KR20220122659A - 아우리스타틴-관련 화합물, 접합된 아우리스타틴 화합물, 및 이들의 사용 방법 - Google Patents

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브라이언 에이. 멘델손
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다우디 잭슨
크리스토퍼 켐볼
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싸이톰스 테라퓨틱스, 인크.
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Abstract

본 발명은 일반적으로 아우리스타틴 계열의 신규한 화합물, 표적-결합 분자와 같은 다른 분자에 페이로드를 커플링시키기 위한 신규한 링커, 신규한 링커-독소 분자, 및 제어된 부위-특이적 접합을 허용하는 신규한 항체 분자에 관한 것이다.

Description

아우리스타틴-관련 화합물, 접합된 아우리스타틴 화합물, 및 이들의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 발명은 2020년 1월 6일자로 출원된 미국 가출원 제62/957,780호의 이익을 주장하며, 이의 내용은 그의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
본 발명의 기술분야
본 개시내용은 일반적으로 아우리스타틴 계열(auristatin family)의 신규한 화합물에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 일반적으로 페이로드(payload)를 표적-결합 분자와 같은 다른 분자에 커플링시키기 위한 신규한 링커에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 일반적으로 신규한 링커-독소 분자에 관한 것이다. 본 개시내용은, 독소가 아우리스타틴 계열의 신규한 화합물인, 신규한 링커-독소 분자에 접합된 표적-결합 분자에 관한 것이다.
서열 목록에 대한 참조
파일명 CYTX_070_PCT_ST25.txt로 EFS-Web을 통해 컴퓨터 판독 가능한 형식(ASCII 포맷)으로 37 C.F.R. § 1.821에 따라 본 출원과 함께 전자적으로 동시에 제출된 서열 목록은 참조에 의해 본 명세서에 원용된다. 서열 목록의 ASCII 사본은 2021년 1월 6일자로 생성되었으며 크기는 48킬로바이트이다.
돌라스타틴(dolastatin)으로 알려진 몇 가지 짧은 펩타이드 화합물은, 천연 공급원으로부터 단리되었거나 또는 튜불린에 결합하여 중합을 차단함으로써 항유사분열 생물학적 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 아우리스타틴으로 알려진 이들 화합물의 유사체도 제조되었고, 유사한 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
이러한 분자는 화학적 링커를 통해 표적-특이적 단클론성 항체와 같은 표적-결합 부분에 접합시킴으로써 치료적으로 사용되고, 이로써 표적-특이적 방식으로 독성 페이로드를 전달한다. 낮은 안정성을 갖는 링커가 약물을 동소에서 방출함으로써, 약물의 독성 및 내약성을 잠재적으로 증가시킬 것이므로, 이러한 분자의 효능 및 안전성은 독소의 속성 및 연결 링커의 안정성에 따라서 좌우될 수 있다.
항체 또는 활성화 가능한 항체에 대한 약물의 접합은 전형적으로 중쇄 또는 경쇄 상의 아미노 또는 티올 측쇄에 약물을 연결하는 화학 반응에 의존한다. 그러나, 이들 천연 아미노산 잔기에 대한 의존은 접합 후 약물과 항체(DAR) 간의 화학량론을 변화시킬 수 있거나 또는 접합을 허용하기 위하여 기존의 시스테인 다이설파이드 결합을 파괴하기 위해 항체를 감소시킬 필요를 초래할 수 있다.
따라서, 적합한 효능 및 충분히 안정적인 링커를 갖도록 약물 분야에서 지속적인 요구가 있다. 또한 제어된 부위-특이적 접합을 허용하는 신규한 항체 변이체에 대하여 당해 분야에서 지속적인 요구가 있다.
본 명세서에서는 하기 화학식 (I), (II) 및 (III)의 화합물이 제공된다;
Figure pct00001
식 중, R1은 수소 또는 C1-6 알킬기이고, R은 수소, C1-6 알킬, 링커 또는 X1-Y1-*기로 이루어진 군으로부터 선택되고, *는 질소에 대한 부착점임,
Figure pct00002
식 중, R3은 화학식 (II)에 부착된 제제이되, 부착점은 질소, 황, 산소 또는 탄소 원자이고, R2는 화학식 (II)에 부착된 모이어티이되, 부착점은 염소기, 요오드기, 브로민기 및 티올기로 이루어진 군으로부터 선택됨,
Figure pct00003
식 중, R2는 화학식 (III)에 부착된 모이어티이되, 부착점은 염소기, 요오드기, 브로민기 및 티올기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에서는 항체 및 활성화 가능한 항체가 제공되되, 카밧(Kabat) 위치 328은 시스테인이다. 몇몇 실시형태에서, 화학식 (I), (II) 및 (III)의 화합물은 폴리펩타이드에 접합된다. 몇몇 실시형태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물은 카밧 위치 328에서 시스테인의 측쇄 티올기에 대해서 항체에 접합된다.
본 개시내용의 화학식 (I)의 화합물의 몇몇 실시형태에서, Y1은 옥시카보닐기이고 X1은 C1-6 알킬기, 9-플루오레닐메틸기, 벤질기 또는 tert-부틸기이다. 화학식 (I)의 화합물의 몇몇 실시형태에서, R1은 메틸기이고 R은 수소이다. 화학식 (I)의 화합물의 몇몇 실시형태에서, X1-Y1은 9-플루오레닐메톡시카보닐(Fmoc)기이다.
본 개시내용의 화학식 (II)의 화합물의 몇몇 실시형태에서, R2는 표적-결합 모이어티이되, R2에서의 부착점은 티올기이다. 화학식 (II)의 화합물의 몇몇 실시형태에서, 표적-결합 모이어티는 표적에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB)이다. 화학식 (II)의 화합물의 몇몇 실시형태에서, 표적-결합 모이어티는, 활성화된 상태에서, 표적에 특이적으로 결합하는 활성화 가능한 항체이고, 활성화 가능한 항체는 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB), AB에 커플링된 마스킹 모이어티(MM)로서, 활성화 가능한 항체가 미절단 상태에 있을 때 표적에 대한 AB의 결합을 저해하는, 상기 MM, AB에 커플링된 절단 가능한 모이어티(CM)로서, 프로테아제에 대해서 기질로서 기능하는 폴리펩타이드인, 상기 CM을 포함한다. 화학식 (II)의 몇몇 실시형태에서, MM은 표적에 대한 AB의 해리 상수보다 더 큰 AB에 결합하기 위한 해리 상수를 갖고, MM은 활성화 가능한 항체가 절단된 상태에 있을 때 표적에 결합하기 위한 AB를 방해하지 않거나 또는 이와 경쟁하지 않고, MM은 40개 이하의 아미노산 길이를 가진 폴리펩타이드이고, MM 폴리펩타이드 서열은 표적 서열의 것과 상이하고, 그리고/또는 MM 폴리펩타이드 서열은 AB의 임의의 천연 결합 상대와 50% 이하의 동일성이다. 화학식 (II)의 몇몇 실시형태에서, 표적은 CD44, CD147, CD166, ITGa3, ITGb1, PSMA 및 SLC34A2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (II)의 몇몇 실시형태에서, 제제는 아우리스타틴 E, 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF), 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 D(MMAD), 메이탄시노이드 DM4, 메이탄시노이드 DM1, 칼리키아마이신(calicheamicin), 두오카마이신(duocarmycin), 피롤로벤조다이아제핀 및 피롤로벤조다이아제핀 이량체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 몇몇 실시형태에서, R은 링커이다. 몇몇 실시형태에서, 링커는 절단 가능한 링커이다. 몇몇 실시형태에서, 링커는 표적-결합 모이어티에 연결된다. 몇몇 실시형태에서, 표적-결합 모이어티는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 몇몇 실시형태에서, 표적은 CD44, CD147, CD166, ITGa3, ITGb1, PSMA 및 SLC34A2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, 항체 또는 활성화 가능한 항체는 카밧 위치 328에서의 시스테인 잔기를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물은 티올기에 대해서 폴리펩타이드에 연결된다. 몇몇 실시형태에서, 티올기는 시스테인 잔기의 티올기 측쇄이다. 몇몇 실시형태에서, 시스테인 잔기는 항체의 카밧 위치 328에서의 시스테인 잔기이다.
본 개시내용의 몇몇 실시형태에서, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법이 제공되되, 해당 방법은 화학식 (I)의 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 단계를 포함하되, 식 중, R1은 수소 또는 C1-6 알킬기이고, R은 수소, C1-6 알킬, 링커 또는 X1-Y1-*기로 이루어진 군으로부터 선택되되, *는 질소에 대한 부착점이고; 그리고 Y1은 옥시카보닐기이고, X1은 C1-6 알킬기, 9-플루오레닐메틸기, 벤질기 또는 tert-부틸기이고, 적어도 1당량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 유도체가 폴리펩타이드에 접합된다.
본 개시내용의 몇몇 실시형태에서, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법이 제공되되, 해당 방법은 화학식 (II)의 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 단계를 포함하되, 여기서 R2는 화학식 (II)에 부착된 모이어티이되, 부착점은 염소기, 요오드기, 브로민기 및 티올기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시내용의 몇몇 실시형태에서, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법은 폴리펩타이드를 환원제로 환원시키는 단계로서, 적어도 하나의 다이설파이드기는 유리티올기로 환원되는, 상기 환원시키는 단계, 유리 티올기를 산화시키는 일 없이 폴리펩타이드를 산화제로 재산화시키는 단계, 및 화학식 (I) 또는 (III)의 화합물을 유리 티올기에 접합시키는 단계를 포함한다.
도 1은 본 개시내용의 아우리스타틴 종에 대한 합성 경로의 개략도이다.
도 2A 및 도 2B는 활성화된 카텝신 B에 대한 본 개시내용의 링커의 예시적인 시험관내 안정성을 묘사하는 그래프를 나타낸다.
도 3A 및 도 3B는 활성화된 리소좀에 대한 본 개시내용의 링커의 예시적인 시험관내 안정성을 묘사하는 그래프를 나타낸다.
도 4는 링커-독소 활성화 및 항체에 대한 링커-독소의 접합의 예시적인 방법의 공정 흐름도를 나타낸다.
본 개시내용은 일반적으로 아우리스타틴 계열의 신규한 화합물에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 일반적으로 페이로드를 표적-결합 분자와 같은 다른 분자에 커플링시키기 위한 신규한 링커에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 일반적으로 신규한 링커-독소 분자에 관한 것이다. 이러한 실시형태의 예는 이하의 실시예에 기재되어 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물이 접합될 수 있는 표적-결합 모이어티는 항-PSMA 항체를 포함하며, 이의 예는 하기 서열에 기재되어 있다:
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물이 접합될 수 있는 표적-결합 모이어티는 항-SLC34A2 항체를 포함하며, 이의 예는 하기 서열에 기재되어 있다:
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
실시예 1: 아우리스타틴 종의 예시적인 제조
본 실시예는 티오페닐메틸 및 하이드록시메틸 치환체를 갖는 모노메틸아우리스타틴 분자인 MMATH의 화합물(분자 14)의 예시적인 제조 방법을 제공한다. 이 분자의 합성 제조의 개략도가 도 1에 묘사되어 있다.
반응식 1:
Figure pct00022
반응식 1에 요약된 반응을 참조하면, MeOH(500.00㎖) 중 Ala(2-TH)-OH(분자 1; 50.04g, 0.29 ㏖)의 교반된(0℃) 현탁액에 SOCl2(100.07㎖, 1.38 ㏖)를 2시간에 걸쳐서 첨가하였다. 이 혼합물을 23℃에서 교반하였다. 17시간 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 더욱 144시간 동안 건조시켰다. Ala(2-Th)-OMe_HCl을 얻었다(분자 2). HPLC rt = 0.59분(표준 방법), ESI [M+H]+ 186.2.
반응식 2:
Figure pct00023
반응식 2에 요약된 반응을 참조하면, DCM(1.00ℓ) 중 Ala(2-Th)-OMe_HCl(분자 2: 64.43g, 0.29 ㏖), Boc-Dap-OH_DCHA(분자 3: 163.64g, 0.35 ㏖), WSC_HCl(67.25g, 0.35 ㏖) 및 HOBt_H2O(42.77g, 0.28 ㏖)의 교반된(23℃) 현탁액에 Et3N(49.00㎖, 0.35 ㏖)을 첨가하였다. 18시간 후, 이 반응 혼합물을 실리카겔 패드(대략 500g)를 통해서 여과시키고, 필터 케이크를 DCM(1ℓ)로 세척하였다. 여과액을 약 500㎖가 될 때까지 감압 하에 농축시켰다. 미용해 물질을 여과시키고, 필터 케이크를 DCM(100㎖)으로 세척하였다. 이 여과액에 1.0M HCl aq.(500㎖)를 첨가하고, 이어서, 이 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 미용해 물질을 여과시킨 후, 여과액을 분리시켰다. 분리된 유기층에 1.0M HCl aq.(500㎖)를 재차 첨가하고, 이어서 이 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 분리 후, 유기층을 포화 NaHCO3 aq.(500㎖), 염수(500㎖)로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시켰다. 유기층을 여과시킨 후, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 더욱 3시간 동안 건조시켰다. 조질의 물질에 AcOEt(200㎖)를 첨가하고, 이어서, 이 혼합물을 80℃(내부 온도)까지 가열하였다. 이 혼합물을 셀라이트를 통해서 여과시킨 후 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 이 잔사에 AcOEt(150㎖)를 첨가하고, 이어서, 이 혼합물을 물질이 용해될 때까지 80℃(내부 온도)까지 가열하였다. 이 혼합물을 주위 온도에서 정치시켰다. 24시간 후에, 이 혼합물을 여과시키고, 고체를 헥산/AcOEt의 10:1 혼합물 50㎖로 2회 세척하였다. 고체를 더욱 14시간 동안 건조시켰다. Boc-Dap-Ala(2-Th)-OMe(분자 4; 92.30g, 0.20 ㏖)를 얻었다. HPLC rt = 1.52분(표준 방법), ESI [M+H]+ 455.2.
반응식 3:
Figure pct00024
반응식 3을 참조하면; 빙욕 냉각 하에, THF(500.00㎖) 중 LAH(8.25g, 0.22 ㏖)의 교반된 용액에 내부 온도를 2시간에 걸쳐서 5℃ 미만으로 유지하면서 THF(100㎖) 중 Boc-Dap-Ala(2-Th)-OMe(분자 4; 39.10g, 0.09 ㏖)를 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 동일한 온도(내부 온도; 5℃)에서 교반하였다. 5분 후에, 빙욕 냉각 하에, 이 혼합물에 H2O(8.5㎖)를 서서히, 15% NaOH aq(8.5㎖) 및 H2O(25.5㎖)를 이 순서로 첨가하였다. 이 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 셀라이트(Celite) 패드를 통해서 여과시키고, 이어서 필터 케이크를 100㎖의 AcOEt로 3회 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 더욱 4시간 동안 건조시켰다. 조질의 물질에 톨루엔(110㎖)을 첨가하고, 이어서 모든 물질이 용해될 때까지 이 혼합물을 60℃까지 가열하였다. 이 혼합물을 주위 온도에서 정치시켰다. 24시간 후에, 이 혼합물을 여과시키고, 이어서, 고체를 50㎖의 톨루엔으로 2회 세척하고, 더욱 15시간 동안 건조시켰다. Boc-Dap-Ala(2-Th)-CH2OH(분자 5; 28.43g, 0.07 ㏖)를 얻었다. HPLC rt = 1.38분(표준 방법), ESI [M+H]+ 427.3.
반응식 4:
Figure pct00025
반응식 4에 요약된 반응을 참조하면, MeOH(100.00㎖) 중 Boc-Dap-Ala(2-Th)-CH2OH(분자 5; 19.42g, 0.05 ㏖)의 교반된(23℃) 용액에 HCl/다이옥산(91.00㎖, 0.36 ㏖)을 첨가하였다. 2시간 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 잔사에 AcOEt(250㎖)를 첨가하고, 이어서 이 혼합물을 진공 중 농축시켰다. 이 과정을 2회 반복하였다. 잔사를 더욱 20시간 동안 건조시켰다. 조질의 물질에 ACN/H2O(38㎖)의 20:1 혼합물을 첨가하였다. 모든 물질이 용해될 때까지 이 혼합물을 70℃(내부 온도)까지 가열하고, 이어서, 이 혼합물을 주위 온도에서 정치시켰다. 24시간 후에, 이 혼합물을 여과시키고, 이어서 고체를 15㎖의 ACN으로 2회 세척하였다. 고체를 더욱 8시간 동안 건조시켰다. H-Dap-Ala(2-Th)-CH2OH_HCl(12.84g, 0.04 ㏖)을 얻었다. HPLC rt = 0.60분(표준 방법), ESI [M+H]+ 327.2. MeOH(500.00㎖) 중 Ala(2-TH)-OH(50.04g, 0.29 ㏖)의 교반된 (0℃) 현탁액에 SOCl2(100.07㎖, 1.38 ㏖)를 2시간에 걸쳐서 첨가하였다. 이 혼합물을 23℃에서 교반하였다. 17시간 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 더욱 144시간 동안 건조시켰다. Ala(2-Th)-OMe_HCl을 얻었다(분자 6). HPLC rt = 0.59분(표준 방법), ESI [M+H]+ 327.2.
반응식 5:
Figure pct00026
반응식 5에 요약된 반응을 참조하면, 에틸 아세테이트(2.50ℓ) 에틸 아세테이트(2.50ℓ) 중 (2S)-2-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}-3-메틸부탄산(분자 7; 100.00g, 294.65 m㏖), tert-부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노에이트(분자 8; 63.69g, 245.54 m㏖) 및 2-클로로-1-메틸피리딘-1-윰 아이오다이드(106.64g, 417.42 m㏖)의 교반된 (20℃) 용액에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(154.38㎖, 883.95 m㏖)을 일단 일관되게 혼합이 달성되면 첨가하였다. 16시간 후에, 조질의 반응 혼합물을 여과시키고, EtOAc로 세척하였다. 이 용액을 1ℓ의 1M HCl, 이어서 1ℓ의 물, 이어서 0.5ℓ의 중탄산나트륨, 이어서 0.5ℓ의 염수로 추출하였다. 합한 유기 분획을 황산마그네슘을 사용하여 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}-N,3-다이메틸부탄아미도]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트(분자 9; 149.00g, 0.26 ㏖)를 분홍색 고체로서 얻었다. HPLC rt = 1.55분(표준 방법), ESI [M+H]+ 581.4.
반응식 6:
Figure pct00027
반응식 6에 요약된 반응을 참조하면, 에틸 아세테이트(200.00㎖) 중 tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}-N,3-다이메틸부탄아미도]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트(분자 9; 143.00g, 246.23 m㏖)의 교반된 (20℃) 용액에 다이에틸아민(200.00㎖, 1,930.63 m㏖)을 첨가하였다. 1시간 후에, 조질의 혼합물을 진공 중 농축시켰다. 잔사를 200㎖의 에틸 아세테이트에 용해시키고, 이어서 재차 농축시켰다. 이 작업을 2회 반복하였다. 이 잔사에 50㎖의 톨루엔을 첨가하고, 이어서 농축시켰다. 잔사를 1000㎖의 헥산에 용해시켰다. 이 혼합물에 500㎖의 1M 염산 및 500㎖의 물을 첨가하였다. 이 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 2상(biphasic) 혼합물을 분액 깔때기에 넣고, 수성층을 분리시켰다. 유기층을 500㎖의 0.1M 염산으로 2회 추출하였다. 합한 수성층을 500㎖의 헥산으로 2회 세척하였다. 수성층에 탄산칼륨을 첨가하여 pH를 10 초과로 조절하였다. 수용액을 분액 깔때기에 넣고, 500㎖의 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기층을 500㎖ 염수, 황산마그네슘 위에서 건조시키고, 진공 중 농축시켰다. tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-아미노-N,3-다이메틸부탄아미도]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트(분자 10; 66.80g, 0.19 ㏖)를 분홍색 오일로서 얻었다. HPLC rt = 0.82분(표준 방법), ESI [M+H]+ 359.4.
반응식 7:
Figure pct00028
반응식 7에 요약된 반응을 참조하면, 에틸 아세테이트(1.50ℓ) 에틸 아세테이트(1.50ℓ) 중 (2S)-2-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐](메틸)아미노}-3-메틸부탄산(분자 7; 55.00g, 155.63 m㏖), tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-아미노-N,3-다이메틸부탄아미도]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트(분자 10; 55.79g, 0.16 ㏖), 및 2-클로로-1-메틸피리딘-1-윰 아이오다이드(67.59g, 264.56 m㏖)의 교반된 (20℃) 용액에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(97.85㎖, 560.25 m㏖)을 일단 일관되게 혼합이 달성되면 첨가하였다. 16시간 후에, 황색 석출물을 셀라이트 여과에 의해 제거하고, 100㎖의 EtOAc로 세척하였다. 여과액을 분액 깔때기에 넣고, 200㎖의 1M 염산으로 2회, 200㎖의 물, 200㎖의 포화 중탄산나트륨 용액으로 2회 그리고 염수로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘 위에서 건조시키고, 진공 중 농축시켰다. 잔사를 고진공 하에 24시간 동안 건조시켜 Fmoc-MeVal-Val-Dil-OtBu(분자 11; 103.53g, 0.15 ㏖)를 황색 발포물로서 제공하였다. HPLC rt = 1.86분(표준 방법), ESI [M+H]+ 694.5.
반응식 8:
Figure pct00029
반응식 8에 요약된 반응을 참조하면, 염산(57.64㎖, 230.58 m㏖)의 교반된 (20℃) 용액에 tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[(2S)-2-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐](메틸)아미노}-3-메틸부탄아미도]-N,3-다이메틸부탄아미도]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트(분자 11; 20.00g, 28.82 m㏖)를 첨가하였다. 16시간 후, 조질의 혼합물을 진공 중 농축시켰다. 잔사를 50㎖의 톨루엔에 현탁시키고, 진공 중 농축시켰다. 이 작업을 3회 반복하였다. 얻어진 잔사를 고진공 하에 24시간 동안 건조시켜 Fmoc-MeVal-Val-Dil-OH(분자 12; 18.00g, 0.03 ㏖)를 베이지색 발포물로서 제공하였다. HPLC rt = 1.58분(표준 방법), ESI [M+H]+ 638.6.
반응식 9:
Figure pct00030
반응식 9에 요약된 반응을 참조하면, Dap-(2-Th)Ala-CH2OH_HCl(분자 5; 3.94g, 10.86 m㏖)에 Fmoc-MeVal-Val-Dil-OH(분자 12; 6.30g, 9.88 m㏖), EDC_HCl(2.84g, 14.82 m㏖), HOBt(1.51g, 9.88 m㏖) 및 DIPEA(4.30㎖, 24.69 m㏖)를 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 23℃에서 교반하였다. 18시간 동안 교반 후, 이 혼합물에 CH2Cl2(100㎖)를 첨가하였다. 이 혼합물을 0.1M HCl aq(100㎖), 포화 NaHCO3 aq.(100㎖), 이어서 염수(100㎖)로 세척하였다. 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하였다. 유기층을 진공 중 농축시켜 Fmoc-MMATH(모노메틸아우리스타틴 티오페닐메틸 하이드록시메틸)(분자 13; 7.63g, 0.01 ㏖)를 제공하였다. HPLC rt = 1.63분(표준 방법), ESI [M+H]+ 946.8.
반응식 10:
Figure pct00031
반응식 10에 요약된 반응을 참조하면, Fmoc-MMATH(분자 13; 7.13g, 7.54 m㏖)에 EtOAc(100.00㎖), 도데실 머캅탄(3.61㎖, 15.07 m㏖) 및 DBU(0.23㎖, 1.51 m㏖)를 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 23℃에서 교반하였다. 18시간 동안 교반 후, 조질의 혼합물을 분액 깔때기에 넣고, 50㎖의 1.0M 염산으로 2회 추출하였다. 합한 수성층을 100㎖의 에틸 아세테이트로 2회 세척하였다. 수용액을 둥근 바닥 플라스크에 옮겼다. 이 혼합물에 탄산칼륨을 첨가하여, 혼합물의 pH를 10 초과로 조절하였다. 수용액을 분액 깔때기에 넣고, 100㎖의 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 위에서 건조시키고, 진공 중 농축시켰다. 잔사를 고진공 하에 16시간 동안 건조시켜 MMATH(분자 14; 4.51g, 0.01 ㏖)를 무색 발포물로서 제공하였다. HPLC rt = 0.95분(표준 방법), ESI [M+H]+ 724.7.
실시예 2: 아우리스타틴 링커-독소 종의 예시적인 제조
본 실시예는 표적화 분자에 커플시키는데 적합한 링커를 갖는, 티오페닐메틸 하이드록시메틸 아우리스타틴 분자인 MMATH의 화합물(분자 14)의 예시적인 제조 방법을 제공한다.
반응식 11:
Figure pct00032
반응식 11에 요약된 반응을 참조하면, THF(600㎖) 중 Boc2O(137.0g, 628 m㏖)의 교반된 23℃ 용액에 물(600㎖) 중 H2N-Cit-OH(분자 15; 100.0g, 571 m㏖) 및 NaCO3H(71.9g, 856 m㏖)를 첨가하였다. 16시간 후, 석출물이 형성되었고, 20시간 후, 반응은 LCMS 분석에 의해 완료되었다. 휘발성 유기물을 감압 하에 제거하고, 이 반응물을 2M HCl로 pH 4로 조절하고, EtOAc(4×750㎖)로 추출하였다. 합한 유기물을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시켰다. 이 용액을 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 77%의 분자 16을 백색 고체로서 수득하였다.
반응식 12:
Figure pct00033
반응식 12에 요약된 반응을 참조하면, EtOH(600㎖) 중 Boc-Cit(분자 16, 120.0g, 436 m㏖)의 교반된 50℃ 용액에 Paba(64.4g, 523 m㏖) 및 EEDQ(129.3g, 523 m㏖)를 첨가하였다. 이 용액을 24시간 동안 교반하고, 유기 용매를 300㎖로 농축시켰다. 1.0ℓ의 EtOAc를 첨가하고 나서, 추가의 2.0ℓ의 헥산을 첨가함으로써, 농축된 조질의 용액을 배산시키고(triturated), 1시간 동안 교반하였다. 백색 고체를 여과에 의해 수집하고, 감압 하에 건조시켜, 분자 16을 77% 수율로 얻었다.
반응식 13:
Figure pct00034
반응식 13에 요약된 반응을 참조하면, MeCN(300㎖) 중 Boc-Cit-Paba(분자 16; 10.0g, 26.3 m㏖)의 교반된 23℃ 용액에 Im(1.79g, 26.3 m㏖)을, 이어서 PNP-COCl(7.95g, 39.4 m㏖)을 첨가하였다. 16시간 후, 이 반응물을 감압 하에 농축시켜 황색 오일을 제공하였다. 이 오일에 300㎖의 EtOAc를 첨가하고, 이 용액을 15분 동안 배산시켰다. 백색 석출물을 여과에 의해 수집하고, 성청액을 50% 용적으로 농축시키고, 제2 배취를 15분 동안 배산시키고, 여과에 의해 수집하였다. 합한 물질을 감압 하에 건조시켜, 분자 17을 69% 수율로 백색 분말로 수득하였다.
반응식 14:
Figure pct00035
반응식 14에 요약된 반응을 참조하면, DMF(21㎖) 중 Boc-Cit-Paba-PNP(분자 17; 1.45g, 2.65 m㏖)의 교반된 23℃ 용액에 MMATH(분자 14; 1.2g, 1.66 m㏖) 및 HOAt(83.7㎎, 0.55 m㏖), 이어서 NMM(0.73㎖, 6.63 m㏖)을 첨가하였다. 72시간 후, 반응물을 EtOAc(200㎖)로 희석시키고, 1.0M HCl(2×100㎖)에 이어서, 포화 NaHCO3(1×100㎖) 및 염수(1×100㎖)로 세척하였다. 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 황색 발포물을 EtOAc 중 0% 내지 10% MeOH를 사용하는 실리카겔 상의 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 Boc-Cit-Paba-MMATH(분자 18)를 백색 발포물로서 80% 수율로 제공하였다.
반응식 15:
Figure pct00036
반응식 15에 요약된 반응을 참조하면, Boc-Cit-Paba-MMATH(분자 18, 1.2g, 1.06 m㏖)를 5분의 초음파 처리를 사용해서 MeCN(6㎖)에 용해시켰다. MeCN(6㎖) 중 Boc-Cit-Paba-MMATH(분자 18; 1.2g, 1.06 m㏖)의 교반된 23℃ 용액에 H3PO4(6㎖)를 첨가하였다. 16시간 후, 이 용액을 물(15㎖)로 희석시키고, 10M 수성 NaOH로 pH 8로 조절하였다. 수성층을 DCM(2×100㎖)으로 추출하였다. 합한 유기물을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 Cit-Paba-MMATH(분자 19)를 황색 발포물로서 98% 수율로 수득하였다.
반응식 16:
Figure pct00037
반응식 16에 요약된 반응을 참조하면, MeCN(40㎖) 중 β-homoVal(분자 20; 1000㎎, 7.62 m㏖)의 교반된 0℃ 현탁액에 4M NaOH(3.81㎖, 15.25 m㏖)를 첨가하고 나서 MeCN(10㎖) 중 묽은 ClAcCl(0.60㎖, 7.55 m㏖)을 서서히 첨가하였다(1 ㎖/분). 20분 후에, 이 반응물을 1M HCl(100㎖) 및 EtOAc(100㎖)로 희석시켰다. 수성층을 제거하고 유기층을 1M HCl(3×100㎖)에 이어서, 염수(1×100㎖)로 세척하였다. 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조질의 반응물을 0.05% 수성 TFA 중 5% 내지 98% MeCN을 용리액으로서 이용하는 Phenomex Gemini-NX 칼럼을 구비한 RP-HPLC에 의해 정제시켰다. 분자 21을 무색 오일로서 얻었다(1.14g).
반응식 17:
Figure pct00038
반응식 17에 요약된 반응을 참조하면, DMF(0.5㎖) 중 DMTMMT(55㎎, 0.14 m㏖)의 교반된 0℃ 용액에 DIPEA(100㎕, 0.57 m㏖)에 이어서 H2N-Cit-Paba-MMATH(분자 19; 105㎎, 0.1 m㏖)를 첨가하였다. 이 반응물을 5분 동안 교반 후, ClAc-β-homoVal(분자 21; 30㎎, 0.14 m㏖)을 첨가하였다. 1시간 후에, 조질의 용액을 0.05% 수성 TFA 중 5% 내지 98% MeCN을 용리액으로서 이용하는 Phenomenex Gemini 10μ, C18 110Å 칼럼을 구비한 분취 RP-HPLC에 의해 정제시켰다. MMATH-L-Cl(분자 22)을 백색 분말로서 얻었다(114㎎, 91%).
본 개시내용의 다른 실시형태에서, MMATH 링커-독소 조합물은, 클로로기가 브로모기(분자 23) 또는 아이오도기(분자 24)로 대체된, 분자 22의 브로모- 및 요오도- 유도체를 포함하며, 여기서 "페이로드"는 독소를 나타낸다. 본 개시내용의 몇몇 실시형태에서, 독소는 N-말단 질소를 통해서 연결된 MMATH(분자 22)이다.
Figure pct00039
본 개시내용의 몇몇 실시형태에서, 분자 23, 24 또는 25의 페이로드는 독소와 같은 제제로 표시될 수 있다.
본 개시내용의 몇몇 실시형태에서, 화합물은 분자 26으로 표시되는데, 여기서 페이로드는 독소와 같은 제제를 나타내고, R은 표적-결합 모이어티, 예컨대, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 유리티올기를 통한 임의의 다른 분자를 나타낸다.
Figure pct00040
실시예 3: 아우리스타틴 종의 시험관내 세포독성
이 예시적인 연구에서, 시험관내 세포독성은 본 개시내용의 아우리스타틴 종인 화학식 (I)로 본 명세서에 나타낸 바와 같은 MMATH(아우리스타틴의 티오페닐메틸 하이드록시메틸 유도체)의 상대적 독성을 평가하는데 사용하였다.
이 검정에서, 시험 세포를 플레이팅하고 적절한 세포 밀도(예컨대, SW780 세포의 경우 1500 세포/웰(50㎕/웰))로 성장시켰다. 세포를 약물(MMATH 또는 MMAE (모노메틸아우리스타틴 E))로 10μM 내지 10-4nM의 범위의 농도로 5일 동안 3회 처리하였다. 제6일 종말점에, 세포를 20㎕의 Presto Blue와 37C에서 2시간 동안 인큐베이션하고, 신호를 Biotek synergy H4 플레이트 리더 상에서 판독하였다. 배지 배경을 차감한 후에, 퍼센트 생존율을 계산하고 플로팅하여, 표 1의 예시적인 결과에 나타낸 바와 같은 EC50을 결정하였다.
표 1: 아우리스타틴 종의 시험관내 세포독성
Figure pct00041
예시적인 연구에서, MMAE 및 MMATH의 튜블린에의 결합을 측정하여, 69.9nM(MMAE) 및 204.4nM(MMATH)의 KD를 나타내었다. 예시적인 결과는, 신규한 MMATH 아우리스타틴 종이 MMAE에 대한 필적할 만한 독성을 가진 것을 나타낸다. 이들 예시적인 결과는 또한 이 필적할 만한 시험관내 효능이 효능에 대한 추정되는 분자 표적인 튜불린에 대한 더 낮은 친화도를 갖는 분자로 달성되었다.
실시예 4: 링커 종의 안정성
이 예시적인 연구에서, 시험관내 연구는 발린-시트룰린(vc) 링커와 비교해서 본 개시내용의 링커(분자 26)의 안정성을 평가하기 위하여 사용되었다.
이 연구에서, 2개의 상이한 시스테인-접합된 약물 링커에 대한 다양한 카텝신에 의한 절단의 상대적인 운동 속도를 LCMS에 의해 측정하였다. 효소(카텝신 B, D, H, K, L 및 S)는 기질에 도입되기 전에 활성화되었다. 하나의 기질은 발린-시트룰린-PAB-카복시 링커(CAS 번호: 646502-53-6)를 통해 시스테인에 연결된 아우리스타틴 MMAE였고, 다른 하나는 분자 26의 링커를 통해서 시스테인에 연결된 본 개시내용의 MMATH 아우리스타틴(분자 14)이었다.
2개의 상이한 티올-연결된 시스테인-연결된 아우리스타틴(MMATH-L-Cys 및 Cys-vc-MMAE)을 48시간 기간에 걸쳐서 사전 활성화된 요소와 함께 37℃에서 인큐베이션하였다. 시점은 2M, pH 9 Tris 완충제로 직접 분취하여 효소 활성을 정지시키고, 이어서 -80℃까지 즉시 동결시켰다. 각각에 대해서 유리 약물 및 시스테인-연결된 약물 둘 다의 MS XIC의 AUC를 시간 경과에 따라서 모니터링하였다. 모든 샘플은 Dionex LC 프런트 엔드를 사용하는 Thermo LTQ Velos OrbiTrap 질량 분석계 상에서 실행하였다. 원래의 시스테인-연결된 약물, 유리 약물 및 절단된 "링커" 스텁(stub)의 양을 시간 경과에 따라서 측정하였다.
도 2A 및 도 2B를 참조하면, 예시적인 결과는 분자 26의 링커로 MMATH에 연결된 시스테인이 vcMMAE에 연결된 대응하는 시스템보다 더 높은 안정성을 보였음을 나타낸다. 카텝신 H, D, L, K 및 S에 의한 결과에서, 결과는 모든 카텝신에 대해서 두 링커 사이에 유사한 상대적 안정성을 나타내었다. 카텝신 D 및 L은 카텝신 B와 필적할 만한 속도로 절단한 반면, 카텝신 H는 카텝신 B보다 비교적 더 느리게 절단하였다. 카텝신 K 및 S는 카텝신 B보다 비교적 더 빠르게 절단하였다.
또 다른 예시적인 연구에서, 2개의 시스테인-연결된 아우리스타틴 종의 안정성은 활성화된 리소좀-유도 용해물에서 시험되었다. 이 연구에서, 리소좀은 3회 연속 동결/해동 사이클에 의해 용해된 후에, 30분의 초음파 처리되었다. 시스테인-연결된 아우리스타틴을 24시간 기간에 걸쳐서 사전 활성화된 리소좀과 함께 37℃에서 인큐베이션하였다. 이 연구에서, 시스테인-MMATH-L 기질을 5× 리소좀 농도로 인큐베이션하였다. 시점은 인큐베이션 전체를 통해서 취해졌고, 유리 약물 및 cys-DL 둘 다에 대한 MS XIC의 AUC를 시간 경과에 따라서 모니터링하였다. 모든 샘플은 Dionex LC 프런트 엔드를 사용하는 Thermo LTQ Velos OrbiTrap 질량 분석계 상에서 실행하였다. 원래의 시스테인-연결된 약물, 유리 약물 및 절단된 "링커" 스텁의 양을 시간 경과에 따라서 측정하였다.
도 3A 및 도 3B를 참조하면, 예시적인 결과는 분자 26의 링커로 MMATH에 연결된 시스테인이 vcMMAE에 연결된 대응하는 시스테인보다 활성화된 리소좀에서 필적할 만한 안정성을 나타냈고, 심지어 전자는 5× 리소좀 농도로 처리되어서, vcMMAE 링커보다 약 5배 느린 속도를 나타내는 것을 보여준다.
추가의 예시적인 연구에서, 기질의 안정성은 4가지 상이한 카복실에스테라제(인간 또는 마우스 CES-1 및 CES-1C)의 존재 하에 결정되었다. 이 연구에서, 효소를 기질 도입 전에 활성화시키고, 이어서 48시간 기간에 걸쳐서 37℃에서 기질과 함께 인큐베이션하였다. 시점은 2M, pH 9 Tris 완충제로 직접 분취하여 효소 활성을 정지시키고, 이어서 -80℃까지 즉시 동결시켰다. 각각에 대해서 유리 약물 및 시스테인-연결된 약물 둘 다에 대한 MS XIC의 AUC를 시간 경과에 따라서 모니터링하였다. 모든 샘플은 Dionex LC 프런트 엔드를 사용하는 Thermo LTQ Velos OrbiTrap 질량 분석계 상에서 실행하였다. 원래의 시스테인-연결된 약물, 유리 약물 및 절단된 "링커" 스텁의 양을 시간 경과에 따라 측정하였다.
CES-1 또는 CES-1C 마우스 또는 인간 카복실에스테라제를 사용하는 이 연구에서, 인간 또는 마우스 CES-1에 의한 기질 절단은 관찰되지 않았다. 그러나, 시스테인-vcMMAE는 인간 및 마우스 CES-1C 둘 다에 의해 48시간에 완전히 절단되었다. 본 개시내용의 MMATH-링커의 경우, 마우스 또는 인간 CES-1C에 의한 절단은 대략 12시간에 시작되고, vcMMAE로 관찰된 것보다 상당히 더 느린 속도로 시작된다.
이들 예시적인 결과는 분자 26의 링커가 활성화된 효소 및 리소좀 둘 다에서 발린-시트룰린 링커보다 더 높은 안정성을 갖는다는 것을 나타낸다. 이들 예시적인 결과는 분자 26의 링커-MMATH가 활성화된 효소 및 리소좀 둘 다에서 vcMMAE보다 더 높은 안정성을 갖는다는 것을 나타낸다.
실시예 5: 신규한 항체 접합 부위
이 예시적인 연구에서, 류신 잔기는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역의 FG-루프에 위치되었다. 참조로, 당해 류신은 서열 KVSNKALPAPI의 맥락(즉, 위치 328 카밧 넘버링)에서 발견되었다. 본 개시내용에서, 이 위치에서의 류신은 시스테인으로 부위-특이적으로 변형되었다, 즉, KVSNKACPAPI.
이 연구에서는, 약물 접합 및 기타 효과에 대한 적합성을 결정하기 위하여, 표적 HER2에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 트라스투주맙을 이 위치에서 류신으로부터 시스테인으로 변형시켰다. 천연 트라스투주맙과 본 개시내용의 변형된 버전 간의 비교는 하기에 제시되어 있다.
Figure pct00042
이들 예시적인 결과는 원래의 항체와 비교하여 본 개시내용의 L328C 변이체의 Fcγ 수용체에 대한 결합의 현저한 감소를 나타내면서, 대략 2의 특이적 DAR을 초래하지만 매우 효율적인 접합, 즉, 1% 미만의 접합된 항체를 초래한다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 이 돌연변이의 다른 예(항-PSMA 및 항-SLC34A2 항체)
이들 예시적인 결과는, 특정 화학량론과의 접합을 위한 효율적이고 제어된 부위를 제공하기 위해, 이러한 부위-특이적 변형을 갖는 항체 또는 활성화가능한 항체를 사용하는 이점을 입증한다.
실시예 6: 예시적인 접합 방법
본 실시예에서, 예시적인 접합 방법은 본 개시내용의 아우리스타틴 MMATH를 항체 분자에 접합시키는 것으로 기재되어 있다.
도 4의 예시적인 공정 흐름도를 참조하면, 본 개시내용의 예시적인 방법에서, 카밧 위치 328에 시스테인 잔기를 가진 항체는 7.2의 pH에서 14 g/ℓ의 농도로 제공된다. 항체 용액을 여과시키고, 이어서 환원제인 트리스(2-카복시에틸)포스핀(TCEP)으로 9:1 TCEP:항체 몰비로 20℃에서 80 내지 120분 동안 환원시켰다. 이 반응물을 접선 유동 여과(TFF)에 의해 8 투과부피(diavolume)로 여과시키고, 12 g/ℓ로 회수하였다. 항체를 (L)-데하이드로아스코르브산(DHA)로 10:1 DHA:항체 몰비로 20℃에서 90분 동안 재산화시켰다.
R2가 염소인 화학식 (III)을 가진 MMATH 링커-독소 화합물을 요오드화나트륨으로 활성화시켰다. 활성화된 링커-독소를 재산화된 항체에 9:1 링커-독소:항체 몰비로 20℃에서 12 내지 16시간 동안 재산화시켜 항체에 대한 링커-독소의 접합을 허용하였다. 이 반응 혼합물을 TFF에 의해 10 투과부피로 여과시키고, 17 g/ℓ로 회수하였다. 접합된 항체의 분석은 2의 DAR로 카밧 328 시스테인 위치에서 부위-특이적 접합을 나타내었다.
이들 예시적인 결과는 본 개시내용의 아우리스타틴 유도체가 부위-특이적 방식으로 항체에 접합되어 항체-약물 접합체를 2의 DAR로 제공할 수 있음을 나타내었다.
이들 예시적인 결과는 또한 링커-독소를 카밧 위치 328에서 부위-특이적 시스테인에 접합시킴으로써, 시스테인 티올기에 링커-독소의 요오드-활성화된 커플링을 사용해서 접합을 진행시킬 수 있음을 나타내었다. 이 방식에서, 접합된 생성물은 티올-말레이미드 접합체보다 탈접합 반응에 덜 민감하고, 후자는 티올 교환에 의해 더욱 용이하게 역전되어, 링커-독소의 바람직하지 않은 방출을 초래할 수 있다. 카밧 위치 328에서의 것과 같은 링커-독소 접합을 위한 부위-특이적 시스테인을 가진 항체의 사용은 또한 2의 DAR로 접합된 항체 생성물을 제공한다. 부위-특이적 시스테인 잔기, 예컨대, 카밧 위치 328에서의 것을 가진 이러한 항체의 사용은, 또한 항체의 천연 사슬내 또는 사슬간 다이설파이드 결합의 파괴 없이 항체에 링커-독소 접합을 허용한다.
기타 실시형태
본 발명이 이의 상세한 설명과 함께 기재되었지만, 전술한 설명은 첨부된 청구범위의 범위에 의해 정의되는 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니라 예시하는 것으로 의도된다. 기타 양상, 이점 및 변형은 다음의 청구범위의 범주 내이다.
SEQUENCE LISTING <110> CytomX Therapeutics, Inc. <120> Auristatin-Related Compounds, Conjugated Auristatin-Related Compounds, and Methods of Use Thereof <130> CYTX-070-PCT <140> PCT/US2021/012364 <141> 2021-01-06 <150> US 62/957,780 <151> 2020-01-06 <160> 72 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic 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caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720 ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780 cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900 cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960 aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagcct gcccagcccc catcgagaaa 1020 accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080 cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag 1260 agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320 cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa 1359 <210> 36 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 36 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggaat cacctttagt 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 65 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Val Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 66 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 66 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ile Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Val Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 67 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 67 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ser Gly Val Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Phe Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ile Thr Gly Ala Pro Leu Val Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Cys Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 68 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 68 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His 20 25 30 Ile Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Ser Asn Gly Leu Ser Ser Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Leu Leu Tyr 65 70 75 80 Val His Met Gly Ser Leu Lys Pro Glu Asp Met Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Arg Asp Arg Val Pro Ala Val Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Cys Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 69 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 69 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc aggtttttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaggtcct gatctatgtt acatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag agttacaata cccctatcac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa acggactgtc gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 70 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 70 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctataggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattggc acctttttaa attggtatca acaaaaacca 120 gggaaagccc ctaaggtcct gatctatgtt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcattg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagtg ttccgatcac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa acggactgtc gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 71 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 71 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agttatgtta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggaata tgtttcaggt gttagtagta gtggggatag cacattttat 180 gtagactctg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctttat 240 cttcaaatgg gcagcctgag agctgaggac atggctgtgt attactgtgc gagagggggt 300 ataactggag ctccactggt ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360 tcagcatcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660 cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gcctgcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353 <210> 72 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 72 gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc tgggtccagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agtcatatta tgtactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggaata tgtttcgggt attagcagta atggacttag ctcatattat 180 gttgactctg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa tttactgtat 240 gttcatatgg gcagcctgaa acctgaggac atggctatgt attactgtgc gagagggggc 300 cgggatagag tgccagctgt ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tccgcttcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660 cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gcctgcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353

Claims (58)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물:
    Figure pct00043

    식 중, R1은 수소 또는 C1-6 알킬기이고;
    R은 수소, C1-6 알킬, 링커 또는 X1-Y1-*기로 이루어진 군으로부터 선택되되, *는 질소에 대한 부착점이고; 그리고
    Y1은 옥시카보닐기이고, X1은 C1-6 알킬기, 9-플루오레닐메틸기, 벤질기 또는 tert-부틸기이다.
  2. 제1항에 있어서, R1은 메틸기이고 그리고 R은 수소인, 화합물.
  3. 제1항에 있어서, X1-Y1은 9-플루오레닐메톡시카보닐(Fmoc)기인, 화합물.
  4. 하기 화학식 (II)의 화합물:
    Figure pct00044

    식 중, R3은 화학식 (II)에 부착된 제제이되, 부착점은 질소, 황, 산소 또는 탄소 원자이고; 그리고
    R2는 화학식 (II)에 부착된 모이어티이되, 부착점은 염소기, 요오드기, 브로민기 및 티올기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  5. 제4항에 있어서, R2는 표적-결합 모이어티이고, R2에서의 상기 부착점은 티올기인, 화합물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 티올기는 시스테인 잔기의 측쇄 티올기인, 화합물.
  7. 하기 화학식 (III)의 화합물:
    Figure pct00045

    식 중, R2는 화학식 (III)에 부착된 모이어티이되, 부착점은 염소기, 요오드기, 브로민기 및 티올기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  8. 제7항에 있어서, R2는 표적-결합 모이어티이되, R2에서의 부착점은 티올기인, 화합물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 티올기는 시스테인 측쇄 티올기인, 화합물.
  10. 제4항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적-결합 모이어티는 상기 표적에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB)인, 화합물.
  11. 제4항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적-결합 모이어티는, 활성화된 상태에서, 상기 표적에 특이적으로 결합하는 활성화 가능한 항체이고, 상기 활성화 가능한 항체는,
    상기 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB);
    상기 AB에 커플링된 마스킹 모이어티(MM)로서, 상기 활성화 가능한 항체가 미절단 상태에 있을 때 상기 표적에 대한 상기 AB의 결합을 저해하는, 상기 MM; 및
    상기 AB에 커플링된 절단 가능한 모이어티(CM)로서, 프로테아제에 대해서 기질로서 기능하는 폴리펩타이드인, 상기 CM
    을 포함하는, 화합물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 MM은 표적에 대한 상기 AB의 해리 상수보다 더 큰 상기 AB에 결합하기 위한 해리 상수를 갖는, 화합물.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 MM은 상기 활성화 가능한 항체가 절단된 상태에 있을 때 표적에 결합하기 위한 상기 AB를 방해하지 않거나 또는 이와 경쟁하지 않는, 화합물.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MM은 40개 이하의 아미노산 길이를 가진 폴리펩타이드인, 화합물.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MM 폴리펩타이드 서열은 표적 서열의 것과는 상이한, 화합물.
  16. 제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MM 폴리펩타이드 서열은 상기 AB의 임의의 천연 결합 상대와 50% 이하 동일한, 화합물.
  17. 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적은 CD44, CD147, CD166, ITGa3, ITGb1, PSMA 및 SLC34A2로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
  18. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 아우리스타틴 E, 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF), 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 D(MMAD), 메이탄시노이드 DM4, 메이탄시노이드 DM1, 칼리키아마이신, 두오카마이신, 피롤로벤조다이아제핀 및 피롤로벤조다이아제핀 이량체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
  19. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R은 링커인, 화합물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 링커는 절단 가능한 링커인, 화합물.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 상기 링커는 표적-결합 모이어티에 연결되는, 화합물.
  22. 제21항에 있어서, 상기 표적-결합 모이어티는 상기 표적에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB)인, 화합물.
  23. 제21항에 있어서, 상기 표적-결합 모이어티는, 활성화된 상태에서, 상기 표적에 특이적으로 결합하는 활성화 가능한 항체이고, 상기 활성화 가능한 항체는,
    상기 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB);
    상기 AB에 커플링된 마스킹 모이어티(MM)로서, 상기 활성화 가능한 항체가 미절단 상태에 있을 때 상기 표적에 대한 상기 AB의 결합을 저해하는, 상기 MM; 및
    상기 AB에 커플링된 절단 가능한 모이어티(CM)로서, 프로테아제에 대해서 기질로서 기능하는 폴리펩타이드인, 상기 CM
    을 포함하는, 화합물.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적은 CD44, CD147, CD166, ITGa3, ITGb1, PSMA 및 SLC34A2로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
  25. 제10항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 활성화 가능한 항체는 카밧(Kabat) 위치 328에서 시스테인 잔기를 포함하는, 화합물.
  26. 카밧 위치 328이 시스테인인, IgG1 항체.
  27. 활성화 가능한 항체로서,
    표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB);
    상기 AB에 커플링된 마스킹 모이어티(MM)로서, 상기 활성화 가능한 항체가 미절단 상태에 있을 때 상기 표적에 대한 상기 AB의 결합을 저해하는, 상기 MM; 및
    상기 AB에 커플링된 절단 가능한 모이어티(CM)로서, 프로테아제에 대해서 기질로서 기능하는 폴리펩타이드인, 상기 CM
    을 포함하되, 상기 AB의 카밧 위치 328은 시스테인인, 활성화 가능한 항체.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, 상기 항체 또는 상기 AB는 CD44, CD147, CD166, ITGa3, ITGb1, PSMA 및 SLC34A2로 이루어진 군으로부터 선택된 표적에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 활성화 가능한 항체.
  29. 약제학적 조성물로서,
    제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 화합물, 항체 또는 활성화 가능한 항체; 및 적합한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  30. 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법으로서,
    하기 화학식 (I)의 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 단계를 포함하되:
    Figure pct00046

    식 중, R1은 수소 또는 C1-6 알킬기이고;
    R은 수소, C1-6 알킬, 링커 또는 X1-Y1-*기로 이루어진 군으로부터 선택되되, *는 질소에 대한 부착점이고; 그리고
    Y1은 옥시카보닐기이고, X1은 C1-6 알킬기, 9-플루오레닐메틸기, 벤질기 또는 tert-부틸기이고;
    적어도 1당량의 상기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 유도체가 상기 폴리펩타이드에 접합되는, 방법.
  31. 제30항에 있어서, R1은 메틸기이고, R은 수소인, 방법.
  32. 제30항에 있어서, X1-Y1은 9-플루오레닐메톡시카보닐(Fmoc)기인, 방법.
  33. 제30항에 있어서, R은 링커인, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 링커는 절단 가능한 링커인, 방법.
  35. 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법으로서, 하기 화학식 (III)의 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 단계를 포함하는, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법:
    Figure pct00047

    식 중, R2는 화학식 (III)에 부착된 모이어티이되, 부착점은 염소기, 요오드기, 브로민기 및 티올기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  36. 제35항에 있어서, 상기 R2는 할로겐기인, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 R2는 요오드기인, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  38. 제36항에 있어서, 상기 R2는 브로민기인, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  39. 제36항에 있어서, 상기 R2는 염소기인, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  40. 제30항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I) 또는 (III)의 저어도 하나의 화합물은 상기 폴리펩타이드 상의 티올기를 통해서 상기 폴리펩타이드에 접합되는, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  41. 제40항에 있어서, 상기 티올기는 상기 폴리펩타이드의 시스테인 잔기의 측쇄 티올기인, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  42. 제30항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 표적-결합 모이어티를 포함하는, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  43. 제30항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB)을 포함하는, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 시스테인 잔기는 상기 AB의 카밧 위치 328에 있는, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  45. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은,
    (i) 상기 폴리펩타이드를 환원제로 환원시키는 단계로서, 적어도 하나의 다이설파이드기는 유리티올기로 환원되는, 상기 환원시키는 단계;
    (ii) 상기 유리 티올기를 산화시키는 일 없이 상기 폴리펩타이드를 산화제로 재산화시키는 단계; 및
    (iii) 상기 화학식 (I) 또는 (III)의 화합물을 상기 유리 티올기에 접합시키는 단계
    를 포함하는, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 상기 환원제는 TCEP인, 화합물을 폴리펩타이드에 접합시키는 방법.
  47. 하기 화학식을 갖는 접합된 폴리펩타이드:
    [T] - [L] - [C];
    식 중, [T]는 표적-결합 모이어티이고, [L]은 링커 모이어티이고; 그리고
    [C]는 하기 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 화합물이다:
    (I)
    Figure pct00048

    식 중, R1은 수소 또는 C1-6 알킬기이고; 그리고
    R은 [L]에 대한 부착점이다.
  48. 제47항에 있어서, R1은 메틸기인, 접합된 폴리펩타이드.
  49. 하기 화학식을 갖는 접합된 폴리펩타이드:
    [T] - [LC]
    식 중, [T]는 표적-결합 모이어티이고, [LC]는 링커-독소이고; 그리고
    [LC]는 하기 화학식 (III)의 화합물을 포함하는 화합물이다:
    Figure pct00049

    식 중, R2는 [T]에 대한 부착점이다.
  50. 제47항 또는 제48항에 있어서, 상기 링커 [L]은 절단 가능한 링커인, 접합된 폴리펩타이드.
  51. 제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 [L] 또는 상기 링커-독소 [LC]는 상기 표적-결합 모이어티 상의 티올기를 통해서 상기 표적-결합 모이어티 [T]에 커플링되는, 접합된 폴리펩타이드.
  52. 제51항에 있어서, 상기 티올기는 상기 표적-결합 모이어티 상의 시스테인 잔기의 측쇄 티올기인, 접합된 폴리펩타이드.
  53. 제47항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적-결합 모이어티 [T]는 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(AB)을 포함하는, 접합된 폴리펩타이드.
  54. 제53항에 있어서, 상기 시스테인 잔기는 상기 AB의 카밧 위치 328에 있는 시스테인 잔기인, 접합된 폴리펩타이드.
  55. 질환 또는 장애를 가진 대상체를 치료하는 방법으로서,
    치료를 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물, 제29항의 약제학적 조성물 또는 제47항 내지 제54항 중 어느 한 항의 접합된 폴리펩타이드를 포함하는, 유효량의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 가진 대상체를 치료하는 방법.
  56. 질환 또는 장애를 치료하기 위한, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물, 제29항의 약제학적 조성물, 또는 제47항 내지 제54항 중 어느 한 항의 접합된 폴리펩타이드.
  57. 질환 또는 장애를 치료하기 위한 의약의 제조에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물, 제29항의 약제학적 조성물 또는 제47항 내지 제54항 중 어느 한 항의 접합된 폴리펩타이드.
  58. 제55항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암인, 방법.
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