KR20210039986A - Ox40에 대한 완전한 인간 항체, 이를 준비하는 방법 및 이의 용도 - Google Patents

Ox40에 대한 완전한 인간 항체, 이를 준비하는 방법 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20210039986A
KR20210039986A KR1020207035680A KR20207035680A KR20210039986A KR 20210039986 A KR20210039986 A KR 20210039986A KR 1020207035680 A KR1020207035680 A KR 1020207035680A KR 20207035680 A KR20207035680 A KR 20207035680A KR 20210039986 A KR20210039986 A KR 20210039986A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
antibody
antigen
binding fragment
acid sequence
Prior art date
Application number
KR1020207035680A
Other languages
English (en)
Inventor
용 쩡
바오티엔 양
징 리
Original Assignee
우시 바이올로직스 (상하이) 컴퍼니 리미티드
우시 바이올로직스 아일랜드 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 우시 바이올로직스 (상하이) 컴퍼니 리미티드, 우시 바이올로직스 아일랜드 리미티드 filed Critical 우시 바이올로직스 (상하이) 컴퍼니 리미티드
Publication of KR20210039986A publication Critical patent/KR20210039986A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • C12N5/163—Animal cells one of the fusion partners being a B or a T lymphocyte
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0331—Animal model for proliferative diseases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 출원은 OX40 및 CD134로도 알려진 종양 괴사 인자 수용체 수퍼 패밀리 멤버 4 (TNFRSF4)에 대한 완전 인간 단일클론 항체를 제공한다. 또한 인간화 트랜스 제닉 랫트, 항-OX40 항체를 코딩하는 핵산 분자, 항-OX40 항체의 발현에 사용되는 발현 벡터 및 숙주 세포를 사용하는 하이브리도마 생성 방법을 제공한다. 본 발명은 시험관 내 항체의 기능 및 생체 내 항체의 효능을 검증하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명의 항체는 인간 면역 기능을 조절하여 암을 포함하는 여러 질병의 치료를 위한 매우 강력한 제제를 제공한다.

Description

OX40에 대한 완전한 인간 항체, 이를 준비하는 방법 및 이의 용도
본 출원은 2018년 5월 11일에 출원된 PCT 출원 번호 PCT/CN2018/086574와 2018년 5월 29일에 출원된 중국 출원 번호 201810529840.5에 우선권을 주장한다.
본 출원은 서열목록을 포함하며 그 전체가 여기에 참조로 포함된다.
본 발명은 일반적으로 항체와 관련된다. 보다 구체적으로, 본 출원은 OX40에 대한 완전 인간 모노클로날 항체, 이의 제조 방법 및 이의 용도에 관한 것이다.
전임상 및 임상 결과에서 증가하는 증거는 면역 체크 포인트를 표적으로 하는 것이 암 환자를 치료하는 가장 유망한 접근법이 되고 있음을 보여준다. 면역 체크 포인트 단백질 중 하나인 종양 괴사 인자 수용체 수퍼 패밀리 멤버 4 (TNFRSF4, OX40, CD134 및 ACT35로도 알려짐)는 T 세포 수용체 신호 전달을 강화하고 이들의 활성화를 유도하여 T 세포 기능에 중요한 역할을 한다.
OX40은 주로 활성화된 CD4+ 및 CD8+ T 세포, 기억 T 세포, 조절 T (Treg) 세포 및 자연 살해 (NK) 세포에 의해 발현된다. 활성화된 T 세포에서 발현된 OX40과 항원 제시 세포에서 발현된 리간드 (OX40L)의 상호 작용은 T 세포 활성화, 증식 및 이동을 극적으로 촉진하고, 이펙터 T 세포의 생존을 증가시키고, 배의 중심 형성 및 수지상 세포 성숙을 향상시킨다. 또한, OX40 신호 전달은 조절 T 세포의 분화 및 확장을 억제하고, 유도성 조절 T 세포의 생성을 길항하고 조절 T 세포의 억제 기능을 차단할 수 있다. 다양한 전임상 마우스 종양 모델과 임상 시험에서 OX40의 작용제가 암과 감염성 질환을 치료하기 위한 매우 유망한 전략이라는 것이 입증되었다. MedImmune, GlaxoSmithKline (GSK), 화이자 (Pfizer) 및 Incyte와 같은 제약 회사에서 OX40을 표적으로 하는 여러 작용제를 개발했다. MedImmune이 개발한 OX40 (9B12, AgonOX)을 표적으로 하는 작용성 뮤린 (murine) 항체는 진행성 암 환자의 임상 1 상 시험에 사용되었다. 항체 "9B12"의 한 과정으로 치료받은 환자는 30 명의 환자 중 12 명에서 허용 가능한 독성 프로파일과 적어도 하나의 전이성 병변의 퇴행을 나타냈다. 기계적으로, 이 치료는 리포터 항원 면역 (예: KLH)에 대한 T 및 B 세포 반응을 증가시켰고, 종양 침윤 림프구의 CD4+ FoxP3+ 조절 T 세포에서 OX40의 우선적인 상향 조절을 유도하였으며, 흑색종 환자에서 T 및 B 세포의 항 종양 반응성을 증가시켰다. GSK는 또한 고형 종양 및 혈액 악성 종양을 포함한 암의 잠재적 치료를 위해 MD Anderson Cancer Center와의 협력을 통해 확인된 T 세포 표면에서 OX40을 활성화하는 인간화 IgG1 단일클론 항체인 GSK-3174998을 개발하고 있다. OX40을 표적으로 하는 임상 개발의 다른 약제로는 현재 광범위한 악성 종양에서 임상 개발중인 화이자의 완전 인간 IgG2 작용제 항체 PF-04518600이 있고; 항 OX40 인간 IgG1 항체 인 Incyte의 INCAGN-1949는 잠재적 인 암 치료를 위해 최적의 작용 프로파일과 종양 내 조절 T 세포를 선택적으로 고갈시키는 능력을 갖추고 있다.
치료제로서 OX40에 대한 항체에 대한 개선의 여지가 있다. 공동 자극 수용체에 대한 작용제로서, 독성은 임상 적용을 제한하는 사이토 카인 폭풍과 같은 가장 우려되는 의문점일 수 있다. 더욱이, 현재 임상 시험에서 시험된 항 OX40 항체는 인간 마우스 키메라 또는 인간화 항체이며, 높은 면역원성은 마우스 유래 단백질 서열로 인해 효능을 감소시킨다. 완전 인간 항체는 이러한 단점을 극복하고 생체 내에서 더 높은 효율성과 더 낮은 독성을 나타냈다.
본 발명에서는 독자적인 하이브리도마 기술을 활용하여 OX40에 대한 완전한 인간 항체를 생성했다. 본 발명의 항체는 높은 결합 친화성을 갖고, 인간 및 원숭이 OX40 단백질 모두에 특이적으로 결합하고, 및 T 세포 증식을 향상시키고 사이토 카인 인터페론-감마 (IFN-γ) 및 인터루킨-2 생성을 증가시키고 조절 T 세포의 억제 기능을 손상시키는 것을 포함하는 강력한 조절 면역 반응을 갖는다.
이러한 목적 및 다른 목적은 본 발명에 의해 제공되며, 이는 넓은 의미에서 개선된 효능을 갖는 항체를 제공하는 화합물, 방법, 조성물 및 제조 물품에 관한 것이다. 본 발명에 의해 제공되는 이점은 항체 치료 및 진단 분야에서 광범위하게 적용 가능하며 다양한 표적과 반응하는 항체와 함께 사용될 수 있다. 본 발명은 인간 OX40에 결합하는 항체, 바람직하게는 완전 인간 모노클로날 항체를 제공한다. 또한 인간화 랫트, 항 OX40 항체를 코딩하는 핵산 분자, 항-OX40 항체의 발현에 사용되는 벡터 및 숙주 세포를 사용하는 하이브리도마 생성 방법을 제공한다. 본 발명은 시험관내 및 생체 내 항체의 기능을 검증하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명의 항체는 인간 면역 기능을 조절하여 암을 포함하는 여러 질병의 치료를 위한 강력한 제제를 제공한다.
일부 측면에서, 본 발명은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음 특성 중 하나 이상을 갖는다:
(a) 1 x 10-8 M 이하의 KD로 인간 OX40에 결합;
(b) CD4+ T 세포에서 사이토 카인 (예를 들어, IL-2 또는 IFN-γ)의 생산 유도;
(c) 1차 인간 CD4+ T 세포의 증식 향상;
(d) 조절 T 세포 (Treg) 세포의 존재 하에 1차 인간 CD4+ T 이펙터 세포 (T effector cells)의 증식을 향상;
(e) 인간 또는 붉은 털 원숭이 (rhesus monkey) OX40에 각각 결합; 또는
(f) 인간 CD40, CD137 및 CD271에 대한 교차 반응이 없음.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 OX40의 CRD2 및/또는 CRD3 도메인에 결합한다.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
A) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 중쇄 CDRs (CDRHs):
(i) 서열번호 1, 7, 13, 15, 21 및 27로 이루어진 군에서 선택된 CDRH1 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH1;
(ii) 서열번호 3, 9, 17, 23 및 29로 이루어진 군에서 선택된 CDRH2 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH2; 및
(iii) 서열번호 5, 11, 19, 25 및 31로 이루어진 군에서 선택된 CDRH3 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH3;
B) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 경쇄 CDRs (CDRLs):
(i) 서열번호 2, 8, 14, 16, 22 및 28로 이루어진 군에서 선택된 CDRL1 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL1;
(ii) 서열번호 4, 10, 18, 24 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 CDRL2 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL2; 및
(iii) 서열번호 6, 12, 20, 26 및 32로 이루어진 군에서 선택된 CDRL3 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL3; 또는
C) A의 CDRHs 중 1종 이상 및 B의 CDRLs 중 1종 이상.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
A) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 1종 이상의 중쇄 CDRs (CDRHs):
(i) 서열번호 1, 7, 13, 15, 21 및 27로 이루어진 군에서 선택된 CDRH1, 또는 상기 CDRH1에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH1;
(ii) 서열번호 3, 9, 17, 23 및 29로 이루어진 군에서 선택된 CDRH2, 또는 상기 CDRH2에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH2; 및
(iii) 서열번호 5, 11, 19, 25 및 31로 이루어진 군에서 선택된 CDRH3, 또는 상기 CDRH3에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH3;
B) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 적어도1종 이상의 경쇄 CDRs (CDRLs):
(i) 서열번호 2, 8, 14, 16, 22 및 28로 이루어진 군에서 선택된 CDRL1, 또는 상기 CDRH1에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL1;
(ii) 서열번호 4, 10, 18, 24 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 CDRL2, 또는 상기 CDRH2에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL2; 및
(iii) 서열번호 6, 12, 20, 26 및 32로 이루어진 군에서 선택된 CDRL3, 또는 상기 CDRH3에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL3; 또는
C) A의 CDRHs 중 1종 이상 및 B의 CDRLs 중 1종 이상.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
A) 서열 번호 5, 11, 19, 25 또는 31을 포함하는 CDRH3; 또는
B) 서열 번호 5, 11, 19, 25 및 31로 구성된 군으로부터 선택된 CDRH3 서열 과 적어도 90 % 서열 상동성을 갖는 CDRH3; 또는
C) 2개 이하의 아미노산의 아미노산 추가, 결실 또는 치환에 의해 A의 CDRH3과 아미노산 서열이 상이한 CDRH3,
상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 1 x 10-8 M 이하의 KD로 인간 OX40에 결함함.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호 1을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 3을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 5를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 2를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
(e) 서열번호 4를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
(f) 서열번호 6을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호 7을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 9를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 11을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 8을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
(e) 서열번호 10을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
(f) 서열번호 12를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호 13을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 9를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 11을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 14를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
(e) 서열번호 10을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
(f) 서열번호 12를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호 15를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 17을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 19를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 16을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
(e) 서열번호 18을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
(f) 서열번호 20을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호 21을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 23을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 25를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 22를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
(e) 서열번호 24를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
(f) 서열번호 26을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호 27을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 29를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 31을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 28을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
(e) 서열번호 30을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
(f) 서열번호 32를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(A) 중쇄 가변 영역 (VH):
(i) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함;
(ii) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함; 또는
(iii) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상 (예를 들어,, 1-10, 1-5, 1-3, 1, 2, 3, 4, 또는 5)의 아미노산의 추가, 결실 및/또는 치환을 포함; 및/또는
(B) 경쇄 가변 영역 (VL):
(i) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함;
(ii) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함; 또는
(iii) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상 (예를 들어, 1-10, 1-5, 1-3, 1, 2, 3, 4, 또는 5)의 아미노산의 추가, 결실 및/또는 치환을 포함.
일부 실시예에서, 본 발명은 상기 정의된 바와 같은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대한 결합에 경쟁하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 단리된 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 적어도 하나의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 숙주 세포에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하는 단계 및 숙주 세포로부터 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 분리하는 단계를 포함하는, 항 OX40 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 면역 반응이 조절되도록 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 면역 반응을 조절하는 방법에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 비정상적인 세포 성장을 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양 세포 전이를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 조절 T 세포 (Treg)의 억제 기능을 손상시키는 방법에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 포함하는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조 용도에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 진단제의 제조 용도에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료에 유용한 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하는 키트 또는 장치 및 관련 방법에 관한 것이다. 이를 위해 본 발명은 바람직하게는 이러한 장애를 치료하는데 유용한 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 용기를 포함하는 제조물품 및 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 증식성 장애 또는 이의 진행 또는 재발을 치료, 개선 또는 예방하기 위한 지침자료를 제공한다.
상술한 내용은 요약으로 필요에 따라 단순화, 일반화 및 세부 사항 누락을 포함한다. 결과적으로, 당업자는 요약이 단지 예시일 뿐이며 어떤 식으로든 제한하려는 의도가 아님을 이해할 것이다. 본 명세서에 기재된 방법, 조성물 및/또는 장치 및/또는 다른 주제의 다른 측면, 특징 및 이점은 본 명세서에 기재된 교시에서 명백해질 것이다. 요약은 아래의 자세한 설명에서 더 자세히 설명하는 단순화된 형태로 개념 선택을 소개하기 위해 제공된다. 상기 요약은 청구된 주제의 주요 특징이나 필수 특징을 식별하기 위한 것이 아니며 청구 대상의 범위를 결정하는데 도움을 주기위한 것도 아니다. 또한, 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고 문헌, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용은 전체가 참고로 여기에 포함된다.
이러한 목적 및 다른 목적은 본 발명에 의해 제공되며, 이는 넓은 의미에서 개선된 효능을 갖는 항체를 제공하는 화합물, 방법, 조성물 및 제조 물품에 관한 것이다. 본 발명에 의해 제공되는 이점은 항체 치료 및 진단 분야에서 광범위하게 적용 가능하며 다양한 표적과 반응하는 항체와 함께 사용될 수 있다. 본 발명은 인간 OX40에 결합하는 항체, 바람직하게는 완전 인간 모노클로날 항체를 제공한다. 또한 인간화 랫트, 항 OX40 항체를 코딩하는 핵산 분자, 항-OX40 항체의 발현에 사용되는 벡터 및 숙주 세포를 사용하는 하이브리도마 생성 방법을 제공한다. 본 발명은 시험관내 및 생체 내 항체의 기능을 검증하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명의 항체는 인간 면역 기능을 조절하여 암을 포함하는 여러 질병의 치료를 위한 강력한 제제를 제공한다.
도 1은 PTM 돌연변이 후 항 OX40 항체 1.62.3-u1-IgG1K의 변이체 간의 비교를 보여주는 그래프이다.
도 2는 인간 OX40 형질 감염된 CHO-K1 세포에 결합하는 항체를 보여주는 그래프이다.
도 3은 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 결합하는 항체를 보여주는 그래프이다.
도 4는 OX40L과 OX40에 경쟁적으로 결합하는 항체를 보여주는 그래프이다.
도 5는 붉은 털 원숭이 (rhesus monkey) OX40 형질 감염된 293F 세포에 결합하는 항체를 보여주는 그래프이다.
도 6은 ELISA에 의해 인간 CD40, CD137 및 CD271을 포함한 다른 TNFR 패밀리 구성원에 대한 항 OX40 항체의 교차 패밀리 결합 테스트 결과를 보여주는 그래프이다.
도 7A, 7B 및 7C는 각각 벤치 마크 항체 BMK1 (도 7A), BMK7 (도 7B) 및 BMK10 (도 7C)에 대한 항체의 에피토프 비닝을 보여주는 그래프이다.
도 8A, 8B 및 8C는 유리 항체 또는 CD32b 발현 CHO-K1 세포 또는 항 인간 IgG Fc 시약에 의한 FcγR 가교를 사용하여 Jurkat 세포에서 OX40 자극 NFkB 루시퍼 라제 활성에 대한 항체의 효과를 보여주는 그래프이다. (도 8A) 유리 항체 또는 (도 8B) F (ab ') 2 염소 항-인간 IgG 또는 (도 8C) CD32b 발현 CHO-K1 세포에 의해 가교된 리포터 활성이 각각 표시된다.
도 9는 1차 인간 CD4+ T 세포에 의한 항 CD3 유도 IL-2 분비에 대한 항체의 효과를 보여주는 그래프이다.
도 10은 1차 인간 CD4+ T 세포에 의한 항 CD3 유도 IFN-γ 분비에 대한 항체의 효과를 보여주는 그래프이다.
도 11은 1차 인간 CD4+ T 세포의 항CD3 유도 증식에 대한 항체의 효과를 보여주는 그래프이다.
도 12는 조절 T 세포 (Treg)가 존재하는 상태에서 1차 인간 CD4+ T 이펙터 세포의 증식을 유도한 CD3/CD28 다이나비즈 (Dynabedes)에 대한 항체의 효과를 보여주는 그래프다.
도 13A는 활성화된 인간 CD4+ T 세포에서 OX40 발현을 보여주는 그래프이고, 도 13B는 OX40 과발현 Jurkat 세포에서 OX40 발현을 보여주는 그래프이다.
도 14A는 OX40 과발현 Jurkat 세포에 대한 OX40 항체의 ADCC 효과를 보여주는 그래프이고, 도 14B는 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 대한 OX40 항체의 ADCC 효과를 보여주는 그래프이다.
도 15A는 OX40 과발현 Jurkat 세포에 대한 OX40 항체의 CDC 효과를 보여주는 그래프이고, 도 15B는 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 대한 OX40 항체의 CDC 효과를 보여주는 그래프이다.
도 16A 및 16B는 항체 1.134.9-u1-IgG1L의 투여 후 MC38 종양 보유 마우스의 종양 성장을 보여주는 그래프이다.
도 17은 항체 1.134.9-u1-IgG1L의 투여 후 MC38 종양 보유 마우스의 체중 변화를 보여주는 그래프이다.
본 발명은 많고 다양한 형태로 구현될 수 있지만, 본 발명의 원리를 예시하는 특정 예시적인 실시예가 여기에 개시된다. 본 발명은 예시된 특정 실시 예에 제한되지 않는다는 것이 강조되어야 한다. 또한, 여기에 사용된 모든 섹션의 제목은 구성 목적으로만 사용되며 설명된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학적 및 기술적 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 가져야 한다. 또한 문맥 상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함해야 한다. 보다 구체적으로, 본 명세서 및 첨부된 청구 범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "단백질"에 대한 언급은 복수의 단백질을 포함하고; "세포"에 대한 언급은 세포의 혼합물 등을 포함한다. 본 출원에서 "또는"의 사용은 달리 명시되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다.
또한, "포함하는"이라는 용어뿐만 아니라 "포함하는" 및 "포함된"과 같은 다른 형태의 사용은 제한되지 않는다. 또한, 명세서 및 첨부된 청구 범위에 제공된 범위는 양 끝점과 끝점 사이의 모든 점을 포함한다.
일반적으로, 본원에 기술된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련하여 사용되는 명명법 및 그 기술은 당 업계에 널리 공지되고 일반적으로 사용되는 것들이다. 본 발명의 방법 및 기술은 일반적으로 당업계에 잘 알려진 통상적인 방법에 따라 그리고 달리 지시되지 않는 한 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되고 논의되는 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참고 문헌에 기재된 바와 같이 수행된다. 예를 들어, Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 6th ed., W.B. Saunders Company (2010); Sambrook J. & Russell D. Molecular Cloning : A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2000); Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology : A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, John & Sons, Inc. (2002); Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; 및 Coligan et al., Short Protocols in Protein Science, Wiley, John & Sons, Inc. (2003) 참조. 본원에 기술된 분석 화학, 합성 유기 화학 및 의약 및 제약 화학과 관련하여 사용되는 명명법 및 실험실 절차 및 기술은 당 업계에 잘 알려져 있고 일반적으로 사용되는 것들이다. 또한, 여기에 사용된 모든 섹션 제목은 구성 목적으로 만 사용되며 설명된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
정의
본 발명의 이해를 돕기 위해 관련 용어의 정의 및 설명은 다음과 같다.
본원에 사용된 용어 "항체" 또는 "Ab"는 일반적으로 공유 이황화 결합 및 비공유 상호 작용에 의해 함께 결합된 2 개의 중쇄 (H) 및 2 개의 경쇄 (L) 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 Y- 형 사량 체 단백질을 지칭한다. 항체의 경쇄는 κ 및 λ 경쇄로 분류될 수 있다. 항체를 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 정의하는 중쇄는 μ, δ, γ, α 및 ε으로 각각 분류될 수 있다. 경쇄 및 중쇄에서 가변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역을 통해 불변 영역에 연결되고, 중쇄는 약 3개 이상의 아미노산의 "D"영역을 추가로 포함한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역 (VH)과 중쇄 불변 영역 (CH)으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3 개의 도메인 (CH1, CH2 및 CH3)으로 구성된다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역 (VL)과 경쇄 불변 영역 (CL)으로 구성된다. VH 및 VL 영역은 상대적으로 보존적인 영역 (프레임 워크 영역 (FR)이라고 함)에 의해 간격을 두는 초 가변 영역 (CDR (상보적 결정 영역)이라고 함)으로 더 나눌 수 있다. 각 VH 및 VL은 N-말단에서 C-말단까지 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 3 개의 CDR과 4 개의 FR로 구성된다. 각 중쇄/경쇄 쌍의 가변 영역 (VH 및 VL)은 각각 항원 결합 부위를 형성한다. 다양한 영역 또는 도메인에서의 아미노산 분포는 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 및 1991)) 또는 Chothia & Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196 : 901-917; Chothia et al., (1989) Nature 342 : 878-883를 따른다. 항체는 예를 들어, IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 서브 타입), IgA1, IgA2, IgD, IgE 또는 IgM 항체와 같은 상이한 항체 동형 일 수 있다.
본 출원과 관련하여 상호 교환 적으로 사용될 수 있는 항체의 "항원 결합 부분" 또는 "항원 결합 단편"이라는 용어는 전장 항체가 특이적으로 결합하는 능력을 보유하거나, 및/또는 동일한 항원에 대한 결합을 위해 전장 항체와 경쟁하는 전장 항체의 단편을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일반적으로 Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., the second edition, Raven Press, NY (1989), 이는 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함됨. 항체의 항원 결합 단편은 재조합 DNA 기술 또는 효소 또는 화학적 방법에 의해 생성될 수 있다. 일부 조건에서 항원 결합 파편에는 Pab, Fab', F(ab)2, Fd, Fv, Fv, dab 및 상보적 결정 영역 (CDR) 파편, 단일 체인 항체 (예: scFv), 키메릭 항체, 디아바디 (diabody) 및 폴리펩타이드에 대한 특정 항원 결합 능력을 부여하기에 충분한 항체의 최소한 일부를 구성하는 그러한 폴리펩타이드 등이 포함된다. 항체의 항원 결합 단편들은 주어진 항체 (예: 즉석 적용에서 제공되는 단클론 항 인간 OX40 항체)에서 통상에 기술자 (예: 재조합 DNA 기술 또는 효소 적 또는 화학적 기술)에 의해 알려진 통상의 기술로 얻을 수 있고, 온전한 항체를 스크리닝하는 것과 동일한 방식으로 특이성을 스크리닝 할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체" 또는 "mAb"는 단일 분자 조성의 항체 분자 제제를 지칭한다. 단일클론 항체는 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성과 친화성을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "인간 항체" 또는 "완전 인간 항체"는 프레임 워크 및 CDR 영역 둘 모두가 인간 생식 계열 면역 글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 더욱이, 항체가 불변 영역을 포함한다면, 불변 영역은 또한 인간 생식 계열 면역 글로불린 서열로부터 유래된다. 본 발명의 인간 항체는 인간 생식 계열 면역 글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관 내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발 또는 생체 내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유 동물 종의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임 워크 서열에 이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "인간 모노클로날 항체"는 프레임 워크 및 CDR 영역이 모두 인간 생식 계열 면역 글로불린 서열로부터 유래되는 가변 영역을 갖는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 지칭한다.
용어 "인간화 항체"는 다른 포유류 종, 예를 들어, 마우스의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임 워크 서열에 이식된 항체를 의미하는 것으로 의도된다. 추가 프레임 워크 영역 변형은 인간 프레임 워크 서열 내에서 이루어질 수 있다.
본원에 사용된 용어 "키메라 항체"는 가변 영역 서열이 한 종으로부터 유래되고 불변 영역 서열이 다른 종으로부터 유래된 항체, 예를 들어, 가변 영역 서열이 마우스 항체로부터 유래되고, 불변 영역 서열은 인간 항체에서 유래된 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "재조합 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체, 예를 들어, 다른 종의 면역글로불린 유전자에 대해 형질 전환된 동물로부터 단리된 항체, 숙주 세포로 형질 감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 면역 글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포함하는 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체와 같은 항체이다.
본원에 사용된 용어 "항 OX40 항체" 또는 "OX40 항체"는 본원에 정의된 바와 같이 OX40 수용체, 예를 들어, 인간 OX40 수용체에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다.
본원에서 상호 교환 적으로 사용되는 용어 "OX40", "OX40 수용체", "OX40 단백질", "tumor necrosis factor receptor superfamily, member 4 (TNFRSF4)" 또는 "CD134"는 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 슈퍼 패밀리의 하나이다. 용어 "OX40"은 인간 OX40 수용체뿐만 아니라 그의 변이체, 동형체 및 종 상동체를 포함할 수 있다. 따라서, 본원에 정의되고 개시된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 인간 이외의 종, 예를 들어, 사이노몰거스 원숭이 OX40으로부터 OX40을 결합시킬 수 있다.
본원에 사용된 용어 "인간 OX40"은 인간 서열 OX40, 예를 들어, Genbank 수탁 번호 CAE11757.1을 갖는 인간 OX40의 완전한 아미노산 서열을 지칭한다. 인간 OX40 서열은, 예를 들어, 비 보존 영역에서 보존된 돌연변이 또는 돌연변이를 가짐으로써 Genbank 수탁 번호 CAE11757.1의 인간 OX40과 상이할 수 있으며, OX40은 Genbank 수탁 번호 CAE11757.1의 인간 OX40과 실질적으로 동일한 생물학적 기능을 갖는다.
본원에 사용된 용어 "마우스 OX40"은 마우스 서열 OX40, 예를 들어, Genbank 수탁 번호 CAA59476.1을 갖는 마우스 OX40의 완전한 아미노산 서열을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "사이노몰거스 (cynomolgus) OX40"은 Genbank 수탁 번호 XP_001090870.1을 갖는 붉은 털 원숭이 OX40의 완전한 아미노산 서열과 같은 사이노몰거스 원숭이 서열 OX40을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "Ka"는 특정 항체-항원 상호 작용의 결합 속도를 의미하는 반면, 본원에 사용된 용어 "Kd"는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 의미하는 것으로 의도된다. 항체에 대한 Kd 값은 당 업계에 잘 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "Kd"는 특정 항체-항원 상호 작용의 해리 상수를 의미하는 것으로 의도되며, 이는 Kd 대 Ka의 비율 (즉, Kd/Ka)로부터 얻어지고 몰 농도 (M)로 표현된다. 항체의 Kd를 결정하는 바람직한 방법은 표면 플라즈몬 공명을 사용하는 것이며, 바람직하게는 Biacore® 시스템과 같은 바이오 센서 시스템을 사용하는 것이다.
본원에 사용된 IgG 항체에 대한 용어 "고 친화성"은 OX40 수용체와 같은 타겟 항원에 1 x 10-7 M 이하, 보다 바람직하게는 5 x 10-8 M 이하, 더욱더 바람직하게는 1x10-8 M, 더욱더 바람직하게는 5 x 10-9 M, 더욱더 바람직하게는 1 x 10-9 M의 KD를 갖는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "EC50"은 "최대 유효 농도의 절반"으로도 지칭되며, 특정 노출 시간 후 기준선과 최대 값 사이의 중간에 반응을 유도하는 약물, 항체 또는 독성 물질의 농도를 의미한다. 본 명세서 상의 맥락에 따라, EC50은 "nM"단위로 표현된다.
본원에 사용된 용어 "결합을 위한 경쟁"은 결합 표적에 대한 결합에서 두 항체의 상호 작용을 지칭한다. 제1항체와 이의 동족 에피토프의 결합이 제2항체의 부재하에 제1항체의 결합과 비교하여 제2항체의 존재하에 검출 가능하게 감소되면 제1항체는 제2항체와의 결합에 대해 경쟁한다. 제1항체의 존재하에 제2항체의 에피토프에 대한 결합이 또한 검출 가능하게 감소되는 대안은 그럴 수 있지만 반드시 그럴 필요는 없다. 즉, 제1항체는 제1항체가 그 각각의 에피토프에 대한 결합을 억제하지 않고 제2항체가 그 에피토프에 결합하는 것을 억제할 수 있다. 그러나, 각각의 항체가 동족 에피토프와의 다른 항체의 결합을 검출 가능하게 억제하는 경우, 그 범위가 같든 크든 작든, 항체는 각각의 에피토프 (들)의 결합을 위해 서로 "교차 경쟁"한다고 한다.
본원에 사용된 "결합 억제"의 능력은 임의의 검출 가능한 수준으로 두 분자 (예를 들어, 인간 OX40 및 인간 항 OX40 항체)의 결합을 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 능력을 지칭한다. 특정 실시 양태에서, 두 분자의 결합은 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 50 % 이상 억제될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 이러한 억제 효과는 60 % 초과, 70 % 초과, 80 % 초과 또는 90 % 초과일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "에피토프"는 면역 글로불린 또는 항체가 특이적으로 결합하는 항원상의 부분을 지칭한다. "에피토프"는 "항원 결정 인자"로도 알려져 있다. 에피토프 또는 항원 결 인정자는 일반적으로 아미노산, 탄수화물 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹으로 구성되며 일반적으로 특정 3차원 구조와 특정 전하 특성을 가지고 있다. 예를 들어, 에피토프는 일반적으로 고유의 입체 형태로 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 개 이상의 "선형" 또는 "구조적"인 연속 또는 비 연속 아미노산을 포함한다. 예를 들어, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)를 참조할 수 있다. 선형 에피토프에서 단백질과 상호 작용 분자 (예: 항체) 사이의 모든 상호 작용 부위는 단백질의 1차 아미노산 서열을 따라 선형으로 존재한다. 구조적 에피토프에서 상호 작용 부위는 단백질에서 서로 단리된 아미노산 잔기에 걸쳐 있다. 항체는 당업자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 동일한 에피토프에 대한 결합의 경쟁력에 따라 스크리닝될 수 있다. 예를 들어, 경쟁 또는 교차 경쟁에 대한 연구를 수행하여 항원에 대한 결합을 위해 서로 경쟁하거나 교차 경쟁하는 항체 (예: RSV 융합 단백질)를 얻을 수 있다. 교차 경쟁에 기초한 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 얻기 위한 고 처리량 방법은 국제 특허 출원 WO 03/48731에 설명되어 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "단리된"은 인위적인 수단에 의해 자연 상태로부터 얻은 상태를 의미한다. 특정 "단리된" 물질 또는 구성 요소가 자연에 존재하는 경우 자연 환경이 변하거나 물질이 자연 환경에서 분리되거나 둘 다로 인해 가능하다. 예를 들어, 어떤 분리되지 않은 특정 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 특정한 살아있는 동물의 신체에 자연적으로 존재하고, 그러한 자연 상태로부터 단리된 고순도의 동일한 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드를 단리된 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드라고 한다. 용어 "단리된"은 혼합된 인공 또는 합성 물질 또는 단리된 물질의 활성에 영향을 주지 않는 기타 불순물을 배제하지 않는다.
본원에 사용된 용어 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다 (예를 들어, OX40 단백질에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 OX40 단백질 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 다만, 인간 OX40 단백질에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 종의 OX40 단백질과 같은 다른 항원과 교차 반응성을 가질 수 있다. 또한, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학 물질이 실질적으로 없을 수 있다.
본원에 사용된 용어 "벡터"는 폴리뉴클레오타이드가 삽입된 핵산 비히클을 의미한다. 벡터가 삽입된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 단백질의 발현을 허용하는 경우, 벡터를 발현 벡터라고 한다. 벡터는 숙주 세포로의 형질 전환, 형질 도입 또는 형질 감염에 의해 숙주 세포에서 발현되는 운반된 유전 물질 요소를 가질 수 있다. 벡터는 당업자에 잘 알려져 있으며, 플라스미드, 파지, 코스미드 (cosmid), 효모 인공 염색체 (yeast artificial chromosome; YAC), 박테리아 인공 염색체 (bacterial artificial chromosome; BAC)와 또는 P1-유래 인공 염색체 (P1-derived artificial chromosome; PAC)와 같은 인공 염색체; λ 파지 또는 M13 파지와 같은 파지와 동물 바이러스를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 벡터로 사용될 수 있는 동물 바이러스에는 레트로 바이러스 (렌티 바이러스 포함), 아데노 바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스 바이러스 (예: 단순 포진 바이러스), 수두 바이러스, 배큘로 바이러스, 유두종 바이러스, 파포바 바이러스 (예: SV40)가 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 벡터는 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서 서열, 선택 요소 및 리포터 유전자를 포함하지만 이에 제한되지 않는 발현 조절을 위한 다중 요소를 포함할 수 있다. 또한, 벡터는 복제 기점을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "숙주 세포"는 단백질, 단백질 단편 또는 관심 펩티드를 생성하도록 조작될 수 있는 세포 시스템을 의미한다. 숙주 세포는 배양된 세포, 예를 들어, 예를 들어, CHO, BHK, NSO, SP2/0, YB2/0와 같은 설치류 (쥐, 마우스, 기니피그 또는 햄스터) 유래된 포유 동물 배양 세포, 또는 인간 조직 또는 하이브리도마 세포, 효모 세포 및 곤충 세포, 및 트랜스제닉 동물 또는 배양된 조직 내에 포함된 세포를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 상기 용어는 특정 대상 세포뿐만 아니라 그러한 세포의 자손도 포함한다. 특정 변형은 돌연변이 또는 환경 영향으로 인해 다음 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 그러한 자손은 모세포와 동일하지 않을 수 있지만 여전히 "숙주 세포"라는 용어의 범위 내에 포함된다.
본원에 사용된 용어 "동일성"은 서열을 정렬하고 비교함으로써 결정된 바와 같이 2개 이상의 폴리펩타이드 분자 또는 2개 이상의 핵산 분자의 서열 간의 관계를 지칭한다. "동일성 백분율"은 비교되는 분자에서 아미노산 또는 뉴클레오타이드 사이의 동일한 잔기의 백분율을 의미하며 비교되는 가장 작은 분자의 크기를 기준으로 계산된다. 이러한 계산을 위해 정렬의 간격 (있는 경우)은 특정 수학적 모델 또는 컴퓨터 프로그램 (즉, "알고리즘")에 의해 해결되는 것이 바람직하다. 정렬된 핵산 또는 폴리펩타이드의 동일성을 계산하는 데 사용할 수 있는 방법은 Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M., ed.), 1988, New York: Oxford University Press; Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W., ed.), 1993, New York: Academic Press; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds.), 1994, New Jersey: Humana Press; von Heinje, G., 1987, Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press; Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. and Devereux, J., eds.), 1991, New York: M. Stockton Press; and Carillo et al, 1988, SIAMJ. Applied Math. 48:1073에 기재되어 있다.
본원에 사용된 용어 "면역원성"은 유기체에서 특정 항체 또는 민감화된 림프구의 형성을 자극하는 능력을 의미한다. 특정 면역 세포를 활성화, 증식, 분화하여 최종적으로 항체, 감작 림프구 등의 면역 효과 물질을 생성하도록 자극하는 항원의 특성을 의미할 뿐만 아니라 항원으로 유기체를 자극한 후 유기체의 면역계에서 항체 또는 감작된 T 림프구가 형성될 수 있는 특정 면역 반응을 의미하기도 한다. 면역 원성은 항원의 가장 중요한 특성이다. 항원이 숙주에서 면역 반응의 생성을 성공적으로 유도할 수 있는지 여부는 항원의 특성, 숙주의 반응성 및 면역 수단의 세 가지 요인에 따라 달라진다.
본원에 사용된 용어 "형질 감염"은 핵산이 진핵 세포, 특히 포유 동물 세포로 도입되는 과정을 지칭한다. 형질 감염을 위한 프로토콜 및 기술에는 지질 형질 감염 및 전기 천공과 같은 화학적 및 물리적 방법이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 다수의 형질 감염 기술이 당 업계에 잘 알려져 있으며 여기에 개시되어있다. 예를 들어, Graham et al., 1973, Virology 52 : 456; Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, supra; Davis et al., 1986, Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier; Chu 등, 1981, Gene 13 : 197. 본 발명의 특정 구체 예에서, 인간 OX40 유전자는 293F 세포로 형질 감염되었다.
본원에서 사용되는 용어 "하이브리도마" 및 용어 "하이브리도마 세포주"는 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 용어 "하이브리도마" 및 용어 "하이브리도마 세포주"가 언급될 때, 이들은 또한 하이브리도마의 서브 클론 및 자손 세포를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "SPR" 또는 "표면 플라스몬 공명"이라는 용어는, 예를 들어, BIAcore 시스템 (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)을 사용하는 바이오센서 매트릭스 내에서 단백질 농도의 변화를 감지하여 실시간 바이오스펙트럼 상호작용을 분석할 수 있는 광학적 현상을 의미하고 포함한다. 자세한 설명은 실시예 5 및 Joensson, U., et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26; Joensson, U., et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jφnsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., et al. (1995) J. Mol. Recognit. 8:125-131; and Johnnson, B., et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277 참조.
본원에 사용된 용어 "형광 활성화 세포 분류" 또는 "FACS"는 특수한 유형의 유세포 분석을 의미한다. 이는 각 세포의 특정 광 산란 및 형광 특성에 따라 생물학적 세포의 이질적인 혼합물을 두 개 이상의 용기 (한 번에 한 세포씩)로 분류하는 방법을 제공한다 (FlowMetric. "Sorting Out Fluorescence Activated Cell Sorting". Retrieved 2017-11-09.). FACS를 수행하기위한 도구는 당업자에게 공지되어 있으며 대중에게 상업적으로 이용 가능하다. 이러한 기기의 예로는 Becton Dickinson (Foster City, California)의 FACS Star Plus, FACScan 및 FACSort, Coulter Epics Division (Hialeah, Fla.)의 Epics C와 Cytomation의 MoFlo (Colorado Springs, Colo)가 있다.
본원에 사용된 용어 "항체 의존성 세포 매개 세포 독성" 또는 "ADCC"는 특정 세포독성 세포 (예를 들어: 자연 살해 (NK) 세포, 호중구 및 대식세포)에 존재하는 Fc 수용체(FcRs)에 결합된 Ig가 분비되면 이들 세포독성 이펙터 세포가 항원을 갖는 표적 세포에 구체적으로 결합하고, 그 후에 세포독성으로 표적 세포를 죽일 수 있는 세포독성의 형태를 말한다. 항체는 세포 독성 세포를 "무장"하고 이러한 살해에 절대적으로 필요하다. ADCC를 매개하는 일차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포에 대한 FcR 발현은 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) 의 464 페이지의 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 미국 특허 번호 5,500,362 또는 5,821,337에 설명된 것과 같은 시험관 내 ADCC 분석이 수행될 수 있다. 이러한 분석에 유용한 효과기 세포에는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포가 포함된다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체 내, 예를 들어, Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다.
용어 "보체 의존성 세포 독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하에 표적 세포의 용해를 지칭한다. 고전적인 보체 경로의 활성화는 보체 시스템 (Clq)의 첫 번째 구성 요소가 동족 항원에 결합된 항체 (적절한 하위 부류의)에 결합함으로써 시작된다. 보체 활성화를 평가하기 위해 Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)에 기재된 CDC 어세이가 수행될 수 있다.
용어 "대상"은 임의의 인간 또는 비인간 동물, 바람직하게는 인간을 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "암"은 임의의 또는 종양 또는 악성 세포 성장, 증식 또는 전이 매개된 고형 종양 및 백혈병과 같은 비고형 종양을 지칭하고 의학적 상태를 개시한다.
상태를 치료하는 맥락에서 본원에서 사용되는 용어 본원에서 사용된 용어 "치료", "치료하는" 또는 "치료된"은 일반적으로 인간 또는 동물의 치료 및 치료에 관련되며, 여기서 일부 원하는 치료 효과가 달성되는 것으로, 예를 들어, 상태 진행의 억제는 진행률의 감소, 진행률의 중단, 상태의 회귀, 상태의 개선 및 상태의 치료를 포함한다. 예방 조치 (예: 예방, 방지)로서의 치료도 포함된다. 암의 경우, "치료하는"은 종양 또는 악성 세포 성장, 증식 또는 전이, 또는 이들의 일부 조합을 완화하거나 늦추는 것을 의미할 수 있다. 종양의 경우, "치료"는 종양의 전체 또는 일부 제거, 종양 성장 및 전이 억제 또는 지연, 종양 발생 예방 또는 지연, 또는 이들의 일부 조합을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "유효량"은 합당한 이점에 상응하는 일부 원하는 치료 효과를 생성하고, 원하는 치료 요법에 따라 투여할 때 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 효과적인 활성 화합물 또는 활성 화합물을 포함하는 물질, 조성물 또는 투여량의 그 양에 관한 것이다. 예를 들어, "유효량"은 OX40 관련 질환 또는 상태의 치료와 관련하여 사용될 때 상기 질환 또는 상태를 치료하는 데 효과적인 양 또는 농도의 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 의미한다.
포유 동물의 특정 질병 상태와 관련하여 본원에 사용된 용어 "예방하다", "예방" 또는 "예방하는"은 질병의 발병을 예방 또는 지연시키거나 이의 임상 또는 무증상 증상의 발현을 예방하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는"은 비히클, 희석제, 부형제 및/또는 이의 염이 제제의 다른 성분과 화학적으로 및/또는 물리적으로 상용 성이고 수용자와 생리학적으로 호환됨을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제"는 당해 분야에 잘 알려진 대상체 및 활성제와 약제학적 및/또는 생리학적으로 적합한 담체 및/또는 부형제를 지칭하고 (예를 들어, Remington 's Pharmaceutical Sciences. Edited by Gennaro AR, 19th ed. Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1995 참조), pH 조절제, 계면 활성제, 보조제 및 이온 강도 향상제를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 예를 들어, pH 조절제는 인산염 완충액; 계면 활성제는 양이온성, 음이온성 또는 비이온성 계면 활성제, 예를 들어, Tween-80을 포함하지만 이에 제한되지 않고; 이온 강도 증강제는 염화나트륨을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "보조제 (adjuvant)"는 항원에 대한 면역 반응을 향상시키거나, 항원과 함께 유기체에 전달되거나 또는 유기체에 미리 전달될 때 유기체에서 면역 반응의 유형을 변경할 수 있는 비특이적 면역 강화제를 의미한다. 알루미늄 보조제 (예를 들어, 수산화 알루미늄), 프로이트 보조제 (Freund's adjuvants) (예를 들어, 프로이트 완전 보조제 및 프로이트 불완전 보조제), 코린 박테리아 파르붐 (coryne bacterium parvum), 리포 다당류, 사이토 카인 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 보조제가 있다. 프로이트 보조제는 현재 동물 실험에서 가장 일반적으로 사용되는 보조제이다. 수산화 알루미늄 보조제는 임상 시험에서 더 일반적으로 사용된다.
항-OX40 항체
일부 측면에서, 본 발명은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (isolated antibody or an antigen-binding portion)을 포함한다.
본 명세서에서, "항체"는 폴리클로날 항체 (polyclonal antibodies), 멀티클로날 항체 (multiclonal antibodies), 모노클로날 항체 (monoclonal antibodies), 키메라 항체 (chimeric antibodies), 인간화 및 영장류화 항체 (humanized and primatized antibodies), CDR 이식 항체 (CDR grafted antibodies), 인간 항체 (human antibodies), 재조합 항체 (recombinantly produced antibodies), 인트라바디 (intrabodies), 다중 특이적 항체 (multispecific antibodies), 이중 특이적 항체 (bispecific antibodies), 1가 항체 (monovalent antibodies), 다가 항체 (monovalent antibodies), 항-이디오 타입 항체 (anti-idiotypic antibodies), 뮤테인 (muteins) 및 이의 변이체 (variants)를 포함하는 합성 항체,; Fc 융합, 기타 변형 및 OX40 단백질과의 우선적 결합 또는 결합을 나타내는 임의의 면역 반응성 분자를 포함하는 이의 유도체를 포함한다. 게다가, 달리 정의되지 않은 한, 용어 “항체”는 모든 클래스의 항체 (즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM) 및 모든 하위 클래스 (즉, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)를 포함한다. 바람직한 일 실시예에서, 항체는 모노클로날 항체이다. 더 바람직한 일 실시예에서, 항체는 인간 모노클로날 항체이다.
인간 항체는 당해 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 하나의 기술은 항체의 라이브러리 (바람직하게는 인간)가 파지 (phages)에서 합성되고, 라이브러리가 관심 항원 또는 이의 항원 결합 단편으로 스크리닝되고, 면역-반응 단편 (immune-reactive fragments)이 존재할 수 있는 파지로부터, 항원에 결합하는 파지가 단리되는 파지 디스플레이 (phage display)이다. 이러한 라이브러리를 제조하고 스크리닝하는 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있으며 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하기 위한 키트는 시판되고 있다 (예를 들어, Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, 카탈로그 번호 27-9400-01; 및 Stratagene SurfZAPTM 파지 디스플레이 키트, 카탈로그 번호 240612). 또한, 항체 디스플레이 라이브러리를 생성하고 스크리닝하는 데에 사용할 수 있는 다른 방법 및 시약도 있다 (예를 들어, Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 7978-7982 (1991) 참조).
인간 항체는 또한, 인간 면역 글로불린 유전자좌 (human immunoglobulin loci)를 트랜스제닉 동물, 예를 들어, 내인성 면역 글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 비활성화되고 인간 면역 글로불린 유전자가 도입된 마우스에 도입함으로써 제조될 수 있다. 도입 시, 유전자 재배열, 조립 및 항체 레퍼토리 (antibody repertoire)를 포함하여 모든 면에서 인간에서 볼 수 있는 것과 매우 유사한 인간 항체의 생산이 관찰된다. 이러한 접근 방식은 예를 들어, XenoMouseβ 기술과 관련하여, U.S.P.Ns 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016 및 6,075,181 및 6,150,584; 그리고, Lonberg와 Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)에 기술되어 있다. 대안적으로, 인간 항체는 표적 항원에 대한 항체를 생산하는 인간 B 림프구 (human B lymphocytes)의 불멸화 (immortalization)를 통해 제조될 수 있다 (이러한 B 림프구는 신생물성 장애 (neoplastic disorder)를 앓고 있는 개체로부터 회복되거나 시험관내 면역화되었을 수 있다). 예를 들어, Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol, 147 (1):86-95 (1991); 및 U.S.P.N. 5,750,373. 참조.
모노클로날 항체는 하이브리도마 기술 (hybridoma techniques), 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 트랜스제닉 동물 (예를 들어, XenoMouse®) 또는 이의 조합을 포함하는 당해 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 준비될 수 있다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 하이브리도마 및 An, Zhigiang (ed.) Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic, John Wiley and Sons, 1st ed. 2009; Shire et. al. (eds.) Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing, Springer Science + Business Media LLC, 1st ed. 2010; Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988;, 그리고, Hammerling, et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)에 자세히 설명된 바와 같이 당해 기술분야에 알려진 생화학 및 유전 공학 기술을 이용하여 생산할 수 있고, 이들 각각은 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다. 선택된 결합 서열은 예를 들어, 표적에 대한 친화성 향상, 표적 결합 서열 인간화, 세포 배양에서 이의 생산 향상, 생체 내 면역원성 (immunogenicity) 감소, 다중 특이적 항체 생성 등을 위하여 추가로 변경될 수 있으며, 표적 결합 서열이 변경된 항체 또한, 본 발명의 항체에 포함됨을 이해하여야 한다. 바람직한 일 실시예에서, 항-인간 OX40 모노클로날 항체는 하이브리도마를 이용함으로써 준비된다.
본 발명의 인간 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마의 생성
본 발명의 항체를 생산하는 하이브리도마를 생성하기 위해, 예를 들어, 본 발명의 인간 모노클로날 항체, 면역화된 마우스로부터의 비장 세포 (splenocytes) 및/또는 림프절 세포 (lymph node cells)를 분리하고 적절히 불멸화된 세포주, 예를 들어, 마우스 골수종 (mouse myeloma) 세포주에 융합시켰다. 생성된 하이브리도마는 항원 특이적 항체 생산을 위해 스크리닝될 수 있다. 하이브리도마의 생성은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York 참조.
본 발명의 모노클로날 항체를 생산하는 트랜스펙토마 (Transfectomas) 생성
본 발명의 항체는 또한, 예를 들어, 당해 기술분야에 잘 알려진 재조합 DNA 기술 및 유전자 형질 감염법 (gene transfection methods)의 조합을 이용하여 숙주 세포 형질 감염 종에서 생산될 수 있다 (예를 들어, Morrison, S. (1985) Science 229:1202). 일 실시예에서, 표준 분자 생물학 기술에 의해 수득된 부분 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 DNA는, 유전자가 전사 및 번역 조절 서열 (transcriptional and translational regulatory sequences)에 작용 가능하게 연결되도록 하나 이상의 발현 벡터 (expression vectors)에 삽입된다. 이러한 맥락에서, 용어 "작동 가능하게 연결된 (operatively linked)"은 벡터 내의 전사 및 번역 제어 서열 (transcriptional and translational control sequences)이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 의도된 기능을 제공하도록 항체 유전자가 벡터에 연결됨을 의미하는 것으로 의도된다.
용어 "조절 서열 (regulatory sequence)"은 항체 사슬 유전자의 전사 또는 번역을 조절하는 프로모터, 인핸서 및 기타 발현 조절 요소 (예를 들어, 폴리아데닐화 신호)를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 조절 서열은 예를 들어, Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990))에 설명되어 있다. 포유 동물 숙주 세포 발현을 위한 예시적인 조절 서열은 포유 동물 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 지시하는 바이러스 요소, 예를 들어, 거대 세포 바이러스 (cytomegalovirus, CMV), Simian 바이러스 40 (SV40), 아데노 바이러스 (예를 들어: 아데노 바이러스 주요 후기 프로모터 (adenovirus major late promoter, AdMLP)) 및 폴리오마 (polyoma)로부터 유래된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 대안적으로, 유비퀴틴 프로모터 (ubiquitin promoter) 또는 β-글로빈 프로모터 (β-globin promoter)와 같은 비바이러스성 조절 서열이 사용될 수 있다. 더 나아가, 조절 요소 (regulatory elements)는 SRa 프로모터 시스템과 같이, SV40 초기 프로모터의 서열 및 인간 T 세포 백혈병 바이러스 1형의 긴 말단 반복 (Takebe et al. (1988) MoI. Cell. Biol. 8: 466-472)을 포함하는 다양한 출처에서 유래된 서열을 포함한다. 발현 벡터 및 발현 조절 서열은 숙주 세포와 양립할 수 있도록 선택된다.
항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 동일하거나 별개의 발현 벡터에 삽입될 수 있다. 일부 실시예에서, 가변 영역은 원하는 이소형 (isotype)의 중쇄 불변 및 경쇄 불변 영역을 이미 코딩하는 발현 벡터에 삽입됨으로써 임의의 항체 이소형의 전장 (full-length) 항체 유전자를 생성하는 데에 사용되어, VH 세그먼트는 벡터 내의 CH 세그먼트(들)에 작동 가능하도록 연결되고, VL 세그먼트는 벡터 내의 CL 세그먼트에 작동 가능하도록 연결된다. 추가적으로 또는 대안적으로, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 사슬의 분비를 촉진하는 신호 펩티드 (signal peptide)를 코딩할 수 있다. 항체 사슬 유전자가 벡터 내로 클로닝 됨으로써, 신호 펩티드는 항체 사슬 유전자의 아미노 말단 구조 내에 연결된다. 신호 펩티드는 면역 글로불린 신호 펩티드 또는 이종 신호 펩티드 (즉, 비-면역 글로불린 단백질의 신호 펩티드)일 수 있다.
항체 사슬 유전자 및 조절 서열 이외에, 본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포 (예를 들어, 복제 기점) 및 선별 가능한 마커 유전자 (selectable marker gene)에서 벡터의 복제를 조절하는 서열과 같은 추가 서열을 운반할 수 있다. 선별 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선별을 용이하게 한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,399,216; 4,634,665 및 5,179,017 참조). 예를 들어, 일반적으로 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 G418, 하이그로마이신 (hygromycin) 또는 메토트렉세이트 (methotrexate)와 같은 약물에 대한 내성을 부여한다. 선택 가능한 마커 유전자는 디하이드로폴레이트 환원효소 (dihydrofolate reductase, DHFR) 유전자 (메토트렉세이트 (methotrexate) 선별/증폭을 통해 dhfr-숙주 세포에서 사용을 위함) 및 neo 유전자 (G418 선별용)를 포함할 수 있다.
경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 발현 벡터(들)는 표준 기술에 의해 숙주 세포로 형질 감염된다. 용어 "형질 감염 (transfection)"의 외인성 DNA를 원핵 또는 진핵 숙주 세포로 도입하는 데에 일반적으로 사용되는 다양한 기술, 예를 들어, 전기 천공 (electroporation), 칼슘-포스페이트 침전 (calcium-phosphate precipitation), DEAE-덱스트란 형질 감염 (DEAE-dextran transfection) 등을 포괄하는 것으로 의도된다. 본 발명의 항체는 원핵 또는 진핵 숙주 세포, 예를 들어, 적절하게 접혀 있고 면역학적으로 활성을 갖는 항체를 조립하고 분비하는 것이 가능한 포유 동물 숙주 세포에서 발현할 수 있다.
본 발명의 재조합 항체를 발현하기 위한 포유 동물 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 (CHO 세포) (Urlaub 및 Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. ScL USA 77:4216-4220에 기술된 dhfr CHO 세포, 및 예를 들어, R.J. Kaufman 및 P.A. Sharp (1982) J. MoI. Biol. 159:601-621에 기술된 DHFR 선별 마커를 포함), NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 특히 NSO 골수종 세포와 사용하기 위한 다른 발현 시스템으로는 WO 87/04462, WO 89/01036 및 EP 338,841에 개시된 GS 유전자 발현 시스템이 있다. 항체 유전자를 코딩하는 재조합 발현 벡터가 포유 동물 숙주 세포에 도입될 때, 항체는 숙주 세포에서 항체가 충분히 발현되거나 배양 배지로 항체가 분비될 수 있도록 일정 기간 숙주 세포를 배양함으로써 생산된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법 (standard protein purification methods)을 사용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다.
특정한 특성을 가진 항-OX40 항체
본 발명의 항체는 항체의 특정한 기능적 특징 또는 특성으로 특징지어 진다. 일부 실시예에서, 다음 특성 중 1종 이상의 특성을 갖는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
(a) 1 x 10-8 M 또는 그 이하의 KD로 인간 OX40와 결합;
(b) CD4+T 세포에서 사이토카인 (예를 들어, IL-2 또는 IFN-γ)의 생산을 유도;
(c) 초기 인간 CD4+ T 세포의 분화 촉진;
(d) Treg 세포 존재 하에서 초기 인간 CD4+ T 이펙터 세포의 분화 촉진;
(e) 인간 또는 붉은털 원숭이 (rhesus monkey) OX40와 각각 결합; 또는
(f) 인간 CD40, CD137 및 CD271에 대하여 교차반응성 부재 (no cross-reactivity)
본 발명의 항체는 높은 친화도로 인간 OX40에 결합한다. OX40에 대한 본 발명의 항체의 결합은 당해 기술분야에 잘 확립된 1종 이상의 기술, 예를 들어, ELISA를 이용하여 평가될 수 있다. 본 발명의 항체의 결합 특이성은 또한, OX40 단백질을 발현하는 세포에 대한 항체의 결합, 예를 들어, 유세포 분석 (flow cytometry)을 모니터링함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체는 세포 표면에서 OX40을 발현하도록 형질 감염된 CHO 세포와 같이 인간 OX40을 발현하는 세포주와 항체가 반응하는 유세포 분석에 의해 테스트될 수 있다. 유세포 분석에 사용하기에 적합한 다른 세포로는 천연 OX40을 발현하는 항-CD3-자극된 CD4+ 활성화 T 세포가 포함된다. 추가적으로 또는 대안적으로, 결합 동역학 (예를 들어, Kd 값)을 포함하는 항체의 결합은 BIAcore 결합 분석으로 테스트될 수 있다. 또 다른 적합한 결합 분석으로는 예를 들어, 재조합 OX40 단백질을 사용하는 ELISA 분석이 포함된다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 1 x 10-8 M 또는 그 이하의 KD로 OX40와 결합하고, 1 x 10-9 M 또는 그 이하의 KD로 OX40와 결합하고, 5 x 10-10 M 또는 그 이하의 KD로 OX40와 결합하고, 2 x 10-10 M 또는 그 이하의 KD로 OX40와 결합하고, 1 x 10-10 M 또는 그 이하의 KD로 OX40와 결합하고, 5 x 10-11 M 또는 그 이하의 KD로 OX40와 결합하고, 3 x 10-11 M 또는 그 이하의 KD로 OX40와 결합하고, 또는 2 x 10-11 M 또는 그 이하의 KD로 OX40와 결합한다.
특정 서열에 대한 서열 동일성을 갖는 CDRs을 포함하는 항-OX40 항체
일부 실시예에서, 다음을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
A) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 중쇄 CDRs (CDRHs):
(i) 서열번호 1, 7, 13, 15, 21 및 27로 이루어진 군에서 선택된 CDRH1 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH1;
(ii) 서열번호 3, 9, 17, 23 및 29로 이루어진 군에서 선택된 CDRH2 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH2; 및
(iii) 서열번호 5, 11, 19, 25 및 31로 이루어진 군에서 선택된 CDRH3 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH3;
B) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 경쇄 CDRs (CDRLs):
(i) 서열번호 2, 8, 14, 16, 22 및 28로 이루어진 군에서 선택된 CDRL1 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL1;
(ii) 서열번호 4, 10, 18, 24 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 CDRL2 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL2; 및
(iii) 서열번호 6, 12, 20, 26 및 32로 이루어진 군에서 선택된 CDRL3 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL3; 또는
C) A의 CDRHs 중 1종 이상 및 B의 CDRLs 중 1종 이상.
각 CDRs에 대한 아미노산의 할당은 달리 명시되지 않은 한, Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th　Ed.), US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242; Chothia et al., 1987, PMID: 3681981; Chothia et al., 1989, PMID: 2687698; MacCallum et al.,1996, PMID: 8876650; or Dubel, Ed. (2007) Handbook of Therapeutic Antibodies, 3rd Ed.,　Wily-VCH Verlag GmbH and Co.에 제공된 번호 체계 중 하나에 따를 수 있다.
항체 서열의 가변 영역 및 CDRs은 당해 기술분야에서 개발된 일반적인 규칙에 따라 (예를 들어, 위에서 설명한 Kabat 넘버링 시스템과 같이) 또는 알려진 가변 영역 데이터베이스에 대하여 서열을 정렬함으로써 확인할 수 있다. 이러한 영역을 식별하는 방법은 Kontermann and Dubel, eds., Antibody Engineering, Springer, 뉴욕, 2001 and Dinarello et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley and Sons Inc., Hoboken, 뉴저지, 2000.에 설명되어 있다. 항체 서열의 예시적인 데이터베이스는 Retter et al., Nucl. Acids Res., 33 (Database issue): D671-D674 (2005)에 기술된, www.bioinf.org.uk/abs의 “Abysis" (영국, 런던 소재 런던대학교의 생화학 및 분자생물학과의 A.C. Martin에 의해 유지 관리됨) 및 www.vbase2.org의 VBASE2 웹사이트에 설명되어 있으며, 이를 통해 접근할 수 있다. 바람직하게 서열은 Kabat, IMGT 및 PDB (Protein Data Bank)의 서열 데이터를 PDB의 구조 데이터와 통합하는 Abysis 데이터베이스를 사용하여 분석된다. Dr. Andrew C. R. Martin's book chapter　Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In:　Antibody Engineering Lab Manual　(Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg, ISBN-13: 978-3540413547, bioinforg.uk/abs에서 이용 가능) 참조. Abysis 데이터베이스 웹사이트는 상기 교시에 따라 사용될 수 있는 CDRs을 식별하기 위하여 개발된 일반적인 규칙을 추가로 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 여기에 제시된 모든 CDRs은 Kabat에 따른 Abysis 데이터베이스 웹사이트에 의하여 파생된다.
두 아미노산 서열 사이의 동일성 백분율 (percent identity)은 ALIGN 프로그램 (버전 2.0)에 통합된 E. Meyers 및 W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988))의 알고리즘을 이용하고, PAM120 가중치 잔여 표, 12의 간격 길이 패널티 (gap length penalty) 및 4의 간격 패널티 (gap penalty)를 이용하여 결정될 수 있다. 또한, 두 아미노산 서열 간의 동일성 백분율은 GCG 소프트웨어 (http://www.gcg.com에서 사용 가능)의 GAP 프로그램에 통합된 Needleman 및 Wunsch (J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)) 알고리즘을 이용하고, Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 간격 가중치 (gap weight) 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치 (length weight)에 의해 결정될 수 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명의 단백질 서열은 예를 들어, 관련 서열을 식별하기 위하여 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위해 "질의 서열 (query sequence)"로 추가 사용될 수 있다. 이러한 검색은 Altschul, et al. (1990) J. MoI. Biol. 215:403-10.의 XBLAST 프로그램 (버전 2.0)을 사용하여 수행할 수 있다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램, 점수(score)=50, 단어 길이(wordlength)=3으로 수행하여 본 발명의 항체 분자에 상동성인 아미노산 서열을 획득할 수 있다. 비교 목적으로 간격 정렬 (gapped alignments)을 획득하기 위해서는, Altschul et al, (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402.에 기술된 Gapped BLAST가 이용될 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 활용할 때는, 각 프로그램의 기본 매개 변수 {예를 들어, XBLAST and NBLAST)가 사용될 수 있다. www.ncbi.nlm.nih.gov. 참조.
다른 구체예에서, CDR 아미노산 서열은 전술한 각 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있다. 설명을 위한 일 예로서, 항체는 서열번호 1, 7, 13, 15, 21 및 27로 이루어진 군에서 선택된 CDRH1 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 CDRH1을 포함할 수 있다.
아미노산 추가, 결실 및/또는 치환을 갖는 CDRs을 포함하는 항-OX40 항체
일부 실시예에서, 다음을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
A) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 적어도1종 이상의 중쇄 CDRs (CDRHs):
(i) 서열번호 1, 7, 13, 15, 21 및 27로 이루어진 군에서 선택된 CDRH1, 또는 상기 CDRH1에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH1;
(ii) 서열번호 3, 9, 17, 23 및 29로 이루어진 군에서 선택된 CDRH2, 또는 상기 CDRH2에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH2; 및
(iii) 서열번호 5, 11, 19, 25 및 31로 이루어진 군에서 선택된 CDRH3, 또는 상기 CDRH3에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH3;
B) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 적어도1종 이상의 경쇄 CDRs (CDRLs):
(i) 서열번호 2, 8, 14, 16, 22 및 28로 이루어진 군에서 선택된 CDRL1, 또는 상기 CDRH1에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL1;
(ii) 서열번호 4, 10, 18, 24 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 CDRL2, 또는 상기 CDRH2에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL2; 및
(iii) 서열번호 6, 12, 20, 26 및 32로 이루어진 군에서 선택된 CDRL3, 또는 상기 CDRH3에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL3; 또는
C) A의 CDRHs 중 1종 이상 및 B의 CDRLs 중 1종 이상.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 CDRs은 1개 이하 아미노산의 보존적 치환을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "보존적 치환"은 아미노산 서열을 포함하는 단백질/폴리펩타이드의 필수 특성에 불리하게 영향을 미치거나, 변경하지 않는 아미노산 치환을 지칭한다. 예를 들어, 보존적 치환은 부위-지정 돌연변이 유발 (site-directed mutagenesis) 및 PCR 매개 돌연변이 유발과 같은 당해 기술분야에 알려진 표준 기술에 의해 도입될 수있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 다른 아미노산 잔기, 예를 들어, 상응하는 아미노산 잔기와 물리적 또는 기능적으로 유사한 잔기 (예를 들어, 공유 결합 또는 수소 결합 등을 형성하는 것 등을 포함하여 유사한 크기, 모양, 전하, 능력을 포함하는 화학적 특성을 가지는 것)로 치환되는 것을 포함한다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당해 기술분야에 정의되어 있다. 이러한 패밀리는 알칼리성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산 및 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), β-분지 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신 등) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 따라서, 상응하는 아미노산 잔기는 바람직하게 동일한 측쇄 패밀리의 다른 아미노산 잔기로 치환된다. 아미노산 보존적 치환을 확인하는 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다 (예를 들어, Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12 (10): 879-884). (1999); 및 Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 412-417 (1997)은 본문에 참조로 삽입된다).
CDRs를 포함하는 항-OX40 항체
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 1을 포함하는 CDRH1;
(b) 서열번호 3을 포함하는 CDRH2;
(c) 서열번호 5를 포함하는 CDRH3;
(d) 서열번호 2를 포함하는 CDRL1;
(e) 서열번호 4를 포함하는 CDRL2; 및
(f) 서열번호 6을 포함하는 CDRL3.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 1로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 3으로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 5 로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 2 로 이루어진 CDRL1;
(e) 서열번호 4 로 이루어진 CDRL2; 및
(f) 서열번호 6으로 이루어진 CDRL3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 7을 포함하는 CDRH1;
(b) 서열번호 9를 포함하는 CDRH2;
(c) 서열번호 11을 포함하는 CDRH3;
(d) 서열번호 8을 포함하는 CDRL1;
(e) 서열번호 10을 포함하는 CDRL2; 및
(f) 서열번호 12를 포함하는 CDRL3.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 7로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 9 로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 11 로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 8 로 이루어진 CDRL1;
(e) 서열번호 10으로 이루어진 CDRL2; 및
(f) 서열번호 12 로 이루어진 CDRL3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 13을 포함하는 CDRH1;
(b) 서열번호 9를 포함하는 CDRH2;
(c) 서열번호 11을 포함하는 CDRH3;
(d) 서열번호 14를 포함하는 CDRL1;
(e) 서열번호 10을 포함하는 CDRL2; 및
(f) 서열번호 12를 포함하는 CDRL3.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 13로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 9로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 11로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 14로 이루어진 CDRL1;
(e) 서열번호 10으로 이루어진 CDRL2; 및
(f) 서열번호 12 로 이루어진 CDRL3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 15를 포함하는 CDRH1;
(b) 서열번호 17을 포함하는 CDRH2;
(c) 서열번호 19를 포함하는 CDRH3;
(d) 서열번호 16을 포함하는 CDRL1;
(e) 서열번호 18을 포함하는 CDRL2; 및
(f) 서열번호 20을 포함하는 CDRL3.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 15로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 17로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 19로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 16으로 이루어진 CDRL1;
(e) 서열번호 18로 이루어진 CDRL2; 및
(f) 서열번호 20으로 이루어진 CDRL3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 21을 포함하는 CDRH1;
(b) 서열번호 23을 포함하는 CDRH2;
(c) 서열번호 25를 포함하는 CDRH3;
(d) 서열번호 22를 포함하는 CDRL1;
(e) 서열번호 24를 포함하는 CDRL2; 및
(f) 서열번호 26을 포함하는 CDRL3.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 21로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 23으로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 25로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 22로 이루어진 CDRL1;
(e) 서열번호 24로 이루어진 CDRL2; 및
(f) 서열번호 26으로 이루어진 CDRL3.
일부 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 27을 포함하는 CDRH1;
(b) 서열번호 29를 포함하는 CDRH2;
(c) 서열번호 31을 포함하는 CDRH3;
(d) 서열번호 28을 포함하는 CDRL1;
(e) 서열번호 30을 포함하는 CDRL2; 및
(f) 서열번호 32를 포함하는 CDRL3.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(a) 서열번호 27로 이루어진 CDRH1;
(b) 서열번호 29로 이루어진 CDRH2;
(c) 서열번호 31로 이루어진 CDRH3;
(d) 서열번호 28로 이루어진 CDRL1;
(e) 서열번호 30으로 이루어진 CDRL2; 및
(f) 서열번호 32로 이루어진 CDRL3.
중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체
일부 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기의 구성을 포함한다:
(A) 중쇄 가변 영역:
(i) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함;
(ii) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함; 또는
(iii) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산의 추가, 결실 및/또는 치환을 포함; 및/또는
(B) 경쇄 가변 영역:
(i) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함;
(ii) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함; 또는
(iii) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산의 추가, 결실 및/또는 치환을 포함
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 33의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 34의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 35의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 36의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 37의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 38의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 39의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 40의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 41의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 42의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 구체예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 43의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 44의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구체예에서, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 전술한 각 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있다. 설명을 위한 일 예로서, 항체는 서열번호 33의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
보다 구체적인 실시예에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역에서 아미노산의 보존적 치환 (conservative substitution) 또는 변형 (modification)을 포함할 수 있다. 항원 결합을 제거하지 않고, 특정한 보존적 서열 변형이 가능함은 당해 기술분야에 알려져 있다. 예를 들어, Brummell et al. (1993) Biochem 32:1180-8; de Wildt et al. (1997) Prot. Eng. 10:835-41; Komissarov et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:26864- 26870; Hall et al. (1992) J. Immunol. 149:1605-12; Kelley and O’ Connell (1993) Biochem. 32:6862-35; Adib-Conquy et al. (1998) Int. Immunol. 10:341-6 및 Beers et al. (2000) Clin. Can. Res. 6:2835-43 참조.
전술한 바와 같이, 본 명세서에서 사용되는 용어 "보존적 치환"은 아미노산 서열을 포함하는 단백질/폴리펩타이드의 필수 특성에 불리하게 영향을 미치거나, 변경하지 않는 아미노산 치환을 지칭한다. 예를 들어, 보존적 치환은 부위 지정 돌연변이 유발 (site-directed mutagenesis) 및 PCR 매개 돌연변이 유발과 같은 당해 기술분야에 알려진 표준 기술에 의해 도입될 수있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 다른 아미노산 잔기, 예를 들어, 상응하는 아미노산 잔기와 물리적 또는 기능적으로 유사한 잔기 (예를 들어, 공유 결합 또는 수소 결합 등을 형성하는 것 등을 포함하여 유사한 크기, 모양, 전하, 능력을 포함하는 화학적 특성을 가지는 것)로 치환되는 것을 포함한다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당해 기술분야에 정의되어 있다. 이러한 패밀리는 알칼리성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산 및 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), β-분지 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신 등) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 따라서, 상응하는 아미노산 잔기는 바람직하게 동일한 측쇄 패밀리의 다른 아미노산 잔기로 치환된다. 아미노산 보존적 치환을 확인하는 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다 (예를 들어, Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12 (10): 879-884). (1999); 및 Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 412-417 (1997)은 본문에 참조로 삽입된다).
비닝 (Binning) 및 에피토프 (epitope) 매핑
개시된 항체는 선택된 표적 또는 이의 단편에 의해 제시된 별개의 에피토프 (epitopes) 또는 면역원성 결정기 (immunogenic determinants)와 결합하거나 상호 작용할 수 있음을 이해할 것이다. 일부 실시예에서, 에피토프 또는 면역원성 결정기는 아미노산, 당 측쇄 (sugar side chains), 포스포릴기 (phosphoryl groups) 또는 설포닐기 (sulfonyl groups)와 같은 분자의 화학적으로 활성화한 표면 그룹 (surface groupings)을 포함한다. 일부 실시예에서, 에피토프는 특정한 3차원 구조적 특성 및/또는 특정한 전하 특성을 가질 수 있다. 따라서, 상기 용어 “에피토프”는 면역 글로불린 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합하거나 분자와 함께 상호 작용할 수 있는 임의의 단백질 결정기 (protein determinant)를 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 단백질 및/또는 거대 분자 (macromolecules)의 혼합물에서 표적 항원을 우선적으로 인식할 때, 항원에 특이적으로 결합 (또는 면역-특이적으로 결합하거나 반응)하는 것으로 알려져 있다. 일부 실시예에서, 항체는 평형 해리 상수 (KD)가 106 M 또는 그 이하, 107 M 또는 그 이하, 더 바람직하게는 KD가 108 M 또는 그 이하, 보다 더 바람직하게는 KD가 109 M 또는 그 이하인 때, 항원에 특이적으로 결합하는 것으로 알려져 있다.
인접 아미노산 (contiguous amino acids) ("선형 (linear)" 또는 "연속 (continuous)" 에피토프라고도 함)에서 형성된 에피토프는 일반적으로 단백질 변성시 유지되는 반면 3차 접힘 (tertiary foldin)에 의해 형성된 에피토프는 일반적으로 단백질 변성시 손실된다. 어떤 경우이든 항체 에피토프는 일반적으로 고유한 공간적인 구조 (spatial conformation)에 적어도 3개 이상, 보다 일반적으로 5개 또는 8 내지 10개 이상의 아미노산을 포함한다.
이와 관련하여, 일부 실시예에서, 에피토프는 예를 들어, PD-1 단백질의 하나 이상의 영역, 도메인 또는 모티프와 연관되거나 그 안에 존재할 수 있음을 이해할 것이다. 유사하게, 당해 기술분야에서 인정된 용어 "모티프 (motif)"는 그것의 일반적인 의미에 따라 사용될 것이며 일반적으로 10 내지 20개의 인접한 아미노산 잔기인 단백질의 짧고 보존된 영역을 지칭한다.
항원에 대하여 원하는 에피토프가 결정되면, 예를 들어, 본 발명에 기술된 기술을 사용하여 에피토프를 포함하는 펩티드로 면역화 (immunizing)함으로써, 그 에피토프에 대한 항체를 생성하는 것이 가능하다. 대안적으로, 발견 과정 (discovery process) 동안, 항체의 생성 및 특성화는 특정 도메인 또는 모티프에 위치하고 있는 바람직한 에피토프에 관한 정보를 설명할 수 있다. 이러한 정보로부터, 동일한 에피토프에 결합하기 위하여 항체를 경쟁적으로 스크리닝하는 것이 가능하다. 이를 달성하기 위한 접근 방식은, 경쟁 연구를 수행하여 서로 경쟁적으로 결합하는 항체, 즉 항원에 결합하기 위해 서로 경쟁하는 항체를 찾는 것이다. 교차 경쟁 (cross-competition)에 기초한 항체 비닝 (binning)을 위한 대량 신속 처리 프로세스 (high throughput process)는 WO 03/48731에 기술되어 있다. 항체 경쟁 또는 효모에 대한 항원 단편 발현을 포함하는 비닝 또는 도메인 수준 또는 에피토프 매핑의 다른 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "비닝 (binning)"은 항원 결합 특성 및 경쟁을 기반으로 항체를 그룹화하거나 분류하기 위해 사용되는 방법을 의미한다. 이 방법은 본 발명의 항체를 정의하고 분류하는 데에 유용하지만, 빈 (bin)은 항상 에피토프와 직접적으로 관련있는 것은 아니며, 에피토프 결합의 초기 결정과 같이 당해 기술분야에서 인정하는 다른 방법론에 의해 추가로 개선되고 확인될 수 있다. 그러나, 개별 빈에 대한 항체의 경험적 할당 (empirical assignment)은 개시된 항체의 치료 잠재력을 나타낼 수 있는 정보를 제공한다는 것을 이해할 것이다.
보다 구체적으로, 선택된 참조 항체 (또는 이의 단편)가 동일한 에피토프에 결합하는지 또는 당해 기술분야에 공지되고 제시된 예시를 이용하여 제2 테스트 항체와의 결합을 위해 교차 경쟁 (cross competes)하는지 (즉, 동일한 빈에 있음)를 결정할 수 있다.
다른 호환 가능한 에피토프 매핑 기술로는, 알라닌 스캐닝 돌연변이체 (alanine scanning mutants), 펩티드 블롯 (peptide blots) (Reineke (2004) Methods Mol Biol 248:443-63) (그 전문은 본 명세서에 구체적인 참조로 포함됨) 또는 펩티드 절단 분석 (peptide cleavage analysis)이 포함된다. 추가로, 에피토프 절제 (epitope excision), 에피토프 추출 (epitope extraction) 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법이 채용될 수 있다 (Tomer (2000) Protein Science 9:487-496) (그 전문은 본 명세서에 구체적인 참조로 포함됨).
본 발명의 항체를 코딩하는 핵산 분자
일부 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같이 단리된 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다.
본 발명의 핵산은 표준 분자 생물학 기술을 이용하여 얻을 수 있다. 하이 브리도마에 의해 발현된 항체의 경우 (예를 들어, 하기에 추가로 설명되는 바와 같이 인간 면역 글로불린 유전자를 보유하는 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마), 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 수득될 수 있다. 면역 글로불린 유전자 라이브러리 (예: 파지 디스플레이 기술 사용)에서 수득한 항체를 위하여, 이와 같은 항체를 암호화하는 핵산은 유전자 라이브러리로부터 회수될 수 있다.
VH 영역을 코딩하는 단리된 핵산은 VH-코딩 핵산을 중쇄 불변 영역 (CH1, CH2 및 CH3)을 코딩하는 다른 DNA 분자에 기능하도록 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당 업계에 공지되어 있으며 (예를 들어, Kabat et al. (1991), supra 참조), 이러한 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 얻을 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있으나, 보다 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역이다.
VL 영역을 코딩하는 단리된 핵산은 VL 코딩 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 코딩하는 다른 DNA 분자에 기능하도록 연결함으로써 전장 경쇄 유전자 (Fab 경쇄 유전자뿐만 아니라)로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당 업계에 공지되어 있고 (예를 들어, Kabat et al., supra 참조), 이러한 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 얻을 수 있다. 바람직한 구체 예에서, 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.
VH 및 VL 세그먼트를 인코딩하는 DNA 단편이 획득되면 이러한 DNA 단편은 예를 들어, 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환하는, 표준 재조합 DNA 기술에 의해 추가로 조작될 수 있다.
이러한 조작에서, VL- 또는 VH-를 코딩하는 DNA 단편은 항체 불변 영역 또는 유연한 링커 (linker)와 같이 다른 단백질을 코딩하는 다른 DNA 단편에 기능적으로 연결된다. 본 명세서에서 사용된 용어 "작동 가능하도록 연결된 (operatively linked)"은 2 개의 DNA 단편에 의해 코딩된 아미노산 서열이 프레임 내에 남아 있도록 2 개의 DNA 단편이 결합됨을 의미하는 것으로 의도된다.
일부 구체예에서, 단리된 핵산 분자는 단리된 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하고, 다음으로 이루어진 군에서 선택된 핵산 서열을 포함한다:
(A) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 또는 43에 제시된 바와 같은 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열;
(B) 서열번호 45, 47, 49, 51, 53 또는 55에 제시된 핵산 서열; 또는
(C) A 또는 B의 핵산 서열의 상보적 서열에 높은 엄격성 조건 하에서 혼성화된 핵산 서열.
예를 들어, 핵산 서열은 서열번호 45, 47, 49, 51, 53 또는 55으로 이루어진다. 대안적으로, 핵산 분자는 서열번호 45, 47, 49, 51, 53 또는 55와 적어도 80% (예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는다. 일부 구체예에서, 동일성 백분율은 유전 코드의 퇴행성으로부터 유도되고, 암호화된 단백질 서열은 변하지 않고 유지된다.
일부 실시예에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같이, 단리된 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다.
일부 구체예에서, 단리된 핵산 분자는 단리된 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 다음으로 이루어진 군에서 선택된 핵산 서열을 포함한다:
(A) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 또는 44에 제시된 바와 같은 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열;
(B) 서열번호 46, 48, 50, 52, 54 또는 56에 제시된 핵산 서열; 또는
(C) A 또는 B의 핵산 서열의 상보적 서열에 높은 엄격성 조건 하에서 혼성화된 핵산 서열.
예를 들어, 핵산 분자는 서열번호 46, 48, 50, 52, 54 또는 56을 포함한다. 대안적으로, 핵산 분자는 서열번호 46, 48, 50, 52, 54 또는 56과 적어도 80% (예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는다. 일부 구체예에서, 동일성 비율은 유전 암호 (genetic code)의 퇴행성 (degeneracy)에서 유래되며, 코딩된 단백질 서열은 여전히 변하지 않는다.
예시적인 높은 엄격성 조건 (stringency conditions)은 5X SSPE 및 45 % 포름 아미드 (formamide)에서 45 ℃ 온도 조건에서의 혼성화 및 0.1 X SSC에서 65 ℃ 온도 조건에서의 최종 세척을 포함한다. Ausubel, et al. (Eds.), Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1994), pp. 6.0.3 to 6.4.10.에 기재된 바와 같이, 온도 및 완충액, 또는 염 농도의 변화를 통해 동등한 엄격도 (equivalent stringency)의 조건이 달성될 수 있음은 당해 기술분야에 알려져 있다. 혼성화 조건의 변형은 프로브의 구아노신/사이토신 (guanosine/cytosine, GC) 염기 쌍의 길이와 백분율을 기반으로 경험적으로 결정하거나 정확하게 계산할 수 있다. 혼성화 조건은 Sambrook, et al, (Eds.), Molecular Cloning: A laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, New York (1989), pp. 9.47 to 9.51.에 설명된 바에 따라 계산될 수 있다.
약제학적 조성물 (Pharmaceutical Compositions)
일부 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 하나의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체 (pharmaceutically acceptable carrier)를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
조성물의 구성 요소 (Components of the compositions)
약제학적 조성물 (pharmaceutical composition)은 선택적으로 하나 이상의 추가적인 약제학적 활성 성분, 예를 들어, 다른 항체 또는 약물을 함유할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 또한 예를 들어, 다른 면역 자극제, 항암제, 항바이러스제 또는 백신과 조합한 용법으로 투여될 수 있고, 항-OX40과 같은 항체는 백신에 대한 면역 반응을 향상시킨다. 약제학적으로 허용되는 담체는, 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 액체, 겔 또는 고체 담체, 수성 매질, 비수성 매질, 항미생물제, 등장제, 완충제, 항산화제, 마취제, 현탁/분산제, 킬레이트제, 희석제, 보조제, 부형제 또는 무독성 보조 물질, 당해 기술분야에 알려진 기타 성분들의 조합을 포함한다.
적합한 성분 (Suitable components)은 예를 들어, 항산화제, 충전제, 결합제, 붕 해제, 완충제, 방부제, 윤활제, 향료, 증점제, 착색제, 유화제 또는 당 및 시클로덱스트린 (cyclodextrin)과 같은 안정제를 포함할 수 있다. 적합한 항산화제 (Suitable anti-oxidants)는 예를 들어, 메티오닌 (methionine), 아스코르브산 (ascorbic acid), EDTA, 티오 황산나트륨 (sodium thiosulfate), 백금 (platinum), 카탈라제 (catalase), 시트르산 (citric acid), 시스테인 (cysteine), 머캅토글리세롤 (mercapto glycerol), 티오글리콜산 (thioglycolic acid), 머캅토 소르비톨 (Mercapto sorbitol), 부틸 메틸 아니솔 (butyl methyl anisole), 부틸화 히드록시 톨루엔 (butylated hydroxy toluene) 및/또는 프로필갈락테 (propylgalacte)를 포함할 수 있다. 본 발명에 개시된 바와 같이, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 용매에서 조성물은 메티오닌과 같은 하나 이상의 항산화제를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 환원시킴으로써, 산화될 수 있다. 산화 환원은 결합 친화성의 감소를 방지하거나, 감소시켜 항체 안정성을 향상시키고 저장 수명을 연장할 수 있다. 따라서, 일부 실시예에서, 본 발명은 하나 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 하나 이상의 항산화제, 예를 들어, 메티오닌을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 메티오닌과 같은 하나 이상의 항산화제와 혼합되고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 산화되는 것을 방지하여, 유통 기한 연장 및/또는 활성 증가를 위한 다양한 방법을 제공한다.
추가로 예시하기 위해, 약제학적으로 허용되는 담체는, 예를 들어, 염화나트륨 주사, 링거 주사, 등장성 포도당 주사, 멸균 증류수 주사 또는 포도당 및 젖산 링거 주사와 같은 수성 비히클 (aqueous vehicles), 식물성 유, 면실 유, 옥수수 유, 참기름 또는 땅콩기름과 같은 비수성 비히클 (nonaqueous vehicles), 정균성 (bacteriostatic) 또는 진균성 (fungistatic) 농도 수준의 항균제 (antimicrobial agents), 염화나트륨 (sodium chloride) 또는 덱스트로스 (dextrose)와 같은 등장제 (isotonic agents), 인산염 (phosphate) 또는 구연산염 (citrate) 완충액과 같은 완충제 (buffers), 중 황산나트륨 (sodium bisulfate)과 같은 항산화제, 프로카인 염산염 (procaine hydrochloride)과 같은 국소 마취제, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨 (sodium carboxymethylcelluose), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (hydroxypropyl methylcellulose) 또는 폴리비닐피롤리돈 (polyvinylpyrrolidone)과 같은 현탁제 및 분산제, 폴리소르베이트 80 (Polysorbate 80) (TWEEN-80)과 같은 유화제, EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) 또는 EGTA (ethylene glycol tetraacetic acid)와 같은 격리제 또는 킬레이트제 (sequestering or chelating agents), 에틸 알코올 (ethyl alcohol), 폴리에틸렌 글리콜 (polyethylene glycol), 프로필렌 글리콜 (propylene glycol), 수산화 나트륨 (sodium hydroxide), 염산 (hydrochloric acid), 구연산 (citric acid) 또는 젖산 (lactic acid)을 포함할 수 있다. 담체로 사용되는 항균제는 페놀 또는 크레졸 (phenols or cresols), 수은 (mercurials), 벤질 알코올 (benzyl alcohol), 클로로부탄올 (chlorobutanol), 메틸 및 프로필 p-히드록시벤조산 에스테르 (methyl and propyl p-hydroxybenzoic acid esters), 티메로살 (thimerosal), 염화 벤잘코늄 (benzalkonium chloride) 및 염화 벤제토늄 (benzethonium chloride)을 포함하는 다회 복용 (multiple-dose) 용기에서 약제학적 조성물에 첨가될 수 있다. 적합한 부형제는, 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 또는 에탄올을 포함할 수 있다. 적합한 무독성 보조 물질은, 예를 들어, 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 안정제, 용해도 향상제 (solubility enhancers), 또는 아세트산 나트륨 (sodium acetate), 소르비탄 모노라우레이트 (sorbitan monolaurate), 트리에탄올아민 올레이트 (triethanolamine oleate) 또는 사이클로덱스트린 (cyclodextrin)과 같은 제제를 포함할 수 있다.
투여, 제형 및 투여량
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 (oral), 정맥 내 (intravenous), 동맥 내 (intra-arterial), 피하 (subcutaneous), 비경구 (parenteral), 비강 내 (intranasal), 근육 내 (intramuscular), 두개 내 (intracranial), 심장 내 (intracardiac), 심실 내 (intraventricular), 기관 내 (intratracheal), 구강 내 (buccal), 직장 내 (rectal), 복강 내 (intraperitoneal), 피 내 (intradermal), 국소 (topical), 경피 (transdermal) 및 척수강 내 (intrathecal), 또는 이식 (implantation) 또는 흡입 (inhalation)에 의해 투여될 수 있으나, 이에 한정되지 않고, 다양한 경로에 의해 필요로 하는 대상체의 생체 내에 투여될 수 있다. 대상 조성물은 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태의 제제로 제형화될 수 있으며; 제제는 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 관장제, 주사제, 흡입제 및 에어로졸을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 적절한 제형 및 투여 경로는 의도된 투여 용법에 따라 선택될 수 있다.
장내 투여에 적합한 제형은 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐, 알약, 코팅된 정제, 엘릭시르 (elixirs), 현탁액, 시럽 또는 흡입을 포함한 정제 및 이의 제어된 방출 제제를 포함한다.
비경구 투여 (예를 들어, 주사)에 적합한 제제로는, 수성 또는 비수성, 등장성, 발열원이 없는 멸균 액체 (예를 들어, 용액 및 현탁액), 활성 성분이 용해, 현탁 또는 다른 방식으로 제공되는 경우 (예: 리포솜 또는 기타 미세 입자)를 포함한다. 이러한 액체는 항산화제, 완충제, 방부제, 안정제, 정균제, 현탁제, 증점제 및 제제를 의도된 수용자의 혈액 (또는 기타 관련 체액)과 등장성으로 만드는 용질과 같은 다른 약제학적으로 허용되는 성분을 추가로 포함할 수 있다. 부형제는 예를 들어, 물, 알코올 (alcohols), 폴리올 (polyols), 글리세롤 (glycerol), 식물성 오일 (vegetable oils) 등을 포함한다. 이러한 제제에 사용하기에 적합한 등장성 담체는 예를 들어, 염화나트륨 주사, 링거 용액 또는 젖산 링거 주사를 포함한다. 유사하게, 투여 용량, 투여 시기 및 반복 투여를 포함하는 복용 방법은 특정 개인과 해당 개인의 병력뿐만 아니라 약동학 (예: 반감기, 청소율 등)과 같은 경험적 고려 사항에 따라 달라진다.
투여 빈도는 치료 과정 동안 결정되고, 증식성 또는 종양성 세포의 수 감소, 신생물성 세포의 감소 유지, 신생물성 세포의 증식 감소 또는 전이 발달 지연에 기초하여 조정될 수 있다. 일부 실시예에서, 투여 용량은 잠재적인 부작용 및/또는 독성을 관리하기 위해 조정되거나 낮아질 수 있다. 대안적으로, 대상 치료 조성물의 지속적인 연속 방출 제형이 적절할 수 있다.
적절한 투여 용량은 환자마다 다를 수 있음을 당해 기술분야의 통상의 기술자 이해할 것이다. 최적의 투여 용량을 결정하는 것은 일반적으로 위험 또는 유해한 부작용에 대한 치료적 이점 수준의 균형을 포함한다. 선택된 투여 용량의 수준은 특정 화합물의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 화합물의 배설 속도, 치료 기간 등을 포함하나, 이에 한정되지 않고, 병용하는 약물, 화합물 및/또는 물질, 상태의 중증도 (severity), 종 (species), 성별, 나이, 체중, 상태, 일반적인 건강 및 이전 병력과 같은 다양한 인자에 따라 달라질 것이다. 화합물의 투여 용량과 투여 경로는 궁극적으로 의사, 수의사 또는 임상의의 재량에 달려 있으나, 일반적으로 상당히 해롭거나 유해한 부작용을 주지 않으면서도 원하는 효과를 얻을 수 있을 정도의 국소 농도를 달성하는 투여 용량이 선택될 것이다.
일반적으로, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다양한 범위로 투여될 수 있다. 다양한 범위는 용량당 약 5 ug/kg 내지 약 100 mg/kg 체중; 용량당 약 50 ug/kg 내지 약 5 mg/kg 체중; 용량당 약 100 ug/kg 내지 약 10 mg/kg 체중을 포함한다. 다른 범위는 용량당 약 100 ug/kg 내지 약 20 mg/kg 체중 및 용량당 약 0.5 mg/kg 내지 약 20 mg/kg 체중을 포함한다. 특정 구체예에서, 투여 용량은 적어도 약 100 ug/kg 체중, 적어도 약 250 ug/kg 체중, 적어도 약 750 ug/kg 체중, 적어도 약 3 mg/kg 체중, 적어도 약 5 mg kg 체중, 적어도 약 10 mg/kg 체중이다.
어느 경우에서든, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이를 필요로 하는 대상체에게 필요에 따라 바람직하게 투여된다. 투여 빈도는 예를 들어, 치료할 상태, 치료할 대상의 연령, 치료할 상태의 중증도, 치료할 대상의 일반적인 건강 상태 등을 고려하여 주치의와 같은 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의하여 결정될 수 있다.
바람직한 특정예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 치료 과정은 수 주 또는 수 개월 동안 선택된 약물의 다회 복용 (multiple doses)을 포함할 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 매일, 2일, 4일, 매주, 10일, 2주, 3주, 매달, 6주, 2개월, 10주 또는 3개월 마다 1회 투여될 수 있다. 이와 관련하여, 투여 용량을 변경하거나 환자 반응 및 임상 경험에 따라 간격을 조정할 수 있음을 이해할 것이다.
투여 용량 및 투여 용법은 또한 하나 이상의 투여(들)를 받은 개인에 대하여 개시된 치료 조성물로부터 경험적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 개개인은 본 명세서에 기술된 바와 같이 생산된 치료 조성물의 증대된 용량을 제공받을 수 있다. 선택된 실시예에서, 투여 용량은 각각 경험적으로 결정되거나 관찰된 부작용 또는 독성에 기초하여 점진적으로 증가 또는 감소 또는 약화될 수 있다. 선택된 조성물의 효능을 평가하기 위해, 전술한 바와 같은 특정 질환, 장애 또는 상태의 마커를 따를 수 있다. 암의 경우에 이러한 마커는, 촉진 또는 육안 관찰을 통한 종양 크기의 직접 측정, 엑스레이 또는 기타 이미징 기술을 통한 종양 크기의 간접 측정; 직접 종양 생검 및 종양 샘플의 현미경 검사로 평가된 바와 같은 개선; 간접 종양 마커 (예를 들어, 전립선 암에 대한 PSA) 또는 본 명세서에 기재된 방법에 따라 확인된 종양원성 항원의 측정, 통증 또는 마비의 감소; 종양과 관련된 언어, 시력, 호흡 또는 기타 장애 개선; 식욕 증가; 또는 허용된 테스트 또는 생존 연장에 의해 측정된 삶의 질의 증가를 포함한다. 투여 용량은 개인, 신생물 상태 (neoplastic condition)의 유형, 신생물 상태의 단계, 신생물 상태가 개인의 다른 부위로 전이되기 시작했는지 여부, 과거 및 현재 동시 치료 중인지 여부에 따라 명백할 것이다.
비경구 투여 시 (예를 들어, 정맥 내 주사), 적합한 제형은 약 10 ug/ml 내지 약 100 mg/ml의 농도로 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 것이다. 특정 선택된 구체예에서, 항원 또는 이의 항원 결합 단편의 농도는 20 ug/ml, 40 ug/ml, 60 ug/ml, 80 ug/ml, 100 ug/ml, 200 ug/ml, 300, ug/ml, 400 ug/ml, 500 ug/ml, 600 ug/ml, 700 ug/ml, 800 ug/ml, 900 ug/ml 또는 1,000 mg/ml을 포함할 것이다. 다른 바람직한 구체예에서, ADC 농도는 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 8 mg/ml, 10 mg/ml, 12 mg/ml, 14 mg/ml, 16 mg/ml, 18 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 30 mg /ml, 35 mg /ml, 40 mg/ml, 45 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 70 mg/ml, 80 mg/ml, 90 mg/ml 또는 100 mg/ml을 포함할 수 있다.
발명의 적용
본 발명의 항체, 항체 조성물 및 방법은 예를 들어, OX40의 검출 또는 면역 반응의 향상을 포함하는 수많은 시험관내 (in vitro) 및 생체내 (in vivo) 유용성을 나타낸다. 예를 들어, 이 분자들은 다양한 상황에서 면역을 향상시키기 위하여, 배양 세포, 시험관내 또는 생체외, 또는 인간 대상체 (예를 들어, 생체 내)에 투여될 수 있다. 면역 반응은 예를 들어, 증강되거나 (augmented), 자극되거나 (stimulated) 또는 상향-조절 (up-regulated)을 통하여 조절될 수 있다.
바람직한 대상체는 면역 반응의 향상을 필요로 하는 인간 환자를 포함한다. 상기 방법은 면역 반응 (예를 들어, T-세포 매개 면역 반응)을 향상시킴으로써 치료할 수 있는 장애를 가진 인간 환자를 치료하는데 특히 적합하다. 특정 실시예에서, 상기 방법은 생체내 암 치료에 특히 적합하다. 항원-특이적 (antigen- specific) 면역 향상을 달성하기 위해, 항-OX40 항체는 관심 항원과 함께 투여되거나 항원이 치료될 대상체 (예를 들어, 종양-보유 또는 바이러스-보유 대상체)에 이미 존재할 수 있다. OX40에 대한 항체가 다른 약제와 함께 투여되는 경우, 이 둘은 순서대로 또는 동시에 투여될 수 있다.
본 발명은 샘플에서 인간 OX40 항원의 존재를 검출하거나, 또는 항체 또는 이의 단편과 인간 OX40 사이에 복합체 형성을 허용하는 조건 하에서, 인간 OX40에 특이적으로 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 샘플 및 대조 샘플을 접촉시키는 것을 포함하는 인간 OX40 항원의 양을 측정하는 방법을 추가적으로 제공한다. 이후 복합체의 형성이 검출되며, 대조군 샘플과 비교한 샘플 간 복합체 형성의 차이는 샘플에 인간 OX40 항원이 존재함을 가리킨다. 더욱이, 본 발명의 항-OX40 항체는 면역 친화성 정제 (immunoaffinity purification)를 통해 인간 OX40을 정제하는데 사용될 수 있다.
암을 포함한 장애 치료
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에서 개시하는 바와 같이, 치료를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 인간)에게 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 약제학적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 포유 동물의 장애 치료 방법을 제공한다. 예를 들어, 상기 장애는 암이다.
OX40이 관여하는 다양한 암은, 악성이든 양성이든, 원발성이든 이차성이든, 본 개시 내용에 의하여 제공된 방법으로 치료 또는 예방할 수 있다. 암은 고형암 (solid cancers) 또는 혈액 악성 종양 (hematologic malignancies)일 수 있다. 암은 기관지 암종 (bronchogenic carcinoma) (예를 들어, 편평세포 암종 (squamous cell carcinoma), 소세포암종 (small cell carcinoma), 대세포암종 (large cell carcinoma) 및 선암종 (adenocarcinoma)), 폐포세포 암종 (alveolar cell carcinoma), 기관지 선종 (bronchial adenoma), 연골성 과육종 (chondromatous hamartoma, 비암성) 및 육종 (sarcoma, 암성)과 같은 폐암; 점액종 (myxoma), 섬유종 (fibromas) 및 횡문근종 (rhabdomyomas)과 같은 심장암; 골 연골종 (osteochondromas), 콘드로마 (condromas), 연골 모세포종 (chondroblastomas), 연골점액성 섬유종 (chondromyxoid fibromas), 골질골종 (osteoid osteomas), 거대세포 종양 (giant cell tumors), 연골육종 (chondrosarcoma), 다발성 골수종 (multiple myeloma), 골육종 (osteosarcoma), 섬유육종 (fibrosarcomas), 악성 섬유조직 세포종 (malignant fibrous histiocytomas), 유윙 종양 (Ewing's tumor, 유잉 육종), 망상세포 육종 (reticulum cell sarcoma)과 같은 골암; 신경교종 (gliomas, 예: 다형성 교모세포종 (glioblastoma multiforme)), 역형성 성상세포종 (anaplastic astrocytomas), 성상세포종 (astrocytomas), 희소돌기아교종 (oligodendrogliomas), 수모세포종 (medulloblastomas), 척색종 (chordoma), 슈와노마스 (Schwannomas) 뇌수막종 (ependymomas), 수막종 (meningiomas), 뇌하수체 선종 (pituitary adenoma), 송과선종 (pinealoma), 골종 (osteomas), 혈관 모세포종 (hemangioblastomas), 두개인두종 (craniopharyngiomas), 척색종 (chordomas), 생식종 (germinomas), 기형종 (teratomas), 유피낭종 (dermoid cysts) 및 혈관종 (angiomas)과 같은 뇌암; 대장암 (colon cancer), 평활근종 (leiomyoma), 표피성 암종 (epidermoid carcinoma), 선암종 (adenocarcinoma), 평활근 육종 (leiomyosarcoma), 위 선암종 (stomach adenocarcinomas), 장 지방종 (intestinal lipomas), 장신경 섬유종 (intestinal neurofibromas), 장 섬유종 (intestinal fibromas), 대장 폴립 (polyps in large intestine) 및 결장 직장암 (colorectal cancers)과 같은 소화계암; 간세포 선종 (hepatocellular adenomas), 혈관종 (hemangioma), 간세포암종 (hepatocellular carcinoma), 섬유층 암종 (fibrolamellar carcinoma), 담관암종 (cholangiocarcinoma), 간 모세포종 (hepatoblastoma) 및 혈관 육종 (angiosarcoma)과 같은 간암; 신장 선암 (kidney adenocarcinoma), 신장세포 암종 (renal cell carcinoma), 과신종 (hypernephroma) 및 신장 골반의 이행세포 암종 (transitional cell carcinoma of the renal pelvis)과 같은 신장암; 방광암; 급성 림프구성 (림포 모세포) 백혈병 (acute lymphocytic (lymphoblastic) leukemia), 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid (myelocytic, myelogenous, myeloblasts, myelomonocytic) leukemia), 만성 림프구성 백혈병 (예: 세자리 증후군 및 모세포 백혈병) (chronic lymphocytic leukemia (e.g., Sezary syndrome and hairy cell leukemia)), 만성 골수성 백혈병 (chronic myelocytic (myeloid, myelogenous, granulocytic) leukemia)과 같은 혈액암 림프종, 호지킨 림프종 (Hodgkin's lymphoma), 비호지킨 림프종 (non-Hodgkin's lymphoma), B 세포 림프종 (B cell lymphoma), 균상식 육종 (mycosis fungoides) 및 골수 증식성 장애 (myeloproliferative disorders) (베라 적혈구 증가증 (polycythemia vera), 골수 섬유증 (myelofibrosis), 혈소판 증식증 (thrombocythemia) 및 만성 골수성 백혈병 (chronic myelocytic leukemia)과 같은 골수 증식성 장애 포함); 기저세포 암종 (basal cell carcinoma), 편평세포 암종 (squamous cell carcinoma), 흑색종 (melanoma), 카포시육종 (Kaposi's sarcoma) 및 파제트병 (Paget's disease)과 같은 피부암; 두경부암 (head and neck cancers); 망막 모세포종 (retinoblastoma) 및 안구내 흑색암종 (intraoccular melanocarcinoma)과 같은 눈 관련 암; 양성 전립선 비대증 (benign prostatic hyperplasia), 전립선암 (prostate cancer) 및 고환암 (testicular cancers) (예를 들어, 정액종 (seminoma), 기형종 (teratoma), 배아 암종 (embryonal carcinoma) 및 융모막암종 (choriocarcinoma))과 같은 남성 생식계암; 유방암; 자궁암 (자궁내암) (cancer (endometrial carcinoma)), 자궁 경부암 (cervical cancer (cervical carcinoma)), 난소암 (cancer of the ovaries (ovarian carcinoma)), 외음부암 (vulvar carcinoma), 질암 (vaginal carcinoma), 나팔관암 (fallopian tube cancer), 포상기태 (hydatidiform mole)와 같은 여성 생식계암; 갑상선암 (유두암 (papillary), 여포암 (follicular), 역형성암 (anaplastic) 또는 수질암 (medullary cancer) 포함); 갈색 세포종 (부신) (pheochromocytomas (adrenal gland)); 부갑상선의 비암성 성장 (noncancerous growths of the parathyroid glands); 췌장암 (pancreatic cancers); 및 백혈병 (leukemias), 골수종 (myelomas), 비호지킨 림프종 (non-Hodgkin's lymphomas) 및 호지킨 림프종 (Hodgkin's lymphoma)과 같은 혈액암을 포함한다. 일 구체예에서, 암은 대장암이다.
일부 실시예에서, 암은 예를 들어, B-세포 림프종 (저등급/여포성 비호지킨 림프종 (NHL) 포함) (B-cell lymphoma (including low grade/follicular non-Hodgkin’s lymphoma (NHL)); 소림프구성 (small lymphocytic, SL) NHL; 중등급/난포성 NHL (intermediate grade/follicular NHL); 중등급 미만성 NHL (intermediate grade diffuse NHL); 고등급 면역 모세포 NHL (high grade immunoblastic NHL), 고등급 림프모구 NHL (high grade lymphoblastic NHL), 고등급 소형 비절단 세포 NHL (high grade small non-cleaved cell NHL), 벌키 병 NHL (bulky disease NHL), 맨틀세포 림프종 (mantle cell lymphoma), AIDS 관련 림프종 (AIDS-related lymphoma), 발덴스트롬 마크로 글로불린혈증 (Waldenstrom’s Macroglobulinemia), 만성 림프구성 백혈병 (chronic lymphocytic leukemia, CLL), 급성 림프아구성 백혈병 (acute lymphoblastic leukemia, ALL), 털세포 백혈병 (Hairy cell leukemia), 만성 골수 모세포성 백혈병 (chronic myeloblastic leukemia) 및 이식 후 림프절 제장애 (post-transplant lymphoproliierative disorder, PTLD), 뿐만 아니라 파코마토스 (phakomatoses), 부종 (edema) (예: 뇌종양과 관련된 것), B 세포 증식 장애 (B-cell proliferative disorders) 및 메이그 증후군 (Meigs’ syndrome)과 관련된 비정상적인 혈관 증식을 포함한다. 보다 구체적으로 암은 예를 들어, 재발성 또는 불응성 NHL (relapsed or refractory NHL), 프론트 저등급 NHL (front line low grade NHL), III/ IV기 NHL (Stage III/IV NHL), 화학요법 내성 NHL (chemotherapy resistant NHL), 전구체 B 림프구성 백혈병 및/또는 림프종 (precursor B lymphoblastic leukemia and/or lymphoma), 소림프구성 림프종 (small lymphocytic lymphoma), B세포 만성 림프구성 백혈병 (B-cell chronic lymphocytic leukemia) 및/또는 전림프구성 백혈병 (prolymphocytic leukemia) 및/또는 소림프구성 림프종 (small lymphocytic lymphoma), B세포 전림프구성 림프종 (B-cell prolymphocytic lymphoma), 면역 세포종 (immunocytoma) 및/또는 림프형질세포성 림프종 (lymphoplasmacytic lymphoma), 림프형질세포성 림프종 (lymphoplasmacytic lymphoma), 변연부 B 세포 림프종 (marginal zone B-cell lymphoma), 비장 변연부 림프종 (splenic marginal zone lymphoma), 결절외 변연부-MALT 림프종 (extranodal marginal zone-MALT lymphoma), 결절 변연부 림프종 (nodal marginal zone lymphoma), 털세포 백혈병 (hairy cell leukemia), 형질세포종 (plasmacytoma) 및/또는 형질세포 골수종 (plasma cell myeloma), 저등급/여포성 림프종 (low grade/follicular lymphoma), 중등급/여포성 NHL (intermediate grade/follicular NHL), 맨틀세포 림프종 (mantle cell lymphoma), 여포중심 림프종 (여포) (follicle center lymphoma (follicular)), 중등급 미만성 NHL (intermediate grade diffuse NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종 (diffuse large B-cell lymphoma), 공격적인 NHL (aggressive NHL) (공격적인 프론트 NHL (aggressive front-line NHL) 및 공격적인 재발된 NHL (aggressive relapsed NHL) 포함), 자가 줄기세포 이식 후 NHL 재발 또는 불응성 (NHL relapsing after or refractory), 원발성 가슴세로칸 큰 B세포 림프종 (primary mediastinal large B-cell lymphoma), 원발 삼출성 림프종 (primary effusion lymphoma), 고등급 면역모세포 NHL (high grade immunoblastic NHL), 고등급 림프 모세포 NHL (high grade lymphoblastic NHL), 고등급 소형 비절단세포 NHL (high grade small non-cleaved cell NHL), 벌키 병 NHL (bulky disease NHL), 버킷 림프종 (Burkitt’s lymphoma), 전구체(말초) 거대과립 림프구성 백혈병 (precursor (peripheral) large granular lymphocytic leukemia), 균상식 육종 (mycosis fungoides) 및/또는 세자리 증후군 (Sezary syndrome), 피부(피부) 림프종 (skin (cutaneous) lymphomas), 역형성 대세포 림프종 (anaplastic large cell lymphoma) 및 혈관 중심 림프종 (angiocentric lymphoma)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
일부 실시예에서, 암은 예를 들어, B 세포 증식성 장애 (B-cell proliferative disorders), 림프종 (lymphomas, 예: B세포 비호지킨 림프종 (NHL) (B-Cell Non- Hodgkin’s lymphomas (NHL))) 및 림프구성 백혈병 (lymphocytic leukemias)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 림프종 및 림프구성 백혈병은 예를 들어, a) 여포성 림프종 (follicular lymphomas), b) 작은 비절단세포 림프종/버킷 림프종 (Small Non-Cleaved Cell Lymphomas/Burkitt’s lymphoma) (풍토성 버킷 림프종 (endemic Burkitt’s lymphoma), 산발성 버킷 림프종 (sporadic Burkitt’s lymphoma) 및 비버킷 림프종 (Non-Burkitt’s lymphoma) 포함), c) 변연부 림프종 (marginal zone lymphomas) (결절외 변연부 B세포 림프종 (extranodal marginal zone B-cell lymphoma) 포함 (Mucosa 관련 림프 조직 림프종 (Mucosa-associated lymphatic tissue lymphomas, MALT)), 결절 변연부 B 세포 림프종 (nodal marginal zone B-cell lymphoma) 및 비장 변연부 림프종 (splenic marginal zone lymphoma)), d) 맨틀세포 림프종 (Mantle cell lymphoma, MCL), e) 대세포 림프종 (Large Cell Lymphoma) (B세포 미만성 림프종 (B-cell diffuse large cell lymphoma, DLCL), 미만성 혼합세포 림프종 (Diffuse Mixed Cell Lymphoma), 면역 모세포 림프종 (Immunoblastic Lymphoma), 원발성 가슴세로칸 B 세포 림프종 (Primary Mediastinal B-Cell Lymphoma), 혈관 중심 림프종-폐 B 세포 림프종 (Angiocentric Lymphoma- Pulmonary B-Cell Lymphoma) 포함)), f) 털세포 백혈병 (hairy cell leukemia), g) 림프구성 림프종 (lymphocytic lymphoma), 왈덴스트롬 거대 글로불린혈증 (Waldenstrom’s macroglobulinemia), h) 급성 림프구성 백혈병 (acute lymphocytic leukemia, ALL), 만성 림프구성 백혈병 (chronic lymphocytic leukemia, CLL)/소림프구성 림프종 (small lymphocytic lymphoma, SLL), B세포 전림프구성 백혈병 (B cell prolymphocytic leukemia), i) 형질세포 신생물 (plasma cell neoplasms), 형질세포 골수종 (plasma cell myeloma), 다발성 골수종 (multiple myeloma), 형질세포종 (plasmacytoma), 및/또는 j) 호지킨병 (Hodgkin’s disease)을 포함한다.
일부 다른 실시예에서, 장애는 자가 면역 질환 (autoimmune disease)이다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 치료할 수 있는 자가 면역 질환은 예를 들어, 자가 면역 뇌척수염 (autoimmune encephalomyelitis), 홍반성 루푸스 (lupus erythematosus) 및 류마티스 관절염 (rheumatoid arthritis)을 포함할 수 있다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한, 감염성 질환, 염증성 질환 (예: 알레르기성 천식) 및 만성 이식편대 숙주 질환 (graft-versus-host disease)을 치료 또는 예방하는 데 사용될 수 있다.
면역 반응의 자극
일부 측면에서, 본 발명은 또한, 대상체에서 면역 반응이 강화되도록 대상체에게 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함하는 대상체의 면역 반응 강화 (예를 들어, 자극) 방법을 제공한다. 예를 들어, 대상체는 포유 동물이다. 일 구체예에서, 대상체는 인간이다.
용어 "면역 반응 향상" 또는 그 문법적 변형은 포유 동물의 면역 체계의 반응을 자극, 유발, 증가, 개선 또는 증대시키는 것을 의미한다. 면역 반응은 세포 반응 (즉, 세포 독성 T 림프구 매개와 같은 세포 매개) 또는 체액 반응 (즉, 항체 매개 반응)일 수 있으며, 1차 또는 2차 면역 반응일 수 있다. 면역 반응의 향상은 예를 들어, 증가된 CD4+ 도움 T 세포 활성 및 세포 용해성 T 세포 생성, 세포 독성 T 림프구 분석, 사이토카인 방출 (예: IL-2 생산 또는 IFN-γ 생산), 종양 퇴행, 종양 보유 동물의 생존, 항체 생산, 면역 세포 증식, 세포 표면 마커의 발현 및 세포 독성과 같이 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 잘 알려진 시험관내 또는 생체내 측정을 이용하여 평가될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 전형적으로, 본 발명에서 개시하는 방법은 본 발명에 개시된 방법을 사용하여 치료되지 않은 포유 동물 면역 반응과 비교할 때, 포유 동물의 면역 반응을 향상시킨다. 일 실시예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 미생물 병원체 (예: 바이러스)에 대한 인간의 면역 반응을 향상시키기 위하여 사용된다. 다른 실시예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 백신에 대한 인간의 면역 반응을 향상시키기 위해 사용된다. 일 실시예에서, 방법은 세포 면역 반응, 특히 세포 독성 T 세포 반응을 향상시킨다. 다른 실시예에서, 세포 면역 반응은 T 도움 세포 반응이다. 또 다른 실시예에서, 면역 반응은 사이토카인의 생산, 특히 IFN-γ 또는 IL-2의 생산이다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 미생물 병원체 (바이러스와 같은) 또는 백신에 대한 인간의 면역 반응을 향상시키는 데 사용될 수 있다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단독 요법으로서 단독으로 사용하거나, 병용 요법으로서 화학 요법 또는 방사선 요법과 병용하여 사용될 수 있다.
화학 요법과의 병용
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항암제, 세포독성제 또는 화학 요법제와 조합하여 사용될 수 있다.
용어 "항암제 (anti-cancer agent)" 또는 "항증식제 (anti-proliferative agent)"는 암과 같은 세포 증식성 장애를 치료하는 데 사용될 수 있는 임의의 제제를 의미하며, 세포 독성제 (cytotoxic agents), 세포 증식 억제제 (cytostatic agents), 항혈관신생제 (nti-angiogenic agents), 부피 감소제 (debulking agents), 화학 요법제 (chemotherapeutic agents), 방사선 요법 및 방사선 치료제 (radiotherapy and radiotherapeutic agents), 표적 항암제 (targeted anti-cancer agents), BRMs, 치료용 항체 (therapeutic antibodies), 암 백신 (cancer vaccines), 사이토카인 (cytokines), 호르몬 요법 (hormone therapies), 방사선 요법 (radiation therapy) 및 항전이제 (anti-metastatic agents) 및 면역 치료제 (immunotherapeutic agents)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 전술한 바와 같이 선택된 실시예에서, 이러한 항암제는 접합체 (conjugates)를 포함할 수 있고, 투여에 앞서 개시된 부위-특이적 항체 (site-specific antibodies)와 연관될 수 있음을 이해할 것이다. 보다 구체적으로, 특정 실시예에서 선택된 항암제는 본 명세서에 제시된 조작된 접합체 (engineered conjugates)를 제공하기 위하여 조작된 항체 (engineered antibodies)의 짝을 이루지 않은 시스테인 (unpaired cysteines)에 연결될 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "세포 독성제 (cytotoxic agent)"는 세포에 대한 독성을 나타내고 세포의 기능을 감소 또는 억제하거나 세포의 파괴를 유발하는 물질을 의미한다. 특정 실시예에서, 물질은 살아있는 유기체로부터 유래된 자연 발생 분자이다. 세포 독성제는 예를 들어, 박테리아의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소 (예를 들어, 디프테리아 독소 (Diptheria toxin), 슈도모나스 내독소 및 외독소 (Pseudomonas endotoxin and exotoxin), 포도상 구균 장 독소 A (Staphylococcal enterotoxin A)), 진균 (예를 들어, α-사르신 (α-sarcin), 리스트릭토신 (restrictocin)), 식물 (예를 들어, 아브린 (abrin), 리신 (ricin), 모데신 (modeccin), 비스큐민 (viscumin), 포케위드 항-바이러스 단백질 (pokeweed anti-viral protein), 사포린 (saporin), 젤로닌 (gelonin), 모모리딘 (momoridin), 트리코산틴 (trichosanthin), 발리 독소 (barley toxin), 알루라이트 포디 단백질 (Aleurites fordii proteins), 디안틴 단백질 (dianthin proteins), 피토라카 메리카나 단백질 (Phytolacca mericana proteins, PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모디카 카란티아 (Momordica charantia) 억제제, 커신 (curcin), 크로틴 (crotin), 사포나리아 오피시날리스 (saponaria officinalis) 억제제, 젤로닌 (gelonin), 미테겔린 (mitegellin), 리스트릭토신 (restrictocin), 페노마이신 (phenomycin), 네오마이신 (neomycin) 및 트리코테센 (tricothecenes)) 또는 동물 (예를 들어, 세포외 췌장 RNase와 같은 세포 독성 RNase; DNase I, 이의 단편 및/또는 변이체 포함)을 포함한다.
본 발명의 목적을 위해 "화학 요법제 (chemotherapeutic agent)"는 암 세포의 성장, 증식 및/또는 생존을 비특이적으로 감소시키거나 억제하는 화학적 화합물 (예를 들어, 세포 독성제 또는 세포 증식 억제제)을 포함한다. 이러한 화학 작용제는 종종 세포 성장 또는 분열에 필요한 세포내 과정을 지시하므로 일반적으로 빠르게 성장하고 분열하는 암 세포에 특히 효과적이다. 예를 들어, 빈크리스틴 (vincristine)은 미세 소관 (microtubules)을 분해하여 세포가 유사 분열 (mitosis)에 진입하는 것을 억제합니다. 일반적으로, 화학 요법제는 암성 세포, 암이 될 가능성이 있는 세포 또는 종양성 자손 (tumorigenic progeny, 예를 들어, TIC)을 생성할 가능성이 있는 세포를 억제하거나 억제하도록 설계된 임의의 화학 작용제를 포함할 수 있다. 이러한 제제는 자주 투여되며, 예를 들어, CHOP 또는 FOLFIRI와 같은 요법에서 조합으로 투여시 가장 효과적이다.
본 발명의 부위-특이적 구축물 (site-specific constructs) (부위 특이적 접합체의 성분으로서 또는 비접합 상태로서)과 조합하여 사용될 수 있는 항암제는 예를 들어, 알킬화제 (alkylating agents), 알킬 설포네이트 (alkyl sulfonates), 아지리딘 (aziridines), 에틸렌이민 (ethylenimines) 및 메틸라멜아민 (methylamelamines), 아세토게닌 (acetogenins), 캄프토테신 (camptothecin), 브리오스타틴 (bryostatin), 칼리스타틴 (callystatin), CC-1065, 크립토피신 (cryptophycins), 돌라스타틴 (dolastatin), 듀오카마이신 (duocarmycin), 엘레우테로빈 (eleutherobin), 판크라티스타틴 (pancratistatin), 사르코딕티인 (sarcodictyin), 스폰지스타틴 (spongistatin), 질소 머스타드 (nitrogen mustards), 항생제 (antibiotics), 엔디인 항생제 (enediyne antibiotics), 다이네마이신 (dynemicin), 비스포스포네이트 (bisphosphonates), 에스페라마이신 (esperamicin), 색소 단백질 엔디인 항생 발색단 (chromoprotein enediyne antiobiotic chromophores), 아클라시노마이신 (aclacinomysins), 악티노마이신 (actinomycin), 오쓰라마이신 (authramycin), 아자세린 (azaserine), 블레오마이신 (bleomycins), 캣타이노마이신 (cactinomycin), 카라비신 (carabicin), 카르미노마이신 (carminomycin), 카르지노필린 (carzinophilin), 크로모마이시니스 (chromomycinis), 닥 티노마이신 (dactinomycin), 다우노루비신 (daunorubicin), 데토루비신 (detorubicin), 6-디아조-5-옥소-L-노르류신 (6-diazo-5-oxo-L-norleucine,), ADRIAMYCIN® 독소루비신 (doxorubicin), 에피루비신 (epirubicin), 에소루비신 (esorubicin), 이다루비신 (idarubicin), 마르셀로마이신 (marcellomycin), 마이토마이신 (mitomycins), 마이코페놀 산 (mycophenolic acid), 노갈라마이신 (nogalamycin), 올리보마이신 (olivomycins), 페플로마이신 (peplomycin), 포트피로마이신 (potfiromycin), 푸로마이신 (puromycin), 켈라마이신 (quelamycin), 로도루비신 (rodorubicin), 스트렙토니그린 (streptonigrin), 스트렙토조신 (streptozocin), 투베르시딘 (tubercidin), 우베니멕스 (ubenimex), 지노스타틴 (zinostatin), 조루비신 (zorubicin); 항대사 산물 (anti-metabolites), 엘로티닙 (erlotinib), 베무라페닙 (vemurafenib), 크리조티닙 (crizotinib), 소라페닙 (sorafenib), 이브루티닙 (ibrutinib), 엔잘루타마이드 (enzalutamide), 엽산 유사체 (folic acid analogues), 퓨린 유사체 (purine analogs), 안드로겐 (androgens), 항부신제 (anti-adrenals), PSK® 다당류 복합체 (JHS Natural Products, Eugene, OR), 라조산 (razoxane); 리족신 (rhizoxin); 시조피란 (sizofiran); 스피로저마늄 (spirogermanium); 테누아존산 (tenuazonic acid); 트리아지쿠온 (triaziquone); 2,2',2"-트리클로로 트리에틸아민 (2,2',2"-trichlorotriethylamine), 트리코테센 (trichothecenes) (특히 T-2독소, 베라쿠린 A (verracurin A), 로리딘 A (roridin A) 및 안구이딘 (anguidine)); 우레탄 (urethan); 빈데신 (vindesine); 다카르바진 (dacarbazine); 마노무스틴 (mannomustine); 마이토브로니톨 (mitobronitol); 미톨락톨 (mitolactol); 피포브로만 (pipobroman); 가시토신 (gacytosine); 아라비노사이드 (arabinoside) ("Ara-C"); 시클로포스파미드 (cyclophosphamide); 티오테파 (thiotepa); 텍소이드, 클로란부실 (taxoids, chloranbucil); GEMZAR® 젬시타빈 (gemcitabine); 6-티오구아닌 (6-thioguanine); 머캅토퓨린 (mercaptopurine); 메토트렉세이트 (methotrexate); 백금 유사체, 빈블라스틴 (platinum analogs, vinblastine); 백금 (platinum); 에토포사이드 (etoposide) (VP-16); 이포스파미드 (ifosfamide); 미톡산트론 (mitoxantrone); 빈크리스틴 (vincristine); NAVELBINE® 비노렐빈 (vinorelbine); 노반트론 (novantrone); 테니포사이드 (teniposide); 에다트렉세이트 (edatrexate); 다우노마이신 (daunomycin); 아미노프테린 (aminopterin); 젤로다 (xeloda); 이반드로네이트 (ibandronate); 이리노테칸 (irinotecan) (캄프토사르 (Camptosar), CPT-11), 토포이소머라제 억제제 (topoisomerase inhibitor) RFS 2000; 디플루오로메틸로니틴 (difluorometlhylornithine); 레티노이드 (retinoids); 카페시타빈 (capecitabine); 콤브레타스타틴 (combretastatin); 류코보린 (leucovorin); 옥살리플라틴 (oxaliplatin); 세포 증식을 감소시키는 PKC-알파, Raf, H-Ras, EGFR 및 VEGF-A의 억제제 및 상기한 항암제 중 임의의 것과 약제학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
방사선 요법과의 병용
본 발명은 또한, 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 방사선 요법 (즉, 감마선 조사, X 선, UV 조사, 마이크로파, 전자 배출 등과 같이 종양 세포 내에서 국소적으로 DNA 손상을 유도하는 모든 메커니즘을 포함)의 조합을 제공한다. 종양 세포에 방사성 동위 원소를 직접 전달하는 조합 요법이 또한 고려되며, 개시된 접합체는 표적화된 항암제 또는 다른 표적화 수단과 함께 사용될 수 있다. 전형적으로, 방사선 요법은 약 1 내지 2주 동안의 주기로 수행된다. 방사선 요법은 약 6 내지 7주 동안 두경부암 환자에게 수행될 수 있다. 선택적으로, 방사선 요법은 단일, 다중, 연속적 횟수로 수행될 수 있다.
진단
본 발명은 시험관내 및 생체내 증식성 장애 (proliferative disorders)를 감지, 진단 또는 모니터링하는 방법 및 종양 형성 세포 (tumorigenic cells)를 포함하는 종양 세포 (tumor cells)를 확인하기 위해 환자의 세포를 스크리닝하는 방법을 제공한다. 이와 같은 방법은 환자 또는 환자로부터 얻은 샘플 (생체내 또는 시험관내)을 본 명세서에 기재된 항체와 접촉시키는 것; 암의 치료 또는 진행을 모니터링하기 위해 암에 걸린 개인을 식별하는 것; 및 샘플에서 결합된 또는 유리된 표적 분자에 대한 항체의 존재 또는 부재, 또는 결합 수준을 검출하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 본원에 기재된 바와 같은 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자를 포함할 것이다.
일부 실시예에서, 항체와 샘플내 특정 세포의 군집 (association)은 샘플이 종양 형성 세포 (tumorigenic cells)를 포함하고 있음을 표시할 수 있으며, 이에 따라, 암을 가진 개체가 본 명세서에 기재된 항체로 효과적으로 치료될 수 있음을 가리킬 수 있다.
샘플은 예를 들어, 방사선 면역 분석 (radioimmunoassays), 효소면역 분석 (enzyme immunoassays, 예: ELISA), 경쟁 결합 분석 (competitive-binding assays), 형광 면역 분석 (fluorescent immunoassays), 면역 블롯 분석 (immunoblot assays), 웨스턴 블롯 분석 (Western Blot analysis) 및 유세포 분석 (flow cytometry assays)과 같이 다양한 분석 방법을 이용하여 분석될 수 있다. 호환 가능한 생체내 치료 또는 진단 분석 방법은 예를 들어, 자기 공명 영상 (magnetic resonance imaging), 컴퓨터 단층 촬영 (computerized tomography, 예: CAT 스캔), 양전자 단층 촬영 (positron tomography, 예: PET 스캔), 방사선 촬영 (radiography), 초음파 (ultrasound) 등과 같이, 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 영상 또는 모니터링 기술을 포함한다.
약제학적 팩 및 키트
1회 이상의 용량의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 하나 이상의 용기를 포함하는 약제학적 팩 및 키트가 또한 제공된다. 특정 실시예에서, 단위 투여 용량 (unit dosage)이 제공되며, 단위 투여 용량은 예를 들어, 미리 결정된 양의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 조성물을 함유하고, 1종 이상의 추가 작용제가 포함되거나 포함되지 않을 수 있다. 다른 실시예에서, 이러한 단위 투여 용량은 주사를 위한 일회용 사전 충전 주사기로 공급된다. 또 다른 실시예에서, 단위 투여 용량에 함유된 조성물은 식염수 (saline), 수크로스 (sucrose) 등을 포함할 수 있고; 인산염 (phosphate) 등과 같은 완충액; 및/또는 안정하고 효과적인 pH 범위 내에서 제제화된다. 대안적으로, 특정 실시예에서, 접합체 조성물 (conjugate composition)은 적절한 액체, 예를 들어, 멸균수 (sterile water) 또는 식염수 (saline solution)의 첨가를 통하여 재구성될 수 있는 동결 건조 분말 (lyophilized powder)로서 제공될 수 있다. 특정 바람직한 실시예에서, 조성물은 단백질 응집을 억제하는 1종 이상의 물질을 포함하고, 수크로스 및 아르기닌을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 용기(들)와 관련된 모든 라벨은, 동봉된 접합체 조성물 (conjugate composition)이 선택된 조건의 신생물 질환 (neoplastic disease)을 치료하기 위해 이용됨을 표시한다.
본 발명은 또한, 부위-특이적 접합체 및 임의로 1종 이상의 항암제의 단일 용량 또는 다회 투여 용량의 생산을 위한 키트를 제공한다. 키트는 용기, 및 패키지 삽입물 또는 용기와 관련된 라벨을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어, 병, 바이알 (vials), 주사기 등이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있으며, 접합 또는 비접합 형태로 접합체를 약제학적 유효량만큼 포함할 수 있다. 다른 바람직한 실시예에서, 용기(들)는 멸균 접근 포트를 포함한다 (예를 들어, 용기는 정맥내 용액 주머니 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 바이알일 수 있음). 이와 같은 키트는 일반적으로 적합한 용기에 조작된 접합체를 약제학적으로 허용되는 제형을 포함하고, 선택적으로, 1종 이상의 항암제를 동일하거나 상이한 용기에 포함할 것이다. 키트는 또한, 진단 또는 병용 요법을 위하여 약제학적으로 허용되는 다른 제형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대하여 추가적으로, 키트는 화학 요법 또는 방사선 치료 약물과 같은 임의의 1종 이상의 항암제; 항혈관 신생제 (anti-angiogenic agents); 항전이제 (anti-metastatic agents); 표적 항암제 (targeted anti-cancer agents); 세포 독성제 (cytotoxic agents); 및/또는 다른 항암제 (anti-cancer agents)를 포함할 수 있다.
보다 구체적으로, 키트는 추가 성분의 포함 유무와 관계없이, 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 단일 용기를 가질 수 있고, 각각의 원하는 작용제를 위한 별개의 용기를 포함할 수 있다. 접합 (conjugation)을 위해 조합된 치료제가 제공되는 경우, 단일 용액은 몰 등가 조합 (molar equivalent combination) 또는 다른 성분을 초과하는 하나의 성분과 미리 혼합될 수 있다. 대안적으로, 키트의 접합체 및 모든 임의의 항암제는 환자에게 투여하기 전 별개의 용기 내에서 별도로 유지될 수 있다. 키트는 또한, 멸균된 약제학적으로 허용되는 완충액 또는 기타 희석제, 예를 들어, 주사용 정균수 (bacteriostatic water for injection, BWFI), 인산염 완충 식염수 (phosphate-buffered saline, PBS), 링거 용액 (Ringer's solution) 및 덱스트로스 용액 (dextrose solution)을 함유하기 위한 두 번째/세 번째 용기를 포함할 수 있다.
키트의 성분이 하나 이상의 액체 용액으로 제공되는 경우, 액체 용액은 바람직하게는 수용액이고, 더욱 바람직하게는 멸균된 수성 (sterile aqueous) 또는 식염수 용액 (saline solution)이다. 그러나, 키트의 구성 요소는 건조 분말(들)로 제공될 수 있다. 시약 또는 구성 요소가 건조 분말로 제공되는 경우, 적절한 용매를 추가하여 분말을 재구성할 수 있다. 용매는 다른 용기에 제공될 수도 있다.
위에 간략히 기술한 바와 같이, 키트는 또한, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 모든 임의의 성분을 환자에게 투여하는 수단, 예를 들어, 하나 이상의 바늘, I.V. 주머니 또는 주사기, 또는 점안기 (eye dropper), 피펫 (pipette) 또는 기타 유사한 기구를 이용하여, 제제가 동물에게 주사 또는 도입되거나 질환 부위에 적용될 수 있다. 본 발명의 키트는 또한 일반적으로, 바이알을 담는 수단, 또는 예를 들어, 원하는 바이알 및 기타 장치가 배치되고 유지되는 블로우 몰드 플라스틱 용기 (blow-molded plastic containers)와 같이 상업적 판매를 위한 밀폐된 기타 구성 요소를 포함할 것이다.
시퀀스 목록 요약
본 출원서에 첨부된 것은 다수의 핵산 및 아미노산 서열을 포함하는 서열 목록이다. 하기 표 16, 17 및 18은 서열목록의 요약을 제공한다.
완전 인간 항-OX40 모노클로날 항체인 본 명세서에 개시된 6개의 예시적인 항체는 "1.62.3-u1-IgG1K", "1.62.3-u1-3-IgG1K", "1.7.10-u1", IgG1K”,“1.134.9-u1-IgG1L”, “1.186.19-u1-IgG1K” 및 “1.214.23-u1-IgG1K”로 각각 명명된다.
따라서, 일반적으로 기재된 본 발명은 하기 실시예를 참조하여 보다 용이하게 이해될 것이며, 이는 예시로서 제공되는 것이지 본 발명을 제한하려는 의도는 아니다. 실시예는 하기 실험이 모두 또는 유일한 수행된 실험임을 나타내기 위한 것은 아니다.
실시예 1. 재료 준비
1.1 면역원 생성
OX40 단백질 (GenBank ref CAB96543.1)의 세포 외 도메인 (extracellular domain, ECD)을 암호화하는 cDNA는 상곤 바이오테크 (Sangon biotech)에 의해 합성되었고 변형된 발현 벡터 pcDNA3.3 (ThermoFisher)에 삽입되었다. 플라스미드 DNA를 맥스-프렙 (Max-prep)하고 상기 삽입된 DNA 서열은 시퀀싱으로 확인되었다. 인간 Fc 또는 His 태그와 접합된 융합 단백질 OX40 ECD는 인간 OX40 ECD 유전자를 프리스타일 293F (ThermoFisher) 또는 Expo-293F 세포 (ThermoFisher)로 형질전환 하여 수득 되었다. 5일 후, 일시적 형질 감염된 세포의 배양물로부터 상청액을 수확하였다. 상기 융합 단백질은 면역화 및 스크리닝의 사용을 위해 정제되고 정량화 되었다.
1.2 벤치마크 항체의 생산
4개의 벤치마크 (benchmark) 항체, 즉, BMK1, BMK5, BMK7 및 BMK10이 실시예에서 양성 대조군으로 적용되었다. BMK1은 미국 특허 US8236930B2 (Pfizer)로부터 11D4의 클론에 따라 합성되었다. BMK5는 미국 특허 출원 번호 US20140308276 (University of Texas System)로부터 106-22 클론에 따라 합성되었다. BMK7은 PCT 공개 번호 WO2016057667 (MedImmune)로부터 OX40mAb24의 클론에 따라 합성되었다. BMK10은 PCT 공개 번호 WO2015153513 (Genentech)로부터 1A7.gr1의 클론에 따라 합성되었다.
1.3 안정된 세포주 확립
항체 스크리닝 및 검증 도구를 얻기 위해 OX40 감염체 세포주를 생성하였다. 간단히 말해서, CHO-K1 또는 293F 세포는 제조업체의 프로토콜에 따라 리포펙타민 2000 (Lipofectamine 2000) 또는 플라스펙트 (PlasFect)형질 감염 키트를 사용하여 전장 OX40을 포함하는 변형된 발현 벡터 pcDNA3.3으로 형질 감염되었다. 형질 감염 후 48 내지 72 시간에, 형질 감염된 세포는 선별을 위해 블라스티시딘 (Blasticidin)을 함유하는 배지에서 배양되었다. 시간이 지남에 따라 게놈 DNA에 안정적으로 통합된 발현 플라스미드를 가진 세포가 선택되었다. 한편 세포는 OX40 발현에 대해 확인되었다. 일단 발현이 확인되면, 관련이 있는 모노클로날 클론은 제한된 희석에 의해 선택되고 대량으로 확장되었다. 상기 확립된 모노클로날 클론 세포주는 블라스티시딘을 포함하는 배지에서 유지되었다.
실시예 2. 항체 하이브리도마 생성
2.1 면역화 및 세포 융합
OX40에 대한 완전한 인간 모노클로날 항체는 인간 특형을 가진 기능성 면역 글로불린의 최적 생산에 유용한 키메라 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 OMT 래트 (rat)를 사용하여 제조되었다. PCT 공개 WO 2014/093908에 기재된 바와 같이 래트 균주는 인간 중쇄 및 경쇄 이식 유전자를 운반한다. OX40에 대한 완전한 인간 모노클로날 항체를 생성하기 위해, 6 내지 8주령의 OMT 쥐는 발바닥에 인산 -알루미늄 (Alum-Phos)에 포함된 20 ug의 인간 OX40 ECD 단백질로 면역화 하였고 첫번째 부스트 (boost)를 위해서 타이터맥스 (TiterMax)에서 피하로 20 ug의 인간 OX40 ECD 단백질을 면역화 하였고, 면역화는 인산-알루미늄 및 타이터맥스에서 인간 OX40 ECD 단백질로 2주마다 반복하였다. 혈청 항체 역가는 1 주 또는 2 주마다 ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)로 측정되었다. 혈청 항체 역가가 충분히 높을 때, 래트는 아쥬반트 (adjuvant)없이 DPBS에서 40 ug의 인간 OX40 ECD 단백질로 최종 부스트를 받았다. 세포 융합은 다음과 같이 수행되었다: 골수종 세포 SP2/0을 준비하고, 골수종 세포를 융합 전 주에 해동하고, 그리고 세포를 대수 성장기에 유지하기 위해 융합 전날까지 매일 1:2로 분할하였다. 면역화된 OMT 래트의 림프절에서 단리된 B 림프구를 골수종 세포와 결합하였다 (1:1.1 비율). 세포 혼합물을 세척하고 2 x 106 세포/mL로 ECF 용액에 재현탁 시켰다. 세포는 ECF를 위한 준비가 되었다. 전자 세포 융합 후, 융합 챔버의 세포 현탁액은 즉시 더 많은 배지를 포함하는 멸균 튜브로 옮기고, 37 ℃ 인큐베이터에서 24시간 이상 배양하였다. 세포 현탁액을 혼합하고 96-웰 플레이트로 옮겼다 (1Х104 cells/well). 96-웰 플레이트는 37 ℃, 5% CO2 에서 배양되었으며, 주기적으로 모니터링 되었다. 클론이 충분히 클 때, 100 uL의 상청액을 조직 배양 플레이트에서 항체 스크리닝을 위해 96-웰 플레이트로 옮겼다.
2.2 하이브리도마 상청액의 고처리량 스크리닝
ELISA는 인간 및 원숭이 OX40 단백질에 대한 하이브리도마 상청액의 결합을 테스트하기 위한 첫번째 스크리닝 방법으로 사용되었다. 간단히 말해서, 플레이트 (Nunc)는 1 ug/mL의 인간 또는 붉은털 원숭이 (rhesus monkey) OX40 ECD의 가용성 단백질로 4 ℃에서 밤새 코팅되었다. 블로킹 및 세척 후, 하이브리도마 상청액을 코팅된 플레이트로 옮기고 실온에서 2시간 동안 배양하였다. 이어서 플레이트를 세척하고 그 뒤에 2차 항체인 염소 항-래트 IgG HRP (Bethyl)과 함께 1시간 동안 배양하였다. 세척 후, TMB 기질을 첨가하고 2M HCL로 상호 작용을 중단시켰다. 450 nm에서의 흡광도는 마이크로 플레이트 리더 (Molecular Device)를 사용하여 판독되었다.
세포막에서 발현되는 입체 형태 OX40 분자에 대한 항-OX40 항체의 고유 결합을 확인하기 위해, 유세포 분석 (FACS) 분석은 OX40 형질 감염된 세포주에서 수행되었다. 인간 OX40을 발현하는 293F 세포를 1 Х 105 세포/웰의 밀도로 96- 웰 U-바닥 플레이트 (Corning)로 옮겼다. 하이브리도마 상청액을 세포에 로딩하고 4 ℃에서 1시간 동안 배양하였다. 1xPBS/1% BSA로 세척한 후, 2차 항체 염소 항-래트 Alexa647 (Jackson ImmunoResearch lab)을 적용하고 30분 동안 암실에서 세포와 함께 배양하였다. 세포를 세척한 다음 1xPBS/1% BSA 또는 4% 파라포름알데하이드로 고정하고, 유세포 분석 (BD)로 분석하였다. 모 (parental) 293F 세포주에 결합하는 항체는 음성 대조군으로 사용되었다. 주르캣 엔에프카파비-루시퍼라제 리포터 (Jurkat NFkB-luciferase reporter) T 세포를 사용하여 항체의 생체 활성을 테스트하는 것이 두번째 스크리닝 방법으로 사용되었다. 간단히 말해서, 인간 OX40/CD40 융합 단백질-과발현 주르캣 엔에프카파비-루시퍼라제 리포터 (Jurkat NFkB-luciferase reporter) T 세포는 전술한 바와 같이 구축되었다. 세포는 10% FBS 및 0.5 mg/mL의 하이그로마이신 B를 포함하는 완전한 RPMI1640 배지에서 배양하였다. OX40 주르캣 리포터 세포는 수집하고 4 x 104 세포/웰로 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 가교 항체 F(ab') 2 염소-래트 IgG (JacksonImmunoResearch Lab) 및 하이브리도마 상청액으로 희석한 RPMI 1640 완전 배지는 세포에 첨가되었고, 그리고 나서 상기 세포는 37 ℃, 5% CO2에서 밤새 배양하였다. 둘째 날, 재구성된 루시퍼라제 기질 (luciferase substrate) (Promega)를 각 웰 (50 uL/웰)에 첨가하고 잘 혼합하였다. 상기 루시퍼라제의 강도는 마이크로플레이트 판독기 (Molecular Device)를 사용하여 판독되었다.
2.3 하이브리도마 서브-클로닝
첫번째 및 확인 스크리닝을 통해 특이적 결합 및 생체활성이 확인되면, 양성 하이브리도마 세포주를 서브 클로닝에 사용하였다. 요약하면, 각 하이브리도마 세포주, 세포는 200 uL 복제 배지 당 1개의 세포를 제공하기 위해 계수하고 희석되었다. 상기 세포 현탁액을 2개의 96-웰 플레이트에 200 uL/웰로 플레이팅을 하였다. 플레이트는 ELISA 분석으로 확인할 준비가 될 때까지 37 ℃, 5% CO2에서 배양하였다. 선택된 단일클론의 고갈된 상청액 (exhausted supernatant, ESN)을 수집하고, 그리고 추가 특성화를 위해 항체를 정제하였다.
실시예 3. 완전한 인간 항체 분자 구성 및 정제
3.1 하이브리도마 시퀀싱
RNA는 트리졸 (Trizol)시약과 함께 RNeasy plus Minikit (Qiagen)를 사용하여 모노클로날 하이브리도마 세포에서 분리되었다. OX40 키메라 항체의 중쇄 가변 영역 (VH) 및 중쇄 가변 영역(VL)을 다음과 같이 증폭하였다. 간단히 말해서, RNA는 먼저 여기에 설명된 역전사 효소를 사용하여 cDNA로 역전사 된다.
cDNA 증폭 반응 (20 μL)
Component Amount
Up to 5 μg total RNA 5 μL
Primer (50 μM oligo(dT)20/50 ng/μL random hexamers) 1 μL/1μL
Annealing Buffer 1 μL
RNase/DNase-free water to 8 μL
65 ℃ for 5min, then immediately place on ice for at least 1 minute
2ХFirst-Strand Reaction Mix 10 μL
SuperScript?? III/RNaseOUT?? Enzyme Mix 2 μL
cDNA 증폭 반응 조건
Step1 Step 2 Step3 Step4
Temperature 25 50 85 4
Time 10 min 50 min 5 min ∞
생성된 cDNA는 관심있는 유전자에 특이적인 프라이머를 사용하여 후속 PCR 증폭을 위한 주형으로 사용되었다. PCR 반응은 다음과 같이 진행되었다.
PCR 반응 시스템 (50μL)
Component Amount
cDNA 2.0 μL
Premix Ex Taq 25 μL
5'- degenerated primer sets (10 pM) 2.5 μL
3'- constant region degenerated primer (10 pM) 1.0 μL
ddH2O 19.5 μL
PCR 반응 조건
Step 1 Step 2 Step 3 Step 4 Step 5
Temperature (℃) 95 94 58 72 72
Time 4 min 45 sec 45 sec 1 min 10 min
Cycles NA 30 NA NA
PCR 산물 (10 uL)을 pMD18-T 벡터에 삽입하였다; 그리고 10 uL의 결찰 생성물을 탑 10 컨피턴트 (Top 10 competent)세포로 형질 전환을 시켰다. 형질 전환된 세포를 2-YT+Cab 플레이트에 플레이팅하고 밤새 배양하였다. M13-48 및 M13-47 프라이머를 사용한 PCR로 양성 클론을 확인한 다음 시퀀싱을 하였다.
하이브리도마 클론 1.7.10, 1.62.3, 1.134.9, 1.186.19 및 1.214.23은 서열 최적화 및 추가 평가를 위해 선택되었다.
3.2 항체 서열 최적화
항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 특정 부위에서 적절한 변형을 도입하여 항체 서열 최적화를 수행하였다. 번역 후 변형 (Post-translational modification, 이하, PTM) 부위 제거 돌연변이는 제조업체의 프로토콜에 따라 QuickChange 변이유발키트를 사용하여 부위 지정 돌연변이 유발에 의해 도입되었다.
하이브리도마 클론의 1.62.3 중쇄의 CDR1에 있는 아미노산 NGG는 탈아미드화 사이트로 확인되었으며, 그래서 안티센스 돌연변이 유발 뉴클레오타이드는 "1.62-u1-IgG1K"중쇄:N에서 Q (NGG-QGG), N 에서 S (NGG-SGG) 또는 G에서 A (NGG-NAG)까지 다음과 같은 돌연변이를 도입하도록 설계되었다. 클론 1.62.3 경쇄의 CDR1에 있는 아미노산 C는 시스테인 잔기로 확인되었고, 그래서 세린은 시스테인 (C 에서 S)으로 치환되었다. 모든 돌연변이는 시퀀싱으로 확인되었다.
PTM 돌연변이 후 변종간의 비교는 도 1에 나타내었다. 변이체는 각각 항체 "1.62.3-u1-1-IgG1K", "1.62.3-u1-2-IgG1K"및 "1.62.3-u1-2-IgG1K"로 명명된다. 항체 "1.62.3-u1-1-IgG1K"는 N에서 Q 로의 돌연변이를 포함하고, "1.62.3-u1-2-IgG1K"는 N에서 S 로의 돌연변이를 포함하고, "1.62.3-u1-3-IgG1K"는 G에서 A로의 돌연변이를 포함한다.
3.3 완전 인간 항체 분자 구성 및 정제
OX40 하이브리도마 항체의 VH 및 VL은 전술한 바와 같이 증폭되었다. 합성 유전자를 변형된 인간 IgG1 발현 벡터 pcDNA3.4 (ThermoFisher)에 재클로닝하여 완전한 인간 항체를 발현하였다. Expi-293F 세포는 항체 발현을 위한 벡터로 일시적으로 형질 감염되었다. 항체를 포함하는 배양 상청액을 수거하고 단백질 A 크로마토 그래피를 사용하여 정제하였다.
완전한 인간 모노클로날 항체 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-IgG1K ("1.62.3-u1-3-IgG1K"로 명명된 서열 최적화 클론), 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19 -u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K는 하이브리도마 클론 1.7.10, 1.62.3, 1.134.9, 1.186.19 및 1.214.23 하이브리도마에서 각각 얻었다. 이들의 서열은 표 A, B 및 C에 요약되었다.
실시예 4. 항체 특성화
4.1 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의한 전체 운동 결합 친화도 테스트
항체는 Biacore T2000 (GE)을 사용한 SPR 분석에 의해 OX40에 대한 친화성 및 결합 동역학에 대하여 특성화 되었다. 항-인간 IgG 항체는 센서칩 (CM5)에 사전 고정되었고, 러닝 버퍼 (1xHBS-EP+, GE)의 항-OX40 항체는 칩에 주입될 때 캡처되었다. 그런 다음 다양한 농도의 인간 또는 원숭이 OX40 및 러닝 버퍼를 180초의 결합 단계 동안 30 uL/min의 유속으로 센서 칩을 통해 흘려보낸 다음 해리하였다. 연관 (association) 및 해리 곡선은 BIAevaluation T200 소프트웨어를 사용하여 1:1 Langmuir 결합 모델에 의해 적합화되었다.
실험 결과는 하기 표 5와 같다.
SPR에 의한 인간 OX40에 대한 완전한 운동 결합 친화도
Abs ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
1.7.10-u1-IgG1K 8.60Х105 1.28Х10-3 1.49Х10-9
1.62.3-u1-IgG1K 5.26Х105 2.43Х10-4 4.61Х10-10
1.62.3-u1-3-IgG1K 6.97Х105 1.45Х10-3 2.08Х10-9
1.134.9-u1-IgG1L 2.07Х105 3.70Х10-5 1.79Х10-10
1.186.19-u1-IgG1K 3.90Х105 4.51Х10-4 1.16Х10-9
1.214.23-u1-IgG1K 4.26Х105 2.14Х10-4 5.02Х10-10
BMK7 2.44Х105 1.54Х10-3 6.30Х10-9
BMK10 4.42Х105 2.25Х10-5 5.10Х10-10
표 5에 나타낸 바와 같이, 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-3-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K and 1.214.23-u1-IgG1K을 포함하는 본 발명의 예시적인 항체는 1.79Х10-10 M to 2.08Х10-9 M의 KD로 높은 특이성으로 인간 OX40에 결합한다.
4.2 유세포 분석에 의한 결합 친화도 분석
인간 OX40을 발현하는 CHO-K1 세포를 5Х104 세포/mL의 밀도로 96-웰-U-바닥 플레이트 (코닝)로 옮겼다. 테스트 항체는 세척 완충액 (1xPBS/1% BSA)에서 1:2로 연속 희석되었고 4 ℃에서 1시간 동안 세포와 함께 배양되었다. 2차 항체 염소 항 인간 IgG Fc FITC (IgG 1 몰당 3.2 몰 FITC, Jackson Immunoresearch Lab)을 첨가하고 암실에서 4 ℃에서 30분 동안 세포와 함께 배양하였다. 그런 다음 세포를 1회 세척하고 1xPBS/1% BSA에 재현탁하고 유세포 분석(BD)으로 분석하였다. 형광 강도는 정략적 비드 QuantumTM MESF 키트 (Bangs Laboratories, Inc.)를 기반으로 결합된 분자/세포로 변환되었다. 각 항체의 KD 값은 그래프패드 프리즘5 (Graphpad Prism5)를 사용하여 계산되었다.
유세포 분석에 의해 인간 OX40을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 항-인간 OX40 항체의 결합에 대한 데이터는 표 6 및 도 2에 나타내었다. 상기 데이터는 예시적인 항체 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-3-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K가 인간 OX40을 발현하는 CHO-K1 세포에 대하여 잘 결합하는 효율을 나타낸다는 것을 설명한다.
유세포 분석에 의해 테스트된 세포 표면 인간 OX40에 대한 항 -OX40 항체의 결합 친화도
Abs Bmax (M) KD (M)
1.134.9-u1-IgG1L 2.1Х10-10 5.3Х10-10
1.214.23-u1-IgG1K 1.7Х10-10 6.7Х10-11
BMK7 2.0Х10-10 1.5Х10-9
BMK10 1.8Х10-10 2.3Х10-10
표 6 및 도 2에서 설명된 바와 같이, 항체 1.134.9-u1-IgG1L 및 1.214.23-u1-IgG1K는 BMK7 및 BMK10과 동등하거나 훨씬 더 높게 높은 친화 도로 세포 표면 인간 OX40에 결합한다.
4.3 OX40에 대한 항 -OX40 항체의 결합
항-OX40 항체의 OX40에 대한 결합 활성을 테스트하기 위해 세포 기반 FACS를 사용하였다. 간단히 말해서, 인간 OX4-발현 CHO-K1 세포 또는 활성화된 인간 CD4+ 세포를 1Х105 세포/웰의 밀도로 96-웰 U-바닥 플레이트 (코닝)에 옮겼다. 테스트 항체를 세척 완충액 (1xPBS/1% BSA)에 연속 희석하고 4 ℃에 1시간 동안 세포와 함께 배양하였다. 1xPBS/1% BSA로 세척한 후, 2차 항체 염소 항-인간 IgG Fc-PE (Jackson ImmunoResearch Lab)을 적용하고 4 ℃ 암실에서 1시간동안 세포와 함께 배양하였다. 세포를 세척하고 1xPBS/1% BSA에 재현탁하거나 4% 파라포름알데히드로 고정한 다음 유세포 분석 (BD)으로 분석하였다.
유세포 분석에 의해 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 대한 항-OX40 항체의 결합에 대한 데이터는 도 3에 나타내었다. 데이터는 예시적 항체인 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K가 용량 의존적인 방식으로 세포 표면 인간 OX40에 결합한다는 것을 보여준다.
4.4 OX40에 대한 리간드 결합의 경쟁
ELISA 기반 경쟁 분석은 항-OX40 항체가 OX40의 OX40 리간드 (OX40L)에 대한 결합을 경쟁적으로 차단할 수 있는지 여부를 테스트하기 위해 사용되었다. 간단히 말하면, 플레이트 (Nunc)는 4 ℃에서 밤새 1ug/mL의 인간 OX40 ECD로 코팅되었다. 항체를 차단 완충액에 연속으로 희석하고 일정한 농도의 OX40L과 혼합하였다. 블로킹 및 세척 후, 항체/OX40L 혼합물을 플레이트에 첨가한 다음 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 이어서 플레이트를 세척하고 뒤이어서 HRP 접합된 2차 항체와 함께 1시간 동안 인큐베이션하여 OX40L의 OX40 ECD에 대한 결합을 검출하였다. 세척 후, TMB 기질을 첨가하고 2M HCl로 상호작용을 중단시켰다. 450 nm 및 540 nm에서의 흡광도는 마이크로플레이트 리더 (Molecular Device)를 사용하여 판독되었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 예시적 항체인 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K는 인간 OX40에 OX40L과 경쟁적으로 결합하였다.
4.5 올쏠로그 (Orthologue) (종간-교차) 테스트
붉은 털 원숭이 OX40에 대한 항-OX40 항체의 교차 반응성은 세포 기반 FACS로 측정되었다. 간단히 말하면, 붉은 털 원숭이 OX40-발현 293F 세포를 2Х105 세포/웰 의 밀도로 96-웰 U-바닥 플레이트 (코닝)로 옮겼다. 테스트 항체를 세척 완충액 (1xPBS/1% BSA)에 연속 희석하고 4 ℃에서 1시간 동안 세포와 함께 배양하였다. 1xPBS/1% BSA로 세척한 후, 2차 항체 염소 항-인간 IgG FC-PE (Jackson ImmunoResearch Lab)를 적용하고 4 ℃에서 1시간 동안 암실에서 세포와 함께 배양하였다. 세포를 세척하고 1xPBS/1% BSA에 재현탁하거나 4% 파라포름알데히드로 고정한 다음 유세포 분석 (BD)으로 분석하였다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 예시적 항체인 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-3-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K가 붉은 털 원숭이 OX40 형질 감염된 293F 세포에 교차 반응성 결합을 가졌다.
4.6 호몰로그 (Homologue) (종간) 바인딩
인간 OX40, CD40, 4-1BB (CD137) 및 CD271 ECD를 플레이트 (Nunc)에 4 ℃에서 밤새 코팅하였다. 차단 및 세척 후, 시험 항체를 차단 완충액에 희석하고 플레이트에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 이어서 플레이트를 세척하고 뒤이어서 2차 항체 염소 항-인간 IgG FC-HRP (Benthly)와 함께 1시간 동안 배양하였다. 세척 후, TMB 기질을 첨가하고 2M HCl에 의해 상호 작용을 중단시켰다. 450 nm 및 540 nm에서의 흡광도는 마이크로 플레이트 리더 (Molecular Device)를 사용하여 판독되었다. ELISA에 의한 인간 CD40, 4-1BB (CD137) 및 CD272 ECD에 대한 항-OX40 항체의 교차 패밀리 결합 테스트 결과는 도 6에 나타내었다. 결과는 OX40 항체인 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K가 특이적으로 OX40 (예를 들어, CD134)에 결합하고, 인간 CD40, CD137 및 CD271에 결합하지 않는 다는 것을 설명한다.
4.7 BMK 항체에 대한 에피토프 비닝 테스트
항-OX40 항체의 결합 에피토프는 ELISA에 의해 벤치마크 (benchmark) 항체에 대해 비닝 (binning) 되었다. 상기 시험 항체를 플레이트 (Nunc)에 4 ℃에서 밤새 코팅하였다. 차단 및 세척 후, 차단 완충액에 희석된 일정한 농도의 인간 OX40 단백질을 플레이트에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 그런 다음 비오틴화된 벤치마크를 연속적으로 희석하고 각 웰에 첨가하고 추가로 1시간 동안 배양하였다. 이어서 플레이트를 세척하고 뒤이어서 2차 항체 스트렙타비딘-HRP (streptavidin-HRP)(Life Technology)와 함께 1시간 동안 배양하였다. 세척 후, TMB 기질을 첨가하고 2M HCl로 상호 작용을 중단시켰다. 450 nm 및 540 nm에서의 흡광도는 마이크로플레이트 리더 (Molecular Device)를 사용하여 판독되었다.
도 7A, 7B 및 7C는 각각의 벤치마크 항체인 BMK1 (도 7A), BMK7 (도 7B) 및 BMK10 (도 7C)에 대한 항체인 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K의 에피토프 비닝 (epitope binning)을 나타낸다. 도 7A에 나타낸 바와 같이, 항체 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K는 BMK1과 다른 빈 (bins)을 공유한다. 도 7B 및 7C에 나타낸 바와 같이, 1.62.3-u1-IgG1K 및 1.134.9-u1-IgG1L은 BMK7 및 BMK과 다른 빈 (bins)을 공유하나, 항체 1.7.10-u1-IgG1K, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K은 BMK7 및 BMK10과 비슷하거나 가까운 빈 (bins)을 공유한다.
4.8 주르캣 엔에프카파비-루시퍼라제 리포터 (Jurkat NFkB-luciferase reporter) T 세포를 사용한 생물 활성 분석
인간 OX40을 통해 신호를 보내는 항-OX40 항체의 능력은 OX40/CD40 융합 단백질 및 주르캣 엔에프카파비-루시퍼라제 리포터 유전자 (Jurkat NFkB-luciferase reporter gene) 를 사용하여 평가되었다. 항-인간 IgG Fc 시약을 사용하여 가교된 항체-OX40의 생체활성 또는 인간 Fcγ 리셉터 보체 (complements)를 발현하는 세포를 측정하였다. 상기 주르캣 엔에프카파비-루시퍼라제 리포터 유전자 세포는 10% FBS, 및 0.5 mg/mL의 하이그로마이신 B (Hygromycin B)를 포함하는 완전한 RPMI 1640 배지에서 선택하여 배양하였다.
복합 상태에서 항-OX40 항체의 생물 활성을 결정하려면, CD32b-발현 CHO-K1 세포 또는 F(ab')2 염소 항-사람 IgG (Jackson ImmunoResearch Lab)은 주르캣 리포터 세포에서 OX40을 클러스터 (cluster)링하고 활성화하는 항체 가교를 매개하기 위해 사용되었다. OX40 주르캣 리포터 세포를 수집하고 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 완전 배지에서 연속적으로 희석된 OX40 항체를 CD32b-발현 CHO-K1 세포, 모 (Parental) CHO-K1 세포 또는 가교 항체가 존재하는 세포에 첨가하고, 플레이트를 37 ℃, CO2에서 6시간 또는 밤새 배양하였다. 재구성된 루시퍼라제 기질 (Promega)를 각 웰에 첨가하고 잘 혼합하였다. 루시페라제 강도는 마이크로 플레이트 판독기 (Molecular Device)를 사용하여 판독되었다. 항-OX40 항체는 또한 가용성 조건에서 생물활성에 대해 테스트되었다.
도 8A, 8B 및 8C는 유리 항체를 사용하여 Jurkat 세포에서 OX40 자극 엔에프카파비 루시퍼라제 활성에 대한 항체의 테스트 또는 CD32-발현 CHO-K1 세포 에 의한 FCγR 가교 또는 항-인간 IgG Fc 시약의 효과를 나타낸다. 각각의 프리 (free) 항체 (도 8A)의 리포터 활성 또는 F(ab')2 염소 항-인간 IgG (도 8B)에 의한 가교 또는 CD32b-발현 CHO-K1 세포 (도 8C)을 나타낸다.
도 8A, 8B 및 8C에 나타낸 바와 같이, 가교 항체는 OX40 신호 전달을 효과적으로 활성화할 수 있다.
4.9 세포 기반 분석에 의해 테스트된 항-OX40 항체의 시험관 내 기능
본 실시예에 사용된 인간 CD4+ T 세포는 제조업체의 프로토콜에 따라 인간 CD4+ T 세포 강화 키트 (StemCell)을 사용하여 인간의 PBMCs (Peripheral blood mononuclear cell)로부터 분리되었다. 세포를 완전한 RPMI 1640 배지에 재현탁 시켰다.
4.9.1 시험관 내 항-OX40 항체가 인터루킨 2 (IL-2) 생산에 미치는 영향
이 분석에서, 비-조직 배양 처리된 평평한 바닥 96-웰 플레이트 (Corning)를 4 ℃에서 밤새 항-CD3으로 사전 코팅하였다. 분석 당일, 플레이트를 완전한 RPMI 1640 배지로 세척하여 결합되지 않은 항체를 제거하였다. 새롭게 단리된 인간 CD4+ T 세포를 100 uL의 부피로 1x105 세포/웰 의 밀도로 각 웰에 첨가하였다. 그 다음 일정한 농도의 교차 결합 항체 F (ab')2 염소 항-사람 IgG 및 연속 희석된 OX40 항체를 100 uL에서 혼합하고 또한 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 상기 플레이트는 37 ℃, 5% CO2에서 3일 동안 배양한 다음 ELISA에 의한 IL-2 측정을 위해 수확되었다.
도 9는 1차 인간 CD4+ T 세포에 의한 IL-2 분비로 유도된 항-CD3에 대한 항체의 효과를 보여준다. 그것은 예시적 항체 (1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K을 포함하는)가 1차 인간 CD4+ T 세포에 의한 IL-2 분비를 강화했음을 확인하였다.
4.9.2 항-OX40 항체가 시험관 내 사이토카인 IFNγ 분비 및 CD4+ T 세포 증식에 미치는 영향
IFNγ 생산 및 CD4+ T 세포 증식 향상에 대한 항-OX40 항체의 효과를 직접 평가하기 위해, 우리는 CD3/T 세포 리셉터 (TCR) 복합체와 함께 OX40 신호를 통해 인간 CD4+ T 세포를 공동 자극하는 분석을 수행하였다. 간단히 말해서, 비-조직 배양 처리된 평평한 바닥 96-웰 플레이트 (Corning)를 일정한 농도의 항-CD3 및 다른 농도의 항-OX 항체의 혼합물 100 uL로 사전 코팅을 하였다. 플레이트를 4 ℃에서 밤새 인큐베이션 한 다음, 완전한 RPMI 1640 배지로 세척하여 결합되지 않은 항체를 제거하였다. 새로 단리된 인간 CD4+ T 세포를 200 uL의 부피에서 1x105 세포/웰의 밀도로 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37 ℃, 5% CO2에서 3일 동안 인큐베이션 한 다음 ELISA에 의한 IFNγ 측정을 위해 상청액을 수확하였다. 세포 펠렛을 수확하여 다음과 같이 3H-티미딘에 의한 CD4+ T 세포 증식을 측정하였다: 3H-티미딘 (PerkinElmer)를 0.5 uCi/웰로 세포 배양 플레이트에 첨가하였다. 상기 플레이트는 3H-티미딘의 증식세포로의 결합이 Topcount NXT 섬광 계수기 (Scintillation Counter) (Perkin Elmer)를 사용하여 결정되기 전에, 상기 플레이트를 37 ℃에서 16 내지 18 시간동안 배양하였다.
도 10은 1차 인간 CD4+ T 세포에 의한 IFN-γ 분비가 유도된 항-CD3에 대한 항체의 효과를 나타낸다. 도 10 은 예시적 항체인 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-3-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K가 1차 인간 CD4+ T 세포에 의한 IFN-γ 분비를 증가시켰음을 나타내었다.
도 11은 인간 CD4+ T 세포의 증식으로 유도된 항-CD3에 대한 항체의 효과를 나타낸다. 도 11은 예시적 항체인 1.7.10-u1-IgG1K, 1.62.3-u1-3-IgG1K, 1.134.9-u1-IgG1L, 1.186.19-u1-IgG1K 및 1.214.23-u1-IgG1K가 일차 인간 CD4+ T 세포의 증식을 증가시켰음을 나타내었다.
4.9.3 인간 항-OX40 항체가 조절 T 세포 (Tregs) 억제 기능에 미치는 영향
T 세포의 하위집단인, 조절 T 세포 (Tregs)는 주요 면역 조절제이며 자기-내성을 유지하는데 필수적인 역할을 한다. CD4+CD25+ 조절 T 세포는 종양 성장과 관련이 있는 것으로 제시되는데, 조절 T 세포의 증가는 다발암 환자에서 발견되고 좋지 않은 예후 (poor prognosis)와 관련된다. 면역 억제 반응에 대한 인간 항-OX40 항체의 효과를 직접 평가하기 위해, 우리는 항-OX40 항체의 존재 및 부재에서의 조절 T 세포의 기능을 비교하였다. CD4+CD25+ 조절 T 세포 및 CD4+CD25- 효과기 T (Teff) 세포는 특정 항-CD25 마이크로비드 (StemCell)을 사용하여 분리되었다. 효과기 T 세포 (Teff)는 1x105 세포/50 uL/웰로 접종되었고 96-웰 둥근-바닥 플레이트 (BD)에 1x105 조절 T 세포/50 uL/웰과 공동 배양하였다. 이어서 교차 결합 항체 및 항-OX40 항체의 존재하에 1 DC/10 효과기 T 세포에서 단핵구로부터 유도된 인간 동종 수지상 세포 (DCs)로 상기 세포를 자극하였다. 항체 또는 이소타입 항체는 음성 대조군으로 사용되지 않았다. 공동 배양물은 37 ℃, CO2 에서 5일 동안 배양되었다. 3H-티미딘 결합에 의해 측정된 효과기 T 증식을 결정하기 위해 5일째에 펠렛을 수집하였다.
도 12는 조절 T 세포의 존재하에 1차 인간 CD4+ T 효과기 (effector)세포의 증식으로 유도된 수지상 세포에 대한 항체의 효과를 나타낸다. 상기 항체인 1.134.9-u1-IgG1L 및 1.214.23-u1-IgG1K는 조절 T 세포의 억제 기능을 역전시켜 CD4+CD25- T 세포의 증식을 회복시킬 수 있다.
4.10 ADCC 및 CDC 테스트:
OX40은 다양한 세포 유형에서 발현된다. Fc 효과기 (effector) 기능을 유발하는 능력을 평가하기 위해, 항-OX40 항체는 OX40 발현 세포에 ADCC 및 CDC 효과를 유도할 수 있는지 평가되었다.
도 13A는 활성화된 인간 CD4+ T 세포에서의 OX40의 발현을 나타내고 도 13B는 OX40 과발현 주르캣 (Jurkat) 세포에서의 OX40의 발현을 나타낸다.
4.10.1 ADCC 테스트:
표적으로서, OX40을 발현하는 주르캣 세포 또는 활성된 인간 CD4+ T 세포 그리고 다양한 농도의 항-OX40 항체를 96-웰 둥근-바닥 플레이트 (BD)에 30분 동안 사전 인큐베이션을 하였고; 그리고 이어서 효과기 (effector)로서 동종 PBMC를 50:1의 효과기/표적 비율로 추가하였다. 상기 플레이트는 37 ℃, 5% CO2에서 4시간동안 유지하였다. 표적 세포 용해는 LDH-기반 세포독성 검출 키트 (Roche)에 의해 결정되었다. 492nm에서의 흡광도는 마이크로 플레이트 리더 (Molecular Device)를 사용하여 판독되었다.
도 14A 및 14B는 각각 OX40 과발현 주르캣 세포에 대한 OX40 항체의 ADCC 효과 (도 14A) 또는 활성된 인간 CD4+ T 세포 도 14B)를 나타낸다. 도 14A 및 14B에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 개시된 예시적 항체, 예를 들어, 1.134.9-u1-IgG1L 및 1.214.23-u1-IgG1K는 OX40 과발현 주르캣 세포 및 활성된 인간 CD4+ T 세포에 대해 낮은 ADCC 효과가 있다.
4.10.2 CDC 테스트:
표적으로서, OX40을 발현하는 주르캣 세포 또는 활성된 인간 CD4+ T 세포 그리고 다양한 농도의 항-OX40 항체를 96-웰 둥근-바닥 플레이트 (BD)에 30분 동안 혼합하였다. 인간 보체는 1:50의 최종 희석으로 추가되었다. 플레이트를 37 ℃, 5% CO2에서 2시간 동안 유지하였다. 표적 세포 용해는 CellTiter-Glo (Promega)에 의해 결정되었다. 발광 (luminescence)는 마이크로플레이트 리더 (Molecular Device)를 사용하여 판독하였다.
도 15A 및 15B는 각각 OX40 과발현 주르캣 세포에 대한 CDC 효과 (도 15A) 또는 활성된 인간 CD4+ T 세포 (도 15B)를 나타낸다. 도 15A 및 15B에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 개시된 예시적 항체, 예를 들어, 1.134.9-u1-IgG1L 및 1.214.23-u1-IgG1K는 OX40 과발현 주르캣 세포 및 활성된 인간 CD4+ T 세포에 대해 낮은 CDC 효과가 있다.
4.11 도메인 맵핑 (Domain mapping)
OX40 항체의 결합 도메인을 조사하기 위해, 일련의 인간 / 마우스 OX40 키메라 변이체가 사용되었다. OX40 항체는 이들의 아미노산 (또는 본 명세서에서 "aa"라고 지칭됨)서열 각각에서 60% 및 23%의 동일성을 공유함에도 불구하고, 마우스 OX40 및 인간 CD40에 대한 교차-반응 없이도 인간 OX40에 특이적으로 결합한다. 간단히 말해서, 인간 OX40 (hPro1)의 세포외 도메인의 다음 잔기를 상응하는 마우스 OX40 (mPro1) 아미노산 서열 또는 인간 CD40 아미노산 (hPro40)으로 대체하여 22개의 변형체(변형체 "x1", "x2"?? "x22"로 이름을 붙임)를 구축하였다.
변형체 (Variant) x1: xPro1.FL-x1: CRDmox40_1 (인간 OX40 aa 29에서 65는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x2: xPro1.FL.x2: CRDmox40_2 (인간 OX40 aa 66에서 107는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x3: xPro1.FL-x3: CRDmox40_3 (인간 OX40 aa 108에서 146는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x4: xPro1.FL-x4: CRDmox40_4 (인간 OX40 aa 147에서 214는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x5: xPro1.FL-x5: CRDmox40_1-2 (인간 OX40 aa 29에서 107는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x6: xPro1.FL-x6: CRDmox40_2-3 (인간 OX40 aa 66에서 146는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x7: xPro1.FL-x7: CRDmox40_3-4 (인간 OX40 aa 108에서 214는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x8: xPro1.FL-x8: CRDmox40_1-3 (인간 OX40 aa 29에서 146는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x9: xPro1.FL-x9: CRDmox40_2-4 (인간 OX40 aa 66에서 214는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x10: xPro1.FL-x10: CRDmox40_1,2,4 (인간 OX40 aa 29 에서 107 및 147에서 214는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x11: xPro1.FL-x11: CRDmox40_1,3,4 (인간 OX40 aa 29에서 65 및 108에서 214는 마우스 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x12: xPro1.FL-x12: CRDhcd40_1 (인간 OX40 aa 29에서 65는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x13: xPro1.FL-x13: CRDhcd40_2 (인간 OX40 aa 66에서107는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x14: xPro1.FL-x14: CRDhcd40_3 (인간 OX40 aa 108에서 146는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x15: xPro1.FL-x15: CRD hcd40_4 (인간 OX40 aa 147에서 214는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x16: xPro1.FL-x16: CRDhcd40_1-2 (인간 OX40 aa 29에서 107는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x17: xPro1.FL-x17: CRDhcd40_2-3 (인간 OX40 aa 66에서 146는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x18: xPro1.FL-x18: CRDhcd40_3-4 (인간 OX40 aa 108에서 214는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x19: xPro1.FL-x19: CRDhcd40_1-3 (인간 OX40 aa 29에서 146는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x20: xPro1.FL-x20: CRDhcd40_2-4 (인간 OX40 aa 66에서 214는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x21: xPro1.FL-x21: CRDhcd40_1,2,4 (인간 OX40 aa 29에서 107 그리고 147에서 214는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
변형체 (Variant) x22: xPro1.FL-x22: CRDhcd40_1,3,4 (인간 OX40 aa 29에서 65 and 108에서 214는 인간 CD40 aa 대응물로 대체)
"x1"에서 "x22"까지 22 개의 변형체는 pcDNA3.0 벡터로 클로닝 되었으며, 그리고 293F세포 형질 감염에 사용된다. 간단히 말해서, 293F 세포는 프리스타일 (FreeStyle) 293F 배지를 사용하여 1x106 세포/mL의 밀도로 희석하고 웰당 3mL의 분취량을 24 웰 플레이트에 첨가하였다. 293펙틴 (fectin) 시약 (Life Technologies)을 사용하여 형질 감염을 수행하였다. 각 형질 감염에 대해, 3 ug의 DNA를 150 uL Opti-MEMI 환원 혈청 배지 (life Technologies)에 희석하고, 그리고 이어서 150 uL Opti-MEMI 환원된 혈청 배지에 미리 희석된 6 uL 293펙틴과 결합시켰다. DNA/리포펙타민 혼합물은 배양물에 첨가하기 전에 25 ℃에서 20분 동안 방치하였다. 형질 감염된 세포는 48시간 형질 감염 후 유세포 분석에 의해 분석되었다.
키메릭 (chimeric) OX40 변이체에 대한 항체의 결합은 유세포 분석에 의해 분석되었다. 간단히 말해서, BMK10이 2 ug/mL인 것을 제외한, 1 ug/mL 항체를 4 ℃에서 1시간 동안 키메릭 OX40 발현된 형질 감염된 293F 세포와 함께 배양하고, 그리고 이어서 4 ℃에서 40분동안 3 ug/mL 염소 항-인간 IgG Fc R-PE (Jackson InnomuResearch Lab)과 함께 배양하였다. 세포는 유세포 분석기를 사용하여 분석하였다.
결과는 하기 표 7 내지 9에 나타내었다.
OX40 항체에 대한 변이체의 결합
1.134.9-u1-IgG1L 1.214.23-u1-IgG1K
MFI PE+ % MFI PE+ %
293F 29.2 0 293F 28.6 0
293F+1.134.9-u1-IgG1L+ goat anti-human IgG Fc R-PE 28.8 0.106 293F+1.214.23-u1-IgG1K +goat anti-human IgG Fc R-PE 26.7 0.158
hPro1 9162 85.2 hPro1 8324 89.3
mPro1 44.4 0.937 mPro1 49.9 0.315
x1 6442 75.3 x1 5421 82.9
x2 49.5 0.904 x2 23300 92.8
x3 3805 66.1 x3 2251 70
x4 24100 96.6 x4 23200 97.7
x5 61 1.73 x5 21700 96.5
x6 211 6.75 x6 113 2.31
x7 9157 80.3 x7 6542 81.5
x8 43.2 0.678 x8 42.6 0.743
x9 44.1 0.668 x9 80.1 0.244
x10 42.7 0.624 x10 19600 94.4
x11 9403 74 x11 6260 70.8
벤치마크 항체 BMK1 또는 BMK5에 대한 변이체의 결합
BMK1 BMK5
MFI PE+ % MFI PE+ %
293F 28.3 0.024 293F 28.4 0.023
293F+BMK1+goat anti-human IgG Fc R-PE 25.1 0.063 293F+BMK5+goat anti-human IgG Fc R-PE 24.4 0.081
hPro1 8101 89.1 hPro1 9641 89.2
mPro1 33.7 0.189 mPro1 31.6 0.04
x1 43.7 1.22 x1 6029 80.4
x2 14800 94.3 x2 53.9 1.89
x3 3334 72.7 x3 4412 73.7
x4 22300 97.9 x4 25900 98.3
x5 103 2.02 x5 66.1 2.65
x6 12600 90.4 x6 134 8.43
x7 8118 85.8 x7 9740 88.8
x8 39.4 0.31 x8 63.8 0.652
x9 12800 93.2 x9 38.6 0.198
x10 58.2 0.43 x10 33.5 0.12
x11 105 4.44 x11 33.5 0.12
벤치 마크 항체 BMK7 또는 BMK10에 대한 변이체의 결합
BMK7 BMK10
MFI PE+ % MFI PE+ %
293F 22.5 0 293F 22.7 0.045
293F+BMK7+goat anti-human IgG Fc R-PE 21.8 0.147 293F+BMK10+goat anti-human IgG Fc R-PE 21.9 0.084
hPro1 18900 97.2 hPro1 27600 98.3
mPro1 157 21.2 mPro1 4997 91.6
x1 14900 91.6 x1 18100 92.6
x2 23900 92.8 x2 33700 95.1
x3 772 56.7 x3 4931 87
x4 18200 99.6 x4 29500 99.7
x5 26300 98.9 x5 39700 99.5
x6 7066 88.9 x6 14000 94.1
x7 775 49.6 x7 6816 96.6
x8 2629 95.7 x8 16700 98.4
x9 2975 82.5 x9 19700 97.1
x10 16400 97.9 x10 24400 98.6
x11 1144 37.8 x11 8204 91.5
x12 7969 96.8 x12 10300 97.8
x13 10300 95.3 x13 15000 96.5
x14 25.7 0.068 x14 26.9 0.113
x15 22300 99 x15 31300 99.5
x16 20000 89.6 x16 28100 91.8
x17 24.2 0.086 x17 27.4 0.16
x18 27.5 0.042 x18 28 0.176
x19 26.9 0.043 x19 27.2 0.22
x20 25.4 0.066 x20 24.2 0.064
x21 171 20.8 x21 2111 94.5
x22 23.8 0 x22 32.8 0.806
hPro40 60.3 0.291 hPro40 28.8 0.068
표 10은 항원 결합에 관여하는 OX40 (회색)의 도메인을 보여준다.
Figure pct00001
참고: CRD는 시스테인이 풍부한 도메인을 나타내며, 여기서 "CRD1"은 인간 OX4의 아미노산 29-65를 나타내고, "CRD2"는 인간 OX4의 아미노산 66-107을 나타내며,"CRD3"은 인간 OX4의 아미노산 108-146을 지칭하고, "CRD4"는 인간 OX40의 아미노산 147-214를 지칭한다.
4.12 OX40 항체는 인간 OX40 형질 전환 모델에서 MC38 결장 암종의 성장을 억제한다
본 연구는 OX40 인간화된 B-hTNFRSF4 마우스에서의 MC38 결장암 모델에서 항체 1.134.9-u1-IgG1L의 생체 내 항 종양 효능을 평가하였다.
OX40 인간화된 B-hTNFRSF4 마우스는 바이오사이토젠사 (Biocytogen Co., Ltd.)에서 구입하였다. 마우스는 각각 케이지별로 5마리씩 일정한 온도 및 습도에서 개별 환기 케이지에 보관하였다.
상기 MC38 세포는 10 % 소 태아 혈청, 2mML-글루타민, 100 U/mL 페니실린 및 100μg/mL 스트렙토마이신이 포함된 DMEM 배지 보충물에서 단층 배양으로 공기 중 5% CO2 공기를 포함하는 37 ℃ 시험관 내에서 유지되었다. 종양세포는 트립신-EDTA 처리에 의해 주 2회마다 주기적으로 계대 배양되었다. 지수 성장기에서 성장하는 세포를 수확하고 종양 접종을 위해 계수하였다.
각각의 마우스는 종양 발달 (development)를 위해 0.1 mL의 PBS에 MC38종양 세포 (3x105)를 오른쪽 겨드랑이 (측면)에 피하로 접종되었다. 평균 종양 부피가 65 mm3에 도달했을 때, 동물을 무작위로 그룹화 한 다음 효능 연구를 위한 치료를 시작했다. 모든 시험 항체 및 대조 항체는 3주 동안 ("BIWx3") 매주 2회 (BIW) 복강 내 (IP) 주사로 투여되었다. 자세한 정보는 표 11에 제공되었다.
Group Animal Number Sex Treatment Dose (mg/kg body weight) Dosing
route		 Schedule
1 8 female hIgG1 Isotype 5 IP BIW Х 3
2 8 female 1.134.9-u1-IgG1L 5 IP BIW Х 3
3 8 female 1.134.9-u1-IgG1L 1 IP BIW Х 3
4 8 female 1.134.9-u1-IgG1L 0.2 IP BIW Х 3
연구에서 동물 취급, 관리 및 치료와 관련된 모든 절차는 실험실 동물 관리 평가 및 인증 협회 (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care) (AAALAC)의 지침에 따라 WuXi Apptec의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에서 승인 한 지침에 따라 수행되었다. 일상적인 모니터링 시, 동물의 이동성, 음식 및 물 소비 (육안으로만), 몸무게 증/감 (하루에 한번 체중 측정), 눈/모발 매팅 및 프로토콜에 명시된 기타 비정상적인 효과 같은 정상적인 행동에 대한 종양 성장 및 치료의 효과를 매일 확인하였다. 사망 및 관찰된 임상 징후는 각 하위 집합 내의 동물 수를 기준으로 기록하였다.
종양 크기는 캘리퍼를 사용하여 2차원으로 매주 3회 측정되었고, 부피는 다음의 공식을 사용하여 mm3 단위로 측정되었다: V = 0.5a x b2 여기서 a와 b는 각각 종양의 긴 지름과 짧은 지름이다. 종양 크기는 T/C (%) 값 계산에 사용된다. 상대 종양 증식률의 T/C (%)는 다음 공식을 사용하여 계산되었다: T/C % = TRTV/CRTVХ100%(TRTV는 치료군 상대 종양 부피를 의미한다; CRTV는 음성 대조군 상대 종양 부피를 의미한다) 상대적 종양 부피는 종양 측정을 기반으로 계산되었으며 계산 공식은 다음과 같다: RTV = Vt/V0, V0는 치료 시작일의 평균 종양 부피, Vt는 1회 측정의 평균 종양 부피, TRTV는 CRTV와 같은 날의 데이터를 사용하였다.
TGI는 다음 공식을 사용하여 각 그룹에 대해 계산되었다: TGI (%) = [1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]; Ti는 주어진 날짜에 치료 그룹의 평균 종양 부피, T0는 치료 첫날 치료군의 평균 종양 부피이며, Vi는 Ti와 같은 날 비히클 (vehicle) 대조군의 평균 종양 부피이고 V0는 치료 첫날 비히클 그룹의 평균 종양 부피이다.
평균 및 평균의 표준 오차 (SEM)를 포함한 요약 통계는 각 시점에서 각 그룹의 종양 부피에 대해 제공한다. 최적의 치료 시점에서 얻은 데이터에 대해 군간 종양 부피 차이에 대한 통계적 분석 및 약물 상호 작용 분석을 수행하였다. 3개 이상의 그룹 간의 종양 부피를 비교하기 위해 일원 분산 분석 (One-way ANOVA)을 수행하였다. 유의한 F-통계량 (오류 분산에 대한 처리 분산의 비율)을 얻었을 때, 그룹간의 비교는 Game-Howell 테스트로 수행되었고; 그렇지 않은 경우에는 Dunnett-t (양면)이 사용되었다. 모든 데이터는 SPSS 17.0을 사용하여 분석되었다. 0.05 미만 (p <0.05)의 p 값은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
실험 데이터는 표 12 및 13과 도 16 및 17에 나타내었다.
1.134.9-u1-IgG1L 투여 후 MC38 종양 보유 마우스에서 시간 경과에 따른 평균 종양 부피
Days after treatment Tumor volume (mm3)
hIgG1 isotype
(5 mg/kg)		 1.134.9-u1-IgG1L
(5 mg/kg)		 1.134.9-u1-IgG1L
(1 mg/kg)		 1.134.9-u1-IgG1L
(0.2 mg/kg)
0 66±4 65±4 65±3 65±4
3 103±6 103±7 104±4 104±9
5 164±10 131±17 133±8 137±12
7 260±19 178±31 191±14 228±29
10 750±97 376±95 194±32 539±73
12 1246±146 511±139 181±42 841±118
14 1709±195 611±165 227±57 1157±151
17 3955±1246 1168±295 417±101 2387±354
19 - 1574±415 625±150 2274±424
1.134.9-u1-IgG1L 투여 후 12 일째에 종양 성장 억제율
Group Animal number Tumor volume (mm3) T/C (%) TGI (%) P value
hIgG1 isotype
(5 mg/kg)		 8 1246±146 - - -
1.134.9-u1-IgG1L(5 mg/kg) 8 511±139 41.29 62.26 0.019
1.134.9-u1-IgG1L(1 mg/kg) 8 181±42 14.61 90.17 0.001
1.134.9-u1-IgG1L(0.2 mg/kg) 8 841±118 67.98 34.24 0.255
OX40 항체 1.134.9-u1-IgG1L은 B-hTNFRSF4 마우스가 갖는 MC38 결장 암종에 대해 유의한 항 종양 활성을 생산했으며, 항체는 종양 보유 동물에 잘 견디는 것을 알 수 있다.
4.12 에피토프 맵핑
OX40 항체의 결합 에피토프를 확인하기 위해, 인간 OX40에 대한 알라닌 스캐닝 실험을 수행하고 항체 결합에 대한 효과를 평가하였다. 인간 OX40의 알라닌 잔기는 글리신 코돈으로 돌연변이 되었고, 다른 모든 잔기 (시스테인 잔기 및 OX40-OX4-R 복합체 기반의 10미만(10<) 용매 가능 표면 지역 (PDB:2HEV) (SASA> 표면 아미노산으로 10세트) 제외)는 알라닌 코돈으로 돌연변이 되었다. 인간 OX40 세포 외 도메인의 각 잔기에 대해, 2개의 순차적 PCR 단계를 사용하여 포인트 아미노산 치환을 만들었다. 인간 OX40의 ECD와 C-말단 His-태그를 암호화하는 pcDNA3.3-OX40-ECD.His 플라스미드를 주형으로 사용하였고, QuikChange lightning multi-site-directed mutagenesis 키트 (Agilent technologies, Palo Alto, CA)를 사용한 첫 번째 단계 PCR에 돌연변이 유발 프라이머 세트가 사용되었다. Dpn I 엔도 뉴클레아제는 돌연변이 가닥 합성 반응 후 모 (parental) 주형을 분해 (digest)하는데 사용되었다. 2단계 PCR에서는, CMV 프로모터로 구성된 선형 DNA 발현 카세트 (cassette), OX40의 세포 외 도메인, 히스-태그 (His-tag) 및 단순포진 바이러스 티미딘 키나제 (a herpes simplex virus thymidine kinase) (TK) 폴리아데닐화 (polyadenylation)는 37 ℃에서 증폭되었고 293F 세포에서 일시적으로 발현되었으며 (life Technologies, Gaithersburg, MD), 히스-테그 (His-tag)정량화 ELISA에 의해 정량화되었다. 모노클로날 항체 1.134.9-u1-IgG1L (2 μg/mL)는 ELISA 결합 분석을 위해 플레이트에 코팅되었다. 정량화된 OX40 돌연변이체 또는 인간 OX40-ECD을 포함하는 상청액과 상호 작용한 후, His 단백질, HRP 접합된 항-His 항체 (1:5000, GenScript-A00612, CHN)를 검출 항체로 추가하였다. 대조군 돌연변이 체의 평균에 따라 흡광도를 표준화하였다. 바인딩 폴드 변경 (<0.75)에 추가 컷오프를 설정한 후, 최종 결정된 에피토프 잔기는 도메인 맵핑, 에피토프 맵핑 및 결정 구조를 고려하여 확인되었으며, CRD3 & CRD4에 속한 아미노산과 같은 구조 안정성에 기여하는 아미노산은 포함하지 않았다.
항체 결합에 대한 OX40 점 돌연변이의 정규화된 배수 변화를 표 14에 나타내었다. 핫스팟은 도메인 맵핑, 알라닌 스캐닝 (컷오프:결합 배 변화 <0.75, SASA>10) 및 결정 구조 (PDB:2HEV)를 고려하여 식별되었고, CRD3 & CRD4에 속한 아미노산과 같은 구조 안정성에 기여하는 아미노산은 포함하지 않았다. 표 15에 나타낸 바와 같이, 1.134.9-u1-IgG1L에는 8 개의 핫스팟 위치가 있다.
항체 결합에 대한 OX40 점 돌연변이의 정규화된 배 변화
1.134.9-u1-IgG1L
OX40
Residue		 Fold
Change		 SD
G 92 0.233 0.002
D 163 0.318 0.001
Y 72 0.384 0.003
N 88 0.429 0.004
S 159 0.458 0.002
A 164 0.470 0.005
G 70 0.511 0.012
T 100 0.557 0.032
F 133 0.627 0.005
P 115 0.632 0.006
V 106 0.662 0.001
T 145 0.675 0.001
D 104 0.692 0.001
E 94 0.716 0.002
N 138 0.730 0.004
N 146 0.730 0.001
G 151 0.742 0.003
T 113 0.784 0.003
T 105 0.787 0.004
Q 114 0.790 0.014
D 74 0.796 0.009
T 85 0.808 0.001
K 152 0.810 0.003
H 132 0.826 0.009
W 86 0.842 0.008
T 154 0.843 0.004
D 137 0.851 0.002
A 111 0.853 0.000
F 71 0.866 0.004
I 165 0.871 0.001
S 77 0.879 0.008
W 144 0.881 0.005
A 101 0.881 0.017
S 91 0.886 0.004
V 63 0.886 0.005
K 82 0.894 0.005
V 53 0.896 0.003
K 120 0.896 0.000
P 135 0.899 0.007
P 129 0.907 0.000
P 66 0.913 0.010
P 83 0.918 0.000
P 143 0.920 0.010
K 142 0.921 0.003
T 62 0.923 0.004
T 102 0.940 0.003
P 80 0.944 0.018
S 161 0.945 0.003
K 96 0.949 0.001
D 117 0.951 0.003
P 127 0.953 0.008
A 126 0.954 0.007
R 110 0.955 0.001
R 41 0.958 0.002
G 131 0.958 0.012
L 155 0.959 0.004
A 150 0.960 0.003
N 50 0.961 0.003
S 57 0.963 0.000
S 118 0.969 0.005
A 140 0.969 0.001
Q 156 0.970 0.001
Q 60 0.971 0.000
P 121 0.974 0.002
Q 103 0.974 0.001
R 55 0.976 0.001
M 52 0.977 0.005
Q 97 0.981 0.007
R 108 0.981 0.000
P 48 0.981 0.001
L 116 0.982 0.000
D 168 0.983 0.001
P 69 0.987 0.005
N 39 0.988 0.004
D 124 0.989 0.005
N 61 0.990 0.002
D 34 0.991 0.004
N 160 0.992 0.000
P 157 0.992 0.002
K 79 0.992 0.000
L 89 0.992 0.001
S 54 0.993 0.003
A 173 0.993 0.007
D 40 0.994 0.005
V 75 0.994 0.002
Y 119 0.995 0.002
R 95 0.996 0.003
R 65 0.996 0.001
S 38 0.997 0.002
H 153 0.997 0.001
S 162 0.998 0.004
E 167 0.998 0.007
G 68 0.998 0.002
Q 139 0.999 0.002
R 58 1.000 0.002
Y 36 1.000 0.003
G 33 1.000 0.007
T 148 1.000 0.006
R 169 1.001 0.001
V 123 1.001 0.006
L 149 1.002 0.006
H 44 1.002 0.001
S 59 1.002 0.002
S 78 1.002 0.004
R 47 1.002 0.001
L 29 1.003 0.006
P 37 1.006 0.002
H 30 1.007 0.005
D 170 1.012 0.002
R 90 1.012 0.002
P 130 1.013 0.003
V 32 1.014 0.006
A 158 1.014 0.002
L 98 1.015 0.002
P 172 1.016 0.004
P 171 1.016 0.003
V 76 1.019 0.002
T 35 1.021 0.001
E 45 1.024 0.001
a결합의 폴드변화는 몇 가지 침묵 알라닌 치환의 결합과 관련이 있다.
1.134.9-u1-IgG1L에 8 개의 핫스팟 위치
1.134.9-u1-IgG1L
Residue Location
G 70 CRD2
Y 72 CRD2
N 88 CRD2
G 92 CRD2
E 94 CRD2
T 100 CRD2
D 104 CRD2
V 106 CRD2
컷오프 폴드 변경 <0.75, SASA> 10.
당업자는 본 발명이 본 발명의 정신 또는 중심 속성에서 벗어나지 않고 다른 특정 형태로 구현될 수 있다는 것을 더 인식할 것이다. 본 발명의 전술 한 설명은 단지 예시적인 실시예만을 개시하고 있다는 점에서, 다른 변형이 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 고려된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 본 발명은 여기서 상세히 설명된 특정 실시 예에 제한되지 않는다. 오히려, 본 발명의 범위 및 내용을 나타내는 첨부된 청구 범위를 참조해야 한다.
CDR 아미노산 서열
　Antibody CDR1 CDR2 CDR3
1.7.10-u1-IgG1K CDRH SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 5
GFTFSDYYMS YISGSGNTIYYADSVKG ERGAAGTGWFDP
CDRL SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 6
RASQGISSWLA AASSLQG QQVNSFPWT
1.62.3-u1-IgG1K CDRH SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 11
GGSISNGGYYWS YIYYSGSTYYNPSLKS DEWELRGFDY
CDRL SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 10 SEQ ID NO: 12
KSSQSVVFSSNNKICLA WSSTRES QQYYSSPWT
1.62.3-u1-3-IgG1K CDRH SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 11
GGSISNAGYYWS YIYYSGSTYYNPSLKS DEWELRGFDY
CDRL SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 10 SEQ ID NO: 12
KSSQSVVFSSNNKISLA WSSTRES QQYYSSPWT
1.134.9-u1-IgG1L CDRH SEQ ID NO: 15 SEQ ID NO: 17 SEQ ID NO: 19
GGSISSYNWWS EIYHGGNTNYNPSLKS APGDWGGSPYFDF
CDRL SEQ ID NO: 16 SEQ ID NO: 18 SEQ ID NO: 20
QGDNLRTYYAS GRNKRPS NSRDSSGNPVV
1.186.19-u1-IgG1K CDRH SEQ ID NO: 21 SEQ ID NO: 23 SEQ ID NO: 25
GFTFSDYYMG YISGSGNTIYYADSVKG ERGAAGAGWFDP
CDRL SEQ ID NO: 22 SEQ ID NO: 24 SEQ ID NO: 26
RASQGISSWLA AASSLQG QQVNSFPWT
1.214.23-u1-IgG1K CDRH SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 29 SEQ ID NO: 31
GGSISNRNWWS EIFHSGNTNYNPSLKS SFAVALDS
CDRL SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 30 SEQ ID NO: 32
RASQDINSYLA AASSLQS QQLFSYPIT
가변 영역 아미노산 서열
Antibody VH VL
1.7.10-u1-IgG1K SEQ ID NO: 33 SEQ ID NO: 34
QVHLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISGSGNTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRADDTAVYFCARERGAAGTGWFDPWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVNSFPWTFGQGTKVEIK
1.62.3-u1-IgG1K SEQ ID NO: 35 SEQ ID NO: 36
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDEWELRGFDYWGQGTLVTVSS DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVVFSSNNKICLAWYQQKPGQPPKLLIYWSSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSSPWTFGQGTKVEIK
1.62.3-u1-3-IgG1K SEQ ID NO: 37 SEQ ID NO: 38
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNAGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDEWELRGFDYWGQGTLVTVSS DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVVFSSNNKISLAWYQQKPGQPPKLLIYWSSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSSPWTFGQGTKVEIK
1.134.9-u1-IgG1L SEQ ID NO: 39 SEQ ID NO: 40
QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGGSISSYNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIYHGGNTNYNPSLKSRVTMSVDNSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARAPGDWGGSPYFDFWGQGTLVTVSS SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDNLRTYYASWYQQKPGQAPILLIYGRNKRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEAAYYCNSRDSSGNPVVFGGGTKLTVL
1.186.19-u1-IgG1K SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 42
QVHLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMGWIRQAPGQGLEWVSYISGSGNTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRADDTAVYFCAKERGAAGAGWFDPWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYHCQQVNSFPWTFGQGTKVEIK
1.214.23-u1-IgG1K SEQ ID NO: 43 SEQ ID NO: 44
QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCVVSGGSISNRNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIFHSGNTNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKVNSVTAADTAVYYCAKSFAVALDSWGQGTLVTVSS DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQDINSYLAWCQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGTGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLFSYPITFGQGTRLEIK
가변 영역 뉴클레오티드 서열
Antibody VHnu (heavy chain variable region nucleotide sequences) VLnu (light chain variable region nucleotide sequences)
1.7.10-u1-IgG1K SEQ ID NO: 45 SEQ ID NO: 46
CAG GTG CAC CTG GTG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTC AAG CCT GGA GGG TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT GAC TAC TAC ATG AGC TGG ATC CGC CAG GCT CCA GGG AAG GGG CTG GAG TGG GTT TCA TAC ATT AGT GGT AGT GGT AAC ACC ATT TAC TAC GCA GAC TCT GTG AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGG GAC AAC GCC AAG AAC TCA CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAC GAC ACG GCC GTA TAT TTC TGT GCG AGA GAG AGA GGA GCA GCT GGT ACA GGG TGG TTC GAC CCC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA GAC ATC CAG ATG ACC CAG TCT CCA TCT TCC GTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC AGA GTC ACC ATC ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT GCT GCA TCC AGT TTG CAA GGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT TAC TAT TGT CAA CAG GTT AAC AGT TTC CCG TGG ACG TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC AAA
1.62.3-u1-IgG1K SEQ ID NO: 47 SEQ ID NO: 48
CAG GTG CAG CTG CAG GAG TCG GGC CCA GGA CTG GTG AAG CCT TCA CAG ACC CTG TCC CTC ACC TGC ACT GTC TCT GGT GGC TCC ATC AGT AAT GGT GGT TAC TAC TGG AGC TGG ATC CGC CAG CAC CCA GGG AAG GGC CTG GAG TGG ATT GGG TAC ATC TAT TAC AGT GGG AGC ACC TAC TAC AAC CCG TCC CTC AAG AGT CGA GTT ACC ATA TCA GTA GAC ACG TCT AAG AAC CAG TTC TCC CTG AAA CTG AGC TCT GTG ACT GCC GCG GAC ACG GCC GTG TAT TAC TGT GCG AGA GAT GAG TGG GAG CTA CGG GGG TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA GAC ATC GTG ATG ACC CAG TCT CCA GAC TCC CTG GCT GTG TCT CTG GGC GAG AGG GCC ACC ATC AAC TGC AAG TCC AGC CAG AGT GTT GTA TTC AGC TCC AAC AAT AAG ATC TGC TTA GCT TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGA CAG CCT CCT AAG CTG CTC ATT TAC TGG TCA TCT ACC CGG GAA TCC GGG GTC CCT GAC CGA TTC AGT GGC AGC GGG TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGC CTG CAG GCT GAA GAT GTG GCA GTT TAT TAC TGT CAG CAA TAT TAT AGT TCT CCG TGG ACG TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC AAA
1.62.3-u1-3-IgG1K SEQ ID NO: 49 SEQ ID NO: 50
CAG GTG CAG CTG CAG GAG TCG GGC CCA GGA CTG GTG AAG CCT TCA CAG ACC CTG TCC CTC ACC TGC ACT GTC TCT GGT GGC TCC ATC AGT AAT GCC GGT TAC TAC TGG AGC TGG ATC CGC CAG CAC CCA GGG AAG GGC CTG GAG TGG ATT GGG TAC ATC TAT TAC AGT GGG AGC ACC TAC TAC AAC CCG TCC CTC AAG AGT CGA GTT ACC ATA TCA GTA GAC ACG TCT AAG AAC CAG TTC TCC CTG AAA CTG AGC TCT GTG ACT GCC GCG GAC ACG GCC GTG TAT TAC TGT GCG AGA GAT GAG TGG GAG CTA CGG GGG TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA GAC ATC GTG ATG ACC CAG TCT CCA GAC TCC CTG GCT GTG TCT CTG GGC GAG AGG GCC ACC ATC AAC TGC AAG TCC AGC CAG AGT GTT GTA TTC AGC TCC AAC AAT AAG ATC AGC TTA GCT TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGA CAG CCT CCT AAG CTG CTC ATT TAC TGG TCA TCT ACC CGG GAA TCC GGG GTC CCT GAC CGA TTC AGT GGC AGC GGG TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGC CTG CAG GCT GAA GAT GTG GCA GTT TAT TAC TGT CAG CAA TAT TAT AGT TCT CCG TGG ACG TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC AAA
1.134.9-u1-IgG1L SEQ ID NO: 51 SEQ ID NO: 52
CAG GTG CAG CTG CAG GAG TCG GGC CCA GGA CTG GTG AAG CCT TCG GGG ACC CTG TCC CTC ACC TGC GCT GTC TCT GGT GGC TCC ATC AGT AGT TAT AAC TGG TGG AGT TGG GTC CGC CAG CCC CCA GGG AAG GGA CTG GAG TGG ATT GGG GAA ATC TAT CAT GGT GGG AAC ACC AAC TAC AAC CCG TCC CTC AAG AGT CGA GTC ACC ATG TCA GTA GAC AAC TCC AAG AAC CAG TTC TCC CTG AAG CTG AGC TCT GTG ACC GCC GCG GAC ACG GCC GTA TAT TAC TGT GCG AGA GCC CCC GGG GAC TGG GGA GGT TCC CCC TAT TTT GAC TTC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA GGT TCT GTG GTT TCT TCT GAA CTG ACT CAG GAC CCT GCT GTG TCT GTG GCC TTG GGA CAG ACA GTC AGG ATC ACA TGC CAG GGA GAC AAC CTC AGA ACC TAT TAT GCA AGC TGG TAC CAG CAG AAG CCA GGA CAG GCC CCT ATA CTT CTC ATC TAT GGT AGA AAC AAG CGG CCC TCA GGG ATC CCA GAC CGA TTC TCT GGC TCC AGC TCG GGA AAC ACA GCT TCC TTG ACC ATC ACT GGG GCT CAG GCG GAA GAT GAG GCT GCG TAC TAC TGT AAC TCC CGG GAC AGC AGT GGT AAT CCT GTG GTA TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA
1.186.19-u1-IgG1K SEQ ID NO: 53 SEQ ID NO: 54
CAG GTG CAC CTG GTG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTC AAG CCT GGA GGG TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT GAC TAC TAC ATG GGC TGG ATC CGC CAG GCT CCA GGG CAG GGG CTG GAG TGG GTT TCA TAC ATT AGT GGT AGT GGT AAC ACC ATT TAC TAC GCA GAC TCT GTG AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGG GAC AAC GCC AAG AAC TCA CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAC GAC ACG GCC GTT TAT TTC TGT GCG AAA GAG AGA GGA GCA GCT GGT GCA GGG TGG TTC GAC CCC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA GAC ATC CAG ATG ACC CAG TCT CCA TCT TCC GTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC AGA GTC ACC ATC ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT GCT GCA TCC AGT TTG CAA GGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT TAC CAT TGT CAA CAG GTT AAC AGT TTC CCG TGG ACG TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC AAA
1.214.23-u1-IgG1K SEQ ID NO: 55 SEQ ID NO: 56
CAG GTG CAG CTG CAG GAG TCG GGC CCA GGA CTG GTG AAG CCT TCG GGG ACC CTG TCC CTC ACC TGT GTT GTC TCC GGT GGC TCC ATC AGC AAT AGA AAC TGG TGG AGT TGG GTC CGC CAG CCC CCA GGG AAG GGG CTG GAG TGG ATT GGG GAA ATC TTT CAT AGT GGG AAC ACC AAC TAC AAC CCG TCC CTC AAG AGT CGC GTC ACC ATA TCA GTA GAC AAG TCC AAG AAC CAG TTC TCC CTG AAG GTG AAC TCT GTG ACC GCC GCG GAC ACG GCC GTG TAT TAC TGT GCG AAA TCC TTT GCA GTG GCC CTT GAC TCC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA GAC ATC CAG TTG ACC CAG TCT CCA TCC TTC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC AGA GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCC AGT CAG GAC ATT AAC AGT TAT TTA GCC TGG TGT CAG CAA AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT GCT GCA TCC TCT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC ACT GGA TCT GGG ACA GAG TTC ACT CTC ACA ATC AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT TAT TAC TGT CAA CAG CTT TTT AGT TAC CCG ATC ACC TTC GGC CAA GGG ACA CGA CTG GAG ATT AAA
<110> WuXi Biologics (Shanghai) Co., LTD. Wuxi Biologics Ireland Limited <120> Fully human antibodies against OX40, method for preparing the same, and use thereof <130> PI200024CN <150> PCT/CN 2018/086574 <151> 2018-05-11 <150> CN 201810529840.5 <151> 2018-05-29 <160> 56 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 2 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 3 Tyr Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 4 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Gly 1 5 <210> 5 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 5 Glu Arg Gly Ala Ala Gly Thr Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 6 Gln Gln Val Asn Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 7 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 of 1.62.3-u1-IgG1K <400> 7 Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5 10 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 of 1.62.3-u1-IgG1K <400> 8 Lys Ser Ser Gln Ser Val Val Phe Ser Ser Asn Asn Lys Ile Cys Leu 1 5 10 15 Ala <210> 9 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 of 1.62.3-u1-IgG1K or 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 9 Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 of 1.62.3-u1-IgG1K or 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 10 Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 of 1.62.3-u1-IgG1K or 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 11 Asp Glu Trp Glu Leu Arg Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 of 1.62.3-u1-IgG1K or 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 12 Gln Gln Tyr Tyr Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 13 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 of 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 13 Gly Gly Ser Ile Ser Asn Ala Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5 10 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 of 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 14 Lys Ser Ser Gln Ser Val Val Phe Ser Ser Asn Asn Lys Ile Ser Leu 1 5 10 15 Ala <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 15 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Asn Trp Trp Ser 1 5 10 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 16 Gln Gly Asp Asn Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 17 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 17 Glu Ile Tyr His Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 18 Gly Arg Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 19 Ala Pro Gly Asp Trp Gly Gly Ser Pro Tyr Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 20 Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro Val Val 1 5 10 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 21 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Gly 1 5 10 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 22 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 23 Tyr Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 24 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Gly 1 5 <210> 25 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 25 Glu Arg Gly Ala Ala Gly Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 26 Gln Gln Val Asn Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 27 Gly Gly Ser Ile Ser Asn Arg Asn Trp Trp Ser 1 5 10 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 28 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 29 Glu Ile Phe His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 30 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 31 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 31 Ser Phe Ala Val Ala Leu Asp Ser 1 5 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 32 Gln Gln Leu Phe Ser Tyr Pro Ile Thr 1 5 <210> 33 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 33 Gln Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Gly Ala Ala Gly Thr Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 34 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 34 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asn Ser Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 35 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.62.3-u1-IgG1K <400> 35 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly 20 25 30 Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Glu Trp Glu Leu Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 36 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.62.3-u1-IgG1K <400> 36 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Val Phe Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Ile Cys Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 37 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 37 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Ala 20 25 30 Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Glu Trp Glu Leu Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 38 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 38 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Val Phe Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Ile Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 39 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 39 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Asn Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Pro Gly Asp Trp Gly Gly Ser Pro Tyr Phe Asp Phe Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 40 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Asn Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Gly Arg Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Ala Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 41 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 41 Gln Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Arg Gly Ala Ala Gly Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Val Asn Ser Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 43 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 43 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Arg 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Phe His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Val Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Phe Ala Val Ala Leu Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 44 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 44 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Cys Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Thr Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Phe Ser Tyr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 45 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 45 caggtgcacc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtggta gtggtaacac catttactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgacgac acggccgtat atttctgtgc gagagagaga 300 ggagcagctg gtacagggtg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 46 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.7.10-u1-IgG1K <400> 46 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaggtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gttaacagtt tcccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 47 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.62.3-u1-IgG1K <400> 47 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt aatggtggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240 tccctgaaac tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagat 300 gagtgggagc tacgggggtt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 360 <210> 48 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.62.3-u1-IgG1K <400> 48 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgttgta ttcagctcca acaataagat ctgcttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactggtc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagttct 300 ccgtggacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339 <210> 49 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 49 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt aatgccggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240 tccctgaaac tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagat 300 gagtgggagc tacgggggtt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 360 <210> 50 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.62.3-u1-3-IgG1K <400> 50 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgttgta ttcagctcca acaataagat cagcttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactggtc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagttct 300 ccgtggacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339 <210> 51 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 51 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggggac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtgg ctccatcagt agttataact ggtggagttg ggtccgccag 120 cccccaggga agggactgga gtggattggg gaaatctatc atggtgggaa caccaactac 180 aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccatg tcagtagaca actccaagaa ccagttctcc 240 ctgaagctga gctctgtgac cgccgcggac acggccgtat attactgtgc gagagccccc 300 ggggactggg gaggttcccc ctattttgac ttctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 52 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.134.9-u1-IgG1L <400> 52 ggttctgtgg tttcttctga actgactcag gaccctgctg tgtctgtggc cttgggacag 60 acagtcagga tcacatgcca gggagacaac ctcagaacct attatgcaag ctggtaccag 120 cagaagccag gacaggcccc tatacttctc atctatggta gaaacaagcg gccctcaggg 180 atcccagacc gattctctgg ctccagctcg ggaaacacag cttccttgac catcactggg 240 gctcaggcgg aagatgaggc tgcgtactac tgtaactccc gggacagcag tggtaatcct 300 gtggtattcg gcggagggac caagctgacc gtccta 336 <210> 53 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 53 caggtgcacc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgggctggat ccgccaggct 120 ccagggcagg ggctggagtg ggtttcatac attagtggta gtggtaacac catttactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgacgac acggccgttt atttctgtgc gaaagagaga 300 ggagcagctg gtgcagggtg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 54 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.186.19-u1-IgG1K <400> 54 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaggtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacca ttgtcaacag gttaacagtt tcccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 55 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 55 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggggac cctgtccctc 60 acctgtgttg tctccggtgg ctccatcagc aatagaaact ggtggagttg ggtccgccag 120 cccccaggga aggggctgga gtggattggg gaaatctttc atagtgggaa caccaactac 180 aacccgtccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca agtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaggtga actctgtgac cgccgcggac acggccgtgt attactgtgc gaaatccttt 300 gcagtggccc ttgactcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351 <210> 56 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of 1.214.23-u1-IgG1K <400> 56 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca ggacattaac agttatttag cctggtgtca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatcctctt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcactggatc tgggacagag ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag ctttttagtt acccgatcac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa a 321

Claims (50)

  1. 다음을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    A) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 중쇄 CDRs (CDRHs):
    (i) 서열번호 1, 7, 13, 15, 21 및 27로 이루어진 군에서 선택된 CDRH1 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH1;
    (ii) 서열번호 3, 9, 17, 23 및 29로 이루어진 군에서 선택된 CDRH2 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH2; 및
    (iii) 서열번호 5, 11, 19, 25 및 31로 이루어진 군에서 선택된 CDRH3 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRH3;
    B) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 경쇄 CDRs (CDRLs):
    (i) 서열번호 2, 8, 14, 16, 22 및 28로 이루어진 군에서 선택된 CDRL1 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL1;
    (ii) 서열번호 4, 10, 18, 24 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 CDRL2 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL2; 및
    (iii) 서열번호 6, 12, 20, 26 및 32로 이루어진 군에서 선택된 CDRL3 서열과 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 CDRL3; 또는
    C) A의 CDRHs 중 1종 이상 및 B의 CDRLs 중 1종 이상.
  2. 제1항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    A) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 적어도1종 이상의 중쇄 CDRs (CDRHs):
    (i) 서열번호 1, 7, 13, 15, 21 및 27로 이루어진 군에서 선택된 CDRH1, 또는 상기 CDRH1에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH1;
    (ii) 서열번호 3, 9, 17, 23 및 29로 이루어진 군에서 선택된 CDRH2, 또는 상기 CDRH2에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH2; 및
    (iii) 서열번호 5, 11, 19, 25 및 31로 이루어진 군에서 선택된 CDRH3, 또는 상기 CDRH3에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRH3;
    B) 다음으로 이루어진 군에서 선택된 적어도1종 이상의 경쇄 CDRs (CDRLs):
    (i) 서열번호 2, 8, 14, 16, 22 및 28로 이루어진 군에서 선택된 CDRL1, 또는 상기 CDRH1에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL1;
    (ii) 서열번호 4, 10, 18, 24 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 CDRL2, 또는 상기 CDRH2에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL2; 및
    (iii) 서열번호 6, 12, 20, 26 및 32로 이루어진 군에서 선택된 CDRL3, 또는 상기 CDRH3에서 2개 이하의 아미노산이 추가, 결실 또는 치환된 CDRL3; 또는
    C) A의 CDRHs 중 1종 이상 및 B의 CDRLs 중 1종 이상.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 1을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
    (b) 서열번호 3을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
    (c) 서열번호 5를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
    (d) 서열번호 2를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
    (e) 서열번호 4를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
    (f) 서열번호 6을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 7을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
    (b) 서열번호 9를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
    (c) 서열번호 11을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
    (d) 서열번호 8을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
    (e) 서열번호 10을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
    (f) 서열번호 12를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 13을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
    (b) 서열번호 9를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
    (c) 서열번호 11을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
    (d) 서열번호 14를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
    (e) 서열번호 10을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
    (f) 서열번호 12를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 15를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
    (b) 서열번호 17을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
    (c) 서열번호 19를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
    (d) 서열번호 16을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
    (e) 서열번호 18을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
    (f) 서열번호 20을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 21을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
    (b) 서열번호 23을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
    (c) 서열번호 25를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
    (d) 서열번호 22를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
    (e) 서열번호 24를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
    (f) 서열번호 26을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 27을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH1;
    (b) 서열번호 29를 포함하거나 이로 이루어진 CDRH2;
    (c) 서열번호 31을 포함하거나 이로 이루어진 CDRH3;
    (d) 서열번호 28을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH1;
    (e) 서열번호 30을 포함하거나 이로 이루어진 CDLH2; 및
    (f) 서열번호 32를 포함하거나 이로 이루어진 CDLH3.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (A) 중쇄 가변 영역:
    (i) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함;
    (ii) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함; 또는
    (iii) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 및 43으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산의 추가, 결실 및/또는 치환을 포함; 및/또는
    (B) 경쇄 가변 영역:
    (i) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함;
    (ii) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함; 또는
    (iii) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 및 44로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산의 추가, 결실 및/또는 치환을 포함
  10. 제9항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (e) 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (f) 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음의 특성 중 하나 이상을 포함하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 1 x 10-8 M 이하의 KD로 인간 OX40에 결합;
    (b) CD4+ T 세포에서 사이토 카인 (예를 들어, IL-2 또는 IFN-γ)의 생산 유도;
    (c) 1차 인간 CD4+ T 세포의 증식 향상;
    (d) 조절 T 세포 (Treg) 세포의 존재 하에 1차 인간 CD4+ T 이펙터 세포 (T effector cells)의 증식을 향상;
    (e) 인간 또는 붉은 털 원숭이 (rhesus monkey) OX40에 각각 결합; 또는
    (f) 인간 CD40, CD137 및 CD271에 대한 교차 반응이 없음.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 모노클로날 항체, 키메라 항체 또는 인간화 항체인 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 완전 인간 모노클로날 항체인 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 이식 유전자를 가진 (transgenic) 포유류 동물에 의해 생성된 완전 인간 모노클로날 항체인 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  15. 제1항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 이식 유전자를 가진 래트 (rat)에 의해 생성된 완전 인간 모노클로날 항체인 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 재조합 면역 글로불린 유전자좌를 갖는 이식 유전자를 가진 래트 (rat)에 의해 생성된 완전 인간 모노클로날 항체인 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  17. 제1항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG의 불변 영역에 융합된 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간의 IgG의 불변 영역에 융합된 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간의 IgG1 또는 인간의 IgG4의 불변 영역에 융합된 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  20. 제1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 OX40의 CRD2 및/또는 CRD3 도메인에 결합하는 것인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대한 결합에 경쟁하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 단리된 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자.
  23. 제22항에 있어서, 상기 단리된 핵산 분자는 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 단리된 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하고, 다음으로 이루어진 군에서 선택된 핵산 서열을 포함하는 것인, 단리된 핵산 분자:
    (A) 서열번호 33, 35, 37, 39, 41 또는 43에 제시된 바와 같은 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열;
    (B) 서열번호 45, 47, 49, 51, 53 또는 55에 제시된 핵산 서열; 또는
    (C) A 또는 B의 핵산 서열의 상보적 서열에 높은 엄격성 조건 하에서 혼성화된 핵산 서열.
  24. 제22항에 있어서, 상기 단리된 핵산 분자는 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 단리된 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 다음으로 이루어진 군에서 선택된 핵산 서열을 포함하는 것인, 단리된 핵산 분자:
    (A) 서열번호 34, 36, 38, 40, 42 또는 44에 제시된 바와 같은 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열;
    (B) 서열번호 46, 48, 50, 52, 54 또는 56에 제시된 핵산 서열; 또는
    (C) A 또는 B의 핵산 서열의 상보적 서열에 높은 엄격성 조건 하에서 혼성화된 핵산 서열.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  26. 제25항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  27. 제1항 내지 제21항의 항체 중 적어도 하나 이상의 항체 또는 이의 결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  28. 다음의 단계를 포함하는 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법:
    - 제26항의 숙주 세포에서 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하는 단계; 및
    - 숙주 세포로부터 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 분리하는 단계.
  29. 대상체에서 면역 반응이 조절되도록 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 면역 반응을 조절하는 방법.
  30. 제24항에 있어서, 상기 T 세포 증식은 대상체에서 향상되는 것인, 방법.
  31. 제24항에 있어서, 상기 1차 인간 CD4+ T 세포의 항-CD3 유도 증식은 대상체에서 강화되는 것인, 방법.
  32. 제24항에 있어서, 상기 조절 T 세포의 존재 하에 1차 인간 CD4+ T 이펙터 세포의 증식은 대상체에서 강화되는 것인, 방법.
  33. 제24항에있어서, 상기 사이토 카인 IFN-γ 생산이 증가되는 것인, 방법.
  34. 제24항에있어서, 상기 사이토 카인 IL-2 생산이 증가되는 것인, 방법.
  35. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제27항의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 비정상적인 세포 성장을 치료하는 방법.
  36. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제27항의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 조절 T 세포 (Treg)의 억제 기능을 손상시키는 방법.
  37. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제27항의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법.
  38. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제27항의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양 세포 전이를 감소시키는 방법.
  39. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제27항의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 포함하는 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 암은 고형암인 것인, 방법.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 상기 암은 대장암인 것인, 방법.
  42. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 대상체에서 면역 반응을 조절하기 위한 약제의 제조 용도.
  43. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 대상체에서 비정상적인 세포 성장을 치료하기 위한 약제의 제조 용도.
  44. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하기 위한 약제의 제조 용도.
  45. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 대상체에서 종양 세포 전이를 감소시키기 위한 약제의 제조 용도.
  46. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조 용도.
  47. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 진단하기 위한 진단제의 제조 용도.
  48. 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도.
  49. 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 진단하기 위한 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도.
  50. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 용기를 포함하는 증식성 장애 (예를 들어, 암), 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을 치료 또는 진단용 키트.
KR1020207035680A 2018-05-11 2019-05-07 Ox40에 대한 완전한 인간 항체, 이를 준비하는 방법 및 이의 용도 KR20210039986A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNPCT/CN2018/086574 2018-05-11
CN2018086574 2018-05-11
CN201810529840 2018-05-29
CN201810529840.5 2018-05-29
PCT/CN2019/085886 WO2019214624A1 (en) 2018-05-11 2019-05-07 Fully human antibodies against ox40, method for preparing same, and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210039986A true KR20210039986A (ko) 2021-04-12

Family

ID=68466901

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207035680A KR20210039986A (ko) 2018-05-11 2019-05-07 Ox40에 대한 완전한 인간 항체, 이를 준비하는 방법 및 이의 용도

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20210171647A1 (ko)
EP (2) EP3790903A4 (ko)
JP (1) JP7411575B2 (ko)
KR (1) KR20210039986A (ko)
CN (2) CN114685665A (ko)
AU (1) AU2019264712A1 (ko)
BR (1) BR112020023026A2 (ko)
CA (1) CA3103040A1 (ko)
MX (1) MX2020012081A (ko)
SG (1) SG11202011201QA (ko)
TW (1) TWI831778B (ko)
WO (1) WO2019214624A1 (ko)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112020023746A2 (pt) 2018-05-23 2021-02-17 Beigene, Ltd. anticorpo, composição farmacêutica, método para tratar câncer, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, processo para a produção de um anticorpo e reagente de diagnóstico
US20230022859A1 (en) * 2019-11-21 2023-01-26 Beigene, Ltd. Treatment of cancer with anti-ox40 antibodies and multi-kinase inhibitors
CN113045655A (zh) * 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
CN111153994B (zh) * 2019-12-31 2021-10-15 武汉班科生物技术股份有限公司 人肿瘤坏死因子的人源单克隆抗体
JP2023519584A (ja) * 2020-03-23 2023-05-11 バイオ － テラ ソリューションズ、リミテッド 免疫細胞活性化剤の開発及び応用
CN117186219B (zh) * 2020-04-17 2024-07-12 珠海泰诺麦博制药股份有限公司 抗人神经生长因子的抗体
CN111518209B (zh) * 2020-05-09 2023-07-25 郑州航空港百桥生物科技有限公司 特异性结合人ox40的单克隆抗体及其应用
WO2022100659A1 (en) * 2020-11-12 2022-05-19 Curon Biopharmaceutical (Shanghai) Co., Limited Combination therapy and methods utilizing the same

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US7771951B2 (en) 2001-12-03 2010-08-10 Amgen Fremont Inc. Antibody categorization based on binding characteristics
EP1525223B1 (en) 2002-06-13 2007-11-21 Crucell Holland B.V. Ox40 (=cd134) receptor agonists and therapeutic use
TWI461436B (zh) * 2005-11-25 2014-11-21 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd 人類ｃｄ１３４（ｏｘ４０）之人類單株抗體及其製造及使用方法
JP5761997B2 (ja) * 2007-12-14 2015-08-12 ブリストル−マイヤーズ・スクイブ・カンパニー ヒトｏｘ４０受容体に対する結合分子
ES2630328T3 (es) * 2010-08-23 2017-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Anticuerpos anti-OX40 y procedimientos de uso de los mismos
JP6261499B2 (ja) * 2011-07-11 2018-01-17 グレンマーク ファーマシューティカルズ， エセ．アー． Ｏｘ４０と結合する抗体およびその使用
GB201116092D0 (en) * 2011-09-16 2011-11-02 Bioceros B V Antibodies and uses thereof
PT2931030T (pt) 2012-12-14 2020-08-03 Open Monoclonal Tech Inc Polinucleótidos que codificam anticorpos de roedores com idiótipos humanos e animais que os compreendem
MX2015013288A (es) 2013-03-18 2016-04-07 Biocerox Prod Bv Anticuerpos anti-cd134 (ox40) humanizados y usos de los mismos.
MX371455B (es) * 2013-08-02 2020-01-28 Pfizer Anticuerpos anti-cxcr4 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
PE20161571A1 (es) 2014-03-31 2017-02-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-ox40 y metodos de uso
TW201619200A (zh) 2014-10-10 2016-06-01 麥迪紐有限責任公司 人類化抗－ｏｘ４０抗體及其用途
MY189692A (en) * 2015-05-07 2022-02-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
JP2018520650A (ja) 2015-05-21 2018-08-02 アリゲーター・バイオサイエンス・アーベー 新規のポリペプチド
US9644032B2 (en) * 2015-05-29 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against OX40 and uses thereof
WO2017063162A1 (zh) 2015-10-15 2017-04-20 苏州丁孚靶点生物技术有限公司 抗ox40抗体及其应用
MA43389A (fr) * 2015-12-02 2021-05-12 Agenus Inc Anticorps anti-ox40 et leurs procédés d'utilisation
CN109863170B (zh) 2016-08-12 2024-08-16 詹森生物科技公司 具有增强的激动作用和效应子功能的工程化抗体及其他含Fc结构域分子
CN107815465B (zh) * 2016-08-31 2021-03-16 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 人源化基因改造动物模型的制备方法及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CA3103040A1 (en) 2019-11-14
EP4074732A1 (en) 2022-10-19
CN110467674B (zh) 2022-05-31
BR112020023026A2 (pt) 2021-02-09
CN114685665A (zh) 2022-07-01
CN110467674A (zh) 2019-11-19
EP3790903A1 (en) 2021-03-17
AU2019264712A1 (en) 2021-01-07
SG11202011201QA (en) 2020-12-30
JP7411575B2 (ja) 2024-01-11
TWI831778B (zh) 2024-02-11
MX2020012081A (es) 2021-04-28
EP3790903A4 (en) 2022-06-08
JP2021522847A (ja) 2021-09-02
US20210171647A1 (en) 2021-06-10
WO2019214624A1 (en) 2019-11-14
TW202003575A (zh) 2020-01-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110204614B (zh) 抗人lag-3单克隆抗体及其制备方法和用途
CN110357961B (zh) 抗人4-1bb单克隆抗体及其制备方法和用途
CN110467674B (zh) 抗ox40的全人抗体及其制备方法和用途
DK2594590T3 (en) A process for the production of binding molecules to the human OX40-receptor
US12054554B2 (en) Monoclonal antibody against human 4-1BB, method for preparing the same, and use thereof
US20240067725A1 (en) Monoclonal antibody against human lag-3, method for preparing same, and use thereof
CN114599681B (zh) 新型抗cd47抗体及其用途
WO2022037662A1 (en) Cd40 agonistic antibody and method of use
CN113195538B (zh) 抗tim-3抗体及其用途
WO2020119792A1 (en) Humanized antibodies against ox40, method for preparing the same, and use thereof
WO2020119789A1 (en) Fully human antibodies against ox40, method for preparing the same, and use thereof
WO2020119793A1 (en) Humanized antibodies against ox40, method for preparing the same, and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right