KR20220046584A - 간 재생 촉진 또는 간세포 사멸 감소 또는 예방을 위한 헤테로아릴-치환된 피라졸로-피리딘 단백질 키나제 억제제 - Google Patents

간 재생 촉진 또는 간세포 사멸 감소 또는 예방을 위한 헤테로아릴-치환된 피라졸로-피리딘 단백질 키나제 억제제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 미토젠-활성화 단백질 키나제 키나제 4(mitogen-activated protein kinase kinase 4, MKK4), 특히 단백질 키나제 JNK1 및 MKK7에 비해 MKK4를 선택적으로 억제하는 피라졸로-피리딘 화합물에 관한 것이다. 상기 화합물은 간 재생 촉진 또는 간세포 사멸 감소 또는 예방에 유용하다. 이들은 또한 골관절염 또는 류마티스 관절염, 또는 CNS 관련 질환의 치료에 유용하다.

Description

간 재생 촉진 또는 간세포 사멸 감소 또는 예방을 위한 헤테로아릴-치환된 피라졸로-피리딘 단백질 키나제 억제제
본 발명은 미토젠-활성화 단백질 키나제 키나제 4(mitogen-activated protein kinase kinase 4, MKK4)를 억제하는 헤테로아릴 치환된 피라졸로-피리딘 단백질 키나아제 억제제에 관한 것으로, 특히 단백질 키나제 JNK1 및 MKK7에 비해 MKK4를 선택적으로 억제한다.
간 질환은 감염, 부상, 알코올이나 약물과 같은 독성 화합물에 대한 노출, 자가면역 과정, 유전적 결함 및 기타 요인으로 인해 발생할 수 있다. 간은 놀라운 재생 능력을 가지고 있지만 질환 상태에서 손상될 수 있으므로 간세포 및 기관 기능의 손실을 보상하기에 불충분할 수 있다.
WO 2007/002433은 단백질 키나제의 비정상적인 활성과 관련된 질환 및 상태를 치료하는데 유용한 단백질 키나제 억제제인 화합물을 기재하고 있다. 이들 화합물은 Raf 단백질 키나제, 특히 B-Raf 및 c-Raf 및 이들의 돌연변이의 억제제이고 따라서 암 치료에 유용하다. 또한, 이들은 다양한 다른 단백질 키나제를 억제한다고 하는데 그 중에서도 c-Jun N-말단 키나제(JNK) 및 특히 JNK1를 들 수 있다. WO 2007/002325는 유사한 내용을 개시하고 있고 WO 2012/109075 및 WO 2014/194127은 Raf 단백질 키나제 억제 활성을 갖는 변형된 화합물을 개시하고 있다. H. Vin et al.은 JNK 신호의 표적외 억제를 통해 세포자멸사(apoptosis)를 억제하는 B-Raf 억제제로서 WO 2007/002433의 2가지 화합물을 언급한다. WO 2010/111527에는 암과 같은 Raf 단백질 키나제 매개 질환 또는 상태를 치료하는 데 유용한 단백질 키나제 억제제인 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물이 기재되어 있다. 또한, 이들은 다양한 다른 단백질 키나제를 억제한다고 하는데 그 중에서도 c-Jun N-말단 키나제(JNK) 및 특히 JNK1를 들 수 있다. WO 2012/136859는 미토겐-활성화 단백질 키나제 4(MKK4)의 억제제로서 기술되고 간부전 치료, 세포자멸사에 대항하는 간세포 보호 및 간세포 재생에 유용한 것으로 기술된 일부 화합물을 개시하고 있다. Wuestefeld et al. (Cell 153:389-401, 2013) 및 Willebring et al. (Cell 153:283-284)는 간세포의 재생 능력을 증가시키기 위해 이용될 수 있는 유전자 표적의 식별을 위한 기능적 유전적 접근법을 설명한다. 특히, Wuestefeld et al.은 단백질 키나제 MKK4를 간 재생의 주요 조절인자로 확인하고 MKK4 억제가 MKK7의 보상적 상향조절과 ATF2 및 ELK1의 JNK1-의존적 활성화를 통해 간세포 재생을 증가시켰다고 보고한다.
선행 기술의 발견에 기초하여 MKK4 및 JNK1 억제제가 JNK1-매개 질환을 치료하는 데 유용할 수 있다는 결론이 내려졌다. 그러나 JNK1의 억제가 간 질환 치료에 도움이 될 수 있다는 인식에도 불구하고 임상 연구는 수행되지 않았다. WO 2018/134254는 간 재생을 촉진하거나 간세포 사멸을 감소 또는 예방하기 위한 단백질 키나제 억제제인 피롤로-피리딘 화합물을 개시하고 있다.
발명의 요약
본 발명의 근본적인 문제는 유용한 MKK4 억제제, 특히 MKK7 및 JNK1보다 MKK4를 선택적으로 억제하는 MKK4 억제제인 화합물을 제공하는 것이었다. 추가 문제는 간 질환을 치료하고 특히 간 재생을 촉진하거나 간세포 사멸을 감소 또는 예방하는데 유용한, MKK7 및 JNK1보다 MKK4를 선택적으로 억제하는 MKK4 억제제인 화합물을 제공하는 것이었다.
이 문제는 화학식 (I)의 화합물을 제공함으로써 해결되었다.
따라서, 본 발명은 하기 구체예에 관한 것이다:
1. 화학식 I의 화합물
Figure pct00001
및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 생물학적 활성 대사물, 용매화물 및 입체이성질체,
여기서 화학식(I)의 변수는 다음과 같은 의미를 갖는다:
R1은 H 또는 알킬이고;
R4는 H 또는 알킬이고;
R5는 다음에서 선택되고:
a) 시클로알킬, 알킬, -COOR10, -OH, 알킬설파닐, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 테트라졸릴, CN, 할로겐, 알콕시, -(NR10=)S(=O)-알킬[S-알킬술폰이미도일] 및
Figure pct00002
로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐 및
b1) 알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환되고 -OH, 알콕시, CN, -COOR10, CF3, -(NR10=)S(=O)-알킬, 및
Figure pct00003
로 선택적으로 추가로 치환된 피리딜, 및
b2) -COOR10으로 치환되고, 추가로 -OH, CN, 또는 CF3로 치환된 피리딜;
R6은 H 또는 알킬이고;
Rw는 -NR10SO2R12이고;
Rx는 H, 할로겐 또는 알킬이고;
Ry는 H, 할로겐 또는 알킬이고;
Rz는 H, 할로겐 또는 알킬이고;
여기서 Rx, Ry 또는 Rz 중 1개 또는 2개 또는 3개는 할로겐이고, Rx, Ry 및 Rz 중 나머지는 H 또는 알킬이고;
R10은 각 경우에 독립적으로 H 또는 알킬이고;
R12는 H, 알킬 또는 페닐알킬이고;
n은 1 또는 2이다.
2. 구체예 1에 있어서, R1이 H인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
3. 구체예 1 또는 2에 있어서, Rx, Ry 또는 Rz 중 2개 또는 3개가 할로겐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
4. 구체예 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 할로겐 원자 또는 Rx, Ry 또는 Rz 의 할로겐 원자가 독립적으로 F 또는 Cl, 특히 F인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
5. 구체예 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, R4 및 R6이 H인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
6. 구체예 6에 있어서, R5가 시클로알킬, 알킬, -COOR10, -OH, 알킬설파닐, 알킬설피닐, 알킬설포닐, CN, 및 테트라졸릴로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
7. 구체예 6에 있어서, R5가 시클로알킬, 알킬, 알콕시, OH, 알킬설파닐, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 할로겐, CN 및 테트라졸릴로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
8. 구체예 7에 있어서, R5가 시클로알킬, 알콕시, OH, 알킬설파닐, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 할로겐, CN, 및 테트라졸릴로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
9. 구체예 8에 있어서, R5가 시클로알킬, 알콕시, OH, 알킬설파닐, 할로겐, CN, 및 테트라졸릴로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
10. 구체예 9에 있어서, R5가 시클로알킬, 알콕시, OH, 할로겐 및 알킬설파닐로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
11. 구체예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, R5가 시클로알킬, 알킬, -COOR10, 알콕시, -OH, 알킬설파닐, 알킬설피닐 및 알킬설포닐로부터 선택된 기로 치환되고 할로겐, CN, 테트라졸릴, -(NR10=)S(=O)-알킬, 및
Figure pct00004
로 추가로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
12. 구체예 7에 있어서, R5가 시클로알킬, 알킬, 알콕시, -OH 및 알킬설파닐로부터 선택된 기로 치환되고 알킬, 알콕시, 및 알킬설파닐로부터 선택된 기로 추가로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
13. 구체예 12에 있어서, R5가 시클로알킬, 알킬, -OH 및 알킬설파닐로부터 선택된 기로 치환되고 알킬, 알콕시, 및 알킬설파닐로부터 선택된 기로 추가로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
14. 구체예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, R5가 시클로알킬기로 치환되고 선택적으로 시클로알킬, 알킬, -COOR10, -OH, 알킬설파닐, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 테트라졸릴, CN, 할로겐, 알콕시, -(NR10=)S(=O)-알킬[S-알킬술폰이미도일] 및
Figure pct00005
로부터 선택된 기로 추가로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
15. 구체예 14에 있어서, R5가 시클로알킬기로 치환되고 선택적으로 시클로알킬, 알킬, -COOR10, -OH, 알킬설파닐, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 테트라졸릴, CN, 할로겐 및 알콕시로부터 선택된 기로 추가로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
16. 구체예 15에 있어서, R5가 시클로알킬기로 치환되고 선택적으로 시클로알킬, 알킬, -COOR10, -OH, 알킬설파닐, 테트라졸릴, CN, 할로겐 및 알콕시로부터 선택된 기로 추가로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
17. 구체예 16에 있어서, R5가 시클로알킬기로 치환되고 선택적으로 알킬, -COOR10, -OH, 알킬설파닐, CN, 할로겐 및 알콕시로부터 선택된 기로 추가로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
18. 구체예 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, R5가 2-위치에서 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
19. 구체예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, R5가 2-위치에서 -COOR10로 치환되어 있고 -OH, CN 또는 CF3로 추가로 치환되어 있는 피리드-3-일(피리딜기는 피라졸로피리딘기에 3-위치에서 결합되어 있음)인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
20. 구체예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, R5가 3-위치에서 알킬 또는 할로겐으로 치환되어 있는 피리드-4-일(피리딜기는 피라졸로피리딘기에 4-위치에서 결합되어 있음)인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
21. 구체예 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, R10이 H 또는 알킬, 특히 H인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
22. 구체예 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, R12가 알킬 또는 페닐알킬인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
23. 구체예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, R12가 C1-C3-알킬 또는 벤질인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
24. 구체예 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 화학식 (Ia)를 갖는 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체:
Figure pct00006
여기서
Rx는 할로겐이고;
Ry는 할로겐이고;
R1, R4, R5, R6, 및 Rw는 상기 구체예들 중 어느 하나에서 정의된 바와 같다.
25. 구체예 1 내지 청구항 23 중 어느 하나에 있어서, 화학식 (Ib)를 갖는 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체:
Figure pct00007
여기서
Rx는 할로겐이고;
Ry는 할로겐이고;
R1, R4, R5, R6 및 Rw는 구체예 1 내지 15 중 어느 하나에서 정의된 바와 같다.
26. 구체예 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 하기 화학식 (Ic)를 갖는 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체:
Figure pct00008
여기서
Rx는 할로겐이고;
Ry는 할로겐이고;
Rz는 할로겐이고;
R1, R4, R5, R6 및 Rw는 구체예 1 내지 15 중 어느 하나에서 정의된 바와 같다.
27. 구체예 24 내지 26 중 어느 하나에 있어서, Rx, Ry 및 Rz(존재하는 경우)가 F 또는 Cl, 특히 F인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
일 구체예에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 에스테르, 용매화물 및 광학 이성질체에 관한 것이며, 여기서 R1, R4 내지 R6, Rw, Rx, Ry 및 Rz는 임의의 조합에서 상기에서 정의된 바와 같다.
추가 구체예에서, 본 발명은 화학식 (Ia), (Ib) 및 (Ic)의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 에스테르, 용매화물 및 광학 이성질체에 관한 것이며, 여기서 변수는 상기 구체예에서 정의된 바와 같다.
추가 구체예에서, Rx, Ry 및 Rz 중 적어도 2개는 할로겐이고, Rx, Ry 및 Rz는 중 다른 하나는 H, 할로겐 또는 알킬, 특히 알킬 또는 할로겐이다. 할로겐은 바람직하게는 F 또는 Cl, 특히 F이다.
추가 구체예에서, R1, R4 및 R6은 H이다.
추가 구체예에서, R12는 메틸, 에틸 또는 프로필이다.
일 구체예에서, 본 발명은 화학식 (I) 및 (Ia) 내지 (Ic)의 MKK4 억제제, 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체, 특히 단백질 키나제 JNK1 및 MKK7에 비해 단백질 키나제 MKK4를 선택적으로 억제하는 MKK4 억제제에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은 또한 단백질 키나제 MKK4를 억제하는데 사용하기 위한, 특히 단백질 키나제 JNK1 및 MKK7에 비해 단백질 키나제 MKK4를 선택적으로 억제하는데 사용하기 위한 본 발명의 화합물에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은 또한 간 재생을 촉진하거나 간세포 사멸을 감소 또는 예방하고 동시에 간세포 증식을 증가시키는 데 사용하기 위한 상기 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기 언급된 화합물의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 염은 특히 약학적으로 허용되는 산 또는 염기와의 산 또는 염기 부가염이다. 적합한 약학적으로 허용되는 유기 및 무기산의 예는 염산, 브롬화수소산, 인산, 황산, 설팜산, C1-C4-알킬설폰산, 예컨대 메탄설폰산, 지환족 설폰산, 예컨대 S-(+)-10-캄포 설폰산, 방향족 설폰산, 예컨대 벤젠설폰산 및 톨루엔설폰산, 디- 및 트리카르복실산 및 2 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 히드록시카르복실산, 예를 들어 옥살산, 말론산, 말레산, 푸마르산, 젖산, 타르타르산, 구연산, 글리콜산, 아디프산 및 벤조산이다. 기타 사용 가능한 산은 예를 들어 Fortschritte der Arzneimittelforschung [Advances in drug research], Volume 10, pages 224 ff., Birkhauser Verlag, Basel and Stuttgart, 1966에 설명되어 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 유기 및 무기 염기의 예는 수산화나트륨 또는 수산화칼륨과 같은 알칼리 금속 수산화물, 수산화칼슘 또는 수산화마그네슘과 같은 알칼리 토금속 수산화물, 수산화암모늄, 디메틸아민, 트리메틸아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 콜린, 2-아미노-2-히드록시메틸-프로판-1,3-디올, 메글루민, 프로카인 등과 같은 유기 질소 염기, L-아르기닌, L-리신, 에틸렌디아민 또는 히드록시에틸피롤리딘이다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 및 염 및 이들의 혼합물의 임의의 호변이성질체, 결정체 및 다형체 형태를 포함한다.
본 발명은 또한 수화물과 같은 용매화물을 포함한다.
본 발명의 화합물은 하나 이상의 키랄 중심을 함유할 수 있고, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체와 같은 상이한 광학 활성 형태로 존재할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "전구약물"은 일부 생리학적 화학적 과정에 의해 생체내(in vivo)에서 모약물로 전환되는 제제를 의미한다. 제한 없이, 전구약물의 예는 에스테르 형태의 본 발명의 화합물일 것이다.
전구약물에는 많은 유용한 특성이 있다. 예를 들어, 전구약물은 최종 약물보다 더 수용성일 수 있으므로 약물의 정맥내 투여를 용이하게 할 수 있다. 전구약물은 또한 최종 약물보다 더 높은 수준의 경구 생체이용률을 가질 수 있다. 투여 후, 전구약물은 효소적으로 또는 화학적으로 절단되어 혈액 또는 조직 내에 최종 약물을 전달한다. 예시적인 전구약물은 유리 수소가 (C1-C4)알킬, (C1-C12)알카노일옥시메틸, (C4-C9)1-(알카노일옥시)에틸, 5 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 1-메틸-1-(알카노일옥시)-에틸, 3 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알콕시카르보닐옥시메틸, 4 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 1-(알콕시카르보닐옥시)에틸, 5 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 1-메틸-1-(알콕시카르보닐옥시)-에틸, 3 내지 9개의 탄소 원자를 갖는 N-(알콕시카르보닐)아미노메틸, 4 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 1-(N-(알콕시카르보닐)아미노)에틸, 3-프탈리딜, 4-크로토노락토닐, 감마-부티로락톤-4-일, 디-N,N-(C1-C2)알킬아미노(C2-C3)알킬(예: β-디메틸아미노에틸), 카르바모일-(C1-C2)알킬, N,N-디(C1-C2)-알킬카르바모일-(C1-C2)알킬 및 피페리디노-, 피롤리디노- 또는 모르폴리노(C2-C3)알킬로 대체된 카르복실산 치환기를 갖는 화합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다른 예시적인 전구약물은 히드록실 치환기(예를 들어, R 기는 히드록실을 함유함)의 유리 수소가 (C1-C6)알카노일옥시-메틸, 1-((C1-C6)알카노일옥시)-에틸, 1-메틸-1-(C1-C6)알카노일옥시)에틸, (C1-C12)알콕시-카르보닐옥시-메틸, N-(C1-C6)-알콕시-카르보닐아미노메틸, 숙시노일, (C1-C6)알카노일, α-아미노(C1-C4)알카노일, 아릴락틸 및 α-아미노아실, 또는 α-아미노아실-α-아미노아실로 대체된 화학식 (I)의 알코올을 방출하며 여기서 상기 α-아미노아실 모이어티는 독립적으로 단백질에서 발견되는 임의의 자연 발생 L-아미노산, P(O)(OH)2, -P(O)(O(C1-C6)알킬)2 또는 글리코실(탄수화물의 헤미아세탈의 히드록실 분리로 인한 라디칼)이다.
MKK4 억제제라는 표현은 MKK4의 키나제 활성이 <10 μmol/l, 바람직하게는 < 1 μmol/l, 특히 <0.5 μmol/l의 IC50으로 억제됨을 의미한다. 본원에서 사용된 표현 "단백질 키나제 JNK1 및 MKK7에 비해 단백질 키나제 MKK4를 선택적으로 억제"는 MKK4 억제 활성에 대한 MKK7 억제 활성의 비율 또는 MKK4 억제 활성에 대한 JNK1 억제 활성의 비율이 대조군 또는 Kd의 백분율로 표현하여 KINOMEscan™으로 측정 시 ≥ 10인 것이다.
본 명세서에 사용된 "간 재생 촉진 또는 간세포 사멸 감소 또는 예방"이라는 표현은 치료 초기에 증식하는 세포의 수와 비교하여 증식하는 간세포의 상대 수가 30% 이상, 바람직하게는 50% 이상 증가하는 것을 의미한다. 특히, 상기 표현은 치료 초기에 증식하는 세포의 수에 비해 100% 이상(≥100%) 증가한 것을 의미한다. 이러한 맥락에서, 실험적 결정 및 정량화는 표준 방법, 예를 들어 세포 증식과 엄격하게 연관된 단백질 Ki67의 정량화를 사용하여 수행될 것이다. 조직 슬라이드에서 증식하는 간세포의 정량화를 위해 1차 항-Ki67 항체를 사용한 다음, 예를 들어 양고추냉이(horseradish) 퍼옥시다제 접합 이차 항체를 사용하여 항-Ki67 결합을 시각화하는 여러 면역조직화학 표준 방법을 사용할 수 있다. 발색 기질의 효소적 전환에 의해 가시화되는 퍼옥시다제 활성의 양은 Ki67 단백질의 양 및 증식하는 세포의 수와 상관관계가 있다.
아래 설명된 실험에서 간세포 증식은 Abcam의 1차 다클론성 토끼 항-Ki67 항체(제품 번호 ab15580, Abcam, Cambridge, USA)와 Invitrogen의 2차 염소 다클론성 항체를 포함하는 형광단 테트라메틸로다민(제품 번호 16101, Invitrogen/ThermoFisher)을 사용하여 Ki67-염색에 의해 정량화되었다. 여러 전임상 마우스 모델에서 얻은 데이터를 기반으로 만성 CCl4(사염화탄소) 매개 간 손상 마우스 모델에서 shRNA(small hairpin RNA) 매개 MKK4 억제가 간세포 증식을 (대조군 shRNA에 비해) 13%에서 27%로 증가시키고 간 손상(트랜스아미나제) 감소 및 간 섬유증 감소와 관련이 있었음을 알았다. 앞 장의 정의에 따르면 증식하는 세포의 상대적인 증가는 108%였다. 알코올 유도 지방간염(ASH) 모델에서 MKK4의 shRNA 매개 침묵은 4%의 간세포 증식율을 가져왔으며 이는 대조군 shRNA를 사용했을 때(상대 증가율: 100%)의 2%에 대조적이었다. 간세포 증식의 복제는 지방증(지방 침착) 감소 및 트랜스아미나제로 측정한 간 손상 감소와 관련이 있다. 동일한 맥락에서, shRNA 매개 MKK4 침묵(silencing)은 부분 간 절제 모델(간의 2/3을 외과적으로 제거한 후 48시간) 모델에서 간세포 증식을 16%(대조군 shRNA)에서 33%(상대 증가: 106%)로 증가시켰다. 재차, 증가된 간세포 증식은 개선된 간 재생 및 간 질량의 더 빠른 회복과 연관되었다. 결론적으로, 이러한 연구는 MKK4를 급성 및 만성 간 질환 치료를 위한 치료 표적으로서 입증한 것이다. 또한, WO 2018/134254는 MKK7 및 JNK1에 비해 MKK4를 선택적으로 억제하는 새로운 화합물을 개시한다. 시험관 내 및 생체 내 간 재생 실험 모델에서 이들 화합물은 Jo2 항체 투여에 의해 유발된 급성 간부전 예방에 효과적이었고 분리된 1차 마우스 간세포의 증식을 유도했다.
본 출원에 개시된 신규 화합물은 MKK7 및 JNK1에 대해 선택성을 갖는 강력한 MKK4 억제제이므로 WO 2018/134254에 개시된 화합물과 유사하게 간 질환의 치료 및 간 재생 촉진 또는 산세포 사멸의 감소 또는 예방에 사용될 수 있다.
변수의 상기 정의에서 언급된 유기 모이어티는 할로겐이라는 용어와 같이 개별 군 구성원의 개별 목록에 대한 집합적인 용어이다. 접두사 Cn-Cm은 각 경우에 그 군의 가능한 탄소 원자 수를 나타낸다.
할로겐이라는 용어는 각 경우에 불소, 브롬, 염소 또는 요오드, 특히 불소 또는 염소, 바람직하게는 불소를 나타낸다.
알킬은 바람직하게는 C1-C6-알킬기, 즉 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기, 보다 바람직하게는 C1-C4-알킬기, 특히 C1-C3-알킬기인 직쇄 또는 분지형 알킬 기이다. 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 2-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, 펜틸, 1-메틸부틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 헥실, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 1-메틸펜틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 3,3-디메틸부틸, 1-에틸부틸, 2-에틸부틸, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,2,2-트리메틸프로필, 1-에틸-1-메틸프로필 및 1-에틸-2-메틸프로필이다.
알킬의 정의는 알콕시, 알킬설피닐, 페닐알킬 등과 같은 알킬기를 포함하는 임의의 기에 마찬가지로 적용할 수 있다.
할로알킬은 상기 정의된 바와 같은 할로겐화된 알킬 기이고, 적어도 하나, 예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 모든 수소 원자가 1, 2, 3, 4 또는 상응하는 수의 동일하거나 상이한 할로겐 원자로 대체된, 예를 들어 트리플루오로메틸, 클로로메틸, 브로모메틸, 디플루오로메틸, 플루오로메틸, 디플루오로에틸이다. 특정 예에는 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 플루오로메틸, 또는 디플루오로에틸과 같이 정의된 플루오르화 C1-C4 알킬 기가 포함된다.
시클로알킬은 바람직하게는 C3-C8-시클로알킬, 즉 3 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 시클로알킬기인 시클로지방족 라디칼이다. 특히, 3 내지 6개의 탄소 원자가 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실과 같은 고리 구조를 형성한다. 고리 구조는 비치환될 수 있거나 1, 2, 3 또는 4개의 C1-C4 알킬 라디칼, 바람직하게는 하나 이상의 메틸 라디칼을 보유할 수 있다.
본 발명의 화합물은 WO 2010/111527에 개시된 바와 같이 제조될 수 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함되거나 유사한 절차에 따라 포함된다. 산 또는 염기 부가염은 유리 염기를 상응하는 산과 혼합하거나 유리 산을 원하는 염기와 혼합함으로써 통상적인 방식으로 제조된다. 선택적으로, 반응은 유기 용매, 예를 들어 MeOH, 에탄올 또는 프로판올과 같은 저급 알코올, 메틸 tert-부틸 에테르 또는 디이소프로필 에테르와 같은 에테르, 아세톤 또는 메틸 에틸 케톤과 같은 케톤, 또는 EtOAc와 같은 에스테르 중 용액에서 수행된다.
본 발명의 화합물은 간 재생을 촉진하거나 간세포 사멸을 감소 또는 예방하고, 동시에 간세포 증식을 증가시키는데 유용하다. 따라서 상기 화합물은 감염, 부상, 독성 화합물에 대한 노출, 혈액 내 정상 물질의 비정상적인 축적, 자가 면역 과정, 유전적 결함 또는 알려지지 않은 원인에 의해 유발될 수 있는 간에 대한 급성 또는 만성 손상을 포함하는 질환을 치료, 조절, 개선 또는 예방하기에 유용하다.
이러한 간 질환은 증가된 간 재생 및 간세포 사멸의 감소 또는 예방이 잠재적인 치료 효과, 즉 간 기능의 부분적 또는 완전한 회복을 달성하는 데 도움이 될 수 있는 모든 질환을 포함한다. 이러한 질환에는 B, C, E 형 간염과 같은 급성 및 만성 바이러스성 간염, Epstein-Barr 바이러스, 거대 세포 바이러스, 단순 포진 바이러스 및 기타 바이러스에 의한 간염, 모든 유형의 자가 면역 간염, 일차 경화 감염, 알코올성 간염과 같은 만성 간 질환의 급성 및 만성 또는 급성;
대사 증후군, 비알코올성 지방간과 같은 비알코올성 지방간(NAFL), 비알코올성 지방간염(NASH), 알코올성 지방간염(ASH), 모르버스 윌슨, 혈색소증, 알파1-항트립신 결핍증, 글리코겐 저장 질환과 같은 대사성 간 질환;
원발성 담즙성 간경변, 에틸 독성 간경변, 잠복성 간경변과 같은 모든 유형의 간경화;
아세트아미노펜(파라세타몰) 유도 간부전, 알파-아마니틴 유도 간부전, 약물 유발 간독성과 같은 독성 간부전 및 예를 들어 항생제, 비스테로이드성 항염증제, 항경련제에 의한 간부전, 한약재(카바, 마황, 스컬캡, 페니로얄 등)에 의한 급성 간부전, 버드-키아리 증후군과 같은 혈관질환으로 인한 간질환 및 부전, 원인 불명의 급성 간부전, 우심부전으로 인한 만성 간질환과 같은 급성(전격) 또는 만성 간부전;
갈락토스혈증, 낭포성 섬유증, 포르피린증, 간 허혈 관류 손상, 간 이식 후 소형 증후군, 원발성 경화성 담관염 또는 간성 뇌병증을 포함한다.
간 재생을 촉진하거나 간세포 사멸을 감소 또는 예방하기 위해, 본 발명의 화합물은 이를 필요로 하는 환자에게 치료학적 유효량으로 투여된다. 간 질환의 존재를 감지하기 위해 다양한 진단 방법을 사용할 수 있다. 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 및 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST)의 혈중 농도가 임상적으로 허용되는 정상 범위를 초과하면 진행 중인 간 손상을 나타내는 것으로 알려져 있다. 혈액 빌리루빈 수준 또는 기타 간 효소를 검출 또는 진단 기준으로 사용할 수 있다. ALT 및 AST의 혈중 농도에 대한 간 질환 환자의 일상적인 모니터링은 치료 중 에 간 질환의 진행을 측정하기 위해 사용된다. 허용되는 정상 범위 내로 상승된 ALT 및 AST 수준의 감소는 환자의 간 손상 중증도 감소를 반영하는 임상 증거로 간주된다. FibroTest/FibroSURE, HepaScore®, FibroMeter 또는 Cirrhometer와 같은 상용 어세이는 간 지방증, 섬유증 및 간경변의 검출을 위한 5개 이상의 생화학적 매개변수의 결합된 결과를 평가한다. 또한, 자기공명영상, 초음파, 및 특히 엘라스토그래피 기술과 같은 비침습적이고 혁신적인 물리적 영상 기술을 사용하여 간 질환의 상태와 진행을 감지하고 모니터링할 수 있다.
shRNA 매개 MKK4 억제(suppression)가 골관절염에서 TNF-α-유도 연골 기질 분해를 약화시키는 것으로 추가로 밝혀졌다(Cell Death and Disease(2017)8, e3140). 따라서, 본 발명의 화합물을 사용하여 MKK4의 활성을 억제하는 것은 골관절염 및 류마티스 관절염을 치료하는데 추가로 유용하다.
또한, MKK4 억제제는 알츠하이머병 및 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질환의 치료에도 유용할 수 있다. Grueninger et al.은 인간 신경모세포종 세포에서 MKK4가 타우 응집을 촉진하는 세린 422에서 타우 단백질의 인산화에 중요한 역할을 한다는 것을 발견했다(Mol Cell Biochem (2011) 357:199-207). 타우의 응집을 방지하는 타우 인산화의 억제제는 알츠하이머병의 예방 또는 치료에 유용한 것으로 간주되고 있다.
최근에 MKK4 억제제는 시험관내 및 생체내에서 강력한 신경보호 효과가 있는 것으로 기술되었다. 해마 배양에서 MKK4 억제제와 함께 배양하면 글루타메이트로 인한 세포 사멸과 카스파제-3 활성화가 방지되었으며 SH-SY5Y 세포에서 N-메틸-4-페닐피리디늄 아이오다이드 및 아밀로이드 β1-42가 유도하는 세포 사멸도 억제되었다. 동일한 화합물은 또한 마우스에서 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘-유도된 흑질선조체 도파민성 뉴런(nigrostriatal dopaminergic neurons)의 변성을 완화했다(Biochemical Pharmacology (2018), Vol. 162, April 2019, 109-122; doi: https://doi.org/10.1016/j.bcp.2018.10.008).
본 발명의 화합물은 선택적으로 불활성 담체(예를 들어, 약학적으로 허용되는 부형제) 및 적절한 경우 다른 약물과 함께 본 발명에 따른 하나 이상의 화합물을 포함하는 약학 조성물의 형태로 통상적으로 투여된다. 이들 조성물은 예를 들어 경구, 직장, 경피, 피하, 복강내, 정맥내, 근육내 또는 비강내 투여될 수 있다.
적합한 약제학적 조성물의 예는 고체 의약 형태, 예를 들어 분말, 과립, 정제, 특히 필름 정제, 로젠지, 향낭, 카셰, 당의정, 캡슐, 예를 들어 경질 젤라틴 캡슐 및 연질 젤라틴 캡슐, 또는 좌약, 반고체 의약 형태, 예컨대, 연고, 크림, 히드로겔, 페이스트 또는 플라스터, 및 또한 액체 의약 형태, 예를 들어, 용액, 에멀젼, 특히 수중유 에멀젼, 현탁액, 예를 들어 로션, 주사 제제 및 주입 제제이다. 또한, 리포솜 또는 마이크로스피어를 사용하는 것도 가능하다.
조성물을 제조할 때, 본 발명에 따른 화합물은 선택적으로 하나 이상의 담체(부형제)와 혼합되거나 희석된다. 담체(부형제)는 비히클, 담체 또는 활성 화합물의 매질 역할을 하는 고체, 반고체 또는 액체 물질일 수 있다.
적합한 담체(부형제)는 전문 의약 모노그래프에 나열되어 있다. 또한, 제제는 습윤제; 유화제 및 현탁제; 방부제; 항산화제; 항자극제; 킬레이트제; 코팅 보조제; 에멀젼 안정제; 필름 형성제; 겔 형성제; 냄새 차폐제; 맛 교정제; 수지; 히드로콜로이드; 용매; 가용화제; 중화제; 확산 촉진제; 안료; 4차 암모늄 화합물; 재지방 및 과지방제; 연고, 크림 또는 오일의 원료; 실리콘 유도체; 확산 보조제; 안정제; 살균제; 좌약 베이스; 결합제, 충전제, 활택제, 붕해제 또는 코팅제와 같은 정제 보조제; 추진제; 건조제; 불투명화제; 증점제; 왁스; 가소제 및 백색 광유와 같은 약학적으로 허용되는 보조 물질을 포함할 수 있다. 이와 관련하여 제제는 예를 들어 Fiedler, H.P., Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete [Encyclopedia of auxiliary substances for pharmacy, cosmetics and related fields], 4th edition, Aulendorf: ECV-Editio-Cantor-Verlag, 1996에 기재되어 있다.
본 발명의 화합물은 또한 다른 치료제와의 조합에 적합할 수 있다. 따라서, 본 발명은 특히 간 재생을 촉진하거나 간세포 사멸을 감소 또는 예방하는데 사용하기 위한, 본 발명의 화합물과 하나 이상의 추가 치료제를 포함하는 조합에 관한 것이다. 본 발명의 조합 요법은 부가적으로 투여될 수 있다. 부가 투여는 별개의 약학적 조성물 또는 장치의 형태로 각 성분의 동시(coterminous) 또는 중복 투여를 의미한다. 2종 이상의 치료제의 이러한 치료적 투여 요법은 일반적으로 당업자에 의해 그리고 본원에서는 보조적 치료 투여로 지칭되며; 추가(add-on) 치료 투여로도 알려져 있다. 환자가 본 발명의 화합물 및 적어도 하나의 추가 치료제의 개별적이지만 동시적이거나 중복되는 치료 투여를 받는 임의의 모든 치료 요법은 본 발명의 범위 내에 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 부가적 치료 투여의 일 구체예에서, 환자는 일정 기간 동안 하나 이상의 성분의 치료 투여에 대해 전형적으로 안정화되고, 이어서 다른 성분의 투여를 받는다.
본 발명의 병용 요법은 또한 동시에 투여될 수 있다. 동시 투여는 개별 성분이 단일 약학적 조성물 또는 두 성분을 모두 포함하거나 함유하는 장치의 형태로, 또는 각각이 성분 중 하나를 포함하는 별개의 조성물 또는 장치로서 동시에 투여되는 치료 요법을 의미한다. 동시 조합을 위한 별도의 개별 구성요소의 이러한 조합은 부품 키트(kit-of-parts) 형태로 제공될 수 있다.
본 발명의 화합물과 조합하여 사용하기에 적합한 제제는 예를 들어 다음을 포함한다:
WO 2016/112305에 개시된 바와 같이, TOFA(5-(테트라데실옥시)-2-푸로산), 피르소코스타트(이전에는 GS 0976로 알려짐), PF-05221304 및 ACC 억제제와 같은 ACC 억제제,
안지오텐신 II 수용체 길항제,
에날라프릴과 같은 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제,
selonsertib(이전에는 GS-4997로 알려짐) 또는 SRT-015과 같은 ASK1(Apoptosis signal-regulating kinase 1, MAP3K5) 억제제,
엠리카산과 같은 카스파제 억제제,
혼합 카텝신 B/C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 억제제, VBY-376와 같은 카텝신 B 억제제,
CCR2 케모카인 길항제, 예를 들어 세니크리비록과 같은 혼합 CCR2/CCR5 케모카인 길항제,
CCR5 케모카인 길항제,
코비프로스톤과 같은 염화물 채널 자극제,
콜레스테롤 가용화제,
BI 1467335(이전에는 PXS-4728A로 알려짐)와 같은 구리 아민 산화효소 3(AOC3) 억제제
LCQ908 또는 GSK-3008356과 같은 디아실글리세롤 O-아실트랜스퍼라제 1(DGAT1) 억제제,
PF-06865571와 같은 디아실글리세롤 O-아실트랜스퍼라제 2(DGAT2) 억제제,
리나글립틴과 같은 디펩티딜 펩티다제 IV(DPPIV) 억제제,
INT-747(오베티콜산), 클리오펙소르(이전에는 GS-9674 또는 PX-102로 알려짐), 트로피펙소르(이전에는 LJN452로 알려짐), EDP-305 또는 LMB-763과 같은 파르네소이드 X 수용체(FXR) 작용제,
섬유아세포 성장 인자(FGF) 및 이의 유사체, 예컨대 FGF19의 지속성 유사체(예: 알다페르민, 이전에 NGM-282로 알려짐) 또는 지속성 FGF21 유사체(예: TEV-47948, Bio89-100 또는 ARK01이라고도 함 또는 PF-05231023라고 함)
INT-767과 같은 FXR/TGR5 이중 작용제,
GR-MD-02와 같은 갈렉틴-3 억제제,
리라글루티드 또는 엑세나티드와 같은 글루카곤 유사 펩티드 1(GLP1) 작용제,
코타두티드와 같은 글루카곤 유사 펩티드 1(GLP1) / 글루카곤 이중 작용제,
이중 포도당 의존성 인슐린 분비 촉진 폴리펩티드(GIP) 및 글루카곤 유사 펩티드-1(GLP-1) 수용체 작용제, 예컨대 tirzepatide(이전에는 LY3298176로 알려짐)
글루타티온 전구체,
C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 억제제, 예컨대 VBY-376와 같은 혼합 카텝신 B/C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 억제제,
HMG CoA 환원효소 억제제, 예컨대 아토르바스타틴과 같은 스타틴,
R05093151과 같은 11β-히드록시스테로이드 탈수소효소(11ß-HSD1) 억제제,
IL-1β 길항제,
IL-6 길항제, 예컨대 BLX-1002와 같은 혼합 IL-6/IL-1β/TNFα 리간드 억제제,
peg-ilodecakin과 같은 IL-10 작용제,
항-IL-11 항체 또는 IL-11 길항제
KD-025와 같은 IL-17 길항제,
볼릭시바트(이전에는 SHP-626으로 알려짐)와 같은 회장(ileal) 나트륨 담즙산 공동수송체 억제제,
선택적 αvβ1-억제제와 같은 인테그린 억제제(예: PLN-1474 또는 Wilkinson et al., Eur. J. Pharmacol., 842, 239-247 (2019)에서 리뷰한 것들),
PF-06835919와 같은 케토헥소키나제 억제제
메트렐렙틴과 같은 렙틴 유사체,
5-리폭시게나제 억제제, 예를 들어 티펠루카스트와 같은 혼합 5-리폭시게나제/PDE3/PDE4/PLC 억제제,
Alipogene tiparvovec과 같은 LPL 유전자 자극제,
리실 옥시다제 동족체 2(LOXL2) 억제제, 예를 들어 심투주맙(이전에는 GS-6624로 알려짐)과 같은 항-LOXL2 항체 또는 WO 2017/136870에 개시된 것과 같은 소분자 억제제,
MCC950과 같은 nod-like 수용체 패밀리 피린 도메인 함유 3(NLRP3) 인플라마좀 소분자 억제제,
오메가-3 다중불포화 지방산 및 이의 유도체, 예를 들어 아이코사부테이트 및 US 8,735,436 B2에 개시된 실시예,
25-히드록시콜레스테롤 3-설페이트 및 25-히드록시-콜레스테롤 3,25-디설페이트와 같은 옥시스테롤 설페이트,
ASP-9831과 같은 PDE4 억제제
PPARα 작용제, 예를 들어 혼합 PPARα/δ 작용제 엘라피브라노르(이전에는 GFT-505로 알려짐), 혼합 PPARα/γ/δ 작용제 라니피브라노르 또는 혼합 PPARα/γ 작용제 사로글리타자르),
피오글리타존과 같은 PPARγ 작용제,
셀라델파와 같은 PPARδ 작용제,
KD-025와 같은 Rho 관련 단백질 키나제 2(ROCK2) 억제제,
레모글리플로진 에타보네이트와 같은 소듐 포도당 수송체-2(SGLT2) 억제제,
리코글리플로진과 같은 소듐 포도당 수송체-1/2(SGLT1/2) 억제제
아람콜 또는 CVT-12805와 같은 스테아로일 CoA 불포화 효소(desaturase)-1 억제제,
MGL-3196 또는 VK2809와 같은 갑상선 호르몬 수용체 β 작용제,
종양 괴사 인자 α(TNFα) 리간드 억제제,
메르캅타민과 같은 트랜스글루타미나제 억제제 및 트랜스글루타미나제 억제제 전구체,
A119505, A220435, A321842, CPT633, ISIS-404173, JTT-551, MX-7014, MX-7091, MX-7102, NNC-521246, OTX-001, OTX-002, 또는 TTP814와 같은 PTPlb 억제제, 및 비활성 형태에서 칸나비노이드 1 수용체(CB1)를 안정화시키는 항체인 나마시주맙.
일부 구체예에서, 하나 이상의 추가 치료제는 아세틸살리실산, 알리포진 티파보벡, 아람콜, 아토르바스타틴, BLX-1002, 세니크리비록, 코비프로스톤, 콜레세벨람, 엠리카산, 에날라프릴, GFT-505, GR-MD-02, 히드로클로로티아지드, 이코사펜트 에틸 에스테르(에틸 에이코사펜타엔산), IMM-124E, KD-025, 리나글립틴, 리라글루타이드, 메르캅타민, MGL-3196, 오베티콜산, 올레속심, 페그-일로데카킨, 피오글리타존, GS-9674, 레모글리플로진 에타보네이트, SHP-626, 솔리트로마이신, 티펠루카스트, TRX-318, 우르소데옥시콜산 및 VBY-376로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 하나 이상의 추가 치료제 중 하나는 아세틸살리실산, 알리포진 티파르보벡, 아람콜, 아토르바스타틴, BLX-1002, 및 세니크리비록으로부터 선택된다.
일 구체예에서, 본 발명은
단백질 키나제 MKK4 억제,
단백질 키나제 JNK1 및 MKK7에 비해 단백질 키나제 MKK4를 선택적으로 억제하여 간 재생을 촉진하거나 간세포 사멸을 예방,
급성, 급만성 또는 만성 간 질환 치료,
급성 및 만성 또는 급만성 간 질환의 치료, 예컨대 B, C, E 형 간염과 같은 급성 및 만성 바이러스성 간염, Epstein-Barr 바이러스, 거대 세포 바이러스, 단순 포진 바이러스 및 기타 바이러스에 의한 간염, 모든 유형의 자가 면역 간염, 원발성 경화성 간염, 알코올성 간염의 치료;
대사성 간 질환의 치료, 예컨대 대사 증후군, 비알코올성 지방간과 같은 지방간(NAFL), 비알코올성 지방간염(NASH), 알코올성 지방간염(ASH), 모르버스 윌슨, 혈색소증, 알파1-항트립신 결핍증, 글리코겐 저장 질환의 치료;
모든 유형의 간경화 치료, 예컨대 원발성 담즙성 간경변, 에틸 독성 간경변, 잠복성 간경변의 치료;
급성(전격) 또는 만성 간부전 치료, 예컨대 아세트아미노펜(파라세타몰) 유도 간부전, 알파-아마니틴 유도 간부전, 약물 유발 간독성과 같은 독성 간부전 및 예를 들어 항생제, 비스테로이드성 항염증제, 항경련제에 의한 간부전, 한약재(카바, 마황, 스컬캡, 페니로얄 등)에 의한 급성 간부전, 버드-키아리 증후군과 같은 혈관질환으로 인한 간질환 및 부전, 원인 불명의 급성 간부전, 우심부전으로 인한 만성 간질환의 치료;
갈락토스혈증, 낭포성 섬유증, 포르피린증, 간 허혈 관류 손상, 간 이식 후 작은 이식편 증후군(small for size syndrome), 원발성 경화성 담관염 또는 간성 뇌병증 치료;
골관절염 또는 류마티스 관절염, 또는 CNS 관련 질환, 예컨대 알츠하이머병 및 파킨슨병의 치료
의 방법으로서, 상기 정의된 바와 같은 화합물 또는 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.
일 구체예에서, 본 발명의 화합물은 치료되는 개체의 0.2 내지 15 mg/kg 또는 0.5 내지 12 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 상기 화합물은 하루에 한 번 또는 여러 번 투여될 수 있다. 상기 화합물은 4주에서 12주에 걸쳐 투여된다.
하기 실시예는 본 발명을 제한없이 예시한다.
실 시 예
약어:
Boc2O di-tert--부틸옥시카보네이트
CPME 시클로펜틸메틸 에테르
DCM 디클로로메탄
4-DMAP 4-디메틸아미노피리딘
DME 디메틸 에테르
DMF 디메틸포름아미드
DMSO 디메틸설폭사이드
EtOAc 에틸 아세테이트
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
KOH 수산화칼륨
LDA 리튬 디이소프로필아미드
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
NaHCO3 중탄산나트륨
NH4Cl 염화암모늄
Na2SO4 황산나트륨
O/N 밤새 (over night)
PdCl2(PPh3)2 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드
Pd(dppf)Cl2 DCM 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센 디클로로팔라듐(II), DCM과 착물
Pd2(dba3) 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)
pTSA 파라-톨루엔설폰산
PE 페트로에테르
RT 실온
TEA 트리에틸아민
THF 테트라히드로푸란
TLC 박막 크로마토그래피
Xantphos 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐
실시예 1: N-(3-(5-(2-시클로프로필피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로페닐)-1-페닐메탄술폰아미드의 합성
Figure pct00009
단계 1-1: 5-브로모-3-요오도-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘 (II)
DMF(45mL) 중 5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘((I), 6.81g, 34.4mmol) 및 수산화칼륨(KOH, 6.75g, 120.4mmol)의 교반된 혼합물에 실온에서 요오드(9.60g, 37.8mmol)를 한번에 첨가하였다. 짧은 유도 기간 후에 발열 반응이 시작되었다. 1시간 후, 요오드 1g을 추가로 첨가하고, 혼합물을 45℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 Na2SO3의 묽은 용액 300mL에 붓고 2N HCl로 산성화하였다. 고체를 흡입 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 110℃의 오븐에서 건조시켰다. 수율: 10.92g,
분석 데이터:
HPLC 순도: 95%,
1H NMR (200 MHz, DMSO) δ 14.29 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.17 (s, 1H); 13C NMR (50 MHz, DMSO) δ 150.53, 150.17, 131.86, 120.58, 112.43, 91.95;
MS(ESI-): m/z 322.0 / 324.0 [M-H]-.
단계 1-2: 5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르복실산 (III)
5-브로모-3-요오도-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘((II), 10.44g, 32.2mmol)을 DMF, MeOH 및 트리에틸아민(TEA, 각각 75mL)과 합하였다. 용기를 비우고 아르곤으로 플러싱했다(4x). XantPhos(1.12g, 1.93mmol) 및 Pd(OAc)2 (217mg, 0.97mmol)를 첨가하고 60℃로 가열하면서 용액을 통해 일산화탄소(포름산 및 황산으로부터 생성됨)를 버블링시켰다. 혼합물을 일산화탄소(풍선) 분위기 하에 8시간 동안 교반하였다. 1.5시간마다 일산화탄소를 용액을 통해 5분 동안 버블링했다. 혼합물을 감압 하에 농축하고 잔류물을 2N HCl로 연화처리(triturate)하였다. 고체를 밤새(O/N) 약 100mL 1N NaOH에서 95℃에서 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 진한 HCl 용액으로 산성화하고 침전물을 흡인 여과에 의해 수집하고 물로 세척하였다. 고체를 110℃의 오븐에서 일정한 질량으로 건조시켰다. 고체를 100mL의 톨루엔에서 5분 동안 초음파 처리하고 30분 동안 교반했다. 생성물을 여과하고, 추가 20mL의 톨루엔으로 세척하고, 110℃에서 건조시켰다. 수율: 7.92g.
분석 데이터:
HPLC 순도: > 99%,
1H NMR (200 MHz, DMSO) δ 8.64 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.69 (bs, 1H); 13C NMR (50 MHz, DMSO) δ 163.27, 150.97, 149.67, 136.69, 132.65, 115.73, 113.6;
MS(ESI-): m/z 239.9 / 241.9 [M-H]-.
단계 1-3: 5-브로모-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르복사미드 (IV)
5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르복실산((III), 7.91g, 32.7mmol) 및 1,1'-카르보닐디이미다졸(5.83g, 35.9mmol)을 45분 동안 60℃에서 DMF 200mL 중에서 교반하였다. 생성된 현탁액에 N,O-디메틸히드록실아민 염산염(3.51g, 35.9mmol)을 첨가하고 혼합물을 65℃에서 4시간 동안 교반하였다. 대부분의 용매는 진공 하에 제거되었고 나머지 반에 포화 NaHCO3-용액을 첨가하였다. 고체를 흡입 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 110℃에서 건조시켰다. 수율: 7.94g,
분석 데이터:
HPLC 순도: 96%,
1H NMR (200 MHz, DMSO) δ 14.46 (s, 1H), 8.62 (d, J = 20.4 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.44 (s, 3H),
MS(ESI-): m/z 283.0 / 285.0 [M-H]-
단계 1-4: (3-아미노-2,6-디플루오로페닐)(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-일)메탄온 (V)의 합성
2,4-디플루오로아닐린(6.25g, 48.4mmol)을 50mL 건조 THF에 용해시키고 아르곤 분위기 하에 -78℃로 냉각시켰다. 헥산 중 2.5M n-부틸리튬(19.4mL, 48.4mmol)을 적가하였다. 15분 후, 15mL 건조 THF 중 1,2-비스(클로로디메틸실릴)에탄(10.9g, 49.5mmol)을 적가하고 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 헥산 중 2.5M n-부틸리튬(19.4mL, 48.4mmol)을 적가하고 혼합물을 1시간 이내에 실온에 도달하도록 하였다. -78℃로 냉각시킨 후, 헥산 중 2.5M n-부틸리튬(19.4mL, 48.4mmol)을 적가하고 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. (= 용액 A).
5-브로모-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르복사미드((IV), 6.00g, 21.1mmol)를 50mL 건조 THF에 현탁시키고 아르곤 분위기에서 0℃로 냉각시켰다. NaH(광유 중 60%, 0.88g, 22.1mmol)를 조금씩 첨가하고 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. (= 용액 B).
용액 B를 -78℃에서 용액 A에 적가하였다. 첨가를 완료한 후, 혼합물을 30분 이내에 실온으로 가온하였다. 12mL 농축 HCl을 조심스럽게 첨가하고 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 고체 NaHCO3를 첨가하여 용액을 중화시키고, 고체를 여과하고 THF로 세척하였다. 여액을 증발시키고 잔류물을 MeOH 및 물로 연화처리하고 110℃에서 건조시켰다. 수율: 4.03g;
분석 데이터:
HPLC 순도: 97%,
1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 14.91 (s, 1H), 8.77 (dd, J = 5.4, 2.1 Hz, 2H), 7.18 - 6.59 (m, 2H), 5.25 (s, 2H); 13C NMR (50 MHz, DMSO) δ 183.95, 151.04, 150.79, 150.27 (dd, J = 161.0, 6.8 Hz), 145.50 (dd, J = 167.3, 6.8 Hz), 141.34, 133.35 (dd, J = 12.8, 2.6 Hz), 132.28, 117.45 (dd, J = 8.4, 6.5 Hz), 116.24 (dd, J = 22.7, 19.1 Hz), 115.55, 114.81, 111.26 (dd, J = 21.7, 3.5 Hz); MS(ESI-): m/z 351.1 / 353.1 [M-H]-.
단계 1-5: N-(3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (VI)
(3-아미노-2,6-디플루오로페닐)-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-일)메탄온(579 mg, 1.64 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(4-DMAP, 0.401g, 3.28mmol)을 가열하면서 피리딘(3.31mL, 41.0mmol)에 용해시켰다. -10℃로 냉각시킨 후, 페닐메탄설포닐 클로라이드(406mg, 2.13mmol)를 형성된 현탁액에 첨가하였다. 혼합물을 -10℃에서 10분 동안, 실온에서 추가로 10분 동안 교반한 다음, 50℃로 가온하고 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 2N NaOH(2.46mL, 4.92mmol)로 재구성하고 실온에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 교반하면서 2N HCl 25mL에 천천히 첨가하였다. 10분 후, 형성된 고체를 흡인 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 75℃에서 건조시켰다(0.590g, 1.16mmol, 71% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 14.22 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.79 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.52 - 7.25 (m, 6H), 6.87 (td, J = 9.1, 1.6 Hz, 1H), 4.32 (s, 2H);
MS(ESI-): m/z 504.7 [M-1]-.
단계 1-6: N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,4-디플루오로페닐]-1-페닐메탄술폰아미드 (Ⅶ)
N-[3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로페닐]-1-페닐메탄술폰아미드(0.419g, 0.826mmol), p-톨루엔설폰산(p-TSA) 일수화물(15.7mg, 0.0826mmol) 및 디히드로피란(0.0904mL, 0.991mmol)을 4.13ml DCM에 용해시키고 1.5시간 동안 환류시켰다. 냉각 후, 혼합물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3-용액으로 세척하고, 건조 및 여과하였다. n-헵탄을 첨가하고 DCM을 제거하였다. 빙욕에서 냉각시킨 후, 생성물을 흡인 여과에 의해 수집하였다(0.393g, 0.6650mmol, 80% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 8.88 (d, J=1.8 Hz,1H), 8.68 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.62 (td, J = 9.0, 5.6 Hz, 1H), 7.34 (s, 5H), 6.96 (t, J=8.1 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.14 (dd, J=9.8, 2.0 Hz, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.03 (d, J=11.1 Hz, 1H), 3.90 - 3.56 (m, 1H), 2.56 - 2.36 (m, 1H), 2.09 - 1.46 (m, 5H);
MS(ESI-): m/z 591.3 / 589.4 [M-H]-.
단계 1-7: N-[2,4-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]-1-페닐메탄술폰아미드 (VIII)
용기에 N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,4-디플루오로페닐]-1-페닐메탄술폰아미드(0.365g, 0.617mmol), 비스(피나콜라토)디붕소(0.313g, 1.23mmol), 아세트산칼륨(0.182g, 1.85mmol) 및 DMF(3.09mL)를 채웠다. 혼합물을 90℃로 가열하고 용기를 비우고 아르곤으로 채웠다(3x). 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드(PdCl2(PPh)3)2, 4.33 mg, 0.00617 mmol)을 첨가하고 반응물을 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 반응물을 농축하고, EtOAc에 넣고, 물, 반포화 염수 및 염수로 세척하고, 건조 및 여과하였다. 여액에 활성탄을 넣고 혼합물을 15분간 환류하였다. 냉각 후, 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고 용매를 제거하였다. 잔류물을 소량의 DCM에 넣고, n-헵탄을 첨가하고, DCM을 감압하에 제거하였다. 고체를 흡인 여과에 의해 수집하고 n-헥산으로 세척하고 생성물을 회백색 고체로서 건조시키고(0.298g, 0.4670mmol, 76% 수율), 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
분석 데이터:
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 9.16 (s,1H), 8.97 (s, 1H), 7.63 (td, J = 9.1, 5.7 Hz, 1H), 7.34 (s, 5H), 6.96 (t, J=8.6 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.23 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.12 - 3.94 (m, 1H), 3.80 (t, J=9.9 Hz, 1H), 2.60 - 2.31 (m, 1H), 2.09 - 1.55 (m, 5H), 1.39 (s, 12H).
단계 1-8: N-(3-(5-(2-시클로프로필피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로페닐)-1-페닐메탄술폰아미드 (IX)
용기를 N-[2,4-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]-1-페닐메탄술폰아미드(0.275g, 0.431mmol), 5-브로모-2-시클로프로필피리미딘(0.111g, 0.560mmol), PdCl2(PPh)3)2 (3.02mg, 0.00431mmol) 및 1,4-디옥산(1.44mL)으로 채웠다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채웠다. 탈기된 3M 수성 K2CO3 (0.431mL, 1.29mmol)를 첨가하고 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 반응물을 EtOAc로 희석하고 NH4Cl 용액으로 중화시켰다. 유기상을 건조시키고, 증발시키고, 주요 생성물을 플래쉬 크로마토그래피(DCM/EtOAc, 10 내지 50%)로 단리하였다. THP 보호기를 제거하기 위해 단리된 생성물을 2.5N HCl(3mL)에서 1시간 동안 환류시켰다.
분석 데이터:
1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 15.01 (s, 1H), 9.86 (s,1H), 9.12 (s, 2H), 9.08 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.90 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.60 - 7.16 (m, 7H), 4.54 (s, 2H), 2.39 - 2.19 (m, 1H), 1.27 - 1.04 (m, 4H).
MS(ESI-): m/z 545.5 [M-H]-.
실시예 2: N-(3-(5-(4-클로로페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)메탄술폰아미드의 합성
Figure pct00010
단계 2-1: N-[3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐]메탄-술폰아미드
(3-아미노-2,4-디플루오로페닐)(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-일)메탄온 (1.29g, 3.65mmol)을 18ml THF 및 5.09ml TEA에 용해시켰다(36.5mmol, 10당량). 혼합물을 가온하여 완전한 용해를 달성하였다. 그 다음, 용액을 0℃로 냉각시킨 다음 메실클로라이드 0.99 ml(12.8 mmol, 3.5 당량)을 가하였다. 10분 후, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 2N KOH 12ml를 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 3N HCl로 산성화한 후, THF를 감압하에 제거하고, 고체를 흡인 여과에 의해 수집하고, 3N HCl/MeOH(1+1)로 세척하고, 건조시켰다(1.46g, 93%).
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.87 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 8.71 (d, J=13.9 Hz, 2H), 7.85 (d, J=6.6 Hz, 1H), 7.39 (t, J=8.5 Hz, 1H), 3.12 (s, 3H).
MS(ESI-): m/z 431.1 / 429.1 [M-H]-, 411.1 / 409.1 [M-H-HF]-.
단계 2-2: N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]메탄술폰아미드
16.8mL DCM 중 디히드로피란 (0.614 mL, 6.73 mmol) 및 N-[3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐]메탄술폰아미드(1.45 g, 3.36mmol)의 현탁액에 p-TSA 일수화물(64.0mg, 0.336mmol)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 소량의 아세톤에 취하고 교반하면서 디에틸 에테르로 옮겼다. 생성물을 흡인 여과에 의해 수집하고 디에틸 에테르로 세척하여 생성물을 백색 분말로서 수득하였다(1.07g, 2.08mmol, 62% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 9.78 (s, 1H), 8.80 (dd, J=13.4, 1.6 Hz, 2H), 7.88 (dd, J=14.6, 7.8 Hz, 1H), 7.43 (t, J=9.0 Hz, 1H), 6.14 (d, J=8.6 Hz, 1H), 3.94 (d, J=11.6 Hz, 1H), 3.72 (dd, J=14.6, 9.1 Hz, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.46-2.19 (m, 1H), 2.00-1.18 (m, 5H);
MS(ESI-): m/z 515.2 / 513.2 [M-H]-.
단계 2-3: N-[3-[5-(4-클로로페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]메탄술폰아미드
용기에 N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]메탄술폰아미드 (119 mg, 0.231mmol), (4-클로로페닐)보론산(36.1mg, 0.231mmol), PdCl2(PPh)3)2 (3.24mg, 0.00462mmol)을 넣고 아르곤으로 퍼징하였다. 탈기된 1,4-디옥산(0.770mL) 및 탈기된 불화칼륨 (95.7mg, 0.693mmol)을 첨가하고 반응물을 60℃에서 15분 동안 교반하였다. 냉각 후, EtOAc 및 NH4Cl 용액을 첨가하고 수상을 버렸다. 유기상을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 EtOH 중 2.5N HCl(3mL)에 녹이고 60℃ O/N에서 교반하였다. 3 ml의 이소프로판올을 첨가하고, 원심분리에 의해 고체를 수집하고, 용매를 버렸다. 고체를 THF/NaHCO3-용액에 취하고 진탕하였다. 유기상을 건조시키고, 용매를 증발시키고, 잔류물을 DCM으로 연화처리하였다(수율: 44.0 mg, 0.0941 mmol, 41%).
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.82 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 9.00 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.90 - 7.81 (m, 3H), 7.61 - 7.57 (m, 2H), 7.40 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.11 (s, 3H);
계산된 정확한 질량: 462.04, MS(ESI-): m/z: 461.0 [M-1]-.
실시예 3: N-(3-(5-(4-클로로페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)에탄술폰아미드의 합성
실시예 2와 유사하게, N-(3-(5-(4-클로로페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)에탄술폰아미드를 제조하였다.
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.76 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 13.4, 8.4 Hz, 3H), 7.60 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.38 (t, J=8.6 Hz, 1H), 3.17 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.32 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
계산된 정확한 질량: 476.05, MS(ESI-): m/z: 474.9 [M-1]-.
실시예 4: 에틸 4-(3-(2,4-디플루오로-3-(메틸술폰아미도)벤조일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일)벤조에이트의 합성
Figure pct00011
단계 4-1: 4-[3-[2,4-디플루오로-3-(메탄술폰아미도)벤조일]-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일]벤조산
N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]메탄술폰아미드 ((I), 355 mg, 0.689 mmol) 및 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조산 (188 mg, 0.758 mmol) XPhos Pd G3((2-디시클로-헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄술포네이트, Aldrich로부터 상업적으로 입수가능, 17.5 mg, 0.0207 mmol)을 탈기된 1,4-디옥산(2.30mL) 및 1.5M 탄산칼륨(2.07mL, 3.10mmol)과 합하였다. 반응물을 비우고 아르곤(3x)으로 플러싱했다. XPhos Pd G3(17.5 mg, 0.0207 mmol)을 첨가하고 반응물을 60℃(유욕 온도)에서 3시간 동안 교반하였다. 냉각 후 혼합물을 2N HCl로 산성화하고 EtOAc로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨(Na2SO4) 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM + MeOH 3%에서 25%로)로 정제하고 n-헥산(276 mg, 0.4960 mmol, 72% 수율)으로 연화처리했다.
단계 4-2: 에틸 5-(3-(2,4-디플루오르-3-(메틸술폰아미도)벤조일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일)벤조에이트
50mg(II)(0.09mmol)을 300㎕ H2SO4 및 800㎕ EtOH의 혼합물에 용해시키고 75℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 이를 수성 NaHCO3에 붓고, 침전물을 원심분리에 의해 수집하고, 물 및 디에틸에테르(22 mg, 46%, 화학적 순도(HPLC/UV): 95%)로 세척하였다.
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 14.86 (s, 1H), 9.76 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.10 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 8.04 - 7.94 (m, 2H), 7.87 (dd, J = 14.5, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.35 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.11 (s, 3H), 1.35 (t, J = 7.1 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 500.10, MS(ESI-): m/z: 499.4 [M-1]-.
실시예 5: 메틸 5-(3-(2,4-디플루오로-3-(메틸술폰아미도)벤조일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일)피콜리네이트의 합성
Figure pct00012
단계 5-1: N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-)일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]메탄술폰아미드
용기에 N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]메탄술폰아미드 ((I) , 0.630g, 1.22mmol), 비스(피나콜라토)디보론 (341mg, 1.34mmol), 무수 아세트산칼륨 (360mg, 3.67mmol) 및 무수 1,4-디옥산(4.08mL)을 채웠다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채웠다. 1,1'-비스(디페닐포스피노)-페로센-디클로로팔라듐(DCM과 1:1 착물)(Pd(dppf)Cl2,17.9 mg, 0.0245 mmol)을 첨가하고 반응물을 80℃ O/N에서 교반하였다. 냉각 후, EtOAc를 첨가하고, 현탁액을 30분 동안 교반하고 셀라이트 상에서 여과하였다. 용매를 농축하고, n-헵탄을 첨가하고, 고체를 흡인 여과로 수집하고, 헥산으로 세척하고 건조시켰다(0.690g, 1.23mmol, 100% 수율).
단계 5-2: 메틸 5-(3-(2,4-디플루오로-3-(메틸술폰아미도)벤조일)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b] 피리딘-5-일)피콜리네이트
용기에 N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]메탄술폰아미드 ((II), 116 mg, 0.206 mmol), 메틸 5-브로모피리딘-2-카르복실레이트 (49.0 mg, 0.227 mmol), 불화칼륨(36.0 mg, 0.619 mmol), Pd(dppf)Cl2 DCM(8.42 mg, 0.0103 mmol) 및 탈기된 1,4-디옥산/물(4+1)(0.6 mL)로 채우고 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채웠다. 혼합물을 50℃에서 O/N 교반한 다음, EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하고, 용매를 제거하였다. 생성물을 플래시 크로마토그래피(DCM + EtOAc 0% 내지 20%)를 통해 단리하였다; 81.0 mg 백색 고체(0.1420 mmol, 69% 수율).
단계 5-3: 메틸 5-(3-(2,4-디플루오로-3-(메틸술폰아미도)벤조일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일)피콜리네이트
메탄올(0.525mL) 중 메틸 5-[3-[2,4-디플루오로-3-(메탄술폰아미도)벤조일]-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일]피리딘-2-카르복실레이트((III), 60.0mg, 0.105mmol) 용액에 메탄설폰산(0.0273mL, 0.420mmol)을 첨가하고 혼합물을 65℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 디에틸 에테르(15mL)에 천천히 첨가하였다. 고체를 흡인 여과에 의해 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 진공에서 건조시켰다; 36.0mg의 백색 고체(0.0739mmol, 70% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 14.90 (s, 1H), 9.74 (s, 1H), 9.16 (dd, J = 12.4, 1.9 Hz,2H), 8.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.47 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 14.8, 7.7 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.12 (s, 3H);
계산된 정확한 질량: 487.08; MS(ESI+): m/z: 510.4 [M+Na+]+.
실시예 6: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00013
단계 6-1: N-[3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드
THF(614mL) 중 (3-아미노-2,4-디플루오로페닐)-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-일)메탄온 ((I), 65.0 g, 184 mmol) 및 TEA(282mL, 2020mmol)의 현탁액에, 1-프로판설포닐 클로라이드(68.4mL, 607mmol) 및 DCM의 1:1(v/v) 혼합물을 -5 ℃ 이하 미만의 온도를 유지하면서 -10℃에서 적가하였다. 첨가를 완료한 후, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 2N NaOH(736mL, 1470mmol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 추가로 30분 동안 교반하였다. THF 및 TEA를 감압 하에 45℃에서 혼합물로부터 증발시켰다. 용액을 20℃로 냉각시키고 소용돌이(진탕 없음)로 하면서 EtOAc(4x300mL)로 조심스럽게 세척하였다. 잔류 EtOAc를 감압하에 제거하고 용액을 3N HCl(736mL, 2210mmol)에 효율적으로 교반하면서 천천히 첨가하였다. 고체를 흡입 여과로 수집하고, 다량의 물로 세척하고, 100℃에서 건조시켜 N-[3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-설폰아미드(73.9g, 161mmol, 87% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다.
단계 6-2: N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드
DCM(440mL) 중 (II)(70.7g, 154mmol)의 현탁액에 p-TSA 일수화물(2.93g, 15.4mmol) 및 디히드로피란(15.5mL, 169mmol)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 환류시켰다. 냉각 후, 혼합물을 200mL DCM으로 희석하고 포화 NaHCO3 용액 및 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조하고 증발시켰다. 유성 잔류물을 따뜻한(45℃) MeOH(150mL)에 취하고, 이전 합성으로부터의 시딩 결정을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 침전이 관찰된 후, 혼합물을 차가운 MeOH로 희석하고, 현탁액을 2시간 동안 -20℃로 냉각시키고, 고체를 흡인 여과에 의해 수집하고 -20℃에서 50mL MeOH로 세척하였다. 생성물을 진공 오븐에서 50℃에서 건조시켜 N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드를 수득하였다 (73.4g, 135mmol, 88% 수율).
단계 6-3: N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-)일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드
용기를 N-[3-[5-브로모-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드((III), 4.74g, 8.72mmol), 비스(피나콜라토)디붕소(4.65g, 18.3mmol) 및 무수 아세트산칼륨(2.57g, 26.2mmol)으로 채웠다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채웠다. 건조 DMF(29.1mL)를 첨가하고 혼합물을 90℃로 가열하였다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 다시 채웠다. 아르곤 기류 하에 PdCl2(PPh3)2 (30.6 mg, 0.0436 mmol)를 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 반응물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 약 10분 동안 약 50 ml의 EtOAc에 취하고 물, 반포화 NaCl 용액 및 염수로 세척하였다. 건조 후, 추출물을 여과하고, 활성탄을 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 환류 온도로 가열하였다. 냉각 후, 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고, n-헵탄(50 mL)을 여액에 첨가하고, 용매를 제거하였다. 고체를 n-헥산(100mL)에서 30분 동안 교반하고 생성물을 흡인 여과에 의해 수집하였다. 건조 후 N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드 (4.37 g, 7.4 mmol, 85% 수율)를 무색 고체로서 얻었다.
단계 6-4: N-[2,6-디플루오로-3-(5-피리미딘-5-일-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐]프로판-1-술폰아미드
용기에 N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-)일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-설폰아미드((IV), 120mg, 0.203mmol), 5-브로모피리미딘(35.5mg, 0.224mmol), 불화칼륨(35.4) mg, 0.610mmol), PdCl2(PPh3)2(3.32mg, 0.00406mmol) 및 탈기된 1,4-디옥산/물(0.5mL, (4+1))를 채웠다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채우고 2시간 동안 60℃로 가열했다. 반응물을 농축 HCl(0.3mL)액으로 산성화시키고, MeOH(0.2mL)로 희석하고 60℃ O/N으로 가열하였다. 또 다른 0.3mL 농축 HCl을 첨가하고 4시간 동안 계속 교반하였다. 냉각 후, 혼합물을 물로 희석하고, NaHCO3 용액으로 중화하고, THF로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조하고 증발시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM/MeOH, 2% 내지 8%)로 정제하고 아세톤으로 연화처리하여 N-[2,6-디플루오로-3-(5-피리미딘-5-일-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐]프로판-1-술폰아미드 (35.0 mg, 0.0741 mmol, 36% 수율)을 수득하였다.
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.87(s, 1H), 9.71 (s, 1H), 9.28 (d, J = 10.4 Hz, 3H), 9.10 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.94 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 14.7, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 3.20 - 3.07 (m, 2H), 1.89 - 1.71 (m, 2H), 0.99 (t, J = 7.4 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 458.10 for C20H16F2N6O3S (molecular weight: 458.44);
MS(ESI-): m/z: 456.9 [M-1]-.
실시예 7: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(2-메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00014
용기에 N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드(120mg, 0.203mmol), 5-브로모-2-메틸피리미딘(38.7mg, 0.224mmol), 불화칼륨(35.4) mg, 0.610mmol), Pd(dppf)Cl2·DCM(3.32mg, 0.00406mmol) 및 탈기된 1,4-디옥산/물(0.5mL, (4+1))을 채웠다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채우고 2시간 동안 60℃로 가열했다. 혼합물을 농축 HCl(0.3mL)로 산성화하고, MeOH(0.2mL)로 희석하고 60℃ O/N으로 가열했다. 또 다른 0.3mL 농축 HCl을 첨가하고 교반을 3시간 동안 계속하였다. 냉각 후, 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 유기상을 증발시키고 생성물을 플래시 크로마토그래피로 정제하였다.
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.82 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 9.16 (s, 2H), 9.06 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.89 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 14.6, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.15 (dd, J = 8.7, 6.5 Hz, 2H), 2.70 (s, 3H), 1.81 (dq, J = 14.9, 7.4 Hz, 2H), 0.99 (t, J = 7.5 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 472.11 for C21H18F2N6O3S (molecular weight: 472.47);
MS(ESI-): m/z: 471.0 [M-1]-
실시예 8: 5-(3-(2,4-디플루오로-3-(프로필술폰아미도)벤조일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일)피리미딘-2-카르복실산의 합성
Figure pct00015
단계 8-1: 메틸 5-(3-(2,4-디플루오로-3-(프로필술폰아미도)벤조일)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일)피리미딘-2-카르복실레이트
용기에 N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드 ((I), 134 mg, 0.227 mmol), 메틸 5-브로모피리미딘-2-카르복실레이트(54.2 mg, 0.250 mmol) , 불화칼륨(39.6mg, 0.681mmol), Pd(dppf)Cl2 DCM(3.71mg, 0.00454mmol) 및 탈기된 1,4-디옥산/물(0.5mL, (4+1))을 채웠다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채우고 2시간 동안 60℃로 가열했다. NH4Cl 용액 및 EtOAc를 첨가하고 혼합물을 셀라이트 상에서 증발시켰다. 생성물을 플래시 크로마토그래피(DCM/EtOAc, 30% 내지 100%)로 단리하였다; 121mg 고체(0.2010mmol, 89% 수율).
단계 8-2: 5-(3-(2,4-디플루오로-3-(프로필술폰아미도)벤조일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일)피리미딘-2-카르복실산
메틸 5-[3-[2,4-디플루오로-3-(프로필술포닐아미노)벤조일]-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일]피리미딘-2-카르복실레이트 ((II), 87.0 mg, 0.1640mmol, 82% 수율)을 EtOH 중 3mL 2.5M HCl에 취하고 1시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공에서 제거하고 잔류물을 2mL MeOH 및 2mL 2N NaOH에 취하고 1시간 동안 환류시켰다. 냉각 후, 혼합물을 1N HCl을 사용하여 pH 3으로 산성화하고, 염수를 첨가하고, 혼합물을 THF 및 THF/EtOAc(1:1)로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고(일부 1N HCl로 산성화됨), Na2SO4로 건조시키고 여과하였다. 용매를 제거하여 5-[3-[2,4-디플루오로-3-(프로필술포닐아미노)벤조일]-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일]피리미딘-2-카르복실산 (87.0 mg, 0.1640mmol, 82% 수율)를 산출했다.
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.94 (s, 1H), 9.68 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 9.45 (s, 2H), 9.16 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.04 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 14.5, 7.9 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 3.15 (dd, J = 8.7, 6.6 Hz, 3H), 1.87 - 1.77 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 502.09 for C21H16F2N6O5S (molecular weight: 502.45);
MS(ESI-): m/z: 501.0 [M-1]-
실시예 9: N-(3-(5-(2-시아노피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00016
단계 9-1: N-[3-[5-(2-시아노피리미딘-5-일)-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6 -디플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드
용기에 N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드 ((I), 398 mg, 0.674 mmol), 5-브로모피리미딘-2-카르보니트릴 (136 mg, 0.741 mmol), 불화칼륨(117mg, 2.02mmol), PdCl2(PPh3)2 (11.8mg, 0.0169mmol) 및 탈기된 디옥산/물(4+1, 2.5mL)를 채웠다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채우고 2시간 동안 60℃로 가열했다. 냉각 후, 반응 혼합물을 NH4Cl 용액으로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조하고 증발시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM/EtOAc, 5% 내지 30%)로 정제하여 N-[3-[5-(2-시아노피리미딘-5-일)-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드 (270 mg, 0.4760 mmol, 71% 수율)를 산출했다.
단계 9-2: N-[3-[5-(2-시아노피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드
N-[3-[5-(2-시아노피리미딘-5-일)-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-설폰아미드((II), 50.0 mg, 0.0881 mmol)를 1 mL TFA 중 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 물에 취하고, 1N NaOH를 사용하여 pH를 4로 조정하였다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 증발시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르로 연화처리하여 N-[3-[5-(2-시아노피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-설폰아미드를 수득하였다(27.0mg, 0.0542mmol, 61% 수율).
분석 데이터:
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.98 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 9.55 (s, 2H), 9.31 (s, 1H), 9.17 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 14.5, 7.8 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 1.86 - 1.74 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 483.09 for C21H15F2N7O3S (molecular weight: 483.45);
MS(ESI-): m/z: 482.0 [M-1]-.
실시예 10: N-(3-(5-(2-(1H-테트라졸-5-일)피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00017
다음으로부터 수정: Vorona, S., et al. (Synthesis-Stuttgart 46(6): 781-786 (2014)), N-[3-[5-(2-시아노피리미딘-5-일)-1-(옥산-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]-프로판-1-술폰아미드(75.0mg, 0.132mmol), 브롬화아연(29.8mg, 0.132mmol) 및 아지드화나트륨(9.45mg, 0.145mmol)을 2시간 동안 1-프로판올(0.661mL) 중에서 95℃까지 가열하였다. 반응물을 냉각시키고, 0.25N NaOH(2.64mL, 0.661mmol)를 첨가하고, n-프로판올을 감압 하에 제거하고, 현탁액을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 필터를 0.25N NaOH(2.64mL, 0.661mmol)로 세척하였다. 여액을 2N HCl로 산성화하고 EtOAc로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조하고 증발시켰다. 잔류물을 EtOH(2 mL) 중 2.5N HCl에 취하고 2시간 동안 70℃로 가열하였다. 반응물을 농축하고, 디에틸 에테르로 희석하고, 고체를 흡인 여과에 의해 수집하여 N-[2,6-디플루오로-3-[5-[2-(1H-테트라졸-5-일)피리미딘-5-일)]-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드 염산염을 수득하였다(44.0 mg, 0.0782 mmol, 59% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.96 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 9.57 (s, 2H), 9.22 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 14.8, 7.6 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 3.21 - 3.09 (m, 2H), 1.89 - 1.72 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 526.11 for C21H16F2N10O3S (분자량: 526.48);
MS(ESI-): m/z: 525.0 [M-1]-.
실시예 11: N-(3-(5-(2-시클로프로필피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00018
용기에 N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-설폰아미드(176mg, 0.298mmol), 5-브로모-2-시클로프로필피리미딘(65.3mg, 0.328mmol), 불화칼륨(52.0) mg, 0.894mmol), PdCl2(PPh3)2 (4.18mg, 0.00596mmol) 및 탈기된 1,4-디옥산/물(1mL, (4+1))을 채웠다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채우고 2시간 동안 60℃로 가열했다. 냉각 후, 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 및 EtOAc으로 분할시키고, 유기상을 Na2SO4로 건조시키고 증발시켰다. 주요 생성물을 플래시 크로마토그래피(DCM/EtOAc, 20% 내지 80%)로 단리하고 EtOH 중 2mL 2.5N HCl에 취하고 2시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 농축하고, 고체를 EtOAc로 연화처리하여 N-[3-[5-(2-시클로프로필피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드 염산염을 수득했다(55.0 mg, 0.1030 mmol, 34% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 14.90 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 9.11 (s, 2H), 9.04 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 14.9, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 3.20 - 3.10 (m, 2H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 1.86 - 1.74 (m, 2H), 1.16 - 1.04 (m, 4H), 0.99 (t, J = 7.5 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 498.13; for C23H20F2N6O3S (분자량: 498.51);
MS(ESI-): m/z: 497.0 [M-1]-.
실시예 12: N-(3-(5-(2-클로로피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00019
용기에 N-[2,6-디플루오로-3-[1-(옥산-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드(120mg, 0.203mmol), 5-브로모-2-클로로피리미딘(43.2mg, 0.224mmol), 불화칼륨(35.4) mg, 0.610mmol), Pd(dppf)Cl2 DCM(3.32mg, 0.00406mmol) 및 탈기된 1,4-디옥산/물(0.5mL, (4+1))을 충전했다. 용기를 비우고 아르곤(3x)으로 채우고 2시간 동안 60℃로 가열했다. 냉각 후, 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 및 EtOAc으로 분할하고, 유기상을 Na2SO4로 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 1mL DCM 및 1mL TFA에 취하고 O/N 교반하였다. 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하고, 추출물을 NH4Cl 용액으로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 증발시켰다. 생성물을 플래쉬 크로마토그래피(용매: MeOH; DCM/EtOAc, 용매 시스템으로서 20% 내지 80% 사용, 생성물은 컬럼으로부터 용리되지 않음)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 증발 건조시키고 잔류물을 톨루엔 및 MeOH로 연화처리하였다. HPLC는 87%의 순도만을 나타냈다. 고체를 DCM, MeCN 및 디에틸 에테르로 세척하고 건조시켰다(33.0 mg, 0.0596 mmol, 29% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.92 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.28 (s, 2H), 9.09 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 14.9, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.22 - 3.10 (m, 2H), 1.86 - 1.74 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 492.06 for C20H15ClF2N6O3S (분자량: 492.89);
MS(ESI-): m/z: 490.9 [M-1]-.
실시예 13: N-(3-(5-(4-클로로페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4,6-트리플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00020
단계 13-1: (3-아미노-2,4,6-트리플루오로페닐)-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-일)메탄온
THF(5.82mL) 중 2,4,6-트리플루오로아닐린(941mg, 6.40mmol) 및 클로로트리메틸실란(1.62mL, 12.8mmol)의 용액을 -78℃로 냉각하고 THF/헵탄/에틸벤젠 중 2M 리튬 디이소프로필아미드(6.40mL, 12.8mmol)를 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고 30분 동안 교반하였다. 5-브로모-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르복사미드 (829 mg, 2.91 mmol)를 첨가하고 혼합물을 -30℃로 냉각시켰다. THF/헵탄/에틸벤젠 중 리튬 디이소프로필아미드(4.65mL, 9.30mmol)를 적가하고 혼합물을 -15℃에서 20분 동안 교반하였다. 농축된 HCl(3 mL)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응물을 2N NaOH로 중화하고, 수성상을 분리하고 THF로 추출하였다. 합한 유기상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM/EtOAc, 0% - 25%)로 정제하고 소량의 DCM으로 연화처리하여 (3-아미노-2,4,6-트리플루오로페닐)-(5-브로모-1H-피라졸로)[3,4-b]피리딘-3-일)메탄온을 밝은 황색 고체로서 수득하였다(0.423g, 1.14mmol, 39% 수율).
분석 데이터:
1H-NMR (200 MHz, CDCl3) δ 14.96 (s, 1H), 8.77 (d, J=2.8 Hz, 3H), 7.21 (t, J=10 Hz, 2H), 5.33 (s, 4H).
MS(ESI+): m/z= 370.8 / 368.8 [M-H]-, 350.8 / 348.8 [M-H-HF]-.
단계 13-2: N-[3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4,6-트리플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드
THF(5.09mL) 중 (3-아미노-2,4,6-트리플루오로페닐)-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-일)메탄온(0.378g, 1.02mmol) 및 TEA(1.56mL, 11.2mmol)의 용액을 -10℃에서 1mL THF 중 1-프로판설포닐 클로라이드(0.378mL, 3.36mmol)에 천천히 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반하고 2N NaOH(4.07mL, 8.15mmol)를 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 교반한 후, THF를 혼합물로부터 증발시키고 수용액을 EtOAc로 세척하였다. 용액을 2N HCl로 산성화하고 EtOAc로 추출하였다. 추출물을 Na2SO4로 건조시키고, 증발시키고, 잔류물을 n-헥산으로 연화하여 N-[3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4,6-트리플루오로페닐]프로판-1-설폰아미드를 산출하였다(0.344g, 0.7210mmol, 71% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 8.78 (dd, J=5.7, 2.2 Hz, 2H), 7.57 (td, J=9.8, 2.0 Hz, 1H), 3.18-3.05 (m, 3H), 1.90 - 1.68 (m, 2H), 0.98 (t, J=7.4 Hz, 3H);
MS(ESI-): 476.8 / 474.8 [M-H]-, 456.9 / 454.9 [M-H-HF]-.
단계 13-3: N-[3-[5-(4-클로로페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,4,6-트리플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드
마이크로파 용기에 N-[3-(5-브로모-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4,6-트리플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드 (78.0 mg, 0.163mmol), (4-클로로페닐)보론산(26.8mg, 0.172mmol)을 충전하고 아르곤으로 퍼징하였다. 탈기된 1,4-디옥산(0.545mL) 및 탈기된 1.5M 수성 탄산칼륨(0.327mL, 0.490mmol)을 첨가하고 반응물을 마이크로파 조사 하에 1시간 동안 110℃로 가열하였다. 반응물을 NH4Cl 용액과 EtOAc 사이에 분배하고 유기상을 증발시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM/EtOAc 5% 내지 35%)로 정제하고 DCM 및 n-헥산의 혼합물로 연화처리하여 N-[3-[5-(4-클로로페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,4,6-트리플루오로페닐]프로판-1-술폰아미드를 산출하였다(44.0 mg, 0.0865 mmol, 53% 수율).
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.97 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 9.04 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.05 - 7.69 (m, 2H), 7.71 - 7.44 (m, 3H), 3.21 - 3.02 (m, 2H), 1.92 - 1.62 (m, 2H), 0.99 (t, J = 7.4 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 508.06 for C22H16ClF3N4O3S (분자량: 508.90);
MS(ESI-): m/z: 507.0 [M-1]-.
실시예 14: N-(3-(5-(2-시클로프로필피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)-1-페닐메탄술폰아미드의 합성
실시예 11과 유사하게 실시예 14를 합성하였다.
Figure pct00021
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, dmso) δ 15.02 - 14.46 (m, 1H), 9.77 (s, 1H), 9.10 (s, 2H), 9.05 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 14.3, 7.5 Hz, 1H), 7.46 - 7.34 (m, 6H), 4.51 (s, 2H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 1.15 - 1.06 (m, 4H).
계산된 정확한 질량: 546.13 for C27H20F2N6O3S (분자량: 546.55)
MS(ESI+): m/z 546.0 [M+H]+.
실시예 15: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(2-메톡시피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 15를 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00022
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.87 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.09 (s, 2H), 9.04 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 14.3, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.19 - 3.09 (m, 2H), 1.81 (td, J = 14.8, 7.3 Hz, 2H), 0.99 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 488.11 for C21H18F2N6O4S (분자량: 488.47)
MS(ESI+): m/z 489.05 [M+H]+.
실시예 16: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(2-히드록시피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 16을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00023
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.78 (s, 1H), 12.38 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.49 (s, 2H), 7.85 (dd, J = 14.7, 7.7 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 3.18 - 3.11 (m, 2H), 1.81 (td, J = 14.8, 7.3 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 474.09 for C20H16F2N6O4S (분자량: 474.44)
MS(ESI+): m/z 475.00 [M+H]+.
실시예 17: N-(3-(5-(3-클로로피리딘-4-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 17을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00024
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 15.05 - 14.58 (m, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.83 (s, 2H), 8.76 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 14.3, 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 1.81 (dq, J = 14.8, 7.3 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 491.06 for C21H16ClF2N5O3S (분자량: 491.90)
MS(ESI+): m/z 491.95 [M+H]+.
실시예 18: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(3-메틸피리딘-4-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 18을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00025
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.82 (s, 1H), 9.88 - 9.37 (m, 1H), 8.75 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 14.7, 7.5 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 10.8, 5.9 Hz, 2H), 3.17 - 3.11 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 1.81 (dq, J = 14.9, 7.4 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 471.12 for C22H19F2N5O3S (분자량: 471.48)
MS(ESI+): m/z 471.9 [M+H]+.
실시예 19: N-(3-(5-(4-(tert-부틸)페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 19를 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00026
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.78 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.00 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 14.7, 7.6 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.40 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.18 - 3.12 (m, 2H), 1.81 (td, J = 15.0, 7.4 Hz, 2H), 1.34 (s, 9H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 512.17 for C26H26F2N4O3S (분자량: 512.56)
MS(ESI+): m/z 513.0 [M+H]+.
실시예 20: N-(3-(5-(2-클로로-4-메톡시페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 20을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00027
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.82 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.72 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 15.0, 7.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.10 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.15 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.81 (dq, J = 15.0, 7.5 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 520.08 for C23H19ClF2N4O4S (분자량: 520.94)
MS(ESI+): m/z 521.0 [M+H]+.
실시예 21: N-(3-(5-(2-(tert-부틸)피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐의 합성)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 21을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00028
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.88 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 9.22 (s, 2H), 9.08 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 7.86 (dd, J = 14.7, 7.3 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.18 - 3.11 (m, 2H), 1.87 - 1.74 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 514.16 for C24H24F2N6O3S (분자량: 514.55)
MS(ESI+): m/z 515.15 [M+H]+.
실시예 22: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(2-(메틸티오)피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 22를 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00029
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.87 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.13 (s, 2H), 9.06 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 14.3, 7.5 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.19 - 3.12 (m, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 504.08 for C21H18F2N6O3S2 (분자량: 504.53)
MS(ESI+): m/z 505.05 [M+H]+.
실시예 23: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(2-이소프로필피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 23을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00030
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.87 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.13 (s, 2H), 9.06 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 14.3, 7.5 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.19 - 3.12 (m, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 500.14 for C23H22F2N6O3S (분자량: 500.52)
MS(ESI+): m/z 501.05 [M+H]+.
실시예 24: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(4-플루오로-2-메틸페닐)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 24를 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00031
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.82 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 8.68 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 14.8, 7.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 2H), 7.26 (dd, J = 10.1, 2.5 Hz, 1H), 7.17 (td, J = 8.5, 2.6 Hz, 1H), 3.18 - 3.11 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.81 (dq, J = 15.0, 7.4 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 488.11 for C23H19F3N4O3S (분자량: 488.49)
MS(ESI+): m/z 489.05 [M+H]+.
실시예 25 및 26: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(4-메톡시-2-메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-설폰아미드(실시예 25) 및 N-(2,6-디플루오로-3-(5-(4-히드록시-2-메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드(실시예 26)의 합성
단계 1: N-(2,6-디플루오로-3-(1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 전환을 5-브로모-4-클로로-2-메틸피리미딘으로써 실시예 9, 단계 9-1과 유사하게 수행하였다.
탈보호를 위한 두 가지 다른 절차는 실시예 25 또는 실시예 26으로 이어졌다.
Figure pct00032
N-(2,6-디플루오로-3-(5-(4-메톡시-2-메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-설폰아미드의 분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.84 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.86 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.75 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 15.4, 7.4 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.18 - 3.10 (m, 2H), 2.62 (s, 3H), 1.81 (td, J = 15.3, 7.7 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 502.12 for C22H20F2N6O4S (분자량: 502.50)
MS(ESI+): m/z 502.95 [M+H]+.
N-(2,6-디플루오로-3-(5-(4-히드록시-2-메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-설폰아미드의 분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.84 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.86 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.75 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 15.4, 7.4 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.18 - 3.10 (m, 2H), 2.62 (s, 3H), 1.81 (td, J = 15.3, 7.7 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 488.11 for C21H18F2N6O4S (분자량: 488.47)
MS(ESI+): m/z 489.15 [M+H]+.
실시예 27: N-(2,6-디플루오로-3-(5-(피리딘-3-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 27을 실시예 11과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00033
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.86 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.05 (dd, J = 10.7, 2.0 Hz, 2H), 8.83 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.66 (dd, J = 4.8, 1.5 Hz, 1H), 8.30 - 8.23 (m, 1H), 7.87 (dd, J = 14.9, 7.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 7.5, 4.8 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 3.17 - 3.12 (m, 2H), 1.86 - 1.75 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 457.10 for C21H17F2N5O3S (분자량: 457.46)
MS(ESI-): m/z: 455.9 [M-1]-.
실시예 28: 5-(3-(2,4-디플루오로-3-(프로필술폰아미도)벤조일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일)피콜린산의 합성
실시예 28을 실시예 11과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00034
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.92 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 9.15 (dd, J = 16.8, 2.0 Hz, 2H), 8.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.45 (dd, J = 8.1, 2.3 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 14.5, 7.7 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 1.86 - 1.75 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H);
계산된 정확한 질량: 501.09 for C22H17F2N5O5S (분자량: 501.46);
MS(ESI-): m/z: 500.1 [M-1]-
실시예 29: N-[2,6-디플루오로-3-[5-(4-메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 29를 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00035
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.90 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.80 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 1H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.19 - 3.11 (m, 3H), 1.88 - 1.73 (m, 3H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).;
계산된 정확한 질량: 472.11 for C21H18F2N6O3S (분자량: 472.47);
MS(ESI+): m/z: 473.55 [M+H]+.
실시예 30: N-[3-[5-(2,4-디메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로-페닐]프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 30을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00036
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.88 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 8.77 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.67 - 8.59 (m, 2H), 7.86 (dd, J = 14.6, 7.5 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.20 - 3.10 (m, 2H), 2.66 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.87 - 1.74 (m, 2H), 0.99 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 486.13 for C22H20F2N6O3S (분자량: 486.49);
MS(ESI+): m/z: 486.9 [M+H]+.
실시예 31: N-(3-(5-(2-시클로프로필-4-메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3 카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-설폰아미드의 합성
Figure pct00037
단계 1: N-(3-(5-(2-시클로프로필-4-메틸피리미딘-5-일)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (C)의 합성
1,4-디옥산/H2O(10mL) 중 N-(2,6-디플루오로-3-(1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드(300mg, 0.51mmol), 화합물 B(119mg, 0.56mmol) 및 KF(144mg, 1.53mmol)을 실온에서 교반한 다음, 5분 동안 아르곤으로 퍼징하였다. PdCl2(dppf).CH2Cl2(42 mg, 0.051 mmol)를 첨가하고 혼합물을 5분 동안 아르곤으로 다시 퍼징하였다. 이어서, 반응물을 8시간 동안 환류 가열하였다. 반응의 진행을 TLC를 사용하여(헥산 중 20% EtOAc v/v) 모니터링하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 점차적으로 실온으로 냉각하고 에틸 아세테이트(20mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 감압 하에 농축하여 조 화합물을 수득하였다. 조 물질을 최종적으로 FCC에 의해 정제하여 135 mg(45%)의 원하는 화합물 C를 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.69 (s, 1H), 8.81 (d, 1H, J = 2.0 Hz), 8.64 (d, 1H, J = 2.0 Hz), 8.56 (s, 1H), 7.93 - 7.85 (m, 1H), 7.43 (t, 1H, J = 8.8 Hz), 6.21 (d, 1H, J = 9.6 Hz), 3.93 - 3.97 (m, 1H), 3.71 - 3.80 (m, 1H), 3.14 (t, 2H, J = 7.6 Hz), 2.43 (br s, 3H), 2.21 - 2.27 (m, 1H), 1.95 - 2.01 (m, 2H), 1.67 - 1.75 (m, 3H), 1.55 - 1.62 (m, 3H), 1.10 - 1.20 (m, 4H), 0.99 (t, 3H, J = 7.2 Hz).
MS(ESI+): m/z 597.1 (M+H+)
단계-2: N-(3-(5-(2-시클로프로필-4-메틸피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
실온에서 MeOH(10mL) 중 화합물 C(135mg, 0.22mmol)의 용액에 p-TSA(28mg, 0.24mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 6시간 동안 50℃로 가열하였다. 반응의 진행은 TLC를 사용하여(DCM 중 5% MeOH v/v) 모니터링되었다. 반응 완료 후, 용매를 진공에서 증발시키고, 물(5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 포화 NaHCO3로를 사용하여 중화하고 EtOAc(3x20mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조하고 감압 하에 농축하여 미정제 화합물을 수득하고, 이를 연화처리하여 원하는 화합물 55 mg(48%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.67 (br s, 1H), 8.76 (d, 1H, J = 2.0 Hz), 8.61 (d, 1H, J = 2.0 Hz), 8.55 (s, 1H), 7.82 - 7.88 (m, 1H), 7.39 (t, 1H, J = 8.80 Hz), 3.14 (t, 2H, J = 7.60 Hz), 2.42 (s, 3H), 2.20 - 2.28 (m, 1H), 1.80 (q, 2H, J = 7.60 Hz), 1.05 - 1.11 (m, 4H), 0.99 (t, 3H, J = 7.20 Hz).
계산된 정확한 질량: 512.14 for C24H22F2N6O3S (분자량: 512.53);
MS(ESI+): m/z 513.60 [M+H]+.
실시예 32: N-(3-(5-(2-시클로프로필-4-(메틸티오)피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3 카르보닐)-2,6- 디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
파트 A. 5-브로모-2-시클로프로필-4-(메틸티오)피리미딘(D)의 합성
Figure pct00038
단계-1: 5-브로모-4-클로로-2-(메틸설포닐)피리미딘(B)
실온에서 THF(25mL) 중 5-브로모-4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘(3g, 12.6mol)의 교반된 용액에 물(15mL)에 용해된 옥손(1.16g, 37.8mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 4시간 동안 교반되도록 하였다. EtOAc/n-헥산(30/70% v/v)을 용매로 사용하여 TLC에 의해 관찰된 바와 같은 반응의 완료 후, 반응을 물(50 mL)로 희석하고 EtOAc(3x25 mL)로 추출하였다. 합한 분리된 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 감압 하에 증발시켜 3.2g(94%)의 화합물 B를 회백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.38 (s, 1H), 3.41 (s, 3H)
MS(ESI+): m/z 272.80 [M+H]+
단계-2: 5-브로모-4-클로로-2-시클로프로필피리미딘(C)
0℃에서 건조 THF(20mL) 중 화합물 B(1.5g, 5.55mmol)의 교반된 용액에 1M 시클로프로필마그네슘 브로마이드(6.66mL, 6.66mmol)를 천천히 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 서서히 가온하고 2시간 동안 교반하였다. EtOAc/n-헥산(20/80% v/v)을 용매로 사용하여 TLC에 의해 관찰된 바와 같이 반응 완료 후, 수성 NH4Cl 용액의 첨가로 켄칭하고 EtOAc(2x25mL)를 사용하여 추출하였다. 분리된 합한 유기 층을 염수(15mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조하고 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 얻었다. 조 물질을 최종적으로 FCC에 의해 정제하여 600 mg(52%)의 목적하는 화합물 C를 회백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 8.59 (s, 1H), 2.05 - 2.25 (m, 1H), 1.05 - 1.10 (m, 4H)
MS(ESI+): m/z 234.8 [M+H]+.
단계-3: 5-브로모-2-시클로프로필-4-(메틸티오)피리미딘(D)
실온에서 DMF(10mL) 중 화합물 C(1.2g, 5.17mmol)의 교반된 용액에 NaSMe(544mg, 7.75mol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 후, EtOAc/n-헥산(10/90% v/v)을 사용하여 TLC에 의해 보이는 바와 같이 반응의 완료, 물(30 mL)을 첨가하고 EtOAc(2x25 mL)로 추출하고, 분리된 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 감압하에 증발시켜 화합물 D 800mg(80%)을 황색 액체로 얻었다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.25 (s, 1H), 2.52 (s, 3H), 4.10 - 4.23 (m, 1H), 1.10 - 1.20 (m, 4H)
MS(ESI+): m/z 246.8 [M+H]+.
파트 B: N-(3-(5-(2-시클로프로필-4-(메틸티오)피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3 카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00039
단계-1: N-(3-(5-(2-시클로프로필-4-(메틸티오)피리미딘-5-일)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (C)
1,4-디옥산/H2O(75/25% v/v) 5ml 중 N-(2,6-디플루오로-3-(1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰-아미드(400mg, 0.67mmol) 및 화합물 D(182mg, 0.74mmol)의 교반된 용액에 물 1ml에 용해된 KF 118mg(2.03mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤으로 5분 동안 퍼징한 다음, Pd(dppf)Cl2 DCM(0.1당량, 55mg, 0.067mmol)을 첨가하고 혼합물을 다시 아르곤으로 5분 동안 퍼징하였다. 그런 다음 반응물을 90℃에서 6시간 동안 가열했다. 반응 완료 후, 물(10mL)을 첨가하고 1N HCl로 pH를 6으로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc(3x15 mL)로 추출하고, 유기층을 분리하고, 건조하고, 농축하여 조 잔류물을 얻었다. 조 물질을 역상 분취용 HPLC로 정제하여 60 mg(14% 수율)의 화합물 C를 얻었다.
MS(ESI+): m/z 629.20 [M+H]+.
단계 2: N-(3-(5-(2-시클로프로필-4-(메틸티오)피리미딘-5-일)-1 H 피라졸로[3,4-b]피리딘-3 카르보닐)-2,6-디플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드
MeOH(2 mL) 중 화합물 C(90 mg, 0.143 mmol)의 교반된 용액에 실온에서 pTSA(74 mg, 0.42 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 16시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 진행을 EtOAc/n-헥산(70/30% v/v)을 사용하여 TLC로 모니터링했다. 반응 완료 후, 용매를 진공에서 증발시키고, 물(5 mL)을 첨가한 다음, 수성 NaHCO3용액으로 만들고 중화하고(pH = 7), EtOAc(3x5mL)로 추출하였다. 분리된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조하고 감압하에 농축하여 조 생성물을 수득하고 이를 SFC로 정제하여 25 mg(32%)의 원하는 화합물을 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.66 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.86 (q, 1H, J = 6.8 Hz), 7.39 (t, 1H, J = 8.8 Hz), 3.14 (t, 2H, J = 8.0 Hz), 2.20 - 2.30 (m, 1H), 1.70 - 1.86 (m, 2H), 1.10 - 1.15 (br s, 4H), 0.99 (t, 3H, J = 7.2 Hz).
계산된 정확한 질량: 512.14 for C24H22F2N6O3S (분자량: 512.53);
MS(ESI+): m/z 545.10 [M+H]+.
실시예 33: N-[2,6-디플루오로-3-[5-(4-메틸-2-메틸술파닐-피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]페닐]프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 33을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00040
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.79 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 8.77 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.86 (dd, J = 14.6, 7.8 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 3.21 - 3.05 (m, 2H), 2.57 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 1.91 - 1.68 (m, 2H), 0.99 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 518.10 for C22H20F2N6O3S2 (분자량: 518.56);
MS(ESI-): m/z: 517.5 [M-1]-.
실시예 34: N-[3-[5-(2,4-디메톡시피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로-페닐]프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 34를 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00041
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.80 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.81 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.84 (dd, J = 14.5, 7.7 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.05 - 3.89 (m, 6H), 3.18 - 3.09 (m, 2H), 1.86 - 1.72 (m, 2H), 0.98 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 518.12 for C22H20F2N6O5S (분자량: 518.49);
MS(ESI+): m/z 519.15 [M+H]+
실시예 35: N-(3-(5-(2-시클로프로필피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4,6-트리플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
Figure pct00042
단계-1: (3-아미노-2,4,6-트리플루오로페닐)(5-브로모-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-일)메탄온 (B)의 합성
용액 A: 건조 THF(24mL) 중 화합물 A(4.22g, 18.68mmol)에 THF 중 2M 이소프로필마그네슘 클로라이드(9.33mL, 1당량 18.68 mmol)를 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 -10℃에서 적가하였다. 25℃에서 20분 동안 교반한 후, 반응물을 0℃로 냉각시키고 클로로트리메틸실란(2.02g, 1당량., 18.68mmol)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 가온하고 30분 동안 교반하였다. 용액을 다시 -10℃로 냉각하고 THF 중 2M 이소프로필마그네슘 클로라이드(9.33mL, 1당량, 18.68 mmol)을 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 적가하였다. 25℃에서 20분 동안 교반한 후, 반응물을 0℃로 냉각시키고 클로로트리메틸실란(2.02 g, 1 당량, 18.68mmol)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 가온하고 30분 동안 교반하였다. 반응물을 -10℃로 냉각시키고 THF 중 2M 이소프로필마그네슘 클로라이드(9.33mL, 1당량, 18.68 mmol)을 적가하였다. 첨가를 완료한 후, 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다.
용액 B: 두 번째 플라스크에 THF 중 2M 이소프로필마그네슘 클로라이드(9.33 mL, 1 당량, 18.68 mmol)을 THF(30mL) 중 5-브로모-N-메톡시-N-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르복사미드(3g, 8.12mmol)의 현탁액에 온도를 0℃ 미만으로 유지하면서 -10℃에서 적가하여 첨가하였다. 첨가 완료 후, 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다.
용액 B를 용액 A에 첨가하고 반응물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그런 다음 모든 마그네슘 염이 용해될 때까지 수성 4N HCl을 조심스럽게 첨가하였다. 수용액을 30% NaOHaq로 pH 5로 조정하고, NaCl로 포화시키고, 층을 분리하였다. 수성 층을 THF 및 EtOAc의 혼합물로 추출하였다(층을 분리하기 위해 EtOAc의 첨가가 필요함). 추출물을 증발시키고, THF에 재용해시키고, 유기상과 합하였다. 농축 HClaq(5 mL)를 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 고체 NaHCO3로 중화하고, 더 낮은 수성층을 버리고 유기층을 Na2SO4상에서 건조시켰다. 용매를 증발시킨 후, 잔류물을 디에틸 에테르(15mL)에 현탁시키고, DCM(20mL)으로 연화처리하고, 고체를 흡인 여과에 의해 수집하였다. 여액을 증발시키고, 잔류물을 (20 mL) 디에틸 에테르에 취하고, 흡입 여과에 의해 고체를 수집하였다. 합한 고체를 DCM 중 0-5% MeOH를 사용하여 FCC에 의해 정제하여 목적하는 900 mg(38%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 8.86 (d, 1H, J = 2.0 Hz), 8.80 (d, 1H, J = 2.0 Hz), 7.25 - 7.35 (m, 1H), 6.14 (d, 1H, J = 10 Hz), 5.36 (br s, 2H), 3.90 - 3.95 (m, 1H), 3.70 - 3.85 (m, 1H), 2.25 - 2.33 (m, 1H), 1.65 - 1.85 (m, 1H), 1.50 - 1.62 (m,2H), 1.10 - 1.15 (m, 2H).
MS(ESI+): m/z 455.18 [M+H]+
단계 2: N-(3-(5-브로모-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4,6-트리플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드(C)의 합성
THF(20mL) 중 화합물 B(900mg, 1.98mmol) 및 트리에틸아민(13.7mL, 10mmol)의 용액에 동일한 부피의 THF 중 1-프로판설포닐 클로라이드(0.8mL, 7mmol)를 -10℃에서 천천히 첨가하고 반응물을 -10℃에서 30분 동안 교반하였다. 2N NaOH(3.75mL, 12mmol)를 첨가하고 THF를 감압 하에 45℃에서 증발시켰다. 수용액을 EtOAc(2x20 mL) 및 디에틸 에테르로 세척하였다. 잔류 유기물을 증발시키고 용액을 2N HCl로 산성화하고 30분 동안 격렬하게 교반하여 더 큰 덩어리를 부수었다. 고체를 흡인 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 100℃에서 건조시켜 화합물 C를 회백색 고체로서 수득하였다(960 mg, 87% 수율). 1H NMR은 다음 단계에서 그대로 사용되는 모노 및 디 술폰아미드의 혼합물을 나타내었다.
단계-3: N-(2,4,6-트리플루오로-3-(1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)페닐)프로판-1-술폰아미드 (D)의 합성
1,4-디옥산(15mL) 중 화합물 C(900mg, 1.60mmol)의 교반된 용액에 비스(피나콜라토)디붕소(612mg, 2.41mmol) 및 KF(278mg, 4.8mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 10분 동안 아르곤으로 탈기하였다. Pd(dppf)Cl2 DCM(65mg, 0.08mmol)을 첨가하고, 혼합물을 아르곤으로 5분 동안 추가로 탈기하고, 85℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 진행은 EtOAc/n-헥산(60/40 %v/v)을 용매로 사용하여 TLC로 모니터링했다. 완료 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, EtOAc(20 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 유기 층을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 수득하고, 이를 FCC로 정제하여 화합물 D(960 mg , 87%)를 수득하였다.
MS(ESI+): m/z 609.0 [M+H]+.
단계-4: N-(3-(5-(2-시클로프로필피리미딘-5-일)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4,6-트리플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (F)의 합성
1,4-디옥산/H2O(10mL) 중 화합물 D(950mg, 1.56mmol) 및 화합물 E(342mg, 1.71mmol)의 교반된 용액에 KF(271mg, 4.68mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 10분 동안 아르곤으로 탈기시켰다. Pd(dppf)Cl2 DCM(64mg, 0.078mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 아르곤으로 5분 동안 추가로 탈기하고, 90℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 용매로서 EtOAc/n-헥산(40/60% v/v)을 사용하여 TLC로 모니터링하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 EtOAc(20mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 유기층을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 수득하고, 이를 디에틸 에테르를 사용하여 분쇄하여 화합물 F의 (650mg, 61%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.10 - 9.15 (m, 3H), 8.89 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.80 (t, 1H, J = 8.8 Hz), 6.66 (dd, 1H, J = 2.4 & 10.4 Hz), 3.60 - 3.80 (m, 4H), 2.22 - 2.38 (m, 3H), 1.95 - 2.00 (m, 2H), 1.72 - 1.93 (m, 3H), 1.55 - 1.60 (m, 2H), 1.06 -1.09 (m, 2H), 0.95 - 1.05 (m, 5H)
단계-5: N-(3-(5-(2-시클로프로필피리미딘-5-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4,6-트리플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 합성
화합물 F(650 mg, 1.08 mmol)에 TFA(10 mL)를 실온에서 첨가하고 혼합물을 밤새 교반하였다. (MeOH/DCM 5/95% v/v)를 사용하여 TLC에 의해 관찰된 바와 같은 반응의 완료 후, 반응 혼합물을 실온에서 N2의 기류를 사용하여 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 이 조 물질을 수성 포화 NaHCO3를 사용하여 pH를 8로 중화하고, 이어서 DCM(2x20 mL)으로 추출하고, 유기층을 분리하고 무수 Na2SO4상에서 건조하고, 용매를 증발시켜 조 물질을 얻었다. 조 물질을 DCM 중 0 - 5% MeOH (v/v)를 사용하여 FCC에 의해 최종적으로 정제하여 목적 화합물 175 mg (32%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): 13.05 (br s, 1H), 9.66 (br s, 1H), 9.11 (s, 2H), 9.07 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 7.59 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 3.13 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 2.25 - 3.35 (m, 1H), 1.70 - 1.85 (m, 2H), 1.05 - 1.15 (m, 4H), 0.98 (t, 3H, J = 7.60 Hz)
MS(ESI+): m/z 517.06 [M+H]+.
실시예 36: N-[3-[5-(3-에틸-4-피리딜)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로-페닐]프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 36을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00043
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.90 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 8.72 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.59 - 8.50 (m, 2H), 7.87 (dd, J = 14.7, 7.6 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 14.1, 6.6 Hz, 2H), 3.21 - 3.06 (m, 2H), 2.66 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.88 - 1.73 (m, 2H), 1.06 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 485.13 for C23H21F2N5O3S (분자량: 485.51);
MS(ESI-): m/z: 484.2 [M+H]-.
실시예 37: N-[3-[5-(3-시아노-4-피리딜)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-3-카르보닐]-2,6-디플루오로-페닐]프로판-1-술폰아미드의 합성
실시예 37을 실시예 7과 유사하게 합성하였다.
Figure pct00044
분석 데이터:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.19 (s, 1H), 9.04 - 8.91 (m, 3H), 7.95 - 7.84 (m, 2H), 7.41 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 1.81 (dq, J = 15.0, 7.5 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
계산된 정확한 질량: 482.10 for C22H16F2N6O3S (분자량: 482.47);
MS(ESI-): m/z: 481.3 [M+H]-.
실시예 38: 생물학적 활성 - 기능적 효소 어세이에서의 억제 효능 및 선택성
본 발명의 화합물의 키나제 활성은 독일 프라이부르크 소재 ProQinase GmbH에서 제공하는 33PanQinase® 어세이 서비스를 사용하여 측정되었다. 분석 조건의 세부 사항은 ProQinase 웹사이트(https://www.proqinase.com/products-services-biochemical-assay-services/kinase-assays)에 공개되어 있다. 간단히 말해서, 모든 키나제 어세이는 50μl 반응 부피에서 PerkinElmer (Boston, MA, USA)로부터의 96웰 FlashPlatesTM에서 수행되었다. 반응 칵테일은 다음 순서로 4단계로 피펫팅되었다.
·20 μl의 어세이 완충액(표준 완충액)
·5μl의 ATP 용액 (H2O 중)
·5μl의 시험 화합물 (10% DMSO 중)
·20μl의 효소/기질 믹스
모든 단백질 키나아제에 대한 어세이는 70mM HEPES-NaOH pH7.5, 3mM MgCl2, 3mM MnCl2, 3μM Na-orthovanadate, 1.2mM DTT, 50μg/ml PEG20000, ATP(가변 농도, 각각의 키나아제의 겉보기 ATP-Km에 일치), [γ-33P]-ATP(웰당 약 8 x 1005 cpm), 단백질 키나아제 및 기질을 함유하였다.
반응 칵테일을 30℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 반응을 2%(v/v) H3PO4 50μl로 중지하고 플레이트를 흡인하고 0.9%(w/v) NaCl 200μl로 2회 세척하였다. 33Pi의 혼입은 마이크로플레이트 섬광 계수기(Microbeta, Wallac)를 사용하여 결정되었다.
모든 어세이는 BeckmanCoulter/SAGIANTM Core System으로 수행되었다.
단일 농도 어세이의 경우, 시험 화합물의 역가는 % 잔류 활성으로 표시된다. IC50 값을 결정하기 위해 100μM과 3nM(10개 농도) 사이의 최종 농도 범위에서 연속 희석을 테스트했다. IC50 결정을 위한 피팅 모델은 매개변수 "상단"이 100%로 "하단"이 0%로 고정된 "S자형 응답(가변 기울기)"이었다. 사용된 피팅 방법은 최소제곱 피팅이다.
MKK4 효능:
MKK4에 대한 억제 효능은 다음과 같이 분류된다.
IC50-값 결정으로 어세이:
범주
IC50 < 100nM: +++
100nM < IC50 < 1μM: ++
1μM < IC50 < 10μM: +
IC50 > 10μM: o
모두 오프-타겟으로 표시된 BRaf, JNK1 및 MKK7에 대한 테스트 화합물의 선택성은 IC50(오프-타겟)/IC50(MKK4)의 비율로 계산되었으며 다음과 같이 분류되었다:
범주
IC50(오프-타겟) / IC50(MKK4) > 100 +++
100 ≥ IC50(오프-타겟) / IC50(MKK4) > 10 ++
10 ≥ IC50(오프-타겟) / IC50(MKK4) > 3 +
3 ≥ IC50(오프-타겟) / IC50(MKK4) o
표 1: IC 50 -값에 기초한, MKK4에 대한 대표적인 실시예의 생화학적 효능 및 BRaf, MKK7 및 JNK1에 대한 선택성.
실시예 효능 선택성
MKK4 Braf JNK1 MKK7
1 ++ + O +++
2 +++ +++ +++ +++
3 ++ +++ ++ +++
4 ++ +++ ++ +++
5 + ++ + ++
6 ++ +++ +++ +++
7 +++ +++ +++ +++
8 +++ +++ +++ ++
9 ++ ++ ++ ++
10 +++ +++ +++ ++
11 +++ +++ +++ +++
12 ++ +++ +++ +++
13 +++ +++ ++ +++
15 +++ +++ +++ +++
16 +++ +++ +++ +++
17 +++ +++ +++ +++
18 +++ +++ +++ +++
19 ++ +++ ++ +++
20 +++ +++ ++ +++
21 +++ +++ +++ +++
22 +++ +++ +++ +++
23 +++ +++ +++ +++
27 +++ +++ +++ +++
28 +++ +++ +++ ++
29 ++ +++ +++ +++
30 ++ +++ +++ +++
31 ++ +++ +++ +++
32 ++ +++ +++ +++
33 +++ +++ +++ +++
34 +++ +++ +++ +++
35 +++ +++ +++ +++
36 +++ +++ +++ +++
37 +++ +++ +++ +++

Claims (20)

  1. 화학식 I의 화합물
    Figure pct00045

    및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 생물학적 활성 대사물, 용매화물 및 입체이성질체,
    여기서 화학식(I)의 변수는 다음과 같은 의미를 갖는다:
    R1은 H 또는 알킬이고;
    R4는 H 또는 알킬이고;
    R5는 다음에서 선택되고:
    a) 시클로알킬, 알킬, -COOR10, -OH, 알킬설파닐, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 테트라졸릴, CN, 할로겐, 알콕시, -(NR10=)S(=O)-알킬[S-알킬술폰이미도일] 및
    Figure pct00046

    로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐 및
    b1) 알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환되고 선택적으로 추가로 -OH, 알콕시, CN, -COOR10, CF3, -(NR10=)S(=O)-알킬, 및
    Figure pct00047

    로 치환된 피리딜, 및
    b2) -COOR10으로 치환되고, 추가로 -OH, CN, 또는 CF3로 치환된 피리딜;
    R6은 H 또는 알킬이고;
    Rw는 -NR10SO2R12이고;
    Rx는 H, 할로겐 또는 알킬이고;
    Ry는 H, 할로겐 또는 알킬이고;
    Rz는 H, 할로겐 또는 알킬이고;
    여기서 Rx, Ry 또는 Rz 중 1개 또는 2개 또는 3개는 할로겐이고, Rx, Ry 및 Rz 중 나머지는 H 또는 알킬이고;
    R10은 각 경우에 독립적으로 H 또는 알킬이고;
    R12는 H, 알킬 또는 페닐알킬이고;
    n은 1 또는 2이다.
  2. 청구항 1에 있어서, R1이 H인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, R4 및 R6이 H인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서, R5가 시클로알킬, 알킬, 알콕시, -OH, 알킬설파닐, 할로겐, CN, 및 테트라졸로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체,
  5. 청구항 4에 있어서, R5가 시클로알킬, 알킬, 알콕시, -OH, 알킬설파닐, 할로겐 및 CN으로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  6. 청구항 5에 있어서, R5가 시클로알킬, 알킬, 알콕시, -OH 및 알킬설파닐로부터 선택된 기로 치환되고 알킬, 알콕시, 및 알킬설파닐로부터 선택된 기로 추가로 치환된 피리미디닐인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  7. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서, R5가 3-위치에서 알킬 또는 할로겐으로 치환된 피리딜-4-일(피라졸로피리딘 기에 대해 4-위치에서 결합됨)인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  8. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서, R10이 H 또는 알킬, 특히 H인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  9. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서, R12가 알킬 또는 페닐알킬인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  10. 청구항 9에 있어서, R12가 C1-C3-알킬 또는 벤질인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  11. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ia)를 갖는 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체:
    Figure pct00048

    여기서
    Rx는 할로겐이고;
    Ry는 할로겐이고;
    R1, R4, R5, R6, 및 Rw는 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같다.
  12. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (Ib)를 갖는 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체:
    Figure pct00049

    여기서
    Rx는 할로겐이고;
    Ry는 할로겐이고;
    R1, R4, R5, R6 및 Rw는 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같다.
  13. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (Ic)를 갖는 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체:
    Figure pct00050

    여기서
    Rx는 할로겐이고;
    Ry는 할로겐이고;
    Rz는 할로겐이고;
    R1, R4, R5, R6 및 Rw는 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같다.
  14. 청구항 11 내지 청구항 13 중 어느 한 항에 있어서, Rx, Ry 및 Rz(존재하는 경우)가 F 또는 Cl, 특히 F인 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  15. 청구항 1에 있어서, 다음으로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00051

    Figure pct00052

    Figure pct00053

    및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  16. 다음으로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00054

    및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체.
  17. 청구항 1 내지 청구항 16 중 어느 한 항의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체를 포함하는 약학적 조성물.
  18. 단백질 키나제 MKK4 억제 및 특히 단백질 키나제 JNK1 및 MKK7에 비해 단백질 키나제 MKK4를 선택적으로 억제;
    간 재생 촉진 또는 간세포 사멸 감소 또는 예방;
    급성, 급만성(acute-on-chronic) 또는 만성 간 질환의 치료;
    급성 및 만성 또는 급만성 간 질환의 치료, 예컨대 B, C, E 형 간염과 같은 급성 및 만성 바이러스성 간염, Epstein-Barr 바이러스, 거대 세포 바이러스, 단순 포진 바이러스 및 기타 바이러스에 의한 간염, 모든 유형의 자가 면역 간염, 원발성 경화성 간염, 알코올성 간염의 치료;
    대사성 간 질환의 치료, 예컨대 대사 증후군, 비알코올성 지방간과 같은 지방간(NAFL), 비알코올성 지방간염(NASH), 알코올성 지방간염(ASH), 모르버스 윌슨, 혈색소증, 알파1-항트립신 결핍증, 글리코겐 저장 질환의 치료;
    모든 유형의 간경화 치료, 예컨대 원발성 담즙성 간경변, 에틸 독성 간경변, 잠복성 간경변의 치료;
    급성(전격) 또는 만성 간부전 치료 치료, 예컨대 아세트아미노펜(파라세타몰) 유도 간부전, 알파-아마니틴 유도 간부전, 약물 유발 간독성과 같은 독성 간부전 및 예를 들어 항생제, 비스테로이드성 항염증제, 항경련제에 의한 간부전, 한약재(카바, 마황, 스컬캡, 페니로얄 등)에 의한 급성 간부전, 버드-키아리 증후군과 같은 혈관질환으로 인한 간질환 및 부전, 원인 불명의 급성 간부전, 우심부전으로 인한 만성 간질환의 치료;
    갈락토스혈증, 낭포성 섬유증, 포르피린증, 간 허혈 관류 손상, 간 이식 후 작은 이식편 증후군(small for size syndrome), 원발성 경화성 담관염 또는 간성 뇌병증 치료;
    골관절염 또는 류마티스 관절염, 또는 CNS 관련 질환, 예컨대 알츠하이머병 및 파킨슨병의 치료
    에 사용하기 위한 청구항 1 내지 청구항 16 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 용매화물 및 광학 이성질체 또는 청구항 17의 조성물.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 화합물이 1 내지 12개월 주(1 to 12 months weeks)에 걸쳐 치료될 개체의 0.2 내지 15 mg/kg의 투여량으로 투여되는 것인 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 및 광학 이성질체.
  20. 단백질 키나제 MKK4 억제,
    단백질 키나제 JNK1 및 MKK7에 비해 단백질 키나제 MKK4를 선택적으로 억제하여 간 재생을 촉진하거나 간세포 사멸을 예방,
    급성, 급만성 또는 만성 간 질환 치료,
    B, C, E 형 간염과 같은 급성 및 만성 바이러스성 간염, Epstein-Barr 바이러스, 거대 세포 바이러스, 단순 포진 바이러스 및 기타 바이러스에 의한 간염, 모든 유형의 자가 면역 간염, 일차 경화 감염, 알코올성 간염과 같은 만성 간 질환의 급성 및 만성 또는 급성 치료;
    대사 증후군, 비알코올성 지방간과 같은 비알코올성 지방간(NAFL), 비알코올성 지방간염(NASH), 알코올성 지방간염(ASH), 모르버스 윌슨, 혈색소증, 알파1-항트립신 결핍증, 글리코겐 저장 질환과 같은 대사성 간 질환의 치료;
    원발성 담즙성 간경변, 에틸 독성 간경변, 잠복성 간경변과 같은 모든 유형의 간경화 치료;
    아세트아미노펜(파라세타몰) 유도 간부전, 알파-아마니틴 유도 간부전, 약물 유발 간독성과 같은 독성 간부전 및 예를 들어 항생제, 비스테로이드성 항염증제, 항경련제에 의한 간부전, 한약재(카바, 마황, 스컬캡, 페니로얄 등)에 의한 급성 간부전, 버드-키아리 증후군과 같은 혈관질환으로 인한 간질환 및 부전, 원인 불명의 급성 간부전, 우심부전으로 인한 만성 간질환과 같은 급성(전격) 또는 만성 간부전 치료;
    갈락토스혈증, 낭포성 섬유증, 포르피린증, 간 허혈 관류 손상, 간 이식 후 소형 증후군, 원발성 경화성 담관염 또는 간성 뇌병증 치료;
    골관절염 또는 류마티스 관절염, 또는 알츠하이머병 및 파킨슨병과 같은 CNS 관련 질환의 치료
    의 방법으로서, 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화합물 또는 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
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