CN115894700A - 同时靶向PD-L1和FasL的双特异性抗体、药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种靶向PD‑L1及FasL的双特异性抗体，其包括：(a)能够特异性地结合PD‑L1的PD‑L1抗体，以及(b)能够特异性地结合FasL的FasL抗体或Fas胞外结构域、Fas胞外结构域的截短体或突变体；其中，所述FasL抗体的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列连接至所述PD‑L1抗体的重链可变区和轻链可变区，和/或Fas胞外结构域通过接头序列连接至所述PD‑L1抗体的恒定区。本发明包含了所述分子的制备方法以及其作为抗癌药物的用途。本发明的双特异性抗体包括能够结合PD‑L1的片段和特异性结合FasL的片段，这种双功能抗体分子能够产生协同作用，发挥高效抗肿瘤的作用。相对于单独给予这两种抗体中的任一种抗体，本发明双特异性抗体在癌症疗中显示出明显的协同作用。

Description

同时靶向PD-L1和FasL的双特异性抗体、药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地涉及一种同时靶向PD-L1及FasL的双特异性抗体、包括该双特异性抗体的药物组合物及其作为抗癌药物的应用。

背景技术

肿瘤免疫治疗已成为肿瘤治疗研究领域的热点。人体正常情况下，免疫系统可以识别并清除肿瘤微环境中的肿瘤细胞，但肿瘤细胞能够采用一系列策略，使人体的免疫系统受到抑制，导致免疫系统不能正常地杀伤肿瘤细胞，从而使肿瘤细胞在抗肿瘤免疫应答的各阶段得以幸存，这一过程称为免疫逃逸。不同肿瘤可以通过不同环节的异常抑制免疫系统对肿瘤细胞的有效识别和杀伤从而产生免疫耐受，甚至促进肿瘤的发生、发展。肿瘤免疫治疗就是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制和清除肿瘤的一种治疗方法。包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞治疗和小分子抑制剂等，均采用这种治疗方法。

目前，肿瘤免疫治疗领域最广泛的应用是开发针对抑制T细胞活化的调节性免疫检查点分子的靶向单克隆抗体，其中以阻断程序性死亡蛋白1(Programmed cell deathprotein-1，PD-1)和阻断程序性死亡配体蛋白1(programmed cell death proteinligand-1，PD-L1)的药物为主要代表。PD-1起作用在免疫反应的效应阶段，其表达于活化的T细胞、B细胞及髓系细胞，其有两个配体，即程序性死亡分子配体PD-L1和PD-L2。PD-L1/PD-L2在抗原提呈细胞都有表达。另外，PD-L1在多种组织也有表达。PD-1与PD-L1的结合介导T细胞活化的共抑制信号，抑制T细胞的杀伤功能，对人体免疫应答起到负调节作用。陈列平实验室首先发现PD-L1在肿瘤组织高表达，而且抑制肿瘤浸润CD8+T细胞的功能，是肿瘤细胞免疫逃逸的一个重要机制。因此，以PD-1/PD-L1为靶点的免疫调节对抗肿瘤有重要的意义。PD-1/PD-L1抑制剂能够特异性地结合肿瘤细胞上的PD-L1而抑制其表达，从而能够使功能受抑制的T细胞恢复对肿瘤细胞的识别功能，实现通过自身免疫系统达到抗癌作用。目前，针对PD-1/PD-L1的肿瘤免疫疗法在实现更高的客观缓解率同时，显著降低了免疫相关的副作用，如今已获得FDA批准应用于10多种癌症适应症。同时，针对PD-1/PD-L1的肿瘤免疫疗法与其他不同疗法联合使用时，也显示出显著的抗肿瘤效果。针对PD-1/PD-L1的肿瘤免疫疗法，靶点作用明确，但是有效率仅为20％左右，有效率仍有待提高。因此，在此基础上开发更高效且更广泛的免疫疗法具有重要的意义。

发明内容

本发明的第一方面提供一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包括：

(a)能够特异性地结合PD-L1的PD-L1抗体，以及

(b)能够特异性地结合FasL的FasL抗体或Fas胞外结构域、Fas胞外结构域的截短体或突变体；其中，所述FasL抗体的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列连接至所述PD-L1抗体的重链可变区和轻链可变区，和/或Fas胞外结构域通过接头序列连接至所述PD-L1抗体的恒定区。

细胞凋亡(apoptosis)指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。Fas/FasL信号通路是细胞凋亡的一个重要的信号通路。Fas又称CD95，是一种跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，它与其配体FasL结合可以启动凋亡信号的转导引起细胞凋亡。Fas作为一种普遍表达的受体分子，可表达于多种细胞表面，但FasL通常只表达于活化的T细胞和NK细胞。随着进一步的研究，人们发现FasL与肿瘤发展密切相关，FasL可以抑制免疫微环境中CD8+T细胞的活性；肿瘤表达FasL可以诱导肿瘤浸润性T淋巴细胞凋亡；肿瘤部位的FasL高表达导致T细胞数目减少，因此肿瘤特性更倾向变成冷肿瘤；另外有研究表明肿瘤部位FasL的过表达促进了肿瘤的转移及发展。

本发明通过设计靶向PD-L1和FasL的双特异性抗体，实现两种抗体带来的双重抗肿瘤作用，不仅提高了治疗的有效性，而且可以减少用药剂量，降低副作用，提高安全性。

在本发明的一个实施方案中，PD-L1抗体可以连接完整的FasL抗体，也可以连接Fas胞外结构域(Fas-ECD)。对于Fas/FasL蛋白的抑制，可以通过FasL抗体与FasL配体的结合来实现，也可以通过Fas-ECD与FasL配体的结合来实现。本发明中，发明人在研究过程中发现，FasL包括可溶性表达的FasL(sFasL)，也有膜表达的FasL(mFasL)，两种FasL均能发挥免疫作用。因此，在靶向FasL蛋白的设计时，选择了FasL抗体以及Fas-ECD两种形式，它们均可以靶向FasL而发挥免疫作用。

在本发明的一种实施方案中，所述双特异性抗体包括PD-L1抗体以及分别在PD-L1抗体的C端的重链恒定区两侧通过接头序列连接的一个或两个Fas胞外结构域(Fas-ECD)。

在本发明的另一种实施方案中，所述双特异性抗体包括PD-L1抗体和FasL抗体，其中，所述PD-L1抗体的N端的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列与所述FasL抗体的N端的重链可变区和轻链可变区连接。在另一种方案中，所述FasL抗体的N端的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列与所述PD-L1抗体的N端的重链可变区和轻链可变区连接。

在本发明的一种实施方案中，所述双特异性抗体包括PD-L1抗体、FasL抗体和Fas胞外结构域，其中，所述PD-L1抗体的N端的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列连接至所述FasL抗体的N端的重链可变区和轻链可变区，以及在PD-L1抗体和FasL抗体连接形成双特异性抗体的PD-L1抗体或FasL抗体的C端的重链恒定区两侧分别通过接头序列连接一个或两个Fas胞外结构域。在另一种实施方案中，所述FasL抗体的N端的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列连接至所述PD-L1抗体的N端的重链可变区和轻链可变区，以及在FasL抗体和PD-L1抗体连接形成双特异性抗体的C端的重链恒定区两侧分别通过接头序列连接一个或两个Fas胞外结构域。

在本发明，PD-L1抗体可以是能够与PD-L1特异性结合的完整的PD-L1抗体，也可以是能够与PD-L1特异性结合的PD-L1抗体的突变体或其截短体。类似地，FasL抗体可以是完整的FasL抗体、FasL抗体的突变体或截短体。同样，Fas胞外结构域也可以是突变体或截短体。

在本发明中，所述PD-L1抗体和FasL抗体均分别包括两条轻链和两条重链，每条轻链均包括轻链可变区和轻链恒定区，每条重链均包括重链可变区和重链恒定区；其中，PD-L1抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列编码；PD-L1抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，其由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列编码；

FasL抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，其由SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列编码；PD-L1抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，其由SEQID NO:8所示的核苷酸序列编码。

在本发明中，所述接头序列可以是常用的(G4S)3接头序列((G4S)3接头序列)。具体地，所述(G4S)3接头序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。通过接头序列，将两个抗体或抗体的相应的部分连接起来，且不影响双特异性抗体的功能。

本发明的第另一方面提供一种药物组合物，其含有本发明所述的双特异性抗体以及任选地药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明的又一方面提供了本发明所述的双特异性抗体在制备治疗PD-L1和FasL相关的癌症的药物中的应用。

在本发明的应用中，所述双特异性抗体可以治疗的癌症可以是尿路上皮癌、小细胞肺癌、三阴性乳腺癌、肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、肾癌、结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌中的一种或多种。

本发明基于如下发现：本发明的双特异性抗体包括能够结合PD-L1的片段和特异性结合FasL的片段，这种双功能抗体分子可以产生协同作用，同时靶向PD-L1和FasL，从而发挥高效的抗肿瘤作用。相对于单独给予这两种抗体时的疗效，本发明的双特异性抗体在癌症治疗中显示出明显的协同作用。

附图说明

图1是单克隆抗体(PD-L1单抗或FasL单抗)的结构示意图。

图2是以PD-L1单克隆抗体为主体，在PD-L1单克隆抗体的C端两侧的两条重链各融合表达一个Fas-ECD的双特异性抗体的示意图。

图3是以PD-L1单克隆抗体为主体，在PD-L1单克隆抗体的C端两侧的两条重链各融合表达两个Fas-ECD的双特异性抗体的示意图。

图4是以PD-L1单克隆抗体为主体，在PD-L1单克隆抗体的N端两侧的轻链和重链的N端分别融合表达对应的FasL抗体的轻链和重链，或者以FasL单克隆抗体为主体，在FasL单克隆抗体的N端两侧的轻链和重链的N端分别融合表达对应的PD-L1抗体的轻链和重链的示意图。在图4中，VL1和VH1是PD-L1单克隆抗体和FasL单克隆抗体中一个抗体的轻链可变区和重链可变区，而VL2和VH2是PD-L1单克隆抗体和FasL单克隆抗体中另一个抗体的轻链可变区和重链可变区，两个抗体通过接头序列进行端对端连接。

图5是以图4的双特异性抗体为基础，在PD-L1单克隆抗体或FasL抗体的C端两侧分别融合表达一个Fas-ECD的示意图。在图5中，VL1和VH1是PD-L1单克隆抗体和FasL单克隆抗体中一个抗体的轻链可变区和重链可变区，而VL2和VH2是PD-L1单克隆抗体和FasL单克隆抗体中另一个抗体的轻链可变区和重链可变区，两个抗体通过接头序列进行端对端连接。

图6是以图4的双特异性抗体为基础，在PD-L1单克隆抗体或FasL抗体的C端两侧分别融合表达两个Fas-ECD。在图6中，VL1和VH1是PD-L1单克隆抗体和FasL单克隆抗体中一个抗体的轻链可变区和重链可变区，而VL2和VH2是PD-L1单克隆抗体和FasL单克隆抗体中另一个抗体的轻链可变区和重链可变区，两个抗体通过接头序列进行端对端连接。

图7为本发明实施例2中非还原性SDS-PAGE的结果，其显示纯化获得的PD-L1/FasL蛋白纯度。大部分蛋白稳定性良好，构型中包含Fas ECD的蛋白稳定性略差，有少量聚集和降解。

图8为本发明实施例2中还原性SDS-PAGE的结果，其显示纯化获得的PD-L1/FasL蛋白纯度。大部分蛋白稳定性良好，构型中包含Fas ECD的蛋白稳定性略差，有少量聚集和降解。

图9至图19为本发明实施例2中SEC-HPLC的结果，显示纯化获得的PD-L1/FasL蛋白聚集体及降解情况。大部分蛋白稳定性良好，少数蛋白出现部分聚集体和降解；其中，

图9是编号为60/61的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图10是编号为141/142的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图11是编号为101/102的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图12是编号为101/167的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图13是编号为101/168的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图14是编号为161/157的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图15是编号为161/164的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图16是编号为161/166的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图17是编号为162/159的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图18是编号为162/163的蛋白的SEC-HPLC的结果；

图19是编号为162/165的蛋白的SEC-HPLC的结果。

图20为本发明实施例3中PD-L1/FasL双特异性抗体在分子水平上阻断PD-1/PD-L1信号通路的实验结果。

图21为本发明实施例4中PD-L1/FasL双特异性抗体在细胞水平上的靶点结合活性曲线。(A)PD-L1/FasL双特异性抗体与CHO-K1-PD-L1稳转细胞株的结合活性曲线。(B)PD-L1/FasL双特异性抗体与CHO-K1-FasL稳转细胞株的结合活性曲线。

图22为本发明实施例5中PD-L1/FasL双特异性抗体对重组人源游离FasL诱导Jurkat细胞凋亡的抑制曲线。

图23为本发明实施例6中采用Annexin-V法测定PD-L1/FasL双特异性抗体对CHO-K1-FasL稳转细胞株诱导Jurkat细胞凋亡的抑制作用曲线。

图24为本发明实施例7中乳酸脱氢酶释放法测定PD-L1/FasL双特异性抗体对CHO-K1-FasL稳转细胞株诱导Jurkat细胞凋亡的抑制作用曲线。

图25为本发明实施例8中PD-L1/FasL双特异性抗体对CHO-K1-FasL细胞株表达游离FasL的中和作用曲线图。

图26为本发明实施例9中PD-L1/FasL双特异性抗体对CHO-K1-FasL-PD-L1细胞株诱导CD8+T细胞凋亡的抑制作用。其中，(A)表示加入PD-L1/FasL双特异性抗体后，共培养体系中CD8+T细胞的比例曲线图。(B)表示PD-L1/FasL双特异性抗体对CHO-K1-FasL-PD-L1稳转细胞株诱导CD8+T胞凋亡的抑制作用对比图。(C)表示CD8+T细胞与CHO-K1-FasL-PD-L1稳转细胞株共培养时IFN-γ的表达水平。

图27为本发明实施例10中混合淋巴实验体系加入PD-L1/FasL双特异性抗体后对细胞因子IFN-γ和IL-2表达水平的影响结果图。其中，(A)表示PD-L1/FasL双特异性抗体对CD8+T细胞表达细胞因子IFN-γ的影响结果图。(B)表示PD-L1/FasL双特异性抗体对CD8+T细胞表达细胞因子IL-2的影响结果图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行详细的说明。

在本发明中，抗体是指本领域技术人员一般理解的抗体(免疫球蛋白，Ig)。

抗体由四条多肽链组成，各肽链之间由数量不等的链间二硫键连接，可以形成“Y”字型结构，构成抗体的基本单位。

抗体分子含有四条多肽链，其中，分子量较大的两条链称为重链(heavy chain，H)，而分子量较小的两条链称为轻链(Light chain，L)。同一抗体分子中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。

重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸序列变化很大，其他部分氨基酸序列相对恒定。因此，轻链和重链中靠近N端氨基酸序列变化较大的区域被称为可变区(variableregion，V)，将靠近C端的氨基酸序列相对稳定的区域，称为恒定区(constant region，C)。

在本申请中，重链可变区用VH表示，轻链可变区用VL表示；重链恒定区用CH表示，轻链恒定区用CL表示。

VH和VL中各含有3个氨基酸组成和排列顺序高度可变的区域，称为高变区(hypervariable region，HVR)或互补决定区(complementarity determining region，CDR)，包括CDRl、CDR2和CDR3。

不同型(κ或λ)抗体的轻链恒定区的长度基本一致，但是不同类Ig的CH长度不同，例如IgG、IgA和IgD包括CH1、CH2和CH3，而IgM和IgE则包括CH1、CH2、CH3和CH4。

木瓜蛋白酶可在IgG重链铰链区链间二硫键近氨基端处将其断裂为三个片段，即，两个完全相同的抗原结合片段(fragment antigen-binding，Fab)和一个可结晶片段(fragment crystallizable，Fc)。每个Fab段由一条完整的轻链和部分重链(VH和CH1)组成。该片段具有单价抗体活性，只能与一个相应抗原表位结合，因此与相应抗原结合后不能形成大分子免疫复合物。Fc段由铰链区链间二硫键连接的两条重链的CH2和CH3功能区组成，无抗原结合活性。

在本发明中，PD-L1抗体的所有轻链可变区的氨基酸序列一致，如SEQ ID NO:1所示，其由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列进行编码。

在本发明中，PD-L1抗体的所有重链可变区的氨基酸序列一致，如下SEQ ID NO:3所示，其由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列进行编码。

在本发明中，FasL抗体的所有轻链可变区的氨基酸序列一致，如下SEQ ID NO:5所示，其由SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列进行编码。

本发明中，FasL抗体的所有重链可变区的氨基酸序列一致，如下SEQ ID NO:7所示，其由SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列进行编码。

在本发明中，Fas胞外结构域(Fas-ECD)的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，其由SEQ ID NO:10所示的氨基酸的核苷酸序列进行编码。

在本发明中，PD-L1抗体和FasL抗体的轻链恒定区一致且轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，其由SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列进行编码。

实施例1：双特异性抗体PD-L1/FasL克隆与表达

采用抗人PD-L1抗体作为双特异性抗体中调节PD-1/PD-L1免疫检查点部分，将人肿瘤坏死因子蛋白Fas胞外结构域或抗人FasL抗体作为双特异性抗体中调控T细胞凋亡的分子部分，形成PD-L1/FasL双特异性抗体。

质粒构建：质粒以完整抗体(PD-L1抗体或FasL抗体)为主体，在该抗体重链N端连接双特异性抗体的另外一个靶点抗体的重链可变区，其中两个结构域由(G4S)3接头序列连接，在该抗体轻链N端连接双特异性抗体的另外一个靶点抗体的轻链可变区，其中两个结构域由(G4S)3接头序列连接。抗体重链C端串联一个或两个人Fas胞外结构域(Fas-ECD)，Fc与Fas胞外结构域由(G4S)3接头序列连接，两个Fas胞外结构域由(G4S)3接头序列连接。

PD-L1抗体或FasL抗体的轻链和重链的氨基酸序列和核苷酸序列见序列表中的SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:16。接头序列(G4S)3的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示。信号肽序核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示，信号肽序氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，信号肽加入Kozak序列(GCCACC)。所有序列委托南京金斯瑞生物科技有限公司进行密码子优化(哺乳动物细胞中表达)后进行全基因合成，目的片段由XbaI和EcoRV酶切后连接入pCDNA3.4表达载体中，测序确认序列的正确性。

SEQ ID NO:17：

GGTGGTGGTGGTTCTGGTGGTGGTGGTTCTGGCGGCGGCGGCTCC

SEQ ID NO:18：GGGGSGGGGSGGGGS

SEQ ID NO:19：

ATGGGCTGGAGCTGCATCATCCTGTTCCTGGTGGCCACCGCCACAGGCGTGCACTCC

SEQ ID NO:20：MGWSCIILFLVATATGVHS

在本申请中，质粒编号与其所表达的蛋白部分之间的对应关系如下表1所示。

表1.质粒编号与其表达的蛋白部分

质粒编号及其表达的蛋白质对应的氨基酸和核苷酸序列如下：

PL101：PD-L1轻链氨基酸序列(SEQ ID NO:21)。

PL101：PD-L1轻链核苷酸序列(SEQ ID NO:22)。

PL102：PD-L1重链氨基酸序列(SEQ ID NO:23)。

PL102：PD-L1重链核苷酸序列(SEQ ID NO:24)。

PL141：FasL轻链氨基酸序列(SEQ ID NO:25)。

PL141：FasL轻链核苷酸序列(SEQ ID NO:26)。

PL142：FasL重链氨基酸序列(SEQ ID NO:27)。

PL142：FasL重链核苷酸序列(SEQ ID NO:28)。

PL060：FasL轻链氨基酸序列(SEQ ID NO:29)。

PL060：FasL轻链核苷酸序列(SEQ ID NO:30)。

PL061：FasL重链氨基酸序列(SEQ ID NO:31)。

PL061：FasL重链核苷酸序列(SEQ ID NO:32)。

PL162：PD-L1-FasL-LC氨基酸序列(SEQ ID NO:33)。

PL162：PD-L1-FasL-LC核苷酸序列(SEQ ID NO:34)。

PL159：PD-L1-FasL-HC氨基酸序列(SEQ ID NO:35)。

PL159：PD-L1-FasL-HC核苷酸序列(SEQ ID NO:36)。

PL165：PD-L1-FasL-HC-Fas ECD氨基酸序列(SEQ ID NO:37)。

PL165：PD-L1-FasL-HC-Fas ECD核苷酸序列(SEQ ID NO:38)。

PL163：PD-L1-FasL-HC-2Fas ECD氨基酸序列(SEQ ID NO:39)。

PL163：PD-L1-FasL-HC-2Fas ECD核苷酸序列(SEQ ID NO:40)。

PL167：PD-L1-HC-Fas ECD氨基酸序列(SEQ ID NO:41)。

PL167：PD-L1-HC-Fas ECD核苷酸序列(SEQ ID NO:42)。

PL168：PD-L1-HC-2Fas ECD氨基酸序列(SEQ ID NO:43)。

PL168：PD-L1-HC-2Fas ECD核苷酸序列(SEQ ID NO:44)。

PL161：FasL-PD-L1-LC氨基酸序列(SEQ ID NO:45)。

PL161：FasL-PD-L1-LC核苷酸序列(SEQ ID NO:46)。

PL157：FasL-PD-L1-HC氨基酸序列(SEQ ID NO:47)。

PL157：FasL-PD-L1-HC核苷酸序列(SEQ ID NO:48)。

PL166：FasL-PD-L1-HC-Fas ECD氨基酸序列(SEQ ID NO:49)。

PL166：FasL-PD-L1-HC-Fas ECD核苷酸序列(SEQ ID NO:50)。

PL164：FasL-PD-L1-HC-2Fas ECD氨基酸序列(SEQ ID NO:51)。

PL164：FasL-PD-L1-HC-2Fas ECD核苷酸序列(SEQ ID NO:52)。

进行质粒转化并用无内毒素大提试剂盒提取高纯度质粒(购自天根生化科技，货号DP117)，测序保证质粒序列的正确性。细胞转染试剂均购自美国赛默飞世尔科技有限公司。细胞转染(以25mL培养液为例)时，在转染前一天按3×10⁶细胞/mL接种ExpiCHO-S细胞，待转染时细胞密度应在6×10⁶细胞/mL，细胞活率要求>95％。转入时首先配置转染复合物，取20μg DNA用1mL无血清培养基稀释，充分混匀，制成DNA稀释液；取80μL ExpiFectamine^TMCHO Reagent用920μL无血清培养基稀释，充分混匀，制成转染试剂稀释液。分别室温静置不超过5min。然后充分混匀这两种稀释液，室温静置5min。最后将转染复合物加入到含有25mL细胞和无血清完全培养基的125mL细胞培养摇瓶中，轻柔充分混匀。细胞于95rpm，37℃，90％湿度，8％CO₂细胞培养摇床中继续培养12天。转染18-22小时后加入150μLExpiFectamine^TM CHO Enhancer和6mL ExpiCHO^TM Feed。

实施例2：PD-L1/FasL双特异性抗体的纯化及稳定性检测

Protein A琼脂糖纯化树脂是亲和类树脂(BBI生命科学，货号C600953)，用于纯化和分离IgG。其中Protein A是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc段与哺乳动物的IgG结合。

蛋白纯化过程在低温层析柜(购自博医康公司)中进行，细胞转染后第12天收集并进行纯化，首先在1000rpm的转速下离心3min，以去除细胞，然后在8500rpm的转速下离心30min，以去除杂质。采用0.22μm膜进行过滤。蛋白上样前调整其盐离子浓度至20mM，平衡Protein A柱子时，先用10个柱体积去离子水冲洗，再用10个柱体积Binding Buffer(BBI生命科学，货号C600482)冲洗柱子；然后上样，上样后，先用10个柱体积Binding Buffer洗脱，再用Elution Buffer(BBI生命科学，货号C600481)洗脱，3mL每管收集洗脱液，接12管(预先用Neutralization Buffer(BBI生命科学，货号B548142)调整蛋白洗脱液pH值7左右)。收集完样品后，用10个柱体积的Binding Buffer，去离子水冲洗平衡纯化柱，最后用20％乙醇封存于4℃。

蛋白浓缩用合适大小的超滤管3800rpm在4℃进行浓缩，蛋白buffer置换成PBS，NanoDrop(购自美国赛默飞世尔科技)检测蛋白浓度后0.22μm滤膜过滤，得到PD-L1/FasL双特异性抗体，4℃保存。

SDS-PAGE和SEC-HPLC检测蛋白表达情况，结果如图7和图8所示，大部分蛋白稳定性良好，构型中包含Fas-ECD的蛋白稳定性略差，有少量聚集和降解。

另外，为了检测蛋白的稳定性，纯化后的蛋白用SYPRO^TM Orange Protein GelStain试剂盒(购自西格玛)检测其Tm值。10μM蛋白样品加入染色液配制成25μL反应体系，离心使其混合均匀，尽量避光，放在qPCR仪(购自宏石科技)中运行检测，设置温度变化0.01℃/s，温度变化区间为25-95℃。分析结果如表2所示，裸抗Tm值比较高，纯化的双特异性抗体中的部分蛋白Tm值偏高，另外一些蛋白的Tm值明显降低。

表2.qPCR检测PD-L1/FasL蛋白的Tm值

注：表中，101/102、60/61、141/142等编号的含义是：以101/102为例，斜杠前数字表示编号为PL101的质粒所表达的蛋白(轻链)的编号，斜杠后数字表示编号为PL102的质粒所表达的蛋白(重链)的编号，101/102编号是PL101和PL102质粒共同转染细胞后表达并纯化获得的蛋白。

由表2的结果可以看出，qPCR检测PD-L1/FasL蛋白的Tm值显示出双特异性抗体具有比较高的稳定性。

实施例3

PD-L1/FasL双特异性抗体在分子水平上阻断PD-1/PD-L1相互作用

使用Cisbio Human PD1/PD-L1 biochemical binding assay(购自PerkinElmer公司，货号64ICP01PEH)检测PD-L1/FasL双特异性抗体在分子水平阻断作用。使用384孔微孔板(购自康宁公司)进行检测，每孔20μL体系，首先加4μL Tag1-PD-L1蛋白溶液(工作浓度为5nM)，其次加入2μL不同稀释浓度的双特异性抗体，每个蛋白样品稀释9个浓度梯度，稀释比为1:5，然后加入4μL Tag2-PD-1蛋白溶液(工作浓度为50nM)，室温静置15min后，加入10μL混合的anti-Tag1-Eu3+and anti-Tag2-XL665溶液(首先稀释成100×储备溶液)，低速离心2min使样品充分混合，室温静置2小时，使用多功能酶标仪(购自BioTek公司)检测样品620nm及665nm荧光值。该实验中，我们使用了PD-L1抗体阿替丽珠单抗作为对照品进行了检测，分析结果如图20所示，PD-L1/FasL双特异性抗体均能有效阻断PD-1/PD-L1相互作用，由抑制曲线计算所得IC50浓度见表3。

表3.PD-L1/FasL双特异性抗体在分子水平上阻断PD-1/PD-L1相互作用的IC50浓度

由表3的数据可以看出，本发明的部分双特异性抗体中的PD-L1端的功能达到PD-L1单抗的水平，可以有效的阻断PD-1/PD-L1的相互作用。另外，本发明旨在采用靶向PD-L1和FasL双靶点的作用方式，使该双特异性抗体具有阻断PD-1/PD-L1相互作用的同时，还可以有效防止Fas/FasL介导的T细胞凋亡，通过阻断两个信号通路的协同作用，整体上提高机体的抗肿瘤作用。双特异性抗体的FasL端功能在后面的实施例中显示。另外，从表3数据还可以看出，双特异性抗体的C端连接的结构或序列越多，蛋白质的空间位阻等可能会大，因此，可见抑制效果略差。

实施例4

PD-L1/FasL双特异性抗体在细胞水平上结合活性

高表达PD-L1的CHO-K1-PD-L1稳转细胞株和高表达FasL的CHO-K1-FasL稳转细胞株使用含10％FBS(购自美国赛默飞世尔科技)及双抗(购自上海碧云天生物技术有限公司)的DMEM/F12培养基(购自美国赛默飞世尔科技)培养，每2–3天传代。

取对数生长期的稳转细胞株，胰酶消化贴壁的细胞，使用完全培养基重悬。细胞计数后，使用1×PBS缓冲液清洗细胞团，250×g离心5分钟。细胞重悬于1×PBS缓冲液并接种于96孔V底培养板(购自NEST公司)，每孔50μL细胞悬液，细胞密度为5×10⁵细胞/孔。向各孔中分别加入50μL梯度稀释的待测双特异性抗体，使蛋白终浓度分别为100、20、4、0.8、0.16、0.032、0.0064、0.00128、0.000256、0.0000512、0.00001024nM，未加抗体的细胞孔作为阴性对照，4℃孵育1小时。PBS清洗细胞两次2次，每次250×g离心5分钟。向其中加入100μL 1:200稀释于PBS中的二抗Goat anti-Human IgG Fc Secondary Antibody PE(购自赛默飞世尔科技，货号12-4998-82)，4℃孵育30分钟。PBS清洗细胞两次2次，每次250×g离心5分钟，重悬于120μL PBS，应用CytoFLEX流式细胞仪(购自贝克曼库尔特公司)测定双特异性抗体在细胞水平结合活性。

PD-L1/FasL双特异性抗体在不同浓度下与CHO-K1-PD-L1或CHO-K1-FasL细胞株的靶点结合活性曲线如图21，由结合曲线所计算EC50浓度见表4。

表4.PD-L1/FasL双特异性抗体在细胞水平上与靶点结合EC50浓度

实施例5

PD-L1/FasL双特异性抗体抑制游离FasL诱导的Jurkat细胞凋亡

Jurkat细胞(人外周血白血病T细胞)使用含10％FBS(购自美国赛默飞世尔科技)及双抗(购自上海碧云天生物技术有限公司)的RPMI-1640培养基(购自美国赛默飞世尔科技)培养，每2-3天传代。取对数生长期的Jurkat细胞，细胞计数后，使用完全培养基调整细胞浓度至1.11×10⁵细胞/mL，接种于黑色96孔培养板(购自美国康宁公司)，每孔90μL(2×10⁴细胞/孔)。向细胞中加入5μL梯度稀释的待测双特异性抗体，放入37℃培养箱中预孵育30分钟，随后加入5μL重组人源FasL(美国CST公司，货号5452)，使FasL终浓度为80ng/mL，待测双特异性抗体终浓度为500、100、20、4、0.8、0.16、0.032、0.0064、0.00128nM。不含抗体孔作为对照。将培养板置于37℃培养箱中培养24小时，取出放置在室温中平衡10分钟，96孔板每孔加入50μL CellTiter-Lumi^TM发光法检测试剂。室温振荡2分钟，以促进细胞的裂解。室温孵育10分钟，使发光信号趋于稳定，使用多功能酶标仪(购自BioTek公司)进行化学发光检测。

结果如图22所示，FasL/PD-L1双特异性抗体都通过结合游离FasL，抑制Fas/FasL介导的Jurkat细胞凋亡，从而提高细胞活率。由抑制曲线计算所得IC50浓度见表5。

表5.PD-L1/FasL双特异性抗体抑制游离FasL诱导的Jurkat细胞凋亡的IC50浓度

实施例6

Annexin V-FITC法测定FasL/PD-L1双特异性抗体抑制CHO-K1-FasL细胞株诱导Jurkat细胞凋亡

取对数生长期的CHO-K1-FasL稳转细胞株，胰酶消化贴壁的细胞，使用完全培养基重悬。细胞计数后，离心，使用含4％FBS的RPMI-1640培养基调整细胞浓度至1.2×10⁶/mL，接种于V型底96孔细胞培养板(购自美国康宁公司)中，每孔50μL。向其中加入50μL梯度稀释的待测抗体，放入37℃培养箱中预孵育2小时。按照说明书所述方法，使用CellTracker^TMViolet BMQC探针(购自美国赛默飞世尔科技，货号C10094)标记Jurkat细胞，随后重悬于含4％FBS的RPMI-1640培养基，分别加入96孔细胞培养板中，每孔50μL(2×10⁴细胞/孔)。在此共培养体系中，效应细胞(CHO-K1-FasL细胞株)与靶细胞(Jurkat细胞)的比例为3:1，待测抗体终浓度分别为500、100、20、4、0.8nM。不含抗体孔及只含一种细胞孔作为对照。将培养板置于37℃培养箱中培养20小时。

Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司(货号C1062L)。共培养结束后，细胞250×g离心5分钟，用PBS洗一次。细胞250×g离心5分钟，加入195μL结合液重悬细胞。加入5μL Annexin V-FITC，轻轻混匀。加入10μL碘化丙啶(PI)染色液，轻轻混匀。室温避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中，应用CytoFLEX流式细胞仪(购自贝克曼库尔特公司)检测Jurkat细胞的活细胞及凋亡细胞比例。使用紫色荧光确定Jurkat细胞分群，Annexin V-FITC为绿色荧光，碘化丙啶(PI)为红色荧光，Annexin-V和PI双阴性细胞即为活细胞群。

结果如图23所示，本发明所构建PD-L1/FasL双特异性抗体均能够阻断CHO-K1-FasL细胞株诱导的Jurkat细胞凋亡。随着抗体浓度升高，共培养体系中Jurkat靶细胞的活细胞比例逐渐升高。由实验结果可以看出，与PD-L1/FasL结构的双特异性抗体或PD-L1/Fas-ECD结构的双特异性抗体相比，FasL/PD-L1结构的双特异性抗体展示出更好的抑制活性。这主要是因为PD-L1/FasL的结构是以FasL抗体为主体，FasL抗体的N端连接至PD-L1抗体的可变区；PD-L1/FasL的结构是以PD-L1抗体为主体，PD-L1抗体的N端连接FasL抗体的可变区，两者的位置可以互换。一般地，在最外侧(整体蛋白的N端)的抗体功能相对受到的影响会更小一些，因为没有空间位阻，作为主体的抗体的功能可能由于空间位阻而损失一部分。

实施例7

乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定PD-L1/FasL双特异性抗体抑制CHO-K1-FasL细胞株诱导Jurkat细胞凋亡

取对数生长期的CHO-K1-FasL稳转细胞株，胰酶消化贴壁的细胞，使用完全培养基重悬。细胞计数后，离心，使用含4％FBS的RPMI-1640培养基调整细胞浓度至1.2×10⁶/mL，接种于V型底96孔细胞培养板(购自美国康宁公司)中，每孔50μL。向其中加入50μL梯度稀释的待测抗体，放入37℃培养箱中预孵育2小时。取对数生长期的Jurkat细胞，250×g离心5分钟，重悬于含4％FBS的RPMI-1640培养基，分别加入96孔细胞培养板中，每孔50μL(2×10⁴细胞/孔)。在此共培养体系中，效应细胞(CHO-K1-FasL细胞株)与靶细胞(Jurkat细胞)的比例为3:1，待测双特异性抗体终浓度分别为500、100、20、4、0.8、0.16、0.032、0.0064、0.00128nM，不含抗体孔及只含一种细胞孔作为对照，每种处理条件3个复孔。

应用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)释放法测定CHO-K1-FasL诱导的Jurkat细胞凋亡。乳酸脱氢酶定量测定试剂盒购自普洛麦格公司(货号G1780)。提前45分钟取出培养板，向只含Jurkat靶细胞的最大活性对照孔加入15μL裂解液(10×)，置于37℃培养箱中继续孵育45分钟。共培养结束后，细胞250×g离心5分钟，将50μL上清液转移到96孔酶标板中，分别向其中加入50μL用检测缓冲液配置的底物，室温避光孵育30分钟，随后向每孔加入50μL终止液，使用多功能酶标仪在490nM记录吸光值。

实验结果如图24所示，本发明所构建PD-L1/FasL双特异性抗体均能够阻断CHO-K1-FasL细胞株诱导的Jurkat细胞凋亡，所得结果与Annexin-V-FITC法结果一致。随着抗体浓度升高，共培养体系中Jurkat靶细胞释放的乳酸脱氢酶逐渐降低，表明靶细胞凋亡比例逐渐降低，且与所加入抗体浓度呈现剂量依赖性趋势。由本实施例中所测双特异性抗体的抑制曲线计算出的IC50浓度如表6。

表6.FasL/PD-L1双特异性抗体阻断CHO-K1-FasL细胞株诱导的Jurkat细胞凋亡的IC50浓度

从表6的实验结果可知，与PD-L1/FasL结构的双特异性抗体或PD-L1/Fas-ECD结构的双特异性抗体相比，FasL/PD-L1结构的双特异性抗体展示出更好的抑制活性。

实施例8

PD-L1/FasL双特异性抗体对CHO-K1-FasL细胞株表达游离FasL的中和作用

细胞共培养体系建立方法同实施例7，待测双特异性抗体终浓度分别为500、100、20、4、0.8、0.16、0.032、0.0064nM，不含抗体孔及只含一种细胞孔作为对照。将培养板置于37℃培养箱中培养20小时。共培养结束后，细胞250×g离心5分钟，收集细胞上清液，应用人源FasL ELISA试剂盒(购自博士德生物工程有限公司，货号EK0337)测定游离FasL的浓度。

本实验通过测定体系中未被结合的游离FasL水平，反映双特异性抗体对FasL的结合能力。结果如图25所示，在共培养体系中，本发明所构建的PD-L1/FasL双特异性抗体能够结合CHO-K1-FasL稳转细胞株表达于细胞上清中的游离FasL，从而抑制CHO-K1-FasL诱导的Jurkat细胞凋亡。随着抗体浓度升高，细胞共培养体系中的游离FasL浓度逐渐降低，且呈现出剂量依赖性。由本实施例中所测抗体的FasL中和曲线计算出的EC50浓度如表7。

表7.PD-L1/FasL双特异性抗体结合CHO-K1-FasL细胞株表达游离FasL的EC50浓度

实施例9

PD-L1/FasL双特异性抗体抑制CHO-K1-FasL细胞株诱导CD8+T细胞凋亡

人原代CD8阳性T细胞(CD8+T)购自广州雷德倍尔公司。复苏CD8T细胞，培养于含30UI/mL人重组IL-2(购自北京义翘神州)的ImmunoCult^TM-XF培养基(购自美国Stemcell公司，货号10981)，向其中加入ImmunoCult^TM Human CD3/CD28 T细胞激活剂(25μL/mL)(购自美国Stemcell公司，货号10971)，每隔2-3天更换含IL-2的新鲜培养基。

取对数生长期的CHO-K1-FasL-PD-L1稳转细胞株(同时表达FasL和PD-L1)，胰酶消化贴壁的细胞，进行计数并离心。使用ImmunoCult^TM-XF培养基调整细胞浓度，接种于V型底96孔细胞培养板中，每孔50μL(1×10⁴细胞/孔)。向其中加入50μL梯度稀释的待测PD-L1/FasL双特异性抗体，放入37℃培养箱中预孵育2小时。

取对数生长期的CD8+T细胞，细胞计数后，300×g离心10分钟，弃上清。PBS洗1次，使用CellTrace^TM Violet细胞扩增试剂盒(购自赛默飞世尔公司，货号C34557)标记细胞。标记结束后，重悬于ImmunoCult^TM-XF培养基，分别加入96孔细胞培养板中，每孔50μL(3×10⁴细胞/孔)。在此共培养体系中，CHO-K1-FasL-PD-L1细胞株与CD8+T细胞的比例为1:3，待测抗体终浓度分别为500、100、20、4、0.8nM，不含抗体孔及只含一种细胞孔作为对照。将培养板置于37℃培养箱中培养72小时。

共培养结束后，细胞300×g离心10分钟，收集细胞上清液，应用人源IFN-γELISA试剂盒(购自美国BioLegend公司，货号430104)测定培养体系中IFN-γ的浓度。剩余细胞加入预冷的PBS洗涤2次，细胞300×g离心10分钟，弃上清，加入100μL结合缓冲液重悬细胞，并每孔加入2.5μL Annexin-V-APC和5μL PI(试剂盒购自上海翌圣生物，货号40304)。室温孵育15分钟后，每孔加入100μL PBS，应用CytoFLEX流式细胞仪(购自贝克曼库尔特公司)测定CD8+T细胞活率。

如图26所示，在共培养体系中，本发明所构建的PD-L1/FasL双特异性抗体对CHO-K1-FasL-PD-L1稳转细胞株诱导的活化CD8+T细胞的凋亡具有显著的抑制作用。随着抗体浓度升高，共培养体系中的CD8+T比例(图26A)及细胞活率(图26B)逐渐升高，IFN-γ表达水平(图26C)增加，且与抗体浓度呈现出剂量依赖性趋势。其中，与PD-L1/FasL结构双特异性抗体相比，FasL/PD-L1结构的双特异性抗体展示出更好的保护CD8+T细胞的活性。

实施例10

混合淋巴细胞反应

实验方法：人外周血分离的原代单核细胞(CD14阳性)购自广州雷德倍尔公司，树突状细胞诱导(dendritic cell，DC)诱导试剂盒(ImmunoCult^TM-ACF Dendritic CellDifferentiation Kit)购自美国Stemcell公司，货号10985。将CD14+单核细胞复苏后，使用含1％DC细胞分化组分的DC细胞培养基调整细胞浓度为1×10⁶/mL，并接种于6孔细胞培养板中。培养第3天，更换含分化组分的新鲜培养基。培养第6天，得到未成熟DC细胞(immatureDC，imDC)。不换培养基，直接加入促成熟组分(1:100稀释)。培养到第8天，得到成熟DC细胞(mature DC，mDC)。

实验前一天，分别复苏人原代CD8阳性T细胞(CD8+T)(购自广州雷德倍尔公司)。加入ImmunoCult^TM-XF培养基，调整细胞浓度为1×10⁶/mL，并接种于6孔细胞培养板中，置于37℃培养箱中培养过夜。

实验当天，DC细胞计数，300×g离心10分钟，使用T细胞扩增培养基调整细胞浓度，接种于V型底96孔细胞培养板中，每孔50μL(1×10⁴细胞/孔)。向其中加入50μL梯度稀释的待测抗体，放入37℃培养箱中预孵育2小时。取实验前一天复苏的CD8+T细胞，细胞计数后，300×g离心10分钟，弃上清。细胞重悬于T细胞扩增培养基，分别加入96孔细胞培养板中，每孔50μL(3×10⁴细胞/孔)。混匀后，将培养板置于37℃培养箱中培养5天。体系中DC细胞与T细胞的比例为1:3，待测抗体终浓度分别为1000、100、10nM，不含抗体孔、加入Human IgG1(购自美国BioLegend公司)及只含一种细胞孔作为阴性对照，加入CD3/CD28磁珠(购自赛默飞世尔科技，货号11161D)的孔作为阳性对照。

培养5天后，细胞300×g离心10分钟。收集细胞培养上清，应用人IFN-γELISA试剂盒及人IL-2ELISA试剂盒(均购自美国BioLegend公司)，分别测定培养体系中IFN-γ及IL-2的表达水平。

混合淋巴实验能够用于评价PD-L1/FasL双特异性抗体的PD-L1端活性，阿替丽珠单抗作为活性对照。结果如图27A所示，加入PD-L1/FasL构型的双特异性抗体后，CD8+T细胞表达IFN-γ的水平高于阿替丽珠单抗，且PD-L1/FasL构型蛋白PD-L1端活性要显著高于FasL/PD-L1构型的蛋白。图27B示出共培养体系中IL-2的水平。

综上所述，本发明提供的PD-L1和FasL双特异性抗体能够同时靶向PD-L1和FasL，能显著提高肿瘤浸润T细胞的功能，具有高效抗肿瘤的效果，为肿瘤或癌症的治疗提供一种更加有效的方案。

序列表

<110> 北京康辰药业股份有限公司

<120> 同时靶向PD-L1和FasL的双特异性抗体、药物组合物及其应用

<150> 202111165537X

<151> 2021-09-30

<160> 52

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 1

Asp Ile Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Lys Met

            20                  25                  30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

        35                  40                  45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

    50                  55                  60

Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp

65                  70                  75                  80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105

<210> 2

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 2

gacatccaga tcacccagtc tcctagcaca ctgtccgcct ctgttggaga tagagtgaca 60

atcacctgta gcgccagcag ctccgtgtcc aaaatgaact ggtaccagca aaagcccggc 120

aaggccccta agagatggat ctacgacacc agcaaactgg ccagcggcgt gcccagtaga 180

ttcagcggca gcggatctgg cacagagtac accctgacca tcagcagcct gcaacctgat 240

gacttcgcca catactactg ccagcagtgg tcctctaatc ctctgacctt cggccagggc 300

accaagctgg aaatcaag 318

<210> 3

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 3

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr

            20                  25                  30

Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Asp Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg His Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

        115

<210> 4

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 4

caggtgcagc tggttcagag cggagctgaa gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg cctctggata catcttcacc gagtacatca tccactgggt gcggcaggcc 120

cctggacaag gcctggaatg gatcggctgg ttctaccctg gcagcgacaa catcaagtac 180

aacgagaagt tcaaggatag agccaccctg accgcagata agtccaccag caccgtctac 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggat acagccgtgt actactgcgc cagacacgaa 300

accggctact tcttcgacta ctggggccag ggtacactgg tgaccgtgtc ctcc 354

<210> 5

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 5

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser

            20                  25                  30

Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Gly Trp Cys Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

                85                  90                  95

Asn Tyr Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210> 6

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 6

gacgtggtga tgacccagac ccctctgtct ctgcctgtga ccctcggcca gcctgcctcc 60

atctcctgca agtccaccaa aagcctgctg aattccgacg gctttaccta tctgggctgg 120

tgcctgcaga agcctggcca gagccctcag ctgctgatct acctggtgtc caaccggttt 180

tctggcgtgc ccgacagatt ctccggctcc ggatctggaa ccgatttcac cctcaagatc 240

tccagagtgg aagccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagtccaa ctacctgcct 300

ctgaccttcg gccaaggcac caagctggaa atcaag 336

<210> 7

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

            20                  25                  30

Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

            100                 105                 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115

<210> 8

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 8

caggttcagc tggtgcagtc cggagccgag gtgaagaagc ccggcgcttc tgtgaaggtg 60

tcttgtaagg cctctggcta caccttcacc aactactgga tcggctgggt gaagcaggcc 120

cctggccagg gcctggaatg gatcggctat ctgtaccctg gaggcctgta taccaattac 180

aacgagaagt tcaagggcaa ggccaccatg accgctgaca cctctaccaa cactgcctac 240

atggaactgt ccagcttgcg gtccgaggat accgctgtgt actactgcgc cagataccgg 300

gactatgact acgccatgga ctattgggga caaggcaccc tggtgacagt atcctcc 357

<210> 9

<211> 148

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 9

Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val

1               5                   10                  15

Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln

            20                  25                  30

Phe Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys

        35                  40                  45

Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys

    50                  55                  60

Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg

65                  70                  75                  80

Leu Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg

                85                  90                  95

Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser

            100                 105                 110

Thr Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile

        115                 120                 125

Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly

    130                 135                 140

Ser Arg Ser Asn

145

<210> 10

<211> 444

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 10

caagtgactg acatcaactc caagggattg gaattgagga agactgttac tacagttgag 60

actcagaact tggaaggcct gcatcatgat ggccaattct gccataagcc ctgtcctcca 120

ggtgaaagga aagctaggga ctgcacagtc aatggggatg aaccagactg cgtgccctgc 180

caagaaggga aggagtacac agacaaagcc catttttctt ccaaatgcag aagatgtaga 240

ttgtgtgatg aaggacatgg cttagaagtg gaaataaact gcacccggac ccagaatacc 300

aagtgcagat gtaaaccaaa ctttttttgt aactctactg tatgtgaaca ctgtgaccct 360

tgcaccaaat gtgaacatgg aatcatcaag gaatgcacac tcaccagcaa caccaagtgc 420

aaagaggaag gatccagatc taac 444

<210> 11

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 11

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1               5                   10                  15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

            20                  25                  30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

        35                  40                  45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

    50                  55                  60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65                  70                  75                  80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

                85                  90                  95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

            100                 105

<210> 12

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 12

cggaccgtgg ccgccccttc tgtgttcatc ttccccccca gcgacgagca gctgaagagc 60

ggaaccgcca gcgtggtgtg cctgctcaac aacttctacc cgcgggaagc caaggtgcag 120

tggaaggtgg acaacgccct gcagagcggc aacagccagg agagcgtgac cgagcaggac 180

agcaaggact ctacatacag cctgagcagc accctgacac tgtctaaagc cgactacgag 240

aagcacaagg tgtacgcctg tgaagtgaca caccagggcc tgagcagccc tgtgaccaag 300

tcttttaacc ggggcgagtg c 321

<210> 13

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 13

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

            100                 105                 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

        115                 120                 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

    130                 135                 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145                 150                 155                 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

                165                 170                 175

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

            180                 185                 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

        195                 200                 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

    210                 215                 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225                 230                 235                 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

                245                 250                 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

            260                 265                 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

        275                 280                 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

    290                 295                 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305                 310                 315                 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                325                 330

<210> 14

<211> 990

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 14

gccagcacca agggccctag cgtctttcca ctggcccctt cttctaagag cacaagcggc 60

ggaaccgccg ctctgggttg tctggtcaaa gattacttcc ccgaacctgt gaccgtgtcc 120

tggaacagcg gcgccctgac atctggcgtg cacacattcc cagccgtgtt gcagagcagc 180

ggcctgtact ctctgtctag cgtcgtcacc gtgcccagca gcagcctggg aacacagacc 240

tacatctgca acgtgaacca caagcctagc aacaccaaag tggataagaa agtggaaccc 300

aagagctgcg acaagaccca cacctgtcct ccgtgccctg ctcctgagct gctgggcggc 360

cccagcgtgt tcctgttccc ccccaagcct aaggacaccc tgatgatcag ccgcacccct 420

gaggtgacat gcgtggtcgt cgacgtgtcc cacgaggacc ccgaggtgaa attcaactgg 480

tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc caagagaaga gcagtacgcc 540

tctacataca gagtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 600

gaatacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcccgctc ctatcgagaa gacaatctct 660

aaggctaaag gccagcctag agaacctcag gtttatacac tgcctcctag cagagaggaa 720

atgaccaaga accaggtgtc tctgacctgt ctggtgaagg gcttctatcc ttctgacatc 780

gccgtggaat gggagagcaa tggccaacct gagaacaact acaagacgac ccctccagtg 840

ctggacagcg acggcagttt tttcctgtac agcaagctga cagtcgacaa aagccggtgg 900

cagcagggca atgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctccataa tcactacacc 960

cagaagtccc tgagcctgag tcctggcaag 990

<210> 15

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 15

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

            100                 105                 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

        115                 120                 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

    130                 135                 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145                 150                 155                 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

                165                 170                 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

            180                 185                 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

        195                 200                 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

    210                 215                 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225                 230                 235                 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

                245                 250                 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

            260                 265                 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

        275                 280                 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

    290                 295                 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305                 310                 315                 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

                325

<210> 16

<211> 981

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 16

gccagcacca agggccccag cgtgttccct ctggcccctt gtagccggag cacatcagag 60

agcaccgccg ctctgggttg tctggtgaaa gactacttcc cagaacccgt gaccgtgagc 120

tggaacagcg gcgccttaac aagcggcgtg cacacctttc cagccgtgct ccagagctct 180

ggcctgtata gcctctcctc tgtggtgacc gtgccctcta gcagcctggg gaccaagacc 240

tacacatgca acgtggacca caagcctagc aacactaagg tcgacaagag agtggaatct 300

aagtacggcc ctccatgccc cccctgtcct gcccctgagt tcctgggagg cccttccgtc 360

tttctgttcc cccccaagcc taaggacacc ctgatgatca gccgcacccc tgaggtcaca 420

tgcgtggtgg tggatgtgag tcaggaggat cctgaggtgc agtttaactg gtacgtggac 480

ggcgtggaag tgcacaacgc caagacaaaa cctcgggaag agcagttcaa ttctacctac 540

cgggtggtca gcgtgctgac agtgctgcac caggactggc tgaacggaaa ggaatacaag 600

tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcccagc agcatcgaga aaaccatcag taaagccaag 660

ggccagccta gagagcctca ggtgtatacc ctgcctccta gccaggagga aatgaccaag 720

aaccaggtgt ccctgacctg cctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggaa 780

tgggagagca acggacaacc tgagaacaac tacaagacca cccctccagt gcttgattct 840

gatggcagct tcttcctgta ctctaggctg acagtggaca agagcagatg gcaggagggc 900

aacgttttca gctgcagcgt catgcacgag gccctgcata atcactacac acagaaaagc 960

ctgtctctgt ctctgggcaa g 981

<210> 17

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 17

ggtggtggtg gttctggtgg tggtggttct ggcggcggcg gctcc 45

<210> 18

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 18

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1               5                   10                  15

<210> 19

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 19

atgggctgga gctgcatcat cctgttcctg gtggccaccg ccacaggcgt gcactcc 57

<210> 20

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 20

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1               5                   10                  15

Val His Ser

<210> 21

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 21

Asp Ile Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Lys Met

            20                  25                  30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

        35                  40                  45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

    50                  55                  60

Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp

65                  70                  75                  80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

            100                 105                 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

        115                 120                 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

    130                 135                 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145                 150                 155                 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

                165                 170                 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

            180                 185                 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

        195                 200                 205

Asn Arg Gly Glu Cys

    210

<210> 22

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 22

gacatccaga tcacccagtc tcctagcaca ctgtccgcct ctgttggaga tagagtgaca 60

atcacctgta gcgccagcag ctccgtgtcc aaaatgaact ggtaccagca aaagcccggc 120

aaggccccta agagatggat ctacgacacc agcaaactgg ccagcggcgt gcccagtaga 180

ttcagcggca gcggatctgg cacagagtac accctgacca tcagcagcct gcaacctgat 240

gacttcgcca catactactg ccagcagtgg tcctctaatc ctctgacctt cggccagggc 300

accaagctgg aaatcaagcg gaccgtggcc gccccttctg tgttcatctt cccccccagc 360

gacgagcagc tgaagagcgg aaccgccagc gtggtgtgcc tgctcaacaa cttctacccg 420

cgggaagcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggag 480

agcgtgaccg agcaggacag caaggactct acatacagcc tgagcagcac cctgacactg 540

tctaaagccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgtg aagtgacaca ccagggcctg 600

agcagccctg tgaccaagtc ttttaaccgg ggcgagtgc 639

<210> 23

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 23

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr

            20                  25                  30

Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Asp Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg His Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210> 24

<211> 1344

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 24

caggtgcagc tggttcagag cggagctgaa gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg cctctggata catcttcacc gagtacatca tccactgggt gcggcaggcc 120

cctggacaag gcctggaatg gatcggctgg ttctaccctg gcagcgacaa catcaagtac 180

aacgagaagt tcaaggatag agccaccctg accgcagata agtccaccag caccgtctac 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggat acagccgtgt actactgcgc cagacacgaa 300

accggctact tcttcgacta ctggggccag ggtacactgg tgaccgtgtc ctccgccagc 360

accaagggcc ctagcgtctt tccactggcc ccttcttcta agagcacaag cggcggaacc 420

gccgctctgg gttgtctggt caaagattac ttccccgaac ctgtgaccgt gtcctggaac 480

agcggcgccc tgacatctgg cgtgcacaca ttcccagccg tgttgcagag cagcggcctg 540

tactctctgt ctagcgtcgt caccgtgccc agcagcagcc tgggaacaca gacctacatc 600

tgcaacgtga accacaagcc tagcaacacc aaagtggata agaaagtgga acccaagagc 660

tgcgacaaga cccacacctg tcctccgtgc cctgctcctg agctgctggg cggccccagc 720

gtgttcctgt tcccccccaa gcctaaggac accctgatga tcagccgcac ccctgaggtg 780

acatgcgtgg tcgtcgacgt gtcccacgag gaccccgagg tgaaattcaa ctggtacgtg 840

gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagccaagag aagagcagta cgcctctaca 900

tacagagtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggaatac 960

aagtgcaagg tgtccaacaa ggccctgccc gctcctatcg agaagacaat ctctaaggct 1020

aaaggccagc ctagagaacc tcaggtttat acactgcctc ctagcagaga ggaaatgacc 1080

aagaaccagg tgtctctgac ctgtctggtg aagggcttct atccttctga catcgccgtg 1140

gaatgggaga gcaatggcca acctgagaac aactacaaga cgacccctcc agtgctggac 1200

agcgacggca gttttttcct gtacagcaag ctgacagtcg acaaaagccg gtggcagcag 1260

ggcaatgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctcc ataatcacta cacccagaag 1320

tccctgagcc tgagtcctgg caag 1344

<210> 25

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 25

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser

            20                  25                  30

Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Gly Trp Cys Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

                85                  90                  95

Asn Tyr Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

        115                 120                 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

    130                 135                 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145                 150                 155                 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

                165                 170                 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

            180                 185                 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

        195                 200                 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210                 215

<210> 26

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 26

gacgtggtga tgacccagac ccctctgtct ctgcctgtga ccctcggcca gcctgcctcc 60

atctcctgca agtccaccaa aagcctgctg aattccgacg gctttaccta tctgggctgg 120

tgcctgcaga agcctggcca gagccctcag ctgctgatct acctggtgtc caaccggttt 180

tctggcgtgc ccgacagatt ctccggctcc ggatctggaa ccgatttcac cctcaagatc 240

tccagagtgg aagccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagtccaa ctacctgcct 300

ctgaccttcg gccaaggcac caagctggaa atcaagcgga ccgtggctgc tccctctgtg 360

ttcatcttcc ctccttccga tgaacagctg aaatctggta ccgcttctgt cgtgtgtctg 420

ctgaacaact tctaccccag agaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480

tctggcaact cccaagagtc cgtgaccgag caggactcta aggactccac atactccctg 540

agctctaccc tgacactgtc caaggccgac tacgagaagc acaaggtcta cgcctgcgag 600

gtgacccacc agggcctgtc ctctccagtt acaaagtcct tcaacagagg cgagtgt 657

<210> 27

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 27

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

            20                  25                  30

Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

            100                 105                 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

        115                 120                 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

    130                 135                 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145                 150                 155                 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

                165                 170                 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

            180                 185                 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

        195                 200                 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

    210                 215                 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225                 230                 235                 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

                245                 250                 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

            260                 265                 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

        275                 280                 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val

    290                 295                 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305                 310                 315                 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

                325                 330                 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

            340                 345                 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

        355                 360                 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

    370                 375                 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385                 390                 395                 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

                405                 410                 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

            420                 425                 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

        435                 440                 445

Lys

<210> 28

<211> 1347

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 28

caggttcagc tggtgcagtc cggagccgag gtgaagaagc ccggcgcttc tgtgaaggtg 60

tcttgtaagg cctctggcta caccttcacc aactactgga tcggctgggt gaagcaggcc 120

cctggccagg gcctggaatg gatcggctat ctgtaccctg gaggcctgta taccaattac 180

aacgagaagt tcaagggcaa ggccaccatg accgctgaca cctctaccaa cactgcctac 240

atggaactgt ccagcttgcg gtccgaggat accgctgtgt actactgcgc cagataccgg 300

gactatgact acgccatgga ctattgggga caaggcaccc tggtgacagt atcctccgcc 360

tctaccaagg gcccatctgt gttccctctg gccccctcct ccaagtccac atccggcggc 420

acagctgctc tgggctgcct ggtcaaagat tacttcccag aacctgtgac cgtctcctgg 480

aactccggcg ccctgacctc cggtgtccat acctttcctg ccgtgctgca gtcttctggc 540

ctgtacagcc tgagctctgt ggtgaccgtg cctagcagct ctctcggcac ccagacctac 600

atctgcaacg tgaaccacaa gccttctaac accaaagtgg ataagaaagt ggaacctaag 660

tcctgcgaca agacccatac ctgtcctcct tgtccagctc cagagctgct gggcggcccc 720

tccgtgtttc tgttcccccc taagcccaag gatacactga tgatctcccg gacccctgaa 780

gtgacctgcg tggtggttga cgtgtctcac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac 840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gtacgcttct 900

acatacagag tggtctctgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggaaaagag 960

tacaagtgca aggtctccaa caaggctctg cctgctccta tcgagaaaac catctctaag 1020

gccaagggcc agcctcggga gcctcaagtg tacaccctgc ctccttcccg cgaagagatg 1080

accaagaacc aggtgagcct cacatgtctg gtgaaaggct tctacccctc agacatcgcc 1140

gtcgagtggg agtcgaatgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg 1200

gactccgacg gctccttctt cctgtactct aagctgacag tggacaagtc cagatggcag 1260

cagggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1320

aagtccctgt ccctgtctcc tggcaag 1347

<210> 29

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 29

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser

            20                  25                  30

Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Gly Trp Cys Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

                85                  90                  95

Asn Tyr Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

        115                 120                 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

    130                 135                 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145                 150                 155                 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

                165                 170                 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

            180                 185                 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

        195                 200                 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210                 215

<210> 30

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 30

gacgtggtga tgacccagac ccctctgagc ctgccagtga ccctgggaca gcctgcttct 60

atcagctgta aaagcacaaa atctctgctg aacagcgatg gcttcaccta cctgggctgg 120

tgtctgcaga aacctggaca gagccctcag ctgctgatct acctggtgtc taatagattt 180

tctggcgtcc ccgatagatt tagcggcagc ggctctggca ccgacttcac cctcaagatc 240

agcagagtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactactgct tccagagcaa ctacctgcca 300

ctgacattcg gacaaggcac aaagctggaa atcaagcgca ccgtggccgc ccctagcgtg 360

ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagtccggca ccgccagcgt cgtgtgcctg 420

ctgaacaact tctaccctcg ggaagccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcaa 480

tctggcaata gccaggagag cgttacagaa caggacagca aggacagcac ctattctctg 540

agctccaccc tgaccctgtc caaggccgat tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600

gtgacacacc agggcctgag ctcccctgtg acaaagagct tcaaccgggg cgagtgc 657

<210> 31

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 31

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

            20                  25                  30

Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

            100                 105                 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

        115                 120                 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

    130                 135                 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145                 150                 155                 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

                165                 170                 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

            180                 185                 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

        195                 200                 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

    210                 215                 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225                 230                 235                 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

                245                 250                 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

            260                 265                 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

        275                 280                 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

    290                 295                 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305                 310                 315                 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

                325                 330                 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

            340                 345                 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

        355                 360                 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

    370                 375                 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385                 390                 395                 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

                405                 410                 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

            420                 425                 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

        435                 440                 445

<210> 32

<211> 1338

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 32

caggtgcagc tggtccagag cggcgccgag gtgaaaaaac ccggcgctag cgtgaaggtt 60

tcctgtaaag ccagcggata caccttcacc aattactgga tcggctgggt gaagcaagcc 120

cctggacagg gcctggaatg gattggctac ctgtaccctg gcggcctgta caccaactac 180

aacgagaagt tcaagggcaa ggctacaatg acagccgata ccagcacaaa taccgcctac 240

atggaactgt cgagcctgag atctgaggac acggccgtgt actactgcgc cagatacaga 300

gattacgact acgccatgga ctattggggc caaggcaccc tggtgacagt gagcagcgcc 360

agcaccaagg gccccagcgt gttccctctg gccccttgta gccggagcac atcagagagc 420

accgccgctc tgggttgtct ggtgaaagac tacttcccag aacccgtgac cgtgagctgg 480

aacagcggcg ccttaacaag cggcgtgcac acctttccag ccgtgctcca gagctctggc 540

ctgtatagcc tctcctctgt ggtgaccgtg ccctctagca gcctggggac caagacctac 600

acatgcaacg tggaccacaa gcctagcaac actaaggtcg acaagagagt ggaatctaag 660

tacggccctc catgcccccc ctgtcctgcc cctgagttcc tgggaggccc ttccgtcttt 720

ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagcc gcacccctga ggtcacatgc 780

gtggtggtgg atgtgagtca ggaggatcct gaggtgcagt ttaactggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gacaaaacct cgggaagagc agttcaattc tacctaccgg 900

gtggtcagcg tgctgacagt gctgcaccag gactggctga acggaaagga atacaagtgc 960

aaggtgtcca acaagggcct gcccagcagc atcgagaaaa ccatcagtaa agccaagggc 1020

cagcctagag agcctcaggt gtataccctg cctcctagcc aggaggaaat gaccaagaac 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaacg gacaacctga gaacaactac aagaccaccc ctccagtgct tgattctgat 1200

ggcagcttct tcctgtactc taggctgaca gtggacaaga gcagatggca ggagggcaac 1260

gttttcagct gcagcgtcat gcacgaggcc ctgcataatc actacacaca gaaaagcctg 1320

tctctgtctc tgggcaag 1338

<210> 33

<211> 340

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 33

Asp Ile Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Lys Met

            20                  25                  30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

        35                  40                  45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

    50                  55                  60

Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp

65                  70                  75                  80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly

            100                 105                 110

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr

        115                 120                 125

Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys

    130                 135                 140

Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Gly

145                 150                 155                 160

Trp Cys Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu

                165                 170                 175

Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly

            180                 185                 190

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp

        195                 200                 205

Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser Asn Tyr Leu Pro Leu Thr Phe

    210                 215                 220

Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

                245                 250                 255

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

            260                 265                 270

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

        275                 280                 285

Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

    290                 295                 300

Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys

305                 310                 315                 320

Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn

                325                 330                 335

Arg Gly Glu Cys

            340

<210> 34

<211> 1020

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 34

gacatccaga tcacccagtc tcctagcaca ctgtccgcct ctgttggaga tagagtgaca 60

atcacctgta gcgccagcag ctccgtgtcc aaaatgaact ggtaccagca aaagcccggc 120

aaggccccta agagatggat ctacgacacc agcaaactgg ccagcggcgt gcccagtaga 180

ttcagcggca gcggatctgg cacagagtac accctgacca tcagcagcct gcaacctgat 240

gacttcgcca catactactg ccagcagtgg tcctctaatc ctctgacctt cggccagggc 300

accaagctgg aaatcaaggg tggtggtggt tctggtggtg gtggttctgg cggcggcggc 360

tccgacgtgg tgatgaccca gacccctctg tctctgcctg tgaccctcgg ccagcctgcc 420

tccatctcct gcaagtccac caaaagcctg ctgaattccg acggctttac ctatctgggc 480

tggtgcctgc agaagcctgg ccagagccct cagctgctga tctacctggt gtccaaccgg 540

ttttctggcg tgcccgacag attctccggc tccggatctg gaaccgattt caccctcaag 600

atctccagag tggaagccga ggatgtgggc gtgtactact gcttccagtc caactacctg 660

cctctgacct tcggccaagg caccaagctg gaaatcaagc ggaccgtggc tgctccctct 720

gtgttcatct tccctccttc cgatgaacag ctgaaatctg gtaccgcttc tgtcgtgtgt 780

ctgctgaaca acttctaccc cagagaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 840

cagtctggca actcccaaga gtccgtgacc gagcaggact ctaaggactc cacatactcc 900

ctgagctcta ccctgacact gtccaaggcc gactacgaga agcacaaggt ctacgcctgc 960

gaggtgaccc accagggcct gtcctctcca gttacaaagt ccttcaacag aggcgagtgt 1020

<210> 35

<211> 582

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 35

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr

            20                  25                  30

Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Asp Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg His Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

        115                 120                 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

    130                 135                 140

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

145                 150                 155                 160

Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln

                165                 170                 175

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn

            180                 185                 190

Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser

        195                 200                 205

Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

    210                 215                 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp

225                 230                 235                 240

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

                245                 250                 255

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

            260                 265                 270

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

        275                 280                 285

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

    290                 295                 300

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

305                 310                 315                 320

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

                325                 330                 335

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

            340                 345                 350

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

        355                 360                 365

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

    370                 375                 380

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

385                 390                 395                 400

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

                405                 410                 415

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala

            420                 425                 430

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

        435                 440                 445

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

    450                 455                 460

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

465                 470                 475                 480

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

                485                 490                 495

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

            500                 505                 510

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

        515                 520                 525

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

    530                 535                 540

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

545                 550                 555                 560

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

                565                 570                 575

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

            580

<210> 36

<211> 1746

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 36

caggtgcagc tggttcagag cggagctgaa gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg cctctggata catcttcacc gagtacatca tccactgggt gcggcaggcc 120

cctggacaag gcctggaatg gatcggctgg ttctaccctg gcagcgacaa catcaagtac 180

aacgagaagt tcaaggatag agccaccctg accgcagata agtccaccag caccgtctac 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggat acagccgtgt actactgcgc cagacacgaa 300

accggctact tcttcgacta ctggggccag ggtacactgg tgaccgtgtc ctccggtggt 360

ggtggttctg gtggtggtgg ttctggcggc ggcggctccc aggttcagct ggtgcagtcc 420

ggagccgagg tgaagaagcc cggcgcttct gtgaaggtgt cttgtaaggc ctctggctac 480

accttcacca actactggat cggctgggtg aagcaggccc ctggccaggg cctggaatgg 540

atcggctatc tgtaccctgg aggcctgtat accaattaca acgagaagtt caagggcaag 600

gccaccatga ccgctgacac ctctaccaac actgcctaca tggaactgtc cagcttgcgg 660

tccgaggata ccgctgtgta ctactgcgcc agataccggg actatgacta cgccatggac 720

tattggggac aaggcaccct ggtgacagta tcctccgcct ctaccaaggg cccatctgtg 780

ttccctctgg ccccctcctc caagtccaca tccggcggca cagctgctct gggctgcctg 840

gtcaaagatt acttcccaga acctgtgacc gtctcctgga actccggcgc cctgacctcc 900

ggtgtccata cctttcctgc cgtgctgcag tcttctggcc tgtacagcct gagctctgtg 960

gtgaccgtgc ctagcagctc tctcggcacc cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag 1020

ccttctaaca ccaaagtgga taagaaagtg gaacctaagt cctgcgacaa gacccatacc 1080

tgtcctcctt gtccagctcc agagctgctg ggcggcccct ccgtgtttct gttcccccct 1140

aagcccaagg atacactgat gatctcccgg acccctgaag tgacctgcgt ggtggttgac 1200

gtgtctcacg aggaccccga ggtgaagttc aactggtacg tggatggagt ggaagtgcac 1260

aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag tacgcttcta catacagagt ggtctctgtg 1320

ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac ggaaaagagt acaagtgcaa ggtctccaac 1380

aaggctctgc ctgctcctat cgagaaaacc atctctaagg ccaagggcca gcctcgggag 1440

cctcaagtgt acaccctgcc tccttcccgc gaagagatga ccaagaacca ggtgagcctc 1500

acatgtctgg tgaaaggctt ctacccctca gacatcgccg tcgagtggga gtcgaatggc 1560

cagcctgaga acaactacaa gaccacccct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 1620

ctgtactcta agctgacagt ggacaagtcc agatggcagc agggcaacgt gttctcctgc 1680

tccgtgatgc acgaggccct gcacaatcac tacacccaga agtccctgtc cctgtctcct 1740

ggcaag 1746

<210> 37

<211> 745

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr

            20                  25                  30

Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Asp Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg His Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

        115                 120                 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

    130                 135                 140

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

145                 150                 155                 160

Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln

                165                 170                 175

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn

            180                 185                 190

Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser

        195                 200                 205

Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

    210                 215                 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp

225                 230                 235                 240

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

                245                 250                 255

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

            260                 265                 270

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

        275                 280                 285

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

    290                 295                 300

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

305                 310                 315                 320

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

                325                 330                 335

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

            340                 345                 350

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

        355                 360                 365

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

    370                 375                 380

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

385                 390                 395                 400

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

                405                 410                 415

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala

            420                 425                 430

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

        435                 440                 445

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

    450                 455                 460

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

465                 470                 475                 480

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

                485                 490                 495

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

            500                 505                 510

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

        515                 520                 525

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

    530                 535                 540

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

545                 550                 555                 560

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

                565                 570                 575

Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

            580                 585                 590

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu Glu

        595                 600                 605

Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly Leu

    610                 615                 620

His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu Arg

625                 630                 635                 640

Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val Pro

                645                 650                 655

Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser Lys

            660                 665                 670

Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val Glu

        675                 680                 685

Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn

    690                 695                 700

Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr Lys

705                 710                 715                 720

Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr Lys

                725                 730                 735

Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn

            740                 745

<210> 38

<211> 2235

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 38

caggtgcagc tggttcagag cggagctgaa gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg cctctggata catcttcacc gagtacatca tccactgggt gcggcaggcc 120

cctggacaag gcctggaatg gatcggctgg ttctaccctg gcagcgacaa catcaagtac 180

aacgagaagt tcaaggatag agccaccctg accgcagata agtccaccag caccgtctac 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggat acagccgtgt actactgcgc cagacacgaa 300

accggctact tcttcgacta ctggggccag ggtacactgg tgaccgtgtc ctccggtggt 360

ggtggttctg gtggtggtgg ttctggcggc ggcggctccc aggttcagct ggtgcagtcc 420

ggagccgagg tgaagaagcc cggcgcttct gtgaaggtgt cttgtaaggc ctctggctac 480

accttcacca actactggat cggctgggtg aagcaggccc ctggccaggg cctggaatgg 540

atcggctatc tgtaccctgg aggcctgtat accaattaca acgagaagtt caagggcaag 600

gccaccatga ccgctgacac ctctaccaac actgcctaca tggaactgtc cagcttgcgg 660

tccgaggata ccgctgtgta ctactgcgcc agataccggg actatgacta cgccatggac 720

tattggggac aaggcaccct ggtgacagta tcctccgcct ctaccaaggg cccatctgtg 780

ttccctctgg ccccctcctc caagtccaca tccggcggca cagctgctct gggctgcctg 840

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ccttctaaca ccaaagtgga taagaaagtg gaacctaagt cctgcgacaa gacccatacc 1080

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aagcccaagg atacactgat gatctcccgg acccctgaag tgacctgcgt ggtggttgac 1200

gtgtctcacg aggaccccga ggtgaagttc aactggtacg tggatggagt ggaagtgcac 1260

aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag tacgcttcta catacagagt ggtctctgtg 1320

ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac ggaaaagagt acaagtgcaa ggtctccaac 1380

aaggctctgc ctgctcctat cgagaaaacc atctctaagg ccaagggcca gcctcgggag 1440

cctcaagtgt acaccctgcc tccttcccgc gaagagatga ccaagaacca ggtgagcctc 1500

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ctgtactcta agctgacagt ggacaagtcc agatggcagc agggcaacgt gttctcctgc 1680

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ggcaagggtg gtggtggttc tggtggtggt ggttctggcg gcggcggctc ccaagtgact 1800

gacatcaact ccaagggatt ggaattgagg aagactgtta ctacagttga gactcagaac 1860

ttggaaggcc tgcatcatga tggccaattc tgccataagc cctgtcctcc aggtgaaagg 1920

aaagctaggg actgcacagt caatggggat gaaccagact gcgtgccctg ccaagaaggg 1980

aaggagtaca cagacaaagc ccatttttct tccaaatgca gaagatgtag attgtgtgat 2040

gaaggacatg gcttagaagt ggaaataaac tgcacccgga cccagaatac caagtgcaga 2100

tgtaaaccaa actttttttg taactctact gtatgtgaac actgtgaccc ttgcaccaaa 2160

tgtgaacatg gaatcatcaa ggaatgcaca ctcaccagca acaccaagtg caaagaggaa 2220

ggatccagat ctaac 2235

<210> 39

<211> 908

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 39

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr

            20                  25                  30

Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Asp Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg His Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

        115                 120                 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

    130                 135                 140

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

145                 150                 155                 160

Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln

                165                 170                 175

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn

            180                 185                 190

Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser

        195                 200                 205

Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

    210                 215                 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp

225                 230                 235                 240

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

                245                 250                 255

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

            260                 265                 270

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

        275                 280                 285

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

    290                 295                 300

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

305                 310                 315                 320

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

                325                 330                 335

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

            340                 345                 350

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

        355                 360                 365

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

    370                 375                 380

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

385                 390                 395                 400

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

                405                 410                 415

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala

            420                 425                 430

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

        435                 440                 445

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

    450                 455                 460

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

465                 470                 475                 480

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

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Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

            500                 505                 510

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

        515                 520                 525

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

    530                 535                 540

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

545                 550                 555                 560

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

                565                 570                 575

Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

            580                 585                 590

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu Glu

        595                 600                 605

Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly Leu

    610                 615                 620

His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu Arg

625                 630                 635                 640

Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val Pro

                645                 650                 655

Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser Lys

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Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val Glu

        675                 680                 685

Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn

    690                 695                 700

Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr Lys

705                 710                 715                 720

Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr Lys

                725                 730                 735

Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

            740                 745                 750

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys

        755                 760                 765

Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu

    770                 775                 780

Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro Pro

785                 790                 795                 800

Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp

                805                 810                 815

Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe

            820                 825                 830

Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly Leu

        835                 840                 845

Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys

    850                 855                 860

Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp Pro

865                 870                 875                 880

Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser

                885                 890                 895

Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn

            900                 905

<210> 40

<211> 2724

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 40

caggtgcagc tggttcagag cggagctgaa gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg cctctggata catcttcacc gagtacatca tccactgggt gcggcaggcc 120

cctggacaag gcctggaatg gatcggctgg ttctaccctg gcagcgacaa catcaagtac 180

aacgagaagt tcaaggatag agccaccctg accgcagata agtccaccag caccgtctac 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggat acagccgtgt actactgcgc cagacacgaa 300

accggctact tcttcgacta ctggggccag ggtacactgg tgaccgtgtc ctccggtggt 360

ggtggttctg gtggtggtgg ttctggcggc ggcggctccc aggttcagct ggtgcagtcc 420

ggagccgagg tgaagaagcc cggcgcttct gtgaaggtgt cttgtaaggc ctctggctac 480

accttcacca actactggat cggctgggtg aagcaggccc ctggccaggg cctggaatgg 540

atcggctatc tgtaccctgg aggcctgtat accaattaca acgagaagtt caagggcaag 600

gccaccatga ccgctgacac ctctaccaac actgcctaca tggaactgtc cagcttgcgg 660

tccgaggata ccgctgtgta ctactgcgcc agataccggg actatgacta cgccatggac 720

tattggggac aaggcaccct ggtgacagta tcctccgcct ctaccaaggg cccatctgtg 780

ttccctctgg ccccctcctc caagtccaca tccggcggca cagctgctct gggctgcctg 840

gtcaaagatt acttcccaga acctgtgacc gtctcctgga actccggcgc cctgacctcc 900

ggtgtccata cctttcctgc cgtgctgcag tcttctggcc tgtacagcct gagctctgtg 960

gtgaccgtgc ctagcagctc tctcggcacc cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag 1020

ccttctaaca ccaaagtgga taagaaagtg gaacctaagt cctgcgacaa gacccatacc 1080

tgtcctcctt gtccagctcc agagctgctg ggcggcccct ccgtgtttct gttcccccct 1140

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ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac ggaaaagagt acaagtgcaa ggtctccaac 1380

aaggctctgc ctgctcctat cgagaaaacc atctctaagg ccaagggcca gcctcgggag 1440

cctcaagtgt acaccctgcc tccttcccgc gaagagatga ccaagaacca ggtgagcctc 1500

acatgtctgg tgaaaggctt ctacccctca gacatcgccg tcgagtggga gtcgaatggc 1560

cagcctgaga acaactacaa gaccacccct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 1620

ctgtactcta agctgacagt ggacaagtcc agatggcagc agggcaacgt gttctcctgc 1680

tccgtgatgc acgaggccct gcacaatcac tacacccaga agtccctgtc cctgtctcct 1740

ggcaagggtg gtggtggttc tggtggtggt ggttctggcg gcggcggctc ccaagtgact 1800

gacatcaact ccaagggatt ggaattgagg aagactgtta ctacagttga gactcagaac 1860

ttggaaggcc tgcatcatga tggccaattc tgccataagc cctgtcctcc aggtgaaagg 1920

aaagctaggg actgcacagt caatggggat gaaccagact gcgtgccctg ccaagaaggg 1980

aaggagtaca cagacaaagc ccatttttct tccaaatgca gaagatgtag attgtgtgat 2040

gaaggacatg gcttagaagt ggaaataaac tgcacccgga cccagaatac caagtgcaga 2100

tgtaaaccaa actttttttg taactctact gtatgtgaac actgtgaccc ttgcaccaaa 2160

tgtgaacatg gaatcatcaa ggaatgcaca ctcaccagca acaccaagtg caaagaggaa 2220

ggatccagat ctaacggtgg tggtggttct ggtggtggtg gttctggcgg cggcggctcc 2280

caagtgactg acatcaactc caagggattg gaattgagga agactgttac tacagttgag 2340

actcagaact tggaaggcct gcatcatgat ggccaattct gccataagcc ctgtcctcca 2400

ggtgaaagga aagctaggga ctgcacagtc aatggggatg aaccagactg cgtgccctgc 2460

caagaaggga aggagtacac agacaaagcc catttttctt ccaaatgcag aagatgtaga 2520

ttgtgtgatg aaggacatgg cttagaagtg gaaataaact gcacccggac ccagaatacc 2580

aagtgcagat gtaaaccaaa ctttttttgt aactctactg tatgtgaaca ctgtgaccct 2640

tgcaccaaat gtgaacatgg aatcatcaag gaatgcacac tcaccagcaa caccaagtgc 2700

aaagaggaag gatccagatc taac 2724

<210> 41

<211> 611

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 41

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr

            20                  25                  30

Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Asp Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg His Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln

    450                 455                 460

Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr

465                 470                 475                 480

Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe

                485                 490                 495

Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr

            500                 505                 510

Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu

        515                 520                 525

Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu

    530                 535                 540

Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr

545                 550                 555                 560

Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr

                565                 570                 575

Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile

            580                 585                 590

Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser

        595                 600                 605

Arg Ser Asn

    610

<210> 42

<211> 1833

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 42

caggtgcagc tggttcagag cggagctgaa gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg cctctggata catcttcacc gagtacatca tccactgggt gcggcaggcc 120

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aacgagaagt tcaaggatag agccaccctg accgcagata agtccaccag caccgtctac 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggat acagccgtgt actactgcgc cagacacgaa 300

accggctact tcttcgacta ctggggccag ggtacactgg tgaccgtgtc ctccgccagc 360

accaagggcc ctagcgtctt tccactggcc ccttcttcta agagcacaag cggcggaacc 420

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agcggcgccc tgacatctgg cgtgcacaca ttcccagccg tgttgcagag cagcggcctg 540

tactctctgt ctagcgtcgt caccgtgccc agcagcagcc tgggaacaca gacctacatc 600

tgcaacgtga accacaagcc tagcaacacc aaagtggata agaaagtgga acccaagagc 660

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aagaaccagg tgtctctgac ctgtctggtg aagggcttct atccttctga catcgccgtg 1140

gaatgggaga gcaatggcca acctgagaac aactacaaga cgacccctcc agtgctggac 1200

agcgacggca gttttttcct gtacagcaag ctgacagtcg acaaaagccg gtggcagcag 1260

ggcaatgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctcc ataatcacta cacccagaag 1320

tccctgagcc tgagtcctgg caagggtggt ggtggttctg gtggtggtgg ttctggcggc 1380

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acagttgaga ctcagaactt ggaaggcctg catcatgatg gccaattctg ccataagccc 1500

tgtcctccag gtgaaaggaa agctagggac tgcacagtca atggggatga accagactgc 1560

gtgccctgcc aagaagggaa ggagtacaca gacaaagccc atttttcttc caaatgcaga 1620

agatgtagat tgtgtgatga aggacatggc ttagaagtgg aaataaactg cacccggacc 1680

cagaatacca agtgcagatg taaaccaaac tttttttgta actctactgt atgtgaacac 1740

tgtgaccctt gcaccaaatg tgaacatgga atcatcaagg aatgcacact caccagcaac 1800

accaagtgca aagaggaagg atccagatct aac 1833

<210> 43

<211> 774

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 43

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr

            20                  25                  30

Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Asp Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg His Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln

    450                 455                 460

Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr

465                 470                 475                 480

Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe

                485                 490                 495

Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr

            500                 505                 510

Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu

        515                 520                 525

Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu

    530                 535                 540

Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr

545                 550                 555                 560

Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr

                565                 570                 575

Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile

            580                 585                 590

Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser

        595                 600                 605

Arg Ser Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

    610                 615                 620

Gly Ser Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys

625                 630                 635                 640

Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly Leu His His Asp

                645                 650                 655

Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg

            660                 665                 670

Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu

        675                 680                 685

Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg

    690                 695                 700

Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys

705                 710                 715                 720

Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys

                725                 730                 735

Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr Lys Cys Glu His

            740                 745                 750

Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu

        755                 760                 765

Glu Gly Ser Arg Ser Asn

    770

<210> 44

<211> 2322

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 44

caggtgcagc tggttcagag cggagctgaa gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg cctctggata catcttcacc gagtacatca tccactgggt gcggcaggcc 120

cctggacaag gcctggaatg gatcggctgg ttctaccctg gcagcgacaa catcaagtac 180

aacgagaagt tcaaggatag agccaccctg accgcagata agtccaccag caccgtctac 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggat acagccgtgt actactgcgc cagacacgaa 300

accggctact tcttcgacta ctggggccag ggtacactgg tgaccgtgtc ctccgccagc 360

accaagggcc ctagcgtctt tccactggcc ccttcttcta agagcacaag cggcggaacc 420

gccgctctgg gttgtctggt caaagattac ttccccgaac ctgtgaccgt gtcctggaac 480

agcggcgccc tgacatctgg cgtgcacaca ttcccagccg tgttgcagag cagcggcctg 540

tactctctgt ctagcgtcgt caccgtgccc agcagcagcc tgggaacaca gacctacatc 600

tgcaacgtga accacaagcc tagcaacacc aaagtggata agaaagtgga acccaagagc 660

tgcgacaaga cccacacctg tcctccgtgc cctgctcctg agctgctggg cggccccagc 720

gtgttcctgt tcccccccaa gcctaaggac accctgatga tcagccgcac ccctgaggtg 780

acatgcgtgg tcgtcgacgt gtcccacgag gaccccgagg tgaaattcaa ctggtacgtg 840

gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagccaagag aagagcagta cgcctctaca 900

tacagagtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggaatac 960

aagtgcaagg tgtccaacaa ggccctgccc gctcctatcg agaagacaat ctctaaggct 1020

aaaggccagc ctagagaacc tcaggtttat acactgcctc ctagcagaga ggaaatgacc 1080

aagaaccagg tgtctctgac ctgtctggtg aagggcttct atccttctga catcgccgtg 1140

gaatgggaga gcaatggcca acctgagaac aactacaaga cgacccctcc agtgctggac 1200

agcgacggca gttttttcct gtacagcaag ctgacagtcg acaaaagccg gtggcagcag 1260

ggcaatgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctcc ataatcacta cacccagaag 1320

tccctgagcc tgagtcctgg caagggtggt ggtggttctg gtggtggtgg ttctggcggc 1380

ggcggctccc aagtgactga catcaactcc aagggattgg aattgaggaa gactgttact 1440

acagttgaga ctcagaactt ggaaggcctg catcatgatg gccaattctg ccataagccc 1500

tgtcctccag gtgaaaggaa agctagggac tgcacagtca atggggatga accagactgc 1560

gtgccctgcc aagaagggaa ggagtacaca gacaaagccc atttttcttc caaatgcaga 1620

agatgtagat tgtgtgatga aggacatggc ttagaagtgg aaataaactg cacccggacc 1680

cagaatacca agtgcagatg taaaccaaac tttttttgta actctactgt atgtgaacac 1740

tgtgaccctt gcaccaaatg tgaacatgga atcatcaagg aatgcacact caccagcaac 1800

accaagtgca aagaggaagg atccagatct aacggtggtg gtggttctgg tggtggtggt 1860

tctggcggcg gcggctccca agtgactgac atcaactcca agggattgga attgaggaag 1920

actgttacta cagttgagac tcagaacttg gaaggcctgc atcatgatgg ccaattctgc 1980

cataagccct gtcctccagg tgaaaggaaa gctagggact gcacagtcaa tggggatgaa 2040

ccagactgcg tgccctgcca agaagggaag gagtacacag acaaagccca tttttcttcc 2100

aaatgcagaa gatgtagatt gtgtgatgaa ggacatggct tagaagtgga aataaactgc 2160

acccggaccc agaataccaa gtgcagatgt aaaccaaact ttttttgtaa ctctactgta 2220

tgtgaacact gtgacccttg caccaaatgt gaacatggaa tcatcaagga atgcacactc 2280

accagcaaca ccaagtgcaa agaggaagga tccagatcta ac 2322

<210> 45

<211> 340

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 45

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser

            20                  25                  30

Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Gly Trp Cys Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

                85                  90                  95

Asn Tyr Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp

        115                 120                 125

Ile Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

    130                 135                 140

Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Lys Met Asn

145                 150                 155                 160

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp

                165                 170                 175

Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly

            180                 185                 190

Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp

        195                 200                 205

Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe

    210                 215                 220

Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

                245                 250                 255

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

            260                 265                 270

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

        275                 280                 285

Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

    290                 295                 300

Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys

305                 310                 315                 320

Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn

                325                 330                 335

Arg Gly Glu Cys

            340

<210> 46

<211> 1020

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 46

gacgtggtga tgacccagac ccctctgtct ctgcctgtga ccctcggcca gcctgcctcc 60

atctcctgca agtccaccaa aagcctgctg aattccgacg gctttaccta tctgggctgg 120

tgcctgcaga agcctggcca gagccctcag ctgctgatct acctggtgtc caaccggttt 180

tctggcgtgc ccgacagatt ctccggctcc ggatctggaa ccgatttcac cctcaagatc 240

tccagagtgg aagccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagtccaa ctacctgcct 300

ctgaccttcg gccaaggcac caagctggaa atcaagggtg gtggtggttc tggtggtggt 360

ggttctggcg gcggcggctc cgacatccag atcacccagt ctcctagcac actgtccgcc 420

tctgttggag atagagtgac aatcacctgt agcgccagca gctccgtgtc caaaatgaac 480

tggtaccagc aaaagcccgg caaggcccct aagagatgga tctacgacac cagcaaactg 540

gccagcggcg tgcccagtag attcagcggc agcggatctg gcacagagta caccctgacc 600

atcagcagcc tgcaacctga tgacttcgcc acatactact gccagcagtg gtcctctaat 660

cctctgacct tcggccaggg caccaagctg gaaatcaagc ggaccgtggc cgccccttct 720

gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gaaccgccag cgtggtgtgc 780

ctgctcaaca acttctaccc gcgggaagcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 840

cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc tacatacagc 900

ctgagcagca ccctgacact gtctaaagcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 960

gaagtgacac accagggcct gagcagccct gtgaccaagt cttttaaccg gggcgagtgc 1020

<210> 47

<211> 582

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 47

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

            20                  25                  30

Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

            100                 105                 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

        115                 120                 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu

    130                 135                 140

Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly

145                 150                 155                 160

Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

                165                 170                 175

Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Asp Asn Ile

            180                 185                 190

Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys

        195                 200                 205

Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp

    210                 215                 220

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg His Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Asp

225                 230                 235                 240

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

                245                 250                 255

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

            260                 265                 270

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

        275                 280                 285

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

    290                 295                 300

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

305                 310                 315                 320

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

                325                 330                 335

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

            340                 345                 350

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

        355                 360                 365

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

    370                 375                 380

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

385                 390                 395                 400

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

                405                 410                 415

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala

            420                 425                 430

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

        435                 440                 445

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

    450                 455                 460

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

465                 470                 475                 480

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

                485                 490                 495

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

            500                 505                 510

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

        515                 520                 525

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

    530                 535                 540

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

545                 550                 555                 560

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

                565                 570                 575

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

            580

<210> 48

<211> 1746

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 48

caggtccaac tggtgcaatc aggcgccgag gtcaagaagc cgggcgcttc cgttaaggtg 60

tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc aactactgga tcggctgggt gaagcaggcc 120

cccggccagg gcctggaatg gatcggatac ctgtaccccg gcggcctgta caccaactac 180

aacgagaagt tcaagggcaa ggctaccatg acagccgata catctaccaa taccgcctac 240

atggaactga gctccctgag atccgaggac accgccgtgt actactgcgc tcggtaccgg 300

gattatgact acgccatgga ctattggggc cagggcaccc tcgttacagt ctcctctgga 360

ggcggcggct ctggtggcgg cggctccggc ggagggggct ctcaggtgca gctggtgcag 420

agtggcgctg aggtgaagaa gcctggcgcc tccgtgaaag tgtcttgcaa ggcctctggc 480

tacattttca ccgagtacat catccactgg gtgcggcagg ctcctggaca gggcctggag 540

tggatcggct ggttctaccc cggatctgac aacatcaagt acaacgagaa atttaaggac 600

agagccaccc tgaccgccga caagtccacc tctaccgtgt acatggaact gtccagcctg 660

cggtctgagg acacagccgt gtactactgt gccagacacg agaccggcta tttcttcgac 720

tactggggac aaggcacact ggtgaccgtg tccagcgcct ccaccaaggg cccatctgtg 780

tttcctctgg ccccatcttc caagagcacc agcggcggca ccgctgctct gggctgcctg 840

gtgaaggact acttccctga gcctgtgaca gtgtcctgga actccggcgc tctgacctct 900

ggcgtgcata cctttccagc tgtgctgcag tccagcggcc tgtactccct gagttccgtg 960

gtaaccgtgc cctcttcttc tctgggcacc cagacctaca tctgcaatgt gaaccacaag 1020

ccttccaaca ccaaggtgga taagaaagtg gaacctaagt cctgcgacaa gacccacacc 1080

tgccctcctt gtcctgctcc tgagctgctt ggaggcccta gcgttttcct gttccctccc 1140

aagcccaagg ataccctgat gatctcccgg accccagaag tgacctgtgt ggtggtggac 1200

gtgtctcatg aggatcctga ggtgaagttc aactggtacg tggatggcgt ggaagtgcac 1260

aacgccaaga ccaaacctag agaggaacag tacgcctcta cctacagagt ggtctccgtg 1320

ctaacagtgc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaagagt ataagtgcaa agtgtctaac 1380

aaggctctgc ctgctcctat cgagaaaacc atctccaagg ccaaggggca gcctcgcgaa 1440

cctcaggtgt acactctgcc tccttccaga gaggagatga ccaagaacca ggtttccctg 1500

acctgtctgg tgaagggctt ctatccttcc gacatcgcag tggaatggga gtccaatggc 1560

cagcctgaga acaactacaa gacaacgccc cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 1620

ctgtacagca agctgacagt ggacaagagc cggtggcaac agggcaacgt gttctcctgc 1680

tccgtgatgc acgaggccct gcacaaccac tacacccaga aatctctctc cctgtcccct 1740

ggcaag 1746

<210> 49

<211> 503

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 49

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser

            20                  25                  30

Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Gly Trp Cys Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

                85                  90                  95

Asn Tyr Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp

        115                 120                 125

Ile Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

    130                 135                 140

Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Lys Met Asn

145                 150                 155                 160

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp

                165                 170                 175

Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly

            180                 185                 190

Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp

        195                 200                 205

Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe

    210                 215                 220

Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

                245                 250                 255

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

            260                 265                 270

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

        275                 280                 285

Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

    290                 295                 300

Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys

305                 310                 315                 320

Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn

                325                 330                 335

Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

            340                 345                 350

Gly Gly Ser Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu Glu Leu Arg

        355                 360                 365

Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly Leu His His

    370                 375                 380

Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu Arg Lys Ala

385                 390                 395                 400

Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val Pro Cys Gln

                405                 410                 415

Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser Lys Cys Arg

            420                 425                 430

Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val Glu Ile Asn

        435                 440                 445

Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn Phe Phe

    450                 455                 460

Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr Lys Cys Glu

465                 470                 475                 480

His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr Lys Cys Lys

                485                 490                 495

Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn

            500

<210> 50

<211> 1509

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 50

gacgtggtga tgacccagac ccctctgtct ctgcctgtga ccctcggcca gcctgcctcc 60

atctcctgca agtccaccaa aagcctgctg aattccgacg gctttaccta tctgggctgg 120

tgcctgcaga agcctggcca gagccctcag ctgctgatct acctggtgtc caaccggttt 180

tctggcgtgc ccgacagatt ctccggctcc ggatctggaa ccgatttcac cctcaagatc 240

tccagagtgg aagccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagtccaa ctacctgcct 300

ctgaccttcg gccaaggcac caagctggaa atcaagggtg gtggtggttc tggtggtggt 360

ggttctggcg gcggcggctc cgacatccag atcacccagt ctcctagcac actgtccgcc 420

tctgttggag atagagtgac aatcacctgt agcgccagca gctccgtgtc caaaatgaac 480

tggtaccagc aaaagcccgg caaggcccct aagagatgga tctacgacac cagcaaactg 540

gccagcggcg tgcccagtag attcagcggc agcggatctg gcacagagta caccctgacc 600

atcagcagcc tgcaacctga tgacttcgcc acatactact gccagcagtg gtcctctaat 660

cctctgacct tcggccaggg caccaagctg gaaatcaagc ggaccgtggc cgccccttct 720

gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gaaccgccag cgtggtgtgc 780

ctgctcaaca acttctaccc gcgggaagcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 840

cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc tacatacagc 900

ctgagcagca ccctgacact gtctaaagcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 960

gaagtgacac accagggcct gagcagccct gtgaccaagt cttttaaccg gggcgagtgc 1020

ggtggtggtg gttctggtgg tggtggttct ggcggcggcg gctcccaagt gactgacatc 1080

aactccaagg gattggaatt gaggaagact gttactacag ttgagactca gaacttggaa 1140

ggcctgcatc atgatggcca attctgccat aagccctgtc ctccaggtga aaggaaagct 1200

agggactgca cagtcaatgg ggatgaacca gactgcgtgc cctgccaaga agggaaggag 1260

tacacagaca aagcccattt ttcttccaaa tgcagaagat gtagattgtg tgatgaagga 1320

catggcttag aagtggaaat aaactgcacc cggacccaga ataccaagtg cagatgtaaa 1380

ccaaactttt tttgtaactc tactgtatgt gaacactgtg acccttgcac caaatgtgaa 1440

catggaatca tcaaggaatg cacactcacc agcaacacca agtgcaaaga ggaaggatcc 1500

agatctaac 1509

<210> 51

<211> 666

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 51

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser

            20                  25                  30

Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Gly Trp Cys Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

                85                  90                  95

Asn Tyr Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp

        115                 120                 125

Ile Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

    130                 135                 140

Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Lys Met Asn

145                 150                 155                 160

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp

                165                 170                 175

Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly

            180                 185                 190

Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp

        195                 200                 205

Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe

    210                 215                 220

Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

                245                 250                 255

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

            260                 265                 270

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

        275                 280                 285

Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

    290                 295                 300

Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys

305                 310                 315                 320

Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn

                325                 330                 335

Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

            340                 345                 350

Gly Gly Ser Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu Glu Leu Arg

        355                 360                 365

Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly Leu His His

    370                 375                 380

Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu Arg Lys Ala

385                 390                 395                 400

Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val Pro Cys Gln

                405                 410                 415

Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser Lys Cys Arg

            420                 425                 430

Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val Glu Ile Asn

        435                 440                 445

Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn Phe Phe

    450                 455                 460

Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr Lys Cys Glu

465                 470                 475                 480

His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr Lys Cys Lys

                485                 490                 495

Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

            500                 505                 510

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly Leu

        515                 520                 525

Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn Leu Glu Gly

    530                 535                 540

Leu His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro Pro Gly Glu

545                 550                 555                 560

Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro Asp Cys Val

                565                 570                 575

Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His Phe Ser Ser

            580                 585                 590

Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly Leu Glu Val

        595                 600                 605

Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro

    610                 615                 620

Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp Pro Cys Thr

625                 630                 635                 640

Lys Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr Ser Asn Thr

                645                 650                 655

Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn

            660                 665

<210> 52

<211> 1998

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 52

gacgtggtga tgacccagac ccctctgtct ctgcctgtga ccctcggcca gcctgcctcc 60

atctcctgca agtccaccaa aagcctgctg aattccgacg gctttaccta tctgggctgg 120

tgcctgcaga agcctggcca gagccctcag ctgctgatct acctggtgtc caaccggttt 180

tctggcgtgc ccgacagatt ctccggctcc ggatctggaa ccgatttcac cctcaagatc 240

tccagagtgg aagccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagtccaa ctacctgcct 300

ctgaccttcg gccaaggcac caagctggaa atcaagggtg gtggtggttc tggtggtggt 360

ggttctggcg gcggcggctc cgacatccag atcacccagt ctcctagcac actgtccgcc 420

tctgttggag atagagtgac aatcacctgt agcgccagca gctccgtgtc caaaatgaac 480

tggtaccagc aaaagcccgg caaggcccct aagagatgga tctacgacac cagcaaactg 540

gccagcggcg tgcccagtag attcagcggc agcggatctg gcacagagta caccctgacc 600

atcagcagcc tgcaacctga tgacttcgcc acatactact gccagcagtg gtcctctaat 660

cctctgacct tcggccaggg caccaagctg gaaatcaagc ggaccgtggc cgccccttct 720

gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gaaccgccag cgtggtgtgc 780

ctgctcaaca acttctaccc gcgggaagcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 840

cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc tacatacagc 900

ctgagcagca ccctgacact gtctaaagcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 960

gaagtgacac accagggcct gagcagccct gtgaccaagt cttttaaccg gggcgagtgc 1020

ggtggtggtg gttctggtgg tggtggttct ggcggcggcg gctcccaagt gactgacatc 1080

aactccaagg gattggaatt gaggaagact gttactacag ttgagactca gaacttggaa 1140

ggcctgcatc atgatggcca attctgccat aagccctgtc ctccaggtga aaggaaagct 1200

agggactgca cagtcaatgg ggatgaacca gactgcgtgc cctgccaaga agggaaggag 1260

tacacagaca aagcccattt ttcttccaaa tgcagaagat gtagattgtg tgatgaagga 1320

catggcttag aagtggaaat aaactgcacc cggacccaga ataccaagtg cagatgtaaa 1380

ccaaactttt tttgtaactc tactgtatgt gaacactgtg acccttgcac caaatgtgaa 1440

catggaatca tcaaggaatg cacactcacc agcaacacca agtgcaaaga ggaaggatcc 1500

agatctaacg gtggtggtgg ttctggtggt ggtggttctg gcggcggcgg ctcccaagtg 1560

actgacatca actccaaggg attggaattg aggaagactg ttactacagt tgagactcag 1620

aacttggaag gcctgcatca tgatggccaa ttctgccata agccctgtcc tccaggtgaa 1680

aggaaagcta gggactgcac agtcaatggg gatgaaccag actgcgtgcc ctgccaagaa 1740

gggaaggagt acacagacaa agcccatttt tcttccaaat gcagaagatg tagattgtgt 1800

gatgaaggac atggcttaga agtggaaata aactgcaccc ggacccagaa taccaagtgc 1860

agatgtaaac caaacttttt ttgtaactct actgtatgtg aacactgtga cccttgcacc 1920

aaatgtgaac atggaatcat caaggaatgc acactcacca gcaacaccaa gtgcaaagag 1980

gaaggatcca gatctaac 1998

Claims (10)

1.一种双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括：

(a)能够特异性地结合PD-L1的PD-L1抗体，以及

(b)能够特异性地结合FasL的FasL抗体或Fas胞外结构域、Fas胞外结构域的截短体或突变体；

其中，所述FasL抗体的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列连接至所述PD-L1抗体的重链可变区和轻链可变区，和/或Fas胞外结构域通过接头序列连接至所述PD-L1抗体的恒定区。

2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括PD-L1抗体以及分别在PD-L1抗体的C端的重链恒定区两侧通过接头序列连接的一个或两个Fas胞外结构域、Fas胞外结构域的截短体或突变体。

3.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括PD-L1抗体和FasL抗体，其中，所述PD-L1抗体的N端的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列与所述FasL抗体的N端的重链可变区和轻链可变区连接；

或所述FasL抗体的N端的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列与所述PD-L1抗体的N端的重链可变区和轻链可变区连接。

4.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括PD-L1抗体、FasL抗体和Fas胞外结构域，其中，所述PD-L1抗体的N端的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列连接至所述FasL抗体的N端的重链可变区和轻链可变区，以及在PD-L1抗体和FasL抗体连接形成双特异性抗体的C端的重链恒定区两侧分别通过接头序列连接一个或两个Fas胞外结构域；

或所述FasL抗体的N端的重链可变区和轻链可变区分别通过接头序列连接至所述PD-L1抗体的N端的重链可变区和轻链可变区，以及在FasL抗体和PD-L1抗体连接形成双特异性抗体的C端的重链恒定区两侧分别通过接头序列连接一个或两个Fas胞外结构域。

5.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述PD-L1抗体为完整的PD-L1抗体或PD-L1抗体的突变体或其截短体；所述FasL抗体为完整的FasL抗体或FasL抗体的突变体或截短体。

6.根据权利要求1至5任一项所述的双特异性抗体，其中，所述PD-L1抗体和FasL抗体均分别包括两条轻链和两条重链，每条轻链均包括轻链可变区和轻链恒定区，每条重链均包括重链可变区和重链恒定区；

其中，PD-L1抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列编码；PD-L1抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，其由SEQID NO:4所示的核苷酸序列编码；

FasL抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，其由SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列编码；PD-L1抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，其由SEQ IDNO:8所示的核苷酸序列编码。

7.根据权利要求1至6任一项所述的双特异性抗体，其特征在于，所述Fas胞外结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，其由SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列编码。

8.一种药物组合物，其含有权利要求1至7任一项的双特异性抗体以及任选地药学上可接受的载体或赋形剂。

9.根据权利要求1至7任一项所述的双特异性抗体在制备治疗PD-L1和FasL相关的癌症的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述癌症选自尿路上皮癌、小细胞肺癌、三阴性乳腺癌、肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、肾癌、结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌中的一种或多种。

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