CN112105624B - 使用(2,2-双羟甲基)亚甲基环丙烷核苷酸治疗癌症 - Google Patents

使用(2,2-双羟甲基)亚甲基环丙烷核苷酸治疗癌症 Download PDF

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Abstract

本发明提供可用于治疗癌症，特别是白血病的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐和组合物，其中B是核碱基；U是O或S；Rx是‑OC(＝O)Ry、‑OC(＝O)CH(Ry)NH2、‑OCH2OC(＝O)Ry；Ry是任选地取代的烷基或烯基或者天然或非天然氨基酸的侧链，R1是H，或任选地取代的苯基、苄基、萘基、吡啶基或吲哚基，或Rx和R1一起限定键，从而形成环状磷酸酯；R2和R2’一起定义天然或非天然氨基酸的侧链；R3是任选地取代的烷基、环烷基、苯基或苄基。

Description

使用(2,2-双羟甲基)亚甲基环丙烷核苷酸治疗癌症
发明领域
本发明涉及(2,2-双羟甲基)亚甲基环丙烷核苷类似物及其衍生物，包括鸟嘌呤衍生物cyclopropavir(CPV)的磷前药，其用于治疗癌症。本发明进一步涉及包含这些化合物的组合物和组合，以及它们用于治疗癌症，特别是白血病的方法。
背景技术
亚甲基环丙烷核苷类似物是已确立的有效针对多种疱疹病毒，例如巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)和人疱疹病毒6和8(HHV-6和HHV-8)的抗病毒剂。一种这样的抗病毒剂是cyclopropavir，2,2-双-(羟甲基)亚环丙基甲基鸟嘌呤(也称为CPV，filociclovir或MBX400)，其合成和抗疱疹活性在WO2003/104440中公开。CPV作为核苷给予。
作用机理研究表明，CPV最初被病毒蛋白激酶UL97磷酸化，同时可以通过细胞激酶将CPV单磷酸酯(CPV-MP)转化为CPV二磷酸酯(CPV-DP)和CPV三磷酸酯(CPV-TP)。因此，CPV仅在感染了一种疱疹病毒的细胞中被激活为抗病毒活性物质。在2017年，CPV完成了适应症CMV感染的I期临床试验。
先前在WO2003/104440或学术文献或其他地方都没有公开过针对cyclopropavir或其衍生物的癌症活性，这是可以理解的，因为CPV仅在疱疹病毒感染的细胞中被磷酸化，这意味着核苷CPV对未感染的细胞无毒。
Yan等人，J Med Chem,2005,48,91-99描述了使用环状磷酸酯或三酯磷酰丙氨酸酯方法拓宽CPV抗病毒谱的尝试：
然而，Yan公开的上述化合物7a对鼠类和人类巨细胞病毒的效力比相应的核苷CPV低十倍以上，意味着CMV感染是CPV的临床目标。化合物7a对疱疹病毒1和2也无活性，但抗EBV与母体核苷CPV基本等效，尽管Yan等人通过论述其活性依赖于测定来证明这一点。显然地，化合物7a在不存在疱疹UL97激酶的肿瘤适应症中并不是开发新化合物的有希望的起点。另外，如下面的比较例1所证明的，本专利申请人已经确定了由化合物7a代表的类别的化合物，即CPV的三酯磷酰丙氨酸酯是不稳定的。在解决方案中，他们在22天内分解，损失了约四分之一的完整性。在固体形式的此类化合物中已经观察到类似现象，但尚未定量。
Yan等人在第93页右栏表1下方的完整的第一句中进一步披露，“没有证据表明形成环状磷酸酯26”：
如Yan等人的方案5中所述，并且没有另外的合成或分离。
发明描述
本发明涉及如下定义的式I的化合物，包含这样的化合物的药物组合物和合成所述化合物的方法。因此，一方面，本发明提供了式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐：
其中：
B是选自基团(a)至(d)的核碱基：
U是O或S；
Rx是-OC(＝O)Ry、-OC(＝O)CH(Ry)NH2、-OCH2OC(＝O)Ry；或
Rx和R1一起限定键，从而形成环状磷酸酯；
Ry是C1-C20烷基或C2-C20烯基，其任何一个任选地被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自氟、羟基和氨基；或
Ry是天然氨基酸的侧链，其可以是D或L构型；
R1是H，或选自苯基、苄基、萘基、吡啶基或吲哚基的环状基团，所述环状基团的每个任选地被一个、两个或三个R22取代；或
R1和Rx一起限定键，从而形成环状磷酸酯；
每个R22独立地选自卤素、羟基、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤代-C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷基羰基、C3-C6环烷基羰基、叠氮基、氰基、氨基，或连接到相邻环碳原子的任何两个R22基团可以结合以形成-O-(CH2)1-2-O-，其中C3-C6环烷基任选地被C1-C3烷基取代；
R2和R2’各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C3-C7环烷基C1-C3烷基、苯基、苄基和吲哚基；或
R2和R2’与它们所连接的碳原子一起形成C3-C7亚环烷基；
其中每个C1-C6烷基任选地被卤素或OR12取代，并且每个C3-C7环烷基、C3-C7亚环烷基、苯基和苄基任选地被一个或两个独立地选自C1-C3烷基、卤素和OR12的基团取代；或
R2和R2’中的一个是H，另一个是天然氨基酸的侧链；其中Asp或Glu的羧基末端任选地被C1-C6烷基酯化；
R3是C1-C10烷基、C3-C7环烷基、C1-C3烷基C3-C7环烷基、苯基或苄基；其任何一个任选地被1、2或3个各自独立地选自卤素、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基和N(R12)2的取代基取代；
R4、R5、R7和R8各自独立地是H、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、卤素、-OR12或-N(R12)2；
R6、R9、R10和R11各自独立地为H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、卤素、OR12、-N(R12)2、-NHC(O)OR12、氰基、-C(O)OR12、-C(O)N(R12)2或-NHC(O)R13，其中C2-C6烯基和C2-C6炔基任选地被卤素或C3-C5环烷基取代；
每个R12独立地为H、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基或C1-C6烷基C3-C7环烷基；
R13是R12或CH2CH(NH2)C(＝O)OH；
条件是所述化合物不是
式(I)的化合物可以任选地以药学上可接受的盐和/或溶剂化物的形式提供。一方面，本发明提供了药学上可接受的盐形式的式(I)的化合物。在另一方面，本发明提供了药学上可接受的溶剂化物形式的式(I)的化合物。在另一方面，本发明提供了其游离形式的式(I)的化合物。
在本发明的典型实施方案中，核碱基B是基团(d)：
其中
R11是NH2或NHCOC1-C6烷基，特别是鸟嘌呤。
在本发明的供选择的实施方案中，核碱基B是基团(c)：
其中R9是C1-C6烷氧基、C1-C6环烷氧基、C1-C6烷基胺基或C3-C6环烷基胺基，并且R10是NH2或NHCOC1-C6烷基。
在本发明的供选择的实施方案中，核碱基B是基团(c)：
其中R9是H并且R10是NH2。
在本发明的供选择的实施方案中，核碱基B是基团(a)中的胞嘧啶或5-氟胞嘧啶：
其中：R4是H，
R5是F或H，并且
R6是NH2。
本发明的某些实施方案具有R1为H。
本发明的另外的实施方案具有R1为苯基，其任选地被一个或两个R22取代，并且每个R22独立地选自卤素、C1-C3烷基、C3-C4环烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、卤代C1-C3烷氧基、C1-C3烷基羰基、C3-C4环烷基羰基，其中C3-C4环烷基任选地被甲基取代；
本发明的实施方案具有R1为苯基，其在4位上被Br取代。供选择的实施方案具有未取代的苯基作为R1。
在某些实施方案中，式I中的-O-C(＝O)-CR2’(R2)-NH-部分表示携带天然氨基酸的任何侧链的L-、或D-或DL-氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺。Asp或Glu侧链的羧基末端任选地被C1-C6烷基，例如与R3相同的烷基酯化。
本发明的某些实施方案具有R2’为H，并且R2为C1-C6烷基或卤代C1-C6烷基，例如叔丁基、正丁基或氟亮氨酸的侧链。
在某些实施方案中，立体化学如部分式中所示：
特别地，其中R2是甲基。
本发明的实施方案具有R3为C1-C10烷基，优选地甲基、异丙基、2-丙基戊基或2-乙基丁基。
本发明的供选择的实施方案具有R3为苄基或C3-C7环烷基，例如环戊基或环己基。
本发明的某些实施方案具有Rx为-OC(＝O)C1-C6烷基，优选地其中C1-C6烷基部分是甲基、异丙基、异丁基或叔丁基。
本发明的另一个实施方案具有Rx为-OC(＝O)C16-C20烷基，优选地-OC(＝O)C17烷基，例如鲸蜡酰基、硬脂酰基或二十碳酰基。
在供选择的实施方案中，Rx是-OC(＝O)CH(Ry)NH2，其中Ry是天然氨基酸的侧链，例如异亮氨酸、亮氨酸，和优选地缬氨酸，并且Ry所连接的手性中心处的构型是L-氨基酸的构型。
在本发明的供选择的实施方案中，Rx是-OCH2OC(＝O)CH3或-OCH2OC(＝O)C(CH3)3，优选地-OCH2OC(＝O)C(CH3)3。
在本发明的优选的实施方案中，U是O。
本发明的特定实施方案包括：
及其药学上可接受的盐。
本发明的另外的特定实施方案包括：
及其药学上可接受的盐。
本发明的特定的实施方案具有式：
及其药学上可接受的盐。
本发明的特定的实施方案具有式：
及其药学上可接受的盐。
本发明的特定的实施方案具有式：
及其药学上可接受的盐。
本发明的特定的实施方案具有式：
及其药学上可接受的盐。
本发明的特定的实施方案具有式：
及其药学上可接受的盐。
本发明的化合物显示出针对癌症，特别是淋巴细胞性和髓型白血病的活性，并且可以用作治疗患有这种癌症的温血动物，特别是人的药物。可应用本发明的淋巴细胞性癌症包括急性成淋巴细胞性白血病(ALL)或慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。可以应用本发明的髓性白血病包括急性髓性白血病(AML)、成髓细胞性白血病和慢性髓性白血病(CML)，包括慢性髓单核细胞性白血病。其他白血病包括毛细胞白血病(HCL)和青少年髓单核细胞白血病。
每当在上文和下文中使用时，术语“式(I)的化合物”或“发明的化合物”或“本发明的化合物”或类似术语意指包括式(I)的化合物，其药学上可接受的前药、盐、溶剂化物、季铵、立体异构体和互变异构体以及金属络合物。
本发明的另一方面提供了药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药，立体异构体或互变异构体以及药学上可接受的载体。药学上可接受的载体可以进一步包括赋形剂、稀释剂或表面活性剂。可以分别根据常规混合、制粒或包衣方法制备组合物，并且本发明的药物组合物可以包含按重量或体积计约0.1％至约99％，约5％至约90％或约1％至约20％的所公开的化合物。
在另一方面，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体或互变异构体，其用作药物，特别地用于治疗癌症如白血病。
在另一方面，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体或互变异构体，用于治疗或预防癌症，特别地用于治疗癌症如白血病。
一方面，在与一种或多种治疗剂(药物组合)或治疗方式例如非药物疗法的联合治疗中以治疗有效量给予本发明的化合物。例如，可以与其他抗增殖、抗癌、免疫调节或抗炎物质发生协同作用。当本发明的化合物与其他疗法联合给药时，共同给药的化合物的剂量将根据所使用的共同药物的类型，所使用的特定药物，所治疗的病症等而变化。
根据本发明的联合疗法包括与一种或多种其他生物活性成分联合给药本发明的化合物，所述其他生物活性成分包括但不限于第二和不同的抗肿瘤药剂或靶向DNA修复的第二药剂和非药物疗法，所述非药物疗法包括但不限于手术或放射治疗。例如，本发明的化合物可以与其他药物活性化合物，优选能够增强本发明的化合物的作用的化合物联合使用。本发明的化合物可以例如作为单一制剂或单独制剂同时地或相继地施用于其他药物疗法或治疗方式。通常，联合疗法设想在单个周期或疗程中施用两种或更多种药物。
在一个实施方案中，本发明提供了一种在正在经历抗癌剂治疗的哺乳动物中增强癌症的化学治疗的方法，该方法包括向哺乳动物共同施用有效量的本发明的化合物。在某些实施方案中，抗癌剂是DNA损伤剂。DNA损伤剂可以是任何合适的DNA损伤剂。合适的DNA损伤剂的非限制性实例包括DNA损伤剂(放线菌素、氨苄青霉素、蒽环类、博来霉素、白消安(busulfan)、喜树碱、卡铂、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、癌得星(cytoxan)、放线菌素D、柔红霉素、阿霉素、表柔比星、六甲基三聚氰胺奥沙利铂、异环磷酰胺、美法仑、氮芥、丝裂霉素、米托蒽醌、亚硝基脲、普卡霉素、丙卡巴肼、紫杉醇、泰素帝、替尼泊苷、三亚乙基硫代磷酰胺和依托泊苷。在优选的实施方案中，DNA损伤剂是顺铂。DNA损伤剂也可以是辐射或生物治疗剂如抗体。
在某些实施方案中，DNA损伤剂可以是辐射，例如当施用至细胞时诱导细胞中DNA交联的辐射。DNA交联辐射包括电离辐射和紫外线(UV)辐射。电离辐射由亚原子粒子或电磁波组成，这些亚原子粒子或电磁波的能量足以通过使电子从原子或分子中脱离而引起电离。电离取决于撞击单个粒子或波的能量。通常，能量高于几个电子伏特的电离粒子或光子可以被电离。电离粒子的非限制性实例是α粒子、β粒子和中子。光子电离原子或分子的能力取决于其频率。短波辐射(例如高频紫外线、X射线和伽马射线)是电离。电离辐射来自放射性材料、X射线管和粒子加速器。
在一些实施方案中，施用式(I)的化合物或包含本发明的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物诱导细胞周期或细胞活力的改变。
此外，本发明的方法可以包括向受试者施用另外的治疗剂。所述另外的治疗剂可以优选地为：
(i)阻断或抑制免疫系统检查点的另外的免疫调节剂；和/或
(ii)直接刺激免疫效应反应的药剂，例如细胞因子或趋化因子(或刺激两者之一产生的药剂)，肿瘤特异性过继转移的T细胞群，或对肿瘤细胞表达的蛋白质具有特异性的抗体；和/或
(iii)包含肿瘤抗原或其免疫原性片段的组合物；和/或
(iv)化疗剂；和/或
(v)辐射。
本发明的化合物可以与另外的治疗剂同时施用或在另外的治疗剂之前或之后施用。本发明的化合物可以通过相同或不同的给药途径分开给药，或与另外的治疗剂在相同的药物组合物中一起给药。
免疫系统检查点的实例包括：
a)吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO1)与其底物之间的相互作用；
b)PD1与PDL1和/或PD1与PDL2之间的相互作用；
c)CTLA4与CD86和/或CTLA4与CD80之间的相互作用；
d)B7-H3和/或B7-H4与它们各自的配体之间的相互作用；
e)HVEM与BTLA之间的相互作用；
f)GAL9和TIM3之间的相互作用；
g)MHC I类或II类与LAG3之间的相互作用；和
h)MHC I类或II类与KIR之间的相互作用；
i)OX40(CD134)与OX40L(CD252)之间的相互作用；
k)CD40和CD40L(CD154)之间的相互作用；
l)4-1BB(CD137)与包括4-1BBL的配体之间的相互作用；
m)GITR与包括GITRL的配体之间的相互作用。
出于本发明的目的，优选的检查点是检查点(b)，即PD1与其配体PD-L1和PD-L2的任一个之间的相互作用。PD1在效应T细胞上表达。与任一种配体的结合均产生下调激活的信号。配体由一些肿瘤表达。特别地，PD-L1由许多实体瘤(包括黑色素瘤)表达。因此，这些肿瘤可能因此通过激活T细胞上的抑制性PD-1受体而下调免疫介导的抗肿瘤作用。通过阻断PD1与其一个或两个配体之间的相互作用，可以消除免疫应答的检查点，从而导致增强的抗肿瘤T细胞应答。因此，PD1及其配体是免疫系统检查点的组分的实例，优选地可以联合本发明对其进行靶向。
出于与本发明结合的目的，另一个优选的检查点是检查点(c)，即T细胞受体CTLA-4与其配体B7蛋白(B7-1和B7-2)之间的相互作用。最初激活后，CTLA-4通常在T细胞表面上调，而配体结合会产生抑制进一步/持续激活的信号。CTLA-4与受体CD28竞争结合于B7蛋白，该受体CD28也在T细胞表面上表达但其上调激活。因此，通过阻断CTLA-4与B7蛋白的相互作用，但不阻断CD28与B7蛋白的相互作用，可以消除免疫应答的正常检查点之一，从而导致增强的抗肿瘤T细胞应答。因此，CTLA4及其配体是免疫系统检查点的组分的实例，优选地可以结合本发明对其进行靶向。
免疫调节剂
本文所用的“免疫调节剂”是指当施用于受试者时，阻断或抑制免疫系统检查点的作用，从而导致在受试者中的免疫效应应答(通常是T细胞效应应答，其优选地包括抗肿瘤T细胞效应应答)上调的任何药剂。
用于本发明的方法的免疫调节剂可以阻断或抑制上述任何免疫系统检查点。所述药剂可以是抗体或导致所述阻断或抑制的任何其他合适的药剂。因此，该药剂通常被称为所述检查点的抑制剂。
本文所用的“抗体”包括完整抗体及其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或单链。抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体，并且可以通过任何合适的方法产生。抗体的术语“抗原结合部分”所涵盖的结合片段的实例包括Fab片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段和分离的互补决定区(CDR)。单链抗体例如scFv和重链抗体例如VHH和骆驼抗体也意图包含在术语抗体的“抗原结合部分”内。
阻断或抑制CTLA-4与B7蛋白之间相互作用的优选的抗体包括伊帕单抗(ipilumumab)、曲美单抗(tremelimumab)或WO2014/207063中公开的任何抗体。其他分子包括多肽或可溶性突变体CD86多肽。伊帕单抗是最优选的。
阻断或抑制PD1与PD-L1之间相互作用的优选的抗体包括纳武单抗(Nivolumab)、派姆单抗(Pembrolizumab)、Lambrolizumab、吡地利单抗(Pidilzumab)、BGB-A317和AMP-224。纳武单抗或派姆单抗是最优选的。抗PD-L1抗体包括阿特珠单抗(atezolizemab)、阿维单抗(avelumab)或度伐单抗(durvalumab)、MEDI-4736和MPDL3280A。
阻断或抑制4-1BB与其配体之间相互作用的优选抗体包括utomilumab。
其他合适的抑制剂包括小分子抑制剂(SMI)，其通常是有机小分子。IDO1的优选抑制剂包括依帕卡司他(INCB24360)、Indoximod、GDC-0919(NLG919)和F001287。IDO1的其他抑制剂包括1-甲基色氨酸(1MT)。
免疫效应应答的直接刺激
如本文所用，“直接刺激免疫效应应答的药剂”是指任何合适的药剂，但通常是指细胞因子或趋化因子(或刺激二者之一产生的药剂)，肿瘤特异性过继转移的T细胞群，或对肿瘤细胞表达的蛋白质具有特异性的抗体。
细胞因子可以是选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ的干扰素，或白介素，优选地IL-2。趋化因子可以是炎症介质，例如选自CXCL9、10和11的炎症介质，其吸引表达CXCR3的T细胞。刺激细胞因子或趋化因子产生的药剂可以是适合于对人施用的佐剂。优选的实例是卡介苗(BCG)，其通常膀胱内施用(即，尿道导管)以治疗膀胱癌。BCG治疗膀胱癌的典型剂量方案是每周一次，共六周，但是鉴于其悠久的安全历史，它也可以无限期地作为维持施用。已显示BCG刺激针对膀胱癌的免疫应答。BCG也已与包含肿瘤抗原的组合物(即与癌症疫苗)联合用作佐剂，特别是当其通常在皮内施用用于结肠癌时。在本发明中还设想了BCG的这种用途。
本发明化合物的施用可以通过治疗剂的任何施用方式来完成，包括全身或局部施用，例如口服、鼻腔、肠胃外、透皮、皮下、阴道、颊、直肠或局部施用方式。在一个实施方案中，经口服、肠胃外、皮下、通过注射或通过输注进行施用。
取决于预期的施用方式，所公开的组合物可以是固体、半固体或液体剂型，例如注射剂、片剂、栓剂、丸剂、延时释放胶囊、酏剂、酊剂、乳剂、糖浆剂、散剂、液体剂、混悬剂等，有时为单位剂量，并且与常规制药实践一致。组合物也可以静脉内(推注和输注)、腹膜内、皮下或肌内形式施用，并且所有形式均采用药学领域技术人员熟知的形式。
说明性的药物组合物是包含本发明的化合物和药学上可接受的载体的片剂和明胶胶囊，例如
a)稀释剂，如纯净水、甘油三酸酯油(例如氢化或部分氢化植物油或其混合物)、玉米油、橄榄油、葵花籽油、红花油、鱼油(例如EPA或DHA或其酯或甘油三酸酯或其混合物)、欧米茄-3脂肪酸或其衍生物、乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素、钠、糖精、葡萄糖和/或甘氨酸；
b)润滑剂，如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸的镁盐或钙盐、油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠和/或聚乙二醇；也用于片剂；
c)粘合剂，如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、碳酸镁、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(如阿拉伯胶、黄芪胶或海藻酸钠)、蜡和/或聚乙烯吡咯烷酮，如果需要；
d)崩解剂，如淀粉、琼脂、甲基纤维素、膨润土、黄原胶、藻酸或其钠盐，或泡腾混合物；
e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂；
f)乳化剂或分散剂，例如Tween 80、Labrasol、HPMC、DOSS、caproyl 909、labrafac、labrafil、peceol、transcutol、capmul MCM、capmul PG-12、captex 355、gelucire、维生素E TGPS或其他可接受的乳化剂；和/或
g)增强化合物吸收的药剂，例如环糊精、羟丙基-环糊精、PEG400和PEG200。
液体，尤其是可注射的组合物可以例如通过溶解，分散等来制备。例如，将本发明的化合物溶解在药学上可接受的溶剂中，或与之混合，所述药学上可接受的溶剂例如水、盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等，从而形成可注射的等渗溶液或混悬液。诸如白蛋白、乳糜微粒或血清蛋白之类的蛋白质可用于增溶所公开的化合物。
本发明的化合物也可以配制成栓剂，其可以使用聚亚烷基二醇如丙二醇作为载体由脂肪乳液或混悬液制备。
本发明的化合物也可以脂质体递送系统的形式施用，所述脂质体递送系统例如小的单层囊泡、大的单层囊泡和多层囊泡。脂质体可由包含胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱的多种磷脂质形成。在一些实施方案中，脂质成分的膜与药物的水溶液水合以形成包封药物的脂质层，如申请号为5,262,564的美国专利所述，其全部内容通过引用结合于此。
本发明的化合物还可以通过使用单克隆抗体作为与所公开的化合物偶联的单独载体来递送。本发明的化合物也可以与可溶性聚合物偶联作为可靶向的药物载体。这样的聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰基残基取代的聚环氧乙烷聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可以与用于实现药物的受控释放的一类可生物降解的聚合物偶联，例如，聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。在一个实施方案中，所公开的化合物不与聚合物例如共聚羧酸聚合物或聚丙烯酸酯共价结合。
肠胃外注射剂的施用通常用于皮下、肌内或静脉内注射和输注。注射剂可以常规形式制备，可以是液体溶液或混悬剂，也可以是适于在注射前溶解在液体中的固体形式。
根据多种因素选择利用本发明化合物的给药方案，所述因素包括患者的类型、种类、年龄、性别和医学状况，所治疗的疾病的性质，施用途径，患者的肾或肝功能和所用的特定化合物。具有本领域普通技术的医师或兽医可以容易地确定和开出预防、抵抗或阻止疾病进展所需的有效量的药物。
在体内或体外使用以达到指定效果的本发明的化合物在组合物中的有效剂量为约0.5mg至约5000mg化合物，例如0.5、5、20、50、75、100、150、250、500、750、1000、1250、2500、3500或5000mg的化合物，或者在一个量到另一个量的范围内。然而，通常合适的剂量可以在约0.005至约30mg/kg体重每天的范围内，优选地在0.05至20mg/kg/天的范围内。期望的剂量方便地以单剂量提供或以适当间隔，例如每天两次、三次、四次或更多次剂量的分剂量提供。取决于治疗和/或预防的需要，期望的剂量还可以是例如每两天一次、每三天一次或甚至每周一次。
该化合物方便地以单位剂型施用；例如，每单位剂型含有0.5-1500mg，方便地1-1000mg，最方便地5-700mg活性成分。
本发明的化合物通常将通过口服、肠胃外、静脉内、肌内、皮下或其他注射方式、经颊、直肠、阴道、经皮和/或经鼻途径和/或通过吸入方式以药物制剂的形式给药，所述药物制剂的形式包括：药学上可接受的剂型的活性成分或其药学上可接受的盐或前药或溶剂化物，或此类盐的溶剂化物。取决于待治疗的疾病和患者以及施用途径，可以以不同剂量施用组合物。
还提供了本发明的式(I)的化合物的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指衍生自药学上可接受的无机和有机酸或碱的盐。本发明的化合物的合适的药学上可接受的盐是例如足够碱性的本发明化合物的酸加成盐，例如与例如无机或有机酸形成的酸加成盐，所述无机或有机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、甲基磺酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸、2-间苯二甲磺酸、柠檬酸、乙酸、酒石酸、富马酸、乳酸、琥珀酸、苹果酸、丙二酸、马来酸、1,2-乙二磺酸、己二酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、乙磺酸或烟酸。另外，本发明的化合物的合适的药学上可接受的盐是足够酸性的本发明化合物的碱加成盐，例如金属盐，如钠、钾、钙、镁、锌或铝、铵盐，与提供生理上可接受的阳离子的有机碱形成的盐，其包括季铵离子，例如甲胺、乙胺、二乙胺、三甲胺、叔丁胺、三乙胺、二苄胺、N,N-二苄基乙胺、环己基乙胺、三-(2-羟乙基)胺、羟乙基二乙胺、(1R,2S)-2-羟基茚-1-胺、吗啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、哌嗪、甲基哌嗪、金刚烷基胺、氢氧化胆碱、四丁基氢氧化铵、氢氧化三-(羟甲基)甲胺、L-精氨酸、N-甲基D-葡糖胺、赖氨酸、精氨酸等。
本发明包括未标记的化合物以及其中一个或多个原子被该原子的同位素替代的化合物，所述同位素即与通常在自然界中发现的原子具有相同原子序数但原子质量不同的原子。可以掺入本发明的化合物中的同位素的实例包括但不限于氢的同位素，例如2H(氘，也表示为D)和3H(氚，也表示为T)，碳，例如11C、13C和14C，氮，例如13N和15N，氧，例如15O、17O和18O，磷，例如31P和32P，氟，例如18F，氯，例如36Cl，以及溴，例如75Br、76Br、77Br和82Br。同位素标记的化合物包括例如其中存在放射性同位素如3H和14C的那些，或其中存在非放射性同位素如2H和13C的那些。
在含有同位素的化合物中所包含的同位素的选择将取决于该化合物的具体应用。例如，对于药物或底物的组织分布测定或在代谢研究中，其中掺入放射性同位素(例如3H或14C)的化合物通常最为有用。对于放射成像应用，例如正电子发射断层扫描(PET)，诸如11C、18F、13N或15O的正电子发射同位素将是有用的。向本发明的化合物中掺入较重的同位素(如氘，即2H)可提供由更高的代谢稳定性引起的某些治疗优势，其例如可导致化合物的体内半衰期延长、剂量需求降低或治疗指标改善。
同位素标记的式(I)的化合物或其任何亚组通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过使用合适的同位素标记的试剂或起始原料，而不是相应的非同位素标记的试剂或起始原料，通过使用本文的方案和/或实施例中描述的那些类似的方法来制备。
药学上可接受的溶剂化物包括其中结晶的溶剂可以被同位素取代的那些，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
当本发明的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、立体异构体和前药中存在互变异构体时，所有单独的互变异构形式及其组合均意在作为单独的具体实施方案在本发明的范围内。
本发明的化合物中一个或多个手性中心的存在可以产生立体异构体。因此，具有一个或多个手性中心的本发明的化合物可以作为外消旋或对映体富集形式的立体异构体混合物的存在，即每个手性中心可以具有(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在每个手性中心，两种构型的比率优选为至少75/25、至少80/20、至少85/15、至少90/10、至少98/2或至少99.5/0.5。在其中化合物为对映体的本发明的实施方案中，对映体过量为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少95％或至少99％。另外，具有两个或更多个手性中心的本发明的化合物还可以分别是差向异构体或非对映异构体，即在一个或多个立体中心具有不同的立体化学。如果可能，原子上具有不饱和双键的取代基可以顺式(Z)-或反式(E)-的形式存在。除非立体化学由化学结构清楚地定义，否则在每种情况下，本发明应理解为延伸到所有此类纯净形式和彼此混合的立体异构体，包括其对映异构体、差向异构体、非对映异构体以及混合物，包括外消旋混合物。
因此，本发明的化合物的所有异构形式均在本发明的范围内，包括所有可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体、顺式和反式异构体、非对映异构体、旋光异构体、外消旋体及其混合物。如果化合物包含双键，则取代基可以为E或Z构型。
可以基于成分的物理化学差异，将任何所得的异构体混合物分离为纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体，例如通过色谱法和/或分级结晶进行。
最终产物或中间体的任何得到的外消旋物可以通过已知方法拆分成旋光对映体，例如，通过分离使用旋光性酸或碱获得的其非对映异构盐，然后释放旋光性酸性或碱性化合物拆分。特别地，可以使用碱性部分将本发明的化合物拆分为其旋光对映体，例如通过与旋光性酸(例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O’-对甲苯甲酰基酒石酸、扁桃酸，苹果酸或樟脑-10-磺酸)形成的盐的分级结晶进行。外消旋产物也可以通过手性色谱法，例如使用手性固定相的高压液相色谱法(HPLC)，或通过超临界流体色谱法(SFC)来拆分。
应当理解，式(I)的化合物可以具有金属结合、螯合或络合物形成性质，因此可以作为金属络合物或金属螯合物存在。式(I)的化合物的这种金属化衍生物旨在包含在本发明的范围内。
上文和下文中使用的科学技术术语和命名具有与本领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义，此外，除非另外特别说明，否则以下定义将适用于整个说明书和所附权利要求。
有时会添加符号“-”以阐明哪个键充当连接点。例如，RO-表示基团，其中R与氧原子键合且所述氧原子在整个基团的连接点处，类似地，-C(＝O)R表示R-取代的羰基部分通过C原子连接到骨架。
作为基团或基团的部分的术语“Cm-Cn烷基”，例如Cm-Cn卤代烷基、Cm-Cn烷基羰基、Cm-Cn烷基胺等，其中m和n是≥0的整数，且m＜n，表示具有所示碳原子数的饱和的直链或支链烃基，例如C1-C4烷基是指具有1-4个碳原子的烷基，并且包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基和异丁基，类似地，C1-C6烷基是指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，还包括戊基和己基的所有直链和支链异构体。
作为基团或基团的部分的术语“Cm-Cn亚烷基”定义了具有m至n个碳原子的二价直链或支链饱和烃链，其中m和n为＞0的整数且m＜n，例如，亚甲基、亚乙基、1,3-丙二基、1,2丙二基等。
作为基团或基团的部分的术语“C2-Cn烯基”表示具有饱和碳-碳键和至少一个碳-碳双键并且具有所示碳原子数的直链或支链烃基，其中n为>2的整数，例如C2-C6烯基是指具有2至6个碳原子的烯基。示例性烯基基团包括但不限于次乙基(或乙烯基)、1-丙烯基、2-丙烯基(或烯丙基)、异丙烯基、丁烯基等。
作为基团或基团的部分的术语“C2-Cn炔基”表示具有饱和碳-碳键和至少一个碳-碳三键并且具有所示碳原子数的直链或支链烃基，其中n为>2的整数，例如C2-C6炔基是指具有2至6个碳原子的炔基。示例性炔基基团包括但不限于乙炔基、丙炔基、丙炔基，丁炔基等。
作为基团或基团的部分的术语“C3-Cn环烷基”表示具有所示碳原子数的饱和环状烃基，其中n为>4的整数，例如C3-C6环烷基是指具有3、4、5或6个碳原子的环烷基基团。示例性的环烷基基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基，环己基等，特别是环丙基。
术语“C3-Cn’环烷基Cm-Cn烷基”表示被C3-Cn’环烷基部分取代的Cm-Cn烷基基团，其中C3-Cn’环烷基和Cm-Cn烷基如以上分别针对C3-Cn环烷基和Cm-Cn烷基的定义。示例性C3-Cn’环烷基Cm-Cn烷基基团包括但不限于C3-C7环烷基C1-C3烷基，即环烷基部分通过甲基、乙基、正丙基或异丙基键合。
术语“Cm-Cn烷氧基”定义了基团O-Cm-Cn烷基，其中Cm-Cn烷基如上所定义。用于本发明的优选的Cm-Cn烷氧基基团是C1-C6烷氧基，即具有1至6个碳原子的烷氧基基团。示例性烷氧基基团包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基等。
术语“卤代”或“卤素”是氟、氯、溴和碘的通称。
作为基团或基团的部分的术语“卤代Cm-Cn烷基”表示其中至少一个C原子被一个或多个卤素原子取代的Cm-Cn烷基，特别是被一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个卤素原子取代的C1-C4烷基，例如具有一个或多个氟原子的甲基或乙基，例如二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基。如果在卤代Cm-Cn烷基的定义内将多于一个卤素原子连接到烷基，则卤素原子可以相同或不同。在许多情况下，优选三氟甲基。
术语“卤代Cn-Cm烷氧基”表示具有所示碳原子数的Cn-Cm烷氧基，其中至少一个C-原子被一个或多个卤素原子取代，通常为氯或氟。特别令人感兴趣的是C1-C6卤代烷氧基。在许多情况下，优选三氟甲氧基。
术语“羟烷基”是指如上定义的烷基，其中该烷基基团被一个或多个-OH基团取代。羟烷基的实例包括但不限于HO-CH2-、HO-CH2-CH2-和CH3-CH(OH)-。
术语“氧代”或“(＝O)”表示双键氧原子，即当连接到碳原子时形成羰基部分，当连接到硫原子时形成亚砜部分和当两个所述术语连接到相同的硫原子时形成磺酰基部分。应该注意的是，仅当该原子的化合价允许时，该原子才能被氧代基团取代。
术语“氨基”是指NH2。
术语“Cm-Cn烷基氨基”表示其中一个氢原子被Cm-Cn烷基替代的氨基，其中Cm-Cn烷基如上所定义。
术语“二(Cm-Cn烷基)氨基”表示其中两个氢原子均被Cm-Cn烷基替代的氨基，其中Cm-Cn烷基如上所定义，并且两个Cm-Cn烷基可以相同或不同，即(Cm-Cn烷基)2中的m和n彼此独立地选择。
术语“烷氧基酰胺基”表示NHC(＝O)C1-C6烷氧基，例如叔丁氧基羰基氨基。
本文所用的作为基团或基团的部分的术语“芳基”表示芳基部分，例如苯基或萘基或与C4-C6环烷基稠合的苯基(例如，茚满基)或C4-C6环烯基。合适的芳基基团的实例包括但不限于苯基、联苯基、萘基、四氢萘基、茚基和茚满基。
术语“芳基Cm-Cn烷基”表示被芳基取代的Cm-Cn烷基，其中芳基和Cm-Cn烷基如上所定义。用于本发明的优选的芳基Cm-Cn烷基基团是芳基C1-C3烷基，即，芳基部分通过甲基、乙基、正丙基或异丙基基团键合。
除非另有说明，本文所用的术语“杂环基”、“杂环的”或“杂环”表示由4-10个原子组成的饱和或部分不饱和的单环或双环系统，其中1、2、3或4个为各自独立地选自S、O和N的杂原子。合适的杂环基基团的实例包括但不限于吡喃基、四氢吡喃基、四氢硫吡喃基、硫代吡喃基、呋喃基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡唑啉基、吡唑烷基、噻唑烷基、噻二唑基、吡咯啉基、吡咯烷基、氮杂环丁基、氮杂环丙基等。除非另有说明，杂环基任选地被一个、两个或三个取代基取代。
术语“杂环氧基”定义为基团O-杂环基，其中杂环基如上所定义。
术语“杂环基Cm-Cn烷基”表示被杂环基取代的Cm-Cn烷基，其中杂环基和Cm-Cn烷基如上文所定义。用于本发明的优选的杂环基Cm-Cn烷基是杂环基C1-C3烷基，即杂环基部分通过甲基、乙基、正丙基或异丙基键合。
本文所用的术语“杂芳基”是指包含一个、两个、三个或四个各自独立地选自N、O和S的杂原子的单环、双环或三环环系统，其由5至14个环原子组成，其中至少一个杂原子是芳环的部分。术语“杂芳基”旨在包括所有可能的异构体形式以及所有稠合、桥接和螺环形式。“杂芳基”可以任选地被一个或多个取代基取代。
合适的杂芳基基团的实例包括但不限于吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、喹唑啉基、四氢喹唑啉基、喹喔啉基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻嗪基、苯并异噻嗪基、苯并噻唑基、苯并噁二唑基、苯并-1,2,3-三唑基、苯并-1,2,4-三唑基、苯并四唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并吡啶基、苯并嘧啶基、苯并哒嗪基、苯并吡唑基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、茚满基、吡咯并吡啶基、吡唑并吡啶基。除非另有说明，杂芳基任选地被一个、两个或三个取代基取代。
应该注意的是，在定义中使用的任何部分上的一个或多个基团的位置可以在该部分上的任何位置，只要它是化学稳定的即可。
除非另有说明，否则变量定义中使用的基团包括所有可能的异构体。例如，吡啶基包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基。
术语“杂芳基Cm-Cn烷基”表示被杂芳基取代的Cm-Cn烷基，其中杂芳基和Cm-Cn烷基如上文所定义。用于本发明的优选的杂芳基Cm-Cn烷基是杂芳基C1-C3烷基，即杂芳基部分通过甲基、乙基、正丙基或异丙基键合。
如本文所用，术语“任选地取代的”是指取代是任选的，即可以被取代或可以不被取代。例如，表述“任选地被一个或多个取代基取代的烷基”是指烷基被零个、一个或多个取代基取代。
术语“取代的”是指其中至少一个氢原子被取代基取代的分子。
当变量在任何组成部分中多次出现时，每个定义都是独立的。
如本文所用，术语“盐”或“多种盐”是指化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别地包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物学有效性和性质，并且通常并非生物学上或其他方面不希望的盐，在许多情况下，所述化合物能够凭借氨基和/或羧基或与其类似的基团的存在形成酸和/或碱盐。
术语“溶剂化物”是指由溶质和溶剂形成的可变化学计量的复合物。用于本发明目的的此类溶剂可以不干扰溶质的生物学活性。合适的溶剂的实例包括但不限于水、MeOH、EtOH和AcOH。其中水是溶剂分子的溶剂化物通常称为水合物。水合物包括含有化学计量量的水的组合物，以及含有可变量的水的组合物。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等及其组合，如本领域技术人员所公知的(参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Printing Company,1990,pp.1289-1329)。除非与活性成分不相容的任何常规载体，否则考虑将其用于治疗或药物组合物中。
术语“治疗有效量”是指将引起受试者的生物学或医学反应，例如减少或抑制酶或蛋白质活性，或改善症状，缓解病症，减慢或延缓疾病进程，或预防疾病等的物质的量。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于受试者时，足以实现免疫调节作用的本发明的化合物的量，其至少部分地减轻、抑制、预防和/或改善癌症状况。
如本文所用，“化疗剂”是指已经被批准用作癌症的化学疗法的任何药剂。实例包括但不限于：全反式视黄酸、辅酶B12(actimide)、阿扎胞苷(azacitidine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、博来霉素(bleomycin)、卡铂(carboplatin)、卡培他滨(capecitabine)、顺铂(cisplatin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、柔红霉素(daunorubicin)、多西他赛(docetaxel)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依托泊苷(etoposide)、氟达拉滨(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲(hydroxyurea)、伊达比星(idarubicin)、伊立替康(irinotecan)、来那度胺(lenalidomide)、亮丙瑞林(leucovorin)、氮芥(mechlorethamine)、美法仑(melphalan)、巯基嘌吟(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素、米托蒽醌(mitoxantrone)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、培美曲塞(pemetrexed)、瑞复美(revlimid)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替哌(thiotepa)、戊柔比星(valrubicin)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)和长春瑞滨(vinorelbine)。用于本发明的联合的化疗剂本身可以是不同的化疗剂的联合。合适的联合包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)和奥沙利铂的联合(可以被称作FOLFOX)，或伊立替康、5-FU和甲酰四氢叶酸的联合(可以被称作IFL)。
如本文所用，术语“受试者”是指动物。通常，动物是哺乳动物。受试者还指例如灵长类动物(例如，人，雄性或雌性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔子、大鼠、小鼠、鱼、鸟等，在某些实施方案中，受试者是灵长类动物。在其他实施方案中，受试者是人。
如本文所用，如果受试者在生物学、医学或生活质量方面从治疗中受益，则该受试者“需要”这样的治疗。
如本文所用，术语“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibition)”或“抑制(inhibiting)”是指减轻或抑制给定的状况、症状、病症或疾病，或生物学活性或过程的基线活性显著降低。
如本文所用，在一个实施方案中，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指改善疾病或病症(即减慢或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)，在另一个实施方案中，“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指减轻或改善至少一个身体参数，包括患者可能无法辨别的那些参数。在又一个实施方案中，“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指物理上(如可辨别症状的稳定)、生理上(如身体参数的稳定)或在两者上调节疾病或病症。在又一个实施方案中，“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指预防或延迟疾病或病症的发作或发展或进展。
另外，除非内容中另有明确规定，在本说明书和所附权利要求书中使用的单数形式“一个(a)”、“一个(an)”和“所述(the)”包括复数个指代物。因此，例如，提及“抑制剂”包括两种或更多种这样的抑制剂。
本发明还涉及制备本发明的化合物的方法。可以通过任何适用的有机合成方法和技术来制备化合物。许多这样的方法和技术在本领域中是众所周知的，并且一些已知的方法技术阐述于Compendium of Organic Synthetic Methods,共12卷(John Wiley&Sons,New York)；Advanced Organic Chemistry，第5版.M.Smith&J.March(John Wiley&Sons,New York,2001)和Comprehensive Organic Synthesis.Selectivity.Strategy&Efficiency in Modern Organic Chemistry，共9卷.Barry M.Trost,总编辑(PergamonPress,New York,1993)。
下文的一般方案和制备实施例中提供了许多制备本发明的化合物的示例性方法。这些方法旨在说明此类制剂的性质，并不旨在限制适用方法的范围。对于本领域普通有机化学家而言显而易见的替代途径也可以用于合成本发明的化合物或其中间体。
在下文所述的用于制备式(I)的化合物的过程中，可以通过有机合成中常规使用的合适的常规保护基团保护在起始材料中易于参与不期望的副反应的官能团，特别是氨基、酰胺、羧基、羟基和磷酸基团。那些保护基团可以已经存在于前体中，并且它们旨在保护所讨论的官能团免于不希望的次级反应，例如酰化、醚化、酯化、烷基化、氧化、还原、溶剂分解等。在某些情况下，保护基可以另外引起反应选择性地进行，例如区域选择性地或立体选择性地。保护基团的特征在于它们可以容易地被去除，即不发生不希望的次级反应，例如通过酸处理、氟化物处理、溶剂分解、还原或光解去除。通过这类保护基团保护官能团，保护基团本身以及除去这些保护基的反应描述于例如标准的著作如T.W.Greene和P.G.M.Wuts"Protective Groups inOrganic Synthesis"John Wiley&Sons,Inc.,New York 1999中。
缩写
除以上定义外，以上合成方案和以下实施例中使用以下缩写。如果未定义本文使用的缩写，则其具有其普遍接受的含义。
Ac 乙酰基
Ac2O 乙酸酐
AcOH 乙酸
Bn 苄基
Bz 苯甲酰基
DCM 二氯甲烷
DEAD 偶氮二羧酸二乙酯
DIPEA 二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
Et3N 三乙胺
EtOH 乙醇
Et2O 乙醚
HPLC 高效液相色谱
i-Pr 异丙基
LC 液相色谱
LCMS 液相色谱-质谱
Me 甲基
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MS 质谱
MTBE 甲基叔丁基醚
NP HPLC 正相HPLC
on 过夜
p.ether 石油醚
Pg 保护基团
Ph 苯基
rt 室温
SOR 比旋光度
THF 四氢呋喃
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
TFAA 三氟乙酸酐
TIPS 三异丙基甲硅烷基
TLC 薄层色谱
TMS 三甲基甲硅烷基
如果示例性化合物的化学名称与所述实例的相应结构之间存在不一致，则应使用化学结构来确定所述实例的化合物。
本发明的化合物的一般合成
本发明的化合物和可用于合成这些化合物的中间体可以根据文献方法和/或如一般合成方案中所说明并且如本文以下实验部分中详述的那样，使用各种本领域技术人员已知的方法和技术来制备。下面显示和描述的一般合成方案和制备实施例说明了本发明化合物的典型合成路线。对于本领域普通有机化学家而言显而易见的是，可以替代地使用其他途径来制备整个化合物或化合物的各个部分。所用的起始原料和试剂可以从商业供应商处获得，或者可以使用本领域技术人员熟知的方法根据文献程序制备。
在任何可能干扰反应的结构单元或中间体上存在任何官能团的情况下，为了避免不希望的副反应而在反应过程中对它们适当保护，并在合成结束时将其脱保护。可以使用的合适的保护基广泛地描述于文献，例如Greene,"Protective Groups in OrganicChemistry",John Wiley&Sons,New York(1981)。
通过将期望的基团引入2,2-(双羟甲基)亚甲基环丙烷核苷类似物的两种醇中来制备本发明的化合物。为了能够在两个伯羟基上引入不同的基团，需要采用保护基团策略。在方案1中说明了其中Rx是酯，即式-OC(＝O)CRy基团的式(I)的化合物的一般路线。
可以通过形成原酸酯然后打开原酸酯方便地获得单酰化的化合物(1B)。通常，原酸酯是通过二醇(1A)与期望的原烷酸三甲酯在酸性条件下(例如在酸如对甲苯磺酸等的存在下)反应形成的。然后通过在水的存在下用酸例如乙酸水溶液处理来打开原酸酯，从而以立体异构体的混合物形式提供期望的单酰化的化合物。然后使用在氨基磷酸酯核苷领域中已知的方法引入氨基磷酸酯部分，例如，在碱存在下，通过醇(1B)与合适的磷酸化剂(1C)的缩合反应。例如，可以使用期望的氨基磷酸酯的五氟苯酚之类的磷酸化剂或其中离去基团是卤素如氯，或活化的苯酚如对硝基苯酚或卤代苯酚如单-、二-或三氟苯酚或五氯苯酚等的磷酸化剂。用于该缩合的合适的碱包括例如N-甲基咪唑(NMI)，其特别适用于形成对硝基苯酚氨基磷酸酯，或格氏试剂如叔丁基氯化镁等，其对形成五氟苯酚氨基磷酸酯特别有用。然后使用任何合适的分离方法，例如手性HPLC或SFC，分离得到的环丙烷氨基磷酸酯衍生物(1D)的异构体混合物的立体异构体，从而提供分离的异构体(1E-R和1E-S)。优选地，使用手性磷酸化剂。
对本领域技术人员显而易见的是，供选择地，异构体的分离可以在引入氨基磷酸酯部分之前进行。然后如方案2中所述获得其中Rx为式-OC(＝O)Ry基团的式(I)的化合物。
在其中Ry是甲基的单酰化衍生物(2A-S)的S-异构体的供选择的方法中，使用本领域熟知的标准方法将二醇(1A)二乙酰化，此后通过酶促反应实现对乙酰基团的其中一个的选择性脱乙酰作用。
其中Rx是式-OC(＝O)CH(Ry)NH2基团的本发明的化合物通常是由中间体正交地保护的环丙基亚甲基核苷类似物制备。方案3中说明了合成此类化合物的典型途径。
如上所述，单乙酰化的环丙基亚甲基衍生物(3B)通常由二醇(3A)获得，即在酸的存在下与原乙酸三甲酯反应，然后通过在水性条件下用酸处理，例如用乙酸水溶液处理来打开原酸酯，或通过将两个羟基基团乙酰化，然后进行选择性酶促单脱乙酰基。在使用原酸酯途径的情况下，可以使用任何合适的手性分离方法，例如手性HPLC或SFC分离立体异构体，或使用异构体混合物继续合成过程，并在合成后期进行分离。然后用保护基团保护游离的醇，该保护基随后可被去除而不影响引入的Rx基团。例如，可以使用缩醛如四氢吡喃基，醚如苄基或其衍生物或三苯甲基或其衍生物或类似物或作为保护基团。使用标准方法去除乙酸酯，通常采用碱性条件(例如NaOMe或NH3的MeOH溶液等)，然后在碱(通常是叔胺，如三乙胺、二异丙胺等)的存在下，通过标准肽偶联条件(即使用HOBt、EDAC或HATU等肽偶联剂)进行氨基酸偶联，提供酰化的衍生物(3E)。根据所使用的保护基使用合适的条件去除羟基保护基团，例如在乙缩醛或三苯甲基衍生物的情况下进行酸性处理，然后使用上文概述的氨基磷酸酯核苷领域已知的方法进行磷酸化，然后去除N-保护基团，提供氨基磷酸酯(3F)。
其中Rx是式-OCH2OC(＝O)Ry基团的本发明的化合物通常由正交保护的中间体制备，该中间体以与前述相似的方式获得，使用可以在不影响引入的Rx的情况下被去除的保护基团。为此目的有用的保护基团是本领域技术人员已知的。例如，可以使用单或二甲氧基三苯甲基或对甲氧基苄基基团。方案4中说明了一般路线。
在DIEA或类似的存在下，在升高的温度下使醇(3D)与氯烷基酯(11b)或酯反应，得到缩醛衍生物(4A)。如前所述，去除保护基然后进行磷酸化，然后提供氨基磷酸酯(4B)。
制备本发明的化合物所用的氨基磷酸酯试剂广泛描述于文献中。例如，如方案5所示，可以在两步反应中制备氯氨基磷酸酯。
在惰性溶剂(如Et2O)中，将P(＝O)Cl3与期望的醇R1OH缩合，得到二氯磷酸芳氧酯或杂芳氧酯(5A)。随后与氨基酸衍生物(5B)反应，得到氯氨基磷酸酯(5C)。
如果需要，可以将所获得的氯氨基磷酸酯(5C)转化为具有活化的酚作为离去基团而不是氯离去基团的磷酸化剂，例如在方案6中通常示出的五氟苯酚或对-NO2-苯酚。
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该转化可通过氯衍生物(5C)与期望的活化苯酚(如五氟苯酚或对硝基苯酚)在碱(如三乙胺等)的存在下反应方便地进行，从而提供磷酸化剂(6A)和(6B)。
根据分离的性质，由上述方法得到的对映异构体、非对映异构体、顺式/反式异构体的任何混合物可以通过手性盐技术、正相色谱、反相色谱、手性柱色谱或超临界流体色谱(SFC)分离为单其一组分。
应当理解，在上面所示的描述和式中，除非另有说明，否则各种R-基团和其他变量如上文所定义。此外，出于合成目的，一般方案的化合物仅使用选择的基团来代表，以说明如本文所定义的通式(I)的化合物，通式(I)的化合物的子组和通式(I)的化合物的中间体及其子组的一般合成方法。
具体实施方案的详细描述
现在将通过以下实施例说明本发明的化合物及其中间体的各种实施方案。实施例仅旨在进一步说明本发明的某些实施方案，而绝非旨在限制本发明的范围。
化学实例和中间体
如本领域技术人员所熟知的，当需要保护反应组分免受空气或湿气影响时，反应在惰性气氛中进行，所述惰性气氛包括但不限于氮气和氩气气氛。温度以摄氏度(℃)给出。除非另有说明，否则溶液的百分比和比率表示体积与体积的关系。下文实施例中使用的反应物可以从商业来源获得，或者如本文所述或通过本领域已知的方法从商业可得的起始原料制备。
如本文的实施例和一般方案中所述制备包含中间体的本发明的化合物。对于技术人员显而易见的是，可以使用类似的合成途径，并进行适当的修饰，以制备本文所述的本发明的化合物。本文描述的反应的进展适当地通过例如LC、GC或TLC跟进，并且本领域技术人员将容易地意识到，可以相应地调节反应时间和温度。
使用CDCl3(氘代氯仿)或DMSO-d6(氘代DMSO，二甲基-d6亚砜)作为溶剂，在Bruker光谱仪上记录核磁共振(NMR)光谱，该光谱仪在500MHz下操作用于1H NMR，在126MHz下操作用于13C NMR。化学位移(δ)相对于用作内部参考的四甲基硅烷(TMS)或相对于残留溶剂峰以百万分率(ppm)为单位。偶合常数J以赫兹为单位。
所指示的NMR位移是使用自动化过程获得的，其中可能存在残留的溶剂和/或杂质，积分和化学位移可能不完全准确，信号可能较宽，信噪比很低，并且可能与残留溶剂的信号重叠，多重性可能被误判。尽管如此，通过自动化过程获得的所有光谱仍支持每种所分析的化合物的结构。
化合物名称由ChemDraw Ultra软件，Cambridgesoft，12.0.2版生成。
使用方法A-E中的任何一种进行制备HPLC。
制备HPLC方法A
柱：Kromosil C18(25X150)mm 10μ
流动相：10mM ABC的水溶液:MeCN(梯度)
制备HPLC方法B：
柱：Kromosil C18(25x150)mm 10μ
流动相：0.1％甲酸的水溶液:MeCN(梯度)
制备HPLC方法C
柱：X-Select C18(19X150)mm 5μ
流动相：10mM ABC的水溶液:MeCN(梯度)
制备HPLC方法D
柱：X-Select C18(19X150)mm 5μ
流动相：0.1％甲酸的水溶液:MeCN(梯度)
制备HPLC方法E
柱：X-Bridge C18(30X250)mm 5μ
流动相：0.1％甲酸的水溶液:MeCN(梯度)
制备HPLC方法F
柱：X-Bridge Amide C18(19X250)mm 5μ
流动相：10mM ABC的水溶液:MeCN(梯度)
制备HPLC方法G
柱：YMC TRIAT C18(25X 150)mm 10u
流动相：10mM ABC的水溶液:MeCN(梯度)
制备HPLC方法H
柱：YMC TRIAT C18(25X 150)mm 10u
流动相：0.1％甲酸的水溶液:MeCN(梯度)
中间体1
4-甲基-2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)戊酸(S)-甲酯(I-1)
在氮气下，于-70℃下，在30分钟内将三乙胺(11mL，79mmol)滴加到搅拌的2-氨基-4-甲基戊酸(S)-甲酯盐酸盐(6.5g，35mmol)的DCM(70mL)溶液中。在-70℃下，经45min的时间滴加二氯磷酸苯酯(5.4ml，36mmol)的DCM(70mL)溶液，然后将反应混合物在-70℃至0℃下搅拌3h。在45分钟内，向该混合物中添加五氟苯酚(6.3g，34mmol)和三乙胺(5.5mL，40mmol)的DCM(60mL)溶液。在0℃下，将反应混合物搅拌2h，然后浓缩，并将残余物溶于叔丁基甲基醚(100mL)中，并通过硅藻土滤出不溶物，并将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用15-20％EtOAc的石油醚溶液洗脱。合并纯级分并减压浓缩。将得到的外消旋化合物溶于20％EtOAc的石油醚(70mL)溶液中，并在冰箱中放置16h，滤出由此形成的晶体，得到固体的标题化合物(3g，18％)。LC-MS显示99.7％的期望的化合物质量。MS(ES+)m/z468.28[M+H]+.
中间体2
4-甲基-2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)戊酸(S)-异丙酯(I-2)
在-78℃下，在10min内，向搅拌的2-氨基-4-甲基戊酸(S)-异丙酯(3.8g，18mmol)的DCM(50mL)溶液中滴加Et3N(5.6mL，40mmol)。在30min内，滴加二氯磷酸苯酯(2.7mL，18mmol)的DCM(30mL)溶液。将反应混合物在-78℃下再搅拌30min，然后在2h内升温至0℃并再搅拌1h。将2,3,4,5,6-五氟苯酚(3.0g，16mmol)和Et3N(2.0mL，20mmol)的DCM(20mL)溶液滴加到反应混合物中。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后减压浓缩。将得到的残余物溶解在MTBE(100mL)中，滤出不溶物并将滤液浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用10％EtOAc的石油醚溶液洗脱，合并纯级分并减压浓缩。将得到的外消旋混合物(4.5g，44％不期望的异构体和55％期望的异构体)溶于20％EtOAc的己烷(100mL)溶液中，并在0℃下静置2h。滤出由此形成的晶体，用冷己烷(2×30mL)洗涤，并减压干燥，得到标题化合物(2.0g，22％，手性纯度98.9％)。MS(ES+)m/z 496.15[M+H]+。LCMS显示出99％的期望的产物。
中间体3
步骤a)2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(S)-(S)-戊-2-酯(I-3a)
在室温下，向搅拌的Boc-Val-OH(7.0g，32mmol)和(S)-戊-2-醇(3.4ml，31mmol)的DCM(100mL)溶液中添加DMAP(400mg，3.2mmol)、EDCI(6.8g，35mmol)。将溶液搅拌16h，然后用DCM(100mL)稀释，用水(2×50mL)、饱和碳酸氢钠溶液(2×50mL)、2M HCl(2×50mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用5-10％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物(7.5g，80％)。MS(ES+)m/z288.29[M+H]+。
步骤b)3-甲基-2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸(S)-(S)-戊- 2-酯(I-3b)
在室温下，向搅拌的化合物I-3a(7.5g，26mmol)的无水1,4-二氧六环(30mL)的溶液中添加4.0M HCl的二氧六环(34mL，135mmol)溶液。将溶液搅拌2h，然后减压浓缩，并与甲苯(2×50mL)共同蒸馏。将残余物溶解在DCM(50mL)中，置于氮气下并冷却至-70℃。在10min内滴加Et3N(8.2mL，58mmol)，然后滴加二氯磷酸苯酯(3.8mL，26mmol)的DCM(20mL)溶液。将反应混合物在-70℃至0℃搅拌3h，然后滴加五氟苯酚(4.8g，26mmol)和Et3N(4.0mL，29mmol)的DCM(30mL)溶液。将反应混合物在0℃下搅拌2h，然后浓缩。将残余物溶于叔丁基甲基醚(100mL)中，并滤出不溶物。使用叔丁基甲基醚(2×30mL)洗涤过滤器并将合并的滤液减压浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。合并纯级分并减压浓缩。将得到的外消旋混合物溶于15％EtOAc的石油醚(150mL)溶液，在冰箱中放置过夜。滤出由此形成的晶体，使用石油醚(100mL)洗涤并减压干燥，得到标题化合物(3.5g，26％，手性纯度98.1％)。MS(ES+)m/z 510.16[M+H]+。
中间体4
2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-2-丙基戊酯(I-4)
在-78℃下，将Et3N(12.3mL，88mmol)滴加到搅拌的2-氨基丙酸(S)-2-丙基戊酯(10g，42mmol)的DCM(100mL)溶液中，然后滴加二氯磷酸苯酯(1.4mL，42mmol)的DCM(70mL)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌30min，然后在2h内升温至0℃，然后在0℃下再搅拌1h。在0℃下，滴加2,3,4,5,6-五氟苯酚(7g，38mmol)和Et3N(6.5mL，46mmol)的DCM(80mL)溶液，然后在室温下搅拌反应混合物3h，然后减压浓缩至干。将粗产物溶解在MTBE(200mL)中，滤出不溶物，并将滤液减压浓缩至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。合并纯级分，并减压浓缩。将得到的外消旋化合物溶于20％EtOAc的正戊烷(100mL)溶液中，并在室温下放置2h，滤出由此形成的晶体，并用冷的正戊烷(2×30mL)洗涤，并在真空下干燥，得到标题化合物(3.1g，14％，手性纯度99％)。MS(ES+)m/z 524.17[M+H]+。
中间体7
步骤a)2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸(S)-(S)-戊-2-酯(I-7a)
向搅拌的(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸(5.0g，22mmol)和(S)-戊-2-醇(2.1mL，19mmol)的DCM(50mL)溶液中添加DMAP(400mg，3.24mmol)和EDC·HCl(5.0g，26mmol)。将溶液在室温下搅拌18h，然后用DCM(200mL)稀释，并用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用5-10％EtOAc的石油醚梯度溶液洗脱，得到标题化合物(4.0g，61％)。
步骤b)4-甲基-2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)戊酸(S)-(S)-戊- 2-酯(I-7b)
将4M HCl的二氧六环(14mL，56mmol)溶液加入到搅拌的化合物I-7a(4.0g，13mmol)的1,4-二氧六环(40mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)中，将溶液冷却至-78℃，并滴加Et3N(3.7mL，26.50mmol)，然后滴加二氯磷酸苯酯(1.9mL，13mmol)的DCM(25mL)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌30min，然后在2h内升温至0℃，并在0℃下再搅拌1h。在0℃下，将2,3,4,5,6-五氟苯酚(2.1g，11mmol)和Et3N(1.9mL，14mmol)的DCM(25mL)溶液滴加到反应混合物中。将混合物在室温下搅拌5h，然后用MTBE(100mL)稀释并搅拌10min。滤出沉淀的不溶物，并将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用20％EtOAc的己烷溶液洗脱。将得到的外消旋混合物溶于10％EtOAc的石油醚(50mL)溶液并在冰箱中放置4h。滤出由此形成的晶体，用石油醚(50mL)洗涤并真空干燥，得到标题化合物(1.5g，22％)。MS(ES+)m/z 524.21[M+H]+。手性HPLC显示出99.75％的期望的异构体。
中间体8
步骤a)2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(S)-2-乙基丁酯(I-8a)
在0℃下，向搅拌的N-Boc-L-缬氨酸(4.68g，21.5mmol)的DCM(20mL)溶液中添加EDC·HCl(4.13g，21.5mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.24g，2.0mmol)。将混合物在0℃下搅拌30min，然后在0℃下滴加2-乙基丁-1-醇(2.41mL，19.6mmol)。将混合物在室温下搅拌16h，然后用DCM(150mL)稀释，并用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用10％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到标题化合物。(ES+)m/z302.26[M+H]+。
步骤b)2-((双(4-硝基苯氧基)磷酰基)氨基)-3-甲基丁酸(S)-2-乙基丁酯(I-8b)
在室温下，将pTSA一水合物(1.8g，9.5mmol)添加到搅拌的I-8a(2.6g，8.6mmol)的EtOAc(25mL)溶液中。将混合物在70℃下搅拌4h，然后减压浓缩，与甲苯(x2)共蒸馏，并用正戊烷洗涤。在0℃下，将得到的残余物和双(4-硝基苯基)磷酰氯(3.0g，8.3mmol)溶于DCM(60mL)中，滴加Et3N(2.3mL，17mmol)。将溶液在室温下搅拌16h，然后用DCM(2×20mL)和水(20mL)萃取。用NaHCO3水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物(2g)。
中间体9
步骤a)2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯(I-9a)
在0℃下，向搅拌的(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸(4.5g，24mmol)和(S)-戊-2-醇(3.1mL，29mmol)的DCM(50mL)溶液中添加EDC·HCl(5.1g，26mmol))和DMAP(0.3g，2mmol)。将反应在室温搅拌16h，然后用DCM(50mL)稀释，并用水(2×50mL)和盐水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到标题化合物(3.5g)。
步骤b)2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯(I- 9b)
在室温下，向搅拌的化合物I-9a(3.5g，13.5mmol)的1,4-二氧六环(15mL)溶液中添加4M HCl的二氧六环(14mL，57mmol)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后浓缩。将残余物溶于DCM(30mL)中，并冷却至-78℃。滴加Et3N(3.9mL，28mmol)，然后滴加二氯磷酸苯酯(2.0mL，13mmol)的DCM(20mL)溶液。将反应混合物在-78℃下再搅拌30min，然后在2h内升温至0℃，并在0℃下再搅拌1h。在0℃下，将2,3,4,5,6-五氟苯酚(2.2g，12mmol)和Et3N(2.1mL，mmol)的DCM(20mL)溶液滴加到反应混合物中。将反应混合物在室温下搅拌3h。3h后，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，并用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。将得到的固体溶于10％EtOAc的石油醚(100mL)溶液，并在室温下静置2h。滤出由此形成的晶体，用石油醚(2×20mL)洗涤并真空干燥，得到标题化合物(1.3g，20％收率，手性纯度99.86％)。LCMS(ES+)m/z 482.11[M+H]+。
中间体10
乙酸(Z)-(1-(羟甲基)-2-((2-异丁酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基) 环丙基)甲酯(I-10)
如Li,Chengwei；Gentry,Brian G.；Drach,John C.；Zemlicka,Jiri inNucleosides,Nucleotides&Nucleic Acids(2009),28(9),795-808所述制备标题化合物。
中间体11
异丁酸(Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙 基)甲酯(I-11)
在室温下，向(Z)-2-氨基-9-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(500mg，1.9mmol)的DMF(30mL)溶液添加原丁酸三甲酯(1.2mL，7.6mmol)和p-TSA(360mg，1.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后浓缩。将乙酸(80％的水溶液，50mL)添加到残余物中，并将混合物在室温下搅拌3h，然后浓缩。通过通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用10-15％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(350mg，5％)，为固体。LCMS(ES+)m/z334.30[M+H]+。
中间体12
步骤a)二乙酸(Z)-(2-((2-异丁酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)环丙 烷-1,1-二基)双(亚甲酯)(I-12a)
在室温下，向搅拌的化合物I-10(100mg，0.30mmol)的DMF(10mL)溶液中添加DMAP(7mg，0.06mmol)和乙酸酐(0.2mL，2.1mmol)。将混合物在室温下搅拌1h，然后减压浓缩。将得到的粗化合物通过硅胶柱色谱法纯化，用5％的MeOH洗脱，得到标题化合物(110mg，82％)为固体。LCMS(ES+)m/z 418.41[M+H]+。
步骤b)乙酸(R,Z)-(1-(羟甲基)-2-((2-异丁酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲酯(I-12b)
在室温下，向搅拌的化合物2a(110mg，0.26mmol)的DMF(15mL)溶液中添加0.02M磷酸盐缓冲液(pH 7，110mL)和猪肝酯酶(230mg)。将反应混合物在室温下搅拌1h，然后减压浓缩。将得到的粗化合物通过硅胶柱色谱法纯化，用10％MeOH的DCM溶液洗脱。合并适当的级分并减压浓缩。手性HPLC显示出91.7％的期望的异构体。通过手性SFC纯化残余物，得到标题化合物(40mg，39％)为固体。LCMS(ES+)m/z 376.32[M+H]+。
通过LCMS、1H NMR、手性HPLC和比旋光度(SOR)分析得到的化合物。发现得到的化合物的SOR为+26.52°(c 0.5，DMSO)，其与R-异构体的报道文献值一致(+21.7,c 1.0,DMSO,Nucleosides,Nucleotides and Nucleic Acids,28:795–808,2009)。
制备SFC条件：
中间体13
乙酸(Z)-(1-(羟甲基)-2-((2-异丁酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基) 环丙基)甲酯(I-13)
该化合物如Li,Chengwei；Gentry,Brian G.；Drach,John C.；Zemlicka,Jiri inNucleosides,Nucleotides&Nucleic Acids(2009),28(9),795-808所述制备为外消旋体。两种立体异构体通过制备NP HPLC分离。
级分-1(200mg,14％)比旋光度(SOR)+21.10°,
级分-2,(230mg,16％)，SOR-19.79°。
通过将SOR与实施例12的酶促制备的化合物(+26.52°)进行比较来确定异构体的手性。
制备NP HPLC条件
步骤b)2-氨基-9-((Z)-((2R)-2-(羟甲基)-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲 基)亚环丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(I-13b)
在室温下，将甲磺酸(0.15mL，2.4mmol)的DMF(10mL)溶液滴加到化合物I-13S(900mg，2.4mmol)和3,4-二氢-2H-吡喃(4.3mL，48mmol)的DMF(40mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌5h，然后添加三乙胺(2.5mL)，并将混合物浓缩。在室温下，将得到的粗产物溶于MeOH(80mL)中，并添加25％的氨水(65mL，420mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌12h，然后浓缩。粗化合物通过硅胶柱色谱法纯化，用15％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(700mg，69％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 348.38[M+H]+。
中间体14
步骤a)异丁酸(R,Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲酯(I-14)
通过手性SFC纯化外消旋化合物I-11(450mg)，得到峰-1(150mg，23％)，为固体。通过旋光(SOR)分析得到的化合物。发现得到的化合物的SOR为+10.7°(0.44％，DMSO)，并推定为R-异构体。
中间体15
3-甲基-2-(((全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸(2S)-2-乙基丁酯(I-15)
根据I-4描述的方法，通过I-8a的反应制备标题化合物。产率：26％。LCMS(ES+)524.29[M+H]+。手性HPLC显示99.11％期望的异构体。
中间体16
2-(((4-(1-甲基环丙基)苯氧基)(全氟苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(2S)-异丙酯 (I-16)
如WO2015/034420所描述的制备标题化合物。
中间体17
2-(((全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(2S)-甲酯(I-17)
根据I-3步骤b所描述的方法，通过2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(S)-甲酯的反应制备标题化合物。产率：25％。LCMS(ES+)m/z 426.13[M+H]+。根据手性HPLC，标题化合物的手性纯度为99.5％。
中间体18
2-(((S)-(4-溴苯氧基)(全氟苯氧基)磷酰基)氨基)-4-甲基戊酸(S)-(S)-戊-2酯 (I-18)
根据I-7步骤b所描述的方法，通过I-7a的反应制备标题化合物。LCMS(ES+)m/z602.10和604.10[M+H]+。根据手性HPLC，标题化合物的手性纯度为99％。
中间体19
步骤a)乙酸(Z)-(2-((2-异丁酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1- (((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(I-19a)
在室温下，将3,4-二氢-2H-吡喃(5mL,55.41mmol)和CH3SO3H(0.2mL,3.5mmol)添加到搅拌的化合物I-11(1.3g,3.5mmol)的DMF(20mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌5h，然后添加Et3N(5mL)并将混合物减压浓缩。粗化合物(1.4g)无需另外的纯化即可用于下一步。MS(ES+)m/z460.29[M+H]+。
步骤b)(Z)-2-氨基-9-((2-(羟甲基)-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)亚环 丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(I-19b)
在室温下，向搅拌的化合物I-19a(1.4g)的MeOH(100mL)溶液添加25％的氨水溶液(150mL，975mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌12h，然后使其达到室温并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用15％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(850mg，两步71％)，为固体。MS(ES+)m/z 348.26[M+H]+。
步骤c)2-(((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1- (((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(4-溴苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸 (2S)-(S)-戊-2-酯(I-19c)
将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，4.3mL，4.3mmol)滴加到化合物I-19b(300mg,，0.86mmol)的DMF(30mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后滴加化合物I-5(580mg,，1.04mmol)的无水THF(15mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用10％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(350mg,，40％)，为固体。MS(ES+)m/z 723.21和725.22[M+H]+。
步骤d)2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲氧基)(4-溴苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯(I-19d-1)和
2-(((S)-(((R,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基) 环丙基)甲氧基)(4-溴苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯(I-19d-2)
在室温下，将化合物I-19c(400mg，0.553mmol)的80％乙酸(40mL，558mmol)溶液搅拌24h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用12％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物的外消旋混合物。通过制备SFC分离混合物，得到固体形式的异构体-1(80mg)和异构体-2(100mg)。
使用方法B，通过制备HPLC进一步纯化异构体2，得到纯异构体(52mg)，为固体。
制备SFC条件
中间体20
2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基) 环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-4-甲基戊酸(S)-异丙酯(I-20)
向I-13b(200mg，0.576mmol)的DMF(12mL)溶液滴加叔丁基氯化镁(2.9mL，1M的THF溶液，2.9mmol)。将混合物在室温下搅拌30min，然后滴加I-2(343mg，0.691mmol)的无水THF(8mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌24h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用4％MeOH洗脱。合并适当的级分并浓缩，将残余物溶于80％的乙酸(37mL，509mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用8％MeOH的DCM溶液洗脱。合并纯级分并浓缩，使用方法C通过制备HPLC纯化残余物，得到标题化合物(70mg，45％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 575.31[M+H]+。
中间体21
2-(((S)-(((1S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(((四 氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(4-溴苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(2S)-(S)- 戊-2-酯(I-21)
在室温下，在5min内向I-13b(100mg，0.288mmol)的DMF(10mL)溶液中滴加叔丁基氯化镁(1.4mL，1M的THF溶液，1.4mmol)，并搅拌1h。然后滴加I-5(190mg,，0.345mmol)的无水THF(5mL)溶液5min，将反应混合物在室温下搅拌16h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用7％MeOH的DCM溶液洗脱。合并适当的级分并浓缩，使用方法C通过制备HPLC纯化残余物，得到标题化合物(60mg，28％)，为白色固体。LCMS(ES+)m/z 725.24[M+H]+。
中间体22
2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基) 环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-4-甲基戊酸(S)-甲酯(I-22)
使用中间体20所述的方法，由I-13b和I-1制备标题化合物。产率21％。LCMS(ES+)m/z 631.44[M+H]+。
中间体25
2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基) 环丙基)甲氧基)(4-(1-甲基环丙基)苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-异丙酯(I-25)
使用中间体20所述的方法，由I-13b和I-4制备标题化合物。使用方法D通过制备HPLC纯化最终化合物。产率26％。LCMS(ES+)m/z 587.26[M+H]+。
中间体26
2-(((S)-(((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基) 环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-甲酯(I-26)
使用中间体20所述的方法，由I-13b和I-17制备标题化合物。通过SFC纯化最终的化合物。产率5.4％，LCMS(ES+)m/z 505.31[M+H]+。
制备SFC条件
中间体27
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丁酸(Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基) 甲酯(I-27)
在室温下，向搅拌的(Z)-2-氨基-9-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(500mg，1.9mmol)的DMF(30mL)溶液添加原丁酸三甲酯(0.5mL，2.8mmol)和pTSA(37mg,，0.19mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后添加三乙胺(0.5mL)并将混合物浓缩。将残余物溶于80％乙酸的水(75mL)溶液，在室温下搅拌2h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用8％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(350mg，55％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 34.23[M+H]+。
中间体28
步骤a)1-((苄基氧基)甲基)-2-溴环丙烷-1,2-二羧酸二苄酯(I-28a)
在-78℃下，在氩气下，在1h内，将正丁基锂(1.6M的己烷溶液)(520mL，829mmol)滴加到-78℃的苄醇(86mL，829mmol)的无水THF溶液(1000mL)中。将溶液在-78℃下搅拌3h，然后在-78℃下，在1h内，添加化合物2-溴丙烯酸苄酯(400g，1659mmol)的THF(500mL)溶液，在该温度下搅拌4h，并在室温下搅拌16h。在0℃下，向反应混合物添加饱和的氯化铵溶液(700mL)并使用EtOAc(2x 1500mL)萃取混合物。使用水(1000mL)、盐水(1000mL)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用15％EtOAc的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物(270g)。MS(ES+)511.09[M+H]+。粗化合物无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤b)(1-((苄基氧基)甲基)-2-溴环丙烷-1,2-二基)二甲醇(I-28b)
在0℃下，在氩气下，在2h内，将DIBAL-H(1M)(2120mL，2120mmol)滴加到化合物I-28a(270g，530.05mmol)的无水THF(2300mL)溶液。将溶液在室温下搅拌16h，然后在0℃下添加饱和氯化铵溶液(700mL)，过滤沉淀的固体并使用EtOAc(2x 1500mL)洗涤。使用水(700mL)、盐水(700mL)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用50％EtOAc的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物(95g，54％)。MS(ES+)301.09[M+H]+。
步骤c)二乙酸(1-((苄基氧基)甲基)-2-溴环丙烷-1,2-二基)双(亚甲酯)(I-28c)
在0℃下于30min内将吡啶(128mL，1577mmol)和乙酸酐(68.5mL，725.5mmol)滴加到搅拌的化合物I-28b(95g，315.43mmol)的DCM(450mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后在0℃下使用2N HCl(500mL)淬灭，使用DCM(2x 400mL)萃取混合物。使用水(500mL)、盐水(500mL)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到标题化合物(120g，88％)。MS(ES+)404.15[M+H]+
步骤d)(1-((苄基氧基)甲基)-2-亚甲基环丙基)甲醇(I-28d)
在室温下于15min内将锌粉(163g，2492mmol)[在室温下，通过将商品锌粉(200g)与2M HCl(300mL)搅拌1h进行活化，然后过滤锌，使用水(2x 400mL)、丙酮(2x 400mL)洗涤并在真空下干燥过夜]分批添加到搅拌的化合物I-28c(120g，311.5mmol)的EtOH(800mL)溶液中。将反应混合物在80℃下搅拌16h，然后冷却至室温并通过硅藻土床过滤，使用EtOAc(2x 200mL)洗涤。减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用20％EtOAc的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物(34g，47％)。MS(ES+)205.25[M+H]+。
步骤e)(2-亚甲基环丙烷-1,1-二基)二甲醇(I-28e)
在0℃下于1H内将BCl3-DMS(2M的DCM溶液)(100mL，200mmol)滴加到搅拌的化合物I-28d(34g，166.5mmol)的DCM(400mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌5h，然后过滤并使用10％MeOH的DCM溶液(2X 500mL)洗涤。减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用80％EtOAc的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物(18g，95％)。
步骤f)(2-亚甲基环丙烷-1,1-二基)双(亚甲基)二乙酸酯(I-28f)
在0℃下于30min内，将乙酸酐(104.2mL，1104mmol)滴加到搅拌的化合物I-28e(18g，157.7mmol)的吡啶(45mL，552mmol)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后在0℃下使用水(200mL)淬灭，并使用DCM(2X 500mL)萃取。使用2N HCl(2x 200mL)、水(200mL)、盐水(200mL)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用15％EtOAc的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物(27g，81％)。MS(ES+)216.27[M+H]+为铵加合物。
步骤g)二乙酸(2-溴-2-(溴甲基)环丙烷-1,1-二基)双(亚甲酯)(I-28g)
在0℃下于30min内将溴(7mL，136.22mmol)滴加到搅拌的化合物I-28f(27g，136.22mmol)的四氯化碳(250mL)溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌1h，然后使用DCM(300mL)稀释并使用硫代硫酸钠溶液(2X300mL)洗涤。使用饱和碳酸氢钠溶液(300mL)、水(300mL)、盐水(300mL)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用20％EtOAc的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物(40g，74％)。MS(ES+)376.02[M+H]+为铵加合物。
步骤h)(Z)-4-氨基-1-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)嘧啶-2(1H)-酮(I-28h)
将干燥K2CO3(9.3g，67mmol)和N4-苄基胞嘧啶(2.4g，11.2mmol)添加到搅拌的化合物I-28g(4g，11.2mmol)的DMF(400mL)溶液中。将反应混合物在100℃下搅拌12h，然后冷却至50℃并添加MeOH(40mL)。将得到的反应混合物在50℃下搅拌2h，然后冷却至室温并过滤。减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用10％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(2.4g)，为E和Z异构体的混合物。MS(ES+)224.2[M+H]+。
步骤i)(Z)-N-(1-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4- 基)苯甲酰胺(I-28i)
将苯甲酸酐(7.3g，32.3mmol)添加到搅拌的化合物I-28h(2.4g，10.8mmol)的EtOH(300mL)溶液中，并将反应混合物在100℃下搅拌3h，将反应混合物冷却至室温，过滤。减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用5％MeOH的DCM溶液洗脱。通过硅胶柱色谱法进一步纯化残余物，并用5％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(500mg，14％)。MS(ES+)328.29[M+H]+。
步骤j)(Z)-4-氨基-1-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)嘧啶-2(1H)-酮(I-28j)
在室温下将搅拌的化合物I-28i(500mg，1.53)在7M NH3的MeOH溶液(50.2mL)中的溶液搅拌16h，然后将沉淀的固体过滤并干燥。通过制备HPLC在X-bridge C18柱(30x 250)mm 5u上将残余物进一步纯化，使用10mM NH4HCO3的水溶液:MeCN的梯度作为流动相，得到标题化合物(80mg)，为固体。将滤液减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用15％MeOH的DCM溶液洗脱，得到另一批标题化合物(80mg)。MS(ES+)224.27[M+H]+。
步骤k)异丁酸(Z)-(2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环 丙基)甲酯(I-28k)
在室温下，向搅拌的化合物I-28j(130mg，0.6mmol)的DMF(10mL)溶液添加原异丁酸三甲酯(0.14mL，0.9mmol)和pTSA(11mg，0.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后添加Et3N(0.5mL)并将混合物浓缩。将残余物溶于80％乙酸的水溶液(15mL)中，在室温下搅拌2h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用7％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(180mg，97％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 294.26[M+H]+。
中间体29
步骤a)(叔丁氧羰基)-L-苯丙氨酸戊-3-酯(I-29a)
在0℃下，向搅拌的(叔丁氧羰基)-L-苯丙氨酸(7.2g,27.2mmol)和戊-3-醇(2.5mL，22.7mmol)的DCM(150mL)溶液中添加DMAP(416mg，3.4mmol)、EDCI(4.8g，25mmol)。将溶液搅拌18h，然后使用DCM(100mL)稀释，使用水(2x 50mL)和盐水(100mL)洗涤。经无水硫酸钠干燥有机层并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到标题化合物(6.5g，85％)。
步骤b)(S)-1-氧代-1-(戊-3-基氧基)-3-苯基丙烷-2-氯化铵(I-29b)
在0℃下，将4M HCl的1,4-二氧六环(22mL，87.2mmol)溶液添加到化合物I-29a(6.5g，19.4mmol)的1,4-二氧六环(60mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后减压浓缩，得到标题化合物(5g，HCl盐)，为固体。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤bc((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-苯丙氨酸戊-3-酯(I-29c)
在-78℃下于10min内将Et3N(5.4mL，38.6mmol)滴加到搅拌的化合物I-29b(5g，18.4mmol)的DCM(100mL)溶液中，然后于30min内滴加二氯磷酸苯酯(2.8mL，18.4mmol)的DCM(50mL)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌30min，然后允许在2h内升温至0℃，然后在0℃下搅拌1h。在0℃下，滴加2,3,4,5,6-五氟苯酚(3g，16.6mmol)和Et3N(2.8mL，20.2mmol)的DCM(50mL)溶液，然后将反应混合物在室温下搅拌3h，然后减压浓缩至干。将粗产物溶于MTBE(100mL)，滤出不溶物并减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。合并纯级分并减压浓缩。将得到的外消旋化合物溶于30％EtOAc的石油醚溶液(250mL)并在室温下放置24h，滤出形成的晶体并使用石油醚(2x 100mL)洗涤，并在真空下干燥，得到标题化合物(2g，18％，手性纯度99％)。MS(ES+)m/z 558.30[M+H]+。
中间体30
步骤a)(叔丁氧羰基)-L-苯丙氨酸2-乙基丁酯(I-30a)
在0℃下，向搅拌的(叔丁氧羰基)-L-苯丙氨酸(7.8g,29.5mmol)和2-乙基丁-1-醇(3.1mL，24.7mmol)的DCM(80mL)溶液中添加DMAP(450mg，3.7mmol)、EDCI(5.2g，27.1mmol)。将溶液在室温下搅拌16h，然后使用DCM(200mL)稀释，使用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到标题化合物(7.5g，87％)。MS(ES+)m/z 350.47[M+H]+。
步骤b)(S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-氯化铵(I-30b)
在室温下，将4M HCl的1,4-二氧六环(32mL，128mmol)溶液添加到化合物I-30a(7.5g，21.5mmol)的1,4-二氧六环(100mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩，得到标题化合物(5.5g，88％，HCl盐)，为固体。
步骤c)((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-苯丙氨酸2-乙基丁酯(I-30c)
在-78℃下于10min内将Et3N(5.6mL，40.1mmol)滴加到搅拌的化合物I-30b(5.5g，19.2mmol)的DCM(100mL)溶液中，然后于30min内滴加二氯磷酸苯酯(2.9mL，19.4mmol)的DCM(40mL)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌30min，然后允许在2h内升温至0℃，然后在0℃下搅拌1h。在0℃下于15min内滴加2,3,4,5,6-五氟苯酚(3.2g，17.4mmol)和Et3N(3.4mL，24.3mmol)的DCM(50mL)溶液，然后将反应混合物在室温下搅拌5h，然后减压浓缩至干。将粗产物溶于MTBE(100mL)并搅拌10min，滤出不溶物并减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用20％EtOAc的己烷溶液洗脱。合并纯级分并减压浓缩。将得到的外消旋化合物溶于20％EtOAc的石油醚溶液(100mL)并在冰箱中放置4h，滤出形成的晶体并使用20％EtOAc的石油醚(30mL)溶液洗涤，并在真空下干燥，得到标题化合物(1.5g，13％，手性纯度99％)。MS(ES+)m/z 572.30[M+H]+。
中间体31
步骤a)(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸2-乙基丁酯(I-31a)
在0℃下，向搅拌的(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸(6.8g,29.4mmol)和2-乙基丁-1-醇(2.6mL，24.5mmol)的DCM(100mL)溶液中添加DMAP(449mg，3.7mmol)和EDCI(5.2g，26.9mmol)。将溶液在室温下搅拌16h，然后使用DCM(100mL)稀释，使用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到标题化合物(7.2g，93％)。MS(ES+)m/z 316.43[M+H]+。
步骤b)(S)-1-(2-乙基丁氧基)-4-甲基-1-氧代戊-2-氯化铵(I-31b)
在室温下，将4M HCl的1,4-二氧六环(36mL，143.8mmol)溶液添加到溶液化合物I-31a(7.2g，22.8mmol)的1,4-二氧六环(50mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后减压浓缩，得到标题化合物(5.5g，HCl盐)，为固体。MS(ES+)m/z 216.28[M+H]+。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤c)((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸2-乙基丁酯(I-31c)
在-78℃下于10min内，将Et3N(6.4mL，46mmol)滴加到搅拌的化合物I-31b(5.5g，22mmol)的DCM(125mL)溶液中，然后于30min内滴加二氯磷酸苯酯(3.3mL，22mmol)的DCM(125mL)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌30min，然后允许在2h内升温至0℃，然后在0℃下搅拌1h。在0℃下于15min内，滴加2,3,4,5,6-五氟苯酚(3.6g，20mmol)和Et3N(3.4mL，24mmol)的DCM(50mL)溶液，然后将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩至干。将粗产物溶于MTBE(100mL)并搅拌10min，滤出不溶物并减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用20％EtOAc的己烷溶液洗脱。合并纯级分并减压浓缩。将得到的外消旋化合物溶于10％EtOAc的石油醚溶液(100mL)并在冰箱中放置12h，滤出形成的晶体并使用5％EtOAc的石油醚溶液(30mL)洗涤，并在真空下干燥。通过手性SFC进一步纯化得到的残余物，得到标题化合物(500mg)。MS(ES+)m/z 538.43[M+H]+。
制备SFC条件：
中间体32
(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚 甲基)-1-(羟甲基)环丙基)甲酯(I-32a)
在室温下将DCC(549mg，2.7mmol)和DMAP(33mg，0.27mmol)添加到搅拌的(Z)-2-氨基-9-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(350mg，1.3mmol)和(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸(289mg，1.3mmol)的DMF(20mL)溶液中。将得到的反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩。将粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，并用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(65mg，10％)，为固体。MS(ES+)463.43[M+H]+。
制备SFC条件：
中间体33
步骤a)丁酸(Z)-(2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙 基)甲酯(I-33a)
在室温下，向搅拌的化合物I-28j(300mg，1.34mmol)的DMF(20mL)溶液添加原丁酸三甲酯(0.32mL，2.02mmol)和pTSA(26mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后添加Et3N(0.5mL)并浓缩混合物。将残余物溶于80％乙酸的水溶液(20mL)，在室温下搅拌2h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用8％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(260mg，57％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 294.34[M+H]+。
中间体34
步骤a)O-(2-乙基丁基)-L-高丝氨酸2-乙基丁酯(I-34a)
在0℃下，向搅拌的L-天冬氨酸(5g，37.6mmol甲苯(100mL)溶液添加pTSA(449mg，3.7mmol)，然后添加2-乙基丁-1-醇(7.7g，75.1mmol)。将溶液在110℃下搅拌16h，然后减压浓缩。将残余物溶于水并使用EtOAc萃取，使用饱和碳酸氢钠溶液，盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到标题化合物(7.15g，63％)。MS(ES+)m/z302.41[M+H]+。
步骤b)L-天冬氨酸双(2-乙基丁酯)盐酸盐(I-34b)
在室温下，将4M HCl的1,4-二氧六环(40mL，160mmol)溶液添加到化合物I-34a(7.15g，23.7mmol)的1,4-二氧六环(35mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌12h，然后减压浓缩，得到标题化合物(8g，HCl盐)，为固体。MS(ES+)m/z 302.28[M+H]+。
步骤c)((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-天冬氨酸双(2-乙基丁酯)(I- 34c)
在-70℃下于5min内将Et3N(6.9mL，49.3mmol)滴加到搅拌的化合物I-34b(8g，23.5mmol)的DCM(40mL)溶液中，然后于10min内滴加二氯磷酸苯酯(3.5mL，23.5mmol)的DCM(20mL)溶液。将反应混合物在-70℃下搅拌30min，然后允许在2h内升温至0℃，然后在0℃下搅拌1h。在0℃下滴加2,3,4,5,6-五氟苯酚(3.9g，21.12mmol)和Et3N(3.6mL，25.8mmol)的DCM(20mL)溶液，然后将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩至干，将粗产物溶于MTBE(100mL)，滤出不溶物并减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。合并纯级分并减压浓缩。将得到的外消旋化合物溶于10％EtOAc的石油醚溶液(90mL)并在0℃下放置12h，滤出形成的晶体，并在真空下干燥。将得到的化合物再次溶于10％EtOAc的石油醚溶液(30mL)并在0℃下放置12h，滤出形成的晶体并在真空下干燥。将得到的化合物再次溶于2％EtOAc的石油醚溶液(50mL)并在0℃下放置4h，滤出形成的晶体并在真空下干燥，得到标题化合物(2g，12％，手性纯度98.6％)。MS(ES+)m/z624.60[M+H]+。
中间体35
步骤a)新戊酸(Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲酯(I-35a)
在室温下，将DMAP(464mg，3.8mmol)添加到搅拌的(Z)-2-氨基-9-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(1g，3.8mmol)的DMF(50mL)溶液。将反应混合物冷却至10℃，然后添加新戊酰氯(920mg，7.6mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌1h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用8％MeOH的DCM溶液洗脱。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(100mg)，为固体。MS(ES+)348.41[M+H]+。
中间体36
异丁酸(R,Z)-(2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基) 甲酯(I-36a)和
异丁酸(S,Z)-(2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基) 甲酯(I-36b)
在室温下，向搅拌的化合物I-28j(300mg，1.34mmol)的DMF(15mL)溶液添加原异丁酸三甲酯(0.64mL，4.03mmol)和pTSA(128mg，0.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后添加Et3N(1mL)并浓缩混合物。将残余物溶于80％乙酸的水溶液(20mL)，在室温下搅拌2h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用8％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法G进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物峰-1(61mg，15％)和峰-2(62mg，15％)，为固体。MS(ES+)294.30[M+H]+。
峰-1：
SOR：+46.14°(基于鸟嘌呤偶联化合物的SOR值，立体化学被推定为R-异构体)。
峰-2：
SOR：-46.18°(基于鸟嘌呤偶联化合物的SOR值，立体化学被推定为S-异构体)。
制备SFC条件
中间体37
步骤a)(Z)-N-(1-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-5-氟-2-氧代-1,2-二氢嘧 啶-4-基)苯甲酰胺(I-37a)
将干燥的K2CO3(7.1g，51.5mmol)和化合物I-28g(3g，8.6mmol)添加到搅拌的N-(5-氟-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)苯甲酰胺(2.0g，8.6mmol)的DMF(100mL)溶液中。将反应混合物在100℃下搅拌48h，然后冷却至50℃并添加MeOH(6mL)。将得到的反应混合物在50℃下搅拌2h，然后冷却至室温并过滤。减压浓缩滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用12％MeOH的DCM溶液洗脱。通过硅胶柱色谱法进一步纯化得到的残余物并用5％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(500g，16％)为Z异构体。MS(ES+)346.28[M+H]+。
步骤b)(Z)-4-氨基-1-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-5-氟嘧啶-2(1H)-酮 (I-37b)
在室温下将搅拌的化合物I-37a(500mg，1.45mmol)在7M NH3的MeOH溶液(20mL，14mmol)中的溶液搅拌16h，然后浓缩。通过使用EtOAc(10mL)研磨将残余物进一步纯化，过滤并干燥，得到标题化合物(300mg，85％)，为固体。MS(ES+)242.28[M+H]+。
步骤c)异丁酸(Z)-(2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟甲 基)环丙基)甲酯(I-37c)
在室温下向搅拌的化合物I-37b(250mg，1.04mmol)的DMF(10mL)溶液中添加原异丁酸三甲酯(0.5mL，3.1mmol)和pTSA(79mg，0.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后添加Et3N(2mL)并浓缩混合物。将残余物溶于80％乙酸的水(30mL)溶液，在室温下搅拌2h，然后浓缩。将粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用8％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(250mg，77％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 312.39[M+H]+。
中间体38
步骤a)丁酸(Z)-(2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基) 环丙基)甲酯(I-38a)
在室温下，向搅拌的化合物I-37b(300mg，1.24mmol)的DMF(30mL)溶液中添加原丁酸三甲酯(0.6mL，3.7mmol)和pTSA(119mg，0.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后添加Et3N(0.5mL)并浓缩混合物。将残余物溶于80％乙酸的水溶液(30mL)，在室温下搅拌2h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用7％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(350mg，88％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 312.31[M+H]+。
中间体39
步骤a)异丁酸(R,Z)-(2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟 甲基)环丙基)甲酯(I-39a)
通过手性SFC进一步纯化化合物I-37a(3.25g)，得到标题化合物(峰-2)(1.21g，31％)，为固体。MS(ES+)312.35[M+H]+。
峰-2：
SOR：+92.72°(基于胞嘧啶偶联化合物的SOR值，立体化学被推定为R-异构体)。
制备SFC条件：
步骤b)异丁酸((1R,Z)-2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1- (((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(I-39b)
在室温下，将甲磺酸(0.53mL，8.1mmol)的DMF(10mL)溶液滴加到搅拌的化合物I-39a(1.1g，3.4mmol)和3,4-二氢-2H-吡喃(6.2mL，67.5mmol)的DMF(30mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后添加Et3N(10mL)并减压浓缩。得到的粗化合物(1.25g)无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS(ES+)m/z 396.37[M+H]+。
步骤c)4-氨基-5-氟-1-((Z)-((2S)-2-(羟甲基)-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧 基)甲基)亚环丙基)甲基)嘧啶-2(1H)-酮(I-39c)
在室温下，向搅拌的化合物I-39b(1.25g，3.2mmol)的MeOH(60mL)溶液添加25％氨水(60mL，389.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌36h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物并用7％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(910mg，88％)，为固体。LCMS(ES+)m/z326.34[M+H]+。
步骤d)(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸((1R,Z)-2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)- 基)亚甲基)-1-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(I-39d)
在室温下将(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸(1.52mg，7.0mmol)和DCC(866mg，4.2mmol)的DMF(60mL)溶液的混合物搅拌3h，然后将不溶物固体过滤并将滤液减压浓缩。将得到的残余物溶于DMF(60mL)并添加化合物I-39c(910mg，2.8mmol),随后添加DMAP(103mg，0.84mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用4％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物，为异构体的混合物(930mg，63％)，为固体。MS(ES+)525.46[M+H]+。
步骤e)(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸((R,Z)-2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)- 基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基)甲酯(I-39e)
在室温下将80％AcOH(100mL，1397.5mmol)添加到化合物I-39d(930mg，1.8mmol)并将得到的反应混合物搅拌36h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物。用6％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(520mg，64％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 441.39[M+H]+。
实施例1
步骤a)乙酸((1R,Z)-2-((2-异丁酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1- (((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(1a)
在室温下将甲磺酸(0.3mL，4.3mmol)的DMF(40mL)溶液滴加到搅拌的化合物I-12b(800mg，2.13mmol)的DMF(10mL)溶液和3,4-二氢-2H-吡喃(3.9mL，43mmol)中。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩。得到的粗化合物(1.1g)无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS(ES+)m/z 460.26[M+H]+。
步骤b)2-氨基-9-((Z)-((2S)-2-(羟甲基)-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲 基)亚环丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(1b)
在室温下，向搅拌的化合物1a(1.1g，2.4mmol)的MeOH(50mL)溶液中添加25％氨水(55mL，360mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌12h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物并用15％的MeOH洗脱，得到标题化合物(750mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z348.20[M+H]+。
步骤c)2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸(2S)-((1R,Z)-2-((2-氨基-6-氧代- 1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(1c)
在室温下将N-Boc-L-缬氨酸(915mg，4.21mmol)和二环己基碳二亚胺(500mg，2.43mmol)的DCM(40mL)溶液的混合物搅拌3h，然后过滤并减压浓缩。将得到的粗产物溶于DMF(60mL)，然后添加化合物1b(650mg，1.87mmol)，然后添加4-二甲基氨基吡啶(70mg，0.56mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩。
通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用7％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(900mg，86％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 547.37[M+H]+。
步骤d)2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸(S)-((R,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H- 嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基)甲酯(1d)
在室温下，将化合物1c(900mg，1.6mmol)的80％乙酸(90mL，1.3mol)溶液搅拌16h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用10-12％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(600mg，67％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 463.29[M+H]+。
步骤e)2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸(S)-((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H- 嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-((((S)-(((S)-1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基) (苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(1e)
将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1.1mL，1.1mmol)滴加到化合物1d(100mg，0.22mmol)的DMF(10mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌30min，然后滴加I-4(140mg，0.26mmol)的无水THF(5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌12h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用10-12％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(120mg，46％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 802.42[M+H]+。
步骤f)2-氨基-3-甲基丁酸(S)-((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)-1-((((S)-(((S)-1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰 基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(1f-1)
和
2-氨基-3-甲基丁酸(R)-((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲 基)-1-((((S)-(((S)-1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧 基)甲基)环丙基)甲酯(1f-2)
在90℃下，将化合物1e(120mg，0.14mmol)的60％乙酸(12mL，126mmol)溶液搅拌5h，然后使其达到室温并减压浓缩。通过制备HPLC使用HPLC方法A纯化得到的残余物。将得到的残余物与另一批合并并通过手性NP HPLC纯化。
得到两种标题化合物，1f-1(22mg)和1f-2(8mg)。
制备NP-HPLC条件
1f-1:LCMS(ES+)m/z 702.39[M+H]+.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.71(s,1H),7.93(s,1H),7.33(m,J＝4.0Hz,2H),7.19(m,J＝8.1Hz,4H),6.54(s,2H),6.06(q,J＝7.7Hz,1H),4.44(d,J＝11.6Hz,1H),4.37(q,J＝5.8Hz,1H),4.07(q,J＝5.5Hz,1H),3.97(m,J＝3.8Hz,2H),3.87(m,J＝4.9Hz,2H),3.06(d,J＝5.4Hz,1H),1.64(t,J＝6.1Hz,4H),1.22(m,J＝3.2Hz,12H),0.82(q,J＝4.3Hz,6H),0.75(d,J＝6.8Hz,3H),0.70(d,J＝6.8Hz,3H).
1f-2:LCMS(ES+)m/z 702.39[M+H]+.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.70(s,1H),7.95(s,1H),7.34(t,J＝7.9Hz,2H),7.18(m,J＝6.0Hz,4H),6.55(s,2H),6.07(q,J＝7.8Hz,1H),4.34(d,J＝11.6Hz,1H),4.20(m,J＝5.4Hz,2H),4.02(d,J＝11.6Hz,1H),3.96(q,J＝5.6Hz,1H),3.77(m,J＝3.8Hz,2H),3.05(d,J＝5.2Hz,1H),1.79(m,J＝4.7Hz,1H),1.58(m,J＝4.9Hz,3H),1.20(m,J＝5.7Hz,11H),0.82(m,J＝3.5Hz,9H),0.74(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例2
2-氨基-3-甲基丁酸(S)-((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲 基)-1-((((S)-(((S)-3-甲基-1-氧代-1-((S)-戊-2-基氧基)丁-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰 基)氧基)甲基)环丙基)甲酯
和
2-氨基-3-甲基丁酸(R)-((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲 基)-1-((((S)-(((S)-3-甲基-1-氧代-1-((S)-戊-2-基氧基)丁-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰 基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(2-1和2-2)
根据实施例1的步骤e由化合物1d和I-3b制备标题化合物，然后通过使用4M HCl的二氧六环溶液处理Boc保护的化合物的二氧六环溶液4h去除Boc基团，然后浓缩。通过制备HPLC方法C纯化残余物，然后通过手性制备NP HPLC分离立体异构体。
手性制备NP HPLC
2-1：(60mg，27％产率)LCMS(MS+)688.34[M+H]+，根据手性NP HPLC，99.4％的手性纯度。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.70(s,1H),7.92(s,1H),7.30(t,J＝7.5Hz,2H),7.22(s,1H),7.13(d,J＝7.7Hz,3H),6.54(s,2H),5.90(t,J＝11.3Hz,1H),4.77(d,J＝6.1Hz,1H),4.42(m,J＝10.7Hz,2H),4.08(q,J＝5.3Hz,1H),3.98(d,J＝11.6Hz,1H),3.51(q,J＝9.1Hz,2H),3.04(d,J＝4.9Hz,1H),1.91(t,J＝6.3Hz,1H),1.64(s,3H),1.48(s,1H),1.39(d,J＝13.6Hz,1H),1.26(m,J＝10.0Hz,3H),1.11(d,J＝6.0Hz,3H),0.82(t,J＝6.8Hz,9H),0.71(q,J＝11.4Hz,6H).
2-2：(12mg，5.2％产率)LCMS(MS+)688.38[M+H]+，根据手性NP HPLC，97.8％的手性纯度。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.73(s,1H),7.93(s,1H),7.31(t,J＝7.8Hz,2H),7.17(m,J＝9.9Hz,5H),6.56(s,1H),5.89(t,J＝11.6Hz,1H),4.75(q,J＝6.1Hz,1H),4.36(d,J＝11.6Hz,1H),4.21(m,J＝5.7Hz,2H),4.00(q,J＝6.0Hz,2H),3.47(m,J＝6.9Hz,1H),3.04(d,J＝5.1Hz,1H),1.91(q,J＝6.5Hz,2H),1.77(t,J＝6.2Hz,1H),1.61(q,J＝8.5Hz,2H),1.42(m,J＝10.1Hz,3H),1.23(m,J＝7.6Hz,5H),1.08(d,J＝6.2Hz,3H),0.78(m,J＝12.6Hz,17H).
实施例3
步骤a)2-(((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1- (((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-丙酸(2S)-2- 丙基戊酯(3a)
在室温下，将叔丁基氯化镁(0.7mL，1M的THF溶液，0.72mmol)滴加到化合物I-19b(50mg，0.14mmol)的DMF(5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌30min。然后滴加化合物I-4(90mg，0.17mmol)的无水THF(2.5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用10％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(55mg，53％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 687.39[M+H]+。
步骤b)2-(((S)-(((R,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-2-丙基戊酯
和
2-((1-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-6-氧代-5,7-二氧杂-6-磷 杂螺[2.5]辛-6-基)氨基)丙酸(S,Z)-2-丙基戊酯(3b-1和3b-2)
在室温下将化合物3a(400mg，0.582mmol)的80％乙酸(40mL，559mmol)溶液搅拌24h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用12％MeOH的DCM溶液洗脱。将得到的残余物进行手性制备SFC纯化，得到两种级分，3b-1和3b-2。
通过制备HPLC使用方法B使用梯度0/35、9/67、9.1/99、10/99、10.1/35、12/35纯化3b-1，得到标题化合物(35mg)。根据LCMS的纯度：96.6％，手性HPLC 99.9％。LCMS(ES+)m/z607.31[M+H]+。
通过手性制备NP HPLC纯化3b-2，然后通过手性制备SFC使用“IPA方法”，得到环化的化合物3b-2。LCMS(ES+)m/z 509.19[M+H]+。
制备SFC条件“IPA方法”
实施例4
2-((1-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-6-氧代-5,7-二氧杂-6-磷 杂螺[2.5]辛-6-基)氨基)丙酸(S,Z)-2-乙基丁酯(4)
在室温下于30min内将1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.2mL，1.14mmol)的DMF(2mL)溶液滴加到搅拌的(Z)-2-氨基-9-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(150mg，0.57mmol)和I-6(0.31g，0.62mmol)的DMF(3mL)溶液的悬浮液中。将混合物在室温下搅拌3h，然后使用NaHCO3水溶液(10mL)稀释并使用DCM(25mL)萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用5％MeOH的DCM溶液洗脱。合并适当的级分，浓缩并通过制备HPLC使用方法C纯化，得到标题化合物(18mg，6.6％)为P-异构体的混合物。LCMS(ES+)m/z 481.25[M+H]+。
实施例5
2-((1-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-6-氧代-5,7-二氧杂-6-磷 杂螺[2.5]辛-6-基)氨基)-3-甲基丁酸(S,Z)-2-乙基丁酯(5)
在室温下于30min内向搅拌的(Z)-2-氨基-9-((2,2-双(羟甲基)亚环丙基)甲基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(0.1g，0.38mmol)和I-8b(0.2g，0.38mmol)的DMF(10mL)的悬浮液中滴加1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.12mL，0.760mmol)的DMF(5mL)溶液。将混合物搅拌3h，然后使用NaHCO3水溶液(5mL)稀释并使用DCM(3x 20mL)萃取。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用5％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法A纯化得到的残余物，得到标题化合物(12mg)，为P-立体异构体的混合物。LCMS(ES+)509.32[M+H]+。
实施例6
异丁酸((R,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-((((S)- (((S)-1-氧代-1-((S)-戊-2-基氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基) 甲酯
和
异丁酸((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-((((S)- (((S)-1-氧代-1-((S)-戊-2-基氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基) 甲酯(6-1和6-2)
将叔丁基氯化镁(2.7mL，1M的THF溶液，2.700mmol)滴加到I-11(180mg，0.540mmol)的DMF(20mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌20min，然后滴加I-9b(312mg，0.648mmol)的无水THF(20mL)溶液。将混合物在室温下搅拌2h，然后浓缩。将残余物与另一批合并并通过柱色谱法使用Combi快速仪器纯化，用7％DCM的MeOH溶液洗脱。合并适当的级分并浓缩，通过制备HPLC使用方法B纯化残余物。合并适当的级分并浓缩。手性HPLC显示两种对应异构体，其通过制备SFC分离。
6-1：LCMS(ES+)m/z 631.30[M+H]+。手性HPLC显示99.9％的纯度。
6-2：LCMS(ES+)m/z 631.30[M+H]+。手性HPLC显示99.8％的纯度。
制备SFC条件
实施例7
2-(((S)-(((S,Z)-1-((((S)-2-氨基-3-甲基丁酰基)氧基)甲基)-2-((2-氨基-6- 氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-4-甲基戊酸 (S)-(S)-戊-2-酯
和
2-(((S)-(((S,Z)-1-((((R)-2-氨基-3-甲基丁酰基)氧基)甲基)-2-((2-氨基-6- 氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-4-甲基戊酸 (S)-(S)-戊-2-酯(7-1和7-2)
根据实施例1步骤e和f，由化合物1d和I-7b制备标题化合物，不同之处在于通过以下进行最终化合物的纯化/分离
1)制备HPLC方法C
2)通过制备手性NP HPLC分离异构体
3)通过制备HPLC方法C纯化级分2
制备手性NP HPLC
7-1：LCMS(ES+)m/z 702.35[M+H]+，根据手性NP HPLC，99.96％的手性纯度。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.83(s,1H),7.90(s,1H),7.32(m,J＝4.0Hz,2H),7.22(t,J＝1.8Hz,1H),7.14(t,J＝7.3Hz,3H),6.60(s,2H),6.01(q,J＝7.7Hz,1H),4.77(m,J＝4.8Hz,1H),4.42(m,J＝7.6Hz,2H),4.04(q,J＝5.5Hz,1H),3.96(d,J＝11.5Hz,1H),3.71(m,J＝4.7Hz,1H),3.03(d,J＝5.5Hz,1H),1.63(q,J＝4.1Hz,4H),1.43(m,J＝3.0Hz,4H),1.24(m,J＝2.9Hz,2H),1.11(d,J＝6.3Hz,3H),0.83(q,J＝3.1Hz,5H),0.79(t,J＝5.6Hz,4H),0.74(d,J＝6.8Hz,3H),0.69(d,J＝6.8Hz,3H)。
7-2：LCMS(ES+)m/z 702.35[M+H]+，根据手性NP HPLC，97.97％的手性纯度。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.93(s,1H),7.90(s,1H),7.32(q,J＝5.3Hz,2H),7.22(t,J＝1.8Hz,1H),7.15(m,J＝6.7Hz,3H),6.72(s,2H),6.01(q,J＝7.8Hz,1H),4.75(q,J＝6.4Hz,1H),4.34(d,J＝11.5Hz,1H),4.20(m,J＝6.1Hz,2H),4.00(d,J＝11.5Hz,1H),3.66(m,J＝8.7Hz,1H),3.03(d,J＝5.2Hz,1H),1.78(m,J＝5.4Hz,1H),1.59(m,J＝4.4Hz,4H),1.42(m,J＝4.1Hz,5H),1.23(m,J＝3.8Hz,3H),1.07(t,J＝5.6Hz,3H),1.05(s,1H),0.81(m,J＝4.1Hz,13H),0.74(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例8
2-(((S)-(((S,Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲氧基)(4-溴苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯
和
2-(((S)-(((R,Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲氧基)(4-溴苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-基酯(8-1和8-2)
根据实施例1步骤e所描述的方法，使乙酸(Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基)甲酯和I-5反应。通过制备HPLC使用方法A纯化得到的化合物。通过SFC制备外消旋混合物，得到两种异构体，为分离的化合物。
8-1：2.7％产率，根据手性HPLC，98.82％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z 681.16[M+H]+。
8-2：3.2％产率，根据手性HPLC，99.7％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z 681.16[M+H]+。
制备SFC条件
实施例9
2-(((S)-(((S,Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯
和
2-(((S)-(((R,Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯(9-1和9-2)
根据实施例1步骤e所描述的方法，使乙酸(Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基)甲酯和I-3b反应。通过制备HPLC使用方法D纯化得到的化合物。通过制备SFC制备外消旋混合物，得到两种异构体，为分离的化合物。
9-1：6.0％产率，根据手性HPLC，98.07％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z 631.30[M+H]+。
9-2：6.0％产率，根据手性HPLC，98.9％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z 631.30[M+H]+。
制备SFC条件
实施例10
2-(((S)-(((S,Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲氧基)(4-溴苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯
和
2-(((S)-(((R,Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲氧基)(4-溴苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-(S)-戊-2-酯(10-1和10-2)
根据实施例1步骤e所描述的方法，使(Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基)乙酸甲酯和I-18b反应。通过制备HPLC使用方法D纯化得到的化合物。通过制备SFC制备外消旋混合物，得到两种异构体，为分离的化合物。
10-1：产率5.1％，根据分析SFC，99.9％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z 723.22和725.20[M+H]+。
10-2：产率8.0％，根据分析SFC，99.34％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z 723.19和725.20[M+H]+。
制备SFC条件
实施例11
丁酸((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-((((S)-(((S)- 1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基)甲酯
和
丁酸((R,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-((((S)-(((S)- 1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基)甲酯 (11-1和11-2)
根据实施例1步骤e所描述的方法使I-27和I-4反应。通过制备HPLC使用方法A纯化得到的化合物。通过制备SFC制备外消旋混合物，得到两种异构体，为分离的化合物。
11-1：产率4.2％，根据SFC，手性纯度99.95％，LCMS(ES+)m/z 673.33[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.79(s,1H),7.93(s,1H),7.33(t,J＝7.8Hz,2H),7.22(s,1H),7.15(t,J＝7.3Hz,3H),6.58(s,2H),6.05(q,J＝7.7Hz,1H),4.35(m,J＝7.0Hz,2H),4.04(q,J＝6.6Hz,2H),3.97(q,J＝5.5Hz,1H),3.88(m,J＝5.6Hz,2H),2.18(m,J＝7.4Hz,2H),1.60(d,J＝9.4Hz,3H),1.45(q,J＝7.1Hz,2H),1.24(d,J＝6.9Hz,11H),0.81(m,J＝4.9Hz,9H)。
11-2：产率4.0％，根据SFC，手性纯度99.14％，LCMS(ES+)m/z 673.29[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.74(s,1H),7.94(s,1H),7.34(t,J＝7.8Hz,2H),7.20(d,J＝7.1Hz,3H),7.16(t,J＝7.4Hz,1H),6.57(s,2H),6.05(q,J＝7.8Hz,1H),4.27(d,J＝11.6Hz,1H),4.18(m,J＝6.0Hz,2H),4.02(d,J＝11.6Hz,1H),3.96(q,J＝5.6Hz,1H),3.79(m,J＝5.0Hz,2H),2.17(m,J＝7.7Hz,2H),1.56(q,J＝10.5Hz,3H),1.45(q,J＝7.3Hz,2H),1.20(m,J＝7.1Hz,11H),0.81(q,J＝7.8Hz,9H)。
制备SFC条件
实施例12
丁酸((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-((((S)-(4-溴 苯氧基)(((S)-1-氧代-1-((S)-戊-2-基氧基)丙-2-基)氨基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基) 甲酯
和
丁酸((R,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-((((S)-(4-溴 苯氧基)(((S)-1-氧代-1-((S)-戊-2-基氧基)丙-2-基)氨基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基) 甲酯(12-1和12-2)
根据实施例1步骤e所描述的方法使I-27和I-5反应。通过制备HPLC使用方法D纯化得到的化合物。通过制备SFC分离外消旋混合物，得到两种异构体，为分离的化合物。
12-1：产率3.5％，根据分析SFC，99.48％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z709.41和711.35[M+H]+。
1H nmr(500MHz,DMSO)δ10.74(s,1H),7.91(s,1H),7.51(d,J＝8.5Hz,2H),7.22(s,1H),7.13(d,J＝8.5Hz,2H),6.56(s,2H),6.09(t,J＝11.5Hz,1H),4.78(m,J＝6.2Hz,1H),4.36(m,J＝7.0Hz,2H),4.04(t,J＝9.9Hz,2H),3.81(q,J＝8.9Hz,1H),2.18(m,J＝7.4Hz,2H),1.63(s,2H),1.44(m,J＝7.0Hz,4H),1.23(d,J＝6.9Hz,5H),1.12(d,J＝6.2Hz,3H),0.81(m,J＝7.3Hz,6H).
12-2：产率4.0％，根据分析SFC，98.93％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z709.41和711.39[M+H]+。
1H nmr(500MHz,DMSO)δ10.72(s,1H),7.92(s,1H),7.51(d,J＝8.5Hz,2H),7.21(s,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,2H),6.55(s,2H),6.09(t,J＝11.6Hz,1H),4.75(q,J＝6.1Hz,1H),4.29(d,J＝11.6Hz,1H),4.20(d,J＝5.8Hz,2H),4.04(d,J＝11.5Hz,1H),3.73(q,J＝9.0Hz,1H),2.16(m,J＝7.8Hz,2H),1.61(s,2H),1.42(m,J＝6.7Hz,4H),1.22(t,J＝7.1Hz,5H),1.09(d,J＝6.3Hz,3H),0.81(m,J＝6.8Hz,6H)。
制备SFC条件
实施例13
2-(((S)-(((S,Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-2-丙基戊酯
和
2-(((S)-(((R,Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基) 亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(S)-2-丙基戊酯(13-1和13-2)
根据实施例1步骤e所描述的方法，使乙酸(Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基)环丙基)甲酯和I-4反应。通过制备HPLC纯化得到的化合物。通过制备SFC制备外消旋混合物，得到两种异构体，为分离的化合物。
13-1：产率14％，根据分析SFC，96.88％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z 645.35[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO)_10.81(s,1H),7.93(s,1H),7.33(t,J＝7.7Hz,2H),7.22(s,1H),7.15(t,J＝7.9Hz,3H),6.60(s,2H),6.05(t,J＝11.5Hz,1H),4.32(m,J＝6.7Hz,2H),4.06(t,J＝9.7Hz,2H),3.96(q,J＝5.5Hz,1H),3.87(m,J＝7.1Hz,2H),1.93(s,3H),1.61(s,3H),1.24(d,J＝6.8Hz,11H),0.82(t,J＝6.2Hz,6H)。
13-2：产率18％，根据分析SFC，98.23％的手性纯度，LCMS(ES+)m/z 645.39[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO)_11.22(s,1H),7.92(s,1H),7.34(t,J＝7.6Hz,2H),7.21(d,J＝7.0Hz,3H),7.16(t,J＝7.4Hz,1H),6.74(s,2H),6.05(t,J＝11.7Hz,1H),4.20(t,J＝10.9Hz,3H),4.05(d,J＝11.6Hz,1H),3.96(q,J＝5.5Hz,1H),3.80(q,J＝5.3Hz,2H),1.92(s,3H),1.57(d,J＝21.6Hz,3H),1.20(m,J＝7.3Hz,11H),0.82(t,J＝6.7Hz,6H)。
制备SFC条件
实施例14
步骤a)乙酸(Z)-(2-((2-氨基-6-(环丙基氨基)-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲酯(14a)
在室温下，向搅拌的(Z)-(2-((2-氨基-6-(环丙基氨基)-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲基)环丙烷-1,1-二基)二甲醇(700mg，2.22mmol)的DMF(70mL)溶液中添加原乙酸三甲酯(1.15mL，8.90mmol)和pTSA(425mg，2.23mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后浓缩。将残余物溶于80％乙酸(水溶液，100mL)，将混合物在室温下搅拌3h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，用4.5％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法C纯化得到的化合物，得到标题化合物(180mg，24％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 345.31[M+H]+.
步骤b)2-(((S)-(((Z)-1-(乙酰氧基甲基)-2-((2-氨基-6-环丙基氨基-1H-嘌呤- 9(6H)-基)亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(2S)-2-丙基戊酯(14b)
在5min内向14a(50mg，0.14mmol)的无水THF(4mL)溶液滴加叔丁基氯化镁(0.8mL，1M的THF溶液，0.8mmol)。将混合物在室温下搅拌30min，然后滴加I-4(92mg，0.18mmol)的无水THF(2mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用8％MeOH的DCM溶液洗脱。合并适当的级分并浓缩。通过制备HPLC使用方法D纯化得到的残余物，得到标题化合物(10mg，10％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 684.45[M+H]+.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.98(d,J＝4.6Hz,1H),7.44(s,1H),7.31(m,J＝7.3Hz,3H),7.16(q,J＝9.5Hz,3H),6.02(m,J＝6.9Hz,3H),4.36(m,J＝13.5Hz,1H),4.18(m,J＝9.5Hz,2H),3.97(m,J＝5.2Hz,1H),3.83(m,J＝7.3Hz,2H),3.03(s,1H),1.92(d,J＝3.0Hz,3H),1.59(d,J＝7.0Hz,3H),1.20(m,J＝7.6Hz,12H),0.81(d,J＝6.9Hz,6H),0.66(d,J＝6.6Hz,2H),0.60(s,2H)。
实施例15
2-氨基-3-甲基丁酸(S)-((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲 基)-1-((((S)-(((S)-1-氧代-1-((S)-戊-2-基氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧 基)甲基)环丙基)甲酯
和
2-氨基-3-甲基丁酸(R)-((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)亚甲 基)-1-((((S)-(((S)-1-氧代-1-((S)-戊-2-基氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧 基)甲基)环丙基)甲酯(15-1和15-2)
根据实施例1步骤e和f由化合物1d和I-9b制备标题化合物，不同之处在于通过以下进行最终化合物的纯化/分离
1)制备手性NP HPLC，得到第一级分(15-1)和第二级分(15-2)。
2-1)第一级分与另一批相同的化合物合并，并通过制备HPLC，方法C纯化。
2-2)第二级分与另一批相同的化合物合并，并通过制备HPLC，方法A纯化。
3)通过制备手性NP HPLC纯化第二级分。
制备NP HPLC
15-1：LCMS(ES+)m/z 660.33[M+H]+，根据手性NP HPLC，99.2％的手性纯度。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.60(s,1H),7.93(s,1H),7.33(m,J＝3.2Hz,2H),7.23(t,J＝1.8Hz,1H),7.16(d,J＝7.9Hz,3H),6.54(s,2H),6.02(q,J＝7.7Hz,1H),4.79(m,J＝3.8Hz,1H),4.46(d,J＝11.6Hz,1H),4.38(q,J＝5.8Hz,1H),4.06(q,J＝5.5Hz,1H),3.96(d,J＝11.5Hz,1H),3.80(m,J＝5.1Hz,1H),3.03(d,J＝5.5Hz,1H),1.63(q,J＝4.0Hz,4H),1.45(m,J＝3.5Hz,2H),1.22(d,J＝7.1Hz,5H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H),0.83(t,J＝7.4Hz,3H),0.74(d,J＝6.8Hz,3H),0.69(d,J＝6.8Hz,3H)。
15-2：LCMS(ES+)m/z 660.33[M+H]+，根据手性NP HPLC，99.0％的手性纯度。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),7.93(s,1H),7.33(q,J＝5.3Hz,2H),7.18(m,J＝5.2Hz,4H),6.70(s,2H),6.03(q,J＝7.8Hz,1H),4.76(q,J＝6.4Hz,1H),4.35(d,J＝11.6Hz,1H),4.20(m,J＝3.3Hz,2H),4.03(d,J＝11.5Hz,1H),3.73(m,J＝5.1Hz,1H),3.04(d,J＝5.2Hz,1H),1.78(m,J＝3.8Hz,1H),1.61(m,J＝4.0Hz,3H),1.42(m,J＝3.2Hz,3H),1.28(q,J＝4.4Hz,1H),1.22(m,J＝5.7Hz,5H),1.09(d,J＝6.3Hz,3H),0.82(t,J＝7.3Hz,6H),0.74(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例16
异丁酸((Z)-2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((((((S)-1-氧代- 1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基)甲酯于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，2.6mL，2.6mmol)滴加到化合物I-28k(150mg，0.51mmol)的DMF(15mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后在10min内滴加化合物I-4(322mg，0.6mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后浓缩并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用8-10％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法C进一步纯化得到的产物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-1)(9mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 633.53[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO)：δ7.74(t,J＝5.5Hz,1H),7.43(t,J＝1.7Hz,2H),7.35(t,J＝8.0Hz,3H),7.16(q,J＝3.7Hz,3H),6.05(q,J＝7.7Hz,1H),5.80(d,J＝7.4Hz,1H),4.37(d,J＝11.5Hz,1H),4.22(q,J＝5.6Hz,1H),3.99(m,J＝5.4Hz,2H),3.88(m,J＝5.7Hz,3H),2.46(t,J＝3.5Hz,1H),1.60(t,J＝5.7Hz,1H),1.47(d,J＝1.8Hz,2H),1.23(m,J＝6.3Hz,12H),1.06(t,J＝3.5Hz,3H),1.03(q,J＝3.1Hz,3H),0.84(m,J＝2.5Hz,6H)。
制备SFC条件：
实施例17
步骤a)((S)-(((1S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)- 1-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸2-丙基 戊酯(17a)
于5min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，5mL，5.0mmol)滴加到化合物I-13b(350mg，1mmol)的DMF(35mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于5min内滴加化合物I-4(633mg，1.2mmol)的无水THF(17mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后浓缩并合并得到的粗化合物，通过硅胶柱色谱法纯化。用10％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(250mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 687.29[M+H]+。
步骤b)((S)-(((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸2-丙基戊酯(17b)
将80％AcOH(104.2mL，1455.7mmol)添加到化合物17a(250mg，0.4mmol)，并将得到的反应混合物在室温下搅拌48h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用12％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法A进一步纯化得到的产物，得到标题化合物(110mg，42％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 603.48[M+H]+。
步骤c)((((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1-(羟 甲基)环丙基)甲氧基)(羟基)磷酰基)-L-丙氨酸(17c)
在50℃下将化合物17b(40mg，0.07mmol)的Et3N(1mL)溶液和水(0.25mL)搅拌46h。将反应混合物冻干并通过制备HPLC使用方法G纯化，得到标题化合物(15mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 603.48[M+H]+.
步骤d)((((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1-(羟 甲基)环丙基)甲氧基)氧代磷酰基)-L-丙氨酸锂(17d)
将Dowex 50WX4-200离子交换树脂放入柱(2x 10cm)中，使用水:MeOH(1:1，100mL)洗涤直至得到无色洗脱液，然后使用Milli Q水(100mL)洗涤以洗去MeOH。再次用0.5M硫酸(50mL)洗脱离子交换树脂，直至达到酸性pH，并使用水(200mL)洗涤直至中性pH。再次用1M氢氧化锂(50mL)洗脱离子交换树脂直至达到碱性pH，并使用水(200mL)洗涤直至中性pH。将化合物17c(13mg，0.031mmol)的Milli Q水(2mL)溶液通过上述新制备的Dowex Li+柱。将适当的级分冻干，得到标题化合物(8mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 415.30[M+H]+。
1H NMR(500MHz,D2O)δ8.31(d,J＝11.3Hz,1H),7.23(m,J＝2.2Hz,1H),4.01(m,J＝5.3Hz,1H),3.77(m,J＝5.2Hz,3H),3.49(m,J＝5.7Hz,1H),1.54(m,J＝3.1Hz,2H),1.19(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例18
((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1-((异丁酰 氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸甲酯(18)
于15min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1.5mL，1.5mmol)滴加到化合物I-11a(210mg，0.63mmol)的DMF(25mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后于5min内滴加化合物I-1(308mg，0.66mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后减压浓缩并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用7％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法D进一步纯化得到的产物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-2)(67mg，17％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 617.46[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.69(s,1H),7.92(s,1H),7.32(t,J＝7.9Hz,2H),7.22(s,1H),7.14(q,J＝6.7Hz,3H),6.55(s,2H),6.05(q,J＝7.8Hz,1H),4.38(m,J＝6.9Hz,2H),4.01(m,J＝7.3Hz,2H),3.75(q,J＝5.2Hz,1H),3.57(s,3H),2.44(m,J＝7.0Hz,1H),1.61(d,J＝1.4Hz,3H),1.43(m,J＝4.7Hz,2H),1.04(d,J＝7.0Hz,3H),0.99(d,J＝7.0Hz,3H),0.82(d,J＝6.7Hz,3H),0.78(d,J＝6.6Hz,3H)。
制备SFC条件：
实施例19
((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1-((异丁酰 氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-苯丙氨酸戊-3-酯
在室温下于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，2.3mL，2.3mmol)滴加到化合物I-11(300mg，0.9mmol)的DMF(15mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于10min内滴加化合物I-29c(552mg，1.0mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用8％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法D进一步纯化得到的产物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-2)(90mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 707.70[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.82(s,1H),7.88(s,1H),7.28(t,J＝7.9Hz,2H),7.20(t,J＝2.8Hz,5H),7.11(m,J＝4.3Hz,2H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),6.62(s,2H),6.13(q,J＝7.8Hz,1H),4.58(m,J＝3.5Hz,1H),4.25(d,J＝11.6Hz,1H),3.96(q,J＝5.4Hz,1H),3.87(m,J＝6.1Hz,2H),3.69(q,J＝5.8Hz,1H),3.25(t,J＝7.6Hz,1H),2.98(m,J＝3.2Hz,1H),2.77(q,J＝7.5Hz,1H),2.41(q,J＝7.0Hz,1H),1.53(t,J＝5.0Hz,1H),1.41(m,J＝5.3Hz,5H),1.02(d,J＝7.0Hz,3H),0.97(d,J＝7.0Hz,3H),0.75(t,J＝7.4Hz,3H),0.64(t,J＝7.4Hz,3H)。
制备SFC条件：
实施例20
((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1-((异丁酰 氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-苯丙氨酸2-乙基丁酯(20)
在室温下于15min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，2.1mL，2.1mmol)滴加到化合物I-11(300mg，0.9mmol)的DMF(25mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后于5min内滴加化合物I-30c(566mg，1.0mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用8％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法D进一步纯化得到的产物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物。通过手性SFC再次纯化不纯的化合物，得到标题化合物(峰-2)(75mg，11％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 721.64[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.73(s,1H),7.86(s,1H),7.27(q,J＝5.3Hz,2H),7.20(d,J＝4.4Hz,5H),7.10(m,J＝5.1Hz,2H),7.00(d,J＝8.6Hz,2H),6.56(s,2H),6.13(q,J＝7.7Hz,1H),4.35(d,J＝11.6Hz,1H),4.07(q,J＝5.8Hz,1H),4.00(q,J＝5.5Hz,1H),3.87(m,J＝5.3Hz,3H),3.58(q,J＝5.4Hz,1H),2.97(m,J＝3.3Hz,1H),2.78(q,J＝7.5Hz,1H),2.43(m,J＝7.0Hz,1H),1.55(t,J＝5.1Hz,1H),1.50(q,J＝3.6Hz,1H),1.36(t,J＝6.2Hz,1H),1.20(m,J＝4.5Hz,4H),1.03(d,J＝7.0Hz,3H),0.98(d,J＝7.0Hz,3H),0.77(m,J＝3.5Hz,6H)。
制备SFC条件-1：
制备SFC条件-2：
实施例21
((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1-((异丁酰 氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸2-乙基丁酯(21)
在室温下于3min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1.4mL，2.1mmol)滴加到化合物I-11(200mg，0.6mmol)的DMF(15mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后于5min内滴加化合物I-31c(360mg，0.7mmol)的无水THF(8mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用8％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法F进一步纯化得到的产物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物。通过手性SFC再次纯化不纯的异构体，得到标题化合物(峰-2)(7.5mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z687.71[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.89(s,1H),7.32(t,J＝7.9Hz,2H),7.22(s,1H),7.14(t,J＝8.6Hz,3H),6.69(s,2H),6.02(t,J＝11.6Hz,2H),4.38(t,J＝10.1Hz,2H),4.00(q,J＝5.2Hz,2H),3.92(t,J＝5.8Hz,2H),3.76(q,J＝8.3Hz,1H),2.44(q,J＝7.0Hz,1H),1.60(d,J＝9.6Hz,3H),1.43(t,J＝5.9Hz,3H),1.27(m,J＝7.2Hz,4H),1.04(d,J＝7.0Hz,3H),0.99(d,J＝7.0Hz,3H),0.81(m,J＝6.8Hz,12H)。
制备SFC条件-1
制备SFC条件-2
实施例22
步骤a)((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸2-丙基戊 酯(22a)
在室温下于5min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，4.3mL，4.3mmol)滴加到化合物I-19b(300mg，0.9mmol)的DMF(33mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌45min，然后于10min内滴加化合物I-4(545mg，1.01mmol)的无水THF(17mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用7％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(250mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 687.71[M+H]+。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤b)((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸2-丙基戊酯(22b)
将80％AcOH(105mL，1455.7mmol)添加到22a(250mg，0.4mmol)并将得到的反应混合物在室温下搅拌24h，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用12％MeOH的DCM溶液洗脱。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤c)硬脂酸((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((((S)-(((S)-1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲 基)环丙基)甲酯(22c)
在室温下将DCC(154mg，0.75mmol)和DMAP(6mg，0.1mmol)添加到搅拌的化合物22b(100mg，0.17mmol)和硬脂酸(142mg，0.5mmol)的DMF(10mL)溶液中。将得到的反应混合物在室温下搅拌20h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用5％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法D进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-1)(7mg，5％)，为固体。MS(ES+)869.77[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.68(s,1H),7.94(s,1H),7.32(m,J＝3.2Hz,2H),7.22(d,J＝1.7Hz,1H),7.16(d,J＝7.8Hz,3H),6.53(s,2H),6.05(q,J＝7.7Hz,1H),4.34(m,J＝7.1Hz,2H),4.04(m,J＝6.5Hz,2H),3.97(q,J＝5.6Hz,1H),3.87(m,J＝4.2Hz,2H),2.19(m,J＝7.3Hz,2H),1.61(s,3H),1.42(d,J＝3.9Hz,2H),1.21(t,J＝20.3Hz,40H),0.84(m,J＝4.1Hz,9H)。
注意：氨基酸侧链的(S)立体化学是基于用于合成I-4的起始原料所定义的手性。
基于文献报告定义了磷中心的(S)立体化学
尽管没有经过验证(或证明)，但推定没有手性纯度的损失。
制备SFC条件
实施例23
步骤a)(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9- 基)亚甲基)-1-((((S)-(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)(苯氧基) 磷酰基)氧基)甲基)环丙基)甲酯(23a)
在室温下于15min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，0.7mL，0.7mmol)滴加到化合物I-32(65mg，0.14mmol)的DMF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌40min，然后于15min内滴加化合物I-30c(97mg，0.17mmol)的无水THF(5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用5％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(65mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 850.85[M+H]+。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤b)L-缬氨酸((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((((S)-(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基) 甲基)环丙基)甲酯(23b)
将60％AcOH(13mL，129mmol)添加到化合物23a(130mg，0.15mmol)并将得到的反应混合物在90℃下搅拌5h，然后减压浓缩。通过制备HPLC使用方法D纯化得到的粗化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(18mg)，为固体。MS(ES+)750.71[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.72(s,1H),7.84(s,1H),7.27(t,J＝7.9Hz,2H),7.20(t,J＝2.4Hz,5H),7.11(m,J＝5.8Hz,2H),6.99(d,J＝8.6Hz,2H),6.54(s,2H),6.14(q,J＝7.7Hz,1H),4.40(d,J＝11.6Hz,1H),4.09(q,J＝5.6Hz,1H),4.00(t,J＝8.3Hz,1H),3.85(q,J＝5.5Hz,3H),3.63(q,J＝5.4Hz,1H),3.03(d,J＝5.5Hz,1H),2.95(t,J＝3.2Hz,1H),2.78(q,J＝7.5Hz,1H),1.57(m,J＝7.6Hz,4H),1.35(q,J＝6.2Hz,1H),1.20(m,J＝5.4Hz,5H),0.77(m,J＝3.5Hz,6H),0.71(q,J＝10.0Hz,6H)。
制备SFC条件：
实施例24
步骤a)((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸(S)-戊- 2-酯(24a)
在室温下于5min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，2.9mL，2.9mmol)滴加到化合物I-19b(200mg，0.6mmol)的DMF(30mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌45min，然后于10min内滴加化合物I-9b(333mg，0.7mmol)的无水THF(15mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩。并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用5％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(200mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z645.64[M+H]+。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤b)((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸(S)-戊-2-酯(24b)
将80％AcOH(88.8mL，1240.6mmol)添加到化合物25a(200mg，0.3mmol)并将得到的反应混合物在室温下搅拌24h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用12％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(85mg，46％)，为固体。MS(ES-)559.58[M-H]-。
步骤c)硬脂酸((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((((S)-(((S)-1-氧代-1-(((S)-戊-2-基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲 基)环丙基)甲酯(24c)
在室温下，将DCC(141mg，0.7mmol)和DMAP(6mg，0.05mmol)添加到搅拌的化合物24b(85mg，0.15mmol)和硬脂酸(130mg，0.5mmol)的DMF(3mL)溶液中。将得到的反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗化合物，并用5％MeOH的DCM溶液洗脱。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(8mg)，为固体。MS(ES+)827.71[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.73(s,1H),7.93(s,1H),7.32(q,J＝5.3Hz,2H),7.18(m,J＝7.2Hz,4H),6.56(s,2H),5.99(m,J＝7.2Hz,1H),4.79(m,J＝6.4Hz,1H),4.36(m,J＝6.6Hz,2H),4.04(q,J＝5.8Hz,2H),3.81(m,J＝3.4Hz,1H),2.19(m,J＝7.4Hz,2H),1.62(s,2H),1.44(m,J＝4.5Hz,4H),1.18(m,J＝13.4Hz,37H),0.84(m,J＝4.7Hz,6H)。
制备SFC条件：
实施例25
步骤a)((S)-(((Z)-2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((异丁酰氧 基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-苯丙氨酸2-乙基丁酯(25)
在室温下于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1.4mL，1.4mmol)滴加到化合物I-28k(80mg，0.27mmol)的DMF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于10min内滴加化合物I-30c(187mg，0.33mmol)的无水THF(5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用6％MeOH的DCM溶液洗脱。将得到的化合物与另一批合并，并通过制备HPLC使用方法D进一步纯化。通过手性SFC进一步纯化纯化合物(两次)，得到标题化合物(峰-2)(26mg，14％)，为固体。MS(ES+)681.66[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.67(d,J＝7.5Hz,1H),7.42(q,J＝5.1Hz,2H),7.36(s,1H),7.27(m,J＝6.1Hz,4H),7.17(m,J＝7.0Hz,4H),7.00(d,J＝8.6Hz,2H),6.15(q,J＝7.8Hz,1H),5.79(d,J＝7.4Hz,1H),4.20(d,J＝11.5Hz,1H),3.95(m,J＝4.1Hz,1H),3.89(q,J＝5.6Hz,1H),3.79(m,J＝5.1Hz,4H),2.96(m,J＝3.3Hz,1H),2.77(q,J＝7.5Hz,1H),2.46(m,J＝7.0Hz,1H),1.36(m,J＝5.3Hz,4H),1.21(m,J＝3.7Hz,4H),1.03(q,J＝7.5Hz,6H),0.77(q,J＝4.8Hz,6H)。
制备SFC条件-1
制备SFC条件-2：
实施例26
步骤a)四氢三磷酸((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲 基)-1-(羟甲基)环丙基)甲酯(26a)
在0℃下将POCl3(0.5mL，0.53mmol)添加到I-13R(100mg，0.27mmol)的磷酸三乙酯(0.07mL，3.8mmol)的悬浮液中，并在0℃下搅拌4h。向上述反应混合物中添加三丁胺(0.07mL，0.3mmol)，然后添加三丁基焦磷酸铵(731mg，1.33mmol)的DMF(2mL)溶液，并在0℃下搅拌30min，在室温下搅拌1h。添加氢氧化铵溶液(10mL，65mmol)并在室温下继续搅拌16h。将反应混合物减压浓缩，然后冻干。通过制备HPLC使用方法H纯化粗化合物。残余物包含二磷酸酯和三磷酸酯化合物，并通过制备HPLC使用方法I再次纯化。通过制备HPLC使用方法I进一步纯化不纯的化合物。通过制备HPLC使用方法I进一步纯化得到的不纯的标题化合物，得到标题化合物(25mg)，为固体。MS(ES+)504.31[M+H]+。
步骤b)三磷酸(S,Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲酯锂(26b)
将Dowex 50WX8氢形式的离子交换树脂放入柱(2x 10cm)，使用水:MeOH(1:1，100mL)洗涤，直至得到无色洗脱液，然后使用Milli Q水(100mL)洗涤以洗去MeOH。再次用0.5M硫酸(50mL)洗脱离子交换树脂，直至达到酸性pH，并使用水(200mL)洗涤直至观察到中性pH。再次用1M氢氧化锂(50mL)洗脱离子交换树脂直至达到碱性pH，并使用水(200mL)洗涤直至中性pH。将化合物26a(25mg，0.05mmol)的Milli Q水(3mL)溶液通过上述新制备的Dowex LI+柱。将适当的级分冻干，得到标题化合物(15mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 504.27[M+H]+。
1H NMR(500MHz,D2O):δ8.23(s,1H),7.18(s,1H),4.14(q,J＝5.3Hz,1H),4.02(q,J＝5.3Hz,1H),3.70(d,J＝4.2Hz,2H),3.27(d,J＝1.0Hz,1H),1.58(d,J＝9.4Hz,1H),1.49(d,J＝9.3Hz,1H)。
实施例27
步骤a)三氢二磷酸((S,Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲 基)-1-(羟甲基)环丙基)甲酯(27a)
在0℃下将POCl3(0.5mL，0.53mmol)添加到I-13R(100mg，0.27mmol)的磷酸三乙酯(0.07mL，3.8mmol)悬浮液中，并在0℃下搅拌4h。向上述反应混合物中，添加三丁胺(0.07mL，0.3mmol)，然后添加三丁基焦磷酸铵(731mg，1.33mmol)的DMF(2mL)溶液，并在0℃下搅拌30min，并在室温下搅拌1h。添加氢氧化铵溶液(10mL，65mmol)并继续在室温下搅拌16h。将反应混合物减压浓缩，然后冻干。通过制备HPLC使用方法H纯化粗化合物。残余物包含二磷酸酯和三磷酸酯化合物，并通过制备HPLC使用方法I再次纯化。通过制备HPLC使用方法I进一步纯化不纯的化合物。通过制备HPLC使用方法I进一步纯化得到的不纯的标题化合物，得到标题化合物(15mg)，为固体。MS(ES+)424.30[M+H]+。
步骤b)二磷酸(S,Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- (羟甲基)环丙基)甲酯锂(27b)
将Dowex 50WX8氢形式(50-100目)的离子交换树脂放入柱(2x 10cm)，使用水:MeOH(1:1，100mL)洗涤直至得到无色洗脱液，然后使用Milli Q水(100mL)洗涤以洗去MeOH。再次用0.5M硫酸(50mL)洗脱离子交换树脂，直至达到酸性pH，并使用水(200mL)洗涤直至观察到中性pH。再次用1M氢氧化锂(50mL)洗脱离子交换树脂直至达到碱性pH，并使用水(200mL)洗涤直至中性pH。将化合物27a(15mg，0.04mmol)的Milli Q水(3mL)溶液通过上述新制备的Dowex Li+柱。将适当的级分冻干。得到标题化合物(13mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z424.34[M+H]+。
1H NMR(500MHz,D2O):δ8.36(s,1H),7.26(s,1H),4.21(q,J＝5.2Hz,1H),4.05(q,J＝5.3Hz,1H),3.83(d,J＝12.2Hz,1H),3.69(m,J＝9.4Hz,2H),1.64(q,J＝3.5Hz,1H),1.57(d,J＝9.0Hz,1H)。
实施例28
步骤a)异丁酸((Z)-2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((((S)- (((S)-1-氧代-1-(((S)-戊-2-基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙 基)甲酯(28)
在室温下于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，3.4mL，3.4mmol)滴加到化合物I-28k(200mg，0.7mmol)的DMF(15mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于10min内滴加化合物I-9b(394mg，0.82mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用4％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法G进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-2)(36mg，9％)，为固体。MS(ES+)591.60[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.73(d,J＝7.5Hz,1H),7.43(s,1H),7.35(q,J＝5.3Hz,1H),7.16(q,J＝4.7Hz,1H),6.00(q,J＝7.7Hz,1H),5.80(d,J＝7.5Hz,1H),4.80(m,J＝4.8Hz,1H),4.38(d,J＝11.5Hz,1H),4.23(q,J＝5.7Hz,1H),3.99(q,J＝5.3Hz,1H),3.88(d,J＝11.5Hz,1H),3.79(m,J＝3.5Hz,1H),2.47(d,J＝7.0Hz,1H),1.47(t,J＝6.6Hz,1H),1.23(t,J＝6.0Hz,1H),1.13(d,J＝6.3Hz,1H),1.04(q,J＝7.9Hz,1H),0.84(t,J＝7.4Hz,1H)。
制备SFC条件
实施例29
步骤a)丁酸((Z)-2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((((S)-(((S)- 1-氧代-1-(((S)-戊-2-基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基)甲酯 (29)
在室温下于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，4.3mL，4.3mmol)滴加到化合物I-33a(250mg，0.9mmol)的DMF(20mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于10min内滴加化合物I-9b(492mg，1.02mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用4％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法G进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-1)(45mg，9％)，为固体。MS(ES+)591.57[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.73(d,J＝7.5Hz,1H),7.53(s,1H),7.41(t,J＝1.8Hz,1H),7.36(m,J＝4.6Hz,3H),7.17(d,J＝7.4Hz,3H),6.01(q,J＝7.7Hz,1H),5.82(d,J＝7.4Hz,1H),4.79(m,J＝4.2Hz,1H),4.35(d,J＝11.5Hz,1H),4.23(q,J＝5.7Hz,1H),3.99(q,J＝5.4Hz,1H),3.91(d,J＝11.5Hz,1H),3.80(m,J＝3.5Hz,1H),2.22(m,J＝5.7Hz,2H),1.48(m,J＝3.7Hz,6H),1.22(t,J＝3.6Hz,6H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H),0.84(m,J＝3.1Hz,6H)。
制备SFC条件
实施例30
步骤a)丁酸((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((((S)-(((S)-1-氧代-1-(((S)-戊-2-基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲 基)环丙基)甲酯(30)
在室温下于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，3.8mL，3.8mmol)滴加到化合物I-27(250mg，0.8mmol)的DMF(20mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌40min，然后于15min内滴加化合物I-9b(433mg，0.9mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用5％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法G进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-1)(28mg)，为固体。MS(ES+)631.62[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.71(s,1H),7.93(s,1H),7.33(m,J＝3.2Hz,2H),7.22(t,J＝1.9Hz,1H),7.16(d,J＝7.9Hz,3H),6.55(s,2H),6.02(q,J＝7.7Hz,1H),4.79(m,J＝3.2Hz,1H),4.37(m,J＝7.5Hz,2H),4.03(q,J＝5.4Hz,2H),3.84(s,1H),2.18(m,J＝6.1Hz,2H),1.62(d,J＝1.2Hz,2H),1.45(m,J＝3.0Hz,4H),1.22(t,J＝7.0Hz,5H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H),0.81(m,J＝7.6Hz,6H)。
制备SFC条件：
实施例31
步骤a)异丁酸(S,Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((膦酰氧基)甲基)环丙基)甲酯(31a)
在0℃下将POCl3(0.1mL，0.84mmol)添加到I-14(140mg，0.42mmol)的磷酸三乙酯(1.6mL，9.3mmol)悬浮液中，并在0℃下搅拌2h。在0℃下通过添加三乙基碳酸氢铵缓冲液(1M,pH＝8)(8mL)淬灭过量的POCl3。将反应混合物减压浓缩。通过制备HPLC使用方法A纯化粗化合物，得到标题化合物(65mg，37％)，为固体。MS(ES+)414.44[M+H]+。
步骤b)磷酸(S,Z)-(2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((异丁酰氧基)甲基)环丙基)甲酯锂(31b)
将Dowex 50WX8氢形式(50-100目)的离子交换树脂放入柱(2x 10cm)，使用水:MeOH(1:1，100mL)洗涤直至得到无色洗脱液，然后使用Milli Q水(100mL)洗涤以洗去MeOH。再次用0.5M硫酸(50mL)洗脱离子交换树脂，直至达到酸性pH，并使用水(200mL)洗涤直至观察到中性pH。再次用1M氢氧化锂(50mL)洗脱离子交换树脂直至达到碱性pH，并使用水(200mL)洗涤直至中性pH。将化合物31a(55mg，0.13mmol)的Milli Q水(10mL)溶液通过上述新制备的Dowex Li+柱。将适当的级分冻干，得到标题化合物(55mg，93％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 414.37[M+H]+。
1H NMR(500MHz,D2O):δ8.07(s,1H),7.22(s,1H),4.63(d,J＝11.5Hz,1H),4.20(q,J＝5.4Hz,1H),3.92(m,J＝6.4Hz,2H),2.31(m,J＝4.7Hz,1H),1.80(d,J＝9.6Hz,1H),1.67(d,J＝9.6Hz,1H),0.97(q,J＝2.6Hz,3H),0.88(q,J＝2.6Hz,3H)。
实施例32
步骤a)丁酸((Z)-2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((((S)-(((S)- 1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基)甲酯 (32)
在室温下于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1.7mL，1.7mmol)滴加到化合物I-33a(100mg，0.34mmol)的DMF(20mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于10min内滴加化合物I-4(214mg，0.4mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用5％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法G进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-1)(20mg)，为固体。MS(ES+)633.72[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.72(d,J＝7.5Hz,1H),7.42(s,2H),7.35(q,J＝5.3Hz,3H),7.17(t,J＝6.8Hz,3H),6.04(q,J＝7.7Hz,1H),5.81(d,J＝7.4Hz,1H),4.34(d,J＝11.5Hz,1H),4.21(q,J＝5.6Hz,1H),3.98(m,J＝3.6Hz,2H),3.87(m,J＝8.1Hz,3H),2.21(m,J＝7.9Hz,2H),1.60(s,1H),1.49(m,J＝5.0Hz,4H),1.25(q,J＝5.7Hz,11H),0.84(m,J＝3.0Hz,9H)。
制备SFC条件：
实施例33
步骤a)((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((((叔丁氧羰基)-L-缬氨酰)氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸2-乙 基丁酯(33a)
在室温下于15min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1mL，1mmol)滴加到化合物I-32(90mg，0.2mmol)的DMF(20mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌40min，然后于15min内滴加化合物I-4(126mg，0.23mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用5％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(70mg，37％)，为固体。MS(ES+)816.89[M+H]+。
步骤b)((S)-(((Z)-1-(((L-缬氨酰)氧基)甲基)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢- 9H-嘌呤-9-基)亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸2-乙基丁酯(33b)
将60％AcOH(9mL，92.7mmol)添加到化合物33a(90mg，0.11mmol)，并在90℃下将得到的反应混合物搅拌5h，然后减压浓缩。通过制备HPLC使用方法G进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-1)(10mg，12％)，为固体。MS(ES+)716.51[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.69(s,1H),7.91(s,1H),7.33(t,J＝7.9Hz,2H),7.23(t,J＝1.8Hz,1H),7.15(m,J＝4.6Hz,3H),6.55(s,2H),6.05(q,J＝7.8Hz,1H),4.42(m,J＝7.9Hz,2H),4.06(q,J＝5.5Hz,1H),3.94(m,J＝5.4Hz,3H),3.75(m,J＝8.8Hz,1H),1.62(m,J＝6.2Hz,5H),1.43(q,J＝5.9Hz,4H),1.27(m,J＝7.3Hz,6H),0.77(m,J＝9.4Hz,20H)。
制备SFC条件：
实施例34
步骤a)((S)-(((Z)-2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((异丁酰氧 基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸2-乙基丁酯(34)
在室温下于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，3.4mL，3.4mmol)滴加到到化合物I-28k(200mg，0.7mmol)的DMF(15mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于10min内滴加化合物I-4(403mg，0.8mmol)的无水THF(8mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗化合物，用8％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法G进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-2)(56mg，12％)，为固体。MS(ES+)647.69[M+H]+.
1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.72(d,J＝7.4Hz,1H),7.43(t,J＝1.7Hz,2H),7.34(m,J＝4.0Hz,3H),7.15(m,J＝4.1Hz,3H),6.03(q,J＝7.8Hz,1H),5.80(d,J＝7.4Hz,1H),4.36(d,J＝11.5Hz,1H),4.23(q,J＝5.6Hz,1H),3.92(m,J＝5.7Hz,4H),3.73(m,J＝5.0Hz,1H),2.46(t,J＝7.0Hz,1H),1.59(m,J＝6.7Hz,1H),1.44(m,J＝3.8Hz,5H),1.28(m,J＝3.3Hz,4H),1.04(q,J＝8.0Hz,6H),0.81(m,J＝4.7Hz,12H)。
制备SFC条件：
实施例35
步骤a)((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((异丁酰氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-天冬氨酸双(2-乙基丁酯)(35)
在室温下于5min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1.9mL，1.9mmol)滴加到化合物I-11(125mg，0.4mmol)的DMF(8mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后于5min内滴加化合物I-34c(257mg，0.4mmol)的无水THF(4mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用5％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法H进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-1)(51mg)，为固体。MS(ES+)773.80[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.72(s,1H),7.93(s,1H),7.33(q,J＝5.3Hz,2H),7.22(t,J＝1.8Hz,1H),7.15(m,J＝4.3Hz,3H),6.56(s,2H),6.11(q,J＝7.6Hz,1H),4.40(m,J＝7.7Hz,2H),4.16(m,J＝3.5Hz,1H),3.94(m,J＝4.1Hz,6H),2.75(q,J＝8.0Hz,1H),2.62(m,J＝5.6Hz,1H),2.45(m,J＝7.0Hz,1H),1.61(d,J＝1.6Hz,2H),1.42(m,J＝4.2Hz,2H),1.25(m,J＝3.2Hz,8H),1.01(q,J＝11.4Hz,6H),0.80(q,J＝7.0Hz,12H)。
制备SFC条件：
实施例36
步骤a)((S)-(((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((异丁酰氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸异丙酯(36)
在室温下于5min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，4.5mL，4.5mmol)滴加到化合物I-11(300mg，0.9mmol)的DMF(18mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后于5min内滴加化合物I-2(490mg，1.0mmol)的无水THF(9mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用7％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法D进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-2)(62mg)，为固体。MS(ES+)645.64[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.70(s,1H),7.92(s,1H),7.32(t,J＝7.9Hz,2H),7.22(t,J＝1.8Hz,1H),7.14(t,J＝7.8Hz,3H),6.55(s,2H),5.99(q,J＝7.8Hz,1H),4.84(m,J＝6.3Hz,1H),4.39(m,J＝7.5Hz,2H),4.01(m,J＝7.1Hz,2H),3.69(m,J＝5.0Hz,1H),2.44(m,J＝7.0Hz,1H),1.61(d,J＝1.3Hz,3H),1.41(m,J＝4.3Hz,2H),1.14(t,J＝6.2Hz,6H),1.01(q,J＝11.1Hz,6H),0.81(q,J＝10.0Hz,6H)。
制备SFC条件
/>
实施例37
步骤a)异丁酸(S,Z)-(2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((膦酰氧 基)甲基)环丙基)甲酯(37a)
在0℃下将POCl3(0.03mL，0.34mmol)添加到I-36a(50mg，0.17mmol)的磷酸三乙酯(0.64mL，3.8mmol)悬浮液中，并在0℃下搅拌2h。在0℃下向上述反应混合物中添加三乙基碳酸氢铵缓冲液(1M,pH＝8)(2mL)并冻干。通过制备HPLC使用方法C纯化粗化合物，得到标题化合物(15mg，23％)，为固体。MS(ES+)374.27[M+H]+。
步骤b)磷酸(S,Z)-(2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((异丁酰氧 基)甲基)环丙基)甲酯锂(37b)
将Dowex 50WX8氢形式(50-100目)的离子交换树脂放入柱(2x 10cm)，使用水:MeOH(1:1，100mL)洗涤直至得到无色洗脱液，然后使用Milli Q水(100mL)洗涤以洗去MeOH。再次用0.5M硫酸(25mL)洗脱离子交换树脂直至达到酸性pH，并使用水洗涤(100mL)直至观察到中性pH。再次用1M氢氧化锂(25mL)洗脱离子交换树脂直至达到碱性pH，并使用水(100mL)洗涤直至中性pH。将化合物37a(15mg，0.04mmol)的Milli Q水(1mL)溶液通过上述新制备的Dowex LI+柱。将适当的级分冻干，得到标题化合物(15mg，96％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 374.42[M+H]+。
1H NMR(500MHz,D2O):δ7.86(q,J＝2.8Hz,1H),7.25(s,1H),6.14(d,J＝7.5Hz,1H),4.61(d,J＝11.5Hz,1H),4.08(q,J＝5.3Hz,1H),3.96(q,J＝5.0Hz,1H),3.88(d,J＝11.5Hz,1H),2.47(m,J＝5.6Hz,1H),1.68(q,J＝3.8Hz,1H),1.59(d,J＝9.4Hz,1H),1.05(m,J＝4.2Hz,6H)。
实施例38
步骤a)新戊酸((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((((S)-(((S)-1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲 基)环丙基)甲酯(38)
在室温下于2min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1.44mL，1.44mmol)滴加到化合物I-35(100mg，0.3mmol)的DMF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于5min内滴加化合物I-4(181mg，0.35mmol)的无水THF(5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用10％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法A进一步纯化得到的化合物，得到标题化合物(15mg)，为固体。MS(ES+)687.75[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.68(s,1H),7.93(s,1H),7.33(m,J＝3.9Hz,2H),7.18(m,J＝4.5Hz,4H),6.54(s,2H),6.06(m,J＝4.4Hz,1H),4.29(m,J＝10.1Hz,3H),3.99(m,J＝6.5Hz,2H),3.86(m,J＝4.1Hz,1H),3.77(m,J＝3.9Hz,1H),1.57(m,J＝4.6Hz,3H),1.19(m,J＝5.3Hz,12H),1.08(d,J＝1.1Hz,9H),0.82(m,J＝2.6Hz,6H)。
实施例39
步骤a)异丁酸((Z)-2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1- ((((S)-(((S)-1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲 基)环丙基)甲酯(39)
在室温下于5min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，4mL，4.0mmol)滴加到化合物I-37c(250mg，0.8mmol)的DMF(12mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后于5min内滴加化合物I-4(462mg，0.9mmol)的无水THF(6mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用4％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法B进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(峰-2)(70mg)，为固体。MS(ES+)651.69[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ8.02(s,1H),7.97(d,J＝6.8Hz,1H),7.79(s,1H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H),7.34(t,J＝8.0Hz,2H),7.16(q,J＝3.9Hz,3H),6.05(q,J＝7.8Hz,1H),4.46(d,J＝11.6Hz,1H),4.17(q,J＝5.5Hz,1H),4.05(q,J＝5.2Hz,1H),3.97(q,J＝5.5Hz,1H),3.89(q,J＝5.5Hz,1H),3.82(m,J＝5.0Hz,2H),2.47(d,J＝7.0Hz,1H),1.60(t,J＝5.9Hz,1H),1.49(d,J＝1.6Hz,2H),1.24(m,J＝5.6Hz,12H),1.06(q,J＝8.8Hz,6H),0.84(q,J＝4.4Hz,6H)。
制备SFC条件
实施例40
步骤a)丁酸((Z)-2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((((S)- (((S)-1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙 基)甲酯(40)
在室温下于10min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，3.2mL，3.2mmol)滴加到化合物I-38(200mg，0.64mmol)的DMF(20mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后于10min内滴加化合物I-4(403mg，0.8mmol)的无水THF(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用4％MeOH的DCM溶液洗脱。通过制备HPLC使用方法A进一步纯化得到的化合物。通过手性SFC进一步纯化纯化合物，得到标题化合物(36mg,)，为固体。MS(ES+)651.73[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ8.02(d,J＝7.0Hz,2H),7.80(s,1H),7.35(m,J＝4.1Hz,3H),7.17(t,J＝4.3Hz,3H),6.06(q,J＝7.8Hz,1H),4.40(d,J＝11.6Hz,1H),4.20(q,J＝5.5Hz,1H),4.01(q,J＝5.5Hz,1H),3.95(q,J＝5.6Hz,1H),3.82(m,J＝5.2Hz,3H),2.22(q,J＝7.1Hz,2H),1.58(t,J＝6.0Hz,1H),1.49(m,J＝5.1Hz,4H),1.22(m,J＝4.5Hz,12H),0.83(m,J＝3.7Hz,9H)。
制备SFC条件
实施例41
步骤a)((S)-(((S,Z)-2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1- ((((叔丁氧羰基)-L-缬氨酰)氧基)甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸2-乙 基丁酯(41a)
在室温下于5min内将叔丁基氯化镁(1M的THF溶液，1.8mL，1.8mmol)滴加到化合物I-39e(150mg，0.34mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后于5min内滴加化合物I-31c(201mg，0.4mmol)的无水THF(5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后减压浓缩，并将得到的粗化合物与另一批合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用4％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(170mg)为半固体。MS(ES+)794.92[M+H]+.
步骤b)((S)-(((S,Z)-1-(((L-缬氨酰)氧基)甲基)-2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧 啶-1(2H)-基)亚甲基)环丙基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-亮氨酸2-乙基丁酯(41b)
在0℃下，将4M HCl的1,4-二氧六环(1mL，4mmol)溶液添加到化合物41a(150mg，0.2mmol)的1,4-二氧六环(20mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1h，然后减压浓缩。通过制备HPLC使用方法A纯化得到的化合物两次。通过手性SFC进一步纯化纯化合物并冻干，得到标题化合物(26mg)，为固体。MS(ES+)694.78[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO):δ8.02(s,1H),7.89(d,J＝6.7Hz,1H),7.81(s,1H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H),7.33(m,J＝4.0Hz,1H),7.14(q,J＝5.8Hz,1H),6.04(q,J＝7.8Hz,1H),4.52(d,J＝11.6Hz,1H),4.22(q,J＝5.6Hz,1H),4.04(q,J＝5.3Hz,1H),3.92(m,J＝5.1Hz,1H),3.75(m,J＝7.6Hz,1H),3.08(d,J＝5.2Hz,1H),1.74(q,J＝6.4Hz,1H),1.59(m,J＝6.7Hz,1H),1.50(s,1H),1.43(q,J＝6.1Hz,1H),1.27(m,J＝3.9Hz,1H),0.79(m,J＝5.1Hz,1H)。
制备SFC条件：
实施例42
步骤a)异丁酸(S,Z)-(2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((膦 酰氧基)甲基)环丙基)甲酯(42a)
在0℃下将蒸馏的POCl3(0.1mL，1.0mmol)添加到I-39a(150mg，0.5mmol)的磷酸三乙酯(1.9mL，11.2mmol)悬浮液中，并在0℃下搅拌3h。在0℃下向上述反应混合物中添加三乙基碳酸氢铵缓冲液(1M,pH＝8)(7mL)并减压浓缩。通过制备HPLC使用方法A纯化粗化合物两次并冻干，得到标题化合物(40mg，19％)，为固体。MS(ES+)392.36[M+H]+。
步骤b)磷酸(S,Z)-(2-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((异丁 酰氧基)甲基)环丙基)甲酯锂(42b)
将Dowex 50WX8氢形式(50-100目)的离子交换树脂放入柱(2x 10cm)，使用水:MeOH(1:1，100mL)洗涤直至得到无色洗脱液，然后使用Milli Q水(100mL)洗涤以洗去MeOH。再次用0.5M硫酸(50mL)洗脱离子交换树脂，直至达到酸性pH，并使用水(200mL)洗涤直至观察到中性pH。再次用1M氢氧化锂(50mL)洗脱离子交换树脂直至达到碱性pH，并使用水(200mL)洗涤直至中性pH。将化合物41a(40mg，0.1mmol)的Milli Q水(5mL)溶液通过上述新制备的Dowex LI+柱。将适当的级分冻干，得到标题化合物(40mg，92％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 392.36[M+H]+。
1H NMR(500MHz,D2O):δ8.14(d,J＝6.1Hz,1H),7.26(d,J＝1.6Hz,1H),4.67(d,J＝11.5Hz,1H),4.04(q,J＝5.2Hz,1H),3.96(q,J＝5.0Hz,1H),3.92(d,J＝11.4Hz,1H),2.51(m,J＝7.0Hz,1H),1.66(q,J＝3.7Hz,1H),1.56(d,J＝9.2Hz,1H),1.08(d,J＝7.0Hz,3H),1.03(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例43
步骤a)四氢三磷酸((S,Z)-2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟甲 基)环丙基)甲酯(43a)
在室温下将2-氯-4H-苯并[d][1,3,2]二氧磷杂环己烷-4-酮(54mg，0.3mmol)添加到化合物I-36a(75mg，0.3mmol)的无水DMF(2mL)和无水吡啶(0.6mL)的溶液中，并在室温下搅拌30min。添加三丁基焦磷酸铵(130mg，0.23mmol)和无水三丁胺(0.15mL，0.64mmol)的无水DMF(1.2mL)溶液并在室温下搅拌45min。添加碘(84mg，0.33mmol)的吡啶/水：98:2(5.25mL/0.15mL)溶液并在室温下搅拌反应15min。添加5％NaHSO3(1.5mL)并减压浓缩。将氢氧化铵(1.5mL)添加到残余物并在室温下搅拌16h，然后减压浓缩。得到的粗品与另一批合并，并通过制备HPLC使用方法F纯化两次并冻干，得到标题化合物(23mg，18％)，为固体。MS(ES+)464.32[M+H]+。
步骤b)三磷酸(S,Z)-(2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-(羟甲基) 环丙基)甲酯锂(43b)
将Dowex 50WX8氢形式(50-100目)，离子交换树脂放入柱(2x 10cm)，使用水:MeOH(1:1，50mL)洗涤直至得到无色洗脱液，然后使用Milli Q水(50mL)洗涤以洗去MeOH。再次用0.5M硫酸(25mL)洗脱离子交换树脂直至达到酸性pH并使用水(100mL)洗涤直至观察到中性pH。再次用1M氢氧化锂(25mL)洗脱离子交换树脂直至达到碱性pH并使用水(100mL)洗涤直至中性pH。将化合物43a(23mg，0.05mmol)的Milli Q水(1mL)溶液通过上述新制备的DowexLI+柱。将适当的级分冻干。通过制备HPLC使用方法F纯化得到的残余物并冻干，得到标题化合物(7mg，23％)，为固体。LCMS(ES+)m/z 464.29[M+H]+。
1H NMR(500MHz,D2O):δ8.11(d,J＝7.5Hz,1H),7.33(s,1H),6.16(d,J＝7.5Hz,1H),4.32(q,J＝5.2Hz,1H),3.94(q,J＝5.3Hz,1H),3.82(d,J＝12.1Hz,1H),3.61(d,J＝12.1Hz,1H),1.51(m,J＝7.0Hz,2H)。
实施例44-1和44-2
步骤a)新戊酸((Z)-2-((2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)亚甲基)-1- ((((S)-(((S)-1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲 基)环丙基)甲酯(44-1和44-2)
通过正相HPLC将化合物38(55mg)进一步纯化。
44-1：
将峰-1浓缩并冻干，得到标题化合物(13.6mg，35)，为固体。MS(ES+)m/z 687.75[M+H]+.
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.69(s,1H),7.93(s,1H),7.33(m,J＝4.0Hz,2H),7.18(m,J＝4.8Hz,4H),6.54(s,25H),6.06(q,J＝7.8Hz,1H),4.28(d,J＝11.5Hz,1H),4.18(m,J＝6.1Hz,2H),3.95(q,J＝5.6Hz,2H),3.77(m,J＝3.9Hz,2H),1.57(m,J＝4.3Hz,3H),1.20(m,J＝4.4Hz,11H),1.08(s,9H),0.81(t,J＝7.0Hz,6H)。
44-2：
将峰-2浓缩并冻干，得到标题化合物(11.6mg，3％)，为固体。MS(ES+)m/z 687.75[M+H]+.
1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.70(s,1H),7.93(s,1H),7.32(t,J＝8.0Hz,2H),7.22(t,J＝1.8Hz,1H),7.15(m,J＝3.2Hz,3H),6.55(s,2H),6.06(q,J＝7.7Hz,1H),4.43(d,J＝11.6Hz,1H),4.35(q,J＝5.7Hz,1H),4.02(q,J＝5.4Hz,1H),3.96(m,J＝5.7Hz,2H),3.86(m,J＝4.1Hz,2H),1.60(s,3H),1.22(m,J＝5.0Hz,11H),1.08(s,9H),0.82(m,J＝3.1Hz,6H)。
正相HPLC条件：
实施例45-1和45-2
步骤a)丁酸((Z)-2-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)亚甲基)-1-((((S)-(((S)- 1-氧代-1-((2-丙基戊基)氧基)丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)环丙基)甲酯 (45-1和45-2)
通过手性SFC进一步纯化化合物32(1.5g)。
45-1：
使用方法A通过制备HPLC进一步纯化从峰-1获得的残余物。通过手性SFC进一步纯化并冻干不纯的化合物，得到标题化合物(215mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 633.72[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.72(d,J＝7.5Hz,1H),7.42(t,J＝1.8Hz,2H),7.35(m,J＝4.0Hz,3H),7.17(m,J＝3.5Hz,3H),6.04(q,J＝7.7Hz,1H),5.80(d,J＝7.4Hz,1H),4.34(d,J＝11.5Hz,1H),4.21(q,J＝5.6Hz,1H),3.98(m,J＝3.6Hz,2H),3.87(m,J＝8.1Hz,3H),2.22(m,J＝6.7Hz,2H),1.61(q,J＝5.8Hz,1H),1.49(m,J＝4.4Hz,4H),1.25(m,J＝4.3Hz,11H),0.84(m,J＝2.2Hz,9H)。
45-2：
使用方法A通过制备HPLC进一步纯化从峰-2获得的残余物并冻干，得到标题化合物(280mg)，为固体。LCMS(ES+)m/z 633.72[M+H]+1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.74(d,J＝7.4Hz,1H),7.42(d,J＝1.8Hz,2H),7.35(m,J＝3.2Hz,3H),7.17(t,J＝7.8Hz,3H),6.06(q,J＝7.8Hz,1H),5.80(d,J＝7.4Hz,1H),4.24(d,J＝11.5Hz,1H),4.17(q,J＝5.5Hz,1H),4.06(q,J＝5.5Hz,1H),3.97(m,J＝3.8Hz,2H),3.86(q,J＝5.5Hz,1H),3.80(m,J＝3.4Hz,1H),2.22(q,J＝7.1Hz,2H),1.60(q,J＝6.0Hz,1H),1.48(m,J＝6.1Hz,4H),1.23(m,J＝5.1Hz,11H),0.84(m,J＝3.3Hz,9H)。
制备SFC的条件：
制备SFC的条件(实施例45-1)：
对比实施例1
磷酸丙氨酸三酯的不稳定性
上面合成的中间体化合物I-19d2和I-25是磷酸丙氨酸三酯，类似于描述于Yan等人，J Med Chem 2005 48 91-99的现有技术化合物：
通过LC MS在22-29天内评估了这些模型化合物的结构完整性，如下所示：
因此得出的结论是约四分之一的相应的三酯磷酸丙氨酸酯在三周多的时间内已经分解。
生物学实施例1
使用以下试验评价了本发明的化合物对白血病细胞系THP-1、EOL-1和MV4-11的活性：
材料
细胞和细胞培养
使来自ATCC的目录号TIB-202的THP-1(人类急性单核细胞白血病)在完全细胞培养基中生长：RPMI-1640培养基，Gibco目录号11835-063(Fisher Scientific)；10％胎牛血清(FBS)，HyClone目录号SV30160.03，批号RAB35924(GE Healthcare Life Sciences)；青霉素50u/ml/链霉素0.05mg/ml，PAA目录号P11-010，来自Fisher Scientific。
使来自ATCC的目录号CRL-9591的MV4-11细胞，人B骨髓单核细胞性白血病，在完全细胞培养基中生长：IMDM(w.GLUTAMAX-1)目录号31980022(Fisher Scientific)；10％胎牛血清(FBS)，HyClone目录号SV30160.03，批号RAB35924(GE Healthcare Life Sciences)；青霉素50u/ml/链霉素0.05mg/ml，PAA目录号P11-010，来自Fisher Scientific。
使来自DSMZ的目录号ACC 386的EOL-1(人类急性单核细胞白血病)在完全细胞培养基中生长：RPMI-1640培养基，Gibco目录号11835-063(Fisher Scientific)；10％胎牛血清(FBS)，HyClone目录号A15102，批号10211-2117(GE Healthcare Life Sciences)；青霉素50u/ml/链霉素0.05mg/ml，PAA目录号P11-010，来自Fisher Scientific。
细胞培养瓶75cm2，目录号83.1813，来自Sarstedt AB。
化合物稀释板，96孔，V底PP板，Nunc目录号249944，来自Thermo Scientific。
细胞检测板，96孔，目录号128009296，来自Fisher Scientific。
Dojindo的Cell Counting Kit-8 CK04。
在DMSO中将测试化合物制成10mM的储备溶液。
方法
使白血病细胞(THP-1、EOL-1和MV4-11)在含有约100ml完全细胞培养基的75cm2细胞培养瓶中生长。使用具有60μm传感器的Scepter手持式自动细胞计数器(Millipore)对细胞进行计数，并将其悬浮在完全细胞培养基中至2x105个细胞。将100μl细胞悬液接种到所有孔中(2x104个细胞/孔)。
测试化合物稀释液：
以十二种浓度，10倍系列稀释液，50μM-5x10-10μM的浓度测试化合物。
将来自化合物稀释板的100μl转移至细胞分析板＝200μl/孔的总体积，并在37℃，5％CO2培养箱中孵育5天。
5天后，添加10μl KIT-8，将培养物在37℃，5％CO2培养箱中孵育3-4h。
在分光光度计中使用620nm的参考滤光片在450nm波长下读取板。
数据分析
通过将抑制程度(与溶媒对照比较)相对于化合物浓度的对数作图来计算CC50值。系列稀释中的结果值拟合到由以下表达式描述的4-参数S形剂量-反应曲线：
F(x)＝D+(A-D)/(1+(x/C)^B)
其中
A＝最小值
B＝斜率。
C＝拐点。拐点定义为曲线上曲率改变方向或信号的点。
D＝最大
F＝分数抑制
CC50值是x值，赋予F＝0.5，如下表4所示：
表4
显然地，在这种白血病细胞系模型中，本发明的化合物比现有技术的cyclopropavir核苷具有更强的活性。

Claims (26)

1.一种式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
B是选自基团(a)至(d)的核碱基：
U是O或S；
Rx是-OC(＝O)Ry、-OC(＝O)CH(Ry)NH2、-OCH2OC(＝O)Ry；
Ry是C1-C20烷基或C2-C20烯基，其任何一个任选地被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自氟、羟基和氨基；或
Ry是天然氨基酸的侧链，其可以是D或L构型；
R1是H，或选自苯基、苄基、萘基、吡啶基或吲哚基的环状基团，所述环状基团的每个任选地被一个，两个或三个R22取代；
每个R22独立地选自卤素、羟基、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷基羰基、C3-C6环烷基羰基、叠氮基、氰基、氨基，或连接到相邻环碳原子的任何两个R22基团可以结合以形成-O-(CH2)1-2-O-，其中C3-C6环烷基任选地被C1-C3烷基取代；或
R1和Rx一起限定键，从而形成环状磷酸酯；
R2和R2’各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C3-C7环烷基C1-C3烷基、苯基、苄基和吲哚基；或
R2和R2’与它们所连接的碳原子一起形成C3-C7亚环烷基；
其中每个C1-C6烷基任选地被卤素或OR12取代，并且每个C3-C7环烷基、C3-C7亚环烷基、苯基和苄基任选地被一个或两个独立地选自C1-C3烷基、卤素和OR12的基团取代；或
R2和R2’中的一个是H，另一个是天然氨基酸的侧链；其中Asp或Glu的羧基末端任选地被C1-C6烷基酯化；
R3是C1-C10烷基、C3-C7环烷基、C1-C3烷基C3-C7环烷基、苯基或苄基；其任何一个任选地被1、2或3个各自独立地选自卤素、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基和N(R12)2的取代基取代；
R4、R5、R7和R8各自独立地是H、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、卤素、-OR12或-N(R12)2；
R6、R9、R10和R11各自独立地为H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、卤素、OR12、-N(R12)2、-NHC(O)OR12、氰基、-C(O)OR12、-C(O)N(R12)2或-NHC(O)R13，其中C2-C6烯基和C2-C6炔基任选地被卤素或C3-C5环烷基取代；
每个R12独立地为H、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基或C1-C6烷基C3-C7环烷基；
R13是R12或CH2CH(NH2)C(＝O)OH；
条件是所述化合物不是
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B是基团(d)：
其中
R11是NH2或NHCOC1-C6烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B是基团(a)：
其中：R4是H，
R5是F或H，并且
R6是NH2。
4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为H或任选地被一个或两个R22取代的苯基，并且每个R22独立地选自卤素、C1-C3烷基、C3-C4环烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、卤代C1-C3烷氧基、C1-C3烷基羰基、C3-C4环烷基羰基，其中C3-C4环烷基任选地被甲基取代。
5.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中苯基在4位上被Br取代。
6.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述苯基是未取代的。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2’为H并且R2为C1-C6烷基或卤代C1-C6烷基。
8.根据权利要求7所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述立体化学如部分式中所示：
9.根据权利要求7所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是甲基。
10.根据权利要求中1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是C1-C10烷基。
11.根据权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是甲基、异丙基、2-丙基戊基或2-乙基丁基。
12.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是苄基或C3-C7环烷基。
13.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rx是-OC(＝O)C1-C6烷基。
14.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述-OC(＝O)C1-C6烷基中的C1-C6烷基部分是甲基、异丙基、异丁基或叔丁基。
15.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rx是-OC(＝O)C16-C20烷基。
16.根据权利要求15所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rx是-OC(＝O)C17烷基。
17.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rx是-OC(＝O)CH(Ry)NH2，并且Ry是天然氨基酸的侧链，并且Ry所连接的手性中心处的构型是L-氨基酸的构型。
18.根据权利要求17所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Ry是丙氨酸的侧链。
19.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rx是-OCH2OC(＝O)CH3或-OCH2OC(＝O)C(CH3)3。
20.根据权利要求19所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rx是-OCH2OC(＝O)C(CH3)3。
21.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中U是O。
22.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自：
或其药学上可接受的盐。
23.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自：
或其药学上可接受的盐。
24.一种药物组合物，其包含与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体结合的根据权利要求1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
25.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
26.根据权利要求25所述的用途，其中所述癌症为白血病。
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