KR20210107781A - 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드 및 이뮤노크로마토 진단 키트 - Google Patents

Abstract

본 발명은 검사 결과의 재현성이 우수하고, 역류를 야기하지 않는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드를 제공한다. 본 발명은 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드로서, 상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 구성하는 글루코오스 단위 중의 수산기의 평균 치환도가 0.05 이상 1.5 이하인 것을 특징으로 하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드 및 이것을 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트에 관한 것이다.

Description

이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드 및 이뮤노크로마토 진단 키트

본 발명은 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드에 관한 것이다. 보다 자세히는, 본 발명은 검사 결과의 재현성이 우수하고, 역류를 야기하지 않는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드에 관한 것이다.

최근, 바이러스나 세균 등의 병원체 감염의 유무, 임신의 유무, 암 마커의 유무, 식품 중의 특정 원재료나 잔류 농약 등의 유해 물질의 유무 등의 여러 가지 검사를 단시간에 행하는 간이 검사 시약이나 진단약, 진단 키트가 개발되고 있다. 이들은 각각의 검사 대상 물질과, 검사 대상 물질에 특이적으로 반응하는 물질에 의한 특이적 반응이 이용된다. 특히, 항원과 항체에 의한 항원 항체 반응을 이용하는 면역학적 측정법은, 이뮤노크로마토 측정법, 비탁 면역 측정법, 효소 면역 측정법, 화학 발광 측정법, 방사 면역 측정법, 표면 플라즈몬 공명을 이용하는 측정법 등, 많은 측정법이 개발되고 있다. 그리고 이들 측정법은 병원, 진료소 등에서의 병 등의 검사나, 식품 회사 등에서의 음식물 검사 등에 이용되고 있다. 그 중에서도 이뮤노크로마토 측정법은, 특별한 설비, 기기, 지식을 필요로 하지 않고 조작도 간편하며 염가이고, 신속한 진단이 가능하다고 하는 특징으로부터 매우 많은 검사가 실시되고 있다. 최근에는, 임신 검사약이나 HIV 검사약 등은 일반 약국에서 시판되어 일반 소비자라도 측정할 수 있게 되었고, 또한 검사 대상 물질의 유무를 검사하는 정성 검사뿐만 아니라 양을 측정하는 정량 검사 등도 할 수 있게 되어 오고 있다.

이뮤노크로마토 측정법의 측정 원리로서는, 샌드위치법이라고 불리는 방법이나 경합법이라고 불리는 방법이 있다. 또한, 측정 형식으로서는, 플로우 스루형이나 라테랄 플로우형이라고 불리는 방법이 있다. 검체 중의 검사 대상 물질로서는 여러 가지 물질을 검출할 수 있는데, 전형적인 예로서는 샌드위치법에 따라 항원을 검출하는 측정이 있고, 이하 같은 조작이 순차 실행된다.

(1) 검사 대상 물질인 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 크로마토그래프 매체막 등의 크로마토그래프 매체의 소정의 부위에 고정화하고, 크로마토그래프 매체의 임의의 위치에 테스트 라인(이하 「TL」이라고 한다)이라고 불리는 반응 부위를 형성한다.

(2) 효소, 표지 물질, 형광 표지 물질, 자성 입자 등의 표지 물질에, 검사 대상 물질과 특이적으로 결합하는 항체를 담지시킨 검출 시약을 조제하고, 컨쥬게이트 패드 등에 검출 시약을 도포 건조하여, 검출 시약 함유부를 형성시키고, 상기 크로마토그래프 매체와 조합하여 이뮤노크로마토 진단 키트를 형성한다.

(3) 항원을 포함하는 검체 그 자체, 또는 그것을 임의의 액체로 희석한 용액을 상기 이뮤노크로마토 진단 키트의 소정의 위치에, 예컨대 샘플 패드에 적하하여, 항원과 검출 시약을 크로마토그래프 매체 상에 전개시킨다.

이들 조작에 의해, 반응 부위에 있어서 크로마토그래프 매체 상에 고정화된 항체에, 항원을 통해 표지 물질이 포착되고, 표지 물질의 신호를 검출함으로써 이뮤노크로마토 진단 키트에 의한 진단을 행한다.

상기 이뮤노크로마토그래프법에 따른 검사는, 임상 현장에 있어서는, 특히 질환의 판정을 정확하게 행하는 것이 종래부터 강하게 요구되고 있다. 예컨대, 급성 관 증후군의 진단에 유용한 검사 항목이 몇 가지인가 있다. 급성 관 증후군 중에서도, 급성 심근 경색은, 관동맥이 혈전으로 폐색되어, 심근 조직이 괴사에 빠지는 질환이며, 발증 조기에 있어서의 재관류의 성부가 예후에 크게 영향을 끼친다. 그 때문에, 정확성이 높은 진단이 중요하다. 이 경우, 진단에 필요한 마커를 정량적으로 검출해야 하며, 당연히, 상기 진단에서 사용되는 이뮤노크로마토 진단 키트는, 이뮤노크로마토 진단 키트 제품간의 발색 강도의 편차가 더없이 작은 것이 필수적이다. 만약, 발색 강도의 편차가 큰 이뮤노크로마토 진단 키트를 이용한 경우, 당연히, 오진단으로 이어지고, 상기 질환의 경우에 있어서는, 오진단에 의해, 생명의 위험에 노출될 가능성도 있다. 이들로부터, 이뮤노크로마토 진단 키트 제품간의 편차를 더없이 작게 하는 것은, 이뮤노크로마토 진단 키트 개발에 있어서의 큰 과제의 하나로 되어 있다.

편차의 원인으로서는 키트를 구성하는 각 부재의 영향이 생각되지만, 특히 흡수 패드에 관해서는 흡액을 담당하는 부분이기 때문에, 백 그라운드의 착색이라고 하는 문제점에 의한 발색 강도의 편차의 원인으로 되어 있다.

여기서 「백 그라운드」란, 표지 시약이, 크로마토그래프 매체막의 세공에 가득 차거나, 비특이 흡착하거나 함으로써, 크로마토그래프 매체막이 착색되어 버려 발생하는 현상이다. 백 그라운드가 나쁘면, 크로마토그래프 매체막과 테스트 라인(TL)의 콘트라스트가 나빠져, TL의 발색한 라인을 보기 어려워져 버려, 의료 현장에서 판정하기 어려워진다. 또한, 백 그라운드가 나쁘면, 음성의 TL(즉, 발색없음)의 판단이 곤란해져 버린다. 이들 현상은, 오진단을 야기해 버릴 가능성이 있다.

또한, 백 그라운드의 착색 이외에 오진단을 야기하는 문제가 되는 한가지 원인으로서, 판정 후의 표지 시약의 역류에 의한 백 그라운드의 착색이라고 하는 것이 있다. 일반적으로 이뮤노크로마토 진단 키트는, 판정 시간이 각각의 이뮤노크로마토 진단 키트에서 정해져 있지만, 매우 바쁜 임상 현장에서는, 그 판정 시간에 딱 맞게 판정할 수 없는 경우가 때때로 있다. 여기서, 「표지 시약의 역류」란, 크로마토그래프 매체의 건조에 의해, 일단 흡수 패드에 흡수된 표지 시약이 역류하여, 크로마토그래프 매체 상을 역방향으로 전개하여 버리는 것이다. 이 역류에 의해, 백 그라운드의 착색이나, 또한 TL을 더럽혀 버림으로써, 오진단을 야기할 가능성이 있다.

이뮤노크로마토법의 검사 키트에 이용되는 흡수 패드로서는, 종래, 셀룰로오스 섬유, 유리 파이버, 펄프 등의 섬유를 포함하는 면, 부직포, 여과지 등이 이용되어 왔다. 그러나, 이들 소재만으로 구성되는 흡수 패드는, 그 구조나 구성 소재, 제조 방법의 영향을 받아, 흡수성이 불충분하며, 흡수량의 편차가 생기거나, 역류를 야기하거나 하는 것이 문제가 되고 있었다.

이들 문제를 해결하기 위해, 이하의 특허문헌 1에서는, 고흡수성 폴리머 입자를 이용한 흡수 패드를, 그리고 이하의 특허문헌 2에서는, 실리카 입자 등을 셀룰로오스 섬유 등의 부직포 소재에 분무한 흡수 패드를 이용하는 것이 검토되고 있다. 그러나, 이들 흡수 패드의 경우, 섬유 밀도의 균일화나 분무량의 균일화가 곤란하며, 흡수성은 개선되어도 제품간에서 흡수 속도에 편차가 생기기 쉬워지기 때문에, 제품간의 편차의 개선에는 이르지 않는다고 하는 것이 현재 상태이다.

또한, 종래의 흡수 패드에 기인하는 키트 제조 공정상의 문제도 보고되어 있다. 예컨대, 유리 파이버제 흡수 패드는, 이뮤노크로마토 진단 키트 생산 공정에 있어서의 절단 시에 탈락 섬유가 분진으로서 흩날리는 경우가 있다. 이들 유리 파이버의 분진은, 흡입하여 버리면 기관지의 염증을 일으킬 가능성이 있기 때문에, 제조 작업원의 건강 피해의 관점에서, 그다지 사용이 선호되지 않는 경우가 있다. 또한, 커팅 모듈의 날이 깨져 버리는 등의 문제점의 보고도 많다. 이들 이유로부터, 되도록 유리 파이버제 흡수 패드의 사용은 피하고자 한다.

이와 같이, 편차를 최대한으로 억제하면서, 또한 역류를 야기하지 않는 흡수 패드가 강하게 요구되고 있다.

특허문헌 1: 일본 특허 제6134615호 공보 특허문헌 2: 일본 특허 공개 제2012-189346호 공보

이러한 종래 기술의 수준을 감안하여, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는, 검사 결과의 재현성이 우수하고, 역류를 야기하지 않는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드를 제공하는 것이다.

본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의 검토하여 실험을 거듭한 결과, 흡수 패드로서, 특정한 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함함으로써, 재현성이 향상되고, 또한 역류가 억제된다는 것을 예상외로 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이른 것이다.

즉, 본 발명은 이하와 같은 것이다.

[1] 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드로서, 상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 구성하는 글루코오스 단위 중의 수산기의 평균 치환도가 0.05 이상 1.5 이하인 것을 특징으로 하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.

[2] 상기 패드의 캐치 앤드 릴리스 지수가 0.5 이하인, 상기 [1]에 기재된 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.

[3] 상기 패드의 평량이 10 g/㎡ 이상 400 g/㎡ 이하이고, 또한 두께가 0.03 ㎜ 이상 10.00 ㎜ 이하인, 상기 [1] 또는 [2]에 기재된 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.

[4] 상기 패드의, 생리 식염수에 함침시켰을 때의 흡액량이 5 g/100 ㎠ 이상 50 g/100 ㎠ 이하인, 상기 [1]∼[3] 중 어느 하나에 기재된 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.

[5] 상기 패드가 단층의 시트 또는 적층한 시트의 형태인, 상기 [1]∼[4] 중 어느 하나에 기재된 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.

[6] 상기 [1]∼[5] 중 어느 하나에 기재된 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트.

본 발명의 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드를 이용한 이뮤노크로마토 진단 키트는, 검사 결과의 재현성이 우수하고, 역류를 야기하지 않는 것이 된다.

도 1은 본 발명의 일실시형태로서의 이뮤노크로마토 진단 키트의 단면도이다.

이하, 본 발명의 실시형태를 상세하게 설명한다.

본 실시형태의 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드는, 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드로서, 상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 구성하는 글루코오스 단위 중의 수산기의 평균 치환도가 0.05 이상 1.5 이하인 것을 특징으로 한다.

이뮤노크로마토 진단 키트를 이용하여 실시하는 이뮤노크로마토그래프법에 따른 검사 방법에는, 일반적으로, 피측정물을 포함하는 용액을 막에 대하여 수직 방향으로 통과시키는 플로우 스루 방식과, 수평 방향으로 통과시키는 라테랄 플로우 방식의 2종류가 있는데, 본 실시형태의 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드는, 이들 중 어떤 방식에도 사용할 수 있고, 또한 흡수한다고 하는 이뮤노크로마토 진단 키트의 시스템이라는 의미에서는, 이들에 한정되지 않는다.

본 실시형태의 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드에 포함되는 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유는, 카르복시메틸화하였을 때의 셀룰로오스를 구성하는 글루코오스 단위 중의 수산기의 평균 치환도가 0.05 이상 1.5 이하이다. 평균 치환도가 지나치게 높으면, 전개되어 온 액을 흡수하였을 때, 흡수 패드의 전방 부분에 워터 블록을 만들어 버린다. 그에 의해, 전개액을 충분량 흡수하지 못하게 되고, 또한 전개 불량을 일으켜 버리기 때문에, 검사 편차가 생긴다. 평균 치환도의 상한은, 바람직하게는 1.3 이하이고, 보다 바람직하게는 0.9 이하이다. 더욱 바람직하게는 0.6 이하이다. 평균 치환도가 0.05 이상이면, 충분한 흡액량를 확보할 수 있다. 평균 치환도의 하한은 바람직하게는 0.1 이상이고, 보다 바람직하게는 0.2 이상이다.

또한, 상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유는, 카르복시메틸화한 시점에서는, 카르복시메틸기의 말단이 나트륨염으로 되어 있지만, 그 후, 산으로 처리하여 일부의 카르복시메틸기를 프로톤형으로 할 수 있다. 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 부분적으로 프로톤화하는 방법에는, 특별히 제한은 없지만, 알코올을 함유하는 용매를 이용하여 소정의 농도로 조정한 초산, 염산, 질산에 침지함으로써 프로톤화되는 것이 바람직하고, 알코올을 함유하는 용매를 이용하여 소정의 농도로 조정한 초산에 침지함으로써 프로톤화되는 것이 보다 바람직하다.

본 실시형태의 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드는, 캐치 앤드 릴리스 지수가 0.5 이하인 것이 바람직하다. 본 명세서 중, "캐치 앤드 릴리스 지수"란, 부여된 액체를 흡수 패드가 흡수하는 특성과, 부여된 액체를 흡수 패드가 유지하는 특성의 밸런스를 지표하는 지수이며, 이하의 식:

캐치 앤드 릴리스 지수=(100×C÷D)÷T

{식 중, C: 흡액량(g/100 ㎠), D: 평량(g/㎡), T: 릴리스 시간(분)}

에 따라 산출되는 것이다. 캐치 앤드 릴리스 지수가 지나치게 크면, 일단 흡수 패드에 흡수된 표지 시약이 크로마토그래프 매체 상을 역류하거나, 검사 편차가 생기거나 해 버린다. 캐치 앤드 릴리스 지수의 상한은, 보다 바람직하게는 0.3 이하이고, 더욱 바람직하게는 0.1 이하이다. 하한은, 바람직하게는 0.0001 이상이고, 보다 바람직하게는 0.001 이상이다. 캐치 앤드 릴리스 지수는, 상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유의 평균 치환도, 평균 섬유 직경, 섬유 길이 등 및/또는 상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 흡수 패드의 형태 등을 컨트롤함으로써 조정할 수 있다.

또한 본 명세서 중, "릴리스 시간"이란, 폭 4 ㎜×길이 25 ㎜의 크로마토그래프 매체 상에, 폭 4 ㎜×길이 25 ㎜의 흡수 패드를 어긋남이 없도록 중첩해 두고, 20 μL의 생리 식염수를 상기 흡수 패드 상에 조용히 빈틈없이 적하하였을 때의, 흡수 패드로부터 크로마토그래프 매체로 생리 식염수가 이행하기 시작할 때까지 요한 시간을 분 단위로 나타낸 수치를 말한다. 또한, "릴리스 시간"의 측정에는, 흡수 패드 치수와 생리 식염수의 액량의 관계성이 전술한 방법과 동등해지는 방법이면, 전술한 방법과는 다른 흡수 패드 치수 및 생리 식염수의 액량을 이용하여도 좋다.

상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유의 평균 섬유 직경은, 1 ㎛ 이상 100 ㎛ 이하인 것이 바람직하다. 평균 섬유 직경이 지나치게 굵으면, 전개되어 온 액을 흡수하였을 때, 흡수 패드의 전방 부분에 워터 블록을 만들어 버린다. 그에 의해, 전개액을 충분량 흡수하지 못하게 되고, 또한 전개 불량을 일으켜 버리기 때문에, 검사 편차가 생긴다. 섬유 직경의 상한은, 바람직하게는 80 ㎛ 이하이고, 보다 바람직하게는 70 ㎛ 이하이다. 평균 섬유 직경이 1 ㎛ 이상이면, 충분한 흡액량를 확보할 수 있다. 평균 섬유 직경의 하한은 바람직하게는 3 ㎛ 이상이고, 보다 바람직하게는 5 ㎛ 이상이다. 또한, 평균 섬유 직경은, 주사 전자 현미경(SEM, JEOL사 제조)을 사용하여, N=10으로 측정한 섬유 직경의 평균값을 평균 섬유 직경으로 하였다.

본 실시형태의 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단약 키트용 흡수 패드의 형태가 직물형, 편물형 또는 부직포형의 형태일 수 있고, 예컨대 부직포의 형태인 경우, 그의 평량(g/㎡)(즉, 부직포 중량(g)/부직포 면적(㎡))은, 10 g/㎡ 이상 400 g/㎡ 이하인 것이 바람직하다. 평량이 지나치게 낮으면, 이뮤노크로마토 진단약의 흡수 패드로서 충분한 흡액량이 얻어지지 않는다. 평량의 하한은, 보다 바람직하게는 20 g/㎡ 이상, 더욱 바람직하게는 30 g/㎡ 이상이다. 한편, 평량이 지나치게 높으면, 유연성이 손상되어, 이뮤노크로마토 진단 키트 제조 시의 취급이 현저히 손상되고, 결과로서 진단 결과의 편차로 이어진다. 평량의 상한은, 보다 바람직하게는 350 g/㎡ 이하, 더욱 바람직하게는 300 g/㎡ 이하, 보다 더욱 바람직하게는 250 g/㎡ 이하, 보다 더욱 바람직하게는 200 g/㎡ 이하, 보다 더욱 바람직하게는 190 g/㎡ 이하, 보다 더욱 바람직하게는 180 g/㎡ 이하이다.

본 실시형태의 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드의 두께는, 예컨대 직물형 또는 시트형인 경우, 0.03 ㎜ 이상 10.00 ㎜ 이하인 것이 바람직하다. 패드의 두께가 지나치게 두꺼우면, 예컨대, 이뮤노크로마토 진단 키트에 사용할 때, 하우징에의 수납이 곤란해지고, 결과로서 진단 결과의 편차가 커진다. 패드의 두께의 상한은, 보다 바람직하게는 9.00 ㎜ 이하, 더욱 바람직하게는 8.00 ㎜ 이하이다. 한편, 시트가 지나치게 얇으면, 이뮤노크로마토 진단 키트의 흡수 패드로서 충분한 흡액량을 확보할 수 없다. 패드의 두께의 하한은, 보다 바람직하게는 0.05 ㎜ 이상, 더욱 바람직하게는 0.10 ㎜ 이상이다. 본 명세서 중, 패드의 "두께"란, JIS-L1096에 준거하는 두께 시험에서, 하중을 1.96 ㎪로 하여 측정하여 얻어진 값을 말한다.

본 실시형태의 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드는, 생리 식염수에 함침시켰을 때의 흡액량이 5 g/100 ㎠ 이상 50 g/100 ㎠ 이하인 것이 바람직하다. 흡액량이 지나치게 크면, 이뮤노크로마토 진단 키트에 사용할 때, 흡액하면 구조가 무너져 버려 전개 불량을 일으켜 버린다. 흡액량의 상한은, 바람직하게는 50 g/100 ㎠ 이하, 보다 바람직하게는 30 g/100 ㎠ 이하이다. 흡액량이 5 g/100 ㎠ 미만이면, 소망의 효과를 발휘할 수 없고, 역류를 일으켜 버릴 우려가 있다. 흡액량의 하한은, 바람직하게는 5 g/100 ㎠ 이상, 보다 바람직하게는 10 g/100 ㎠ 이상이다.

상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유의 원료가 되는 (카르복시메틸화 전의)셀룰로오스 섬유로서는, 특별히 제한은 없고, 구리암모니아 레이온, 비스코스 레이온, 리오셀, 코튼, 펄프, 폴리노직 등의 공지의 셀룰로오스 섬유, 바람직하게는 구리암모니아 레이온, 비스코스 레이온, 보다 바람직하게는 구리암모니아 레이온을 들 수 있다. 셀룰로오스 섬유의 소재에는, 중합도가 낮은 것이 있고, 이러한 소재에서는 치환도를 높게 하면 섬유가 분해되기 쉬워 극력 낮은 치환도로 억제할 필요가 있는 것에 대하여, 구리암모니아 레이온을 이용하면, 중합도가 높고, 비교적 고치환도에 있어서도 붕괴되기 어렵다고 하는 이점이 있어 폭넓은 치환도를 선택하는 것이 가능하다.

상기 셀룰로오스 섬유로서는 장섬유 또는 단섬유 중 어느 것이어도 좋다. 장섬유에서는 연속 장섬유가 바람직하다. 본 명세서 중, 장섬유란, 섬유 길이가 10 ㎜ 이상인 것을 말하고, 섬유 길이는, 바람직하게는 20 ㎜ 이상이고, 보다 바람직하게는 50 ㎜ 이상이고, 더욱 바람직하게는 연속 장섬유이다. 단섬유 셀룰로오스 시트는, 단섬유이기 때문에, 치환도를 높게 하면 섬유가 분리되기 쉬워 극력 낮은 치환도로 억제할 필요가 있는 것에 대하여, 연속 장섬유 시트를 이용하면 비교적 고치환도에 있어서도 붕괴되기 어렵다고 하는 이점이 있어 폭넓은 치환도를 선택하는 것이 가능하다.

본 실시형태의 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드의 형태로서는, 면형, 직물형, 편물형 또는 부직포형의 형태인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는, 카르복시메틸화된 재생 셀룰로오스 섬유의 직물 또는 부직포, 더욱 바람직하게는 카르복시메틸화 재생 셀룰로오스 섬유의 부직포의 형태이다. 부직포형의 형태이면, 습윤 시에 겔화한 상태라도 섬유가 교락하고 있기 때문에, 습윤 시의 강도를 유지한 상태로 높은 흡액성을 얻을 수 있어, 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드로서 적합하게 사용할 수 있다.

본 실시형태의 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드에는, 소망의 작용 효과를 해치지 않는 범위에서 천연 또는 재생 셀룰로오스 섬유 유래 이외의 섬유, 예컨대 폴리에스테르 섬유, 폴리프로필렌 섬유, 나일론 섬유 등의 합성 섬유나, 폴리글리콜산, 폴리젖산, 폴리말산 등의 생체 흡수성 섬유가 포함되어 있어도 좋다. 소망의 효과를 해치지 않는 범위로서는, 이러한 소재가 50％ 이하인 것이 바람직하고, 30％ 이하인 것이 보다 바람직하다. 이러한 섬유는 장섬유여도 단섬유여도 좋다. 장섬유로서는 연속 장섬유가 바람직하다.

본 실시형태의 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드는, 여러 가지 용도에 따라, 시트를 더 적층한 것이어도 좋다. 부직포를 적층하는 경우, 열엠보스 가공, 초음파 융착 등의 열융착법, 니들 펀치, 워터 제트 등의 기계적 교락법, 핫멜트 접착제, 우레탄계 접착제 등의 접착제에 의한 방법, 압출 라미네이트 등을 비롯하여, 여러 가지 공지의 방법을 채용할 수 있고, 특별히 한정되는 것이 아니다.

시트의 적층에 이용되는 시트 소재는, 하등 한정되는 것이 아니며, 셀룰로오스, 열가소성 수지나, 폴리글리콜산, 폴리젖산, 폴리말산 등의 생체 흡수성 폴리머여도 좋다. 그 중에서, 열가소성 수지로서는, 폴리올레핀계 수지, 폴리에스테르계 수지, 폴리아미드계 수지일 수 있고, 구체적으로는, 에틸렌, 프로필렌, 1-부텐, 1-헥센, 4-메틸-1-펜텐, 1-옥텐 등의 α-올레핀의 단독중합체 또는 공중합체인 고압법 저밀도 폴리에틸렌, 선형 저밀도 폴리에틸렌(LLDPE), 고밀도 폴리에틸렌, 폴리프로필렌(프로필렌 단독중합체), 폴리프로필렌 랜덤 공중합체, 폴리1-부텐, 폴리4-메틸-1-펜텐, 에틸렌·프로필렌 랜덤 공중합체, 에틸렌-1-부텐 랜덤 공중합체, 프로필렌-1-부텐 랜덤 공중합체 등의 폴리올레핀, 폴리에스테르(폴리에틸렌테레프탈레이트, 폴리부틸렌테레프탈레이트, 폴리에틸렌나프탈레이트 등), 폴리아미드(나일론-6, 나일론-66, 폴리메타크실렌아디파미드 등), 폴리염화비닐, 폴리이미드, 에틸렌·초산비닐 공중합체, 폴리아크릴로니트릴, 폴리카보네이트, 폴리스티렌, 아이오노머, 이들의 혼합물 등을 예시할 수 있다. 특히, 본 실시형태에 사용하는 경우, 열이나 수분에 대한 안정성이나 범용성의 점에서, 폴리에틸렌테레프탈레이트, 폴리부틸렌테레프탈레이트, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌 중 어느 하나, 또는 혼합물이 적합하다.

일반적으로 열가소성 수지는 소수성의 것이 많아, 부직포로서 구조 형성하여도 흡수되는 일은 거의 없다. 본 실시형태에서는, 소수성의 열가소성 수지의 섬유로 구성되는 부직포를 사용하여, 친수화 처리를 행함으로써, 흡수의 편차를 저감시킬 수 있다는 것을 알 수 있다. 친수화의 방법에 대해서는 특별히 한정하지 않고, 물리적인 가공 방법이면, 예컨대 코로나 처리 또는 플라즈마 처리에 의한 친수화를 들 수 있고, 또한 화학적인 가공 방법, 예컨대 표면 관능기의 도입, 예컨대 산화 처리 등에 의해 술폰산기, 카르복실산기 등을 도입하는 것이나, 수용성 고분자, 예컨대 폴리비닐알코올(PVA), 폴리에스테르계 수지, 폴리스티렌술폰산, 또는 폴리글루타민산 및/또는 계면활성제, 예컨대 비이온성 계면활성제, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 또는 양쪽이온성 계면활성제 등의 처리제를 부직포에 딥닙법이나 스프레이 코트법 등으로 함침, 코팅하는 방법 등 공지의 방법을 들 수 있다. 흡수 패드에 필요한 흡수성을 고려하여, 적절한 친수화 가공 방법 및 조건, 예컨대 처리제의 사용량 및 관능기의 도입량 등을 선택할 수 있다.

시트의 적층에 부직포를 이용하는 경우, 그 부직포의 제법에는 특별히 제한은 없고, 스펀 본드 부직포, 멜트 블로운 부직포, 습식 부직포, 건식 부직포, 건식 펄프 부직포, 플래시 방사 부직포, 개섬 부직포 등을 들 수 있고, 특히 극세 섬유를 포함하는 부직포로서, 멜트 블로운 부직포나 플래시 방사 부직포가 바람직하다.

시트의 적층에 이용하는 부직포로서는, 평량이 20 g/㎡ 이상 200 g/㎡ 이하, 두께가 0.06 ㎜ 이상 1.20 ㎜이하, 그리고 평균 섬유 직경이 0.7 ㎛ 이상 5.0 ㎛ 이하인 것을 적합하게 사용할 수 있다.

본 실시형태의 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드의 제조 방법예를 이하에 나타내는데, 이 방법에 한정되는 것이 아니다.

천연 또는 재생 셀룰로오스 섬유의 구조체를 알코올 함유 수산화나트륨 수용액 중에서 알칼리 상태를 유지하면서, 35℃에서 30분 교반한다. 그 후, 반응 용기 중의 시약을 배액한 후, 알코올을 포함하는 모노클로로초산나트륨을 첨가하여, 30℃∼55℃에서 1∼12시간 교반한다. 그때의, 치환도의 제어는, 반응액과 구조체의 욕비, 온도 및 시간에 따라 제어한다. 또한, 그 외의 반응 조건은, 생산 비용 등도 고려하면서 적절하게 변경할 수 있다. 얻어진 구조체를 초산 함유 에탄올 수용액으로 pH 6.0∼8.0로 조정한 후, 70 wt％, 90 wt％, 100 wt％ 에탄올로 알코올 치환을 행한다. 조금이라도 수분을 포함하면 딱딱해지기 때문에, 서서히 알코올 농도를 올려 감으로써, 알코올 치환을 확실하게 행하여, 형태 안정성을 유지할 수 있다. 그 후 소정의 농도로 조정한 산 함유 에탄올 용액에 침지하고, 1시간 교반하여, 70 wt％, 90 wt％, 100 wt％ 에탄올로 알코올 치환을 행하고, 건조시켜, 프로톤화한 시트형 구조체를 얻는다. 또한 소정의 농도로 조정한 수산화칼슘 함유 에탄올 수용액에 침지하여, 1시간 교반하고, 70 wt％, 90 wt％, 100 wt％ 에탄올로 알코올 치환을 행하고, 건조시켜, 본원 실시형태의 시트형의 패드를 얻는다.

본 실시형태의 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드를 이용하는 이뮤노크로마토 진단 키트를 이용하여 실시하는 「진단 방법」이란, 인비트로에 있어서, 이뮤노크로마토 진단 키트를 이용하여 행해지는 여러 가지 진단을 가리킨다. 진단 대상은 특별히 한정되는 것이 아니며, 사람용, 동물용, 식품용, 식물용, 그 외 환경 검사 등 여러 가지 진단 대상의 검사에 이용할 수 있다. 일반적인 진단의 순서에서는, 검사 대상으로부터 검체 시료를 채취하고, 필요하다면 그것을 추출이나 여과 등의 전처리를 행하여, 샘플 패드에 적하하고, 검사 개시로부터 소정 시간 대기하여, 검사 대상 물질의 유무에 따라 다른 발색으로부터 진단 결과를 판단한다. 물론 이 순서에 한정되지 않고, 비슷한 순서, 원리의 진단에도 이용할 수 있다. 바람직한 것은, 검체 시료를 미리 여과해 둠으로써 여분의 이물이나 협잡물을 제거할 수 있고, 그에 의해 한층 더 진단의 신속화나, 진단 정밀도의 향상을 기대할 수 있다.

본 실시형태의 이뮤노크로마토 진단 키트란, 여러 가지 검체 중의 검사 대상 물질의 유무를 간편하게 검출하기 위한 것이다. 진단 키트의 종류로서는, 라테랄 플로우식이나 플로우 스루식이 있다. 표지 시약이나 흡수 패드를 이용하는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 라테랄 플로우식이다. 또한, 라테랄 플로우식 중에서도, 딥스틱 타입과 카세트 타입이 있는데, 이들 타입은 특별히 한정되지 않는다. 진단 키트의 구성은, 특별히 한정되는 것이 아니며, 해당 분야에서 일반적으로 이용되는 구성이면 어느 것이라도 상관없다. 부재로서는, 해당 분야에서 이용되는 것이면 특별히 한정되지 않고, 예컨대 도 1에 나타내는 (a) 샘플 패드, (b) 컨쥬게이트 패드(항체 감작 표지 시약을 포함한다), (e) 크로마토그래프 매체막, (f) 흡수 패드 및 (g) 대지(臺紙)를 들 수 있다. 또한, 필요에 따라 이들 부재를 일부 생략하고 있어도 상관없다.

도 1에 나타내는 바와 같이, (f) 흡수 패드란, 이뮤노크로마토에 있어서 측정 대상인 검체를 마지막으로 흡수하는 부분이며, (c)는 테스트 라인(TL), (d)는 컨트롤라인(CT)이다. 또한, 상기한 바와 같이, 종래기술의 일반적인 흡수 패드로서는, 셀룰로오스 여지, 종이, 유리 섬유, 유리 파이버 등을 들 수 있다.

샘플 패드는, 이뮤노크로마토에 있어서 측정 대상인 검체를 가장 먼저 수취하는 부분이다. 일반적인 샘플 패드로서는, 셀룰로오스 여지, 종이, 유리 섬유, 유리 파이버, 아크릴 섬유, 나일론 섬유, 각종 직물 등을 들 수 있다. 또한, 필요에 따라 전처리를 행하여도 상관없다. 예컨대, 완충액, 계면활성제, 단백, 검체 시료 중의 협잡물을 트랩하는 시약, 방부제, 항균제, 산화 방지제, 흡습제 등을 미리 포함시키는 등의 처리를 행하여도 상관없다.

컨쥬게이트 패드는, 항체 감작 표지 시약 등의 표지 입자를 건조 고정화해 두는 부분이다. 일반적인 컨쥬게이트 패드로서는, 유리 섬유, 유리 파이버, 아크릴 섬유, PET 섬유 단체 또는 복합된 부직포, 직포 등을 들 수 있다. 또한, 필요에 따라 전처리를 행하여도 상관없다.

컨쥬게이트 패드에 고정되는 표지 시약이란, 물, 완충액 등에 불용성이며, 색소나 염료 등이 담지된 입자형 물질을 가리킨다. 입자를 구성하는 소재는 특별히 한정되지 않지만, 이러한 표지 시약으로서는, 예컨대 금 콜로이드, 백금 콜로이드, 은 콜로이드, 셀레늄 콜로이드 등의 금속 콜로이드 입자, 폴리스티렌 라텍스 등의 스티렌계 라텍스나 아크릴산계 라텍스 등을 착색한 착색 라텍스 입자, 규소 원자 및 산소 원자로 이루어지는 3차원 구조체로 구성되는 실리카를 착색한 착색 실리카 입자, 셀룰로오스를 착색한 착색 셀룰로오스 입자, 카본 블랙 등의 착색 성분을 그대로 입자화한 표지 시약, 자성 입자 등을 들 수 있다. 또한, 상기 표지 시약은 형광 발광성 입자여도 상관없다.

표지 시약은, 항체 등의 피검출물에 특이적으로 결합하는 물질을 담지할 필요가 있지만, 그 담지 방법은 특별히 한정되지 않는다. 예컨대, 물리적인 흡착에 의한 담지, 공유 결합에 의한 담지, 이들의 조합에 의한 담지 등을 들 수 있다. 담지하는 물질의 종류나 양도 특별히 한정되지 않는다. 담지하는 물질의 종류로서는 항체가 가장 일반적이며 바람직하다. 또한, 담지하는 방법으로서는, 용이함의 관점에서는 물리적인 흡착에 의한 담지가, 안정성이나 성능 등의 관점에서는 공유 결합에 의한 담지가 바람직하다.

본 실시형태의 이뮤노크로마토 진단 키트로 진단할 수 있는 대상은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 구체예로서는 이하의 것을 들 수 있다: 암 마커, 호르몬, 감염증, 자기 면역, 혈장 단백, TDM, 응고·섬유소 용해(線溶), 아미노산, 펩티드, 단백, 유전자, 세포 등. 보다 구체적으로는, CEA, AFP, 페리틴, β2 마이크로, PSA, CA19-9, CA125, BFP, 엘라스타아제 1, 펩시노겐 1·2, 변잠혈, 요중 β2 마이크로, PIVKA-2, 요중 BTA, 인슐린, E3, HCG, HPL, LH, HCV 항원, HBs 항원, HBs 항체, HBc 항체, HBe 항원, HBe 항체, HTLV-1 항체, HIV 항체, 톡소플라즈마 항체, 매독, ASO, A형 인플루엔자 항원, A형 인플루엔자 항체, B형 인플루엔자 항원, B형 인플루엔자 항체, 로타 항원, 아데노 바이러스 항원, 로타·아데노 바이러스 항원, A군 렌서 구균, B군 렌서 구균, 칸디다 항원, CD균, 크립토코쿠스 항원, 콜레라균, 수막염균 항원, 과립균 엘라스타아제, 헬리코박터 파일로리 항체, O157 항체, O157 항원, 렙토스피라 항체, 아스페르길루스 항원, MRSA, RF, 총IgE, LE 테스트, CRP, IgG, A, M, IgD, 트랜스페린, 요중 알부민, 요중 트랜스페린, 미오글로빈, C3·C4, SAA, LP(a), α1-AC, α1-M, 합토글로빈, 마이크로트랜스페린, APR 스코어, FDP, D 다이머, 플라스미노겐, AT3, α2PI, PIC, PAI-1, 프로틴 C, 응고 제X3 인자, IV형 콜라겐, 히알루론산, GHbA1c, 그 외의 각종 항원, 각종 항체, 각종 바이러스, 각종 균, 각종 아미노산, 각종 펩티드, 각종 단백질, 각종 DNA, 각종 세포, 각종 알레르겐, 각종 잔류 농약, 각종 유해물을 들 수 있다.

이뮤노크로마토 진단 키트에 이용되는 크로마토그래프 매체는 특별히 한정되는 것이 아니며, 일반적으로 이용되는 여러 가지 크로마토그래프 매체를 이용할 수 있다. 구체적으로는, 니트로셀룰로오스 멤브레인을 들 수 있다.

이하, 이뮤노크로마토 진단 키트의 제작 방법의 일례에 대해서 설명한다.

소정의 농도로 조정한 표지 시약의 분산액을 준비하여, 완충액, 항체를 부가하고, 온도 조정을 행하면서 일정 시간 교반하여, 표지 시약에 항체를 흡착시킨다. 일정 시간 교반 후, 블로킹제를 더 부가하여 온도 조정을 행하면서 일정 시간 교반함으로써, 착색 셀룰로오스 입자의 블로킹을 행한다. 블로킹제로서는, 검사 대상 물질이나 검체 또는 그것을 희석하는 용액의 조성 등에 따라 여러 가지 블로킹제를 이용할 수 있다. 항체 흡착·블로킹 후의 표지 시약을 세정하기 위해, 원심 분리를 행하여, 잉여인 항체와 블로킹제가 포함된 상청액과 침강한 입자를 분리하고, 상청액을 경사분리로 제거한다. 침강한 입자에 완충액 등의 액체를 부가하고, 필요에 따라 초음파 등으로 분산 처리를 행한다. 이 원심 분리에 의한 침강, 상청의 제거, 액체의 첨가라고 하는 일련의 조작에 의한 세정을 필요 횟수 행하여, 항체 흡착·블로킹을 행한 입자를 소정의 농도 함유한 분산액을 조제한다. 이 분산액에 필요에 따라 단백질, 계면활성제, 수크로스나 트레할로오스 등의 당을 부가하고, 얻어진 용액을 유리 파이버제의 컨쥬게이트 패드에 일정량 도포하고, 건조시켜, 검출 시약 함유부를 조제한다. 또한 재생 셀룰로오스 연속 장섬유 부직포에 필요에 따라 완충액, 계면활성제, 단백, 검체 시료 중의 협잡물을 트랩하는 시약, 방부제, 항균제, 산화 방지제, 흡습제 등을 도포하고, 건조시켜, 샘플 패드를 조제한다. 또한 소정의 위치에 항체를 고정화한 크로마토그래프 매체막제의 크로마토그래프 매체, 검체를 흡수하기 위한 셀룰로오스 여지제의 흡수 패드를 조제한다. 이들을 배킹 시트라고 불리는 접착 부위를 갖는 시트에 고정화하여, 소정의 사이즈로 재단함으로써 이뮤노크로마토 진단 키트를 제작한다.

실시예

이하, 본 발명을 실시예, 비교예에 의해 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 실시예에만 한정되는 것이 아니다.

<평균 치환도의 측정>

(i) 산도, 알칼리도

시료(무수물) 약 1 g을 300 mL 삼각 플라스크에 정밀하게 재서 담고, 물을 약 200 mL 부가하여 녹인다. 이것에 0.05 몰/L 황산 5 mL를 피펫으로 부가하여, 10분간 자비(煮沸)한 후 냉각하고, 페놀프탈레인 지시약을 부가하여, 0.1 몰/L 수산화칼륨으로 적정한다(SmL). 동시에 공시험을 행하여(BmL), 하기 식 (1):

알칼리도={(B-S)×f}/시료 무수물 중량(g)…식 (1)

{식 중, f: 0.1 몰/L 수산화칼륨 역가}

에 따라 산출한다.

여기서, (B-S)×f값이 (-)일 때에는 알칼리도를 산도로 대체한다.

(ii) 평균 치환도

시료(무수물) 0.5∼0.7 g을 정밀하게 재서, 여과지에 싸서 자제(磁製) 도가니 중에서 회화한다. 냉각한 후, 이것을 500 mL 비이커에 옮기고, 물을 약 250 mL, 또한 피펫으로 0.05 몰/L 황산 35 mL를 부가하여 30분간 자비한다. 이것을 냉각하고, 페놀프탈레인 지시약을 부가하고, 과잉의 산을 0.1 몰/L 수산화칼륨으로 역적정하여, 하기 식 (2)와 (3):

A=(a×f-b×f1)/시료 무수물 중량(g)-알칼리도(또는 +산도)…식 (2)

치환도=(162×A)/(10000-80×A)…식 (3)

{식 중, A: 시료 1 g 중의 결합 알칼리에 소비된 0.05 몰/L 황산의 양(mL), a: 0.05 몰/L 황산의 사용량(mL), f: 0.05 몰/L 황산의 역가, b: 0.1 몰/L 수산화칼륨의 적정량(mL), f1: 0.1 몰/L 수산화칼륨의 역가}

에 따라 치환도를 산출하고, 그 평균값(N=3 이상)을 평균 치환도로 한다.

<흡액량 C(g/100 ㎠)>

시트형 구조체의 흡액성을, 자유로운 형태 변화를 허용한 조건을 기초로 측정하였다. 구체적으로는 시트형 구조체를 5 ㎝×5 ㎝로 절단하여, 샬레에 배치한다. 그 후, 샘플 중량의 50배량의 생리 식염수를 37℃로 가온한 후, 첨가하여, 37℃의 항온기 내에서 30분간 정치한다. 그 후 인큐베이트 전후의 중량으로부터 하기 식 (4):

흡액량 C(g/100 ㎠)=(B-A)×4…식 (4)

{식 중, A: 침지 전의 건조 상태에서의 중량(g), B: 30분간 인큐베이트 후의 중량(g)}

에 따라, 흡액량를 산출한다.

<평량 D(g/㎡)>

0.5 ㎡ 이상의 면적의 부직포를, 105℃에서 일정 중량이 될 때까지 건조 후, 20℃, 65％ RH의 항온실에 16시간 이상 방치하여 그 중량을 측정하고, 부직포의 단위 면적당의 중량을 측정하였다.

<두께>

JIS-L1096에 준거하는 두께 시험에서, 하중을 1.96 ㎪로 하여 측정하여 얻어지는 값을 말한다.

<릴리스 시간(분)>

폭 4 ㎜×길이 25 ㎜의, 니트로셀룰로오스로 이루어지는 크로마토그래프 매체 상에, 폭 4 ㎜×길이 25 ㎜의 흡수 패드를 어긋남이 없게 중첩해 둔 시험편을 복수조 준비하고, 생리 식염수를 각 시험편의 흡수 패드 상에 20 μL씩 조용히 빈틈없이 적하하였다. 생리 식염수의 적하 완료로부터 시간 T1(분)이 경과하였을 때, 1조의 시험편에 대하여, 흡수 패드를 크로마토그래프 매체 상으로부터 제거하여 크로마토그래프 매체의 표면 상태를 육안으로 보아 관찰하였다. 이때, 생리 식염수로 젖음으로써 색이 변화한 부분이 크로마토그래프 매체 표면에 있다고 인정된 경우는, 상기 흡수 패드의 릴리스 시간을 T1(분)로 하였다. 한편, 색이 변화한 부분이 있다고 인정되지 않은 경우는, 생리 식염수의 적하 완료로부터 시간 T2(분)(단, T1＜T2)가 경과하였을 때에, 시간 T1(분) 경과 후에 확인한 시험편과는 다른 1조의 시험편에 대하여, 상기와 동일한 방법으로 크로마토그래프 매체 표면의 색의 변화를 판단하였다. 이상의 조작을, 젖음에 의한 색의 변화가 크로마토그래프 매체 표면에 인정되게 될 때까지 반복함으로써, 릴리스 시간을 결정하였다. 단, 생리 식염수의 적하 완료로부터 900분이 경과하기까지의 동안의 어느 시간에 있어서도 액 젖음에 의한 크로마토그래프 매체 표면의 색의 변화가 인정되지 않은 경우는, 그 흡수 패드의 릴리스 시간을 900분으로 하였다.

<이뮤노크로마토 진단 키트의 백 그라운드(BG 착색)>

적절한 폭으로 컷트한 이뮤노크로마토 진단 키트를 플라스틱의 하우징에 넣었다. 다음에, 1 중량％ BSA를 포함하는 66 mM, pH 7.4의 PBS를 조제하여, 음성 검체로 하였다. 얻어진 하우징에 든 진단 키트를 이용하여, 100 μL의 음성 검체를 진단 키트의 샘플 적하부에 적하하고, 5분 후에, 하마마츠호토닉스사 제조의 이뮤노크로마토 리더 C10066-10을 이용하여, TL과 CL 사이의 1점의 발색 강도(단위는 mABS)를 측정하였다. 여기서 발색 강도가 20 mABS 이상인 경우를 BG가 착색되어 있다고 판단하였다. 여기서 20 mABS 이상으로 한 이유는, 20 mABS 이상이 되면 육안으로 보아 확실하게 착색을 확인할 수 있기 때문이다.

<이뮤노크로마토 진단 키트의 역류 확인>

역류의 확인에 대해서는, 상기 백 그라운드의 확인 실험과 동일한 방법으로 실시하였다. 적절한 폭으로 컷트한 이뮤노크로마토 진단 키트를 플라스틱의 하우징에 넣고, 다음에, 1 중량％ BSA를 포함하는 66 mM, pH 7.4의 PBS를 조제하여, 음성 검체로 하였다. 얻어진 하우징에 든 진단 키트를 이용하여, 100 μL의 음성 검체를 진단 키트의 샘플 적하부에 적하하고, 20분 후에, TL과 CL 사이의 1점의 발색 강도(단위는 mABS)를 측정하였다. 여기서 발색 강도가 20 mABS 이상인 경우를 BG가 착색되어 있다고 판단하였다(판정은 ×로 기록). 착색되지 않은 경우는 ○로 기록하였다.

<테스트 라인(TL) 발색 강도의 편차>

TL 발색 강도의 측정에 대해서는, 상기와 같이 양성 검체 100 μL를 진단 키트의 샘플 적하부에 적하하고, 5분 후의 테스트 라인의 발색 강도(mABS)를 이뮤노크로마토 리더에 의해 측정하였다. 이 측정을 계 30회 행하여, 평균 발색 강도(mABS)를 TL 발색 강도로 하였다.

또한, 동시에 TL 발색 강도의 표준 편차를 구하고, 재현성을 나타내는 지표 ％CV는 하기 식 (5):

％CV=(TL 발색 강도의 표준 편차/TL 발색 강도)×100…식 (5)

에 따라 산출하였다.

[참고예 1(샘플 1∼15)]

재생 셀룰로오스 연속 장섬유 시트형 구조체(큐프라 시트형 구조체)(샘플 1∼12), 큐프라 단섬유 부직포(샘플 13), 리오셀 단섬유 부직포(샘플 14) 및 레이온 단섬유 부직포(샘플 15)(폭 20 ㎝, 각 평량, 각 두께 0.2∼7.0 ㎜): 100 g을 반응 용기에 넣고, 그 후, 수산화나트륨 함유 에탄올 수용액(물: 875 g, 에탄올: 875 g, NaOH: 162.5 g)을 부가한 후, 35℃에서 30분 교반하였다. 다음에, 반응 용기 중의 시약을 배액한 후, 모노클로로초산나트륨 함유 에탄올 수용액(물 300 g, 에탄올 960 g, 모노클로로초산나트륨 122.5 g)을 첨가하여, 30 또는 50℃에서 1∼12시간 교반하였다. 그 후, 건조시켜, 카르복시메틸화한 시트형 구조체를 얻었다. 전술에서 얻은 시트형 구조체를 초산 함유 에탄올 수용액(초산: 37.5 g, 증류수: 375 g, 에탄올: 875 g)에 의해 pH 6.0∼8.0으로 조정한 후, 70 wt％ 에탄올 수용액 1375 g으로 1회, 90 wt％ 에탄올 수용액 1250 g으로 1회 세정하고, 100 wt％ 에탄올 1250 g으로 2회 알코올 치환을 행하였다. 그 후 초산 함유 에탄올 용액 1250 g(1∼100 wt％) 또는 염산 함유 에탄올 수용액(2∼5 wt％)에 침지하여, 1시간 교반한 후, 70 wt％ 에탄올 수용액 1375 g으로 1회, 90 wt％ 에탄올 수용액 1250 g으로 1회 세정하고, 100 wt％ 에탄올 1250 g으로 2회 알코올 치환을 행하고, 건조시키고, 또한 105℃, 6 h 또는 120℃, 3 h의 조건 하에서 열풍 건조기에 넣어, 시트형 구조체를 얻었다. 얻어진 시트형 구조체(샘플 1∼15)의 평균 치환도, 캐치 앤드 릴리스 지수, 평량, 두께 및 흡액량를 이하의 표 1에 나타낸다. 이들 샘플 1∼15를, 흡수 패드로서 사용하였다.

[항체 감작 금 콜로이드 입자의 조제]

금 콜로이드 입자 현탁액(다나카기킨조쿠사 제조, 평균 입자 직경 40 ㎚, 입자 농도 0.006 wt％, 평균 입자 직경 40 ㎚) 2500 μL에, 인산 완충액(50 mM, pH 7.0)을 600 μL 부가하고, 또한 항hCG-α 마우스 항체(Fitzgerald사 제조, 모노클로널 항체)의 0.1％ 수용액을 200 μL 부가하여, 보텍스로 교반한다. 계속해서, 25℃에서 10분간, 온도 조절하면서 교반하였다. 상기 현탁액에 1％의 PEG 수용액을 300 μL, 10％의 BSA 수용액(pH 9.0, 50 mM 붕산 함유)을 600 μL 첨가하여, 보텍스로 교반하였다. 그 후, 원심 분리 조작(10000 g, 30분간)을 행하여, 상청액을 제거하였다. 그 잔사에, 1％ BSA 수용액(0.05％ PEG, 150 mMNaCl, pH 8.2, 20 mM 트리스 함유)을 11000 μL 첨가하여, 보텍스로 교반하였다. 그 후, 원심 분리조작(10000 g, 30분간)을 행하여, 상청액을 제거하였다. 그 잔사에, 1％ BSA 수용액(0.05％ PEG, 150 mM NaCl, pH 8.2, 20 mM 트리스 함유)을 900 μL 첨가하여, 초음파 처리를 30초간 행하였다.

[컨쥬게이트 패드에의 표지 시약의 함침, 건조]

유리 바이버제 컨쥬게이트 패드(Ahlstrom사 제조, #8951)를 높이 10 ㎜, 길이 300 ㎜의 형상으로 컷트하였다. 그 후, 항체 감작 금 콜로이드 입자 분산액을 1020 μL 균등하게 도포하여, 50℃에서 60분 건조시켰다.

[샘플 패드의 전처리]

샘플 패드(Millipore사 제조, C048)를, 대과잉의 2.0 중량％의 BSA(시그마알드리치사 제조, A7906)와 2.0 중량％의 Tween-20(등록 상표)을 함유하는 PBS 완충액(66 mM, pH 7.4)에 함침하고, 여분의 액을 제거한 후에 50℃에서 60분 건조시켰다. 계속해서 높이 18 ㎜, 길이 300 ㎜의 형상으로 컷트하였다.

[포착 항체 도포 니트로셀룰로오스막의 조제]

니트로셀룰로오스막(Millipore사 제조, SHF0900425)을 높이 25 ㎜, 길이 300 ㎜의 형상으로 컷트하였다. 액체 도포 장치(무사시엔지니어링사 제조, 300DS)를 이용하여, 0.1 중량％ 항hCG-β 마우스 항체(MedixBiochemica사 제조, 6601)를 포함하는 PBS 용액(66 mM, pH 7.4)을 0.1 μL/㎜의 비율로 높이 7 ㎜의 부분에 도포하였다. 계속해서 0.1 중량％의 항마우스-토끼 항체(Daco사 제조, Z0259)를 포함하는 PBS 용액(66 mM, pH 7.4)을 0.1 μL/㎜의 비율로 높이 12 ㎜의 부분에 도포하였다. 계속해서 37℃에서 30분 건조시켰다.

[이뮤노크로마토 진단 키트의 조제]

배킹 카드(Adhesives Reserch사 제조, AR9020)에, 조제한 포착 항체 도포 니트로셀룰로오스막, 참고예 1에서 제조한 흡수 패드(샘플 1∼15), 표지 시약을 함유한 컨쥬게이트 패드, 샘플 패드를 붙였다. 계속해서 재단기에 의해 5 ㎜의 폭으로 컷트하여, 폭 5 ㎜, 높이 60 ㎜의 이뮤노크로마토 진단 키트를 얻었다.

[실시예 1∼15]

[이뮤노크로마토 진단 키트의 성능 평가]

이하의 표 1에 나타내는 샘플 1∼15를, 각각 흡수 패드로서 이용하여 평가하였다. 이뮤노크로마토 진단 키트폭을 5 ㎜, 또한, 두께가 0.2 ㎜ 이상인 흡수 패드를 이용하였는데 성능 평가에 있어서는, 전개액의 전개 가능량이 대략 80∼120 μL가 되기 때문에, 실제로 100 μL를 전개하여 평가하였다. 또한, 키트폭을 2.5 ㎜로 한 것, 또는 두께가 0.2 ㎜ 미만인 흡수 패드를 이용한 것에서는, 전개액의 전개 가능량이 대략 30∼80 μL가 되기 때문에, 실제로 50 μL를 전개하여 평가하였다. 평가 결과를 이하의 표 2에 나타낸다. 어느 진단 키트도 편차가 적어, 역류를 야기하지 않았다. 또한, 어느 진단 키트도 이탈 섬유가 적어, 공정상의 안전성을 확보할 수 있었다.

[샘플 16]

재생 셀룰로오스 연속 장섬유 시트형 구조체(큐프라 시트형 구조체)(폭 20 ㎝, 100 g/㎡ 평량, 두께 0.9 ㎜)를 준비하였다.

[샘플 17]

재생 셀룰로오스 연속 장섬유 시트형 구조체(큐프라 시트형 구조체)(폭 20 ㎝, 100 g/㎡ 평량, 두께 1.0 ㎜)를 준비하고, 사용하는 모노클로로초산의 사용량을 늘려, 치환도가 커지도록 조정한 것 이외에는, 참고예 1과 동일한 방법으로 처리를 실시하여, 시트형 구조체를 얻었다.

[샘플 18]

재생 셀룰로오스 연속 장섬유 시트형 구조체(큐프라 시트형 구조체)(폭 20 ㎝, 300 g/㎡ 평량, 두께 4.0 ㎜)를 준비한 것 이외에는, 참고예 1과 동일한 방법으로 처리를 실시하여, 시트형 구조체를 얻었다.

[샘플 19]

레이온 단섬유 시트형 구조체(폭 20 ㎝, 300 g/㎡ 평량, 두께 12.0 ㎜)를 준비한 것 이외에는, 참고예 1과 동일한 처리를 행하여, 시트형 구조체를 얻었다.

[샘플 20]

레이온 단섬유 시트형 구조체(폭 20 ㎝, 430 g/㎡ 평량, 두께 6.7 ㎜)를 준비한 것 이외에는, 참고예 1과 동일한 처리를 행하여, 시트형 구조체를 얻었다.

[비교예 1∼7]

[이뮤노크로마토 진단 키트의 성능 평가]

이하의 표 3에 나타내는 샘플 16∼20을, 각각, 이용하여 평가하였다. 상기 샘플 16∼20 및 유리 파이버제 흡수 패드(74 g/㎡ 평량, 두께 0.5 ㎜), 셀룰로오스제 흡수 패드(180 g/㎡ 평량, 두께 0.51 ㎜)를 사용한 것 이외에는, 실시예 1과 동일한 방법으로 평가를 실시하였다. 평가 결과를 이하의 표 4에 나타낸다. 그 결과, 카르복시메틸화하지 않은 샘플 16은 역류를 야기하고, 평균 치환도가 본원 범위를 상회하고 있는 샘플 17은 전개 중에 흡수 패드의 겔이 붕괴되어, 편차가 커져 버렸다. 샘플 18은 캐치 앤드 릴리스 지수가 지나치게 높은 탓에, 검사 결과의 편차가 커졌다. 샘플 19는 두께가 지나치게 두꺼운 탓에 유연성이 손상되어, 단단히 접합을 할 수 없어, 편차가 커졌다. 샘플 20은 평량이 지나치게 큰 탓에 유연성이 손상되어, 취급성이 현저히 저하하고, 단단히 접합을 할 수 없어, 편차가 커졌다. 유리 파이버제 흡수 패드와 종래부터 사용되고 있는 셀룰로오스제 흡수 패드는, 역류가 생겨 버렸다. 또한, 유리 파이버를 이용하면 이탈 섬유가 많아, 공정상의 안전성 확보가 곤란하였다.

본 발명의 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드를 이용한 이뮤노크로마토 진단 키트는, 발색 강도의 편차가 적어 재현성이 우수한 것이 된다. 또한, 역류도 방지할 수 있기 때문에, 각종 이뮤노크로마토 진단 키트의 흡수 패드로서 적합하게 이용 가능하다.

(a) 샘플 패드
(b) 컨쥬게이트 패드(항체 감작 표지 시약을 포함한다)
(c) 테스트 라인(TL)
(d) 컨트롤 라인(CT)
(e) 크로마토그래프 매체막 샘플 패드
(f) 흡수 패드
(g) 대지

Claims (6)

1. 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드로서, 상기 카르복시메틸화된 셀룰로오스 섬유를 구성하는 글루코오스 단위 중의 수산기의 평균 치환도가 0.05 이상 1.5 이하인 것을 특징으로 하는 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.
2. 제1항에 있어서, 상기 패드의 캐치 앤드 릴리스 지수가 0.5 이하인, 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 패드의 평량이 10 g/㎡ 이상 400 g/㎡ 이하이고, 또한 두께가 0.03 ㎜ 이상 10.00 ㎜ 이하인, 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 패드의, 생리 식염수에 함침시켰을 때의 흡액량이 5 g/100 ㎠ 이상 50 g/100 ㎠ 이하인, 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 패드가 단층의 시트 또는 적층한 시트의 형태인, 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 기재된 이뮤노크로마토 진단 키트용 흡수 패드를 포함하는 이뮤노크로마토 진단 키트.

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