JP3005668B2 - 遺伝子型の判定方法 - Google Patents
遺伝子型の判定方法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、遺伝子型の判定方
法に関し、詳しくは変異部位を含むＤＮＡ領域を、全遺
伝子型から増幅できる１組のプライマーと遺伝子型を決
定する変異部位の配列を３’末端にもつプライマーを共
存させたポリメラーゼ連鎖反応により増幅させ、得られ
た反応産物を電気泳動法によって分析することによって
生物の遺伝子型を判定する方法に関する。
法に関し、詳しくは変異部位を含むＤＮＡ領域を、全遺
伝子型から増幅できる１組のプライマーと遺伝子型を決
定する変異部位の配列を３’末端にもつプライマーを共
存させたポリメラーゼ連鎖反応により増幅させ、得られ
た反応産物を電気泳動法によって分析することによって
生物の遺伝子型を判定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】遺伝子型の違いは、ＤＮＡの塩基配列に
生じる塩基の置換，挿入または欠失によって引き起こさ
れる。ポリメラーゼ連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ、以下ＰＣＲと言う。）
法を利用した遺伝子型の判定には、変異に特異的なプラ
イマーで増幅する方法、ＰＣＲ産物を制限酵素で切断す
る方法（ＰＣＲ−ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ産物をハイブリダ
イゼイションで判定する方法、ＰＣＲ産物の１本鎖高次
構造多型解析法（ＰＣＲ−ＳＳＣＰ）等がある。
生じる塩基の置換，挿入または欠失によって引き起こさ
れる。ポリメラーゼ連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ、以下ＰＣＲと言う。）
法を利用した遺伝子型の判定には、変異に特異的なプラ
イマーで増幅する方法、ＰＣＲ産物を制限酵素で切断す
る方法（ＰＣＲ−ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ産物をハイブリダ
イゼイションで判定する方法、ＰＣＲ産物の１本鎖高次
構造多型解析法（ＰＣＲ−ＳＳＣＰ）等がある。
【０００３】このうち、変異に特異的なプライマーで増
幅する方法は、遺伝子型をＰＣＲ産物の有無で判定する
ため、ヘテロ型をホモ型から識別することが不可能であ
り、変異塩基の種類によっては、非特異的な増幅が起こ
る。また、その他の方法についても、ＰＣＲの後に複雑
な操作の手順が必要とされ、いずれも簡易な分析方法で
はない。
幅する方法は、遺伝子型をＰＣＲ産物の有無で判定する
ため、ヘテロ型をホモ型から識別することが不可能であ
り、変異塩基の種類によっては、非特異的な増幅が起こ
る。また、その他の方法についても、ＰＣＲの後に複雑
な操作の手順が必要とされ、いずれも簡易な分析方法で
はない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】そこで、ヘテロ型及び
ホモ型の遺伝子型を判定でき、しかも微小な塩基の変異
に起因する生物の遺伝子型の違いを簡易に同定する方法
の開発が望まれている。本発明は、微少な塩基変異に起
因する生物の遺伝子型の違いを簡便に同定する方法の提
供を目的とする。本発明者らは、上記の課題について鋭
意研究を重ねた結果、変異部位を含むＤＮＡ領域を増幅
する１組のプライマーと３’末端が変異部位に相当する
プライマーを共存させてＰＣＲを行うと、遺伝子型によ
って反応産物の長さが異なることを見出した。この知見
に基づいて、ＰＣＲを行い、その反応産物の長さを分析
することによって、塩基の変異に起因する生物のすべて
の遺伝子型の違いを簡易に判定する本発明の方法に到達
した。
ホモ型の遺伝子型を判定でき、しかも微小な塩基の変異
に起因する生物の遺伝子型の違いを簡易に同定する方法
の開発が望まれている。本発明は、微少な塩基変異に起
因する生物の遺伝子型の違いを簡便に同定する方法の提
供を目的とする。本発明者らは、上記の課題について鋭
意研究を重ねた結果、変異部位を含むＤＮＡ領域を増幅
する１組のプライマーと３’末端が変異部位に相当する
プライマーを共存させてＰＣＲを行うと、遺伝子型によ
って反応産物の長さが異なることを見出した。この知見
に基づいて、ＰＣＲを行い、その反応産物の長さを分析
することによって、塩基の変異に起因する生物のすべて
の遺伝子型の違いを簡易に判定する本発明の方法に到達
した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、変異
部位を含むＤＮＡ領域を、全遺伝子型から増幅できる１
組のプライマーと該プライマーによって挟まれた位置に
遺伝子型を決定する変異部位の配列を３’末端にもつプ
ライマーを共存させたＰＣＲにより増幅させ、得られた
反応産物を電気泳動法によって分析し、当該反応産物の
長さから遺伝子型を判定することを特徴とする遺伝子型
の判定方法である。
部位を含むＤＮＡ領域を、全遺伝子型から増幅できる１
組のプライマーと該プライマーによって挟まれた位置に
遺伝子型を決定する変異部位の配列を３’末端にもつプ
ライマーを共存させたＰＣＲにより増幅させ、得られた
反応産物を電気泳動法によって分析し、当該反応産物の
長さから遺伝子型を判定することを特徴とする遺伝子型
の判定方法である。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明では、変異部位を含むＤＮ
Ａ領域を、全遺伝子型から増幅できる１組のプライマー
と該プライマーによって挟まれた位置に遺伝子型を決定
する変異部位の配列を３’末端にもつプライマーの２種
を共存させてＰＣＲを行い、得られた反応産物の長さを
電気泳動法により分析し、その遺伝子型の判定を行うも
のである。
Ａ領域を、全遺伝子型から増幅できる１組のプライマー
と該プライマーによって挟まれた位置に遺伝子型を決定
する変異部位の配列を３’末端にもつプライマーの２種
を共存させてＰＣＲを行い、得られた反応産物の長さを
電気泳動法により分析し、その遺伝子型の判定を行うも
のである。
【０００７】変異特異的なプライマーの位置は、共通プ
ライマーで増幅される領域の中に含まれているようにな
っているため、変異特異的なプライマーから増幅される
遺伝子型は短い産物を生産し、該当しない遺伝子型は長
い産物を生産する。すなわち、３’末端を変異部位とす
るプライマーからは、その配列に該当する遺伝子型のＤ
ＮＡの反応産物、つまりその変異部位から増幅が開始さ
れるため、遺伝子型共通プライマーからの産物よりも短
い産物ができる。しかし、遺伝子型共通プライマーから
の産物は、この変異特異的プライマーからの産物に妨害
されるため、ほとんど増幅されない。したがって、３’
末端に変異部位を有するプライマーに該当する遺伝子型
からは、その変異部位から増幅される短い産物が主にで
きる。一方、変異特異的プライマーに該当しない遺伝子
型からは、共通プライマーからの産物だけが生産され
る。
ライマーで増幅される領域の中に含まれているようにな
っているため、変異特異的なプライマーから増幅される
遺伝子型は短い産物を生産し、該当しない遺伝子型は長
い産物を生産する。すなわち、３’末端を変異部位とす
るプライマーからは、その配列に該当する遺伝子型のＤ
ＮＡの反応産物、つまりその変異部位から増幅が開始さ
れるため、遺伝子型共通プライマーからの産物よりも短
い産物ができる。しかし、遺伝子型共通プライマーから
の産物は、この変異特異的プライマーからの産物に妨害
されるため、ほとんど増幅されない。したがって、３’
末端に変異部位を有するプライマーに該当する遺伝子型
からは、その変異部位から増幅される短い産物が主にで
きる。一方、変異特異的プライマーに該当しない遺伝子
型からは、共通プライマーからの産物だけが生産され
る。
【０００８】遺伝子型がヘテロ型の場合は、両遺伝子型
のＤＮＡが存在するため、２種類の産物ができることか
ら、ヘテロ型であると判定することができる。なお、複
数の変異部位が領域内に存在する場合も、それらの変異
部位を含めて増幅する１組のプライマーと複数の変異特
異的なプライマーを共存させてＰＣＲにより増幅させ、
以下前記と同様に行うことにより、遺伝子型を判定する
ことが可能である。
のＤＮＡが存在するため、２種類の産物ができることか
ら、ヘテロ型であると判定することができる。なお、複
数の変異部位が領域内に存在する場合も、それらの変異
部位を含めて増幅する１組のプライマーと複数の変異特
異的なプライマーを共存させてＰＣＲにより増幅させ、
以下前記と同様に行うことにより、遺伝子型を判定する
ことが可能である。
【０００９】本発明の方法に用いるＤＮＡやプライマー
は、通常のＰＣＲに用いられるグレードのもので良い。
また、プライマーは、ＰＣＲの常法に用いられるものと
同様に、ＤＮＡ合成機により合成することができ、２０
〜３０ｍｅｒ程度のもの、好ましくは２５〜３０ｍｅｒ
のものを用いる。本発明では、このＤＮＡを鋳型とし、
得られたプライマーを用いてＰＣＲによりＤＮＡの増幅
を行う。すなわち、２００μｌ容プラスチック試験管に
鋳型ＤＮＡ，耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ，ｄＮＴＰｓ，
プライマー，反応液および蒸留水を混合し、必要に応じ
て鉱物油で試験管を覆い、ＰＣＲ機（例えばＰＥＲＫＩ
Ｎ ＥＬＭＥＲ社製）にかける。反応工程は、熱変性９
３〜９８℃１０〜６０秒、アニーリング５０〜６５℃１
０〜６０秒、伸長反応６５〜７６℃１０〜２４０秒、好
ましくは熱変性９４℃３０秒、アニーリング６０℃４５
秒、伸長反応７２℃４５秒を１サイクルとし、これを３
０〜４０回、好ましくは３５〜４０回行う。次に、この
ＰＣＲによって得られた産物を電気泳動分析する。ここ
で、電気泳動分析は常法によって行えばよく、例えば４
％アガロースを含むＴＡＥ緩衝液ゲル中で、１００Ｖの
電圧をかけて電気泳動し、分離したＤＮＡバンドパター
ンを分析する。これにより、遺伝子型を判定することが
できる。
は、通常のＰＣＲに用いられるグレードのもので良い。
また、プライマーは、ＰＣＲの常法に用いられるものと
同様に、ＤＮＡ合成機により合成することができ、２０
〜３０ｍｅｒ程度のもの、好ましくは２５〜３０ｍｅｒ
のものを用いる。本発明では、このＤＮＡを鋳型とし、
得られたプライマーを用いてＰＣＲによりＤＮＡの増幅
を行う。すなわち、２００μｌ容プラスチック試験管に
鋳型ＤＮＡ，耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ，ｄＮＴＰｓ，
プライマー，反応液および蒸留水を混合し、必要に応じ
て鉱物油で試験管を覆い、ＰＣＲ機（例えばＰＥＲＫＩ
Ｎ ＥＬＭＥＲ社製）にかける。反応工程は、熱変性９
３〜９８℃１０〜６０秒、アニーリング５０〜６５℃１
０〜６０秒、伸長反応６５〜７６℃１０〜２４０秒、好
ましくは熱変性９４℃３０秒、アニーリング６０℃４５
秒、伸長反応７２℃４５秒を１サイクルとし、これを３
０〜４０回、好ましくは３５〜４０回行う。次に、この
ＰＣＲによって得られた産物を電気泳動分析する。ここ
で、電気泳動分析は常法によって行えばよく、例えば４
％アガロースを含むＴＡＥ緩衝液ゲル中で、１００Ｖの
電圧をかけて電気泳動し、分離したＤＮＡバンドパター
ンを分析する。これにより、遺伝子型を判定することが
できる。
【００１０】本発明を利用した遺伝子型判定キットを作
成することにより、遺伝子型の違いに起因する生物の生
理的な相違を予測することが可能となり、各種疾病の遺
伝子治療や植物等の品種改良などを行うことができる。
成することにより、遺伝子型の違いに起因する生物の生
理的な相違を予測することが可能となり、各種疾病の遺
伝子治療や植物等の品種改良などを行うことができる。
【００１１】
【実施例】以下に、本発明を実施例によって詳しく説明
するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ 牛の成長ホルモン遺伝子のエキソン４および５におい
て、エキソン５のコドン１２７および１７２に存在する
２ヵ所の塩基置換を含む領域について、以下の手順で、
遺伝子型の判定を行った。なお、コドン１２７，１７２
の塩基の変異については、第１表に示す。
するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ 牛の成長ホルモン遺伝子のエキソン４および５におい
て、エキソン５のコドン１２７および１７２に存在する
２ヵ所の塩基置換を含む領域について、以下の手順で、
遺伝子型の判定を行った。なお、コドン１２７，１７２
の塩基の変異については、第１表に示す。
【００１２】
【表１】
【００１３】１）プライマーの合成 プライマーの合成は、試薬会社に依頼した。合成したプ
ライマーはＧＨ４Ｆ，ＧＨ５Ｒ，ＧＨＡＲおよびＧＨＡ
ＢＲであり、これらは配列表の配列番号１〜４に記載し
た塩基配列を有する。
ライマーはＧＨ４Ｆ，ＧＨ５Ｒ，ＧＨＡＲおよびＧＨＡ
ＢＲであり、これらは配列表の配列番号１〜４に記載し
た塩基配列を有する。
【００１４】合成した牛の成長ホルモン遺伝子のエキソ
ン４および５に対するプライマーのうち、全遺伝子型を
増幅できる１組のプライマーをＧＨ４Ｆ（配列番号：
１），ＧＨ５Ｒ（配列番号：２）とした。このプライマ
ーを用いたＰＣＲによって、６５６ｂｐの増幅産物が得
られる。また、変異特異的なプライマーとして、エキソ
ン５におけるコドン１２７の変異部位を３’末端にもつ
プライマーをＧＨＡＲ（配列番号：３）とした。このプ
ライマーによって、３４７ｂｐの増幅産物が得られる。
ン４および５に対するプライマーのうち、全遺伝子型を
増幅できる１組のプライマーをＧＨ４Ｆ（配列番号：
１），ＧＨ５Ｒ（配列番号：２）とした。このプライマ
ーを用いたＰＣＲによって、６５６ｂｐの増幅産物が得
られる。また、変異特異的なプライマーとして、エキソ
ン５におけるコドン１２７の変異部位を３’末端にもつ
プライマーをＧＨＡＲ（配列番号：３）とした。このプ
ライマーによって、３４７ｂｐの増幅産物が得られる。
【００１５】２）ＰＣＲ ＤＮＡ１００ｎｇを鋳型として、２００μＭ ｄＮＴＰ
ｓ，０．４μＭ プライマー（ＧＨ４Ｆ，ＧＨ５Ｒ）お
よび０．１μＭ プライマー（ＧＨＡＲ）に、０．５ユ
ニットのＴａｑポリメラーゼ（ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥ
Ｒ社製）を加えて２０μｌの反応液とした。ＰＣＲ機
（ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥＲ社製）を用い、熱変性９４
℃３０秒、アニーリング６０℃４５秒、伸長反応７２℃
４５秒を１サイクルとし、これを４０回行った。
ｓ，０．４μＭ プライマー（ＧＨ４Ｆ，ＧＨ５Ｒ）お
よび０．１μＭ プライマー（ＧＨＡＲ）に、０．５ユ
ニットのＴａｑポリメラーゼ（ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥ
Ｒ社製）を加えて２０μｌの反応液とした。ＰＣＲ機
（ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥＲ社製）を用い、熱変性９４
℃３０秒、アニーリング６０℃４５秒、伸長反応７２℃
４５秒を１サイクルとし、これを４０回行った。
【００１６】３）電気泳動分析 次に、上記のＰＣＲによって得られた産物を、電気泳動
分析する。電気泳動装置としては、コスモ・バイオ社製
のミューピッドを用いた。ゲルトレーに泳動ゲル（組成
は、４％アガロース，ＴＡＥ緩衝液）を作成し、ＰＣＲ
によって増幅したＤＮＡを添加した。次いで、１００Ｖ
の電圧をかけて電気泳動し、分離したＤＮＡバンドパタ
ーンを常法により染色し、分析した。ＤＮＡ分子量マー
カーとして、φ×１７４ＤＮＡ／ＨｉｎｃII ｄｉｇｅ
ｓｔを用いた。分子量マーカーの大きさは、大きい方か
ら順に１０５７，７７０，６１２，４９５，３９２，３
４５ｂｐである。この電気泳動の泳動像を図１に示す。
分析する。電気泳動装置としては、コスモ・バイオ社製
のミューピッドを用いた。ゲルトレーに泳動ゲル（組成
は、４％アガロース，ＴＡＥ緩衝液）を作成し、ＰＣＲ
によって増幅したＤＮＡを添加した。次いで、１００Ｖ
の電圧をかけて電気泳動し、分離したＤＮＡバンドパタ
ーンを常法により染色し、分析した。ＤＮＡ分子量マー
カーとして、φ×１７４ＤＮＡ／ＨｉｎｃII ｄｉｇｅ
ｓｔを用いた。分子量マーカーの大きさは、大きい方か
ら順に１０５７，７７０，６１２，４９５，３９２，３
４５ｂｐである。この電気泳動の泳動像を図１に示す。
【００１７】実施例２ 変異特異的なプライマーとして、ＧＨＡＲの代わりに、
エキソン５のコドン１７２の変異部位を３’末端にもつ
プライマーであるＧＨＡＢＲ（配列番号：４）を用いた
こと以外は、すべて実施例１と同様に行った。このプラ
イマーによって、４８３ｂｐの増幅産物が得られた。こ
の電気泳動の泳動像を図２に示す。
エキソン５のコドン１７２の変異部位を３’末端にもつ
プライマーであるＧＨＡＢＲ（配列番号：４）を用いた
こと以外は、すべて実施例１と同様に行った。このプラ
イマーによって、４８３ｂｐの増幅産物が得られた。こ
の電気泳動の泳動像を図２に示す。
【００１８】実施例３ 変異特異的なプライマーとして、エキソン５のコドン１
２７の変異部位を３’末端にもつプライマーのＧＨＡＲ
（配列番号：３）、コドン１７２の変異部位を３’末端
にもつプライマーのＧＨＡＢＲ（配列番号：４）を用い
たこと以外は、すべて実施例１と同様に行った。この電
気泳動の泳動像を図３に示す。ヘテロ型のものには、大
きさの異なる２本の増幅産物が見られ、ホモ型のものと
異なる泳動像が得られた。
２７の変異部位を３’末端にもつプライマーのＧＨＡＲ
（配列番号：３）、コドン１７２の変異部位を３’末端
にもつプライマーのＧＨＡＢＲ（配列番号：４）を用い
たこと以外は、すべて実施例１と同様に行った。この電
気泳動の泳動像を図３に示す。ヘテロ型のものには、大
きさの異なる２本の増幅産物が見られ、ホモ型のものと
異なる泳動像が得られた。
【００１９】
【発明の効果】本発明の方法によれば、ＰＣＲ産物は遺
伝子型に特異的な長さを示すので、ＰＣＲ産物を通常の
電気泳動法で分離するだけで、ヘテロ型およびホモ型の
遺伝子型を簡便、かつ正確に判定することができる。
伝子型に特異的な長さを示すので、ＰＣＲ産物を通常の
電気泳動法で分離するだけで、ヘテロ型およびホモ型の
遺伝子型を簡便、かつ正確に判定することができる。
【００２０】
【００２１】配列番号：１ 配列の長さ：２９ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 起源： 生物名：ウシ 配列の特徴 特徴を表す記号：ｅｘｏｎ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列： ＴＣＴＡＴＧＡＧＡＡ ＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣ ＣＴＧＧＡＧＧＡＡ ２９
【００２２】配列番号：２ 配列の長さ：３０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 起源： 生物名：ウシ 配列の特徴 特徴を表す記号：ｅｘｏｎ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列： ＣＣＡＧＡＡＴＡＧＡ ＡＴＧＡＣＡＣＣＴＡ ＣＴＣＡＧＡＣＡＡＴ ３０
【００２３】配列番号：３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 起源： 生物名：ウシ 配列の特徴 特徴を表す記号：ｅｘｏｎ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列： ＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣ ＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧ ２０
【００２４】配列番号：４ 配列の長さ：２２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 起源： 生物名：ウシ 配列の特徴 特徴を表す記号：ｅｘｏｎ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列： ＡＴＧＡＣＣＣＴＣＡ ＧＧＴＡＣＧＴＣＴＣ ＣＧ ２２
【図１】 変異部位を３’末端にもつプライマーとして
ＧＨＡＲを用いたＰＣＲ反応を行って得た増幅産物の電
気泳動写真である。
ＧＨＡＲを用いたＰＣＲ反応を行って得た増幅産物の電
気泳動写真である。
【図２】 変異部位を３’末端にもつプライマーとして
ＧＨＡＢＲを用いたＰＣＲ反応を行って得た増幅産物の
電気泳動写真である。
ＧＨＡＢＲを用いたＰＣＲ反応を行って得た増幅産物の
電気泳動写真である。
【図３】 変異部位を３’末端にもつプライマーとして
ＧＨＡＲおよびＧＨＡＢＲを用いたＰＣＲ反応を行って
得た増幅産物の電気泳動写真である。
ＧＨＡＲおよびＧＨＡＢＲを用いたＰＣＲ反応を行って
得た増幅産物の電気泳動写真である。
Ｌ・Ｌ：コドン１２７にコードされているアミノ酸のロ
イシン・ロイシンのホモ型（ＣＴＧ／ＣＴＧ） Ｖ・Ｖ：コドン１２７にコードされているアミノ酸のバ
リン・バリンのホモ型（ＧＴＧ／ＧＴＧ） Ｌ・Ｖ：コドン１２７にコードされているアミノ酸のロ
イシン・バリンのヘテロ型（ＣＴＧ／ＧＴＧ） Ｔ・Ｔ：コドン１７２にコードされているアミノ酸のス
レオニン・スレオニンのホモ型（ＡＣＧ／ＡＣＧ） Ｍ・Ｍ：コドン１７２にコードされているアミノ酸のメ
チオニン・メチオニンのホモ型（ＡＴＧ／ＡＴＧ） Ｔ・Ｍ：コドン１７２にコードされているアミノ酸のス
レオニン・メチオニンのヘテロ型（ＡＣＧ／ＡＴＧ） ＡＡ：表１に示した遺伝子型でＡＡのホモ型 ＢＢ：表１に示した遺伝子型でＢＢのホモ型 ＣＣ：表１に示した遺伝子型でＣＣのホモ型 ＡＢ：表１に示した遺伝子型でＡＢのヘテロ型 ＡＣ：表１に示した遺伝子型でＡＣのヘテロ型 ＢＣ：表１に示した遺伝子型でＢＣのヘテロ型を示す。
イシン・ロイシンのホモ型（ＣＴＧ／ＣＴＧ） Ｖ・Ｖ：コドン１２７にコードされているアミノ酸のバ
リン・バリンのホモ型（ＧＴＧ／ＧＴＧ） Ｌ・Ｖ：コドン１２７にコードされているアミノ酸のロ
イシン・バリンのヘテロ型（ＣＴＧ／ＧＴＧ） Ｔ・Ｔ：コドン１７２にコードされているアミノ酸のス
レオニン・スレオニンのホモ型（ＡＣＧ／ＡＣＧ） Ｍ・Ｍ：コドン１７２にコードされているアミノ酸のメ
チオニン・メチオニンのホモ型（ＡＴＧ／ＡＴＧ） Ｔ・Ｍ：コドン１７２にコードされているアミノ酸のス
レオニン・メチオニンのヘテロ型（ＡＣＧ／ＡＴＧ） ＡＡ：表１に示した遺伝子型でＡＡのホモ型 ＢＢ：表１に示した遺伝子型でＢＢのホモ型 ＣＣ：表１に示した遺伝子型でＣＣのホモ型 ＡＢ：表１に示した遺伝子型でＡＢのヘテロ型 ＡＣ：表１に示した遺伝子型でＡＣのヘテロ型 ＢＣ：表１に示した遺伝子型でＢＣのヘテロ型を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．32［１ ］（1991）ｐ．183−187 実験医学 （1990）第８巻 第４号 ｐ．371−374 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (2)
- 【請求項１】 変異部位を含むＤＮＡ領域を、全遺伝子
型から増幅できる１組のプライマーと該プライマーによ
って挟まれた位置に遺伝子型を決定する変異部位の配列
を３’末端にもつプライマーを共存させたポリメラーゼ
連鎖反応により増幅させ、得られた反応産物を電気泳動
法によって分析し、当該反応産物の長さから遺伝子型を
判定することを特徴とする遺伝子型の判定方法。 - 【請求項２】 牛の成長ホルモン遺伝子のエキソン５に
存在する２ヵ所の塩基置換を含む領域について、請求項
１記載の方法により遺伝子型を判定するにあたり、全遺
伝子型を増幅できる１組のプライマーとして配列番号１
記載のＧＨ４Ｆと配列番号２記載のＧＨ５Ｒを用い、変
異特異的プライマーとして配列番号３記載のＧＨＡＲ及
び／又は配列番号４記載のＧＨＡＢＲを用いることによ
り、遺伝子型を判定する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8312654A JP3005668B2 (ja) | 1996-11-11 | 1996-11-11 | 遺伝子型の判定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8312654A JP3005668B2 (ja) | 1996-11-11 | 1996-11-11 | 遺伝子型の判定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10136985A JPH10136985A (ja) | 1998-05-26 |
| JP3005668B2 true JP3005668B2 (ja) | 2000-01-31 |
Family
ID=18031822
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8312654A Expired - Lifetime JP3005668B2 (ja) | 1996-11-11 | 1996-11-11 | 遺伝子型の判定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3005668B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002272500A (ja) | 2001-03-23 | 2002-09-24 | National Agricultural Research Organization | 有用ウシの評価方法 |
| SE0101532D0 (sv) * | 2001-05-02 | 2001-05-02 | Pharmacia Ab | Method and kit for diagnosing GH deficiency |
-
1996
- 1996-11-11 JP JP8312654A patent/JP3005668B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３２［１］（１９９１）ｐ．１８３−１８７ |
| 実験医学 （１９９０）第８巻 第４号 ｐ．３７１−３７４ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10136985A (ja) | 1998-05-26 |
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