KR20220085182A - 초 저분자 착염 복합체 및 다시마 또는 다시마 다당체를 유효성분으로 하는 사료 첨가제 조성물 - Google Patents
초 저분자 착염 복합체 및 다시마 또는 다시마 다당체를 유효성분으로 하는 사료 첨가제 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 초 저분자 착염 복합체; 및 다시마 또는 다시마 다당체;를 포함하는 어류용 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 면역증강으로 인하여 질병을 예방할 수 있고, 환경적인 변화에 따른 스트레스에 의한 폐사율도 감소시키며, 장내 유산균 작용으로 인한 소화 촉진을 상승시키고 사료효율을 증대시킴으로써 성장을 촉진할 수 있다.
Description
본 발명은 초 저분자 착염 복합체 및 다시마 또는 다시마 다당체를 유효성분으로 하는 어류용 사료 첨가제 조성물에 관한 것이다.
최근 양식기술의 비약적인 발전으로 해산어 양식 생산량은 계속하여 증가하고 있다. 그 중에서 넙치와 조피볼락이 대부분 차지고 있고. 특히 넙치의 경우 1980년대 인공종묘 생산 기술이 개발된 이후 완전양식이 이루어져, 현재 해산어 양식의 40% 이상을 차지하는 산업적으로 중요한 양식사업으로 자리매김하고 있다. 그러나 사료영양 연구는 상대적으로 미비하여, 해산어를 위한 배합사료 또는 해산어 사육관리를 위한 사료 첨가제의 개발은 미흡한 상태이다.
양식 어류는 천연 어류와 달리 고밀도로 사육되기 때문에, 해양 환경의 급변화와 과대 밀식에 의한 질병에 항상 노출되어 있다. 따라서 대량폐사하는 일이 매년 반복되고 있으며, 이로 인해 양식 어민들의 경제적 손실이 심각한 실정이다.
어류 질병으로는 병원성 세균, 바이러스 및 기생충 등에 의한 감염이 주원인이고, 다양한 양식 어류와 어종에 따른 양식 환경의 다양성으로 인해 어류 질병에 대한 체계적인 연구에 많은 어려움이 있다. 이외에도 양식환경의 악화와 부적절한 사육으로 인한 증체율 저하 등 많은 문제들이 있다.
최근 대량폐사 피해를 저감하고, 사육관리를 개선하기 위한 다양한 사료첨가제가 개발되어 양식어류에 적용되었으나, 이러한 사료 내 합성 항산화제나 합성항생제의 사용은, 이들 물질의 어체 내 잔류, 환경오염, 항생제 내성, 수질오염 및 식품으로서의 안전성 위협 등의 문제를 야기하였다. 이에 유렵의 몇몇 나라에서는 상기 사료첨가제의 사용을 전면 금지하고 있고, 우리나라에서도 앙어용 배합사료 제조시 합성항생제를 사용하지 못하도록 법규로 규정하고 있다.
따라서 어류의 양식생산양 증대를 위한 합성 항산화제나 합성항생제를 대체할 수 있는 연구개발이 필요하나, 국내의 대부분의 연구는 주로 어병에 대한 기원과 원인분석에 집중되어 있고, 해산어의 면역력 향상, 사료효율 증대, 생육촉진 및 환경오염 감소 등에 관한 복합적 기능을 갖는 사료첨가제 개발은 미미한 수준이다. 국외 선직국들에서도 항생제 사용 규제에 따른 대체품 개발에 관심을 기울이고 있으나 대부분 어류에 초점을 맞추기 보다는 광범위한 동물, 축산 분야에 치중하고 있는 실정이다.
우리나라 어류 양식은 주로 제주 연안, 경상남도 및 전라남도에 대부분 분포해있는데, 동절기에 바다 수온이 급격히 떨어져 성장의 둔화가 발생하고, 여름철에 집중 호우로 저염분 조건에 의한 스트레스 발생으로 생육이 저하되는 등 계절적 특성이 주는 피해 역시 만만치 않다. 따라서 질병에 의한 대량폐사를 저해하고, 환경적인 요인에 따른 생육 억제를 감소시키며, 항생제를 대체할 수 있는 안전한 사료첨가제의 개발이 절실히 요구된다.
본 발명은 초저분자 착염 복합체와 다시마 또는 다시마 다당체를 사료 첨가제로 응용하여, 어류의 면역력을 향상시키고, 스트레스에 의한 폐사율을 감소시키며, 사료효율을 증대시키는 등의 여러 효과를 나타낼 수 있는 사료 첨가제 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명은 아연 및 아스파르트산이 1 : 1 또는 1 : 2의 몰비로 결합된 초 저분자 착염 복합체; 및 다시마 또는 다시마 다당체;를 유효성분으로 하는 사료 첨가제 조성물에 관한 것이다.
상기 다시마 다당체는, 다시마에서 추출한 1 kDa 내지 100 kDa의 분자량을 갖는 다당체일 수 있다.
상기 초 저분자 착염 복합체의 분자량은 100 내지 250 Da일 수 있다.
상기 초 저분자 착염 복합체와 다시마 또는 다시마 다당체는 1 : 0.05 내지 1 : 0.5의 중량비로 혼합되는 것일 수 있다.
상기 사료 첨가제 조성물은 파우더 또는 과립형태의 제형일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 어류용 사료 첨가제 조성물을 포함하는 어류용 양식 사료에 관한 것이다.
또한 본 발명은 1) 아연 전구체 및 아스파르트산을 1 : 1 또는 1 : 2의 몰(mole)비로 물에 투입하는 단계; 2) 상기 1) 단계의 아연 전구체 및 아스파르트산 혼합 수용액을 50 내지 100 ℃에서 10 분 내지 24 시간 가열 및 초음파 처리하여 초 저분자 착염 복합체를 제조하는 단계; 및 3) 상기 초 저분자 착염 복합체에 다시마 또는 다시마 다당체를 혼합하는 단계;를 포함하는 어류용 사료 첨가제 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
상기 다시마 다당체는 다시마를 고온, 가압 조건 하에서 1 내지 5 시간동안 열수 추출하여 조추출물을 제조하고, 상기 조추출물을 여과하여 염류를 제거한 다음, 이를 100 kDa 한외여과막(ultrafiltration membrane)으로 여과하여 고분자를 제거하고, 1 kDa 한외여과막으로 여과하여 농축한 후 동결건조하여 제조된 것일 수 있다.
상기 3) 단계에서 초 저분자 착염 복합체와 다시마 또는 다시마 다당체는 1 : 0.05 내지 1 : 0.5의 중량비로 혼합되는 것일 수 있다.
본 발명은 어사료 첨가제 조성물로, 초저분자 착염 복합체와 다시마를 유효성분으로 함으로써, 면역증강으로 인하여 질병을 예방할 수 있고, 환경적인 변화에 따른 스트레스에 의한 폐사율도 감소시키며, 장내 유산균 작용으로 인한 소화 촉진을 상승시키고 사료효율을 증대시킴으로써 성장을 촉진할 수 있다.
또한, 본 발명의 어사료 첨가제 조성물은 고가로 사용중인 항생제, 간장제, 영양제 등의 제품들을 대체하여 단독 사용이 가능하므로, 어류의 생산 원가를 절감하여, 경쟁적인 양식이 가능하다는 장점이 있다.
또한, 본 발명의 어사료 첨가제 조성물은 생사료를 포함하는 어류용 사료의 산패를 억제하여 부영양화 방지, 수질개선, 환경오염 방지 효과를 갖는다.
또한, 본 발명의 어사료 첨가제 조성물은 자연 유래 성분을 포함하므로, 소비자들에게 안정감을 제공할 수 있다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명의 일 측면은 아연 및 아스파르트산이 1 : 1 또는 1 : 2의 몰비로 결합된 초 저분자 착염 복합체; 및 다시마 또는 다시마 다당체;를 유효성분으로 하는 사료 첨가제 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 측면은 하기 단계를 포함하는 사료 첨가제 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
1) 아연 전구체 및 아스파르트산을 1 : 1 또는 1 : 2의 몰(mole)비로 물에 투입하는 단계;
2) 상기 1) 단계의 아연 전구체 및 아스파르트산 혼합 수용액을 50 내지 100 ℃에서 10 분 내지 24 시간 가열 및 초음파 처리하여 초 저분자 착염 복합체를 제조하는 단계; 및
3) 상기 초 저분자 착염 복합체에 다시마 또는 다시마 다당체를 혼합하는 단계.
본 발명에서 '사료 첨가제'는 영양적 또는 특정 목적을 위하여 사료에 미량으로 첨가되는 물질을 의미하는 것으로서, 본 발명의 사료첨가제는 사료에 첨가되어 어류의 생장을 촉진하고, 면역을 증진시키며, 스트레스를 완화하고, 질병저항성을 높이는 등 기능성을 더한다.
본 발명에서 '어류'는 척추동물문의 연골어강, 경골어강, 먹장어강, 두갑강, 조기강을 통틀어 이르는 의미로, 바람직하게는 양식이 가능한 어류라면 특별히 이에 제한되지 않으나, 보다 바람직하게는 참돔, 붉바리, 방어, 가자미, 우럭, 뱀장어, 바다장어, 넙치 및 조피볼락으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이상일 수 있고, 가장 바람직하게는 넙치 또는 조피볼락일 수 있다.
상기 초 저분자 착염 복합체는 분자식 C4H9NO7Zn이고, 하기 화학식 1로 표시될 수 있으며, 상기 초 저분자 착염 복합체 1 g은 25 ℃의 물 1 내지 30 ml에 용해되는 수용해성을 가지고, 사방정계 결정인 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 초 저분자 착염 복합체의 분자량은 100 내지 250 Da인 것을 특징으로 한다.
[화학식 1]
상기 수용해성은 상기 아연 아스파르트산 수화물 1 g이 25 ℃의 물 1 내지 30 ml에 용해되는 것, 바람직하게는 1 내지 15 mㅣ에 용해되는 특성을 의미한다.
상기 초 저분자 착염 복합체는 아연 전구체 및 아스파르트산을 1 : 1 또는 2의 몰(mole)비로 물에 투입하는 단계; 및 상기 단계의 미네랄 전구체 및 아스파르트산 혼합 수용액을 50 내지 100 ℃에서 10 분 내지 24 시간 가열 및 초음파 처리하여 반응시키는 단계;를 포함하여 제조되는 것일 수 있다.
상기 반응시키는 단계는 50 내지 100 ℃에서 10 분 내지 24 시간, 특히 수용성 아연염의 경우는 상기 범위에서도 상대적으로 낮은 온도 및 짧은 시간, 예를 들어 50 내지 80 ℃에서 10 분 내지 1 시간 가열하는 것만으로 반응이 종료될 수 있으나, 산화아연의 경우 80 내지 100 ℃에서 1 시간 이상, 바람직하게는 1.5 시간 조건에서 가열됨과 동시에 초음파 처리되는 것이 바람직하다. 한편 수용성 아연염이나 산화아연 모두 3 시간 이내에 대부분 약 95%, 바람직하게는 99% 이상의 아스파르트산이 반응하므로, 3 시간을 초과하여 가열하더라도 불용물 또는 미반응물의 감소는 크지 않을 수 있다.
또한, 상기 반응시키는 단계에서 초음파 처리가 동시에 수행되는 것이 바람직한데, 이를 통해 상기 분자량이 100 내지 250 Da인 초 저분자 착염 복합체를 용이하게 제조할 수 있다. 상기 초 저분자 착염 복합체의 분자량이 100 내지 250 Da를 초과하거나 미만일 경우 쉽게 혼합될 수 없고, 상당 기간동안 고른 분산성과 지속정도가 낮아지고, 상기 초 저분자 착염 복합체의 체내 이용율이 낮아지며, 상기 초 저분자 착염 복합체를 다시마 또는 다시마 다당체와 혼합하였을 때, 이에 따른 다양한 효과를 충분히 확보할 수 없다.
상기 아연 전구체는 식품, 약품 또는 사료로서 사용될 수 있는 아연염 또는 아연산화물로서, 바람직하게는 식품첨가물로서 안전성이 확인된 글루콘산아연 또는 황산아연과 같은 수용성 아연염, 또는 물에 불용성인 산화아연이 사용될 수 있고, 더욱 바람직하게는 산화아연이다. 특히 종래 초 저분자 착염 복합체의 제조에는 물에 잘 녹는 수용성 아연염을 사용하는 것이 당연시되었으나, 오히려 물에 불용성인 산화아연을 사용하면서 일정온도 및 시간 이상 가열할 경우 더욱 효과가 뛰어난 아연 아스파르트산 복합체가 형성됨을 확인하였다.
상기 아연 전구체 및 아스파르트산의 몰비는, 아연과 아스파르트산의 몰비를 의미하며, 1 : 1 또는 1 : 2 몰, 더욱 바람직하게는 1 : 2 몰이 복합체 형성 후 남는 미반응물 또는 불용물을 최소화할 수 있는 점에서 유리하다.
상기 단계의 반응액에서 불용물을 제거하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 불용물을 제거하는 단계는 수용성 아연염을 아연 전구체로 사용하는 경우에도 추가될 수 있으나, 특히 산화아연을 아연 전구체로 사용하는 경우 더욱 필요하다.
상기 불용물을 제거하는 단계는 수 ㎛ 이하, 예를 들어 0.2 ㎛ 여과지 또는 여과포로 여과할 수 있고, 상기 여과 전에, 또는 상기 여과와 별개로 원심분리를 통해 불용물을 제거할 수 있다.
상기 제조방법은 종래 방법과 달리 아연 전구체, 아스파르트산 및 물 이외에 별도의 첨가제를 필요로 하지 않고, 제조공정이 단순하여 공정 비용이 절감된다는 장점을 가진다.
상기 초 저분자 착염 복합체에 다시마 분말을 바로 혼합하거나, 다시마 다당체를 혼합하여 어류용 사료 첨가제 조성물로 활용할 수 있다. 이 경우 단순조합 이상으로 어류의 체내에 직접 작용하여 그 생존율을 크게 높이는데 기여하고, 어류의 질병에 대한 저항성을 높이고, 외부 환경 변화에 스트레스를 덜 받도록 하면서, 사료사용에 따른 환경오염을 감소시키는데 기여할 수 있다.
상기 다시마 또는 다시마 다당체는 평균 직경 30 내지 40 ㎛의 분말 형태일 수 있다. 상기 범위일 때, 상기 다시마 또는 다시마 다당체는 초 저분자 착염 복합체와의 혼화성이 우수하고, 유효성분으로서 효과가 높아질 뿐만 아니라, 사료에 적용시 사료를 코팅하여 부영양화를 방지하는 등의 부가적인 효과를 내며, 어류에 보다 원활하게 흡수되어 면역증강, 생육증진 등 효과를 내도록 하는데 더 유리할 수 있다.
본 발명에서 다시마 다당체는 다시마에서 추출한 1 kDa 내지 100 kDa의 분자량을 갖는 다당체로, 다시마에서 추출한 1 kDa 내지 100 kDa의 분자량을 갖는 다시마 다당체 분획물이라고도 한다. 만약 상기 분자량 범주를 벗어나는 다시마 다당체를 사용할 경우, 초 저분자 착염 복합체와의 혼합에 의한 다양한 효과를 달성할 수 없게 된다.
또한 상기 다시마가 직접적으로 이용되는 것보다, 다시마 다당체가 유효성분으로 사용될 경우, 넙치의 면역, 생육, 질병저항성 및 외부 환경에 따른 스트레스에 의한 성장이 증대되는 것을 확인할 수 있다.
구체적으로 상기 다시마 다당체는 한국산 건조된 참다시마(경남 기장)를 고온, 가압 조건 하에서 1 내지 5 시간동안 열수 추출하여 조추출물을 제조하고, 상기 조추출물을 여과하여 염류를 제거한 다음, 이를 100 kDa 한외여과막(ultrafiltration membrane)으로 여과하여 고분자를 제거하고, 1 kDa 한외여과막으로 여과하여 농축한 후 동결건조하여 1 kDa 내지 100 kDa의 분자량을 갖는 다시마 다당체를 제조할 수 있다.
본 발명의 어류용 사료 첨가제 조성물은 초 저분자 착염 복합체; 및 다시마 또는 다시마 다당체;를 각각 단독으로 사용하는 것보다, 혼합하여 사용하는 것이 현저히 우수한 면역 및 항바이러스 활성을 가지며, 장내 유익균의 증식 활성이 보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.
상기 초 저분자 착염 복합체와 다시마 또는 다시마 다당체는 1 : 0.05 내지 1 : 0.5의 중량비로 혼합되는 것일 수 있다. 상기 범위를 벗어나거나 상기 유효성분 중 어느 하나만을 단독으로 사용할 경우, 사료 첨가제 조성물의 기능을 온전히 발휘될 수 없다. 예를 들어 어류의 증체량 증가 효과가 저하되고, 어류의 질병 저항성 증가가 크지 않으며, 스트레스 완화 효과를 달성할 수 없을 수 있다.
본 발명의 사료 첨가제 조성물은 아미노산, 무기염류, 비타민, 항생물질, 항균물질, 항산화, 항곰팡이 효소, 다른 생균 형태의 미생물 제제 등과 같은 보조제 성분; 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분; 지질, 예를 들면 가열에 의해 임의로 액화시킨 동물성 지방 및 식물성 지방 등과 같은 주성분; 영양보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제, 질병 예방제와 같은 첨가제가 추가로 포함될 수 있다.
본 발명의 사료 첨가제 조성물은 파우더 형태 또는 과립 형태 또는 액체 상태의 제제 형태일 수 있으며, 파우더 형태 또는 과립 형태의 제형인 것이 어류의 생체 내 이용율 측면에서 바람직하다. 또한 본 발명의 사료 첨가제 조성물은 사료첨가용 부형제를 포함할 수 있다. 사료첨가용 부형제로는 예를 들어, 탄산칼슘, 말분, 제올라이트, 옥분 또는 미강 등을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 사료 첨가제 조성물은 어류에게 단독으로 투여되거나 식용 담체 중에서 다른 사료 첨가제와 조합되어 투여될 수 있다. 또한, 상기 사료 첨가제 조성물에는 탑 드레싱으로서 또는 이들을 사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도로, 별도의 경구 제형으로, 또는 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여할 수 있다. 통상적으로, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 단독 일일 섭취량 또는 분할 일일 섭취량을 사용할 수 있다.
상기 사료 첨가제 조성물은 전체 사료 조성물 기준으로 0.05 중량% 내지 10 중량%의 양으로 배합될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다. 바람직하게 상기 사료 첨가제는 전체 사료 조성물 기준으로 0.1 중량% 내지 5 중량%의 양으로 배합될 수 있고, 보다 바람직하게는 0.5 중량% 내지 1.5 중량% 양으로 배합될 수 있으며, 가장 바람직하게는 1 중량%의 양으로 배합되는 것일 수 있다.
본 발명은 또한 상기 어류용 사료 첨가제 조성물을 포함하는 양식 사료에 관한 것으로, 본 발명의 어류용 사료 첨가제 조성물을 시판 중인 일반 해산어류 양식사료(예를 들어, 배합습사료(MP;moist pellet), 배합건조사료(EP; extruded pellet 사료) 등)에 사료 총 중량 기준으로 0.05 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 5 중량%, 보다 바람직하게는 0.5 내지 1.5 중량%, 가장 바람직하게는 1 중량% 범위 내에서 첨가된다.
상기 어류용 사료 첨가제 조성물은 해산어류 양식용 사료에 코팅시켜 사용할 수 있으며, 상기 코팅 조건은 물과 액상 타입의 사료 첨가제 조성물 혹은 파우더 타입의 사료 첨가제 혹은 과립 형태의 사료 첨가제 조성물을 3:1의 중량비로 섞어 3분간 코팅후 1분간 휴지하는 공정을 3회 반복하여 수행하면 충분하다.
또한, 본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물을 사료와 함께 어류에 급이하여 어류 병원성 세균에 대한 면역력을 증가시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 사료 첨가제 조성물을 사료와 함께 어류에 급이하면 사료 첨가제 조성물 내 포함된 유효성분들의 생체 이용율이 증대되어 어류의 증체량이 증가되고, 어류 병원성 세균에 대한 면역력이 증가될 수 있다. 특히, 넙치 등의 어류를 위해 사용됨으로서 성장률 및 생존율 등을 향상시킬 수 있다. 이때, 상기 사료 첨가제의 구성, 제제 형태 및 투여 방법은 상술한 바와 같다.
이하 실시예 등을 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 하며, 다만 이하에 실시예 등에 의해 본 발명의 범위와 내용이 축소되거나 제한되어 해석될 수 없다. 또한, 이하의 실시예를 포함한 본 발명의 개시 내용에 기초한다면, 구체적으로 실험 결과가 제시되지 않은 본 발명을 통상의 기술자가 용이하게 실시할 수 있음은 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연하다.
실시예 1: 사료 첨가제 조성물의 제조
아스파르트산 60 g을 500 ㎖의 물에 넣고 교반하면서, 여기에 황산아연(아연 35 중량%)을 넣어 교반시키면서 60 ℃의 온도로 30 분 이상 충분히 반응시킨 후 원심분리하여 상등액을 동결건조하여, 약 70 g의 초 저분자 착염 복합체를 얻었다. 단, 상기 황산아연과 상기 아스파르트산은 1 : 1 몰(mole)비의 함량으로 투입하였다.
다시마를 물에 12시간 담궈 염분을 제거하고, 음지에서 하루동안 건조하였다. 상기 건조된 다시마를 입도 30 내지 40 ㎛가 되도록 파쇄하여 다시마 분말을 제조하였다. 상기 초 저분자 착염 복합체 40 g에 상기 다시마 분말 4 g을 혼합하되 80~90℃ 조건의 스팀을 공급하여 과립형태로 성형하였다. 상기 성형된 혼합물을 수분함량 14% 이하로 건조하여 본 발명의 사료 첨가제 조성물을 제조하였다. 이는 실시예 1의 사료 첨가제 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
실시예 2: 사료 첨가제 조성물의 제조
실시예 1의 초 저분자 착염 복합체를 제조하는 과정에서, 황산아연과 아스파르트산을 1 : 1 몰비로 혼합하는 대신, 상기 황산아연과 상기 아스파르트산을 1 : 2 몰(mole)비의 함량으로 투입하여 초 저분자 착염 복합체를 제조한 것을 제외하고는 실시예 1과 모두 동일하게 제조하였다. 이는 실시예 2의 사료 첨가제 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
실시예 3: 사료 첨가제 조성물의 제조
실시예 1에서, 다시마 4g 대신, 하기 제조과정으로 제조된 다시마 다당체를 4g 투입한 것을 제외하고는 실시예 1과 모두 동일하게 제조하였다.
상기 다시마 다당체는 다음과 같이 제조된 것을 사용하였다. 우선 마른 다시마 1kg을 고온, 가압의 물로 3시간 동안 열수 추출하여 조추출물을 제조하였다. 상기 조추출물(crude extract)을 0.1-m2 membranes를 이용하여 초여과법(ultrafiltration)을 실시하였다. 고분자를 제거하기 위해서 100 kD 멤브레인(membrane)을 사용하여 여과하였고, 참다시마의 염(salt)을 제거하기 위해서 1 kD 멤브레인(membrane)을 사용하여 농축한 후 동결건조하였다.
상술한 과정을 통해 제조된 사료 첨가제 조성물은 실시예 3의 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
실시예 4: 사료 첨가제 조성물의 제조
실시예 2에서, 다시마 4g 대신, 하기 제조과정으로 제조된 다시마 다당체를 4g 투입한 것을 제외하고는 실시예 2와 모두 동일하게 제조하였다.
상기 다시마 다당체는 다음과 같이 제조된 것을 사용하였다. 우선 마른 다시마 1kg을 고온, 가압의 물로 3시간 동안 열수 추출하여 조추출물을 제조하였다. 상기 조추출물(crude extract)을 0.1-m2 membranes를 이용하여 초여과법(ultrafiltration)을 실시하였다. 고분자를 제거하기 위해서 100 kD 멤브레인(membrane)을 사용하여 여과하였고, 참다시마의 염(salt)을 제거하기 위해서 1 kD 멤브레인(membrane)을 사용하여 농축한 후 동결건조하였다.
상술한 과정을 통해 제조된 사료 첨가제 조성물은 실시예 4의 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
비교예 1: 다시마 단독 사료 첨가제 조성물의 제조
다시마를 물에 12시간 담궈 염분을 제거하고, 음지에서 하루동안 건조하였다. 상기 건조된 다시마를 입도 30 내지 40 ㎛가 되도록 파쇄하여 다시마 분말을 제조하였다. 상기 다시마 분말 40 g에 80~90℃ 조건의 스팀을 공급하여 과립형태로 성형하였다. 상기 성형된 과립을 수분함량 14% 이하로 건조하여 본 발명의 사료 첨가제 조성물을 제조하였다. 이는 비교예 1의 사료 첨가제 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
비교예 2: 다시마 다당체 단독 사료 첨가제 조성물의 제조
우선 마른 다시마 1kg을 고온, 가압의 물로 3시간 동안 열수 추출하여 조추출물을 제조하였다. 상기 조추출물(crude extract)을 0.1-m2 membranes를 이용하여 초여과법(ultrafiltration)을 실시하였다. 고분자를 제거하기 위해서 100 kD 멤브레인(membrane)을 사용하여 여과하였고, 참다시마의 염(salt)을 제거하기 위해서 1 kD 멤브레인(membrane)을 사용하여 농축한 후 동결건조하여 다시마 다당체를 제조하였다.
상기 과정을 통해 제조된 다시마 다당체 분말 40 g에 80~90℃ 조건의 스팀을 공급하여 과립형태로 성형하였다. 상기 성형된 과립을 수분함량 14% 이하로 건조하여 본 발명의 사료 첨가제 조성물을 제조하였다. 이는 비교예 2의 사료 첨가제 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
비교예 3: 초저분자 착염 복합체 단독 사료 첨가제 조성물의 제조
아스파르트산 60 g을 500 ㎖의 물에 넣고 교반하면서, 여기에 황산아연(아연 35 중량%)을 넣어 교반시키면서 60 ℃의 온도로 30 분 이상 충분히 반응시킨 후 원심분리하여 상등액을 동결건조하여, 약 70 g의 초 저분자 착염 복합체를 얻었다. 단, 상기 황산아연과 상기 아스파르트산은 1 : 1 몰(mole)비의 함량으로 투입하였다.
상기 초 저분자 착염 복합체 40 g에 80~90℃ 조건의 스팀을 공급하여 과립형태로 성형하였다. 상기 성형된 과립을 수분함량 14% 이하로 건조하여 본 발명의 사료 첨가제 조성물을 제조하였다. 이는 비교예 3의 사료 첨가제 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
비교예 4: 다시마 다당체 단독 사료 첨가제 조성물의 제조
아스파르트산 60 g을 500 ㎖의 물에 넣고 교반하면서, 여기에 황산아연(아연 35 중량%)을 넣어 교반시키면서 60 ℃의 온도로 30 분 이상 충분히 반응시킨 후 원심분리하여 상등액을 동결건조하여, 약 70 g의 초 저분자 착염 복합체를 얻었다. 단, 상기 황산아연과 상기 아스파르트산은 1 : 2 몰(mole)비의 함량으로 투입하였다.
상기 초 저분자 착염 복합체 40 g에 80~90℃ 조건의 스팀을 공급하여 과립형태로 성형하였다. 상기 성형된 과립을 수분함량 14% 이하로 건조하여 본 발명의 사료 첨가제 조성물을 제조하였다. 이는 비교예 4의 사료 첨가제 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
비교예 5: 사료 첨가제 조성물의 제조
실시예 1의 초 저분자 착염 복합체를 제조하는 과정에서, 황산아연과 아스파르트산을 1 : 1 몰비로 혼합하는 대신, 상기 황산아연과 상기 아스파르트산을 1 : 1.5 몰(mole)비의 함량으로 투입하여 초 저분자 착염 복합체를 제조한 것을 제외하고는 실시예 1과 모두 동일하게 제조하였다. 이는 비교예 5의 사료 첨가제 조성물로 지칭한 후, 하기 실험에서 사용하였다.
실험예 1: 넙치(
Paralichthys olivaceus)
의 성장 및 질병저항성에 미치는 영향 시험
1) 실험사료
실험사료는 상기 실시예 1 및 실시예 3에서 얻은 분말 사료 첨가제를 0 (Control), 1.0 중량%씩 첨가한 3개의 사료와 비교예 1, 2, 3 및 4에서 얻은 분말 사료 첨가제를 1.0 중량% 첨가한 4개의 사료 총 7개의 실험사료를 제작하였다(Con은 0 중량%; E1은 1.0 중량% 실시예 1; E3은 1.0 중량% 실시예 3; C1은 1.0 중량% 비교예 1; C2는 1.0 중량% 비교예 2; C3은 1.0 중량% 비교예 3; C4는 1.0 중량% 비교예 4).
각 제품의 첨가 함량만큼 셀룰로오스의 함량을 감소시켜 사료 전체 영양소 균형을 조절하였다. 기초사료 조성표는 표 1에 나타내었다.
실험사료는 우선 사료원들을 혼합기에 넣어 균일하게 혼합한 다음(표 1), 어유를 첨가한 뒤 사료원 총량의 30 중량%에 해당하는 증류수를 첨가하여 사료혼합기로 반죽하였다. 혼합반죽물은 소형초파기(SMC-12, Kuposlice, Busan, Korea)를 이용하여 실험어류에게 알맞은 3 mm 크기의 펠렛으로 성형하였다. 성형된 실험사료는 24h 동안 건조기에서 완전건조시켜 사료 공급 전까지 -20 ℃에 보관하면서 사용하였다.
| 사료원 | %, 건물(DM) |
| white fish meal | 48.0 |
| Soybean meal | 8.0 |
| Corn gluten meal | 8.0 |
| Wheat flour | 21.5 |
| Squid liver oil | 10.0 |
| Mineral mix1 | 1.0 |
| Vitamin mix2 | 1.0 |
| Choline chloride | 0.5 |
| CMC | 1.0 |
| Celluclose | 1.0 |
Mineral mix: MgSO4ㅇ7H2O,80.0; NaH2PO4ㅇ2H2O,370.0; KCl,130.0; Ferriccitrate,40.0; ZnSO4ㅇ7H2O,20.0; Ca-lactate,356.5; CuCl,0.2; AlCl3ㅇ6H2O,0.15; Na2Se2O3,0.01; MnSO4ㅇH2O,2.0; CoCl2ㅇ6H2O,1.0.
Vitamin mix(g/kg): L-아스코르브산, 121.2; DL-알파 토코페릴아세테이트, 18.8; 티아민 염산염, 2.7; 리보플라빈, 9.1; 피리독신 염산염, 1.8; 니아신, 36.4; Ca-D-판토테네이트, 12.7; 미오이노시톨, 181.8; D-비오틴, 0.27; 엽산, 0.68; p-아미노벤조산, 18.2; 메나디온, 1.8; 레티닐 아세테이트, 0.73; 콜레칼시페롤, 0.003; 시아노코발라민, 0.003.
2) 실험어 및 사육관리
실험에 사용된 어류는 제주도 애월읍에 위치한 종묘배양장에서 구입하였다. 실험어류는 2주 동안 시판 배합사료를 공급하면서 실험환경에 적응할 수 있도록 순치되었다. 예비사육 후 넙치치어(초기평균무게: 22.8±0.08 g)는 각각의 150 L 원형 플라스틱 수조에 배치하였고, 각 수조 당 45마리씩 무작위로 선택하여 배치하였다. 사육수는 모래여과해수를 사용하여 2 - 3 L/min의 유수량이 공급되도록 조절하였고 모든 실험수조에 용존산소 유지를 위하여 에어스톤을 설치하였다. 사육수온은 자연수온(18-23℃)에 의존하였으며 광주기는 형광등을 이용하여 12L:12D 로 유지되었다. 실험사료 공급은 1일 2회(08:00 hr 와 18:00 hr) 만복공급을 하였으며 실험은 총 8주간 진행되었다.
넙치의 성장률, 사료요구율, 일간성장율을 측정하기 위해 매 2주마다 전체 무게를 측정하였으며, 다음과 같이 계산하였고, 그 결과를 표 2에 나타내었다.
성장률(WG, %) = 100 × (final mean body weight - initial mean body weight)/initial mean body weight;
사료이용효율(FI, %): (wet body wt. gain/dry feed intake)×100;
단백질이용효율(PER) = wet weight gain/total protein given;
일간성장률(SGR, %) = [(loge final body weight - loge initial body weight)/days] × 100.
| 구분 | Con | E1 | E3 | C1 | C2 | C3 | C5 |
| FMB | 67.6±0.3 | 72.5±0.4 | 75.1±0.8 | 64.2±2.6 | 59.9±1.1 | 64.2±1.0 | 62.9±2.1 |
| WG(%) | 197.8±0.12 | 220.8±0.13 | 230.8±0.04 | 182.8±0.12 | 162.7±0.18 | 180.3±0.01 | 178.3±0.39 |
| SGR(%) | 1.94±0.02 | 2.08±0.02 | 2.14±0.14 | 1.86±0.25 | 1.72±0.18 | 1.86±0.18 | 1.81±0.07 |
| PER | 2.40±0.12 | 2.85±0.14 | 2.90±0.04 | 2.34±0.19 | 2.35±0.01 | 2.55±0.44 | 2.50±0.10 |
| Survival(%) | 85.9±7.8 | 91.4±6.8 | 94.4±2.6 | 81.9±2.2 | 80.5±9.8 | 84.6±4.6 | 82.1±2.2 |
8주 동안 사육한 넙치의 성장결과를 살펴본 결과, 넙치 치어의 증체율 및 일간성장율은 실시예 1 및 3의 사료 첨가제를 투여한 실험구(E1, E3)가 대조구(con)에 비해 유의적으로 높은 수치를 나타내었다. 또한 실시예 1 및 3(E1, E3)의 최종 무게가 대조구(con)에 비해 높은 경향을 나타내었으며, 사료전환효율, 단백질이용효율, 일간성장률 또한 이와 유사한 경향을 나타내었다. 생존율은 모든 실험구에서 유의적인 차이가 없었으나, 실시예 1 및 3의 사료첨가제가 투여된 군(E1, E3)에서 다소 높은 경향을 나타내었다.
즉, 본 발명의 사료 첨가제는 넙치의 성장율을 증대시키는 효과를 가지고 있음을 알 수 있다.
3) 공격실험을 통한 질병저항성 실험
① 병원균주
본원발명의 초저분자 착염 복합체와 다시마 또는 다시마 다당체가 넙치의 항병력에 미치는 영향을 조사하기 위해 공격실험을 실시하였다. 우선, 사육실험이 종료된 후, 각 수조당 4마리씩 무작위로 선별하여 S. iniae(Streptococcus inia)균주 현탁액을 주입하였다. S. iniae(Streptococcus inia) 균주는 TSA 배지를 사용하여 25 ㅀC에서 24시간 배양한 후 집균 하였고, PBS 1 x 108 cfu/㎖이 되도록 현탁한 현탁액을 제조한 후, 이를 주사기로 실험 어류의 복강 내 10 ㎕ 주입하였다. 균이 주입된 넙치는 64 L 플라스틱수조에 3 반복으로 분주되었으며, 어류의 행동 및 폐사를 하루 3번씩 관찰하였으며, 8일 동안 진행되었다.
S. iniae의 감염증상은 안구돌출, 백탁 및 충혈, 두부와 상하턱의 발적, 아가미 뚜껑 하부의 출혈 및 아가미와 체표에 점액이 많이 분비되며, 넙치에 가장 큰 피해를 입히는 대표적인 세균이다.
| 구분 | Con | E1 | E3 | C1 | C2 | C3 | C4 |
| 4일(%) | 41 | 80 | 98 | 55 | 50 | 60 | 50 |
| 6일(%) | 0 | 51 | 65 | 16 | 12 | 15 | 14 |
S. iniae(Streptococcus inia)균주를 이용한 공격실험 결과의 누적 생존율을 확인하여 표 3에 나타내었다. 그 결과 대조군(con)과 실시예 1, 3의 사료 첨가제 실험군인 E1, E3은 다시마 또는 다시마 다당체 또는 초저분자 착염 복합체를 단독으로 처리한 경우(C1, C2, C3, C4)보다 높은 누적 생존율을 보이고 있음을 확인하였다.
즉, 본 발명의 사료 첨가제는 세균에 대한 넙치의 질병저항성을 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
실험예 2: 스트레스에 대한 넙치(
Paralichthys olivaceus)
의 영향 시험
1) 실험어류 및 조건
실시예 1, 2, 3, 4 및 비교예 1, 2, 3, 4, 5의 사료 첨가제 조성물을 포함한 각각의 실험사료를 실험예 1과 같이 제조하였다. 이로부터 실험예 1과 동일하게 8주 동안 사육실험을 진행하였다.
실험사료는 상기 실시예 1, 실시예 2, 실시예 4, 실시예 4에서 얻은 분말 사료 첨가제를 0 (Control), 1.0 중량%씩 첨가한 5개의 사료와 비교예 1, 2, 3, 4 및 5에서 얻은 분말 사료 첨가제를 1.0 중량% 첨가한 5개의 사료 총 10개의 실험사료를 제작하였다(Con은 0 중량%; E1은 1.0 중량% 실시예 1; E2은 1.0 중량% 실시예 2; E3은 1.0 중량% 실시예 3; E4는 1.0 중량% 실시예 4; C1은 1.0 중량% 비교예 1; C2는 1.0 중량% 비교예 2; C3은 1.0 중량% 비교예 3; C4는 1.0 중량% 비교예 4; C5는 1.0 중량% 비교예 5).
사육실험이 종료된 후, 각 수조당 20마리씩 무작위로 선별하여, 이를 각각 가온 및 냉각이 가능한 50 L 사각수조에 각각 그룹(Con, E1, E2, E3, E4, C1, C2, C3, C4, C5)별로 수용한 뒤, 마취실험과 공기노출 실험을 실시하였다.
각 실험구당 10마리씩 무작위로 채집하여 2-phenoxyethanol(Sigma, USA) 800 ppm농도로 맞춘 수조에 3분간 마취 후, 흐르는 물에 수용하여 회복되는 시간을 타이머로 30초 간격으로 측정하였고, 이때 각 실험구당 3반복으로 실시되었다.
공기노출 실험은 각 실험구당 10마리씩 무작위로 물이 빠지는 사각 플라스틱 바구니에 채집하여 15분간 공기 중 노출시킨 후, 흐르는 물에 수용하여 6시간 후 폐사율을 측정하였으며, 역시 각 실험구당 3반복으로 실시하였다.
2) 결과
스트레스에 대한 반응을 조사하기 위하여, 마취실험에서의 회복시간과 공기노출 뒤 폐사율을 측정하여 표 4에 나타내었고, 공기노출 후 혈액을 채취하여 글루코스 농도변화를 측정하였다. 글루코스는 다음과 같이 분석하였다.
채취한 혈액의 일부를 원심분리(3,000 RPM 10분) 하여 혈청을 분리하고, 글루코스(glucose)를 상업용 키트(Kit)를 이용해 DRI-CHEM 4000i- Fuji Dri-Chem Slide- 3150(Minato-ku, Tokyo, Japan)로 분석하였다.
| 구분 | 마취실험 | 공기노출 실험 | ||
| 회복시간, min | 폐사율, % | 노출전(0hr) Glucose, mg/dl |
노출후(4hr) Glucose, mg/dl |
|
| Con | 4.83±0.52 | 45.0±7.01 | 17.09±1.75 | 178.94±33.75 |
| E1 | 3.67±0.12 | 12.0±2.12 | 25.71±0.81 | 60.98±3.93 |
| E2 | 3.07±022 | 6.0±1.45 | 24.15±0.21 | 57.23±2.14 |
| E3 | 3.01±0.41 | 5.0±2.61 | 26.28±0.32 | 51.70±2.56 |
| E4 | 3.03±0.25 | 5.0±2.54 | 26.12±0.30 | 50.47±1.15 |
| C1 | 5.67±0.45 | 55.0±10.00 | 31.27±0.54 | 172.83±9.48 |
| C2 | 5.37±0.5 | 50.0±14.14 | 28.67±0.41 | 168.48±3.67 |
| C3 | 4.83±0.29 | 45.0±7.07 | 31.25±0.77 | 151.33±5.23 |
| C4 | 5.00±0.50 | 45.0±10.00 | 30.14±0.94 | 158.24±1.56 |
| C5 | 4.75±0.25 | 40.0±12.5 | 29.54±0.14 | 130.24±1.64 |
상기 스트레스 환경(마취, 공기노출)에서 넙치의 회복시간, 폐사율 등을 분석한 결과, 실시예 1 내지 4의 사료 첨가제를 투여한 E1, E2, E3, E4는 마취후 회복되는 시간이 현저히 감소하였음을 확인하였다.
또한, 공기에 노출된 경우, 폐사율을 살펴보면, 비교예 1 내지 5의 사료 첨가제를 투여한 C1~C5는 대조구와 유의적 차이가 없었으나, 실시예 1 내지 4의 사료 첨가제를 투여한 E1 내지 E4는 5~12%로 대조구보다 현저히 폐사율이 낮아졌음을 확인하였다.
넙치 치어의 공기노출 후 혈액을 채취하여 글루코스 농도변화를 살펴본 결과, 실시예 1 내지 4의 사료 첨가제를 투여한 E1 내지 E4는 글루코스의 증가량이 가장 낮음을 알 수 있다. 이에 반해 비교예 1 내지 5의 사료 첨가제를 투여한 C1~C5는 4 시간 후 급격히 글루코스 농도가 증가하였다.
어류는 신경내분비계의 당신생합성을 촉진시키고, 불안정한 생리 상태를 극복하기 위해 항상성 유지에 필요한 에너지원인 글루코스를 필요로 하게 된다. 따라서 어류가 스트레스를 받으면 혈장에서의 코티졸과 글루코스가 급격하게 동반상승하는 것으로 널리 알려져 있다. 따라서 글루코스 농도는 어류의 스트레스 정도를 판단하는 널리 알려진 인자 중 하나이다.
즉, 본 발명의 사료 첨가제는 외부 환경 변화에 대한 넙치의 스트레스 저항성을 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
실험예 3 : 비특이적 면역반응 실험
(1) SOD 활성 측정 실험
실시예 1, 2, 3, 4 및 비교예 1, 2, 3, 4, 5의 사료 첨가제 조성물을 사용하여 상기 실험예 2와 동일하게 8주간 사육실험을 수행하였다.
사육실험이 완료된 각각의 실험구별 어류에서 혈청을 채취하고, 분리한 혈청으로 SOD Assay Kit(Sigma-Aldrich, 191600)을 사용하여 제조사의 지시를 따라 WST-1(Water Soluble Tetrazolium dye)와 xanthine oxidase으로 효소의 저해율을 백분위로 계산하였다. 그리고, 각각의 샘플이 인큐베이터(Incubator)에 37 ℃로 20 분간 반응시켜 평행시간에 도달하였을 때, 450 nm파장(WST-1과 활성산소가 반응하여 나타난 유색을 측정하기 위한 파장의 흡광도)에서 흡광도를 측정한다. 저해율은 mg 단백질(protein)당 SOD 활성 단위로 나타냈으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
(2) 리소자임(Lysozyme) 활성 측정 실험
사육실험이 완료된 각각의 실험구별 어류에서 분리한 혈청 0.1 ml과 0.05M sodium phosphate buffer(pH 6.2)에 Micrococcus lysodeikticus(0.2 mg/ml)를 부유시킨 suspension 2 ml와 혼합했다. 그리고, 반응은 20℃ 조건에서 분광 흡광도계의 흡광도 530 nm에서 0.5분과 4.5분에 측정했다. 리소자임의 활성 단위는 분당 0.001의 흡광도 감소를 나타내는 효소양으로 정의했다. 측정 결과는 냈으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
| 구분 | SOD(% inhibition) | Lysozyme(U/ml) |
| Con | 37.70±1.02 | 0.83±0.09 |
| E1 | 50.24±1.13 | 1.17±0.04 |
| E2 | 55.14±1.21 | 1.30±0.06 |
| E3 | 52.27±1.32 | 1.23±0.57 |
| E4 | 56.14±1.64 | 1.31±0.45 |
| C1 | 32.49±1.54 | 0.76±0.11 |
| C2 | 33.47±0.97 | 0.67±0.57 |
| C3 | 38.58±1.11 | 0.77±0.10 |
| C4 | 34.24±1.31 | 0.68±0.31 |
| C5 | 32.87±3.41 | 0.67±1.31 |
대식세포는 체내에 침입한 세균, 바이러스 등을 가수분해함으로 활성산소(reactive oxygen species, ROS)를 증가시키게 되는데, SOD 활성은 과산화이온을 산소와 과산화수소로 바꿔주는 반응을 촉매하는 대표적인 항산화 효소로써, 체내에 침입한 병원체를 제거하는 역할을 하고, 리소자임(Lysozyme)은 항생물질과 같은 성상을 나타내는 임파구 유래의 점액 용균성 효소로 내인성 방어기구의 일부가 된다. 상기 표 5의 SOD 활성 실험에 있어서 실시예 1 내지 실시예 4의 사료 첨가제가 투여된 군은 대조구에 비해 유의하게 높게 나타났다. 하지만 비교예 1 내지 5의 사료 첨가제가 투여된 군은 대조구와 유의한 차이가 나타나지 않았다.
또한, 리소자임 활성 결과를 살펴보면, 실시예 1 내지 4의 사료 첨가제가 첨가된 군은 대조구에 비해 유의하게 높게 나타났다. 하지만 비교예 1 내지 5의 사료 첨가제가 첨가된 군은 대조구와 유의한 차이가 나타나지 않았다.
상기 실시예 및 실험결과를 통하여, 본 발명의 사료 첨가제는 양식어류의 성장과 면역을 증강시키며, 항생제 대체물질로 효과를 나타낼 수 있음을 확인할 수 있다.
Claims (9)
- 아연 및 아스파르트산이 1 : 1 또는 1 : 2의 몰비로 결합된 초 저분자 착염 복합체; 및 다시마 또는 다시마 다당체;를 유효성분으로 하는 어류용 사료 첨가제 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 다시마 다당체는, 다시마에서 추출한 1 kDa 내지 100 kDa의 분자량을 갖는 다당체인 것을 특징으로 하는 어류용 사료 첨가제 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 초 저분자 착염 복합체의 분자량은 100 내지 250 Da인 것을 특징으로 하는 어류용 사료 첨가제 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 초 저분자 착염 복합체와 다시마 또는 다시마 다당체는 1 : 0.05 내지 1 : 0.5의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 하는 어류용 사료 첨가제 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 사료 첨가제 조성물은 파우더 또는 과립형태의 제형인 것을 특징으로 하는 어류용 사료 첨가제 조성물. - 제1항에 따른 어류용 사료 첨가제 조성물을 포함하는 어류용 양식 사료.
- 1) 아연 전구체 및 아스파르트산을 1 : 1 또는 1 : 2의 몰(mole)비로 물에 투입하는 단계;
2) 상기 1) 단계의 아연 전구체 및 아스파르트산 혼합 수용액을 50 내지 100 ℃에서 10 분 내지 24 시간 가열 및 초음파 처리하여 초 저분자 착염 복합체를 제조하는 단계; 및
3) 상기 초 저분자 착염 복합체에 다시마 또는 다시마 다당체를 혼합하는 단계;를 포함하는 어류용 사료 첨가제 조성물의 제조방법. - 제7항에 있어서,
상기 다시마 다당체는 다시마를 고온, 가압 조건 하에서 1 내지 5 시간동안 열수 추출하여 조추출물을 제조하고, 상기 조추출물을 여과하여 염류를 제거한 다음, 이를 100 kDa 한외여과막(ultrafiltration membrane)으로 여과하여 고분자를 제거하고, 1 kDa 한외여과막으로 여과하여 농축한 후 동결건조하여 제조된 것을 특징으로 하는 어류용 사료 첨가제 조성물의 제조방법. - 제7항에 있어서,
상기 3) 단계에서 초 저분자 착염 복합체와 다시마 또는 다시마 다당체는 1 : 0.05 내지 1 : 0.5의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 하는 어류용 사료 첨가제 조성물의 제조방법.
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| KR1020200175040A KR20220085182A (ko) | 2020-12-15 | 2020-12-15 | 초 저분자 착염 복합체 및 다시마 또는 다시마 다당체를 유효성분으로 하는 사료 첨가제 조성물 |
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|---|---|---|---|---|
| KR20170133153A (ko) | 2016-05-25 | 2017-12-05 | 대한민국(농촌진흥청장) | 갈색거저리를 이용한 넙치 사료용 조성물 및 이의 제조방법 |
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