); 탄소의 동위원소(예컨대 11C, 13C 및 14C); 염소의 동위원소(예컨대 36Cl); 불소의 동위원소(예컨대 18F); 요오드의 동위원소(예컨대 123I 및 125I); 질소의 동위원소(예컨대 13N 및 15N); 산소의 동위원소(예컨대 15O, 17O 및 18O); 인의 동위원소(예컨대 32P); 및 황의 동위원소(예컨대 35S)를 포함하지만 (이에 제한되지 않는다). 본원의 일부 동위원소 표지된 화합물(예를 들어 방사성 동위원소로 도핑된 것)은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구(예를 들어 분석)에 사용될 수 있다. 방사성 동위원소 삼중수소(3H)와 탄소-14(14C)는 쉽게 도핑하고 쉽게 검출할 수 있기 때문에 이러한 목적에 특히 유용하다. 양전자 방출 동위원소(예를 들어 11C, 18F, 15O 및 13N)로의 치환은 위치 방출 단층 촬영(PET) 연구에서 기질 수용체의 점유를 검사하는 데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 구조는 또한 각 비대칭 중심의 R 및 S 구성, (Z) 및 (E) 이중 결합 이성질체, 및 (Z) 및 (E) 형태적 이성질체와 같은 구조의 모든 이성질체(예를 들어 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 기하학적 (또는 입체형태)) 형태를 포함하는 것을 지칭한다. 따라서, 이들 화합물의 단일 입체화학적 이성질체 및 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 기하학적 (또는 형태적) 혼합물은 모두 본원의 범위에 속한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원 화합물의 모든 호변이성질체 형태는 본원의 범위에 속한다. 또한, 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 구조는 하나 이상의 동위원소-풍부 원자의 존재만으로 모든 상이한 화합물을 포함하는 것을 지칭한다.
본원의 화합물의 모든 가능한 결정 형태 또는 다형 물질이 본원에 포함되며, 이는 단일 결정 형태일 수 있거나 임의 비율의 하나 초과의 다형 물질의 혼합물일 수 있다.
또한, 본원의 일부 화합물은 치료를 위해 유리 형태로 존재할 수 있거나, 적절한 경우 약제학적으로 허용가능한 유도체의 형태로 존재할 수 있음을 이해해야 한다. 본원에서, 약제학적으로 허용가능한 유도체는 약제학적으로 허용가능한 염, 용매화물, N-산화물, 대사물질 또는 전구약물을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 필요로 하는 환자에게 투여한 후, 본원의 화합물, 또는 이의 대사산물 또는 잔류물은 직간접적으로 제공된다. 따라서, 본 명세서에서 "본원의 화합물"이라고 언급하는 경우, 상기 화합물의 다양한 유도체 형태도 함유된다.
본원 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 산 부가 염 및 염기 부가 염을 포함하며, 염의 종류는 생리학적으로 허용되는 것이면 특별히 제한되지 않는다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 산 부가 염의 예는 하이드로클로라이드, 하이드로브롬화물, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 타르트레이트, 푸마레이트, 옥살레이트, 말레에이트, 시트레이트, 석시네이트, 메탄설포네이트, 벤젠설포네이트, 말레이트, 아스파르테이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 오로테이트, 팔미테이트 및 다른 유사한 염을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 염기 부가 염의 예는 나트륨 염, 칼륨 염, 암모늄 염, 칼슘 염, 마그네슘 염, 알루미늄 염, 철 염, 히스티딘 염, 아르기닌 염, 콜린 염 및 다른 유사한 염을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원의 화합물은 용매화물(바람직하게는 수화물)의 형태로 존재할 수 있으며, 여기서 본원의 화합물은 화합물의 결정 격자의 구조적 요소로서 극성 용매, 예를 들어 특히 물, 메탄올, 또는 특히 에탄올을 함유한다. 극성 용매, 특히 물의 양은 화학량론적 비율 또는 비-화학량론적 비율의 형태로 존재할 수 있다.
당업자는 질소가 이용가능한 고립 전자를 갖는 산화물로 산화될 필요가 있기 때문에 모든 질소 함유 헤테로사이클이 N-산화물을 형성할 수 있는 것은 아니라는 것을 이해할 수 있다. 당업자는 N-산화물을 형성할 수 있는 질소 함유 복소환을 인식할 수 있다. 당업자는 또한 삼차 아민이 N-산화물을 형성할 수 있음을 인지할 수 있다. 복소환 및 삼차 아민을 제조하기 위한 N-산화물의 합성 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 복소환 및 삼차 아민을 과산화산 예컨대 퍼아세트산 및 m-클로로퍼옥시벤조산 (MCPBA), 과산화수소, 알킬 과산화수소 예컨대 tert-부틸 하이드로퍼옥사이드, 나트륨 퍼보레이트 및 디옥이시란 예컨대 디메틸 디옥이시란으로 산화시키는 것을 포함한다.
본원 화합물이 투여될 때 생체 내에서 형성되는 물질과 같이, 본원 화합물의 대사산물도 본원의 범위에 포함된다. 이러한 생성물은 예를 들어 투여되는 화합물의 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 탈아미드화, 에스테르화, 효소분해 등에 의해 생성될 수 있다. 따라서, 본원은 본원의 화합물의 대사산물을 포함하고, 대사산물을 생산하기에 충분한 시간 동안 본원의 화합물을 포유동물과 접촉시키는 방법에 의해 생산된 화합물을 포함한다.
본 출원은 본 출원의 범위 내에서 본원의 화합물의 전구약물을 추가로 포함하고, 이는 예를 들어, 약리학적 활성이 거의 없거나 전혀 없는 본원 화합물의 일부 유도체가 신체에 또는 신체 상에 투여될 때 가수분해 절단에 의해 원하는 활성을 갖는 본 출원의 화합물로 전환될 수 있다. 일반적으로, 이러한 전구약물은 화합물의 기능적 유도체일 수 있으며, 이는 생체내에서 원하는 치료 활성을 갖는 화합물로 쉽게 전환된다.
본원에서 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분과 함께 투여되는 약리학적 및 약학적으로 허용되는 첨가제를 지칭하며, 부형제, 붕해제, 접착제, 윤활제, 코팅제, 염료, 희석제, 염기 제제, 등장화제 등이 사용될 수 있다.
투여 형태는 정제, 캡슐, 로젠지, 하드 캔디, 파우더, 스프레이, 크림, 연고, 점적제(drop), 좌약, 겔, 페이스트, 로션, 수성 현탁액, 주사가능 용액, 엘릭시르 및 시럽을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
경구 투여에 적합한 투여 형태의 예는 정제, 캡슐제, 분말, 미립제, 과립제, 액제, 시럽제 등을 포함한다. 비-경구 투여에 적합한 투여 형태의 예는 주사제, 점적제, 좌제 등을 포함한다.
달리 명시되지 않는 한 본문에서 단수 용어는 복수 지시 대상을 포함하며 그 반대도 마찬가지이다.
달리 명시되지 않는 한, "대상체"라는 용어는 "개체" 및 "환자"라는 용어와 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 마우스, 랫트, 기니아 피그, 개, 돼지, 양, 소, 닭, 토끼, 원숭이(붉은털원숭이 등), 인간 등을 포함하는 척추동물, 예컨대 조류, 어류 및 포유동물을 포함한다.
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 성분의 양, 측정 값 또는 반응 조건을 나타내기 위해 사용된 모든 숫자는 가능한 측정 오류를 나타내기 위해 모든 경우에 "약"이라는 용어로 수식된 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 백분율로 연결될 때 "약"이라는 용어는 ±1%를 지칭할 수 있다.
본원의 화학식 I의 화합물은 갑상선 호르몬 β 수용체 효능제 작용을 나타내고, 다음 질환의 예방, 감소 및/또는 치료에 사용되는 것과 같이 수용체
Figure pct00040
에 의해 조절되는 질환의 예방 또는 치료용 약물일 수 있다: 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고중성지질혈증, 가족성 고콜레스테롤혈증, 이상지질혈증, 갑상선암, 갑상선기능저하증, 근본 갑상선기능저하증, 죽상동맥경화증, 대사 증후군, 비만, 당뇨병, 심혈관 질환, 관상 동맥 질환, 심근경색증, 심실 결핍, 심부전, 지방간, 간경변증, 비-알코올성 지방간염 (NASH), 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD), 우울증, 치매, 골다공증, 탈모증, 네일 질환, 피부 질환, 신장 질환, 만성 신부전, 및/또는 암, 등, 특히 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고중성지질혈증, 가족성 고콜레스테롤혈증, 이상지질혈증, 죽상동맥경화증, 갑상선기능저하증 및/또는 근본 갑상선기능저하증, 등.
도 1은 섬유증 평가 결과를 보여준다.
도 2는 NAS 점수 결과를 보여준다.
구현예
본원의 목적 및 기술적 해결책을 보다 명확하게 하기 위해, 본원은 특정 구현예를 참조하여 아래에서 추가로 설명된다. 이들 구현예는 단지 본원을 예시하기 위해 사용되며 본원의 범위를 제한하기 위해 사용되지 않는다는 것을 이해해야 한다. 또한, 하기 구현예에서 언급하지 않은 구체적인 실험 방법은 통상적인 실험 방법에 따라 수행한다.
실시예 1 주요 중간체 KH01의 합성
Figure pct00041
화합물 KH01-1: 출발 물질 2-클로로-5-브로모피리미딘 (KH01-1a) (100 g, 516 mmol, 1.00 eq), 이소부티르산 (1b) (36.4 g, 413 mmol, 38.3 mL, 0.80 eq), 칼륨 퍼설페이트 (111 g, 413 mmol, 82.8 mL, 0.80 eq), 및 질산은 (17.5 g, 103 mmol, 0.20 eq)을 0℃에서 둥근 바닥 플라스크에 첨가한 다음, 1 L의 디클로로메탄 및 1 L의 물과 함께 첨가하였다. 고르게 교반한 후, 일부 고체는 용해되지 않고, 그 다음 혼합물을 질소의 보호 하에 실온(25℃)에서 12시간 동안 교반하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응하고 새로운 스폿이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 디클로로메탄 2회 (2 × 1 L)로 세척하였다. 여액을 수집하고, 감압 하에서 농축하고; 잔류물을 실리카겔 (100-200 메쉬) 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 =100: 1)로 정제하여 54.0 g의 물질 KH01-1을 오일로서 얻었다. 수율: 44.3%. LCMS:MS (ESI) m/z = 236.9 [M+H]+. 1H NMR (400MHz CDCl3): δ 8.58 (s, 1H), 3.48 -3.41 (m, 1H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KH01-2: N,N-디메틸포름아미드 (150 mL) 중 KH01-1 (15.0 g, 63.6 mmol, 1.00 eq), 1a (11.3 g, 63.6 mmol, 1.00 eq), 및 탄산세슘 (62.2 g, 191 mmol, 3.00 eq)의 반응 혼합물을 교반 하에 3회 질소 대체한 다음, 질소 보호 하에 외부 온도 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응을 완료 시까지 TLC로 모니터링하였다. 반응 혼합물을 100mL의 물에 부었고, 투명한 용액이 형성될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 조합하였다. 포화 염 용액 (2 × 100 mL)로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시키고 잔류물을 실리카겔 (100-200 메쉬) 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1: 2)를 통해 정제하여 13.0 g의 KH01-2를 황색 고체로서 얻었다. 수율: 54.1%. LCMS: MS (ESI) m/z = 378.0 [M+H]+. 1H NMR (400MHz CDCl3): δ 8.46 (s, 1H), 6.68 (s, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.43 - 3.36 (m, 1H), 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KH01-3: 디옥산 (100 mL) 중 KH01-2 (10.0 g, 26.5 mmol, 1.00 eq), 비스(피나콜레이트)디보론 (pin2B2) (13.4 g, 53.0 mmol, 2.00 eq), 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)이염화물 디클로로메탄 complex (1.08 g, 1.33 mmol, 0.05 eq), 및 아세트산칼륨 (5.21 g, 53.0 mmol, 2.00 eq)의 반응 혼합물을 3회 질소 대체를 거치고, 그 다음 4시간 동안 질소의 보호 하에 110℃의 외부 온도로 가열하였다. TLC는 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 혼합물에 200 mL의 물을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 (3 × 200 mL)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 조합하였다. 포화 염 용액 (300 mL × 2)로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시켜 12.0 g의 미정제 생성물을 갈색 오일로서 얻었고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LCMS: MS (ESI) m/z = 425.2 [M+H]+.
화합물 KH01: 상기 미정제 KH01-3 (12.0 g, 28.2 mmol, 1.00 eq) 및 30.0% 과산화수소 (6.74 g, 59.4 mmol, 5.71 mL, 2.10 eq)을 0℃의 외부 온도에서 테트라하이드로푸란 (120 mL)에 용해시켰다. 혼합물을 실온(25℃)에서 2시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. TLC는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 50 mL의 2M 아황산나트륨 용액으로 켄칭한 다음, 디클로로메탄 (3Х 5 mL)로 추출하였다. 조합된 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 (100-200 메쉬) 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1: 2)로 정제하여 4.80 g의 황색 고체를 얻었다. 수율: 53.4%. LCMS: MS (ESI) m/z = 314.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.85 (br s, 1H), 7.95 (s, 1H), 6.66 (s, 2H), 5.52 (s, 2H), 3.31 - 3.18 (m, 1H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 2 화합물 KH02의 합성
Figure pct00042
화합물 KH02-1: 단일목 플라스크 내의 KH01 (0.152 g, 0.485 mmol), 디에틸 포스파이트 (0.104 g, 0.754 mmol), 파라포름알데하이드 (0.095 g, 1.055 mmol) 및 황산나트륨 (0.156 g, 1.098 mmol)의 혼합물에 N2의 보호 하에 톨루엔 (8 mL)을 첨가하였다. 부분 용해된 반응 혼합물을 110℃의 외부 온도로 3시간 동안 가열하였다. TLC는 반응의 완료를 보여주었고, 증가된 극성을 갖는 새로은 스폿이 형성되었다. 반응 혼합물에 100 mL의 물을 첨가하고, 에틸 아세테이트 (3 × 50 mL)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1: 2)로 정제하여 KH02-1을 무색 오일 (142 mg, 63%)로서 얻었다. LC-MS (ESI, m/z): 465.3[M+H]+.
화합물 KH02: 화합물 KH02-1 (0.142 g, 0.306 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 디클로로메탄 (10 mL)로 N2의 보호 하에 첨가하였다. -10℃의 외부 온도에서, 트리메틸브로모실란 (3.2 mL)을 천천히 반응 시스템에 적가하였다. 이 온도에서 30분 동안 반응시킨 다음, 온도를 밤새 반응을 위해 실온으로 천천히 상승시켰다. LCMS는 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 회전식 증발로 직접적으로 농축하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 냉동 건조 후 화합물 KH02를 희미한 황색 고체 (55 mg, 44%)로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 9.87 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 6.82 (s, 2H), 4.61 - 5.22 (m, 3H), 3.27 (m, 3H), 1.12 (d, J = 4 MHz, 6H). LC-MS (ESI, m/z): 408.0 [M+1]+.
실시예 3 화합물 KH03의 합성
Figure pct00043
화합물 KH03-1: 화합물 KH01 (0.265 g, 0.846 mmol)을 11.2 mL의 물에 첨가하였다. 5.6 mL의 농축 염산을 0℃의 외부 온도에서 첨가한 다음, 칭량된 아질산나트륨 (0.072 g, 1.043 mmol)을 0.8 mL의 물에 용해시키고, 반응 용액에 천천히 적가 첨가하였다. 0℃에서 1.5시간 동안 교반하여 혼합물을 얻었다. 화합물 3a (0.148 g, 0.948 mmol)을 추가로 칭량하고, 19.4 mL의 물에 용해시키고, 5.6 mL의 피리딘을 0℃에서 첨가하였다. 1.5시간 동안 이 온도에서 교반한 다음, 전술한 반응 용액에 0℃에서 빠르게 첨가하였다. 이 경우에, 오렌지색 고체를 형성한 다음, 반응 용액을 천천히 실온(25℃)으로 가열하고, 밤새 계속해서 반응시켰다. TLC 모니터링이 반응의 완료를 보여준 후, 고체를 필터 깔때기 상에서 직접적으로 여과하고, 50 mL의 물 및 PE 각각으로 3회 세척하였다. 오렌지색 고체 KH03-1 (380 mg, 93.8%)을 수집하고, 수득하였다. LC-MS (ESI, m/z): 482.3 [M+1]+.
화합물 KH03: 화합물 KH03-1 (0.380 g, 0.931 mmol) 및 아세트산나트륨 (0.650 g, 7.926 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 아세트산 (10 mL)로 N2의 보호 하에 용해시켰다. 반응을 3시간 동안 120℃의 외부 온도에서 수행하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응을 중단하였다. 반응 용액을 0℃로 냉각시키고, 100 mL의 물을 첨가한 다음, 다량의 고체는 침전되었고, 이를 필터 깔때기를 통해 직접 여과하고, 고체를 물 및 PE 각각 (3 × 50 mL)로 세척하였다. 오렌지색 고체 KH03을 수집하고, (230 mg, 66.9%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.09 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.75 (s, 2H), 3.27 - 3.28 (m, 1H), 1.13 (d, J = 4 MHz, 6H). LC-MS (ESI, m/z): 435.2 [M+1]+.
실시예 4 화합물 KH04의 합성
Figure pct00044
화합물 KH04-1: 화합물 KH01 (0.0512 g, 0.1635 mmol), 에틸 글리옥실레이트 (0.0274 g, 0.268 mmol) 및 나트륨 트리아세톡시붕소수화물 (0.1023 g, 0.483 mmol)을 칭량하고, 단일목 플라스크에 첨가한 다음, 용해를 위해 1,2-디클로로에탄 (3 mL)을 첨가하였다. 반응을 수행된 75℃의 외부 온도에서 3시간 동안 교반하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었고, 새로운 증가된 극성 스폿이 형성되었음을 보여주었다. 그 다음, 반응을 중단하였다. 반응 용액에 50 mL의 디클로로메탄 및 100 mL의 물을 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 유기상을 분리하고, 수성상을 디클로로메탄 (3Х50 mL)로 추출한 다음, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 크로마토플레이트 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1: 2)로 정제하여 무색 오일성 물질 KH04-1 (50 mg, 78.5%)을 얻었다. LC-MS (ESI, m/z): 401.3 [M+1]+.
화합물 KH04: 화합물 KH04-1 (50 mg, 0.125 mmol) 및 수산화리튬 (35 mg, 1.458 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 용해를 위해 테트라하이드로푸란/메탄올/물 (4:1:1, 6 mL)을 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 수행하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응을 중단하였다. 20 mL의 물을 희석 반응 용액에 첨가하였다. 유기 용매를 감압 하에서 제거하였다. 반응 pH을 0℃에서 3-4로 조정하였다. 디클로로메탄 (50 mL × 3)을 추출을 위해 반응 용액에 첨가하였다. 유기상을 수집하였다. 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 용매를 제거하였다. 잔류물을 크로마토플레이트 (디클로로메탄/메탄올 = 5: 1)로 정제하였다. 표적 생성물을 수집하고, 냉동건조시켜 백색 고체 KH04 (24 mg, 51.6%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.48 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 6.65 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 4.21 - 4.22 (m, 1H), 3.49 (s, 1H), 3.34 - 3.19 (m, 2H), 1.12 (d, J = 4 MHz, 6H). LC-MS (ESI, m/z): 372.1 [M+1]+.
실시예 5 화합물 KH05의 합성
Figure pct00045
100 mg의 화합물 KH03을 5 mL의 아세트산에 용해시키고, 1 mL의 농축 염산을 첨가하였다. 90℃의 외부 온도에서 4시간 동안 교반하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응 용액을 압축 해제하고, 회전식 증발로 건조시키고, 포화 탄산나트륨 용액을 첨가하여 pH를 9-10으로 조정하였다. 반응 용액을 50 mL의 에틸 아세테이트로 추출한 후, 유기상을 버리고, 수성상을 pH =3-4로 조정하고, 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출한 다음, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 70 mg의 백색 고체를 얻었다. 수율은 67.1%였다. LC-MS (ESI, m/z): 455.3 [M+1]+.
실시예 6 화합물 KH06의 합성
Figure pct00046
KH05（60mg）을 4 mL의 티오글리콜산에 용해시키고, 120℃의 외부 온도에서 질소의 보호 하에 6시간 동안 교반하였다. TLC 모니터링은 낮은 극성 스폿이 형성되었음을 보여주었다. 포화 티오황산나트륨을 반응 용액에 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 에틸 아세테이트를 추출 (25 ml × 3)에 사용하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하고, 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올 = 10: 1)를 통해 정제하였다. 표적 생성물을 수집하고, 냉동건조시켜 약 1.5 mg의 백색 고체 KH06을 얻었다, 수율: 27.8%. LC-MS (ESI, m/z): 410.1 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ: 12.49 (s, 1H), 10.08 (s, 1H), 8.01 (s, 2H), 7.71 (d, J = 4 MHz, 1H), 3.27-3.33 (m, 1H), 1.12 (d, J = 4MHz, 6H).
실시예 7 주요 중간체 KH07-10의 합성
Figure pct00047
화합물 KH07-2: 원료 KH07-1 (25.0 g, 184 mmol, 1 eq)을 DMF (200 mL)에 용해시키고, NBS (32.9 g, 184 mmol, 1 eq)을 0℃에서 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 25℃의 외부 온도에서 5시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 스폿 (RT = 0.483)이 형성되었다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1) 모니터링은 2개의 새로운 스폿이 형성되었음을 보여주었다. 반응 용액을 물 (250 mL)로 희석한 다음, 추출을 위해 에틸 아세테이트 (250 mL × 2)을 첨가하였다. 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (250 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/ 에틸 아세테이트 = 50/1 내지 3/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KH07-2 (29.1 g, 135 mmol, 수율: 73.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 216.1 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 6.75 - 6.69 (m, 1H), 6.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.76 (s, 2H), 4.58 - 4.49 (m, 2H), 3.15 - 3.08 (m, 2H).
화합물 KH07-3: 화합물 KH07-2 (28.0 g, 130 mmol, 1 eq) 및 TFAA (32.9 g, 156 mmol, 21.8 mL, 1.2 eq)을 디클로로메탄 (280 mL)에 용해시키고, DIEA (33.8 g, 261 mmol, 45.5 mL, 2 eq)를 0℃의 외부 온도에서 천천히 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 25℃의 외부 온도에서 1시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 용액을 물 (280 mL)에 부었고, 디클로로메탄 (300 mL × 3)로 추출하였다. 유기층을 조합하였다. 포화 염 용액 (280 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/ 에틸 아세테이트= 50/1 내지 3/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KH07-3 (27.8 g, 수율: 68.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 309.9 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 11.26 - 10.86 (m, 1H), 7.15 - 7.10 (m, 1H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 4.71 - 4.62 (m, 1H), 4.66 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.25 (t, J = 8.8 Hz, 2H).
화합물 KH07-4: 화합물 KH07-3 (27.0 g, 87.0 mmol, 1 eq), Pd(dppf)Cl2ㆍCH2Cl2 (3.56 g, 4.35 mmol, 0.05 eq), Pin2B2 (55.2 g, 217 mmol, 2.5 eq) 및 아세트산칼륨 (25.6 g, 261 mmol, 3 eq)을 디옥산 (270 mL)에 첨가하였다. 80℃의 외부 온도에서 6시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. LCMS 모니터링이 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응을 물 (500 mL)에 부었고, 에틸 아세테이트 (500 mL × 3)로 추출하였다. 조합하였다. 유기상을 포화 염 용액 (500 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 갈색 고체 KH07- 4 (33.0 g, 미정제 생성물)를 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. MS (ESI) m/z: 358.1 [M+H]+.
화합물 KH07-5: 화합물 KH07-4 (32.0 g, 89.6 mmol, 1 eq)을 테트라하이드로푸란 (300 mL)으로 용해시키고, H2O2 (30.4 g, 268 mmol, 25.8 mL, 순도 30.0%, 3 eq)을 0℃의 외부 온도에서 천천히 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 25℃의 외부 온도에서 5시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링이 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응 용액을 포화 아황산나트륨 (400 mL)에 천천히 부어서 반응을 종료한 다음, 에틸 아세테이트 (200 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (100 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/ 에틸 아세테이트 = 20/1 내지 5/1)를 통해 정제하여 백색 고체 KH07-5 (20.0 g, 80.9 mmol, 수율: 90.3%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 248.1 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 10.6 (s, 1H), 9.63 (s, 1H), 6.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 8.8 Hz, 2H).
화합물 KH07-6: 화합물 KH07-5 (10.0 g, 40.4 mmol, 1 eq) 및 NCS (6.48 g, 48.5 mmol, 1.20 eq)을 클로로포름 (100 mL) 및 DMSO (25.0 mL)의 혼합 용매에 첨가하였다. 25℃의 외부 온도에서 5시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링이 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응 용액을 직접적으로 농축시키고 분취 HPLC로 정제하여 백색 고체 KH07-6 (4.50 g, 15.9 mmol, 수율: 39.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 282.0 [M+H]+. 1 H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 8.00 - 7.88 (m, 1H), 7.76 (br s, 1H), 5.57 (br s, 1H), 4.65 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.24 - 3.18 (m, 2H).
화합물 KH07-7: 화합물 KH07-6 (2.50 g, 8.88 mmol, 1 eq) 및 KH07-6a을 25 mL의 피리딘에 첨가하고, 78℃의 외부 온도에서 5시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 용액을 60 mL의 물에 부었고, 에틸 아세테이트 (100 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (100 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트= 5/1 내지 3/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KH07-7 (1.20 g, 2.50 mmol, 수율: 28.1%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 482.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 11.20 - 11.11 (m, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.47 - 7.35 (m, 1H), 4.68 - 4.61 (m, 2H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 2H), 1.15 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KH07-8: 화합물 KH07-7 (1.05 g, 2.18 mmol, 1 eq), Pin2B2 (1.39 g, 5.46 mmol, 2.5 eq), AcOK (643 mg, 6.55 mmol, 3 eq) 및 Pd(dppf)Cl2ㆍCH2Cl2 (107 mg, 131 mmol, 0.06 eq)을 10 mL의 디옥산에 첨가하였다. 교반 하에 3회 질소 대체하고, 그 다음 혼합물을 80℃의 외부 온도에서 12시간 동안 질소의 보호 하에 계속 교반하였다. LCMS 모니터링은 일부 원료가 남아있음을 보여주었고, 약 39.8% 생성물이 형성되었다. 반응 용액을 직접적으로 농축하였다. 잔류물을 100 mL의 물에 첨가하였다. 교반하였다. 에틸 아세테이트 (100 mL × 2)로 추출하였다. 포화 염 용액 (100 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 갈색 고체 (1.00 g, 미정제 생성물)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 528.1 [M+H]+.
화합물 KH07-9: 조작은 화합물 KH07-5의 합성과 동일하였고, 반응 용액을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 3/1)를 통해 정제하여 백색 고체 KH07-9 (700 mg)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 418.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 11.12 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 4.62 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.34 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 3.30 - 3.26 (m, 1H), 3.02 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 1.17 - 1.10 (m, 1H), 1.14 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KH07-10: 화합물 KH07-9 (700 mg, 1.68 mmol, 1 eq) 및 수산화칼륨 (376 mg, 6.70 mmol, 4 eq)을 에탄올 (4 mL) 및 물 (3 mL)의 혼합 용액에 첨가하고, 45℃의 외부 온도에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 용액을 1N 염산으로 대략 pH 7으로 조정한 다음, 50 mL의 물을 첨가하고, 10분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트 (50 mL × 2회)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (100 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 분취 HPLC로 정제하여 희미한 황색 고체 KH07-10 (501.4mg, 수율: 93.0%, 순도 99.6%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 322.2 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 9.81 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 6.71 - 6.35 (m, 1H), 5.75 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 4.50 (br t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.31 - 3.21 (m, 1H), 2.90 (br t, J = 8.8 Hz, 2H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 8 화합물 KH07의 합성
Figure pct00048
화합물 KH07-11: 반응 용액 A: 화합물 KH07-10 (202.5 mg, 0.637 mmol)을 10 mL의 물에 첨가하였다. 5.6 mL의 농축 염산을 0℃에서 첨가하였다. 칭량된 아질산나트륨 (58.3 mg, 0.803 mmol)을 1 mL의 물에 용해시키고, 반응 용액에 천천히 적가 첨가하고, 0℃에서 1.5시간 동안 교반하여 아질산나트륨을 만들어 용액을 얻었고; 반응 용액 B: 화합물 KH07-10a (108.8 mg, 0.7 mmol)을 20 mL의 물에 첨가하고, 5.6 mL의 피리딘을 0℃에서 첨가한 다음, 이 온도에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 반응 용액 A를 0℃에서 반응 용액 B에 빠르게 부어서 오렌지색 고체를 형성하였다. 온도를 실온으로 천천히 상승시켜 반응을 밤새 계속하였다. TLC 모니터링이 반응의 완료를 보여준 후, 고체를 직접적으로 여과하고, 물 및 석유 에테르 (25 mL × 3)로 각각 세척하였다. 오렌지색 고체 KH07-11 (280 mg, 수율: 89.9%, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 289.2 [M+H]+.
화합물 KH07: 화합물 KH07-11 (280 mg, 0.573 mmol) 및 아세트산나트륨 (485.4 mg, 5.73 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 아세트산 (10 mL)로 N2의 보호 하에 용해시켰다. 반응을 3시간 동안 120℃의 외부 온도에서 수행하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응을 중단하였다. 반응 용액을 0℃로 냉각시키고, 50 mL의 물의 첨가 후, 다량의 고체는 침전되었고, 이를 직접적으로 여과하고, 물 (20 mL × 3) 및 석유 에테르 (20 mL × 3)로 각각 세척하였다. 오렌지색 고체 (254 mg, 미정제 생성물)을 수집하고, 50 mg의 미정제 생성물을 분취 HPLC로 정제하여 회백색 고체 화합물 KH07 (13.5 mg, 27.0%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 443.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): 10.06 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.65 (t, 2H, J = 8.0Hz), 3.21-3.32 (m, 1H), 3.05 (t, 2H, J = 8.0 Hz), 1.16 (d, 6H, J = 8.0Hz).
실시예 9 화합물 KH08의 합성
Figure pct00049
화합물 KH08-1: 미정제 화합물 KH07 (200 mg, 0.452 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 아세트산 (7.5 mL)에 용해시킨 다음, 농축 염산 (2.5 mL)을 반응에 적가하였다. 4시간 동안 90℃에서 4시간 후, TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 증가된 극성 스폿이 형성되었고, 반응을 중단하였다. 반응 용액을 회전식 증발로 직접 건조시키고, 반응 pH를 포화 탄산나트륨 용액으로 9-10으로 조정한 다음, 반응 용액을 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 2회 추출하였다. 수성상을 수집하고, 수성상의 pH을 3-4로 조정한 다음, 수성상을 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출한다, 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 유기상을 농축시켜 황색 고체 KH08-1 (186.5 mg, 89.4%)을 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 KH08: 화합물 KH08-1 (150 mg, 0.325 mmol, 1 eq) 및 수산화나트륨 (52 mg, 1.3 mmol, 4 eq)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 물 (20 mL)로 용해시킨 다음, 티오글리콜산 (0.6 g, 6.5 mmol, 20 eq)을 반응 용액에 첨가하였다. 120℃에서 3시간 동안 반응시켰다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 감소된 극성 스폿이 형성되고, 반응을 중단하였다. 포화 탄산나트륨 용액을 첨가하여 반응 시스템의 pH를 중성으로 조정한 다음, 반응 시스템을 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 분취 HPLC로 정제하여 백색 고체 KH08 (36.8 mg, 27.1%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 418.2 [M+H]+.
실시예 10 주요 중간체 KH09-6의 합성
Figure pct00050
화합물 KH09-2: 원물질 KH09-1 (50.0 g, 219 mmol, 28.0 mL, 1.00 eq) 및 KH09-1a (32.9 g, 219 mmol, 30.8 mL, 1.00 eq)을 테트라하이드로푸란 (200 mL)에 용해시키고, KHMDS (1.00M, 230 mL, 1.05 eq)을 0℃에서 적가 첨가하였다. 첨가 후, 이 온도에서 10분 동안 교반한 다음, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10: 1) 모니터링이 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응 용액을 빙수에 천천히 부었고, 디클로로메탄 (500 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (300 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 황색 오일성 물질 KH09-2 (75.0 g, 미정제 생성물)를 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 8.97 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 5H), 7.26 - 7.20 (m, 1H), 5.64 (s, 1H), 3.68 - 3.64 (m, 3H).
화합물 KH09-3: KH09-2 (75.0 g, 219 mmol, 1.00 eq)을 염화수소의 아세트산 용액 (100 mL)에 용해시키고, 90℃의 외부 온도에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링이 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응 용액을 회전식 증발로 직접 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르 / 에틸 아세테이트 =100/1 내지 20/ 1)를 통해 정제하여 회백색 고체 KH09-3 (23.0 g, 81.1 mmol, 수율: 36.9%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 282.9 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 8.93 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.21 (m, 3H), 4.23 (s, 2H).
화합물 KH09-4: 화합물 KH09-3 (10.0 g, 35.2 mmol, 1.00 eq) 및 화합물 KH09-3a (6.28 g, 35.2 mmol, 1.00 eq)을 100 mL의 DMF에 용해시킨 다음, 탄산세슘 (34.4 g, 105 mmol, 3.00 eq)을 첨가하고, 80℃의 외부 온도에서 2시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100: 1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 용액을 여과하고, 필터 잔류물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 세척하였다. 여액을 수집하였다. 50 mL의 물을 첨가하고, 5분 동안 교반한 다음, 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (100 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시키고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 20/1)를 통해 정제하여 백색 고체 KH09-4 (12.0 g, 28.2 mmol, 수율: 80.0%)을 얻었다. 1 H NMR(DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 8.75 (s, 1H), 7.41 - 7.12 (m, 5H), 6.68 (s, 2H), 5.64 (s, 2H), 4.14 (s, 2H).
화합물 KH09-5: 화합물 KH09-4 (5.00 g, 11.7 mmol, 1.00 eq), Pin2B2 (5.97 g, 23.5 mmol, 2.00 eq), Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2 (480 mg, 588. μmol, 0.05 eq) 및 아세트산칼륨 (2.31 g, 23.5 mmol, 2.00 eq)을 50 mL의 디옥산에 첨가하였다. 반응 용액 내의 공기를 질소로 3번 대체한 다음, 반응 용액을 110℃의 외부 온도에서 4시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. TLC 모니터링에서 원료가 완전히 반응한 것으로 나타난 후, 반응 용액을 여과하고, 여액을 수집하고, 회전식 증발로 직접 건조시키고 및 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르 /에틸 아세테이트 = 100: 1 내지 50: 1)를 통해 정제하여 갈색 오일성 물질 (5.00 g, 미정제 생성물, 붕산 생성물 존재함)를 얻었다.
화합물 KH09-6: 화합물 KH09-5 (5.00 g, 10.5 mmol, 1.00 eq)을 테트라하이드로푸란으로 용해시키고, H2O2 (2.46 g, 21.7 mmol, 2.08 mL, 순도 30%, 2.05 eq)을 0℃에서 첨가하고, 30분 동안 교반한 다음, 계속해서 H2O2 (4.80 g, 42.3 mmol, 4.07 mL, 순도 30%, 4.00 eq)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC 모니터링에서 원료가 완전히 반응한 것으로 나타난 후, 반응 용액을 50 mL의 포화 아황산나트륨 용액에 부었고, 15분 동안 교반하고; 디클로로메탄 (200 mL × 3)으로 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하였다. 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100: 1 내지 10: 1)를 통해 정제하여 희미한 황색 고체 KH09-6 (1.01 g, 2.74 mmol, 수율: 25.8%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 362.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 10.03 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.38 - 7.09 (m, 5H), 6.66 (s, 2H), 5.54 (s, 2H), 3.97 (s, 2H), 1.98 (s, 1H).
실시예 11 화합물 KH09의 합성
Figure pct00051
화합물 KH09-7: 조작은 KH07-11의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KH09-7 (323 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 KH09: 조작은 KH07의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KH09 (432 mg, 미정제 생성물)을 수득하였다. 50 mg의 고체를 취하고, 분취 HPLC로 정제하여 6.12 mg의 백색 고체를 얻었다, 수율: 7.65%. MS (ESI) m/z: 482.9 [M+H]+. 1 H NMR(DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 13.05 -13.10 (m, 1H), 10.26 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.75 (s, 2H), 7.18 - 7.30(m, 5H), 4.00 (s, 1H).
실시예 12 화합물 KH10의 합성
Figure pct00052
화합물 KH10-1: 조작은 KH08-1의 합성과 동일하였고, 황색 고체 (255.7 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 502.0 [M+1]+.
화합물 KH10: 조작은 KH08의 합성과 동일하였고, 백색 고체 KH10 (51 mg, 수율: 20.0%)을 수득하였다. MS (ESI) m/z: 458.0 [M+1]+. 1 H NMR(DMSO-d 6 , 400 MHz): 12.49(s, 1H), 10.25(s, 1H), 8.01(s, 1H), 7.77(s, 2H), 7.72(d, 1H, J=4.0Hz), 7.17-7.30(m, 5H), 4.0(s, 2H).
실시예 13 주요 중간체 KH11-3의 합성
Figure pct00053
화합물 KH11-1: 조작은 KH09-4의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KH11-1 (9.00 g, 26.7 mmol, 수율: 73.4%)을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 1/2)를 통해 정제로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 338.1 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 8.42 (s, 1H), 6.43 (s, 2H), 3.52 (br s, 2H), 3.46 - 3.33 (m, 1H), 2.04 (s, 6H), 1.25 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KH11-2: 화합물 KH11-1 (5.00 g, 14.8 mmol, 1.00 eq), pin2B2 (7.55 g, 29.7 mmol, 2.00 eq), Pd(dppf)Cl2ㆍCH2Cl2 (607 mg, 743 μmol, 0.05 eq) 및 아세트산칼륨 (2.92 g, 29.7 mmol, 2.00 eq)을 50 mL의 디옥산에 첨가하였다. 반응 용액 내의 공기를 질소로 3번 대체한 다음, 반응 용액을 110℃의 외부 온도에서 10시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. TLC 모니터링에서 원료가 완전히 반응한 것으로 나타난 후, 반응 용액을 회전식 증발로 직접 건조시키고, 50 mL의 물 및 50 mL의 에틸 아세테이트를 첨가하고, 10분 동안 교반하고, 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 흑색 오일성 물질 KH11-2 (6.00 g, 미정제 생성물)를 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 384.5 [M+H]+.
화합물 KH11-3: 조작은 화합물 KH09-6의 합성과 동일하였고, 회백색 고체 (1.11 g, 2.79 mmol, 수율: 17.8%, TFA 염)을 분취 HPLC (0.1% TFA)를 통한 정제로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 274.2 [M+H]+. 1 H NMR (MeOD, 400 MHz): δ 7.93 (s, 1H), 7.12 (s, 2H), 3.40 - 3.33 (m, 1H), 2.13 (s, 6H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 14 화합물 KH11의 합성
Figure pct00054
화합물 KH11-4: 조작은 KH07-11의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KH11-4 (368.4 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 441.3[M+H]+.
화합물 KH11: 조작은 KH07의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KH11 (342.3 mg, 미정제 생성물)을 수득하였다. 50 mg의 고체를 취하고, 분취 HPLC로 정제하여 11.2 mg의 백색 고체를 얻었다, 수율: 23.2%. MS (ESI) m/z: 395.2 [M+H]+.
실시예 15 화합물 KH12의 합성
Figure pct00055
화합물 KH12-1: 조작은 KH08-1의 합성과 동일하였고, 황색 고체 (286 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 414.2 [M+H]+.
화합물 KH10: 조작은 KH08의 합성과 동일하였고, 백색 고체 KH10 (38.4 mg, 수율: 15.2%)을 수득하였다. MS (ESI) m/z: 370.1 [M+H]+.
구현예 16 주요 중간체 KH13-7의 합성
Figure pct00056
Figure pct00057
화합물 KH13-2: N,N-디이소프로필아민 (1.89 g, 18.6 mmol, 2.63 mL, 0.1 eq) 및 원물질 KH13-1 (25.0 g, 186 mmol, 1 eq)을 아세토니트릴 (250 mL)에 용해시킨 다음, NCS (26.1 g, 195 mmol, 1.05 eq)을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 10시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 회전식 증발로 건조시키고, 100 mL의 물로 희석하였다. 에틸 아세테이트 (100 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 =1/0 내지 20/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KH13-2 (5.00 g, 29.6 mmol, 수율 15.9%)를 얻었다. 1 H NMR(DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 9.24 (s, 1H), 7.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.85 - 2.77 (m, 4H), 2.05 - 1.96 (m, 2H).
화합물 KH13-3: 화합물 KH13-2 (3.70 g, 21.9 mmol, 1 eq)을 에탄올 (37 mL)에 용해시키고,첨가하고질산 (2.42 g, 23.0 mmol, 1.73 mL, 순도 60.0%, 1.05 eq)을 10℃에서 첨가하였다. 이 온도에서 1시간 동안 계속해서 교반하였다. TLC 모니터링은 완료가 완전히 사라졌음을 보여주었다. 혼합물을 100 mL의 물로 희석한 다음, 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 포화 염 용액 (100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KH13-3 (3.5.0 g, 16.3 mmol, 수율: 74.6%)를 얻었다. 1 H NMR(DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 10.96 (br s, 1H), 7.98 (s, 1H), 3.25 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.89 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.50 (td, J = 1.6, 3.5 Hz, 1H), 2.06 (quin, J = 7.6 Hz, 2H).
화합물 KH13-4: 화합물 KH13-3 (3.50 g, 16.3 mmol, 1 eq) 및 SnCl2ㆍ2H2O (18.4 g, 81.9 mmol, 5 eq)을 메탄올 (10 mL)에 용해시키고, 70℃에서 7시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링이 원료가 완전히 사라졌음을 모니터링한 후, 반응 용매를 회전식 증발로 직접 건조시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 용해시킨 다음, 포화 중탄산나트륨 용액을 첨가한 다음, 고체를 수득하였다. 반응 용액을 여과하여 고체를 제거하였다. 여액을 수집하고, 유기상을 분리하고, 포화 염 용액 (100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켰다. 잔류물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하여 황색 고체 KH13-4 (2.70 g, 14.7 mmol, 수율: 89.7%)을 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 8.12 (s, 1H), 6.39 (s, 1H), 4.48 (s, 2H), 2.75 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.04 - 1.89 (m, 2H).
화합물 KH13-5: 화합물 KH13-4 (2.50 g, 13.6 mmol, 1 eq), 화합물 KH07-6a (3.21 g, 13.6 mmol, 1 eq) 및 탄산세슘 (13.3 g, 40.8 mmol, 3 eq)을 DMF (30 mL)에 첨가하고, 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1) 모니터링은 완료가 완전히 사라졌음을 보여주었다. 반응 용액을 100 mL의 물로 희석한 후, 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출한 다음, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 3/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KH13-5 (3.70 g, 9.57 mmol, 수율: 70.3%, 순도: 99.0%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 383.8 [M+H]+. 1 H NMR(DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 8.54 - 8.35 (m, 1H), 6.70 - 6.51 (m, 1H), 3.59 (s, 2H), 3.41 (spt, J = 6.8 Hz, 1H), 2.76 (td, J = 7.6, 17.5 Hz, 4H), 2.19 - 2.06 (m, 2H), 1.25 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KH13-6: 조작은 화합물 KH11-2의 합성과 동일하였고, 갈색 고체 KH13-6 (4.30 g, 미정제 생성물)을 수득하였다. MS (ESI) m/z: 430.3 [M+H]+.
화합물 KH13-7: 조작은 화합물 KH11-3의 합성과 동일하였고, 희미한 황색 고체 KH13-7 (1.20 g, 3.72 mmol, 수율: 38.0%)을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 1/1)를 통한 정제로 얻었다. MS (ESI) m/z: 320.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 9.74 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.22 - 4.80 (m, 2H), 3.27 (spt, J = 6.8 Hz, 1H), 2.64 (br t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.59 - 2.51 (m, 2H), 1.95 (br dd, J = 7.6, 15.1 Hz, 2H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 17 화합물 KH13의 합성
Figure pct00058
화합물 KH13-8: 조작은 KH07-11의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 (431.3 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 487.2[M+H]+.
화합물 KH13: 조작은 KH07의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KH13 (354.2 mg, 미정제 생성물)을 수득하였다. 120 mg의 고체를 취하고, 분취 HPLC로 정제하여 43 mg의 백색 고체를 얻었다. MS (ESI) m/z: 441.2 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): 13.07 (s, 1H), 10.06 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 3.25 - 3.34 (m, 1H), 2.84 (t, 2H, J = 8.0Hz), 2.68 (t, 2H, J = 8.0Hz), 2.01 (t, 2H, J = 8.0Hz), 1.15 (d, 6H, J = 4.0Hz).
실시예 18 화합물 KH14의 합성
Figure pct00059
화합물 KH14-1: 조작은 KH08-1의 합성과 동일하였고, 황색 고체 (251.4 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 460.1 [M+H]+.
화합물 KH14: 조작은 KH08의 합성과 동일하였고, 백색 고체 KH14 (6 mg, 수율: 11.1%)을 수득하였다. MS (ESI) m/z: 416.2 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): 12.40 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.63 (s,1H), 7.46 (s, 1H), 3.27 - 3.30 (m, 1H), 2.83 (t, 2H, J=8.0Hz), 2.68 (t, 2H, J=8.0Hz), 2.0 (t, 2H, J=8.0Hz), 1.15 (d, 6H, J=4.0Hz).
실시예 19 주요 중간체 KH15-8의 합성
Figure pct00060
화합물 KH15-2: 수소화나트륨 (7.49 g, 187 mmol, 순도 60.0%, 3.00 eq)을 테트라하이드로푸란 (100 mL)에 용해시키고, KH15-1 (10.0 g, 62.4 mmol, 9.43 ml, 1.00 eq) 및 CD3I (19.0 g)을 0℃에서 상기 반응 시스템에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 계속 교반한 다음, 25℃로 천천히 가열하고, 11.5시간 동안 교반하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 용액을 200 mL의 빙수에 부었고, 에틸 아세테이트 (100 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 황색 오일성 물질 KH15-2 (8.35 g, 42.9 mmol, 수율: 68.8%)을 얻었다. 고체를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다.
화합물 KH15-3: 화합물 KH15-2 (8.95 g, 46.0 mmol, 1.00 eq)을 물 (20 mL)에 용해시키고, 수산화나트륨 (6.27 g, 111 mmol, 2.42 eq)을 전술한 반응 용액에 첨가하였다. 첨가 후, 반응을 3시간 동안 100℃에서 수행하였다. TLC 모니터링은 새로운 스폿이 형성되었음을 보여주었다. pH를 0℃에서 6N 염산으로 2로 조정한 다음, 반응 용액을 디클로로메탄 (100 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하여 무색 오일 KH15-3 (5.02 g, 미정제 생성물)을 얻었다.
화합물 KH15-4: 화합물 KH15-3 (5.00 g, 36.1 mmol, 1.00 eq)을 200℃로 가열하고, 0.5시간 동안 교반하였다. TLC 모니터링이 새로운 화합물이 형성되었음을 보여준 후, 미정제 생성물을 증류 (140℃, 1 atm)하여 황색 오일 KH15-4 (2.52 g, 26.7 mmol, 수율: 73.9%)을 얻었다.
화합물 KH15-5: 화합물 KH15-4 (2.50 g, 28.3 mmol, 1.00 eq), 화합물 KH15-4a (5.49 g, 28.3 mmol, 1.00 eq), 질산은 (1.64 g, 9.65 mmol, 0.34 eq), 및 K2S2O8 (11.5 g, 42.5 mmol, 8.52 mL, 1.50 eq)을 디클로로메탄 (50 mL) 및 물 (50 mL)에 첨가하고, 25℃의 외부 온도에서 12시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1) 모니터링은 새로운 스폿이 형성되었음을 보여주었다. 반응 용액을 아황산나트륨 용액으로 켄칭하고, 디클로로메탄 (100 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)를 통해 정제하여 미정제 생성물을 얻은 다음, 미정제 생성물을 분취 HPLC로 정제하여 황색 오일성 물질 KH15-5 (2.60 g, 10.7 mmol, 수율: 37.9%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 243.1 [M+H]+.
화합물 KH15-6: 화합물 KH15-5 (2.60 g, 10.7 mmol, 1.00 eq), 화합물 KH09-3a (1.92 g, 10.7 mmol, 1.00 eq) 및 탄산세슘 (10.5 g, 32.29 mmol, 3.00 eq)을 DMF (26 mL)에 첨가하고, 80℃의 외부 온도에서 10시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료가 이미 완전히 반응되었음을 보여주었다. 에틸 아세테이트 (100 mL) 및 물 (100 mL)을 추출 및 분리를 위해 반응 용액에 첨가하였다. 유기상을 수집하였다. 포화 염 용액 (100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 1/0 내지 5/1)를 통해 정제하여 황색 오일성 물질 KH15-6 (2.7 0 g, 7.05 mmol, 수율: 65.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 384.1 [M+H]+.
화합물 KH15-7: 조작은 화합물 KH11-2의 조작과 동일하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 5/1)를 통해 정제하여 백색 고체 KH15-7 (3.00 g, 6.97 mmol, 수율: 98.9%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 429.9 [M+H]+.
화합물 KH15-8: 화합물 KH15-7 (3.00 g, 6.97 mmol, 1.00 eq)을 테트라하이드로푸란 (30 mL)에 용해시키고, 과산화수소 (1.66 g, 14.6 mmol, 1.41 mL, 순도 30.0%, 2.10 eq)을 0℃에서 반응에 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 신규한 생성물 MS가 발견되었다. 반응은 포화 아황산나트륨 용액 (50 mL)로 종료되었고, 디클로로메탄 (50 mL × 3)으로 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)를 통해 정제하여 희미한 황색 고체 KH15-8 (1.20 g, 3.73 mmol, 수율: 53.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 320.1 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 9.91 - 9.78 (m, 1H), 8.01 - 7.90 (m, 1H), 6.70 - 6.56 (m, 2H), 5.56 - 5.42 (m, 2H), 3.25 - 3.19 (m, 1H).
실시예 20 화합물 KH15의 합성
Figure pct00061
화합물 KH15-9: 조작은 KH07-11의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 (430 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 487.2[M+H]+.
화합물 KH15: 조작은 KH07의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KH15 (320 mg, 미정제 생성물)을 수득하였다. 100 mg의 고체를 취하고, 분취 HPLC로 정제하여 6 mg의 백색 고체를 얻었다. MS (ESI) m/z: 441.2 [M+H]+.
실시예 21 화합물 KH16의 합성
Figure pct00062
화합물 KH16-1: 조작은 KH08-1의 합성과 동일하였고, 황색 고체 (200 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 460.1 [M+H]+.
화합물 KH16: 조작은 KH08의 합성과 동일하였고, 백색 고체 KH16 (11 mg, 수율: 21.2%)을 수득하였다. MS (ESI) m/z: 416.2 [M+H]+.
실시예 22 주요 중간체 KH17-5의 합성
Figure pct00063
화합물 KH17-2: 화합물 KH17-1 (50.0 g, 238 mmol, 1 eq) 및 나트륨 설파이드 (27.8 g, 357 mmol, 14.9 mL, 1.5 eq)을 DMF (500 mL)에 첨가하고, 5시간 동안 25℃에서 교반하였다. LCMS 모니터링은 화합물 KH17-1이 이미 사라졌음을 보여주었다. 반응 용액을 500 mL의 빙수에 부었고, pH를 염산 (2N)로 5로 조정하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (200 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (300 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고 잔류물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하여 적색 고체 KH17-2 (43.0 g, 미정제 생성물)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 224.1 [M+H]+.
화합물 KH17-3: 화합물 KH17-2 (40.0 g, 178 mmol, 1 eq) 및 Zn (58.3 g, 892 mmol, 5 eq)을 테트라하이드로푸란 (1.5 L)에 첨가하였다. 아세트산 (21.4 g, 357 mmol, 20.4mL, 2 eq)을 0℃에서 적가 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 10시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 완료가 완전히 사라졌음을 보여주었다. 반응 용액을 직접적으로 여과하고, 여액을 수집하고, 회전식 증발로 건조시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 메틸 tert-부틸 에테르로 고체 분말로 펄프화하여 백색 고체 KH17-3 (220 g, 108 mmol, 수율: 60.8%, 순도: 95.8%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 194.0 [M+H]+.
화합물 KH17-4: 화합물 KH17-3 (16.0 g, 82.4 mmol, 1 eq), 화합물 KH07-6a (16.1 g, 57.7 mmol, 0.7 eq) 및 탄산세슘 (40.2 g, 123 mmol, 1.5 eq)을 DMF (200 mL)에 첨가하고, 10시간 동안 교반하고 25℃에서 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료가 이미 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 용액을 200 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트 (200 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 포화 염 용액 (200 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 메틸 tert-부틸 에테르로 고체 분말로 펄프화하여 황색 고체 KH17-4 (2.60 g, 10.7 mmol, 수율: 37.9%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 394.0 [M+H]+.
화합물 KH17-5: 화합물 KH17-4 (5.00 g, 12.7 mmol, 1 eq)을 물 (25.0 mL) 및 디옥산 (100 mL)에 용해시킨 후, 수산화칼륨 (2.85 g, 50.8 mmol, 4 eq), Pd2(dba)3 (1.16 g, 1.27 mmol, 0.1 eq) 및 t-Buxphos (540 mg, 1.27 mmol, 0.1 eq)을 혼합물에 첨가하고, 90℃에서 2시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료가 이미 완전히 사라졌음을 보여준 후, 반응 용액을 1M 희석된 염산으로 pH 5로 조정한 다음, 100 mL의 물을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 (100 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 포화 염 용액 (100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 3/1)를 통해 정제하여 회백색 고체 KH17-5 (1.20 g, 3.48 mmol, 수율: 27.3%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 330.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 9.99 (br s, 1H), 8.10 - 7.90 (m, 1H), 6.83 - 6.64 (m, 2H), 6.14 - 5.88 (m, 2H), 3.22 (spt, J = 6.8 Hz, 1H), 1.04 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 23 화합물 KH17의 합성
Figure pct00064
화합물 KH17-6: 조작은 KH07-11의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 (390 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 497.1[M+H]+.
화합물 KH17: 조작은 KH07의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KH17 (140 mg, 미정제 생성물)을 수득하였다. 40 mg의 고체를 취하고, 분취 HPLC로 정제하여 5 mg의 희미한 황색 고체를 얻었다, 수율: 약 12.5%. MS (ESI) m/z: 451.1 [M+H]+.
실시예 24 화합물 KH18의 합성
Figure pct00065
화합물 KH18-1: 조작은 KH08-1의 합성과 동일하였고, 갈색 고체 (102.4 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 470.1 [M+H]+.
화합물 KH18: 조작은 KH08의 합성과 동일하였고, 백색 고체 KH18 (18 mg, 수율: 19.8%)을 수득하였다. MS (ESI) m/z: 426.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): 12.50 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.94 (s, 2H), 7.73 (s, 1H), 3.20-3.27 (m, 1H), 1.04 (d, 6H, J=4.0Hz).
실시예 25 화합물 KHE001의 합성
Figure pct00066
화합물 KHE001 -2: 화합물 KHE001 -1 (20.0 g, 87.8 mmol, 11.2 mL, 1.00 eq) 및 KHE001 -1a (14.8 g, 87.8 mmol, 1.00 eq)을 톨루엔 (8 mL)에 용해시키고, 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드 (KHMDS) (1 M, 92.2 mL, 1.05 eq)을 0℃에서 천천히 적가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반한 후, TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1) 모니터링은 원료의 잔여량이 5% 미만이고 새로운 증가된 극성 스폿이 형성되었음을 보여주었다. 반응을 빙수 (500 mL)에서 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 포화 염 용액 (100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 5/1)를 통해 정제하여 황색 오일성 물질 KHE001 -2 (17.1 g, 수율: 54.2%)을 얻었다.
화합물 KHE001 -3: 화합물 KHE001 -2 (17.0 g, 47.3 mmol, 1.00 eq)을 염산 (20 mL, 순도 36%) 및 아세트산 (80 mL)에 용해시키고, 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었고 새로운 스폿 (Rf = 0.60)이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 회전식 증발로 감압 하에서 직접 건조시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨 용액 (50 mL × 2)로 세척하였다. 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 용매를 제거하였다. 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1)로 정제하여 백색 고체 KHE001 -3 (9.70 g, 수율: 68.0%)을 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.62 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 5.6, 8.8 Hz, 2H), 7.04 - 6.97 (m, 2H), 4.22 (s, 2H).
화합물 KHE001 -4: 화합물 KHE001 -3 (9.00 g, 29.9 mmol, 1.00 eq), KHE001-3a (6.38 g, 35.8 mmol, 1.20 eq) 및 탄산세슘 (29.2 g, 89.5 mmol, 3.00 eq)을 디메틸포름아미드 (90 mL)에 용해시켰다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고 80℃에서 질소의 보호 하에 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료 KHE001 -3가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 표적 생성물 신호는 주요 피크이다. 에틸 아세테이트 (300 mL) 및 물 (100 mL)을 추출 및 분리를 위해 반응 용액에 첨가하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 용매를 제거하여 미정제 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 5/1)로 정제하여 황색 고체 KHE001 -4 (4.50 g, 수율: 34.0%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 443.8 [M+H]+.
화합물 KHE001 -5: 화합물 KHE001 -4 (4.50 g, 10.1 mmol, 1.0 eq), Pin2B2 (5.16 g, 20.3 mmol, 2.00 eq), Pd(dppf)Cl2ㆍCH2Cl2 (415 mg, 508 μmol, 0.05 eq) 및 아세트산칼륨 (1.99 g, 20.3 mmol, 2.00 eq)을 디옥산 (45 mL)에 용해시켰다. 반응 시스템을 질소의 보호 하에 교반하였다. 4시간 동안 110℃에서 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료 KHE001 -4가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 표적 생성물 신호는 주요 피크이다. 반응 시스템을 회전식 증발로 직접 건조시켜 갈색 오일성 물질 KHE001 -5 (14.0 g, 혼합물)을 얻었고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 490.1 [M+H]+.
화합물 KHE001 -6: 화합물 KHE001 -5 (14.0 g, 28.6 mmol, 1.00 eq)을 테트라하이드로푸란 (70 mL) 및 물 (70 mL)에 용해시키고, 나트륨 퍼보레이트 (NaBO3ㆍ4H2O) (13.2 g, 85.7 mmol, 3.00 eq)을 반응에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1, Rf = 0.15) 모니터링은 반응이 이미 완료되었음을 보여주었다. 반응을 물 (150 mL)로 희석하고, 25℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 세척하였다. 조합된 여액을 에틸 아세테이트 (100 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 포화 염 용액 (300 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 용매를 제거하여 미정제 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 0/1)를 통해 정제하여 갈색 고체 KHE001-6 (1.11 g, 수율: 28.8%, 순도: 94.2%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 380.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 10.10-10.05 (m, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.30-7.20 (m, 2H), 7.14-7.02 (m, 2H), 6.66 (s, 2H), 5.54 (br s, 2H), 3.99-3.91 (m, 2H).
화합물 KHE001 -7: 반응 용액 A: 화합물 KHE001 -6 (0.5014 g, 1.322 mmol)을 26 mL의 물에 첨가하였다. 14 mL의 농축 염산을 0℃에서 첨가하였다. 아질산나트륨 (0.1218 g, 1.765 mmol)을 4 mL의 물에 용해시키고, 반응 용액에 천천히 적가 첨가하고, 0℃에서 1.5시간 동안 교반하여 용액이 되었다. 반응 용액 B: 화합물 KHE001 -6a (0.2381 g, 1.526 mmol)을 40 mL의 물에 첨가하였다. 14 mL의 피리딘을 0℃에서 첨가하였다. 이 온도에서 1.5시간 동안 계속 교반한 다음, 반응 용액 A를 반응 용액 B에 0℃에서 빠르게 부어서 오렌지색 고체를 형성하였다. 온도를 실온으로 천천히 상승시켜 반응을 밤새 계속하였다. TLC 모니터링이 반응의 완료를 보여준 후, 고체를 여과하고, 50 mL의 물 및 석유 에테르로 각각 3회 세척하였다. 오렌지색 고체 KHE001 -7 (600 mg, 수율: 82.9%, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 다음 단계를 위해 정제 없이 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 547.1 [M+H]+.
화합물 KHE001: 화합물 KHE001 -7 (600 mg, 1.097 mmol) 및 아세트산나트륨 (0.9035 g, 11.018 mmol)을 단일-목 병에 넣고, 아세트산 (12 mL)로 N2의 보호 하에 용해시켰다. 반응을 3시간 동안 120℃의 온도에서 수행하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응을 중단하였다. 반응 용액을 0℃로 냉각시키고, 100 mL의 물을 첨가한 다음, 다량의 고체는 침전되었고, 이를 직접적으로 여과하고, 고체를 50 mL의 물 및 석유 에테르 각각으로 3회 세척하였다. 오렌지색 고체 (560 mg, 미정제 생성물)을 수집하였다. 100 mg의 미정제 생성물을 분취 HPLC로 정제하여 회백색 고체 화합물 KHE001 (21.8 mg, 23.8%)을 얻었다. MS (ESI, m/z): 500.9 [M+1]+. 1 H NMR ( DMSO -d6, 400 MHz ): δ 13.25 (s, 1H), 10.28 (s, 1H), 8.08 (s, 2H), 7.74 (s, 2H), 7.22-7.24 (m, 2H), 7.07-7.11 (m, 2H), 3.39 (s, 2H).
실시예 26 화합물 KHE002의 합성
Figure pct00067
화합물 KHE002 -1: 미정제 화합물 KHE001 (460 mg, 0.918mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하고, 용해된 by 아세트산 (15 mL), 및 그 다음 농축 염산 (5 mL)을 반응에 적가하였다. 4시간 동안 90℃에서 반응 후, TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 증가된 극성 스폿이 형성되었고, 반응을 중단하였다. 반응 용액을 회전식 증발로 직접 건조시키고, 반응 pH를 포화 탄산나트륨 용액으로 9-10으로 조정한 다음, 반응 용액을 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 추출하였다. 수성상을 수집하고, 수성상의 pH을 3-4로 조정한 다음, 수성상을 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 유기상을 농축시켜 황색 고체 KHE002 -1 (300 mg, 62.8%)을 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 KHE002: 화합물 KHE002 -1 (300 mg, 0.577 mmol) 및 수산화나트륨 (0.0985 g, 2.462 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 물 (40 mL)로 용해시킨 다음, 반응 용액에 티오글리콜산 (1.0831 g, 11.773 mmol)을 첨가하고, 120℃에서 3시간 동안 반응시켰다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 감소된 극성 스폿이 형성되고, 반응을 중단하였다. 포화 탄산나트륨 용액을 첨가하여 반응 시스템의 pH를 중성으로 조정한 다음, 반응 시스템을 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 분취 HPLC로 정제하여 백색 고체 KHE002 (46.7 mg, 17.0%)을 얻었다. MS (ESI, m/z): 476.3[M+1]+. 1 H NMR ( DMSO - d6 , 400 MHz ): δ 12.49 (s, 1H), 10.25 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.69 (s, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.23-7.24 (m, 2H), 7.07-7.12 (m, 1H), 3.98 (m, 2H).
실시예 27 화합물 KHE003의 합성
Figure pct00068
화합물 KHE003 -2: KHE003 -1a (10.0 g, 42.5 mmol, 1.60 eq) 및 화합물 KHE003-1 (5.00 g, 26.6 mmol, 1.00 eq)을 피리딘 (50 mL)에 용해시키고, 130℃에서 5시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트= 10/1, Rf = 0.52) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응을 20℃로 냉각시키고, 물 (500 mL)로 희석하였다. 에틸 아세테이트 (200 mL × 2)로 추출하였다. 조합된 유기상을 포화 염 용액 (300 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 용매를 제거하여 미정제 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 5/1)로 정제하여 황색 오일성 물질 KHE003 -2 (2.40 g, 수율: 23.2%)을 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.51 - 8.47 (m, 1H), 7.73 - 7.70 (m, 2H), 3.41 (spt, J = 6.8 Hz, 1H), 1.19 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE003 -3: 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (377 mg, 5.43 mmol, 1.50 eq), 화합물 KHE003 -2 (1.40 g, 3.62 mmol, 1.00 eq) 및 중탄산나트륨 (304 mg, 3.62 mmol, 1.00 eq)을 에탄올 (20 mL)에 첨가하고, 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트= 2/1, Rf = 0.11) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응을 회전식 증발로 직접 건조시켜 미정제 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 20/1)로 정제하여 황색 오일성 물질 KHE003 -3 (1.00 g, 수율: 65.8%)을 얻었다.
화합물 KHE003 -4: 트리포스겐 (1.61 g, 5.43 mmol, 1.20 eq), 화합물 KHE017-3 (1.90 g, 4.52 mmol, 1.00 eq) 및 DIEA (2.92 g, 22.6 mmol, 3.94 mL, 5.00 eq)을 질소의 보호 하에 0℃에서 테트라하이드로푸란 (20 mL)에 용해시키고, 0℃에서 0.5시간 동안 계속 교반한 다음, 20℃로 가열하고, 12시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트= 1/1, Rf = 0.22) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 물 (500 mL)로 희석하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (300 mL) 및 물 (150 mL)을 추출 및 분리를 위해 반응 용액에 첨가하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 용매를 제거하여 미정제 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 0/1)로 정제하여 황색 고체 KHE003 -4 (1.30 g, 수율: 64.4%)을 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 13.02 (br s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.05 (s, 2H), 3.42-3.40 (m, 1H), 1.13 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE003 -5: 팔라듐 아세테이트 (60.4 mg, 269 μmol, 0.10 eq), 화합물 KHE003 -4 (1.20 g, 2.69 mmol, 1 eq), Pin2B2 (6.83 g, 26.9 mmol, 10.0 eq) 및 아세트산칼륨 (792 mg, 8.07 mmol, 3.00 eq)을 질소의 보호 하에 DMF (10 mL)에 첨가하고, 90℃에서 10시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 20℃로 냉각한 후, 반응 용액을 물 (100 mL)을 천천히 첨가하고, 에틸 아세테이트 (30 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 포화 염 용액 (100 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 유기 용매를 회전식 증발로 건조시켜 황색 오일성 물질 KHE003-5 (2.00 g, 혼합물)을 얻었고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. MS (ESI) m/z = 493.0 [M+1]+.
화합물 KHE003: 화합물 KHE003 -5 (2.00 g, 4.06 mmol, 1.00 eq)을 (10 mL) 및 물 (10 mL)에 용해시키고 테트라하이드로푸란, 및 그 다음 나트륨 퍼보레이트 (NaBO3ㆍ4H2O) (1.87 g, 12.2 mmol, 3.00 eq)을 반응에 첨가하였다. 반응을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (100 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과한 다음, 유기상을 회전식 증발로 건조시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체 KHE003 (154 mg, 수율: 14.9%, 및 순도 97.0%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 383.1 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 10.12 (br s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.97 (s, 2H), 3.27 (br s, 1H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 28 화합물 KHE004의 합성
Figure pct00069
화합물 KHE004 -2: KHE001 -3a (7.56 g, 42.5 mmol, 1.00 eq), 화합물 KHE004-1 (10.0 g, 42.5 mmol, 1.00 eq) 및 탄산칼륨 (11.7 g, 84.9 mmol, 2.00 eq)을 DMF (100mL)에 첨가하고, 80℃에서 3시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 20℃로 냉각한 후, 반응 용액을 물 (200 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (100 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 2/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KHE004 -2 (12.0 g, 수율: 75.0%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 378.0 [M+1]+.
화합물 KHE004 -3: 화합물 KHE004 -2 (5.00 g, 13.3 mmol) 및 브로모아세토니트릴 (KHE004 -2a) (11.9 g, 99.5 mmol)을 MeCN (50 mL)에 용해시킨 다음, 요오드화나트륨 (5.96 g, 39.8 mmol) 및 탄산칼륨 (5.50 g, 39.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100mL 밀봉된 튜브에서 100℃로 가열하고, 48시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1, Rf = 0.22) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 회전식 증발로 직접 건조시키고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 2/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KHE004 -3 (4.00 g, 수율: 72.5%)을 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.72 (s, 1H), 6.92 (s, 2H), 6.77 (br t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.41 - 4.34 (m, 1H), 4.38 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 1.14 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE004 -4: 화합물 KHE004 -3 (4.00 g, 9.61 mmol) 및 트리에틸아민 (1.02 g, 10.1 mmol, 1.40 mL)을 디클로로메탄 (40 mL)에 용해시킨 다음, Boc2O (2.20 g, 10.1 mmol, 2.32 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1, Rf = 0.62) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 20℃로 냉각시키고, 물 (200 mL)을 첨천히 첨가하였다. 디클로로메탄 (40 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 포화 염 용액 (200 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 황색 오일성 물질 KHE004 -4 (4.80 g, 수율: 96.7%)을 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.78 (s, 1H), 7.65 (s, 2H), 4.81 (s, 2H), 3.38 - 3.33 (m, 1H), 1.46 - 1.41 (m, 10H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE004 -5: 화합물 KHE004 -4 (4.80 g, 9.30 mmol) 및 아세트산나트륨 (6.10 g, 74.4 mmol)을 DMF (40 mL)에 용해시키고, 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (5.17 g, 74.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1, Rf = 0.39) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 실온으로 냉각한 후, 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL) 및 물 (250 mL)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 0/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KHE004-5 (4.60 g, 수율: 90.1%)를 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.78 (s, 1H), 7.65 (s, 2H), 4.81 (s, 2H), 3.38 - 3.33 (m, 1H), 1.46 - 1.41 (m, 9H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE004 -6: N,N'-디석신이미딜 카보네이트 (DSC) (2.67 g, 10.4 mmol), 화합물 KHE004 -5 (4.40 g, 8.01 mmol) 및 트리에틸아민 (3.05 g, 30.1 mmol, 4.19 mL)을 DMF (10 mL)에 용해시키고, 80℃에서 1시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1, Rf = 0.07) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. KHE004 -6 신호을 LCMS로 모니터링하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (50 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 황색 고체 KHE004 -6 (4.20 g, 혼합물)를 얻었고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 576.0 [M+1]+.
화합물 KHE004 -7: 팔라듐 아세테이트 (39.0 mg, 174 μmol, 0.10 eq), 화합물 KHE004 -6 (1.00 g, 1.74 mmol, 1.00 eq), 아세트산칼륨 (512 mg, 5.22 mmol, 3.00 eq) 및 Pin2B2 (4.41 g, 17.4 mmol, 10.0 eq)을 DMF (15 mL)에 용해시키고, 100℃에서 12시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. 표적 생성물 KHE004-7을 LCMS로 모니터링하였다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (20 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 황색 고체 KHE004 -7 (4.00 g, 미정제 생성물)를 얻었다. 미정제 생성물을 다음 반응에 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 622.3 [M+1]+.
화합물 KHE004 -8: 화합물 KHE004 -7 (4.00 g, 6.43 mmol, 1.00 eq)을 테트라하이드로푸란 (20 mL) 및 물 (20 mL)에 용해시킨 다음, 나트륨 퍼보레이트 (NaBO3ㆍ4H2O) (2.97 g, 19.3 mmol, 3.00 eq)을 반응에 첨가하고, 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (100 mL)로 분리하였다. 유기상을 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 황색 고체 KHE004 -8 (2.00 g, 미정제 생성물)를 얻었다. 미정제 생성물을 다음 반응에 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 514.0 [M+1]+.
화합물 KHE004: KHE004 -8 (2.00 g, 3.90 mmol, 1.00 eq)을 디클로로메탄 (20 mL)에 용해시키고, 염화수소의 에틸 아세테이트 용액 (4 M, 10 mL, 10.3 eq)을 반응 용액에 첨가하고, 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 회전식 증발로 직접 건조시키고, 분취 HPLC로 정제하여 갈색 고체 KHE004 (19.5 mg, 수율: 1.16%, 순도 96.3%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 412.0 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 12.42 (br s, 1H), 9.89 (br s, 1H), 7.95 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.68 - 6.55 (m, 1H), 4.29 (s, 2H), 3.32 - 3.23 (m, 2H), 1.11 (s, 6H).
실시예 29 화합물 KHE005의 합성
Figure pct00070
화합물 KHE005 -1: 팔라듐 아세테이트 (238 mg, 1.06 mmol, 0.10 eq), 화합물 KHE004-2 (4.00 g, 10.6 mmol, 1.00 eq), Pin2B2 (27.0 g, 106 mmol, 10.0 eq) 및 아세트산칼륨 (3.12 g, 31.8 mmol, 3.00 eq)을 DMF (100 mL)에 용해시키고, 90℃에서 12시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었고, 표적 피크는 명백하였다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (50 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 황색 고체 KHE005 -1 (4.00 g, 9.43 mmol, 미정제 생성물)를 얻었다. 미정제 생성물을 다음 반응에 직접 사용하였다. MS (ESI) m/z: 424.1 [M+H]+.
화합물 KHE005 -2: 화합물 KHE005 -1 (4.00 g, 9.43 mmol, 1.00 eq)을 테트라하이드로푸란 (10 mL) 및 물 (10 mL)에 용해시킨 다음, 나트륨 퍼보레이트 (NaBO3ㆍ4H2O) (4.35 g, 28.3 mmol, 3.00 eq)을 반응에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었고, 표적 피크는 명백하였다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (20 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트= 20/1 내지 5:/1)를 통해 정제하여 자주색 오일성 물질 KHE005 -2 (1.40 g, 수율: 42.0%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 314.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 10.04 (s, 1 H), 7.97-7.99 (m, 3 H), 3.27 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.11 (s, 3 H), 1.09 (s, 3 H).
화합물 KHE005 -3: 화합물 KHE005 -2 (800 mg, 2.55 mmol, 1.00 eq)을 농축 염산 (12.0 M, 20 mL, 94.3 eq)에 첨가하였다. 반응을 -5℃로 냉각시켰다. 아질산나트륨 (1.05 g, 15.3 mmol, 6.00 eq)을 물 (4.00 mL)에 용해시킨 다음, 전술한 용액에 천천히 적가하였다. 격렬하게 교반하였다. 반응 온도를 -5℃ 내지 0℃에서 유지하였다. 0.5시간 동안 반응 후, 요오드화칼륨 (6.34 g, 38.2 mmol, 15.0 eq)을 물 (6.00 mL)에 용해시킨 다음, 전술한 용액에 천천히 적가하였다. 격렬하게 교반하였다. 반응 온도를 계속해서 -5℃ 내지 0℃에서 유지하였다. 첨가 후, 반응 용액을 25℃로 가열하고, 12시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (100 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하였다. 포화 아황산나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 0/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KHE005-3 (546 mg, 수율: 50.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 424.9 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 10.05 (br s, 1 H) 7.98 (s, 2 H) 7.98 (s, 1 H) 3.27 (d, J = 6.8 Hz, 1 H) 1.11 (s, 3 H) 1.10 (s, 3 H).
화합물 KHE005 -4: 질소의 보호 하에, Pd(dppf)Cl2 (93 mg, 0.127 mmol, 0.10 eq), 화합물 KHE005 -3 (540 mg, 1.27 mmol, 1.00 eq), Pin2B2 (3.227 g, 12.7 mmol, 10.0 eq) 및 아세트산칼륨 (374 mg, 3.81 mmol, 3.00 eq)을 디옥산 (7 mL)에 용해시키고, 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 회전식 증발로 직접 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 20/1)를 통해 정제하여 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 분취 HPLC로 정제하여 적색 고체 붕산 생성물 KHE005 -4 (400 mg, 수율: 92.0%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 343.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 10.05 (s, 1 H), 8.47 (s, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 3.27 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.10 (s, 3 H),1.08 (s, 3 H).
화합물 KHE005: 질소의 보호 하에, Pd(dppf)Cl2 (51.2 mg, 0.07 mmol, 0.06 eq), 화합물 KHE005 -4 (400 mg, 1.17 mmol, 1.00 eq), KHE005 -4a (224 mg, 1.17 mmol, 1.00 eq) 및 인산칼륨 (495 mg, 2.33 mmol, 2.00 eq)을 디옥산 (2.5 mL) 및 물 (2.5 mL)의 시스템에 첨가하고, 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (10 mL) 및 물 (80 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 20/1)를 통해 정제하여 미정제 생성물을 얻었고, 이것을 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체 KHE005 -5 (101 mg, 수율: 21.0%, 순도 99.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 410.1 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 12.69 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 12.23 (s, 1H), 10.07 (br s, 1H), 8.04-7.97 (m, 3H), 3.36-3.21 (m, 1H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 30 화합물 KHE006의 합성
Figure pct00071
화합물 KHE006 -1: 화합물 KHE005 -4a (3.00 g, 15.6 mmol, 1.00 eq)을 아세토니트릴 (45 mL)에 용해시킨 다음, 반응에 KHE006 -1a (8.14 g, 40.0 mmol, 9.89 mL, 2.56 eq)을 첨가하고, 82℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 요오드화메틸 (2.71 g, 19.1 mmol, 1.19 mL, 1.22 eq)을 상기 반응 시스템에 첨가하였다. 24시간 동안 교반한 다음, 반응에 요오드화메틸 (1.11 g, 7.81 mmol, 486 μL, 0.50 eq)을 계속해서 첨가하였다. 24시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1, Rf = 0.55)는 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (50 mL)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시키고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 0/1)를 통해 정제하여 황색 고체 KHE006 -1 (2.00 g, 수율: 62.1%)을 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 3.44 (s, 3 H), 12.49 (br s, 1 H).
화합물 KHE006: 질소의 보호 하에, Pd(dppf)Cl2 (89.6 mg, 0.122 mmol, 0.06 eq), KHE005 -4 (700 mg, 2.04 mmol, 1.00 eq), KHE006 -1 (631 mg, 3.06 mmol, 1.50 eq) 및 인산칼륨 (866 mg, 4.08 mmol, 2.00 eq)을 디옥산 (2.5 mL) 및 물 (2.5 mL)의 시스템에 용해시키고, 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (10 mL) 및 물 (80 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 분취 HPLC로 정제하여 희미한 황색 고체 KHE006 (10.4 mg, 수율: 1.11%, 순도 91.9%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 424.1 [M+1]+.
실시예 31 화합물 KHE007의 합성
Figure pct00072
화합물 KHE007 -2: 화합물 KHE007 -1 (30.0 g, 155 mmol, 1.00 eq)을 물 (300 mL)에 첨가하였다. KHE007 -1a (26.5 g, 186 mmol, 26.2 mL, 1.20 eq), 질산은 (5.27 g, 31.0 mmol, 0.20 eq) 및 트리플루오로아세트산 (8.84 g, 77.6 mmol, 5.74 mL, 0.50 eq)을 상기 반응 시스템에 첨가하였다. 혼합물을 70℃로 가열하고, 교반한 다음, 과황산암모늄 (NH4)2S2O8 (70.8 g, 310 mmol, 2.00 eq)을 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 반응을 12시간 동안 계속하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0, Rf = 0.12)는 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 20℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (100 mL)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)로 정제하여 무색 오일성 물질 KHE007 -2 (24.4 g, 84.3 mmol, 수율: 54.3%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 291.2 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.88 (s, 1H), 2.74 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.81 (dt, J = 3.6, 7.2 Hz, 1H), 1.69-1.54 (m, 5H), 1.27-1.12 (m, 3H), 1.09-0.96 (m, 2H).
화합물 KHE007 -3: 화합물 KHE007 -2 (24.4 g, 84.3 mmol, 1.00 eq) 및 K2CO3 (23.3 g, 169 mmol, 2.00 eq)을 DMSO (200 mL)에 첨가?K고, 한편, KHE001 -3a (15.0 g, 84.3 mmol, 1.00 eq)을 상기 반응 시스템에 첨가하였다. 반응 용액을 60℃로 가열하고, 3시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1, Rf = 0.34)는 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 추출하고, 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (100 mL)로 분리하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)로 정제하여 무색 오일성 물질 KHE007 -3 (28.0 g, 64.9 mmol, 수율: 77.1%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 432.1 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.71 (s, 1H), 6.68 (s, 2H), 5.62 (s, 2H), 2.68-2.63 (m, 2H), 1.83-1.69 (m, 1H), 1.66-1.51 (m, 5H), 1.15-1.05 (m, 3H), 1.02-0.88 (m, 2H).
화합물 KHE007 -4: 화합물 KHE007 -3 (2.00 g, 4.64 mmol, 1.00 eq), 아세트산칼륨 (911 mg, 9.28 mmol, 2.00 eq) 및 Pin2B2 (2.36 g, 9.28 mmol, 2.00 eq)을 디옥산 (10 mL)에 첨가한 다음, Pd(dppf)Cl2ㆍCH2Cl2 (189 mg, 0.232 mmol, 0.05 eq)을 상기 반응 시스템에 첨가하였다. 반응 용액을 110℃로 가열하고, 4시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. LCMS 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (100 mL)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 갈색 고체 KHE026-4 (4.00 g, 미정제 생성물)를 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 478.1 [M+H]+.
화합물 KHE007 -5: 화합물 KHE007 -4 (4.00 g, 8.36 mmol, 1.00 eq)의 미정제 생성물을 테트라하이드로푸란 (20 mL) 및 물 (20 mL)에 용해시킨 다음, 나트륨 퍼보레이트 NaBO3ㆍ4H2O (3.86 g, 25.1 mmol, 3.00 eq)을 전술한 용액에 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 20℃에서 수행하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1, Rf = 0.15)는 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여액을 수집하고, 에틸 아세테이트 (50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 수집하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 0/1)로 정제하여 담황색 오일성 물질 (1.40 g)를 얻었고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 회색 고체 KHE007 -5 (1.23 g, 3.27 mmol, 수율: 72.0%, 순도: 97.8%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 368.1 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 9.74 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 6.65 (s, 2H), 5.51 (s, 2H), 2.94 (s, 1H), 1.62-1.41 (m, 4H), 0.68 (t, J = 7.2 Hz, 6H).
화합물 KHE007 -6: 반응 용액 A: 화합물 KHE007 -5 (0.5038 g, 1.369 mmol)을 물 (26 mL)에 용해시키고, 14 mL의 농축 염산을 0℃에서 첨가하였다. 칭량된 아질산나트륨 (0.1234 g, 1.788 mmol)을 4 mL의 물에 용해시키고, 반응 용액에 천천히 적가 첨가하였다. 반응 온도를 0 내지 5℃에서 유지하였다. 첨가 후, 반응 용액을 0℃에서 1.5시간 동안 계속 교반하여 용액을 얻었다. 반응 용액 B: 화합물 KHE001 -6a (0.2381 g, 1.526 mmol)을 40 mL의 물에 첨가하였다. 14 mL의 피리딘을 0℃에서 첨가하였다. 1.5시간 동안 이 온도에서 교반한 다음, 반응 용액 A를 0℃에서 반응 용액 B에 빠르게 부어서 오렌지색 고체를 형성하였다. 온도를 실온으로 천천히 상승시켜 반응을 밤새 계속하였다. TLC 모니터링이 반응의 완료를 보여준 후, 고체를 직접적으로 여과하고, 50 mL의 물 및 석유 에테르 각각으로 3회 세척하였다. 고체를 수집하여 오렌지색 고체 KHE007 -6 (700 mg, 95.6%, 미정제 생성물)를 얻었다. 미정제 생성물을 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 535.1 [M+H]+.
화합물 KHE007: 화합물 KHE007 -6 (700 mg, 1.310 mmol) 및 NaOAc (1.075 g, 13.110 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하고, 질소의 보호 하에 아세트산 (12 mL)로 용해시켰다. 반응을 3시간 동안 120℃의 온도에서 수행하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 반응을 중단하였다. 반응 용액을 0℃로 냉각시키고, 100 mL의 물을 첨가한 다음, 다량의 고체는 침전되었고, 이를 직접적으로 여과하고, 50 mL의 물 및 석유 에테르 각각으로 3회 세척하였다. 오렌지색 고체 (620 mg, 미정제 생성물)을 수집하고, 수득하였다. 120 mg의 미정제 생성물을 분취 HPLC로 정제하여 희미한 황색 고체 화합물 KHE007 (26.9 mg, 수율: 22.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 489.3 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.25 (s, 1H), 10.02 (s, 1H), 8.03 (s, 2H), 7.75 (s, 1H), 2.49 - 2.50 (m, 2H), 1.55-1.71 (m, 6H), 1.04 - 1.13 (m, 4H), 0.92 - 0.97 (m, 2H).
실시예 32 화합물 KHE008의 합성
Figure pct00073
화합물 KHE008 -1: 화합물 KHE007 (503.8 mg, 1.030 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 아세트산 (15 mL)으로 용해시킨 다음, 농축 염산 (5 mL)을 적가 반응에 첨가하였다. 첨가 후, 반응을 4시간 동안 90 ℃에서 수행하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 증가된 극성 스폿이 형성되었고, 반응을 중단하였다. 반응 용액을 회전식 증발로 직접 건조시키고, pH를 포화 탄산나트륨 용액으로 9-10으로 조정하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 추출하였다. 수성상을 수집하고, 수성상을 pH를 3-4로 조정하고, 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 추출한 다음, 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 유기상을 농축시켜 용매를 제거하고, 황색 고체 KHE008 -1 (260 mg, 49.7%)를 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 KHE008: 화합물 KHE008 -1 (260 mg, 0.581 mmol) 및 수산화나트륨 (0.0891 g, 2.227 mmol)을 단일목 플라스크에 첨가하였다. 물 (40 mL)로 용해시킨 다음, 티오글리콜산 (1.0125 g, 10.331 mmol)을 반응에 첨가하였다. 반응을 3시간 동안 120℃에서 수행하였다. TLC 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여준 후, 감소된 극성 스폿이 형성되고, 반응을 중단하였다. 포화 탄산나트륨 용액을 첨가하여 반응 시스템의 pH를 중성으로 조정한 다음, 반응 시스템을 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 분취 HPLC로 정제하여 백색 고체 KHE008 (96.9 mg, 40.9%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 464.3[M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 12.46 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 8.03 (s, 2H), 7.77 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 2.49 - 2.50 (m, 2H), 1.60 - 1.71 (m, 1H), 1.56 - 1.59 (m, 5H), 1.10 - 1.13 (m, 3H), 0.92 - 0.97 (m, 2H).
실시예 33 화합물 KHE009의 합성
Figure pct00074
화합물 KHE009 -2: 조작은 화합물 KHE007 -2의 합성과 동일하였고, 미정제 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)로 정제하여 황색 오일 KHE009 -2 (45.5 g, 173 mmol, 수율: 66.8%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 263.0[M+1]+. 1 H NMR (CDCl3, 400MHz): δ 8.93 (s, 1H), 3.15 - 3.05 (m, 1H), 1.73 - 1.59 (m, 4H), 0.74 (t, J = 7.6 Hz, 6H).
화합물 KHE009 -3: 조작은 화합물 KHE007 -3의 합성과 동일하였고, 미정제 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 0/1)를 통해 정제하여 백색 고체 KHE009 -3 (11.8 g, 29.1 mmol, 수율: 38.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 404.0[M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.77 (s, 1H), 6.68 (s, 2H), 5.61 (s, 2H), 3.04 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 1.54 (quin, J = 7.2 Hz, 4H), 0.69 (t, J = 7.2 Hz, 6H).
화합물 KHE009 -4: 조작은 화합물 KHE007 -4의 합성과 동일하여 갈색 고체 KHE009-4 (22.0 g, 미정제 생성물)를 얻었다. 미정제 생성물을 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 452.2 [M+H]+.
화합물 KHE009 -5: 조작은 화합물 KHE007 -5의 합성과 동일하여 백색 고체 KHE009-5 (4.44 g, 12.5 mmol, 수율: 48.7%, 순도 96.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 342.0 [M+H]+.
1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 9.74 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 6.65 (s, 2H), 5.51 (s, 2H), 2.82 - 3.01 (m, 1H), 1.62 - 1.41 (m, 4H), 0.68 (t, J = 7.2 Hz, 6H).
화합물 KHE009 -6: 조작은 화합물 KHE007 -6의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 KHE009 -6 (650 mg, 86.7%, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 509.2 [M+H]+.
화합물 KHE009: 조작은 화합물 KHE007의 합성과 동일하였고, 오렌지색 고체 (570 mg, 미정제 생성물)을 수득하였다. 100 mg의 미정제 생성물을 분취 HPLC로 정제하여 희미한 황색 고체 KHE009 (18 mg, 수율: 18.2%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 463.0 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.26 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.75 (s, 2H), 2.98 - 3.02 (m, 1H), 1.52-1.55 (m, 4H), 1.24 (s, 1H), 0.68 - 0.72 (m, 6H).
실시예 34 화합물 KHE010의 합성
Figure pct00075
화합물 KHE010 -1: 조작은 화합물 KHE008 -1의 합성과 동일하였고, 황색 고체 KH010-1 (280 mg, 57.4%)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 482.0 [M+1]+.
화합물 KHE010: 조작은 화합물 KHE008의 합성과 동일하였고, 백색 고체 KHE010 (113.6 mg, 44.7%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후에 얻었다. MS (ESI) m/z: 438.2 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 12.47(s, 1H), 9.98(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.78(s, 2H), 7.70(s, 1H), 2.94-3.01(m, 1H), 1.48-1.61(m, 4H), 0.70(t, 6H, J=8.0Hz).
실시예 35 화합물 KHE011의 합성
Figure pct00076
화합물 KHE011 -2: 화합물 KHE011 -1 (50.0 g, 221 mmol, 1.00 eq), KHE011 -1a (30.0 g, 265 mmol, 28.3 mL, 1.20 eq) 및 Cs2CO3 (144 g, 442 mmol, 2.00 eq)을 DMF (250 mL)에 첨가하고, 20℃에서 1시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다.
TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 스폿이 형성되었다 (Rf = 20). 반응 용액을 1N HCl (1 L)에 부었다. 황색 고체는 침전되었고, 여과하고, 필터 케이크를 물 (200 mL × 3)로 세척한 다음, 필터 케이크를 수집하였다. 에틸 아세테이트 (1 L)에 용해시키고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시켜 황색 고체 화합물 KHE011-2 (60.0 g, 198 mmol, 수율: 89.7%)를 얻었고, 이것을 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 289.0 [M+1]+.
화합물 KHE011 -3: 화합물 KHE001 -2 (60.0 g, 198 mmol, 1.00 eq) 및 LiCl (12.6 g, 297 mmol, 1.50 eq)을 DMSO (150 mL) 및 물 (50 mL)에 첨가하였다. 3회 질소 대체를 거치고, 165℃에서 1시간 동안 질소의 보호 하에 반응시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 스폿이 형성되었다 (Rf = 0.50). 반응 용액을 빙수 (1 L)에 부었고, 에틸 아세테이트 (500 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 포화 염 용액 (200 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축하였다. 농축 여액을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 5/1)로 정제하여 황색 고체 KHE011 -3 (22.1 g, 95.7 mmol, 수율: 48.3%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 231.0 [M+1]+.
화합물 KHE011 -4: 화합물 KHE011 -3 (7.50 g, 32.5 mmol, 1.00 eq), KHE011-3a (9.06 g, 32.5 mmol, 1.00 eq) 및 Cs2CO3 (21.2 g, 64.9 mmol, 2.00 eq)을 DMSO (70 mL)에 첨가하고, 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 작은 극성 (Rf = 0.70)을 갖는 새로운 화합물이 형성되었다. 반응 용액을 포화 염 용액 (500 mL)에 부었고, 에틸 아세테이트 (500 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (200 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)로 정제하여 어두운 회색 고체 KHE011 -4 (3.95 g, 9.18 mmol, 수율: 28.3%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 429.0 [M+1]+. 1 H NMR (CDCl3, 400MHz): δ 8.66 (s, 1H), 8.29 (s, 2H), 6.39 (s, 1H), 3.43 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 1.24 - 1.13 (m, 6H).
화합물 KHE011 -5: 화합물 KHE011 -4 (2.90 g, 6.74 mmol, 1.0 eq)을 물 (12 mL), 아세트산 (12 mL) 및 농축 황산 (12 mL)의 시스템에 첨가하고, 110℃에서 6시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 스폿이 형성되었다 (Rf = 0.47). 반응 용액을 물 (200 mL)로 희석하였다. 에틸 아세테이트 (80 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (200 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)로 정제하여 황색 고체 KHE011 -5 (2.50 g, 6.17 mmol, 수율: 91.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 404.0 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 8.79 (s, 1H), 8.35 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 3.38 - 3.33 (m, 1H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE011 -6: 조작은 화합물 KHE007 -4의 합성과 동일하여 갈색 오일성 물질 KHE011 -6 (4.50 g, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 452.2 [M+1]+.
화합물 KHE011 -7: 조작은 화합물 KHE007 -5의 합성과 동일하여 분취 HPLC로 정제한 후 회색 고체 KHE011 -7 (680 mg, 1.94 mmol, 수율: 31.5%, 순도 97.8%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 342.0 [M+1]+.
화합물 KHE011 -8: 화합물 KHE011 -7 (680 mg, 1.95 mmol, 순도 97.9%, 1.00 eq)을 에탄올 (10 mL)에 용해시키고, 염화제일주석 (SnCl2.2H2O) (1.32 g, 5.84 mmol, 3.00 eq)을 첨가하고, 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 물 (80 mL)의 시스템에 배치로 첨가하여 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (30 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (100 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하였다. 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체 KHE011 -8 (254 mg, 788 μmol, 수율: 40.5%, 순도 96.8%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 312.0 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 10.19 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 6.80 - 6.68 (m, 2H), 4.24 (s, 2H), 3.31 - 3.23 (m, 1H), 2.08 - 2.06 (m, 1H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE011 -9: 조작은 화합물 KHE007 -6의 합성과 동일하였고, 황색 고체 KHE011-9 (350 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 479.0 [M+1]+.
화합물 KHE011: 조작은 화합물 KHE007의 합성과 동일하였고, 황색 고체 KHE011 (194 mg, 433 μmol, 수율: 63.9%, 순도 96.6%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 433.0 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 13.21 (s, 1H), 10.06 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.63 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 3.30 - 3.26 (m, 1H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 36 화합물 KHE012의 합성
Figure pct00077
화합물 KHE012 -1: 조작은 화합물 KHE008 -1의 합성과 동일하였고, 황색 고체 KHE012-1 (120 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 451.9 [M+1]+.
화합물 KHE012: 조작은 화합물 KHE008의 합성과 동일하였고, 희미한 황색 고체 KHE012 (58.0 mg, 수율: 51.2%, 순도: 97.9%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 408.2 [M+1]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 12.43 (s, 1H), 10.05 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.66 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 3.35 - 3.21 (m, 1H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 37 화합물 KHE013의 합성
Figure pct00078
화합물 KHE013 -2: KHE013 -1 (250 g, 1.10 mol, 140 mL, 1.00 eq) 및 KHE013-1a (165 g, 1.10 mol, 154 mL, 1.00 eq)을 테트라하이드로푸란 (2L)에 용해시키고, KHMDS (1.0 M, 1.15 L, 1.05 eq)을 0℃의 외부 온도에서 천천히 적가하였다. 첨가 후, 반응 용액을 20℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 스폿이 형성되었다 (Rf = 0.33). 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 (1 L)에 천천히 부었고, 그 다음 추출 (600 mL × 3)을 위해 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 유기상을 조합하고, 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 갈색 고체 KHE013 - 2 (360 g, 미정제 생성물)를 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 343.0 [M+H]+.
화합물 KHE013 -3: KHE013 -2 (330 g, 966 mmol, 1.00 eq)을 농축 염산 (165 mL, 순도 37%) 및 아세트산 (660 mL)의 용액 시스템에 첨가하였다. 2시간 동안 교반하고 90℃의 외부 온도에서 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 화합물은 형성되었다 (Rf = 0.48). 용매를 감압 하에서 증발로 제거하고, 잔여 오일성 물질을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 2/1)로 직접 정제하여 백색 고체 KHE013 -3 (117 g, 412 mmol, 수율: 37.6%)을 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 8.93 (br d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.37 - 7.21 (m, 5H), 4.23 (br d, J = 2.4 Hz, 2H).
화합물 KHE013 -4: KHE013 -3 (30.0 g, 106 mmol, 1.00 eq)을 DMSO (300 mL) 및 아세트산 (150 mL)의 혼합 용액에 용해시키고, FeCl2ㆍ4H2O (2.10 g, 10.6 mmol, 0.10 eq)을 첨가하였다. 100℃의 외부 온도에서 10시간 동안 산소에서 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1) 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 스폿이 형성되었다 (Rf = 0.24). 반응 용액을 에틸 아세테이트 (200 mL) 및 물 (800 mL)에 천천히 부었고, 에틸 아세테이트 층을 분리하였다. 수성층을 에틸 아세테이트 (150 mL × 2)로 추출하였다. 유기층을 조합하였다. 포화 염 용액 (500 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 2/1)로 정제하여 황색 고체 KHE013-4 (16.0 g, 53.8 mmol, 수율: 50.8%)를 얻었다.
화합물 KHE013 -5: 디클로로메탄 (50 mL) 중 SF4 (14.2 g, 131 mmol, 3.00 eq) 및 HF (8.74 g, 437 mmol, 7.95 mL, 10.0 eq)을 KHE013 -4 (13.0 g, 43.7 mmol, 1.00 eq)의 용액에 -78℃의 외부 온도에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응 용액을 10℃의 외부 온도 및 0.30 MPa에서 14시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었고, 새로운 화합물은 형성되었다 (Rf = 0.70). 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)에 부었고, pH를 포화 중탄산나트륨 (300 mL)로 7-8로 조정하였다. 유기층을 분리하였다. 수성층을 에틸 아세테이트 (100 mL × 3)로 추출하였다. 유기층을 조합하였다. 포화 염 용액 (200 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 1/1)로 정제하여 무색 오일성 물질 KHE013 -5 (10.0 g, 31.3 mmol, 수율: 71.6%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 320.8 [M+H]+. 1 H NMR: (CDCl3, 400MHz): δ 8.78 (s, 1H), 7.63 (dd, J = 1.2, 7.2 Hz, 2H), 7.54 - 7.41 (m, 3H). 19 F NMR: (CDCl3, 400MHz): δ -96.31.
화합물 KHE013 -6: 조작은 화합물 KHE007 -3의 조작과 동일하였다. 반응 용액을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 2/1)로 정제하여 황색 고체 KHE013 -6 (10.2 g, 22.1 mmol, 수율: 88.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z：460.0 [M+H]+. 1 H NMR(DMSO-d 6 , 400MHz): δ 9.03 (s, 1H), 7.64 - 7.44 (m, 5H), 6.69 (s, 2H), 5.70 (s, 2H).
화합물 KHE013 -7: 조작은 화합물 KHE007 -4의 합성과 동일하여 갈색 오일성 물질 KHE013 -7 (25.0 g, 미정제 생성물)를 얻었다. 미정제 생성물을 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 508.2 [M+H]+.
화합물 KHE013 -8: 조작은 화합물 KHE007 -5의 합성과 동일하여 분취 HPLC로 정제한 후 회백색 고체 KHE013 -8 (3.28 g, 8.09 mmol, 수율: 33.3%, 순도: 98.2%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 380.0 [M+H]+. 1 H NMR(DMSO-d 6 , 400MHz):δ 10.65 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.57 - 7.43 (m, 5H), 6.67 (s, 2H). 19 F NMR(DMSO-d 6 , 400MHz): δ -95.89.
화합물 KHE013 -9: 조작은 화합물 KHE007 -6의 합성과 동일하였고, 황색 고체 KHE013-9 (512 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 565.0 [M+H]+.
화합물 KHE013: 조작은 화합물 KHE007의 합성과 동일하였고, 회백색 고체 KHE013 (134 mg, 수율: 65.2%, 순도: 98.1%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 519.1 [M+H]+.
실시예 38 화합물 KHE014의 합성
Figure pct00079
화합물 KHE014 -1: 조작은 화합물 KHE008 -1의 합성과 동일하였고, 황색 고체 KHE014-1 (63 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 538.0 [M+1]+.
화합물 KHE014: 조작은 화합물 KHE008의 합성과 동일하였고, 희미한 황색 고체 KHE014 (24.0 mg, 수율: 23.2%, 2 단계로, 및 순도: 96.8%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 494.1 [M+1]+.
실시예 39 화합물 KHE015의 합성
Figure pct00080
화합물 KHE015 -1: 조작은 화합물 KHE007 -3의 합성과 동일하였고, 황색 고체 KHE015-1 (6.00 g, 13.7 mmol, 수율: 56.5%)을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)를 통한 정제 후 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 9.09 (s, 1H), 7.85 - 7.75 (m, 3H), 7.62 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 6.66 (s, 2H), 5.66 (br s, 2H).
화합물 KHE015 -2: 화합물 KHE015 -1 (6.00 g, 13.7 mmol, 1.00 eq), 수산화칼륨 (3.07 g, 54.7 mmol, 4.00 eq) 및 t-Bu Xphos (580 mg, 1.37 mmol, 0.10 eq)을 디옥산 (60 mL) 및 물 (15 mL)의 시스템에 첨가한 다음, Pd2(dba)3 (1.25 g, 1.37 mmol, 0.10 eq)을 첨가하였다. 첨가 후, 용액을 90℃의 외부 온도에 두었고, 10시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1) 모니터링은 반응의 완료를 보여주었고, 새로운 스폿이 형성되었다 (Rf = 0.22). 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (200 mL)에 부었고, 10분 동안 교반하였다. 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (100 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체 KHE015 -2 (2.45 g, 6.46 mmol, 수율: 47.3%, 99.2%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 376.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 10.62 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.56 (s, 2H), 6.64 (s, 2H), 5.84 - 5.29 (m, 2H).
화합물 KHE015 -3: 조작은 화합물 KHE007 -6의 합성과 동일하였고, 희미한 황색 고체 KHE015 -3 (625.7 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 543.0 [M+H]+.
화합물 KHE015: 조작은 화합물 KHE007의 합성과 동일하였고, 회백색 고체 KHE015 (278.4 g, 2 단계의 수율: 31.1%, 95.9%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): 10.87(s, 1H), 8.49(s, 1H), 7.82(s, 1H), 7.80(d, 1H, J=4.0Hz), 7.77(s, 2H), 7.71-7.74(m, 1H), 7.55-7.59(m, 2H).
실시예 40 화합물 KHE016의 합성
Figure pct00081
화합물 KHE016 -1: 조작은 화합물 KHE008 -1의 합성과 동일하였고, 황색 고체 KHE016-1 (74.5 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 516.0 [M+1]+.
화합물 KHE016: 조작은 화합물 KHE008의 합성과 동일하였고, 회백색 고체 KHE016 (31.2 mg, 수율: 26.3%, 2 단계로, 및 순도 97.2%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 472.0 [M+1]+.
실시예 41 화합물 KHE017의 합성
Figure pct00082
화합물 KHE017 -2: 조작은 화합물 KHE007 -2의 조작과 동일하였다. 반응 용액을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 5/1)로 정제하여 무색 오일성 물질 KHE017 -2 (9.50 g, 40.7 mmol, 수율: 78.7%)을 얻었다. 1 H NMR (CDCl3, 400MHz): δ 8.46 - 8.39 (m, 1H), 2.39 (tt, J = 4.8, 8.0 Hz, 1H), 1.25 - 1.20 (m, 1H), 1.25 - 1.20 (m, 1H), 1.18 - 1.11 (m, 2H).
화합물 KHE017 -3: 조작은 화합물 KHE007 -3의 조작과 동일하였다. 회색 고체 KHE017-3 (13.0 g, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 375.9 [M+H]+.
화합물 KHE017 -4: 조작은 화합물 KHE007 -4의 조작과 동일하였다. 황색 고체 KHE017-4 (25.0 g, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 422.3 [M+H]+.
화합물 KHE017 -5: 조작은 화합물 KHE007 -5의 조작과 동일하였다. 황색 고체 KHE017-5 (439 mg, 1.40 mmol, 수율: 13.1%, 순도: 99.4%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 312.0 [M+H]+.
1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 9.89 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.70 - 6.60 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 2.39 - 2.25 (m, 1H), 1.06 - 0.93 (m, 2H), 0.88 - 0.76 (m, 2H).
화합물 KHE017 -6: 조작은 화합물 KHE007 -6의 조작과 동일하였다. 약 451.6 mg의 오렌지색 고체 KHE017 -6을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 479.1 [M+H]+.
화합물 KHE017: 조작은 화합물 KHE007의 조작과 동일하였다. 200 mg을 취하여 분취 HPLC에 의한 정제로 약 56.2 mg의 백색 고체 KHE017을 얻었다. MS (ESI) m/z: 433.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ13.27 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.74 (s, 2H), 2.28 (m, 1H), 1.04 (m, 2H), 0.86 (m, 2H).
실시예 42 화합물 KHE018의 합성
Figure pct00083
화합물 KHE018 -1: 조작은 화합물 KHE008 -1의 합성과 동일하였고, 황갈색 고체 KHE018 -1 (205.7 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 452.0 [M+H]+.
화합물 KHE018: 조작은 화합물 KHE008의 합성과 동일하였고, 회백색 고체 KHE018 (20 mg, 순도 96.81%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 472.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): 12.46(s, 1H), 10.09(s, 1H), 8.25(s, 1H), 7.75(s, 2H), 7.68(s, 1H), 2.32-2.39(m, 1H), 1.02-1.07(m, 2H), 0.85-0.90(m, 2H).
실시예 43 화합물 KHE019의 합성
Figure pct00084
화합물 KHE019 -2: 조작은 KHE007 -2의 조작과 동일하였다. 황색 고체 KHE019-2 (9.00 g, 31.7 mmol, 수율: 68.2%)을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 283.0 [M+H]+. 1 H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 8.62 (s, 1H), 3.88 - 3.60 (m, 1H), 3.11 - 2.90 (m, 4H).
화합물 KHE019 -3: 조작은 KHE007 -3의 조작과 동일하였다. 황색 고체 KHE019-3 (5.20 g, 12.2 mmol, 수율: 86.7%)을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 424.0[M+H]+. 1 H NMR (CDCl3, 400MHz): δ 8.50 (s, 1H), 6.69 (s, 2H), 4.06 - 3.75 (m, 2H), 3.75 - 3.64 (m, 1H), 2.91 (td, J = 8.4, 16.4 Hz, 4H).
화합물 KHE019 -4: 조작은 KHE007 -4의 조작과 동일하였다. 갈색 오일성 물질 KHE019-4 (5.80 g, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 472.1 [M+H]+.
화합물 KHE019 -5: 조작은 KHE007 -5와 동일하였다. 백색 고체 KHE019 -5 (1.1 g, 2.96 mmol, 수율: 24.0%, 순도 97.4%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 362.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 10.13 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 6.67 (s, 2H), 5.55 (s, 2H), 3.62 (dquin, J = 2.8, 8.8 Hz, 1H), 2.91 - 2.73 (m, 4H). 19 F NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ -80.48 (d, J = 12.8 Hz, 1F), -95.69 (d, J = 12.8 Hz, 1F).
화합물 KHE019 -6: 조작은 화합물 KHE007 -6의 조작과 동일하였다. 약 324 mg의 오렌지색 고체 KHE019 -6을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 529.0 [M+H]+.
화합물 KHE019: 조작은 화합물 KHE007의 조작과 동일하였다. 120 mg을 취하여 분취 HPLC에 의한 정제로 약 43.7 mg의 백색 고체 KHE019을 얻었다. MS (ESI) m/z: 483.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 13.25 (s, 1H), 10.377 (s, 1H), 8.073 (s, 1H), 7.779 (s, 2H), 3.653-3.675 (m, 1H), 2.836 - 2.948 (m, 4H).
실시예 44 화합물 KHE020의 합성
Figure pct00085
화합물 KHE020 -1: 조작은 화합물 KHE008 -1의 합성과 동일하였고, 갈색 고체 KHE020-1 (157 mg, 미정제 생성물)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z: 502.0 [M+H]+.
화합물 KHE020: 조작은 화합물 KHE008의 합성과 동일하였고, 회백색 고체 KHE020 (15.4 mg, 순도 97.23%)을 분취 HPLC에 의한 정제 후 얻었다. MS (ESI) m/z: 458.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ12.480 (s, 1H), 10.341 (s, 1H), 8.073 (s, 1H), 7.722 (s, 2H), 7.718 (s, 1H), 3.343 - 3.665 (m, 1H), 2.841-2.946 (m, 4H).
실시예 45 화합물 KHE021의 합성
Figure pct00086
화합물 KHE021 -1: 화합물 KHE005 -2 (0.1095 g, 3.498 mmol, 1.00 eq)을 THF (10 ml)에 용해시킨 다음, KHE021 -1a (0.4736 g, 3.882 mmol, 12 eq) 및 DIEA (0.9965 g, 7.665 mmol, 24 eq)을 반응 시스템에서 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. TLC 모니터링은 새로운 스폿이 형성되었음을 보여주었다. 반응 용액을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전식 증발로 건조시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 TLC 플레이트로 정제하여 황색 고체 KHE021 -1 (80 mg, 수율: 57.3%)을 얻고, 샘플링하고, 생성물 신호를 결정하기 위해 LCMS를 사용하였다. MS (ESI) m/z: 400.0 [M+H]+.
화합물 KHE021: 화합물 KHE021 -1 (80 mg, 0.2 mmol)을 메탄올 (6 mL)에 용해시키고, 수산화나트륨 용액 (1 ml, 1 M, aq)을 첨가하였다. 반응 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. TLC 모니터링은 반응의 완료를 보여주었다. 반응 용액을 10 ml의 물로 희석하였다. 반응 내의 유기 용매를 회전식 증발로 직접 건조시켰다. pH를 3-4로 조정한 다음, 반응 용액을 에틸 아세테이트 (20 × 3)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 회전식 증발로 건조시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 크로마토플레이트로 정제하여 백색 고체 화합물 KHE021 (12 mg, 수율: 15.5%)을 얻었다. MS (ESI) m/z: 386.0 [M+H]+. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400MHz): δ 9.87 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 6.65 (s, 2H), 5.53 (s, 2H), 3.23 - 3.28 (m, 1H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 46 화합물 KHE022의 합성
Figure pct00087
화합물 KHE022 -2: KH01-2 (120 g, 318 mmol, 1.0 eq)을 염산성 용액 (12 M, 358 mL, 13.5 eq)에 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시켰다. 아질산나트륨 (24.1 g, 350 mmol, 1.1 eq)을 50 mL의 물에 용해시키고, 전술한 용액에 천천히 적가하였다. 첨가 후, 0℃에서 1시간 동안 계속해서 교반하였다. TLC 모니터링 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)는 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 스폿이 형성되었다 (Rf = 0.80). 염화제일주석 (215 g, 954 mmol, 3.0 eq)을 염산 (12 M, 493 mL, 18.6 eq)에 용해시키고, 전술한 반응 용액에 0℃에서 적가 첨가하였다. 첨가 후, 이 온도에서 1시간 동안 계속해서 교반하였다. LCMS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 새로운 표적 생성물이 형성되었다. 반응 용액을 여과하고, 필터 케이크를 수집하여 황색 고체 KHE022-2 (80.0 g, 204 mmol, 수율: 64.1%)의 미정제 생성물을 추가 정제없이 얻었다. MS (ESI) m/z = 392.9 [M+1]+.
화합물 KHE022 -3: 화합물 KHE022 -2 (80.0 g, 204 mmol, 1.0 eq) 및 KHE022-2A (32.3 g, 367 mmol, 25.8 mL, 1.8 eq)을 480 mL의 에탄올 및 1.5 L의 물에 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 KHE022 -2가 완전히 반응되었음을 보여주었고 표적 생성물이 형성되었다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (2L × 2)로 2회 추출하고; 에틸 아세테이트 층을 조합하였다. 500 mL의 포화 염 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 고체 KHE022 -3 (26.5 g, 57.34 mmol, 수율: 28.1%)을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z = 462.9 [M+1]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 1H NMR: DMSO-d6, 400MHz δ 12.16 (s, 1H), 10.04 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.56 (s, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.24 - 1.14 (m, 6H).
화합물 KHE022 -4: 화합물 KHE022 -3 (10.0 g, 21.64 mmol, 1 eq)을 2.0 L의 톨루엔에 첨가하였다. 티오닐 클로라이드 (7.72 g, 64.92 mmol, 4.71 mL, 3.0 eq)을 실온에서 첨가한 다음, 110℃로 가열하였다. 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 회전식 증발로 건조시켜 과잉의 티오닐 클로라이드를 제거한 다음, 용해를 위해 2.0 L의 톨루엔을 첨가한 다음, 우레아 (5.78 g, 64.9 mmol, 3.0 eq) 및 KHE022 -3A (2.89 g, 32.4 mmol, 1.5 eq)을 첨가하였다. 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 표적 생성물이 형성되었다. 반응 용액을 회전식 증발로 건조시키고, 1 L의 물 및 1 L의 에틸 아세테이트를 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 그 이후로는, 유기상을 분리하고, 수성상을 1 L의 에틸 아세테이트로 1회 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 역상 플래시 (0.1% TFA)로 정제하여 황색 고체 KHE022 -4 (1.00 g, 1.45 mmol, 수율: 3.35%, 순도 71.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 534.0 [M+1]+.
화합물 KHE022 -5: KHE022 -4 (1.00 g, 1.88 mmol, 1.0 eq)을 N,N-디메틸아세트아미드 (15 mL)에 용해시키고, 탄산칼륨 (777 mg, 5.63 mmol, 3.0 eq)을 첨가하고, 120℃에서 6시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 표적 생성물이 형성되었다. 반응 용액에 30 mL의 물을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 (30 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 HPLC로 정제하여 황색 고체 KHE022 -5 (400 mg, 821 μmol, 수율: 43.7%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 487.9 [M+1]+.
화합물 KHE022 -6: KHE022 -5 (400 mg, 821 μmol, 1.0 eq) 및 Pin2B2 (521 mg, 2.05 mmol, 2.5 eq)을 디옥산 (4.0 mL)에 용해시키고, 아세트산칼륨 (241 mg, 2.46 mmol, 3.0 eq) 및 Pd(dppf)Cl2ㆍCH2Cl2 (33.5 mg, 41.0 μmol, 0.05 eq)을 첨가하고, 120℃에서 6시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었다. 반응 용액을 여과하고, 여액을 수집하였다. 5 mL의 에틸 아세테이트를 첨가한 다음, 5 mL의 물 및 5 mL의 포화 염 용액으로 차례로 세척하였다. 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체 KHE022 -6 (100 mg, 187 μmol, 수율: 22.8%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 534.1 [M+1]+.
화합물 KHE022 : KHE022 -6 (90.0 mg, 168 μmol, 1 eq)을 테트라하이드로푸란 (1.0 mL) 및 물 (1.0 mL), 나트륨 퍼보레이트 (NaBO3ㆍ4H2O) (150 mg, 673.91 μmol, 4.0 eq)의 혼합 용액에 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 표적 생성물이 형성되었다. 반응 용액에 5 mL의 물을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 (5.0 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체 KHE022 (18.0 mg, 42.17μmol, 수율: 25.0%, 순도 99.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 424.0 [M+1]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz):δ 12.40 (s 1H), 10.07 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.78 (s, 2H), 3.32 - 3.26 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 1.16 - 1.10 (m, 6H).
실시예 47 화합물 KHE023의 합성
Figure pct00088
화합물 KHE023 -2: KH01-2 (40.0 g, 106 mmol, 1.00 eq)을 농축 황산 (60.0 mL) 및 물 (25.0 mL)에 첨가하였다. 아질산나트륨 용액 (7.32 g, 106 mmol, 1.00 eq, 150 mL의 물에 용해됨)을 0℃에서 적가 첨가하였다. 첨가 후, 이 온도에서 1시간 동안 계속해서 교반하였다. 황산구리 용액 (253 g, 1.59 mol, 244 mL, 15.0 eq, 150 mL의 물에 용해됨)을 전술한 반응 용액에 적가 첨가하였다. 한편, 제이구리 옥사이드 (8.44 g, 106.08 mmol, 1.34 mL, 1.00 eq)을 첨가하였다. 반응 용액을 50℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 표적 생성물이 형성되었음을 보여주었다. 반응 용액을 여과하였다. 여액에 800 mL의 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 200 mL의 포화 염 용액으로 세척하였다. 유기상을 수집하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 역상 HPLC로 정제하여 황색 고체 KHE023 -2 (7.60 g, 20.0 mmol, 수율: 18.96%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 378.9 [M+1]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 10.36 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 6.96 (s, 2H), 3.40 - 3.36 (m, 1H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE023 -3: KHE023 -2 (4.50 g, 11.9 mmol, 1.00 eq)을 DMF (50.0 mL)에 용해시키고, KHE023-2a (4.60 g, 14.2 mmol, 3.68 mL, 1.20 eq) 및 탄산세슘 (4.65 g, 14.2 mmol, 1.20 eq)을 첨가하고, 60℃에서 13시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 표적 생성물이 형성되었음을 보여주었다. 반응물을 50 mL의 물에 부었고, 에틸 아세테이트 (50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (50 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 2/1)를 통해 정제하여 황색 오일성 물질 KHE023 -3 (3.80 g, 7.19 mmol, 수율: 60.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 529.0 [M+1]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.73 (s, 1H), 7.36 (s, 2H), 4.57 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 4.18 - 4.05 (m, 4H), 3.37 (m, 1H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 6H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE023 -4: KHE023 -3 (3.50 g, 6.63 mmol, 1.00 eq)을 디옥산 (85.0 mL)에 용해시키고, 아세트산칼륨 (1.30 g, 13.2 mmol, 2.00 eq), Pin2B2 (3.37 g, 13.2 mmol, 2.00 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (484 mg, 662 μmol, 0.10 eq)을 첨가하고, 80℃에서 13시간 동안 질소의 보호 하에 교반하였다. LC-MS 모니터링은 표적 생성물이 형성되었음을 보여주었다. 반응 용액을 10 mL의 물에 부었고, 에틸 아세테이트 (10 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 조합하고, 포화 염 용액 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 오일성 물질 KHE023 -4 (2.00 g)의 미정제 생성물을 얻었고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 반응시켰다. MS (ESI) m/z = 575.1 [M+1]+.
화합물 KHE023 -5: KHE023 -4 (2.00 g, 3.48 mmol, 1.00 eq)을 테트라하이드로푸란 (40.0 mL)으로 용해시키고, 과산화수소 (3.94 g, 34.7 mmol, 3.34 mL, 순도 30.0%, 10.0 eq)을 0℃에서 첨가한 다음, 실온으로 가열하고, 5시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 원료가 완전히 반응되었음을 보여주었고, 표적 생성물이 형성되었다. 반응 용액을 포화 아황산나트륨 (50 ml)에 부었고, 10분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트 (50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 수집하였다. 포화 염 용액 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 갈색 오일성 물질 KHE023-5 (0.80 g, 1.72 mmol, 수율: 49.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 465.2 [M+1]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 10.0 (br s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.32 (s, 2H), 4.57 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 4.13 (quin, J = 7.2 Hz, 4H), 3.31 - 3.25 (m, 1H), 1.27 (t, J = 7.2 Hz, 6H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
화합물 KHE023 : KHE023 -5 (0.65g, 1.40 mmol, 1.00 eq)을 20 mL의 아세토니트릴에 용해시키고, 트리메틸브로모실란 (2.6g, 16.8mmol, 2.2 mL, 12.0 eq)을 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LC-MS 모니터링은 원료의 사라짐을 보여주었고, 표적 생성물이 형성되었다. 반응물을 20 mL의 메탄올에 부었고, 30분 동안 교반하였다. 회전식 증발로 감압 하에서 건조시켰다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 백색 고체 KHE023 (0.5 g, 1.22 mmol, 수율: 87.4%)을 얻었다. MS (ESI) m/z = 409.0 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 9.96 (br s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.25 (s, 2H), 4.21 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 3.30 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 48 TRα, 또는 TRβ의 시험관내 결합 실험
TRα 또는 TRβ에 대한 화합물 작용성의 시험관내 분석을 시간-분해 형광 공명 에너지 전달 검정에 기반한 펩타이드 동원 실험에 의해 수행하였다. 실험에서, 유로퓸-항-GST 항체(Cisbio, 61GSTKLB), 비오틴-SRC2-2 공동-활성화된 펩타이드(Sangon Biotech), 스트렙타비딘-d2(Cisbio, 610SADAB), RXRα(Pharmaron), 및 TRαLBD(Invitrogen, PV4762), 또는 GST 태그를 갖는 TRβLBD(Invitrogen, PV4764)를 사용하였다. 유로퓸-항-GST 항체는 GST 태그에 결합함으로써 TRα-LBD, 또는 TRβ-LBD를 간접적으로 표지하였다. 스트렙타비딘-d2(Cisbio, 610SADAB)는 비오틴 태그에 결합시킴으로써 SRC2-2 공동-활성화된 펩타이드를 간접적으로 표지하였다. RXRα의 존재의 경우, TRα-LBD, 또는 TRβ-LBD는 각각 RXRα를 갖는 이종이량체 TRα-LBD/RXRα, 또는 TRβ-LBD/RXRα를 형성할 수 있다. 아고니스(agonis)는 TRα-LBD/RXRα, 또는 TRβ-LBD/RXRα에 결합되고 TRα-LBD 또는 TRβ-LBD의 입체형태적 변화를 초래하여, SRC2-2 공동-활성화된 펩타이드에 대한 이종이량체의 동원 능력을 개선시킨다. 한편, d2-표지된 SRC2-2 공동-활성화된 펩타이드와 유로퓸-항-GST 항체 사이의 거리가 감소되었기 때문에, TR-FRET 신호가 증가되었다.
상이한 농도에서 TRα 또는 TRβ 활성에 대한 화합물의 효과에 따라, 화합물의 작용성이 평가될 수 있다
작업 단계:
a. 양성 기준 화합물(MGL-3196) 및 시험될 화합물(100X)의 6 mM 용액을 디메틸 설폭사이드(DMSO)에서 제조하고, 100% DMSO를 음성 대조군으로 사용하였다.
b. 양성 기준 화합물(MGL-3196) 또는 시험될 화합물의 6 mM(100X) 용액을 총 10개의 농도에 대해 1:3 비율로 100% 디메틸 설폭사이드로 순차적으로 희석하고, 96-웰 플레이트로 옮겼다.
c. 농도 구배 희석을 거친 4X 화합물을 1X 반응 완충제(50 mM HEPES(pH7.0), 50 mM KF, 1 mM DTT, 0.05% NP-40, 0.2% BSA)로 제조하였다.
d. 농도 구배 희석을 거친 5 mL의 4X 화합물을 384-웰 실험 플레이트에 첨가하였다.
e. 4X TRαLBD 및 4X RXRα를 1X 반응 완충제(50 mM HEPES(pH7.0), 50 mM KF, 1 mM DTT, 0.05% NP-40, 0.2% BSA)로 제조하였다.
f. 5 mL의 4X TRαLBD 및 4X RXRα를 384-웰 실험 플레이트에 첨가하였다.
g. 2X 비오틴-SRC2-2, 2X 유로퓸-항-GST 및 2X 스트렙타비딘-d2의 혼합물 용액을 1X 반응 완충제(50 mM HEPES(pH7.0), 50 mM KF, 1 mM DTT, 0.05% NP-40, 0.2% BSA)로 제조하였다.
h. 10 mL의 2X 혼합물 용액(단계 g에서)을 384-웰 실험 플레이트에 첨가하였다.
i. 인큐베이션을 암소에서 실온에서 4시간 동안 수행하였다.
j. 384-웰 실험 플레이트의 각 웰에서 665 nm 및 615 nm 파장에서의 형광 신호 값을 Envision 2104(PerkinElmer) 마이크로플레이트 판독기에 의해 기록하고, 665 nm/615 nm의 형광 신호 비율을 계산하였다.
데이터 분석:
각 웰의 상대 비율을 계산하고:(665 nm/615 nm의 비율 - 블랭크 비율), 활성 백분율(% 활성)을 하기 수학식과 같이 계산하였다:
[수학식]
Figure pct00089
[상기 식에서,
비율양성은 전체 플레이트에서 양성 대조군의 상대적 비율이었고;
비율비히클은 전체 플레이트에서 음성 대조군의 상대적 비율이었고;
비율화합물은 전체 플레이트에서 화합물의 상대적 비율임].
EC50은 % 활성 값 및 화합물 농도의 로그를 Graphpad 8.0으로 비선형 회귀에 피팅함으로써 계산되었다.
[수학식]
Y = 하단 + (상단-하단)/(1+10^((LogEC50-X) Х 경사))
X: 화합물 농도의 로그; Y: % 활성.
특정 시험 데이터는 표 1에 제시되어 있다.
표 1. 시험관내 TRα, 또는 TRβ의 결합 실험 결과
Figure pct00090
양성 화합물 MGL3196을 CN101228135B호에 기재된 방법에 따라 제조하였다.
실시예 49 시험관내 TRα, 또는 TRβ 세포 형질감염 실험
TRα 또는 TRβ에 대한 화합물의 작용 효과를 평가하기 위해 실험을 설계하였다. TRα-LBD, 또는 TRβ-LBD 및 RXRα-LBD의 코딩 서열을 pBIND 플라스미드(Promega, E1581)에 삽입하였다. 2개의 발현 벡터 및 리포터 벡터(GAL4 프로모터에 의해 구동되는 안정적으로 통합된 루시페라제 리포터 유전자와 함께 운반되는 GAL4.35)(Promega, E1370)를 숙주 세포에서 공동-발현시켰다. 작용제가 상응하는 키메라 수용체에 결합될 때, 키메라 수용체는 리포터 유전자 벡터 상의 GAL4 결합 부위에 결합하고 리포터 유전자 발현을 자극한다. TRα 또는 TRβ에 대한 화합물의 작용 활성은 발광 신호의 강도에 의해 평가될 수 있다.
세부 단계:
작업 용액의 제조
a) 기준 화합물(MGL-3196), 또는 시험될 화합물의 30 mM 용액을 디메틸 설폭사이드(DMSO)에서 제조하였다.
b) 모든 화합물을 총 10개의 농도 구배에 대해 30 mM의 초기 농도로 시작하여 DMSO로 3-배 구배 희석하였다.
c) 50 μM T3의 양성 대조군(DMSO에 용해시켜 제조된 트리아이오도티로닌) 및 음성 대조군(100% DMSO)을 제조하였다.
d) 화합물 플레이트를 밀봉하고 5분 동안 진탕시켰다.
세포 현탁액의 제조
a) 모든 세포를 ATCC 표준에 따라 배양하고, HEK293T 검정을 이의 지수 성장 단계 동안 수행하였다.
b) 세포 배양 배지 상층액을 조심스럽게 제거하였다. 세포를 PBS로 2회 세척하였다.
c) TrypLETM 트립신 소화 용액(Gibco)을 첨가하여 세포를 소화시키고, 완전 배양 배지(Gibco)로 소화를 종결시켰다.
d) 세포를 수집하고, 계수하였다. 실험은 세포 생존율이 90% 초과인 경우에만 수행될 수 있었다.
e) 2.5Х106개의 HEK293T 세포를 각각의 60 mm 세포 배양 접시에 각각 접종하였다.
f) 세포를 접종한 배양 접시를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 밤새 배양하였다.
세포 형질감염
a) Fugene6 형질감염 시약(Promega, E2691)을 실온에 두었다.
b) 30 mL의 Fugene6 시약을, 튜브 벽과의 접촉을 피하면서, Opti-MEMTM 배양 배지(Gibco, 11058-021)에 첨가하였다.
c) 혼합물을 피펫으로 고르게 혼합하고, 실온에서 5분 동안 침전시켰다.
d) 6 ㎍의 플라스미드(TRα-LBD, 또는 TRβ-LBD 및 RXRα-LBD의 코딩 서열이 삽입된 pBIND 플라스미드(Pharmaron), 및 pGL4.35 리포터 유전자 플라스미드(Promega, E1370))를 희석된 형질감염 시약에 첨가하였다. 혼합물을 피펫으로 균일하게 혼합하고, 실온에서 20분 동안 침전시켰다.
e) 플라스미드 DNA와 혼합된 형질감염 시약을 세포가 접종된 60 mm 세포 배양 접시에 첨가하였다.
f) 배양 접시를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 5시간 동안 배양하였다.
화합물 처리
a) 희석된 화합물 용액, 양성 대조군 및 음성 대조군을 Echo550(Labcyte, 550)에 의해 384-웰 세포 배양 플레이트(PerkinElmer, 6007680-50)로 옮겼다.
b) 세포를 웰 당 15,000개의 세포로, 384-웰 세포 배양 플레이트에 접종하고, 5% 우태아 혈청을 함유하는 배양 배지(Gibco, 16000-044) 25 mL를 첨가하였다.
c) 세포를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 밤새 배양하였다.
화합물 검출
a) Steady-GloTM(Promega, E2520) 검출 시약을 실온에 두었다.
b) 384-웰 세포 배양 플레이트를 실온에 두었다.
c) 25 mL의 Steady-GloTM 검출 시약을 세포 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하였다.
d) 배양 플레이트를 오실레이터에 놓고, 암소에서 5분 동안 진탕시켰다.
Envision 2104(PerkinElmer, Envision HTS)에 의해 발광 값을 검출하였다.
데이터 분석:
각 웰에 대한 RLU 형광 신호(신호)를 계산한 다음, 하기 수학식에 나타낸 바와 같이 활성의 백분율(% 활성)을 계산한다.
[수학식]
% 활성 = (신호화합물 - 신호Ave_VC)/(신호Ave_PC-신호Ave_VC)Х100
[상기 식에서,
신호ave_pc는 전체 플레이트에서 양성 대조군의 평균 RLU 형광 신호이고;
신호ave_vc는 전체 플레이트에서 음성 대조군의 평균 RLU 형광 신호이고;
신호화합물은 전체 플레이트에서 화합물의 평균 RLU 형광 신호임].
EC50은 % 활성 값 및 화합물 농도의 로그를 Graphpad 8.0으로 비선형 회귀에 피팅함으로써 계산되었다.
[수학식]
Y = 하단 + (상단-하단)/(1+10^((LogEC50-X)Х 경사))
X: 화합물 농도의 로그; Y: % 활성.
특정 시험 데이터는 하기 표 2에 제시되어 있다.
표 2. TRα, 또는 TRβ의 세포 형질감염 실험의 결과
Figure pct00091
실시예 50 시험관내 간독성 검출
1차 간세포의 정보
Figure pct00092
실험:단계 1: 시험 물질을 200 mM DMSO 스톡 용액으로 제조한 다음, 7개 농도로 3-배 구배 연속 희석하고, 이후에 8개 농도의 용액 각각 1.5 mL를 498.5 mL의 인큐베이션 배양 배지(표 5에 언급된 조성을 가지고, 직접 고르게 혼합됨)에 첨가하여 작업 용액을 제조하고, 인큐베이션 배양 배지를 제조 전에 37℃에서 예열하였다. DMSO를 용매 대조군으로 사용하였다. 작업 용액 및 용매 대조군에서 DMSO 함량은 둘 모두 0.3 부피%였다. 화합물의 농도는 하기와 같았다:
Figure pct00093
단계 2: 플레이트 접종 및 세포 배양
제2 단계: 세포의 플레이트 접종 및 배양
1) 초저온에서 보존된 실험에 사용된 공여자의 간세포의 세뇨관(tube)을 취하고, 간세포를 소생시키기 전에 저온에서 여전히 동결되도록 하였다. 간세포를 신속하게 37℃의 수조에 넣고 모든 얼음 결정이 분산될 때까지 부드럽게 진탕시키고, 70 부피% 에탄올을 분무한 후 생물안전성 캐비닛으로 옮겼다.
2) 간세포 세뇨관의 내용물을 50 mL의 소생 배양 배지(표 3에 언급된 조성을 가지고, 직접 고르게 혼합함)를 함유하는 50 mL 원심분리 튜브에 붓고, 80 g에서 8분 동안 원심분리하였다. 원심분리 후, 소생 배양 배지를 흡인하고 접종 배양 배지를 첨가하였다(표 4를 참조하는 조성을 가지고, 직접 고르게 혼합됨). 세포를 AO/PI 염색에 의해 계수하여 밀리리터 당 0.2Х106개 세포의 세포 밀도를 갖는 세포 현탁액을 수득하였다.
3) 상기 세포 현탁액을 콜라겐 I로 코팅된 96-웰 플레이트에 웰 당 100 mL로 접종하였다. 배양 플레이트를 4시간 내지 6시간 동안 배양을 위한 95% 상대 습도의 5% CO2 인큐베이터에 두었다.
4) 4시간 내지 6시간 동안 인큐베이션 후, 세포의 상태를 현미경으로 관찰하였다. 배양 플레이트를 부드럽게 흔들고, 접종 배양 배지를 흡입하고, 100 mL의 인큐베이션 배양 배지를 각 웰에 첨가하였다(표 5에 언급된 조성을 가짐). 인큐베이터에서 18시간 내지 20시간 동안 배양한 후 독성 시험을 수행할 수 있다.
5) 투여 전에, 세포의 모폴로지를 현미경으로 관찰하였다. 배양 플레이트에서의 배양 배지를 흡입하고, 100 mL의 용매 대조군(DMSO), 또는 시험 물질 작업 용액을 각 웰에 첨가하였다. 3개의 병행 샘플을 각 조건 하에서 시험하였다.
6) 새로 제조된 작업 용액 또는 용매 대조군을 투여 후 24시간마다 용액 교환에 사용하였다.
작업 용액이 48시간 동안 작용한 후, 세포의 형태를 나중에 사용하기 위해 현미경으로 관찰하였다.
단계 3: 세포독성 검출
1) -20℃에서 보관된 CellTiter-Glo(Promega, 물품 번호 G9243) 시약을 37℃의 수조에서 용융시켰다.
2) 상기에서 수득된 세포 배양 플레이트를 48시간 동안 인큐베이션한 후, 50 mL의 CellTiter-Glo 용액을 각 실험 웰에 직접 첨가하였다.
3) 세포 배양 플레이트를 400 rpm에서 10분 동안 볼텍싱하고, 실온에서 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시켰다.
10분 후, 100 mL의 반응 용액을 각 웰로부터 흡입하고 새로운 백색 불투명-바닥 평판(Corning 96-웰 플레이트 Cat No. 3917)으로 옮겼다. 각 웰의 화학발광 값을 마이크로플레이트 판독기에 의해 판독하였다(백색 불투명-바닥 평판의 발광 값은 "발광 값블랭크"로 기록되었고; 용매 대조군의 발광 값은 "발광 값용매"로 기록되었다).
단계 4: 데이터 처리
[수학식]
세포 생존율(%) = [(발광 값시험 화합물 - 발광 값블랭크)/(발광 값용매 - 발광 값블랭크)] Х 100%
세포 생존율(%) 대 화합물의 농도의 곡선을 플롯팅하고, 세포 생존율(%)을 GraphPad Prism 8.0.2로 화합물의 농도에 피팅함으로써 화합물의 IC50을 계산하였다.
[수학식]
Y = 하단 + (상단 - 하단)/(1 + 10^((LogIC50 - X) Х 경사))
X는 화합물의 농도이고; Y는 세포 활성(%)이었다.
특정 시험 데이터는 표 6에 제시되어 있다.
표 3. 소생 배양 배지
Figure pct00094
표 4 접종 배양 배지
Figure pct00095
표 5 인큐베이션 배양 배지
Figure pct00096
표 6 간독성 검출 결과
Figure pct00097
실시예 51. 시노몰구스 원숭이의 PK 실험
이러한 실험의 목적은 단일 정맥내 및 위내 투여 후 시험될 화합물의 약동학적 거동을 평가하고, 위내 투여 후 생체이용률을 연구하여 임상 연구를 위한 동물 실험 데이터를 제공하는 것이었다.
정맥내 주사 및 위내 투여를 위한 용액의 제조: 시험하고자 하는 적절한 양의 화합물을 정확하게 칭량하고, 적합한 용매(5 부피% DMSO + 10 부피% 폴리에틸렌 글리콜 - 15-하이드록시스테아레이트 + 85 부피% 생리 식염수)와 혼합하였다. 볼텍스, 또는 초음파 처리 후, 맑고 투명한 용액(정맥내 주사 투여용 용액), 또는 균일한 현탁액을 수득하였다. 정맥내 주사에 의해 투여된 용액은 0.22 ㎛ 필터 막을 통해 여과될 필요가 있었다.
실험 설계: 제1 용량 전에 시노몰구스 원숭이를 체중에 따라 2개의 그룹으로 나누었고, 각 그룹에는 3마리의 수컷 시노몰구스 원숭이가 있었고, 여기서, 그룹 1의 동물에 단일 정맥내 주사(IV)로 시험될 화합물(1 mg/kg)을 제공하였으며; 제2 그룹의 동물에 단일 위내 투여(PO)에 의해 시험될 화합물(5 mg/kg)을 투여하였다. 투여 전에 동물의 체중을 측정하고, 동물의 체중을 기준으로 투여량을 계산하였다.
샘플 수집: 정맥천자에 의해 상지(또는 다른 적합한 혈액 수집 부위)에서 특정 시간에 전혈 샘플(약 0.2 mL)을 수집하고, 실제 혈액 수집 시간을 시험 기록에 기록하였다. 투여 후 1시간 이내에 하나의 획득 시점에 대한 허용되는 오차는 ±1분이고, 다른 시점에 대한 허용되는 오차는 이론적인 시간의 ±5%이다. 모든 혈액 샘플을 즉시 K2-EDTA를 함유하는 표지된 상업적 원심분리 튜브로 옮겼다. 혈액 샘플 수집 후, 혈액 샘플을 4℃ 및 3,200 g에서 10분 동안 원심분리하고, 상청액 혈장을 흡입하고, 빠르게 드라이 아이스에 넣고, LC-MS/MS 분석을 위해 -70±10℃의 냉장고에 보관하였다. 두 그룹의 수집 시간은 투여 후 0.083시간, 0.25시간, 0.5시간, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간 및 24시간이었다.
데이터 처리: 곡선 아래 면적(AUC(0-t) 및 AUC(0-Δ), 제거 반감기(T1/2), 피크 농도(Cmax), 최대 혈장 농도에 도달하는 시간(Tmax) 등을 Phoenix WinNonlin 7.0의 비구획 분석 모듈에 의해 계산하였다.
[수학식]
생체이용률(F) = PO 투여의 경우 곡선 아래 면적 AUC(0-t) Х 투여량IV/(IV 투여의 경우 곡선 아래 면적 AUC(0-t) Х 투여량PO) Х 100%
특정 데이터는 표 7에 제시되어 있다.
표 7. 시노몰구스 원숭이의 PK 실험 결과
Figure pct00098
실시예 52 생체내 약리학적 실험
이러한 실험의 초기 단계에서, DIO(식이-유발 비만)에 의해 유도된 마우스에 고지방 식이를 공급한 후, 고지방 식이 공급 동안 CCl4를 복강내 주사하여 NASH 모델을 유도하였다. 이러한 모델에서, 시험될 화합물의 항-NASH 효능을 평가하였다
동물 정보: 32마리의 DIO 마우스 + 8마리의 정상 마우스를 포함하는 C57BL/6J 수컷 마우스(18주령)를 사용하였고, 여기서 DIO 마우스의 체중은 > 38 g이었다.
표 8. 투여 정보
Figure pct00099
표 9. 약력학적 동물 그룹핑 정보
Figure pct00100
CCl4에 의한 유도: 1부의 CCl4 및 3부의 올리브 오일을 유리병에 넣어 25%(부피비)의 CCl4 용액을 제조하였다. 용액을 잘 혼합하고, 준비된 직후에 사용하였다. 제1 그룹의 8마리의 마우스에 정상 대조군으로서 생리 식염수 용액을 복강내 주사하였다. 제2 그룹 내지 제5 그룹의 마우스에 주 2회 25% CCl4 용액을 복강내 주사하였다. 25%(부피비) CCl4를 체중에 따라, 0.5 ml/kg으로 투여하였다. CCl4의 주사 시간과 당일 투여 시간 사이의 간격은 4시간 이상이어야 한다.
조직병리학적 분석
모든 간 샘플을 탈수 기기(Leica HistoCore Pearl-0348)에 의해 탈수시킨 다음, 파라핀 포매 기계(HistoCoreArcadia)에 의해 포매하였다. 포매된 간 샘플을 이후 Lecia RM2235 기계를 사용하여 슬라이싱하였다.
NAS 점수
NAS 점수를 지방증, 풍선 변성(balloon degeneration), 및 소엽 염증의 합계로서 HE(헤마톡실린-에오신) 염색된 슬라이스에 대해 수행하였다. 슬라이스를 하기 표 10에 제시된 표준에 따라 병리학자에 의해 스코어링하였다.
표 10. NAS 평가 방법
Figure pct00101
병변 평가 기준
(1) 간세포의 풍선 변성: 액포와 유사한 병리학적 변화가 간세포에서 관찰되었다. 액포-유사 변화로 인해, 간세포의 크기가 증가하고, 간세포 핵이 농축되거나 이탈되었다.
(2) 염증 세포의 침윤: 다수의 응집된 염증 세포, 주로 호중구 및 대식세포가 문맥 영역, 복부 정맥 영역, 또는 간 소엽 주위에서 발견되었다.
(3) 다양한 크기의 간세포에서 지방증 일반 둥근 액포(steatosis regular roundvacuole)가 관찰되었고, 간세포의 핵은 가장자리에 위치하였다.
섬유증의 백분율
시리우스 레드(Sirius red)로 염색된 모든 슬라이스를 Leica Aperio AT2 브라이트필드 스캐너로 스캔한 다음, 시리우스 레드 양성 염색 영역의 백분율을 HALO AI 시스템에 의해 계산하여 스캔된 총 간 영역에서 시리우스 레드의 백분율 영역을 평가하였다.
결과는 도 1 및 도 2에 나타내었다.
도 1은 섬유증 평가의 결과를 도시한 것으로서, 여기서, KH06의 효능은 용량 의존적이었고, 이러한 것 모두는 섬유증의 비율을 감소시키는 효과를 달성하였다. 1 mg/kg의 투여량에서 KH06의 효능은 3 mg/kg의 투여량에서 MGL3196의 효능보다 우수하였다.
도 2는 NAS 점수의 결과를 도시한 것으로서, 여기서 NAS 점수의 수직 좌표는 지방증, 풍선 변성 및 소엽 염증의 점수의 합계이다. 모델 그룹과 비교하여, KH06은 용량 의존적이었고, 모두는 점수에서 유의한 감소를 달성하였다. 한편, 1 mg/kg의 KH06은 3 mg/kg의 MGL3196과 동일한 효능을 가졌다.
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Claims (15)

  1. 화학식 I의 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구약물:
    Figure pct00102

    화학식 I
    식 중,
    R1은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 카바모일 또는 -COR10이고;
    X는 선택적으로 치환된 메틸렌, -O-, -S- 또는 -SO2-이고;
    Ra는 수소, 할로겐, C1-6 선형 및 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬로부터 선택되거나; 또는 2개의 인접한 Ra가 결합하여 탄소환 고리 또는 복소환형 고리를 형성하거나;
    L1은 단일 결합, 메틸렌, -CH=CH-, -O-, -CO-, -NR3-, -NR3CO-, -CONR3-, -CH2NR3-, 또는 -S-이고;
    L2는 단일 결합 또는 - (CR4R5)p이고;
    R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
    Figure pct00103

    Figure pct00104

    Figure pct00105
    또는
    Figure pct00106
    으로 표시되는 기이고;
    R3은 수소, 또는 선택적으로 치환된 알킬이고;
    R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 할로겐 또는 선택적으로 치환된 알킬로부터 선택되거나, 또는 R4 및 R5는 결합되어 사이클로알킬을 형성하고;
    R6은 수소, 시아노, 아미노, COOH, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 CC3-6 할로사이클로알킬이고;
    R8은 수소, 시아노, COOH, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 CC3-6 할로사이클로알킬이고;
    R7 및 R9는 수소, C1-3 알킬, 또는 C1-3 할로알킬이고;
    R10은 선택적으로 치환된 알킬, 아미노, 하이드록실, 선택적으로 치환된 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴, 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고;
    n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 그리고
    p는 0, 1 또는 2이다.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 I의 화합물은 화학식 II로 나타내는, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구약물:
    Figure pct00107

    화학식 II
    식 중, Rb, Rc, Rd 및 Re는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이거나; 또는 Rb 및 Rc는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하거나; 또는 Rd 및 Re는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성한다.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 화학식 I의 화합물은 화학식 III으로 나타내는, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구약물:
    Figure pct00108

    화학식 III
    식 중,
    Rb 및 Rc는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이고; 그리고
    A는 O 또는 메틸렌이다.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 하기로부터 선택되는, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물:
    1) 선택적으로 치환된 C1-6 선형 및 분지형 알킬;
    2) 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬;
    3) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C3-8 비-방향족 헤테로사이클릴;
    4) 선택적으로 치환된 페닐; 또는
    5) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C5-6 헤테로아릴.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -(CR11R12)mR13로부터 선택되고; R11 및 R12는 수소, 중수소, 할로겐, 하이드록실, 아미노 또는 선택적으로 치환된 C1-4 알킬로부터 선택되고; 그리고 R13은
    1) 수소 또는 중수소;
    2) 할로겐,
    3) 하이드록실;
    4) 아미노;
    5) 카복실;
    6) 선택적으로 치환된 C1-4 알킬, 또는 C1-4 알콕시;
    7) 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬;
    8) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C3-8 비-방향족 헤테로사이클릴;
    9) 선택적으로 치환된 페닐; 또는
    10) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C5-6 헤테로아릴로부터 선택되고; 그리고
    m은 0, 1, 2 또는 3인, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -COR10에서 선택되고, R10은 하기로부터 선택되는, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물:
    1) 아미노;
    2) 하이드록실;
    3) 선택적으로 치환된 C1-4 알킬, 또는 C1-4 알콕시;
    4) 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬;
    5) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C3-8 비-방향족 헤테로사이클릴;
    6) 선택적으로 치환된 페닐; 또는
    7) 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 C5-6 헤테로아릴.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 하기:
    Figure pct00109

    Figure pct00110
    또는
    Figure pct00111
    로부터 선택되고:
    바람직하게는 Rb, Rc, Rd 및 Re는 수소, 중수소 또는 할로겐으로부터 선택되고;
    바람직하게는 L1은 단일 결합, -O-, -NH- 또는 -NHCO-에서 선택되고;
    바람직하게는 L2는 단일 결합 또는 메틸렌으로부터 선택되고; 그리고
    바람직하게는 R2는
    Figure pct00112

    Figure pct00113
    또는
    Figure pct00114
    로부터 선택되는, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물.
  8. 제2항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 C3-8 사이클로알킬이고;
    X는 O, S 또는 -CH2-이고;
    Rb, Rc, Rd 및 Re는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이거나; 또는 Rb 및 Rc는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하거나; 또는 Rd 및 Re는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하고;
    L1은 단일 결합, -NR3-, -O 또는 -S-이고;
    L2는 단일 결합 또는 -CH2-이고;
    R2는 하기 화학식:
    Figure pct00115

    Figure pct00116

    Figure pct00117
    또는
    Figure pct00118
    으로 표시되는 그룹으로부터 선택되고;
    R3은 수소, 또는 선택적으로 치환된 C1- 6 알킬이고;
    R6은 수소, 시아노, 아미노, COOH, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 CC3-6 할로사이클로알킬이고;
    R8은 수소, 시아노, COOH, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 CC3-6 할로사이클로알킬이고; 그리고
    R7 및 R9는 수소, C1-3 알킬, 또는 C1-3 할로알킬인, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물.
  9. 제2항 또는 제8항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고;
    Rb, Rc, Rd 및 Re는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형, 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이거나; 또는 Rb 및 Rc는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하거나; 또는 Rd 및 Re는 결합하여 5- 또는 6-원 사이클로알킬, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 비-방향족 복소환형 고리를 형성하고;
    X는 O, S 또는 -CH2-이고;
    L1은 단일 결합, -O, -S- 또는 -NH-이고;
    L2는 단일 결합이고;
    R2는 하기 화학식:
    Figure pct00119
    Figure pct00120
    또는
    Figure pct00121
    으로 표시되는 그룹으로부터 선택되고;
    R6은 수소, 시아노, C1-6 알킬, 또는 C1-6 할로알킬이고;
    R8은 수소, 시아노, C1-6 알킬, 또는 C1-6 할로알킬이고; 그리고
    R7 및 R9는 수소, C1-3 알킬, 또는 C1-3 할로알킬인, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물.
  10. 제2항, 제8항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 벤질, 또는 수소, 중수소, 삼중수소, C1-6 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN로 선택적으로 치환된 C5-6 사이클로알킬메틸렌, 더욱 바람직하게는 이소프로필 또는 벤질이고;
    Rb 및 Rd는 할로겐이고, Rc 및 Re는 수소이고, 그리고 Rb 및 Rd는 추가로 바람직하게는 염소이고;
    X는 O, S 또는 -CH2-이고;
    L1은 단일 결합, -O, -S- 또는 -NH-이고;
    L2는 단일 결합 또는 -CH2-이고;
    R2는 하기 화학식:
    Figure pct00122
    Figure pct00123
    또는
    Figure pct00124
    으로 표시되는 그룹으로부터 선택되고; 그리고
    R6, R7, R8 및 R9는 수소, 또는 C1-6 알킬, 또는 C3-8 사이클로알킬인, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물.
  11. 제1항에 있어서, R1은 수소, C1-10 알킬, C3-10 사이클로알킬, C3-10 사이클로알킬C1 -6 알킬, C5-10 아릴, C5-10 아릴C1 -6 알킬, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로사이클릴, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로아릴, 아미노, 또는 -COR10이고, 그리고 C1-10 알킬, C3-10 사이클로알킬, C3-10 사이클로알킬C1 -6 알킬, C5-10 아릴, C5-10 아릴C1 -6 알킬, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로사이클릴, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로아릴, 또는 아미노는 비치환되거나, 중수소, 삼중수소, C1-6 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN에 의해 치환될 수 있고;
    X는 메틸렌, -O-, -S- 또는 -SO2-이고;
    Ra는 수소, 중수소, 할로겐, C1-6 선형 또는 분지형 알킬, 또는 사이클로알킬이거나; 또는 2개의 인접한 Ra는 결합하여 5-10 원 탄소환 고리, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 복소환형 고리를 형성하고;
    L1은 단일 결합, 메틸렌, -O-, -CO-, -NR3-, -NR3CO-, -CONR3-, -CH2NR3-, 또는 -S-이고;
    L2는 단일 결합 또는 C1-6 알킬이고;
    R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
    Figure pct00125
    Figure pct00126
    또는
    Figure pct00127
    으로 표시되는 기이고;
    R3은 수소, 또는 C1-6 알킬이고;
    R6은 수소, 시아노, 아미노, COOH, C1-6 알킬, 또는 C1-6 할로알킬이고;
    R8은 수소, 시아노, COOH, C1-6 알킬, 또는 C1-6 할로알킬이고;
    R7 및 R9는 수소, C1-3 알킬, 또는 C1-3 할로알킬이고;
    R10은 C3-10 사이클로알킬, C5-10 아릴, 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로사이클릴, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-10 원 헤테로아릴이고; 그리고
    n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 그리고
    바람직하게는
    R1은 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로프로판메틸, 사이클로부탄메틸, 사이클로펜탄메틸, 사이클로헥산메틸, 페닐, 벤질, 또는 -COR10이고, 그리고 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로프로판메틸, 사이클로부탄메틸, 사이클로펜탄메틸, 사이클로헥산메틸, 페닐, 또는 벤질은 비치환되거나, 중수소, C1-3 알킬, 하이드록실, 할로겐, 또는 CN에 의해 치환될 수 있고;
    X는 메틸렌, -O-, -S- 또는 -SO2-이고;
    Ra는 할로겐이거나; 또는 2개의 인접한 Ra는 결합하여 5 원 탄소환 고리, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유하는 5 원 복소환형 고리를 형성하고;
    L1은 단일 결합, -O-, -NH-, -NHCO-, -CONH-, -CH2NH-, 또는 -S-이고;
    L2는 단일 결합, 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
    R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
    Figure pct00128
    Figure pct00129
    또는
    Figure pct00130
    으로 표시되는 기이고;
    R6은 수소, 시아노, COOH, 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
    R8은 수소, 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
    R7 및 R9는 수소 또는 메틸이고;
    R10은 페닐이고; 그리고
    n은 2 또는 3인, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물.
  12. 제11항에 있어서, R1은 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로프로판메틸, 사이클로부탄메틸, 사이클로펜탄메틸, 사이클로헥산메틸, 페닐, 또는 벤질이고, 그릴고 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로프로판메틸, 사이클로부탄메틸, 사이클로펜탄메틸, 사이클로헥산메틸, 페닐, 또는 벤질은 비치환되거나, 중수소, C1-3 알킬, 하이드록실, F, Cl, Br, 또는 CN에 의해 치환될 수 있고;
    X는 메틸렌, -O- 또는 -S-이고;
    Ra는 F, Cl, 또는 Br이거나; 또는 2개의 인접한 Ra는 결합하여 5 원 탄소환 고리, 또는 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로부터 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유하는 5 원 복소환형 고리를 형성하고;
    L1은 단일 결합, -O-, -NH- 또는 -NHCO-이고;
    L2는 단일 결합, 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
    R2는 카복실, 또는 하기 화학식:
    Figure pct00131
    또는
    Figure pct00132
    으로 표시되는 기이고;
    R6은 수소, 시아노 또는 메틸이고;
    R7은 수소이고; 그리고
    n은 2 또는 3인, 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물.
  13. 하기 화학식의 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구약물:
    Figure pct00133

    Figure pct00134

    Figure pct00135
    또는
    Figure pct00136
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구약물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  15. β 수용체 효능제 작용과 관련된 질환을 예방하거나 치료하기 위한 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 그의 전구약물, 또는 제14항에 따른 약학적 조성물로서, 바람직하게는, β 수용체 효능제 작용과 관련된 질환은 비만, 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지질혈증, 이상지질혈증, 갑상선암, 대사 증후군, 심혈관 질환, 관상 동맥 질환, 심근경색증, 심실 결핍, 심부전, 지방간, 간경변, 당뇨병, 지방간염, 비-알코올성 지방간염, 비-알코올성 지방 간 질환, 죽상동맥경화증, 또는 갑상선기능저하증 질환, 또는 장애인, 화합물 또는 약제학적 조성물.
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