KR20220161267A - 항-muc1-sea 항체 - Google Patents

항-muc1-sea 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR20220161267A
KR20220161267A KR1020227028562A KR20227028562A KR20220161267A KR 20220161267 A KR20220161267 A KR 20220161267A KR 1020227028562 A KR1020227028562 A KR 1020227028562A KR 20227028562 A KR20227028562 A KR 20227028562A KR 20220161267 A KR20220161267 A KR 20220161267A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
represented
antibody
acid sequence
antigen
Prior art date
Application number
KR1020227028562A
Other languages
English (en)
Inventor
다니엘 루빈스타인
다니엘 레슈너
Original Assignee
바이오모디파잉, 엘엘씨
라모트 앳 텔-아비브 유니버시티 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 바이오모디파잉, 엘엘씨, 라모트 앳 텔-아비브 유니버시티 리미티드 filed Critical 바이오모디파잉, 엘엘씨
Publication of KR20220161267A publication Critical patent/KR20220161267A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0058—Antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/852—Pancreas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

본 발명은 MUC1 SEA 도메인에 결합하는 단리된 단클론 항체를 제공한다. 또한, 본 발명은 치료 및 진단 방법에서의 이들 항체의 용도에 관한 것이다.

Description

항-MUC1-SEA 항체
본 발명은, 인간 세포의 세포 표면 상에 존재하는 당단백질인 MUC1의 알파 및 베타 사슬(SEA 도메인을 포함함)의 접합부에 대해 특이적으로 유도된 항체, 및 암의 검출 및 치료뿐만 아니라 다양한 비-악성 질환 및 장애의 검출 및 치료에 있어서의 방법 및 이의 용도에 관한 것이다.
본 개시된 주제에 대한 배경으로서 관련이 있는 것으로 간주되는 참고문헌이 아래에 열거되어 있다:
[1] G. Rivalland, B. Loveland, P. Mitchell, Update on Mucin-1 immunotherapy in cancer: a clinical perspective, Expert Opin Biol Ther, 15 (2015) 1773-1787.
[2] J. Taylor-Papadimitriou, J.M. Burchell, R. Graham, R. Beatson, Latest developments in MUC1 immunotherapy, Biochem Soc Trans, 46 (2018) 659-668.
[3] J.M. Burchell, A. Mungul, J. Taylor-Papadimitriou, O-linked glycosylation in the mammary gland: changes that occur during malignancy, J Mammary Gland Biol Neoplasia, 6 (2001) 355-364.
[4] W. Fiedler, S. DeDosso, S. Cresta, J. Weidmann, A. Tessari, M. Salzberg, B. Dietrich, H. Baumeister, S. Goletz, L. Gianni, C. Sessa, A phase I study of PankoMab-GEX, a humanised glyco-optimised monoclonal antibody to a novel tumour-specific MUC1 glycopeptide epitope in patients with advanced carcinomas, Eur J Cancer, 63 (2016) 55-63.
[5] K. Ryuko, D.J. Schol, F.G. Snijdewint, S. von Mensdorff-Pouilly, R.J. Poort-Keesom, Y.A. Karuntu-Wanamarta, R.A. Verstraeten, K. Miyazaki, P. Kenemans, J. Hilgers, Characterization of a new MUC1 monoclonal antibody (VU-2-G7) directed to the glycosylated PDTR sequence of MUC1, Tumour Biol, 21 (2000) 197-210.
[6] M.A. Tarp, A.L. Sorensen, U. Mandel, H. Paulsen, J. Burchell, J. Taylor-Papadimitriou, H. Clausen, Identification of a novel cancer-specific immunodominant glycopeptide epitope in the MUC1 tandem repeat, Glycobiology, 17 (2007) 197-209.
[7] D. Zhou, L. Xu, W. Huang, T. Tonn, Epitopes of MUC1 Tandem Repeats in Cancer as Revealed by Antibody Crystallography: Toward Glycopeptide Signature-Guided Therapy, Molecules, 23 (6) (2018) 1326.
[8] T. Kimura, O.J. Finn, MUC1 immunotherapy is here to stay, Expert Opin Biol Ther, 13 (2013) 35-49.
[9] N.K. Ibrahim, K.O. Yariz, I. Bondarenko, A. Manikhas, V. Semiglazov, A. Alyasova, V. Komisarenko, Y. Shparyk, J.L. Murray, D. Jones, S. Senderovich, A. Chau, F. Erlandsson, G. Acton, M. Pegram, Randomized phase II trial of letrozole plus anti-MUC1 antibody AS1402 in hormone receptor-positive locally advanced or metastatic breast cancer, Clin Cancer Res, 17 (2011) 6822-6830.
[10] D.B. Rubinstein, M. Karmely, R. Ziv, I. Benhar, O. Leitner, S. Baron, B.Z. Katz, D.H. Wreschner, MUC1/X protein immunization enhances cDNA immunization in generating anti-MUC1 alpha/beta junction antibodies that target malignant cells, Cancer Res, 66 (2006) 11247-11253.
[11] E. Pichinuk, I. Benhar, O. Jacobi, M. Chalik, L. Weiss, R. Ziv, C. Sympson, A. Karwa, N.I. Smorodinsky, D.B. Rubinstein, D.H. Wreschner, Antibody targeting of cell-bound MUC1 SEA domain kills tumor cells, Cancer Res, 72 (2012) 3324-3336.
[12] D.B. Rubinstein, M. Karmely, E. Pichinuk, R. Ziv, I. Benhar, N. Feng, N.I. Smorodinsky, D.H. Wreschner, The MUC1 oncoprotein as a functional target: immunotoxin binding to alpha/beta junction mediates cell killing, Int J Cancer, 124 (2009) 46-54.
[13] D.V. Gold, Z. Karanjawala, D.E. Modrak, D.M. Goldenberg, R.H. Hruban, PAM4-reactive MUC1 is a biomarker for early pancreatic adenocarcinoma, Clin Cancer Res, 13 (2007) 7380-7387.
전술한 참고문헌에 대한 본원의 언급은 이들이 본 개시된 주제의 특허 가능성과 어떤 식으로든 관련이 있다는 의미로 여겨지지 않아야 한다.
배경
MUC1 당단백질은 유방암, 전립선암, 췌장암, 난소암, 폐암 및 결장암을 포함하는 다양한 고발생율, 고치명율 인간 상피 악성 종양에 의해 과발현될 뿐만 아니라, 다발성 골수종의 악성 형질 세포 및 급성 골수성 백혈병의 골수성 세포에 의해 과발현된다. 이는 악성 세포에 의해 우선적으로 높은 발현을 나타내고, 세포 표면 상에서 발현되는 노출된 분자이기 때문에, MUC1은 유도된 암 요법의 표적으로서 및 질병 진행의 마커로서 연구되어 왔다[1, 2].　
구조적으로, MUC1 분자는 막관통 당단백질(MUC-TM으로 지칭됨)이다. MUC-TM은 20개 아미노산 길이의 서열의 20 내지 125개 반복을 함유하는 세포외 도메인(가변 수 직렬 반복, VNTR이라 함), 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달을 매개하는 짧은 세포질 꼬리로 이루어진 이종이량체이다(도 1a 참조). MUC1 분자는 120개의 아미노산의 고도로 보존된 도메인인 SEA 모듈 내에서의 자가-단백질분해로 절단된다. 이는, 분자의 막관통 및 세포질 도메인을 함유하는 막관통 β 서브유닛에 대한 강력한 비공유 상호작용으로 결합된 직렬 반복 어레이를 함유하는 큰 세포외 α 서브유닛을 생성한다. β 사슬에 대한 α 사슬의 결합은 간헐적으로 발생한다: α 사슬은 온-오프 방식으로 β 사슬에 결합한다. β 사슬이 항상 세포 표면 상에 남아 있는 반면, VNTR을 갖는 α 사슬은 간헐적으로만 세포 결합 상태로 유지된다.
다수의 항-MUC1 항체가 문헌에 보고되었으며, 대다수는 α 사슬의 고 면역원성 VNTR에 대한 것이다. 항-VNTR 항체는 시험관 내에서 MUC1+ 세포에 성공적으로 결합할 수 있지만, VNTR을 함유하는 MUC1 α 사슬의 생체 내 말초 순환계로의 발산은 MUC1 발현 종양에 임상적으로 영향을 미치는 항-VNTR 항체의 능력을 심각하게 손상시킨다. 종양 세포 표면에서 α 사슬이 발산되는 것은 항-α 사슬 항체에 대한 MUC1 표적의 수를 크게 감소시킬 뿐만 아니라, 추가적으로, 생체 내에서 주변부를 자유롭게 순환하는 MUC1 α 사슬이 항-VNTR 항체 또는 항-당질화-VNTR 항체에 결합하고 이를 중화시킴으로써, MUC1-발현 종양에 도달하는 능력을 제한할 수 있다.
VNTR의 암 특이적 절단된 O-당형을 인식하는 항체, 예컨대, 항체 PankoMab-Gex, 5E5, SM3, 및 VU-2-G7은 정상 조직에 의해 발현된 MUC1을 표적화하는 잠재적 독성을 극복하기 위한 가능한 방법으로서 제안되었다. 그러나, α-사슬 VNTR 표적화의 한계(도 1a), 즉 세포 표면으로부터 이의 발산 및 이의 치료적으로 투여된 항-MUC1 항체에 결합하는 능력의 한계는 여전히 남아 있다[3-7].
언급된 바와 같이, 온-오프 메커니즘에서 종양 세포에 간헐적으로만 결합하는 표적의 불안정성으로 인해, 항-MUC1 VNTR 항체는 아직 임상적으로 효과적인 것으로 입증되지 않았다[4, 8, 9]. 주목할 점은, Fiedler 등이 항-VNTR 암 특이적 당질화 항체인 PankoMab-Gex의 임상시험에서 16건의 안정적인 병변 사례를 보고하였다는 점이다[4]. 그러나, 이 연구는 항-VNTR 항체의 1상 임상시험이었으며, 여기에서 일차 연구 목적은 항종양 효능이라기 보다는 항체 안전성이었으며, 따라서 관찰된 안정적인 병변 사례를 실상 해석할 수 없었다. 현재까지, MUC1 VNTR에 대한 항체, 또는 MUC1의 α 사슬에 대한 어떠한 항체도 인간에서의 종양에 대해 효과적인 것으로 밝혀지지 않았다.
α 사슬 및 이의 VNTR과 대조적으로, α-서브유닛과 β-서브유닛의 세포외 부분의 상호작용에 의해 형성된 MUC1 SEA 도메인은 안정적인 세포막-고정 분자 모이어티이다. 항-MUC1 알파/베타 접합 항체는 Rubinstein 등 및 Pichinuk 등의 문헌에 개시되어 있다[10-12].
제1 양태에서, 본 발명은 MUC1 SEA 도메인에 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 전술한 항체는 다음을 포함한다:
a. 서열번호 25로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 26으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 27로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 28로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 29로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 30으로 표시되는 CDRL3; 또는
b. 서열번호 31로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 32로 표시되는 CDRH2, 서열번호 33으로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 34로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 35로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 36으로 표시되는 CDRL3; 또는
c. 서열번호 37로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 38로 표시되는 CDRH2, 서열번호 39로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 40으로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 41로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 42으로 표시되는 CDRL3; 또는
d. 서열번호 43으로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 44로 표시되는 CDRH2, 서열번호 45로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 46으로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 47로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 48로 표시되는 CDRL3; 또는
e. 서열번호 49로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 50으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 51로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 52로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 53으로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 54로 표시되는 CDRL3; 또는
f. 서열번호 55로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 56으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 57로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 58로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 59로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 60으로 표시되는 CDRL3.
일부 구현예에서, 전술한 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기에서:
a. 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 1로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 2와 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
b. 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 3으로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 4와 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
c. 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 6과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
d. 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 7로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 8과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
e. 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 9로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 10과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
f. 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 11로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 12와 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 전술한 항체는 다음을 포함한다:
a. 서열번호 13으로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
b. 서열번호 15로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
c. 서열번호 17로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
d. 서열번호 19로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
e. 서열번호 21로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
f. 서열번호 23으로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체.
일부 구현예에서, 전술한 항체는 완전한 마우스 항체, 완전한 키메라 항체, 완전한 인간화 항체(예를 들어, 항체 서열의 일부는 마우스 서열로부터 유래되고, 일부는 인간으로부터는 유래됨), 또는 완전한 인간 항체이다.
일부 구현예에서, 전술한 이의 항원 결합 단편은 Fv, 단일 사슬 Fv (scFv), 단일 사슬 Fv-Fc (scFv-Fc), Fab', Fab, F(ab')2 또는 F(ab)2이다,
일부 구현예에서, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 신선 냉동(Fresh Frozen, FF) 조직으로부터의 포름알데히드 고정 절편 및/또는 파라핀 포매 및 포름알데히드 고정(PEFF) 조직 상에서, 및/또는 MUC1-발현 인간 세포의 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석에 의해 수행된 면역조직화학에서 MUC1 SEA를 식별한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 본 발명의 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열 또는 이의 임의의 항원 결합 단편을 포함하는 단리된 핵산 분자를 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 단리된 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포를 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 추가 세포독성제 또는 치료제를 포함하는 면역접합체를 제공한다.
소정의 구현예에서, 전술한 세포독성제는 알킬화 약물, 안트라시클린, 피리미딘 유도체, 빈카 알칼로이드, 광역학 약물, 백금 함유 화합물, 탁산, 국소이성화효소 억제제, 리보솜 불활성화제, DNA 손상을 유도하는 제제, 튜불린 억제제, 항-유사분열제, 방사성 동위원소, 세포독성 항체, 및 박테리아 독소로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 전술한 세포독성제는 슈도모나스 엑소독소이다.
일 구현예에서, 전술한 면역접합체는 암을 앓고 있는 대상체에게 투여될 때 종양 부피를 감소시킨다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 상이한 항원 표적에 결합하는 제2 항체에 결합된 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 이중특이적 항체를 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 활성 성분으로서의 본 발명의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본 발명의 면역접합체, 또는 본 발명의 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 전술한 약학적 조성물은 질환 또는 장애, 예를 들어, 암의 치료에 사용하기 위한 것이다.
일 구현예에서, 전술한 약학적 조성물은 추가 치료제를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 질환 또는 장애의 치료 또는 완화 방법을 제공하며, 방법은 본 발명의 적어도 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 면역접합체, 또는 이중특이적 항체, 또는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 전술한 방법은 추가 치료제를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 암이다.
일 구현예에서, 전술한 암은 MUC1 발현 암이다.
일부 구현예에서, 전술한 암은 폐 암종, 전립선 암종, 유방 암종, 난소 암종, 결장 암종, 췌장 암종, 다발성 골수종, 및 급성 골수성 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
인용된 모든 암 유형은 그의 악성 세포 상에서 MUC1을 발현하는 것으로 알려져 있다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 자가면역 또는 염증성 질환이다.
일부 구현예에서, 전술한 자가면역 또는 염증성 질환은 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 전신성 홍반 루푸스, 아밀로이드증, 및 자가면역 췌장염으로 이루어진 군으로부터 선택되나, 이에 한정되지는 않는다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 비-악성이지만 비정상적이고 임상적으로 유의한 성장 병태, 예를 들어, 신장 낭종, 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 또는 간 낭종과 같은 낭종이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 질환 또는 장애의 치료 또는 완화 방법에 사용하기 위한 본 발명의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 면역접합체, 또는 이중특이적 항체, 또는 약학적 조성물을 제공하며, 전술한 방법은 전술한 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 전술한 면역접합체, 전술한 이중특이적 항체, 또는 전술한 약학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 전술한 방법은 추가 치료제를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 암이다.
일 구현예에서, 전술한 암은 MUC1 발현 암이다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 자가면역 또는 염증성 질환이다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 비-악성 비정상 성장 병태, 예를 들어, 신장 낭종, 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 또는 간 낭종과 같은 낭종이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 질환 또는 장애를 진단하는 방법을 제공하며, 여기에서 전술한 질환 또는 장애는 MUC-1 발현과 연관되며, 전술한 방법은,
a. 전술한 환자로부터 수득된 생검을 본 발명의 적어도 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
b. 상기 단리된 단클론 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편을 검출하는 단계를 포함하되;
생검에서의 MUC1 SEA를 과발현하는 세포의 검출은 대상체가 질환 또는 장애를 갖는 것으로 진단되었음을 나타낸다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 암이다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 자가면역 또는 염증성 질환이다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 비-악성이지만 임상적으로 유의한 성장 병태, 예를 들어, 신장 낭종, 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 또는 간 낭종과 같은 낭종이다.
일 구현예에서, 전술한 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출 가능하게 표지된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 질환 또는 장애를 영상화하는 방법을 제공하며, 전술한 방법은,
a. 본 발명의 적어도 하나의 단리된 항-MUC1 SEA 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체 내로 도입하는 단계로서, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성 동위원소, 또는 시각화 가능한 제제(즉, 예를 들어 스캐닝에 의해 시각화될 수 있는 제제)로 검출 가능하게 표지되는, 단계; 및
b. 전술한 검출 가능하게 표지된 단리된 항-MUC1 SEA 단클론 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편을 시각화하는 단계를 포함하되;
전술한 동위원소 또는 전술한 시각화 가능한 제제로 표지된 세포 및/또는 조직의 검출은 전술한 대상체에서 전술한 질환 및 장애의 존재, 및/또는 국소화 및/또는 전이의 정도 및/또는 존재를 나타낸다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 암이다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 자가면역 또는 염증성 질환이다.
일 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 비-악성 비정상 성장 병태, 예를 들어, 신장 낭종, 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 또는 간 낭종과 같은 낭종이다.
본원에 개시된 주제를 보다 잘 이해하고 그것이 실제로 어떻게 수행될 수 있는지를 예시하기 위해, 이제 다음의 첨부 도면을 참조하여, 단지 비제한적인 예로서 구현예가 설명될 것이다.
도 1a 내지 도 1c는 MUC1-TM, MUC1-X 이소형, 및 재조합 MUC1-X 분자의 개략도이다. (1a) N(N)으로부터 C 말단(C)으로 이어지는 MUC1-TM은 N-말단 신호 펩티드에 이어서 30개 아미노산 길이 분절(N30)로 이루어져, N-말단 및 C-말단이 가변 직렬 반복 어레이(VNTR)의 측면에 위치하는 서열로 이어진다. 이어서, MUC1-X 이소형(1b), 및 MUC1 X, MUC1-Xex(1c)의 가용성 세포외 도메인 모두에 공통인 영역이 이어진다. β-서브유닛 세포외 도메인은 막관통(TM) 및 세포질(CT) 도메인에 대해 바로 인접하는 N-말단의 58개 아미노산으로 이루어진다. SEA 모듈은 α- 및 β-서브유닛 둘 모두가 기여하는 120개의 아미노산을 포함한다. 재조합 가용성 MUC1-Xex 단백질(1c)은 신호 펩티드, N-말단 30개 아미노산 서열 및 SEA 모듈 영역을 포함한다.
도 1d 내지 도 1k는 항-MUC1 SEA 항체 DMB5F3의 유세포 분석을 나타내는 그래프이다. MUC1-TM(1d) 또는 비-형질감염된 DA3 세포(1e)로 안정적으로 형질감염된 DA3 세포를 항-MUC1 SEA mAb DMB5F3과 반응시키고, 이어서 FITC-접합체를 반응시켰다(화살표로 표시된 추적). MUC1+ 인간 췌장암 세포주 Colo357(1f) 및 MUC1+ 유방암 세포 T47D 및 ZR75(1h, 1j)를 DMB5F3과 반응시켰다(화살표로 표시된 추적). 4개의 패널 모두에서, 화살표로 표시되지 않은 추적은 2차 항체에만 결합된 세포를 나타내고, 화살표로 표시된 추적은 DMB5F3 및 2차 항체 둘 모두와 반응한 세포를 나타낸다. 가용성 MUC1-Xex 단백질의 존재에 의해, MUC1+ 세포에 대한 항-MUC1 SEA 결합은 결합에서 완전히 배제되었다(도 1g, 도 1i, 및 도 1k에서의 백색 화살표는 MUC1-Xex 매개 차단된 결합을 나타냄).
도 2는 항-MUC1 SEA α-β 접합 단클론 항체의 가변 영역의 아미노산 서열을 나타낸다. 모든 서열에 대해, 다음의 일반 구조가 제시된다:리더 서열-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4.
도 3a 내지 도 3n은 항-MUC1 SEA α-β 접합 항체 DMB5F3에 의해 나타난 MUC1 발현의 구조를 나타낸다. 도 3a 내지 도 3d: 정상 조직(3a 및 3b) 및 악성 췌장 조직(3c 및 3d)의 파라핀 포매 마이크로어레이를 DMB5F3으로 염색하였다. DMB5F3은 주위를 둘러싸는 패턴(3c 및 3d)으로 강력하게 염색된 악성 세포인 반면, 정상 췌장 선포 세포에서는 약한 정점 양성만이 관찰되었다(3a(i), 흑색 화살표). DMB5F3과 함께 MUC1-Xex 단백질을 첨가하면 염색이 경쟁적으로 폐기되며(3b), 이는 DMB5F3 결합의 특이성을 나타낸다. 도 3e 내지 도 3h: 4명의 환자로부터의 파라핀 포매된 정상 유방 조직(3e 및 3f) 및 악성 침습성 관상 유방 선암종(3g 및 3h)을 DMB5F3 항체로 염색하였다. 도 3i 내지 도 3n DMB5F3으로 염색한, 인접한 비-악성 조직으로 둘러싸인 종양으로 각각 이루어진 6명의 환자의 유방 암종 생검 시편. 각각의 시편에서, DMB5F3은 침습성 암 상피 세포를 주위를 둘러싸는 패턴(어두운 염색)으로 강하게 염색하였다. 대조적으로, 인접한 정상 선 상피 세포는 약한 정점 양성만을 나타냈다(검은색 화살표).
도 4a 내지 도 4o는 항-MUC1 SEA α-β 접합 항체를 사용한 조직 마이크로어레이의 IHC 염색을 나타낸다.
도 4a 내지 도 4l: 항-MUC1 SEA α-β 접합 항체를 사용한 폐, 전립선, 결장 및 유방 암종의 IHC. 폐, 전립선, 결장, 및 유방 암종의 파라핀 포매 마이크로어레이를 항체 DMB5F3로 염색하였고, 도 4a, 도 4d, 도 4g 및 도 4i는 각각 대표적인 절편을 도시한다. 도 4b, 도 4e, 도 4h 및 도 4k는 더 높은 배율을 도시하고, 도 4a, 도 4d, 도 4g와 도 4j, 및 도 4b, 도 4e, 도 4h와 도 4k의 삼각형은 확대된 영역을 지시하는 역할을 한다. 100 μg/ml의 경쟁하는 가용성 MUC1-Xex 단백질의 존재 하에 항체 DMB5F3로 염색을 다시 폐기하여, 항체 DMB5F3의 특이성을 입증하였다(미도시). 도 4c, 도 4f, 도 4i 및 도 4l은 비특이적 마우스 면역글로불린으로 염색한 대조군을 도시한다. 항체 DMB5F3은 주위를 둘러싸는 패턴으로 악성 세포를 강하게 염색하였다. 도 4a, 도 4d, 도 4g 및 도 4j의 하단에 있는 선들(선의 어느 양 단부에 화살표가 있음) 및 도 4b, 도 4e, 도 4h 및 도 4k의 하부에 있는 선들(선의 양 단부에 채워진 원이 있음)은 각각 200 μm 및 100 μm를 나타낸다. 짙은 염색 침전물은 MUC1 단백질을 나타낸다(도 4a, 도 4b, 도 4d, 도 4e, 도 4g, 도 4h, 도 4j 및 도 4k를 도 4c, 도 4f, 도 4i 및 도 4l과 비교함). 도 4a, 도 4d, 도 4g 및 도 4j의 조직은 각각 병리학적 2등급 폐 선암종, 병리학적 5등급 전립선 선암종, 병리학적 3등급 결장 선암종 및 침습성 유관 유방 암종으로부터 유래한다.
도 4m 내지 도 4o: 항-MUC1 SEA α-β 접합 항체를 이용한 정상 및 악성 췌장 조직의 확증적 IHC 염색. 췌장 암종에서의 MUC1의 고발현 및 변경된 분자 구조를 입증하기 위해, 추가의 췌장 악성 종양을 항-MUC1 SEA로 염색하고 정상 조직과 비교하였다. 정상 조직(도 4m) 및 악성 췌장 조직(도 4n 및 도 4o)의 파라핀 포매 마이크로어레이를 항체 DMB5F3으로 염색하였다. 염색은 정상 췌장 선포 세포에서 약한 정점 양성을 확인한 반면(도 4m), 악성 세포는 주위를 둘러싸는 패턴으로 일관되게 염색되었다(도 4n 및 도 4o).
도 5a 내지 도 5d는 chDMB5F3, 에르비툭스(Erbitux) 및 헤르셉틴(Herceptin)의 비교 세포파괴 활성을 나타내는 그래프이며, 여기에서 이들 셋의 각각은 단백질 ZZ에 의해 슈도모나스 엑소독소 PE38에 연결되었다. 생성된 3개의 ZZ-PE38 면역독소를 인간 종양 세포주 T47D, KB, A431 및 N87과 반응시켰다(각각 도 5a 내지 도 5d). 면역독소 chDMB5F3:ZZ-PE38(타원형 표식), 에르비툭스:ZZ-PE38(다이아몬드형 표식), 및 헤르셉틴:ZZ-PE38(직사각형 표식)을 다양한 항체 농도(x-축)로 세포와 반응시켰다. 세포 생존력을 알칼리 인산분해효소 검정으로 평가하였다(y-축). 총(100%) 생존력을, ZZ-PE38 독소(5 nM)만을 첨가한 대조군 웰에서 결정하였다.
도 6a 내지 도 6d는 누드 마우스에 이종이식된 인간 췌장 종양에서의 chDMB5F3:ZZ-PE38의 생체 내 세포독성을 나타낸다. 도 6a: 누드 마우스에게 MUC1+ 췌장 종양 Colo357을 접종하였다(0일차). 그런 다음, 이종이식된 마우스를 3개의 군으로 나누었다: 1, 6, 9, 14, 22 및 29일차에, A군은 chDMB5F3:ZZ-PE38을 투여받음: B군은 비특이적, 이소형 일치 IgG-ZZ:PE38을 투여받음(주사 당 5 μg), 그리고 C군은 단지 Hepes 완충액만을 투여받음; 모든 투여는 iv였음(시점은 화살표로 표시됨). 종양 부피는 주사 기간 동안 매주 측정되었고, 3개의 군: chDMB5F3:ZZ-PE38 면역독소를 투여받은 마우스, 비특이적 이소형-일치 hIgG-ZZ:PE38를 투여받은 마우스, 및 Hepes 완충액을 투여받은 마우스에서 38일차까지 측정되었다. mm3 단위의 종양 부피가 y-축 상에 나타나고, 사진 이미지는 Hepes 대조군 마우스(도 6b) 및 chDMB5F3:ZZ-PE38 면역독소를 투여받은 마우스(도 6c)에서의 종양을 나타낸다. 도 6d: 항-MUC SEA DMB5F3-ZZ-P38 면역독소의 혈청 반감기를 정량화하기 위해, 5 마이크로그램 단일 투여량을 마우스에게 투여하고, 혈청 수준을 연속적으로 희석된 Elisa로 측정하였다. 7일차(7d)와 비교했을 때, 14일차(14d) 및 28일차(28d)에서의 chDMB5F3의 혈청 수준은 각각 2배 및 4배 감소하였다.
도 7a 내지 도 7d는 chDMB5F3의 세포독성을 나타낸다: SCID 마우스에서의 MUC1+ 췌장암 이종이식편의 제거를 나타내는 ZZ-PE38 생체 내 면역독소. 도 7a: SCID 마우스를 0일차에 인간 Colo357 췌장암 세포로 피하 접종하고, 3개의 군으로 나누었다: [1]군은 5 μg의 chDMB5F3:ZZ-PE38 면역독소를 투여받음, [2]군은 5 μg의 비특이적 일치 이소형 인간 Ig:ZZ-PE38 접합체를 투여받음, 및 [3]군은 Hepes 완충액을 투여받음. 3개의 군의 모든 이종이식 마우스에게 1, 4, 8, 11, 16, 24, 31 및 38일차에 주사하였다. 종양 부피는 세포 접종 후 49일차까지 비교하였다. 히스토그램은 각 군에 대한 평균 종양 부피를 나타내며, 각각의 별표는 개별 마우스에 대한 값을 나타낸다. 좌측으로의 y-축은 1군 및 2군에 대한 종양 부피(mm3 단위)를 나타내고; 우측으로의 y-축은 Hepes 대조군에서의 보다 큰 종양 부피를 포함하도록 500 mm3까지 연장된 3군(Hepes 완충액 군)에서의 종양 부피를 나타낸다. 500 mm3 포인트를 초과 값을 갖는 3군에서의 2개의 포인트는 705 mm3 및 1008 mm3의 종양 부피를 나타낸다. 도 7b 내지 도 7d는 49일 간의 종양 측정 기간의 종료 시의, 각 군의 대표적인 마우스를 이들의 종양 부피와 함께 나타낸다. 도 7b: chDMB5F3:ZZ-PE38 면역독소를 투여받은 마우스, 도 7c: 비특이적 인간 Ig:ZZ-PE38 접합체를 투여받은 마우스, 및 도 7d: Hepes 완충액만을 투여받은 마우스.
본 발명은 생체 내에서 강력한 항암 활성을 갖는, MUC1 SEA α-β 접합체(SEA 도메인으로 지칭됨)에 대해 유도되는 단클론 항체(mAb)의 서열을 제공한다.
본 발명은 본원에서 DMB5F3, DMB7F3, DMB4B4, DMB10F10, DMB4F4, DMB10B7, DMB13D11 및 DMC209로 명명된 MUC1 SEA 도메인에 대해 유도되는 항체의 서열을 제공한다.
아래의 실시예에서 나타낸 바와 같이, 폐, 전립선, 유방, 결장 및 췌장 암종을 포함하는 일련의 악성 종양으로부터의 세포의 DMB5F3로 지칭되는 mAb를 사용하는 면역염색은, 정상 세포와 악성 세포 상에서의 MUC1 발현 간의 정량적 및 정성적인 차이를 나타낸다: DMB5F3은 주위를 둘러싸는 패턴으로 악성 세포를 강하게 염색한 반면, 정상 췌장 및 유방 조직에서 MUC1은 유관/선포 세포에서 약한 정점 양성 패턴만을 나타냈다. ZZ-PE38에 연결된 키메라(마우스-인간) DMB5F3(ZZ는 슈도모나스 엑소독소 PE38에 융합된 IgG 결합 단백질임)은 시험관 내에서 MUC1+ 악성 세포의 활발한 세포독성을 유도하였다. 항-MUC1 DMB5F3:ZZ-PE38 단백질-엑소독소 작제물에 의한 세포 사멸 강도는 표적 세포에 의해 발현된 MUC1의 수준과 상관 관계가 있었으며, 이는 MUC1 발현의 임계값이 세포 사멸을 위해 필요하다는 것을 시사한다. 항체 DMB5F3이 종양 사멸에 미치는 효과를 생체 내에서 입증하기 위해, MUC1+ Colo357 인간 췌장암 세포를 누드 및 SCID 마우스로 이종이식한 다음, chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체로 치료하였다. 두 이식 모델(누드 및 SCID 마우스) 모두에서, chDMB5F3:ZZ-PE38은 병용 대조군과 비교하여 SCID 마우스에서 종양 부피의 최대 90%를 억제하는 유의한 생체 내 항종양 활성을 나타냈다.
따라서, 본 발명은 MUC1-발현 악성 종양의 치료에 사용하기 위한 항체를 제공한다.
따라서, 제1 양태에서, 본 발명은 MUC1 SEA 도메인에 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
용어 " MUC1 SEA 도메인 "(본원에서 " MUC1 SEA 모듈 "로도 지칭됨)은 MUC1 α-서브유닛과 MUC1 β-서브유닛의 세포외 부분의 상호작용에 의해 형성된 120개 아미노산의 고도로 보존된 도메인을 지칭한다. 따라서, 이는 MUC1 α-β 접합부에 위치하며, 안정적인 세포 막-고정 모이어티이다; 어떠한 경우에도 세포 표면으로부터 발산되지 않는다(도 1a, 도 1b 및 도 1c, 타원형으로 표시된 영역 참조).
당업계에 공지된 바와 같은 SEA 도메인은 인간 MUC1 단백질의 아미노산 264와 384 사이에 위치한 영역(UniProtKB - A0A087X2A4　(A0A087X2A4_HUMAN)으로 정의된다.
MUC1 막관통 당단백질(MUC-TM)은 20개 아미노산 길이 서열의 20 내지 125개 반복을 함유하는 세포외 도메인(가변 수 직렬 반복, VNTR이라 함), 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달을 매개하는 짧은 세포질 꼬리로 이루어진 이종이량체이다. MUC1은 SEA 모듈 내에서 자가-단백질분해로 절단된다. 이는, 분자의 막관통 및 세포질 도메인을 함유하는 막관통 β 서브유닛에 대한 강력한 비공유 상호작용으로 결합된 직렬 반복 어레이를 함유하는 큰 세포외 α 서브유닛을 생성한다.
구체적으로, 본 발명은 MUC1 SEA 도메인에 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 전술한 항체는 다음을 포함한다:
a. 서열번호 25로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 26으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 27로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 28로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 29로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 30으로 표시되는 CDRL3; 또는
b. 서열번호 31로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 32로 표시되는 CDRH2, 서열번호 33으로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 34로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 35로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 36으로 표시되는 CDRL3; 또는
c. 서열번호 37로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 38로 표시되는 CDRH2, 서열번호 39로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 40으로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 41로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 42으로 표시되는 CDRL3; 또는
d. 서열번호 43으로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 44로 표시되는 CDRH2, 서열번호 45로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 46으로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 47로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 48로 표시되는 CDRL3; 또는
e. 서열번호 49로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 50으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 51로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 52로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 53으로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 54로 표시되는 CDRL3; 또는
f. 서열번호 55로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 56으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 57로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 58로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 59로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 60으로 표시되는 CDRL3.
위에 나타낸 바와 같이, 본 발명은 MUC1 SEA 도메인에 결합하는 단리된 단클론 항체를 제공한다. 용어 " 항체 "는 항원에 특이적으로 결합하고 인식하는 면역글로불린 유전자에 의해 암호화된 폴리펩티드를 지칭하며, 본 경우에는 MUC1 SEA 도메인이다.
본원에서 정의되는 바와 같은 용어 " 단클론 항체 ", " 단클론의 항체 " 또는 " mAb "는 균질한 항체의 집단이다. 즉, 해당 집단을 포함하는 개별 항체는 자연적으로 발생할 수 있는 희귀 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단클론 항체는 단일 항원 부위(에피토프)에 대해 유도된다.
단클론 항체는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 제조되고 정제될 수 있다. 예를 들어, 단클론 항체는 면역화된 동물(예를 들어, 토끼, 랫트, 마우스, 또는 원숭이)의 비장 또는 림프절로부터 취해진 B 세포로부터 제조될 수 있다.
단클론 항체의 정제는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여, 예를 들어, 친화도 크로마토그래피, 즉 특이적 에피토프(또는 항원)가 접합되는 친화도 컬럼을 사용하여 수행될 수 있다. 대안적으로, 항체의 정제는 단백질 A 및 단백질 G 컬럼 크로마토그래피의 사용에 기초할 수있다.
예시적인 항체 구조 유닛은 당업계에 공지된 바와 같은 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 사슬로 구성되며, 각각의 쌍은 하나의 " 경쇄 " 및 하나의 " 중쇄 "를 갖는다. 각각의 사슬의 N-말단은 항원(에피토프) 인식을 주로 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 정의한다.
따라서, 용어 " 중쇄 가변 영역 "(VH) 및 " 경쇄 가변 영역 "(VL)은 각각 이들 중쇄 및 경쇄를 지칭한다. 보다 구체적으로, 가변 영역은 초가변 및 프레임워크(FR) 영역으로 세분화된다. 초가변 영역은 특정 위치에서, 해당 위치의 가장 흔한 아미노산에 비해, 상이한 아미노산의 비율이 높다. 보다 안정적인 아미노산 서열을 갖는 4개의 FR 영역은 초가변 영역을 분리한다. 초가변 영역은 항원 표면의 일부와 직접 접촉한다. 이러한 이유로, 초가변 영역은 본원에서 " 상보성 결정 영역 " 또는 " CDR "로 지칭되며, CDR은 항체의 중쇄(" 중쇄 상보성 결정 영역 ") 및 항체의 경쇄(" 경쇄 상보성 결정 영역 ") 둘 모두에 위치된다.
N-말단에서 C-말단까지, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 모두는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. CDR은 주로 항원의 에피토프에 대한 결합을 담당한다. 각각의 사슬의 CDR은 일반적으로 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 지칭되고, N-말단에서 시작하여 순차적으로 번호가 매겨지고, 또한 일반적으로 CDR이 위치하는 사슬에 의해 식별된다.
따라서, 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 항체의 중쇄의 N-말단으로부터 시작하는 3개의 상보성 결정 영역(본원에서 중쇄 상보성 결정 영역이라고도 지칭됨)을 지칭하며, 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 항체의 경쇄의 N-말단으로부터 시작하는 3개의 상보성 결정 영역(본원에서 경쇄 상보성 결정 영역이라고도 지칭됨)을 지칭한다.
본 발명은 본 발명의 단리된 항-MUC1 SEA 도메인 단클론 항체의 항원 결합 단편을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항원 결합 단편" 은 MUC1 SEA 도메인에 대한 항체의 결합 특이성을 보유하는 전장 항체의 단편과 관련된다. 항원 결합 단편은 Fv, 단쇄 Fv (scFv), 단쇄 Fv-Fc (scFv-Fc), Fab', Fab, F(ab')2 및 F(ab)2를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
이러한 단편은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 파파인(Fab 단편을 생산하기 위함) 또는 펩신(F(ab')2 단편을 생산하기 위함)과 같은 효소를 사용하는 단백질분해 절단에 의해 생성될 수 있다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체의 일부 구현예에서, 전술한 항체는 단쇄 Fv-Fc(scFv-Fc) 분자, 단쇄 Fv(scFv), Fv, Fab', Fab, F(ab')2, 및 F(ab)2로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체 단편이다.
특정 구현예에서, 본 발명의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 MUC1 SEA 도메인에 결합한다.
아래의 실시예 5에서 입증된 바와 같이, 항체 DMB5F3 및 세포독성 모이어티를 포함하는 면역복합체의 투여는 마우스의 생체 내 암 모델에서 종양 부피를 유의미하게 감소시켰다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 대상체에서 종양 부피를 감소시키는 데 효과적이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 " 감소(한) " 종양 부피는 본 발명의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하지 않았을 때와 비교하여, 당업계에 공지된 임의의 수단에 의해 측정했을 때의 종양의 크기를 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 약 100%만큼 줄였다는 것을 의미한다. 소정의 구현예에서, 용어 "감소"는 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%의 감소를 지칭하는 것을 의미한다.
일부 구현예에서, 단리된 항-MUC1 SEA 도메인 단클론 항체는 쥣과 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 인간 항체이다.
본원에서 사용되는 바와 같이 용어 " 키메라 항체 "는 하나의 종(예를 들어, 쥣과 항체의 가변 도메인) 및 상이한 종(예를 들어, 인간)의 불변 도메인으로부터의 항원 결합 가변 도메인을 보유하는 항체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 인간화 항체 "는 인간에서 자연적으로 생성된 항체 변이체와 유사성을 증가시키기 위해 아미노산 서열이 변형된 비인간 종(예를 들어, 마우스)의 구조에 기초하는 항체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 인간 항체 "는 인간에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하고/하거나 당업계에 공지된 인간 항체를 제조하기 위한 기술 중 어느 하나를 사용하여 만들어진 항체를 지칭한다. 이러한 정의는, 구체적으로 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다.
키메라, 인간화 및 인간 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다.
다량의 항체(키메라, 인간화, 또는 인간)를 제조하기 위해, 항체를 발현하는 안정적인 세포주는 항체의 중쇄 및 경쇄 둘 모두를 함유하는 Ig 발현 벡터로 세포(예를 들어, CHO 세포)를 형질감염시킴으로써 제조될 수 있다. 이어서, 항체는 예를 들어 바이오리액터 시스템에서 제조될 수 있다. 항체는 양호하게 정립된 단클론 항체 정제 방법을 사용하여 임상 등급으로 정제될 수 있다. 그런 다음, 당업계에 공지된 임의의 방법, 예를 들어, MUC1 SEA 도메인-특이적 ELISA 검정에 의한 시험을 사용하여, 높은 수준의 항-MUC1 SEA 도메인 항체를 생성하는 클론을 선택하여 상청액 내 항체 수준에 기초하여 증식시킬 수 있다. 특이적 클론을 위해 개발된 마스터 세포 은행은 모든 임상 등급 배치에 대한 시작 성장 물질로서의 역할을 할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기에서 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 1로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 2로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기에서 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역으로 구성되되, 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 3으로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 4로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 추가의 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기에서 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역으로 구성되되, 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 6으로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기에서 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역으로 구성되되, 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 7로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 8로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기에서 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 9로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 10으로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기에서 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 전술한 중쇄 가변 영역은 서열번호 11로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 전술한 경쇄 가변 영역은 서열번호 12로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90% 또는 그 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하되, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하되, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 추가의 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하되, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하되, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정의 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하되, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하되, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 단리된 항체의 다른 구현예에서, 전술한 항체는 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이되, 전술한 항체는 서열번호 25 내지 30으로 표시되는 6개의 CDR 서열, 및 서열번호 13과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열번호 14와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 단리된 항체의 다른 구현예에서, 전술한 항체는 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이되, 전술한 항체는 서열번호 31 내지 36으로 표시되는 6개의 CDR 서열, 및 서열번호 15와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열번호 16과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 단리된 항체의 추가의 구현예에서, 전술한 항체는 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이되, 전술한 항체는 서열번호 37 내지 42로 표시되는 6개의 CDR 서열, 및 서열번호 17과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열번호 18과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 단리된 항체의 다양한 구현예에서, 전술한 항체는 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이되, 전술한 항체는 서열번호 43 내지 48로 표시되는 6개의 CDR 서열, 및 서열번호 19와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열번호 20과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 단리된 항체의 다른 구현예에서, 전술한 항체는 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이되, 전술한 항체는 서열번호 49 내지 54로 표시되는 6개의 CDR 서열, 및 서열번호 21과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열번호 22와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 단리된 항체의 추가의 구현예에서, 전술한 항체는 항-MUC1 SEA 도메인 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이되, 전술한 항체는 서열번호 55 내지 60으로 표시되는 6개의 CDR 서열, 및 서열번호 23과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열번호 24와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 항체와 경쟁하는 단리된 단클론 항체를 제공한다:
(a) 서열번호 25를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 26을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열번호 27을 포함하는 중쇄 CDR3; 및 서열번호 28을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 29를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열번호 30을 포함하는 경쇄 CDR3; 또는
(b) 서열번호 31을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 32를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열번호 33을 포함하는 중쇄 CDR3; 및 서열번호 34를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 35를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열번호 36을 포함하는 경쇄 CDR3; 또는
(c) 서열번호 37을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 38을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열번호 39를 포함하는 중쇄 CDR3; 및 서열번호 40을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 41을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열번호 42를 포함하는 경쇄 CDR3; 또는
(d) 서열번호 43을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 44를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열번호 45를 포함하는 중쇄 CDR3; 및 서열번호 46을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 47을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열번호 48을 포함하는 경쇄 CDR3; 또는
(e) 서열번호 49를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 50을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열번호 51을 포함하는 중쇄 CDR3; 및 서열번호 52를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 53을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열번호 54를 포함하는 경쇄 CDR3; 또는
(f) 서열번호 55를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 56을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열번호 57을 포함하는 중쇄 CDR3; 및 서열번호 58을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 59를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열번호 60을 포함하는 경쇄 CDR3.
본원에서 DMB5F3, DMB7F3, DMB4B4, DMB4F4, DMB10B7, 및 DMC209로 명명된 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 핵산 서열은 아래의 표 1에 상세히 기술되어 있다. 또한, 본원에 기술된 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 아래의 표 2에 상세히 기술되어 있다. 또한, 전술한 항체의 CDR의 서열을 아래의 표 3에 나타냈다.
DMB4B4 및 DMB10F10은 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
DMB4F4는 mIg-gamma1이다. DMB10B7 및 DMB13D11은 mIgA이다. 그러나, 3개의 항체 모두의 가변 영역: DMB4F4, DMB10B7 및 DMB13D11은 동일하다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
CDR 서열은 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열 내에서 강조 표시된 형태로, 표 3에 열거되어 있다.
Figure pct00005
다음의 표는 항체의 게놈 유도체를 나타낸다.
Figure pct00006
Figure pct00007
본 발명은 또한 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 변이체를 포함한다. 변이체는 본원에 기술된 항체의 활성을 변경시키지 않는 중쇄 및 경쇄의 상보성 결정 영역, 또는 프레임워크 영역에서의 돌연변이를 포함할 수 있다.
용어 " 변이체 "는 하나 이상의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드가 결실되거나, 치환되거나, 첨가되는, 본원에서 구체적으로 식별된 서열과 상이한 아미노산 또는 뉴클레오티드의 서열을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 추가(된) "는 본원에 기술된 서열에 대해 아미노산 잔기를 첨가하는 것을 의미한다는 것을 이해해야 한다.
변이체는 다양한 아미노산 치환을 포함한다. 아미노산 " 치환 "은 하나의 아미노산을 이와 유사하거나 상이한 구조적 및/또는 화학적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 대체한 결과이다. 아미노산 치환은 관련 잔기의 극성, 전하, 용해도, 소수성, 친수성 및/또는 양친매성 성질의 유사성에 기초하여 이루어질 수 있다.
일반적으로, 변이체는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 테이블은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 비극성(소수성) 아미노산은 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 및 메티오닌을 포함하고; 극성 중성 아미노산은 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴, 및 글루타민을 포함하고; 양전하(염기성) 아미노산은 아르기닌, 리신, 및 히스티딘을 포함하고; 음전하(산성) 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함한다.
다음의 8 종류의 기 각각은 서로에 대한 보존적 치환인 다른 예시적인 아미노산을 함유한다:
1) 알라닌(A), 글리신(G);
2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);
3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);
4) 아르기닌(R), 리신(K);
5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V);
6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W);
7) 세린(S), 트레오닌(T); 및
8) 시스테인(C), 메티오닌(M).
보존적 핵산 치환은 위에서 정의된 바와 같은 보존적 아미노산 치환을 초래하는 핵산 치환이다.
본 발명에 따른 변이체는 또한 비극성에서 극성으로의 아미노산 치환을 포함하며, 그 반대의 경우도 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 아미노산 " 또는 " 아미노산 잔기 "는 자연적으로 발생하는 아미노산 및 합성 아미노산뿐만 아니라, 자연적으로 발생하는 아미노산과 유사하게 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 포함하여 지칭한다.
변이체 서열은 본원에 기술된 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 본원에 기술된 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열)에 대한 이들의 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 동일성의 백분율을 특징으로 할 수 있는 아미노산 또는 핵산 서열을 지칭한다.
일부 구현예에서, 본원에서 정의된 바와 같은 변이체 서열은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열을 지칭하며, 각각은 본원에 기술된 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열과 비교했을 때, 적어도 70% 또는 75%의 서열 동일성, 약 80% 또는 85%의 서열 동일성, 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드의 서열을 갖는다.
일부 다른 구현예에서, 본원에서 정의된 바와 같은 변이체 서열은 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 지칭하며, 각각은 본원에 기술된 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열과 비교했을 때, 적어도 70% 또는 75%의 서열 동일성, 약 80% 또는 85%의 서열 동일성, 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산의 서열을 갖는다.
용어 " 항체의 활성 "은 MUC1 SEA 도메인에 결합하는 항체의 능력, 바람직하게는 세포 세포독성을 단독으로 또는 세포독성 모이어티를 갖는 면역복합체의 일부로서 매개하는 능력을 의미한다. 항체의 활성은, 예를 들어, 아래의 실시예에 기술된 바와 같이, 당업계에 공지된 방법을 사용하여 생체 내 또는 시험관 내에서 측정될 수 있다.
본 발명의 항체의 표적 단백질에 대한 결합은, 예를 들어 ELISA, 바이오층 간섭계(BLI), 웨스턴 블롯 또는 면역형광 검정(IFA)을 사용하여 측정될 수 있다.
항체의 생물학적 활성은, 예를 들어, 아래의 실시예에 상세히 기술된 바와 같이, 생체 내 암 모델에서 측정될 수 있다.
본원의 양태 중 또 다른 하나에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자를 제공한다.
본원에서 정의된 바와 같이, 용어 " 핵산 " 또는 " 핵산 분자 "는 단일- 또는 이중-가닥일 수 있는 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하며, 이는 데옥시리보핵산(DNA), 및 적절한 경우 리보핵산(RNA)과 같은 폴리뉴클레오티드이다. 또한, 전술한 용어는, 균등물로서, 뉴클레오티드 유사체로부터 만들어진 RNA 또는 DNA 중 하나의 유사체를 포함하는 것으로 이해되어야 하며, 기술된 구현예에 적용 가능한 경우, 단일-가닥 (예컨대, 센스 또는 안티센스) 및 이중-가닥 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본원에서 사용되는 용어 DNA는 cDNA, 즉, 역전사효소(RNA-의존성 DNA 중합효소)의 작용에 의해 RNA 템플릿으로부터 생성된 상보적 또는 복제 DNA를 포함한다.
본 발명은 본원에서 정의된 바와 같은 단리된 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 추가로 제공한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, " 발현 비히클 " 또는 " 발현 작제물 "로서 때때로 지칭되는 " 발현 벡터 "는 플라스미드, 바이러스, 박테리오파지, 통합 DNA 단편, 및 숙주의 게놈 내로 DNA 단편의 통합을 가능하게 하는 다른 비히클과 같은 벡터를 포함한다. 발현 벡터는 일반적으로 원하는 유전자 또는 그의 단편을 함유하는 자가-복제 DNA 또는 RNA 작제물, 및 적절한 숙주 세포에서 인식되고 원하는 유전자의 발현에 영향을 미치는 작동 가능하게 연결된 유전자 조절 요소이다. 이들 조절 요소는 적절한 숙주 내에서 발현에 영향을 미칠 수 있다. 본 발명에 따른 발현 벡터는, 몇 가지 예를 들어 박테리아, 효모, 또는 포유류 숙주 세포에서의 발현에 적합할 수 있다.
본원의 양태 중 또 다른 하나에서, 본 발명은 본 발명에 따른 단리된 핵산 분자 또는 본 발명에 따른 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포를 제공한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 숙주 세포 "는 본 발명에 따른 단리된 핵산 분자의 도입 또는 본 발명에 따른 발현 벡터의 침습에 민감한 세포를 지칭한다. 바람직하게는, 전술한 세포는 포유류 세포, 예를 들어 CHO 세포 또는 NS0 세포이다. 본 발명에 따른 단리된 핵산 분자 또는 발현 벡터를 숙주 세포에 형질감염시키는 것은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다.
본원의 양태 중 또 다른 하나에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 본원에서 아래에 정의한 바와 같은 추가 세포독성제 또는 치료제를 포함하는 면역접합체를 제공한다.
용어 " 면역접합체 ", " 면역복합체 "는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 추가 제제에 접합(연결 또는 결합)되는 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다. 면역접합체는 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 본 발명에 따른 항체에 추가 제제를 가교 결합함으로써, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다.
소정의 구현예에서, 면역접합체는 면역독소이며, 이에 의해 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 세포독성제에 접합된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 세포독성제 "는 접촉 시 세포에 세포독성 효과를 발휘하는 임의의 제제를 지칭한다. 이러한 세포독성제는 당업자에게 공지되어 있다. 본 발명의 면역복합체에 사용될 수 있는 세포독성제의 예는 다음을 포함하나 이에 한정되지 않는다: 알킬화 약물, 안트라시클린, 피리미딘 유도체, 빈카 알칼로이드, 광역학적 약물, 백금 함유 화합물, 탁산, 국소이성화효소 억제제, 리보솜 불활성화제(예를 들어, 젤로닌), DNA 손상을 유도하는 제제(예를 들어, 칼리케아미신), 튜불린 억제제(예를 들어, 엠탄신), 항-유사분열 제제(예를 들어, 모노메틸 아우리스타틴), 또는 박테리아 독소. 세포독성제는 또한 방사성 동위원소 또는 세포독성 항체일 수 있다. 일 구현예에서, 독성 제제는 슈도모나스 엑소독소, 예를 들어, ZZ-PE38(슈도모나스 엑소독소에 융합된 ZZ IgG-결합 단백질)이다.
본 발명은 또한 2개의 별도의 표적 또는 에피토프에 결합할 수 있는 이중특이적 항체를 포함하며, 여기에서 전술한 이중특이적 항체는 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 이의 추가적인 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.
따라서, 특정 구현예에서, 본 발명은 MUC1 SEA 도메인에 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 면역복합체를 제공하며, 전술한 항체는 다음을 포함한다:
서열번호 25로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 26으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 27로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 28로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 29로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 30으로 표시되는 CDRL3, 및 슈도모나스 엑소독소인 세포독성제(여기에서, 전술한 면역복합체는 암을 앓고 있는 대상체에게 투여시 종양 부피를 감소시킴).
본 발명의 항-MUC1 SEA 도메인 항체는 적어도 하나의 추가 치료제와 조합하여 투여될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 추가 치료제 "는 질환 또는 장애, 예를 들어 암을 치료하는 데 사용될 수 있는 임의의 제제를 지칭한다.
소정의 구현예에서, 추가 치료제는 추가 항체이다. 본원에서 정의된 바와 같이, 용어 " 추가 항체 "는 본 발명의 항체(즉, 본 발명의 적어도 2개의 항체의 병용 사용)뿐만 아니라, 본 발명에 따른 항체가 아닌, 항체를 지칭하며, 이는 질환 또는 장애, 예를 들어, 암을 치료하기 위해 본 발명의 항체와 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 다른 항체는 항-CD22 항체, 항-CD30 항체, 항-HER2 수용체 항체, 항-VEGF 항체, 항-EGFR 항체, 항-종양 연관 항원(TAA) 항체, 및 항-관문 억제제를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
추가 치료제는 또한 화학요법제, 또는 항염증제일 수도 있다.
본 발명은, 활성 성분으로서의 본 발명의 적어도 하나의 단리된 항-MUC1 SEA 항체, 또는 본원에서 정의된 바와 같은 이의 항원 결합 단편 또는 면역접합체, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물을 추가로 제공한다.
특정 구현예에서, 전술한 약학적 조성물은 MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 것이다.
용어 " MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애 "는 가장 광범위한 의미로 본원에서 사용되고, MUC1의 비정상적인 발현을 특징으로 하는 임의의 질환을 지칭한다. 특정 구현예에서, MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애는 암이다. 이에 대한 예는, 폐 암종, 전립선 암종, 유방 암종, 난소 암종, 결장 암종, 소장 암종, 췌장 암종, 위 암종, 간암, 다발성 골수종, 또는 급성 골수성 백혈병을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 구현예에서, MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애는 자가면역 또는 염증성 질환이다. 자가면역 또는 염증성 질환의 비제한적인 예는 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 전신성 홍반 루푸스, 아밀로이드증, 및 자가면역 췌장염을 포함한다.
다른 구현예에서, 전술한 질환 또는 장애는 비-악성이지만 비정상적인 성장 병태, 예를 들어, 임상적으로 유의한 신장 낭종, 거대 비-기능성 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 간 낭종 등과 같은 낭종이다.
본 발명의 " 약학적 조성물 "은 대체적으로 본원에서 정의된 바와 같은 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편, 및 조성물의 삼투압농도를 조절하는 제제인 완충제, 및 선택적으로 당업계에 공지된 바와 같은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제 "는 당업계에 공지된 바와 같은 임의의 용매, 분산액 매질, 코팅제, 항균 및 항진균제 등을 포함한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 적절한 혼합물, 및 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산액 매질일 수 있다. 각각의 담체는 다른 성분과 공존할 수 있고 대상체에게 유해하지 않다는 의미에서, 약학적 및 생리학적으로 모두 허용 가능해야 한다. 임의의 종래의 매질 또는 제제가 활성 성분과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 치료 조성물에서의 이의 용도가 고려된다.
다른 구현예에서, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 추가 치료제를 추가로 포함한다. 추가 치료제의 비제한적인 예는, 항-MUC1 항체, 항-CD22 항체, 항-CD30 항체, 항-HER2 수용체 항체, 항-VEGF 항체, 항-EGFR 항체, 항-TAA 항체 및 관문 억제제를 포함한다.
본 발명은 또한 MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애(예를 들어, 암)의 치료 또는 완화 방법을 제공하며, 방법은 본 발명의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 면역접합체, 또는 본 발명의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 면역접합체를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
용어 " 대상체 " 또는 " 환자 "는 상호 교환적으로 사용되고, 포유동물(예를 들어, 개, 고양이, 양, 돼지, 말, 소, 또는 인간)과 같은 본 발명으로부터 이익을 얻을 수 있는 대상체를 지칭한다. 일 특정 구현예에서, 환자는 인간이다. MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애의 진단은 당업계에 공지된 방법에 의해 숙련된 의사에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 용어 " 이를 필요로 하는 대상체 "는 특히 포유동물, 특히 본원에 정의된 바와 같은 MUC1의 과발현과 연관된 질병 또는 장애를 앓고 있는 인간 대상체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 치료하다 ", " 치료하는 ", " 치료 " 또는 이의 변형은 MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애(예를 들어, 암)의 유해한 효과를 감소, 예방, 치유, 역전, 완화, 경감, 약화, 최소화, 억제, 또는 중지시키거나, 하나 이상의 임상적 징후의 발병을 지연시키는 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 본원에서 정의된 바와 같은 추가 치료제를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 투여는 다음의 경로 중 어느 하나에 의해 수행될 수 있다: 경구 투여, 정맥내, 근육내, 복강내, 경막내 또는 피하 주사; 직장내 투여; 비강내 투여, 안구 투여, 또는 국소 투여.
특정 구현예에서, 본 발명에 따른 투여는 정맥내로 수행된다.
본원에서 정의된 바와 같은 항체 또는 항체 단편, 이와 동일하거나 이들을 포함하는 임의의 접합체를 포함하는 임의의 약학적 조성물은 단일 투여량 또는 다중 투여량으로 대상체에게 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 단리된 단클론 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편의 " 치료적 유효량 ", 또는 본원에서 정의된 목적을 위한 본 발명에 따른 약학적 조성물은, 의학적 병태를 치유, 정지 또는 적어도 완화 또는 경감하도록, 당업계에 공지된 바와 같은 이러한 고려 사항에 의해 결정된다. 본 발명의 방법에 사용되는 임의의 제제에 대해, 투여량 또는 치료적 유효량은 시험관 내 세포 배양 검정으로부터, 또는 적절한 동물 모델에 기초하여 초기에 추정될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 치료적 유효량은 10 μg/kg 내지 약 50 mg/kg의 범위이다.
다른 구현예에서, 본 발명에 따른 치료적 유효량은 0.1 mg/kg 내지 40 mg/kg, 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 또는 5 mg/kg 내지 10 mg/kg의 범위이다.
특정 예시적인 투여량은, 의사의 재량에 따라 0.25 mg/kg, 또는 0.75 mg/kg, 또는 2.5 mg/kg, 또는 5 mg/kg, 또는 10 mg/kg의 일일 투여량으로, 또는 3일에 한 번, 또는 1주에 한 번을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일 구현예에서, 투여량은 정맥내로 제공된다.
본 발명은, 본원에서 정의된 바와 같은 MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애(예를 들어, 암)의 치료 또는 완화 방법에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 단리된 항-MUC1 SEA 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편, 또는 본 발명에 따른 면역복합체, 또는 본 발명에 따른 약학적 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은, 본원에서 정의된 바와 같은 MUC1의 과발현과 연관된 질환 또는 장애(예를 들어, 암)의 치료 또는 완화를 위한 의약의 제조에서의, 본 발명의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 면역복합체, 또는 약학적 조성물의 용도를 추가로 제공한다.
용어 " 정제된 " 또는 " 단리된 "은 아미노산 또는 핵산 서열, 펩티드, 폴리펩티드, 또는 자연 환경으로부터 제거되거나, 단리되거나, 분리된 항체와 같은 분자를 지칭한다는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, "단리된 항체"는 정제된 항체이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 정제된 " 또는 " 정제되는 "은 또한 샘플로부터 오염물을 제거하는 것을 지칭한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체로부터 수득된 생검에서 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 진단하는 방법을 제공하며, 전술한 방법은,
a. 전술한 생검을 본 발명의 적어도 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
b. 상기 단리된 단클론 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편을 검출하는 단계를 포함하되;
생검에서의 MUC1 SEA를 과발현하는 세포의 검출은 전술한 질환 또는 장애(예를 들어, 암)의 표시로서 기능한다.
MUC1-SEA 발현 검출에 있어서 본 발명의 단리된 항체의 능력에 대한 평가는 당업계에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 면역조직화학 또는 유세포 계측법에 의해 수행될 수 있다. 면역조직화학은 신선 냉동(FF) 조직으로부터의 포름알데히드 고정 절편뿐만 아니라 파라핀 포매 및 포름알데히드 고정(PEFF) 조직 상에서 수행된다. 예를 들어, 아래의 실시예 2에 나타낸 바와 같이, 항체 DMB5F3 염색된 MUC1발현 세포는 FF 및 PEFF 절편 둘 모두에 존재한다. 항체는 또한 유세포 계측법을 사용하여 MUC1-발현 세포를 인식할 수 있었다. 다양한 구현예에서, 본 발명에 따른 단리된 항체는 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 표지될 수 있다. 다른 구현예에서, 검출은 이차 항체를 사용하여 전술한 항체를 식별하는 것에 기초할 수 있다.
용어 " 생검 "은 가장 광범위한 의미로 본원에서 사용되며, MUC1 SEA를 과발현하는 세포가 검출될 수 있는, 본원에서 정의된 바와 같은 대상체로부터 취해진 임의의 생검을 지칭한다. 생검은 포유동물(인간 포함)로부터 수득될 수 있고, 세포를 포함하는 유체 샘플 및 조직 샘플 둘 모두를 포함한다. 일부 구현예에서, 유체 샘플은 혈액, 혈장, 혈청, 림프액 또는 소변이다. 일부 구현예에서, 생검은 암성 세포를 함유하는 것으로 의심되는 조직 샘플이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 질환 또는 장애를 영상화하는 방법을 제공하며, 전술한 방법은,
a. 본 발명의 적어도 하나의 단리된 항-MUC1 SEA 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체 내로 도입하는 단계로서, 전술한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성 동위원소, 또는 시각화 가능한 제제(즉, 예를 들어 스캐닝에 의해 시각화될 수 있는 제제)로 검출 가능하게 표지되는, 단계; 및
b. 전술한 검출 가능하게 표지된 단리된 항-MUC1 SEA 단클론 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편을 시각화하는 단계를 포함하되;
전술한 동위원소 또는 전술한 시각화 가능한 제제로 표지된 세포 및/또는 조직의 검출은 전술한 대상체에서 전술한 질환 및 장애의 존재, 및/또는 국소화 및/또는 전이의 정도 및/또는 존재를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 약 "은 최대 1%, 보다 구체적으로 5%, 보다 구체적으로 10%, 보다 구체적으로 15%까지 이탈할 수 있는 값을 나타내고, 일부 경우, 정수 값을 포함하는 편차 범위보다 최대 20% 더 높거나 더 낮은 값, 및 적용 가능한 경우, 연속적인 범위를 구성하는 비-정수 값까지 이탈할 수 있는 값을 나타낸다. 개시되고 기술되는 바와 같이, 이러한 방법 단계 및 조성물은 다소 변경될 수 있으므로, 본 발명은 본원에 개시된 특정 실시예, 방법 단계 및 조성물에 한정되지 않음을 이해해야 한다. 또한, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위 및 이의 균등물에 의해서만 제한되므로, 본원에서 사용되는 용어는 특정 구현예를 기술하기 위한 목적으로만 사용되며 이를 제한하고자 하는 것이 아니라는 것을 이해해야 한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태 "일", "한" 및 "하나"는 그 내용이 명백하게 달리 언급하지 않는, 한 복수의 지시 대상을 포함한다는 점에 주목해야 한다.
본 명세서 및 이어지는 실시예 및 청구범위 전반에 걸쳐, 문맥상 달리 요구하지 않는 한, "~ 를 포함한다 "라는 단어, 및 " ~를 포함하는 " 및 "~ 를 포함하고 "와 같은 이의 변형은, 명시된 정수 또는 정수의 단계 또는 군을 포함하지만, 임의의 다른 정수 또는 정수 또는 단계의 단계 또는 군을 배제하지 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
실시예
물질 및 방법
시약 및 항체
달리 명시되지 않는 한, 모든 시약 및 화학물질은 Sigma(St. Louis, MO)로부터 수득하였다. 세포 역염색 또는 면역조직화학 개발에 사용된 이차 항체는 Jackson ImmunoResearch Laboratories(Bar Harbor, ME)로부터 수득하였다.
마우스의 면역화 및 하이브리도마의 생성
마우스는 초기에 21일 간격으로 이격된 5회의 연속적인 피내 DNA 면역화로 면역화되었다. 면역화 DNA는 MUC1-TM 단백질을 코딩하는 pCL-MUC1-TM 발현 벡터 플라스미드로 이루어졌다. 그런 다음, MUC1-X 단백질의 세포외 도메인(재조합 박테리아 MUC1-Xex)을 불완전한 Freund 보강제와 함께 사용하여 마우스를 부스팅하였다. 이러한 면역화에 사용되는 박테리아 합성 재조합 MUC1-Xex 단백질은 자발적으로 자가 절단되어, 강력하지만 비공유적으로 서로 상호작용하여 매우 안정적인 이종이량체 절단 MUC1-Xex 단백질을 형성하는 MUC1-X a 및 b 서브유닛을 생성한다. 비분비성 골수종 세포를 면역 비장세포와 융합시켜 하이브리도마를 제조하고, ELISA 검정으로 선별하였다.
MUC1-X 단백질의 세포외 도메인에 대한 항-MUC1 다클론 및 단클론 항체의 결합을 결정하기 위한 ELISA
Elisa Immunoassay 플레이트(CoStar)를 재조합 MUC1 단백질로 코팅한 다음 차단하였다. 그런 다음, 초기 하이브리도마로부터의 사용된 배양 배지를 웰에 도포하였다. 인큐베이션 후, 샘플을 제거하고, 웰을 PBS/Tween으로 세척하였다. 결합된 항체의 검출은 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)-접합 항-마우스 항체로 수행하였다.
항-MUC1 단클론 항체의 선택을 위한 2-단계 선별
하이브리도마의 일차 선별은 전술한 ELISA 검정에 기술된 바와 같이 MUC1-X(MUC1-Xex)의 세포외 도메인에 대한 항체 결합을 평가함으로써 수행하였다. MUC1-Xex뿐만 아니라 완전한 세포 표면 MUC1-TM 단백질을 인식하는 하이브리도마 분비 항체를 선택하기 위해, 1차 선별에서 양의 신호를 나타내는 하이브리도마를 2차 선별로 처리하였다. 이는 인간 MUC1-TM을 발현하는 마우스 세포 형질감염체(DA3-TM 세포라 함), 및 동시에 인간 MUC1을 발현하지 않는 동일한 부모 세포(DA3-PAR 세포라 함)를 사용하는 유세포 계측 분석으로 이루어졌다. 이러한 절차는 MUC1-X 및 MUC1-TM 둘 모두에 공통적인 MUC1 모이어티에 결합했을 뿐만 아니라 포유류 세포에 의해 발현될 때 세포 표면 인간 MUC1-TM 분자를 인식하는 항체의 선택을 보장하였다.
세포주 및 세포 배양
DA3-PAR 부모 마우스 유방 세포(인간 MUC1을 발현하지 않음), cDNA로 안정적으로 형질감염된 DA3-TM 마우스 유방 세포(전장 인간 MUC1-TM을 암호화함), 세포주 T47D 및 ZR75(인간 유방 암종), 세포주 KB(인간 표피 암종), Colo357(인간 췌장 암종), N87(인간 위 암종), 및 CHO-K1(차이니즈 햄스터 난소 세포)은 모두 Dulbecco의 Modified Eagle's Medium(DMEM), RPMI 및 DMEM:F12(1:1) 배양 배지에서 성장하였다[12].
동물
이스라엘 보건부(Israel Ministry of Health)의 규정 및 표준에 따라, 텔아비브 대학(TAU) 실험실 동물 관리 인증 기관 윤리위원회(Tel Aviv University (TAU) Institutional Ethics Committee for Accreditation of Laboratory Animal Care)가 승인한 시설에서, 7주령 무흉선(누드) 및 SCID 마우스(Harlan Laboratories, Madison, WI)를 희생 시까지 사육하였다.
유세포 계측법 분석
트립신화 후, MUC1-발현 종양 세포를 세척하고, MUC1-Xex 경쟁자(100 μg/ml)와 함께 또는 없이 DMB5F3(0.5 μg/ml)과 함께 4°C에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. FACS 완충액으로 세척한 후, 형광 표지된 염소 항-마우스 IgG를 4°C에서 45분 동안 첨가하였다. 결합된 IgG를 FACSCaliburTM(Becton Dickinson) 상에서 유세포 계측법으로 검출하였다.
면역조직화학(IHC) 염색
정상 및 악성 췌장 및 유방 조직의 마이크로어레이를 US Biomax(Derwood, MD)로부터 구매하였다. 제조업체의 지침에 따라, Dako Autostainer Link 48(Dako, Santa Clara, CA)을 사용하여 자동화된 면역 염색을 수득하였다. 구연산염 완충액으로 실온에서 30분 동안 항원 회수를 수행하였다. 30분 동안의 Envision Flex Peroxidase Blocking Reagent(Dako)의 첨가로 내인성 퍼옥시다아제 활성을 차단한 다음, DMB5F3(5 μg/ml)으로 2시간 동안 인큐베이션하였다. 면역조직화학 반응은, 15분 동안의 퍼옥시다아제 및 이차 항체와 결합된 중합체 덱스트란(EnVision-Flex/HRP, Dako)의 첨가 및 10분 동안의 디아미노벤지딘(Dakocytomation)의 첨가로 검출하였다. 이어서, 헤마톡실린으로 10분 동안 역염색하였다.
항-MUC1-SEA 모듈 단클론 항체의 서열 결정
시약에 대한 기술 매뉴얼(Ambion Inc., Foster City, CA)에 따라, TRIzol® 시약 l을 사용하여 DMB 하이브리도마 시리즈로부터 RNA를 단리하였다. RNA 서열은 다음과 같이 결정하였다: PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit(Takara Bio Inc., Mountain View, CA)에 대한 기술 매뉴얼에 따라, 범용 또는 이소형-특이적 안티-센스 프라이머를 사용하여 총 RNA의 역전사에 의해 cDNA를 생성하였다. VH 및 VL 항체 단편의 증폭은 cDNA 말단의 신속한 증폭에 이어서 표준 클로닝 벡터 내로의 별도의 클로닝을 수반하는 표준 작업 절차(GenScript, NJ, USA)에 따라 수행하였다. 정확한 크기의 삽입체를 갖는 클론을 콜로니 PCR로 시퀀싱하였고, 이러한 삽입체를 갖는 적어도 5개의 콜로니를 각각의 단편에 대해 시퀀싱하였으며, 상이한 클론의 정렬로 공통 서열을 유도하였다.
차이니즈 햄스터 난소 세포에서의 포유류 발현을 위한 키메라 chDMB5F3의 작제
마우스 DMB5F3으로부터 인간 키메라 DMB5F3(chDMB5F3)을 생성하였다. 포유류 벡터 pMAZ-IgH 및 pMAZ-IgL을 인간 γ1 중쇄 및 인간 κ 경쇄에 각각 융합된 DMB5F3의 VH 및 VL 영역에 대한 cDNA 코딩의 발현을 위한 골격으로서 사용하였다[Mazor 등, J Immunol Methods, 321 (2007) 41-59; Mazor 등, Cancer Lett, 257 (2007)124-135]. 생성된 pMAZ IgH-chDMB5F3 및 pMAZ IgL-chDMB5F3 벡터를 형질감염에 사용하였고, 생성된 키메라 항체 chDMB5F3을 CHO 세포에서 발현시켰다. 안정적으로 형질감염된 CHO 세포는 chDMB5F3을 분비하였으며, 이는 단백질-A 친화도 크로마토그래피에 의해 정제되었다.
chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체의 제조
chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체의 생성은 Pichinuk 등[11]에 기술된 바와 같이 수행하였다. 요약하면, chDMB5F3을 2배 몰 과량의 ZZ-PE38의 20 mM Hepes 완충액 중의 정제된 재조합 ZZ-PE38 단백질과 혼합하고, 4°C에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 과량의 ZZ-PE38 및 미접합 chDMB5F3 항체를 Sephadex G200 사이징 컬럼을 통해 통과시켜 제거하였다.
시험관 내 세포 생존력 분석
T47D, KB, A431 및 N87 암세포(20,000 세포/웰)를 96-웰 세포 배양 플레이트에 씨딩하고 5% CO2 하 37°C에서 성장시켰다. 씨딩 후, chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체를 100 ng/ml의 농도로 세포에 직접 도포하였다. 음성 대조군은 chDMB5F3 항체에 접합되지 않은 ZZ-PE38 독소 단독, 또는 Z-PE38 독소가 결여된 chDMB5F3 단클론 항체 단독에 반응한 표적 세포로 이루어졌다. 알칼리 인산분해효소 활성/웰에 따라 세포 생존력을 평가하였다. 결과는 3회 수행된 실험으로부터의 2 내지 3개의 실험의 평균으로서 계산되었다.
MUC1-Xex 단백질에 대한 chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체의 결합의 결정을 위한 ELISA
마우스 혈청에서의 chDMB5F3 수준을 정량화하기 위해, 재조합 MUC1-Xex 단백질로 ELISA 면역분석 플레이트를 코팅한 다음(개략적인 구조를 나타내는 도 1c 참조), 차단하였다. 5 μg chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체의 1회 투여 후 1, 7, 15 및 28일차에, 마우스 혈청을 2배 희석으로 ELISA 웰에 도포하고, 서양고추냉이 퍼옥시다아제-접합 염소 항-인간 Fc 항체를 사용하여 결합된 항체를 검출하였다. 결과는 3회 수행된 실험으로부터의 2 내지 3개의 실험의 평균으로서 계산되었다.
생체 내 세포독성 검정
MUC1+ 인간 췌장암 세포주인 Colo357을 사용하여, 7주령 암컷 무흉선 누드 마우스 중 1마리 및 7주령 SCID 마우스 중 1마리에 대해, 2개의 정량적으로 측정 가능한 인간 종양 이종이식 모델을 정립하였다. 작은 부피(100 μl)의 Hepes 완충액에 현탁된 총 3 x 106개의 Colo357 세포를 마우스의 우측 옆구리에 피하 주사하였다. 누드 및 SCID 마우스 연구 둘 모두에서, 마우스를 3개의 군으로 나누었다(5마리 마우스/군): 1군은 5 μg의 chDMB5F3:ZZ-PE38(0.25 mg/kg)을 투여받음, 2군은 5 μg의 비특이적 인간 Ig:ZZ-PE38(0.25 mg/kg)을 투여받음, 및 3군은 Hepes 완충액을 동등한 부피로 단독으로 투여받음. 무흉선 누드 마우스(7주령 암컷 마우스)에서는, 3개의 실험군에서 항-MUC1 면역독소, 비특이적 면역독소 또는 Hepes의 투여를 Colo357 세포의 주사 후 24시간 시점에 개시하였다. 주사 프로토콜은 각 실험군에서 1, 6, 9, 15, 22 및 29일차에 총 6회의 정맥내(iv) 투여로 이루어졌다(x-축을 따르는 흑색 화살표, 도 6 참조). SCID 마우스(7주령 암컷 마우스), chDMB5F3:ZZ-PE38, 비특이적 인간 Ig:ZZ-PE38, 및 Hepes를 3개의 군 각각에서 췌장 종양 세포의 주사 후 24시간부터 시작하여 유사하게 투여하였다. 전체적인 투여 프로토콜은 3개의 군 각각에서 1, 4, 8, 11, 16, 24, 31 및 38일차에 8회의 iv 주사로 이루어졌다. 디지털 캘리퍼로 각각의 실험 군에서 종양 성장을 순차적으로 평가하였다. 종양 부피는 식 0.5 x L x W2에 따라 계산하였으며, 여기에서, Tomayko 및 Reynolds(Cancer Chemother Pharmacol, 24 (1989) 148-154)에 기술된 바와 같이, L은 종양 길이이고, W는 종양 폭이다. 모든 동물 실험은 TAU 임상시험 심사위원회(TAU's Institutional Review Board)의 승인을 받았다.
통계
생체 내 종양 성장의 통계적 분석을 단순 쌍 1-측 t 검정에 따라 수행하였다. 0.05 미만의 p 값은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
결과
실시예 1: 세포 결합 MUC1 α-β 접합에 결합하는 DMB mAb의 생성과 시퀀싱, 및 DMB5F3 mAb의 특성 분석
항-MUC1 단클론 IgG을 다클론 항-MUC1-Xex 항체의 높은 역가를 갖는 접종된 마우스로부터 단리된 비장 세포로 생성된 하이브리도마로부터 생성하였다. 면역화에 사용된 MUC1-Xex 재조합 단백질, 및 이의 막관통 MUC1-TM 및 MUC1-Xex 단백질과의 관계는 도 1에 도시되어 있다(도 1c를 도 1b 및 도 1a와 비교함). 따라서 총 7개의 DMB mAb가 생성되었다.
모든 항-MUC1 SEA α-β 접합 단클론 항체의 가변 영역의 뉴클레오티드 서열은 전술한 물질 및 방법 섹션에서 기술된 바와 같이 결정되었으며, mAb의 추론된 아미노산 서열은 도 2에 제시되어 있다. 생성된 mAb의 시퀀싱은, [I] DMB5F3[I], [II] DMB7F3[II], [III] DMB4B4[III-a] 및 DMB10F10 [III-b] 및 [IV] DMB4F4[IV-a], DMB10B7[IV-b] 및 DMB13D11[IV-c]로 명명된 4개의 군으로 클러스터링됨을 나타냈다(전체 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은 도 2 및 표 1과 표 2 참조). 각 군 내의 서열은 DMB5F3[I] 및 DMB7F3[II]에 대한 것과 같은 고유한 mAb 서열, 또는 [III] 군 및 [IV] 군에 대한 것과 동일한 VH 및 VL 서열을 갖는 mAb를 나타냈다.
모든 항체에 대한 가변 도메인은 프라임-부스트에 의해 생성된 항체로부터 예상되는 바와 같은 친화도 성숙의 전형이다. [IV] 군 mAb DMB10B7[IV-b] 및 DMB13D11[IV-c]을 제외한 모든 mAb는 Ig-gamma1이었다. [IV] 군은 동일한 VH 및 VL 서열을 갖는 3개의 mAb를 함유하였으며, 이 중, 하나의 (DMB4F4[IV-a])는 Ig-gamma1 하위유형을 갖는 반면, 나머지 2개의 (DMB10B7[IV-b] 및 DMB13D11[IV-c])는 IgA였다.
모든 7개의 항-MUC1 α-β 접합 mAb는 유세포 계측법으로 평가했을 때, 막관통 MUC1-TM 단백질을 발현하는 세포에 강력하게 결합하였다(도 1d 내지 도 1k). 또한, 4개의 mAb 군 각각으로부터의 대표적인 mAb를, 신선 냉동(FF) 조직으로부터의 포름알데히드 고정 절편뿐만 아니라 파라핀 포매 및 포름알데히드 고정(PEFF) 조직 상에서 수행된 면역조직화학으로 MUC1-TM 발현을 검출하는 능력에 대해 평가하였다. 항체 DMB5F3[I]은 FF 및 PEFF 절편 둘 모두에 존재하는 MUC1-발현 세포를 염색한 반면(아래 참조), DMB7F3[II] 및 [IV] 군으로부터의 mAb는 FF 절편 상에서만 염색하였다 - 대조적으로, [III] 군 mAb는 유세포 계측법에 의해 평가된 바와 같이 MUC1-발현 세포에 양호하게 결합한 반면, FF 및 PEFF 절편 둘 모두와 비반응성이었다(데이터 미도시).
VH 도메인은 9개의 체세포 돌연변이를 갖는 마우스 생식선 V 유전자 IGHV3-1*02로부터 유래된다. 이는 NCBI BlastP 검색에서 가장 높은 점수를 받은 동일한 서열과 105/122(86%) 동일하다. VL 도메인(V-카파)은 3개의 체세포 돌연변이를 갖는 마우스 생식선 V 유전자 IGKV5-48*01로부터 유래된다. 이는 NCBI BlastP 검색에서 가장 높은 점수를 받은 동일한 서열과 101/107(94%) 동일하다.
유세포 계측법 분석 결과, DMB5F3은 전장 MUC1(DA3-TM)로 안정적으로 형질감염된 DA3 세포에 강하게 결합한 반면(도 1e), MUC1을 발현하지 않는 형질감염되지 않은 DA3-PAR 세포는 일관되게 음성인 것으로 나타났다(도 1e). MUC1 양성 인간 췌장암 세포주인 Colo357뿐만 아니라 MUC1 양성 유방암 세포주 T47D 및 ZR75는 DMB5F3과 강한 반응성을 나타냈다(도 1d, 도 1f, 도 1h 및 도 1j). 경쟁하는 가용성 재조합 MUC1-Xex 단백질(재조합 MUC1-Xex의 구조는 도 1c 참조)의 첨가는, 모든 DMB5F3 세포 결합(도 1g, 도 1i 및 도 1k)을 제거하여 이의 항체 특이성을 확인하였다.
실시예 2: DMB5F3을 이용한 인간 췌장 및 유방 조직 절편의 IHC 염색
단클론 DMB5F3가 악성 및 정상 조직에 결합하는 정도를 결정하기 위해, 유방, 췌장, 폐, 전립선 및 결장 암종을 포함하는 조직 마이크로어레이에서의 다양한 악성 종양에 대해 면역조직화학 염색을 수행하였다(예시적인 결과는 도 3 및 도 4에 도시됨). 악성 종양에서 MUC1 과발현을 입증하는 이전의 보고에도 불구하고, MUC1 발현에 대한 광범위한 분석을 수행하는 이론적 근거는, 본원에 기술된 항-MUC1 mAb가 MUC1 SEA 모듈을 인식하고 재조합 MUC1-Xex 단백질로 면역화하여 생성되었지만(도 1c 참조) MUC1-TM 단백질로는 생성되지 않았다는 유의미한 사실(도 1a 참조)에 기인한다. 현재까지 MUC1 발현의 분석은 거의 독점적으로 α-사슬 VNTR 모이어티 내의 에피토프를 인식하는 항체를 사용하여 수행되었다. 따라서, 최초로 항-MUC1-SEA 도메인 항체의 세포 인식 패턴을 분석하는 것은 유의미하다. 이들 분석에 사용된 조직 마이크로어레이는 다음을 포함하였다(괄호는 Biomax 마이크로어레이 명칭임): 인접한 비신생물 조직을 갖는 6개의 췌장 종양(PA241); 40개의 상이한 췌장 종양 및 8개의 정상 췌장 조직(PA483); 유방 형질 세포 유방염, 선종 및 섬유선종 각각의 3개의 샘플 및 36개의 침습성 유방관 암종 + 2개의 침습성 유방 소엽 암종(BR963a); 및 결장, 유방, 전립선, 폐 및 결장 암종 각각의 10건, 이에 더하여 이에 상응하는 각각의 정상 조직으로부터의 2개의 절편(TP481). DMB5F3으로 면역조직화학적으로 염색된 정상 및 악성 조직의 대표적인 복합 어레이가 도 3에 도시되어 있다. (마이크로어레이 PA241 및 PA483에서의) 46개의 췌장 종양 중, 44개는 DMB5F3과 강한 반응성을 나타냈고; 종양 세포는 주위를 둘러싸는 패턴으로 염색되었다(예를 들어, 도 3c 및 도 3d 참조). 대조적으로, 정상 췌장 조직의 DMB5F3 반응성은 관상 췌장 상피 세포의 내강 표면으로 한정되었다(도 3a).
BR963a 마이크로어레이에 대해 분석된 유방 조직 샘플 중에서, 정상 유방 조직, 형질 세포 유방염, 선증 및 섬유선종을 포함하는 비악성 조직에서는 염색이 미미하거나 전혀 관찰되지 않았다. 대조적으로, 36개의 침습성 유방관 암종 중 21개는 매우 높은 DMB5F3 반응성을 나타냈고, 4개는 낮은 수준의 발현을 나타냈고, 11개 샘플은 거의 또는 전혀 발현을 나타내지 않았다. 검사된 췌장 조직은 포상선(도 3d) 및 관 선암종(도 3c 및 도 4n 및 도 4o) 둘 모두를 포함하였고, 마이크로어레이에서의 악성 유방 조직은 침습성 관 암종(도 3g 및 도 3h)으로 이루어졌다. 췌장 암종(도 3c 및 도 3d, 및 도 4n 및 도 4o), 유방 암종(도 3g 및 도 3h, 및 도 3i 내지 도 3n, 환자 1 내지 6), 및 폐, 전립선 및 결장 암종(도 4a, 도 4d, 및 도 4g, 각각, 더 높은 배율에서의 4b, 도 4e 및 도 4h)으로부터의 악성 세포는 주위를 둘러싸는 세포 염색으로 DMB5F3와 강력하게 반응하였다. 대조적으로, 정상 췌장 포상선 세포는 이전의 설명 [13]과 일치하게 약한 정점 양성(도 3a(i)에서 흑색 화살표로 표시됨; 더 높은 배율이 도 3b 및 도 4m에 도시됨)만을 나타냈다. 마이크로어레이 상의 악성 종양에 인접한 비-악성 상피 세포에 의해 형성된 정상 유방관 상피 세포(도 3e 및 도 3f) 및 정상 선-유사(gland-like) 구조는 약한 정점 양성을 나타냈다(도 3i 내지 도 3n은 6명의 환자로부터의 생검 절편을 나타냄; 정상 선-유사 구조는 흑색 화살표로 표시됨). 이는 DMB5F3 항-MUC1-SEA 항체로 강력하게 염색한 동일한 섹션의 악성 세포와 현저한 대조를 이루었다(도 3i 내지 도 3n). 악성 및 비-악성 물질이 동일한 마이크로어레이 샘플 상에 있었기 때문에, 동시에 균일하게 염색되므로, 취급 및 염색의 기술적인 차이만으로 결과를 설명할 수 있는 가능성은 배제될 수 있다. 또한, 가용성 MUC1-Xex가 DMB5F3에 의한 세포 염색을 경쟁에서 배제시킨다는 사실은 DMB5F3의 항-MUC1 특이성을 확인시킨다(각각 도 3a 및 도 3b를 비교함).
이러한 관찰을 다른 종양 유형으로 확장시키기 위해, 폐, 전립선 및 결장 암종을 DMB5F3으로 면역조직화학적으로 검사하였다(도 4a, 도 4d 및 도 4g). 결과는 유방 및 췌장 암종에서 관찰된 것과 유사한 MUC1 분포 패턴을 나타냈다(도 3). 세포 수준에서 MUC1 발현의 밀도 증가 이외에, MUC1 구조에서의 상이점 또한 관찰되었다: 항-MUC1-SEA DMB5F3은 거의 주변을 둘러싸는 패턴으로 악성 세포에 결합하였다. 여기에서도, 경쟁하는 가용성 재조합 MUC1-Xex 단백질의 존재 하에서 DMB5F3에 의한 염색은 제거되었고, 이는 DMB5F3의 특이성을 입증하였으며(데이터 미도시), 비면역 마우스 면역글로불린에 대해서는 염색이 관찰되지 않았다(도 4a, 도 4d, 도 4g 및 도 4j를 도 4c, 도 4f, 도 4i 및 도 4l과 비교함). 마이크로어레이에서 검사한 거의 50개의 폐, 전립선, 결장, 유방 및 췌장 선암종 조직의 대부분은 유사한 IHC 염색 패턴을 나타냈으며, 이 중 소수는 MUC1의 더 적은 양을 발현하고 몇몇은 미미한 정도의 MUC1 발현을 나타냈다. 이러한 불균일성은 대체적으로 종양 표현형의 이질성 및 특히 MUC1의 이질성과 일치한다. 생체 내 연구를 위해 고사망율 MUC1 발현 악성 종양인 췌장 암종을 선택하였기 때문에(아래 참조), MUC1 발현의 변경된 종양 연관 구조를 확인하기 위해 추가적인 일련의 환자로부터의 췌장 종양 조직을 검사하였다(도 4n 및 도 4o의 대표적인 염색 참조). 이들 분석은 선암종 암세포의 전체 세포 표면에 걸쳐 증가된 주변의 DMB5F3 면역 반응성을 나타내지만, 다음의 두 가지 주의 사항을 감안해야 한다: (a) 면역조직학적 분석은 단지 반-정량적임, 및 (b) 일부 경우, MUC1은 세포 내에서 강하게 발현되어 표면 발현의 비교를 어렵게 함. 이들 두 가지 조건에도 불구하고, 선암종으로부터 유래된 암세포는 DMB5F3과의 높은 세포 표면 면역반응성을 명확하게 나타낸다.
실시예 3: chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체의 시험관 내 세포독성
세포주(도 1d 및 도 1k) 및 조직 생검의 마이크로어레이(도 3 및 4) 둘 모두에서 세포 표면 MUC1을 발현하는 암 세포와의 DMB5F3의 반응성을 입증한 후, 세포독성 모이어티를 악성 세포 내로 운반하는 항체의 능력을 조사하였다. ZZ-PE38 융합 단백질은 슈도모나스 엑소독소 PE38 및 단백질 A로부터 유래된 IgG-결합 ZZ-도메인으로 이루어진다. ZZ 도메인은 인간 Fc에 단단히 결합하고 마우스 IgG1 Fc에 무시할 만한 결합을 나타내기 때문에, 전술한 물질 및 방법 섹션에 기술된 바와 같이, 마우스 IgG1-Fc를 인간 Fc로 치환하여 키메라 DMB5F3를 생성한 다음, ZZ-PE38을 키메라 (ch)DM5F3에 첨가하여 면역-독소 복합체를 형성하였다.
ZZ-PE38 독소만으로는 세포에 결합하거나 세포 내로 내재화할 수 없으므로, DMB5F3-ZZ-P38-면역복합체에 의해 유도된 모든 종양 세포독성은 단지 항-MUC1 DMB5F3 면역복합체에 의한 세포 결합 및 내재화에 기인한다[Mazor 등, J Immunol Methods, 321 (2007) 41-59; Mazor 등, Cancer Lett, 257 (2007) 124-135]. 세포주 T47D, KB, A431 및 N87을 300 ng/ml의 농도에서 chDMB5F3, 에르비툭스 및 헤르셉틴으로 세포측정학적으로 분석하였다. MUC1+ T47D 세포(유방 암종) 및 KB 세포(표피 종양)는 chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체-매개 세포 성장 억제에 민감한 것으로 밝혀졌으며, 종양 세포독성은 200 pM만큼 낮은 항체 농도에서 관찰되었다(도 5a 및 도 5b). 대조적으로, 낮지만 명확하게 검출 가능한 수준의 EGFR1을 발현하는 T47D 유방암 세포는 에르비툭스®:ZZ-PE38에 민감하지 않았고(도 5a, 다이아몬드형 표식), 헤르셉틴®:ZZ-PE38에 부분적으로만 민감하였다(도 5a, 직사각형 표식). 낮지만 명확하게 검출 가능한 수준의 erbB2-EGFR2를 발현하는 KB 세포는 헤르셉틴®:ZZ-PE38에 민감하지 않았다(도 5b, 직사각형 표식). N87과 같이 현저하게 낮은 수준의 MUC1을 발현하는 세포는 T47D 및 KB 세포에서 관찰된 높은 MUC1 발현 및 높은 세포독성과 대조적으로, 약 40%의 세포독성을 나타냈다(도 5d를 도 5a 및 도 5b와 비교함). 조사된 모든 세포주 중 가장 낮은 MUC1를 발현하는 A431은 MUC1 발현을 나타내지 않은 대부분의 세포 집단을 함유하였으며, 단지 낮은 수준의 MUC1을 발현하는 매우 작은 하위 모집단만을 함유하였다. 이러한 낮은 수준의 MUC1 발현 chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체는 매우 한정적인 A431의 세포독성을 초래하였다. 이들 결과는 세포 표면 MUC1 발현 및 밀도의 임계 수준이 세포독성을 유도하는 데 필요한 요건임을 나타낸다. 이들 세포에 의한 낮지만 검출 가능한 수준의 erbB2-EGFR2 발현에도 불구하고, KB 세포에 적용했을 때, 헤르셉틴-면역독소-복합체의 세포독성이 없는 경우 유사한 현상이 관찰되었으며(도 5b), 에르비툭스-면역독소-복합체는 T47D에 적용했을 때, 낮지만 검출 가능한 수준의 EGFR1을 발현한다(도 5a).
실시예 4: 누드 마우스에서의 chDMB5F3의 약동학
chDMB5F3의 생체 내 안정성을 iv 투여 후 1, 7, 14 및 28일차에 혈청 수준을 평가함으로써 평가하였다. 결과는, 7일차와 비교하여, 14일차 및 28일차의 항체 chDMB5F3의 혈청 수준이 각각 2배 및 4배 감소하였음을 나타냈으며(도 6d), 이는 시험관 내에서 생성된 키메라 IgG의 마우스 및 임상 사용시 항체의 마우스에서 이전에 보고된 반감기와 일치한다. 독소 접합체의 경우, 슈도모나스 엑소독소의 반감기는 IgG에 대한 연결에 의해 연장된 것으로 나타났다.
실시예 5: 이종이식 인간 종양에서의 chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체의 생체 내 세포독성
MUC1+ 인간 췌장 Colo357 세포를 이종이식한 누드 마우스에게 chDMB5F3:ZZPE38 면역복합체를 투여한 결과, Hepes 완충액 또는 비특이적, 이소형 일치 IgG-ZZ:PE38이 투여된 대조군과 비교했을 때, 21, 28 및 35일차에 종양 부피가 감소하는 현저한 세포파괴 효과가 나타났다(도 6a). chDMB5F3:ZZPE38 면역복합체 투여의 완료 시, 예상한 바와 같이, 치료군의 종양 부피는 대조군의 종양 부피와 평행하게 점진적으로 증가하였고, 3개의 군 모두에서 (동물이 희생되었을 때인) 40일차에 종양 부피는 200 내지 400 mm3 범위에 도달하였다(도 6a). 이는 투여된 chDMB5F3:ZZPE38의 종양 억제 효과를 다시 확인시킨다.
이종이식된 누드 마우스에서의 chDMB5F3:ZZPE38 면역복합체의 세포독성 효능을 제한하는 인자는 내인성 순환 항체일 것이며, 이는 ZZ 링커와 상호작용함으로써 chDMB5F3으로부터 ZZ-PE38 독소를 적어도 부분적으로 변위시킬 수 있다. ZZ는 마우스 IgG1에 결합하지 않지만, 마우스 IgG2에 결합할 수 있다. 변위에 의한 면역독소 효능의 제한은 종양 세포 표면 MUC1에 대한 항체 chDMB5F3의 결함을 갖는 결합을 반영하지는 않지만, chDMB5F3 항체에 대한 ZZ-PE38의 ZZ-매개성 결합의 감소로 인한 독소 상실로부터 발생한다. 이러한 복잡한 인자를 피하기 위해, 검출 가능한 내인성 항체가 결여된 SCID 마우스를 대상으로 거의 동일한 연구를 이어서 수행하였다. 누드 마우스 프로토콜에서와 같이, 이식된 SCID 마우스를 다음과 같은 3개의 군으로 나누었다: 하나는 chDMB5F3:ZZPE38 면역복합체를 투여받았고, 하나는 일치된 이소형 IgG-ZZ:PE38을 투여받았고, 나머지 하나는 Hepes 완충액만을 투여받았으며, 각각은 췌장 종양의 주사 후 24시간 시점에 개시되었다. 전술한 물질 및 방법 섹션에서 언급한 바와 같이, 프로토콜은 1, 4, 8, 11, 16, 24, 31, 및 38일차에 각 군에서의 연속적인 투여로 이루어졌다. chDMB5F3:ZZ-PE38 면역복합체는 현저한 항종양 효과를 나타냈다: chDMB5F3:ZZ-PE38으로 치료한 SCID 마우스에서, 이종이식된 Colo357 인간 종양의 부피는 대조군에 비해 90%만큼 감소하였다(도 7). 치료 후 종양 부피의 실제 값(mm3 단위)은 다음과 같다: chDMB5F3-면역독소로 치료된 1군 마우스: 2, 14, 16, 25 및 36 mm3; 비특이적, 이소형 일치 IgG-ZZ:PE38로 치료된 2군 마우스: 180, 225, 258 및 270 mm3(이 군의 마우스 한 마리에 대한 종양 채취 결여 미포함); Hepes 완충액만으로 치료된 3군 마우스: 180, 245, 304, 705, 및 1008 mm3. 31일 및 38일차까지의 chDMB5F3:ZZ-PE38 투여의 연장된 투여 일정은 49일차까지 항종양 효과를 보장하였다.
실시예 6: DMC209의 시퀀싱
RNeasy Plus Micro Kit(QIAGEN, 카탈로그 No.: 74034)의 기술 매뉴얼에 따라 하이브리도마 세포로부터 총 RNA를 분리하였다. 그런 다음 SMARTScribe Reverse Transcriptase(TaKaRa, 카탈로그 No.: 639536)의 기술 매뉴얼에 따라 이소형-특이적 안티센스 프라이머 또는 범용 프라이머를 사용하여 총 RNA를 cDNA로 역전사하였다. GenScript의 cDNA 말단 신속 증폭(RACE)에 대한 표준 운영 절차(standard operating procedure, SOP)에 따라 중쇄 및 경쇄의 항체 단편을 증폭시켰다. 증폭된 항체 단편을 표준 클로닝 벡터 내로 개별적으로 클로닝하였다. 콜로니 PCR을 수행하여 정확한 크기의 삽입체를 갖는 클론을 선별하였다. 공통 서열은 표 1에 제공된다(중쇄 가변 영역에 대해 서열번호 11, 및 경쇄 가변 영역에 대해 서열번호 12).
SEQUENCE LISTING <110> BioModifying, LLC <120> Anti MUC1-SEA antibodies <130> 300242 <150> US62/991077 <151> 2020-03-18 <160> 60 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 420 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 1 atgagagtgc tgattctttt gtgcctgttc acagcctttc ctggtgtcct gtctgatgtg 60 caggttcagg agtcaggacc tgacctggtg aaaccttctc agtcactttc tctcacctgc 120 actgtcactg gccactccat caccagaggt tctagctggc actggatccg gcagtttcca 180 ggaaacaaac tggagtggat gggatacata cattacggtg gtggcacttc ctacaaccca 240 tctctcaaaa gtcgaatctc tatcactcga gacacatcca agaaccagtt cttcctgcag 300 ttgaattctg tgactactga ggacacagcc acatttttct gtgcacggta ttcctacgat 360 attacctacc gctggttctt cgatgtctgg ggcgcaggga ccacggtcat cgtctcctca 420 <210> 2 <211> 381 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 2 atggtatcca cacctcagtt ccttgtattt ttgcttttct ggattccagc ctccagaggt 60 gacatcttgc tgactcagtc tccagccatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 120 ttctcctgca gggccagtca gaacattggc acaagcatac actggtatca gcaaagaaaa 180 aatggttctc caagacttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gattccttcc 240 aggtttagtg gcagcggatc tgggacagat tttactcttt ccatcaacag tgtggagtct 300 gaagatatgg cagattatta ctgtcaacaa aataataact ggccgctcac gttcggtgct 360 gggaccaagc tggaactgaa a 381 <210> 3 <211> 408 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 3 atggaatggc cttgtatctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgaaggtgt ccactcccag 60 gttcaccttc agcagtctgg ggctgagctg gtgaggcctg ggtcctcagt gaagatttcc 120 tgtaaggctt ctggctatga attcaatagt ttctggatga actgggtgaa gcagaggcct 180 ggacagggtc ttgagtggat tggacagatt tatcctggag atggtgatac taactacaat 240 ggaaaattca agggtaaagc cacactgact gctgacaaat cctccagcac agcctacatg 300 cagctcagca gcctaacatc tgaggactct gggatttact tctgtgcaag aggatacaag 360 gcctggttta tttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctctgaa 408 <210> 4 <211> 381 <212> DNA <213> mus musculus <400> 4 atggtatcca cacctcagtt ccttgtattt ttgcttttct ggattccagc ctccagaggt 60 gacgtcttgc tgactcagtc tccagccatt ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 120 ttctcctgca gggccagtca gaacattggc acaagcatac actggtatca gcaaagcaca 180 aatggttctc caaggcttat cataaagtat gcttctgagt ctctctctgg gatcccttcc 240 aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta ccatcaacag tgtggagtct 300 gaggatattg cagattatta ctgtcaacaa agtaatggct ggccgctcac gttcggtggt 360 gggaccaagc tggagctgaa a 381 <210> 5 <211> 405 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 5 atgggatgga gctggatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccagctgc aacagtctgg acctgaactg gtgaagccta aaacttcaat gaagatatcc 120 tgcaaggcct ctggttactc attcactgac ttcaccatga actgggtgaa gcagagccat 180 ggaaaaaacc ctgagtggat tggacttatt actccttaca atggtggaac tagttacaac 240 cagaagttca agggcaaggc cacatttact gtagacaggt catccagcac tgcctacatg 300 gaactcctca gtctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtgcaag aggcctgacc 360 tattttgacc agtggggcca aggcaccact ctcacagtct cctca 405 <210> 6 <211> 387 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 6 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatga gtgcctcagt cataatgtcc 60 aggggacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcactcatgt ctgcatctcc aggggagaag 120 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgtactggta tcagcagaag 180 ccaacatcct cccccaaacc ctggattttg ctcacttcca acctggcttc tggagtccct 240 actcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag 300 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggaata gtaaaccacc catcacgttc 360 ggagggggga ccaagctgga aataaaa 387 <210> 7 <211> 405 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 7 atgggatgga gctggatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccagctgc aacagtctgg acctgaactg gtgaagccta aaacttcaat gaagatatcc 120 tgcaaggcct ctggttactc attcactgac ttcaccatga actgggtgaa gcagagccat 180 ggaaaaaacc ctgagtggat tggacttatt actccttaca atggtggaac tagttacaac 240 cagaagttca agggcaaggc cacatttact gtagacaggt catccagcac tgcctacatg 300 gaactcctca gtctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtgcaag aggcctgacc 360 tattttgacc agtggggcca aggcaccact ctcacagtct cctca 405 <210> 8 <211> 387 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 8 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatga gtgcctcagt cataatgtcc 60 aggggacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcactcatgt ctgcatctcc aggggagaag 120 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgtactggta tcagcagaag 180 ccaacatcct cccccaaacc ctggattttg ctcacttcca acctggcttc tggagtccct 240 actcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag 300 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggaata gtaaaccacc catcacgttc 360 ggagggggga ccaagctgga aataaaa 387 <210> 9 <211> 411 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 9 atggctgtcc tggggctgct tctctgcctg gtgacgttcc caagctgtgt cctgtcccag 60 gtgcagctga aggaatcagg acctggccta gtggcgccct cacagaacct gtccatcaca 120 tgcactgtct caggtttctc attaaccgac tatggtgtaa actgggttcg ccagccttca 180 ggaaagggtc tggagtggct gggagaaata tgggctggtg gaactacatt ctataattca 240 gctctcaaat ccagactgac catcaccaag gacaactcca agagccaagt tttcttagaa 300 atgaacagtc tgcaaagtca tgacacagcc atgtactatt gtgccaaacg gcttaactgg 360 gacagttcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 411 <210> 10 <211> 393 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 10 atggagacag acacactcct gttatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60 gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc tttgctgtat ctctgggaca gagggccacc 120 atctcatgca gggccagcga aagtgtcagt acgtctgcct ataattttct gcactggtac 180 cagcagaaac ctggacagcc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccaa cctagaatct 240 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 300 cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga gcttccgtac 360 acgttcggag gggggaccaa gttggaaata aaa 393 <210> 11 <211> 405 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 11 atgagagtgc tgattctttt gtggctgttc acagcctttc ctggtatcct gtctgatgtg 60 cagcttcagg agtcgggacc tggcctggtg aaaccttctc agtctctgtc cctcacctgc 120 actgtcactg gctactcaat caccagtgat tatgcctgga actggatccg gcactttcca 180 ggaaacaaac tggagtggat gggctacata agctacagtg gtagcactag ctacaaccca 240 tctctcaaaa gtcgaatctc tatcactcga gacacatcca agaaccagtt cttcctgcag 300 ttgaattctg tgactactga ggacacagcc acatattact gtgcaagaga tggttactac 360 acctttgctt tctggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 405 <210> 12 <211> 393 <212> DNA <213> mus Musculus <400> 12 atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60 gttgtgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120 tcttgcagat ctagtcagag ccttgtacac agtaatggaa acacctattt acattggtac 180 ctgcagaagc caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240 ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300 agagtggagg ctgaggatct gggagtttat ttctgctctc aaagtacaca tgttccgtac 360 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 393 <210> 13 <211> 140 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 13 Met Arg Val Leu Ile Leu Leu Cys Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly Val 1 5 10 15 Leu Ser Asp Val Gln Val Gln Glu Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro 20 25 30 Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly His Ser Ile Thr 35 40 45 Arg Gly Ser Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Tyr Ile His Tyr Gly Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Pro 65 70 75 80 Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln 85 90 95 Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Phe 100 105 110 Phe Cys Ala Arg Tyr Ser Tyr Asp Ile Thr Tyr Arg Trp Phe Phe Asp 115 120 125 Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Ile Val Ser Ser 130 135 140 <210> 14 <211> 127 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 14 Met Val Ser Thr Pro Gln Phe Leu Val Phe Leu Leu Phe Trp Ile Pro 1 5 10 15 Ala Ser Arg Gly Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser 20 25 30 Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn 35 40 45 Ile Gly Thr Ser Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Lys Asn Gly Ser Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn 85 90 95 Ser Val Glu Ser Glu Asp Met Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 100 105 110 Asn Trp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 115 120 125 <210> 15 <211> 136 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 15 Met Glu Trp Pro Cys Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Glu Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val His Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg 20 25 30 Pro Gly Ser Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Glu Phe 35 40 45 Asn Ser Phe Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Gly Ile 100 105 110 Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Tyr Lys Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Glu 130 135 <210> 16 <211> 127 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 16 Met Val Ser Thr Pro Gln Phe Leu Val Phe Leu Leu Phe Trp Ile Pro 1 5 10 15 Ala Ser Arg Gly Asp Val Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser 20 25 30 Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn 35 40 45 Ile Gly Thr Ser Ile His Trp Tyr Gln Gln Ser Thr Asn Gly Ser Pro 50 55 60 Arg Leu Ile Ile Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Leu Ser Gly Ile Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 85 90 95 Ser Val Glu Ser Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 100 105 110 Gly Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 115 120 125 <210> 17 <211> 135 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 17 Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Lys Thr Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Asp Phe Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Pro 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Thr Tyr Phe Asp Gln Trp Gly Gln Gly 115 120 125 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 18 <211> 129 <212> PRT <213> mus musculus <400> 18 Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Met Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu 20 25 30 Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser 35 40 45 Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Thr Ser Ser 50 55 60 Pro Lys Pro Trp Ile Leu Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 65 70 75 80 Thr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile 85 90 95 Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp 100 105 110 Asn Ser Lys Pro Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 115 120 125 Lys <210> 19 <211> 135 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 19 Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Lys Thr Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Asp Phe Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Pro 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Thr Tyr Phe Asp Gln Trp Gly Gln Gly 115 120 125 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 20 <211> 129 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 20 Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Met Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu 20 25 30 Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser 35 40 45 Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Thr Ser Ser 50 55 60 Pro Lys Pro Trp Ile Leu Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 65 70 75 80 Thr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile 85 90 95 Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp 100 105 110 Asn Ser Lys Pro Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 115 120 125 Lys <210> 21 <211> 137 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 21 Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys 1 5 10 15 Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala 20 25 30 Pro Ser Gln Asn Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45 Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Leu Gly Glu Ile Trp Ala Gly Gly Thr Thr Phe Tyr Asn Ser 65 70 75 80 Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln 85 90 95 Val Phe Leu Glu Met Asn Ser Leu Gln Ser His Asp Thr Ala Met Tyr 100 105 110 Tyr Cys Ala Lys Arg Leu Asn Trp Asp Ser Ser Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 22 <211> 131 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 22 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Phe Ala 20 25 30 Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser 35 40 45 Val Ser Thr Ser Ala Tyr Asn Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys 130 <210> 23 <211> 135 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 23 Met Arg Val Leu Ile Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly Ile 1 5 10 15 Leu Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 20 25 30 Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr 35 40 45 Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg His Phe Pro Gly Asn Lys Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro 65 70 75 80 Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln 85 90 95 Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 100 105 110 Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Tyr Tyr Thr Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly 115 120 125 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 130 135 <210> 24 <211> 131 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 24 Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala 1 5 10 15 Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val 20 25 30 Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu 35 40 45 Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys 100 105 110 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys 130 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 25 Arg Gly Ser Ser Trp His 1 5 <210> 26 <211> 16 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 26 Tyr Ile His Tyr Gly Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 27 <211> 13 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 27 Tyr Ser Tyr Asp Ile Thr Tyr Arg Trp Phe Phe Asp Val 1 5 10 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 28 Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Thr Ser Ile His 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 29 Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 30 Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 31 <211> 5 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 31 Ser Phe Trp Met Asn 1 5 <210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 32 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 33 Gly Tyr Lys Ala Trp Phe Ile Tyr 1 5 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 34 Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Thr Ser Ile His 1 5 10 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 35 Tyr Ala Ser Glu Ser Leu Ser 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 36 Gln Gln Ser Asn Gly Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 37 <211> 5 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 37 Asp Phe Thr Met Asn 1 5 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 38 Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 39 Gly Leu Thr Tyr Phe Asp Gln 1 5 <210> 40 <211> 10 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 40 Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr 1 5 10 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 41 Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> mus musculus <400> 42 Gln Gln Trp Asn Ser Lys Pro Pro Ile Thr 1 5 10 <210> 43 <211> 5 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 43 Asp Phe Thr Met Asn 1 5 <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 44 Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 45 Gly Leu Thr Tyr Phe Asp Gln 1 5 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> mus musculus <400> 46 Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr 1 5 10 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 47 Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 48 Gln Gln Trp Asn Ser Lys Pro Pro Ile Thr 1 5 10 <210> 49 <211> 5 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 49 Asp Tyr Gly Val Asn 1 5 <210> 50 <211> 16 <212> PRT <213> mus musculus <400> 50 Glu Ile Trp Ala Gly Gly Thr Thr Phe Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 51 <211> 10 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 51 Arg Leu Asn Trp Asp Ser Ser Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> mus musculus <400> 52 Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Thr Ser Ala Tyr Asn Phe Leu His 1 5 10 15 <210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 53 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> mus musculus <400> 54 Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 55 <211> 6 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 55 Ser Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5 <210> 56 <211> 16 <212> PRT <213> mus musculus <400> 56 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 57 <211> 8 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 57 Asp Gly Tyr Tyr Thr Phe Ala Phe 1 5 <210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> mus Musculus <400> 58 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 59 <211> 7 <212> PRT <213> mus musculus <400> 59 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> mus musculus <400> 60 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr 1 5

Claims (35)

  1. MUC1 SEA 도메인에 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체는,
    a. 서열번호 25로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 26으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 27로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 28로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 29로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 30으로 표시되는 CDRL3; 또는
    b. 서열번호 31로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 32로 표시되는 CDRH2, 서열번호 33으로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 34로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 35로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 36으로 표시되는 CDRL3; 또는
    c. 서열번호 37로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 38로 표시되는 CDRH2, 서열번호 39로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 40으로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 41로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 42으로 표시되는 CDRL3; 또는
    d. 서열번호 43으로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 44로 표시되는 CDRH2, 서열번호 45로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 46으로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 47로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 48로 표시되는 CDRL3; 또는
    e. 서열번호 49로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 50으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 51로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 52로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 53으로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 54로 표시되는 CDRL3; 또는
    f. 서열번호 55로 표시되는 중쇄 상보성 결정 영역(CDRH) 1, 서열번호 56으로 표시되는 CDRH2, 서열번호 57로 표시되는 CDRH3, 및 서열번호 58로 표시되는 경쇄 상보성 결정 영역(CDRL) 1, 서열번호 59로 표시되는 CDRL2, 및 서열번호 60으로 표시되는 CDRL3을 포함하는, 단리된 단클론 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되,
    a. 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 1로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 2와 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
    b. 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 3으로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 4와 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
    c. 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 6과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
    d. 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 7로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 8과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
    e. 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 9로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 10과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되거나;
    f. 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 11로 표시되는 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되고, 여기에서 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 12와 적어도 70% 동일한 핵산 서열에 의해 암호화되는, 단리된 단클론 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는,
    a. 서열번호 13으로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
    b. 서열번호 15로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
    c. 서열번호 17로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
    d. 서열번호 19로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
    e. 서열번호 21로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체; 또는
    f. 서열번호 23으로 표시되는 아마노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 또는 이의 변이체 및 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 이의 변이체를 포함하는, 단리된 단클론 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 마우스 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 인간 항체인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 단편은 Fv, 단쇄 Fv(scFv), 단쇄 Fv-Fc(scFv-Fc), Fab', Fab, F(ab')2 또는 F(ab)2인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 신선 냉동(FF) 조직으로부터의 포름알데히드 고정 절편 및/또는 파라핀 포매 및 포름알데히드 고정(PEFF) 조직 상에서, 및/또는 MUC1-발현 인간 세포의 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석에 의해 수행된 면역조직화학에서 MUC1 SEA를 식별하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  8. 제7항에 따른 단리된 핵산 분자를 포함하는, 발현 벡터.
  9. 제8항에 따른 발현 벡터로 형질감염된, 숙주 세포.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 추가 세포독성제 또는 치료제를 포함하는, 면역접합체.
  11. 제10항에 있어서, 상기 세포독성제는 알킬화 약물, 안트라시클린, 피리미딘 유도체, 빈카 알칼로이드, 광역학 약물, 백금 함유 화합물, 탁산, 국소이성화효소 억제제, 리보솜 불활성화제, DNA 손상을 유도하는 제제, 튜불린 억제제, 항-유사분열제, 방사성 동위원소, 세포독성 항체, 및 박테리아 독소로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  12. 제10항에 있어서, 상기 세포독성제는 슈도모나스 엑소독소인, 면역접합체.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역접합체는 암을 앓고 있는 대상체에게 투여 시 종양 부피를 감소시키는, 면역접합체.
  14. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 상이한 항원 표적에 결합하는 제2 항체를 포함하는, 이중특이적 항체.
  15. 활성 성분으로서, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체, 제14항의 이중특이적 항체, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 희석제를 포함하는, 약학적 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 추가 치료제를 추가로 포함하는, 약학적 조성물.
  17. 질환 또는 장애의 치료 또는 완화 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체, 제14항의 이중특이적 항체, 또는 제15항 또는 제16항에 따른 약학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암인, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 암은 MUC1 발현 암인, 방법.
  20. 제18항에 있어서, 상기 암은 폐 암종, 전립선 암종, 유방 암종, 난소 암종, 결장 암종, 췌장 암종, 다발성 골수종, 및 급성 골수성 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  21. 제17항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 자가면역 질환 또는 염증성 질환인, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환은 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 전신성 홍반 루푸스, 아밀로이드증, 및 자가면역 췌장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  23. 제17항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 비-악성의 임상적으로 유의한 성장 병태, 예를 들어, 신장 낭종, 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 또는 간 낭종과 같은 낭종인, 방법.
  24. 제17항 내지 제23항 중 어느 한 항에서, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  25. 질환 또는 장애의 치료 또는 완화 방법에 사용하기 위한 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 면역접합체, 또는 약학적 조성물로서, 상기 방법은 상기 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 면역접합체, 또는 상기 약학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체, 제14항의 이중특이적 항체, 또는 제15항 또는 제16항에 따른 약학적 조성물.
  26. 제25항의 용도에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 면역접합체, 또는 이중특이적 항체, 또는 약학적 조성물.
  27. 제25항의 용도에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 자가면역 질환 또는 염증성 질환이거나, 상기 질환 또는 장애는 비-악성 비정상적인 성장 병태, 예를 들어, 신장 낭종, 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 또는 간 낭종과 같은 낭종인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 면역접합체, 또는 이중특이적 항체, 또는 약학적 조성물.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 추가 치료제를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 면역접합체, 또는 이중특이적 항체 또는 약학적 조성물.
  29. 대상체에서 질환 또는 장애를 진단하는 방법으로서, 상기 질환 또는 장애는 MUC-1 발현과 연관되며, 상기 방법은,
    a. 상기 환자로부터 수득된 생검을 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
    b. 상기 단리된 단클론 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편을 검출하는 단계를 포함하되;
    상기 생검에서의 MUC1 SEA를 과발현하는 세포의 검출은 상기 대상체가 상기 질환 또는 장애를 갖는 것으로 진단되었음을 나타내는, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암인, 방법.
  31. 제29항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 자가면역 질환 또는 염증성 질환이거나, 상기 질환 또는 장애는 비-악성 비정상적인 성장 병태, 예를 들어, 신장 낭종, 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 또는 간 낭종과 같은 낭종인, 방법.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출 가능하게 표지되는, 방법.
  33. 질환 또는 장애의 영상화 방법으로서, 상기 방법은,
    a. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 도입하는 단계로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성 동위원소 또는 시각화 가능한 제제로 검출 가능하게 표지되는, 단계; 및
    b. 상기 검출 가능하게 표지된 단리된 단클론 항체 또는 이의 임의의 항원 결합 단편을 시각화하는 단계를 포함하되;
    상기 동위원소 또는 상기 시각화 가능한 제제로 표지된 세포 및/또는 조직의 검출은 상기 대상체에서 상기 질환 및 장애의 존재, 및/또는 위치 및/또는 전이의 정도 및/또는 존재를 나타내는, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암인, 방법.
  35. 제33항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 자가면역 질환 또는 염증성 질환이거나, 상기 질환 또는 장애는 비-악성 비정상적인 성장 병태, 예를 들어, 신장 낭종, 갑상선 낭종 및 갑상선 종괴, 또는 간 낭종과 같은 낭종인, 방법.
KR1020227028562A 2020-03-18 2021-03-11 항-muc1-sea 항체 KR20220161267A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062991077P 2020-03-18 2020-03-18
US62/991,077 2020-03-18
PCT/IL2021/050269 WO2021186427A1 (en) 2020-03-18 2021-03-11 Anti- muc1-sea antibodies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220161267A true KR20220161267A (ko) 2022-12-06

Family

ID=75439163

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227028562A KR20220161267A (ko) 2020-03-18 2021-03-11 항-muc1-sea 항체

Country Status (18)

Country Link
US (1) US20230085269A1 (ko)
EP (1) EP4087879A1 (ko)
JP (1) JP2023517754A (ko)
KR (1) KR20220161267A (ko)
CN (1) CN115667312A (ko)
AU (1) AU2021239078A1 (ko)
BR (1) BR112022018629A2 (ko)
CA (1) CA3171531A1 (ko)
CL (1) CL2022002520A1 (ko)
CO (1) CO2022014726A2 (ko)
CR (1) CR20220523A (ko)
CU (1) CU20220055A7 (ko)
DO (1) DOP2022000193A (ko)
EC (1) ECSP22080687A (ko)
IL (1) IL296572A (ko)
MX (1) MX2022011553A (ko)
PE (1) PE20230602A1 (ko)
WO (1) WO2021186427A1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024183635A1 (en) * 2023-03-03 2024-09-12 Beigene, Ltd. Muc1 and cd16a antibodies and methods of use
WO2024183637A1 (en) * 2023-03-03 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Muc1 antibodies and methods of use

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008528623A (ja) * 2005-01-28 2008-07-31 ラモット アット テル アビブ ユニバーシティ， リミテッド 抗ＭＵＣ１のα／β抗体
IL269488B2 (en) * 2017-03-21 2023-09-01 Peptron Inc Conjugation of an antibody specifically for muc1 and its use

Also Published As

Publication number Publication date
EP4087879A1 (en) 2022-11-16
US20230085269A1 (en) 2023-03-16
CN115667312A (zh) 2023-01-31
CA3171531A1 (en) 2021-09-23
CO2022014726A2 (es) 2023-02-16
IL296572A (en) 2022-11-01
CL2022002520A1 (es) 2023-03-10
CR20220523A (es) 2023-01-23
AU2021239078A1 (en) 2022-08-11
BR112022018629A2 (pt) 2023-03-07
DOP2022000193A (es) 2023-03-23
WO2021186427A1 (en) 2021-09-23
PE20230602A1 (es) 2023-04-10
CU20220055A7 (es) 2023-06-13
ECSP22080687A (es) 2022-12-30
JP2023517754A (ja) 2023-04-26
MX2022011553A (es) 2023-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3353213B1 (en) Anti-mesothelin antibody and composition comprising the same
KR101264216B1 (ko) 항-5ｔ4 항체 및 이의 용도
US6924360B2 (en) Antibodies against the MUC18 antigen
JP6324399B2 (ja) 抗ｃｅａｃａｍ５抗体およびその使用
US8404817B2 (en) Humanized anti-prostate stem cell antigen monoclonal antibody
US7067131B2 (en) Methods for using anti-MUC18 antibodies
US8278423B2 (en) Monoclonal antibodies and fragment thereof directed against the human Anti-Müllerian Hormone type II receptor (AMHR-II)
JP6326137B2 (ja) 抗ｈｅｒ２抗体及びその結合体
US20060246077A1 (en) Use of antibodies against the MUC18 antigen
US20100278818A1 (en) Antibody specific for the Tn antigen for the treatment of cancer
KR20100003366A (ko) 암 세포의 세포독성을 매개하는 인간화 및 키메라 항-ｔｒｏｐ-２ 항체
AU2003216748A1 (en) Novel anti-igf-ir antibodies and uses thereof
CN113330034A (zh) 针对B7-H3的IgV结构域的单克隆抗体及其用途
KR102351556B1 (ko) 프로가스트린 결합 분자를 사용하는 전립선암의 검출 및 치료를 위한 조성물 및 방법
KR20220161267A (ko) 항-muc1-sea 항체
KR20090130335A (ko) 암 세포 세포독성을 매개하는 인간화 및 키메라 항-ｃｄ５９ 항체
CN108137695B (zh) 作为功能性癌症靶标的、不在糖脂而在糖蛋白上表达的唾液酸化二路易斯a及其抗体
CN117425500A (zh) 抗dll3抗体-药物缀合物
CN113454120A (zh) 针对人免疫检查点CEACAM1（CD66a）的拮抗剂抗体及其制剂，试剂盒，和使用方法
OA20958A (en) Anti- MUC1-sea antibodies
US20230235080A1 (en) Trophoblast cell-surface antigen-2 (trop-2) antibodies
WO2024076514A1 (en) C-c chemokine receptor type 8 (ccr8) antagonist antibodies
IL285313A (en) Antibodies for cancer treatment