KR20220119394A - Tslp-관련 질환에 대한 치료제의 개발 및 적용 - Google Patents

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Abstract

TSLP 단백질에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분, 그의 제조 방법 및 그의 적용이 제공된다. 항체는 인간 TSLP 및/또는 사이노몰구스 마카크 TSLP에 높은 친화도로 결합하고, TSLP 및 TSLPR의 결합을 차단하며, STAT5 경로를 통한 TSLP 자극 신호의 전달을 억제할 수 있다.

Description

TSLP-관련 질환에 대한 치료제의 개발 및 적용
본 발명은 TSLP 단백질을 인식하는 항체, 및 그의 제조 방법 및 적용에 관한 것이다.
흉선 기질상 림포포이에틴(TSLP: Thymic stromal lymphopoietin)은 인터류킨-7 사이토카인 계열의 사이토카인이다. 이는 피부, 장관 또는 폐에 위치한 상피 세포와 각질 세포에서 주로 생성되며 점막면역계의 안정성을 유지하는데 관여한다. 알레르겐 또는 병원체에 의한 상피 조직의 자극 또는 파괴 시, 수지상 세포는 미감작(naive) CD4+ T 세포에 항원을 제시하여 상피 세포 인자, TSLP 및 IL-33을 방출한다. 이러한 중요한 공동-자극 사이토카인은 알레르겐 특이적 TH2 세포의 발달을 유도하고, 이어서 사이토카인 인터류킨 IL-4, IL-5 및 IL-13을 생성한다. 이러한 TH2 유래 사이토카인 그룹은 알레르기 질병의 발병기전에 중요한 역할을 한다.
TSLP는 DC 세포, CD4 및 CD8+ T 세포, B 세포, 비만 세포, 호염기구, 호산구 및 NKT 세포를 포함한 면역 세포 표면 상의 다양한 TSLPR/IL-7Ra 수용체를 통해 생물학적 기능을 발휘할 수 있는 다기능 사이토카인이다[지글러(Ziegler SF)의 문헌(2013)]. TSLP는 미성숙 수지상 세포(iDC: immature dendritic cell) 활성화를 자극하고, 항원 제시를 증가시키며, IL-8(인터류킨 8 또는 다르게는 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 8(CXCL 8)로 알려짐), 에오탁신(eotaxin) 2(또는 다르게는 케모카인(C-C 모티프) 리간드 24(CCL 24)로 알려짐), TARC(흉선 및 활성화 조절된 케모카인 또는 다르게는 케모카인(C-C 모티프) 리간드 17(CCL 17)로 알려짐) 및 MDC(대식세포 유래 케모카인 또는 다르게는 케모카인(C-C 모티프) 22(CCL 22)로 알려짐)를 생성하고, 호산구, 호중구 및 Th2 세포 응집을 유인하며; TSLP는 TSLP에 의해 유도된 DC 세포에 의한 OX40L의 발현에 의존하는, 미감작 T 세포의 TH2 세포로의 분화를 촉진할 수 있으며; TSLP는 비만 세포 증식을 유도하고, 호산구의 수명 주기를 연장하며, 특히 염증성 사이토카인 및 케모카인을 방출할 수 있고; TSLP는 또한 점막 면역 세포의 또 다른 중요한 그룹인 그룹 2 선천성 림프 세포(ILC2: group 2 innate lymphoid cell)를 자극하여 Th2 사이토카인 IL-4, IL5 및 IL-13을 분비하며, 생체 내에서 피부 염증을 촉진할 수 있다. 평활근 세포는 또한 TSLP에 의해 자극된 후 IL-8과 에오탁신을 분비한다. TSLP는 또한 ILC2, 비만 세포, 자연 살해 세포 및 호산구를 포함한 다양한 선천성 면역 세포의 사이토카인 생성을 증가시키고 호염기구 하위집합의 발달 및 기능을 촉진하는 것으로 입증되었다. 따라서, TSLP는 염증 캐스케이드(cascade)의 개시제 중 하나일 수 있고, TSLP의 억제는 염증의 초기 단계부터 개입하고, 이에 따라 면역 세포에 의한 전염증성 사이토카인의 방출을 방지할 수 있으며, 이는 IL-4, IL-5 및 IL-13 단독의 억제보다 더 효과적이다.
TSLP는 JAK/STAT(JAK 키나아제-신호 전달기 및 전사의 활성화제) 경로를 통해 신호를 전달한다. TSLP는 세포막의 TSLPR에 결합한 다음 IL-7Rα에 결합하여 안정적인 TSLP-TSLPR-IL7Rα 수용체 복합체를 형성하고, 여기서 TSLPR 수용체의 세포내 분절은 JAK2를 모집하여 활성화하고 IL7Rα에 의해 모집된 JAK1과 상호작용하여 다운스트림 신호전달 분자를 활성화한다. 연구에 따르면 인간 말초 혈액에서 유래된 CD11c+ DC 세포에서 TSLP는 STAT1, STAT3, STAT4, STAT5 및 STAT6과 같은 여러 STAT 신호전달 분자를 활성화할 수 있으며, 여기서 STAT5 활성화 신호는 TH2 세포 분화 및 TH2 인자의 분비를 촉진하는 핵심이다. 또한, TSLP에 의해 자극된 JAK/STAT5 신호전달 경로의 활성화는 ILC2 세포가 글루코코르티코이드의 억제 효과에 반응하지 않도록 만들 수 있으며, 이는 TSLP의 억제가 환자의 글루코코르티코이드에 대한 감수성을 회복하는 데 도움이 될 수 있음을 시사한다.
TSLP는 타입 II 염증성 질환의 발생과 밀접한 관련이 있다. 연구에 따르면 TSLP는 아토피 피부염 환자의 손상된 피부에서 풍부하게 발현되지만 손상되지 않은 피부에서는 검출되지 않는다. 건강한 대조군보다 폐포 세척 샘플에서 TSLP 농도가 더 높은 천식 및 만성 폐쇄성 폐질환(COPD: chronic obstructive pulmonary disease) 환자의 폐 상피 및 점막하에서도 많은 수의 TSLP mRNA 양성 세포가 검출되었다. 천식 환자에서 TSLP의 발현 수준은 TH2 사이토카인 및 케모카인의 발현과 직접적인 상관관계가 있지만 환자가 유지하는 폐 기능 상태와는 음의 상관관계가 있다. 알레르기 비염 환자의 생검에서 비강 상피에서 TSLP의 증가된 발현이 발견되었고 상피 관련 조직에서 TH2 사이토카인 생성 및 호산구 침윤과 상관관계가 있었다.
TSLP 및 TSLPR의 유전적 다형성은 호산구성 식도염(EoE: eosinophilic esophagitis)의 발병기전과 관련이 있다. EoE 환자의 식도 샘플에서 TSLP의 높은 발현과 증가된 비율의 호염기구(lin-, CD49b+, FcεRI+, c-kit-, 2D7+)가 검출되었다. 흥미롭게도 마우스 EoE 모델은 TSLP와 호염기구에 의존적이지만 IgE에는 의존적이지 않다. TSLP 중화 항체의 사용 또는 호염기구 소거는 모두 EoE 증후를 줄이는 데 효과적이며, 이는 IgE보다 TSLP-호염기구의 억제가 EoE 치료에 효과적인 접근법일 수 있음을 시사한다.
또한, 연구에 따르면 TSLP는 류마티스 관절염 및 다발성 경화증과 같은TH1/TH17 관련 자가면역 질환에 기여할 수 있다. 류마티스 관절염 환자의 관절에서 TSLP 및 TSLPR을 발현하는 세포가 증가한다. 프로테오글리칸-유도된 류마티스 관절염 마우스 모델에서 TSLPR 결핍 마우스는 IL-17, IL-1β 및 IL-6의 수준 감소, INFγ 및 IL-10의 수준 증가, 및 질병 증후 감소를 나타낸다. 이러한 결과는 TSLP와 그의 수용체가 류마티스 관절염을 치료하기 위한 새로운 치료 표적이 될 수 있음을 시사한다.
본 발명자들은 재조합 TSLP 단백질, 유전자 총(gene gun), 또는 이들의 조합으로 마우스를 면역화하여 인간 및 사이노몰구스 마카크(Cynomolgus macaque) TSLP 재조합 단백질을 인식하는 고 친화도 항체의 다수의 균주를 수득하였다. 높은 친화도를 갖는 본 개시내용의 항체는 TSLP가 그의 수용체 TSLPR에 결합하는 것을 효과적으로 차단할 수 있고, 리포터 세포에서 TSLP-유도된 STAT5 신호 전달을 차단할 수 있으며, 동시에 TSLP-유도된 세포 증식을 차단할 수 있고, 여기서 차단 효율은 동일한 유형의 다른 항체에 비해 높아서 알레르기성 염증성 질환의 진단 및 치료에 사용될 수 있다.
한 양태에서, 본 개시내용은 TSLP 단백질에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 임의의 전술된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산을 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 전술된 양태의 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 전술된 양태의 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
전술된 양태들 중 어느 하나에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 제공되며, 여기서 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 인간화된다.
한 양태에서, 본 개시내용은 임의의 전술된 양태에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 이를 코딩하는 핵산 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물 또는 키트를 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 포유동물에게 치료 유효량의 임의의 전술된 양태에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 핵산 분자, 또는 벡터, 또는 세포 및/또는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, TSLP-관련 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
포유동물에서 TSLP-관련 질환을 치료하기 위한 약제 또는 키트의 제조에서의 임의의 전술된 양태의 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 핵산 분자 또는 벡터, 및/또는 세포 또는 약학적 조성물의 용도가 제공된다.
항체는 인간 TSLP 및/또는 사이노몰구스 마카크 TSLP에 고 친화도로 결합하고, TSLP와 TSLPR의 결합을 차단하며, STAT5 경로를 통한 TSLP 자극 신호의 전달을 억제할 수 있다.
도 1은 원핵 세포에서의 TSLP 단백질의 재조합 발현을 예시한다.
도 2는 HEK 293 세포에서의 TSLP 단백질의 재조합 발현을 예시한다.
도 3은 ELISA 분석에 의한 수용체 TSLPR에 대한 TSLP 재조합 단백질의 결합을 예시한다.
도 4는 Ba/F3-hTSLPR 세포의 FACS 분석을 예시한다.
도 5는 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포의 증식 분석을 예시한다.
도 6은 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα-STAT5 luc 세포의 리포터 유전자 분석을 예시한다.
도 7은 ELISA 분석에 의한 키메라 항체의 결합을 예시한다.
도 8은 ELISA 분석에 의한 키메라 항체의 차단을 예시한다.
도 9는 세포 수준에서의 키메라 항체의 차단을 예시한다.
도 10은 세포 증식에 대한 키메라 항체의 억제를 예시한다.
도 11은 리포터 유전자 발현에 대한 키메라 항체의 억제를 예시한다.
도 12는 ELISA 분석에 의한 인간 및 사이노몰구스 마카크에서의 TSLP에 대한 인간화 항체의 결합을 예시한다.
도 13은 ELISA 분석에 의한 인간화 항체의 차단을 예시한다.
도 14는 세포 수준에서의 인간화 항체의 차단을 예시한다.
도 15는 세포 증식에 대한 인간화 항체의 억제를 예시한다.
도 16은 리포터 유전자 발현에 대한 인간화 항체의 억제를 예시한다.
I. 정의
달리 명시되지 않는 한, 본 개시내용에서 사용되는 과학 기술 용어는 당업계의 숙련가에게 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 또한, 본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에 사용된 단백질 및 핵산 화학, 분자 생물학, 세포 및 조직 배양, 미생물학, 면역학 및 실험실 절차는 해당 분야에서 널리 사용되는 용어 및 일상적인 절차이다. 한편, 이하에서는 본 발명을 보다 잘 이해하기 위하여 관련 용어에 대한 정의 및 설명을 제공한다.
한 양태에서, TSLP 및 그의 항원 결합 단편에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, 단일클론성 항체)가 본원에 제공된다. 특정 양태에서, TSLP에 특이적으로 결합하는 항-TSLP 단일클론성 항체가 본원에 제공되며, 여기서 항-TSLP 항체는 모 항체의 변이체를 포함한다. 특정 양태에서, TSLP(예를 들어, 인간 TSLP)에 특이적으로 결합하는 항체가 본원에 제공된다. 특정 양태에서, 변형이 없는 모 항체와 비교하여 항원에 대한 친화도를 보유하는 1개 이상의 아미노산 잔기의 변형(예를 들어, 중쇄 가변성 영역의 골격구조 영역에서의 5 내지 13개 아미노산 치환)을 포함하는 항-TSLP 항체가 본원에 제공된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약" 또는 "대략"은 달리 명시되지 않는 한 주어진 값 또는 범위의 ± 10% 이내를 의미한다. 정수가 필요한 경우 해당 용어는 주어진 값 또는 범위의 ± 10% 이내의 정수, 가장 가까운 정수로 반올림 또는 내림한 정수를 나타낸다.
항체 쇄 폴리펩티드 서열과 관련하여 어구 "실질적으로 동일한"은 기준 폴리펩티드 서열에 대하여 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 항체 쇄로 해석될 수 있다. 핵산 서열에 관한 용어는 기준 핵산 서열에 대하여 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 뉴클레오티드의 서열로 해석될 수 있다.
서열 "동일성의" 또는 "동일성"은 이러한 분야에서 인식된 의미를 가지며, 2개의 핵산 또는 폴리펩티드 분자 또는 영역 사이의 서열 동일성 백분율은 공개된 기술을 사용하여 계산될 수 있다. 서열 동일성은 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드의 전체 길이를 따라 또는 분자의 영역을 따라 측정될 수 있다[예를 들어, 문헌 "Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Pres, New York, 1988"; "Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993"; "Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994"; "Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987"; 및 "Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991" 참조]. 2개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 사이의 동일성을 측정하는 많은 방법이 있는 한편, 용어 "동일성"은 당업자에게 잘 알려져 있다[카릴로(Carrillo, H.) 및 립만(Lipman, D.)의 문헌 "SIAM J Applied Math 48: 1073(1988)"].
"치환" 변이체는 천연 서열에서 적어도 하나의 아미노산 잔기가 제거되고 동일한 위치에서 다른 아미노산이 삽입된 변이체이다. 상기 치환은 분자 내의 단 하나의 아미노산만이 치환되는 단일 치환일 수 있거나; 또는 동일한 분자에서 2개 이상의 아미노산이 치환되는 다중 치환일 수 있다. 다중 치환은 연속적인 위치에 존재할 수 있다. 유사하게, 아미노산은 여러 잔기로 치환될 수 있으며, 여기서 이러한 변이체는 치환 및 삽입을 모두 포함한다. "삽입" 변이체는 하나 이상의 아미노산이 천연 서열의 특정 위치에서 아미노산에 바로 인접하여 삽입된 변이체이다. 바로 인접한 아미노산은 아미노산의 α-카르복시 또는 α-아미노 작용기에 부착됨을 의미한다. "결실" 변이체는 천연 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 제거된 변이체이다. 전형적으로, 결실 변이체 분자의 특정 영역에서 1개 또는 2개의 아미노산이 결실된다.
항체의 가변성 도메인과 관련하여, 용어 "가변성"은 항체 사이에서 서열이 크게 상이하고 특정 항체의 특정 표적을 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 데 사용되는 관련 분자의 특정 부분을 지칭한다. 그러나, 가변성은 항체의 가변성 도메인 전체에 균일하게 분포되지 않는다. 가변성은 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region)(즉, CDR1, CDR2 및 CDR3) 또는 초가변성 영역이라고 하는 3개의 분절에 집중되어 있으며, 이들 모두는 경쇄 및 중쇄의 가변성 도메인 내에 위치한다. 가변성 도메인 내의 보다 보존된 부분은 골격구조(FR: framework) 영역 또는 골격구조 서열로 지칭된다. 천연 중쇄 및 경쇄의 각 가변성 도메인은 주로 β-시트(sheet) 입체배열로 3개의 CDR에 의해 연결된 4개의 FR 영역을 포함하며, 이는 루우프를 형성하여 β-시트 구조의 부분을 연결하고 일부 경우에는 이를 형성한다. 각 쇄의 CDR은 전형적으로 인접한 FR 영역에 의해 함께 연결되며 다른 쇄의 CDR에 의해 항체 표적 결합 부위(에피토프 또는 결정인자)의 형성을 돕는다[카밧(Kabat) 등의 문헌 "Sequences of Proteins of Immunological Interest, nationalInstitute of Health, bethesda, MD(1987)"]. 본원에서 사용되는 바와 같이, 면역글로불린 아미노산 잔기 넘버링은, 달리 지시되지 않는 한, 면역글로불린 내의 아미노산 잔기 넘버링에 대한 카밧 넘버링 체계[카밧(Kabat) 등의 문헌]에 따른다. 하나의 CDR은 동족 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 가질 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항체의 "항체 단편" 또는 "항원 결합 단편"은 전장보다 작지만, 전장 항체의 특이적 결합 능력의 적어도 일부 뿐만 아니라 항원에 결합하여 결합 특이성을 유지하는 항체의 가변성 영역의 적어도 일부(예를 들어, 하나 이상의 CDR 및/또는 하나 이상의 항체 결합 부위)를 포함하는 전장 항체의 임의의 부분을 지칭한다. 따라서, 항원 결합 단편은 항체 단편이 유래된 항체와 동일한 항원에 결합하는 항원 결합 부분을 포함하는 항체 단편을 지칭한다. 항체 단편은 전장 항체의 효소 처리에 의해 생성된 항체 유도체, 뿐만 아니라 합성적으로 생성된 유도체, 예를 들어, 재조합적으로 생성된 유도체를 포함한다. 항체에는 항체 단편이 포함된다. 항체 단편의 예에는 Fab, Fab', F(ab')2, 단일 쇄 Fv(scFv), Fv, dsFv, 디아바디, Fd 및 Fd' 단편 및 변형된 단편을 비롯한 기타 단편이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다[예를 들어, 문헌 "Methods in Molecular Biology, Vol 207: Recombinant Antibodies for Cancer Therapy Methods and Protocols(2003); Chapter 1; p 3-25, Kipriyanov" 참조]. 단편은 예를 들어 디설파이드 결합 및/또는 펩티드 결합기에 의해 함께 연결된 다중 쇄를 포함할 수 있다. 항체 단편은 일반적으로 적어도 또는 약 50개의 아미노산, 및 전형적으로 적어도 또는 약 200개의 아미노산을 포함한다. 항원 결합 단편은 항체 골격구조 내로 삽입될 때(예를 들어, 상응하는 영역의 대체에 의해) 항원에 면역특이적으로 결합(즉, 적어도 약 107-108M-1의 Ka를 나타냄)하는 항체를 생성하는 임의의 항체 단편을 포함한다. "기능적 단편" 또는 "항-TSLP 항체의 유사체"는 리간드에 결합하거나 신호 전달을 개시하는 수용체의 능력을 방지하거나 실질적으로 감소시키는 단편 또는 유사체이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 기능적 단편은 일반적으로 "항체 단편"과 동일한 의미를 가지며, 항체의 경우, 리간드에 결합하거나 신호 전달을 개시하는 수용체의 능력을 방지하거나 실질적으로 감소시키는 단편, 예를 들어 Fv, Fab, F(ab')2 등을 지칭할 수 있다. "Fv" 단편은 비공유 결합에 의해 형성된 중쇄의 가변성 도메인 및 경쇄의 가변성 도메인의 이량체(VH-VL 이량체)로 구성된다. 이러한 입체배열에서, 각 가변성 도메인의 3개의 CDR은 상호작용하여 온전한 항체의 경우와 같이 VH-VL 이량체의 표면 상의 표적 결합 부위를 정의한다. 6개의 CDR은 함께 온전한 항체에 표적 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변성 도메인(또는 3개의 표적 특이적 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)조차도 여전히 표적을 인식하고 이에 결합하는 능력을 가질 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "이중특이적 항체(BsAb)"는 2개의 상이한 항원 결정기에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 및/또는 항원 결합 분자를 지칭한다. 일반적으로, 이중특이적 항체 및/또는 항원 결합 분자는 2개의 항원 결합 부위를 포함하며, 이들 각각은 상이한 항원 결정기에 특이적이다. 일부 실시태양에서, 이중특이적 항체 및/또는 항원 결합 분자는 2개의 항원 결정기, 특히 2개의 상이한 세포 상에서 발현된 2개의 항원 결정기에 동시에 결합할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "단일클론성 항체"는 동일한 항체의 집단을 말하며, 이는 단일클론성 항체 집단 내의 각각의 개별 항체 분자가 또 다른 항체 분자와 동일함을 의미한다. 이러한 특성은 다수의 상이한 서열을 갖는 항체를 포함하는 다중클론성 항체 집단의 특성과 대조적이다. 단일클론성 항체는 다수의 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다[스미쓰(Smith) 등의 문헌 "(2004) J. Clin. Pathol. 57, 912-917"; 및 넬슨(Nelson) 등의 문헌 "J Clin Pathol(2000), 53, 111-117"]. 예를 들어, 단일클론성 항체는 B 세포를 불멸화함으로써, 예를 들어 B 세포를 골수종 세포와 융합하여 하이브리도마 세포주를 생성하거나 B 세포를 EBV와 같은 바이러스로 감염시킴으로써 제조될 수 있다. 재조합 기술은 또한 항체의 뉴클레오티드를 코딩하는 인공 서열을 보유하는 플라스미드로 숙주 세포를 형질전환함으로써 시험관내 숙주 세포의 클론 집단으로부터 항체를 제조하는 데 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "하이브리도마" 또는 "하이브리도마 세포"는 항체-생산 림프구 및 비-항체-생산 암 세포의 융합으로부터 생성된 세포 또는 세포주(전형적으로 골수종 또는 림프종 세포)를 지칭한다. 당업자에게 공지된 바와 같이, 하이브리도마는 증식되고 연속적으로 공급되어 특정 단일클론성 항체를 생성할 수 있다. 하이브리도마를 생산하는 방법은 당업계에 알려져 있다[예를 들어, 하로우(Harlow) 및 래인(Lane)의 1988년 문헌 참조]. "하이브리도마" 또는 "하이브리도마 세포"라는 용어를 언급할 때, 이는 하이브리도마의 서브클론 및 자손 세포도 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 전장 항체는 2개의 전장 중쇄(예를 들어, VH-CH1-CH2-CH3 또는 VH-CH1-CH2-CH3-CH4) 및 2개의 전장 경쇄(VL-CL) 및 힌지 영역을 갖는 항체, 예를 들어, B 세포를 분비하는 항체에 의해 자연적으로 생성된 항체 뿐만 아니라 동일한 도메인을 갖는 합성적으로 생성된 항체이다.
용어 "키메라 항체"는 가변성 영역 서열이 하나의 종으로부터 유래되고 불변성 영역 서열이 또 다른 종으로부터 유래된 항체, 예컨대 가변성 영역 서열이 마우스 항체로부터 유래되고 불변성 영역 서열이 인간 항체로부터 유래된 항체를 지칭한다.
"인간화" 항체는 비-인간 면역글로불린에서 유래된 최소 서열을 함유하는, 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 그의 단편(예를 들어, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원 결합 부분서열)인 비-인간(예를 들어 마우스)의 형태를 지칭한다. 바람직하게는, 인간화 항체는 수용자 항체의 상보성 결정 영역(CDR)의 잔기가 원하는 특이성, 친화도 및 용량을 갖는 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 비-인간 종으로부터의 CDR 잔기(공여자 항체)에 의해 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다.
또한, 인간화에서 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시켜 항체의 하나 이상의 결합 특성(예를 들어, 친화도)을 개선하는 것도 가능하다. 돌연변이는 예를 들어 PCR-매개 돌연변이유발에 의해 도입될 수 있고, 항체 결합 또는 기타 기능적 특성에 대한 이들의 효과는 본원에 기재된 시험관내 또는 생체내 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 전형적으로 보존적 돌연변이가 도입된다. 이러한 돌연변이는 아미노산 치환, 부가 또는 결실일 수 있다. 또한, CDR 내의 돌연변이는 전형적으로 1개 또는 2개를 초과하지 않는다. 따라서, 본 개시내용의 인간화 항체는 또한 CDR 내에 1개 또는 2개의 아미노산 돌연변이를 포함하는 항체를 포괄한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "CDR"은 항체 분자의 중쇄 및 경쇄당 3개의 CDR을 갖는 것으로 알려진 상보성 결정 영역을 지칭한다. CDR은 초가변성 영역으로도 알려져 있으며, CDR의 1차 구조에서 가변성이 매우 높은 부위를 갖는 항체의 중쇄 및 경쇄 각각의 가변성 영역에 존재한다. 본 명세서에서 중쇄의 CDR은 중쇄의 아미노 말단 서열의 아미노 말단부터 CDR1, CDR2, CDR3으로 표시되고, 경쇄의 CDR은 경쇄의 아미노 말단 서열의 아미노 말단부터 CDR1, CDR2, CDR3으로 표시된다. 이들 부위는 3차 구조에서 서로 인접하여 위치하고 항체가 결합하는 항원의 특이성을 결정한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "에피토프"는 항체의 파라토프가 결합하는 항원 상의 임의의 항원 결정기를 지칭한다. 에피토프 결정기는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 유형을 포함하며 일반적으로 특정 3차원 구조적 특성과 특정 전하 특성을 갖는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 관련하여 "특이적 결합" 또는 "면역특이적 결합"은 본원에서 상호교환 가능하게 사용되며, 항체 및 항원의 항체 결합 부위 사이의 비공유 상호작용을 통해 동일한 항원과 함께 하나 이상의 비공유 결합을 형성하는 항체 또는 항원 결합 단편의 능력을 지칭한다. 항원은 단리된 항원일 수 있거나 종양 세포에 존재할 수 있다. 전형적으로, 항원에 면역특이적으로 결합하는(또는 특이적으로 결합하는) 항체는 약 1×107M-1 또는 1×108M-1 이상의 친화도 상수 Ka(또는 1×10-7M 또는 1×10-8M 이하의 해리 상수(Kd))로 항원에 결합하는 항체이다. 친화도 상수는 항체 반응에 대한 표준 동역학적 방법, 예를 들어, 면역분석, 표면 플라즈몬 공명(SPR: surface plasmon resonance)[리치(Rich) 및 미즈카(Myszka)의 문헌 "(2000) Curr. Opin. Biotechnol 11:54"; 엔글레비엔(Englebienne)의 문헌 "(1998) Analyst. 123:1599"], 등온 적정 열량계(ITC: isothermal titration calorimetry), 또는 당업계에 공지된 기타 동역학적 상호작용 분석[예를 들어, 폴(Paul) 등의 문헌 "Fundamental Immunology, 2nd ed., Raven Press, New York, pages 332-336(1989)" 참조]에 의해 결정될 수 있고; 또한 항체의 결합 친화도를 계산하기 위한 예시적인 SPR 및 ITC 방법을 기재한 미국 특허 제7,229,619호를 참조한다. 결합 속도를 실시간으로 검출하고 모니터링하기 위한 기기 및 방법은 공지되어 있으며 상업적으로 이용 가능하다[BiaCore 2000, 비아코어(BiaCore) AB(스웨덴 웁살라) 및 지이 헬쓰케어 라이프 사이언시즈(GE Healthcare Life Sciences); 문헌 "Malmqvist(2000) Biochem. Soc. Trans. 27:335" 참조].
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리뉴클레오티드" 및 "핵산 분자"는 전형적으로 포스포디에스테르 결합에 의해 함께 연결된 데옥시리보핵산(DNA) 및 리보핵산(RNA)을 비롯한 적어도 2개의 연결된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체를 포함하는 올리고머 또는 중합체를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있으며 cDNA일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 단리된 핵산 분자는 핵산 분자의 자연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 단리된 핵산 분자이다. cDNA 분자와 같은 "단리된" 핵산 분자는 재조합 기술에 의해 제조될 때 다른 세포 물질 또는 배양 배지가 실질적으로 없을 수 있거나, 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 기타 화학적 성분이 실질적으로 없을 수 있다. 본원에 제공되는 예시적인 단리된 핵산 분자는 제공된 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 단리된 핵산 분자를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 핵산 서열, 영역, 요소 또는 도메인과 관련하여 "작동 가능하게 연결된"은 핵산 영역이 서로 기능적으로 관련되어 있음을 의미한다. 예를 들어, 프로모터는 프로모터가 핵산의 전사를 조절하거나 매개하도록 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
또한, 본원에 기재된 서열 목록에 제시된 서열의 "보존적 서열 변형", 즉 예를 들어, 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되거나 아미노산 서열을 함유하는 항체의 항원에 대한 결합을 제거하지 않는 뉴클레오티드 및 아미노산 서열 변형이 제공된다. 이러한 보존적 서열 변형은 보존적 뉴클레오티드 및 아미노산의 치환, 및 뉴클레오티드 및 아미노산의 부가 및 결실을 포함한다. 예를 들어, 변형은 부위-지정 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발과 같은 당업계에 공지된 표준 기술에 의해 본원에 기재된 서열 목록에 도입될 수 있다. 보존적 서열 변형은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 당업계에 정의되어 있다. 이러한 계열에는 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 전하를 띠지 않는 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), β-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함하는 아미노산이 포함된다. 따라서, 항-TSLP 항체에서 예측된 비필수 아미노산 잔기는 바람직하게는 동일한 측쇄 계열로부터의 또 다른 아미노산 잔기로 대체된다. 항원 결합을 제거하지 않는 뉴클레오티드 및 아미노산의 보존적 치환을 확인하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다[예를 들어, 브루멜(Brummell) 등의 문헌 "Biochem. 32: 1180-1187(1993)"; 고바야시(Kobayashi) 등의 문헌 "Protein Eng. 12(10): 879-884(1999)"; 벅스(Burks) 등의 문헌 "Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 412-417(1997)" 참조].
대안적으로, 또 다른 실시태양에서, 돌연변이는, 예를 들어 포화 돌연변이유발에 의해 항-TSLP 항체 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 생성된 변형된 항-TSLP 항체는 개선된 결합 활성에 대해 스크리닝될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "발현"은 폴리뉴클레오티드의 전사 및 번역에 의해 폴리펩티드를 생산하는 과정을 의미한다. 폴리펩티드의 발현 수준은 예를 들어 숙주 세포로부터 생산된 폴리펩티드의 양을 결정하는 방법을 비롯하여 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 이러한 방법에는 ELISA, 겔 전기영동에 이은 쿠마시 블루(Coomassie blue) 염색, 로우리(Lowry) 단백질 분석 및 브래드포드(Bradford) 단백질 분석에 의한 세포 용해물의 폴리펩티드 정량화가 포함될 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "숙주 세포"는 벡터를 수용, 유지, 복제 및 확장하기 위한 세포이다. 숙주 세포는 또한 벡터에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 발현하는데 사용될 수 있다. 벡터에 포함된 핵산은 숙주 세포 분열 동안에 복제되어 핵산을 증폭시킨다. 숙주 세포는 진핵 세포 또는 원핵 세포일 수 있다. 적합한 숙주 세포에는 CHO 세포, 다양한 COS 세포, HeLa 세포, HEK 293 세포와 같은 HEK 세포가 포함되나 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "벡터"는 벡터가 적절한 숙주 세포로 형질전환될 때 하나 이상의 이종 단백질이 발현될 수 있는 복제가능한 핵산이다. 벡터에 대한 언급은 폴리펩티드 또는 그의 단편을 코딩하는 핵산이 전형적으로 제한 분해 및 결찰에 의해 도입될 수 있는 벡터를 포함한다. 벡터에 대한 언급은 또한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다. 벡터는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 숙주 세포에 도입하거나, 핵산을 증폭하거나, 핵산에 의해 코딩된 폴리펩티드를 발현/표시하기 위해 사용된다. 벡터는 일반적으로 에피솜으로 남아있지만, 유전자 또는 그의 일부가 게놈의 염색체 내로 통합될 수 있도록 고안될 수 있다. 인공 염색체, 예컨대 효모 인공 벡터 및 포유동물 인공 염색체를 위한 벡터도 고려된다. 이러한 비히클의 선택 및 사용은 당업자에게 잘 알려져 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 벡터는 또한 "바이러스 벡터" 또는 "바이러스성 벡터"를 포함한다. 바이러스성 벡터는 외래 유전자를 세포로 전달하기 위해 (비히클 또는 셔틀로서) 외래 유전자에 작동 가능하게 연결된 조작된 바이러스이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "발현 벡터"는 조절 서열, 예컨대 프로모터 영역에 작동 가능하게 연결된 DNA를 발현할 수 있으며, 이러한 DNA 단편의 발현에 영향을 미칠 수 있는 벡터를 포함한다. 이러한 추가의 단편은 프로모터 및 터미네이터 서열을 포함할 수 있고, 선택적으로 하나 이상의 복제 기점, 하나 이상의 선택 가능한 마커, 인핸서, 폴리아데닐화 신호 등을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 전형적으로 플라스미드 또는 바이러스 DNA로부터 유래되거나 둘 다의 요소를 함유할 수 있다. 따라서, 발현 벡터는 적절한 숙주 세포에 도입될 때 클로닝된 DNA의 발현을 초래하는 플라스미드, 파지, 재조합 바이러스 또는 다른 벡터와 같은 재조합 DNA 또는 RNA 작성물을 지칭한다. 적절한 발현 벡터는 당업자에게 잘 알려져 있으며 진핵 및/또는 원핵 세포에서 복제 가능한 발현 벡터 뿐만 아니라 에피솜으로 남아 있거나 숙주 세포 게놈에 통합된 발현 벡터를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 질병 또는 증상을 갖는 피험체를 "치료"한다는 것은 피험체의 증후가 치료 후에 부분적으로 또는 완전히 완화되거나 변하지 않은 채로 유지됨을 의미한다. 따라서, 치료에는 예방, 치료 및/또는 치유가 포함된다. 예방은 기저 질환을 예방하고/하거나 증후의 악화 또는 질환의 진행을 예방하는 것을 의미한다. 치료는 또한 제공된 임의의 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 본원에 제공된 조성물의 임의의 약학적 사용을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "치료학적 효과"는 질병 또는 증상의 증후를 변경하거나, 전형적으로는 향상시키거나 개선하거나, 질병 또는 증상을 치유하는, 피험체의 치료로부터 발생되는 효과를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "치료학적 유효량" 또는 "치료학적 유효 용량"은 피험체에게 투여된 후 적어도 치료 효과를 생성하기에 충분한 물질, 화합물, 재료, 또는 화합물을 포함하는 조성물의 양을 지칭한다. 따라서 질병이나 질환의 증후를 예방, 치유, 개선, 차단 또는 부분적으로 차단하기 위해 필요한 양이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "예방학적 유효량" 또는 "예방학적 유효 용량"은 피험체에게 투여될 때 원하는 예방학적 효과를 갖는, 예를 들어, 질병 또는 증상의 발생 또는 재발을 예방하거나 지연시키고, 질병 또는 증상의 발생 또는 재발 가능성을 감소시키는 물질, 화합물, 재료, 또는 화합물을 포함하는 조성물의 양을 지칭한다. 완전한 예방학적 유효량은 1회 투여에 의해 발생할 필요는 없으며, 일련의 용량을 투여한 후에만 발생할 수도 있다. 따라서, 예방학적 유효량은 1회 이상 투여될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "환자"는 인간과 같은 포유동물을 지칭한다.
II. 구체적 실시 방식
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 8-10, 18-20, 28-30, 38-40, 48-50, 58-60, 68-70, 78-80, 83-85, 88-90, 93-95, 98-100, 103-105, 108-110, 113-115, 118-120, 123-125, 128-130, 133-135, 138-140, 143-145, 148-150, 153-155, 158-160, 163-165, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 CDR, 및/또는 서열 번호 13-15, 23-25, 33-35, 43-45, 53-55, 63-65, 73-75, 168-170, 173-175, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 CDR을 포함하는, TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다.
한 양태에서, 상기 언급된 양태에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 서열 번호 8, 18, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 83, 88, 93, 98, 103, 108, 113, 118, 123, 128, 133, 138, 143, 148, 153, 158, 163, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 CDR1, 서열 번호 9, 19, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 84, 89, 94, 99, 140, 109, 114, 119, 124, 129, 134, 139, 144, 149, 154, 159, 164, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 CDR3; 및/또는 서열 번호 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 168, 173, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 CDR1, 서열 번호 14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 169, 173, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 15, 25, 35, 45, 55, 65, 75, 170, 175, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 CDR3을 포함한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 다음과 같이 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄의 CDR 조합을 포함하는, 앞서 언급된 양태에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다:
(1) 각각 서열 번호 8-10을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 13-15를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(2) 각각 서열 번호 18-20을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 23-25를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(3) 각각 서열 번호 28-30을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 33-35를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(4) 각각 서열 번호 38-40을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 43-45를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(5) 각각 서열 번호 48-50을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 53-55를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(6) 각각 서열 번호 58-60을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 63-65를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(7) 각각 서열 번호 68-70을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 73-75를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(8) 각각 서열 번호 78-80을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(9) 각각 서열 번호 83-85를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(10) 각각 서열 번호 88-90을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(11) 각각 서열 번호 93-95를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(12) 각각 서열 번호 98-100을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(13) 각각 서열 번호 103-105를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(14) 각각 서열 번호 108-110을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(15) 각각 서열 번호 113-115를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(16) 각각 서열 번호 118-120을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(17) 각각 서열 번호 123-125를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(18) 각각 서열 번호 128-130을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(19) 각각 서열 번호 133-135를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(20) 각각 서열 번호 138-140을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(21) 각각 서열 번호 143-145를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(22) 각각 서열 번호 148-150을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(23) 각각 서열 번호 153-155를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(24) 각각 서열 번호 158-160을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(25) 각각 서열 번호 163-165를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(26) 각각 서열 번호 153-155를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(27) 각각 서열 번호 158-160을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(28) 각각 서열 번호 163-165를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(29) 각각 서열 번호 78-80을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(30) 각각 서열 번호 83-85를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(31) 각각 서열 번호 98-100을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(32) 각각 서열 번호 103-105를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(33) 각각 서열 번호 123-125를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열; 및
(34) 각각 서열 번호 128-130을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 7, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 82, 87, 92, 97, 102, 107, 112, 117, 122, 127, 132, 137, 142, 147, 152, 157, 162, 또는 그의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 가변성 영역, 및/또는 서열 번호 12, 22, 32, 42, 52, 62, 72, 167, 172, 또는 그의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 앞서 언급된 양태에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 7 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 12 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 17 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 22 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 27 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 32 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 37 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 42 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 47 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 52 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 57 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 62 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 67 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 72 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 77 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 82 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 87 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 92 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 97 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 102 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 107 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 112 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 117 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 122 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 127 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 132 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 137 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 142 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 147 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 152 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 157 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 162 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 152 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 157 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 162 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 77 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 82 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 97 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 102 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 122 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 서열 번호 127 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 임의의 전술된 양태에 따른 상기 언급된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산을 제공한다. 바람직하게는, 핵산 분자는 서열 번호 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 86, 91, 96, 101, 106, 111, 116, 121, 126, 131, 136, 141, 146, 151, 156, 161, 166, 또는 그의 임의의 변이체로부터 선택된 항체 중쇄 뉴클레오티드 서열, 및/또는 서열 번호 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 171, 176, 또는 그의 임의의 변이체로부터 선택된 항체 경쇄 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 임의의 전술된 양태의 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 대하여 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는, 인간 TSLP에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 전술된 양태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자, 또는 이에 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 분자에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 개시내용은 전술된 양태 중 어느 하나에 따른 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 전술된 양태 중 어느 하나에 따른 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 전술된 양태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 이를 코딩하는 핵산 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 포유동물에게 치료 유효량의 임의의 전술된 양태에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 핵산 분자, 벡터, 세포 또는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, TSLP-관련 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 포유동물에서 TSLP-관련 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 전술된 양태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 핵산 분자, 벡터, 세포 또는 약학적 조성물의 용도를 제공한다.
전술된 양태 중 어느 하나에 따르면, 임의적으로, TSLP-관련 질환은 TSLP-관련 염증성 질환 및 자가면역 질환이다. 임의적으로, 항체는 표지화되거나 세포독성의 컨주게이트와 같은 다른 약물에 접합된다.
한 양태에서, 본 개시내용은 또한 예를 들어 본 개시내용의 항체, 단편, 동족체, 이의 유도체 등, 예를 들어 표지화되거나 세포독성의 컨주게이트, 뿐만 아니라 항체, 특정 유형의 세포를 사멸시키는 컨주게이트 등의 사용을 위한 지시서를 포함하는 키트를 포함한다. 지시서는 시험관내, 생체내 또는 생체외에서 항체, 컨주게이트 등을 사용하기 위한 지침을 포함할 수 있다. 항체는 액체 형태 또는 고체 형태일 수 있으며 일반적으로 동결건조된다. 키트는 다른 적합한 시약, 예컨대 완충액, 재구성 용액 및 의도한 용도에 필요한 기타 성분을 함유할 수 있다. 사용을 위한, 예를 들어 치료적 사용을 위한 또는 진단학적 분석을 수행하기 위한 지시서와 함께 미리 결정된 양으로 포장된 시약들의 조합이 고려된다. 항체가 예를 들어 효소에 의해 표지화된다면, 키트는 효소에 필요한 기질 및 보조인자(예를 들어, 검출 가능한 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체)를 포함할 수 있다. 또한, 안정화제, 완충제(예를 들어, 차단 완충제 또는 용해 완충제) 등과 같은 기타 첨가제가 또한 포함될 수 있다. 다양한 시약의 상대적인 양은 시약 용액의 농축물을 제공하기 위해 다양할 수 있으며, 이는 사용자 유연성을 제공하고 공간 및 시약을 절약한다. 이들 시약은 또한 용해될 때 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공하는 부형제를 포함하는 건조 분말 형태, 일반적으로 동결건조된 형태로 제공될 수 있다.
한 양태에서, 본 개시내용은 TSLPR에 대한 TSLP의 결합을 억제하기 위한 시약의 제조에서의 전술된 양태중 어느 하나에 따른 항체 또는 그의 작용적 단편 및/또는 핵산 분자 또는 벡터 또는 세포 또는 약학적 조성물 및/또는 키트의 용도를 제공한다.
또한, 본 개시내용의 항체는 면역글로불린 또는 그의 단편을 이용한 면역분석, 정제 방법 및 기타 방법에 사용될 수 있다. 이러한 용도는 당업계에 잘 알려져 있다.
따라서, 본 개시내용은 또한 본 개시내용의 항-TSLP 항체, 또는 그의 단편을 당업계에서 통상적인 바와 같은 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 편리하게 조합하여 포함하는 조성물을 제공한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적 조성물"은 다양한 제제의 제형을 지칭한다. 치료학적 유효량의 다가 항체를 함유하는 제형은 멸균 액체 용액, 액체 현탁액 또는 동결건조 형태이며, 임의적으로 안정화제 또는 부형제를 함유한다.
본 개시내용의 항체는 단독으로 투여되는 조성물로 사용될 수 있거나, 다른 활성제와 조합되어 사용될 수 있다.
기재된 실시태양에 따른 치료제는 개선된 수송, 전달, 내약성 등을 제공하기 위해 제형에 혼입된 적합한 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 기타 제제와 함께 투여될 것임을 이해할 것이다. 다수의 적합한 제형은 약학 화학자에게 공지된 모든 약전[Remington's Pharmaceutical Sciences(15th ed. Mack Publishing Company, Easton, Pa.(1975))], 특히 제87장(Blaug, Seymour)에서 찾아볼 수 있다. 이러한 제형에는 예를 들어 분말, 페이스트, 연고, 겔, 왁스, 오일, 지질, 지질 함유(양이온성 또는 음이온성) 담체[예를 들어, 리포펙틴(Lipofectin: 상표명)], DNA 컨주게이트, 무수 시럽, 수중유적형 및 유중수적형 에멀젼, 폴리에틸렌 글리콜(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔 및 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 반고체 혼합물이 포함된다. 제형의 활성 성분이 제형에 의해 불활성화되지 않고 제형이 생리학적으로 양립가능하고 투여 경로를 용인하는 한, 임의의 전술된 혼합물은 본 개시내용에 따른 치료 또는 요법에 적합할 수 있다.
한 실시태양에서, 항체는 치료제로서 사용될 수 있다. 이러한 제제는 일반적으로 피험체에서 TSLP의 비정상적인 발현, 활성 및/또는 신호전달과 관련된 질병 또는 병리를 치료, 완화 및/또는 예방하기 위해 사용될 것이다. 치료 계획은 피험체, 예를 들어, TSLP의 비정상적인 발현, 활성 및/또는 신호전달과 관련된 질병 또는 질환, 예를 들어, TSLP-관련 질환이 있는(또는 발병할 위험이 있는) 인간 환자를 식별함으로써 표준 방법을 사용하여 구현될 수 있다. 항체 제제, 바람직하게는 그의 표적 항원에 대해 높은 특이성 및 친화도를 갖는 제제가 피험체에게 투여되고, 이는 일반적으로 표적에 대한 그의 결합으로 인해 효과가 있을 것이다. 투여된 항체는 표적(예를 들어, TSLP)의 발현, 활성 및/또는 신호전달 기능을 제거하거나 억제하거나 방해할 수 있다. 투여된 항체는 그것이 자연적으로 결합하는 내인성 리간드에 대한 표적(예를 들어, TSLP)의 결합을 제거하거나 억제하거나 방해할 수 있다. 예를 들어, 항체는 표적에 결합하고 TSLP의 발현, 활성 및/또는 신호전달을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 및/또는 방해한다. 일부 실시태양에서, TSLP의 비정상적인 발현과 관련된 질병 또는 질환을 치료하기 위해, 중쇄 및 경쇄 CDR을 갖는 항체가 피험체에게 투여될 수 있다.
비제한적인 예로서, 비정상적인 TSLP 발현, 활성 및/또는 신호전달과 관련된 TSLP-관련 질환은 TSLP-관련 염증성 질환 뿐만 아니라 자가면역 질환을 포함한다. TSLP-관련 염증 증상에는 알레르기성 염증, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 아토피 피부염 및 호산구성 식도염이 포함된다. 알레르기성 염증에는 알레르기성 비염, 알레르기성 부비동염, 알레르기성 결막염이 있다. 자가면역 질환에는 류마티스 관절염과 다발성 경화증이 있다.
또 다른 실시태양에서, TSLP에 대한 항체는 TSLP의 국소화 및/또는 정량화와 관련하여 당업계에 공지된 방법에 사용될 수 있다(예를 들어, 적절한 생리학적 샘플에서 TSLP 및/또는 TSLP의 수준을 결정하기 위해, 진단 방법을 위해, 단백질 영상화를 위해 등). 주어진 실시태양에서, TSLP 또는 그의 유도체, 단편, 유사체 또는 동족체에 특이적인 항체-유래 항원 결합 도메인을 포함하는 항체는 약학적 활성 화합물(이하 "치료제")로서 사용된다.
또 다른 실시태양에서, TSLP 폴리펩티드는 면역친화도, 크로마토그래피 또는 면역침전과 같은 표준 기술에 의해 TSLP에 특이적인 항체를 사용하여 단리될 수 있다. 생물학적 샘플의 단백질은 TSLP 단백질에 대한 항체(또는 그의 단편)로 검출될 수 있다. 일부 실시태양에서, TSLP는, 예를 들어 주어진 치료 계획의 효능을 결정하기 위해, 임상 시험 절차의 일부로서 생물학적 샘플에서 검출될 수 있다. 항체를 검출 가능한 물질에 커플링(즉, 물리적으로 연결)함으로써 검출이 용이할 수 있다. 검출 가능한 물질의 예에는 다양한 효소, 보결기, 형광 물질, 발광 물질, 생물발광 물질 및 방사성 물질이 포함된다. 적합한 효소의 예에는 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스테라제가 포함되고; 적합한 보결기 복합체의 예에는 스트렙타비딘(streptavidin)/비오틴 및 아비딘(avidin)/비오틴이 포함되고; 적합한 형광 물질의 예에는 움벨리페론(umbelliferone), 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아진 아미노플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린이 포함되고; 발광 물질의 한 예는 루미놀을 포함하고; 생물발광 물질의 예에는 루시페라제, 루시페린 및 에쿼린(aequorin)이 포함되고, 적합한 방사성 물질의 예에는 125I, 131I, 35S, 또는 3H가 포함된다.
또 다른 실시태양에서, 본 개시내용에 따른 항체는 샘플에서 TSLP 또는 그의 단백질 단편의 존재를 검출하기 위한 시약으로서 사용될 수 있다. 일부 실시태양에서, 항체는 검출 가능한 표지를 포함한다. 항체는 다중클론성 항체, 또는 보다 바람직하게는 단일클론성 항체이다. 온전한 항체 또는 그의 단편(예를 들어, Fab, scFv 또는 F(ab')2)이 사용된다. 항체와 관련하여 용어 "표지화"는 검출 가능한 물질을 항체에 커플링(즉, 물리적 연결)함으로써 항체를 직접 표지화하는 것, 뿐만 아니라 직접적으로 표지화되는 다른 시약과 반응시킴으로써 항체를 간접적으로 표지화하는 것을 포괄하는 것으로 의도된다. 간접 표지화의 예는 형광 표지화된 2차 항체를 사용한 1차 항체의 검출 및 형광 표지화된 스트렙타비딘으로 검출을 가능하게 하는 비오틴에 의한 항체의 말단 표지화를 포함한다. 용어 "생물학적 샘플"은 피험체로부터 단리된 조직, 세포 및 생물학적 유체, 뿐만 아니라 피험체에 존재하는 조직, 세포 및 체액을 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 사용된 용어 "생물학적 샘플"은 혈액, 및 혈청, 혈장 또는 림프를 비롯하여 혈액 내의 분별물 또는 성분을 포함한다. 다시 말해서, 기재된 실시태양의 검출 방법은 시험관내 및 생체내 둘 모두에서 생물학적 샘플에서 분석물 mRNA, 단백질 또는 게놈 DNA를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, mRNA 분석물의 검출을 위한 시험관내 기술에는 노던(Norhtern) 혼성화 및 제자리 혼성화가 포함된다. 단백질 분석물의 검출을 위한 시험관내 기술에는 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA: enzyme-linked immunosorbent assay), 웨스턴 블롯팅(Western blotting), 면역침전 및 면역형광이 포함된다. 게놈 DNA 분석물의 검출을 위한 시험관내 기술에는 서던(Southern) 혼성화가 포함된다. 면역분석을 수행하기 위한 절차는 예를 들어 문헌["ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology", vol. 42, J. R. Crowther(ed.) Human Press, Totowa, N. J. 1995]; ["Immunoassay", E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996]; 및 ["Practice and Theory of Enzyme Immunoassays", P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985]에 기재되어 있다. 또한, 단백질 분석물의 검출을 위한 생체내 기술에는 표지화된 항-분석물 단백질 항체를 피험체에 도입함이 포함된다. 예를 들어, 항체는 방사성 표지로 표지화될 수 있으며, 피험체에서 방사성 표지의 존재 및 위치는 표준 영상화 기술에 의해 검출될 수 있다.
본원에 기재된 항체 및 그의 유도체, 단편, 유사체 및 동족체는 투여에 적합한 약학적 조성물에 혼입될 수 있다. 이러한 조성물의 제조와 관련된 원리 및 고려사항, 뿐만 아니라 성분 선택에 대한 지침은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition (Alfonso R. Gennaro et al. Eds.) Mack Pub. Co. Easton, Pa: 1995]; [Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, and Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa. 1994]; 및 [Peptide and Protein Drug Delivery(Advances In Parenteral Sciences, vol. 4), 1991, M. Dekker, New York]을 참조한다.
이러한 조성물은 전형적으로 항체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 항체 단편이 사용되는 경우, 표적 단백질 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 최소 억제 단편이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 항체의 가변성 영역 서열에 기초하여, 표적 단백질 서열에 결합하는 능력을 보유하는 펩티드 분자가 고안될 수 있다. 이러한 펩티드는 화학적으로 합성되고/되거나 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다[예를 들어, 마라스코(Marasco) 등의 문헌 "Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:7889-7893(1993)" 참조].
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용되는 담체"는 약학적 투여와 양립가능한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함하는 것으로 의도된다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체는 본원에 참고로 포함되는 당업계의 표준 참고 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences]의 최신판에 기재되어 있다. 이러한 담체 또는 희석제의 바람직한 예에는 물, 식염수, 링거 용액, 덱스트로스 용액 및 5% 인간 혈청 알부민이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 리포솜 및 고정유와 같은 비-수성 비히클도 사용될 수 있다. 약학적 활성 물질에 대한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 항체와 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 조성물에서의 그의 사용은 고려된다.
실시태양의 약학적 조성물은 그들의 의도된 투여 경로와 양립가능하도록 제형화된다. 투여 경로의 예에는 비경구, 예를 들어, 정맥내, 피내, 피하, 경구(예를 들어, 흡입), 경피(즉, 국소), 경점막 및 직장 투여가 포함된다. 비경구, 피내 또는 피하 투여용 용액 또는 현탁액은 다음 성분을 포함할 수 있다: 물, 식염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매와 같은 주사용 멸균 희석제; 벤질 알코올 또는 메틸 p-하이드록시벤조에이트와 같은 항균제; 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨과 같은 항산화제; EDTA와 같은 킬레이트제; 아세트산염, 시트르산염 또는 인산염과 같은 완충제 및 염화나트륨 또는 덱스트로스와 같은 삼투압을 조정하는 시약. pH는 염산 또는 수산화나트륨과 같은 산 또는 염기로 조정할 수 있다. 비경구 제제는 앰플, 일회용 주사기, 또는 유리나 플라스틱으로 만든 다회 용량 바이알에 포장될 수 있다.
주사용으로 적합한 약학적 조성물은 멸균 수용액(수용성인 경우) 또는 멸균 주사용 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 분산액 및 멸균 분말을 포함할 수 있다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 약학적으로 허용되는 담체는 생리 식염수, 정균수, 크레모포르(Cremophor) EL(상표명)(BASF, 뉴저지주 파르시패니) 또는 인산염 완충 식염수(PBS)를 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 무균이어야 하고 용이한 주사 가능성이 존재하는 정도로 유동적이어야 한다. 이는 제조 및 보관 조건에서 안정해야 하며 박테리아 및 곰팡이와 같은 미생물에 의한 오염에 대해 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 예를 들어, 분산액의 경우 레시틴과 같은 코팅제를 사용하여 원하는 입자 크기를 유지할 수 있으며, 계면활성제를 사용하여 적절한 유동성을 유지할 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살(timerosal) 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에, 등장성 제제, 예를 들어, 당, 다가 알코올, 예컨대 만니톨, 소르비톨 및 염화나트륨이 조성물에 포함되는 것이 바람직하다. 주사용 조성물의 흡수는, 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 조성물에 포함함으로써 연장될 수 있다.
멸균 주사 용액은 필요에 따라 상기 열거된 성분 중 하나 또는 이들의 조합과 함께 적절한 용매에 필요한 양의 항체를 혼입한 후 멸균 여과하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 염기성 분산 매질 및 위에 열거된 것들로부터 필요한 기타 구성성분을 함유하는 멸균 비히클에 항체를 혼입함으로써 제조된다. 생성된 분말은 진공 건조 및 동결 건조되어, 이전에 기재된 구성성분의 멸균 여과 용액으로부터 활성 구성성분 및 임의의 추가의 원하는 구성성분을 함유하는 주사용 멸균 분말을 제조한다.
흡입에 의한 투여의 경우, 화합물은 적절한 추진제, 예를 들어 이산화탄소와 같은 기체를 함유하는 네뷸라이저(nebulizer) 또는 가압 용기 또는 디스펜서로부터 에어로졸 스프레이 형태로 전달된다.
전신 투여는 또한 경점막 또는 경피 수단에 의해 수행될 수 있다. 경점막 또는 경피 투여의 경우, 장벽을 투과하기에 적합한 침투제가 제형에 사용된다. 이러한 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 경점막 투여를 위한 세정제, 담즙산염 및 푸시딘산 유도체를 포함한다. 경점막 투여는 비강 스프레이 또는 좌약을 사용하여 달성할 수 있다. 경피 투여를 위해, 하나 이상의 항체는 당업계에 일반적으로 공지된 바와 같이 연고, 고약, 겔 또는 크림으로 제형화될 수 있다.
화합물은 또한 좌약(예를 들어, 코코아 버터 또는 기타 글리세리드와 같은 통상적인 좌약 기제 사용) 또는 직장 전달을 위한 정체 관장의 형태로 제조될 수 있다.
한 실시태양에서, 항체는 이식체 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 비롯한 지속/제어 방출 제제와 같은, 신체로부터의 신속한 제거를 방지하는 담체와 함께 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체 적합성 중합체가 사용될 수 있다. 이러한 제형을 제조하는 방법은 당업자에게 명백할 것이다.
투여의 용이성과 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 투여량 단위 형태는 치료될 대상에 대한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하고; 각 단위는 필요한 약학적 담체와 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 하나 이상의 항체의 미리 결정된 양을 포함한다. 기재된 실시태양의 투여 단위 형태에 대한 사양은 항체의 고유한 특성 및 달성될 특정 치료 효과, 및 개체를 치료하기 위해 이러한 항체를 제형화하는 기술 분야의 고유한 제한에 의해 지시되고 이에 직접적으로 의존한다.
약학적 조성물은 투여 지시서와 함께 용기, 팩 또는 디스펜서에 제공될 수 있다.
본원에 기재된 제형은 또한 치료될 특정 상황에 따라 하나 보다 많은 항체, 바람직하게는 상보적 활성을 갖지만 서로 불리한 영향을 미치지 않는 항체를 함유할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 조성물은 예를 들어 세포독성제, 사이토카인, 화학요법제 또는 성장 억제제와 같은 기능을 향상시키는 제제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다. 예를 들어, 이들은 키트에 조합되어 존재하거나 사용을 위해 조합될 수 있다.
한 실시태양에서, 하나 이상의 항체는 병용 요법으로, 즉, 다양한 형태의 암, 자가면역 질환 및 염증성 질환과 같은 병리학적 증상 또는 질환을 치료하는 데 사용될 수 있는 다른 제제, 예컨대 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. "병용하여"라는 용어는 본원에서 제제가 실질적으로 동시 발생으로, 동시적으로 또는 순차적으로 투여됨을 의미한다. 순차적으로 투여되는 경우, 두 화합물 중 첫 번째 화합물은 두 번째 화합물이 처음 투여될 때 치료 부위에서 유효 농도로 검출되는 것이 여전히 바람직하다. 한 양태에서, "병용"은 또한 본 개시내용의 항체 및 또 다른 치료제 둘 다를 키트에 포함할 수 있다.
예를 들어, 병용 요법은 본원에 기재된 하나 이상의 항체를 하기에 보다 상세히 기재된 바와 같은 하나 이상의 추가적인 치료제, 예를 들어, 하나 이상의 사이토카인 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 소염제, 대사 억제제, 효소 억제제 및/또는 세포독소 또는 세포정지제와 공동 제형화하고/하거나 공동 투여함을 포함할 수 있다. 이러한 병용 요법은 유리하게는 투여되는 치료제의 더 낮은 투여량을 활용하여, 각각의 단일 요법과 관련된 가능한 독성 또는 합병증을 피할 수 있다.
명료함과 간결함을 위해, 특징들은 동일하거나 별도의 실시태양의 일부로서 본원에 기재되지만, 본 개시내용의 범주는 기재된 특징들의 전부 또는 일부의 조합을 갖는 일부 실시태양을 포함할 수 있음이 이해될 것이다.
실시예
실시예 1: TSLP 및 TSLPR 재조합 단백질의 제조
인간 TSLP(Uniprot: Q969D9, 서열 번호 1) 및 사이노몰구스 마카크 TSLP(Uniprot: A0A2K5TXV0, 서열 번호 2)의 cDNA 서열을 합성한 다음, TSLP의 N-말단에 신호 펩티드 MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARS가 삽입되고 카르복시-말단에 6개의 히스티딘을 함유하는 태그가 융합 발현되도록 진핵생물 발현 벡터 pCMV3[베이징 시노바이올로지칼(Beijing Sinobiological), 카탈로그 번호 CG90911-UT]에 클로닝하여 플라스미드 pSect-hTSLP-cHis 및 pSect-cyTSLP-cHis를 생성하고, 이후 이를 HEK293.6E 세포(ATCC CRL-1573) 내로 형질감염시키고, 세포 상청액을 수집하여 니켈-칼럼 친화도 크로마토그래피에 적용했지만, 상응하는 길이의 재조합 단백질은 나타나지 않았다. 그런 다음 TSLP의 전장 단편을 원핵생물 발현 플라스미드 pET-30a에 클로닝하고, 이를 BL21 이. 콜라이(E. coli) 내로 형질전환시켰고, 재조합 단백질은 발현 유도 후 봉입체에서 발현되는 것으로 밝혀졌다. 봉입체 단백질을 다시 접고 정제하여 인간 TSLP 및 사이노몰구스 마카크 TSLP의 재조합 단백질을 수득하였다. 도 1에 제시된 바와 같이, 인간 TSLP 및 사이노몰구스 마카크 TSLP의 재조합 단백질을 정제하였다.
인간 TSLPR cDNA(Uniprot: Q9HC73, 서열 번호 3, 베이징 시노바이올로지칼에서 구입, 카탈로그 번호 HG18720-UT)를 PCR 증폭하여 인간 TSLPR의 세포외 도메인(Gln23-Lys231)을 코딩하는 유전자 단편을 수득하고, C-말단에서 인간 IgG1 Fc(노브) 단편이 융합 발현되도록 진핵생물 발현 벡터 pCMV3의 프로모터의 다운스트림에 유전자 단편을 클로닝하여 플라스미드 pHC 1-TSLPR-hFc-knob를 생성하였다. 한편, 인간 IgG1 Fc(홀) 단편만을 함유하는 플라스미드 pHC1-hFc-hole을 작성한 후, 진핵생물 발현 플라스미드를 pHC1-TSLPR-hFc-knob 플라스미드와 혼합하고, 혼합물을 진핵생물 HEK293.6E에 공동 형질감염시켜 인간 TSLPR-Fc 융합 단백질을 수득하였다. 유사하게, 합성 사이노몰구스 마카크 TSLPR cDNA(Uniprot: G8F663, 서열 번호 4)를 PCR 증폭하여 사이노몰구스 마카크 TSLPR(Gln23-Lys231)의 세포외 도메인을 코딩하는 유전자 단편을 수득하고, 인간 IgG1 Fc(노브) 단편을 함유하는 진핵생물 발현 플라스미드에 유전자 단편을 클로닝하여 사이노몰구스 마카크 TSLPR의 세포외 도메인과 인간 IgG1 Fc(노브)의 N-말단을 융합하고, 이후 진핵생물 발현 플라스미드를 인간 IgG1 Fc(홀) 단편만을 함유하는 플라스미드와 혼합하고, 혼합물을 진핵 세포 HEK293.6E에 공동 형질감염시켜 사이노몰구스 마카크 TSLPR-Fc 융합 단백질을 수득하였다. HEK293.6E 세포를 플라스미드로 형질감염시킨 후 5 내지 7일 동안 배양하고, 세포 상청액을 수집하고 단백질 A 친화도 크로마토그래피로 정제하여 인간 TSLPR(서열 번호 5) 및 사이노몰구스 마카크 TSLPR(서열 번호 6)의 세포외 도메인의 재조합 단백질을 수득하였고, 결과를 도 2에 제시하였다.
인간 TSLPR 세포외 도메인 재조합 단백질에 대한 인간 TSLP 재조합 단백질의 결합을 ELISA로 검사한 결과, EC50 = 0.11nM을 나타내었고, 이는 재조합 인간 TSLP가 인간 TSLPR에 높은 친화도로 결합함을 지시한다(도 3).
실시예 2. TSLPR 안정적으로 형질감염된 세포의 작성
1) Ba/F3-hTSLPR 안정적으로 형질감염된 세포주의 작성
Ba/F3 세포를 10% 소 태아 혈청, 50μM 2-메르캅토에탄올, 2mM L-글루타민, 50 ㎍/㎖의 페니실린-스트렙토마이신, 및 10 ng/㎖의 마우스 IL-3이 함유된 RPMI-1640 배지에 유지시켰다. 인간 TSLPR을 발현하는 렌티바이러스 발현 벡터[광저우 풀렌젠 코포레이션 리미티드(Guangzhou FulenGen Co., Ltd.), EX-W0156-Lv105-B]를 사용하여 Lenti-Pac HIV 렌티바이러스 패키지 키트(Lentivirus Packaging Kit)(광저우 풀렌젠 코포레이션 리미티드)로 바이러스를 패키징하고, Ba/F3 세포 내로 형질감염시키고, 내성 스크리닝을 위해 퓨로마이신(puromycin)을 첨가하여 인간 TSLPR을 안정적으로 발현할 수 있는 세포주 Ba/F3-hTSLPR을 수득하였다. 도 4에서 보여주듯이, 세포 표면 TSLPR에 대한 비오틴화된 인간 TSLP 단백질의 결합의 검출에 의해 결정된 바와 같이, 작성된 세포는 EC50 = 0.22nM로 인간 TSLPR을 발현하였다.
2) Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 안정적으로 형질감염된 세포주의 작성
TSLP 수용체 복합체의 신호전달에 관여하는 IL-7Rα과 함께 TSLPR에 TSLP를 결합시켜 이종이량체 수용체 복합체를 형성하였고, IL-7Rα의 세포내 분절에 있는 JAK1 및 TSLPR의 세포내 분절에 있는 JAK2를 인산화하여 다운스트림 신호전달 분자를 활성화함으로써, 활성화 신호를 세포 내부로 전달하였다. 인간 TSLPR을 발현하는 렌티바이러스 발현 벡터에 IRES(GenBank KM077140.1, 99-745)와 인간 IL-7Rα 유전자를 클로닝하고, 이중 유전자 공동 발현 플라스미드 pLenti-CMV-TSLPR-IRES-IL7Rα-Puro를 수득하고, 그런 다음 Ba/F3 세포 내로 형질감염시켜 완전한 인간 TSLP 신호 전달 경로를 갖는 안정적으로 형질감염된 세포를 작성하였다.
Ba/F3 세포를 10% 소 태아 혈청, 2mM L-글루타민, 50 ㎍/㎖의 페니실린-스트렙토마이신 및 2 ng/㎖의 마우스 IL-3이 함유된 RPMI-1640 배지에서 유지시켰다. 인간 TSLPR 및 IL-7Rα 이중 유전자 공동 발현 플라스미드를 Lenti-Pac HIV 렌티바이러스 패키징 키트를 사용하여 렌티바이러스 내로 패키징하고, Ba/F3 세포에 재조합 바이러스를 함유하는 배양 상청액을 형질도입하고, 내성 스크리닝을 위해 퓨로마이신을 첨가하여 인간 TSLPR 및 IL-7Rα를 안정적으로 발현할 수 있는 세포주 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα를 수득하였다. 작성된 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포주는 세포 증식 활성 분석에 의해 측정된 바와 같이 EC50 = 0.22nM로 인간 TSLP에 대한 용량 의존적 증식 반응을 나타내었다(도 5).
3) Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα-STAT5 luc 리포터 세포주의 작성
STAT5-luc 리포터 유전자를 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 안정적으로 형질감염된 세포주로 전달하여 STAT5 루시페라제 리포터 세포주를 스크리닝하였다. 먼저, 5개의 STAT5 반응 요소(AGTTCTGAGAAAAGT)를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 합성하고 제한 엔도뉴클레아제 KpnI 및 HindIII에 의해 pGL4.22-luc2P[프로메가(Promega), E6761]에 클로닝하는 한편, Puro 내성 유전자를 대체하기 위해 내습성 유전자를 벡터에 클로닝하여, pGL4.22-luc2p STAT5 RE-hygro를 생성하였다. 두 번째로, pGL4.22-luc2p STAT5 RE-hygro 플라스미드 10 ㎍을 5×106 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 안정적으로 형질감염된 세포와 혼합한 다음, 950 μF의 정전용량으로 300V에서 전기천공하였고; 200㎍/㎖의 하이그로마이신(hygromycin) B 용액을 형질감염 48 내지 72시간 후에 첨가하고, 선별 배지를 3 내지 5일마다 교체하였다. 항생물질 농도가 증가하는 기간 동안 스크리닝한 후, 안정적으로 형질감염된 세포에 의해 콜로니를 형성하고 한계 희석을 거쳐 단일클론성 균주를 수득하였고, 이를 6시간 동안 상이한 농도의 TSLP로 자극할 수 있고, 이어서 형광 신호를 검출할 수 있다. 도 6은 TSLP 농도가 증가함에 따라 형광 신호가 점진적으로 증가함을 보여주며, 이는 TSLP가 안정적으로 형질감염된 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα-STAT5 luc의 STAT 5 신호전달 경로를 EC50 = 0.22nM로 활성화할 수 있음을 보여준다.
실시예 3 동물의 면역화
6주령의 암컷 Balb/C 마우스를 2주에 한 번 피하 면역화를 위해 선택하였고, 여기서 각 마우스를 동일한 부피의 프로인드 보조제(Freund's adjuvant)와 혼합된 항원(인간 및 사이노몰구스 마카크의 TSLP) 50 ㎍으로 교대로 면역화하였다. 4회 면역화한 후 꼬리에서 혈액을 채취하고, 마우스 혈청의 역가 및 TSLPR에 대한 TSLP의 결합에 관한 혈청의 억제 효과를 ELISA로 결정하였다. 대안적으로, 초기 면역화 후, 유전자 총을 사용하여 부스터(booster) 면역화를 격주로 수행하였고, 여기서 노출된 마우스 복부 맨살에 인간 TSLP 발현 플라스미드와 금 분말의 혼합물로 400 psi의 압력에서 총 9회 충격을 가하였다.
실시예 4 항체 스크리닝
1) Fab 파지 라이브러리
마지막 면역화 3주 후, 실시예 3의 면역화된 동물을 꼬리 정맥 주사에 의해 10 ㎍/100 ㎕/마우스의 인간 TSLP 재조합 단백질로 시험감염(challenging) 면역화시켰다. 4일 후 마우스 림프절과 비장세포에서 RNA를 TRNzol 용해법으로 추출한 후 역전사하여 단일 쇄 cDNA를 합성하고, 이를 주형으로 사용하여 항체의 가변성 영역 서열을 증폭시켰다. Fab 항체 단편 파지 디스플레이 플랫폼에 TSLP 면역 라이브러리를 5×109 이상의 라이브러리 크기로 작성하였고, 유도 발현을 위해 96개의 단일클론을 무작위로 선택하였다. 웨스턴 블롯에서 경쇄와 중쇄의 발현율은 95% 이상이었고, 서열 다양성도 양호하였다. 맥시소프(Maxisorp) 면역관에서 인간 TSLP 재조합 단백질 또는 사이노몰구스 마카크 TSLP 재조합 단백질을 코팅하여 TSLP 항체 라이브러리를 스크리닝하였다. 2 라운드의 스크리닝 후, TSLP를 특이적으로 인식하고 TSLP-TSLPR 결합을 효율적으로 차단할 수 있는 여러 양성 클론을 수득하였다. 단일클론성 항체 Fab를 TG1 컴피턴트(competent) 세포에서 발현시켰고, 인간과 사이노몰구스 마카크 TSLP에 대한 결합 및 TSLP/TSLPR의 차단을 다시 확인하여, 인간과 사이노몰구스 마카크 둘 다에 동시에 결합하여 TSLPR에 TSLP이 고 효율로 결합하는 것을 차단할 수 있는 고 친화도의 클론 6개를 생성하였다(결과는 표 1에 제시하였다).
[표 1]
ELISA에 의한 Fab 파지 라이브러리 스크리닝
Figure pct00001
2) 마우스 하이브리도마
마우스를 꼬리 정맥 주사에 의해 10 ㎍/100 ㎕/마우스의 인간 TSLP 재조합 단백질로 시험감염 면역화시켰다. 4일 후, 마우스의 림프절 및 비장을 채취하여 DMEM에서 분쇄하여 B 세포 현탁액을 수득하고, 이를 SP2/0과 적당량으로 혼합한 후 전기융합 기구를 이용하여 세포 융합시켰다. 융합 세포를 5% CO2, 37℃에서 HAT가 함유된 DMEM 완전 배지에서 배양하였다.
3) 하이브리도마의 스크리닝
인간 TSLP에 대한 결합에 관한 효소-연결된 면역흡착 분석(ELISA)에 의한 스크리닝
인간 TSLP 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ug/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. PBS로 1회 세척한 후, 하이브리도마 상청액 또는 파지 상청액 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 60분 동안 항온처리하였고; PBST[PBS + 0.05% 트윈(Tween)-20] 및 PBS로 각각 3회 세척한 후, HRP-표지화된 항-인간 IgG Fc 2차 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 60분 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 각 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다.
사이노몰구스 마카크 TSLP에 대한 결합에 관한 하이브리도마 세포 ELISA에 의한 스크리닝
사이노몰구스 마카크 TSLP 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ug/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. PBS로 1회 세척한 후, 하이브리도마 상청액 또는 파지 상청액 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 60분 동안 항온처리하였고; PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, HRP-표지화된 항-인간 IgG Fc 2차 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 60분 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 각 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다.
인간 TSLP-TSLPR 결합의 차단에 대한 ELISA에 의한 스크리닝
인간 TSLPR 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. 하이브리도마 세포 상청액 또는 파지 상청액을 차단된 U자형 96-웰 플레이트에서 60 ng/㎖의 비오틴화된 인간 TSLP 단백질과 함께 실온에서 30분 동안 항온처리하였다. 96-웰 플레이트를 PBS로 3회 세척하고, 항온처리된 혼합물 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 3회 세척한 후, 스트렙타비딘-접합된 양고추냉이 퍼옥시다제(SA-HRP: streptavidin-conjugated horseradish peroxidase) 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 30분 동안 암실에서 배양하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다.
사이노몰구스 마카크 TSLP 및 사이노몰구스 마카크 TSLPR 차단에 대한 ELISA에 의한 스크리닝
사이노몰구스 마카크 TSLPR 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 1시간 동안 차단하였다. 하이브리도마 세포 상청액 또는 파지 상청액을 차단된 U자형 96-웰 플레이트에서 60 ng/㎖의 비오틴화된 사이노몰구스 마카크 TSLP 단백질과 함께 실온에서 30분 동안 항온처리하였다. 96-웰 플레이트를 PBS로 3회 세척하고, 항온처리된 혼합물 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, SA-HRP 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 암실에서 30분 동안 실온에서 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다.
세포 수준에서의 차단
Ba/F3-hTSLPR 세포를 96-웰 U-플레이트에 5×104/웰로 첨가하였다. 항체를 비오티닐화된 인간 TSLP 단백질과 함께 4℃에서 30분 동안 항온처리한 후 세포에 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 항온처리한 다음, 스트렙타비딘-접합된 피코에리트린 플루오레세인(SA-PE: treptavidin-conjugated phycoerythrin fluorescein)을 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 45분 동안 항온처리하였다. 세포 수준에서 항체의 차단 효과를 유세포 분석에 의해 검출하였다.
인간 TSLP에 결합하는 하이브리도마의 총 712개 클론을 ELISA에 의해 스크리닝하였고, 여기서 하이브리도마의 52개 클론은 ELISA 및 세포 기반 분석 모두에서 인간 TSLPR에 대한 인간 TSLP의 결합을 차단할 수 있었다. 사이노몰구스 마카크 TSLP에 결합하고 사이노몰구스 마카크 TSLPR에 대한 사이노몰구스 마카크 TSLP의 결합을 차단하는 6개의 양성 클론이 존재하였다(결과는 표 2 참조).
[표 2]
ELISA에 의한 하이브리도마 상청액 스크리닝
Figure pct00002
실시예 5 항체 서열의 획득
하이브리도마 스크리닝의 결과에 따라서, 양성 단일클론성 세포를 1000 rpm으로 원심분리하여 세포를 수집하고, 트리졸(Trizol)로 추출한 전체 RNA를 주형으로 사용하여 첫 번째 가닥 cDNA를 합성하고, 이를 후속 주형으로서 사용하여, 하이브리도마 세포에 해당하는 가변성 영역 DNA 서열을 증폭시켰다. 50 ㎕의 반응 시스템에서 cDNA 1 ㎕, 10×PCR 완충액 5 ㎕, 정방향 및 역방향 프라이머 각각 1 ㎕, dNTP 1 ㎕, 25 밀리몰 MgCl2 1 ㎕, H2O 39 ㎕, Taq 효소 1 ㎕를 첨가하고, 95℃에서 10분 동안의 초기 변성 및 온도 순환을 포함하는 PCR 증폭을 수행하였다. 반응 조건은 30 주기의 94℃에서 1분 동안의 변성, 58℃에서 1분 동안의 어닐링, 72℃에서 15초 연장 이후, 72℃에서 10분 동안의 항온처리였다. 파지 스크리닝 결과를 바탕으로, 양성 클론의 가변성 영역 서열을 증폭하였다. 서열분석 후, 수득된 후보 양성 클론의 중쇄 및 경쇄 가변성 영역 서열은 각각 다음과 같았다:
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
실시예 6 항-TSLP 키메라 항체의 제조
실시예 5에서 수득된 중쇄 및 경쇄 가변성 영역 서열 단편을 PCR 증폭하고, 인간 중쇄 불변성 영역을 포함하는 벡터에 중쇄 가변성 영역을 클로닝하여 포유동물 세포에서 전체 IgG1 중쇄를 발현시켰다. 유사하게, 포유동물 세포에서 전체 카파 경쇄를 발현하기 위해 인간 경쇄 불변성 영역을 포함하는 벡터에 경쇄 가변성 영역을 클로닝하였다. 벡터를 서열분석으로 확인한 후 HEK293.6E 포유동물 세포 내로 형질감염시킨 후, IgG1을 발현하여 배양 배지로 분비하고, 단백질 A 크로마토그래피로 정제하였고, 여기서 상청액을 합치고, 수집하고, 여과하고, IgG를 단백질 A 크로마토그래피로 정제하였고; 용출된 단백질을 한외여과로 농축하고, IgG의 농도를 분광광도법으로 결정하고, IgG의 순도를 SDS-PAGE로 분석하였다. 39G5-H8, 71G4, 79D6, 80B12, 80D12 및 80E11의 키메라 항체를 수득하였다.
실시예 7 키메라 항체에 대한 친화도 결정
1) 인간 TSLP에 대한 항체의 결합
인간 TSLP 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. PBS로 1회 세척한 후, 항-TSLP 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 60분 동안 항온처리하였고; PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, HRP-표지화된 항-인간 IgG Fc 2차 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 60분 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 각 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 도 7a 및 표 3은 실시예 6에서 수득된 각각의 키메라 항체가 인간 TSLP에 결합함을 보여준다.
2) 사이노몰구스 마카크 TSLP에 대한 항체의 결합
사이노몰구스 마카크 TSLP 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ug/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. PBS로 1회 세척한 후, 항-TSLP 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 60분 동안 항온처리하였고; PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, HRP-표지화된 항-인간 IgG Fc 2차 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 60분 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 각 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 도 7-b 및 표 3은 실시예 6에서 수득된 각각의 키메라 항체가 사이노몰구스 마카크 TSLP에 결합함을 보여준다.
[표 3]
키메라 항체의 ELISA 검출
Figure pct00008
3) BIAcore에 의한 친화도 분석
인간 TSLP에 대한 항-TSLP 항체의 동역학적 결합 활성은 BIAcore T200 시스템을 사용하여 측정하였다. 2 ㎍/㎖의 항-TSLP 항체를 40초 동안 10 ㎕/분의 유속으로 이동 완충액로서 1×HBS-EP 완충액을 사용하여 센서 칩 단백질 A에 고정화시켰다. 0 내지 21.7nM 범위의 다양한 농도의 인간 TSLP를 30 ㎕/분의 유속으로 고정화된 항-TSLP 항체 표면에 주입하였다. 각 주입 주기 후, 단백질 A 칩 표면을 30 ㎕/분의 유속으로 재생 완충액 10mM 글리신(pH 2.0)으로 재생하였다.
BIAevaluation 소프트웨어를 사용하여 결과 데이터를 랑뮤(Langmuir) 1:1 동역학 이론 모델에 정합시켜 결합 속도 상수(ka), 해리 속도 상수(kd) 및 평형 해리 상수 KD를 분석하였다. 표 4는 각각의 키메라 항체가 인간 TSLP에 높은 친화도로 결합함을 보여준다.
[표 4]
키메라 항체의 친화도
Figure pct00009
실시예 8 ELISA 수준에서의 차단
1) 항체에 의한 인간 TSLPR에 대한 인간 TSLP의 결합 차단
인간 TSLPR 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. 항-TSLP 항체를 차단된 U자형 96-웰 플레이트에서 60 ng/㎖의 비오틴화된 인간 TSLP 단백질과 함께 실온에서 30분 동안 항온처리하였다. 96-웰 플레이트를 PBS로 3회 세척하고, 항온처리된 혼합물 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, SA-HRP 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 암실에서 30분 동안 실온에서 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 도 8a 및 표 3은 각각의 키메라 항체에 의한 인간 TSLPR에 대한 인간 TSLP의 결합 차단을 보여준다.
2) 항체에 의한 사이노몰구스 마카크 TSLPR에 대한 사이노몰구스 마카크 TSLP의 결합 차단
사이노몰구스 마카크 TSLPR 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. 항-TSLP 항체를 실온에서 30분 동안 차단된 U자형 96-웰 플레이트에서 60 ng/㎖의 비오틴화된 사이노몰구스 마카크 TSLP 단백질과 함께 항온처리하였다. 96-웰 플레이트를 PBS로 3회 세척하고, 항온처리된 혼합물 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, SA-HRP 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 암실에서 30분 동안 실온에서 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 도 8-b 및 표 3은 각각의 키메라 항체에 의한 사이노몰구스 마카크 TSLPR에 대한 사이노몰구스 마카크 TSLP의 결합 차단을 보여준다.
실시예 9 세포 수준에서의 차단
Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포를 PBS로 3회 세척하고, 300 g에서 3분 동안 원심분리하고, 3% BSA/PBS로 30분 동안 차단하였다. 세포를 재현탁하고 96-웰 U-플레이트에 5×104/웰로 첨가하였다. 항체를 60 ng/㎖의 비오틴화된 인간 TSLP 단백질과 함께 실온에서 10분 동안 항온처리한 다음, 세포에 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 45분 동안 항온처리하고 0.5% BSA/PBS로 2회 세척하고, SA-PE를 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 45분 동안 항온처리하고, 0.5% BSA/PBS로 2회 세척하고, PI 염료를 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 10분 동안 항온처리하고, 0.5% BSA/PBS로 2회 세척하고, 세포를 PBS에 재현탁하고 세포 수준에서 항체의 차단 효과를 유세포 분석에 의해 검출하였다. 도 9는 각각의 키메라 항체가 세포 표면 TSLPR에 대한 TSLP의 결합을 차단할 수 있음을 보여준다.
실시예 10: 키메라 항체에 의한 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포의 TSLP-자극 증식의 억제
TSLP 항체에 의한 TSLP-유도된 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포 증식의 억제에 대한 분석을 10% 소 태아 혈청이 포함된 RPMI-1640에서 수행하였다.
Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포를 2×104 세포/웰의 농도로 하루 전에 96-웰 세포 배양 플레이트에 첨가하였다. 희석된 항-TSLP 항체 60 ㎕를 실온에서 15분 동안 5 ng/㎖의 인간 TSLP 60 ㎕와 함께 예비-항온처리하였다. 예비-항온처리된 항체-사이토카인을 100 ㎕/웰로 세포 배양 플레이트에 첨가하였다. 96-웰 플레이트를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 72시간 동안 항온처리하였다. 배양 후, 각 웰에 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)를 첨가하여 10분 동안 반응시켰다. 흑색 96-웰 플레이트에서 발광 값을 판독하였다. 도 10 및 표 5에 제시된 바와 같이, 각각의 항체는 세포 증식을 억제할 수 있으며, 71G4 억제가 가장 유의적이다.
[표 5]
키메라 항체에 의한 세포 증식의 억제 IC50
Figure pct00010
실시예 11 키메라 항체에 의한 TSLP-활성화된 STAT5 신호전달의 억제
Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα-STAT5 luc 세포를 밤새 기아 상태로 만들고 다음날 96-웰 플레이트에 웰당 50 ㎕씩 5×104/웰로 도말하였고; 인간 TSLP를 희석하고 미리 37℃에서 30분 동안 항온처리하였고; 50 ㎕의 리간드/항체 혼합물을 블렌딩을 위해 세포 플레이트에 피펫팅하고, 혼합물을 37℃에서 6시간 동안 항온처리하였고; 형광 검출 시약 100 ㎕를 첨가하였고; 각 웰의 발광 값을 미량정량판 판독기로 판독하였다. 도 11 및 표 6에 제시된 바와 같이, 각각의 항체는 리포터 유전자의 발현을 억제할 수 있으며, 71G4 억제가 가장 유의적이다.
[표 6]
키메라 항체에 의한 STAT5 리포터 유전자의 억제 IC50
Figure pct00011
실시예 12 항체의 인간화
TSLP 항체 39G5, 71G4, 76A8, 79D6, 80B12, 80D12 및 80E11은 동일하거나 유사한 마우스 생식세포 계열 유전자로부터 유래되었고, 가장 강력한 중화 활성을 갖는 뮤린 항체 39G5 및 71G4가 가변성 영역 서열 인간화를 위해 선택되었다.
먼저, 뮤린 항체 39G5의 서열을 인간 항체 생식세포 계열의 서열과 정렬시켜, 상동성이 양호하고 항체 구조 코어(상부 소수성 코어)를 유지하는 핵심 아미노산 서열과 완전히 동일하며 인체에서 발생 빈도가 높은 인간 생식세포 계열 경쇄 유전자 VK_1_39 및 IGKJ1*01, 및 인간 생식세포 계열 중쇄 유전자 VH-1-69 및 IGHJ4*01을 발견하고, 뮤린 항체 CDR 이식을 수행하였고; 뮤린 항-71G4 경쇄 및 중쇄의 공급원은 39G5의 공급원과 동일하고 CDR 3의 1개 또는 2개의 아미노산만이 동일한 유형의 상이한 아미노산 잔기였고; 따라서, 71G4 중쇄의 CDR1 및 CDR2를 각각 인간화 39G5 중쇄로 치환하고, 동시에 71G4 인간화 경쇄 또는 39G5 인간화 경쇄를 각각 39G5 인간화 중쇄와의 쌍 형성 발현에 사용하여, 분자 표면 전하의 친화도 및 분포를 개선하도록 코어 결합 부위 주변 영역을 최적화하였다. 후속적으로, 인실리코(in silico) 상동 모델링을 동시에 수행하고, 골격구조 아미노산 서열, 분자 표면 전하, CDR 영역과 그 주변 영역의 소수성 영역 분포를 분석하고, 서로 다른 중쇄 유도체와 경쇄 유도체를 결정하여 TSLP 항체의 다음과 같은 27개 인간화 변이체를 수득하였다: Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26 및 Ab27. 이들 27개의 인간화 변이체의 중쇄 및 경쇄는 표 7에 제시된다.
[표 7]
TSLP 항체의 인간화 고안
Figure pct00012
경쇄 및 중쇄 유도체의 전체 서열을 각각 합성하고, 항체 카파 쇄의 불변성 영역 C카파 또는 인간 IgG1의 불변성 영역 CH1-CH3을 포함하는 벡터에 클로닝하였다. 경쇄 및 중쇄 유도체 플라스미드를 조합하여 쌍을 형성하고, 5 내지 6일 동안 발현을 위해 HEK293.6E 세포 내로 형질감염시키고, 단백질 A 컬럼 정제를 위해 상청액을 수집하였다.
인간화 항체 중쇄/경쇄 가변성 영역 서열은 다음과 같다:
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
실시예 13 인간화 항체에 대한 친화도 결정
1) 인간 TSLP에 대한 인간화 항체의 결합
인간 TSLP 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. PBS로 1회 세척한 후, 항-TSLP 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 60분 동안 항온처리하였고; PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, HRP-표지화된 항-인간 IgG Fc 2차 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 60분 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 각 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 도 12a, c 및 e 및 표 8은 실시예 12에서 수득된 인간화 항체 각각이 인간 TSLP에 결합하고 Ab20이 가장 강한 결합 활성을 가짐을 보여준다.
2) 사이노몰구스 마카크 TSLP에 대한 인간화 항체의 결합
사이노몰구스 마카크 TSLP 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. PBS로 1회 세척한 후, 항-TSLP 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 60분 동안 항온처리하였고; PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, HRP-표지화된 항-인간 IgG Fc 2차 항체 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 60분 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 각 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 도 12-b, d, 및 f 및 표 8은 Ab14 및 Ab15를 제외한 모든 항체가 사이노몰구스 마카크 TSLP에 결합하고, Ab20이 가장 강한 결합 활성을 가짐을 보여준다.
[표 8]
사이노몰구스 마카크 TSLP에 대한 인간화 항체의 결합에 관한 ELISA에 의한 검출
Figure pct00020
3) BIAcore에 의한 친화도 분석
인간 및 사이노몰구스 마카크 TSLP에 대한 항-TSLP 항체의 동역학적 결합 활성을 BIAcore T200 시스템을 사용하여 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정하였다. 10 ㎕/분의 유속으로 이동 완충액로서 1× HBS-EP 완충액을 사용하여 센서 칩 단백질 A에 대략 100 RU의 항-TSLP 항체를 고정화시켰다. 0 내지 21.7nM 범위의 다양한 농도의 인간 또는 사이노몰구스 마카크 TSLP를 30 ㎕/분의 유속으로 표면 고정화된 항-TSLP 항체 상으로 주입하였다. 각 주입 주기 후, 단백질 A 칩 표면을 30 ㎕/분의 유속으로 재생 완충액 10mM 글리신(pH 2.0)으로 재생하였다. BIAevaluation 소프트웨어를 사용하여 결과 데이터를 랑뮤 1:1 동역학 이론 모델에 정합시켜 결합 속도 상수(ka), 해리 속도 상수(kd) 및 평형 해리 상수 KD를 분석하였다.
표 9는 각각의 항체가 인간 및 사이노몰구스 마카크 TSLP 둘 다에 대해 더 높은 친화도를 갖고, 항체 Ab22, Ab23, Ab24 및 Ab26이 인간 TSLP에 대해 각각 0.06pM, 0.08pM, 0.02pM 및 2pM의 더 높은 친화도를 가지며, 사이노몰구스 마카크 TSLP에 대해 각각 0.04pM, 0.007pM, 0.18pM 및 0.31pM의 더 높은 친화도를 가짐을 보여준다.
[표 9]
인간화 항체에 대한 친화도
Figure pct00021
실시예 14 ELISA 수준에서의 차단
1) 인간화 항체에 의한 인간 TSLPR에 대한 인간 TSLP의 결합의 차단
인간 TSLPR 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. 항-TSLP 항체를 차단된 U자형 96-웰 플레이트에서 60 ng/㎖의 비오틴화된 인간 TSLP 단백질과 함께 실온에서 30분 동안 항온처리하였다. 96-웰 플레이트를 PBS로 3회 세척하고, 항온처리된 혼합물 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, SA-HRP 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 암실에서 30분 동안 실온에서 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 도 13-a, c 및 e 및 표 10은 모든 인간화 항체 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab8, Ab10, Ab13, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 및 Ab26이 TSLPR에 대한 인간 TSLP의 결합을 차단함을 보여준다.
2) 인간화 항체에 의한 사이노몰구스 마카크 TSLPR에 대한 사이노몰구스 마카크 TSLP의 결합의 차단
사이노몰구스 마카크 TSLPR 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 탄산염 완충액에서 1 ㎍/㎖로 96-웰 미량정량판 상에 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 1시간 동안 2% 탈지유를 함유하는 PBS를 200 ㎕/웰로 첨가하여 차단하였다. 항-TSLP 항체를 차단된 U자형 96-웰 플레이트에서 60 ng/㎖의 비오틴화된 사이노몰구스 마카크 TSLP 단백질과 함께 실온에서 30분 동안 항온처리하였다. 96-웰 플레이트를 PBS로 3회 세척하고, 항온처리된 혼합물 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, SA-HRP 100 ㎕를 각 웰에 첨가하고 암실에서 30분 동안 실온에서 항온처리하였다. PBST와 PBS로 각각 3회 세척한 후, TMB 기질 100 ㎕를 웰에 첨가하여 37℃에서 10분 동안 발색시키고, 웰당 2M 황산 용액 50 ㎕로 반응을 종결시키고, 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 도 13-b, d, f 및 표 10은 모든 인간화 항체 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab8, Ab10, Ab13, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 및 Ab26이 사이노몰구스 마카크 TSLPR에 대한 TSLP의 결합을 차단함을 보여준다.
[표 10]
인간화 항체에 의한 TSLPR에 대한 TSLP의 결합의 차단
Figure pct00022
실시예 15 인간화 항체에 의한 TSLPR에 대한 TSLP의 결합의 차단에 관한 FACS에 의한 검출
Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포를 PBS로 3회 세척하고, 300 g에서 3분 동안 원심분리하고, 3% BSA/PBS로 30분 동안 차단하였다. 세포를 재현탁하고 96-웰 U-플레이트에 5×104/웰로 첨가하였다. 항체를 60 ng/㎖의 비오틴화된 인간 TSLP 단백질과 함께 실온에서 10분 동안 항온처리한 다음, 세포에 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 45분 동안 항온처리하고 0.5% BSA/PBS로 2회 세척하고, SA-PE를 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 45분 동안 항온처리하고, 0.5% BSA/PBS로 2회 세척하고, PI 염료를 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 10분 동안 항온처리하고, 0.5% BSA/PBS로 2회 세척하고, 세포를 PBS에 재현탁하고, 세포 수준에서 항체의 차단 효과를 유세포 분석에 의해 검출하였다. 도 14 및 표 11은 인간화 항체 Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 및 Ab26 모두가 세포 표면에서 TSLPR에 대한 TSLP의 결합을 차단하고, 항체들 사이에 유의적인 차이가 없음을 보여준다.
[표 11]
인간화 항체에 의한 세포 상의 TSLP에 대한 TSLPR의 결합의 차단
Figure pct00023
실시예 16 인간화 항체에 의한 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포의 TSLP-자극된 증식의 억제
재조합 인간 TSLPR을 발현하는 세포를 이용하는 단기 증식 생물분석을 적용함으로써 인간 TSLP를 생물학적으로 중화시키는 다양한 항-TSLP 항체의 능력을 평가하였다.
세포를 2×104 세포/웰의 농도로 하루 전에 96-웰 세포 배양 플레이트에 첨가하였다. 희석된 항-TSLP 항체 60 ㎕를 실온에서 15분 동안 5 ng/㎖의 인간 TSLP 60 ㎕와 함께 예비-항온처리하였다. 예비-항온처리된 항체-사이토카인을 100 ㎕/웰로 세포 배양 플레이트에 첨가하였다. 96-웰 플레이트를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 72시간 동안 항온처리하였다. 배양 후 각 웰에 셀타이터-글로를 첨가하여 10분 동안 반응시켰다. 흑색 96-웰 플레이트에서 발광 값을 판독하였다.
도 15 및 표 12는 인간화 항체 Ab22, Ab23, Ab24 및 Ab26이 Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα 세포의 TSLP-자극된 증식을 유의적으로 억제하였음을 보여준다(IC50은 대략 2.20nM, 1.10nM, 1.04nM 및 1.50nM과 동일함). Ab22, Ab23, Ab24 및 Ab26의 억제 효과도 동일한 유형의 항체 A5(특허 US 제10287348 B2호 참조)와 비교할 때 A5(IC50 = 16.55로 결정됨)의 억제 효과보다 우수하였다.
[표 12]
인간화 항체에 의한 세포 증식의 억제
Figure pct00024
실시예 17 인간화 항체에 의한 STAT5 경로 전도 신호를 통한 TSLP의 차단에 관한 리포터 유전자 방법에 의한 검출
Ba/F3-hTSLPR-IL7Rα-STAT5 luc 세포를 밤새 기아 상태로 만들고, 다음 날 웰당 50 ㎕로 5×104/웰로 96-웰 플레이트에 도말하였고; 인간 TSLP를 희석하고 미리 37℃에서 30분 동안 항온처리하였고; 블렌딩을 위해 리간드/항체 혼합물 50 ㎕를 세포 플레이트에 피펫팅하고, 혼합물을 37℃에서 6시간 동안 항온처리하였고; 100 ㎕의 형광 검출 시약을 첨가하였고; 각 웰의 발광 값을 미량정량판 판독기로 판독하였다.
도 16 및 표 13의 결과는 4개의 인간화 항체 Ab22, Ab23, Ab24 및 Ab26이 STAT 5 경로를 통한 TSLP-자극 신호 전달을 유의적으로 억제하였고(IC50 = 0.17nM, 0.17nM, 0.15nM 및 0.18nM), 억제 효과가 A5(결정된 IC50 = 1.93nM, 케네쓰(Kenneth V)의 2017년 보고서를 참조하여, IC50 = 1.4nM)보다 더 우수하였음을 보여준다.
[표 13]
인간화 항체에 의한 STAT5 신호전달 경로의 TSLP-유도된 활성화의 억제 IC50
Figure pct00025
본 개시내용의 취지 및 범주를 벗어나지 않으면서 다양한 변경이 이루어질 수 있고 등가물이 그의 요소를 대체할 수 있다. 본 개시내용의 실시태양의 임의의 특징, 단계 또는 실시태양은 문맥상 달리 지시되지 않는 한 임의의 다른 특징, 단계 또는 실시태양과 조합하여 사용될 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Keymed Biosciences Co.,Ltd Shanghai Lingyue Biopharma Co.,Ltd <120> Development and Application of therapeutic agents for TSLP-related diseases <130> MTPIKR19043 <140> PCT/CN2020/128821 <141> 2020-11-13 <150> CN201911207253.5 <151> 2019-11-29 <160> 176 <170> SIPOSequenceListing 1.0 <210> 1 <211> 393 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 tacgacttca ctaactgtga ctttgagaag attaaagcag cctatctcag tactatttct 60 aaagacctga ttacatatat gagtgggacc aaaagtaccg agttcaacaa caccgtctct 120 tgtagcaatc ggccacattg ccttactgaa atccagagcc taaccttcaa tcccaccgcc 180 ggctgcgcgt cgctcgccaa agaaatgttc gccatgaaaa ctaaggctgc cttagctatc 240 tggtgcccag gctattcgga aactcagata aatgctactc aggcaatgaa gaagaggaga 300 aaaaggaaag tcacaaccaa taaatgtctg gaacaagtgt cacaattaca aggattgtgg 360 cgtcgcttca atcgaccttt actgaaacaa cag 393 <210> 2 <211> 393 <212> DNA <213> Macaca fascicularis <400> 2 tacgacttca ccaactgcga cttccagaag atcgaggccg actacctgag aaccatcagc 60 aaggacctga tcacctacat gagcggcacc aagagcaccg 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gagatgaggc ctatgaccag tgcaccgtct acattctcca ggaaggtcac 240 acctcggggt gcctcctaga cgcagagcag caagacgata ttctgtattt ctccatcagg 300 aacgggacgc accccgtttt caccgccagt cgctggatct tttattacct gaagcccagt 360 tctccgaagc aggtgagctt ttcgtggcat caggacgcgg tgacagtgac gtgctctgac 420 ctgtcctaca ggggtctcct ctatgaggtt cagtaccgga gccccttcga cacggagtgg 480 cagtccaaac aggaaaatac ctgcaatgtc actatagaag acttggatgc cgagaagtgt 540 tatgctttcc gggcccgggt gaaggccatg gaggatgcgt atgggccaga cacgtacccg 600 agcgactggt cagaggtgac gtgctggcag agaggcaaga ctcgcgactc gtgcccagag 660 cctcgcacgc ctcccaaacc gaagctgtcc aaatttatgt tagtttccag cctggccatc 720 cttctgatgg tgtgtcttct ccttctgtct ttacggaaat tatggaggtg a 771 <210> 5 <211> 209 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Gln Gly Gly Ala Ala Glu Gly Val Gln Ile Gln Ile Ile Tyr Phe Asn 1 5 10 15 Leu Glu Thr Val Gln Val Thr Trp Asn Ala Ser Lys Tyr Ser Arg Thr 20 25 30 Asn Leu Thr Phe His Tyr Arg Phe Asn Gly Asp Glu Ala Tyr Asp Gln 35 40 45 Cys Thr Asn Tyr Leu Leu Gln Glu Gly His Thr Ser Gly Cys Leu Leu 50 55 60 Asp Ala Glu Gln Arg Asp Asp Ile Leu Tyr Phe Ser Ile Arg Asn Gly 65 70 75 80 Thr His Pro Val Phe Thr Ala Ser Arg Trp Met Val Tyr Tyr Leu Lys 85 90 95 Pro Ser Ser Pro Lys His Val Arg Phe Ser Trp His Gln Asp Ala Val 100 105 110 Thr Val Thr Cys Ser Asp Leu Ser Tyr Gly Asp Leu Leu Tyr Glu Val 115 120 125 Gln Tyr Arg Ser Pro Phe Asp Thr Glu Trp Gln Ser Lys Gln Glu Asn 130 135 140 Thr Cys Asn Val Thr Ile Glu Gly Leu Asp Ala Glu Lys Cys Tyr Ser 145 150 155 160 Phe Trp Val Arg Val Lys Ala Met Glu Asp Val Tyr Gly Pro Asp Thr 165 170 175 Tyr Pro Ser Asp Trp Ser Glu Val Thr Cys Trp Gln Arg Gly Glu Ile 180 185 190 Arg Asp Ala Cys Ala Glu Thr Pro Thr Pro Pro Lys Pro Lys Leu Ser 195 200 205 Lys <210> 6 <211> 209 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 6 Gln Val Ala Thr Gly Glu Gly Leu Gln Ile Gln Ile Ile Tyr Phe Asn 1 5 10 15 Leu Glu Thr Val Gln Val Thr Trp Asn Ala Ser His Tyr Pro Arg Ser 20 25 30 Asn Leu Ser Phe His Tyr Lys Phe Ser Arg Asp Glu Ala Tyr Asp Gln 35 40 45 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atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcggtt 300 gatggttacc ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Phe Ala Lys Thr Leu Thr Asp Gly Val Pro Ser Arg Leu Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 13 Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 14 Phe Ala Lys Thr Leu Thr Asp 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 15 Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 16 <211> 321 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 16 gaaatccaga tgacccagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtc gaacaagtga gaatatttac agttatttag catggtatca gcagaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatttt gcaaaaacct taacagacgg tgtgccatca 180 aggctcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaacag cctgcagcct 240 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat cattatggta ctccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa a 321 <210> 17 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 17 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Met Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Val Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 18 Thr Gly Tyr Trp Met His 1 5 <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 19 Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20 Ser Val Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr 1 5 <210> 21 <211> 351 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 21 caggtccagc tgcagcagtc tggggctgag cttgtgatgc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggcta cacattcact ggctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggaacg attgataatt ctgatagtga tacaacctac 180 aatcaaaagt tcaagggcaa ggtcacattg actgtagacg aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcggtt 300 gatggttacc ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22 Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr 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ccccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa a 321 <210> 27 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 27 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr Gly Leu Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28 Thr Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 29 Leu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr Gly Leu Asn Gln Arg Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 30 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 30 Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 31 <211> 351 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 31 caggtccagc tgcagcagtc tgggcctcag ctggttaggc ctggggcttc agtaaagata 60 tcctgcaagg cttctggtta ctcattcacc agctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag gtcttgagtg gattggcttg attgatcctt ccgatagtga aactgggtta 180 aatcagaggt tcaaggacaa ggccacattg actgtagaca atccctccag cacagcctac 240 atgcaactca gcagcccgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatccctt 300 gatggttact atgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351 <210> 32 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 32 Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 33 <211> 11 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gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gactactgga tgcactgggt ccgacagatg 120 cctggcaaag gcctggaatg gatgggcatc atcgacccca gcgacagcga cacaagcctg 180 aaccagtctt tccagggcca cgtgacactg agcgtggaca agtctagcac caccgcctac 240 ctgcagtggt ctagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgcgc cagatctctg 300 gacggctact acgattactg gggccaggga accctggtca ccgtttcttc t 351 <210> 117 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 118 <211> 6 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Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 123 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 123 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 124 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 124 Ile Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 125 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125 Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 126 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 126 caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ctagcggcta cacattcacc gactactgga tgcactgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gacttgagtg gatgggcatc atcgacccca gcgacagcga cacaagcctg 180 aaccagaaat tccagggcag agtgaccatc accgccgaca cctctacaag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagatctctg 300 gacggctact acgattactg gggccaggga accctggtca ccgtttcttc t 351 <210> 127 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 127 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 128 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 128 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 129 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 129 Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 130 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130 Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 131 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 131 caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ctagcggcta cacattcacc gactactgga tgcactgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gacttgagtg gatgggcacc atcgacaaca gcgacagcga cacaagcctg 180 aaccagaaat tccagggcag agtgaccatc accgccgaca cctctacaag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagatctctg 300 gacggctact acgattactg gggccaggga accctggtca ccgtttcttc t 351 <210> 132 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 132 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 133 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 133 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 134 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 134 Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 135 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 135 Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 136 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 136 caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ctagcggcta cacattcacc gactactgga tgcactgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gacttgagtg gatgggcacc atcgacaaca gcgacagcga cacaagcctg 180 aaccagaaat tccagggcag agtgaccatc accgccgacg agtctagcag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagatctctg 300 gacggctact acgattactg gggccaggga accctggtca ccgtttcttc t 351 <210> 137 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 137 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 138 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 138 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 139 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 139 Ile Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 140 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 140 Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 141 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 141 gaagtgcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gactactgga tgcactgggt ccgacagatg 120 cctggcaaag gcctggaatg gatgggcatc atcgacccca gcgacagcga cacaagcctg 180 aaccagtctt tccagggcca cgtgacaatc agcgccgaca agagcatcag caccgcctac 240 ctgcagtggt ctagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgcgc cagatctctg 300 gacggctact acgactactg gggccaggga acactggtca ccgttagctc t 351 <210> 142 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 142 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 143 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 143 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 144 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 144 Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 145 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 145 Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 146 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 146 gaagtgcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gactactgga tgcactgggt ccgacagatg 120 cctggcaaag gcctggaatg gatgggcacc atcgacaaca gcgacagcga cacaagcctg 180 aaccagagct ttcagggcca cgtgacaatc agcgccgaca agtctatcag caccgcctac 240 ctgcagtggt ctagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgcgc cagatctctg 300 gacggctact acgactactg gggccaggga acactggtca ccgttagctc t 351 <210> 147 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 147 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 148 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 148 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 149 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 149 Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Ser Leu Asn Gln Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 150 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 150 Ser Leu Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 151 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 151 gaagtgcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gactactgga tgcactgggt ccgacagatg 120 cctggcaaag gcctggaatg gatgggcacc atcgacaaca gcgacagcga cacaagcctg 180 aaccagagct ttcagggcca cgtgacaatc agcgccgaca agtctagcac caccgcctac 240 ctgcagtggt ctagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgcgc cagatctctg 300 gacggctact acgattactg gggccaggga accctggtca ccgtttcttc t 351 <210> 152 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 152 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Val Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 153 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 153 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 154 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 154 Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 155 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 155 Ser Val Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr 1 5 <210> 156 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 156 caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ctagcggcta cacattcacc gactactgga tgcactgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gacttgagtg gatgggcacc atcgacaaca gcgacagcga cacaacctac 180 aacccatctt tccagggcca cgtgacaatc agcgccgaca agagcatcag caccgcctac 240 ctgcagtggt ctagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgtgc cagatctgtg 300 gacggctacc tggattactg gggccaggga accctggtca ccgtttcttc t 351 <210> 157 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 157 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Val Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 158 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 158 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 159 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 159 Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 160 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 160 Ser Val Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr 1 5 <210> 161 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 161 caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ctagcggcta cacattcacc gactactgga tgcactgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gacttgagtg gatgggcacc atcgacaaca gcgacagcga cacaacctac 180 aaccagaaat tccagggcag agtgaccctg accgtggaca cctctacaag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagatctgtg 300 gacggctacc tggattactg gggccaggga accctggtca ccgtttcttc t 351 <210> 162 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 162 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Val Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 163 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 163 Thr Asp Tyr Trp Met His 1 5 <210> 164 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 164 Thr Ile Asp Asn Ser Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 165 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 165 Ser Val Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr 1 5 <210> 166 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 166 caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ctagcggcta cacattcacc gactactgga tgcactgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gacttgagtg gatgggcacc atcgacaaca gcgacagcga cacaacctac 180 aaccagaaat tccagggcag agtgaccatg accagagaca cctctacaag caccgtctac 240 atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagatctgtg 300 gacggctacc tggattactg gggccaggga accctggtca ccgtttcttc t 351 <210> 167 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 167 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Arg Thr Leu Pro Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Thr Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 168 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 168 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 169 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 169 Asn Ala Arg Thr Leu Pro Glu 1 5 <210> 170 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 170 Gln His His Tyr Thr Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 171 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 171 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcga gaacatctac agctacctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggctc ccaagctgct gatctacaac gccagaacac tgcctgaggg cgtgccctct 180 agattcagcg gatctggctc tggcaccgac ttcaccctga caatctctag cctgcagcct 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcac cactacacca caccttggac attcggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 172 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 172 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Ala Lys Thr Leu Thr Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 173 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 173 Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 174 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 174 Phe Ala Lys Thr Leu Thr Asp 1 5 <210> 175 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 175 Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 176 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 176 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gaaccagcga gaacatctac agctacctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggctc ccaagctgct gatctacttc gccaagacac tgaccgacgg cgtgccctct 180 agattcagcg gatctggctc tggcaccgac ttcaccctga caatctctag cctgcagcct 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcac cactacggca caccttggac attcggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321

Claims (10)

  1. 서열 번호 8-10, 18-20, 28-30, 38-40, 48-50, 58-60, 68-70, 78-80, 83-85, 88-90, 93-95, 98-100, 103-105, 108-110, 113-115, 118-120, 123-125, 128-130, 133-135, 138-140, 143-145, 148-150, 153-155, 158-160, 163-165, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 CDR, 및/또는 서열 번호 13-15, 23-25, 33-35, 43-45, 53-55, 63-65, 73-75, 168-170, 173-175, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 CDR을 포함하는, 흉선 기질상 림포포이에틴(TSLP: Thymic stromal lymphopoietin)에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  2. 제1항에 있어서,
    서열 번호 8, 18, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 83, 88, 93, 98, 103, 108, 113, 118, 123, 128, 133, 138, 143, 148, 153, 158, 163, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 CDR1, 서열 번호 9, 19, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 84, 89, 94, 99, 104, 109, 114, 119, 124, 129, 134, 139, 144, 149, 154, 159, 164, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 CDR3; 및/또는 서열 번호 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 168, 173, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 CDR1; 서열 번호 14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 169, 174, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 15, 25, 35, 45, 55, 65, 75, 170, 175, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    (1) 각각 서열 번호 8-10을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 13-15를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (2) 각각 서열 번호 18-20을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 23-25를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (3) 각각 서열 번호 28-30을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 33-35를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (4) 각각 서열 번호 38-40을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 43-45를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (5) 각각 서열 번호 48-50을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 53-55를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (6) 각각 서열 번호 58-60을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 63-65를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (7) 각각 서열 번호 68-70을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 73-75를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (8) 각각 서열 번호 78-80을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (9) 각각 서열 번호 83-85를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (10) 각각 서열 번호 88-90을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (11) 각각 서열 번호 93-95를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (12) 각각 서열 번호 98-100을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (13) 각각 서열 번호 103-105를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (14) 각각 서열 번호 108-110을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (15) 각각 서열 번호 113-115를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (16) 각각 서열 번호 118-120을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (17) 각각 서열 번호 123-125를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (18) 각각 서열 번호 128-130을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (19) 각각 서열 번호 133-135를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (20) 각각 서열 번호 138-140을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (21) 각각 서열 번호 143-145를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (22) 각각 서열 번호 148-150을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (23) 각각 서열 번호 153-155를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (24) 각각 서열 번호 158-160을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (25) 각각 서열 번호 163-165를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 168-170을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (26) 각각 서열 번호 153-155를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (27) 각각 서열 번호 158-160을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (28) 각각 서열 번호 163-165를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (29) 각각 서열 번호 78-80을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (30) 각각 서열 번호 83-85를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (31) 각각 서열 번호 98-100을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (32) 각각 서열 번호 103-105를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
    (33) 각각 서열 번호 123-125를 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열; 및
    (34) 각각 서열 번호 128-130을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 각각 서열 번호 173-175를 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 및 경쇄의 CDR 조합을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    서열 번호 7, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 82, 87, 92, 97, 102, 107, 112, 117, 122, 127, 132, 137, 142, 147, 152, 157, 162, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 중쇄 가변성 영역, 및/또는 서열 번호 12, 22, 32, 42, 52, 62, 72, 167, 172, 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열로부터 선택된 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 7 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 12 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 17 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 22 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 27 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 32 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 37 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 42 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 47 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 52 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 57 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 62 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 67 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 72 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 77 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 82 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 87 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 92 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 97 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 102 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 107 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 112 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 117 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 122 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 127 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 132 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 137 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 142 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 147 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 152 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 157 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 162 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 167 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 152 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 157 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 162 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 77 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 82 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 97 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 102 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 122 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 서열 번호 127 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 중쇄 가변성 영역, 및 서열 번호 172 또는 그의 임의의 변이체의 아미노산 서열의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자, 또는 이에 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 분자; 바람직하게는, 서열 번호 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 86, 91, 96, 101, 106, 111, 116, 121, 126, 131, 136, 141, 146, 151, 156, 161, 166, 또는 그의 임의의 변이체로부터 선택된 항체 중쇄 뉴클레오티드 서열, 및/또는 서열 번호 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 171, 176, 또는 그의 임의의 변이체로부터 선택된 항체 경쇄 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
  6. 제5항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  7. 제6항에 따른 핵산 분자 또는 제8항에 따른 벡터를 포함하는 세포.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분, 제5항에 따른 핵산 분자, 제6항에 따른 벡터, 및/또는 제7항에 따른 세포를 포함하는 조성물.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분, 제5항에 따른 핵산 분자, 제6항에 따른 벡터, 제7항에 따른 세포, 및/또는 제8항에 따른 조성물을 포함하는 키트.
  10. TSLP-관련 질환을 치료하기 위한 약제 또는 키트의 제조에서의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 부분, 제5항에 따른 핵산 분자, 제6항에 따른 벡터, 제7항에 따른 세포, 및/또는 제8항에 따른 조성물의 용도로서, 바람직하게는 TSLP-관련 질환이 TSLP-관련 염증성 질환 및 자가면역 질환으로부터 선택되고; 바람직하게는, TSLP-관련 염증성 질환이 알레르기성 염증, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 아토피 피부염 및 호산구성 식도염으로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, 알레르기성 염증이 알레르기성 비염, 알레르기성 부비동염 및 알레르기성 결막염으로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, 자가면역 질환이 류마티스 관절염 또는 다발성 경화증으로부터 선택되는 용도.

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