JP2015232467A - ラテラルフロー用テストストリップ、分析システム、及びラテラルフロー用テストストリップの製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】従来技術と比較して、より強度が高いシグナルを得ることを可能とするラテラルフロー用テストストリップを提供する。
【解決手段】ラテラルフロー用テストストリップ（１）は、毛細管現象を利用して、滴下された試料を、サンプルパッド（１１）、結合パッド（１２）、メンブレン（１３）、吸収パッド（１４）の順に浸潤させ、内部に展開する。サンプルパッドは、滴下した試料を一定時間保持可能な部材である。結合パッドは、前記試料に含まれる分析対象物に特異的な検出対象捕捉物質が標識された粒子を乾燥状態で保持する部材である。メンブレンは、分析対象物に特異的親和性を持つ物質が固相化された検出部位を有し、標識粒子を検出する。メンブレンは、ブロッキング溶液中に浸されることなく製造された部材である。吸収パッドは、最終的に試料を吸収する。
【選択図】図１

Description

本発明は、試料中の分析対象物の検出や濃度測定に用いられるラテラルフロー用テストストリップに関する。

試料中の分析対象物を検出する従来からの手法として、免疫分析法が知られている。例えば、免疫分析法の１つであるＥＬＩＳＡ法は、高感度検出が可能であることから広く普及している。しかし、ＥＬＩＳＡ法は操作時間や反応時間に長時間を要することや、測定操作が煩雑等の問題がある。そこで近年、ＥＬＩＳＡ法に代わる免疫分析法として、抗体を固相化した支持体（メンブレン）の一端に試験溶液を吸収させて、毛細管現象を利用して、試験溶液を展開するラテラルフロー法や、抗体を固定化した支持体の膜厚方向に試験溶液を通過させるスロースルー法を利用した分析法が注目されている。

これらの分析法の中でも特に、ラテラルフロー法は、装置（ストリップ）が小型で可搬性に優れ、ＥＬＳＩＡに比べて保存安定性、迅速測定、判定の容易さ、付属装置が不要等の様々な点において優れている。ラテラルフロー用テストストリップは、迅速且つ簡易に試料中の分析対象物を検出できるため、例えば、臨床分野、食品分野、環境検査等において広く応用されている。特に、妊娠検査薬におけるホルモン検出、インフルエンザ検査におけるウイルス検出、ウイルス感染おける抗体検出等で利用されている。

関連する技術として、特許文献１にイムノクロマトグラフィー用試験片が開示されている。このイムノクロマトグラフィー用試験片は、少なくとも、被検出物と特異的に反応する特異的結合物が担持された不溶性担体と、メンブラン上に固定された被検出物と特異的に反応する特異的結合物から成る。このイムノクロマトグラフィー用試験片では、不溶性担体が牛血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロッキングされ、かつ、メンブランがカゼインでブロッキングされる。

特開２００９−１３３７４０号公報

特許文献１のように、従来手法では、抗体をメンブレンに固定化した後、タンパク質の非特異的吸着を防ぐために、ブロッキング工程を行うのが好ましいとされてきた。例えば、ブロッキング工程においては、アルブミン、カゼイン、ポリビニルアルコール等のブロッキング剤の溶液でそのメンブレンを浸潤させた後に乾燥させる。
しかしながら、メンブレンへのブロッキング工程を行う従来手法においては、ブロッキング工程により、抗原の検出のためメンブレンに塗布した抗体がブロッキング溶液中に流出する可能性があった。そのため、分析対象物から得られるシグナル（発色や蛍光等）の強度が低下し、検出感度が低下するという問題があった。分析対象物質の濃度が低い場合、検出感度は極めて重要であり、検出感度を高める為には、得られるシグナルの強度を更に高めることが必要となる。

そこで、本発明は、上記の課題を解決するため、メンブレンへのブロッキング工程を行わずに製造可能であり、ブロッキング工程を行って製造したものと比較して、より高いシグナルを得る事を可能とするラテラルフロー用テストストリップを提供する事を目的とする。

上記の目的を達成するため、本発明の一態様に係るラテラルフロー用テストストリップは、毛細管現象を利用して、滴下された試料を、サンプルパッド、結合パッド、メンブレン、吸収パッドの順に浸潤させ、内部に展開する。サンプルパッドは、毛細管現象を利用して試料を内部に展開するラテラルフロー用テストストリップであって、滴下した試料を一定時間保持可能な部材である。結合パッドは、サンプルパッドの下流に配置され、試料に含まれる分析対象物に特異的な検出対象捕捉物質が標識された粒子を乾燥状態で保持する部材である。メンブレンは、結合パッドの下流に配置され、捕捉物質により粒子を検出する。なお、メンブレンは、ブロッキング溶液中に浸されることなく製造された部材である。吸収パッドは、メンブレンの下流に配置され、最終的に試料を吸収する。

本発明の一態様によれば、ラテラルフロー用テストストリップの製造の際にメンブレンへのブロッキング工程が不要であるため、メンブレンはブロッキング物質を含有せず、メンブレンに塗布した抗体がブロッキング溶液中に流出しない。そのため、分析対象物の検出において、メンブレンへのブロッキング工程を行って製造した従来のラテラルフロー用テストストリップと比較して、より強度が高いシグナルを得る事が可能となる。これにより、より分析対象物の検出感度を高める事ができる。

本発明の一実施形態に係るラテラルフロー用テストストリップの基本構造図である。 本発明の一実施形態に係るメンブレンの基本構造図である。 本発明の一実施形態に係るテストストリップチップの基本構造図である。 実施例におけるＢＳＡ試料中のＡＦＰ抗原検出結果の目視図である。 実施例におけるＢＳＡ試料中のＡＦＰ抗原検出結果を定量化した図である。 実施例における市販血清試料中のＡＦＰ抗原検出結果の目視図である。 実施例における市販血清試料中のＡＦＰ抗原検出結果を定量化した図である。

＜実施形態＞
以下、本発明の一実施形態について添付図面を参照して説明する。
（ラテラルフロー用テストストリップの基本構造）
図１に示すように、本実施形態に係るラテラルフロー用テストストリップ１は、サンプルパッド１１と、結合パッド１２と、メンブレン１３と、吸収パッド１４の４種の部材を有し、これらの４種の部材がバッキングシート１０を介して直列に連結され、一体化したものである。例えば、ラテラルフロー用テストストリップの幅は、１．５ｍｍ以上５ｍｍ以下である。

サンプルパッド１１は、滴下した試料を一定時間保持可能な試料滴下部材である。例えば、サンプルパッド１１に滴下する分析対象物を含む試料の体積は、２５μＬ以上１００μＬ以下である。また、試料は、アルブミン又はこれに相当するタンパク質を含有する。
結合パッド１２は、サンプルパッド１１の下流（試料が流れる方向）に配置され、試料に含まれる分析対象物に特異的な検出対象捕捉物質が標識された粒子を乾燥状態で保持する。ここでは、試料に含まれる分析対象物に特異的親和性のある第一の検出対象捕捉物質が標識された粒子（標識粒子）を乾燥固化状態で保持する。例えば、標識粒子は、平均粒径２０ｎｍ以上１００ｎｍ以下の金コロイド粒子である。

メンブレン１３は、結合パッド１２の下流に配置され、検出対象捕捉物質が固相化された判定部を持つメンブレンである。図２に示すように、メンブレン１３は、判定部として、テストライン１３ａと、コントロールライン１３ｂを持つ。
テストライン１３ａは、抗原を検出する検出対象捕捉物質が固相化された部位である。ここでは、分析対象物に特異的親和性のある第二の検出対象捕捉物質が固相化されている。例えば、第二の検出対象捕捉物質は、線状に固定化されている。

コントロールライン１３ｂは、粒子表面に備わる抗体を検出する検出対象捕捉物質が固相化された部位である。ここでは、標識粒子の表面の検出対象捕捉物質を検出する補足物質が固相化された部位である。
吸収パッド１４は、メンブレン１３の下流に配置され、毛細管現象により浸潤してきた試料を最終的に吸収する。

図３に示すように、本実施形態に係るラテラルフロー用テストストリップ１は、テストストリップチップ２に組み込むことが可能である。テストストリップチップ２は、ラテラルフロー用テストストリップ１の他に、サンプル滴下部２０を有する。サンプル滴下部２０は、サンプルパッド１１に試料を滴下するための開口部である。例えば、テストストリップチップ２においてサンプル滴下部２０に滴下した試料は、ラテラルフロー用テストストリップ１において毛細管現象によりサンプルパッド１１、結合パッド１２、メンブレン１３の順に浸潤して、テストライン１３ａ及びコントロールライン１３ｂで、検出対象捕捉物質との抗原抗体反応等により標識粒子が検出される。テストライン１３ａにおいては、分析対象物と第一の検出対象捕捉物質と第二の検出対象捕捉物質との複合体が形成されることにより、検出強度が分析対象物の濃度依存的に上昇する。また、コントロールライン１３ｂにおいては、標識粒子が毛細管現象にて流れてきたときに、標識粒子の表面に結合した第一の検出対象捕捉物質を検出する。このように、テストライン１３ａとコントロールライン１３ｂは、メンブレン１３における判定部となる。

標識粒子が判定部へ集積する事により、集積した標識粒子に由来する発色や蛍光等のシグナルの強度を指標として分析対象物の有無や濃度を判定することが可能となる。例えば、標識物質が金コロイドの場合、赤色の呈色として観察され、被検物質の有無、若しくは濃度等を把握することができる。なお、標識物質としては、金コロイドに限らず、各種発色物質や発光物質、蛍光物質等を用いることができる。

標識粒子は、金コロイド、銀コロイド、鉄コロイド、アルミニウムコロイド、又は白金コロイドを含む金属コロイド粒子、又は高分子化合物を材料とする粒子であることとしても良い。例えば、粒子が金コロイドの場合、赤色の呈色として観察され、分析対象物の有無、若しくは濃度等を把握することができる。また、濃度測定方法において、高分子化合物を材料とする粒子は、蛍光色素内包粒子又は可視色素内包粒子であることとしても良い。すなわち、標識粒子として、各種発色物質や発光物質、蛍光物質を用いることもできる。

また、蛍光色素内包粒子に内包された蛍光色素は、二価のマンガン、鉛、アンチモン、セリウム、三価のセリウム、三価のクロム、二価又は三価の鉄、三価又は四価のチタン、銅、銀、二価のサマリウム、二価又は三価のユーロピウム、三価のテルビウム、三価のジスプロシウム、三価のホルミウム、三価のエルビウム、ウラニル化合物、ルテニウム化合物、錫化合物、タリウム化合物、ビスマス化合物、タングステン酸化合物、モリブデン酸化合物、硫黄、バナジウム化合物、ランタン化合物、プラセオジム化合物、ネオジム化合物、プロメチウム化合物、ガドリニウム化合物、ツリウム化合物、イッテルビウム化合物、ルテチウム化合物の群から選ばれる少なくとも１つの物質を含んだ色素とする事ができる。

本実施形態で使用される試料は、生体物質、合成物質等あらゆる物質を分析対象物とする事ができる。分析対象物を含む試料溶液としては、例えば、血液、血清、尿等の生体由来の溶液、自然環境から採取した水や土壌を含む溶液、これらを用いて調整して得た溶液等、任意の物を用いることができる。
従来、メンブレン１３の製造時にブロッキングする工程が必要であった。メンブレンへのブロッキング工程では、ブロッキング溶液中にメンブレン１３を浸漬していた。そのため、工程中で、メンブレン１３に塗布してあった抗体がブロッキング溶液中に流出している可能性があった。このため、従来のラテラルフロー用テストストリップでの感度が低くなっている可能性があった。

本実施形態では、メンブレンへのブロッキング工程を行わずにラテラルフロー用テストストリップを作製したところ、従来よりも高感度に検出することができた。
（ラテラルフロー用テストストリップの形状）
ラテラルフロー用テストストリップの形状は、滴下する試料がラテラルフロー用テストストリップ中を毛細管現象により移動することができる限り、特に制限を受けない。例えば、サンプルパッド１１、結合パッド１２、メンブレン１３、吸収パッド１４の４種の部材が、基板となるバッキングシート１０上にこの順番で一方向に直列連結して固定化された構造が代表的である。各部材をバッキングシート１０に固定化した後、そのバッキングシート１０を裁断機で２ｍｍ以上５ｍｍ以下の幅に裁断してラテラルフロー用テストストリップとするのが好ましい。

（４種の部材及びシートの詳細）
以下、本実施形態に係るラテラルフロー用テストストリップを構成する上記４種の部材及びシートの詳細について説明する。
（１）サンプルパッド
サンプルパッド１１は、滴下された分析対象物を含む液体試料を一定時間保持する部材である。サンプルパッド１１としては、セルロースを素材としたものを使用するのが好ましい。例えば、サンプルパッド１１として、「Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｆｉｂｅｒ Ｓａｍｐｌｅ Ｐａｄ」（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）等が挙げられる。また、滴下された試料によりｐＨが異なることを鑑み、サンプルパッド１１に緩衝液を浸潤させて乾燥させた後に、そのサンプルパッド１１を使用するのが好ましい。

（２）結合パッド
結合パッド１２は、分析対象物に対する標識粒子が乾燥固化された部材であり、サンプルパッド１１から毛細管現象により移動してきた試料に含まれる分析対象物が抗原抗体反応等の特異的認識反応で標識粒子と結合される部分である。結合パッド１２の材質は、ガラス繊維で不織状のものが好ましい。例えば、結合パッド１２として、「Ｇｌａｓｓ Ｆｉｂｅｒ Ｐａｄ」（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）等が挙げられる。なお、上述の分析対象物と標識粒子に備わる検出対象捕捉物質との反応は、物理的親和性、化学的親和性、化学結合、免疫学的方法のいずれか１つを利用して行われるものである。

結合パッド１２における単位面積（ｃｍ^２）当たりの標識粒子の含有量は、特に制限はないが、１μｇ以上４μｇ以下であることが好ましい。また、結合パッド１２への標識粒子の浸潤方法としては、例えば、標識粒子を懸濁させ分散させた液体を、結合パッド１２に塗布、滴下又は噴霧した後に、その結合パッド１２を乾燥させる方法が好ましい。また、標識粒子に備わる検出対象捕捉物質としては、例えば抗体が挙げられ、中でも、マウスＩｇＧ、ヤギＩｇＧの他、例えば、ウサギＩｇＧ、ニワトリＩｇＹ、マウスＩｇＥ、ヒトＩｇＧ、ヒトＩｇＥ等が好ましい。

（３）メンブレン
メンブレン１３は、標識粒子と分析対象物との複合体、標識粒子及び試料が毛細管現象によって移動する部材であり、固定化抗体−分析対象物−標識粒子からなる免疫反応が行われる判定部（テストライン１３ａ）と、固定化抗体−標識粒子からなる免疫反応が行われる判定部（コントロールライン１３ｂ）を有している。上述の分析対象物と検出対象捕捉物質との反応は、物理的親和性、化学的親和性、化学結合、免疫学的方法のいずれか１つを利用して行われるものである。

メンブレン１３は、タンパク質を物理吸着可能な素材で構成されたもの、特にニトロセルロースで構成されたものが好ましい。例えば、メンブレン１３として、「Ｈｉ−Ｆｌｏｗ Ｐｌｕｓ ＨＦ１２０」（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）等が挙げられる。上記メンブレン１３における判定部の形状としては、局所的に捕捉用抗体が固定化されている限り特に制限はなく、例えば、ライン状、円状、帯状等が挙げられる。その形状の中でも、幅０．５以上２．０ｍｍ以下のライン状であることが好ましく、また、１ｃｍにつき抗体量が０．１以上２μｇ以下であることが好ましい。

メンブレン１３に備わる抗体としては、上述の抗体の中でも、マウスＩｇＧ、ヤギＩｇＧの他、例えば、ウサギＩｇＧ、ニワトリＩｇＹ、マウスＩｇＥ、ヒトＩｇＧ、ヒトＩｇＥ等が好ましい。例えば、標識粒子にマウスＩｇＧが表面修飾されている場合は、ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体が固定化された判定部をコントロールライン１３ｂとして用いることができる。

テストライン１３ａにおいては、固定化抗体−分析対象物−標識粒子からなる免疫反応により、形成された複合体（分析対象物−標識粒子）が捕捉される。そして、このテストライン１３ａで、捕捉された標識粒子に由来する発色や蛍光等（具体的には、蛍光、発光、呈色、着色等）のシグナルの強度により分析対象物の有無を判定、すなわち陽性・陰性を判定する。一方、コントロールライン１３ｂにおいては、固定化抗体−標識粒子からなる免疫反応により、試料の移動を確認できる。こうして、判定部に標識粒子が濃縮され、シグナルを目視的に又は検出機器を用いて検出、判定できる。

（４）吸収パッド
吸収パッド１４は、毛細管現象でメンブレン１３を移動してきた試料及び標識粒子を吸収し、常に一定の流れを生じさせるための部材である。吸収パッド１４の材質としては、セルロース素材の繊維状のものが好ましい。例えば、吸収パッド１４として、「Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ Ｐａｄ」（Ｐａｌｌ社製）等が挙げられる。

（５）バッキングシート
バッキングシート１０は、上記のサンプルパッド１１、結合パッド１２、メンブレン１３、吸収パッド１４の４種の部材を固定化させるための粘着性を有したシートである。例えば、バッキングシート１０として、「ＡＲ９０２０」（Ａｄｈｅｓｉｖｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社製）等が挙げられる。

（シグナルの検出方法）
以下、上記のテストライン１３ａで、捕捉された標識粒子に由来するシグナルの検出方法について説明する。
上記のラテラルフロー用テストストリップにおいて、分析対象物と、標識粒子との反応で生じるシグナルは、光学的な方法で検出するのが好ましい。光学的な方法としては、例えば反射光度又は蛍光検出、発光検出、若しくは電気化学発光等が挙げられる。より詳しくは、赤色系／青色系を経時的に検出できる装置としては、「イムノクロマトリーダＣ１００６６−１０」（浜松ホトニクス社製）等が挙げられる。
以上、本発明の実施形態を詳述してきたが、実際には、上記の実施形態に限られるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲の変更があっても本発明に含まれる。

以下、本実施形態について、実施例及び比較例を示して詳細に説明する。但し、実際には、本実施形態は、下記の実施例に限定されるものではない。
（１）抗体調整
例えば分析対象物をＡＦＰ（α―ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ：肝臓癌特異抗原）とした場合について、このＡＦＰを検出する為、メンブレン固相化抗体としてマウスモノクローナル抗ＡＦＰ抗体（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ社製）を使用した。また、コントロールラインには、抗マウスイムノグロブリン抗体（Ｄａｋｏ社製）を使用した。この２種の抗体を５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ：７．４）で透析カートリッジを用いて４℃で透析した。透析後の抗体濃度を測定し、抗ＡＦＰ抗体は１ｍｇ／ｍＬ、抗マウスイムノグロブリン抗体は０．１ｍｇ／ｍＬとなるようそれぞれ調整した。

（２）金コロイド溶液の調整
前述とはエピトープの異なるマウスモノクローナル抗ＡＦＰ抗体（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ社製）を透析し、リン酸緩衝液（ｐＨ：７．４）で６０μｇ／ｍＬに調整した。次に、金コロイド（粒子径４０ｎｍ、田中貴金属工業社製）溶液９ｍＬとリン酸二水素カリウム溶液（ｐＨ：８．０）１ｍＬとの混合液に本抗体溶液を加え、ピペッティングの後、室温で１５分間静置し、１％ＰＥＧ２０，０００溶液及び１０％ＢＳＡ溶液を加えて混合した。この混合溶液を遠心力ＲＣＦ８０００×ｇで１５分間遠心分離した後に上清（上澄み）を廃棄し、結合パッド塗布液を加えて攪拌・超音波処理し、再び遠心分離した後に廃棄した。この操作を２回繰り返し金コロイド溶液とした。

（３）結合パッドの作製
１．５ｍＬのチューブに結合パッド塗布液と金コロイド溶液とを加え、２８ｋＨｚで超音波処理した後、計９００μＬの金コロイド塗布溶液を１０ｍｍ×１５０ｍｍのガラスファイバーパッド「Ｇｌａｓｓ Ｆｉｂｅｒ Ｐａｄ」（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）に滴下し、そのガラスファイバーパッドを真空減圧ポンプで減圧した環境下で１８時間乾燥させた。

（４）サンプルパッドの作製
セルロースを素材としたサンプルパッド「ＣＦＳＰ２０３０００」（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）を１．８ｍｍ×１５０ｍｍに断裁し、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ：７．４）を１ｍＬ滴下して、５０℃で１時間乾燥させた。
（５）メンブレンの作製
メンブレン「Ｈｉ−Ｆｌｏｗ Ｐｌｕｓ ＨＦ１２０」（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）に抗体塗布機「ＸＹＺ３０６０」（ＢｉｏＤｏｔ社製）で、上記（１）で調整した抗体（メンブレン固相化抗体）を１μＬ／ｃｍで塗布した。メンブレンへのブロッキング工程を行わない場合には、抗体塗布後、５０℃にて３０分間乾燥させた。反対に、メンブレンへのブロッキング工程を行う場合には、抗体塗布後、５０℃にて３０分間乾燥させた後、ブロッキング工程として、０．５％乳性カゼイン溶液中でブロッキングし、スクロースや界面活性剤を含む洗浄液で洗浄、安定化した後、一晩室温にて乾燥させた。

（６）テストストリップチップの作製
乾燥させたメンブレン、吸収パッド「Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ Ｐａｄ ＃１１１」（Ｐａｌｌ社製）、結合パッド、サンプルパッドのそれぞれをバッキングシート（Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社製）に貼り付けた。そのバッキングシートをカッティング機器「ＣＭ４０００」（Ｂｉｏ Ｄｏｔ社製）にて５ｍｍ幅で切断してラテラルフロー用テストストリップとした。更に、そのラテラルフロー用テストストリップをハウジングケースに収めてテストストリップチップとした。

（７）試料の調整
分析対象物であるＡＦＰはＡＦＰキャリブレータ（ｓｙｓｍｅｘ社製）を使用した。この抗原溶液を５％ＢＳＡ溶液若しくは市販血清にて希釈し、測定用試料とした。
（８）分析対象物の測定
上記（６）で作製したテストストリップチップを水平に置き、上記（７）で調整した試料溶液を１つのテストストリップチップにつき１００μＬ滴下した。滴下後、「イムノクロマトリーダＣ１００６６−１０」（浜松ホトニクス社製）を用いて試料滴下後２０分時点でのデータを取得した。測定データは、ラテラルフロー用テストストリップの展開方向にスキャニングして得られたピークにおけるシグナル強度を測定データとした。

（実施例１）
メンブレンへのブロッキング工程を行わずに作製したラテラルフロー用テストストリップを収納したテストストリップチップを使用し、５％ＢＳＡにて調整したＡＦＰ抗原を含む試料を用いて、測定を実施した。なお、ＡＦＰ抗原の濃度は０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬでそれぞれ実施した。

（比較例１）
既存方法に従い、メンブレンへのブロッキング工程を行って作製したラテラルフロー用テストストリップを収納したテストストリップチップを使用し、５％ＢＳＡにて調整したＡＦＰ抗原を含む試料を用いて、測定を実施した。なお、ＡＦＰ抗原の濃度は０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬでそれぞれ実施した。実施例１及び比較例１の結果について、図４に目視概観写真を示し、図５に測定数値を示す。

（実施例２）
メンブレンへのブロッキング工程を行わずに作製したラテラルフロー用テストストリップを収納したテストストリップチップを使用し、市販血清にて調整したＡＦＰ抗原を含む試料を用いて、測定を実施した。なお、ＡＦＰ抗原の濃度は０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬでそれぞれ実施した。

（比較例２）
メンブレンへのブロッキング工程を行って作製したラテラルフロー用テストストリップを収納したテストストリップチップを使用し、市販血清にて調整したＡＦＰ抗原を含む試料を用いて、測定を実施した。なお、ＡＦＰ抗原の濃度は０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬでそれぞれ実施した。実施例２及び比較例２の結果について、図６に目視概観写真を示し、図７に測定数値を示す。

上記の結果、メンブレンへのブロッキング工程を行わずに作製したラテラルフロー用テストストリップを収納したテストストリップチップを使用することにより、メンブレンへのブロッキング工程を行って作製したラテラルフロー用テストストリップを収納したテストストリップチップを使用した場合よりも、擬似血清として用いたＢＳＡ溶液、血清中の分析対象物の測定において、より強度が高いシグナルを得られていることが明らかになった。なお、０ｎｇ／ｍＬの値（バックグラウンド）についても大きな値の上昇は見られず、Ｓ／Ｎ比の観点からも本手法が有効である事が言える。また、Ｓ／Ｎ比が良好であり、分析対象物から得られるシグナルの強度が上昇したことを鑑みると、検出感度の観点からも、より定量分析に適する手法であるということが言える。

本実施形態に係るラテラルフロー用テストストリップやテストストリップチップは、試料の判定を行う分析システムや診断システム等において利用可能である。

１… ラテラルフロー用テストストリップ
１０… バッキングシート
１１… サンプルパッド
１２… 結合パッド
１３… メンブレン
１３ａ… テストライン
１３ｂ… コントロールライン
１４… 吸収パッド
２… テストストリップチップ
２０… サンプル滴下部

Claims (6)

1. 毛細管現象を利用して試料を内部に展開するラテラルフロー用テストストリップであって、
   滴下した試料を一定時間保持可能なサンプルパッドと、
   前記サンプルパッドの下流に配置され、前記試料に含まれる分析対象物に特異的な検出対象捕捉物質が標識された粒子を乾燥状態で保持する結合パッドと、
   前記結合パッドの下流に配置され、分析対象物に特異的親和性を持つ物質が固相化された部位を有するメンブレンと、
   前記メンブレンの下流に配置され、前記試料を吸収する吸収パッドと、を備え、
   前記メンブレンは、ブロッキング溶液中に浸されることなく製造された部材であることを特徴とする、ラテラルフロー用テストストリップ。
2. 前記結合パッドは、前記粒子として、前記分析対象物に特異的親和性のある第一の検出対象捕捉物質が標識された標識粒子を乾燥固化状態で保持し、
   前記メンブレンは、
   前記分析対象物に特異的親和性のある第二の検出対象捕捉物質が固相化された部位と、
   前記標識粒子の表面の前記第一の検出対象捕捉物質を検出する補足物質が固相化された部位と
   を持つことを特徴とする、請求項１に記載のラテラルフロー用テストストリップ。
3. 前記試料は、アルブミンを含有することを特徴とする、請求項１又は２に記載のラテラルフロー用テストストリップ。
4. 請求項１乃至３のいずれか一項に記載のラテラルフロー用テストストリップを利用する分析システム。
5. ラテラルフロー用テストストリップを製造するときに、前記ラテラルフロー用テストストリップを構成する基本部材のうち、検出対象捕捉物質を担持するメンブレンに前記検出対象捕捉物質を塗布し、
   前記検出対象捕捉物質の塗布後、前記メンブレンへのブロッキング工程を実施せずに前記メンブレンを作製することを特徴とする、ラテラルフロー用テストストリップの製造方法。
6. 更に、前記メンブレンへのブロッキング工程を実施しないことで、ブロッキング溶液中への前記検出対象捕捉物質の流出を防止する、請求項５に記載のラテラルフロー用テストストリップの製造方法。