KR20210099053A - Vegf 및 il-1베타에 결합하는 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

Vegf 및 il-1베타에 결합하는 항체 및 이의 사용 방법 Download PDF

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KR20210099053A
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Abstract

본 발명은 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.

Description

VEGF 및 IL-1베타에 결합하는 항체 및 이의 사용 방법
본 발명은 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
IL-1베타 및 VEGF에 결합하는 이중 특이적 항체는 이전에 보고되었으며 안구 혈관 질환의 치료를 위해 제안되었다(WO2016/075034, 항체 "0032"). 상기 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 0032는 하나의 결합 암에서 VH/VL 도메인 교환을 갖는 전장 IgG-유사 항체이고(WO2009/080252, Schaefer, W. et al, PNAS, 108 (2011)) 11187-1191), 여기서 야생형 항체 도메인 배열의 결합 암은 IL-1베타에 특이적으로 결합하고 VH/VL 도메인 교차를 포함하는 결합 암은 VEGF에 특이적으로 결합한다. 상기 VEGF 결합 암은 항-VEGF 항체 라니비주맙의 VH 및 VL 도메인을 포함한다.
한 쌍의 가변 중쇄 도메인(VH) 및 가변 경쇄 도메인(VL)에 2개의 파라토프를 포함하는 다중 특이적 항체는 WO2008/027236; WO2010/108127 및 Bostrom, J., et al., Science 323 (2009) 1610-1614 및 WO2012/163520에 기재되어 있다.
WO2012/163520은 한 쌍의 VH 및 VL 도메인("DutaFabs")에 2개의 비-중첩 파라토프를 포함하는 이중 특이적 항체를 개시한다. WO2012/163520의 이중 특이적 항체의 각 파라토프는 중쇄 및 경쇄 CDR로부터의 아미노산을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR-H1 및 CDR-H3 뿐만 아니라 경쇄 CDR-L2는 제1 파라토프에 기여하고, 경쇄 CDR-L1 및 CDR-L3 뿐만 아니라 중쇄 CDR-H2는 제2 파라토프에 기여한다. 개별 파라토프를 포함하는 단일 특이적 항체는 제1 또는 제2 파라토프에서 다양화되는 상이한 Fab-라이브러리로부터 독립적으로 분리된다. 상기 단일 특이적 항체의 아미노산 서열이 확인되고 이중 파라토프의 VH 및 VL 쌍으로 병합된다. VEGF 및 IL-6에 특이적으로 결합하는 하나의 예시적인 Fab 단편은 WO2012/163520에 개시되어 있다.
VEGF 및 IL-1베타에 결합하는 개선된 치료용 항체가 필요하다.
본 발명은 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 가변 경쇄 도메인(VL 도메인) 및 가변 중쇄 도메인(VH 도메인)의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 VEGF 파라토프는 상기 항체의 CDR-H2, CDR-L1 및 CDR-L3으로부터의 아미노산 잔기들을 포함하며, 상기 IL-1베타 파라토프는 상기 항체의 CDR-H1, CDR-H3 및 CDR-L2로부터의 아미노산 잔기들을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, VL 도메인 및 VH 도메인의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 가변 경쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인의 쌍은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 동시에 결합하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, VL 도메인 및 VH 도메인의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 VEGF 파라토프에 포함되는 그 어떤 아미노산도 IL-1베타 파라토프에 포함되지 않는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, VL 도메인 및 VH 도메인의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 항체는 서열 번호 11의 가변 중쇄 도메인 및 서열 번호 12의 가변 경쇄 도메인을 갖는 항체와 동일한 인간 VEGF 상의 에피토프 및 동일한 인간 IL-1베타 상의 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 인간 VEGF에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 50 nM 미만인 VEGFR2에 대한 VEGF의 결합을 억제하고; 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다. 일 구현예에서, 상기 항체는 VH 도메인에서 아미노산 잔기 D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66 및 R83을 포함하고, VL 도메인에서 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, E67, D68, Q69, R92, Y93, H94 및 Y96을 포함하는 VEGF 파라토프; 및 VH 도메인에서 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, K94, D95, V96, F98 및 D101을 포함하고, VL 도메인에서 아미노산 잔기 L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, Y91을 포함하는 IL-1베타 파라토프를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, S67, H68, E69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다. 일 구현예에서, 상기 항체는 VH 도메인에서 아미노산 잔기 D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66 및 R83을 포함하고, VL 도메인에서 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, S67, H68, E69, R92, Y93, H94 및 Y96을 포함하는 VEGF 파라토프; 및 VH 도메인에서 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, K94, D95, V96, F98 및 D101을 포함하고, VL 도메인에서 아미노산 잔기 L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, Y91을 포함하는 IL-1베타 파라토프를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로서, 상기 VH 도메인은 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, R66, R83 및 K94를 포함하고; (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로서, 상기 VL 도메인은 아미노산 잔기 I2, Y49, G57, E67, D68 및 Q69를 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르며, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 일 구현예에서, 상기 항체는 (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로서, 상기 아미노산 치환은 서열 번호 11의 3 내지 25, 36 내지 49, 97 내지 82c, 84 내지 93, 또는 103 내지 113번의 위치에 있는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인으로서, 상기 아미노산 치환은 서열 번호 12의 1, 4, 6, 8 내지 23, 35 내지 48, 58 내지 66, 70 내지 88, 또는 98 내지 107번의 위치에 있는 가변 경쇄 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르며, (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 서열 번호 11의 VH 서열 및 서열 번호 12의 VL 서열을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 서열 번호 20의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 서열 번호 18의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공하며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 (VL 도메인)을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하며, 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는 항체를 제공한다.
본 발명의 일 구현예는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 이중 특이적 항체 단편에 관한 것이다. 일 구현예에서, 상기 항체 단편은 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 또는 이로부터 유래된 단일 사슬 항체들로부터 선택된다. 본 발명의 일 구현예는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 Fab 단편에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 Fv 단편에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현예는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 전장 IgG 항체에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체를 암호화하는 단리된 핵산을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 핵산을 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 항체가 생산되도록 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 생산하는 방법을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 생산되는 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 제형을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 혈관 질환의 치료에 사용하기 위한 일 구현예에서 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 혈관 질환의 치료를 위한 약제의 일 구현예에서, 약제의 제조에서 본 발명의 항체 또는 본 발명의 약학적 조성물의 사용을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 본 발명의 약학적 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 혈관 질환을 갖는 개체를 치료하는 방법을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 혈관 형성을 억제하기 위해 본 발명의 항체 또는 본 발명의 약학적 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 혈관 형성을 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따르면, 이중 특이적 Fab 단편으로서 제공되는 경우에도 표적 항원들에 동시에 결합할 수 있는 치료용 항-VEGF/항-IL-1베타 항체가 제공된다. 또한, 본 발명의 항체는 높은 친화성, 친수성 및 높은 안정성과 같은 치료적 적용을 가능하게 하는 몇 가지 중요한 특성을 제공한다. 본 발명의 항체는 안구 적용에 적합한 점성을 갖는 고농도 액체 제형으로 제공될 수 있다. 본 발명의 항체는 안구 혈관 질환의 치료에 적합하다.
도 1: 본 발명의 항-VEGF/항-IL-1베타 항체의 Fab 단편을 도시한 개략도이다. CDR 아미노산의 배열(상단 이미지)을 포함하는 동족 VH/VL 쌍을 도시한 평면도이다. VH 도메인은 회색으로 표시되고, VL 도메인은 흰색으로 표시된다. 또한, CDR 영역들의 공간적 배열이 표시된다. 본 발명의 항체의 파라토프 영역은 VEGF 파라토프가 H-CDR2, L-CDR1 및 L-CDR2의 영역에 배열되고, IL-1베타 파라토프가 H-CDR1, H-CDR3 및 L-CDR2의 영역에 배열되어 강조 표시된다(아래 이미지).
도 2: 본 발명의 예시적인 항-VEGF/항-IL-1베타 항체의 VH 도메인의 아미노산 서열을 도시한다. CDR 및 FR 영역 뿐만 아니라 아미노산 위치의 카바트 넘버링이 표시된다. VEGF 파라토프 뿐만 아니라 실시예 8에서 확인된 IL-1베타 파라토프에 기여하는 아미노산 위치가 강조 표시된다.
도 3: 본 발명의 예시적인 항-VEGF/항-IL-1베타 항체의 VL 도메인의 아미노산 서열을 도시한다. CDR 및 FR 영역 뿐만 아니라 아미노산 위치의 카바트 넘버링이 표시된다. VEGF 파라토프 뿐만 아니라 실시예 8에서 확인된 IL-1베타 파라토프에 기여하는 아미노산 위치가 강조 표시된다.
도 4: 실시예 5에 따라 SPR을 통해 평가된 바와 같이 VEGF 및 IL-1베타에 대한 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 1HVL12.85의 동시 항원 결합을 도시한다.
도 5: 실시예 5에 따라 SPR을 통해 평가된 바와 같이 VEGF 및 IL-1베타에 대한 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 Ro7200394의의 동시 항원 결합을 도시한다.
도 6: 실시예 5에 따라 SPR을 통해 평가된 바와 같이 VEGF 및 IL-1베타에 대한 종래 기술의 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 0032의 동시 항원 결합을 도시한다.
도 7a: 실시예 6에서 평가된 바와 같이 항체 RO7200394(Fab 단편)의 존재 하에 hVEGFR2에 대한 VEGF의 결합의 억제를 도시한다. 수용체 결합 억제는 이중 특이적 항체, IL-1베타의 다른 표적 항원의 존재 및 부재 하에 평가되었다.
도 7b: 실시예 6에서 평가된 바와 같이 종래 기술의 항체 0032(전장 IgG)의 존재 하에 hVEGFR2에 대한 VEGF의 결합의 억제를 도시한다. 수용체 결합 억제는 이중 특이적 항체, IL-1베타의 다른 표적 항원의 존재 및 부재 하에 평가되었다.
도 8a: 실시예 6에서 평가된 바와 같이 항체 RO7200394(Fab 단편)의 존재 하에 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합의 억제를 도시한다. 수용체 결합 억제는 이중 특이적 항체, VEGF의 다른 표적 항원의 존재 및 부재 하에 평가되었다.
도 8b: 실시예 6에서 평가된 바와 같이 종래 기술의 항체 0032(전장 IgG)의 존재 하에 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합의 억제를 도시한다. 수용체 결합 억제는 이중 특이적 항체, VEGF의 다른 표적 항원의 존재 및 부재 하에 평가되었다.
도 9: 실시예 6에서 평가된 바와 같이 표시된 항체의 존재 하에 VEGF-R1에 대한 VEGF121의 결합을 평가하는 경쟁 ELISA를 도시한다.
도 10: 실시예 6에서 평가된 바와 같이 표시된 항체의 존재 하에 VEGF-R1에 대한 VEGF165의 결합을 평가하는 경쟁 ELISA를 도시한다.
도 11: 실시예 7에서 평가된 바와 같이 본 발명의 항체의 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)의 결과를 도시한다.
도 12: 종래 기술의 항체 0032의 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)의 결과를 도시한다(실시예 7).
도 13: 실시예 8에서 평가된 바와 같이 항체 1HVL12.85의 점성을 도시한다.
도 14: 실시예 8에서 평가된 바와 같이 항체 RO7200394의 점성을 도시한다.
1. 정의
본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학적 및 기술적 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 가져야 한다. 또한, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함해야 한다. 본 개시의 방법 및 기술은 일반적으로 당업계에 일반적으로 공지된 통상적인 방법에 따라 실시된다. 일반적으로, 본원에 기재된 생화학, 효소학, 분자 및 세포 생물학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련하여 사용되는 명명법 및 기술은 당업계에 일반적으로 공지되고 일반적으로 사용되는 것들이다.
본원에서 달리 정의되지 않는 한, 용어 "구성하는"은 용어 "구성되는"을 포함해야 한다.
특정 값(예컨대, 온도, 농도, 시간 및 기타)과 관련하여 본원에서 사용된 용어 "약"은 상기 용어 "약"이 지칭하는 특정 값의 +/- 1%의 변동을 지칭한다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 이들이 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한, 비제한적으로 단클론 항체, 다중특이적 항체(예컨대, 이중특이적 항체), 및 항체 단편을 포함하는 다양한 항체 구조를 포괄한다.
"단리된" 항체는 이의 자연 환경의 구성요소로부터 분리된 것이다. 일부 구현예들에서, 항체는, 예를 들어 전기영동(예컨대, SDS-PAGE, 등전점 맞춤(isoelectric focusing: IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예컨대, 이온 교환 또는 역상 HPLC) 방법들에 의해 결정된 바대로 95% 초과 또는 99%의 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가를 위한 방법들의 검토를 위해, 예컨대 문헌[Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87(2007)]을 참조한다.
본원에서 사용된 용어 "단클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 개체군으로부터 수득된 항체를 지칭한다. 다시 말하면, 상기 개체군을 포함하는 개별 항체는, 예컨대 자연발생 돌연변이를 내포하거나 또는 단클론 항체 제조물의 생산 중에 발생하는 가능한 변이체 항체(상기 변이체는 일반적으로 미량으로 존재함)를 제외하고, 동일하고 및/또는 동일한 에피토프에 결합한다. 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 지향된 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론 항체 제조물과 대조적으로, 단클론 항체 제조물의 각 단클론 항체는 항원 상에서 단일 결정인자에 대해 지향된다. 따라서, 수식어 "단클론"은 항체의 실질적으로 균질한 개체군으로부터 수득되는 것으로서 상기 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생성을 필요로 하는 것으로 해석되지 않는다.
용어 "전장 항체", "무손상 항체", 및 "전체 항체"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, 고유한 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 또는 본원에서 정의된 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
항체의 "부류"는 이의 중쇄에 의해 소유된 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5개 주요 부류의 항체가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM(이들 중 몇몇은 하위부류(동형), 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가 분류될 수 있음). 특정 구현예들에서, 상기 항체는 IgG1 동형의 것이다. 특정 구현예들에서, 상기 항체는 Fc-영역 작동체 기능을 감소시키기 위해 P329G, L234A 및 L235A 돌연변이를 갖는 IgG1 동형의 것이다. 다른 구현예들에서, 상기 항체는 IgG2 동형의 것이다. 특정 구현예들에서, 상기 항체는 IgG4 항체의 안정성을 개선하기 위해 힌지 영역에서 S228P 돌연변이를 갖는 IgG4 동형의 것이다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 α, δ, ε, γ, 및 μ로 각각 불린다. 항체의 경쇄는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 2가지 유형 중에서 한 가지에 배정될 수 있다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 내포하는 면역글로불린 중쇄의 C 말단 영역을 규정하는 데 이용된다. 상기 용어는 고유한 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 중쇄의 Cys226으로부터 또는 Pro230으로부터 카르복실 말단까지 확장된다. 본원에서 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991에 기재된 바와 같이 EU 색인으로도 불리는 EU 넘버링 시스템에 따른다.
"작동체 기능"은 항체의 Fc 영역에 기인한 생물학적 활성을 지칭하는데, 이들은 항체 동형에 따라서 가변한다. 항체 작동체 기능의 예로는 하기를 포함한다: C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체의 하향 조절(예컨대, B 세포 수용체); 및 B 세포 활성화.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체를 항원에 결합시키는 데 관련되는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 고유 항체의 중쇄 및 경쇄 (각각 VH 및 VL)의 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4개의 보존 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다(예컨대, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)를 참조). 본 발명의 항체에서, VH 도메인 및 VL 도메인의 단일 쌍, 즉 동족 VH/VL 쌍은 2개의 표적인 VEGF 및 IL-1베타에 특이적으로 결합한다.
"DutaFab"은 WO2012/163520에 개시된 바와 같은 이중 특이적 항체이다. DutaFab에서 VH 도메인 및 VL 도메인의 단일 쌍은 2개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하며, 여기서 하나의 파라토프는 CDR-H2, CDR-L1 및 CDR-L3으로부터의 아미노산 잔기들을 포함하고 다른 파라토프는 CDR-H1, CDR-H3 및 CDR-L2로부터의 아미노산 잔기들을 포함한다. DutaFab은 동족 VH/VL 쌍 내에 2개의 비-중첩 파라토프를 포함하고 2개의 상이한 에피토프에 동시에 결합할 수 있다. DutaFab 및 단일 특이적 Fab 단편을 포함하는 라이브러리를 선별 검사함으로써 이들을 생성하는 방법은 WO2012/163520에 개시되어 있다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생성되거나, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-암호화 서열을 활용하는 비인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 소유하는 것이다. 인간 항체의 상기 정의는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 특이적으로 배제한다.
"인간 공통 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선별에서 가장 흔히 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 선별된다. 일반적으로, 서열의 하위군은 Kabat et al., 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3]에서와 같이 하위군이다. 일 구현예에서, 상기 VL에 대해, 하위군은 상기 Kabat et al.의 문헌에서처럼 하위군 카파 I이다. 일 구현예에서, 상기 VH에 대해, 하위군은 상기 Kabat et al.의 문헌에서처럼 하위군 III이다.
"항체 단편"은 무손상 항체가 결합하는 항원을 결합하는 상기 무손상 항체의 일부를 포함하는 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 실례는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일 사슬 항체 분자(예컨대, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중 특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 상호 교환적으로 사용되는 "파라토프" 또는 "항원 결합 부위"는 항원을 인식하고 이에 결합하는 항체의 일부를 지칭한다. 파라토프는 Fv 영역의 3차 구조에서 공간적으로 근접하게 배열된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인으로부터의 여러 개별 아미노산 잔기에 의해 형성된다. 본 발명의 항체들은 하나의 동족 VH/VL 쌍에서 2개의 "비-중첩" 파라토프를 포함한다. "비-중첩"은 2개의 파라토프 중 하나에 포함된 아미노산이 다른 파라토프에 포함되지 않음을 의미한다.
본원에서 사용된 "VEGF 파라토프"는 VEGF에 결합하는 파라토프 또는 항원 결합 부위이다. 본 발명의 항체의 VEGF 파라토프는 상기 항체의 CDR-H2, CDR-L1 및 CDR-L3으로부터의 아미노산 잔기를 포함한다.
본원에서 사용된 "IL-1베타 파라토프"는 IL-1베타에 결합하는 파라토프 또는 항원 결합 부위이다. 본 발명의 항체의 IL-1베타 파라토프는 상기 항체의 CDR-H1, CDR-H3 및 CDR-L2로부터의 아미노산 잔기를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "VEGF"는, 달리 지시되지 않는 한, 영장류(예컨대, 인간) 및 설치류(예컨대, 마우스 및 랫트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유한 VEGF를 지칭한다. 상기 용어는 "전장"의 가공되지 않은 VEGF 뿐만 아니라 세포 내에서의 가공에서 비롯된 임의의 형태의 VEGF를 포함한다. 상기 용어는, 또한 VEGF의 자연 발생 변이체, 예컨대 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포괄한다. 예시적인 인간 VEGF의 아미노산 서열은 서열번호 26으로 나타낸다.
용어 "항-VEGF 항체" 및 "VEGF에 결합하는 항체"는 상기 항체가 VEGF를 표적으로 할 때 진단 및/또는 치료 제제로서 유용하도록 충분한 친화성으로 VEGF와 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일 구현예에서, 관련 없는 비-VEGF 단백질에 대한 항-VEGF 항체의 결합 정도는, 예컨대 플라즈몬 공명법(SPR)으로 측정했을 때 VEGF에 대한 상기 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 구현예들에서, VEGF에 결합하는 항체는 ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, 또는 ≤ 0.01 nM의 해리 상수(KD)를 갖는다. 항체의 KD가 1 μM 이하인 경우, 상기 항체는 VEGF에 "특이적으로 결합한다"고 한다.
본원에서 사용된 용어 "IL-1베타"는, 달리 지시되지 않는 한, 영장류(예컨대, 인간) 및 설치류(예컨대, 마우스 및 랫트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유 IL-1베타를 지칭한다. 상기 용어는 "전장"의 가공되지 않은 IL-1베타 뿐만 아니라 세포 내에서의 가공에서 비롯된 임의의 형태의 IL-1베타를 포함한다. 상기 용어는, 또한 IL-1베타의 자연 발생 변이체, 예컨대 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포괄한다. 예시적인 인간 IL-1베타의 아미노산 서열은 서열번호 27로 나타낸다.
용어 "항-IL-1베타 항체" 및 "항-IL-1베타에 결합하는 항체"는 항체가 IL-1베타를 표적으로 하는 데 있어서 진단 시약 및/또는 치료제로서 유용할 만큼 충분한 친화성으로 IL-1베타를 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일 구현예에서, 관련 없는 비-항-IL-1베타 단백질에 대한 항-IL-1베타 항체의 결합 정도는, 예컨대 플라즈몬 공명법(SPR)으로 측정했을 때 항-IL-1베타에 대한 상기 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 구현예들에서, IL-1베타에 결합하는 항체는 ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, 또는 ≤ 0.03 nM의 해리 상수(KD)를 갖는다. 항체의 KD가 1 μM 이하인 경우, 상기 항체는 항-IL-1베타에 "특이적으로 결합한다"고 한다.
본 발명의 항체는 "인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 동시에 결합하고", 이는 (a) 인간 IL-1베타에 결합된 본 발명의 항체 Fab 단편이 인간 VEGF에 (또한) 특이적으로 결합하고, (b) 인간 VEGF에 결합된 본 발명의 항체 Fab 단편이 인간 IL-1베타에 (또한) 특이적으로 결합함을 의미한다. 동시 결합은 당업계에 공지된 방법들, 예컨데 본원에 기재된 표면 플라즈몬 공명법에 의해 평가될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 서열에서 초가변성이고 항원 결합 잔기를 함유하는 항체 가변 도메인의 각 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 CDR을 포함한다: VH 도메인에서 3개(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3), 및 VL 도메인에서 3개(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3). 달리 지시되지 않는 한, 가변 도메인(예컨대, FR 잔기)의 CDR 잔기 및 기타 잔기들은 카바트 넘버링 시스템에 따라 본원에서 넘버링된다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991).
본원에서 사용된 "프레임워크" 또는 "FR"은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 아미노산 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 프레임워크는 일반적으로 4개의 프레임워크 도메인들로 구성된다: FR1, FR2, FR3, 및 FR4. 이에 따라, CDR 및 FR 아미노산 서열들은 일반적으로 하기의 서열로 나타낸다: (a) VH 도메인에서: FR1-CDR-H1-FR2-CDR-H2-FR3-CDR-H3-FR4; 및 (b) VL 도메인에서 FR1-CDR-L1-FR2-CDR-L2-FR3-CDR-L3-FR4.
본원에서 사용된 카바트 넘버링 시스템에 따르면, 프레임워크 및 CDR 영역은 가변 도메인의 하기의 영역에 위치한다:
Figure pct00001
본원에 언급된 카바트 넘버링 시스템에 따른 아미노산 위치는 본 발명의 항체의 아미노산 서열과 정렬하여 도 2에 도시된다. 아미노산 서열 내의 특정 위치에 있는 아미노산은 각각의 아미노산 및 아미노산 위치를 기재함으로써 당업계에 일반적으로 공지된 것으로 본원에 언급된다. 예컨대, "E2"는 각각의 항체 도메인의 아미노산 서열의 카바트 위치 2에 있는 글루탐산 잔기를 의미한다.
"친화성"은 분자(예컨대, 항체)의 단일 결합 부위 및 이의 결합 파트너(예컨대면, 항원) 사이에 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용된 "결합 친화성"은 결합 쌍의 부재들(예컨대, 항체 및 항원) 사이에 1:1 상호작용을 반영하는 내재성 결합 친화성을 지칭한다. 분자 X의 이의 짝 Y에 대한 친화성은 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화성은 본원에 기재된 것들을 포함하여 당업계에 공지된 통상적인 방법들에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화성을 측정하기 위한 특정한 예시적이고 전형적인 구현예들이 본원에서 설명된다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 단백질성 또는 비-단백질성 항원 상의 부위를 나타낸다. 에피토프는 인접 아미노산 스트레치(선형 에피토프)로부터 모두 형성되거나 또는, 예컨대 항원의 접힘, 즉 단백질성 항원의 3차 접힘으로 인해 공간적으로 근접하게 되면서 비-인접 아미노산(구조적 에피토프)을 포함할 수 있다 선형 에피토프는 일반적으로 단백질성 항원이 변성제에 노출된 후에 항체에 의해 결합되는 반면, 형태적 에피토프는 일반적으로 변성제로 처리할 때 파괴된다. 에피토프는 고유한 공간 형태로 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상 또는 8 내지 10개의 아미노산을 포함한다.
특정 에피토프에 결합하는 항체(즉, 동일한 에피토프에 결합하는 항체)에 대한 선별 검사는 당업계에 일반적인 방법들, 예컨대 제한없이 알라닌 스캐닝, 펩티드 블롯(Meth. Mol. Biol. 248 (2004) 443-463을 참조), 펩티드 절단 분석, 에피토프 절제, 에피토프 추출, 항원의 화학적 변형(Prot. Sci. 9 (2000) 487-496을 참조) 및 교차 차단("항체", Harlow and Lane (Cold Spring Harb Press, Cold Spring Harb., Ny를 참조)을 사용하여 실시될 수 있다.
변형-보조된 프로파일링(Modification-Assisted Profiling, MAP)으로도 공지된 항원 구조 기반 항체 프로파일링(Antigen Structure-based Antibody Profiling, ASAP)은 VEGF 또는 IL-1베타에 특이 적으로 결합하는 다수의 단클론 항체들을 상기 다수에서부터 화학적 또는 효소적으로 변형된 항원 표면에 이르는 항체 각각의 결합 프로파일을 기반으로 비닝(binning)할 수 있다 (예컨대, US 2004/0101920을 참조). 각 빈(bin)의 항체는 다른 빈으로 표시되는 에피토프와 뚜렷하게 상이하거나 부분적으로 겹치는 고유한 에피토프일 수 있는 동일한 에피토프에 결합한다.
또한, 경쟁 결합은 항체가 본 발명의 참조 항체와 동일한 VEGF 또는 IL-1베타의 에피토프에 결합하거나, 또는 결합을 위해 경쟁하는지를 쉽게 결정하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 참조 항체와 "동일한 VEGF 및 IL-1베타 상의 에피토프에 결합하는 항체"는 각각의 경쟁 검정에서 항원에 대한 참조 항체의 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭하고, 반대로, 참조 항체는 각각의 경쟁 검정에서 항원에 대한 항체의 결합을 50% 이상 차단한다. 또한, 예를 들어 항체가 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지 확인하기 위해, 참조 항체는 포화 조건 하에서 VEGF 또는 IL-1베타에 결합하도록 허용된다. 과량의 참조 항체를 제거한 후, 해당 항체가 VEGF 또는 IL-1베타에 결합하는 능력을 평가한다. 해당 항체가 참조 항체의 포화 결합 후에 VEGF 또는 IL-1베타에 결합할 수 있다면, 해당 항체가 참조 항체와 상이한 에피토프에 결합한다고 결론내릴 수 있다. 하지만, 해당 항체가 참조 항체의 포화 결합 후에 VEGF 또는 IL-1베타에 결합할 수 없는 경우, 해당 항체는 참조 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 해당 항체가 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 입체적인 이유로 결합이 방해되는지를 확인하기 위해, 일상적인 실험을 사용할 수 있다(예컨대, ELISA, RIA, 표면 플라즈몬 공명, 유세포 분석, 또는 당업계에서 입수 가능한 기타 정량적 또는 정성적 항체 결합 검정을 사용한 펩티드 돌연변이 및 결합 분석). 상기 검정은 두 가지 설정, 즉 두 항체가 모두 포화 항체인 상태에서 실시되어야 한다. 두 설정 모두에서, 제1 (포화) 항체만이 VEGF 또는 IL-1베타에 결합할 수 있는 경우, 해당 항체 및 참조 항체가 VEGF 또는 IL-1베타에 결합하기 위해 경쟁한다고 결론내릴 수 있다.
일부 구현예들에서, 하나의 항체의 1배, 5배, 10배, 20배 또는 100배의 과잉이 다른 항체의 결합을 적어도 50%, 적어도 75%, 적어도 90%, 또는 심지어 99% 이상 억제하는 경우 2개의 항체는 동일하거나 중첩되는 에피토프에 결합하는 것으로 간주된다(예컨대, Junghans et al., Cancer Res. 50 (1990) 1495-1502를 참조).
일부 구현예들에서, 하나의 항체의 결합을 감소하거나 제거하는 항원의 본질적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소하거나 제거하는 경우 2개의 항체가 동일한 에피토프에 결합하는 것으로 간주된다. 한 항체의 결합을 감소하거나 제거하는 아미노산 돌연변이의 서브세트 만이 다른 항체의 결합을 감소하거나 제거하는 경우 두 항체는 "중복 에피토프"를 갖는 것으로 간주된다.
참조 폴리펩티드 서열에 대하여 "퍼센트(%) 아미노산 서열 동일성"은 최고 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 서열을 정렬하고, 필요할 경우 갭을 도입한 후에, 정렬을 목적으로 임의의 보존성 치환을 서열 동일성의 일부로서 고려하지 않고, 참조 폴리펩티드 서열 내에 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내에 아미노산 잔기의 백분율로서 규정된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 목적의 정렬은, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, Clustal W, Megalign (DNASTAR) 소프트웨어 또는 FASTA 프로그램 패키지와 같은 공개적으로 입수 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 범위에 속하는 다양한 방법으로 구현될 수 있다. 당업자라면 비교되는 전장 길이 서열에 대하여 최대의 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 비롯하여 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 대안적으로, 퍼센트 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성될 수 있다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에 의해 저술되었고, 소스 코드가 사용자 문서로 U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559에 제출되었으며, 미국 저작권 등록 번호 제TXU510087 하에 등록되고, WO 2000/005319에 기재되어 있다.
하지만 달리 지시되지 않는 한, 본원의 목적을 위해, % 아미노산 서열 동일성 값은 FASTA 패키지 버전 36.3.8c 이상의 ggsearch 프로그램을 BLOSUM50 비교 매트릭스와 함께 사용하여 생성된다. 상기 FASTA 프로그램 패키지는 W. R. Pearson and D. J. Lipman (1988), "Improved Tools for Biological Sequence Analysis", PNAS 85:2444-2448; W. R. Pearson (1996) "Effective protein sequence comparison" Meth. Enzymol. 266:227- 258; and Pearson et. al. (1997) Genomics 46:24-36 and is publicly available from www.fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml or www. ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta에 의해 작성되었다. 대안적으로, fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi에서 액세스할 수 있는 공용 서버를 사용하여 ggsearch (global protein : protein) 프로그램 및 기본 옵션(BLOSUM50; open: -10; ext: -2; Ktup = 2)을 사용하여 서열을 비교함으로써 로컬이 아닌 글로벌 정렬이 실시되도록 할 수 있다. 퍼센트 아미노산 동일성은 출력 정렬 헤더에 제공된다.
용어 "핵산 분자" 또는 "폴리뉴클레오티드"는 뉴클레오티드의 폴리머를 포함하는 임의의 화합물 및/또는 물질을 포함한다. 각 뉴클레오티드는 염기, 구체적으로 퓨린- 또는 피리미딘 염기(즉, 사이토신(C), 구아닌(G), 아데닌(A), 티민(T) 또는 우라실(U)), 당(즉, 데옥시리보스 또는 리보스), 및 인산염기로 구성된다. 흔히, 상기 핵산 분자는 염기 서열에 의해 기술되고, 상기 염기는 핵산 분자의 일차 구조(선형 구조)를 나타낸다. 염기의 서열은 전형적으로 5'에서 3'으로 나타낸다. 본원에서, 용어 핵산 분자는, 예를 들어 상보성 DNA(cDNA) 및 유전체 DNA를 포함하는 데옥시리보핵산(DNA), 리보핵산(RNA), 특히 전령 RNA(mRNA), DNA 또는 RNA의 합성 형태, 및 상기 분자 중에서 2가지 또는 그 이상을 포함하는 혼성 중합체를 포괄한다. 상기 핵산 분자는 선형 또는 환상일 수 있다. 또한, 상기 용어 핵산 분자는 센스 및 안티센스 가닥뿐만 아니라 단일 가닥 및 이중 가닥 형태 둘 모두를 포함한다. 게다가, 본원에서 설명된 핵산 분자는 자연 발생 또는 비-자연 발생 뉴클레오티드를 내포할 수 있다. 비-자연 발생 뉴클레오티드의 실례는 유도체화된 당 또는 인산염 중추 연쇄 또는 화학적으로 변형된 잔기를 갖는 변형된 뉴클레오티드 염기를 포함한다. 핵산 분자는 또한, 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예컨대, 숙주 또는 환자에서 본 발명의 항체의 직접적인 발현을 위한 벡터로서 적합한 DNA 및 RNA 분자를 포괄한다. 상기 DNA(예컨대, cDNA) 또는 RNA(예컨대, mRNA) 벡터는 변형되지 않거나 또는 변형될 수 있다. 예를 들어, mRNA는 RNA 벡터의 안정성 및/또는 암호화된 분자의 발현을 증진시키기 위해 화학적으로 변경될 수 있어서 mRNA는 생체내 항체를 생산하는 대상 내로 주입될 수 있다(예컨대, 문헌[Stadler ert al, Nature Medicine 2017, published online 12 June 2017, doi:10.1038/nm.4356] 또는 EP 2 101 823 B1호를 참조).
"단리된" 핵산은 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산에는 핵산 분자를 통상적으로 내포하는 세포에 내포된 핵산 분자가 포함되지만, 상기 핵산 분자는 염색체외에 또는 자연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
항체를 "암호화하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 하나 또는 그 이상의 핵산 분자(또는 이의 단편) 뿐만 아니라, 단일 벡터 또는 별개의 벡터들 내에서 상기 핵산 분자(들), 및 숙주 세포 내에 하나 또는 그 이상의 위치에 존재하는 상기 핵산 분자(들)를 포함하여 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "벡터(vector)"는 벡터가 연결되는 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터뿐 아니라, 벡터가 도입된 숙주 세포의 유전체 내에 혼입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터들은 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터들은 본원에서 "발현 벡터"로서 언급된다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양액"은 상호 교환적으로 이용되고, 외인성 핵산이 도입된 세포 및 상기 세포의 자손을 포함하여 지칭한다. 숙주 세포들에는 "형질전환체"와 "형질전환된 세포들"이 포함되는데, 이들은 계대의 수와 무관하게, 1차 형질전환된 세포 및 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량에서 부모 세포와 완전히 동일하지는 않을 수 있으며, 돌연변이를 내포할 수도 있다. 최초 형질전환된 세포에 대해 선별검사되거나 또는 선별된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.
용어 "약학적 조성물" 또는 "약학적 제형"는 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 허용하는 형태의 제제, 및 상기 약학적 조성물이 투여될 대상체에게 허용 불가할 정도의 독성인 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"약학적으로 허용가능한 담체"는 대상체에게 비독성인, 약학적 조성물 또는 제형에서 활성 성분 이외의 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용가능한 담체는 완충액, 부형제, 안정제 또는 보존제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
작용제, 예컨대 약학적 조성물의 "유효량"은 원하는 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 용량에서 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 포유류는 가축(예컨대, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류(예컨대, 인간 및 원숭이와 같은 비인간 영장류), 토끼, 및 설치류(예컨대, 마우스 및 래트)를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 특정 구현예들에서, 상기 개인 또는 대상체는 인간이다.
본원에서 사용된 "치료"(및 이의 문법적 변형, 예컨대 "치료하다" 또는 "치료하는")는 치료되는 개체의 자연스런 과정을 변경하려는 시도에서의 임상적 개입을 지칭하고, 임상 병리의 예방을 위해 또는 임상 병리의 과정 동안 실시될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 개선, 질환의 임의의 직접적인 또는 간접적인 병리학적 결과의 축소, 전이 예방, 질환 진행의 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 일부 구현예들에서, 본 발명의 항체는 질환의 발병을 지연시키거나 질환의 진행을 늦추기 위해 사용된다.
본원에서 사용된 용어 "안구 질환"은 병리학적 혈관 형성 및/또는 위축과 관련된 임의의 안구 질환을 포함한다. 안구 질환은 망막 또는 각막과 같은 안구 조직의 구조 내로 새로운 혈관의 변경되거나 조절되지 않는 증식 및/또는 침범을 특징으로 할 수 있다. 안구 질환은 망막 조직(광 수용체 및 기저 망막 색소 상피(RPE) 및 맥락막모세혈관층)의 위축을 특징으로 할 수 있다. 비-제한적 안구 질환은, 예를 들어 AMD(예컨대, 습성 AMD, 건성 AMD, 중간 AMD, 진행성 AMD 및 지리모양 위축(GA)), 황반 변성, 황반 부종, DME(예컨대, 초점, 비-중심 DME 및 미만성 중심 관련 DME), 망막 병증, 당뇨병성 망막증(DR)(예컨대, 증식성 DR(PDR), 비증식성 DR(NPDR) 및 고고도 DR), 기타 허혈 관련 망막 병증, ROP, 망막 정맥 폐색(RVO)(예컨대, 중앙(CRVO) 및 분지(BRVO) 형태), CNV(예컨대, 근시 CNV), 각막 혈관 신생, 각막 혈관 신생과 관련된 질병, 망막 혈관 신생, 망막/맥락막 혈관 신생과 관련된 질병, 중심 장액성 망막 병증(CSR), 병리적 근시, 폰 히펠-린다우병, 눈의 히스토플라스마증, FEVR, 코우츠병, 노리 병, 골다공증-가성 신경교종 증후군(OPPG)과 관련된 망막 이상, 결막하 출혈, 피부홍조, 안구 신생혈관 질환, 신혈관 녹내장, 색소성 망막염(RP), 고혈압성 망막 병증, 망막 혈관종 증식, 황반 모세혈관 확장증, 홍채 혈관 신생, 안구 내 혈관 신생, 망막 변성, 낭포성 황반 부종(CME), 혈관염, 유두 부종, 망막염(CMV 망막염을 포함하지만, 이에 제한되지는 않음), 안구 흑색종, 망막 모세포종, 결막염(예컨대, 감염성 결막염 및 비감염성(예컨대, 알레르기성 결막염), 레베르 선천성 흑암시(레베르 선천성 흑암시 또는 LCA라고도 공지됨), 포도막염(감염성 및 비감염성 포도막염을 포함), 맥락 막염(예컨대, 다초점 맥락 막염), 안구 히스토플라스마증, 안검염, 안구 건조증, 외상성 안구 손상, 쇼그렌 병 및 기타 안과 질환들을 포함하고, 상기 질환 또는 질병은 안구 혈관 신생, 혈관 누출 및/또는 망막 부종 또는 망막 위축과 관련이 있다. 추가의 예시적인 안구 질환은 망막 층간분리증(망막 감각신경층의 비정상적 분할), 피부홍조와 관련된 질환(각의 신생 혈관) 및 모든 형태의 증식성 유리체 망막 병증을 포함한 섬유 혈관 또는 섬유 조직의 비정상적인 증식으로 인한 질환을 포함한다. 각막 신생혈관형성과 관련된 예시적인 질환은 유행병 각결막염, 비타민 A 결핍, 콘택트 렌즈 과도착용, 아토피성 각막염, 상윤부 각막염, 익상편 건성 각막염, 쇼그렌 증후군, 여드름 장미증, 필렉테눌로시스, 매독, 마이코박테리아 감염, 지질 변성, 화학적 화상, 박테리아 궤양, 진균 궤양, 단순 포진 감염, 대상포진 감염, 원생동물 감염, 카포시 육종, 잠식성 각막궤양, 테리엔 변연 변성, 변연 표피박리, 류마티스성 관절염, 전신 낭창, 다발동맥염, 외상, 베게너 유육종증, 공막염, 스티븐 존슨 증후군, 방사상 각막절개, 및 각막 이식 거부를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 혈관 누출 증가, 동맥류 및 모세 혈관 탈락을 포함한 맥락막 신생 혈관 형성 및 망막 혈관계의 결함과 관련된 예시적인 질병은 당뇨병성 망막 병증, 황반 변성, 겸상 적혈구 빈혈, 유육종, 매독, 탄성섬유 가성 황색종, 페제트병, 정맥 폐색, 동맥 폐쇄, 경동맥 폐색 질환, 만성 포도막염/유리체염, 마이코박테리아 감염, 라임 병, 전신성 홍반성 루푸스, 미숙아 망막 병증, 망막 부종(황반 부종을 포함), 일스병, 베체트 병, 망막염 또는 맥락막염을 유발하는 감염(예컨대, 다초점 맥락막), 추정된 안구 히스토플라스마증, 베스트 병(유리 체형 황반 변성), 근시, 시신경 유두 소와, 평면부염, 망막 박리(예컨대, 만성 망막 박리), 과다점성 증후군, 톡소플라스마증, 외상 및 레이저 치료후 합병증을 포함하지만, 이제 제한되지는 않는다. 망막 조직의 위축(광수용체 및 기저 RPE)과 관련된 예시적인 질병은 위축성 또는 삼출성 AMD(예컨대, 지리모양 위축 또는 진행성 건성 AMD), 황반 위축(예컨대, 혈관 신생과 관련된 위축 및/또는 지리모양 위축), 당뇨병성 망막 병증, 스타가 르트 병, 소르스비 안저 이영양증, 망막 층간분리증 및 색소 성 망막염을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "포장 삽입물"은 치료용 제품의 상업적인 패키지 내에 통상적으로 포함되는 사용설명서를 지칭하는 데 이용되는데, 이는 상기 치료용 제품의 이용과 관련된 징후, 용법, 용량, 투여, 복합 요법, 금기 및/또는 주의사항에 관한 정보를 포함한다.
2. 본 발명의 실시양태의 상세한 설명
일 양태에서, 본 발명은 부분적으로 치료적 적용을 위한 이중 특이적 항체들의 제공을 기반으로 한다. 특정 양태들에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체들이 제공된다. 본 발명의 항체들은, 예컨대 혈관 질환, 예컨대 안구 혈관 질환의 진단 또는 치료에 유용하다.
A. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 예시적인 항체
일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체들을 제공한다. 일 양태에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 단리된 항체들이 제공된다. 일 양태에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체들을 제공한다.
특정 양태들에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체가 제공되고, 상기 항체는 VL 도메인 및 VH 도메인의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프(즉, VEGF에 결합하는 항원 결합 부위) 및 인간 IL-1베타 파라토프(즉, IL-1베타에 결합하는 항원 결합 부위)를 포함하고,
● 상기 VEGF 파라토프는 상기 항체의 CDR-H2, CDR-L1 및 CDR-L3으로부터의 아미노산 잔기들을 포함하며, 상기 IL-1베타 파라토프는 상기 항체의 CDR-H1, CDR-H3 및 CDR-L2로부터의 아미노산 잔기들을 포함하고/하거나;
● 상기 가변 경쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인의 쌍은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 동시에 결합하고/하거나;
● 상기 VEGF 파라토프에 포함되는 그 어떤 아미노산도 IL-1베타 파라토프에 포함되지 않고/않거나;
● 상기 IL-1베타 파라토프에 포함되는 그 어떤 아미노산도 VEGF 파라토프에 포함되지 않고/않거나;
● 상기 항체는 서열 번호 11의 가변 중쇄 도메인 및 서열 번호 12의 가변 경쇄 도메인을 갖는 항체와 동일한 인간 VEGF 상의 에피토프 및 동일한 인간 IL-1베타 상의 에피토프에 결합하고/하거나;
● 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하고/하거나;
● 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내고/내거나;
● 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내고/내거나;
● 인간 VEGF에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 50 nM 미만인 VEGFR2에 대한 VEGF의 결합을 억제하고; 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다. 일 구현예에서, 상기 항체는 상기 VH 도메인 내에 하기의 아미노산 잔기들: D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, 및 R83을 포함하고, 상기 VL 도메인 내에 하기의 아미노산 잔기들; I2, Y27, W27a, S27c, S27d, E67, D68, Q69, R92, Y93, H94 및 Y96을 포함하는 VEGF 파라토프; 및 상기 VH 도메인 내에 하기의 아미노산 잔기들: E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하고, 상기 VL 도메인 내에 하기의 아미노산 잔기들: L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, Y91을 포함하는 IL-1베타 파라토프를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로서, 상기 VH 도메인은 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로서, 상기 VL 도메인은 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로서, 상기 VH 도메인은 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, R66, R83, 및 K94를 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로서, 상기 VL 도메인은 아미노산 잔기 I2, Y49, G57, E67, D68, 및 Q69를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는 항체 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르며, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 1 내지 15, 1 내지 10, 또는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 1 내지 15, 1 내지 10, 또는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 1 내지 15, 1 내지 10, 또는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로서, 상기 아미노산 치환은 서열 번호 11의 3 내지 25, 36 내지 49, 97 내지 82c, 84 내지 93, 또는 103 내지 113번의 위치에 있는 VH 도메인; 및 (b) 1 내지 15, 1 내지 10, 또는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인으로서, 상기 아미노산 치환은 서열 번호 12의 1, 4, 6, 8 내지 23, 35 내지 48, 58 내지 66, 70 내지 88, 또는 98 내지 107번의 위치에 있는 가변 경쇄 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 1 내지 15, 1 내지 10, 또는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 1 내지 15, 1 내지 10, 또는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르며, (a) 1 내지 15, 1 내지 10, 또는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 1 내지 15, 1 내지 10, 또는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 서열 번호 11의 아미노산 서열에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 특정 양태들에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 대하여 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 특정 양태들에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열 번호 11에서 치환되고, 삽입되고 및/또는 결실되었다. 특정 양태들에서, 치환, 삽입 또는 결실은 CDR 밖에서의(즉, FR 내에서의) 영역에서 발생한다. 특정 양태에서, 상기 VH는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 서열 번호 12의 아미노산 서열에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 특정 양태들에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 대하여 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 특정 양태들에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열 번호 12에서 치환되고, 삽입되고 및/또는 결실되었다. 특정 양태들에서, 치환, 삽입 또는 결실은 CDR 밖에서의(즉, FR 내에서의) 영역에서 발생한다. 특정 양태에서, 상기 VL는 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
다른 양태에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체가 제공되고, 여기서 상기 항체는 상기 제공된 양태들 중 임의의 것에서와 같은 VH 서열 및 상기 제공된 양태들 중 임의의 것에서와 같은 VL 서열을 포함한다. 일 양태에서, 상기 항체는 서열 번호 11 및 서열 번호 12의 VH 및 VL 서열들 각각 뿐만 아니라 상기 서열들의 번역후 변형을 포함한다.
다른 양태에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체가 제공되고, 여기서 상기 항체는 서열 번호 20의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체가 제공되고, 여기서 상기 항체는 서열 번호 18의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 추가의 양태에서, 상기 양태들 중 임의의 것에 따른 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 단클론 항체이다. 일 양태에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 항체 단편, 예컨대 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디 또는 F(ab')2 단편이다. 다른 양태에서, 상기 항체는 전장 항체이다.
추가의 양태에서, 상기 양태들 중 임의의 것에 따른 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 하기의 섹션 1-7에 기재된 바와 같이 단독으로 또는 조합으로 임의의 특징을 혼입할 수 있다.
1. 항체 친화성
특정 구현예들에서, 본원에 제공된 항체는 결합하는 항체는 ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, 또는 ≤ 0.01 nM의 해리 상수(KD)를 갖고 VEGF에 결합한다. 특정 구현예들에서, IL-1베타에 결합하는 항체는 ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, 또는 ≤ 0.03 nM의 해리 상수(KD)를 갖는다.
일 양태에서, KD는 비아코어(BIACORE)® 표면 플라스몬 공명 검정을 이용하여 측정될 수 있다.
예를 들어, VEGF에 결합하는 항체의 KD는 약 10 반응 단위(RU)로 C1 칩 상에 고정된 VEGF121으로 25℃에서 실시된 비아코어®-2000 또는 비아코어®-3000(비아코어, 뉴저지 피스캐터웨이 소재)을 이용한 검정에서 측정된다. 동력학적 측정을 위해, 2배 연속 희석된 Fab(1.2 nM 내지 100 nM)를 대략 30 μl/분의 유속으로 25℃에서 HBS-P+(10 mM HEPES, 150 mM NaCl pH 7.4, 0.05% 계면활성제 P20)에서 주입한다. 연관률 (kon) 및 해리율 (koff)은 연관 및 해리 센서그램을 동시에 적합시킴으로써 단순한 1 대 1 랭뮤어 결합 모형 (BIACORE ® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 이용하여 계산된다. 평형 해리 상수 (KD)는 비율 koff/kon로 산출된다. 예컨대, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)를 참조한다.
예를 들어, IL-1베타에 결합하는 항체의 KD는 약 20 반응 단위(RU)로 C1 칩 상에 고정된 이중 특이적 항체로 25℃에서 실시된 비아코어®-2000 또는 비아코어®-3000(비아코어, 뉴저지 피스캐터웨이 소재)을 이용한 검정에서 측정된다. 동력학적 측정을 위해, 2배 연속 희석된 인간 IL-1베타(0.74 내지 60 nM)를 대략 30 μl/분의 유속으로 25℃에서 HBS-P+(10 mM HEPES, 150 mM NaCl pH 7.4, 0.05% 계면활성제 P20)에서 주입한다. 연관률(kon) 및 해리율(koff)은 연관 및 해리 센서그램을 동시에 적합시킴으로써 단순한 1 대 1 랭뮤어 결합 모형 (BIACORE® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 이용하여 계산된다. 평형 해리 상수(KD)는 비율 koff/kon로 산출된다. 예컨대, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)를 참조한다.
2. 항체 단편
특정 양태들에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다.
일 양태에서, 상기 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH 또는 F(ab')2 단편, 특히, Fab 단편이다. 무손상 항체들의 파파인 분해는 각각 중쇄 및 경쇄 가변 도메인(각각 VH 및 VL) 및 경쇄의 불변 도메인(CL) 및 중쇄의 제 1 불변 도메인(CH1) 또한 함유하는 2개의 동일한 항원-결합 단편들, 소위 "Fab" 단편들을 생성한다. 따라서 용어 "Fab 단편"은 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 경쇄 및 VH 도메인 및 CH1 도메인을 포함하는 중쇄 단편을 포함하는 항체 단편을 지칭한다. Fab' 단편은 항체 힌지(hinge)의 영역으로부터의 하나 또는 그 이상의 시스테인을 포함하여 CH1 도메인의 카르복시 말단에서 잔기들의 부가에 의해, Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 본 명세서에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올기를 보유하는 Fab' 단편이다. 펩신 처리는 2개의 항원 결합 부위(2개의 Fab 단편) 및 Fc 영역의 일부를 갖는 F(ab')2 단편을 생성한다. 구제 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의를 위해, 미국 특허 제 5,869,046호를 참조한다.
항체 단편은 본원에서 설명된 바와 같이, 무손상 항체의 단백질분해 소화뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들면 대장균(예컨대, 대장균, CHOi)에 의한 재조합 생산을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 다양한 기술에 의해 만들어질 수 있다.
3. 열 안정성
본원에 제공된 항체는 우수한 열 안정성을 나타낸다. 특정 구현예들에서, 본원에 제공된 항체의 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타낸다. 특정 구현예들에서, 본원에 제공된 항체의 Fab 단편은 동적 광 산란법에 의해 측정될 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타낸다.
4. 라이브러리-유래 항체
특정 양태들에서, 본원에 제공된 항체는 라이브러리로부터 유래된다. 본 발명의 항체는 목적하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝함에 의해 단리될 수 있다. 조합 라이브러리를 선별 검사하는 방법은, 예컨대 Lerner et al. in Nature Reviews 16 : 498-508 (2016)에 검토되어 있다. 예를 들어, 파지 전시 라이브러리를 산출하고, 원하는 결합 특징을 소유하는 항체에 대해 이런 라이브러리를 선별검사하기 위한 다양한 방법이 당해 분야에서 공지된다. 상기 방법들은, 예컨대 Frenzel et al. in mAbs 8:1177-1194 (2016); Bazan et al. in Human Vaccines and Immunotherapeutics 8:1817-1828 (2012) 및 Zhao et al. in Critical Reviews in Biotechnology 36:276-289 (2016) 뿐만 아니라 Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) 및 Marks and Bradbury in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)에서 검토되었다.
특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 별개로 클로닝되고, 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합되고, 이는 이후 문헌[Winter et al. in Annual Review of Immunology 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바대로 항원 결합 파지에 대해 선별 검사될 수 있다. 파지는 전형적으로, 단일 사슬 Fv(scFv) 단편으로서 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 전시한다. 면역화된 공급원으로부터 라이브러리는 하이브리도마를 구축하는 요건 없이 면역원에 대한 높은 친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 미경험 레퍼토리는 문헌[Griffiths et al. in EMBO Journal 12: 725-734 (1993)]에 의해 기재된 바대로 임의의 면역화 없이 넓은 범위의 비-자가 및 또한 자가 항원에 항체의 단일 소스를 제공하도록(예컨대, 인간으로부터) 클로닝될 수 있다. 또한, 미경험 라이브러리는 줄기 세포로부터 비재배열된 V-유전자 절편을 클로닝하고, 문헌[Hoogenboom and Winter in Journal of Molecular Biology 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바대로 고도로 가변인 CDR3 영역을 코딩하고 시험관내 재배열을 달성하기 위해 랜덤 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써 합성으로 또한 제조될 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하는 특허 공보는, 예를 들어 하기를 포함한다: 미국 특허 제5,750,373호; 7,985,840호; 7,785,903호 및 8,679,490호 뿐만 아니라 미국 특허 공보 제2005/0079574호, 2007/0117126호, 2007/0237764호 및 2007/0292936호.
원하는 활성 또는 활성을 갖는 항체에 대한 조합 라이브러리를 선별 검사하기위한 당업계에 공지된 방법의 추가적인 예는 박테리아, 포유류 세포, 곤충 세포 또는 효모 세포에 대한 항체 디스플레이 및 선택 방법뿐만 아니라 리보솜 및 mRNA 디스플레이를 포함한다. 효모 표면 발현을 위한 방법들은, 예컨대 Scholler et al. in Methods in Molecular Biology 503:135-56 (2012) 및 Cherf et al. in Methods in Molecular biology 1319:155-175 (2015) 뿐만 아니라 Zhao et al. in Methods in Molecular Biology 889:73-84 (2012)에서 검토되어 있다. 리보솜 발현을 위한 방법들은, 예컨대 He et al. in Nucleic Acids Research 25:5132-5134 (1997) 및 Hanes et al. in PNAS 94:4937-4942 (1997)에 설명되어 있다.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편인 것으로 고려된다.
5. 다중 특이적 항체
특정 양태들에서, 본원에 제공되는 항체는 키메라 항체이다. "다중 특이적 항체"는 적어도 2가지 상이한 부위들, 즉, 상이한 항원들 상의 상이한 에피토프 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프들에 대한 결합 특이성을 가지는 단클론 항체들이다. 특정 양상들에서, 다중특이적 항체는 3개 이상의 결합 특이성을 가진다.
본원에서 제공된 항체들을 포함하는 3개 이상의 결합 특이성을 갖는 다중 특이적 항체는 동일한 항원 특이성의 하나 이상의 결함 팔들에서 도메인 교차를 갖는 비대칭 형태에서, 즉 VH/VL 도메인들(예컨대, WO 2009/080252 및 WO 2015/150447을 참조), CH1/CL 도메인들(예컨대, WO 2009/080253을 참조) 또는 완전한 Fab 팔들(예컨대, WO 2009/080251, WO 2016/016299를 참조하고, 또한 Schaefer et al, PNAS, 108 (2011) 1187-1191, 및 Klein at al., MAbs 8 (2016) 1010-20을 참조)을 교환함으로써 비대칭 형태로 제공될 수 있다. 다중 특이적 항체에 대한 다양한 추가적인 분자 형태들이 당업계에 공지되어 있으며 본원에 포함된다(예컨대, Spiess et al., Mol Immunol 67 (2015) 95-106을 참조).
6. 항체 변이체
특정 양태들에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 상기 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 성질들을 변경하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 상기 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 내로 적절한 변형을 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 상기 변형은, 예를 들어 항체의 아미노산 서열로부터 결실 및/또는 이들 서열 내로 삽입 및/또는 이들 서열 내에 잔기의 치환을 포함한다. 최종 작제물이 원하는 특징, 예컨대 항원 결합을 보유한다면, 최종 작제물에 도달하기 위해 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 만들어질 수 있다.
특정 양태들에서, 1개 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체들이 제공된다. 치환 돌연변이 유발을 위한 관심 부위에는 CDR들 및 FR들이 포함된다. 보존성 치환은 "바람직한 치환"의 표제 하에 하기의 표에 나타낸다. 더 많은 실질적인 변화는 표 A의 "예시적 치환"이라는 표제 하에 나타내며, 이는 아미노산 측쇄 부류를 참조하여 보다 상세히 설명된다. 아미노산 치환은 목적하는 활성, 예컨대 보유된/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC를 위해 스크리닝된 제품 및 관심 항체에 도입될 수 있다.
[표 A]
Figure pct00002
아미노산은 공통 측쇄 특성에 따라 군화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존성 치환들은 이들 클래스 중 하나의 구성원을 또 다른 클래스의 구성원으로 교환하게 할 것이다.
치환 변이체의 한 가지 유형은 부모 항체의 1개 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 수반한다(예컨대, 인간화 또는 인간 항체). 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택되는 수득한 변이체(들)은 부모 항체에 대하여 특정 생물학적 특성(예컨대, 증가된 친화성, 감소된 면역원성)에서 변형(예컨대, 개선)을 가질 것이고/이거나 부모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화성이 성숙된 항체인데, 이것은 예를 들어, 파지 전시 기반의 친화성 성숙 기술, 예컨대 본원에서 설명된 것들을 이용하여 편리하게 산출될 수 있다. 간단히 말하면, 하나 또는 그 이상의 CDR 잔기가 돌연변이되고, 변이체 항체는 파지에서 전시되고 특정 생물학적 활성(예컨대, 결합 친화성)에 대해 선별검사된다.
예컨대, 항체 친화성을 향상시키기 위해 CDR에서 변경(예컨대, 치환)이 실시될 수 있다. 상기 변경은 CDR "핫스팟", 다시 말하면, 체성 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 암호화된 잔기(예컨대, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)을 참조) 및/또는 항원에 접촉하는 잔기에서 만들어질 수 있으며, 결과로서 생성된 변이체 VH 또는 VL은 결합 친화성에 대해 검사된다. 2차 라이브러리를 구축하고 이들로부터 재선별함에 의한 친화성 성숙은, 예컨대 Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)에서 설명되었다. 친화성 성숙의 일부 구현예들에서, 다양성이 임의의 다양한 방법(예컨대, 오류 가능성 PCR, 사슬 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-유도 돌연변이)에 의해, 성숙을 위해 선택된 가변적 유전자 내로 도입된다. 이어서, 2차 라이브러리가 생성된다. 이어서, 상기 라이브러리는 목적하는 친화성을 갖는 임의의 항체 변이체를 동정하기 위해 선별검사된다. 다양성을 도입하기 위한 다른 방법은 CDR 지시된 접근법을 수반하고, 여기서 몇몇 CDR 잔기(예컨대, 한 번에 4 내지 6개의 잔기)가 무작위화된다. 항원 결합에 관련된 CDR 잔기는, 예컨대 알라닌 주사 돌연변이 생성(alanine scanning mutagenesis) 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 식별할 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적화된다.
특정 양태들에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 상기 변경으로 인하여 상기 항체가 항원에 결합하는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 하나 이상의 CDR 안에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화성을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예컨대, 본원에서 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 CDR에서 만들어질 수 있다. 상기 변경은, 예를 들어 CDR에서 항원 접촉 잔기의 외부에 있을 수 있다. 상기 제시된 특정 변이체 VH 및 VL 서열들에서, 각 CDR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이상의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역의 확인을 위한 유용한 방법은 Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085에 의해 설명된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 상기 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기의 군(예컨대, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys 및 glu)은 항원에 대한 항체의 상호작용이 영향을 받는지를 결정하기 위해 확인되고 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예컨대, 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 대체된다. 초기의 치환에 대해 기능적 민감성을 나타내는 아미노산 위치에 추가적인 치환이 도입될 수 있다. 대안으로적으로 또는 추가적으로, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 이용하여 항체 및 항원 간의 접촉점들을 동정할 수 있다. 상기 접촉 잔기 및 인접한 잔기는 치환을 위한 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체는 그들이 원하는 특성을 내포하는 지를 결정하기 위해 선별검사될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1개 잔기로부터 100개 또는 그 이상의 잔기를 내포하는 폴리펩티드까지의 길이 범위에서 변하는 아미노 및/또는 카르복실 말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 복수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 실례는 N 말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 상기 항체 분자의 다른 삽입 변이체들은 효소(예컨대, ADEPT (항체 지시된 효소 전구약물 요법)의 경우)에 항체의 N- 또는 C-말단의 융합 또는 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드에 항체의 N- 또는 C-말단의 융합을 포함한다.
a) 글리코실화 변이체
특정 양상들에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 이 항체가 당화되는 정도를 증가 또는 감소시키기 위하여 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 달성될 수 있어서 하나 이상의 글리코실화 부위는 제조 또는 제거된다.
항체가 Fc 영역을 포함할 때, 이것에 부착된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생성된 천연 항체는, 일반적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-결합에 의해 결합된, 분지된 바이안테너리(biantennary) 올리고사카라이드를 전형적으로 포함한다. 예컨대 Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)을 참조한다. 올리고당류는 다양한 탄수화물, 예를 들어, 만노오스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토오스 및 시알산뿐만 아니라 바이안테나리 올리고당류 구조의 "줄기"에서 GlcNAc에 부착된 푸코오스를 포함할 수 있다. 일부 양태들에서, 본원 발명의 항체에서 올리고당류의 변형은 일정한 향상된 특성을 갖는 항체 변이체를 창출하기 위해 만들어질 수 있다.
일 양태에서, 비-푸코실화 올리고당, 즉, Fc 영역에 부착된 (직접 또는 간접적으로) 푸코스가 없는 올리고당 구조를 가지는 항체 변이체들이 제공된다. 이러한 비-푸코실화 올리고당 (또한 "아푸코실화" 올리고당으로도 지칭됨)은 특히 이촉각성 올리고당 구조의 줄기에서 첫 번째 GlcNAc에 부착된 푸코스 잔기가 없는 N-연결된 올리고당이다. 일 양태에서, 천연 또는 부모 항체와 비교하여 Fc 영역에서 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고당을 갖는 항체 변이체들이 제공된다. 예를 들어, 비-푸코실화 올리고당의 비율은 적어도 약 20%, 적어도 약 40%, 적어도 약 60%, 적어도 약 80% 또는 심지어 약 100%(즉, 푸코실화 올리고당이 존재하지 않음)일 수 있다. 비-푸코실화 올리고당의 백분율은, 예를 들어, WO 2006/082515에 설명되어 있는 바와 같이, MALDI-TOF 질량 분석법에 의해 측정된 Asn 297에 부착된 모든 올리고당 (예컨대, 복합체, 하이브리드 및 높은 만노스 구조들)의 합에 대한 푸코스 잔기가 없는 올리고당의 (평균) 양이다. Asn297은 Fc 영역 내에 대략 위치 297 (Fc 영역 잔기의 EU 넘버링)에서 위치된 아스파라긴 잔기를 지칭한다; 하지만, Asn297은 또한, 항체에서 경미한 서열 변이로 인해, 위치 297의 대략 ± 3개 아미노산 상류 또는 하류에, 다시 말하면, 위치 294 및 300 사이에 위치될 수 있다. Fc 영역에서 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고당을 갖는 이러한 항체는 개선된 FcγRIIIa 수용체 결합 및/또는 개선된 작동체 기능, 특히 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예컨대, US 2003/0157108; US 2004/0093621을 참조한다.
푸코실화가 감소된 항체를 생산할 수 있는 세포주들의 예들에는 단백질 푸코실화 결핍 Lec13 CHO 세포들(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); US 2003/0157108; 및 WO 2004/056312, 특히 실시예 11), 및 녹아웃 세포주들, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포들(예컨대, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614-622 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO 2003/085107를 참조), 또는 GDP-푸코스 합성 또는 전달체 단백질의 활성이 감소 또는 제거된 세포들(예컨대, US2004259150, US2005031613, US2004132140, US2004110282를 참조)이 포함된다.
추가의 양태에서, 항체의 Fc 영역의 이촉각성 올리고당이 GlcNAc에 의해 양분되어 있는, 양분된 올리고당을 가진 항체 변이체들이 제공된다. 상기 항체 변이체들은 상기 기재한 바와 같이 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 보유할 수 있다. 상기 항체 변이체들의 예들은, 예컨대, Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999); Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006); WO 99/54342; WO 2004/065540, WO 2003/011878에 기재되어 있다.
Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 내 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 상기 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 상기 항체 변이체는, 예컨대 WO 1997/30087; WO 1998/58964; 및 WO 1999/22764에서 설명된다.
b) Fc 영역 변이체
특정 양태들에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에서 제공된 항체의 Fc 영역 내로 도입되어, Fc 영역 변이체가 생성될 수 있다. 상기 Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예컨대, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예컨대, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 양태들에서, 본 발명은 전체 작동체 기능이 아닌 일부만을 보유하는 항체 변이체를 고려하는데, 상기 변이체는 항체의 반감기도 중요하지만, 특정 작동체 기능(예컨대, 보체-의존적 세포독성(CDC) 및 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC))은 불필요하거나 유해한 용도에 바람직한 후보물질이 될 수 있다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확증하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정이 수행될 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 검정은 항체가 FcγR 결합이 부재하지만(따라서 유사하게 ADCC 활성 부재), FcRn 결합 능력을 보유하도록 실시될 수 있다. ADCC를 매개하기 위한 1차 세포인 NK 세포는 단지 FcγRIII를 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포들에서 FcR 발현은 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)의 페이지 464의 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적 예는 미국 특허 제5,500,362호(예컨대, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)을 참조) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337(Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)을 참조)에서 설명된다. 대안적으로, 비방사성 검정 방법이 이용될 수 있다(예를 들어, 유세포분석법의 경우에 ACTI™ 비방사성 세포독성 검정(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; 및 CytoTox 96® 비방사성 세포독성 검정(Promega, Madison, WI)을 참조). 상기 검정을 위한 유용한 작동체 세포는 말초혈 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은, 예컨대, Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)에서 개시된 바와 같은 동물 모델에서 생체내에서 평가될 수 있다. 항체가 C1q에 결합할 수 없고, 따라서 CDC 활성이 결여된다는 것을 확인하기 위해, C1q 결합 검정 또한 실시할 수 있다. 예컨대, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위하여, CDC 분석이 실시될 수 있다(예를 들어, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)를 참조). FcRn 결합 및 생체내 제거/반감기 결정은 당업계에 공지된 방법들을 이용하여 또한 실시될 수 있다(예컨대, Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006); WO 2013/120929 Al를 참조).
감소된 작동체 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중에서 하나 이상에 대한 치환을 갖는 것들을 포함한다(미국 특허 제 6,737,056호). 이런 Fc 돌연변이체는 잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 갖는 이른바 "DANA" Fc 돌연변이체를 비롯하여, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 또는 그 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (US 특허 번호 7,332,581).
FcRs에 향상된 또는 축소된 결합을 갖는 일정한 항체 변이체가 설명된다. (예컨대, 미국 특허 제 6,737,056호; WO 2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)를 참조)
특정 양태들에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예컨대 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334(잔기의 EU 넘버링)에서 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
특정 양태들에서, 항체 변이체는 FcγR 결합을 감소시키는 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환들, 예컨대 Fc 영역의 위치 234 및 235(잔기의 EU 넘버링)에서 치환을 가진 Fc 영역을 포함한다. 일 양태에서, 치환은 L234A 및 L235A(LALA)이다. 특정 양태들에서, 상기 항체 변이체는 인간 IgG1 Fc 영역으로부터 유래된 Fc 영역에 D265A 및/또는 P329G를 추가로 포함한다. 일 양태에서, 치환은 인간 IgG1 Fc 영역으로왜요부터 유래된 Fc 영역에서의 L234A, L235A 및 P329G (LALA-PG)이다. (예컨대, WO 2012/130831을 참조). 다른 양태에서, 치환은 인간 IgG1 Fc 영역으로부터 유래된 Fc 영역에서의 L234A, L235A 및 D265A(LALA-DA)이다.
일부 양태들에서, 예컨대 미국 특허 제 6,194,551호, WO 99/51642호 및 Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)에서 설명된 바와 같이, 변경된(즉, 개선된 또는 축소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성(CDC)을 유발하는 Fc 영역에서 변경이 만들어진다.
태아로 모계 IgGs의 전달을 담당하는, 증가된 반감기 및 신생아의 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합이 개선된 항체들(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))은 US2005/0014934 (Hinton et al.)에서 설명된다. 상기 항체는 FcRn에 Fc 영역의 결합을 향상시키는, 그 안에 하나 또는 그 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 상기 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기의 하나 이상에서 치환을 갖는 것들을 포함한다: 238, 252, 254, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434, 예컨대 Fc 영역 잔기 434의 치환(예컨대, 미국 특허 제 7,371,826; Dall'Acqua, W.F., et al. J. Biol. Chem. 281 (2006) 23514-23524를 참조).
마우스 Fc-마우스 FcRn 상호작용에 중요한 Fc 영역 잔기는 부위 지정 돌연변이유발에 의해 확인되었다(예컨대, Dall'Acqua, W.F., et al. J. Immunol 169 (2002) 5171-5180을 참조). 잔기 I253, H310, H433, N434 및 H435(EU 인덱스 넘버링)는 상호작용에 관여한다(Medesan, C., et al., Eur. J. Immunol. 26 (1996) 2533; Firan, M., et al., Int. Immunol. 13 (2001) 993; Kim, J.K., et al., Eur. J. Immunol. 24 (1994) 542). 잔기 I253, H310 및 H435는 인간 Fc와 뮤린 FcRn의 상호 작용에 중요한 것으로 밝혀졌다 (Kim, JK, 외, Eur. J. Immunol. 29 (1999) 2819). 인간 Fc-인간 FcRn 복합체에 관한 연구는 잔기 I253, S254, H435, 및 Y436이 이러한 상호작용에 중요함을 보여주었다(Firan, M., et al., Int. Immunol. 13 (2001) 993; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604). Yeung, Y.A., et al. (J. Immunol. 182 (2009) 7667-7671)에서, 잔기 248 내지 259 및 301 내지 317 및 376 내지 382 및 424 내지 437의 다양한 돌연변이체들이 보고되었으며 조사되었다.
특정 양태들에 있어서, 항체 변이체는 FcRn 결합을 감소시키는 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환들, 예로써, Fc-영역의 위치 253, 및/또는 310, 및/또는 435 (잔기의 EU 넘버링)에서 치환을 가진 Fc 영역을 포함한다. 특정 양태들에서, 항체 변이체는 위치 253, 310 및 435에서 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 일 양태에서, 상기 치환은 인간 IgG1 Fc-영역으로부터 유래된 Fc 영역에서의 I253A, H310A 및 H435A이다. 예컨대, Grevys, A., et al., J. Immunol. 194 (2015) 5497-5508을 참조한다.
특정 양태들에 있어서, 항체 변이체는 FcRn 결합을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환들, 예컨대 Fc 영역의 위치 310, 및/또는 433, 및/또는 436(잔기의 EU 넘버링)에서 치환을 가진 Fc 영역을 포함한다. 특정 양태들에서, 항체 변이체는 위치 310, 433 및 436에서 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 일 양태에서, 상기 치환은 인간 IgG1 Fc-영역으로부터 유래된 Fc 영역에서의 H310A, H433A A 및 Y436A이다. (예컨대, WO 2014/177460 Al를 참조).
특정 양태들에서, 항체 변이체는 FcRn 결합을 증가시키는 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환들, 예로써, Fc 영역의 위치 252, 및/또는 254, 및/또는 256 (잔기의 EU 넘버링)에서 치환을 가진 Fc 영역을 포함한다. 특정 양태들에서, 항체 변이체는 위치 252, 254, 및 256에서 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 일 양태에서, 상기 치환은 인간 IgG1 Fc-영역으로부터 유래된 Fc 영역에서의 M252Y, S254T 및 T256E이다. Fc 영역 변이체들의 다른 예들에 관련된 Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); U.S. 특허 제 5,648,260; U.S.특허 제 5,624,821; 및 WO 94/29351 참고.
본원에 보고된 항체 중쇄의 C-말단은 아미노산 잔기 PGK로 끝나는 완전한 C-말단 일 수 있다. 상기 중쇄의 C-말단은 1개 또는 2개의 C-말단 아미노산 잔기들이 제거된 짧아진 C-말단일 수 있다. 바람직한 일 양태에서, 상기 중쇄의 C-말단은 짧아진 C-말단 엔딩 PG이다. 본원에 보고된 모든 양태들 중 일 양태에서, 본원에 명시된 바와 같은 C-말단 CH3 도메인을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체는 C-말단 글리신-리신 디펩티드 (G446 및 K447, 아미노산 위치의 EU 인덱스 넘버링)를 포함한다. 본원에 보고된 모든 양태들 중 일 양태에서, 본원에 명시된 바와 같은 C-말단 CH3 도메인을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체는 C-말단 글리신 잔기 (G446, 아미노산 위치의 EU 인덱스 넘버링)를 포함한다.
c) 시스테인 가공된 항체 변이체
특정 양태들에서, 시스테인 가공된 항체, 예컨대 THIOMABTM을 창출하는 것이 바람직할 수 있는데, 여기서 항체의 하나 또는 그 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된다. 특정 양태들에서, 상기 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 나타난다. 상기 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올 기는 따라서, 항체의 접근가능한 부위에서 위치되고, 상기 항체를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합하여 본원에서 추가로 설명된 바와 같은 면역접합체를 창출하는 데 이용될 수 있다. 시스테인 조작된 항체는, 예컨대 미국 특허 제 7,521,541, 8,30,930, 7,855,275, 9,000,130, 또는 WO 2016040856에서 설명된 것과 같이 생성될 수 있다.
7. 면역접합체
본 발명은 하나 또는 그 이상의 치료제, 가령, 세포독성제, 화학치료제 또는 약물, 성장 억제제 물질, 톡신 (예컨데, 단백질 톡신, 박테리아, 진균성, 식물, 또는 동물 기원의 효소적으로 활성 톡신, 또는 이의 단편), 또는 방사능활성 동위원소에 접합된 본원에 개시된 인간 VEGF 및 인간 IL-1항체에 결합하는 항체를 포함하는 면역접합체를 또한 제공한다.
일 양태에서, 면역접합체는 항체가 상기 언급된 치료제 중 하나 이상에 접합된 항체-약물 접합체(ADC)이다. 상기 항체는 전형적으로 링커를 이용하여 치료제 중에서 한 가지 또는 그 이상에 연결된다. 치료제 및 약물 및 링커의 실례를 포함하는 ADC 기술의 개요는 Pharmacol Review 68:3-19 (2016)에서 제시된다.
B. 재조합 방법 및 조성물
항체는, 예를 들어 US 4,816,567호에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 이용하여 생성될 수 있다. 상기 방법을 위해, 항체를 암호화하는 하나 이상의 단리된 핵산(들)이 제공된다.
일 양태에서, 본 발명의 항체를 암호화하는 단리된 핵산이 제공된다.
일 양태에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 만드는 방법이 제공되고, 이 방법은, 상기 제공된 것과 같이, 상기 항체의 발현에 적합한 조건하에서, 상기 항체를 암호화하는 핵산(들)을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것과 선택적으로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 상기 항체를 회수하는 것을 포함한다.
인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체의 재조합 생성을 위해, 예컨대 상기 기재된 바와 같은 항체를 암호화하는 핵산은 숙주 세포에서의 추가적인 클로닝 및/또는 발현을 위해 단리되고 하나 이상의 벡터 내로 삽입된다. 상기 핵산은 종래의 절차를 이용하여 용이하게 단리되고 서열 분석되거나(예컨대, 상기 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드를 이용함으로써) 또는 재조합 방법에 의해 생성되거나 화학적 합성에 의해 수득될 수 있다.
항체-암호화 벡터의 클로닝 또는 발현을 위한 적합한 숙주 세포는 본원에서 설명된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는 박테리아에서, 특히 글리코실화 및 Fc 작동체 기능이 필요치 않을 때, 생성될 수 있다. 박테리아에서 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현을 위해서는, 예컨대 US 5,648,237호, US 5,789,199호, 및 US 5,840,523호를 참조한다. (또한, 대장균에서 항체 단편의 발현을 설명하는 문헌[Charlton, K.A., In: Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (ed.), Humana Press, Totowa, NJ (2003), pp. 245-254]을 참조.) 발현 후, 항체는 가용성 분획물에서 박테리아 세포 덩어리로부터 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
척추동물 세포는, 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 예를 들어, 현탁 상태에서 성장하도록 적응되는 포유류 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 다른 예들은 SV40(COS-7)에 의해 변형된 원숭이 신장 CV1 세포주; 인간 배아 신장 세포주(예컨대, 문헌[Graham, F.L. et al., J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74)]에 기재되어 있는 293 또는 293T 세포); 아기 햄스터 신장세포(BHK); 마우스 세르톨리 세포(예컨대, 문헌[Mather, J.P., Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252]에 기재되어 있는 TM4 세포); 원숭이 신장세포(CV1); 아프리카 초록원숭이 신장세포(VERO-76); 인간 경추 육종 세포(HELA); 개의 신장세포(MDCK; 버팔로 래트의 간세포(BRL 3A); 인간 폐세포(W138); 인간 간세포(Hep G2); 마우스 유선 종양(MMT 060562); TRI 세포(예컨대, 문헌[Mather, J.P. et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383 (1982) 44-68]에 기재되어 있는); MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유류 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포(Urlaub, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220); 및 Y0, NS0 및 Sp2/0 같은 골수종 세포주를 비롯하여 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 포함한다. 항체 생성에 적합한 특정 포유류 숙주 세포주의 검토를 위해, 예컨대 문헌[Yazaki, P. and Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (ed.), Humana Press, Totowa, NJ (2004), pp. 255-268]을 참조한다.
일 양태에서, 상기 숙주 세포는 진핵세포, 예컨대 중국 햄스터 난소(CHO) 또는 림프계 세포(예컨대, Y0, NS0, Sp20 세포)이다.
C. 약학적 조성물
추가의 양태에서, 예컨대 하기의 치료 방법들 중 임의의 것에서 사용하기 위해 본원에서 제공된 항체들 중 임의의 것을 포함하는 약학적 조성물이 제공된다. 일 양태에서, 약학적 조성물은 본원에서 제공된 항체들 중 임의의 것 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 다른 양태에서, 약학적 조성물은 본원에서 제공되는 항체들 중 임의의 것 및, 예컨대 하기에 기재된 바와 같이 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함한다.
본원에서 설명된 바와 같은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체의 약학적 조성물은 동결 건조된 조성물 또는 수성 용액의 형태에서, 원하는 정도의 순도를 갖는 상기 항체를 한 가지 또는 그 이상의 임의적인 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합함으로써 제조된다(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)). 약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 이용된 용량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 하기를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 완충액, 예컨대 히스티딘, 인산염, 구연산염, 아세테이트 및 다른 유기 산; 아스코르빈산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제(예컨대, 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄; 염화헥사메토늄; 염화벤잘코늄; 염화벤제토늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 이하의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대 이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물(예컨대, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG). 본원에서 예시적인 약학적으로 허용가능한 담체는 세포간 약물 분산 작용제, 예컨대 가용성 중성-활성 히알루론산분해효소 당단백질(sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루론산분해효소 당단백질, 예컨대 rHuPH20(HYLENEX®, Halozyme, Inc.)을 추가로 포함한다. rHuPH20을 포함하는 특정한 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공보 제 2005/0260186호 및 2006/0104968호에서 설명된다. 한 양태에서, sHASEGP는 한 가지 또는 그 이상의 추가적인 글리코사미노글리카나아제, 예컨대 콘드로이티나아제와 조합된다.
예시적인 동결 건조된 항체 조성물들은 미국 특허 제 6,267,958호에서 기재된다. 수성 항체 조성물들은 미국 특허 제 6,171,586호 및 WO2006/044908에 기재된 것들을 포함하는데, 후자의 조성물들은 히스티딘-아세트산염 완충제를 포함한다.
본원의 약학적 조성물은, 또한 치료되는 특정 징후에 대해 필요에 따라 한 가지 이상의 활성 화합물, 바람직하게는 서로에 부정적으로 영향을 주지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 내포할 수 있다. 상기 활성 성분은 적합하게는 의도된 목적에 효과적인 양에서 조합으로 존재한다.
활성 성분은, 예를 들어 액적형성 기술에 의해 또는 계면 중합화에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로유제, 나노입자 및 나노캡슐)에서 또는 마크로유제에서 히드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에 포획될 수 있다. 상기 기술은 Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에서 개시된다.
서방성 방출을 위한 약학적 조성물을 제조될 수 있다. 서방형 제제들의 적합한 예는 상기 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체들의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형품, 예컨대, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체내 투여에 이용되는 약학적 조성물은 일반적으로 무균이다. 살균은, 예컨대 무균 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성될 수 있다.
D. 치료 방법 및 투여 경로
본원에 제공된 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체들 중 임의의 것이 치료 방법에 사용될 수 있다.
일 양태에서, 약제로서 사용하기 위해 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체가 제공된다. 추가의 양태들에서, 혈관 질환 치료에 사용하기 위해 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체가 제공된다. 특정 양태들에서, 치료 방법에 사용하기 위해 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체가 제공된다. 특정 양태들에서, 본 발명은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 혈관 질환을 갖는 개체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 제공한다. 상기의 일 양태에서, 상기 방법은, 예컨대 하기에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 추가적인 치료제(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 개의 추가적인 치료제)의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 추가의 양태들에서, 본 발명은 혈관 신생을 억제하는데 사용하기 위해 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 제공한다. 특정 양태들에서, 본 발명은 혈관 신생을 억제하기 위해 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개인에서 혈관 신생을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 제공한다. 상기 양태들 중 임의의 것에 따른 "개체"는 바람직하게는 인간이다.
추가의 양태들에서, 안구 질환의 치료에 사용하기 위해 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체가 제공된다. 일 구현예에서, 안구 질환은, AMD(일 구현예에서, 습성 AMD, 건성 AMD, 중간 AMD, 진행성 AMD 및 지리모양 위축(GA)), 황반 변성, 황반 부종, DME(일 구현예에서, 초점, 비-중심 DME 및 미만성 중심 관련 DME), 망막 병증, 당뇨병성 망막증(DR)(일 구현예에서, 증식성 DR(PDR), 비증식성 DR(NPDR) 및 고고도 DR), 기타 허혈 관련 망막 병증, ROP, 망막 정맥 폐색(RVO)(일 구현예에서, 중앙(CRVO) 및 분지(BRVO) 형태), CNV(일 구현예에서, 근시 CNV), 각막 혈관 신생, 각막 혈관 신생과 관련된 질병, 망막 혈관 신생, 망막/맥락막 혈관 신생과 관련된 질병, 중심 장액성 망막 병증(CSR), 병리적 근시, 폰 히펠-린다우병, 눈의 히스토플라스마증, FEVR, 코우츠병, 노리 병, 골다공증-가성 신경교종 증후군(OPPG)과 관련된 망막 이상, 결막하 출혈, 피부홍조, 안구 신생혈관 질환, 신혈관 녹내장, 색소성 망막염(RP), 고혈압성 망막 병증, 망막 혈관종 증식, 황반 모세혈관 확장증, 홍채 혈관 신생, 안구 내 혈관 신생, 망막 변성, 낭포성 황반 부종(CME), 혈관염, 유두 부종, 망막염(CMV 망막염을 포함하지만, 이에 제한되지는 않음), 안구 흑색종, 망막 모세포종, 결막염(일 구현예에서, 감염성 결막염 및 비감염성(일 구현예에서, 알레르기성 결막염), 레베르 선천성 흑암시(레베르 선천성 흑암시 또는 LCA라고도 공지됨), 포도막염(감염성 및 비감염성 포도막염을 포함), 맥락 막염(일 구현예에서, 다초점 맥락 막염), 안구 히스토플라스마증, 안검염, 안구 건조증, 외상성 안구 손상, 쇼그렌 병 및 기타 안과 질환들을 포함하고, 상기 질환 또는 질병은 안구 혈관 신생, 혈관 누출 및/또는 망막 부종 또는 망막 위축과 관련이 있다. 일 구현예에서, 안구 질환은 AMD(일 구현예에서, 습성 AMD, 건성 AMD, 중간 AMD, 진행성 AMD, 및 지리 위축 (GA)), 황반 변성, 황반 부종, DME(일 구현예에서, 초점, 비-중심 DME 및 미만성, 중심 관련 DME), 망막증, 당뇨병성 망막증(DR)(일 구현예에서, 증식성 DR(PDR), 비증식성 DR(NPDR) 및 고고도 DR로부터 선택된다.
추가의 양태에서, 본 발명은 약제의 제조 또는 준비에서 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체에 결합하는 사용을 제공한다. 일 양태에서, 상기 약제는 암의 치료용이다. 추가의 양태에서, 상기 약제는 혈관 질환을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 것이고, 상기 방법은 상기 약제의 유효량을 혈관 질환을 가진 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기의 일 양태에서, 상기 방법은, 예컨대 하기에 설명된 바와 같은 적어도 1개의 추가적인 치료제의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 상기 약제는 암의 치료용이다. 추가의 양태에서, 상기 약제는 안구 질환을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 것이고, 상기 방법은 상기 약제의 유효량을 안구 질환을 가진 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기의 일 양태에서, 상기 방법은, 예컨대 하기에 설명된 바와 같은 적어도 1개의 추가적인 치료제의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 혈관 질환의 치료 방법을 제공한다. 일 양태에서, 상기 방법은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체의 유효량을 상기 혈관 질환을 가진 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기의 일 양태에서, 상기 방법은 하기에 설명된 바와 같은 적어도 1개의 추가적인 치료제의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 안구 질환의 치료 방법을 제공한다. 일 양태에서, 상기 방법은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체의 유효량을 상기 안구 질환을 가진 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기의 일 양태에서, 상기 방법은 하기에 설명된 바와 같은 적어도 1개의 추가적인 치료제의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
상기의 양태들 중 임의의 것에 따른 "개체"는 인간일 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은, 예컨대 하기의 치료 방법들 중 임의의 것에서 사용하기 위한 본원에서 제공된 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체들 중 임의의 것을 포함하는 약학적 조성물들 중 임의의 것을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 일 양태에서, 약학적 조성물은 본원에서 제공된 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체들 중 임의의 것 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 다른 양태에서, 약학적 조성물은 본원에서 제공된 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체들 중 임의의 것 및, 예컨대 하기에 기재된 바와 같이 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함한다.
본 발명의 항체는 단독으로 투여되거나 병용 요법으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 병용 요법은 본 발명의 항체를 투여하고 적어도 하나의 추가적인 치료제(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 추가적인 치료제)를 투여하는 것을 포함한다.
예를 들어, 특정 구현예들에서, 이전의 방법들 중 임의의 것은 하나 이상의 추가적인 화합물을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 구현예들에서, 본원에 제공된 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 추가적인 화합물(들)과 동시에 투여된다. 특정 구현예들에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 추가적인 화합물(들) 이전 또는 이후에 투여된다. 특정 구현예들에서, 추가적인 화합물은 IL-6; IL-6R; IL-13; IL-13R; PDGF; 안지오포이에틴; Ang2; Tie2; S1P; 인테그린 αvβ3, αvβ5 및 α5β1; 베타셀룰린; 아펠린/APJ; 에리트로포이에틴; 보체 인자 D; TNFα; HtrA1; VEGF 수용체; ST-2 수용체; 및 AMD 위험과 유전적으로 연결된 단백질, 예컨대 보체 경로 성분 C2, 인자 B, 인자 H, CFHR3, C3b, C5, C5a 및 C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; 인터루킨-8(IL-8); CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC; COL10A1; 및 TNFRSF10A로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 생물학적 분자에 결합한다. 특정 구현예들에서, 추가적인 화합물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
상기의 구현예들 중 임의의 것에 따른(또는 이에 적용된) 특정 구현예들에서, 안구 장애는 증식성 망막 병증, 맥락막 혈관 신생(CNV), 연령-관련 황반 변성(AMD), 당뇨병 및 기타 허혈 관련 망막 병증, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 폰 히펠-린다우 병, 눈의 히스토플라스마증, 망막 정맥 폐색(RVO)(CRVO 및 BRVO를 포함), 각막 신생혈관 형성, 망막 신생혈관 혈성 및 미숙아 망막 병증(ROP)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 안내구 신생 혈관 질환이다.
일부 예들에서, 본원에 제공된 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 질환, 예를 들어 본원에 기재된 안구 질환(예컨대, AMD(예컨대, 습성 AMD), DME, DR, RVO 또는 GA) 안구 장애의 치료를 위한 적어도 하나의 추가적인 치료제와 병용으로 투여 될 수 있다. 안구 장애의 치료를 위한 병용 요법을 위한 예시적인 추가 치료제는, 항-혈관 형성제, 예컨대, 예를 들어 항-VEGF 항체(예컨대, 항-VEGF Fab 루센티스(LUCENTIS)®(라니비주맙))를 포함하는 VEGF 길항제, 가용성 수용체 융합 단백질(예컨대, 재조합 가용성 수용체 융합 단백질 아일리아(EYLEA)®(애플리버셉트, VEGF 트랩 아이(Trap Eye)로도 공지됨; 리제네론(Regeneron)/아벤티스(Aventis)), 압타머(예컨대, 항-VEGF 페길화 압타머 마쿠젠(MACUGEN)®(페갑타닙 나트륨; 넥스타 파마슈티컬스(NeXstar Pharmaceuticals)/OSI 파마슈티컬스) 및 VEGFR 티로신 키나제 억제제(예컨대, 4-(4-브로모-2-플루오로아닐리노)-6-메톡시-7-(1-메틸피페리딘-4-일메톡시)퀴나졸린(ZD6474), 4-(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일옥시)-6-메톡시-7-(3-피롤리딘-1-일프로폭시)퀴나졸린(AZD2171), 바탈라닙(PTK787), 세막사미니브(SU5416; 수젠(SUGEN)) 및 수텐트(SUTENT)®(수니티닙)); 트립토파닐-tRNA 합성 효소(TrpRS); 스쿠알라민; 레타아네(RETAANE)®(데포 현탁용 아네코르타브 아세테이트; 알콘(Alcon, Inc.)); 콤브레타스타틴 A4 전구 약물(CA4P); 미페프렉스(MIFEPREX)® (미페프리스톤(mifepristone)-ru486); 서브테논 트리암시놀론 아세토나이드; 유리체내 결정질 트리암시놀론 아세토나이드; 매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제(예컨대, 프리노마스타트(Prinomastat, AG3340; 화이자); 플루오시놀론 아세토나이드(플루오시놀론 안구내 임플란트 포함; 바슈 앤 롬(Bausch & Lomb)/콘트롤 델리버리 시스템(Control Delivery Systems)); 리노미드; 인테그린 β3 기능 억제제; 안지오스타틴 및 이들의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체와 병용으로 투여될 수 있는 상기 및 다른 치료제들은, 예를 들어 본원에 그 전체가 참조로서 원용되는 미국 특허 출원 제 US 2014/0017244호에 기재되어 있다.
안구 장애(예컨대, AMD, DME, DR, RVO 또는 GA)의 치료를 위해 본원에 제공된 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체와 병용으로 사용될 수 있는 추가 치료제의 추가적인 예는 비쥬다인(VISUDYNE)®(버테포르핀, 비열 레이저를 사용한 광역학 요법과 함께 일반적으로 사용되는 광-활성화 약물), PKC412, 엔도비온(Endovion, NS 3728; 뉴로서치(NeuroSearch) A/S), 신경영양 인자(예컨대, 신경교 유도 신경영양 인자(GDNF) 및 섬모 신경영양 인자(CNTF)), 딜티아젬, 도르졸아미드, 포토트롭(PHOTOTROP)®, 9-시스-레티날, 안약(예컨대, 요오드화 포스포린, 에코티오페이트 또는 탄산 탈수효소 억제제), 베오바스타트(AE- 941; 애터나 라보라토리스(AEterna Laboratories), Inc.), 시르나(Sirna)-027(AGF-745; 시마 테라퓨틱스(Sima Therapeutics, Inc.)), 뉴로트로핀(예시로서만 NT-4/5, 제네텍(Genentech) 포함), 캔드(Cand)5 (어큐어티 파마슈티컬스(Acuity Pharmaceuticals)), INS -37217 (인스파이어 파마슈티컬스(Inspire Pharmaceuticals)), 인테그린 길항제(제리니(Jerini) AG 및 애보트 라보라토리즈(Abbott Laboratories)를 포함), Eg-3306(아크 테라퓨틱스(Ark Therapeutics Ltd.)), BDM-E(바이오디엠(BioDiem Ltd.)), 탈리도마이드(예를 들어, 엔트레메드(EntreMed, Inc.)에서 사용됨), 카디오트로핀-1(제네텍(Genentech)), 2-메톡시에스트라디올(알레르간(Allergan)/오쿨렉스(Oculex)), DL-8234(토레이 인더스트리즈(Toray Industries)), NTC-200 (뉴로텍(Neurotech)), 테트라티오몰리브데이트(미시간 대학교), LYN-002 (린케우스 바이오텍(Lynkeus Biotech)), 미세 조류 화합물(아쿠아서치(Aquasearch)/알바니(Albany), 메라 파마슈티컬스(Mera Pharmaceuticals)), D-9120 (셀텍 그룹(Celltech Group)) plc), ATX-S10(하마마쓰시 포토닉스(Hamamatsu Photonics)), TGF-베타 2(젠짐(Genzyme)/셀트릭스(Celtrix)), 티로신 키나제 억제제(예컨대, 알레르간(Allergan), 수젠 또는 화이자), NX-278-L (넥스타 파마슈티컬스/길리아드 사이언스(Gilead Sciences)), Opt-24(옵티스 프랑스(OPTIS France) SA), 망막 세포 신경절 신경 보호제(코젠트 뉴로사이언스(Cogent Neurosciences)), N-니트로피라졸 유도체(텍사스 A & M 대학 시스템), KP-102 (크레니스키 파마슈티컬스(Krenitsky Pharmaceuticals)), 시클로스포린 A, 광역학 요법에 사용되는 치료제(예컨대, 비쥬다인(VISUDYNE))®; 수용체-표적 PDT, 브리스톨-마이어스 스퀴브(Bristol-Myers Squibb, Co.); PDT 주사용 포르피머 나트륨; 베르데포르핀(verteporfin), QLT Inc .; PDT의 로스타포르핀, 미라벤트 메디컬 테크놀로지스(Miravent Medical Technologies); PDT, 니폰 페트로리움(Nippon Petroleum); 및 모텍사핀 루테튬, 파마슈티컬스(주)), 안티센스 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 노바갈리 파르마(Novagali Pharma) SA 및 ISIS-13650, 이오니스 파마슈티컬스(Ionis Pharmaceuticals)에 의해 시험된 제품 포함), 및 이들의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 제공된 바와 같이 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 장애(예컨대, AMD, DME, DR, RVO 또는 GA)의 치료를 위한 요법 또는 수술 절차, 예를 들어 레이저 광응고(예컨대, 범망막 광응고(PRP)), 드루젠 레이저, 황반 구멍 수술, 황반 전좌 수술, 이식형 소형 망원경, PHI-모션 혈관 조영술(마이크로 레이저 요법 및 영양 혈관 치료라고도 공지됨), 양성자 빔 요법, 미세 자극 요법, 망막 박리 및 유리체 수술, 공막 누름 조각, 황반하 수술, 동공 열요법, 광계 I 요법, RNA 간섭 사용(RNAi), 체외 유동술(막 차등 여과 및 유동술 요법이라고도 공지됨), 마이크로 칩 이식, 줄기 세포 요법, 유전자 대체 요법, 리보자임 유전자 요법(저산소 반응 요소에 대한 유전자 요법 포함, 옥스포드 바이오메디카(Oxford Biomedica); 렌티팍(Lentipak), 제네틱스(Genetix); 및 PDEF 유전자 치료, 젠벡(GenVec)), 광 수용체/망막 세포 이식(이식 가능한 망막 상피 세포를 포함, 디아크린(주)(Diacrin, Inc.)); 망막 세포 이식, 예컨대 아스텔라스 팜 US(주)(Astellas Pharma US, Inc.), 레뉴론(ReNeuron), CHA 바이오테크), 침술 및 이들의 조합과 병용으로 투여될 수 있다.
일부 예들에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 장애(예컨대, AMD, DME, DR, RVO 또는 GA)의 치료를 위해 항-혈관신생 제제와 병용으로 투여될 수 있다. 임의의 적합한 항-혈관신생 제제는 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체와 병용으로 사용될 수 있으며, 여기에는 Carmeliet et al. Nature 407:249-257, 2000에 나열된 것들을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구현예들에서, 상기 항-혈관신생 제제는 항-VEGF 항체(예컨대, 항-VEGF Fab 루센티스(LUCENTIS)®(라니비주맙), RTH-258(이전의 ESBA-1008, 항-VEGF 단일 사슬 항체 단편; 노바티스(Novartis)), 또는 이중 특이적 항-VEGF 항체(예컨대, 항-VEGF/항-안지오포에이틴 2 이중 특이적 항체, 예컨대 파리시맙; 로슈(Roche)), 가용성 재조합 수용체 융합 단백질(예컨대, 아일리아(EYLEA)®(애플리버셉트)), VEGF 변이체, 가용성 VEGFR 단편, VEGF(예컨대, 페갑타닙) 또는 VEGFR을 차단할 수있는 압타머, 중화 항-VEGFR 항체, VEGFR 티로신 키나제의 소분자 억제제, 항-VEGF DARPin®(예컨대, 아비시파르 페골, 모레큘라 파트너스(Molecular Partners) AG/알레르간(Allergan)), VEGF 또는 VEGFR의 발현을 억제하는 작은 간섭 RNA, VEGFR 티로신 키나제 억제제(예컨대, 4-(4-브로모-2-플루오로아닐리노)-6-메톡시-7-(1-메틸피페리딘-4-일메톡시)퀴나졸린(ZD6474), 4-(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일옥시)-6-메톡시-7-(3-피롤리딘-1-일프로폭시)퀴나졸린(AZD2171), 바탈라닙(PTK787), 세막사미니브(SU5416; 수젠) 및 수텐트(SUTENT)®(수니티닙)) 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 VEGF 길항제이다.
안구 장애(예컨대, AMD, DME, DR, RVO 또는 GA)의 치료를 위해 본원에 제공된 바와 같이 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체와 병용으로 투여될 수 있는 다른 적합한 항-혈관신생 제제는 코르티코 스테로이드, 혈관 억제 스테로이드, 아네코르타브 아세테이트, 안지오스타틴, 엔도스타틴, 티로신 키나제 억제제, 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP) 억제제, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 3(IGFBP3), 기질 유래 인자(SDF-1) 길항제(예컨대, 항-SDF-1 항체), 색소 상피 유래 인자(PEDF), 감마-세크레타제, 델타-유사 리간드 4, 인테그린 길항제, 저산소증 유도 인자(HIF)-1α 길항제, 단백질 키나제 CK2 길항제, 신생 혈관화 부위로 돌아가는(예컨대, 항-혈관 내피 카드데린(CD-144) 항체 및/또는 항-SDF-1 항체) 줄기 세포 억제제(예컨대, 내피 전구 세포), 및 이들의 조합을 포함한다.
추가의 예에서, 일부 예들에서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체 및/또는 이의 중합체 제형은 안구 장애(예컨대, AMD, DME, DR, RVO 또는 GA)의 치료를 위해 혈관 신생에 대해 활성을 갖는 제제, 예컨대, 항-염증 약물, 라파마이신(mTOR) 억제제의 포유류 표적(예컨대, 라파마이신, 아피니토(AFINITOR)®(에베로리무스) 및 토리셀(TORISEL)®(템시롤리무스)), 사이클로스포린, 종양 괴사 인자(TNF) 길항제(예컨대, 항-TNFα 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대, 인플릭시맙, 아달리무맙, 세르톨리주맙 페골 및 골리무맙) 또는 가용성 수용체 융합 단백질(예컨대, 에타너셉트)), 항-보체 제제, 비-스테로이드성 항염증제(NSAID), 또는 이들의 조합과 병용으로 투여될 수 있다.
다른 추가의 예에서, 일부 경우에, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 신경 보호성이며 건성 AMD에서 습성 AMD로의 진행을 잠재적으로 감소시킬 수 있는 약제, 예컨대 디하이드로에피안드로스테론(DHEA)(상표명: 프라스테라(PRASTERA)™ 및 피델린(FIDELIN)®), 디하이드로에피안드로스테론 설페이트 및 프레그네놀론 설페이트를 포함하는 "신경스테로이드"라는 약물의 부류와 병용으로 투여될 수 있다.
임의의 적합한 AMD 치료제는 안구 장애(예컨대, AMD, DME, DR, RVO 또는 GA)의 치료를 위해 본원에 제공된 바와 같이 하기를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체와 병용으로 추가 치료제로서 투여될 수 있다: VEGF 길항제, 예를 들어 항-VEGF 항체(예컨대, 루센티스(LUCENTIS)®(라니비주맙), RTH-258(이전의 ESBA-1008, 항-VEGF 단일 사슬 항체 단편; 노바티스), 또는 이중 특이적 항-VEGF 항체(예컨대, 항-VEGF/항-안지오포에이틴 2 이중 특이적 항체, 예컨대 파리시맙; 로슈)), 가용성 VEGF 수용체 융합 단백질(예컨대, 아일리아(EYLEA)®(애플리버셉트)), 항-VEGF DARPin® (예컨대, 아비시파르 페골; 모레큘라 파트너스 AG/알레르간) 또는 항-VEGF 압타머(예컨대, 마큐젠®(페갑타닙 나트륨)); 혈소판 유래 성장 인자(PDGF) 길항제, 예를 들어, 항-PDGF 항체, 항-PDGFR 항체(예컨대, REGN2176-3), 항-PDGF-BB 페길화된 압타머(예컨대, 포비스타(FOVISTA)®; 옵소텍(Ophthotech)/노바티스), 가용성 PDGFR 수용체 융합 단백질, 또는 이중 PDGF/VEGF 길항제(예컨대, 소분자 억제제(예컨대, DE-120(산텐(Santen)) 또는 X-82 (타이로젠(Tyrogene)X)) 또는 이중 특이적 항-PDGF/항-VEGF 항체)); 광역학 요법과 조합된 비쥬다인(VISUDYNE)®(버테포르핀); 항산화제; 보체 시스템 길항제, 예를 들어 보체 인자 C5 길항제(예컨대, 소분자 개시제(예컨대, ARC-1905; 옵소텍) 또는 항-C5 항체(예컨대, LFG-316; 노바티스)), 프로페딘 길항제(예컨대, 항-프로퍼딘 항체, 예컨대 CLG-561; 알콘(Alcon)) 또는 보체 인자 D 길항제(예컨대, 항-보체 인자 D 항체, 예컨대 람팔리주맙; 로슈)); C3 차단 펩티드(예컨대, APL-2, 아펠리스(Appellis)); 시각 순환 조절제(예컨대, 에믹서스타트 염산염); 스쿠알라민(예컨대, OHR-102; 오르 파마슈티컬(Ohr Pharmaceutical)); 비타민 및 미네랄 보충제(예컨대, 연령 관련 안구 질환 연구 1(AREDS1; 아연 및/또는 산화 방지제) 및 연구 2(AREDS2; 아연, 산화 방지제, 루테인, 제아잔틴 및/또는 오메가 -3 지방산)에 설명된 것); 세포 기반 요법, 예를 들어 NT-501(레넥서스(Renexus)); PH-05206388(화이자), huCNS-SC 세포 이식(스템셀즈(StemCells)), CNTO-2476(제대 줄기 세포주, 얀센(Janssen)), 옵레겐(OpRegen, RPE 세포 현탁액, 셀 큐어 뉴로사이언스(Cell Cure Neurosciences)) 또는 MA09-hRPE 세포 이식(옥타 테라퓨틱스(Ocata Therapeutics)); 조직 인자 길항제(예컨대, hI-con1; 아이코닉 테라퓨틱스(Iconic Therapeutics)); 알파-아드레날린성 수용체 작용제(예컨대, 브리모니딘 타르트레이트; 알레르간); 펩티드 백신(예컨대, S-646240; 시오노기(Shionogi)); 아밀로이드 베타 길항제(예컨대, 항-베타 아밀로이드 단클론 항체, 예컨대 GSK-933776); S1P 길항제(예컨대, 항-S1P 항체, 예컨대, 아이소넵(iSONEP)™; 엘패스(주)(Lpath Inc); ROBO4 길항제(예컨대, 항-ROBO4 항체, 예컨대 DS-7080a; 다이이찌산쿄(Daiichi Sankyo)); 엔도스타틴 및 안지오스타틴을 발현하는 렌티바이러스 벡터(예컨대, 레티노스타트(RetinoStat)); 및 이들의 임의의 조합. 일부 예들에서, AMD 치료제(이전의 AMD 치료제들 중 임의의 것을 포함)는 공동 제형화될 수 있다. 예를 들어, 항-PDGFR 항체 REGN2176-3은 애플리버셉트(아일리아(EYLEA)®)와 공동 제형화될 수 있다. 일부 경우들에서, 상기 공동 제형은 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체와 병용으로 투여될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 질환(예컨대, AMD, DME, DR, RVO 또는 GA)의 치료를 위해 루센티스(LUCENTIS)®(라니비주맙)와 병용으로 투여될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다. 일부 예들에서, 안구 장애가 GA이다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 질환(예컨대, AMD, DME, DR, RVO, 또는 GA)의 치료를 위해 아일리아®(애플리버셉트)와 병용으로 투여될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다. 일부 예들에서, 안구 장애가 GA이다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 질환(예컨대, AMD, DME, DR, RVO, 또는 GA)의 치료를 위해 마큐젠®(페갑타닙 나트륨)과 병용으로 투여될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다. 일부 예들에서, 안구 장애가 GA이다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 질환(예컨대, AMD, DME, DR, RVO, 또는 GA)의 치료를 위해 광역학 요법과 조합된 비쥬다인®(버테포르핀)와 병용으로 투여될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다. 일부 예들에서, 안구 장애가 GA이다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 질환(예컨대, AMD, DME, DR, RVO, 또는 GA)의 치료를 위해 PDGF 길항제와 병용으로 투여될 수 있다. 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체와 병용으로 사용될 수 있는 예시적인 PDGF 길항제는 항-PDGF 항체, 소분자 억제제(예컨대, 스쿠알라민), 항-PDGF-B 페길화된 압타머, 예컨대 포비스타®(E10030; 옵소텍/노바티스), 이중 PDGF/VEGF 길항제(예컨대, 소분자 억제제(예컨대, DE-120(산텐) 또는 X-82 (타이로젠X)) 또는 이중 특이적 항-PDGF/항-VEGF 항체)를 포함한다. 예를 들어, 포비스타®는 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체에 대한 보조 요법으로 투여될 수 있다. OHR-102는 루센티스® 또는 아일리아®와 같은 VEGF 길항제와 병용으로 투여될 수 있다. 일부 구현예들에서, 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 OHR-102, 루센티스® 및/또는 아일리아®와 병용으로 투여될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다. 일부 예들에서, 상기 안구 장애는 GA이다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 질환(예컨대, AMD, DME, DR, RVO, 또는 GA)의 치료를 위해 RTH-258과 병용으로 투여될 수 있다. RTH-258은, 예를 들어 유리 체내 주사 또는 안구 주입에 의해 투여될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다. 일부 예들에서, 안구 장애가 GA이다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 안구 질환(예컨대, AMD, DME, DR, RVO, 또는 GA)의 치료를 위해 아비시파르 페골과 병용으로 투여될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다. 일부 예들에서, 안구 장애가 GA이다.
하기를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 DME 및/또는 DR 치료제는 안구 질환(예컨대, AMD, DME, DR, RVO 또는 GA)의 치료를 위해 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체와 병용으로 투여될 수 있다: VEGF 길항제(예컨대, 루센티스® 또는 아일리아®), 코르티코 스테로이드(예컨대, 코르티코스테로이드 임플란트(예컨대, 오저덱스(OZURDEX)®(덱사메타손 유리체내 임플란트) 또는 일루비엔(ILUVIEN)®(플루오시놀론 아세토나이드 유리체내 임플란트)), 유리 체내 주사(예컨대, 트리암시놀론 아세토나이드)에 의한 투여를 위해 제형화된 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합. 일부 예들에서, 안구 장애는 DME 및/또는 DR이다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 DME 및/또는 DR(예컨대, NPDR 또는 PDR)의 치료를 위해 루센티스(LUCENTIS)®(라니비주맙)와 병용으로 투여될 수 있다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 DME 및/또는 DR(예컨대, NPDR 또는 PDR)의 치료를 위해 아일리아®(애플리버셉트)와 병용으로 투여될 수 있다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 DME 및/또는 DR의 치료를 위해 오저덱스®(덱사메타손 유리체내 임플란트)와 병용으로 투여될 수 있다.
본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체는 DME 및/또는 DR의 치료를 위해 일루비엔®(덱사메타손 유리체내 임플란트)와 병용으로 투여될 수 있다.
일부 경우들에서, TAO/PRN 치료 요법 또는 TAE 치료 요법은 AMD 치료제(예컨대, 라니비주맙 또는 애플리버셉트)를 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체 및/또는 이의 중합체 제형과 병용으로 투여하는데 사용될 수 있다. 일부 예들에서, 안구 장애는 AMD(예컨대, 습성 AMD)이다. 일부 예들에서, 안구 장애가 GA이다.
전술된 상기 병용 요법은 병용 투여(여기서 2가지 이상의 치료제가 동일한 또는 별개의 제제 내에 포함됨) 및 별개의 투여를 포괄하고, 이 경우 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체의 투여는 추가 치료제 또는 치료제들의 투여에 앞서, 투여와 동시에 및/또는 투여 이후에 발생할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체의 투여 및 추가 치료제의 투여는 서로 간에 약 1, 2, 3, 4 또는 5개월 이내에, 또는 약 1, 2 또는 3주 이내에, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일 이내에 실시한다.
본 발명의 항체 (및 임의의 추가 치료제)는 비경구, 폐내 및 비내를 비롯한 임의의 적절한 수단에 의해, 및 국소 치료를 위해 원하는 경우에, 병소내 투여에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복막내, 또는 피하 투여를 포함한다. 투약은 투여가 단기 또는 장기인지에 부분적으로 따라서, 임의의 적합한 루트, 예를 들어, 주사, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사에 의할 수 있다. 단회 투여 또는 다양한 시점에 걸쳐 복수 투여, 일시 투여, 및 펄스 주입을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 다양한 투약 일정이 본원에서 예기된다.
본 발명의 항체는 모범 의료행위 지침과 일치하는 방식으로 조제되고, 투약되고, 투여될 것이다. 이러한 문맥에서 고려되는 인자는 치료되는 특정 장애, 치료되는 특정 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여의 일정, 및 개업 의사에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 항체는 반드시 그러할 필요는 없지만, 문제되는 장애를 예방하거나 치료하는 데 현재 이용되는 한 가지 또는 그 이상의 작용제로 임의적으로 조제된다. 상기 다른 작용제들의 유효량은 약학적 조성물 내에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 인자에 의존한다. 이들은 일반적으로, 본원에서 설명된 바와 동일한 용량에서 및 투여 루트로, 또는 본원에서 설명된 용량의 약 1 내지 99%에서, 또는 경험적으로/임상적으로 적합한 것으로 결정되는 임의의 용량에서 및 임의의 루트에 의해 이용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위한, 본 발명의 항체의 적절한 용량 (단독으로 또는 한 가지 또는 그 이상의 다른 추가 치료제와 조합으로 이용될 때)은 치료되는 질환의 유형, 항체의 유형, 질환의 심각도와 코스, 항체가 예방적 또는 치료적 목적으로 투여되는 지, 이전 요법, 환자의 임상 병력 및 항체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 것이다. 상기 항체는 적합하게는, 한꺼번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 이중 특이적 항체의 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg(예컨대, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg)은, 예를 들어 하나 이상의 개별 투여에 의해서 또는 연속 주입에 의해서 환자에게 투여하기 위한 최초 후보 투여량이 될 수 있다. 한 가지 전형적인 일일 투여량은 전술된 인자에 따라서, 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상의 범위일 수 있다. 수 일 또는 그 이상에 걸쳐 반복된 투여의 경우에, 상태에 따라서, 치료는 일반적으로, 질환 증상의 원하는 억제가 발생할 때까지 지속될 것이다. 항체의 한 가지 예시적인 용량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위 안에 있을 것이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg (또는 이들의 임의의 조합) 중에서 한 가지 또는 그 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 그러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어, 매주마다 또는 3주마다 투여될 수 있다(예컨대, 따라서 환자가 약 2회 내지 약 20회, 또는 예컨대 약 6회 용량의 항체를 투여받는다). 초기 더욱 높은 부하 복용량, 그 이후에 1회 또는 그 이상의 더욱 낮은 복용량이 투여될 수 있다. 상기 요법의 진행은 전통적인 기술 및 검정에 의해 쉽게 모니터링된다.
E. 제조 물품
본 발명의 다른 양태에서, 상기한 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에서 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기 및 상기 용기 위의 또는 상기 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기로는, 예를 들어 병, 바이알, 주사기, IV 용액 주머니 등이 포함된다. 상기 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 상기 용기는 단독으로, 또는 병태를 치료하고, 예방하고 및/또는 진단하는 데 효과적인 다른 조성물과 조합으로 조성물을 보유하고, 무균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 상기 용기는 정맥내 용액 백, 또는 피하 주사 바늘에 의해 관통가능한 마개를 갖는 바이알일 수 있다). 조성물 내의 적어도 한 가지 활성 제제는 본 발명의 항체이다. 표지 또는 포장 삽입물은 조성물이 선택된 질환을 치료하는 데 이용된다는 것을 지시한다. 또한, 제조 물품은 (a) 조성물이 그 안에 내포된 첫 번째 용기 (여기서 상기 조성물은 본 발명의 항체를 포함한다); 및 (b) 조성물이 그 안에 내포된 두 번째 용기 (여기서 상기 조성물은 추가 세포독성제 또는 만약 그렇지 않으면 치료제를 포함한다)를 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 양태에서 제조 물품은 조성물이 특정 병태를 치료하는 데 이용될 수 있다는 것을 지시하는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조 물품은 약학적으로 허용가능한 완충액, 예컨대 정균성 주사용수(BWFI), 인산염-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 비롯하여, 상업적 관점 및 이용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
3. 본 발명의 특정 구현예들
하기에 본 발명의 구현예가 열거된다:
1. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 가변 경쇄 도메인(VL 도메인) 및 가변 중쇄 도메인(VH 도메인)의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 VEGF 파라토프는 상기 항체의 CDR-H2, CDR-L1 및 CDR-L3으로부터의 아미노산 잔기들을 포함하며, 상기 IL-1베타 파라토프는 상기 항체의 CDR-H1, CDR-H3 및 CDR-L2로부터의 아미노산 잔기들을 포함하는, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
2. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 가변 경쇄 도메인(VL 도메인) 및 가변 중쇄 도메인(VH 도메인)의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 가변 경쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인의 쌍은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 동시에 결합하는, 항체.
3. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 가변 경쇄 도메인(VL 도메인) 및 가변 중쇄 도메인(VH 도메인)의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 VEGF 파라토프에 포함되는 그 어떤 아미노산도 IL-1베타 파라토프에 포함되지 않는, 항체.
4. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 가변 경쇄 도메인(VL 도메인) 및 가변 중쇄 도메인(VH 도메인)의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 항체는 서열 번호 11의 가변 중쇄 도메인 및 서열 번호 12의 가변 경쇄 도메인을 갖는 항체와 동일한 인간 VEGF 상의 에피토프 및 동일한 인간 IL-1베타 상의 에피토프에 결합하는, 항체.
5. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 가변 경쇄 도메인(VL 도메인) 및 가변 중쇄 도메인(VH 도메인)의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고,
● 상기 VEGF 파라토프는 상기 항체의 CDR-H2, CDR-L1 및 CDR-L3으로부터의 아미노산 잔기들을 포함하며, 상기 IL-1베타 파라토프는 상기 항체의 CDR-H1, CDR-H3 및 CDR-L2로부터의 아미노산 잔기들을 포함하고/하거나;
● 상기 가변 경쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인의 쌍은 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 동시에 결합하고/하거나;
● 상기 VEGF 파라토프에 포함되는 그 어떤 아미노산도 IL-1베타 파라토프에 포함되지 않고/않거나;
● 상기 항체는 서열 번호 11의 가변 중쇄 도메인 및 서열 번호 12의 가변 경쇄 도메인을 갖는 항체와 동일한 인간 VEGF 상의 에피토프 및 동일한 인간 IL-1베타 상의 에피토프에 결합하고/하거나;
● 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하고/하거나;
● 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내고/내거나;
● 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내고/내거나;
● 인간 VEGF에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 50 nM 미만인 VEGFR2에 대한 VEGF의 결합을 억제하고; 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는, 항체.
6. 구현예 1 내지 구현예 5 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 항체.
7. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 항체.
8. 구현예 1 내지 구현예 7 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
9. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
10. 구현예 1 내지 구현예 9 중 어느 한 구현예에 있어서, 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
11. 구현예 10에 있어서,
- 상기 VH 도메인 내에 아미노산 잔기 D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, 및 R83, 및 상기 VL 도메인 내에 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, E67, D68, Q69, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VEGF 파라토프; 및
- 상기 VH 도메인 내에 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, K94, D95, V96, F98, 및 D101, 및 상기 VL 도메인 내에 아미노산 잔기 L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, 및 Y91을 포함하는 IL-1베타 파라토프를 포함하는, 항체.
12. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, VL 도메인 및 VH 도메인의 하나의 쌍 내에: (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 (ii) 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
13. 구현예 12에 있어서,
- 상기 VH 도메인 내에 하기의 아미노산 잔기들: D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, 및 R83을 포함하고, 상기 VL 도메인 내에 하기의 아미노산 잔기들; I2, Y27, W27a, S27c, S27d, E67, D68, Q69, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VEGF 파라토프; 및
- 상기 VH 도메인 내에 하기의 아미노산 잔기들: E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하고, 상기 VL 도메인 내에 하기의 아미노산 잔기들: L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, Y91를 포함하는 IL-1베타 파라토프를 포함하는, 항체.
14. 구현예 1 내지 구현예 13 중 어느 한 구현예에 있어서, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 항체.
15. 구현예 1 내지 구현예 14 중 어느 한 구현예에 있어서, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로서, 상기 VH 도메인은 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로서, 상기 VL 도메인은 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
16. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 항체.
17. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로서, 상기 VH 도메인은 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, R66, R83 및 K94를 포함하고; (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로서, 상기 VL 도메인은 아미노산 잔기 I2, Y49, G57, E67, D68 및 Q69를 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
18. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르며, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 항체.
19. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 한 구현예에 있어서, (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는, 항체.
20. 구현예 1 내지 구현예 19 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체는 (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로서, 상기 아미노산 치환은 서열 번호 11의 3 내지 25, 36 내지 49, 97 내지 82c, 84 내지 93, 또는 103 내지 113번의 위치에 있는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인으로서, 상기 아미노산 치환은 서열 번호 12의 1, 4, 6, 8 내지 23, 35 내지 48, 58 내지 66, 70 내지 88, 또는 98 내지 107번의 위치에 있는 가변 경쇄 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
21. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는, 항체.
22. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르며, (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는, 항체.
23. 구현예 1 내지 구현예 22 중 어느 한 구현예에 있어서, 서열 번호 11의 VH 서열 및 서열 번호 12의 VL 서열을 포함하는, 항체.
24. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 서열 번호 11의 VH 서열 및 서열 번호 12의 VL 서열을 포함하는, 항체.
25. 구현예 1 내지 구현예 24 중 어느 한 구현예에 있어서, 서열 번호 20의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
26. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 서열 번호 20의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
27. 구현예 1 내지 구현예 26 중 어느 한 구현예에 있어서, 서열 번호 18의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
28. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 서열 번호 18의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
29. 구현예 1 내지 구현예 28 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
30. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
31. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
32. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르는 항체를 제공하며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
33. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, VH 도메인 및 VL 도메인의 하나의 쌍 내에: (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 (ii) 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
34. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
35. 구현예 1 내지 구현예 34 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는, 항체.
36. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는, 항체.
37. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는, 항체.
38. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는, 항체.
39. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, VH 도메인 및 VL 도메인의 하나의 쌍 내에: (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 (ii) 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는, 항체.
40. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는, 항체.
41. 구현예 1 내지 구현예 40 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는, 항체.
42. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는, 항체.
43. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는, 항체.
44. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는, 항체.
45. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, VH 도메인 및 VL 도메인의 하나의 쌍 내에: (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 (ii) 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는, 항체.
46. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 (VL 도메인)을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하며, 상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는, 항체.
47. 구현예 1 내지 구현예 46 중 어느 한 구현예에 있어서, 인간 VEGF에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 50 nM 미만인 VEGFR2에 대한 VEGF의 결합을 억제하고; 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는, 항체.
48. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 인간 VEGF에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 50 nM 미만인 VEGFR2에 대한 VEGF의 결합을 억제하고; 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는, 항체.
49. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는, 항체.
50. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르며, 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는, 항체.
51. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, VH 도메인 및 VL 도메인의 하나의 쌍 내에: (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 (ii) 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르며, 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는, 항체.
52. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하며, 인간 IL-1베타에 대한 상기 항체의 항체 Fab 단편의 결합은 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 IC50이 30 nM 미만인 IL-1베타R1에 대한 IL-1베타의 결합을 억제하는, 항체.
53. 구현예 1 내지 구현예 52 중 어느 한 구현예에 있어서, 단클론 항체인, 항체.
54. 구현예 1 내지 구현예 53 중 어느 한 구현예에 있어서, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
55. 구현예 1 내지 구현예 54 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체는 이중 특이적인, 항체.
56. 구현예 1 내지 구현예 55 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체는 Fab 단편인, 항체.
57. 구현예 1 내지 구현예 56 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체는 이중 특이적 항체 단편인, 항체.
58. 구현예 1 내지 구현예 57 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체는 다중 특이적 항체인, 항체.
59. 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 따른 항체를 암호화하는 단리된 핵산.
60. 구현예 59에 따른 핵산을 포함하는 숙주 세포.
61. 구현예 61에 따른 핵산을 포함하는 발현 벡터.
62. 항체가 생산되도록 구현예 60에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 생산하는 방법.
63. 구현예 62에 있어서, 상기 숙주 세포로부터 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
64. 구현예 62 또는 구현예 63에 따른 방법에 의해 생산되는 항체.
65. 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 따른 항체, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 제형.
66. 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 있어서, 약제로서 사용하기 위한, 항체.
67. 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 있어서, 혈관 질환의 치료에 사용하기 위한, 항체.
68. 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 있어서, 안구 혈관 질환의 치료에 사용하기 위한, 항체.
69. 약제의 제조에서 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 따른 항체 또는 구현예 65에 따른 약학적 조성물의 사용.
70. 혈관 형성을 억제하기 위한 약제의 제조에서 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 따른 항체, 또는 구현예 65에 따른 약학적 조성물의 사용.
71. 혈관 질환을 가진 개체를 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 따른 항체 또는 구현예 65에 따른 약학적 조성물의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
72. 안구 혈관 질환을 가진 개체를 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 따른 항체 또는 구현예 65에 따른 약학적 조성물의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
73. 개체에서 혈관 형성을 억제하는 방법으로서, 혈관 형성을 억제하기 위해 구현예 1 내지 구현예 58 중 어느 한 구현예에 따른 항체 또는 구현예 65에 따른 약학적 조성물의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
아미노산 서열에 대한 설명
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
실시예
하기의 실시예들은 본 발명의 이해를 돕기 위해 제공되며, 이의 진정한 범위는 첨부된 청구범위에 제시되어 있다. 본 발명의 사상에서 벗어나지 않고 제시된 절차에서 수정이 이루어질 수 있다.
실시예 1: 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편의 생산
이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편은 VEGF 및 IL-1베타에 결합하는 단일 특이적 항체를 비중첩 파라토프와 함께 독립적으로 선별 검사한 후, 예컨대 WO2012/163520에서 앞서 기술된 방법에 의해 VEGF 및 IL-1베타에 결합하는 이중 파라토프 VH/VL 쌍 내로 아미노산 서열을 병합하여 생산하였다.
합성 Fab 단편의 2개의 별개의 파지 디스플레이 라이브러리가 사용되었으며, 여기서 제1 파지 디스플레이 라이브러리에서 Fab 단편의 CDR-H1, CDR-H3 및 CDR-L2 영역 내 잔기들이 다양화되었고, 제2 파지 디스플레이 라이브러리에서 Fab 단편의 CDR-L1, CDR-L3 및 CDR-H2 영역 내 잔기들이 다양화되었다. 각 라이브러리에서, 다른 3개의 CDR 영역은 불변 더미 서열로서 다양화되지 않은 상태로 유지되었다. 두 라이브러리에서, Fab 단편의 CH1 도메인은 링커를 통해 절단된 유전자 III 단백질에 융합되어 파지 디스플레이를 용이하게 하였다.
제1 라이브러리는 인간 IL-1베타에 대한 결합제에 대해 강화되었고, 제2 라이브러리는 파지 라이브러리 패닝에 의해 인간 VEGF-A에 대한 결합제에 대해 강화되었다. 패닝 후, 플라스미드 미니프렙이 두 가지 농축된 파지미드 벡터 풀에 대해 생성되었다. 미니프렙을 제한 효소로 분해하여 절단된 유전자-III 단백질을 암호화하는 영역을 절제하고, 결찰에 의해 재순환시켜 IL-1베타 결합제 또는 VEGF-A 결합제에 대해 각각 강화된 가용성 Fab 단편을 암호화하는 발현 벡터 풀을 수득하였다. 상기 벡터 풀을 TG1 대장균 세포로 형질 전환하고 개별 군집을 골라서 마이크로티터 플레이트에서 개별 Fab 클론의 가용성 발현을 위해 배양하였다. 가용성 Fab 단편을 포함하는 상청액은 표준 ELISA 방법을 사용하여 IL-1베타 또는 VEGF-A에 대한 결합에 대해 선별 검사되었고, 특정 결합제를 생성하는 TG1 클론은 DNA 플라스미드 제조 및 서열 분석을 거쳐 IL-1베타 또는 VEGF-A에 각각 특이적으로 결합하는 VH 및 VL 서열 쌍을 수득하였다.
이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 VH 및 VL 서열 쌍은 (1) IL-1베타 특이적 Fab의 VH 서열에서 관련없는 VH 잔기 52b 내지 65를 VEGF-A 특이적 Fab의 선택된 VH 잔기 52b 내지 65로 대체하여 잠재적으로 VEGF-A 특이적 파라토프의 일부가 되는 CDR-H2 잔기를 IL-1베타 결합제 중쇄 내로 치환함으로써, (2) VEGF-A 특이적 Fab의 VL 서열에서 관련없는 VL 잔기 49 내지 57을 IL-1베타 특이적 Fab의 선택된 VL 잔기 49 내지 57로 대체하여 잠재적으로 IL-1베타 특이적 파라토프의 일부가 되는 CDR-L2 잔기를 VEGF-A 결합제 경쇄 내로 치환함으로써, 인실리코에서 설계되었다.
실시예 2: 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편 1HVL2.3의 발현
결과로서 설계된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1 베타 VH 및 VL 서열 쌍을 합성하고 CH1 및 Ckappa 도메인을 암호화하는 유전자 서열을 사용하여 프레임 내에서 대장균 발현 벡터 내로 클로닝하였다. 상기 벡터를 TG1 대장균 세포 내로 형질전환하고, 이중 특이적 항체 Fab 단편의 가용성 발현을 위해 개별 군집을 배양하였다. 친화성 크로마토그래피에 의해 TG1 배양 상청액으로부터 이중 특이적 항체를 정제하고, IL-1베타 및 VEGF-A 둘 모두에 대한 특이적 결합을 확인하였다.
이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 "1HVL2.3"이 선택되었으며, 서열 번호 9의 중쇄 및 서열 번호 10의 경쇄를 특징으로 한다.
추가 분석을 위해, 본 발명의 항 -VEGF/항-IL-1베타 항체를 표준 재조합 방법에 의해 HEK293 세포 내로 형질 전환하고 이로부터 발현시켰다.
실시예 3: 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편 1HVL2.3의 특성규명
이중 특이적 항체 1HVL2.3의 결합 친화성, 친수성 및 열 안정성을 하기와 같이 평가하였다.
표면 플라즈몬 공명법(SPR)에 의해 평가된 VEGF 결합 동력학
항-His 포획 항체(GE Healthcare 28995056)는 표준 아민 커플링 화학을 사용하여 시리즈 S 센서 칩 C1(GE Healthcare 29104990)에 고정함으로써 약 500개의 공명 장치(RU)의 표면 밀도를 수득하였다. 흐르는 희석 완충액으로서 HBS-P+(10mM HEPES, 150mM NaCl pH 7.4, 0.05% 계면 활성제 P20)를 사용하였다. 인간 VEGF121-His는 약 10 및 20 RU의 결과로서 생성된 리간드 밀도로 각각 표면에 포획되었다. 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1 베타 Fab 단편의 희석 시리즈(1.2 - 100 nM, 1:3 희석)를 각각 90초 동안 연속적으로 주입하고, 30 μl/분의 유속으로 3600초 동안 해리를 모니터링하였다(단일 주기 동력학). 60초 동안 10 mM 글리신 pH 1.5를 주입하여 표면을 재생시켰다. 벌크 굴절률 차이는 맹검액 주입을 빼고 인간 VEGF121을 캡처하지 않고 제어 흐름 세포에서 수득한 반응을 빼서 수정하였다. 곡선 피팅은 비아코어(Biacore) 평가 소프트웨어 내에서 1 : 1 랑뮈어(Langmuir) 결합 모델을 사용하여 실시하였다. 보다 강력한 피팅을 제공하기 위해, 두 리간드 밀도를 사용하는 글로벌 피팅을 위해 멀티플(Multiple) Rmax 옵션을 선택하였다.
표면 플라즈몬 공명법(SPR)에 의해 평가된 IL-1b 결합 동력학
항-Fab 포획 항체(GE Healthcare 28958325)는 표준 아민 커플링 화학을 사용하여 시리즈 S 센서 칩 C1(GE Healthcare 29104990)에 고정함으로써 약 500개의 공명 장치(RU)의 표면 밀도를 수득하였다. 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab은 약 20 RU의 결과로서 생성된 포획 수준으로 표면에 포획되었다. 인간 IL-1 베타(펩프로텍(PeproTech) 200-01B) 또는 시노몰구스 IL-1베타(시노 바이오로지컬(Sino Biological) 90010-CNAE)의 0.74 내지 60 nM(1:3 희석) 범위의 희석 시리즈를 90초 동안 주입하고 해리를 30 μl/분의 유속에서 최소 600초 동안 모니터링하였다. 60초 동안 10 mM 글리신 pH 2.1를 2번 연속으로 각각 주입하여 표면을 재생시켰다. 벌크 굴절률 차이는 맹검액 주입을 빼고 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편을 캡처하지 않고 제어 흐름 세포에서 수득한 반응을 빼서 수정하였다. 곡선 피팅은 비아코어(Biacore) 평가 소프트웨어 내에서 1 : 1 랑뮈어(Langmuir) 결합 모델을 사용하여 실시하였다.
소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)
25 mM Na-포스페이트, 1.5 M 황산 암모늄, pH 7.0으로 평형화된 HIC-에테르-5PW(토소(Tosoh)) 컬럼 상에 20 μg의 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편을 주입하여 뚜렷한 소수성을 결정하였다. 60분 이내에 0에서 100% 완충액 B(25 mM Na-포스페이트, pH 7.0)의 선형 구배로 용출을 실시하였다. 체류 시간은 공지된 소수성을 갖는 단백질 표준과 비교하였다.
열 안정성
이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편의 표본을 20 mM 히스티딘/히스티딘 염화물, 140 mM NaCl, pH 6.0에서 1 mg/mL의 농도로 준비하고, 0.4 μm 필터 플레이트를 통한 원심분리에 의해 광학적 384-웰 평판 내로 옮긴 후, 파라핀 오일로 덮었다. 표본이 25℃로부터 80℃로 0.05℃/분의 속도로 가열되는 동안, 다이나프로(DynaPro) 평판 판독기(Wyatt) 상에서 동적 광 산란에 의해 수력학적 반지름을 반복해서 계측하였다. 대안적으로, 표본을 10 μL 마이크로-큐벳 어레이 내로 옮기고, 25℃로부터 90℃로 0.1℃/분의 속도로 가열되는 동안, 266 nm 레이저로 여기 시에 정적 광 산란 데이터뿐만 아니라 형광 데이터를 옵팀(Optim)1000 기기(아박타(주)(Avacta Inc.))로 기록하였다.
응집 시작 온도는 수력학적 반지름(DLS) 또는 산란광 강도(옵팀1000)가 증가하기 시작하는 온도로서 규정된다. 녹는 점(Tm)은 형광 강도 대 파장 그래프에서의 변곡점으로 정의한다.
결과를 표 1 및 표 2에 나타내었다.
[표 1]
Figure pct00008
[표 2]
Figure pct00009
실시예 4: 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편 1HVL2.3의 개선
상기에서 설명한 바와 같이, 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편 1HVL2.3은 매우 안정적이지만 나노몰 범위에서 IL-1베타에 대한 친화성 및 유의적인 소수성을 나타낸다. 안구 내에 치료제를 주입해야 하는 안구 혈관 질환의 치료를 위해서는, 표적 항원에 대한 높은 친화성을 갖는 치료제를 매우 높은 농도로 제공하여 치료 효과의 내구성을 높이고 환자에 대한 불편함을 최소화하는 것이 바람직하다. 의도된 목적을 위해, 고농도의 등장성 완충제에서 용해성을 보장하기 위해 항체의 친화성을 증가시키고 소수성을 감소시키는 것이 바람직하다.
결과적으로, 임상적 적용을 위해 항체는, 예컨대 IL-1베타 결합(특히 오프율 개선) 및 소수성 감소와 관련하여 추가적인 개선이 필요하였다. VH 및 VL 도메인에 별개의 아미노산 치환을 도입하여 여러 차례l 성숙을 실시하였다. 성숙하는 동안 항체 1HVL2.3에서 유래된 후보 항체를 수율, 친화성, 동시 항원 결합, 친수성, 안정성, 점도 및 기타 매개 변수와 관련하여 원하는 특성에 따라 선별 검사하고 선택하였다.
개선된 후보 항체 1HVL5.15, 1HVL12.85 및 RO7200394는 다수의 시험된 후보 항체 분자로부터 선택하였다. 상기 개선된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편의 아미노산 서열은 표 3에서 확인된다.
[표 3]
Figure pct00010
도 2 및 도 3은 생성된 이중 특이적 항-VEGF/항 -IL-1베타 Fab 단편의 가변 중쇄 도메인 및 가변 경쇄 도메인의 정렬을 도시한다. VH 및 VL 도메인 내의 아미노산 위치 번호는 카바트 넘버링 시스템에 따른다. 단순화를 위해, 프레임워크 및 CDR 아미노산 위치를 추가로 예시하는 번호 매기기가 도면에 포함되어 있다.
실시예 5: 개선된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편의 항원 결합 동력학
표시된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편(표 3에 도시된 아미노산 서열)을 사용하여 실시예 3에 기재된 바와 같이 후보 항체에 대한 VEGF 및 IL-1베타에 대한 결합 동력학을 평가하였다. 비교를 위해, WO2016/075034에 개시된 바와 같이, 전장 IgG 항체인 종래 기술의 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 0032의 항원 결합 동력학이 묘사된다.
IL-1 베타 결합 동력학의 결과는 표 4 및 표 5에 나타내었다.
[표 4]
Figure pct00011
[표 5]
Figure pct00012
다른 종 및 관련 단백질의 IL-1 베타에 대한 결합 동력학은 실시예 3에 기재된 것과 동일한 실험 설정을 사용하여 SPR에 의해 항체 1HVL5.15 및 1HVL12.85에 대해 평가하였다. 랫트 IL-1베타, 돼지 IL-1베타, 인간 IL-1알파 및 인간 IL-1RA에 대한 결합은 관찰되지 않았다. 뮤린 및 토끼 IL1-베타에 대해 약한 결합이 관찰되었다.
VEGF 결합 동력학의 결과는 표 6에 나타내었다.
[표 6]
Figure pct00013
VEGF 및 IL-1베타에 대한 후보 항체의 동시 항원 결합을 하기와 같이 평가하였다.
항-His 포획 항체(GE Healthcare 28995056)는 표준 아민 커플링 화학을 사용하여 시리즈 S 센서 칩 C1(GE Healthcare 29104990)에 고정함으로써 약 500개의 공명 장치(RU)의 표면 밀도를 수득하였다. 흐르는 희석 완충액으로서 HBS-P+(10mM HEPES, 150mM NaCl pH 7.4, 0.05% 계면 활성제 P20)를 사용하였다. 인간 VEGF121-His를 표면에 포착한 다음, 후보 항체 및 IL-1베타를 연속적으로 주입하였다. 60초 동안 10 mM 글리신 pH 1.5를 주입하여 표면을 재생시켰다. 벌크 굴절률 차이는 맹검액 주입을 빼고 인간 VEGF121을 캡처하지 않고 제어 흐름 세포에서 수득한 반응을 빼서 수정하였다.
VEGF 및 IL-1베타에 대한 후보 항체의 동시 결합은 모든 개선된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편, 즉 1HVL5.15, 1HVL12.85 및 RO7200394에 대해 확인되었다. 도 4는 항-VEGF/항-IL-1베타 1HVL12.85의 동시 결합을 도시한다. 도 5는 항-VEGF/항-IL-1베타 RO7200394의 동시 결합을 도시한다.
전장 IgG 종래 기술 항체 0032(WO2016/075034)의 동시 항원 결합을 또한 동일한 실험 설정을 사용하여 평가하였다. 결과는 도 6에서 나타내었다.
실시예 6: 각 수용체에 대한 VEGF 및 IL-1베타의 결합 억제
수용체 억제 검정
후보 항체 RO7200394(Fab 단편)의 존재 하에 각각의 수용체, hVEGFR2 및 IL-1베타R1에 대한 VEGF 및 IL-1베타의 결합 억제를 하기 기재된 바와 같이 평가하였다. 비교를 위해, WO2016/075034에 개시된 바와 같이, 종래 기술의 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 0032(전장 IgG 항체)의 동력학을 평가하였다.
hVEGFR2(R&D Systems 357-KD) 및 IL-1bR1(시노 바이오로지컬(주) 10126-H02H)은 표준 아민 커플링 화학을 사용하여 시리즈 S 센서 칩 CM5(GE Healthcare 29104988)에 상이한 흐름 세포 상에 고정함으로써 표면 밀도를 약 8000 및 20000 공진 단위(RU)로 각각 수득하였다. 흐르는 희석 완충액으로서 HBS-P+(10mM HEPES, 150mM NaCl pH 7.4, 0.05% 계면 활성제 P20)를 사용하였다.
VEGF-수용체 결합 억제를 평가하기 위해, 200 nM의 RO7200394 또는 400 nM 항체 0032의 최종 농도를 50 nM VEGF121과 함께 사전 배양하였다. IL-1베타-수용체 결합 억제를 평가하기 위해, 200 nM의 RO7200394 또는 200 nM 항체 0032의 최종 농도를 50 nM IL-1베타와 함께 사전 배양하였다. 샘플은 상응하는 50 nM VEGF121 또는 IL-1베타 용액에서 희석(1:2)하였다.
항체/리간드 혼합물을 VEGFR2 또는 IL-1R1 표면 상에 5 μl/분의 유속으로 60초 동안 주입하였다. 60초 동안 해리 단계 후, VEGFR2 표면은 60초 동안 5 mM NaOH를 주입하여 재생한 반면, IL-1R1 표면은 각각 60초 동안 10 mM 글리신 pH 3.0 및 5 mM NaOH를 주입하여 재생하였다. 벌크 굴절률 차이는 맹검액 주입을 빼고 맹검 대조 흐름 세포로부터 수득된 반응을 빼서 수정하였다. 평가를 위해, 주입 종료 5초 후 결합 반응을 취하였다. RU에서 유도된 반응은 항체가 없는 리간드(들)에 해당하는 초기 신호에 대한 결합 반응으로 변환되었다. IC50 값은 4개 매개변수 로지스틱 모델(XLfit, ID 비즈니스 솔루션즈(주)(Business Solutions Ltd.))을 사용하여 계산하였다.
결과는 표 7 및 표 8에; 및 도 7a(항체 RO7200394의 존재 하에 VEGFR2 억제), 도 7b(항체 0032의 존재 하에 VEGFR2 억제), 도 8a(항체 RO7200394의 존재 하에 IL-1R1 억제) 및 도 8b(항체 0032의 존재 하에 IL-1R1 억제)에 나타내었다.
[표 7]
Figure pct00014
[표 8]
Figure pct00015
본 발명의 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편에 대한 IL-1베타의 결합은 VEGF/VEGFR2 상호 작용의 억제를 방해하지 않는다는 것이 입증된다. 또한, 본 발명의 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편에 대한 VEGF의 결합은 IL-1베타/IL-1베타R1 상호 작용의 억제를 방해하지 않는다.
VEGF 경쟁 ELISA
하기의 완충액을 사용하였다: PBS(1x PBS pH7.4); PBST(0.1% v/v 트윈(Tween)-20으로 보충된 1x PBS); PBST 1% BSA(1% BSA로 보충된 PBST(시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), A0336의 소 혈청 알부민 용액 30%)); NaHCO3(NaHCO3 용액, pH 9.4, BupH 버퍼 팩으로 제조(써모 사이언티픽(ThermoScientific), 28382)); 2% MPBST(2%(w/v) 탈지 분유로 보충된 PBST(Carl Roth, T145.3)).
96 웰 플레이트(맥시소프(Maxisorp) Nunc-Immoplates)를 200 mM NaHCO3, pH 9.4에서 1시간 동안 실온에서 최종 농도 1 μg/ml로 50 μL/웰 rhVEGFR-1-Fc(R&D #321-FL-050)로 코팅하였다.
한편, 상이한 농도의 항체 Fab 단편을 하기와 같이 항체 Fab-VEGF 프리믹스를 형성하기 위해 VEGF와 함께 사전 배양하였다. 항체 Fab 단편(PBST-1% BSA 중 409.6 nM 항체) 용액 280 μl를 둥근 바닥 96 웰 PS 플레이트의 제1 컬럼의 웰에 첨가하여 일련의 희석 항체 Fab 단편을 제조하였다. 동일한 플레이트의 컬럼 2-12의 개별 웰을 140 μl PBST-1% BSA로 채웠다. 그 후, 상기 항체 용액 140 μl를 다음 컬럼으로 옮기고 충분히 혼합하여 1:2 희석을 실시하고 상기 희석된 항체 용액 140 μl를 다음 컬럼에 옮기는 과정을 진행하였다. 컬럼 11까지 반복한다. 모든 웰이 140 μl를 구성하도록 초과된 140 μl는 폐기하였다. 컬럼 12를 대조군으로 사용하였다(맹검액). VEGF를 사용한 사전 배양을 위해, 둥근 바닥 96 웰 PS 플레이트에 PBST-1% BSA의 용액 중의 2 nM VEGF121(휴먼자임(Humanzyme), HZ-1206, Lot 0614-01) 또는 2 nM VEGF165(휴먼자임, HZ-1153, Lot 0716-01)의 50 μl/웰을 미리 채웠다. 각각의 항체 Fab 단편의 희석 시리즈 50 ㎕를 각각 VEGF121 또는 VEGF165에 첨가하고, 완전히 혼합한 후 실온에서 1.5시간 동안 배양하였다.
rhVEGFR-1-Fc 코팅된 플레이트를 PBST로 2회 세척하고 200 μl의 2% MPBST로 45분 동안 차단하였다. MPBST 용액을 PBST로 2회 세척한 후, 항체 Fab-VEGF 프리믹스 50 ㎕를 플레이트에 첨가하고 실온에서 1.5시간 동안 배양하였다. 그 후, 플레이트를 PBST로 2회 세척하였다. 그런 다음, 비오틴화된 항-VEGF 항체(R&D, BAF293; PBST에서 1:2000 희석) 및 SA-HRP(KPL, 14-30-00; PBST에서 1:2000 희석)를 포함하는 용액 50μl를 첨가하고 30분 동안 실온에서 배양하였다. PBST로 6회 세척한 후, 50 μl의 TMB 기질 용액(2 성분 HRP 기질(KPL, 34021); 실온에서 사용)을 첨가하고 실온에서 30분 동안 배양하였다. 50 μl의 1N H2SO4를 첨가하고 450 nm에서 흡광도를 판독하였다.
결과는 도 9 및 도 10에 나타내었으며 1HVL2.3에 비해 1HVL12.85 및 RO7200394의 VEGF-R1 결합 억제의 개선을 도시한다.
실시예 7: 개선된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편의 생물 물리학적 특성(안정성 및 소수성)
후보 항체의 지시된 생물 물리학적 특성은 지시된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편(표 3에 도시된 아미노산 서열)을 사용하여 실시예 3에 기재된 바와 같이 평가하였다.
표 9는 분석된 항체의 열 안정성 및 소수성을 도시한다. 비교를 위해, WO2016/075034에 개시된 바와 같이, 전장 IgG 항체인 종래 기술의 항-VEGF/항-IL-1베타 항체 0032의 열 안정성이 포함된다. HIC로부터의 크로마토그램은 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편에 대해 도 11에 나타내었고, 종래 기술의 항-VEGF/항-IL-1베타 IgG 항체 0032에 대해 도 12에 나타내었다.
[표 9]
Figure pct00016
실시예 8: 개선된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편의 생물 물리학적 특성(동적 점성)
후보 항체의 점성은 지시된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편(표 3에 도시된 아미노산 서열)을 사용하여 하기와 같이 평가하였다.
점도는 상기에서 설명한 라텍스 비드 DLS 방법으로 측정하였다(He F et al.; Anal Biochem. 2010 Apr 1;399(1):141-3). 간단히 말해, 샘플은 원심 농축 장치, 예컨대 아미콘 울트라(Amicon Ultra) - 0.5 mL 원심 분리 필터(Centrifugal Filters), 울트라셀(Ultracel) - 10K, Cat.-No. UFC501096로 > 200 mg/mL(재료 가용성에 따라)로 농축하였다.
약 10 mg/mL에서 최대 실행 가능한 농도까지의 희석 시리즈를 준비하고 폴리소르베이트 20 및 비드(나노스피어 사이즈 스탠다드(Nanosphere Size Standards), Nom Diam : 300 nm, 1% 고체, 써모피셔(ThermoFisher) Cat.-No. 3300A)를 0.02%(PS20) 및 0.03%(w/w, 비드)의 최종 농도로 각각 첨가하였다.
단백질 농도가 UV280 흡수에 의해 결정되기 전에 상기 샘플들의 소량 분취량을 최대 속도로 1분 동안 원심 분리하였다.
나머지 샘플은 증발을 방지하기 위해 파라핀 오일 층으로 덮인 광학 384 웰 플레이트로 옮기고 DLS 데이터는 지시된 온도에서 기록하였다. 라텍스 비드의 겉보기 유체 역학적 방사성에 대한 DLS 데이터로부터 용액의 점도는 상기 He F et al.에 설명된 대로 계산하였다. 측정된 최고 농도에서의 점도는 표 10에 기록하였다. 결과는 도 13(1HVL12.85) 및 도 14(RO7200394)에도 나타내었다.
[표 10]
Figure pct00017
결과는 본 발명의 항체가 주사기성에 대한 허용 가능한 점도 한계(최대 30 cP) 미만의 점도를 포함하는 고농도로 제형화 될 수 있음을 나타낸다. 두 시험 항체 모두 고농축성을 나타내지만, 그 효과는 RO7200394 항체에서 더욱 두드러진다.
결과적으로, 본 발명의 항체는 제한된 주입 부피로 높은 몰 용량을 제공할 수 있기 때문에 안구 적용에 매우 적합하며, 높은 효능과 조합 될 때 높은 내구성 및 결과적으로 감소된 투여 빈도를 가져오고, 환자 측의 어려움을 줄이는 것으로 바람직하다.
실시예 9: 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편의 화학적 안정성
화학적 분해 시험
항체 샘플을 20 mM His/HisCl, 140 mM NaCl, pH 6.0으로 제형화하고 3개의 분취량으로 분할하였다. 하나의 분취량을 각각 PBS로 재완충하고 2개의 분취량을 원래 제형으로 보관하였다. PBS 분취량 및 His/HisCl 분취량 1개를 40℃(His/NaCl) 또는 37℃(PBS)에서 2주(2w) 동안 1 mg/ml에서 배양하고, PBS 샘플을 총 4주(4w) 동안 추가로 배양하였다. 제3 대조군 분취량 샘플은 -80℃에서 보관하였다. 배양이 종료된 후, 샘플을 상대 활성 농도(비아코어; 각 바인더의 스트레스를 받은 두 부분의 활성 농도를 스트레스를 받지 않은 4℃ 부분으로 정규화함), 응집(SEC) 및 단편화(모세관 전기 영동 또는 SDS-PAGE)에 대해 분석하고 처리되지 않은 대조군과 비교하였다.
스트레스 후 결합 활성은 하기와 같이 평가하였다.
항-Fab 포획 항체(GE Healthcare 28958325)는 표준 아민 커플링 화학을 사용하여 시리즈 S 센서 칩 CM5(GE Healthcare 29104988)에 고정함으로써 약 4000-6000개의 공명 장치(RU)의 표면 밀도를 수득하였다. 흐르는 희석 완충액으로서 HBS-P+(10mM HEPES, 150mM NaCl pH 7.4, 0.05% 계면 활성제 P20)를 사용하였다. 2 ㎍/ml 농도의 항체 항-VEGF/항 IL-1베타 항체 1HVL12.85를 5 ㎕/분의 유속으로 60초 동안 주입하였다. HuVEGF121(사내 준비) 또는 huIL-1베타(펩프로텍(Peprotech) 200-01B)를 각각 2 μg/ml의 농도로 60초 동안 주입하고, 해리를 5 μl/분의 유속으로 60초 동안 모니터링하였다. 60초 동안 10 mM 글리신 pH 2.1를 2번 연속으로 각각 주입하여 표면을 재생시켰다. 벌크 굴절률 차이는 맹검액 주입을 빼고 맹검 대조 흐름 세포로부터 수득된 반응을 빼서 수정하였다. 평가를 위해, 주입 종료 5초 후 결합 반응을 취하였다. 결합 신호를 정상화하기 위해, VEGF 또는 IL-1베타 결합 반응을 항-Fab 반응으로 나누었다. 상대 활성 농도는 각 온도 스트레스 샘플을 해당 비-응력 샘플에 참조하여 계산하였다.
결과를 표 11 및 표 12에 나타내었다.
[표 11]
Figure pct00018
[표 12]
Figure pct00019
실시예 10: 개선된 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편 1HVL5.15의 구조적 분석
항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편 1HVL5.15의 구조 분석은 하기와 같이 x-선 결정학에 의해 실시하였다.
삼원 복합체 IL1β-VEGF121-Fab 1HVL5.15의 복합체 형성 및 결정화
복합체 형성을 위해, 항체 1HVL5.15 Fab 단편 및 인간 IL1β(펩프로텍)를 1:1.1 몰비로 혼합하였다. 4℃에서 밤새 16시간 동안 배양한 후, 인간 VEGF121(사내에서 준비)을 첨가하여 10 mg/ml로 농축된 삼원 복합체를 수득하였다. 초기 결정화 시험은 21℃에서 착탈식 증기 확산 설정에서 실시하였다. 최초의 미세 결정은 1.4M 말로네이트 나트륨에서 4일 이내에 나타났다. 후속 시딩 실험은 0.1M 나트륨 카코딜레이트 pH 5.5, 0.1M 칼슘 아세테이트, 12% PEG8000에서 결정을 산출하였다. 결정은 추가적인 최적화 단계없이 선별 검사 플레이트에서 직접 수확하였다.
데이터 수집 및 구조 결정
데이터 수집을 위해, 결정은 동결 방지제로서 15% 에틸렌 글리콜을 첨가하여 침전 용액에서 100K로 즉석 냉각시켰다. 스위스 광원(빌리겐(Villigen), 스위스)의 빔라인 X10SA에서 PILATUS 6M 검출기를 사용하여 1.0000Å의 파장에서 회절 데이터를 수집하였다. 데이터는 XDS로 처리하고(Kabsch, W. Acta Cryst. D66, 133-144 (2010)), SADABS(BRUKER)로 확장하였다. 결정은 a = 177.97 Å, b = 286.70 Å, c = 105.39 Å, α=β=γ=90° 및 2.97Å의 분해능으로 회절되는 셀 축을 가진 공간 그룹 C2221에 속한다. 구조는 검색 모델로 VEGF에 대한 Fab 단편, IL1β 및 pdb 항목 1MKK의 관련 구조의 좌표를 사용하여 PHASER로 분자 대체에 의해 결정하였다(McCoy, A.J. et al. J. Appl. Cryst. 40, 658-674 (2007)). CCP4 제품군의 프로그램(협업 컴퓨팅 프로젝트(Collaborative Computational Project), 4번 Acta Cryst. D50, 760-763 (1994)) and Buster (Bricogne, G., et al. (2011). Buster version 2.9.5 Cambridge, United Kingdom : Global Phasing Ltd)를 구조의 개선에 사용하였다. 전자 밀도 차이를 이용한 단백질 수동 재건을 COOT로 실시하였다(Emsley, P., et al. Acta Cryst D66, 486-501 (2010)). 데이터 수집 및 개선 통계는 표 13에 요약되어 있다. 모든 그래픽 프레젠테이션은 PYMOL로 준비하였다(DeLano Scientific, Palo Alto, CA, 2002). 구조는 CCP4 제품군의 CONTACT 프로그램으로 분석하고(협업 컴퓨팅 프로젝트, 4번 Acta Cryst. D50, 760-763 (1994)) 최대 4Å의 접촉 거리를 사용하여 파라토프 및 에피토프 잔류물을 식별하였다.
[표 13]
Figure pct00020
각각의 항원, VEGF 및 IL-1베타와 접촉하는 아미노산 잔기는 복합체에서 이중 특이적 항-VEGF/항-IL-1베타 Fab 단편 1HVL5.15의 결정 구조로부터 확인되었다. VH 및 VL 도메인 내 파라토프 아미노산 잔기의 위치에 대한 설명은 도 2 및 도 3에 나타내었다.
경쇄 CDR1 및 CDR3 뿐만 아니라 중쇄 CDR2의 아미노산은 VEGF 파라토프에 기여한다. 상기 VEGF 파라토프는 경쇄 CDR2, 중쇄 CDR1 및 중쇄 CDR3의 아미노산을 포함하지 않는다. IL-1베타 파라토프는 경쇄 CDR2의 아미노산을 포함하지 않는다.
항원 결합에 기여하는 것으로 확인된 아미노산 잔기는 표 14(가변 중쇄 도메인 아미노산 잔기의 경우) 및 표 15(가변 경쇄 도메인 아미노산 잔기의 경우)에서 확인된다. 아미노산 위치는 카바트 넘버링 시스템에 따라 넘버링된다(도 2 및 도 3에서 동일한 넘버링이 사용됨). 항원 결합에 관련된 아미노산 위치는 VH 또는 VL 도메인에서 카바트 위치로 식별된다(도 2 및 도 3의 번호 매기기 참조).
[표 14]
Figure pct00021
[표 15]
Figure pct00022
SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> Antibody that binds to VEGF and IL-1beta and methods of use <130> P35223 (MME) <140> PCT/EP2019/086529 <141> 2019-12-20 <150> EP18215023.5 <151> 2018-12-21 <160> 27 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH domain of 1HVL2.3 <400> 1 Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser 1 5 10 15 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Met Val Phe Ser Trp Asn Ala 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Pro Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe Ile 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Asp Ile Gly Phe Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL domain of 1HVL2.3 <400> 2 Ala Ile Tyr Met His Gln Glu Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Tyr Arg Ile Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser His Glu Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Tyr His Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR1 of 1HVL2.3 <400> 3 Trp Asn Ala Met Ser 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR2 of 1HVL2.3 <400> 4 Ser Ile Ser Pro Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe Ile 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR3 of 1HVL2.3 <400> 5 Asp Ile Gly Phe Phe Asp Val 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR1 of 1HVL2.3 <400> 6 His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR2 of 1HVL2.3 <400> 7 Asp Ala Ser Tyr Arg Ile Ile 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR3 of 1HVL2.3, 1HVL12.85, 1HVL5.15 and RO7200394 <400> 8 Gln Gln Tyr Arg Tyr His Pro Tyr Thr 1 5 <210> 9 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain of 1HVL2.3 Fab fragment <400> 9 Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser 1 5 10 15 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Met Val Phe Ser Trp Asn Ala 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Pro Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe Ile 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Asp Ile Gly Phe Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Lys Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 <210> 10 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain chain of 1HVL2.3 Fab fragment <400> 10 Ala Ile Tyr Met His Gln Glu Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Tyr Arg Ile Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser His Glu Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Tyr His Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 11 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH domain of 1HVL12.85 and RO7200394 <400> 11 Asp Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Glu Gly Met Val Phe Lys Trp Asn 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ser Ile Ser Lys Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe 50 55 60 Ile Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Glu Lys Asp Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Val Gly Phe Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL domain of 1HVL12.85 and RO7200394 <400> 12 Ala Ile Tyr Met His Gln Glu Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Tyr Lys His Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Lys Glu Asp Gln Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Tyr His Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR1 of 1HVL12.85, 1HVL5.15 and RO7200394 <400> 13 Trp Asn Asp Met Ser 1 5 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR2 of 1HVL12.85, 1HVL5.15 and RO7200394 <400> 14 Ser Ile Ser Lys Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe Ile 1 5 10 15 Gly <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR3 of 1HVL12.85, 1HVL5.15 and RO7200394 <400> 15 Asp Val Gly Phe Phe Asp Ile 1 5 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR1 of 1HVL12.85 and RO7200394 <400> 16 His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Ser Leu Val Ala 1 5 10 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR2 of 1HVL12.85, 1HVL5.15 and RO7200394 <400> 17 Asp Ala Lys Tyr Lys His Leu 1 5 <210> 18 <211> 224 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain of 1HVL12.85 Fab fragment <400> 18 Asp Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Glu Gly Met Val Phe Lys Trp Asn 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ser Ile Ser Lys Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe 50 55 60 Ile Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Glu Lys Asp Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Val Gly Phe Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 <210> 19 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain chain of 1HVL12.85 and RO7200394 Fab fragment <400> 19 Ala Ile Tyr Met His Gln Glu Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Tyr Lys His Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Lys Glu Asp Gln Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Tyr His Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 20 <211> 224 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain of RO7200394 Fab fragment (SEQ ID NO: 19 with K196Q mutation) <400> 20 Asp Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Glu Gly Met Val Phe Lys Trp Asn 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ser Ile Ser Lys Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe 50 55 60 Ile Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Glu Lys Asp Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Val Gly Phe Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 <210> 21 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH domain of 1HVL5.15 <400> 21 Asp Glu Thr Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Glu Gly Met Val Phe Lys Trp Asn 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ser Ile Ser Lys Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe 50 55 60 Ile Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Glu Lys Asp Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Val Gly Phe Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL domain of 1HVL5.15 <400> 22 Ala Ile Tyr Met His Gln Glu Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Met Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Tyr Lys His Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser His Glu Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Tyr His Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 23 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR1 of 1HVL5.15 <400> 23 His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Ser Leu Met Ala 1 5 10 <210> 24 <211> 224 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain of 1HVL5.15 Fab fragment <400> 24 Asp Glu Thr Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Glu Gly Met Val Phe Lys Trp Asn 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ser Ile Ser Lys Lys Gly Asp His Lys Tyr Leu Asn Thr Lys Phe 50 55 60 Ile Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Glu Lys Asp Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Val Gly Phe Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 <210> 25 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain chain of 1HVL5.15 Fab fragment <400> 25 Ala Ile Tyr Met His Gln Glu Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Gly Ser Tyr Trp Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Met Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Tyr Lys His Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser His Glu Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Tyr His Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 26 <211> 232 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly 20 25 30 Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln 35 40 45 Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu 50 55 60 Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu 65 70 75 80 Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro 85 90 95 Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His 100 105 110 Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys 115 120 125 Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Lys Lys Ser Val 130 135 140 Arg Gly Lys Gly Lys Gly Gln Lys Arg Lys Arg Lys Lys Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Lys Ser Trp Ser Val Tyr Val Gly Ala Arg Cys Cys Leu Met Pro Trp 165 170 175 Ser Leu Pro Gly Pro His Pro Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys 180 185 190 His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn 195 200 205 Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr 210 215 220 Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg 225 230 <210> 27 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Met Ala Glu Val Pro Glu Leu Ala Ser Glu Met Met Ala Tyr Tyr Ser 1 5 10 15 Gly Asn Glu Asp Asp Leu Phe Phe Glu Ala Asp Gly Pro Lys Gln Met 20 25 30 Lys Cys Ser Phe Gln Asp Leu Asp Leu Cys Pro Leu Asp Gly Gly Ile 35 40 45 Gln Leu Arg Ile Ser Asp His His Tyr Ser Lys Gly Phe Arg Gln Ala 50 55 60 Ala Ser Val Val Val Ala Met Asp Lys Leu Arg Lys Met Leu Val Pro 65 70 75 80 Cys Pro Gln Thr Phe Gln Glu Asn Asp Leu Ser Thr Phe Phe Pro Phe 85 90 95 Ile Phe Glu Glu Glu Pro Ile Phe Phe Asp Thr Trp Asp Asn Glu 100 105 110

Claims (17)

  1. 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체로서, 가변 경쇄 도메인(VL 도메인) 및 가변 중쇄 도메인(VH 도메인)의 하나의 동족 쌍 내에 VEGF 파라토프 및 IL-1베타 파라토프를 포함하고, 상기 VEGF 파라토프는 상기 항체의 CDR-H2, CDR-L1 및 CDR-L3으로부터의 아미노산 잔기들을 포함하며, 상기 IL-1베타 파라토프는 상기 항체의 CDR-H1, CDR-H3 및 CDR-L2로부터의 아미노산 잔기들을 포함하는, 항체.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 VH 도메인, 및 (d) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (e) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (f) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 항체는 (a) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, (c) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, (d) (i) 아미노산 잔기 E2, G26, V28 및 K30을 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 R66, R83 및 K94를 포함하는 FR3을 갖는 인간 중쇄 프레임워크를 포함하는 VH 도메인; 및 (e) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (f) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, (g) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 및 (h) (i) 아미노산 잔기 I2를 포함하는 FR1, (ii) 아미노산 잔기 Y49를 포함하는 FR2, (iii) 아미노산 잔기 G57, E67, D68 및 Q69를 포함하는 FR3을 갖는 인간 경쇄 프레임 워크를 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트(Kabat) 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, R83, K94, D95, V96, F98, 및 D101을 포함하는 VH 도메인, 및 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, E67, D68, Q69, Y91, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VH 및 VL 도메인의 넘버링은 카바트 넘버링 시스템에 따르는, 항체.
  5. 제4항에 있어서,
    - VH 도메인 내에 아미노산 잔기 D55, H56, Y58, T61, K62, F63, I64, R66, 및 R83, 및 VL 도메인 내에 아미노산 잔기 I2, Y27, W27a, S27c, S27d, E67, D68, Q69, R92, Y93, H94, 및 Y96을 포함하는 VEGF 파라토프; 및
    - VH 도메인 내에 아미노산 잔기 E2, G26, V28, K30, W31, N35b, D35c, K52a, K94, D95, V96, F98, 및 D101, 및 VL 도메인 내에 아미노산 잔기 L32, Y49, D50, Y53, K54, L56, G57, 및 Y91을 포함하는 IL-1베타 파라토프를 포함하는, 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 서열 번호 12의 아미노산 서열에 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) 15개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는, 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    서열 번호 11의 VH 서열 및 서열 번호 12의 VL 서열을 포함하는, 항체.
  9. 서열 번호 11의 VH 서열 및 서열 번호 12의 VL 서열을 포함하는, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 특이적으로 결합하는 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체의 항체 Fab 단편은 (i) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 10 pM 미만인 인간 VEGF121, 및 (ii) 표면 플라즈몬 공명법으로 측정했을 때 KD가 30 pM 미만인 인간 IL-1베타에 결합하는, 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체의 항체 Fab 단편은 70℃ 초과의 응집 시작 온도를 나타내는, 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체의 항체 Fab 단편은 동적 광산란법으로 측정했을 때 80℃ 초과의 용융 온도를 나타내는, 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 이중 특이적 항체 단편인, 항체.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체를 암호화하는 단리된 핵산.
  15. 제14항에 따른 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  16. 제15항에 따른 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  17. 항체가 생산되도록 제15항에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인간 VEGF 및 인간 IL-1베타에 결합하는 항체를 생산하는 방법.
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