KR20220152605A - 한우의 육량 관련 adh1c 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 서열번호 2 내지 5의 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트, 상기 프라이머 세트를 포함하는 ADH1C 유전자의 유전형 결정용 키트 및 상기 프라이머 세트를 이용한 ADH1C 유전자의 유전형 결정 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 한우의 육량 관련 ADH1C 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트 및 이의 용도에 관한 것이다.
최근 한우산업은 지방선호도가 전보다 좀 덜해진 소비트랜드로 변화하고 있다. 이러한 이유로 2019년 12월 1일부터 소고기 등급 제도가 개선되었는데, 근내지방도 기준을 완화하여 육질등급 결정방식을 일부 바꾸었고, 1종의 육량산식을 6종으로 개발하여 도체중량이 크면서 정육량과 정육율이 우수한 소의 변별력을 강화하였다(축산물품질평가원, 2020). 이러한 변화된 육류등급제에 따른 육량 및 육질의 극대화 방안 관련 더 정밀한 사양관리 시스템의 필요성이 대두되고 있다.
이에 본 발명에서는 한우의 육량과 관련된 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 SNP (single nucleotide polymorphism) 다형성을 효율적으로 확인할 수 있는 대립유전자 특이적 프라이머 세트를 제작하고, 이를 활용하여 한우 ADH1C 유전자의 유전형을 신속하고 정확하게 판별할 수 있는 방법을 개발하고자 하였다.
한편, 한국등록특허 제1700529호에는 한우 ADH1C 유전자의 단일염기다형 마커를 이용한 '배최장근단면적 연관 분자표지를 이용한 한우의 육량 진단 방법'이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2018-0055254호에는 한우 ADH1C 유전자의 개체별 단일염기 다형성 마커를 검출하는 단계를 포함하는 '비타민 A 제한 급여에 따른 한우 품질 판별 방법'이 개시되어 있으나, 본 발명의 '한우의 육량 관련 ADH1C 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트 및 이의 용도'에 대해서는 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 한우의 육량과 관련된 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 SNP 다형성을 효율적으로 판별할 수 있는 대립유전자 특이적 프라이머 세트를 고안하고, 상기 프라이머 세트를 이용하여 증폭 산물의 크기 판별을 통해 ADH1C 유전자의 유전형을 쉽게 확인할 수 있는 방법을 개발함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 서열번호 2 내지 5의 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 프라이머 세트 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 한우에서 육량 관련 ADH1C 유전자의 유전형 결정용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 한우 개체에서 게놈 DNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 상기 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및 상기 증폭 단계의 산물의 유전형을 분석하는 단계;를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C 유전자의 유전형을 결정하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 있어서, 25번째에 위치한 SNP(single nucleotide polymorphism) 염기를 포함하는 8개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 구성된 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C 유전자의 유전형 결정용 SNP 마커 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 한우의 육량 관련 ADH1C 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트는 대립유전자 특이적 프라이머 세트를 포함하여, ADH1C 유전자의 단일염기다형성(SNP)에 따라 각기 다른 크기의 증폭 산물이 생성되도록 하였다. 본 발명의 상기 방법은 종래 SNP 염기를 포함하는 증폭 산물에 제한효소를 처리하고 전기영동을 통해 유전형을 확인하던 방법에 비해 시간이 단축되는 효과가 있다.
도 1은 ADH1C 유전자 내 SNP를 기반으로 설계된 SNP 대립유전자에 특이적인 프라이머의 위치 및 상기 프라이머를 사용한 allele-specific PCR 실험원리에 대한 모식도이다. O.F, Outer forward primer; O.R, Outer reverse primer; I.F, Inner forward primer; I.R, Inner reverse primer.
도 2는 본 발명의 프라이머 세트를 제작하기 위해 사용한 주형 서열(서열번호 1)로, 빨간색으로 표시된 염기가 SNP 다형성 위치이다.
도 3은 표 2의 조건으로 한우 10두의 게노믹 DNA를 이용한 대립유전자 특이적 PCR 결과 및 염기서열 분석 결과이다.
도 4는 한우 8두의 게노믹 DNA를 이용하여 대립유전자 특이적 PCR을 수행한 결과로, (a)는 외부 프라이머 세트와 내부 프라이머 세트의 농도가 각각 0.2 μM : 0.2 μM이고, (b)는 외부 프라이머 세트와 내부 프라이머 세트의 농도가 1.2 μM : 0.6 μM인 조건이다.
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도 3은 표 2의 조건으로 한우 10두의 게노믹 DNA를 이용한 대립유전자 특이적 PCR 결과 및 염기서열 분석 결과이다.
도 4는 한우 8두의 게노믹 DNA를 이용하여 대립유전자 특이적 PCR을 수행한 결과로, (a)는 외부 프라이머 세트와 내부 프라이머 세트의 농도가 각각 0.2 μM : 0.2 μM이고, (b)는 외부 프라이머 세트와 내부 프라이머 세트의 농도가 1.2 μM : 0.6 μM인 조건이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 2 내지 5의 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트를 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 서열번호 2 내지 5의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 프라이머 세트는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 소 유래 ADH1C 유전자 단편의 25번째에 위치한 SNP(single nucleotide polymorphism) 염기의 유전형을 결정하는 프라이머 세트이다. 상기 서열번호 1의 염기서열은 GenBank accession no. NC_037333.1의 서열에서 25281387 부터 25281512까지의 염기서열이다.
본 발명에 따른 프라이머 세트에 있어서, 상기 서열번호 2 및 3의 올리고뉴클레오티드는 외부(outer) 프라이머 세트이고, 서열번호 4 및 5의 올리고뉴클레오티드는 내부(inner) 프라이머 세트이다.
상기 서열번호 2 및 3의 올리고뉴클레오티드로 이루어진 외부 프라이머 세트는 SNP 위치 염기를 포함하는 ADH1C 유전자 부위를 표적으로 하는 프라이머 세트로, 상기 프라이머 세트에 의한 증폭 산물(762 bp)은 증폭 반응 그 자체에 대한 대조구로 기능한다. 또한, 상기 서열번호 4 및 5의 올리고뉴클레오티드로 이루어진 내부 프라이머 세트는 각 염기서열의 3' 말단 염기가 ADH1C 유전자의 SNP 염기에 특이적(상보적)으로 디자인된 것으로(도 1 참고), 각각 서열번호 2 또는 서열번호 3의 올리고뉴클레오티드 프라이머와 세트를 이루어 표적 서열을 증폭한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 프라이머 세트에 있어서, 상기 서열번호 4의 올리고뉴클레오티드는 3' 말단 염기가 ADH1C 유전자의 SNP 염기 C가 위치하도록 고안된 것으로, 서열번호 3의 올리고뉴클레오티드와 세트를 이루어 330 bp의 증폭 산물이 생성되고, 상기 서열번호 5의 올리고뉴클레오티드는 3' 말단 염기가 ADH1C 유전자의 SNP 위치 염기 T에 특이적으로 결합되도록 고안된 것으로, 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드와 프라이머 세트를 이루어 492 bp의 증폭 산물이 생성된다.
상기 프라이머는 각 프라이머의 서열 길이에 따라, 서열번호 2 내지 5의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 예를 들면, 서열번호 2의 프라이머(28개 올리고뉴클레오티드)는 서열번호 2의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상, 23개 이상, 24개 이상, 25개 이상, 26개 이상, 27개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 또한, 상기 프라이머는 서열번호 2 내지 5의 염기서열의 부가, 결실 또는 치환된 서열도 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 용어 "프라이머"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도(complexity)뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 의존할 것이다.
본 명세서에 있어서, 프라이머로서 이용된 올리고뉴클레오티드는 또한 뉴클레오티드 유사체(analogue), 예를 들면, 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 알킬포스포로티오에이트 또는 펩티드 핵산(peptide nucleic acid)를 포함할 수 있거나 또는 삽입 물질(intercalating agent)을 포함할 수 있다. 또한, 프라이머는 DNA 합성의 개시점으로 작용하는 프라이머의 기본 성질을 변화시키지 않는 추가의 특징을 혼입할 수 있다. 프라이머의 적합한 길이는 사용하고자 하는 프라이머의 특성에 의해 결정하지만, 통상적으로 15 내지 30 bp의 길이로 사용한다. 프라이머는 주형의 서열과 정확하게 상보적일 필요는 없지만 주형과 혼성복합체(hybrid-complex)를 형성할 수 있을 정도로 상보적이어야만 한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 프라이머 세트 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 한우에서 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형 결정용 키트를 제공한다.
본 발명의 키트에 있어서, 상기 프라이머 세트는 서열번호 2 및 3의 올리고뉴클레오티드로 이루어진 외부(outer) 프라이머 세트 및 서열번호 4 및 5의 올리고뉴클레오티드로 이루어진 내부(inner) 프라이머 세트를 포함하고, 상기 외부 프라이머 세트와 내부 프라이머 세트가 몰농도 기준 동일 비율로 혼합된 것일 수 있고, 바람직하게는 0.45 ~ 0.55 μM : 0.45 ~ 0.55 μM의 농도로 혼합된 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.5 μM : 0.5 μM의 농도로 혼합된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 키트에 있어서, 상기 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 완충용액 등을 포함할 수 있으며, 염화마그네슘을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 키트는 또한 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 안내서를 추가로 포함할 수 있다. 안내서는 키트 사용법, 예를 들면, 역전사 완충액 및 PCR 완충액 제조방법, 제시되는 반응 조건 등을 설명하는 인쇄물이다. 안내서는 팜플렛 또는 전단지 형태의 안내 책자, 키트에 부착된 라벨, 및 키트를 포함하는 패키지의 표면상에 설명을 포함한다. 또한, 안내서는 인터넷과 같이 전기 매체를 통해 공개되거나 제공되는 정보를 포함한다.
본 발명은 또한,
한우 개체에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;
상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및
상기 증폭 단계의 산물의 유전형을 분석하는 단계;를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형을 결정하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 유전형 결정 방법에 있어서, 상기 한우 개체에서 게놈 DNA를 분리하는 단계는 당업계에 알려진 통상적인 방법을 통하여 이루어질 수 있다. 예를 들면, 한우 개체의 시료 즉, 한우의 혈액, 각종 체액, 모근, 분리된 조직, 분리된 세포 또는 타액과 같은 시료 등으로부터 DNA를 직접적으로 정제하거나 PCR과 같은 증폭 방법을 사용하여 특정한 영역을 특이적으로 증폭하고 이를 분리함으로써 이루어 질 수 있다. 포유동물로부터 체액 및 조직, 생검 등을 획득하는 방법은 당업계에 알려진 통상의 방법을 이용할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 유전형 결정 방법에 있어서, 상기 프라이머 세트는 서열번호 2 및 3의 올리고뉴클레오티드로 이루어진 외부(outer) 프라이머 세트 및 서열번호 4 및 5의 올리고뉴클레오티드로 이루어진 내부(inner) 프라이머 세트를 포함한다. 상기 외부 프라이머 세트와 내부 프라이머 세트는 몰농도 기준 동일 비율로 혼합된 것일 수 있으며, 전술한 것과 같다.
또한, 본 발명에 따른 유전형 결정 방법에 있어서, 상기 증폭 반응은, 95℃에서 15분간 반응; 95℃에서 30초, 61℃에서 30초 및 72℃에서 1분간 반응시키는 것을 한 사이클로 하여 35회 반복; 및 72℃에서 5분간 반응;하는 단계로 이루어진 것일 수 있다. 본 발명에 따른 상기 증폭 반응 조건은 내부 및 외부 프라이머 세트가 상호 교차 반응하지 않으며, ADH1C 유전자의 SNP 위치 염기를 정확하게 증폭시킬 수 있는 최적화된 조건이다.
본 발명의 유전형 결정 방법에 있어서, 상기 증폭 단계 산물의 유전형 분석은 겔 전기영동을 통해 수행될 수 있고, 겔 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아크릴아미드 겔 전기영동 또는 아가로스 겔 전기영동 등을 이용할 수 있다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 ADH1C 유전자의 유전형 결정 방법에 있어서, 겔 전기영동을 통해 증폭 단계 산물이 762 bp와 492 bp의 2개 밴드를 나타내면 TT 유전형으로, 증폭 단계 산물이 762 bp, 492 bp 및 330 bp의 3개 밴드를 나타내면 CT 유전형으로, 증폭 단계 산물이 762 bp와 330 bp의 2개 밴드를 나타내면 CC 유전형으로 결정할 수 있는 것이다. 상기 TT 유전형은 다른 유전형에 비해 도체 특성 중 등지방 두께가 얇고, 육량 비율이 높다.
본 발명은 또한, 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 있어서, 25번째에 위치한 SNP(single nucleotide polymorphism) 염기를 포함하는 8개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 구성된 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형 결정용 SNP 마커 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 마커 조성물에 있어서, 상기 서열번호 1의 염기서열은 소 유래 ADH1C 유전자(GenBank accession no. NC_037333.1)의 서열에서 25281387 부터 25281512까지의 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드이다. 상기 서열번호 1의 염기서열에서 25번째 SNP 다형성은 T/C이다.
본 발명의 SNP 마커 조성물에 있어서, 상기 연속된 뉴클레오티드는 8 내지 100개의 연속된 뉴클레오티드일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 용어, "뉴클레오티드"는 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태로 존재하는 디옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드이며, 특별하게 다르게 언급되어 있지 않은 한 자연의 뉴클레오티드의 유사체를 포함한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1.
ADH1C
(Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 SNP 특이적 프라이머 제작
본 발명에 사용된 한우 게노믹(genomic) DNA는 농장에서 채취한 꼬리털 모근조직에서 AccuPrep® Genomic DNA Extraction Kit (Bioneer, Korea)를 이용하여 추출하였다.
본 연구를 수행하기 위해 ensemble (http://www.ensembl.org)에서 ADH1C 유전자 내 SNP (rs110799147)를 검색하여 이에 대한 염기서열을 얻었다. 그 후, PRIMER 1 (http://primer1.soton.ac.uk)을 프라이머 설계 도구로 사용하였고, primer design for tetra-primer ARMS-PCR 프로그램을 사용하였다. Ensemble에서 얻은 염기서열을 입력하여 SNP 위치, 대립유전자, 증폭 크기의 범위를 설정하였다. 설계된 SNP 대립유전자에 특이적인 프라이머에 대한 정보는 하기 표 1과 같다.
도 1에 개시된 바와 같이 외부 정방향 프라이머(outer forward primer)와 외부 역방향 프라이머(outer reverse primer)가 결합하여 762bp의 산물이 증폭되고, 상기 산물은 증폭 반응의 대조구(control)로 기능한다. 또한, 3' 말단에 C 염기가 위치한 내부 정방향 프라이머(inner forward primer)와 외부 역방향 프라이머가 결합하여 C 대립유전자에 대해 330bp가 증폭되고, 3' 말단에 A 염기가 위치한 내부 역방향 프라이머(inner reverse primer)와 외부 정방향 프라이머가 결합하여 T 대립유전자에 대해 492bp가 증폭된다. 즉, 증폭 산물의 크기를 통해 유전자형을 알 수 있게 된다.
| 유전자 | rs number | SNP | 염기서열(5'→3') (서열번호) | 증폭 크기(bp) | |
| ADH1C | rs110799147 | C/T | O.F | ACTGGTGTCTGATTTCTCTGTTGTGAAG (2) | control : 762 C allele : 330 T allele : 492 |
| O.R | AGAATTCCAGTTGAGCTATTCCAGATCC (3) | ||||
| I.F | AATCTGTGCAATCTATCTCTTGTATGTCC C (4) | ||||
| I.R | TTACAGACTTACAGGCTCTTCCCTGTTAA A (5) |
O.F, Outer forward primer; O.R, Outer reverse primer; I.F, Inner forward primer; I.R, Inner reverse primer; Italic & bold letter, SNP specific nucleotide.
실시예 2.
ADH1C
유전자의 SNP 특이적 프라이머 세트를 이용한 유전형 검증
상기 표 1에서 제작한 SNP 특이적 프라이머를 이용하여 ADH1C 유전자의 SNP 위치의 유전형을 결정하기 위해, PCR 반응을 수행하였다.
증폭 반응은 한우 10두의 등심조직으로부터 추출한 gDNA 주형, Hotstart Taq DNA polymerase (Labopass, Korea) 시약 및 C1000 Touch™ Thermal Cycler (Bio-rad, USA) 장비를 이용하여 수행하였다. 대립유전자 특이적인 PCR을 위한 PCR 반응물의 조성표는 하기 표 2와 같으며, PCR 반응 조건은 다음과 같다: 95℃에서 초기 변성(initial denaturation) 15분 → [95℃에서 변성 30초, 61℃에서 결합(annealing) 30초, 72℃에서 신장(extension) 1분]의 과정을 35회 반복 → 72℃에서 최종 신장 5분. 증폭 산물은 1.5% 아가로스 겔을 이용하여 100V에서 40분간 전기영동하여 확인하였다.
| Components | Concentration | Volumes (㎕) | |
| Stock | Working | ||
| DNA Template | - | - | 3 |
| 10X Reaction buffer | 10X | 1X | 5 |
| dNTP | each 2.5 mM | 0.2 mM | 4 |
| Primer Mixture (O.F+O.R+I.F+I.R each 10pmole) |
each 10 μM | outer 0.5 μM inner 0.5 μM |
10 |
| Taq DNA polymerase | 5 U | 2.5 U | 0.5 |
| ddH2O | - | - | 27.5 |
| Total | - | - | 50 |
그 결과 도 3에 개시된 바와 같이 모든 시료에서 예측된 대조구 증폭 산물 및 SNP 특이적인 증폭 산물이 증폭되었고, 대립유전자 특이적인 PCR이 성공적으로 수행되었음을 알 수 있었다. 또한, 상기 각 시료의 증폭 산물을 시퀀싱을 통해 분석한 결과, 전기영동 결과와 동일한 유전형이 확인되어, 본 발명의 프라이머 세트를 이용한 분석 시스템이 ADH1C 유전자의 유전형을 판별하는데 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
상기 표 2에서 사용된 외부(outer) 프라이머 세트와 내부(inner) 프라이머 세트의 사용 농도는 다양한 농도 조건별 실험을 통해 얻어진 최적의 농도 조건으로, 외부 프라이머 세트와 내부 프라이머 세트의 농도를 각각 0.2 μM : 0.2 μM 또는 1.2 μM : 0.6 μM로 설정하여 증폭 반응을 수행하였을 경우, 비특이적 반응 또는 증폭 산물이 확인되지 않는 결과들이 관찰되었다(도 4).
실시예 3.
ADH1C
유전자의 유전형과 도체 특성
상기 실시예 3를 통해 확인한 ADH1C 유전자의 유전형과 도체(carcass)의 근내지방도 특성과의 상관관계를 분석하였다. 그 결과, 하기 표 3에서 확인되는 것과 같이, 한우 집단에서 ADH1C 유전자 내 TT 유전형에서 근내지방도 성적이 우수한 것을 알 수 있었다. 즉, T>C SNP (rs110799147)는 한우의 육량 형질과 관련되어 있는 다형성 염기임을 알 수 있었다.
| 유전형 | 근내지방도 (평균±표준편차) (단위: score) |
| CC | - |
| CT | 5.14±0.594 |
| TT | 5.47±0.178 |
(CC 타입의 경우 분석 결과 없음.)
<110> Hankyong Industry Academic Cooperation Center
<120> Primer sets for determining genotype of ADH1C gene related to
meat of Korean native cattle and uses thereof
<130> PN20295
<160> 5
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 126
<212> DNA
<213> Bos taurus
<400> 1
gtgcaatcta tctcttgtat gtacttgaac agggaagagc ctgtaagtct gtaattcaca 60
tctcctgcca gcagagaaaa gaagaaacat gagcacggca ggaaaagtaa ggcaattttt 120
tttttt 126
<210> 2
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 2
actggtgtct gatttctctg ttgtgaag 28
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 3
agaattccag ttgagctatt ccagatcc 28
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 4
aatctgtgca atctatctct tgtatgtccc 30
<210> 5
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 5
ttacagactt acaggctctt ccctgttaaa 30
Claims (6)
- 서열번호 2 내지 5의 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트.
- 제1항에 있어서, 상기 프라이머 세트는 서열번호 1 염기서열로 이루어진 소 유래 ADH1C 유전자 단편 서열 중 25번째 위치한 SNP(single nucleotide polymorphism) 염기의 유전형을 결정하는 것을 특징으로 하는 프라이머 세트.
- 제1항 또는 제2항에 따른 프라이머 세트 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 한우에서 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형 결정용 키트.
- 한우 개체에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;
상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 제1항 또는 제2항의 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및
상기 증폭 단계의 산물의 유전형을 분석하는 단계;를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형을 결정하는 방법. - 제4항에 있어서, 상기 증폭 단계 산물의 유전형 분석은 겔 전기영동을 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 있어서, 25번째에 위치한 SNP(single nucleotide polymorphism) 염기를 포함하는 8개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 구성된 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 한우의 육량 관련 ADH1C (Alcohol dehydrogenase 1C) 유전자의 유전형 결정용 SNP 마커 조성물.
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|---|---|---|---|
| KR1020210059704A KR102634978B1 (ko) | 2021-05-10 | 2021-05-10 | 한우의 육량 관련 adh1c 유전자의 유전형 결정용 프라이머 세트 및 이의 용도 |
Applications Claiming Priority (1)
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| KR101700529B1 (ko) * | 2015-09-24 | 2017-01-26 | 상지대학교산학협력단 | 배최장근단면적 연관 분자표지를 이용한 한우의 육량 진단 방법 |
-
2021
- 2021-05-10 KR KR1020210059704A patent/KR102634978B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101700529B1 (ko) * | 2015-09-24 | 2017-01-26 | 상지대학교산학협력단 | 배최장근단면적 연관 분자표지를 이용한 한우의 육량 진단 방법 |
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| KR102634978B1 (ko) | 2024-02-06 |
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