KR20210008177A

KR20210008177A - 뇌내 출혈을 치료하기 위한 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20210008177A
Application number: KR1020217001254A
Authority: KR
Inventors: 스티븐 아킨; 조아힘 프루비스; 마커스 이. 카; 서니타 헷; 리마 자수자; 데브라 디. 피트맨
Original assignee: 화이자 인코포레이티드
Priority date: 2014-01-24
Filing date: 2015-01-15
Publication date: 2021-01-20
Also published as: US20160375109A1; HUE047588T2; PL3096779T3; BR112016014617A2; DK3096779T3; JP6624787B2; HUE047588T4; IL246637A0; EP3096779A1; SI3096779T1; EP3096779B1; WO2015110939A1; PT3096779T; JP2015147764A; CN105934250A; KR20180014221A; CA2937418A1; RU2016126423A; CN112156176A; MX2016009665A

Abstract

본 개시내용은 FXa의 변이체를 투여하는 것에 의해 대상체에서 뇌내 출혈 (ICH)을 치료하거나 예방하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

뇌내 출혈을 치료하기 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING INTRACEREBRAL HEMORRHAGE}

[관련 출원의 상호-참조]

본 출원은 2014년 1월 24일자 U.S. 가출원 제61/931,071호의 우선권을 주장하는 바, 그의 내용은 그 전체가 본원에 참조로써 개재된다.

[서열 목록 참조]

37 CFR §1.821에 따라 PC072056A_SEQLIST_ST25.txt라는 파일명으로서 EFS-웹을 통하여 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF)로 동봉하여 함께 제출되는 서열 목록은 본원에 참조로써 개재된다. 서열 목록의 전자 사본은 7 킬로바이트의 파일 크기로 2015년 1월 06일에 생성된 것이다.

외과적 개재 또는 다른 수단에 의해서는 출혈이 조절될 수 없는 일련의 임상 조건에서 과도한 출혈을 조절할 효과적인 치료법이 요구되고 있다. 조절되지 않는 출혈과 연관된 가장 파괴적인 임상 증후군 중 하나는 뇌내 출혈 (ICH)이다. 비-외상성 ICH는 뇌실로 연장될 수 있는 뇌 실질로의 출혈이다. 세계적으로 뇌졸중 사례 중 10 % 이상이 ICH에 기인한다. 미국에서 연간 발병되는 사람수의 추정치는 37,000-52,000 명 내지 많게는 79,500 명까지의 범위로써 (문헌 [Qureshi, et al, N Engl J Med 344(19):1450-1460 (2001)]; [Roger, et al, Circulation 125:e2-220 (2012)]), 인구가 고령화되면서 발생률은 증가할 것으로 예상된다. ICH는 여전히 저조한 임상적 결과와 연관되고 있다. 환자들 중 대략 40-50 %가 1개월 이내에 사망하며 (문헌 [Qureshi; Broderick, et al, Stroke 38:2001-2023 (2007)]), 발병된 사람들 중 많은 비율이 6개월까지 기능적인 독립성을 회복하는 데에 실패한다 (문헌 [Broderick]). 따라서, ICH는 영구적인 부분적이거나 완전한 장애의 주요 원인이 된다.

뇌내 출혈 후의 혈종 부피가 ICH에 걸린 환자에서의 사망률 및 이환율의 독립적인 지표인 것으로 나타나 있다 (문헌 [Broderick, et al, Stroke 24:987-993 (1993)]). 뇌내 출혈 환자 중 대략 26 %에서 기초 CT 스캔 1시간 이내에 혈종 부피 팽창이 발생하므로 (문헌 [Brott, et al, Stroke 28:1-5 (1997)]), 혈종 팽창은 사망률 및 저조한 환자 결과의 또 다른 독립적인 지표가 된다 (문헌 [Davis, et al, Neurology 66:1175-1181 (2006)]; [Delcourt, et al, Neurology 79:314-319 (2012)]).

ICH의 치료를 위한 승인된 치료법은 존재하지 않아서, 현재의 관리는 거의 보조용이다 (문헌 [Rincon and Mayer, Critical Care 12:237-250 (2008)]). 예를 들면, 재조합 응고 인자 VIIa의 투여가 ICH 환자에서 혈종 팽창을 감소시켰으나, 90일에 신경학적 기능을 개선하지는 못하였다 (문헌 [Mayer, et al, NEJM 358:2127-2137 (2008)]). 이에 따라, 사망률을 감소시키고 기능상의 신경학적 결과를 개선하기 위하여, 감수성 환자에서 ICH를 예방하고 ICH에 걸린 환자를 치료하는 효과적인 치료법에 대한 강력한 업계의 요구가 존재하고 있다.

본 출원인은 ICH를 예방 및/또는 치료하는 데에 사용하기 위한 조성물을 포함하여, ICH를 예방 및/또는 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공하는 것에 의해, 이와 같이 중요한 미충족 임상적 요구를 해소하였다. 하기 단락에서는, 본 발명의 구체적인 비-제한적 실시양태들을 제시한다.

특정 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 서열식별번호 (SEQ ID NO) 1의 235 또는 236에 해당하는 아미노산 위치에 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 인자 Xa (FXa) 변이체의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것에 의해 대상체에서 뇌내 출혈 (ICH)을 치료하는 방법을 제공한다. 역시 제공되는 것은 대상체에서 뇌내 출혈 (ICH)을 치료하는 데에 사용하기 위한, 서열식별번호: 1의 235 및/또는 236에 해당하는 아미노산 위치에 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 FXa 변이체이다. 일부 실시양태에서, 위치 235에 해당하는 위치에서의 치환은 Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 다른 실시양태에서, 위치 236에 해당하는 위치에서의 치환은 Leu, Ala 또는 Gly에 의한 것일 수 있다.

특정 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 서열식별번호: 1의 235 또는 236에 해당하는 아미노산 위치에 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 인자 Xa (FXa) 변이체의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것에 의해, ICH에 걸린 대상체가 ICH의 결과로서 사망하게 될 가능성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 위치 235에 해당하는 위치에서의 치환은 Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 다른 실시양태에서, 위치 236에 해당하는 위치에서의 치환은 Leu, Ala 또는 Gly에 의한 것일 수 있다.

특정 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 서열식별번호: 1의 235 또는 236에 해당하는 아미노산 위치에 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 인자 Xa (FXa) 변이체의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것에 의해, 대상체가 ICH에 걸린 후의 대상체 뇌 기능을 개선시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 위치 235에 해당하는 위치에서의 치환은 Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 다른 실시양태에서, 위치 236에 해당하는 위치에서의 치환은 Leu, Ala 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 일부 실시양태에 따르면, 개선된 뇌 기능은 ICH에 의해 야기되는 대상체에서의 상승된 두개내 압력 (ICP)을 80 mm Hg, 70 mm Hg, 60 mm Hg, 50 mm Hg, 40 mm Hg, 30 mm Hg, 20 mm Hg 또는 10 mm Hg의 압력 이하로 감소시키는 것과 연관된다. 다른 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 뇌 관류 압력 (CPP)을 40 mm Hg, 50 mm Hg, 60 mm Hg, 70 mm Hg, 80 mm Hg, 90 mm Hg, 100 mm Hg, 110 mm Hg 또는 120 mm Hg의 압력 이상으로 유지하는 것과 연관된다. 다른 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 뇌 조직 산소 분압 (PbtO2)을 6 mm Hg, 8 mm Hg, 10 mm Hg, 12 mm Hg, 14 mm Hg, 16 mm Hg, 18 mm Hg, 20 mm Hg, 22 mm Hg 또는 24 mm Hg의 압력 이상으로 유지하는 것과 연관된다. 다른 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 피루베이트에 대한 락테이트의 농도 비 (LAR)를 60, 50, 40, 30 또는 20 이하로 감소시키는 것과 연관된다. 다른 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 뇌혈관 압력 반응성 지수의 비 (PRx)를 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0.0, -0.1, -0.2 또는 -0.3 이하로 감소시키는 것과 연관된다.

특정 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 서열식별번호: 1의 235 또는 236에 해당하는 아미노산 위치에 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 인자 Xa (FXa) 변이체의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것에 의해, 대상체가 ICH에 걸린 후의 대상체의 신경학적 손상을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 위치 235에 해당하는 위치에서의 치환은 Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 다른 실시양태에서, 위치 236에 해당하는 위치에서의 치환은 Leu, Ala 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 일부 실시양태에 따르면, 감소되는 신경학적 손상은 글라스고 혼수 점수(Glasgow Coma Score)를 사용하여 평가되며, 치료의 결과로서, 대상체의 점수는 3에서 4 이상으로, 4에서 5 이상으로, 5에서 6 이상으로, 6에서 7 이상으로, 7에서 8 이상으로, 8에서 9 이상으로, 9에서 10 이상으로, 10에서 11 이상으로, 11에서 12 이상으로, 12에서 13 이상으로, 13에서 14 이상으로, 또는 14에서 15로 향상된다. 다른 실시양태에서, 신경학적 손상은 글라스고 결과 척도(Glasgow Outcome Scale) 연장 버전을 사용하여 평가되며, 치료의 결과로서, 치료된 대상체의 평균 점수는 1 이상, 2 이상, 3 이상, 4 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상 또는 8로 향상된다. 다른 실시양태에서, 신경학적 손상은 바델 지수(Barthel Index)를 사용하여 평가되며, 치료의 결과로서, 치료된 대상체의 평균 점수는 10 이상, 20 이상, 30 이상, 40 이상, 50 이상, 60 이상, 70 이상 또는 80 이상, 또는 90 이상으로 향상된다. 다른 실시양태에서, 신경학적 손상은 NIH 뇌졸중 척도를 사용하여 평가되며, 치료의 결과로서, 치료된 대상체의 평균 점수는 42에서 41 이하로, 41에서 40 이하로, 40에서 39 이하로, 39에서 38 이하로, 38에서 37 이하로, 37에서 36 이하로, 36에서 35 이하로, 35에서 34 이하로, 34에서 33 이하로, 33에서 32 이하로, 32에서 31 이하로, 31에서 30 이하로, 30에서 29 이하로, 29에서 28 이하로, 28에서 27 이하로, 27에서 26 이하로, 26에서 25 이하로, 25에서 24 이하로, 24에서 23 이하로, 23에서 22 이하로, 22에서 21 이하로, 21에서 20 이하로, 20에서 19 이하로, 19에서 18 이하로, 18에서 17 이하로, 17에서 16 이하로, 16에서 15 이하로, 15에서 14 이하로, 14에서 13 이하로, 13에서 12 이하로, 12에서 11 이하로, 11에서 10 이하로, 10에서 9 이하로, 9에서 8 이하로, 8에서 7 이하로, 7에서 6 이하로, 6에서 5 이하로, 5에서 4 이하로, 4에서 3 이하로, 3에서 2 이하로, 2에서 1 이하로 또는 1에서 0으로 감소된다. 다른 실시양태에서, 신경학적 손상은 변형 랑킨 척도(modified Rankin Scale)를 사용하여 평가되며, 치료의 결과로서, 치료된 대상체의 평균 점수는 약 5 내지 6에서 약 4 내지 5로, 약 4 내지 5에서 약 3 내지 4로, 약 3 내지 4에서 약 2 내지 3으로, 약 2 내지 3에서 약 1 내지 2로, 또는 약 1 내지 2에서 약 0 내지 1로 감소된다. 다른 실시양태에서, 신경학적 손상은 변형 랑킨 척도를 사용하여 평가되며, 치료의 결과로서, 5 또는 6의 변형 랑킨 척도 점수를 갖는 치료된 대상체의 비율이 점수 0, 1, 2, 3 또는 4인 것에 비해 감소된다. 다른 실시양태에서, 신경학적 손상은 변형 랑킨 척도를 사용하여 평가되며, 치료의 결과로서, 4, 5 또는 6의 변형 랑킨 척도 점수를 갖는 치료된 대상체의 비율이 점수 0, 1, 2 또는 3인 것에 비해 감소된다.

특정 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 서열식별번호: 1의 235 또는 236에 해당하는 아미노산 위치에 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 인자 Xa (FXa) 변이체의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것에 의해 대상체가 ICH에 걸린 후의 대상체의 출혈주위 부종(perihemorrhagic edema) (PHE)을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 위치 235에 해당하는 위치에서의 치환은 Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 다른 실시양태에서, 위치 236에 해당하는 위치에서의 치환은 Leu, Ala 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 치료는 ICH에 걸린 대상체에서의 PHE의 평균 부피를 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 또는 95 % 이상까지 감소시킨다. 다른 실시양태에 따르면, 치료는 ICH에 걸린 대상체에서의 PHE에 의해 야기되는 두개내 압력의 평균 증가를 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 또는 95 % 이상까지 감소시킨다.

특정 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 서열식별번호: 1의 235 또는 236에 해당하는 아미노산 위치에 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 인자 Xa (FXa) 변이체의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것에 의해, 대상체가 ICH에 걸린 후의 대상체에서의 혈종 부피 팽창을 감소시키거나 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 위치 235에 해당하는 위치에서의 치환은 Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 다른 실시양태에서, 위치 236에 해당하는 위치에서의 치환은 Leu, Ala 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 치료는 ICH에 걸린 대상체에서의 평균 혈종 부피 팽창을 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 또는 95 % 이상까지 감소시킨다. 다른 실시양태에 따르면, 치료는 대상체에서의 평균 혈종 부피 팽창을 비치료 대조군에 비해 약 1 ml, 1.5 ml, 2 ml, 2.5 ml, 3 ml, 3.5 ml, 4 ml, 4.5 ml, 5 ml, 5.5 ml, 6 ml, 6.5 ml, 7 ml, 7.5 ml, 8 ml, 8.5 ml, 9 ml, 9.5 ml, 10 ml, 10.5 ml, 11 ml, 11.5 ml, 12 ml, 12.5 ml, 13 ml, 13.5 ml, 14 ml, 14.5 ml, 15 ml, 16 ml, 17 ml, 18 ml, 19 ml, 20 ml, 22 ml, 24 ml, 26 ml, 28 ml, 30 ml, 35 ml, 40 ml, 45 ml 또는 50 ml 이상까지 감소시킨다. 다른 실시양태에 따르면, 치료는 혈종 부피가 3 ml 이상, 6 ml 이상 또는 12.5 ml 이상 팽창된 대상체의 비율의 비치료 대조군 대비 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 또는 95 % 이상까지의 감소를 초래한다. 다른 실시양태에 따르면, 치료는 혈종 부피가 15 %, 20 %, 25 %, 30 % 또는 33 % 이상까지 팽창된 대상체의 비율의 비치료 대조군 대비 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 또는 95 % 이상까지의 감소를 초래한다. 다른 실시양태에 따르면, 치료는 치료 후 4, 3, 2 또는 1의 반점 징후 점수(spot sign score)를 가지는 대상체의 비율의 비치료 대조군 대비 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 또는 95 % 이상까지의 감소를 초래한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 반점 징후 점수는 FXa 변이체의 첫 번째 투여 30분, 45분, 60분, 75분, 90분, 2시간, 2.5시간, 3시간, 3.5시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 18시간, 24시간, 30시간, 48시간, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 18일, 3주 또는 4주 후에 결정된다.

본 개시내용의 다른 실시양태에 따르면, 대상체에서 뇌내 출혈 (ICH)을 치료하거나, ICH에 걸린 대상체의 뇌 기능을 개선하거나, ICH에 걸린 대상체의 신경학적 손상을 감소시키거나, ICH에 걸린 대상체에서 출혈주위 부종 (PHE)을 감소시키거나, 또는 ICH에 걸린 대상체에서 혈종 부피 팽창을 감소시키거나 예방하는 데에 사용하기 위한, 서열식별번호: 1의 235 및/또는 236에 해당하는 아미노산 위치에 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 인자 Xa (FXa) 변이체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 위치 235에 해당하는 위치에서의 치환은 Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly에 의한 것일 수 있다. 일부 다른 실시양태에서, 위치 236에 해당하는 위치에서의 치환은 Leu, Ala 또는 Gly에 의한 것일 수 있다.

또한, 또 다른 실시양태에 따르면, 이전의 실시양태들 중 어느 것은 추가적으로 뇌내 출혈이 뇌의 대뇌, 전두엽, 두정엽, 후두엽, 측두엽, 소뇌, 뇌간, 중뇌, 교뇌, 수질, 뇌하수체, 시상하부, 시상, 해마, 편도체, 전장 또는 기저 핵에서 발생하는 것을 특징으로 할 수 있다.

도 1a는 정상 인간 혈장 샘플에서 응고가 개시된 후 생성되는 트롬빈의 양에 대한 상이한 농도의 활성화된 인자 X 변이체 FXa^I16L 첨가의 효과를 시험하는 트롬빈 생성 검정 (TGA)의 결과를 나타낸다. 60-분의 실험 시간 경과 동안, FXa^I16L의 첨가는 비히클만으로 처리된 혈장에 비해 트롬빈 생성의 투여량 의존성 증가를 초래하였다.
도 1b는 정상 인간 혈장 샘플에서 응고가 개시된 후 생성되는 트롬빈의 양에 대한 상이한 농도의 혈장-유래 활성화 인자 X pdFXa 첨가의 효과를 시험하는 트롬빈 생성 검정 (TGA)의 결과를 나타낸다. 60-분의 실험 시간 경과 동안, pdFXa의 첨가는 비히클만으로 처리된 혈장에 비해 트롬빈 생성의 투여량 의존성 증가를 초래하였다.
도 1c는 도 1a 및 도 1b에 기술되어 있는 실험의 데이터로부터 계산된 응고 개시 단계를 위한 지체 시간을 나타낸다. 비히클 만으로 처리된 인간 혈장에 비해, pdFXa 및 FXa^I16L 모두가 지체 시간을 단축하였지만, FXa^I16L 처리된 혈장의 지체 시간이 pdFXa로 처리된 혈장에 비해 더 길었다.
도 2a는 꼬리 가로절단 후의 비-혈우병 마우스로부터의 혈액 손실에 대한 점증적 농도의 FXa^I16L을 사용한 처리의 효과를 나타낸다. 꼬리 가로절단 전의 FXa^I16L 처리는 비히클만으로 처리된 마우스에 비해 총 혈액 손실에 있어서의 투여량-의존성 감소를 야기하였다.
도 2b는 꼬리 가로절단 후의 비-혈우병 래트로부터의 혈액 손실에 대한 점증적 농도의 FXa^I16L을 사용한 처리의 효과를 나타낸다. 꼬리 가로절단 전의 FXa^I16L 처리는 비히클만으로 처리된 래트에 비해 총 혈액 손실에 있어서의 투여량-의존성 감소를 야기하였다.
도 3a는 ICH용 동물 모델로서 뇌내 출혈을 발생시키도록 실험적으로 조작된 마우스에서의 혈종 부피에 대한 점증적 농도의 FXa^I16L을 사용한 처리의 효과를 나타낸다. 뇌 조직으로의 실험적으로 유도된 출혈 후의 FXa^I16L 처리는 비히클만으로 처리된 마우스에 비해 혈종 부피에 있어서의 투여량-의존성 감소를 야기하였다.
도 3b는 도 3a의 데이터를 바탕으로 투여량과 관련시켜 비히클과 비교된 혈종 부피의 % 감소를 나타낸다.
도 4a는 ICH용 동물 모델로서 뇌내 출혈을 발생시키도록 실험적으로 조작된 래트에서의 혈종 부피에 대한 점증적 농도의 FXa^I16L을 사용한 처리의 효과를 나타낸다. 뇌 조직으로의 실험적으로 유도된 출혈 후의 FXa^I16L 처리는 비히클만으로 처리된 래트에 비해 혈종 부피에 있어서의 투여량-의존성 감소를 야기하였다.
도 4b는 도 4a의 데이터를 바탕으로 투여량과 관련시켜 비히클과 비교된 혈종 부피의 % 감소를 나타낸다.
도 5는 야생형 인간 인자 X 전구단백질의 아미노산 서열 (서열식별번호: 1)이다. 신호 펩티드는 아미노산 1-23에 해당한다. 전구펩티드는 아미노산 24-40에 해당한다. 활성화된 인자 X (FXa)의 성숙한 경쇄는 아미노산 41-179에 해당한다. 활성화된 FXa (활성화 펩티드 제거 후)의 성숙한 중쇄는 아미노산 235-488에 해당한다. 활성화 펩티드 (AP)는 아미노산 183-234에 해당한다.
도 6은 야생형 인간 인자 X 전구단백질을 코딩하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 2)이다. 코딩 서열은 뉴클레오티드 58 내지 1524에 해당한다.

효소원 특성을 가지는 응고 인자 Xa의 변이체가 혈우병 동물에서 조절되지 않는 출혈을 억제하는 데에 효과적이라는 것은 이미 입증되어 있다. 그러나, 이와 같은 변이체가 무손상 응고 시스템을 가지고 있는 동물에서의 조절되지 않는 출혈을 효과적으로 중지시킬 수 있는지에 대해서는 알려져 있거나 예측된 바가 없다. 본 출원인은 이와 같은 변이체가 비-혈우병 동물에서 효과적인 전구응고제이며 뇌내 출혈의 비-혈우병 동물 모델에서 혈종 팽창을 감소시킬 수도 있다는 것을 입증하였다. 이러한 새로운 연구로 볼 때, 본 개시내용의 FXa 변이체 및 그와 같은 변이체를 포함하는 조성물은 인간 및 비-인간 동물을 포함한 비-혈우병 대상체에서 ICH를 치료 및 예방하기 위한 방법에 유용할 것으로 예상된다. FXa 변이체를 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 비치료 대조군에 비해 대상체의 삶의 질 및 신경학적 기능성을 개선하고, ICH에 의해 야기되는 증상 및 손상의 중증도를 감소시킬 수 있다. 본 개시내용의 FXa 변이체 및 조성물을 사용한 ICH의 치료 및 예방 방법을 하기에 더 상세하게 기술한다.

인자 XA 및 그의 변이체

응고 인자 X (FX)는 프로트롬비나제의 프로테아제 부분인, 내인성 인자 IX/인자 VIII 또는 외인성 경로 (조직 인자/인자 VIIa)에 의한 활성화시 FXa가 되는 효소원이다. 활성화 펩티드 (AP)를 방출하는 Arg-Ile 절단가능 결합의 단백질분해 절단 후, 일련의 잘 정의되어 있는 효소원의 구조적 변화는 성숙한 활성 세린 프로테아제로의 활성화 과정을 구동한다 (그 전체가 본원에 참조로써 개재되는 문헌 [Toso et al., (2008) J. Biol. Chem. 283, 18627-18635]; [Bunce et al., (2011) Blood 117, 290-298]; 및 [Ivanciu et al., (2011) Nat Biotechnol. 29, 1028-1033] 참조). 성숙한 FXa는 촉매촉진 도메인을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 가지고 있다. 성숙한 FXa는 활성화된 보조인자인 인자 Va (FVa)의 결합을 포함하는 프로트롬비나제 복합체의 형성시 활성인 세린 프로테아제가 된다.

활성화 절단시 효소원-유사 FXa 변이체를 산출하는 FX의 변이체 형태들이 개발되었다. 즉, 일단 절단되고 나면, 생성 FXa 변이체는 저조한 활성 부위 기능을 가지며, 순환성 억제제 (즉 안티트롬빈 III 및 TFPI)에 의한 불활성화에 대하여 더 내성이 된다. 따라서, FXa 변이체는 야생형 FXa에 비해 혈장에서 더 긴 반감기를 가진다. FXa 변이체는 FVa, 지질 막 및 칼슘에 결합하여 프로트롬빈을 효율적으로 활성화하는 완전히 활성인 프로트롬비나제 복합체를 형성한다.

FXa의 효소원-유사 변이체는 효소원-유사 입체형태로 순환하는데, 혈전원성인 것으로는 보이지 않는다 (그 전체가 본원에 참조로써 개재되는 문헌 [Toso et al., (2008) J. Biol. Chem. 283, 18627-18635] 및 [Ivanciu et al., (2011) Nat. Biotechnol. 29, 1028-1033] 참조). 이와 같은 FXa 변이체의 예들은 그 전체가 본원에 참조로써 개재되는 국제 특허 공개 WO2007/059513호에 기술되어 있다.

응고 효소는 키모트립신-유사 접힘을 나타내는 S1 펩티다제 계열의 프로테아제에 속하는 트립신-유사 효소이다. 상기 응고 프로테아제는 서로, 그리고 선구 분해 세린 프로테아제에 대하여 고도로 상동성인 촉매촉진 도메인을 포함한다. 구조적 상동성/동일성이 너무 커서 (> 70 %), 응고 효소 촉매촉진 도메인 (인자 Xa 포함)의 잔기들은 키모트립시노겐의 상응하는 잔기에 따라 넘버링된다 (키모트립신 넘버링 시스템: 모두 그 전체가 본원에 참조로써 개재되는 문헌 [Bajaj and Birktoft, Methods Enzymol. 1993; 222:96-128, Table 2] 및 [Bode W, Mayr I, Bauman Y, et al. The refined 1.9 Å crystal structure of human alpha-thrombin: interaction with D-Phe-Pro-Arg chloromethylketone and significance of the Tyr-Pro-Trp insertion segment. EMBO J 1989;8(11):3467-3475] 참조). 따라서, 본원에서 아미노산들은 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 키모트립신 넘버링 시스템에 따라 지칭될 수 있다.

본 개시내용에 따르면, FXa 변이체는 생체 내 또는 시험관 내에서 변이체가 야생형 FXa 단백질에 비해 더 효소원-유사성이 되게 하는 아미노산 치환을 포함하는 FXa 단백질일 수 있다. 본 개시내용의 FXa 변이체는 실질적으로 프로트롬비나제의 형성시 야생형 FXa 활성을 회복한다. 본 개시내용의 방법에 유용한 FXa 변이체의 예는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 변형을 포함하는 변이체이다: 키모트립신 넘버링 시스템에 따라 a) 위치 16의 IlE이 Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly인 것 및 b) 위치 17의 Val이 Leu, Ala 또는 Gly인 것. 키모트립신 넘버링 시스템에서의 아미노산 16 및 17은 서열식별번호: 1 (인간 인자 X 전전구단백질)의 각각 아미노산 235 및 236에 출현한다. 특정 실시양태에서, FXa 변이체는 FXa^I16L 및 FXa^I16T이다 (본원에서 FXa 변이체에 사용되는 명명법은 키모트립신 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 위치에 원래의 아미노산을 열거한 후, 이어서 치환되는 아미노산을 열거함). FXa 변이체는 임의 포유동물 FXa의 변이체일 수 있다. 그러나, 특히 중요한 것은 인간 FXa의 FXa 변이체이다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 변이체 FXa로 활성화되는 FX 변이체는 비-자연 세포내 단백질분해 절단 부위를 삽입하는 것에 의해 추가적으로 변형될 수 있다. 비-제한적인 예에서는, 포유동물 세포에서 "활성화된" 효소원-유사 FXa 변이체를 발현하기 위하여, 변이체 FX 효소원에서 서열식별번호: 1의 위치 234 (키모트립신 넘버링 시스템의 위치 15)의 Arg와 서열식별번호: 1의 위치 235 (키모트립신 넘버링 시스템의 위치 16)에 해당하는 위치의 아미노산 사이에 비-자연 세포내 단백질분해 절단 부위가 삽입될 수 있다. 특정 실시양태에서, 비-자연 세포내 프로테아제 절단 부위는 Arg-Lys-Arg 또는 Arg-Lys-Arg-Arg-Lys-Arg (서열식별번호: 3)이다. 이러한 절단 부위는 세포 내에서 프로테아제 (PACE/퓨린-유사 효소)에 의해 효율적으로 인식되어 제거된다. 이와 같은 절단은 이제는 서열식별번호: 1의 위치 235 (키모트립신 넘버링 시스템의 위치 16)에 해당하는 위치의 아미노산에서 성숙한 분자 중쇄가 시작하는 프로세싱된 변이체 FXa로 이어질 수 있다. 상기 위치에서의 이와 같은 절단 부위의 도입은 FX의 FXa로의 세포내 전환을 가능케 한다.

특정 실시양태에서는, FX 변이체 활성화 펩티드 (AP)의 전체 아미노산 서열 (즉 서열식별번호: 1의 아미노산 183-234)이 비-자연 세포내 프로테아제 절단 부위로 대체된다. 특정 실시양태에 따르면, 상기 비-자연 세포내 프로테아제 절단 부위는 Arg-Lys-Arg 또는 Arg-Lys-Arg-Arg-Lys-Arg (서열식별번호: 3)이다. 상기에서 설명한 바와 같이, 이와 같은 변형은 세포에 의해 발현되는 FX 변이체의 세포내 절단을 가능케 한다. 세포내 절단은 FX 변이체를 활성화된 효소원-유사 FXa 변이체로 전환시키며, 그것은 이후 차후의 정제를 위하여 세포에 의해 분비된다. 이와 같은 접근법은 그렇지 않을 경우 예를 들면 단백질을 단리한 후 또는 혈액 응고 직전에 변이체 응고 인자를 활성화하는 데에 필요하게 될 세포외 절단에 대한 필요성을 제거한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체는 자연의 야생형 인간 신호 서열 및/또는 전구펩티드 서열을 포함하는 FX 변이체 전구단백질로부터 유도된다. 다른 실시양태에서는, 상응하는 자연 아미노산 서열 대신 비-인간 종 유래의 FX 신호서열 및/또는 전구펩티드가 사용될 수 있다. 또한 또 다른 실시양태에서는, 상응하는 자연 아미노산 서열 대신 다른 인간 또는 비-인간 분비 단백질 유래의 신호 서열 및/또는 전구펩티드 서열이 사용될 수 있다.

대표적인 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 235의 아미노산 (야생형 서열에서는 이소류신)은 트레오닌 (Thr), 류신 (Leu), 페닐알라닌 (Phe), 아스파르트산 (Asp) 또는 글리신 (Gly)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 다른 아미노산으로 치환된다. 이러한 치환은 각각 명명법 I235T, I235L, I235F, I235D 및 I235G를 사용하여 기재될 수 있는데, 여기서 첫 번째 문자는 이소류신의 단일 문자 코드이며, 마지막 문자는 야생형 서열에 치환되는 아미노산의 단일 문자 코드이다. 서열식별번호: 1의 위치 235는 키모트립신 넘버링 시스템의 위치 16과 등가이므로, 동일한 치환이 I16T, I16L, I16F, I16D 및 I16G로 기재될 수 있다. 한 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 235의 아미노산은 Thr에 의해 치환된다 (즉 I235T 또는 I16T). 한 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 235의 아미노산은 Leu에 의해 치환된다 (즉 I235L 또는 I16L). 한 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 235의 아미노산은 Phe에 의해 치환된다 (즉 I235F 또는 I16F). 한 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 235의 아미노산은 Asp에 의해 치환된다 (즉 I235D 또는 I16D). 한 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 235의 아미노산은 Gly에 의해 치환된다 (즉 I235G 또는 I16G).

또 다른 대표적인 실시양태에 따르면, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 236의 아미노산 (야생형 서열에서는 발린)은 류신 (Leu), 알라닌 (Ala) 또는 글리신 (Gly)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 다른 아미노산으로 치환된다. 이러한 치환은 각각 명명법 V236L, V236A 및 V236G를 사용하여 기재될 수 있는데, 여기서 첫 번째 문자는 발린의 단일 문자 코드이며, 마지막 문자는 야생형 서열에 치환되는 아미노산의 단일 문자 코드이다. 서열식별번호: 1의 위치 236은 키모트립신 넘버링 시스템의 위치 17과 등가이므로, 동일한 치환이 V17L, V17A 및 V17G로 기재될 수 있다. 한 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 236의 아미노산은 Leu에 의해 치환된다 (즉 V236L 또는 V17L). 한 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 236의 아미노산은 Ala에 의해 치환된다 (즉 V236A 또는 V17A). 한 실시양태에서, FXa 변이체는 서열식별번호: 1의 아미노산 41-179 및 아미노산 235-488을 포함하며, 여기서 위치 236의 아미노산은 Gly에 의해 치환된다 (즉 V236G 또는 V17G).

다른 실시양태에서, 선행 단락에서 기술된 구체적인 변이체들을 포함한 본 개시내용의 FXa 변이체에는 단백질의 경쇄 및/또는 성숙한 중쇄의 다양한 동형들이 포함될 수 있다. FXa 변이체 성숙 중쇄의 비-제한적인 대표적 동형에는 성숙한 중쇄의 알파 및 베타 버전이 포함된다 (본원에 참조로써 개재되는 문헌 [Jesty et al., J Biol Chem. 1975 Jun 25;250(12):4497-504]). 본 개시내용의 조성물은 알파 및 베타 성숙 중쇄 동형 중 1종 또는 다른 종 또는 모두가 존재하는 FXa 변이체 단백질을 포함할 수 있다.

또 다른 실시양태에 따르면, 선행 단락에서 기술된 구체적인 변이체들을 포함한 FXa 변이체 단백질의 동형에는 가변적인 수의 아미노산 (예를 들면 1, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 이상의 아미노산)이 단백질의 경쇄 및/또는 성숙 중쇄의 카르복시 말단으로부터 결실된 것 또는 거기에 부가된 것 중 어느 하나인 동형이 포함될 수 있다.

특정 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체에는 서열식별번호: 1의 야생형 FXa 아미노산 서열과 비교하였을 때 소정 최소한의 상동성 또는 서열 동일성 정도를 가지는 단백질이 포함된다. 따라서, 예를 들면, FXa 변이체에는 서열식별번호: 1의 야생형 FXa 경쇄 및 성숙 중쇄와 서열이 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 % 또는 99 % 이상 상동성이거나 동일한 경쇄 및 성숙 중쇄를 포함하는 단백질이 포함되는데, Thr, Leu, Phe, Asp 또는 Gly에 의한 서열식별번호: 1의 위치 235에 해당하는 아미노산 위치에서의 치환, 또는 Leu, Ala 또는 Gly에 의한 서열식별번호: 1의 위치 236에 해당하는 아미노산 위치에서의 치환 역시 이와 같은 FXa 변이체에 포함되며, 또한 이와 같은 FXa 변이체는 프로트롬비나제로 통합될 때까지 효소원성이다. 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에서, 야생형 FXa 경쇄 서열은 아미노산 41 내지 179에 해당하며, 야생형 FXa 성숙 중쇄 서열은 아미노산 235 내지 488에 해당한다. % 아미노산 서열 상동성 또는 동일성은 국립 생물공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information)의 웹사이트 (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)에서 입수가능한 프로테인 블라스트(Protein BLAST)와 같은 소프트웨어를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.

다른 비-제한적인 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체에는 또한 비제한적으로 하나 이상의 O-연결 또는 N-연결 탄수화물 기 또는 가변적인 수의 감마-카르복시글루탐산 (Gla) 잔기를 포함한 하나 이상의 번역-후 변형을 포함하는 FXa 변이체가 포함될 수 있다. 본 개시내용의 FXa에는 또한 화학적으로 변형된 FXa 변이체 단백질이 포함될 수 있다. 본 개시내용의 방법에 유용한 다른 FXa 변이체들 역시 가능하다.

본원에서 사용될 때, FXa^I16x라는 용어는 서열식별번호: 1의 위치 235 (키모트립신 넘버링 시스템에서는 위치 16에 해당)에 해당하는 아미노산 이 야생형 서열의 아미노산 (이소류신)으로부터 "x"로 표시되는 다른 아미노산으로 변경되어 있는 활성화된 인자 X의 변이체를 지칭한다. 일부 비-제한적인 대표적 실시양태에서, 아미노산 "x"는 트레오닌 (Thr 또는 T), 류신 (Leu 또는 L), 페닐알라닌 (Phe 또는 F), 아스파르트산 (Asp 또는 D) 또는 글리신 (Gly 또는 G)일 수 있다.

본원에서 사용될 때, FXa^V17y라는 용어는 서열식별번호: 1의 위치 236 (키모트립신 넘버링 시스템에서는 위치 17에 해당)에 해당하는 아미노산이 야생형 서열의 아미노산 (발린)으로부터 "y"로 표시되는 다른 아미노산으로 변경되어 있는 활성화된 인자 X의 변이체를 지칭한다. 일부 비-제한적인 대표적 실시양태에서, 아미노산 "y"는 류신 (Leu 또는 L), 알라닌 (Ala 또는 A) 또는 글리신 (Gly 또는 G)일 수 있다.

FXa^I16x 및 FXa^V17y라는 용어가 서열식별번호: 1에 제시되어 있는 단백질 서열로 제한되는 것은 아니다. 그보다는, 이들 용어는 키모트립신 넘버링 시스템에서 위치 16 또는 17에 특정 치환 돌연변이를 가지며 프로트롬비나제 복합체로 통합될 때까지 효소원으로 거동하는, 본원에서 기술되는 다양한 동형 및 상동성 단백질들을 추가적으로 포함한다.

본 개시내용의 FXa 변이체는 단백질을 발현시키기 위한 어떠한 기술에 의해서도 생성될 수 있다.

"단리된 단백질", "단리된 폴리펩티드" 또는 "단리된 변이체"는 그의 유래의 기원 또는 공급원으로 인하여 (1) 그의 자연 상태에서는 거기에 동반하는 자연상에서는 연관되는 구성요소와 연관되어 있지 않거나, (2) 동일한 종에 속하는 다른 단백질이 없거나, (3) 다른 종에 속하는 세포에 의해 발현되거나, 또는 (4) 자연에서는 출현하지 않는 단백질, 폴리펩티드 또는 변이체이다. 따라서, 화학적으로 합성되거나, 또는 자연에서 그것이 기원하는 세포와 다른 세포 시스템에서 합성되는 폴리펩티드는 그의 자연상에서 연관되어 있는 구성요소로부터 "단리되게" 된다. 단백질은 업계에 잘 알려져 있는 단백질 정제 기술을 사용한 단리에 의해 자연상에서는 연관되어 있는 구성요소가 실질적으로 없게 될 수도 있다.

샘플 중 약 60 내지 75 % 이상이 단일 폴리펩티드 종을 나타내는 경우, 단백질 또는 폴리펩티드는 "실질적으로 순수"하거나, "실질적으로 균질"하거나, 또는 "실질적으로 정제된" 것이다. 폴리펩티드 또는 단백질은 단량체성 또는 다량체성일 수 있다. 실질적으로 순수한 폴리펩티드 또는 단백질은 통상적으로 단백질 샘플의 약 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 % W/W, 더욱 일반적으로는 약 95 %를 구성하게 되며, 99 %를 초과하는 순도일 수도 있다. 단백질 순도 또는 균질성은 단백질 샘플의 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 후 이어서 업계에 잘 알려져 있는 염료를 사용하여 겔을 염색하는 것에 의한 단일 폴리펩티드 밴드의 가시화와 같은 업계에 잘 알려져 있는 수많은 수단에 의해 표시될 수 있다. 특정 목적의 경우, HPLC 또는 정제 업계에 잘 알려져 있는 다른 수단을 사용하여 더 높은 해상도가 제공될 수도 있다.

뇌내 출혈

뇌내 출혈 (ICH)은 뇌에서의 질환에 걸리거나 손상된 혈관의 파열에 기인하여 뇌 조직 (실질)으로의 출혈을 야기하는 뇌졸중의 형태이다. 뇌 손상 및 결과적인 신경학적 손상 또는 사망은 서로 다른 기작을 통하여 발생할 수 있다. 예를 들면, 혈액 누출은 영향을 받은 혈관에 의해 공급되는 뇌 세포에의 산소화를 감소시키는 것으로 생각된다. 또한, 혈액이 모이는 것은 부종을 야기할 수 있으며, 최종적으로 형성되는 혈종은 둘러싸고 있는 뇌 조직에 압력을 가할 수 있는 것으로도 여겨진다. 부종 및 혈종 양자는 두개내 압력을 증가시킬 수 있다. ICH에 의해 야기되는 다른 뇌 손상 기작도 가능하다. 일반적으로 또는 특별한 경우에 ICH 후 뇌 손상을 야기하는 것의 원인이 되는 구체적인 기작 또는 기작들은 어떠한 방식으로도 본 개시내용의 실시양태를 제한하지 않는 것으로 하고자 한다.

ICH는 뇌의 어떠한 부분에서도 발생할 수 있다. ICH가 발생할 수 있거나 뇌의 다른 부분에서 발생하는 ICH에 의해 영향을 받을 수 있는 대표적인 뇌의 영역에는 대뇌 (전두엽, 두정엽, 후두엽, 측두엽 포함), 소뇌, 뇌간 (중뇌, 교뇌, 수질 포함), 뇌하수체, 시상하부, 시상, 해마, 편도체, 전장 또는 기저 핵이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.

ICH는 뇌 동맥으로부터의 출혈의 결과로 발생할 수 있다. 대표적인 뇌 동맥에는 전방 대뇌 동맥 (ACA), 중간 대뇌 동맥 (MCA), 후방 대뇌 동맥 (PCA), 안구 동맥, 윌리스 환(circle of Willis)의 동맥, 후방 하 소뇌 동맥 (PICA) 또는 렌즈핵선조체 동맥이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.

두통, 구역, 구토 및 의식 상실과 같은 증가된 두개내 압력을 표시해주는 소정 증상들이 ICH의 존재를 암시할 수도 있지만, 확정적인 진단은 뇌 영상화를 필요로 한다. 통상의 기술자에게 익숙한 뇌 영상화 (신경영상화로도 지칭됨) 기술에는 컴퓨터화 단층촬영 (CT) 스캔, 혈관조영술, CT 혈관조영술, 자기 공명 영상화 (MRI) 및 MR 혈관조영술이 포함된다. ICH의 확정적인 진단을 위한 다른 기술들은 통상의 기술자에게 익숙할 것이다.

ICH가 혈전에 의한 뇌에서의 혈관의 막힘에 의해 야기되는 허혈성 뇌졸중에 비해 덜 일반적이기는 하지만, 전체 뇌졸중 중 약 12 %를 구성한다. 허혈성 뇌졸중과 달리, ICH는 특히 출혈에 혈종의 팽창이 동반되는 경우, 출혈 개시 후 처음 24시간 이내에 상당히 악화될 가능성이 더 크다. 하기에서 추가적으로 논의될 바와 같이, 혈종 팽창은 악화된 환자 결과와 연관된다.

뇌내 출혈 (ICH)의 치료 방법

본 개시내용은 효소원 특성을 가지는 FXa 변이체, 예를 들면 FXa 변이체 FXa^I16L의 치료 유효량을 ICH의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것에 의해, ICH를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

본원에서 사용될 때, "대상체"라는 용어는 뇌내 출혈에 걸릴 수 있는 뇌, 및 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 활성화될 수 있는 응고 시스템을 가지는 임의의 동물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 상기 동물은 포유동물, 예를 들면 인간 및 비-인간 영장류 (예컨대 유인원, 원숭이, 개코원숭이, 침팬지), 또는 다른 포유동물 예컨대 설치류 (예컨대 마우스, 래트), 소, 말, 고양이, 개, 돼지, 토끼, 염소, 사슴, 양, 흰담비, 게르빌루스쥐, 기니 피그, 햄스터 및 박쥐이다. 통상의 기술자의 지식에 따르는 다른 동물도 가능하다.

일부 실시양태에서, 대상체는 비-혈우병 포유동물, 예를 들면 비-혈우병 인간이다. 다른 실시양태에서, 대상체는 혈우병을 보유하는데, 여기에는 혈우병 A, 혈우병 B 또는 기타 유형의 혈우병이 포함될 수 있다.

본원에서 사용될 때, "치료 유효량"이라는 어구는 ICH에 걸린 대상체에 투여되었을 때 ICH의 결과로서 대상체가 사망하게 될 가능성의 감소를 초래하거나, ICH에 의해 야기되는 이환율의 감소를 초래하거나, ICH에 의해 야기되는 신경학적 손상의 감소를 초래하거나, 또는 ICH 후의 대상체의 기능성, 삶의 질 또는 상태의 개선을 초래하는 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 양을 지칭한다. FXa 변이체의 치료 유효량은 또한 출혈이 개시되거나 ICH가 진단된 후 ICH에 의해 야기되는 혈종의 부피가 팽창하는 정도를 예방하거나 또는 감소시키거나, ICH에 의해 야기되는 출혈-전후 부종의 팽창을 예방하거나 그의 부피를 감소시키거나, 또는 ICH에 수반될 수 있는 두개내 압력의 증가를 예방하거나 감소시킬 수 있다. FXa 변이체의 치료 유효량은 또한 ICH에 의해 야기되는 신체적 징후, 증상, 생리학적 효과 또는 신경학적 손상 중 어느 것의 개시를 지연하거나, 또는 그의 중증도를 완화, 경감 또는 약화시킬 수 있다. FXa 변이체의 치료 유효량은 사용될 구체적인 FXa 변이체의 특성, 치료될 대상체의 질환 상태, 연령, 성 및 체중, 그리고 대상체에서 원하는 반응을 도출하는 FXa 변이체의 능력과 같은 인자들에 따라 달라질 수 있다. 치료 유효량은 FXa 변이체의 임의의 독성 또는 유해 효과가 치료적 유익 효과에 의해 상쇄되는 것이기도 하다.

"예방적 유효량"이라는 어구는 하나 이상의 ICH 위험 인자를 가지고 있는 대상체에 투여되었을 때 대상체가 ICH에 걸리게 될 가능성을 감소시키거나, 또는 유사한 위험 프로파일을 가지는 대상체 집단에서 ICH의 발생률을 감소시키는 FXa 변이체의 양을 지칭한다.

FXa 변이체의 효능 및 유효량은 FXa 변이체를 투여받는 개별 ICH 대상체의 관찰을 바탕으로 결정될 수 있다. FXa 변이체의 효능 및 유효량은 또한 통상의 기술자의 지식에 따라 정해진 ICH 대상체 집단에서 조절되는 임상 연구를 수행하는 것에 의해 결정될 수 있다. 이와 같은 임상 연구의 결과를 바탕으로, 관리 제공자는 ICH를 새롭게 경험하며 그의 치료를 필요로 하는 대상체에게 그것이 투여되기 전에, FXa 변이체의 유효량이 될 가능성이 있는 것을 미리 예측할 수 있다.

바람직하기는 하지만, 효능이 존재함에 있어서, ICH의 신체적 징후 또는 증상 (예를 들면 혈종 팽창 포함) 또는 ICH에 의해 야기되는 신경학적 손상의 완전한 예방 또는 반전이 요구되는 것은 아니다. 그보다는, 상기에서 나타낸 바와 같이, FXa 변이체의 유효량은 ICH 대상체의 상태를 FXa 변이체를 사용한 치료 부재시에 그 대상체의 상태가 될 가능성이 있는 것에 비해 개선할 것만을 필요로 한다.

ICH로 인한 사망률의 감소 방법

ICH에 의해 야기되는 30-일 치명률(fatality)은 40 % 내지 50 %의 범위로써, 사망의 약 절반이 발병 2일 이내에 발생하는 것으로 보고되어 있다 (그 전체가 참조로써 개재되는 문헌 [ML Flaherty et al, "The epidemiology of intracerebral hemorrhage," in Intracerebral Hemorrhage, ed. JR Carhuapoma, et al (Cambridge: Cambridge University Press, 2010)]).

특정 실시양태에 따르면, FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효량을 ICH에 걸린 대상체에게 투여하는 것은 ICH에 의해 야기되는 사망의 발생률 (사망률)을 감소시킬 수 있다. 이는 예를 들면 비치료 대조군 집단에 대비하여 정해진 ICH 대상체 집단에서 사망률을 감소시키는 FXa 변이체의 상대적 능력을 비교하는 것에 의해 입증될 수 있다. 일부 실시양태에서, ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 ICH에 의해 야기되는 사망률을 약 40 %-50 %에서 약 45 %, 약 40 %, 약 35 %, 약 30 %, 약 25 %, 약 20 %, 약 15 %, 약 10 % 이하로 감소시킨다. 일부 다른 실시양태에서, FXa 변이체를 사용한 치료는 ICH에 의해 야기되는 사망률을 FXa 변이체에 의해 치료되지 않는 ICH 대상체의 사망률에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 이상까지 감소시킨다. 사망률은 ICH 발병 후 임의의 시간에 결정될 수 있다. 비-제한적인 대표적 발병 후 시간에는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 10일, 14일, 15일, 20일, 21일, 25일, 28일, 30일 또는 그 이상이 포함된다.

ICH 후의 뇌 기능 개선 방법

본 개시내용의 방법의 한 실시양태에서, FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L) 유효량의 투여는 ICH 대상체의 뇌 기능을 개선한다.

한 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 ICH에 야기되는 상승된 두개내 압력 (ICP)을 소정 최대 수준 미만으로 감소시키는 것과 연관된다. 예를 들면, ICP는 80 mm Hg, 70 mm Hg, 60 mm Hg, 50 mm Hg, 40 mm Hg, 30 mm Hg, 20 mm Hg, 10 mm Hg 이하의 수준까지 감소될 수 있다. 소정 수준 미만으로 ICP를 감소시키는 것에 의해, ICH 대상체가 사망할 가능성은 감소된다. ICP를 모니터링하는 방법은 통상의 기술자에게 익숙하다 (참조로써 개재되는 문헌 [S.-B. Ko, et al., Stroke 42:3087-3092 (2011)]).

또 다른 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 뇌 관류 압력 (CPP)의 소정 최소 수준을 유지하는 것과 연관된다. 예를 들면, CPP는 40 mm Hg, 50 mm Hg, 60 mm Hg, 70 mm Hg, 80 mm Hg, 90 mm Hg, 100 mm Hg, 110 mm Hg, 120 mm Hg 이상의 수준으로 유지될 수 있다. 충분한 수준으로 CPP를 유지하는 것에 의해, ICH 대상체가 뇌 대사 붕괴 또는 뇌 조직 저산소증을 겪을 가능성이 감소된다. 충분히 높은 CPP는 또한 감소된 ICH 대상체 사망률과 연관된다. CPP를 모니터링하는 방법은 통상의 기술자에게 익숙하다 (문헌 [S.-B. Ko, et al., Stroke 42:3087-3092 (2011)]).

또 다른 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 뇌 조직 산소 분압 (P_btO₂)의 소정 최소 수준을 유지하는 것과 연관된다. 예를 들면 P_btO₂는 6 mm Hg, 8 mm Hg, 10 mm Hg, 12 mm Hg, 14 mm Hg, 16 mm Hg, 18 mm Hg, 20 mm Hg, 22 mm Hg, 24 mm Hg 이상의 수준으로 유지될 수 있다. 충분한 수준으로 P_btO₂를 유지하는 것에 의해, ICH 대상체가 뇌 대사 붕괴 또는 뇌 조직 저산소증을 겪을 가능성이 감소된다. 충분히 높은 P_btO₂는 또한 감소된 ICH 대상체 사망률과 연관된다. P_btO₂를 모니터링하는 방법은 통상의 기술자에게 익숙하다 (문헌 [S.-B. Ko, et al., Stroke 42:3087-3092 (2011)]).

다른 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 피루베이트에 대한 락테이트의 농도 비 (LAR)를 소정 수준 미만으로 감소시키는 것과 연관된다. 더 높은 비는 혐기성 대사를 표시한다. 예를 들면, LAR는 60, 50, 40, 30, 20 이하의 수준까지 감소될 수 있다. 소정 수준 미만으로 LAR를 감소시키는 것에 의해, ICH 대상체가 사망할 가능성이 감소된다. 뇌 락테이트 및 피루베이트 농도를 모니터링하는 방법은 통상의 기술자에게 익숙하다 (문헌 [S.-B. Ko, et al., Stroke 42:3087-3092 (2011)]).

또 다른 실시양태에서, 개선된 뇌 기능은 평균 두개내 압력 (ICP)과 평균 동맥혈 압력 (MAP) 사이의 이동 상관 계수로 계산되는 뇌혈관 압력 반응성 지수의 비 (PRx)를 감소시키는 것과 연관된다 (참조로써 개재되는 문헌 [C. Zweifel, et al., Neurosurg. Focus, 25(10):E2 (2008)]). 예를 들면, PRx는 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0.0, -0.1, -0.2, -0.3 이하의 수준까지 감소될 수 있다. 소정 수준 미만으로 PRx를 감소시키는 것에 의해, ICH 대상체가 사망할 가능성이 감소된다. PRx를 계산할 수 있는 ICH 및 MAP의 모니터링 방법은 통상의 기술자에게 익숙하다 (문헌 [S.-B. Ko, et al., Stroke 42:3087-3092 (2011)]).

ICH 후의 신경학적 손상 감소 방법

사망 이외에, 대상체에 대한 ICH의 가장 심각한 충격은 종종 중증인 신경학적 손상으로써, 대상체 및 대상체 가족의 삶의 질을 황폐화하는 것은 물론, 실질적인 사회적 비용을 부과할 수도 있다. 다른 무엇보다도, 신경학적 손상은 ICH 대상체가 도움없이 일을 하거나 일반적인 일상 활동을 계속하는 것을 방해하거나 막을 수 있다. 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 대상체에서 ICH를 치료하거나 예방하는 것에 의해, ICH에 의해 야기되는 신경학적 손상의 정도는 동일 대상체 또는 유사한 비치료 대조군 대상체에서 치료 부재시에 발생하게 될 손상 정도에 비해 감소될 수 있다. 결과적으로, 독립적으로 일을 하거나 기능하는 본 개시내용의 방법에 따라 치료되는 ICH 대상체의 능력이 개선된다.

신경학적 손상은 신경학적 기능 평가 수단을 사용하여 정량될 수 있다. 이와 같은 평가 수단의 비-제한적인 예에는 글라스고 혼수 점수 (GCS), 글라스고 결과 척도 연장 버전 (GOS-E), 바델 지수 (BI), NIH 뇌졸중 척도 (NIHSS) 및 변형 랑킨 척도 (mRS)가 포함된다. 통상적인 기술자의 지식에 따라, 예를 들면 유로콜(EuroQol) 척도, 우울증에 대한 개정 해밀턴 등급화 척도 등을 포함한 다른 평가 수단들이 사용될 수도 있다.

글라스고 혼수 점수는 ICH 후 대상체의 의식 수준 또는 다른 뇌 손상을 기술하고자 하는 것이다. GCS는 3 내지 15로 점수화되는데, 3이 최악이며, 15가 최상이다. 그것은 최고 안구 반응, 최고 구두 반응 및 최고 운동 반응을 포함하는 3종의 파라미터로 구성된다. 최고 안구 반응의 경우, 안구 개방 없음 = 1; 통증에 대한 안구 개방 = 2; 구두 지시에 대한 안구 개방 = 3; 그리고 자발적 안구 개방 = 4이다. 최고 구두 반응의 경우, 구두 반응 없음 = 1; 이해할 수 없는 소리 = 2; 부적절한 언어 = 3; 혼돈 = 4; 그리고 지향성 = 5이다. 최고 운동 반응의 경우, 운동 반응 없음 = 1; 통증에 대한 신장 = 2; 통증에 대한 굴곡 = 3; 통증으로부터 수축 = 4; 국부화된 통증 = 5; 그리고 지시에 복종 = 6이다. 13 이상의 GSC는 경증의 뇌 손상과 상관되며, 9 내지 12는 중간 손상이고, 8 이하는 중증의 뇌 손상이다.

글라스고 결과 척도 (GOS) 및 그의 연장 버전 (GOS-E)는 ICH 또는 다른 뇌 손상 후 대상체가 얼마나 잘 회복되었는지를 기술하고자 하는 것이다. GOS는 5개의 수준 및 연관 점수를 갖는데, 사망 = 1; 식물 상태 (대상체가 살아 있으나 무반응성) = 2; 중증 장애 (대상체가 의식이 있으나 장애로 인하여 다른 이의 일상적인 보조를 필요로 함) = 3; 중간 장애 (대상체가 독립적이나 장애가 있음) = 4; 그리고 우수 회복 (대상체가 대부분의 정상 활동을 재개하였으나 경미한 잔여 문제들을 가질 수 있음) = 5가 포함된다.

연장된 GOS 또는 GOS-E에서는, 점수화 시스템이 8개의 수준으로 확장되는데, 사망 = 1; 식물 상태 = 2; 저급 중증 장애 = 3; 상급 중증 장애 = 4; 저급 중간 장애 = 5; 상급 중간 장애 = 6; 저급 우수 회복 = 7; 그리고 상급 우수 회복 = 8이다.

바델 지수 (BI)는 ICH 또는 다른 뇌 손상 후 대상체의 활동 제한을 측정하기 위한 등급화 척도이다 (참조로써 개재되는 문헌 [Mahoney F. and Barthel D., Functional evaluation: the Barthel Index., Md Med J. 14:61-65 (1965)]). 상기 척도는 섭식 능력, 목욕 능력, 단장 능력, 복장 능력, 장 조절, 방광 조절, 화장실 사용, 침대와 의자 사이 및 역으로 이동하는 능력, 이동성 및 계단 사용 능력을 포함한 10개의 기능상 범주로 구성된다. 대상체는 각 범주에서 특정되는 활동을 수행하는 데에 요구되는 도움의 양으로 점수화된다. 이후, 범주 점수들이 합계됨으로써 전체 활동 점수를 산출한다. 상이한 BI 척도 버전들 사이에서는, 범주는 일치하나 의존성 정도에 할당되는 숫자 값이 달라짐으로써, 사용되는 버전에 따라 최소 및 최대 합계 점수가 달라진다. 예를 들면, 일부 버전에서는 점수가 0 내지 20의 범위인 반면 다른 버전에서는 점수가 0 내지 100의 범위이지만, 모든 버전에서 점수가 더 높을수록 독립적으로 기능하는 대상체의 능력은 더 크다.

NIH 뇌졸중 척도 (NIHSS)는 의식, 언어, 부주의, 시야 상실, 안구외 이동, 운동 강도, 실조, 조음장애 및 감각 상실의 수준에 대한 ICH, 뇌졸중 또는 다른 뇌 손상의 효과를 평가하는 데에 사용되는 15-항목의 신경학적 조사 뇌졸중 척도이다. 훈련된 관찰자가 질문에 응답하고 활동을 수행하는 대상체의 능력을 등급화한다. 각 항목의 등급은 0을 정상으로 하여 3 내지 5 등급으로 점수화된다. 0의 점수는 뇌졸중 증상 없음을 나타내며, 1-4의 점수는 경미한 뇌졸중을 나타내고, 5-15의 점수는 중간 뇌졸중을 나타내며, 16-20의 점수는 중간 내지 중증 뇌졸중을 나타내고, 21-42의 점수는 중증의 뇌졸중을 나타낸다.

변형 랑킨 척도 (mRS)는 ICH, 뇌졸중 또는 다른 뇌 손상 후 대상체의 일상적인 활동에 있어서의 무능 또는 의존성 정도를 측정한다. 점수는 0 내지 6의 범위로써, 0은 신경학적 결손 증상이 없음을 나타내며; 1은 일부 증상의 존재에도 불구하고 심각한 무능이 없음을 나타내고; 2는 약간의 무능 (예컨대 독립적으로 기능할 수 있으나, 모든 이전 활동을 수행할 수는 없음)을 나타내며; 3은 중간 무능 (예컨대 약간의 도움을 필요로 하나, 도움없이 걸을 수 있음)을 나타내고; 4는 중간 중증인 무능 (예컨대 신체의 요구를 돌보거나 도움없이 걸을 수 없음)을 나타내며; 5는 중증의 무능 (예컨대 일정한 간호 관리를 필요로 함, 누워만 있음, 실금)을 나타내고; 6은 사망을 나타낸다.

일부 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효 투여량을 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 신경학적 손상 평가 수단을 사용하여 측정하였을 때의 ICH에 의해 야기되는 신경학적 손상을 감소시키는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에 따르면, 신경학적 기능 평가 수단에는 글라스고 혼수 점수 (GCS), 글라스고 결과 척도 연장 버전 (GOS-E), 바델 지수 (BI), NIH 뇌졸중 척도 (NIHSS) 또는 변형 랑킨 척도 (mRS)가 포함된다. 다른 것의 사용 역시 가능하다. GCS, GOS, GOS-E, BI가 사용되는 경우라면, 감소되는 신경학적 손상은 증가되는 점수로 반영된다.

일부 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효 투여량을 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 글라스고 혼수 점수에서의 대상체의 점수를 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12까지 증가시키는 데에 효과적이다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효 투여량을 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 그의 연장 버전을 포함한 글라스고 결과 척도에서의 대상체의 점수를 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7까지 증가시키는 데에 효과적이다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효 투여량을 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 바델 지수에서의 대상체의 점수를 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20까지, 또는 더 광범위한 점수 범위가 사용되는 경우 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 그 이상까지 증가시키는 데에 효과적이다.

NIHSS 또는 mRS가 사용되는 경우라면, 감소되는 신경학적 손상은 감소되는 점수로 반영된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효 투여량을 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 NIH 뇌졸중 척도에서의 대상체의 점수를 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 또는 42 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다.

변형 랑킨 척도는 보통 ICH에 의해 야기되는 대상체의 무능 또는 의존성의 정도를 평가하는 데에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효 투여량을 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 약 5 내지 6에서 약 4 내지 5로, 약 4 내지 5에서 약 3 내지 4로, 약 3 내지 4에서 약 2 내지 3으로, 약 2 내지 3에서 약 1 내지 2로, 약 1 내지 2에서 약 0 내지 1로 평균 mRS 점수를 감소시키는 데에 효과적이다. 비치료시와 비교되는 다른 실시양태에서, FXa 변이체의 유효 투여량을 사용한 ICH 대상체의 치료는 약 5 내지 6에서 약 3 내지 4로, 또는 약 3 내지 4에서 약 1 내지 2로의 평균 mRS 점수의 감소를 경험하는 대상체의 비율을 증가시킨다.

비치료시와 비교되는 다른 실시양태에서, FXa 변이체의 유효 투여량을 사용한 ICH 대상체의 치료는 점수가 0, 1, 2, 3 또는 4인 대상체에 대비한 5 또는 6의 변형 랑킨 척도 점수를 갖는 대상체의 비율을 감소시키거나, 또는 점수가 0, 1, 2 또는 3 (우수로 특성화)인 대상체에 대비한 4, 5 또는 6 (저조로 특성화)의 점수를 갖는 대상체의 비율을 감소시킨다. 비치료시와 비교되는 다른 실시양태에서, FXa 변이체의 유효 투여량을 사용한 ICH 대상체의 치료는 점수가 0 또는 1인 대상체에 대비한 2, 3, 4, 5 또는 6의 점수를 갖는 대상체의 비율을 감소시킨다. 또한 비치료시와 비교되는 다른 실시양태에서, FXa 변이체의 유효 투여량을 사용한 ICH 대상체의 치료는 2, 3, 4 또는 5의 mRS 점수로부터 6의 mRS 점수로 진행하는 대상체의 비율을 감소시킨다.

일부 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효 투여량을 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 치료의 결과로서 신경학적 손상이 비치료 대조군 ICH 대상체에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 이상까지 감소된 ICH 대상체의 비율을 증가시키는 데에 효과적이다.

신경학적 손상의 평가는 ICH 치료 후의 서로 다른 시간에 평가 수단을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들면, 신경학적 손상은 FXa 변이체를 사용한 ICH의 치료 7일, 10일, 14일, 20일, 21일, 28일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일 또는 90일 또는 그 이상 후에 측정될 수 있다. 치료 후 다른 시간에서의 측정은 통상의 기술자의 지식에 따라서도 가능하다.

ICH 후 부종의 예방 또는 감소 방법

ICH에 부수하는 출혈주위 부종 (PHE)은 환자 이환율에 기여할 수도 있다. 어떠한 특정 작용 이론에도 얽매이고자 하는 것은 아니나, 최초 손상 후 응고 및 혈종 분해의 생성물들이 PHE의 발생으로 이어지는 출혈주위 뇌 조직에 대한 2차 손상 단계를 개시하는 것으로 생각된다. 기저 혈종 부피의 평균 약 2배인 부종은 두개내 압력 및 종괴 효과(mass effect), 예컨대 탈출증을 증가시키는 데에 기여할 수 있다 (참조로써 개재되는 문헌 [D. Staykov, et al., Stroke 42:2625-2629 (2011)]). 부종 부피의 증가는 사망 및 무능과 양성으로 상관된다 (참조로써 개재되는 문헌 [H. Arima, et al., Neurology 73:1963-1968 (2009)]). 부종 부피는 신경영상화 기술, 예컨대 본원의 다른 곳에서 기술되는 바와 같은 MRI 또는 CT 스캐닝을 사용하여 측정될 수 있다.

본 개시내용은 또한 ICH를 경험한 인간 환자를 포함한 대상체에게 효소원 특성을 가지는 FXa 변이체의 치료 유효량을 투여하는 것에 의해, ICH와 연관되어 있는 출혈주위 부종 (PHE)을 예방하거나 또는 약화시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 FXa 변이체는 FXa^I16L이다. FXa 변이체 치료적 유효 투여량을 사용한 치료 후의 부종 부피는 FXa 변이체를 사용하여 치료되지 않는 ICH 환자에서의 부종 부피에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 이상까지 감소될 수 있다. 일부 실시양태에서, 부종 부피는 FXa 변이체가 ICH 대상체에게 투여되기 직전에 통상의 기술자에게 익숙한 신경영상화 또는 다른 기술을 사용하여 측정된다. 다음에는, 존재할 경우의 부종 부피의 변화를 모니터링하기 위하여, FXa 변이체를 사용한 치료가 개시된 후 1회 이상 부종 부피가 측정될 수 있다. 특정 실시양태에서는, 부종 부피 변화를 모니터링하기 위하여, FXa 변이체를 사용한 치료 개시 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 9시간, 12시간, 18시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 5일, 6일, 7일, 14일, 21일 이상 후에 부종 부피가 측정될 수 있다.

다른 실시양태에 따르면, 효소원 특성을 가지는 FXa 변이체의 치료 유효량을 ICH 환자에게 투여하는 것에 의해, 뇌 조직의 압축에 의해 야기되는 증가된 두개내 압력 또는 탈출증과 같은 PHE 후유증의 발생률 또는 중증도가 감소될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 FXa 변이체는 FXa^I16L이다. FXa 변이체의 치료적 유효 투여량을 사용하여 치료되는 ICH 환자에서의 PHE 후유증 (비제한적으로 부종 또는 탈출증 포함)의 발생률 또는 중증도는 FXa 변이체를 사용하여 치료되지 않는 ICH 환자의 것에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 이상까지 감소될 수 있다.

혈종 팽창을 감소시키거나 또는 예방하는 방법

ICH에 의해 야기되는 최초 출혈 후, ICH 환자 중 약 30 %가 계속하여 출혈함으로써 상당한 혈종 팽창을 초래한다 (문헌 [Brouwers and Greenberg, Cerebrovasc. Dis. 35:195-201 (2013)]). 불행히도, 혈종 팽창은 악화된 환자 결과와 연관된다 (문헌 [Davis (2006)]; [Dowlatshahi, et al, Neurology 76:1238-1244 (2011)]). 이와 같은 ICH 환자 하위집단을 치료하기 위하여, 본 개시내용의 FXa 변이체를 포함하는 조성물이 혈종 팽창을 감소시키거나 심지어는 예방하는 데에 효과적인 투여량으로 투여될 수 있다.

ICH 후 최초로, 그리고 이후 그것이 시간 경과에 따라 변화할 때 혈종 부피를 측정하기 위한 다양한 기술들은 통상의 기술자에게 익숙하다. 비-제한적인 예에는 뇌 영상화 기술 예컨대 CT, CTA, MRI 또는 MRA가 포함된다. 구체적인 방법에는 ABC/2, 조정된 C 값을 가지는 ABC/2, 면적측정법 및 3D 부피 렌더링이 포함된다. 뇌 스캔 동안 수집된 데이터를 바탕으로 부피를 계산하는 컴퓨터 소프트웨어의 사용이 일반적이다.

혈종 부피는 ICH를 확정적으로 진단함으로써 기준선 부피를 확립하는 데에 사용되는 일차 뇌 스캔을 사용하여 수집되는 데이터를 바탕으로 계산될 수 있다. 혈종 부피는 혈종 부피가 정적인지 또는 팽창하는지 여부, 그리고 팽창하는 경우라면 어떤 속도인지를 모니터링하기 위하여, 이후의 1회 이상의 예정된 시간에 추가적으로 결정될 수 있다.

일부 실시양태에서, 혈종 팽창은 기준선 뇌 스캔 후 1회 이상의 예정된 시간에서의 부피의 % 증가로 정량될 수 있다. 기준선에 대비한 소정 시간 기간에 걸친 혈종 부피의 비-제한적인 대표적 상대 증가에는 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 %, 150 % 이상이 포함된다. 다른 실시양태에서, 혈종 팽창은 기준선 뇌 스캔 후 1회 이상의 예정된 시간에서의 부피의 절대적 증가로 정량될 수 있다. 기준선에 대비한 소정 시간 기간에 걸친 혈종 부피의 비-제한적인 대표적 절대 증가에는 약 1 밀리리터 (ml), 1.5 ml, 2 ml, 2.5 ml, 3 ml, 3.5 ml, 4 ml, 4.5 ml, 5 ml, 5.5 ml, 6 ml, 6.5 ml, 7 ml, 7.5 ml, 8 ml, 8.5 ml, 9 ml, 9.5 ml, 10 ml, 10.5 ml, 11 ml, 11.5 ml, 12 ml, 12.5 ml, 13 ml, 13.5 ml, 14 ml, 14.5 ml, 15 ml, 16 ml, 17 ml, 18 ml, 19 ml, 20 ml, 22 ml, 24 ml, 26 ml, 28 ml, 30 ml, 35 ml, 40 ml, 45 ml, 50 ml 이상이 포함된다.

비-제한적인 예에서, 혈종 부피는 부피가 증가되었는지, 그리고 그러할 경우 어떠한 양으로 증가되었는지를 결정하기 위하여, 혈종 부피의 기준선 측정 약 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 9시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 36시간, 48시간, 60시간, 72시간 이상 후에 측정될 수 있다. 더 큰 해상도로 시간 경과에 따른 혈종 팽창을 추적하기 위해서는, 동일한 대상체의 다중 스캔이 이루어질 수 있다.

소정의 비-제한적인 실시양태에 따르면, 혈종 팽창은 존재할 경우 계산되는 혈종 부피의 증가가 절대적 부피 기준 또는 부피의 상대적 % 증가 중 어느 하나에서 소정 임계치를 초과하는 경우에 발생하는 것으로 정의될 수 있다. 따라서 예를 들면, 혈종 팽창은 기준선과 비교하였을 때의 부피가 예정된 시간 기간 후 절대 부피의 3 밀리리터 (ml) 이상, 6 ml 이상 또는 12.5 ml 이상까지, 또는 소정의 다른 증가까지 증가되는 경우에 발생하는 것으로 언급될 수 있다. 대안적으로, 혈종 팽창은 기준선에 비교하였을 때의 부피가 예정된 시간 기간 후 부피의 15 % 이상, 20 % 이상, 25 % 이상, 30 % 이상, 33 % 이상까지, 또는 소정의 다른 % 증가까지 증가되는 경우에 발생하는 것으로 언급될 수 있다.

일부 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체 (예컨대 FXa^I16L)의 유효 투여량을 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 그렇지 않을 경우 예를 들면 비치료 대조군에서 발생하게 될 혈종 팽창을 감소시키거나 예방하는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, ICH 대상체는 ICH를 나타내기 전에 항응고제 치료법을 받은 적이 있거나 현재 받고 있는 중이다. 일부 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 그렇지 않을 경우 소정 시간 기간에 걸쳐 발생하게 될 혈종 부피의 평균 팽창을 비치료 대조군에 비해 1 ml, 1.5 ml, 2 ml, 2.5 ml, 3 ml, 3.5 ml, 4 ml, 4.5 ml, 5 ml, 5.5 ml, 6 ml, 6.5 ml, 7 ml, 7.5 ml, 8 ml, 8.5 ml, 9 ml, 9.5 ml, 10 ml, 10.5 ml, 11 ml, 11.5 ml, 12 ml, 12.5 ml, 13 ml, 13.5 ml, 14 ml, 14.5 ml, 15 ml, 16 ml, 17 ml, 18 ml, 19 ml, 20 ml, 22 ml, 24 ml, 26 ml, 28 ml, 30 ml, 35 ml, 40 ml, 45 ml, 50 ml 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 그렇지 않을 경우 소정 시간 기간에 걸쳐 발생하게 될 혈종 부피의 평균 팽창을 비치료 대조군에 비해 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 또는 95 % 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 그렇지 않을 경우 소정 시간 기간에 걸쳐 발생하게 될 혈종 부피의 평균 팽창을 비치료 대조군에 비해 약 5 % 내지 15 %, 약 10 % 내지 20 %, 약 15 % 내지 25 %, 약 20 % 내지 30 %, 약 25 % 내지 35 %, 약 30 % 내지 40 %, 약 35 % 내지 45 %, 약 40 % 내지 50 %, 약 45 % 내지 55 %, 약 50 % 내지 60 %, 약 55 % 내지 65 %, 약 60 % 내지 70 %, 약 65 % 내지 75 %, 약 70 % 내지 80 %, 약 75 % 내지 85 %, 약 80 % 내지 90 %, 약 85 % 내지 95 % 또는 약 90 % 내지 100 %까지 감소시키는 데에 효과적이다.

일부 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 혈종 팽창을 경험하는 대상체의 비율을 감소시키는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 상기 비율은 약 30 % 이상에서 약 25 % 이하, 20 % 이하, 15 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 감소된다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용한 치료는 소정 시간 기간에 걸쳐 혈종 팽창을 경험하는 ICH 대상체의 비율을 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % 이상까지 감소시킨다.

다른 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 혈종 부피가 소정 시간 기간에 걸쳐 3 ml 이상, 6 ml 이상 또는 12.5 ml 이상까지 (또는 소정의 다른 양 이상까지) 증가되는 대상체의 비율을 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 혈종 부피가 소정 시간 기간에 걸쳐 15 % 이상, 20 % 이상, 25 % 이상, 30 % 이상, 33 % 이상까지 (또는 소정의 다른 % 이상까지) 증가되는 대상체의 비율을 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다.

CT 혈관조영술 또는 다른 방법을 사용하여 확인되는 소위 "반점 징후(spot sign)"의 존재는 혈종 팽창 및 악화된 환자 결과와 연관되며, 그의 지표가 된다. 혈종 팽창의 반점 징후 지표 값은 증상의 발병 6시간 후를 초과하여 병원에 온 환자에도 존재한다 (문헌 [Brouwers, et al., Neurocrit Care 17:421-428 (2012)]).

반점 징후는 급성 일차 실질 혈종 내의 하나 이상의 작은 대조 강화 초점이다. 어떠한 특정 작용 이론에도 얽매이고자 하는 것은 아니나, 반점 징후의 존재는 활성인 혈관외유출로 인한 것으로 여겨진다 (문헌 [Wada, et al, Stroke 38:1257-1262 (2007)]; [Brouwers, et al, Stroke 43:3427-3432 (2012)]; [Demchuk, et al, Lancet Neurol. 11:307-314 (2012)]).

반점 징후의 수, 최대 축상 치수 및 최대 약화를 기준으로 하는 반점 징후 특징 바탕의 점수화 시스템이 제안된 바 있다 (문헌 [Delgado, et al, Stroke 40:2994-3000 (2009)]). 반점 징후가 존재하는 경우, 점수는 각각 크기가 5 mm 미만이며 180 HU 미만의 약화를 나타내는 1 또는 2개 반점 징후의 존재에 해당하는 1로부터 가장 큰 것이 축상 치수가 5 mm 이상이며 180 HU 이상의 최대 약화를 나타내는 3개 이상 반점 징후의 존재에 해당하는 4까지의 범위이다. 0의 점수는 반점 징후가 존재하지 않음을 표시한다. 상기 점수는 혈종 팽창의 위험과 고도로 상관된다.

일부 실시양태에 있어서는, 특정 반점 징후 점수를 갖는 ICH에 걸린 대상체가 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 치료될 수 있다. 따라서, 예를 들면 ICH에 걸려 있으며 4, 3, 2 또는 1의 반점 징후 점수를 갖는 대상체가 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 치료될 수 있다. 다른 실시양태에서, FXa 변이체를 사용하여 ICH 대상체를 치료하는 것은 특정 대상체의 반점 징후 점수를 감소시킨다. 따라서, 예를 들면 최초에는 4의 반점 징후 점수를 나타내던 ICH 대상체가 FXa 변이체를 사용한 치료의 결과로서 그 또는 그녀의 점수를 3, 2, 1 또는 0으로 감소시킬 수 있다. 최초에 3의 반점 징후 점수를 나타내던 ICH 대상체는 FXa 변이체를 사용한 치료의 결과로서 그 또는 그녀의 점수를 2, 1 또는 0으로 감소시킬 수 있다. 최초에 2의 반점 징후 점수를 나타내던 ICH 대상체는 FXa 변이체를 사용한 치료의 결과로서 그 또는 그녀의 점수를 1 또는 0으로 감소시킬 수 있다. 또한 최초에 1의 반점 징후 점수를 나타내던 ICH 대상체는 FXa 변이체를 사용한 치료의 결과로서 그 또는 그녀의 점수를 0으로 감소시킬 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 4의 반점 징후 점수를 나타내는 대상체의 비율을 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 3의 반점 징후 점수를 나타내는 대상체의 비율을 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다. 다른 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 2의 반점 징후 점수를 나타내는 대상체의 비율을 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 1의 반점 징후 점수를 나타내는 대상체의 비율을 비치료 대조군에 비해 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % 이상까지 감소시키는 데에 효과적이다. 또한 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 0의 반점 징후 점수를 나타내는 대상체의 비율을 비치료 대조군에 비해 약 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 150 %, 200 %, 250 %, 300 %, 350 %, 400 % 이상까지 증가시키는 데에 효과적이다. 다른 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 임의 반점 징후의 발생률을 약 5 % 내지 15 %, 약 10 % 내지 20 %, 약 15 % 내지 25 %, 약 20 % 내지 30 %, 약 25 % 내지 35 %, 약 30 % 내지 40 %, 약 35 % 내지 45 %, 약 40 % 내지 50 %, 약 45 % 내지 55 %, 약 50 % 내지 60 %, 약 55 % 내지 65 %, 약 60 % 내지 70 %, 약 65 % 내지 75 %, 약 70 % 내지 80 %, 약 75 % 내지 85 %, 약 80 % 내지 90 %, 약 85 % 내지 95 % 또는 약 90 % 내지 100 %까지 감소시키는 데에 효과적이다.

특정 실시양태에 따르면, 반점 징후 점수는 본 개시내용의 FXa 변이체의 투여 전 또는 후 예정된 시간에서의 신경영상화 후에 결정될 수 있다. 예를 들어 일부 실시양태에서, 반점 징후 점수는 일차 또는 이후의 FXa 변이체 투여 30분, 45분, 60분, 75분, 90분, 2시간, 2.5시간, 3시간, 3.5시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 18시간, 24시간, 30시간, 48시간, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 18일, 3주, 4주 또는 소정의 다른 시간 기간 후에 결정된다.

ICH의 위험 인자를 가지고 있는 환자의 치료 방법

ICH에 대한 증가된 위험에 기여하는 다양한 인간 환자 위험 인자들이 확인되어 있다 (각각 그 전체가 참조로써 개재되는 문헌 [ML Flaherty et al, "The epidemiology of intracerebral hemorrhage," in Intracerebral Hemorrhage, ed. JR Carhuapoma, et al (Cambridge: Cambridge University Press, 2010)]; [Brouwers, et al., Neurocrit Care 17:421-428 (2012)]; [Appelboom, et al., J. Stroke Cereb Dis., 22:713-717 (2013)]). 특정 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 해당 환자의 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 하나 이상의 ICH 위험 인자를 가지는 인간 ICH 환자에게 치료 유효량으로 투여될 수 있다.

연령은 가장 중요한 위험 인자로써, ICH의 비율은 60세를 초과하는 연령의 개체들에서 급격하게 증가한다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 연령 60세 이상의 환자에게 투여된다.

반면, 고혈압은 70 %를 초과하는 ICH 환자에 존재하는 가장 중요한 변경가능한 ICH 위험 인자이다. 치료되지 않는 고혈압은 치료에 의해 조절되는 고혈압에 비해 더 큰 위험 인자이며, 해당 약물치료를 중단한 치료하의 고혈압 환자는 그것을 유지하는 환자에 비해 더 큰 위험을 가진다. 고혈압은 깊은 반구 및 뇌간 영역에서의 출혈은 물론, 엽성 ICH의 위험 인자이다. ICH 위험 인자로서의 고혈압의 상대적인 충격은 고령인 환자에 비해 젊은이에서 더 크다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 고혈압 환자에게 투여된다.

불법적인 교감신경작용 약물, 예를 들면 코카인 및 암페타민의 사용이 ICH와 연관되어 있다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 불법적인 교감신경작용 약물을 사용하는 ICH 환자에게 투여된다.

뇌 아밀로이드 혈관병증 (CAA) 또한 고령층에서 엽성 ICH의 중요한 위험 인자이다. CAA는 연수막 동맥, 세동맥, 모세관, 그리고 때로는 정맥의 매질 및 외막에서의 아밀로이드 단백질의 침착을 특징으로 한다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 뇌 아밀로이드 혈관병증에 걸린 환자에게 투여된다.

아포지질단백질 E (APOE) ε2 및 ε4 대립유전자는 잠재적으로 CAA에의 이 유전자의 연관의 결과로서 엽성 뇌 영역에서의 독립적인 ICH 위험 인자이다 (참조로써 개재되는 문헌 [Brouwers et al, Stroke 43:2120-2125 (2012)]). 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 APOE 대립유전자 ε2 또는 ε4를 가지는 환자에게 투여된다.

동정맥 기형 (AVM), 해면 기형, 경막 동정맥루, 정맥 기형 및 모세관 확장증을 포함한 혈관 기형은 모두 ICH와 연관된다. 딸기 동맥류 역시 더 통상적인 바와 같은 지주막하 공간으로와 대조되는 뇌 실질로 그것이 출혈될 경우 ICH를 야기할 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 혈관 기형을 가지는 환자에게 투여된다.

허혈성 뇌졸중을 예방하기 위한 와파린(warfarin)과 같은 항응고제의 사용은 증가된 ICH 발생률과 연관된다. 항응고 환자에서의 상대적인 ICH 위험은 일반적인 집단에 비해 약 7-10배 더 크다. 유사하게, 심근 경색 또는 허혈성 뇌졸중에서의 혈전용해를 수행하기 위한 혈전용해제 및 항응고제의 사용은 작기는 하지만 증가된 ICH 위험과 연관된다. 심근 경색의 혈전용해에서, 출혈의 대부분은 뇌의 엽성 영역에서의 것이다. 아스피린 또는 클로피도그렐과 같은 항혈소판 약물의 사용 역시 경미한 ICH 위험 인자이다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 항응고제 (예컨대 와파린) 또는 항혈소판 (예컨대 클로피도그렐) 약물을 섭취하는 환자에게 투여된다.

구배 에코 MRI를 사용하여 검출되는 뇌 실질에서의 미세출혈은 ICH에 걸린 환자에서 일반적이어서, 소형 혈관 질환 및 ICH-경향 상태의 마커로 간주된다. 또한, 선행 뇌 경색은 5-배 내지 22-배 증가된 ICH 위험과 연관된다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 뇌 미세출혈이 있거나 선행 뇌 경색이 있는 환자에게 투여된다.

저콜레스테롤혈증은 (허혈성 뇌졸중의 위험 인자인 고콜레스테롤혈증과 달리) ICH의 위험 인자이다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 저콜레스테롤혈증이 있는 환자에게 투여된다.

추가적인 ICH 위험 인자에는 혈종 팽창과 연관되어 있는 과중한 알콜 소비, 및 담배 소비가 포함된다. 당뇨병 역시 경미한 ICH 위험 인자인 것으로 여겨진다. 따라서, 본 개시내용의 일부 방법에서, FXa 변이체, 예를 들면 FXa^I16L은 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 알콜을 남용하거나 담배를 소비하는 환자, 또는 당뇨병 환자에게 투여된다. FXa^I16L 또는 또 다른 FXa 변이체는 ICH를 치료하거나 예방하기 위하여 외상, 감염 또는 종양이 ICH의 단독 또는 기여 원인인 환자에게 투여될 수도 있다.

기타 ICH 관련 치료 방법

다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 대상체에서 ICH에 의해 야기되는 무능을 감소시키는 데에 효과적이다. 무능의 비-제한적인 예에는 자동차를 운전하거나, 도움없이 자신을 돌보거나, 작업을 하거나, 읽거나, 말하거나, 이동하거나, 걷거나, 타인과 상호작용하는 데에 있어서의 무능 또는 감소되거나 손상된 능력, 또는 기타 유형의 무능이 포함된다.

다른 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 FXa 변이체를 사용하여 ICH에 걸린 대상체를 치료하는 것은 해당 대상체의 임상적 상태를 개선하는 데에 효과적이다. 임상적 상태 개선의 비-제한적인 예에는 재활 시설로의 방면 전 입원 일수의 감소 (예를 들면 병원 잔류의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8일 이상까지의 감소); 환자 상태 중증도의 등급하향 (예를 들면 위중에서 중증 이상으로, 중증에서 적정 이상으로, 적정에서 우수로); ICH 환자가 신경-집중 관리처에 입원하는 일수의 감소 (예를 들면 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8일 이상까지); 또는 ICH 환자가 도움없이 호흡하는 능력을 회복하기 전에 기계식 인공호흡기에 의해 보조될 것을 요하는 일수의 감소 (예를 들면 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8일 이상까지)가 포함된다.

ICH의 치료 또는 예방을 위한 FXA 변이체의 투여

FXa 변이체, 예컨대 FXa^I16L은 ICH 증상의 발병 또는 ICH의 진단이 확인된 후 가능하면 빨리 환자에게 투여되어야 한다. 본원에서 언급되는 바와 같이, ICH는 소정 증상의 출현시 의심될 수 있으며, 신경영상화, 예컨대 MRI 또는 CT 스캐닝에 의해 확인될 수 있다. 본 개시내용의 특정 실시양태에 따르면, FXa 변이체는 ICH 증상의 발병 후 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1시간 미만 이내에 환자에게 투여된다. 다른 실시양태에서, FXa 변이체는 신경영상화 또는 통상의 기술자에게 익숙한 다른 기술에 의한 ICH의 확인 진단 후 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1시간 미만 이내에 환자에게 투여된다.

ICH를 치료하거나 예방하기에 충분한 FXa 변이체의 목표 혈장 농도를 달성하는 것은 통상의 기술자의 지식에 속한다. 비-제한적인 예에서는, 대상체의 성, 키 및 체중, 또는 기타 인자들을 기준으로 대상체 혈장 부피 또는 기타 파라미터들과 같은 관련 약동학 파라미터들의 추정치가 산출된 후, 목표 농도를 달성하는 데에 얼마나 많은 FXa 변이체가 투여될 필요가 있는지를 계산하는 데에 사용될 수 있다. FXa 변이체를 투여한 후에는, 통상의 기술자의 지식에 따라 혈장 농도가 모니터링될 수 있는데, 이와 같은 정보는 임의의 원하는 범위로 농도를 유지하는 데에 사용된다.

투약 처방계획은 최적의 원하는 반응 (예컨대 치료 또는 예방 반응)을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들면, 단일 일시주사가 투여될 수 있거나, 시간 경과에 따라 수회의 분할된 투여량이 투여될 수 있거나, 또는 치료 상황의 요건에 의해 표시되는 대로 투여량이 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다.

투약량 값은 사용되는 구체적인 FXa 변이체 및 그것이 단독으로 사용되는지 또는 또 다른 치료제와의 조합으로써 사용되는지 여부, 치료될 집단, 하위집단 또는 개별 대상체의 고유 특징, 그리고 의도하는 구체적인 치료 또는 예방 효과와 같은 인자들에 따라 달라질 수 있다. 투약량 값에 영향을 줄 수 있는 다른 인자들에 대해서는 통상의 기술자라면 알고 있을 것이다. 또한, 임의의 특정 대상체에 있어서, 시간이 경과하면서 개체의 필요, 및 FXa 변이체 조성물을 투여하거나 그의 투여를 감독하는 관리 제공자의 전문적인 판단에 따라 구체적인 투약 처방계획이 조정될 필요가 있을 수도 있다. 따라서, 본원에서 제시되는 투약량 범위는 단지 대표적인 것으로써, 청구되는 FXa 조성물 또는 그 사용 방법의 영역 또는 실행을 제한하고자 하는 것은 아니다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체의 치료 또는 예방-유효량은 약 0.0001 내지 50 mg/kg, 약 0.001 내지 50 mg/kg, 약 0.001 내지 5 mg/kg, 약 0.001 내지 0.5 mg/kg, 약 0.001 내지 0.05 mg/kg, 약 0.01 내지 5 mg/kg 또는 약 0.01 내지 0.5 mg/kg이다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체의 치료 또는 예방-유효 혈액 또는 혈장 농도는 약 0.0003 내지 300 nM, 약 0.003 내지 300 nM, 약 0.03 내지 300 nM, 약 0.003 내지 30 nM, 약 0.03 내지 30 nM 또는 약 0.3 내지 3 nM이다. 다른 투여량, 또는 혈액 또는 혈장 농도 역시 가능하다. 예를 들면 혈액 또는 혈장에서의 FXa 변이체의 농도는 업계에 알려져 있는 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다.

FXa 변이체는 예를 들면 그와 같은 변이체를 포함하는 조성물로써 1회 또는 다수의 회수로 적정한 치료 또는 예방 효과가 달성될 때까지 대상체에게 투여될 수 있다. 다수 투여가 사용되는 경우, 그것은 매시간, 매일, 또는 예를 들면 다수의 하루 투여량을 포함한 임의의 다른 적절한 간격으로 투여될 수 있다. 다수 투여량은 10분마다, 15분마다, 20분마다, 30분마다, 매시간, 2시간마다, 3시간마다, 4시간마다, 5시간마다, 6시간마다, 하루 3회, 하루 2회, 하루 1회, 2일마다 1회, 3일마다 1회, 매주 1회와 같은 일정, 또는 소정의 다른 일정으로 투여될 수 있다. FXa 변이체는 예컨대 미니펌프를 통하여 연속적으로 투여될 수도 있다. FXa 변이체는 예를 들면 비경구 경로 (예컨대 정맥내, 피하, 복막내 또는 근육내)를 통하여 투여될 수 있다. FXa 변이체는 일반적으로 본원에서 기술되는 바와 같은 제약 조성물의 일부로서 투여되게 된다.

대상체의 ICH, 부종 또는 혈종 팽창과 같은 효과를 최적으로 치료하는 투약 처방계획을 맞추기 위하여, FXa 변이체의 투여는 대상체 모니터링과 조합될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에 따르면, FXa 변이체의 용량은 이후 뇌내 출혈, 부종 또는 혈종 팽창이 중지되었는지 또는 적어도 감소되었는지를 결정하기 위한 신경영상화에 적용되는 ICH 대상체에게 투여된다. 스캔 결과가 출혈, 부종 또는 혈종 팽창이 중지되거나 적어도 충분하게 개선되지 않았음을 표시하는 경우라면, 또 다른 FXa 변이체의 용량이 투여될 수 있다. 반복적으로 투여하고 뇌내 출혈, 부종 또는 혈종 팽창에 대한 FXa 변이체의 효과를 평가하기 위하여 대상체를 모니터링하는 과정은 대상체의 상태가 충분하게 개선될 때까지 계속될 수 있다. 투여와 모니터링 사이의 적합한 간격은 통상의 기술자의 지식에 따라 결정될 수 있다. 비-제한적인 예에는 15분, 30분, 45분, 1시간, 1.5시간, 2시간, 2.5시간, 3시간, 3.5시간, 4시간, 5시간, 6시간 이상이 포함된다.

또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체는 1종 이상의 제2 활성 치료제와 공동-투여될 수 있다 (조합 치료법). 일부 실시양태에서, 상기 제2 작용제는 다른 본 개시내용의 FXa 변이체일 수 있다. 다른 실시양태에서, 제2 작용제는 예를 들면 인자 IX, 인자 XIa, 인자 XIIa, 인자 VIII, 인자 VIIa, 전구응고제 조성물 예컨대 FEIBA 또는 프로트롬빈 복합체 농축물 (PCC), 또는 항-섬유소용해제 예컨대 ε-아미노카프로산, 트라넥셈산 또는 아프로티닌을 포함한 또 다른 응고 인자 또는 그의 변이체일 수 있다.

본 개시내용의 FXa 변이체가 1종 이상의 제2 치료제와 공동-투여되는 경우, 그것은 동일한 조성물 중에서 동시에 함께, 또는 별도 조성물 중에서 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 대안적으로, FXa 변이체와 1종 이상의 제2 치료제는 별도의 조성물 중에서 상이한 시간에 투여될 수 있다. FXa 변이체를 포함하는 조성물은 1종 이상의 제2 치료제를 포함하는 조성물 전 또는 후에 투여될 수 있다. 순차 투여 사이의 간격은 특정 실시양태에서는 동일한 날에 이루어지는 FXa 변이체와 제2 치료제의 투여에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, FXa 변이체는 2일마다 1회 투여될 수 있는 반면, 제2 치료제는 양 작용제가 투여되는 날의 FXa 변이체와 동일한 시간 또는 상이한 시간 중 어느 하나에 하루 1회 투여된다.

조합 치료법은 매시간, 매일 또는 매주 다수의 회수로 투여될 수 있다. 용량은 10분마다, 15분마다, 20분마다, 30분마다, 매시간, 2시간마다, 3시간마다, 4시간마다, 5시간마다, 6시간마다, 하루 3회, 하루 2회, 하루 1회, 2일마다 1회, 3일마다 1회, 매주 1회와 같은 일정, 또는 소정의 다른 일정으로 투여될 수 있다. FXa 변이체는 예컨대 미니펌프를 통하여 연속적으로 투여될 수도 있다. 조합 치료법은 예를 들면 비경구 경로 (예컨대 정맥내, 피하, 복막내 또는 근육내)를 통하여 투여될 수 있다.

다른 실시양태에서, 본 개시내용의 FXa 변이체는 ICH를 치료하는 데에 효과적인 것으로 생각되는 또 다른 치료법과 함께 투여될 수 있다. 비-제한적인 예에서, FXa 변이체는 ICH에 걸린 대상체의 혈압 또는 두개내 압력을 감소시키기 위한 약물의 투여, 또는 예컨대 ICH에 의해 야기되는 혈종을 제거하기 위한 수술 전에, 그와 함께 또는 그 후에 투여될 수 있다. 다른 예에서, FXa 변이체는 각각 ICH에 동반될 수 있는 발작 또는 열을 예방하거나 치료하기 위한 약물 전에, 그와 함께 또는 그 후에 투여될 수 있다 (참조로써 개재되는 문헌 [R. Sahni and J. Weinberger, Vasc Health Risk Manag 3:701-709 (2007)]).

다른 측면에서, 본 개시내용은 대상체에서 ICH를 치료하거나 예방하는 데에 사용하기 위한 FXa 변이체를 포함하는 조성물을 제공한다. 조성물은 제약상 허용되는 담체, 비히클, 또는 생리학적으로 상용성인 기타 성분들을 포함할 수 있다. 그와 같은 담체, 비히클 및 기타 성분의 비-제한적인 예에는 용매 (예컨대 물, 에탄올, 식염수, 포스페이트 완충 식염수), 세제, 계면활성제, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 또는 항진균제, 등장화제, 흡수 지연제, 당 (예컨대 수크로스, 덱스트로스, 락토스), 폴리알콜 (예컨대 글리세롤, 만니톨, 소르비톨), 염 (예컨대 나트륨 클로라이드, 칼륨 클로라이드), 습윤제, 에멀션화제, 보존제, 완충제, 그리고 FXa 변이체의 안정성 또는 효과성을 강화할 수 있는 작용제가 포함된다.

본 개시내용에 따라 사용하기 위한 조성물은 대상체에의 투여를 위한 임의의 적합한 형태, 예컨대 액체 용액 (예컨대 주사가능 및 주입가능 용액)일 수 있다. 조성물은 예를 들면 바이알 또는 사전-충전 주사기 중의 대상체에의 투여를 위한 준비가 된 사전-혼합 포맷으로 제공될 수 있다. 그와 같은 포맷은 투여 전의 희석제를 사용한 재구성을 필요로 하지 않는다. 대안적으로, 조성물은 투여 전에 희석제 (예컨대 멸균수 또는 식염수)를 사용한 재구성을 필요로 하는 동결건조 형태로 제공될 수 있다. 후자의 경우, 희석제는 별도의 용기 중으로 동결건조물과 함께 제공될 수 있다. 통상의 기술자의 지식에 따라, 조성물은 냉장 또는 실온하에서의 저장용으로 제제화될 수 있다. 조성물의 형태는 적어도 부분적으로는 예정된 투여 양식에 따라 달라진다. 특정 실시양태에서, 투여 양식은 예를 들면 정맥내, 피하, 복막내 또는 근육내 투여를 포함한 비경구이다.

비경구 조성물은 물론 다른 유형도 투여의 용이성 및 투약량의 균일성을 위하여 투약 단위 형태로 제제화될 수 있다. 투약 단위 형태는 치료될 대상체를 위한 단위 투약분으로 적합화된 물리적으로 별개인 단위를 지칭하는 것으로써, 각 단위는 필요한 제약 담체와의 조합으로써 원하는 치료 효과를 산출하도록 계산된 예정량의 활성 화합물을 함유한다.

치료 조성물은 통상적으로 제조 및 저장 조건하에서 무균성이고 안정해야 한다. 조성물은 용액, 미세에멀션, 분산액, 리포좀, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정돈된 구조로 제제화될 수 있다. 멸균 주사가능 용액은 필요에 따라 상기에서 열거된 성분들 중 1종 또는 조합과 함께 적절한 용매에 필요한 양의 FXa 변이체를 도입한 후, 이어서 여과 멸균하는 것에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 상기에서 열거된 것들에 속하는 기본 분산 매질 및 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클에 활성 화합물을 도입하는 것에 의해 제조된다. 멸균 주사가능 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 미리 멸균-여과된 해당 용액으로부터 활성 성분 더하기 임의의 추가적인 원하는 성분의 분말을 산출하는 진공 건조 및 냉동-건조이다. 용액의 적정한 유동성은 예를 들면 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사가능 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연하는 작용제, 예를 들면 모노스테아레이트염 및 젤라틴을 조성물에 포함시키는 것에 의해 초래될 수 있다.

본 개시내용은 또한 FXa 변이체 또는 이와 같은 FXa 변이체를 포함하는 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 키트는 또한 진단제 또는 1종 이상의 추가적인 치료제를 포함할 수 있다. 키트는 또한 치료 방법에서 사용하기 위한 지침은 물론, 포장 재료도 포함할 수 있다. 키트는 또한 관리 제공자에 의한 편리한 투여를 위해 설계된 용기 중에 하나 이상의 단위 투여 형태를 포함할 수 있다. 비-제한적인 예에는 바이알 또는 사전충전 주사기가 포함된다. 동결건조 조성물용 희석제도 포함될 수 있다.

본원에서 기술되는 실시예 및 실시양태들은 단지 예시 목적의 것으로써, 그에 비추어 다양한 변형 또는 변경이 통상의 기술자에게 드러나게 되는데, 본 발명의 진정한 영역 내에 포함되어야 하는 바, 거기에서 벗어나지 않고도 이루어질 수 있는 것으로 양해된다.

[실시예]

실시예 1

FXa ^I16L 은 정상 혈장에서 응괴 형성을 촉진한다

건강한 인간 대상체로부터 단리된 시트르산첨가 혼합 혈장에서 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(activated partial thromboplastin time) (aPTT)을 측정하는 것에 의해, FXa^I16L 및 혈장 유래 FXa (pdFXa)의 활성을 평가하였다. aPTT 시험은 시트르산첨가 혈장에 표면 활성화제 및 희석 인지질을 첨가하는 것에 의해 수행하였다. 접촉 인자 (인자 XII, 인자 XI, 프리칼리크레인 및 고분자량 키니노겐)의 활성화를 가능케 하기 위한 인큐베이션 후, 칼슘을 첨가하고, 응고 시간을 측정하였다. 검정 동안, 낮은 수준의 FVa 및 FVIIIa가 생성되었다.

점증적 농도의 pdFXa 또는 FXa^I16L 첨가는 응고 시간의 투여량-의존성 단축을 초래하였다. FXa^I16L 및 pdFXa에 대하여 계산된 추정 EC₅₀은 각각 45 ng/mL 및 9 ng/mL이었다.

정상인 마우스, 래트 및 필리핀 원숭이로부터 단리된 시트르산첨가 혈장에서 FXa^I16L의 활성을 추가적으로 조사하였다. aPTT 검정을 사용하여 응고 시간을 측정하였다. 인간 혈장에서 관찰되었던 것과 유사하게, FXa^I16L 첨가는 전체 3개 종에서 응고 시간의 투여량-의존성 단축을 초래하였다. 필리핀 원숭이, 마우스 및 래트 혈장에서 FXa^I16L에 대하여 계산된 추정 EC₅₀은 각각 49, 89 및 91 ng/mL이었다.

트롬빈 생성 검정 (TGA)은 트롬빈 생성의 개시 단계, 활성화 단계 및 불활성화 단계를 측정한다. TGA는 응고의 개시 후 시간 경과에 따른 혈장에서의 트롬빈 생성을 측정하는데, 이전에 기술된 바와 같이 (그 전체가 본원에 참조로써 개재되는 문헌 [Bunce et al., Blood 117:290-298 (2011)]) 수행하였다. 이러한 연구에 사용되는 조건하에서, 1 pM의 조직 인자 (TF)를 사용하여 응고를 개시하였다. 건강한 대상체로부터 단리된 혈소판 희박 시트르산첨가 인간 혈장에서 트롬빈 생성 (TG)을 측정하였다. 60-분의 실험 시간 경과 동안, FXa^I16L 또는 pdFXa의 첨가는 트롬빈 생성의 투여량 의존성 증가를 초래하였다 (도 1a, 도 1b). 비히클-처리 인간 혈장과 비교하였을 때, pdFXa 및 FXa^I16L 모두에서 지체 시간 (개시 단계)의 단축이 관찰되었다. 그러나, 절대적인 숫자에 있어서는, FXa^I16L의 지체 시간이 pdFXa에 비해 더 길었다 (도 1c). TGA 지체 시간에 대한 기술되는 효과를 위한 FXa^I16L에 대하여 계산된 추정 EC₅₀은 9 ng/mL이었다. FXa^I16L 및 pdFXa의 최대 트롬빈 생성은 유사하였는데, 최대 트롬빈 농도는 각각 233-352 nM 및 198-349 nM의 범위였다.

상기에 요약된 데이터는 FXa^I16L이 인간을 포함한 비-혈우병 동물의 혈장에서 응괴 형성을 촉진하는 데에 효과적이라는 것을 입증하고 있다.

실시예 2

FXa ^I16L 은 비-혈우병 설치류 출혈 모델에서 지혈을 야기한다

비-혈우병 마우스 및 래트에서 꼬리 절단 손상 후 혈액 손실에 대한 효과를 측정하는 것에 의해, 비-혈우병 동물에서 지혈을 야기하는 FXa^I16L의 능력을 시험하였다. 꼬리 절단은 응고 시스템을 자극하는 심각한 출혈을 야기한다.

상이한 투여량 (0, 1, 10, 25, 50, 100 및 200 ㎍/kg)으로 정상 C57BI/6 마우스에 FXa^I16L을 정맥내 투여하였다. 2분 후, 꼬리를 단부로부터 3 mm 가로로 절단하고, 마이크로리터 (μl)로 지혈까지의 총 혈액 손실을 측정하였다. 대조 마우스에는 비히클을 주사하였다. 결과를 도 2a에 나타내고, 데이터는 평균 ± SEM으로 나타내었는데, "*"은 p 값 < 0.05에서의 통계적 유의성을 나타내며, "***"는 p 값 < 0.001에서의 통계적 유의성을 나타낸다. 비히클의 경우, 5마리의 동물을 시험하였다. 상이한 투여량의 FXa^I16L이 투여된 동물의 경우, 6마리는 1 ㎍/kg에서 시험하였으며, 8마리는 10 ㎍/kg에서 시험하였고, 8마리는 25 ㎍/kg에서 시험하였으며, 6마리는 50 ㎍/kg에서 시험하였고, 8마리는 100 ㎍/kg에서 시험하였으며, 5마리는 200 ㎍/kg에서 시험하였다.

비히클-처리 마우스와 비교하였을 때, 꼬리 가로절단 전의 FXa^I16L 처리는 12 % (1 ㎍/kg), 16.6 % (10 ㎍/kg), 26.7 % (25 ㎍/kg), 45.3 % (50 ㎍/kg), 62.9 % (100 ㎍/kg) 및 69.6 % (200 ㎍/kg)인 총 혈액 손실에 있어서의 투여량-의존성 감소를 야기하였다. 추정 ED₅₀은 46 ㎍/kg이었다.

제2 연구에서는, 정상 수컷 CD-1 마우스를 25 ㎍/kg의 FXa^I16L 또는 비히클로 처리한 2분 후에, 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 검정 및 트롬빈 생성 검정 (TGA)을 사용하여 혈장 응고 활성을 측정하였다. 처리된 동물로부터의 혈장에서, aPTT는 67 % 더 짧은 응고까지의 시간을 나타내었으며, TGA 지체 시간은 85 %까지 단축되었다. 10 ㎍/kg 또는 25 ㎍/kg의 FXa^I16L, 또는 비히클을 사용하여 처리된 CD-1 마우스로부터의 전혈에서의 응고 활성도 TEG를 사용하여 측정하였다. 투여 2분 후, FXa^I16L의 양 투여량으로 처리된 동물로부터의 혈액의 TEG R-값이 비히클 만을 투여받은 마우스에 비해 70 %까지 감소되었다.

FXa^I16L의 지혈 활성을 꼬리 절단 중증 손상 모델의 정상 수컷 스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 래트에서도 시험하였다. 비히클-처리 래트와 비교하였을 때, FXa^I16L를 사용하여 사전-처리된 래트는 5.7 % (10 ㎍/kg), 11.3 % (30 ㎍/kg), 49.0 % (50 ㎍/kg), 63.2 % (100 ㎍/kg) 및 59.45 % (200 ㎍/kg)인 투여량 의존성 출혈 감소를 나타내었다. 결과는 도 2b에 나타내었는데, "*"은 p 값 < 0.05에서의 통계적 유의성을 나타낸다. 각 투여량마다 총 5-7마리의 래트를 사용하였다. 방법은 마우스를 사용한 실험에서와 유사하였다. 추정 ED₅₀은 38 ㎍/kg이었다. TEG를 사용하여 전혈에서의 생체외 활성을 측정하였다. 1, 5, 10 또는 30 ㎍/kg의 FXa^I16L을 사용하여 래트를 처리한 2분 후, 비히클만으로 처리된 래트와 비교하였을 때, 각각 투여량 10 ㎍/kg 및 30 ㎍/kg에서 38.2 % 및 43.6 %의 TEG-R 값 감소가 관찰되었다.

실시예 3

FXa ^I16L 은 설치류 ICH 모델에서 혈종 부피를 감소시킨다

마우스 ICH 모델에서 FXa^I16L을 연구하였다. 이와 같은 모델에서는, 뇌의 선조체에 정위로(stereotactically) 박테리아 콜라게나제를 주사한다 (그 전체가 참조로써 개재되는 문헌 [F. Schlunk, et al., Stroke 43:246-249 (2012)]; [C. Foerch, et al., Stroke 39:3397-3404 (2008)]). 주사 부위 부근의 모세관을 둘러싸고 있는 세포외 기질의 단백질분해성 분해는 연속 출혈에 의해 야기되는 ICH 환자에서의 혈종 팽창을 모방한 출혈을 초래한다.

FXa 변이체를 사용한 실험에서, ICH는 마우스 우측 선조체에의 박테리아 콜라게나제의 입체 주사에 의해 유도하였다. 콜라게나제 주사 45분 후, FXa^I16L 또는 비히클을 상이한 투여량으로 정맥내 투여하였다. 손상 24시간 후, 모세관의 콜라게나제 파열의 결과로서의 뇌 실질로 누출된 혈액의 부피를 측정하였다. 그 시간에, 혈관계로부터 혈액을 플러싱하고, 뇌를 제거하여 균질화한 후, 표준 곡선에의 비교에 의해 균질화된 뇌 조직의 헤모글로빈 함량을 정량하였다.

FXa^I16L를 사용한 처리는 비히클만으로 처리된 마우스에 비해 마우스의 혈종 부피를 투여량 반응성인 방식으로 감소시켰다. 결과를 도 3a에 나타내었는데, "*"는 p 값 < 0.05에서의 통계적 유의성을 나타낸다. 추정 ED₅₀ = 3.05 ㎍/kg이었다. 군 당 시험된 동물은 7 내지 15마리 범위였다. 도 3b는 투여량과 관련시켜 비히클과 비교된 혈종 부피의 % 감소를 나타낸다.

마우스에서 사용된 것과 유사한 방법을 사용하여, 수컷 스프라그 돌리 래트에서 ICH를 유도하였다. 콜라게나제 주사 15분 후, 상이한 투여량의 FXa^I16L, 100 U/kg의 전응고제 조성물인 인자 8 억제제 우회 활성체 (FEIBA), 또는 비히클 단독을 정맥내로 래트에 투여하였다. 손상 2시간 후, 뇌 헤모글로빈 함량을 기준으로 한 혈종 부피를 결정하였다.

FXa^I16L을 사용한 처리는 비히클 단독을 사용하여 처리된 래트에 비해 래트에서의 혈종 부피를 감소시켰다. 결과를 도 4a에 나타내었는데, "*"는 p 값 < 0.05에서의 통계적 유의성을 나타낸다. 도 4b는 투여량과 관련시켜 비히클과 비교된 혈종 부피의 % 감소를 나타낸다. 마우스에서처럼 현저하지는 않았지만, 투여량 반응성의 경향은 분명하였다.

본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학 및 기술 용어들은 통상의 기술자에 의해 보편적으로 이해되는 의미를 가지게 된다. 또한, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하게 되며, 복수 용어는 단수를 포함하게 된다. 일반적으로, 본원에서 기술되는 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학, 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련되어 사용되는 명명법, 그리고 그의 기술들은 업계에 잘 알려져 있으며 거기에서 통상적으로 사용되는 것들이다.

본 발명의 방법 및 기술은 일반적으로 달리 표시되지 않는 한, 업계에 잘 알려져 있는 통상적인 방법에 따라, 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 언급 및 논의되는 다양한 일반 및 더 구체적인 참고문헌들에 기술되어 있는 바와 같이 수행된다. 예를 들면 참조로써 본원에 개재되는 문헌 [Sambrook J. & Russell D.. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2000)]; [Ausubel et al. , Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, John & Sons, Inc. (2002)]; [Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1998)]; 및 [Coligan et al., Short Protocols in Protein Science, Wiley, John & Sons, Inc. (2003)]을 참조하라. 효소 반응 및 정제 기술은 제조자의 명세서에 따라 업계에서 통상적으로 수행되는 바와 같이, 또는 본원에서 기술되는 바와 같이 수행된다. 본원에서 기술되는 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의료 및 제약 화학과 관련되어 사용되는 명명법, 그리고 그의 실험실 절차 및 기술들은 업계에 잘 알려져 있으며 거기에서 통상적으로 사용되는 것들이다.

본원에서 언급되는 모든 공개, 특허, 특허 출원 또는 기타 문헌들은 모든 목적에 있어서 각 개별 공개, 특허, 특허 출원 또는 기타 문헌들이 모든 목적에 참조로써 개재되는 것을 개별적으로 표시하는 것과 같은 정도까지 그 전체가 의거 참조로써 개재된다.

본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐, "포함하는"이라는 단어, 또는 "포함하다" 또는 "포함하는"과 같은 변형들은 언급된 정수 또는 정수 군의 포함을 암시하는 것으로 이해되게 되지만, 임의의 다른 정수 또는 정수 군의 배제는 아니다.

SEQUENCE LISTING <110> PFIZER INC. <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING INTRACEREBRAL HEMORRHAGE <130> PC072056A <150> US 61/931,071 <151> 2014-01-24 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 488 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Arg Pro Leu His Leu Val Leu Leu Ser Ala Ser Leu Ala Gly 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Gly Glu Ser Leu Phe Ile Arg Arg Glu Gln Ala Asn 20 25 30 Asn Ile Leu Ala Arg Val Thr Arg Ala Asn Ser Phe Leu Glu Glu Met 35 40 45 Lys Lys Gly His Leu Glu Arg Glu Cys Met Glu Glu Thr Cys Ser Tyr 50 55 60 Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe Glu Asp Ser Asp Lys Thr Asn Glu Phe 65 70 75 80 Trp Asn Lys Tyr Lys Asp Gly Asp Gln Cys Glu Thr Ser Pro Cys Gln 85 90 95 Asn Gln Gly Lys Cys Lys Asp Gly Leu Gly Glu Tyr Thr Cys Thr Cys 100 105 110 Leu Glu Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys Glu Leu Phe Thr Arg Lys Leu 115 120 125 Cys Ser Leu Asp Asn Gly Asp Cys Asp Gln Phe Cys His Glu Glu Gln 130 135 140 Asn Ser Val Val Cys Ser Cys Ala Arg Gly Tyr Thr Leu Ala Asp Asn 145 150 155 160 Gly Lys Ala Cys Ile Pro Thr Gly Pro Tyr Pro Cys Gly Lys Gln Thr 165 170 175 Leu Glu Arg Arg Lys Arg Ser Val Ala Gln Ala Thr Ser Ser Ser Gly 180 185 190 Glu Ala Pro Asp Ser Ile Thr Trp Lys Pro Tyr Asp Ala Ala Asp Leu 195 200 205 Asp Pro Thr Glu Asn Pro Phe Asp Leu Leu Asp Phe Asn Gln Thr Gln 210 215 220 Pro Glu Arg Gly Asp Asn Asn Leu Thr Arg Ile Val Gly Gly Gln Glu 225 230 235 240 Cys Lys Asp Gly Glu Cys Pro Trp Gln Ala Leu Leu Ile Asn Glu Glu 245 250 255 Asn Glu Gly Phe Cys Gly Gly Thr Ile Leu Ser Glu Phe Tyr Ile Leu 260 265 270 Thr Ala Ala His Cys Leu Tyr Gln Ala Lys Arg Phe Lys Val Arg Val 275 280 285 Gly Asp Arg Asn Thr Glu Gln Glu Glu Gly Gly Glu Ala Val His Glu 290 295 300 Val Glu Val Val Ile Lys His Asn Arg Phe Thr Lys Glu Thr Tyr Asp 305 310 315 320 Phe Asp Ile Ala Val Leu Arg Leu Lys Thr Pro Ile Thr Phe Arg Met 325 330 335 Asn Val Ala Pro Ala Cys Leu Pro Glu Arg Asp Trp Ala Glu Ser Thr 340 345 350 Leu Met Thr Gln Lys Thr Gly Ile Val Ser Gly Phe Gly Arg Thr His 355 360 365 Glu Lys Gly Arg Gln Ser Thr Arg Leu Lys Met Leu Glu Val Pro Tyr 370 375 380 Val Asp Arg Asn Ser Cys Lys Leu Ser Ser Ser Phe Ile Ile Thr Gln 385 390 395 400 Asn Met Phe Cys Ala Gly Tyr Asp Thr Lys Gln Glu Asp Ala Cys Gln 405 410 415 Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Val Thr Arg Phe Lys Asp Thr Tyr Phe 420 425 430 Val Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Arg Lys Gly Lys 435 440 445 Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys Val Thr Ala Phe Leu Lys Trp Ile Asp Arg 450 455 460 Ser Met Lys Thr Arg Gly Leu Pro Lys Ala Lys Ser His Ala Pro Glu 465 470 475 480 Val Ile Thr Ser Ser Pro Leu Lys 485 <210> 2 <211> 1560 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 gactttgctc cagcagcctg tcccagtgag gacagggaca cagtactcgg ccacaccatg 60 gggcgcccac tgcacctcgt cctgctcagt gcctccctgg ctggcctcct gctgctcggg 120 gaaagtctgt tcatccgcag ggagcaggcc aacaacatcc tggcgagggt cacgagggcc 180 aattcctttc ttgaagagat gaagaaagga cacctcgaaa gagagtgcat ggaagagacc 240 tgctcatacg aagaggcccg cgaggtcttt gaggacagcg acaagacgaa tgaattctgg 300 aataaataca aagatggcga ccagtgtgag accagtcctt gccagaacca gggcaaatgt 360 aaagacggcc tcggggaata cacctgcacc tgtttagaag gattcgaagg caaaaactgt 420 gaattattca cacggaagct ctgcagcctg gacaacgggg actgtgacca gttctgccac 480 gaggaacaga actctgtggt gtgctcctgc gcccgcgggt acaccctggc tgacaacggc 540 aaggcctgca ttcccacagg gccctacccc tgtgggaaac agaccctgga acgcaggaag 600 aggtcagtgg cccaggccac cagcagcagc ggggaggccc ctgacagcat cacatggaag 660 ccatatgatg cagccgacct ggaccccacc gagaacccct tcgacctgct tgacttcaac 720 cagacgcagc ctgagagggg cgacaacaac ctcaccagga tcgtgggagg ccaggaatgc 780 aaggacgggg agtgtccctg gcaggccctg ctcatcaatg aggaaaacga gggtttctgt 840 ggtggaacca ttctgagcga gttctacatc ctaacggcag cccactgtct ctaccaagcc 900 aagagattca aggtgagggt aggggaccgg aacacggagc aggaggaggg cggtgaggcg 960 gtgcacgagg tggaggtggt catcaagcac aaccggttca caaaggagac ctatgacttc 1020 gacatcgccg tgctccggct caagaccccc atcaccttcc gcatgaacgt ggcgcctgcc 1080 tgcctccccg agcgtgactg ggccgagtcc acgctgatga cgcagaagac ggggattgtg 1140 agcggcttcg ggcgcaccca cgagaagggc cggcagtcca ccaggctcaa gatgctggag 1200 gtgccctacg tggaccgcaa cagctgcaag ctgtccagca gcttcatcat cacccagaac 1260 atgttctgtg ccggctacga caccaagcag gaggatgcct gccaggggga cagcgggggc 1320 ccgcacgtca cccgcttcaa ggacacctac ttcgtgacag gcatcgtcag ctggggagag 1380 ggctgtgccc gtaaggggaa gtacgggatc tacaccaagg tcaccgcctt cctcaagtgg 1440 atcgacaggt ccatgaaaac caggggcttg cccaaggcca agagccatgc cccggaggtc 1500 ataacgtcct ctccattaaa gtgagatccc actcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560

Claims

인간에 대한 치료 방법.