KR20210038544A - Blg에 기반한 인스턴트 음료 분말 - Google Patents

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캐스퍼 뵈겔룬트 라우리드슨
한스 베르텔슨
쇠렌 방 니엘슨
모우라 마씨엘 구일헤름 드
카레 쇤더가아드
베흐나즈 라지 파르지콜라에이
탄야 크리스틴 예거
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아를라 푸즈 에이엠비에이
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Abstract

본 발명은 인스턴트 음료 분말 제품 및 인스턴트 음료 분말 제품을 제조하는 방법, 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 액체 식품 및 액체 식품을 제조하는 방법, 액체 식품의 용도, 및 인스턴트 음료 분말 제품을 포함하는 키트에 관한 것이다.

Description

BLG에 기반한 인스턴트 음료 분말
본 발명은 인스턴트 음료 분말 제품 및 인스턴트 음료 분말 제품을 제조하는 방법, 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 액체 식품 및 액체 식품을 제조하는 방법, 액체 식품의 용도, 및 인스턴트 음료 분말 제품을 포함하는 키트에 관한 것이다.
유청(milk serum) 단백질을 포함하는 영양 보충제는 일반적으로 근육 합성, 체중 조절, 및 근육과 체중 유지를 위해 사용된다. 영양 보충제는 상이한 종류의 소비자, 예를 들어, 스포츠맨/여성, 운동선수, 어린이, 노인, 및 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자 및/또는 단백질 요구량이 증가된 환자를 대상으로 한다. 따라서, 소비자가 제품을 마시는 것에 대해 느껴야 하기 때문에 영양 보충제에 대한 소비자의 인식은 매우 중요하다.
유청 단백질은 유청 또는 유장(whey)으로부터 단리될 수 있다. 유장은 전형적으로 베타-락토글로불린(BLG), 알파-락트알부민(ALA), 혈청 알부민 및 면역글로불린의 혼합물을 포함하고, 이 중 BLG가 가장 압도적이다. 따라서, 유장 단백질 농축물(WPC: whey protein concentrate)은 이러한 단백질의 혼합물을 포함한다. 유장 단백질 단리물(WPI: whey protein isolate)은 WPC보다 지방과 유당을 덜 함유한다. 유청 또는 유장으로부터 베타-락토글로불린(BLG)의 단리는 다수의 간행물의 주제이며, 전형적으로 정제된 베타-락토글로불린 제품에 도달하기 위한 여러 분리 단계 및 종종 크로마토그래피 기술을 포함한다.
국제 특허 출원 제WO2002/056707호(Nestle)에는 적어도 하나의 지방 또는 오일 공급원, 적어도 하나의 탄수화물 공급원, 및 적어도 하나의 단백질 공급원을 갖는 균형잡힌 분말 블렌드 조성물에 대해 기재되어 있다. 이 조성물은 식품의 영양적 가치를 보충하기 위해 식품에 유리하게 첨가되지만, 식품의 맛을 실질적으로 변경시키지 않는다.
제WO 2018/115520 A1호는 식용의 단리된 베타-락토글로불린 조성물 및/또는 염용 모드(salting-in mode)로 BLG의 결정화에 기반하는 결정화된 베타-락토글로불린을 함유하는 조성물을 제조하는 방법을 개시한다. 그 후, 결정화된 BLG는 잔류 모액으로부터 분리될 수 있다.
제WO 2011/112695 A1호는 영양 조성물 및 영양 조성물의 제조 및 사용 방법을 개시한다. 영양 조성물은 유장 단백질 미셀 및 류신을 포함하고 인간의 단백질 합성을 개선하기 위해 충분한 양의 류신을 제공하면서 또한 저점도 유체 매트릭스 및 허용 가능한 감각 수용성(organoleptic) 성질을 유지한다.
제WO2011/051436 A1호는 인간 또는 동물 소비를 위해 의도된 적어도 부분적으로 투명한 조성물을 개시하고 그러한 조성물의 포장에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예는 적어도 부분적으로 투명한 수성 비-알콜성 조성물을 함유하는 적어도 부분적으로 투명한 용기에 관한 것이다. 용기는 조성물에 존재하는 액정을 가시화하는 적어도 하나의 편광자를 포함한다.
제WO2004/049819 A2호는 구형 단백질의 기능성 성질을 개선하는 방법을 개시하는데, 상기 방법은 단백질(들)이 적어도 부분적으로 피브릴에 응집되어 있는 하나 이상의 구형 단백질의 용액을 제공하는 단계; 및 하기 단계들 중 하나 이상을 무작위 순서로 수행하는 단계: pH를 증가시키는 단계; 염 농도를 증가시키는 단계; 용액을 농축시키는 단계; 및 용액의 용매 품질을 변경시키는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 하나 이상의 구형 단백질의 용액은 낮은 pH에서 가열하거나 변성제를 첨가하여 제공된다. 또한, 이와 같이 수득된 단백질 첨가제, 식품 및 비-식품 적용을 위한 이의 용도 및 단백질 첨가제를 함유하는 식품 및 비-식품이 개시된다.
제WO 2010/037736 A1호는 유장 단백질의 단리 및 유장 제품 및 유장 단리물의 제조를 개시한다. 특히, 본 발명은 β-락토글로불린 생성물의 단리 및 동물로부터 수득된 유장으로부터 α-풍부 유장 단백질 단리물의 단리에 관한 것이다. 본 발명에 의해 제공된 α-풍부 유장 단백질 단리물은 β-락토글로불린이 낮은 것 이외에도 α-락트알부민과 면역글로불린 G가 높다.
제FR 2 296 428호는 임의의 알려진 분리 공정에 의해 수득된 락토세럼(lactoserum) 단백질에 기반한 식이 및 치료용 단백질 조성물을 개시한다. 조성물은 유아 및 성인의 소화 장애(예를 들어, 설사)의 치료 또는 예방, 장 감염에 대한 내성 증가, 및 특정 대사 장애(예를 들어, 고페닐알라닌혈증) 치료에 사용될 수 있다. 이들은 또한 피부과적으로 또는 미용적으로 사용될 수 있고, 저 단백질 식이의 일부를 형성할 수 있다.
본 발명자들은 높은 BLG 함량을 갖는 인스턴트 음료 분말 제품을 제공하였다. 제품은 상온에서 안정(shelf stable)하면서 동시에 식욕을 돋우는 식품이 되는데, 즉, 제품의 외관과 맛이 고객에게 관심을 끌고 있다.
따라서, 본 발명의 양태는 적어도 1% w/w BLG, 바람직하게는 적어도 5% w/w BLG를 포함하고, 여기서:
i. BLG의 결정화도는 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%이고/이거나,
ii. 단백질의 총량의 적어도 85% w/w가 BLG로 구성되고,
비타민, 향미제, 착색제, 미네랄, 감미료, 산화방지제, 식용 산, 지질, 탄수화물, 프리바이오틱스, 프로바이오틱스, 소포제 및 비-유장 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 성분을 추가로 포함하는, 인스턴트 음료 분말에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양태는 BLG 및 적어도 하나의 임의의 성분을 포함하는 인스턴트 음료 분말을 제조하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 건조 BLG 단리물을 비타민, 향미제, 착색제, 미네랄, 감미료, 산화방지제, 식용 산, 지질, 탄수화물, 프리바이오틱스, 프로바이오틱스, 소포제 및 비-유장 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 성분과 블렌딩하여 인스턴트 음료 분말을 수득하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 액체 및 본 발명에 따른 분말을 포함하는 액체 식품에 관한 것이다.
본 발명의 추가 양태는 본 발명에 따른 액체 식품을 제조하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은
i. 본 발명에 따른 인스턴트 음료 분말을 첨가하는 단계,
ii. 임의로 적어도 하나의 추가 성분을 첨가하는 단계, 및
iii. 수득된 분말과 액체를 혼합하여 균일한 혼합물을 형성하는 단계를 포함한다.
본 발명의 추가 양태는 영양 보충제로서 사용하기 위한, 본 발명에 따른 인스턴트 음료 분말에 관한 것이다.
본 발명의 추가 양태는 본 발명에 따른 분말을 포함하는 키트에 관한 것이며:
i. 상기 분말을 측정하기 위한 도구, 및
ii. 용기를 열고 닫기 위한 뚜껑을 갖는 용기;
여기서, 상기 용기는 상기 분말을 액체와 혼합하여 식품을 형성하기 위한 것이고, 상기 용기는 용기로부터 직접 식품을 마시기에 적합하다.
도 1은 PCT 출원 제PCT/EP2017/084553호의 실시예 3의 공급물 3으로부터 회수된 BLG 결정의 현미경 사진이다.
도 2는 PCT 출원 제PCT/EP2017/084553호의 실시예 3의 공급물 2로부터 수득된 전체 및 단편화된 둘 다의 BLG 결정의 현미경 사진을 나타낸다.
도 3은 실시예 5에서 제조된 6개의 저 인(low phosphorous) 음료의 하위샘플을 포함하는 시험 튜브의 사진이다.
정의
본 발명의 맥락에서, 용어 "베타-락토글로불린" 또는 "BLG"는, 예를 들어 천연, 언폴딩된 및/또는 글리코실화된 형태의 포유동물 종으로부터의 베타-락토글로불린에 관련되며, 자연 발생 유전적 변이체를 포함한다. 상기 용어는 또한 응집된 BLG, 침전된 BLG 및 결정질 BLG를 포함한다. BLG의 양을 언급할 때, 응집된 BLG를 포함하는 BLG의 총량을 참조한다. BLG의 총량은 실시예 1.31에 따라 결정된다. 용어 "응집된 BLG"는 적어도 부분적으로 언폴딩되고 또한 전형적으로 소수성 상호작용 및/또는 공유 결합에 의해 다른 변성된 BLG 분자 및/또는 다른 변성된 유장 단백질과 응집된 BLG에 관련된다.
BLG는 소의 유장 및 유청에서 가장 우세한 단백질이고, 여러 유전적 변이체로 존재하고, 젖소의 젖에서의 주요 단백질은 A와 B로 표시된다. BLG는 리포칼린 단백질이고, 많은 소수성 분자와 결합할 수 있어서, 이들의 운반에 있어 역할을 시사한다. BLG는 또한 사이드로포어(siderophore)를 통해 철에 결합할 수 있고 병원균과 싸우는 역할을 할 수 있는 것으로 나타났다. BLG의 동족체는 인간 모유에는 없다.
소 BLG는 분자량이 대략 18.3 내지 18.4 kDa인 대략 162개 아미노산 잔기의 비교적 작은 단백질이다. 생리학적 조건하에, 주로 이량체이지만 약 pH 3 미만의 단량체로 해리되어 핵 자기 공명 분광법을 사용하여 결정된 이의 천연 상태로 보존된다. 반대로, BLG는 또한 다양한 자연 조건하에 사량체, 팔량체 및 기타 다중 응집 형태로 발생한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "비-응집된 베타-락토글로불린" 또는 "비-응집된 BLG"는 또한, 예를 들어, 천연의 언폴딩된 및/또는 글리코실화된 형태의 포유동물 종으로부터의 베타-락토글로불린에 관련되며, 자연 발생 유전적 변이체를 포함한다. 그러나, 상기 용어는 응집된 BLG, 침전된 BLG 또는 결정화된 BLG를 포함하지 않는다. 비-응집된 BLG의 양 또는 농도는 실시예 1.6에 따라 결정된다.
총 BLG에 대한 비-응집된 BLG의 백분율은(m총 BLG - m비응집체 BLG)/m총 BLG *100%를 계산하여 결정된다. m총 BLG는 실시예 1.31에 따라 결정된 BLG의 농도 또는 양이고, m비-응집된 BLG는 실시예 1.6에 따라 결정된 비-응집된 BLG의 농도 또는 양이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "결정"은 구성요소(예컨대, 원자, 분자 또는 이온)가 고도로 정렬된 미세한(microscopic) 구조로 배열되어 모든 방향으로 확장되는 결정 격자를 형성하는 고체 물질에 관련된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "BLG 결정"은 주로 비응집되고 바람직하게는 고도로 정렬된 미세한 구조로 배열된 천연 BLG를 함유하여 모든 방향으로 확장되는 결정 격자를 형성하는 단백질 결정에 관련된다. BLG 결정은, 예를 들어, 모놀리식 또는 다결정질일 수 있고, 예를 들어, 온전한 결정, 결정의 단편, 또는 이의 조합일 수 있다. 결정의 단편은, 예를 들어, 처리 동안 온전한 결정이 기계적 전단 처리될 때 형성된다. 결정의 단편은 또한 고도로 정렬된 미세한 결정 구조를 갖지만, 온전한 결정의 균일한 표면 및/또는 균일한 가장자리 또는 모서리가 없을 수 있다. 예를 들어, 다수의 온전한 BLG 결정의 예에 대해서는 도 1을 참조하고 BLG 결정의 단편의 예에 대해서는 도 2를 참조한다. 두 경우 모두, BLG 결정 또는 결정 단편은 광학 현미경을 사용하여 시각적으로 잘 정의되고 조밀하며 일관된 구조로 식별될 수 있다. BLG 결정 또는 결정 단편은 종종 적어도 부분적으로 투명하다. 단백질 결정은 또한 복굴절성으로 알려져 있으며, 이러한 광학적 성질은 결정 구조를 갖는 알려져 있지 않은 입자를 식별하기 위해 사용될 수 있다. 반면, 비-결정질 BLG 응집체는 종종 불충분하게 정의되고 불투명하고 불규칙한 크기의 개방 또는 다공성 덩어리로 보인다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "결정화하다"는 단백질 결정의 형성에 관련된다. 결정화는, 예를 들어, 자발적으로 발생하거나 결정화 씨드의 첨가에 의해 개시될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "식용 조성물"은 인간이 소비하고 식품 성분으로서 사용하기에 안전하며 문제가 되는 양의 독성 성분, 예컨대 톨루엔 또는 기타 원치 않는 유기 용매를 함유하지 않는 조성물에 관련된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "ALA" 또는 "알파-락트알부민"은, 예를 들어, 천연 및/또는 글리코실화된 형태로 포유동물 종으로부터 알파-락트알부민에 관련되며, 자연 발생 유전적 변이체를 포함한다. 상기 용어는 또한 응집된 ALA 및 침전된 BLG를 포함한다. ALA의 양을 언급할 때, 예를 들어, 응집된 ALA를 포함하는 ALA의 총량을 참조한다. ALA의 총량은 실시예 1.31에 따라 결정된다. 용어 "응집된 ALA"는 전형적으로 적어도 부분적으로 언폴딩되고 또한 전형적으로 소수성 상호작용 및/또는 공유 결합에 의해 다른 변성된 ALA 분자 및/또는 다른 변성된 유장 단백질과 응집된 ALA에 관련된다.
알파-락트알부민(ALA)은 거의 모든 포유류 종의 젖에 존재하는 단백질이다. ALA는 락토스 신타제(LS) 이종이량체의 조절 서브유닛을 형성하고, β-1,4-갈락토실트랜스퍼라제(베타4Gal-T1)는 촉매 성분을 형성한다. 함께, 이들 단백질은 LS가 갈락토스 모이어티를 글루코스로 전달하여 락토스를 생산할 수 있도록 한다. 베타-락토글로불린과의 주요 구조적 차이들 중 하나는 ALA가 공유 응집 반응의 시작점으로 역할을 할 수 있는 임의의 유리 티올기를 갖지 않는다는 것이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "비-응집된 ALA"는 또한, 예를 들어, 천연의 언폴딩된 및/또는 글리코실화된 형태의 포유동물 종으로부터의 ALA에 관련되며, 자연 발생 유전적 변이체를 포함한다. 그러나, 상기 용어는 응집된 ALA 또는 침전된 ALA를 포함하지 않는다. 비-응집된 BLG의 양 또는 농도는 실시예 1.6에 따라 결정된다.
총 ALA에 대한 비-응집된 ALA의 백분율은 (m총 ALA - m비응집체 ALA)/m총 ALA *100%를 계산하여 결정된다. m총 ALA는 실시예 1.31에 따라 결정된 ALA의 농도 또는 양이고, m비-응집된 ALA는 실시예 1.6에 따라 결정된 비-응집된 ALA의 농도 또는 양이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "카제이노마크로펩티드" 또는 "CMP"는, 예를 들어, 천연 및/또는 글리코실화된 형태로 포유동물 종으로부터 "κ-CN" 또는 "카파-카제인"의 가수분해로부터 유래된 친수성 펩티드, 잔기 106 내지 169에 관련되며, 아스파르트산 프로테이나제, 예를 들어, 키모신에 의한 자연 발생 유전적 변이체를 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "BLG 단리물"은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w의 양의 BLG를 함유하는 조성물을 의미한다. BLG 단리물은 바람직하게는 총 고형분에 대해 적어도 30% w/w, 및 바람직하게는 적어도 80% w/w의 총 단백질 함량을 갖는다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "BLG 단리물 분말"은 분말 형태의 BLG 단리물 및 바람직하게는 자유-유동 분말에 관련된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "BLG 단리물 액체"는 액체 형태의 BLG 단리물 및 바람직하게는 수성 액체에 관련된다.
용어 "유장"은 젖(밀크)의 카제인이 침전되어 제거된 후 남은 액체 상(phase)에 관련된다. 카제인 침전은, 예를 들어, 젖의 산성화 및/또는 레닛 효소의 사용에 의해 달성될 수 있다. 카제인의 레닛-기반 침전에 의해 생성되는 유장 생성물인 "스위트 유장" 및 카제인의 산-기반 침전에 의해 생성되는 유장 생성물인 "산 유장" 또는 "사워 유장(sour whey)"과 같은 여러 유형의 유장이 존재한다. 카제인의 산-기반 침전은, 예를 들어, 식용 산을 첨가하거나 박테리아 배양에 의해 달성될 수 있다.
용어 "유청"은, 예를 들어, 미세여과 또는 큰 기공 한외여과에 의해 카제인 및 유지방구(milk fat globule)가 젖에서 제거되었을 때 남아 있는 액체에 관련된다. 유청은 "이상적인 유장"으로도 지칭될 수 있다.
용어 "유청 단백질" 또는 "혈청 단백질"은 유청에 존재하는 단백질에 관련된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "유장 단백질"은 유장 또는 유청에서 발견되는 단백질에 관련된다. 유장 단백질은 유장 또는 유청에서 발견되는 단백질 종의 하위세트일 수 있으며, 심지어 단일 유장 단백질 종일 수 있거나, 유장 또는/및 유청에서 발견되는 단백질 종의 완전한 세트일 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 스위트 유장으로부터의 표준 유장 단백질 농축물의 주요 비-BLG 단백질은 ALA, CMP, 소 혈청 알부민, 면역글로불린, 오스테오폰틴, 락토페린, 및 락토퍼옥시다제이다. 본 발명의 맥락에서, 스위트 유장으로부터의 표준 유장 단백질 농축물의 주요 비-BLG 유장 단백질의 중량 백분율은 다음과 같다:
총 단백질에 대해 18% w/w 양의 ALA,
총 단백질에 대해 18% w/w 양의 CMP,
총 단백질에 대해 4% w/w 양의 BSA,
총 단백질에 대해 5% w/w 양의 카제인 종,
총 단백질에 대해 6% w/w 양의 면역글로불린,
총 단백질에 대해 0.5% w/w 양의 오스테오폰틴,
총 단백질에 대해 0.1% w/w 양의 락토페린, 및
총 단백질에 대해 0.1% w/w 양의 락토퍼옥시다제.
용어 카제인은 젖에서 발견되는 카제인 단백질에 관련되며 생젖(raw milk)에서 발견되는 천연 미셀라 카제인, 개별 카제인 종 및 카제인염을 모두 포함한다.
본 발명의 맥락에서, "과포화" 또는 "BLG에 대해 과포화"된 액체는 주어진 물리적 및 화학적 조건에서 해당 액체의 비-응집된 BLG의 포화 점보다 높은 용해된 비-응집된 BLG의 농도를 포함한다. 용어 "과포화"는 결정화 분야에 익히 알려져 있으며 (예를 들어, Gerard Coquerela, "Crystallization of molecular systems from solution: phase diagrams, supersaturation and other basic concepts", Chemical Society Reviews, p. 2286-2300, Issue 7, 2014 참조), 과포화는 다수의 상이한 측정 기술에 의해 (예를 들어, 분광법 또는 입자 크기 분석에 의해) 결정될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, BLG에 대한 과포화는 다음 절차에 의해 결정된다.
특정 조건의 세트에서 액체가 BLG에 대해 과포화되는지 여부를 시험하기 위한 절차:
a) 시험될 액체의 50 ml의 샘플을 115 mm의 높이, 25 mm의 내경 및 50 mL의 용량을 갖는 원심분리 튜브(VWR 카탈로그 번호 525-0402)로 옮긴다. a) 내지 h) 단계 동안 액체의 원래 물리적 및 화학적 조건에서 샘플 및 이의 후속 분획을 유지하도록 주의해야 한다.
b) 샘플을 3000 g에서 3.0분 동안 최대 30초 가속 및 최대 30초 감속으로 즉시 원심분리한다.
c) 원심분리 직후, 상청액을 가능한 한 많이 (펠릿이 형성된 경우, 펠릿을 방해하지 않고) 제2 원심분리 튜브(단계 a와 동일한 유형)로 옮긴다.
d) 상청액의 0.05 mL의 서브샘플(서브샘플 A)을 취한다.
e) 최대 200 미크론의 입자 크기를 갖는 10 mg의 BLG 결정(적어도 98% 순수, 총 고형분에 대해 비-응집된 BLG)을 제2 원심분리 튜브에 첨가하고, 혼합물을 진탕시킨다.
f) 제2 원심분리 튜브를 원래 온도에서 60분 동안 방치한다.
g) 단계 f) 직후, 제2 원심분리 튜브를 500 g에서 10분 동안 원심분리한 다음, 상청액의 또 다른 0.05 mL의 서브샘플(서브샘플 B)을 취한다.
h) 단계 g)의 원심분리 펠릿이 존재하는 경우, 이를 회수하고, milliQ 물에 이를 재현탁하고, 현미경으로 볼 수 있는 결정의 존재에 대해 현탁액을 즉시 검사한다.
i) 실시예 1.6에 요약된 방법을 사용하여 서브샘플 A 및 B에서 비-응집된 BLG의 농도를 결정한다 - 결과는 서브샘플의 총 중량에 대한 % BLG w/w로서 표시된다. 서브샘플 A의 비-응집된 BLG의 농도는 CBLG, A로 지칭되고, 서브샘플 B의 비-응집된 BLG의 농도는 CBLG, B로 지칭된다.
j) 단계 a)의 샘플을 취한 액체는 cBLG, B가 cBLG, A보다 낮고 단계 i)에서 결정이 관찰되면 (특정 조건에서) 과포화되었다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "액체" 및 "용액"은 입자상 물질이 없는 조성물과 액체 및 고체 및/또는 반고체 입자, 예컨대 단백질 결정 또는 기타 단백질 입자의 조합을 함유하는 조성물을 둘 다 포함한다. 따라서, "액체" 또는 "용액"은 현탁액 또는 심지어 슬러리일 수 있다. 그러나, "액체" 및 "용액"은 바람직하게는 펌핑 가능하다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "유장 단백질 농축물"(WPC) 및 "유청 단백질 농축물"(SPC)은 총 고형분에 대해 20 내지 89% w/w의 단백질의 총량을 함유하는 건조 또는 수성 조성물에 관련된다.
WPC 또는 SPC는 바람직하게는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 20 내지 89% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 15 내지 70% w/w BLG,
총 단백질에 대해 8 내지 50% w/w ALA, 및
단백질에 대해 0 내지 40% w/w CMP.
대안적으로, 그러나 또한 바람직하게는 WPC 또는 SPC는 다음을 함유할 수 있다:
총 고형분에 대해 20 내지 89% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 15 내지 90% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 50% w/w ALA, 및
단백질에 대해 0 내지 40% w/w CMP.
바람직하게는, WPC 또는 SPC는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 20 내지 89% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 15 내지 80% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 50% w/w ALA, 및
단백질에 대해 0 내지 40% w/w CMP.
더 바람직하게는, WPC 또는 SPC는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 70 내지 89% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 30 내지 90% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 35% w/w ALA, 및
단백질에 대해 0 내지 25% w/w CMP.
SPC는 전형적으로 CMP를 함유하지 않거나 미량의 CMP만을 함유한다.
용어 "유장 단백질 단리물"(WPI) 및 "유청 단백질 단리물"(SPI)은 총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w의 단백질의 총량을 함유하는 건조 또는 수성 조성물에 관련된다.
WPI 또는 SPI는 바람직하게는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 15 내지 70% w/w BLG,
총 단백질에 대해 8 내지 50% w/w ALA, 및
총 단백질에 대해 0 내지 40% w/w CMP.
대안적으로, 그러나 또한 바람직하게는 WPI 또는 SPI는 다음을 함유할 수 있다:
총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 30 내지 95% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 35% w/w ALA, 및
총 단백질에 대해 0 내지 25% w/w CMP.
더 바람직하게는, WPI 또는 SPI는 다음을 함유할 수 있다:
총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 30 내지 90% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 35% w/w ALA, 및
총 단백질에 대해 0 내지 25% w/w CMP.
SPI는 전형적으로 CMP를 함유하지 않거나 미량의 CMP만을 함유한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "추가 단백질"은 BLG가 아닌 단백질을 의미한다. 유장 단백질 용액에 존재하는 추가 단백질은 전형적으로 유청 또는 유장에서 발견되는 비-BLG 단백질 중 하나 이상을 포함한다. 그러한 단백질의 비제한적인 예는 알파-락트알부민, 소 혈청 알부민, 면역글로불린, 카제이노마크로펩티드(CMP), 오스테오폰틴, 락토페린, 및 유지방구 막 단백질이다.
용어 "본질적으로 이루어지다" 및 "본질적으로 이루어진"은 해당 청구항 또는 특징이 명시된 재료 또는 단계 및 청구된 발명의 기본 및 신규 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것을 포함함을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 문구 "Y 및/또는 X"는 "Y" 또는 "X" 또는 "Y 및 X"를 의미한다. 동일한 논리의 방식을 따라, 문구 "n1, n2, ..., ni-1, 및/또는 ni"는 " n1" 또는 " n2" 또는 ... 또는 "ni-1" 또는 "ni" 또는 구성요소의 임의의 조합을 의미한다: n1, n2,...ni-1, 및 ni.
본 발명의 맥락에서, 용어 "건조" 또는 "건조된"은 해당 조성물 또는 제품이 최대 10% w/w, 바람직하게는 최대 6% w/w, 더 바람직하게는 이보다 적은 물을 포함함을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "물리적 미생물 감소"는 조성물의 생존 가능한 미생물의 총량을 감소시키는 조성물과의 물리적 상호작용에 관련된다. 상기 용어는 미생물을 사멸시키는 화학물질의 추가를 포함하지 않는다. 상기 용어는 또한 분무-건조 동안 분무된 액적이 노출되는 열 노출을 포함하지 않지만 분무-건조 전에 가능한 예열을 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 분말의 pH는 90 g의 탈염수에 혼합된 10 g의 분말의 pH를 지칭하며 실시예 1.16에 따라 측정된다.
본 발명의 맥락에서, 특정 조성물, 제품, 또는 재료의 성분의 중량 백분율(% w/w)은 다른 참조(예를 들어, 총 고형분 또는 총 단백질)가 구체적으로 언급되지 않는 한, 특정 조성물, 제품 또는 재료의 중량에 대한 해당 성분의 중량 백분율을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 공정 단계 "농도" 및 동사 "농축시키다"는 단백질의 농도에 관련되며 총 고형분 기준의 단백질의 농도 및 총 중량 기준의 단백질의 농도를 둘 다 포함한다. 이것은, 예를 들어, 단백질 함량이 총 고형분에 대해 증가하는 한, 농도가 반드시 조성물의 단백질의 절대 농도 w/w를 증가시키는 것을 필요로 하지 않는다는 것을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 성분 X와 성분 Y 사이의 용어 "중량 비"는 mX/mY 계산에 의해 얻어진 값을 의미하며, 여기서, mX는 성분 X의 양(중량)이고, mY는 성분 Y의 양(중량)이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "적어도 저온살균"은 10초 동안 70℃의 열-처리와 동일하거나 그 보다 높은 미생물 사멸 효과를 갖는 열-처리에 관련된다. 박테리아 사멸 효과를 결정하기 위한 기준은 이. 콜리(E. coli) O157:H7이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "유장 단백질 공급물"은 액체 BLG 단리물이 유래하는 유장 단백질 공급원에 관련된다. 유장 단백질 공급물은 액체 BLG 단리물보다 총 단백질에 대해 BLG의 함량이 낮으며, 전형적으로 WPC, WPI, SPC 또는 SPI이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "BLG-풍부 조성물"은 유장 단백질 공급물로부터 BLG를 단리하여 생성된 BLG-풍부 조성물에 관련된다. BLG-풍부 조성물은 전형적으로 유장 단백질 공급물과 동일한 유장 단백질을 포함하지만, BLG는 유장 단백질 공급물보다 총 단백질에 대해 상당히 더 높은 농도로 존재한다. BLG-풍부 조성물은, 예를 들어, 크로마토그래피, 단백질 결정화 및/또는 막-기반 단백질 분별에 의해 유장 단백질 공급물로부터 제조될 수 있다. BLG-풍부 조성물은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w의 양의 BLG를 포함한다. 일부 경우에는, BLG-풍부 조성물은 액체 BLG 단리물로서 직접 사용될 수 있다. 그러나, BLG-풍부 조성물을 액체 BLG 단리물로 전환하기 위해 종종 추가 처리가 필요하다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "유장 단백질 용액"은 염용 모드로 BLG 대비 과포화되고 BLG 결정을 제조하기에 유용한 특정 수성 유장 단백질 조성물을 설명하기 위해 사용된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "멸균상태"는 해당 멸균 조성물 또는 제품이 임의로 생존 가능한 미생물을 함유하지 않고 따라서 실온에서 저장 동안 미생물 성장이 없음을 의미한다. 멸균된 조성물은 멸균상태이다.
액체, 예컨대 음료 제제가 멸균되고 무균 상태로 멸균 용기에 포장되는 경우, 전형적으로 실온에서 적어도 6개월의 유통 기한(shelf-life)을 갖는다. 멸균 처리는 액체의 부패를 초래할 수 있는 포자와 미생물을 사멸시킨다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "에너지 함량"은 식품에 함유된 에너지의 총 함량을 의미한다. 에너지 함량은 킬로줄(kJ) 또는 킬로 칼로리(kcal)로 측정될 수 있으며, 식품의 양당 칼로리, 예를 들어, 식품의 100 그램당 kcal로 지칭된다. 일례는 인스턴트 음료 분말 100 그램당 350 kcal의 에너지 함량을 갖는 인스턴트 음료 분말이다.
식품의 총 에너지 함량은, 예를 들어, 단백질, 지질 및 탄수화물로부터의 에너지인, 식품에 존재하는 모든 다량 영양소(macronutrient)로부터의 에너지 기여를 포함한다. 식품 내의 다량 영양소로부터의 에너지 분포는 식품 내의 다량 영양소의 양과 식품의 총 에너지 함량에 대한 다량 영양소의 기여에 기반하여 계산될 수 있다. 에너지 분포는 식품의 총 에너지 함량의 에너지 퍼센트(E%)로 언급될 수 있다. 예를 들어, 20 E% 단백질, 50 E% 탄수화물 및 30 E% 지질을 포함하는 인스턴트 음료 분말의 경우, 이것은 총 에너지의 20%가 단백질로부터, 총 에너지의 50%가 탄수화물로부터 그리고 총 에너지의 30%가 지방(지질)으로부터 나온다는 것을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "영양 보충제"는 하나 이상의 다량 영양소, 예컨대 단백질, 지질 및/또는 탄수화물을 포함하고, 임의로 비타민 및 미네랄을 포함하는 식품에 관련된다. 영양 보충제는 완전하거나 불완전할 수 있다.
용어 "영양적으로 완전한 영양 보충제"란 단백질, 지질, 및 탄수화물을 포함하며 비타민, 미네랄, 및 미량 원소를 추가로 포함하는 식품으로 이해되고, 여기서, 식품은 완전하고 건강한 식이와 일치하는 영양 프로파일을 갖고 있다.
용어 "영양적으로 불완전한 보충제"는 하나 이상의 다량 영양소를 포함하며 임의로 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하는 식품을 의미한다. 영양적으로 불완전한 보충제는 단백질을 유일한 영양소로 포함할 수 있거나, 단백질, 지질 및 탄수화물을 포함할 수 있다.
용어 "특수 의료 목적용 식품(FSMP)" 또는 "의료 식품"은 경구 섭취 또는 튜브 공급을 위한 식품으로, 이는 특정 의학적 장애, 질환 또는 병태에 사용되고 독특한 영양 요구사항이 있으며 의료 감시하에 사용된다. 의료 식품은 영양적으로 완전한 보충제 또는 영양적으로 불완전한 보충제일 수 있다.
용어 "영양소"는 유기체가 생존, 성장 및 번식을 위해 사용되는 물질을 의미한다. 영양소는 다량 영양소 또는 미량 영양소일 수 있다. 다량 영양소는 소비될 때 에너지를 제공하는 영양소, 예를 들어, 단백질, 지질 및 탄수화물이다. 미량 영양소는 비타민, 미네랄 및 미량 원소와 같은 영양소이다.
용어 "인스턴트 음료 분말" 또는 "인스턴트 음료 분말 제품"이란 액체, 예컨대 물의 첨가에 의해 액체 음료로 전환될 수 있는 분말을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 실질적으로 사용되는 용어 "음료 제제" 및 "제제"는, 예를 들어, 붓거나, 마시거나, 튜브로 공급함으로써, 음료로서 섭취될 수 있는 임의의 물-기반 액체에 관련된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "단백질 분획"은 해당 조성물의 단백질, 예를 들어, 분말 또는 음료 제제의 단백질에 관련된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "떫은 맛(astringency)"은 식감(mouthfeeling)에 관련된다. 떫은 맛은 뺨 근육의 수축처럼 느껴져 타액 생성을 증가시킨다. 따라서, 떫은 맛은 그 자체의 맛이 아니라 물리적 식감과 입안의 시간-의존적 느낌이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "건조 식감"은 입안의 느낌에 관련되며, 입과 치아가 건조해지는 것처럼 느껴져 타액 생성을 최소화한다. 따라서, 건조 식감은 그 자체의 맛이 아니라 물리적 식감과 입안의 시간-의존적 느낌이다.
본 발명의 맥락에서, 본원에 사용된 용어 "미네랄"은, 달리 명시되지 않는 한, 주요 미네랄, 미량 또는 소량 미네랄, 기타 미네랄 및 이들의 조합 중 임의의 하나를 지칭한다. 주요 미네랄은 칼슘, 인, 칼륨, 황, 나트륨, 염소, 마그네슘을 포함한다. 미량 또는 소량 미네랄은 철, 코발트, 구리, 아연, 몰리브덴, 요오드, 셀레늄, 망간을 포함하고, 기타 미네랄은 크롬, 불소, 붕소, 리튬, 및 스트론튬을 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 본원에 사용된 용어 "지질", "지방" 및 "오일"은, 달리 명시되지 않는 한, 식물 또는 동물로부터 유래되거나 처리된 지질 물질을 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 이들 용어는 또한 그러한 합성 물질이 인간의 소비에 적합한 한, 합성 지질 물질을 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "투명한"은 눈에 띄게 맑은 외관을 갖고 광이 통과할 수 있고 뚜렷한 이미지가 나타나는 음료 제제를 포함한다. 투명한 음료는 최대 200 NTU의 탁도를 갖는다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "불투명한"은 외관이 눈에 띄게 맑지 않고 탁도가 200 NTU 초과인 음료 제제를 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "모액"은 BLG가 결정화되고 BLG 결정이 적어도 부분적으로 제거된 후에 남아 있는 유장 단백질 용액에 관련된다. 모액은 여전히 일부 BLG 결정을 함유할 수 있지만, 일반적으로 분리를 면한 작은 BLG 결정만을 함유할 수 있다.
용어 "인스턴트 음료 분말" 또는 "인스턴트 음료 분말 제품"이란 액체, 예컨대 물의 첨가에 의해 액체 음료로 전환될 수 있는 분말을 의미한다.
상세한 설명
영양 보충제의 전반적인 개념은 소비자가 인지하고 있다. 영양 보충제는 맛과 외관이 입맛을 돋워야 한다; 그렇지 않으면 소비자가 거부할 것이다. 또한, 소비자는 첨가제가 없는 천연 제품을 중시한다. 소비자에게 더 중요한 파라미터는 제품의 유통 기한이다.
본 발명의 양태는 적어도 1% w/w BLG, 바람직하게는 적어도 5% w/w BLG를 포함하고, 여기서:
i. BLG의 결정화도는 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%이고/이거나,
ii. 단백질의 총량의 적어도 85% w/w가 BLG로 구성되고,
비타민, 향미제, 착색제, 미네랄, 감미료, 산화방지제, 식용 산, 지질, 탄수화물, 프리바이오틱스, 프로바이오틱스, 소포제 및 비-유장 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 성분을 추가로 포함하는, 인스턴트 음료 분말에 관련된다.
인스턴트 음료 분말에 사용되는 BLG 공급원은 본 특허 출원에 기술된 바와 같이 BLG 단리물 또는 BLG 단리물 분말일 수 있다. 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 공급원은 인스턴트 음료 분말의 총 단백질의 적어도 90% w/w, 더 바람직하게는 적어도 95% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 98% w/w에 기여하고, 가장 바람직하게는 인스턴트 음료 분말의 모든 단백질에 기여한다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 공급원은 BLG 단리물 분말이며 인스턴트 음료 분말에서 유일한 단백질 공급원이다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 BLG 단리물 분말 및 기타 성분을 건조-블렌딩하여 제조된다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 용해된 형태의 적어도 하나의 성분을 사용하고 이어서 건조 단계를 수행하여 제조된다. 건조 단계는, 예를 들어, 습식-과립화 공정 또는 분무-건조 단계의 일부를 형성한다.
본 발명의 인스턴트 음료 분말의 BLG는 바람직하게는 최대 10%, 바람직하게는 최대 4%, 더 바람직하게는 최대 1%, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.4%, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.1%와 같은 낮은 변성도를 갖는다. 가장 바람직하게는, BLG는 전혀 변성되지 않는다. 인스턴트 음료 분말의 경우, BLG는 액체와 혼합될 경우 거품이 발생하는 경향을 감소시키기 때문에 낮은 변성도를 갖는 것이 유리하다.
인스턴트 음료 분말은 바람직하게는 최대 10%, 바람직하게는 최대 4%, 더 바람직하게는 최대 1%, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.4%, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.1%의 단백질 변성도를 갖는다. 가장 바람직하게는, 단백질은 전혀 변성되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 1 내지 90% w/w BLG를 포함한다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 30 내지 90% w/w BLG, 더 바람직하게는 40 내지 90% w/w 범위의 BLG 또는 더욱 더 바람직하게는 50 내지 90% w/w 범위의 BLG를 포함한다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 10 내지 97% w/w BLG를 포함한다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 30 내지 96% w/w BLG, 더 바람직하게는 40 내지 95% w/w 범위의 BLG 또는 더욱 더 바람직하게는 50 내지 94% w/w 범위의 BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 1 내지 50% w/w BLG를 포함한다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 2 내지 45% w/w BLG, 더 바람직하게는 3 내지 40% w/w 범위의 BLG 또는 더욱 더 바람직하게는 3 내지 35% w/w 범위의 BLG를 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 단백질의 총량의 적어도 85% w/w의 BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 예컨대 총 단백질에 대해 적어도 86% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 87% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 88% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 89% w/w BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 91% w/w BLG, 예컨대 총 단백질에 대해 적어도 92% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 93% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 95% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 96% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 97% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 98% w/w BLG 또는 총 단백질에 대해 적어도 99% w/w BLG를 포함한다.
본 발명의 인스턴트 음료 분말의 일부 바람직한 구현예에서, 적어도 85% w/w의 단백질은 BLG이다. 바람직하게는, 적어도 88% w/w의 단백질은 BLG이고, 더 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 91% w/w, 가장 바람직하게는 적어도 92% w/w의 단백질은 BLG이다.
더욱 더 높은 상대적인 양의 BLG가 실행 가능하고 바람직하므로 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 적어도 94% w/w의 단백질은 BLG이고, 더 바람직하게는 적어도 96% w/w의 단백질은 BLG이고, 더욱 더 바람직하게는 적어도 98% w/w의 단백질은 BLG이고, 가장 바람직하게는 대략 100% w/w의 단백질은 BLG이다.
예를 들어, 인스턴트 음료 분말은 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 97.5% w/w, 바람직하게는 적어도 98.0% w/w, 더 바람직하게는 적어도 98.5% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 99.0%의 양의 BLG를 포함하고, 가장 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 99.5% w/w, 예컨대 총 단백질에 대해 대략 100.0% w/w의 양의 BLG를 포함한다.
인스턴트 음료 분말의 단백질은 바람직하게는 포유동물의 젖, 바람직하게는 반추동물의 젖, 예를 들어, 젖소, 양, 염소, 버팔로, 낙타, 라마, 말 및/또는 사슴의 젖으로부터 제조된다. 소의 젖으로부터 유래된 단백질이 특히 바람직하다. 따라서, 인스턴트 음료 분말의 단백질은 바람직하게는 소의 유단백질이다.
인스턴트 음료 분말의 단백질은 바람직하게는 유장 단백질 또는 유청 단백질, 더욱 더 바람직하게는 소의 유장 단백질 또는 유청 단백질이다.
고유한 트립토판 형광 발광 비(I330 nm/I350 nm)는 BLG의 언폴딩 정도를 측정한 것으로, 본 발명자들은 BLG의 낮은 언폴딩과 관련이 있거나 언폴딩과 관련이 없는 높은 BLG 트립토판 형광 발광 비에서 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330 nm/I350 nm)가 실시예 1.1에 따라 측정됨을 발견하였다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330 nm/I350 nm)를 갖는다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 적어도 1.12, 바람직하게는 적어도 1.13, 더 바람직하게는 적어도 1.15, 더욱 더 바람직하게는 적어도 1.17, 가장 바람직하게는 적어도 1.19의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330 nm/I350 nm)를 갖는다.
인스턴트 음료 분말이 상당한 양의 비-단백질 물질을 함유하면, 고유한 트립토판 형광 발광 비를 측정하기 전에 단백질 분획을 단리하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 단백질 분획은 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비를 갖는다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 단백질 분획은 적어도 1.12, 바람직하게는 적어도 1.13, 더 바람직하게는 적어도 1.15, 더욱 더 바람직하게는 적어도 1.17, 가장 바람직하게는 적어도 1.19의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330 nm/I350 nm)를 갖는다.
단백질 분획은, 예를 들어, 인스턴트 음료 분말을 탈염수에 용해시키고 단백질을 보유하는 필터를 사용하여 용액을 투석 또는 한외여과-기반 정용여과함으로써 인스턴트 음료 분말로부터 분리될 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 BLG의 결정화도는 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%, 더 바람직하게는 적어도 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80%, 가장 바람직하게는 적어도 90%이다. 적어도 20%의 BLG의 결정화도를 갖는 것은 상당한 양의 BLG가 인스턴트 음료 분말에서 건조된 BLG 결정 형태로 존재한다는 것을 의미한다.
본 발명자들은 단백질이 전통적인 WPI보다 더 높은 밀도를 갖는 형태로 존재한다는 것을 의미하기 때문에 적어도 20%의 BLG의 결정화도가 유리하다는 것을 발견하였다. 이것은 인스턴트 음료 분말에 더 높은 전체 벌크 밀도를 제공하고 먼지가 덜 생기고 최종 사용자가 취급하기 용이하게 만든다. 본 발명자들은 또한, 예를 들어, 단백질 분말 이외에 탄수화물 분말 및/또는 식용 산 분말을 함유하는 건조-블렌딩된 인스턴트 음료 분말에서 입자 분리 경향이 감소하는 것을 관찰하였다.
본 발명은 단맛과 높은 단백질 함량 둘 다를 갖는 저 탄수화물 인스턴트 음료 분말을 제공하는 것을 가능하게 한다.
따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 다음을 포함한다:
- 100 그램의 분말당 320 내지 380 kcal 범위, 바람직하게는 100 그램당 350 내지 370 kcal 범위의 에너지 함량,
- 90 내지 100 E%의 범위, 바람직하게는 95 내지 100 E% 범위의 단백질로부터의 에너지의 기여,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w, 더 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w 양의 BLG,
- 0 내지 10 E%의 범위, 바람직하게는 0 내지 5 E% 범위의 탄수화물로부터의 에너지의 기여,
- 0.01 내지 4% w/w의 범위, 바람직하게는 0.05 내지 3%의 범위의 고 강도 감미료의 총량,
- 적어도 0.45 g/mL, 바람직하게는 적어도 0.50 g/mL, 더 바람직하게는 적어도 0.6 g/mL의 벌크 밀도를 가짐.
인스턴트 음료 분말의 단백질은, 바람직하게는 i) 2 내지 4.9, ii) 6.1 내지 8.5, 또는 iii) 5.0 내지 6.0 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함하는 BLG 단리물 분말에 의해 제공되며:
- 적어도 90% w/w, 바람직하게는 적어도 95% w/w 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w, 더 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w의 양의 BLG;
상기 BLG 단리물 분말은 다음을 갖는다:
- 적어도 0.45 g/mL, 바람직하게는 적어도 0.50 g/mL, 더 바람직하게는 적어도 0.6 g/mL의 벌크 밀도, 및
- 하기 중 하나 이상:
- 적어도 1.11, 바람직하게는 적어도 1.13, 더 바람직하게는 적어도 1.15의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350),
- 최대 10%, 바람직하게는 적어도 5%의 단백질 변성도,
- pH 3.9에서 최대 200 NTU의 열-안정성, 및
- 최대 1000 집락-형성 단위/g.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 향미제, 착색제, 미네랄, 감미료, 산화방지제, 식용 산, 지질, 탄수화물, 프리바이오틱스, 프로바이오틱스 및 비-유장 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 성분을 추가로 포함한다.
추가 성분은 인스턴트 음료 분말이 원하는 영양소, 즉 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자, 신장 질환을 앓고 있는 환자, 체중 증가를 위해 특별히 조정된 영양소를 함유하거나, 예를 들어, 스포츠맨 또는 운동선수에 의해 영양 보충제로서 사용될 수 있도록 보장한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 비타민 A, 비타민 B1 (티아민), 비타민 B2 (리보플라빈), 비타민 B3 (니아신), 비타민 B5 (판토텐산), 비타민 B6 (피리독신), 비타민 B7 (비오틴), 비타민 B9 (엽산), 및 비타민 B12 (코발라민), 비타민 C, 비타민 D, 비타민 E, 비타민 K, 콜린, 이노시톨, 이들의 염, 이들의 유도체 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 비타민을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 염, 향미료, 향미 증강제 및/또는 향신료로 이루어진 군으로부터 선택된 향미제를 포함할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 플레이버는 초콜릿, 코코아, 레몬, 오렌지, 라임, 딸기, 바나나, 포레스트 과일 플레이버 또는 이들의 조합을 포함한다.
일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 붕소, 칼슘, 크롬, 구리, 요오드, 철, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 니켈, 인, 칼륨, 나트륨, 셀레늄, 규소, 주석, 바나듐, 아연, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 미네랄을 포함할 수 있다.
인스턴트 음료 분말은 전형적으로 유장 또는 밀크 유래의 제품에 존재하는 염 및 미네랄을 추가로 함유할 수 있다. 인스턴트 음료 분말의 미네랄 함량은 전형적으로 식품 성분 또는 제품의 회분 함량(ash content)으로 표시된다. 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 베타-카로틴, 비타민 C, 비타민 E, 셀레늄, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항산화제를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 하나 이상의 감미료, 예컨대 탄수화물 감미료, 폴리올 및/또는 고 강도 감미료를 포함할 수 있다. 인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 인스턴트 음료 분말의 총 중량에 대해 0.001 내지 20% w/w의 범위의 탄수화물 감미료의 총량을 포함할 수 있다. 대안적으로, 인스턴트 음료 분말은 식품의 총 중량에 대해 0.1 내지 15% w/w 범위의 탄수화물 감미료의 총량을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 적어도 하나의 고 강도 감미료를 포함한다. 일 구현예에서, 적어도 하나의 고 강도 감미료는 아스파탐, 시클라메이트, 수크랄로스, 아세설팜 염, 네오탐, 사카린, 스테비아 추출물, 스테비올 글리코시드, 예를 들어, 레바우디오사이드 A, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 감미료가 하나 이상의 고 강도 감미료(HIS)를 포함하거나 심지어 이로 이루어지는 것이 특히 바람직하다.
고 강도 감미료는 천연 감미료와 인공 감미료 둘 다에서 발견되며, 전형적으로 감미료 강도는 수크로스 강도의 적어도 10배이다.
사용된다면, 고 강도 감미료의 총량은 전형적으로 0.01 내지 4% w/w의 범위이다. 예를 들어, 고 강도 감미료의 총량은 0.05 내지 3% w/w의 범위일 수 있다. 대안적으로, 고 강도 감미료의 총량은 0.1 내지 2.0% w/w의 범위일 수 있다.
감미료의 선택은 생산될 음료 및 제품의 소비자에 따라 달라질 수 있는데, 예를 들어, 환자의 특정 진단으로 조정될 수 있다. 고 강도 설탕 감미료(예를 들어, 아스파탐, 아세설팜-K 또는 수크랄로스)는 감미료로부터의 에너지의 기여를 원하지 않는 음료에 사용될 수 있는 반면, 천연 프로파일을 갖는 음료의 경우, 천연 감미료(예를 들어, 스테비올 글리코시드, 소르비톨 또는 수크로스)가 사용될 수 있다.
또한 감미료가 하나 이상의 폴리올 감미료(들)를 포함하거나 심지어 이로 이루어지는 것이 바람직할 수 있다. 유용한 폴리올 감미료의 비제한적인 예는 말티톨, 만니톨, 락티톨, 소르비톨, 이노시톨, 크실리톨, 트레이톨, 갈락티톨 또는 이들의 조합이다. 사용된다면, 폴리올 감미료의 총량은 전형적으로 1 내지 40% w/w의 범위이다. 예를 들어, 폴리올 감미료의 총량은 2 내지 30% w/w의 범위일 수 있다. 대안적으로, 폴리올 감미료의 총량은 4 내지 20% w/w의 범위일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다:
i. 감미료, 예를 들어, 설탕 감미료 및/또는 무설탕 감미료,
ii. 향미제,
iii. 적어도 하나의 식용 산, 예를 들어, 시트르산 또는 기타 적합한 식용 산,
iv. 인스턴트 음료 중 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이고,
여기서, 탈염수 중 분말의 10% w/w 용액은 2 내지 8 범위의 pH를 갖는다.
인스턴트 음료 분말의 pH는 실시예 1.16에 기술된 바와 같이 실온에서 90 ml의 탈염수에 10 g의 인스턴트 음료 분말을 용해시켜 측정될 수 있다.
본 발명자들은 인스턴트 음료 분말, 예를 들어, 신장 질환 환자에게 특히 유용한 인스턴트 음료 분말에 저 인/저 칼륨 BLG 단리물 분말을 사용하는 것이 유리하다는 것을 발견하였다.
감미료, 향미제 및/또는 식용 산을 첨가함으로써, 인스턴트 음료 분말이 소비자에게 관심을 끌도록 제품의 맛을 디자인할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 소비자는 인스턴트 음료 분말의 플레이버, 감미료 및 산성 프로파일이 환자의 필요와 진단에 맞게 조정되는 환자일 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 고 강도 감미료 및 향미제를 포함할 수 있다. 본 발명의 더욱 더 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 수크랄로스 0.001 내지 0.05% w/w 및 초콜릿, 코코아, 레몬, 오렌지, 라임, 딸기, 바나나, 포레스트 과일 플레이버 또는 이들의 조합으로부터 선택된 플레이버 0.01 내지 0.2% w/w를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 소포제를 포함한다. 소포제는 식품에 적합한 소포제로부터 선택될 수 있다. 소포제는 오일-기반 소포제, 물-기반 소포제, 실리콘-기반 소포제, EP/PO-기반 소포제 또는 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다.
인스턴트 음료 분말은 최대 6% w/w의 수분 함량을 갖는다. 본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 최대 5% w/w 물, 바람직하게는 최대 4% w/w 물, 더 바람직하게는 최대 3% w/w 물, 더욱 더 바람직하게는 최대 2% w/w 물을 포함한다.
분말의 수분 함량을 낮출 경우, 인스턴트 음료 분말의 저장 안정성이 증가할 수 있다.
본 발명자들은 인스턴트 음료 분말의 원하는 성질 중 일부에 도달하기 위해 미네랄 함량을 제어하는 것이 유리할 수 있다는 것을 발견하였다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다. 바람직하게는, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca 양의 합은 최대 6 mmol/g 단백질, 더 바람직하게는 최대 4 mmol/g 단백질, 더욱 더 바람직하게는 최대 2 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca 양의 합은 최대 1 mmol/g 단백질이다. 바람직하게는, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca 양의 합은 최대 0.6 mmol/g 단백질, 더 바람직하게는 최대 0.4 mmol/g 단백질, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.2 mmol/g 단백질, 가장 바람직하게는 최대 0.1 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, PCT/EP2017/084553에 설명된 하나 이상의 방법에 의해 수득 가능한 건조 BLG 결정을 포함한다. BLG 결정을 함유하는 인스턴트 음료 분말은 적어도 0.30 g/mL, 바람직하게는 적어도 0.4 g/mL의 벌크 밀도를 가질 수 있다.
본 발명자들은 BLG의 적어도 일부가 결정 형태인 인스턴트 음료 분말이 BLG 결정이 없는 유사한 인스턴트 BLG 조성물보다 더 높은 밀도를 갖는다는 것을 관찰하였다. 따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 적어도 0.30 g/mL, 바람직하게는 적어도 0.40 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다. 바람직하게는, 인스턴트 음료 분말은 적어도 0.45 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다. 더 바람직하게는, 인스턴트 음료 분말은 적어도 0.50 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다. 더욱 더 바람직하게는, 인스턴트 음료 분말은 적어도 0.6 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다. 인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 적어도 0.7 g/mL의 벌크 밀도를 가질 수 있다.
본 발명의 인스턴트 음료 분말은 바람직하게는 0.3 내지 1.0 g/mL의 범위, 바람직하게는 0.40 내지 0.9 g/mL의 범위, 더 바람직하게는 0.45 내지 0.8 g/mL의 범위, 더욱 더 바람직하게는 0.45 내지 0.75 g/mL의 범위, 더욱 더 바람직하게는 0.50 내지 0.75 g/mL의 범위, 가장 바람직하게는 0.6 내지 0.75 g/mL의 범위의 벌크 밀도를 갖는다.
분말의 벌크 밀도는 실시예 1.17에 따라 측정될 수 있다.
본 발명의 인스턴트 음료 분말에서 총 단백질 함량과 에너지 함량은 인스턴트 음료 분말의 의도된 용도에 따라 달라진다. 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal의 범위이다.
인스턴트 음료 분말의 경우, 단백질로부터의 에너지의 기여는 적어도 7 E%, 바람직하게는 적어도 25 E%, 더 바람직하게는 적어도 30 E%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 40 E%일 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 단백질로부터의 에너지의 기여는 10 내지 30 E%의 범위, 바람직하게는 10 내지 15 E%의 범위 또는 더욱 더 바람직하게는 11 E%이다. 대안적으로, 단백질로부터의 에너지의 기여는 15 내지 25 E%의 범위, 바람직하게는 18 내지 22 E%의 범위이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 단백질로부터의 에너지의 기여는 7 내지 25 E%의 범위, 바람직하게는 10 내지 25 E%의 범위, 더 바람직하게는 15 내지 20 E%의 범위이거나, 더욱 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말은 단백질로부터 15 E% 또는 단백질로부터 20 E%를 포함하거나, 단백질로부터의 에너지의 기여는 8 내지 15 E%의 범위이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 구현예에서, 단백질로부터의 에너지의 기여는 적어도 50 E%, 바람직하게는 적어도 60 E% 또는 적어도 70 E% 또는 더욱 더 바람직하게는 적어도 80 E%이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 단백질로부터의 에너지의 기여는 80 내지 100 E%의 범위, 바람직하게는 90 내지 100 E%의 범위 또는 더욱 더 바람직하게는 95 내지 100 E%의 범위이다
본 발명의 바람직한 구현예에서, 단백질로부터의 에너지의 기여는 30 내지 80 E%의 범위, 바람직하게는 60 내지 80 E%의 범위이다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 단백질로부터의 에너지의 기여는 30 내지 40 E%의 범위이거나, 더욱 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말은 단백질로부터 33 E%를 포함한다.
인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자를 치료하기 위해, 신장 질환을 앓고 있는 환자를 위해, 체중 증가를 위해 영양 보충제로서 사용될 수 있거나, 예를 들어, 스포츠맨 또는 운동선수에 의해 운동 전에, 운동 동안 또는 운동 후에 영양 보충제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 인스턴트 음료 분말은 단백질 이외의 다른 다량 영양소를 포함할 수 있다. 인스턴트 음료 분말은 단백질 이외에 탄수화물 및/또는 지질을 포함할 수 있다. 본 발명의 인스턴트 음료 분말에서 총 지질 함량은 인스턴트 음료 분말의 의도된 용도에 따라 달라진다. 본 발명의 일 구현예에서, 지질로부터의 에너지의 기여는 0 내지 60 E%의 범위이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 지질로부터의 에너지의 기여는 지질로부터 0 내지 5 E%의 범위, 바람직하게는 0 내지 3 E%의 범위 또는 더 바람직하게는 0 내지 2 E%의 범위이다.
더욱 더 적은 지질이 바람직할 수 있으며, 따라서, 본 발명의 바람직한 구현예에서, 지질로부터의 에너지의 기여는 지질로부터 0 내지 1 E%의 범위, 바람직하게는 0 내지 0.1 E%의 범위 또는 더 바람직하게는 0 내지 0.01 E%의 범위이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 지질로부터의 에너지의 기여는 30 내지 60 E%의 범위, 바람직하게는 30 내지 50 E%의 범위이거나, 더욱 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말은 지질로부터 35 E%, 지질로부터 45 E% 또는 지질로부터 50 E%를 포함한다. 대안적으로, 지질로부터의 에너지의 기여는 25 내지 45 E%의 범위이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 지질로부터의 에너지의 기여는 15 내지 20 E%의 범위, 바람직하게는 16 내지 18 E%의 범위이거나, 더욱 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말은 지질로부터 16 E%를 포함한다.
인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자를 치료하기 위해, 신장 질환을 앓고 있는 환자를 위해, 체중 증가를 위해 영양 보충제로서 사용될 수 있거나, 예를 들어, 스포츠맨 또는 운동선수에 의해 운동 전에, 운동 동안 또는 운동 후에 영양 보충제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 단백질 이외에 탄수화물을 포함할 수 있다. 인스턴트 음료 분말의 총 에너지에 대한 탄수화물의 에너지의 기여는 0 내지 90 E%의 범위일 수 있다.
탄수화물은 당, 올리고사카라이드 또는 폴리사카라이드로부터 선택될 수 있다. 당의 예는 모노-, 디사카라이드 및 폴리올이다. 올리고사카라이드의 예는 말토올리고사카라이드, 예컨대 말토덱스트린 또는 기타 올리고사카라이드, 예컨대 라피노스, 스타키오스 또는 프럭토-올리고사카라이드이다. 폴리사카라이드의 예는 전분, 예컨대 아밀로오스, 아밀로펙틴, 또는 변형된 전분 및 비-전분 폴리사카라이드, 예컨대 식이 섬유, 셀룰로오스, 펙틴 및 하이드로콜로이드이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 탄수화물은 말토덱스트린, 사카로스 또는 글루코스 시럽으로부터 선택된다.
본 발명의 인스턴트 음료 분말에서 총 탄수화물 함량은 인스턴트 음료 분말의 의도된 용도에 따라 달라진다. 스포츠맨 또는 운동선수에게 사용되는 인스턴트 음료 분말의 경우, 스포츠맨의 즉각적인 에너지를 증가시키기 위해 당 형태의 탄수화물이 첨가될 수 있거나 포만감을 연장하기 위해 느린 탄수화물 형태의 탄수화물 또는 식이 섬유가 첨가될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 70 내지 90 E%의 범위, 바람직하게는 75 내지 85 E%의 범위이거나, 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말은 탄수화물로부터 89 E%를 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 30 내지 50 E%의 범위, 바람직하게는 35 내지 45 E%의 범위이거나, 더욱 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말은 탄수화물로부터 35 E%, 탄수화물로부터 45 E% 또는 탄수화물로부터 50 E%를 포함한다. 대안적으로, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 40 내지 60 E%의 범위, 예컨대 45 내지 55 E%의 범위이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 구현예에서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 0 내지 20 E%의 범위이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 0 내지 10 E%의 범위, 바람직하게는 0 내지 5 E%의 범위이다.
본 발명의 더 바람직한 구현예에서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 0 내지 4 E%, 더 바람직하게는 0 내지 1 E%, 더욱 더 바람직하게는 0 내지 0.2 E%의 범위이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 구현예에서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 3 내지 20 E%의 범위이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 4 내지 15 E%의 범위이다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 45 내지 55 E%의 범위이다.
인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자를 치료하기 위해, 신장 질환을 앓고 있는 환자를 위해, 체중 증가를 위해 영양 보충제로서 사용될 수 있거나, 예를 들어, 스포츠맨 또는 운동선수에 의해 운동 전에, 운동 동안 또는 운동 후에 영양 보충제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 인스턴트 음료 분말은 단백질을 포함하고, 단백질 이외에 인스턴트 음료 분말의 의도된 용도에 따라 지질 및/또는 탄수화물을 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다. 인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자를 치료하기 위해, 신장 질환을 앓고 있는 환자를 위해, 체중 증가를 위해 영양 보충제로서 사용될 수 있거나, 예를 들어, 스포츠맨 또는 운동선수에 의해 영양 보충제로서 사용될 수 있다.
인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal의 범위일 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 300 내지 400 kcal의 범위, 더욱 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 320 내지 380 kcal의 범위 또는 가장 바람직하게는 분말 100 그램당 350 내지 370 kcal의 범위이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질과 같은 에너지 분포를 갖는다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 10 내지 15 E% 단백질, 75 내지 85 E% 탄수화물 및 0 내지 1 E% 지질의 에너지 분포를 갖는다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 11 E% 단백질, 89 E% 탄수화물 및 0 E% 지질의 에너지 분포를 갖는다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 단백질, 탄수화물 및 지질을 포함하고, 임의로 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 포함한다. 인스턴트 음료 분말은 음료 분말의 권장된 1일 섭취량이 비타민, 미네랄 및 미량 원소의 권장된 1일 섭취량을 공급하도록 설계될 수 있다. 그러나, 이것은 필수 요건은 아니다.
그러한 인스턴트 음료 분말은 소비자가 에너지 분포, 다량 영양소 및 미량 영양소와 관련하여 건강한 식이를 반영하는 다량 영양소 비율을 가진 영양 보충제에 관심이 있는 경우, 예를 들어, 영양 보충제가 건강 관리 전문가의 감독하에 제공되는 경우, 영양 보충제로서 유용할 수 있다.
인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 400 내지 500 kcal의 범위이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 410 내지 490 kcal의 범위, 더욱 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 420 내지 480 kcal의 범위 또는 가장 바람직하게는 분말 100 그램당 440 내지 460 kcal의 범위이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 7 내지 25 E% 단백질, 30 내지 50 E% 탄수화물 및 30 내지 55 E% 지질과 같은 에너지 분포를 갖는다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 10 내지 25 E% 단백질, 30 내지 50 E% 탄수화물 및 30 내지 55 E% 지질, 또는 더욱 더 바람직하게는 15 내지 20 E% 단백질, 35 내지 45 E% 탄수화물 및 35 내지 50 E% 지질의 에너지 분포를 갖는다. 본 발명의 더욱 더 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 15 E% 단백질, 35 E% 탄수화물 및 50 E% 지질의 에너지 분포, 20 E% 단백질, 45 E% 탄수화물 및 35 E% 지질의 에너지 분포, 또는 8 내지 15 E% 단백질, 40 내지 47 E% 탄수화물 및 45 E% 지질의 에너지 분포를 갖는다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자를 치료하기 위해, 신장 질환을 앓고 있는 환자를 위해, 체중 증가를 위해 영양 보충제로서 사용될 수 있거나, 예를 들어, 스포츠맨 또는 운동선수에 의해 운동 전에, 운동 동안 또는 운동 후에 영양 보충제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 단백질, 탄수화물 및 지질을 포함한다. 그러한 인스턴트 음료 분말은 단백질의 섭취가 소비자의 최우선 순위인 경우, 예를 들어, 소비자가 규칙적인 식사를 보충하고자 하는 경우, 영양 보충제로서 유용할 수 있다. 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal의 범위이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal의 범위이거나, 더욱 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 200 내지 300 kcal의 범위이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질과 같은 에너지 분포를 갖는다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 90 내지 98 E% 단백질, 0 내지 10 E% 탄수화물 및 0 내지 3 E% 지질의 에너지 분포를 갖는다. 본 발명의 더욱 더 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 95 내지 98 E% 단백질, 0 내지 5 E% 탄수화물 및 0 내지 2 E% 지질의 에너지 분포를 갖는다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다. 인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자를 치료하기 위해, 신장 질환을 앓고 있는 환자를 위해, 체중 증가를 위해 영양 보충제로서 사용될 수 있거나, 예를 들어, 스포츠맨 또는 운동선수에 의해 영양 보충제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 단백질, 탄수화물 및 지질을 포함한다. 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal의 범위이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 300 내지 420 kcal의 범위이거나, 더 바람직하게는 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 320 내지 380 kcal의 범위이거나, 더욱 더 바람직한 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은 분말 100 그램당 350 내지 370 kcal의 범위이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질과 같은 에너지 분포를 갖는다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 60 내지 80 E% 단백질, 4 내지 15 E% 탄수화물 및 16 내지 18 E% 지질의 에너지 분포를 갖는다. 본 발명의 더욱 더 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 보충제는 30 내지 40 E% 단백질, 45 내지 55 E% 탄수화물 및 12 내지 18 E% 지질, 예를 들어, 33 E% 단백질, 46 E% 탄수화물 및 15 E% 지질의 에너지 분포를 갖는다.
대안적으로, 인스턴트 음료 분말의 에너지 함량은, 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질, 또는 바람직하게는 15 내지 25 E% 단백질, 45 내지 55 E% 탄수화물 및 30 내지 40 E% 지질과 같은 에너지 분포로 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal의 범위일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다. 인스턴트 음료 분말은, 예를 들어, 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자를 치료하기 위해, 신장 질환을 앓고 있는 환자를 위해, 체중 증가를 위해 영양 보충제로서 사용될 수 있거나, 예를 들어, 스포츠맨 또는 운동선수에 의해 영양 보충제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 향미제, 착색제, 감미료, 산화방지제, 식용 산, 지질, 탄수화물, 프리바이오틱스, 프로바이오틱스 또는 비-유장 단백질을 추가로 포함할 수 있다.
편의상의 이유로, 인스턴트 음료 분말은 본 발명의 인스턴트 분말, 상기 분말을 측정하기 위한 도구, 및 용기를 열고 닫기 위한 뚜껑을 갖는 용기를 포함하는 키트로 판매될 수 있으며, 여기서, 상기 용기는 식품을 형성하기 위해 상기 분말을 액체와 혼합하기 위한 것이며, 상기 용기는 용기로부터 직접 식품을 마시기에 적합하다. 유용한 용기의 예는, 예를 들어, 병, 판지 상자(carton), 브릭(brick), 파우치 및/또는 백(bag)이다.
키트를 구매하는 소비자는 본 발명에 따른 액체 식품을 용이하게 제조하기 위한 모든 항목을 얻을 것이다. 측정 도구는 소비자가 용기에 있는 물의 양에 대해 정확한 양의 인스턴트 분말을 계량하도록 보장한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 분말을 측정하기 위한 도구는 스푼이고 용기는 음료수 병이다. 본 발명의 일 구현예에서, 용기에는 얼마나 많은 양의 액체가 용기에 채워지는 지를 나타내는 내부 표시가 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 뚜껑은 액체 식품을 용기로부터 직접 마시고 액체 식품을 혼합하는 동안 닫기에 적합한 개구부를 갖는다.
인스턴트 음료 분말의 pH가 중요한데, 이는 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 제품의 맛이 제품의 pH에 따라 달라지기 때문이다. 분말의 pH는 실시예 1.16에 기술된 바와 같이 25℃에서 탈염수 중 10% w/w 용액의 인스턴트 음료 분말의 pH를 측정함으로써 결정될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 탈염수 중 10% w/w 용액의 인스턴트 음료 분말의 pH는 25℃에서 2 내지 8의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, pH는 2.0 내지 4.9의 범위, 예컨대 2.5 내지 4.7, 더 바람직하게는 2.8 내지 4.3, 더욱 더 바람직하게는 3.2 내지 4.0, 가장 바람직하게는 3.4 내지 3.9의 범위이다. 대안적으로, 그러나 또한 바람직하게는 인스턴트 음료 분말은 3.6 내지 4.3 범위의 pH를 가질 수 있다.
대안적으로, 탈염수 중 10% w/w 용액의 인스턴트 음료 분말의 pH는 25℃에서 5.0 내지 6.0 범위의 pH이고, 바람직하게는, 분말은 5.1 내지 5.9, 더 바람직하게는 5.2 내지 5.8, 더욱 더 바람직하게는 5.3 내지 5.7, 가장 바람직하게는 5.4 내지 5.6 범위의 pH를 갖는다.
대안적으로, 인스턴트 음료 분말의 pH는 6.1 내지 8.5, 더 바람직하게는 6.2 내지 8.0, 더욱 더 바람직하게는 6.3 내지 7.7, 가장 바람직하게는 6.5 내지 7.5의 범위이다.
그러나 본 발명의 일 양태는 식품 성분으로서 본원에 정의된 인스턴트 음료의 용도에 관련된다.
본 발명의 일 양태는 본원에 기재된 인스턴트 음료 분말 제품을 함유하는 용기를 포함하는 포장된 인스턴트 음료 분말 제품에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말 제품은 임의로 불활성 가스로 포장된 용기에 밀폐 밀봉된다.
인스턴트 음료 분말 제품을 보관하기 위해 광범위한 범위의 상이한 용기가 사용될 수 있다. 예를 들어, 용기는 병, 캔, 백, 파우치, 및 작은 봉지(sachet)로 이루어진 군으로부터 선택된 용기일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
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본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
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본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 400 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 7 내지 25 E% 단백질, 30 내지 50 E% 탄수화물 및 30 내지 55 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 400 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 7 내지 25 E% 단백질, 30 내지 50 E% 탄수화물 및 30 내지 55 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 400 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 7 내지 25 E% 단백질, 30 내지 50 E% 탄수화물 및 30 내지 55 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 400 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 7 내지 25 E% 단백질, 30 내지 50 E% 탄수화물 및 30 내지 55 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이다.
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본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 400 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 7 내지 25 E% 단백질, 30 내지 50 E% 탄수화물 및 30 내지 55 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
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본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 400 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 7 내지 25 E% 단백질, 30 내지 50 E% 탄수화물 및 30 내지 55 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이다.
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본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
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본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 400 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 70 내지 90 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 95% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 350 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 80 내지 98 E% 단백질, 0 내지 20 E% 탄수화물 및 0 내지 5 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 200 내지 420 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 30 내지 80 E% 단백질, 3 내지 20 E% 탄수화물 및 15 내지 20 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2 내지 8의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 2.0 내지 4.9의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 분말 100 그램당 150 내지 250 kcal 범위의 에너지 함량을 가지며, 에너지 분포는 10 내지 30 E% 단백질, 40 내지 60 E% 탄수화물 및 25 내지 45 E% 지질의 범위이며, 여기서, 인스턴트 음료 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 90% w/w BLG를 포함하며, 분말의 pH는 6.1 내지 8.5의 범위이며, 인스턴트 음료 분말은 비타민, 미네랄 및 미량 원소를 추가로 포함하며, 여기서, 인스턴트 음료 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 식품은 탄수화물 및 단백질을 포함하는 건조 식품, 예를 들어, 바(bar) 또는 인스턴트 음료 분말이며, 상기 건조 식품은 적어도 1% w/w BLG, 바람직하게는 적어도 5% w/w BLG를 포함하고, 여기서:
i) BLG의 결정화도는 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%이고/이거나,
ii) 단백질의 총량의 적어도 90% w/w가 BLG로 구성된다.
본 발명의 일부 특히 바람직한 구현예에서, 식품은 단백질 100 g당 최대 40 mg의 인을 포함하는 저 인의 식품이다.
식품의 비제한적인 예는, 예를 들어, 유제품, 사탕, 음료, 인스턴트 음료, 단백질 바, 장용 영양 조성물, 베이커리 제품이다
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 식품은 다음을 포함하거나 심지어 본질적으로 다음으로 이루어진 인스턴트 음료 분말이며:
- 적어도 1% w/w, 바람직하게는 적어도 5% w/w의 BLG의 총량을 제공하기 위해 분말 형태의 본원에 정의된 바와 같은 식용 BLG 조성물로서, 상기 식용 BLG 조성물은 적어도 20%의 BLG의 결정화도를 가지며,
- 분말 형태의 감미료, 예를 들어, 설탕 감미료 및/또는 무설탕 감미료,
- 임의로, 향미제,
- 분말 형태의 적어도 하나의 식용 산, 예를 들어, 시트르산 또는 기타 적합한 식용 산, 및
- 단백질 100 g당 최대 80 mg 인;
여기서, 탈염수 중 인스턴트 음료 분말의 10% 용액은 2.5 내지 4.0 범위의 pH를 갖는다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 식용 BLG 조성물은 다음을 포함하며:
- 최대 6% w/w 물,
- 총 고형분에 대해 적어도 80% 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 95% BLG;
상기 식용 BLG 조성물은:
- 건조 분말이며,
- 적어도 0.50 g/mL, 바람직하게는 적어도 0.60 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 식용 BLG 조성물은 다음을 포함하며:
- 최대 6% w/w 물,
- 총 고형분에 대해 적어도 80% 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 95% BLG;
상기 식용 BLG 조성물은 다음과 같다:
- 건조 분말이며,
- 적어도 0.50 g/mL, 바람직하게는 적어도 0.60 g/mL의 벌크 밀도를 가지며,
- 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%의 BLG의 결정화도를 갖는다.
본 발명의 추가의 바람직한 구현예에서, 식용 BLG 조성물은 다음을 포함하며:
- 최대 6% w/w 물,
- 총 고형분에 대해 적어도 80% 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 95% BLG,
- 단백질 100 g당 최대 80 mg 인;
상기 식용 BLG 조성물은 다음과 같다:
- 건조 분말이다.
본 발명의 더 바람직한 구현예에서, 식용 BLG 조성물은 다음을 포함하며:
- 최대 6% w/w 물,
- 총 고형분에 대해 적어도 90% 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 97% BLG,
- 단백질 100 g당 최대 50 mg 인;
상기 식용 BLG 조성물은 다음과 같다:
- 건조 분말이다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 식용 BLG 조성물은 다음을 포함하며:
- 최대 6% w/w 물,
- 총 고형분에 대해 적어도 80% 총 단백질, 바람직하게는 총 고형분에 대해 적어도 90% 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 30 내지 70% BLG,
- 총 단백질에 대해 8 내지 25% w/w ALA;
상기 식용 BLG 조성물은 다음과 같다:
- 건조 분말이며,
- 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%의 BLG의 결정화도를 갖는다.
본 발명의 일 양태에서, 액체 식품은 인스턴트 음료 분말로부터 제조된다. 본 발명에 따른 인스턴트 음료 분말을 사용함으로써, 매우 짧은 시간 내에 액체 식품을 얻는 것이 가능하다.
따라서, 본 발명의 일 양태는 본 발명에 따른 액체 식품을 제조하는 방법에 관련된 것으로, 상기 방법은
i. 본 발명에 따른 인스턴트 음료 분말을 첨가하는 단계,
ii. 임의로 적어도 하나의 추가 성분을 추가하는 단계, 및
iii. 상기 수득된 분말과 액체를 혼합하여 균일한 혼합물을 형성하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 액체는 물, 유제품, 과일 주스, 야채 주스, 음료 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 추가 성분은 과일 또는 야채로부터 선택된다.
분말과 액체를 혼합하는 경우, 진탕시켜 혼합을 수행할 수 있다. 진탕시킨 후, 액체 식품, 완전히 용해시키기 위해 인스턴트 음료 분말을 ½-2분 동안 방치하였다. 인스턴트 음료 분말의 한 가지 이점은 인스턴트 음료 분말이 용이하게 용해되고 균일한 용액을 형성하며 균일한 용액을 유지하는 것으로, 즉 실질적으로 분리가 발생하지 않는다.
일반적으로 인스턴트 음료 분말과 연관된 문제는 분말로부터 액체 식품을 제조하는 경우, 거품이 발생한다는 것이다. 본 발명의 인스턴트 음료 분말은 분말로부터 액체 식품을 제조하는 경우 거품이 발생하지 않는 경향이 있다.
액체 및 본 발명에 따른 분말을 포함하는 액체 식품은 본 발명의 인스턴트 음료 분말을 액체와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 상기 액체 100 그램당 최대 40 그램의 상기 분말, 예컨대 상기 액체 100 그램당 최대 30 그램의 상기 분말을 포함할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 액체 식품은 상기 액체 100 그램당 1 내지 30 그램의 상기 분말, 더 바람직하게는 1 내지 20 그램의 상기 분말, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 10 그램의 상기 분말, 또는 바람직하게는 1 내지 5 그램의 상기 분말 또는 더욱 더 바람직하게는 2.5 내지 5 그램의 상기 분말을 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 액체 식품은 액체 100 그램당 5 내지 25 그램의 상기 분말, 바람직하게는 액체 100 그램당 5 내지 25 그램의 상기 분말, 더 바람직하게는 10 내지 15 그램의 상기 분말, 더욱 더 바람직하게는 11 내지 14 그램의 상기 분말 또는 더 바람직하게는 11 내지 12 그램의 상기 분말을 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 식품은 식품 100 그램당 30 내지 300 kcal의 범위, 바람직하게는 식품 100 그램당 30 내지 100 kcal의 범위, 더 바람직하게는 식품 100 그램당 40 내지 90 kcal의 범위, 또는 더욱 더 바람직하게는 식품 100 그램당 40 내지 70 kcal의 범위의 에너지 함량을 갖는다.
대안적으로, 식품은 식품 100 그램당 100 내지 300 kcal의 범위, 바람직하게는 식품 100 그램당 100 내지 250 kcal의 범위, 또는 더 바람직하게는 식품 100 그램당 125 내지 225 kcal의 범위의 에너지 함량을 갖는다.
액체 식품은 물, 유제품, 과일 주스, 야채 주스, 음료 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 액체를 포함할 수 있다.
액체 식품, 예를 들어, 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 음료의 외관은 소비자에게 매우 중요하다. 투명도는 소비자가 제품을 평가하기 위해 사용하는 파라미터이다. 액체 식품의 투명도를 결정하는 한 가지 방식은 실시예 1.7에 기재된 제품의 탁도를 측정하는 것이다.
인스턴트 음료 분말로부터 제조된 음료의 일부 구현예에서, 음료가 투명한 것이 유익하다. 이것은, 예를 들어, 음료가 스포츠 음료로서 사용되거나 "단백질 물"로 사용될 경우 유리할 수 있는데, 이 경우 음료가 외관상 물과 유사한 것이 유익하다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 음료는 최대 200 NTU의 탁도를 가지며, 그러한 음료는 투명 및/또는 반투명하다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 음료는 최대 150 NTU의 탁도, 또는 바람직하게는 최대 100 NTU의 탁도, 또는 바람직하게는 최대 80 NTU의 탁도, 또는 바람직하게는 최대 60 NTU의 탁도 또는 더 바람직하게는 최대 40 NTU의 탁도, 또는 바람직하게는 최대 30 NTU의 탁도, 바람직하게는 최대 20 NTU의 탁도, 더 바람직하게는 최대 10 NTU의 탁도, 더 바람직하게는 최대 5 NTU의 탁도, 더욱 더 바람직하게는 최대 2 NTU의 탁도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 음료는 200 NTU 초과의 탁도를 가지며, 그러한 음료는 불투명하다.
인스턴트 음료 분말로부터 제조된 음료의 일부 구현예에서, 음료가 불투명한 것이 유익하다. 이것은, 예를 들어, 음료가 밀크와 비슷하고 유백색 외관을 가져야 할 경우, 유리하다. 영양적으로 완전한 영양 보충제의 외관은 전형적으로 불투명하다
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 음료는 250 NTU 초과의 탁도를 갖는다. 바람직하게는 음료는 300 NTU 초과의 탁도, 더 바람직하게는 500 NTU 초과의 탁도, 더 바람직하게는 1000 NTU 초과의 탁도, 바람직하게는 1500 NTU 초과의 탁도, 더욱 더 바람직하게는 2000 NTU 초과의 탁도를 갖는다.
제품의 색상은 소비자에게 매우 중요하다. 유장 단백질을 포함하는 인스턴트 음료 분말 제품은 약간 노란색을 띤다. 그러나, 적어도 20%의 결정화도를 갖는 BLG를 포함하는 인스턴트 음료 분말 또는 적어도 90%의 단백질이 BLG로 구성되는 인스턴트 음료 분말을 사용하는 경우, 제품의 색상이 실질적으로 덜 노란색이며, 제품이 더 백색으로 보인다. 따라서, 노란색을 가리기 위해 인스턴트 음료 분말에 색상을 추가할 필요가 없다.
제품의 색상을 측정하는 한 가지 방법은 색상을 3개의 수치로 표현하는 CIELAB 색상 공간을 사용하는 것이다; L*는 밝기에 대한 것이고, a* 및 b*는 녹색-적색 및 청색-황색 구성요소에 대한 것이다. 실시예 1.9는 액체 식품에 대한 L*, a* 및 b* 값을 측정하는 방법을 기술한다.
본 발명의 일 구현예에서, 액체 식품의 단백질 분획은 CIELAB 색상 스케일에서 -0.10 내지 +0.51 범위의 색상 값 델타 b*를 가지며, 여기서, 실온에서 측정된 델타 b* = b6.0 w/w % 단백질로 표준화된 샘플* - b탈염수*이다.
본 발명의 또 다른 양태는 BLG 및 적어도 하나의 임의의 성분을 포함하는 인스턴트 음료 분말을 제조하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 건조 BLG 단리물을 비타민, 향미제, 착색제, 미네랄, 감미료, 산화방지제, 식용 산, 지질, 탄수화물, 프리바이오틱스, 프로바이오틱스, 소포제 및 비-유장 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 성분과 블렌딩하여 인스턴트 음료 분말을 수득하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, BLG 공급원의 BLG는 유기산으로 코팅된다. 예를 들어, BLG 공급원이 분말이면, 이것은 분말이 유기산으로 코팅됨을 의미한다. 단백질을 포함하는 인스턴트 음료 분말을 제조하는 경우, 레시틴은 통상적으로 단백질의 용해도를 향상시키기 위해 사용된다. 그러나, 레시틴은 인의 공급원이다. 따라서, 단백질을 포함하는 인스턴트 음료 분말의 용해도를 향상시키는 또 다른 방법을 찾는 것이 바람직하다.
본 발명자들은 하나 이상의 유기산으로 BLG 결정 또는 BLG 공급원의 분말 입자를 코팅함으로써 인스턴트 음료 분말의 용해도가 향상된다는 것을 발견하였다. 유기산 또는 유기산의 염은 피루베이트, 아코니테이트, 시트레이트, 이소-시트레이트, 케토글루타레이트, 석시닐-CoA, 석시네이트, 푸마레이트, 말레이트, 옥살로아세테이트, 타르트레이트, 아세테이트, 탄닌산, 벤조산, 말레산 및 락테이트로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, BLG 결정은 피루베이트, 시트레이트, 이소-시트레이트, 케토글루타레이트, 석시네이트, 푸마레이트, 말레이트, 옥살로아세테이트, 타르트레이트, 아세테이트, 말레산 및 락테이트 및 이의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 유기산 또는 유기산의 염으로 코팅된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, BLG 공급원의 BLG 결정은 시트레이트, 예를 들어, 시트르산 삼나트륨, 시트르산 칼륨 및 시트르산 칼슘으로 이루어진 군으로부터 선택된 시트레이트로 코팅된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, BLG 공급원의 BLG는 분무-건조 또는 유동층을 사용하여 유기산으로 코팅된다. 건조된 BLG 결정이, 예를 들어, 분무-건조 또는 유동층을 사용하여 유기산 또는 이의 염으로 코팅되는 것이 특히 바람직하다.
BLG 공급원은 BLG가 결정으로 단리된 유장 단백질 공급물로부터 수득될 수 있다. BLG 단리물을 제조하는 한 가지 방법은 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 번호 제PCT/EP2017/084553호에 기재되어 있다. BLG 단리물은 출원된 제PCT/EP2017/084553호의 페이지 6, 라인 23 내지 32에 기재된 바와 같이 제조될 수 있으며, 여기서, 결정화된 및/또는 단리된 형태의 BLG를 포함하는 식용 조성물은 본 발명의 BLG 단리물에 상응한다. 바람직한 구현예에서, BLG 단리물은 출원된 제PCT/EP2017/084553호의 페이지 39, 라인 15 내지 34에 기재된 방법에 의해 제조된다. 또 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물은 출원된 제PCT/EP2017/084553호의 페이지 41, 라인 1 내지 24에 기재된 방법에 의해 제조된다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말은 건조된 BLG 결정을 포함하는 BLG 단리물 분말을 포함하거나 심지어 이로 이루어지며, 상기 BLG 단리물 분말은 유기산 및/또는 유기산의 염으로 코팅된다. BLG 단리물의 중량과 유기산과 탈양성자화된 유기산의 합의 총 중량 사이의 중량 비는 바람직하게는 5 내지 100, 더 바람직하게는 8 내지 60, 더욱 더 바람직하게는 10 내지 40, 및 가장 바람직하게는 12 내지 30이다.
본 발명의 일 양태는 유기산 및/또는 유기산의 염으로 코팅된 BLG 단리물 분말을 제조하는 방법에 관련되며, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:
- 바람직하게는 본원에 기재된 BLG 결정화 공정에 의해 수득된, 바람직하게는 건조된 BLG 결정을 포함하거나 심지어 이로 이루어진, 코팅될 BLG 단리물 분말을 제공하는 단계, 및
- 유기산 및/또는 유기산의 염을 코팅될 BLG 단리물 분말에, 바람직하게는 BLG 단리물 분말을 코팅하기에 충분한 양으로 적용하지만 용해되지 않도록 하는 단계,
- 임의로 코팅된 BLG 단리물 분말로부터 잔류 수분을 증발시키는 단계.
코팅될 BLG 단리물 분말은 바람직하게는 높은 단백질 함량 및 높은 BLG 순도를 둘 다 갖는다. 코팅될 BLG 단리물 분말은 바람직하게는 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%, 더 바람직하게는 적어도 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80%의 BLG의 결정화도를 갖는다.
BLG 단리물 분말의 중량과 유기산과 탈양성자화된 유기산의 합의 총 중량 사이의 중량 비를 제공하기에 충분한 양으로 코팅될 BLG 단리물 분말에 대한 유기산 및/또는 유기산의 염은 바람직하게는 5 내지 100, 더 바람직하게는 8 내지 60, 더욱 더 바람직하게는 10 내지 40, 가장 바람직하게는 12 내지 30이다.
유기산 및/또는 유기산의 염은 바람직하게는 유기산 및/또는 유기산의 염을 바람직하게는 용해된 형태로 유동층에 분무함으로써 유동층 시스템에서 BLG 단리물 분말에 적용되어 BLG 단리물 분말을 코팅한다. 작동 동안 온도는 바람직하게는 5 내지 70℃의 범위, 더 바람직하게는 50 내지 65℃의 범위, 예컨대 바람직하게는 대략 60℃이다.
유기산 및/또는 유기산의 염의 적용 후, 코팅된 BLG 단리물은 바람직하게는 수분 함량이 최대 6% w/w, 더 바람직하게는 최대 5% w/w가 될 때까지, 추가 수분을 증발시키도록 처리될 수 있다.
유기산은 바람직하게는 식용 유기산, 즉 소위 식용 산이다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말을 제조하는데 사용되는 BLG 공급원은 적어도 20% w/w의 고형분 함량을 갖는다. 바람직하게는, BLG 공급원은 적어도 30% w/w의 고형분 함량을 가지며, 더 바람직하게는, BLG 공급원은 적어도 40% w/w의 고형분 함량을 가지며, 더욱 더 바람직하게는, BLG 공급원은 적어도 50% w/w, 예를 들어, 적어도 60% w/w의 고형분 함량을 갖는다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 인스턴트 음료 분말을 제조하는데 사용되는 BLG 공급원은 20 내지 80% w/w 범위의 고형분 함량을 갖는다. 바람직하게는, BLG 공급원은 30 내지 70% w/w 범위의 고형분 함량을 갖는다. 더 바람직하게는, BLG 공급원은 40 내지 65% w/w 범위의 고형분 함량을 갖는다. 더욱 더 바람직하게는, BLG 공급원은 50 내지 65% w/w, 예를 들어, 대략 60% w/w 범위의 고형분 함량을 갖는다.
BLG 공급원은 바람직하게는 BLG 단리물 분말이거나, 액체 BLG 단리물은 물과 BLG 단리물 분말의 고형분을 1 내지 50% w/w 범위의 양으로 함유한다. BLG 공급원이 BLG 단리물 분말인 것이 특히 바람직하다.
바람직하게는 분무-건조에 의해 제조된 베타-락토글로불린(BLG) 단리물 분말은 i) 2 내지 4.9, ii) 6.1 내지 8.5, 또는 iii) 5.0 내지 6.0 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함한다:
- 적어도 30% w/w 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w 양의 BLG, 및
- 최대 10% w/w 양의 물.
BLG 단리물 분말은 바람직하게는 다음 중 하나 이상을 갖는다:
- 적어도 0.2 g/cm3의 벌크 밀도,
- 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350),
- 최대 10%의 단백질 변성도,
- pH 3.9에서 최대 200 NTU의 열-안정성, 및
- 최대 1000 집락-형성 단위/g.
BLG 단리물 분말은 바람직하게는 식용 조성물이다. 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 본원에 정의된 식용 BLG 조성물이다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 2 내지 4.9 범위의 pH를 갖는다. 그러한 분말은 산성 식품 및 특히 산성 음료에 특히 유용하다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 6.1 내지 8.5 범위의 pH를 갖는다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 적어도 40% w/w, 바람직하게는 적어도 50% w/w, 적어도 60% w/w, 더 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80% w/w의 양의 총 단백질을 포함한다.
더욱 더 높은 단백질 함량이 필요할 수 있으며, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 적어도 92% w/w, 더 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 95% w/w의 양의 총 단백질을 포함한다.
총 단백질은 실시예 1.5에 따라 측정된다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 총 단백질에 대해 적어도 92% w/w, 바람직하게는 적어도 95% w/w, 더 바람직하게는 적어도 97% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 98% w/w, 가장 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 99.5% w/w의 양의 BLG를 포함한다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 알파-락트알부민(ALA)과 카제이노마크로펩티드(CMP)의 합은 분말 중 비-BLG 단백질의 적어도 40% w/w, 바람직하게는 적어도 60% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 70% w/w, 가장 바람직하게는 분말 중 비-BLG 단백질의 적어도 90% w/w를 구성한다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 각각의 주요 비-BLG 유장 단백질은 총 단백질에 대해 중량 백분율로 존재하며 이는 스위트 유장으로부터의 표준 유장 단백질 농축물에서 총 단백질에 대해 이의 중량 백분율의 최대 25%, 바람직하게는 최대 20%, 더 바람직하게는 최대 15%, 더욱 더 바람직하게는 최대 10%, 가장 바람직하게는 최대 6%이다.
더욱 더 낮은 농도의 주요 비-BLG 유장 단백질이 바람직할 수 있다. 따라서, 본 발명의 추가의 바람직한 구현예에서, 각각의 주요 비-BLG 유장 단백질은 총 단백질에 대해 중량 백분율로 존재하며 이는 스위트 유장으로부터의 표준 유장 단백질 농축물에서 총 단백질에 대해 이의 중량 백분율의 최대 4%, 바람직하게는 최대 3%, 더 바람직하게는 최대 2%, 더욱 더 바람직하게는 최대 1%이다.
본 발명자들은 락토페린 및/또는 락토퍼옥시다제의 감소가 중성색(colour-neutral) 유장 단백질 제품을 수득하는데 특히 유리하다는 징후를 보았다.
따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 락토페린은 총 단백질에 대해 중량 백분율로 존재하며 이는 스위트 유장으로부터의 표준 유장 단백질 농축물에서 총 단백질에 대해 이의 중량 백분율의 최대 25%, 바람직하게는 최대 20%, 더 바람직하게는 최대 15%, 더욱 더 바람직하게는 최대 10%, 가장 바람직하게는 최대 6%이다. 더욱 더 낮은 농도의 락토페린이 바람직할 수 있다. 따라서, 본 발명의 추가의 바람직한 구현예에서, 락토페린은 총 단백질에 대해 중량 백분율로 존재하며 이는 스위트 유장으로부터의 표준 유장 단백질 농축물에서 총 단백질에 대해 이의 중량 백분율의 최대 4%, 바람직하게는 최대 3%, 더 바람직하게는 최대 2%, 더욱 더 바람직하게는 최대 1%이다.
유사하게, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, 락토퍼옥시다제는 총 단백질에 대해 중량 백분율로 존재하며 이는 스위트 유장으로부터의 표준 유장 단백질 농축물에서 총 단백질에 대해 이의 중량 백분율의 최대 25%, 바람직하게는 최대 20%, 더 바람직하게는 최대 15%, 더욱 더 바람직하게는 최대 10%, 가장 바람직하게는 최대 6%이다. 더욱 더 낮은 농도의 락토퍼옥시다제가 바람직할 수 있다. 따라서, 본 발명의 추가의 바람직한 구현예에서, 락토퍼옥시다제는 총 단백질에 대해 중량 백분율로 존재하며 이는 스위트 유장으로부터의 표준 유장 단백질 농축물에서 총 단백질에 대해 이의 중량 백분율의 최대 4%, 바람직하게는 최대 3%, 더 바람직하게는 최대 2%, 더욱 더 바람직하게는 최대 1%이다.
락토페린 및 락토퍼옥시다제는 실시예 1.29에 따라 정량화된다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 최대 10% w/w, 바람직하게는 최대 7% w/w, 더 바람직하게는 최대 6% w/w, 더욱 더 바람직하게는 최대 4% w/w, 가장 바람직하게는 최대 2% w/w의 양의 수분 함량을 갖는다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 최대 60% w/w, 바람직하게는 최대 50% w/w, 더 바람직하게는 최대 20% w/w, 더욱 더 바람직하게는 최대 10% w/w, 더욱 더 바람직하게는 최대 1% w/w, 가장 바람직하게는 최대 0.1%의 양의 탄수화물을 포함한다. BLG 단리물 분말은, 예를 들어, 탄수화물, 예를 들어, 락토스, 올리고사카라이드 및/또는 락토스의 가수분해 생성물(즉, 글루코스 및 갈락토스), 수크로스, 및/또는 말토덱스트린을 함유할 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 최대 10% w/w, 바람직하게는 최대 5% w/w, 더 바람직하게는 최대 2% w/w, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.1% w/w의 양의 지질을 포함한다.
본 발명자들은 BLG 단리물 분말의 원하는 성질 중 일부에 도달하기 위해 미네랄 함량을 제어하는 것이 유리할 수 있다는 것을 발견하였다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이다. 바람직하게는, BLG 단리물 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 6 mmol/g 단백질, 더 바람직하게는 최대 4 mmol/g 단백질, 더욱 더 바람직하게는 최대 2 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 1 mmol/g 단백질이다. 바람직하게는, BLG 단리물 분말의 Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 0.6 mmol/g 단백질, 더 바람직하게는 최대 0.4 mmol/g 단백질, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.2 mmol/g 단백질, 가장 바람직하게는 최대 0.1 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말의 Mg 및 Ca의 양의 합은 최대 5 mmol/g 단백질이다. 바람직하게는, BLG 단리물 분말의 Mg 및 Ca의 양의 합은 최대 3 mmol/g 단백질, 더 바람직하게는 최대 1.0 mmol/g 단백질, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.5 mmol/g 단백질이다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말의 Mg 및 Ca의 양의 합은 최대 0.3 mmol/g 단백질이다. 바람직하게는, BLG 단리물 분말의 Mg 및 Ca의 양의 합은 최대 0.2 mmol/g 단백질, 더 바람직하게는 최대 0.1 mmol/g 단백질, 더욱 더 바람직하게는 최대 0.03 mmol/g 단백질, 가장 바람직하게는 최대 0.01 mmol/g 단백질이다.
본 발명자들은 특히 신장 질환을 가진 환자에게 유용한 BLG 단리물 분말의 저 인/저 칼륨 변이체를 사용할 수 있음을 발견하였다. 그러한 제품을 만들기 위해, BLG 단리물 분말은 인과 칼륨 함량이 동등하게 낮아야 한다.
따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 100 mg 인의 총 인 함량을 갖는다. 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 80 mg 인의 총 함량을 갖는다. 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 50 mg 인의 총 함량을 갖는다. 더욱 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 20 mg 인의 총 인 함량을 갖는다. BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 5 mg 인의 총 인 함량을 갖는다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 600 mg 칼륨을 포함한다. 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 500 mg 칼륨을 포함한다. 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 400 mg 칼륨을 포함한다. 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 300 mg 칼륨을 포함한다. 더욱 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 200 mg 칼륨을 포함한다. 더욱 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 100 mg 칼륨을 포함한다. 더욱 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 50 mg 칼륨을 포함하고, 더욱 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 10 mg 칼륨을 포함한다.
인의 함량은 해당 조성물의 인 원소의 총량과 관련되며, 실시예 1.19에 따라 결정된다. 유사하게, 칼륨의 함량은 해당 조성물의 칼륨 원소의 총량과 관련되며, 실시예 1.19에 따라 결정된다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 100 mg 인 및 단백질 100 g당 최대 700 mg 칼륨, 바람직하게는 단백질 100 g당 최대 80 mg 인 및 단백질 100 g당 최대 600 mg 칼륨, 더 바람직하게는 단백질 100 g당 최대 60 mg 인 및 단백질 100 g당 최대 500 mg 칼륨, 더 바람직하게는 단백질 100 g당 최대 50 mg 인 및 단백질 100 g당 최대 400 mg 칼륨, 또는 더 바람직하게는 단백질 100 g당 최대 20 mg 인 및 단백질 100 g당 최대 200 mg 칼륨, 또는 더욱 더 바람직하게는 단백질 100 g당 최대 10 mg 인 및 단백질 100 g당 최대 50 mg 칼륨을 포함한다. 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 단백질 100 g당 최대 100 mg 인 및 단백질 100 g당 최대 340 mg 칼륨을 포함한다.
본 발명에 따른 저 인 및/또는 저 칼륨 조성물은 신장 기능이 저하된 환자군을 위한 식품 생산을 위한 식품 성분으로 사용될 수 있다.
본 발명자들은 일부 적용, 예를 들어, 산성 식품 및 특히 산성 음료에 대해, 최대 4.9, 더욱 더 바람직하게는 최대 4.3의 pH를 갖는 산성 BLG 단리물 분말을 갖는 것이 특히 유리하다는 것을 발견하였다. 이것은 특히 고 단백질의 투명한 산성 음료에 해당된다.
본 발명의 맥락에서, 투명한 액체는 실시예 1.7에 따라 측정된 최대 200 NTU의 탁도를 갖는다.
따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 2 내지 4.9 범위의 pH를 갖는다. 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 2.5 내지 4.7, 더 바람직하게는 2.8 내지 4.3, 더욱 더 바람직하게는 3.2 내지 4.0, 가장 바람직하게는 3.4 내지 3.9 범위의 pH를 갖는다. 대안적으로, 그러나 또한 바람직하게는 BLG 단리물 분말은 3.6 내지 4.3 범위의 pH를 가질 수 있다.
본 발명자들은 일부 적용, 예를 들어, pH-중성 식품 및 특히 pH-중성 음료에 대해, pH-중성 BLG 단리물 분말을 갖는 것이 특히 유리하다는 것을 발견하였다. 이것은 특히 고 단백질의 투명한 또는 불투명한 pH-중성 음료에 해당된다.
따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 6.1 내지 8.5 범위의 pH를 갖는다. 바람직하게는, 분말은 6.1 내지 8.5, 더 바람직하게는 6.2 내지 8.0, 더욱 더 바람직하게는 6.3 내지 7.7, 가장 바람직하게는 6.5 내지 7.5 범위의 pH를 갖는다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 5.0 내지 6.0 범위의 pH를 갖는다. 바람직하게는, 분말은 5.1 내지 5.9, 더 바람직하게는 5.2 내지 5.8, 더욱 더 바람직하게는 5.3 내지 5.7, 가장 바람직하게는 5.4 내지 5.6 범위의 pH를 갖는다.
유리하게는, 본 발명에 사용되는 BLG 단리물 분말은 적어도 0.20 g/cm3, 바람직하게는 적어도 0.30 g/cm3, 더 바람직하게는 적어도 0.40 g/cm3, 더욱 더 바람직하게는 적어도 0.45 g/cm3, 더욱 더 바람직하게는 적어도 0.50 g/cm3, 가장 바람직하게는 적어도 0.6 g/cm3의 벌크 밀도를 가질 수 있다.
저 밀도 분말, 예컨대 동결-건조된 BLG 단리물은 폭신하며 사용 동안 생산 현장의 공기로 용이하게 유입된다. 이것은 동결-건조된 분말이 다른 식품에 교차-오염될 위험을 증가시키고 먼지가 많은 환경이 위생 문제의 원인으로 알려져 있기 때문에 문제가 된다. 극단적인 경우, 먼지가 많은 환경은 또한 먼지 폭발의 위험을 증가시킨다.
본 발명의 고 밀도 변이체는 취급하기 쉽고 주변 공기로 유입되는 경향이 적다.
본 발명의 고 밀도 변이체의 추가 이점은 운송 동안 공간을 덜 차지하고 이에 따라 하나의 체적 단위로 운송될 수 있는 BLG 단리물 분말의 중량을 증가시킨다는 점이다.
그러나 본 발명의 고 밀도 변이체의 이점은 기타 분말화된 식품 성분, 예를 들어, 분말화된 당(대략 0.56 g/cm3의 벌크 밀도), 과립화된 당(대략 0.71 g/cm3의 벌크 밀도), 분말화된 시트르산(대략 0.77 g/cm3의 벌크 밀도)과의 분말 혼합물에 사용되는 경우, 분리되는 경향이 작다는 점이다.
본 발명의 BLG 단리물 분말은 0.2 내지 1.0 g/cm3 범위, 바람직하게는 0.30 내지 0.9 g/cm3 범위, 더 바람직하게는 0.40 내지 0.8 g/cm3 범위, 더욱 더 바람직하게는 0.45 내지 0.75 g/cm3 범위, 더욱 더 바람직하게는 0.50 내지 0.75 g/cm3 범위, 가장 바람직하게는 0.6 내지 0.75 g/cm3 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있다.
분말의 벌크 밀도는 실시예 1.17에 따라 측정된다.
본 발명자들은 BLG의 천연 형태를 유지하는 것이 유리하다는 것을 발견하였고, BLG가 산성 음료에 사용되는 경우 BLG의 증가된 언폴딩이 증가된 수준의 건조 식감을 야기한다는 징후를 보았다.
고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350)는 BLG의 언폴딩 정도를 측정한 것이며, 본 발명자들은 BLG의 언폴딩이 적거나 없는 것과 서로 관련된 높은 고유한 트립토판 형광 발광 비에서 더 적은 건조 식감이 관찰된다는 것을 발견하였다. 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350)는 실시예 1.1에 따라 측정된다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350)를 갖는다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 적어도 1.12, 바람직하게는 적어도 1.13, 더 바람직하게는 적어도 1.15, 더욱 더 바람직하게는 적어도 1.17, 가장 바람직하게는 적어도 1.19의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350)를 갖는다.
BLG 단리물 분말이 상당한 양의 비-단백질 물질을 함유하면, 고유한 트립토판 형광 발광 비를 측정하기 전에 단백질 분획을 단리하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말의 단백질 분획은 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비를 갖는다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말의 단백질 분획은 적어도 1.12, 바람직하게는 적어도 1.13, 더 바람직하게는 적어도 1.15, 더욱 더 바람직하게는 적어도 1.17, 가장 바람직하게는 적어도 1.19의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350)를 갖는다.
단백질 분획은, 예를 들어, BLG 단리물 분말을 탈염수에 용해시키고, 단백질을 보유하는 필터를 사용하여 용액을 투석 또는 한외여과-기반 정용여과함으로써 BLG 단리물 분말로부터 분리될 수 있다. BLG 단리물 분말이 간섭 수준의 지질을 함유하면, 그러한 지질은, 예를 들어, 미세여과에 의해 제거될 수 있다. 미세여과 및 한외여과/정용여과 단계를 결합하여 단백질 분획으로부터 지질과 소분자를 둘 다 제거할 수 있다.
BLG 단리물 분말의 상당한 양의 BLG가 비-응집된 BLG인 것이 종종 바람직하다. 바람직하게는 적어도 50%의 BLG는 비-응집된 BLG이다. 더 바람직하게는 적어도 80%의 BLG는 비-응집된 BLG이다. 더욱 더 바람직하게는 적어도 90%의 BLG는 비-응집된 BLG이다. 가장 바람직하게는, 적어도 95%의 BLG는 비-응집된 BLG이다. 더욱 더 바람직하게는 BLG 단리물 분말의 대략 100%의 BLG는 비-응집된 BLG이다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 최대 10%, 바람직하게는 최대 8%, 더 바람직하게는 최대 6%, 더욱 더 바람직하게는 최대 3%, 더욱 더 바람직하게는 최대 1%, 가장 바람직하게는 최대 0.2%의 단백질 변성도를 갖는다.
그러나, 예를 들어, 불투명한 음료가 요구된다면, BLG 단리물 분말이 상당한 수준의 단백질 변성을 갖는 것이 또한 바람직할 수 있다. 따라서, 본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 적어도 11%, 바람직하게는 적어도 20%, 더 바람직하게는 적어도 40%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 가장 바람직하게는 적어도 90%의 단백질 변성도를 갖는다.
BLG 단리물 분말이 상당한 수준의 단백질 변성을 가진다면, 낮은 수준의 불용성 단백질 물질, 즉 저장 동안 음료에 침전되는, 침전된 단백질 물질을 유지하는 것이 종종 바람직하다. 불용성 물질의 수준은 실시예 1.10에 따라 측정된다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 최대 20% w/w 불용성 단백질 물질, 바람직하게는 최대 10% w/w 불용성 단백질 물질, 더 바람직하게는 최대 5% w/w 불용성 단백질 물질, 더욱 더 바람직하게는 최대 3% w/w 불용성 단백질 물질, 가장 바람직하게는 최대 1% w/w 불용성 단백질 물질을 포함한다. BLG 단리물 분말이 임의의 불용성 단백질 물질을 전혀 함유하지 않는 것이 더욱 바람직할 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 최대 19%, 바람직하게는 최대 10%, 더 바람직하게는 최대 5%, 가장 바람직하게는 0%의 BLG의 결정화도를 갖는다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%, 더 바람직하게는 적어도 60%, 및 가장 바람직하게는 적어도 80%의 BLG의 결정화도를 갖는다. 이들 구현예는 상당한 양의 건조된 BLG 결정을 포함하며, 고체의 조밀한 형태로 존재하는 단백질 공급원을 갖는 이점을 제공한다.
본 발명자들은 BLG 단리물 분말의 pH 3.9에서의 열-안정성이 투명한 고 단백질 음료에 대한 이의 유용성에 대한 우수한 지표라는 것을 발견하였다. pH 3.9에서의 열-안정성은 실시예 1.2에 따라 측정된다.
BLG 단리물 분말은 pH 3.9에서 최대 200 NTU, 바람직하게는 최대 100 NTU, 더 바람직하게는 최대 60 NTU, 더욱 더 바람직하게는 최대 40 NTU, 가장 바람직하게는 최대 20 NTU의 열-안정성을 갖는 것이 특히 바람직하다. 더욱 더 나은 열-안정성이 가능하며, BLG 단리물 분말은 바람직하게는 pH 3.9에서 최대 10 NTU, 바람직하게는 최대 8 NTU, 더 바람직하게는 최대 4 NTU, 더욱 더 바람직하게는 최대 2 NTU의 열-안정성을 갖는다.
BLG 단리물 분말의 미생물의 함량은 최소로 유지하는 것이 바람직하다. 그러나, 미생물 감소를 위한 과정은 단백질 언폴딩 및 변성도를 초래하는 경향이 있기 때문에, 높은 정도의 단백질 천연성과 낮은 미생물 함량을 둘 다 얻는 것은 어려운 과제이다. 본 발명은 BLG의 천연성을 높은 수준으로 유지하는 동시에 매우 낮은 함량의 미생물을 얻을 수 있도록 한다.
따라서, 본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 최대 15000 집락-형성 단위(CFU)/g을 함유한다. 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 최대 10000 CFU/g을 함유한다. 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 최대 5000 CFU/g을 함유한다. 더욱 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 최대 1000 CFU/g을 함유한다. 더욱 더 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 최대 300 CFU/g을 함유한다. 가장 바람직하게는, BLG 단리물 분말은 최대 100 CFU/g, 예를 들어, 최대 10 CFU/g을 함유한다. 특히 바람직한 구현예에서, 분말은 멸균상태이다. 멸균 BLG 단리물 분말은, 예를 들어, BLG 단리물 분말을 생성하는 동안, 예를 들어, 미세여과 및 산성 pH에서의 열-처리와 같은 여러 물리적 미생물 감소 공정을 조합하여 제조될 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 i) 2 내지 4.9, ii) 6.1 내지 8.5, 또는 iii) 5.0 내지 6.0 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함하며:
- 적어도 30% w/w, 바람직하게는 적어도 80% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 90% w/w의 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w의 양의 베타-락토글로불린(BLG),
- 최대 6% w/w 양의 물,
- 최대 2% w/w, 바람직하게는 최대 0.5% w/w 양의 지질;
상기 BLG 단리물 분말은 다음을 갖는다:
- 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350),
- 최대 10%의 단백질 변성도, 및
- pH 3.9에서 최대 200 NTU의 열-안정성.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 i) 2 내지 4.9 또는 ii) 6.1 내지 8.5 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함하며:
- 적어도 30% w/w, 바람직하게는 적어도 80% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 90% w/w 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w 양의 베타-락토글로불린(BLG),
- 최대 6% w/w 양의 물,
- 최대 2% w/w, 바람직하게는 최대 0.5% w/w 양의 지질;
상기 BLG 단리물 분말은 다음을 갖는다:
- 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350),
- 최대 10%, 바람직하게는 최대 5%의 단백질 변성도, 및
- pH 3.9에서 최대 70 NTU, 바람직하게는 최대 50 NTU, 더욱 더 바람직하게는 최대 40 NTU의 열-안정성.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 i) 2 내지 4.9 또는 ii) 6.1 내지 8.5 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함하며:
- 적어도 30% w/w 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w 양의 베타-락토글로불린(BLG),
- 최대 6% w/w 양의 물,
상기 BLG 단리물 분말은 다음을 갖는다:
- 적어도 0.2 g/cm3의 벌크 밀도,
- 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350),
- 최대 10%의 단백질 변성도, 및
- pH 3.9에서 최대 200 NTU의 열-안정성.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 2 내지 4.9 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함하며:
- 적어도 80% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 94% w/w 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w 양의 베타-락토글로불린(BLG),
- 최대 6% w/w 양의 물,
- 최대 2% w/w, 바람직하게는 최대 0.5% w/w 양의 지질;
상기 BLG 단리물 분말은 다음을 갖는다:
- 적어도 0.2 g/cm3, 바람직하게는 적어도 0.3 g/cm3, 더 바람직하게는 적어도 0.4 g/cm3의 벌크 밀도,
- 적어도 1.11의 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350),
- 최대 10%, 바람직하게는 최대 5%, 더 바람직하게는 최대 2%의 단백질 변성도, 및
- pH 3.9에서 최대 50 NTU, 바람직하게는 최대 30 NTU, 더욱 더 바람직하게는 최대 10 NTU의 열-안정성.
본 발명의 더 다른 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 6.1 내지 8.5 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함하며:
- 적어도 80% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 94% w/w 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w 양의 베타-락토글로불린(BLG),
- 최대 6% w/w 양의 물,
- 최대 2% w/w, 바람직하게는 최대 0.5% w/w 양의 지질;
상기 BLG 단리물 분말은 다음을 갖는다:
- 적어도 0.2 g/cm3, 바람직하게는 적어도 0.3 g/cm3, 더 바람직하게는 적어도 0.4 g/cm3의 벌크 밀도,
- 최대 10%, 바람직하게는 최대 5%, 더 바람직하게는 최대 2%의 단백질 변성도, 및
- pH 3.9에서 최대 50 NTU, 바람직하게는 최대 30 NTU, 더욱 더 바람직하게는 최대 10 NTU의 열-안정성.
본 발명의 추가의 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 6.1 내지 8.5 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함하며:
- 적어도 80% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 94% w/w 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w 양의 베타-락토글로불린(BLG),
- 최대 6% w/w 양의 물,
- 최대 2% w/w, 바람직하게는 최대 0.5% w/w 양의 지질;
상기 BLG 단리물 분말은 다음을 갖는다:
- 적어도 0.2 g/cm3, 바람직하게는 적어도 0.3 g/cm3, 더 바람직하게는 적어도 0.4 g/cm3의 벌크 밀도,
- 최대 10%, 바람직하게는 최대 5%, 더 바람직하게는 최대 2%의 단백질 변성도, 및
- pH 3.9에서 최대 50 NTU, 바람직하게는 최대 30 NTU, 더욱 더 바람직하게는 최대 10 NTU의 열-안정성.
본 발명의 추가의 바람직한 구현예에서, BLG 단리물 분말은 5.0 내지 6.0 범위의 pH를 가지며, 다음을 포함하며:
- 적어도 80% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 94% w/w 양의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w, 바람직하게는 적어도 90% w/w, 더욱 더 바람직하게는 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w 양의 베타-락토글로불린(BLG),
- 최대 6% w/w 양의 물,
- 최대 2% w/w, 바람직하게는 최대 0.5% w/w 양의 지질;
상기 BLG 단리물 분말은 다음을 갖는다:
- 적어도 0.2 g/cm3, 바람직하게는 적어도 0.3 g/cm3, 더 바람직하게는 적어도 0.4 g/cm3의 벌크 밀도,
- 최대 10%, 바람직하게는 최대 5%, 더 바람직하게는 최대 2%의 단백질 변성도,
- pH 3.9에서 최대 50 NTU, 바람직하게는 최대 30 NTU, 더욱 더 바람직하게는 최대 10 NTU의 열-안정성, 및
- 바람직하게는, 10% 미만의 BLG 결정화도.
총 단백질에 대해 적어도 85% w/w의 양의 BLG를 함유하는 BLG 단리물 분말은 전형적으로 다음 단계를 포함하는 방법에 의해 제공된다:
a) 다음을 갖는 액체 BLG 단리물을 제공하는 단계로서:
i) 2 내지 4.9 범위의 pH,
ii) 6.1 내지 8.5 범위의 pH, 또는
iii) 5.0 내지 6.0 범위의 pH
상기 액체 BLG 단리물은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w의 양의 BLG를 함유하는, 단계,
b) 임의로, 상기 액체 BLG 단리물을 물리적 미생물 감소시키는 단계,
c) 상기 액체 BLG 단리물을 건조, 바람직하게는 분무-건조시키는 단계.
BLG 단리물은 바람직하게는 포유동물의 젖, 바람직하게는 반추동물의 젖, 예를 들어, 젖소, 양, 염소, 버팔로, 낙타, 라마, 암말 및/또는 사슴의 젖으로부터 제조된다. 소의 젖으로부터 유래된 단백질이 특히 바람직하다. 따라서, BLG는 바람직하게는 소 BLG이다.
액체 BLG 단리물은 다수의 상이한 방식으로 제공될 수 있다.
전형적으로, 액체 BLG 단리물의 제공은 다음 방법 중 하나 이상에 의해 BLG- 풍부 조성물을 제공하기 위해 유장 단백질 공급물로부터 BLG를 단리하는 단계를 포함하거나 심지어 이로 이루어진다:
- 염용에 의한 BLG의 결정화 또는 침전,
- 염석(salting-out)에 의한 BLG의 결정화 또는 침전,
- 이온 교환 크로마토그래피, 및
- 한외여과에 의한 유장 단백질의 분별
BLG-풍부 조성물을 제공하는 특히 바람직한 방식은 BLG의 결정화, 바람직하게는 염용 또는 대안적으로 염석에 의한 것이다.
유장 단백질 공급물은 바람직하게는 WPC, WPI, SPC, SPI, 또는 이들의 조합이다.
용어 "유장 단백질 공급물"은 BLG-풍부 조성물 및 후속적으로 액체 BLG 단리물이 유래되는 조성물에 관련된다.
본 발명의 일부 구현예에서, BLG-풍부 조성물의 제조는 US 제2,790,790 A1호에 따라 pH 범위 3.6 내지 4.0에서 고 염 BLG 결정화를 포함하거나 심지어 이로 이루어진다.
본 발명의 다른 구현예에서, BLG-풍부 조성물의 제조는 de Jongh 등 (Mild Isolation Procedure Discloses New Protein Structural Properties of β-Lactoglobulin, J Dairy Sci., vol. 84(3), 2001, pages 562-571) 또는 Vyas 등 (Scale-Up of Native β-Lactoglobulin Affinity Separation Process, J. Dairy Sci. 85:1639-1645, 2002)에 의해 기재된 방법을 포함하거나 심지어 이로 이루어진다.
그러나, 본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, BLG-풍부 조성물은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된 PCT 출원 제PCT/EP2017/084553호에 기재된 바와 같은 염용 조건하에 pH 5 내지 6에서 결정화에 의해 제조된다.
본 발명의 일부 바람직한 구현예에서, BLG-풍부 조성물은 총 단백질에 대해 적어도 90% BLG를 함유하고 바람직하게는 BLG 결정을 함유하는 제PCT/EP2017/084553호에 따른 식용 BLG 조성물이다.
액체 BLG 단리물로서 사용될 필요한 특성을 아직 갖지 않는다면, 유장 단백질 공급물로부터 단리되었던 BLG-풍부 조성물은 액체 BLG 단리물 제공의 일부로서 다음 군으로부터 선택된 하나 이상의 단계로 처리될 수 있다:
- 탈염,
- 미네랄 첨가,
- 희석,
- 농축,
- 물리적 미생물 감소, 및
- pH 조정.
탈염의 비제한적인 예는, 예를 들어, 투석, 겔 여과, UF/투석 여과, NF/투석 여과, 및 이온 교환 크로마토그래피를 포함한다.
미네랄 첨가의 비제한적인 예는 수용성의 식품에 허용되는 염, 예를 들어, Na, K, Ca, 및/또는 Mg의 염의 첨가를 포함한다. 그러한 염은, 예를 들어, 포스페이트-염, 클로라이드 염 또는 식용 산의 염, 예를 들어, 시트레이트 염 또는 락테이트 염일 수 있다. 미네랄은 고체, 현탁된 또는 용해된 형태로 첨가될 수 있다.
희석의 비제한적인 예는, 예를 들어, 액체 희석제, 예컨대 물, 탈염수, 또는 미네랄, 산 또는 염기의 수용액의 첨가를 포함한다.
농도의 비제한적인 예는, 예를 들어, 증발, 역삼투, 나노여과, 한외여과 및 이들의 조합을 포함한다.
농도가 총 고형분에 대해 단백질의 농도를 증가시켜야 한다면, 한외여과 또는 대안적으로 투석과 같은 농축 단계를 사용하는 것이 바람직하다. 농도가 총 고형분에 대해 단백질의 농도를 증가시킬 필요가 없다면, 예를 들어, 증발, 나노여과 및/또는 역삼투와 같은 방법이 유용할 수 있다.
물리적 미생물 감소의 비제한적인 예는, 예를 들어, 열-처리, 세균 여과, UV 방사선, 고압 처리, 펄스 전기장 처리 및 초음파를 포함한다. 이들 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
pH 조정의 비제한적인 예는, 예를 들어, 염기 및/또는 산, 바람직하게는 식품에 허용되는 염기 및/또는 산의 첨가를 포함한다. 2가 금속 양이온을 킬레이트화할 수 있는 산 및/또는 염기를 사용하는 것이 특히 바람직하다. 그러한 산 및/또는 염기의 예는 시트르산, 시트레이트 염, EDTA, 락트산, 락테이트 염, 인산, 포스페이트 염, 및 이들의 조합이다.
다음에는 BLG-풍부 조성물로부터 단계 a)의 액체 BLG 단리물을 제공하는 다수의 바람직한 구현예가 있다. 이러한 맥락에서 언급된 공정 단계는 BLG-풍부 조성물을 따르는 BLG-함유 생성물 스트림에 적용된다.
본 발명은 특정 구현예를 참조하여 상기에 기재되었다. 그러나, 상기 기재된 것 이외의 다른 구현예도 본 발명의 범위 내에서 동일하게 가능하다. 본 발명의 다양한 구현예 및 양태의 상이한 특징 및 단계는, 달리 언급되지 않는 한, 본원에 기재된 것들과 다른 방식으로 결합될 수 있다.
실시예
실시예 1: 분석 방법
실시예 1.1: 고유한 트립토판 형광에 의한 단백질 천연성의 결정
트립토판(Trp) 형광 분광법은 단백질 폴딩 및 언폴딩을 모니터링하기 위한 잘-설명된 도구이다. 천연 단백질 내에 묻혀 있는 Trp 잔기는 전형적으로 언폴딩된 단백질과 같은 더 많은 용매 노출 위치에 존재하는 경우보다 330 nm 부근에서 가장 높은 형광 발광을 나타낸다. 언폴딩된 단백질에서, Trp 형광 발광을 위한 파장은 전형적으로 더 높은 파장으로 이동하며 종종 350 nm 부근에서 측정된다. 본 발명자들은 여기서 가열 온도의 영향을 조사하기 위해 330 nm와 350 nm에서 형광 발광 사이의 비를 계산함으로써 열적으로 유도된 언폴딩을 모니터링하기 위해 이 전환을 활용한다.
분석은 다음 단계를 포함한다:
ㆍ 음료 조성물을 MQ 물 중 0.6 mg/ml로 희석하였다.
ㆍ 300 μl 샘플을 기포를 방지하는 백색 96-웰 플레이트로 옮기거나, 3 mL를 10 mm 석영 큐벳으로 옮겼다.
ㆍ 310 nm와 400 nm 사이의 트립토판 형광 발광 강도는 5 nm 슬릿을 사용하여 295에서 여기에 의해 상단으로부터 기록되었다.
ㆍ 샘플을 플레이트 리더 액세서리(G9810A) 또는 단일 큐벳 홀더가 장착된 Cary Eclipse 형광 분광광도계를 사용하여 22℃에서 측정하였다.
ㆍ 발광 강도 비는 330 nm에서 측정된 형광 발광 강도를 350 nm에서의 발광 강도로 나누어 계산하여 (R = I330/I350), 단백질 발생(nativity)의 척도로서 사용되었다.
o 적어도 1.11의 R은 우세한 천연 BLG 형태를 설명하고,
o 1.11 미만의 R은 적어도 부분적인 언폴딩 및 응집에 대해 보고한다.
실시예 1.2: pH 3.9에서의 열-안정성
pH 3.9에서의 열-안정성:
pH 3.9에서의 열-안정성은 pH 3.9에서 장기간 저온살균시 맑게 유지되는 단백질 조성물의 능력을 측정한 것이다.
pH 3.9에서의 열-안정성은 시험될 분말 또는 액체의 샘플을 물과 혼합함으로써 (또는 대안적으로, 희석 액체라면 저온 증발에 의해 농축시킴) pH가 3.9이고 6.0% w/w 단백질을 포함하는 수용액을 형성하는 단계, 및 필요한 최소량의 0.1 M NaOH 또는 0.1 M HCl로 pH를 3.9로 조정하는 단계에 의해 결정된다.
pH-조정된 혼합물은 30분 동안 그대로 둔 후 25 mL의 혼합물을 30 mL 얇은 벽의 유리 시험 튜브로 옮긴다. 75.0℃ 온도의 워터 배스에 침지시켜 300초 동안 75.0℃로 가열한다. 가열 직후, 유리 시험 튜브를 얼음 배스에 옮겨 1 내지 5℃로 냉각시키고, 실시예 1.7에 따라 열-처리된 샘플의 탁도를 측정한다.
실시예 1.3: 유장 단백질 조성물의 단백질 변성도의 결정
변성된 유장 단백질은 pH 4.6 미만 또는 pH 4.6 초과의 pH 값에서보다 pH 4.6에서 용해도가 낮은 것으로 알려져 있으며, 따라서, 유장 단백질 조성물의 변성도는 용액에서의 단백질이 안정한 pH에서 단백질의 총량에 대한 pH 4.6에서의 가용성 단백질의 양을 측정하여 결정된다.
보다 구체적으로, 유장 단백질의 경우, 분석될 유장 단백질 조성물(예를 들어, 분말 또는 수용액)은 다음과 같이 변환된다:
- 5.0% (w/w) 총 단백질을 함유하고 7.0 또는 3.0의 pH를 갖는 제1 수용액, 및
- 5.0% (w/w) 총 단백질을 함유하고 4.6의 pH를 갖는 제2 수용액.
pH 조정은 3% (w/w) NaOH (수성) 또는 5% (w/w) HCl (수성)을 사용하여 이루어진다.
제1 수용액의 총 단백질 함량 (PpH 7.0 또는 3.0)은 실시예 1.5에 따라 결정된다.
제2 수용액을 실온에서 2시간 동안 저장하고, 그 후 3000 g에서 5분 동안 원심분리한다. 상청액의 샘플을 회수하고 실시예 1.5에 따라 분석하여 상청액(SpH4.6)의 단백질 농도를 제공한다.
유장 단백질 조성물의 단백질 변성도, D는 다음과 같이 계산된다:
D = ((PpH 7.0 또는 3.0-SpH 4.6)/PpH 7.0 또는 3.0)*100%
실시예 1.4 역상 UPLC 분석을 사용하여 단백질 변성의 결정 (pH 4.6 산 침전을 사용함).
BLG 샘플(예컨대 비-가열된 기준 및 가열된 BLG 음료 조성물)을 MQ 물 중에서 2%로 희석하였다. 5 mL 단백질 용액, 10 mL Milli-Q, 4 mL 10% 아세트산 및 6 mL 1.0 M NaOAc를 혼합하고, 20분 동안 교반하여 pH 4.6 부근에서 변성된 단백질의 침전 응집을 허용한다. 용액은 0.22 μm 필터를 통해 여과되어 응집체 및 비-천연 단백질을 제거한다.
모든 샘플은 연마된 물을 첨가하여 동일한 정도로 희석하였다.
각 샘플에 대해, 동일한 체적을 UPLC 컬럼(단백질 BEH C4; 300 Å; 1.7 μm; 150 x 2.1 mm)을 갖는 UPLC 시스템에 로딩하였고 214 nm에서 검출하였다.
샘플은 다음 조건을 사용하여 실행되었다:
완충액 A: Milli-Q 물, 0.1% w/w TFA
완충액 B: HPLC 등급 아세토니트릴, 0.1% w/w TFA
유동: 0.4 ml/분
구배: 0 내지 6.00분　24 내지 45% B; 6.00 내지 6.50분 45 내지 90% B; 6.50 내지 7.00분 90% B; 7.00 내지 7.50분 90 내지 24% B 및 7.50 내지 10.00분 24% B.
단백질 표준(Sigma L0130)에 대한 BLG 피크의 면적을 사용하여 샘플(5 레벨 보정 곡선)에서 천연 BLG의 농도를 결정하였다.
샘플을 추가로 희석하고, 선형 범위를 벗어나면 재주입하였다.
실시예 1.5: 총 단백질의 결정
샘플의 총 단백질 함량(순 단백질)은 다음에 의해 결정된다:
1) ISO 8968-1/2|IDF 020-1/2- 밀크에 따른 샘플의 총 질소를 결정함 - 질소 함량의 결정 - 파트 1/2: 킬달 방법(Kjeldahl method)을 사용한 질소 함량의 결정
2) ISO 8968-4|IDF 020-4- 밀크에 따른 샘플의 비-단백질 질소를 결정함 - 질소 함량의 결정 - 파트 4: 비-단백질-질소 함량의 결정.
3) 단백질 총량을 (m총 질소 - m비-단백질-질소)*6.38로서 계산함.
실시예 1.6: 비-응집된 BLG, ALA, 및 CMP의 결정
비-응집된 알파-락트알부민(ALA), 베타-락토글로불린(BLG) 및 카제이노마크로펩티드(CMP)의 함량 각각은 0.4 mL/분에서 HPLC 분석에 의해 분석되었다. 25 μL 여과된 샘플을 용리액(465 g Milli-Q 물, 417.3 g 아세토니트릴 및 1 mL 트리플루오로아세트산으로 이루어짐)에서 평형화된 부착된 전치-컬럼 PWxl (6 mm x 4 cm, Tosohass, 일본)로 직렬로 연결된 2개의 TSKgel3000PWxl (7.8 mm 30 cm, Tosohass, 일본) 컬럼에 주입하고 210 nm에서 UV 검출기를 사용한다.
천연 알파-락트알부민(C알파), 베타-락토글로불린(C베타), 및 카제이노마크로펩티드(CCMP)의 함량의 정량적 결정은 상응하는 표준 단백질에 대해 얻어진 피크 영역을 샘플의 피크 영역과 비교하여 수행하였다.
추가 단백질(비-BLG 단백질)의 총량은 (실시예 1.5에 따라 결정된) 총 단백질의 양으로부터 BLG의 양을 빼서 결정되었다.
실시예 1.7: 탁도의 결정
탁도는 공기 중의 연기와 유사하게 육안으로는 일반적으로 보이지 않는 많은 수의 입자에 의해 초래된 유체의 흐림(cloudiness) 또는 흐릿함(haziness)이다.
탁도는 NTU(nephelometric turbidity units)로 측정된다.
20 mL 음료/샘플을 NTU-유리에 첨가하고 Turbiquant® 3000 IR 탁도계에 넣었다. NTU-값은 안정화 후 측정되었고 2회 반복되었다.
실시예 1.8: 점도의 결정
음료 제제의 점도는 레오미터(Anton Paar, Physica MCR301)를 사용하여 측정되었다.
3.8 mL 샘플을 컵 DG26.7에 첨가하였다. 샘플을 22℃로 평형화시킨 다음, 50s-1에서 30초 동안 사전-전단하고, 이어서 30초 평형 시간과 1s-1 및 200s-1 및 1s-1 사이의 전단 속도 스위프를 수행하였다.
점도는 달리 명시되지 않는 한, 100s-1의 전단 속도로 단위 센티포이즈(cP)로 표시된다. 측정된 cP 값이 높을수록 점도가 높아진다.
대안적으로, 점도는 Viscoman(제조사: Gilson)을 사용하여 추정되었고 약 300s-1의 전단 속도로 보고되었다.
실시예 1.9: 색상의 결정
색상은 색도계(Chroma Meter)(Konica Minolta, CR-400)를 사용하여 측정되었다. 15 g 샘플을 작은 페트리 접시(55 x 14.2 mm, VWR Cat# 391-0895)에 첨가하여 기포 형성을 방지하였다. 샘플의 단백질 함량은 6.0 w/w % 이하 단백질로 표준화되었다.
색도계는 백색 보정 플레이트(No. 19033177)로 보정되었다. 광원(illuminant)은 D65로 설정되고 관찰자는 2도로 설정되었다. 색상(CIELAB 색상 공간, a*-, b*-, L*-값)은 페트리 접시의 다른 위치에서 3개의 개별 판독치의 평균으로서 현탁액을 덮는 뚜껑으로 측정되었다.
탈염수 기준은 다음 값을 갖는다:
L* 39.97±0.3
a* 0.00±0.06
b* -0.22±0.09
측정은 탈염수 측정을 기반으로 델타/차이 값으로 변환되었다.
델타 L* = L6.0 w/w % 단백질로 표준화된 샘플* - L탈염수*, 실온에서 측정됨.　
델타 a* = a6.0 w/w % 단백질로 표준화된 샘플* - a탈염수*, 실온에서 측정됨.　 　
델타 b* = b6.0 w/w % 단백질로 표준화된 샘플* - b탈염수*, 실온에서 측정됨.　
샘플은 6.0 w/w % 이하 단백질로 표준화된다.
L*a*b*　색상 공간(CIELAB 공간으로도 지칭됨)은 1976년 국제 조명위원회(CIE: International Commission on Illumination)에 의해 정의된 균일한 색상 공간 중 하나이며, 밝기와 색조(ISO 11664-4:2008(E)/CIE S 014- 4/E:2007)를 정량적으로 보고하기 위해 사용되었다
이 공간에서, L*은 밝기(0 내지 100의 값), L* = 0에서 가장 어두운 검정 그리고 L* = 100에서 가장 밝은 백색을 나타낸다.
색상 채널 a* 및 b*는 a* = 0 및 b* = 0에서 진정한 중성 회색 값을 나타낸다. a* 축은 녹색-적색 구성요소를 나타내며, 이때 녹색은 음의 방향이고 적색은 양의 방향이다. b* 축은 청색-황색 구성요소를 나타내며, 이때 청색은 음의 방향이고 황색은 양의 방향이다.
실시예 1.10 음료 안정성 시험/불용성 단백질 물질
3000 g에서 5분 동안 원심분리시 가열된 샘플에서 총 단백질의 15% 미만이 침전되면, 유장 단백질 음료 조성물은 안정한 것으로 간주되었다.
ㆍ 대략 20 g 샘플을 원심분리 튜브에 첨가하고 3000 g에서 5분 동안 원심분리하였다.
ㆍ 원심분리 전 단백질 및 원심분리 후 상청액의 킬달 분석을 사용하여 단백질 회수를 정량화하였다. 실시예 1.5를 참조한다.
단백질의 손실은 다음과 같이 계산된다:
Figure pct00001
또한, 이 파라미터는 때때로 불용성 단백질 물질의 수준으로도 지칭되며, 액체 샘플과 분말 샘플 둘 다를 분석하는데 사용될 수 있다. 샘플이 분말이면, 10 g의 분말을 90 g 탈염수에 현탁시키고, 온화한 교반하에 1시간 동안 22℃에서 수화시킨다. 대략 20 g의 샘플(예를 들어, 액체 샘플 또는 현탁된 분말 샘플)을 원심분리 튜브에 첨가하고 3000 g에서 5분 동안 원심분리하였다. 원심분리 전(P총) 단백질 및 원심분리 후(P3000xg) 상청액의 킬달 분석을 사용하여 실시예 1.5에 따른 단백질 회수를 정량화하였다.
불용성 단백질 물질의 양은 다음과 같이 계산된다:
Figure pct00002
실시예 1.11: 감각 평가
열-처리된 음료 제제는 묘사적인 감각 평가를 받았다. 음료 제제는 플레이트 열 교환기를 사용하여 열 처리하였다.
1 체적 샘플을 1 체적 물과 혼합하고, 비-가열된 유장 단백질 단리물과 비교하고, 락트산 및 시트르산을 또한 사용하여 최종 시음 세션 전에 속성 목록(attribute list)을 형성한다:
카테고리 속성:
향 유장, 산성(사워 유제품)
기본 맛 산, 쓴맛
향미 유장, 시트르산, 락트산
식감 건조, 떫은 맛
크래커, 백차(white tea), 멜론 및 물을 사용하여 각 샘플 사이의 참가자의 입을 깨끗하게 하였다.
주변 온도(20 내지 25℃)에서 15 mL 시험 샘플을 작은 컵에 담았다.
시험 샘플은 각각 무작위 순서로 세 가지 상이한 블록에서 10명의 개인에게 3회 제공되었다.
속성(상기 표 참조)은 0 = 저 강도 및 15 = 고 강도로 15 cm 스케일로 평가되었다.
통계 분석은 다중 반복을 위해 삼원 분산분석(3-way ANOVA) 시험을 사용하여 'Panelcheck' 소프트웨어에서 수행되었다. 샘플을 고정하고 패널을 무작위로 설정하였다. 최소 유의 차이 값(문자와 관련된 군의 쌍 비교)을 암시하는 본페로니(Bonferroni) 보정을 사용하여 샘플 간의 유의한 차이를 평가하였다.
실시예 1.12: 이미징에 의한 투명도의 결정
음료 제제의 사진은 'lorem ipsum' 텍스트가 있는 종이 조각에 닿는 탁도 NTU 측정 바이알에 샘플을 넣어 수행되었다. 바이알은 스마트폰을 사용하여 촬영하였고 본 발명자들은 텍스트가 바이알을 통해 명확하게 관찰될 수 있는지 여부를 평가하였다.
실시예 1.13: 회분 함량의 결정
식품의 회분 함량은 NMKL 173:2005 "식품에서의 회분, 중량 측정"에 따라 결정된다.
실시예 1.14: 전도도의 결정
수용액의 "전도도"(때때로 "비전도율"로 지칭됨)는 전기를 전도하는 용액의 능력을 측정한 것이다. 전도도는, 예를 들어, 두 전극 사이의 용액의 AC 저항을 측정하여 결정될 수 있으며, 그 결과는 전형적으로 cm당 밀리지멘스(mS/cm) 단위로 제공된다. 전도도는, 예를 들어, EPA(the US Environmental Protection Agency) 방법 No. 120.1에 따라 측정될 수 있다.
본원에 언급된 전도도 값은 달리 명시되지 않는 한 25℃로 정규화되었다.
전도도는 전도도 측정기(테트라콘(tetracon) 325 전극이 있는 WTW Cond 3210)에서 측정된다.
시스템은 사용 전에 매뉴얼에 기재된 바와 같이 보정된다. 전극은 국소 희석을 피하기 위해 측정이 수행되는 바와 동일한 유형의 매질에서 철저히 헹군다. 전극은 측정이 발생하는 영역이 완전히 잠기도록 매질 안으로 내린다. 이어서, 전극에 갇힌 임의의 공기를 제거하도록 전극을 진탕시킨다. 이어서, 안정된 값을 얻고 디스플레이로부터 기록될 수 있을 때까지 전극을 그대로 유지한다.
실시예 1.15: 용액의 총 고형분의 결정
용액의 총 고형분은 문헌 [NMKL 110 2nd Edition, 2005 (Total solids (Water) - Gravimetric determination in milk and milk products)]에 따라 결정될 수 있다. NMKL은 "북유럽 식품 방법론 위원회(Nordisk Metodikkomite for Naeringsmidler)"의 약어이다.
용액의 수분 함량은 100% - 총 고형분(% w/w)의 상대적인 양으로서 계산될 수 있다.
실시예 1.16: pH의 결정
모든 pH 값은 pH 유리 전극을 사용하여 측정되며 25℃로 정규화된다.
pH 유리 전극(온도 보정을 가짐)은 사용 전에 조심스럽게 헹구고 보정한다.
샘플이 액체 형태일 경우, pH는 25℃의 액체 용액에서 직접 측정된다.
샘플이 분말인 경우, 10 그램의 분말을 90 ml의 탈염수에 실온에서 격렬하게 교반하면서 용해시킨다. 이어서. 용액의 pH는 25℃에서 측정된다.
실시예 1.17: 루즈한(loose) 밀도 및 벌크 밀도의 결정
건조 분말의 밀도는 명시된 조건하에 특수 Stampf 체적 측정기(즉, 측정 실린더)를 사용하여 분석되는 분말의 중량과 체적 사이의 관계로 정의된다. 밀도는 전형적으로 g/ml 또는 kg/L로 표시된다.
이 방법에서, 건조된 분말의 샘플을 측정 실린더에 담는다. 명시된 수의 탭핑 후에, 제품의 체적을 판독하고 밀도를 계산한다.
이 방법에 의해 세 가지 유형의 밀도가 정의될 수 있다:
■ 명시된 측정 실린더로 옮긴 후 분말의 체적으로 질량을 나눈, 주입된 밀도(poured density)
■ 이 표준에서 명시된 조건에 따라 100회 탭핑한 후 분말의 체적으로 질량을 나눈, 루즈한 밀도.
■ 이 표준에서 명시된 조건에 따라 625회 탭핑한 후 분말의 체적으로 질량을 나눈, 벌크 밀도.
상기 방법은 특수 측정 실린더, 250 ml, 눈금이 있는 0 내지 250 ml, 중량 190±15 g (J. Engelsmann A. G. 67059 Ludwigshafen/Rh) 및 Stampf 체적 측정기, 예를 들어, J. Engelsmann A. G를 사용한다.
건조된 제품의 루즈한 밀도와 벌크 밀도는 다음 절차에 의해 결정된다.
전처리:
측정될 샘플은 실온에서 보관한다.
이어서, 용기를 반복적으로 회전시키고 돌려서 샘플을 완전히 혼합한다 (입자 분쇄 방지). 용기는 2/3 초과하여 채워지지 않는다.
절차:
100.0 ± 0.1 그램의 분말을 칭량하고 이를 측정 실린더로 옮긴다. 체적은 V0은 ml 단위로 판독한다.
100 g 분말이 실린더에 들어가지 않으면, 양을 50 또는 25 그램으로 감소시켜야 한다.
측정 실린더를 Stampf 체적 측정기에 고정하고, 이를 100회 탭으로 탭핑한다. 스파츌라로 표면을 평평하게 하고 체적 V100은 ml 단위로 판독한다.
탭의 수를 625회로 변경한다 (100회 탭 포함). 탭핑 후에, 표면을 평평하게 하고, 체적 V625는 ml 단위로 판독한다.
밀도 계산:
다음 식에 따라 g/ml로 표시된 루즈한 밀도와 벌크 밀도를 계산한다:
벌크 밀도 = M/V
여기서, M은 칭량된 샘플을 그램 단위로 나타내고, V는 625회 탭핑한 후의 체적을 ml 단위로 나타낸다.
실시예 1.18: 분말의 수분 함량의 결정
식품의 수분 함량은 ISO 5537:2004 (분유-수분 함량의 결정 (참조 방법))에 따라 결정된다. NMKL은 "북유럽 식품 방법론 위원회 (Nordisk Metodikkomite for Naeringsmidler)"의 약어이다.
실시예 1.19: 칼슘, 마그네슘, 나트륨, 칼륨, 인의 양 결정 (ICP-MS 방법)
칼슘, 마그네슘, 나트륨, 칼륨, 및 인의 총량은 마이크로파 분해(microwave digestion)를 사용하여 샘플을 먼저 분해하는 절차를 사용하여 결정한 다음, ICP 장치를 사용하여 미네랄(들)의 총량을 결정한다.
장치:
마이크로파는 제조사(Anton Paar)로부터의 것이며 ICP는 제조사(PerkinElmer Inc.)로부터의 Optima 2000DV이다.
재료:
1 M HNO3
2% HNO3 중 이트륨
5% HNO3 중 칼슘, 마그네슘, 나트륨, 칼륨, 및 인에 적합한 표준물
전처리:
일정량의 분말을 칭량하고 그 분말을 마이크로파 분해 튜브로 옮긴다. 5 mL 1 M HNO3을 첨가한다. 마이크로파 지침에 따라 마이크로파에서 샘플을 분해시킨다. 분해된 튜브를 흄 컵보드에 넣고 뚜껑을 제거하고 휘발성 흄이 증발하도록 한다.
측정 절차:
전처리된 샘플을 알려진 양의 Milli-Q 물을 사용하여 DigiTUBE로 옮긴다. 2% HNO3 중 이트륨 용액을 분해 튜브(50 mL 희석된 샘플당 약 0.25 mL)에 첨가하고, Milli-Q 물을 사용하여 알려진 체적으로 희석한다. 제조업체에 의해 설명된 절차를 사용하여 ICP에서 샘플을 분석한다.
블라인드 샘플은 Milli-Q 물을 사용하여 10 mL 1 M HNO3과 2% HNO3 중 0.5 mL 이트륨 용액과의 혼합물을 최종 체적 100 mL로 희석하여 제조한다.
예상되는 샘플 농도를 괄호로 넣은 농도를 갖는 적어도 3개의 표준 샘플을 제조한다.
실시예 1.20: 퓨로신-값의 결정:
퓨로신 값은 문헌 ["Maillard Reaction Evaluation by Furosine Determination During Infant Cereal Processing", Guerra-Hernandez et al, Journal of Cereal Science 29 (1999) 171-176] 기재된 바와 같이 결정되고, 단백질의 총량은 실시예 1.5에 따라 결정된다. 퓨로신 값은 단백질 100 g당 퓨로신 단위 mg으로 보고된다.
실시예 1.21: 액체에서 BLG의 결정화도의 결정
다음 방법은 5 내지 6 범위의 pH를 갖는 액체에서 BLG의 결정화도를 결정하기 위해 사용된다.
a) 해당 액체의 10 mL 샘플을 0.45 미크론 기공 크기 CA 막이 있는 Maxi-Spin 필터로 옮긴다.
b) 즉시 필터를 1500 g에서 5분 동안 회전시킨다. 원심분리기를 2℃로 유지한다.
c) 2 mL 차가운 Milli-Q 물(2℃)을 스핀 필터의 보유물 면(retentate side)에 첨가하고, 즉시, 원심 분리기를 2℃로 냉각시킨 상태를 유지하면서 필터를 1500 g에서 5분 동안 회전시키고, 투과액(투과액 A)을 수집하고, 체적을 측정하고, 실시예 1.31에 요약된 방법을 사용하여 HPLC를 통해 BLG 농도를 결정한다.
d) 4 mL 2 M NaCl을 필터의 보유물 면에 첨가하고, 빠르게 진탕하고, 혼합물을 25℃에서 15분 동안 방치한다.
e) 즉시 필터를 1500 g에서 5분 동안 회전시키고, 투과액(투과액 B)을 수집한다.
f) 실시예 1.31에 요약된 방법을 사용하여 투과액 A 및 투과액 B에서 BLG의 총 중량을 결정하고, 그 결과를 중량 퍼센트 대신 BLG의 총 중량으로 변환시킨다. 투과액 A에서 BLG의 중량은 m투과액 A로 지칭되고, 투과액 B에서 BLG의 중량은 m투과액 B로 지칭된다.
g) BLG에 대해 액체의 결정화도는 다음과 같이 결정된다:
결정화도 = m투과액 B/(m투과액 A+ m투과액 B)*100%
실시예 1.22: 건조 분말에서 BLG의 결정화도의 결정
이 방법은 건조 분말에서 BLG의 결정화도를 결정하기 위해 사용된다.
a) 5.0 그램의 분말 샘플을 20.0 그램의 차가운 Milli-Q 물(2℃)과 혼합하고, 2℃에서 5분 동안 방치한다.
b) 해당 액체의 샘플을 0.45 미크론 CA 막이 있는 Maxi-Spin 필터로 옮긴다.
c) 즉시 필터를 1500 g에서 5분 동안 회전시킨다. 원심분리기를 2℃로 유지한다.
d) 2 mL 차가운 Milli-Q 물(2℃)을 스핀 필터의 보유물 면에 첨가하고, 즉시, 필터를 1500 g에서 5분 동안 회전시키고, 투과액(투과액 A)을 수집하고, 체적을 측정하고, 실시예 1.6에 요약된 방법을 사용하여 HPLC를 통해 BLG 농도를 결정하고, 그 결과를 중량 퍼센트 대신 BLG의 총 중량에 대한 결과로 변환시킨다. 투과액 A에서 BLG의 중량은 m투과액 A로 지칭된다.
f) 이어서, 분말에서 BLG의 결정화도는 다음 식을 사용하여 계산된다:
Figure pct00003
여기서, mBLG 총은 단계 a)의 분말 샘플에서 BLG의 총량이다.
분말 샘플의 BLG의 총량을 알 수 없다면, 이는 20.0 그램의 Milli-Q 물에 또 다른 5 g 분말 샘플(동일한 분말 공급원으로부터)을 현탁시키고, 수성 NaOH를 첨가하여 pH를 7.0으로 조정하고, 혼합물을 교반하에 25℃에서 1시간 동안 방치시키고, 최종적으로 실시예 1.31을 사용하여 분말 샘플의 BLG의 총량을 결정함으로써 결정될 수 있다.
실시예 1.23: UF 투과액 전도도의 결정
15 mL의 샘플을 3 kDa 컷 오프(3000 NMWL)된 Amicon Ultra-15 원심분리 필터 장치로 옮기고, 4000 g에서 20 내지 30분 동안 또는 전도도 측정을 위한 충분한 체적의 UF 투과액이 필터 장치의 바닥 부분에 축적될 때까지 원심분리한다. 전도도는 원심분리 직후 측정된다. 샘플 취급 및 원심분리는 샘플 공급원의 온도에서 수행된다.
실시예 1.24: 분말에서 건조된 BLG 결정의 검출
분말에서 건조된 BLG 결정의 존재는 다음과 같은 방식으로 확인할 수 있다:
분석될 분말의 샘플을 재현탁시키고, 4℃의 온도를 갖는 탈염수에 물 2부 대 분말 1부의 중량 비로 온화하게 혼합하고, 4℃에서 1시간 동안 재수화시켰다.
재수화된 샘플은 결정의 존재를 확인하기 위해 현미경으로 검사되며, 바람직하게는 평면 편광을 사용하여 복굴절을 검출한다.
결정 구조의 존재를 입증하기 위해 결정형 물질을 분리하여 x-선 결정학으로 처리하고, 또한 결정 격자(공간 군 및 단위 셀 치수)가 BLG 결정의 결정 격자와 일치하는지 확인하는 것이 바람직하다.
분리된 결정형 물질의 화학적 조성을 분석하여 이의 고체가 주로 BLG로 이루어지는지를 입증한다.
실시예 1.25: 락토스의 총량의 결정
락토스의 총량은 다음에 따라 결정된다: ISO 5765-2:2002 (IDF 79-2: 2002) "Dried milk, dried ice-mixes and processed cheese - Determination of lactose content - Part 2: Enzymatic method utilizing the galactose moiety of the lactose".
실시예 1.26: 탄수화물의 총량의 결정:
탄수화물의 양은 탄수화물이 가수분해되어 490 nm에서 분광광도계로 모니터링되는 색소원(chromagen)으로 변환되는 푸르푸랄 및 하이드록시푸르푸랄로 변환되는, Sigma Aldrich 총 탄수화물 검정 키트(Cat MAK104-1KT)를 사용하여 결정된다.
실시예 1.27: 지질의 총량의 결정
지질의 양은 ISO 1211:2010 (지방 함량의 결정 - Rose-Gottlieb 중량 방법)에 따라 결정된다.
실시예 1.28: 브릭스의 결정
브릭스 측정은 연마된 물(최대 0.05 mS/cm의 전도도를 얻기 위해 역삼투에 의해 여과된 물)에 대해 보정된 PAL-α 디지털 휴대용 굴절계(Atago)를 사용하여 수행되었다.
대략 500 μl의 샘플을 기기의 프리즘 표면으로 옮기고 측정을 시작하였다. 측정된 값을 판독하고 기록하였다.
유장 단백질 용액의 브릭스는 총 고형분(TS)의 함량에 비례하고, TS (% w/w)는 대략 브릭스 * 0.85이다.
실시예 1.29 락토페린 및 락토퍼옥시다제의 결정
락토페린의 농도는 문헌 [Soyeurt 2012 (Soyeurt et al; Mid-infrared prediction of lactoferrin content in bovine milk: potential indicator of mastitis; Animal (2012), 6:11, pp 1830-1838)]에 의해 요약된 바와 같이 ELISA 면역분석에 의해 결정된다.
락토퍼옥시다제의 농도는 시판되는 소 락토퍼옥시다제 키트를 사용하여 결정된다.
실시예 1.30: 집락-형성 단위의 수 결정
샘플 그램당 집락-형성 단위의 수의 결정은 다음에 따라 수행된다: ISO 4833-1:2013(E): 식품 및 동물 사료의 미생물학 - 미생물 계수를 위한 수평적 방법 - 30℃에서 집락 계수 기술.
실시예 1.31: BLG, ALA, 및 CMP의 총량의 결정
이 절차는 단백질, 예컨대 ALA, BLG 및 CMP 및 임의로 또한 조성물의 기타 단백질 종의 정량 분석을 위한 액체 크로마토그래피(HPLC) 방법이다. 실시예 1.6의 방법과 반대로, 본 방법은 또한 응집되어 존재하는 단백질을 측정하며 따라서 해당 조성물에서 단백질 종의 총량의 측정을 제공한다.
분리 모드는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)이며, 상기 방법은 샘플 용매와 HPLC 이동상 둘 다로 6 M 구아니딘 HCl 완충액을 사용한다. 머캅토에탄올은 환원제로 사용되어 단백질 또는 단백질 응집체에서 이황화물(S-S)을 환원시켜 언폴딩된 단량체 구조를 생성한다.
샘플 제조는 10 mg 단백질 등가물을 이동상에 용해시켜 용이하게 달성된다.
2개의 TSK-GEL G3000SWXL (7.7 mm x 30.0 cm) 컬럼(GPC 컬럼)과 가드 컬럼을 직렬로 배열하여 원료의 주요 단백질의 적절한 분리를 달성한다.
용출된 분석물은 UV 검출(280 nm)에 의해 검출되고 정량화된다.
장비/재료:
1. 수동 씰 세척 기능이 있는 HPLC 펌프 515 (Waters)
2. HPLC 펌프 컨트롤러 모듈 II (Waters)
3. 오토샘플러 717 (Waters)
4. 이중 흡광도 검출기 2487 (Waters)
5. 정량 보고서를 생성할 수 있는 컴퓨터 소프트웨어 (Empower 3, Waters)
6. 분석 컬럼: 2개의 TSK-GEL G3000SWXL (7.8 x 300 mm, P/N: 08541).
가드 컬럼: TSK-가드 컬럼 SWxL (6.0 x 40 mm, P/N: 08543).
7. 초음파 배스 (Branson 5200)
8. 0.2 μm 셀룰로오스 아세테이트 막을 가진 25 mm 주사기 필터 (514-0060, VWR)
절차:
이동상:
A. 스톡 완충 용액.
1. 1000 mL 비이커에 56.6 g의 Na2HPO4, 3.5 g의 NaH2PO4, 및 2.9 g의 EDTA를 칭량한다. 800 mL의 물에 용해시킨다.
2. pH를 측정하고, 필요한 경우, HCl(pH 감소) 또는 NaOH(pH 증가)를 사용하여 7.5 ± 0.1로 조정한다.
3. 1000 mL 체적 플라스크로 옮기고, 물로 체적을 희석한다.
B. 6 M 구아니딘 HCl 이동상.
1. 2000 mL 비이커에 1146 g의 구아니딘 HCl을 칭량하고, 200 mL의 스톡 완충 용액 (A)을 첨가한다.
2. 이 용액을 마그네틱 교반 바(50℃)를 사용하여 혼합하면서 물로 약 1600 mL로 희석한다.
3. NaOH를 사용하여 pH를 7.5 ± 0.1로 조정한다.
4. 2000 mL 체적 플라스크로 옮기고, 물로 체적을 희석한다.
5. 0.22 μm 막 필터를 갖는 용매 여과 장치를 사용하여 여과된다.
보정 표준.
정량화될 각 단백질의 보정 표준은 다음과 같은 방식으로 준비된다:
1. 10 mL 체적 플라스크에 약 25 mg의 단백질 참조 표준물을 정확하게 칭량(0.01 mg까지)하고, 10 mL의 물에 용해시킨다.
이것은 단백질의 단백질 스톡 표준 용액(S1)이다.
2. 200 μl의 S1을 20 mL 체적 플라스크에 피펫팅하고, 이동상으로 체적을 희석한다.
이것은 낮은 작업 표준 용액 WS1이다.
3. 500 μL의 S1을 10 mL 체적 플라스크에 피펫팅하고, 이동상으로 체적을 희석한다.
이것은 표준 용액 WS2이다.
4. 500 μL의 S1을 5 mL 체적 플라스크에 피펫팅하고, 이동상으로 체적을 희석한다.
이것은 표준 용액 WS3이다.
5. 750 μL의 S1을 5 mL 체적 플라스크에 피펫팅하고, 이동상으로 체적을 희석한다.
이것은 표준 용액 WS4이다.
6. 1.0 mL의 S1을 5 mL 체적 플라스크에 피펫팅하고, 이동상으로 체적을 희석한다.
이것은 높은 작업 표준 용액 WS5이다.
7. 눈금이 있는 일회용 피펫을 사용하여 1.5 mL의 WS1 내지 5를 별도의 바이알로 옮긴다.
각 바이알과 캡에 10 μL의 2-머캅토에탄올을 첨가한다. 용액을 10초 동안 볼텍싱시킨다.
표준물을 약 1시간 동안 주변 온도에서 유지한다.
8. 0.22 μm 셀룰로오스 아세테이트 주사기 필터를 사용하여 표준물을 여과한다.
단백질의 순도는 킬달 (N x 6.38) 및 HPLC를 사용하여 표준 용액 WS5의 면적 %를 사용하여 측정된다.
단백질 (mg) = "단백질 표준 중량" (mg) x P1 x P2
P1 = P% (킬달)
P2 = 단백질 면적% (HPLC)
샘플 제조
1. 25 mL 체적 플라스크에 원래 샘플의 25 mg의 단백질 등가물을 칭량한다.
2. 대략 20 mL의 이동상을 첨가하고, 샘플을 약 30분 동안 용해시킨다.
3. 이동상을 체적에 첨가하고, 167 μL의 2-머캅토에탄올을 25 mL 샘플 용액에 첨가한다.
4. 약 30분 동안 초음파 처리한 후 샘플을 주변 온도에서 약 1½시간 동안 유지한다.
5. 용액을 혼합하고, 0.22 μl 셀룰로오스 아세테이트 주사기 필터를 사용하여 여과한다.
HPLC 시스템/컬럼
컬럼 평형화
1. GPC 가드 컬럼과 2개의 GPC 분석 컬럼을 직렬로 연결한다.
새로운 컬럼은 일반적으로 포스페이트-염 완충액으로 배송된다.
2. 새로운 컬럼을 통해 물을 0.1 mL/분으로부터 0.5 mL/분으로 30 내지 60분 내에 점진적으로 흘린다.
약 1시간 동안 계속 플러싱한다.
3. 유량을 0.5 mL/분으로부터 0.1 mL/분으로 점진적으로 감소시키고 저장소에서 이동상으로 대체한다.
4. 압력 충격을 방지하고 0.5 mL/분으로 두기 위해 0.1 mL/분으로부터 0.5 mL/분으로 30 내지 60분 내에 펌프 유량을 점진적으로 증가시킨다.
5. 컬럼이 포화되도록 1O개의 샘플을 주입하고, 피크가 용출될 때까지 기다린다.
이것은 컬럼의 컨디셔닝에 도움이 될 것이다.
이 단계는 다음 주입 전에 각 주입이 완료될 때까지 기다릴 필요 없이 수행된다.
6. 적어도 1시간 동안 이동상과 평형화시킨다.
결과의 계산
정량화될 단백질, 예를 들어, 알파-락트알부민, 베타-락토글로불린, 및 카제이노마크로펩티드의 함량의 정량적 결정은 상응하는 표준 단백질에 대해 얻어진 피크 영역을 샘플의 피크 영역과 비교하여 수행된다. 결과는 원래 샘플 100 g당 특정 단백질의 g, 또는 원래 샘플의 중량에 대한 특정 단백질의 중량 백분율로 보고된다.
실시예 2: 조(crude) 유장 단백질 농축물로부터 베타-락토글로불린의 결정화
프로토콜:
1.2 미크론 필터를 통해 여과된, 표준 치즈 생산 공정으로부터의 스위트 유장으로부터 유래된 락토스 고갈된 UF 보유물은 BLG 결정화 공정을 위한 공급물로서 사용되었다. 스위트 유장 공급물은 21% TS (총 고형분) ± 5의 공급물 농도와 정용여과 매질로서 연마된 물(최대 0.05 mS/cm의 전도도를 얻기 위해 역삼투에 의해 여과된 물)을 사용하여 46 mil 스페이서, 공급 압력 1.5 내지 3.0 bar인 Koch HFK-328 유형 막을 사용하는 한외여과 설정에서 컨디셔닝되었다. 한외여과 동안 공급물과 보유물의 온도는 대략 12℃였다. 이어서, HCl을 첨가하여 pH를 조정하여 대략 5.40의 pH를 얻었다. 20분 기간에 걸쳐 보유물의 전도도 강하가 0.03 mS/cm 미만이 될 때까지 정용여과가 계속되었다. 이어서, 보유물을 대략 30% TS(농축된 보유물의 총 중량에 대해 대략 23.1% 총 단백질)로 농축시켰다. 농축된 보유물의 샘플을 3000 g에서 5분 동안 원심분리하였지만, 눈에 보이는 펠릿은 형성되지 않았다. 상청액을 HPLC 분석하였다. 공급물의 조성물은 표 1에 나타낸다.
농축된 보유물은 (공급물 2와 관련하여 실시예 3에 기재된 바와 같이) 자발적인 BLG 결정화로부터 얻은 0.5 g/L 순수한 BLG 결정 물질로 씨딩하였다. 씨딩 물질은 BLG 결정 슬러리를 milliQ 물에서 5회 세척하고 각 세척 후 BLG 결정을 수집하여 준비하였다. 세척 후, BLG 결정을 동결 건조하고, 막자와 사발을 사용하여 분쇄한 다음, 200 미크론 체에 통과시켰다. 따라서, 결정화 씨드는 입자 크기가 200 미크론 미만이었다.
농축된 보유물을 300 L 결정화 탱크로 옮기고 여기서 약 4℃로 냉각시키고 온화하게 교반하면서 이 온도에서 밤새 유지하였다. 다음날 아침, 냉각된 농축된 보유물의 샘플을 시험 튜브로 옮기고 육안으로 그리고 현미경으로 둘 다 검사하였다. 빠르게 침강하는 결정이 밤새 분명히 형성되었다. 결정과 모액 둘 다를 포함하는 혼합물의 실험실 샘플을 얼음물 배스에서 0℃로 추가 냉각시켰다. 모액과 결정을 3000 g에서 5분 동안 원심분리하여 분리하고, 상청액과 펠릿의 샘플을 HPLC 분석을 위해 취하였다. 결정을 차가운 연마된 물로 1회 세척한 다음, 펠릿을 동결-건조하기 전에 다시 원심분리하였다.
표 1: 95% w/w 총 고형분으로 표준화된 공급물의 선택된 성분의 농도
Figure pct00004
HPLC에 의한 BLG 상대적 수율 정량:
모든 샘플은 연마된 물을 첨가하여 동일한 정도로 희석하였다. 샘플은 0.22 미크론 필터를 통해 여과되었다. 각 샘플에 대해, 동일한 체적을 Phenomenex Jupiter® 5 μm C4 300 Å, LC 컬럼 250 x 4.6 mm (Part Number: 00G-4167-E0)를 갖춘 HPLC 시스템에 로딩하고, 214 nm에서 검출하였다.
샘플은 다음 조건을 사용하여 실행되었다:
완충액 A: MilliQ 물, 0.1% w/w TFA
완충액 B: HPLC 등급 아세토니트릴, 0.085% w/w TFA
유량: 1 ml/분
구배: 0 내지 30분 82 내지 55% A 및 18 내지 45% B; 30 내지 32분 55 내지 10% A 및 45 내지 90% B; 32.5 내지 37.5분 10% A 및 90% B; 38 내지 48분 10 내지 82% A 및 90 내지 18% B.
데이터 처리:
모든 샘플이 동일한 방식으로 처리되었기 때문에, 본 발명자들은 BLG 피크의 면적을 직접 비교하여 상대적 수율을 얻을 수 있다. 결정은 BLG만을 함유하고 샘플은 모두 동일한 방식으로 처리되었으므로, 알파-락트알부민(ALA)의 농도 및 따라서 ALA의 면적은 모든 샘플에서 동일해야 한다. 따라서, 결정화 전후의 ALA의 면적은 상대 수율을 계산할 때 보정 계수(cf)로서 사용된다.
Figure pct00005
상대 수율은 다음 식으로 계산된다:
Figure pct00006
결과:
스위트 유장으로부터의 BLG의 결정화 전후로부터 얻은 크로마토그램으로부터, BLG의 농도가 크게 감소한 것이 명백하며, 이전에 기재된 수율 계산을 사용하여, 제거된 BLG의 수율이 64.5 % w/w로 결정되었다.
결정 슬러리는 현미경으로 조사되었다. 샘플은 육각형 결정을 함유하였는데, 많은 결정들은 200 미크론보다 상당히 큰 크기를 갖는 것으로 이는 관찰된 결정이 씨딩 결정뿐만 아니라는 것을 나타낸다. 결정은 바늘로 눌렀을 때 용이하게 분쇄되었는데, 이로서 이들이 단백질 결정이라는 것이 확인되었다.
세척된 결정 생성물의 크로마토그램은 BLG가 크로마토그램 전체 면적의 98.9%를 차지함을 나타낸다. 추가 세척에 의해 BLG 제품의 순도를 더욱 더 증가시킬 수 있다.
결론:
본 실시예는 놀랍게도 총 단백질에 대해 비-BLG 단백질을 48% 이상 함유하는 조 유장 단백질 농축물에서 BLG를 선택적으로 결정화할 수 있으며, 수득된 BLG 결정 단리물은 순도가 매우 고 순도라는 것을 입증한다. 이러한 발견은 산업용 유단백질 분리를 위한 새로운 접근법을 제시하고, 여기서 BLG는 바람직하게는 고온 및 문제가 되는 화학물질에 장기간 노출되는 것을 피하는 온화한 방식으로 기타 단백질 성분으로부터 분리된다.
실시예 3: 세 가지 유형의 유장 단백질 용액에서 BLG의 결정화
프로토콜:
실시예 2에서와 동일한 실험 및 분석 설정을 사용하여 세 가지 상이한 유형의 유장 단백질-함유 원료를 결정화를 위한 공급물로서 시험하였다. 그러나, 공급물 2로 수행한 시험에서는 씨딩을 사용하지 않았다. 공급물 1 및 2는 스위트 유장을 기반으로 하였고, 실시예 2에 기재된 바와 같이 처리 전에 Synder FR 막을 통해 지방-감소되었다. 공급물 3은 산 유장으로부터 유래되었다.
세 가지 공급물의 조성은 아래 표 2, 표 3 및 표 4에서 볼 수 있다. 공급물 3은 21% TS (공급물의 총 중량에 대해 13.3% w/w의 총 단백질)에서 결정화되었고, 이는 다른 2개 (공급물 1에서 26.3% w/w 및 공급물 2에서 25.0% w/w의 총 단백질)보다 더욱 낮은 농도였다.
결정화된 공급물 1의 슬러리는 0.45 미크론 CA 막이 있는 Maxi-스핀 필터에서 1500 g에서 5분 동안 원심분리하였다. 이어서, 2 체적의 MilliQ 물을 다시 원심분리하기 전에 필터 케이크에 첨가하였다. 생성된 필터 케이크는 HPLC로 분석하였다. 공급물 2로부터의 펠릿은 2 체적의 MilliQ 물로 세척하고, 펠릿을 HPLC로 분석하기 전에 표준 조건하에 다시 원심분리하였다. 공급물 3으로부터의 펠릿을 세척 없이 분석하였다.
공급물 2로부터 만든 결정을 10% TS로 희석하고, 1 M NaOH를 사용하여 pH를 pH 7로 조정하여 결정화를 역전시켰다. NaCl을 공급물 2, 36% TS로부터 결정 슬러리에 첨가하여 결정화를 역전시켰다.
표 2: 공급물 1의 선택된 성분의 농도 (스위트 유장에 기반하는 유장 단백질 농축물). BDL = 습식 샘플에서 검출 한계 미만
Figure pct00007
표 3: 공급물 2의 선택된 성분의 농도 (스위트 유장에 기반하는 ALA-감소된 유장 단백질 농축물). BDL = 습식의 비-표준화된 샘플에서 검출 한계 미만.
Figure pct00008
표 4: 공급물 3의 선택된 성분의 농도 (산 유장에 기반하는 유장 단백질 농축물).
Figure pct00009
결과:
공급물 1:
공급물의 단백질 조성과 모액의 크로마토그램으로부터, BLG의 많은 부분이 공정에 의해 결정으로 회수된 것이 명백하다. 단리된 BLG의 수율(실시예 2에 기재된 바와 같이 계산됨)은 공급물에서 BLG의 총량에 대해 대략 65%이다.
결정화 기간의 초기 단계 동안 촬영한 샘플의 현미경 사진과 결정화가 종료되었을 때 촬영한 샘플의 현미경 사진으로부터, BLG 결정이 상대적으로 깨지기 쉽다는 것이 명백하다. 결정의 일부는 교반 동안 깨지는 것처럼 보이며, 육각형 또는 마름모 형상으로부터 결정 단편으로 변환되어 여전히 매우 조밀하고 잘 정의된 것처럼 보이지만 더 불규칙한 형상을 갖는다.
스핀 필터에서 분리 및 세척된 BLG 결정의 크로마토그램으로부터, 순도가 매우 높고 다른 유장 단백질의 제거가 매우 효율적이라는 것을 알 수 있다.
공급물 2:
공급물 2의 단백질 조성 및 수득된 모액의 크로마토그램으로부터, BLG의 많은 부분이 제거되었으며 계산된 수율은 공급물 2에서 BLG의 총량에 대해 82%였다는 것이 명백하다.
결정화 전후의 공급물 2를 연구함으로써, 결정화 동안 공급물이 투명한 액체(교반 자석이 보였음)로부터 유백색의 불투명한 액체로 변환되는 것을 알 수 있다.
BLG 결정의 현미경 사진은 대부분의 결정이 부서졌지만 육각형 형상을 보여준다.
2 체적의 MilliQ 물로 세척한 후 BLG 결정의 단리된 펠릿의 크로마토그램은 결정이 매우 고 순도로 BLG를 함유하고 있음을 명확하게 보여준다.
(NaCl을 첨가하여) 전도도를 높이거나 (NaOH를 첨가하여 pH를 7로 조정함으로써) pH를 변경하여 환경이 더 이상 결정질 구조를 선호하지 않도록 하면 두 경우 모두 BLG 결정이 용해됨에 따라 유백색의 현탁액이 투명한 액체로 변하는 것을 보여준다.
공급물 2로부터 수득된 결정 제제의 미네랄 조성은 표 5에 제공된다. 본 발명자들은 인 대 단백질 비가 매우 낮아서, 이는 결정 제제가 신장 질환이 있는 환자의 단백질 공급원으로서 적합하다는 것에 주목한다.
표 5: 공급물 2로부터 수득된 결정 제제에서 선택된 성분의 농도
Figure pct00010
공급물 3:
공급물 3의 단백질 조성 및 생성된 모액의 크로마토그램으로터, BLG의 많은 부분이 단리되는 것이 명백하다 (공급물에서 BLG의 총량에 대해 70.3%의 계산된 수율). 결정화 전에 단백질 함량이 더 높았다면, 수득된 수율은 더욱 더 높았을 것이다.
공급물 3(실질적으로 CMP가 없음)으로부터 단리된 BLG 결정의 현미경 사진은 결정이 육각형 형상과 반대로 직사각형 형상을 가졌음을 보여준다. 직사각형 결정은 육각형 결정보다 더 견고해 보였다. 세척하지 않고 단리된 결정 펠릿의 크로마토그램의 경우; 상기 크로마토그램은 육각형 형상이 아닌 직사각형 형상에도 불구하고 결정이 BLG 결정임을 명확하게 보여준다.
표 6: 공급물 3으로부터 수득된 결정 제제의 선택된 성분의 농도
Figure pct00011
공급물 3으로부터 유래된 결정 제제는 단백질 100 g당 45 mg P를 함유하였다. 본 발명자들은 인 대 단백질 비가 매우 낮아서, 이는 결정 제제가 신장 질환이 있는 환자에 대한 단백질 공급원으로서 적합하다는 것에 주목한다.
결론:
세 가지 모든 공급물은 BLG 결정화 공정에 적합하였다. BLG 결정은 염을 첨가하거나 pH 또는 온도를 상승시켜 용이하게 용해되었다. 새로운 방법은 인 함량이 매우 낮은 BLG 제제를 제조할 수 있도록 하여, 이는 제제가 신장 질환이 있는 환자의 단백질 공급원으로서 적합하다.
실시예 4: 분무-건조된 BLG 결정의 제조 및 벌크 밀도의 결정
실시예 3(공급물 2를 사용함)에서 생성된 BLG 결정의 일부를 디캔터 원심분리기에서 1200 g, 5180 RPM, 110 RPM Diff.에서 64 mil 스페이서 (mil은 1/1000 인치를 의미함) 및 25 내지 30 L/h의 유량으로 분리하였다. 이어서, BLG 결정 상을 연마된 물과 1:1 혼합한 다음, 동일한 설정을 사용하여 디캔터 원심분리기에서 다시 분리하였다. 이어서, 대략 25% 건조-물질을 함유하고 BLG의 결정화도가 대략 80인 슬러리를 제조하기 위해 BLG 결정 상을 연마된 물과 혼합하고, 그 후 임의의 예열 없이 입구 온도가 180℃이고 출구 온도가 85℃인 파일럿 플랜트 분무 건조기에서 건조시켰다. 분무-건조될 때까지 액체 스트림의 온도는 10 내지 12℃였다. 출구에서 샘플링된 생성된 분말은 4.37% w/w의 수분 함량을 가졌다.
슬러리에서 BLG의 결정화도는 대략 90%였다.
본 발명자들은 또한 디캔터 원심분리기에서 BLG 결정 및 모액의 슬러리를 350 g, 2750 RPM, 150 RPM Diff.에서 64 mil 스페이서 및 75 L/h의 유량으로 성공적으로 분리하였다. 그 후, BLG 결정 상을 연마된 물과 1:2 혼합하였다. 그 후, 더 얇은 슬러리로 만들기 위해 BLG 결정 상을 연마된 물과 혼합하고, 그 후 상기 기재된 것과 동일한 파라미터를 사용하여 파일럿 플랜트 분무 건조기에서 건조시켰다.
이어서, 분무-건조된 분말의 벌크 밀도를 실시예 1.17에 따라 측정하고, 동일한 장비에서 건조된 표준 WPI의 벌크 밀도와 비교하였다. 표준 WPI는 0.39 g/mL의 벌크 밀도(625 스탬핑을 기반으로)를 갖는 것으로 밝혀졌으며, 이는 WPI 분말에 대한 정상 범위의 상한이다. 그러나, 분무-건조된 BLG 결정 제제는 0.68 g/mL의 벌크 밀도를 가졌으며, 이는 표준 WPI의 벌크 밀도보다 75%보다 더 높았다. 이것은 정말 놀랍고 다수의 물류 및 적용-관련 이점을 제공한다.
표 7: 실시예 7의 분무-건조된 BLG 결정 제제의 선택된 성분의 농도. BDL = 검출 한계 미만
Figure pct00012
그 후, 분무-건조된 BLG 결정 제제의 샘플은 차가운 탈염수에 재현탁시켰고 BLG 결정은 현미경으로 여전히 명확하게 볼 수 있었다. 시트르산 또는 NaCl의 첨가는 BLG 결정을 용해시키고 불투명한 결정 현탁액을 맑은 액체로 변형시켰다.
본 발명자들은 건조 단계 동안 확장된 가열이 결정 형태인 BLG의 양을 감소시킨다는 징후를 보았다. 따라서, BLG 결정 제제의 열 노출은 가능한 한 낮은 것이 바람직하다.
결론:
본 실시예는 BLG 결정을 포함하는 슬러리가 분무-건조될 수 있으며, 건조 단계 동안 가열이 제어되면, BLG 결정이 재현탁된 분무-건조된 분말로 여전히 존재한다는 것을 입증한다.
본 발명자들은 또한 BLG 결정을 함유하는 유장 단백질 분말의 벌크 밀도가 용해된 단백질 스트림의 정상적인 분무-건조에 의해 수득된 것보다 상당히 더 높다는 것을 발견하였다. 고 밀도 분말은 분말 kg당 포장 재료가 더 적게 필요하므로 분말의 더 비용-효율적인 포장 및 물류가 가능하며, 보다 많은 분말(질량)이 주어진 컨테이너 또는 트럭에 의해 운송될 수 있다.
고 밀도 분말은 또한 제조 및 사용 동안 취급하기 쉽고 푹신하고 먼지가 적은 것처럼 보인다.
실시예 5: 저 인 단백질 음료
실시예 3으로부터 정제된 BLG 생성물(공급물 3으로부터 수득된 결정 제제)을 사용하여 6개의 저 인 인스턴트 음료 분말을 제조하였다. 모든 건조 성분을 블렌딩하여 인스턴트 음료 분말을 수득한 다음, 탈염수와 혼합하여 10 kg의 각 샘플을 수득하고, 10℃에서 1시간 동안 수화시켰다.
표 8: 6개의 음료 샘플의 조성.
Figure pct00013
6개 샘플의 하위샘플의 탁도는 Turbiquant® 3000 IR 탁도계에서 측정되고 점도는 vicoman(제조사: Gilson)에서 측정되었다. 결과는 아래 표에 나타낸다.
표 9: 6개 음료 샘플의 측정된 점도 및 탁도.
Figure pct00014
6개의 저 인 음료 샘플의 하위 샘플을 함유하는 시험 튜브의 사진을 도 3에 나타낸다. 왼쪽으로부터 오른쪽으로, 하위 샘플은 샘플 A, B, C, D, E, 및 F였다. 시험 튜브의 육안 검사는 탁도 측정을 확인하고, 모든 음료 샘플이 투명하고 특히 샘플 C 및 D(pH 3.0)가 매우 투명하다는 것을 문서화하였다. 낮은 점도는 음료 샘플을 용이하게 마실 수 있었다는 것을 입증한다.
음료를 제조하는 데 사용된 모든 성분은 인이 적었고 불필요한 미네랄을 함유하지 않았다. 따라서, 수득된 음료는 단백질 100 g당 인 함량이 대략 45 mg P였고, 일반적으로 미네랄 함량이 매우 낮았다. 따라서, 인스턴트 음료 분말로부터 제조된 6개의 액체 식품은 신장 질환 환자를 위한 인스턴트 단백질 음료로서 사용하기에 적합하였다.
실시예 6: 동적 교차-유동 여과에 의한 결정 분리
1.2 미크론 필터를 통해 여과된, 표준 치즈 생산 공정으로부터의 스위트 유장으로부터 유래된 락토스-고갈된 UF 보유물은 결정화 공정을 위한 공급물로서 사용되었다. 스위트 유장 공급물은 10% TS (총 고형분) ± 5의 공급물 농도와 정용여과 매질로서 연마된 물(최대 0.05 mS/cm의 전도도를 얻기 위해 역삼투에 의해 여과된 물)을 사용하여 46 mil 스페이서, 공급 압력 1.5 내지 3.0 bar인 Koch HFK-328 유형 막을 사용하는 한외여과 설정에서 컨디셔닝되었다. 한외여과 동안 공급물과 보유물의 온도는 대략 12℃였다. 이어서, HCl을 첨가하여 pH를 조정하여 대략 5.60의 pH를 얻었다. 보유물의 전도도가 1.30 mS/cm 미만이 될 때까지 정용여과를 계속하였다. 이어서, 보유물이 대략 27% TS (농축된 보유물의 총 중량에 대해 대략 21% 총 단백질)로 농축되기 전에 공급물을 25℃로 가열하였다. 투과액 전도도는 농도 말미에 0.33 mS/cm였다. 농축된 보유물의 샘플을 3000 g에서 5분 동안 원심분리하였지만, 눈에 보이는 펠릿은 형성되지 않았다.
농축된 보유물을 300 L 결정화 탱크로 옮기고 여기서 약 6℃로 냉각시키고 온화하게 교반하면서 이 온도에서 밤새 유지하였다. 다음날 아침, 보유물이 결정화되었다. 모액과 결정을 3000 g에서 5분 동안 원심분리하여 분리하고, 상청액과 펠릿의 샘플을 HPLC 분석을 위해 취하였다. 이 공정으로부터 BLG의 수율은 67%로 계산되었다.
300 L 탱크로부터의 결정 슬러리는 500 nm의 기공 크기를 갖는 하나의 디스크 막을 사용하는 Andritz DCF 152S 시스템의 공급물에 사용되었다. 여과는 8℃에서 실행되었고, 회전 속도는 32 Hz였고, 막관통 압력은 0.4 bar였다. 시스템은, 보유물이 계속적으로 제거되는 더 큰 장치와 달리 보유물이 여과 챔버에 축적되는 전량 여과(dead end filtration)로서 작동한다. 여과는 40분 이상 안정한 방식으로 실행되었고, 이때 여과 챔버에 축적된 고형물이 여과에 영향을 미치기 시작하였다.
결정 질량의 양은 DFC 작동 동안 상당히 증가하였다.
결론: DCF는 ML로부터 결정을 분리하는 안정적이고 효율적인 수단을 제공한다. 필요한 경우, 세척액이 DCF에 첨가될 수 있다.
실시예 7: 상이한 유장 단백질 제품의 단백질 변성도
상용 제품과 4개의 BLG 단리물의 단백질 변성도를 비교하였다. BLG 단리물은 본 발명의 인스턴트 음료 분말을 제조하는데 적합하다. 샘플은 아래에 기재되어 있다.
Figure pct00015
샘플 B 내지 E는 다음과 같은 방식으로 제조되었다:
실시예 6에 기재된 바와 같이 결정 슬러리를 제조하고 실시예 4에 기재된 바와 같이 분리하였다. 분리된 BLG 슬러리의 일부를 꺼내어 4개 부분으로 나누었다.
샘플 B: 분리된 BLG 결정 슬러리의 첫 번째 부분은 3% NaOH를 사용하여 BLG 결정 슬러리의 pH를 7.01로 조정함으로써 어떠한 건조도 없이 재용해되었고, 이어서, 대략 5% 단백질 용액을 만들기 위해 샘플을 브릭스 6으로 희석하였다.
샘플 C: 분리된 BLG 결정 슬러리의 두 번째 부분을 동결-건조시켰다. 이어서, 분말을 연마된 물에 재현탁시키고, 3% NaOH를 사용하여 pH를 7.09로 조정한 다음, 대략 5% 단백질 용액을 만들기 위해 샘플을 브릭스 6으로 희석하였다.
샘플 D: 분리된 BLG 결정 슬러리의 세 번째 부분을 3% NaOH를 사용하여 pH를 7.0으로 조정하여 재용해한 다음, 동결-건조시켰다. 이어서, 동결-건조된 분말을 연마된 물에 재현탁시키고, pH는 7.07로 측정되었다. 이어서, 대략 5% 단백질 용액을 만들기 위해 샘플을 브릭스 6으로 희석하였다.
샘플 E: 분리된 BLG 결정 슬러리의 네 번째 부분을 실시예 4에 기재된 바와 같이 처리하고 분무 건조시켰다. 이어서, 분말을 연마된 물에 재현탁시키고, 3% NaOH를 사용하여 pH를 7.04로 조정하였다. 이어서, 대략 5% 단백질 용액을 만들기 위해 샘플을 브릭스 6으로 희석하였다.
각 샘플의 단백질 변성도는 실시예 1.3에 따라 결정되었으며, 그 결과는 아래 표에 제시되어 있다.
표: 시판되는 WPI 제품(Bipro)과 본 발명의 인스턴트 음료 분말에 사용될 수 있는 4개의 BLG 제품의 단백질 변성도의 비교.
Figure pct00016
결론:
건조 방법에 관계없이, BLG 단리물은 놀랍도록 낮은 정도의 변성 단백질을 갖는다; 비교를 위해 사용되는 시판되는 WPI에서 찾을 수 있는 것의 단지 1/10이다. 분무-건조된 BLG 결정 슬러리 제품이 여전히 모든 제품 중에서 가장 낮은 변성도를 갖는다는 것이 특히 놀랍다.
실시예 8: 분무-건조된, 산성 BLG 단리물 분말의 생산
유장 단백질 공급물
표준 치즈 생산 공정으로부터의 스위트 유장으로부터 유래된 락토스-고갈된 UF 보유물은 1.2 미크론 필터를 통해 여과되었고, BLG 결정화 공정을 위한 공급물로서 사용되기 전에 Synder FR 막을 통해 지방-감소되었다. 공급물의 화학적 조성물은 표 10에서 볼 수 있다. 본 발명자들은 본 실시예에서 언급된 BLG, ALA와 같은 특정 단백질의 모든 중량 백분율이 총 단백질에 대해 비-응집된 단백질의 중량 백분율에 관련된다는 것에 주목한다.
컨디셔닝
스위트 유장 공급물은 21% 총 고형분 (TS) ± 5의 공급물 농도로 정용여과 매질로서 연마된 물(최대 0.05 mS/cm의 전도도를 얻기 위해 역삼투에 의해 여과된 물)을 사용하여 46 mil 스페이서 공급 압력 1.5 내지 3.0 bar로 Koch HFK-328 유형 막(70 m2 막)을 사용하는 20℃에서의 한외여과 설정에서 컨디셔닝되었다. 이어서, HCl을 첨가하여 pH를 조정하여 pH는 대략 5.5였다. 20분 기간에 걸쳐 보유물의 전도도 강하가 0.1 mS/cm 미만이 될 때까지 정용여과를 계속하였다. 이어서, 투과액 유동이 1.43 L/h/m2 미만이 될 때까지 보유물을 농축시켰다. 농축된 보유물의 첫 번째 샘플을 취하여 3000 g에서 5분 동안 원심분리하였다. 첫 번째 샘플의 상청액을 BLG 수율 결정을 위해 사용되었다.
결정화
농축된 보유물을 300 L 결정화 탱크로 옮기고 여기서 재수화되고 분무-건조된 BLG 결정으로 만들어진 순수한 BLG 결정 물질로 씨딩되었다. 그 후, 씨딩된 유장 단백질 용액을 대략 10시간에 걸쳐 20℃로부터 대략 6℃로 냉각시켜 BLG 결정이 형성되고 성장되도록 하였다.
냉각 후, 결정-함유 유장 단백질 용액의 샘플(두 번째 샘플)을 취하고, BLG 결정을 3000 g에서 5분 동안 원심분리하여 분리하였다. 두 번째 샘플로부터의 상청액 및 결정 펠릿을 아래에 기재된 바와 같이 HPLC 분석하였다. 결정화의 수율은 아래 요약된 바와 같이 계산되었고, 57%로 결정되었다.
표 10: 공급물의 화학적 조성
Figure pct00017
HPLC를 사용한 BLG 수율 결정:
첫 번째 샘플과 두 번째 샘플의 상청액은 연마된 물을 첨가하여 동일한 정도로 희석하였고 희석된 상청액은 0.22 μm 필터를 통해 여과하였다. 여과되고 희석된 각 상청액에 대해, 동일한 체적을 Phenomenex Jupiter® 5 μm C4 300 Å, LC 컬럼 250 x 4.6 mm, Ea.를 갖춘 HPLC 시스템에 로딩하고, 214 nm에서 검출하였다.
샘플은 다음 조건을 사용하여 실행되었다:
완충액 A: MilliQ 물, 0.1% w/w TFA
완충액 B: HPLC 등급 아세토니트릴, 0.085% w/w TFA
유동: 1 mL/분
컬럼 온도: 40℃
구배: 0 내지 30분 82 내지 55% A 및 18 내지 45% B; 30 내지 32분 55 내지 10% A 및 45 내지 90% B; 32.5 내지 37.5분 10% A 및 90% B; 38 내지 48분 10 내지 82% A 및 90 내지 18% B.
데이터 처리:
두 상청액이 모두 동일한 방식으로 처리되었으므로 BLG 피크의 면적을 직접 비교하여 상대 수율을 계산할 수 있다. 결정은 BLG만을 함유하고 샘플은 모두 동일한 방식으로 처리되었으므로 알파-락트알부민(ALA)의 농도 및 따라서 ALA의 면적은 모든 샘플에서 동일해야 한다. 따라서, 결정화 전후의 ALA의 면적은 상대 수율을 계산할 경우 보정 계수(cf)로서 사용된다.
Figure pct00018
상대 수율은 다음 식에 의해 계산된다:
Figure pct00019
BLC 결정의 산 용해
결정화 탱크로부터의 나머지 물질은, 연마된 물과 1:2로 혼합된 공급물을 분리하기 전에, 디캔터를 사용하여 350 g, 2750 RPM, 150 RPM Diff.에서 64 스페이서 및 75 L/h의 공급 유량으로 분리하였다. 이어서, 디캔터로부터의 BLG 결정/고체 상은, 결정을 빠르게 용해시키기 위해 인산을 첨가하여 pH를 대략 3.0으로 낮추기 전에 더 얇은 슬러리로 만들기 위해, 연마된 물과 혼합하였다.
BLG 결정을 용해시킨 후, 순수한 BLG 단백질 액체를 결정화를 위한 공급물을 제조하는 데 사용된 것과 동일한 UF 설정에서 15 브릭스로 농축시키고 대략 3.8의 최종 pH로 pH를 조정하였다. 이어서, 액체 BLG 단리물을 5분 동안 75℃까지 가열하고 그 후 10℃까지 냉각시켰다. 열-처리는 열-처리 전 137.000 CFU/g로부터 열-처리 후 <1000 CFU/g로 미생물 부하량을 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 열-처리는 어떠한 단백질 변성도 야기하지 않았으며 고유한 트립토판 형광 비(330 nm/350 nm)는 1.20으로 결정되었으며, 이는 BLG 분자의 천연 형태를 나타내었다.
BLG를 입구 온도가 180℃이고 출구 온도가 75℃인 파일럿 플랜트 분무 건조기에서 건조시켰다. 출구에서 샘플링된 생성된 분말은 대략 4 % w/w의 수분 함량을 가졌고 분말의 화학적 조성은 표 11에 나타낸다. 건조된 분말의 샘플을 용해시키고, 단백질 변성도를 1.5%로 결정하고, 고유한 트립토판 형광 발광 비(I330/I350)를 1.20으로 측정하였다.
표 11: BLG 단리물 분말의 조성 (BDL = 검출 한계 미만)
Figure pct00020
분무-건조된 분말의 벌크 밀도(625 탭)는 0.2 내지 0.3 g/cm3로 추정되었다.
결론: 상기 기재된 공정을 사용함으로써, 본 발명자들은 처리 동안 실질적으로 단백질 변성 또는 단백질 언폴딩이 없이 열-처리될 수 있는 고 순도 BLG 제품을 생산할 수 있었다. 열-처리는 단백질 제품을 손상시키지 않고 박테리아 수준을 크게 낮추었다.
본 발명자들은 분무-건조 전에 단백질 함량을 증가시킴으로써 더욱 더 높은 벌크 밀도를 얻을 수 있다는 징후를 보았다. 또한, 본 발명자들은 분무-건조에 사용되는 입구 및/또는 출구 온도가 감소되면, 더욱 더 낮은 변성도가 얻어진다는 것을 관찰하였다.
실시예 9: 분무-건조된 pH-중성 BLG 단리물 분말의 생산
실시예 2에서와 동일한 프로토콜 및 실험 설정을 사용하는 경우, 표 12에 나타낸 락토스-감소된 유장 단백질 단리물을 컨디셔닝하고 결정화를 위한 공급물로서 사용하였다. 결정화의 수율은 68%로 계산되었다.
본 발명자들은 본 실시예에서 언급된 BLG 및 ALA와 같은 특정 단백질의 모든 중량 백분율은 총 단백질에 대해 비-응집된 단백질의 중량 백분율에 관련된다는 것에 주목한다.
표 12: 공급물의 조성
Figure pct00021
결정화 탱크로부터의 나머지 물질은, 연마된 물과 1:2로 혼합된 공급물을 분리하기 전에, 디캔터에서 350 g, 2750 RPM, 150 RPM Diff.에서 64 스페이서 및 75 L/h의 공급 유량으로 분리하였다. 이어서, 디캔터로부터의 BLG 결정/고체 상은, 결정을 빠르게 용해시키기 위해 0.1 M 수산화칼륨을 첨가하여 pH를 대략 7로 조정하기 전에 더 얇은 슬러리로 만들기 위해, 연마된 물과 혼합하였다.
결정을 용해시킨 후, 순수한 BLG 단백질 액체를 결정화를 위한 유장 단백질 용액을 제조하는 데 사용된 것과 동일한 UF 설정에서 15 브릭스로 농축시키고 7.0의 최종 pH로 pH를 조정하였다. BLG를 입구 온도가 180℃이고 출구 온도가 75℃인 파일럿 플랜트 분무 건조기에서 건조시켰다. 출구에서 샘플링된 생성된 분말은 대략 4% w/w의 수분 함량을 가졌다. 분말의 조성은 표 13에 나타낸다. 건조 후, 분말의 일부를 탈염수에 용해시키고, 단백질 변성도를 9.0%로 결정하였고, 고유한 트립토판 형광 비(330 nm/350 nm)는 1.16이었다.
표 13: BLG 단리물 분말의 화학적 조성
Figure pct00022
분무-건조된 분말의 벌크 밀도(625 탭)는 0.2 내지 0.3 g/cm3로 추정되었다.
결론: 상기 기재된 공정을 사용함으로써, 본 발명자들은 처리 동안 단백질 변성이 최소화되거나 전혀 없는 pH-중성, 고-순도 BLG 제품을 생산할 수 있다. 본 발명자들은 분무-건조 전에 단백질 함량을 증가시킴으로써 더욱 더 높은 벌크 밀도를 얻을 수 있다는 징후를 보았다. 또한, 본 발명자들은 분무-건조에 사용되는 입구 및/또는 출구 온도가 감소되면, 더욱 더 낮은 변성도가 얻어진다는 것을 관찰하였다. 변성 수준은 또한 분무-건조 전에 미네랄 함량을 감소시킴으로써 감소될 수 있다.
실시예 10: 코팅된 BLG 단리물 분말의 제조
실시예 4 또는 실시예 9에 기재된 바와 같이 생성된 분무-건조된 BLG 단리 물을 사용하여 코팅된 BLG 단리물을 유동층(DIOSNA, MINILAB XP 번호 365-146l)에서 생성하였다. 입구 온도는 60℃였다. 분말 온도는 공정 기간 동안 40℃와 50℃ 사이였고, 기류는 시간당 25 내지 35 m3였다. 코팅 재료를 50 g의 탈염수에 용해시키고, 유동층에 서서히 주입하여 여기에서 분무되었다. 각 배치에 대해, 500 g의 분무 건조된 BLG 단리물이 사용되었다. 코팅 재료가 첨가된 후, 코팅된 BLG 단리물이 4 내지 5%의 수분 함량을 가질 때까지 건조를 계속하였다. 이 설정을 사용하여 25 g의 시트르산으로 코팅된 BLG 단리물과 30 g의 시트르산 삼나트륨으로 코팅된 BLG 단리물이 생성되었다.
시험 샘플은 표에 나타낸 바와 같이 제조되고 아래 기재된 바와 같이 용해도에 대해 분석되었다. 기재된 10% w/w 용액에 추가하여, BLG 단리물 분말의 30% w/w 용액을 제조하고 시험하였다. 시험 샘플은 아래 기재된 바와 같이 젖음성과 관련하여 추가로 분석되었다. 또한, 시험 샘플은 실시예 1.11에 설정된 파라미터에 따라 2명의 훈련된 시험 담당자에 의해 감각적으로 평가되었다.
실시예 8로부터의 BLG 단리물 분말을 사용하여, 레시틴으로 코팅된 분말은 상기와 동일한 유동층에서 생성되었다. 500 g의 분말을 유동층에 첨가한 입구 온도는 75℃였고 기류는 25 m3/h였다. 분말 온도가 38℃에 도달하는 경우, 50 mL의 물을 분무기를 통해 서서히 첨가하였다. 분말 온도를 최대 45℃까지 상승시키고, 5 ml 레시틴을 분무기를 통해 주입하였다. 분말을 65℃로 가열하고, 5% 미만의 수분을 함유할 때까지 건조시켰다.
용해도 시험: 용해할 인스턴트 분말의 용해도 및 준비도는 본 시험에 의해 측정될 수 있다. 10 그램의 분말을 밀봉 가능한 투명한 시험 튜브에서 90 그램의 탈염수(8℃)에 첨가한다. 혼합물을 30초 동안 손으로 격렬하게 진탕시킨다. 혼합물을 즉시 평가하고, 1분 동안 방치한 후, 혼합물을 다시 평가한다. 평가는 아래 파라미터를 육안 검사로 수행된다: 액체 상의 투명도, 거품 형성, 색상 및 분말이 용해된 정도.
결과
Figure pct00023
Figure pct00024
결론: 입수된 BLG 단리물 분말은 우수한 응집 구조를 가졌고 물에 용이하게 용해되었다. 모든 코팅된 BLG 단리물 분말(샘플 1, 3-5 및 7-8)은 이 시험에서 일반적으로 코팅된 WPI(시험 샘플 2)와 동일하거나 그 보다 더 나은 성능을 발휘하였다. 놀랍게도, 30% 버전을 시험할 경우, 코팅 및 비코팅된 BLG 단리물(시험 샘플 1, 3-5 및 7-8)을 용해하는 것이 용이했으므로, 단백질 농도가 30% 이상으로 올라갈 가능성이 있다고 여겨진다. 30% 용액(샘플 7-8)에서 코팅된 BLG 단리물과 비코팅된 BLG 단리물 둘 다는 거품에 가시적인 입자가 있는 표준 WPI(샘플 9)에 비해 용이하게 용해되었다.
젖음성: 이 방법은 분말의 젖음성을 설명하기 위해 사용된다. 젖음성은 전체 샘플이 젖기 전에 걸리는 시간으로 정의된다. 0.5 그램의 분말을 측정하여 직경 5 cm의 원통형 용기 내 100 g의 탈염수(5℃)의 표면에 놓는다. 분말을 물의 표면에 놓은 후 분말이 용해되거나 수면을 통과한 시간까지를 측정한다.
결과
Figure pct00025
결론: 코팅된 BLG 단리물 분말(샘플 10, 12, 14)은, 시트르산으로 코팅된 BLG 단리물 분말(샘플 13)을 제외하고는 일반 인스턴트화된 WPI(샘플 11, 15)에서와 유사한 방식으로 젖었다. 비코팅된 BLG 단리물 분말이 표준 WPI(샘플 6)보다 더욱 더 우수하게 젖었다는 것은 놀라운 것이었다.
실시예 11: 비코팅된 BLG 단리물의 젖음성
본 실시예에서, 비코팅된 산성 BLG 단리물 및 비코팅된 중성 BLG 단리물의 젖음성은 비코팅된 유장 단백질 단리물(WPI)의 젖음성과 비교한다. 젖음성은 전체 샘플이 젖기 전에 걸리는 시간으로 정의된다. 0.5 그램의 분말을 측정하여 직경 5 cm의 원통형 용기 내 100 g의 탈염수(10℃)의 표면에 놓는다. 분말을 물의 표면에 놓은 후 분말이 용해되거나 수면을 통과한 시간까지를 측정한다.
결과
Figure pct00026
결론: 비코팅된 BLG 단리물 분말(샘플 2, 3)이 표준 WPI(샘플 1)보다 더욱 더 잘 젖는다는 것은 놀라웠다.
실시예 12: 인스턴트 음료 분말의 제조
영양 보충제로서 사용된 인스턴트 분말의 제조.
100 g의 인스턴트 분말은 다음 성분을 블렌딩하여 제조된다: 실시예 4에서 제조된 적어도 85% w/w의 BLG를 포함하는 91 그램의 유장 단백질 농축물 및 4 그램의 소야 레시틴.
100 그램의 인스턴트 분말은 다음과 같은 에너지 분포로 360 Kcal을 포함한다: 지질로부터 2 E%, 탄수화물로부터 1 E% 및 단백질로부터 97 E%. 인스턴트 분말로부터 제조된 식품은, 예를 들어, 인스턴트 분말을 물과 혼합하여 음료를 얻거나 일반 식사에 분말을 첨가함으로써, 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자의 치료를 위한 단백질 보충제로서 사용될 수 있다. 10 내지 15 그램의 인스턴트 분말을 온도가 15 내지 25℃인 물로 교반한다. 제조된 인스턴트 분말 음료는 좋은 맛, 색상 및 점도를 갖는다.
실시예 13: 인스턴트 음료 분말의 제조
BLG를 포함하는 영양적으로 완전한 인스턴트 분말의 제조.
100 g의 인스턴트 분말은 18.2 그램의 식물성유 (팜핵 오일, 코코넛 오일, 평지씨 오일 및 해바라기 오일로 이루어진 혼합물), 56.4 그램의 글루코스 시럽, 및 실시예 4에 제조된 바와 같은 적어도 90% w/w의 BLG를 포함하는 20 그램의 유장 단백질 농축물 및 약 3 그램의 소야 레시틴을 블렌딩하여 제조된다.
시트르산칼륨, 시트르산나트륨, 염화나트륨, 인산수소마그네슘, 인산수소칼륨, 염화마그네슘, 염화콜린, 탄산칼슘, 인산칼슘, 나트륨 L-아스코르베이트, 아로마, 황산철, l-아스코르빈산, 황산아연, 시트르산마그네슘, DL-알파-토코페릴 아세테이트, 황산망간, 니코틴 아미드, D-비오틴, 황산구리, 칼슘-D-판토테네이트, 프테로일 모노글루타민산, 불화나트륨, DL-알파-토코페롤, 티아민 염산염, 피리독신 염산염, 카로테노이드, 레티닐 팔미테이트 리보플라빈, 시아노코발라민, 콜레칼시페롤, 염화크롬, 나트륨 몰리브덴, 요오드화칼륨, 아셀렌산나트륨 및 피토메타디온이 추가로 첨가되어 다음과 같은 영양 프로파일을 갖는 인스턴트 분말을 수득한다: 381 μg RE 비타민 A, 0.91 mg 카로테노이드, 3.3 μg 비타민 D, 5.9 mg α-TE 비타민 E, 24 μg 비타민 K, 0.69 mg 비타민 B1, 0.74 mg 비타민 B2, 8.3 mg-NE 니아신, 2.5 mg 판토텐산, 0.79 μg 비타민 B6, 123 μg 엽산, 0.98 μg 비타민 B12, 24 μg 비오틴, 60 mg 비타민 C, 156 mg 콜린, 1.17 그램 염, 469 mg 나트륨, 705 mg 칼륨, 578 mg 염화물, 371 mg 칼슘, 337 mg 인, 107 mg 마그네슘, 7.4 mg 철, 5.6 mg 아연, 0.83 mg 구리, 1.5 mg 망간, 0.5 g 불소, 48 μg 몰리브덴, 26 μg 셀레늄, 25 μg 크롬, 61 μg 요오드화물.
인스턴트 분말은 다음과 같은 에너지 분포로 462 Kcal/100 그램을 포함한다: 지질로부터 35.6 E%, 탄수화물로부터 48.7 E% 및 단백질로부터 15.7 E%. 인스턴트 분말로부터 제조된 식품은, 예를 들어, 인스턴트 분말을 물과 혼합하여 음료를 얻거나 튜브 공급에 사용하는 것과 같이 영양실조가 있거나 이의 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 영양적으로 완전한 식품으로서 사용될 수 있다. 22 그램의 인스턴트 분말을 85 ml 냉수에 교반하여 (비등시킴) 100 kcal를 포함하는 음료를 얻는다. 33 그램의 인스턴트 분말을 78 ml 냉수 (비등시킴)에 교반하여 150 kcal를 포함하는 음료를 얻는다. 제조된 인스턴트 분말 음료는 좋은 맛, 색상 및 점도를 갖는다.

Claims (38)

  1. 적어도 1% w/w, 바람직하게는 적어도 5% w/w 베타-락토글로불린(BLG)을 포함하는 인스턴트 음료 분말로서,
    i. BLG의 결정화도는 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%이고/이거나,
    ii. 단백질의 총량의 적어도 85% w/w가 BLG로 구성되고,
    비타민, 향미제, 착색제, 미네랄, 감미료, 산화방지제, 식용 산, 지질, 탄수화물, 프리바이오틱스, 프로바이오틱스, 소포제 및 비-유장 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 성분을 추가로 포함하는 인스턴트 음료 분말.
  2. 제1항에 있어서, 상기 인스턴트 음료 분말은 1 내지 90% w/w BLG 범위의 BLG를 포함하는 것인 분말.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 분말은 하기 중 하나 이상을 추가로 포함하고:
    i. 감미료, 예를 들어, 설탕 감미료 및/또는 무설탕 감미료,
    ii. 향미제,
    iii. 적어도 하나의 식용 산, 예를 들어, 시트르산 또는 기타 적합한 식용 산,
    iv. 상기 인스턴트 음료 중 Na, K, Mg, 및 Ca 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질이고,
    탈염수 중 상기 분말의 10% w/w 용액은 2 내지 8 범위의 pH를 갖는 것인 분말.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분말은 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG, 예컨대 총 단백질에 대해 적어도 86% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 87% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 88% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 89% w/w BLG를 포함하는 것인 분말.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분말은 총 단백질에 대해 적어도 91% w/w BLG, 예컨대 총 단백질에 대해 적어도 92% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 93% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 94% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 95% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 96% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 97% w/w BLG, 총 단백질에 대해 적어도 98% w/w BLG 또는 총 단백질에 대해 적어도 99% w/w BLG를 포함하는 것인 분말.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분말은 최대 6% w/w, 예컨대 최대 5% w/w, 바람직하게는 최대 4% w/w, 더 바람직하게는 최대 3% w/w, 더욱 더 바람직하게는 최대 2% w/w의 양의 수분 함량을 포함하는 것인 분말.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분말은
    i. 최대 6% w/w 물,
    ii. 총 고형분에 대해 적어도 15% w/w 총 단백질,
    iii. 총 단백질에 대해 적어도 85% w/w BLG
    를 포함하고, 상기 분말은 건조 분말인 분말.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분말은 적어도 0.30 g/mL, 바람직하게는 적어도 0.4 g/mL, 더 바람직하게는 0.5 g/mL 또는 더욱 더 바람직하게는 0.5 g/mL의 벌크 밀도를 갖는 것인 분말.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, ALA와 카제이노마크로펩티드(CMP)의 합이 상기 분말 중 비-BLG 단백질의 적어도 40% w/w, 바람직하게는 상기 분말 중 비-BLG 단백질의 적어도 60% w/w, 더욱 더 바람직하게는 적어도 70% w/w, 가장 바람직하게는 적어도 85% w/w를 포함하는 것인 분말.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Na, K, Mg, 및 Ca의 양의 합은 최대 10 mmol/g 단백질인 분말.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분말은 100 그램의 분말당 약 200 내지 500 kcal 범위의 에너지 함량을 갖는 것인 분말.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질의 에너지 양이 적어도 7 E%, 바람직하게는 적어도 25 E%, 더 바람직하게는 적어도 30 E%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 40 E%인 분말.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 지질로부터의 에너지의 기여는 0 내지 60 E%의 범위인 분말.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 탄수화물로부터의 에너지의 기여는 0 내지 90 E%의 범위인 분말.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 탈염수 중 10% w/w 용액 중의 상기 분말은 실온에서 2 내지 8 범위의 pH를 갖는 것인 분말.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 식품 성분으로서 사용하기 위한 분말.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 영양실조가 있거나 영양실조의 위험이 있는 환자의 치료 방법에 사용하기 위한 분말.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 신장 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 분말.
  19. 액체 및 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 인스턴트 음료 분말을 포함하는 액체 식품.
  20. 제19항에 있어서, 상기 식품은 100 그램의 상기 액체당 최대 40 그램의 상기 분말, 바람직하게는 100 그램의 상기 액체당 최대 30 그램의 상기 분말을 포함하는 것인 식품.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 최대 200 NTU의 탁도를 갖는 식품.
  22. 제19항 또는 제20항에 있어서, 200 NTU를 초과하는 탁도를 갖는 식품.
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 액체는 물, 유제품, 과일 주스, 야채 주스, 음료 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 식품.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품은 물 및 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 인스턴트 음료 분말을 포함하고, 상기 식품은 100 그램의 식품당 30 내지 300 kcal 범위의 에너지 함량을 갖는 것인 식품.
  25. 제24항에 있어서, 상기 식품은 100 그램의 식품당 30 내지 100 kcal 범위, 바람직하게는 100 그램의 식품당 30 내지 100 kcal 범위, 더 바람직하게는 100 그램의 식품당 40 내지 90 kcal 범위, 또는 더욱 더 바람직하게는 100 그램의 식품당 40 내지 70 kcal 범위의 에너지 함량을 갖는 것인 식품.
  26. 제24항에 있어서, 상기 식품은 100 그램의 식품당 100 내지 300 kcal 범위, 바람직하게는 100 그램의 식품당 100 내지 250 kcal 범위, 또는 100 그램의 식품당 125 내지 225 kcal 범위의 에너지 함량을 갖는 것인 식품.
  27. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 액체 식품의 단백질 분획은 CIELAB 색상 스케일에서 -0.10 내지 +0.51 범위의 색상 값 델타 b*를 가지고, 여기서, 델타 b* = b6.0 w/w% 단백질로 표준화된 샘플* - b탈염수*이고, 실온에서 측정되는 것인 식품.
  28. 제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품은 야채 및/또는 과일을 추가로 포함하는 것인 식품.
  29. 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 영양 보충제로서 사용하기 위한 식품.
  30. 제19항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품은 운동 전, 동안 또는 후에 섭취되는 것인 식품.
  31. 제19항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 영양실조가 있거나 영양실조의 위험이 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 식품.
  32. 제19항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 신장 질환의 치료에 사용하기 위한 식품.
  33. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 분말을 포함하는 키트로서, 상기 키트는
    i. 상기 분말을 측정하기 위한 도구, 및
    ii. 용기를 열고 닫기 위한 뚜껑을 갖는 용기
    를 포함하고, 상기 용기는 상기 분말을 액체와 혼합하여 식품을 형성하기 위한 것이고, 상기 용기는 용기로부터 직접 식품을 마시기에 적합한 것인 키트.
  34. i. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 분말을 액체에 첨가하는 단계,
    ii. 임의로 적어도 하나의 추가 성분을 첨가하는 단계, 및
    iii. 수득된 분말과 액체를 혼합하여 균일한 혼합물을 형성하는 단계
    를 포함하는, 제19항 내지 제32항 중 어느 한 항에 따른 액체 식품을 제조하는 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 추가 성분은 과일 또는 야채로부터 선택되는 것인 방법.
  36. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 혼합은 진탕에 의해 수행되는 것인 방법.
  37. 건조 BLG 단리물을 비타민, 향미제, 착색제, 미네랄, 감미료, 산화방지제, 식용 산, 지질, 탄수화물, 프리바이오틱스, 프로바이오틱스, 소포제 및 비-유장 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 성분과 블렌딩하여 인스턴트 음료 분말을 수득하는 단계를 포함하는, BLG와 적어도 하나의 임의의 성분을 포함하는 인스턴트 음료 분말을 제조하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 건조 BLG 단리물의 BLG는 피루베이트, 아코니테이트, 시트레이트, 이소-시트레이트, 케토글루타레이트, 석시닐-CoA, 석시네이트, 푸마레이트, 말레이트, 옥살로아세테이트, 타르트레이트, 아세테이트, 탄닌산, 벤조산, 말레산 및 락테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 유기산으로 코팅되는 것인 방법.
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