KR20220109384A - Q-er 펩타이드 - Google Patents

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KR20220109384A
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겔트 웬스부르트
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바이오템프트, 비.브이.
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Abstract

본 발명은 세포에 의한 자가포식을 수반하는 질환의 치료를 위한 수단 및 방법에 관한 것이며, 본 발명에 따른 과정은 조직 수선, 혈관 투과성 및 면역 반응의 기전들에 수반된다. 본 발명은 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 표적화하기 위한 방법 및 수단을 제공하고, 특정 표적화제를 포함하는 분자 및 조성물뿐만 아니라 자가포식 경로 및 그와 관련된 질환에 수반되는 아미노산 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 펩타이드-약물 개발, 특히 자가포식 억제 아미노산 함유 펩타이드(의 개선), 보다 구체적으로 글루타민-함유 펩타이드 및/또는 혈관 및 염증 상태의 치료에 유용한 글루타민 및 다른 자가포식 조정 아미노산 함유 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 당뇨병, 혈관 및/또는 염증 상태의 치료에 유용한 글루타민 펩타이드의 개선에 관한 것이다. 본 발명은 적어도 하나의 PG-도메인 아미노산 모티프 xGxxPG 또는 그것의 기능적 등가물이 제공된 합성 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체를 포함하는, Q-ER 펩타이드를 제공하며, 상기 PG-도메인 모티프는 엘라스틴 수용체 복합체(ER)에 상기 펩타이드의 표적화를 가능하게 하고, 위치 x에 있는 적어도 하나의 아미노산은 아미노산 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌의 군으로부터 선택되며, 상기 펩타이드에는 적어도 하나의 글루타민(Q)이 제공된다.

Description

Q-ER 펩타이드
본 발명은 세포에 의한 자가포식을 수반하는 질환의 치료를 위한 수단 및 방법에 관한 것이며, 본 발명에 따른 과정은 조직 수선, 혈관 투과성 및 면역 반응의 기전들에 수반된다. 본 발명은 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 표적화하기 위한 방법 및 수단을 제공하고, 특정 표적화제를 포함하는 분자 및 조성물뿐만 아니라 자가포식 경로 및 그와 관련된 질환에 수반되는 아미노산 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 펩타이드-약물 개발, 특히 자가포식 억제 아미노산 함유 펩타이드(의 개선), 보다 구체적으로 글루타민-함유 펩타이드 및/또는 혈관 및 염증 상태의 치료에 유용한 글루타민 및 다른 자가포식 조정 아미노산 함유 조성물에 관한 것이다.
글루타민(Gln, Q)은 혈장 및 조직 풀에 가장 풍부한 자유 아미노산이다. 이것은 빠르게 분열하는 세포, 특히 백혈구 및 장세포를 위한 중요한 연료 공급원이다. 글루타민은 체내에 가장 풍부한 비필수 아미노산이며, 스트레스 상태에서 조건부로 필수 아미노산이 된다. 이것은 소장 장세포가 선호하는 연료 공급원이며, 스트레스를 받는 동안 소장의 구조 및 기능을 유지하는데 도움이 되는 것으로 추정된다. 패혈증 및 영양실조 환자의 경우 근육 글루타민이 고갈되며, 이들 환자에서는 림프구와 장에서 글루타민의 가용성이 감소되어 패혈증의 위험이 증가한다. 면역성을 개선하도록 설계된 경장식은 복잡한 결과를 나타내지만, 글루타민 보충은 유해하지 않은 것으로 확인됐으며, 실제로 골수 이식 환자, 수술 후, 및 중병 및 중증 화상 환자의 합병증을 감소시켰다.
비경구 글루타민을 사용한 연구는 일반적으로 장용 글루타민을 이용한 연구보다 더 긍정적이었다. 글루타민은 비필수 아미노산으로 간주되지만, 유익한 조직 재생 특성을 가지며 이화작용 상태에 있는 환자에 대해서는 조건부로 필수 아미노산으로 간주된다는 것이 많은 연구에서 확인되었다[J Nutr 131: 2543S-2549S discussion 2550S-2541S.; Nutr Rev 48: 297-309. doi: 10.1111/j.1753-4887.1990. tb02967.x; Yonsei Med J 52: 892-897. doi: 10.3349/ymj.2011.52.6.892; Lancet 336: 523-525. doi: 10.1016/0140-6736(90)92083-t; PLoSONE 9(1): e84410.doi: 10.1371/journal.pone.0084410]. Shiomi et al.[Inflamm Bowel Dis 17:2261-2274. doi: 10.1002/ibd.21616]은 결장 염증의 급성기에 혈청 및 결장 조직의 Gln 수준이 유의하게 저하되었고, Gln 보충은 덱스트란황산나트륨(DSS)에 의해 유도된 미세 손상 정도를 약화시켰다고 보고했다. 또한, 글루타민 및 알라닐-글루타민 디펩타이드는 실험 모델 내독소혈증 동안 장간막 혈장 유출, 백혈구 유착 및 종양괴사인자-α(TNF-α) 방출을 동반하는 혈관 투과성을 감소시킨다[Scheibe, Ricardo et al., 2009 - 60 Suppl 8 Journal of physiology and pharmacology: an official journal of the Polish Physiological Society].
글루타민-함유 디펩타이드, 예컨대 알라닐-글루타민(1 문자 코드 AQ, 상표명 Dipeptivin®), 글리실-글루타민(GQ), 류실-글루타민(LQ), 발릴-글루타민(VQ), 이소류실-글루타민(IQ), 및 시스테이닐-글루타민(CQ)은 다양한 상태의 치료에 유용하다고 밝혀졌다(US20050059610 참조). 글루타민을 포함하는 트리펩타이드 및 테트라펩타이드(예컨대 LQG, SEQ ID NO: 1(LQGV), AQG, 또는 SEQ ID NO: 2(AQGV), WO2012112048 참조)는 상기 디펩타이드 이상으로 중증 전신 상태를 치료하기 위한 방법 및 제약학적 조성물에 유익하게 사용된다. 상기 트리펩타이드 및 테트라펩타이드는 베타-인간 융모막 성선자극 호르몬으로부터 유래된 합성 선형 글루타민-함유 펩타이드이며, 동물 연구에서 조직-보호 효과를 나타냈다.
예를 들어, SEQ ID NO :1(LQGV)을 가진 테트라펩타이드는 뮤린 다균성 패혈증 모델에서 사망률을 감소시키는 것으로 나타났다(van den Berg et al, Crit Care Med　39: 126-134.). LQGV(5 mg/kg 체중)는 중등도 맹장 결찰 및 천공 후 최초 5일 동안 생존율을 20%에서 50%로 유의하게 개선했다. 이것은 복막 세척액, 폐, 및 더 적은 정도로는 혈장에서 감소된 사이토카인 및 E-셀렉틴 수준과 관련되었다. SEQ ID NO: 1(LQGV) 치료는 또한 폐 핵 인자-κB 활성화 및 폐 손상을 감소시켰다. 심한 맹장 결찰 및 천공 모델에서 수액 소생 및 항생제와 조합된 SEQ ID NO: 1(LQGV)을 가진 테트라펩타이드(5 mg/kg 체중)는 수액 소생 및 항생제 단독 사용시 관찰된 것(30%)보다 유의하게 개선된 생존율(70%)을 가져왔다.
또한, SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 테트라펩타이드는 신장 허혈/재관류 손상(IRI) 및 동종 신장 이식 후 허혈-유도된 지연된 이식편 기능의 마우스 모델에서 생존율을 개선하고 신장 기능 손실을 완화하는 것으로 나타났다(Gueller et al, PLoS One.　2015 Jan 24;10(1): e0115709. doi: 10.1371/journal.pone. 0115709. eCollection 2015). IRI는 35분 동안 일시적 양측 신경겸자에 의해 수컷 C57Bl/6N 마우스에서 유도되었다. SEQ ID NO: 2(AQGV)(20-50 mg/kg 하루 2회, 복강내, 4일 연속)을 이용한 치료는 급성 신장 손상(AKI)이 이미 확립된 경우 IRI 후 24시간째에 개시되었다. 이 치료는 생존율을 용량 의존 방식으로 현저히 개선했다. SEQ ID NO: 2(AQGV)　치료에 의해 IRI 후 2일째에 급성 세뇨관 손상이 감소되었고 세뇨관 상피 세포 증식은 유의하게 증진되었다. 또한, IRI 후 4주째에 SEQ ID NO: 2(AQGV) 치료된 신장 조직에서는 허혈 후 섬유증 마커인 GTGF 상향조절이 유의하게 감소했다. 다음에, SEQ ID NO: 2(AQGV)　치료가 동종 신장 이식 후 허혈-유도된 지연된 이식편 기능의 모델에서 시험되었다. 수혜자는 SEQ ID NO: 2(AQGV)(50 mg/kg)로 하루 2번 복강내 경로로 치료되었으며, 이것은 허혈성 동종이식편 손상을 완화함으로써 신장 기능 및 동종이식편 생존율을 개선했다.
SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 테트라펩타이드는 또한 인간의 전신 염증 반응 증후군(SIRS)의 실험 모델에서 안전하며 유의하고 유익한 면역조정 효과를 갖는 것으로 나타났다(Groenendael et al., Intensive Care Medicine Experimental 2016, 4(Suppl 1):A132). SIRS는 뚜렷한 조직 손상을 초래할 수 있으며, 다기관 부전 및 중환자실 사망률의 빈번한 원인이다. SIRS는 패혈증, 외상 및 대수술과 같은 여러 상해에 의해 유래될 수 있으며, 현재 일상적으로 사용되는 특정 요법은 없는 실정이다. 인간에서 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 테트라펩타이드의 관용성, 안전성 및 면역조정 효과를 조사하기 위해, 60명의 건강한 지원자를 대상으로 이중맹검 위약 대조군 단계적 증량 무작위 임상 시험이 수행되었다. 이 연구는 다음과 같이 두 단계로 수행되었다. 제1 단계에서(n = 24), 펩타이드의 단계적 증량(30, 90 및 180 mg/kg)에 대해 안정성과 관용성이 확립되었다. 제2 단계에서(n = 36)에서는 동일한 용량을 사용하여 실험 모델 인간 내독소혈증 동안 전신 염증(SIRS)에 대한 펩타이드의 효과를 평가했다. t = 0h에서, 2 ng/kg 이콜리(E. Coli) 내독소가 정맥내 투여되었고, 2시간 후에 SEQ ID NO: 2(AQGV)을 가진 테트라펩타이드 또는 위약이 정맥내 주입되었다. 순환 사이토카인 및 유착 분자의 수준뿐만 아니라 체온 및 독감-유사 증상들이 평가되었다.
SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 테트라펩타이드는 잘 관용되었고 우수한 안전성 프로파일을 나타냈다. 이 펩타이드 180 mg/kg(최고 용량)를 이용한 치료는 IL-6, IL-8, IL-1RA, MCP-1, MIP-1α 및 MIP-1β와 유착 분자 VCAM-1의 혈장 수준의 내독소 유도 증가를 유의하게 약화시켰지만, 더 낮은 용량에서는 그렇지 않았다. 또한, 최고 용량은 열 및 독감-유사 증상을 감소시켰다.
SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 테트라펩타이드의 투여는 안전하며, 인간에서 전신 염증 반응의 약화를 가져온다. 그러나, 비경구 적용에 있어서 상기 논의된 디-, 트리- 및 테트라-펩타이드의 단점은 이들이 표적 세포에 도달하여 유익한 작용을 발휘할 수 있기 전에 혈액에서 빠르게 가수분해될 가능성이 있다는 것이다. 이러한 빠른 펩타이드 손실 때문에 원하는 유익한 효과를 얻기 위해서는 고 용량 및 긴 적용 시간을 사용하는 것이 필요하다.
본 발명에 따라서, 유익한 효과를 가진 아미노산이 세포에 표적화되며, 이들은 특히 임의의 특정 수단을 통해 엘라스틴 수용체 복합체를 표적화함으로써 유익한 효과를 가질 수 있다. 바람직하게, 표적화 수단은 아미노산의 내재화를 가능하게 하며, 아미노산이 올리고펩타이드 형식으로 제공되었을 때 상기 내재화는 전형적으로 올리고펩타이드가 리소좀(일반적으로, 본원에서는 자가포식소체라고도 함)으로 전달되는 결과를 가져온다. 따라서, 본 발명은 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 자가포식을 저감하기 위한 방법을 제공하며, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공된다. 다음에, 상기 표적화의 결과로서 상기 공급원이 자가포식 억제 아미노산의 패키지로서 세포에 전달되고, 상기 공급원 또는 패키지가 제공된 분자는 예를 들어 통상적인 내포작용(endocytosis) 및/또는 포식작용에 의해 흡수된 다음, 리소좀(자가포식소체)에서 그것의 구성성분 무리로, 바람직하게 자가포식 억제 아미노산들로 가수분해되고, 개별 아미노산이 상기 세포의 시토졸에 방출된다. 이 방식에서, Q-ER 펩타이드를 상기 세포에 표적화하기 위해 선택된 상기 패키지 내의 자가포식 억제 아미노산 무리에 의해 기계적 라파마이신 표적(mTOR)이 활성화된다. 상기 분자는 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 적어도 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드라고 명명됨)를 포함하는 것이 바람직하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 상기 분자가 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 포함하는 방법을 제공하며, 여기서 φn 및/또는 φm은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 다이펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하며, 바람직하게 AQ, LQ, GQ, AQL, LQL, GQL, PLQ, LQG, AQG의 군으로부터 선택된 펩타이드를 포함한다. 상기 분자는 펩타이드 결합을 통해서 상기 펩타이드에 연결된 것이 바람직하다.
또한, 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는, 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드가 제공되며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산 이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다.
또한, 본 발명은 자동 펩타이드 합성장치를 사용하여 상기 펩타이드를 합성하는 단계를 포함하는, 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드의 생성 방법을 제공하며, 자동 펩타이드 합성장치로 합성함으로써 얻어질 수 있는 Q-ER 펩타이드 및 특히 대상체가 해당 치료를 필요로 한다고 간주될 때 대상체의 세포의 자가포식을 저감하기 위한 상기 Q-ER 펩타이드의 용도를 제공한다. 본 발명에 의해 제공된 올리고펩타이드의 크기는 적절하게 선택되어야 한다. 흡수 속도와 면역 반응 위험의 저감을 위해서는 크기가 작을수록 바람직하고, 반감기와 자가포식 저감 아미노산 전달량을 위해서는 서열이 길수록 바람직하다. 치료될 상태 및 허용되는 용량에 따라, 당업자는 선택적으로 동시에 제공되는 추가의 자가포식 저감 아미노산과 함께(예를 들어 상기 추가의 아미노산을 포함하는 비히클과의 콘쥬게이션을 통해서), 올리고펩타이드의 올바른 크기 또는 상이한 크기들의 조합을 결정할 수 있을 것이다.
이와 함께, 본 발명은 기계적 라파마이신 표적(mTOR) 경로를 수반하는 중심 세포 이벤트를 조절하기 위한 방법을 제공한다(Liu and Sabatini, Nature Reviews Molecular Cell Biology volume 21, pages 183-203(2020)). mTOR 경로는 성장 인자 신호 및 영양 상태와 같은 상이한 세트의 환경 신호들을 통합하여 진핵 세포 성장을 지시한다. 지난 25년 동안, mTOR 신호전달 환경의 매핑은 mTOR가 단백질 합성 및 자가포식을 포함하는 핵심 세포 과정을 조정하여 세포에서 mTOR 활성화 단백질 형성과 단백질 분해 자가포식의 균형을 맞춤으로써 바이오매스 축적 및 대사를 제어한다는 것이 밝혀졌다. 본 발명은 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 표적화된 세포에 전달하는 것을 제공하며, 이후 내포작용 또는 포식작용을 통해 상기 세포, 및 특히 상기 세포의 리소좀 구획에 자가포식 억제 아미노산의 상기 공급원이 제공되고, 상기 구획에서 아미노산이 유리되어(예를 들어 효소 가수분해를 통해서) 시토졸 경로화에 이용할 수 있게 된다.
세포 항성성과 생리학적 항상성을 유지하는데 있어서 mTOR 경로의 중심 역할을 고려하면, mTOR 신호전달의 조절장애는 당뇨병, 신경변성, 암, 염증 및 노화와 같은 대사장애 등의 일반적인 세포 기원을 가진 많은 장애에 관련된다. 특히, 기계적 라파마이신 복합체 I 표적(mTORC1)은 세포 및 유기체 성장의 중심 조절인자이며, 이 경로는 많은 동물 및 인간 질환의 발병기전과 관련된다. mTORC1은 리소좀에서 아미노산과 같은 영양소의 가용성에 반응하여 성장을 촉진하고 세포질로 전달되며, mTORC1을 활성화 부위인 리소좀 표면으로 보낸다. 본 발명에 따라서, 일부 아미노산은 다른 것들보다 mTOR을 더 활성화하고, 또한 다른 것들보다 더 자가포식을 억제하거나 또는 단백질 형성을 자극하며, 특히 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된 아미노산이 다른 자연 발생 아미노산들보다 자가포식을 더 억제한다고 알려져 있다. 본 발명은 유기체, 특히 인간 유기체의 건강에 중심인 조직 결함을 치유함으로써 유기체가 질환에 대처하거나 질환을 퇴치하는데 도움이 되는 세포에 전달된 이러한 자가포식 억제 아미노산의 무리 또는 집단을 표적화하는 것을 제공한다. 혈관 시스템 내부 및 근처의 세포가 치유 활성의 중심이며, 혈관 완전성 또는 투과성, 조직 수선 및 선천 및 적응 면역 반응과 관련되고, 모든 세포는 다양한 방식으로 상해, 손상, 감염, 대사 변경 및 세포 변성으로 인한 손상으로부터 유기체를 치유하는데 수반된다.
자가포식 억제 아미노산의 이러한 공급원을 치유를 필요로 하는 세포 및 조직에 전달하는 것을 중심으로, 본 발명은 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포에 이러한 아미노산의 무리 또는 공급원의 표적화된 전달의 용도를 제공하며, 이들 세포는(세포 라이프 사이클의 적어도 일부 시기에 표면-결합된 엘라스틴 수용체 복합체를 갖거나 또는 그것을 보유한 세포의 예들은 적혈구 및 백혈구, 혈관 내피 세포, 평활근 세포 및 섬유아세포임) 전형적으로 저하되고 적어도 부분적으로 억제된 자가포식 및 증가되고 개선된 mTOR 매개 단백질 형성으로부터 이익을 얻는 치유 활성에 수반된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 혈관 투과성을 변형시키기 위한 방법을 제공하며, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드 A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공된다. 증가된 혈관 투과성은, 예를 들어 체액 및 백혈구 유출을 좌우하는데, 이것은 급성 염증의 초기에는 요구되지만, 후기 단계에서는 전형적으로 억제 또는 감소(즉 투과성 저하, 또는 원래 혈관 완전성의 회복)가 필요하며, 이로써 예를 들어 염증이 억제되어 조직의 완전성이 회복되고 치유되도록 설정된 후 조직 수선이 가능해진다. 또한, 본 발명은 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 조직 수선을 개선 또는 촉진하기 위한 방법을 제공하며, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드 A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공된다. 조직 완전성의 회복은 특히 급성 염증 반응이 약화되고 면역 반응이 치유 및 조직 수선 반응 쪽으로 전환되어야 할 때 유익하다. 본 발명은 또한 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 면역 반응을 조정하기 위한 방법을 제공하며, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드 A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공된다.
본원에서 상기 복합체를 인식하는 분자는 xGxxPG(여기서 x는 자연 발생 아미노산을 나타냄)로 표시된 엘라스틴 펩타이드 모티프를 갖는 것이 바람직지만, 엘라스틴 수용체 복합체는 다소 복잡한 성질을 가져서, 특히 P 다음의 아미노산이 상기 엘라스틴 수용체 복합체에 의한 인식을 용이하게 하는 VIII 베타-턴이 될 수 있을 때 기능적으로 관련된 모티프인 xGxPG 또는 xGxxPx도 종종 인식한다. 자가포식 억제 아미노산의 상기 공급원은 상기 자가포식 억제 아미노산을 포함하는 펩타이드인 것이 바람직하다. 이러한 목적을 위해, 상기 자가포식 억제 아미노산을 포함하는 펩타이드는 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드, 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하며, 바람직하게 AQ, LQ, GQ, AQL, LQL, GQL, PLQ, LQG, AQG의 군으로부터 선택된 펩타이드를 포함한다. 또한, 모티프 xGxxPG에 결합한 상기 엘라스틴 수용체 복합체는 펩타이드 결합에 의해 상기 자가포식 억제 아미노산을 포함하는 상기 펩타이드에 연결된다. 본 발명의 이들 분자는 펩타이드 합성장치에 의해 간단히 생성될 수 있고, 리소좀에서 한번에 쉽게 분해됨으로써 자가포식 억제 아미노산을 생성할 수 있다.
또한, 본 발명은 자가포식의 저감에 사용하기 위한 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식하는 분자를 제공하며, 상기 분자는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 포함한다. 바람직하게, 본원에서 제공된 이러한 분자는 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드라고 명명됨)를 포함하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 여기서 φn 및/또는 φm은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하고, 바람직하게 AQ, LQ, GQ, AQL, LQL, GQL, PLQ, LQG, AQG의 군으로부터 선택된 펩타이드를 포함한다.
또한, 본 발명은 면역 반응의 조정에 사용하기 위한 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식하는 분자를 제공하며, 상기 분자는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 포함한다. 바람직하게, 본원에서 제공된 이러한 분자는 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드라고 명명됨)를 포함하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 여기서 φn 및/또는 φm은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하고, 바람직하게 AQ, LQ, GQ, AQL, LQL, GQL, PLQ, LQG, AQG의 군으로부터 선택된 펩타이드를 포함한다.
또한, 본 발명은 조직 수선의 개선에 사용하기 위한 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식하는 분자를 제공하며, 상기 분자는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 포함한다. 바람직하게, 본원에서 제공된 이러한 분자는 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드라고 명명됨)를 포함하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 여기서 φn 및/또는 φm은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하고, 바람직하게 AQ, LQ, GQ, AQL, LQL, GQL, PLQ, LQG, AQG의 군으로부터 선택된 펩타이드를 포함한다.
또한, 본 발명은 혈관 투과성의 변형에 사용하기 위한 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식하는 분자를 제공하며, 상기 분자는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 포함한다. 바람직하게, 본원에서 제공된 이러한 분자는 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드라고 명명됨)를 포함하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 여기서 φn 및/또는 φm은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하고, 바람직하게 AQ, LQ, GQ, AQL, LQL, GQL, PLQ, LQG, AQG의 군으로부터 선택된 펩타이드를 포함한다.
또한, 본 발명은 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 대안적인 방식을 제공하며, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공된다. 추가의 한 구체예에서, 본 발명은 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 자가포식을 저감하기 위한 방법을 제공하며, 여기서 상기 복합체를 인식하는 분자는, 바람직하게 IgG, IgM, 단쇄 항체, FAB- 또는 FAB'2-단편으로부터 선택된, 항체-유사 분자이다. 원칙적으로, 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식할 수 있는 임의의 항체-유사 분자가 사용될 수 있으며, 적어도 하나의 Vh 또는 Vhh를 포함하는 단쇄 형식(하나의 유일한 폴리펩타이드 사슬)이 바람직하다. 이들 단쇄 형식은 펩타이드 결합을 통해서 자가포식 저감 아미노산이 결합된 올리고펩타이드로서 사용될 수 있기 때문에 바람직하다. 실제로, Q-ER 펩타이드가 언급된 경우, 전형적으로 Q-Vh 및/또는 Q-Vhh도 또한 개시된 것으로 간주되어야 한다. 항체-유사 분자는 일반적으로 표적에 결합시 빠르게 식균되어 리소좀 구획으로 전달되며, 해당 공급원의 아미노산이 mTOR 활성화를 위해 더 이용될 수 있다. 따라서, 항체-유사 분자의 내재화가 바람직하다. 자가포식 억제 아미노산의 상기 공급원은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO:2 (AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하는 펩타이드이며, 이들은 펩타이드 결합을 통해 상기 항체-유사 분자에 연결되거나, 상기 항체-유사 분자가 자가포식 억제 아미노산의 상기 공급원에 콘쥬게이션된다. 콘쥬게이션 방법은 당업계에 공지되어 있다. 마찬가지로, 자가포식 억제 아미노산의 상기 공급원은 리포솜과 같은 지질 소포이며, 특히 상기 리포솜은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO:2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하고, 바람직하게 AQ, LQ, GQ, AQL, LQL, GQL, PLQ, LQG, AQG의 군으로부터 선택된 펩타이드를 포함한다.
본 발명은 엘라스틴-수용체 결합 모티프가 제공되고 또한 선택된 아미노산이 제공된(부화된) 합성 글루타민 펩타이드를 제공하며, 이것은 펩타이드가 세포의 리소좀에서 그것의 개별 아미노산 성분들로 가수분해된 후 세포의 (mTOR 매개된) 자가포식을 우선적으로 억제한다. 이들 선택된 자가포식 억제 아미노산에 의한 자가포식의 억제는 면역 세포의 활성을 조정한다. 이들 선택된 자가포식 억제 아미노산에 의한 자가포식의 억제는 혈관의 투과성을 조정한다. 이들 작용은 단독으로 또는 조합하여 상기 면역 및/또는 혈관 세포가 본 발명에 따른 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER로 명명됨)로 표적화된 후 치유적 조직 수선 활성을 나타내는데 기여한다. 본 발명은 치유적 조직 수선 지원 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 상기 펩타이드는 글루타민(Q) 및 엘라스틴-수용체(ER) 결합 아미노산 서열 모티프가 제공된 합성 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체를 포함하고, 또한 자가포식 억제 아미노산인 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 프롤린(P), 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된 적어도 50% 아미노산을 포함한다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 엘라스틴-수용체 결합 모티프가 제공되고 또한 자가포식 억제 아미노산인 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된 적어도 60%, 더 바람직하게 적어도 75%, 가장 바람직하게 적어도 90% 아미노산을 포함하는, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체를 제공한다. 이러한 펩타이드는 본원에서 Q-ER 펩타이드로 명명되며, Q는 글루타민을 의미하며 ER은 엘라스틴 수용체를 의미한다. 제1 구체예에서, 합성 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체로 구성되거나 또는 그것을 포함하는 Q-ER 펩타이드에는 적어도 하나의 엘라스틴 수용체 결합 아미노산 모티프, 예컨대 PG-도메인 아미노산 모티프 xGxxPG, xGxPGx 또는 그것의 기능적 등가물이 제공되며, 상기 PG-도메인 모티프는 엘라스틴 수용체 복합체(ER)에 상기 펩타이드의 표적화를 허용하고, 여기서 위치 x에 있는 적어도 하나의 아미노산은 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택되며, 또한 상기 펩타이드에는 적어도 하나의 글루타민(Q)이 제공된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 또한 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드로 명명됨)를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 여기서 φn 및/또는 φm은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하고, 바람직하게 AQ, LQ, GQ, AQL, LQL, GQL, PLQ, LQG, AQG의 군으로부터 선택된 펩타이드를 포함한다.
본 발명은 또한 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드로 명명됨)를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 xGxxPG를 포함하는 펩타이드 및 자가포식의 저감에 사용하기 위한, AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드로부터 선택된 펩타이드, 및 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산을 나타낸다.
본 발명은 또한 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드로 명명됨)를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 xGxxPG를 포함하는 펩타이드 및 혈관 투과성의 변형에 사용하기 위한, AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드로부터 선택된 펩타이드, 및 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산을 나타낸다.
본 발명은 또한 식 φn xGxxPG, 또는 xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드로 명명됨)를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 xGxxPG를 포함하는 펩타이드 및 면역 반응의 조정에 사용하기 위한, AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드로부터 선택된 펩타이드, 및 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산을 나타낸다.
본 발명은 또한 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드로 명명됨)를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 xGxxPG를 포함하는 펩타이드 및 조직 수선의 개선 또는 촉진에 사용하기 위한, AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드로부터 선택된 펩타이드, 및 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산을 나타낸다.
본 발명은 또한 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드(본원에서는 또한 Q-ER 펩타이드로 명명됨)를 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하이다. 바람직한 구체예에서, n+m은 16 이하, 더 바람직하게 12 이하, 더욱 바람직하게 8 이하이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 xGxxPG를 포함하는 펩타이드 및 자가포식의 저감에 사용하기 위한, AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드로부터 선택된 펩타이드를 포함하고, 바람직하게는 췌장 베타-세포 기능의 손상의 치료에 사용하기 위한, 인슐린을 더 포함하는 제약학적 제제를 제공하며, 여기서 x는 자연 발생 아미노산을 나타낸다.
전형적으로, 본 발명의 제약학적 제제는 비경구 투여를 위한 것이다. 동물 연구 및 임상 연구에서, 당업자에게 잘 공지된 용량 발견 프로토콜에 따라서 안전하며 효능있는 용량이 확립될 수 있다. 전형적으로, 본 발명에 따른 펩타이드는 임의의 표적화 수단이 없는 경우 순환 올리고펩타이드의 제한된 반감기 때문에 고 용량으로 제공되어야 한다. 본 발명의 한 가지 이점은 표적화에 의해 더 적은 무작위 순환이 일어난다는 것과 표적화에 의해 필요한 경우 더 많은 본 발명의 아미노산이 송달될 것이고, 따라서 표적화가 없는 펩타이드보다 용량이 저하될 수 있다는 것이다.
본 발명은 또한 글루타민(Q)을 포함하는 펩타이드의 개선에 관한 것이며, 이로써 Q-ER 펩타이드가 효과를 발휘할 수 있는 세포에 상기 글루타민-함유 펩타이드(본원에서는 또한 글루타민 펩타이드라고 명명됨)의 효과적인 표적화가 가능해지고, 투약 요건이 또한 개선된다. 본 발명에 의해 제공된 이러한 Q-ER 펩타이드는 염증 및 혈관 상태의 치료를 위한 방법 및 제약학적 조성물에 유용하다. 본 발명은 30개 이하 아미노산, 바람직하게 20개 이하 아미노산, 더 바람직하게 15개 이하 아미노산, 가장 바람직하게 9개 이하 아미노산의 합성 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 상기 Q-ER 펩타이드에는 적어도 하나의 PG-도메인 모티프 GxxPG 또는 GxPGx가 제공되고, 상기 모티프는 인간 엘라스틴 수용체 복합체(ER)에 Q-ER 펩타이드의 표적화를 허용한다. Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 펩타이드로부터 선택될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 자가포식 억제 아미노산인 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된 적어도 50%, 더 바람직하게 적어도 75%, 가장 바람직하게 적어도 100% 아미노산을 포함하는, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체를 제공한다. 더 바람직한 구체예에서, 본 발명은 자가포식 억제 아미노산인 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 적어도 50%, 더 바람직하게 적어도 75%, 가장 바람직하게 적어도 100% 아미노산을 포함하는, Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체를 제공한다. 가장 바람직한 구체예에서, 본 발명은 자가포식 억제 아미노산인 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 류신(L) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 적어도 50%, 더 바람직하게 적어도 75%, 가장 바람직하게 적어도 100% 아미노산을 포함하는, Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체를 제공한다. 이들 아미노산, 특히 글루타민(Q) 및 류신(L)은 mTOR 매개 자가포식을 가장 현저히 억제할 수 있는 것으로 나타났으며, mTOR은 세포에서 단백질 형성 및 단백질 분해(자가포식)을 좌우하는 중요한 요소이다.
바람직하게, Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체는 4-12개 아미노산, 더 바람직하게 6-12개 아미노산 범위의 길이를 가진다. 바람직하게, 이러한 기능적 유사체는 선형 펩타이드이다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체는 더 바람직하게 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드 서열을 포함하는 펩타이드들로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체는 더 바람직하게 AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 서열을 포함하는 펩타이드들로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게, 상기 기능적 유사체는 기능적 엘라스틴 수용체 결합 모티프를 가진 펩타이드들의 군으로부터 선택되며, 바람직하게 타입 VIII 베타-턴을 허용하는 PG-도메인, 바람직하게 펩타이드 서열 GxP 또는 GxxP를 포함하는 PG-도메인, 더 바람직하게 펩타이드 서열 GxPG 또는 GxxPG, 가장 바람직하게 GxxPG를 포함하는 PG-도메인을 가진다.
위치 x에 있는 적어도 하나의 아미노산은 자가포식-억제 아미노산인 알라닌, 류신, 발린 또는 글루타민의 군으로부터 선택되는 것이 바람직하며(이들 4개 중 류신 및 알라닌이 본 발명에 따른 PG-도메인을 가진 Q-ER 펩타이드에 포함되기에 가장 바람직하다), 또한 상기 펩타이드는 적어도 하나의 글루타민이 제공되거나 또는 적어도 하나의 글루타민을 함유한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드는 AQ, LQ, GQ, VQ, IQ, CQ, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG, SEQ ID NO: 2(AQGV) 및 SEQ ID NO: 1 (LQGV)의 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 인간에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드에는 PG-도메인 모티프 GxxPG가 존재하고 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및/또는 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 적어도 하나의 아미노산 서열이 포함되는 것이 가장 바람직하다.
또한, 본 발명은 당뇨병, 염증 또는 혈관 상태의 치료에 사용하기 위한, 바람직하게는 인간의 이러한 상태의 치료에 사용하기 위한 개선된 합성 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 상기 Q-ER 펩타이드에는 면역 세포 반응성 및/또는 혈관 세포 수선을 조정하는데 수반되는 수용체 복합체인 인간 엘라스틴 수용체 복합체를 지닌 세포에 개선된 Q-ER 펩타이드의 표적화 및 도킹을 허용하는 아미노산의 핵심 모티프(PG-도메인)가 제공된다. Q-ER 펩타이드의 유익한 항-당뇨병, 항-염증 및 혈관 수선 효과는, 그것이 일단 표적 세포에 진입한 다음, Q-ER 펩타이드의 가수분해에 의해 생성된 자가포식-억제 아미노산을 통해서 상기 표적 세포의 자가포식을 억제함으로써 나타나며, 포유류 라파마이신 표적(mTOR) 복합체에 작용한다고 추정된다.
본 발명에 의해 제공된 Q-ER 펩타이드에 포함된 바람직한 자가포식-억제 아미노산은 알라닌(A), 프롤린(P), 류신(L) 및 글루타민(Q)의 군으로부터 선택된다. 본 발명에 따른 PG-도메인 포함 Q-ER 펩타이드에 포함되기 위한 가장 바람직한 자가포식 억제 아미노산은 L-류신, L-글루타민 및 L-알라닌이다.
본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드에 의한 표적 세포(면역 세포 또는 혈관 세포와 같은 활성 엘라스틴 수용체 복합체를 가진 세포가 바람직하게 표적화됨)에서의 자가포식의 억제는 일반적으로 투과성에 대한 개선된 저항성 및 혈관 세포의 개선된 증식 및 감소된 급성 염증 활성 및 면역 세포의 감소된 유출을 가져온다. 패혈증 또는 전신 염증 반응 증후군(SIRS)과 같은 급성 전신 상태, 뿐만 아니라 C-펩타이드가 상대적 또는 절대적으로 부족한 환자에서의 만성 전신 혈관병증(전형적으로 제1형 당뇨병 및 말기 제2형 당뇨병에서 볼 수 있음)은 종종 면역 세포(예를 들어, 호중구, 대식세포 및 림프구)의 유해한 활성화 및 유출과 혈관을 형성하는 혈관 세포(예를 들어, 혈관 내피 세포, 평활근 세포 및 섬유아세포)의 파괴를 수반하는 미세혈관 손상의 발병기전을 초래한다.
이들 세포에 대한 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드의 표적화는, 그것이 가수분해되어 자가포식을 억제하는 개별 아미노산의 작용을 통해 자가포식을 억제하는 경우, 이들 병리학적 상태를 호전시키고, 당뇨병, C-펩타이드의 부족으로 인한 상태, 및 다른 (미세)혈관 및/또는 염증 상태로 고통받는 환자의 치료에 유익한 효과를 나타낸다.
인간 엘라스틴 수용체 복합체는 전형적으로 엘라스틴 및 그것의 분해 생성물(PG-도메인-단편)에서 발견된 아미노산의 핵심 모티프(PG-도메인)를 지닌 펩타이드에 의해 활성화된다. 본원에서는 기능적 PG 도메인을 가진 펩타이드 또는 펩타이드 단편은 적어도 하나의 GxxPx 또는 GxPxx 아미노산 서열 모티프를 가진 펩타이드로서 정의되며, G는 글리신, P는 프롤린이고, x는 임의의 아미노산으로서, P 다음의 아미노산은 타입 VIII-베타 턴을 허용하며, 이 조건은 C-말단에서 P 다음에 G가 올 때 항상 충족되는 것으로 간주된다. 본 발명은 또한 엘라스틴 수용체에 결합(도킹)하고 그것을 조정할 수 있는 이러한 펩타이드를 인간에게 제공하는 단계를 포함하는 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 추가의 구체예에서, 본 발명은 적어도 하나의 PG-도메인 펜타펩타이드 모티프 GxxPG(G는 글리신, P는 프롤린, x는 임의의 아미노산)가 제공된 합성 펩타이드를 제공하며, 바람직하게 하나의 위치 x에 있는 적어도 하나의 아미노산은 알라닌, 류신, 발린 또는 이소류신의 군으로부터 선택되고, 상기 펩타이드에는 항상 적어도 하나의 글루타민이 제공된다. 또한, 본 발명은 이 펜타펩타이드 모티프가 적어도 한번 반복된 합성 펩타이드를 제공하며, 선택적으로 상기 PG-도메인 반복부는 링커에 의해 분리되고, 이러한 링커는 하나 이상의 아미노산, 예컨대 알라닌, 류신, 글리신, 발린, 이소류신 또는 글루타민의 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 적어도 하나의 헥사펩타이드 모티프 xGxxPG가 제공된 합성 펩타이드를 제공하며, 여기서 위치 x에 있는 적어도 하나의 아미노산, 더 바람직하게 위치 x에 있는 적어도 2개의 아미노산은 알라닌, 류신, 발린 또는 이소류신의 군으로부터 선택되며, 상기 펩타이드에는 적어도 하나의 글루타민이 제공된다. 본 발명은 또한 이 헥사펩타이드 모티프가 적어도 한번 반복된 합성 펩타이드를 제공하며, 선택적으로 상기 반복부는 링커에 의해 분리되고, 이러한 링커는 하나 이상의 아미노산, 예컨대 알라닌, 류신, 글리신, 발린, 이소류신 또는 글루타민의 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
특히, 본 발명은 전신 상태를 치료할 수 있는 공지된 글루타민 펩타이드 AQ, LQ, GQ, VQ, PQ, IQ, CQ, AQG, LQG, SEQ ID NO: 2(AQGV) 및 SEQ ID NO: 1(LQGV)의 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하는 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 엘라스틴 수용체 복합체를 지닌 염증 및 혈관 세포에 의해 인식되는 펜타펩타이드 모티프 GxxPG를 포함시킴으로써, 상기 PG-도메인은 본 발명의 펩타이드가 혈관 및/또는 염증 상태에 전형적으로 수반되는 세포에 표적화될 수 있도록 기능하며, 공지된 펩타이드의 군으로부터 선택된 상기 아미노산 서열은 이러한 상태를 치료하는 데 유용하다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 헥사-, 헵타- 또는 옥타-, 노나-, 데카, 운데카 또는 도데카펩타이드를 제공한다. 헥사-, 헵타- 또는 옥타-, 노나-펩타이드가 가장 바람직하며, 더 큰 펩타이드는 일반적으로 오랜 기간에 걸쳐서 반복 적용하기에는 과도하게 면역원성이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 적어도 하나의 PG-도메인 펜타펩타이드 모티프 GxxPG가 제공되고 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및/또는 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 적어도 하나의 아미노산 서열을 가진 합성 Q-ER 펩타이드를 제공하며, 바람직한 구체예에서, SEQ ID NO: 1(LQGV) 및/또는 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 아미노산 서열을 가진 이러한 펩타이드는 바람직하게 SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG), SEQ ID NO: 8(LQGVLPG), SEQ ID NO: 9(AQGVAPGQ), SEQ ID NO: 10(LQGVAPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), 및 SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ)의 군으로부터 선택된다. 본 명세서는 엘라스틴 수용체 복합체(ERC)를 표적화하는 ERC 인식 PG-도메인 모티프가 제공된 합성 Q-ER 펩타이드를 제공함으로써 활성 비-표적화 글루타민 펩타이드의 손실에 대한 해결책을 제공한다. 전형적으로, 인간, 영장류 및 대부분의 포유류에서 이러한 모티프는 바람직하게 컨센서스 헥사펩타이드 서열 xGxxPG을 갖고, 일부 다른 포유류(예를 들어 반추동물)는 바람직하게 컨센서스 펜타펩타이드 서열 xGxPG을 가지며, 이것은 일부 종에서 기능적으로 동등한 결합 친화성을 보인다. 바람직하게, 본원에 개시된 합성 Q-ER 펩타이드에서, 미지정 아미노산 위치(x)의 적어도 하나는 지방족 아미노산, 예컨대 발린(V), 글루타민(Q) 또는 가장 바람직하게 류신(L) 또는 알라닌(A)을 나타낸다. 본 발명은 헥사펩타이드 xGxxPG 모티프를 가진 합성 펩타이드, 예컨대 헥사펩타이드 모티프 SEQ ID NO: 3(QGVLPG) 또는 SEQ ID NO: 4(QGVAPG)를 가진 펩타이드를 제공하며, 여기서 상기 펩타이드의 N-말단 아미노산은 발린(V), 글리신(G), 이소류신(I) 또는, 가장 바람직하게 류신(L) 또는 알라닌(A)으로부터 선택된다. 다른 바람직한 구체예에서, 본 발명은 헥사펩타이드 모티프 SEQ ID NO: 3(QGVLPG) 또는 SEQ ID NO: 4 (QGVAPG)를 가진 사람에 사용하기 위한 펩타이드를 제공하며, 여기서 N-말단 아미노산은 알라닌(A) 또는 바람직하게 류신(L)이며, 예컨대 각각 합성 헵타펩타이드 SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG) 또는 SEQ ID NO: 8(LQGVLPG)이다. 본 발명은 또한 이들 PG-도메인 모티프 중 하나가 적어도 한번 반복된 합성 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 선택적으로 상기 반복부는 링커에 의해 분리되고, 이러한 링커는 하나 이상의 아미노산, 예컨대 글리신, 알라닌, 류신, 발린, 이소류신 또는 글루타민의 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 글루타민이 피로-글루타민으로 전이하는 것을 방지하는 비-글루타민 N-말단 아미노산이 바람직하게 부착된다. 사람에 사용하기에 바람직한 추가의 구체예에서, 본 발명은 xGxxPG 모티프를 가진 합성 펩타이드, 예컨대 SEQ ID NO: 3(QGVLPG) 또는 SEQ ID NO: 4(QGVAPG)를 제공하며, 여기서 N-말단 아미노산은 발린(V), 글리신(G), 이소류신(I) 또는 가장 바람직하게 류신(L) 또는 알라닌(A)으로부터 선택된다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 헥사펩타이드 모티프 SEQ ID NO: 3(QGVLPG) 또는 SEQ ID NO: 4(QGVAPG)를 가진 사람에 사용하기 위한 펩타이드를 제공하며, 여기서 N-말단 아미노산은 알라닌(A) 또는 바람직하게 류신(L)이고, C-말단 아미노산은 글루타민(Q)이며, N-말단 아미노산은 글루타민의 피로-글루타민으로의 전이를 방지하고, C-말단 아미노산은 xGxxPG 인식 수용체, 엘라스틴 수용체 복합체(ERC)를 가진 세포에 표적화되는 여분의 글루타민을 제공한다. 본원에서 제공된 전형적인 예들은 합성 옥타펩타이드 SEQ ID NO: 9(AQGVAPGQ), SEQ ID NO: 10(LQGVAPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ) 또는 SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ)이다. 다른 바람직한 구체예에서, 본 발명은 헥사펩타이드 모티프 SEQ ID NO:13(LQGQAPG) 또는 SEQ ID NO: 14(QGQAPG)를 가진 사람에 사용하기 위한 펩타이드를 제공하며, 여기서 N-말단 아미노산은 알라닌(A) 또는 바람직하게 류신(L)이고, C-말단 아미노산은 글루타민(Q)이며, N-말단 아미노산은 글루타민의 피로-글루타민으로의 전이를 방지하고, C-말단 아미노산은 xGxxPG 인식 수용체, 엘라스틴 수용체 복합체(ERC)를 가진 세포에 표적화되는 여분의 글루타민을 제공하며, 세포에 표적화되는 또 다른 제3의 글루타민을 제공한다. 본원에서 제공된 전형적인 예들은 합성 옥타펩타이드 SEQ ID NO: 15(AQGQAPGQ), SEQ ID NO: 16(LQGQAPGQ), SEQ ID NO: 17(AQGQLPGQ) 또는 SEQ ID NO: 18(LQGQLPGQ)이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 3에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프 및 위치 xx에 아미노산 GQ를 가진 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 46(VQGGQPGQ), SEQ ID NO: 49(AQGGQPGQ) 및 SEQ ID NO: 53(GQGGQPGQ)을 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 4에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프 및 위치 xx에 아미노산 VQ를 가진 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 51(GQGVQPGQ), SEQ ID NO: 44(VQGVQPGQ), SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ), SEQ ID NO: 22(AQGVQPG) 및 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 5에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프 및 위치 xx에 아미노산 VA를 가진 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 4(QGVAPG), SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 9(AQGVAPGQ), SEQ ID NO: 10(LQGVAPGQ), SEQ ID NO: 27(VQGVAPG), SEQ ID NO: 29(GQGVAPG), SEQ ID NO: 33 (VQGVAPGQ) 및 SEQ ID NO: 37(GQGVAPGQ)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 6에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프 및 위치 xx에 아미노산 VL을 가진 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 3(QGVLPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG), EQ ID NO: 8(LQGVLPG), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ), SEQ ID NO: 26(VQGVLPG), SEQ ID NO: 28(GQGVLPG), SEQ ID NO: 32 (VQGVLPGQ) 및 SEQ ID NO: 36(GQGVLPGQ)을 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 7에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프 및 위치 xx에 아미노산 QA를 가진 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 13(LQGQAPG), SEQ ID NO: 14(QGQAPG), SEQ ID NO: 15(AQGQAPGQ) 및 SEQ ID NO: 16(LQGQAPGQ)을 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 8에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프 및 위치 xx에 아미노산 AQ를 가진 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 45(VQGAQPGQ), SEQ ID NO: 41(LQGAQPGQ), SEQ ID NO: 48(AQGAQPGQ) 및 SEQ ID NO: 52(GQGAQPGQ)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 9에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프 및 위치 xx에 아미노산 QL을 가진 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 17(AQGQLPGQ), SEQ ID NO: 18(LQGQLPGQ), SEQ ID NO: 21(AQPGQLPG), SEQ ID NO: 30(LQGQLPG), SEQ ID NO: 31(VQGQLPG), SEQ ID NO: 34(AQGQLPG), SEQ ID NO: 35(GQGQLPG), SEQ ID NO: 38(VQGQLPGQ) 및 SEQ ID NO: 39(GQGQLPGQ)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 10에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프 및 위치 xx에 아미노산 LQ를 가진 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 20(LQVGLQPG), SEQ ID NO: 40(LQGLQPGA), SEQ ID NO: 42(LQGLQPGQ), SEQ ID NO: 43(VQGLQPGQ), SEQ ID NO: 47(AQGLQPGQ) 및 SEQ ID NO: 50(GQGLQPGQ)을 포함하는 군으로부터 선택된다.
가장 바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 11에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 갖고 SEQ ID NO: 1(LQGV)을 가진 펩타이드 서열이 더 제공된 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 8(LQGVLPG), SEQ ID NO: 10(LQGVAPGQ), SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ) 및 SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
가장 바람직한 구체예에서, 본 발명은 표 12에서 확인되는 것과 같은 GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 갖고 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 펩타이드 서열이 더 제공된 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드를 제공한다. 더욱 바람직한 Q-ER 펩타이드는 SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG), SEQ ID NO: 9(AQGVAPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 22(AQGVQPG) 및 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
PG-도메인 결합 모티프가 제공된 추가의 유용한 합성 Q-ER 펩타이드(특히 Q-Vh 및/또는 Q-Vhh)는 본 명세서의 상세한 설명 등에서 또한 제시된다.
본원에서 제공된 펩타이드는 급성 상태, 예컨대 급성 신장 손상, 또한 혈관 손상을 초래하며 종종 (다발성) 장기 부전에 의해 악화되는 급성 전신 염증 상태, 예컨대 패혈증 또는 전신 염증 반응 증후군(SIRS), 또는 염증 상태의 치료에 유용하다. 당뇨병 환자는 감소된 C-펩타이드 및 인슐린 수준을 나타내고, 또한 일반적으로 과도한 순환 혈중 글루코오스와 함께 과도한 (미세)혈관 투과성 및 과도한 백혈구 유출로 고통받는데, 본 발명의 펩타이드는 특히 감소된 베타-세포 활성으로 인한 당뇨병(제1형 당뇨병 및 말기 제2형 당뇨병)에 동반된 혈관 상태에 유용하다. 이러한 대상체는 Q-ER 펩타이드가 주어지거나 또는 그것으로 치료될 때 상승된 글루코오스 수준을 완화시키기 위해 인슐린과 같은 항-당뇨병 조성물로 동반 또는 동시 치료를 받는 것이 바람직하다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 본원에서 제공된 합성 Q-ER 펩타이드는 내산성 캡슐에 캡슐화된다. 이러한 (제약학적) 캡슐은 인간 및 동물 투여용 경구 제형으로서 제약 분야에 널리 사용된다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드로 충전된 이러한 캡슐은 적어도 1개, 바람직하게 2 또는 3개의 PG-도메인 모티프 GxxPG(G는 글리신, P는 프롤린, x는 임의의 아미노산)가 제공된 합성 Q-ER 펩타이드의 장내 투여에 유용하며, 바람직하게 위치 x에 있는 적어도 하나의 아미노산은 알라닌, 류신, 발린 또는 이소류신의 군으로부터 선택되고, 또한 상기 펩타이드에는 적어도 하나의 글루타민이 제공된다. 이러한 투여는, 예를 들어 장 내피 세포의 재생이 필요한 크론병과 같은 질환을 완화 또는 치료할 수 있다. 또한, 이러한 투여는 과도한 방사선 후 얻어진 위장 손상을 치료하는데 유용할 수 있다. 본원에서 제공된 Q-ER 펩타이드는 또한 다른 치료제들, 예컨대 면역조정 물질, 예를 들어 (면역조정) 펩타이드, 특히 SEQ ID NO: 1(LQGV), AQG, 또는 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 펩타이드와 같은 펩타이드, 또는 종래의 면역조정제, 예컨대 면역조정 항체 또는 TNF-알파, IL-1 또는 IL-6과 같은 사이토카인에 대해 작용하는 단백질, 또는 코르티코스테로이드 제제와 유익하게 조합될 수 있다.
또한, 본 발명은 급성 및/또는 전신 상태로 고통받거나 고통받는다고 여겨지는 대상체의 급성 및/또는 전신 상태의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 30개 이하의 아미노산의 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드, 바람직하게 합성 Q-ER 펩타이드를 상기 대상체에게 바람직하게는 비경구, 정맥내 또는 복강내 경로로 제공하는 단계를 포함하고, 상기 Q-ER 펩타이드에는 엘라스틴 수용체 복합체에 상기 펩타이드의 표적화를 허용하는 적어도 하나의 PG-도메인 모티프 GxxPG가 제공되며, 여기서 위치 x에 있는 적어도 하나의 아미노산은 알라닌, 류신, 발린 또는 이소류신의 군으로부터 선택되고, 또한 상기 펩타이드에는 적어도 하나의 글루타민이 제공된다. 상기 Q-ER 펩타이드는 AQ, LQ, GQ, VQ, IQ, CQ, AQG, LQG, SEQ ID NO: 2(AQGV) 및 SEQ ID NO: 1(LQGV)의 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 인간 대상체의 치료 방법에서, PG-도메인 모티프 GxxPG를 갖고 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및/또는 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 적어도 하나의 아미노산 서열을 갖는 Q-ER 펩타이드로 상기 대상체를 치료하는 것이 가장 바람직하다.
또한, 본 발명은 혈관 및/또는 염증 상태로 고통받거나 고통받는다고 여겨지는 인간 대상체의 혈관 및/또는 염증 상태의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 헵타-, 옥타-, 노나-, 데카-, 운데카- 또는 도데카-펩타이드, 가장 바람직하게 헵타-, 옥타-, 노나-펩타이드를 상기 대상체에게 바람직하게는 비경구, 정맥내 또는 복강내 경로로 제공하는 단계를 포함하며, 상기 펩타이드에는 엘라스틴 수용체 복합체에 상기 펩타이드의 표적화를 허용하는 적어도 하나의 PG-도메인 모티프 GxxPG가 제공되고, 여기서 위치 x에 있는 적어도 하나의 아미노산은 알라닌, 류신, 발린 또는 이소류신의 군으로부터 선택되며, 또한 상기 펩타이드에는 적어도 하나의 글루타민이 제공된다. 본 발명에 따른 상기 펩타이드에는 적어도 2개의 글루타민, 더 바람직하게 3개의 글루타민이 제공되는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 염증 상태로 고통받거나 고통받는다고 여겨지는 대상체의 염증 상태의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및/또는 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 적어도 하나의 아미노산 서열을 가진 펩타이드, 바람직하게 SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG) 및 SEQ ID NO: 8(LQGVLPG)의 군으로부터 선택된 합성 펩타이드를 상기 대상체에게 바람직하게는 비경구, 정맥내 또는 복강내 경로로 제공하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 혈관 및/또는 염증 상태로 고통받거나 고통받는다고 여겨지는 대상체의 혈관 및/또는 염증 상태의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및/또는 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 적어도 하나의 아미노산 서열을 가진 펩타이드, 바람직하게 SEQ ID NO: 9(AQGVAPGQ), SEQ ID NO: 10(LQGVAPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ) 및 SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ)의 군으로부터 선택된 합성 펩타이드를 상기 대상체에게 바람직하게는 비경구, 정맥내 또는 복강내 경로로 제공하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 혈관 및/또는 염증 상태로 고통받거나 고통받는다고 여겨지는 대상체의 혈관 및/또는 염증 상태의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및/또는 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 적어도 하나의 아미노산 서열을 가진 펩타이드, 바람직하게 SEQ ID NO: 15(AQGQAPGQ), SEQ ID NO: 16(LQGQAPGQ), SEQ ID NO: 17(AQGQLPGQ) 및 SEQ ID NO: 18(LQGQLPGQ)의 군으로부터 선택된 합성 펩타이드를 상기 대상체에게 바람직하게는 비경구, 정맥내 또는 복강내 경로로 제공하는 단계를 포함한다.
상세한 설명, 추가의 구체예 및 실시예
Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체들은 아미노산 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 더 바람직하게 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 펩타이드로부터 선택될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 자가포식 억제 아미노산인 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 프롤린(P), 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된 적어도 50%, 더 바람직하게 적어도 75%, 가장 바람직하게 적어도 100% 아미노산을 포함하는 Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체를 제공한다. 더 바람직한 구체예에서, 본 발명은 자가포식 억제 아미노산인 아미노산 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 적어도 50%, 더 바람직하게 적어도 75%, 가장 바람직하게 적어도 100% 아미노산을 포함하는 Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체를 제공한다. 가장 바람직한 구체예에서, 본 발명은 자가포식 억제 아미노산인 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 류신(L), 및 프롤린(P)의 군으로부터 선택된 적어도 50%, 더 바람직하게 적어도 75%, 가장 바람직하게 적어도 100% 아미노산을 포함하는 Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체를 제공한다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체는 4-12개 아미노산, 더 바람직하게 6-12개 아미노산 범위의 길이를 가진다. 바람직하게, 이러한 기능적 유사체는 선형 펩타이드이다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체는 더 바람직하게 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드 서열을 포함하는 펩타이드들로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드의 기능적 유사체는 더 바람직하게 AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드를 포함하는 펩타이드들로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게, 상기 기능적 유사체는 기능적 엘라스틴 수용체 결합 모티프, 바람직하게 타입 VIII 베타-턴을 허용하는 PG-도메인이 제공되거나 또는 그것을 가진 합성 펩타이드의 군으로부터 선택되며, 바람직하게 PG-도메인은 펩타이드 서열 GxP 또는 GxxP, 더 바람직하게 펩타이드 서열 GxPG 또는 GxxPG, 가장 바람직하게 GxxPG를 포함한다.
다른 구체예에서, Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체는 손상된 베타-세포 기능을 가진 인간 대상체의 치료에 사용하기 위해 제공된다. 추가의 구체예에서, 베타-세포 기능은 당뇨병에서 손상된다. 한 구체예에서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체는 베타-세포 기능의 개선을 위한 인간 대상체의 치료에 사용하기 위해 제공된다. 베타-세포 기능은 췌장의 베타-세포에 의한 프레-프로인슐린 생성을 결정함으로써, 바람직하게 혈액, 혈청 또는 혈장에서 인슐린 및/또는 C-펩타이드를 평가함으로써 평가될 수 있다. 췌장 β-세포의 결함있는 기능은 현재 제1형 및 말기 제2형 당뇨병의 홀마크로서 인정된다. 제1형 당뇨병에서 β-세포의 중요성은 오랫동안 인정되었다. 반면, 말기 제2형 당뇨병에서 췌장 결함의 요건은 아주 최근에야 널리 인정되었다. 임상에서는 가장 널리 사용되고 검증된, 금식 상태 샘플 또는 간단한 자극 테스트, 예컨대 OGTT, 글루카곤 자극성 테스트, 또는 표준 조식 테스트가 인슐린 분비 변수로서 사용될 수 있다. 이들 테스트에서 금식 상태 글루코오스 수준, 인슐린 및 C-펩타이드 농도를 수학적으로 다루는 것이 가장 간단한 방법이다. 금식 상태 수준의 수학적 취급은 HOMA, 금식 상태 베타-세포 반응성(MO) 및 QUICKI와 같은 다양한 지수를 도입함으로써 인슐린 민감성 및 분비의 계산에 사용되었다. 인간에서는 (예를 들어, 글루코오스 수준, 인슐린 또는 C-펩타이드를 결정함에 의한) 베타-세포 기능의 평가가 표준 임상 관례이다. Q-ER 펩타이드를 받지 않은 것과 비교하여 베타-세포 기능의 개선은 HOMA, 금식 상태 베타-세포 반응성(MO), 및 QUICKI와 같은 방법에 의해 평가되었을 때 베타-세포 기능 단계로의 진행을 포함할 수 있다. 베타-세포 기능의 개선은 또한 글루코오스 수준의 개선을 포함한다. 어떤 평가가 이루어지든, Q-ER 펩티드 또는 그것의 유사체의 사용은 베타-세포가 손상된 인간의 베타-세포 기능을 개선할 수 있고 및/또는 대상체의 베타-세포 기능의 손상을 개선할 수 있다.
Q-ER 펩타이드의 사용은 베타 세포 기능을 개선할 수 있을 뿐만 아니라 베타 세포 기능의 감소 및/또는 손상을 예방할 수 있다. 따라서, 당뇨병이 예방될 수 있다. 바람직하게, 베타-세포 기능이 손상된 인간 대상체의 예방에서, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr) 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 10 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다. 필요하다면 Q-ER 펩타이드는 인슐린 또는 인슐린 유사체와 함께 투여될 수 있다. 이로써, 한 구체예에서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용은 인간 환자에서 베타-세포 기능의 유지를 가능하게 한다. 다른 구체예에서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용은 인간 환자에서 베타-세포 기능의 감소 및/또는 손상의 예방을 가능하게 한다.
다른 구체예에서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체는 신장 기능이 손상된 인간 대상체의 치료에 사용하기 위해 제공된다. 추가의 구체예에서, 손상된 신장 기능은 급성 신장 손상(AKI)이다. 한 구체예에서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체는 신강 기능의 개선을 위한 인간 대상체의 치료에 사용하기 위해 제공된다. 신장 기능은 사구체 여과율(GFR)을 결정함으로써, 예를 들어 혈액 혈장으로부터 이오헥솔의 청소율을 평가함으로써 평가될 수 있다. 신장 기능은 또한 크레아티닌의 혈장 수준을 측정하고 그로부터 추정 GFR(eGFR) 기능을 계산함으로써 평가될 수 있는데, 이것은 또한 MDRD 식 또는 방정식이라고 하며, 성별, 연령 및 인종과 같은 환자 특징(신장 질환에서 식이의 변형)을 고려하여 계산된다. 신장 기능은 RIFLE 기준을 적용함으로써 GFR 측정값(또는 MDRD에 기초한 그것의 추정치)에 기초하여 평가될 수 있다. 위험, 손상, 고장, 손실 또는 ESKD의 단계에 있는 RIFLE 점수는 신장 손상 및/또는 신장 기능의 손상을 표시할 수 있다. 인간에서 (예를 들어, GFR, 크레아티닌 청소율 및/또는 eGFR/MDRD를 결정함에 의한) 신장 기능의 평가는 표준 임상 관례이다. Q-ER 펩타이드를 받지 않은 것과 비교하여 신장 기능의 개선은 RIFLE 기준에 따라 평가되었을 때 덜 심각한 단계로의 신장 기능 단계로의 진행(예를 들어, 손상 상태로부터 손상 위험이 있는 상태 또는 AKI가 없는 상태로 진행한 환자)을 포함할 수 있다. 신장 기능의 개선은 또한 GFR 또는 eGFR 점수의 개선을 포함한다. 어떤 평가가 이루어지든, Q-ER 펩티드 또는 그것의 유사체의 사용은 신장이 손상된 인간에서 신장 기능을 개선하고 및/또는 면역조정 효과가 부재한 대상체에서 신장 기능의 손상을 개선할 수 있다.
Q-ER 펩타이드의 사용은 신장 기능을 개선할 수 있을 뿐만 아니라 신장 기능의 감소 및/또는 손상을 예방할 수 있다. 따라서, AKI가 예방될 수 있다. 바람직하게, 신장 기능이 손상된 인간 대상체의 예방에서, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr)인 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 10 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다. 이로써, 한 구체예에서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용은 인간 환자에서 신장 기능의 유지를 가능하게 한다. 다른 구체예에서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용은 인간 환자에서 신장 기능의 감소 및/또는 손상의 예방을 가능하게 한다. 예를 들어, AKI가 없는 상태 또는 신장 손상(예컨대 AKI)의 위험이 있는 상태로 분류될 수 있는 인간 환자는, 이러한 환자가 Q-ER 펩타이드 치료를 받았을 때, 이러한 환자는 더 심각한 신장 기능 단계로 진행하는 대신 그 상태를 유지할 수 있다. 이로써, 예를 들어 (유도된) 외상으로 인해 신장 손상이 발생할 위험이 있는 인간 환자는, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체 치료를 받은 결과로서 이러한 인간 환자는 그들의 신장 기능 상태를 유지할 수 있다.
다른 구체예에서, Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체는 인간 대상체에서 나쁜 체액 저류(fluid retention)를 감소시킨다. 체액 저류 또는 체액 과부하는 인간 대상체에서 일어날 수 있으며, 이것의 증상은 예를 들어 체중 증가 및 부종을 포함한다. 체액 저류는 (상기 대상체에 의해 내인성 C-펩타이드가 전혀 또는 거의 생성되지 않을 때와 미세혈관 흐름이 손상되었을 때) 감소된 신장 기능 및/또는 제1형 당뇨병 또는 말기 제2형 당뇨병의 결과일 수 있다. 체액 저류는 모세관 누출의 결과일 수 있다. Q-ER 펩타이드 및 그것의 유사체의 사용은 모세관 누출에 영향을 미칠 수 있어, 혈액으로부터 주변 조직 및/또는 장기로의 혈장 누출 및 면역 세포(백혈구) 유출을 감소시킨다. 부종 및/또는 백혈구 유출이 또한 나쁜 체액 저류라고 할 수 있으며, 환자에게 악영향을 미칠 수 있다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드의 사용에 의해 부종 및/또는 백혈구 유출이 감소 및/또는 방지된다. 체액 저류의 원인이 무엇이든, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 인간 대상체에서 체액 저류(백혈구 유출이 있든 없든)를 개선할 수 있고, 이로써 체중 증가 및 부종과 같은 체액 저류와 관련된 증상이 완화되어, 이뇨제의 사용을 감소시킬 수 있다. 바람직하게, 체액 저류를 개선하기 위한 (특히 더 적은) Q-ER 펩타이드(5-15개 아미노산)의 사용에 있어서, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr)인 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 20 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다.
다른 구체예에서, 본 발명에 따른, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 신장이 손상된 환자 및 베타-세포가 손상된 환자에 제한되지 않는다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 전신 염증의 위험이 있다고 여겨지고 및/또는 항-염증 요법이 필요하다고 인정되는 인간 환자의 치료를 포함한다. 이러한 인간 환자는 집중치료실에 입원해야 하거나, 또는 입원해야 한다고 예상되는 환자를 포함한다. 따라서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 수술과 같은 유도된 외상을 위한 사용을 포함한다. 유도된 외상은 인체에 대한 임의의 신체적 손상을 포함하며, 전형적으로 인간 대상체의 혈액 손실 및/또는 조직 손상을 포함할 수 있다. 유도된 외상은 예를 들어 수술을 포함한다. 따라서, 바람직한 구체예에서, 유도된 외상은 수술이다. 수술과 같은 유도된 외상의 치료를 위한 Q-ER 펩타이드의 사용은 수술 전, 도중 및/또는 이후에 이루어질 수 있다. Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용은 수술 도중에 이루어지는 것이 바람직할 수 있다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr)인 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 20 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다.
다른 또는 추가의 구체예에서, 본 발명에 따라서 사용하기 위한, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용은 심부전을 가진 인간 대상체에서 사용하기 위한 것이다. 바람직하게, 심부전을 가진 인간 대상체에서의 사용에 있어서, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr)인 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 20 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다.
본 발명은 체액 과부화의 위험이 있다고 간주되거나 또는 그것으로 고통받는 인간 대상체의 치료에서 사용하기 위한, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용을 포함하며, 상기 사용은 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것을 포함한다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 체액 과부화의 위험이 있다고 여겨지고 및/또는 혈역학 요법이 필요하다고 인정되는 인간 환자의 치료를 포함한다. 이러한 인간 환자는 집중치료실에 입원해야 하거나, 또는 입원해야 한다고 예상되는 환자를 포함한다. 따라서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 수액 요법에 의한 것과 같은 유도된 체액 과부화의 예방을 위한 사용을 포함한다. 바람직하게, 유도된 체액 과부화의 예방을 위한 사용에 있어서, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr) 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20mg, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 20 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다. 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 신장이 손상된 환자 및/또는 혈역학 요법이 필요한 환자에 제한되지 않는다.
본 발명은 대상체의 ICU 체류 기간을 개선하기 위한, 더 나아가 대상체의 ICU 체류 기간을 단축하기 위한 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용을 포함한다. 이것을 달성할 수 있는 한 가지 방식은 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것이다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 혈관수축제 또는 근수축성 의약으로의 치료가 위험하다고 여겨지고 및/또는 수액 요법에 의한 혈역학 요법이 필요하다고 인정되는 인간 환자의 치료를 포함한다. 이러한 인간 환자는 집중치료실에 입원해야 하거나, 또는 입원해야 한다고 예상되는 환자, 및 ICU 체류 기간의 단축이 바람직한 경우를 포함한다. 따라서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 유해한 혈관수축제 또는 근수축성 의약 및/또는 수액 요법에 의한 치료가 위험하다고 여겨지는 인간 환자의 치료를 위한 사용을 포함하며, 예를 들어 실시예에 나타낸 대로 제공된다. 바람직하게, 위험한 상태에 있다고 여겨지는 인간 환자에서, 대상체의 ICU 체류 기간을 단축하기 위한 사용에 있어서, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr) 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 20 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다.
다른 구체예에서, 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 신장이 손상된 환자, 베타-세포가 손상된 환자 및/또는 혈역학 요법이 필요한 환자에 제한되지 않는다. 본 발명은 대상체의 병원 입원 기간을 개선하기 위한, 더 나아가 대상체의 병원 입원 기간을 단축하기 위한 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용을 포함하며, 상기 사용은 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것을 포함한다. 본 발명에 따른 Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 혈관수축제 또는 근수축성 의약으로의 치료가 위험하다고 여겨지고 및/또는 수액 요법에 의한 혈역학 요법이 필요하다고 인정되는 인간 환자의 치료를 포함한다. 이러한 인간 환자는 집중치료실 또는 병원에 입원해야 하거나, 또는 입원해야 한다고 예상되는 환자, 및 병원 입원 기간의 단축이 바람직한 경우를 포함한다. 따라서, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 유해한 혈관수축제 또는 근수축성 의약 및/또는 수액 요법에 의한 치료가 위험하다고 여겨지는 인간 환자의 치료를 위한 사용을 포함한다. 바람직하게, 위험한 상태에 있다고 여겨지는 인간 환자에서, 대상체의 ICU 체류 기간을 단축하기 위한 사용에 있어서, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr) 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 20 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다.
바람직하게, 본 발명에 따른 상기 설명된 바와 같은 Q-ER 펩티드, 또는 그것의 기능적 유사체의 사용은 혈류에 펩타이드의 투여를 수반한다. 혈류에 투여하는 것은, 예를 들어 정맥내 투여 또는 동맥내 투여를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 주입을 통한 Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 일정한 공급이 바람직하며, 이때 Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체는 생리학적으로 허용되는 용액에 포함된다. 적합한 생리학적으로 허용되는 용액은 생리학적 염 용액(예를 들어, 0.9% NaCl) 또는 주사 및/또는 주입을 위한 임의의 다른 적합한 용액을 포함할 수 있다. 이러한 생리학적 용액은 인간 대상체에 더 이익이 될 수 있는 추가의 화합물(예를 들어, 글루코오스 등)을 포함할 수 있고, 또한 다른 제약학적 화합물(예를 들어, 혈관수축제)를 포함할 수 있다.
바람직하게, Q-ER 펩타이드는 시간당 환자 체중 kg당 적어도 10mg(mg/kg/hr) 속도로 투여된다. 바람직하게, 투여 속도는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 가장 바람직하게 적어도 50 mg/kg/hr이다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간 동안 투여된다. 바람직하게, Q-ER 펩타이드는 적어도 20 mg/kg/hr의 속도로 투여되고, 적어도 1시간, 더 바람직하게 적어도 1.5시간, 가장 바람직하게 적어도 2시간, 예컨대 적어도 2.5시간 동안 투여된다. 바람직하게, 투여는 수술 동안 이루어진다. 더 바람직하게, 투여는 수술 전 이루어진다.
다른 구체예에서, Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체는 상기 설명된 바와 같은 본 발명에 따른 임의의 사용을 위해 제공되며, 여기서 인간 대상체는 집중치료실에 입원한 상태이고, 상기 사용은 인간 대상체의 측정된 변수를 개선하며, 상기 변수는 집중치료실에 남을지 말지 평가하기 위해 결정된다. 상술한 바와 같이, 인간 환자가 집중치료실에 있을 때 평가되는 변수는 신장 기능 및 체액 저류와 관련된 변수를 포함하며, 혈역학적 안정성의 개선을 가능하게 한다. 어느 경우든, Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용은 이러한 변수를 개선함으로써 집중치료실 체류 기간을 단축한다. Q-ER 펩타이드 또는 그것의 유사체의 사용은 집중치료실 체류 기간을 단축할 뿐만 아니라, 병원 입원 기간을 단축시키고, 병원 재입원 확률을 감소시킨다.
추가 구체예들
추가 구체예 1: 인간 대상체에서 베타-세포 기능을 변형시키는 것을 포함하는, 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 2: 인간 대상체에서 프레프로인슐린 수준을 변형시키는 것을 포함하는, 베타-세포 고장 위험이 있거나 또는 그것으로 고통받는다고 간주되는 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 3: 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것을 포함하는, 신장 기능이 손상된 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 4: 인간 대상체에서 염증을 변형시키는 것을 포함하는, 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 5: 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것을 포함하는, 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 6: 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것을 포함하는, 과도한 혈관수축제/근수축제 사용이 위험하거나 또는 그것으로 고통받는다고 간주되는 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한, Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 7: 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 인간 대상체는 유도된 외상을 경험하고, 상기 사용은 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것을 포함한다.
추가 구체예 8: 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것을 포함하는, 체액 과부화 위험이 있거나 또는 그것으로 고통받는다고 간주되는 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 9: 인간 대상체에서 체액 저류를 변형시키는 것을 포함하는, 신장 기능이 손상된 인간 대상체의 치료에 사용하기 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 10: 추가 구체예 1-9 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 인간 대상체에서 체액 저류를 감소시킨다.
추가 구체예 11: 추가 구체예 1-10 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 혈관수축제의 감소된 사용을 포함한다.
추가 구체예 12: 추가 구체예 1-11 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 감소된 체액 흡수를 포함한다.
추가 구체예 13: 추가 구체예 7에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 혈관수축제의 감소된 사용은 혈관수축제 사용 기간의 감소를 포함한다.
추가 구체예 14: 추가 구체예 6-9 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 대상체는 유도된 외상을 경험한다.
추가 구체예 15: 추가 구체예 8-12 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 인간 대상체에서 신장 기능을 개선한다.
추가 구체예 16: 추가 구체예 11에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 개선된 신장 기능은 개선된 GFR 속도를 수반한다.
추가 구체예 17: 추가 구체예 6-12 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 인간 대상체는 신장 기능이 손상되며, 손상된 신장 기능은 AKI이다.
추가 구체예 18: 추가 구체예 1-13 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 혈액으로부터 주변 조직 및/또는 장기로의 혈장 누출 및 혈액 유출을 감소시킨다.
추가 구체예 19: 추가 구체예 1-13 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 혈액으로부터 주변 조직 및/또는 장기로의 혈장 누출을 감소시킨다.
추가 구체예 20: 추가 구체예 1-13 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 혈액으로부터 주변 조직 및/또는 장기로의 혈액 유출을 감소시킨다.
추가 구체예 21: 추가 구체예 1-20 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 심부전으로 고통받거나 또는 심부전의 위험이 있는 인간 대상체를 대상으로 한다.
추가 구체예 22: 추가 구체예 1-21 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 부종의 위험이 있는 인간 대상체를 대상으로 한다.
추가 구체예 23: 추가 구체예 7 및 14 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 인간 대상체는 유도된 외상을 경험했고, 유도된 외상은 수술이다.
추가 구체예 24: 추가 구체예 23에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 수술은 심폐 바이패스를 필요로 한다.
추가 구체예 25: 추가 구체예 1-24 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 펩타이드는 혈류에 투여된다.
추가 구체예 26: 추가 구체예 25에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 펩타이드는 적어도 10 mg/kg 체중/h의 속도로 투여된다.
추가 구체예 27: 추가 구체예 25 또는 26에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 펩타이드는 적어도 1시간 동안 투여된다.
추가 구체예 28: 추가 구체예 1-27 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 인간 대상체는 집중치료실에 입원한 상태이며, 상기 사용은 인간 대상체의 측정된 변수를 개선하고, 상기 변수는 집중치료실에 남을지 말지 평가하기 위해 결정된다.
추가 구체예 29: 추가 구체예 27에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 변수의 개선은 집중치료실 체류 기간을 단축시킨다.
추가 구체예 30: 추가 구체예 1-29 중 어느 하나에 따른 사용을 위한 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체로서, 상기 사용은 혈관수축을 유도한다.
추가 구체예 31: 혈역학적 안정성을 유지할 필요가 있는 인간 대상체에게 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체를 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
추가 구체예 32: 혈역학적 안정성을 개선할 필요가 있는 인간 대상체에게 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체를 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
추가 구체예 33: 신장 기능이 손상된 인간 대상체에게 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체를 투여하는 것을 포함하는 치료 방법으로서, Q-ER 펩타이드를 투여하는 치료는 인간 대상체에서 혈역학적 안정성을 유지 또는 개선하는 것을 포함한다.
추가 구체예 34: 글루타민(Q) 및 엘라스틴-수용체(ER) 결합 아미노산 서열 모티프가 제공되고, 또한 자가포식 억제 아미노산인 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 프롤린(P), 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된 적어도 50% 아미노산을 포함하는 합성 펩타이드를 포함하는 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 35: AQ, LQ, GQ, VQ, AQG, LQG, SEQ ID NO: 2(AQGV) 및 SEQ ID NO: 1(LQGV)의 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 추가 구체예 34에 따른 Q-ER 펩타이드, 또는 그것의 기능적 유사체.
추가 구체예 36: 추가 구체예 34 또는 35에 따른 헵타-, 옥타-, 노나-, 데카-, 운데카- 또는 도데카-펩타이드로 구성되는, Q-ER 펩타이드.
추가 구체예 37: 적어도 2개의 글루타민이 제공된 추가 구체예 34 내지 36 중 어느 하나에 따른 Q-ER 펩타이드.
추가 구체예 38: SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG) 및 SEQ ID NO: 8(LQGVLPG)의 군으로부터 선택된 추가 구체예 34 내지 36 중 어느 하나에 따른 Q-ER 펩타이드.
추가 구체예 39: SEQ ID NO: 9(AQGVAPGQ), SEQ ID NO: 10(LQGVAPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ) 및 SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ)의 군으로부터 선택된 추가 구체예 34 내지 36 중 어느 하나에 따른 Q-ER 펩타이드.
추가 구체예 40: SEQ ID NO: 15(AQGQAPGQ), SEQ ID NO: 16(LQGQAPGQ), SEQ ID NO: 17(AQGQLPGQ) 및 SEQ ID NO: 18(LQGQLPGQ)의 군으로부터 선택된 추가 구체예 34 내지 36 중 어느 하나에 따른 Q-ER 펩타이드.
추가 구체예 41: 추가 구체예 34 내지 40 중 어느 하나에 따른 Q-ER 펩타이드를 포함하는 제약학적 조성물.
추가 구체예 42: 인슐린을 추가로 포함하는 추가 구체예 41에 따른 제약학적 조성물.
추가 구체예 43: 췌장 베타-세포 기능 손상의 치료를 위한 추가 구체예 3 내지 40 중 어느 하나에 따른 Q-ER 펩타이드 또는 추가 구체예 41 또는 42에 따른 제약학적 조성물.
본원에 정의된 대로 Q-ER 펩타이드를 표적화하기 위한 적합한 수용체는 인간 엘라스틴-결합-단백질(EBP)이며, 이것은 BLB1 유전자(Uniprot 식별자 P16278)에 의해 암호화된, 베타-갈락토시다아제로부터 유래된 교대 스플라이스된 갈락토시다아제로서 인간 엘라스틴 수용체 복합체에서 발견될 수 있다. 이 유전자 생성물의 1번 이소폼은 베타 갈락토시다아제에 관한 것이고, 2번 이소폼은 교대 스플라이스된 갈락토시다아제(EBP 또는 S-Gal)에 관한 것이다. 베타-Gal(1번 이소폼)은 강글리오시드, 당단백질 및 글리코아미노글리칸으로부터 베타-연결된 말단 갈락토실 잔기를 절단하며, 리소좀에 주로 위치된다.
2번 이소폼(EBP 또는 S-Gal)은 베타-갈락토시다아제 촉매 활성을 거의 또는 전혀 갖지 않지만, 세포외 탄성 섬유의 형성(탄성섬유형성) 및 결합 조직의 발생에서 기능적 역할을 한다. S-Gal은 섬유아세포, 평활근 세포, 연골모세포, 백혈구 및 특정 암 세포 타입에서 발현된 비-인테그린 세포 표면 수용체의 주요 성분인 엘라스틴 수용체 복합체(ERC) 내의 엘라스틴 결합 단백질(EBP)와 동일하다고 간주된다. 엘라스틴 생성 세포에서 ERC는 트로포엘라스틴과 세포내 결합하고, 트로포엘라스의 분비 및 그것의 탄성 섬유로의 조립을 용이하게 하는 재순환 분자 샤프롱으로서 기능한다.
엘라스틴 수용체는 엘라스틴 결합 단백질(EBP) 또는 S-Gal로 확인된, 인간 베타-갈락토시다아제의 교대 스플라이스된 변이체를 포함한다. 인간에서 상기 수용체는 엘라스틴 및 피브릴린-1과 같은 세포외 바탕질 단백질(의 단백질분해 단편)에 있는 헥사펩타이드 x-Gly-x-x-Pro-Gly(xGxxPG) 모티프에 결합한다. 이 모티프의 대표적으로 가장 잘 알려진 것은 (트로포)엘라스틴에서 발견된 헥사펩타이드 SEQ ID NO: 19(VGVAPG)(Blanchevoye, C et al. (2013) J Biol Chem 288:1317-28)이지만, 일반적으로 엘라스틴 펩타이드라고 칭하는, 시그니쳐 서열 xGxxPG, 또는 일부 예에서는 xxGxPG에 부합하는 많은 다른 생물학적 활성 펩타이드들이 작용제로서 보고된다. 기능적으로 동등한 생물학적 활성을 위한 최소 필수 서열은 GxxP이며, P에 있는 펩타이드는 타입 VIII 베타-턴을 취할 수 있어야 한다. 락토오스, 및 이 수용체의 결합 부위에 상응하는 V14 펩타이드(SEQ ID NO: 23(VVGSPSAQDEASPL))가 엘라스틴 펩타이드 결합을 길항하기 위해 사용된다. 엘라스틴 수용체는 세포 표면에서 엘라스틴 결합 단백질(EBP), 뉴라미니다아제(Neu-1) 및 보호 단백질-카텝신 A(PPCA)와 함께 복합체를 형성한다. 리간드에 결합한 후, 이 복합체는 세포의 엔도솜 구획에 내재화되어 수많은 세포 반응을 촉발한다. 마우스에서 엘라스틴 펩타이드는 Neu-1을 통해 죽상경화증을 강화하고 Neu-1과 인슐린 수용체의 상호작용으로 인한 IR을 조절한다. 또한, 마우스에서 PPCA는 탄성 섬유의 조립 및 엔도텔린-1의 비활성화에 필요하며, 엔도텔린-1의 손상된 활성은 고혈압을 초래한다.
최근 연구는 ERC 복합체의 Neu-1 성분이 세포 활성화의 촉발을 담당한다는 것을 밝혔다. ERC는 다양한 타입의 백혈구, 및 간엽 세포, 예컨대 혈관 평활근 세포 및 섬유아세포를 포함하는 많은 세포 타입에 존재한다. 인간 엘라스틴에 존재하는 공통 반복 서열인 헥사펩타이드 SEQ ID NO: 19(VGVAPG)가 이 수용체에 대한 가장 잘 알려진 리간드이지만, 본 발명에서는 C-펩타이드, 갈렉틴-3, 및 인간 융모막 성선자극 호르몬(hCG)의 베타-2 루프도 ERC에 결합할 수 있음을 확인했다. SEQ ID NO: 19(VGVAPG)에 더하여, 모티프 GxxPG(여기서 x는 일반적으로 소수성 아미노산)의 다음에 오는 펩타이드는 시험관내에서 단구에 대해 주화성을 나타낸다(Bisaccia F, et al., Int. J. Pept. Protein Res. 1994;44:332-341, Castiglione Morelli MA, et al., J. Pept. Res. 1997;49:492-499).
다른 유용한 작용제들이, 예를 들어 인간 ERC의 엘라스틴-결합 부위의 상동성 모델을 이용하여 인 실리코(in silico) 방식으로 선택될 수 있다. Blanchevoy 등은 최근에 이 단백질의 상동성 모델을 구축하고, 이 모델에서 SEQ ID NO: 19 (VGVAPG)의 도킹을 보여주었다(Blanchevoye et al, doi: 10.1074/jbc.M112.419929 jbc.M112.419929.; 결합 부위의 관련된 원자 좌표와 같은 내용이 본원에 참고로 포함된다).
본원에서 단백질 또는 펩타이드 조성물, 구조 및 기능을 설명할 때 아미노산이 참조된다. 본 명세서에서 아미노산 잔기들은 하기 약자를 사용하여 표시된다. 또한, 명백히 달리 나타내지 않는다면, 펩타이드 및 단백질의 아미노산 서열은 N-말단에서부터 C-말단으로, 좌측 말단에서부터 우측 말단으로 확인되며, N-말단이 첫 번째 잔기로서 확인된다. Ala: 알라닌 잔기; Asp: 아스파르테이트 잔기; Glu: 글루타메이트 잔기; Phe: 페닐알라닌 잔기; Gly: 글리신 잔기; His: 히스티딘 잔기; Ile: 이소류신 잔기; Lys: 리신 잔기; Leu: 류신 잔기; Met: 메티오닌 잔기; Asn: 아스파라긴 잔기; Pro: 프롤린 잔기; Gln: 글루타민 잔기; Arg: 아르기닌 잔기; Ser: 세린 잔기; Thr: 트레오닌 잔기; Val: 발린 잔기; Trp: 트립토판 잔기; Tyr: 티로신 잔기; Cys: 시스테인 잔기. 아미노산은 또한 종래의 문자 코드 약자에 의해, 즉 A=Ala; T=Thr; V=Val; C=Cys; L=Leu; Y=Tyr; I=Ile; N=Asn; P=Pro; Q=Gln; F=Phe; D=Asp; W=Trp; E=Glu; M=Met; K=Lys; G=Gly; R=Arg; S=Ser; 및 H=His로서 언급될 수 있다.
펩타이드는 펩타이드(아미드) 결합에 의해 연결된 아미노산 단량체들의 천연의 생물학적 또는 인공적으로 제조된 (합성) 단쇄를 의미한다. 글루타민 펩타이드는 아미노산 단량체 중 하나가 글루타민인 펩타이드(아미드) 결합에 의해 연결된 아미노산 단량체들의 천연의 생물학적 또는 인공적으로 제조된 (합성) 단쇄를 의미한다.
화학적으로 합성된 펩타이드는 일반적으로 자유로운 N- 및 C-말단을 가진다. N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화는 펩타이드의 전체 전하를 감소시키므로, 전체 용해성이 감소될 수 있다. 그러나, 말단 아세틸화/아미드화는 자생 단백질에 더 가까운 의태체를 생성하기 때문에 펩타이드의 안정성이 또한 증가될 수 있다. 이들 변형은 펩타이드의 생물학적 활성을 증가시킬 수 있고, 이는 본원에서도 제시된다. 합성 PG-도메인 또는 xGxxPG-타입 펩타이드는 전통적인 고체상 합성에 의해 합성된다.
펩타이드 합성
합성 PG-도메인 또는 GxxP-타입 펩타이드 또는 그것의 레트로-인버소(retro-inverso) 변이체는 전통적인 고체상 합성에 따라서 합성된다. 펩타이드의 순도는 고성능 액체 크로마토그래피 및 고속 원자 충격 질량분석법에 의해 확인된다. 전통적으로, 펩타이드는 2 내지 50개 아미노산으로 구성된 분자로서 정의되고, 단백질은 50개 이상의 아미노산으로 이루어진다. 또한, 펩타이드는 2차, 3차 및 4차 구조로 알려진 복잡한 형태를 취할 수 있는 단백질에 비해 구조가 잘 정의되지 않는 경향이 있다. 또한, 펩타이드와 단백질 간에 기능적 구분이 있을 수 있다. 실제로, 본 출원뿐만 아니라 대부분의 연구자들은 펩타이드라는 용어를 사용하여 펩타이드, 또는 50개 이하의 아미노산을 가진 비교적 짧은 아미노산 사슬(올리고펩타이드라고도 칭함)을 구체적으로 지칭하며, 폴리펩타이드라는 용어는 단백질, 또는 > 50 또는 훨씬 더 많은 아미노산의 사슬을 설명하기 위해 사용된다.
주화 활성의 결정
American Type Culture Collection(ATCC 카탈록 번호 CRL-1593.2, Manassas, Va)에서 인간 U937 단구 세포가 구입된다. 10% 태아 소 혈청 및 항생제로 보충된 RPMI 1640 배지를 함유한 T-75 플라스크 내의 현탁 배양물에 세포가 유지되고, 배양물은 3 내지 5일마다 분할된다. 주화성 분석에 사용하기 3일 전에, 1 mmol/L 디부티릴 환형 아데노신 모노포스페이트(dbcAMP; Sigma Chemical Co)에 노출시킴으로써 U937 세포를 자극하여 대식세포 계통을 따라 분화시킨다. 세포를 3번 세척하여 배양 배지를 제거한 다음, 주화성 배지(1% 락트알부민 가수분해물로 보충된 Dulbecco 변형 필수 배지)에 재현탁하고, 2.5 x 106 세포/mL의 최종 농도로 분석 챔버에 평판한다. 주화성 분석은 48-웰 미소주화성 챔버(Neuro Probe, Cabin John, Md)에서 수행된다. 챔버의 하부 웰은 3개씩 주화성 자극제(또는 배지 단독) 25mL로 채워진다. 포어 크기가 5mm인 코팅되지 않은 10mm 두께의 폴리비닐피롤리돈-무함유 폴리카보네이트 필터(Neuro Probe)가 샘플 위에 배치된다. 실리콘 개스킷과 챔버 윗 부분이 적용되고, 단구 세포 현탁액 50mL가 상부 웰에 배치된다. 37℃에서 3시간 동안 가습 5% CO2 분위기에서 챔버를 인큐베이션하고, 이동하지 않은 세포를 필터의 상부 표면에서 부드럽게 닦아낸다. 메탄올계 고정제에 필터를 30초 동안 담그고 변형된 Wright-Giemsa 기술(Protocol Hema 3 염색 세트; Biochemical Sciences, Inc, Swedesboro, NJ)을 사용하여 염색한 다음 유리 슬라이드에 장착한다. 필터를 통해서 완전히 이동한 세포가 광 현미경 아래서 계수되며, 웰당 3개의 무작위 고출력 필드(HPF; 원래 배율 x 400)에서 계수된다.
연속 Ficoll/Pelastin 수용체 복합체 (ERC)oll 구배 원심분리를 사용하여 건강한 지원자의 새로 채혈된 혈액으로부터 인간 단구가 분리된다. 0.5% 인간 혈청으로 보충된 RPMI-1640 배지에서 16시간 동안 세포가 배양되고 분리 후에 중단된다. 세포 순도는 유세포계수 분석에 의해 결정되었을 때 >95%이다. 단구 주화성은 48-웰 미소주화성 챔버(Neuroprobe, Gaithersburg, MD)에서 혈청-무함유 배지에서 분석된다. 상부 및 하부 챔버의 웰은 폴리비닐피롤리돈-무함유 폴리카보네이트 막(포어 크기 5μm; Costar)에 의해 분리된다. 새로 분리된 단구는 5 x 105/mL의 밀도로 재조합 C-펩타이드(Sigma)와 함께 2.5시간 동안 인큐베이션되고, 이후 필터 바닥면의 이동된 세포가 염색되며 광 현미경 아래서 계수된다. 0.1 mmol/L N-포밀-메티오닐-류실-페닐알라닌(f-MLF; Sigma Chemical Co)을 사용하여 최대 주화 활성이 측정되고, 체커보드 분석를 사용하여 주화성과 화학활동성이 구별된다.
주화성은 SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ) 또는 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ)에 대해 시험된다. 락토오스에 세포를 노출시켜 67-kD ERC를 특이적으로 해리한다. 락토오스에 대한 대조군은 글루코오스, 프럭토오스 및 만노오스를 포함했고, 이들 중 어느 것도 67-kD ERC에 영향을 미치지 않는다. 각 경우, SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ) 또는 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ)의 관련된 농도(10-9 내지 10-5 mol/L)에 단구 세포가 30분 동안 노출된 후 주화성 분석이 시작된다. SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ) 또는 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ)는 농도 의존적 방식으로 주화성을 유도하며 0.1 mmol/L에서 양호한 활성을 나타내는데, 이것은 동일한 농도의 f-MLF보다 상당히 더 강력하다. 분석 챔버의 상부 웰의 단구는 SEQ ID NO:12(LQGVLPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ) 또는 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ)의 다양한 농도에 30분 동안 노출되고, 이후 하부 웰에서 SEQ ID NO: 19(VGVAPG)(0.1 nmol/L - 10 nmol/L)에 의해 자극된다. SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ) 또는 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ)와 함께 단구 세포의 예비 인큐베이션은 f-MLF에 대한 주화성 반응을 변경하지 않는다. SEQ ID NO: 19(VGVAPG)는 단구 이동의 농도 의존적 증가를 자극한다. SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ), SEQ ID NO: 11 (AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ), 또는 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ) 유도된 주화 활성은 세포 엘라스틴 수용체에 결합하는 인간 엘라스틴에서 발견된 반복 펩타이드인 Val-Gly-Val-Arg-Pro-Gly(SEQ ID NO: 19(VGVAPG))과의 경쟁에 의해 제거된다. SEQ ID NO: 19(VGVAPG), SEQ ID NO: 12(LQGVLPGQ), SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ), SEQ ID NO: 24(LQGVQPGQ), 또는 SEQ ID NO: 25(AQGVQPGQ)에 반응한 단구 주화성은 67-kD ERC를 특이적으로 해리하는 갈락토당인 락토오스의 존재하에 제거되지만, 글루코오스, 프럭토오스 또는 만노오스에 의해서는 영향을 받지 않는다.
또한, 변형된 Boyden 챔버에서 이중 마이크로포어 막 시스템에 의해 주화성이 분석된다. 다양한 농도의 펩타이드 또는 그것의 단편 180μl를 함유하는 하부 구획과 세포 현탁액(5　x　104 세포, 예컨대 내피 세포, 평활근 세포, 혈관주위세포, 각질세포, 섬유아세포 또는 백혈구, 배지 ml당) 200μl를 함유하는 상부 구획은 10μm 폴리카보네이트 막(Millipore, Bedford, MA)으로 분리된다. 세포의 부착을 용이하게 하기 위해 실온에서 24시간 동안 제1형 소 콜라겐(ml당 25μg 인산염 완충 식염수)(Chemicon International, Temecula, CA)에서 막이 미리 소킹된다. 5% CO2-나머지 공기 중에서 37℃에서 18h 동안 챔버가 인큐베이션된다. 다음에, 챔버가 해체되고 막 쌍이 헤마톡실린으로 염색된다. 현미경 아래서 예컨대 5개 정도의 무작위 비중복 필드에서 세포 수가 계수된다. 모든 실험에서 하부 챔버의 배지가 단독으로 베이스라인 대조군으로 사용될 수 있다. 유도된 세포 이동을 확인하기 위해, 세포 현탁액에 다양한 용량의 엘라스틴을 첨가함으로써 상부 및 하부 구획 간의 농도 구배를 제거한다. 주화성이 상기 설명된 대로 분석된다. 또한, 주화성은 내피 세포 이동 및 증식을 측정하는 생체외 대동맥 환 분석에서 연구될 수 있다.
재조합 엘라스틴 결합 단백질은 다음과 같이 생성된다. β-갈락토시다아제 유전자의 1차 전사체의 비순차 교대 스플라이싱에 의해 2개의 mRNA가 생성된다고 알려져 있으며, 그 중 하나는 리소좀 효소(β-gal)의 전구체를 암호화하고, 나머지 하나는 리소좀에 표적화되지 않는 효소 비활성 단백질(S-gal 또는 엘라스틴 결합 단백질)을 암호화한다. S-gal-암호화 mRNA에서 엑손 3, 4 및 6은 스플라이스되고, 엑손 5는 프레임 내 이동되며, 이로써 S-gal에 32-아미노산 서열을 암호화하는 독특한 영역이 생성되는데, 이것은 활성 β-gal의 엑손 5에 의해 암호화된 대응물과 상이하며, 엘라스틴-펩타이드 결합 도메인을 함유한다. S-gal cDNA 클론은 통상의 과정에 의해 구성된다. Morreau와 동료들에 의해 설명된 서열을 반영한 전장 교대 스플라이스된 cDNA 클론(1986 bp)을 구성하기 위해, Pharmacia의 Quick Prep mRNA 정제 키트를 사용하여 배양된 정상 인간 피부 섬유아세포로부터 폴리(A)+mRNA가 분리된다. 이 mRNA(500ng)는 무작위 6량체 및 Superscript 역 전사효소(Life Technologies, Inc.)를 사용하여 역 전사된다. cDNA의 중복 단편을 분리하기 위해 2번의 중합효소 연쇄반응(PCR)이 수행된다. cDNA의 5' 부분(357 bp)이 프라이머 5'-SEQ ID NO: 54(GGTGGTCATGCCGGGGTTCCT)-3'과 5'-SEQ ID NO: 55(ATGTTGCTGCCTGCACTGTT)-3'을 사용하여 증폭된다. 프라이머 5'-SEQ ID NO: 56(CCATCCAGACATTACCTGGC)-3'과 5'-SEQ ID NO: 57(CCCTCACACATTCCAGGTGGT)-3'을 사용하여 cDNA의 3' 단편(1598 bp)이 증폭된다. 반응은 55℃의 아닐링 온도를 사용하여 Perkin-Elmer 써머 사이클러에서 수행된다. 단편은 겔 정제되고 pBluescript SK+의 EcoRV 부위에 리게이션된다. 각 단편은 각각의 3' 및 5' 단부에 115-bp 중복 서열을 함유한다. 또한, 5' 단편의 5' 단부에 위치된 처음 27 bp의 부재와 3' 단편의 3' 단부에서 119 bp의 부재가 검출된다(초기 PCR 반응에서 프라이머 배치에 기인함). 전장 클론의 최종 조립은 S-gal의 두 부분 사이의 중복 영역에서 발견된 공통 PvuII 부위를 이용함으로써 중복 세그먼트를 제거한다. 제한 효소 KpnI 및 PvuII에 의한 5' 클론의 완전한 이중 효소절단은 S-gal의 5' 세그먼트(즉 PvuII 부위로의 5')인 316-bp 단편을 제공하며, 이것은 5' 단부에 추가의 57 bp 벡터를 포함한다. KpnI 효소절단은 3' 오버행을 생성하고, 이것은 Pfu DNA 중합효소를 사용함으로써 무딘 형태로 종결된다. 다음에, 316-bp 5' 단편과 PvuII-효소절단된 3' 클론이 모두 아가로오스 겔 정제되고, 유전자 세척되고, 리게이션된다. 리게이션 생성물은 박테리아 세포에 형질전환되고 LB-AMP 플레이트에서 성장한다. XhoI 및 PvuII에 의한 제한 효소절단에 의해 이 새로운 구성물에서 S-gal의 짧은 5' 세그먼트의 정확한 배향이 확인된다. 시험관내 전사/번역이 Promega에 의해 제공된 프로토콜에 따라서 행해진다. pGEM-3Z 중의 S-gal cDNA(5μg)가 선형화되고(XbaI로 효소절단됨), 시험관내 전사가 수행된다. 이후 시험관내 번역이 수행되며, 이것은 0.8 mCi/ml [35S]메티오닌([35S] Met)의 존재하에 뉴클레아제-처리된 토끼 망상적혈구 세포용해액(마이너스 마이크로솜 막 및 프로테아제 억제제) 중의 RNA 기질 2μl를 사용한다. 번역 믹스(마이너스 mRNA)가 대조군으로 사용된다. SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의해 상청액이 직접 분석되고, 이후 [35S]Met-표지된 반응 생성물의 존재를 검출하고 분자 크기를 비교하기 위해 오토라디오그래피가 수행된다. 반응 생성물은 β-gal, S-gal 및 엘라스틴 결합 단백질을 인식하는 항체에 의한 면역침전을 사용하고, 이어서 엘라스틴 친화성 칼럼에 의해 더 특성화된다.
본 발명에서 유용한 합성 Q-ER 펩타이드가 하기 표 1에 이들의 서열 식별자와 함께 열거된다. 특히, 적어도 하나의 인간 엘라스틴 수용체 결합 모티프 GxxPG를 갖고 적어도 하나의 아미노산 Q를 갖는 표 1의 펩타이드는 급성 염증 상태를 갖거나 가진다고 의심되는 인간의 치료에 사용하기 위해 또는 제1형 당뇨병 또는 말기 제2형 당뇨병에서 보이는 손상된 베타-세포 기능, 및 손상된 신장 기능, 체액 저류 및/또는 백혈구 및 혈액 혈장의 유출과 같은 혈역학적 상태에서와 같은, 미세혈관 합병증을 갖거나 가진다고 의심되는 인간의 치료에 사용하기 위해 제공된다.
[표 1]
SEQ ID NO: 1 (LQGV)
SEQ ID NO: 2 (AQGV)
SEQ ID NO: 3 (QGVLPG)
SEQ ID NO: 4 (QGVAPG)
SEQ ID NO: 5 (AQGVAPG)
SEQ ID NO: 6 (LQGVAPG)
SEQ ID NO: 7 (AQGVLPG)
SEQ ID NO: 8 (LQGVLPG)
SEQ ID NO: 9 (AQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 10 (LQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 11 (AQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 12 (LQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 13 (LQGQAPG)
SEQ ID NO: 14 (QGQAPG)
SEQ ID NO: 15 (AQGQAPGQ)
SEQ ID NO: 16 (LQGQAPGQ)
SEQ ID NO: 17 (AQGQLPGQ)
SEQ ID NO: 18 (LQGQLPGQ)
SEQ ID NO: 19 (VGVAPG)
SEQ ID NO: 20 (LQVGLLPG)
SEQ ID NO: 21 (AQPGQLPG)
SEQ ID NO: 22 (AQGVQPG)
SEQ ID NO: 23 (VVGSPSAQDEASPL)
SEQ ID NO: 24 (LQGVQPGQ)
SEQ ID NO: 25 (AQGVQPGQ)
SEQ ID NO: 26 (VQGVLPG)
SEQ ID NO: 27 (VQGVAPG)
SEQ ID NO: 28 (GQGVLPG)
SEQ ID NO: 29 (GQGVAPG)
SEQ ID NO: 30 (LQGQLPG)
SEQ ID NO: 31 (VQGQLPG)
SEQ ID NO: 32 (VQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 33 (VQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 34 (AQGQLPG)
SEQ ID NO: 35 (GQGQLPG)
SEQ ID NO: 36 (GQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 37 (GQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 38 (VQGQLPGQ)
SEQ ID NO: 39 (GQGQLPGQ)
SEQ ID NO: 40 (LQGLQPGA)
SEQ ID NO: 41 (LQGAQPGQ)
SEQ ID NO: 42 (LQGLQPGQ)
SEQ ID NO: 43 (VQGLQPGQ)
SEQ ID NO: 44 (VQGVQPGQ)
SEQ ID NO: 45 (VQGAQPGQ)
SEQ ID NO: 46 (VQGGQPGQ)
SEQ ID NO: 47 (AQGLQPGQ)
SEQ ID NO: 48 (AQGAQPGQ)
SEQ ID NO: 49 (AQGGQPGQ)
SEQ ID NO: 50 (GQGLQPGQ)
SEQ ID NO: 51 (GQGVQPGQ)
SEQ ID NO: 52 (GQGAQPGQ)
SEQ ID NO: 53 (GQGGQPGQ)
본원에서 합성된 것과 같은 유용한 핵산들이 표 2에 제시된다.
[표 2]
5'-SEQ ID NO: 54 (GGTGGTCATGCCGGGGTTCCT)-3'
5'-SEQ ID NO: 55 (ATGTTGCTGCCTGCACTGTT)-3'
5'-SEQ ID NO: 56 (CCATCCAGACATTACCTGGC)-3'
5'-SEQ ID NO: 57 (CCCTCACACATTCCAGGTGGT)-3'
[표 3]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 위치 xx에 아미노산 GQ가 있는 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 46 (VQGGQPGQ)
SEQ ID NO: 49 (AQGGQPGQ)
SEQ ID NO: 53 (GQGGQPGQ)
[표 4]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 위치 xx에 아미노산 VQ가 있는 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 51 (GQGVQPGQ)
SEQ ID NO: 44 (VQGVQPGQ)
SEQ ID NO: 24 (LQGVQPGQ)
SEQ ID NO: 22 (AQGVQPG)
SEQ ID NO: 25 (AQGVQPGQ)
[표 5]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 위치 xx에 아미노산 VA가 있는 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 4 (QGVAPG)
SEQ ID NO: 5 (AQGVAPG)
SEQ ID NO: 6 (LQGVAPG)
SEQ ID NO: 9 (AQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 10 (LQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 27 (VQGVAPG)
SEQ ID NO: 29 (GQGVAPG)
SEQ ID NO: 33 (VQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 37 (GQGVAPGQ)
[표 6]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 위치 xx에 아미노산 VL이 있는 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 3 (QGVLPG)
SEQ ID NO: 7 (AQGVLPG)
SEQ ID NO: 8 (LQGVLPG)
SEQ ID NO: 11 (AQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 12 (LQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 26 (VQGVLPG)
SEQ ID NO: 28 (GQGVLPG)
SEQ ID NO: 32 (VQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 36 (GQGVLPGQ)
[표 7]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 위치 xx에 아미노산 QA가 있는 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 13 (LQGQAPG)
SEQ ID NO: 14 (QGQAPG)
SEQ ID NO: 15 (AQGQAPGQ)
SEQ ID NO: 16 (LQGQAPGQ)
[표 8]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 위치 xx에 아미노산 AQ가 있는 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 45 (VQGAQPGQ)
SEQ ID NO: 41 (LQGAQPGQ)
SEQ ID NO: 48 (AQGAQPGQ)
SEQ ID NO: 52 (GQGAQPGQ)
[표 9]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 위치 xx에 아미노산 QL이 있는 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 17 (AQGQLPGQ)
SEQ ID NO: 18 (LQGQLPGQ)
SEQ ID NO: 21 (AQPGQLPG)
SEQ ID NO: 30 (LQGQLPG)
SEQ ID NO: 31 (VQGQLPG)
SEQ ID NO: 34 (AQGQLPG)
SEQ ID NO: 35 (GQGQLPG)
SEQ ID NO: 38 (VQGQLPGQ)
SEQ ID NO: 39 (GQGQLPGQ)
[표 10]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 위치 xx에 아미노산 LQ가 있는 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 20 (LQVGLQPG)
SEQ ID NO: 40 (LQGLQPGA)
SEQ ID NO: 42 (LQGLQPGQ)
SEQ ID NO: 43 (VQGLQPGQ)
SEQ ID NO: 47 (AQGLQPGQ)
SEQ ID NO: 50 (GQGLQPGQ)
[표 11]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 또한 SEQ ID NO: 1(LQGV)을 가진 펩타이드 서열이 제공된 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 6 (LQGVAPG)
SEQ ID NO: 8 (LQGVLPG)
SEQ ID NO: 10 (LQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 12 (LQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 24 (LQGVQPGQ)
[표 12]
GxxPG 엘라스틴-수용체-결합 모티프를 가지며 또한 SEQ ID NO: 2(AQGV)를 가진 펩타이드 서열이 제공된 바람직한 Q-ER 펩타이드
SEQ ID NO: 5 (AQGVAPG)
SEQ ID NO: 7 (AQGVLPG)
SEQ ID NO: 9 (AQGVAPGQ)
SEQ ID NO: 11 (AQGVLPGQ)
SEQ ID NO: 22 (AQGVQPG)
SEQ ID NO: 25 (AQGVQPGQ)
본 발명은 또한 Q-ER 펩타이드의 표 1 목록의 임의의 펩타이드가 적어도 한번 반복된 합성 펩타이드를 제공하며, 선택적으로 상기 반복부는 링커에 의해 분리되고, 이러한 링커는 하나 이상의 아미노산, 예컨대 글리신, 알라닌, 류신, 발린, 이소류신 또는 글루타민의 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 상기 표 1에 열거된 펩타이드에서 발견되는 펜타펩타이드 모티프 GxxPG를 가진 2개 또는 3개의 펩타이드가 적어도 한번 포함된 합성 펩타이드를 제공하며, 선택적으로 PG-도메인 반복부를 가진 상기 펩타이드는 링커에 의해 분리되고, 이러한 링커는 하나 이상의 아미노산, 예컨대 글리신, 알라닌, 류신, 발린, 이소류신 또는 글루타민의 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
제약학적 Q-ER 조성물
실시예 1
펩타이드 SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ)
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
펩타이드 SEQ ID NO: 11(AQGVLPGQ)--500 mg
M-크레오솔--25 mg
글리세롤--160 mg
최종 pH 7.0-7.8이고 조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 물 및 10% 염산 또는 10% 수산화나트륨.
선택적으로, 상기 조성물을 내산성 캡슐에 충전한다.
실시예 2
펩타이드 SEQ ID NO: 12 (LQGVLPGQ)
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
펩타이드 SEQ ID NO: 12 (LQGVLPGQ)--500 mg
M-크레오솔--25 mg
글리세롤--160 mg
최종 pH 7.0-7.8이고 조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 물 및 10% 염산 또는 10% 수산화나트륨.
선택적으로, 상기 조성물을 내산성 캡슐에 충전한다.
실시예 3
펩타이드 SEQ ID NO: 47 (AQGLQPGQ)
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
펩타이드 SEQ ID NO: 47 (AQGLQPGQ)--500 mg
M-크레오솔--25 mg
글리세롤--160 mg
최종 pH 7.0-7.8이고 조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 물 및 10% 염산 또는 10% 수산화나트륨.
선택적으로, 상기 조성물을 내산성 캡슐에 충전한다.
실시예 4
펩타이드 SEQ ID NO: 40 (LQGLQPGQ)
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
펩타이드 SEQ ID NO: 40 (LQGLQPGQ)--500 mg
M-크레오솔--25 mg
글리세롤--160 mg
최종 pH 7.0-7.8이고 조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 물 및 10% 염산 또는 10% 수산화나트륨.
선택적으로, 상기 조성물을 내산성 캡슐에 충전한다.
실시예 5
펩타이드 SEQ ID NO: 11 (AQGVLPGQ) 및 인슐린
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
인간 인슐린 (28 U/mg)--1000 U
펩타이드 SEQ ID NO: 11 (AQGVLPGQ)--500 mg
M-크레오솔--25 mg
글리세롤--160 mg
최종 pH 7.0-7.8이고 조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 물 및 10% 염산 또는 10% 수산화나트륨.
실시예 6
펩타이드 SEQ ID NO: 12 (LQGVLPGQ) 및 인슐린
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
인간 인슐린 (28 U/mg)--1000 U
펩타이드 SEQ ID NO: 12 (LQGVLPGQ)--500 mg
M-크레오솔--25 mg
글리세롤--160 mg
최종 pH 7.0-7.8이고 조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 물 및 10% 염산 또는 10% 수산화나트륨.
실시예 7
펩타이드 SEQ ID NO: 47 (AQGLQPGQ) 및 인슐린
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
인간 인슐린 (28 U/mg)--1000 U
펩타이드 SEQ ID NO: 47 (AQGLQPGQ)--500 mg
M-크레오솔--25 mg
글리세롤--160 mg
최종 pH 7.0-7.8이고 조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 물 및 10% 염산 또는 10% 수산화나트륨.
실시예 8
펩타이드 SEQ ID NO: 40 (LQGLQPGQ) 및 인슐린
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
인간 인슐린 (28 U/mg)--1000 U
펩타이드 SEQ ID NO: 40 (LQGLQPGQ)--500 mg
M-크레오솔--25 mg
글리세롤--160 mg
최종 pH 7.0-7.8이고 조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 물 및 10% 염산 또는 10% 수산화나트륨.
실시예 9
펩타이드 SEQ ID NO: 5 (AQGVAPG)
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
펩타이드 SEQ ID NO: 5 (AQGVAPG)―40 mg
조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 PBS 또는 0.9% NaCl.
실시예 10
펩타이드 SEQ ID NO: 6 (LQGVAPG)
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
펩타이드 SEQ ID NO: 6 (LQGVAPG)―40 mg
조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 PBS 또는 0.9% NaCl.
실시예 11
펩타이드 SEQ ID NO: 7 (AQGVLPG)
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
펩타이드 SEQ ID NO: 7 (AQGVLPG)―40 mg
조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 PBS 또는 0.9% NaCl.
실시예 12
펩타이드 SEQ ID NO: 8 (LQGVLPG)
조성물 10 ml를 제조하기 위해 하기의 조성으로 혼합한다.
펩타이드 SEQ ID NO: 8 (LQGVLPG)―40 mg
조성물 부피를 10 ml로 만들기에 충분한 PBS 또는 0.9% NaCl.
실시예 13
선택된 아미노산에 의한 자가포식의 억제
자가포식은 자가포식소체(autophagosome)라고 하는 이중막 소포를 통해서 세포외 및 세포질 물질을 리소좀으로 전달하는 분해 경로이다. 세포질 구성성분은 자가포식소체에 격리되고, 이어서 적재물이 분해되는 리소좀과 융합한다. 세포외 물질은 내포작용 또는 포식작용에 의해 흡수되고, 이어서 다시 적재물이 분해되는 리소좀과 융합한다. 자가포식은 세포 대사 및 에너지 균형을 포함하는 많은 양태의 세포 기능에 수반되는 중요한 기전이며, 자가포식의 변경은 인간의 다양한 병리학적 과정과 관련된다. 자가포식은 세포가 자가포식소체에 의해 세포 성분을 제거하고 분해하는 자연적인 기전이다. 자가포식은 많은 신체 및 병리학적 과정과 관련되기 때문에 인기있는 연구 분야이다. 이 방식에서, 세포는 경시적으로 대부분의 아미노산을 재순환시키는 일정한 단백질 턴오버를 가진다. 필수 아미노산의 비필수 아미노산으로의 교환 및 산화된 아미노산으로부터 아미노산 생합성으로 아미노기의 전달을 통해 항상성이 달성된다. 이러한 항상성 상태는 활성 mTORC1 복합체를 통해서 유지된다. 아미노산 고갈하에서 mTORC1은 비활성화된다.
본 발명은 일부 아미노산이 다른 아미노산보다 단백질형성(mTOR 키나아제) 또는 단백질분해(자가포식)를 더 잘 제어한다는 것을 제시한다. 기계적 라파마이신 복합체 I 표적(mTORC1)은 세포 및 유기체 성장의 중심 조절제이며, 이 경로는 많은 인간 질환의 발병기전에 연관된다. mTORC1은 mTORC1을 활성화 부위인 리소좀 표면으로 보내는 아미노산과 같은 영양소의 가용성에 반응하여 성장을 촉진한다. 아미노산 수준이 mTORC1과 소통되는 방식은 Rag GTPases 및 Ragulator, v-ATPase, GATOR 및 폴리큘린 복합체로 이루어진 리소좀-기반 신호전달 시스템의 발견에 의해 단지 최근에야 밝혀지고 있는 중이다. 세포 성장을 자극하기 위해, mTORC1은 그것의 하류 이펙터에 의존하여, 조화로운 방식으로, 단백질형성, 세포 분화 및 세포- 및 세포-소기관 성장의 근간이 되는 mRNA 번역과 같은 동화작용 프로그램을 촉진하고(Ma XM, Blenis J. Molecular mechanisms of mTOR-mediated translational control.　Nat Rev Mol Cell Biol.　2009;10:307-318), 단백질분해 및 세포- 또는 세포-소기관 붕괴의 근간이 되는 자가포식과 같은 이화작용 프로그램을 억압, 저하 또는 억제함으로써(Rabinowitz JD, White E. Autophagy and metabolism. Science. 2010;330:1344-1348), 조화롭지 못한 (동화작용성) 합성과 (이화작용성) 분해의 무익한 사이클을 방지한다. 일반적으로, 아미노산이 적은 조건하에서는 Ragulator가 v-ATPase와 함께 억제 상태에서 발견되고, GATOR1이 RagA를 향한 GAP 활성을 발휘하여, GTPase는 mTORC1을 모집하기에 충분하지 않은 비활성 GDP-결합된 상태로 유지된다. 인슐린 신호전달은 TSC 복합체가 리소좀 표면으로 전위하는 것을 억제하는데, 리소좀 표면에서 Rheb에 대한 GAP로서 기능하여 G 단백질을 비활성화한다. 아미노산 자극시 GATOR1은 GATOR2 및 Ragulator에 의해 억제될 수 있고, v-ATPase는 RagA를 향한 Ragulator의 GEF 활성을 촉발하는 입체구조적 변화를 겪는 한편, 폴리큘린 복합체는 RagC GTP 가수분해를 촉진한다. GTP-결합된 RagA 및 GDP-로딩된 RagC로 구성된 활성 이종이량체가 mTORC1을 리소좀 표면에 모집하고, Rheb와 상호작용하며 Rheb에 의해 활성화된다. mTORC1은 작은 리소좀 표면에 거주하며 mTORC1 키나아제 활성의 강력한 자극제로 기능하는 GTPase Rheb에 의해 조절된다. 본질적으로 자가포식은 기능부전 단백질 및 세포소기관들이 분해되는 세포내 분해 시스템이다. 이 과정에서 응집된 기능부전 단백질들이 내포작용 또는 포식작용을 통해 세포에 의해 흡수되거나, 또는 리소좀 소포로부터의 이중막에 의해 세포간 봉입되어 자가포식소체를 형성하며, 전형적으로 가수분해를 수반하는 분해가 달성된다. DALGreen은 살아있는 세포에서 Q-ER-펩타이드 유도 자가포식을 검출하는데 사용된다. 자가포식은 세포내 분해 시스템이며, 이 과정에서 응집된 기능부전 단백질들은 이중막에 의해 봉입되어 자가포식소체를 형성한다. 자가포식의 (아미노산 매개) 억제를 검출 및 정량하는 방법은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Zhang, Ziyan, Rajat Singh, and Michael Aschner. "Methods for the Detection of Autophagy in Mammalian Cells."　Current protocols in toxicology　69.1 (2016): 20.12.1-20.12.26, 및 하기 표 13의 참고문헌들 참조). 예를 들어, 작은 소수성 분자인 DALGreen은 살아있는 세포의 원형질 막을 통과해서 자가포식소체에 통합된다. 리소좀이 자가포식소체와 융합한 후 오토리소좀의 환경은 산성이 된다. 산도가 증가함에 따라 DALGreen은 더 강한 형광을 방출한다. 이 염료는 형광 현미경에 의한 살아있는 세포의 영상화 및 유세포계수법에 의한 Q-ER 매개 자가포식의 정량 분석을 가능하게 한다. Q-ER 펩타이드를 사용한 다른 자가포식 연구에서, 자가포식은 자가포식 과정을 추적할 수 있는 LC3-I 및 LC3-II 검출을 통해서 결정되며, 이것은 LC3에 의한 Q-ER 매개 자가포식의 정량을 허용한다. LC3은 자가포식 경로의 핵심 단백질이다. 일단 합성되면 세포질 LC3은 C-말단에서 Atg4에 의해 처리되어 세포질 LC3-I(16 KDa)를 형성한다. 자가포식 신호시 LC3-I는 유비퀴틴-유사 단백질 Atg7 및 Atg3에 의해 지질 포스파티딜에탄올아민(PE)과 콘쥬게이션되어 지질화된 LC3-II(14 KDa)를 생성한다. 지질화된 LC3-II는 자가포식소체의 내부막과 외부막에 모두 결합하며, 내부막은 리소좀과의 융합 후 분해되고, 외부막의 LC3은 ATG4에 의해 콘쥬게이션이 해제되어 시토졸로 되돌아간다. 따라서, LC3-I의 LC3-II로의 전환 및 LC3-II의 리소좀 분해는 자가포식의 진행을 반영하며, 세포에 Q-ER 표적화 후 LC3 양의 변화를 모니터링하기 위해 면역블롯팅이 사용된다.
최근의 데이터와 과거 데이터(표 13 참조)에 따르면, 효과가 없거나 반대 효과를 가진다고 보고된 글루타민(E), 트레오닌(T), 세린(S), 리신(K), 트레오닌(T), 페닐알라닌(F), 티로신(Y) 및 메티오닌(M)과 같은 다른 아미노산보다 류신(L), 발린(V), 이소류신(I), 알라닌(A), 글루타민(Q), 아르기닌(R), 글리신(G), 프롤린(P)이 단독으로 또는 조합하여 mTOR의 강력한 활성화제 또는 자가포식의 억제제임이 확인되었다. 따라서, 본원에서 제시된 것과 같이, 본 발명에 따라서 Q-ER(Q-vh/vhh) 펩타이드에 포함시키기 위한, 류신(L), 발린(V), 이소류신(I), 알라닌(A), 글루타민(Q), 아르기닌(R), 글리신(G), 프롤린(P)은 단독으로 또는 (바람직하게) 조합하여, 세포 패키징 및 표적화를 위해 인간 세포에 사용하기 위한 가장 바람직한 mTOR의 활성화제 또는 자가포식의 억제제이다. 아미노산 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 및 프롤린(P)이 인간 세포에 대해 가장 현저한 mTOR 관련 자가포식 억제 효과를 가진다고 보고되었다(AJ Meijer et al amino acids 2015, 47, 2037-2063). 글리신(Zhong Z, Wheeler MD, Li X, Froh M, Schemmer P, Yin M, Bunzendaul H, Bradford B, Lemasters JJ.　l-Glycine: a novel antiinflammatory, immuno-modulatory, and cytoprotective agent.　Curr Opin Clin Nutr Metab Care　6: 229-240,　2003)은 아미노산-자극된 포유류 라파마이신 표적(mTOR) 복합체 1 활성화를 개선한다. 따라서, 본원에서 제시된 것과 같이, 본 발명에 따라서 Q-ER(Q-vh/vhh) 펩타이드에 포함시키기 위한, 류신(L), 알라닌(A), 글루타민(Q), 글리신(G) 및 프롤린(P)은 단독으로 또는 (바람직하게) 조합하여 인간 세포에 사용하기 위한 가장 바람직한 mTOR의 활성화제 또는 자가포식의 억제제이다.
[표 13]
Figure pct00001
Figure pct00002
실시예 14
엘라스틴-수용체 결합 모티프가 제공되고 자가포식을 억제하는 아미노산으로 부화된 Q-ER 펩타이드는 마우스에서 제1형 당뇨병을 감소시킨다.
비-비만 당뇨병(NOD) 마우스에 제1형 당뇨병(T1D)을 자발적으로 발생시키고 T1D의 유전적 및 면역학적 베이스와 치료를 이해하기 위한 모델로 사용했다. NOD 마우스가 이들 연구에 사용된다. 대부분의 NOD 마우스는 인슐린 결핍성 당뇨병으로 고통받는데, 췌장 베타-세포의 손실 또는 파괴의 근본 원인은 내분비 베타-세포 조직을 둘러싼 미세혈관계에서의 염증 과정의 결과일 가능성이 크며, 유전적으로 가속된 자가면역이 의심된다. 당뇨병은 Abbott Medisense Precision 혈당측정기를 사용하여 정맥 혈중 글루코오스 수준을 측정함으로써 평가된다. 2회 연속 글루코오스 측정값이 ≥11 mmol/l(200 mg/dl)이면 마우스는 당뇨병으로 간주된다. 연속으로 ≥11 mmol/l이 판독되기 시작한 첫날부터 당뇨병이 개시된 것으로 기산한다. 생체내 치료: 14주령 암컷 NOD 마우스 그룹(그룹당 n=12)이 합성 펩타이드 SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG), SEQ ID NO: 8(LQGVLPG) 또는 부형제(PBS)로 각각 치료된다. 치료는 복강내(i.p.) 경로로 주 3회 PBS에 희석된 250μg 펩타이드를 주사하여 실행한다. 대조군 마우스는 단지 PBS로만 치료된다. PBS로 치료된 NOD 마우스 모두에서 당뇨병이 발생했을 때 치료를 중단한다. 이것은 일반적으로 19주령이 되었을 때다. 펩타이드 및 PBS 치료는 최대 5주 동안 행해진다. ≥20 mmol/l의 과당혈증의 경우, 장기간의 괴로움을 방지하고자 마우스를 죽인다. 나머지 마우스는 추가의 치료 없이 최대 35주령까지 생존한다. 이들 실험은 17주령 이후의 지연된 당뇨병 발병에 의해 확인된 대로, 펩타이드 치료가 당뇨병 발생을 동반하는 베타-세포 손상을 유의하게 감소시킨다는 것을 보여준다.
실시예 15
엘라스틴-수용체 결합 모티프가 제공되고 자가포식을 억제하는 아미노산으로 부화된 Q-ER 펩타이드는 SIRS를 감소시킨다.
심한 출혈성 쇼크 후의 소생술은 엄청난 염증 반응을 유도하며, 전신 염증 반응 증후군, 다발성 장기 기능부전 증후군 및 최종적으로 사망에 이를 수 있다. 이러한 염증을 효과적으로 예방하는 치료는 지금까지는 제한적이다. 이전 연구에서 인간 융모막 성선자극 호르몬의 1차 구조와 관련된 합성 올리고펩타이드 LQGV 또는 AQGV가 염증 반응 및 고 용량 지질다당 유도 염증에 따른 사망률을 억제할 수 있음을 증명했다. 이러한 강력한 항-염증 효과를 고려하여, 출혈성 쇼크의 SIRS 동안 25 mg/ml의 농도로 0.9% NaCl에 용해된 합성 헵타펩타이드 SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG), SEQ ID NO: 8 (LQGVLPG), 또는 비히클(0.9% NaCl) 0.5 ml를 각각 복강내 투여하는 것이 이 상태와 관련된 염증 반응을 약화시킬 수 있는지 조사했다.
6마리 래트 그룹에서 40mmHg의 평균 동맥압에 도달될 때까지 60분 동안 혈액을 빼내어 출혈성 쇼크를 유도한다. 출혈성 쇼크 유도 30분 후 래트는 합성 헵타펩타이드 SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG), SEQ ID NO: 8(LQGVLPG) 중 하나, 또는 대조군으로서 0.9% NaCl 용액을 1회 주사받았다. 합성 헵타펩타이드 SEQ ID NO: 5(AQGVAPG), SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG), SEQ ID NO: 8(LQGVLPG)로의 치료는 TNF-α 및 IL-6의 전신 방출을 예방하며, 간에서 TNF-α, IL-6 및 E-셀렉틴 mRNA 전사체 수준을 감소시키고, 동시에 간으로의 호중구 침윤을 감소시키며, 간 손상을 감소시킨다.
동물: 특정 병원균이 없는 350-400g 중량의 성체 수컷 Wistar 래트를 사용한다. 25℃에서 12h 명/암 주기하에 장벽 안에 래트를 수용하며, 사료와 물은 무제한 허용된다. 실험 프로토콜은 the Council of Europe(1986), Directive 86/609/EC에 의한, "Guidelines on the protection of experimental animals"를 구현하는 국내법에 명시된 규칙을 준수한다. 래트는 실험 시작 전 하룻밤 동안 물을 제외하고는 금식된다. N2O/O2/이소플루란(Pharmachemie B.V., Haarlem, The Netherlands)의 혼합물을 사용하여 래트를 마취한다. 온도 제어 '하프-파이프'(UNO, Rotterdam, The Netherlands) 위에 래트를 위치시켜 체온을 37.5℃로 일정하게 유지한다. 기관내 삽관을 수행하고, N2O/O2/이소플루란 혼합물로 분당 60회 호흡으로 래트를 환기시킨다. 헤파린으로 폴리에틸렌 튜브(PE-50, Becton Dickinson; St. Michielsgestel, The Netherlands)를 플러싱하고, 대동맥의 오른쪽 경동맥을 통해서 오른쪽 내부 경정맥에 배치한다. 5cm 정중선 개복술을 수행하고, 치골 상부 카테터를 삽입하여 소변 생성을 모니터링한다. 혈액을 빼내어 출혈성 쇼크를 유도하며, 40mmHg의 평균 동맥압(MAP)에 도달될 때까지 순환 혈액 부피를 감소시킨다. 이 수준의 저혈압이 60분 동안 유지된다. 출혈성 쇼크 유도 30분 후 래트는 헵타펩타이드 용액 또는 비히클을 1회 정맥내(IV) 볼루스 주사받았다. 출혈성 쇼크 유도 60분 후 30분에 걸쳐서 소실된 혈액 부피의 4배까지 래트를 소생시켜 MAP를 정상화하고, 120분 동안 더 모니터링한 다음 죽였다. 래트는 실험 전 또는 실험 도중에 헤파린을 투여 받지 않았다. 겉보기 동물은 출혈성 쇼크 동물과 동일한 수술 과정을 적용 받지만, 혈액 소실 및 헵타펩타이드의 투여가 없다.
실시예 16
엘라스틴-수용체 결합 모티프가 제공되고 자가포식을 억제하는 아미노산으로 부화된 Q-ER 펩타이드는 급성 염증을 감소시킨다.
mTOR을 우선적으로 활성화하거나 또는 자가포식을 우선적으로 억제하는 상이한 선택된 아미노산을 포함하는 엘라스틴 수용체 결합 모티프가 제공되는 짧은 합성 Q-ER 펩타이드(이것의 예들은 상기 표에 제시)는 백혈구의 염증 활성을 감소시키고, 급성 전신 염증을 전체적으로 감소시킬 수 있다. 상기 아미노산으로 부화되고 염증 질환을 하향조절하는 펩타이드의 예들이 본원에서 제시된다. 다른 펩타이드들이, 바람직하게 A, G, L, V, Q 및 P의 군으로부터 선택된, mTOR을 우선적으로 활성화하거나 또는 자가포식을 우선적으로 억제하는 아미노산들을 조합하여, 바람직하게는 엘라스틴-수용체-복합체의 표적화를 가능하게 하는 GxxPG 모티프가 또한 제공된 Q-ER 펩타이드의 스트링으로 작은 펩타이드를 생성하거나 또는 합성함으로써 쉽게 유도된다.
실시예 17
엘라스틴-수용체 결합 모티프가 제공되고 자가포식을 억제하는 아미노산으로 부화된 Q-ER 펩타이드는 혈관 투과성을 감소시킨다.
마우스에서 VEGF-매개된 미세혈관 투과성의 예방은, 예를 들어 4주 동안 주 3회 투약으로, 당뇨병 마우스에게 25 mg/ml의 농도로 0.9% NaCl에 용해된 SEQ ID NO: 7(AQGVLPG)을 가진 헵타펩타이드 0.5 ml(i.p)를 반복 투여함으로써 달성된다.
Miles 혈관 투과성 분석을 사용하여 당뇨병 마우스의 피부에서 VEGF-유도된 혈관 누출을 조사한다. 이러한 헵타펩타이드 투여는 당뇨병에서 혈관 내피 성장인자(VEGF)-유도된 반응성 산소 종(ROS)에 의해 매개된 증가된 미세혈관 투과성에 대한, mTOR을 우선적으로 활성화하거나 또는 자가포식을 우선적으로 억제하는 상이한 선택된 아미노산을 포함하는 본 발명의 짧은 합성 Q-ER 펩타이드(이것의 다양한 예들은 상기 표에 제시)의 보호 역할을 보여준다.
실시예 18
엘라스틴-수용체 결합 모티프가 제공되고 자가포식을 억제하는 아미노산으로 부화된 Q-ER 펩타이드는 백혈구 유출을 감소시킨다.
mTOR을 우선적으로 활성화하거나 또는 자가포식을 우선적으로 억제하는 상이한 선택된 아미노산을 포함하는 짧은 합성 Q-ER 펩타이드(이것의 예들은 상기 표에 제시)는 백혈구 유출을 감소시킨다. 헵타펩타이드(SEQ ID NO: 6(LQGVAPG), SEQ ID NO: 7(AQGVLPG), SEQ ID NO: 8(LQGVLPG))를 15 mg/mL의 농도로 0.9% NaCl에 용해한다. 특정 병원균이 없는 350-400g 중량의 성체 수컷 Wistar 래트(Harlan CPB, Zeist, The Netherlands)를 사용한다. 25℃에서 12h 명/암 주기하에 장벽 안에 래트를 수용하며, 사료와 물은 무제한 허용된다. 실험 프로토콜은 the Animal Experiments Committee under the Dutch Experiments on Animals Act에 의해 승인되며, the Council of Europe(1986; directive 86/609/EC)에 의한, "Guidelines on the protection of experimental animals"를 구현하는 국내법에 명시된 규칙을 준수한다. 래트는 실험 시작 전 하룻밤 동안 물을 제외하고는 금식된다. N2O/O2/이소플루란(Pharmachemie B.V., Haarlem, The Netherlands)의 혼합물을 사용하여 래트를 마취한다. 온도 제어 '하프-파이프'(UNO, Rotterdam, The Netherlands) 위에 래트를 위치시켜 체온을 37.5℃로 일정하게 유지한다. 기관내 삽관을 수행하고, N2O/O2/이소플루란 혼합물로 분당 60회 호흡으로 래트를 환기시킨다. 헤파린으로 폴리에틸렌 튜브(PE-50, Becton Dickinson; St. Michielsgestel, The Netherlands)를 플러싱하고, 대동맥의 오른쪽 경동맥을 통해서 오른쪽 내부 경정맥에 배치한다. 5cm 정중선 개복술을 수행하고, 치골 상부 카테터를 삽입하여 소변 생성을 모니터링한다.
15분의 순응 기간 후, 래트를 다음과 같이 5개의 상이한 그룹(그룹당 8마리 래트)으로 무작위로 나눈다; 1) 겉보기, 2) HS, 3) SEQ ID NO: 6(LQGVAPG) 치료를 받은 HS, 4) SEQ ID NO: 7(AQGVLPG) 치료를 받은 HS, 및 5) SEQ ID NO: 8(LQGVLPG) 치료를 받은 HS(HS/LAGV).　 혈액을 빼내어 출혈성 쇼크(HS)를 유도하며, 40mmHg의 MAP에 도달될 때까지 순환 혈액 부피를 감소시킨다. 이 수준의 저혈압이 60분 동안 유지된다. HS 유도 30분 후 래트는 어느 한 헵타펩타이드, 또는 0.9% NaCl 용액을 5 mg/kg 체중 용량으로 1회 정맥내(IV) 볼루스 주사받았다. HS 유도 60분 후 30분의 기간에 걸쳐서 소실된 혈액 부피의 4배까지 래트를 소생시켜 MAP를 정상화하고, 120분 동안 더 모니터링한 다음 죽였다. 래트는 실험 전 또는 실험 도중에 헤파린을 투여 받지 않았다. 겉보기 동물은 HS 동물과 동일한 수술 과정을 적용 받지만, 혈액 소실 및 올리고펩타이드의 투여가 없다. HS 유도 180분 후에 간, 폐, 회장 및 S자 결장을 수술로 제거하고, 급속 동결하고, 분석시까지 -80℃에 보관한다.
백혈구 유출은 내피 세포 및 간세포 상에서 E-셀렉틴 및 세포내 유착 분자 1(ICAM-1)과 같은 유착 분자의 증가된 발현을 특징으로 한다. 이들 유착 분자의 상향조절은 호중구와 같은 백혈구에 의한 조직 침윤을 촉진하며, 그 결과 세포-매개된 장기 손상을 가져온다. 외상 및 소생술에 대한 래트 모델을 사용하면, 외상 유도 후 주어진 Q-ER 헵타펩타이드는 간에서 E-셀렉틴 mRNA 전사체 수준을 약화시킨다. 또한, Q-ER 헵타펩타이드 치료는 간에 호중구 축적을 동반한 유출을 방지한다.
실시예 19
엘라스틴-수용체 결합 모티프가 제공되고 자가포식을 억제하는 아미노산으로 부화된 Q-ER 펩타이드는 신장 기능부전을 감소시킨다.
mTOR을 우선적으로 활성화하거나 또는 자가포식을 우선적으로 억제하는 상이한 선택된 아미노산을 포함하는, 엘라스틴 수용체 결합 모티프가 제공된 짧은 합성 Q-ER 펩타이드(이것의 예들은 상기 표에 제시)는 신장 기능에 영향을 미친다. 신장 기능 및 뇨 단백질 누출에 대한 SEQ ID NO: 8(LQGVLPG; 5 nmol x min(-1) x kg(-1) 체중)를 가진 헵타펩타이드의 140분 정맥내 주입의 급성 효과가 인슐린 치료 없이 스트렙토조토신 주사 2주 후 마취된 당뇨병 수컷 래트에서 연구된다. 스트렙토조토신-유도된 당뇨병 래트를 헵타펩타이드 치료 그룹(N=12) 및 헵타펩타이드 미치료 그룹(N=11)에서 연구한다. 두 그룹은 연구 동안 유사하게 상승된 혈중 글루코오스 농도를 나타낸다. 연령 일치된 정상 래트를 대조군으로 사용한다(N=5). 기저 상태 및 60분 글리신 주입(0.22 mmol x min(-1) x kg(-1) 체중) 동안의 인슐린 청소율에 의해 사구체 여과율(GFR)을 측정하여, 세 그룹에서 모두 신장 기능 예비능을 시험한다(단백질 부하 과제와 유사함).
기저 상태에서, 헵타펩타이드로 치료되지 않은 당뇨병 래트는 정상 래트와 비교하여 증가된 GFR 및 증가된 총 단백질 누출을 나타낸다. 정상 래트는 글리신 주입에 반응하여 GFR가 증가하지만, 헵타펩타이드로 치료되지 않은 당뇨병 래트에서는 증가하지 않는다. 헵타펩타이드로 치료한 당뇨병 래트에서 글리신 주입 전 초기 사구체 과여과를 감소시킨다. 헵타펩타이드는 또한 신장 기능 예비능을 정상으로 회복시키고, 헵타펩타이드로 치료되지 않은 래트와 비교하여 총 단백질 누출을 저하시킨다. 따라서, 헵타펩타이드의 단기 주입은 래트에서 단백질 누출 및 과여과에 유익한 효과를 나타내며, 신장 기능 예비능을 개선한다.
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Gly Val Ala Pro Gly 1 5 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 30 Leu Gln Gly Gln Leu Pro Gly 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 31 Val Gln Gly Gln Leu Pro Gly 1 5 <210> 32 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 32 Val Gln Gly Val Leu Pro Gly Gln 1 5 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 33 Val Gln Gly Val Ala Pro Gly Gln 1 5 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 34 Ala Gln Gly Gln Leu Pro Gly 1 5 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 35 Gly Gln Gly Gln Leu Pro Gly 1 5 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 36 Gly Gln Gly Val Leu Pro Gly Gln 1 5 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 37 Gly Gln Gly Val Ala Pro Gly Gln 1 5 <210> 38 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 38 Val Gln Gly Gln Leu Pro Gly Gln 1 5 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 39 Gly Gln Gly Gln Leu Pro Gly Gln 1 5 <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 40 Leu Gln Gly Leu Gln Pro Gly Ala 1 5 <210> 41 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 41 Leu Gln Gly Ala Gln Pro Gly Gln 1 5 <210> 42 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 42 Leu Gln Gly Leu Gln Pro Gly Gln 1 5 <210> 43 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 43 Val Gln Gly Leu Gln Pro Gly Gln 1 5 <210> 44 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunomodulatory peptide <400> 44 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Claims (30)

  1. 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 자가포식을 저감하기 위한 방법으로서, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공되는, 방법.
  2. 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 혈관 투과성을 변형시키기 위한 방법으로서, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공되는, 방법.
  3. 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 조직 수선을 개선하기 위한 방법으로서, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공되는, 방법.
  4. 엘라스틴 수용체 복합체가 표면에 결합된 세포를 상기 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로 표적화하는 단계를 포함하는, 면역 반응을 조정하기 위한 방법으로서, 상기 분자에는 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원이 제공되는, 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복합체를 인식하는 분자는 xGxxPG로 표시된 엘라스틴 펩타이드 모티프를 가지며, x는 자연 발생 아미노산인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자가포식 억제 아미노산의 공급원은 상기 자가포식 억제 아미노산을 포함하는 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 자가포식 억제 아미노산을 포함하는 펩타이드는 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서, xGxxPG는 펩타이드 결합에 의해 상기 자가포식 억제 아미노산을 포함하는 펩타이드에 연결되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복합체를 인식하는 분자는, 바람직하게 IgG, IgM, 단쇄 항체, FAB- 또는 FAB'2-단편으로부터 선택된, 항체-유사 분자인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 자가포식 억제 아미노산의 공급원은 펩타이드 결합을 통해 상기 항체-유사 분자에 연결된, AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하는 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 9 항에 있어서, 상기 항체-유사 분자는 상기 자가포식 억제 아미노산의 공급원에 콘쥬게이션되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 9 항에 있어서, 상기 자가포식 억제 아미노산 상기 공급원은 리포솜과 같은 지질 소포인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 12 항에 있어서, 상기 리포솜은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 자가포식의 저감에 사용하기 위한 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로서, 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 포함하는 분자.
  15. 면역 반응의 조정에 사용하기 위한 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로서, 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 포함하는 분자.
  16. 조직 수선의 개선에 사용하기 위한 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로서, 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 포함하는 분자.
  17. 혈관 투과성의 변형에 사용하기 위한 엘라스틴 수용체 복합체를 특이적으로 인식하는 분자로서, 알라닌(문자 코드: A), 글루타민(Q), 글리신(G), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P) 및 아르기닌(R)의 군으로부터 선택된, 자가포식 억제 아미노산의 공급원을 포함하는 분자.
  18. 제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분자는 xGxxPG로 표시된 엘라스틴 펩타이드 모티프를 포함하며, x는 자연 발생 아미노산인 것을 특징으로 하는 분자.
  19. 제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분자는 IgG, IgM, 단쇄 항체, FAB- 또는 FAB'2-단편으로부터 선택된, 항체-유사 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자.
  20. 제 14 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자가포식 억제 아미노산의 공급원은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하는 펩타이드인 것을 특징으로 하는 분자.
  21. 제 20 항에 있어서, 상기 분자는 펩타이드 결합을 통해 상기 펩타이드에 연결되는 것을 특징으로 하는 분자.
  22. 자가포식을 저감하는데 사용하기 위한, AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드로부터 선택된 펩타이드 및 xGxxPG를 포함하는 펩타이드로서, x는 자연 발생 아미노산인 펩타이드.
  23. 식 φn xGxxPG, xGxxPG φn, 또는 φn xGxxPG φm의 서열을 포함하는 7개 이상 아미노산 및 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드로서, x는 자연 발생 아미노산이고, φ는 자가포식 억제 아미노산이고, n은 1 내지 24의 정수이고, m은 1 내지 23의 정수이며, n+m은 24 이하인 펩타이드.
  24. 제 23 항에 있어서, φn 및/또는 φm은 AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  25. 자가포식을 저감하는데 사용하기 위한, AQ, LQ, PQ, VQ, GQ의 군으로부터 선택된 디펩타이드, AQL, LQL, PQL, VQL, GQL, PLQ, LQG, PQV, VGQ, LQP, LQV, AQG, QPL, PQV, VGQ, GQG의 군으로부터 선택된 트리펩타이드 또는 SEQ ID NO: 1(LQGV) 및 SEQ ID NO: 2(AQGV)의 군으로부터 선택된 테트라펩타이드로부터 선택된 펩타이드 및 xGxxPG를 포함하고, x가 자연 발생 아미노산인 펩타이드 및 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약학적 제제.
  26. 제 23 항 또는 제 24 항에 따른 펩타이드 및 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약학적 제제.
  27. 제 25 항 또는 제 26 항에 있어서, 인슐린을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 제제.
  28. 제 27 항에 있어서, 췌장 베타-세포 기능 손상의 치료에 사용하기 위한 것임을 특징으로 하는 제약학적 제제.
  29. 자동화된 펩타이드 합성장치를 사용하여 펩타이드를 합성하는 단계를 포함하는 제 23 항 또는 제 24 항에 따른 펩타이드의 생성 방법.
  30. 제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따라서 사용하기 위한 제 29 항에 따른 방법에 의해 얻어질 수 있는 제 23 항 또는 제 24 항에 따른 펩타이드.
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