KR20220101272A - 숙취 해소 효능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 gfc_b001 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 식품 조성물 - Google Patents
숙취 해소 효능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 gfc_b001 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 식품 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 숙취 해소 효능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP) 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명으로부터 제공되는 신규한 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP) 균주는 알데하이드 탈수소 효소를 보유하고 있어 아세트알데하이드 분해 효과가 우수할 뿐만 아니라, 알코올에 의한 독성으로부터 간세포를 보호하는 효과가 뛰어나기 때문에, 숙취해소 및 알코올성 간 손상 개선을 위한 식품 조성물로 활용 가능하다.
본 발명으로부터 제공되는 신규한 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP) 균주는 알데하이드 탈수소 효소를 보유하고 있어 아세트알데하이드 분해 효과가 우수할 뿐만 아니라, 알코올에 의한 독성으로부터 간세포를 보호하는 효과가 뛰어나기 때문에, 숙취해소 및 알코올성 간 손상 개선을 위한 식품 조성물로 활용 가능하다.
Description
본 발명은 숙취 해소 효능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP) 및 이를 유효성분으로 포함하는 식품 조성물에 관한 것이다.
보통 숙취는 술을 마신 뒤 몇 시간 내에 시작되는 두통, 갈증, 현기증, 속쓰림 등의 현상을 의미하는데, 숙취의 원인으로는 전해질 부족, 탈수 증상 등 여러 가지가 있을 수 있지만, 특히 간세포에 축적된 알코올(Alcohol)이나 아세트알데하이드(Acetaldehyde)의 독성에 의해 발생된다.
술의 주성분인 알코올(Alcohol)은 섭취 후 위장이나 소장에서 흡수되어 혈액에 의해 간으로 이동하게 된다. 이렇게 이동된 알코올은 간에서 대사작용에 의해 아세트알데하이드로 전환된다. 간세포에는 알코올 탈수효소(Alcohol dehydrogenase, ADH)가 있어 알코올을 아세트알데하이드로 산화시키고, 아세트알데하이드는 다시 아세트알데하이드 탈수소효소(Aldehyde dehydrogenase, ALDH)에 의해 초산으로 분해되어 전진의 근육이나 지방 조직 등으로 옮겨져 분해되는 것이다.이 과정에서 산화되지 못한 아세트알데하이드가 축적됨으로써 그 독성에 의해 정상적인 신진대사가 방해를 받아 두통, 속쓰림, 구토 증상 등의 숙취 현상이 나타나게 된다.
한편, 미생물 중에는 생육하면서 유산을 대사산물로 많이 생성하는 세균들을 총칭하여 유산균(Lactic acid bacteria)이라고 한다. 유산균은 기본적으로 유산을 생성해 유해균의 활동을 억제하고, 장의 연동운동을 정상으로 유지하게 도와준다. 특히 장내에 정착한 유산균은 병원성 세균이 소화관 상피에 부착하는 것을 방해하여 질병 발생을 막아주며, 유산균에 의해 생성된 항생 물질이 설사를 일으키는 병원성 미생물이나 장내 유해균을 죽이거나 증식을 억제한다.
유산균은 1858년 포도주 산패의 원인을 연구하는 과정에서 Pasteur에 의해서 그 정체가 처음 밝혀졌으며, 이후 미국의 FDA에서 식품 첨가제로서 사용에 대하여 GRAS로 인정이 되며 거의 모든 식품 산업 분야에 폭 넓게 이용이 되고 있다. 유산균은 오래전부터 요구르트, 버터, 치즈와 같은 유가공 식품에서 중요한 역할을 담당하고 있을 뿐만 아니라 간장, 김치, 된장 등과 같은 발효 식품에서도 주요 구성 균종으로 존재한다. 유산균을 이용한 발효 식품은 특유의 풍미와 생성된 유산에 의한 우수한 보존성, 단백질의 부분 분해에 의한 소화 흡수성 향상 등 기호적, 영양적인 우수성을 나타내며 전 세계를 통하여 엄청난 시장 규모를 형성하고 있다.
현재 유산균으로 활용되는 다양한 속중에서 락토바실러스(Lactobacillus) 속을 이용하여 여러 식품에서 다양하게 적용되는 기술로는, 대한민국 등록특허공보 제10-1917822호 「Lactobacillus plantarum KCCM 11322 균주를 이용한 cirsimaritin이 강화된 엉겅퀴농축액의 제조방법」, 대한민국 등록특허공보 제10-1925997호 「내당성이 높은 락토바실러스 플랜타룸 wikim0067 및 이를 이용한 발효식품」, 대한민국 등록특허 공보 제10-2065585호 「락토바실러스 플란타룸 3JSRL 24-4 균주를 이용한 발효 현미 식혜의 제조방법」, 대한민국 등록특허 공보 제10-1789155호 「발효시 높은 생균수를 갖는 락토바실러스 파라카제이 균주, 이를 포함하는 조성물 및 이를 이용한 발효 식품 제조 방법」 등이 개시되어 있다.
이에, 본 발명자들은 양조장에서 유래된 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)가 알데하이드 탈수소 효소 활성을 보유하고 있어 아세트알데하이드 분해 효능이 우수하고, 알코올에 의해 유발되는 간독성으로부터 간 기능을 보호하는 효과를 부여할 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 숙취 해소 효능을 갖는 신규한 균주를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 신규한 균주를 유효성분으로 포함하는 프로바이오틱스 제제를 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 프로바이오틱스 제제를 포함하는 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선용 식품 조성물을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 알데하이드 탈수소 효소 활성, 아세트알데하이드 분해 효능 및 알코올에 대한 간 기능 보호 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)를 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 균주는 양조장에서 분리한 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP), 상기 균주의 파쇄액, 상기 균주의 추출물, 상기 균주의 배양액, 상기 배양액의 농축액 및 건조물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유효성분을 포함하는 프로바이오틱스 제제를 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 균주는 동결건조하여 생균의 형태로 제조된 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 프로바이오틱스 제제는 액상, 분말, 과립, 정제 및 캅셀로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 프로바이오틱스 제제를 포함하는 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 식품 조성물은 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 발효유 및 건강기능식품으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제품에 포함되는 것을 특징으로 한다.
본 발명으로부터 제공되는 신규한 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)는 알데하이드 탈수소 효소를 보유하고 있어 아세트알데하이드 분해 효능이 우수할 뿐만 아니라, 알코올에 의한 독성으로부터 간세포를 보호하는 효과가 뛰어나기 때문에, 숙취해소 및 알코올성 간손상 개선을 위한 식품 조성물로 활용 가능하다.
도 1은 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 16S rRNA gene의 염기서열이다.
도 2는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 16S rRNA gene의 염기서열을 기초로 한 다른 세균(bacteria)과의 계통학적 관계를 나타낸 도이다.
도 3은 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 ALDH(알데하이드 탈수소효소) 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 아세트 알데하이드 분해 정도를 나타낸 그래프이다.
도 5는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 간세포 독성평가를 나타낸 그래프이다.
도 6은 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 알코올 독성 유발 모델에 대한 간세포 보호 활성을 나타낸 그래프이다.
도 2는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 16S rRNA gene의 염기서열을 기초로 한 다른 세균(bacteria)과의 계통학적 관계를 나타낸 도이다.
도 3은 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 ALDH(알데하이드 탈수소효소) 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 아세트 알데하이드 분해 정도를 나타낸 그래프이다.
도 5는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 간세포 독성평가를 나타낸 그래프이다.
도 6은 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)의 알코올 독성 유발 모델에 대한 간세포 보호 활성을 나타낸 그래프이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
이에, 본 발명에서는 양조장으로부터 분리된 미생물로부터 알데하이드 탈수소 효소(Aldehyde dehydrogenase, ALDH)(이하'ALDH'로 약칭함)를 보유하고 있는 균주를 스크리닝하여 ALDH 활성이 우수한 균주를 선발하고, 16S RNA gene 염기서열 분석을 실시한 결과, 락토바실러스(Lactobacillus) 속(genus)에 속하는 신규 미생물임을 확인하였다. 이에, 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주로 명명하고 한국생명공학연구원(KCTC)에 2020년 7월 20일자로 특허기탁하여, 수탁번호 KCTC 14244BP를 부여받았다.
따라서, 본 발명은 알데하이드 탈수소 효소 활성, 아세트알데하이드 분해 효능 및 알코올에 대한 간 기능 보호 활성을 갖는 락토바실러스 플랜타룸 B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP)(이하'GFC_B001'로 약칭함)에 관한 것이다.
이때, 상기 GFC_B001 균주는 양조장에서 분리한 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 GFC_B001 균주, 상기 균주의 패쇄액, 상기 균주의 추출물, 상기 균주의 배양액의 농축액 및 건조물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유효성분을 포함하는 프로바이오틱스 제제에 관한 것이다.
상기 GFC_B001 균주는 동결건조하여 생균의 형태로 제조된 것일 수 있다.
상기 GFC_B001 균주의 균체를 배양하기 위한 배지로는 통상적으로 탈지유, 훼이, 카제인 등의 우유 단백질, 당류, 효모 엑기스 등을 포함하고 있으며, 배양 방법으로는 일반적인 각종 호기적 또는 혐기적인 방법을 적절히 사용할 수 있다.
상기 GFC_B001 균주의 배양액을 수득하기 위한 균주의 배양 온도로는 예를 들어, 배양 온도를 25 ~ 40℃를 설정하고, 배양 중에는 수산화나트륨 등의 알칼리를 사용하여 배지의 pH를 산성으로부터 중성, 예를 들어 pH가 5~6 정도가 되도록 유지하는 중화배양법을 사용할 수도 있다. 이와 같은 중화배양법 외에 회분배양법 등의 임의의 배양 방법을 사용 할 수 있으며, 배양한 후에는 필요에 따라서 배양물이나 그 상층액을 농축, 건조, 희석 등을 할 수도 있다.
또한, 원심분리법이나 막분리법을 사용하여 배양물의 상층액과 균체를 분리하여 균체를 농축한 상태로 회수할 수도 있다. 그리고 균체에 초음파 처리나 효소 처리 등을 행하여 균체 내의 성분을 추출하거나, 배양물이나 그 상층액, 균체나 그 추출물 등을 건조할 수도 있다. 이들은 상기 프로바이오틱스 제제의 유효성분으로 포함될 수 있다.
상기 프로바이오틱스 제제는 액상, 분말, 과립, 정제 및 캅셀로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 프로바이오틱스 제제를 포함하는 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
상기 식품 조성물은 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 발효유 및 건강기능식품으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제품인 것일 수 있다. 상기와 같은 제품으로 사용되는 경우, 각종 식품류, 발효유, 육류, 음료수, 초콜렛, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올 음료, 비타민 복합체, 주류 및 그 밖의 건강기능식품일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 식품 조성물은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함 할 수 있다. 예컨대, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미네 및 향미제를 포함한다. 상기 탄수화물로는 단당류(예를 들어 포도당, 과당 등), 이당류(예를 들어 말토스, 스크로스, 올리고당 등) 및 다당류(예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등)과 같은 동상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당알코올이다. 향미제로서 천연 향미제(타우마린, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오사이드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파탐 등)를 사용할 수 있다.
에컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 매실 추출액 또는 헛개나무열매 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 식품, 기능성 식품(functional food), 영양보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 천연소재의 가공 형태를 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조될 수 있다.
예를 들면, 건강식품으로는 상기 GFC_B001 균주 자체를 차, 주스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취 할 수 있다. 또한, 식품으로는 음료(알코올성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예를 들어 과일통조림, 병조림, 잼, 마말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예를 들어 햄, 소시지, 콘비프 등), 빵류 및 면류(예를 들어 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예를 들어 요거트, 발효유, 바터, 치즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트식품, 냉동식품, 각종 조미료(예를 들어 된장, 간장 소스 등) 등에 첨가하여 제조 될 수 있다. 또한, 본 발명의 GFC_B001 균주를 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.
상기 식품 조성물의 사용량은 연령, 건강 상태 정도 등의 개인차나 제형, 형태에 따라 적절하게 조절될 수 있으며, 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선을 위한 식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
상기와 같은 방법으로부터 수득된 조성물은 알데하이드 탈수소 효소 활성이 뛰어나 아세트알데하이트를 효과적으로 분해하고, 알코올에 의한 독성으로부터 간세포를 보호하는 효과를 나타내어 우수한 숙취해소 및 알코올성 간손상 개선용 식품을 제공할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
<실시예 1> 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(
Lactobacillus plantarum
GFC_B001)의 분리 및 동정
1-1. 균주의 분리
본 발명에 따른 신규 유산균주를 분리하기 위하여 양조장(경기도 포천시) 막걸리를 MRS 한천배지(MRS agar medium, Digco)에 접종하고, 37℃에서 약 48시간 동안 혐기적으로 배양한 후, 콜로니(colony)를 형성한 균주들을 분리하였다.
1-2. ALDH 효소를 보유한 유산균 선발
상기 분리된 유산균의 ALDH 효소 보유 유무를 확인하기 위하여 균주를 1X108 CFU/mL 농도로 배양하였고, ALDH activity assay kit(Adcam)을 사용하여 ALDH 활성을 확인하여 가장 활성이 높은 균주를 선발하였다.
1-3. 선발한 균주의 동정
선발한 균주의 16S rRNA gene 염기서열을 분석하여 균주의 종을 확정하고, 균주명을 부여하였다. 균주의 동정 결과, 선발 균주는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)와 99.87%의 상동성을 확인하였고, 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001)로 균주명을 명명하였으며, 16S rRNA gene의 염기서열(서열번호 1)을 도 1에 나타내었다. 도 2는 16S rRNA gene의 염기서열을 기초로 하여 다른 세균(bacteria)과의 계통학적 관계를 나타낸 것이다.
1-4. 균주의 수탁 정보
본 발명의 발명자들은 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주를 한국생명공학연구원(KCTC)에 2020년 7월 20일자로 특허기탁하여, 수탁번호 KCTC 14244BP를 부여받았다.
<실시예 2> 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(
Lactobacillus plantarum
GFC_B001)의 프로바이오틱스 제제 제조
상기 실시예 1에서 수득된 GFC_B001 균주를 증류수로 2회 세척하고, 증류수에 현탁시킨 후 동결건조하여 최종 분말 형태의 프로바이오틱스 제제를 제조하였다.
<비교예 1>
Lactobacillus plantarum
표준 균주 준비
국립농업과학원 미생물은행(Korean Agricultural Culture Collection, KACC)에서 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum) 표준균주(KACC No. 11451)를 분양받아 비교예로 사용하였다.
<실험예 1> ALDH 효소 활성 시험 : ALDH activity assay
실시예 1 및 비교예 1의 균주를 이용하여 ALDH 효소 활성을 알아보기 위하여 ALDH activity를 평가하였다.
상기 실시예 1 및 비교예 1의 균주를 활성화시켜 1X108 CFU/mL 농도로 배양한 후, ALDH activity assay kit(Abcam)를 사용하여 반응액을 96-well plate에 담아 ELISA reader기를 이용하여 450nm에서 30분간 kinetic mode로 흡광도를 측정하였다. 또한, Bradford(Bio-rad)법을 사용하여 각 균주의 단백질 양으로 ALDH 활성을 보정하였다. 따라서, 각 시료 별 단백질 양 및 반응 0분을 기준으로 하여 수학식 1과 같이 시료의 ALDH 활성(ALDH activity, mU/mg)을 계산하였다.
[수학식 1]
ALDH 활성(mU/mg)=[(시료가 반응 중 생성한 NADH 양)/(반응시간 X 반응한 시료 양)] X (희석 배수 / 시료의 단백질 양)
그 결과, 도 3에서 확인할 수 있듯이 실시예 1이 비교예 1 보다 ALDH 활성이 현저하게 우수한 것을 확인하였다.
<실험예 2> 아세트알데하이드 분해 확인 시험 : acetaldehyde quantitative assay
실시예 1 및 비교예 1의 균주를 이용하여 acetaldehyde 분해 효과를 알아보기 위하여 acetaldehyde 함량을 측정하였다.
실시예 1 및 비교예 1의 균주를 활성화시켜 1X108 CFU/mL 농도로 배양한 후, 각 균주에 동일한 농도로 acetaldehyde를 1mM씩 첨가하였고, 30분간 반응시켰다. 30분 후, acetaldehyde assay kit(Bio assay systems)를 사용하여 30분간 반응시킨 반응액을 96-well plate에 담아 ELISA reader기를 이용하여 565nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 4에서 확인할 수 있듯이 실시예 1이 비교예 1 보다 acetaldehyde 함량이 감소하였고, acetaldehyde 분해 효과가 더 우수한 것을 확인하였다.
<실험예 3> 세포 독성 평가 : MTT assay
실시예 1 및 비교예 1의 균주를 이용하여 세포에 대한 독성을 갖는지 확인하기 위해 인간 유래 간암 세포주인 HepG2 세포를 이용하여 세포독성 실험을 진행하였다.
실시예 1 및 비교예 1의 균주를 활성화시켜 배양한 후, 원심분리하여 회수 후 세척하였고, 회수된 균체는 -80℃에서 급속 동결하고, -80℃ 온도 조건에서 동결건조한 후 분쇄하여 냉장보관 하였다.
인간 유래 간암 세포주인 HepG2 세포에 독성을 미치는지 확인하기 위해 MEM 배지를 이용하여 24-well plate에 1X108 cell/well의 농도로 세포를 분주한 후, 37℃ 및 5% CO₂조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양한 cell에 상기 동결건조된 실시예 1 및 비교예 1의 균주를 농도별로 배지와 혼합하여 각 well에 처리 후, 37℃ 및 5% CO₂조건에서 24시간 동안 배양한 다음, 배양액을 제거하고 각 well에 0.5mg/mL의 MTT용액을 처리하여 배양기에서 4시간 반응시켰다. 4시간 후, 상등액을 제거하고 각 well에 1mL의 DMSO를 첨가하여 생성된 포마잔(formazan) 결정을 용해시켜서 ELISA reader기로 560nm에서 흡광도를 측정하였으며, 아래의 수학식 2와 같이 세포 생존율을 계산하였다.
[수학식 2]
세포 생존율(%)=[(시료 처리군의 흡광도/무처리군의 흡광도) X 100]
그 결과, 도 5에서 확인 할 수 있듯이 실시예 1 및 비교예 1은 세포독성이 나타나지 않았음을 확인하였다.
<실험예 4> 알코올에 의한 간 손상에 대한 간세포 보호 활성 : MTT assay
실시예 1 및 비교예 1의 균주를 이용하여 알코올에 의한 간 손상에 대한 간세포 보호 효과를 갖는지 확인하기 위해 인간 유래 간암 세포주인 HepG2 세포를 이용하여 간세포 보호 활성 실험을 진행하였다.
실시예 1 및 비교예 1의 균주를 활성화시켜 배양한 후, 원심분리하여 회수 후 세척하였고, 회수된 균체는 -80℃에서 급속 동결하고, -80℃ 온도 조건에서 동결건조 한 후 분쇄하여 냉장보관 하였다.
알코올성 간 손상이 유발된 HepG2 세포에 보호효과를 나타내는지 확인하기 위해 MEM 배지를 이용하여 24-well plate에 1X108 cell/well의 농도로 세포를 분주한 후, 37℃ 및 5% CO₂조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양한 cell에 실시예 1 및 비교예 1의 균주를 농도별로 알코올이 500mM 포함된 배지와 혼합하여 각 well에 처리 후, 37℃ 및 5% CO₂조건에서 24시간 동안 배양하여 알코올성 간손상을 유도한 뒤, 배양액을 제거하고 각 well에 0.5mg/mL의 MTT 용액을 처리하여 배양기에서 4시간 반응시켰다. 4시간 후, 상등액을 제거하고 각 well에 1mL의 DMSO를 첨가하여 생성된 포마잔(fomazan) 결정을 용해시켜 ELISA reader기로 560nm에서 흡광도를 측정하였으며, 아래의 수학식 3과 같이 간세포 보호 활성을 계산하였다.
[수학식 3]
간세포 보호 활성(%)=[(알코올 처리 및 시료 처리군의 흡광도/알코올 무처리 및 시료 무처리군의 흡광도) X 100]
그 결과, 도 6에서 확인할 수 있듯이 실시예 1이 비교예 1보다 알코올에 의해 손상된 HepG2 cell에서 간세포 보호 활성이 더 우수한 것을 확인하였다.
<제제예 1> 유산균 음료의 제조
아래의 표 1에 기재된 성분을 사용하여 통상의 방법에 의하여 유산균 음료를 제조하였다.
| 성분 | 함량(중량 g) |
| 실시예 2의 프로바이오틱스 | 2 |
| 하이드록시프로필 전분 | 6 |
| 유당 | 1 |
| 물 | 200 |
<제제예 2> 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선용 아이스크림 제조
아래의 표 2에 기재된 성분을 사용하여 통상의 방법에 의하여 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선용 건강 음료를 제조하였다.
| 성분 | 함량(중량 g) |
| 실시예 2의 프로바이오틱스 | 0.2 |
| 구연산 | 1 |
| 올리고당 | 100 |
| 타우린 | 1 |
| 정제수 | 0.2 |
<제제예 3> 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선용 캔디 제조
아래의 표 3에 기재된 성분을 사용하여 통상의 방법에 의하여 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선용 캔디를 제조하였다.
| 성분 | 함량(중량 g) |
| 실시예 2의 프로바이오틱스 | 2 |
| 포도당 | 11 |
| 구연산 | 0.38 |
| 비타민C | 0.04 |
| 스테비오사이드 | 0.035 |
| 합성착향료 | 0.18 |
| 정제수 | 86.35 |
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> GFC Life Science Co., Ltd.
<120> Lactobacillus plantarum GFC_B001 for removing hangover and food
composition comprising the same as an effective ingredient
<130> P20265
<160> 1
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1453
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Lactobacillus plantarum GFC_B001
<400> 1
ccgcgcgctc tatctgcagt cgacgaactc tggtattgat tggtgcttgc atcatgattt 60
acatttgagt gagtggcgaa ctggtgagta acacgtggga aacctgccca gaagcggggg 120
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gtaacggctc accatggcaa tgatacgtag ccgacctgag agggtaatcg gccacattgg 300
gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cacaatggac 360
gaaagtctga tggagcaacg ccgcgtgagt gaagaagggt ttcggctcgt aaaactctgt 420
tgttaaagaa gaacatatct gagagtaact gttcaggtat tgacggtatt taaccagaaa 480
gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga 540
tttattgggc gtaaagcgag cgcaggcggt tttttaagtc tgatgtgaaa gccttcggct 600
caaccgaaga agtgcatcgg aaactgggaa acttgagtgc agaagaggac agtggaactc 660
catgtgtagc ggtgaaatgc gtagatatat ggaagaacac cagtggcgaa ggcggctgtc 720
tggtctgtaa ctgacgctga ggctcgaaag tatgggtagc aaacaggatt agataccctg 780
gtagtccata ccgtaaacga tgaatgctaa gtgttggagg gtttccgccc ttcagtgctg 840
cagctaacgc attaagcatt ccgcctgggg agtacggccg caaggctgaa actcaaagga 900
attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagct acgcgaagaa 960
ccttaccagg tcttgacata ctatgcaaat ctaagagatt agacgttccc ttcggggaca 1020
tggatacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc 1080
gcaacgagcg caacccttat tatcagttgc cagcattaag ttgggcactc tggtgagact 1140
gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc cttatgacct 1200
gggctacaca cgtgctacaa tggatggtac aacgagttgc gaactcgcga gagtaagcta 1260
atctcttaaa gccattctca gttcggattg taggctgcaa ctcgcctaca tgaagtcgga 1320
atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc tgtacacacc 1380
gcccgtcaca ccatgagagt ttgtaacacc caaagtcggt ggggaacctt tagaaccgcc 1440
gctaaggcga tgg 1453
Claims (7)
- 알데하이드 탈수소 효소 활성, 아세트알데하이드 분해 효능 및 알코올에 대한 간 기능 보호 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP).
- 제1항에 있어서, 상기 균주는 양조장에서 분리한 것을 특징으로 하는 락토바실러스 플란타룸 GFC_B001(Lactobacillus plantarum GFC_B001) 균주(기탁번호:KCTC 14244BP).
- 제1항 내지 제2항 중 어느 한 항의 균주, 상기 균주의 파쇄액, 상기 균주의 추출물, 상기 균주의 배양액, 상기 배양액의 농축액 및 건조물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유효성분을 포함하는 프로바이오틱스 제제.
- 제3항에 있어서, 상기 균주는 동결건조하여 생균의 형태로 제조된 것을 특징으로 하는 프로바이오틱스 제제.
- 제3항에 있어서, 상기 프로바이오틱스 제제는 액상, 분말, 과립, 정제 및 캅셀로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 프로바이오틱스 제제.
- 제3항의 프로바이오틱스 제제를 포함하는 숙취 해소 및 알코올성 간손상 개선용 식품 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 식품 조성물은 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 발효유 및 건강기능식품으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제품에 포함되는 것을 특징으로 하는 숙취해소 및 알코올성 간손상 개선용 식품 조성물.
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2021
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Non-Patent Citations (1)
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|---|
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Also Published As
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| KR102567791B1 (ko) | 2023-08-17 |
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