JP2015147764A - 脳内出血を治療するための組成物および方法 - Google Patents

Abstract

【課題】死亡率を低減し、機能的な神経学的転帰を改善するために、易罹患性患者においてＩＣＨを予防し、ＩＣＨを有する患者を治療するのに有効な療法を提供すること。【解決手段】本開示は、ＦＸａのバリアントを投与することによって、対象における脳内出血（ＩＣＨ）を治療または予防するための組成物および方法を提供する。【選択図】図１−１

Description

関連出願の相互参照
本願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０１４年１月２４日に出願された米国仮出願第６１／９３１，０７１号の利益を主張する。

配列表への参照
ファイル名ＰＣ０７２０５６Ａ＿ＳＥＱＬＩＳＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔとしてＥＦＳ−Ｗｅｂを介してコンピューターで読み込み可能な形式（ＣＲＦ）で、連邦規則集第３７編§１．８２１の下、本明細書と同時提出された配列表は、参照により本明細書に組み込まれている。配列表の電子コピーは、７キロバイトのファイルサイズで２０１５年１月６日に作成された。

出血を外科的介入または他の手段によって制御することができない一連の臨床状態における過剰な出血を制御する有効な療法が必要とされている。出血が制御されない最も壊滅的な臨床的症候群の１つは、脳内出血（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ、ＩＣＨ）である。非外傷性ＩＣＨは、脳実質への出血であり脳室まで達することもある。世界中の脳卒中症例の少なくとも１０パーセントは、ＩＣＨに起因する。米国において毎年罹患する人の数の推定は、３７，０００〜５２，４００から７９，５００にも及び（Ｑｕｒｅｓｈｉら、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ、３４４（１９）：１４５０〜１４６０（２００１）；Ｒｏｇｅｒら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１２５：ｅ２〜２２０（２０１２））、発生率は、集団が高齢化するにつれて増大すると予期されている。ＩＣＨは、臨床転帰不良に関連し続けている。患者のおよそ４０〜５０％が１カ月以内に死亡し（Ｑｕｒｅｓｈｉ；Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋら、Ｓｔｒｏｋｅ、３８：２００１〜２０２３（２００７））、罹患した人の大部分が６カ月までに機能的自立を回復することができない（Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋ）。したがってＩＣＨは、永続的な部分的または完全な身体障害の主な原因である。

脳内出血後の血腫体積は、ＩＣＨを有する患者における死亡率および病的状態の独立した予測因子であることが示された（Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋら、Ｓｔｒｏｋｅ、２４：９８７〜９９３（１９９３））。血腫体積拡大は、ベースラインＣＴスキャンの１時間以内に脳内出血患者のおよそ２６％で起こり（Ｂｒｏｔｔら、Ｓｔｒｏｋｅ、２８：１〜５（１９９７））、血腫拡大は、死亡率および患者転帰不良の追加の独立した予測因子である（Ｄａｖｉｓら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、６６：１１７５〜１１８１（２００６）；Ｄｅｌｃｏｕｒｔら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、７９：３１４〜３１９（２０１２））。

米国仮出願第６１／９３１，０７１号 国際特許公開第ＷＯ２００７／０５９５１３号

Ｑｕｒｅｓｈｉら、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ、３４４（１９）：１４５０〜１４６０（２００１） Ｒｏｇｅｒら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１２５：ｅ２〜２２０（２０１２） Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋら、Ｓｔｒｏｋｅ、３８：２００１〜２０２３（２００７） Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋら、Ｓｔｒｏｋｅ、２４：９８７〜９９３（１９９３） Ｂｒｏｔｔら、Ｓｔｒｏｋｅ、２８：１〜５（１９９７） Ｄａｖｉｓら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、６６：１１７５〜１１８１（２００６） Ｄｅｌｃｏｕｒｔら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、７９：３１４〜３１９（２０１２） ＲｉｎｃｏｎおよびＭａｙｅｒ、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ、１２：２３７〜２５０（２００８） Ｍａｙｅｒら、ＮＥＪＭ、３５８：２１２７〜２１３７（２００８） Ｔｏｓｏら（２００８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３、１８６２７〜１８６３５ Ｂｕｎｃｅら、（２０１１）Ｂｌｏｏｄ、１１７、２９０〜２９８ Ｉｖａｎｃｉｕら（２０１１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２９、１０２８〜１０３３ 、ＢａｊａｊおよびＢｉｒｋｔｏｆｔ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１９９３；２２２：９６〜１２８、表２ Ｂｏｄｅ Ｗ、Ｍａｙｒ Ｉ、Ｂａｕｍａｎ Ｙら、Ｔｈｅ ｒｅｆｉｎｅｄ １．９Å ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ−ｔｈｒｏｍｂｉｎ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｋｅｔｏｎｅ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｓｅｇｍｅｎｔ．、ＥＭＢＯ Ｊ、１９８９；８（１１）：３４６７〜３４７５ Ｊｅｓｔｙら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、１９７５年６月２５日；２５０（１２）：４４９７〜５０４ ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ ＭＬ Ｆｌａｈｅｒｔｙら、「Ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ」ｉｎ Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ Ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ、ＪＲ Ｃａｒｈｕａｐｏｍａら編（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０１０） Ｓ．−Ｂ．Ｋｏら、Ｓｔｒｏｋｅ、４２：３０８７〜３０９２（２０１１） Ｃ．Ｚｗｅｉｆｅｌら、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｆｏｃｕｓ、２５（１０）：Ｅ２（２００８） Ｍａｈｏｎｅｙ Ｆ．およびＢａｒｔｈｅｌ Ｄ．、Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ：ｔｈｅ Ｂａｒｔｈｅｌ Ｉｎｄｅｘ．、Ｍｄ Ｍｅｄ Ｊ．、１４：６１〜６５（１９６５） Ｄ．Ｓｔａｙｋｏｖら、Ｓｔｒｏｋｅ、４２：２６２５〜２６２９（２０１１） Ｄ．Ｈ．Ａｒｉｍａら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、７３：１９６３〜１９６８（２００９） ＢｒｏｕｗｅｒｓおよびＧｒｅｅｎｂｅｒｇ、Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．、３５：１９５〜２０１（２０１３） Ｄｏｗｌａｔｓｈａｈｉら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、７６：１２３８〜１２４４（２０１１） Ｂｒｏｕｗｅｒｓら、Ｎｅｕｒｏｃｒｉｔ Ｃａｒｅ、１７：４２１〜４２８（２０１２） Ｗａｄａら、Ｓｔｒｏｋｅ、３８：１２５７〜１２６２（２００７） Ｂｒｏｕｗｅｒｓら、Ｓｔｒｏｋｅ、４３：３４２７〜３４３２（２０１２） Ｄｅｍｃｈｕｋら、Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ．、１１：３０７〜３１４（２０１２） Ｄｅｌｇａｄｏら、Ｓｔｒｏｋｅ、４０：２９９４〜３０００（２００９） Ａｐｐｅｌｂｏｏｍら、Ｊ．Ｓｔｒｏｋｅ Ｃｅｒｅｂ Ｄｉｓ．、２２：７１３〜７１７（２０１３） Ｂｒｏｕｗｅｒｓら、Ｓｔｒｏｋｅ、４３：２１２０〜２１２５（２０１２） Ｒ．ＳａｈｎｉおよびＪ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ、Ｖａｓｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ｍａｎａｇ、３：７０１〜７０９（２００７） Ｂｕｎｃｅら、Ｂｌｏｏｄ、１１７：２９０〜２９８（２０１１） Ｆ．Ｓｃｈｌｕｎｋら、Ｓｔｒｏｋｅ、４３：２４６〜２４９（２０１２） Ｃ．Ｆｏｅｒｃｈら、Ｓｔｒｏｋｅ、３９：３３９７〜３４０４（２００８） Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ．＆Ｒｕｓｓｅｌｌ Ｄ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（２０００） Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ，Ｊｏｈｎ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００２） ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９９８） Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｉｌｅｙ，Ｊｏｈｎ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００３）

ＩＣＨの治療のために認可された療法は無く、現在の管理は、大部分は対症的である（ＲｉｎｃｏｎおよびＭａｙｅｒ、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ、１２：２３７〜２５０（２００８））。例えば、組換え凝固因子ＶＩＩａを投与すると、ＩＣＨ患者において血腫拡大が低減したが、９０日の時点で神経機能は改善しなかった（Ｍａｙｅｒら、ＮＥＪＭ、３５８：２１２７〜２１３７（２００８））。したがって、死亡率を低減し、機能的な神経学的転帰を改善するために、易罹患性患者においてＩＣＨを予防し、ＩＣＨを有する患者を治療するための有効な療法が当技術分野において切迫して必要である。

出願者らは、ＩＣＨの予防および／または治療に使用するための組成物を含めた、ＩＣＨを予防および／または治療するための組成物および方法を提供することによって、この極めて重要な未だ対処されていない臨床的必要性に対処した。本発明の特定の限定されない実施形態を以下の段落で示す。

ある特定の実施形態によれば、本開示は、配列番号１の２３５または２３６に対応するアミノ酸位置で少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量の第Ｘａ因子（ＦＸａ）バリアントを対象に投与することによって、対象における脳内出血（ＩＣＨ）を治療するための方法を提供する。対象における脳内出血（ＩＣＨ）の治療で使用するための配列番号１の２３５および／または２３６に対応するアミノ酸位置に少なくとも１つの置換突然変異を含むＦＸａバリアントも提供される。いくつかの実施形態では、２３５位に対応する位置の置換は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙとのものでありうる。他の実施形態では、２３６位に対応する位置の置換は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙとのものでありうる。

ある特定の実施形態によれば、本開示は、配列番号１の２３５または２３６に対応するアミノ酸位置で少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量の第Ｘａ因子（ＦＸａ）バリアントを対象に投与することによって、ＩＣＨを有する対象がＩＣＨの結果として死亡する可能性を低減するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、２３５位に対応する位置の置換は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙとのものでありうる。他の実施形態では、２３６位に対応する位置の置換は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙとのものでありうる。

ある特定の実施形態によれば、本開示は、配列番号１の２３５または２３６に対応するアミノ酸位置で少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量の第Ｘａ因子（ＦＸａ）バリアントを対象に投与することによって、対象がＩＣＨを罹患した後の対象の脳機能を改善するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、２３５位に対応する位置の置換は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙとのものでありうる。他の実施形態では、２３６位に対応する位置の置換は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙとのものでありうる。いくつかの実施形態によれば、脳機能の改善は、ＩＣＨによって引き起こされた対象における上昇した頭蓋内圧（ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ ｐｒｅｓｓｕｒｅ、ＩＣＰ）を、８０ｍｍＨｇ、７０ｍｍＨｇ、６０ｍｍＨｇ、５０ｍｍＨｇ、４０ｍｍＨｇ、３０ｍｍＨｇ、２０ｍｍＨｇ、または１０ｍｍＨｇの圧力以下に低減することと関連する。他の実施形態では、脳機能の改善は、脳潅流圧（ｃｅｒｅｂｒａｌ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅ、ＣＰＰ）を、４０ｍｍＨｇ、５０ｍｍＨｇ、６０ｍｍＨｇ、７０ｍｍＨｇ、８０ｍｍＨｇ、９０ｍｍＨｇ、１００ｍｍＨｇ、１１０ｍｍＨｇ、または１２０ｍｍＨｇの圧力以上に維持することと関連する。他の実施形態では、脳機能の改善は、脳組織酸素分圧（ＰｂｔＯ_２）を６ｍｍＨｇ、８ｍｍＨｇ、１０ｍｍＨｇ、１２ｍｍＨｇ、１４ｍｍＨｇ、１６ｍｍＨｇ、１８ｍｍＨｇ、２０ｍｍＨｇ、２２ｍｍＨｇ、または２４ｍｍＨｇの圧力以上に維持することと関連する。他の実施形態では、脳機能の改善は、乳酸／ピルビン酸濃度比（ＬＡＲ）を６０、５０、４０、３０、または２０以下に低減することと関連する。他の実施形態では、脳機能の改善は、脳血管の頭蓋内圧と平均血圧の二変量の相関係数（ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ、ＰＲｘ）の比を０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．０、−０．１、−０．２、または−０．３以下に低減することと関連する。

ある特定の実施形態によれば、本開示は、配列番号１の２３５または２３６に対応するアミノ酸位置で少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量の第Ｘａ因子（ＦＸａ）バリアントを対象に投与することによって、対象がＩＣＨを罹患した後の対象の神経学的障害を低減するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、２３５位に対応する位置の置換は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙとのものでありうる。他の実施形態では、２３６位に対応する位置の置換は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙとのものでありうる。いくつかの実施形態によれば、神経学的障害の低減は、グラスゴー昏睡スコアを使用して評価され、治療の結果として、対象のスコアは、３から４以上、４から５以上、５から６以上、６から７以上、７から８以上、８から９以上、９から１０以上、１０から１１以上、１１から１２以上、１２から１３以上、１３から１４以上、または１４から１５に改善する。他の実施形態では、神経学的障害は、グラスゴー転帰スケール拡張版を使用して評価され、治療の結果として、治療された対象の平均スコアは、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、または８に改善する。他の実施形態では、神経学的障害は、バーセルインデックスを使用して評価され、治療の結果として、治療された対象の平均スコアは、１０以上、２０以上、３０以上、４０以上、５０以上、６０以上、７０以上、または８０以上、または９０以上に改善する。他の実施形態では、神経学的障害は、ＮＩＨ脳卒中スケールを使用して評価され、治療の結果として、治療された対象の平均スコアは、４２から４１以下、４１から４０以下、４０から３９以下、３９から３８以下、３８から３７以下、３７から３６以下、３６から３５以下、３５から３４以下、３４から３３以下、３３から３２以下、３２から３１以下、３１から３０以下、３０から２９以下、２９から２８以下、２８から２７以下、２７から２６以下、２６から２５以下、２５から２４以下、２４から２３以下、２３から２２以下、２２から２１以下、２１から２０以下、２０から１９以下、１９から１８以下、１８から１７以下、１７から１６以下、１６から１５以下、１５から１４以下、１４から１３以下、１３から１２以下、１２から１１以下、１１から１０以下、１０から９以下、９から８以下、８から７以下、７から６以下、６から５以下、５から４以下、４から３以下、３から２以下、２から１以下、または１から０に低減される。他の実施形態では、神経学的障害は、修正ランキンスケールを使用して評価され、治療の結果として、治療された対象の平均スコアは、約５と６の間から約４と５の間、約４と５の間から約３と４の間、約３と４の間から約２と３の間、約２と３の間から約１と２の間、または約１と２の間から約０と１の間に低減される。他の実施形態では、神経学的障害は、修正ランキンスケールを使用して評価され、治療の結果として、５または６の修正ランキンスケールスコアを有する治療された対象の比率は、０、１、２、３、または４のスコアを有するものと比較して低減される。他の実施形態では、神経学的障害は、修正ランキンスケールを使用して評価され、治療の結果として、４、５、または６の修正ランキンスケールスコアを有する治療された対象の比率は、０、１、２、または３のスコアを有するものと比較して低減される。

ある特定の実施形態によれば、本開示は、配列番号１の２３５または２３６に対応するアミノ酸位置で少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量の第Ｘａ因子（ＦＸａ）バリアントを対象に投与することによって、対象がＩＣＨを罹患した後の対象の血腫周囲の浮腫（ｐｅｒｉｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｅｄｅｍａ、ＰＨＥ）を低減するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、２３５位に対応する位置の置換は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙとのものでありうる。他の実施形態では、２３６位に対応する位置の置換は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙとのものでありうる。ある特定の実施形態によれば、治療により、未治療の対照と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％、ＩＣＨを有する対象におけるＰＨＥの平均体積が低減される。他の実施形態では、治療により、未治療の対照と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％、ＩＣＨを有する対象においてＰＨＥによって引き起こされた頭蓋内圧の平均上昇が低減される。

ある特定の実施形態によれば、本開示は、配列番号１の２３５または２３６に対応するアミノ酸位置で少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量の第Ｘａ因子（ＦＸａ）バリアントを対象に投与することによって、対象がＩＣＨを罹患した後の対象における血腫体積拡大を低減または予防するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、２３５位に対応する位置の置換は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙとのものでありうる。他の実施形態では、２３６位に対応する位置の置換は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙとのものでありうる。ある特定の実施形態によれば、治療により、未治療の対照と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％、ＩＣＨを有する対象における平均血腫体積拡大が低減される。他の実施形態では、治療により、未治療の対照と比較して、少なくとも約１ｍｌ、１．５ｍｌ、２ｍｌ、２．５ｍｌ、３ｍｌ、３．５ｍｌ、４ｍｌ、４．５ｍｌ、５ｍｌ、５．５ｍｌ、６ｍｌ、６．５ｍｌ、７ｍｌ、７．５ｍｌ、８ｍｌ、８．５ｍｌ、９ｍｌ、９．５ｍｌ、１０ｍｌ、１０．５ｍｌ、１１ｍｌ、１１．５ｍｌ、１２ｍｌ、１２．５ｍｌ、１３ｍｌ、１３．５ｍｌ、１４ｍｌ、１４．５ｍｌ、１５ｍｌ、１６ｍｌ、１７ｍｌ、１８ｍｌ、１９ｍｌ、２０ｍｌ、２２ｍｌ、２４ｍｌ、２６ｍｌ、２８ｍｌ、３０ｍｌ、３５ｍｌ、４０ｍｌ、４５ｍｌ、または５０ｍｌ、対象における平均血腫体積拡大が低減される。他の実施形態では、治療により、血腫体積が３ｍｌ以上、６ｍｌ以上、または１２．５ｍｌ以上拡大した対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される。他の実施形態では、治療により、血腫体積が１５％、２０％、２５％、３０％、もしくは３３％、またはそれ以上拡大した対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される。他の実施形態では、治療により、治療後に４、３、２、または１のスポットサインスコアを有する対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される。さらに他の実施形態では、スポットサインスコアは、ＦＸａバリアントを最初に投与して、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１８時間、２４時間、３０時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１８日、３週間、または４週間後に判定される。

本開示の他の実施形態によれば、対象における脳内出血（ＩＣＨ）を治療し、ＩＣＨを有する対象の脳機能を改善するのに使用するため、ＩＣＨを有する対象における神経学的障害を低減するため、ＩＣＨを有する対象における血腫周囲の浮腫（ＰＨＥ）を低減するため、またはＩＣＨを有する対象における血腫体積拡大を低減もしくは予防するための、配列番号１の２３５および／または２３６に対応するアミノ酸位置で少なくとも１つの置換突然変異を含む第Ｘａ因子（ＦＸａ）バリアントが提供される。いくつかの実施形態では、２３５位に対応する位置の置換は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙとのものでありうる。いくつかの他の実施形態では、２３６位に対応する位置の置換は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙとのものでありうる。

そして、さらに他の実施形態によれば、先の実施形態のいずれも、脳内出血が、脳の大脳、前頭葉、頭頂葉、後頭葉、側頭葉、小脳、脳幹、中脳、脳橋、髄質、脳下垂体、視床下部、視床、海馬、扁桃体、前障、または基底核で起こることをさらに特徴としうる。

図１Ａ 正常なヒト血漿の試料中で凝固が開始された後に生成されるトロンビンの量に対する、様々な濃度の活性化第Ｘ因子バリアントＦＸａ^Ｉ１６Ｌを添加することの効果を試験するトロンビン生成アッセイ（ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ、ＴＧＡ）の結果を示す図である。実験の６０分の時間経過にわたって、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌを添加すると、ビヒクルのみで処置された血漿と比較してトロンビン生成が用量依存的に増大した。 図１Ｂ 正常なヒト血漿の試料中で凝固が開始された後に生成されるトロンビンの量に対する、様々な濃度の血漿由来活性化第Ｘ因子ｐｄＦＸａを添加することの効果を試験するトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）の結果を示す図である。実験の６０分の時間経過にわたって、ｐｄＦＸａを添加すると、ビヒクルのみで処置された血漿と比較してトロンビン生成が用量依存的に増大した。 図１Ｃ 図１Ａおよび図１Ｂに記載の実験からのデータから計算した凝固の開始相の遅延時間を示す図である。ビヒクルのみで処置されたヒト血漿と比較して、ｐｄＦＸａおよびＦＸａ^Ｉ１６Ｌはともに、遅延時間を短縮したが、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ処置血漿の遅延時間は、ｐｄＦＸａで処置された血漿より長かった。 図２Ａ 尾切断後の非血友病マウスからの失血に対する、漸増濃度のＦＸａ^Ｉ１６Ｌを用いた前処置の効果を示す図である。尾切断前にＦＸａ^Ｉ１６Ｌで処置すると、ビヒクルのみで処置されたマウスと比較して、総失血が用量依存的に減少した。 図２Ｂ 尾切断後の非血友病ラットからの失血に対する、漸増濃度のＦＸａ^Ｉ１６Ｌを用いた前処置の効果を示す図である。尾切断前にＦＸａ^Ｉ１６Ｌで処置すると、ビヒクルのみで処置されたラットと比較して、総失血が用量依存的に減少した。 図３Ａ ＩＣＨの動物モデルとして脳内出血を生じるように実験的に操作されたマウスにおける、血腫体積に対する漸増濃度のＦＸａ^Ｉ１６Ｌを用いた処置の効果を示す図である。脳組織内に出血を実験的に誘導した後にＦＸａ^Ｉ１６Ｌで処置すると、ビヒクルのみで処置されたマウスと比較して、血腫体積が用量依存的に減少した。 図３Ｂ 図３Ａのデータに基づく用量に関してビヒクルと比較した血腫体積の減少パーセントを示す図である。 図４Ａ ＩＣＨの動物モデルとして脳内出血を生じるように実験的に操作されたラットにおける、血腫体積に対する漸増濃度のＦＸａ^Ｉ１６Ｌを用いた処置の効果を示す図である。脳組織内に出血を実験的に誘導した後にＦＸａ^Ｉ１６Ｌで処置すると、ビヒクルのみで処置されたラットと比較して、血腫体積が用量依存的に減少した。 図４Ｂ 図４Ａのデータに基づく用量に関してビヒクルと比較した血腫体積の減少パーセントを示す図である。 野生型ヒト第Ｘ因子タンパク質前駆体（配列番号１）のアミノ酸配列を示す図である。シグナルペプチドは、アミノ酸１〜２３に対応する。プロペプチドは、アミノ酸２４〜４０に対応する。活性化された第Ｘ因子（ＦＸａ）の成熟軽鎖は、アミノ酸４１〜１７９に対応する。活性化されたＦＸａの成熟重鎖（活性化ペプチドを除去した後の）は、アミノ酸２３５〜４８８に対応する。活性化ペプチド（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｅｐｔｉｄｅ、ＡＰ）は、アミノ酸１８３〜２３４に対応する。 野生型ヒト第Ｘ因子タンパク質前駆体（配列番号２）をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す図である。コード配列は、ヌクレオチド５８〜１５２４に対応する。 図６−１の配列番号２の続きである。

酵素原性を有する凝固因子Ｘａのバリアントは、血友病動物における制御されていない出血を阻害するのに有効であることが以前に実証された。しかし、このバリアントが、インタクトな凝固系を有する動物における制御されていない出血を有効に停止できるか否かは未知であったか、または予測されていなかった。出願者らは、このバリアントが非血友病動物において有効な凝血促進剤であり、脳内出血の非血友病動物モデルにおける血腫拡大を低減することもできることを実証した。これらの新しい研究に基づくと、本開示のＦＸａバリアント、およびこのようなバリアントを含む組成物は、ヒトおよび非ヒト動物を含めた非血友病対象におけるＩＣＨを治療および予防するための方法において有用であることが予期される。ＦＸａバリアントでＩＣＨ対象を治療すると、未治療の対照と比較して、対象の生活の質および神経学的機能を改善し、ＩＣＨによって引き起こされる症状および障害の重症度を低減することができる。本開示のＦＸａバリアントおよび組成物を使用してＩＣＨを治療および予防するための方法を、以下でさらに詳細に記載する。

第Ｘａ因子およびそのバリアント
凝固因子Ｘ（ＦＸ）は、内因性第ＩＸ因子／第ＶＩＩＩ因子または外因経路（組織因子／第ＶＩＩａ因子）によって活性化されるとプロトロンビナーゼのプロテアーゼ部分であるＦＸａになる酵素原である。Ａｒｇ−Ｉｌｅ切断性結合がタンパク質分解的に切断され、活性化ペプチド（ＡＰ）を放出した後、酵素原の一連の明確な構造変化が、成熟活性セリンプロテアーゼへの活性化プロセスを推進する（その全体が本明細書に参照により組み込まれている、Ｔｏｓｏら（２００８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３、１８６２７〜１８６３５；Ｂｕｎｃｅら、（２０１１）Ｂｌｏｏｄ、１１７、２９０〜２９８；およびＩｖａｎｃｉｕら（２０１１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２９、１０２８〜１０３３を参照）。成熟ＦＸａは、軽鎖、および触媒ドメインを含有する重鎖を有する。成熟ＦＸａは、活性化した補助因子、第Ｖａ因子（ＦＶａ）の結合を含むプロトロンビナーゼ複合体が形成されると活性セリンプロテアーゼになる。

活性化されると、切断により酵素原様ＦＸａバリアントが生じるＦＸのバリアント型が開発された。すなわち、切断されると、得られるＦＸａバリアントは、活性部位機能不良を有し、循環する阻害剤（すなわち、抗トロンビンＩＩＩおよびＴＦＰＩ）による不活化に対してより耐性である。したがって、ＦＸａバリアントは、野生型ＦＸａより血漿中で長い半減期を有する。ＦＸａバリアントは、ＦＶａ、脂質膜、およびカルシウムに結合して、プロトロンビンを効率的に活性化する完全に活性なプロトロンビナーゼ複合体を形成する。

ＦＸａの酵素原様バリアントは、酵素原様コンホメーション内で循環し、血栓形成性ではないようである（その全体が本明細書に参照により組み込まれている、Ｔｏｓｏら（２００８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３、１８６２７〜１８６３５、およびＩｖａｎｃｉｕら（２０１１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２９、１０２８〜１０３３を参照）。ＦＸａバリアントの例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている国際特許公開第ＷＯ２００７／０５９５１３号に記載されている。

凝固の酵素は、キモトリプシン様フォールドを持つプロテアーゼのＳ１ペプチダーゼファミリーに属するトリプシン様酵素である。凝固プロテアーゼは、互いに、かつ消化の祖先セリンプロテアーゼと高度に相同である触媒ドメインを含有する。構造的な相同性／同一性は、非常に大きく（７０％超）、凝固酵素（第Ｘａ因子を含む）の触媒ドメイン内の残基は、キモトリプシノーゲン中の対応する残基によって番号付けられる。（キモトリプシン番号方式；ともにその全体が本明細書に参照により組み込まれている、ＢａｊａｊおよびＢｉｒｋｔｏｆｔ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１９９３；２２２：９６〜１２８、表２、ならびにＢｏｄｅ Ｗ、Ｍａｙｒ Ｉ、Ｂａｕｍａｎ Ｙら、Ｔｈｅ ｒｅｆｉｎｅｄ １．９Å ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ−ｔｈｒｏｍｂｉｎ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｋｅｔｏｎｅ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｓｅｇｍｅｎｔ．、ＥＭＢＯ Ｊ、１９８９；８（１１）：３４６７〜３４７５を参照）。したがって、アミノ酸は、当業者に周知であるキモトリプシン番号方式によって本明細書で言及されうる。

本開示によれば、ＦＸａバリアントは、バリアントをｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで野生型ＦＸａタンパク質と比較してより酵素原様にするアミノ酸置換を含むＦＸａタンパク質でありうる。本開示のＦＸａバリアントは、プロトロンビナーゼを形成すると野生型ＦＸａ活性を実質的に回復する。本開示の方法で有用であるＦＸａバリアントの例は、キモトリプシン番号方式によって、ａ）１６位のＩｌｅがＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙである、およびｂ）１７位のＶａｌがＬｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙである、からなる群から選択される修飾を含むバリアントである。キモトリプシン番号方式におけるアミノ酸１６および１７は、配列番号１（ヒト第Ｘ因子プレプロタンパク質）のそれぞれアミノ酸２３５および２３６に存在する。ある特定の実施形態では、ＦＸａバリアントは、ＦＸａ^Ｉ１６ＬおよびＦＸａ^Ｉ１６Ｔである（ＦＸａバリアントについて本明細書で使用する命名法は、キモトリプシン番号方式によって番号付けられた位置の元のアミノ酸と、その後の置換されたアミノ酸を列挙する）。ＦＸａバリアントは、任意の哺乳動物ＦＸａのバリアントでありうる。しかし、特に対象とするのは、ヒトＦＸａのＦＸａバリアントである。

ある特定の実施形態では、活性化されて本開示のバリアントＦＸａになるＦＸバリアントは、非天然細胞内タンパク質分解的切断部位を挿入することによってさらに修飾することができる。非限定例では、哺乳動物細胞内で「活性化された」酵素原様ＦＸａバリアントを発現させるために、非天然細胞内タンパク質分解的切断部位を、バリアントＦＸ酵素原内の配列番号１の２３４位（キモトリプシン番号方式における１５位）のＡｒｇと、配列番号１の２３５位（キモトリプシン番号方式における１６位）に対応する位置のアミノ酸との間に挿入することができる。ある特定の実施形態では、非天然細胞内プロテアーゼ切断部位は、Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＡｒｇまたはＡｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（配列番号３）である。これらの切断部位は、細胞内でプロテアーゼ（ＰＡＣＥ／フューリン様酵素）によって効率的に認識され、除去される。この切断は、プロセシングされたバリアントＦＸａをもたらすことができ、このバリアントでは、分子の成熟重鎖は、配列番号１の２３５位（キモトリプシン番号方式における１６位）に対応する位置のアミノ酸からこの時点で始まる。前記位置でこの切断部位を導入すると、ＦＸからＦＸａへの細胞内転換が可能になる。

ある特定の実施形態では、ＦＸバリアント活性化ペプチド（ＡＰ）のアミノ酸配列全体（すなわち、配列番号１のアミノ酸１８３〜２３４）は、非天然細胞内プロテアーゼ切断部位で置き換えられている。ある特定の実施形態によれば、非天然細胞内プロテアーゼ切断部位は、Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＡｒｇまたはＡｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（配列番号３）である。上記に説明したように、この修飾は、細胞によって発現されるＦＸバリアントの細胞内切断を可能にする。細胞内切断により、ＦＸバリアントが活性化された酵素原様ＦＸａバリアントに変換され、次いでこれは細胞によって分泌され、引き続いて精製される。この手法は、例えば、タンパク質を単離した後、または血液凝固の直前にバリアント凝固因子を活性化することが他の方法では要求される細胞外切断の必要性を回避する。

ある特定の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントは、天然野生型ヒトシグナル配列および／またはプロペプチド配列を含むＦＸバリアントタンパク質前駆体に由来する。他の実施形態では、非ヒト種由来のＦＸシグナル配列および／またはプロペプチドを、対応する天然アミノ酸配列の代わりに使用することができる。そしてさらに他の実施形態では、他のヒトまたは非ヒト分泌タンパク質由来のシグナル配列および／またはプロペプチド配列を、対応する天然アミノ酸配列の代わりに使用することができる。

例示的な実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３５位のアミノ酸（野生型配列中のイソロイシン）は、トレオニン（Ｔｈｒ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、またはグリシン（Ｇｌｙ）からなる群から選択される異なるアミノ酸で置換されている。これらの置換は、命名法Ｉ２３５Ｔ、Ｉ２３５Ｌ、Ｉ２３５Ｆ、Ｉ２３５Ｄ、およびＩ２３５Ｇを使用してそれぞれ書くことができ、最初の文字は、イソロイシンの一文字コードであり、最後の文字は、野生型配列中に置換されているアミノ酸の一文字コードである。配列番号１の２３５位は、キモトリプシン番号方式での１６位と等価であるので、同じ置換をＩ１６Ｔ、Ｉ１６Ｌ、Ｉ１６Ｆ、Ｉ１６Ｄ、およびＩ１６Ｇと書くことができる。一実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３５位のアミノ酸は、Ｔｈｒで置換されている（すなわち、Ｉ２３５ＴまたはＩ１６Ｔ）。一実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３５位のアミノ酸は、Ｌｅｕで置換されている（すなわち、Ｉ２３５ＬまたはＩ１６Ｌ）。一実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３５位のアミノ酸は、Ｐｈｅで置換されている（すなわち、Ｉ２３５ＦまたはＩ１６Ｆ）。一実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３５位のアミノ酸は、Ａｓｐで置換されている（すなわち、Ｉ２３５ＤまたはＩ１６Ｄ）。一実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３５位のアミノ酸は、Ｇｌｙで置換されている（すなわち、Ｉ２３５ＧまたはＩ１６Ｇ）。

別の例示的な実施形態によれば、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３６位のアミノ酸（野生型配列中のバリン）は、ロイシン（Ｌｅｕ）、アラニン（Ａｌａ）、またはグリシン（Ｇｌｙ）からなる群から選択される異なるアミノ酸で置換されている。これらの置換は、命名法Ｖ２３６Ｌ、Ｖ２３６Ａ、およびＶ２３６Ｇを使用してそれぞれ書くことができ、最初の文字は、バリンの一文字コードであり、最後の文字は、野生型配列中に置換されているアミノ酸の一文字コードである。配列番号１の２３６位は、キモトリプシン番号方式での１７位と等価であるので、同じ置換をＶ１７Ｌ、Ｖ１７Ａ、およびＶ１７Ｇと書くことができる。一実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３６位のアミノ酸は、Ｌｅｕで置換されている（すなわち、Ｖ２３６ＬまたはＶ１７Ｌ）。一実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３６位のアミノ酸は、Ａｌａで置換されている（すなわち、Ｖ２３６ＡまたはＶ１７Ａ）。一実施形態では、ＦＸａバリアントは、配列番号１のアミノ酸４１〜１７９およびアミノ酸２３５〜４８８を含み、２３６位のアミノ酸は、Ｇｌｙで置換されている（すなわち、Ｖ２３６ＧまたはＶ１７Ｇ）。

他の実施形態では、先の段落に記載の特定のバリアントを含めた本開示のＦＸａバリアントは、タンパク質の軽鎖および／または成熟重鎖の様々なアイソフォームを含みうる。ＦＸａバリアント成熟重鎖の限定されない例示的なアイソフォームとしては、成熟重鎖のアルファおよびベータバージョンがある。参照により本明細書に組み込まれているＪｅｓｔｙら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、１９７５年６月２５日；２５０（１２）：４４９７〜５０４。本開示の組成物は、アルファおよびベータ成熟重鎖アイソフォームの一方もしくは他方または両方が表現されているＦＸａバリアントタンパク質を含みうる。

さらに他の実施形態によれば、先の段落に記載の特定のバリアントを含めたＦＸａバリアントタンパク質のアイソフォームは、多様な数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上のアミノ酸）が、タンパク質の軽鎖および／または成熟重鎖のカルボキシ末端から欠失しているか、またはこれに付加されているアイソフォームを含みうる。

ある特定の実施形態によれば、本開示のＦＸａバリアントは、配列番号１中の野生型ＦＸａのアミノ酸配列と比較して、ある特定の最小程度の相同性または配列同一性を有するタンパク質を含む。したがって、例えば、ＦＸａバリアントは、配列番号１中の野生型ＦＸａ軽鎖および成熟重鎖と配列において少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％相同または同一である軽鎖および成熟重鎖を含有するタンパク質を含み、このようなＦＸａバリアントは、配列番号１の２３５位に対応するアミノ酸位置でのＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙとの置換、または配列番号１の２３６位に対応するアミノ酸位置でのＬｅｕ、Ａｌａ、もしくはＧｌｙとの置換も含み、さらにこのようなＦＸａバリアントは、プロトロンビナーゼ複合体中に組み込まれるまで酵素原性である。配列番号１のアミノ酸配列では、野生型ＦＸａ軽鎖配列は、アミノ酸４１〜１７９に対応し、野生型ＦＸａ成熟重鎖配列は、アミノ酸２３５〜４８８に対応する。パーセンテージアミノ酸配列相同性または同一性は、国立バイオテクノロジー情報センターのウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）で入手可能なＰｒｏｔｅｉｎ ＢＬＡＳＴなどのソフトウェアを使用して容易に決定することができる。

他の限定されない実施形態によれば、本開示のＦＸａバリアントは、限定することなく、１つもしくは複数のＯ結合型もしくはＮ結合型炭水化物基または多様な数のガンマ−カルボキシグルタミン酸（Ｇｌａ）残基を含めた１つまたは複数の翻訳後修飾を含有するＦＸａバリアントも含みうる。本開示のＦＸａバリアントは、化学修飾されたＦＸａバリアントタンパク質をさらに含みうる。本開示の方法で有用な他のＦＸａバリアントも可能である。

本明細書において、用語ＦＸａ^Ｉ１６ｘは、配列番号１の２３５位（キモトリプシン番号方式での１６位に対応する）に対応するアミノ酸が、野生型配列中のアミノ酸（イソロイシン）から「ｘ」で表される異なるアミノ酸に変更されている活性化された第Ｘ因子のバリアントを指す。いくつかの限定されない例示的な実施形態では、アミノ酸「ｘ」は、トレオニン（ＴｈｒもしくはＴ）、ロイシン（ＬｅｕもしくはＬ）、フェニルアラニン（ＰｈｅもしくはＦ）、アスパラギン酸（ＡｓｐもしくはＤ）、またはグリシン（ＧｌｙもしくはＧ）でありうる。

本明細書において、用語ＦＸａ^Ｖ１７ｙは、配列番号１の２３６位（キモトリプシン番号方式での１７位に対応する）に対応するアミノ酸が、野生型配列中のアミノ酸（バリン）から「ｙ」で表される異なるアミノ酸に変更されている活性化された第Ｘ因子のバリアントを指す。いくつかの限定されない例示的な実施形態では、アミノ酸「ｙ」は、ロイシン（ＬｅｕもしくはＬ）、アラニン（ＡｌａもしくはＡ）、またはグリシン（ＧｌｙもしくはＧ）でありうる。

用語ＦＸａ^Ｉ１６ｘおよびＦＸａ^Ｖ１７ｙは、配列番号１に示されているタンパク質配列によって限定されない。それどころか、これらの用語は、プロトロンビナーゼ複合体中に組み込まれるまで酵素原として挙動するキモトリプシン番号方式での１６位または１７位で特定の置換突然変異を有する本明細書に記載の様々なアイソフォームおよび相同タンパク質をさらに含む。

本開示のＦＸａバリアントは、タンパク質を発現させるための任意の技法によって生成することができる。

「単離タンパク質」、「単離ポリペプチド」、または「単離バリアント」は、派生物のその起源または源によって、（１）その天然の状態でそれに伴う天然に付随する構成成分と付随していない、（２）同じ種に由来する他のタンパク質を含まない、（３）異なる種に由来する細胞によって発現される、または（４）自然において存在しない、タンパク質、ポリペプチド、またはバリアントである。したがって、化学合成された、またはそれが天然に生じる細胞と異なる細胞系で合成されたポリペプチドは、その天然に付随する構成成分から「単離されている」ことになる。タンパク質は、当技術分野で周知のタンパク質精製技法を使用して、単離によって天然に付随する構成成分を実質的に含まないようにすることもできる。

タンパク質またはポリペプチドは、試料の少なくとも約６０〜７５％が単一種のポリペプチドを呈する場合、「実質的に純粋であり」、「実質的に均一であり」、または「実質的に精製されている」。ポリペプチドまたはタンパク質は、単量体であっても多量体であってもよい。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質は一般に、タンパク質試料の約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％Ｗ／Ｗ、より通常には約９５％を構成し、９９％超純粋でありうる。タンパク質純度または均一性は、タンパク質試料のポリアクリルアミドゲル電気泳動、その後の、当技術分野で周知の染色剤でゲルを染色した後の単一ポリペプチドバンドの可視化などの当技術分野で周知のいくつかの手段によって示すことができる。ある特定の目的に関して、より高い解像度を、ＨＰＬＣまたは精製のための他の当技術分野で周知の手段を使用することによってもたらすことができる。

脳内出血
脳内出血（ＩＣＨ）は、脳組織（実質）内への出血を引き起こす脳内の罹患または損傷した血管の破裂から生じる脳卒中の一形態である。脳損傷および結果として起こる神経学的障害または死は、異なる機構から生じうる。例えば、血液漏出は、患部血管によって供給される脳細胞への酸素供給を低減すると考えられている。血液のプーリングは、浮腫を引き起こし得、最終的に形成する血腫はまた、周囲脳組織に対して圧力を発揮しうることも考えられている。浮腫および血腫はともに、頭蓋内圧を増大させうる。ＩＣＨによって引きこされる脳損傷の他の機構も可能である。ＩＣＨ後の脳損傷の原因に関与する１つまたは複数の特定の機構は、一般に、または特定の場合において、本開示の実施形態を限定するように決して意図されていない。

ＩＣＨは、脳の任意の部分で起こりうる。ＩＣＨが起こりうる、または脳の異なる部分で起こるＩＣＨによって影響されうる脳の例示的な領域としては、それだけに限らないが、大脳（前頭葉、頭頂葉、後頭葉、側頭葉を含む）、小脳、脳幹（中脳、脳橋、髄質を含む）、脳下垂体、視床下部、視床、海馬、扁桃体、前障、または基底核がある。

ＩＣＨは、脳内の動脈からの出血の結果として起こりうる。脳の例示的な動脈としては、それだけに限らないが、前大脳動脈（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ、ＡＣＡ）、中大脳動脈（ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ、ＭＣＡ）、後大脳動脈（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ、ＰＣＡ）、眼動脈、ウィリス輪の動脈、後下小脳動脈（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｉｎｆｅｒｉｏｒ ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ａｒｔｅｒｙ、ＰＩＣＡ）、またはレンズ核線条体動脈がある。

頭蓋内圧の増大を示すある特定の症状、例えば、頭痛、吐き気、嘔吐、および意識消失などは、ＩＣＨの存在を示唆しうるが、確定診断は、脳撮像を必要とする。当業者によく知られた脳撮像（神経画像処理とも呼ばれる）技術としては、コンピューター断層撮影（ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、ＣＴ）スキャン、血管造影、ＣＴ血管造影、磁気共鳴画像法（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ、ＭＲＩ）、およびＭＲ血管造影がある。ＩＣＨの確定診断のための他の技法も、当業者によく知られているであろう。

ＩＣＨは、血栓による脳内の血管の閉塞によって引き起こされる虚血性脳卒中ほど一般的ではないが、すべての脳卒中の約１２パーセントを占める。虚血性脳卒中と対照的に、ＩＣＨは、出血が始まった後の最初の２４時間以内に、特に、出血が血腫の拡大を伴う場合、著しく悪化する可能性がより高い。以下でさらに論じるように、血腫拡大は、より悪い患者転帰と関連する。

脳内出血（ＩＣＨ）を治療する方法
本開示は、ＩＣＨの治療を必要とする対象に、治療有効量の酵素原性を有するＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａバリアントＦＸａ^Ｉ１６Ｌを投与することによってＩＣＨを治療または予防するための方法を提供する。

本明細書において、用語「対象」は、脳内出血を罹患しうる脳および本開示のＦＸａバリアントを使用して活性化されうる凝固系を有する任意の動物を指す。いくつかの実施形態では、動物は、哺乳動物、例えば、ヒトおよび非ヒト霊長類動物（例えば、類人猿、サル、ヒヒ、チンパンジー）、または他の哺乳動物、例えば、げっ歯類動物（例えば、マウス、ラット）、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、アレチネズミ、モルモット、ハムスター、およびコウモリなどである。他の動物も、当業者の知識によれば可能である。

いくつかの実施形態では、対象は、非血友病哺乳動物、例えば、非血友病ヒトである。他の実施形態では、対象は、血友病Ａ、血友病Ｂ、または他のタイプの血友病を含みうる血友病を有する。

本明細書において、語句「治療有効量」は、ＩＣＨを有する対象に投与されたとき、対象がＩＣＨの結果として死亡する可能性を低減し、ＩＣＨによって引き起こされる病的状態を低減し、ＩＣＨによって引き起こされる神経学的障害を低減し、またはＩＣＨ後の対象の機能、生活の質、もしくは状態を改善するＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）の量を指す。治療有効量のＦＸａバリアントはさらに、出血が始まり、もしくはＩＣＨが診断された後にＩＣＨによって引き起こされる血腫が体積を拡大する程度を予防もしくは低減し、ＩＣＨによって引き起こされる血腫周囲の浮腫の拡大を予防し、もしくはこの浮腫の体積を低減し、またはＩＣＨに伴いうる頭蓋内圧の増大を予防もしくは低減することができる。治療有効量のＦＸａバリアントはさらに、発病を遅延させ、またはＩＣＨによって引き起こされる身体的徴候、症状、生理的効果、もしくは神経学的障害のいずれかの重症度を緩和し、減らし、もしくは減衰させることができる。ＦＸａバリアントの治療有効量は、使用される特定のＦＸａバリアントの性質、治療される対象の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびにＦＸａバリアントが対象において所望の応答を発揮する能力などの要因によって変動しうる。治療有効量は、ＦＸａバリアントのいずれの有毒または有害な効果よりも、治療的に有益な効果が勝っているものでもある。

語句「予防有効量」は、ＩＣＨの１つまたは複数のリスクファクターを有する対象に投与されたとき、対象がＩＣＨを罹患する可能性を低減し、または同様のリスクプロファイルを有する対象の集団におけるＩＣＨの発生率を低減するＦＸａバリアントの量を指す。

ＦＸａバリアントの効力および効果的な量は、ＦＸａバリアントを投与される個々のＩＣＨ対象の知見に基づいて決定されうる。ＦＸａバリアントの効力および効果的な量は、当業者の知識によってＩＣＨ対象の規定された集団において制御された臨床試験を行うことによっても決定することができる。このような臨床試験の結果に基づいて、医療提供者は、ＩＣＨを新たに経験しており、ＩＣＨを治療する必要のある対象にＦＸａバリアントが投与される前に、ＦＸａバリアントの有効量である可能性が高いものを事前に予測することができる。

望ましくはあるが、ＩＣＨの身体的徴候もしくは症状（例えば、血腫拡大を含む）、またはＩＣＨによって引き起こされる神経学的障害の完全な予防または逆転は、効力が存在するために必要ではない。そうではなく、上記に示したように、有効量のＦＸａバリアントは、ＦＸａバリアントで治療せずにＩＣＨ対象がなっていた可能性の高い状態と比較して、その対象の状態を改善すれば十分である。

ＩＣＨに起因する死亡率を低減する方法
ＩＣＨを原因とする３０日致死率は、４０％〜５０％に及び、死亡の約半分が発病の２日以内に起こることが報告されている。その全体が参照により組み込まれている、Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ Ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ、ＪＲ Ｃａｒｈｕａｐｏｍａら編（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０１０）のＭＬ Ｆｌａｈｅｒｔｙら、「Ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ」。

ある特定の実施形態によれば、有効量のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）をＩＣＨを有する対象に投与すると、ＩＣＨを原因とする死亡の発生率（死亡率）を低減することができる。このことは、例えば、未治療の対照集団と比較して、ＩＣＨ対象の規定された集団において死亡率を低減するＦＸａバリアントの相対能力を比較することによって実証されうる。いくつかの実施形態では、ＩＣＨを有する対象を治療すると、ＩＣＨを原因とする死亡率が約４０％〜５０％から、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、またはそれ未満まで低減される。いくつかの他の実施形態では、ＦＸａバリアントで治療すると、ＦＸａバリアントで治療されなかったＩＣＨ対象の死亡率と比較して、ＩＣＨを原因とする死亡率が約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、またはそれ以上低減される。死亡率は、ＩＣＨ発病後の任意の時間で決定することができる。発病後の限定されない例示的な時間には、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１４日、１５日、２０日、２１日、２５日、２８日、３０日、またはそれ以上が含まれる。

ＩＣＨ後の脳機能を改善する方法
本開示の方法の一実施形態では、有効量のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）を投与すると、ＩＣＨ対象における脳機能が改善される。

一実施形態では、脳機能の改善は、ＩＣＨによって引き起こされた上昇した頭蓋内圧（ＩＣＰ）を、ある特定の最大レベル未満に低減することと関連する。例えば、ＩＣＰは、８０ｍｍＨｇ、７０ｍｍＨｇ、６０ｍｍＨｇ、５０ｍｍＨｇ、４０ｍｍＨｇ、３０ｍｍＨｇ、２０ｍｍＨｇ、１０ｍｍＨｇ、またはそれ未満の値以下のレベルに低減されうる。ある特定のレベル未満にＩＣＰを低減することによって、ＩＣＨ対象が死亡する可能性が低減される。ＩＣＰを監視するための方法は、当業者によく知られている。参照により組み込まれている、Ｓ．−Ｂ．Ｋｏら、Ｓｔｒｏｋｅ、４２：３０８７〜３０９２（２０１１）。

別の実施形態では、脳機能の改善は、ある特定の最低レベルの脳潅流圧（ＣＰＰ）を維持することと関連する。例えば、ＣＰＰは、４０ｍｍＨｇ、５０ｍｍＨｇ、６０ｍｍＨｇ、７０ｍｍＨｇ、８０ｍｍＨｇ、９０ｍｍＨｇ、１００ｍｍＨｇ、１１０ｍｍＨｇ、１２０ｍｍＨｇ、またはそれより高い値以上のレベルに維持されうる。十分なレベルでＣＰＰを維持することによって、ＩＣＨ対象が脳代謝危機または脳組織低酸素を経験する可能性が低減される。十分に高いＣＰＰは、ＩＣＨ対象の死亡率の低減にも関連する。ＣＰＰを監視するための方法は、当業者によく知られている。Ｓ．−Ｂ．Ｋｏら、Ｓｔｒｏｋｅ、４２：３０８７〜３０９２（２０１１）。

さらに別の実施形態では、脳機能の改善は、ある特定の最低レベルの脳組織酸素分圧（Ｐ_ｂｔＯ_２）を維持することと関連する。例えば、Ｐ_ｂｔＯ_２は、６ｍｍＨｇ、８ｍｍＨｇ、１０ｍｍＨｇ、１２ｍｍＨｇ、１４ｍｍＨｇ、１６ｍｍＨｇ、１８ｍｍＨｇ、２０ｍｍＨｇ、２２ｍｍＨｇ、２４ｍｍＨｇ、またはそれより高い値以上のレベルに維持されうる。十分なレベルでＰ_ｂｔＯ_２を維持することによって、ＩＣＨ対象が脳代謝危機または脳組織低酸素を経験する可能性が低減される。十分に高いＰ_ｂｔＯ_２は、ＩＣＨ対象の死亡率の低減にも関連する。Ｐ_ｂｔＯ_２を監視するための方法は、当業者によく知られている。Ｓ．−Ｂ．Ｋｏら、Ｓｔｒｏｋｅ、４２：３０８７〜３０９２（２０１１）。

さらなる実施形態では、脳機能の改善は、乳酸／ピルビン酸濃度比（ＬＡＲ）をある特定のレベル未満に低減することと関連する。比がより高いことは、嫌気的代謝を示す。例えば、ＬＡＲは、６０、５０、４０、３０、２０、またはそれより低い値以下のレベルに低減されうる。ある特定のレベル未満にＬＡＲを低減することによって、ＩＣＨ対象が死亡する可能性が低減される。脳の乳酸およびピルビン酸の濃度を監視するための方法は、当業者によく知られている。Ｓ．−Ｂ．Ｋｏら、Ｓｔｒｏｋｅ、４２：３０８７〜３０９２（２０１１）。

別の実施形態では、脳機能の改善は、平均頭蓋内圧（ｍｅａｎ ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ ｐｒｅｓｓｕｒｅ、ＩＣＰ）と平均動脈圧（ｍｅａｎ ａｒｔｅｒｉａｌ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ、ＭＡＰ）との間の移動相関係数として計算される脳血管の頭蓋内圧と平均血圧の二変量の相関係数（ＰＲｘ）の比を低減することと関連する。参照により組み込まれている、Ｃ．Ｚｗｅｉｆｅｌら、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｆｏｃｕｓ、２５（１０）：Ｅ２（２００８）。例えば、ＰＲｘは、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．０、−０．１、−０．２、−０．３、またはそれより低い値以下のレベルに低減されうる。ある特定のレベル未満にＰＲｘを低減することによって、ＩＣＨ対象が死亡する可能性が低減される。ＰＲｘを計算することができるＩＣＨおよびＭＡＰを監視するための方法は、当業者によく知られている。Ｓ．−Ｂ．Ｋｏら、Ｓｔｒｏｋｅ、４２：３０８７〜３０９２（２０１１）。

ＩＣＨ後の神経学的障害を低減する方法
死亡は別として、対象に対するＩＣＨの最も重要なインパクトは、重度であることが多い神経学的障害であり、それは、対象および対象の家族の生活の質を荒廃させ、相当な社会的費用を負わせる場合がある。とりわけ、神経学的障害は、ＩＣＨ対象が支援無しで働き、または通常の１日の活動を続けることを妨害または阻止しうる。本開示のＦＸａバリアントを使用して対象におけるＩＣＨを治療または予防することによって、ＩＣＨによって引き起こされる神経学的障害の程度を、同じ対象において治療をせずに、または同様の未治療の対照の対象で起こる障害の程度と比較して低減することができる。結果として、本開示の方法によって治療されたＩＣＨ対象が、独立して働き、または機能する能力が改善される。

神経学的障害は、神経機能評価ツールを使用して定量化することができる。このような評価ツールの非限定例としては、グラスゴー昏睡スコア（Ｇｌａｓｇｏｗ Ｃｏｍａ Ｓｃｏｒｅ、ＧＣＳ）、グラスゴー転帰スケール拡張版（Ｇｌａｓｇｏｗ Ｏｕｔｃｏｍｅ Ｓｃａｌｅ，ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｖｅｒｓｉｏｎ、ＧＯＳ−Ｅ）、バーセルインデックス（Ｂａｒｔｈｅｌ Ｉｎｄｅｘ、ＢＩ）、ＮＩＨ脳卒中スケール（ＮＩＨ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃａｌｅ、ＮＩＨＳＳ）、および修正ランキンスケール（ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｒａｎｋｉｎ Ｓｃａｌｅ、ｍＲＳ）がある。例えば、ＥｕｒｏＱｏｌスケール、改訂うつ病用ハミルトン評価尺度などを含めた他の評価ツールも、当業者の知識によって使用することができる。

グラスゴー昏睡スコアは、ＩＣＨまたは他の脳傷害後の対象における意識のレベルを記述するように意図されている。ＧＣＳは、３から１５の間でスコアを付け、３が最悪であり、１５が最良である。これは、開眼（Ｂｅｓｔ Ｅｙｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、言語による応答（Ｂｅｓｔ Ｖｅｒｂａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、および運動による応答（Ｂｅｓｔ Ｍｏｔｏｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を含む３つのパラメータから構成されている。開眼（Ｂｅｓｔ Ｅｙｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）については、開眼無し＝１；痛みに対する開眼＝２；言葉による指示に対する開眼＝３、および自発的な開眼＝４である。言語による応答（Ｂｅｓｔ Ｖｅｒｂａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）については、言語の応答無し＝１；理解できない音声＝２；不適切な言葉＝３；混乱している＝４、および見当識あり＝５である。運動による応答（Ｂｅｓｔ Ｍｏｔｏｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）については、運動応答無し＝１；痛みに対する伸展＝２；痛みに対する屈曲＝３；痛みから逃避＝４；疼痛部位認識可能＝５、および指示に従う＝６である。１３以上のＧＳＣは、軽度の脳傷害と相関し、９〜１２は、中等度の傷害であり、８以下は、重度の脳傷害である。

グラスゴー転帰スケール（ＧＯＳ）およびその拡張版（ＧＯＳ−Ｅ）は、ＩＣＨまたは他の脳傷害後に対象がどれほどよく回復したかを記述するように意図されている。ＧＯＳは、５つのレベルおよび関連するスコアを有し、死亡＝１；植物状態（対象は生きているが、無応答性である）＝２；重度の障害（対象は意識があるが、身体障害のため毎日のサポートに他人を必要とする）＝３；中等度の障害（対象は独立しているが、障害を持つ）＝４、および良好な回復（対象はほとんど正常な活動を再開したが、軽微な問題が残りうる）＝５を含む。

拡張されたＧＯＳまたはＧＯＳ−Ｅでは、スコアシステムは、死亡＝１；植物状態＝２；下位重度身体障害＝３；上位重度身体障害＝４；下位中等度身体障害＝５；上位中等度身体障害＝６；下位の良好な回復＝７、および上位の良好な回復＝８の８つのレベルに拡張されている。

バーセルインデックス（ＢＩ）は、ＩＣＨまたは他の脳傷害後の対象における活動制限を測定するための評価尺度である。参照により組み込まれている、Ｍａｈｏｎｅｙ Ｆ．およびＢａｒｔｈｅｌ Ｄ．、Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ：ｔｈｅ Ｂａｒｔｈｅｌ Ｉｎｄｅｘ．、Ｍｄ Ｍｅｄ Ｊ．、１４：６１〜６５（１９６５）。このスケールは、摂食能力、入浴能力、整容能力、着替え能力、排便コントロール、排尿コントロール、トイレの使用、ベッドから椅子と椅子からベッドの間で移動する能力、機動性、および階段を使用する能力を含めた１０の機能別カテゴリーからなる。対象は、各カテゴリーに指定された活動を達成するのに要求される支援の量についてスコアを付けられる。次いでカテゴリーのスコアが合計されて、全体的な活動スコアが得られる。ＢＩスケールの異なるバージョンの中で、カテゴリーは一貫しているが、依存性の程度に割り当てられる数値は多様であり、その結果、最低および最大の合計スコアは、使用されるバージョンで変動する。例えば、いくつかのバージョンでは、スコアは、０〜２０の範囲であり、一方、他のバージョンでは、スコアは、０〜１００の範囲であるが、すべてのバージョンにおいて、スコアが高いほど、対象が独立して機能する能力が大きい。

ＮＩＨ脳卒中スケール（ＮＩＨＳＳ）は、意識、言語、無視、視野損失、外眼運動、運動力、失調症、構音障害、および感覚消失のレベルに対するＩＣＨ、脳卒中、または他の脳傷害の効果を評価するのに使用される１５項目の神経学的診察脳卒中スケールである。訓練を受けた観察者が、質問に答え、活動を実施する対象の能力を評価する。各項目のレーティングは、０を正常として３〜５グレードでスコアを付ける。０のスコアは、脳卒中症状無しを示し、１〜４のスコアは、軽微な脳卒中を示し、５〜１５のスコアは、中等度の脳卒中を示し、１６〜２０のスコアは、中等度〜重度の脳卒中を示し、２１〜４２のスコアは、重度の脳卒中を示す。

修正ランキンスケール（ｍＲＳ）は、ＩＣＨ、脳卒中、または他の脳傷害後の身体障害または対象の１日の活動における依存性の程度を測定する。スコアは、０〜６の範囲であり、０は、神経学的欠損の症状無しを示し；１は、いくつかの症状の存在にもかかわらず、著しい身体障害無しを示し；２は、わずかな身体障害（例えば、独立して機能することができるが、すべての以前の活動を続けることができない）を示し；３は、中等度の身体障害（例えば、いくらかの補助を必要とするが、支援無しで歩くことができる）を示し；４は、中等度の身体障害（例えば、支援無しで身体ニーズに応じる、または歩くことができない）；５は、重度の身体障害（例えば、一定の介護を必要とする、寝たきり、失禁）を示し、６は、死亡を示す。

いくつかの実施形態では、有効用量の本開示のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）でＩＣＨ対象を治療することは、神経学的障害評価ツールを使用して測定される場合、ＩＣＨによって引き起こされる神経学的障害を低減するのに有効である。いくつかの実施形態によれば、神経機能評価ツールとしては、グラスゴー昏睡スコア（ＧＣＳ）、グラスゴー転帰スケール拡張版（ＧＯＳ−Ｅ）、バーセルインデックス（ＢＩ）、ＮＩＨ脳卒中スケール（ＮＩＨＳＳ）、または修正ランキンスケール（ｍＲＳ）がある。他のものの使用も可能である。ＧＣＳ、ＧＯＳ、ＧＯＳ−Ｅ、ＢＩが使用される場合、神経学的障害の低減は、スコアを上昇させることによって反映される。

いくつかの実施形態では、有効用量の本開示のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）でＩＣＨ対象を治療することは、グラスゴー昏睡スコアでの対象のスコアを１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２上昇させるのに有効である。他の実施形態では、有効用量の本開示のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）でＩＣＨ対象を治療することは、その拡張版を含めたグラスゴー転帰スケールでの対象のスコアを１、２、３、４、５、６、または７上昇させるのに有効である。さらに他の実施形態では、有効用量の本開示のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）でＩＣＨ対象を治療することは、バーセルインデックスでの対象のスコアを、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０、またはより広いスコア範囲が使用される場合、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくはそれ以上上昇させるのに有効である。

ＮＩＨＳＳまたはｍＲＳが使用される場合、神経学的障害の低減は、スコアを減少させることによって反映される。いくつかの実施形態では、有効用量の本開示のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）でＩＣＨ対象を治療することは、ＮＩＨ脳卒中スケールでの対象のスコアを、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、または４２低減するのに有効である。

修正ランキンスケールは一般に、ＩＣＨによって引き起こされる対象の身体障害または依存性の程度を評価するのに使用される。いくつかの実施形態では、有効用量の本開示のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）でＩＣＨ対象を治療することは、平均ｍＲＳスコアを、約５と６の間から約４と５の間、約４と５の間から約３と４の間、約３と４の間から約２と３の間、約２と３の間から約１と２の間、約１と２の間から約０と１の間に低減するのに有効である。他の実施形態では、治療無しと比較して、有効用量のＦＸａバリアントでＩＣＨ対象を治療すると、約５と６の間から約３と４の間、または約３と４の間から約１と２の間への平均ｍＲＳスコアの低減を経験する対象の比率が増大する。

他の実施形態では、治療無しと比較して、有効用量のＦＸａバリアントでＩＣＨ対象を治療すると、５もしくは６の修正ランキンスケールスコアを有する対象の比率が０、１、２、３、もしくは４のスコアを有するものと比較して低減し、または、４、５、もしくは６のスコア（不良と特徴付けられる）を有する対象の比率が０、１、２、もしくは３のスコアを有する（良好と特徴付けられる）対象と比較して低減する。他の実施形態では、治療無しと比較して、有効用量のＦＸａバリアントでＩＣＨ対象を治療すると、２、３、４、５、または６のスコアを有する対象の比率が０または１のスコアを有するものと比較して低減する。そして他の実施形態では、治療無しと比較して、有効用量のＦＸａバリアントでＩＣＨ対象を治療すると、２、３、４、または５のｍＲＳスコアから６のｍＲＳスコアに進行する対象の比率が低減する。

いくつかの実施形態によれば、有効用量の本開示のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）でＩＣＨ対象を治療することは、治療の結果として神経学的障害が低減されたＩＣＨ対象の比率を、未治療の対照ＩＣＨ対象と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、またはそれ以上増大させるのに有効である。

神経学的障害の評価は、ＩＣＨを治療した後の様々な時間で評価ツールを使用して実施することができる。例えば、神経学的障害は、ＦＸａバリアントでＩＣＨを治療して７日、１０日、１４日、２０日、２１日、２８日、３０日、４０日、５０日、６０日、７０日、８０日、もしくは９０日、またはそれ以上の後に測定することができる。治療後の他の時間における測定も、当業者の知識によれば可能である。

ＩＣＨ後の浮腫を予防または低減する方法
ＩＣＨに続発する血腫周囲の浮腫（ＰＨＥ）も、患者の死亡率の一因となりうる。操作のいずれの特定の理論にも束縛されることは望まないが、最初の傷害後の凝固の生成物および血腫分解は、出血周辺の脳組織の損傷の二次カスケードを開始し、ＰＨＥを発症させると考えられる。浮腫は、平均して下にある血腫の体積の約２倍になり、頭蓋内圧の増大、およびヘルニア形成などの腫瘤効果の一因となりうる。参照により組み込まれている、Ｄ．Ｓｔａｙｋｏｖら、Ｓｔｒｏｋｅ、４２：２６２５〜２６２９（２０１１）。浮腫体積の増大は、死亡および身体障害と正に相関する。参照により組み込まれている、Ｄ．Ｈ．Ａｒｉｍａら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、７３：１９６３〜１９６８（２００９）。浮腫体積は、本明細書の他で記載されている神経画像処理技法、例えば、ＭＲＩまたはＣＴスキャニングを使用して測定することができる。

本開示は、ＩＣＨを経験した、ヒト患者を含めた対象に、酵素原性を有する治療有効量のＦＸａバリアントを投与することによって、ＩＣＨに関連する血腫周囲の浮腫（ＰＨＥ）を予防し、または減衰させるための方法も提供する。いくつかの実施形態では、ＦＸａバリアントは、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌである。治療有効用量のＦＸａバリアントで治療した後の浮腫体積は、ＦＸａバリアントで治療されていないＩＣＨ患者の浮腫体積と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、またはそれ以上低減されうる。いくつかの実施形態では、浮腫体積は、ＦＸａバリアントがＩＣＨ対象に投与される直前に、神経画像処理または当業者によく知られている他の技法を使用して測定される。次いで浮腫体積は、ＦＸａバリアントでの治療が始まった後に少なくとも１回測定されて、もしあれば、浮腫体積の変化が監視される。ある特定の実施形態では、浮腫体積は、浮腫体積変化を監視するために、ＦＸａバリアントでの治療が始まって１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、９時間、１２時間、１８時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、５日、６日、７日、１４日、２１日、またはそれ以上の後に測定することができる。

他の実施形態によれば、脳組織の圧迫によって引き起こされる頭蓋内圧の増大またはヘルニア形成などのＰＨＥの後遺症の発生率または重症度は、ＩＣＨ患者に酵素原性を有する治療有効量のＦＸａバリアントを投与することによって低減されうる。いくつかの実施形態では、ＦＸａバリアントは、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌである。治療有効用量のＦＸａバリアントで治療されたＩＣＨ患者におけるＰＨＥの後遺症（それだけに限らないが、浮腫またはヘルニア形成を含む）の発生率または重症度は、ＦＸａバリアントで治療されていないＩＣＨ患者のものと比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、またはそれ以上低減されうる。

血腫拡大を低減または予防する方法
ＩＣＨによって引き起こされた初期の出血の後、ＩＣＨ患者の約３０％が出血し続け、著しく血腫が拡大する。ＢｒｏｕｗｅｒｓおよびＧｒｅｅｎｂｅｒｇ、Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．、３５：１９５〜２０１（２０１３）。残念ながら、血腫拡大は、より悪い患者転帰に関連する。Ｄａｖｉｓ（２００６）；Ｄｏｗｌａｔｓｈａｈｉら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、７６：１２３８〜１２４４（２０１１）。ＩＣＨ患者のこの亜集団を治療するために、本開示のＦＸａバリアントを含む組成物を、血腫拡大を低減し、またはさらには予防するのに有効な用量で投与することができる。

血腫体積を、最初にＩＣＨ後に、次いでそれが経時的に変化する際に測定するための様々な技法が、当業者によく知られている。非限定例としては、脳撮像技術、例えば、ＣＴ、ＣＴＡ、ＭＲＩ、またはＭＲＡなどがある。特定の方法としては、ＡＢＣ／２、Ｃ値が調整されたＡＢＣ／２、面積測定、および３Ｄ体積レンダリングがある。脳スキャン中に収集されるデータに基づいて体積を計算するコンピューターソフトウェアの使用は、一般的である。

血腫体積は、ＩＣＨを決定的に診断するのに使用される最初の脳スキャンで収集されるデータに基づいて計算することができ、それによってベースライン体積が確立される。血腫体積は、その後１つまたは複数の所定の時間でさらに求めて、血腫体積が静的であるか、または拡張しているか、もし拡張している場合、どれくらいの割合であるかを監視することができる。

いくつかの実施形態では、血腫拡大は、ベースライン脳スキャン後の１つまたは複数の所定の時間における体積のパーセント増大として定量化することができる。ベースラインと比較したある時間にわたる血腫体積の限定されない例示的な相対的増大としては、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１５０％、またはそれ以上がある。他の実施形態では、血腫拡大は、ベースライン脳スキャン後の１つまたは複数の所定の時間における体積の絶対的増大として定量化することができる。ベースラインと比較したある時間にわたる血腫体積の限定されない例示的な絶対的増大としては、約１ミリリットル（ｍｌ）、１．５ｍｌ、２ｍｌ、２．５ｍｌ、３ｍｌ、３．５ｍｌ、４ｍｌ、４．５ｍｌ、５ｍｌ、５．５ｍｌ、６ｍｌ、６．５ｍｌ、７ｍｌ、７．５ｍｌ、８ｍｌ、８．５ｍｌ、９ｍｌ、９．５ｍｌ、１０ｍｌ、１０．５ｍｌ、１１ｍｌ、１１．５ｍｌ、１２ｍｌ、１２．５ｍｌ、１３ｍｌ、１３．５ｍｌ、１４ｍｌ、１４．５ｍｌ、１５ｍｌ、１６ｍｌ、１７ｍｌ、１８ｍｌ、１９ｍｌ、２０ｍｌ、２２ｍｌ、２４ｍｌ、２６ｍｌ、２８ｍｌ、３０ｍｌ、３５ｍｌ、４０ｍｌ、４５ｍｌ、５０ｍｌ、またはそれ以上がある。

非限定例では、血腫体積は、血腫体積のベースラインを測定して約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、９時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、またはそれ以上後に測定して、体積が増大したか否か、もし増大した場合、どれくらいの量であるかを決定することができる。同じ対象の複数のスキャンを取って、より高い解像度で経時的に血腫拡大を追跡することができる。

ある特定の限定されない実施形態によれば、血腫拡大は、血腫体積の増大の計算値が、存在する場合、絶対的な体積基準または体積の相対的なパーセンテージ増大に対してある閾値を超えるとき起こると定義することができる。したがって、例えば、血腫拡大は、ベースラインと比較した体積が、所定の時間後に３ミリリットル（ｍｌ）以上、６ｍｌ以上、もしくは１２．５ｍｌ以上、または絶対体積のいくらかの他の増大によって増大した場合、起こると言うことができる。代わりに、血腫拡大は、ベースラインと比較した体積が、所定の時間後に１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３３％以上、または体積のいくらかの他のパーセンテージ増大によって増大した場合、起こると言うことができる。

いくつかの実施形態によれば、有効用量の本開示のＦＸａバリアント（例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ）でＩＣＨを有する対象を治療することは、もし治療しなければ例えば未治療の対照において起こる血腫拡大を低減または予防するのに有効である。いくつかの実施形態では、ＩＣＨ対象は、ＩＣＨを提示する前に抗凝固剤療法を受けていた、または受けている。いくつかの他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、もし治療しなければある時間にわたって起こるはずである血腫体積の平均拡大を、未治療の対照と比較して、少なくとも１ｍｌ、１．５ｍｌ、２ｍｌ、２．５ｍｌ、３ｍｌ、３．５ｍｌ、４ｍｌ、４．５ｍｌ、５ｍｌ、５．５ｍｌ、６ｍｌ、６．５ｍｌ、７ｍｌ、７．５ｍｌ、８ｍｌ、８．５ｍｌ、９ｍｌ、９．５ｍｌ、１０ｍｌ、１０．５ｍｌ、１１ｍｌ、１１．５ｍｌ、１２ｍｌ、１２．５ｍｌ、１３ｍｌ、１３．５ｍｌ、１４ｍｌ、１４．５ｍｌ、１５ｍｌ、１６ｍｌ、１７ｍｌ、１８ｍｌ、１９ｍｌ、２０ｍｌ、２２ｍｌ、２４ｍｌ、２６ｍｌ、２８ｍｌ、３０ｍｌ、３５ｍｌ、４０ｍｌ、４５ｍｌ、５０ｍｌ、またはそれ以上低減するのに有効である。他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、もし治療しなければある時間にわたって起こるはずである血腫体積の平均拡大を、未治療の対照と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減するのに有効である。さらに他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、もし治療しなければある時間にわたって起こるはずである血腫体積の平均拡大を、未治療の対照と比較して、約５％〜１５％、約１０％〜２０％、約１５％〜２５％、約２０％〜３０％、約２５％〜３５％、約３０％〜４０％、約３５％〜４５％、約４０％〜５０％、約４５％〜５５％、約５０％〜６０％、約５５％〜６５％、約６０％〜７０％、約６５％〜７５％、約７０％〜８０％、約７５％〜８５％、約８０％〜９０％、約８５％〜９５％、または約９０％〜１００％低減するのに有効である。

いくつかの実施形態によれば、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、血腫拡大を経験する対象の比率を低減するのに有効である。いくつかの実施形態では、比率は、約３０％以上から約２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、または５％以下に低減される。他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントで治療すると、ある時間にわたって血腫拡大を経験するＩＣＨ対象の比率が、未治療の対照と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上低減される。

他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、血腫体積がある時間にわたって３ｍｌ以上、６ｍｌ以上、もしくは１２．５ｍｌ以上（またはいくらかの他の量以上）増大した対象の比率を、未治療の対照と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上低減するのに有効である。さらに他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、血腫体積がある時間にわたって１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３３％以上（またはいくらかの他のパーセンテージ以上）増大した対象の比率を、未治療の対照と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上低減するのに有効である。

ＣＴ血管造影または他の方法を使用して同定されるいわゆる「スポットサイン」の存在は、血腫拡大およびより悪い患者転帰と関連し、これらを予測するものである。血腫拡大のスポットサインの予測値は、症状を開始して６時間超後に病院に現れる患者でさえ存在する。Ｂｒｏｕｗｅｒｓら、Ｎｅｕｒｏｃｒｉｔ Ｃａｒｅ、１７：４２１〜４２８（２０１２）。

スポットサインは、急性原発性実質血腫内でコントラストが促進された１つまたは複数の小病巣である。操作のいずれの特定の理論にも束縛されることは望まないが、スポットサインの存在は、活性な血管外遊出に起因すると考えられる。Ｗａｄａら、Ｓｔｒｏｋｅ、３８：１２５７〜１２６２（２００７）；Ｂｒｏｕｗｅｒｓら、Ｓｔｒｏｋｅ、４３：３４２７〜３４３２（２０１２）；Ｄｅｍｃｈｕｋら、Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ．、１１：３０７〜３１４（２０１２）。

スポットサイン特性に基づくスコアシステムが、スポットサイン数、最大軸方向寸法、および最大減衰に基づいて提案された。Ｄｅｌｇａｄｏら、Ｓｔｒｏｋｅ、４０：２９９４〜３０００（２００９）。スポットサインが存在する場合、スコアは、それぞれが、サイズが５ｍｍ未満であり、１８０ＨＵ未満の減衰を呈する１つまたは複数のスポットサインの存在に対応する１から、最大のものが、軸方向寸法が５ｍｍ以上であり、１８０ＨＵ以上の最大減衰を呈する、３つ以上のスポットサインの存在に対応する最大４の範囲である。ゼロのスコアは、スポットサインがまったく存在しなかったことを示す。このスコアは、血腫拡大のリスクと高度に相関する。

いくつかの実施形態によれば、特定のスポットサインスコアを伴うＩＣＨを有する対象は、本開示のＦＸａバリアントで治療されうる。したがって例えば、ＩＣＨおよび４、３、２、または１のスポットサインスコアを有する対象は、本開示のＦＸａバリアントで治療されうる。他の実施形態では、ＦＸａバリアントでＩＣＨ対象を治療すると、特定の対象におけるスポットサインスコアが低減する。したがって、例えば、４のスポットサインスコアを最初に提示するＩＣＨ対象は、ＦＸａバリアントを用いた治療の結果として、自分のスコアを３、２、１、または０に低減させることができる。３のスポットサインスコアを最初に提示するＩＣＨ対象は、ＦＸａバリアントを用いた治療の結果として、自分のスコアを２、１、または０に低減させることができる。２のスポットサインスコアを最初に提示するＩＣＨ対象は、ＦＸａバリアントを用いた治療の結果として、自分のスコアを１、または０に低減させることができる。そして１のスポットサインスコアを最初に提示するＩＣＨ対象は、ＦＸａバリアントを用いた治療の結果として、自分のスコアを０に低減させることができる。

ある特定の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、４のスポットサインスコアを提示する対象の比率を、未治療の対照と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上低減するのに有効である。他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、３のスポットサインスコアを提示する対象の比率を、未治療の対照と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上低減するのに有効である。他の実施形態によれば、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、２のスポットサインスコアを提示する対象の比率を、未治療の対照と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上低減するのに有効である。他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、１のスポットサインスコアを提示する対象の比率を、未治療の対照と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上低減するのに有効である。そしてさらに他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、０のスポットサインスコアを提示する対象の比率を、未治療の対照と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、またはそれ以上増大させるのに有効である。他の実施形態によれば、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、任意のスポットサインの発生率を、約５％〜１５％、約１０％〜２０％、約１５％〜２５％、約２０％〜３０％、約２５％〜３５％、約３０％〜４０％、約３５％〜４５％、約４０％〜５０％、約４５％〜５５％、約５０％〜６０％、約５５％〜６５％、約６０％〜７０％、約６５％〜７５％、約７０％〜８０％、約７５％〜８５％、約８０％〜９０％、約８５％〜９５％、または約９０％〜１００％低減するのに有効である。

ある特定の実施形態によれば、スポットサインスコアは、本開示のＦＸａバリアントを投与する前または後の所定の時間での神経画像処理後に判定することができる。いくつかの実施形態では、例えば、スポットサインスコアは、ＦＸａバリアントを最初に投与後、または後続の投与後、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１８時間、２４時間、３０時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１８日、３週間、４週間、またはいくつかの他の時間に判定される。

ＩＣＨのリスクファクターを有する患者を治療する方法
ＩＣＨのリスクの増大の一因となる様々なヒト患者リスクファクターが同定されている。それぞれの全体が参照により組み込まれている、Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ Ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ、ＪＲ Ｃａｒｈｕａｐｏｍａら編（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０１０）のＭＬ Ｆｌａｈｅｒｔｙら、「Ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ」；Ｂｒｏｕｗｅｒｓら、Ｎｅｕｒｏｃｒｉｔ Ｃａｒｅ、１７：４２１〜４２８（２０１２）；Ａｐｐｅｌｂｏｏｍら、Ｊ．Ｓｔｒｏｋｅ Ｃｅｒｅｂ Ｄｉｓ．、２２：７１３〜７１７（２０１３）。ある特定の実施形態によれば、本開示のＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌを、１つまたは複数のＩＣＨリスクファクターを有するヒトＩＣＨ患者に、このような患者におけるＩＣＨを治療または予防するように治療有効量で投与することができる。

年齢は、最も重要なリスクファクターであり、ＩＨＣの割合は、年齢６０歳を超える人の間で劇的に増大する。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために年齢６０歳以上の患者に投与される。

対照的に、高血圧は、ＩＣＨの最も重要な修正可能なリスクファクターであり、ＩＣＨ患者の７０％超で存在する。未治療の高血圧は、治療によって制御された高血圧より大きいリスクファクターであり、自分の薬物療法を中断する治療下の高血圧患者は、自分の薬物療法に留まる高血圧患者より大きいリスクを有する。高血圧は、大脳半球深部領域および脳幹領域における出血、ならびに大葉性ＩＣＨのリスクファクターである。ＩＣＨリスクファクターとしての高血圧の相対的なインパクトは、高齢の患者と比較して若い患者において大きい。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために高血圧患者に投与される。

違法な交感神経興奮薬、例えば、コカインおよびアンフェタミンの使用は、ＩＣＨと関連してきた。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、違法な交感神経興奮薬を使用したＩＣＨ患者に投与される。

脳アミロイド血管障害（ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ、ＣＡＡ）も、高齢者における大葉性ＩＣＨの重要なリスクファクターである。ＣＡＡは、軟膜動脈、細動脈、毛細血管、および時に静脈の中膜および外膜中のアミロイドタンパク質の堆積によって特徴付けられる。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために、脳アミロイド血管障害を有する患者に投与される。

アポリポタンパク質Ｅ（Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ、ＡＰＯＥ）ε２およびε４対立遺伝子は、潜在的にＣＡＡにおけるこれらの遺伝子の関与の結果として、大葉脳領域内のＩＣＨの独立したリスクファクターである。参照により組み込まれている、Ｂｒｏｕｗｅｒｓら、Ｓｔｒｏｋｅ、４３：２１２０〜２１２５（２０１２）。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために、ＡＰＯＥ対立遺伝子ε２またはε４を有する患者に投与される。

動静脈奇形（ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ ｍａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、ＡＶＭ）、海綿状奇形、硬膜動静脈瘻、静脈奇形、および毛細血管拡張症を含めた血管奇形はすべて、ＩＣＨに関連する。桑実状動脈瘤も、これらが、より一般的であるくも膜下腔内と対照的に脳実質内に出血する場合、ＩＣＨを引き起こしうる。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために、血管奇形を有する患者に投与される。

虚血性脳卒中を予防するためのワルファリンなどの抗凝固剤の使用は、ＩＣＨの発生率の増大に関連する。抗凝固処理患者におけるＩＣＨの相対リスクは、一般的な集団と比較して約７〜１０倍大きい。関連して、心筋梗塞または虚血性脳卒中において血栓溶解を行うための血栓溶解剤および抗凝固剤の使用は、ＩＣＨの小さいが増大したリスクに関連する。心筋梗塞の血栓溶解では、出血の大部分は、脳の大葉領域内である。アスピリンまたはクロピドグレルなどの抗血小板薬の使用も、ＩＣＨの軽微なリスクファクターである。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために、抗凝固剤（例えば、ワルファリン）または抗血小板（例えば、クロピドグレル）薬を服用している患者に投与される。

グラディエントエコーＭＲＩで検出される脳実質内のマイクロブリードは、ＩＣＨを罹患している患者において一般的であり、小血管疾患およびＩＣＨを起こしやすい状態のマーカーと考えられている。さらに、従前の脳梗塞は、ＩＣＨのリスクの５倍〜２２倍の増大と関連する。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために、脳のマイクロブリードを有する、または従前の脳梗塞を有した患者に投与される。

低コレステロール血症は（虚血性脳卒中のリスクファクターである高コレステロール血症と対照的に）、ＩＣＨのリスクファクターである。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために、低コレステロール血症を有する患者に投与される。

ＩＣＨの追加のリスクファクターには、血腫拡大と関連してきたアルコールの大量摂取、および喫煙が含まれる。糖尿病も、ＩＣＨの軽微なリスクファクターであると考えられている。したがって、本開示のいくつかの方法では、ＦＸａバリアント、例えば、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨを治療または予防するために、アルコールを乱用し、もしくはタバコを使用する患者、または糖尿病患者に投与される。ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ、または別のＦＸａバリアントは、ＩＣＨを治療または予防するために、外傷、感染、または腫瘍がＩＣＨの唯一のまたは一因となる原因である患者にも投与することができる。

ＩＣＨに関連する治療の他の方法
他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、対象におけるＩＣＨによって引き起こされる身体障害を低減するのに有効である。身体障害の非限定例としては、車を運転する、支援無しで自分の世話をする、働く、読む、話す、動く、歩く、他の人と対話することの不能、またはその能力の低減もしくは障害、あるいは他のタイプの身体障害がある。

他の実施形態によれば、本開示のＦＸａバリアントでＩＣＨを有する対象を治療することは、このような対象の臨床状態を改善するのに有効である。臨床状態改善の非限定例としては、リハビリテーション施設に解放される前の入院の日数の低減（例えば、入院の１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上の日数の低減）；患者の状態の重症度の格下げ（例えば、危篤から重篤以上、重篤から小康状態以上、小康状態から良好）；ＩＣＨ患者が神経集中治療室に入っている日数の低減（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上の日数）；またはＩＣＨ患者が、自力で呼吸する能力を回復する前に人工呼吸器によって支援される必要がある日数の低減（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上の日数）がある。

ＩＣＨの治療または予防のためのＦＸａバリアントの投与
ＦＸａ^Ｉ１６ＬなどのＦＸａバリアントは、ＩＣＨ症状の開始後、またはＩＣＨの診断が確認された後、可能な限り早く患者に投与されるべきである。本明細書に言及したように、ある特定の症状の提示によりＩＣＨが疑われる場合があり、神経画像処理によって、例えば、ＭＲＩまたはＣＴスキャニングによって確認することができる。本開示のある特定の実施形態によれば、ＦＸａバリアントは、ＩＣＨの症状の開始後、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、もしくは１時間、またはそれ未満以内に患者に投与される。他の実施形態では、ＦＸａバリアントは、神経画像処理または当業者によく知られている他の技法によってＩＣＨの診断が確認された後、８、７、６、５、４、３、２、１時間、またはそれ未満以内に患者に投与される。

ＩＣＨを治療または予防するのに十分なＦＸａバリアントの標的血漿濃度を実現することは、当業者の知識の範囲内である。非限定例では、対象の血漿量または他のパラメータなどの関連した薬物動態パラメータの推定は、対象の性別、身長、および体重、または他の要因に基づいて行い、標的濃度を実現するのにどれくらいのＦＸａバリアントが投与される必要があるかを計算するのに使用することができる。ＦＸａバリアントを投与した後、血漿濃度は、当業者の知識に従って監視することができ、この情報を任意の所望の範囲内で濃度を維持するのに使用することができる。

投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療的または予防的な応答）をもたらすように調整することができる。例えば、単回ボーラスを投与することができ、いくつかの分割量を経時的に投与することができ、または治療状況の緊急性によって示される場合、用量を比例して低減または増加させることができる。

投与量値は、使用される特定のＦＸａバリアント、およびこれが単独で、または別の治療剤と組み合わせて使用されるかどうか、治療される集団、亜集団、または個々の対象のユニークな特性、ならびに意図される特定の治療または予防効果などの要因に応じて変動しうる。投与量値に影響しうる他の要因も、当業者によって理解されるであろう。さらに、任意の特定の対象について、特定の投薬レジメンは、個々の必要性、およびＦＸａバリアント組成物を投与し、またはその投与を監督する医療提供者の専門的な判断によって経時的に調整される必要がありうる。したがって、本明細書に示した投与量範囲は、例示的であるだけであり、主張したＦＸａ組成物またはこれらの使用の方法の範囲または実行を限定するように意図されていない。

ある特定の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントの治療または予防有効量は、約０．０００１〜５０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜０．５ｍｇ／ｋｇである。他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントの治療または予防有効血中または血漿濃度は、約０．０００３〜３００ｎＭ、約０．００３〜３００ｎＭ、約０．０３〜３００ｎＭ、約０．００３〜３０ｎＭ、約０．０３〜３０ｎＭ、または約０．３〜３ｎＭである。他の用量、または血中もしくは血漿濃度も可能である。例えば、血液または血漿中のＦＸａバリアントの濃度は、当技術分野で公知の任意の方法によって測定されうる。

ＦＸａバリアントは、例えば、十分な治療または予防効果が実現されるまで、対象に１回または複数回、このようなバリアントを含む組成物で投与することができる。複数の投与が使用される場合、これらは、毎時間、毎日、または例えば、複数の一日量を含めた任意の他の適切な間隔で投与することができる。複数回用量は、１０分毎、１５分毎、２０分毎、３０分毎、１時間毎、２時間毎、３時間毎、４時間毎、５時間毎、６時間毎、毎日３回、毎日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、毎週１回などのスケジュールで、またはいくつかの他のスケジュールで投与することができる。ＦＸａバリアントは、例えば、ミニポンプを介して連続的に投与されてもよい。ＦＸａバリアントは、例えば、非経口経路（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内）を介して投与されてもよい。ＦＸａバリアントは一般に、本明細書に記載の医薬組成物の一部として投与されることになる。

ＦＸａバリアントの投与は、対象の監視と組み合わせることによって、浮腫または血腫拡大などの対象のＩＣＨおよび効果を最適に治療する投与量レジームをカスタマイズすることができる。したがって、いくつかの実施形態によれば、ある用量のＦＸａバリアントは、脳内出血、浮腫、または血腫拡大が停止し、または少なくとも減少したか否かを判定するためにその後神経画像処理を受けるＩＣＨ対象に投与される。スキャン結果が、出血、浮腫、または血腫拡大が停止してない、または少なくとも十分に改善されていないことを示す場合、さらなる用量のＦＸａバリアントを投与することができる。脳内出血、浮腫、または血腫拡大に対するＦＸａバリアントの効果を評価するために反復して投薬し、対象を監視するプロセスは、対象の状態が十分に改善されるまで継続することができる。投薬と監視の適当な間隔は、当業者の知識によって決定することができる。非限定例としては、１５分、３０分、４５分、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、５時間、６時間、またはそれ以上がある。

別の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントは、少なくとも第２の活性治療剤とともに共投与されうる（組合せ療法）。いくつかの実施形態では、第２の作用物質は、本開示の異なるＦＸａバリアントでありうる。他の実施形態では、第２の作用物質は、例えば、第ＩＸ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、凝固促進組成物、例えば、ＦＥＩＢＡもしくはプロトロンビン複合体濃縮製剤（ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ、ＰＣＣ）など、または抗線維素溶解剤、例えば、ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、もしくはアプロチニンなどを含めた別の凝固因子またはそのバリアントでありうる。

本開示のＦＸａバリアントが少なくとも第２の治療剤とともに共投与される場合、これらは、同じ組成物で同じ時間に一緒に、または別個の組成物で同時にもしくは順次投与することができる。代わりに、ＦＸａバリアントおよび少なくとも第２の治療剤は、別個の組成物で異なる時間に投与することができる。ＦＸａバリアントを含む組成物は、少なくとも第２の治療剤を含む組成物の前または後に投与することができる。逐次投与間の間隔は、ある特定の実施形態では、同じ日に行われるＦＸａバリアントおよび第２の治療剤の投与によって変動しうる。例えば、ＦＸａバリアントは、１日おきに１回投与することができ、一方、第２の治療剤は、ＦＸａバリアントと同じ時点で、または両作用物質が投与される日の異なる時間に１日１回投与される。

組合せ療法は、毎時間、毎日、または毎週、複数回投与されうる。投与は、は、１０分毎、１５分毎、２０分毎、３０分毎、１時間毎、２時間毎、３時間毎、４時間毎、５時間毎、６時間毎、毎日３回、毎日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、毎週１回などのスケジュールで、またはいくつかの他のスケジュールで施すことができる。ＦＸａバリアントは、例えば、ミニポンプを介して連続的に投与されてもよい。組合せ療法は、例えば、非経口経路（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内）を介して投与されてもよい。

他の実施形態では、本開示のＦＸａバリアントは、ＩＣＨを治療するのに有効であると考えられる別の療法に合わせて投与することができる。非限定例では、ＦＸａバリアントは、薬物が、ＩＣＨを有する対象の血圧もしくは頭蓋内圧を低減するために投与される前、これらととともに、もしくはこれらの後に、またはＩＣＨによって引き起こされた血腫を除去するなどのための手術の前、それととともに、もしくはその後に投与することができる。他の例では、ＦＸａバリアントは、それぞれがＩＣＨを伴いうる発作または発熱を予防または治療するための薬物の前、これらとともに、またはこれらの後に投与することができる。参照により組み込まれている、Ｒ．ＳａｈｎｉおよびＪ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ、Ｖａｓｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ｍａｎａｇ、３：７０１〜７０９（２００７）。

さらなる態様では、本開示は、対象におけるＩＣＨを治療または予防するのに使用するためのＦＸａバリアントを含む組成物を提供する。組成物は、薬学的に許容できる担体、ビヒクル、または生理学的に適合性である他の成分を含みうる。このような担体、ビヒクル、および他の成分の非限定例としては、溶媒（例えば、水、エタノール、生理食塩水、リン酸緩衝溶液）、界面活性剤、表面活性剤、分散媒質、コーティング剤、抗菌剤または抗真菌剤、等張化剤、吸収遅延剤、糖（例えば、スクロース、デキストロース、ラクトース）、多価アルコール（例えば、グリセロール、マンニトール、ソルビトール）、塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム）、湿潤剤、乳化剤、防腐剤、緩衝剤、およびＦＸａバリアントの安定性または有効性を増強することができる作用物質がある。

本開示によって使用するための組成物は、溶液（例えば、注射用溶液および注入用溶液）などの対象に投与するための任意の適当な形態でありうる。組成物は、例えば、バイアルまたはプレフィルドシリンジ内の、対象に投与する準備ができているプレミックスフォーマットで提供することができる。このようなフォーマットは、投与前に希釈剤で再構成することを必要としない。代わりに、組成物は、投与前に希釈剤（例えば、滅菌水または生理食塩水）での再構成を必要とする凍結乾燥形態で提供することができる。後者の場合、希釈剤は、別個の容器で凍結乾燥物とともに提供されうる。当業者の知識によれば、組成物は、冷蔵下で、または室温で貯蔵するために製剤化することができる。組成物の形態は、意図される投与モードに少なくとも部分的に依存する。ある特定の実施形態では、投与モードは、例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内の投与を含めた非経口である。

非経口組成物および他のタイプは、投与の容易さおよび投与量の均一性のために単位剤形で製剤化してもよい。単位剤形は、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体と関連して所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性化合物を含有する。

治療用組成物は一般に、滅菌されていなければならず、かつ製造および貯蔵の条件下で安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液として、リポソーム、または高薬物濃度に適した他の指定された構造で製剤化することができる。滅菌注射用溶液は、必要に応じて上記に列挙した成分の１つまたは組合せとともに、適切な溶媒中で必要量でＦＸａバリアントを組み込み、その後濾過滅菌することによって調製されうる。一般に、分散液は、基本分散媒、および上記に列挙したものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製用滅菌粉末の場合では、調製の好適な方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、それにより、活性成分と任意の追加の所望の成分の粉末が、これらの先に滅菌濾過した溶液から生じる。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用、分散液の場合における要求される粒径の維持、および表面活性剤の使用によって維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。

本開示は、ＦＸａバリアント、またはこのようなＦＸａバリアントを含む組成物を含むキットも提供する。キットは、診断剤または１つもしくは複数の追加の治療剤をさらに含みうる。キットは、治療法で使用するための指示書、および包装材も含みうる。キットは、医療提供者が都合よく投与するために設計された容器内に１つまたは複数の単位用量形態をさらに含みうる。非限定例としては、バイアルまたはプレフィルドシリンジがある。凍結乾燥組成物用希釈剤も含めることができる。

本明細書に記載の実施例および実施形態は、例示的な目的のためだけであり、これらに照らした様々な改変または変更が、当業者に明らかとなり、本発明内に含まれるべきであり、本発明の真の範囲から逸脱することなく行うことができることが理解される。

（実施例１）
ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、正常な血漿中で血栓形成を促進する
ＦＸａ^Ｉ１６Ｌおよび血漿由来ＦＸａ（ｐｌａｓｍａ ｄｅｒｉｖｅｄ ＦＸａ、ｐｄＦＸａ）の活性を、健康なヒト対象から単離したクエン酸プール血漿中で活性化部分トロンボプラスチン時間（ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐａｒｔｉａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ ｔｉｍｅ、ａＰＴＴ）を測定することによって評価した。ａＰＴＴ試験は、表面活性化物質および希釈したリン脂質をクエン酸血漿に添加することによって実施した。インキュベートして接触因子（第ＸＩＩ因子、第ＸＩ因子、プレカリクレイン、および高分子量キニノーゲン）を活性化させた後、カルシウムを添加し、凝固時間を測定した。低レベルのＦＶａおよびＦＶＩＩＩａがアッセイ中に生成される。

漸増濃度のｐｄＦＸａまたはＦＸａ^Ｉ１６Ｌを添加すると、凝固時間が用量依存的に短縮した。ＦＸａ^Ｉ１６ＬおよびｐｄＦＸａについて計算された推定ＥＣ_５０は、それぞれ、４５ｎｇ／ｍＬおよび９ｎｇ／ｍＬであった。

ＦＸａ^Ｉ１６Ｌの活性を、正常なマウス、ラット、およびカニクイザルから単離したクエン酸血漿中でさらに検査した。凝固時間を、ａＰＴＴアッセイを使用して測定した。ヒト血漿で観察されたものと同様に、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌ添加は、３つすべての種において凝固時間の用量依存的短縮をもたらした。カニクイザル、マウス、およびラットの血漿中のＦＸａ^Ｉ１６Ｌについて計算された推定ＥＣ_５０は、それぞれ、４９、８９、および９１ｎｇ／ｍＬであった。

トロンビン生成アッセイ（ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ、ＴＧＡ）では、トロンビン生成の開始相、活性化相、および不活性化相が測定される。ＴＧＡは、凝固開始後の経時的な血漿中のトロンビン生成を測定するものであり、以前に記載されたように実施した（その全体が本明細書に参照により組み込まれている、Ｂｕｎｃｅら、Ｂｌｏｏｄ、１１７：２９０〜２９８（２０１１））。これらの試験で使用した条件下で、１ｐＭの組織因子（ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ、ＴＦ）を、凝固を開始するのに使用した。トロンビン生成（ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ、ＴＧ）は、健康な対象から単離した血小板乏クエン酸ヒト血漿中で測定した。実験の６０分の時間経過にわたって、ＦＸａ^Ｉ１６ＬまたはｐｄＦＸａを添加すると、トロンビン生成が用量依存的に増大した（図１Ａ、図１Ｂ）。ビヒクル処置ヒト血漿と比較して、遅延時間（開始相）の短縮がｐｄＦＸａおよびＦＸａ^Ｉ１６Ｌについてともに観察された。しかし、絶対数において、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌの遅延時間は、ｐｄＦＸａと比較してより長かった（図１Ｃ）。ＴＧＡ遅延時間に対する記載した効果に関してＦＸａ^Ｉ１６Ｌについて計算された推定ＥＣ_５０は、９ｎｇ／ｍＬであった。ＦＸａ^Ｉ１６ＬおよびｐｄＦＸａについてのピークトロビン生成は同様であり、ピークトロンビン濃度は、それぞれ、２３３〜３５２ｎＭおよび１９８〜３４９ｎＭであった。

上記に要約したデータは、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌが、ヒトを含めた非血友病動物に由来する血漿中で血栓形成を促進するのに有効であることを実証する。

（実施例２）
ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、非血友病げっ歯類動物出血モデルにおいて止血を生じさせる
ＦＸａ^Ｉ１６Ｌの非血友病動物において止血を生じさせる能力を、非血友病マウスおよびラットにおける尾切断傷害後の失血に対する効果を測定することによって試験した。尾クリップは、凝固系を刺激する重度の出血を引き起こす。

ＦＸａ^Ｉ１６Ｌを、様々な用量（０、１、１０、２５、５０、１００、および２００μｇ／ｋｇ）で正常なＣ５７Ｂ１／６マウスに静脈内投与した。２分後、尾を末端からから３ｍｍ横切し、止血までの全失血をマイクロリットル（μｌ）で測定した。対照マウスにビヒクルを注射した。結果を図２Ａに示す。図中、データは、平均±標準誤差として提示されており、「^＊」は、ｐ値＜０．０５における統計的有意性を示し、「^＊＊＊」は、ｐ値＜０．００１における統計的有意性を示す。ビヒクルについて、５匹の動物を試験した。様々な用量のＦＸａ^Ｉ１６Ｌを投与される動物については、６匹を１μｇ／ｋｇで試験し、８匹を１０μｇ／ｋｇで試験し、８匹を２５μｇ／ｋｇで試験し、６匹を５０μｇ／ｋｇで試験し、８匹を１００μｇ／ｋｇで試験し、５匹を２００μｇ／ｋｇで試験した。

尾切断前にＦＸａ^Ｉ１６Ｌで処置すると、ビヒクル処置マウスと比較して、全失血が、１２％（１μｇ／ｋｇ）、１６．６％（１０μｇ／ｋｇ）、２６．７％（２５μｇ／ｋｇ）、４５．３％（５０μｇ／ｋｇ）、６２．９％（１００μｇ／ｋｇ）、および６９．６％（２００μｇ／ｋｇ）、用量依存的に減少した。推定ＥＤ_５０は、４６μｇ／ｋｇであった。

第２の試験では、正常な雄ＣＤ−１マウスを２５μｇ／ｋｇのＦＸａ^Ｉ１６Ｌまたはビヒクルで処置して２分後に、血漿凝固活性を、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイおよびトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）を使用して測定した。処置された動物に由来する血漿では、ａＰＴＴは、６７％短い凝固までの時間を示し、ＴＧＡ遅延時間は、８５％短縮された。１０μｇ／ｋｇもしくは２５μｇ／ｋｇのＦＸａ^Ｉ１６Ｌ、またはビヒクルで処置されたＣＤ−１マウス由来の全血中の凝固活性も、ＴＥＧを用いて測定した。投薬して２分後、両用量のＦＸａ^Ｉ１６Ｌで処置された動物由来の血液のＴＥＧ Ｒ値は、ビヒクルのみを受けているマウスと比較して７０％減少した。

ＦＸａ^Ｉ１６Ｌの止血活性も、尾クリップ重度傷害モデルにおいて、正常な雄スプラーグドーリーラットで試験した。ＦＸａ^Ｉ１６Ｌで事前処置されたラットは、ビヒクル処置ラットと比較して、５．７％（１０μｇ／ｋｇ）、１１．３％（３０μｇ／ｋｇ）、４９．０％（５０μｇ／ｋｇ）、６３．２％（１００μｇ／ｋｇ）、および５９．４５％（２００μｇ／ｋｇ）の出血の用量依存減少を示した。結果を図２Ｂに示す。図中、「^＊」は、ｐ値＜０．０５における統計的有意性を示す。合計で５〜７匹のラットを各用量について使用した。方法は、マウスを使用する実験と同様であった。推定ＥＤ_５０は、３８μｇ／ｋｇであった。全血中のｅｘ ｖｉｖｏ活性を、ＴＥＧを使用して測定した。１、５、１０、または３０μｇ／ｋｇのＦＸａ^Ｉ１６Ｌでラットを処置して２分後に、ビヒクルのみで処置されたラットと比較して３８．２％および４３．６％のＴＥＧ−Ｒ値の減少が、それぞれ用量１０μｇ／ｋｇおよび３０μｇ／ｋｇで観察された。

（実施例３）
ＦＸａ^Ｉ１６Ｌは、ＩＣＨのげっ歯類動物モデルにおいて血腫体積を低減する
ＦＸａ^Ｉ１６ＬをＩＣＨのマウスモデルにおいて試験した。このモデルでは、細菌性コラゲナーゼを、脳の線条体中に定位的に注射する。その全体が参照により組み込まれている、Ｆ．Ｓｃｈｌｕｎｋら、Ｓｔｒｏｋｅ、４３：２４６〜２４９（２０１２）；Ｃ．Ｆｏｅｒｃｈら、Ｓｔｒｏｋｅ、３９：３３９７〜３４０４（２００８）。注射部位付近の毛細血管を囲繞する細胞外マトリックスのタンパク質消化が、連続的な出血（ｂｌｅｅｄｉｎｇ）によって引き起こされるＩＣＨ患者の血腫拡大を模倣する出血（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ）をもたらす。

ＦＸａバリアントを使用する実験では、ＩＣＨを、マウスの右線条体中への細菌性コラゲナーゼの定位注射によって誘導した。コラゲナーゼを注射して４５分後に、ＦＸａ^Ｉ１６Ｌまたはビヒクルを、様々な用量で静脈内投与した。毛細血管のコラゲナーゼ破壊の結果として脳実質内に漏出した血液の体積を、傷害から２４時間後に測定した。その時、血液を血管系から流し、脳を取り出し、ホモジナイズし、ホモジナイズされた脳組織のヘモグロビン含量を、検量線との比較によって定量化した。

ＦＸａ^Ｉ１６Ｌで処置すると、ビヒクルのみで処置されたマウスと比較して、用量応答様式でマウスの血腫体積が低減された。結果を図３Ａに示す。図中、「^＊」は、ｐ値＜０．０５における統計的有意性を示す。推定ＥＤ_５０＝３．０５μｇ／ｋｇ。１群当たりの試験した動物は、７から１５の間の範囲であった。図３Ｂは、用量に関してビヒクルと比較した血腫体積の減少パーセントを示す。

マウスで使用したものと同様の方法を使用して、ＩＣＨを雄スプラーグドーリーラットにおいて誘導した。コラゲナーゼを注射して１５分後に、ラットに様々な用量のＦＸａ^Ｉ１６Ｌ、１００Ｕ／ｋｇの凝固促進組成物第ＶＩＩＩ因子インヒビター迂回活性複合体製剤（Ｆａｃｔｏｒ ｅｉｇｈｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｂｙｐａｓｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ、ＦＥＩＢＡ）またはビヒクル単独を静脈内投与した。脳ヘモグロビン含量に基づく血腫体積を、傷害から２時間後に決定した。

ＦＸａ^Ｉ１６Ｌで処置すると、ビヒクルのみで処置されたラットと比較して、ラットの血腫体積が低減された。結果を図４Ａに示す。図中、「^＊」は、ｐ値＜０．０５における統計的有意性を示す。図４Ｂは、用量に関してビヒクルと比較した血腫体積の減少パーセントを示す。マウスほど顕著ではないが、用量応答性への傾向が明白であった。

本明細書で別段の定義のない限り、本発明とともに使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、脈絡による別段の要求のない限り、単数形の用語は、複数存在することを含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法、ならびにこれらの技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。

本発明の方法および技法は一般に、別段の指定のない限り、当技術分野で周知であり、本明細書全体にわたって引用され、論じられている様々な一般的な参考文献、およびより具体的な参考文献に記載されている従来法によって実施される。例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ．＆Ｒｕｓｓｅｌｌ Ｄ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（２０００）；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ，Ｊｏｈｎ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００２）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９９８）；ならびにＣｏｌｉｇａｎら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｉｌｅｙ，Ｊｏｈｎ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００３）を参照。酵素反応および精製技法は、当技術分野で一般に達成されるように、または本明細書に記載するように、製造者の仕様によって実施される。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに薬化学および製薬化学に関連して使用される命名法、ならびにこれらの実験室手順および技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。

本明細書に引用したすべての刊行物、特許、特許出願、または他の文献は、各個々の刊行物、特許、特許出願、または他の文献がすべての目的に関して参照により組み込まれるように個々に示されているのと同じ程度に、すべての目的に関してその全体が参照により本明細書に組み込まれている。

本明細書および特許請求の範囲全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、述べた整数または整数の群を含むが、任意の他の整数または整数の群を除外しないことを暗示するように理解されるであろう。

Claims (36)

1. 対象における脳内出血（ＩＣＨ）を治療するための方法であって、ＩＣＨの治療を必要とする対象に、
   ａ）配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸がＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙで置換されている、および
   ｂ）配列番号１の２３６に対応する位置のアミノ酸がＬｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている
   からなる群から選択される少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量の第Ｘａ因子（ＦＸａ）バリアントを投与するステップを含む、方法。
2. 配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸が、Ｌｅｕで置換されている、請求項１に記載の方法。
3. ＩＣＨを有する対象が死亡する可能性を低減するための方法であって、ＩＣＨの結果として死亡する危険のある対象に、
   ａ）配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸がＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙで置換されている、および
   ｂ）配列番号１の２３６に対応する位置のアミノ酸がＬｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている
   からなる群から選択される少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量のＦＸａバリアントを投与するステップを含む、方法。
4. 配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸が、Ｌｅｕで置換されている、請求項３に記載の方法。
5. ＩＣＨを有する対象の脳機能を改善するための方法であって、ＩＣＨを罹患した後の脳機能の改善を必要とする対象に、
   ａ）配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸がＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙで置換されている、および
   ｂ）配列番号１の２３６に対応する位置のアミノ酸がＬｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている
   からなる群から選択される少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量のＦＸａバリアントを投与するステップを含む、方法。
6. 配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸が、Ｌｅｕで置換されている、請求項５に記載の方法。
7. 脳機能の改善が、ＩＣＨによって引き起こされた上昇した頭蓋内圧（ＩＣＰ）を８０ｍｍＨｇ、７０ｍｍＨｇ、６０ｍｍＨｇ、５０ｍｍＨｇ、４０ｍｍＨｇ、３０ｍｍＨｇ、２０ｍｍＨｇ、および１０ｍｍＨｇからなる群から選択される圧力値以下に低減することと関連する、請求項５に記載の方法。
8. 脳機能の改善が、脳潅流圧（ＣＰＰ）を４０ｍｍＨｇ、５０ｍｍＨｇ、６０ｍｍＨｇ、７０ｍｍＨｇ、８０ｍｍＨｇ、９０ｍｍＨｇ、１００ｍｍＨｇ、１１０ｍｍＨｇ、および１２０ｍｍＨｇからなる群から選択される圧力値以上に維持することと関連する、請求項５に記載の方法。
9. 脳機能の改善が、脳組織酸素分圧（ＰｂｔＯ_２）を６ｍｍＨｇ、８ｍｍＨｇ、１０ｍｍＨｇ、１２ｍｍＨｇ、１４ｍｍＨｇ、１６ｍｍＨｇ、１８ｍｍＨｇ、２０ｍｍＨｇ、２２ｍｍＨｇ、および２４ｍｍＨｇからなる群から選択される圧力値以上に維持することと関連する、請求項５に記載の方法。
10. 脳機能の改善が、乳酸／ピルビン酸濃度比（ＬＡＲ）を６０、５０、４０、３０、および２０からなる群から選択される値以下に低減することと関連する、請求項５に記載の方法。
11. 脳機能の改善が、脳血管の頭蓋内圧と平均血圧の二変量の相関係数（ＰＲｘ）の比を０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．０、−０．１、−０．２、および−０．３からなる群から選択される値以下に低減することと関連する、請求項５に記載の方法。
12. ＩＣＨを有する対象の神経学的障害を低減するための方法であって、ＩＣＨによって引き起こされた神経学的障害の低減を必要とする対象に、
    ａ）配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸がＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙで置換されている、および
    ｂ）配列番号１の２３６に対応する位置のアミノ酸がＬｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている
    からなる群から選択される少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量のＦＸａバリアントを投与するステップを含む、方法。
13. 配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸が、Ｌｅｕで置換されている、請求項１２に記載の方法。
14. 神経学的障害がグラスゴー昏睡スコアを使用して評価され、治療の結果として、対象のスコアが、３から４以上、４から５以上、５から６以上、６から７以上、７から８以上、８から９以上、９から１０以上、１０から１１以上、１１から１２以上、１２から１３以上、１３から１４以上、または１４から１５に改善する、請求項１２に記載の方法。
15. 神経学的障害が、グラスゴー転帰スケール拡張版を使用して評価され、治療の結果として、治療された対象の平均スコアが、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、または８に改善する、請求項１２に記載の方法。
16. 神経学的障害が、バーセルインデックスを使用して評価され、治療の結果として、治療された対象の平均スコアが、１０以上、２０以上、３０以上、４０以上、５０以上、６０以上、７０以上、または８０以上、または９０以上に改善する、請求項１２に記載の方法。
17. 神経学的障害が、ＮＩＨ脳卒中スケールを使用して評価され、治療の結果として、治療された対象の平均スコアが、４２から４１以下、４１から４０以下、４０から３９以下、３９から３８以下、３８から３７以下、３７から３６以下、３６から３５以下、３５から３４以下、３４から３３以下、３３から３２以下、３２から３１以下、３１から３０以下、３０から２９以下、２９から２８以下、２８から２７以下、２７から２６以下、２６から２５以下、２５から２４以下、２４から２３以下、２３から２２以下、２２から２１以下、２１から２０以下、２０から１９以下、１９から１８以下、１８から１７以下、１７から１６以下、１６から１５以下、１５から１４以下、１４から１３以下、１３から１２以下、１２から１１以下、１１から１０以下、１０から９以下、９から８以下、８から７以下、７から６以下、６から５以下、５から４以下、４から３以下、３から２以下、２から１以下、または１から０に低減される、請求項１２に記載の方法。
18. 神経学的障害が、修正ランキンスケールを使用して評価され、治療の結果として、治療された対象の平均スコアが、約５と６の間から約４と５の間、約４と５の間から約３と４の間、約３と４の間から約２と３の間、約２と３の間から約１と２の間、または約１と２の間から約０と１の間に低減される、請求項１２に記載の方法。
19. 神経学的障害が、修正ランキンスケールを使用して評価され、治療の結果として、５または６の修正ランキンスケールスコアを有する治療された対象の比率が、０、１、２、３、または４のスコアを有するものと比較して低減される、請求項１２に記載の方法。
20. 神経学的障害が、修正ランキンスケールを使用して評価され、治療の結果として、４、５または６の修正ランキンスケールスコアを有する治療された対象の比率が、０、１、２、または３のスコアを有するものと比較して低減される、請求項１２に記載の方法。
21. ＩＣＨを有する対象における血腫周囲の浮腫（ＰＨＥ）を低減するための方法であって、ＩＣＨによって引きこされたＰＨＥの低減を必要とする対象に、
    ａ）配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸がＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙで置換されている、および
    ｂ）配列番号１の２３６に対応する位置のアミノ酸がＬｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている
    からなる群から選択される少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量のＦＸａバリアントを投与するステップを含む、方法。
22. 配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸が、Ｌｅｕで置換されている、請求項２１に記載の方法。
23. 治療の結果として、ＩＣＨを有する対象におけるＰＨＥの平均体積が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２１に記載の方法。
24. 治療の結果として、ＩＣＨを有する対象におけるＰＨＥによって引き起こされた頭蓋内圧の平均上昇が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２１に記載の方法。
25. ＩＣＨを有する対象における血腫体積拡大を低減または予防するための方法であって、血腫体積拡大を低減または予防する必要のある対象に、
    ａ）配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸がＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、またはＧｌｙで置換されている、および
    ｂ）配列番号１の２３６に対応する位置のアミノ酸がＬｅｕ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている
    からなる群から選択される少なくとも１つの置換突然変異を含む治療有効量のＦＸａバリアントを投与するステップを含む、方法。
26. 配列番号１の２３５に対応する位置のアミノ酸が、Ｌｅｕで置換されている、請求項２５に記載の方法。
27. 治療の結果として、ＩＣＨを有する対象における平均血腫体積拡大が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２５に記載の方法。
28. 治療の結果として、ＩＣＨを有する対象における平均血腫体積拡大が、未治療の対照と比較して少なくとも約１ｍｌ、１．５ｍｌ、２ｍｌ、２．５ｍｌ、３ｍｌ、３．５ｍｌ、４ｍｌ、４．５ｍｌ、５ｍｌ、５．５ｍｌ、６ｍｌ、６．５ｍｌ、７ｍｌ、７．５ｍｌ、８ｍｌ、８．５ｍｌ、９ｍｌ、９．５ｍｌ、１０ｍｌ、１０．５ｍｌ、１１ｍｌ、１１．５ｍｌ、１２ｍｌ、１２．５ｍｌ、１３ｍｌ、１３．５ｍｌ、１４ｍｌ、１４．５ｍｌ、１５ｍｌ、１６ｍｌ、１７ｍｌ、１８ｍｌ、１９ｍｌ、２０ｍｌ、２２ｍｌ、２４ｍｌ、２６ｍｌ、２８ｍｌ、３０ｍｌ、３５ｍｌ、４０ｍｌ、４５ｍｌ、または５０ｍｌ低減される、請求項２５に記載の方法。
29. 血腫体積が３ｍｌ以上、６ｍｌ以上、または１２．５ｍｌ以上拡大したＩＣＨを有する対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２５に記載の方法。
30. 血腫体積が１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３３％以上拡大したＩＣＨを有する対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２５に記載の方法。
31. 治療後に４のスポットサインスコアを有するＩＣＨ対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２５に記載の方法。
32. 治療後に３のスポットサインスコアを有するＩＣＨ対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２５に記載の方法。
33. 治療後に２のスポットサインスコアを有するＩＣＨ対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２５に記載の方法。
34. 治療後に１のスポットサインスコアを有するＩＣＨ対象の比率が、未治療の対照と比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減される、請求項２５に記載の方法。
35. スポットサインスコアが、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１８時間、２４時間、３０時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１８日、３週間、および４週間からなる群から選択される、ＦＸａバリアントの最初の投与後の時間に判定される、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
36. 脳内出血が、大脳、前頭葉、頭頂葉、後頭葉、側頭葉、小脳、脳幹、中脳、脳橋、髄質、脳下垂体、視床下部、視床、海馬、扁桃体、前障、および基底核からなる群から選択される脳領域内で起こる、請求項１、３、５、１２、２１、または２５のいずれか一項に記載の方法。

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