KR20240036142A - 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질 - Google Patents
3특이성 및/또는 3가 결합 단백질 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240036142A KR20240036142A KR1020247007840A KR20247007840A KR20240036142A KR 20240036142 A KR20240036142 A KR 20240036142A KR 1020247007840 A KR1020247007840 A KR 1020247007840A KR 20247007840 A KR20247007840 A KR 20247007840A KR 20240036142 A KR20240036142 A KR 20240036142A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- amino acid
- seq
- acid sequence
- cdr
- polypeptide chain
- Prior art date
Links
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 254
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 254
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 584
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 582
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 582
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 214
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 200
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 200
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 200
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 79
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 78
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 84
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 84
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 claims description 78
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 claims description 78
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 76
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 20
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1491
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 272
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 106
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 100
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 92
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 92
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 78
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 78
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 59
- -1 CLEC9 Proteins 0.000 description 55
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 50
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 49
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 45
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 42
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 41
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 40
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 36
- 102100029722 Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 Human genes 0.000 description 29
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 28
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 26
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 25
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 25
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 23
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 23
- 101001012447 Homo sapiens Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 Proteins 0.000 description 21
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 description 21
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 description 21
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 19
- 101001019455 Homo sapiens ICOS ligand Proteins 0.000 description 18
- 102100034980 ICOS ligand Human genes 0.000 description 18
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 14
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 13
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 13
- 241000894007 species Species 0.000 description 13
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 12
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 12
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 12
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 11
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 11
- 102100023703 C-C motif chemokine 15 Human genes 0.000 description 11
- 102100035294 Chemokine XC receptor 1 Human genes 0.000 description 11
- 102100035943 HERV-H LTR-associating protein 2 Human genes 0.000 description 11
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 11
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 11
- 101000978376 Homo sapiens C-C motif chemokine 15 Proteins 0.000 description 11
- 101000804783 Homo sapiens Chemokine XC receptor 1 Proteins 0.000 description 11
- 101001021491 Homo sapiens HERV-H LTR-associating protein 2 Proteins 0.000 description 11
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 11
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 11
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 11
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 11
- 108010009254 Lysosomal-Associated Membrane Protein 1 Proteins 0.000 description 11
- 102100029527 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 ligand 1 Human genes 0.000 description 11
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 11
- 102100036846 C-C motif chemokine 21 Human genes 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 101000713085 Homo sapiens C-C motif chemokine 21 Proteins 0.000 description 10
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 description 10
- 102100020881 Interleukin-1 alpha Human genes 0.000 description 10
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 10
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 10
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 102100036842 C-C motif chemokine 19 Human genes 0.000 description 9
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 9
- 102100036848 C-C motif chemokine 20 Human genes 0.000 description 9
- 102100036849 C-C motif chemokine 24 Human genes 0.000 description 9
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 9
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 9
- 101000713106 Homo sapiens C-C motif chemokine 19 Proteins 0.000 description 9
- 101000955999 Homo sapiens V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Proteins 0.000 description 9
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 9
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 9
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 8
- 108010080422 CD39 antigen Proteins 0.000 description 8
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 8
- 101000713099 Homo sapiens C-C motif chemokine 20 Proteins 0.000 description 8
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 8
- 102100021933 C-C motif chemokine 25 Human genes 0.000 description 7
- 102100021935 C-C motif chemokine 26 Human genes 0.000 description 7
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 description 7
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 7
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 7
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 7
- 102100020997 Fractalkine Human genes 0.000 description 7
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 7
- 101000713078 Homo sapiens C-C motif chemokine 24 Proteins 0.000 description 7
- 101000897486 Homo sapiens C-C motif chemokine 25 Proteins 0.000 description 7
- 101000884279 Homo sapiens CD276 antigen Proteins 0.000 description 7
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 7
- 101000854520 Homo sapiens Fractalkine Proteins 0.000 description 7
- 101000853002 Homo sapiens Interleukin-25 Proteins 0.000 description 7
- 101001002709 Homo sapiens Interleukin-4 Proteins 0.000 description 7
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 7
- 101001128431 Homo sapiens Myeloid-derived growth factor Proteins 0.000 description 7
- 101001117312 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 2 Proteins 0.000 description 7
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 7
- 102100036680 Interleukin-25 Human genes 0.000 description 7
- 108010067003 Interleukin-33 Proteins 0.000 description 7
- 102000017761 Interleukin-33 Human genes 0.000 description 7
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 7
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 7
- 101001043810 Macaca fascicularis Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 7
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 7
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 7
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 102000055229 human IL4 Human genes 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 description 6
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 description 6
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 101000797762 Homo sapiens C-C motif chemokine 5 Proteins 0.000 description 6
- 101000797758 Homo sapiens C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 6
- 101000946794 Homo sapiens C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 6
- 101000978392 Homo sapiens Eotaxin Proteins 0.000 description 6
- 101100286681 Homo sapiens IL13 gene Proteins 0.000 description 6
- 101100460850 Homo sapiens NCR3LG1 gene Proteins 0.000 description 6
- 101100407307 Homo sapiens PDCD1LG2 gene Proteins 0.000 description 6
- 101000795169 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Proteins 0.000 description 6
- 101000864342 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase BTK Proteins 0.000 description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 6
- 102000026633 IL6 Human genes 0.000 description 6
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 6
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 6
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 6
- 102100036922 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13B Human genes 0.000 description 6
- 101710181056 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13B Proteins 0.000 description 6
- 102100029690 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Human genes 0.000 description 6
- 102100029823 Tyrosine-protein kinase BTK Human genes 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 101100339431 Arabidopsis thaliana HMGB2 gene Proteins 0.000 description 5
- 208000032679 Autosomal recessive spastic paraplegia type 64 Diseases 0.000 description 5
- 101000840545 Bacillus thuringiensis L-isoleucine-4-hydroxylase Proteins 0.000 description 5
- 102100024167 C-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 5
- 101710149862 C-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 5
- 101710149863 C-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 5
- 102100028990 C-X-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 5
- 102100025277 C-X-C motif chemokine 13 Human genes 0.000 description 5
- 102100039521 C-type lectin domain family 9 member A Human genes 0.000 description 5
- 102100032976 CCR4-NOT transcription complex subunit 6 Human genes 0.000 description 5
- 102100024263 CD160 antigen Human genes 0.000 description 5
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 5
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 description 5
- 102100025805 Cadherin-1 Human genes 0.000 description 5
- 101100328097 Caenorhabditis elegans clec-91 gene Proteins 0.000 description 5
- 108091007854 Cdh1/Fizzy-related Proteins 0.000 description 5
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 5
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 5
- 102100038497 Cytokine receptor-like factor 2 Human genes 0.000 description 5
- 108090000369 Glutamate Carboxypeptidase II Proteins 0.000 description 5
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 5
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 5
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 description 5
- 101150021904 HMGB1 gene Proteins 0.000 description 5
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 5
- 102100038006 High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 5
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 5
- 101000897493 Homo sapiens C-C motif chemokine 26 Proteins 0.000 description 5
- 101000916050 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 5
- 101000858064 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 13 Proteins 0.000 description 5
- 101000888548 Homo sapiens C-type lectin domain family 9 member A Proteins 0.000 description 5
- 101000761938 Homo sapiens CD160 antigen Proteins 0.000 description 5
- 101100166600 Homo sapiens CD28 gene Proteins 0.000 description 5
- 101000868215 Homo sapiens CD40 ligand Proteins 0.000 description 5
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 description 5
- 101000956427 Homo sapiens Cytokine receptor-like factor 2 Proteins 0.000 description 5
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 description 5
- 101000878611 Homo sapiens High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 5
- 101001037256 Homo sapiens Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Proteins 0.000 description 5
- 101001042104 Homo sapiens Inducible T-cell costimulator Proteins 0.000 description 5
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 description 5
- 101001015006 Homo sapiens Integrin beta-4 Proteins 0.000 description 5
- 101001033249 Homo sapiens Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 5
- 101001076386 Homo sapiens Interleukin-1 family member 10 Proteins 0.000 description 5
- 101000852968 Homo sapiens Interleukin-1 receptor-like 1 Proteins 0.000 description 5
- 101000998146 Homo sapiens Interleukin-17A Proteins 0.000 description 5
- 101001055145 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit beta Proteins 0.000 description 5
- 101001010626 Homo sapiens Interleukin-22 Proteins 0.000 description 5
- 101000960936 Homo sapiens Interleukin-5 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 5
- 101001055219 Homo sapiens Interleukin-9 receptor Proteins 0.000 description 5
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 5
- 101000628535 Homo sapiens Metalloreductase STEAP2 Proteins 0.000 description 5
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 5
- 101000633520 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 3 ligand 1 Proteins 0.000 description 5
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 101000610551 Homo sapiens Prominin-1 Proteins 0.000 description 5
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 5
- 101000585365 Homo sapiens Sulfotransferase 2A1 Proteins 0.000 description 5
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 description 5
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 5
- 101000845170 Homo sapiens Thymic stromal lymphopoietin Proteins 0.000 description 5
- 101000831567 Homo sapiens Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 5
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 5
- 101000669460 Homo sapiens Toll-like receptor 5 Proteins 0.000 description 5
- 101000795107 Homo sapiens Triggering receptor expressed on myeloid cells 1 Proteins 0.000 description 5
- 101000638251 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Proteins 0.000 description 5
- 101000795167 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Proteins 0.000 description 5
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 5
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 5
- 101001050476 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ITK/TSK Proteins 0.000 description 5
- 108091058560 IL8 Proteins 0.000 description 5
- 102100040061 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Human genes 0.000 description 5
- 102100021317 Inducible T-cell costimulator Human genes 0.000 description 5
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 description 5
- 102100033000 Integrin beta-4 Human genes 0.000 description 5
- 102100039065 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 5
- 102100026015 Interleukin-1 family member 10 Human genes 0.000 description 5
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 5
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 5
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 5
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 5
- 102100033461 Interleukin-17A Human genes 0.000 description 5
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 5
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 5
- 102100026879 Interleukin-2 receptor subunit beta Human genes 0.000 description 5
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 5
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 5
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 description 5
- 108010066979 Interleukin-27 Proteins 0.000 description 5
- 102100036678 Interleukin-27 subunit alpha Human genes 0.000 description 5
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 5
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 5
- 102100039881 Interleukin-5 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 5
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 5
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 5
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 5
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 5
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 5
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 5
- 102100026244 Interleukin-9 receptor Human genes 0.000 description 5
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 description 5
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 5
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 5
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 5
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 5
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 5
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 5
- 102100026711 Metalloreductase STEAP2 Human genes 0.000 description 5
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 5
- 101000597780 Mus musculus Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Proteins 0.000 description 5
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 5
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 5
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 5
- 102100040120 Prominin-1 Human genes 0.000 description 5
- 108050000258 Prostaglandin D receptors Proteins 0.000 description 5
- 102100024218 Prostaglandin D2 receptor 2 Human genes 0.000 description 5
- 101001037255 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 5
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 5
- 102100029867 Sulfotransferase 2A1 Human genes 0.000 description 5
- 102000000551 Syk Kinase Human genes 0.000 description 5
- 108010016672 Syk Kinase Proteins 0.000 description 5
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 5
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 description 5
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 5
- 102100031294 Thymic stromal lymphopoietin Human genes 0.000 description 5
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 5
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 5
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 5
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 5
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 5
- 102100039357 Toll-like receptor 5 Human genes 0.000 description 5
- 102100033117 Toll-like receptor 9 Human genes 0.000 description 5
- 102100029681 Triggering receptor expressed on myeloid cells 1 Human genes 0.000 description 5
- 102100040653 Tryptophan 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 5
- 101710136122 Tryptophan 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 5
- 102100024584 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 12 Human genes 0.000 description 5
- 101710097155 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 12 Proteins 0.000 description 5
- 102100035283 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Human genes 0.000 description 5
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 5
- 102100029675 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Human genes 0.000 description 5
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 5
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 5
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 5
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 5
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 5
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 5
- 102100023345 Tyrosine-protein kinase ITK/TSK Human genes 0.000 description 5
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 5
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 5
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 5
- 201000007111 hereditary spastic paraplegia 64 Diseases 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 5
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 5
- 201000001278 lymphoproliferative syndrome 2 Diseases 0.000 description 5
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 102100023698 C-C motif chemokine 17 Human genes 0.000 description 4
- 101000978362 Homo sapiens C-C motif chemokine 17 Proteins 0.000 description 4
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 3
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- 101710139422 Eotaxin Proteins 0.000 description 3
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 3
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 3
- 101001026578 Hordeum vulgare Ent-kaurenoic acid oxidase 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N mcp 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101710155834 C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 2
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 2
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 2
- 108010083647 Chemokine CCL24 Proteins 0.000 description 2
- 108010083698 Chemokine CCL26 Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 2
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710151803 Mitochondrial intermediate peptidase 2 Proteins 0.000 description 2
- 102000017954 Nuclear factor of activated T cells (NFAT) Human genes 0.000 description 2
- 108050007058 Nuclear factor of activated T cells (NFAT) Proteins 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940126587 biotherapeutics Drugs 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 5-bromouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000025324 B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101100016516 Caenorhabditis elegans hbl-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101710116782 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- DTERQYGMUDWYAZ-ZETCQYMHSA-N N(6)-acetyl-L-lysine Chemical compound CC(=O)NCCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O DTERQYGMUDWYAZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- JJIHLJJYMXLCOY-BYPYZUCNSA-N N-acetyl-L-serine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JJIHLJJYMXLCOY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 150000008209 arabinosides Chemical class 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000012829 chemotherapy agent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- PGUYAANYCROBRT-UHFFFAOYSA-N dihydroxy-selanyl-selanylidene-lambda5-phosphane Chemical compound OP(O)([SeH])=[Se] PGUYAANYCROBRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001102 germinal center b cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 244000145841 kine Species 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 201000006845 reticulosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029922 reticulum cell sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000002483 superagonistic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 231100000048 toxicity data Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/247—IL-4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
본 발명은 하나 이상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 결합 단백질을 형성하는 제1 폴리펩티드 쌍은 교차 배향을 갖는 이중 가변 도메인을 보유하고, 결합 단백질을 형성하는 제2 폴리펩티드 쌍은 단일 가변 도메인을 보유한다. 또한 본 발명은 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질의 제조 방법 및 그러한 결합 단백질의 용도를 제공한다.
Description
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2016년 4월 13일자로 출원된 미국 가출원 제62/322,036호; 2016년 5월 3일자로 출원된 미국 가출원 제62/331,191호; 2016년 10월 24일자로 출원된 미국 가출원 제62/412,187호; 및 2017년 3월 17일자로 출원된 유럽 특허 출원 제17305298.6호의 우선권 상의 이득을 청구하며, 이들은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일로의 서열 목록 제출
ASCII 텍스트 파일로의 하기 제출의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다: 컴퓨터 판독가능 형태(computer readable form; CRF)의 서열 목록 (파일명: 183952027140SEQLISTING.txt, 기록된 날짜: 2017년 4월 11일, 크기: 200 KB).
본 발명은 하나 이상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성(trispecific) 및/또는 3가 결합 단백질에 관한 것이며, 여기서, 결합 단백질을 형성하는 제1 폴리펩티드 쌍은 교차 배향(cross-over orientation)을 갖는 이중 가변 도메인을 보유하고, 결합 단백질을 형성하는 제2 폴리펩티드 쌍은 단일 가변 도메인을 보유한다. 또한 본 발명은 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질의 제조 방법 및 그러한 결합 단백질의 용도에 관한 것이다.
단클론 항체 기반 생물치료제가 새로운 약물 개발을 위한 중요한 방안이 되어왔다. 단클론 항체 기술은 특정한 표적화, 정확한 시그널링(signaling) 전달 및/또는 페이로드(payload)(특정 세포 집단에 대하여)를 제공하며, 그의 Fc 기능을 통하여 장시간 지속되는 생물학적 효과를 제공한다. 항체 공학에서의 노력에 의해 다양한 생물학적 응용을 위한 두 단클론 항체의 특이성이 조합된 2특이성 항체가 개발되어 항체 약물 개발의 범주가 확장되었다. 폭 및 효력이 개선된 새롭게 발견된 중화 항체는 복합 질환, 예컨대 암, 관절염, 및/또는 염증성 장애의 치료를 위한 생물치료제의 개발을 위한 더 많은 옵션을 제공할 수 있다.
3개의 항원 결합 부위를 형성하는 다중특이성 결합 단백질(예를 들어, 항체)이 본원에서 제공된다. 이러한 결합 단백질은 1가지, 2가지 또는 3가지의 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다.
일 실시 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 가지며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 가지며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 가지며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 가지며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
일부 실시 양태에서, 제2 및/또는 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3특이성이며, 3개의 상이한 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3가이지만 2특이성이며 3개의 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 3개의 항원 표적 중 2개는 동일하다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3가이지만 1특이성이며 3개의 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 3개의 항원 표적 전부는 동일하다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 하나 이상의 표적 단백질들의 기능을 억제할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3특이성이며, 3개의 상이한 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4(VTCN1로도 공지됨), B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2(MCP-1로도 공지됨), CCL3(MIP-1a로도 공지됨), CCL4(MIP-1b로도 공지됨), CCL5(RANTES로도 공지됨), CCL7(MCP-3으로도 공지됨), CCL8(mcp-2로도 공지됨), CCL11(에오탁신(eotaxin)으로도 공지됨), CCL15(MIP-1d로도 공지됨), CCL17(TARC로도 공지됨), CCL19(MIP-3b로도 공지됨), CCL20(MIP-3a로도 공지됨), CCL21(MIP-2로도 공지됨), CCL24(MPIF-2/에오탁신-2로도 공지됨), CCL25(TECK로도 공지됨), CCL26(에오탁신-3으로도 공지됨), CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23(IgE의 수용체인 FCER2로도 공지됨), CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80(B7-1로도 공지됨), CD86(B7-2로도 공지됨), CD122, CD137(41BB로도 공지됨), CD137L, CD152(CTLA4로도 공지됨), CD154(CD40L로도 공지됨), CD160, CD272, CD273(PDL2로도 공지됨), CD274(PDL1로도 공지됨), CD275(B7H2로도 공지됨), CD276(B7H3으로도 공지됨), CD278(ICOS로도 공지됨), CD279(PD-1로도 공지됨), CDH1(E-카데린(cadherin)으로도 공지됨), 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1(M-CSF로도 공지됨), CSF-2(GM-CSF로도 공지됨), CSF-3(GCSF로도 공지됨), CX3CL1(SCYD1로도 공지됨), CXCL12(SDF1로도 공지됨), CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb(IL25의 수용체로도 공지됨), IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4(b4 인테그린(integrin)으로도 공지됨), ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴(leptin), LPFS2, MHC 클래스(class) II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2 (IL33의 수용체로도 공지됨), STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP(IL7Ra의 공동수용체로도 공지됨), TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1(GPR5/CCXCR1로도 공지됨)로부터 선택되는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 1개, 2개 또는 3개의 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 항원 표적 중 하나 이상은 인간 항원 표적이다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3특이성이며, 상기 목록으로부터 선택되는 3개의 상이한 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3가이지만 2특이성이며 상기 목록으로부터 선택되는 3개의 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 3개의 항원 표적 중 2개는 동일하다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3가이지만 1특이성이며 상기 목록으로부터 선택되는 3개의 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 3개의 항원 표적 전부는 동일하다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 T 세포 상의 2개의 표적 단백질 및 하나의 종양 표적 단백질에 상응하는 3개의 표적 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 양태에서, T 세포 상의 상기 표적 단백질들 중 하나는 CD3이다. 일부 실시 양태에서, T 세포 상의 상기 표적 단백질들 중 하나는 CD28이다. 일부 실시 양태에서, 상기 종양 표적 단백질은 CD38이다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 T 세포 상의 2개의 표적 단백질 및 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 표적 단백질에 상응하는 3개의 표적 단백질에 특이적으로 결합한다: A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4, B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 가지며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 가지며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 가지며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 가지며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
(a) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 2, 4, 10, 14, 18, 22, 115 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이거나;
(b) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(c) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 및 167 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나;
(d) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125, 138 내지 140, 및 149 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나; 또는
(e) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 경쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함하며;
(a) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 1, 3, 9, 13, 17, 21, 114 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이거나;
(b) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(c) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 및 166 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나;
(d) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122, 및 126 내지 128 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나; 또는
(e) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 중쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제2 및/또는 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
(a) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 2, 4, 10, 14, 18, 22, 115 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이거나;
(b) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(c) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 및 167 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나;
(d) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125, 138 내지 140, 및 149 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나; 또는
(e) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 경쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함하며;
(a) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 1, 3, 9, 13, 17, 21, 114 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이거나;
(b) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(c) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 및 166 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나;
(d) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122, 및 126 내지 128 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나; 또는
(e) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 중쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 및 167 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하며; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 및 166 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125, 138 내지 140, 및 149 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며; (d) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122, 및 126 내지 128 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함한다.
본원에 개시된 결합 단백질 중 임의의 것의 일부 실시 양태에서, (a) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (b) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (c) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (d) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (e) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (f) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (g) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (h) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (i) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; 또는 (j) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다. 일부 실시 양태에서, (a) VH1은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 T-세포 표면 단백질에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 부위 및 항원 표적, 예를 들어 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 또 다른 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, 및 CD19, CD20, CD38, Her2, 및 LAMP1로 이루어진 군으로부터 선택되는 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, VH1 및 VL1은 인간 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 CD28에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, VH1 및 VL1은 인간 CD28에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, 항원 결합 부위는 CD19, CD20, CD38, Her2, 및 LAMP1로 이루어진 군으로부터 선택되는 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 다음을 포함한다: (a) 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는 (b) 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시 양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 표 2 내지 표 5에 예시된 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인, 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 다음을 포함한다: (a) 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는 (b) 서열 번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인.일부 실시 양태에서, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 표 2 내지 표 5에 예시된 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인, 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 다음을 포함한다: (a) 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; (b) 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; (c) 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; (d) 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는 (e) 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시 양태에서, 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 표 2 내지 표 5에 예시된 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인, 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 표 2 내지 표 5에 예시된 항-Her2, 항-CD19, 항-CD20, 항-CD38, 또는 항-LAMP1 결합 도메인의 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인, 또는 6개의 CDR을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 가지며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 가지며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 가지며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 가지며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
(a) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 86, 88, 94 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이거나;
(b) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 86, 88, 94 중 어느 하나로 개시된 적어도 하나의 아미노산 서열의 가변 도메인의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(c) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 169, 171, 및 173 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나;
(d) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 141 내지 147, 178, 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나; 또는
(e) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 경쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함하며;
(a) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87, 93 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이거나;
(b) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87, 93 중 어느 하나로 개시된 적어도 하나의 아미노산 서열의 가변 도메인의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(c) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 168, 170, 및 172 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나;
(d) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 129 내지 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나; 또는
(e) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 중쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제2 및/또는 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
(a) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 86, 88, 94 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이거나;
(b) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 86, 88, 94 중 어느 하나로 개시된 적어도 하나의 아미노산 서열의 가변 도메인의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(c) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 169, 171, 및 173 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나;
(d) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 141 내지 147, 178, 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나; 또는
(e) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 경쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함하며;
(a) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87, 93 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이거나;
(b) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87, 93 중 어느 하나로 개시된 적어도 하나의 아미노산 서열의 가변 도메인의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(c) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 168, 170, 및 172 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나;
(d) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 129 내지 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하거나;
(e) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 중쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 169, 171, 및 173 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하며; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 168, 170, 및 172 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 141 내지 147, 178, 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 129 내지 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함한다.
본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것의 일부 실시 양태에서, (a) VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (b) VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (c) VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (d) VH1은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (e) VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (f) VH1은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (g) VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (h) VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; (i) VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; 또는 (j) VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다. 일부 실시 양태에서, VH1, VL1, VH2, VL2, VH3, 및 VL3 중 하나 이상은 표 2 내지 표 5에 예시된 항체의 1개, 2개 또는 3개의 CDR 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3개의 항원 결합 부위를 포함하며, 여기서, 1개, 2개 또는 3개의 항원 결합 부위(들)는 IL-4, IL-13 및 TNFa로 이루어진 군으로부터 선택되는 사이토카인 표적 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 양태에서, (a) VH1 및 VL1은 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 형성하거나; (b) VH1 및 VL1은 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나; (c) VH1 및 VL1은 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나; (d) VH1 및 VL1은 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나; (e) VH1 및 VL1은 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나; 또는 (f) VH1 및 VL1은 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, IL13에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것의 일부 실시 양태에서, 제2 및/또는 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L1, L2, L3 또는 L4 중 적어도 하나는 독립적으로 길이가 0개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, L1, L2, L3 또는 L4는 각각 독립적으로 길이가 적어도 1개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3특이성이며, 3개의 상이한 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3특이성이며, 3개의 상이한 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 하나 이상의 표적 단백질들의 기능을 억제할 수 있다.
본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것의 일부 실시 양태에서, L1, L2, L3 또는 L4 중 적어도 하나는 독립적으로 길이가 0개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, L1, L2, L3 또는 L4는 각각 독립적으로 길이가 적어도 1개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, L1, L2, L3 및 L4 중 1개, 2개, 3개, 또는 4개 전부는 길이가 0 내지 15개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, L1, L2, L3 및 L4 중 적어도 2개는 길이가 1 내지 15개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, (a) L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 길이가 0개의 아미노산이거나, GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하거나; 또는 (b) L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 GQPKAAP (서열 번호 175)를 포함하며, L2는 서열 TKGPS (서열 번호 106)를 포함하며, L3은 서열 S를 포함하며, L4는 서열 RT를 포함하거나; L1은 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L2는 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이거나; L1은 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L2는 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이거나; 또는 L1은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L2는 길이가 0개의 아미노산이며, L3은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L4는 길이가 0개의 아미노산이다.
본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것의 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스(Index)에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 428 및 434에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 M428L 및 N434S이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이고; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이고; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬 둘 다의 CH3 도메인들은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 428 및 434에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 M428L 및 N434S이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역 중 하나만이 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인들은 인간 IgG1 CH3 도메인이며, 상기 CH3 도메인들 중 하나만이 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 228 및 409에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S228P 및 R409K이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인들은 인간 IgG4 CH3 도메인이며, 상기 CH3 도메인 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 228 및 409에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 S228P 및 R409K이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 F234A 및 L235A이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인들은 인간 IgG4 CH3 도메인이며, 상기 CH3 도메인 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 F234A 및 L235A이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 L234A 및 L235A이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인들은 인간 IgG1 CH3 도메인이며, 상기 CH3 도메인 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 L234A 및 L235A이다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이다.
본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것의 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이거나; 또는 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이며; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이며; 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354, 366, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C, T366W, H435R, 및 Y436F이며; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이며; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제2 및/또는 제3 폴리펩티드 사슬은 인간 IgG1 또는 IgG4 Fc 영역을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 제1 폴리펩티드 사슬, 제2 폴리펩티드 사슬, 제3 폴리펩티드 사슬 및 제4 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질을 제공하며, 여기서,
(a) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 1의 아미노산 서열 또는 서열 번호 1의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 2의 아미노산 서열 또는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(b) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 1의 아미노산 서열 또는 서열 번호 1의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 2의 아미노산 서열 또는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(c) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 13의 아미노산 서열 또는 서열 번호 13의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 14의 아미노산 서열 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(d) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 13의 아미노산 서열 또는 서열 번호 13의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 14의 아미노산 서열 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(e) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 17의 아미노산 서열 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 18의 아미노산 서열 또는 서열 번호 18의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(f) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 17의 아미노산 서열 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 18의 아미노산 서열 또는 서열 번호 18의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(g) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 21의 아미노산 서열 또는 서열 번호 21의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 22의 아미노산 서열 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(h) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 21의 아미노산 서열 또는 서열 번호 21의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 22의 아미노산 서열 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(i) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 61의 아미노산 서열 또는 서열 번호 61의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(j) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 61의 아미노산 서열 또는 서열 번호 61의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(k) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 71의 아미노산 서열 또는 서열 번호 71의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(l) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 76의 아미노산 서열 또는 서열 번호 76의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 75의 아미노산 서열 또는 서열 번호 75의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(m) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 82의 아미노산 서열 또는 서열 번호 82의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 81의 아미노산 서열 또는 서열 번호 81의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(n) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 88의 아미노산 서열 또는 서열 번호 88의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 87의 아미노산 서열 또는 서열 번호 87의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(o) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 94의 아미노산 서열 또는 서열 번호 94의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 93의 아미노산 서열 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(p) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(q) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(r) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(s) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(t) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 114의 아미노산 서열 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 115의 아미노산 서열 또는 서열 번호 115의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(u) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 114의 아미노산 서열 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 115의 아미노산 서열 또는 서열 번호 115의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 결합 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자 또는 이의 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 핵산 분자를 포함하는 단리된 숙주 세포를 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 발현 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시 양태에서, 단리된 숙주 세포는 포유류 세포 또는 곤충 세포이다. 일 실시 양태에서, 본 발명은 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 결합 단백질의 제1, 제2, 제3 및 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 하나 이상의 벡터를 포함하는 벡터 시스템을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 벡터 시스템은 결합 단백질의 제1 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제1 벡터, 결합 단백질의 제2 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제2 벡터, 결합 단백질의 제3 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제3 벡터, 및 결합 단백질의 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제4 벡터를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 벡터 시스템은 결합 단백질의 제1 및 제2 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제1 벡터, 및 결합 단백질의 제3 및 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제2 벡터를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 하나 이상의 벡터는 발현 벡터이다. 일 실시 양태에서, 본 발명은 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 벡터 시스템을 포함하는 단리된 숙주 세포를 제공한다. 일 실시 양태에서, 본 발명은 결합 단백질의 제조 방법을 제공하며, 본 방법은 a) 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 숙주 세포를, 상기 숙주 세포가 결합 단백질을 발현하도록 하는 조건 하에 배양하는 단계; 및 b) 결합 단백질을 숙주 세포로부터 단리하는 단계를 포함한다. 일 실시 양태에서, 본 발명은 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 결합 단백질 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 환자에서의 암의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 이는 환자에게 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 적어도 하나의 결합 단백질 또는 제약 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 환자에서의 암의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 결합 단백질 또는 제약 조성물을 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 환자에서의 암의 예방 및/또는 치료를 위한 약제의 제조를 위한 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 결합 단백질을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 T-세포 표면 단백질에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 부위 및 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 또 다른 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, 및 CD19, CD20, CD38, Her2, 및 LAMP1로 이루어진 군으로부터 선택되는 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 화학요법제와 함께 공동 투여된다. 일부 실시 양태에서, 환자는 인간이다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 표적 단백질의 기능을 억제할 수 있다: A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4, B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 환자에서의 염증성 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 이는 환자에게 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 적어도 하나의 결합 단백질 또는 제약 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 환자에서의 염증성 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 결합 단백질 또는 제약 조성물을 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 환자에서의 염증성 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료를 위한 약제의 제조를 위한 상기 실시 양태들 중 임의의 것에 따른 결합 단백질을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 IL-4, IL-13 및 TNFa로 이루어진 군으로부터 선택되는 사이토카인 표적 단백질에 각각이 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 3개의 결합 부위 중 2개는 IL-4, IL-13 및 TNFa로 이루어진 군으로부터 선택되는 사이토카인 표적 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 항염증제와 함께 공동 투여된다. 일부 실시 양태에서, 환자는 인간이다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 표적 단백질의 기능을 억제할 수 있다: A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4, B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 숙주 세포에 의해 생성된 결합 단백질의 정제 방법을 제공하며, 이는 하기 단계를 포함한다:
(a) 하나 이상의 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질을 숙주 세포에서 생성하는 단계(여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며; 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인 중 하나만이 EU 인덱스에 따른 인간 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F임);
(b) (a)에서 생성된 결합 단백질을 단백질 A와 접촉시키는 단계; 및
(c) 상기 결합 단백질을 H435R 및 Y436F인 아미노산 치환을 포함하는 0 또는 2개의 CH3 도메인을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 단백질 A로부터 용출시키는 단계.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이거나; 또는 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 본 방법은 하기 단계를 추가로 포함한다:(d) (c)에서 용출시킨 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체와 접촉시키는 단계; 및 (e) 상기 결합 단백질을 람다 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체로부터 용출시키는 단계. 일부 실시 양태에서, 본 방법은 (e) 후에 (f) (e)에서 용출시킨 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체와 접촉시키는 단계; 및 (g) 상기 결합 단백질을 카파 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체로부터 용출시키는 단계. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이거나; 또는 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 본 방법은 하기 단계를 추가로 포함한다:(d) (c)에서 용출시킨 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체와 접촉시키는 단계; 및 (e) 상기 결합 단백질을 카파 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체로부터 용출시키는 단계. 일부 실시 양태에서, 본 방법은 (e) 후에 (f) (e)에서 용출시킨 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체와 접촉시키는 단계; 및 (g) 상기 결합 단백질을 람다 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체로부터 용출시키는 단계. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이며; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)를 사용하여 (c) 및 (e) 중 하나 이상에서 검출된다. 일부 실시 양태에서, 제2 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인 및/또는 Fc 영역은 인간 IgG1 또는 IgG4 CH3 도메인 및/또는 Fc 영역이다.
본원에 개시된 다양한 실시 양태의 특성 중 하나, 일부, 또는 전체는 본 발명의 다른 실시 양태를 형성하도록 조합될 수 있음이 이해되어야 한다. 본 발명의 이러한 측면 및 다른 측면은 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명의 이러한 실시 양태 및 다른 실시 양태는 하기 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 의해 추가로 설명된다.
도 1a 내지 도 1c는 3개의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 결합 단백질의 개략도를 나타내며, 여기서, 제1 폴리펩티드 쌍은 2개의 항원 결합 부위를 형성하는 교차 배향을 갖는 이중 가변 도메인(VH1-VH2 및 VL2-VL1)을 보유하며, 제2 폴리펩티드 쌍은 단일 항원 결합 부위를 형성하는 단일 가변 도메인(VH3 및 VL3)을 보유한다. 도 1a는 "놉-인투-홀(knobs-into-holes)" 돌연변이를 포함하는 3특이성 결합 단백질을 도시하며, 여기서, 놉은 단일 가변 도메인을 갖는 제2 폴리펩티드 쌍 상에 있다. 도 1b는 "놉-인투-홀" 돌연변이를 포함하는 3특이성 결합 단백질을 도시하며, 여기서, 놉은 교차 배향을 갖는 제1 폴리펩티드 쌍 상에 있다. 도 1c는 상기 폴리펩티드 사슬들 상에서의 가변 도메인들의 배향, 및 표 1 내지 표 3에 예시된 결합 단백질들의 놉/홀 배향을 도시한다. "중쇄 A" (예를 들어, 본 발명의 제3 폴리펩티드 사슬)는 중쇄 A의 가변 도메인을 나타낸다. "경쇄 A" (예를 들어, 본 발명의 제4 폴리펩티드 사슬)는 경쇄 A의 가변 도메인을 나타낸다. "중쇄 B" (예를 들어, 본 발명의 제2 폴리펩티드 사슬)는 중쇄 B의 가변 도메인 1 및 가변 도메인 2를 나타낸다. "경쇄 B" (예를 들어, 본 발명의 제1 폴리펩티드 사슬)는 경쇄 B의 가변 도메인 1 및 가변 도메인 2를 나타낸다.
도 2는 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체 (결합 단백질 1), 또는 이소타입 대조 항체의 인간 CD3, CD28 및 Her2에의 결합성을 측정하는 ELISA 분석법의 결과를 도시한다. 결합된 항체는 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)-콘쥬게이션된(conjugated) 항-Fab 이차 항체를 사용하여 검출되었다.
도 3a 내지 도 3c는 E:T=10의 인간 PBMC를 사용한, 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-Her2 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, Her2+ 유방암 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 3a는 ZR-75-1 세포의 3특이성 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 3b는 AU565 세포의 3특이성 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 3c는 ZR-75-1 및 AU565 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 4 및 도 5는 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 1), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-Her2 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, Her2+ 유방암 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 4는 E:T=10의 공여 KP45926 유래의 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용한 ZR-75-1 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 5는 E:T=10의 공여 KP45944 유래의 인간 PBMC를 사용한 AU565 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 4 및 도 5는 상이한 공여체 유래의 PBMC를 사용한, 도 3a 내지 도 3c에 도시된 것과 유사한 세포 사멸 결과를 확인해 준다.
도 6a 및 도 6b는 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 결합 단백질 (HER2/CD28supxCD3mid; 본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐), 항-CD28 결합 도메인이 결여된 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 결합 단백질(HER2/ΔCD28supxCD3mid), 항-CD3 결합 도메인이 결여된 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 결합 단백질(HER2/CD28supxΔCD3mid), 항-CD28 결합 도메인 및 항-CD3 결합 도메인 둘 다가 결여된 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 결합 단백질(HER2/Δ(CD28supxΔCD3mid)), 대조 항-CD3 단클론 항체, 또는 대조 IgG4 항체로 처리된 인간 T 세포의 활성화(CD69+) 및 증식을 도시한다. 도 6a는 세 공여체 유래의 인간 CD4+ T 세포의 활성화(CD69+)를 도시한다. 도 6b는 세 공여체 유래의 인간 CD8+ T 세포의 활성화(CD69+)를 도시한다. CD28sup: 항-CD28 초작동제(superagonist) 항체. CD3mid: 항-CD3 항체.
도 7a 내지 도 7c는 항-CD3 및 항-CD28 시그널링을 통한 IL-2, NFκB, 및 활성화 T 세포의 핵 인자(NFAT)의 경로 활성화를 도시하며, 이는 IL-2 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 7a), NFκB 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 7b), 또는 NFAT 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 7c)을 포함하는 인간 Jurkat T 세포를 사용하여 루시퍼라아제 분석법에 의해 측정되는 바와 같다. 테스트한 항체는 상기에 기술된 것이었다(도6a 내지 도 6d 참고).
도 8은 항-CD19 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 3"으로 칭해짐), 또는 이소타입 대조 항체의 CD3, CD28, 및 CD19에의 결합성을 측정하는 ELISA 분석법의 결과를 도시한다. 결합된 항체는 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)-콘쥬게이션된 항-Fab 이차 항체를 사용하여 검출되었다.
도 9a 내지 도 9n은 E:T=10의 이펙터(effector) 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD19 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 3"으로 칭해짐), 또는 표시된 대조구를 사용한, CD19+ 인간 GCB 림프종 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9a는 OCI-LY19 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9b는 OCI-LY19 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다. 도 9c는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 OCI-LY19 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9d는 E:T=10의 공여 KP48573 유래의 PBMC를 사용한 OCI-LY19 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9e는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 인간 림프종 KARPASS-422 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9f는 E:T=10의 공여 KP48573 유래의 PBMC를 사용한 KARPASS-422 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9g는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 인간 만성 B 세포 백혈병 MeC1 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9h는 E:T=10의 공여 KP48775 유래의 PBMC를 사용한 인간 다발성 골수종 RPMI8226 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9i는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 인간 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma) Raji 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9j는 E:T=10의 공여 KP48775 유래의 PBMC를 사용한 인간 미만성 거대 B-세포 림프종 HBL1 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9k는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 거대 세포 림프종 SUDHL8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9l은 E:T=10의 공여 KP48573 유래의 PBMC를 사용한 SUDHL8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9m은 E:T=10의 공여 KP48775 유래의 PBMC를 사용한 인간 B 세포 림프종 ARH77 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9n은 E:T=10의 공여 KP48775 유래의 PBMC를 사용한 OCI-Ly3 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다.
도 10은 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 또는 이소타입 대조 항체의 CD3, CD28 및 CD38에의 결합성을 측정하는 ELISA 분석법의 결과를 도시한다. 결합된 항체는 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)-콘쥬게이션된 항-Fab 이차 항체를 사용하여 검출되었다.
도 11a 내지 도 11d는 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 인간 다발성 골수종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 11a는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한 MOLP-8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 11b는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한 RPMI-8226 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 11c는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한 KMS-12-BM 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 11d는 MOLP-8, RPMI-8226, 및 KMS-12-BM 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 12a 내지 도 12d는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 인간 다발성 골수종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 12a는 NCI-H929 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 12b는 MM.1S 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 12c는 MM.1R 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 12d는 NCI-H929, MM.1S, 및 MM.1R 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 13a 내지 도 13d는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 인간 다발성 골수종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 13a는 OPM-2 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 13b는 KMS-26 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 13c는 U266 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 13d는 OPM-2, KMS-26, 및 U226 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 14a 내지 도 14d는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 인간 림프종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 14a는 SUDHL-8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 14b는 OCI-LY19 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 14c는 SUDHL-8 및 OCI-LY19 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 15a 내지 도 15d는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ ALL 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 15a는 KOPN-8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 15b는 HAL-1 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 15c는 CCRF-SB 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 15d는 KOPN-8, HAL-1, 및 CCRF-SB 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 16은 E:T=10의 공여 PK45926 유래의 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서, 사용되는 특이적 항-CD28 결합 도메인에 따라 "결합 단백질 5" 및 "결합 단백질 6"으로 칭해짐), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 골수종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다.
도 17a 및 도 17b는 항-CD3 및 항-CD28 시그널링을 통한 IL-2, NFκB, 및 활성화 T 세포의 핵 인자(NFAT)의 경로 활성화를 도시하며, 이는 IL-2 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 17a) 또는 NFAT 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 17b)을 포함하는 인간 Jurkat T 세포를 사용하여 루시퍼라아제 분석법에 의해 측정되는 바와 같다. 테스트한 항체는 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 IgG4 항체(결합 단백질 5, "Tri-Ab"로 라벨링됨), CD28 결합 도메인이 결여된 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 IgG4 항체("Tri-Ab (ΔCD28)"로 라벨링됨), CD3 결합 도메인이 결여된 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 IgG4 항체("Tri-Ab (ΔCD3)"로 라벨링됨), 및 CD3 결합 도메인 및 CD28 결합 도메인이 결여된 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 IgG4 항체("Tri-Ab (ΔCD28x ΔCD3)"로 라벨링됨)였다. 루시퍼라아제 분석은 표시된 Tri-Ab 각각에 대하여 이중으로 수행되었다.
도 18a 내지 도 18e는 비-인간 영장류에서의 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐)를 사용한 용량 증가 독성 연구의 결과를 도시한다(용량은 0.1, 0.5, 2.5, 5, 10 ㎍/kg으로부터 100 ㎍/kg까지 증가함; 동물은 "409" 및 "410"으로 라벨링됨). 도 18a는 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 투여한지 6시간 후 각각의 동물에서의 순환 CD4+ T 세포의 백분율의 결과를 도시한다. 도 18b는 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 투여한지 6시간 후 각각의 동물에서의 순환 CD8+ T 세포의 백분율의 결과를 도시한다. 도 18c는 투약한지 6시간 후 순환 CD4+ T 세포의 활성화(CD69+)의 결과를 도시한다. 도 18d는 투약한지 6시간 후 순환 CD8+ T 세포의 활성화(CD69+)의 결과를 도시한다. 도 18e는 각각의 투약에서 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 투여한지 6시간 후 관찰되는 염증성 사이토카인의 방출량을 도시한다.
도 19a 및 도 19b는 BT474 세포를 이식한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐)의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다. 도 19a는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스의 체중의 변화를 도시한다. 도 19b는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스에서의 종양 부피의 변화를 도시한다.
도 20a 내지 도 20h는 BT474 세포를 이식한 인간 PBMC 인간화 NSG 마우스 모델에서의 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐)의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다. 도 20a는 마우스 체중에 대한 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질, 표시된 농도의 헤르셉틴(Herceptin), 또는 비히클 대조구의 영향을 도시한다. 도 20b는 개별 마우스에서와 같은, 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질, 헤르셉틴 또는 표시된 대조구의 용량-의존성 항-종양 활성을 도시한다. 도 20c는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구의 투여 후 마우스에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 도 20d는 표시된 농도의 헤르셉틴 또는 PBS 대조구의 투여 후 마우스에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 도 20e는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질, 표시된 농도의 헤르셉틴, 또는 PBS 대조구의 투여 후 마우스에서의 제34일에서의 평균 종양 부피의 막대 그래프를 도시한다. 도 20f는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질, 표시된 농도의 헤르셉틴, 또는 PBS 대조구의 투여 후 마우스에서의 제34일에서의 평균 종양 중량을 도시한다. 도 20g는 연구 마지막에 마우스의 혈액 중 인간 CD45+, CD3+, CD4+, CD8+ 세포를 도시한다. 도 20h는 연구 마지막에 마우스의 비장 중 인간 CD45+, CD3+, CD4+, CD8+ 세포를 도시한다.
도 21a 내지 도 21f는 비-인간 영장류에서의 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5)를 사용한 용량 증가 독성 연구의 결과를 도시한다(용량은 0.1, 0.5, 2.5, 5, 10 ㎍/kg으로부터 100 ㎍/kg까지 증가함). 도 21a는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체의 투여 후 순환 CD4+ T 세포의 T 세포 활성화(CD69+)(선 그래프) 및 증식(막대 그래프)을 도시한다. 도 21b는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체의 투여 후 순환 CD8+ T 세포의 T 세포 활성화(CD69+)(선 그래프) 및 증식(막대 그래프)을 도시한다. 도 21c는 개별 동물에 의한, 각각을 투약한지 6시간 후의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 받은 동물에서의 IL6 방출량을 도시한다. 도 21d는 개별 동물에 의한, 각각을 투약한지 6시간 후의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 받은 동물에서의 IL10 방출량을 도시한다. 도 21e는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 받은 동물에서의 TNFα 방출량을 도시한다. 도 21f는 개별 동물에 의한, 각각을 투약한지 6시간 후의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 받은 동물에서의 IFNγ 방출량을 도시한다.
도 22a 내지 도 22c는 CD38 및 PD-L1이 형질도입된 RPMI-8226 다발성 골수종 세포를 이식한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5)의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다. 예비 연구로서, 이 실험에 의해 결합 단백질 5의 작용 용량 범위가 결정되었다. 도 22a는 표시된 농도의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 대조구의 군에서의 생체 내 종양 성장의 곡선을 도시한다. 도22b는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 표시된 대조구를 투여한 마우스에서의 인간 CD8+ T 세포 침윤 종양을 도시한다. 도 22c는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 표시된 대조구를 투여한 마우스에서의 인간 CD4+ T 세포 침윤 종양을 도시한다.
도 23a 내지 도 23d는 CD38 및 PD-L1이 형질도입된 RPMI-8226 세포를 이식한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5)의 생체 내 활성을 도시한다. 도 23a는 표시된 농도의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스의 체중의 변화를 도시한다. 도 23b는 표시된 농도의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스에서의 종양 부피의 변화를 도시한다. 도 23c는 제19일에서의 각각의 군에서의 종양 부피를 도시한다. 모든 처리된 군에서의 종양 부피는 뚜렷한 감소를 나타냈는데, 이는 PBS 대조군과는 통계학적으로 차이가 있다. 도 23d는 표시된 농도의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구를 첫 번째로 투약한지 4시간 후 마우스에서의 염증성 사이토카인 IFN-g, TNF, 및 IL-2의 혈청중 농도를 도시한다.
도 24 및 도 25는 CD69+ T 세포의 백분율의 증가를 결정함으로써 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5; 삼각형), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(정사각형), 또는 항-CD28 IgG4 항체(원)의 투여에 의한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 T 세포의 생체 내 활성화를 도시한다. 도 24는 CD4+ T 세포의 생체 내 활성화를 도시한다. 도 25는 CD8+ T 세포의 생체 내 활성화를 도시한다.
도 26a 내지 도 26c는 염증성 사이토카인의 혈청중 수준을 결정함으로써 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5; 삼각형), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(정사각형), 또는 항-CD28 IgG4 항체(원)의 투여에 의한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 T 세포의 생체 내 활성화를 도시한다. 도 26a는 IL-2의 혈청중 수준을 도시한다. 도 26b는 TNF의 혈청중 수준을 도시한다. 도 26c는 IFN-γ의 혈청중 수준을 도시한다.
도 27a 및 도 27b는 크기 배제 크로마토그래피에 의한 표시된 단백질의 정제를 도시한다. 도 27a는 크기 배제 크로마토그래피에 의한 결합 단백질 9 내지 15의 정제를 도시한다. 도 27b는 크기 배제 크로마토그래피에 의한 결합 단백질 16 내지 19의 정제를 도시한다.
도 28a는 선택적 결합 단백질 특징부(예를 들어, 카파/람다 경쇄, 놉/홀 돌연변이, 및 H435R/Y436F 돌연변이)의 구성(configuration) 및 정제 계획의 최적화를 위한 실험에서 사용되는 3특이성 결합 단백질을 도시한다.
도 28b는 각각의 테스트된 구성을 도시한다.
도 29는 분석용 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)로부터의 각각의 크로마토그램을 도시하며, 이는 3특이성 결합 단백질이 쌍 형성 오류 종과는 구별되었음을 보여준다.
도 30a 및 도 30b는 단백질 A, 이어서 KappaSelect(GE Healthcare) 정제 단계에 의한, CODV 아암(arm)을 위한 람다 경쇄, Fab 아암을 위한 카파 경쇄, CODV 아암에서의 놉 돌연변이, Fab 아암에서의 홀 돌연변이, 및 Fab 아암에서의 RF 돌연변이를 포함하는 결합 단백질의 성공적인 정제를 도시한다. 쌍 형성 오류 종으로부터의 결합 단백질의 성공적인 정제는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC; 도 30a) 및 SDS-PAGE(도 30b)에 의해 입증되었다.
도 2는 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체 (결합 단백질 1), 또는 이소타입 대조 항체의 인간 CD3, CD28 및 Her2에의 결합성을 측정하는 ELISA 분석법의 결과를 도시한다. 결합된 항체는 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)-콘쥬게이션된(conjugated) 항-Fab 이차 항체를 사용하여 검출되었다.
도 3a 내지 도 3c는 E:T=10의 인간 PBMC를 사용한, 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-Her2 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, Her2+ 유방암 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 3a는 ZR-75-1 세포의 3특이성 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 3b는 AU565 세포의 3특이성 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 3c는 ZR-75-1 및 AU565 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 4 및 도 5는 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 1), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-Her2 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, Her2+ 유방암 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 4는 E:T=10의 공여 KP45926 유래의 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용한 ZR-75-1 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 5는 E:T=10의 공여 KP45944 유래의 인간 PBMC를 사용한 AU565 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 4 및 도 5는 상이한 공여체 유래의 PBMC를 사용한, 도 3a 내지 도 3c에 도시된 것과 유사한 세포 사멸 결과를 확인해 준다.
도 6a 및 도 6b는 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 결합 단백질 (HER2/CD28supxCD3mid; 본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐), 항-CD28 결합 도메인이 결여된 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 결합 단백질(HER2/ΔCD28supxCD3mid), 항-CD3 결합 도메인이 결여된 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 결합 단백질(HER2/CD28supxΔCD3mid), 항-CD28 결합 도메인 및 항-CD3 결합 도메인 둘 다가 결여된 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 결합 단백질(HER2/Δ(CD28supxΔCD3mid)), 대조 항-CD3 단클론 항체, 또는 대조 IgG4 항체로 처리된 인간 T 세포의 활성화(CD69+) 및 증식을 도시한다. 도 6a는 세 공여체 유래의 인간 CD4+ T 세포의 활성화(CD69+)를 도시한다. 도 6b는 세 공여체 유래의 인간 CD8+ T 세포의 활성화(CD69+)를 도시한다. CD28sup: 항-CD28 초작동제(superagonist) 항체. CD3mid: 항-CD3 항체.
도 7a 내지 도 7c는 항-CD3 및 항-CD28 시그널링을 통한 IL-2, NFκB, 및 활성화 T 세포의 핵 인자(NFAT)의 경로 활성화를 도시하며, 이는 IL-2 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 7a), NFκB 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 7b), 또는 NFAT 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 7c)을 포함하는 인간 Jurkat T 세포를 사용하여 루시퍼라아제 분석법에 의해 측정되는 바와 같다. 테스트한 항체는 상기에 기술된 것이었다(도6a 내지 도 6d 참고).
도 8은 항-CD19 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 3"으로 칭해짐), 또는 이소타입 대조 항체의 CD3, CD28, 및 CD19에의 결합성을 측정하는 ELISA 분석법의 결과를 도시한다. 결합된 항체는 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)-콘쥬게이션된 항-Fab 이차 항체를 사용하여 검출되었다.
도 9a 내지 도 9n은 E:T=10의 이펙터(effector) 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD19 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 3"으로 칭해짐), 또는 표시된 대조구를 사용한, CD19+ 인간 GCB 림프종 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9a는 OCI-LY19 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9b는 OCI-LY19 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다. 도 9c는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 OCI-LY19 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9d는 E:T=10의 공여 KP48573 유래의 PBMC를 사용한 OCI-LY19 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9e는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 인간 림프종 KARPASS-422 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9f는 E:T=10의 공여 KP48573 유래의 PBMC를 사용한 KARPASS-422 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9g는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 인간 만성 B 세포 백혈병 MeC1 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9h는 E:T=10의 공여 KP48775 유래의 PBMC를 사용한 인간 다발성 골수종 RPMI8226 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9i는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 인간 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma) Raji 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9j는 E:T=10의 공여 KP48775 유래의 PBMC를 사용한 인간 미만성 거대 B-세포 림프종 HBL1 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9k는 E:T=10의 공여 KP48572 유래의 PBMC를 사용한 거대 세포 림프종 SUDHL8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9l은 E:T=10의 공여 KP48573 유래의 PBMC를 사용한 SUDHL8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9m은 E:T=10의 공여 KP48775 유래의 PBMC를 사용한 인간 B 세포 림프종 ARH77 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 9n은 E:T=10의 공여 KP48775 유래의 PBMC를 사용한 OCI-Ly3 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다.
도 10은 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 또는 이소타입 대조 항체의 CD3, CD28 및 CD38에의 결합성을 측정하는 ELISA 분석법의 결과를 도시한다. 결합된 항체는 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)-콘쥬게이션된 항-Fab 이차 항체를 사용하여 검출되었다.
도 11a 내지 도 11d는 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 인간 다발성 골수종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 11a는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한 MOLP-8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 11b는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한 RPMI-8226 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 11c는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한 KMS-12-BM 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 11d는 MOLP-8, RPMI-8226, 및 KMS-12-BM 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 12a 내지 도 12d는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 인간 다발성 골수종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 12a는 NCI-H929 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 12b는 MM.1S 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 12c는 MM.1R 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 12d는 NCI-H929, MM.1S, 및 MM.1R 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 13a 내지 도 13d는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 인간 다발성 골수종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 13a는 OPM-2 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 13b는 KMS-26 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 13c는 U266 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 13d는 OPM-2, KMS-26, 및 U226 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 14a 내지 도 14d는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 인간 림프종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 14a는 SUDHL-8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 14b는 OCI-LY19 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 14c는 SUDHL-8 및 OCI-LY19 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 15a 내지 도 15d는 E:T=10의 이펙터 세포로서의 인간 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ ALL 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 15a는 KOPN-8 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 15b는 HAL-1 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 15c는 CCRF-SB 세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다. 도 15d는 KOPN-8, HAL-1, 및 CCRF-SB 세포 상에서의 표시된 마커의 세포 표면 발현을 결정하는 FACS 분석법의 결과를 도시한다.
도 16은 E:T=10의 공여 PK45926 유래의 PBMC를 사용한, 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서, 사용되는 특이적 항-CD28 결합 도메인에 따라 "결합 단백질 5" 및 "결합 단백질 6"으로 칭해짐), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(huCD28 x CD3), 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항-CD38 IgG1 항체, 또는 대조 항체(인간-IgG1)를 사용한, CD38+ 골수종 암세포의 항체-매개된 특이적 사멸의 결과를 도시한다.
도 17a 및 도 17b는 항-CD3 및 항-CD28 시그널링을 통한 IL-2, NFκB, 및 활성화 T 세포의 핵 인자(NFAT)의 경로 활성화를 도시하며, 이는 IL-2 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 17a) 또는 NFAT 프로모터-루시퍼라아제 구축물(도 17b)을 포함하는 인간 Jurkat T 세포를 사용하여 루시퍼라아제 분석법에 의해 측정되는 바와 같다. 테스트한 항체는 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 IgG4 항체(결합 단백질 5, "Tri-Ab"로 라벨링됨), CD28 결합 도메인이 결여된 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 IgG4 항체("Tri-Ab (ΔCD28)"로 라벨링됨), CD3 결합 도메인이 결여된 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 IgG4 항체("Tri-Ab (ΔCD3)"로 라벨링됨), 및 CD3 결합 도메인 및 CD28 결합 도메인이 결여된 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 IgG4 항체("Tri-Ab (ΔCD28x ΔCD3)"로 라벨링됨)였다. 루시퍼라아제 분석은 표시된 Tri-Ab 각각에 대하여 이중으로 수행되었다.
도 18a 내지 도 18e는 비-인간 영장류에서의 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐)를 사용한 용량 증가 독성 연구의 결과를 도시한다(용량은 0.1, 0.5, 2.5, 5, 10 ㎍/kg으로부터 100 ㎍/kg까지 증가함; 동물은 "409" 및 "410"으로 라벨링됨). 도 18a는 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 투여한지 6시간 후 각각의 동물에서의 순환 CD4+ T 세포의 백분율의 결과를 도시한다. 도 18b는 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 투여한지 6시간 후 각각의 동물에서의 순환 CD8+ T 세포의 백분율의 결과를 도시한다. 도 18c는 투약한지 6시간 후 순환 CD4+ T 세포의 활성화(CD69+)의 결과를 도시한다. 도 18d는 투약한지 6시간 후 순환 CD8+ T 세포의 활성화(CD69+)의 결과를 도시한다. 도 18e는 각각의 투약에서 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 투여한지 6시간 후 관찰되는 염증성 사이토카인의 방출량을 도시한다.
도 19a 및 도 19b는 BT474 세포를 이식한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐)의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다. 도 19a는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스의 체중의 변화를 도시한다. 도 19b는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스에서의 종양 부피의 변화를 도시한다.
도 20a 내지 도 20h는 BT474 세포를 이식한 인간 PBMC 인간화 NSG 마우스 모델에서의 항-Her2 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(본원에서 "결합 단백질 1"로 칭해짐)의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다. 도 20a는 마우스 체중에 대한 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질, 표시된 농도의 헤르셉틴(Herceptin), 또는 비히클 대조구의 영향을 도시한다. 도 20b는 개별 마우스에서와 같은, 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질, 헤르셉틴 또는 표시된 대조구의 용량-의존성 항-종양 활성을 도시한다. 도 20c는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구의 투여 후 마우스에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 도 20d는 표시된 농도의 헤르셉틴 또는 PBS 대조구의 투여 후 마우스에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 도 20e는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질, 표시된 농도의 헤르셉틴, 또는 PBS 대조구의 투여 후 마우스에서의 제34일에서의 평균 종양 부피의 막대 그래프를 도시한다. 도 20f는 표시된 농도의 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질, 표시된 농도의 헤르셉틴, 또는 PBS 대조구의 투여 후 마우스에서의 제34일에서의 평균 종양 중량을 도시한다. 도 20g는 연구 마지막에 마우스의 혈액 중 인간 CD45+, CD3+, CD4+, CD8+ 세포를 도시한다. 도 20h는 연구 마지막에 마우스의 비장 중 인간 CD45+, CD3+, CD4+, CD8+ 세포를 도시한다.
도 21a 내지 도 21f는 비-인간 영장류에서의 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5)를 사용한 용량 증가 독성 연구의 결과를 도시한다(용량은 0.1, 0.5, 2.5, 5, 10 ㎍/kg으로부터 100 ㎍/kg까지 증가함). 도 21a는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체의 투여 후 순환 CD4+ T 세포의 T 세포 활성화(CD69+)(선 그래프) 및 증식(막대 그래프)을 도시한다. 도 21b는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체의 투여 후 순환 CD8+ T 세포의 T 세포 활성화(CD69+)(선 그래프) 및 증식(막대 그래프)을 도시한다. 도 21c는 개별 동물에 의한, 각각을 투약한지 6시간 후의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 받은 동물에서의 IL6 방출량을 도시한다. 도 21d는 개별 동물에 의한, 각각을 투약한지 6시간 후의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 받은 동물에서의 IL10 방출량을 도시한다. 도 21e는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 받은 동물에서의 TNFα 방출량을 도시한다. 도 21f는 개별 동물에 의한, 각각을 투약한지 6시간 후의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 받은 동물에서의 IFNγ 방출량을 도시한다.
도 22a 내지 도 22c는 CD38 및 PD-L1이 형질도입된 RPMI-8226 다발성 골수종 세포를 이식한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5)의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다. 예비 연구로서, 이 실험에 의해 결합 단백질 5의 작용 용량 범위가 결정되었다. 도 22a는 표시된 농도의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 대조구의 군에서의 생체 내 종양 성장의 곡선을 도시한다. 도22b는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 표시된 대조구를 투여한 마우스에서의 인간 CD8+ T 세포 침윤 종양을 도시한다. 도 22c는 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 표시된 대조구를 투여한 마우스에서의 인간 CD4+ T 세포 침윤 종양을 도시한다.
도 23a 내지 도 23d는 CD38 및 PD-L1이 형질도입된 RPMI-8226 세포를 이식한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5)의 생체 내 활성을 도시한다. 도 23a는 표시된 농도의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스의 체중의 변화를 도시한다. 도 23b는 표시된 농도의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스에서의 종양 부피의 변화를 도시한다. 도 23c는 제19일에서의 각각의 군에서의 종양 부피를 도시한다. 모든 처리된 군에서의 종양 부피는 뚜렷한 감소를 나타냈는데, 이는 PBS 대조군과는 통계학적으로 차이가 있다. 도 23d는 표시된 농도의 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 또는 PBS 대조구를 첫 번째로 투약한지 4시간 후 마우스에서의 염증성 사이토카인 IFN-g, TNF, 및 IL-2의 혈청중 농도를 도시한다.
도 24 및 도 25는 CD69+ T 세포의 백분율의 증가를 결정함으로써 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5; 삼각형), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(정사각형), 또는 항-CD28 IgG4 항체(원)의 투여에 의한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 T 세포의 생체 내 활성화를 도시한다. 도 24는 CD4+ T 세포의 생체 내 활성화를 도시한다. 도 25는 CD8+ T 세포의 생체 내 활성화를 도시한다.
도 26a 내지 도 26c는 염증성 사이토카인의 혈청중 수준을 결정함으로써 항-CD38 x CD28 x CD3 IgG4 3특이성 항체(결합 단백질 5; 삼각형), 항-CD28 x CD3 IgG4 2특이성 항체(정사각형), 또는 항-CD28 IgG4 항체(원)의 투여에 의한 CD34+ 제대혈 세포 인간화 NSG 마우스 모델에서의 T 세포의 생체 내 활성화를 도시한다. 도 26a는 IL-2의 혈청중 수준을 도시한다. 도 26b는 TNF의 혈청중 수준을 도시한다. 도 26c는 IFN-γ의 혈청중 수준을 도시한다.
도 27a 및 도 27b는 크기 배제 크로마토그래피에 의한 표시된 단백질의 정제를 도시한다. 도 27a는 크기 배제 크로마토그래피에 의한 결합 단백질 9 내지 15의 정제를 도시한다. 도 27b는 크기 배제 크로마토그래피에 의한 결합 단백질 16 내지 19의 정제를 도시한다.
도 28a는 선택적 결합 단백질 특징부(예를 들어, 카파/람다 경쇄, 놉/홀 돌연변이, 및 H435R/Y436F 돌연변이)의 구성(configuration) 및 정제 계획의 최적화를 위한 실험에서 사용되는 3특이성 결합 단백질을 도시한다.
도 28b는 각각의 테스트된 구성을 도시한다.
도 29는 분석용 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)로부터의 각각의 크로마토그램을 도시하며, 이는 3특이성 결합 단백질이 쌍 형성 오류 종과는 구별되었음을 보여준다.
도 30a 및 도 30b는 단백질 A, 이어서 KappaSelect(GE Healthcare) 정제 단계에 의한, CODV 아암(arm)을 위한 람다 경쇄, Fab 아암을 위한 카파 경쇄, CODV 아암에서의 놉 돌연변이, Fab 아암에서의 홀 돌연변이, 및 Fab 아암에서의 RF 돌연변이를 포함하는 결합 단백질의 성공적인 정제를 도시한다. 쌍 형성 오류 종으로부터의 결합 단백질의 성공적인 정제는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC; 도 30a) 및 SDS-PAGE(도 30b)에 의해 입증되었다.
본 발명은 하나 이상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 결합 단백질을 형성하는 제1 폴리펩티드 쌍은 교차 배향을 갖는 이중 가변 도메인을 보유하고, 결합 단백질을 형성하는 제2 폴리펩티드 쌍은 단일 가변 도메인을 보유한다.
일반 정의
본 발명에 따라 이용되는 바와 같이, 하기 용어는, 달리 지시되지 않는 한, 하기 의미를 갖는 것으로 이해된다. 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수형 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수형 용어는 단수형을 포함할 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "폴리뉴클레오티드"라는 용어는 10개 이상의 뉴클레오티드의 길이의 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산 중합체를 나타낸다. 특정 실시 양태에서, 폴리뉴클레오티드에 포함되는 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드 또는 어느 한 유형의 뉴클레오티드의 변형된 형태일 수 있다. 그러한 변형은 염기 변형체, 예컨대 브로모우리딘, 리보스 변형체, 예컨대 아라비노시드 및 2',3'-디데옥시리보스, 및 뉴클레오티드간 결합 변형체, 예컨대 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포르아닐라데이트 및 포스포로아미데이트를 포함한다. "폴리뉴클레오티드"라는 용어는 구체적으로 단일 가닥 및 이중 가닥 형태의 DNA를 포함한다.
"단리된 폴리뉴클레오티드"는 게놈, cDNA, 또는 합성 기원의 폴리뉴클레오티드 또는 이들의 일부의 조합으로서, 이는 (1) 단리된 폴리뉴클레오티드가 자연에서 발견되는 폴리뉴클레오티드 전부와 또는 이의 일부분과 결부되지 않거나, (2) 자연에서는 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드에 연결되거나, 또는 (3) 자연에서는 더 큰 서열의 일부로서 존재하지 않는다.
"단리된 폴리펩티드"는 (1) 보통 함께 발견될 적어도 일부의 다른 폴리펩티드가 부재하는 것, (2) 동일한 공급원으로부터의, 예를 들어, 동일한 종으로부터의 다른 폴리펩티드가 본질적으로 부재하는 것, (3) 상이한 종들 유래의 세포에 의해 발현되는 것, (4) 적어도 약 50%의 폴리뉴클레오티드, 지질, 탄수화물, 또는 다른 물질 (자연에서는 단리된 폴리펩티드가 이와 결부되어 있음)로부터 분리된 것, (5) 자연에서는 "단리된 폴리펩티드"가 결부되어 있는 폴리펩티드의 부분들과 (공유적 또는 비공유적 상호작용에 의해) 결부되어 있지 않은 것, (6) 자연에서는 단리된 폴리펩티드가 결부되지 않는 폴리펩티드와 (공유적 또는 비공유적 상호작용에 의해) 작동가능하게 결부된 것, 또는 (7) 자연에서 존재하지 않는 것이다. 그러한 단리된 폴리펩티드는 게놈 DNA, cDNA, mRNA 또는 기타 RNA (합성 기원의 것), 또는 이들의 임의의 조합에 의해 코딩될 수 있다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩티드에는 그의 천연 환경에서 발견되는 폴리펩티드 또는 기타 오염물질 (이는 그의 사용 (치료적 사용, 진단적 사용, 예방적 사용, 연구용 또는 다른 것)을 방해함)이 실질적으로 부재한다.
천연 발생 항체는 전형적으로 사량체를 포함한다. 각각의 이러한 사량체는 전형적으로 동일한 두 쌍의 폴리펩티드 사슬로 구성되며, 각 쌍은 하나의 전장 "경쇄" (전형적으로, 분자량이 약 25 kDa임)와 하나의 전장 "중쇄" (전형적으로, 분자량이 약 50 내지 70 kDa임)를 갖는다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "중쇄" 및 "경쇄"라는 용어는 표적 항원에 대한 특이성을 부여하기에 충분한 가변 도메인 서열을 갖는 임의의 면역글로불린 폴리펩티드를 나타낸다. 각각의 경쇄 및 중쇄의 아미노 말단 부분은 전형적으로 약 100 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 도메인을 포함하며, 상기 가변 도메인은 전형적으로 항원 인식에 책임이 있다. 각 사슬의 카르복시 말단 부분은 전형적으로 이펙터 기능에 책임이 있는 불변 도메인을 정한다. 따라서, 천연 발생 항체에서, 전장 중쇄 면역글로불린 폴리펩티드는 하나의 가변 도메인 (VH) 및 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2, 및 CH3)을 포함하며, 여기서, VH 도메인은 폴리펩티드의 아미노 말단에 있고, CH3 도메인은 카르복시 말단에 있으며, 전장 경쇄 면역글로불린 폴리펩티드는 하나의 가변 도메인 (VL) 및 하나의 불변 도메인 (CL)을 포함하고, 여기서, VL 도메인은 폴리펩티드의 아미노 말단에 있으며, CL 도메인은 카르복시 말단에 있다.
인간 경쇄는 전형적으로 카파 및 람다 경쇄로 분류되며, 인간 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되고, 항체의 이소타입을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 정의한다. IgG는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아닌 몇몇 하위클래스(subclass)를 갖는다. IgM은 IgM1 및 IgM2를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아닌 하위클래스를 갖는다. 이와 유사하게, IgA는 IgA1 및 IgA2를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아닌 하위클래스로 세분된다. 전장 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 도메인 및 불변 도메인은 전형적으로 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되며, 이때 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Fundamental Immunology (Paul, W., ed., Raven Press, 2nd ed., 1989)]을 참조하는데, 이는 그 전체가 모든 목적을 위하여 참고로 포함된다. 각 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역들은 전형적으로 항원 결합 부위를 형성한다. 전형적으로 천연 발생 항체의 가변 도메인은 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 칭해지는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 상대적으로 보존된 프레임워크 영역(framework region; FR)의 동일 일반 구조를 나타낸다. 각 쌍의 두 사슬로부터의 CDR은 전형적으로 프레임워크 영역과 나란히 정렬되며, 이는 특정 에피토프에의 결합을 가능하게 할 수 있다. 아미노 말단으로부터 카르복실 말단으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다는 전형적으로 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4를 포함한다.
"CDR 세트"라는 용어는 항원과 결합할 수 있는 단일 가변 영역에 존재하는 3개의 CDR의 군을 나타낸다. 이러한 CDR들의 정확한 경계부는 상이한 시스템에 따라 상이하게 정의되었다. 카바트(Kabat) (문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) and (1991)])에 의해 기술된 시스템은 항체의 임의의 가변 영역에 적용가능한 명백한 잔기 넘버링(numbering) 시스템을 제공할 뿐만 아니라 3개의 CDR을 정의하는 정확한 잔기 경계부도 제공한다. 이러한 CDR은 카바트 CDR로 칭해질 수 있다. 초티아(Chothia) 및 협력자 (문헌[Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-17]; 문헌[Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-83])는 카바트 CDR 내의 특정한 하위부분(sub-portion)이, 아미노산 서열 수준에서 큰 다양성을 가짐에도 불구하고, 거의 동일한 펩티드 골격 구조(backbone conformation)를 채용함을 발견하였다. 이러한 하위부분들은 L1, L2, 및 L3 또는 H1, H2, 및 H3으로 표기되었으며, 여기서, "L" 및 "H"는 각각 경쇄 영역 및 중쇄 영역을 표기한다. 이러한 영역들은 카바트 CDR과 중첩되는 경계부를 갖는 초티아 CDR로 칭해질 수 있다. 카바트 CDR과 중첩되는 CDR을 정의하는 다른 경계부는 문헌[Padlan, 1995, FASEBJ. 9: 133-39]; 문헌[MacCallum, 1996, J. Mol. Biol. 262(5): 732-45]; 및 문헌[Lefranc, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27:55-77]에서 기술되었다. 또 다른 CDR 경계부 정의는 본원에서의 시스템들 중 하나를 엄격히 따르지 않을 수도 있지만, 그럼에도 불구하고, 특정 잔기 또는 잔기 군 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합에 유의하게 영향을 주지 않는다는 실험적인 발견 또는 예측을 고려하면 카바트 CDR이 짧아지거나 길어질 수 있기는 하지만 카바트 CDR과 중첩될 것이다. 본원에서 사용되는 방법에서는 이러한 시스템들 중 임의의 것에 따라 정의되는 CDR을 이용될 수 있지만, 특정 실시 양태에서 카바트 또는 초티아 정의된 CDR이 사용된다. 아미노산 서열을 이용한 예측 CDR의 확인은 본 기술 분야에서, 예컨대 문헌[Martin, A.C. "Protein sequence and structure analysis of antibody variable domains,"In Antibody Engineering, Vol. 2. Kontermann R., eds. Springer-Verlag, Berlin, p. 33-51 (2010)]에 잘 알려져 있다. 또한 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열은 다른 통상적인 방법에 의해, 예를 들어 다른 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 공지된 아미노산 서열과의 비교에 의해 CDR의 서열을 확인하여 서열 초가변 영역을 결정하도록 점검될 수 있다. 넘버링된 서열들은 육안으로, 또는 정렬 프로그램, 예컨대 CLUSTAL 스위트(suite)의 프로그램들 중 하나의 이용에 의해 정렬될 수 있으며, 이는 문헌[Thompson, 1994, Nucleic Acids Res. 22:4673-80]에 기술된 바와 같다. 통상적으로 분자 모델을 이용하여 프레임워크 및 CDR 영역을 정확하게 묘사하고 그에 따라 서열-기반 배치를 보정한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "Fc"라는 용어는 단량체 형태이든지 다량체 형태이든지 간에, 항체의 분해로부터 생기거나 다른 수단에 의해 생성된 비-항원-결합 단편의 서열을 포함하는 분자를 나타내며, 이는 힌지 영역을 함유할 수 있다. 천연 Fc의 본래의 면역글로불린 공급원은 바람직하게는 인간 기원이며, 임의의 면역글로불린일 수 있지만 IgG1 및 IgG2가 바람직하다. Fc 분자는 공유적(즉, 디술피드 결합) 및 비-공유적 회합에 의해 이량체 또는 다량체 형태로 연결될 수 있는 단량체형 폴리펩티드로 이루어진다. 천연 Fc 분자의 단량체 서브유닛 사이의 분자간 디술피드 결합의 수는 클래스 (예를 들어, IgG, IgA, 및 IgE) 또는 하위클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgA1, 및 IgGA2)에 따라 1 내지 4개의 범위이다. Fc의 한 예로는 IgG의 파파인 분해로부터 생성되는 디술피드-결합된 이량체가 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "천연 Fc"는 단량체, 이량체 및 다량체 형태의 총칭이다.
F(ab) 단편은 전형적으로 하나의 경쇄와, 하나의 중쇄의 VH 및 CH1 도메인을 포함하며, 여기서, F(ab) 단편의 VH-CH1 중쇄 부분은 또 다른 중쇄 폴리펩티드와 디술피드 결합을 형성할 수 없다. 본원에서 사용되는 바와 같이, F(ab) 단편은 또한 아미노산 링커에 의해 분리된 2개의 가변 도메인을 포함하는 하나의 경쇄와, 아미노산 링커에 의해 분리된 2개의 가변 도메인 및 CH1 도메인을 포함하는 하나의 중쇄를 포함할 수 있다.
F(ab') 단편은 전형적으로 하나의 경쇄와, (CH1 도메인과 CH2 도메인 사이에) 더 많은 불변 영역을 포함하는 하나의 중쇄의 일부분을 포함하여서, 사슬간 디술피드 결합이 2개의 중쇄 사이에서 형성되어 F(ab')2 분자를 형성할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "결합 단백질"이라는 용어는 적어도 하나의 표적 항원에 특이적으로 결합하며, 적어도 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 비-천연 발생 (또는 재조합 또는 엔지니어링된(engineered)) 분자를 나타내고, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 가지며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 가지며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3- CH1로 표시되는 구조를 가지며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3- CL로 표시되는 구조를 가지며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
"재조합" 분자는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 것이다.
본 발명의 일 실시 양태는 1 내지 3개의 표적 항원에 대한 생물학적 및 면역학적 특이성을 갖는 결합 단백질을 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시 양태는 그러한 결합 단백질을 형성하는 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시 양태는 그러한 결합 단백질을 형성하는 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시 양태는 그러한 결합 단백질을 발현하는 숙주 세포 (즉, 그러한 결합 단백질을 형성하는 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 핵산 분자 또는 벡터를 포함함)를 제공한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "스와프 능력(swapability)"이라는 용어는 결합 단백질 포맷 내에서의 가변 도메인들의 호환성(interchangeability)을 나타내며, 이때 폴딩 및 궁극적 결합 친화도는 유지된다. "전 스와프 능력(full swapability)"은 화학식 I의 폴리펩티드 사슬 또는 화학식 II의 폴리펩티드 사슬에서, 결합 친화도의 유지에 의해 입증되는 바와 같이 결합 단백질의 전 기능성(full functionality)을 유지하면서, VH1 및 VH2 도메인 둘 다의 순서, 및 그에 따라 VL1 및 VL2 도메인의 순서를 스와프하는 (즉, 상기 순서가 반대가 되도록) 능력을 나타낸다. 더욱이, VH 및 VL이라는 표기는 최종 포맷의 특정 단백질 사슬 상에서의 상기 도메인의 위치만을 나타낸다는 것이 주지되어야 한다. 예를 들어, VH1 및 VH2는 모 항체에서의 VL1 및 VL2 도메인으로부터 유래되고 결합 단백질에서의 VH1 및 VH2 위치에 두어질 수 있다. 이와 마찬가지로, VL1 및 VL2는 모 항체에서의 VH1 및 VH2 도메인으로부터 유래되고 결합 단백질에서의 VH1 및 VH2 위치에 두어질 수 있다. 따라서, VH 및 VL이라는 표기는 현재의 위치를 나타내며, 모 항체에서의 원래의 위치를 나타내는 것이 아니다. 따라서 VH 및 VL 도메인은 "스와프가능하다".
본원에서 사용되는 바와 같이, "항원" 또는 "표적 항원" 또는 "항원 표적"이라는 용어는 결합 단백질이 결합할 수 있고, 추가로, 동물에서 사용되어 그 항원의 에피토프에 결합할 수 있는 항체를 생성할 수 있는 분자 또는 분자의 일부분을 나타낸다. 표적 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 결합 단백질에 의해 인식되는 각각의 표적 항원과 관련하여, 결합 단백질은 표적 항원을 인식하는 온전한 항체와 경쟁할 수 있다.
용어 "Her2"는 인간 표피 성장 인자 수용체 2(이는 표피 성장 인자 수용체 패밀리의 구성원임)를 나타낸다.
"CD3"은 분화 인자 클러스터 3(cluster of differentiation factor 3) 폴리펩티드이며, 전형적으로 T 세포 수용체(TCR) 복합체의 일부인 T-세포 표면 단백질이다.
"CD28"은 분화 클러스터 28(cluster of differentiation) 28 폴리펩티드이며, T-세포의 활성화 및 생존에 대한 공동자극 신호(co-stimulatory signal)를 제공하는 T-세포 표면 단백질이다.
"CD19"는 분화 클러스터 19 폴리펩티드이며 B-세포 상에 위치한다.
"CD20"은 분화 클러스터 20 폴리펩티드이며, B-세포의 표면 상에서 발현되는 활성화-글리코실화 인단백질이다.
"CD38"은 분화 클러스터 38 폴리펩티드이며, 많은 면역 세포의 표면 상에서 발견되는 당단백질이다.
"LAMP1"은 리소좀-결부된 막 단백질 1이다.
"IL-4"는 인터루킨 4이며, 나이브() 헬퍼 T 세포의 분화를 유도하는 사이토카인이다.
"IL-13"은 인터루킨 13이며, T-세포와 같은 많은 세포 타입에 의해 분비되는 사이토카인이다.
"TNFa"는 종양 괴사 인자 알파이며, 전신 염증에 연루된 사이토카인이다.
"T-세포 관여항체"라는 용어는 종양 표적 단백질에 대하여 유도된 결합 단백질뿐만 아니라 숙주의 면역계, 더 구체적으로 T 세포의 세포독성 활성에 대하여 유도된 결합 단백질도 나타낸다.
"1특이성 결합 단백질"이라는 용어는 하나의 항원 표적에 특이적으로 결합하는 결합 단백질을 나타낸다.
"1가 결합 단백질"이라는 용어는 하나의 항원 결합 부위를 갖는 결합 단백질을 나타낸다.
"2특이성 결합 단백질"이라는 용어는 2개의 상이한 항원 표적에 특이적으로 결합하는 결합 단백질을 나타낸다.
"2가 결합 단백질"이라는 용어는 2개의 결합 부위를 갖는 결합 단백질을 나타낸다.
"3특이성 결합 단백질"이라는 용어는 3개의 상이한 항원 표적에 특이적으로 결합하는 결합 단백질을 나타낸다.
"3가 결합 단백질"이라는 용어는 3개의 결합 부위를 갖는 결합 단백질을 나타낸다. 특정 실시 양태에서, 3가 결합 단백질은 하나의 항원 표적에 결합할 수 있다. 다른 실시 양태에서, 3가 결합 단백질은 2개의 항원 표적에 결합할 수 있다. 다른 실시 양태에서, 3가 결합 단백질은 3개의 항원 표적에 결합할 수 있다.
"단리된" 결합 단백질은 그의 천연 환경의 성분으로부터 확인되고 분리된 및/또는 회수된 것이다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 결합 단백질의 진단적 또는 치료적 사용을 간섭하는 물질이며, 이는 효소, 호르몬, 및 기타 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은(1) 로우리법(Lowry method)에 의해 결정할 경우 95 중량% 초과의, 그리고 가장 바람직하게는 99 중량% 초과의 항체까지, (2) 회전 컵 서열 분석기(spinning cup sequenator)의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시 블루(Coomassie blue), 또는 바람직하게는 은 염색제를 이용한 환원 또는 비환원 조건 하에서의 SDS-PAGE에 의한 균질성까지 정제될 것이다. 결합 단백질의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 단리된 결합 단백질은 재조합 세포 내에서의 원위치에서의 결합 단백질을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "실질적으로 순수한" 또는 "실질적으로 정제된"이라는 용어는 존재하는 주된 종인 종 또는 화합물을 나타낸다 (즉, 몰 기준으로, 이것은 조성물 중의 임의의 다른 개별 종보다 더 풍부하다).일부 실시 양태에서, 실질적으로 정제된 분획물은 당해 종이 존재하는 모든 거대분자 종의 적어도 약 50% (몰 기준으로)로 포함된 조성물이다. 다른 실시 양태에서, 실질적으로 순수한 조성물은 조성물에 존재하는 모든 마크로몰(macromolar) 종의 약 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 초과를 포함할 것이다. 또 다른 실시 양태에서, 종은 필수적인 균질성까지 정제되며 (오염 종은 통상적인 검출 방법에 의해서는 조성물에서 검출될 수 없음), 여기서, 조성물은 본질적으로 단일 거대분자 종으로 이루어진다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "중화" 결합 단백질은 이것이 결합하는 표적 항원의 이펙터 기능을 차단할 수 있거나 상당히 감소시킬 수 있는 분자를 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "상당히 감소시키다"는 표적 항원의 이펙터 기능의 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더 바람직하게는 적어도 약 75%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 85%, 가장 바람직하게는 적어도 약 90% 감소를 의미한다.
"에피토프"라는 용어는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 결정자, 바람직하게는 폴리펩티드 결정자를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 에피토프 결정자는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기, 또는 술포닐기와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그루핑(grouping)을 포함하며, 특정 실시 양태에서, 특이적인 3-차원 구조 특성, 및/또는 특이적인 전하 특성을 가질 수 있다. 에피토프는 항체 또는 결합 단백질이 결합하는 항원의 영역이다. 특정 실시 양태에서, 결합 단백질은, 단백질들 및/또는 거대분자들의 복합 혼합물 중 그의 표적 항원을 우선적으로 인식할 때 항원에 특이적으로 결합한다고 한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 평형 해리 상수가 ≤ 10-8 M일 때, 더 바람직하게는 평형 해리 상수가 ≤ 10-9 M일 때, 그리고 가장 바람직하게는 상기 해리 상수가 ≤ 10-10 M일 때 항원에 특이적으로 결합한다고 한다.
결합 단백질의 해리 상수 (KD)는, 예를 들어 표면 플라스몬 공명에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로, 표면 플라스몬 공명 분석에서는 비아코어 시스템(Pharmacia Biosensor; 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)을 이용하여 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 리간드(바이오센서 매트릭스 상의 표적 항원)와 피분석물(용액 중 결합 단백질) 사이의 실시간 결합 상호작용이 측정된다. 표면 플라스몬 분석은 또한 피분석물(바이오센서 매트릭스 상의 결합 단백질)의 고정 및 리간드(표적 항원)의 제시에 의해 수행될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "KD"라는 용어는 특정 결합 단백질과 표적 항원 사이의 상호작용의 해리 상수를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "특이적으로 결합하다"라는 용어는 적어도 약 1 x 10-6 M, 1 x 10-7 M, 1 x 10-8 M, 1 x 10-9 M, 1 x 10-10 M, 1 x 10-11 M, 1 x 10-12 M의, 또는 이보다 더 큰 Kd로 에피토프 함유 항원에 결합하고/하거나, 비특이적 항원에 대한 친화성보다 적어도 2배 더 큰 친화성으로 에피토프에 결합하는 결합 단백질 또는 이의 항원-결합 단편의 능력을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "링커"라는 용어는 교차 이중 가변 영역 면역글로불린으로 폴딩되기에 충분한 이동성을 경쇄 및 중쇄의 도메인에 제공하도록 면역글로불린 도메인들 사이에 삽입되는 하나 이상의 아미노산 잔기를 나타낸다. 링커는 서열 수준에서 각각 가변 도메인들 사이 또는 가변 도메인과 불변 도메인 사이의 전환부(transition)에 삽입된다. 면역글로불린 도메인의 적절한 크기가 잘 이해되어 있기 때문에, 도메인들 사이의 전환부가 확인될 수 있다. 도메인 전환부의 정확한 위치는, 실험 데이터에 의해 입증되는 바와 같이 또는 2차 구조 예측 또는 모델링 기술에 의해 추정될 수 있는 바와 같이, 베타-시트(sheet) 또는 알파-나선과 같은 2차 구조의 요소를 형성하지 않는 펩티드 스트레치(stretch)의 위치화에 의해 결정될 수 있다. 본원에 기술된 링커는 VL2의 C-말단과 VL1 도메인의 N-말단 사이의 경쇄에 위치하는 L1; 및 VL1의 C-말단과 CL 도메인의 N-말단 사이의 경쇄에 위치하는 L2로 칭해진다. 중쇄 링커는 VH1의 C-말단과 VH2 도메인의 N-말단 사이에 위치하는 L3; 및 VH2의 C-말단과 CH1 도메인의 N-말단 사이에 위치하는 L4로 공지되어 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "벡터"라는 용어는 코딩 정보를 숙주 세포에게 전하는 데 사용되는 임의의 분자 (예를 들어, 핵산, 플라스미드, 또는 바이러스)를 나타낸다. "벡터"라는 용어는 이것이 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 포함한다. 하나의 유형의 벡터로는 "플라스미드"가 있으며, 이는 추가의 DNA 절편이 삽입될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 분자를 나타낸다. 또 다른 유형의 벡터로는 바이러스 벡터가 있으며, 여기서, 추가의 DNA 절편이 바이러스 게놈 내로 삽입될 수 있다. 특정 벡터(예를 들어, 박테리아 복제 원점을 가지는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터)는 그들이 도입되는 숙주 세포에서 자율 복제가 가능하다. 기타 벡터 (예를 들어, 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포 내로의 도입시에 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있으며, 그에 의해, 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정 벡터는 그들이 작동되게 연결된 유전자의 발현을 유도할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" (또는 간단히 "발현 벡터")로 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태로 존재한다. "플라스미드" 및 "벡터"라는 용어는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있으며, 그 이유는 플라스미드가 가장 일반적으로 사용되는 형태의 벡터이기 때문이다. 그러나, 본 발명은, 동등한 기능을 수행하는 바이러스 벡터 (예를 들어, 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-부속 바이러스)와 같은 다른 형태의 발현 벡터들도 포함하는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "재조합 숙주 세포" (또는 "숙주 세포")라는 어구는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 나타낸다. 재조합 숙주 세포 또는 숙주 세포는 특정한 해당 세포뿐만 아니라 그러한 세포의 자손도 나타내고자 한다. 특정 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인하여 후속 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 사실상 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 그러한 세포는 여전히 본원에서 사용되는 용어 "숙주 세포"의 범주 내에 포함된다. 박테리아, 효모, 바큘로바이러스 및 포유류 발현 시스템 (이외에도, 파지 디스플레이(phage display) 발현 시스템)을 포함하는 매우 다양한 숙주 세포 발현 시스템을 사용하여 결합 단백질을 발현시킬 수 있다. 적합한 박테리아 발현 벡터의 예로는 pUC19가 있다. 결합 단백질을 재조합적으로 발현시키기 위하여, 숙주 세포는 결합 단백질의 폴리펩티드 사슬이 숙주 세포 내에서 발현되도록, 그리고 바람직하게는 숙주 세포가 배양되는 배지 내로 분비되도록, 상기 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 DNA 단편을 갖는 하나 이상의 재조합 발현 벡터로 형질전환되거나 트랜스펙션(transfection)되는데, 상기 배지로부터 결합 단백질이 회수될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "형질전환"이라는 용어는 세포의 유전적 특징의 변화를 나타내며, 세포는 새로운 DNA를 함유하도록 변형되었을 때 형질전환된 것이다. 예를 들어, 세포는 그의 천연 상태로부터 유전적으로 변형되었을 경우 형질전환된 것이다. 형질전환 후, 형질전환 DNA는 세포의 염색체 내로의 물리적 통합에 의해 세포의 DNA와 재조합될 수 있거나, 또는 복제되지 않고서 에피솜 요소로서 일시적으로 유지될 수 있거나, 또는 독립적으로 플라스미드로서 복제될 수 있다. 세포는 DNA가 세포 분열에 의해 복제될 때 안정하게 형질전환된 것으로 간주된다. "트랜스펙션"이라는 용어는 세포에 의한 외래 또는 외인성 DNA의 흡수를 나타내며, 외인성 DNA가 세포막 내부로 도입된 경우에 세포는 "트랜스펙션"된 것이다. 다수의 트랜스펙션 기술이 본 기술 분야에 잘 알려져 있다. 그러한 기술은 하나 이상의 외인성 DNA 분자를 적합한 숙주 내로 도입하는 데 사용될 수 있다.
본원에서 사용되고 대상에게 적용되는 바와 같이, "천연 발생"이라는 용어는 그 대상이 자연에서 발견될 수 있고 사람에 의해 조작되지 않은 사실을 나타낸다. 예를 들어, 자연에서 공급원으로부터 단리될 수 있고 사람에 의해 의도적으로 변형된 것이 아닌 유기체 (바이러스를 포함함)에 존재하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 천연 발생적인 것이다. 이와 유사하게, 본원에서 사용되는 바와 같이, "천연 비-발생"은 자연에서 발견되지 않거나 또는 사람에 의해 구조적으로 변형되거나 합성된 대상을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 20가지의 통상적인 아미노산 및 그의 약어는 통상적인 용법을 따른다. 20가지의 통상적인 아미노산의 입체이성질체 (예를 들어, d-아미노산); 비천연 아미노산 및 유사체, 예컨대 a-, a-2치환 아미노산, N-알킬 아미노산, 락트산, 및 다른 비통상적인 아미노산이 또한 결합 단백질의 폴리펩티드 사슬에 적합한 성분일 수 있다. 비통상적인 아미노산의 예는 다음을 포함한다:4-히드록시프롤린, g-카르복시글루타메이트, e-N,N,N-트리메틸라이신, e-N-아세틸라이신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-히드록시라이신, s-N-메틸아르기닌, 및 기타 유사 아미노산 및 이미노산 (예를 들어, 4-히드록시프롤린). 본원에서 사용되는 폴리펩티드 표기법에서, 표준 용법 및 관례에 따르면 왼손 방향은 아미노 말단 방향이며, 오른손 방향은 카르복실 말단 방향이다.
천연 발생 잔기는 통상적인 측쇄 특성에 따라 다음 부류로 분류될 수 있다:
(1) 소수성: Met, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Trp, Tyr, Pro;
(2) 극성 친수성: Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Lys, Ser, Thr;
(3) 지방족: Ala, Gly, Ile, Leu, Val, Pro;
(4) 지방족 소수성: Ala, Ile, Leu, Val, Pro;
(5) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(6) 산성: Asp, Glu;
(7) 염기성: His, Lys, Arg;
(8) 사슬 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;
(9) 방향족: His, Trp, Tyr, Phe; 및
(10) 방향족 소수성: Phe, Trp, Tyr.
보존적 아미노산 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 동일 부류의 또 다른 구성원으로 대체하는 것을 포함할 수 있다. 비보존적 치환은 이러한 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류로부터의 구성원으로 대체하는 것을 포함할 수 있다.
당업자라면 잘 알려진 기술을 이용하여 결합 단백질의 폴리펩티드 사슬의 적합한 변이체를 결정할 수 있을 것이다. 예를 들어, 당업자라면 활성에 중요할 것으로는 생각되지 않는 영역의 표적화에 의해 활성을 파괴하지 않고서 변화될 수 있는 폴리펩티드 사슬의 적합한 영역을 확인할 수 있다. 대안적으로, 당업자라면 유사 폴리펩티드들 사이에서 보존된 분자의 잔기 및 부분을 확인할 수 있다. 게다가, 심지어 생물학적 활성에 또는 구조에 중요할 수 있는 영역도 생물학적 활성을 파괴하지 않고서 또는 폴리펩티드 구조에 악영향을 주지 않고서 보존적 아미노산 치환이 가해질 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "환자"라는 용어는 인간 및 동물 대상체를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "치료" 또는 "치료하다"라는 용어는 치료적 치료 및 예방적 또는 방지적 조치 둘 다를 나타낸다. 치료를 필요로 하는 것은 장애를 갖고 있는 것과, 장애를 갖기 쉬운 것 또는 장애가 예방되어야 하는 것을 포함한다. 특별한 실시 양태에서, 결합 단백질은 암에 걸린 인간 또는 암에 걸리기 쉬운 인간의 치료, 또는 인간 대상체에서의 암의 개선에 사용될 수 있다. 결합 단백질은 또한 인간 환자에서의 암의 예방에 사용될 수 있다. 특별한 실시 양태에서, 암은 다발성 골수종, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 림프종, 유방암, 예컨대 Her2+ 유방암, 배중심 B-세포 림프종 또는 B-세포 급성 림프모구성 백혈병이다. 다른 실시 양태에서, 결합 단백질은 염증성 장애에 걸린 인간, 또는 염증성 장애에 걸리기 쉬운 인간의 치료, 또는 인간 대상체에서의 염증성 장애의 개선에 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "제약 조성물" 또는 "치료적 조성물"은 환자에게 적절하게 투여되는 경우, 원하는 치료 효과를 유도할 수 있는 화합물 또는 조성물을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용가능한 담체" 또는 "생리학적으로 허용가능한 담체"라는 용어는 결합 단백질의 전달을 성취하거나 향상시키기에 적합한 하나 이상의 제형화 물질을 나타낸다.
하나 이상의 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물과 관련하여 사용될 때 "유효량" 및 "치료적 유효량"이라는 용어는 원하는 치료 결과를 생성하기에 충분한 양 또는 투여량을 나타낸다. 더 구체적으로, 치료적 유효량은 치료되는 병태와 연관된 임상적으로 정의된 병리학적인 과정들 중 하나 이상을 일부 시간 기간 동안 억제하기에 충분한 결합 단백질의 양이다. 유효량은 사용되고 있는 특정 결합 단백질에 따라 달라질 수 있으며, 또한 치료되는 환자와 관련된 다양한 요인 및 상태와 장애의 중증도에 달려 있다. 예를 들어, 결합 단백질을 생체 내에서 투여하려고 할 경우, 환자의 연령, 중량 및 건강과 같은 요인과, 전임상 동물 연구에서 얻어진 용량 반응 곡선 및 독성 데이터가 고려되는 요인에 속한다. 주어진 제약 조성물의 유효량 또는 치료적 용량의 결정은 충분히 당업자의 능력 내에 있다.
본 발명의 일 실시 양태는 제약상 허용가능한 담체 및 치료적 유효량의 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
3특이성 및/또는 3가 결합 단백질
일 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의(예를 들어, 3가지의) 상이한 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질이며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
일 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의(예를 들어, 3가지의) 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질이며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
일 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의(예를 들어, 3가지의) 상이한 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질이며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3- CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
일 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의(예를 들어, 3가지의) 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질이며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3- CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬 및 제2 폴리펩티드 사슬은 2개의 특유한 항원 결합 부위를 형성하는 교차 배향을 갖는다. 일부 실시 양태에서, VH1 및 VL1은 결합 쌍을 형성하며, 제1 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, VH2 및 VL2는 결합 쌍을 형성하며, 제2 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, 제3 폴리펩티드 및 제4 폴리펩티드는 제3 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, VH3 및 VL3은 결합 쌍을 형성하며, 제3 항원 결합 부위를 형성한다.
일 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의(예를 들어, 3가지의) 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질이며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VD1-L1-VD2-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VD3-L3-VD4-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3- CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VD1은 제1 면역글로불린의 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인이며;
VD2는 제2 면역글로불린의 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인이며;
VD3은 제3 면역글로불린의 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인이며;
VD4는 제4 면역글로불린의 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인이며;
VH3은 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VL3은 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 1가지, 2가지, 또는 3가지의 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3개의 항원 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3개의 상이한 항원 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 항원 결합 부위들 중 2개가 동일 항원 표적에 결합한다. 상기 실시 양태에서, 결합 단백질은 동일 결합 도메인(2개), 또는 상이한 결합 도메인들을 포함하고/하거나 동일 항원 표적 상의 상이한 항원들 또는 에피토프들에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 양태에서, 항원 결합 부위들 중 3개가 동일 항원 표적에 결합한다. 상기 실시 양태에서, 결합 단백질은 동일 결합 도메인(3개), 또는 상이한 결합 도메인들을 포함하고/하거나 동일 항원 표적 상의 상이한 항원들 또는 에피토프들에 특이적으로 결합한다.
일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 2, 4, 10, 14, 18, 22 또는 115 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이며; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 1, 3, 9, 13, 17, 21 또는 114 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이다. 다른 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 86, 88 또는 94 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이며; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87 또는 93 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열로부터 유래되는 가변 도메인이다. 다른 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함한다. 다른 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 86, 88 또는 94 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87 또는 93 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 중쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 169, 171, 및 173 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하고/하거나; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 168, 170, 및 172 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 141 내지 147, 178, 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하고/하거나; VH1, VH2 / 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 129 내지 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 및 167 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하고/하거나; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 및 166 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125, 138 내지 140, 및 149 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하고/하거나; VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122, 및 126 내지 128 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 표 2 내지 표 5에 예시된 경쇄 상보성 결정 영역 및/또는 가변 도메인 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 화학식 I의 폴리펩티드 사슬 또는 화학식 II의 폴리펩티드 사슬에서 VH1 및 VH2 도메인의 순서, 및 그에 따라 VL1 및 VL2 도메인의 순서는 스와프된다(즉, 상기 순서가 반대가 되도록).
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 1의 아미노산 서열 또는 서열 번호 1의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 1의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 2의 아미노산 서열 또는 서열 번호 2의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 1의 아미노산 서열 또는 서열 번호 1의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 1의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 2의 아미노산 서열 또는 서열 번호 2의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 13의 아미노산 서열 또는 서열 번호 13의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 13의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 14의 아미노산 서열 또는 서열 번호 14의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 14의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 13의 아미노산 서열 또는 서열 번호 13의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 13의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 14의 아미노산 서열 또는 서열 번호 14의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 14의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 17의 아미노산 서열 또는 서열 번호 17의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 17의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 18의 아미노산 서열 또는 서열 번호 18의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 18의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 17의 아미노산 서열 또는 서열 번호 17의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 17의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 18의 아미노산 서열 또는 서열 번호 18의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 18의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 21의 아미노산 서열 또는 서열 번호 21의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 21의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 22의 아미노산 서열 또는 서열 번호 22의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 22의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 21의 아미노산 서열 또는 서열 번호 21의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 21의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 22의 아미노산 서열 또는 서열 번호 22의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 22의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 61의 아미노산 서열 또는 서열 번호 61의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 61의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 61의 아미노산 서열 또는 서열 번호 61의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 61의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 71의 아미노산 서열 또는 서열 번호 71의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 71의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 76의 아미노산 서열 또는 서열 번호 76의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 76의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 75의 아미노산 서열 또는 서열 번호 75의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 75의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 82의 아미노산 서열 또는 서열 번호 82의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 82의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 81의 아미노산 서열 또는 서열 번호 81의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 81의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 88의 아미노산 서열 또는 서열 번호 88의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 88의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 87의 아미노산 서열 또는 서열 번호 87의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 87의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 94의 아미노산 서열 또는 서열 번호 94의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 94의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 93의 아미노산 서열 또는 서열 번호 93의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 93의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 114의 아미노산 서열 또는 서열 번호 114의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 114의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 115의 아미노산 서열 또는 서열 번호 115의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 115의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 114의 아미노산 서열 또는 서열 번호 114의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 114의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 115의 아미노산 서열 또는 서열 번호 115의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 115의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
다른 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의(예를 들어, 3가지의) 상이한 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질이며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 가지며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3 (홀)으로 표시되는 구조를 가지며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3 (놉)으로 표시되는 구조를 가지며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 가지며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
다른 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의(예를 들어, 3가지의) 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질이며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 가지며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3 (홀)으로 표시되는 구조를 가지며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3 (놉)으로 표시되는 구조를 가지며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 가지며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성한다.
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬 및 제2 폴리펩티드 사슬은 2개의 특유한 항원 결합 부위를 형성하는 교차 배향을 갖는다. 일부 실시 양태에서, VH1 및 VL1은 결합 쌍을 형성하며, 제1 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, VH2 및 VL2는 결합 쌍을 형성하며, 제2 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, 제3 폴리펩티드 및 제4 폴리펩티드는 제3 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, VH3 및 VL3은 결합 쌍을 형성하며, 제3 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬은 하나 이상의 변형을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질의 제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬은 상이하며, 이는 예를 들어 상이한 CH1, CH2, 및/또는 CH3 도메인(들)(예컨대 본원에 기술된 변형을 포함하는 것)을 갖는다. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬 및 제4 폴리펩티드 사슬은 하나 이상의 변형을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질의 제1 폴리펩티드 사슬 및 제4 폴리펩티드 사슬은 상이하며, 이는 예를 들어 상이한 CL 도메인들(예컨대 본원에 기술된 변형을 포함하는 것, 및/또는 람다 대 카파 CL 도메인)을 갖는다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 150의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 150과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 151의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 151과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 152의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 152와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 153의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 153과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 154의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 154와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 155의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 155와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 156의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 156과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 157의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 157과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 158의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 158과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 159의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 159와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 160의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 160과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 161의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 161과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 162의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 162와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 163의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 163과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 164의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 164와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 165의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 165와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 166의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 166과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 167의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 167과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 168의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 168과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 169의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 169와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 170의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 170과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 171의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 171과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 172의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 172와 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열 번호 173의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는, 서열 번호 173과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 1가지, 2가지 또는 3가지의 항원 표적에 1 μM 이하, 500 nM 이하, 100 nM 이하, 50 nM 이하, 10 nM 이하, 5 nM 이하, 또는 1 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 결합한다. KD의 결정을 위한 예시적인 분석법이 본 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, KD는 실시예 1에 설명된 기술(예를 들어, SPR 또는 ELISA)을 이용하여 0℃ 내지 37℃에서, 예를 들어 0℃, 4℃, 25℃, 또는 37℃에서 결합 반응 속도(binding kinetics)를 측정함으로써 결정된다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 시험관 내에서 CD4 및/또는 CD8 T 세포를 활성화시키고/시키거나 결합 단백질의 하나 이상의 결합 도메인의 하나 이상의 항원 표적을 발현하는 세포의 항체-매개된 시험관 내 세포 사멸을 유도한다. 예시적인 시험관 내 세포 사멸 및 T 세포 활성화에 대한 분석법은 본 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 시험관 내 세포 사멸 및/또는 T 세포 활성화는 실시예 1에 설명된 기술을 이용하여 분석된다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의 사이토카인에 특이적으로 결합하고/하거나 하나 이상의 사이토카인에 의해 매개되는 시그널링을 차단한다. 예시적인 사이토카인 방출에 대한 분석법은 본 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 사이토카인 방출은 실시예 1에 설명된 기술을 이용하여 분석된다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 T 세포 상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, T 세포 상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 T 세포 상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, T 세포 상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 T 세포 상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, T 세포 상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 일부의 일부 실시 양태에서, 제1 및 제2 항원 결합 부위는 각각 예를 들어 CD3 및 CD28로부터 선택되는 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부의 일부 실시 양태에서, 제1 및 제2 항원 결합 부위는 각각 예를 들어 CD28 및 CD3으로부터 선택되는 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 양태에서, 제3 항원 결합 부위는 CD19, CD20, CD38, Her2, 또는 LAMP1에 특이적으로 결합한다. 그러한 표적 및 표적 단백질의 추가의 예가 아래에 제공되어 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CD28에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 항원 표적 또는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 그러한 항원 표적 또는 표적 단백질의 추가의 예가 아래에 제공되어 있다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 인간 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, 인간 CD28에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CD28에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 인간 CD28에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, 인간 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제3 항원 결합 부위는 CD19, CD20, CD38, Her2, 또는 LAMP1에 특이적으로 결합한다. 그러한 종양 항원 표적 또는 종양 표적 단백질의 추가의 예가 아래에 제공되어 있다.
일부 실시 양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것에서 사용하기에 적합한, CD3에 특이적으로 결합하는 항체의 추가의 VH, VL, 및/또는 CDR 서열은 본원에 그 전체가 참고로 포함된 국제 공개 제2016/116626호에서 발견될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 표 2 내지 표 5에 예시된 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인, 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 (i) 각각 서열 번호 34, 35 및 36의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 52, 53 및 54의 3개의 경쇄 CDR; 또는 (ii) 각각 서열 번호 34, 35 및 36의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 149, 53 및 54의 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 사슬의 일부이다. 일부 실시 양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 사슬의 일부이다.
일부 실시 양태에서, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는 서열 번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 표 2 내지 표 5에 예시된 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인, 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 (i) 각각 서열 번호 28, 29 및 30의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 46, 47 및 48의 3개의 경쇄 CDR; 또는 (ii) 각각 서열 번호 31, 32 및 33의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 49, 50 및 51의 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 사슬의 일부이다. 일부 실시 양태에서, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 폴리펩티드 사슬의 CDR과 100% 동일한 CDR을 선택적으로 포함하는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 사슬의 일부이다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 CD38에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위, 또는 CD28에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 CD38에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함하며, 여기서,
·
CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 (i) 각각 서열 번호 34, 35 및 36의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 52, 53 및 54의 3개의 경쇄 CDR; 또는 (ii) 각각 서열 번호 34, 35 및 36의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 149, 53 및 54의 3개의 경쇄 CDR을 포함하고;
·
CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 (i) 각각 서열 번호 28, 29 및 30의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 46, 47 및 48의 3개의 경쇄 CDR; 또는 (ii) 각각 서열 번호 31, 32 및 33의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 49, 50 및 51의 3개의 경쇄 CDR을 포함하며;
·
CD38에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 (i) 각각 서열 번호 40, 41 및 42의 3개의 중쇄 CDR, 및 각각 서열 번호 58, 44 및 59의 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 표 2 내지 표 5에 예시된 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인, 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 표 2 내지 표 5에 예시된 항-Her2, 항-CD19, 항-CD20, 항-CD38, 또는 항-LAMP1 결합 도메인의 6개의 CDR을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 169, 171, 및 173 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하며;
VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 168, 170, 및 172 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 141 내지 147, 178, 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며;
VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 129 내지 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3- CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 및 167 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하며;
VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 및 166 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3- CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125, 138 내지 140, 및 149 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며;
VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122, 및 126 내지 128 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, 및 CD3 또는 CD28 이외의 항원 표적에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 인간 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, 인간 CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, 및 CD3 또는 CD28 이외의 인간 항원 표적에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 (a) CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위(여기서, CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 (i) 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, (ii) 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, (iii) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 또는 (iv) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함함); (b) CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위(여기서, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 (i) 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, (ii) 서열 번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, (iii) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 또는 (iv) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함함); 및 (c) CD3 또는 CD28 이외의 항원 표적에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 4 또는 10의 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드 사슬, 서열 번호 3 또는 9의 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬, 및 CD3 또는 CD28 이외의 항원 표적에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 형성하는 제3 및 제4 폴리펩티드 사슬을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD3 또는 CD28 이외의 항원 표적에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4(VTCN1로도 공지됨), B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2(MCP-1로도 공지됨), CCL3(MIP-1a로도 공지됨), CCL4(MIP-1b로도 공지됨), CCL5(RANTES로도 공지됨), CCL7(MCP-3으로도 공지됨), CCL8(mcp-2로도 공지됨), CCL11(에오탁신으로도 공지됨), CCL15(MIP-1d로도 공지됨), CCL17(TARC로도 공지됨), CCL19(MIP-3b로도 공지됨), CCL20(MIP-3a로도 공지됨), CCL21(MIP-2로도 공지됨), CCL24(MPIF-2/에오탁신-2로도 공지됨), CCL25(TECK로도 공지됨), CCL26(에오탁신-3으로도 공지됨), CCR3, CCR4, CD19, CD20, CD23(IgE의 수용체인 FCER2로도 공지됨), CD24, CD27, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80(B7-1로도 공지됨), CD86(B7-2로도 공지됨), CD122, CD137(41BB로도 공지됨), CD137L, CD152(CTLA4로도 공지됨), CD154(CD40L로도 공지됨), CD160, CD272, CD273(PDL2로도 공지됨), CD274(PDL1로도 공지됨), CD275(B7H2로도 공지됨), CD276(B7H3으로도 공지됨), CD278(ICOS로도 공지됨), CD279(PD-1로도 공지됨), CDH1(E-카데린으로도 공지됨), 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1(M-CSF로도 공지됨), CSF-2(GM-CSF로도 공지됨), CSF-3(GCSF로도 공지됨), CX3CL1(SCYD1로도 공지됨), CXCL12(SDF1로도 공지됨), CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb(IL25의 수용체로도 공지됨), IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4(b4 인테그린으로도 공지됨), ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2 (IL33의 수용체로도 공지됨), STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP(IL7Ra의 공동수용체로도 공지됨), TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1(GPR5/CCXCR1로도 공지됨)로부터 선택되는 항원 표적에 결합한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시 양태에서, VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
항원 표적
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하기 항원 표적 또는 표적 단백질 중 1가지 이상(예를 들어, 1가지, 2가지, 또는 3가지)에 결합한다: A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4(VTCN1로도 공지됨), B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2(MCP-1로도 공지됨), CCL3(MIP-1a로도 공지됨), CCL4(MIP-1b로도 공지됨), CCL5(RANTES로도 공지됨), CCL7(MCP-3으로도 공지됨), CCL8(mcp-2로도 공지됨), CCL11(에오탁신으로도 공지됨), CCL15(MIP-1d로도 공지됨), CCL17(TARC로도 공지됨), CCL19(MIP-3b로도 공지됨), CCL20(MIP-3a로도 공지됨), CCL21(MIP-2로도 공지됨), CCL24(MPIF-2/에오탁신-2로도 공지됨), CCL25(TECK로도 공지됨), CCL26(에오탁신-3으로도 공지됨), CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23(IgE의 수용체인 FCER2로도 공지됨), CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80(B7-1로도 공지됨), CD86(B7-2로도 공지됨), CD122, CD137(41BB로도 공지됨), CD137L, CD152(CTLA4로도 공지됨), CD154(CD40L로도 공지됨), CD160, CD272, CD273(PDL2로도 공지됨), CD274(PDL1로도 공지됨), CD275(B7H2로도 공지됨), CD276(B7H3으로도 공지됨), CD278(ICOS로도 공지됨), CD279(PD-1로도 공지됨), CDH1(E-카데린으로도 공지됨), 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1(M-CSF로도 공지됨), CSF-2(GM-CSF로도 공지됨), CSF-3(GCSF로도 공지됨), CX3CL1(SCYD1로도 공지됨), CXCL12(SDF1로도 공지됨), CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb(IL25의 수용체로도 공지됨), IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4(b4 인테그린으로도 공지됨), ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2 (IL33의 수용체로도 공지됨), STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP(IL7Ra의 공동수용체로도 공지됨), TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1(GPR5/CCXCR1로도 공지됨). 일부 실시 양태에서, 상기 항원 표적 중 하나 이상은 인간 항원 표적이다.
일 실시 양태에서, 결합 단백질은 하나 이상의 종양 항원 표적(예를 들어, 표적 단백질)에 특이적으로 결합한다. 다른 실시 양태에서, 결합 단백질은 하나 이상의 종양 표적 단백질 및 T 세포 수용체 복합체를 비롯한 T-세포 상의 하나 이상의 표적 단백질에 특이적으로 결합한다. 이러한 T-세포 관여항체 결합 단백질은 T 세포를 일시적으로 표적 세포에 모집하고 이와 동시에 T 세포의 세포용해 활성을 활성화시키는 것이 가능하다. T 세포 상의 표적 단백질의 예는 특히 CD3 및 CD28을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 그러한 항원 표적 또는 표적 단백질의 추가의 예가 위에 제공되어 있다. 일부 실시 양태에서, 3특이성 결합 단백질은 2가지 이상의 1특이성 항체 (모 항체)의 항원 결합 도메인들을 하나의 항체로 조합함으로써 생성될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하기 항원 표적 중 1가지 이상(예를 들어, 1가지, 2가지, 또는 3가지)에 결합한다: CD3, CD19, CD20, CD28, CD38, Her2, LAMP1, IL-4, IL-13 및 TNFa.
본 발명의 일부 실시 양태에서, 3가 결합 단백질은 3가지의 항원 표적에 결합할 수 있다. 본 발명의 일부 실시 양태에서, 3가 결합 단백질은 3가지의 상이한 항원 표적에 결합할 수 있다. 일 실시 양태에서, 결합 단백질은 3특이성이며, 하나의 경쇄-중쇄 쌍은 2가지의 상이한 항원 표적 또는 에피토프에 결합할 수 있으며, 하나의 경쇄-중쇄 쌍은 하나의 항원 표적 또는 에피토프에 결합할 수 있다. 또 다른 실시 양태에서, 결합 단백질은 3가지의 종양 항원 표적에 결합할 수 있다. 또 다른 실시 양태에서, 결합 단백질은 3가지의 상이한 종양 항원 표적에 결합할 수 있다. 다른 실시 양태에서, 결합 단백질은 항원 표적들 중 하나 이상의 기능을 억제할 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의 종양 표적 단백질에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 단일 종양 표적 단백질 상의 3개의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 단일 종양 표적 단백질 상의 3개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 제1 종양 표적 단백질 상의 2개의 상이한 에피토프, 및 제2 종양 표적 단백질 상의 1개의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 제1 및 제2 종양 표적 단백질은 상이하다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3가지의 상이한 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의 사이토카인 표적 단백질에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 단일 사이토카인 표적 단백질 상의 3개의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 단일 사이토카인 표적 단백질 상의 3개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 제1 사이토카인 표적 단백질 상의 2개의 상이한 에피토프, 및 제2 사이토카인 표적 단백질 상의 1개의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 제1 및 제2 사이토카인 표적 단백질은 상이하다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 3가지의 상이한 사이토카인 표적 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 상기 하나 이상의 사이토카인 표적 단백질은 IL-4, IL-13 및/또는 TNFa 중 하나 이상이다. 사이토카인 표적 단백질의 추가의 예가 아래에 제공되어 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 이상의 종양 표적 단백질 및 하나 이상의 T 세포 표적 단백질에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 하나의 종양 표적 단백질 및 단일 T 세포 표적 단백질 상의 2개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 하나의 종양 표적 단백질 및 2가지의 상이한 T 세포 표적 단백질(예를 들어, CD28 및 CD3)에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 하나의 T 세포 표적 단백질 및 단일 종양 표적 단백질 상의 2개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 하나의 T 세포 표적 단백질 및 2가지의 상이한 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질의 제1 및 제2 폴리펩티드 사슬은 2가지의 T 세포 표적 단백질에 특이적으로 표적화되는 2개의 항원 결합 부위를 형성하며, 결합 단백질의 제3 및 제4 폴리펩티드 사슬은 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질의 제1 및 제2 폴리펩티드 사슬은 2가지의 종양 표적 단백질에 특이적으로 표적화되는 2개의 항원 결합 부위를 형성하며, 결합 단백질의 제3 및 제4 폴리펩티드 사슬은 T 세포 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 양태에서, 상기 하나 이상의 종양 표적 단백질은 CD3, CD19, CD20, CD28, CD38, Her2, LAMP1, IL-4, IL-13 및/또는 TNFa 중 하나 이상이다. 일부 실시 양태에서, 상기 하나 이상의 T 세포 표적 단백질은 CD3 및 CD28 중 하나 이상이다. 종양 표적 단백질 및 T 세포 표적 단백질의 추가의 예가 위에 제공되어 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서로 독립적으로, 다음으로부터 선택되는 동일하거나 상이한 1가지, 2가지 또는 3가지 항원 표적 또는 표적 단백질에 결합한다: 사이토카인 표적 단백질, 종양 표적 항원 또는 종양 표적 단백질, T 세포 표적 단백질, 면역 체크포인트 억제제, 면역 체크포인트 조절제, 면역 체크포인트 공동자극 분자, 및/또는 면역 세포의 표면 상의 표적 분자. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 3가이지만 2특이성이며 동일 항원 표적 또는 표적 단백질에 2회 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 단일 사이토카인 표적 단백질, 종양 표적 항원 또는 종양 표적 단백질, T 세포 표적 단백질, 면역 체크포인트 억제제, 면역 체크포인트 조절제, 면역 체크포인트 공동자극 분자, 및/또는 면역 세포의 표면 상의 표적 분자 상의 2개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 그러한 항원 표적 또는 표적 단백질의 추가의 예가 위에 제공되어 있다.
본 발명의 결합 단백질은 예를 들어, 인간, 쥐과 또는 인간화 항체를 포함하는 임의의 인간 또는 비-인간 항체로부터 수득되거나, 그로부터 유래된 도메인 또는 서열을 사용하여 제조될 수 있다.
링커
일부 실시 양태에서, 링커 L1, L2, L3, 및 L4는 아미노산 없음(길이=0)으로부터 약 100개의 아미노산의 길이까지, 또는 100, 50, 40, 30, 20, 또는 15개 미만의 아미노산 또는 이보다 더 적은 아미노산까지의 범위이다. 링커는 또한 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 아미노산의 길이일 수 있다. 하나의 결합 단백질에서의 L1, L2, L3, 및 L4는 전부 동일 아미노산 서열을 가질 수 있거나 또는 전부 상이한 아미노산 서열을 가질 수 있다.
적합한 링커의 예는 단일 글리신 (Gly) 잔기; 디글리신 펩티드 (Gly-Gly); 트리펩티드 (Gly-Gly-Gly); 4개의 글리신 잔기를 갖는 펩티드 (Gly-Gly-Gly-Gly; 서열 번호 98); 5개의 글리신 잔기를 갖는 펩티드 (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly; 서열 번호 99); 6개의 글리신 잔기를 갖는 펩티드 (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly; 서열 번호 100); 7개의 글리신 잔기를 갖는 펩티드 (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly; 서열 번호 101); 8개의 글리신 잔기를 갖는 펩티드 (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly; 서열 번호 102)를 포함한다. 아미노산 잔기의 다른 조합, 예컨대 펩티드 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (서열 번호 103), 펩티드 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (서열 번호 104), 펩티드 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (서열 번호 105), 및 펩티드 Gly-Gly-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-Gly (서열 번호 148)이 사용될 수 있다. 다른 적절한 링커는 단일 Ser 및 Val 잔기; 디펩티드 Arg-Thr, Gln-Pro, Ser-Ser, Thr-Lys, 및 Ser-Leu; Thr-Lys-Gly-Pro-Ser (서열 번호 106), Thr-Val-Ala-Ala-Pro (서열 번호 107), Gln-Pro-Lys-Ala-Ala (서열 번호 108), Gln-Arg-Ile-Glu-Gly (서열 번호 109); Ala-Ser-Thr-Lys-Gly-Pro-Ser (서열 번호 110), Arg-Thr-Val-Ala-Ala-Pro-Ser (서열 번호 111), Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (서열 번호 112), 및 His-Ile-Asp-Ser-Pro-Asn-Lys (서열 번호 113)을 포함한다. 상기 열거된 예는 본 발명의 범주를 어떤 방식으로든 제한하는 것으로 의도되지 않으며, 발린, 류신, 이소류신, 세린, 트레오닌, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르테이트, 글루타메이트, 아스파라긴, 글루타민, 글리신 및 프롤린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 무작위로 선택된 아미노산을 포함하는 링커가 결합 단백질에서 적합한 것으로 밝혀졌다. 링커 서열의 추가의 설명에 대해서는 예를 들어 국제 공개 제2012135345호를 참조한다.
링커에서의 아미노산 잔기의 아이덴티티(identity) 및 서열은 링커에서 달성할 필요가 있는 이차 구조 요소의 유형에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 글리신, 세린 및 알라닌은 최대 유연성을 갖는 링커에 있어서 최적이다. 글리신, 프롤린, 트레오닌 및 세린의 일부 조합은, 더욱 경성(rigid)이고 연장된 링커가 필요한 경우에 유용하다. 원하는 특성에 따라 필요할 경우 더 큰 펩티드 링커가 구축되도록 임의의 아미노산 잔기가 다른 아미노산 잔기와 조합되어 링커로 간주될 수 있다.
일부 실시 양태에서, L1의 길이는 L3의 길이의 적어도 2배이다. 일부 실시 양태에서, L2의 길이는 L4의 길이의 적어도 2배이다. 일부 실시 양태에서, L1의 길이는 L3의 길이의 적어도 2배이며, L2의 길이는 L4의 길이의 적어도 2배이다. 일부 실시 양태에서, L1은 길이가 3 내지 12개의 아미노산 잔기이며, L2는 길이가 3 내지 14개의 아미노산 잔기이며, L3은 길이가 1 내지 8개의 아미노산 잔기이며, L4는 길이가 1 내지 3개의 아미노산 잔기이다. 일부 실시 양태에서, L1은 길이가 5 내지 10개의 아미노산 잔기이며, L2는 길이가 5 내지 8개의 아미노산 잔기이며, L3은 길이가 1 내지 5개의 아미노산 잔기이며, L4는 길이가 1 내지 2개의 아미노산 잔기이다. 일부 실시 양태에서, L1은 길이가 7개의 아미노산 잔기이며, L2는 길이가 5개의 아미노산 잔기이며, L3은 길이가 1개의 아미노산 잔기이며, L4는 길이가 2개의 아미노산 잔기이다. 일부 실시 양태에서, L1은 길이가 10개의 아미노산 잔기이며, L2는 길이가 10개의 아미노산 잔기이며, L3은 길이가 0개의 아미노산 잔기이며, L4는 길이가 0개의 아미노산 잔기이다. 일부 실시 양태에서, L1, L2, L3, 및 L4는 각각 독립적으로 0 내지 15개의 아미노산(예를 들어, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 아미노산)의 선택된 길이를 가지며, 여기서, 링커들 중 적어도 2개는 1 내지15개의 아미노산(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 아미노산)의 길이를 갖는다. 일부 실시 양태에서, L1, L2, L3, 및 L4는 각각 길이가 0개의 아미노산이다.
일부 실시 양태에서, L1, L2, L3, 및/또는 L4는 서열 Asp-Lys-Thr-His-Thr (서열 번호 525)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 Asp-Lys-Thr-His-Thr (서열 번호 525)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L3은 서열 Asp-Lys-Thr-His-Thr (서열 번호 525)을 포함한다.
일부 실시 양태에서, L1, L2, L3, 및/또는 L4는 항체 가변 도메인과 항체 불변 도메인 사이의 접합부(junction)에서 천연 발생 서열로부터 유래된 서열을 포함한다(예를 들어, 국제 공개 제2012/135345호에 기술된 바와 같음). 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 링커는 내인성 VH 도메인과 CH1 도메인 사이에, 또는 내인성 VL 도메인과 CL 도메인(예를 들어, 카파 또는 람다) 사이에 전이부(transition)에서 발견되는 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 링커는 내인성 인간 VH 도메인과 CH1 도메인 사이에, 또는 내인성 인간 VL 도메인과 CL 도메인(예를 들어, 인간 카파 또는 람다) 사이에 전이부에서 발견되는 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, L1, L2, L3, 및/또는 L4는 서열 Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (서열 번호 175)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (서열 번호 175)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (서열 번호 175)을 포함하며, L2는 서열 Thr-Lys-Gly-Pro-Ser-Arg (서열 번호 176)을 포함하며, L3은 서열 Ser을 포함하며, L4는 서열 Arg-Thr을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L3은 서열 Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (서열 번호 175)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 Ser을 포함하며, L2는 서열 Arg-Thr을 포함하며, L3은 서열 Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (서열 번호 175)을 포함하며, L4는 서열 Thr-Lys-Gly-Pro-Ser-Arg (서열 번호 176)을 포함한다.
일부 실시 양태에서, L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 (GGGGS)n (여기서, n은 0 내지 5의 정수임; 서열 번호 174), GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로부터 선택되는 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 GQPKAAP (서열 번호 175)를 포함하며, L2는 서열 TKGPS (서열 번호 106)를 포함하며, L3은 서열 S를 포함하며, L4는 서열 RT를 포함한다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L2는 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L2는 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, L1은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L2는 길이가 0개의 아미노산이며, L3은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L4는 길이가 0개의 아미노산이다. 일부 실시 양태에서, L1 및 L2는 길이가 0개의 아미노산이며, L3 및 L4 각각은 (GGGGS)n (여기서, n은 0 내지 5의 정수임; 서열 번호 174), GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로부터 선택되는 독립적 선택 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, L3 및 L4는 길이가 0개의 아미노산이며, L1 및 L2 각각은 (GGGGS)n (여기서, n은 0 내지 5의 정수임; 서열 번호 174), GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로부터 선택되는 독립적 선택 서열을 포함한다.
Fc 영역 및 불변 도메인
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하는 제3 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 CH1에 연결된 Fc 영역(상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬과, CH1에 연결된 Fc 영역(상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제3 폴리펩티드 사슬을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 하나 또는 2가지의 Fc 변이체를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Fc 변이체"는 천연 Fc로부터 변형되지만 재생 수용체(salvage receptor)인 FcRn(신생아 Fc 수용체)에 대한 결합 부위를 여전히 포함하는 분자 또는 서열을 나타낸다. 예시적인 Fc 변이체, 및 이것과 재생 수용체의 상호작용이 본 기술 분야에 공지되어 있다. 따라서, 용어 "Fc 변이체"는 비-인간 천연 Fc 유래의 인간화된 분자 또는 서열을 포함할 수 있다. 더욱이, 천연 Fc는 본 발명의 항체 유사 결합 단백질에 요구되지 않는 구조적 특징 또는 생물학적 활성을 제공하기 때문에 제거될 수 있는 영역을 포함한다. 따라서, 용어 "Fc 변이체"는 하나 이상의 천연 Fc 부위 또는 잔기가 결여된, 또는 하나 이상의 Fc 부위 또는 잔기가 변형된(이는(1) 디술피드 결합 형성, (2) 선택된 숙주 세포와의 불화합성(incompatibility), (3) 선택된 숙주 세포에서의 발현시의 N-말단 이종성(heterogeneity), (4) 글리코실화, (5) 보체와의 상호작용, (6) 재생 수용체 이외의 Fc 수용체에의 결합, 또는 (7) 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC)에 영향을 주거나 이들에 연루됨) 분자 또는 서열을 포함한다.
결합 단백질의 수율을 향상시키기 위하여, CH3 도메인은 예를 들어 국제 공개 제96/027011호, 문헌[Ridgway et al., 1996, Protein Eng. 9: 617-21]; 및 문헌[Merchant et al., 1998, Nat. Biotechnol. 16: 677-81]에 몇몇 예를 이용하여 상세하게 설명된 "놉-인투-홀" 기술에 의해 변경될 수 있다. 구체적으로, 2개의 CH3 도메인의 상호작용 표면은 이러한 2개의 CH3 도메인을 포함하는 둘 다의 중쇄의 이종이량체화(heterodimerisation)를 증가시키도록 변경된다. (상기 2개의 중쇄의) 상기 2개의 CH3 도메인 각각은 "놉"일 수 있는 반면, 다른 것은 "홀"이다. 디술피드 가교체의 도입은 추가로 이종이량체를 안정화시키며 (문헌[Merchant et al., 1998]; 문헌[Atwell et al., 1997, J. Mol. Biol. 270: 26-35]) 수율을 증가시킨다. 특정 실시 양태에서, 놉은 단일 가변 도메인을 갖는 제2 폴리펩티드 쌍 상에 있다. 다른 실시 양태에서, 놉은 교차 배향을 갖는 제1 폴리펩티드 쌍 상에 있다. 또 다른 실시 양태에서, CH3 도메인은 놉 인 홀(knob in hole)을 포함하지 않는다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 제2 폴리펩티드 사슬 상의 "놉" 돌연변이 및 제3 폴리펩티드 사슬 상의 "홀" 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 제3 폴리펩티드 사슬 상의 "놉" 돌연변이 및 제2 폴리펩티드 사슬 상의 "홀" 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, "놉" 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및/또는 366에 상응하는 위치에서의 치환(들)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 아미노산 치환은 S354C, T366W, T366Y, S354C 및 T366W, 또는 S354C 및 T366Y이다. 일부 실시 양태에서, "놉" 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 치환을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이다. 일부 실시 양태에서, "홀" 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 407, 및 선택적으로, 349, 366, 및/또는 368에 상응하는 위치에서의 치환(들)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 아미노산 치환은 Y407V 또는 Y407T 및 선택적으로 Y349C, T366S, 및/또는 L368A이다. 일부 실시 양태에서, "홀" 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 치환을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이다.
일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 366 및 선택적으로 354에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(들)을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 T366W 또는 T366Y 및 선택적으로 S354C이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 407 및 선택적으로 349, 366, 및/또는 368에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(들)을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y407V 또는 Y407T 및 선택적으로 Y349C, T366S, 및/또는 L368A이다.
일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 407 및 선택적으로 349, 366, 및/또는 368에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(들)을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y407V 또는 Y407T 및 선택적으로 Y349C, T366S, 및/또는 L368A이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 366 및 선택적으로 354에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(들)을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 T366W 또는 T366Y 및 선택적으로 S354C이다.
일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 T366W이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 366, 368, 및/또는 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(들)을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 T366S, L368A, 및/또는 Y407V이다.
일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 366, 368, 및/또는 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(들)을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 T366S, L368A, 및/또는 Y407V이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 T366W이다.
일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 혈청중 반감기를 개선시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다(예를 들어, 문헌[Hinton, P.R. (2006) J. Immunol. 176(1):346-56] 참조). 일부 실시 양태에서, 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 428 및 434에 상응하는 위치에서의 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 M428L 및 N434S이다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역(상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬과, CH1에 연결된 제2 Fc 영역(상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제3 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 여기서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 428 및 434에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 M428L 및 N434S이다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 놉 및 홀 돌연변이 및 혈청중 반감기를 향상시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 예를 들어 IgG4의 이량체 계면 및/또는 힌지 영역의 안정성을 향상시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다(예를 들어, 문헌[Spiess, C. et al. (2013) J. Biol. Chem. 288:26583-26593] 참조). 일부 실시 양태에서, 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 228 및 409에 상응하는 위치에서의 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 S228P 및 R409K이다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역(상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬과, CH1에 연결된 제2 Fc 영역(상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제3 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 228 및 409에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 S228P 및 R409K이다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 놉 및 홀 돌연변이 및 안정성을 향상시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 예를 들어 정제 시약에 대한 친화도를 조정함으로써 정제를 개선시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, 이종이량체형 결합 단백질은 상기 이종이량체 형태가 동종이량체 형태보다 단백질 A-기반의 정제에 대하여 중간 친화성을 가질 것이고, 예를 들어 상이한 pH의 이용에 의해 단백질 A로부터 선택적으로 용출될 수 있기 때문에, 상기 이종이량체 형태의 2개의 Fc 영역 중 하나가 단백질 A에의 결합을 감소시키거나 없애는 돌연변이(들)를 포함할 경우 이종이량체 형태로부터 선택적으로 정제될 수 있음이 공지되어 있다(예를 들어, 문헌Smith, E.J. et al. (2015) Sci. Rep. 5:17943] 참조). 일부 실시 양태에서, 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F이다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역(상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬과, CH1에 연결된 제2 Fc 영역(상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제3 폴리펩티드 사슬을 포함하며; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역 중 하나만이 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F이다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 놉 및 홀 돌연변이 및 정제를 개선시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 이펙터 기능, 예를 들어 Fc 수용체-매개된 항체-의존성 세포 식작용(ADCP), 보체-의존성 세포독성(CDC), 및/또는 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC)을 감소시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 L234A 및 L235A이다. 일부 실시 양태에서, 제2 및 제3 폴리펩티드 사슬의 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이며, 상기 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 L234A 및 L235A이다. 일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 234, 235, 329에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 L234A, L235A, 및 P329A이다. 일부 실시 양태에서, 제2 및 제3 폴리펩티드 사슬의 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이며, 상기 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 234, 235, 및 329에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 L234A, L235A, 및 P329A이다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 F234A 및 L235A이다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역(상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬과, CH1에 연결된 제2 Fc 영역(상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함함)을 추가로 포함하는 제3 폴리펩티드 사슬을 포함하며; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 F234A 및 L235A이다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 놉 및 홀 돌연변이 및 이펙터 기능을 감소시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이다. 일부 실시 양태에서, 제1 및/또는 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이다. 위치 329에서의 Fc 돌연변이의 추가 설명에 대해서는, 예를 들어 문헌[Shields, R.L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604] 및 국제 공개 제1999051642호를 참조한다.
일부 실시 양태에서, 위에 설명된 돌연변이의 유형은 임의의 순서 또는 조합으로 조합될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 결합 단백질은 "놉" 및 "홀" 돌연변이, 혈청중 반감기를 향상시키기 위한 하나 이상의 돌연변이, IgG4 안정성을 향상시키기 위한 하나 이상의 돌연변이, 정제를 개선시키기 위한 하나 이상의 돌연변이, 및/또는 이펙터 기능을 개선시키기 위한 하나 이상의 돌연변이(상기에 기술됨) 중 둘 이상을 포함할 수 있다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 다음을 포함한다: 람다 CL 도메인을 포함하는 제1 폴리펩티드 사슬; EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인(여기서, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W임); EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하는 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인(여기서, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F임); 및 카파 CL 도메인을 포함하는 제4 폴리펩티드 사슬. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이며; 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 354, 366, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C, T366W, H435R, 및 Y436F이며; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이며; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 단백질 A 친화성 크로마토그래피, 카파 경쇄 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라 KappaSelect 수지를 사용하여; GE Healthcare), 및 선택적으로 람다 경쇄 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라 LambdaFabSelect 수지를 사용하여; GE Healthcare)에 의해 정제된다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 단백질 A 친화성 크로마토그래피, 람다 경쇄 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라 LambdaFabSelect 수지를 사용하여; GE Healthcare), 및 선택적으로 카파 경쇄 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라 KappaSelect 수지를 사용하여; GE Healthcare)에 의해 정제된다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 2개의 Fc 영역(각각은 CH3 도메인을 포함함)을 포함하며, 상기 CH3 도메인들 중 하나만이 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F이다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 단백질 A 친화성 크로마토그래피, 그 후 카파 경쇄 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라 KappaSelect 수지를 사용하여; GE Healthcare), 그 후 선택적으로 람다 경쇄 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라 LambdaFabSelect 수지를 사용하여; GE Healthcare)에 의해 정제된다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 순서대로 단백질 A 친화성 크로마토그래피, 그 후 람다 경쇄 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라 LambdaFabSelect 수지를 사용하여; GE Healthcare), 그 후 선택적으로 카파 경쇄 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라 KappaSelect 수지를 사용하여; GE Healthcare)에 의해 정제된다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 결합 단백질을 단백질 A와 접촉시키고, 상기 결합 단백질을 H435R 및 Y436F인 아미노산 치환을 포함하는 0개 또는 2개의 CH3 도메인을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 단백질 A로부터 용출시키고, 카파 경쇄 친화성 매체(예를 들어, KappaSelect 수지에서 사용되는 바와 같음; GE Healthcare)와 접촉시키고, 상기 결합 단백질을 람다 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체로부터 용출시킨다(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라). 단백질 A 용출에 적합한 조건은 본 기술 분야에 공지되어 있으며, 이는 제한 없이 pH4.5 내지 2.8로부터의 단계적 용출 구배를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단백질 정제에 유용한 단백질 A 또는 단백질 A 변이체가 이용된다. 일부 실시 양태에서, 단백질 A는 예를 들어 크로마토그래피 매체의 일부로서 기재 또는 수지에 부착되어 있다. 일부 실시 양태에서, 카파 경쇄 친화성 매체로부터의 용출 후, 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체(예를 들어, LambdaFabSelect 수지에서 사용되는 바와 같음; GE Healthcare)와 접촉시키며, 상기 결합 단백질을 카파 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체로부터 용출시킨다(예를 들어, 제조업자의 지시에 따라). 일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질을 HIC 크로마토그래피를 사용하여 검출한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 다음을 포함한다: 람다 CL 도메인을 포함하는 제1 폴리펩티드 사슬; EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하는 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인(여기서, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W임); EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하는 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인(여기서, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F임); 및 카파 CL 도메인을 포함하는 제4 폴리펩티드 사슬. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질이 숙주 세포에 의해 생성된다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 세포 배양 배지 또는 숙주 세포 추출물로부터 정제된다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 숙주 세포에 의해 분비되거나 또는 생성되어 추출된다(숙주 세포로부터)(예를 들어, 단백질 A와의 접촉 전에). 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 단백질 A와 접촉될 때 세포 배양 배지 또는 숙주 세포 추출물에 있다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 다른 결합 단백질들, 폴리펩티드들, 및/또는 다른 세포 성분들로부터 정제된다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 3특이성 결합 단백질의 CH1, CH2, CH3 및 CL은 결합 단백질 1 내지 53의 CH1, CH2, CH3 및 CL 서열 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
핵산
표준 재조합 DNA 방법은 결합 단백질을 형성하는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 구축하고, 이러한 폴리뉴클레오티드를 재조합 발현 벡터 내에 포함시키고, 그러한 벡터를 숙주 세포 내에 도입하는 데 사용된다. 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd ed.)]을 참조한다. 효소 반응 및 정제 기술은 제조업자의 명세서에 따라 수행될 수 있으며, 이는 본 기술 분야에서 일반적으로 성취되는 바와 같거나 본원에 설명된 바와 같다. 특정한 정의가 제공되지 않으면, 본원에서 설명된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약품 및 제약 화학과 관련하여 이용되는 명명법 및 이들의 검사실의 절차 및 기술로는 본 기술 분야에서 잘 알려지고 일반적으로 사용되는 것이 있다. 이와 유사하게, 통상적인 기술이 화학 합성, 화학 분석, 제약 제제, 제형, 전달, 및 환자의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 실시 양태에서, 단리된 핵산은 결합 단백질-코딩 핵산 서열의 전사를 지시하기 위한 이종 프로모터에 작동가능하게 연결된다. 프로모터는 핵산의 전사를 지시하는 핵산 제어 서열을 나타낼 수 있다. 제1 핵산 서열은 제2 핵산 서열과 기능적으로 관련되어 두어질 때 제2 핵산 서열에 작동가능하게 연결된 것이다. 예를 들어, 프로모터는 결합 단백질의 코딩 서열의 전사 또는 발현에 영향을 줄 경우 상기 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 것이다. 프로모터의 예는 바이러스 (예컨대 폴리오마 바이러스(polyoma virus), 계두 바이러스(fowlpox virus), 아데노바이러스(adenovirus) (예컨대 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 거대세포 바이러스(cytomegalovirus), 레트로바이러스, B형 간염 바이러스, 시미안 바이러스(Simian Virus) 40 (SV40) 등)의 게놈으로부터, 이종성 진핵 프로모터 (예컨대 액틴 프로모터, 면역글로불린 프로모터, 열충격(heat-shock) 프로모터 등), CAG-프로모터 (문헌[Niwa et al., Gene 108(2):193-9, 1991]), 포스포글리세레이트 키나아제 (PGK)-프로모터, 테트라사이클린-유도성 프로모터 (문헌[Masui et al., Nucleic Acids Res. 33:e43, 2005]), lac 시스템, trp 시스템, tac 시스템, trc 시스템, 파지 람다의 주요 오퍼레이터 및 프로모터 영역, 3-포스포글리세레이트 키나아제에 대한 프로모터, 효모 산 포스파타아제의 프로모터, 및 효모 알파-교배 인자의 프로모터로부터 수득되는 프로모터를 포함할 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 구성적(constitutive) 프로모터, 유도성 프로모터, 또는 본원에 개시된 임의의 다른 적합한 프로모터 또는 당업자에 의해 쉽게 인식되는 다른 적합한 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다.
일부 실시 양태에서, 단리된 핵산은 벡터 내에 포함된다. 일부 실시 양태에서, 벡터는 발현 벡터이다. 발현 벡터는 발현될 폴리뉴클레오티드에 작동되게 연결된 하나 이상의 조절 서열을 포함할 수 있다. 용어 "조절 서열"은 프로모터, 인핸서 및 기타 발현 제어 요소(예를 들어, 폴리아데닐화 신호)를 포함한다. 적합한 인핸서의 예는 포유류 유전자 (예컨대 글로빈, 엘라스타아제, 알부민, α-태아단백질, 인슐린 등)로부터의 인핸서 서열, 및 진핵 세포 바이러스로부터의 인핸서 서열 (예컨대 복제 원점의 후기 쪽의 SV40 인핸서 (bp 100-270), 거대세포 바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 원점의 후기 쪽의 폴리오마(polyoma) 인핸서, 아데노바이러스 인핸서 등)을 포함할 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 적합한 벡터의 예는 예를 들어 플라스미드, 코스미드, 에피솜, 트랜스포존, 및 바이러스 벡터 (예를 들어, 아데노바이러스, 백시니아 바이러스, 신드비스(Sindbis) 바이러스, 홍역 바이러스, 헤르페스 바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노-부속 바이러스 벡터 등)를 포함할 수 있다. 발현 벡터는 예를 들어 박테리아 세포, 효모 세포, 곤충 세포, 및 포유류 세포와 같은 숙주 세포의 트랜스펙션에 사용될 수 있다. 숙주에서의 발현 및 복제가 가능한 생물학적 기능성 바이러스 및 플라스미드 DNA 벡터가 본 기술 분야에 공지되어 있으며, 이는 관심 대상의 임의의 세포의 트랜스펙션에 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것의 제1, 제2, 제3, 및 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 하나 이상의 벡터를 포함하는 벡터 시스템에 관한 것이다. 일부 실시 양태에서, 벡터 시스템은 결합 단백질의 제1 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제1 벡터, 결합 단백질의 제2 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제2 벡터, 결합 단백질의 제3 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제3 벡터, 및 결합 단백질의 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제4 벡터를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 벡터 시스템은 결합 단백질의 제1 및 제2 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제1 벡터, 및 결합 단백질의 제3 및 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제2 벡터를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 벡터 시스템은 결합 단백질의 제1 및 제3 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제1 벡터, 및 결합 단백질의 제2 및 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제2 벡터를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 벡터 시스템은 결합 단백질의 제1 및 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제1 벡터, 및 결합 단백질의 제2 및 제3 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제2 벡터를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 벡터 시스템은 결합 단백질의 제1, 제2, 제3 및 제4 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 제1 벡터를 포함한다. 벡터 시스템의 상기 하나 이상의 벡터는 본원에 개시된 벡터들 중 임의의 것일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 상기 하나 이상의 벡터는 발현 벡터이다.
단리된 숙주 세포
본 발명의 다른 측면은 본원에 개시된 하나 이상의 단리된 폴리뉴클레오티드, 벡터, 및/또는 벡터 시스템을 포함하는 단리된 숙주 세포에 관한 것이다. 일부 실시 양태에서, 숙주 세포는 박테리아 세포 (예를 들어, 이. 콜라이(E. coli) 세포)이다. 일부 실시 양태에서, 숙주 세포는 효모 세포 (예를 들어, 에스. 세레비지애(S. cerevisiae) 세포)이다. 일부 실시 양태에서, 숙주 세포는 곤충 세포이다. 곤충 숙주 세포의 예는 예를 들어 드로소필라(Drosophila) 세포 (예를 들어, S2 세포), 트리코플루시아 니(Trichoplusia ni) 세포 (예를 들어, 하이 파이브(High Five)™ 세포), 및 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포 (예를 들어, Sf21 또는 Sf9 세포)를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 숙주 세포는 포유류 세포이다. 포유류 숙주 세포의 예는 예를 들어 인간 배아 신장 세포 (예를 들어, 현탁 배양에서의 성장용으로 서브클로닝된 293 또는 293 세포), 엑스피(Expi)293TM 세포, CHO 세포, 베이비 햄스터 신장 세포(baby hamster kidney cell) (예를 들어, BHK, ATCC CCL 10), 마우스 세르톨리(mouse sertoli) 세포 (예를 들어, TM4 세포), 원숭이 신장 세포 (예를 들어, CV1 ATCC CCL 70), 아프리카 사바나 원숭이(African green monkey) 신장 세포 (예를 들어, VERO-76, ATCC CRL-1587), 인간 자궁경부 암종 세포 (예를 들어, HELA, ATCC CCL 2), 개 신장 세포 (예를 들어, MDCK, ATCC CCL 34), 버팔로 래트(buffalo rat) 간세포 (예를 들어, BRL 3A, ATCC CRL 1442), 인간 폐세포 (예를 들어, W138, ATCC CCL 75), 인간 간세포 (예를 들어, Hep G2, HB 8065), 마우스 유선 종양 세포 (예를 들어, MMT 060562, ATCC CCL51), TRI 세포, MRC 5 세포, FS4 세포, 인간 간암 세포주 (예를 들어, Hep G2), 및 골수종 세포 (예를 들어, NS0 및 Sp2/0 세포)를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 본원에 개시된 결합 단백질들 중 임의의 것의 제조 방법에 관한 것이다. 일부 실시 양태에서, 본 방법은 a) 단리된 핵산, 벡터, 및/또는 벡터 시스템 (예를 들어, 본원에 개시된 단리된 핵산, 벡터, 및/또는 벡터 시스템 중 임의의 것)을 포함하는 숙주 세포 (예를 들어, 본원에 개시된 숙주 세포 중 임의의 것)를, 숙주 세포가 결합 단백질을 발현하도록 하는 조건 하에 배양하는 단계; 및 b) 결합 단백질을 숙주 세포로부터 단리하는 단계를 포함한다. 단백질을 발현시키는 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. 단백질을 배양된 숙주 세포로부터 단리하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 이는 예를 들어 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피, 이어서 크기 배제 크로마토그래피를 포함하는 2단계 친화성 크로마토그래피)에 의한 것을 포함한다.
결합 단백질의 용도
결합 단백질은 임의의 공지된 분석 방법, 예컨대 경쟁적 결합 분석법, 직접적 및 간접적 샌드위치(sandwich) 분석법, 및 면역침전 분석법 (하나 이상의 표적 항원의 검출 및 정량화를 위한 것임)에서 이용될 수 있다. 결합 단백질은 이용되는 분석 방법에 적절한 친화도로 상기 하나 이상의 표적 항원에 결합할 것이다.
진단 응용에 있어서, 특정 실시 양태에서, 결합 단백질은 검출가능한 모이어티(moiety)로 표지될 수 있다. 검출가능한 모이어티는 검출가능한 신호를 직접적으로 또는 간접적으로 생성할 수 있는 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 검출가능한 모이어티는 방사성 동위 원소, 예컨대 3H, 14C, 32P, 35S, 125I, 99Tc, 111In, 또는 67Ga; 형광 또는 화학발광 화합물, 예컨대 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 또는 루시페린; 또는 효소, 예컨대 알칼리 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 또는 서양 고추냉이 퍼옥시다아제일 수 있다.
결합 단백질은 또한 생체 내 영상화에 유용하다. 검출가능한 모이어티로 표지된 결합 단백질은 동물에게, 바람직하게는 혈류 내로 투여될 수 있으며, 숙주 내에서의 표지된 항체의 존재 및 위치가 분석될 수 있다. 결합 단백질은 핵 자기 공명에 의해서든지, 방사선 이용(radiology)에 의해서든지, 또는 본 기술 분야에 공지된 다른 검출 수단에 의해서든지 간에 동물에서 검출가능한 임의의 모이어티로 표지될 수 있다.
또한 결합 단백질은 세포 활성화, 종양 표적화, 사이토카인 활성의 중화, 바이러스 감염의 중화, 다수의 시그널링 이벤트들의 조합에 사용되어 암, 관절염, 및/또는 염증성 장애를 치료할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4(VTCN1로도 공지됨), B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2(MCP-1로도 공지됨), CCL3(MIP-1a로도 공지됨), CCL4(MIP-1b로도 공지됨), CCL5(RANTES로도 공지됨), CCL7(MCP-3으로도 공지됨), CCL8(mcp-2로도 공지됨), CCL11(에오탁신으로도 공지됨), CCL15(MIP-1d로도 공지됨), CCL17(TARC로도 공지됨), CCL19(MIP-3b로도 공지됨), CCL20(MIP-3a로도 공지됨), CCL21(MIP-2로도 공지됨), CCL24(MPIF-2/에오탁신-2로도 공지됨), CCL25(TECK로도 공지됨), CCL26(에오탁신-3으로도 공지됨), CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23(IgE의 수용체인 FCER2로도 공지됨), CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80(B7-1로도 공지됨), CD86(B7-2로도 공지됨), CD122, CD137(41BB로도 공지됨), CD137L, CD152(CTLA4로도 공지됨), CD154(CD40L로도 공지됨), CD160, CD272, CD273(PDL2로도 공지됨), CD274(PDL1로도 공지됨), CD275(B7H2로도 공지됨), CD276(B7H3으로도 공지됨), CD278(ICOS로도 공지됨), CD279(PD-1로도 공지됨), CDH1(E-카데린으로도 공지됨), 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1(M-CSF로도 공지됨), CSF-2(GM-CSF로도 공지됨), CSF-3(GCSF로도 공지됨), CX3CL1(SCYD1로도 공지됨), CXCL12(SDF1로도 공지됨), CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb(IL25의 수용체로도 공지됨), IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4(b4 인테그린으로도 공지됨), ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2 (IL33의 수용체로도 공지됨), STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP(IL7Ra의 공동수용체로도 공지됨), TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1(GPR5/CCXCR1로도 공지됨)로부터 선택되는 1가지, 2가지 또는 3가지의 항원 표적에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 양태에서, 상기 항원 표적 중 하나 이상은 인간 항원 표적이다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 이를 필요로 하는 환자에게 암의 치료 또는 예방을 위하여 투여된다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 T-세포 표면 단백질에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 부위 및 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 또 다른 항원 결합 부위(예를 들어, T-세포 표면 단백질에 특이적으로 결합하는 2개의 항원 결합 부위 및 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 부위, 또는 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 2개의 항원 결합 부위 및 T-세포 표면 단백질에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 부위)를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위, 및 CD19, CD20, CD38, Her2, 및 LAMP1로부터 선택되는 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 화학요법제와 함께 공동 투여된다. 일부 실시 양태에서, 환자는 인간이다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 이를 필요로 하는 환자에게 염증성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위하여 투여된다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 IL-4, IL-13 및 TNFa로부터 선택되는 사이토카인 표적 단백질에 각각이 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 결합 단백질은 항염증제와 함께 공동 투여된다. 일부 실시 양태에서, 환자는 인간이다.
또한 본 발명은 생물학적 샘플 중 표적 항원 수준의 탐지에 유용한 다른 시약 및 결합 단백질을 포함하는 키트에 관한 것이다. 그러한 시약은 검출가능 표지체, 차단용 혈청, 양성 및 음성 대조 샘플, 및 검출 시약을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 키트는 본원에 개시된 임의의 결합 단백질, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 벡터 시스템, 및/또는 숙주 세포를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키트는 용기 및 용기 상의 또는 용기와 결부된 라벨 또는 패키지 인서트(insert)를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 시린지, IV 용액용 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 재료, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 단독인, 또는 병태의 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 또 다른 조성물과 조합된 조성물을 수용하며, 살균 접근 포트(access port)를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘에 의해 관통가능한 마개를 갖는 정맥내 용액용 백 또는 바이알일 수 있다). 일부 실시 양태에서, 라벨 또는 패키지 인서트는 조성물이 선택된 병태의 예방, 진단, 및/또는 치료에 사용됨을 표시한다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 제조 물품 또는 키트는 정균처리한 주사용수(bacteriostatic water for injection, BWFI), 인산염 완충 염수, 링거액(Ringer's solution) 및 덱스트로스 용액과 같은 제약상 허용가능한 완충액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 그것은 다른 완충액, 희석제, 필터, 주사바늘 및 주사기를 포함한, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
결합 단백질의 치료용 조성물 및 이의 투여
결합 단백질을 포함하는 치료용 조성물 또는 제약 조성물은 본 발명의 범주 내에 있다. 그러한 치료용 조성물 또는 제약 조성물은 투여 양식에서의 적합성을 위하여 선택된 제약상 또는 생리학적으로 허용가능한 제형화제와 혼합된, 치료적 유효량의 결합 단백질, 또는 결합 단백질-약물 콘쥬게이트를 포함할 수 있다.
허용가능한 제형화 물질은 바람직하게는 이용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이다.
제약 조성물은 예를 들어 조성물의 pH, 오스몰 농도, 점도, 투명도, 색, 등장성, 냄새, 살균성, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 흡착성, 또는 투과성을 변경시키거나, 유지하거나, 보존하기 위한 제형화 물질을 함유할 수 있다. 적합한 제형화 물질은 아미노산 (예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 또는 라이신), 항미생물제, 산화방지제 (예컨대 아스코르브산, 아황산나트륨, 또는 아황산수소나트륨), 완충제 (예컨대 보레이트, 바이카르보네이트, 트리스-HCl, 시트레이트, 포스페이트, 또는 다른 유기 산), 벌킹제(bulking agent) (예컨대 만니톨 또는 글리신), 킬레이팅제 (예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)), 복합체 형성제(complexing agent) (예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린, 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린), 충전제, 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물 (예컨대 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린), 단백질 (예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린), 착색제, 착향제 및 희석제, 유화제, 친수성 중합체 (예컨대 폴리비닐피롤리돈), 저분자량 폴리펩티드, 염-형성 반대 이온 (예컨대 소듐), 방부제 (예컨대 벤잘코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산, 또는 과산화수소), 용매 (예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜, 또는 폴리에틸렌 글리콜), 당 알코올 (예컨대 만니톨 또는 소르비톨), 현탁제, 계면활성제 또는 습윤제 (예컨대 플루로닉(pluronic); PEG; 소르비탄 에스테르; 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80; 트리톤(triton); 트로메타민; 레시틴; 콜레스테롤 또는 틸록사팔), 안정성 향상제 (예컨대 수크로스 또는 소르비톨), 장성 향상제 (예컨대 알칼리 금속 할로겐화물 - 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨 - 또는 만니톨 소르비톨), 전달 비히클, 희석제, 부형제 및/또는 의약 보조제(pharmaceutical adjuvant) (예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (18th Ed., A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company 1990)], 및 이의 후속판 참조, 임의의 목적을 위하여 본원에 참고로 포함됨)를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
최적 제약 조성물은 예를 들어 의도된 투여 경로, 전달 포맷, 및 원하는 투여량에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다. 그러한 조성물은 결합 단백질의 물리적 상태, 안정성, 생체 내 방출 속도, 및 생체 내 제거 속도에 영향을 줄 수 있다.
제약 조성물 중 일차 비히클 또는 담체는 사실상 수성 또는 비-수성 중 어느 하나일 수 있다. 예를 들어, 주사에 적합한 비히클 또는 담체는 가능하게는 비경구 투여용 조성물에서 일반적인 다른 물질이 보충된, 물, 생리 식염수 용액, 또는 인공 뇌척수액일 수 있다. 중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수가 추가의 예시적인 비히클이다. 다른 예시적인 제약 조성물은 대략 pH 7.0 내지 8.5의 트리스 완충제, 또는 대략 pH 4.0 내지 5.5의 아세테이트 완충제를 포함할 수 있는데, 이는 소르비톨 또는 적합한 대체재를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시 양태에서, 결합 단백질 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 선택된 조성물을 선택적 제형화제와 혼합함으로써 보관용으로, 동결건조 케이크 또는 수성 용액의 형태로 제조될 수 있다. 또한, 결합 단백질은 적절한 부형제, 예컨대 수크로스를 이용하여 동결건조물로서 제형화될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 비경구 전달 또는 피하용으로 선택될 수 있다. 대안적으로, 조성물은 흡입용으로 또는 소화관을 통한 전달용으로, 예컨대 경구용으로 선택될 수 있다. 그러한 제약상 허용가능한 조성물의 제조는 본 기술 분야의 기술 내에 있다.
제형 성분은 투여 부위에 허용가능한 농도로 존재한다. 예를 들어, 완충제는 조성물을 생리학적 pH에서 또는 약간 더 낮은 pH에서, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내에서 유지하는 데 사용된다.
비경구 투여가 고려될 때, 사용하기 위한 치료용 조성물은 제약상 허용가능한 비히클 중 원하는 결합 단백질을 포함하는 무발열원성의 비경구용으로 허용가능한 수성 용액의 형태로 존재할 수 있다. 비경구 주사에 특히 적합한 비히클은 적당하게 방부제 처리된, 결합 단백질이 살균, 등장 용액으로서 제형화되는 살균 증류수이다. 또 다른 제법은 생성물의 조절 방출 또는 지속 방출을 제공하는, 주사가능 미소구체, 생분해성(bio-erodible) 입자, 중합체성 화합물 (예컨대 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드, 또는 리포좀과 같은 에이전트(agent)를 이용한 원하는 분자의 제형화를 포함할 수 있는데, 상기 생성물은 그 후 데포(depot) 주사를 통하여 전달될 수 있다. 히알루론산이 또한 사용될 수 있으며, 이것은 순환의 부단한 지속을 촉진하는 효과를 가질 수 있다. 원하는 분자의 도입에 적합한 다른 수단은 이식형 약물 전달 장치를 포함한다.
일 실시 양태에서, 제약 조성물은 흡입용으로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 결합 단백질은 흡입용 건조 산제로서 제형화될 수 있다. 결합 단백질 흡입 용액은 또한 에어로졸 전달을 위하여 분사제를 이용하여 제형화될 수 있다. 또 다른 실시 양태에서, 용액은 분무될 수 있다.
특정 제형은 경구 투여될 수 있음이 또한 고려된다. 본 발명의 일 실시 양태에서, 이러한 방식을 투여되는 결합 단백질은 고체 투여 형태, 예컨대 정제 및 캡슐의 배합에서 관례적으로 사용되는 담체를 이용하여 또는 이를 이용하지 않고서 제형화될 수 있다. 예를 들어, 캡슐은 생체이용률이 최대화되고 사전-전신적 분해가 최소화되는 때의 위장관에서의 지점에서 제형의 활성 부분을 방출하도록 설계될 수 있다. 추가의 에이전트를 첨가하여 결합 단백질의 흡수를 용이하게 할 수 있다. 희석제, 착향제, 저 융점 왁스, 식물유, 활택제, 현탁제, 정제 붕해제, 및 결합제가 또한 이용될 수 있다.
또 다른 제약 조성물은 정제의 제조에 적합한 비-독성 부형제와의 혼합물 형태의 유효한 양의 결합 단백질을 포함할 수 있다. 정제를 살균수, 또는 또 다른 적절한 비히클에 용해시킴으로써, 용액이 단위 용량 형태로 제조될 수 있다. 적합한 부형제는 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨 또는 중탄산나트륨, 락토스, 또는 인산칼슘; 또는 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴, 또는 아카시아; 또는 활택제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 또는 활석을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
지속 전달형 또는 조절 전달형 제형 형태의 결합 단백질을 포함하는 제형을 비롯한 본 발명의 추가의 제약 조성물은 당업자에게 명백할 것이다. 다양한 다른 지속 전달 또는 조절 전달 수단, 예컨대 리포좀 담체, 생분해성 미세입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사제의 제형화 기술이 또한 당업자에게 공지되어 있다. 지속 방출형 제제의 추가의 예는 성형 물품의 형태의 반투과성 중합체 매트릭스, 예를 들어 필름, 또는 미세캡슐을 포함한다. 지속 방출형 매트릭스는 폴리에스테르, 히드로겔, 폴리락티드, L-글루탐산과 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트), 에틸렌 비닐 아세테이트, 또는 폴리-D(-)-3-히드록시부티르산을 포함할 수 있다. 지속 방출형 조성물은 또한 리포좀을 포함할 수 있으며, 이는 본 기술 분야에 공지된 임의의 몇몇 방법에 의해 제조될 수 있다.
생체 내 투여에 사용될 제약 조성물은 전형적으로 살균성이어야 한다. 이는 살균 여과막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 조성물이 동결건조되는 경우, 이러한 방법을 이용한 살균은 동결건조 및 재구성 전에, 또는 동결건조 및 재구성 후에 행해질 수 있다. 비경구 투여용 조성물은 동결건조 형태로 또는 용액으로 보관될 수 있다. 게다가, 일반적으로 비경구 조성물은 살균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 바늘에 의해 관통가능한 마개를 갖는 정맥내 용액용 백 또는 바이알 내에 두어진다.
일단 제약 조성물이 제형화되었으면, 그것은 용액, 현탁액, 겔, 에멀젼, 고체 또는 탈수 또는 동결건조 분말로서 살균 바이알에 보관될 수 있다. 그러한 제형은 즉시 사용 가능한 형태 또는 투여 전에 재구성을 필요로 하는 형태 (예를 들어, 동결건조됨)로 보관될 수 있다.
본 발명은 또한 단일 용량 투여 단위를 생성하기 위한 키트를 포함한다. -키트는 각각 건조 단백질을 갖는 제1 용기 및 수성 제형을 갖는 제2 용기 둘 다를 포함할 수 있다. 또한, 단일 및 다중-챔버형 사전-충전 주사기 (예를 들어, 액체 주사기 및 동결주사기(lyosyringe))를 포함하는 키트가 본 발명의 범주 내에 포함된다.
치료적으로 이용될 결합 단백질 제약 조성물의 유효량은 예를 들어 치료적 맥락 및 목적에 따라 달라질 것이다. 따라서 당업자라면 치료에 적절한 투여 수준이 부분적으로는 전달되는 분자, 결합 단백질이 사용되는 증후, 투여 경로, 및 환자의 크기 (체중, 체표면적, 또는 기관 크기) 및 상태 (연령 및 종합 건강)에 따라 달라짐을 알 것이다. 따라서, 임상의는 투여량을 적정하고 투여 경로를 변경시켜 최적의 치료 효과를 얻을 수 있다.
투약 빈도는 사용되는 제형 중 결합 단백질의 약동학적 파라미터에 따라 달라질 것이다. 전형적으로, 임상의는 원하는 효과를 달성하는 투여량에 도달될 때까지 조성물을 투여할 것이다. 따라서 조성물은 단회 용량으로서, 시간이 지남에 따른 2회 이상의 용량 (이는 동일한 양의 원하는 분자를 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있음)으로서, 또는 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입물로서 투여될 수 있다. 적절한 투여량의 추가의 개량은 당업자에 의해 일상적으로 이루어지며, 당업자에 의해 일상적으로 수행되는 과제의 영역 내에 있다. 적절한 투여량은 적절한 용량-반응 데이터의 사용을 통하여 규명될 수 있다.
제약 조성물의 투여 경로는 공지된 방법, 예를 들어 경구적 방법에 따르거나; 정맥내, 복강내, 뇌내 (뇌실질내), 뇌실내, 근육내, 안내, 동맥내, 문맥내, 또는 병변내 경로에 의한 것이거나; 지속 방출 시스템에 의한 것이거나; 또는 이식 장치에 의한 것이다. 원할 경우, 조성물은 볼루스 주사에 의해 또는 주입에 의해 계속적으로, 또는 이식 장치에 의해 투여될 수 있다.
조성물은 또한 원하는 분자가 흡수되었거나 봉지된 막, 스펀지, 또는 기타 적절한 물질의 이식을 통하여 국소 투여될 수 있다. 이식 장치가 사용될 경우, 상기 장치는 임의의 적합한 조직 또는 기관 내에 이식될 수 있으며, 원하는 분자의 전달은 확산, 정시 방출형 볼루스, 또는 연속 투여를 통한 것일 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명은 증식성 질환 또는 장애(예를 들어, 암)의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것이다. 일부 실시 양태에서, 본 방법은 환자에게 본원에 개시된 결합 단백질들 중 적어도 하나의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 환자는 인간이다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 하나 이상의 항암 요법제(예를 들어, 본 기술 분야에 공지된 임의의 항암 요법제)와 조합되어 투여된다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 상기 하나 이상의 항암 요법제 전에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 상기 하나 이상의 항암 요법제와 동시에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 상기 하나 이상의 항-레트로바이러스 요법제 후에 투여된다.
일부 실시 양태에서, 본 발명은 염증성 질환 또는 장애(예를 들어, 암)의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것이다. 일부 실시 양태에서, 본 방법은 환자에게 본원에 개시된 결합 단백질들 중 적어도 하나의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 환자는 인간이다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 하나 이상의 항염증 요법제(예를 들어, 본 기술 분야에 공지된 임의의 항염증 요법제)와 조합되어 투여된다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 상기 하나 이상의 항염증 요법제 전에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 상기 하나 이상의 항염증 요법제와 동시에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 상기 적어도 하나의 결합 단백질은 상기 하나 이상의 항염증 요법제 후에 투여된다.
본 발명을 제한하지 않고서, 본 발명의 다수의 실시 양태는 예시의 목적으로 하기에 기술된다.
아이템 1:
하나 이상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질로서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하는, 결합 단백질.
아이템 2:
하나 이상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질로서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하는, 결합 단백질.
아이템 3:
제2 및/또는 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하는, 아이템 1의 결합 단백질.
아이템 4:
L1, L2, L3 또는 L4 중 적어도 하나는 독립적으로 길이가 0개의 아미노산인, 아이템 1 내지 3 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 5:
L1, L2, L3 또는 L4는 각각 독립적으로 길이가 적어도 1개의 아미노산인, 아이템 1 내지 3 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 6:
(a) L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 길이가 0개의 아미노산이거나, GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하거나; 또는 (b) L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는, 아이템 1 내지 3 및 5 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 7:
(a)
L1은 서열 GQPKAAP (서열 번호 175)를 포함하며, L2는 서열 TKGPS (서열 번호 106)를 포함하며, L3은 서열 S를 포함하며, L4는 서열 RT를 포함하거나;
(b)
L1은 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L2는 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이거나;
(c)
L1은 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L2는 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이거나; 또는
(d)
L1은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L2는 길이가 0개의 아미노산이며, L3은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L4는 길이가 0개의 아미노산인, 아이템 1 내지 5 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 8:
3특이성이며, 3가지의 상이한 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있는, 아이템 1 내지 7 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 9:
T 세포 상의 2개의 표적 단백질 및 하나의 종양 표적 단백질에 상응하는 3개의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는, 아이템 1 내지 8 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 10:
상기 T 세포 상의 표적 단백질들 중 하나는 CD3인, 아이템 9의 결합 단백질.
아이템 11:
상기 T 세포 상의 표적 단백질들 중 하나는 CD28인, 아이템 9 또는 아이템 10의 결합 단백질.
아이템 12:
상기 종양 표적 단백질은 CD38인, 아이템 9 내지 11 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 13:
T 세포 상의 2개의 표적 단백질 및 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 표적 단백질에 상응하는 3개의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는, 아이템 1 내지 8 중 어느 하나의 결합 단백질: A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4, B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1.
아이템 14:
하나 이상의 표적 단백질의 기능을 억제할 수 있는, 아이템 1 내지 13 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 15:
상기 하나 이상의 표적 단백질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 아이템 14의 결합 단백질: A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4, B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1.
아이템 16:
3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질로서, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
(a) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 및 167 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나; 또는
(b) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125, 138 내지 140, 및 149 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며;
(a) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 및 166 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나; 또는
(b) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122, 및 126 내지 128 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 결합 단백질.
아이템 17:
3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질로서, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
(a) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 및 167 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나; 또는
(b) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 43 내지 59, 123 내지 125, 138 내지 140, 및 149 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며;
(a) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 및 166 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나; 또는
(b) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 25 내지 42, 120 내지 122, 및 126 내지 128 중 어느 하나로 개시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 결합 단백질.
아이템 18:
제2 및/또는 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하는, 아이템 16의 결합 단백질.
아이템 19:
L1, L2, L3 또는 L4 중 적어도 하나는 독립적으로 길이가 0개의 아미노산인, 아이템 16 내지 18 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 20:
L1, L2, L3 또는 L4는 각각 독립적으로 길이가 적어도 1개의 아미노산인, 아이템 16 내지 18 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 21:
(a) L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 길이가 0개의 아미노산이거나, GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하거나; 또는 (b) L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는, 아이템 16 내지 18 및 20 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 22:
(a)
L1은 서열 GQPKAAP (서열 번호 175)를 포함하며, L2는 서열 TKGPS (서열 번호 106)를 포함하며, L3은 서열 S를 포함하며, L4는 서열 RT를 포함하거나;
(b)
L1은 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L2는 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이거나;
(c)
L1은 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L2는 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이거나; 또는
(d)
L1은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L2는 길이가 0개의 아미노산이며, L3은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L4는 길이가 0개의 아미노산인, 아이템 16 내지 22 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 23:
(a) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(b) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(c) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(d) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(e) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(f) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(g) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(h) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(i) VH1은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나; 또는
(j) VH1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 아이템 16 내지 22 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 24:
3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질로서, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
(a) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 169, 171, 및 173 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나; 또는
(b) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 141 내지 147, 178, 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며;
(a) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 168, 170, 및 172 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나; 또는
(b) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 129 내지 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 결합 단백질.
아이템 25:
3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질로서, 여기서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1-힌지-CH2-CH3으로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
CH2는 면역글로불린 CH2 중쇄 불변 도메인이며;
CH3은 면역글로불린 CH3 중쇄 불변 도메인이며;
힌지는 CH1 및 CH2 도메인을 연결하는 면역글로불린 힌지 영역이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하며;
(a) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 169, 171, 및 173 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나; 또는
(b) VL1, VL2 및 VL3은 각각 독립적으로 서열 번호 141 내지 147, 178, 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하며;
(a) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 168, 170, 및 172 중 어느 하나로 개시된 가변 도메인 서열을 포함하거나; 또는
(b) VH1, VH2 및 VH3은 각각 독립적으로 서열 번호 129 내지 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 결합 단백질.
아이템 26:
제2 및/또는 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하는, 아이템 24의 결합 단백질.
아이템 27:
L1, L2, L3 및 L4 중 적어도 하나는 독립적으로 길이가 0개의 아미노산인, 아이템 24 내지 26 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 28:
L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 길이가 적어도 1개의 아미노산인, 아이템 24 내지 26 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 29:
(a) L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 길이가 0개의 아미노산이거나, GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하거나; 또는 (b) L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 GGGGSGGGGS (서열 번호 104), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105), S, RT, TKGPS (서열 번호 106), GQPKAAP (서열 번호 175), 및 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는, 아이템 24 내지 26 및 28 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 30:
(a)
L1은 서열 GQPKAAP (서열 번호 175)를 포함하며, L2는 서열 TKGPS (서열 번호 106)를 포함하며, L3은 서열 S를 포함하며, L4는 서열 RT를 포함하거나;
(b)
L1은 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L2는 서열 GGGGSGGGGS (서열 번호 104)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이거나;
(c)
L1은 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L2는 서열 GGSGSSGSGG (서열 번호 148)를 포함하며, L3은 길이가 0개의 아미노산이며, L4는 길이가 0개의 아미노산이거나; 또는
(d)
L1은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L2는 길이가 0개의 아미노산이며, L3은 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 105)를 포함하며, L4는 길이가 0개의 아미노산인, 아이템 24 내지 28 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 31:
(a) VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(b) VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(c) VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(d) VH1은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(e) VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(f) VH1은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(g) VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(h) VH1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(i) VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나;
(j) VH1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL1은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH2는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL2는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; VH3은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하며; VL3은 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 아이템 24 내지 30 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 32:
제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V인, 아이템 1, 3 내지 16, 18 내지 24 및 26 내지 31 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 33:
제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제1 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W인, 아이템 1, 3 내지 16, 18 내지 24 및 26 내지 31 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 34:
일부 실시 양태에서, 제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 428 및 434에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 M428L 및 N434S인, 아이템 1, 3 내지 16, 18 내지 24 및 26 내지 33 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 35:
제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이고; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V인, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25 및 27 내지 31 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 36:
제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 349, 366, 368, 및 407에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V이고; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W인, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25 및 27 내지 31 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 37:
제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬 둘 다의 CH3 도메인들은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 428 및 434에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 M428L 및 N434S인, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25 및 27 내지 31, 35 및 36 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 38:
제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 또는 IgG4 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 중 하나만이 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F인, 아이템 1, 3 내지 16, 18 내지 24, 및 26 내지 34 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 39:
제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인들은 인간 IgG1 또는 IgG4 CH3 도메인이며, 상기 CH3 도메인들 중 하나만이 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F인, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25, 27 내지 31, 및 35 내지 37 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 40:
제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 228 및 409에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S228P 및 R409K인, 아이템 1, 3 내지 16, 18 내지 24, 26 내지 34 및 38 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 41:
제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인들은 인간 IgG4 CH3 도메인이며, 상기 CH3 도메인 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 228 및 409에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 S228P 및 R409K인, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25, 27 내지 31, 35 내지 37 및 39 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 42:
제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역은 인간 IgG4 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 F234A 및 L235A인, 아이템 1, 3 내지 16, 18 내지 24, 26 내지 34, 38 및 40 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 43:
제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인들은 인간 IgG4 CH3 도메인이며, 상기 CH3 도메인 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 F234A 및 L235A인, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25, 27 내지 31, 35 내지 37, 39 및 41 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 44:
제2 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제1 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제1 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 제3 폴리펩티드 사슬은 CH1에 연결된 제2 Fc 영역을 추가로 포함하며, 상기 제2 Fc 영역은 면역글로불린 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 포함하고; 여기서, 제1 및 제2 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이며; 상기 제1 및 제2 Fc 영역 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 L234A 및 L235A인, 아이템 1, 3 내지 16, 18 내지 24, 26 내지 34, 38 및 40 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 45:
제2 폴리펩티드 사슬 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인들은 인간 IgG1 CH3 도메인이며, 상기 CH3 도메인 각각은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG4의 위치 234 및 235에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서, 상기 아미노산 치환은 L234A 및 L235A인, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25, 27 내지 31, 35 내지 37, 39 및 41 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 46:
VH1 및 VL1은 인간 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 CD28에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하는, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25, 27 내지 31, 35 내지 37, 39, 41, 43, 및 45 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 47:
VH1 및 VL1은 인간 CD28에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하는, 아이템 2, 4 내지 15, 17, 19 내지 23, 25, 27 내지 31, 35 내지 37, 39, 41, 43, 및 45 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 48:
제3 항원 결합 부위는 CD19, CD20, CD38, Her2, 및 LAMP1로 이루어진 군으로부터 선택되는 인간 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는, 아이템 46 또는 아이템 47의 결합 단백질.
아이템 49:
CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 하기를 포함하는, 아이템 46 내지 48 중 어느 하나의 결합 단백질:
(a) 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는
(b) 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인.
아이템 50:
CD28에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 하기를 포함하는, 아이템 46 내지 49 중 어느 하나의 결합 단백질:
(a) 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는
(b) 서열 번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인.
아이템 51:
종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 하기를 포함하는, 아이템 46 내지 50 중 어느 하나의 결합 단백질:
(a) 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
(b) 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
(c) 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
(d) 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는
(e) 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인.
아이템 52:
(a)
VH1 및 VL1은 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나;
(b) VH1 및 VL1은 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나;
(c) VH1 및 VL1은 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나;
(d) VH1 및 VL1은 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나;
(e) VH1 및 VL1은 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하거나; 또는
(f) VH1 및 VL1은 인간 IL13에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하며, VH2 및 VL2는 인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하며, VH3 및 VL3은 인간 IL4에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 형성하는, 아이템 2, 17, 35 내지 37, 39, 41, 43, 및 45 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 53:
인간 TNFa에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 아이템 52의 결합 단백질.
아이템 54:
인간 IL4에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 아이템 52 또는 아이템 53의 결합 단백질.
아이템 55:
인간 IL13에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 아이템 52 내지 54 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 56:
(a)
제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이거나; 또는
(b) 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인인, 아이템 1 내지 55 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 57:
일부 실시 양태에서, 제1 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이며; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함하는, 아이템 2, 17, 25, 35 내지 37, 39, 41, 및 43 내지 55 중 어느 하나의 결합 단백질.
아이템 58:
제1 폴리펩티드 사슬, 제2 폴리펩티드 사슬, 제3 폴리펩티드 사슬 및 제4 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질로서, 여기서,
(a) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 1의 아미노산 서열 또는 서열 번호 1의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 2의 아미노산 서열 또는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(b) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 1의 아미노산 서열 또는 서열 번호 1의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 2의 아미노산 서열 또는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(c) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 13의 아미노산 서열 또는 서열 번호 13의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 14의 아미노산 서열 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(d) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 13의 아미노산 서열 또는 서열 번호 13의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 14의 아미노산 서열 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(e) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 17의 아미노산 서열 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 18의 아미노산 서열 또는 서열 번호 18의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(f) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 17의 아미노산 서열 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 18의 아미노산 서열 또는 서열 번호 18의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(g) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 21의 아미노산 서열 또는 서열 번호 21의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 22의 아미노산 서열 또는 서열 번호 22로부터 선택되는 것 등의 프로테아제 저항성 펩티드 링커에 의해 대체되고/되거나;
(h) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 21의 아미노산 서열 또는 서열 번호 21의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 22의 아미노산 서열 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(i) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 61의 아미노산 서열 또는 서열 번호 61의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(j) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 61의 아미노산 서열 또는 서열 번호 61의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(k) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 60의 아미노산 서열 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 71의 아미노산 서열 또는 서열 번호 71의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(l) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 76의 아미노산 서열 또는 서열 번호 76의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 75의 아미노산 서열 또는 서열 번호 75의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(m) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 82의 아미노산 서열 또는 서열 번호 82의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 81의 아미노산 서열 또는 서열 번호 81의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(n) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 88의 아미노산 서열 또는 서열 번호 88의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 87의 아미노산 서열 또는 서열 번호 87의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(o) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 94의 아미노산 서열 또는 서열 번호 94의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 93의 아미노산 서열 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(p) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(q) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 69의 아미노산 서열 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 68의 아미노산 서열 또는 서열 번호 68의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(r) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 73의 아미노산 서열 또는 서열 번호 73의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 74의 아미노산 서열 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(s) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 63의 아미노산 서열 또는 서열 번호 63의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 62의 아미노산 서열 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 85의 아미노산 서열 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 86의 아미노산 서열 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(t) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 4의 아미노산 서열 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 114의 아미노산 서열 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 115의 아미노산 서열 또는 서열 번호 115의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(u) 제1 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 10의 아미노산 서열 또는 서열 번호 10의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제2 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제3 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 114의 아미노산 서열 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며; 제4 폴리펩티드 사슬은 서열 번호 115의 아미노산 서열 또는 서열 번호 115의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
아이템 59:
아이템 1 내지 58 중 어느 하나의 결합 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자.
아이템 60:
아이템 59의 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
아이템 61:
아이템 59의 핵산 분자를 포함하는 단리된 숙주 세포.
아이템 62:
아이템 60의 발현 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
아이템 63:
포유류 세포 또는 곤충 세포인, 아이템 61 또는 아이템 62의 단리된 숙주 세포.
아이템 64:
아이템 1 내지 58 중 어느 하나의 결합 단백질 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
아이템 65:
아이템 1 내지 23 및 32 내지 58 중 어느 하나의 적어도 하나의 결합 단백질 또는 아이템 64의 제약 조성물의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서의 암의 예방 및/또는 치료 방법.
아이템 66:
결합 단백질은 T-세포 표면 단백질에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 부위 및 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 또 다른 항원 결합 부위를 포함하는, 아이템 65의 방법.
아이템 67:
결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 CD19, CD20, CD38, Her2, 및 LAMP1로 이루어진 군으로부터 선택되는 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함하는, 아이템 66의 방법.
아이템 68:
상기 적어도 하나의 결합 단백질은 화학요법제와 함께 공동투여되는, 아이템 65 내지 67 중 어느 하나의 방법.
아이템 69:
아이템 1 내지 15, 24 내지 45 및 52 내지 58 중 어느 하나의 적어도 하나의 결합 단백질 또는 아이템 64의 제약 조성물의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서의 염증성 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료 방법.
아이템 70:
결합 단백질은 IL-4, IL-13 및 TNFa로 이루어진 군으로부터 선택되는 사이토카인 표적 단백질에 각각이 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 포함하는, 아이템 69의 방법.
아이템 71:
상기 적어도 하나의 결합 단백질은 항염증제와 함께 공동 투여되는, 아이템 69 또는 아이템 70의 방법.
아이템 72:
환자는 인간인, 아이템 65 내지 71 중 어느 하나의 방법.
아이템 73:
결합 단백질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 표적 단백질의 기능을 억제할 수 있는, 아이템 65 또는 아이템 69의 방법: A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4, B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1.
아이템 74:
환자에서의 암의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한, 아이템 1 내지 23 및 32 내지 58 중 어느 하나의 결합 단백질 또는 아이템 64의 조성물.
아이템 75:
결합 단백질은 T-세포 표면 단백질에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 부위 및 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 또 다른 항원 결합 부위를 포함하는, 아이템 74의 용도를 위한 결합 단백질 또는 조성물.
아이템 76:
결합 단백질은 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위, CD28에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위, 및 CD19, CD20, CD38, Her2, 및 LAMP1로 이루어진 군으로부터 선택되는 종양 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 제3 항원 결합 부위를 포함하는, 아이템 75의 용도를 위한 결합 단백질 또는 조성물.
아이템 77:
결합 단백질은 화학요법제와 함께 공동투여되는, 아이템 74 내지 76 중 어느 하나의 용도를 위한 결합 단백질 또는 조성물.
아이템 78:
환자에서의 염증성 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한, 아이템 1 내지 15, 24 내지 45, 및 52 내지 58 중 어느 하나의 결합 단백질 또는 아이템 64의 조성물.
아이템 79:
결합 단백질은 IL-4, IL-13 및 TNFa로 이루어진 군으로부터 선택되는 사이토카인 표적 단백질에 각각이 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 포함하는, 아이템 78의 용도를 위한 결합 단백질 또는 조성물.
아이템 80:
결합 단백질은 항염증제와 함께 공동투여되는, 아이템 78 또는 아이템 79의 용도를 위한 결합 단백질 또는 조성물.
아이템 81:
환자는 인간인, 아이템 74 내지 80 중 어느 하나의 용도를 위한 결합 단백질 또는 조성물.
아이템 82:
결합 단백질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 표적 단백질의 기능을 억제할 수 있는, 아이템 74 또는 아이템 78의 용도를 위한 결합 단백질 또는 조성물: A2AR, APRIL, ATPD아제, BAFF, BAFFR, BCMA, BlyS, BTK, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4, B7H5, B7H6, B7H7, B7RP1, B7-4, C3, C5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, 키티나아제, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라아제 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNα, IgE, IGF1R, IL2R베타, IL1, IL1A, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhIL10, IL12, IL13, IL13Ra1, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, 렙틴, LPFS2, MHC 클래스 II, NCR3LG1, NKG2D, NTPD아제-1, OX40, OX40L, PD-1H, 혈소판 수용체, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk 키나아제, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM, 및 XCR1.
아이템 83:
하기 단계를 포함하는, 숙주 세포에 의해 생성된 결합 단백질의 정제 방법:
(a) 숙주 세포에서 아이템 2, 17, 25, 35 내지 37, 41, 43, 45, 및 46 내지 55 중 어느 하나의 결합 단백질을 생성하는 단계로서, 제2 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인 중 하나만이 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1 또는 IgG4의 위치 435 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서, 상기 아미노산 치환은 H435R 및 Y436F인, 단계;
(b) (a)에서 생성된 결합 단백질을 단백질 A와 접촉시키는 단계; 및
(c) 상기 결합 단백질을 H435R 및 Y436F인 아미노산 치환을 포함하는 0 또는 2개의 CH3 도메인을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 단백질 A로부터 용출시키는 단계.
아이템 84:
제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이거나; 또는 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 하기 단계를 추가로 포함하는, 아이템 83의 방법:
(d) (c)에서 용출시킨 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체와 접촉시키는 단계; 및
(e) 상기 결합 단백질을 람다 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체로부터 용출시키는 단계.
아이템 85:
단계 (e) 후에 하기 단계를 추가로 포함하는, 아이템 84의 방법:
(f) (e)에서 용출시킨 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체와 접촉시키는 단계; 및
(g) 상기 결합 단백질을 카파 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체로부터 용출시키는 단계.
아이템 86:
제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이거나; 또는 제1 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 람다 CL 도메인이며, 제4 폴리펩티드 사슬의 CL 도메인은 인간 카파 CL 도메인이며, 하기 단계를 추가로 포함하는, 아이템 83의 방법:
(d) (c)에서 용출시킨 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체와 접촉시키는 단계; 및
(e) 상기 결합 단백질을 카파 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 람다 경쇄 친화성 매체로부터 용출시키는 단계.
아이템 87:
단계 (e) 후에 하기 단계를 추가로 포함하는, 아이템 86의 방법:
(f) (e)에서 용출시킨 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체와 접촉시키는 단계; 및
(g) 상기 결합 단백질을 람다 CL 도메인만을 포함하는 결합 단백질들로부터 단리하기에 적합한 조건 하에, 상기 결합 단백질을 카파 경쇄 친화성 매체로부터 용출시키는 단계.
아이템 88:
제1 폴리펩티드 사슬은 람다 CL 도메인을 포함하며; 여기서, 제83 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 354 및 366에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 S354C 및 T366W이며; 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 EU 인덱스에 따른 인간 IgG1의 위치 349, 366, 368, 407, 435, 및 436에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F이고; 제4 폴리펩티드 사슬은 카파 CL 도메인을 포함하는, 아이템 83 내지 87 중 어느 하나의 방법.
아이템 89:
결합 단백질은 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)를 사용하여 (c) 및 (e) 중 하나 이상에서 검출되는, 아이템 83 내지 88 중 어느 하나의 방법.
아이템 90:
제2 및 제3 폴리펩티드 사슬의 CH3 도메인은 인간 IgG1 또는 IgG4 CH3 도메인인, 아이템 83 내지 89 중 어느 하나의 방법.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 특정 실시 양태 및 이의 다양한 용도를 예시하는 것이다. 본 실시예는 단지 설명 목적을 위하여 개시되며, 어떠한 방식으로든지 본 발명의 범주를 한정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1: 재료 및 방법
하기 재료 및 방법을 실시예 2 내지 5에 설명한 실험에 사용하였다.
3특이성 항체의 설계
일반적인 3특이성 항체의 설계의 계략도가 도 1a 내지 도 1c에 도시되어 있다. 개별적인 3특이성 항체를 다음 5가지 파라미터를 기반으로 하여 설계하였다: 1) 항체 결합 부위의 선택; 2) 각각의 결합 부위의 위치의 고려; 3) 2특이성 결합 아암(즉, 도 1c에서 중쇄/경쇄 B)을 위한 링커의 선택; 4). 항체의 각각의 절반 내로의 "놉" 및 "홀" 돌연변이의 통합; 5) Fc 이소타입(IgG1 또는 IgG4)의 선택. 각각의 3특이성 분자를 위한 아미노산 서열들의 조립 후, 각각의 3특이성 Ab를 위한 4개의 유전자를 인간이 선호하는 코돈을 이용하여 합성하고(미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 CambrY Applied Biosciences), 진핵 발현 벡터 내로 클로닝하였다.
3특이성 항체의 생성 및 정제
제조업자의 프로토콜에 따라 ExpiFectamine™ 293 트랜스펙션 키트(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 4가지의 발현 플라스미드로 Expi293 세포를 일시적으로 트랜스펙션시켜 3특이성 항체를 생성하였다. 간략하게는, 25% (w/w)의 각각의 플라스미드를 Opti-MEM에서 희석시키고, 사전 희석시킨 ExpiFectamine 시약과 실온(RT)에서 20 내지 30분 동안 혼합하고, Expi293 세포 (2.5x106개의 세포/ml)에 첨가하였다. 종종 플라스미드들의 최상의 비를 결정하기 위한 트랜스펙션의 최적화를 이용하여 수율 및 순도가 양호한 3특이성 항체를 생성하였다.
트랜스펙션한지 4 내지 5일 후, 트랜스펙션된 세포로부터의 상청액을 수집하고, 0.45 ㎛ 필터 유닛(Nalgene)을 통하여 여과시켰다. 상청액 중 3특이성 항체를 3단계 절차를 이용하여 정제하였다. 첫째, 단백질 A 친화성 정제를 이용하였으며, 결합된 Ab를 "IgG 용출용 완충액"(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 용출시켰다. 둘째, 생성물을 PBS (pH7.4)에 대하여 하룻밤 투석시켰으며, 이때 PBS 완충액을 2회 교환하였다. 다음 단계 전에 0.45 ㎛ 필터 유닛(Nalgene)을 통한 여과에 의해 임의의 침전물을 제거하였다. 셋째, 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 정제(Hiload 16/600 Superdex 200pg, 또는 Hiload 26/600 Superdex 200pg, GE Healthcare)를 이용하여 프렙(prep) 중 응집물 및 다른 종들을 제거하였다. 분획을 환원 및 비-환원 SDS-PAGE에서 분석하여 단량체형 3특이성 항체를 함유하는 분획들을 확인한 후 이들을 합하였다. 정제된 항체를 분취하여 -80℃에서 장시간 보관할 수 있다.
ELISA 분석
정제된 항체의 결합 특성을 ELISA법 또는 SPR법 중 어느 하나를 이용하여 분석하였다. ELISA에 있어서, 3특이성 항체에서의 각각의 결합 부위에 대하여 상응하는 항원을 이용하여, PBS(pH7.4) 중 2 ㎍/ml의 각각의 항원을 사용하여 96웰 Immuno Plate(Nunc 439454, Thermo Fisher Scientific)를 4℃에서 하룻밤 코팅하였다. 코팅된 플레이트를 5% 탈지유+2% BSA(PBS 중)를 사용하여 실온에서 1시간 동안 차단시키고, 이어서 PBS+0.25% 트윈(Tween) 20으로 3회 세척하였다(Aqua Max 400, Molecular Devices). 항체들(3특이성 및 대조 Ab)의 연속 희석물을 제조하고, ELISA 플레이트에 첨가하고(100 ㎕/웰, 이중으로), 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시키고, 이어서 PBS+0.25% 트윈 20으로 5회 세척하였다.
세척 후, HRP 콘쥬게이션된 이차 항-인간 Fab (1:5000, 카탈로그 번호 109-035-097, Jackson ImmunoResearch Inc)를 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. PBS+0.25% 트윈 20으로 5회 세척한 후, 100 ㎕의 TMB 마이크로웰 퍼옥시다아제 기질(미국 메릴랜드주 게이더스버그 소재의 KPL)을 각각의 웰에 첨가하였다. 반응을 50 ㎕의 1 M H2SO4의 첨가에 의해 종료하고, OD450을 SpectraMax M5(Molecular Devices)를 사용하여 측정하고, SoftMax Pro6.3 소프트웨어(Molecular Devices)를 사용하여 분석하였다. 최종 데이터를 GraphPad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 소재의 GraphPad Software)로 전달하고 플로팅하였으며, 이는 예시된 바와 같다. EC50을 상기 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.
SPR 분석
중쇄 및 경쇄의 2개의 쌍을 전체 속도 분석(full kinetic analysis)을 위하여 선택하였다. 정제된 항체의 동역학적 특성화를 BIACORE 3000(GE Healthcare)에서 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술을 이용하여 수행하였다. 조사된 항체들의 태그 특이적 항체 포획 및 배향을 이용한 포획 분석을 이용하였다. Fc 함유 단백질 구축물들의 포획을 위하여 인간 항체 포획 키트(GE Healthcare)를 사용하였으며, His 태그 함유 단백질 구축물들의 포획을 위하여 His 포획 키트(GE Healthcare)를 사용하였다. 표준 절차를 이용하여 연구용 등급의 CM5 칩(GE Life Sciences) 상의 일차 아민 기를 통하여 포획 항체를 고정시켰다(11000 RU). 전형적으로 30 RU의 최대 피분석물 결합 신호를 생성하는 조정된 RU 값을 이용하여 10 μL/분의 유량에서 분석 항체를 포획하였다.
예시적인 분석에 있어서, 재조합 인간 IL13(카탈로그 번호 IL012) 및 인간 IL4(카탈로그 번호 IL004)를 Millipore로부터 구매하고, 재조합 인간 TNFα(카탈로그 번호 H8916)를 Sigma Aldrich로부터 구매하였다. 결합 반응 속도를 재조합 인간 IL4 및 IL13에 대하여, IL4의 경우 0.1 내지 3 nM의 농도 범위에 걸쳐, 그리고 IL13의 경우 0.8 내지 25 nM의 농도 범위에 걸쳐 측정하였다. 인간 TNFα에 있어서, 3 내지 100 nM의 농도 범위를 이용하였다. 분석용 완충제로서 HBS EP (10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.005% Surfactant P20)를 30 ㎕/분의 유량으로 사용하였다. 칩 표면을 각각의 포획 키트의 재생 용액을 이용하여 재생시켰다. BIAevaluation 프로그램 패키지 v4.1에서 기준물로서 포획 항체가 없는 유동 세포를 사용하고 1:1 Langmuir binding model with mass transfer를 사용하여 동역학적 파라미터를 분석 및 계산하였다. 항원들의 동시 결합을 연구하기 위하여, 3특이성 항체를 항-인간 항체 포획 표면에 의해 포획하였다. 항원들을 단일 농도로 사용하였으며, 이때 IL4는 3 nM로, IL13은 25nM로, 그리고 TNFα는 100nM로 하였다. 모든 3가지 항원의 동시 결합을 보여주기 위하여, IL4, IL13 및 TNFα의 혼합물을 주입하였다. 별개의 분석 사이클에서, IL13을 단독으로 주입하고, 이어서 IL4 또는 TNFα 중 어느 하나를 주입하고, 이어서 IL4/TNFα를 공동주입하거나 TNFα/IL4를 공동주입하였다. 각각의 사이클에서 측정된 최종 응답을 비교하여 2가지 또는 3가지 항원의 연이은 결합과 모든 3가지 항원의 혼합물의 동시 결합의 유사성을 보여주었다.
시험관 내 T 세포 활성화 및 증식 분석
인간 PBMC를 Ficoll-Paque Plus법을 사용하여 Blood Research Component(미국 매사추세츠주 브루클린 소재)로부터 구매한 버피 코트(buffy coat)로부터 정제하였다. 간략하게는, 신선한 버피 코트를 먼저 PBS(pH7.4)에서 1:3의 비로 희석시키고, Ficoll-Paque Plus 용액(Ficoll)과 철저히 혼합한 후, 그 병을 수 회 뒤집음으로써 사용하였다. 15 mL의 밀도 구배 매질을 각각의 Leucosep® 튜브에 첨가하고, 1000xg, 실온에서 30s 동안 스핀하였다. 이제 상기 매질은 다공성 장벽 아래에 위치한다. 그 후, 30 내지 40mL의 희석 버피 코트를 각각의 Leucosep 튜브에 조심스럽게 붓고, 800 x g에서 실온에서 15분 동안 원심분리시켰으며, 이때 brake off and Max accel은 5였다. 혈장층을 제거하고, 풍부화된 PBMC를 함유하는 나머지의 상청액을 새로운 튜브로 옮겼다(Leucosep 튜브는 2초보다 긴 시간 동안 뒤집어진 위치로 유지된 것은 아님). 풍부화된 PBMC를 45 ml PBS로 세척하고, 250 x g에서 실온에서 10분 동안 스핀다운하였다. 세척을 반복하고, 다수의 튜브를 하나로 합하였다. 세포를 20 mL PBS에 재현탁시키고, Bio-Rad TC20을 이용하여 계수하였다.
시험관 내 T 세포 활성화 분석을 준비하기 위하여, 정제된 인간 PBMC를 배양 배지(10% FBS를 포함하고 글루타민/스트렙토마이신이 보충된 RPMI1640)(Thermo Fisher Scientific)에 재현탁시켰다(106개의 세포/ml). 표시된 농도의 상이한 3특이성 항체 및 대조 항체를 각각의 웰에 첨가하거나, 이를 사용하여 플레이트를 코팅한 후 사용하였으며(문헌[Stebbings, R. et al. (2007) J. Immunol. 179:3325-3331]에 기술된 바와 같음), 조직 배양 인큐베이터에서 16 내지 24시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 스핀다운하고, 상청액을 사이토카인 방출량 측정용으로 수집하거나, 버렸다. 세포를 T 세포 마커(CD3, CD4, CD8 등) 및 활성화 마커(CD69, CD62L 등)에 대한 형광 표지 항체로 염색하고, 샘플을 Fortessa 유세포 분석기(미국 캘리포니아주 새너제이 소재의 Beckton Dickinson)에서 러닝(running)시킴으로써 분석하고, 이어서 Flowjo 소프트웨어(FlowJo v10)를 이용하여 분석하고 플로팅하였으며, 이는 예시된 바와 같다.
시험관 내 T 세포 증식 분석을 준비하기 위하여, 정제된 인간 PBMC를 배양 배지(10% FBS를 포함하고 글루타민/스트렙토마이신이 보충된 RPMI1640)(Thermo Fisher Scientific)에 재현탁시켰다(106개의 세포/ml). 표시된 농도의 상이한 3특이성 항체 및 대조 항체를 각각의 웰에 첨가하고, 조직 배양 인큐베이터에서 1 내지 7일 동안 인큐베이션하였다. 세포를 스핀다운하고, 상청액을 사이토카인 방출량 측정용으로 수집하거나, 버렸다. 세포를 T 세포 마커(CD3, CD4, CD8 등) 및 활성화 마커(CD69, CD62L 등)에 대한 형광 표지 항체로 염색하고, 샘플을 Fortessa 유세포 분석기(미국 캘리포니아주 새너제이 소재의 Beckton Dickinson)에서 러닝시킴으로써 분석하고, 이어서 Flowjo 소프트웨어(FlowJo v10)를 이용하여 분석하고 플로팅하였으며, 이는 예시된 바와 같다.
시험관 내 세포 사멸 분석
상이한 3특이성 항체들을 사용하여 다양한 암세포에 대한 시험관 내 사멸 분석에 정제된 인간 PBMC를 사용하였다. 간략하게는, 사멸 분석을 96웰 V자형 바닥 플레이트에서 준비하였다. 각각의 플레이트에 있어서, 각각의 공여자로부터의 40 ml의 PBMC를 2x10^6개의 세포/ml로 도말하고, 30 ml의 PKH26 (Sigma #MINI26) 표지 표적 세포(2.5x10^5개의 세포/ml)(1x10^7개까지의 세포를 염색하기 위한 4 μL의 염색제)를 준비하였다. 처음에 20 μL/웰의 테스트용 단백질(다양한 농도) 또는 PMA를 각각의 웰에 첨가하고, 이어서 80 μL/웰의 표지된 표적 세포를 각각의 웰에 첨가하였다(2X10^4개의 세포/웰). 그 후 100 μL의 PBMC를 각각의 웰에 첨가하여, E:T=10:1의 웰에 도달하고(2x10^5개의 세포/웰), 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 스핀다운하고, 상청액을 사이토카인 방출량 측정용으로 수집하거나, 버렸다. 세포를 Vivid LIVE/DEAD™ Fixable Violet Dead Cell Staining 완충액(Life Technology #L34955)을 이용하여 염색하였다(염색 완충액은 60 μL의 Vivid 시약을 60 ml의 PBS에 첨가함으로서 제조함). 암소에서 실온에서 15분 동안 인큐베이션함에 의해 100 μL 염색 완충액에 세포를 재현탁시켰다. 세포를 1xPBS로 세척한 후, 세포를 0.5% 파라포름알데히드를 포함하는 200 μL PBS에 재현탁시키고, PKH26+Vivid+ 암세포를 Fortessa 유세포 분석기(미국 캘리포니아주 새너제이 소재의 Beckton Dickinson)에 의해 수집하고, 이어서 Flowjo 소프트웨어를 이용하여 분석하였다. 사멸률을 "특이적 사멸-자연 사멸/총 세포"로 계산하여 플로팅하였으며, 이는 예시된 바와 같다.
사이토카인 방출 분석
시험관 내 활성화 분석, 시험관 내 사멸 분석, CD34+ 제대 세포 인간화 NSG 마우스에서의 생체 내 활성화 분석, 및 독성 연구에서의 염증성 사이토카인 농도의 측정을 위하여, 세포 배양 상청액을 수집하고, 혈청 샘플을 Milliplex Human High Sensitivity T cell 13-plex 키트(EMD Millipore)를 사용하여 제조업자의 프로토콜에 따라 희석시켰다. 상기 샘플을 후속적으로 EMD Millipore MAGPIX® System, 및 MILLIPLEX® Analyst 5.1 소프트웨어에 의해 분석하였다.
생체 내용 마우스 모델 및 효능 연구
인간 CD34+ 조혈 줄기 세포-생착된 NSG 마우스(hu-CD34)를 생체 내용 마우스 모델로서 사용하였다. 이러한 마우스는 다중-계열 인간 면역 세포가 발달하며, 면역-항암(immuno-oncology) 효능 연구를 위한 인증된 플랫폼(platform)이다(예를 들어, 문헌[Shultz, L.D. et al. (2014) Cold Spring Harb. Protoc. 2014:694-708] 참조). Hu-CD34+ NSG 마우스는 T 세포, B 세포 및 일부 다른 집단을 포함하는 인간 면역 세포 집단의 효과적인 다중-계열 생착을 보여주는 CD34+ 조혈 줄기 세포의 주사에 의해 생성된다(문헌[McDermott, S.P. et al. (2010) Blood 116:193-200]). 다중-계열 조혈은 12주 내에 발생한다. 생착은 이식편 대 숙주 질환 없이 1년 넘게 안정하다.
hu-CD34 NSG 마우스를 이용한 효능 연구를 위하여, 마우스를 The Jackson Laboratory(미국 메인주 소재)로부터 구매하고, 인간 세포 집단을 인증한 후 사용하였다. 일반적으로, Matrigel (BD Biosciences)에서 혼합한 5x106개의 종양 세포(50% (v/v))를 각각의 마우스에서의 종양 접종에 사용하였다. 일단 종양 크기가 100 내지 150 mm3에 도달하면, 연구를 위하여 마우스를 선택하여 각각의 군으로 무작위화하였다. 항체를 주어진 용량으로 주 3회 정맥내로 제공하였다. 체중을 주 1회 내지 3회 모니터링하였다. 종양 크기를 캘리퍼스 종양 측정에 의해 주 1회 내지 3회 측정하였다. 종양 크기가 1,500 mm3에 도달한 때, 또는 마지막으로 투약한지 24시간 후, 모든 마우스를 끝냈다. 말단 혈액 샘플 (0.3 mL)을 혈청 분리기 튜브 내에 수집하고, 부드럽게 5회 뒤집음으로써 혼합하고, 튜브 랙에 넣었다. 말단 종양을 또한 수집하고 칭량한 후, 면역조직화학적 분석을 위하여 고정제에 넣었다.
인간 PBMC 인간화(hu-PBMC) NSG 마우스를 또 다른 생체 내용 마우스 모델로서 사용하였다. 이러한 마우스는 건강한 공여자 유래의 정제된 인간 PBMC의 주사에 의해 생성되는데, 이는 성인 말초 혈액 단핵 세포를 사용한 생착 속도가 가장 빨라서 강한 이펙터 및 기억 T 세포 및 NK 세포 기능을 요구하는 단기 연구를 가능하게 하고, 이식편 대 숙주 질환으로 인하여 단기 효능 연구(3 내지 4주)에 적합하다.
hu-PBMC NSG 마우스를 이용한 효능 연구를 위하여, 8 내지 10주령 NSG 마우스(카탈로그 번호 005557, NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)를 The Jackson Laboratory(미국 메인주 소재)로부터 구매하였다. Matrigel(BD Biosciences) 중에 혼합한 5x106개의 종양 세포(50% (v/v))를 각각의 마우스에 접종하였다. 일단 종양 크기가 50 내지 100 mm3의 범위에 도달하면, 건강한 공여자 유래의 10x106개의 인간 PBMC를 각각의 마우스에 대하여 재구성하였다. 인간 세포 재구성을 다음날에 인증하였다. 일단 종양 크기가 100 내지 150 mm3에 도달하면, 연구를 위하여 마우스를 선택하여 각각의 군으로 무작위화하였다. 항체를 주어진 용량으로 주 3회 정맥내로 제공하였다. 체중을 주 1회 내지 3회 모니터링하였다. 종양 크기를 캘리퍼스 종양 측정에 의해 주 1회 내지 3회 측정하였다. 종양 크기가 1,500 mm3에 도달한 때, 또는 마지막으로 투약한지 24시간 후, 모든 마우스를 끝냈다. 말단 혈액 샘플 (0.3 mL)을 혈청 분리기 튜브 내에 수집하고, 부드럽게 5회 뒤집음으로써 혼합하고, 튜브 랙에 넣었다. 말단 종양을 또한 수집하고 칭량한 후, 면역조직화학적 분석을 위하여 고정제에 넣었다.
NHP의 내용성 및 약동학적 연구
모든 NHP 연구는 Covance(미국 뉴저지주 프린스턴 소재)에 의해 Covance ICUCA 프로토콜에 따라 실시되었다. 약물- 및 단백질-나이브 또는 단백질-나이브 수컷 시노몰구스 원숭이를 모든 연구에서 사용하였다. 연구 설계를 기반으로 하여, 각각의 3특이성 항체에 대하여 원숭이를 선택하여 나누었다. 항체를 복재 정맥을 통하여 1시간 동안 정맥내 주입함으로써 제공하였다. 저용량(<10 ㎍/kg)의 경우 증가하는 용량을 연일 제공하였지만, 더 많은 용량(>10 ㎍/kg)의 경우 1 내지 2일의 간격이 있었다(관찰 목적을 위하여). 명시된 바와 같이, 각각의 용량 후, 모든 동물에 있어서 주입 시작으로부터 0시간(단지 제1일), 0.5시간(주입 중간), 1시간 및 6시간에 혈액 샘플을 수집하였다. 추가의 일정외 혈액 샘플을 연구 책임자, 병리학자, 및/또는 임상 수의사의 재량에 따라 수집하였다. 모든 동물은 제60일에 군집으로 되돌아갔다. 혈액 샘플로부터의 혈청 및 PBMC를 표준 방법을 이용하여 준비하고, 미래의 분석을 위하여 보존하였다.
루시퍼라아제 리포터 분석
GloResponse™ IL2-luc2P Jurkat 세포, Thaw and Use(Promega 파트 번호 CS187002) 및 GloResponse™ NFAT-Luc2 Jurkat 세포(Promega 카탈로그 번호 CS176401)를 Promega(미국 위스콘신주 소재)로부터 구매하고, 제조업자의 프로토콜에 따라 사용을 위하여 준비하였다.
간략하게는, 상기 세포를 37℃ 수조에서 2분 동안 해동시키고, 10 mL의 사전-가온 R10 배지를 포함하는 15 mL의 원심분리용 코니칼 튜브로 부드럽게 옮겼다. 상기 튜브를 300g에서 실온에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 제거하고, 세포를 20 mL의 사전-가온 R10 배지에 재현탁시키고, 75 cm2 배양 플라스크로 옮기고, 이어서 세포가 성장하여 안정하게 될 때까지(대략 3 내지 4일) 37C 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 상기 세포를 주 2회 0.1e6개의 세포/mL로 분주하였다. 세포를 선발을 위한 R10+하이그로마이신 B 배지에서 유지하였다. 세포를 해동한지 대략 7일 후 분석에 사용하였다.
항체 자극을 위하여, 3특이성 항체 또는 대조 항체를 다양한 농도로 준비하고, 연속 희석시켰다(PBS에서). 웰당 25 μL의 항체를 분배하였다. 플레이트-결합된 Ab를 위하여, Maxisorp 플레이트를 사용하고, 4C에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 용해성 Ab를 위하여, U자형-바닥 플레이트를 사용하였다. 리포터 세포를 0.3 내지 0.5 e6/mL까지 재현탁시키고, 175 uL의 세포를 각각의 웰에 첨가하고, 37C CO2 인큐베이터에서 6시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 상기 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내고, 주위 온도까지 평형화되게 하였다(10 내지 15분). 그 후 50 μl의 Bio-Glo™ 시약(Promega 카탈로그 번호 G7941)(주위 온도)을 분석용 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 5분 동안의 인큐베이션 후, 발광 활성을 MicroBeta2 LumiJET 마이크로플레이트 카운터(Perkin Elmer; 1s의 판독 시간)를 이용하여 측정하였다. GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 데이터를 플로팅하였다.
형태 안정성(Conformational stability)
열안정성 측정치(예를 들어, 융점, Tm)를 시차 주사 형광측정법(DSF)을 이용하여 결정하였다. 샘플을 백색 세미-스커트(semi-skirt) 96웰 플레이트(BIORAD)에서 D-PBS 중 SYPRO-Orange 염색제 (Invitrogen, DMSO 중 5000x 스톡)의 4x 농축액을 포함하는 0.2 μg/㎕의 최종 농도까지 D-PBS 완충제(Invitrogen)에서 희석시켰다. 모든 측정은 MyiQ2 실시간 PCR 기기 (바이오라드)를 이용하여 이중으로 이루어졌다. 용융 곡선의 네거티브 일차 도함수 곡선(Negative first derivative curves)(-d(RFU)/dT)을 iQ5 소프트웨어 v2.1(BIORAD)에서 생성시켰다. 그 후, 데이터를 Tm 결정 및 데이터의 그래픽 디스플레이를 위하여 Microsoft Excel로 엑스포트하였다.
IC
50
측정
리포터 세포주를 이용한 IL-4 및 IL-13에 대한 항체 활성의 검출
사이토카인 IL4 및 IL13에 대한 2특이성 항체 또는 유도체의 활성을 구매가능한 HEK-Blue IL-4/IL-13 리포터 세포(InvivoGen)에서 측정하였다. HEK-Blue IL-4/IL-13 세포는 IL-4 또는 IL13에 의한 STAT6 경로의 활성화를 모니터하도록 설계되어 있다. 어느 하나의 사이토카인을 이용한 세포의 자극에 의해, QUANTI-Blue assay를 이용하여 배양 상청액에서 측정될 수 있는 리포터 유전자의 분비형 배아 알칼리 포스파타아제(SEAP)가 생성된다. IL4 또는 IL13에 대한 항체 활성을 테스트하기 위하여, 상기 사이토카인들을 상이한 농도의 항체와 함께 1시간 동안 예비-인큐베이션하고, 50.000개의 HEK-Blue IL-4/IL-13 세포에 첨가하였다. 사이토카인-매개된 SEAP 유도는 세포 배양 상청액에서 QUANTI-Blue assay(InvivoGen)와 함께 24시간 인큐베이션한 후 측정하였다. 각각의 실험을 각각의 항체 농도에 대하여 n = 3개의 데이터포인트로 수행하였다. 각각의 항체의 반수 최대 억제 농도(IC50)를 내부 어플리케이션인 Biostat-Speed V2.0(Sanofi)을 통하여 계산하였다.
리포터 세포주를 이용한 TNFα에 대한 항체 활성의 검출
TNFa에 대한 2특이성 항체 또는 유도체의 활성을 구매가능한 HEK-Blue TNF-a 리포터 세포(InvivoGen)를 사용하여 측정하였다. HEK-Blue TNF-a 세포는 QUANTI Blue Assay(InvivoGen)를 이용하여 배양 상청액에서 측정될 수 있는 리포터 유전자의 분비형 배아 알칼리 포스파타아제(SEAP)의 발현을 통하여 NFkB 경로의 활성화를 모니터링함으로써 생물활성 TNFa를 검출하도록 설계되어 있다. TNFa에 대한 항체 활성을 측정하기 위하여, 상기 사이토카인을 상이한 농도의 항체와 함께 1시간 동안 예비-인큐베이션하고, 50,000개의 HEK Blue TNF-a 세포에 첨가하였다. 사이토카인-매개된 SEAP 유도는 QUANTI-Blue assay(InvivoGen)를 이용하여 배양 상청액에서 24시간 후 측정하였다. 각각의 실험을 각각의 항체 농도에 대하여 n = 3개의 데이터포인트로 수행하였다. 각각의 항체의 반수 최대 억제 농도를 계산하였다.
실시예 2: 3특이성 결합 단백질의 개관
3특이성 결합 단백질의 생성을 위하여 신규한 전략을 개발하였다. 3특이성 단백질은 3개의 표적 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드를 포함하였다(도 1a 내지 도 1c). 각각의 표적 결합 부위는 특유한 인간 항원 표적을 표적화하는 항체로부터의 VH 및 VL 도메인을 포함하였다(예를 들어, 표 1 참조). 3특이성 결합 단백질은 2개의 특유한 항원 결합 부위를 형성하는 교차 배향을 가진 이중 가변 도메인(CODV Ig 포맷으로 불림)을 보유하는 제1 폴리펩티드 쌍, 및 각각이 제3 항원 결합 부위를 형성하는 단일 가변 도메인을 가진 제2 폴리펩티드 쌍을 함유하였다 (도 1a 및 도 1b).
[표 1]
제1 폴리펩티드 쌍(이는 이중 가변 도메인을 보유함)은 구조 VL2-링커-VL1-링커-면역글로불린 경쇄 불변 도메인을 갖는 제1 폴리펩티드, 및 구조 VH1-링커-VH2-링커-면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인을 갖는 제2 폴리펩티드를 포함하여, 2개의 특유한 항원 결합 부위: VH1-VL1 및 VH2-VL2를 형성하는 교차 배향을 갖는 폴리펩티드 쌍을 생성하였다(도 1c, 경쇄 및 중쇄 B 참조). 표 A는 대표적인 3특이성 결합 단백질의 IgG1 및 IgG4 변이체의 2특이성 아암(즉, 중쇄 및 경쇄 B를 포함하는 아암)의 설계의 요약을 제공하며, 이는 3특이성 결합 단백질의 2특이성 아암에서 사용되는 링커들의 다양한 조합들을 표시하는 것을 포함한다. 제2 폴리펩티드 쌍(각각이 단일 가변 도메인을 보유함)은 구조 VH3-면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인을 갖는 제1 폴리펩티드, 및 구조 VL3-면역글로불린 경쇄 불변 도메인을 갖는 제2 폴리펩티드를 포함하여, 제3 항원 결합 부위: VH3-VL3를 형성하는 폴리펩티드 쌍을 생성하였다 (도 1c, 경쇄 및 중쇄 A 참조). 더욱이, 3특이성 결합 단백질은 CH3 도메인들 중 어느 하나가 항체 이량체화를 용이하게 하기 위한 놉 또는 홀 변형을 포함할 수 있도록 구축하였다(도 1).
[표 A]
실시예 3: T 세포 관여항체의 시험관 내 결합 활성 및 항체-매개된 특이적 사멸
본 실시예는 T 세포 관여항체의 활성을 특성화하기 위한 시험관 내 분석법을 설명한다.
3특이성 결합 단백질 설계에 대하여 상기 실시예 2에서 설명한 접근법을 이용하여, 4가지의 3특이성 결합 단백질(결합 단백질 1, 3, 5, 및 6)을 생성하였다. 이러한 3특이성 결합 단백질들은 3특이성 결합 단백질 프레임워크 상에 하기의 특유한 인간 단백질을 표적화하는 항체로부터 단리한 VH 및 VL 도메인을 그래프팅(grafting)함으로써 생성하였다: CD3, CD19, CD28, CD38, 또는 Her2. 제1 폴리펩티드 쌍(이는 2개의 항원 결합 부위를 형성함)이 CD28 및 CD3을 표적화하고, 제2 폴리펩티드 쌍(이는 단일 항원 결합 부위를 형성함)이 Her2를 표적화하도록 결합 단백질 1을 구축하였다(결합 단백질 1 = Her2 x (CD28 x CD3)). 제1 폴리펩티드 쌍(이는 2개의 항원 결합 부위를 형성함)이 CD28 및 CD3을 표적화하고, 제2 폴리펩티드 쌍(이는 단일 항원 결합 부위를 형성함)이 CD19를 표적화하도록 결합 단백질 3을 구축하였다(결합 단백질 3 = CD19 x (CD28 x CD3)). 제1 폴리펩티드 쌍(이는 2개의 항원 결합 부위를 형성함)이 CD28 및 CD3을 표적화하고, 제2 폴리펩티드 쌍(이는 단일 항원 결합 부위를 형성함)이 CD38을 표적화하도록 결합 단백질 5를 구축하였다(결합 단백질 5 = CD38 x (CD28 x CD3)). 제1 폴리펩티드 쌍(이는 2개의 항원 결합 부위를 형성함)이 CD28 및 CD3을 표적화하고, 제2 폴리펩티드 쌍(이는 단일 항원 결합 부위를 형성함)이 CD38을 표적화하도록 결합 단백질 6을 구축하였다(결합 단백질 6 = CD38 x (CD28 x CD3)).
항-Her2를 포함하는 3특이성 결합 단백질을 사용한 시험관 내 분석
3가지의 상이한 인간 항원을 표적화하여 이에 결합하는 3특이성 결합 단백질의 능력을 테스트하기 위하여, 먼저 결합 단백질 1의 그의 표적에 대한 특이성을 ELISA 분석에 의해 조사하였다. 결합 단백질 1은 3가지 전부의 그의 표적 단백질(CD3, CD28, 및 Her2)에 결합할 수 있었으며(도 2), 이는 3특이성 포맷에서의 각각의 결합 도메인이 그의 기능을 유지함을 나타내는 것이었다.
ZR-75-1, AU565(Her2+), ARH-77(CD19+), MOLP-8, RPMI-8226, KMS-12_BM, NCI-H929, MM.1.S, MM.1., R OPM-2, KMS-26, 및 U266 세포(CD38+)를 막 염색제 PKH-26(Sigma)로 표지하고, 세포독성 분석에서 표적 세포로 사용하였다. 이러한 표지된 세포주들을 증가하는 농도의 3특이성 항체, 2특이성 항체 또는 대조 단백질의 존재 하에 24시간 동안 풍부화 인간 Pan T 세포와 함께 10:1의 E:T 비로 공동배양하였다. 표적 세포에서의 세포 용해의 정도는, 생세포/죽은 세포 마커(Life technologies)로 염색하고, 표지된 표적 세포 집단에서의 죽은 세포의 수를 Fortessa 유세포 분석기(미국 캘리포니아주 새너제이 소재의 Beckton Dickinson)에서의 샘플의 러닝, 이어서 Flowjo 소프트웨어(FlowJo v10)를 이용한 분석에 의해 측정함으로써 결정하였다.
Her2+, CD19+, CD38+ 종양 세포주를 인간 CD3, CD28, CD19, CD38, LAMP1, 및/또는 Her2에 대한 형광 콘쥬게이션 항체(Biolegend)로 염색하였다. 각각의 이소타입-매칭 대조 항체를 이용한 염색도 포함시켰다. 그 후 세포를 Fortessa(미국 캘리포니아주 새너제이 소재의 Beckton Dickinson) 기기에서 획득하였다. Flow 분석을 FlowJo v10에서 수행하였다. 다양한 결합 단백질들의 매개된 사멸의 결과가 도 3a 내지 도 5, 도 9a, 도 9b 및 도 11a 내지 도 16에 예시되어 있다.
HER2 단백질을 표면 상에서 발현하는 종양 세포의 항체-매개된 세포 사멸을 유도하는 결합 단백질 1의 능력을 테스트하였다. 결합 단백질 1은 3가지 전부의 그의 표적 단백질에 결합할 수 있을 뿐만 아니라 Her2+ 세포주의 항체-매개된 세포 사멸도 유도할 수 있었다(도 3a 내지 도 4). 결합 단백질 1은 효력 있는 항체-매개 세포 사멸 활성을 나타낸 반면 항-CD3/CD28 2특이성 Ab 및 항-Her2 항체는 최소의 사멸 활성을 나타냈으며(도 3a, 도 3b, 도 4 및 도 5), 이는 종양 항원(HER2) 및 T 세포 마커(CD3 및 CD28)를 통하여 종양 세포가 T 세포와 관여되게 하기 위한 3특이성 Ab의 사용 효과를 입증하였다. 항-CD3/CD28은 T 세포 모집에 중요할 뿐만 아니라 더 효과적인 T 세포 활성화 및 생존 시그널링도 제공하여서 잠재적으로 효능을 향상시킨다.
부가적으로, 항-Her2 x CD28 x CD3 3특이성 항체(결합 단백질 1)를 사용하여 시험관 내 T 세포 활성화 및 증식과, 사이토카인 생성에 대한 연구를 실시하였다. 결합 단백질 1 및 부위 지정 돌연변이 유발에 의해 불활성화된 하나 또는 2개의 결합 도메인을 갖는 대조 변이체(CD28: 항-CD28이 불활성화됨; CD3: 항-CD3이 불활성화됨; (CD3xCD28): 항-CD3 및 항-CD28 둘 다가 불활성화됨)를 실시예 1에서 설명한 바와 같이 인간 PBMC 시험관 내 활성화 분석에서 사용하였다. 결과에 의하면 결합 단백질 1은 인간 일차 CD4 T 세포 및 CD8 T 세포 둘 다를 시험관 내에서 효과적으로 활성화시킴이 밝혀졌다. 항-CD28의 불활성화는 활성화 효력을 감소시켰으며, 이는 항-CD28 공동시그널링 경로의 중요성을 나타내는 것이었다. 항-CD3 결합 부위의 불활성화는 결합 단백질 1이 최소 활성으로 되게 하였으며, 이는 항-CD3이 일차 T 세포 활성화 시그널링을 제공함을 시사하는 것이었다(도 6a 및 도 6b). IL2 및 NFAT 리포터 인간 T 세포주(Jurkat-IL2 및 Jurkat-NFAT)를 사용하여 유사한 결과를 얻었다(도 7a 내지 도 7c).
항-CD19를 포함하는 3특이성 결합 단백질을 사용한 시험관 내 분석
항-CD19 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질은 그의 표적 항원에 결합할 수 있었으며(도 8)), 이는 3특이성 포맷에서의 각각의 결합 도메인이 그의 기능을 유지함을 나타내는 것이었다.
항-CD19 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질은 또한 CD19+ 세포의 항체-매개된 세포 사멸을 유도할 수 있었다(도 9a 내지 도 9n). 이와 유사하게, 항-CD19 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질은 인간 림프종 세포에 대하여 효력있는 사멸 활성을 나타낸 반면 둘 다의 항-CD3/CD28 항체, 항-CD19 항체, 및 이소타입 대조 항체는 최소의 사멸 활성을 나타냈으며, 이는 종양 항원(CD19) 및 T 세포 마커(CD3 및 CD28)를 통하여 종양 세포가 T 세포와 관여되게 하기 위한 3특이성 Ab의 사용 효과를 입증하였다.
항-CD38을 포함하는 3특이성 결합 단백질을 사용한 시험관 내 분석
결합 단백질 1 및 3에서 관찰된 바와 같이, 결합 단백질 5는 ELISA 분석에 의해 평가할 경우 3가지 전부의 그의 표적 단백질(CD3, CD28, 및 CD38)에 결합할 수 있었으며(도 10)), 이는 3특이성 포맷에서의 각각의 결합 도메인이 그의 기능을 유지함을 나타내는 것이었다.
결합 단백질 5는 또한 다양한 수준의 CD38 및 CD28 발현을 갖는 9가지의 인간 다발성 골수종 세포에 대하여 세포의 항체-매개된 세포 사멸(도 11a 내지 도 15d)을 유도하는 것으로 밝혀졌다(도 도 11d, 도 12d, 및 도 13d 참조). 이와 유사하게, 3특이성 결합 단백질 5는 인간 다발성 골수종 세포에 대하여 효력있는 사멸 활성을 나타낸 반면 둘 다의 항-CD38 항체 및 이소타입 대조 항체는 최소의 사멸 활성을 나타냈으며, 이는 종양 항원(CD38 및 CD28) 및 T 세포 마커(CD3 및 CD28)를 통하여 종양 세포가 T 세포와 관여되게 하기 위한 3특이성 Ab의 사용 효과를 입증하였다. 2특이성 항-CD3/CD28 대조 항체는 또한 CD28+ MM 세포에 대하여 미미한 사멸 활성을 나타냈다(도 11b, 도 12a 내지 도 12c, 및 도 13a 내지 13c).
이러한 결과는 본원에 개시된 3특이성 항체 플랫폼이 2가지 종양 마커에 대한 결합 부위들, 또는 T 세포 마커에 대한 2개의 결합 부위의 통합 가능성을 제공하여서 다양한 응용 및 과학적 설계의 유연성을 허용하게 됨을 입증한다. 결합 단백질 5는 또한 5가지의 CD38+ 인간 림프종 세포주에 대하여 효과적이어서(도 14c 및 도 15d), 효력있는 사멸 활성을 보여주었다(도 14a 및 도 14b와 도 15a 내지 도 15c).
결합 단백질 5 및 결합 단백질 6을 사용한 다발성 골수종 세포주 RPMI8226에 대한 항체-매개된 세포 사멸을 테스트하였으며, 상기 결합 단백질들의 EC50을 계산하고, CD28 및 CD3에 표적화되는 CODV 포맷 2특이성 항체의 EC50과 비교하였다(도 16 및 표 B). 결합 단백질 5 및 결합 단백질 6은 항-CD28 결합 도메인만이 상이하며; 결합 단백질 5는 항-CD28 초작동제를 포함하는 반면 결합 단백질 6은 통상적인 항-CD28을 포함한다. 결합 단백질 5는 더 큰 효력이 있는 사멸 활성을 나타냈다.
[표 B]
항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 결합 단백질 5 및 부위 지정 돌연변이 유발에 의해 불활성화된 하나 또는 2개의 결합 도메인을 갖는 대조 변이체(CD28: 항-CD28이 불활성화됨; CD3: 항-CD3이 불활성화됨; (CD3xCD28): 항-CD3 및 항-CD28 둘 다가 불활성화됨)를 실시예 1에서 설명한 바와 같이 시험관 내 활성화 분석에서 IL2 및 NFAT 리포터 인간 T 세포주(Jurkat-IL2 및 Jurkat-NFAT)를 사용하여 테스트하였다. 결과에 의하면 결합 단백질 5는 인간 IL2 프로모터 및 NFAT 프로모터 둘 다를 시험관 내에서 효과적으로 활성화시킴이 밝혀졌다(도 17a 및 도 17b). 항-CD28의 불활성화는 활성화 효력을 감소시켰으며(IL2 리포터에 대하여 더 현저함), 이는 항-CD28 공동시그널링 경로의 중요성을 나타내는 것이었다. 항-CD3 결합 부위의 불활성화는 결합 단백질 5가 최소 활성으로 되게 하였으며, 이는 항-CD3이 일차 T 세포 활성화 시그널링을 제공함을 시사하는 것이었다.
실시예 4: 생체 내에서의 T 세포 관여항체 활성
본 실시예는 생체 내에서 항-Her2 또는 항-CD38 함유 T 세포 관여항체의 활성 및 특성을 특성화하는 실험을 설명한다.
항-Her2를 포함하는 3특이성 결합 단백질을 사용한 생체 내 분석
Her2 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 사용한 용량 증가 연구를 비-인간 영장류에서 실시하였으며(도 18a 내지 도 18e), 이는 실시예 1에 설명된 바와 같았다. 결합 단백질 1에서의 모든 3개의 결합 도메인은 원숭이 CD3/CD28/HER2와의 교차 반응성을 갖는다. 용량 증가 독성 연구를 고안하여 분자의 잠재적 독성 프로파일을 평가하였다. 혈액 샘플을 혈청 및 PBMC 단리용으로 수집하였다. 순환 T 세포 집단을 각각의 투약 후 조사하였다(도 18a 및 도 18b)(T 세포 부분모집단 활성화(CD69+)와 함께(도 18c 및 도 18d). 순환 중인 CD4 및 CD8 T-세포의 백분율은 낮은 용량 증가에서는 증가되었지만, 높은 용량 증가에서는 결국 감소되었다. 유의한 CD4 및 CD8 T 세포 활성화는 단지 100 ㎍/kg의 용량에서 현저하였으며, 이는 상당히 높은 내용 용량을 시사하는 것이었다. 몇몇 사이토카인의 혈청중 수준을 또한 측정하였다. 유의한 사이토카인 방출은 단지 최고 용량에서 관찰되었다(100 ㎍/kg; 도 18e).
다음, 인간화 마우스 모델에서 종양 성장에 대한 3특이성 항-Her2 x CD28 x CD3 결합 단백질 1 항체의 영향을 실시예 1에서 설명한 바와 같이 조사하였다(도 19a 내지 도 20h). 도 19a 및 도 19b에는 인간 HER2+ 유방암 주BT474를 접종한 인간 CD34+ 조혈 줄기 세포-생착 NSG 마우스(hu-CD34) 모델을 사용하여 얻은 결과가 요약되어 있다. 유의한 항-종양 활성이 모든 용량군 내에서 명백하였다. 항-종양 활성은 용량 의존성이었으며, 이는 25 ㎍/kg에서 대조군과 비교하여 통계학적으로 차이가 있다. 처리군에서 유의한 체중 손실은 전혀 관찰되지 않았다.
인간 HER2+ 유방암 주 BT474를 접종한 인간 PBMC 재구성 NSG 마우스 모델을 사용한 두 번째 생체 내 연구를 또한 행하였다(도 20a 내지 도 20h). 유의한 항-종양 활성이 고용량군(100 및 500 ㎍/kg) 내에서 관찰되었다. 종양 위축은 500 ㎍/kg 군에서 40%의 마우스에서 관찰되었다. 항-종양 활성은 용량 의존성이었다. 100 및 500 ㎍/kg의 용량으로 처리한 군에서의 항-종양 활성은 항-HER2-처리군(0.1 내지 10 mg/kg)보다 유의하게 더 양호하였으며, 이는 결합 단백질 1로부터의 탁월한 항-종양 활성을 나타내는 것이었다. 처리군에서 유의한 체중 손실은 전혀 관찰되지 않았다.
항-CD38을 포함하는 3특이성 결합 단백질을 사용한 생체 내 분석
실시예 1에서 설명한 바와 같이 3특이성 항-CD38 x CD28 x CD3 항체(결합 단백질 5)를 이용하여 비-인간 영장류에서 용량 증가 연구를 행하였다(도 21a 내지 도 21f). 결합 단백질 5에서의 3개의 결합 도메인 중 2개는 원숭이 CD3 및 CD28과의 교차 반응성을 갖는다. 용량 증가 독성 연구를 고안하여 분자의 잠재적 독성 프로파일을 평가하였다. 혈액 샘플을 혈청 및 PBMC 단리용으로 수집하였다. 순환 T 세포 집단을 각각의 투약 후 조사하였다(도 21a 및 도 21b, 막대 그래프)(T 세포 부분모집단 활성화(CD69+)와 함께(도 21a 및 도 21b, 선 그래프). 순환 중인 CD4 및 CD8 T-세포의 백분율은 낮은 용량 증가에서는 증가되었지만, 높은 용량 증가에서는 결국 감소되었다. 유의한 CD4 및 CD8 T 세포 활성화는 단지 100 ㎍/kg의 용량에서 현저하였으며, 이는 상당히 높은 내용 용량을 시사하는 것이었다. 몇몇 사이토카인의 혈청중 수준을 또한 측정하였다. 유의한 사이토카인 방출은 단지 최고 용량에서 관찰되었다(100 ㎍/kg; 도 21c 내지 도 21f).
다음, 실시예 1에서 설명한 바와 같이 인간화 마우스에서 항-CD38 x CD28 x CD3 3특이성 항체를 테스트하였다(도 22a 내지 도 23d). 도 22a 내지 도 22c에는 5, 50 및 100 ㎍/kg의 용량의 결합 단백질 5로 처리한, CD38 및 PD-L1이 형질도입된 인간 MM 세포주 RPMI-8226을 이식한 인간 CD34+ 조혈 줄기 세포-생착 NSG 마우스(hu-CD34) 모델을 사용한 용량 결정 예비 연구로부터의 결과가 요약되어 있다. 유의한 항-종양 활성은 5 ㎍/kg으로 처리된 군에서만 명백하였다(도 22a). CD8 T 세포 침윤이 결합 단백질 5로 처리한 마우스(5 ㎍/kg)에서 관찰되었다(도 22b 및 도 22c).
상기 모델에서의 추적 연구를 0.04 내지 5 ㎍/kg의 투여량의 결합 단백질 5를 사용하여 수행하였다(도 23a 내지 도 23d). 유의한 항-종양 활성이 결합 단백질 5로 처리된 모든 군에서 나타났으며(도 23b), 이는 연구 마지막에 대조구와 통계학적으로 차이가 있었다(도 23c). 처리군에서 유의한 체중 손실은 전혀 관찰되지 않았다(도 23a). 첫 번째로 투약한지 4시간 후 혈청 염증성 사이토카인인 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2의 용량 의존성 유도가 표시된 농도의 결합 단백질 5 또는 PBS 대조구로 처리된 마우스에서 관찰되었으며(도 23d), 이는 생체 내에서의 3특이성 결합 단백질 5에 의한 효과적인 T 세포 활성화를 나타내는 것이었다.
인간화 CD34+ NSG 마우스(n=3)에 100 mcg/kg의 3특이성 Ab(삼각형), 2특이성 Ab(정사각형) 또는 1특이성 Ab(원)를 정맥내 주사하였다. CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 Ab 주사 후 0시간(주사 전), 1시간, 24시간 및 72시간에 측정하였으며, 이는 Luminex의 xMAP 다중화 기술에 의해 각각의 시점에서 평균적인 CD69 증가율(%), CD62L 감소율(%) 및/또는 염증성 사이토카인의 농도(혈장에서)를 결정함에 의한 것이었다. 다양한 3특이성 항체들의 T 세포 활성화 결과가 도 24 내지 도 26c에 예시되어 있다.
결합 단백질 5, 항-CD3/CD28_IgG4 2특이성 항체 및 항-CD28 IgG4 항체 대조구의 투여 후 인간 CD34+ 조혈 줄기 세포-생착 NSG 마우스(hu-CD34) 모델에서 전신적 생체 내 T 세포 활성화를 연구하였다(도 24). 100 ㎍/kg의 결합 단백질 5 및 대조 항체를 군당 3마리의 마우스 내로 투여하였다. 혈액 샘플을 투여 전, 투여 후 1시간, 투여 후 24시간 및 투여 후 72시간에 수집하였다. 마우스 혈청 및 인간 T 세포를 혈액으로부터 단리하고, T 세포 활성화 분석 및 혈청중 사이토카인 수준의 측정을 위하여 보존하였다. 도 24 및 도 25는 인간 CD4 및 CD8 T 세포 둘 다가 항체를 주입한지 1시간 후에 활성화되었음을 보여주는데, 이는 72시간에 기저선으로 되돌아갔다. 도 26a 내지 도 26c는 상기 마우스에서 혈청 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2 방출의 증가를 보여주는데, 이는 주입한지 1시간 후에 관찰되었고, 24시간 뒤에는 기저선으로 되돌아갔다. 이러한 결과는 결합 단백질 5 및 항-CD3/CD28 IgG4 2특이성 항체 둘 다가 주어진 동물 모델에서 T 세포 활성화에 효과적이어서 이것이 생체 내 효능 연구에 적합해지게 함을 입증하였다.
실시예 5: 사이토카인-유도된 3특이성 결합 단백질 및 2특이성-3가 결합 단백질의 특성화
하기 실시예에는 인간 사이토카인을 표적화하는 신규한 3특이성 결합 단백질 및 2특이성-3가 결합 단백질의 안정성, 결합 특성 및 활성을 특성화하는 실험이 설명되어 있다.
3특이성 결합 단백질(예를 들어, 3가지의 상이한 표적 단백질에 결합하는 것; 결합 단백질 9 내지 15)과, 2특이성-3가 결합 단백질(예를 들어, 1가식의 하나의 항원 상의 2가식의 하나의 항원에의 결합을 하는 것; 결합 단백질 16 내지 19)을 설계하였다(표 C). CODV-LC 및 Fab-아암-LC 둘 다에서 카파 불변 도메인이 사용된 결합 단백질 11을 제외하고서, 모든 다른 결합 단백질(9 내지 10 및 12 내지 19)을 CODV-LC에서의 카파 불변 도메인 및 Fab-아암-LC에서의 람다 불변 도메인을 이용하여 생성하였다. Fc-백본(backbone)으로서 IgG1 서열을 사용하였다. CODV-HC는 놉-RF 돌연변이(S354C, T366W; H435R 및 Y436F)를 갖는 반면 Fab-아암-HC는 홀 돌연변이(Y349C, T366S, L368A, Y407V)를 포함한다.
[표 C]
3특이성 결합 단백질 및 2특이성-3가 결합 단백질을 생성하고 정제하였으며, 이는 상기에 설명된 바와 같았다(도 27).
[표 D]
3특이성 결합 단백질의 안정성을 평가하기 위하여, 이의 융점을 DSF로 평가하고, 모 항체의 열안정성과 비교하였다(표 E).
[표 E]
3특이성 포맷 내의 모든 단일 항체 결합 도메인의 결합 친화성을 평가하기 위하여, 각각의 단일 항원에 대한 SPR 분석을 이전에 설명한 바와 같이 수행하였다. 그 결과는 모 항체의 친화성에 대하여 벤치마킹되었다(표 F, 표 G, 및 표 H).
[표 F]
[표 G]
[표 H]
3특이성 결합 단백질의 중화 활성을 평가하기 위하여, 상이한 HEK Blue 키트들(Invivogen)을 사용하여 세포 분석을 수행하였다. 사이토카인들을 96웰 플레이트에서 실온에서 30분 동안 상이한 농도의 항-사이토카인 항체와 함께 예비인큐베이션하였다. 대조구는 단지 사이토카인의 사용 또는 단지 항체의 사용을 포함하였다. 50,000개의 HEK Blue 세포(HEK Blue TNFa/IL1ß 세포(InvivoGen, 카탈로그 번호 hkb-tnfil1; HEK Blue STAT-6 세포(InvivoGen, 카탈로그 번호 Hkb.stat6)를 사이토카인/항체 혼합물에 첨가하고, 인큐베이터에서 37℃, 5% CO2에서 23시간 동안 인큐베이션하였다. QuantiBlue 시약을 각각의 배양 웰에 첨가하고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. OD를 620 nm에서 측정하고, IC50을 BioStat Speed 2.0을 사용하여 계산하였다. 다양한 3특이성 항체의 HEK Blue 리포터 세포 분석 결과가 표 I 및 표 M에 예시되어 있다.
다음, IC50 값을 결합 단백질 9 내지 15에 대하여 계산하고, 단일 모 항체에 대하여 벤치마킹하였다(표 I).
[표 I]
2특이성-3가 결합 단백질의 열안정성을 시차 주사 형광 측정법으로 측정하였다(DSF; 표 J).
[표 J]
2특이성-3가 결합 단백질 각각에 의해 결합되는 표적 단백질의 수 및 결합 친화성을 인간 IL-4(표 K) 및 IL-13(표 K 및 표 L)에 대하여 측정하였다.
[표 K]
[표 L]
마지막으로, IC50 값을 결합 단백질 16 내지 19에 대하여 계산하였다(표 M).
[표 M]
실시예 6: 3특이성 결합 단백질 포맷의 최적화
많은 기존의 이종이량체형 결합 단백질 포맷(예를 들어, 2특이성 항체 및 이의 변이체)에서의 문제점은 동종이량체형 종을 또한 포함함이 없이 원하는 이종이량체형 종만을 정제하는 것이 어려울 수 있다는 것이다. 따라서, 원하는 이종이량체형 결합 단백질의 효율적인 정제 방법은 예를 들어 공업적 규모의 생산에 있어서 관심이 많다.
본원에 개시된 바와 같이, 본 발명의 결합 단백질은, 제한 없이 놉 및 홀 돌연변이(예를 들어, 적당한 이종이량체 형성을 촉진하기 위한 것임) 및 정제를 개선시키기 위한 돌연변이를 포함하는 몇몇 선택적 특징을 포함할 수 있다. 게다가, 이러한 결합 단백질은 4가지의 잠재적인 구성을 초래하는 2가지의 경쇄, 즉 2개의 카파 경쇄, 2개의 람다 경쇄(이중 가변 도메인을 갖는 아암("CODV 아암") 상의 카파 경쇄 및 전통적인 항체 아암("Fab 아암") 상의 람다 경쇄와, CODV 아암 상의 람다 경쇄 및 Fab 아암 상의 카파 경쇄)를 포함한다.
따라서, 관심있는 원하는 결합 단백질의 효율적인 정제를 허용하는 방법을 확인하기 위하여 실험에 착수하였다. 결합 단백질 변이체도 이의 정제 효율에 대하여 테스트하였다.
도 28a는 독특한 구성을 초래하는 변이들을 나타내는 본 발명의 예시적인 결합 단백질의 다이아그램을 도시한다. 이러한 실험은 하기의 배치의 영향을 테스트하였다: 카파 및 람다 경쇄(예를 들어, 2개의 카파, 2개의 람다, CODV 아암 상의 카파 및 Fab 아암 상의 람다, 및 CODV 아암 상의 람다 및 Fab 아암 상의 카파), 놉 및 홀 돌연변이(예를 들어, CODV 아암 상의 놉 돌연변이 및 Fab 아암 상의 홀 돌연변이, 또는 CODV 아암 상의 홀 돌연변이 및 Fab 아암 상의 놉 돌연변이), 및 H435R/Y436F 돌연변이("RF 돌연변이," 예를 들어, CODV 또는 Fab 아암 상의 RF 돌연변이, 또는 RF 돌연변이 없음). 도 28b에 예시된 바와 같이, 총 18가지의 상이한 변이체를 테스트하였다. 이러한 실험에 있어서, CODV 아암은 TNFa에 특이적인 항원 결합 부위(즉, 각각 서열 번호 168 및 169의 VH 및 VL 서열) 및 IL4에 특이적인 항원 결합 부위(즉, 각각 서열 번호 170 및 171의 VH 및 VL 서열)를 가지며, 반면에 Fab 아암은 IL13에 특이적인 항원 결합 부위(즉, 각각 서열 번호 172 및 173의 VH 및 VL 서열)를 가졌다. S354C 및 T366W를 놉 돌연변이에 사용하고, Y349C, T366S, L368A, 및 Y407V를 홀 돌연변이에 사용하였다.
다양한 프로세싱 단계를 CODV 및 Fab 아암의 올바른 쌍 형성(예를 들어, CODV 또는 Fab 동종이량체와는 반대됨)과, 올바른 중쇄-경쇄 쌍 형성(예를 들어, Fab 아암 경쇄와 CODV 아암 중쇄 사이의 쌍 형성, 또는 Fab 아암 중쇄와 CODV 아암 경쇄 사이의 쌍 형성과는 반대됨)을 모니터링하는 능력에 대하여 테스트하였다. 분석용 크기 배제 크로마토그래피(SEC)는 올바른 중쇄 및 경쇄 쌍 형성을 구별하는 데 효과적이지 않은 것으로 밝혀졌으며; Fab 아암 경쇄와 CODV 중쇄의 쌍이 잘못 형성된 결합 단백질 및 2개의 Fab 아암을 포함하는 동종이량체형 결합 단백질이 원하는 3특이성 결합 단백질과 함께 공동용출되는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 분석용 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)는 Fab 아암 경쇄와 CODV 중쇄의 쌍이 잘못 형성된 결합 단백질 및 2개의 Fab 아암을 포함하는 동종이량체형 결합 단백질로부터 원하는 3특이성 결합 단백질을 분할하는 것으로 밝혀졌다(도 29).
도 28b에 예시된 18가지의 결합 단백질 구성을 단백질 A 친화성 크로마토그래피, 그 후 KappaSelect(GE Healthcare) 정제에 의해 정제하였다. 종들을 HIC 크로마토그래피에 의해 모니터링하였다. 하나의 결합 단백질 구성을 쌍 형성 오류 종의 포함 없이 효율적으로 정제하였다: CODV 아암을 위한 람다 경쇄, Fab 아암을 위한 카파 경쇄, CODV 아암 상의 놉 돌연변이, Fab 아암 상의 홀 돌연변이, 및 Fab 아암 상의 RF 돌연변이. HIC 크로마토그래피(도 30a), SDS-PAGE(도 30b), 및 온전한 매스(mass)의 분석에 의하면, 원하는 3특이성 결합 단백질에 상응하는 단일 종이 정제됨이 입증되었다.
이러한 결과는 쌍 형성 오류 종으로부터의 관심있는 결합 단백질의 더 효율적인 정제를 허용하는 결합 단백질 구성을 확인해 준다. 게다가, 단백질 A, 이어서 KappaSelect 정제 단계의 정제 공정은 관심있는 결합 단백질을 쌍 형성 오류 종으로부터 효과적으로 분리하는 것으로 밝혀졌다.
본 발명은 다양한 실시 양태를 포함하지만, 변화 및 변경이 당업자에게 나타남이 이해된다. 따라서, 첨부된 청구범위는 본 발명의 범주 내에 있는 모든 그러한 동등한 변화를 커버하는 것으로 의도된다. 게다가, 본원에 사용된 섹션의 제목들은 단지 구조적 목적을 위한 것으로서, 기술된 주제를 제한하는 것으로 해석되지는 않는다.
본원에 기술된 각각의 실시 양태는, 명백하게 반대로 지시되지 않는 한 임의의 다른 실시 양태(들)와 조합될 수 있다. 특히, 바람직하거나 유리한 것으로 나타낸 임의의 특징 또는 실시 양태는, 명백하게 반대로 지시되지 않는 한, 바람직하거나 유리한 것으로 나타낸 임의의 다른 특징(들) 또는 실시 양태(들)와 조합될 수 있다.
본 출원에서 인용된 모든 참고 문헌은 분명히 본원에 참고로 포함된다.
서열
[표 1]
[표 2]
[표 3]
[표 4]
[표 5]
SEQUENCE LISTING
<110> YANG, Zhi-yong
NABEL, Gary J.
WU, Lan
SEUNG, Edward
WEI, Ronnie
BENINGA, Jochen
RAO, Ercole
LEUSCHNER, Wulf Dirk
BEIL, Christian
LANGE, Christian
CORVEY, Carsten
<120> TRISPECIFIC AND/OR TRIVALENT BINDING
PROTEINS
<130> 183952027140
<140> Not Yet Assigned
<141> Concurrently Herewith
<150> US 62/322,036
<151> 2016-04-13
<150> US 62/331,191
<151> 2016-05-03
<150> US 62/412,187
<151> 2016-10-24
<150> EP 17305298.6
<151> 2017-03-17
<160> 179
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Cys Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 3
<211> 571
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Lys
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
130 135 140
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp Met His Trp Val Arg Gln
145 150 155 160
Ala Pro Gly Lys Gln Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser
165 170 175
Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg Gly Val Tyr Tyr
210 215 220
Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser Arg Thr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
245 250 255
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
290 295 300
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
305 310 315 320
Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
325 330 335
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
465 470 475 480
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
565 570
<210> 4
<211> 338
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 4
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
115 120 125
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
130 135 140
Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
145 150 155 160
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly
165 170 175
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
180 185 190
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
195 200 205
Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
210 215 220
Ile Lys Thr Lys Gly Pro Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
245 250 255
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
260 265 270
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
275 280 285
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
290 295 300
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
305 310 315 320
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
325 330 335
Glu Cys
<210> 5
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 5
gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtggccaga atctacccca ccaacggcta caccagatac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agcgccgaca ccagcaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgtag tagatgggga 300
ggcgacggct tctacgccat ggactattgg ggccagggca ccctcgtgac cgtgtctagt 360
gcgtcgacca agggcccatc ggtgttccct ctggcccctt gcagcagaag caccagcgaa 420
tctacagccg ccctgggctg cctcgtgaag gactactttc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480
tggaactctg gcgctctgac aagcggcgtg cacacctttc cagccgtgct ccagagcagc 540
ggcctgtact ctctgagcag cgtcgtgaca gtgcccagca gcagcctggg caccaagacc 600
tacacctgta acgtggacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaatct 660
aagtacggcc ctccctgccc tccttgccca gcccctgaat ttctgggcgg accctccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatca gccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccaggaagat cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa cagcacctac 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcccagc tccatcgaga aaaccatcag caaggccaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca agtgtatacc ctgccccctt gccaggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgtggtg tctcgtgaaa ggcttctacc ccagcgacat tgccgtggaa 1140
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg accgtggaca agagccggtg gcaggaaggc 1260
aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtctctgt ccctgggcaa g 1341
<210> 6
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 6
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtctgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgta gagccagcca ggacgtgaac accgccgtgg cctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gaagcagaag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca ccccccccac atttggccag 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttcccacct 360
agcgacgagc agctgaagtc cggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgcgagg ccaaagtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gaaagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgaca 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600
ctgtctagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642
<210> 7
<211> 1713
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 7
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag gtcgtgaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cacctttacc agctactaca tccactgggt gcgccaggcc 120
cctggacagg gactggaatg gatcggcagc atctaccccg gcaacgtgaa caccaactac 180
gcccagaagt tccagggcag agccaccctg accgtggaca ccagcatcag caccgcctac 240
atggaactga gccggctgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcac ccggtcccac 300
tacggcctgg attggaactt cgacgtgtgg ggcaagggca ccaccgtgac agtgtctagc 360
agccaggtgc agctggtgga atctggcggc ggagtggtgc agcctggcag aagcctgaga 420
ctgagctgtg ccgccagcgg cttcaccttc accaaggcct ggatgcactg ggtgcgccag 480
gcccctggaa agcagctgga atgggtggcc cagatcaagg acaagagcaa cagctacgcc 540
acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg ttcaccatca gccgggacga cagcaagaac 600
accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgtcgg 660
ggcgtgtact atgccctgag ccccttcgat tactggggcc agggaaccct cgtgaccgtg 720
tctagtcgga ccgccagcac aaagggccca tcggtgttcc ctctggcccc ttgcagcaga 780
agcaccagcg aatctacagc cgccctgggc tgcctcgtga aggactactt tcccgagccc 840
gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg 900
ctccagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtcgtga cagtgcccag cagcagcctg 960
ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 1020
cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc cctccttgcc cagcccctga atttctgggc 1080
ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 1140
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat 1200
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggaacagttc 1260
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccca gctccatcga gaaaaccatc 1380
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caagtgtgta ccctgccccc tagccaggaa 1440
gagatgacca agaaccaggt gtccctgagc tgtgccgtga aaggcttcta ccccagcgac 1500
attgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1560
gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg gtgtccaagc tgaccgtgga caagagccgg 1620
tggcaggaag gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1680
acccagaagt ccctgtctct gtccctgggc aag 1713
<210> 8
<211> 1014
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 8
gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtga cacctggaca gcctgccagc 60
atcagctgca agagcagcca gagcctggtg cacaacaacg ccaacaccta cctgagctgg 120
tatctgcaga agcccggcca gagcccccag tccctgatct acaaggtgtc caacagattc 180
agcggcgtgc ccgacagatt ctccggcagc ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240
agccgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactattgtg gccagggcac ccagtacccc 300
ttcacctttg gcagcggcac caaggtggaa atcaagggcc agcccaaggc cgcccccgac 360
atccagatga cccagagccc cagcagcctg tctgccagcg tgggcgacag agtgaccatc 420
acctgtcagg ccagccagaa catctacgtg tggctgaact ggtatcagca gaagcccggc 480
aaggccccca agctgctgat ctacaaggcc agcaacctgc acaccggcgt gcccagcaga 540
ttttctggca gcggctccgg caccgacttc accctgacaa tcagctccct gcagcccgag 600
gacattgcca cctactactg ccagcagggc cagacctacc cctacacctt tggccagggc 660
accaagctgg aaatcaagac caagggcccc agccgtacgg tggccgctcc cagcgtgttc 720
atcttcccac ctagcgacga gcagctgaag tccggcacag cctctgtcgt gtgcctgctg 780
aacaacttct acccccgcga ggccaaagtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 840
ggcaacagcc aggaaagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 900
agcaccctga cactgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaagtg 960
acccaccagg gcctgtctag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgt 1014
<210> 9
<211> 571
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Lys Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Lys Gly Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
130 135 140
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp Met His Trp Val Arg Gln
145 150 155 160
Ala Pro Gly Lys Gln Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser
165 170 175
Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg Gly Val Tyr Tyr
210 215 220
Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser Arg Thr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
245 250 255
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
290 295 300
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
305 310 315 320
Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
325 330 335
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
465 470 475 480
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
565 570
<210> 10
<211> 342
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala
115 120 125
Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala
130 135 140
Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Val Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln
145 150 155 160
Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ala Ala Ser Asn
165 170 175
Val Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
180 185 190
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asn Asp Val Ala Asn
195 200 205
Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly
210 215 220
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Lys Gly Pro Ser Arg Thr Val Ala Ala
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
245 250 255
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
260 265 270
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
275 280 285
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
290 295 300
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
305 310 315 320
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
325 330 335
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
340
<210> 11
<211> 1713
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 11
caggtgcagc tgcaggaatc tggccctggc ctcgtgaagc ctagccagac cctgagcctg 60
acctgtaccg tgtccggctt cagcctgagc gactacggcg tgcactgggt gcgccagcca 120
cctggaaaag gcctggaatg gctgggcgtg atctgggctg gcggaggcac caactacaac 180
cccagcctga agtccagaaa gaccatcagc aaggacacca gcaagaacca ggtgtccctg 240
aagctgagca gcgtgacagc cgccgatacc gccgtgtact actgcgccag agacaagggc 300
tacagctact actacagcat ggactactgg ggccagggca ccaccgtgac cgtgtcatcc 360
tctcaggtgc agctggtgga atctggcggc ggagtggtgc agcctggcag aagcctgaga 420
ctgagctgtg ccgccagcgg cttcaccttc accaaggcct ggatgcactg ggtgcgccag 480
gcccctggaa agcagctgga atgggtggcc cagatcaagg acaagagcaa cagctacgcc 540
acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg ttcaccatca gccgggacga cagcaagaac 600
accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgtcgg 660
ggcgtgtact atgccctgag ccccttcgat tactggggcc agggaaccct cgtgaccgtg 720
tctagtcgga ccgcttcgac caagggccca tcggtgttcc ctctggcccc ttgcagcaga 780
agcaccagcg aatctacagc cgccctgggc tgcctcgtga aggactactt tcccgagccc 840
gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg 900
ctccagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtcgtga cagtgcccag cagcagcctg 960
ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 1020
cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc cctccttgcc cagcccctga atttctgggc 1080
ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 1140
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat 1200
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggaacagttc 1260
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccca gctccatcga gaaaaccatc 1380
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caagtgtgta ccctgccccc tagccaggaa 1440
gagatgacca agaaccaggt gtccctgagc tgtgccgtga aaggcttcta ccccagcgac 1500
attgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1560
gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg gtgtccaagc tgaccgtgga caagagccgg 1620
tggcaggaag gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1680
acccagaagt ccctgtctct gtccctgggc aag 1713
<210> 12
<211> 1026
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 12
gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtga cacctggaca gcctgccagc 60
atcagctgca agagcagcca gagcctggtg cacaacaacg ccaacaccta cctgagctgg 120
tatctgcaga agcccggcca gagcccccag tccctgatct acaaggtgtc caacagattc 180
agcggcgtgc ccgacagatt ctccggcagc ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240
agccgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactattgtg gccagggcac ccagtacccc 300
ttcacctttg gcagcggcac caaggtggaa atcaagggcc agcccaaggc cgcccccgac 360
atcgtgctga cacagagccc tgctagcctg gccgtgtctc ctggacagag ggccaccatc 420
acctgtagag ccagcgagag cgtggaatat tacgtgacca gcctgatgca gtggtatcag 480
cagaagcccg gccagccccc caagctgctg attttcgccg ccagcaacgt ggaaagcggc 540
gtgccagcca gattttccgg cagcggctct ggcaccgact tcaccctgac catcaacccc 600
gtggaagcca acgacgtggc caactactac tgccagcaga gccggaaggt gccctacacc 660
tttggccagg gcaccaagct ggaaatcaag accaagggcc ccagccgtac ggtggccgct 720
cccagcgtgt tcatcttccc acctagcgac gagcagctga agtccggcac agcctctgtc 780
gtgtgcctgc tgaacaactt ctacccccgc gaggccaaag tgcagtggaa ggtggacaac 840
gccctgcaga gcggcaacag ccaggaaagc gtgaccgagc aggacagcaa ggactccacc 900
tacagcctga gcagcaccct gacactgagc aaggccgact acgagaagca caaggtgtac 960
gcctgcgaag tgacccacca gggcctgtct agccccgtga ccaagagctt caaccggggc 1020
gagtgt 1026
<210> 13
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Gly Lys
450
<210> 14
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 14
Asp Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 15
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 15
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgaa gtgaagaagc ctggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta tgccttcagc agctactgga tgaactgggt gaggcaggca 120
cctggccagg gcctggagtg gataggccaa atatggcctg gcgatggcga caccaactac 180
aaccagaagt tcaagggcag agcgaccttg accgccgacg agagcaccag caccgcgtac 240
atggagctga gcagcctgag gagcgaggac accgccgtgt actattgcgc cagaagggag 300
accaccaccg tgggcaggta ctactacgcc atggactact ggggccaggg aaccaccgtg 360
accgtgagca gcgcctcgac caagggccca tcggtgttcc ctctggcccc ttgcagcaga 420
agcaccagcg aatctacagc cgccctgggc tgcctcgtga aggactactt tcccgagccc 480
gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg 540
ctccagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtcgtga cagtgcccag cagcagcctg 600
ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc cctccttgcc cagcccctga atttctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 780
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggaacagttc 900
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccca gctccatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caagtgtata ccctgccccc ttgccaggaa 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgtctcgtga aaggcttcta ccccagcgac 1140
attgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagccgg 1260
tggcaggaag gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgtctct gtccctgggc aag 1353
<210> 16
<211> 654
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 16
gacctcgtgc tgacccagag ccctgcgagc ctggctgtga gccctggcca gagagccacc 60
atcacctgca aagccagcca gagcgtggac tacgacggcg acagctacct caactggtac 120
cagcagaagc ctggccagcc ccccaagctg ctgatttacg atgccagcaa cctggtgagc 180
ggcgtgcctg ctagattcag cggctccggc agcggcaccg acttcaccct gaccatcaac 240
cccgtggagg ccaacgacac cgccaactac tactgccagc agagcacgga ggacccctgg 300
accttcggcc agggcacaaa gctggagatc aagcgtacgg tggccgctcc cagcgtgttc 360
atcttcccac ctagcgacga gcagctgaag tccggcacag cctctgtcgt gtgcctgctg 420
aacaacttct acccccgcga ggccaaagtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 480
ggcaacagcc aggaaagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 540
agcaccctga cactgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaagtg 600
acccaccagg gcctgtctag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgt 654
<210> 17
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Cys Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 18
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 19
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 19
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtggccaagc ctggcacaag cgtgaagctg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gactactgga tgcagtgggt caagcagagg 120
ccaggccagg gcctggaatg gatcggcaca atctatcccg gcgacggcga taccggctac 180
gcccagaagt ttcagggcaa ggccaccctg accgccgaca agagcagcaa gaccgtgtac 240
atgcacctga gcagcctggc cagcgaggac agcgccgtgt actattgcgc cagaggcgac 300
tactacggca gcaacagcct ggactattgg ggccagggca ccagcgtgac agtgtctagt 360
gcgtcgacca agggcccatc ggtgttccct ctggcccctt gcagcagaag caccagcgaa 420
tctacagccg ccctgggctg cctcgtgaag gactactttc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480
tggaactctg gcgctctgac aagcggcgtg cacacctttc cagccgtgct ccagagcagc 540
ggcctgtact ctctgagcag cgtcgtgaca gtgcccagca gcagcctggg caccaagacc 600
tacacctgta acgtggacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaatct 660
aagtacggcc ctccctgccc tccttgccca gcccctgaat ttctgggcgg accctccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatca gccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccaggaagat cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa cagcacctac 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcccagc tccatcgaga aaaccatcag caaggccaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca agtgtatacc ctgccccctt gccaggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgtggtg tctcgtgaaa ggcttctacc ccagcgacat tgccgtggaa 1140
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg accgtggaca agagccggtg gcaggaaggc 1260
aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtctctgt ccctgggcaa g 1341
<210> 20
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 20
gacatcgtga tgacccagag ccacctgagc atgagcacca gcctgggcga ccccgtgtcc 60
atcacctgta aagccagcca ggacgtgtcc accgtggtgg cctggtatca gcagaagcct 120
ggccagagcc ccagacggct gatctacagc gccagctatc ggtacatcgg cgtgcccgac 180
agattcaccg gaagcggagc cggcaccgac ttcaccttca ccatcagctc tgtgcaggcc 240
gaggacctgg ccgtgtacta ctgccagcag cactacagcc ccccctacac ctttggcgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttcccacct 360
agcgacgagc agctgaagtc cggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgcgagg ccaaagtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gaaagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgaca 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600
ctgtctagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642
<210> 21
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Lys Lys Ser Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Ala Pro Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ala Asn Trp Asp Val Ala Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 22
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Arg Tyr
20 25 30
Met Ala Trp Tyr Gln Asp Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
His Asp Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 23
<211> 1335
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 23
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ccggcagcag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta catcttcacc aactacaaca tccactgggt caagaagtcc 120
ccaggccagg gcctggaatg gatcggcgcc atctatcccg gaaacggcga cgccccttac 180
agccagaagt tccagggcaa ggccaccctg accgccgata ccagcacctc caccacctac 240
atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actattgcgt gcgggccaac 300
tgggatgtgg ccttcgccta ttggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc ctctgcgtcg 360
accaagggcc catcggtgtt ccctctggcc ccttgcagca gaagcaccag cgaatctaca 420
gccgccctgg gctgcctcgt gaaggactac tttcccgagc ccgtgaccgt gtcctggaac 480
tctggcgctc tgacaagcgg cgtgcacacc tttccagccg tgctccagag cagcggcctg 540
tactctctga gcagcgtcgt gacagtgccc agcagcagcc tgggcaccaa gacctacacc 600
tgtaacgtgg accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agcgggtgga atctaagtac 660
ggccctccct gccctccttg cccagcccct gaatttctgg gcggaccctc cgtgttcctg 720
ttccccccaa agcccaagga caccctgatg atcagccgga cccccgaagt gacctgcgtg 780
gtggtggatg tgtcccagga agatcccgag gtgcagttca attggtacgt ggacggcgtg 840
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaggaacagt tcaacagcac ctaccgggtg 900
gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaagagta caagtgcaag 960
gtgtccaaca agggcctgcc cagctccatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 1020
ccccgcgagc ctcaagtgta taccctgccc ccttgccagg aagagatgac caagaaccag 1080
gtgtccctgt ggtgtctcgt gaaaggcttc taccccagcg acattgccgt ggaatgggag 1140
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 1200
tcattcttcc tgtactccaa gctgaccgtg gacaagagcc ggtggcagga aggcaacgtg 1260
ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gtccctgtct 1320
ctgtccctgg gcaag 1335
<210> 24
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 24
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtctgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacatgca aggccagcca ggacatcgat cggtacatgg cctggtatca ggacaagccc 120
ggcaaggccc ccagactgct gatccacgat accagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180
agattttccg gctctggcag cggcagagac tacaccctga ccatcagcaa cctggaaccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcctgcag tacgacaacc tgtggacctt cggcggaggc 300
accaaggtgg aaatcaagcg tacggtggcc gctcccagcg tgttcatctt cccacctagc 360
gacgagcagc tgaagtccgg cacagcctct gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420
cgcgaggcca aagtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa 480
agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctgacactg 540
agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 600
tctagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 25
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 26
Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr
1 5
<210> 27
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 27
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 28
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 29
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 29
Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr
1 5
<210> 30
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 30
Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val
1 5 10
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 31
Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr Gly
1 5
<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 32
Ile Trp Ala Gly Gly Gly Thr
1 5
<210> 33
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 33
Ala Arg Asp Lys Gly Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp
1 5 10
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 34
Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp
1 5
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 35
Ile Lys Asp Lys Ser Asn Ser
1 5
<210> 36
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 36
Arg Gly Val Tyr Tyr Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 37
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 37
Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 38
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 39
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
1 5 10 15
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 40
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Trp
1 5
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 41
Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr
1 5
<210> 42
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 42
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 43
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 43
Gln Asp Val Asn Thr Ala
1 5
<210> 44
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 44
Ser Ala Ser
1
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 45
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 46
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 46
Gln Asn Ile Tyr Val Trp
1 5
<210> 47
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 47
Lys Ala Ser
1
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 48
Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 49
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 49
Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Val Thr Ser Leu
1 5 10
<210> 50
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 50
Ala Ala Ser
1
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 51
Gln Gln Ser Arg Lys Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 52
Gln Ser Leu Val His Asn Asn Ala Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 53
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 53
Lys Val Ser
1
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 54
Gly Gln Gly Thr Gln Tyr Pro
1 5
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 55
Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr
1 5 10
<210> 56
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 56
Asp Ala Ser
1
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 57
Gln Gln Ser Thr Glu Asp Pro Trp Thr
1 5
<210> 58
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 58
Gln Asp Val Ser Thr Val
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 59
Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr Thr
1 5
<210> 60
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
450
<210> 61
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 61
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Pro Lys Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
115 120 125
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
130 135 140
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
145 150 155 160
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
165 170 175
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
180 185 190
Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala
195 200 205
Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 62
<211> 570
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 62
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Lys
115 120 125
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly Ser Leu Ser Ile Thr
130 135 140
Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser Ser Ile Asn Trp Val
145 150 155 160
Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Met Ile Trp Gly
165 170 175
Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Glu Met Thr Ser Leu
195 200 205
Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Tyr Phe
210 215 220
Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
245 250 255
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
260 265 270
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
275 280 285
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
305 310 315 320
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
325 330 335
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
465 470 475 480
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565 570
<210> 63
<211> 345
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 63
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
115 120 125
Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys
130 135 140
His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys
145 150 155 160
Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His
165 170 175
Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe
180 185 190
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr
195 200 205
Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
210 215 220
Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr
225 230 235 240
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
245 250 255
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
260 265 270
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
275 280 285
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
305 310 315 320
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
325 330 335
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
340 345
<210> 64
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 64
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgcc atcacctgga acagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggaaggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggtgtcc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc 360
agcgcttcca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ctagcagcaa gagcacatct 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgacagtg 480
tcctggaact ctggcgccct gaccagcgga gtgcatacct tccctgccgt gctgcagtcc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtc acagtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggaa 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgt cccccctgcc ctgcccctga actgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 780
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg accctgaagt gaagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcataac gccaagacca agcccagaga ggaacagtac 900
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccccatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caagtctgca ccctgccccc cagcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgagc tgcgccgtga agggcttcta ccccagcgat 1140
atcgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg gtgtccaagc tgacagtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccattac 1320
acccagaagt ccctgagcct gagccccggc 1350
<210> 65
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 65
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtc gggccagcca gggcatccgg aactacctgg cctggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg tacaacagag ccccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gggacagccc aaggctgccc cctcggtcac cctgttcccc 360
ccaagcagcg aggaactgca ggccaacaag gccaccctcg tgtgcctgat cagcgacttc 420
taccctggcg ccgtgaccgt ggcctggaag gccgatagct ctcccgtgaa ggccggcgtg 480
gaaaccacca cccccagcaa gcagagcaac aacaaatacg ccgcctccag ctacctgagc 540
ctgacccccg agcagtggaa gtcccaccgg tcctacagct gccaggtcac acacgagggc 600
agcaccgtgg aaaagaccgt ggcccccacc gagtgcagc 639
<210> 66
<211> 1710
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 66
caggtgcagc tgcagcagag cggccctgag ctggtcaagc ctggcgccag cgtgaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc agctactgga tccactggat caagcagcgg 120
cctggccagg gcctggaatg gatcggcatg atcgacccca gcgacggcga gacacggctg 180
aaccagagat tccagggcag agccaccctg accgtggacg agagcaccag caccgcctac 240
atgcagctgc ggagccccac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcac ccggctgaaa 300
gagtacggca actacgacag cttctacttc gacgtgtggg gagccggcac cctggtcacc 360
gtgtccagcg aagtgcagct gaaagaaagc ggccctggcc tggtggcccc tggcggcagc 420
ctgagcatca cctgtaccgt gtccggcttc agcctgaccg acagcagcat caactgggtc 480
cgacagcccc ctggcaaggg cctcgagtgg ctgggaatga tctggggcga cggccggatc 540
gactacgccg acgccctgaa gtcccggctg agcatcagca aggacagcag caagagccag 600
gtgttcctgg aaatgaccag cctgcggacc gacgacaccg ccacctacta ctgcgccagg 660
gacggctact tcccctacgc catggatttc tggggccagg gcaccagcgt gaccgtgtcc 720
tctgcttcca ccaagggccc cagcgtgttc cctctggccc ctagcagcaa gagcacatct 780
ggcggaacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact ttcccgagcc cgtgaccgtg 840
tcctggaact ctggtgccct gacaagcgga gtgcatacct tccctgccgt gctgcagagc 900
agcggcctgt actctctgag cagcgtggtc accgtgccaa gcagcagcct gggcacccag 960
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaaggtggaa 1020
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgt cctccctgtc ctgcccctga actgctgggc 1080
ggaccctccg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggata ccctgatgat cagccggacc 1140
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg atcccgaagt gaagttcaat 1200
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcataac gccaagacca agcccagaga ggaacagtac 1260
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg acagtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccag cccctatcga gaaaaccatc 1380
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caggtgtaca cactgcctcc atgccgggac 1440
gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1500
atcgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac cacccctccc 1560
gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagtcccgg 1620
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctct gtgatgcacg aggccctgca caaccggttc 1680
acccagaagt ccctgagcct gagccctggc 1710
<210> 67
<211> 1035
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 67
gacatcgtgc tgacccagag ccctgccagc ctggccgtgt ctctgggcca gagagccacc 60
atcagctgcc gggccagcga gagcgtggac agctacggcc agagctacat gcactggtat 120
cagcagaagg ccggccagcc ccccaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggaaagc 180
ggcgtgcccg ccagattcag cggcagcggc agcagaaccg acttcaccct gaccatcgac 240
cccgtgcagg ccgaggacgc cgccacctac tactgccagc agaacgccga ggacagccgg 300
accttcggcg gaggcaccaa gctggaaatc aagggcggct ccggcagcag cggctctggc 360
ggcgatatcc agatgaccca gtcccccgcc tccctgagcg tgtccgtggg cgacaccatc 420
accctgacat gccacgccag ccagaacatc gacgtgtggc tgagctggtt ccagcagaag 480
cctggcaaca tccctaagct gctcatctat aaggcctcca acctgcacac cggcgtgccc 540
agcaggtttt ccggctctgg cagcggcacc ggctttaccc tgacaatcag cagcctgcag 600
cccgaggata tcgccacata ttactgtcag caggcccaca gctacccctt cacctttggc 660
ggcggaacaa agctcgagat taagggcggc agcggaagct ccggctccgg cggacgtacg 720
gtggccgctc cttccgtgtt catcttccct ccctccgacg agcagctgaa gtccggcacc 780
gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc taccctcggg aggccaaggt gcagtggaag 840
gtggacaacg ccctgcagtc cggcaactcc caggagtccg tcaccgagca ggactccaag 900
gacagcacct actccctgtc ctccaccctg accctgtcca aggccgacta cgagaagcac 960
aaggtgtacg cctgtgaggt gacccaccag ggcctgtcca gccctgtgac caagtccttc 1020
aaccggggcg agtgc 1035
<210> 68
<211> 570
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 68
Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu
115 120 125
Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Arg Leu Asn Gln Arg Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu
180 185 190
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp
195 200 205
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp
210 215 220
Ser Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
245 250 255
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
260 265 270
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
275 280 285
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
305 310 315 320
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
325 330 335
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
465 470 475 480
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565 570
<210> 69
<211> 345
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 69
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser
100 105 110
Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu
115 120 125
Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu
130 135 140
Ser Val Asp Ser Tyr Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys
145 150 155 160
Ala Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu
165 170 175
Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe
180 185 190
Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr
195 200 205
Cys Gln Gln Asn Ala Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
210 215 220
Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr
225 230 235 240
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
245 250 255
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
260 265 270
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
275 280 285
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
305 310 315 320
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
325 330 335
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
340 345
<210> 70
<211> 1035
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 70
gacatccaga tgacccagag ccccgccagc ctgagcgtgt ccgtgggcga taccatcacc 60
ctgacctgcc acgccagcca gaacatcgac gtgtggctga gctggttcca gcagaagccc 120
ggcaacatcc ccaagctgct gatctacaag gccagcaacc tgcacaccgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gctctggcag cggcaccggc tttaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag gcccacagct accccttcac cttcggcgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gggcggcagc ggcagctccg gctctggcgg cgatatcgtg 360
ctgacccagt ctcccgcctc cctggccgtg tctctgggcc agagagccac catcagctgc 420
cgggccagcg agagcgtgga cagctacggc cagagctaca tgcactggta tcagcagaag 480
gccggacagc cccctaaact gctcatctac ctggcctcca acctggaaag cggcgtgccc 540
gccaggtttt ccggcagcgg ctccagaacc gacttcaccc tgacaatcga ccccgtgcag 600
gccgaggacg ccgccacata ttactgtcag cagaacgccg aggacagcag aacctttggc 660
ggcggaacaa agctcgagat taagggcggc tccggctcca gcggatctgg cggacgtacg 720
gtggccgctc cttccgtgtt catcttccct ccctccgacg agcagctgaa gtccggcacc 780
gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc taccctcggg aggccaaggt gcagtggaag 840
gtggacaacg ccctgcagtc cggcaactcc caggagtccg tcaccgagca ggactccaag 900
gacagcacct actccctgtc ctccaccctg accctgtcca aggccgacta cgagaagcac 960
aaggtgtacg cctgtgaggt gacccaccag ggcctgtcca gccctgtgac caagtccttc 1020
aaccggggcg agtgc 1035
<210> 71
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 71
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 72
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 72
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtc gggccagcca gggcatccgg aactacctgg cctggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg tacaacagag ccccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctcctt ccgtgttcat cttccctccc 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcaccgcc tccgtggtgt gtctgctgaa caacttctac 420
cctcgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caactcccag 480
gagtccgtca ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc caccctgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gtgaggtgac ccaccagggc 600
ctgtccagcc ctgtgaccaa gtccttcaac cggggcgagt gc 642
<210> 73
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 73
Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
355 360 365
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 74
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 74
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 75
<211> 573
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 75
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Val
115 120 125
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser
130 135 140
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val
145 150 155 160
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Trp
165 170 175
Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr
180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr
210 215 220
Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
245 250 255
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
290 295 300
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
305 310 315 320
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
325 330 335
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
340 345 350
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
355 360 365
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
370 375 380
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
385 390 395 400
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
405 410 415
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
420 425 430
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
435 440 445
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
450 455 460
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
465 470 475 480
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
485 490 495
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
500 505 510
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
515 520 525
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
530 535 540
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
545 550 555 560
Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565 570
<210> 76
<211> 341
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 76
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser
100 105 110
Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu
115 120 125
Ser Val Ser Val Gly Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln
130 135 140
Asn Ile Asp Val Trp Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile
145 150 155 160
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro
165 170 175
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile
180 185 190
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala
195 200 205
His Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Val Ala Ala Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
245 250 255
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
260 265 270
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
275 280 285
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
305 310 315 320
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
325 330 335
Asn Arg Gly Glu Cys
340
<210> 77
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 77
gaggtgcagc tgaaggagag cggccccggc ctggtggccc ccggcggcag cctgagcatc 60
acctgcaccg tgagcggctt cagcctgacc gacagcagca tcaactgggt gcgccagccc 120
cccggcaagg gcctggagtg gctgggcatg atctggggcg acggccgcat cgactacgcc 180
gacgccctga agagccgcct gagcatcagc aaggacagca gcaagagcca ggtgttcctg 240
gagatgacca gcctgcgcac cgacgacacc gccacctact actgcgcccg cgacggctac 300
ttcccctacg ccatggactt ctggggccag ggcaccagcg tgaccgtgag cagcgccagc 360
accaagggcc ccagcgtgtt ccccctggcc cctagcagca agagcacatc tggcggcaca 420
gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgagc ccgtgacagt gtcctggaac 480
tctggcgccc tgaccagcgg agtgcatacc ttccctgccg tgctgcagtc cagcggcctg 540
tacagcctga gcagcgtggt cacagtgccc agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600
tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaggtgga acccaagagc 660
tgcgacaaga cccacacctg tcccccctgc cctgcccctg aactgctggg cggaccctcc 720
gtgttcctgt tccccccaaa gcccaaggac accctgatga tcagccggac ccccgaagtg 780
acctgcgtgg tggtggacgt gtcccacgag gaccctgaag tgaagttcaa ttggtacgtg 840
gacggcgtgg aagtgcataa cgccaagacc aagcccagag aggaacagta caacagcacc 900
taccgggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaagagtac 960
aagtgcaagg tgtccaacaa ggccctgcct gcccccatcg agaaaaccat cagcaaggcc 1020
aagggccagc ctagagagcc ccaagtctgc accctgcccc ccagcagaga tgagctgacc 1080
aagaaccagg tgtccctgag ctgcgccgtg aagggcttct accccagcga tatcgccgtg 1140
gaatgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc tgtgctggac 1200
agcgacggct cattcttcct ggtgtccaag ctgacagtgg acaagagccg gtggcagcag 1260
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccatta cacccagaag 1320
tccctgagcc tgagccccgg c 1341
<210> 78
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 78
gacatcgtgc tgacccagag ccctgccagc ctggccgtgt ctctgggcca gagagccacc 60
atcagctgcc gggccagcga gagcgtggac agctacggcc agagctacat gcactggtat 120
cagcagaagg ccggccagcc ccccaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggaaagc 180
ggcgtgcccg ccagattcag cggcagcggc agcagaaccg acttcaccct gaccatcgac 240
cccgtgcagg ccgaggacgc cgccacctac tactgccagc agaacgccga ggacagccgg 300
accttcggcg gaggcaccaa gctggaaatc aagggacagc ccaaggctgc cccctcggtc 360
accctgttcc ccccaagcag cgaggaactg caggccaaca aggccaccct cgtgtgcctg 420
atcagcgact tctaccctgg cgccgtgacc gtggcctgga aggccgatag ctctcccgtg 480
aaggccggcg tggaaaccac cacccccagc aagcagagca acaacaaata cgccgccagc 540
agctacctga gcctgacccc cgagcagtgg aagtcccacc ggtcctacag ctgccaggtc 600
acacacgagg gcagcaccgt ggaaaagacc gtggccccca ccgagtgcag c 651
<210> 79
<211> 1719
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 79
caggtgcagc tgcagcagag cggccctgag ctggtcaagc ctggcgccag cgtgaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc agctactgga tccactggat caagcagcgg 120
cctggccagg gcctggaatg gatcggcatg atcgacccca gcgacggcga gacacggctg 180
aaccagagat tccagggcag agccaccctg accgtggacg agagcaccag caccgcctac 240
atgcagctgc ggagccccac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcac ccggctgaaa 300
gagtacggca actacgacag cttctacttc gacgtgtggg gagccggcac cctggtcacc 360
gtgtccagcg aagtgcagct ggtggaaagc ggcggaggcc tggtgcagcc cggcagaagc 420
ctgagactga gctgcgccgc cagcggcttc accttcgacg actacgccat gcactgggtc 480
cgacaggccc ctggcaaagg actggaatgg gtgtccgcca tcacctggaa cagcggccac 540
atcgactacg ccgacagcgt ggaaggccgg ttcaccatca gccgggacaa cgccaagaac 600
agcctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg gccgaggata ccgccgtgta ttattgcgcc 660
aaggtgtcct acctgagcac cgccagcagc ctggactact ggggccaggg caccctcgtg 720
acagtgtcct ccgcttccac caagggcccc agcgtgttcc ctctggcccc tagcagcaag 780
agcacatctg gcggaacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt tcccgagccc 840
gtgaccgtgt cctggaactc tggtgccctg acaagcggag tgcatacctt ccctgccgtg 900
ctgcagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtggtca ccgtgccaag cagcagcctg 960
ggcacccaga cctacatctg caacgtgaac cacaagccct ccaacaccaa ggtggacaag 1020
aaggtggaac ccaagagctg cgacaagacc cacacctgtc ctccctgtcc tgcccctgaa 1080
ctgctgggcg gaccctccgt gttcctgttc cctccaaagc ccaaggatac cctgatgatc 1140
agccggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggacgtgt cccacgagga tcccgaagtg 1200
aagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa gtgcataacg ccaagaccaa gcccagagag 1260
gaacagtaca acagcaccta ccgggtggtg tccgtgctga cagtgctgca ccaggactgg 1320
ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg ccctgccagc ccctatcgag 1380
aaaaccatca gcaaggccaa gggccagccc cgcgagcctc aggtgtacac actgcctcca 1440
tgccgggacg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgtggt gcctcgtgaa gggcttctac 1500
ccctccgata tcgccgtgga atgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc 1560
acccctcccg tgctggacag cgacggctca ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac 1620
aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc agctgctctg tgatgcacga ggccctgcac 1680
aaccggttca cccagaagtc cctgagcctg agccctggc 1719
<210> 80
<211> 1023
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 80
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtc gggccagcca gggcatccgg aactacctgg cctggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg tacaacagag ccccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gggcggctct ggcagctccg gcagcggcgg agacattcag 360
atgacacagt cccccgccag cctgtccgtg tccgtgggcg ataccatcac cctgacatgc 420
cacgccagcc agaacatcga cgtgtggctg agctggttcc agcagaaacc tggcaacatc 480
cctaagctgc tcatctataa ggccagcaac ctgcacacag gcgtgccctc cagattctcc 540
ggctctggct ctggcaccgg ctttacactg acaatcagtt ctctgcagcc tgaggatatc 600
gccacatatt actgtcagca ggcccacagc taccctttca ccttcggagg cggcaccaag 660
ctcgagatta agggcggaag cggctcctcc ggctccggcg gacgtacggt ggccgctcct 720
tccgtgttca tcttccctcc ctccgacgag cagctgaagt ccggcaccgc ctccgtggtg 780
tgtctgctga acaacttcta ccctcgggag gccaaggtgc agtggaaggt ggacaacgcc 840
ctgcagtccg gcaactccca ggagtccgtc accgagcagg actccaagga cagcacctac 900
tccctgtcct ccaccctgac cctgtccaag gccgactacg agaagcacaa ggtgtacgcc 960
tgtgaggtga cccaccaggg cctgtccagc cctgtgacca agtccttcaa ccggggcgag 1020
tgc 1023
<210> 81
<211> 573
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser
115 120 125
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
130 135 140
Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His Trp Ile Lys Gln
145 150 155 160
Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp
165 170 175
Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr
180 185 190
Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr
195 200 205
Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly
210 215 220
Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
245 250 255
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
290 295 300
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
305 310 315 320
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
325 330 335
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
340 345 350
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
355 360 365
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
370 375 380
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
385 390 395 400
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
405 410 415
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
420 425 430
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
435 440 445
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
450 455 460
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
465 470 475 480
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
485 490 495
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
500 505 510
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
515 520 525
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
530 535 540
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
545 550 555 560
Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565 570
<210> 82
<211> 341
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 82
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser
100 105 110
Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
115 120 125
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
130 135 140
Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
145 150 155 160
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro
165 170 175
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
180 185 190
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr
195 200 205
Asn Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Val Ala Ala Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
245 250 255
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
260 265 270
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
275 280 285
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
305 310 315 320
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
325 330 335
Asn Arg Gly Glu Cys
340
<210> 83
<211> 1719
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 83
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgcc atcacctgga acagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggaaggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggtgtcc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt caccgtgtcc 360
agtcaggtcc agctgcagca gagcggccct gagctggtca agcctggcgc cagcgtgaag 420
atcagctgca aggccagcgg ctacagcttc accagctact ggatccactg gatcaagcag 480
cggcctggcc agggcctcga gtggatcggc atgatcgacc ccagcgacgg cgagacacgg 540
ctgaaccaga gattccaggg cagagccacc ctgaccgtgg acgagagcac cagcaccgcc 600
tacatgcagc tgcggagccc caccagcgag gatagcgccg tgtattattg cacccggctg 660
aaagagtacg gcaactacga cagcttctac ttcgacgtgt ggggagccgg caccctcgtg 720
acagtgtcct ccgcttccac caagggcccc agcgtgttcc ctctggcccc tagcagcaag 780
agcacatctg gcggaacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt tcccgagccc 840
gtgaccgtgt cctggaactc tggtgccctg acaagcggag tgcatacctt ccctgccgtg 900
ctgcagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtggtca ccgtgccaag cagcagcctg 960
ggcacccaga cctacatctg caacgtgaac cacaagccct ccaacaccaa ggtggacaag 1020
aaggtggaac ccaagagctg cgacaagacc cacacctgtc ctccctgtcc tgcccctgaa 1080
ctgctgggcg gaccctccgt gttcctgttc cctccaaagc ccaaggatac cctgatgatc 1140
agccggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggacgtgt cccacgagga tcccgaagtg 1200
aagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa gtgcataacg ccaagaccaa gcccagagag 1260
gaacagtaca acagcaccta ccgggtggtg tccgtgctga cagtgctgca ccaggactgg 1320
ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg ccctgccagc ccctatcgag 1380
aaaaccatca gcaaggccaa gggccagccc cgcgagcctc aggtgtacac actgcctcca 1440
tgccgggacg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgtggt gcctcgtgaa gggcttctac 1500
ccctccgata tcgccgtgga atgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc 1560
acccctcccg tgctggacag cgacggctca ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac 1620
aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc agctgctctg tgatgcacga ggccctgcac 1680
aaccggttca cccagaagtc cctgagcctg agccctggc 1719
<210> 84
<211> 1023
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 84
gacatccaga tgacccagag ccccgccagc ctgagcgtgt ccgtgggcga taccatcacc 60
ctgacctgcc acgccagcca gaacatcgac gtgtggctga gctggttcca gcagaagccc 120
ggcaacatcc ccaagctgct gatctacaag gccagcaacc tgcacaccgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gctctggcag cggcaccggc tttaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag gcccacagct accccttcac cttcggcgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gggcggcagc ggcagctccg gcagcggcgg agacattcag 360
atgacacagt cccccagcag cctgtccgcc agcgtgggcg acagagtgac catcacctgt 420
cgggccagcc agggcatccg gaactacctg gcctggtatc agcagaaacc tggcaaggcc 480
cctaaactgc tcatctacgc cgccagcaca ctgcagtctg gcgtgccctc cagattctcc 540
ggaagcggct ccggcaccga tttcaccctg acaatctcat ctctgcagcc tgaggacgtg 600
gccacatatt actgccagag atacaacaga gccccctaca cctttggcca gggcaccaag 660
gtcgagatta agggcggatc cggctccagc ggcagcggag gacgtacggt ggccgctcct 720
tccgtgttca tcttccctcc ctccgacgag cagctgaagt ccggcaccgc ctccgtggtg 780
tgtctgctga acaacttcta ccctcgggag gccaaggtgc agtggaaggt ggacaacgcc 840
ctgcagtccg gcaactccca ggagtccgtc accgagcagg actccaagga cagcacctac 900
tccctgtcct ccaccctgac cctgtccaag gccgactacg agaagcacaa ggtgtacgcc 960
tgtgaggtga cccaccaggg cctgtccagc cctgtgacca agtccttcaa ccggggcgag 1020
tgc 1023
<210> 85
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 85
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 86
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 86
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gln Pro Lys Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
115 120 125
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
130 135 140
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
145 150 155 160
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
165 170 175
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
180 185 190
Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala
195 200 205
Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 87
<211> 568
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 87
Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile
165 170 175
Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
180 185 190
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser
210 215 220
Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
225 230 235 240
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
245 250 255
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
260 265 270
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
275 280 285
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
290 295 300
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
305 310 315 320
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
325 330 335
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
340 345 350
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
355 360 365
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
370 375 380
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
385 390 395 400
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
405 410 415
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
420 425 430
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
435 440 445
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
450 455 460
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu
465 470 475 480
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
485 490 495
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
500 505 510
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
515 520 525
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
530 535 540
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
545 550 555 560
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565
<210> 88
<211> 344
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 88
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu
20 25 30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Ser
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala
115 120 125
Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser
130 135 140
Val Asp Ser Tyr Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala
145 150 155 160
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
165 170 175
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
180 185 190
Leu Thr Ile Asp Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
195 200 205
Gln Gln Asn Ala Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
210 215 220
Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Val
225 230 235 240
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
245 250 255
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
260 265 270
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
275 280 285
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
290 295 300
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
305 310 315 320
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
325 330 335
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
340
<210> 89
<211> 1356
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 89
caggtgcagc tgcagcagag cggccccgag ctggtgaagc ccggcgccag cgtgaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc agctactgga ttcactggat caagcagcgc 120
cccggccagg gcctggagtg gatcggcatg atcgacccca gcgacggcga gacccgcctg 180
aaccagcgct tccagggccg cgccaccctg accgtggacg agagcaccag caccgcctac 240
atgcagctgc gcagccccac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcac ccgcctgaag 300
gagtacggca actacgacag cttctacttc gacgtgtggg gcgccggcac cctggtgacc 360
gtgagcagcg ccagcaccaa gggccccagc gtgttccccc tggcccctag cagcaagagc 420
acatctggcg gcacagccgc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgagcccgtg 480
acagtgtcct ggaactctgg cgccctgacc agcggagtgc ataccttccc tgccgtgctg 540
cagtccagcg gcctgtacag cctgagcagc gtggtcacag tgcccagcag cagcctgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaaccac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaag 660
gtggaaccca agagctgcga caagacccac acctgtcccc cctgccctgc ccctgaactg 720
ctgggcggac cctccgtgtt cctgttcccc ccaaagccca aggacaccct gatgatcagc 780
cggacccccg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc acgaggaccc tgaagtgaag 840
ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcca agaccaagcc cagagaggaa 900
cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960
aacggcaaag agtacaagtg caaggtgtcc aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa 1020
accatcagca aggccaaggg ccagcctaga gagccccaag tctgcaccct gccccccagc 1080
agagatgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc ctgagctgcg ccgtgaaggg cttctacccc 1140
agcgatatcg ccgtggaatg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200
ccccctgtgc tggacagcga cggctcattc ttcctggtgt ccaagctgac agtggacaag 1260
agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320
cattacaccc agaagtccct gagcctgagc cccggc 1356
<210> 90
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 90
gacatccaga tgacccagag ccccgccagc ctgagcgtgt ccgtgggcga taccatcacc 60
ctgacctgcc acgccagcca gaacatcgac gtgtggctga gctggttcca gcagaagccc 120
ggcaacatcc ccaagctgct gatctacaag gccagcaacc tgcacaccgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gctctggcag cggcaccggc tttaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag gcccacagct accccttcac cttcggcgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gggacagccc aaggctgccc cctcggtcac cctgttcccc 360
ccaagctctg aggaactgca ggccaacaag gccaccctcg tgtgcctgat cagcgacttc 420
taccctggcg ccgtgaccgt ggcctggaag gccgatagct ctcccgtgaa ggccggcgtg 480
gaaaccacca cccccagcaa gcagagcaac aacaaatacg ccgccagcag ctacctgagc 540
ctgacccccg agcagtggaa gtcccaccgg tcctacagct gccaggtcac acacgagggc 600
agcaccgtgg aaaagaccgt ggcccccacc gagtgcagc 639
<210> 91
<211> 1704
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 91
gaggtgcagc tgaaagagtc cggccctgga ctggtggccc ctggcggcag cctgagcatc 60
acctgtaccg tgtccggctt cagcctgacc gacagcagca tcaactgggt ccgacagccc 120
cctggcaagg gcctggaatg gctgggcatg atctggggcg acggccggat cgactacgcc 180
gacgccctga agtcccggct gagcatcagc aaggacagca gcaagagcca ggtgttcctg 240
gaaatgacca gcctgcggac cgacgacacc gccacctact actgcgccag ggacggctac 300
ttcccctacg ccatggattt ctggggccag ggcaccagcg tgaccgtgtc ctccgaagtg 360
cagctggtgg aaagcggcgg aggcctggtg cagcccggca gaagcctgag actgagctgc 420
gccgccagcg gcttcacctt cgacgactac gccatgcact gggtccgcca ggctcccgga 480
aagggactcg agtgggtgtc cgccatcacc tggaacagcg gccacatcga ttacgccgat 540
agcgtggaag gccggttcac catcagccgg gacaacgcca agaacagcct gtacctgcag 600
atgaacagcc tgagagccga ggataccgcc gtgtactact gtgccaaggt gtcctacctg 660
agcaccgcca gcagcctgga ctactgggga cagggaaccc tggtcaccgt gtccagcgct 720
tccaccaagg gccccagcgt gttccctctg gcccctagca gcaagagcac atctggcgga 780
acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tactttcccg agcccgtgac cgtgtcctgg 840
aactctggtg ccctgacaag cggagtgcat accttccctg ccgtgctgca gagcagcggc 900
ctgtactctc tgagcagcgt ggtcaccgtg ccaagcagca gcctgggcac ccagacctac 960
atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 1020
agctgcgaca agacccacac ctgtcctccc tgtcctgccc ctgaactgct gggcggaccc 1080
tccgtgttcc tgttccctcc aaagcccaag gataccctga tgatcagccg gacccctgaa 1140
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 1200
gtggacggcg tggaagtgca taacgccaag accaagccca gagaggaaca gtacaacagc 1260
acctaccggg tggtgtccgt gctgacagtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 1320
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg ccagccccta tcgagaaaac catcagcaag 1380
gccaagggcc agccccgcga gcctcaggtg tacacactgc ctccatgccg ggacgagctg 1440
accaagaacc aggtgtccct gtggtgcctc gtgaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1500
gtggaatggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg 1560
gacagcgacg gctcattctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1620
cagggcaacg tgttcagctg ctctgtgatg cacgaggccc tgcacaaccg gttcacccag 1680
aagtccctga gcctgagccc tggc 1704
<210> 92
<211> 1035
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 92
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtc gggccagcca gggcatccgg aactacctgg cctggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg tacaacagag ccccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gggcggctct ggcagctccg gctctggcgg cgatatcgtg 360
ctgacccagt ctcccgccag cctggccgtg tctctgggcc agagagccac catcagctgc 420
agagccagcg agagcgtgga cagctacggc cagagctaca tgcattggta tcagcagaaa 480
gccggccagc ctcctaaact gctcatctac ctggccagca acctggaatc cggcgtgccc 540
gccaggtttt ccggcagcgg cagcagaacc gatttcacac tgacaatcga ccccgtgcag 600
gccgaggatg ccgccacata ttactgtcag cagaacgccg aggacagccg gaccttcggc 660
ggaggcacca agctcgagat taagggcgga agcggctcca gcggcagtgg cggacgtacg 720
gtggccgctc cttccgtgtt catcttccct ccctccgacg agcagctgaa gtccggcacc 780
gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc taccctcggg aggccaaggt gcagtggaag 840
gtggacaacg ccctgcagtc cggcaactcc caggagtccg tcaccgagca ggactccaag 900
gacagcacct actccctgtc ctccaccctg accctgtcca aggccgacta cgagaagcac 960
aaggtgtacg cctgtgaggt gacccaccag ggcctgtcca gccctgtgac caagtccttc 1020
aaccggggcg agtgc 1035
<210> 93
<211> 568
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser
115 120 125
Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr
130 135 140
Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln
145 150 155 160
Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly
165 170 175
Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys
180 185 190
Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr
195 200 205
Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr
210 215 220
Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala
225 230 235 240
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
245 250 255
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
260 265 270
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
275 280 285
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
290 295 300
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
305 310 315 320
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
325 330 335
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
340 345 350
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
355 360 365
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
370 375 380
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
385 390 395 400
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
405 410 415
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
420 425 430
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
435 440 445
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
450 455 460
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu
465 470 475 480
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
485 490 495
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
500 505 510
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
515 520 525
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
530 535 540
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
545 550 555 560
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565
<210> 94
<211> 345
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 94
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
115 120 125
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
130 135 140
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
145 150 155 160
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln
165 170 175
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
180 185 190
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr
195 200 205
Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
210 215 220
Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr
225 230 235 240
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
245 250 255
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
260 265 270
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
275 280 285
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
305 310 315 320
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
325 330 335
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
340 345
<210> 95
<211> 1704
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 95
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgcc atcacctgga acagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggaaggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggtgtcc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt caccgtgtcc 360
tccgaagtgc agctgaaaga gtccggccct ggcctggtgg cccctggcgg cagcctgagc 420
atcacctgta ccgtgtccgg cttcagcctg accgacagca gcatcaactg ggtccgccag 480
cctcccggaa agggactcga gtggctgggc atgatctggg gcgacggccg gatcgattac 540
gccgatgccc tgaagtcccg gctgagcatc agcaaggaca gcagcaagag ccaggtgttc 600
ctggaaatga ccagcctgag aaccgacgac accgccacct actactgtgc ccgggacggc 660
tacttcccct acgccatgga tttctgggga cagggaacca gcgtgaccgt gtccagcgct 720
tccaccaagg gccccagcgt gttccctctg gcccctagca gcaagagcac atctggcgga 780
acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tactttcccg agcccgtgac cgtgtcctgg 840
aactctggtg ccctgacaag cggagtgcat accttccctg ccgtgctgca gagcagcggc 900
ctgtactctc tgagcagcgt ggtcaccgtg ccaagcagca gcctgggcac ccagacctac 960
atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 1020
agctgcgaca agacccacac ctgtcctccc tgtcctgccc ctgaactgct gggcggaccc 1080
tccgtgttcc tgttccctcc aaagcccaag gataccctga tgatcagccg gacccctgaa 1140
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 1200
gtggacggcg tggaagtgca taacgccaag accaagccca gagaggaaca gtacaacagc 1260
acctaccggg tggtgtccgt gctgacagtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 1320
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg ccagccccta tcgagaaaac catcagcaag 1380
gccaagggcc agccccgcga gcctcaggtg tacacactgc ctccatgccg ggacgagctg 1440
accaagaacc aggtgtccct gtggtgcctc gtgaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1500
gtggaatggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg 1560
gacagcgacg gctcattctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1620
cagggcaacg tgttcagctg ctctgtgatg cacgaggccc tgcacaaccg gttcacccag 1680
aagtccctga gcctgagccc tggc 1704
<210> 96
<211> 1035
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 96
gacatcgtgc tgacccagag ccctgccagc ctggccgtgt ctctgggcca gagagccacc 60
atcagctgcc gggccagcga gagcgtggac agctacggcc agagctacat gcactggtat 120
cagcagaagg ccggccagcc ccccaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggaaagc 180
ggcgtgcccg ccagattcag cggcagcggc agcagaaccg acttcaccct gaccatcgac 240
cccgtgcagg ccgaggacgc cgccacctac tactgccagc agaacgccga ggacagccgg 300
accttcggcg gaggcaccaa gctggaaatc aagggcggct ccggcagcag cggctctggc 360
ggcgatatcc agatgaccca gtcccccagc agcctgagcg ccagcgtggg cgacagagtg 420
accatcacct gtagagccag ccagggcatc cggaactacc tggcttggta tcagcagaaa 480
cccggaaagg cccctaaact gctcatctac gccgccagca ccctgcagtc cggcgtgcca 540
agcagattct ccggctctgg cagcggcacc gatttcacac tgacaatcag cagcctgcag 600
cccgaggatg tggccaccta ttattgccag agatacaaca gagcccccta caccttcggc 660
cagggcacca aggtcgagat taagggcgga agcggcagct ccggctccgg cggacgtacg 720
gtggccgctc cttccgtgtt catcttccct ccctccgacg agcagctgaa gtccggcacc 780
gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc taccctcggg aggccaaggt gcagtggaag 840
gtggacaacg ccctgcagtc cggcaactcc caggagtccg tcaccgagca ggactccaag 900
gacagcacct actccctgtc ctccaccctg accctgtcca aggccgacta cgagaagcac 960
aaggtgtacg cctgtgaggt gacccaccag ggcctgtcca gccctgtgac caagtccttc 1020
aaccggggcg agtgc 1035
<210> 97
<211> 1710
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 97
gaggtgcagc tgaaagagtc cggccctgga ctggtggccc ctggcggcag cctgagcatc 60
acctgtaccg tgtccggctt cagcctgacc gacagcagca tcaactgggt ccgacagccc 120
cctggcaagg gcctggaatg gctgggcatg atctggggcg acggccggat cgactacgcc 180
gacgccctga agtcccggct gagcatcagc aaggacagca gcaagagcca ggtgttcctg 240
gaaatgacca gcctgcggac cgacgacacc gccacctact actgcgccag ggacggctac 300
ttcccctacg ccatggattt ctggggccag ggcaccagcg tgaccgtgtc cagtcaggtc 360
cagctgcagc agagcggccc tgagctggtc aagcctggcg ccagcgtgaa gatcagctgc 420
aaggccagcg gctacagctt caccagctac tggatccact ggatcaagca gcggcctggc 480
cagggcctcg agtggatcgg aatgatcgac cccagcgacg gcgagacacg gctgaaccag 540
agattccagg gcagagccac cctgaccgtg gacgagagca ccagcaccgc ctacatgcag 600
ctgcggagcc ccaccagcga ggacagcgcc gtgtactact gcacccggct gaaagaatac 660
ggcaactacg acagcttcta cttcgacgtg tggggagccg gcaccctggt caccgtgtct 720
agcgcttcca ccaagggccc cagcgtgttc cctctggccc ctagcagcaa gagcacatct 780
ggcggaacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact ttcccgagcc cgtgaccgtg 840
tcctggaact ctggtgccct gacaagcgga gtgcatacct tccctgccgt gctgcagagc 900
agcggcctgt actctctgag cagcgtggtc accgtgccaa gcagcagcct gggcacccag 960
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaaggtggaa 1020
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgt cctccctgtc ctgcccctga actgctgggc 1080
ggaccctccg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggata ccctgatgat cagccggacc 1140
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg atcccgaagt gaagttcaat 1200
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcataac gccaagacca agcccagaga ggaacagtac 1260
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg acagtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccag cccctatcga gaaaaccatc 1380
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caggtgtaca cactgcctcc atgccgggac 1440
gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1500
atcgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac cacccctccc 1560
gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagtcccgg 1620
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctct gtgatgcacg aggccctgca caaccggttc 1680
acccagaagt ccctgagcct gagccctggc 1710
<210> 98
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 98
Gly Gly Gly Gly
1
<210> 99
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 99
Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 100
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 100
Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 101
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 101
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 102
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 102
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 103
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 104
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 104
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 105
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 105
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 106
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 106
Thr Lys Gly Pro Ser
1 5
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 107
Thr Val Ala Ala Pro
1 5
<210> 108
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 108
Gln Pro Lys Ala Ala
1 5
<210> 109
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 109
Gln Arg Ile Glu Gly
1 5
<210> 110
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
1 5
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 111
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
1 5
<210> 112
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 112
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
1 5
<210> 113
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 113
His Ile Asp Ser Pro Asn Lys
1 5
<210> 114
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 114
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Cys Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 115
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 115
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 116
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 116
caggtgcagc tgcagcagcc tggcgccgaa ctcgtgaaac ctggcgcctc cgtgaagatg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacaaca tgcactgggt caagcagacc 120
cccggcagag gcctggaatg gatcggcgcc atctaccccg gcaacggcga cacctcctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccaccctg accgccgaca agagcagcag cacagcctac 240
atgcagctgt ccagcctgac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcgc cagaagcacc 300
tactacggcg gcgactggta cttcaacgtg tggggagccg gcaccaccgt gacagtgtct 360
gctgcttcga ccaagggccc atcggtgttc cctctggccc cttgcagcag aagcaccagc 420
gaatctacag ccgccctggg ctgcctcgtg aaggactact ttcccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgctct gacaagcggc gtgcacacct ttccagccgt gctccagagc 540
agcggcctgt actctctgag cagcgtcgtg acagtgccca gcagcagcct gggcaccaag 600
acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660
tctaagtacg gccctccctg ccctccttgc ccagcccctg aatttctggg cggaccctcc 720
gtgttcctgt tccccccaaa gcccaaggac accctgatga tcagccggac ccccgaagtg 780
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaggaa gatcccgagg tgcagttcaa ttggtacgtg 840
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggaacagtt caacagcacc 900
taccgggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaagagtac 960
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgccc agctccatcg agaaaaccat cagcaaggcc 1020
aagggccagc cccgcgagcc tcaagtgtat accctgcccc cttgccagga agagatgacc 1080
aagaaccagg tgtccctgtg gtgtctcgtg aaaggcttct accccagcga cattgccgtg 1140
gaatgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc tgtgctggac 1200
agcgacggct cattcttcct gtactccaag ctgaccgtgg acaagagccg gtggcaggaa 1260
ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320
tccctgtctc tgtccctggg caag 1344
<210> 117
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 117
cagatcgtgc tgagccagag ccctgccatc ctgagcgctt ccccaggcga gaaagtgacc 60
atgacctgca gagccagcag cagcgtgtcc tacatccact ggttccagca gaagcccggc 120
agcagcccca agccttggat ctacgccacc agcaatctgg ccagcggagt gcctgtgcgg 180
tttagcggct ctggcagcgg cacaagctac agcctgacca tcagccgggt ggaagccgaa 240
gatgccgcca cctactactg ccagcagtgg accagcaacc cccccacatt tggcggaggc 300
accaagctgg aaatcaagcg tacggtggcc gctcccagcg tgttcatctt cccacctagc 360
gacgagcagc tgaagtccgg cacagcctct gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420
cgcgaggcca aagtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa 480
agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctgacactg 540
agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 600
tctagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639
<210> 118
<211> 1713
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 118
caggtgcagc tgcaggaatc tggccctggc ctcgtgaagc ctagccagac cctgagcctg 60
acctgtaccg tgtccggctt cagcctgagc gactacggcg tgcactgggt gcgccagcca 120
cctggaaaag gcctggaatg gctgggcgtg atctgggctg gcggaggcac caactacaac 180
cccagcctga agtccagaaa gaccatcagc aaggacacca gcaagaacca ggtgtccctg 240
aagctgagca gcgtgacagc cgccgatacc gccgtgtact actgcgccag agacaagggc 300
tacagctact actacagcat ggactactgg ggccagggca ccaccgtgac cgtgtcatcc 360
tctcaggtgc agctggtgga atctggcggc ggagtggtgc agcctggcag aagcctgaga 420
ctgagctgtg ccgccagcgg cttcaccttc accaaggcct ggatgcactg ggtgcgccag 480
gcccctggaa agcagctgga atgggtggcc cagatcaagg acaagagcaa cagctacgcc 540
acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg ttcaccatca gccgggacga cagcaagaac 600
accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgtcgg 660
ggcgtgtact atgccctgag ccccttcgat tactggggcc agggaaccct cgtgaccgtg 720
tctagtcgga ccgcttcgac caagggccca tcggtgttcc ctctggcccc ttgcagcaga 780
agcaccagcg aatctacagc cgccctgggc tgcctcgtga aggactactt tcccgagccc 840
gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg 900
ctccagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtcgtga cagtgcccag cagcagcctg 960
ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 1020
cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc cctccttgcc cagcccctga atttctgggc 1080
ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 1140
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat 1200
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggaacagttc 1260
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccca gctccatcga gaaaaccatc 1380
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caagtgtgta ccctgccccc tagccaggaa 1440
gagatgacca agaaccaggt gtccctgagc tgtgccgtga aaggcttcta ccccagcgac 1500
attgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1560
gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg gtgtccaagc tgaccgtgga caagagccgg 1620
tggcaggaag gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1680
acccagaagt ccctgtctct gtccctgggc aag 1713
<210> 119
<211> 1026
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 119
gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtga cacctggaca gcctgccagc 60
atcagctgca agagcagcca gagcctggtg cacaacaacg ccaacaccta cctgagctgg 120
tatctgcaga agcccggcca gagcccccag tccctgatct acaaggtgtc caacagattc 180
agcggcgtgc ccgacagatt ctccggcagc ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240
agccgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactattgtg gccagggcac ccagtacccc 300
ttcacctttg gcagcggcac caaggtggaa atcaagggcc agcccaaggc cgcccccgac 360
atcgtgctga cacagagccc tgctagcctg gccgtgtctc ctggacagag ggccaccatc 420
acctgtagag ccagcgagag cgtggaatat tacgtgacca gcctgatgca gtggtatcag 480
cagaagcccg gccagccccc caagctgctg attttcgccg ccagcaacgt ggaaagcggc 540
gtgccagcca gattttccgg cagcggctct ggcaccgact tcaccctgac catcaacccc 600
gtggaagcca acgacgtggc caactactac tgccagcaga gccggaaggt gccctacacc 660
tttggccagg gcaccaagct ggaaatcaag accaagggcc ccagccgtac ggtggccgct 720
cccagcgtgt tcatcttccc acctagcgac gagcagctga agtccggcac agcctctgtc 780
gtgtgcctgc tgaacaactt ctacccccgc gaggccaaag tgcagtggaa ggtggacaac 840
gccctgcaga gcggcaacag ccaggaaagc gtgaccgagc aggacagcaa ggactccacc 900
tacagcctga gcagcaccct gacactgagc aaggccgact acgagaagca caaggtgtac 960
gcctgcgaag tgacccacca gggcctgtct agccccgtga ccaagagctt caaccggggc 1020
gagtgt 1026
<210> 120
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 120
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn
1 5
<210> 121
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 121
Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr
1 5
<210> 122
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 122
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val
1 5 10
<210> 123
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 123
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 124
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 124
Ala Thr Ser
1
<210> 125
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 125
Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro
1 5
<210> 126
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 126
Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr Asn Ile His
1 5 10
<210> 127
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 127
Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Ala Pro
1 5 10
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 128
Ala Asn Trp Asp Val Ala Phe Ala Tyr
1 5
<210> 129
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 129
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His
1 5 10
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 130
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp
1 5 10
<210> 131
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 131
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 132
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 132
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His
1 5 10
<210> 133
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 133
Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr
1 5
<210> 134
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 134
Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 135
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 135
Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser Ser Ile Asn
1 5 10
<210> 136
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 136
Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp
1 5
<210> 137
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 137
Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe
1 5 10
<210> 138
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 138
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Arg Tyr Met Ala
1 5 10
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 139
Asp Thr Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 140
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 140
Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 141
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 141
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 142
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 142
Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 143
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 143
His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 144
Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 145
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 145
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Gln Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 146
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 146
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 147
Gln Gln Asn Ala Glu Asp Ser Arg Thr
1 5
<210> 148
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 148
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly
1 5 10
<210> 149
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 149
Gln Ser Leu Val His Asn Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 150
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 150
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 151
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 151
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 152
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 152
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Gly Val Tyr Tyr Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 153
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 153
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 154
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 154
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Gly Val Tyr Tyr Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 155
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 155
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 156
<211> 124
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 156
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 157
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 157
Asp Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 158
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 158
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 159
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 159
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 160
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 160
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Lys
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 161
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 161
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 162
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 162
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Lys Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Lys Gly Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 163
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 163
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Val Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Val Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 164
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 164
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 165
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 165
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 166
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 166
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Lys Lys Ser Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Ala Pro Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ala Asn Trp Asp Val Ala Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 167
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 167
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Arg Tyr
20 25 30
Met Ala Trp Tyr Gln Asp Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
His Asp Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 168
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 168
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 169
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 169
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 170
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 170
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 171
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 171
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 172
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 172
Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 173
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 173
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 174
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(5)
<223> Can be absent or present, or present in repeats
of up to 5 times
<400> 174
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 175
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 175
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
1 5
<210> 176
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 176
Asp Lys Thr His Thr
1 5
<210> 177
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 177
Thr Lys Gly Pro Ser Arg
1 5
<210> 178
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 178
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 179
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 179
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
Claims (1)
- 하나 이상의 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 3개의 항원 결합 부위를 형성하는 4개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 결합 단백질의 용도로서, 제1 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 I:
[화학식 I]
VL2-L1-VL1-L2-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
제2 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 II:
[화학식 II]
VH1-L3-VH2-L4-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제3 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 III:
[화학식 III]
VH3-CH1로 표시되는 구조를 포함하며;
제4 폴리펩티드 사슬은 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
VL3-CL로 표시되는 구조를 포함하며;
VL1은 제1 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL2는 제2 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VL3은 제3 면역글로불린 경쇄 가변 도메인이며;
VH1은 제1 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH2는 제2 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
VH3은 제3 면역글로불린 중쇄 가변 도메인이며;
CL은 면역글로불린 경쇄 불변 도메인이며;
CH1은 면역글로불린 CH1 중쇄 불변 도메인이며;
L1, L2, L3 및 L4는 아미노산 링커이며;
화학식 I의 폴리펩티드와 화학식 II의 폴리펩티드는 교차 경쇄-중쇄 쌍을 형성하는, 결합 단백질의 용도.
Applications Claiming Priority (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662322036P | 2016-04-13 | 2016-04-13 | |
| US62/322,036 | 2016-04-13 | ||
| US201662331191P | 2016-05-03 | 2016-05-03 | |
| US62/331,191 | 2016-05-03 | ||
| US201662412187P | 2016-10-24 | 2016-10-24 | |
| US62/412,187 | 2016-10-24 | ||
| EP17305298 | 2017-03-17 | ||
| EPEP17305298.6 | 2017-03-17 | ||
| PCT/US2017/027488 WO2017180913A2 (en) | 2016-04-13 | 2017-04-13 | Trispecific and/or trivalent binding proteins |
| KR1020187032530A KR20180134378A (ko) | 2016-04-13 | 2017-04-13 | 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020187032530A Division KR20180134378A (ko) | 2016-04-13 | 2017-04-13 | 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240036142A true KR20240036142A (ko) | 2024-03-19 |
Family
ID=80631088
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020247007840A KR20240036142A (ko) | 2016-04-13 | 2017-04-13 | 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질 |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11932704B2 (ko) |
| EP (1) | EP4257193A3 (ko) |
| KR (1) | KR20240036142A (ko) |
| DK (1) | DK3443006T5 (ko) |
| ES (1) | ES2960329T3 (ko) |
| FI (1) | FI3443006T3 (ko) |
| HR (1) | HRP20231188T1 (ko) |
| HU (1) | HUE063824T2 (ko) |
| LT (1) | LT3443006T (ko) |
| MX (1) | MX2023004804A (ko) |
| MY (1) | MY192090A (ko) |
| PL (1) | PL3443006T3 (ko) |
| RS (1) | RS64771B1 (ko) |
| SI (1) | SI3443006T1 (ko) |
| TN (1) | TN2020000058A1 (ko) |
| ZA (1) | ZA202006103B (ko) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2016347058B2 (en) | 2015-10-25 | 2023-11-09 | Sanofi | Trispecific and/or trivalent binding proteins for prevention or treatment of HIV infection |
| SI3443006T1 (sl) | 2016-04-13 | 2024-01-31 | Sanofi | Trispecifični in/ali trivalentni vezni proteini |
| US11613576B2 (en) | 2019-04-09 | 2023-03-28 | Sanofi | Trispecific binding proteins, methods, and uses thereof |
Family Cites Families (52)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1338518C (en) | 1987-09-23 | 1996-08-13 | Joyce M. Zarling | Antibody heteroconjugates for the killing of hiv-infected cells |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| DE69937291T2 (de) | 1998-04-02 | 2008-07-10 | Genentech, Inc., South San Francisco | Antikörpervarianten und fragmente davon |
| EP2316951A1 (en) | 2001-01-17 | 2011-05-04 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
| CN1294148C (zh) * | 2001-04-11 | 2007-01-10 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 环状单链三特异抗体 |
| US20050163782A1 (en) | 2003-06-27 | 2005-07-28 | Biogen Idec Ma Inc. | Modified binding molecules comprising connecting peptides |
| US9200061B2 (en) | 2004-02-06 | 2015-12-01 | Morpho Sys AG | Generation and profiling of fully human HuCAL gold®-derived therapeutic antibodies specific for human CD3i |
| CN100376599C (zh) * | 2004-04-01 | 2008-03-26 | 北京安波特基因工程技术有限公司 | 基因工程重组抗cea抗cd3抗cd28线性单链三特异抗体 |
| EP2014680A1 (en) | 2007-07-10 | 2009-01-14 | Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg | Recombinant, single-chain, trivalent tri-specific or bi-specific antibody derivatives |
| EP2050764A1 (en) * | 2007-10-15 | 2009-04-22 | sanofi-aventis | Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof |
| JP2011523853A (ja) * | 2008-06-03 | 2011-08-25 | アボット・ラボラトリーズ | 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用 |
| AU2010298025B2 (en) | 2009-09-25 | 2016-04-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to HIV-1 and their use |
| RS59769B1 (sr) * | 2010-06-09 | 2020-02-28 | Genmab As | Antitela protiv humanog cd38 |
| CN103282385A (zh) | 2010-11-12 | 2013-09-04 | 美国洛克菲勒大学 | 用于hiv治疗的融合蛋白 |
| JOP20210044A1 (ar) | 2010-12-30 | 2017-06-16 | Takeda Pharmaceuticals Co | الأجسام المضادة لـ cd38 |
| TWI743461B (zh) | 2011-03-28 | 2021-10-21 | 法商賽諾菲公司 | 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白 |
| WO2012154312A1 (en) | 2011-05-09 | 2012-11-15 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 and their use |
| CN107903325B (zh) | 2011-05-16 | 2021-10-29 | 埃泰美德(香港)有限公司 | 多特异性fab融合蛋白及其使用方法 |
| PT2710033T (pt) | 2011-05-17 | 2021-03-11 | Univ Rockefeller | Anticorpos neutralizantes do vírus da imunodeficiência humana e métodos de utilização destes |
| US9475862B2 (en) | 2011-11-07 | 2016-10-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing GP41 antibodies and their use |
| CN104271597B (zh) | 2011-12-08 | 2018-05-25 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | Hiv-1的中和抗体及其用途 |
| WO2013163427A1 (en) | 2012-04-25 | 2013-10-31 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Antibodies to treat hiv-1 infection |
| JOP20200236A1 (ar) | 2012-09-21 | 2017-06-16 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها |
| JP2015529236A (ja) | 2012-09-25 | 2015-10-05 | グレンマーク ファーマシューティカルズ， エセ．アー． | ヘテロ二量体免疫グロブリンの精製 |
| WO2014089152A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | University Of Maryland, Baltimore | Hiv-1 env-binding antibodies, fusion proteins, and methods of use |
| EA201591131A1 (ru) | 2012-12-13 | 2015-12-30 | Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания | Днк-конструкции антитела и способ их применения |
| US20140213772A1 (en) * | 2012-12-28 | 2014-07-31 | Abbvie, Inc. | Cross-over dual variable domain immunoglobulin constructs |
| US10487155B2 (en) | 2013-01-14 | 2019-11-26 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| WO2014116846A2 (en) * | 2013-01-23 | 2014-07-31 | Abbvie, Inc. | Methods and compositions for modulating an immune response |
| KR101833602B1 (ko) | 2013-02-26 | 2018-02-28 | 로슈 글리카트 아게 | 이중특이적 t 세포 활성화 항원 결합 분자 |
| BR112015023557A2 (pt) * | 2013-03-15 | 2017-10-24 | Abbvie Inc | proteínas de ligações dual específicas direcionadas contra tnfa |
| US20140302037A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-10-09 | Amgen Inc. | BISPECIFIC-Fc MOLECULES |
| WO2015017755A1 (en) | 2013-08-02 | 2015-02-05 | The Regents Of The University Of California | Engineering antiviral t cell immunity through stem cells and chimeric antigen receptors |
| AU2014343636A1 (en) | 2013-11-04 | 2016-06-02 | Glenmark Pharmaceuticals S.A. | Production of T cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins |
| WO2015149077A1 (en) * | 2014-03-28 | 2015-10-01 | Xencor, Inc. | Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3 |
| BR112017004270B1 (pt) | 2014-09-04 | 2023-03-07 | Stemcell Technologies Inc | Método de ativação de células t ou células nk |
| AU2016210068B2 (en) | 2015-01-23 | 2021-10-28 | Sanofi | Anti-CD3 antibodies, anti-CD123 antibodies and bispecific antibodies specifically binding to CD3 and/or CD123 |
| EP3298389B1 (en) | 2015-05-20 | 2021-09-29 | Quantum-Si Incorporated | Method of determining the sequence of a nucleic acid using time resolved luminescence |
| US10654943B2 (en) | 2015-06-02 | 2020-05-19 | The Rockefeller University | Tri-specific antibodies for HIV therapy |
| US10738099B2 (en) | 2015-09-22 | 2020-08-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method of redirecting T cells to treat HIV infection |
| AU2016347058B2 (en) | 2015-10-25 | 2023-11-09 | Sanofi | Trispecific and/or trivalent binding proteins for prevention or treatment of HIV infection |
| CN105837688B (zh) | 2015-11-20 | 2019-02-26 | 北京大学深圳研究生院 | 单域抗体及其编码基因，免疫毒素及其编码基因、制备方法、表达载体、应用，及宿主细胞 |
| CN109311967B (zh) | 2015-12-15 | 2022-03-04 | 吉利德科学公司 | 人免疫缺陷病毒中和抗体 |
| KR20180134378A (ko) | 2016-04-13 | 2018-12-18 | 사노피 | 3특이성 및/또는 3가 결합 단백질 |
| SI3443006T1 (sl) | 2016-04-13 | 2024-01-31 | Sanofi | Trispecifični in/ali trivalentni vezni proteini |
| WO2018120842A1 (zh) | 2016-12-30 | 2018-07-05 | 上海欣百诺生物科技有限公司 | 一种双功能分子及其应用 |
| US10626169B2 (en) | 2017-02-17 | 2020-04-21 | Sanofi | Multispecific binding molecules having specificity to dystroglycan and laminin-2 |
| JP7304288B2 (ja) | 2017-02-17 | 2023-07-06 | サノフイ | ジストログリカンおよびラミニン２に対する特異性を有する多特異性結合性分子 |
| US11845787B2 (en) | 2017-03-27 | 2023-12-19 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | DNA antibody constructs for use against HIV |
| JP7036909B2 (ja) | 2017-10-10 | 2022-03-15 | サノフイ | 抗ｃｄ３８抗体および使用方法 |
| EP3864043A1 (en) | 2018-10-09 | 2021-08-18 | Sanofi | Trispecific anti-cd38, anti-cd28, and anti-cd3 binding proteins and methods of use for treating viral infection |
| US11613576B2 (en) | 2019-04-09 | 2023-03-28 | Sanofi | Trispecific binding proteins, methods, and uses thereof |
-
2017
- 2017-04-13 SI SI201731423T patent/SI3443006T1/sl unknown
- 2017-04-13 MY MYPI2018703698A patent/MY192090A/en unknown
- 2017-04-13 LT LTEPPCT/US2017/027488T patent/LT3443006T/lt unknown
- 2017-04-13 HR HRP20231188TT patent/HRP20231188T1/hr unknown
- 2017-04-13 ES ES17732263T patent/ES2960329T3/es active Active
- 2017-04-13 PL PL17732263.3T patent/PL3443006T3/pl unknown
- 2017-04-13 EP EP23179697.0A patent/EP4257193A3/en active Pending
- 2017-04-13 DK DK17732263.3T patent/DK3443006T5/da active
- 2017-04-13 TN TNP/2020/000058A patent/TN2020000058A1/en unknown
- 2017-04-13 FI FIEP17732263.3T patent/FI3443006T3/fi active
- 2017-04-13 RS RS20230996A patent/RS64771B1/sr unknown
- 2017-04-13 HU HUE17732263A patent/HUE063824T2/hu unknown
- 2017-04-13 KR KR1020247007840A patent/KR20240036142A/ko active Search and Examination
-
2018
- 2018-10-12 MX MX2023004804A patent/MX2023004804A/es unknown
-
2020
- 2020-10-02 ZA ZA2020/06103A patent/ZA202006103B/en unknown
-
2021
- 2021-10-29 US US17/515,227 patent/US11932704B2/en active Active
-
2024
- 2024-02-05 US US18/433,295 patent/US20240279362A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUE063824T2 (hu) | 2024-02-28 |
| DK3443006T5 (da) | 2024-09-16 |
| US11932704B2 (en) | 2024-03-19 |
| EP4257193A2 (en) | 2023-10-11 |
| US20220119553A1 (en) | 2022-04-21 |
| DK3443006T3 (da) | 2023-10-23 |
| LT3443006T (lt) | 2023-10-25 |
| PL3443006T3 (pl) | 2024-01-29 |
| RS64771B1 (sr) | 2023-11-30 |
| SI3443006T1 (sl) | 2024-01-31 |
| FI3443006T3 (fi) | 2023-10-23 |
| EP4257193A3 (en) | 2024-01-24 |
| MY192090A (en) | 2022-07-26 |
| TN2020000058A1 (en) | 2022-01-06 |
| MX2023004804A (es) | 2023-05-10 |
| ES2960329T3 (es) | 2024-03-04 |
| US20240279362A1 (en) | 2024-08-22 |
| ZA202006103B (en) | 2022-01-26 |
| HRP20231188T1 (hr) | 2024-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109476732B (zh) | 三特异性和/或三价结合蛋白 | |
| JP7387780B2 (ja) | 抗ｃｄ３８抗体および使用方法 | |
| US11932704B2 (en) | Trispecific and/or trivalent binding proteins | |
| KR20210149141A (ko) | 삼중특이적 결합 단백질, 이의 방법 및 용도 | |
| KR20230104256A (ko) | 증가된 선택성의 다중표적화 이중특이적 항원 결합 분자 | |
| RU2822200C2 (ru) | Триспецифические связывающие белки, относящиеся к ним способы и варианты их применения | |
| RU2812910C2 (ru) | Антитела к cd38 и комбинации с антителами к cd3 и cd28 | |
| TW202430563A (zh) | 抗cd38抗體及其使用方法 | |
| TW202432580A (zh) | 抗cd38抗體及其使用方法 | |
| BR122024005246A2 (pt) | Método de purificação de uma proteína de ligação produzida por uma célula hospedeira |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A107 | Divisional application of patent | ||
| A201 | Request for examination |