KR20230012568A - 인간 il-15 돌연변이체 및 그 용도 - Google Patents

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Abstract

인간 IL-15분자의 돌연변이체 및 IL-15 돌연변이체 및 조합 돌연변이를 포함하는 융합 단백질을 제공하고, 여기서, 상기 융합 단백질은 면역 세포의 활성화 및 증폭을 매개할 수 있고, 종양 질병 치료에 사용할 수 있다.

Description

인간 IL-15 돌연변이체 및 그 용도
본 발명은 인간 IL-15 돌연변이체, 이를 코딩하는 핵산, IL-15 돌연변이체 및 조합 돌연변이를 포함하는 융합 단백질, 약물 조성물, 및 종양 치료를 위한 약물 조성물의 관련 용도에 관한 것이다.
인터류킨-15(Interleukin 15, IL-15)는 1994년 그랩스타인(Grabstein)이 원숭이 신장의 피부 세포주 CV-1/EBNA를 검출하는 배양 상등액에서 발견하여 명명한 중요한 가용성 사이토카인이다. IL-15는 예컨대 단핵/대식 세포, 림프구, 상피세포 등과 같은 다양한 세포와 조직에서 발현될 수 있다.
IL-15생물학적 활성
IL-15에 의해 매개되는 신호 경로
인터류킨 15 수용체(IL15R): IL15R은 조혈 인자 슈퍼 패밀리에 속하고, α, β(CD122로도 칭함), γ(CD132로도 칭함, 흔히 γ사슬, γc이 있음) 이 3개의 서브 유닛으로 구성된다. IL2와 IL15는 β사슬 수용체를 공유한다. IL2, IL4, IL7, IL9, IL15 및 IL21은 γ사슬 수용체를 공유한다. IL2 및 IL15의 수용체는 β사슬 및 γc사슬을 공유하나, IL2와 IL15는 모두 그 자체 특이성 α 수용체 사슬을 가진다. 인간 IL15Rα는 I 형 막관통 단백질에 속하고, IL2Rα 및 IL15Rα는 모두 하나의 보존된 단백질 결합 모티프(sushi 도메인)를 가진다. IL15와 IL15Rα는 친화력이 비교적 높으나(Kd는 약 10-11 M), 이들의 결합은 신호를 전달하지 않는다. IL15와 IL15βγ 이종이량체의 친화력은 중간 정도이고(Kd는 약 10-9 M), 이들의 결합은 신호를 전달할 수 있고; IL15와 IL15αβγ 이종삼량체의 친화력은 IL15와 IL15βγ 이종이량체의 친화력과 유사하고(Kd는 약 10-9 M), 이들의 결합은 신호를 전달할 수 있다. IL2와 IL15의 수용체는 β사슬 및 γ사슬을 공유하기에, IL2와 IL15는 여러 유사한 생물학적 기능을 가지고, 예컨대, 모두 T 세포 및 NK 세포의 증식을 촉진할 수 있다.
IL15와 수용체의 결합: IL15Rα는 주로 DC 및 단핵 세포에서 발현된다. 대부분의 경우, IL15/IL15Rα는 트랜스 제시된(trans-presented) 형태로 수용체에 결합된다. 즉 IL-15 및 IL-15Ra가 같은 세포에서 발현된 후, 세포 내 IL-15와 IL-15Rα의 sushi 도메인은 높은 친화력으로 결합된 후 막표면에 운반되고, 그 후 이의 반응성 세포(예컨대 T 세포 또는 NK 세포) 막표면의 βγ 이종이량체 복합체 또는 αβγ 이종삼량체 복합체와 결합하며, β 및 γ 수용체는 각각 다운 스트림 Jak1 및 Jak3을 활성화할 수 있어, STAT-3 및 STAT-5 활성화를 초래하고, 캐스케이드 반응을 활성화하여, 특이성 유전자 발현을 유도한다. IL15가 자가분비 형태로 이펙터 세포에 작용할 때, 시스(cis) 형태로 IL15 수용체와 작용하고, 다운스트림 신호를 활성화하여 이펙터 기능을 발생할 수 있다.
IL-15의 면역 조절 작용
IL-15는 광범위한 면역 조절 작용이 있고, 다양한 면역 세포의 활성, 증식 및 기능의 조절에 관여한다. (1) T 세포에 대한 조절 작용: IL-15는 T 세포의 활성화 및 증식을 촉진하고, 기억성 CD8+ T 세포의 생성을 촉진하며, 또한 체내 기억성 CD8+ T 세포의 수량 유지에서도 중요한 작용을 할 수 있다. 즉 Treg 세포가 존재하는 경우에도, IL-15는 CD8+ T 세포의 기능 및 수량을 잘 유지할 수 있다. (2) NK 세포에 대한 조절 작용: IL-15는 NK 세포의 활성화 및 증식에 중요한 작용을 하고, NK 세포의 ADCC 살상 능력을 향상시킬 수 있다. (3) 기타 면역 세포에 대한 조절 작용: IL-15는 DC 및 대식 세포의 기능적 성숙에도 중요한 작용을 한다. IL-15는 DC가 공동 자극 인자 및 IFN-γ을 발현하는 것을 촉진하고, DC가 CD8+T 세포와 NK 세포를 활성화시키는 능력을 향상시킬 수 있다. 그 외, IL-15는 호중구(neutrophil granulocyte)의 증식을 촉진할 수 있다.
IL-15의 항암 작용
IL-15는 다양한 면역 세포를 증폭 및 활성화시키는 능력에 기반하여, 항종양 작용을 구현하고, 임상 연구에서도 IL-15가 우수한 항종양 치료 효과를 가지는 것이 입증되었다. 그러나 야생형 IL-15의 반감기가 짧고 이의 분자 크기가 작으며 신장 클리어런스가 높아, 하루에도 여러 번 주사하거나 또는 피하로 주사하는 것이 극히 불편하다. 따라서, 단순히 야생형 재조합 IL-15의 적용은 마찬가지로 종양 치료에서 한계가 있다.
연구에 따르면, T 세포 및 NK 세포 증식에 대한 IL-15의 활성을 저하시키면 IL-15의 반감기를 증가시키는 동시에 그 독성을 줄일 수 있는 것으로 나타났다. 그 외, IL-15 및 타겟 종양 관련 항원의 항체로 구성된 융합 단백질은 IL-15의 특이성을 증가시키고, 종양 미세 환경에서의 IL-15의 농도를 증가시키며, IL-15의 독성을 감소시킬 수 있다. 따라서, 활성이 저하된 IL-15 돌연변이체를 개발하면, 종양 치료에서 IL-15의 용량 반응 관계를 향상시켜, IL-15의 임상 항종양 적용을 확장할 수 있어, 사회적, 경제적 의미가 중대하다.
본 발명은 IL-15 돌연변이체, 상기 돌연변이체를 코딩하는 핵산, 상기 돌연변이체를 포함하는 융합 단백질 및 약물 조성물 및 종양 세포를 살상하기 위한 이들의 기능, 종양 치료를 위한 용도를 제공한다.
제1 양태에 있어서, 본 발명은 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드를 제공하고, 상기 폴리펩티드는 야생형 IL-15의 Val3, Ile6, Asp8 또는 His105에 대응되는 하나 또는 복수의 아미노산 잔기 위치의 하나 또는 복수의 돌연변이를 포함한다.
제2 양태에 있어서, 본 발명은 IL-15 돌연변이체를 포함하는 폴리펩티드를 제공하고, 상기 폴리펩티드는 야생형 IL-15의 Val3, Ile6, Asp8 또는 His105에 대응되는 하나 또는 복수의 아미노산 잔기 위치의 하나 또는 복수의 돌연변이를 포함한다.
하나의 실시 형태에 있어서, IL-15 돌연변이체 폴리펩티드는 적어도 Val3, Ile6, Asp8 또는 His105 중의 2개, 3개, 또는 4개의 아미노산 잔기 위치의 돌연변이를 포함한다.
하나의 실시 형태에 있어서, 상기 돌연변이는 치환, 삽입 또는 결실이다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 돌연변이는 Val3Leu(V3L), Ile6Asp(I6D), Ile6Pro(I6P), Asp8Glu(D8E), Asp8Gln(D8Q), Asp8Arg(D8R), Asp8Ser(D8S), Asp8Val(D8V), Asp8Gly(D8G), Asp8Ile(D8I), Asp8Leu(D8L), Asp8Thr(D8T), His105Asn(H105N) 및/또는 His105Lys(H105K)으로부터 선택되는 아미노산 치환이다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드 또는 IL-15 돌연변이체를 포함하는 폴리펩티드는 (1) Asp8Glu; (2) Asp8Gln; (3) Asp8Arg; (4) Asp8Ser; (5) Asp8Val; (6) Val3Leu; (7) Ile6Asp; (8) His105Lys; (9) His105Asn; (10) Asp8Gly; (11) Asp8Ile; (12) Asp8Leu; (13) Ile6Pro; (14) Asp8Thr; (15) Asp8Glu 및 Val3Leu; (16) Asp8Glu 및 Ile6Asp; (17) Val3Leu 및 Ile6Asp; (18) Ile6Asp 및 His105Lys; (19) Asp8Ser 및 His105Lys; (20) Asp8Ser 및 His105Asn; 또는, (21) Val3Leu, Ile6Asp 및 His105Lys의 돌연변이 또는 돌연변이 조합을 포함한다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 IL-15 돌연변이체와 인간 야생성 IL-15는 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 일치성을 갖는다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 IL-15 돌연변이체의 아미노산 서열은 SEQ ID NO.3, SEQ ID NO.5, SEQ ID NO.7, SEQ ID NO.9, SEQ ID NO.11, SEQ ID NO.13, SEQ ID NO.15, SEQ ID NO.17, SEQ ID NO.19, SEQ ID NO.21, SEQ ID NO.23, SEQ ID NO.25, SEQ ID NO.27, SEQ ID NO.29, SEQ ID NO.35, SEQ ID NO.37, SEQ ID NO.39, SEQ ID NO.41, SEQ ID NO.43, SEQ ID NO.45 또는 SEQ ID NO.47로 표시된 바와 같다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드 또는 IL-15 돌연변이체를 포함하는 폴리펩티드는 (1) 인간 CD8+ T 세포의 증식을 매개하고; (2) 인간 NK 세포의 증식을 매개하며; 및/또는, (3) 종양의 성장을 억제하는 활성을 갖는다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드 또는 IL-15 돌연변이체를 포함하는 폴리펩티드는 CD8+ T 및/또는 NK 세포 증식/증폭을 매개하는 활성이 야생형 IL-15를 포함하는 폴리펩티드의 활성보다 작다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 야생형 IL-15의 아미노산 서열은 SEQ ID NO.1로 표시된 바와 같다.
제3 양태에 있어서, 본 발명은 단백질을 제공하고, 상기 단백질은 상기 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드 또는 IL-15 돌연변이체를 포함하는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 상기 단백질은 상기 IL-15 돌연변이체와 융합되는 면역 글로블린 분자 또는 그 일부 및/또는 상기 IL-15 돌연변이체와 융합되는 IL-15Rα를 더 포함한다.
하나의 실시 형태에 있어서, 상기 면역 글로블린 분자는 항체 또는 항원 결합 단편이고; 상기 면역 글로블린 분자의 일부는 면역 글로블린 Fc영역이다.
하나의 실시 형태에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 (1) 키메라 항체 또는 그 단편; (2) 인간화 항체 또는 그 단편; 또는, (3) 전 인간화 항체 또는 그 단편으로부터 선택된다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 F(ab)2, Fab’, Fab, Fv, scFv, 이중 특이성 항체, 나노 항체 및 항체 최소 인식 단위 중의 하나 또는 복수로부터 선택된다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 면역 글로블린 Fc영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE 또는 IgD의 임의의 하나의 Fc영역으로부터 선택되고; 바람직하게는 인간 또는 뮤린 항체IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 불변 영역의 서열을 포함한다. 바람직하게는, 상기 면역 글로블린 Fc영역의 아미노산 서열은 SEQ ID NO.73으로 표시된 바와 같다.
다른 실시 형태에 있어서, IL-15 돌연변이체는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 면역 글로블린 분자 또는 그 일부와 융합되거나, 또는 IL-15 돌연변이체는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 IL-15 Rα와 융합되며; 바람직하게는 연결펩티드를 사용하고; 바람직하게는 SEQ ID NO.65, SEQ ID NO.67, SEQ ID NO.69 또는 SEQ ID NO.71로 표시되는 연결펩티드를 사용한다.
다른 실시 형태에 있어서, IL-15 돌연변이체는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 IL-15Rα와 융합되고, 또 면역 글로블린 분자 또는 그 일부와 융합되며; 바람직하게는 연결펩티드를 사용하고; 바람직하게는 SEQ ID NO.65, SEQ ID NO.69 또는 SEQ ID NO.71로 표시되는 연결펩티드를 사용한다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 각 도메인의 연결 순서는 N말단에서 C말단까지
(1) 면역 글로블린 분자 또는 그 일부, IL-15Rα 및 IL-15 돌연변이체;
(2) 면역 글로블린 분자 또는 그 일부, IL-15 돌연변이체 및 IL-15Rα;
(3) IL-15 돌연변이체, IL-15Rα 및 면역 글로블린 분자 또는 그 일부;
(4) IL-15Rα, IL-15 돌연변이체 및 면역 글로블린 분자 또는 그 일부;
(5) IL-15 돌연변이체 및 면역 글로블린 분자 또는 그 일부;
(6) 면역 글로블린 분자 또는 그 일부 및 IL-15 Rα;
(7) IL-15Rα 및 면역 글로블린 분자 또는 그 일부;
(8) IL-15 돌연변이체 및 IL-15Rα; 또는
(9) IL-15Rα 및 IL-15 돌연변이체이다.
다른 실시 형태에 있어서, IL-15Rα 또는 IL-15 돌연변이체가 면역 글로블린 분자와 융합될 때, 상기 IL-15Rα 또는 IL-15 돌연변이체는 면역 글로블린 분자 중쇄 가변영역의 N말단 또는 면역 글로블린 Fc영역의 C말단에 융합되고; IL-15Rα 또는 IL-15 돌연변이체가 면역 글로블린 Fc영역과 융합될 때, 상기 IL-15Rα 또는 IL-15 돌연변이체는 면역 글로블린 Fc영역의 N말단 또는 C말단에 융합된다.
제4 양태에 있어서, 본 발명은 단백질 또는 항체 융합 작제물/복합체를 제공하고, 이는
(1) 면역 글로블린 중쇄;
(2) 면역 글로블린 경쇄;
(3) IL-15Rα; 및
(4) 제1 양태, 제2 양태에 따른 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드를 포함한다.
하나의 실시 형태에 있어서, IL-15Rα는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 면역 글로블린 중쇄 가변영역의 N말단 또는 면역 글로블린 Fc영역의 C말단에 융합된다.
하나의 실시 형태에 있어서, IL-15 돌연변이체 폴리펩티드는 IL-15Rα에 비공유 연결되거나, 또는 IL-15 돌연변이체는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 IL-15Rα 타단에 융합된다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 단백질은 (1) - (4) 부분으로 구성된 단량체의 동종이량체를 포함한다.
제5 양태에 있어서, 본 발명은 단백질 또는 Fc융합 작제물을 포함하고, 상기 작제물은
(1) 면역 글로블린 Fc영역;
(2) IL-15Rα; 및
(3) 제1 양태, 제2 양태에 따른 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드를 포함한다.
하나의 실시 형태에 있어서, IL-15Rα는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드의 N말단 또는 C말단에 융합되고, 또 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 면역 글로블린 Fc영역의 N말단 또는 C말단에 융합된다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 단백질은 (1) - (3) 부분으로 구성된 단량체의 동종이량체를 포함한다.
다른 바람직한 실시 형태에 있어서, 상기 면역 글로블린은 항PD-L1 항체로부터 선택되고; 상기 항PD-L1 항체는 바람직하게는 Tecentriq, KN-035 또는 794-h1-71이다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 항PD-L1 항체는 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역을 포함하고, 여기서 상기 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역은 각각 SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100로 표시되는 서열을 갖거나, 또는 SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100로 표시되는 서열에 비해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 더욱 높은 일치성을 갖는 서열을 갖거나; 또는, 상기 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역은 각각 SEQ ID NO: 97 및 SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열을 갖거나, 또는 SEQ ID NO: 97 및 SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열에 비해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 더욱 높은 일치성을 갖는 서열을 갖는다.
다른 바람직한 실시 형태에 있어서, 상기 IL-15Rα는 IL-15Rα-sushi로부터 선택되고; 바람직하게는, 상기 IL-15Rα-sushi는 SEQ ID NO.49, SEQ ID NO.51, SEQ ID NO.53, 또는 SEQ ID NO.55로 표시되는 아미노산 서열을 갖는다.
제6 양태에 있어서, 본 발명은 PD-L1에 특이적으로 결합될 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역을 포함하며; 바람직하게는, 상기 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역은 각각 SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100로 표시되는 서열을 갖거나, 또는 SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100로 표시되는 서열에 비해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 더욱 높은 일치성을 갖는 서열을 갖는다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 인간 프로그램화된 사멸 리간드-1(PD-L1)과 결합되는 해리 상수(KD)는 1.8 × 10-9 M 이하이고, 사이노몰구스 원숭이 프로그램화된 사멸 리간드-1(PD-L1)과 결합되는 해리 상수(KD)는 9.4 × 10-10 M 이하이거나; 또는, 선택적으로, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 원숭이 PD-L1과 결합되거나 또는 결합되지 않고; 선택적으로, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 뮤린 PD-L1과 결합되거나 또는 결합되지 않는다.
하나의 구체적인 실시 형태에 있어서, 상기 항PD-L1 항체는 PD-L1 또는 그 항원 에피토프에 경쟁적으로 결합되고,
(1) PD-L1재조합 단백질 및 PD-L1을 발현하는 세포에 특이적으로 결합되며;
(2) PD-L1과 PD-1단백질의 결합을 차단하고;
(3) PD-1과 세포 표면에서 발현되는 PD-L1의 결합을 억제하며;
(4) T 세포 활성을 증강시키고; 및/또는
(5) 종양의 성장을 억제하는 활성을 갖는다.
하나의 바람직한 실시 형태에 있어서, 상기 항PD-L1 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE 또는 IgD 중 임의의 하나로부터 유래되는 불변 영역을 포함하고; 바람직하게는 인간 또는 뮤린 항체IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 불변 영역의 서열을 포함한다.
다른 바람직한 실시 형태에 있어서, 상기 PD-L1 항체는 F(ab)2, Fab’, Fab, Fv, scFv, 이중 특이성 항체 중의 하나 또는 복수로부터 선택된다.
제7 양태에 있어서, 본 발명은 단리된 핵산 분자를 제공하고, 상기 핵산 분자는 상기 제1 양태 내지 제6 양태 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 단백질, 항원 또는 항원 결합 단편을 코딩한다.
제8 양태에 있어서, 본 발명은 발현 벡터를 제공하고, 상기 발현 벡터는 제7 양태에 따른 단리된 핵산 분자를 포함한다.
제9 양태에 있어서, 본 발명을 숙주 세포를 제공하고, 상기 숙주 세포는 제7 양태에 따른 단리된 핵산 분자 또는 제8 양태에 따른 발현 벡터를 포함하며; 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 진핵 세포 또는 원핵 세포이고; 더욱 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 포유 동물 세포, 효모 세포, 곤충 세포, 대장간균 및/또는 고초간균으로부터 유래되며; 더욱 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 세포(CHO)로부터 선택된다.
제10 양태에 있어서, 본 발명은 폴리펩티드 또는 단백질의 제조 방법을 제공하고, 상기 방법은 적합한 조건 하에서 제9 양태에 따른 숙주 세포를 배양하고, 상기 폴리펩티드 또는 단백질를 단리하는 단계를 포함한다.
제11 양태에 있어서, 본 발명은 약물 조성물을 제공하고, 상기 약물 조성물은 제1 양태 내지 제6 양태 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 단백질, 항원 또는 항원 결합 단편, 상기 제7 양태에 따른 단리된 핵산 분자, 상기 제8 양태에 따른 발현 벡터, 제9 양태에 따른 숙주 세포, 또는 제10 양태에 따른 방법으로 제조된 제품; 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하고; 바람직하게는, 상기 약물 조성물은 별도의 항종양제를 더 포함한다.
제12 양태에 있어서, 본 발명은 대상체 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 약물 제조에서 상기 제1 양태 내지 제6 양태에 따른 폴리펩티드, 단백질, 항원 또는 항원 결합 단편, 상기 제7 양태에 따른 단리된 핵산 분자, 상기 제8 양태에 따른 발현 벡터, 제9 양태에 따른 숙주 세포, 제10 양태에 따른 방법으로 제조된 제품, 또는 제11 양태에 따른 약물 조성물의 용도를 제공하고; 상기 질병은 바람직하게는 종양이다.
제13 양태에 있어서, 본 발명은 대상체의 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 방법을 제공하고, 상기 방법은 이러한 수요가 있는 환자에게 상기 제1 양태 내지 제6 양태에 따른 폴리펩티드, 단백질, 항원 또는 항원 결합 단편, 상기 제7 양태에 따른 단리된 핵산 분자, 상기 제8 양태에 따른 발현 벡터, 제9 양태에 따른 숙주 세포, 제10 양태에 따른 방법으로 제조된 제품, 또는 제11 양태에 따른 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함하고; 상기 질병은 바람직하게는 종양이다.
용어 및 정의
달리 설명하지 않는 한, 본문에서 사용되는 용어는 본 기술 분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 의미를 가진다. 본 문에서 명백해게 정의하는 용어에 있어서, 이러한 용어의 의미는 본문에서 정의한 바에 준한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “IL-15”, “IL15” 또는 “인터류킨15(interleukin-15, IL-15)”은 다면 발현성 사이토카인이고, 이는 T 세포, B 세포 및 NK 세포를 활성화시키며 이러한 세포의 증식 및 생존을 매개한다. 그 외, IL-15는 CD8+기억성 T 세포를 활성화, 유지 및 증폭시킬 수 있다. 본 발명에 개시된 상기 “IL-15” 또는 “IL-15 펩티드 조각” 또는 “IL-15 폴리펩티드”는 임의의 IL-15(인터류킨 15) 또는 그 돌연변이체, 예컨대 인간 IL-15 또는 비인간 포유동물 IL-15 또는 비포유동물 IL-15일 수 있다. 예시적인 비인간 포유동물은 예컨대 돼지, 토끼, 원숭이, 우랑우탄, 마우스 등이고, 비포유동물은 예컨대 닭 등이다. 바람직하게는 인간의 인터류킨 15 성숙 분자는 데이터 베이스 UniProtKB를 참조하고, 등록 번호는 P40933, 49-162aa이다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “IL-15 야생형” 또는 “야생형 IL-15”는 천연 유래 인간 IL-15 또는 비인간 포유동물 IL-15 또는 비포유동물 IL-15를 지칭하고; 본 분야에서 이미 통용되는 IL-15폴리펩티드를 지칭할 수도 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “IL-15 돌연변이체”는 IL-15 수용체에 대한 친화력 향상 또는 저하 또는 특정 세포계 자극 시, T 세포 또는 NK 세포 증식 활성 및 사이토카인 방출 활성이 증가 또는 저하되는 돌연변이체 분자를 지칭하고, 여기서 상기 돌연변이체 분자는 하나 또는 복수의 아미노산의 치환, 추가 또는 결실에 의해 얻어진다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “IL-15Rα”는 임의의 종의 IL-15Rα 또는 그 기능성 단편, 예컨대 인간 IL-15Rα 또는 비인간 포유동물 IL-15Rα 또는 비포유동물 IL-15Rα를 지칭한다. 예시적인 비인간 포유동물은 예컨대 돼지, 토끼, 원숭이, 우랑우탄, 마우스 등이고, 비포유동물은 예컨대 닭 등이다. 바람직하게는 인간의 IL-15Rα이고; 바람직하게는 인간의 인터류킨 15 수용체 α세포외 도메인 단편(IL-15Rα ECD라고 칭함)이며; 바람직하게는 IL-15Rα-sushi는 표 1을 참조한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “IL-15Rα변이체”는 IL-15Rα에서 하나 또는 복수의 아미노산 결실, 삽입 또는 치환 돌연변이에 의해 형성된 것이고, 그 리간드 분자, 예컨대 IL15와 결합 능력을 갖는 기능성 돌연변이체이며, 바람직하게는 인간 IL15Rα 분자이고, 더욱 바람직하게는 인간 IL-15Rα 세포외 도메인 단편의 단축 형태이며, 즉 세포외 도메인 단편C말단로부터 시작하여 하나 또는 복수의 아미노산 결실 돌연변이를 통해 얻는 인간 인터류킨 15수용체α 활성을 갖는 분자이고, 바람직하게는 65-120개 아미노산의 결실 돌연변이 형태를 보류하며, 더욱 바람직하게는 65-102개 아미노산의 결실돌연변이단축 형태, 예컨대 IL-15Rα-sushi를 보류하고; 바람직하게는 IL-15Rα-sushi는 표 3을 참조하도록 한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “면역 글로블린 Fc영역”은 면역 글로블린사슬 불변 영역, 특히 면역 글로블린 중쇄 불변 영역의 카르복실기 말단 또는 그 일부를 지칭하고, 이는 항원 결합 활성을 가지지 않으며, 항체 분자가 이펙트 분자 및 세포와 서로 작용하는 부위이다. 본 발명의 “면역 글로블린 Fc영역”은 임의의 Fc 또는 그 변이체일 수 있고, 이는 인간 또는 비인간 포유동물로부터 유래된다. 예를 들어, 면역 글로블린 Fc영역은 중쇄 CH1, CH2, CH3, CH4의 두 개 또는 그 이상의 도메인과 면역 글로블린 흰지 영역의 조합을 포함할 수 있다. Fc는 상이한 종으로부터 유래될 수 있고, 바람직하게는 인간의 면역 글로블린이다. 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 따르면, 면역 글로블린은 상의한 클래스로 나뉠 수 있고, 주로 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5개 유형의 면역 글로블린을 포함한다. 그 중 일부는 서브 클래스(동종형), 예컨대 IgG-1, IgG-2, IgG-3, IgG-4; IgA-1 및 IgA-2로 더 나뉠 수 있다. 바람직하게, “Fc영역”은 적어도 하나의 면역 글로블린 흰지 영역 및 IgG의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 더욱 바람직하게는 IgG1의 하나의 CH2도메인, 하나의 CH3도메인 및 하나의 면역 글로블린 흰지 영역을 포함하고, 흰지 영역 시작 아미노산 위치는 변경될 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “Fc변이체”는 Fc에서 적절한 부위 위치의 하나 또는 복수의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실 돌연변이에 의해 야기되는 Fc 구조 또는 기능의 변화를 지칭한다. “Fc변이체 사이의 상호 작용”은 돌연변이의 설계를 거쳐 Fc변이체 사이에 형성되는 공간 충전 이펙트, 정전기 스티어링, 수소 결합 작용, 소수성 작용 등을 의미한다. Fc변이체 사이의 상호 작용은 안정적인 이종이량체 단백질을 형성하는데 도움을 준다. 바람직한 돌연변이 유발 설계는 “노브 인투 홀(Knob-into-Hole)” 형태의 돌연변이 유발 설계이다.
Fc변이체의 돌연변이 설계 기술은 본 분야에서 이중 특이적 항체 또는 이종이량체화된 Fc융합 단백질의 제조에 이미 광벙위하게 적용되고 있다. 대표적으로 Cater 등(Protein Engineering [단백질공학] 제9권, 제7기, 제617-621페이지, 1996)이 제기한 “노브 인투 홀” 형태; 암젠사(Amgen) 기술자는 정전기 스티어링(Electrostatic Steering)에 의해 형성된Fc 함유 이종이량체 형태(US 20100286374 A1); Jonathan H.Davis 등(Protein Engineering [단백질공학], Design & Selection [디자인과 선택] 제1-8페이지, 2010)이 제기한 IgG/IgA사슬 교환을 통해 형성된 이종이량체 형태(SEED bodies); 젠맵사(Genmab) DuoBody(Science [과학], 2007.317(5844))플랫폼 기술에 의해 형성된 이중 특이적 분자; 젠코사(Xencor)의 기술자가 구조 계산 및 Fc아미노산 돌연변이를 종합하고, 상이한 작용 방식을 종합하여 형성된 이종이량체 단백질 형태(mAbs 3:6, 546-557; 2011년 11월/12월); 알파맵사(Alphamab Company)의 전하 네트워크를 기반으로 하는 Fc 개조 방법(CN 201110459100.7)을 통해 얻은 이종이량체 단백질 형태; 및 Fc아미노산 변화 또는 기능 개조에 기반하여 이종이량체 기능 단백질의 유전자 공학화를 구현하는 기타 방법이 있다. 본 발명의 Fc변이체 단편 중의 노브/홀(Knob/Hole)구조는 두 가닥의 Fc단편 각각의 돌연변이를 지칭하고, 돌연변이 후 “노브 인투 홀” 형태를 통해 결합된다. 바람직하게는 Cater 등의 “노브 인투 홀” 모델을 이용하여 Fc영역에서 부위 돌연변의 개조하여, 제1 Fc 변이체 및 제2 Fc변이체가 “노브 인투 홀”의 형태로 결합되어 이종이량체를 형성하도록 한다. 특정 면역 글로블린 클래스 및 서브 클래스로부터 특정 면역 글로블린 Fc영역을 선택하는 것은 본 분야의 기술자가 장악하고 있는 기술 범위 내에 있다. 바람직하게는 인간 항체IgG1, IgG2, IgG3, IgG4의 Fc영역이고, 더욱 바람직하게는 인간 항체IgG1의 Fc영역이다. 랜덤으로 제1 Fc변이체 또는 제2 Fc변이체 중 하나를 선택하여 노브 돌연변이시키고, 다른 하나는 홀 돌연변이시킨다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “항체”(Antibody, Ab)는 표적 항원과 특이적으로 결합되거나 또는 면역 반응성 면역 글로블린 분자를 가지고, 항체의 폴리클로날, 모노클로날, 유전자 공학 및 기타 변형 형태(키메라 항체, 인간화 항체, 전인간화 항체, 이종 커플링 항체(예를 들어 이중 특이성, 삼중 특이성 및 사중 특이성 항체, 디아바디, 트리바디 및 테트라바디, 항체 접합체를 포함하나 이에 한정되지 않음) 및 항체의 항원 결합 단편(예를 들어 Fab’, F(ab')2, Fab, Fv, rIgG 및 scFv단편을 포함)을 포함한다. 그 외, 별도로 정의하지 않는 한, 용어 “모노클로날 항체”(mAb)는 타겟 단백질에 특이적으로 결합될 수 있는 완전 항체 분자 및 불완전 항체 단편(예를 들어 Fab 및 F(ab')2단편을 포함하고, 이들은 완전 항체의 Fc단편이 부족하여(동물 순환에서 더욱 빨리 제거됨)이, Fc에 의해 매개되는 이펙트 기능이 결핍하다(effector function)(Wahl al., J. Nucl.Med.24: 316, 1983 참조; 그 내용은 본문에 통합됨).
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “인간화 항체”는 유전자 공학에 의해 조작된 비인간화 항체를 지칭하고, 그 아미노산 서열을 변형시켜 인간 항체의 서열과의 상동성을 향상시킨다. 통상적으로, 인간화 항체의 전부 또는 일부 CDR영역은 비인간화 항체(공여체 항체)로부터 유래되고, 전부 또는 일부의 비CDR영역(예를 들어, 가변영역FR 및/또는 불변 영역)은 인간 면역 글로블린(수용체 항체)으로부터 유래된다. 인간화 항체는 통상적으로 공여체 항체의 예기 특성을 전부 또는 일부 보류하였고, 항원 특이성, 친화력, 반응성, 면역 세포 활성의 능력의 향상, 면역 반응의 능력 증강 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
용어 “ 항체 접합체”는 항체 분자가 직접 또는 링커를 거쳐 다른 분자와 화학적으로 결합되어 형성되는 결합체/접합체를 지칭한다. 예를 들어 항체-약물 접합체(ADC)이고, 그 중 약물 분자는 상기 다른 분자이다.
용어 “모노클로날 항체”는 단일 클론(임의의 진핵, 원핵, 또는 파지 클론을 포함)으로부터 유래되는 항체를 지칭하고, 상기 항체의 생성 방법에 한정되지 않는다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “융합 단백질”(fusion protein)은 유전자 재조합 방법, 화학 방법 또는 기타 적절한 방법을 통해 두 개 또는 그 이상의 유전자의 코딩 영역을 연결하고, 동일 조절 서열의 제어 하에서 재조합된 유전자를 발현시켜 얻은 단백질 산물을 지칭한다. 본 발명의 융합 단백질에서, 두 개 또는 그 이상의 유전자의 코딩 영역 사이는 펩티드 링커 또는 연결 펩티드를 코딩하는 서열로 하나 또는 여러 위치에서 융합될 수 있다. 펩티드 링커 또는 연결 펩티드는 본 발명의 융합 단백질을 구축할 수 있다. 본 발명의 용어 “융합 단백질”은 항체/Fc융합 단백질 작제물/복합체, 또는 비공유 방식을 통해 형성되는 항체/Fc융합 단백질 작제물/복합체의 조성물을 지칭하고, 예를 들어, 본 발명에 개시된 융합 단백질은 이하의 구조로 나타낼 수 있다:
(1) 두 가닥의 단량체의 동종이량체를 포함하는 IL-15융합 단백질; 상기 단량체는 항체 중쇄, 항체 경쇄, IL-15 및 IL-15Rα sushi를 포함하고; 예를 들어, 항체 중쇄 Fc를 IL-15Rα sushi와 융합하고, 항체 경쇄 및 IL-15-WT(야생형) 또는 IL-15 돌연변이체와 공동 발현되어, IL-15와 IL-15Rα sushi가 비공유 연결을 형성하도록 하며;
(2) 두 가닥의 단량체의 동종이량체를 포함하는 IL-15융합 단백질; 상기 단량체는 항체 중쇄, 항체 경쇄, IL-15 및 IL-15Rα sushi를 포함하고; 예를 들어, 링커를 통해 항체 중쇄 Fc와 IL-15Rα sushi 및 IL-15-WT(야생형) 또는 IL-15 돌연변이체를 직렬 융합 및 발현시키고, 항체 경쇄와 공동 발현시키며;
(3) 두 가닥의 단량체의 동종이량체를 포함하는 IL-15융합 단백질; 상기 단량체는 Fc, IL-15 및 IL-15Rα sushi를 포함하고; 예를 들어, IL-15-WT 또는 IL-15 돌연변이체는 링커 및 IL15-Rα sushi를 통해 연결되고, IL15-Rα sushi는 또 링커를 통해 Fc에 연결되며; 또는
(4) 두 가닥의 단량체의 동종이량체를 포함하는 IL-15융합 단백질; 상기 단량체는 Fc, IL-15 및 IL-15Rα sushi를 포함하고; 예를 들어, IL15-Rα sushi는 링커 및 IL-15 - WT 또는 IL-15 돌연변이체를 통해 연결되고, IL-15는 다시 링커를 거쳐 Fc에 연결된다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “펩티드 링커(peptide linker)/연결펩티드(linker peptide)/링커(linker)”는 본 발명에서 IL-15와 다른 단백질 분자 또는 단백질 단편을 연결하여, 단백질의 정확한 접힘 및 안정적인 펩티드를 확보하기 위한 것을 의미한다. 상기 다른 분자는 IL-15Rα, Fc, Fc변이체, 항체 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 “링커”는 바람직하게는 (GGGGS)n이고, 여기서 n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 이상일 수 있고, 바람직하게는 n는 2-4이거나; 또는 바람직하게는 SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ이다. 연결 펩티드 서열이 너무 짧으면, 두 개의 단백질의 고급 구조의 접힘에 영향을 미쳐 서로 간섭될 수 있고; 연결 펩티드 서열이 너무 길면, 또한 면역 원성에 영향을 미치고, 이는 링커 서열 자체가 새로운 항원이기 때문이다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “이종이량체 단백질”은 두 개의 상이한 단량체 단밸질이 결합되어 이루는 단백질을 지칭한다. 본 발명에서, 두 개의 상의한 단량체 단백질은 각각 Fc단편 또는 Fc변이체 단편을 포함하고, Fc단편 또는 Fc변이체 단편의 상호 작용을 통해 이종이량체 단백질을 형성한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “동종이량체 단백질”은 두 개의 동일한 단량체 단백질이 결합되어 이루어지는 단백질을 지칭한다. 본 발명에서, 두 개의 동일한 단량체 단백질는 각각 Fc단편 또는 Fc변이체 단편을 포함하고, Fc단편 또는 Fc변이체 단편의 상호 작용을 통해 동종이량체 단백질을 형성한다.
본 발명에서 이종이량체 단백질 또는 동종이량체 단백질을 구성하는 “단량체 단백질”은 융합 단백질 또는 비융합 단백질일 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “PD-L1”은 프로그램화된 사멸 리간드-1을 지칭하고, CD279(분화 클러스터 279)라고도 칭하며, 중요한 면역 억제 분자이다. 상기 PD-L1는 바람직하게는 인간 PD-L1이다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “항-프로그램화된 사멸 리간드-1 항체”, “프로그램화된 사멸 리간드-1 항체”, “항PD-L1 항체”, “PD-L1 항체”, “항-PD-L1 항체 부분” 및/또는 “항-PD-L1 항체 단편” 등은 PD-L1에 특이적 결합될 수 있는 면역 글로블린 분자의 적어도 일부(예를 들어 중쇄 또는 경쇄의 적어도 하나의 상보적 결정 영역(CDR) 또는 그 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변영역, 중쇄 또는 경쇄불변 영역, 프레임워크 영역 또는 그 임의의 부분이나 이에 한정되지 않음)의 단백질 또는 펩티드를 포함하는 임의의 분자를 지칭한다. PD-L1 항체는 항체 유사 단백질 스캐폴드(예컨대 피브로넥틴의 제10 유형 III 도메인(10Fn3))을 더 포함하고, 이는 항체CDR과 구조 및 용매 접근성에서 유사한 BC, DE 및 FG구조 루프를 포함한다. 10Fn3도메인의 3급 구조는 IgG 중쇄 가변영역의 3급 구조와 유사하고, 10Fn3의 BC, DE 및 FG 루프의 잔기를 PD-L1모노클로날 항체에서 유래된 CDR-H1, CDR-H2 또는 CDR-H3 영역의 잔기로 치환하며, 당업자는 예를 들어 PD-L1모노클로날 항체의 CDR을 피브로넥틴 스캐폴드에 접목할 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “공동 발현”(co-expression)은 하나의 세포에서 복수의 유전자가 함께 발현되는 동시에 그들의 산물이 나타나는 것을 의미한다. 이러한 유전자는 동시에 존재하거나 각각 또는 공동으로 제어를 받아 발현될 수 있다. 본 발명에서, 바람직하게는 하나의 진핵 세포에서 두 가지 유전자가 공동 발현된다. 공동 발현되어 얻은 유전자 발현 산물은 높은 효율적이고 간단하게 복합체를 형성하는 데 유리하고; 본 발명에서, 이종이량체 단백질 또는 동종이량체 단백질을 형성하는 데 유리하다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “백분율(%) 서열 일치성”은 최대 백분율 서열 일치성에 도달하기 위해, 서열 정렬 및 빈자리도입(필요할 경우)(예를 들어, 최적의 정렬을 위해, 후보 및 기준 서열 중의 하나의 또는 두 개에서 빈자리를 도입할 수 있고, 비교의 목적을 위해, 비상동 서열을 무시할 수 있음) 후, 후보 서열의 아미노산(또는 뉴클레오티드)잔기와 기준 서열의 아미노산( 또는 뉴클레오티드)잔기가 동일한 백분율을 지칭한다. 백분율 서열 일치성을 확정하기 위해, 당업자가 숙지하는 여러 방식으로 정렬할 수 있고, 예를 들어 공중이 사용할 수 있는 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR)소프트웨어를 사용할 수 있다. 당업자는 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개 변수를 확정할 수 있고, 비교되는 서열의 전장 범위 내에서 최대 정렬을 해야 하는 임의의 알고리즘을 포함한다., 예를 들어, 후보 서열과의 비교를 위해 정렬되는 기준 서열은 후보 서열의 전장 또는 후보 서열의 연속적인 아미노산(또는 뉴클레오티드) 잔기의 선택된 부분에서 50% 내지 100%의 서열 동일성을 나타낼 수 있다. 비교의 목적으로 정렬되는 후보 서열의 길이는 예를 들어 기준 서열의 길이의 적어도 30%(예를 들어30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%)일 수 있다. 후보 서열 중의 위치가 기준 서열 중의 상응 위치와 동일한 아미노산 잔기에 의해 차지되면, 이러한 분자는 이 위치에서 서로 같다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “특이적 결합”은 결합 반응을 지칭하고, 이는 항원이 단백질 및 기타 생물 분자의 하나의 이질성 집단에서의 존재 상황을 결정하며, 상기 단백질 및 기타 생물 분자는 예를 들어 항체 또는 그 항원 결합 단편에 특이적 인식된다. 항원과 특이적 결합되는 항체 또는 그 항원 결합 단편은 100 nM 보다 작은 KD로 항원에 결합된다. 예를 들어, 항원과 특이적 결합되는 항체 또는 그 항원 결합 단편은 100 nM(예를 들어, 1 pM 내지 100 nM 사이)보다 높은 KD로 항원에 결합된다. 특정 항원 또는 그 에피토프와 특이적 결합되는 항체 또는 그 항원 결합 단편을 나타내지 않고 상기 특정 항원 또는 그 에피토프가 100 nM(예를 들어, 500 nM, 1 μM, 100 μM, 500 μM 또는 1 mM보다 큼)보다 큰 KD를 나타낸다. 다양한 면역 측정 방법을 사용하여, 특정 단백질 또는 탄수화물에 대해 특이적 면역 반응을 나타내는 항체를 선택할 수 있다. 예를 들어, 통상적으로 고상 ELISA 면역 측정법을 사용하여 단백질 또는 탄수화물에 대해 특이적 면역 반응을 나타내는 항체를 선택한다. Harlow & Lane, Antibodies, ALabortory Manual, Cold Spring Harbor Press, NewYork (1988) 및 Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, NewYork (1999)을 참조하고, 이는 특이적 면역 반응성을 확정하는 면역 방법 및 조건을 설명하였다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “벡터”는 핵산 벡터, 예를 들어 DNA 벡터(예컨대 플라스미드), RNA 벡터, 바이러스 또는 기타 적합한 레플리콘(예를 들어 바이러스 벡터)을 포함한다. 외인성 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 원핵 세포 또는 진핵 세포에 전달하기 위한 다양한 벡터가 개발되었다. 본 발명의 발현 벡터는 폴리뉴클레오티드 서열 및 예를 들어 단백질 발현 및/또는 이러한 폴리뉴클레오티드 서열을 포유 동물 세포 게놈에 통합하는 부가 서열 요소를 포함한다. 본 발명의 항체 및 항체 단편의 발현에 사용할 수 있는 일부 벡터는 유전자 전사를 지시하는 조절 서열(예컨대 프로모터 및 인핸서 영역)을 함유한 플라스미드를 포함한다. 항체 및 항체 단편을 발현하기 위한 기타 유용한 벡터는 폴리뉴클레오티드서열을 포함하고, 이는 이러한 유전자의 번역 속도를 향상시키거나 유전자 전사에 의해 생성되는 mRNA의 안정성 또는 핵수출을 향상시킨다. 이러한 서열 요소는 예를 들어 5’ 및 3’ 비번역 영역, 내부 리보솜 진입 부위(IRES) 및 폴리아데닐화 신호 부위를 포함하여, 발현 벡터에 지닌 유전자의 효과적인 전사를 지시한다. 본 발명의 발현 벡터는 이하의 폴리뉴클레오티드를 더 포함할 수 있고, 이러한 폴리뉴클레오티드 코딩은 이러한 벡터를 포함하는 세포의 표지를 선택하는 데 사용된다. 적합한 표지의 구현예로서 항생제(예컨대 암피실린, 클로람페니콜, 카나마이신 또는 뉴소트리신)내성을 코딩하는 유전자를 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “피험자” 및 “환자”는 예컨대 본문에 기재된 특정 질병 또는 병증(예컨대 암증 또는 전염성 질병)에 대해 치료를 받는 생명체를 지칭한다. 피험자 및 환자의 구현예로서 질병 또는 병증(예를 들어 암증 또는 전염성 질병과 같은 세포 증식성 장애)의 치료를 받는 포유 동물, 예컨대 인간, 영장류 동물, 돼지, 염소, 토끼, 햄스터, 고양이, 개, 기니피그, 소과 동물(예컨대 가축우, 들소, 버팔로, 엘크, 야크 등), 면양 및 말 등을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “치료”는 외과 수술 또는 약물 처리(surgical or therapeutic treatment)를 지칭하고, 이는 치료 피험자의 바람직하지 않은 생리적 변화 또는 병변, 예컨대 세포 증식성 장애(예컨대 암증 또는 전염성 질병)의 진행을 예방, 완화(감소), 치료하는 것을 목적으로 한다. 유익하거나 바람직한 임상 결과는 증상의 완화, 질병 심각도의 감소, 질병 상태의 안정화(즉 악화 없음), 질병 진행의 지연 또는 개선, 질병 상태의 개선 또는 완화, 및 관해(remission)(부분적 또는 완전한 관해)를 포함하나 이에 한정되지 않고, 이는 검출 가능하거나 검출 가능하지 않은 것일 수 있다. 치료될 피험자는 질병 또는 병증을 앓고 있는 피험자 및 질병 또는 병증에 걸리기 쉬운 피험자 또는 질병 또는 병증을 예방하고자 하는 피험자를 포함한다. 약화, 경감, 완화, 느려짐,관해 등 용어는 제거, 소실 및 비발생도 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, “면역 장애(immune disorders)”는 예를 들어 병리성 염증, 염증성 장애 및 자가 면역 장애 또는 질병을 포함한다. “면역 장애”는 또한 암증, 종양 또는 혈관 발생과 같은 감염, 지속적 감염 및 증식성 장애를 지칭한다. “암성 장애”는 예를 들어 암증, 암 세포, 종양, 혈관 발생 및 발육 이상과 같은 전암 병변을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “약물 조성물”은 하나 또는 복수의 본문에 기재된 화합물 또는 그 생리적으로/약학적으로 허용 가능한 염 또는 프로드러그 및 기타 화학 성분 및 기타 성분 예를 들어 생리적으로/약학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제를 포함하는 혼합물을 지칭한다. 약물 조성물은 생명체에 대한 투여을 촉진하고 활성 성분의 흡수를 촉진하여 그 생물 활성을 발휘하는 것을 목적으로 한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “크기배제 크로마토그래피”(Size Exclusion Chromatograph, SEC)는 측정 성분 cvn분자 크기에 따라 분리하는 크로마토그래피 기법이다. 크로마토그래피 캄럼 필러 표면에 상이한 크기의 홀이 분포되어 있다. 샘플이 크로마토그래피 칼럼에 들어간 후, 샘플 중의 상이한 성분은 그 분자 크기에 따라 상응한 홀경의 홀에 들어간다. 모든 홀경보다 큰 분자는 필러 과립 내부에 들어 갈 수 없고, 크로마토 그래피 과정에서 보류되지 않고, 보류 시간이 비교적 짧으며; 모든 홀경보다 작은 분자는 자유롭게 필러 표면의 모든 홀경의 홀에 들어갈 수 있고, 크로마토그래피 칼럼에서 보류되는 시간이 비교적 길며, 이로 인해 보류 시간이 길고; 나머지 분자는 분자 크기에 따라 순차적으로 용출된다.
“선택적” 또는 “선택적으로”는 이후에 설명되는 사건 또는 환경이 발생될 수 있으나 반드시 발생되는 것이 아니고, 해당 사건 또는 환경이 발생하거나 또는 발생하지 않는 경우를 포함한다. 예를 들어, “선택적으로 1 개 내지 3개의 항체 중쇄 가변영역을 포함한다”는 것은 항체 중쇄 가변영역이 존재할 수 있으나 반드시 존재해야 하는 것은 아님을 의미하고; 존재 시, 항체 중쇄 가변영역은 1 개, 2개 또는 3 개일 수 있다.
본 발명에서 설명하는 재조합 DNA로 숙주 세포를 형질 전환시키는 단계는 당업자가 숙지한 통상적인 기술을 사용할 수 있다. 획득한 형질 전환체는 통상적인 방법으로 배양되어 본 발명의 유전자가 코딩하는 폴리펩티드를 발현시킬 수 있다. 사용되는 숙주 세포에 따라, 배양에 사용되는 배지는 다양한 통상적인 배지로부터 선택될 수 있다. 숙주 세포는 숙주 세포 성장에 적합한 조건에서 배양한다.
인간 IL-15분자의 돌연변이체 및 IL-15 돌연변이체 및 조합 돌연변이를 포함하는 융합 단백질을 제공하고, 여기서, 상기 융합 단백질은 면역 세포의 활성화 및 증폭을 매개할 수 있고, 종양 질병 치료에 사용할 수 있다.
본 발명의 이하의 상세한 설명 및 도면을 통해 본 발명에 기재된 양태 및 기타 양태를 명확하게 설명하도록 한다. 본문에서 첨부 도면은 본 발명의 일부 바람직한 실시 형태를 설명하기 위한 것이고, 본 발명은 개시된 특정 실시 형태에 의해 한정되지 않는 것을 이해해야 한다.
도 1은 인간화된 PD-L1 항체가 PD-L1 및 PD-1 결합을 차단하는 결과를 보여주고, 여기서 양성 대조는 Tecentriq이다.
도 2는 FACS로 인간화된 PD-L1 항체와 세포 수준 PD-L1 결합 능력을 측정하는 것을 보여주고, 여기서 양성 대조는 Avelumab이다.
도 3은 Jurkat-PD-1/CHO-PD-L1-NFAT 체계를 사용하여 측정한 PD-L1/PD-1에 대한 인간화된 PD-L1 항체의 차단 능력을 보여주고, 여기서 양성 대조는 Avelumab이다.
도 4는 인간화된 항PD-L1 항체가 혼합 림프구 반응에서 IFN-γ의 분비를 촉진하는 결과를 보여주고, 여기서 음성 대조는 항Hel 항체이고, 양성 대조는 Avelumab이다.
도 5는 IL-15융합 단백질의 두 가지 구조를 보여준다.
A: IL-15 야생형 또는 돌연변이체는 IL-15Rαsushi와 공동 발현되고 비공유 연결을 통해 조립되며;
B: IL-15 야생형 또는 돌연변이체는 IL-15Rαsushi와 링커를 통해 직렬 융합되고 조립되어 발현되고;
C: IL-15 야생형 또는 돌연변이체는 먼저 IL-15Rαsushi와 링커를 통해 연결되며, IL-15Rαsushi가 또 링커를 통해 Fc와 직렬 융합되고 조립되어 발현되며;
D: IL-15Rαsushi는 링커를 통해 먼저 IL-15 야생형 또는 돌연변이체와 연결되고, IL-15 야생형 또는 돌연변이체가 또 링커를 통해 Fc와 직렬 융합되며 조립되어 발현된다.
도 6A-6D는 IL15 돌연변이체가 Mo7e 세포 증식을 촉진하는 것을 보여준다: 융합 단백질의 구조는 도 5A에 도시된 바와 같고; Tecentriq는 IL-15Rαsushi에 융합되며, IL15 돌연변이체는 IL-15Rαsushi와 비공유 연결되고, 링커 없이 연결된다.
도 7A-7N은 IL-15 돌연변이체가 CD8+ T 세포 증식을 유도하는 것을 보여준다:
도 7A: 융합 단백질의 구조는 도 5A에 도시된 바와 같고, Tecentriq는 IL-15Rα sushi에 융합되며, IL15 돌연변이체는 IL-15Rαsushi와 비공유 연결되고, 링커 없이 연결되며;
도 7B-7G 및 7M-7N: 융합 단백질의 구조는 도 5B에 도시된 바와 같고, 자체 연구 PD-L1단일클론 항체는 IL-15Rαsushi 및 IL15 돌연변이체에 융합되며, IL15 돌연변이체는 IL-15Rαsushi와 링커를 통해 연결되어 직렬 발현되고; Drug0은 반응계에 어떠한 단백질의 음성 대조도 추가하지 않음을 나타낸다.
도 7H-7K: 융합 단백질의 구조는 도 5D에 도시된 바와 같고, IL-15Rαsushi는 링커를 통해 먼저 IL-15 야생형 또는 돌연변이체와 연결되고, IL-15 야생형 또는 돌연변이체가 또 링커를 통해 Fc와 직렬 융합되며 조립되어 발현되고;
도 7L: 융합 단백질은 도 5C에 도시된 바와 같고, IL-15 야생형 또는 돌연변이체는 먼저 IL-15Rαsushi와 링커를 통해 연결되며, IL-15Rαsushi가 또 링커를 통해 Fc와 직렬 융합되며 조립되어 발현된다.
도 8A-8M은 IL-15 돌연변이체가 NK 세포 증식을 유도하는 것을 보여준다:
도 8A: 융합 단백질의 구조는 도 5A에 도시된 바와 같고, Tecentriq는 IL-15Rα sushi에 융합되며, IL15 돌연변이체는 IL-15Rαsushi와 비공유 연결되고, 링커 없이 연결되며;
도 8B-8F 및 8L-8M: 융합 단백질의 구조는 도 5B에 도시된 바와 같고, 자체 연구 PD-L1 단일클론 항체는 IL-15Rαsushi 및 IL15 돌연변이체에 융합되며, IL15 돌연변이체는 IL-15Rαsushi와 링커를 통해 연결되어 직렬 발현되고; Drug0은 반응계에 어떠한 단백질의 음성 대조도 추가하지 않음을 나타낸다.
도 8G-8J: 융합 단백질의 구조는 도 5D에 도시된 바와 같고, IL-15Rαsushi는 링커를 통해 먼저 IL-15 야생형 또는 돌연변이체에 연결되고, IL-15 야생형 또는 돌연변이체가 또 링커를 통해 Fc와 직렬 융합되며 조립되어 발현된다.
도 8K: 융합 단백질은 도 5C에 도시된 바와 같고, IL-15 야생형 또는 돌연변이체는 먼저 IL-15Rαsushi와 링커를 통해 연결되고, IL-15Rαsushi가 또 링커를 통해 Fc에 직렬 융합되며 조립되어 발현된다.
도 9A-9C: hPBMC-A375마우스 체내 약효이다. 융합 단백질은 도 5B에 도시된 바와 같다.
도 10A-10C: hPBMC-A375마우스 체내 약효이다. 융합 단백질은 도 5C 또는 5D에 도시된 바와 같다.
도 10D: hPBMC-A375마우스 투여 후 체중 변화이다.
이하 구체적인 실시예에 결부하여, 본 발명을 더 설명하도록 하고, 본 발명의 장점 및 특점은 설명에 따라 더욱 명확해질 것이다. 만약 구현예에서 구체적인 조건을 명시하지 않았다면, 통상적인 조건 또는 제조사가 제안하는 조건에서 진행한다. 사용되는 시약 또는 기기는 제조사를 명시하지 않고, 모두 시중에서 구매하여 얻을 수 있는 통상적인 제품이다.
본 발명의 구현예는 시범적인 예시에 불과하고, 본 발명의 범위에 대해 어떠한 한정도 하지 않는다. 당업자는 본 발명의 취지 및 범위를 이탈하지 않는 전제 하에서 본 발명의 기술적 해결수단의 세부 사항 및 형식을 수정 또는 대체할 수 있으나, 이러한 수정 및 대체는 모두 본 발명의 보호 범위 내에 속하는 것을 이해해야 한다.
구현예 1. 항체 인간화
먼저 전형적인 “CDR 이식” 방법으로 항체 인간화를 진행하고, 즉 최고의 서열 상동성을 갖는 인간 항체를 선택하여 항체 프레임워크 영역(FR)을 제공하며, Kabat명명법에 기반하여 타겟 항체의 항원 결합 단편 상보적 결정 영역(CDR)을 전자에 이식하여 인간화 항체를 형성하였다. 다음, 항체 활성 및 친화력을 더욱 잘 유지하기 위해, 항체 구조에 기반하여 MOE 소프트웨어를 사용하여 모델링 분석을 진행한다: 1). 항체 프레임워크 영역에서 VH-VL계면에 위치하고, CDR에 접근하거나 또는 그와 직접 서로 작용하는 등의 아미노산 잔기를 선택하여 역돌연변이시키고, 이러한 아미노산 잔기는 CDR 배열을 유지하는 데 통상적으로 더 중요하며; 2). 면역 원성을 고려하여, 될수록 단백질 내부에 포매된 아미노산을 선택하여 역돌연변이시키고; 3). 항체 안정성 및 발현 수준을 고려하여, 분자 에너지가 돌연변이를 저하시키는 것이 바람직하다. 상이한 돌연변이를 포함하는 인간화 항체와 인간 PD-L1의 결합 친화력 및 표면에서 PD-L1을 발현하는 세포의 결합 친화력를 측정함으로써, 뮤린 PD-L1 항체 친화력, 항체 특성화 및 활성 기능에 상당하거나 더욱 우수한 인간화 항체를 스크리닝하였다.
여기서, 뮤린 PD-L1 항체(PDL1-794)가 인간화된 후의 바람직한 후보 항체 분자(794-h1-71)의 중쇄 및 경쇄 가변영역의 아미노산 서열 정보는 표 1에 기재된 바와 같다.
표 1.뮤린 및 인간화 항PD-L1 항체 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역의 구체적인 서열 정보
Figure pct00001
구현예 2 인간화 항체의 발현 및 정제
2.1 인간화 항체의 발현
형질 감염 하루 전, ExpiCHO-S 세포(써모피셔사 (Thermo fisher), A29127)를 2.5 x 106 내지 4 x 106개의 세포/mL의 밀도로 새로운 ExpiCHO발현 배지(인비트로젠사 (Invitrogen), A29100-01)에 접종하고, 진탕기에서 밤새 배양하였다. 형질 감염 당일, 밤새 배양한 ExpiCHO-S 세포 현탁액의 카운팅을 진행하고, 세포 생존율 > 95%이며, 세포 밀도는 7 x 106 및 10 x 106개의 생세포/mL 사이에 있다. 필요한 세포 현탁액을 ExpiCHO발현 배지(인비트로젠사, A29100-01)로 6 x 106개의 세포/mL의 밀도로 희석하고, 진탕기에 넣어 준비하였다. 준비된 인간화 항체 발현 플라스미드를 배지에 희석하고, 균일하게 혼합되도록 원심관을 가볍게 흔들어 돌리며, OptiPRO™ SFM-DNA희석액(인비트로젠사, 12309-019)을 첨가하고, 균일하게 혼합되도록 원심관을 가볍게 흔들어 돌린 후 실온에서 1 내지 5 min 정치하였다. 상기 플라스미드 복합체를 천천히 형질감염될 세포 현탁액에 적가하고, 적가 과정에서 셰이크 플라스크를 흔들어 돌린다. 형질 감염 완료 후, 진탕기에서 세포를 밤새 배양하였다. 형질 감염 후 1일째의 세포에 세포 부피 0.6%의 ExpiFectamine™ CHO Enhancer(인비트로젠사, A29129) 및 세포 부피 16%의 ExpiCHO™ Feed(인비트로젠사, A29129)를 보충하고, 첨가 과정에서 셰이크 플라스크를 가볍게 흔들어 돌리며, 진탕기에 세포를 옮겨 4일간 배양하였다. 형질 감염 후 5일째에 형질 감염된 세포에 세포 부피 16%의 ExpiCHO™ Feed(인비트로젠사, A29129)를 보충하고, 첨가 과정에서 셰이크 플라스크를 가볍게 흔들어 돌린다. 형질 감염 후 12일째에 9,000 g의 배지를 취해, 원심 분리 10 min 후 상등액을 얻었다.
2.2 인간화 항체의 정제
구현예 2.1에서 수집한 세포 배양액을 고속 원심 분리한 상등액을 0.45 μm + 0.22 μm의 여과막에 통과시켰다. 친화 크로마토로 제1 단계의 정제하였다. 크로마토 매질은 Fc와 서로 작용하는 protein A 충전재 Mbaselect Sure(GE, 17543803)이고, 평형 완충액은 PBS(2.5 g/L Na2HPO4·12H2O, 0.408 g/L NaH2PO4, 8.76 g/L NaCl, pH7.2)이며, 칼럼을 4배 칼럼 부피의 PBS로 평형시킨 후, 세포 상등액을 시료 로딩하고 칼럼과 결합시켜, 샘플이 칼럼에서의 보류 시간이 ≥ 5 min 이 되도록 유속을 제어하였다. 시료 로딩 완료 후, A280 자외선 흡수가 기준선까지 저하될 때 까지 PBS(pH7.2)로 칼럼을 세척하였다. 다음, 칼럼을 2 배 칼럼 부피의 20 mM PB + 1 M NaCl(pH 6.0)으로 세척하였다. 또 A280 자외선 흡수 및 전도가 기준선까지 도달할 때 까지 PBS(pH7.2)로 칼럼을 세척하였다. 마지막으로 20 mM의 구연산(pH 3.4)의 용출 완충액으로 칼럼을 세척하고, A280 자외선 흡수 피크에 기반하여 용출 피크를 수집하였다. 수집된 용출 샘플은 1 M의 Tris- HCl(pH 9.0)으로 중성이 될때 까지 중화시켰다.
구현예 3. KD 측정 분석을 거친 항체와 인간 및 사이노몰구스 원숭이 PD-L1재조합 단백질의 결합
Biacore T200(GE 핼스케어사 (GE Healthcare))를 사용하여 인간 및 사이노몰구스 원숭이 PD-L1-His단백질에 대한 PD-L1 항체의 결합 친화력을 측정하였다. 25℃에서 CM5칩(GE 핼스케어사, 카달로그 번호 BR-1005-30)에 항인간 IgG Fc(겐웨이사 (Genway), 카달로그 번호 GWB-20A705)를 고정시켰다. 항인간 IgG Fc를 아세테이트 pH 5.0(GE 핼스케어사, BR-1003-51)로 20 μg/mL까지 희석하였다. 아민에 따른 고정 방법으로 고정시켰다. 대체 가능하게, 상용 Protein A(GE 핼스케어사, 카달로그 번호 29127556)칩을 사용하여 검출할 수 있다. 25℃에서 다순환적 동역학법을 사용하여 항체와 항원의 친화력을 측정하였다. 각각의 사이클에서, 먼저 측정될 항체를 고정시킨 CM5칩에 포획한 후, 재조합 인간 PD-L1-His단백질(Novoprotein사(Novoprotein), 카달로그 번호 315) 및 사이노몰구스 원숭이 PD-L1-His단백질(Sino Biological사 , 카달로그 번호 90251-C08H)을 주입하고, 마지막으로 글리신 pH1.5(HUSHI사, 카달로그 번호 62011516)으로 재생시켰다. 이동상은 HBS-EP + 완충액(Buffer)(GE 핼스케어사, 카달로그 번호 BR-1006-69)이고, 유속은 30 μL/min이며, 결합 시간은 300초이다. 재생 유속은 30 μL/min이고, 시간은 30초이다. Biacore T200 평가 소프트웨어(3.0버전)를 사용하여, 1 : 1 결합 모델로, 실험 데이터를 분석하고, 항체 및 항원의 평형 해리 상수(KD)를 피팅하고 결합 속도 상수(ka) 및 해리 속도 상수(kd)를 확정하였다.
결과로부터 알 수 있다시피, 테스트한 PD-L1 항체는 인간 PD-L1재조합 단백질 및 사이노몰구스 원숭이 PD-L1재조합 단백질 결합에 대해 모두 nM수준 또는 더욱 높은 친화력을 보이고, 상세한 내용은 이하 표 2를 참조바란다.
표 2. 인간화 PD-L1 항체 결합 친화력(KD)Biacore 결과
Figure pct00002
구현예 4. PD-L1와 PD-1의 상호 작용을 차단하는 항체의 IC50 측정 분석
경쟁성 ELISA방법으로 PD-L1단백질과 PD-1단백질 결합을 차단하는 항PD-L1 항체의 IC50을 확정하였다. 인간 PD-L1재조합 단백질(xeno life science사, 카달로그 번호 10084-H05H)을 탄산염 완충액으로 희석하고, 96웰 ELISA플레이트에 첨가하며, 최종 농도는 1 μg/ml이다. 3%의 BSA를 함유하는 PBS용액으로 폐쇄하고 구배 희석한 항PD-L1 항체(40 nM 내지 0.02 nM) 및 인간 PD-1-His재조합 단백질(xeno life science사, 카달로그 번호 10377-H08H)을 공동으로 인큐베이션한 후, HRP표지의 항His태그 항체(MBL사, 카달로그 번호 D291-7) 및 TMB(써모사(Thermo), 카달로그 번호 34029)를 첨가하여 발색하며, 1 M의 황산으로 종료 후 OD값(이중 파장 450 nm - 630 nm)을 리딩하였다. 항체 농도와 OD값을 매칭시켜 테스트 항체의 경쟁 결합 곡선을 그릴 수 있고, IC50값을 산출하였다. 도 1은 항PD-L1 항체와 인간 PD-L1재조합 단백질의 경쟁 결합 곡선을 보여준다. 결과로부터 알 수 있다시피, 테스트될 항체(794-h1-71)는 효과적으로 인간 PD-L1단백질과 인간 PD-1단백질의 상호 작용을 차단할 수 있고, IC50은 0.8488 nM이며, 양성 대조 Tecentriq(진텍(Genetech), 로트 번호: H0172)의 IC50은 0.8486 nM이다.
구현예 5. FACS측정을 통해 세포 표면 PD-L1에 결합하는 PD-L1 항체의 EC50을 검출
구배 농도의 검출될 항체(항체 농도: 10000 ng/ml - 0.1 ng/ml)와 세포 표면에서 PD-L1을 높게 발현하는 CHO-PD-L1 세포(Nanjing Yongshan Biotechnology Co., Ltd., 105개의 세포/웰)를 4℃에서 30 min 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 이상의 배양물에 희석된(1 : 250) 항인간 IgG PE 형광 항체(eBioscience사, 카달로그 번호 12-4998-8)를 첨가하고 4℃에서 30 min 인큐베이션하였다. 형광 항체는 검출될 항체의 Fc단편과 특이적으로 결합하였다. FACS를 통해 PE형광 강도의 고저를 검출하여 검출될 항체가 세포 표면에 결합되어 PD-L1 단백질을 높게 발현하는 능력에 대해 분석하였다. 도 2결과로부터 알 수 있다시피, 794-h1-71 항체 EC50은 38.44 ng/ml이고, 이는 이번 실험의 양성 대조 Avelumab(EC50는 약 72 ng/ml)와 유사하였다. 상기 측정은 794-h1-71 항체가 세포 표면에서 PD-L1 타겟에대해 조제량 의존적으로 결합되는 능력을 정량적으로 입증하였다. 평균 형광 강도 변화 배율(MFI 배수) ＝ 실험군 MFI값/약물(항체) 미첨가 대조군의 MFI값.
구현예 6. PD-1/PD-L1-NFAT 리포트 유전자를 통해 분석한 PD-1: PD-L1에 대한 항PD-L1 항체의 결합 및 신호 전달의 억제
PD-1이 안정적으로 형질 감염된 Jurkat 세포계(진스크립트사 (GenScript), 카달로그 번호 00612) 및 PD-L1이 안정적으로 형질 감염된 CHO 세포주(진스크립트사, 카달로그 번호 M00613)를 사용하여PD-1/PD-L1단백질에 대한 PD-L1 항체의 상호 작용 및 이의 신호 경로의 길항 작용을 비교하였다. 억제 신호 경로가 억제되면, NFAT가 제어하는 발광 리포트 유전자 발현이 증가되고, 따라서 발광 신호값이 증가된다. 발광 리딩값의 강도(relative light unit, RLU)로 PD-L1에 대한 항체의 차단 작용의 강약을 반영하였다.
PD-L1이 안정적으로 형질 감염된 CHO 세포계를 96웰 화이트 보텀 플레이트에 접종하고, 밀도는 40,000개의 세포/웰(100 μl/웰)이며 인큐베이터에서 밤새 배양하였다. 2일째, 플레이트 중의 배지를 제거하여, PD-1이 안정적으로 형질 감염된 세포계 및 측정될 PD-L1 항체를 첨가하여 공동으로 인큐베이션하고, PD-1 세포 샘플량은 16,000개의 세포/웰이며, 항체는 구배 희석되고, 각 조제량은 3중 중복하고, 인큐베이션 부피는 100 μl/웰이며, 인큐베이션 시간은 6 시간이다. 인큐베이션 완료 시, 동일 부피(100 μl) 발광 검출 시약을 플레이트에 첨가하고, 값을 리딩하였다. 검출값에 기반하여 Graphpad로 4 파라미터 분석하여 회귀 곡선을 그림으로써, 각 항체의 EC50값을 얻었다. 도 3은 794-h1-71 항체의 EC50(166.2 ng/ml)이 양성 대조 Avelumab의 EC50(184.3 ng/ml)와 유시한 것을 보여준다. 상기 측정은 항체(794-h1-71)가 세포 표면 PD-1: PD-L1에 대해 상호 작용하는 조제량 의존적 억제 능력을 보여줌으로서, 조제량 의존적으로 Jurkat 세포 내 리포트 유전자의 활성을 증가시키는 것을 정량적으로 입증하였다.
구현예 7. ELISA로 혼합 림프구 방응 중 T 세포가 분비하는 IFN-γ를 검출
혼합 림프구 반응(mixed lymphocyte reaction, MLR)을 통해 PD-L1단일클론 항체가 증강하는 T 세포 활성을 측정하였다. 건강한 인간 공여체 1의 말초 혈액 단핵구(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)에서 CD4+단핵구를 단리하고, 재조합 인간 과립구-대식 세포 콜로니 자극인자(GM-CSF, 페프로텍사 (Peprotech), 카달로그 번호 300-03) 및 재조합 인간 인터류킨 4(rh IL-4, 페프로텍사, 카달로그 번호 200-04)를 사용하여 체외에서 수지상 세포(dendritic cell, DC)로 유도 및 분화하였다. 배양 6일째에 LPS(시그마사 (Sigma), 카달로그 번호 : L4516)를 첨가하여 DC를 자극하였다. 7일째에, 공여체 1의 DC와 건강한 공여체 2의 PBMC가 농축된 CD4+ T 세포(DC: CD4+는 1 : 10), 검사 대상 항체, 음성 대조 항체(항Hel, Biointron에서 합성) 및 양성 대조 항체Avelumab(항체 농도: 7 nM - 0.28 nM)를 함께 4일 배양하였다. 4 일 후 세포 배양 상등액을 수집하여, ELISA를 통해 상등액 중 IFN-γ의 함량을 검출하였다. 도 4에 도시된 바와 같이, 794-h1-71 및 양성 대조 항체Avelumab는 항Hel단일클론 항체(음성 대조 그룹)에 비해 MLR 실험 중 CD4+ T 세포가 IFN-γ를 분비하는 능력을 모두 현저하게 증강시킬 수 있고, 또한 PD-L1 항체 약물 농도가 저하됨에 따라 IFN-γ 분비를 향상시키는 활성도 저하된다. 상기 결과는 항체(794-h1-71)가 조제량 의존적 방식으로 T 세포의 기능을 향상시킬 수 있음을 나타낸다(T검증, *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001, ****P < 0.0001).
구현예 8. IL-15융합 단백질의 구축
MOE소프트웨어를 사용하여 인간의 IL-15가 상응한 수용체βγ사슬과 상호 작용하는 관건 아미노산 부위를 시물레이션하고, 각각 D8, V3, I6 및 H105이다. MOE소프트웨어 시물레이션에 따라, 이하의 IL-15 돌연변이체 서열을 설계 및 합성하고, 아미노산 서열은 표 3을 참조하며, 코딩 핵산 서열은 표 4를 참조바란다.
IL-15 융합 단백질( 항체/Fc융합 작제물/복합체)은 4 가지 모드로 구축된다:
(1) 도 5A에 도시된 바와 같은 구조, IL-15융합 단백질은 두 가닥의 단량체의 동종이량체를 포함하고; 상기 단량체는 항체 중쇄, 항체 경쇄, IL-15 및 IL-15Rα sushi를 포함하며; 항체 중쇄 Fc말단을 IL-15Rα sushi에 융합하고, 단일클론 항체 경쇄 및 IL-15-WT(야생형) 또는 IL-15 돌연변이체와 공동 발현하여, IL-15와 IL-15Rα sushi가 비공유 연결을 형성하도록 하며;
(2) 도 5B에 도시된 바와 같은 구조, IL-15 융합 단백질은 두 가닥의 단량체의 동종이량체을 포함하고; 상기 단량체는 항체 중쇄, 항체 경쇄, IL-15 및 IL-15Rα sushi를 포함하며; 링커를 통해 항체 중쇄 Fc말단, IL-15Rα sushi 및 IL-15-WT 또는 IL-15 돌연변이체가 발현하도록 순서대로 직렬 융합하고, 항체 경쇄와 공동 발현하고;
(3) 도 5C에 도시된 바와 같은 구조(V5로 정의), IL-15융합 단백질은 두 가닥의 단량체의 동종이량체를 포함하며; 상기 단량체는 Fc, IL-15 및 IL-15Rα sushi를 포함하고; IL-15-WT 또는 IL-15 돌연변이체는 링커를 통해 IL15-Rαsushi에 연결되고, IL15-Rαsushi가 또 링커를 통해 Fc에 연결되며;
(4) 도 5D에 도시된 바와 같은 구조(V9로 정의), IL-15융합 단백질은 두 가닥의 단량체의 동종이량체를 포함하고; 상기 단량체는 Fc, IL-15 및 IL-15Rαsushi를 포함하며; IL15-Rαsushi는 링커를 통해 IL-15-WT 또는 IL-15 돌연변이체에 연결되고, IL-15는 또 링커를 통해 Fc에 연결된다.
PD-L1 항체와 IL-15 융합 단백질의 명명 규칙은 다음과 같다: “ 항체 별칭 - IL-15(야생형/돌연변이체) - 융합 단백질 구축 모드”;
예를 들어: “T-IL15-xx-1”: “T”는 Tecentriq를 나타내고; “IL15-xx”,는 IL15-WT 또는 IL15 돌연변이체를 나타내며; “1”은 도 5A에 도시된 바와 같은 구조 모드를 나타내고;
예를 들어: “794- IL15-xx-2”: “794”는 794-h1-71 단일클론 항체를 나타내며; “IL15-xx”,는 IL15-WT 또는 IL15 돌연변이체를 나타내고; “2”는 도 5B에 도시된 바와 같은 구조 모드를 나타낸다.
각종 IL-15융합 단백질 설계는 표 5 및 표 6에 나타내었다. 이상의 4 가지 구축 모드에 따라, 융합 단백질을 코딩하는 핵산 서열은 각각 pTT5 플라스미드로 구축된다.
표 3. IL-15융합 단백질 아미노산 서열 정보
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
비고: IL-15 돌연변이체 융합 단백질 명명 규칙은 이하와 같다:
예를 들어: “T-IL15-xx-1”: “T”는 Tecentriq를 나타내고; “IL15-xx”,는 IL15-WT 또는 IL15 돌연변이체를 나타내며; “1”은 도 5A에 도시된 바와 같은 구조 모드를 나타내고;
예를 들어: “794-IL15-xx-2”: “794”는 794-h1-71 mAb를 나타내고; “IL15-xx”,는 IL15-WT 또는 IL15 돌연변이체를 나타내며; “2”는 도 5B에 도시된 바와 같은 구조 모드를 나타낸다.
표 4. IL-15융합 단백질을 코딩하는 핵산 서열 정보
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
표 5. PD-L1-IL-15융합 단백질 분자 조성
Figure pct00019
비고: IL-15 돌연변이체 융합 단백질 명명 규칙은 이하와 같다:
예를 들어: “T-IL15-xx-1”: “T”는 Tecentriq를 나타내고; “IL15-xx”,는 IL15-WT 또는 IL15 돌연변이체를 나타내며; “1”은 도 5A에 도시된 바와 같은 구조 모드를 나타내고;
예를 들어: “794-IL15-xx-2”: “794”는 794-h1-71 mAb를 나타내고; “IL15-xx”,는 IL15-WT 또는 IL15 돌연변이체를 나타내며; “2”는 도 5B에 도시된 바와 같은 구조 모드를 나타낸다.
표 6. IL-15-Fc융합 단백질 분자 조성
Figure pct00020
구현예 9. IL-15 융합 단백질의 발현
ExpiCHO발현 시스템을 이용하여 단백질 일시적 발현을 진행하였다. ExpiCHOTM발현 배지(카달로그 번호 A2910001)에서 계대된 숙주 세포 ExpiCHO-S(카달로그 번호 A29127)를 적절한 밀도로 희석하여, 형질 감염 준비를 위해 진탕기(100 rpm, 37℃, 8% CO2)에 넣었다. 융합 단백질을 코딩하는 핵산 서열을 지닌 벡터를 OptiPRO™ SFM(카달로그 번호 12309019) 배지에 첨가하여, 벡터 최종 농도가 0.5-1.0 μg/mL로 되도록 하였다. DNA를 포함하는 OptiPRO™ SFM 배지에 적량의 ExpiFectamine™ CHO시약(카달로그 번호 A29129)을 첨가하여 DNA-ExpiFectamine™ CHO시약 복합체를 형성하고, 실온에서 1-5 min 정치한 후 복합체를 천천히 형질 감염될 세포 현탁액에 적가하였다. 형질 감염 후 1일째에, 현탁액에 일정량의 ExpiFectamine ™ CHO Enhancer(카달로그 번호 A29129) 및 ExpiCHO ™ Feed(카달로그 번호 A29129)를 첨가한 후, 32℃로 온도를 낮추어, 계속 배양하였다. 형질 감염 후 4-6일째에, 일정량의 ExpiCHO™ Feed(카달로그 번호 A29129)를 추가로 첨가하였다. 형질 감염 후 10-12일째에, 5000 g로 30 min 원심 분리하여 상등액을 얻었다.
구현예 10. IL-15융합 단백질의 정제
자기 비드법을 통해 돌연변이체 융합 단백질을 정제하였다. 발효 상등액에 적량의 자기 비드 현탁액(진스크립트사, 카달로그 번호 L00695)을 첨가하고, 회전식 혼합기에서 2시간 인큐베이션하여 IL-15융합 단백질이 자기 비드에 결합되도록 보장하였다. 상등액을 버린 후, PBS으로 비드를 3회 세착하였다. pH 3.0에서 구연산염으로 IL-15융합 단백질을 용출하고, 1M의 Tris-HCl으로 중화하였다. NanoDrop One을 통해 IL-15융합 단백질의 농도를 측정하였다.
구현예 11. 크기배제 크로마토그래피를 통해 측정된 IL-15융합 단백질의 순도
TSKgel G3000SWXL칼럼(토소사 (TOSOH), 0008541) 및 프리 칼럼 Tskgel guard칼럼SWXL(토소사, 0008543)을 사용하여 크기배제 크로마토그래피(SEC)를 진행하여 본 발명의 IL-15 돌연변이체 융합 단백질의 순도를 측정하였다. 이동상(50 mM PB, 300 mM NaCl, pH6.8)을 이용하여 크로마토그래피를 평형시키고, 유속은 1 mL/min이다. 자외선 검출 파장은 280 nm이다. 결과는 표 7에 나타내었다.
표 7. 크기배제 크로마토그래피를 통해 측정된 IL-15융합 단백질의 순도
Figure pct00021
구현예 12. IL-15 돌연변이체 융합 단백질에 의해 유도되는 Mo7e 세포 증식 측정
Mo7e는 인간 거핵 세포 백혈병 세포계(Cobioer, CBP60791)이고, 세포 증식활성에 대한 IL-15의 작용을 연구하는 데 사용할 수 있다. IL-15 돌연변이체 융합 단백질을 1640-10%의 FBS(RPMI1640, Gibco사 (Gibco), 72400047; FBS, Gibco사, 10099141)로 구배 농도(최종 농도: 100000 pM-1.28 pM, 5 배 희석)로 희석하였다. Mo7e 세포를 1640-10%의 FBS로 105개의 세포/ml까지 희석하였다. Mo7e 세포를 1640-10%의 FBS로 105개의 세포/ml까지 희석하였다. 96웰 U보텀 플레이트에 50 μl의 돌연변이체 배지 및 50 μl의 Mo7e 세포 현탁액을 첨가한 후, 혼합하고 37℃에서 5% CO2로 인큐베이션하였다. 72시간 후 배양 플레이트를 꺼내, 100 μl의 Cell Titer Glo발광 세포 활력 검출 시약(프로메가사 (Promega), G7571)을 첨가하여 형광 강도를 검출하고, 형광 강도와 세포 증식 능력은 정비례된다.
결과로부터 알 수 있다시피, 도 6A-6D에서: T-IL15-7-1, T-IL15-8-1 및 T-IL15-9-1 돌연변이체는 T-IL15-WT-1에 비해 현저히 저하된 활성을 보이고, T-IL15-7-1의 EC50은 5735 pM이며, 대응되는 T-IL15-WT-1의 EC50은 133.3 pM이다(도 6A). T-IL15-10-1, T-IL15-11-1 및 T-IL15-26-1 돌연변이체는 T-IL15-WT-1에 비해 현저히 저하된 활성을 보이고, T-IL15-10-1 및 T-IL15-26-1의 EC50은 각각 28076 pM 및 290.9 pM이며, 대응되는 T-IL15-WT-1의 EC50은 143.3 pM이다(도 6B). T-IL15-29-1 및 T-IL15-42-1 돌연변이체는 T-IL15-WT-1에 비해 저하된 활성을 보이고, EC50은 각각 285.2 pM 및 194.5 pM이며, T-IL15-43-1 돌연변이체는 T-IL15-WT-1에 비해 증강된 활성을 보이고, T-IL15-43-1의 EC50는 103.2 pM이며, T-IL15-WT-1의 EC50은 150.7 pM이다(도 6C). T-IL15-com1-1 및 T-IL15-com2-1 조합 돌연변이체는 T-IL15-WT-1에 비해 저하된 활성을 보이고; Tecentriq대조군은 Mo7e 세포 증식에 영향을 미치지 않고, 즉 항PD-L1 항체는 Mo7e 세포에 대해 증식 활성을 유도하지 않으며(도 6D), 세포 증식 활성에 대한 영향은 IL-15에 의해 발생된 것이다 .
구현예 13. IL15 돌연변이체 융합 단백질에 의해 유도되는 CD8+ T 세포 증식
IL-15 돌연변이체 융합 단백질이 인간 PBMC(ALLCELLs (Allcells), 로트 번호: 1911150123)에서 CD8+ T 세포의 증식에 대한 자극 작용을 검출하기 위해, 본 구현예에서 Ki67을 증식 마커로 하여, 상이한 농도의 IL-15 돌연변이체 융합 단백질로 인간 PBMC 자극 3일 후, CD8+ T 세포의 증식 비율을 검출하였다. 먼저, 인간 PBMC를 10%의 FBS(Gibco사, 카달로그 번호 : 10099141) 및 1%의 페니실린-스트렙토마이신(Gibco사, 카달로그 번호 : 15140122)을 함유한 RPMI1640 배지(Gibco사, 카달로그 번호 : 72400047)에 현탁시켰다. 세포 밀도를 2 × 106개의 세포/ml로 조절한 후, 세포 현탁액을 100 μl/웰로 96웰 U보텀 플레이트(코닝사 (Corning), 카달로그 번호 : 3799)에 첨가하였다. 그 후, IL-15 돌연변이체 융합 단백질을 500 nM에서 시작하여, 4배 구배로 희석하고, 총 11 개 구배이다. 그 후 각 농도의 샘플을 100 μl/웰로 인간 PBMC를 코팅한 96웰 U보텀 플레이트에 첨가하고, 균일하게 혼합한 후 , 37℃, 5% CO2 조건의 인큐베이터에서 3일 배양하였다. 배양 후의 세포는 LIVE/DEAD 픽서블 바이올렛 데드 셀 염색 키트(인비트로젠사, 카달로그 번호 : L34964) 및 CD3-AF700(BD사, 카달로그 번호 : 557943), CD8-FITC(BD사, 카달로그 번호 : 555366) 및 APC-Ki67(Biolegend사 (Biolegend), 카달로그 번호 : 350514) 항체로 염색하고, 그 후 유세포 분석기로 상이한 농도 IL-15 돌연변이체 융합 단백질 자극 후 CD3+ CD8+ T 세포 중 Ki67+ 세포의 비율을 검출하였다. 도 7A-7N은 구배 희석된 T-IL15-7-1, T-IL15-8-1, T-IL15-9-1, T-IL15-10-1, T-IL15-11-1, T-IL15-26-1, T-IL15-29-1, T-IL15-42-1, T-IL15-43-1, 794-IL15-7-2, 794-IL15-com1-2, 794-IL15-com3-2, 794-IL15-com4-2, 794-IL15-com5-2, 794-IL15-com6-2, 794-IL15-com7-2, V9-IL15-61, V9-IL15-62, V9-IL15-63, V9-IL15-com6, 794-IL15-65-2, 794-IL15-64-2, V5-IL15-WT 및 P22339로 인간 PBMC 자극 3일 후, CD8+ T 세포의 증식 비율 및 각 돌연변이체가 증식을 자극한 EC50값을 보여준다. 여기서, T-IL15-8-1, T-IL15-9-1 및 T-IL15-11-1은 CD8+ T 세포 증식 능력을 현저히 저하시키는 작용을 하고, 플랫폼에 도달하지 않으며, 곡선은 EC50을 피팅 산출할 수 없고; 794-IL15-com4-2, 794-IL15-com5-2, 794-IL15-com6-2, 794-IL15-com7-2, V9-IL15-61, V9-IL15-62, V9-IL15-63, V9-IL15-com6 및 794-IL15-65-2는 플랫폼에 도달하지 않으며, EC50값은 피팅이 정확하지 않지만; 결과는 이러한 돌연변이체의 조합은 794-IL15-WT-2 또는 P22339에 비해 CD8+ T 세포 증식 활성을 저하하는 작용을 보이는 것으로 나타났다. T-IL15-WT-1 및 794-IL15-WT-2는 야생형 IL-15 대조이고, P22339은 돌연변이형 IL-15 대조이며; 794-h1-71단일클론 항체는 항PD-L1 항체 대조이고; Drug0은 어떠한 단백질의 음성 대조도 첨가하지 않은 것이다. 야생형 IL-15 대조와 비교하여, IL15 돌연변이체는 CD8+ T 세포의 증식에 대해 미세한 작용을 보인다. 794-h1-71mAb대조 그룹은 CD8+ T 세포 증식에 대해 영향을 미치지 않고, 즉 항PD-L1 항체는 CD8+ T 세포에 대해 증식 활성을 유도하지 않으며(도 7B), 세포 증식 활성에 대한 영향은 IL-15에 의해 발생된 것이다.
구현예 14. IL15 돌연변이체 융합 단백질이 유도하는 NK 세포 증식
IL-15 돌연변이체 융합 단백질이 인간 PBMC(ALLCELLs, 로트 번호: 1911150123) 중 NK 세포의 증식에 대한 자극 작용을 검출하기 위해, 본 구현예 Ki67를 증식 마커로 하여, 상이한 농도의 IL-15 돌연변이체 융합 단백질로 인간 PBMC 자극 3일 후, NK 세포의 증식 비율을 검출하였다. 먼저, 인간 PBMC를 10%의 FBS(Gibco사, 카달로그 번호 : 10099141) 및 1%의 페니실린-스트렙토마이신(Gibco사, 카달로그 번호: 15140122)을 함유한 RPMI1640 배지(Gibco사, 카달로그 번호: 72400047)에 현탁시켰다. 세포 밀도를 2 × 106개의 세포/ml로 조절한 후 , 세포 현탁액을 100 μl/웰로 96웰 U보텀 플레이트(코닝사, 카달로그 번호: 3799)에 첨가하였다. 그 후, IL-15 돌연변이체 융합 단백질을 500 nM에서 시작하여, 4배 구배로 희석하고, 총 11개 구배이다. 그 후 각 농도의 샘플을 100 μl/웰로 인간 PBMC를 코팅한 96웰 U보텀 플레이트에 첨가하고, 균일하게 혼합한 후 , 37℃, 5% CO2 조건의 인큐베이터에서 3일 배양하였다. 배양 후의 세포는 LIVE/DEAD 픽서블 바이올렛 데드 셀 염색 키트(인비트로젠사, 카달로그 번호 : L34964) 및 CD3-AF700(BD사, 카달로그 번호 : 557943), CD56-PE(BD사, 카달로그 번호 : 555516) 및 APC-Ki67(Biolegend사, 카달로그 번호 : 350514) 항체로 염색하고, 그 후 인비트로젠사 Attune NxT 유세포 분석기로 상이한 농도의 IL-15 돌연변이체 융합 단백질로 자극 후 NK세포 중 Ki67+ 세포의 비율을 검출하였다. 도 8A-8M은 구배 희석된 T-IL15-7-1, T-IL15-8-1, T-IL15-9-1, T-IL15-10-1, T-IL15-11-1, T-IL15-26-1, T-IL15-29-1, T-IL15-42-1, T-IL15-43-1, 794-IL15-7-2, 794-IL15-com1-2, 794-IL15-com4-2, 794-IL15-com5-2, 794-IL15-com6-2, 794-IL15-com7-2, V9-IL15-61, V9-IL15-62, V9-IL15-63, V9-IL15-com6, 794-IL15-65-2, 794-IL15-64-2, V5-IL15-WT 및 P22339로 인간 PBMC를 3일 자극한 후, NK 세포(CD3-CD56+) 증식 비율 및 각 돌연변이체 자극 증식된 EC50값을 보여준다. 여기서, T-IL15-8-1, T-IL15-9-1, T-IL15-11-1, V9-IL15-com6, V9-IL15-62 및 V9-IL15-63은 NK 세포 증식능력을 현저히 저하시키는 작용을 보여주고, 플랫폼에 도달하지 않으며, EC50값 피팅이 정확하지 않지만; 이러한 돌연변이체의 조합은 대조 그룹T-IL15-WT-1 또는 P22339에 비해, NK 세포 증식 활성을 현저히 저하시키는 작용을 보여준다. T-IL15-WT-1 및 794-IL15-WT-2는 야생형 IL-15 대조이고, P22339은 돌연변이형 IL-15 대조이며; 794-h1-71단일클론 항체는 항PD-L1 항체 대조이고; Drug0은 어떠한 단백질의 음성 대조도 첨가하지 않은 것이다. 야생형 IL-15 대조에 비교하여, IL-15 돌연변이체는 NK 세포의 증식에 대해 미세한 작용을 보인다. 794-h1-71mAb대조 그룹이 NK 세포 증식에 영향을 미치지 않고, 즉 항PD-L1 항체는 NK 세포에 대해 증식 활성을 유도하지 않으며(도 8B), 세포 증식 활성에 대한 영향은 IL-15에 의해 발생된 것이다 .
구현예 15. 인간화된 항PD-L1 항체-Il15 이중 관능 분자/융합 단백질의 마우스 체내 약효
인간 흑색종A375(Beina Bio; BNCC100266) 세포를 5 × 106개의 세포/100 μL로 NPG마우스 오른쪽 등 피하에 접종하였다. A375 접종 후 다음날에 냉동 보관된 PBMC(ALLCELLs, PB005F-C)를 소생시켜 5 × 106개의 세포s/200 μl의 조제량으로 NPG마우스 (5-6주, 암컷; Beijing Vitalstar Biotechnology Co.,Ltd.에서 구입)체내에 꼬리 정맥 주사하였다. PBMC 접종 6 일후 40 μl 채혈하여 hCD45+ 세포 비율을 검출하였다. 종양이 약 80 mm3로 성장한 후, 체중, hCD45+ 세포 비율, 종양 부피가 너무 크거나 너무 작은 마우스를 제외하였다. 종양 부피에 따라 마우스를 렌덤으로 PBS군룹, Tecentriq군(10 mg/kg), 794-IL15-WT-2군(1 mg/kg), 794-IL15-com6-2군(4 mg/kg) 총 4 그룹으로 나누고, 각 그룹당 마우스가 8 마리이며, 마우스는 총 32 마리이다. 투여 방식은 복강 투여이고, 794-IL15-WT-2군(1 mg/kg) 및 794-IL15-com6-2군(4 mg/kg)으로 그룹을 나누고, 일주일당 1회 투여하며, 총 1회 투여하며; PBS군 및 Tecentriq군(10 mg/kg)은 일주일당 2회 투여하고, 총 5회 투여하였다. 종양 부피는 일주일당 3회 측정하고, 데이터를 기록하였다. 종양 부피(긴 지름 × 짧은 지름2/2) 및 종양 성장 억제율(TGITV (%), TGITV (%) = [1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]× 100%; Ti: 치료군의 투여 i일째의 종양 부피 평균값, T0: 치료 그룹의 투여 0일째의 종양 부피 평균값; Vi: 비히클 대조군의 투여 i일째의 종양 부피 평균값; V0: 비히클 대조군의 투여 0일째의 종양 부피 평균값)을 산출한다. 그룹핑 투여 14일째에, 투여군은 종양 부피에서 모두 현저한 억제 효과를 보이고, 통계학적 차이를 보이며(P < 0.05), 794-IL15-WT-2군 및 794-IL15-com6-2군은 Tecentriq군에 비해 종양 부피에서 현저한 억제 효과를 보였다(P < 0.05). 도 9A-9C 및 표 8을 참조바란다.
표 8. 면역 재구성 NPG마우스 A375 종양 부피에 대한 피험물의 영향
Figure pct00022
비고: a: 평균값 ± 표준 오차; b: 투여군 종양 부피와 비히클 대조군(PBS) 종양 부피에 대해 그룹핑 투여 제14 일에 통계학 비교를 진행하고, 이원분산분석(ANOVA 분석)을 진행하며, P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001, P < 0.0001이고; c: 투여군 종양 부피와 Tecentriq(양성 약물)군 종양 부피에 대해 그룹핑 투여 14일째에 통계학 비교를 진행하고, 이원분산분석(ANOVA 분석)을 진행하며, P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001, P < 0.0001이다.
위의 결과로부터 알 수 있다시피, 794-IL15-WT-2 및 794-IL15-com6-2(인간화된 항PD-L1 항체-IL15 이중 관능 분자/융합 단백질)은 모두 A375 종양 피하 이식암 성장에 현저한 억제 작용을 가지고(P < 0.0001); 794-IL15-WT-2군 및 794-IL15-com6-2군은 Tecentriq군에 비해, 종양 부피에서 억제 효과가 더욱 강하고, 현저한 차이를 보였다(P < 0.05).
구현예 16. IL15-Fc 융합 단백질의 마우스 체내 약효
인간 흑색종A375(Beina Bio; BNCC100266) 세포를 5 × 106개의 세포/100 μL로 NPG마우스 오른쪽 등 피하에 접종하였다. A375 접종 후 다음날에 냉동 보관된 PBMC(ALLCELLs, PB005F-C)를 소생시켜 5 × 106개의 세포s/200 μl의 조제량으로 NPG마우스(5-6주, 암컷; Beijing Vitalstar Biotechnology Co.,Ltd.에서 구입) 체내에 꼬리 정맥 주사하였다. PBMC 접종 6일후 40 μl 채혈하여 hCD45+ 세포 비율을 검출하였다. 종양이 약 69 mm3로 성장한 후, 체중, hCD45+ 세포 비율, 종양 부피가 너무 크거나 너무 작은 마우스를 제외하였다. 종양 부피에 따라 마우스를 렌덤으로 PBS군, ALT803(0.2 mg/kg), V9-IL15-61(1 mg/kg), V9-IL15-61(5 mg/kg), V9-IL15-com6(1 mg/kg), V9-IL15-com6(5 mg/kg) 및 V5-IL15-WT(2 mg/kg) 총 7 그룹으로 나누고, 각 그룹당 마우스가 8 마리이며, 마우스는 총 56마리이다. 투여 방식은 복강 투여이고, 그룹핑에 따라 일주일당 1회 투여하고, 총 3회 투여하며; 종양 부피는 일주일당 3회 측정하고, 데이터를 기록하였다. 종양 부피(긴 지름 × 짧은 지름2/2) 및 종양 성장 억제율(TGITV (%), TGITV (%) = [1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]× 100%; Ti: 치료군의 투여 i일째의 종양 부피 평균값, T0: 치료 그룹의 투여 0일째의 종양 부피 평균값; Vi: 비히클 대조군의 투여 i일째의 종양 부피 평균값; V0: 비히클 대조군의 투여 0일째의 종양 부피 평균값)을 산출한다. 그룹핑 투여 21일째에, PBS대조군에 비해, 투여군은 종양 부피에 모두 현저한 억제 효과를 보이고, 통계학적 차이를 보이며(P < 0.05), ALT803(양성 약물)그룹 및 V9-IL15-com6그룹은 종양 부피에 유사한 억제 효과를 보였다(P > 0.05). 도 10A-10C 및 표 9를 참조바란다.
표 9. 면역 재구성 NPG마우스 A375종양 부피에 대한 피험물의 영향
Figure pct00023
비고: a: 평균값 ± 표준 오차; b: 투여군 종양 부피와 비히클 대조군(PBS) 종양 부피에 대해 그룹핑 투여 제14 일에 통계학 비교를 진행하고, 이원분산분석(ANOVA 분석)을 진행하며, P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001, P < 0.0001이고; c: 이상값(outliers)을 감정하는 것을 통해 21일째 종양 부피를 분석하고, V9-IL15- com6 5 mpk군 중 하나의 데이터가 유난히 크기 때문에, 해당 데이터를 제외하였다.
실험 동물은 투여 기간 동안 활동적이고 먹는 상태가 양호하였다. 투여 후, ALT803 및 V5-IL15-WT군의 마우스는 체중이 현저하게 감소되고, 심지어 일부 마우스는 사망하였고, 이는 마우스가 해당 조제량 및 투여 빈도에서 ALT803 및 V5-IL15-WT에 대해 내성이 없음을 보여주었다. V9-IL15-61(5 mpk)군 및 V9-IL15-com6(1 mpk)군에서 동물 사망이 나타났으나, 사망 전 빈혈 등 GVHD 현상이 관찰되었다. 마우스 사망은 GVHD에 의한 것으로 추정되고, 약물과는 무관하다. 도 10D, 표 10 및 표 11을 참조바란다.
표 10. 면역 재구성의 A375 종양 NPG마우스 체중에 대한 피험물의 영향
Figure pct00024
비고: a: 평균값 ± 표준 오차; b: 그룹핑 투여 21일째에 투여군 체중과 비히클 대조군 체중에 대해 통계학 비교를 진행하고, 이원분산분석(ANOVA 분석)을 진행하였다.
표 11 면역 재구성의 A375 종양 NPG마우스 생존에 대한 피험물의 영향
Figure pct00025
비고: a: 평균값 ± 표준 오차; b: 그룹핑 투여 후 마우스가 사망하였고, 1은 당일 마우스 1 마리가 사망한 것을 나타내며, 0은 당일에 마우스 1 마리가 사망하였으나 사망 전 마우스에게서 빈혈, 황달 등 증상이 관찰된 것을 나타낸다.
이상 결과로부터 알 수 있다시피, IL15-Fc 융합 단백질 V9-IL15-61 및 V9-IL15-com6은 모두 인간 면역 재구성 A375 종양 피하 이식암 성장에 현저한 억제 작용을 가지는 것으로 나타났고; V9-IL15-com6(5 mg/kg)은 양성 대조 항체 ALT803(0.2 mg/kg)에 비해, 양자의 TGI(종양 성장 억제율) 수준이 비슷하고, 안전성이 더욱 우수한 것으로 나타났다.
<110> Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co., Ltd. <120> Human IL-15 mutant and use thereof <130> LTNOF210390S <140> PCT/CN2021/094167 <141> 2021-05-17 <150> 2020104174277 <151> 2020-05-18 <150> 202110483653X <151> 2021-04-30 <160> 100 <170> SIPOSequenceListing 1.0 <210> 1 <211> 114 <212> PRT <213> 人工序列(Artificial Sequence) <400> 1 Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 20 25 30 Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 35 40 45 Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 50 55 60 Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 65 70 75 80 Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 85 90 95 Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 100 105 110 Thr Ser <210> 2 <211> 342 <212> DNA <213> 人工序列(Artificial Sequence) <400> 2 aactgggtga atgtgatctc tgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gtccatgcac 60 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Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser 435 440 445 Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser 450 455 460 Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys 465 470 475 480 Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala 485 490 495 Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp 500 505 510 Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Gly Gly Ser Gly 515 520 525 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Gln Asn 530 535 540 Trp Val Asn Val Ile Ser Ser Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln 545 550 555 560 Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro 565 570 575 Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val 580 585 590 Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn 595 600 605 Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr 610 615 620 Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys 625 630 635 640 Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val Asn Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr 645 650 655 Ser <210> 96 <211> 1971 <212> DNA <213> 人工序列(Artificial Sequence) <400> 96 caagtgcagc tgcagcagtc tggccctggc ctggtgaagc cttctcagac cctgtctctg 60 acctgtgccg tgagcggcga ttctatcacc tctggctact ggaactggat cagaaagttt 120 ccttctagag gcctggagta catgggctac atctcttact ctggctctac ctactacaac 180 cctttcctga agtctagaat ctctatcaac agagatacct ctaagaacca gtactacctg 240 cagctgaact ctgtgacccc tgaggatacc gccgtgtact actgtgccaa gatgggcgat 300 tggctggcct ggttcgccta ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgtc ttctgctagc 360 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 420 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 660 tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 720 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccccgaggtc 780 acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 900 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320 agcctctccc tgtctccggg tagctgcccc cctccaatgt ctgtggagca cgccgacatc 1380 tgggtgaagt cttactccct gtattccagg gagcggtaca tctgcaacag cggcttcaag 1440 aggaaggctg gcacctccag cctgacagag tgcgtgctga acaaggccac caatgtggct 1500 cactggacca caccttctct gaagtgtatc agagatccag ccctggtgca tcagcgcccc 1560 gctcccccta gcggcggctc tggcggcggc ggcagcggcg gcggctctgg cggcggcggc 1620 tctctgcaga actgggtgaa cgtgatctct tctctgaaga agatcgagga tctgatccag 1680 tctatgcaca tcgatgccac cctgtacacc gagtctgatg tgcacccttc ttgtaaggtg 1740 accgccatga agtgtttcct gctggagctg caggtcatct ctctggagtc tggcgatgcc 1800 tctatccacg ataccgtgga gaacctgatc atcctggcca acaactctct gagctctaac 1860 ggcaacgtga ccgagtctgg ctgtaaggag tgtgaggagc tggaggagaa gaacatcaag 1920 gagttcctgc agtctttcgt gaacatcgtg cagatgttca tcaacacctc t 1971 <210> 97 <211> 118 <212> PRT <213> 人工序列(Artificial Sequence) <400> 97 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Phe Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Met Gly Asp Trp Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 98 <211> 113 <212> PRT <213> 人工序列(Artificial Sequence) <400> 98 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Gly Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 99 <211> 118 <212> PRT <213> 人工序列(Artificial Sequence) <400> 99 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Ser Arg Gly Leu Glu Tyr Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Phe Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Ser Ile Asn Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Met Gly Asp Trp Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 100 <211> 113 <212> PRT <213> 人工序列(Artificial Sequence) <400> 100 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Pro Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile 50 55 60 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Gly Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys

Claims (18)

  1. 야생형 IL-15에 대응되는 Val3, Ile6, Asp8 또는 His105의 하나 또는 복수의 아미노산 잔기 위치의 하나 또는 복수의 돌연변이를 포함하는 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드.
  2. 야생형 IL-15에 대응되는 Val3, Ile6, Asp8 또는 His105의 하나 또는 복수의 아미노산 잔기 위치의 하나 또는 복수의 돌연변이를 포함하는 IL-15돌연변이체를 포함하는 폴리펩티드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 하나 또는 복수의 돌연변이는 치환, 삽입 또는 결실이고;
    바람직하게는, 상기 폴리펩티드는 Val3, Ile6, Asp8 또는 His105 중의 2 개 또는 3개 또는 4개의 아미노산 잔기 위치의 돌연변이를 포함하며;
    바람직하게는, 상기 돌연변이는 Val3Leu(V3L), Ile6Asp(I6D), Ile6Pro(I6P), Asp8Glu(D8E), Asp8Gln(D8Q), Asp8Arg(D8R), Asp8Ser(D8S), Asp8Val(D8V), Asp8Gly(D8G), Asp8Ile(D8I), Asp8Leu(D8L), Asp8Thr(D8T), His105Asn(H105N), 및/또는 His105Lys(H105K) 그룹의 아미노산 치환으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 폴리펩티는
    (1) Asp8Glu, (2) Asp8Gln, (3) Asp8Arg, (4) Asp8Ser, (5) Asp8Val, (6) Val3Leu, (7) Ile6Asp, (8) His105 Lys, (9) His105 Asn, (10) Asp8Gly，(11) Asp8Ile，(12) Asp8Leu，(13) Ile6Pro, (14) Asp8Thr, (15) Asp8Glu 및 Val3Leu，(16) Asp8Glu 및 Ile6Asp, (17) Val3Leu 및 Ile6Asp, (18) Ile6Asp 및 His105Lys, (19) Asp8Ser 및 His105Lys, (20) Asp8Ser 및 His105Asn 또는 (21) Val3Leu, Ile6Asp 및 His105Lys의 돌연변이 또는 돌연변이 조합을 포함하며;
    바람직하게는 상기 IL-15 돌연변이체와 인간 야생형 IL-15는 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 일치성을 갖는 폴리펩티드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 IL-15돌연변이체의 아미노산 서열은 SEQ ID NO.3, SEQ ID NO.5, SEQ ID NO.7, SEQ ID NO.NO.9, SEQ ID NO.11, SEQ ID NO.13, SEQ ID NO.15, SEQ ID NO.17, SEQ ID NO.19, SEQ ID NO.21, SEQ ID NO.23, SEQ ID NO.25.SEQ ID NO.27, SEQ ID NO.29, SEQ ID NO.35, SEQ ID NO.37, SEQ ID NO.39, SEQ ID NO.41, SEQ ID NO.43, SEQ ID NO.45 또는 SEQ ID NO.47로 표시고;
    바람직하게는, 상기 폴리펩티드는
    (1) 인간 CD8+ T세포의 증식을 매개하는 활성;
    (2) 인간 NK세포의 증식을 매개하는 활성; 및/또는
    (3) 종양의 성장을 억제하는 활성을 가지며;
    바람직하게는, 상기 폴리펩티는 CD8+ T세포 및/또는 NK세포의 증식/증폭을 매개하는 활성이 야생형 IL-15를 포함하는 폴리펩티드의 활성보다 낮고;
    바람직하게는 상기 야생형 IL-15는 SEQ ID NO.1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드.
  5. 단백질로서,
    상기 단백질은 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 포함하되, 상기 단백질은 (1) 상기 IL-15돌연변이체와 융합되는 면역 글로블린 분자 및 그 부분; 및/또는 (2) 상기 IL-15돌연변이체와 융합되는 IL-15Rα를 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 면역 글로블린 분자는 항체 또는 항원 결합 단편이며; 상기 면역 글로블린 분자 부분은 면역 글로블린 Fc영역이고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은
    (1) 키메라 항체 또는 그 단편;
    (2) 인간화 항체 또는 그 단편; 또는
    (3) 전 인간화 항체 또는 그 단편으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 F(ab)2, Fab', Fab, Fv, scFv, 이중 특이성 항체, 나노 항체 및 항체 최소 인식 단위 중 하나 또는 복수로부터 선택되며;
    바람직하게는, 상기 면역 글로블린 Fc영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE 또는 IgD 중 임의의 하나의 Fc영역으로부터 선택되고; 바람직하게는, 인간 또는 뮤린 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체의 불변 영역의 서열을 포함하고; 바람직하게는, 상기 면역 글로블린 Fc영역은 SEQ ID NO.73으로 표시되는 아미노산 서열을 가지며;
    바람직하게는, 상기 IL-15돌연변이체는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분과 융합되거나 또는 상기 IL-15 돌연변이체는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 상기 IL-15Rα와 융합되고; 바람직하게는 연결펩티드를 사용하며; 바람직하게는, SEQ ID NO.65, SEQ ID NO.67, SEQ ID NO.69 또는 SEQ ID NO.71로 표시되는 연결펩티드를 사용하고;
    바람직하게는, 상기 IL-15 돌연변이체는 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 상기 IL-15Rα와 융합되고, 그 다음 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분과 융합되며; 바람직하게는 연결펩티드를 사용하고; 바람직하게는, SEQ ID NO.65, SEQ ID NO.69 또는 SEQ ID NO.71로 표시되는 연결펩티드를 사용하는 단백질.
  6. 제5항에 있어서,
    각 도메인의 연결 순서는 N말단에서 C말단까지
    (1) 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분, 상기 IL-15Rα 및 상기 IL-15돌연변이체;
    (2) 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분, 상기 IL-15돌연변이체 및 상기 IL-15Rα;
    (3) 상기 IL-15돌연변이체, 상기 IL-15Rα 및 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분;
    (4) 상기 IL-15Rα, IL-15돌연변이체 및 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분;
    (5) 상기 IL-15돌연변이체 및 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분;
    (6) 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분 및 상기 IL-15Rα;
    (7) 상기 IL-15Rα 및 상기 면역 글로블린 분자 또는 그 부분;
    (8) 상기IL-15돌연변이체 및 상기 IL-15Rα, 또는
    (9) 상기 IL-15Rα 및 상기 IL-15돌연변이체이고;
    바람직하게는, 상기 IL-15Rα 또는 IL-15 돌연변이체가 상기 면역 글로블린 분자와 융합될 경우, 상기 IL-15Rα 또는 IL-15돌연변이체는 상기 면역 글로블린 분자의 중쇄 가변영역의 N말단 또는 상기 면역 글로블린 분자 Fc영역의 C말단에 융합되며; 상기 IL-15Rα 또는 IL-15돌연변이체가 상기 면역 글로블린 Fc영역과 융합될 경우, 상기 IL-15Rα 또는 IL-15돌연변이체는 상기 면역 글로블린 Fc영역의 N말단 또는 C말단에 융합되는 단백질.
  7. 단백질로서,
    (1) 면역 글로블린 중쇄;
    (2) 면역 글로블린 경쇄;
    (3) IL-15Rα; 및
    (4) 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드를 포함하고;
    바람직하게는, 상기 단백질은 (1) 내지 (4)로 구성된 단량체를 포함하는 동종이량체이며;
    바람직하게는, 상기 IL-15Rα가 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 상기 면역 글로블린 중쇄 가변영역의 N말단 또는 Fc영역의 C말단에 융합되고;
    바람직하게는, 상기 IL-15돌연변이체 폴리펩티드가 상기 IL-15Rα와 비공유 연결되거나 또는 상기 IL-15돌연변이체 폴리펩티드가 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 상기 IL-15Rα의 타단에 융합되는 단백질.
  8. 단백질로서,
    (1) 면역 글로블린 Fc영역;
    (2) IL-15Rα; 및
    (3) 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드를 포함하고;
    바람직하게는, 상기 단백질은 (1) 내지 (3)으로 구성된 단량체를 포함하는 동종이량체이며;
    바람직하게는, 상기 IL-15Rα가 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 IL-15 돌연변이체 폴리펩티드의 N말단 또는 C말단에 융합되고, 그 다음 연결펩티드를 통해 또는 연결펩티드를 통하지 않고 면역 글로블린 Fc영역의 N말단 또는 C말단에 융합되는 단백질.
  9. 제5항 내지 제8항에 있어서, 상기 면역 글로블린은 항PD-L1 항체로부터 선택되고; 바람직하게는, 상기 항PD-L1 항체는 Tecentriq, KN-035 또는 794-h1-71이며;
    바람직하게는 상기 항PD-L1 항체는 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역을 포함하되, 상기 중쇄 가변영역 및 상기 경쇄 가변영역은 각각 SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열을 또는 SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 일치성을 갖는 서열을 가지고; 또는
    상기 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역은 각각 SEQ ID NO: 97 및 SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열 또는 SEQ ID NO: 97 및 SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 일치성을 갖는 서열을 가지며;
    바람직하게는, 상기 IL-15Rα는 IL-15Rα-sushi로부터 선택되고; 바람직하게는, 상기 IL-15Rα-sushi는 SEQ ID NO.49, SEQ ID NO.51, SEQ ID NO.53 또는 SEQ ID NO.55로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 단백질.
  10. PD-L1에 특이적으로 결합될 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편으로서,
    상기 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역을 포함하고; 바람직하게는 상기 중쇄 가변영역 및 상기 경쇄 가변영역은 각각 SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열 또는 SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 일치성을 갖는 서열을 가지며;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 인간 프로그램화된 사멸 리간드1(PD-L1)와 결합되는 해리 상수(KD)는 1.8 × 10-9 M 이하이고, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 사이노몰구스 원숭이 프로그램화된 사멸 리간드1(PD-L1)과 결합되는 해리 상수(KD)는 9.4 × 10-10 M 이하이거나; 또는
    선택적으로, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 원숭이 PD-L1과 결합되거나 또는 결합되지 않고;
    선택적으로, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 뮤린 PD-L1과 결합되거나 또는 결합되지 않으며;
    바람직하게는, 상기 항PD-L1 항체는 PD-L1 또는 그 항원 에피토프에 경쟁적으로 결합되고,
    (1) PD-L1재조합 단백질 및 PD-L1을 발현하는 세포에 특이적으로 결합되고;
    (2) PD-L1과 PD-1단백질의 결합을 차단하며;
    (3) PD-1과 세포 표면에서 발현되는 PD-L1의 결합을 억제하고;
    (4) T 세포 활성을 증강시키며; 및/또는
    (5) 종양의 성장을 억제하는 활성을 가지며;
    바람직하게는, 상기 항PD-L1 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE 또는 IgD 중 임의의 하나로부터 유래되는 불변영역을 포함하며; 바람직하게는, 인간 또는 뮤린 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체의 불변 영역의 서열을 포함하고;
    바람직하게는, 상기 PD-L1 항체는 F(ab)2, Fab', Fab, Fv, scFv 및 이중 특이성 항체 중의 하나 또는 복수로부터 선택되는 단백질.
  11. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 단백질 또는 제10항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  12. 제11항에 따른 단리된 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
  13. 숙주 세포로서,
    제11항에 따른 단리된 핵산 분자, 또는 제12항에 따른 발현 벡터를 포함하고; 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 진핵 세포 또는 원핵 세포이며; 더욱 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 포유 동물 세포, 효모 세포, 곤충 세포, 대장간균 및/또는 고초간균으로부터 유래되고; 더욱 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 세포(CHO)로부터 선택되는 숙주 세포.
  14. 적합한 조건 하에서 제13항에 따른 숙주 세포를 배양하고, 상기 폴리벱티드 또는 단백질을 단리하는 단계를 포함하는 폴리펩티드 또는 단백질의 제조 방법.
  15. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제10항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 제11항에 따른 단리된 핵산 분자, 제12항에 따른 발현 벡터, 제13항에 따른 숙주 세포, 제14항에 따른 방법에 의해 제조된 제품; 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하고; 바람직하게는, 별도의 항암제를 더 포함하는 약물 조성물.
  16. 대상체 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 약물 제조에서 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제10항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 제11항에 따른 단리된 핵산 분자, 제12항에 따른 발현 벡터, 제13항에 따른 숙주 세포, 제14항에 따른 방법에 따라 제조된 제품 또는 제15항에 따른 약물 조성물의 용도로서, 상기 질병은 종양 또는 염증성 질병이고;
    바람직하게는, 상기 종양은 교모세포종, 전립선암, 혈액암, B세포종양, 다발성 골수종, B세포림프종, B세포 비호지킨림프종, 호지킨림프종, 만성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 피부 T세포림프종, T세포림프종, 고형종양, 요로상피/방광암, 흑색종, 폐암, 신장세포암, 유방암, 위암, 식도암, 전립선암, 췌장암, 대장암, 난소암, 비소세포암, 및 두경부 편상세포암으로부터 선택되는 대상체 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 약물 제조에서 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제10항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 제11항에 따른 단리된 핵산 분자, 제12항에 따른 발현 벡터, 제13항에 따른 숙주 세포, 또는 제14항에 따른 방법으로 제조된 제품, 또는 제15항에 따른 약물 조성물의 용도.
  17. 대상체에서 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 방법으로서,
    상기 방법은 필요한 환자에게 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제10항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 제11항에 따른 단리된 핵산 분자, 제12항에 따른 발현 벡터, 제13항에 따른 숙주 세포, 제14항에 따른 방법에 따라 제조된 제품 또는 제15항에 따른 약물 조합을 투여하는 단계를 포함하고; 상기 질병은 종양 또는 염증성 질병이며;
    바람직하게는, 상기 종양은 교모세포종, 전립선암, 혈액암, B세포종양, 다발성 골수종, B세포림프종, B세포 비호지킨림프종, 호지킨림프종, 만성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 피부 T세포림프종, T세포림프종, 고형종양, 요로상피/방광암, 흑색종, 폐암, 신장세포암, 유방암, 위암, 식도암, 전립선암, 췌장암, 대장암, 난소암, 비소세포암, 및 두경부 편상세포암으로부터 선택되는 대상체에서 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 방법.
  18. 대상체 질병을 예방 및/또는 치료하에 사용되는 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제10항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 제11항에 따른 단리된 핵산 분자, 제12항에 따른 발현 벡터, 제13항에 따른 숙주 세포, 제14항에 따른 방법에 따라 제조된 제품 또는 제15항에 따른 약물 조성물로서, 상기 질병은 종양 또는 염증성 질병이고;
    바람직하게는, 상기 종양은 교모세포종, 전립선암, 혈액암, B세포종양, 다발성 골수종, B세포림프종, B세포 비호지킨림프종, 호지킨림프종, 만성 림프구성 백혈병, 급성 수성 백혈병, 피부 T세포림프종, T세포림프종, 고형종양, 요로상피/방광암, 흑색종, 폐암, 신장세포암, 유방암, 위암, 식도암, 전립선암, 췌장암, 대장암, 난소암, 비소세포암, 및 두경부 편상세포암으로부터 선택되는 대상체에서 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제10항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 제11항에 따른 단리된 핵산 분자, 제12항에 따른 발현 벡터, 제13항에 따른 숙주 세포, 제14항에 따른 방법에 따라 제조된 제품 또는 제15항에 따른 약물 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2005315658A1 (en) * 2004-12-13 2006-06-22 Cytos Biotechnology Ag IL-15 antigen arrays and uses thereof
DK2235064T3 (en) 2008-01-07 2016-01-11 Amgen Inc A process for the preparation of heterodimeric Fc molecules using electrostatic control effects
PE20191034A1 (es) * 2016-10-14 2019-08-05 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas biespecificas que contienen proteinas de fusion fc il-15/il-15r y fragmentos de anticuerpo pd-1
CU24546B1 (es) * 2016-12-30 2021-09-07 Ct Ingenieria Genetica Biotecnologia Composición vacunal que comprende un mutante de la interleucina-15 humana
CN107973854B (zh) * 2017-12-11 2021-05-04 苏州银河生物医药有限公司 Pdl1单克隆抗体及其应用
WO2019165453A1 (en) * 2018-02-26 2019-08-29 Synthorx, Inc. Il-15 conjugates and uses thereof
US11845801B2 (en) * 2019-06-12 2023-12-19 AskGene Pharma, Inc. IL-15 prodrugs and methods of use thereof
EP4208476A1 (en) * 2020-09-01 2023-07-12 Wuxi Biologics Ireland Limited Long-acting il-15 and uses thereof

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