KR20210024688A - 관절 건강을 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤 또는 둘 다와 플라반 또는 커큐미노이드 또는 둘 다의 혼합물을 제공하며, 이 혼합물은 관절 염증, 관절 통증, 관절 강직성, 연골 열화를 조절하거나, 운동성, 운동 범위, 유연성, 관절의 물리적 기능 또는 이들의 조합을 개선할 수 있다. 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤 또는 둘 다와 플라반 또는 커큐미노이드 또는 둘 다의 혼합물은 경우에 따라 다른 관절 관리제, 예를 들어 비스테로이드성 항염증제/진통제, COX/LOX 억제제, 글루코사민 화합물, 신경병증 통증 완화제 등과 조합하여 사용할 수 있다.

Description

관절 건강을 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR JOINT}
본 발명은 관절 건강 관리에 유용한 화합물과 조성물, 기술된 화합물의 입체이성체, 약학적 또는 기능식품적(nutraceutically)으로 허용가능한 염, 토토머, 글리코시드 및 전구약물, 관절 건강을 개선하는 관련 방법에 관한 것이다.
체내에서 가장 풍부한 헤테로다당류(heteropolysaccharide)는 글리코사미노글리칸(GAG)이다. 헤테로다당류는 링커 올리고당 영역에 의해 프로테오글리칸의 코어 단백질에 결합된 헥소사민과 헥수론산(hexuronic acid)의 이당류 반복단위로 구성되어 있다. 다수의 GAG는 연골 아그레칸(aggrecan)의 코어 단백질에 연결된다. GAG는 고도로 음으로 하전된 분자이며 용액에 점도를 부여하는 길어진 형태를 연장한다. 이러한 음으로 하전된 탄수화물은 연골의 높은 팽윤능을 담당한다. GAG는 주로 세포의 표면 또는 세포외 매트릭스(ECM)에 존재한다. GAG는 연골의 세포외 매트릭스의 크고 작은 프로테오글리칸뿐만 아니라 양 세포 표면 프로테오글리칸의 중요한 분자 구성성분이다. GAG의 높은 점도에 따라 압축성이 낮아지고, 이것으로 이 분자들은 관절에서 윤활액으로 이상적이 된다. 동시에, 그의 강성률(rigidity)은 세포에 구조적 완전성(integrity)을 제공하고 세포 간 통로를 제공한다.
글리코사미노글리칸은 관절 연골, 관절액, 및 기타 부드러운 결합조직의 주요 성분이다. 관절 연골의 글리코사미노글리칸(GAG)은 콘드로이틴 6-설페이트, 콘드로이틴 4-설페이트, 더마탄(dermatan) 설페이트, 헤파린, 헤파린 설페이트 및 케라틴 설페이트로 확인되었다. GAG는 분해한 연골 매트릭스로부터 다량으로 관절 염증 시에 방출된다. GAG의 농도 또는 분자 성질의 변화는 일부 결합조직 질환과 연관되어 있다. 예를 들어, 관절염과 경피증 환자는 혈액과 활액 내에서 GAG의 농도가 증가하고, 관절염 환자의 관련 관절의 열화는 활액에서 GAG의 높은 농도와 분명히 연관성이 있다. 관절염 관절의 연골에 대한 조직화학적 및 생화학적 연구는 GAG 함량의 상당한 감소를 나타내었고, 이 감소는 질환의 중증도에 대략 비례하였다.
모러스 알바 엘(Morus alba L, Moraceae), 뽕(mulberry) 또는 화이트베리 식물은 중국 북부가 원산지이며, 인도에서 중동 내지 서유럽까지, 최근에는 북아메리카 지역에 이르는 다른 곳에서 재배 및 귀화되었다. 그의 근피는 상백피 또는 Cortex Mori라고 알려진 전통적인 약재로 사용되고 있다(Pharmacopoeia of the People's Republic of China, 2005). 이 식물은 한국에서는 뽕나무, 일본에서는 소하쿠히 (Sohakuhi)로 알려져 있다. 현대 약리학적 연구에서, 뽕나무(Morus alba) 근피는 항박테리아, 항바이러스, 항산화, 혈당강하, 지질강하, 신경보호, 항궤양, 진통 및 항염증 활성이 있는 것으로 보고되었다. 뽕나무 근피에서 유래한 다양한 생활성 화합물이 생체내 및 시험관내 항염증 활성을 갖는다.
아카시아(Acacia)는 콩과 나무와 관목의 속이다. 아카시아속에는 1000 종 이상이 포함되어 있고 콩과 (Leguminosae)와 미모사아과(Mimosoideae)에 속한다. 아카시아는 세계적으로 중앙 아메리카와 남아메리카의 열대 및 아열대 지역, 아프리카, 아시아 일부, 및 오스트레일리아에 분포하고, 수많은 풍토성 종이 있다. 아카시아는 주로 건조 및 매우 건조한 지역에서 자라며, 여기서 그 숲은 대개 오픈 가시 관목과 비슷하다. 아카시아는 경제적으로 매우 중요하며, 탄닌, 검(gum), 목재, 연료 및 사료의 공급원을 제공한다. 탄닌은 주로 수피에서 단리되며 생가죽과 스킨의 태닝에 광범위하게 사용된다. 일부 아카시아 수피는 또한 국소 스피릿에 맛을 더하는데 사용된다. 또한, A. sinuata 같은 일부 토착종에서는 사포닌을 얻을 수 있고, 이것은 세제, 기포제 및 유화제에서 사용된다. 일부 아카시아종의 꽃은 방향성으로 향수를 만드는데 사용된다. 다양한 아카시아의 심재는 농기구 제작에 사용되며 장작의 재료를 공급하기도 한다. 아카시아 검은 의약과 제과에서, 그리고 섬유 산업의 사이징(sizing) 및 마무리 재료로서 광범위한 용도를 갖는다.
운카리아 감비르(Uncaria gambir, 꼭두서니과(Rubiaceae))는 원지(round branch)를 갖는 덩굴형 관목으로, 파이퍼 베틀(piper bettle) 잎을 씹으면 치아가 강건해진다고 여겨진다. 이 식물의 모든 부위는 수렴 특성을 갖는다. U. gambir 식물의 잎은 유리 카테킨뿐만 아니라 중합 카테킨-탄닌-을 함유하며, 이것은 오래된 잎보다는 어린 잎에 더 풍부하다. U. gambir는 EAFUS(Everything Added to Food in the United States)의 식품 첨가물 데이터베이스, KFDA의 대한민국 식품첨가물 코드 및 MHLW의 일본 식품첨가물 코드에 천연 풍미제로서 등재되어 있다. U. gambir는 또한 대한민국 의약품 코덱스(KP), 일본 의약품 코덱스(JP) 및 중국 의약품 코덱스(CP)에 등재되어 있다. 대한민국에는 U. gambir 추출물을 함유하는, 특히 소화불량, 구취, 구토, 식욕 부진에 대한 수많은 일반의약품(OTC)이 있다. 일본에서 U. gambir는 설사, 구토 및 위염에 사용된다. 미국에서 U. gambir는 간 기능과 지방 대사를 지원하는 식이보충제로 사용된다.
커큐마 롱가 엘 (Curcuma longa L)은 일반명이 강황으로, 생강과 (Zingiberaceae)의 다년생 식물이다. 강황이라는 이름은 라틴어로 가치있는 땅(terra merita) 또는 투메라이트 (turmeryte)에서 유래한 것으로 보이며, 사프론과 연관되어 있다. 이것은 원래 열대 남부 아시아에서 유래하였고 인도와 동남 아시아에서 대량으로 재배된다. 강황은 지하경으로부터 제조되며 인도에서는 수천년 동안 사용되어 왔다. 최근 연구에서는 강황이 요리 용도 이외에도 항박테리아, 항산화, 화학적예방, 화학치료, 항증식, 항기생충, 항말라리아, 통증완화 및 항염증 특성을 가지는 것으로 나타났다.
미국특허공보 7,514,469 (2009.04.07. 공개)
Jackson Roberto Guedes da Silva Almeida 등, ‘Chapter 11 - Medicinal Plants and Natural Compounds from the Genus Morus (Moraceae) with Hypoglycemic Activity: A Review’, Glucose tolerance, 2012, licensee InTech, pp.189-206
요약하면, 본 발명은 관절 건강 관리에 유용한 화합물과 조성물, 기술된 화합물의 입체이성체, 약학적 또는 기능식품적(nutraceutically)으로 허용가능한 염, 토토머, 글리코시드 및 전구약물, 관절 건강을 개선하는 관련 방법에 관한 것이다.
특정한 구체예에서, 본 발명은 임의로 하나 이상의 프레닐화(prenylated) 플라보노이드 (예를 들어, 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 딜스-알더(Diels-Alder) 부가물), 또는 하나 이상의 스틸벤, 또는 그의 조합이 강화된 뽕나무 추출물과, 임의로 플라반(flavan)이 강화된 아카시아 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 추가 구체예에서, 본 발명은 임의로 프레닐화 플라보노이드(예를 들어, 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 딜스-알더 부가물), 또는 하나 이상의 스틸벤, 또는 그의 조합이 강화된 뽕나무 추출물과, 임의로 플라반(flavan)이 강화된 운카리아 감비르 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 추가 구체예에서, 본 발명은 하나 이상의 프레닐화(prenylated) 플라보노이드(예를 들어, 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 딜스-알더 부가물), 또는 하나 이상의 스틸벤, 또는 그의 조합이 강화된 뽕나무 추출물과 강황 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 하나 이상의 프레닐화(prenylated) 플라보노이드(예를 들어, 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 딜스-알더 부가물), 또는 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물과 페퍼민트 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 다른 구체예에서, 조성물은 또한, 경우에 따라 하나 이상의 글루코사민 화합물, 예컨대 N-아세틸 글루코사민을 함유한다.
예를 들어, 강황과 뽕나무 근피 추출물의 1:1 비율 혼합물은 강황 또는 뽕나무 근피 추출물 각각과 비교하여 항염증 및 통증완화(anti-nociceptive) 효능이 증강되어 유익한 상승작용 효과를 나타냈다.
또다른 측면에서, 본 발명은 관절 건강을 관리하는 방법을 제공한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 관절 연골의 치료, 예방 또는 관리, 연골 열화의 최소화, 연골 무결성 보호에 의한 관절 건강의 증진, 관절 건강에 영향을 주는 효소 작용 약화, 관절 운동 및/또는 기능 개선, 관절 통증의 완화, 관절 강직의 경감, 관절의 운동 및/또는 유연성 범위 향상, 이동성 증진 및/또는 그의 조합을 위한 방법에 사용할 수 있다.
본 발명의 이러한 측면과 다른 측면은 이하의 상세한 설명을 참조하여 분명해질 것이다.
도 1은 강황(Curcuma longa 88 HTP) 분획에 의한 BKB1 수용체 결합의 저해를 나타낸 것이다.
특정 측면에서, 본 발명은 관절 건강을 개선하는데 사용하기 위한, 플라반 또는 커큐미노이드(curcuminoid)와 혼합된 프레닐화 플라보노이드 및 레스베라트롤(resveratrol) 화합물을 제공한다. 특정한 구체예에서, 프레닐화 플라보노이드 및 레스베라트롤 화합물은 뽕나무(Morus alba), 예컨대 뽕나무 뿌리로부터 추출된다. 또다른 구체예에서, 플라반과 조합된 뽕나무 추출물은 임의로 다른 관절 건강 관리제, 예컨대 비스테로이드성 항염증제/진통제, COX/LOX 억제제, 예컨대 아세트아미노펜, 이부프로펜, 셀레콕시브, 보스웰리아(Boswellia) 추출물, 글루코사민 화합물, 예컨대 글루코사민 설페이트, 글루코사민 염산염, N-아세틸글루코사민, 콘드로이틴 설페이트 및 메틸설포닐메탄, 히알루론산, ω-3 지방산(예컨대 에이코사펜타에노산, EPA 및 도코사헥사에노산, DHA), 가수분해 콜라겐(예를 들어, 소의 I형 콜라겐, 닭 흉골 II형 콜라겐에서 유래), 콜라겐 유도성 펩티드 또는 콜라겐 아미노산의 혼합물, 잔토필 카로티노이드(예를 들어, 해양 박테리아, 조류, 갑각류, 어류에 분포하는 아스탁산틴(astaxanthin)), 멀티비타민과 미네랄, 예컨대 비타민 D 및 칼슘 프럭토보레이트, 신경성 동통 완화제, 관절 건강을 증진하는 허브 및/또는 식물 추출물, 또는 관절 건강을 증진하는 식이 보충제와 추가로 조합한다.
다른 구체예는 본 발명의 조성물을 사용하는 방법에 관한 것으로, 예컨대 관절 연골의 유지, 연골 열화의 최소화, 연골 무결성 보호에 의한 관절 건강의 증진, 관절 건강에 영향을 주는 효소 작용 약화, 관절 운동 및/또는 기능 개선, 관절 통증의 완화, 관절 불편감의 완화, 관절 통증과 불편감의 완화, 관절 강직의 경감, 관절의 운동 및/또는 유연성 범위 향상, 이동성 증진 등의 방법에 관한 것이다.
이하의 설명에서는 본 발명의 다양한 구체예들에 대한 충분한 이해를 제공하기 위해 특정한 구체적인 상세를 기재하였다. 그러나, 당업자라면 본 발명이 이러한 상세 없이도 실시될 수 있음을 이해할 것이다.
본 명세서에서 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위 또는 정수 범위는 다른 언급이 없는 한, 언급된 범위내 임의의 정수 값과, 적절하다면 그의 임의의 분수(예컨대, 한 정수의 1/10과 1/100) 값을 포함한다. 또한 본 명세서에서 임의의 물리적 특징과 관련하여 언급된 임의의 수 범위, 예컨대 폴리머 소단위, 크기 또는 두께는 다른 언급이 없는 한, 언급된 범위내 임의의 정수를 포함하는 것으로 이해해야 한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약"과 "~로 필수적으로 구성된(consisting essentially of)"이란 다른 언급이 없는 한, 명시된 범위, 값 또는 구조의 ±20%를 의미한다. 본 명세서에서 사용된 단수를 나타내는 용어는 "하나 이상의" 열거된 성분을 지칭한다. 대안(예를 들어, "또는")의 사용은 대안물 하나 또는 둘 다 또는 그의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 내용 상 달리 요구되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위 전체에서, 단어 "포함하다(comprise)" 및 그의 변형, 예컨대 "포함하다(comprises)" 및 "포함하는(comprising)" 뿐만 아니라 "함유하다(include)"와 "보유하다(have)" 및 그의 변형 등의 동의어는 개방형 포괄적 의미; 즉 "포함하나 이에 한정되지 않는"으로 간주되어야 한다.
본 명세서 전체에서 "일 구체예" 또는 "구체예"에 대한 언급은 이 구체예와 관련하여 기술된 특정 성질, 구조 또는 특징이 본 발명의 적어도 하나의 구체예에 포함되는 것을 의미한다. 따라서, 전체 명세서에 걸쳐 다양한 곳에서 "일 구체예에서" 또는 "구체예에서"라는 문구는 반드시 모두 동일한 구체예를 지칭하는 것은 아니다. 또한, 하나 이상의 구체예에서 특정 성질, 구조 또는 특징들이 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다.
"아미노＂는 -NH2 라디칼을 지칭한다.
"시아노(cyano)＂는 -CN 라디칼을 지칭한다.
"히드록시(hydorxy)＂ 또는 "히드록실(hydroxyl)＂은 -OH 라디칼을 지칭한다.
"이미노(imino)＂는 =NH 치환체를 지칭한다.
"니트로(Nitro)＂는 -NO2 라디칼을 지칭한다.
"옥소(oxo)＂는 =O 치환체를 지칭한다.
"티옥소(thioxo)＂는 =S 치환체를 지칭한다.
"알킬"은 1개 내지 12개 탄소 원자 (C1-C12알킬), 또는 1 내지 8개의 탄소 원자 (C1-C8 알킬) 또는 1 내지 6개 탄소 원자 (C1-C6 알킬)를 갖는 포화되거나 불포화된 (즉, 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합이 함유된) 탄소와 수소 원자만으로 구성된 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 쇄 라디칼을 지칭하며, 이들은 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착되는데, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 1-메틸에틸 (이소-프로필), n-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸에틸 (t-부틸), 3-메틸헥실, 2-메틸헥실, 에테닐, 프로피-1-에닐, 부트-1-에닐, 펜트-1-에닐, 펜타-1,4-디에닐, 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐, 헥시닐, 등이다. 명세서에서 다른 언급이 없는 한, 알킬 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"알킬렌" 또는 "알킬렌 쇄"는 1개 내지 12개 탄소 원자를 갖고, 포화되거나 불포화된(즉, 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합이 함유됨), 탄소와 수소 만으로 구성되는, 라디칼 그룹에 분자의 나머지가 연결된 직쇄 또는 분지쇄 2가 탄화수소 사슬을 지칭하고, 예를 들어 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, n-부틸렌, 에테닐렌, 프로페닐렌, n-부테닐렌, 프로피닐렌, n-부티닐렌 등이다. 알킬렌 쇄는 단일 또는 이중 결합을 통하여 분자의 나머지, 그리고 단일 또는 이중 결합을 통하여 라디칼 그룹에 결합된다. 분자의 나머지와 라디칼 그룹에 알킬렌 쇄의 결합 지점은 쇄 안에 한 개 탄소 또는 임의의 2개 탄소를 통하여 이루어질 수 있다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 알킬렌 쇄는 임의로 치환될 수 있다.
"알콕시(alkoxy)"는 식 -ORa의 라디칼을 말하며, 여기에서 Ra는 1개 내지 12개 탄소 원자가 함유된 상기에서 정의된 바와 같은 알킬 라디칼이다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 알콕시 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"알킬아미노(alkylamino)"는 식 -NHRa 또는 -NRaRa의 라디칼을 말하며, 여기에서 각 Ra는 독립적으로 1개 내지 12개 탄소 원자가 함유된 상기에서 정의된 바와 같은 알킬 라디칼이다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 알킬아미노그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"티오알킬(thioalkyl)"은 식 -SRa의 라디칼을 말하며, 여기에서 Ra는 1개 내지 12개 탄소 원자가 함유된 상기에서 정의된 바와 같은 알킬 라디칼이다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 티오알킬 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"아릴(아릴)"은 수소, 6 내지 18개의 탄소 원자와 적어도 하나의 방향족 고리를 포함하는 탄화수소 고리계 라디칼을 말한다. 본 명세서의 목적을 위하여, 아릴 라디칼은 단일환, 이환, 삼환 또는 사환 고리계일 수 있고, 이는 융합되거나 연결된 고리계를 포함할 수 있다. 아릴 라디칼은 아쎄안트릴렌, 아쎄나프틸렌, 아쎄페난트릴렌, 안트라쎈, 아줄렌, 벤젠, 크리쎈, 플루오란텐, 플루오렌, as-인다쎈, s-인다쎈, 인단, 인덴, 나프탈렌, 페날렌, 페난트렌, 플레아덴, 피렌, 및 트리페닐렌으로부터 유도된 아릴 라디칼이다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 용어 "아릴＂ 또는 접두어 "아르-(ar-)"(예컨대 "아르알킬"에서)는 임의로 치환된 아릴 라디칼이 포함됨을 의미한다.
"아르알킬(아르알킬)＂은 식 -Rb-Rc의 라디칼을 말하며, 여기에서 Rb는 상기에서 정의된 알킬렌 쇄이며, Rc는 상기에서 정의된 하나 이상의 아릴 라디칼, 예를 들어, 벤질, 디페닐메틸 등이다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 아르알킬 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"사이클로알킬" 또는 "카르보사이클 고리"는 탄소와 수소 원자만으로 구성된 안정한 비-방향족 단일환 또는 다중환 탄화수소 라디칼을 말하며, 3 내지 15개 탄소 원자, 또는 3개 내지 10개 탄소 원자를 갖는 융합되거나 연결된 고리계를 포함할 수 있으며, 포화되거나 불포화된, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 결합된다. 단일환 라디칼은, 예를 들어 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 및 사이클로옥틸을 포함한다. 다중환 라디칼은, 예를 들어 아다만틸, 노르보르닐, 데칼리닐, 7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵타닐 등을 포함한다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 사이클로알킬 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"사이클로알킬알킬"은 식 -RbRd의 라디칼을 말하며, 여기에서 Rb는 상기에서 정의된 알킬렌 쇄이며, Rd는 상기에서 정의된 사이클로알킬 라디칼이다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 사이클로알킬알킬그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"융합된(fused)＂이란 본 명세서의 화합물에서 기존의 고리 구조에 융합된 본 명세서에 기술된 임의의 고리 구조를 지칭한다. 융합된 고리가 헤테로사이클릴 고리 또는 헤테로아릴 고리인 경우, 융합된 헤테로사이클릴 고리 또는 융합된 헤테로아릴 고리의 일부분이 되는 기존 고리 구조상의 임의의 탄소 원자가 질소 원자로 대체될 수 있다.
"할로(halo)" 또는 "할로겐"은 브로모, 클로로, 플루오로 또는 요오도를 지칭한다.
"할로알킬"은 상기에서 정의된 하나 이상의 할로 라디칼에 의해 치환된 상기에서 정의된 알킬 라디칼을 지칭하며, 예를 들어 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리클로로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 1,2-디플루오로에틸, 3-브로모-2-플루오로프로필, 1,2-디브로모에틸 등이다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 할로알킬 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"헤테로사이클릴" 또는 "헤테로사이클 고리＂는 2 내지 12개 탄소 원자와 질소, 산소 및 황으로 구성된 군에서 선택된 1 내지 6개의 이종원자로 구성된 안정한 3- 내지 18-원(membered)의 비-방향족 고리 라디칼을 지칭한다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 헤테로사이클릴 라디칼은 단일환, 이환, 삼환 또는 사환고리계일 수 있으며, 융합되거나 연결된 고리계를 포함할 수 있고; 헤테로사이클릴 라디칼 내의 질소, 탄소 또는 황 원자는 임의로 산화될 수 있으며; 질소 원자는 임의로 사중화(quaternized)될 수 있고; 그리고 헤테로사이클릴 라디칼은 부분적으로 또는 완전하게 포화될 수 있다. 이러한 헤테로사이클릴 라디칼의 예로는 디옥소라닐, 티에닐[1,3]디티아닐, 데카히드로이소퀴놀릴, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 이소옥사졸리디닐, 모폴리닐, 옥타히드로인돌릴, 옥타히드로이소인돌릴, 2-옥소피페라지닐, 2-옥소피페리디닐, 2-옥소피롤리디닐, 옥사졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 퀴누클리디닐, 티아졸리디닐, 테트라히드로퓨릴, 트리티아닐, 테트라히드로피라닐, 티오모폴리닐, 티아모폴리닐, 1-옥소-티오모폴리닐, 및 1,1-디옥소-티오모폴리닐이 포함된다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 헤테로사이클릴 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"N-헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 질소가 포함된 상기에서 정의된 헤테로사이클릴 라디칼을 지칭하며, 여기에서 헤테로사이클릴 라디칼이 분자의 나머지에 결합되는 지점은 헤테로사이클릴 라디칼 내 질소 원자를 통해서다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, N-헤테로사이클릴 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"헤테로사이클릴알킬"은 식 -RbRe의 라디칼을 지칭하며, 여기에서 Rb는 상기에서 정의된 알킬렌 쇄이며, Re는 상기에서 정의된 헤테로사이클릴 라디칼이며, 헤테로사이클릴이 질소-함유 헤테로사이클릴인 경우, 헤테로사이클릴은 질소 원자에서 알킬 라디칼에 결합될 수 있다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 헤테로사이클릴알킬 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"헤테로아릴"은 수소 원자, 1 내지 13개의 탄소 원자, 질소, 산소 및 황으로 구성된 군에서 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자, 및 적어도 하나의 방향족 고리가 포함된 5- 내지 14-원 고리계 라디칼을 지칭한다. 본 명세서의 목적을 위하여, 헤테로아릴 라디칼은 단일환, 이환, 삼환 또는 사환 고리계일 수 있으며, 융합되거나 연결된 고리계를 포함할 수 있고; 헤테로아릴 라디칼 내의 질소, 탄소 또는 황 원자는 임의로 산화될 수 있으며; 질소 원자는 임의로 사중화(quaternized)될 수 있다. 예로는 아제피닐, 아크리디닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈인돌릴, 벤조디옥솔릴, 벤조퓨라닐, 벤조옥사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조[b][1,4]디옥세피닐, 1,4-벤조디옥사닐, 벤조나프토퓨라닐, 벤조옥사졸릴, 벤조디옥솔일, 벤조디옥시닐, 벤조피라닐, 벤조피라노닐, 벤조퓨라닐, 벤조퓨라노닐, 벤조티에닐 (벤조티오페닐), 벤조트리아졸릴, 벤조[4,6]이미다조[1,2-a]피리디닐, 카르바졸릴, 씨놀리닐, 디벤조퓨라닐, 디벤조티오페닐, 퓨라닐, 퓨라노닐, 이소티아졸릴, 이미다졸릴, 인다졸릴, 인돌릴, 인다졸릴, 이소인돌릴, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 이소퀴놀릴, 인돌리지닐, 이소옥사졸릴, 나프티리디닐, 옥사디아졸릴, 2-옥소아제피닐, 옥사졸릴, 옥시라닐, 1-옥시도피리디닐, 1-옥시도피리미디닐, 1-옥시도피라지닐, 1-옥시도피리다지닐, 1-페닐-1H-피롤릴, 페나지닐, 펜토티아지닐, 페녹사지닐, 프탈라지닐, 프테리디닐, 퓨리닐, 피롤릴, 피라졸릴, 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 퀴누클리디닐, 이소퀴놀리닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 티아졸릴, 티아디아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 트리아지닐, 및 티오페닐(즉, 티에닐)을 포함한다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 헤테로아릴 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"N-헤테로아릴"은 적어도 하나의 질소가 포함된 상기에서 정의된 헤테로아릴 라디칼을 지칭하며, 여기에서 헤테로아릴 라디칼이 분자의 나머지에 결합되는 지점은 헤테로아릴 라디칼 내의 질소 원자를 통한다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, N-헤테로아릴 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
"헤테로아릴알킬"은 식 -RbRf의 라디칼을 지칭하며, 여기에서 Rb는 상기에서 정의된 알킬렌 쇄이며, Rf는 상기에서 정의된 헤테로아릴 라디칼이다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 헤테로아릴알킬 그룹은 임의로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "치환된＂이란 상기한 그룹들 중 임의의 그룹(즉, 알킬, 알킬렌, 알콕시, 알킬아미노, 티오알킬, 아릴, 아르알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 할로알킬, 헤테로사이클릴, N-헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로아릴, N-헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬)을 의미하며, 여기서 적어도 하나의 수소 원자는 비-수소 원자, 예컨대 할로겐 원자, 예컨대 F, Cl, Br, 및 I; 예컨대 히드록실 그룹, 알콕시 그룹, 및 에스테르 그룹 내의 산소 원자; 예컨대 티올 그룹, 티오알킬 그룹, 술폰 그룹, 술포닐 그룹, 및 술폭시드 그룹 내의 황 원자; 예컨대 아민, 아미드, 알킬아민, 디알킬아민, 아릴아민, 알킬아릴아민, 디아릴아민, N-옥시드, 이미드, 및 엔아민 내의 질소 원자; 예컨대 트리알킬실릴 그룹, 디알킬아릴실릴 그룹, 알킬디아릴실릴 그룹, 및 트리아릴실릴 그룹 내의 실리콘 원자; 및 다양한 다른 그룹 내의 다른 헤테로원자와의 결합에 의해 대체될 수 있다. "치환된＂이란 또한 하나 이상의 수소 원자가 헤테로원자, 예를 들어 옥소, 카르보닐, 카르복실, 및 에스테르 그룹 내의 산소; 및 예를 들어 이민, 옥심(oximes), 히드라존, 및 니트릴 그룹 내의 질소에 더 높은 차수 결합(예를 들어, 이중- 또는 삼중-결합)에 의해 대체된 상기 그룹들 중 임의의 그룹을 의미한다. 예를 들어, "치환된＂이란 하나 이상의 수소 원자가 -NRgRh, -NRgC(=O)Rh, -NRgC(=O)NRgRh, -NRgC(=O)ORh, -NRgSO2Rh, -OC(=O)NRgRh, -ORg, -SRg, -SORg, -SO2Rg, -OSO2Rg, -SO2ORg, =NSO2Rg, 및 -SO2NRgRh로 대체된 상기 그룹들 중 임의의 그룹을 포함한다. "치환된"이란 또한 하나 이상의 수소 원자가 -C(=O)Rg, -C(=O)ORg, -C(=O)NRgRh, -CH2SO2Rg, -CH2SO2NRgRh로 대체된 상기 그룹들 중 임의의 그룹을 의미한다. 전술한 것에서, Rg 및 Rh는 동일하거나 상이하며, 독립적으로 수소, 알킬, 알콕시, 알킬아미노, 티오알킬, 아릴, 아르알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 할로알킬, 헤테로사이클릴, N-헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로아릴, N-헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬이다. "치환된＂은 또한 하나 이상의 수소 원자가 아미노, 시아노, 히드록실, 이미노, 니트로, 옥소, 티옥소, 할로, 알킬, 알콕시, 알킬아미노, 티오알킬, 아릴, 아르알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 할로알킬, 헤테로사이클릴, N-헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로아릴, N-헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬 그룹에 대한 결합으로 대체된 상기 그룹들 중 임의의 그룹을 의미한다. 또한, 상기한 각 치환체는 하나 이상의 상기 치환체로 임의로 치환될 수도 있다.
"글리코시드(glycoside)"는 당(sugar) 그룹이 글리코시드 결합을 통하여 다른 그룹에 아노머(anomeric) 탄소를 통하여 결합되어 있는 분자를 지칭한다. 예시적인 당에는 글루코스, 람노스, 만노스, 갈락토스, 아라비노스, 글루쿠로니드 등이 포함된다. 글리코시드는 O- (O-글리코시드), N- (글리코실아민), S-(티오글리코시드), 또는 C- (C-글리코시드) 글리코시드 결합에 의해 연결될 수 있다. 본 명세서의 화합물들은 임의의 적합한 지점에서 글리코시드를 형성할 수 있다.
"프레닐(prenyl) 그룹＂은 식
Figure pat00001
의 5 탄소 주쇄를 포함하는 잔기이다. 일부 구체예에서, 프레닐 그룹은 하나 이상의 탄소-탄소 이중결합을 포함하거나/하고 하나 이상의 치환체로 치환된다. "프레닐"은
Figure pat00002
라디칼을 지칭한다. 이소프레닐은
Figure pat00003
라디칼(시스 또는 트랜스)을 지칭한다. 프레닐 그룹은 치환되거나 비치환되며, 예컨대
Figure pat00004
또는
Figure pat00005
이다.
"프레닐페닐(prenylphenyl)＂은 상기에서 정의된 프레닐 잔기에 연결된 페닐 잔기를 지칭한다. 프레닐페닐은 분자내 적어도 하나의 프레닐 그룹이 있다면 치환된 페닐, 예컨대 플라보노이드 및 다른 치환된 페닐과 헤테로아릴을 포함한다. 치환된 페닐과 헤테로아릴의 경우에서, 프레닐 잔기는 페닐 고리에 직접적으로 결합될 필요는 없지만, 분자내 임의의 지점에 결합될 수 있다.
"칼콘(chalcone)＂은 다음의 핵심 구조를 포함하는 화합물을 지칭한다:
Figure pat00006
칼콘은 상기 탄소 원자들 중 임의의 위치에 다양하게 치환될 수 있다.
"전구약물(prodrug)＂은 생리적 조건에서 전환되거나 가용매분해에 의해 본 명세서의 생물학적으로 활성인 화합물로 전환될 수 있는 화합물을 지칭한다. 따라서, 용어 "전구약물"은 제약학적으로 및 기능식품적으로 허용가능한 본 발명의 화합물의 대사 전구물질을 지칭한다. 전구약물은 이를 필요로 하는 대상에 투여될 때 불활성일 수 있지만, 생체 내에서 본 발명의 활성 화합물로 전환된다. 전구약물은 전형적으로 생체 내에서, 예를 들어 혈액 또는 장 내 가수분해에 의해 신속하게 본 명세서의 모(parent) 화합물로 전환되거나 간에서 대사된다. 전구약물 화합물은 대개 포유동물 유기체 내에서 용해도, 조직 적합성 또는 지연된 방출의 이점을 제공한다 (Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam) 참조). 전구약물에 대한 언급은 Higuchi, T., et al., A.C.S. Symposium Series, Vol. 14, 및 Bioreversible Carriers in Drug Design, Ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical 및 Nutraceutical Association 및 Pergamon Press, 1987에서 제공된다.
용어 "전구약물"은 또한 이러한 전구약물이 포유동물 대상에게 투여될 때 생체 내에서 본 발명의 활성 화합물을 유리하는 공유결합에 의해 결합된 임의의 담체를 포함하는 것을 의미한다. 본 발명 화합물의 전구약물은 통상적인 조작 또는 생체 내에서 본 발명의 모 화합물로 절단되는 방식으로 본 발명의 화합물 내에 존재하는 작용기를 변경하여 제조할 수 있다. 전구약물은 본 발명의 화합물을 포함하며, 여기서 히드록시, 아미노 또는 머캅토 그룹은 임의의 그룹에 결합되고, 본 발명 화합물의 전구약물이 포유동물 대상에게 투여될 때, 자유 히드록시, 자유 아미노 또는 자유 머캅토 그룹으로 각각 절단된다. 전구약물의 예로는 본 발명의 아민 작용기의 알코올 또는 아미드 유도체의 아세테이트, 포르메이트 및 벤조에이트 유도체 등이 포함된다.
본 발명은 또한 구조 (I)-(VI)의 모든 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 화합물을 포괄하는 것을 의미하며, 이것은 상이한 원자량 또는 질량 번호를 갖는 원자로 대체된 하나 이상의 원자를 보유함으로써 동위원소적으로-표지된 것일 수 있다. 기술된 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예로는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 염소, 및 요오드, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 123I, 및 125I를 각각 포함한다. 이러한 방사성 동위원소 표지된 화합물은, 예를 들어 작용 부위 또는 방식, 또는 약리학적으로 중요한 작용 부위에 대한 결합 친화력을 특징화함으로써, 화합물들의 효능을 결정 또는 측정하는데 유용할 수 있다. 구조 (I)-(VI) 중 어느 하나의 특정 동위원소-표지된 화합물, 예를 들어 방사성 동위원소가 혼입된 것들은 약물 또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소 삼중수소, 즉 3H, 및 탄소-14, 즉 14C는 혼입의 용이성 및 탐지의 준비된 수단 측면에서 본 목적에 특히 유용하다.
더 무거운 동위원소, 예를 들어 중수소, 즉 2H로의 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어 생체내 반감기 증가 또는 투여요구량의 감소로 인하여 특정 치료 이점을 제공할 수 있고, 따라서 일부 환경에서 바람직할 수 있다.
양전자방출 동위원소, 예를 들어 11C, 18F, 15O 및 13N로의 치환은 기질 수용체 점유를 실험하는 양전자방출단층촬영(PET)에 유용할 수 있다. 구조 (I)-(VI) 중 어느 하나의 동위원소-표지된 화합물들은 일반적으로 당업자에 공지된 통상적인 기술에 의해, 또는 기존에 사용된 비-표지된 시약을 대신하여 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 본 원에서 제시된 바와 같은 제조 및 실시예에서 설명된 것과 유사한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명은 또한 기술된 화합물의 생체 내 대사 산물을 포괄한다. 이러한 산물은, 예를 들어 투여된 화합물의 주로 효소 과정으로 인한 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 에스테르화 등으로부터 생성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명 화합물의 대사 산물을 얻는데 충분한 기간 동안 포유동물에게 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법에 의해 생성된 화합물들을 포함한다. 이러한 산물은 전형적으로 동물, 예를 들어 래트, 마우스, 기니피그, 개, 고양이, 돼지, 양, 말, 원숭이 또는 인간에게 본 발명의 방사성 동위원소 표지된 화합물의 탐지가능한 투여 분량을 투여하고, 대사가 일어나도록 충분한 시간을 허용하고, 소변, 혈액 또는 다른 생물학적 시료로부터 이 화합물의 전환 산물을 단리함으로써 확인된다.
"안정한 화합물"과 "안정한 구조"는 반응 혼합물로부터 유용한 수준의 순도를 가지도록 단리될 수 있고, 효과적인 치료 물질로 제형화되는데 충분한 강도를 가진 화합물을 지칭한다.
"포유동물"은 인간 및 가축, 예를 들어 실험실 동물 또는 가정용 반려동물 (예를 들어, 래트, 마우스, 기니피그, 고양이, 개, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 토끼, 영장류), 그리고 비-가축, 예를 들어 야생동물 등을 포함한다.
"임의의" 또는 "선택적으로"란 후속적으로 기술된 요소, 성분, 사건 또는 환경이 일어날 수도 또는 일어나지 않을 수도 있는 것을 의미하며, 요소, 성분, 사건 또는 환경이 발생한 경우와 발생하지 않은 경우를 포함한다. 예를 들어, "임의로 치환된 아릴"은 아릴 라디칼이 치환되거나 치환되지 않을 수도 있는 것을 의미하며, 다시 말해서 치환된 아릴 라디칼과 치환을 보유하지 않는 아릴 라디칼 모두를 포함한다는 의미가 된다.
"약학적으로 또는 기능식품적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 첨가제"는 미국 Food 및 Drug Administration에서 인간 및 가축에게 사용이 승인된 임의의 어쥬번트, 담체, 첨가제, 유동성개선제(glidant), 감미제, 희석제, 보존제, 염료/착색제, 풍미 보강제, 계면활성제, 습윤제, 분산제, 현탁제, 안정화제, 등장화제, 용매, 또는 유화제를 포함한다.
"약학적으로 또는 기능식품적으로 허용가능한 염"은 산 및 염기 부가염 모두를 포함한다.
"약학적으로 또는 기능식품적으로 허용가능한 산 부가 염"은 자유 염기의 생물학적 효능 및 특성을 보유하고, 생물학적으로 또는 달리 비바람직하지 않으며, 무기산, 예를 들어 염산, 브롬산, 황산, 질산, 인산 등과, 유기산, 예를 들어 아세트산, 2,2-디클로로아세트산, 아디프산, 알긴산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 4-아세트아미도벤조산, 캄포르산, 캄포르-10-술폰산, 카프르산, 카프로산, 카프릴산, 카본산, 계피산, 구연산, 사이클람산, 도데실술폰산, 에탄-1,2-디술폰산, 에탄술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 포름산, 푸마르산, 갈락타르산, 겐티스산, 글루코헵톤산, 글루콘산, 글루쿠론산, 글루탐산, 글루타르산, 2-옥소-글루타르산, 글리세로포스포린산, 글리콜산, 힙푸르산, 이소부티르산, 젖산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 말론산, 만델산, 메탄술폰산, 점액산, 나프탈렌-1,5-디술폰산, 나프텔렌-2-술폰산, 1-히드록시-2-나프토산, 니코틴산, 올레산, 오로트산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 프로피온산, 피로글루탐산, 피루브산, 살리실산, 4-아미노살리실산, 세바스산, 스테아르산, 숙신산, 타르타르산, 티오시안산, p-톨루엔술폰산, 트리플루오로아세트산, 운데실렌산 등으로 형성된 염을 지칭한다.
"약학적으로 또는 기능식품적으로 허용가능한 염기 부가 염"은 자유 산의 생물학적 효능 및 특성을 보유하고, 생물학적으로 또는 달리 비바람직하지 않은 염을 지칭한다. 이들 염은 무기 염기 또는 유기 염기를 자유 산에 첨가하여 제조된다. 무기 염기로부터 유도된 염은 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간, 알루미늄염 등을 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 무기염은 암모늄, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 또는 마그네슘 염이다. 유기 염기로부터 유도된 염은 1차, 2차, 3차 아민, 자연적으로 발생되는 치환된 아민이 포함된 치환된 아민, 고리 아민, 및 염기성 이온교환수지, 예를 들어 암모니아, 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 디에탄올아민, 에탄올아민, 데아놀, 2-디메틸아미노에탄올, 2-디에틸아미노에탄올, 디사이클로헥실아민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 프로카인, 하이드라바민, 콜린, 베타인, 베네타민, 벤자틴, 에틸렌디아민, 글루코사민, 메틸글루카민, 테오브로민, 트리에탄올아민, 트로메타민, 퓨린, 피페라진, 피페리딘, N-에틸피페리딘, 폴리아민 수지 등의 염을 포함한다. 특별히 유용한 유기 염기는 이소프로필아민, 디에틸아민, 에탄올아민, 트리메틸아민, 디사이클로헥실아민, 콜린 또는 카페인이다.
대개는 결정화에 의해 본 발명 화합물의 용매화물이 만들어진다. 본 명세서에서 사용된, 용어 "용매화물(solvate)"은 본 발명 화합물의 하나 이상의 분자와 하나 이상의 용매 분자를 포함하는 응집체(aggregate)를 지칭한다. 용매는 물일 수 있으며, 이 경우 용매화물은 수화물이 될 수 있다. 경우에 따라, 용매는 유기용매일 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 1수화물, 2수화물, 반수화물, 세스퀴수화물(sesquihydrate), 3수화물, 4수화물 등을 포함하는 수화물 형태뿐만 아니라 상응하는 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 본 명세서의 화합물은 진정한 용매화물일 수 있고, 다른 경우에 있어서 본 발명의 화합물은 단순히 우연적으로 물을 함유하거나, 또는 물과 일부 우연적인 용매의 혼합물일 수 있다.
"약학 조성물" 또는 "기능식품적(nutraceutical) 조성물"은 본 발명의 화합물과 포유동물, 예를 들어 인간에게 생물학적으로 활성인 화합물의 전달을 위하여 당업계에서 일반적으로 허용되는 매질의 제제(formulation)를 지칭한다. 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물은 단독 조성물(stand alone composition)로서 또는 처방약, 처방전 없이 구입하는 일반의약품(OTC), 식물성 약품(botanical drug), 한약(herbal medicine), 동종요법 물질(homeopathic agent), 또는 정부에서 검토하고 승인한 건강관리제품의 다른 형태의 성분으로 제제화되거나 사용될 수 있다. 본 명세서의 예시적인 기능식품적 조성물은 단독 조성물로 제제화 또는 사용되거나, 음식, 새로운 음식, 기능 식품, 음료, 바(bar), 식용 향료, 식품 첨가제, 의료 식품, 식이 보충제 또는 허브 제품에서 영양 또는 생활성 성분으로 제제화되거나 사용될 수 있다. 당업계에서 일반적으로 허용되는 매질은 약학적으로 또는 기능식품적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 첨가제를 모두 포함한다.
본 명세서에서 사용된, "~이 강화된(enriched for)"이란 추출 또는 다른 제조 과정 전에 식물 재료 또는 다른 공급원의 중량으로 확인된 하나 이상의 활성 화합물의 양 또는 활성과 비교하였을 때, 하나 이상의 활성 화합물의 양 또는 활성에서 적어도 2배 내지 최대 약 1000-배 증가한 식물 추출물 또는 다른 조제물(preparation)을 지칭한다. 특정 구체예들에 있어서, 추출 또는 다른 제조 과정 전 식물 재료 또는 다른 원료의 중량은 건중량, 습윤중량 또는 이의 조합이 될 수 있다.
본 명세서에서 사용된, "주요 활성 성분(ingredient)" 또는 "주요 활성 요소(component)"는 식물 추출물 또는 다른 조제물에서 확인되거나 적어도 하나의 생물학적 활성을 나타낼 수 있는 식물 추출물 또는 다른 조제물에 강화된 하나 이상의 활성 화합물을 지칭한다. 특정 구체예에 있어서, 강화(enriched) 추출물의 주요 활성 성분은 이 추출물에 강화된 하나 이상의 활성 화합물이 될 것이다. 일반적으로, 하나 이상의 주요 활성 성분은 다른 추출물 성분과 비교하였을 때, 하나 이상의 측정가능한 생물학적 활성 또는 효과의 대부분(즉, 50% 이상)을 직접 또는 간접적으로 부여한다. 특정 구체예에 있어서, 주요 활성 성분은 추출물의 중량 비율로는 소수 성분이 될 수 있지만(예를 들어, 추출물 내에 포함된 성분 중 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 미만), 원하는 생물학적 활성의 대부분을 제공한다. 주요 활성 성분을 함유하는 본 발명의 임의의 조성물은 또한 주요 활성 요소의 수준이 아니라 강화된 조성물의 약학 또는 기능식품적 활성에 기여하거나 기여하지 않는 소수의 활성 성분들을 함유할 수 있으며, 소수 활성 요소만이 주요 활성 성분 없이 효과적이지 않을 수도 있다.
"유효량(Effective amount)" 또는 "치료학적 유효량"은 포유동물, 예를 들어 인간에게 투여될 때 다음 중 어느 하나 이상을 포함하는 치료를 나타내는데 충분한 본 발명의 화합물 또는 조성물의 양을 지칭한다:(1) 포유동물에서 연골의 손실을 치료 또는 예방하고; (2) 관절 건강을 증진하고; (3) 포유동물에서 연골의 손실을 억제시키고; (4) 포유동물에서 관절 유연성을 증가시키고; (5) 포유동물에서 관절 통증을 치료 또는 예방하고; (6) 포유동물에서 관절의 염증을 변형시키고; (7) 관절의 운동 범위를 증가시킨다. "치료학적 유효량"으로 구성된 본 명세서의 화합물 또는 조성물의 양은 화합물, 치료되고 있는 상태 및 그의 중증도, 투여 방식, 치료 기간 또는 치료될 대상의 체중과 연령에 따라 달라질 것이지만, 당업자의 고유한 지식 및 본 명세서와 관련하여 당업자가 통상적으로 결정할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 "보충제(supplements)"는 자연 상태 또는 생물학적 과정과 연관된 특정 상태, 구조 또는 기능을 개선, 증진, 지원, 증가, 조절, 관리, 제어, 유지, 최적화, 변형, 감소, 억제 또는 예방하는 제품이다(즉, 질환을 진단, 치료, 완화, 치유 또는 예방하는데 사용되는 것은 아님). 특정 구체예에서, 보충제는 식이 보충제이다. 예를 들어, 관절 건강과 연관된 상태와 관련하여, 식이 보충제는 관절 연골의 유지, 연골 열화의 최소화, 연골 무결성 보호에 의한 관절 건강의 증진, 관절 건강에 영향을 주는 효소 작용 약화, 관절 운동 및/또는 기능 개선, 관절 기능의 지원, 관절 통증의 완화, 관절 불편감의 완화, 관절 강직의 경감, 관절 운동 및 유연성 범위 향상, 이동성 증진 등을 위해 사용될 수 있다. 특정 구체예에 있어서, 식이 보충제는 특정 범주의 식이요법제, 음식 또는 둘 다이며, 약물은 아니다.
"처리하는(treating)" 또는 "치료(treatment)" 또는 "개선"이란 관심 질환 또는 상태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 포유동물, 예를 들어 인간에게서 관심 질환 또는 상태의 치료적 처리 또는 예방/방지 처리를 지칭하며, 여기에는 다음이 포함된다: (i) 포유동물에서 이 질환 또는 상태의 발생을 방지, 특히 이러한 포유동물은 이 상태에 걸리기 쉽지만, 아직 걸린 것으로 진단받지는 않았을 때; (ii) 이 질환 또는 상태를 저해, 즉, 발병을 억제; (iii) 이 질환 또는 상태를 완화, 즉 이 질환 또는 상태의 퇴행을 야기; 또는 (iv) 기저 질환 또는 상태를 해결하지 않고, 이 질환 또는 상태로 인한 증상을 완화(예를 들어, 통증 완화, 염증 감소, 연골 손실 감소). 본 명세서에서 사용된, 용어 "질환" 및 "상태"는 호환될 수 있거나, 또는 특정 심각한 문제 또는 상태가 공지의 원인 물질을 가지지 않을 수 있고(따라서 병인은 아직 알아내지 못함), 그에 따라 질환으로서가 아니라, 단지 바람직하지 못한 상태 또는 증상으로서만 인식된다는 점에서 상이할 수 있으며, 이때 다소 특정한 일련의 증상들은 임상의에 의해 확인된다. 특정 구체예에서, 본 명세서의 조성물과 방법은, 예를 들어 골관절염, 류마티스 관절염, 또는 둘 다를 치료하기 위해 사용된다.
본 명세서에서 사용된, "통계학적 유의성(statistical significance)"은 Students t-검정을 사용하여 산출된 0.050 이하의 p 값을 지칭하며, 특정 사건 또는 결과는 우연에 의해 일어날 가능성이 없다는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용된, 화학적 명명방법 및 구조 다이아그램은 I.U.P.A.C. 명명 체계의 변형된 형태이며, ACD/Name Version 9.07 소프트웨어 프로그램 또는 ChemDraw Ultra Version 11.0 소프트웨어 명명 프로그램(CambridgeSoft)을 사용하였고, 여기서 본 발명의 화합물은 중심 코어 구조, 예를 들어 이미다조피리딘 구조의 유도체로서 본 명세서에서 명명되었다. 본 명세서에 적용된 복잡한 화학명에 있어서, 치환체 그룹은 결합하고 있는 그룹의 앞에 기재하였다. 예를 들어, 사이클로프로필에틸은 사이클로프로필 치환체를 갖는 에틸 주쇄를 포함한다. 이하에 기술된 것을 제외하고, 모든 결합은 본 명세서의 화학 구조 다이아그램에서 확인되며, 원자가를 완성하기 위해 충분한 수소 원자에 결합된 것으로 보이는 일부 탄소 원자는 제외한다.
본 명세서에서 언급된 바와 같이, 특정 구체예에서 본 발명은 프레닐화 플라보노이드를 포함하는 조성물을 제공한다. 플라보노이드는 플라반, 플라본, 플라보놀, 플라바논, 플라바노놀, 이소플라보노이드, 네오플라보노이드, 칼콘, 아릴벤조퓨란 등을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 플라보노이드 화합물은 하기한 화학식 (III)으로 표시된다:
Figure pat00007
상기 화학식 (III)에서, R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐, 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이거나; R1-R12 중 하나가 R1-R12 중 다른 하나와 함께 고리를 형성하고, 남아있는 R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이나, 단 모든 원자가가 충족된다(예를 들어, 임의의 이중결합이 고리 C 내에 존재하면, R12가 없으며 R10 또는 R11 중 적어도 하나가 존재하지 않는다). 특정 구체예에서, R1-R12 중 적어도 하나는 프레닐 그룹, 예를 들어
Figure pat00008
또는
Figure pat00009
이다. 다른 구체예에서, 임의의 이중결합이 고리 C 내에 존재하고, R11과 R12는 존재하지 않고 R10은 프레닐 그룹이다. 또다른 구체예에서, R1-R9 중 적어도 하나는 프레닐 그룹이고, R10-R12는 독립적으로 H 또는 히드록실이다. 특정한 특이적 구체예에서, 프레닐화 플라보노이드는 알바닌(Albanin) G, 쿠와논(Kuwanon) G, 모루신(Morusin), 또는 이들의 조합을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 플라보노이드 화합물은 하기한 화학식 (IV)로 표시된다:
Figure pat00010
상기 화학식 (IV)에서, R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐, 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이거나; R1-R12 중 하나가 R1-R12 중 다른 하나와 함께 고리를 형성하고, 남아있는 R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이나, 단 모든 원자가가 충족된다(예를 들어, 임의의 이중결합이 고리 C 내에 존재하면, R12가 없으며 R10 또는 R11 중 적어도 하나가 존재하지 않는다). 특정 구체예에서, R1-R12 중 적어도 하나는 프레닐 그룹, 예를 들어
Figure pat00011
또는
Figure pat00012
이다. 다른 구체예에서, 임의의 이중결합이 고리 C 내에 존재하고, R11과 R12는 존재하지 않고 R10은 프레닐 그룹이다. 또다른 구체예에서, R1-R9 중 적어도 하나는 프레닐 그룹이고, R10-R12는 독립적으로 H 또는 히드록실이다. 특정한 특이적 구체예에서, 프레닐화 플라보노이드는 알바닌(Albanin) G, 쿠와논(Kuwanon) G, 모루신(Morusin), 모루시놀, 상게논(Sanggenon), 이소잔토휴몰(isoxanthoumol), 글라브리딘, 카타야논 A, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 칼코노이드 화합물은 하기한 화학식 (V)로 표시된다:
Figure pat00013
상기 화학식 (V)에서, R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 또는 아르알킬카르보닐이다. 특정 구체예에서, R1-R10 중 적어도 하나는 프레닐 그룹, 예를 들어
Figure pat00014
또는
Figure pat00015
이다. 다른 구체예에서, 임의의 이중결합이 고리 C 내에 존재하고, R11과 R12는 존재하지 않고 R10은 프레닐 그룹이다. 또다른 구체예에서, R1-R9 중 적어도 하나는 프레닐 그룹이고, R10-R12는 독립적으로 H 또는 히드록실이다. 특정한 특이적 구체예에서, 칼코노이드 화합물은 잔토휴몰(xanthohumol)을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 스틸벤 화합물은 화학식 I의 (E)-스틸벤(트랜스 이성체) 구조 또는 화학식 II의 (Z)-스틸벤(시스 이성체) 구조이다:
Figure pat00016
상기 화학식에서, R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 글리코시드, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알케닐, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 또는 아르알킬카르보닐이다. 특정 구체예에서, R1-R10 중 적어도 하나는 프레닐 그룹, 예를 들어
Figure pat00017
또는
Figure pat00018
이다. 다른 구체예에서, R1, R5, R6 및 R10은 H이다. 다른 추가 구체예에서, R2는 글루코시드이거나 R2 및 R8가 글리코시드이고, R4, R9 및 R10 중 하나 이상이 히드록실이다. 또다른 추가 구체예에서, R1, R5, 및 R6는 H이고 R2-R4 및 R7-R10 중 하나 이상은 독립적으로 히드록실, C1-3 알콕시, 또는 이들의 조합이다. 특정한 특이적 구체예에서, 스틸벤은 옥시레스베라트롤, 레스베라트롤, 피시아탄올, 피노실빈(pinosylvin), 3,4'-디히드록시스틸벤, 콤브레타스타틴 A-1, 프테로스틸벤, 라폰티게닌을 포함하고, 스틸벤 글리코시드는 멀베로시드 (mulberroside) A, 라폰티신(rhaponticin), 피세이드, 아스트린진, 또는 스틸벤 또는 스틸벤 글리코시드의 조합물을 포함한다.
상기한 화학식 (I) 내지 (VI)의 화합물과 화학식 (I) 내지 (VI)의 화합물에 대해 본 명세서에 나열된 특정 치환체의 구체예는 독립적으로 화학식 (I) 내지 (VI)의 화합물의 다른 구체예 또는 치환체와 조합하여 위에서 구체적으로 나열하지 않은 본 발명의 구체예를 형성할 수 있다. 또한, 치환체 목록이 특정한 구체예 또는 청구항의 특정한 R 그룹으로 나열된 경우에 각각의 개별 치환체는 특정한 구체예 또는 청구항으로부터 삭제될 수 있으며 치환체들의 남은 목록은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주한다.
투여 목적으로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 가공되지 않은(raw) 화학물질로 투여되거나, 약학적 또는 기능식품적 조성물로 제제화될 수 있다. 특정한 구체예에서, 본 발명의 약학적 또는 기능식품적 조성물은 화학식 (I) 내지 (VI)을 갖는 화합물 하나 이상과 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 첨가제를 포함한다. 화학식 (I) 내지 (VI)의 화합물은 관심 있는 특정 질환 또는 상태를 치료하는데 유효한 양으로 조성물 내에 개별적으로 또는 조합으로 존재한다. 화학식 (I) 내지 (VI) 중 어느 하나로 기술된 화합물로 관절 건강을 증진, 관리 또는 개선하거나 질환을 치료하는 것은, 예를 들어 본 명세서의 실시예에 기술된 바와 같이 당업자들에 의해 결정될 수 있다.
특정한 구체예에서, 본 발명의 화합물과 (예를 들어, 약학적, 기능식품적)조성물은 관절 건강 증진; 관절 건강 개선; 관절 건강의 유지; 관절 건강의 치료 또는 관리; 관절 건강 지원; 운동 및/또는 유연성의 정상 및 평안한 범위 지원; 운동 및/또는 유연성 범위 개선; 보호성 관절 조직을 분해하는 유해 효소 작용 감소; 관절 건강에 영향을 주는 효소 작용의 변경; 관절 운동 및/또는 관절 기능의 개선; 물리적 이동성 개선; 물리적 이동성의 관리 및/또는 유지; 관절 통증 및/또는 관절 강직성 경감; 관절의 물리적 기능의 개선; 유연성과 편안한 운동의 증진 또는 강화; 건강한 관절 기능과 관절 안락감의 증진; 관절 불쾌감의 완화; 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합으로 야기된 관절 불쾌감의 완화; 연골 무결성을 보호하여 관절 건강 증진; 관절 연골을 유지; 관절 연골을 지원; 연골 열화를 치료, 예방 또는 관리; 연골 열화 최소화; 관절 윤활 활액을 유지하여 관절 건강 또는 편안함을 증진; 관절의 안정성 및 관절 유연성을 지원; 관절 활성화 및 이동성 촉진; 유연한 관절 및 강한 연골을 증진; 증강된 유연성 및/또는 강도를 지원하는 관절의 정상 혈류 유지; 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합 후 관절의 편안함과 폭넓은 운동 범위의 증진; 또는 본 명세서에 기술된 다른 관련 증상에 충분하고, 일반적으로 환자에게 허용가능한 독성을 갖는 양으로 투여할 수 있다.
다른 특정한 구체예에서, 본 발명의 화합물과 (예를 들어 약학적, 기능식품적)조성물은 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군, 펠티 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 미만성 특발성 골격 과다증(DISH), 천장 관절 장애, 다발성 근육통 류마티스, 손목 터널 증후군, 통풍, 활액낭염, 건초염(tendenitis), 활막염, SAPHO(활막염, 여드름, 농포, 골과다증, 골염) 증후군, 슬개골 연골 연화증, 반복성 스트레인 부상, 염좌, 탈구 또는 다른 관련 증상을 치료하는데 충분하고 일반적으로 환자에게 허용가능한 독성을 갖는 양으로 투여할 수 있다.
순수한 형태 또는 적절한 약학 또는 기능식품적 조성물에 포함된 본 명세서의 화합물 또는 이들의 약학적으로 또는 기능성 식품으로서 허용가능한 염의 투여는 유사한 용도의 물질을 투여하기 위한 수용된 임의의 방식을 통하여 실행될 수 있다. 본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 본 명세서의 화합물에 적절한 약학적으로 또는 기능성 식품으로서 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 복합시켜 제조될 수 있고, 그리고 고체, 반-고체, 액체 또는 기체 형태, 예를 들어 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 주사, 흡입제, 겔, 미소구, 그리고 에어로졸의 조제물로 제형화될 수 있다. 이러한 약학 또는 기능식품적 조성물의 투여를 위한 일반적인 경로에는 구강, 국소, 경피, 흡입, 비경구, 설하, 볼, 직장, 질 또는 비강이 포함된다. 본 명세서에서 사용된 비경구란 용어는 피하 주사, 정맥내, 근육내, 흉골내 주사 또는 주입 기술이 포함된다. 본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 환자에게 이 조성물이 투여될 때 이 안에 포함된 활성 성분들이 생물학적으로 사용가능하도록 제제화된다. 특정한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 대상 또는 환자에게 하나 이상의 용량 단위 형태로 투여되는데, 여기에서, 예를 들어 정제는 단일 용량 단위일 수 있고, 에어로졸 형태의 본 발명의 화합물의 용기는 복수 용량 단위를 보유할 수 있다. 용량 형태를 조제하는 실제 방법은 공지되어 있거나, 당업자에게 자명하고, 예를 들어, Remington:The Science 및 Practice of Pharmacy, 20판(Philadelphia College of Pharmacy 및 Science, 2000)을 참고한다. 투여될 조성물은 임의의 경우에 본 발명의 교시에 따라 관심 질환 또는 상태를 치료하기 위하여 치료요법적으로 유효량의 본 명세서의 화합물, 또는 그의 약학적으로 또는 기능성 식품으로서 허용가능한 염을 함유한다.
본 명세서의 약학적 또는 기능식품적 조성물은 고체 또는 액체 형태일 수 있다. 일 측면에서, 담체(들)은 미립자이고, 따라서 조성물은, 예를 들어 정제 또는 분말 형태로 있다. 담체(들)은 액체이며, 조성물은, 예를 들어 경구 시럽, 주사가능한 액체 또는 에어로졸일 수 있고, 에어로졸은 예를 들어 흡입 투여에 유용하다.
경구 투여를 위해서, 약학적 또는 기능식품적 조성물은 고체 또는 액체 형태일 수 있고, 여기에서 반-고체, 반-액체, 현탁액 그리고 겔 형태는 고체 또는 액체로써 본 명세서에서 고려되는 형태 내에 포함된다.
경구 투여를 위한 고체 조성물로서, 약학 또는 기능식품적 조성물은 분말, 과립, 압착된 정제, 알약, 캡슐, 츄잉 검, 웨이퍼, 바(bar), 또는 유사한 형태로 제형화될 수 있다. 이러한 고체 조성물은 하나 이상의 불활성 희석제 또는 식용 담체를 일반적으로 함유할 것이다. 또한, 다음 중 하나 또는 그 이상이 존재할 수 있다:결합제 예를 들어 카르복시메틸셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 시클로덱스트린, 미정질의 셀룰로스, 트라가칸트 검 또는 젤라틴; 부형제 예를 들어 전분, 락토스 또는 덱스트린, 붕해제 예를 들어 알긴산, 알긴산 나트륨, Primogel, 옥수수 전분 등; 윤활제 예를 들어 스테아레이트 마그네슘 또는 Sterotex®; 유동성개선제 예를 들어 콜로이드성 이산화실리콘; 감미 물질 예를 들어 슈크로즈 또는 사카린; 풍미제 예를 들어 페퍼민트, 메틸 살리실산염 또는 오렌지 풍미제; 및 착색제.
약학 또는 기능식품적 조성물이 캡슐, 예를 들어 젤라틴 캡슐 형태로 있는 경우, 상기 유형의 물질에 추가하여, 액체 담체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 또는 오일을 포함할 수 있다.
약학 또는 기능식품적 조성물은 액체 형태, 예를 들어 엘릭시르, 시럽, 겔, 용액, 에멀젼 또는 현탁액의 형태로 존재할 수 있다. 액체는 두 가지 예로써 경구 투여 또는 주사에 의한 전달을 위한 것일 수 있다. 경구 투여를 의도한 경우, 유용한 조성물은 본 화합물에 추가하여, 하나 이상의 감미 물질, 보존제, 염료/착색제 그리고 풍미 보강제를 포함한다. 주사에 의해 투여되도록 의도된 조성물에 있어서, 하나 이상의 계면활성제, 보존제, 습윤제, 분산제, 현탁제, 완충액, 안정화제 및 등장제가 포함될 수 있다.
본 명세서의 약학 또는 기능식품적 액체 조성물은, 조성물이 용액, 현탁액 또는 다른 유사 형태인지와 상관없이, 하나 이상의 다음 어쥬번트들을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예를 들어 주사용 물, 염수 용액, 예를 들어 생리학적 염수, Ringer 용액, 등장 염화나트륨, 용매 또는 현탁 매질로 작용될 수 있는 고정된 오일 예를 들어 합성 모노 또는 디글리세리드, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 용매; 항균 물질 예를 들어 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 또는 중아황산 나트륨염; 킬레이트화제 예를 들어 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충액 예를 들어 아세테이트, 구연산염 또는 인산염 그리고 강장성 조정 물질, 예를 들어 염화나트륨 또는 덱스트로즈. 비경구 조제물은 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 앰플, 1회용 주사기, 다중 분량 바이알에 동봉될 수 있다. 생리적 염수는 일반적으로 유용한 어쥬번트이다. 주사가능한 약학 또는 기능식품적 조성물은 살균한다.
비경구 또는 경구 투여용 액체 형태의 약학 또는 기능식품적 조성물은 적합한 용량을 얻도록 본 명세서의 화합물 양을 포함해야 한다.
본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 국소 투여용이 될 수 있고, 이 경우 운반체는 용액, 에멀젼, 크림, 로션, 연고, 또는 겔 기재를 적절하게 포함할 수 있다. 예를 들어, 기재는 다음 중 하나 또는 그 이상을 포함한다: 바셀린, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 벌 밀랍, 미네랄 오일, 희석제, 예를 들어 물과 알코올, 및 유화제와 안정화제. 증점제는 국소 투여용 약학 또는 기능식품적 조성물에 존재할 수 있다. 경피 투여를 위해, 조성물은 경피 패치 또는 이온이동법 장치를 포함할 수 있다.
본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 직장 투여용, 예를 들어 좌약 형태일 수 있으며, 이것은 직장에서 용해되어 약물을 방출하게 된다. 직장 투여용 조성물은 적합한 비자극 부형제로써 유지성(oleaginous) 기재를 포함할 수 있다. 이러한 기재는 라놀린, 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.
본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 고체 또는 액체 용량 단위의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 활성 요소들 주변에 피복 층을 형성하는 물질들을 포함할 수 있다. 피복층을 형성하는 물질들은 전형적으로 불활성이며, 예를 들어 당, 셀락, 및 다른 장용코팅 물질로부터 선택될 수 있다. 경우에 따라, 활성 성분들은 젤라틴 캡슐안에 포함될 수 있다.
고체 또는 액체 형태의 본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 본 명세서의 화합물에 결합되고, 이로 인하여 이 화합물의 전달을 지원하는 물질을 포함할 수 있다. 이러한 능력에 작용할 수 있는 적합한 물질은 단일클론성 또는 다중클론성 항체, 단백질 또는 리포좀을 포함한다.
고체 또는 액체 형태의 본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 예를 들어, 생체이용가능성을 개선시키기 위하여 입자의 크기를 감소시킬 수 있다. 부형제를 갖거나 갖지 않는 조성물 내 분말, 과립, 입자, 미세구 등의 크기는 크기 및 벌크 밀도를 개선하기 위하여 마크로 (예를 들어, 눈에 보이는 크기 또는 크기가 최소한 100 μm), 마이크로 (예를 들어, 크기가 약 100　μm 내지 약 100 nm 범위), 나노 (예를 들어, 100nm 이하의 크기일 수 있음), 그리고 이들 사이 또는 이의 임의의 조합 범위 내 임의의 크기일 수 있다.
본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 에어로졸로 투여될 수 있는 용량 단위로 구성될 수 있다. 용어 에어로졸은 콜로이드 성질인 것들부터 가압된 패키지로 구성된 시스템까지 다양한 시스템을 나타내기 위해 사용된다. 액화 또는 압축 가스에 의해 또는 활성 요소들을 분배하는 적합한 펌프시스템에 의해 전달될 수 있다. 본 명세서의 화합물의 에어로졸은 활성 요소(들)을 전달하기 위하여 단일 상, 이중상(bi-phasic), 또는 삼중상 시스템으로 전달될 수 있다. 에어로졸의 전달은 필수 용기, 활성제, 밸브, 하위용기, 및 이와 유사한 것들을 포함하고, 이들이 함께 키트를 이룰 수 있다. 당업자는 과도한 실험없이 가장 적절한 에어로졸(들)을 결정할 수 있다.
본 명세서의 약학 또는 기능식품적 조성물은 약학 또는 기능식품 분야에서 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 주사에 의해 투여되도록 의도된 약학 또는 기능식품적 조성물은 용액을 형성하기 위하여 멸균 증류수와 본 명세서의 화합물을 조합하여 제조할 수 있다. 계면활성제를 첨가하여 균질 용액 또는 현탁액의 형성을 용이하게 할 수 있다. 계면활성제는 수성 운반계에서 화합물의 용해 또는 균질 현탁액이 가능하도록 본 명세서의 화합물과 비-공유적으로 상호작용하는 화합물이다.
본 발명의 화합물 또는 그의 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 염은 치료적 유효량으로 투여되며, 이 유효량은 사용된 특정 화합물의 활성; 이 화합물의 대사 안정성 및 작용 기간; 환자의 연령, 체중, 전반적인 건강, 성별 및 식이요법; 투여 방식 및 시간; 배출 속도; 약물 조합; 특정 장애 또는 상태의 중증도; 및 대상이 받고 있는 요법이 포함된 다양한 인자들에 따라 다양하게 변화한다.
본 명세서의 화합물, 또는 그의 약학적으로 또는 기능식품적으로 허용가능한 유도체들은 또한 하나 이상의 다른 치료제의 투여와 동시에, 이들보다 먼저 또는 나중에 투여될 수 있다. 이러한 조합 요법은 본 명세서의 화합물과 하나 이상의 추가 활성 물질이 포함된 단일 약학 또는 기능식품적 용량 제제의 투여뿐만 아니라 고유의 별개의 약학 또는 기능식품적 용량 제제 내의 각 활성 물질과 본 명세서의 화합물의 투여를 포함한다. 예를 들어, 본 명세서의 화합물과 또다른 활성 물질은 함께 단일 경구 용량 조성물로, 예를 들어 정제 또는 캡슐로 환자에게 투여될 수 있거나, 또는 각 물질이 별개의 경구 용량 제제로 투여될 수 있다. 별개의 용량 제형이 사용되는 경우, 본 명세서의 화합물과 하나 이상의 추가 활성 물질은 기본적으로 같은 시간, 즉 동시에 투여될 수 있거나, 또는 별도로 시차를 두고, 즉 연속적으로 투여될 수 있고; 조합 요법은 이들 모든 섭생을 포함하는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 기재한 화학식의 치환체 또는 변수들의 조합은 이러한 조합에 의해 안정적인 화합물을 얻는 경우에만 허용가능하다는 것을 인지해야 한다.
당업자라면 본 명세서에 기술된 공정에서 중간체 화합물의 작용기가 적합한 보호기에 의해 보호될 필요가 있을 수 있다는 것을 또한 인지할 수 있다. 이러한 작용기는 히드록시, 아미노, 머캡토 및 카르복실산을 포함한다. 히드록시의 적합한 보호기는 트리알킬실릴 또는 디아릴알킬실릴 (예를 들어, t-부틸디메틸실릴, t-부틸디페닐실릴 또는 트리메틸실릴), 테트라히드로피라닐, 벤질 등을 포함한다. 아미노, 아미디노 및 구아니디노의 적합한 보호기는 t-부톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 등을 포함한다. 머캡토의 적합한 보호기는 -C(O)-R"(여기에서 R"는 알킬, 아릴 또는 아릴알킬임), p-메톡시벤질, 트리틸 등을 포함한다. 카르복실산의 적합한 보호기는 알킬, 아릴 또는 아릴알킬 에스테르를 포함한다. 보호기는 당업자들에게 공지된 그리고 본 명세서에서 기술된 표준 기술에 따라 추가 또는 제거될 수 있다. 보호기의 용도는 Green, T.W. 및 P.G.M. Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis (1999), 3rd Ed., Wiley에 상세하게 설명되어 있다. 당업자가 인지하는 바와 같이, 보호기는 또한 폴리머 수지, 예를 들어 Wang 수지, Rink 수지 또는 2-클로로트리틸-클로라이드 수지가 될 수도 있다.
당업자들이라면 본 발명 화합물의 이러한 보호된 유도체들이 비록 그 자체로 약리학적 활성을 보유하지 못하지만, 포유동물에게 투여되고, 그 이후 체내에서 대사되어 약제학적으로 활성인 본 명세서의 화합물이 형성될 수 있음을 또한 인지할 것이다. 따라서 이러한 유도체들은 "전구약물(prodrugs)＂이라고 기술할 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 전구약물은 본 명세서의 범위내에 포함된다.
더욱이, 자유 염기 또는 산 형태로 존재하는 본 명세서의 모든 화합물은 당업자에게 공지된 방법을 통하여 적절한 무기 또는 유기 염기 또는 산으로 처리하여 이들의 약학적으로 또는 기능식품적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있다. 본 명세서의 화합물의 염은 표준 기술에 의해 이들의 자유 염기 또는 산으로 전환될 수 있다.
일부 구체예에 있어서, 본 명세서의 화합물은 식물 공급원, 예를 들어 실시예 및 본 명세서의 곳곳에 포함된 식물들로부터 단리될 수 있다. 이 화합물의 단리에 적합한 식물 부위는 잎, 껍질, 나무 몸통, 나무 몸통 껍질, 줄기, 줄기 껍질, 잔가지, 덩이줄기, 뿌리, 근피, 껍질표면(예를 들어, 주피 또는 다중상피, 예를 들어 코르크 조직, 코르크 형성층, 코르크 피층 또는 이들의 조합 포함), 새순, 근경, 종자, 열매, 수술군, 암술군, 꽃받침, 수꽃술, 꽃잎, 꽃받침, 심피 (암술), 꽃, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 일부 관련된 구체예에 있어서, 이 화합물은 식물 원료로부터 단리되고, 언급된 임의의 치환체가 포함되도록 합성에 의해 변형된다. 이와 관련하여, 식물로부터 단리된 화합물의 합성 변형은 당업계에 공지된 임의의 다수의 기술을 사용하여 이룰 수 있으며, 이것은 또한 당업자의 지식 범위 내에 속한다.
본 명세서에서 언급된, 칼콘과 프레닐페닐 모이어티의 딜스-알더 부가물, 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤 또는 이들의 조합의 화합물들은 화학적 합성 또는 식물 추출물, 예를 들어 뽕나무(Morus) 또는 밀리시아(Milicia) 추출물로부터 얻어질 수 있다. 예를 들어, 뽕나무는 뽕나무과(Moraceae)에 속하는 꽃나무속이며, 이것은 많은 나라에서 야생 또는 재배 하에 자라는 (뽕나무라고 알려진)30종 이상을 포함한다. 예시적인 뽕나무 종은 다음을 포함한다:Morus alba L., Morus australis Poir, Morus celtidifolia Kunth, Morus insignis, Morus mesozygia Stapf, Morus microphylla, Morus nigra L., Morus rubra L., Morus atropurpurea, Morus bombycis, Morus cathayana, Morus indica, Morus Ihou, Morus japonica, Morus kagayamae, Morus laevigata, Morus latifolia, Morus liboensis, Morus macroura, Morus mongolica, Morus multicaulis, Morus notabilis, Morus rotundiloba, Morus serrate, Morus heterophyllus, Morus tillaefolia, Morus trilobata, Morus yunnanensis, 및 Morus wittiorum.
특정 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바(Morus alba)로부터 얻어지며, 또는 뽕나무 추출물은 1, 2, 3, 4, 또는 5가지의 상이한 뽕나무 종에서 얻어진 추출물의 혼합물이다. 추출물의 혼합물은 2 이상의 뽕나무 종 또는 표 A에 열거된 다른 공급원에서 유래한 추출물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 칼콘과 프레닐페닐 모이어티의 딜스-알더 부가물, 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤 또는 이들의 조합을 포함하는 조성물은 뽕나무 추출물(예를 들어, 모러스 알바)과 밀리시아 추출물(예를 들어, Milicia excelsa)로 제조될 수 있다. 특정 구체예에서, 프레닐화 플라보노이드 및 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물은 모러스 알바의 (a) 근피, (b) 근피와 잎, (c) 근피와 잔가지, (d) 근피, 잎 및 잔가지, 또는 (e) 근피, 근재(root wood), 잔뿌리, 줄기 수피, 가지, 가지 수피, 지재(branch wood), 및 잔가지에서 유래한다.
일부 특정한 구체예에서, 칼콘과 프레닐페닐 모이어티의 딜스 알더 부가물의 화합물은 표 A에 제공된 하나 이상의 화합물일 수 있다.
표 A 예시적인 딜스-알더 부가물 화합물의 목록
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표 A와 실시예 3, 5, 6 및 68의 화합물은 기재한 식물종 또는 특정 식물 부위(예를 들어, 수피, 몸통, 몸통 껍질, 줄기 껍질, 뿌리, 근피, 껍질표면(예를 들어, 주피 또는 다중상피, 예를 들어 코르크 조직, 코르크 형성층, 코르크 피층 또는 이들의 조합 포함), 잎, 열매, 꽃, 다른 식물 부위 또는 이들의 조합)로부터 추출, 단리 또는 정제하거나, 합성방법이 본 명세서에 참조로 통합된 국제특허출원 PCT/US2013/43188에 상세하게 기술된 바와 같이 합성적으로 또는 반합성적으로 제조할 수 있다. 특정 구체예에서, 표 A와 실시예 3, 5, 6 및 68의 화합물 하나 이상은 기재된 식물종의 추출물 중 주요 활성 성분들이 강화되거나 그의 주요 활성 성분이다(여기서, 강화된 추출물은 전체 식물 또는 특정한 식물 부위, 예를 들어 잎, 껍질, 나무몸통, 나무몸통 껍질, 줄기, 줄기 껍질, 잔가지, 덩이줄기, 뿌리, 근피, 껍질표면(예를 들어, 주피 또는 다중상피, 예를 들어 코르크 조직, 코르크 형성층, 코르크 피층 또는 이들의 조합 포함), 새순, 근경, 종자, 열매, 수술군, 암술군, 꽃받침, 수꽃술, 꽃잎, 꽃받침, 심피 (암술), 꽃, 또는 이의 임의의 조합으로부터 얻어진다).
추가 구체예에서, 뽕나무 추출물 중의 주요 활성 성분은 (표 A와 실시예 3, 5, 6 및 68에 제공된 것과 같은)프레닐화 플라보노이드 및 스틸벤을 포함하며, 여기서 추출물은 근피, 잎, 잔가지 또는 이들의 조합에서 유래한 활성 성분들이 강화된다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물은 프레닐화 플라보노이드와 스틸벤이 강화되며, 여기서 추출물은 약 1% 내지 약 25%의 프레닐화 플라보노이드와 약 1% 내지 약 25%의 스틸벤을 포함하거나, 추출물은 약 2% 내지 약 6%의 프레닐화 플라보노이드와 약 2% 내지 약 6%의 스틸벤을 포함하거나, 추출물은 적어도 3%의 프레닐화 플라보노이드와 적어도 3%의 스틸벤을 포함한다(중량 대 중량).
특정 구체예에서는 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드 또는 칼코노이드 (chalconoid) 및 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물이 제공되며, 여기서 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드는 다음 화학식 (III) 또는 (IV)를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 염, 토토머, 글리코시드, 전구약물 또는 입체이성체이고:
Figure pat00046
또는
Figure pat00047
(상기 화학식 (III) 또는 (IV)에서 R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐, 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이거나; R1-R12 중 하나가 R1-R12 중 다른 하나와 함께 고리를 형성하고, 남아있는 R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이나, 단 모든 원자가가 충족된다);
칼코노이드는 화학식 (V)의 화합물, 또는 그의 약학적 또는 기능식품으로 허용가능한 염, 토토머, 글리코시드, 전구약물 또는 입체이성체이고:
Figure pat00048
(상기 화학식 (V)에서, R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬 카르보닐, 아르알킬카르보닐이나, 단 모든 원자가가 충족된다);
하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이다:
Figure pat00049
(상기 화학식 (I) 또는 (II)에서, R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 글리코시드, 프레닐, 플라보노이드, 칼콘, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알케닐, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐이다).
추가 구체예에서, 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드는 화학식 (III), (IV) 또는 (V)를 갖는 화합물이고, 여기서 임의의 이중결합이 고리 C 내에 존재하고, R11 및 R12는 존재하지 않으며 R10은 프레닐 그룹이다. 또다른 추가 구체예에서, 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드는 화학식 (III), (IV) 또는 (V)를 갖는 화합물이고, 여기서 R1-R9 중 적어도 하나가 프레닐 그룹이고 R10-R12는 독립적으로 H 또는 히드록실이다. 특정한 특이적 구체예에서, 프레닐화 플라보노이드는 알바닌(Albanin) G, 쿠와논(Kuwanon) G, 모루신(Morusin), 모루시놀, 상게논(Sanggenon), 이소잔토휴몰(isoxanthoumol), 글라브리딘, 카타야논 A, 또는 이들의 조합을 포함한다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고, 여기서 R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 글리코시드 또는 C1-4 알콕시이다. 추가 구체예에서, 하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고, 여기서 R1, R5, R6, 및 R10은 H이다. 다른 추가 구체예에서, 하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고, 여기서 R2는 글루코시드이거나 R2와 R8이 글리코시드이고, R4, R9, 및 R10 중 하나 이상이 히드록실이다. 또다른 추가 구체예에서, 하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고, 여기서 R1, R5, 및 R6은 H이고, R2-R4 및 R7-R10 중 하나 이상은 독립적으로 히드록실, C1-3 알콕시 또는 이들의 조합이다. 특정한 특이적 구체예에서, 스틸벤 화합물은 옥시레스베라트롤, 레스베라트롤, 피시아탄올, 피노실빈 (pinosylvin), 3,4'-디히드록시스틸벤, 콤브레타스타틴 A-1, 프테로스틸벤, 라폰티게닌을 포함하고, 스틸벤 글리코시드는 멀베로시드 A, 라폰티신(rhaponticin), 피세이드, 아스트린진, 또는 스틸벤 또는 스틸벤 글리코시드의 조합물을 포함한다.
일부 구체예에서, 플라보노이드는 화학식 (III)의 화합물이고, 다른 구체예에서 플라보노이드는 화학식 (IV)의 화합물이다. 일부 다른 구체예에서, R1-R12 중 적어도 하나, 예컨대 R10은 프레닐이다. 다른 구체예에서는 폴리플라보노이드가 제공되며 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물에서 R1-R12 중 적어도 하나는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물에 대한 결합이다(즉, 화합물은 1 초과의 화학식 (III) 및/또는 (IV)의 플라보노이드를 포함한다).
화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물에 대한 일부 다른 구체예에서, R1-R12는 H, 히드록실, 프레닐 그룹 또는 사이클로알킬이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 사이클로알킬은 치환되거나/되고 하나 이상의 탄소-탄소 이중결합을 포함한다(즉, 불포화된다). 임의의 치환체는 전형적으로 아릴, 예를 들어 페닐, 및 아릴 카르보닐에서 선택된다. 따라서, 일부 추가 구체예에서, 플라보노이드는 다음 화학식 (IIIa) 또는 (IVa) 중 하나를 갖는다:
Figure pat00050
또는
Figure pat00051
상기 화학식 (IIIa) 또는 (IVa)에서, R4a는 각각의 경우에 독립적으로 H, 히드록실 또는 프레닐 그룹이다.
화학식 (IIIa) 또는 (IVa)의 화합물에 대한 특정 구체예에서, R1-R3 및 R5-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실 및 프레닐 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, R1-R3, R4a 또는 R5-R12 중 적어도 하나는 프레닐이고, 예를 들어 일부 구체예에서, R10은 프레닐이다. 화학식 (IIIa) 또는 (IVa)의 화합물에 대한 다른 구체예에서, R1-R3, R4a 또는 R5-R12 중 적어도 2개는 히드록실이다.
보다 특이적인 일부 구체예에서, 플라보노이드는 다음 화학식 중 하나를 갖는다:
Figure pat00052
또는
Figure pat00053
다른 구체예에서, R1-R12 중 하나는 R1-R12 중 다른 하나와 결합하여 고리를 형성하고, 남아있는 R1-R12는 H, 히드록실 또는 프레닐 그룹이다. 이러한 구체예들 중 일부에서, 고리는 헤테로사이클릭 고리, 예를 들어 사이클릭 에테르 고리이다.
따라서, 특정한 구체예에서, 플라보노이드는 다음 화학식 (IIIb) 또는 (IVb) 중 하나를 갖는다:
Figure pat00054
또는
Figure pat00055
화학식 (IIIb) 또는 (IVb)의 화합물에 대한 특정 구체예에서, R1, R2 및 R5-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실 및 프레닐 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, R1, R2 또는 R5-R12 중 적어도 하나는 프레닐이고, 예를 들어 일부 구체예에서, R10은 프레닐이다. 화학식 (IIIb) 또는 (IVb)의 화합물에 대한 다른 구체예에서, R1, R2 또는 R5-R12 중 적어도 2개는 히드록실이다. 특정한 구체예에서, 플라보노이드는 다음 화학식을 갖는다:
Figure pat00056
다양한 다른 구체예에서, 화학식 (V)의 칼코노이드 중 R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹 및 C1-C12 알콕시에서 선택된다.
본 명세서에서 생물학적으로 활성인 플라반은 합성방법에 의해 제조하거나, 하나 이상의 식물, 예컨대 아카시아, 운카리아 또는 둘 다로부터 추출할 수 있다. 특정 구체예에서, 아카시아 식물종은 A. angustifolia, A. ataxacantha, A. berlandieri, A. bonariensis, A. brevispica, A. catechu, A. chundra, A. concinna, A. floribunda, A. greggii, A. interior, A. macilenta, A. mellifera, A. merrallii, A. occidentalis, A. peninsularis, A. pennata, A. pennatula, A. polyacantha, A. polyphylla, A. riparia, A. roemeriana, A. senegal, A. sinuata, A. tamarindifolia, A. tenuifolia, A. victoriae, A. visco, 또는 임의의 이들의 조합(예를 들어 아카시아 추출물과 플라반, 미국 특허 제8,124,134호 참조)으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 운카리아 식물 종은 U. acida, U. africana, U. attenuate, U. bernaysii, U. borneensis, U. callophylla, U. cordata, U. elliptica, Uncaria gambir, U. guianensis, U. hirsute, U. homomalla, U. lanosa, U. longiflora, U. macrophylla, U. orientalis, U. rhynchophylla, U. scandens, U. sessilifructus, U. setiloba, U. sinensis, U. sterrophylla, U. tomentosa, U. wangii, 또는 임의의 이들의 조합 (예를 들어 아카시아 추출물과 플라반, 미국 특허출원 공개 제2007/0264361호)으로부터 선택된다.
추가 구체예에서, 본 명세서의 조성물은 카테킨, 에피카테킨, 또는 이들의 조합을 함유하는 플라반이 강화된 아카시아 카테추(Acacia catechu) 추출물을 포함한다. 다른 추가 구체예에서, 본 명세서의 조성물은 카테킨, 에피카테킨, 또는 이들의 조합을 함유하는 플라반이 강화된 운카리아 감비르 추출물을 포함한다. 또다른 추가 구체예에서, 플라반이 강화된 아카시아 추출물은 아카시아 카테추로부터 유래하거나, 플라반이 강화된 아카시아 추출물은 1, 2, 3, 4, 5 이상의 상이한 아카시아 종, 운카리아 종, 또는 다른 공급원으로부터 유래한 추출물들의 혼합물이다. 다른 구체예에서, 플라반이 강화된 운카리아 추출물은 운카리아 감비르로부터 유래하거나, 플라반이 강화된 운카리아 추출물은 1, 2, 3, 4, 5 이상의 상이한 운카리아 종, 아카시아 종, 다른 공급원(예를 들어, 상이한 식물, 예를 들어 녹차, 합성물), 또는 이들의 조합으로부터 유래한 추출물들의 혼합물이다. 예를 들어, 본 명세서의 조성물은 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다를 함유하는 플라반이 강화된 아카시아 카테추 추출물 및 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다를 함유하는 플라반이 강화된 운카리아 감비르 추출물의 혼합물을 포함한다.
특정 구체예에서, 아카시아 추출물 중의 주요 활성 성분은 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다를 함유하는 플라반을 포함하고, 여기서 추출물은 뿌리, 수피 또는 이들의 조합에서 유래한 활성 성분들이 강화된다. 특정 구체예에서, 운카리아 추출물 중의 주요 활성 성분은 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다를 함유하는 플라반을 포함하고, 여기서 추출물은 잎에서 유래한 활성 성분들이 강화된다.
특정 구체예에서, 본 명세서에서는 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다를 함유하는 하나 이상의 플라반이 강화된 아카시아 또는 운카리아 추출물이 제공되며, 여기서 플라반은 다음 화학식 (VI)의 화합물이다:
Figure pat00057
상기 화학식 (VI)에서, R21, R22, R23, R24 및 R25는 독립적으로 H, -OH, -SH, -OCH3, -SCH3, -OR, -SR, -NH2, -NRH, -NR2, -NR3 +X-, (갈레이트, 아세테이트, 시나모일과 히드록실-시나모일 에스테르, 트리히드록시벤조일 에스테르 및 카페오일(caffeoyl) 에스테르로 구성되는 군에서 독립적으로 선택된)치환체 그룹의 에스테르; 여러 당, 예를 들어 알도펜토스, 메틸 알도펜토스, 알도헥소스, 케토헥소스의 단일 또는 조합의 탄소, 산소, 질소 또는 황 글리코시드; 다이머, 트리머 또는 다른 중합된 플라반에서 선택되며;
여기에서 R은 C1-10 알킬 그룹이고;
X는 히드록실, 염화물, 요오드화물, 설페이트, 포스페이트, 아세테이트, 불화물 또는 카보네이트의 약학적으로 허용가능한 반대 음이온이다.
특정 구체예에서, 본 명세서에서는 커큐미노이드(curcuminoids)를 포함하는 강황 추출물을 제공한다. 다른 구체예에서, 커큐마 롱가(Curcuma longa) 추출물은 커큐미노이드, 예를 들어 커큐민(디페룰로일메탄), 데메톡시-커큐민, 비스데메톡시-커큐민, 캐슈무닌 A, 캐슈무닌 B 또는 이들의 조합이 강화된다. 본 명세서의 생물학적으로 활성인 커큐미노이드 및 그의 유사물은 합성방법에 의해 제조하거나(Anand et al, Biochem. Pharmacol. 76:1590, 2008 참조), 하나 이상의 식물, 예를 들어 강황 식물, 생강 식물, 또는 둘 다로부터 추출할 수 있다.
본 발명에 있어서 강황 속의 예시적인 종은 다음을 포함한다:C. aeruginosa, C. albicoma, C. albiflora, C. alismatifolia, C. amada, C. amarissima, C. americana, C. angustifolia, C. aromatica, C. attenuata, C. aurantiaca, C. australasica, C. bakeriana, C. bicolor, C. bhatii, C. brog, C. burttii, C. caesia, C. candida, C. cannanorensis, C. caulina, C. careyana, C. ceratotheca, C. chuanezhu, C. chuanhuangjiang, C. chuanyujin, C. coccinea, C. cochinchinensis, C. codonantha, C. coerulea, C. colorata, C. comosa, C. cordata, C. cordifolia, C. coriacea, C. decipiens, C. domestica, C. ecalcarata, C. ecomata, C. elata, C. erubescens, C. euchroma, C. exigua, C.ferruginea, C. flavtflora, C. glans, C. glaucophylla, C. gracillima, C. grahamiana, C. grandiflora, C. haritha, C. harmandii, C. heyneana, C. inodora, C. karnatakensis, C. kuchoor, C. kudagensis, C. kuenstleri, C. kurzii, C. kwangsiensis, C. lanceolata, C. larsenii, C. latiflora, C. latifolia, C. leucorhiza, C. leucorrhiza, C. loerzingii, C. longa, C. longiflora, C. longispica, C. lutea, C. malabarica, C. mangga, C. meraukensis, C. montana, C. musacea, C. mutabilis, C. neilgherrensis, C. nilamburensis, C. ochrorhiza, C. officinalis, C. oligantha, C. ornata, C. pallida, C. parviflora, C. parvula, C. peethapushpa, C. petiolata, C. phaeocaulis, C. picta - C. pierreana, C. plicata, C. porphyrotaenia, C. prakasha, C. pseudomontana, C. purpurascens, C. purpurea, C. raktakanta, C. ranadei, C. reclinata, C. rhabdota, C. rhomba, C. roscoeana, C. rotunda, C. rubescens, C. rubricaulis, C. rubrobracteata, C. sattayasaii, C. sessilis, C. sichuanensis, C. singularis, C. soloensis, C. sparganiifolia, C. speciosa, C. spicata, C. stenochila, C. strobilifera, C. sulcata, C. sumatrana, C. sylvatica, C. sylvestris, C. thalakaveriensis, C. thorelii, C. trichosantha, C. vamana, C. vellanikkarensis, C. viridiflora, C. vitellina - C. wenchowensis, C. wenyujin, C. xanthorrhiza, C. yunnanensis, C. zedoaria, C. zedoaroides, C. zerumbet.
특정 구체예에서, 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물은 커큐마 롱가 (Curcuma longa)로부터 유래하거나, 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물은 1, 2, 3, 4, 5 이상의 상이한 강황종 또는 다른 공급원에서 유래한 추출물의 혼합물이다. 예를 들어, 커큐미노이드를 포함하는 조성물은 합성 커큐미노이드와 혼합된 강황 추출물(예를 들어, 커큐마 롱가), 또는 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물(예를 들어, 커큐마 롱가)과 커큐미노이드가 강화된 Zingiber cassumunar 추출물, 커큐미노이드가 강화된 Curcuma phaeocaulis 추출물, 커큐미노이드가 강화된 Curcuma. xanthorrhiza 추출물, 또는 이들의 조합의 혼합물일 수 있다. 다른 구체예에서, 하나 이상의 커큐미노이드(예를 들어, 커큐민, 데메톡시-커큐민, 비스데메톡시-커큐민, 캐슈무닌 A, 캐슈무닌 B 또는 이들의 조합)가 강화된 강황 추출물은 뿌리, 근경 또는 이들의 조합에서 유래할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 본 명세서 또는 미국 특허 제8,124,134호에 기술된 하나 이상의 플라반이 강화되거나 이를 함유하는 아카시아 추출물, 및 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 딜스-알더 부가물, 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나가 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물을 포함한다. 특정 구체예에서, 조성물은 본 명세서 또는 미국 특허 제8,124,134호에 기술된 하나 이상의 플라반이 강화되거나 이를 함유하는 아카시아 추출물, 및 표 A와 실시예 3, 5, 6 및 68에 기재된 하나 이상의 화합물이 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물을 포함한다. 다른 추가 구체예에서, 조성물은 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다로 강화되거나 이를 함유하는 아카시아 추출물, 및 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드, 하나 이상의 스틸벤, 또는 이들의 조합으로 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물을 포함한다. 다른 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물과 플라반이 강화된 아카시아 추출물의 혼합물을 포함한다.
추가 구체예에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물과 하나 이상의 플라반이 강화된 아카시아 추출물의 혼합물을 포함하고, 여기서 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드는 다음 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물, 또는 이들의 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 염, 토토머, 글리코시드, 전구약물 또는 입체이성체이고:
Figure pat00058
또는
Figure pat00059
(상기 화학식 (III) 또는 (IV)에서, R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬 카르보닐, 아르알킬카르보닐, 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이거나; R1-R12 중 하나가 R1-R12 중 다른 하나와 함께 고리를 형성하고, 남아있는 R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이나, 단 모든 원자가가 충족된다);
칼코노이드는 화학식 (V)의 화합물, 또는 그의 약학적 또는 기능식품으로 허용가능한 염, 토토머, 글리코시드, 전구약물 또는 입체이성체이고:
Figure pat00060
(상기 화학식 (V)에서, R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬 카르보닐, 또는 아르알킬카르보닐이나, 단 모든 원자가가 충족된다);
하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고:
Figure pat00061
(상기 화학식 (I) 또는 (II)에서, R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 글리코시드, 프레닐, 플라보노이드, 칼콘, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알케닐, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 또는 아르알킬카르보닐이다);
플라반은 다음 화학식 (VI)의 화합물이다:
Figure pat00062
(상기 화학식 (VI)에서, R21, R22, R23, R24 및 R25는 독립적으로 H, -OH, -SH, -OCH3, -SCH3, -OR, -SR, -NH2, -NRH, -NR2, -NR3 +X-, (갈레이트, 아세테이트, 시나모일과 히드록실-시나모일 에스테르, 트리히드록시벤조일 에스테르 및 카페오일(caffeoyl) 에스테르로 구성되는 군에서 독립적으로 선택된)치환체 그룹의 에스테르; 여러 당, 예를 들어 알도펜토스, 메틸 알도펜토스, 알도헥소스, 케토헥소스의 단일 또는 조합의 탄소, 산소, 질소 또는 황 글리코시드; 다이머, 트리머 또는 다른 중합된 플라반에서 선택되며;
여기에서 R은 C1-10 알킬 그룹이고;
X는 히드록실, 염화물, 요오드화물, 설페이트, 포스페이트, 아세테이트, 불화물 또는 카보네이트의 약학적으로 허용가능한 반대 음이온이다).
상기한 조성물들 중 어느 하나에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바에서 유래하고, 아카시아 추출물은 아카시아 카테추에서 유래한다. 본 조성물들의 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물 중의 주요 활성 성분은 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A 또는 이들의 조합이고, 아카시아 추출물 중의 주요 활성 성분은 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다이다.
추가 구체예에서, 상기한 조성물은 화학식 (III), (IV) 또는 (V)를 갖는 화합물인 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드를 포함하고, 여기서 임의의 이중결합이 고리 C 내에 존재하고, R11 및 R12는 존재하지 않으며 R10은 프레닐 그룹이다. 다른 추가 구체예에서, 상기한 조성물은 화학식 (III), (IV) 또는 (V)를 갖는 화합물인 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드를 포함하고, 여기서 R1-R9 중 적어도 하나가 프레닐 그룹이고 R10-R12는 독립적으로 H 또는 히드록실이다. 특정 구체예에서, 상기한 조성물은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 하나 이상의 스틸벤을 포함하고, 여기서 R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 글리코시드 또는 C1-4 알콕시이다. 다른 특정 구체예에서, 상기한 조성물은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물인 하나 이상의 스틸벤을 포함하고, 여기서 R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 글리코시드 또는 C1-4 알콕시이다. 추가 구체예에서, 상기한 조성물은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물인 하나 이상의 스틸벤을 포함하고, 여기서 R1, R5, R6, 및 R10은 H이다. 다른 추가 구체예에서, 상기한 조성물은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물인 하나 이상의 스틸벤을 포함하고, 여기서 R2는 글루코시드(glucoside)이거나 R2와 R8이 글리코시드이고, R4, R9, 및 R10 중 하나 이상이 히드록실이다. 또다른 추가 구체예에서, 상기한 조성물은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물인 하나 이상의 스틸벤을 포함하고, 여기서 R1, R5, 및 R6은 H이고, R2-R4 및 R7-R10 중 하나 이상은 독립적으로 히드록실, C1-3 알콕시 또는 이들의 조합이다. 특정한 특이적 구체예에서, 스틸벤 화합물은 옥시레스베라트롤, 레스베라트롤, 피시아탄올, 피노실빈(pinosylvin), 3,4'-디히드록시스틸벤, 콤브레타스타틴 A-1, 프테로스틸벤, 라폰티게닌을 포함하고, 스틸벤 글리코시드는 멀베로시드(멀베로시드) A, 라폰티신(rhaponticin), 피세이드, 아스트린진, 또는 스틸벤 또는 스틸벤 글리코시드의 조합물을 포함한다.
아카시아 추출물과 혼합된 뽕나무 추출물의 상기한 조성물은 관절 건강을 증진, 관리 또는 개선하거나, 관절 장애 또는 질환(예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군, 펠티 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 미만성 특발성 골격 과다증(DISH), 천장 관절 장애, 다발성 근육통 류마티스, 손목 터널 증후군, 통풍, 활액낭염, 건초염(tendenitis), 활막염, SAPHO(활막염, 여드름, 농포, 골과다증, 골염) 증후군, 슬개골 연골 연화증, 반복성 스트레인 부상, 염좌, 탈구)을 치료하는데 유용하다.
특정 측면에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물과 플라반이 강화된 아카시아 추출물의 혼합물을 포함하고, 여기서 조성물은 연골 열화를 억제한다. 연골 열화는 GAG 유리 어세이 반응 종료시 배지에 유리된 황산화 GAG(예를 들어, 프로테오글리간으로부터 방출)의 농도로 측정되며, 이것은 관절 연골 열화량을 반영한다. "연골 열화의 억제"는, 예를 들어 Blyscan™ 어세이(Accurate Chemical and Scientific Corp., Westbury, New York)에서 측정되고 본 명세서에서 실시예 27에 기술된 바와 같이 황산화 GAG 유리의 통계적으로 유의한 감소가 있을 때 정해진다.
특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 본 명세서 또는 미국 특허 제8,034,387호에 기술된 하나 이상의 플라반이 강화되거나 이를 함유하는 운카리아(Uncaria) 추출물과 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 딜스-알더 부가물, 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나가 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물을 포함한다. 특정 구체예에서, 조성물은 본 명세서 또는 미국 특허 제8,034,387호에 기술된 하나 이상의 플라반이 강화되거나 이를 함유하는 운카리아 추출물과 표 A와 실시예 3, 5, 6 및 68에 기재된 하나 이상의 화합물이 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물을 포함한다. 다른 추가 구체예에서, 조성물은 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다로 강화되거나 이를 함유하는 아카시아 추출물, 및 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드, 하나 이상의 스틸벤, 또는 이들의 조합으로 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물을 포함한다. 다른 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물과 플라반이 강화된 운카리아 추출물의 혼합물을 포함한다.
추가 구체예에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물과 하나 이상의 플라반이 강화된 운카리아 추출물의 혼합물을 포함하며,
여기서 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드는 다음 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물, 또는 이들의 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 염, 토토머, 글리코시드, 전구약물 또는 입체이성체이고:
Figure pat00063
또는
Figure pat00064
(상기 화학식 (III) 또는 (IV)에서, R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬 카르보닐, 아르알킬카르보닐, 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이거나; R1-R12 중 하나가 R1-R12 중 다른 하나와 함께 고리를 형성하고, 남아있는 R1-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 아르알킬카르보닐 또는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이나, 단 모든 원자가가 충족된다);
칼코노이드는 화학식 (V)의 화합물, 또는 그의 약학적 또는 기능식품으로 허용가능한 염, 토토머, 글리코시드, 전구약물 또는 입체이성체이고:
Figure pat00065
(상기 화학식 (V)에서, R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹, 플라보노이드, 칼콘, 글리코시드, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬 카르보닐, 아르알킬카르보닐이나, 단 모든 원자가가 충족된다);
하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고:
Figure pat00066
(상기 화학식 (I) 또는 (II)에서, R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 글리코시드, 프레닐, 플라보노이드, 칼콘, 할로겐, 술프히드릴, 아미노, 알데히드, C1-12 알킬, C1-12 알케닐, C1-12 알콕시, C1-12 알크티오, C1-12 알키아미노, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 알킬카르보닐, 또는 아르알킬카르보닐이다);
플라반은 다음 화학식 (VI)의 화합물이다:
Figure pat00067
(상기 화학식 (VI)에서, R21, R22, R23, R24 및 R25는 독립적으로 H, -OH, -SH, -OCH3, -SCH3, -OR, -SR, -NH2, -NRH, -NR2, -NR3 +X-, (갈레이트, 아세테이트, 시나모일과 히드록실-시나모일 에스테르, 트리히드록시벤조일 에스테르 및 카페오일(caffeoyl) 에스테르로 구성되는 군에서 독립적으로 선택된)치환체 그룹의 에스테르; 여러 당, 예를 들어 알도펜토스, 메틸 알도펜토스, 알도헥소스, 케토헥소스의 단일 또는 조합의 탄소, 산소, 질소 또는 황 글리코시드; 다이머, 트리머 또는 다른 중합된 플라반에서 선택되며;
여기에서 R은 C1-10 알킬 그룹이고;
X는 히드록실, 염화물, 요오드화물, 설페이트, 포스페이트, 아세테이트, 불화물 또는 카보네이트의 약학적으로 허용가능한 반대 음이온이다).
상기한 조성물들 중 어느 하나에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바에서 유래하고, 운카리아 추출물은 운카리아 감비르에서 유래한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물 중의 주요 활성 성분은 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A 또는 이들의 조합이고, 운카리아 추출물 중의 주요 활성 성분은 카테킨, 에피카테킨, 또는 이들의 조합이다.
추가 구체예에서, 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드는 화학식 (III), (IV) 또는 (V)를 갖는 화합물이고, 여기서 임의의 이중결합이 고리 C 내에 존재하고, R11 및 R12는 존재하지 않으며 R10은 프레닐 그룹이다. 다른 추가 구체예에서, 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드는 화학식 (III), (IV) 또는 (V)를 갖는 화합물이고, 여기서 R1-R9 중 적어도 하나가 프레닐 그룹이고 R10-R12는 독립적으로 H 또는 히드록실이다. 특정한 특이적 구체예에서, 프레닐화 플라보노이드는 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 모루시놀, 상게논, 이소잔토휴몰, 글라브리딘, 카타야논 A 또는 이들의 조합을 포함한다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고, 여기서 R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 글리코시드 또는 C1-4 알콕시이다. 추가 구체예에서, 하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고, 여기서 R1, R5, R6, 및 R10은 H이다. 다른 추가 구체예에서, 하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고, 여기서 R2는 글루코시드이거나 R2와 R8이 글리코시드이고, R4, R9, 및 R10 중 하나 이상이 히드록실이다. 또다른 추가 구체예에서, 하나 이상의 스틸벤은 화학식 (I) 또는 (II)를 갖는 화합물이고, 여기서 R1, R5, 및 R6은 H이고, R2-R4 및 R7-R10 중 하나 이상은 독립적으로 히드록실, C1-3 알콕시 또는 이들의 조합이다. 특정한 특이적 구체예에서, 스틸벤 화합물은 옥시레스베라트롤, 레스베라트롤, 피시아탄올, 피노실빈(pinosylvin), 3,4'-디히드록시스틸벤, 콤브레타스타틴 A-1, 프테로스틸벤, 라폰티게닌을 포함하고, 스틸벤 글리코시드는 멀베로시드 A, 라폰티신, 피세이드, 아스트린진, 또는 스틸벤 또는 스틸벤 글리코시드의 조합물을 포함한다.
일부 구체예에서, 플라보노이드는 화학식 (III)의 화합물이고, 다른 구체예에서, 플라보노이드는 화학식 (IV)의 화합물이다. 일부 구체예에서, R1-R12 중 적어도 하나, 예를 들어 R10은 프레닐이다. 다른 구체예에서, 폴리플라보노이드가 제공되며, 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물에서 R1-R12 중 적어도 하나는 화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물과의 결합이다(즉, 화합물은 1 초과의 화학식 (III) 및/또는 (IV)의 플라보노이드를 포함한다).
화학식 (III) 또는 (IV)의 화합물에 대한 다른 일부 구체예에서, R1-R12는 H, 히드록실, 프레닐 그룹 또는 사이클로알킬이다. 예를 들어, 일부 구체예에서 사이클로알킬은 치환되거나/되고, 하나 이상의 탄소-탄소 이중결합을 포함한다(즉, 불포화). 임의의 치환체는 전형적으로, 아릴, 예를 들어 페닐, 및 아릴 카르보닐로부터 선택된다. 따라서, 일부 추가 구체예에서, 플라보노이드는 다음 화학식 (IIIa) 또는 (IVa) 중 하나를 갖는다:
Figure pat00068
또는
Figure pat00069
상기 화학식 (IIIa) 또는 (IVa)에서, R4a는 각각의 경우에 독립적으로 H, 히드록실 또는 프레닐 그룹이다.
화학식 (IIIa) 또는 (IVa)의 화합물에 대한 특정 구체예에서, R1-R3 및 R5-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실 및 프레닐 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, R1-R3, R4a 또는 R5-R12 중 적어도 하나는 프레닐이고, 예를 들어 일부 구체예에서, R10은 프레닐이다. 화학식 (IIIa) 또는 (IVa)의 화합물에 대한 다른 구체예에서, R1-R3, R4a 또는 R5-R12 중 적어도 2개는 히드록실이다.
보다 특이적인 일부 구체예에서, 플라보노이드는 다음 화학식 중 하나를 갖는다:
Figure pat00070
또는
Figure pat00071
다른 구체예에서, R1-R12 중 하나는 R1-R12 중 다른 하나와 결합하여 고리를 형성하고, 남아있는 R1-R12는 H, 히드록실 또는 프레닐 그룹이다. 특정한 이들 구체예에 있어서, 고리는 헤테로사이클릭 고리, 예를 들어 사이클릭 에테르 고리이다.
따라서, 특정한 구체예에서, 플라보노이드는 다음 화학식 (IIIb) 또는 (IVb) 중 하나를 갖는다:
Figure pat00072
또는
Figure pat00073
화학식 (IIIb) 또는 (IVb)의 화합물에 대한 특정 구체예에서, R1, R2 및 R5-R12는 각각 독립적으로 H, 히드록실 및 프레닐 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, R1, R2 및 R5-R12 중 적어도 하나는 프레닐이고, 예를 들어 일부 구체예에서, R10은 프레닐이다. 화학식 (IIIb) 또는 (IVb)의 화합물에 대한 다른 구체예에서, R1, R2 또는 R5-R12 중 적어도 2개는 히드록실이다. 특정한 구체예에서, 플라보노이드는 다음 화학식을 갖는다:
Figure pat00074
다양한 다른 구체예에서, 화학식 (V)의 칼코노이드 중 R1-R10은 각각 독립적으로 H, 히드록실, 프레닐 그룹 및 C1-C12 알콕시에서 선택된다.
상기한 뽕나무 추출물과 혼합된 운카리아 추출물의 조성물은 관절 건강을 증진, 관리 또는 개선하거나, 관절 장애 또는 질환(예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군, 펠티 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 미만성 특발성 골격 과다증(DISH), 천장 관절 장애, 다발성 근육통 류마티스, 손목 터널 증후군, 통풍, 활액낭염, 건초염(tendenitis), 활막염, SAPHO(활막염, 여드름, 농포, 골과다증, 골염) 증후군, 슬개골 연골 연화증, 반복성 스트레인 부상, 염좌, 탈구)을 치료하는데 유용하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물과 플라반이 강화된 운카리아 추출물의 혼합물을 포함하고, 여기서 이 조성물은 연골 열화를 억제한다.
특정 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물, 플라반이 강화된 운카리아 추출물, 및 플라반이 강화된 아카시아 추출물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물, 카테킨, 에피카테킨 또는 둘 다를 포함하는 플라반이 강화된 운카리아 추출물, 및 카테킨, 에피카테킨 또는 둘 다를 포함하는 플라반이 강화된 아카시아 추출물의 혼합물을 포함한다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바에서 유래하고, 운카리아 추출물은 운카리아 감비르에서 유래하고, 아카시아 추출물은 아카시아 카테추에서 유래한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물 중의 주요 활성 성분은 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A 또는 이들의 조합이고, 운카리아 추출물 중의 주요 활성 성분은 카테킨, 에피카테킨, 또는 이들의 조합이다. 이들 3가지 추출물의 조성물(뽕나무, 운카리아, 아카시아)은 관절 건강을 증진, 관리 또는 개선하거나, 관절 장애 또는 질환(예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군, 펠티 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 미만성 특발성 골격 과다증(DISH), 천장 관절 장애, 다발성 근육통 류마티스, 손목 터널 증후군, 통풍, 활액낭염, 건초염(tendenitis), 활막염, SAPHO(활막염, 여드름, 농포, 골과다증, 골염) 증후군, 슬개골 연골 연화증, 반복성 스트레인 부상, 염좌, 탈구)을 치료하는데 유용하다.
특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 딜스-알더 부가물, 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나가 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물과 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 조성물은 표 A와 실시예 3, 5, 6 및 68에 기재된 하나 이상의 화합물이 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물과 하나 이상의 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물의 혼합물을 포함한다. 다른 추가 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드, 하나 이상의 스틸벤, 또는 이들의 조합으로 강화되거나 이를 함유하는 뽕나무 추출물과 하나 이상의 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물을 포함한다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바에서 유래하고, 강황 추출물은 커큐마 롱가에서 유래한다. 상기한 조성물 중 어느 하나에서, 뽕나무 추출물 중의 주요 활성 성분은 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A 또는 이들의 조합이고, 강황 추출물 중의 주요 활성 성분은 커큐민, 데메톡시-커큐민, 비스데메톡시-커큐민, 또는 이들의 조합이다.
상기한 뽕나무 추출물과 혼합된 강황 추출물의 조성물은 관절 건강을 증진, 관리 또는 개선하거나, 관절 장애 또는 질환(예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군, 펠티 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 미만성 특발성 골격 과다증(DISH), 천장 관절 장애, 다발성 근육통 류마티스, 손목 터널 증후군, 통풍, 활액낭염, 건초염(tendenitis), 활막염, SAPHO(활막염, 여드름, 농포, 골과다증, 골염) 증후군, 슬개골 연골 연화증, 반복성 스트레인 부상, 염좌, 탈구)을 치료하는데 유용하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물과 하나 이상의 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물의 혼합물을 포함하고, 여기서 이 조성물은 연골 열화를 억제한다.
특정 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물, 플라반이 강화된 아카시아 추출물, 및 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물, 카테킨, 에피카테킨 또는 둘 다를 포함하는 플라반이 강화된 아카시아 추출물, 및 하나 이상의 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물의 혼합물을 포함한다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바에서 유래하고, 아카시아 추출물은 아카시아 카테추에서 유래하며, 강황 추출물은 커큐마 롱가에서 유래한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물의 주요 활성 성분은 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A 또는 이들의 조합이고, 강황 추출물 중의 주요 활성 성분은 커큐민(디페룰로일메탄), 데메톡시-커큐민, 비스데메톡시-커큐민, 또는 이들의 조합이다.
특정 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물, 플라반이 강화된 운카리아 추출물, 및 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물, 카테킨, 에피카테킨 또는 둘 다를 포함하는 플라반이 강화된 운카리아 추출물, 및 하나 이상의 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물의 혼합물을 포함한다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바에서 유래하고, 운카리아 추출물은 운카리아 감비르에서 유래하며, 강황 추출물은 커큐마 롱가에서 유래한다.
이들 3가지 추출물의 조성물(뽕나무, 뽕나무, 아카시아, 강황 또는 뽕나무, 운카리아, 강황)은 관절 건강을 증진, 관리 또는 개선하거나, 관절 장애 또는 질환(예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군, 펠티 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 미만성 특발성 골격 과다증(DISH), 천장 관절 장애, 다발성 근육통 류마티스, 손목 터널 증후군, 통풍, 활액낭염, 건초염(tendenitis), 활막염, SAPHO(활막염, 여드름, 농포, 골과다증, 골염) 증후군, 슬개골 연골 연화증, 반복성 스트레인 부상, 염좌, 탈구)을 치료하는데 유용하다.
상기한 조성물에 있어서, 뽕나무 추출물은 프레닐화 플라보노이드, 예를 들어 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 또는 이들의 조합이 강화된다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물은 스틸벤, 예를 들어 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A, 또는 이들의 조합이 강화된다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물은 프레닐화 플라보노이드와 스틸벤이 강화되며, 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A, 또는 이들의 조합을 포함한다. 다른 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물은 프레닐화 플라보노이드와 스틸벤이 강화되며, 여기서 추출물은 약 2% 내지 약 25% 프레닐화 플라보노이드와 약 1% 내지 약 8% 스틸벤을 포함하거나, 추출물은 적어도 3% 프레닐화 플라보노이드와 적어도 3% 스틸벤(중량 대 중량)을 포함한다. 다른 구체예에서, 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤, 또는 둘 다는 뽕나무 추출물로부터 단리하고 정제하여 본 발명의 조성물에 사용된다. 뽕나무 추출물로부터 단리하고 정제하여 본 발명의 조성물에 사용할 수 있는 예시적인 활성 성분은 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A, 또는 이들의 조합을 포함한다. 상기한 조성물에서 뽕나무 추출물은 모러스 알바에서 유래한다.
상기한 구체예들 중 어느 하나에서, 추출물 또는 화합물들의 혼합물을 포함하는 조성물은 특별한 중량 비율로 혼합할 수 있다. 예를 들어, 뽕나무 추출물과 아카시아 추출물은 각각 2:1의 중량비로 블렌드할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 2개 추출물 또는 화합물의 (중량)비율은 약 0.5:5 내지 약 5:0.5의 범위이다. 2 초과의 추출물 또는 화합물(예를 들어, 3, 4, 5)이 사용되는 경우, 유사한 범위가 사용된다. 예시적인 비율은 0.5:1, 0.5:2, 0.5:3, 0.5:4, 0.5:5, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 2:1, 2:2, 2:3, 2:4, 2:5, 3:1, 3:2, 3:3, 3:4, 3:5, 4:1, 4:2, 4:3, 4:4, 4:5, 5:1, 5:2, 5:3, 5:4, 5:5, 1:0.5, 2:0.5, 3:0.5, 4:0.5, 또는 5:0.5이다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물과 아카시아 추출물은 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 1:2, 1:3, 1:4, 또는 1:5의 중량비 각각으로 블렌드된다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물과 아카시아 추출물은 1:2 내지 4:1 중량비의 범위로 각각 블렌드된다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물과 운카리아 추출물은 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 1:2, 1:3, 1:4, 또는 1:5의 중량비로 각각 블렌드된다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물과 운카리아 추출물은 1:4 내지 4:1의 중량비 범위로 각각 블렌드된다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물과 강황 추출물은 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 1:2, 1:3, 1:4, 또는 1:5의 중량비로 각각 블렌드된다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물과 강황 추출물은 1:1 내지 4:1의 중량비 범위로 각각 블렌드된다.
상기한 구체예들 중 어느 하나에서, 추출물 또는 화합물들의 혼합물을 포함하는 조성물은 특정한 퍼센트 농도 또는 비율로 존재할 수 있다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물을 포함하는 조성물은 0.1% 내지 49.9% 또는 약 1% 내지 약 10% 또는 약 0.5% 내지 약 3%의 프레닐화 플라보노이드, 0.1% 내지 49.9% 또는 약 1% 내지 약 10% 또는 약 0.5% 내지 약 3%의 스틸벤, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 아카시아 추출물을 포함하는 조성물은 약 0.01% 내지 약 99.9%의 플라반을 포함하거나, 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 또는 80%의 플라반(예를 들어, 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다)을 포함할 수 있다.
특정한 예에서, 본 발명의 조성물은 제제화되어 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 약학적 또는 기능식품적 제제는 추출 혼합물의 활성 또는 주요 활성 성분 약 0.5 중량 퍼센트(wt%) 내지 약 90wt%를 포함한다. 추가 구체예에서, 약학적 또는 기능식품적 제제는 약 0.5 중량 퍼센트(wt%) 내지 약 90wt%, 약 0.5wt% 내지 약 80wt%, 약 0.5wt% 내지 약 75wt%, 약 0.5wt% 내지 약 70wt%, 약 0.5wt% 내지 약 50wt%, 약 1.0wt% 내지 약 40wt%, 약 1.0wt% 내지 약 20wt%, 약 1.0wt% 내지 약 10wt%, 약 3.0wt% 내지 약 9.0wt%, 약 5.0 wt% 내지 약 10wt%, 약 3.0wt% 내지 약 6wt%의 추출 혼합물 중 주요 활성 성분 등을 포함한다. 상기한 제제들 중 어느 하나에서, 본 발명의 조성물은 정제, 경질 캡슐, 연질젤 캡슐, 분말, 또는 과립으로 제제화된다.
특정 구체예에서, 뽕나무 추출물과 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물은 적어도 6wt% 또는 적어도 5wt% 또는 적어도 3wt% 또는 적어도 2wt% 또는 적어도 1wt%의 활성 뽕나무 성분, 예를 들어 프레닐화 플라보노이드, 스틸벤, 또는 이들의 조합을 함유하게 된다. 예를 들어, 뽕나무 추출물을 포함하는 약학적 또는 기능식품적 조성물은 적어도 3wt% 프레닐화 플라보노이드 또는 약 적어도 0.5wt% 내지 약 적어도 2.5wt% 또는 약 적어도 1wt% 내지 약 적어도 2.5wt% 또는 약 적어도 1.5wt% 내지 약 적어도 2.5wt% (예를 들어, 알바닌 G, 쿠와논 G, 모루신, 또는 이들의 조합) 및 적어도 3% 스틸벤(예를 들어, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A, 또는 둘 다)을 포함하게 된다. 특정 구체예에서, 아카시아 또는 운카리아 추출물과 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물은 적어도 20wt% 활성 아카시아 또는 운카리아 성분, 예를 들어 플라반을 함유하게 된다. 예를 들어, 아카시아 또는 운카리아 추출물을 포함하는 약학적 또는 기능식품적 조성물은 적어도 약 3.5wt% 내지 약 적어도 14wt% 또는 적어도 약 6wt% 내지 약 적어도 16.5wt% (예를 들어, 카테킨, 에피카테킨, 또는 둘 다)가 포함된다. 특정 구체예에서, 강황 추출물과 약학적 또는 기능식품적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물은 적어도 25wt%의 활성 강황 성분, 예를 들어 커큐미노이드를 함유하게 된다. 예를 들어, 강황 추출물을 포함하는 약학적 또는 기능식품적 조성물은 적어도 약 4.5wt% 내지 적어도 약 13wt% 커큐미노이드 (예를 들어, 커큐민, 데메톡시-커큐민, 비스데메톡시-커큐민, 또는 이들의 조합)를 포함하게 된다. 상기한 제제들 중 어느 하나에서, 본 발명의 조성물은 정제, 경질 캡슐, 연질젤 캡슐, 분말, 또는 과립으로 제제화된다.
특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 뽕나무 추출물과 아카시아 추출물을 포함하며, 여기서 조성물은 약 1wt%내지 약 2.5wt%의 프레닐화 플라보노이드, 예를 들어 알바닌 G, 쿠와논 G 및 모루신, 약 1wt%내지 약 2.5wt%의 스틸벤, 예를 들어 옥시레스베라트롤 및 멀베로시드 A, 및 약 3.5wt% 내지 약 14wt%의 플라반, 예를 들어 카테킨 및 에피카테킨을 포함한다. 특정한 다른 구체예에서, 본 발명의 조성물은 뽕나무 추출물과 운카리아 추출물을 포함하며, 여기서 조성물은 약 0.5wt% 내지 약 2.5wt% 프레닐화 플라보노이드, 예를 들어 알바닌 G, 쿠와논 G 및 모루신, 약 0.5wt% 내지 약 2.5wt% 스틸벤, 예를 들어 옥시레스베라트롤 및 멀베로시드 A, 및 약 6wt% 내지 약 16.5wt% 플라반, 예를 들어 카테킨 및 에피카테킨을 포함한다. 특정한 추가 구체예에서, 본 발명의 조성물은 뽕나무 추출물과 강황 추출물을 포함하며, 여기서 조성물은 약 1.5wt% 내지 약 2.5wt% 프레닐화 플라보노이드, 예를 들어 알바닌 G, 쿠와논 G 및 모루신, 약 1.5wt% 내지 약 2.5wt%의 스틸벤, 예를 들어 옥시레스베라트롤 및 멀베로시드 A, 및 약 4.5wt% 내지 약 13wt%의 커큐미노이드, 예를 들어 커큐민을 포함한다.
상기한 조성물들을 사용하여, 관절 건강을 증진하고; 관절 건강을 개선하며; 관절 건강을 유지하고; 관절 건강을 치료 또는 관리하고; 관절 건강을 지원하고; 운동 및/또는 유연성의 정상적이고 편안한 범위를 지원하며; 운동 및/또는 유연성의 범위를 개선하고; 보호성 관절 조직을 분해하는 유해 효소 작용을 감소하고; 관절 건강에 영향을 주는 효소 작용을 변경하고; 관절 운동 및/또는 관절 기능을 개선하고; 물리적 이동성을 개선하고; 물리적 이동성을 관리 및/또는 유지하고; 관절 통증 및/또는 관절 강직성을 경감하고; 관절의 물리적 기능을 개선하고; 유연성과 편안한 운동을 증진하거나 강화하고; 건강한 관절 기능과 관절 안락감을 증진하고; 관절 불쾌감을 완화하고; 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합으로 야기된 관절 불쾌감을 완화하고; 연골 무결성을 보호하여 관절 건강을 증진하고; 관절 연골을 유지하고; 관절 연골을 지원하고; 연골 열화를 치료, 예방 또는 관리하고; 연골 열화를 최소화하고; 관절 윤활 활액을 유지하여 관절 건강 또는 편안함을 증진하고; 관절의 안정성 및 관절 유연성을 지원하고; 관절 활성화 및 이동성을 촉진하고; 유연한 관절 및 강한 연골을 촉진하고; 증강된 유연성 및/또는 강도를 지원하는 관절의 정상 혈류를 유지하고; 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합 후 관절의 편안함과 폭넓은 운동 범위를 증진할 수 있다.
다른 구체예에서, 상기한 조성물은 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군, 펠티 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 미만성 특발성 골격 과다증(DISH), 천장 관절 장애, 다발성 근육통 류마티스, 손목 터널 증후군, 통풍, 활액낭염, 건초염(tendenitis), 활막염, SAPHO(활막염, 여드름, 농포, 골과다증, 골염) 증후군, 슬개골 연골 연화증, 반복성 스트레인 부상, 염좌, 탈구 또는 다른 연관 증상을 치료하기 위해, 일반적으로 환자에게 허용가능한 독성으로 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 조성물은 또한 어쥬번트 또는 담체를 포함할 수 있다. 어쥬번트는 일반적으로 관절 건강을 증진, 유지 또는 개선하는데 있어서 화학식의 기능을 강화시키는 물질들이다. 적합한 어쥬번트는 프로인트(Freund) 어쥬번트; 다른 박테리아 세포벽 성분; 알루미늄 기반 염; 칼슘 기반 염; 실리카; 붕소, 히스티딘, 글루코사민 설페이트, 콘드로이틴 설페이트, 구리 글루코네이트, 폴리뉴클레오티드; 비타민 D, 비타민 K, 톡소이드; 상어 및 소 연골; 혈청 단백질; 바이러스 피막 단백질; 다른 박테리아 유래 조제물; γ-인터페론; 블록 코폴리머 어쥬번트, 예를 들어 헌터스 티터맥스 어쥬번트(Hunter's Titermax adjuvant; Vaxcel™, Inc. Norcross, Ga); 리비 어쥬번트(Ribi adjuvant; Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, Mont.로부터 입수가능); 및 Quil A(Superfos Biosector A/S, Denmark로부터 입수가능)와 같은 사포닌 및 그의 유도체를 포함한다. 담체는 치료 대상에서 치료학적 또는 기능식품적 조성물의 반감기를 증가시키는 화합물이다. 적합한 담체는 중합성 서방형 제형, 생분해성 임플란트, 리포좀, 박테리아, 바이러스, 오일, 에스테르 및 글리콜을 포함한다.
본 발명의 조성물에 유용한 다른 어쥬번트는 글루코사민(예를 들어, 글루코사민 설페이트, 글루코사민 염산염, N-아세틸글루코사민), 글리코사미노글리칸(GAG), 히알루론산(HA), 엘라스틴, 콜라겐, 치킨 콜라겐 II형, 히알루론산과 콜라겐 블렌드, 콘드로이틴 설페이트, 메틸설포닐메탄(MSM), 소 연골, 아미노산(예를 들어, 데스모신(desmosine), 이소데스모신, L-글루타민), Boswellia serrata 추출물, 피페린(예를 들어, Piper nigrum L (후추) 추출물 또는 Piper longum L (long pepper) 추출물), 브로멜라인(파인애플 추출물), 트립신, 루틴, 이뮤 오일, 형질전환 성장인자(TGF)-β, 카로티노이드(예를 들어, 루테인, 카로틴, 칸타잔틴); 비타민(예를 들어, 비타민 D3), ω-3 지방산(예를 들어, 에이코사펜타에노산, EPA; 도코사헥사에노산, DHA), 칼슘 프럭토보레이트, 난각막, 아스타잔틴, Hydrilla verticillata 추출물(잎과 싹), 생강 추출물(뿌리), 자몽 추출물 (종자), 비스테로이드성 항염증약(NSAIDs), 또는 이들의 조합을 포함한다.
예시적인 NSAIDS는 살리실레이트, 예를 들어 아스피린(아세틸살리실산), 디플루시날, 살살레이트; 프로피온산 유도체, 예를 들어 이부프로펜, 덱시부프로펜, 나프록센, 페노프로펜, 케토프로펜, 덱스케토프로펜, 플루르비프로펜, 옥스프로진, 록소프로펜; 아세트산 유도체, 예를 들어 인도메타신, 톨메틴, 술린닥, 에토돌락, 케토롤락, 디클로페낙, 남부메톤; 엔올산 유도체, 예를 들어 피록시캄, 멜록시캄, 테녹시캄, 드록시캄, 로르녹시캄, 이속시캄; 페남산 유도체, 예를 들어 메페남산, 메클로페남산, 플루페남산, 톨페남산; 선택적 COX-2 억제제, 예를 들어 셀레콕시브, 파레콕시브, 루미라콕시브, 에토리콕시브, 피로콕시브, 파라세타몰, H-하파기드; 서폰아닐리드(suphonanilide), 예를 들어 니메술리드; 니코틴산 유도체, 예를 들어 리신 클로닉시네이트; 이중 COX/LX 억제제, 예를 들어 리코펠론을 포함한다. 관련 약물, 파라세타몰 또는 "아세트아미노펜"은 종종 비마약성 진통제와 해열제로서의 그의 용도로 인하여 NSAIDS와 동일한 범주로 간주되지만, 약한 항염증을 나타내기 때문에 NSAIDS로 분류되지는 않는다.
특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 또한 주사가능한 항응고제, 경구 항응고제, 항혈소판제, 항앙기나제(anti-angina agent), 또는 COX-2 선택성 억제제를 포함한다. 예시적인 주사가능한 항응고제는 헤파린, 달테파린, 에녹사파린 및 틴자파린을 포함한다. 경구 항응고제의 예는 와파린, 비타민 K 길항제 및 비타민 K 리덕타제 억제제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 항혈소판제의 예는 아스피린, 클로디포그렐 및 디피리다몰을 포함한다. 예시적인 항앙기나제는 니트레이트, 베타-차단제, 칼슘 차단제, 안지오텐신 전환 효소 억제제 및 칼륨 채널 활성제를 포함한다. 최종적으로, COX-2 선택성 억제제의 예는 로페콕시브, 셀레콕시브, 에토돌락 및 멜록시캄을 포함한다.
특정 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 추출물, 플라반이 강화된 아카시아 추출물, 및 글루코사민 타입 화합물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바 추출물이고, 아카시아 추출물은 아카시아 카테추 추출물이고, 글루코사민 타입 화합물은 글루코사민 설페이트, 글루코사민 염산염, N-아세틸글루코사민, 콘드로이틴 설페이트, 메틸설포닐메탄, 또는 히알루론산이다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물, 아카시아 추출물, 및 NAG는 1:1:1, 2:1:1, 3:1:1, 4:1:1, 5:1:1, 1:2:1, 1:3:1, 1:4:1, 1:5:1, 1:1:2, 1:1:3, 1:1:4, 또는 1:1:5의 중량비 각각으로 블렌드된다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물, 운카리아 추출물, 및 NAG는 1:1:1, 2:1:1, 3:1:1, 4:1:1, 5:1:1, 1:2:1, 1:3:1, 1:4:1, 1:5:1, 1:1:2, 1:1:3, 1:1:4, 또는 1:1:5의 중량비 각각으로 블렌드된다. 특정 구체예에서, 뽕나무 추출물, 강황 추출물, 및 NAG는 1:1:1, 2:1:1, 3:1:1, 4:1:1, 5:1:1, 1:2:1, 1:3:1, 1:4:1, 1:5:1, 1:1:2, 1:1:3, 1:1:4, 또는 1:1:5의 중량비 각각으로 블렌드된다. 특정 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물, 플라반이 강화된 운카리아 추출물, 및 글루코사민 타입 화합물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바 추출물이고, 운카리아 추출물은 운카리아 감비르 추출물이고, 글루코사민 타입 화합물은 글루코사민 설페이트, 글루코사민 염산염, N-아세틸글루코사민, 콘드로이틴 설페이트, 메틸설포닐메탄, 또는 히알루론산이다.
특정 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물, 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물, 및 글루코사민 타입 화합물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바 추출물이고, 강황 추출물은 커큐마 롱가 추출물이고, 글루코사민 타입 화합물은 글루코사민 설페이트, 글루코사민 염산염, N-아세틸글루코사민, 콘드로이틴 설페이트, 메틸설포닐메탄, 또는 히알루론산이다.
상기한 조성물들에 있어서, 조성물은 추가로 로즈마린산, 에리오시트린 (eriocitrin), 또는 둘 다에 의해 강화된 멘타(Mentha) 추출물을 포함한다. 로즈마린산 축적은 가장 뚜렷하게 많은 꿀풀과(Lamiaceae) (쌍떡잎식물) 식물, 특히 Nepetoideae 아과, 예를 들어 통상적으로 요리용 허브로 사용되는 식물, 예를 들어 Ocimum basilicum (바질), Ocimum tenuiflorumcum (홀리 바질), Melissa officinalis (레몬밤), Rosmarinus officinalis (로즈마리), Origanum majorana (마조람), Salvia officinalis (세이지), Thymus vulgaris (타임) 및 Mentha piperita (페퍼민트)에서 발견된다. 로즈마린산은 또한 의약적 특성을 갖는 식물, 예를 들어 통상적 약초(common self-heal)(Prunella vulgaris) 또는 Stachy 속의 종에서 발견된다. 로즈마린산을 함유하는 다른 예시적인 식물은 Heliotropium foertherianum (지치과(Boraginaceae) 식물), Maranta 속의 종(Maranta leuconeura, Maranta depressa, (마란타(Marantaceae)과의 식물), 외떡잎 식물), Thalia 속의 종(Thalia geniculata), 및 Anthoceros agrestis (붕어마름)를 포함한다.
로즈마린산 또는 에리오시트린 또는 둘 다를 함유하는 예시적인 민트 식물은 Mentha aquatica (워터 민트 또는 마쉬 민트); Mentha arvensis (콘 민트, 와일드 민트, 일본 페퍼민트, 필드 민트, 푸디나(Pudina), 바나나 민트); Mentha asiatica (아시아 민트); Mentha australis (오스트레일리아 민트); Mentha canadensis; Mentha cervina (Hart의 페니로열); Mentha citrata (베르가모트 민트, 오렌지 민트); Mentha crispata (링클 잎 민트); Mentha dahurica (다우리안(Dahurian) 타임); Mentha diemenica (슬렌더 민트); Mentha laxiflora (포레스트 민트); Mentha longifolia (Mentha sylvestris, 호오스 민트); Mentha piperita (페퍼민트); Mentha pulegium (페니로열); Mentha requienii (코르시카 민트); Mentha sachalinensis (가든 민트); Mentha satureioides (네티브 페니로열); Mentha spicata (M. viridis, syn M. cordifolia Spearmint, 컬리 민트); Mentha suaveolens (애플 민트, 파인애플 민트 (애플 민트의 다양한 재배종)); Mentha vagans (그레이 민트)를 포함한다.
특정 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물, 플라반이 강화된 아카시아 추출물, 및 로즈마린산, 에리오시트린 또는 둘 다를 강화한 멘타 추출물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바 추출물이고, 아카시아 추출물은 아카시아 카테추 추출물이고, 멘타 추출물은 멘타 피페리타(Mentha piperita) 추출물이다. 특정 구체예에서, 뽕나무, 아카시아 및 멘타 추출물은 1:1:0.5, 2:1:0.5, 3:1:0.5, 4:1:0.5, 5:1:0.5, 1:2:0.5, 1:3:0.5, 1:4:0.5, 1:5:0.5, 1:1:1, 1:1:2, 1:1:3, 1:1:4, 또는 1:1:5의 중량비로 각각 블렌드된다.
특정 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물, 플라반이 강화된 운카리아 추출물, 및 로즈마린산, 에리오시트린 또는 둘 다를 강화한 멘타 추출물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바 추출물이고, 운카리아 추출물은 운카리아 감비르 추출물이고, 멘타 추출물은 멘타 피페리타(Mentha piperita) 추출물이다. 특정 구체예에서, 뽕나무, 운카리아 및 멘타 추출물은 1:1:0.5, 2:1:0.5, 3:1:0.5, 4:1:0.5, 5:1:0.5, 1:2:0.5, 1:3:0.5, 1:4:0.5, 1:5:0.5, 1:1:1, 1:1:2, 1:1:3, 1:1:4, 또는 1:1:5의 중량비로 각각 블렌드된다.
특정 구체예에서, 조성물은 프레닐화 플라보노이드가 강화된 뽕나무 추출물, 커큐미노이드가 강화된 강황 추출물, 및 로즈마린산, 에리오시트린 또는 둘 다를 강화한 멘타 추출물의 혼합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 뽕나무 추출물은 모러스 알바 추출물이고, 강황 추출물은 커큐마 롱가 추출물이고, 멘타 추출물은 멘타 피페리타(Mentha piperita) 추출물이다. 특정 구체예에서, 뽕나무, 강황 및 멘타 추출물은 1:1:0.5, 2:1:0.5, 3:1:0.5, 4:1:0.5, 5:1:0.5, 1:2:0.5, 1:3:0.5, 1:4:0.5, 1:5:0.5, 1:1:1, 1:1:2, 1:1:3, 1:1:4, 또는 1:1:5의 중량비로 각각 블렌드된다.
상기한 조성물은 관절 건강을 증진하고; 관절 건강을 개선하며; 관절 건강을 유지하고; 관절 건강을 치료 또는 관리하고; 관절 건강을 지원하고; 운동 및/또는 유연성의 정상적이고 편안한 범위를 지원하며; 운동 및/또는 유연성의 범위를 개선하고; 보호성 관절 조직을 분해하는 유해 효소 작용을 감소하고; 관절 건강에 영향을 주는 효소 작용을 변경하고; 관절 운동 및/또는 관절 기능을 개선하고; 물리적 이동성을 개선하고; 물리적 이동성을 관리 및/또는 유지하고; 관절 통증 및/또는 관절 강직성을 경감하고; 관절의 물리적 기능을 개선하고; 유연성과 편안한 운동을 증진하거나 강화하고; 건강한 관절 기능과 관절 안락감을 증진하고; 관절 불쾌감을 완화하고; 산화성 스트레스, 유해 자유 라디칼, 노화, 마모, 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합으로 야기된 관절 불쾌감을 완화하고; 산화성 스트레스, 유해 자유 라디칼, 노화, 마모, 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합으로 야기된 관절 손상을 관리 또는 감소하고; 연골 무결성을 보호하여 관절 건강을 증진하고; 관절 연골을 유지하고; 관절 연골을 지원하고; 연골 열화를 치료, 예방 또는 관리하고; 연골 열화를 최소화하고; 관절 윤활 활액을 유지하여 관절 건강 또는 편안함을 증진하고; 관절의 안정성 및 관절 유연성을 지원하고; 관절 활성화 및 이동성을 촉진하고; 유연한 관절 및 강한 연골을 촉진하고; 증강된 유연성 및/또는 강도를 지원하는 관절의 정상 혈류를 유지하고; 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합 후 관절의 편안함과 폭넓은 운동 범위를 증진하거나 이들의 조합에 유용하다.
추가 구체예에서, 상기한 조성물은 관절 장애 또는 질환, 예를 들어 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군, 펠티 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 미만성 특발성 골격 과다증(DISH), 천장 관절 장애, 다발성 근육통 류마티스, 손목 터널 증후군, 통풍, 활액낭염, 건초염(tendenitis), 활막염, SAPHO(활막염, 여드름, 농포, 골과다증, 골염) 증후군, 슬개골 연골 연화증, 반복성 스트레인 부상, 염좌, 탈구 또는 이들의 조합을 치료, 예방 또는 개선하는데 유용하다.
실시예
실시예 1
모러스 알바로부터 유기 및 수성 추출물의 제조
모러스 알바 L. 근피에서 얻어진 식물 재료를 2 밀리미터 (mm) 이하의 입자 크기로 분쇄하였다. 이후, 건조한 식물 재료 분쇄물(60　그램(g))을 엘렌마이어 플라스크로 옮기고, 메탄올:디클로로메탄 (1:1 부피비) (600　밀리리터 (mL))을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고 여과하여 바이오매스(biomass)를 메탄올:디클로로메탄 (1:1 부피비)(600　mL)으로 다시 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 진공 하에 증발시켜서 3.55g의 유기 추출물(OE)을 얻었다. 유기 추출 후, 바이오매스를 공기 건조하고, 초순수 물 (600　mL)로 한번 추출하였다. 수성 용액을 여과하고, 동결건조하여 4.44g의 수성 추출물 (AE)을 얻었다.
동일한 방법이나 플라스크 내에서의 환류를 사용하여 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 유기용매를 메탄올 또는 에탄올로 대체하면 각각 메탄올 추출물(ME) 또는 에탄올 추출물(EE)을 얻는다. 식물의 다른 종과 부위 및 해양 시료도 동일한 방법을 사용하여 추출하였다.
실시예 2
활성 식물 추출물의 대량 정제(HTP)
실시예　1에서 얻어진 모러스 알바 근피 추출물의 유기 추출물(400　mg)을 사전 충전된 (2cm ID x 8.2cm, 10g 실리카 겔) 컬럼에 적재하였다. 이후 컬럼을 Hitachi® High Throughput Purification (HTP) 시스템에서 분당 5　mL의 유속으로 30분간 (A) EtOAc:헥산의 50:50 부피비 및 (B) 100%　A 내지 100%　B의 메탄올의 그래디언트 이동상으로 용출하였다. 광대역 파장 UV 검출기를 사용하여 분리를 모니터하고 Gilson 분획 수집기를 사용하여 웰당 1.9mL로 96-딥-웰 플레이트에서 분획을 수집하였다. 시료 플레이트를 저진공 하에 건조하고, 원심분리한 다음, 시료를 웰당 1.5　mL 디메틸 술폭시드(DMSO)로 용해하였다. 일부(100μL)를 취하고, 작용 어세이를 위해 (UV 추적에 근거하여)합하였다. 유의한 생물학적 활성을 갖는 컬럼 분획들은 추가 테스트를 위하여 유지되었다.
실시예 3
모러스 알바 추출물로부터 프레닐화 플라보노이드의 단리, 정제 및 확인
실시예　1에서 기술된 바와 같이 얻어진 모러스 알바 근피의 유기 추출물 (11g)을 나누어 2개의 사전충전된 플래쉬 컬럼(120g 실리카, 입자 크기　32-60μm, 4cm x 19cm) 상에 개별 적재한 다음, 분당 20mL의 유속으로 헥산, EtOAc 및 메탄올 (이동상)로 용출하였다. 그래디언트는 5분 동안 95% 헥산/EtOAC로 시작하고, 이어서 25분 동안 5%에서 100%까지 EtOAC의 양을 증가한 다음, 추가 5분 동안 100% EtOAc로 유지하였고, 그 다음 15분 동안 0%에서 50% MeOH/EtOAC로 MeOH를 증가시키고, 최종적으로 용출 용액을 100% MeOH로 교환하고, 다시 16분 동안 컬럼을 용출하였다. 총 운용 시간은 66분이었으며, 88개의 분획이 각 컬럼에서 생성되었다. 실리카겔 박층 크로마토그래피(TLC)에 의해 분획물을 분석하였고, 함께 모아서 8개 컬럼 용출액 풀(pool)을 생성하였다.
얻어진 최고 활성 풀(300 mg의 물질 함유)을 제조용 C18 컬럼 (30 cm x 250 cm)에서 물(A)과 메탄올 (B)의 그래디언트 이동상으로 60분 동안 분당 20mL의 유속으로 분획화하여 22개의 분획 풀을 생성하였다. 질량분광법(MS) 분석 결과, 모아진 물질 분획은 이하에 상세히 기술된 3종의 관련 화합물을 함유하였다.
화합물 1(28.2 mg)은 모라세닌(Moracenin) B 또는 알바닌 F로도 알려진, 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 딜스-알더 부가물, 이른 바 쿠와논 G로 확인되었다; 고해상 전자분무 이온화 질량분광학(HRESIMS)(m/z) [M+H]- = 693.2329; UV λmax (MeOH):265, 320 nm; 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6, 100℃) δ ppm 1.44 (s, 3 H) 1.52 (br. s., 3 H) 1.58 (s, 3 H) 1.92 (m, 2 H) 3.08 (d, 3 H) 3.56 (m, 2 H) 4.29 (d, J=10.02 Hz, 1 H) 4.48 (m, 1 H) 5.07 (m, 1 H) 5.14 (br. s, 1 H) 5.93 (s, 2 H) 5.96 (dd, J=8.35, 2.23 Hz, 1 H) 6.02 (br s, 1 H) 6.11 (d, J=2.23 Hz, 1 H) 6.41 (dd, J=8.35, 2.23 Hz, 1 H) 6.51 (s, 1 H) 6.60 (m, 1 H) 7.13 (d, J=8.35 Hz, 1 H) 7.28 (br s, 1 H); 13C NMR (126 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 16.35 (1 C) 21.78 (1 C) 23.35 (1 C) 24.53 (1 C) 37.72 (1 C) 97.14 (1 C) 101.57 (1 C) 102.22 (1 C) 102.33 (1 C) 104.28 (1 C) 106.55 (2 C) 107.00 (1 C) 107.21 (1 C) 112.37 (1 C) 114.47 (1 C) 120.27 (1 C) 121.62 (2 C) 123.27 (1 C) 131.05 (1 C) 131.35 (2 C) 132.62 (1 C) 132.99 (1 C) 155.16 (1 C) 155.56 (1 C) 156.38 (1 C) 159.66 (1 C) 160.39 (2 C) 161.13 (1 C) 161.88 (1 C) 164.51 (1 C) 164.63 (1 C) 182.46 (1 C) 208.68 (1 C).
Figure pat00075
쿠와논 G
화합물 2 (10.5 mg)는 쿠와논 H 또는 모라세닌 A로도 알려진, 칼콘과 프레닐페닐 잔기의 또다른 딜스-알더 부가물인 알바닌 G로 확인되었다:HRESIMS (m/z) [M-H]- = 759; UV λmax (MeOH):265, 320 nm; 13C NMR(126 MHz, METHANOL-d4) ppm 16.35 (1 C) 16.47 (1 C) 20.96 (1 C) 21.79 (1 C) 23.32 (1 C) 24.51 (1 C) 24.53 (1 C) 33.74 (1 C) 35.61 (1 C) 36.81 (1 C) 37.77 (1 C) 97.19 (1 C) 102.27 (1 C) 102.33 (1 C) 104.24 (1 C) 106.07 (1 C) 106.53 (2 C) 107.34 (1 C) 112.37 (1 C) 113.94 (1 C) 114.35 (1 C) 120.17 (1 C) 121.60 (2 C) 122.31 (2 C) 123.25 (1 C) 130.21 (2C) 131.33 (2 C) 132.96 (1 C) 156.37 (3 C) 157.07 (1 C) 159.59 (1 C) 160.37 (1 C) 161.23 (1 C) 161.77 (1 C) 161.96 (1 C) 162.21 (1 C) 182.45 (1 C) 208.82 (1 C).
Figure pat00076
알바닌 G
화합물 3 (12.9 mg)은 모루시놀로 확인되었다:ESIMS (m/z) [M-H]- = 437; UV λmax (MeOH):269, 317 nm; 1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 1.08 (s, 6 H) 1.43 (s, 6 H) 1.60 (m, 2 H) 2.43 (m, 2 H) 5.59 (d, J=9.97 Hz, 1 H) 6.16 (s, 1 H) 6.43 (m, 2 H) 6.59 (d, J=10.26 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=9.09 Hz, 1 H); 13C NMR (126 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 21.52 (t, 1 C) 28.54 (q, 2 C) 28.88 (q, 2 C) 43.19 (t,l C) 71.56 (s, 1 C) 79.28 (s, 1 C) 100.28 (d, 1 C) 102.35 (s, 1 C) 104.06 (d, 1 C) 106.05 (s, 1 C) 108.26 (d, 1 C) 113.14 (s, 1 C) 115.89 (d, 1 C) 122.99 (s, 1 C) 128.36 (d, 1 C) 132.37 (d, 1 C) 153.97 (s, 1 C) 157.96 (s, 1 C) 160.62 (s, 1 C) 162.13 (s, 1 C) 162.88 (s, 1 C) 163.63 (s, 1 C) 184.09 (s, 1 C)
Figure pat00077
모루시놀
또다른 최고 활성 풀(538 mg의 물질 함유)을 제조용 C18 컬럼 (30 cm x 250 cm)에서 물(A)과 메탄올 (B)의 그래디언트 이동상으로 60분 동안 분당 20mL의 유속으로 분획화하여 16개의 분획 풀을 생성하였다. 멀베로크로멘으로 알려진, 프레닐페닐화 화합물 4, 이른 바 모루신(80mg)을 단리하였다. 구조 및 분광학 데이터는 다음과 같다:
Figure pat00078
Figure pat00079
모루신
실시예 4
모러스 알바로부터 유기 70% ETOH 추출물의 제조
2 kg의 건조된 모러스 알바 뿌리와 근피를 잘라서 분쇄한 다음 약 10배 부피(20 L)의 70% 에탄올 수용액(v/v)으로 추출하였으며; 추출은 80℃에서 5시간 동안 수행하였다. 에탄올 용액을 여과하여 상청액을 얻은 다음, 진공 하에 40℃에서 증발기로 농축하였다. 추출과 농축 과정을 2회 반복하였다. 추출 용액을 함께 모아서 원래 부피의 1/25가 될 때까지 농축하였다. 농축 용액을 진공 동결건조로 건조하여 283.5 g의 모러스 알바 70% EtOH 추출물 분말 1-01을 얻었다. 추출 수율은 약 14.7% (w/w)였다.
실시예 5
모러스 알바 ETOH 추출물에서 멀베로시드 A의 단리
실시예 4에서 얻어진 모러스 알바 70% 에탄올 추출물 1-01 20g을 실리카겔 컬럼에 적재하고 컬럼을 헥산:EtOAc (5:1 내지 1:5)의 선형 그래디언트를 함유하는 용매 혼합물의 단계적 적용으로 용출하여 8개의 서브분획을 얻었다. 8개의 서브분획 중에서, 8번째 분획을 제조용 HPLC 시스템(JAI, LC-9104, Japan)에 주입하여 RP-HPLC 컬럼 (YMC-ODS) 5 μm, C18(250 x 30 mm)을 거쳐서 UV 파장 330 nm로 16.2분 동안 15% 아세토니트릴의 H2O 용액으로 용출하여 화합물 5 (멀베로시드 A)를 얻었다(191 mg).
화합물 5 (멀베로시드 A, C26H32014):APCI-MS (m/z) [M+H]+ 569.58;
Figure pat00080
Figure pat00081
멀베로시드 A
실시예 6
밀리시아 엑셀사( Milicia excelsa )(아프리카 티크)로부터 정제된 화합물
밀리시아 엑셀사의 줄기 수피에서 실시예 1에 기술된 방법으로 얻어진 유기 추출물(8 g)을 나누어 2개의 사전충전된 플래쉬 컬럼(120g 실리카, 입자 크기　32-60μm, 4cm x 19cm) 상에 개별 적재한 다음, 컬럼을 실시예 4에 기술된 그래디언트로 용출하였다. 프레닐화 플라보노이드-화합물 6-를 활성 분획들 중 하나에서 단리하였으며, 상게논(Sanggenon) C/D/O로 확인되었다.
화합물 6의 구조 및 분광학 데이터는 다음과 같다:ESIMS
Figure pat00082
Figure pat00083
상게논
실시예 7
다양한 밀리시아 엑셀사 추출물의 제조
밀리시아 EtOAc 추출물 분획 7은 다음과 같이 제조하였다:5 kg의 건조된 밀리시아 엑셀사 줄기 수피를 잘라서 분쇄하고, 약 4배 부피(20 L)의 에탄올(식품용, Korea Ethanol Supplies Company, Korea) 수용액(v/v)으로 추출하였다. 추출 용매를 80℃에서 4시간 동안 처리하고, 얻어진 추출물을 여과하여 상청액을 얻은 다음, 40℃에서 증발기로 농축하였다. 상기한 추출 과정을 2회 반복하였다. 얻어진 추출 용액을 함께 모아서 원래 부피의 1/25가 될 때까지 농축하였다. 농축 용액을 진공 동결건조로 건조하여 200 g의 미정제 밀리시아 엑셀사 EtOH 추출물 분말을 얻었다.
상기한 방법으로 제조된 196g의 미정제 밀리시아 엑셀사 EtOH 추출물 분말을 2L의 증류수에 현탁하고, 현탁액을 2L의 n-헥산과 격렬하게 혼합하여 n-헥산 가용성 분획과 수용성 분획을 얻었다. n-헥산 가용성 분획을 모으고 잔류 용액에 대해 2차 n-헥산 추출을 수행하였다. 상기한 방법을 4회 반복하고, 얻어진 n-헥산 가용성 분획을 합해서 진공 하에 증발하여 밀리시아 엑셀사 줄기 수피의 n-헥산 가용성 추출물 7-1 74.8 g을 얻었다.
상기 방법으로 제조된 밀리시아 엑셀사 줄기 수피의 수용성 분획을 같은 부피의 에틸 아세테이트와 격렬하게 혼합하여 에틸 아세테이트 가용성 분획과 수용성 분획을 얻었다. 에틸 아세테이트 가용성 분획을 모으고 남은 용액에 대해 다시 에틸 아세테이트 추출을 수행하였다. 이 과정을 4회 반복하였다. 에틸 아세테이트 가용성 분획과 수용성 분획을 각각 진공 하에 증발시켜서 밀리시아 엑셀사 줄기 수피 의 에틸 아세테이트 가용성 추출 분획 7을 63.9 g, 수용성 추출물 7-2를 35.34 g 얻었다.
실시예 8
뽕나무과 식물 추출물의 제조 및 HPLC 정량
뽕나무 시료를 대한민국의 다양한 지역에서 상이한 식물 부위로부터 수집하였다. 건조한 식물 재료를 분쇄하여 분말을 제조하였다. 20 g의 뽕나무 식물 분말을 충분한 규조토와 혼합하여 100mL 추출 셀을 충전하고, ASE 350 추출기를 사용하여 70% 에탄올/물로 추출하였다(추출 조건:가열 = 5분, 정지(Static) = 5분, 플러쉬 = 80 부피, 퍼지(Purge)= 900 초, 주기 = 3, 압력 = 1500 psi, 온도 = 60℃). 추출 후, 용액을 50℃에서 증발기로 농축하여 고형 추출물을 얻었다.
뽕나무 추출물 중의 표적 성분 멀베로시드 A, 옥시레스베라트롤, 쿠와논 G, 알바닌 G 및 모루신을 Hitachi HPLC 시스템, 325 nm에서 Luna C18 역상 컬럼 (Phenomenex, 10 μm, 250mmx4.6mm)으로 정량하였다. 컬럼을 0.1% 포름산의 수용액 (이동상 A)과 아세토니트릴(이동상 B)의 이중 그래디언트로 분당 1 ml의 유속 및 30℃의 컬럼 온도로 용출하였다.
표 1 HPLC 분석 방법의 그래디언트
Figure pat00084
실시예 4에 따라 제조된 레퍼런스 표준 물질 72-1(뽕나무 70% EtOH 추출물 1-01)을 정량 표준으로 사용하였다. 모든 추출물 시료를 MeOH ml 당 약 5 mg의 농도로 제조하였다. 약 15분 동안 초음파처리한 후, 시료 용액을 플라스크에서 실온으로 냉각하고 0.45 μm 나일론 시린지 필터에 의해 여과하고 20 μl의 시료를 컬럼에 주입하였다.
뽕나무과 식물을 대한민국과 중국, 두 나라의 다양한 지역에서 수집하였다. 다른 지역, 다른 수령의 식물에서 수집된 상이한 종, 상이한 식물 부위 중 멀베로시드 A, 옥시레스베라트롤, 쿠와논 G, 알바닌 G 및 모루신 함량의 HPLC 정량을 표 2와 3에 기재하였다. 활성물질은 뽕나무 근피, 근재, 잔뿌리, 줄기 수피, 가지, 가지 수피, 가지재 및 잔가지에서 정량되었다. 뽕나무 잎에서 소량의 스틸벤 타입 화합물-멀베로시드 A와 옥시레스베라트롤-이 검출되었다.
표 2 대한민국에서 수집된 뽕나무 중의 활성 화합물 정량
Figure pat00085
Figure pat00086
표 3 중국에서 수집된 뽕나무 중의 활성 화합물 정량
Figure pat00087
실시예 9
뽕나무 근피 추출물의 HPLC 정량
중국의 다양한 지역에서 뽕나무 근피의 에탄올 추출물을 얻었다. 뽕나무 추출물 중의 4종의 활성 요소 - 멀베로시드 A, 쿠와논 G, 알바닌 G 및 모루신 - 함량을 실시예 8에 기술된 HPLC 방법에 따라 정량하였다. 표 4에서 보이는 바와 같이, 2개의 뽕나무 추출물(ME-10과 ME-12)은 4종의 활성 화합물 중 어떤 것도 함유하지 않았다. 3개의 뽕나무 추출물((ME-6, ME-7 및 ME-8)은 멀베로시드 A를 함유하지 않았고 프레닐화 플라보노이드는 극소량(존재하는 3가지 화합물 전체가 4% 미만)을 함유하였다. 또다른 4개의 뽕나무 추출물((ME-3, ME-4, ME-5 및 ME-14)은 소량의 프레닐화 플라보노이드(존재하는 3가지 화합물 총 2% 미만)와 다양한 양의 멀베로시드 A를 함유하였다. 이 실시예에 따라, 일반 뽕나무 근피 추출물 중에 스틸벤과 프레닐화 플라보노이드가 농축 및 표준화되지 않은 것이 분명히 입증되었다.
표 4 중국에서 수집된 뽕나무 추출물 중의 활성 화합물 정량
Figure pat00088
Figure pat00089
실시예 10
모러스 알바 70% EtOH 추출물 10의 제조
건조된 모러스 알바 뿌리와 근피(93.3 kg)를 잘라서 분쇄한 다음 약 7배 부피(700 L)의 70% 에탄올 수용액(v/v)으로 추출하였으며; 추출은 100℃에서 4시간 동안 수행하였다. 에탄올 용액을 여과하여 상청액을 얻은 다음, 진공 하에 40℃에서 증발기로 농축하였다. 추출과 농축 과정을 2회 반복하였다. 추출 용액을 함께 모아서 부피가 원래 부피의 1/25가 될 때까지 농축하였다. 농축 용액을 진공 동결건조로 건조하여 18.3 kg의 모러스 알바 70% EtOH 추출물 분말 10을 얻었다. 추출 수율은 약 19.6% (w/w)였다. 주요 활성 성분 함량을 실시예 14의 표 4에 기재하였다.
실시예 11
모러스 알바 EtOH 분획 11의 제조
실시예 10에 따라 제조된 모러스 알바 EtOH 추출물을 약 2배 부피의 에탄올(EP 등급, Ducksan Chemical, Korea)로 4kg의 건조 모러스 알바 근피로부터 추출하여 570 g의 모러스 알바 EtOH 추출물 분말을 얻었다. EtOH 추출물을 헥산과 물로 분배한 다음, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출은 추출 용액을 15,000 rpm으로 5분 동안 균질기(IKA T25D, Germany)로 균질화하여 수행하였다. 잘 균질화된 추출 용액을 원심분리기(Beckman J-20XP, Germany)에서 3,000 rpm (rotor# JLA 8.1000)으로 5분 동안 분리하였다. 상응하는 n-헥산 가용성 및 수용성 추출물을 570g의 미정제 모러스 알바 EtOH 분말로부터 제조하였다. 그 결과, 80.5 g의 n-헥산 가용성 및 156 g의 수용성 모러스 알바 추출물을 제조하였다. EtOAc로 용매 분배한 후, 상층(EtOAc 가용성층)을 여과지(Hyundai Micro, No. 20, Korea)로 여과하여 EtOAc 용액을 모았다. 원심분리로 모아진 잔류물(침전된 물질)을 2배 부피(300 L)의 에틸 아세테이트(EP 등급, Ducksan Chemical, Korea)로 다시 추출하였다. 다시 추출된 용액을 150 rpm에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 여과(Hyundai Micro, No. 20, Korea)하여 추가의 EtOAc 추출 용액을 얻었다. 상기한 방법을 2회 반복하였다. 3개의 얻어진 EtOAc 추출 용액을 모아서 증발기에 의해 40℃에서 농축하여 최종 EtOAc 추출물 11을 얻었다. 이 방법에서 얻어진 모러스 알바 EtOAc 분획 11의 최종 양은 327g이었다. 주요 활성 성분 함량을 표 4에 기재하였다(실시예 14).
실시예 12
모러스 알바 70% EtOH 침전 추출물 12의 제조
모러스 알바 EtOH 침전 추출물 12는 다음과 같이 제조하였다: 634 킬로그램(KG)의 건조된 모러스 알바 뿌리와 근피를 잘라서 분쇄하고, 약 7배 부피(3600 리터(L))의 70% 에탄올 수용액(v/v)으로 추출하였으며; 추출 용매를 80℃에서 4시간 동안 처리하고; 잔류물을 여과하여 상청액을 얻은 다음, 40℃에서 증발기로 농축하였다. 상기한 과정을 3회 반복하였다. 추출 용액을 부피가 원래 출발부피의 1/30이 될 때까지 농축하였다. 이후, 농축 용액을 모아서 농축 용액의 부피를 원래 추출 용액의 1/90 부피까지 줄이기 위해 다시 증발시켰다. 농축된 용액을 실온에서 24시간(hr) 동안 방치하여 2개 층으로 분리하였다(상청액과 침전물 층). 침전물을 여과하고 진공 동결건조로 건조하여 모러스 알바 70% EtOH 침전물 분말을 얻었다. 634 kg의 식물 원료물질로부터 총 24 kg의 생성물을 얻었다. 추출 수율은 약 3.79% (w/w)였다. 주요 활성 성분 함량을 표 4에 기재하였다(실시예 14).
실시예 13
모러스 알바 70% EtOH 추출물(13-1), 침전물(13-2) 및 상청액 (13-3) 추출물의 제조
모러스 알바 EtOH 침전 추출물을 다음과 같이 제조하였다: 465 kg의 건조된 모러스 알바 뿌리와 근피를 잘라서 분쇄하고, 약 10배 부피(4500 L)의 70% 에탄올 수용액(v/v)으로 추출하였으며; 추출 용매를 80℃에서 4시간 동안 처리하고; 잔류물을 여과하여 상청액을 얻은 다음, 40℃에서 증발기로 농축하였다. 상기한 과정을 3회 반복하였다. 추출 용액을 부피가 원래 부피의 1/30이 될 때까지 농축하였다. 이후, 농축 용액을 모아서 농축 용액의 부피를 원래 추출 용액의 1/90 부피까지 줄이기 위해 다시 증발시켰다. 농축된 용액을 실온에서 24 hr 동안 방치하여 상청액과 침전물 층으로 분리하였다. 침전물을 진공으로 건조하여 12 kg의 모러스 알바 70% EtOH 침전물 분말 13-2를 얻었다. 뽕나무 근피로부터의 침전물 수율은 약 2.6% (w/w)였다. 상청액 층을 진공 건조하여 24 kg의 모러스 알바 70% EtOH 상청액 분말 13-3을 얻었다. 상청액 13-3의 추출 수율은 약 5.2%였다.
모러스 알바 70% EtOH 조합 추출물(13-1)은 2 kg의 침전물(13-2)과 4 kg의 상청액 (13-3)을 블렌딩하여 얻었다. 두 모러스 알바 EtOH 추출물 13-1, 침전물 13-2 및 상청액 13-3 중 주요 활성 성분 함량을 표 4에 기재하였다(실시예 14).
실시예 14
다양한 모러스 알바 추출물의 활성 성분 함량의 HPLC 정량
멀베로시드 A, 옥시레스베라트롤, 쿠와논 G, 알바닌 G 및 모루신 함량의 상세한 HPLC 정량방법을 실시예 8에 기술하였다. 표 4에 실시예 10, 11, 12 및 13에서 제조된 다양한 뽕나무 근피 추출물 중의 활성 성분 함량을 기재하였다.
표 5 뽕나무 추출물 중의 활성 화합물의 정량
Figure pat00090
실시예 15
커큐마 롱가로부터 유기 추출물의 제조
총 20그람의 커큐마 롱가의 건조 근경 분말을 2개의 100 ml 스테인레스 스틸 튜브에 넣고 유기용매 혼합물(염화메틸렌/메탄올 1:1 비율)을 사용하여 ASE 300 자동 추출기로 80℃, 1,500 psi의 압력 하에 2회 추출하였다. 추출 용액을 여과하여 모으고 회전식 증발기로 증발하여 미정제 유기 추출물(OE)을 얻었다((6.04 g, 30.2% 수율).
실시예 16
커큐마 롱가 유기 추출물의 대량 정제(HTP)
실시예　15에 기술된 커큐마 롱가 유기 추출물(OE, 400 mg)을 사전 충전된 플래쉬 컬럼(2cm ID x 8.2cm, 25 ml, 10g 실리카 겔)에 적재하고, Hitachi High Throughput Purification (HTP) 시스템에서 분당 5　mL의 유속으로 30분간 (A) 50:50 EtOAc:헥산 및 (B) 100%　A 내지 100%　B 메탄올의 고유한 그래디언트 이동상으로 용출하였다. 총 88개 분획을 Gilson 분획 수집기를 사용하여 웰당 1.9　mL로 96-딥-웰 플레이트에 수집하였다. 시료 플레이트를 저진공 하에 건조하고, 원심분리한 다음, 건조 시료를 웰당 1.5　mL 디메틸 술폭시드 (DMSO)에 재현탁하였다. 각 웰에서 일부(100μL)를 취하고, BKB1 억제 어세이를 위해 (UV 추적에 근거하여)합하였다.
실시예 17
커큐마 추출물과 그 분획의 브래디키닌 B1 방사성리간드 결합 어세이
브래디키닌(Bradykinin) B1(BKBl) 방사성리간드 결합 어세이를 수행하여 BKB1 수용체(BKB1R)에 대한 BKB1 결합에서 커큐마 롱가 OE와 추출 분획의 억제 활성을 측정하였다. 변성 HEPES 완충액(PH=7.4) 중의 IL-1β로 자극된 인간 IMR-90 폐 섬유아세포의 막을 시험 시료와 0.9 nM [3H](Des-Arg10)-칼리딘 존재하에 60분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 막을 여과하고 변성 DPBS 완충액 (pH=7.4)으로 5회 세척하였다. 시료를 섬광 카운트하여 BKB1 수용체를 함유하는 막에 특이적으로 결합된 양을 측정하였다.
커큐마 롱가 OE를 166 μg/mL의 농도로 시험하여 IC50값을 400 μg/mL 내지 5 ng/mL 범위의 농도로 연속 희석하는 방법으로 측정하여 용량반응곡선을 얻었다. 커큐마 롱가 OE 추출물에 의한 BKB1R에 대한 BKB1 결합 저해를 나타내는 데이터를 표 6에 나타내었다.
표 6 커큐마 롱가 OE에 의한 BKB1 수용체 결합의 저해
Figure pat00091
커큐마 롱가 OE는 강력한 BKB1 결합 저해를 나타냈으며, IC50은 약 9.6 μg/mL였다. 또한, 커큐마 롱가 OE의 HTP 분획을 BKB1 결합 어세이에서 실험하였다(도 1 참조). HTP 분획의 활성 프로파일에서는 분획 11-22, 34, 및 38이 가장 강력한 BKB1 수용체 결합 저해를 갖는 것으로 나타났으며, 대조군의 평균 백분율(POC)은 10% 미만이었다.
커큐미노이드는 HTP 분획 11-22의 활성과 연관된 주요 활성 화합물인 것을 확인하였다.
실시예 18
강황 화합물의 BKB1 및 BKB2R 결합 활성
실시예 17에 기술된 BKB1 결합 어세이를 사용하여 커큐마 롱가 추출물(화합물 11)에서 단리된 커큐민 화합물뿐만 아니라 상업적으로 입수가능한 커큐민(Sigma-Aldrich로부터 구입(C1386))을 시험하였다. 커큐민을 200 μM 내지 5 nM 범위의 최종 농도로 시험하였다. 결합 곡선을 비선형 회귀 피트(GraphPad Prizm 소프트웨어 사용)로 플로팅하였다. Ki값을 Cheng-Prusoff 알고리즘을 사용하여 계산하였다. 또한, 커큐민에 의한 BKB2 수용체 결합 활성의 저해를 BKB1 수용체에 대해 실시예 17에서 기술된 것과 유사한 방법으로 약간 변형하여 실험하였다. 브래디키닌 방사성리간드 결합 어세이 (BKB2)를 표준 어세이에 의해 다음 조건하에 수행하였다:
1. 어세이 완충액의 조성: 24 mM TES, pH 6.8, 1 mM 1.10-페난트리올린, 0.3% BSA.
2. BKb2R의 공급원: 재조합 인간 BKb2R을 발현하는 CHO-K1 세포
3. 리간드: [3H]-브래디키닌:0.2 nM.
4. 인큐베이션 시간: 90 min RT.
5. 판독: TopCount.
시판 커큐민(Sigma, C1386)을 200 μM 내지 5 nM 범위의 농도에서 시험하였다. 시판 커큐민의 결합 곡선은 경쟁적 억제제의 질량작용의 법칙에 부합하지 않는다. Ki를 Cheng-Prusoff 식을 사용하여 매뉴얼로 계산하였다. 커큐민에 의한 BKB1과 BKB2 저해활성을 표 7에 나타내었다.
표 7 커큐민에 의한 BKB1과 BKB2 저해
Figure pat00092
이 데이터는 커큐민이 BKB2 결합과 비교하여 BKB1 결합 활성에 대해 더 강력한 저해를 보이기 때문에 커큐민이 선택적 BKB1 길항제임을 나타낸다.
실시예 19
커큐마 롱가 에탄올 추출물 19의 제조
강황 EtOH 추출물을 다음과 같이 제조하였다: 20 kg의 건조 커큐마 롱가 근경(뿌리)을 분쇄하여 약 4배 부피(80 L)의 100% 에탄올로 추출하고 추출 용매를 80-85℃에서 30시간 동안 유지하였다. 잔류물을 여과하여 상청액을 얻고, 이것을 증발기로 85-90℃에서 농축하였다. 이후, 추출 용액을 부피가 원래 부피의 1/25가 될 때까지 농축하였다. 농축된 용액을 분무건조방법(온도 I/P 200℃ 및 O/P 95℃)으로 건조하여 약 1 kg의 붉은 오렌지색을 갖는 25% 강황 에탄올 추출물 분말 19를 얻었다. 추출 수율은 약 5% (w/w)였다.
실시예 20
강황 근경 추출물에서 커큐민의 정량
하기한 분석방법으로 커큐마 롱가 근경 추출물 중 커큐민의 양을 측정하였다. Agilent HPLC/PDA 시스템은 커큐민과 미량 성분의 검출 및 정량을 위해 C18 역상 컬럼(Phenomenex, USA, Luna 5 um, 250 mm x 4.6 mm)과 함께 사용되었다. 정제수(이동상 A)와 아세토니트릴(이동상 B) 그래디언트 중의 이성분 0.1% 아세트산을 표 7에 기술된 커큐민 성분의 용출에 사용하였다. 유속을 분당 1 ml로 설정하고, 컬럼 온도가 35℃인 Luna C18 컬럼을 통과시켰다. UV 검출기는 407 nm에서 흡광도를 판독하도록 세팅하였다.
표 7 커큐민 HPLC 그래디언트 용출 스케쥴
Figure pat00093
정량 표준물 커큐민은 Sigma-Aldrich Co.로부터 구입하였다. 가장 높은 커큐민 농도는 0.05mg/ml였고 메탄올을 사용하여 L1(0.0031mg/ml)에서 L5로 희석하였다. 커큐마 롱가 근경 추출물 시료의 농도를 메스 플라스크 중에서 메탄올 1 ml 당 약 1 mg으로 조절하고 용해될 때까지(약 20분) 초음파처리한 다음 실온으로 냉각하고, 잘 혼합하여 0.45 μm 나일론 시린지 필터로 여과하였다. 10 μl의 시료를 HPLC로 정량하고, 커큐마 롱가 근경 추출물의 결과를 표 8에 기재하였다.
표 8 커큐마 롱가 근경 추출물의 HPLC 정량
Figure pat00094
실시예 21
감비르(운카리아 감비르( Uncaria gambir )) 추출물 21의 제조
운카리아 감비르 수 추출물을 다음과 같이 제조하였다: 100 kg의 건조한 운카리아 감비르 잎을 잘라서 분쇄하여 15배 부피(1500 L)의 70% 에탄올로 추출하고, 추출 용매를 80℃에서 7시간 동안 처리하였다. 얻어진 잔류물을 여과하여 상청액을 얻었다. 상기한 방법을 2회 반복하였다. 추출 상청액을 함께 모아서 증발기를 사용하여 46℃에서 진공 조건하에 부피가 원래 부피의 1/30이 될 때까지 농축하였다. 농축된 용액을 추가로 증발시켜서 농축 용액의 부피를 원래 용액의 1/90 부피까지 줄였다. 이후, 얻어진 농축 용액을 실온에서 24시간 방치하여 농축 용액 중에서 침전을 형성하였다. 침전물을 여과하고 진공하에 건조하여 침전물 분말을 운카리아 감비르 추출물 분말 21로 얻었다. 100 kg의 건조한 운카리아 감비르 잎으로부터의 수득물은 약 6kg의 추출물 분말이었으며, 따라서 추출 수율은 약 6% (w/w)이다.
실시예 22
운카리아 감비르 추출물의 HPLC 정량
이하의 분석방법을 사용하여 운카리아 감비르 잎 추출물에서 카테킨의 양을 측정하였다. C18 역상 컬럼 (Phenomenex, USA, Luna 5 um, 250 mm x 4.6 mm)을 사용하는 Agilent HPLC/PDA 시스템으로 감비르 추출물에서 카테킨 화합물을 검출 및 정량하였다. 2성분 컬럼 그래디언트가 컬럼으로부터 물질을 용출하는데 사용되었다. 이동상 A: 0.1% 인산의 정제수 용액, 및 이동상 B:아세토니트릴 그래디언트가 용출에 사용되었다(표 9). 유속을 분당 1.0 ml로 설정하고 컬럼 온도를 35℃로 하여 Luna C18 컬럼을 통과시켰다. UV 검출기는 275 nm에서 흡광도를 판독하도록 세팅하였다.
표 9 HPLC 분석방법의 그래디언트 표
Figure pat00095
순수 카테킨 레퍼런스 시료는 Sigma-Aldrich Co.로부터 구입하였다. 레퍼런스 시료를 MeOH:0.1% H3PO4 (1:1)에 용해하였다. 가장 높은 카테킨 농도 범위는 0.5 mg/ml였고 0.1% H3PO4 중의 50% 메탄올을 사용하여 L1(0.003 mg/ml)에서 L5로 희석하였다. 감비르 추출물 시료의 농도를 메스 플라스크 중에서 0.1% H3PO4 중의 50% 메탄올 1ml 당 2 mg으로 조절하고 용해될 때까지(약 10분) 초음파처리한 다음, 실온으로 냉각하고, 잘 혼합하여 0.45 μm 나일론 시린지 필터로 여과하였다. 20 μl의 시료를 HPLC에 주입하여 HPLC 분석을 수행하였다.
표 10 감비르 추출물의 HPLC 정량
Figure pat00096
실시예 23
아카시아 카테추 65% 카테킨 추출물의 제조
아카시아 카테추(Acacia catechu) 65% 카테킨 추출물을 다음과 같이 제조하였다: 500kg의 아카시아 카테추(KATHA)를 750L의 50% 에탄올에 투입하여 실온에서 90분 동안 교반하였다. 500L의 에틸 아세테이트를 균질화된 KATHA 슬러리에 첨가한 후, 이것을 30분 동안 서서히 교반하였다. 슬러리를 2개의 층으로 분리하기 위해 1hr 동안 방치하였다. 에틸 아세테이트 층을 새로운 용기에 옮기고, 분배를 물 층을 사용하여 반복하였다. 제1 및 제2 에틸 아세테이트 층을 모아서 60-62℃에서 TDS 30%까지 농축한 다음, 분무건조하였다(temp. I/P 190℃ - O/P 90℃). 500kg의 원료 물질로부터 총 72.5 kg의 아카시아 카테추 추출물을 얻었으며, 카테킨과 에피카테킨의 총 함량은 65% 이상이었다. 추출 수율은 14.5% (w/w)였다.
실시예 24
멘타 피레리타 추출물에서 활성 화합물의 분획화, 정제 및 동정
실시예 26에서 제조된 멘타 피페리타(Mentha piperita) 메탄올 추출물(ME) (10.6 g)을 헥산(100 mL)과 물(150 mL) 사이에 3회 분배하였다. 모아진 헥산 용액을 진공 건조하여 2.19 g의 헥산 추출물(HE)을 얻었다. 수성층을 에틸 아세테이트(100 mL)로 3회 추출하였다. 모아진 에틸 아세테이트 층을 진공 하에 건조하여 1.26 g의 에틸 아세테이트 추출물(EA)을 얻었다. 이후 수성층을 부탄올(100 mL)로 3회 추가 추출하여 1.91g의 부탄올 추출물(BU)을 얻었다. 남은 수성층은 동결건조하여 3.91 g의 수성 추출물(WA)을 얻었다. ME, HE, EA, BU 및 WA 각각을 마우스에서 아세트산으로 유발된 복부 협착 모델로 통증억제 활성을 시험하였다. EA와 BU 층에 있는 활성 화합물을 추가로 시험하였다.
생체내 활성에 따른 단리에서 3개의 활성 화합물을 발견하였다. EA 분획 (653.5 mg)을 RP-HPLC 컬럼 (Phenomex) 10 μm Luna C18 (250 x 30 mm)에 2 주입에 의해 HPLC 시스템 L6200A에서 H20 (A) 중의 40% MeOH (B) 내지 60% B까지 8분 내로 출발하여 60% 내지 100% MeOH (27분)로 수행하고, 최종적으로 100% B로 추가 15분 동안 20 mL/min의 유속과 230 nm UV 파장으로 세척하여 화합물 1(로즈마린산)을 얻었다(136.3 mg).
화합물 7 (로즈마린산):ESIMS (m/z) [M-H]- 359; UV λmax (MeOH):
Figure pat00097
로즈마린산
Figure pat00098
BU 분획(1.1 g)의 분리를 RP-HPLC로 동일한 컬럼에서 상기한 바와 같이 2 주입으로 5분 동안 H20 (A) 중의 30% MeOH (B)로 출발하여, 30% B 내지 50% B(15 분), 50%에서 100% B(20분)로 수행하고, 100% B로 15분 동안 20 mL/min의 유속과 320 nm UV 파장으로 세척하여 화합물 2 (에리오시트린)(192.0 mg)과 화합물 3(87.4 mg)을 얻었다.
화합물 8 (에리오시트린):ESIMS (m/z) [M-H]- 595; UV λmax (MeOH):228.4,
Figure pat00099
Figure pat00100
로즈마린산과 에리오시트린의 생체 내 활성을 추가로 래트의 카라기난 유도성 뒷발 부종 및 통증 감도 모델에서 확인하였다. 로즈마린산과 에리오시트린은 각각 200 mg/kg과 100 mg/kg 농도의 용량에서 상당한 항염증 및 진통 활성을 나타내었다.
Figure pat00101
화합물 9를 스콜리모시드(Skolimoside)로 명명하였다: ESIMS (m/z) [M-H]- 593; UV λmax (MeOH):228.4, 258.1, 347.0 nm; 1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 1.19 (d, J=6.11 Hz, 3 H) 3.41 (br. s., 1 H) 3.50 (br. s., 2 H) 3.60 - 3.71 (m, 3 H) 3.74 (dd, J=9.54, 3.18 Hz, 1 H) 3.87 - 3.96 (m, 1 H) 4.06 (d, J=9.78 Hz, 1 H) 4.72 (s, 1 H) 5.04 (br. s., 1 H) 6.52 (s, 1 H) 6.60 (s, 1 H) 6.75 (br. s., 1 H) 6.93 (d, J=8.07 Hz, 1 H) 7.41 (br. s., 2 H); 13C NMR (126 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 16.48 (q, 1 C) 66.07 (t, 1 C) 68.39 (d, 1 C) 69.91 (d, 1 C) 70.67 (d, 1 C) 71.01 (d, 1 C) 72.64 (d, 1 C) 73.33 (d, 1 C) 75.74 (d, 1 C) 76.40 (d, 1 C) 94.73 (d, 1 C) 99.72 (d, 1 C) 100.19 (d, 1 C) 100.68 (d, 1 C) 102.84 (d, 1 C) 105.69 (s, 1 C) 112.92 (d, 1 C) 115.48 (d, 1 C) 119.20 (d, 1 C) 122.11 (s, 1 C) 145.58 (s, 1 C) 149.76 (s, 1 C) 157.49 (s, 1 C) 161.52 (s, 1 C) 163.31 (s, 1 C) 165.54 (s, 1 C) 182.60 (s, 1 C)
Figure pat00102
실시예 25
멘타 피페리타로부터 에탄올 추출물의 제조
페퍼민트(멘타 피페리타(Mentha piperita)) 90% EtOH 추출물 (lot# RM604-13002)를 다음과 같이 제조하였다: 73.4 kg의 건조한 멘타 피페리타를 잘라서 분쇄하고 15배 부피(1100 L)의 90% 에탄올(v/v)로 85℃에서 3시간 동안 추출하였다. 얻어진 잔류물을 여과하여 상청액을 얻고 진공 증발기로 40℃에서 농축하였다. 얻어진 잔류물을 13배 부피(950 L)의 90% 에탄올(v/v)로 40℃에서 1시간 동안 2회 추출하고 여과하여 제2 상청액을 얻었으며, 이것을 진공 증발기로 40℃에서 농축하였다. 얻어진 농축 케이크를 진공 하에 건조하여 19.3 kg의 페퍼민트 90% EtOH 추출물 분말을 얻어 추출물 25로 지정하였다. 추출 수율은 25.3%(w/w)였다.
실시예 26
멘타 피페리타로부터 메탄올 및 다른 유기 추출물의 제조
건조한 분쇄된 페퍼민트 잎 분말(멘타 피페리타)(21.7 g)을 2개의 100 ml 스테인레스 스틸 튜브에 넣고, 유기용매 혼합물(메탄올)로 ASE 300 자동 추출기를 사용하여 80℃, 1,500 psi의 압력하에 2회 추출하였다. 추출 용액을 자동 여과하여 수집하고 회전식 증발기로 증발시켜서 미정제 유기 추출물(ME 26-1)을 얻었다(4.48 g, 20.64% 수율).
경우에 따라, 252.3 g의 멘타 피페리타의 건조한 분쇄된 잎 분말을 메탄올로 3회 매회 1시간 동안 환류하여 추출하였다. 유기 용액을 모아서 진공하에 증발시켜 40.88 g의 메탄올 추출물(ME 26-2)을 16.20%의 수율로 얻었다.
유사한 결과를 동일한 방법을 사용하여 얻었으나, 유기용매를 메탄올 또는 에탄올로 대체하여 메탄올 추출물(ME) 또는 에탄올 추출물(EE), 에탄올:H20 (7:3) 추출물, 에탄올:H20 (1:1) 추출물, 에탄올:H20 (3:7) 추출물 및 물 추출물 각각을 얻었다.
실시예 27
생체 외 글리코사미노글리칸(GAG) 유리 어세이
래빗(체중 2.5 kg) 비절(hock joint)의 관절 연골을 각 동물을 희생한 직후 제거하여 관절 연골 외식편(explant)을 Sandy 등(Biochem. Biophy Acta 543:36, 1978)이 기술한 방법에 따라 취하였다. 요약하면, 관절 표면을 멸균 조건 하에 외과적으로 노출한 후, 관절 당 대략 200-220 mg의 관절 표면을 절개하여 완전 배지(가열 불활성화 5% FBS; 페니실린 100 U/ml; 스트렙토마이신 100 ug/ml가 보충된 DMEM)에 담갔다. 이후, 이것을 완전 배지로 수 회 세정하고 1 내지 2일 동안 37℃, 가습 5% C02/95% 에어 인큐베이터에서 안정화를 위해 인큐베이션하였다. 완전 배지를 기본 배지(DMEM, 가열 불활성화 1% FBS, 10 mM HEPES, 및 페니실린 100 U/ml 스트렙토마이신 100 μg/ml 보충)로 교환하였다. 대략 30 mg의 연골 조각(조각 당 2x3x0.35 mm)을 24-웰 플레이트에 넣고 주어진 농도의 시험 시약으로 처리하였다. 1h 동안 전처리한 후, 5 ng/ml의 rhIL-1α를 배양 배지에 첨가하여 추가로 37℃, 가습 5% C02/95% 에어 인큐베이터에서 추가로 인큐베이션하였다. 배양 배지를 24 h 후에 수집하여 어세이까지 -20℃에서 보관하였다.
반응 종료시 배지 중의 (예를 들어 프로테오글리칸에서 유리된)황산화 GAG의 양은 관절 연골 열화의 양을 반영하며, 이것은 상업적으로 입수가능한 1,9-디메티 (dimethy)-메틸렌 블루 방법을 사용하여 제조업체(Blyscan™ assay, Accurate Chemical 및 Scientific Corp., Westbury, New York)의 지시에 따라 측정하였다.
실시예 28
뽕나무로부터 정제된 화합물의 생체외 GAG 유리에 대한 효과
래빗 연골 외식편을 실시예 3에 따라 단리된 정제 뽕나무 화합물의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 배양하여 프로테오글리칸 (PG) 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 정제된 화합물은 농도 의존적 방식으로 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 저해하였다. 특히, 멀베로시드 A, 옥시레스베라트롤 및 모루신은 디클로페낙 처리군과 비교하여 강력한 저해 효과를 나타냈다.
표 12 생체외 GAG 유리에 대한 뽕나무 화합물의 효과
Figure pat00103
실시예 29
뽕나무 추출물에 의한 생체외 GAG 유리의 감소
래빗 연골 외식편을 뽕나무 추출물의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 뽕나무 추출물은 농도 의존적 방식으로 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 저해하였다. 모든 시료들이 IL-1α 처리군과 비교하여 강력한 효과를 나타냈다.
표 13 생체외 GAG 유리에 대한 뽕나무 추출물의 효과
Figure pat00104
실시예 30
강황 및 운카리아 추출물의 생체외 GAG 유리에 대한 효과
래빗 연골 외식편을 실시예 19의 강황 추출물 또는 실시예 21의 운카리아 추출물의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 강황 추출물 19는 농도 의존적 방식으로 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 저하시킨 반면, 운카리아 추출물 21은 PG 분해에 대해 약한 보호 효과를 나타냈다.
표 14 생체외 GAG 유리에 대한 강황 및 감비르 추출물의 효과
Figure pat00105
Figure pat00106
실시예 31
페퍼민트 추출물의 생체외 GAG 유리에 대한 효과
래빗 연골 외식편을 실시예 25와 26의 페퍼민트 추출물의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다.
표 15 생체외 GAG 유리에 대한 페퍼민트 추출물의 효과
Figure pat00107
페퍼민트 추출물은 농도 의존적 방식으로 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 저해하였지만, PG 분해에 대한 페퍼민트 추출물의 효과는 디클로페낙 처리군보다 더 약했다.
실시예 32
N-아세틸 글루코사민(NAG)의 생체외 GAG 유리에 대한 효과
래빗 연골 외식편을 NAG의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. NAG는 농도 의존적 방식으로 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 감소시켰다. 그러나, NAG의 효과는 디클로페낙 처리군과 비교하여 PG 분해에 대해 미미하였다.
표 16 생체외 GAG 유리 모델에 대한 N-아세틸 글루코사민의 효과
Figure pat00108
실시예 33
커큐마 롱가(C):뽕나무(M) 조성물의 생체외 GAG 유리에 대한 효과
래빗 연골 외식편을 강황과 뽕나무 추출물 혼합물의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 24시간 동안 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 뽕나무와 강황의 식물 추출물은 각각 실시예 10과 19에 따라 제조하였다. 강황과 뽕나무 추출물을 상이한 비율, 예를 들어 4:1, 2:1, 1:1, 1:2 및 1:4 각각으로 조합하였다. 조성물을 4개 용량 - 50, 100, 200 및 300 μg/ml로 시험하였다. 표 17에서 보이는 바와 같이, 식물 추출물의 조성물들은 모두 관절 연골의 rhIL-1α 매개성 분해를 농도 의존적 방식으로 방지하였다.
표 17 생체외 GAG 유리에 대한 뽕나무/강황 조성물의 효과
Figure pat00109
Figure pat00110
실시예 34
생체외 GAG 유리에 대한 강황(C):뽕나무(M) 조성물의 상승작용 평가
래빗 연골 외식편을 강황 추출물, 뽕나무 추출물 또는 이들의 혼합물의 조성물 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 24시간 동안 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과의 존재를 시험하였다. 뽕나무와 강황의 식물 추출물은 각각 실시예 10과 19에 따라 제조하였다. 강황과 뽕나무 추출물을 상이한 비율, 예를 들어 1:2 및 1:4로 조합하였다. 조성물을 2개 용량 - 200 및 300 μg/ml, 또는 하나의 용량 -75 μg/ml로 시험하여 조합된 추출물이 상승적으로 또는 부가적으로 작용하는지 실험하였다. 개별 추출 조성물은 혼합 조성물 중 이들 추출물의 중량 함량에 비례하는 농도로 시험하였다.
표 18 C:M 조성물 대 C 또는 M 단독의 상승작용 효과
Figure pat00111
강황과 뽕나무 추출물의 조성물은 농도 의존적 및 상승작용적 방식으로 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 방해하였다. 특히, 조성물 1C:4M (5 wt% 커큐미노이드, 2.4 wt% 프레닐화 플라보노이드, 2.4 wt% 스틸벤)과 1C:2M (8.3 wt% 커큐미노이드, 2 wt% 프레닐화 플라보노이드, 2 wt% 스틸벤)은 200 및 300 μg/ml에서 상승작용적 효과를 나타냈다. 조성물 1C:1M (12.5 wt% 커큐미노이드, 1.5 wt% 프레닐화 플라보노이드, 1.5 wt% 스틸벤)은 또한 75 μg/ml에서 상승작용적 효과를 나타냈다. 상승작용값은 COLBY 식(Colby, Weeds 15:20, 1967)을 사용하여 계산하였다.
실시예 35
생체외 GAG 유리에 대한 강황(C):뽕나무(M):N-아세틸 글루코사민(NAG) 조성물의 효과
래빗 연골 외식편을 강황과 뽕나무 추출물의 조성물 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 24시간 동안 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 뽕나무와 강황의 식물 추출물은 각각 실시예 10과 19에 따라 제조하였다. 강황과 뽕나무 추출물을 N-아세틸 글루코사민(NAG)과 1C:1M:2NAG의 비율로 조합하였다. 조성물을 4개 용량 - 50, 100, 200 및 300 μg/ml로 시험하였다. 조성물 중의 개별 추출물을 조성물 중 이들 추출물의 중량 함량에 비례하는 농도로 시험하였다. 상승작용값은 COLBY 식(Colby, Weeds 15:20, 1967)을 사용하여 계산하였다.
표 19 강황, 뽕나무 및 NAG 조성물의 효과
Figure pat00112
표 19에서 보이는 바와 같이, 식물 추출물의 조성물은 농도 의존적 방식으로 관절 연골의 rhIL-1α 매개 분해를 저해하였다. 특히, 1C:1M:2NAG 조성물은 3개의 개별 추출물 각각과 비교하여 300 μg/ml에서 예상외의 상승작용적 효과를 나타냈다(표 20).
표 20 C:M:NAG 조성물의 상승작용 효과
Figure pat00113
실시예 36
생체외 GAG 유리에 대한 강황(C):뽕나무(M):페퍼민트(P) 조성물의 효과
래빗 연골 외식편을 강황과 뽕나무 추출물의 조성물 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α (5 ng/ml)와 24시간 동안 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 뽕나무, 강황 및 페퍼민트의 식물 추출물은 각각 실시예 10, 19 및 24에 따라 제조하였다. 강황, 뽕나무 및 페퍼민트 추출물을 1C:1M:0.5P, 1C:1M:1P, 1C:1M:1.5P 및 1C:1M:2P의 비율로 조합하였다. 조성물을 4개 용량 - 50, 100, 200 및 300 μg/ml로 시험하였다.
표 21 생체외 GAG 유리에 대한 C:M:P 조성물의 효과
Figure pat00114
Figure pat00115
표 21에서 보이는 바와 같이, 식물 추출물의 조성물은 모두 농도 의존적 방식으로 관절 연골의 rhIL-1α 유도성 분해를 억제하였다.
실시예 37
동물 관리 및 사육
동물들은 도착했을 때 각 그룹에 무작위로 배정하기 전 1주일 동안 적응시켰다. CD-1 마우스(케이지 당 5마리)와 Lewis 래트(케이지 당 3마리)를 폴리프로필렌 케이지에 수용하고 꼬리에 개별적으로 숫자를 표시하였다. 각 케이지를 와이어바 뚜껑으로 덮고 상부 필터링하였다(AUentown, NJ). 각각의 케이지는 프로젝트 번호, 시험 품목, 용량, 그룹 및 동물 번호를 표시하는 케이지 카드로 구별하였다. Harlan T7087 소프트 코브 베딩을 사용하였고 일 주일에 적어도 2회 교환하였다. 동물들에게는 신선한 물과 설치류 사료 식이 # T2018 (Harlan Teklad, 370W, Kent, WA)이 자유식으로 제공되었으며, 항온실(22.2℃)에서 12시간 명암주기로 사육되었다. 모든 동물 실험은 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 지침과 부합하는 연구 가이드라인에 따라 수행하였다.
실시예 38
포르말린의 내식편 주입으로 유발된 생체 내 통각수용성 행동 모델
마우스(그룹당 n = 6)를 반전 Plexiglas 관찰 챔버에서 30분 동안 길들여서 주위 환경에 적응시켰다. 동물들은 Hamilton 시린지(Hamilton Company, Reno, Nevada)를 사용한 억제된 마우스의 오른쪽 뒷발에 포르말린(20 μl의 2.5 % 용액)의 내식 주입 30분 전에 각각의 처리 그룹으로 경구 처리하였다(Dubuisson et al., Pain 4:161,1977). 마우스를 그들의 개별 관찰 챔버에 즉시 옮겼다. 염증이 있는 뒷발을 움찔거리거나/거리고 핥는데 소요되는 기간을 관찰하고 40분 동안 10분의 구간시간으로 기록하였다. 직접 관찰이 차단된 경우, 챔버 뒤편에 거울을 배치하여 오른쪽 뒷발을 관찰할 수 있다.
실시예 39
내장 통증 지각 모델(비틀림 시험)
마우스(그룹당 n = 6)를 반전 Plexiglas 관찰 챔버에서 30분 동안 길들여서 주위 환경에 적응시켰다. 동물들은 상이한 용량의 처리 품목, 100 mg/kg의 이부프로펜, 또는 비히클 대조군(프로필렌 글리콜)을 26 게이지 니들을 사용한 1O ml/kg의 새로 제조된 아세트산 용액(0.9% NaCl 중 0.7%)의 복강내 투여 30분 전에 경구 투여하였다. 실험은 실온에서 수행되었다. 챌린지 후에, 각각의 동물을 관찰 챔버의 개별 섹션에 다시 배치하고 스트레칭과 함께 복근의 수축 횟수를 30분 동안 누계하였다(Collier et al., Br. J. Pharmacol. Chemother. 32:295, 1968).
실시예 40
카라기난으로 유도된 래트 뒷발 부종 모델
진정된 래트(2.5% 이부프로펜 사용)의 오른쪽 뒷발바닥 표피에 카라기난 λ(Sigma, St. Louis, MO; 100μl의 1% [w/v] / 염수)를 내식 주입하여 국소 염증을 유발하였다(시간 = 0)(Gamache et al., J Neurosurg. 65:619, 1986; Guay et al, J. Biol. Chem. 279:24866, 2004; Chou et al., Anesth. Analg. 97:1124, 2003). 측정하기 전에 래트를 수술실에서 20-30분 동안 적응시켰다. 오른쪽 뒷발의 발바닥 중심 표피에 수직 적용된 Randell-Selitto 발 압력 시험의 팁에 대한 반응성을 측정하여 이질통을 측정하였다. 뒷발의 재빠른 회피로 표시되는 적용된 압력에 대한 양성 반응을 전자식 Von Frey Anesthesiometer (2390 series Electrovonfrey, IITC, Woodland Hills, CA)로 자동 기록하였다(Vivancos et al., Braz. J. Med. Biol. Res. 37:391, 2004). 기계적 이질통을 카라기난 접종 전, 이후 1 hr, 2 hr, 4 hr 및 6 hr에 평가하였다. 뒷발 부종 용적은 부종측정기(plethysmometer)(IITC, Woodland Hills, CA; Model 520)를 사용하여 0시간(카라기난 접종 전), 이후 카라기난을 주입한 1 hr, 2 hr, 4 hr, 및 6 hr 후에 측정하였다. 동물(그룹당 n = 5)에게 양성 대조용 이부프로펜(Spectrum Chemical MFG, Gardena, CA) (100 또는 200 mg/kg); 시험 품목, 예컨대: 다양한 용량의 추출물, 및 추출물 조합(100, 200, 300 내지 400mg/kg)을 경구 위관투여하였고, 비히클 대조군(프로필렌 글리콜)을 달리 특정되지 않는 한 카라기난 접종 1시간 후에 제공하였다.
실시예 41
통각수용성 행동 모델에서 정제된 커큐민의 효과
CD-1 마우스에 포르말린(2.5%)의 발바닥내 주입은 주입 발의 움찔거림, 다리 들기, 물기 및 핥기를 손상하는 이상성(biphasic) 통각수용 반응을 유발하였다. 최초 5분 동안 관찰된 이러한 행동반응은 후기에 염증의 결과인 것으로 판단되는 감각신경종말에 대한 자극물의 직접작용으로 인한 것이다. 이 시험에서, 통증 지각에 있어서 50% 초과의 감소가 실시예 16에서 제조된 커큐마 롱가의 유기 추출물로부터 단리된 커큐민(화합물 11) 또는 이부프로펜의 단일 경구 투여로 처리된 동물에서 염증기에 관찰되었다(표 22). 마우스는 커큐민(50, 100, 150 또는 200 mg/kg) 또는 이부프로펜 (200 mg/kg)으로 포르말린의 발바닥내 주입 30분 전에 경구로 처리되었다.
표 22 커큐민에 의한 통증 감도의 용량 관련 저해
Figure pat00116
통증 감도의 용량 관련 억제가 커큐민 처리된 마우스에서 200 mg/kg 내지 100 mg/kg의 용량 범위에서 관찰되었다. 50 mg/kg과 100 mg/kg의 커큐민으로 처리된 동물 간 통증 억제의 수준은 차이가 없거나 거의 없었다. 200 mg/kg의 커큐민 또는 이부프로펜의 통증 억제는 통계적으로 유의하였다(표 22). 또한, 더 큰 통증 억제가 200 mg/kg의 이부프로펜(63.5 %)보다 200 mg/kg의 커큐민(74.6%)으로 처리된 마우스에서 관찰되었다.
실시예 42
통각수용성 행동 모델에서 B-사이클로덱스트린으로 제제화된 강황의 효과
흡수를 증가시키고 효능을 최대화하기 위해, 실시예 20에 기술된 바와 같이 제조된 강황 추출물을 다양한 비율의 β-사이클로덱스트린으로 제제화하여 복부 수축 어세이에서 시험하였다. CD-1 마우스(N=6)를 50mg/kg 또는 lOOmg/kg의 이들 제제 또는 이부프로펜(100 mg/kg)으로 아세트산의 복강내 주입 30분 전에 (위관영양)처리하였다.
표 23 내장 통증 감도에 대한 강황 조성물의 효과
Figure pat00117
이부프로펜으로 처리된 동물은 통증 감도에서 56.1%의 감소를 나타냈다(표 23). (가장 낮은 커큐민 및 전체 커큐미노이드 함량을 갖는)제제 403-1을 제외하고, 다른 제제들 모두 내장 통증 감도에서 통계적으로 유의한 저해를 나타냈다(표 23).
실시예 43
통각수용성 행동 모델에서 멘타 피페리타 추출물의 효과
항염증 용도의 이력을 갖는 식물을 통증억제활성에 대해 비틀림 동물 모델을 사용하여 스크린하였다. 이들 추출물 중에서 실시예 26에 기술된 페퍼민트 식물 (멘타 피페리타) 메탄올 추출물 ME의 단일 경구 투약 처리된 마우스는 CD-1 마우스에 300mg/kg 투여시 29.8%의 내장 통증 억제를 나타냈다. 에틸 아세테이트 분획화 후에, 메탄올 추출물과 비교하여 통계적으로 유의한 증강된 억제(즉, 47.2%)가 126mg/kg으로 투여된 페퍼민트 분획에서 관찰되었다. 또한 필적할 만한 억제가 이부프로펜 처리된 동물(즉, 67.6%)에서도 관찰되었다.
표 24 페퍼민트 추출물에 의한 내장 통증 감도의 억제율
Figure pat00118
CD-1 마우스(N=6)를 이부프로펜 (100mg/kg) 또는 페퍼민트 (126 또는 3OO mg/kg)로 아세트산 주입 30분 전에 위관영양 급식하였다.
실시예 44
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 페퍼민트 추출물의 생체 내 효능
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델을 실시예 26에 기술된 페퍼민트 에탄올 추출물의 상이한 등급을 평가하기 위해 사용하였고, 질환을 유도한 1시간 후에 200mg/kg을 위관영양 급식하였다. 표 25에서 보이는 바와 같이, 추출물 활성은 추출에 사용된 에탄올의 비율이 감소하면 비례적으로 감소하였다. 통증과 염증의 최대 억제는 래트를 페퍼민트의 100% 에탄올 추출물을 200mg/kg 용량으로, 이어서 90%로 위관영양했을 때 관찰되었다. 그 결과, 90% 에탄올 추출물이 추후 사용을 위해 선택되었다. 이러한 감소율은 비히클 대조군에 대해 분석된 매 시점에서 통계적으로 유의하였다.
표 25 페퍼민트 추출물의 통증억제 및 항염증 활성
Figure pat00119
Figure pat00120
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜 (200mg/kg), 페퍼민트 (200mg/kg), 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클 대비). **P ≤ 0.05 (비히클 대비).
실시예 45
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 로즈마린산의 효능
복부 수축 어세이와 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델로부터의 효능, 차후 활성 유도성 분획화 및 화합물 단리의 기록을 수행하여 페퍼민트 추출물 중 활성 마커 화합물을 결정하였다. 로즈마린산(RA)과 에리오시트린이 페퍼민트의 활성 마커로 확인되었고 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 각각 200mg/kg과 lOOmg/kg의 용량으로 시험되었다. 표 26에서 보이는 바와 같이, 1, 3 및 5시간의 처리 후에 뒷발 부종에서 RA는 29.9%, 35.7% 및 34.6%의 감소를 나타냈고, 에리오시트린은 17.2%, 36.0% 및 30.0%의 감소를 각각 나타내었다. 마찬가지로, 1, 3 및 5시간의 처리 후에 통증 감도에서 RA는 38.9%, 45.0% 및 30.6%의 감소를 나타냈고, 에리오시트린은 20.4%, 36.4% 및 25.2%의 감소를 각각 나타냈다. 양성 대조군인 이부프로펜은 1, 3 및 5시간의 처리 후에 39.5%, 50.4% 및 46.6%의 뒷발 부종 감소와 55.1%, 701.3% 및 50.8%의 통증 감도 감소를 각각 나타냈다(표 26). 측정된 통증 및 염증의 억제는 에리오시트린 처리 1시간 후를 제외하고, 시험된 매 시점에서 RA와 에리오시트린 모두 통계적으로 유의하였다.
표 26 페퍼민트 MeOH 추출물로부터 정제된 화합물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00121
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜 (200mg/kg), 페퍼민트 (200mg/kg), 에리오시트린 1OOmg/kg 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클 대비).
실시예 46
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 페퍼민트 추출물의 생체 내 용량 반응 효과
통증과 염증의 최대 억제를 유도하는 용량을 결정하기 위해 용량반응곡선을 카라기난 유도성 래트 발 부종 모델을 사용하여 수행하였다. 래트는 실시예 25에 기술된 바와 같이 제조된 페퍼민트의 90% 에탄올 추출물을 300mg/kg 내지 50mg/kg 범위의 용량으로 위관영양 급식하였다. 표 27에 나타낸 바와 같이, 래트에게 페퍼민트를 200mg/kg 내지 50mg/kg으로 투여했을 때 통증과 염증 감소의 상관관계가 관찰되었다. 이러한 구체적인 시험에서 90% 페퍼민트 에탄올 추출물 300mg/kg으로 처리된 래트는 200mg/kg으로 처리된 래트보다 더 큰 억제를 나타내지 않았으며, 이는 아마도 고용량의 용해도와 관련된 문제에 기인한 것으로 보인다.
표 27 페퍼민트 추출물 25의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00122
Figure pat00123
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜 (200mg/kg), 90% 페퍼민트 에탄올 추출물(300mg/kg, 200mg/kg, 1OOmg/kg 및 50mg/kg), 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클 대비). **P ≤ 0.05 (비히클 대비).
실시예 47
통각수용성 행동 모델에서 뽕나무 추출물의 효과
비틀림의 동물 모델을 적용하여 본 발명의 식물 추출물의 항-통각수용성 활성을 평가하였다. CD-1 마우스를 실시예 11에서 얻어진 모러스 알바의 에탄올 추출물 25, 50 또는 300mg/kg의 단일 경구 용량으로 처리했을 때, 30.7% 45.3% 및 48.4%의 내장 통증 억제가 비히클 처리된 CD-1 마우스와 비교하여 각각 관찰되었다(표 28).
표 28 뽕나무 추출물에 의한 내장 통증 감도의 억제율
Figure pat00124
CD-1 마우스(N=6)에게 비히클(0 mg/kg) 또는 모러스 알바(25, 50 또는 300 mg/kg)를 아세트산 주입 30분 전에 위관영양 급식하였다.
실시예 48
모러스 추출물에 대한 카라기난 유도성 래트 발 부종 모델의 용량 반응
모러스 알바의 진통 및 항염증 활성도 카라기난 유도성 래트 발 부종 모델을 사용하여 확인하였다. Lewis 래트(N=5)에게 실시예 13에 기술된, 100, 200, 또는 300mg/kg 용량의 뽕나무 에탄올 추출물 13-1을 카라기난 접종 1시간 후에 경구로 위관영양 급식하였다. 뽕나무의 에탄올 추출물은 100 mg/kg 정도로 양 측정에서 유효하였다. 표 29에 나타낸 바와 같이, 300 mg/kg으로 처리된 래트는 비히클 대조군과 비교하여 통증(48.0% - 31.6%) 및 염증(53.1% - 37.0%)에서 가장 높은 억제를 나타냈다. 또한, 뒷발 부종의 45.8% - 24.6% 감소 및 통증의 34.7% - 22.1% 감소 범위가 200mg/kg 용량의 뽕나무 에탄올 추출물 13-1로 처리된 래트에서 관찰되었다. 이러한 감소는 시험된 각 시점에서 통계적으로 유의하였다.
표 29 뽕나무 에탄올 추출물 13-1의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00125
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜 (200mg/kg), 및 모러스 알바의 에탄올 추출물 13-1(300mg/kg, 200mg/kg 및 1OOmg/kg), 또는 비히클 단독으로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클 대비). **P ≤ 0.05 (비히클 대비).
실시예 49
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 뽕나무의 순수 화합물과 추출물의 효능
활성 유도성 분획화와 화합물 단리에 기초하여:실시예 3과 5에 기술된 뽕나무 근피의 추출물로부터 단리된 4개의 주요 활성물질, 옥시레스베라트롤, 멀베로시드 A, 쿠와논 G 및 모루신을 생체 내 활성에 대해 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 평가하였다. 동물에게 카라기난을 접종한 1시간 후에 100 mg/kg 용량의 정제된 뽕나무 화합물을 경구 투여하였다. 이 시험에서는 Morusat의 EtOAc 분획과 에탄올 추출물 11, 13-1 및 13-3을 200mg/kg 용량으로 포함하였다. 표 30에서 보이는 바와 같이, 마커 화합물들은 모두 비히클 대조군과 비교하여 통증과 염증에서 통계적으로 유의한 억제를 나타냈다. 그러나, 높은 활성 함유물 추출물 13-1을 갖는 추출물을 마커 화합물 중의 낮은 활성 함유물 추출물 13-3과 비교했을 때 억제율의 급격한 저하가 관찰되었다. 결과적으로, 이러한 데이터는 높은 함량의 스틸벤과 프레닐화 플라보노이드 모두를 갖는 뽕나무 근피 추출물이 통증 및 염증의 최대 억제를 나타낼 수 있음을 시사하는 것이다.
표 30 뽕나무 추출물과 화합물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00126
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜 (200mg/kg), 마커 화합물(1OOmg/kg), 13-1(M. alba의 에탄올 추출물 200mg/kg 용량), 13-3 (M. alba 상청액 200mg/kg 용량), 11 (모러스 알바의 EtOAc 분획, 200mg/kg 용량) 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클 대비).
실시예 50
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 뽕나무:강황 조성물의 효능
강황과 뽕나무 추출물의 진통 및 항염증 활성을 다수의 동물 모델에서 확인한 다음, 두 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물의 활성을 평가하기 위한 시험을 디자인하였다. 뽕나무와 강황에서 얻어진 식물 추출물은 각각 실시예 20과 19에 따라 제조하였다. 강황과 뽕나무 추출물을 상이한 비율, 예를 들어 4:1, 2:1, 1:1, 1:2 및 1:4로 조합하였다. 조성물 1C:1M, 1C:2M, 2C:1M, 1C:4M 및 4C:1M을 300 mg/kg의 용량으로 경구 투여하였다. 표 31에서 보이는 바와 같이, 모든 조성물이 시험된 모든 시점에서 통계적으로 유의한 통증 및 염증의 억제를 나타냈다. 특히, 강황과 뽕나무 추출물을 1:1의 비율로 조합한 조성물로 위관영양 급식된 래트가 통증과 염증 모두에서 최대 억제를 나타내었고, 이를 다음 시험을 위한 조성물로 선택하였다.
표 31 C:M 조성물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00127
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜 (200mg/kg)과 C:M 조성물(300mg/kg), 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클 대비). **P ≤ 0.05 (비히클 대비).
실시예 51
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 강황:뽕나무 조성물의 용량 반응
블렌딩 비율이 1C:1M인 강황:뽕나무 조성물을 추가로 용량반응 시험을 수행하여 통증과 염증에서 가장 유의한 억제를 나타내는 용량을 결정하였다. 이를 위하여 암컷 Lewis 래트(N=5)에게 발바닥내 카라기난 주입 1시간 후에 실시예 50에 기술된 1C:1M 조성물 100, 200, 300 또는 400mg/kg의 용량을 경구로 위관영양 급식하였다. 통계적으로 유의한, 용량 관련, 통증 및 염증의 억제가 투여된 모든 용량에서 관찰되었으며, 가장 높은 억제는 400mg/kg 용량, 가장 낮은 억제는 100mg/kg 용량의 1C:1M 조성물에 대해 관찰되었다.
표 32 1C:1M 조성물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00128
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜 (200mg/kg)과 1C:1M 조성물(400mg/kg, 300mg/kg, 200mg/kg 또는 1OOmg/kg), 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클과 비교).
실시예 52
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 뽕나무:강황 조성물의 상승작용 평가
카라기난 유도성 뒷발 부종 모델을 사용하여 실시예 50에 기술된 1C:1M의 특정비율로 함께 제제화된 강황과 뽕나무에서 얻어진 추출물의 가능한 상승작용 또는 예상외의 효과를 콜비 방법(Colby, 1967)으로 평가하였다. 1C:1M (12.5wt% 커큐미노이드, 1.5wt% 프레닐화 플라보노이드, 1.5wt% 스틸벤) 조성물 300 mg/kg의 용량으로 처리된 래트는 분석된 각 시점(처리 후 1, 3 또는 5시간)에 염증과 통증 감도 모두에 대해 이론적으로 계산된 값(부가 효과)보다 훨씬 더 큰 활성(상승작용)를 나타냈다. 마찬가지로, 조성물은 또한 동일한 300mg/kg의 용량으로 단독 투여된 강황 또는 뽕나무 추출물보다 통증 감도와 염증의 억제가 더 큰 것으로 나타났다(표 33 및 34).
표 33 1C:1M 혼합물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00129
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜(200mg/kg)과 1C:1M 조성물(300mg/kg), 모러스 알바 추출물(150mg/kg 또는 3OOmg/kg), 커큐마 롱가 추출물(150mg/kg 또는 3OOmg/kg) 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클과 비교).
표 34 1C:1M 혼합물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00130
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 래트(N=5)에게 1C:1M 조성물(300mg/kg), 강황과 뽕나무 추출물(150mg/kg), 및 비히클 단독을 카라기난으로 유도된 뒷발 부종 유발 1시간 후에 위관영양 급식하였다. * C - 강황; M - 뽕나무.
** 예상값 - 콜비 방법에 따라 계산된 값 = A-B 즉 A= (C+M), B= (CM)/100.
￥ 관찰값 - 조성물 300 mg/kg이 경구 투여되었을 때 관찰된 데이터.
실시예 53
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 뽕나무:강황:페퍼민트 조성물의 효능
페퍼민트 추출물이 첨가된 1C:1M 조성물의 효능을 증가된 효능에 대해 시험하였다. 1C1M의 유효 용량을 200mg/kg으로 설정하고 페퍼민트 추출물 24를 50, 100, 150 또는 200 mg/kg의 용량으로 첨가하여 각각 1C:1M:0.5P, 1C:1M:1P, 1C:1M:1.5P 및 1C:1M:2P의 비율로 얻었다. 첨가된 페퍼민트 추출물 24의 비율이 50mg/kg에서 200mg/kg으로 증가했을 때 조성물의 진통 및 항염증 활성에서 반응의 직접적 상관관계가 관찰되었다. 가장 높은 억제는 1C:1M:2P에서 관찰되었으며, 가장 낮은 값은 1C:1M:0.5P로 기록되었다. 그럼에도 불구하고, 1C:1M:0.5P, 1C:1M:1P, 1C:1M:1.5P 및 1C:1M:2P 조성물 모두 1C:1M 보다 더 높은 효능을 나타냈다(표 35).
표 35 C:M:P 및 C:M 조성물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00131
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜(200mg/kg), 조성물 1C1M0.5P (250mg/kg), 1C1M1P (300mg/kg), 1C1M1.5P (350mg/kg), 1C:1M:2P (400mg/kg), 1C:1M (200mg/kg) 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클과 비교).
실시예 54
*카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 뽕나무:강황:N-아세틸글루코사민(NAG) 조성물의 효능
N-아세틸글루코사민(NAG)은 관절 내 콜라겐의 구성요소이다. NAG를 뽕나무 및 강황 조성물 1C:1M에 첨가하여 C:M 조성물의 항염증 및 통증억제 활성을 변화시키지 않고 관절 관리 이점을 증강할 수 있다. 이러한 가설을 시험하기 위해 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종을 질환 모델로 사용하여 시험을 수행하였다. 이 시험에서, 래트를 200mg/kg 용량의 1C:1M 또는 366mg/kg 용량의 3C:3M:5NAG의 등가 용량으로 질환을 유발한 1시간 후에 경구로 처리하였다. NAG 단독으로 166mg/kg을 이 시험에 포함시켰다. 표 36에서 보이는 바와 같이, NAG는 이 모델에서 CM 조성물의 진통 및 항염증 활성을 증강하거나 억제하지 않는다. 적어도 이 동물 모델에서는 NAG가 166mg/kg의 용량으로 통증 또는 염증을 억제하는 활성이 최소 내지 없는 것으로 결론지을 수 있었다.
표 36 C:M:NAG 조성물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00132
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜(200mg/kg), 조성물 1C1M (200 mg/kg), 3C:3M:5NAG (366 mg/kg), NAG (166 mg/kg) 또는 비히클 단독으로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클과 비교).
실시예 55
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 뽕나무:강황:NAG 조성물의 용량 반응
N-아세틸글루코사민(NAG)이 조성물 CM 효능에 대해 중화 효과를 갖는지를 추가 시험하기 위해 용량반응 시험을 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 600, 500, 400 및 300mg/kg의 경구 용량으로 1C:1M:2NAG에 대해 디자인하였다. 래트에게 발바닥내 카라기난 접종 1 시간 후에 조성물을 위관영양 급식하였다. 이 복용량은 300, 250, 200 및 150mg/kg의 1C1M 용량과 각각 연관되어 있다. 표 37에서 보이는 바와 같이, 모든 조성물은 통증과 염증의 통계적으로 유의한 억제를 나타냈으며, 가장 높은 값은 600mg/kg에서, 가장 낮은 값은 300mg/kg에서 나타났다. 이러한 데이터 또한 NAG가 혼합된 강황:뽕나무 조성물의 진통 및 항염증 활성을 증강하거나 억제하지 않는 것을 보여준다.
표 37 1C:1M:2NAG 조성물의 진통 및 항염증 효능
Figure pat00133
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜(200mg/kg), 조성물 1C:1M:2NAG (600, 500, 400 또는 300 mg/kg) 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클과 비교).
실시예 56
비틀림 시험에서 뽕나무:강황:NAG 조성물의 효능
조성물 1C:1M:2NAG를 600mg/kg, 500mg/kg 및 400mg/kg의 용량으로 CD-1 마우스에서 아세트산의 복강내 투여로 가해진 내장 통증을 완화하는 능력에 대해 추가로 시험하였다. 이 시험에서는 (NAG가 없는)1C:1M과 NAG(N-아세틸글루코사민) 단독을 300mg/kg의 용량으로 대조용으로 사용하였다. 자극물질의 주입 직후, 동물은 뒷쪽으로 진행하여 등을 구부리면서 양 뒷다리의 동시 굴근(flexor) 확장으로 종료된 복근의 수축으로 구성되는 복부 수축을 나타냈다.
표 38 1C:1M:2NAG 조성물의 내장 통증 감도에 대한 효과
Figure pat00134
CD-1 마우스 (N=6)에게 이부프로펜(200mg/kg), 1C:1M:2NAG (600, 500, 또는 400 mg/kg), 1C:1M(300 mg/kg), N-아세틸글루코사민(NAG, 300 mg/kg), 또는 비히클단독을 아세트산 주입 30분 전에 위관영양 급식하였다.
30분 동안 관찰된 행동 반응의 수는 비히클 대조군, 즉 96.2±16.3과 비교하여 600, 500 및 400 mg/kg의 용량 각각에서 경구 투여 후에 1C:1M:2NAG에 있어서 50.8±7.9, 64.5±7.8 및 76.8±12.4까지 감소하였다(표 53). 51.5±7.9의 유사한 반응이 1C:1M 300mg/kg으로 처리된 마우스에서 관찰되었다(표 53), 그러나, NAG만을 제공한 마우스는 91.0+18.7의 행동 반응을 나타냈다. 이러한 사실은 1C:1M:2NAG가 용량 의존적 방식으로 진통 효과를 제공하고 1C:1M이 C:M:NAG 조성물의 활성 성분인 한편, NAG는 이 모델에서 1C:1M의 진통 활성에 최소한 내지 중성 효과를 갖는 것을 나타낸다.
실시예 57
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 뽕나무:운카리아 조성물의 효능
실시예 10에 기술된 모러스 알바 에탄올 추출물 10(M)을 실시예 21에 기술된 운카리아 감비르 추출물 21(G)과 1G:1M, 1G:2M, 1G:4M, 2G:1M (13.3wt% 플라반, 1wt% 프레닐화 플라보노이드, 1wt% 스틸벤) 및 4G:1M (16wt% 플라반, 0.6wt% 프레닐화 플라보노이드, 0.6wt% 스틸벤)의 비율로 제제화하여 300mg/kg의 용량으로 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델로 시험하였다. 비교를 위해 각각의 구성성분 추출물, 운카리아와 뽕나무를 300mg/kg의 용량으로 각각 경구투여하였다. 표 39에서 보이는 바와 같이, 모든 처리군(비율 및 개별 성분)은 비히클 대조군과 비교하여 통증과 염증에서 통계적으로 유의한 억제를 나타냈다. 그러나, 1G:1M (10wt% 플라반, 1.5wt% 프레닐화 플라보노이드, 1.5wt% 스틸벤), 1G:2M (6.7wt% 플라반, 2wt% 프레닐화 플라보노이드, 2wt% 스틸벤) 및 1G:4M (4wt% 플라반, 2.4wt% 프레닐화 플라보노이드, 2.4wt% 스틸벤)의 비율에 있어서 300mg/kg의 동일 용량으로 단독 제공된 운카리아 또는 뽕나무와 비교하여 예상외의 증강된(상승작용적) 활성이 관찰되었다.
표 39 "G" 추출물 21 및 "M" 추출물 10과 비교한 GM 조성물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00135
데이터는 비히클과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜(200mg/kg), 조성물 G:M (300mg/kg), 모러스 알바 (300mg/kg), 운카리아 감비르 (300mg/kg) 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클과 비교).
실시예 58
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 뽕나무:아카시아 조성물의 효능
실시예 22에 기술된, 아카시아 카테추의 추출물 22와 실시예 10에 기술된 모러스 알바 에탄올 추출물 10을 포함하는 조성물을 1A:1M, 1A:2M, 1A:4M (4wt% 플라반, 2.4wt% 프레닐화 플라보노이드, 2.4wt% 스틸벤), 2A:1M (13.3wt% 플라반, 1wt% 프레닐화 플라보노이드, 1wt%스틸벤) 및 4A:1M (16wt% 플라반, 0.5 wt% 프레닐화 플라보노이드, 0.5wt% 스틸벤)의 비율로 300mg/kg의 용량으로 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델로 시험하였다. 비교를 위해 각각의 구성성분 추출물, 에이. 카테추 추출물 22 및 엠, 알바 추출물 10을 300mg/kg의 용량으로 각각 개별적으로 경구투여하였다. 표 40에서 보이는 바와 같이, 모든 처리군(비율 및 개별 성분)은 비히클 대조군과 비교하여 통증과 염증에서 통계적으로 유의한 억제를 나타냈다. 그러나, 1A:1M (10wt% 플라반, 1.5wt% 프레닐화 플라보노이드, 1.5wt% 스틸벤) 및 1A:2M (6.7wt% 플라반, 2wt% 프레닐화 플라보노이드, 2wt% 스틸벤)의 비율에 있어서 300mg/kg의 동일 용량으로 단독 제공된 에이. 카테추 추출물 22 또는 엠. 알바 추추물 10과 비교하여 예상외의 증강된 활성이 관찰되었다.
표 40 "A" 추출물 22 및 "M" 추출물 10과 비교한 A:M 조성물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00136
Figure pat00137
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜(200mg/kg), 조성물 A:M (300mg/kg), 모러스 알바 (300mg/kg), 아카시아 카테추 (300mg/kg) 또는 비히클로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클과 비교).
실시예 59
뽕나무 포함 조성물의 용량 관련 진통 및 항염증 활성
실시예 57 및 58에 기술된, 1G:1M, 1A:2M 및 1A:1M의 혼합 조성물은 300mg/kg의 용량에서 개별 성분 G, A 또는 M보다 월등한 항염증 및 진통 활성을 나타냈다. 통증과 염증의 가장 유의한 억제를 나타내는 조성물의 용량을 결정하기 위하여, 각각의 조성물을 경구 투여된 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 모델 유도 1시간 후에 300, 200 및 1OO mg/kg의 용량으로 시험하였다. 표 41에서 보이는 바와 같이, 과민성 및 염증에서 분명한 용량 관련의, 통계적으로 유의한 억제가 시험된 모든 조성물에 대해 관찰되었다.
표 41 1G:1M, 1A:2M 및 1A:1M 조성물의 용량 관련 진통 및 항염증 활성
Figure pat00138
Figure pat00139
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 암컷 Lewis 래트(N=5)를 이부프로펜(200mg/kg), 조성물 1G1M, 1A2M 또는 1A1M (300mg/kg, 200mg/kg 또는 1OOmg/kg) 또는 비히클 단독으로 카라기난 접종 1시간 후에 처리하였다. *P ≤ 0.001 (비히클과 비교).
실시예 60
카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델에서 특정한 뽕나무:아카시아 조성물의 평가
실시예 57과 58의 조성물 1G:1M, 및 1A:2M이 개별 성분 G, A 또는 M과 비교하여 진통 및 항염증 제제로서의 효능이 탁월하다는 사실에도 불구하고, 카라기난 유도성 래트 뒷발 부종 모델을 사용한 시험을 수행하여 1G:1M 및 1A:2M의 특정 비율로 함께 제제화되었을 때 성분들의 잠재적 상승작용 활성을 콜비 방법(Colby, 1967)으로 평가하였다. 래트에게 1G:1M (10wt% 플라반, 1.5wt% 프레닐화 플라보노이드, 1.5wt% 스틸벤) 또는 1A:2M (6.7wt% 플라반, 2wt% 프레닐화 플라보노이드, 2wt% 스틸벤) 조성물을 300mg/kg의 용량으로 제공했을 때 관찰될 결과는 분석된 각 시점(처리 후 1, 3 또는 5시간)에서 염증과 통증 감도 모두에서 이론적으로 계산된 값을 훨씬 초과하였다(표 42).
표 42 1G:1M 및 1A:2M 조성물의 진통 및 항염증 활성
Figure pat00140
데이터는 비히클 단독과 비교한 변화율로 나타내었다. 래트(N=5)에게 조성물 1G:1M 또는 1A:2M (300 mg/kg), G (150mg/kg), A (100 및 150mg/kg), M 추출물 (150 및 200mg/kg) 또는 비히클 단독을 카라기난 유도성 뒷발 부종 1시간 후에 위관영양 급식하였다. * G - 운카리아 감비르, M - 모러스 알바, A - 아카시아 카테추.
** 예상값 - 콜비 방법에 따라 계산된 값 = A-B 즉 A= (C+M), B= (CM)/100.
￥ 관찰값 - 조성물 300 mg/kg이 경구 투여되었을 때 관찰된 데이터.
명백하게, 뽕나무 에탄올 추출물과, 아카시아 또는 감비르 추출물의 조합으로 예상외의 상승작용과 우수한 진통 및 항염증 효능을 갖는 조성물이 얻어졌다.
실시예 61
생체 외 GAG 유리에 대한 아카시아 추출물의 효과
래빗 연골 외식편을 실시예 23에서 제조된 아카시아 추출물 23의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α(5 ng/ml)와 배양하여 프로테오글리칸 (PG) 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 아카시아 추출물은 4개 용량 - 25, 50, 100 및 200 μg/ml로 시험하였다. 아카시아 추출물은 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 용량 의존적 방식으로 방해하였다.
표 43 생체 외 GAG 유리에 대한 아카시아 추출물의 효과
Figure pat00141
실시예 62
생체 외 GAG 유리에 대한 감비르(G):뽕나무(M) 조성물의 효과
래빗 연골 외식편을 감비르와 뽕나무 추출물의 조성물 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α(5 ng/ml)와 24시간 동안 배양하여 프로테오글리칸 (PG) 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 조성물은 2개 용량 - 100 및 200 μg/ml로 시험하였다. 표 44에서 보이는 바와 같이, 식물 추출물의 모든 조성물은 관절 연골의 rhIL-1α 매개성 분해를 농도 의존적 방식으로 방해하였다. 관찰된 효능의 순서는 1G:2M > 1G:1M > 1G:4M > 2G:1M > 4G:1M이었다.
표 44 생체 외 GAG 유리에 대한 G:M 조성물의 효과
Figure pat00142
Figure pat00143
실시예 63
생체 외 GAG 유리에 대한 감비르(G):뽕나무(M) 조성물의 상승작용 평가
래빗 연골 외식편을 감비르 추출물:뽕나무 추출물 혼합 조성물의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α(5 ng/ml)와 24시간 동안 배양하여 PG 분해에 대한 잠재적 보호 효과를 시험하였다. 감비르와 뽕나무로부터 얻어진 식물 추출물은 상기한 실시예에 따라 제조하였다. 조성물은 2개 용량 - 100 및 200 μg/ml로, 조합물이 상승작용 효과를 나타내는지 시험하였다. 감비르와 뽕나무 추출물의 조성물은 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 농도 의존적 방식으로 방해하였다. 상승작용적 효과가 존재하는 지의 여부는 콜비식(Colby, 1967)을 사용하여 계산하였다. 5개의 GM 조합물 1G:1M (10wt% 플라반, 1.5wt% 프레닐화 플라보노이드, 1.5wt% 스틸벤), 1G:2M (6.7wt% 플라반, 2wt% 프레닐화 플라보노이드, 2wt% 스틸벤), 1G:4M (4wt% 플라반, 2.4wt% 프레닐화 플라보노이드, 2.4wt% 스틸벤), 2G:1M (13.3wt% 플라반, 1wt% 프레닐화 플라보노이드, 1wt%스틸벤) 및 4G:1M (16wt% 플라반, 0.6wt% 프레닐화 플라보노이드, 0.6wt% 스틸벤) 모두 2개 용량에서 예상외의 상승작용을 나타냈다.
표 45 생체 외 GAG 유리에 대한 G:M 조성물의 상승작용 효과
Figure pat00144
Figure pat00145
50, 100 및 200 μg/ml의 1G:1M 및 1G:2M에 대한 확인 시험을 2개의 개별 추출물을 조합하여 예상외의 상승작용 효과를 입증하기 위해 수행하였다. 혼합 조성물에 사용된 개별 추출물을 혼합 조성물 중 추출물들의 중량 함량에 비례하는 농도로 시험하였다. 감비르 및 뽕나무 추출물은 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 농도 의존적 방식으로 방해하였다. 상승작용 효과는 콜비식(Colby, 1967)을 사용하여 계산하였다. 1G:1M 및 1G:2M 조성물은 3개 용량 모두에서 예상외의 상승작용을 나타냈다.
표 46 생체 외 GAG 유리에 대한 G:M 조합물의 상승작용
Figure pat00146
실시예 64
생체 외 GAG 유리에 대한 강황(C):감비르(G):뽕나무(M) 조성물의 효과
래빗 연골 외식편을 강황, 운카리아 및 뽕나무 추출물의 조성물 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α(5 ng/ml)와 24시간 동안 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 조성물은 2개 용량 - 50 및 100 μg/ml로 시험하였다. 조성물 중의 개별 추출물을 조성물 중 추출물들의 중량 함량에 비례하는 농도로 시험하였다. 표 47에 나타낸 바와 같이, 식물 추출물의 조성물은 관절 연골의 rhIL-1α 매개성 분해를 농도 의존적 방식으로 억제하였다.
표 47 생체 외 GAG 유리에 대한 C:G:M 조성물의 효과
Figure pat00147
실시예 65
생체 외 GAG 유리에 대한 아카시아(A):뽕나무(M) 조성물의 효과
래빗 연골 외식편을 아카시아 및 뽕나무 추출물의 조성물 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α(5 ng/ml)와 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 조성물은 2개 용량 - 100 및 200 μg/ml로 시험하였다. 표 48에 나타낸 바와 같이, 식물 추출물의 조성물은 모두 관절 연골의 rhIL-1α 매개성 분해를 억제하였다.
표 48 생체 외 GAG 유리에 대한 A:M 조성물의 효과
Figure pat00148
실시예 66
생체 외 GAG 유리에 대한 아카시아(A):뽕나무(M) 조성물의 상승작용 평가
래빗 연골 외식편을 아카시아 및 뽕나무 추출물의 조성물 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α(5 ng/ml)와 24시간 동안 배양하여 PG 분해에 대한 보호 효과를 시험하였다. 아카시아와 뽕나무로부터 얻어진 식물 추출물은 상기한 실시예에 따라 제조하였다. 조성물은 2개 용량 - 50 및 100 μg/ml로, 조합된 추출물이 함께 연골 보호에 대한 예상외의 상승작용 효과를 나타내는지 시험하였다. 조성물 중의 개별 추출물은 조성물 중 추출물들의 중량 함량에 비례하는 농도로 시험하였다. 아카시아와 뽕나무 추출물은 PG의 rhIL-1α 매개성 분해를 농도 의존적 방식으로 방해하였다. 상승작용은 콜비식(Colby, 1967)을 사용하여 계산하였다. 1A:1M (10wt% 플라반, 1.5wt% 프레닐화 플라보노이드, 1.5wt% 스틸벤) 및 1A:2M (6.7wt% 플라반, 2wt% 프레닐화 플라보노이드, 2wt% 스틸벤) 모두 2개 용량에서 예상외의 상승작용을 나타냈다.
표 49 생체 외 GAG 유리에 대한 A:M 조성물의 상승작용 효과
Figure pat00149
실시예 67
생체 내에서 MIA(모노소듐 요오도아세테이트)로 유발된 골관절염(OA) 래트 모델에서 조성물의 관절 보호 작용
시험을 시작하기 전에 동물들을 랜덤화하여 처리군에 배정하였다. 이소플루란으로 마취한 후, 래트에 1mg 모노소듐 요오도아세테이트 (Sigma, St. Louis, MO; lot # SLBB6147V)를 함유하는 50μl를 무릎 인대를 통해 삽입되는 26게이지 니들을 사용하여 오른쪽 무플의 관절내 공간에 주입하였다. 정상 래트에게 MIA 대신 같은 부피의 염수(saline)를 주입하였다. 동물들을 4주 동안 1일 1회 셀레콕시브 1OOmg/kg, 디클로페낙 5mg/kg, 유니베스틴® (황금(Scutellaria):아카시아 추출물 혼합물) 400mg/kg, 1C:1M 600mg/kg 및 1C:1M:2NAG 600mg/kg으로 경구 처리하였다. 제1 시료 처리는 MIA 주사 1시간 전에 투여하였다. 정상 및 대조용 래트에게는 같은 부피의 비히클(0.5% CMC / 염수)을 경구로 제공하였다. 체중과 이질통을 4주 동안 주 1회 측정하였다. 이질통은 오른쪽 뒷발의 발바닥 중심 표피에 수직 적용된 Randall-Selitto 시험(2390 series, IITC, Woodland Hills, CA)의 팁에 대한 반응성을 측정하여 평가하였다. 각 그룹에서 3마리의 동물에 대해 관절 연골 표면과 연골하 골 구조의 구조적 변경을 마이크로 CT 스캔(SkyScanl 173, Belgium)에 의해 평가하였다. 조직학적 변화를 평가하여 OA 래트의 무릎 관절에서 연골 퇴화에 대한 보호 효과를 확인하였다. 탈석회 이후, 관절 조직을 헤마톡실린과 에오신(HE), 및 사프라닌 O-패스트(fast) 그린으로 염색하여 프로테오글리칸 함량을 평가할 수 있다.
실시예 68
프레닐화 플라보노이드의 유기 추출물
프레닐칼콘, 프레닐플라본, 프레닐플라보놀 및 프레닐플라바논은 모두 프레닐플라보노이드에 속한다. 프레닐화 플라보노이드는 식물군에서 제한된 분포를 갖는다. 수많은 프레닐화 플라보노이드가 뽕나무과에서 발견되지만, 이들은 또한 다른 분류, 예컨대 카나바과(Canabaceae), 콩과(Fabaceae), 멀구슬나무과 (Meliaceae), 운향과(Rutaceae), 버즘 나무과(Platanaceae), 세크로피아과 (Cecropiaceae), 자귀나무과, 박주가리과(Asclepiadaceae), 현삼과, 돌담배과 (Gesneriaceae), 국화과, 및 생강과에도 분포되어 있다. 프레닐 이소플라보노이드는 콩과 (Leguminosae)의 아과에 더욱 한정된다.
프레닐화 플라보노이드를 함유하는 것으로 보고된 5종의 상이한 식물속을 표 50에 나타낸 바와 같이 추출을 위해 선택하였다. 각 식물의 분쇄된 분말 총 20그람을 100 ml 스테인레스 스틸 튜브에 넣고, 유기용매 혼합물(1:1 비율의 염화메틸렌/메탄올)로 ASE 350 자동 추출기를 사용하여 80℃, 1,500 psi의 압력하에 2회 추출하였다. 추출물 용액을 자동여과하여 수집하였다. 모아진 유기 추출물 용액을 회전식 증발기로 증발시켜서 미정제 유기 추출물(OE)을 얻었다. 8개 식물의 유기 추출물을 본 명세서에 기술된 GAG 유리 어세이로 시험하였다.
표 50 선택된 식물에서 프레닐화 플라보노이드의 수율
Figure pat00150
잔토휴몰과 이소잔토휴몰은 호프(Humulus lupulus의 열매)에서 유래한 프레닐화 칼콘과 플라바논으로, 이 식물의 주요 활성 화합물로 보고되었다. 글라브리딘은 감초(Glycyrrhiza glabra)에서 특별하게 보고된 주요 프레닐화 플라보노이드 중 하나이다. 카타야논 A는 밀리시아 엑셀사(Milicia excelsa)로부터 단리된 딜스-알더 부가물이다. 상기한 4종의 프레닐화 플라보노이드를 상업적 공급원으로부터 입수하여 GAG 유리 어세이에서 시험하였다.
Figure pat00151
실시예 69
생체 외 GAG 유리에 대한 다양한 유기 추출물의 효과
실시예 68에 기술된 5종의 상이한 식물속으로부터 생성된 유기 추출물을 3개 용량 - 50 μg/ml, 100 μg/ml, 및 200 μg/ml -으로 실시예 27에 기술된 GAG 유리 모델에서 시험하였다. 표 51에 나타낸 바와 같이, 시험된 모든 추출물은 생체 외 GAG 유리를 억제하였다. 특히, 회화나무속(Sophora), 서레일리아속(Psoralea), 감초속 및 호프속에서 유래한 유기 추출물은 GAG 유리의 감소로 반영된 바와 같이 강력한 연골 보호효과를 나타냈으며, 밀레티아속(Millettia) 추출물은 GAG 유리를 억제하였으나 비교 상 더 약한 효능을 나타냈다.
표 51 생체 외 GAG 유리에 대한 다양한 유기 추출물의 효과
Figure pat00152
Figure pat00153
실시예 70
생체 외 GAG 유리에 대한 정제된 프레닐화 플라보노이드의 효과
실시예 68에 기술된 바와 같이 정제된, 4종의 상이한 프레닐화 플라보노이드 (글라브리딘, 화합물 14; 잔토휴몰, 화합물 13; 이소잔토휴몰, 화합물 14; 및 카타야논 A, 화합물 15)를 실시예 27에 기술된 생체 외 GAG 유리 모델로 시험하였다. 래빗 연골 외식편을 정제된 프레닐화 플라보노이드 화합물 각각의 존재 또는 부재 하에 rhIL-1α(5 ng/ml)와 배양하여 연골 열화에 대한 보호 효과를 시험하였다. 정제된 프레닐화 플라보노이드 각각은 4개 농도 - 6.25 μg/ml, 12.5 μg/ml, 25 μg/ml 및 50 μg/ml로 시험하였다.
표 52 생체 외 GAG 유리에 대한 프레닐화 플라보노이드의 효과
Figure pat00154
Figure pat00155
표 52에서 보이는 바와 같이 4종의 프레닐화 플라보노이드는 모두 연골의 rhIL-1α 매개성 열화를 용량 의존적 방식으로 억제하였다.
실시예 71
마우스 비틀림 모델에서 감비르:뽕나무 조성물의 생체 내 항-통각수용성 효능
감비르:뽕나무의 추출물을 1:1 중량비로 함유하는 조성물(1G:1M)을 400 mg/kg, 300 mg/kg 및 200 mg/kg의 용량으로 CD-1 마우스에 0.7%의 새로 제조된 아세트산을 복강내 투여하여 유발된 내장 통증을 완화하는 것을 시험하였다. CD-1 마우스 (N=6)에 이부프로펜 (200 mg/kg), 1G:1M (400, 300 또는 200 mg/kg), 또는 비히클을 10 ml/kg의 새로 제조한 아세트산 용액(0.7% / 0.9% NaCl)을 복강내 투여하기 30분 전에 경구로 위관영양 급식하였다. 자극물질의 주입 직후, 동물은 뒷쪽으로 진행하여 등을 구부리면서 양 뒷다리의 동시 굴근(flexor) 확장으로 종료된 복근의 수축으로 이루어지는 복부 수축을 나타냈다. 이러한 행동 반응을 30분 동안 관찰하였다.
표 53 내장 통증 감도에 대한 1G:1M 조성물의 효과
Figure pat00156
행동 반응은 1G:1M을 400, 300 및 200 mg/kg 각각의 용량으로 경구 투여하여 비히클 대조군의 행동반응, 즉 77.4±18.7과 비교하여 42.2±24.0, 50.5±17.6 및 65.7±17.2로 감소한 것을 확인하였다(표 54). 양성 대조군 이부프로펜은 통증 행동의 25.3±14.3 또는 67.4% 감소를 나타냈다. 통증 감도의 감소는 비히클 대조군과 비교하여 이부프로펜 및 1G:1M(400 mg/kg 및 300 mg/kg 용량)에서 통계적으로 유의하였다.
실시예 72
마우스 비틀림 모델에서 아카시아:뽕나무 조성물의 생체 내 항-통각수용성 효능
1:2 중량비로 블렌드된 아카시아:뽕나무의 추출물을 함유하는 조성물(1A:2M)을 300 mg/kg, 200 mg/kg 및 100 mg/kg의 용량으로 아세트산을 복강내 투여하여 유발된 내장 통증을 완화하는 능력에 대해 시험하였다. CD-1 마우스 (N=6)에 이부프로펜 (200 mg/kg), 1A:2M (300, 200 또는 100 mg/kg), 또는 비히클 단독을 10 ml/kg의 새로 제조한 아세트산 용액(0.7% / 0.9% NaCl)을 복강내 투여하기 30분 전에 경구로 위관영양 급식하였다. 자극물질의 주입 직후, 동물은 뒷쪽으로 진행하여 등을 구부리면서 양 뒷다리의 동시 굴근(flexor) 확장으로 종료된 복근의 수축으로 구성되는 복부 수축을 나타냈다. 이러한 행동 반응을 30분 동안 관찰하였다.
표 54 내장 통증 감도에 대한 1A:2M 조성물의 효과
Figure pat00157
행동 반응은 1A:2M을 300, 200 및 100 mg/kg 각각의 용량으로 경구 투여한 후, 비히클 대조군, 즉 77.5±16.1과 비교하여 50.8±17.2, 54.3±15.5 및 64.0±11.5로 감소한 것을 확인하였다(표 54). 양성 대조군 이부프로펜은 통증 행동의 41.8±12.6 또는 46.0% 감소를 나타냈다. 통증 감도의 감소는 비히클 단독의 대조군과 비교하여 이부프로펜 및 1A:2M(300 mg/kg 및 200 mg/kg 용량)에서 통계적으로 유의하였다.
실시예 73
어쥬번트 유도성 관절염(AIA) 래트 모델에서 통증 및 염증에 대한 강황:뽕나무 조성물의 효과
래트에서 어쥬번트로 유도된 관절염(AIA)은 많은 고등동물들에게 나타나는 류마티스 관절염과 유사한 임상적 및 병리학적 특징을 갖는 염증성 관절 상태 중 가장 널리 사용되는 실험적 동물모델 중 하나이다. 이것은 관절 뼈 및 연골의 후속 진행성 침식성 파괴, 단핵 세포 침윤(infiltration), 판누스(pannus) 형성 및 기능 손상과 관련된 여러 관절의 만성 염증을 특징으로 한다(Wooley, Curr. Rheumatol. Rev. 4:277, 2008; Bolon et al, J. Biomed. Biotechnol. 2011 :569068, 2011).
래트에서 관절염 질환 모델을 유도하는 항원으로서 완전 어쥬번트를 사용하는 것이 염증을 일으키는 면역반응의 2개의 얽힌 단계(phase)를 유도하는 것을 확인하였다. 초기 반응은 접종 부위에서 COX/LOX 경로를 통해 부분적으로 매개된 급성 염증으로(0일째 내지 8일째), 이후 TNF-α, IL1-β 및 NF-κB와 관련하여 세포 및 체액성 반응을 촉발하는 항원에 대한 보편화된 면역학적 폭발(9일째 내지 14일째)로 인한 보다 지연되고 복잡한 2차 전신성 반응이 이어진다(Newbould, Br. J. Pharmacol. Chemother. 21: 127, 1963). 그러므로, 면역반응 또는 염증전 경로를 억제하는 항염증제는 부종 또는 발목 직경 및 통증 감도로 측정되는 이 AIA 모델에서 효능을 나타낸다.
어쥬번트 유도성 래트 관절염 모델을 강황:뽕나무(C:M) 조성물의 항-통증 및 항-염증 활성을 평가하는데 사용하였다. 체중이 150-175g인 목적 배양된 암컷 Wistar 래트(Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA)를 도착했을 때 각 그룹에 무작위로 배정하기 전에 일주일 동안 적응시켰다. 래트에게는 신선한 물과 설치류 사료 식이를 자유식으로 제공하였으며, 항온실(22.2℃)에서 12시간 명암주기로 사육되었다. 항원 접종 전날에 처리를 시작하였으며, 여기서 동물들(n = 9)은 양성 대조군 이부프로펜, 1C:1M 시험 품목, 또는 비히클(프로필렌 글리콜) 단독 대조군을 경구로 위관영양 급식하였다. 다음 날, 2차 처리 투여 1시간 후에 진정된 래트의 오른쪽 뒷발의 하부 발바닥 영역에 액체 파라핀 중의 가열 멸균된 결핵균(Mycobacterium tuberculosis) 현탁액 5mg/ml (w/v)를 함유하는 완전 Freund 어쥬번트 주사로 래트를 민감화하여 관절염을 유발하였다(Currey, Ann. Rheum. Dis. 29:314, 1970; Whitehouse et al, Can. Med. Assoc. J. 129:249, 1983).
항염증 활성 - 발 부종 측정
대조군 또는 시험 품목으로의 처리는 오른쪽 뒷발에 완전 어쥬번트를 발바닥 내 주입하기 전날 개시하였다. C:M 조성물의 항염증 효과는 발 부종의 측정된 변화로 반영되었다. 래트(n = 9)를 1C:1M 조성물(200mg/kg, lOOmg/kg 또는 50mg/kg), 이부프로펜 (lOOmg/kg) 또는 비히클로 14일 동안 경구 처리하였다. 데이터는 평균값 ± SD로 표시하였고, p-값은 비히클에 대해 계산하였다. 발 부종은 1일째(항원 이전), 항원을 주사한 후 3, 5, 7, 9 및 13일째에 부종측정기(IITC, Woodland Hills, CA; Model 520)를 사용하여 측정하였다.
염증의 중요한 징후(통각 과민, 부종 및 충혈)를 나타내는 AIA 모델이 항원으로 프라이밍한 24시간 후에 모든 동물에서 뚜렷하였다. 양성 대조군(이부프로펜)으로 처리된 래트는 3, 5, 7, 9 및 13일째에 각각 비히클 대조군과 비교하여 28.8%, 21.1%, 19.4%, 24.3% 및 32.7%의 발 부종의 통계학적으로 유의한 감소를 나타냈다. C:M 조성물의 경구 투여로 처리된 동물은 3, 5, 7, 9 및 13일째에 각각 비히클 대조군 동물과 비교하여 (a) 200 mg/kg의 용량에서 24.0%, 32.1%, 30.6%, 38.5% 및 48.4%, (b) 100 mg/kg의 용량에서 21.8%, 29.3%, 25.0%, 33.7% 및 38.8%, 및 (c) 50 mg/kg의 용량에서 15.6%, 17.1%, 18.8%, 27.1% 및 38.2%의 발 부종의 감소를 나타냈다(표 55). 이러한 감소율(%)은 분석된 시점마다 통계학적으로 유의하였다.
표 55 AIA 모델에서 뒷발 부종에 대한 C:M 조성물의 효과
Figure pat00158
양성 대조군은 시험 조성물과 비교하여 매일 경구 처리한 3일 후에 염증의 높은 억제를 나타냈지만, 시험 조성물에 대해 관찰된 억제도는 양성 대조군을 초과하여 13일까지 연장된 치료일 동안 증가하였다. 이러한 결과는 C:M 조성물 화합물이 이 치료요법 동안 지속할 수 있는 것을 시사하고, 이것은 낮은 용량의 C:M 조성물이 만성 염증 관리와 치료에 사용될 수 있는 것을 의미한다.
항-통증 활성 - 이질통 측정
대조군 또는 시험 품목으로의 처리는 오른쪽 뒷발에 완전 어쥬번트를 발바닥 내 주입하기 전날 개시하였다. C:M 조성물의 항-통증 효과는 이질통(유도된 통증)에 의해 반영되었다. 래트(n=9)를 1C:1M 조성물(200mg/kg, lOOmg/kg 또는 50mg/kg), 이부프로펜 (lOOmg/kg) 또는 비히클로 14일 동안 경구 처리하였다. 데이터는 평균값 ± SD로 표시하였고, p-값은 비히클에 대해 계산하였다. 이질통은 Randell-Selitto 시험(Randall 및 Selitto, Arch. Int'l Pharmacodyn Therap. 133:233, 1957)을 사용하여 오른쪽 뒷발의 발바닥 중심 표피에 수직 적용된 압력에 대한 반응에 의해 평가하였다. 뒷발의 재빠른 회피로 표시되는 적용된 기계적 압력에 대한 양성 반응을 전자식 Von Frey Anesthesiometer (2390 series Electrovonfrey, IITC, Woodland Hills, CA)(Vivancos et al., 2004)로 자동 기록하였다. 기계적으로 유발된 이질통을 항원 처리 전에 평가한 다음, 항원을 주사한 후 3, 5, 7, 9 및 13일째에 평가하였다.
C:M 조성물과 이부프로펜의 경구 투여로 통증 감도가 현저하게 감소하였다. 표 56에서 보이는 바와 같이, 통증 감도의 통계적으로 유의한 감소가 래트를 1OOmg/kg의 이부프로펜으로 처리했을 때 관찰되었다(3, 5, 7, 9 및 13일째에 각각 31.3%, 39.5%, 48.8%, 52.5% 및 52.5% 감소). 경구로 위관영양 급식된 C:M 조성물의 통증 감도 억제는 200mg/kg 용량에서 27.1%, 38.2%, 51.6%, 52.8% 및 54.2%, 100mg/kg 용량에서 25.6%, 34.9%, 39.0%, 47.6% 및 46.2%, 그리고 50mg/kg 용량에서 21.8%, 24.3%, 29.0%, 37.6% 및 40.8%였다(표 56).
표 56 AIA 모델에서 이질통에 대한 C:M 조성물의 효과
Figure pat00159
이 데이터는 이부프로펜(양성 대조군)이 3일까지 가장 강력한 진통 활성을 나타내지만 1OOmg/kg 또는 50mg/kg의 C:M 조성물은 그 이후에 더 강력한 것을 분명하게 보여준다. 그럼에도 불구하고, 뒷발 부종 데이터와 일치하여, 투여된 용량에서 조성물의 활성은 치료일이 13일까지 연장되는 동안 증가하였다.
항염증 활성 - 발목 폭 측정
대조군 또는 시험 품목으로의 처리는 오른쪽 뒷발에 완전 어쥬번트를 발바닥 내 주입하기 전날 개시하였다. C:M 조성물의 항염증 효과는 측정된 발목 직경의 변화로 반영되었다. 래트(n = 9)를 1C:1M 조성물(200mg/kg, 1OOmg/kg 또는 50mg/kg), 이부프로펜 (lOOmg/kg) 또는 비히클로 14일 동안 경구 처리하였다. 데이터는 평균값 ± SD로 표시하였고, p-값은 비히클에 대해 계산하였다. 발목 직경은 Pocket Thickness Gage (7309, Mitutoyo corp. Japan)를 사용하여 1일째(항원 사용전), 항원 주입 후 3, 5, 7, 9 및 13일째에 측정하였다.
표 57에서 보이는 바와 같이, 발목 직경 감소에서 큰 값의 감소는 관절의 염증을 감소하는데 있어서 C:M 조성물의 조화된 효과를 뒷받침하고 있다. 200mg/kg C:M의 경구 투여로 처리된 동물은 43.1%, 47.3%, 45.5%, 52.4 및 60.9%, 1OOmg/kg의 경구 투여로는 35.9%, 39.0%, 39.2%, 42.0% 및 51.9%, 또한 5Omg/kg의 경구 투여로는 30.9%, 32.2%, 34.1%, 36.5% 및 48.7%의 발목 직경 감소를 3, 5, 7, 9 및 13일째 각각에서 비히클 대조군 처리된 동물과 비교하여 나타냈다. 이러한 감소율은 분석된 각 시점에서 통계적으로 유의하였다. 양성 대조용 이부프로펜은 비히클 대조군과 비교하여 3, 5, 7, 9 및 13일째에 각각 통계적으로 유의한 37.2%, 34.8%, 36.8%, 33.5% 및 44.2%의 발목 직경 감소를 나타냈다(표 57).
표 57 AIA 모델에서 발목 폭에 대한 C:M 조성물의 효과
Figure pat00160
이러한 특정한 경우에서, C:M 조성물(200 mg/kg)은 다른 치료군, 예를 들어 양성 대조용 이부프로펜, 및 관찰된 모든 시점에서와 비교하여 발목 부종의 가장 큰 억제를 나타냈다. 실제로, 1OOmg/kg의 이부프로펜 경구 용량으로 처리된 래트는 항염증 효과에서 5Omg/kg의 C:M 조성물 처리와 비슷하였다.
실시예 74
COX-1 및 COX-2 효소 활성을 억제하는 강황:뽕나무, 아카시아:뽕나무 및 감비르:뽕나무 조성물
COX 억제는 비색 COX (양) 억제 어세이 키트(Cayman Chem., Co.)를 사용하여 시험하였다. 요약하면, 150 μl의 어세이 완충액, 10 μl의 헴(heme), 10 μl의 COX-1 또는 COX-2 효소 및 20 μl의 시험물질을 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 수 초간 주의 깊게 교반하여 25℃에서 5분 동안 인큐베이션한 다음, 20 μl의 비색물질 용액 및 아라키돈산을 첨가하여 반응을 개시하였다. 교반한 후, 반응을 25℃에서 10분 동안 진행한 다음, 각 웰의 흡광도를 590 nm에서 플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다.
표 58 COX-1 / COX-2 활성에 대한 C:M, G:M, 및 A:M 조성물의 효과
Figure pat00161
표 58에서 보이는 바와 같이, C:M, G:M 및 A:M 조성물의 IC50값은 COX-1 효소 활성 어세이에서 각각 40.5, 12.4 및 20.9 μg/ml였고, COX-2 효소 활성 어세이에서 각각 74.1, 39.8 및 49.2 μg/ml였다. 모든 시료는 COX-2 효소의 억제에서 보다 COX-1 효소의 억제에서 각각 용량 의존적 방식으로 더 강력한 효과를 나타냈다.
실시예 75
5-리폭시게나제 활성을 억제하는 강황:뽕나무, 아카시아:뽕나무 및 감비르:뽕나무 조성물
5-리폭시게나제 (5-LOX)에 대한 효과를 리폭시게나제 억제제 스크리닝 어세이 키트 (5-LOX: 감자; Cayman Chem., Co.)를 사용하여 시험하였다. 요약하면, 90μl의 5-LOX 효소와 10 μl의 시험물질을 96-웰 플레이트에 첨가하여 수 초간 주의 깊게 교반한 다음, 10 μl 리놀레산을 첨가하여 반응을 개시하였다. 플레이트를 교반기에 5분 동안 배치한 후, 100 μl의 크로모겐을 각 웰에 첨가하여 효소 반응을 중지하였다. 반응을 진행하기 위해 플레이트를 교반기에 5분 동안 배치하고, 각 웰의 흡광도를 490 nm에서 플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다.
표 59 5-LOX 활성에 대한 C:M, G:M, 및 A:M 조성물의 효과
Figure pat00162
표 59에서 보이는 바와 같이, 모든 시료는 5-LOXIN보다 더 강력한 효과를 나타냈고, 3종의 조성물 모두 용량 의존적 효과를 나타냈다. C:M, G:M 및 A:M의 IC50값은 5-LOX 효소 활성 어세이에서 각각 26.3, 13.6 및 11.1 μg/ml였다.
실시예 76
모노-요오도아세테이트(MIA) 유도성 골관절염 래트 모델에서 감비르:뽕나무 조성물의 항-통각수용성 효과
골관절염(OA)은 관절 통증과 관절 연골의 진행성 손실을 특징으로 하고 현재까지 치료법이 없는 퇴행성 관절 질환이다. 질환이 진행되면 관절 연골 내에서 발생하는 생화학적 변형이 동화 및 이화과정의 불균형을 초래하여, 결과적으로 전체 관절 구조와 기능을 변경하고 만성 통증을 유발한다. OA의 발병과정을 시험하고 신규한 치료제의 효능을 평가하기 위해 다양한 동물 모델이 개발되어 이용되었고 제한적으로 성공하였다. 질환과 연관된 통증과 함께 관절 병리학의 강력한 유도 및 재생성을 갖는 동물 모델이 바람직하며, 따라서 최소 침습성 모노-요오도아세테이트 (MIA) 유도성 OA 모델이 적용되었다. 모노-요오도아세테이트 (MIA)는 연골세포 괴사를 유발하고, 그리하여 프로테오글리칸 매트릭스 손실과 인간 OA와 유사한 기능적 관절 손상을 갖는 연골 병소의 재생을 나타내는 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제 활성의 억제제이다(Marker 및 Pomonis, Methods Mol. Biol. 851:239, 2012).
수컷 Sprague-Dawley (SD) 래트(체중: 약 170 내지 약 230 g, 6주령)를 구입하여 1주일 동안 적응시켰다. 질환 유도 1일 전에 동물을 다음과 같이 4개의 그룹으로 랜덤화하였다: G1 (정상), G2 (비히클), G3 (디클로페낙; 10 mg/kg) 및 G4 (G:M; 500 mg/kg). 각 그룹에 경구로 개별 처리제를 위관영양 급식하였다. 마취된 래트에게 50 μl 염류 용액 중의 0.8 mg MIA를 제2 처리제 투약 1시간 후에 관절 내 주머니로 주입하였다. 통증 감도를 Randall-Salitto 미터를 사용하여 주 1회 측정하고 처리를 6주 동안 지속하였다. 체중을 주 1회 측정하여 각 그룹의 개별 주간 용량을 계산하였다. 생전 시험(in-life study)이 완료되면, 질환 진행 및/또는 처리 효능의 결과로서 관절 조직의 구조적 및 세포적 변형을 조직병리학을 사용하여 변경된 맨킨(Mankin) 스코어 시스템으로 평가하였다.
표 60 OA 모델에서 G:M 조성물에 의한 통증 감도 억제
Figure pat00163
Figure pat00164
OA의 주요 증상 중 하나(즉, 통증)는 주가 경과하면서 모델 유도가 분명했다. 표 60에서 보이는 바와 같이, MIA가 관절 내 주입된 래트는 MIA를 사용한 미처리 비히클 대조군의 평균 통증 감도값으로 나타내어진 통증 감도에서 점진적 증가를 나타냈다. 반면, 500 mg/kg 용량의 G:M으로 매일 6주 동안 경구 처리된 래트는 경구 처리 4주 후에 통증 감도에서 통계적으로 유의한 감소를 나타냈다. 통증 감도의 16.6%, 40.5% 및 22.0% 감소가 1G:1M (500mg/kg)으로 처리된 래트에서 4주, 5주 및 6주에 각각 나타났다. 디클로페낙(양성 대조군)은 5주부터 통증 감도의 유의한 감소를 나타냈으며, 20.8% 및 18.2%의 감소율이 5주와 6주에 각각 관찰되었다.
실시예 77
감비르:뽕나무 조성물에 의한 관절 연골의 보호
실시예 76의 래트 모델에서, 관절 연골 매트릭스 무결성도 측정하였다. 실시예 76의 통증 감도 감소 데이터에 따라, G:M 500 mg/kg의 용량으로 처리된 동물에 대한 총 맨킨(Mankin) 스코어로 나타난 바와 같이 관절 연골 매트릭스 무결성의 통계적으로 유의한 개선이 확인되었다(표 61). 반면, 양성 대조군, 디클로페낙은 양성 경향을 보이지만, 비히클 대조군과 비교하여 구조, 세포 이상성(abnormality) 및 매트릭스 무결성에서 통계적으로 유의하지 않았다(표 61).
표 61 OA 모델에서 조직병리학적 스코어링에 대한 G:M 조성물의 효과
Figure pat00165
* 구조 스코어 (0-6): 0 = 정상; 1 = 불규칙 표면, 예를 들어 래디얼 (radial) 층 내의 갈라짐; 2 = 판누스(pannus); 3 = 표층 연골층의 부재; 4 = 약간의 해체 (부재성 세포열 및 일부 작은 표층 클러스터); 5 = 석회화 연골층 내로의 갈라짐; 6 = 해체(무질서한 구조, 클러스터 및 용골(oesteoclastic) 활성)
† 세포 이상성 스코어 (0-3): 0 = 정상; 1 = 과세포성(Hyper cellularity), 예를 들어 작은 표층 클러스터; 2 = 클러스터, 3 = 저세포성(Hypocellularity)
‡ 매트릭스 (사프라닌-O) 염색 스코어 (0-4): 0 = 정상/ 염색의 약간 감소; 1 = 래디얼 층 내 염색 감소; 2 = 영역사이 매트릭스 내 염색 감소; 3 = 세포주위 매트릭스 내 염색 감소; 4 = 염색 없음.
실시예 78
강황, 운카리아, 아카시아 및 뽕나무로부터의 조합 추출물의 관절 기능 지원에 대한 인간 임상 시험
인간 임상 시험에서, 이중 맹검 랜덤화 플라시보 및 양성 비교 통제 시험을 수행하여 골관절염(OA) 환자에서 C-강황, G-감비르 또는 A-아카시아, 및 M-뽕나무 혼합물의 효능과 안전성을 시험하였다. 이 시험은 0-10 숫자 등급 스케일(시각적 아나로그 스케일, VAS)로 통증 감도의 변화, WOMAC 스케일로 통증 감도의 변화 및 WOMAC 스케일로 측정된 물리적 기능 및 강직성의 변화를 평가하였다. 개선의 객관적 기준을 시험의 베이스라인과 종료점에서 평가하였고, BIODEX에 의한 운동 및 6분 이내에 이동한 거리의 범위와 안정성 평가도 포함되었다.
스크리닝 전에 대상은 IRB 승인 사전동의서 양식을 읽고 서명해야 한다. 이 시험 개체군은 18세 초과 75세 미만이고, 병력으로 측정했을 때 일반적으로 건강이 양호한 남성 및 여성 대상으로 구성되었다. 출산 가능성이 있는 여성 대상은 베이스라인에서 소변 임신 시험이 음성이어야 한다. 이 시험의 목표는 시험군 당 40명의 대상을 치료하는데 충분한 대상을 등재하는 것이다.
포함 기준에 나열된 OA의 명확한 정의: 18 내지 75세의 건강한 성인 남성/여성, 통증 진입 범위, 6개월 이상 무릎 관절통 이력, 안쪽 또는 측면 정강넙다리 관절 라인 무름, 평균적으로 시각적 아나로그 스케일(VAS)에서 매주 대부분의 날을 기능을 방해받는 일측방 무릎통 6/10 이상, 및 골관절염의 켈그렌(Kellgren) 등급 II 또는 III 방사선 촬영 변화를 만족. 모든 진통성 의약(일반의약품[OTC] 진통제 포함) 사용의 중지 의지, 단 시험 치료 및 특별히 시험 목적의 구제 의약으로서 제공된 것 제외.
1차 목표
- 0-10 숫자 등급 스케일에서 통증 감도의 변화, 0-10 cm VAS에서 통증 감도의 변화
- WOMAC 통증 서브스케일 (0-100)에서 통증 감도의 변화, WOMAC 전체 스코어 모든 서브스케일의 변화.
2차 목표 안전성 평가
- 치료에 대한 반응의 환자 전반적 평가, WOMAC 및 WOMAC의 신체기능 및 강직성 서브스케일에서 치료 개선에 대한 반응의 임상의 전반적 평가
- 능동적 및 수동적 운동 범위, 6분 보행 시험에서 보행한 거리로 측정된 관절 기능의 변화. QOL: 일반적 건강 상태 기준, SF-36 및 특이적 건강 상태 기준, WOMAC
안전성 평가:
- 완전 혈구 측정, 간 기능 시험 화학 패널, PT/INR, HCG 및 AE 평가 수행 예정.
데이터 분석
이 시험에서 120명의 대상은 생성물 1, 생성물 2, 또는 플라시보를 수용하도록 동등하게 랜덤화되었다(각 40명). 감손율이 12주의 시험기간 동안 프로토콜에 따른 개체군에서 30%이면, 그룹 당 대략 21명의 분석가능한 대상이 있어야 한다. 파워 분석을 수행하여 유효 크기(효능 종말점의 평균 12주 변화에서 생성물들 간 차이)를 결정하였고, 그룹 당 21명의 분석가능한 대상으로 p ≤ 0.05의 유의한 결과를 얻는 80% 기회를 제공하였다.
이 시험에서 통계적 디자인 매개변수는 다음과 같다:
- 알파 레벨: 0.05 (p ≤ 0.05 통계적으로 유의한 것으로 간주);
- 파워: 0.8 (유의한 p값을 얻는 80% 기회);
- 1차 귀무 가설(Primary Null Hypothesis): 임의의 보충물에 대한 평균 12주 변화가 플라시보에 대한 12주 변화와 같아진다.
- 대체 가설: 두 생성물 간의 변화가 동등하지 않다.
- 통계 시험: 공분산(Covariance) 분석(단일(unpaired) 스튜던트 t 시험에 기초한 파워 계산);
- 시료 크기: 120명의 등재 대상, 각 생성물 그룹 당 40명;
Figure pat00166
Figure pat00167
상기에서 기술한 다양한 구체예들을 조합하여 추가 구체예를 제공할 수 있다. 본 명세서에서 언급되거나 출원 데이터 목록에서 열거된 모든 미국 특허, 미국 특허출원 공개, 미국 특허출원, 외국 특허, 외국 특허출원 및 비-특허 간행물은 그 전문이 본 원에 참고로 포함되었다. 구체예의 측면들은 다양한 특허, 특허출원 및 간행물의 개념을 적용할 필요가 있을 경우 변형되어 추가 구체예를 제공할 수 있다. 이러한 변화 및 다른 변화가 상기 상세한 설명의 측면에서 구체예로 만들어질 수 있다.
일반적으로 이하의 청구범위에 있어서, 사용된 용어들은 청구범위를 본 명세서 및 청구범위에 기술된 특정 구체예로 제한시키지 않아야 하며, 이러한 청구범위가 등재된 것과 등가인 범위와 함께 모든 가능한 구체예를 포함하는 것으로 간주되어야 한다. 따라서, 청구범위는 명세서에 의해 제한되지 않는다.

Claims (30)

  1. i) 하나 이상의 프레닐화 플라보노이드와 하나 이상의 스틸벤이 강화된 뽕나무 (Morus) 추출물; 및
    ii) 플라반(flavan)이 강화된 아카시아 추출물 또는 운카리아(Uncaria) 추출물;의 혼합물을 포함하는,
    관절 건강을 위한 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 건강을 유지하기 위한 것인, 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 건강을 치료 또는 관리하기 위한 것인, 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 포유동물의 운동 및/또는 유연성의 정상적이고 편안한 범위를 지원하기 위한 것인, 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 포유동물의 보호성 관절 조직을 분해하는 유해 효소 작용을 감소하기 위한 것인, 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 건강에 영향을 주는 효소 작용을 변경하기 위한 것인, 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 운동 및/또는 관절 기능을 개선하기 위한 것인, 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 포유동물의 물리적 이동성을 개선하기 위한 것인, 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 통증 및/또는 관절 강직성(stiffness)을 경감하기 위한 것인, 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 포유동물의 물리적 이동성을 관리 및 유지하기 위한 것인, 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 포유동물의 운동 및/또는 유연성의 범위를 개선하기 위한 것인, 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 포유동물 관절의 물리적 기능을 개선하기 위한 것인, 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 포유동물의 유연성과 편안한 운동을 증진하거나 강화하기 위한 것인, 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 건강을 지원하기 위한 것인, 조성물.
  15. 제1항에 있어서, 포유동물의 건강한 관절 기능 및 안락감을 증진하기 위한 것인, 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 불쾌감을 완화하기 위한 것인, 조성물.
  17. 제1항에 있어서, 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합으로 야기된 포유동물의 관절 불쾌감을 완화하기 위한 것인, 조성물.
  18. 제1항에 있어서, 연골 무결성을 보호하여 포유동물의 관절 건강을 증진하기 위한 것인, 조성물.
  19. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 연골을 유지하기 위한 것인, 조성물.
  20. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 연골을 지원하기 위한 것인, 조성물.
  21. 제1항에 있어서, 포유동물의 연골 열화를 치료, 예방 또는 관리하기 위한 것인, 조성물.
  22. 제1항에 있어서, 포유동물의 연골 열화를 최소화하기 위한 것인, 조성물.
  23. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 윤활 활액을 유지하여 관절 건강 또는 편안함을 증진하기 위한 것인, 조성물.
  24. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 안정성 및 관절 유연성을 지원하기 위한 것인, 조성물.
  25. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절 활성화 및 이동성을 촉진하기 위한 것인, 조성물.
  26. 제1항에 있어서, 포유동물의 유연한 관절 및 강한 연골을 촉진하기 위한 것인, 조성물.
  27. 제1항에 있어서, 포유동물의 증강된 유연성 및/또는 강도를 지원하는 관절의 정상 혈류를 유지하기 위한 것인, 조성물.
  28. 제1항에 있어서, 운동, 작업, 과로 또는 이들의 조합 후 포유동물에서 관절의 편안함과 폭넓은 운동 범위를 촉진하기 위한 것인, 조성물.
  29. 제1항에 있어서, 포유동물의 관절염을 치료하기 위한 것인, 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 관절염이 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 스틸병(Still's disease), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 패혈성 관절염, 라이터 증후군, 베체트 증후군 또는 펠티(Felty) 증후군인, 조성물.
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