KR20200141449A - (2,2-비스하이드록시메틸)메틸렌사이클로프로판 뉴클레오티드로의 암 치료 - Google Patents

(2,2-비스하이드록시메틸)메틸렌사이클로프로판 뉴클레오티드로의 암 치료 Download PDF

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Abstract

본 발명은, 암, 특히 백혈병의 치료에 유용한 화학식 I의 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 이의 조성물을 제공한다.
[화학식 I]
Figure pct00172

상기 화학식 I에서,
B는 핵 염기이고;
U는 O 또는 S이고;
Rx는 -OC(=O)Ry, -OC(=O)CH(Ry)NH2 또는 -OCH2OC(=O)Ry이고;
Ry는 임의로 치환된 알킬 또는 알케닐이거나, 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고, R1은 H이거나, 또는 임의로 치환된 페닐, 벤질, 나프틸, 피리딜 또는 인돌릴이고, 또는 Rx 및 R1은 함께 결합을 한정하여 사이클릭 포스페이트를 형성하고;
R2 및 R2'는 함께 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄를 한정하고;
R3은 임의로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 페닐 또는 벤질이다.

Description

(2,2-비스하이드록시메틸)메틸렌사이클로프로판 뉴클레오티드로의 암 치료
본 발명은 암 치료에 유용한 구아닌 유도체 사이클로프로파비르(CPV)를 포함하는 (2,2-비스하이드록시메틸)메틸렌사이클로프로판 뉴클레오시드 유사체의 인 프로드럭 및 이의 유도체에 관한 것이다. 본 발명은 이러한 화합물을 포함하는 조성물 및 병용물, 및 암, 특히 백혈병의 치료에서의 이의 사용 방법에 관한 것이다.
메틸렌사이클로프로판 뉴클레오시드 유사체는 다양한 헤르페스 바이러스, 예를 들면 거대 세포 바이러스(CMV) 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스(EBV) 및 인간 헤르페스 바이러스 6 및 8(HHV-6 및 HHV-8)에 대해 효과적인 확립된 항바이러스제이다. 이러한 항바이러스제 중 하나는 사이클로프로파비르, 2,2-비스-(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴 메틸 구아닌(다르게는 CPV, 필로사이클로비르 또는 MBX400으로 알려짐)이며, 이의 합성 및 항-헤르페스 활성은 WO2003/104440에 개시되어 있다. CPV는 뉴클레오시드로 투여된다.
작용 메커니즘 연구는, CPV는 처음에는 바이러스 단백질 키나제 UL97에 의해 인산화되는 반면, CPV 모노포스페이트(CPV-MP)에서 CPV 디포스페이트(CPV-DP) 및 CPV 트리포스페이트(CPV-TP)로의 전환은 세포 키나제에 의해 실시될 수 있는 것을 보였다. 따라서, CPV는 헤르페스 바이러스 중 하나에 감염된 세포에서 항바이러스 활성 화학종에 대해서만 활성화된다. CPV는 2017년에 CMV 감염 징후에 대한 1상 임상 시험이 완료되었다.
사이클로프로파비르 또는 이의 유도체에 대한 암 활성은 WO2003/104440 및 학술 문헌 또는 다른 곳에서 이전에 공개되지 않았으며, 이는 CPV가 헤르페스 바이러스에 감염된 세포에서만 인산화된다는 점을 감안할 때, 뉴클레오시드 CPV가 감염되지 않은 세포에 대해 비독성이라는 것으로 이해할 수 있다.
얀 등(Yan et al)의 문헌[J Med Chem, 2005, 48,91-99]은, 사이클릭 포스페이트 또는 트리에스테르 포스포랄리니네이트 접근법을 사용하여 CPV의 항바이러스 스펙트럼을 확장하려는 시도를 개시한다:
Figure pct00001
그러나, 얀은, CMV 감염이 CPV의 임상적 표적임을 기억하면서, 상기 화합물 7a가 상응하는 뉴클레오시드 CPV보다 뮤린 및 인간 거대 세포 바이러스에 대해 10배 이상 덜 강력하다고 개시한다. 화합물 7a는 헤르페스 바이러스 1 및 2에 대해서도 비활성이었지만, EBV에 대해서는 모(parent) 뉴클레오시드 CPV와 실질적으로 동등했으며, 얀 등은 활성이 검정 의존적이라고 언급함으로써 이를 한정했다. 분명하게는 화합물 7a는 헤르페스 UL97 키나제가 존재하지 않는 종양 적응증에서 새로운 화합물을 개발하기 위한 유망한 출발점은 아니다. 또한, 하기 비교 실시예 1에 의해 입증되는 바와 같이, 상기 특허 출원인은 화합물 7a로 나타내어지는 부류의 화합물, 즉, CPV의 트리에스테르 포스포랄리니네이트가 불안정하다는 것을 확립하였다. 용액에서, 이들은 분해되어 22일 이내에 이들의 무결성(integrity)의 약 1/4을 상실한다. 고체 형태의 이러한 부류의 화합물에 대해 유사한 현상이 관찰되었지만, 아직 정량화되지 않았다.
얀 등은, 93쪽 오른쪽 컬럼에서, 표 1 아래의 첫 번째 완전한 문장에서 기재된 "사이클릭 포스페이트 26:
Figure pct00002
의 형성에 대한 증거가 없었다"고 개시하고 있으며, 얀 등의 반응식 5에서 다르게 합성되거나 단리되지 않는다.
본 발명은 하기 정의되는 바와 같은 화학식 I의 화합물, 상기 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 상기 화합물의 합성 방법에 관한 것이다. 따라서, 일 양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
[화학식 I]
Figure pct00003
상기 화학식 I에서,
B는 그룹 (a) 내지 (d):
Figure pct00004
로부터 선택되는 핵 염기이고;
U는 O 또는 S이고;
Rx는 -OC(=O)Ry, -OC(=O)CH(Ry)NH2 또는 -OCH2OC(=O)Ry이고; 또는
Rx와 R1이 함께 결합(bond)을 한정하여 사이클릭 포스페이트를 형성하고,
Ry는 C1-C20알킬 또는 C2-C20알케닐이고, 이들 중 어느 것은 플루오로, 하이드록시 및 아미노로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환되고, 또는
Ry는 D 입체 배열(configuration) 또는 L 입체 배열일 수 있는 천연 아미노산의 측쇄이고,
R1은 H이거나, 또는 페닐, 벤질, 나프틸, 피리딜 또는 인돌릴로부터 선택되는 사이클릭 그룹이고, 각각의 상기 사이클릭 그룹은 1, 2 또는 3개의 R22로 임의로 치환되고; 또는
R1과 Rx이 함께 결합을 한정하여 사이클릭 포스페이트를 형성하고,
각각의 R22는 할로, 하이드록시, C1-C6알킬, C3-C6사이클로알킬, 할로C1-C6알킬, 하이드록시C1-C6알킬, C1-C6알콕시, 할로C1-C6알콕시, C1-C6알킬카보닐, C3-C6사이클로알킬카보닐, 아지도, 시아노, 아미노로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 인접한 환 탄소원자들에 부착된 임의의 2개의 R22 그룹이 결합하여(combine) -O-(CH2)1-2-O-를 형성할 수 있고, 여기서 C3-C6사이클로알킬은 C1-C3알킬로 임의로 치환되고;
R2 및 R2'는 각각 독립적으로, H, C1-C6알킬, C3-C7사이클로알킬, C3-C7사이클로알킬C1-C3알킬, 페닐, 벤질 및 인돌릴로부터 선택되고; 또는
R2 및 R2'는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 C3-C7사이클로알킬렌 그룹을 형성하고,
여기서, 각각의 C1-C6알킬은 할로 또는 OR12로 임의로 치환되고, 각각의 C3-C7사이클로알킬, C3-C7사이클로알킬렌, 페닐 및 벤질은, C1-C3알킬, 할로 및 OR12로부터 독립적으로 선택되는 1개 또는 2개의 그룹으로 임의로 치환되고; 또는
R2 및 R2' 중 하나는 H이고, 다른 하나는 천연 아미노산의 측쇄이며, 여기서, Asp 또는 Glu의 카복시 말단은 C1-C6알킬로 임의로 에스테르화되고;
R3은 C1-C10알킬, C3-C7사이클로알킬, C1-C3알킬C3-C7사이클로알킬, 페닐 또는 벤질이고, 이들 중 어느 것은 할로, 하이드록시, C1-C6알콕시, C1-C6할로알콕시 및 N(R12)2로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환되고;
R4, R5, R7 및 R8은 각각 독립적으로, H, C1-C6알킬, C1-C6할로알킬, C1-C6하이드록시알킬, 할로, -OR12 또는 -N(R12)2이고;
R6, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로, H, C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C7사이클로알킬, C1-C6할로알킬, C1-C6하이드록시알킬, 할로, OR12, -N(R12)2, -NHC(O)OR12, 시아노, -C(O)OR12, -C(O)N(R12)2 또는 -NHC(O)R13이고, 여기서 C2-C6알케닐 및 C2-C6알키닐은 할로 또는 C3-C5사이클로알킬로 임의로 치환되고;
각각의 R12는 독립적으로, H, C1-C6알킬, 할로C1-C6알킬, C3-C7사이클로알킬 또는 C1-C6알킬C3-C7사이클로알킬이고;
R13은 R12 또는 CH2CH(NH2)C(=O)OH이고,
단, 상기 화합물은 화학식
Figure pct00005
의 화합물은 아니다.
화학식 I의 화합물은 임의로 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 용매화물의 형태로 제공될 수 있다. 일 양태에서, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 용매화물 형태의 화학식 I의 화합물을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 유리 형태의 화학식 I의 화합물을 제공한다.
본 발명의 일반적인 양태에서, 핵 염기 B는 그룹 (d):
Figure pct00006
(상기 그룹 (d)에서,
R11은 NH2 또는 NHCOC1-C6알킬, 특히 구아닌이다)
이다.
본 발명의 다른 양태에서, 핵 염기 B는 그룹 (c):
Figure pct00007
(상기 그룹 (c)에서,
R9는 C1-C6알콕시, C1-C6사이클로알콕시, C1-C6알킬아민 또는 C3-C6사이클로알킬아민이고,
R10은 NH2 또는 NHCOC1-C6알킬이다)
이다.
본 발명의 다른 양태에서, 핵 염기 B는 그룹 (c):
Figure pct00008
(상기 그룹 (c)에서,
R9는 H이고,
R10은 NH2이다)
이다.
본 발명의 다른 양태에서, 핵 염기 B는 그룹 (a):
Figure pct00009
(상기 그룹 (a)에서,
R4는 H이고,
R5는 F 또는 H이고,
R6은 NH2이다)
내의 시토신 또는 5-플루오로시토신이다.
본 발명의 특정 양태는 R1이 H이다.
본 발명의 다른 양태는, R1이 1개 또는 2개의 R22로 임의로 치환된 페닐이고, 각각의 R22는 할로, C1-C3알킬, C3-C4사이클로알킬, 할로C1-C3알킬, C1-C3알콕시, 할로C1-C3알콕시, C1-C3알킬카보닐, C3-C4사이클로알킬카보닐로부터 독립적으로 선택되며, 여기서, C3-C4사이클로알킬은 메틸로 임의로 치환된다.
본 발명의 양태는 R1이 4-위치에서 Br로 치환된 페닐이다. 다른 양태는 R1이 치환되지 않은 페닐이다.
특정 양태에서, 화학식 I 내의 -OC(=O)-CR2'(R2)-NH- 모이어티(moiety)는, 천연 아미노산, 예를 들면, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 세린, 트레오닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 아스파라긴 또는 글루타민의 임의의 측쇄를 갖는 L-아미노산, D-아미노산 또는 DL-아미노산을 나타낸다. Asp 또는 Glu 측쇄의 카복시 말단은 C1-C6알킬, 예를 들면 R3와 동일한 알킬로 임의로 에스테르화된다.
본 발명의 특정 양태는 R2'가 H이고, R2는 C1-C6알킬 또는 할로C1-C6알킬, 예를 들면 t-부틸, n-부틸 또는 플루오로류신의 측쇄이다.
특정 양태에서, 입체 화학은 부분 화학식:
Figure pct00010
로 나타내어진다.
특히, 상기 화학식에서, R2는 메틸이다.
본 발명의 양태는 R3이 C1-C10알킬, 바람직하게는 메틸, 이소프로필, 2-프로필펜틸 또는 2-에틸부틸이다.
본 발명의 다른 양태는 R3이 벤질 또는 C3-C7사이클로알킬, 예를 들면, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이다.
본 발명의 특정 양태는 Rx가 -OC(=O)C1-C6알킬이며, 바람직하게는 여기서 C1-C6알킬 모이어티는 메틸, 이소프로필, 이소부틸 또는 t-부틸이다.
본 발명의 또 다른 양태는 Rx가 -OC(=O)C16-C20알킬, 바람직하게는 -OC(=O)C17알킬, 예를 들면 세토일, 스테아로일 또는 에이코소일이다.
다른 양태에서, Rx는 -OC(=O)CH(Ry)NH2이고, 여기서 Ry는 천연 아미노산, 예를 들면 이소류신, 류신 및 바람직하게는 발린의 측쇄이고, Ry가 부착되는 키랄 중심에서의 입체 배열은 L-아미노산의 입체 배열이다.
본 발명의 다른 양태에서, Rx는 -OCH2OC(=O)CH3 또는 -OCH2OC(=O)C(CH3)3, 바람직하게는 -OCH2OC(=O)C(CH3)3이다.
본 발명의 바람직일 양태에서, U는 O이다.
본 발명의 특정 양태는 다음 화학식들의 화합물들 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00011
본 발명의 추가의 특정 양태는 다음 화학식들의 화합물들 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
본 발명의 특정 양태는 다음 화학식의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00017
본 발명의 특정 양태는 다음 화학식의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00018
본 발명의 특정 양태는 다음 화학식의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00019
본 발명의 특정 양태는 다음 화학식의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00020
본 발명의 특정 양태는 다음 화학식의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00021
본 발명의 화합물은, 암, 특히 림프구성 유형 및 골수성 유형의 백혈병에 대한 활성을 나타내며, 이러한 암을 가진 온혈 동물, 특히 인간의 치료에 의약으로 사용될 수 있다. 본 발명이 적용될 수 있는 림프구성 암은 급성 림프모구성 백혈병(ALL) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)을 포함한다. 본 발명이 적용될 수 있는 골수성 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수모구성 백혈병, 및 만성 골수단핵구성 백혈병을 포함하는 만성 골수성 백혈병(CML)을 포함한다. 다른 백혈병은 털세포 백혈병(HCL) 및 청소년 골수단핵구성 백혈병을 포함한다.
상기 및 이하에 사용되는 용어 '화학식 I의 화합물', '본 발명의 화합물(compound of the invention 또는 compound of the present invention)' 또는 유사한 용어는 화학식 I의 화합물, 이의 약제학적으로 허용되는 프로드럭, 염, 용매화물, 4급 아민, 입체 이성질체 및 토토머 및 금속 착물을 포함하고자 한다.
본 발명의 또 다른 양태는 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 용매화물, 프로드럭, 입체 이성질체 또는 토토머 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적으로 허용되는 담체는 부형제, 희석제 또는 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법 각각에 따라 제조될 수 있고, 본 발명의 약제학적 조성물은, 중량 또는 용적을 기준으로 하여, 약 0.1 내지 약 99%, 약 5 내지 약 90% 또는 약 1 내지 약 20%의 개시되는 화합물을 함유할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 특히 백혈병과 같은 암의 치료에서 의약으로 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 용매화물, 프로드럭, 입체 이성질체 또는 토토머를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 암의 치료 또는 예방에, 특히 백혈병과 같은 암의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 용매화물, 프로드럭, 입체 이성질체 또는 토토머를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 치료제(약제학적 병용물) 또는 모달리티(modality), 예를 들면, 비-약물 요법과의 병용 요법에서 치료학적 유효량으로 투여된다. 예를 들면, 다른 항증식, 항암, 면역 조절 또는 항염증 물질과 함께 시너지 효과가 발생할 수 있다. 본 발명의 화합물이 다른 요법과 함께 투여되는 경우, 공동-투여되는 화합물의 투여량은, 사용되는 공동-약물의 유형, 사용되는 특정 약물, 치료되는 병태 등에 따라 달라진다.
본 발명에 따른 병용 요법은, DNA 복구를 표적으로 하는, 제2의 상이한 항종양제 또는 제2 제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 다른 생물학적 활성 성분, 및 수술 또는 방사선 치료를 포함하지만 이에 제한되지 않는 비-약물 요법과 병용하는 본 발명의 화합물의 투여를 포함한다. 예를 들면, 본 발명의 화합물은, 다른 약제학적 활성 화합물, 바람직하게는 본 발명의 화합물의 효과를 향상시킬 수 있는 화합물과 병용하여 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 다른 약물 요법 또는 치료 모달리티에 대해, 예를 들면, 동시에 또는 순차적으로, 단일 제제 또는 별도의 제제로 투여될 수 있다. 일반적으로, 병용 요법은 단일 주기 또는 치료 과정 동안 두 가지 이상의 약물의 투여를 고려한다.
일 양태에서, 본 발명은, 항암제로 치료 중인 포유 동물에서 암의 화학 요 법적 치료를 향상시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 발명의 화합물을 포유 동물에게 공동-투여함을 포함한다. 특정 양태에서, 항암제는 DNA 손상제(damaging agent)이다. DNA 손상제는 임의의 적합한 DNA 손상제일 수 있다. 적합한 DNA 손상제의 비제한적인 예는 DNA 손상제(액티노마이신, 암사크린, 안트라사이클린, 블레오마이신, 부술판, 캄프토테신, 카보플라틴, 클로람부실, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 사이톡산, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 헥사메틸멜라민옥살리플라틴, 이포스파미드, 멜팔란, 메르클로레타민, 미토마이신, 미톡산트론, 니트로소우레아, 플리카마이신, 프로카바진, 탁솔, 탁소테레, 테니포시드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 에토포시드)를 포함한다. 바람직한 양태에서, DNA 손상제는 시스플라틴이다. DNA 손상제는 방사선 또는 생물 치료제, 예를 들면 항체일 수 있다.
특정 양태에서, DNA 손상제는 방사선, 예를 들면, 세포에 적용시 세포에서 DNA 가교결합을 유도하는 방사선일 수 있다. DNA 가교결합 방사선은 이온화 방사선 및 자외선(UV) 방사선을 포함한다. 이온화 방사선은 원자 또는 분자로부터 전자를 분리하여 이온화를 유발할 수 있을 만큼 에너지가 충분한 아원자(subatomic) 입자 또는 전자기파로 이루어진다. 이온화는 충돌하는 개별 입자들 또는 파동들의 에너지에 따른다. 일반적으로, 수 전자 볼트 초과의 에너지를 가진 이온화 입자 또는 광자는 이온화될 수 있다. 이온화 입자의 비제한적인 예는 알파 입자, 베타 입자 및 중성자이다. 원자 또는 분자를 이온화하는 광자의 능력은 이의 주파수에 따른다. 단파장 방사선, 예를 들면 고주파 자외선, x-선 및 감마선이 이온화된다. 이온화 방사선은 방사성 물질, x-선 튜브 및 입자 가속기에서 발생한다.
일부 양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 본 발명의 화합물과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물의 투여는 세포 주기 또는 세포 생존력의 변화를 유도한다.
본 발명의 방법은 대상체에게 추가의 치료제를 투여함을 추가로 포함할 수 있다. 추가의 치료제는 바람직하게는 다음과 같을 수 있다:
(i) 면역계 체크포인트를 차단 또는 억제하는 추가의 면역 조절제; 및/또는
(ii) 면역 이펙터 반응을 직접 자극하는 제제, 예를 들면, 시토카인 또는 케모카인(또는 둘 중 하나의 생성을 자극하는 제제), 종양 특이적 입양 전달된 T 세포 집단, 또는 종양 세포에 의해 발현된 단백질에 특이적인 항체; 및/또는
(iii) 종양 항원 또는 이의 면역원성 단편을 포함하는 조성물; 및/또는
(iv) 화학 요법제; 및/또는
(v) 방사선.
본 발명의 화합물은 추가의 치료제와 동시에 또는 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 개별적으로, 또는 추가의 치료제와 동일한 약제학적 조성물로 함께 투여될 수 있다.
면역계 체크포인트의 예는 다음을 포함한다:
a) 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO1)와 이의 기질 사이의 상호 작용;
b) PD1과 PDL1 및/또는 PD1과 PDL2 사이의 상호 작용;
c) CTLA4와 CD86 및/또는 CTLA4와 CD80 사이의 상호 작용;
d) B7-H3 및/또는 B7-H4와 이들의 각각의 리간드 사이의 상호 작용;
e) HVEM과 BTLA 사이의 상호 작용;
f) GAL9와 TIM3 사이의 상호 작용;
g) MHC 클래스 I 또는 II와 LAG3 사이의 상호 작용; 및
h) MHC 클래스 I 또는 II와 KIR 사이의 상호 작용;
i) OX40(CD134)과 OX40L(CD252) 사이의 상호 작용;
k) CD40과 CD40L(CD154) 사이의 상호 작용;
l) 4-1BB(CD137)와, 4-1BBL을 포함하는 리간드 사이의 상호 작용;
m) GITR과, GITRL을 포함하는 리간드 사이의 상호 작용
본 발명의 목적을 위한 바람직한 체크포인트는 체크포인트 (b), 즉, PD1과 이의 리간드 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 사이의 상호 작용이다. PD1은 이펙터 T 세포에서 발현된다. 리간드와의 결합(engagement)은 활성화를 하향 조절하는 신호를 생성한다. 리간드는 일부 종양에 의해 발현된다. 특히 PD-L1은 흑색종을 포함하는 다수의 고형 종양에 의해 발현된다. 따라서, 이러한 종양은 T 세포에서의 억제성 PD-1 수용체의 활성화를 통해 면역 매개 항종양 효과를 하향 조절할 수 있다. PD1과 이의 리간드들 중 하나 또는 둘 다의 사이의 상호 작용을 차단함으로써, 면역 반응의 체크포인트를 제거하여 증가된 항종양 T 세포 반응을 유도할 수 있다. 따라서, PD1 및 이의 리간드는, 바람직하게는 본 발명과 조합하여 표적화될 수 있는 면역계 체크포인트의 구성 성분의 예이다.
본 발명과 조합하기 위한 또 다른 바람직한 체크포인트는 체크포인트 (c), 즉, T 세포 수용체 CTLA-4와 이의 리간드인 B7 단백질(B7-1 및 B7-2) 사이의 상호 작용이다. CTLA-4는 일반적으로 초기 활성화 후 T 세포 표면에서 상향 조절되며, 리간드 결합은 추가의/지속적인 활성화를 억제하는 신호를 생성한다. CTLA-4는, T 세포 표면에서도 발현되지만 활성화를 상향 조절하는 수용체 CD28로의 B7 단백질에 대한 결합에 대해 경쟁적이다. 따라서, B7 단백질과의 CTLA-4의 상호 작용을 차단하지만 B7 단백질과의 CD28의 상호 작용은 차단하지 않음으로써, 면역 반응의 정상적인 체크포인트들 중 하나를 제거하여 항종양 T 세포 반응을 증가시킬 수 있다. 따라서, CTLA4 및 이의 리간드는, 바람직하게는 본 발명과 함께 표적화될 수 있는 면역계 체크포인트의 구성 성분의 예이다.
면역 조절제
"면역 조절제"는, 대상체에게 투여시 면역계 체크포인트의 작용을 차단 또는 억제하여 대상체에서 면역 이펙터 반응, 일반적으로 T 세포 이펙터 반응의 상향 조절을 초래하는 임의의 제제를 의미하기 위해 본원에서 사용되며, T 세포 이펙터 반응은 바람직하게는 항종양 T 세포 이펙터 반응을 포함한다.
본 발명의 방법에 사용되는 면역 조절제는 상기 개시된 임의의 면역계 체크포인트를 차단 또는 억제할 수 있다. 제제는 상기 차단 또는 억제를 초래하는 항체 또는 임의의 다른 적합한 제제일 수 있다. 따라서 제제는 일반적으로 상기 체크포인트의 억제제로 나타낼 수 있다.
본원에서 사용되는 "항체"는 전체 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원 결합 부분") 또는 이의 단일 쇄를 포함한다. 항체는 다중 클론 항체 또는 단일 클론 항체일 수 있으며, 임의의 적합한 방법에 의해 생성될 수 있다. 항체의, 용어 "항원 결합 부분"에 포함되는 결합 단편의 예는, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fd 단편, Fv 단편, dAb 단편 및 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 단일 쇄 항체, 예를 들면 scFv 및 중쇄 항체, 예를 들면 VHH 및 낙타 항체는 용어 항체의 "항원 결합 부분" 내에 포함하고자 한다.
B7 단백질과의 CTLA-4 상호 작용을 차단 또는 억제하는 바람직한 항체는 이필루무맙, 트레멜리무맙 또는 WO2014/207063에 개시된 임의의 항체를 포함한다. 다른 분자는 폴리펩티드 또는 가용성 돌연변이 CD86 폴리펩티드를 포함한다. 이필루무맙이 가장 바람직하다.
PD-L1과의 PD1의 상호 작용을 차단 또는 억제하는 바람직한 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 람브롤리주맙, 피딜주맙, BGB-A317 및 AMP-224를 포함한다. 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙이 가장 바람직하다. 항-PD-L1 항체는 아테졸리제맙, 아벨루맙 또는 두르발루맙, MEDI-4736 및 MPDL3280A를 포함한다.
4-1BB와 이의 리간드 사이의 상호 작용을 차단 또는 억제하는 바람직한 항체는 우토밀루맙을 포함한다.
다른 적합한 억제제는 일반적으로 소형 유기 분자인 소분자 억제제(SMI)를 포함한다. IDO1의 바람직한 억제제는 Epacadostat(INCB24360), Indoximod, GDC-0919(NLG919) 및 F001287을 포함한다. IDO1의 다른 억제제는 1-메틸트립토판(1MT)을 포함한다.
면역 이펙터 반응의 직접적인 자극
본원에서 사용되는 "면역 이펙터 반응을 직접 자극하는 제제"는 임의의 적합한 제제를 의미하지만, 일반적으로는 시토카인 또는 케모카인(또는 둘 중 하나의 생성을 자극하는 제제), 종양 특이적 입양 전달된 T 세포 집단, 또는 종양 세포에 의해 발현되는 단백질에 특이적인 항체를 나타낸다.
시토카인은 IFNα, IFNβ, IFNγ 및 IFNλ로부터 선택되는 인터페론, 또는 인터루킨, 바람직하게는 IL-2일 수 있다. 케모카인은 예를 들면 CXCL9, 10 및 11로부터 선택되는 염증 매개체일 수 있으며, 이는 CXCR3을 발현하는 T 세포를 유인한다. 시토카인 또는 케모카인의 생성을 자극하는 제제는 인간에게 투여하기에 적합한 애주번트(adjuvant)일 수 있다. 바람직한 예는 칼메트-게랑 간균(BCG: Bacille Calmette-Guerin)이며, 이는 일반적으로 방광암 치료를 위해 방광내(즉, 요도 카테터) 투여된다. 방광암에 대한 BCG의 일반적인 투여량 요법은 6주 동안 주 1회이지만, 이의 긴 안전성 이력을 고려할 때 유지 관리에 따라 무기한 투여된다. BCG는 방광암에 대한 면역 반응을 자극하는 것으로 나타났다. BCG는, 특히 일반적으로 피내 투여시 결장암에 대해, 종양 항원을 포함하는 조성물과 병용되는(즉, 암 백신과 함께) 애주번트로서도 사용되어 왔다. BCG의 이러한 용도도 본 발명에서 고려된다.
본 발명의 화합물의 투여는 치료제의 임의의 투여 방식을 통해 달성될 수 있다. 전신 또는 국소 투여, 예를 들면, 경구, 비강, 비경구, 경피, 피하, 질, 협측, 직장 또는 국소 투여 모드를 포함한다. 일 양태에서, 투여는 경구, 비경구, 피하로 실시되거나, 주사 또는 주입에 의해 실시된다.
의도된 투여 방식에 따라, 개시된 조성물은 고형, 반고형 또는 액상 투여 형태, 예를 들면 주사제, 정제, 좌제, 환제, 시한 방출 캡슐, 엘릭시르, 팅크제, 에멀젼, 시럽, 분말, 액체, 현탁액 등일 수 있으며, 종종 단위 투여량일 수 있고 통상적인 제약 관행과 일치하다. 조성물은 정맥내(볼루스 및 주입 둘 다), 복강내, 피하 또는 근육내 형태로, 그리고 모두 제약 분야의 숙련자에게 널리 공지된 형태를 사용하여 투여될 수도 있다.
예시적인 약제학적 조성물은 본 발명의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 정제 및 젤라틴 캡슐제이며, 약제학적으로 허용되는 담체는 예를 들면,
a) 희석제, 예를 들면, 정제수, 트리글리세라이드 오일, 예를 들면, 수소화 또는 부분 수소화 식물성 오일 또는 이들의 혼합물, 옥수수 오일, 올리브 오일, 해바라기 오일, 홍화 오일, 어유, 예를 들면, EPA 또는 DHA 또는 이들의 에스테르 또는 트리글리세라이드 또는 이들의 혼합물, 오메가-3 지방산 또는 이의 유도체, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스, 나트륨, 사카린, 글루코스 및/또는 글리신;
b) 윤활제, 예를 들면, 실리카, 활석, 스테아르산, 이의 마그네슘 또는 칼슘 염, 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨 및/또는 폴리에틸렌 글리콜; 정제의 경우에도 마찬가지이고;
c) 결합제, 예를 들면, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트래거캔스, 메틸셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 탄산마그네슘, 천연 당, 예를 들면, 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수 감미료, 천연 및 합성 검, 예를 들면 아카시아, 트래거캔스 또는 알긴산나트륨, 필요에 따라 왁스 및/또는 폴리비닐피롤리돈;
d) 붕해제, 예를 들면, 전분, 한천, 메틸 셀룰로스, 벤토나이트, 크산탄 검, 알그산 또는 이의 나트륨 염, 또는 발포성 혼합물;
e) 흡수제, 착색제, 향료 및 감미료;
f) 유화제 또는 분산제, 예를 들면, Tween 80, Labrasol, HPMC, DOSS, 카프로일 909, 라브라팍, 라브라필, 페세올, 트란스쿠톨, capmul MCM, capmul PG-12, captex 355, 겔리시어, 비타민 E TGPS 또는 기타 허용되는 유화제; 및/또는
g) 화합물의 흡수를 향상시키는 제제, 예를 들면 사이클로덱스트린, 하이드록시 프로필-사이클로덱스트린, PEG400 및 PEG200이다.
액체, 특히 주사 가능한 조성물은 예를 들면 용해, 분산 등에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용되는 용매, 예를 들면, 물, 염수, 수성 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등에 용해되거나 이와 혼합되어, 주사 가능한 등장성 용액 또는 현탁액을 형성한다. 단백질, 예를 들면, 알부민, 킬로미크론 입자 또는 혈청 단백질을 사용하여 개시된 화합물을 용해시킬 수 있다.
본 발명의 화합물은, 담체로서 폴리알킬렌 글리콜, 예를 들면 프로필렌 글리콜을 사용하여 지방 에멀젼 또는 현탁액으로 제조될 수 있는 좌제로 제형화될 수 있다.
본 발명의 화합물은 리포솜 전달 시스템, 예를 들면 소형 단층 소포, 대형 단층 소포 및 다층 소포의 형태로 투여될 수도 있다. 리포좀은 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린을 함유하는 다양한 인지질로부터 형성될 수도 있다. 일부 양태에서, 미국 특허 제5,262,564호에 기재된 바와 같이, 지질 성분의 필름은 약물의 수용액으로 수화되어 약물을 캡슐화하는 지질 층을 형성하며, 상기 문헌은 이의 전문이 인용에 의해 본원에 포함된다.
본 발명의 화합물은 개시된 화합물들이 커플링되는 개별 담체로서 단일 클론 항체의 사용에 의해 전달될 수도 있다. 본 발명의 화합물은 표적화 가능한 약물 담체로서 가용성 중합체와 커플링될 수도 있다. 이러한 중합체는 폴리비닐피롤리돈, 피란 공중합체, 폴리하이드록시프로필메타크릴아미드-페놀, 폴리하이드록시에틸아스판아미드페놀, 또는 팔미토일 잔기로 치환된 폴리에틸렌옥사이드폴리리신을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 약물의 제어 방출을 달성하는 데 유용한 생분해성 중합체 클래스, 예를 들면, 폴리락트산, 폴리엡실론 카프로락톤, 폴리하이드록시 부티르산, 폴리오르토에스테르, 폴리아세탈, 폴리디하이드로피란, 폴리시아노아크릴레이트 및 하이드로겔의 가교결합된 또는 양친매성 블록 공중합체와 커플링될 수 있다. 일 양태에서, 개시된 화합물은 중합체, 예를 들면, 폴리카복실산 중합체 또는 폴리아크릴레이트에 공유 결합되지 않는다.
모 주사 가능한 투여는 일반적으로 피하, 근육내 또는 정맥내 주사 및 주입에 사용된다. 주사제는 액체 용액 또는 현탁액 형태, 또는 주사 전에 액체에 용해하기에 적합한 고체 형태의 통상적인 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물을 사용하는 투여 요법은 환자의 유형, 종, 연령, 성별 및 의학적 병태, 치료되는 병태의 특성, 투여 경로, 환자의 간 또는 신장 기능, 및 사용되는 특정 화합물을 포함하는 다양한 인자에 따라 선택된다. 당업자인 의사 또는 수의사는 병태의 진행을 예방, 대응 또는 저지하는데 필요한 약물의 유효량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있다.
지시된 효과를 위한 생체내 또는 시험관내 사용하기 위한 조성물 중 본 발명의 화합물의 유효 투여량은, 약 0.5 내지 약 5,000mg의 범위, 예를 들면, 0.5, 5, 20, 50, 75, 100, 150, 250, 500, 750, 1,000, 1,250, 2,500, 3,500 또는 5,000mg의 화합물, 또는 하나의 양 내지 또 다른 양까지의 범위의 화합물이다. 그러나, 일반적으로, 적절한 용량은 1일 약 0.005 내지 약 30mg/kg 체중의 범위, 바람직하게는 0.05 내지 20mg/kg/일의 범위일 수 있다. 바람직한 용량은 단일 용량으로 또는 적절한 간격으로 투여되는 분할 용량, 예를 들면 1일 2, 3 또는 4개 이상의 용량으로 편리하게 제시된다. 치료 및/또는 예방의 필요성에 따라, 바람직한 용량은 예를 들면, 2일에 1회, 3일에 1회 또는 심지어 1주일에 1회일 수 있다.
화합물은, 예를 들면 단위 투여 형태당 0.5 내지 1,500mg, 편리하게는 1 내지 1,000mg, 가장 편리하게는 5 내지 700mg의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 편리하게 투여된다.
본 발명의 화합물은 일반적으로, 경구, 비경구, 정맥내, 근육내, 피하 또는 기타 주사 가능한 방법, 협측, 직장, 질, 경피 및/또는 비강 경로 및/또는 흡입을 통해, 활성 성분 또는 약제학적으로 허용되는 염 또는 이의 프로드럭 또는 용매화물, 또는 이러한 염의 용매화물을 포함하는 약제학적 제제 형태로, 약제학적으로 허용되는 투여 형태로 투여된다. 치료되는 장애 및 환자 및 투여 경로에 따라, 조성물은 다양한 용량으로 투여될 수 있다.
본 발명의 화학식 I의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염도 제공된다. 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 약제학적으로 허용되는 무기 및 유기 산 또는 염기로부터 유도되는 염을 의미한다. 본 발명의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들면, 충분히 염기성인 본 발명의 화합물의 산-부가 염, 예를 들면, 무기 또는 유기 산과의 산-부가 염, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 질산, 메탄설폰산, 황산, 인산, 트리플루오로아세트산, 파라-톨루엔 설폰산, 2-메시틸렌 설폰산, 시트르산, 아세트산, 타르타르산, 푸마르산, 락트산, 석신산, 말산, 말론산, 말레산, 1,2-에탄디설폰산, 아디프산, 아스파르트산, 벤젠설폰산, 벤조산, 에탄설폰산 또는 니코틴산이다. 또한, 본 발명의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들면, 충분히 산성인 본 발명의 화합물의 염기-부가 염, 예를 들면, 금속염, 예를 들면 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘염, 아연염 또는 알루미늄염, 암모늄염, 생리학적으로 허용되는 양이온을 제공하는 유기 염기와의 염이며, 이는 4급 암모늄염, 예를 들면, 메틸아민, 에틸아민, 디에틸아민, 트리메틸아민, tert-부틸아민, 트리에틸아민, 디벤질아민, N,N-디벤질에틸아민, 사이클로헥실에틸아민, 트리스-(2-하이드록시에틸)아민, 하이드록시에틸 디에틸아민, (1R,2S)-2-하이드록시인덴-1-아민, 모르폴린, N-메틸피페리딘, N-에틸피페리딘, 피페라진, 메틸피페라진, 아다만틸아민, 수산화콜린, 테트라부틸암모늄 하이드록사이드, 트리스-(하이드록시메틸)메틸아민 하이드록사이드, L-아르기닌, N-메틸 D-글루카민, 리신, 아르기닌 등을 포함한다.
본 발명은, 표지되지 않은 화합물, 및 하나 이상의 원자(들)가 이 원자(들)의 동위 원소, 즉, 일반적으로 자연에서 발견되는 원자(들)과 동일한 원자 번호를 갖지만 원자 질량이 상이한 원자(들)로 대체된 화합물을 포함한다. 본 발명의 화합물에 포함될 수 있는 동위 원소의 예는, 수소의 동위 원소, 예를 들면 2H(중수소, D로도 나타됨) 및 3H(삼중수소, T로도 나타냄), 탄소, 예를 들면 11C, 13C 및 14C, 질소, 예를 들면 13N 및 15N, 산소, 예를 들면 15O, 17O 및 18O, 인, 예를 들면 31P 및 32P, 불소, 예를 들면 18F, 염소, 예를 들면 36Cl 및 브롬, 예를 들면 75Br, 76Br, 77Br 및 82Br을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 동위 원소 표지된 화합물은 예를 들면, 3H 및 14C와 같은 방사성 동위 원소가 존재하는 화합물 또는 2H 및 13C와 같은 비-방사성 동위 원소가 존재하는 화합물을 포함한다.
동위 원소 함유 화합물에 포함되는 동위 원소의 선택은 상기 화합물의 특정 용도에 따른다. 예를 들면, 약물 또는 기질 조직 분포 검정의 경우, 또는 3H 또는 14C와 같은 방사성 동위 원소가 포함되는 대사 연구 화합물이 일반적으로 가장 유용하다. 무선-이미징 응용 분야, 예를 들면, 양전자 방출 단층 촬영(PET)의 경우, 양전자 방출 동위 원소, 예를 들면, 11C, 18F, 13N 또는 15O가 유용하다. 더 무거운 동위 원소, 예를 들면 중수소, 즉, 2H의 혼입은 예를 들면, 화합물의 생체내 반감기를 증가시킬 수 있거나 투여량 요구를 감소시킬 수 있거나 또는 치료 지수의 개선시킬 수 있는, 본 발명의 화합물에 대해 더 큰 대사 안정성으로 인한 특정 치료 이점을 제공할 수 있다.
화학식 I의 동위 원소 표지된 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹은 일반적으로, 당업자에게 공지된 통상적인 기술에 의해, 또는 상응하는 비-동위 원소 표지 시약 또는 출발 물질 대신 적절한 동위 원소 표지된 시약 또는 출발 물질을 사용하여, 본원의 반응식 및/또는 실시예에 기재된 것과 유사한 공정에 의해 제조될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 용매화물은 결정화 용매가 동위 원소로 치환될 수 있는 것, 예를 들면 D2O, d6-아세톤, d6-DMSO를 포함한다.
토토머가 본 발명의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 및 프로드럭에 존재하는 경우, 모든 개별적인 토토머 형태 및 이들의 조합은 개별 특정 양태로서 본 발명의 범위 내에 있는 것을 의미한다.
본 발명의 화합물의 하나 이상의 키랄 중심(들)의 존재는 입체 이성질체를 생성할 수 있다. 결과적으로, 하나 이상의 키랄 중심(들)을 갖는 본 발명의 화합물은 라세미 또는 거울상 이성질체가 풍부한 형태의 입체 이성질체들의 혼합물로서 존재할 수 있으며, 즉, 각각의 키랄 중심은 (R)-, (S)- 또는 (R,S)-입체 배열이다. 각각의 키랄 중심에서 두 가지 입체 배열의 비는 바람직하게는 적어도 75/25, 적어도 80/20, 적어도 85/15, 적어도 90/10, 적어도 98/2 또는 적어도 99.5/0.5이다. 화합물이 거울상 이성질체들인 본 발명의 양태에서, 거울상 이성질체적 과잉은 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 95% 또는 적어도 99%이다. 2개 이상의 키랄 중심을 갖는 본 발명의 화합물은 추가로 각각 에피머 또는 부분 입체 이성질체일 수 있으며, 즉, 하나 이상의 입체 중심에서 상이한 입체 화학을 가질 수 있다. 불포화 이중 결합을 가진 원자의 치환체는, 경우에 따라 시스-(Z)-형태 또는 트랜스-(E)-형태로 존재할 수 있다. 입체 화학이 화학적 구조에 의해 명확하게 정의되지 않는 한, 각각의 경우 본 발명은, 거울상 이성질체, 에피머, 부분 입체 이성질체 및 이들의 라세미 혼합물을 포함하는 혼합물을 포함하는, 모두 순수한 형태이고 서로 혼합된 모든 이러한 입체 이성질체로 확장되는 것으로 이해되어야 한다.
따라서, 본 발명의 화합물의 모든 이성질체 형태는, 모든 가능한 이성질체, 회전체(rotamer), 회전 장애 이성질체, 토토머, 시스 이성질체 및 트랜스 이성질체, 부분 입체 이성질체, 광학 이성질체, 라세미체 및 이들의 혼합물을 포함하여 본 발명의 범위 내에 있는 것을 의미한다. 화합물이 이중 결합을 함유하는 경우, 치환체는 E 또는 Z 입체 배열일 수 있다.
모든 생성되는 이성질체들의 혼합물은 성분들의 물리화학적 차이에 따라, 예를 들면 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 순수한 또는 실질적으로 순수한 기하 이성질체 또는 광학 이성질체, 부분 입체 이성질체, 라세미체로 분리될 수 있다.
최종 생성물 또는 중간체의 모든 생성되는 라세미체는 공지된 방법, 예를 들면 광학 활성 산 또는 염기로 수득되는 라세미체의 부분 입체 이성질체 염들의 분리 후, 광학 활성 산성 또는 염기성 화합물의 유리에 의해 광학 안티포드로 분해될 수 있다. 특히, 염기성 모이어티는, 예를 들면 광학 활성 산, 예를 들면 타르타르산, 디벤조일 타르타르산, 디아세틸 타르타르산, 디-O,O'-p-톨루오일 타르타르산, 만델산, 말산 또는 캄포르-10-설폰산으로 형성된 염의 분별 결정화에 의해, 본 발명의 화합물을 광학 안티포드들로 분해하는데 사용될 수 있다. 라세미 생성물은 키랄 크로마토그래피, 예를 들면, 키랄 고정상을 사용하는 고압 액체 크로마토그래피(HPLC) 또는 초임계 유체 크로마토그래피(SFC)로도 분해할 수 있다.
화학식 I의 화합물은 금속 결합, 킬레이트 또는 착물 형성 성질을 가질 수 있어, 금속 착물 또는 금속 킬레이트로 존재할 수 있음을 이해할 것이다. 화학식 I의 화합물의 이러한 금속화된 유도체는 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
상기 및 이하에 사용되는 과학 및 기술 용어 및 명명법은 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 가지며, 또한 달리 구체적으로 명시하지 않는 한 명세서 및 첨부되는 청구범위 전체에 걸쳐 이하의 정의가 적용된다.
연결 지점 역할을 하는 결합을 명확히 하기 위해 기호 "-"가 종종 추가된다. 예를 들면, RO-는, R이 산소 원자에 결합되고 상기 산소 원자가 전체 라디칼에 대한 연결 지점에 있는 라디칼을 나타내며, 유사하게는, -C(=O)R은, C 원자를 통해 스캐폴드에 연결된 R-치환된 카보닐 모이어티를 나타낸다.
Cm-Cn할로알킬, Cm-Cn알킬카보닐, Cm-Cn알킬아민 등과 같은 그룹 또는 그룹의 일부로서의 용어 'Cm-Cn알킬(여기서, m 및 n은 ≥0의 정수이고, m<n이다)'은, 표시된 수의 탄소 원자를 갖는 포화된 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼, 예를 들면 C1-C4알킬은 탄소수 1 내지 4의 알킬 라디칼을 의미하고, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, t-부틸, n-부틸 및 이소부틸을 포함하며, 유사하게는, C1-C6알킬은 탄소수 1 내지 6의 직쇄 또는 분지형 알킬 라디칼을 의미하며, 이는 펜틸 및 헥실의 모든 직쇄 및 분지쇄 이성질체도 포함한다.
그룹 또는 그룹의 일부로서의 용어 'Cm-Cn알킬렌(여기서, m 및 n은 >0의 정수이고, m<n이다)'은 탄소수 m 내지 n의 2가 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소 쇄, 예를 들면, 메틸렌, 에틸렌, 1,3-프로판디일, 1,2-프로판디일 등을 정의한다.
그룹 또는 그룹의 일부로서의 용어 'C2-Cn알케닐'은 포화 탄소-탄소 결합 및 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 갖고, n이 >2의 정수로 표시된 탄소수를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 나타내며, 예를 들면, C2-C6알케닐은 탄소수 2 내지 6의 알케닐 그룹을 의미한다. 예시적인 알케닐 그룹은 에테닐(또는 비닐), 1-프로페닐, 2-프로페닐(또는 알릴), 이소프로페닐, 부테닐 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
그룹 또는 그룹의 일부로서의 용어 'C2-Cn알키닐'은 포화 탄소-탄소 결합 및 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖고, n이 >2의 정수로 표시된 탄소수를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 나타내며, 예를 들면 C2-C6알키닐은 탄소수 2 내지 6의 알키닐 그룹을 의미한다. 예시적인 알키닐 그룹은 에티닐, 프로피닐, 프로피닐, 부티닐 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
그룹 또는 그룹의 일부로서의 용어 'C3-Cn사이클로알킬'은 n이 >4의 정수인 표시된 탄소수를 갖는 포화 사이클릭 탄화수소 라디칼을 나타내며, 예를 들면, C3-C6사이클로알킬은 탄소수 3, 4, 5 또는 6의 사이클로알킬 그룹을 의미한다. 예시적인 사이클로알킬 그룹은 사이클로프로필, 사이클로부틸 사이클로펜틸, 사이클로헥실 등, 특히 사이클로프로필을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 'C3-Cn'사이클로알킬Cm-Cn알킬'은, C3-Cn'사이클로알킬 모이어티로 치환된 Cm-Cn알킬 라디칼을 나타내며, 여기서 C3-Cn'사이클로알킬 및 Cm-Cn알킬은 각각 C3-Cn사이클로알킬 및 Cm-Cn알킬에 대해 상기 정의된 바와 같다. 예시적인 C3-Cn'사이클로알킬Cm-Cn알킬 그룹은 C3-C7사이클로알킬C1-C3알킬을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 즉, 사이클로알킬 모이어티는 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소프로필 그룹을 통해 결합된다.
용어 'Cm-Cn알콕시'는 라디칼 O-Cm-Cn알킬을 정의하며, 여기서 Cm-Cn알킬은 상기 정의된 바와 같다. 본 발명에서 사용하기에 바람직한 Cm-Cn알콕시 그룹은 C1-C6알콕시, 즉, 탄소수 1 내지 6의 알콕시 그룹이다. 예시적인 알콕시 그룹은 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 '할로' 또는 '할로겐'은 일반적으로 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 나타낸다.
그룹 또는 그룹의 일부로서의 용어 '할로Cm-Cn알킬'은, 적어도 하나의 C-원자가 하나 이상의 할로겐 원자(들)로 치환된 Cm-Cn알킬, 특히 1, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 이상의 할로 원자로 치환된 C1-C4알킬, 예를 들면, 1개 이상의 플루오로원자를 갖는 메틸 또는 에틸, 예를 들면, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 트리플루오로에틸을 나타낸다. 1개 이상의 할로겐 원자가 할로Cm-Cn알킬의 정의 내의 알킬 그룹에 부착된 경우, 할로겐 원자는 동일하거나 상이할 수 있다. 많은 경우 트리플루오로메틸이 바람직하다.
용어 '할로Cn-Cm알콕시'는 표시된 탄소수의 Cn-Cm알콕시를 나타내며, 여기서 적어도 1개의 C-원자가 1개 이상의 할로겐 원자(들)로, 일반적으로 클로로 또는 플루오로로 치환된다. 특히 흥미로운 것은 C1-C6할로알콕시이다. 많은 경우에 트리플루오로메톡시가 바람직하다.
용어 "하이드록시알킬"은 알킬 그룹이 1개 이상의 -OH 그룹으로 치환된 상기 정의된 바와 같은 알킬 그룹을 의미한다. 하이드록시알킬 그룹의 예는 HO-CH2-, HO-CH2-CH2- 및 CH3-CH(OH)-를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 '옥소' 또는 '(=O)'는 이중 결합된 산소 원자를 나타내며, 즉, 탄소 원자에 부착되는 경우 카보닐 모이어티를 형성하고, 황 원자에 부착되는 경우 설폭사이드 모이어티를 형성하고, 상기 용어 중 2개가 동일한 황 원자에 부착되는 경우 설포닐 모이어티를 형성한다. 원자는 원자가가 허용하는 경우에만 옥소 그룹으로 치환될 수 있다는 점에 유의해야 한다.
용어 '아미노'는 NH2를 의미한다.
용어 'Cm-Cn알킬아미노'는 수소 원자들 중 하나가 Cm-Cn알킬로 대체된 아미노 그룹을 나타내며, 여기서 Cm-Cn알킬은 상기 정의된 바와 같다.
용어 '디(Cm-Cn알킬)아미노'는 수소 원자 둘 다가 Cm-Cn알킬로 대체된 아미노 그룹을 나타내며, 여기서 Cm-Cn알킬은 상기 정의된 바와 같고 2개의 Cm-Cn알킬 그룹은 동일하거나 상이할 수 있다, 즉, (Cm-Cn알킬)2에서의 m 및 n은 서로 독립적으로 선택된다.
용어 '알콕시아미도'는 NHC(=O)C1-C6알콕시, 예를 들면, tert. 부톡시카보닐아미노를 나타낸다.
본원에 적용되는 그룹 또는 그룹의 일부로서의 용어 '아릴'은 아릴 모이어티, 예를 들면, 페닐 또는 나프틸 또는 C4-C6사이클로알킬(예를 들면 인다닐) 또는 C4-C6사이클로알케닐에 융합된 페닐을 의미한다. 적합한 아릴 그룹의 예는 페닐, 비페닐, 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 인데닐 및 인다닐을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 '아릴Cm-Cn알킬'은 아릴로 치환된 Cm-Cn알킬을 나타내며, 여기서 아릴 및 Cm-Cn알킬은 상기 정의된 바와 같다. 본 발명에서 사용하기에 바람직한 아릴Cm-Cn알킬 그룹은 아릴C1-C3알킬이고, 즉, 아릴 모이어티는 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소프로필 그룹을 통해 결합된다.
본원에 적용되는 용어 '헤테로사이클릴', '헤테로사이클릭' 또는 '헤테로사이클'은 달리 명시되지 않는 한, 4 내지 10개의 원자로 구성되는 포화 또는 부분 불포화 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 환 시스템을 나타내며, 이중 1, 2, 3 또는 4개는 S, O 및 N로부터 각각 독립적으로 선택되는 헤테로원자이다. 적합한 헤테로사이클릴 그룹의 예는 피라닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 티오피라닐, 푸라닐, 테트라하이드로푸라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 티아졸리디닐, 티아디아졸릴, 피롤리닐, 피롤리디닐, 아제티디닐, 아제리디닐 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 달리 명시되지 않는 한, 헤테로사이클릴 그룹은 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된다.
용어 '헤테로사이클록시'는 헤테로사이클릴이 상기 정의된 바와 같은 O-헤테로사이클릴 라디칼을 정의한다.
용어 '헤테로사이클릴Cm-Cn알킬'은 헤테로사이클릴로 치환된 Cm-Cn알킬을 나타내며, 여기서 헤테로사이클릴 및 Cm-Cn알킬은 상기 정의된 바와 같다. 본 발명에서 사용하기에 바람직한 헤테로사이클릴Cm-Cn알킬 그룹은 헤테로사이클릴C1-C3알킬이고, 즉, 헤테로사이클릴 모이어티는 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소프로필 그룹을 통해 결합된다.
본원에 적용되는 용어 "헤테로아릴"은 N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 함유하고, 5 내지 14개의 환 원자로 구성되는 모노사이클릭, 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 환 시스템을 의미하며, 여기서 헤테로원자들 중 적어도 하나는 방향족 환의 일부이다. 용어 "헤테로아릴"은 모든 가능한 이성질체 형태 및 모든 융합된 형태, 브릿징된(bridged) 형태 및 스피로 형태를 포함하고자 한다. "헤테로아릴"은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환될 수 있다.
적합한 헤테로아릴 그룹의 예는, 피리디닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 퀴나졸리닐, 테트라하이드로퀴나졸리닐, 퀴나졸리닐, 벤즈이미다졸릴, 벤즈옥사졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤조티아지놀릴, 벤즈이소티아지놀릴, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사디아졸릴, 벤조-1,2,3-트리아졸릴, 벤조-1,2,4-트리아졸릴, 벤조테트라졸릴, 벤조푸라닐, 벤조티에닐, 벤조피리딜, 벤조피리미디닐, 벤조피리다지닐, 벤조피라졸릴, 인돌릴, 이소인돌릴 인돌리닐, 이소인돌리닐, 인다닐, 피롤로피리디닐, 피라졸로피리디닐 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 달리 명시되지 않는 한, 헤테로아릴 그룹은 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된다.
정의에 사용되는 임의의 모이어티 상의 라디칼 위치(들)는 이러한 모이어티가 화학적으로 안정한 한 어느 위치에나 있을 수 있다는 점에 유의해야 한다.
변수의 정의에 사용되는 라디칼은 달리 명시되지 않는 한 가능한 모든 이성질체를 포함한다. 예를 들면, 피리디닐은 2-피리디닐, 3-피리디닐 및 4-피리디닐을 포함한다.
용어 '헤테로아릴Cm-Cn알킬'은 헤테로아릴로 치환된 Cm-Cn알킬을 나타내며, 여기서 헤테로아릴 및 Cm-Cn알킬은 상기 정의된 바와 같다. 본 발명에서 사용하기에 바람직한 헤테로아릴Cm-Cn알킬 그룹은 헤테로아릴C1-C3알킬이고, 즉, 헤테로아릴 모이어티는 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소프로필 그룹을 통해 결합된다.
본원에서 사용되는 용어 "임의로 치환되는"은 치환이 임의적임을 의미하며, 즉, 치환이 있을 수도 있고 없을 수도 있다. 예를 들면, 표현 "하나 이상의 치환체로 임의로 치환되는 알킬 그룹"은 알킬 그룹이 0개 또는 1개 이상의 치환체로 치환됨을 의미한다.
용어 "치환되는"은 적어도 하나의 수소 원자가 치환체로 대체된 분자를 의미한다.
임의의 구성 요소에서 변수가 1회 초과로 발생하면 각각의 정의는 독립적이다.
본원에서 사용되는 용어 "염" 또는 "염들"은 화합물의 산 부가 염 또는 염기 부가 염을 나타낸다. "염"은 특히 "약제학적으로 허용되는 염"을 포함한다. 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 생물학적 효과 및 성질을 보유하며, 일반적으로는 생물학적으로 바람직한 또는 다르게 바람직한 염을 나타내며, 많은 경우 화합물은 아미노 및/또는 카복실 그룹 또는 이와 유사한 그룹들의 존재로 인해 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.
용어 "용매화물"은 용질 및 용매에 의해 형성된 가변 화학양론의 복합체를 나타낸다. 본 발명의 목적을 위한 이러한 용매는 용질의 생물학적 활성을 방해하지 않을 수 있다. 적합한 용매의 예는, 물, MeOH, EtOH 및 AcOH를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 물이 용매 분자인 용매화물은 일반적으로 수화물로 나타낸다. 수화물은 화학양론적 양의 물을 함유하는 조성물, 및 다양한 양의 물을 함유하는 조성물을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는, 당업자에게 공지된 바와 같은 임의의 그리고 모든, 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제(예를 들면, 항균제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향료, 염료 등 및 이들의 조합을 포함한다(예를 들면, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329] 참조). 임의의 통상적인 담체가 활성 성분과 양립할 수 없는 경우를 제외하고는, 치료학적 또는 약제학적 조성물에서의 사용이 고려된다.
용어 "치료학적 유효량"은, 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들면 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제를 유도하거나, 증상을 개선하거나, 병태를 완화하거나, 질환의 진행을 느리게하거나 지연시키거나, 질환을 예방하는 등을 하는 물질의 양을 나타낸다. 하나의 비제한적 양태에서, 용어 "치료학적 유효량"은, 대상체에게 투여시, 암 병태를 적어도 부분적으로 완화, 억제, 예방 및/또는 개선하는 면역 조절 효과를 달성하기에 충분한 본 발명의 화합물의 양을 나타낸다.
본원에서 사용되는 "화학 요법제"는 암에 대한 화학 요법으로 사용하도록 승인된 임의의 제제를 의미한다. 예는 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 올(all)-트랜스 레티노산, 액티미드, 아자시티딘, 아자티오프린, 블레오마이신, 카보플라틴, 카페시타빈, 시스플라틴, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 시타라빈, 다우노루비신, 도세탁셀, 독시플루리딘, 독소루비신, 에피루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 하이드록시우레아, 이다루비신, 이리노테칸, 레날리도마이드, 류코보린, 메클로레타민, 멜팔란, 머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 페메트렉세드, 레블리미드, 테모졸로미드, 테니포시드, 티오구아닌, 티오테파, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 및 비노렐빈. 본원에 기재된 병용물에 사용하기 위한 화학 요법제는 그 자체가 상이한 화학 요법제들의 병용물일 수 있다. 적합한 병용물은 5-플루오로우라실(5-FU), 류코보린 및 옥살리플라틴의 병용물(FOLFOX로 나타낼 수 있음), 또는 이리노테칸, 5-FU 및 류코보린의 병용물(IFL으로 나타낼 수 있음)을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "대상체"는 동물을 나타낸다. 일반적으로 동물은 포유 동물이다. 대상체는 예를 들면 영장류(예를 들면, 남성 또는 여성 인간), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 물고기, 새 등으로도 나타낸다. 특정 양태에서, 대상체는 영장류이다. 또 다른 양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 대상체가 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 이익이 되는 경우, 상기 대상체는 상기 치료를 "필요로 하는" 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 제공된 병태, 증상 또는 장애 또는 질환의 감소 또는 억제, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기저선 활성의 현저한 감소를 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어, 임의의 질환 또는 장애를 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는, 일 양태에서, 질환 또는 장애를 개선하는 것(즉, 질환 또는 이의 적어도 하나의 임상학적 증상의 발달을 늦추거나 억제하거나 또는 감소시키는 것)을 나타내고, 또 다른 양태에서는, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자가 식별할 수 없는 것들을 포함하여 적어도 하나의 물리적 파라미터를 완화 또는 개선하는 것을 나타낸다. 또 다른 양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애를 물리적으로(예를 들면, 식별 가능한 증상의 안정화), 생리학적으로(예를 들면, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 이들 모두로 조절하는 것을 나타낸다. 또 다른 양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애의 발현 또는 발달 또는 진행을 예방 또는 지연시키는 것을 나타낸다.
또한, 본 명세서 및 첨부되는 청구범위에서 사용되는 단수형 "a", "an" 및 "the"는 내용이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "억제제"에 대한 언급은 2개 이상의 이러한 억제제를 포함한다.
본 발명은 본 발명의 화합물의 제조방법에 관한 것이다. 화합물은 유기 합성의 적용 가능한 방법들 및 기술들 중 어느 것에 의해 제조될 수 있다. 많은 이러한 방법 및 기술은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 공지된 방법 기술들 중 일부는 문헌[Compendium of Organic Synthetic Methods, in 12 volumes (John Wiley & Sons, New York); Advanced Organic Chemistry, 5 ed. M. Smith & J. March (John Wiley & Sons, New York, 2001) and Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity. Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry, in 9 Volumes. Barry M. Trost, Editor-in-Chief (Pergamon Press, New York, 1993)]에 설명되어 있다.
본 발명의 화합물을 제조하기 위한 다수의 예시적인 방법은 이하의 일반 반응식 및 제조 실시예에 제공된다. 이러한 방법은 이러한 제조의 특성을 설명하고자 하는 것이며, 적용 가능한 방법의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 통상의 숙련된 유기 화학자에게 쉽게 명백할 대체 경로도 본 발명의 화합물 또는 이들의 중간체를 합성하는데 사용될 수 있다.
화학식 I의 화합물을 제조하기 위해 이하에 설명된 공정 과정에서, 원치 않는 부반응에 참여하기 쉬운 출발 물질의 관능 그룹, 특히 아미노, 아미드, 카복시, 하이드록시 및 포스페이트 그룹은, 유기 합성에서 통상적으로 사용되는 적합한 통상적인 보호 그룹에 의해 보호될 수 있다. 이러한 보호 그룹은 이미 전구체에 존재할 수 있으며, 이들은 원치 않는 2차 반응, 예를 들면, 아실화, 에테르화, 에스테르화, 알킬화, 산화, 환원, 용매 분해(solvolysis) 등으로부터 해당 관능 그룹을 보호하고자 하는 것이다. 특정 경우에, 보호 그룹은 추가로 반응이 선택적으로, 예를 들면, 위치 선택적으로 또는 입체 선택적으로 진행되게 할 수 있다. 이는, 예를 들면 산 처리, 불소 처리, 용매 분해, 환원 또는 광분해에 의해 바람직하지 않은 2차 반응이 발생하지 않고 쉽게 제거될 수 있는, 보호 그룹의 특징이다. 이러한 보호 그룹에 의한 관능 그룹의 보호, 보호 그룹 자체 및 보호 그룹을 제거하기 위한 반응은, 표준 작업서, 예를 들면, 문헌[T.W. Greene and P. G. M. Wuts "Protective Groups in Organic Synthesis" John Wiley & Sons, Inc., New York 1999]에 개시되어 있다.
약어
상기 정의 이외에, 상기 합성 반응식 및 하기 실시예에서 다음 약어가 사용된다. 본원에서 사용되는 약어가 정의되지 않은 경우 일반적으로 허용되는 의미를 갖는다.
Ac 아세틸
Ac2O 아세트산 무수물
AcOH 아세트산
Bn 벤질
Bz 벤조일
DCM 디클로로메탄
DEAD 디에틸 아조디카복실레이트
DIPEA 디이소프로필에틸아민
DMAP 4-디메틸아미노피리딘
DMF N,N-디메틸포름아미드
Et 에틸
EtOAc 에틸 아세테이트
Et3N 트리에틸아민
EtOH 에탄올
Et2O 디에틸 에테르
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
i-Pr 이소프로필
LC 액체 크로마토그래피
LCMS 액체 크로마토그래피-질량 분광법
Me 메틸
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
MS 질량 분광법
MTBE 메틸 tert. 부틸 에테르
NP HPLC 정상 HPLC
on 밤새
p.ether 석유 에테르
Pg 보호 그룹
Ph 페닐
rt 실온
SOR 특정 광학 회전
THF 테트라하이드로푸란
TEA 트리에틸아민
TFA 트리플루오로아세트산
TFAA 트리플루오로아세트산 무수물
TIPS 트리이소프로필실릴
TLC 박막 크로마토그래피
TMS 트리메틸실릴
예시된 화학적 화합물의 화학명과 상응하는 상기 예의 구조 사이에 불일치가 있는 경우, 화학적 구조는 상기 예의 화학적 화합물을 결정하는 데 사용된다.
본 발명의 화합물의 일반적인 합성
본 발명의 화합물 및 이들 화합물의 합성에 유용한 중간체는, 문헌 절차에 따라 그리고/또는 일반적인 합성 반응식에 예시된 바와 같이, 그리고 당업자에게 공지된 다양한 방법 및 기술을 사용하여 본원의 이하의 실험 부분에 상세히 설명 된 바와 같이 제조될 수 있다. 이하에 나타내고 개시된 일반적인 합성 반응식 및 제조 실시예는 본 발명의 화합물에 대한 일반적인 합성 경로를 예시한다. 통상의 숙련된 유기 화학자에게 명백한 바와 같이, 다르게는 전체 화합물을 제조하기 위해 또는 화합물의 다양한 부분에 대해 다른 경로가 사용될 수 있다. 사용되는 출발 물질 및 시약은 상업적 공급 업체로부터 입수할 수 있거나, 당업자에게 널리 공지된 방법을 사용하여 문헌 절차에 따라 제조할 수 있다.
반응을 방해할 수 있는 임의의 빌딩 블록 또는 중간체에 임의의 관능 그룹이 존재하는 경우, 이들은 원치 않는 부반응을 회피하기 위해 반응 동안 적절하게 보호되고, 합성의 종료에서 탈보호된다. 사용할 수 있는 적절한 보호 그룹은 문헌, 예를 들면 문헌[Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, New York (1981)]에 광범위하게 설명되어 있다.
본 발명의 화합물은 2,2-(비스하이드록시메틸)메틸렌사이클로프로판 뉴클레오시드 유사체의 2개의 알콜에 원하는 그룹을 도입함으로써 제조된다. 2개의 1차 하이드록시 그룹에 상이한 그룹들이 도입될 수 있게 하기 위해 보호 그룹 전략을 사용해야 한다. Rx가 에스테르, 즉, 화학식 -OC(=O)CRy의 그룹인 화학식 I의 화합물에 대한 일반적인 경로가 반응식 1에 예시되어 있다.
반응식 1
Figure pct00022
모노아실화 화합물(1B)은 오르토에스테르의 형성 후 오르토에스테르를 개방함으로써 편리하게 수득된다. 일반적으로, 오르토에스테르는, 예를 들면, p-톨루엔 설폰산 등과 같은 산의 존재 하에, 산성 조건 하의 원하는 트리메틸 오르토알카노에이트와 디올(1A)의 반응에 의해 형성된다. 오르토에스테르는 물, 예를 들면, 수성 아세트산의 존재 하에 산으로 처리하여, 입체 이성질체들의 혼합물로서 원하는 모노아실화 화합물을 제공함으로써 개방된다. 이어서, 포스포라미데이트 모이어티는, 포스포라미데이트 뉴클레오시드 분야에 공지된 방법론을 사용하여, 예를 들면, 염기의 존재 하에 알콜(1B)을 적절한 인산화제(1C)와 축합시킴으로써 도입된다. 예를 들면, 원하는 포스포라미데이트의 펜타플루오로 페놀과 같은 인산화제, 또는 이탈 그룹이 클로라이드와 같은 할로겐, 또는 p-니트로페놀과 같은 활성화된 페놀, 또는 모노클로로페놀, 디클로로페놀 또는 트리클로로페놀 또는 펜타클로로페놀 등과 같은 할로겐화 페놀인 인산화제를 사용할 수 있다. 이러한 축합에 적합한 염기는 예를 들면, 특히 p-니트로페놀 포스포라미데이트의 형성에 유용한 N-메틸이미다졸(NMI), 또는 펜타플루오로 페놀 포스포라미데이트의 형성에 특히 유용한 tert. 부틸마그네슘 클로라이드 등과 같은 그리냐르 시약을 포함한다. 이어서, 수득된 사이클로프로펜 포스포라미데이트 유도체(1D)의 이성질체 혼합물의 입체 이성질체는 임의의 적합한 분리 방법, 예를 들면 키랄 HPLC 또는 SFC를 사용하여 분리하여, 분리된 이성질체(1E-R 및 1E-S)를 제공한다. 바람직하게는, 키랄 인산화제가 사용된다.
당업자에게 명백한 바와 같이, 이성질체들의 분리는 다르게는 포스포라미데이트 모이어티의 도입 전에 실시될 수 있다. 이어서, Rx가 화학식 -OC(=O)Ry의 그룹인 화학식 I의 화합물은 반응식 2에 스케치된 바와 같이 수득된다.
반응식 2
Figure pct00023
Ry가 메틸인 모노아실화 유도체(2A-S)의 S-이성질체에 대한 다른 접근법에서, 디올(1A)은 당업계에 널리 공지된 표준 방법을 사용하여 디아세틸화된 후, 단 하나의 아세틸 그룹의 선택적 탈아세틸화는 효소 반응에 의해 영향을 받는다.
Rx가 화학식 -OC(=O)CH(Ry)NH2의 그룹인 본 발명의 화합물은 일반적으로, 중간체 직교 보호된 사이클로프로필메틸렌 뉴클레오시드 유사체로부터 제조된다. 이러한 화합물에 대한 일반적인 경로는 반응식 3에 설명되어 있다.
반응식 3
Figure pct00024
모노아세틸화 사이클로프로필메틸렌 유도체(3B)는 일반적으로 상기 기재된 바와 같이 디올(3A)로부터, 즉, 산의 존재 하에 트리메틸오르토아세테이트와의 반응 후, 수성 조건, 예를 들면 수성 아세트산에서 산 처리에 의해 실시되는 오르토에스테르의 개방에 의해, 또는 선택적 효소적 모노-탈아세틸화에 의한 하이드록시 그룹 모두의 아세틸화에 의해 수득된다. 오르토에스테르 경로가 사용되는 경우, 입체 이성질체는 적절한 키랄 분리 방법, 예를 들면, 키랄 HPLC 또는 SFC를 사용하여 분리될 수 있거나, 또는 합성은 이성질체들의 혼합물 및 합성의 후반 단계에서 실시되는 분리로 계속될 수 있다. 이어서, 유리 알콜은, 도입된 Rx 그룹에 영향을미치지 않고 후속적으로 제거될 수 있는 보호 그룹으로 보호된다. 예를 들면, 테트라하이드로피라닐과 같은 아세탈, 벤질 또는 이의 유도체 또는 트리틸 또는 이의 유도체와 같은 에테르 또는 유사한 것이 보호 그룹으로서 사용될 수 있다. 표준 방법, 일반적으로 염기성 조건, 예를 들면, MeOH 등 중의 NaOMe 또는 NH3를 사용한 후, 염기, 일반적으로 트리에틸아민, 디이소프로필아민 등과 같은 3급 아민의 존재 하에, 표준 펩티드 커플링 조건에 의해, 즉, HOBt, EDAC 또는 HATU와 같은 펩티드 커플링제 또는 유사한 것의 영향을 받는 아미노산의 커플링에 의한 아세테이트의 제거는, 아실화된 유도체(3E)를 제공한다. 아세탈 또는 트리틸 유도체의 경우의 산성 처리와 같이, 사용되는 보호 그룹에 따라 적절한 조건을 사용 후, 상기 설명된 바와 같이 포스포라미데이트 뉴클레오시드 분야에 공지된 방법론을 사용하는 인산화 후, N-보호 그룹의 제거에 의한 하이드록시 보호 그룹의 제거는, 포스포라미데이트(3F)를 제공한다.
Rx가 화학식 -OCH2OC(=O)Ry의 그룹인 본 발명의 화합물은 일반적으로, 도입된 Rx에 영향을 미치지 않고 제거될 수 있는 보호 그룹을 사용하여, 앞서 기재된 것과 유사한 방식으로 수득된 직교 보호된 중간체로부터 제조된다. 이러한 목적에 유용한 보호 그룹은 당업자에게 공지된다. 예를 들면, 모노메톡시트리틸 또는 디메톡시트리틸, 또는 p-메톡시벤질 그룹이 사용될 수 있다. 일반적인 경로는 반응식 4에 설명되어 있다.
반응식 4
Figure pct00025
DIEA 또는 이와 유사한 것의 존재 하에, 승온 하에 알콜(3D)과 클로로알킬 에스테르(11b) 또는 에스테르의 반응은 아세탈 유도체(4A)를 제공한다. 보호 그룹의 제거에 이어 상기 개시한 인산화는 포스포라미데이트(4B)를 제공한다.
본 발명의 화합물의 제조에 사용되는 포스포라미데이트 시약은 문헌에 광범위하게 설명되어 있다. 예를 들면, 포스포라미도클로리데이트는 반응식 5에 예시된 바와 같이 2단계 반응으로 제조될 수 있다.
반응식 5
Figure pct00026
Et2O와 같은 불활성 용매 중에서 P(=O)Cl3와 원하는 알콜 R1OH의 축합은 아릴옥시 또는 헤테로아릴옥시 포스포로디클로리데이트(5A)를 제공한다. 아미노산 유도체(5B)와의 후속적인 반응은 포스포라미도클로리데이트(5C)를 제공한다.
원하는 경우, 수득된 포스포라미도클로리데이트(5C)는 일반적으로 반응식 6에 예시된 바와 같이 클로로 이탈 그룹 대신 이탈 그룹으로서 활성화된 페놀, 예를 들면 펜타플루오로 페놀 또는 p-NO2-페놀을 갖는 인산화제로 전환될 수 있다.
반응식 6
Figure pct00027
상기 전환은, 트리에틸아민 또는 이와 유사한 염기의 존재 하에, 클로로 유도체(5C)와 원하는 활성화된 페놀, 예를 들면 펜타플루오로 페놀 또는 p-니트로페놀의 반응에 의해 편리하게 실시되어, 인산화제(6A 및 6B)를 제공한다.
상기 설명한 공정에서 생성되는 거울상 이성질체, 부분 입체 이성질체, 시스/트랜스 이성질체들의 혼합물은 분리의 성질에 따라, 키랄 염 기술, 정상, 역상, 키랄 컬럼을 사용하는 크로마토그래피 또는 초임계 유체 크로마토그래피(SFC)에 의해 이의 단일 성분들로 분리될 수 있다.
상기 나타낸 설명 및 화학식에서, 다양한 R-그룹 및 기타 변수는 달리 지시 된 경우를 제외하고는 상기 정의된 바와 같다는 것을 이해해야 한다. 또한, 합성의 목적으로, 일반 반응식의 화합물은 본원에 정의되는 바와 같이, 화학식 I의 화합물, 화학식 I의 화합물의 서브 그룹 및 화학식 I의 화합물에 대한 중간체 및 이에 대한 하위 그룹의 일반적인 합성 방법론을 설명하기 위해 선택된 라디칼로 대표적일 뿐이다.
따라서, 본 발명의 화합물 및 중간체의 다양한 양태는 지금부터 하기 실시예에 의해 설명된다. 실시예는 본 발명의 특정 양태를 추가로 예시하고자 할 뿐이며, 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.
화학 실시예 및 중간체
당업자에게 널리 공지된 바와 같이, 공기 또는 습기로부터 반응 성분을 보호할 필요가 있는 경우, 반응은 질소 및 아르곤 분위기를 포함하지만 이에 제한되지 않는 불활성 분위기에서 실시된다. 온도는 섭씨(℃)로 제공된다. 용액 퍼센티지 및 비는 달리 명시되지 않는 한 용적 대 용적의 관계를 나타낸다. 하기 실시예에 사용되는 반응물은 상업적 공급 업체로부터 입수할 수 있거나, 본원에 기재된 바와 같이 상업적으로 입수 가능한 출발 물질로부터 또는 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.
중간체를 포함하는 본 발명의 화합물은 본원의 실시예 및 일반 반응식에 기재된 바와 같이 제조된다. 본원에 기재된 바와 같이 본 발명의 화합물을 제조하기 위해 유사한 합성 경로가 적절한 변형과 함께 사용될 수 있다는 것은 당업자에게 명백하다. 본원에 기재된 반응의 진행은 예를 들면 LC, GC 또는 TLC에 의해 적절하게, 그리고 당업자가 쉽게 알 수 있는 바와 같이 따르며, 반응 시간 및 온도는 이에 따라 조정될 수 있다.
핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼은 CDCl3(중수소화 클로로포름) 또는 DMSO-d6(중수소화 DMSO, 디메틸-d6 설폭사이드)를 용매로 사용하여, 1H NMR의 경우 500MHz에서 그리고 13C NMR의 경우 126MHz에서 작동하는 Bruker 분광계에서 기록되었다. 화학적 이동(δ)은 내부 참조로 사용된 테트라메틸실란(TMS) 또는 잔류 용매 피크에 대한 백만분율(ppm)로 보고된다. 커플링 상수 J는 Hertz로 보고된다.
표시된 NMR 이동은, 잔류 용매 및/또는 불순물이 존재할 수 있고, 적분값 및 화학적 이동이 완전히 정확하지 않을 수 있으며, 신호 대 잡음비가 낮은 신호가 광범위할 수 있으며 잔류 용매의 신호와 중첩될 수 있고, 다중성이 잘못 해석되었을 수 있는, 자동화된 프로세스를 사용하여 수득된 것이다. 그럼에도 불구하고, 자동화된 프로세스로 수득된 모든 스펙트럼은 각각의 분석된 화합물의 구조를 지원한다.
화합물명은 Cambridgesoft사의 ChemDraw Ultra 소프트웨어, 버전 12.0.2에서 생성되었다.
방법 A 내지 E 중 어느 하나를 사용하여 제조용 HPLC를 실시했다.
제조용 HPLC 방법 A
컬럼: Kromosil C18 (25X150)mm 10μ
이동상: H2O 중 10mM ABC:MeCN(구배)
제조용 HPLC 방법 B
컬럼: Kromosil C18 (25x150)mm 10μ
이동상: H2O 중 0.1% 포름산:MeCN(구배)
제조용 HPLC 방법 C
컬럼: X-Select C18 (19X150)mm 5μ
이동상: H2O 중 10mM ABC:MeCN(구배)
제조용 HPLC 방법 D
컬럼: X-Select C18 (19X150)mm 5μ
이동상: H2O 중 0.1% 포름산:MeCN(구배)
제조용 HPLC 방법 E
컬럼: X-Bridge C18 (30X250)mm 5μ
이동상: H2O 중 0.1% 포름산:MeCN(구배)
제조용 HPLC 방법 F
컬럼: X-Bridge Amide C18 (19X250)mm 5μ
이동상: H2O 중 10mM ABC:MeCN(구배)
제조용 HPLC 방법 G
컬럼: YMC TRIAT C18 (25X150)mm 10u
이동상: H2O 중 10mM ABC:MeCN(구배)
제조용 HPLC 방법 H
컬럼: YMC TRIAT C18 (25X150)mm 10u
이동상: H2O 중 0.1% 포름산:MeCN(구배)
중간체 1
Figure pct00028
(S)-메틸 4-메틸-2-(((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)펜타노에이트(I-1)
트리에틸아민(11mL, 79mmol)을, DCM(70mL) 중 (S)-메틸 2-아미노-4-메틸펜타노에이트 하이드로클로라이드(6.5g, 35mmol)의 교반된 용액에 질소 하에 -70℃에서 30분 동안 적가했다. DCM(70mL) 중 페닐 포스포디클로리데이트(5.4mL, 36mmol)를 -70℃에서 45분에 걸쳐 적가한 다음, 반응 혼합물을 -70 내지 0℃에서 3시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 DCM(60mL) 중 펜타플루오로 페놀(6.3g, 34mmol) 및 트리에틸아민(5.5mL, 40mmol)의 용액을 45분 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음 농축하고, 잔류물을 tert-부틸 메틸 에테르(100mL)에 넣고, 불용물을 셀라이트를 통해 여과제거하고 여액을 감압 하에 농축했다. 조 화합물을 p.에테르 중 15 내지 20% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제시켰다. 순수한 분획들을 풀링하고(pooled) 감압 하에 농축시켰다. 수득된 라세미 화합물을 p.에테르 중 20% EtOAc(70mL)에 용해시키고 16시간 동안 냉장고에 보관하여, 이렇게 형성된 결정을 여과제거하여 표제 화합물(3g, 18%)을 고체로 제공했다. LC-MS는 99.7%의 원하는 화합물의 질량을 나타냈다. MS (ES+) m/z 468.28 [M+H]+.
중간체 2
Figure pct00029
(S)-이소프로필 4-메틸-2-(((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)펜타노에이트(I-2)
DCM(50mL) 중 (S)-이소프로필 2-아미노-4-메틸펜타노에이트(3.8g, 18mmol)의 교반된 용액에 Et3N(5.6mL, 40mmol)을 -78℃에서 10분 동안 적가하였다. DCM(30mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(2.7mL, 18mmol)를 30분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 추가로 30분 동안 교반한 다음, 2시간 동안 0℃로 가온하고 추가로 1시간 동안 교반했다. DCM(20mL) 중 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페놀(3.0g, 16mmol) 및 Et3N(2.0mL, 20mmol)의 용액을 상기 반응 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 MTBE(100mL)에 용해시키고, 불용물을 여과제거하고 여액을 농축시켰다. 조 화합물을 p.에테르 중 10% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 풀링하고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 라세미 혼합물(4.5g, 44%의 원하지 않는 이성질체 및 55%의 원하는 이성질체)을, 헥산(100mL) 중 20% EtOAc에 용해시키고 0℃에서 2시간 동안 정치시켰다. 이렇게 형성된 결정을 여과제거하고, 차가운 헥산(2x30mL)으로 세척하고 감압 하에 건조시켜 표제 화합물(2.0g, 22%, 키랄 순도 98.9%)을 제공했다. MS (ES+) m/z 496.15 [M+H]+. LCMS는 99%의 원하는 생성물을 보여주었다.
중간체 3
Figure pct00030
단계 a) (S)-(S)-펜탄-2-일 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-메틸부타노에이트(I-3a)
DCM(100mL) 중 Boc-Val-OH(7.0g, 32mmol) 및 (S)-펜탄-2-올(3.4mL, 31mmol)의 교반된 용액에 DMAP(400mg, 3.2mmol), EDCI(6.8g, 35mmol)를 실온에서 첨가했다. 용액을 16시간 동안 교반한 다음, DCM(100mL)으로 희석하고, 물(2x50mL), 포화 중탄산나트륨 용액(2x50mL), 2M HCl(2x50mL) 및 염수(100mL)로 세척했다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 p.에테르 중 5 내지 10% 에틸 아세테이트로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제시켜, 표제 화합물(7.5g, 80%)을 제공하였다. MS (ES+) m/z 288.29 [M+H]+.
단계 b) (S)-(S)-펜탄-2-일 3-메틸-2-(((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)부타노에이트(I-3b)
무수 1,4-디옥산(30mL) 중 화합물 I-3a(7.5g, 26mmol)의 교반된 용액에, 디옥산(34mL, 135mmol) 중 4.0M HCl을 실온에서 첨가하였다. 용액을 2시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축하고 톨루엔(2x50mL)으로 공-증류시켰다. 잔류물을 DCM(50mL)에 용해시키고 질소 하에 넣고 -70℃로 냉각시켰다. Et3N(8.2mL, 58mmol)을 10분 동안 적가한 다음, DCM(20mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(3.8mL, 26mmol) 용액을 적가했다. 반응 혼합물을 -70 내지 0℃에서 3시간 동안 교반한 다음, DCM(30mL) 중 펜타플루오로 페놀(4.8g, 26mmol) 및 Et3N(4.0mL, 29mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 잔류물을 tert. 부틸 메틸 에테르(100mL)에 용해시키고 불용물을 여과제거했다. 필터를 tert. 부틸 메틸 에테르(2x30mL)로 세척하고 합쳐진 여액을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 헥산 중 10% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 풀링하고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 라세미 혼합물을 p. 에테르(150mL) 중 15% EtOAc에 용해시키고 밤새 냉장고에 정치시켰다. 이렇게 형성된 결정을 여과제거하고 p. 에테르(100mL)로 세척하고 감압 하에 건조하여 표제 화합물(3.5g, 26%, 키랄 순도 98.1%)을 제공했다. MS (ES+) m/z 510.16 [M+H]+.
중간체 4
Figure pct00031
(S)-2-프로필펜틸 2-(((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-4)
Et3N(12.3mL, 88mmol)을, DCM(100mL) 중 (S)-2-프로필펜틸 2-아미노프로파노에이트(10g, 42mmol)의 교반된 용액에 -78℃에서 적가한 다음, DCM(70mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(1.4mL, 42mmol)의 용액을 적가했다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 다음, 2시간 동안 0℃로 가온한 다음 0℃에서 추가로 1시간 동안 교반했다. DCM(80mL) 중 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페놀(7g, 38mmol) 및 Et3N(6.5mL, 46mmol)의 용액을 0℃에서 적가한 다음 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 생성물을 MTBE(200mL)에 용해시키고, 불용물을 여과제거하고 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 헥산 중 10% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 풀링하고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 라세미 화합물을 n-펜탄(100mL) 중 20% EtOAc에 용해시키고 실온에서 2시간 동안 정치시킨 다음, 이렇게 형성된 결정을 여과제거하고 차가운 n-펜탄(2x30mL)으로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 제공했다(3.1g, 14%, 키랄 순도 99%). MS (ES+) m/z 524.17 [M+H]+.
Figure pct00032
중간체 7
Figure pct00033
단계 a) (S)-(S)-펜탄-2-일 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-4-메틸펜타노에이트(I-7a)
DCM(50mL) 중 (tert-부톡시카보닐)-L-류신(5.0g, 22mmol) 및 (S)-펜탄-2-올(2.1mL, 19mmol)의 교반된 용액에 DMAP(400mg, 3.24mmol) 및 EDC·HCl(5.0g, 26mmol)을 첨가했다. 용액을 실온에서 18시간 동안 교반한 다음, DCM(200mL)으로 희석하고 물(100mL) 및 염수(100mL)로 세척했다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과한 후 감압 하에 농축하였다. 수득된 조 화합물을 p. 에테르 중 5 내지 10% EtOAc의 구배로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 제공했다(4.0g, 61%).
단계 b) (S)-(S)-펜탄-2-일 4-메틸-2-(((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)펜타노에이트(I-7b)
디옥산(14mL, 56mmol) 중 4M HCl을, 1,4-디옥산(40mL) 중 화합물 I-7a(4.0g, 13mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 잔류물을 DCM(50mL)에 용해시키고, 용액을 -78℃로 냉각시키고 Et3N(3.7mL, 26.50mmol)을 적가한 다음 DCM(25mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(1.9mL, 13mmol) 용액을 적가했다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 다음, 2시간 동안 0℃로 가온하고 0℃에서 추가로 1시간 동안 교반했다. DCM(25mL) 중 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페놀(2.1g, 11mmol) 및 Et3N(1.9mL, 14mmol)의 용액을 0℃에서 반응 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음 MTBE(100mL)로 희석하고 10분 동안 교반했다. 침전된 불용물을 여과제거하고 여액을 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 헥산 중 20% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 라세미 혼합물을 p. 에테르 중 10% EtOAc(50mL)에 용해시키고 4시간 동안 냉장고에 정치시켰다. 이렇게 형성된 결정을 여과제거하고 p. 에테르(50mL)로 세척하고 진공 하에 건조시켜, 표제 화합물(1.5g, 22%)을 제공했다. MS (ES+) m/z 524.21 [M+H]+. 키랄 HPLC는 99.75%의 원하는 이성질체를 나타냈다.
중간체 8
Figure pct00034
단계 a) (S)-2-에틸부틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-메틸부타노에이트(I-8a)
DCM(20mL) 중 N-Boc-L-발린(4.68g, 21.5mmol)의 교반된 용액에 EDC·HCl(4.13g, 21.5mmol) 및 4-디메틸 아미노 피리딘(0.24g, 2.0mmol)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 2-에틸부탄-1-올(2.41mL, 19.6mmol)을 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, DCM(150mL)으로 희석하고 물(200mL) 및 염수(200mL)로 세척하고, 황산나트륨에서 건조시키고 농축시켰다. 조 화합물을 헥산 중 10% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다. (ES+) m/z 302.26 [M+H]+.
단계 b) (S)-2-에틸부틸 2-((비스(4-니트로페녹시)포스포릴)아미노)-3-메틸부타노에이트(I-8b)
pTSA 1수화물(1.8g, 9.5mmol)을, EtOAc(25mL) 중 I-8a(2.6g, 8.6mmol)의 교반된 용액에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고 톨루엔(x2)과 공-증류하고 n-펜탄으로 세척하였다. 수득된 잔류물과 비스(4-니트로페닐)포스포로클로리데이트(3.0g, 8.3mmol)를 DCM(60mL)에 0℃에서 용해시키고, Et3N(2.3mL, 17mmol)을 적가하였다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, DCM(2x20mL) 및 물(20mL)로 추출했다. 유기층을 NaHCO3 aq.(20mL) 및 염수(20mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과 및 농축하여 표제 화합물(2 g)을 제공했다.
중간체 9
Figure pct00035
단계 a) (S)-(S)-펜탄-2-일 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트(I-9a)
DCM(50mL) 중 (tert-부톡시카보닐)-L-알라닌(4.5g, 24mmol) 및 (S)-펜탄-2-올(3.1mL, 29mmol)의 교반된 용액에, EDC·HCl(5.1g, 26mmol) 및 DMAP(0.3g, 2mmol)를 0℃에서 첨가했다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, DCM(50mL)으로 희석하고 물(2x50mL) 및 염수(2x50mL)로 세척하고, 황산나트륨에서 건조하고, 여과하고 농축하였다. 조 화합물을 헥산 중 10% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(3.5g)을 제공했다.
단계 b) (S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-9b)
1,4-디옥산(15mL) 중 화합물 I-9a(3.5g, 13.5mmol)의 교반된 용액에, 디옥산(14mL, 57mmol) 중 4M HCl을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 잔류물을 DCM(30mL)에 용해시키고, -78℃로 냉각시켰다. Et3N(3.9mL, 28mmol)을 적가한 다음, DCM(20mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(2.0mL, 13mmol) 용액을 적가했다. 반응 혼합물을 -78℃에서 추가로 30분 동안 교반한 다음, 2시간 동안 0℃로 가온하고, 추가로 1시간 동안 0℃에서 교반했다. DCM(20mL) 중 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페놀(2.2g, 12mmol) 및 Et3N(2.1mL,mmol)의 용액을 반응 혼합물에 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 3시간 후 감압 하에 농축하였다. 조 생성물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 헥산 중 10% EtOAc로 용리시켰다. 수득된 고체를 p. 에테르(100mL) 중 10% EtOAc에 용해시키고 실온에서 2시간 동안 정치시켰다. 이렇게 형성된 결정을 여과제거하고 p. 에테르(2x20mL)로 세척하고 진공 하에 건조시켜, 표제 화합물(1.3g, 20% 수율, 99.86% 키랄 순도)을 제공했다. LCMS (ES+) m/z 482.11 [M+H]+.
중간체 10
Figure pct00036
(Z)-(1-(하이드록시메틸)-2-((2-이소부티라미도-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메틸 아세테이트(I-10)
문헌[Li, Chengwei; Gentry, Brian G.; Drach, John C.; Zemlicka, Jiri in Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids (2009), 28(9), 795-808]에 의해 개시된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
중간체 11
Figure pct00037
(Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(I-11)
DMF(30mL) 중 (Z)-2-아미노-9-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온(500mg, 1.9mmol)의 교반된 용액에, 트리메틸 오르토부티레이트(1.2mL, 7.6mmol) 및 p-TSA(360mg, 1.9mmol)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 아세트산(물 중 80%, 50mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 10 내지 15% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(350mg, 5%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 334.30 [M+H]+.
중간체 12
Figure pct00038
단계 a) (Z)-(2-((2-이소부티라미도-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로판-1,1-디일)비스(메틸렌)디아세테이트(I-12a)
DMF(10mL) 중 화합물 I-10(100mg, 0.30mmol)의 교반된 용액에, DMAP(7mg, 0.06mmol) 및 아세트산 무수물(0.2mL, 2.1mmol)을 실온에서 첨가했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(110mg, 82%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 418.41 [M+H]+.
단계 b) (R,Z)-(1-(하이드록시메틸)-2-((2-이소부티라미도-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메틸 아세테이트(I-12b)
DMF(15mL) 중의 화합물 2a(110mg, 0.26mmol)의 교반된 용액에, 0.02M 포스페이트 완충액(pH 7, 110mL) 및 돼지 간 에스테라제(230mg)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 DCM 중 10% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획들을 풀링하고 감압 하에 농축시켰다. 키랄 HPLC는 91.7%의 원하는 이성질체를 나타냈다. 잔류물을 키랄 SFC로 정제하여, 표제 화합물(40mg, 39%)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 376.32 [M+H]+.
수득된 화합물을 LCMS, 1H NMR, 키랄 HPLC 및 비광회전(SOR: specific optical rotation)으로 분석하였다. 수득된 화합물의 SOR은 +26.52°(c 0.5, DMSO)인 것으로 확인되으며, 이는 R-이성질체(+21.7, c 1.0, DMSO, Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 28:795-808, 2009)에 대해 보고된 문헌 값에 따른다.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IC (21x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(100% EtOH)
총 유량: 60.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 234nm
스택 시간: 6.0분
로드/주입: 3.5mg
중간체 13
Figure pct00039
(Z)-(1-(하이드록시메틸)-2-((2-이소부티라미도-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메틸 아세테이트(I-13)
화합물은 문헌[Li, Chengwei; Gentry, Brian G.; Drach, John C.; Zemlicka, Jiri in Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids (2009), 28(9), 795-808]에 의해 개시된 바와 같이 라세미체로서 제조되었다. 2개의 입체 이성질체는 제조용 NP HPLC에 의해 분리되었다.
분획-1(200mg, 14%) 비광회전(SOR) +21.10°,
분획-2(230mg, 16%), SOR -19.79°.
이성질체의 키랄성은 실시예 12의 효소적으로 제조된 화합물(+26.52°)과 SOR을 비교하여 측정하였다.
제조용 NP HPLC 조건
컬럼: Chiralpak IC (150x4.6)mm: 3μ
이동상: 아세토니트릴 100%(등장성)
유속: 1.0mL/min
온도: 주위
단계 b) 2-아미노-9-((Z)-((2R)-2-(하이드록시메틸)-2-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온(I-13b)
DMF(10mL) 중 메탄설폰산(0.15mL, 2.4mmol)을, DMF(40mL) 중 화합물 I-13S(900mg, 2.4mmol) 및 3,4-디하이드로-2H-피란(4.3mL, 48mmol)의 교반된 용액에 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 트리에틸 아민(2.5mL)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 수득된 조 물질을 MeOH(80mL)에 용해시키고, 25% 수성 암모니아(65mL, 420mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 15% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(700mg, 69%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 348.38 [M+H]+.
중간체 14
Figure pct00040
단계 a) (R,Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(I-14)
라세미체 화합물 I-11(450mg)을 키랄 SFC로 정제하여, 피크-1(150mg, 23%)을 고체로 수득했다. 수득된 화합물을 광회전(SOR)으로 분석하였다. 수득된 화합물의 SOR은 +10.7°(0.44%, DMSO)로 확인되었으며, R-이성질체로 가정하였다.
중간체 15
Figure pct00041
(2S)-2-에틸부틸 3-메틸-2-(((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)부타노에이트(I-15)
표제 화합물을 I-4에 대해 기재된 방법에 따라 I-8a의 반응에 의해 제조하였다. 수율: 26%. LCMS (ES+) 524.29 [M+H]+. 키랄 HPLC는 99.11%의 원하는 이성질체를 나타냈다.
중간체 16
Figure pct00042
(2S)-이소프로필 2-(((4-(1-메틸사이클로프로필)페녹시)(퍼플루오로페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-16)
표제 화합물은 WO2015/034420에 기재된 바와 같이 제조하였다.
중간체 17
Figure pct00043
(2S)-메틸 2-(((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-17)
I-3 단계 b에 기재된 방법에 따라 (S)-메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트의 반응에 의해 표제 화합물을 제조하였다. 수율: 25%. LCMS (ES+) m/z 426.13 [M+H]+. 표제 화합물의 키랄 순도는 키랄 HPLC에 따라 99.5%였다.
중간체 18
Figure pct00044
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(4-브로모페녹시)(퍼플루오로페녹시)포스포릴)아미노)-4-메틸펜타노에이트(I-18)
I-7 단계 b에 기재된 방법에 따라 I-7a의 반응에 의해 표제 화합물을 제조하였다. LCMS (ES+) m/z 602.10 & 604.10 [M+H]+. 표제 화합물의 키랄 순도는 키랄 HPLC에 따라 99%였다.
중간체 19
Figure pct00045
단계 a) (Z)-(2-((2-이소부티라미도-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 아세테이트(I-19a)
3,4-디하이드로-2H-피란(5mL, 55.41mmol) 및 CH3SO3H(0.2mL, 3.5mmol)를, DMF(20mL) 중 화합물 I-11(1.3g, 3.5mmol)의 교반된 용액에 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, Et3N(5mL)을 첨가하고 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물(1.4g)을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS (ES+) m/z 460.29 [M+H]+.
단계 b) (Z)-2-아미노-9-((2-(하이드록시메틸)-2-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온 (I-19b)
MeOH(100mL) 중 화합물 I-19a(1.4g)의 교반된 용액에, 25% 수성 암모니아(150mL, 975mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반한 다음 실온에 도달하게 하고 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 DCM 중 15% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(850mg, 2단계에 걸쳐 71%)을 고체로서 수득하였다. MS (ES+) m/z 348.26 [M+H]+.
단계 c) (2S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(4-브로모페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-19c)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 4.3mL, 4.3mmol)를 DMF(30mL) 중 화합물 I-19b(300mg, 0.86mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(15mL) 중 화합물 I-5(580mg, 1.04mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축하고, 수득한 조 화합물을 DCM 중 10% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(350mg, 40%)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) m/z 723.21 & 725.22 [M+H]+.
단계 d) (S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(4-브로모페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-19d-1)
&
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((R,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(4-브로모페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-19d-2)
80% 아세트산(40mL, 558mmol) 중 화합물 I-19c(400mg, 0.553mmol)의 용액을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축했다. 조 화합물을 DCM 중 12% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물의 라세미 혼합물을 제공하였다. 혼합물을 제조용 SFC에 의해 분리하여 고체로서의 이성질체-1(80mg), 및 이성질체-2(100mg)를 제공했다.
방법 B를 사용하는 제조용 HPLC로 이성질체 2를 추가로 정제하여, 순수한 이성질체(52mg)를 고체로 제공했다.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 50.0%
공동 용매: 50.0%(100% IPA)
총 유량: 90.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 8.5분
로드/주입: 19.0mg
중간체 20
Figure pct00046
(S)-이소프로필 2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)-4-메틸펜타노에이트(I-20)
DMF(12mL) 중 I-13b(200mg, 0.576mmol)의 용액에 tert-부틸마그네슘 클로라이드(2.9mL, THF 중 1M, 2.9mmol)를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(8mL) 중의 I-2(343mg, 0.691mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 4% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획들을 풀링하고 농축하고, 잔류물을 80% 아세트산(37mL, 509mmol)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 풀링하고 농축하고, 잔류물을 방법 C를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(70mg, 45%)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 575.31 [M+H]+.
중간체 21
Figure pct00047
(2S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((1S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(4-브로모페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-21)
DMF(10mL) 중 I-13b(100mg, 0.288mmol)의 용액에 tert-부틸마그네슘 클로라이드(1.4mL, THF 중 1M, 1.4mmol)를 5분 동안 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반했다. 이어서, 무수 THF(5mL) 중 I-5(190mg, 0.345mmol)를 5분 동안 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 농축했다. 조 화합물을 DCM 중 7% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획들을 풀링하고 농축하고, 잔류물을 방법 C를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(60mg, 28%)을 백색 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 725.24 [M+H]+.
중간체 22
Figure pct00048
(S)-메틸 2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)-4-메틸펜타노에이트(I-22)
중간체 20에 대해 기재된 방법을 사용하여 I-13b 및 I-1로부터 표제 화합물을 제조하였다. 수율 21%. LCMS (ES+) m/z 631.44 [M+H]+.
중간체 25
Figure pct00049
(S)-이소프로필 2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(4-(1-메틸사이클로프로필)페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-25)
중간체 20에 대해 기재된 방법을 사용하여 I-13b 및 I-4로부터 표제 화합물을 제조하였다. 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 최종 화합물을 정제하였다. 26% 수율. LCMS (ES+) m/z 587.26 [M+H]+.
중간체 26
Figure pct00050
(S)-메틸 2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(I-26)
중간체 20에 대해 기재된 방법을 사용하여 I-13b 및 I-17로부터 표제 화합물을 제조하였다. 제조용 SFC로 최종 화합물을 정제하였다. 5.4% 수율, LCMS (ES+) m/z 505.31 [M+H]+.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(100% MeOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 7.5분
로드/주입: 2.3mg
중간체 27
Figure pct00051
(Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(I-27)
DMF(30mL) 중 (Z)-2-아미노-9-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온(500mg, 1.9mmol)의 교반된 용액에 트리메틸 오르토부티레이트(0.5mL, 2.8mmol) 및 pTSA(37mg, 0.19mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 트리에틸 아민(0.5mL)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 물(75mL) 중 80% 아세트산에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(350mg, 55%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 34.23 [M+H]+.
중간체 28
Figure pct00052
단계 a) 디벤질 1-((벤질옥시)메틸)-2-브로모사이클로프로판-1,2-디카복실레이트(I-28a)
n-BuLi(헥산 중 1.6M)(520mL, 829mmol)를, -78℃의 무수 THF(1,000mL) 중 벤질 알콜(86mL, 829mmol)의 용액에 아르곤 하에 -78℃에서 1시간에 걸쳐 적가했다. 용액을 -78℃에서 3시간 동안 교반한 다음, THF(500mL) 중 화합물 벤질 2-브로모아크릴레이트(400g, 1,659mmol)의 용액을 -78℃에서 1시간에 걸쳐 첨가하고, 실온에서 4시간 및 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물에, 포화 염화암모늄 용액(700mL)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 EtOAc(2x1,500mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(1,000mL), 염수(1,000mL)로 세척하고, 건조하고(Na2SO4), 여과 및 농축하였다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 pet 에테르 중 15% EtOAc로 용리시켜, 표제 화합물(270g)을 제공하였다. MS (ES+) 511.09 [M+H]+. 조 화합물을 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 b) (1-((벤질옥시)메틸)-2-브로모사이클로프로판-1,2-디일)디메탄올(I-28b)
DIBAL-H(1M)(2,120mL, 2,120mmol)를, 아르곤 하에 무수 THF(2,300mL) 중 화합물 I-28a(270g, 530.05mmol)의 용액에 0℃에서 2시간 동안 적가했다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 포화 염화암모늄 용액(700mL)을 0℃에서 첨가하고, 침전된 고체를 여과하고 EtOAc(2x1,500mL)로 세척하였다. 합쳐진 유기층을 물(700mL), 염수(700mL)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 및 농축시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 pet 에테르 중 50% EtOAc로 용리하여, 표제 화합물(95g, 54%)을 제공했다. MS (ES+) 301.09 [M+H]+.
단계 c) (1-((벤질옥시)메틸)-2-브로모사이클로프로판-1,2-디일)비스(메틸렌) 디아세테이트(I-28c)
피리딘(128mL, 1,577mmol) 및 아세트산 무수물(68.5mL, 725.5mmol)을, DCM(450mL) 중의 화합물 I-28b(95g, 315.43mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 30분에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 0℃에서 2N HCl(500mL)로 켄칭시키고 혼합물을 DCM(2x400mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(500mL), 염수(500mL)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 및 농축하여, 표제 화합물(120g, 88%)을 제공했다. MS (ES+) 404.15 [M+H]+
단계 d) (1-((벤질옥시)메틸)-2-메틸렌사이클로프로필)메탄올(I-28d)
Zn 분말(163g, 2,492mmol)[상업적인 Zn 분말(200g)과 2M HCl(300mL)을 실온에서 1시간 동안 교반하여 활성화한 다음, Zn을 여과하고 물(2x400mL), 아세톤(2x400mL)으로 세척하고, 진공 하에 밤새 건조함]을, EtOH(800mL) 중 화합물 I-28c(120g, 311.5mmol)의 교반된 용액에 실온에서 15분에 걸쳐 부분 방식으로(portionwise) 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각하고 셀라이트 베드를 통해 여과하고 EtOAc(2x200mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 pet 에테르 중 20% EtOAc로 용리시켜, 표제 화합물(34g, 47%)을 제공했다. MS (ES+) 205.25 [M+H]+.
단계 e) (2-메틸렌사이클로프로판-1,1-디일)디메탄올(I-28e)
BCl3-DMS(DCM 중 2M)(100mL, 200mmol)를, DCM(400mL) 중 화합물 I-28d(34g, 166.5mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 1시간에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 여과하고 DCM 중 10% MeOH(2X500mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 pet 에테르 중 80% EtOAc로 용리시켜, 표제 화합물(18g, 95%)을 제공했다.
단계 f) (2-메틸렌사이클로프로판-1,1-디일)비스(메틸렌) 디아세테이트(I-28f)
아세트산 무수물(104.2mL, 1,104mmol)을, 피리딘(45mL, 552mmol) 중 화합물 I-28e(18g, 157.7mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 30분에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 0℃에서 물(200mL)로 켄칭시키고 DCM(2X500mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 2N HCl(2x200mL), 물(200mL), 염수(200mL)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 및 농축하였다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 pet 에테르 중 15% EtOAc로 용리하여, 표제 화합물(27g, 81%)을 제공했다. 암모늄 어덕트로서 MS (ES+) 216.27 [M+H]+.
단계 g) (2-브로모-2-(브로모메틸)사이클로프로판-1,1-디일)비스(메틸렌) 디아세테이트(I-28g)
브롬(7mL, 136.22mmol)을, 사염화탄소(250mL) 중 화합물 I-28f(27g, 136.22mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 30분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, DCM(300mL)으로 희석하고 티오황산나트륨 용액(2X300mL)으로 세척했다. 합쳐진 유기층을 포화 중탄산나트륨 용액(300mL), 물(300mL), 염수(300mL)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 및 농축하였다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 pet 에테르 중 20% EtOAc로 용리시켜, 표제 화합물(40g, 74%)을 제공했다. 암모늄 어덕트로서 MS (ES+) 376.02 [M+H]+.
단계 h) (Z)-4-아미노-1-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)피리미딘-2(1H)-온(I-28h)
건조된 K2CO3(9.3g, 67mmol) 및 N4-벤조일시토신(2.4g, 11.2mmol)을, DMF(400mL) 중 화합물 I-28g(4g, 11.2mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 50℃로 냉각시키고 MeOH(40mL)를 첨가하였다. 생성되는 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각하고 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 10% MeOH로 용리하여, 표제 화합물(2.4g)을 E 이성질체와 Z 이성질체들의 혼합물로서 수득하였다. MS (ES+) 224.2 [M+H]+.
단계 i) (Z)-N-(1-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리미딘-4-일)벤즈아미드(I-28i)
벤조산 무수물(7.3g, 32.3mmol)을, EtOH(300mL) 중 화합물 I-28h(2.4g, 10.8mmol)의 교반된 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 5% MeOH로 용리시켰다. 잔류물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로추가로 정제하고 DCM 중 5% MeOH로 용리하여, 표제 화합물(500mg, 14%)을 제공했다. MS (ES+) 328.29 [M+H]+.
단계 j) (Z)-4-아미노-1-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)피리미딘-2(1H)-온(I-28j)
MeOH(50.2mL) 중 7M NH3 중 화합물 I-28i(500mg, 1.53)의 교반된 용액을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 침전된 고체를 여과하고 건조시켰다. 잔류물을, 이동상으로서 H2O 중 10mM NH4HCO3:MeCN의 구배를 사용하는 X-bridge C18 컬럼 (30x250)mm 5u에서의 제조용 HPLC에 의해 추가로 정제하여, 표제 화합물(80mg)을 고체로서 제공하였다. 여액을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 15% MeOH로 용리하여, 또 다른 로트의 표제 화합물(80mg)을 제공했다. MS (ES+) 224.27 [M+H]+.
단계 k) (Z)-(2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(I-28k)
DMF(10mL) 중 화합물 I-28j(130mg, 0.6mmol)의 교반된 용액에, 트리메틸 오르토이소부티레이트(0.14mL, 0.9mmol) 및 pTSA(11mg, 0.1mmol)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, Et3N(0.5mL)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 물 중 80% 아세트산(15mL)에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 7% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(180mg, 97%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 294.26 [M+H]+.
중간체 29
Figure pct00053
단계 a) 펜탄-3-일 (tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라니네이트(I-29a)
DCM(150mL) 중 (tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라닌(7.2g, 27.2mmol) 및 펜탄-3-올(2.5mL, 22.7mmol)의 교반된 용액에, DMAP(416mg, 3.4mmol), EDCI(4.8g, 25mmol)를 0℃에서 첨가했다. 용액을 18시간 동안 교반한 다음, DCM(100mL)으로 희석하고 물(2x50mL) 및 염수(100mL)로 세척했다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 헥산 중 10% 에틸 아세테이트로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(6.5g, 85%)을 수득하였다.
단계 b) (S)-1-옥소-1-(펜탄-3-일옥시)-3-페닐프로판-2-아미늄 클로라이드(I-29b)
1,4 디옥산(22mL, 87.2mmol) 중 4M HCl을, 1,4-디옥산(60mL) 중 화합물 I-29a(6.5g, 19.4mmol) 용액에 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축하여, 표제 화합물(5g, HCl 염)을 고체로서 제공하였다. 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 bc 펜탄-3-일 ((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-페닐알라니네이트(I-29c)
Et3N(5.4mL, 38.6mmol)을, DCM(100mL) 중 화합물 I-29b(5g, 18.4mmol)의 교반된 용액에 -78℃에서 10분에 걸쳐 적가한 다음, DCM(50mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(2.8mL, 18.4mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 다음, 2시간 동안 0℃로 가온한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반했다. DCM(50mL) 중 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페놀(3g, 16.6mmol) 및 Et3N(2.8mL, 20.2mmol)의 용액을 0℃에서 적가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 생성물을 MTBE(100mL)에 용해시키고, 불용물을 여과제거하고 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 헥산 중 10% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 풀링하고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 라세미 화합물을 pet 에테르(250mL) 중 30% EtOAc에 용해시키고 실온에서 24시간 동안 정치시키고, 형성된 결정을 여과제거하고 pet 에테르(2x100mL)로 세척하고 진공 하에 건조 시켜, 표제 화합물(2g, 18%, 키랄 순도 99%)을 제공했다. MS (ES+) m/z 558.30 [M+H]+.
중간체 30
Figure pct00054
단계 a) 2-에틸부틸(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라니네이트(I-30a)
DCM(80mL) 중 (tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라닌(7.8g, 29.5mmol) 및 2-에틸부탄-1-올(3.1mL, 24.7mmol)의 교반된 용액에, DMAP(450mg, 3.7mmol), EDCI(5.2g, 27.1mmol)를 0℃에서 첨가했다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 DCM(200mL)으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 용액(100mL) 및 염수(100mL)로 세척했다. 유기층을 무수 황산나트륨에서 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 헥산 중 20% 에틸 아세테이트로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(7.5g, 87%)을 수득하였다. MS (ES+) m/z 350.47 [M+H]+.
단계 b) (S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-아미늄 클로라이드(I-30b)
1,4 디옥산(32mL, 128mmol) 중 4M HCl을, 1,4-디옥산(100mL) 중 화합물 I-30a(7.5g, 21.5mmol)의 용액에 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 실온에서 교반한 다음, 감압 하에 농축하여, 표제 화합물(5.5g, 88%, HCl 염)을 고체로서 수득하였다.
단계 c) 2-에틸부틸 ((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-페닐알라니네이트(I-30c)
Et3N(5.6mL, 40.1mmol)을, DCM(100mL) 중 화합물 I-30b(5.5g, 19.2mmol)의 교반된 용액에 -78℃에서 10분에 걸쳐 적가한 다음, DCM(40mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(2.9mL, 19.4mmol) 용액을 30분에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 다음, 2시간 동안 0℃로 가온한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반했다. DCM(50mL) 중 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페놀(3.2g, 17.4mmol) 및 Et3N(3.4mL, 24.3mmol)의 용액을 0℃에서 15분에 걸쳐 적가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 생성물을 MTBE(100mL)에 용해시키고 10분 동안 교반하고, 불용물을 여과제거하고 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 헥산 중 20% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 풀링하고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 라세미 화합물을 pet 에테르(100mL) 중 20% EtOAc에 용해시키고 4시간 동안 냉장고에 정치시키고, 형성된 결정을 여과제거하고 pet 에테르(30mL) 중 20% EtOAc로 세척하고, 진공 하에 건조시켜, 표제 화합물(1.5g, 13%, 키랄 순도 99%)을 제공하였다. MS (ES+) m/z 572.30 [M+H]+.
중간체 31
Figure pct00055
단계 a) 2-에틸부틸 (tert-부톡시카보닐)-L-류시네이트(I-31a)
DCM(100mL) 중 (tert-부톡시카보닐)-L-류신(6.8g, 29.4mmol) 및 2-에틸부탄-1-올(2.6mL, 24.5mmol)의 교반된 용액에, DMAP(449mg, 3.7mmol), EDCI(5.2g, 26.9mmol)를 0℃에서 첨가했다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, DCM(100mL)으로 희석하고 물(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨에서 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 헥산 중 10% 에틸 아세테이트로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(7.2g, 93%)을 수득하였다. MS (ES+) m/z 316.43 [M+H]+.
단계 b) (S)-1-(2-에틸부톡시)-4-메틸-1-옥소펜탄-2-아미늄 클로라이드(I-31b)
1,4 디옥산(36mL, 143.8mmol) 중 4M HCl을, 1,4-디옥산(50mL) 중 화합물 I-31a(7.2g, 22.8mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 실온에서 교반한 다음, 감압 하에 농축시켜, 표제 화합물(5.5g, HCl 염)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) m/z 216.28 [M+H]+. 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 c) 2-에틸부틸 ((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(I-31c)
Et3N(6.4mL, 46mmol)을, DCM(125mL) 중 화합물 I-31b(5.5g, 22mmol)의 교반된 용액에 -78℃에서 10분에 걸쳐 적가한 다음, DCM(125mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(3.3mL, 22mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 다음, 2시간 동안 0℃로 가온한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반했다. DCM(50mL) 중 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페놀(3.6g, 20mmol) 및 Et3N(3.4mL, 24mmol)의 용액을 0℃에서 15분에 걸쳐 적가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 생성물을 MTBE(100mL)에 용해시키고 10분 동안 교반하고, 불용물을 여과제거하고 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 헥산 중 20% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 풀링하고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 라세미 화합물을 pet 에테르(100mL) 중 10% EtOAc에 용해시키고, 12시간 동안 냉장고에 정치시키고, 형성된 결정을 여과제거하고 pet 에테르(30mL) 중 5% EtOAc로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 수득된 잔류물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(500mg)을 제공하였다. MS (ES+) m/z 538.43 [M+H]+.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IG (4.6x250mm), 5μ
CO2: 85.0%
공동 용매: 15.0%(100% 이소프로판올)
총 유량: 3.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
중간체 32
Figure pct00056
((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 (tert-부톡시카보닐)-L-발리네이트(I-32a)
DCC(549mg, 2.7mmol) 및 DMAP(33mg, 0.27mmol)를, DMF(20mL) 중 (Z)-2-아미노-9-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온(350mg, 1.3mmol) 및 (tert-부톡시카보닐)-L-발린(289mg, 1.3mmol)의 교반된 용액에 실온에서 첨가했다. 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 헥산 중 10% EtOAc로 용리시켰다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(65mg, 10%)을 고체로 제공했다. MS (ES+) 463.43 [M+H]+.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (250x30)mm, 5μ
CO2: 65.0%
공동 용매: 35.0%(MeOH)
총 유량: 70g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
부하 능력/주입: 5.0mg
스택 시간: 14분
로드/주입: 7mg
중간체 33
Figure pct00057
단계 a) (Z)-(2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(I-33a)
DMF(20mL) 중 화합물 I-28j(300mg, 1.34mmol)의 교반된 용액에, 트리메틸 오르토부티레이트(0.32mL, 2.02mmol) 및 pTSA(26mg, 0.13mmol)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, Et3N(0.5mL)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 물(20mL) 중 80% 아세트산에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(260mg, 57%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 294.34 [M+H]+.
중간체 34
Figure pct00058
단계 a) 2-에틸부틸 O-(2-에틸부틸)-L-호모세리네이트(I-34a)
L-아스파르트산(5g, 톨루엔(100mL) 중 37.6mmol)의 교반된 용액에, pTSA(449mg, 3.7mmol)에 이어 2-에틸부탄-1-올(7.7g, 75.1mmol)을 0℃에서 첨가했다. 용액을 110℃에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물에 용해시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기 추출물을 포화 중탄산나트륨 용액, 염수로 세척하고 황산나트륨에서 건조시키고 감압 하에 농축하여, 표제 화합물(7.15g, 63%)을 제공했다. MS (ES+) m/z 302.41 [M+H]+.
단계 b) 비스(2-에틸부틸) L-아스파르테이트 하이드로클로라이드(I-34b)
1,4 디옥산(40mL, 160mmol) 중 4M HCl을, 1,4-디옥산(35mL) 중 화합물 I-34a(7.15g, 23.7mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하여, 표제 화합물(8g, HCl 염)을 고체로 제공하였다. MS (ES+) m/z 302.28 [M+H]+.
단계 c) 비스(2-에틸부틸)((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-아스파르테이트(I-34c)
Et3N(6.9mL, 49.3mmol)을, DCM(40mL) 중 화합물 I-34b(8g, 23.5mmol)의 교반된 용액에 -70℃에서 5분에 걸쳐 적가한 다음, DCM(20mL) 중 페닐 포스포로디클로리데이트(3.5mL, 23.5mmol)의 용액을 10분에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 -70℃에서 30분 동안 교반한 다음, 2시간 동안 0℃로 가온한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반했다. DCM(20mL) 중 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페놀(3.9g, 21.12mmol) 및 Et3N(3.6mL, 25.8mmol)의 용액을 0℃에서 적가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 생성물을 MTBE(100mL)에 용해시키고, 불용물을 여과제거하고 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 헥산 중 10% EtOAc로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 풀링하고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 라세미 화합물을 pet 에테르(90mL) 중 10% EtOAc에 용해시키고, 0℃에서 12시간 동안 정치시키고, 형성된 결정을 여과제거하고 진공 하에 건조시켰다. 수득된 화합물을 다시 pet 에테르(30mL) 중 10% EtOAc에 용해시키고, 0℃에서 12시간 동안 정치시키고, 형성된 결정을 여과하고 진공 하에 건조시켰다. 수득된 화합물을 다시 pet 에테르(50mL) 중 2% EtOAc에 용해시키고, 0℃에서 4시간 동안 정치시키고, 형성된 결정을 여과제거하고 진공 하에 건조시켜, 표제 화합물(2g, 12%, 키랄 순도 98.6%)을 제공했다. MS (ES+) m/z 624.60 [M+H]+.
중간체 35
Figure pct00059
단계 a) (Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 피발레이트(I-35a)
DMAP(464mg, 3.8mmol)를, DMF(50mL) 중 (Z)-2-아미노-9-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온(1g, 3.8mmol)의 교반된 용액에 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 10℃로 냉각시킨 다음, 피발로일 클로라이드(920mg, 7.6mmol)를 첨가하였다. 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 8% MeOH로 용리시켰다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(100mg)을 고체로 제공했다. MS (ES+) 348.41 [M+H]+.
중간체 36
Figure pct00060
(R,Z)-(2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(I-36a) &
(S,Z)-(2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(I-36b)
DMF(15mL) 중의 화합물 I-28j(300mg, 1.34mmol)의 교반된 용액에, 트리메틸 오르토이소부티레이트(0.64mL, 4.03mmol) 및 pTSA(128mg, 0.7mmol)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, Et3N(1mL)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 물(20mL) 중 80% 아세트산에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 G를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물 피크-1(61mg, 15%) 및 피크-2(62mg, 15%)를 고체로서 제공했다. MS (ES+) 294.30 [M+H]+.
피크-1:
SOR: +46.14°(구아닌 커플링된 화합물의 SOR 값에 기초함, 입체 화학은 R-이성질체로 가정됨).
피크-2:
SOR: -46.18°(구아닌 커플링된 화합물의 SOR 값에 기초함, 입체 화학은 S- 이성질체로 가정됨).
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (30x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(EtOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 6.0분
로드/주입: 10.0mg
중간체 37
Figure pct00061
단계 a) (Z)-N-(1-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로피리미딘-4-일)벤즈아미드(I-37a)
건조된 K2CO3(7.1g, 51.5mmol) 및 화합물 I-28g(3g, 8.6mmol)를, DMF(100mL) 중 N-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로피리미딘-4-일)벤즈아미드(2.0g, 8.6mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 48시간 동안 교반한 다음, 50℃로 냉각시키고 MeOH(6mL)를 첨가하였다. 생성되는 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각하고 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축 건조시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 12% MeOH로 용리시켰다. 수득된 잔류물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로추가로 정제하고 DCM 중 5% MeOH로 용리하여, 표제 화합물(500g, 16%)을 Z 이성질체로서 제공했다. MS (ES+) 346.28 [M+H]+.
단계 b) (Z)-4-아미노-1-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-5-플루오로피리미딘-2(1H)-온(I-37b)
MeOH(20mL, 14mmol) 중 7M NH3 중 화합물 I-37a(500mg, 1.45mmol)의 교반된 용액을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc(10mL)로 분쇄하여 추가로 정제하고, 여과하고 건조하여, 표제 화합물(300mg, 85%)을 고체로서 제공했다. MS (ES+) 242.28 [M+H]+.
단계 c) (Z)-(2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(I-37c)
DMF(10mL) 중 화합물 I-37b(250mg, 1.04mmol)의 교반된 용액에, 트리메틸 오르토이소부티레이트(0.5mL, 3.1mmol) 및 pTSA(79mg, 0.4mmol)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, Et3N(2mL)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 물(30mL) 중 80% 아세트산에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고 DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(250mg, 77%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 312.39 [M+H]+.
중간체 38
Figure pct00062
단계 a) (Z)-(2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(I-38a)
DMF(30mL) 중 화합물 I-37b(300mg, 1.24mmol)의 교반된 용액에, 트리메틸 오르토부티레이트(0.6mL, 3.7mmol) 및 pTSA(119mg, 0.6mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, Et3N(0.5mL)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 물(30mL) 중 80% 아세트산에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 7% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(350mg, 88%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 312.31 [M+H]+.
중간체 39
Figure pct00063
단계 a) (R,Z)-(2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(I-39a)
화합물 I-37a(3.25g)를 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(1.21g, 31%)을 고체로 제공했다. MS (ES+) 312.35 [M+H]+.
피크-2:
SOR: +92.72°(시토신 커플링된 화합물의 SOR 값에 기초함, 입체 화학은 R-이성질체로 가정됨).
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IG (30x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(100% MeOH)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 7.0분
로드/주입: 101.1mg
단계 b) ((1R,Z)-2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(I-39b)
DMF(10mL) 중 메탄설폰산(0.53mL, 8.1mmol)을, DMF(30mL) 중 화합물 I-39a(1.1g, 3.4mmol) 및 3,4-디하이드로-2H-피란(6.2mL, 67.5mmol)의 교반된 용액에 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, Et3N(10mL)을 첨가하고 감압에서 농축하였다. 수득된 조 화합물(1.25g)을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LCMS (ES+) m/z 396.37 [M+H]+.
단계 c) 4-아미노-5-플루오로-1-((Z)-((2S)-2-(하이드록시메틸)-2-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필리덴)메틸)피리미딘-2(1H)-온(I-39c)
MeOH(60mL) 중 화합물 I-39b(1.25g, 3.2mmol)의 교반된 용액에, 25% 수성 암모니아(60mL, 389.5mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 36시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 7% MeOH로 용리하여, 표제 화합물(910mg, 88%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 326.34 [M+H]+.
단계 d) ((1R,Z)-2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 (tert-부톡시카보닐)-L-발리네이트(I-39d)
DMF(60mL) 중 (tert-부톡시카보닐)-L-발린(1.52mg, 7.0mmol) 및 DCC(866mg, 4.2mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 불용성 고체를 여과하고 여액을 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 DMF(60mL)에 용해시키고 화합물 I-39c(910mg, 2.8mmol)에 이어 DMAP(103mg, 0.84mmol)를 첨가하였다. 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 4% MeOH로 용리하여, 표제 화합물을 이성질체들의 혼합물(930mg, 63%)로 고체로 수득하였다. MS (ES+) 525.46 [M+H]+.
단계 e) ((R,Z)-2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 (tert-부톡시카보닐)-L-발리네이트(I-39e)
80% AcOH(100mL, 1,397.5mmol)를 화합물 I-39d(930mg, 1.8mmol)에 첨가하고, 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 36시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 DCM 중 6% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(520mg, 64%)을 고체로서 수득하였다. LCMS (ES+) m/z 441.39 [M+H]+.
실시예 1
Figure pct00064
단계 a) ((1R,Z)-2-((2-이소부티라미도-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 아세테이트(1a)
DMF(40mL) 중 메탄설폰산(0.3mL, 4.3mmol)을, DMF(10mL) 및 3,4-디하이드로-2H-피란(3.9mL, 43mmol) 중 화합물 I-12b(800mg, 2.13mmol)의 교반된 용액에 실온에서 적가했다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 감압에서 농축시켰다. 수득된 조 화합물(1.1g)을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LCMS (ES+) m/z 460.26 [M+H]+.
단계 b) 2-아미노-9-((Z)-((2S)-2-(하이드록시메틸)-2-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온(1b)
MeOH(50mL) 중 화합물 1a(1.1g, 2.4mmol)의 교반된 용액에, 25% 수성 암모니아(55mL, 360mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 감압에서 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 15% MeOH로 용리하여, 표제 화합물(750mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 348.20 [M+H]+.
단계 c) (2S)-((1R,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-메틸부타노에이트(1c)
DCM(40mL) 중 N-Boc-L-발린(915mg, 4.21mmol) 및 디사이클로헥실카보디이미드(500mg, 2.43mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 물질을 DMF(60mL)에 용해시키고, 화합물 1b(650mg, 1.87mmol)에 이어 4-디메틸아미노피리딘(70mg, 0.56mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다.
수득된 조 화합물을 DCM 중 7% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(900mg, 86%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 547.37 [M+H]+.
단계 d) (S)-((R,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-메틸부타노에이트(1d)
80% 아세트산(90mL, 1.3mol) 중 화합물 1c(900mg, 1.6mmol)의 용액을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 10 내지 12% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(600mg, 67%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 463.29 [M+H]+.
단계 e) (S)-((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-메틸부타노에이트(1e)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1.1mL, 1.1mmol)를, DMF(10mL) 중 화합물 1d(100mg, 0.22mmol)의 용액에 적가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(5mL) 중 I-4(140mg, 0.26mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 10 내지 12% MeOH로 용리하여, 표제 화합물(120mg, 46%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 802.42 [M+H]+.
단계 f) (S)-((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 2-아미노-3-메틸부타노에이트(1f-1)
&
(R)-((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 2-아미노-3-메틸부타노에이트(1f-2)
60% 아세트산(12mL, 126mmol) 중 화합물 1e(120mg, 0.14mmol)의 용액을 90℃에서 5시간 동안 교반한 다음, 실온에 도달하게 하고, 감압 하에 농축했다. 수득된 잔류물을 HPLC 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 수득된 잔류물을 또 다른 배취와 합치고 키랄 NP HPLC로 정제하였다.
이는 2개의 표제 화합물, 1f-1(22mg) 및 1f-2(8mg)를 제공하였다.
제조용 NP-HPLC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IC (250X30)mm, 5μ
이동상: n-헥산 중 0.2% DEA:EtOH(30:70)
유량: 38.0mL/분
온도: 주위
파장: 270nm
런 타임: 17분
용해성: EtOH + DCM
부하 능력/주입: 5.0mg
1f-1: LCMS (ES+) m/z 702.39 [M+H]+.
Figure pct00065
1f-2: LCMS (ES+) m/z 702.39 [M+H]+.
Figure pct00066
실시예 2
Figure pct00067
(S)-((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-3-메틸-1-옥소-1-((S)-펜탄-2-일옥시)부탄-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 2-아미노-3-메틸부타노에이트
&
(R)-((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-3-메틸-1-옥소-1-((S)-펜탄-2-일옥시)부탄-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 2-아미노-3-메틸부타노에이트(2-1 & 2-2)
표제 화합물을 실시예 1의 단계 e와 같이 화합물 1d 및 I-3b로부터 제조한 다음, 디옥산 중 Boc 보호 화합물의 용액을 디옥산 중 4M HCl로 4시간 동안 처리하여 Boc 그룹을 제거한 다음 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC 방법 C에 의해 정제 한 후, 키랄 제조용 NP HPLC에 의해 입체 이성질체들을 분리하였다.
키랄 제조용 NP HPLC
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (250X30)mm, 5μ
이동상: n-헥산 중 0.2% DEA:EtOH(50:50)
유량: 44.0mL/분
온도: 주위
파장: 232nm
런 타임: 22분
용해성: EtOH:MeCN:IPA
로드/주입: 10.8mg
2-1: (60mg, 27% 수율) LCMS (MS+) 688.34 [M+H]+, 키랄 NP HPLC에 따른 99.4% 키랄 순도.
Figure pct00068
2-2: (12mg, 5.2% 수율) LCMS (MS+) 688.38 [M+H]+, 키랄 NP HPLC에 따른 97.8% 키랄 순도.
Figure pct00069
실시예 3
Figure pct00070
단계 a) (2S)-2-프로필펜틸 2-(((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)-프로파노에이트(3a)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(0.7mL, THF 중 1M, 0.72mmol)를, DMF(5mL) 중 화합물 I-19b(50mg, 0.14mmol)의 용액에 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 이어서, 무수 THF(2.5mL) 중 화합물 I-4(90mg, 0.17mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 10% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(55mg, 53%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 687.39 [M+H]+.
단계 b) (S)-2-프로필펜틸 2-(((S)-(((R,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
&
(S,Z)-2-프로필펜틸 2-((1-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-6-옥시도-5,7-디옥사-6-포스파스피로[2.5]옥탄-6-일)아미노)프로파노에이트(3b-1 & 3b-2)
80% 아세트산(40mL, 559mmol) 중 화합물 3a(400mg, 0.582mmol)의 용액을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 DCM 중 12% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 잔류물을 키랄 제조용 SFC 정제하여 2개의 분획인 3b-1 및 3b-2를 제공하였다.
구배 0/35, 9/67, 9.1/99, 10/99, 10.1/35, 12/35로 방법 B를 사용하여 3b-1을 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(35mg)을 제공하였다. LCMS에 따른 순도: 96.6% & 키랄 HPLC 99.9%. LCMS (ES+) m/z 607.31 [M+H]+.
키랄 제조용 NP HPLC로 정제한 다음, "IPA 방법"을 사용하여 3b-2를 키랄 제조용 SFC로 정제하여, 환화(cyclized) 화합물 3b-2를 제공했다. LCMS (ES+) m/z 509.19 [M+H]+.
제조용 SFC 조건 "IPA 방법"
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (21x250mm), 5μ
CO2: 75.0%
공동 용매: 25.0%(100% IPA)
총 유량: 60.0g/min
배압: 80.0bar
UV: 229nm
스택 시간: 10.0분
로드/주입: 5.0mg
실시예 4
Figure pct00071
(S,Z)-2-에틸부틸 2-((1-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-6-옥시도-5,7-디옥사-6-포스파스피로[2.5]옥탄-6-일)아미노)프로파노에이트(4)
DMF(2mL) 중 1,8-디아자바이사이클로[5.4.0]운덱-7-엔(0.2mL, 1.14mmol)의 용액을, DMF(3mL) 중 (Z)-2-아미노-9-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온(150mg, 0.57mmol) 및 I-6(0.31g, 0.62mmol)의 교반된 현탁액에 실온에서 30분에 걸쳐 적가했다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, NaHCO3 aq.(10mL)으로 희석하고 DCM(25mL)으로 추출했다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 DCM 중 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획들을 풀링하고, 농축하고, 방법 C를 사용하는 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(18mg, 6.6%)을 P-이성질체들의 혼합물로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 481.25 [M+H]+.
실시예 5
Figure pct00072
(S,Z)-2-에틸부틸 2-((1-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-6-옥시도-5,7-디옥사-6-포스파스피로[2.5]옥탄-6-일)아미노)-3-메틸부타노에이트(5)
DMF(10mL) 중 (Z)-2-아미노-9-((2,2-비스(하이드록시메틸)사이클로프로필리덴)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온(0.1g, 0.38mmol) 및 I-8b(0.2g, 0.38mmol)의 교반된 현탁액에, DMF(5mL) 중 1,8-디아자바이사이클로[5.4.0]운덱-7-엔(0.12mL, 0.760mmol)의 용액을 실온에서 30분의 기간에 걸쳐 첨가했다. 혼합물을 3시간 동안 교반한 다음, NaHCO3 aq(5mL)로 희석하고 DCM(3x20mL)으로 추출했다. 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 화합물을 DCM 중 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 잔류물을 방법 A를 사용하는 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(12mg,)을 P-입체 이성질체들의 혼합물로서 제공하였다. LCMS (ES+) 509.32 [M+H]+.
실시예 6
Figure pct00073
((R,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((S)-펜탄-2-일옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트
&
((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((S)-펜탄-2-일옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(6-1 & 6-2)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(2.7mL, THF 중 1M, 2.700mmol)를, DMF(20mL) 중 I-11(180mg, 0.540mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 무수 THF(20mL) 중 I-9b(312mg, 0.648mmol)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 잔류물을 또 다른 배취와 합치고, MeOH 중 7% DCM으로 용리되는 Combi 플래시 기기를 사용하여 컬럼 크로마토그래피로 정제했다. 적절한 분획들을 풀링하고 농축하고, 잔류물을 방법 B를 사용하여 제조용 HPLC로 정제했다. 적절한 분획들을 풀링하고 농축했다. 키랄 HPLC는 제조용 SFC에 의해 분리된 2개의 거울상 이성질체를 보여주었다.
6-1: LCMS (ES+) m/z 631.30 [M+H]+. 키랄 HPLC는 99.9% 순도를 나타냈다.
6-2: LCMS (ES+) m/z 631.30 [M+H]+. 키랄 HPLC는 99.8% 순도를 나타냈다.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (30x250mm), 5μ
CO2: 50.0%
공동 용매: 50.0%(100% IPA)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 12.6분
로드/주입: 13.0mg
실시예 7
Figure pct00074
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((S,Z)-1-((((S)-2-아미노-3-메틸부타노일)옥시)메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)-4-메틸펜타노에이트
&
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((S,Z)-1-((((R)-2-아미노-3-메틸부타노일)옥시)메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)-4-메틸펜타노에이트(7-1 & 7-2)
최종 화합물의 정제/분리를 다음에 의해 실시한 것을 차이로, 실시예 1의 단계 e 및 f와 같이 화합물 1d 및 I-7b로부터 표제 화합물을 제조하였다.
1) 제조용 HPLC 방법 C
2) 제조용 키랄 NP HPLC에 의한 이성질체들의 분리
3) 분획 2를 제조용 HPLC 방법 C로 정제함
제조용 키랄 NP HPLC
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (250X30)mm, 5μ
이동상: n-헥산 중 0.2% DEA:EtOH(55:45)
유량: 42.0mL/분
온도: 주위
파장: 232nm
런 타임: 22분
용해성: EtOH
로드/주입: 8.1mg
7-1: LCMS (ES+) m/z 702.35 [M+H]+, 키랄 NP HPLC에 따른 99.96% 키랄 순도.
Figure pct00075
7-2: LCMS (ES+) m/z 702.35 [M+H]+, 키랄 NP HPLC에 따른 97.97% 키랄 순도.
Figure pct00076
실시예 8
Figure pct00077
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((S,Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린)-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(4-브로모페녹시)포스포릴)아미노)
&
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((R,Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린)-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(4-브로모페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트 프로파노에이트(8-1 & 8-2)
(Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 아세테이트와 I-5를 실시예 1의 단계 e에 개시된 방법에 따라 반응시켰다. 수득된 화합물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 라세미 혼합물을 SFC로 분리하여, 2개의 이성질체를 별도의 화합물로 제공하였다.
8-1: 2.7% 수율, 키랄 HPLC에 따른 98.82% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 681.16 [M+H]+.
8-2: 3.2% 수율, 키랄 HPLC에 따른 99.7% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 681.16 [M+H]+.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 50.0%
공동 용매: 50.0%(EtOH 중 0.5% 디에틸아민)
총 유량: 90.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 9.4분
로드/주입: 11.0mg
실시예 9
Figure pct00078
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((S,Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린)-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
&
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((R,Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린)-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(9-1 및 9-2)
(Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 아세테이트와 I-3b를 실시예 1의 단계 e에 기재된 방법에 따라 반응시켰다. 수득된 화합물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 라세미 혼합물을 제조용 SFC로 분리하여, 2개의 이성질체를 별도의 화합물로 제공하였다.
9-1: 6.0% 수율, 키랄 HPLC에 따른 98.07% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 631.30 [M+H]+.
9-2: 6.0% 수율, 키랄 HPLC에 따른 98.9% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 631.30 [M+H]+.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (30x250mm), 5μ
CO2: 60.0%
공동 용매: 40.0%(100% MeOH)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 5.5분
로드/주입: 3.0mg
실시예 10
Figure pct00079
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((S,Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린)-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(4-브로모페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
&
(S)-(S)-펜탄-2-일 2-(((S)-(((R,Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린)-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(4-브로모페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(10-1 & 10-2)
(Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 아세테이트와 I-18b를, 실시예 1의 단계 e에 개시된 방법에 따라 반응시켰다. 수득된 화합물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 라세미 혼합물을 제조용 SFC로 분리하여, 2개의 이성질체를 별도의 화합물로 제공하였다.
10-1: 수율 5.1%, 분석 SFC에 따른 99.9% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 723.22 & 725.20 [M+H]+.
10-2: 수율 8.0%, 분석 SFC에 따른 99.34% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 723.19 & 725.20 [M+H]+.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (30x250mm), 5μ
CO2: 60.0%
공동 용매: 40.0%(100% EtOH)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 6.2분
로드/주입: 9.1mg
실시예 11
Figure pct00080
((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트
&
((R,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(11-1 & 11-2)
I-27와 I-4를 실시예 1의 단계 e에 기재된 방법에 따라 반응시켰다. 수득된 화합물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 라세미 혼합물을 제조용 SFC로 분리하여, 2개의 이성질체를 별도의 화합물로 제공했다.
11-1: 수율 4.2%, SFC에 따른 키랄 순도 99.95%, LCMS (ES+) m/z 673.33 [M+H]+.
Figure pct00081
11-2: 수율 4.0%, SFC에 따른 키랄 순도 99.14%, LCMS (ES+) m/z 673.29 [M+H]+.
Figure pct00082
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (30x250mm), 5μ
CO2: 50.0%
공동 용매: 50.0%(100% IPA)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 23.0분
로드/주입: 28.0mg
실시예 12
Figure pct00083
((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(4-브로모페녹시)(((S)-1-옥소-1-((S)-펜탄-2-일옥시)프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트
&
((R,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(4-브로모페녹시)(((S)-1-옥소-1-((S)-펜탄-2-일옥시)프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(12-1 & 12-2)
I-27과 I-5를 실시예 1의 단계 e에 기재된 방법에 따라 반응시켰다. 수득된 화합물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 라세미 혼합물을 제조용 SFC로 분리하여, 2개의 이성질체를 별도의 화합물로 수득하였다.
12-1: 수율 3.5%, 분석 SFC에 따른 99.48% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 709.41 & 711.35 [M+H]+.
Figure pct00084
12-2: 수율 4.0%, 분석 SFC에 따른 98.93% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 709.41 & 711.39 [M+H]+.
Figure pct00085
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 60.0%
공동 용매: 40.0%(100% EtOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 219nm
스택 시간: 10.5분
로드/주입: 5.1mg
실시예 13
Figure pct00086
(S)-2-프로필펜틸 2-(((S)-(((S,Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
&
(S)-2-프로필펜틸 2-(((S)-(((R,Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(13-1 & 13-2)
(Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 아세테이트와 I-4를 실시예 1의 단계 e에 기재된 방법에 따라 반응시켰다. 수득된 화합물을 제조용 HPLC로 정제하였다. 라세미 혼합물을 제조용 SFC로 분리하여, 2개의 이성질체를 별도의 화합물로 제공했다.
13-1: 수율 14%, 분석 SFC에 따른 96.88% 키랄 순도, LCMS (ES+) m/z 645.35 [M+H]+.
Figure pct00087
13-2: 수율 18%, 분석 SFC에 따른 98.23% 키랄 순도 LCMS (ES+) m/z 645.39 [M+H]+.
Figure pct00088
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IC (21x250mm), 5μ
CO2: 75.0%
공동 용매: 25%(100% IPA)
총 유량: 70.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 227nm
스택 시간: 7.0분
로드/주입: 3.0mg
실시예 14
Figure pct00089
단계 a) (Z)-(2-((2-아미노-6-(사이클로프로필아미노)-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 아세테이트(14a)
DMF(70mL) 중 (Z)-(2-((2-아미노-6-(사이클로프로필아미노)-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)사이클로프로판-1,1-디일)디메탄올(700mg, 2.22mmol)의 교반된 용액에, 트리메틸 오르토아세테이트(1.15mL, 8.90mmol) 및 pTSA(425mg, 2.23mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 잔류물을 80% 아세트산(aq., 100mL)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 농축했다. 조 화합물을 DCM 중 4.5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 C를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(180mg, 24%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 345.31 [M+H]+.
단계 b) (2S)-2-프로필펜틸 2-(((S)-(((Z)-1-(아세톡시메틸)-2-((2-아미노-6-사이클로프로필아미노-1H-퓨린-9(6H))-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(14b)
무수 THF(4mL) 중 14a(50mg, 0.14mmol)의 용액에, tert-부틸마그네슘 클로라이드(0.8mL, THF 중 1M, 0.8mmol)를 5분 동안 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(2mL) 중 I-4(92mg, 0.18mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 조 생성물을 DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획을 풀링하고 농축했다. 수득된 잔류물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(10mg, 10%)을 고체로서 수득하였다. LCMS (ES+) m/z 684.45 [M+H]+.
Figure pct00090
실시예 15
Figure pct00091
(S)-((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((S)-펜탄-2-일옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 2-아미노-3-메틸부타노에이트
&
(R)-((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((S)-펜탄-2-일옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 2-아미노-3-메틸부타노에이트(15-1 & 15-2)
최종 화합물의 정제/분리는 다음에 의해 실시하는 것을 차이로 하여, 실시예 1의 단계 e 및 f와 같이 화합물 1d 및 I-9b로부터 표제 화합물을 제조하였다.
1) 제1분획(15-1) 및 제2 분획(15-2)을 제공하는 제조용 키랄 NP HPLC.
2-1) 제1분획을 동일한 화합물의 또 다른 배취와 합치고 제조용 HPLC, 방법 C로 정제했다.
2-2) 제2 분획을 동일한 화합물의 또 다른 배취와 합치고 제조용 HPLC, 방법 A로 정제했다.
3) 제2 분획을 제조용 키랄 NP HPLC로 정제하였다.
제조용 NP HPLC
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (250X30)mm, 5μ
이동상: n-헥산 중 0.2% DEA:EtOH(45:55)
유량: 38.0mL/분
온도: 주위
파장: 270nm
실행 시간: 24분
용해성: EtOH
로드/주입: 9.7mg
15-1: LCMS (ES+) m/z 660.33 [M+H]+, 키랄 NP HPLC에 따른 99.2% 키랄 순도.
Figure pct00092
15-2: LCMS (ES+) m/z 660.33 [M+H]+, 키랄 NP HPLC에 따른 99.0% 키랄 순도.
Figure pct00093
실시예 16
Figure pct00094
((Z)-2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((((((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸))옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 2.6mL, 2.6mmol)를, DMF(15mL) 중 화합물 I-28k(150mg, 0.51mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-4(322mg, 0.6mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 8 내지 10% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 생성물을 방법 C를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-1)(9mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 633.53 [M+H]+.
Figure pct00095
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IC (30x250mm), 5μ
CO2: 50.0%
공동 용매: 50.0%(100% 이소프로판올)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 14.0분
로드/주입: 7.0mg
실시예 17
Figure pct00096
단계 a) 2-프로필펜틸 ((S)-(((1S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(17a)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 5mL, 5.0mmol)를, DMF(35mL) 중 화합물 I-13b(350mg, 1mmol)의 용액에 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(17mL) 중 화합물 I-4(633mg, 1.2mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 농축하고, 수득된 조 화합물을 DCM 중 10% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(250mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 687.29 [M+H]+.
단계 b) 2-프로필펜틸 ((S)-(((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(17b)
80% AcOH(104.2mL, 1,455.7mmol)를 화합물 17a(250mg, 0.4mmol)에 첨가하고, 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반한 다음 농축하였다. 수득된 조 화합물을 DCM 중 12% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 생성물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(110mg, 42%)을 고체로서 수득하였다. LCMS (ES+) m/z 603.48 [M+H]+.
단계 c) ((((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(하이드록시)포스포릴)-L-알라닌(17c)
Et3N(1mL) 및 물(0.25mL) 중 화합물 17b(40mg, 0.07mmol)의 용액을 50℃에서 46시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 동결 건조하고, 방법 G를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(15mg)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 603.48 [M+H]+.
단계 d) 리튬 ((((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)옥시도포스포릴)-L-알라니네이트(17d)
Dowex 50 WX4-200, 이온 교환 수지를 컬럼(2x10cm)에 넣고, 무색 용리액이 얻어질 때까지 물:MeOH(1:1,100mL)로 세척한 다음, Milli Q 물(100mL)로 세척하여 MeOH를 세척제거했다. 산성 pH에 도달할 때까지 이온 교환 수지는 0.5M 황산(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH까지 물(200mL)로 세척하였다. 이온 교환 수지는 염기성 pH에 도달할 때까지 1M 수산화리튬(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH까지 물(200mL)로 세척하였다. Milli Q 물(2mL) 중 화합물 17c(13mg, 0.031mmol)의 용액을 위에서 새로 준비한 Dowex Li+ 컬럼에 통과시켰다. 적절한 분획을 동결 건조(lypholyised)시켜, 표제 화합물(8mg)을 고체로 제공했ㄱ다. LCMS (ES+) m/z 415.30 [M+H]+.
Figure pct00097
실시예 18
Figure pct00098
메틸((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(18)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1.5mL, 1.5mmol)를, DMF(25mL) 중 화합물 I-11a(210mg, 0.63mmol)의 용액에 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-1(308mg, 0.66mmol)을 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 7% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 생성물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(67mg, 17%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 617.46 [M+H]+.
Figure pct00099
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IE (30x250mm), 5μ
CO2: 65.0%
공동 용매: 35.0%(EtOH 중 0.5% DEA)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 8.0분
용해성: 30mL의 아세토니트릴 + 5mL의 MeOH
로드/주입: 10.0mg
실시예 19
Figure pct00100
펜탄-3-일 ((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-페닐알라니네이트
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 2.3mL, 2.3mmol)를, DMF(15mL) 중 화합물 I-11(300mg, 0.9mmol)의 용액에 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-29c(552mg, 1.0mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고 DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 생성물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(90mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 707.70 [M+H]+.
Figure pct00101
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Lux Cellulose-2 (250X30)mm, 5μ
CO2: 60.0%
공동 용매: 40.0%(MeOH)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 13.0분
로드/주입: 15.62mg
실시예 20
Figure pct00102
2-에틸부틸((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-페닐알라니네이트(20)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 2.1mL, 2.1mmol)를, DMF(25mL) 중 화합물 I-11(300mg, 0.9mmol)의 용액에 실온에서 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-30c(566mg, 1.0mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 생성물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하였다. 불순한 화합물을 다시 키랄 SFC로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(75mg, 11%)을 고체 형태로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 721.64 [M+H]+.
Figure pct00103
제조용 SFC 조건-1
컬럼/치수: Chiralpak IE (30x250mm), 5μ
총 유량: 40.0mL/min
스택 시간: 11.0분
용해성: 30mL의 아세토니트릴 + 5mL의 MeOH
로드/주입: 17.3mg
제조용 SFC 조건-2
컬럼/치수: Chiralpak IA (30x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(100% EtOH)
총 유량: 90.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 6.5분
로드/주입: 20mg
실시예 21
Figure pct00104
2-에틸부틸((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(21)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1.4mL, 2.1mmol)를, DMF(15mL) 중 화합물 I-11(200mg, 0.6mmol)의 용액에 실온에서 3분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 무수 THF(8mL) 중 화합물 I-31c(360mg, 0.7mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 생성물을 방법 F를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하였다. 불순한 이성질체를 다시 키랄 SFC로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(7.5mg)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 687.71 [M+H]+.
Figure pct00105
제조용 SFC 조건-1
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 80.0%
공동 용매: 20.0%(100% EtOH)
총 유량: 60.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 13분
로드/주입: 4.1mg
제조용 SFC 조건-2
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 75.0%
공동 용매: 25.0%(100% EtOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 230nm
스택 시간: 6.5분
로드/주입: 2mg
실시예 22
Figure pct00106
단계 a) 2-프로필펜틸 ((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(22a)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 4.3mL, 4.3mmol)를, DMF(33mL) 중 화합물 I-19b(300mg, 0.9mmol)의 용액에 실온에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반한 다음, 무수 THF(17mL) 중 화합물 I-4(545mg, 1.01mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 7% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(250mg)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 687.71 [M+H]+. 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 b) 2-프로필펜틸 ((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(22b)
80% AcOH(105mL, 1,455.7mmol)를 22a(250mg, 0.4mmol)에 첨가하고, 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 DCM 중 12% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 c) ((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 스테아레이트(22c)
DCC(154mg, 0.75mmol) 및 DMAP(6mg, 0.1mmol)를, DMF(10mL) 중 화합물 22b(100mg, 0.17mmol) 및 스테아르산(142mg, 0.5mmol)의 교반된 용액에 실온에서 첨가했다. 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 5% MeOH로 용리시켰다. 수득된 화합물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-1)(7mg, 5%)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 869.77 [M+H]+.
Figure pct00107
참고: 아미노산 측쇄의 (S)입체 화학은 I-4의 합성에 사용된 출발 물질에 의해 정의된 키랄성에 기초했다.
인 중심의 (S)입체 화학은 문헌 보고서에 기초하여 정의되었다.
확인 (또는) 입증되지 않았지만 키랄 순도의 손실은 가정되지 않는다.
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x2 50mm), 5μ
CO2: 75.0%
공동 용매: 25.0%(IPA)
총 유량: 60.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 10분
로드/주입: 3.5mg
실시예 23
Figure pct00108
단계 a) ((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 (tert-부톡시카보닐)-L-발리네이트(23a)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 0.7mL, 0.7mmol)를, DMF(10mL) 중 화합물 I-32(65mg, 0.14mmol)의 용액에 실온에서 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반한 다음, 무수 THF(5mL) 중 화합물 I-30c(97mg, 0.17mmol)를 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득한 조 화합물을 DCM 중 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(65mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 850.85 [M+H]+. 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 b) ((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 L-발리네이트(23b)
60% AcOH(13mL, 129mmol)를 화합물 23a(130mg, 0.15mmol)에 첨가하고, 생성되는 반응 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하였다. 수득된 조 화합물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(18mg)을 고체로 제공하였다. MS (ES+) 750.71 [M+H]+.
Figure pct00109
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (250x30)mm, 5μ
이동상 A: n-헥산 중 0.2% DEA
이동상 B: EtOH
유량: 42.0mL/분
이동상 A:이동상 B의 %: 55:45
온도: 주위
파장: 230nm
스택 시간: 16분
주입 수: 5
부하 능력/주입: 10.0mg
실시예 24
Figure pct00110
단계 a) (S)-펜탄-2-일 ((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(24a)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 2.9mL, 2.9mmol)를, DMF(30mL) 중 화합물 I-19b(200mg, 0.6mmol)의 용액에 실온에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반한 다음, 무수 THF(15mL) 중 화합물 I-9b(333mg, 0.7mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득한 조 화합물을 DCM 중 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(200mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 645.64 [M+H]+. 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 b) (S)-펜탄-2-일 ((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(24b)
80% AcOH(88.8mL, 1,240.6mmol)를 화합물 25a(200mg, 0.3mmol)에 첨가하고, 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 DCM 중 12% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(85mg, 46%)을 고체로서 제공하였다. MS (ES-) 559.58 [M-H]-.
단계 c) ((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-(((S)-펜탄-2-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 스테아레이트(24c)
DCC(141mg, 0.7mmol) 및 DMAP(6mg, 0.05mmol)를, DMF(3mL) 중 화합물 24b(85mg, 0.15mmol) 및 스테아르산(130mg, 0.5mmol)의 교반된 용액에 실온에서 첨가했다. 생성되는 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 5% MeOH로 용리시켰다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(8mg)을 고체로 제공했다. MS (ES+) 827.71 [M+H]+.
Figure pct00111
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Lux Cellulose-2 (250X30)mm, 5μ
CO2: 55.0%
공동 용매: 45.0%(MeOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 227nm
스택 시간: 13.1분
로드/주입: 7.1mg
실시예 25
Figure pct00112
단계 a) 2-에틸부틸 ((S)-(((Z)-2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-페닐알라니네이트(25)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1.4mL, 1.4mmol)를, DMF(10mL) 중 화합물 I-28k(80mg, 0.27mmol)의 용액에 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(5mL) 중 화합물 I-30c(187mg, 0.33mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득한 조 화합물을 DCM 중 6% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 또 다른 배취와 합치고, 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC(2회)로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(26mg, 14%)을 고체로 제공했다. MS (ES+) 681.66 [M+H]+.
Figure pct00113
제조용 SFC 조건-1
컬럼/치수: Chiralpak AS-H (30x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(EtOH)
총 유량: 60.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 8.8분
로드/주입: 10.9mg
제조용 SFC 조건-2
컬럼/치수: Lux Cellulose-2 (250X30)mm, 5μ
CO2: 75.0%
공동 용매: 25.0%(MeOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 5.0분
로드/주입: 1.5mg
실시예 26
Figure pct00114
단계 a) ((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 테트라하이드로젠 트리포스페이트(26a)
POCl3(0.5mL, 0.53mmol)을, 트리에틸 포스페이트(0.07mL, 3.8mmol) 중 I-13R(100mg, 0.27mmol)의 현탁액에 0℃에서 첨가하고, 0℃에서 4시간 동안 교반했다. 상기 반응 혼합물에 트리부틸아민(0.07mL, 0.3mmol)을 첨가한 후, DMF(2mL) 중 트리부틸 암모늄 피로포스페이트(731mg, 1.33mmol)의 용액을 첨가하고, 0℃에서 30분 및 실온에서 1시간 동안 교반했다. 수산화암모늄 용액(10mL, 65mmol)을 첨가하고 실온에서 16시간 동안 계속 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축한 다음 동결 건조시켰다. 조 화합물을 방법 H를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 잔류물은 디포스페이트 및 트리포스페이트 화합물을 함유했으며, 방법 I를 사용하여 제조용 HPLC로 다시 정제하였다. 불순한 화합물을 방법 I를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 수득된 불순한 표제 화합물을 방법 I를 사용하여 제조용 HPLC에 의해 추가로 정제하여, 표제 화합물(25mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 504.31 [M+H]+.
단계 b) 리튬(S,Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 트리포스페이트(26b)
Dowex 50 WX8 수소 형태, 이온 교환 수지를 컬럼(2x10cm)에 넣고, 무색 용리액이 얻어질 때까지 물:MeOH(1:1,100mL)로 세척한 다음, Milli Q 물(100mL)로 MeOH를 세척제거했다. 이온 교환 수지를 산성 pH에 도달할 때까지 0.5M 황산(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH가 관찰될 때까지 물(200mL)로 세척하였다. 이온 교환 수지는 염기성 pH에 도달할 때까지 1M 수산화리튬(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH까지 물(200mL)로 세척하였다. Milli Q 물(3mL) 중 화합물 26a(25mg, 0.05mmol)의 용액을 위에서 새로 준비한 Dowex Li+ 컬럼에 통과시켰다. 적절한 분획을 동결 건조하여, 표제 화합물(15mg)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 504.27 [M+H]+.
Figure pct00115
실시예 27
Figure pct00116
단계 a) ((S,Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 트리하이드로젠 디포스페이트(27a)
POCl3(0.5mL, 0.53mmol)을, 트리에틸 포스페이트(0.07mL, 3.8mmol) 중 I-13R(100mg, 0.27mmol)의 현탁액에 0℃에서 첨가하고, 0℃에서 4시간 동안 교반했다. 상기 반응 혼합물에, 트리부틸아민(0.07mL, 0.3mmol)을 첨가한 후, DMF(2mL) 중 트리부틸암모늄 피로포스페이트(731mg, 1.33mmol) 용액을 첨가하고, 0℃에서 30분 및 실온에서 1시간 동안 교반했다. 수산화암모늄 용액(10mL, 65mmol)을 첨가하고 실온에서 16시간 동안 계속 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축한 다음 동결 건조시켰다. 조 화합물을 방법 H를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 잔류물은 디포스페이트 및 트리포스페이트 화합물을 함유했고, 방법 I를 사용하여 제조용 HPLC로 다시 정제하였다. 불순 화합물을 방법 I를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 수득된 불순한 표제 화합물을 방법 I를 사용하여 제조용 HPLC에 의해 추가로 정제하여, 표제 화합물(15mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 424.30 [M+H]+.
단계 b) 리튬(S,Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 디포스페이트(27b)
Dowex 50 WX8 수소 형태(50 내지 100메쉬), 이온 교환 수지를 컬럼(2x10cm)에 넣고, 무색 용리액을 얻을 때까지 물:MeOH(1:1,100mL)로 세척한 다음, Milli Q 물(100mL)로 세척하여 MeOH를 세척제거했다. 이온 교환 수지는 산성 pH에 도달할 때까지 0.5M 황산(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH가 관찰될 때까지 물(200mL)로 세척하였다. 이온 교환 수지는 염기성 pH에 도달할 때까지 1M 수산화리튬(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH까지 물(200mL)로 세척하였다. Milli Q 물(3mL) 중 화합물 27a(15mg, 0.04mmol)의 용액을 위에서 새로 준비한 Dowex Li+ 컬럼에 통과시켰다. 적절한 분획을 동결 건조하여, 표제 화합물(13mg)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 424.34 [M+H]+.
Figure pct00117
실시예 28
Figure pct00118
단계 a) ((Z)-2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-(((S)-펜탄-2-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(28)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 3.4mL, 3.4mmol)를, DMF(15mL) 중 화합물 I-28k(200mg, 0.7mmol)의 용액에 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-9b(394mg, 0.82mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 DCM 중 4% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 G를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(36mg, 9%)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 591.60 [M+H]+.
Figure pct00119
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 80.0%
공동 용매: 20.0%(IPA)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 9.7분
로드/주입: 7.0mg
실시예 29
Figure pct00120
단계 a) ((Z)-2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-(((S)-펜탄-2-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(29)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 4.3mL, 4.3mmol)를, DMF(20mL) 중 화합물 I-33a(250mg, 0.9mmol)의 용액에 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-9b(492mg, 1.02mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 DCM 중 4% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 G를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-1)(45mg, 9%)을 고체로 제공하였다. MS (ES+) 591.57 [M+H]+.
Figure pct00121
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 90.0%
공동 용매: 10.0%(MeOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 10.5분
로드/주입: 6.9mg
실시예 30
Figure pct00122
단계 a) ((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-(((S)-펜탄-2-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(30)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 3.8mL, 3.8mmol)를, DMF(20mL) 중 화합물 I-27(250mg, 0.8mmol)의 용액에 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-9b(433mg, 0.9mmol)를 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 DCM 중 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 G를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-1)(28mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 631.62 [M+H]+.
Figure pct00123
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel- OX-H (250X30)mm, 5μ
CO2: 65.0%
공동 용매: 35.0%(EtOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 9.2분
로드/주입: 6.3mg
실시예 31
Figure pct00124
단계 a) (S,Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((포스포노옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(31a)
POCl3(0.1mL, 0.84mmol)을, 트리에틸 포스페이트(1.6mL, 9.3mmol) 중 I-14(140mg, 0.42mmol)의 현탁액에 0℃에서 첨가하고, 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 트리에틸 중탄산암모늄 완충액(1M, pH = 8)(8mL)을 0℃에서 첨가하여, 과량의 POCl3를 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(65mg, 37%)을 고체로 제공했다. MS (ES+) 414.44 [M+H]+.
단계 b) 리튬 (S,Z)-(2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 포스페이트(31b)
Dowex 50 WX8 수소 형태(50 내지 100메쉬), 이온 교환 수지를 컬럼(2x10cm)에 넣고, 무색 용리액을 얻을 때까지 물:MeOH(1:1,100mL)로 세척한 다음, Milli Q 물(100mL)로 세척하여 MeOH를 세척제거했다. 이온 교환 수지는 산성 pH에 도달할 때까지 0.5M 황산(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH가 관찰될 때까지 물(200mL)로 세척하였다. 이온 교환 수지는 염기성 pH에 도달할 때까지 1M 수산화리튬(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH까지 물(200mL)로 세척하였다. Milli Q 물(10mL) 중 화합물 31a(55mg, 0.13mmol)의 용액을 위에서 새로 준비한 Dowex Li+ 컬럼에 통과시켰다. 적절한 분획을 동결 건조하여, 표제 화합물(55mg, 93%)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 414.37 [M+H]+.
Figure pct00125
실시예 32
Figure pct00126
단계 a) ((Z)-2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(32)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1.7mL, 1.7mmol)를, DMF(20mL) 중 화합물 I-33a(100mg, 0.34mmol)의 용액에 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-4(214mg, 0.4mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 G를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-1)(20mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 633.72 [M+H]+.
Figure pct00127
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IC (30x250mm), 5μ
CO2: 50.0%
공동 용매: 50.0%(이소프로판올)
총 유량: 70.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 9.3분
로드/주입: 4.95mg
실시예 33
Figure pct00128
단계 a) 2-에틸부틸 ((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((((tert-부톡시카보닐)-L-발릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(33a)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1mL, 1mmol)를, DMF(20mL) 중 화합물 I-32(90mg, 0.2mmol)의 용액에 실온에서 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-4(126mg, 0.23mmol)를 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득한 조 화합물을 DCM 중 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(70mg, 37%)을 고체로 제공하였다. MS (ES+) 816.89 [M+H]+.
단계 b) 2-에틸부틸 ((S)-(((Z)-1-(((L-발릴)옥시)메틸)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(33b)
60% AcOH(9mL, 92.7mmol)를 화합물 33a(90mg, 0.11mmol)에 첨가하고, 생성되는 반응 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 수득된 화합물을 방법 G를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-1)(10mg, 12%)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 716.51 [M+H]+.
Figure pct00129
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IG (30x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(EtOH 중 0.5% DEA)
총 유량: 70.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 15분
로드/주입: 3.5mg
실시예 34
Figure pct00130
단계 a) 2-에틸부틸 ((S)-(((Z)-2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(34)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 3.4mL, 3.4mmol)를, DMF(15mL) 중 화합물 I-28k(200mg, 0.7mmol)의 용액에 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(8mL) 중 화합물 I-4(403mg, 0.8mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득한 조 화합물을 DCM 중 8% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 G를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(56mg, 12%)을 고체 형태로 제공했다. MS (ES+) 647.69 [M+H]+.
Figure pct00131
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak- IA (250x30)mm, 5μ
이동상 A: n-헥산
이동상 B: 이소프로판올
유량: 42.0mL/분
이동상 A:이동상 B의 %: 50:50
온도: 주위
파장: 298nm
스택 시간: 10분
주입 수: 6
부하 능력/주입: 24.16mg
실시예 35
Figure pct00132
단계 a) 비스(2-에틸부틸)((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-아스파르테이트(35)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1.9mL, 1.9mmol)를, DMF(8mL) 중 화합물 I-11(125mg, 0.4mmol)의 용액에 실온에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 무수 THF(4mL) 중 화합물 I-34c(257mg, 0.4mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 5% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 H를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-1)(51mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 773.80 [M+H]+.
Figure pct00133
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (250x30)mm, 5μ
CO2: 65.0%
공동 용매: 35.0%(EtOH)
총 유량: 70g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 13.7분
로드/주입: 5.6mg
실시예 36
Figure pct00134
단계 a) 이소프로필 ((S)-(((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(36)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 4.5mL, 4.5mmol)를, DMF(18mL) 중 화합물 I-11(300mg, 0.9mmol)의 용액에 실온에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 무수 THF(9mL) 중 화합물 I-2(490mg, 1.0mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득한 조 화합물을 다른 배취와 합치고, DCM 중 7% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 D를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(62mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 645.64 [M+H]+.
Figure pct00135
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(EtOH)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 11.8분
로드/주입: 12mg
실시예 37
Figure pct00136
단계 a) (S,Z)-(2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((포스포노옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(37a)
POCl3(0.03mL, 0.34mmol)을, 트리에틸 포스페이트(0.64mL, 3.8mmol) 중 I-36a(50mg, 0.17mmol)의 현탁액에 0℃에서 첨가하고, 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 상기 반응 혼합물에, 트리에틸 중탄산암모늄 완충액(1M, pH = 8)(2mL)을 0℃에서 첨가하고 동결 건조시켰다. 조 화합물을 방법 C를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(15mg, 23%)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 374.27 [M+H]+.
단계 b) 리튬(S,Z)-(2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 포스페이트(37b)
Dowex 50 WX8 수소 형태(50 내지 100메쉬), 이온 교환 수지를 컬럼(2x10cm)에 넣고, 무색 용리액을 얻을 때까지 물:MeOH(1:1,100mL)로 세척한 다음, Milli Q 물(100mL)로 세척하여 MeOH를 세척제거했다. 이온 교환 수지는, 산성 pH에 도달할 때까지 0.5M 황산(25mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH가 관찰될 때까지 물(100mL)로 세척하였다. 이온 교환 수지는, 염기성 pH에 도달할 때까지 1M 수산화리튬(25mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH까지 물(100mL)로 세척하였다. Milli Q 물(1mL) 중 화합물 37a(15mg, 0.04mmol)의 용액을 위에서 새로 준비한 Dowex Li+ 컬럼에 통과시켰다. 적절한 분획을 동결 건조하여, 표제 화합물(15mg, 96%)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 374.42 [M+H]+.
Figure pct00137
실시예 38
Figure pct00138
단계 a) ((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸피발레이트(38)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1.44mL, 1.44mmol)를, DMF(10mL) 중 화합물 I-35(100mg, 0.3mmol)의 용액에 실온에서 2분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(5mL) 중 화합물 I-4(181mg, 0.35mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 10% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(15mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 687.75 [M+H]+.
Figure pct00139
실시예 39
Figure pct00140
단계 a) ((Z)-2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(39)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 4mL, 4.0mmol)를, DMF(12mL) 중 화합물 I-37c(250mg, 0.8mmol)의 용액에 실온에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 무수 THF(6mL) 중 화합물 I-4(462mg, 0.9mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득한 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 4% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 B를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(피크-2)(70mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 651.69 [M+H]+.
Figure pct00141
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: (R,R) WHELK-01 (250X30)mm, 5μ
CO2: 75.0%
공동 용매: 25.0%(EtOH)
총 유량: 100.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 8.5분
로드/주입: 22mg
실시예 40
Figure pct00142
단계 a) ((Z)-2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(40)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 3.2mL, 3.2mmol)를, DMF(20mL) 중 화합물 I-38(200mg, 0.64mmol)의 용액에 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 무수 THF(10mL) 중 화합물 I-4(403mg, 0.8mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득한 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 4% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득된 화합물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하여, 표제 화합물(36mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 651.73 [M+H]+.
Figure pct00143
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak AD-H (30x250mm), 5μ
CO2: 85.0%
공동 용매: 15.0%(100% IPA)
총 유량: 70.0g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 6.0분
로드/주입: 8.9mg.
실시예 41
Figure pct00144
단계 a) 2-에틸부틸 ((S)-(((S,Z)-2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((((tert-부톡시카보닐)-L-발릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(41a)
tert-부틸마그네슘 클로라이드(THF 중 1M, 1.8mL, 1.8mmol)를, DMF(10mL) 중 화합물 I-39e(150mg, 0.34mmol)의 용액에 실온에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 무수 THF(5mL) 중 화합물 I-31c(201mg, 0.4mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하고, 수득된 조 화합물을 또 다른 배취와 합치고, DCM 중 4% MeOH로 용리되는 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(170mg) 반고체로 제공했다. MS (ES+) 794.92 [M+H]+.
단계 b) 2-에틸부틸 ((S)-(((S,Z)-1-(((L-발릴)옥시)메틸)-2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)사이클로프로필)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-류시네이트(41b)
1,4 디옥산(1mL, 4mmol) 중 4M HCl을, 1,4-디옥산(20mL) 중 화합물 41a(150mg, 0.2mmol)의 용액에 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 수득된 화합물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 2회 정제하였다. 순수한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하고 동결 건조하여, 표제 화합물(26mg)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 694.78 [M+H]+.
Figure pct00145
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralcel OX-H (250x30)mm, 5μ
CO2: 80.0%
공동 용매: 20.0%(MeOH)
총 유량: 70g/min
배압: 90.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 10.5분
로드/주입: 8.0mg
실시예 42
Figure pct00146
단계 a) (S,Z)-(2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((포스포노옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 이소부티레이트(42a)
증류된 POCl3(0.1mL, 1.0mmol)을, 트리에틸 포스페이트(1.9mL, 11.2mmol) 중 I-39a(150mg, 0.5mmol)의 현탁액에 0℃에서 첨가하고, 0℃에서 3시간 동안 교반했다. 상기 반응 혼합물에, 트리에틸 중탄산암모늄 완충액(1M, pH = 8)(7mL)을 0℃에서 첨가하고 감압 하에 농축하였다. 조 화합물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 2회 정제하고 동결 건조하여, 표제 화합물(40mg, 19%)을 고체로서 제공하였다. MS (ES+) 392.36 [M+H]+.
단계 b) 리튬(S,Z)-(2-((4-아미노-5-플루오로-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((이소부티릴옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 포스페이트(42b)
Dowex 50 WX8 수소 형태(50 내지 100메쉬), 이온 교환 수지를 컬럼(2x10cm)에 넣고, 무색 용리액을 얻을 때까지 물:MeOH(1:1,100mL)로 세척한 다음, Milli Q 물(100mL)로 세척하여 MeOH를 세척제거했다. 이온 교환 수지는, 산성 pH에 도달할 때까지 0.5M 황산(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH가 관찰될 때까지 물(200mL)로 세척하였다. 이온 교환 수지는, 염기성 pH에 도달할 때까지 1M 수산화리튬(50mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH까지 물(200mL)로 세척하였다. Milli Q 물(5mL) 중 화합물 41a(40mg, 0.1mmol)의 용액을 위에서 새로 준비한 Dowex Li+ 컬럼에 통과시켰다. 적절한 분획을 동결 건조하여, 표제 화합물(40mg, 92%)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 392.36 [M+H]+.
Figure pct00147
실시예 43
Figure pct00148
단계 a) ((S,Z)-2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 테트라하이드로젠 트리포스페이트(43a)
2-클로로-4H-벤조[d][1,3,2]디옥사포스피닌-4-온(54mg, 0.3mmol)의 용액을, 무수 DMF(2mL) 및 무수 피리딘(0.6mL) 중 화합물 I-36a(75mg, 0.3mmol)의 용액에 실온에서 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반했다. 무수 DMF(1.2mL) 중 트리부틸암모늄 피로포스페이트(130mg, 0.23mmol) 및 무수 트리부틸아민(0.15mL, 0.64mmol)의 용액을 첨가하고 실온에서 45분 동안 교반했다. 피리딘/물: 98:2(5.25mL/0.15mL) 중의 요오드(84mg, 0.33mmol) 용액을 첨가하고, 반응을 실온에서 15분 동안 교반했다. 5% NaHSO3(1.5mL)를 첨가하고 감압 하에 농축시켰다. 수산화암모늄(1.5mL)을 잔류물에 첨가하고 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하였다. 수득된 조 물질을 또 다른 배취와 합치고, 방법 F를 사용하여 제조용 HPLC로 2회 정제하고 동결 건조하여, 표제 화합물(23mg, 18%)을 고체로 제공하였다. MS (ES+) 464.32 [M+H]+.
단계 b) 리튬 (S,Z)-(2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸 트리포스페이트(43b)
Dowex 50 WX8 수소 형태(50 내지 100메쉬), 이온 교환 수지를 컬럼(2x10cm)에 넣고, 무색 용리액이 얻어질 때까지 물:MeOH(1:1, 50mL)로 세척한 다음, Milli Q 물(50mL)로 세척하여 MeOH를 세척제거했다. 이온 교환 수지는, 산성 pH에 도달할 때까지 0.5M 황산(25mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH가 관찰될 때까지 물(100mL)로 세척하였다. 이온 교환 수지는, 염기성 pH에 도달할 때까지 1M 수산화리튬(25mL)으로 다시 용리하고, 중성 pH까지 물(100mL)로 세척하였다. Milli Q 물(1mL) 중 화합물 43a(23mg, 0.05mmol)의 용액을 위에서 새로 제조한 Dowex Li+ 컬럼에 통과시켰다. 적절한 분획을 동결 건조시켰다. 수득된 잔류물을 방법 F를 사용하여 제조용 HPLC로 정제하고 동결 건조하여, 표제 화합물(7mg, 23%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ES+) m/z 464.29 [M+H]+.
Figure pct00149
실시예 44-1 & 44-2
Figure pct00150
단계 a) ((Z)-2-((2-아미노-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-퓨린-9-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 피발레이트(44-1 & 44-2)
화합물 38(55mg)을 정상 HPLC로 추가로 정제하였다.
44-1:
피크-1을 농축하고 동결 건조하여, 표제 화합물(13.6mg, 35)을 고체로 제공했다. MS (ES+) m/z 687.75 [M+H]+.
Figure pct00151
44-2:
피크-2를 농축하고 동결 건조하여, 표제 화합물(11.6mg, 3%)을 고체로 제공했다. MS (ES+) m/z 687.75 [M+H]+.
Figure pct00152
정상 HPLC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IA (30x250mm), 5μ
이동상: n-헥산:EtOH(30:70)
유량: 40.0mL/분
온도: 주위
파장: 236nm
런 타임: 13분
부하 능력/주입: 9.2mg
실시예 45-1 & 45-2
Figure pct00153
단계 a) ((Z)-2-((4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)메틸렌)-1-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((2-프로필펜틸)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)사이클로프로필)메틸 부티레이트(45-1 & 45-2)
화합물 32(1.5g)를 키랄 SFC에 의해 추가로 정제하였다.
45-1:
피크-1에서 수득한 잔류물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하였다. 불순한 화합물을 키랄 SFC로 추가로 정제하고 동결 건조하여, 표제 화합물(215mg)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 633.72 [M+H]+
Figure pct00154
45-2:
피크-2에서 수득된 잔류물을 방법 A를 사용하여 제조용 HPLC로 추가로 정제하고 동결 건조하여, 표제 화합물(280mg)을 고체로 제공했다. LCMS (ES+) m/z 633.72 [M+H]+
Figure pct00155
제조용 SFC 조건
컬럼/치수: Chiralpak IC (30x250mm), 5μ
CO2: 50.0%
공동 용매: 50.0%(이소프로판올)
총 유량: 110.0g/min
배압: 100.0bar
UV: 214nm
스택 시간: 13분
로드/주입: 50mg
제조용 SFC 조건(실시예 45-1)
컬럼/치수: Chiralpak IG (30x250mm), 5μ
CO2: 70.0%
공동 용매: 30.0%(100% 이소프로판올)
총 유량: 100mg/min
배압: 100bar
UV: 214nm
스택 시간: 12.2분
로드/주입: 24.5mg
비교 실시예 1
트리에스테르 포스포로알라니네이트의 불안정성
상기 합성된 중간 화합물 I-19 d2 및 I-25는 문헌[Yan et al, J Med Chem 2005 48 91-99]에 개시된 선행 기술 화합물과 유사한 트리에스테르 포스포로-알라니네이트이다:
Figure pct00156
이러한 모델 화합물의 구조적 무결성은 다음과 같이 22 내지 29일 동안 LC MS에 의해 평가되었다.
Figure pct00157
따라서, 각각의 트리에스테르포스포랄리네이트의 약 1/4이 3주가 조금 넘는 동안 분해된 것으로 결론지었다.
생물학적 실시예 1
본 발명의 화합물은 다음 검정을 사용하여 백혈병 세포주 THP-1, EOL-1 및 MV4-11에 대한 활성에 대해 평가되었다:
물질
세포 및 세포 배양:
ATCC 카탈로그 번호 TIB-202의 THP-1(인간 급성 단핵구성 백혈병)은 완전 세포 배지에서 성장되지 않았다: RPMI-1640 배지 Gibco 카탈로그 번호 11835-063(Fisher Scientific), 10% 소 태아 혈청(FBS), HyClone 카탈로그 번호 SV30160.03, 로트 번호 RAB35924(GE Healthcare Life Sciences), 페니실린 50u/mL/스트렙토마이신 0.05mg/mL PAA 카탈로그 번호 P11-010(Fisher Scientific).
ATCC 카탈로그 번호 CRL-9591의 인간 B-골수단핵구성 백혈병인 MV4-11 세포는 완전 세포 배지에서 성장되었다: IMDM(w. GLUTAMAX-1) 카탈로그 번호 31980022(Fisher Scientific), 10% 소 태아 혈청(FBS) HyClone 카탈로그 번호 SV30160.03, 로트 번호 RAB35924(GE Healthcare Life Sciences), 페니실린 50u/mL/스트렙토마이신 0,05mg/mL PAA 카탈로그 번호 P11-010(Fisher Scientific).
DSMZ 카탈로그 번호 ACC 386의 EOL-1(인간 급성 단핵구 백혈병)은 완전 세포 배지에서 성장되었다: RPMI-1640 배지 Gibco 카탈로그 번호 11835-063(Fisher Scientific), 10% 소 태아 혈청(FBS), HyClone 카탈로그 번호 A15102, 로트 번호 10211-2117(GE Healthcare Life Sciences), 페니실린 50u/mL/스트렙토마이신 0.05mg/mL PAA 카탈로그 번호 P11-010(Fisher Scientific).
세포 배양 플라스크 75cm2, Sarstedt AB의 카탈로그 번호 83.1813.
화합물 희석 플레이트, 96-웰, V-바닥 PP 플레이트, Thermo Scientific의 Nunc 카탈로그 번호 249944.
세포 검정 플레이트, 96-웰, Fisher Scientific의 카탈로그 번호 128009296
Dojindo의 세포 계수 Kit-8 CK04.
시험 화합물은 DMSO에서 최대 10mM 스톡 용액으로 이루어졌다.
방법
백혈병 세포(THP-1, EOL-1 및 MV4-11)를 약 100mL의 완전 세포 배지로 세포 배양 플라스크 75cm2에서 성장시켰다. 60μm 센서(Millipore)를 사용하여 Scepter-hand held 자동 세포 계수기를 사용하여 세포를 계수하고, 완전 세포 배지에 2x105cell로 현탁시켰다. 100μl의 세포 현탁액을 모든 웰에 씨딩하였다(2x104cell/웰).
시험 화합물 희석:
화합물을 12가지 농도의 10배 연속 희석인 50 내지 5x10-10μM에서 시험하였다.
화합물 희석 플레이트에서 100μl를 세포 검정 플레이트 = 200μl/웰의 총 용적으로 옮기고, 37℃, 5% CO2 항온배양기에서 5일 동안 항온배양했다.
5일 후, 10μl의 KIT-8을 첨가하고, 배양물을 37℃, 5% CO2 항온배양기에서 3 내지 4시간 동안 항온배양하였다.
플레이트를, 620nm의 기준 필터를 사용하여 분광 광도계에서 파장 450nm에서 판독했다.
데이터 검정
CC50 값은 화합물 농도의 로그에 대한 억제 정도(비히클 대조군에 대한 비교)를 플로팅하여 계산된다. 연속 희석의 결과 값은 다음 수학식으로 설명되는 4-파라미터 시그모이드 용량-반응 곡선에 피팅된다:
F(x) = D + (A-D)/(1+(x/C)^B)
여기서,
A = 최소값
B = 경사
C = 변곡점이다. 변곡점은 곡률이 방향 또는 기호를 변경하는 곡선 상의 지점으로 정의된다.
D = 최대값
F = 분획 억제
CC50 값은, 아래 표 4에 표에 나타낸, F = 0.5를 제공하는 x값이다.
[표 4]
Figure pct00158
상기 백혈병 세포주 모델에서 본 발명의 화합물이 선행 기술의 사이클로프로파비르 뉴클레오시드보다 상당히 더 활성이라는 것이 명백할 것이다.

Claims (23)

  1. 화학식 I로 나타내어지는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
    [화학식 I]
    Figure pct00159

    상기 화학식 I에서,
    B는 그룹 (a) 내지 (d):
    Figure pct00160

    로부터 선택되는 핵 염기이고;
    U는 O 또는 S이고;
    Rx는 -OC(=O)Ry, -OC(=O)CH(Ry)NH2 또는 -OCH2OC(=O)Ry이고; 또는
    Rx와 R1이 함께 결합(bond)을 한정하여 사이클릭 포스페이트를 형성하고,
    Ry는 C1-C20알킬 또는 C2-C20알케닐이고, 이들 중 어느 것은 플루오로, 하이드록시 및 아미노로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환되고, 또는
    Ry는 D 입체 배열(configuration) 또는 L 입체 배열일 수 있는 천연 아미노산의 측쇄이고,
    R1은 H이거나, 또는 페닐, 벤질, 나프틸, 피리딜 또는 인돌릴로부터 선택되는 사이클릭 그룹이고, 상기 사이클릭 그룹 각각은 1, 2 또는 3개의 R22로 임의로 치환되고; 또는
    R1과 Rx가 함께 결합을 한정하여 사이클릭 포스페이트를 형성하고,
    각각의 R22는 할로, 하이드록시, C1-C6알킬, C3-C6사이클로알킬, 할로C1-C6알킬, 하이드록시C1-C6알킬, C1-C6알콕시, 할로C1-C6알콕시, C1-C6알킬카보닐, C3-C6사이클로알킬카보닐, 아지도, 시아노, 아미노로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 인접한 환 탄소원자들에 부착된 임의의 2개의 R22 그룹이 결합하여(combine) -O-(CH2)1-2-O-를 형성할 수 있고, 여기서 C3-C6사이클로알킬은 C1-C3알킬로 임의로 치환되고;
    R2 및 R2'는 각각 독립적으로, H, C1-C6알킬, C3-C7사이클로알킬, C3-C7사이클로알킬C1-C3알킬, 페닐, 벤질 및 인돌릴로부터 선택되고; 또는
    R2 및 R2'는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 C3-C7사이클로알킬렌 그룹을 형성하고,
    여기서, 각각의 C1-C6알킬은 할로 또는 OR12로 임의로 치환되고, 각각의 C3-C7사이클로알킬, C3-C7사이클로알킬렌, 페닐 및 벤질은, C1-C3알킬, 할로 및 OR12로부터 독립적으로 선택되는 1개 또는 2개의 그룹으로 임의로 치환되고; 또는
    R2 및 R2' 중 하나는 H이고, 다른 하나는 천연 아미노산의 측쇄이며, 여기서, Asp 또는 Glu의 카복시 말단은 C1-C6알킬로 임의로 에스테르화되고;
    R3은 C1-C10알킬, C3-C7사이클로알킬, C1-C3알킬C3-C7사이클로알킬, 페닐 또는 벤질이고, 이들 중 어느 것은 할로, 하이드록시, C1-C6알콕시, C1-C6할로알콕시 및 N(R12)2로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환되고;
    R4, R5, R7 및 R8은 각각 독립적으로, H, C1-C6알킬, C1-C6할로알킬, C1-C6하이드록시알킬, 할로, -OR12 또는 -N(R12)2이고;
    R6, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로, H, C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C7사이클로알킬, C1-C6할로알킬, C1-C6하이드록시알킬, 할로, OR12, -N(R12)2, -NHC(O)OR12, 시아노, -C(O)OR12, -C(O)N(R12)2 또는 -NHC(O)R13이고, 여기서 C2-C6알케닐 및 C2-C6알키닐은 할로 또는 C3-C5사이클로알킬로 임의로 치환되고;
    각각의 R12는 독립적으로, H, C1-C6알킬, 할로C1-C6알킬, C3-C7사이클로알킬 또는 C1-C6알킬C3-C7사이클로알킬이고;
    R13은 R12 또는 CH2CH(NH2)C(=O)OH이고,
    단, 상기 화합물은 화학식
    Figure pct00161

    의 화합물은 아니다.
  2. 제1항에 있어서, B가 그룹 (d):
    Figure pct00162

    (상기 그룹 (d)에서,
    R11은 NH2 또는 NHCOC1-C6알킬이다)
    인, 화합물.
  3. 제1항에 있어서, B가 그룹 (c):
    Figure pct00163

    (상기 그룹 (c)에서,
    R9는 C1-C6알콕시, C1-C6사이클로알콕시, C1-C6알킬아민 또는 C3-C6사이클로알킬아민이고,
    R10은 NH2 또는 NHCOC1-C6알킬이다)
    인, 화합물.
  4. 제1항에 있어서, B가 그룹 (a):
    Figure pct00164

    (상기 그룹 (a)에서,
    R4는 H이고,
    R5는 F 또는 H이고,
    R6은 NH2이다)
    인, 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 H이거나, 또는 1개 또는 2개의 R22로 임의로 치환된 페닐이고, 각각의 R22는 할로, C1-C3알킬, C3-C4사이클로알킬, 할로C1-C3알킬, C1-C3알콕시, 할로C1-C3알콕시, C1-C3알킬카보닐, C3-C4사이클로알킬카보닐로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, C3-C4사이클로알킬은 메틸로 임의로 치환되는, 화합물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 페닐이 4-위치에서 Br로 치환되는, 화합물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 페닐이 치환되지 않은, 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R2'가 H이고, R2가 C1-C6알킬 또는 할로C1-C6알킬인, 화합물.
  9. 제8항에 있어서, 입체 화학이 부분 화학식:
    Figure pct00165

    으로 나타내어지는, 화합물,
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, R2가 메틸인, 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 C1-C10알킬, 바람직하게는 메틸, 이소프로필, 2-프로필펜틸 또는 2-에틸부틸인, 화합물.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 벤질 또는 C3-C7사이클로알킬인, 화합물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, Rx가 -OC(=O)C1-C6알킬이고, 바람직하게는 상기 C1-C6알킬 모이어티(moiety)가 메틸, 이소프로필, 이소부틸 또는 t-부틸인, 화합물.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, Rx가 -OC(=O)C16-C20알킬, 바람직하게는 -OC(=O)C17알킬인, 화합물.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, Rx는 -OC(=O)CH(Ry)NH2이고, Ry는 천연 아미노산, 바람직하게는 알라닌의 측쇄이고, Ry가 부착된 키랄 중심에서의 입체 배열은 L-아미노산의 입체 배열인, 화합물.
  16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, Rx가 -OCH2OC(=O)CH3 또는 -OCH2OC(=O)C(CH3)3, 바람직하게는 -OCH2OC(=O)C(CH3)3인, 화합물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, U가 O인, 화합물.
  18. 제1항에 있어서, 다음 화학식들의 화합물들 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염으로부터 선택되는, 화합물:
    Figure pct00166

    Figure pct00167

    Figure pct00168

    Figure pct00169

    Figure pct00170
  19. 제1항에 있어서, 다음 화학식들의 화합물들 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염으로부터 선택되는, 화합물:
    Figure pct00171
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 암, 바람직하게는 백혈병의 치료에 사용하기 위한, 화합물.
  21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 기재된 화합물을, 약제학적으로 허용되는 애주번트(adjuvent), 희석제 또는 담체와 함께 포함하는, 약제학적 조성물.
  22. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 투여를 포함하는, 암, 바람직하게는 백혈병의 치료 방법.
  23. 암, 바람직하게는 백혈병 치료용 의약의 제조에서의, 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 용도.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5262564A (en) 1992-10-30 1993-11-16 Octamer, Inc. Sulfinic acid adducts of organo nitroso compounds useful as retroviral inactivating agents anti-retroviral agents and anti-tumor agents
US6352991B1 (en) * 1997-01-08 2002-03-05 Wayne State University 2-hydroxymethylcyclopropylidenemethylpurines and -pyrimidines as antiviral agents
WO1998030563A1 (en) * 1997-01-08 1998-07-16 The Regents Of The University Of Michigan 2-hydroxymethylcyclopropyli- denemethylpurines and -pyrimidines as antiviral agents
ATE518863T1 (de) 2002-03-15 2011-08-15 Univ Wayne State 2,2-bis(hydroxymethyl)cyclopropyliden methylpurine und pyrimidine als antivirale mittel
JP2011508740A (ja) * 2007-12-27 2011-03-17 エピファニー バイオサイエンシズ， インク． 抗ウイルス化合物
GB201311475D0 (en) 2013-06-27 2013-08-14 Alligator Bioscience Ab Polypeptides
UA117375C2 (uk) 2013-09-04 2018-07-25 Медівір Аб Інгібітори полімерази hcv
TWI678373B (zh) * 2014-10-31 2019-12-01 日商富士軟片股份有限公司 硫代核苷衍生物或其鹽及醫藥組合物
CN107286190A (zh) * 2016-04-13 2017-10-24 刘沛 核苷之烃氧基苄基氨基磷酸/膦酸酯衍生物的制备及其医药用途
GB201609601D0 (en) * 2016-06-01 2016-07-13 Nucana Biomed Ltd Phosphoramidate compounds
US20180030080A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alexandre Vasilievich Ivachtchenko Phosphoramidate nucleoside prodrug for treating viral diseases and cancer, processes for their preparation and their use
CN107011383A (zh) 2017-04-28 2017-08-04 朱孝云 氘代无环核苷膦酸二酯

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