KR20200134203A - Ａｒｆ6 억제제 및 관련 방법 - Google Patents

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나비젠, 인코포레이티드
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Abstract

환자에서 혈관 누출, 혈관 염증, 혈관신생, 안구 장애, 및/또는 염증성 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 ADP-리보실화 인자 6(ARF6) 억제제를 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 신규 화학 물질(new chemical entity) 및 ARF6 억제제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. ARF6 억제제는 ARF6 억제제의 전구약물일 수 있다.

Description

ARF6 억제제 및 관련 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 8월 21일자로 출원된 미국 가출원 제62/548,188호의 이익을 주장하며, 이 출원은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은 환자에서 혈관 누출, 혈관 염증, 혈관신생, 안구 장애, 및/또는 염증성 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 ADP-리보실화 인자 6(ARF6) 억제제를 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 새로운 ARF6 억제제(예를 들어, 신규 화학 물질(new chemical entity, NCE)) 및 ARF6 억제제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. ARF6 억제제는 ARF6 억제제의 전구약물일 수 있다.
ARF6은 Ras 수퍼패밀리의 작은 GTPase로서, 이는 세포내이입 트래픽킹(endocytic trafficking) 및 세포 표면 액틴 재형성에 있어서의 그의 강력한 역할에 의해, 세포-세포 접착 및 세포 운동성의 조절에 있어서 중요한 역할자(player)를 나타낸다(문헌[Donaldson JG. The Journal of biological chemistry. 2003;278:41573-6] 및 문헌[Schweitzer JK, et al. Seminars in cell & developmental biology. 2011;22:39-47] 참조). ARF6은 고유적으로 결합된 GDP를 GTP로 교환함으로써 활성화되는데, 이는, 생리적 환경에 따라, 다수의 구아닌 뉴클레오티드 교환 인자(GEF)에 의해 촉매될 수 있다(문헌[Gillingham AK, et al. Annual review of cell and developmental biology. 2007;23:579-611] 참조). 내피 세포에서의 ARF6의 활성화는 혈관 내피(VE)-카드헤린의 세포내이입을 특징으로 하는데(문헌[Zhu W, et al. Nature. 2012;492:252-5] 및 문헌[Davis CT, et al. Journal of immunology. 2014;192:6045-52] 참조), 혈관 내피(VE)-카드헤린은 내피간 접착 접합부(interendothelial adherens junction)의 필수 성분이다(문헌[Komarova Y, et al. Annual review of physiology. 2010;72:463-93]; 문헌[Gavard J, et al. Nature cell biology. 2006;8:1223-34]; 문헌[London NR, et al. Angiogenesis. 2009;12:149-58]; 및 문헌[Dejana E, et al. Journal of cell science. 2008;121:2115-22] 참조). 이는 혈관 과투과성(혈관 누출)으로 이어지며, 이는 결국 말단 기관 부전(end organ failure) 및 사망으로 이어질 수 있다. ARF6은 염증에 있어서의 역할이 문헌에 기재되어 있는 몇몇 수용체로부터 하류에 있는 신호전달 경로들의 수렴점(convergence point)을 나타내는 것으로 입증되어 있다: IL-1R(문헌[Zhu W, et al. Nature. 2012;492:252-5] 참조), TLR4(문헌[Davis CT, et al. Journal of immunology. 2014;192:6045-52] 참조), IL-6R, 및 VEGFR. ARF6 억제는 원인(만성 염증, 감염 등)에 관계없이 사이토카인-유도 혈관 투과성을 제어하기 위한 효과적인 접근법일 수 있음이 본 명세서에서 제안된다. 따라서, ARF6의 소분자 억제제는 과도한 혈관 누출을 특징으로 하는 질환의 예방 및 치료에 유용하다.
본 명세서에 기재된 개시 내용은 비제한적이고 비포괄적인 예시적인 실시 형태들을 설명한다. 본 명세서에 기재된 도면에 나타낸 소정의 그러한 예시적인 실시 형태들이 참조된다.
도 1은 ARF6가 다수의 염증 매개체(LPS), 사이토카인(IL-1β, Il-6) 및 성장 인자(VEGF)에 의해 활성화됨을 예시한다. ARF6의 활성 GTP-결합 형태는 TLR4(LPS) 및 IL-1β 경로의 하류에서 VE-카드헤린 내재화를 매개하고(1), IL-6-유도 JAK/STAT 신호전달을 증강시키고(2), VEGFR 내재화 및 p-ERK 신호전달로 이어진다(3). ARF6가 그의 비활성 GDP-결합 형태일 때, 접착 접합부 및 혈관계는 안정화된다.
도 2는 MyrARF6 2-13 펩티드가 내독소혈증 동안 생존율을 향상시키는 것을 나타낸 그래프이다. 마우스에 40 mmol/㎏의 펩티드 IV와 병행하여 LPS(25 mg/㎏ IP)의 치사 용량을 투여하고, 생존율에 대해 모니터링하였다.
도 3은 마우스 LPS-유도 급성 폐 손상(ALI) 모델에서의 기관지폐포 세척액(BALF) 세포 카운트에 대한 NAV-A의 효과를 나타낸 그래프이다. 복막내(IP) 주사에 의한 60 mg/㎏(T=0), 30 mg/㎏(T=3), 및 60 mg/㎏(T=3)의 NAV-A의 투여는 BALF 내의 총 세포수의 유의한 감소로 이어졌다. ****, p<0.0001; ***, p<0.001; **, p<0.01. 일원분산분석(1-way ANOVA)에 이어지는 터키의 다중 비교 검정(Tukey's multiple comparison test).
도 4는 7일 동안의 NAV-A IP에 의한 처리가 아시네토박터 바우만니이(Acinetobacter baumannii, AB)로 감염된 호중구감소성증 마우스의 생존율을 유의하게 개선함을 나타낸 그래프이다. NAV-A: 50% 생존율, p<0.05 vs. 비히클 플라세보. 처리군당 마우스의 수 n = 22.
도 5는 AB에 의한 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)의 감염이 활성 ARF6-GTP의 수준을 증가시켰음을 보여주는 일련의 이미지이다. ARF6 활성화는 국제 출원 PCT/US2015/032720호의 화합물 번호 38에 의해 차단되었다.
도 6은 NAV-B(라이신 전구약물)와 이의 모(parent) NAV-A의 화학 구조 및 NAV-B′(라이신 전구약물)과 이의 모 NAV-A′의 화학 구조를 나타낸다.
도 7은 NAV-B를 래트에 정맥(IV) 투여 후(좌측) 및 NAV-B를 마우스에 IP 투여 후(우측)의 NAV-A의 혈장 농도 vs. 시간 프로파일을 나타낸 2개의 그래프이다. NAV-B의 투여는 NAV-A의 탁월한 노출을 제공하였다. 래트에서 IV 투여 후에 하기 약동학적(PK) 파라미터를 결정하였다: 최종 반감기, 10.9시간; 분포 부피, 383 mL/㎏; 제거율(clearance), 25 mL/㎏/hr.
도 8은 NAV-A 및 다른 ARF6 억제제의 전구약물의 예를 나타낸다.
도 9는 NAV-A 및 다른 ARF6 억제제의 전구약물의 예를 나타낸다.
도 10a는 30 mg/㎏의 모 NAV-A와 등가인, T=0에서의 NAV-B, 42.75 mg/㎏ IP에 의한 LPS-유도 BALF 세포 카운트의 감소를 나타낸 그래프이다. a, 62% 감소, p<0.001; b, 100% 감소, p<0.0001.
도 10b는 7일 동안 일일 1회 NAV-B, 42.75 mg/㎏ IP로 처리된 AB 감염된 마우스의 90% 생존율을 나타낸 그래프이다. *, p<0.01 vs. 플라세보.
도 11은 3회의 독립적인 실험에서 NAV-B로 처리된 말라리아-감염된 마우스의 합계 생존율을 나타낸 그래프이다. 마우스를 일수 0에 감염시키고, 이어서 11일 동안 일일 1회 식염수 또는 NAV-B로 처리하였다. NAV-B에 의한 처리는 생존율의 유의한 개선을 가져왔다.
도 12는 NAV-AAR′로 처리된 LPS-유도 ALI 마우스에서의 BALF 내의 유핵 세포의 수 및 총 단백질 농도의 감소를 나타낸다. **, p<0.01 vs. LPS/식염수. ***, p<0.001 vs. LPS/식염수. 일원분산분석과 함께 터키의 다중 비교 검정.
도 13은 NAV-AAR′으로 처리된 다중약물-저항성(MDR) 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 폐렴을 가진 마우스에서의 생존율의 증가를 나타낸다. **, p<0.01 vs. 비히클.
도 14는 NAV-AAC′ 및 NAV-AAR′의 합성에 대한 계획을 나타낸다.
대체로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물, 이들의 약제학적으로 허용되는 염, 및 화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 당업자는 화학식 I의 화합물과 화학식 II의 화합물이 동일한 분자식 및 분자량을 갖는 위치이성질체임을 인식할 것이다.
Figure pct00001
화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물에서, R1로 표기된 기는 독립적으로, 아릴 기(예를 들어, 선택적으로 치환된 아릴) 또는 사이클로알킬 기 중 적어도 하나로부터 선택될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 아릴 기는 하나 이상의 할로 기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 아릴 기는 하나 이상의 클로로 기로 치환될 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물에서, R2로 표기된 기는 독립적으로, 스페이서를 통해 커플링된 모르폴리노 기(예를 들어, 스페이서는 C1-C4 알킬 기일 수 있음), 아릴 기, 헤테로아릴 기, 불포화 사이클로알킬 기, 포화 사이클로알킬 기, 불포화 헤테로사이클릭 기, 포화 헤테로사이클릭 기, 할로겐화 알킬 기, 또는 사이클로프로필 기 중 적어도 하나로부터 선택될 수 있다. 다양한 실시 형태에서, 할로겐화 알킬 기는 -CF3 기일 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물에서, R3으로 표기된 기는 독립적으로, 아릴 기, 헤테로아릴 기, 케토 기, 알킬 기, 사이클로알킬 기, 알콕시 기, 하이드록시 기, 할로 기(예를 들어, 플루오로 기, 클로로 기 등), 니트로 기, 시아노 기, 알킨 기, 알킨 아미노 기(예를 들어, 말단 아미노 기), 및/또는 포스페이트 기로부터 선택될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 아릴 기는 치환될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 알킨 기는 스페이서를 통해 아릴 고리에 결합될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 C1-C4 알킬 기일 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물에서, R4로 표기된 기는 독립적으로, 산소 원자를 통해 스페이서를 통해 연결된, 수소, 알킬 기, 사이클로알킬 기, 카르복실산, 및/또는 에스테르로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 C1-C4 알킬일 수 있다.
화학식 I 또는 화학식 II에 따른 구조를 갖는 화합물의 소정 실시 형태에서, 산소를 통해 부착되어 있는 R4는 상기 산소를 함께 포함할 때, 독립적으로, 에스테르, 산소화(oxygenated) 에스테르, 옥사에스테르, 페길화(pegylated) 에스테르, 하이드록실화 에스테르, 알킬 에스테르, 카르복시알킬 에스테르, 카르복시 알케닐 에스테르, 방향족 에스테르, 헤테로방향족 에스테르, 아미노 에스테르, 아미노산 에스테르, 알킬아미노 에스테르, 카르보네이트, 알킬 카르보네이트, 카르바메이트, 알킬 카르바메이트, 아미노 카르바메이트, 알킬아미노 카르바메이트, 다이알킬아미노 카르바메이트, 및/또는 글루쿠로네이트로부터 선택될 수 있다. 화학식 I 또는 화학식 II에 따른 구조를 갖는 화합물의 다양한 실시 형태에서, R4는 독립적으로, 설포네이트, 포스포네이트, 및/또는 1-, 2-, 또는 3-탄소 스페이서를 통해 연결된 설포네이트 또는 포스포네이트로부터 선택될 수 있다.
다양한 실시 형태에서, R4는 에스테르 결합을 통해 화합물의 나머지 부분에 연결된 프로모이어티(promoiety)일 수 있다. 일부 실시 형태에서, R4는 에스테르 결합을 통해 화합물의 나머지 부분에 연결된 아미노산 잔기일 수 있다. 그러한 실시 형태는 "아미노산 에스테르"로 지칭될 수 있다. 이러한 아미노산 에스테르는 단백질의 빌딩 블록(building block)으로서의 역할을 하는 이른바 "천연 발생 아미노산"들 중 임의의 것의 에스테르를 포함할 수 있다.
"천연 발생 아미노산"은 글리신; 및 알라닌, 세린, 트레오닌, 시스테인, 발린, 류신, 아이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 아스파르트산, 글루탐산, 아스파라긴, 글루타민, 히스티딘, 라이신, 및 아르기닌의 "L-형태"를 포함한다. "아미노산 에스테르"는 또한 "천연 비발생 아미노산"의 에스테르를 포함할 수 있다. "천연 비발생 아미노산"은 "천연 발생 아미노산"의 대안적인 거울상 이성질체, 예컨대 D-아미노산을 포함한다. "천연 비발생 아미노산"은 또한, 알파-탄소에 부착된 측쇄를 갖는 아미노산을 포함하며, 이는 "천연 발생 아미노산"에서의 것들과는 구별된다.
일부 실시 형태에서, R4는, 폴리펩티드 결합에 의해 함께 연결되고 에스테르 결합을 통해 화합물의 나머지 부분에 연결된 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산 잔기를 포함하는 폴리펩티드일 수 있다. 소정 실시 형태에서, R4는 카르바메이트 결합을 통해 화합물의 나머지 부분에 연결된 프로모이어티일 수 있다. 다양한 실시 형태에서, R4는 카르보네이트 결합을 통해 화합물의 나머지 부분에 연결된 프로모이어티일 수 있다. 일부 실시 형태에서, R4는 설페이트 잔기 또는 포스페이트 잔기일 수 있다.
모든 키랄 형태 및 이들의 조합이 화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물에 포함된다. 이들 R 기에 대해 상이한 치환기들이 언급되는 경우, 언급된 순서에 의해 키랄성이 추정되거나 의도되지 않지만, 모든 형태가 포함된다. 본 발명의 실시 형태에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물 중 일부는 단일 입체이성질체(즉, 다른 입체이성질체가 본질적으로 없음), 라세미체, 및/또는 거울상 이성질체 및/또는 부분입체 이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 그러한 단일 입체이성질체, 라세미체, 및 이들의 혼합물 모두는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 더욱이, 본 발명의 실시 형태에 사용하기 위한 화합물들 중 일부는 시스 및 트랜스 기하 이성질체로서 존재할 수 있으며, 그러한 이성질체 및 이들의 혼합물 모두는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 더욱이, 본 발명의 실시 형태에 사용하기 위한 화합물들 중 일부는 위치이성질체로서 존재할 수 있으며, 그러한 위치이성질체 및 이들의 혼합물 모두는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.
예시적인 화학식 I의 화합물 및 이의 유사체는 표 1에 나타낸 화합물을 포함할 수 있다. 화학식 I의 화합물은 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함할 수 있다.
[표 1]
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ND: 결정되지 않음
예시적인 화학식 II의 화합물 및 이의 유사체는 표 2에 나타낸 화합물을 포함할 수 있다. 화학식 II의 화합물은 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함할 수 있다.
[표 2]
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ND: 결정되지 않음
개시된 화합물의 보호된 유도체가 또한 고려된다. 본 발명의 화합물과 함께 사용하기에 적합한 다양한 보호기가 개시된다. 다른 통상적인 보호기가, 예를 들어 문헌[Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis; 3rd Ed.; John Wiley & Sons, New York, 1999]을 참조하여 당업자에 의해 선택될 수 있다.
본 발명의 화합물은 유기 합성 분야의 당업자에게 알려진 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 본 발명의 화합물은 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 합성 유기 화학 분야에 알려진 합성 방법 또는 이들의 변형과 함께, 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 합성될 수 있다.
본 명세서에 포함된 구체적인 예는 단지 예시적인 목적을 위한 것이며, 본 발명을 제한하는 것으로 여겨져서는 안 된다. 하기 실시예에 사용되는 임의의 활성제 및 시약은 구매가능하거나 유기 합성 분야의 당업자에 의해 표준 문헌 절차에 따라 제조될 수 있다. 본 개시내용에 비추어서, 당업자는 이들 실시예 및 개시된 방법의 다른 실시예의 변형이 과도한 실험 없이 가능할 것임을 인식할 것이다.
본 발명의 실시 형태에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물 중 일부는 단일 입체이성질체(즉, 다른 입체이성질체가 본질적으로 없음), 라세미체, 및/또는 거울상 이성질체 및/또는 부분입체 이성질체 및/또는 위치이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 그러한 단일 입체이성질체, 라세미체, 및 이들의 혼합물 모두는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 일반적으로, 광학 활성인 화합물은 실질적으로 광학적으로 순수한 형태로 사용된다. 더욱이, 본 발명의 실시 형태에 사용하기 위한 화합물들 중 일부는 시스 및 트랜스 기하 이성질체로서 존재할 수 있다. 그러한 이성질체 및 이들의 혼합물 모두는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.
추가적으로, 상기 화학식들은 확인된 구조의 용매화된 형태뿐만 아니라 비용매화된 형태도 포함하고자 한다. 예를 들어, 화학식 I 및 화학식 II는 수화된 형태 및 비수화된 형태 둘 모두의 지시된 구조의 화합물을 포함한다. 용매화물의 다른 예에는 이들 구조가 아이소프로판올, 에탄올, 메탄올, 다이메틸설폭사이드(DMSO), 에틸 아세테이트, 아세트산, 또는 에탄올아민과 조합된 상태를 포함된다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물에 더하여, 본 발명의 일부 실시 형태는 약제학적으로 허용되는 전구약물, 약제학적으로 활성인 대사물, 및 그러한 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 포함할 수 있다.
화합물의 전구약물 및 활성 대사물은 당업계에 알려진 일상적인 기법을 사용하여 확인될 수 있다(예를 들어, 문헌[Bertolini, G et al., J. Med. Chem., 40, 2011-2016 (1997)]; 문헌[Shan, D. et al., J. Pharm. Sci., 86 (7), 756-767]; 문헌[Bagshawe K., Drug Dev. Res., 34, 220-230 (1995)]; 문헌[Bodor N.; Advance in Drug Res., 13, 224-331 (1984)]; 문헌[Bundgaard, H., Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985)]; 및 문헌[Larsen, I. K., Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991)] 참조).
본 명세서에 사용되는 용어는 단지 특정 실시 형태를 설명하기 위한 것이며, 단지 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 본 발명의 범주를 제한하고자 하지 않음이 이해되어야 한다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an", 및 "the")은 그 문맥에 달리 명확하게 나타나 있지 않는 한, 마찬가지로 복수형을 포함하는 것으로 의도된다. 또한, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "및/또는"은 열거된 관련 항목들 중 하나 이상의 임의의 그리고 모든 가능한 조합을 지칭하고 포함한다. 더욱이, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 측정가능한 값, 예컨대 화합물의 양, 용량, 시간, 온도 등을 지칭할 때 용어 "약"은 명시된 양의 50%, 30%, 20%, 10%, 5%, 1%, 0.5%, 또는 심지어 0.1%의 변동을 포함하는 것으로 의미된다. 본 명세서에 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허, 및 다른 참고 문헌은 전체적으로 참고로 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬"은 직쇄 및 분지쇄 기를 포함하는 포화 지방족 탄화수소를 지칭한다. 일 실시 형태에서, 알킬 기는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는다(이것이 본 명세서에 나올 때마다, "1 내지 20"과 같은 수치 범위는 주어진 범위 내의 각각의 정수를 지칭하며; 예를 들어, "1 내지 20개의 탄소 원자"는 알킬 기가 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자 등, 종점을 포함하여 최대 20개의 탄소 원자로 이루어질 수 있음을 의미한다). 소정 실시 형태에서, 알킬 기는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 중간 크기의 알킬이다. 일부 실시 형태에서, 알킬 기는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 저급 알킬이다. 알킬 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환된 경우, 치환기(들)는 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로지환족, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 메르캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 할로, 카르보닐, 티오카르보닐, O-카르바밀, N-카르바밀, O-티오카르바밀, N-티오카르바밀, C-아미도, N-아미도, C-카르복시, O-카르복시, 시아네이토, 아이소시아네이토, 티오시아네이토, 아이소티오시아네이토, 니트로, 실릴, 및 아미노로부터 개별적으로 선택되는 하나 이상일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "할로"는 클로로, 플루오로, 브로모, 및 요오도를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "하이드록시"는 -OH 기를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "알콕시"는 본 명세서에 정의된 바와 같은 -O-알킬 기 및 -O-사이클로알킬 기 둘 모두를 지칭하며, "저급 알콕시"는 -O-저급 알킬 기를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "아릴옥시"는 본 명세서에 정의된 바와 같은 -O-아릴 기 및 -O-헤테로아릴 기 둘 모두를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬티오" 기는 본 명세서에 정의된 바와 같은 S-알킬 기 및 -S-사이클로알킬 기 둘 모두를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "아릴티오" 기는 본 명세서에 정의된 바와 같은 -S-아릴 기 및 -S-헤테로아릴 기 둘 모두를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "카르보닐" 기는 -C(=O)R" 기를 지칭하며, 여기서 R"은 본 명세서에 정의된 바와 같은, 하이드로, 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴(고리 탄소를 통해 결합됨) 및 헤테로사이클릭(고리 탄소를 통해 결합됨)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "카르복시" 기는 -C(=O)OR" 기를 지칭하며, 여기서 R"은 상기에 정의된 바와 같다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "카르복시 염"은 -C(=O)O-M+ 기를 지칭하며, 여기서 M+는 리튬, 나트륨, 마그네슘, 칼슘, 칼륨, 바륨, 철, 아연, 및 4차 암모늄으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "아세틸" 기는 -C(=O)CH3 기를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "카르복실산"은 R"이 수소인 카르복시 기를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "할로알킬"은 1 내지 6개의 할로 기로 치환된 알킬 기를 지칭하며, -CX3 기를 갖는 할로알킬일 수 있으며, 여기서 X는 할로 기이다. 할로 기는 독립적으로 선택될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "시아노"는 -C≡N 기를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "설포닐"은 -S(=O)2R" 기를 지칭하며, 여기서 R"은 수소, 알킬, 또는 저급 알킬이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "설폰아미도"는 -S(=O)2NR"2를 지칭하며, 여기서 각각의 R"은 독립적으로, 수소, 알킬, 또는 저급 알킬로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "O-카르바밀"은 -OC(=O)NR"2 기를 지칭하며, 여기서 각각의 R"은 독립적으로, 수소, 알킬, 또는 저급 알킬로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "N-카르바밀"은 -NR"C(=O)NR"2 기를 지칭하며, 여기서 각각의 R"은 독립적으로, 수소, 알킬, 또는 저급 알킬로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "아미노"는 -NR"2 기를 지칭하며, 여기서 각각의 R"은 독립적으로, 수소 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "C-아미도"는 -C(=O)NR"2 기를 지칭하며, 여기서 각각의 R"은 독립적으로, 수소, 알킬, 또는 저급 알킬로부터 선택된다. 용어 "N-아미도"는 NR"C(=O)R"- 기를 지칭하며, 여기서 각각의 R"은 독립적으로, 수소, 알킬, 또는 저급 알킬로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "니트로"는 -NO2 기를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "하이드록시"는 -OH 기를 지칭한다. 치환된 메틸렌 기는 탄소 원자가 알킬 또는 사이클로알킬로 치환될 수 있는 메틸렌 기이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "사이클로알킬"은 전부 탄소로 된(all-carbon) 모노사이클릭 또는 융합된 알킬 고리(즉, 인접한 탄소 원자 쌍을 공유하는 고리) 기를 지칭하며, 여기서 고리들 중 하나 이상은 완전히 컨쥬게이트된 파이 전자계(pi-electron system)를 갖지 않는다. 사이클로알킬 기의 예에는, 제한 없이, 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로펜텐, 사이클로헥산, 아다만탄, 사이클로헥사다이엔, 사이클로헵탄, 및 사이클로헵타트라이엔이 있다. 사이클로알킬 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환된 경우, 치환기(들)는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 메르캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 할로, 카르보닐, 카르복시, O-카르바밀, N-카르바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, 및 아미노로부터 개별적으로 선택되는 하나 이상일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릭"은, 포화 또는 부분 포화된 3원, 4원, 5원, 6원, 또는 7원 모노사이클릭, 또는 7원, 8원, 9원, 또는 10원 바이사이클릭 고리 시스템으로서, 탄소 원자, 및 O, N, 및 S로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자로 이루어진, 상기 고리 시스템을 지칭하며, 여기서 질소 및 황 헤테로원자는 선택적으로 산화될 수 있고, 질소는 선택적으로 4차화될 수 있으며, 이 용어는, 임의의 상기 정의된 헤테로사이클릭 고리가 벤젠 고리에 융합된 임의의 바이사이클릭 기를 포함하며, 헤테로사이클릭 고리는 생성되는 화합물이 안정하다면 탄소 원자 상에서 또는 질소 원자 상에서 치환될 수 있다. 비제한적인 포화 또는 부분 포화 헤테로사이클릭 기에는 테트라하이드로푸라닐, 피라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 인돌리닐, 모르폴리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 테트로노일 및 테트라모일 기가 포함된다. "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릭" 고리의 예에는 또한 모르폴리노, 피라닐, 피페리딜, 피페라지닐, 피롤리디닐, 티오모르폴리노, 호모피페라지닐, 이미다졸릴, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 다이옥사닐, 및 다이옥솔라닐이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. "헤테로사이클"은 헤테로아릴을 포함할 수 있는데, 이것은 헤테로사이클의 파이 전자계가 완전히 컨쥬게이트된 경우이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "아릴"은, 완전히 컨쥬게이트된 파이 전자계를 갖는, 전부 탄소로 된 모노사이클릭 또는 융합 고리 폴리사이클릭(즉, 인접한 탄소 원자 쌍을 공유하는 고리) 기를 지칭한다. 아릴 기의 예에는, 제한 없이, 페닐, 나프탈레닐, 및 안트라세닐이 있다. 아릴 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환된 경우, 치환기(들)는 할로, 트라이할로메틸, 알킬, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 메르캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 니트로, 카르보닐, C-카르복시, O-카르복시, C-아미도, N-아미도, N-알킬, 설피닐, 설포닐, S-설폰아미도, N-설폰아미도, 트라이할로-메탄설폰아미도, 및 아미노로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "헤테로아릴"은, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14개의 고리 원자를 가지며; 하나의 사이클릭 어레이 내에 6, 10, 또는 14개의 파이 전자가 공유되어 있으며; 탄소 원자 및 1, 2, 또는 3개의 산소, 질소, 또는 황 헤테로원자를 함유하는 기를 지칭한다. 비제한적인 헤테로아릴 기는 티에닐(티오페닐), 벤조[b]티에닐, 나프토[2,3-b]티에닐, 티안트레닐, 푸릴(푸라닐), 아이소벤조푸라닐, 크로메닐, 잔테닐, 페녹산티닐, 피롤릴(제한 없이, 2H-피롤릴을 포함함), 이미다졸릴, 피라졸릴, 피리딜(피리디닐)(제한 없이, 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜을 포함함), 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 피리도[1,2-a]피리미딘-4-온, 피라졸로[1,5-a]피리미디닐(제한 없이, 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일을 포함함), 1,2-벤조아이소옥사졸-3-일, 벤즈이미다졸릴, 2-옥스인돌릴, 및 2 옥소벤즈이미다졸릴을 포함한다. 헤테로아릴 기가 고리 내에 질소 원자를 함유하는 경우, 그러한 질소 원자는 N-옥사이드의 형태일 수 있으며, 이에는, 예를 들어 피리딜 N-옥사이드, 피라지닐 N-옥사이드, 및 피리미디닐 N-옥사이드의 형태가 있다. 치환된 경우, 치환기(들)는 알킬, 사이클로알킬, 할로, 트라이할로메틸, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 메르캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 니트로, 카르보닐, 설폰아미도, 카르복시, 설피닐, 설포닐, O-카르바밀, N-카르바밀, C-아미도, N-아미도, 및 아미노로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단위 투여 형태"는 물리적으로 분리된 단위, 예컨대 인간 환자를 위한 단일 투여량으로서 적합한 캡슐 또는 정제를 지칭한다. 각각의 단위는, 원하는 치료적 효과를 산출하는 원하는 약동학적 프로파일을 생성하는 것으로 밝혀졌거나 여겨지는 미리 결정된 양의 화학식 I의 화합물을 함유한다. 투여 단위는 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체, 염, 부형제, 또는 이들의 조합과 함께, 화학식 I의 화합물로 구성된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "용량" 또는 "투여량"은 한번에 개체가 섭취하거나 개체에게 투여되는 활성 성분의 양을 지칭한다. 예를 들어, 800 mg 용량의 화학식 I의 화합물은, 일일 2회 투여 계획의 경우에, 개체가 800 mg의 화학식 I의 화합물 또는 화학식 II의 화합물을 하루에 2번, 예를 들어 아침에 800 mg 그리고 저녁에 800 mg을 섭취하는 상황을 지칭한다. 화학식 I의 화합물 또는 화학식 II의 화합물의 800 mg 용량은 2개 이상의 투여 단위, 예를 들어 화학식 I 화합물 또는 화학식 II의 화합물의 2개의 400 mg 투여 단위로 분할될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 전구약물"은, 생리적 조건 하에서 또는 가용매 분해에 의해 특정 화합물 또는 그러한 화합물의 약제학적으로 허용되는 염으로 전환될 수 있는 화합물이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 활성인 대사물"은 특정 화합물 또는 이의 염의 체내에서의 대사작용을 통해 생성되는 약리학적으로 활성인 생성물을 의미하는 것으로 의도된다. 화합물의 대사물은 당업계에 알려진 일상적인 기법을 사용하여 확인될 수 있고, 이들의 활성은 본 명세서에 기재된 것들과 같은 시험을 사용하여 결정될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 염"은, 특정 화합물의 유리 산 및 유리 염기의 생물학적 유효성을 보유하고, 생물학적으로 또는 달리 바람직한 염을 의미하는 것으로 의도된다. 본 발명의 일부 실시 형태에서 사용하기 위한 화합물은 충분히 산성인 작용기, 충분히 염기성인 작용기, 또는 두 작용기 모두를 포함할 수 있으며, 이에 따라 다수의 무기 또는 유기 염기, 및 무기 및 유기 산 중 임의의 것과 반응하여 약제학적으로 허용되는 염을 형성할 수 있다. 예시적인 약제학적으로 허용되는 염은 본 발명의 화합물을 광산 또는 유기 산 또는 무기 염기와 반응시킴으로써 제조된 염을 포함하며, 그와 같은 염에는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 포스페이트, 모노하이드로포스페이트, 다이하이드로포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 아이소부티레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레에이트, 부틴-1,4-다이오에이트, 헥신-1,6-다이오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 다이니트로벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 설포네이트, 자일렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 감마-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트, 메탄-설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 및 만델레이트가 포함된다.
약제학적 조성물이 본 명세서에 제공된다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 및 본 발명에 따른 활성 화합물의 치료적 유효량을 포함한다. 약제학적 조성물은, 예를 들어 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 분말, 지속-방출 제형, 또는 좌제의 형태를 취할 수 있다. 적합한 약제학적 담체의 예는, 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, by E.W. Martin]에 기재되어 있다. 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물은 당업자에게 알려진 임의의 적합한 경로에 의한 투여를 위하여 제조될 수 있으며, 이러한 경로에는, 예를 들어 정맥내, 피하, 근육내, 피내, 경피, 수강내, 뇌내, 복막내, 비강내, 경막외, 폐, 유리체강내, 및 경구 경로가 포함된다. 투여는 주사에 의한 것과 같이 즉각적이거나 신속할 수 있거나, 또는 제어 또는 지연 방출 제형의 주입 또는 투여에 의한 것과 같이 일정 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
중추 신경계 내의 조직을 치료하기 위해 약제학적 제형이 제조되는 경우, 투여는 뇌척수액(CSF) 내로의 주사 또는 주입에 의해 행해질 수 있다. 더욱이, 약제학적 조성물이 중추 신경계 내의 세포 또는 조직으로의 전달을 위해 제조되는 경우, 약제학적 조성물은 혈액-뇌 장벽을 가로질러 활성 화합물 또는 활성 화합물의 유도체의 침투를 촉진시킬 수 있는 하나 이상의 담체 또는 성분을 포함하도록 제형화될 수 있다.
경구 투여를 위해 제조되는 경우, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은, 예를 들어 캡슐, 정제, 당의정, 로젠지(lozenge), 및 수성 현탁액 또는 용액으로 제조될 수 있다. 경구 투여를 위해 제조되는 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 원하는 투여 형태의 제형에 적합한 알려진 담체를 사용하여 제형화될 수 있으며, 이러한 담체에는 알려진 충전제, 희석제, 부형제, 결합제, 계면활성제, 현탁제, 유화제, 윤활제, 감미제, 향미제, 및 착색제가 포함된다. 추가적으로, 본 명세서에 기재된 바와 같은 약제학적 조성물은 리포좀, 마이크로입자, 마이크로캡슐 내에의 캡슐화, 또는 수용체-매개 세포내이입을 이용하여(예를 들어, 문헌[Wu et al. J. Biol. Chem. 262:4429-32, 1987] 참조), 활성 화합물의 전달 또는 흡수를 용이하게 하는 제형 접근법을 사용하여 제조될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 담체의 예에는 멸균 액체, 예컨대 멸균수 및 멸균 오일이 포함되며, 상기 액체에는 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 및 참기름이 포함된다. 물을 포함한 수성 담체는 정맥내 투여를 위해 제조되는 약제학적 조성물을 위한 전형적인 담체이다. 추가의 예로서, 식염수 용액, 및 덱스트로스 및 글리세롤 수용액이 또한, 특히 주사 용액을 위한 액체 담체로서 사용될 수 있다. 적합한 약제학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 곡분(flour), 백악, 실리카 겔, 소듐 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 및 에탄올을 포함한다. 조성물은, 필요하다면, 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 임의의 활성 화합물(이의 임의의 약제학적으로 허용되는 염, 에스테르, 이성질체, 또는 용매화물을 포함함)을 사용하여 제형화될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 활성 화합물을 포함하며, 대안적인 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 본 발명에 따른 둘 이상의 활성 화합물을 포함한다. 약제학적 조성물 내에 포함되는 하나 이상의 활성 화합물의 양은, 예를 들어 활성 화합물(들)의 성질 및 활성, 투여 형태의 성질 및 조성, 및 대상체에게 투여되는 원하는 용량에 따라 변동될 것이다.
일부 경우에, 본 명세서에 기재된 조성물을 치료를 필요로 하는 영역에 국부적으로 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 국부 투여는, 예를 들어 그리고 제한 없이, 수술 동안의 국부 주입, 국소 적용(예를 들어, 수술 후 상처 드레싱과 함께), 주사에 의해, 카테터에 의해, 좌제에 의해, 또는 이식물(implant)에 의해 달성될 수 있으며, 이식물은 다공성, 비다공성, 또는 젤라틴성(gelatinous) 재료(막, 예컨대 Silastic 막, 또는 섬유를 포함함)의 것이다. 일 실시 형태에서, 투여는 세균 감염 부위에의 직접 주사에 의한 것일 수 있다.
다른 실시 형태에서, 작용제는 소포, 특히 리포좀으로 전달될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 작용제는 제어 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 그러한 일 실시 형태에서는, 펌프가 사용될 수 있다. 그러한 다른 실시 형태에서는, 중합체 재료가 사용될 수 있다. 그러한 또 다른 실시 형태에서는, 제어 방출 시스템이 치료 표적에 근접하게 배치되어, 전신 용량의 극히 일부분만을 이용할 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 활성 화합물 및 약제학적 담체에 더하여, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가의 치료제 또는 예방제를 포함할 수 있다.
그러나, 임의의 특정 대상체 또는 질병 상태에 대한 구체적인 투여량 및 치료 계획(treatment regime)이 연령, 체중, 전반적 건강상태, 성별, 식이, 투여 시간, 활성 화합물(들)의 성질, 배설률, 약물 병용, 치료 담당 의사의 판단, 및 치료되는 특정 질병의 중증도를 포함한 다양한 인자에 좌우될 것임이 이해되어야 한다. 더욱이, 대상체에게 투여되는 약제학적 조성물의 양의 결정은 다른 인자들 중에서도, 약제학적 조성물 내에 포함되는 활성 화합물(들)의 양 및 특이적 활성 및 추가의 치료제 또는 예방제 또는 치료 계획의 사용 또는 도입에 좌우될 것이다. 치료적 유효 투여량의 결정은 동물 모델 연구에 기초할 수 있으며, 전형적으로, 모델 대상체에서의 질병의 발생률 또는 중증도를 유의하게 감소시키는 유효 투여량 및 투여 프로토콜을 결정함으로써 안내된다.
본 명세서에 기재된 활성 화합물의 치료적 유효량에 대한 비제한적인 범위는 일일 약 0.001 mg/㎏ 체중 내지 약 100 mg/㎏ 체중이다. 예를 들어, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 대상체에게 투여되는 본 발명에 따른 활성 화합물의 양이 일일 약 0.001 mg/㎏ 체중 내지 약 50 mg/㎏ 체중, 약 0.01 mg/㎏ 체중 내지 약 20 mg/㎏ 체중, 약 0.1 내지 약 10 mg/㎏ 체중, 및 약 0.1 mg/㎏ 체중 내지 약 5 mg/㎏ 체중에서 선택되도록 제조되고 투여될 수 있다.
본 발명의 일 태양은 직접적인 소분자 ADP-리보실화 인자 6(ARF6) 억제제의 혁신 신약 화합물 시리즈에 관한 것으로, 이들은 지질다당류(LPS)-유도 급성 폐 손상(ALI), 아시네토박터 바우만니이(AB) 폐렴, 메티실린-저항성 스타필로콕쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)(MRSA) 균혈증, 슈도모나스 아에루기노사(PA) 폐렴, 전신성 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 감염, 중증 뇌 말라리아, 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 및 혈관 눈 질병의 마우스 모델을 포함하는, 과도한 혈관 누출을 특징으로 하는 매우 다양한 조건에서 강력한 효능을 나타낸다. 이들 ARF6 억제제는 고처리량의 생화학적, 형광분석 뉴클레오티드 교환 검정(high-throughput biochemical, fluorometric nucleotide exchange assay)을 사용하여, 구매가능한 화합물 라이브러리로부터 100,000개의 화합물을 스크리닝하여 발굴하였다. 의약 화학 최적화 노력이 또한 수행되었다. 일부 실시 형태에서, 발굴된 소분자 ARF6 억제제의 임상적 잠재성은 불량한 용해도에 의해 제한될 수 있다. 따라서, ARF6 억제제의 수용성 전구약물의 합성 및 개발이 유리할 수 있다. 하나의 그러한 화합물, NAV-B(ARF6 억제제 NAV-A의 라이신 전구약물)를 합성하였으며, 그의 효능이 LPS-유도 ALI, AB-유도 폐렴, 맹장 결찰 및 천공(CLP)-유도 패혈증, 및 중증 뇌 말라리아의 마우스 모델에서 입증되었다.
환자 결과는 다중약물 저항성(MDR) 세균 감염에 대한 숙주 반응을 약화시킴으로써 개선될 수 있다. ARF6의 억제는 NF-κB에 의해 매개되는 면역 반응을 온전하게 남기면서, 다양한 염증 매개체로부터의 잠재적 공격(potential challenge)에 직면하여 혈관 안정성을 향상시킬 수 있다. ARF6은 다수의 염증 신호전달 경로에 대한 중추적 수렴점으로서 작용할 수 있기 때문에, ARF6을 억제하도록 설계된 단일 화합물로 다수의 손상-유도(injury-inducing) 경로가 표적화될 수 있다. 본 명세서에 개시된 ARF6 억제제는 과도한 혈관 누출을 특징으로 하는 다양한 질병 상태(예를 들어, 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 연령 관련 황반 변성 등)에서 유망한 활성을 나타낸다. 그러나, 일부 실시 형태에서, ARF6 억제제는 불량한 수용성을 가질 수 있다. ARF6 억제제의 수용성 전구약물의 설계 및 합성은 IV 투여 계획 및 경구 투여 계획 둘 모두에 대해 잠재성을 갖는 새로운 치료제를 내놓을 수 있다.
또 다른 소정 실시 형태에서, NAV-A는 하기에 나타낸 반응도식에 따라 합성될 수 있다:
Figure pct00025
본 발명의 일 태양은 혈관 누출, 혈관 염증, 및/또는 혈관신생에 관련된 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 소정 실시 형태에서, 상기 방법은 유효량의 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 ARF6 억제제, 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염을 포함할 수 있다. 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다.
다양한 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 혈관 누출, 혈관 염증, 및/또는 혈관신생에 관련된 장애의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시키기 위해 상기 환자에게 투여될 수 있다. 다양한 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 혈관 누출, 혈관 염증, 및/또는 혈관신생에 관련된 장애가 발생될 위험을 감소시키기 위해 상기 환자에게 투여될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애는 ALI, 인플루엔자-유도 급성 호흡 곤란, MDR 폐렴, 패혈증, 연령 관련 황반 변성, 류마티스성 관절염, 뇌 말라리아, 다발성 경화증, 또는 암 중 적어도 하나로부터 선택될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애는 에볼라(Ebola) 바이러스 감염, 마르부르크(Marburg) 바이러스 감염, 한타바이러스 감염, 또는 뎅기 바이러스 감염 중 적어도 하나로부터 선택되는 출혈성 열 바이러스 감염일 수 있다.
다양한 실시 형태에서, 상기 방법은 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애를 갖는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 환자는 증강된 ARF6 활성을 갖는다.
본 발명의 다른 태양은 안구 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 ARF6 억제제 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 말라리아를 가진 환자를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 ARF6 억제제 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 다양한 실시 형태에서, 말라리아는 뇌 말라리아, 중증 말라리아, 또는 다른 적합한 형태의 말라리아일 수 있다.
소정 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 안구 장애의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시키기 위해 상기 환자에게 투여될 수 있다. 소정의 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 안구 장애가 발생될 위험을 감소시키기 위해 상기 환자에게 투여될 수 있다.
다양한 실시 형태에서, 안구 장애는 연령 관련 황반 변성, 당뇨병성 망막병증, 미숙아 망막병증, 또는 황반 부종 중 적어도 하나로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 염증성 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 ARF6 억제제 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 투여는 염증성 장애의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시킬 수 있다. 소정의 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 투여는 염증성 장애가 발생될 위험을 감소시킬 수 있다.
다양한 실시 형태에서, 염증성 장애는 ALI, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐렴, 패혈증, 류마티스성 관절염, 또는 다발성 경화증 중 적어도 하나로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 ARF6의 활성을 억제함으로써 치료가능한 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 ARF6 억제제 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 투여는 ARF6의 활성을 억제함으로써 치료가능한 장애의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시킬 수 있다. 소정의 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 투여는 ARF6의 활성을 억제함으로써 치료가능한 장애가 발생될 위험을 감소시킬 수 있다.
본 명세서에 개시된 방법의 다양한 실시 형태에서, 환자는 포유동물, 예컨대 인간일 수 있다. 일부 실시 형태에서, ARF6 억제제는 ARF6 억제제의 전구약물일 수 있다. 예를 들어, 화합물은 표 1 또는 표 2, 또는 도 8 또는 도 9에 확인되어 있는 화합물들 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 본 명세서에 개시된 임의의 방법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 화학식 II의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 태양은 표 1 또는 표 2에 확인되어 있는 화합물들 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염들 중 적어도 하나를 포함한 하나 이상의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 약제학적 조성물은 또한 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 화합물은 안구 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재할 수 있다. 다양한 실시 형태에서, 화합물은 염증성 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은 ARF6의 활성을 억제함으로써 치료가능한 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 화합물은 말라리아(예를 들어, 뇌 말라리아, 중증 말라리아 등)를 가진 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재할 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 표 1 및 표 2의 화학 구조를 갖거나 또는 이들 표에 확인되어 있는 화합물에 관한 것이다. 일부 실시 형태에서, 화합물의 화학 구조는 NAV-B 내지 NAV-AAR 중 적어도 하나 또는 NAV-B′ 내지 NAV-AAR′ 중 적어도 하나일 수 있다. 소정 실시 형태에서, 화합물의 화학 구조는 NAV-B 또는 NAV-AAR′일 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 본 명세서에서, 예를 들어 표 1 및 표 2에 확인되어 있는 화합물의 전구약물에 관한 것이다. 일부 실시 형태에서, 전구약물은 NAV-U의 라이신 에스테르 전구약물일 수 있다. 소정 실시 형태에서, 전구약물은 NAV-A, NAV-A′, NAV-C, NAV-C′, NAV-R, NAV-R′, NAV-U, NAV-U′, NAV-AD, NAV-AD′, NAV-AAC, 또는 NAV-AAC′의 포스페이트 에스테르일 수 있다. 일부 경우에, 포스페이트 에스테르 약물은 그 자체로 활성 ARF6 억제제일 수 있으며, 다른 경우에, 포스페이트 에스테르는 그의 활성 모(parent) 약물이 되기 위해 가수분해를 필요로 하는 전구약물일 수 있다. 본 명세서에(예를 들어, 표 1 및 표 2에) 확인되어 있는 화합물의 다른 적절한 전구약물이 또한 본 발명의 범위 내에 있다.
실시예
이들 실시 형태를 추가로 예시하기 위하여, 하기 실시예가 제공된다. 이들 실시예는 청구된 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않으며, 이는 오로지 첨부된 청구범위에 기초하여 결정되어야 한다.
실시예 1 - 표적 검증
막관통 세포 표면 수용체 Robo4 및 이의 효능제, Slit 당단백질 패밀리에 의해 지배되는 신호전달 경로는 ARF6의 억제를 통해 사이토카인 폭풍 동안 혈관계를 안정화시키는 것으로 입증되어 있다(문헌[Jones CA, et al. Nature medicine. 2008;14:448-53]; 문헌[Jones CA, et al. Nature cell biology. 2009;11:1325-31]; 및 문헌[London NR, et al. Science translational medicine. 2010;2:23ra19] 참조). ARF6은 Ras 수퍼패밀리의 작은 GTPase로서, 이는 세포내이입 트래픽킹 및 세포 표면 액틴 재형성에 있어서의 그의 역할에 의해, 그것을 세포-세포 접착 및 세포 운동성의 조절에 있어서 중요한 역할자가 되게 한다(문헌[Donaldson JG. The Journal of biological chemistry. 2003;278:41573-6] 및 문헌[Schweitzer JK, et al. Seminars in cell & developmental biology. 2011;22:39-47] 참조). ARF6은 고유적으로 결합된 GDP를 GTP로 교환함으로써 활성화되는데, 이는, 생리적 환경에 따라, 다수의 구아닌 뉴클레오티드 교환 인자(GEF)에 의해 촉매될 수 있다(문헌[Gillingham AK and Munro S. Annual review of cell and developmental biology. 2007;23:579-611] 참조). ARF6은 VE-카드헤린의 세포내이입을 촉진함으로써 사이토카인-유도 혈관 과투과성을 매개하는 것으로 밝혀져 있으며(문헌[Davis CT, et al. Journal of immunology. 2014;192:6045-52] 및 문헌[Zhu W, et al. Nature. 2012;492:252-5] 참조), VE-카드헤린은 혈관 완전성의 제어에 있어서 역할을 갖는 내피간 접착 접합부의 성분이다(문헌[Komarova Y and Malik AB. Annual review of physiology. 2010;72:463-93]; 문헌[Gavard J and Gutkind JS. Nature cell biology. 2006;8:1223-34]; 문헌[London NR, et al. Angiogenesis. 2009;12:149-58]; 및 문헌[Dejana E, et al. Journal of cell science. 2008;121:2115-22] 참조).
ARF6은 염증에 있어서의 역할이 문헌에 기재되어 있는 다음 적어도 4가지의 수용체로부터 하류에 있는 신호전달 경로들에 있어서의 수렴점을 나타낼 수 있는 것으로 입증되어 있다: IL-1R, IL-6R, TLR4, 및 VEGFR(문헌[Davis CT, et al. Journal of immunology. 2014;192:6045-52] 및 문헌[Zhu W, et al. Nature. 2012;492:252-5] 참조)(도 1 참조). 각각의 효능제, IL-1β, IL-6, LPS, 또는 VEGF에 대한 혈관 내피 세포 배양물의 노출은 i) ARF6 활성화; ii) VE-카드헤린의 세포내이입; 및 iii) 세포 단층의 세포간(paracellular) 투과성의 증가. 모든 경우에, ARF6-특이적 siRNA는 VE-카드헤린 내재화 및 세포 과투과성 둘 모두를 유의하게 억제하였다. 이들 혈관 안정화 효과에는 NF-κB 경로의 억제가 동반되지 않는데, 이는 ARF6의 억제가 명백한 면역억제를 야기함이 없이 항염증성을 나타낼 수 있음을 시사한다(문헌[Davis CT, et al. Journal of immunology. 2014;192:6045-52] 및 문헌[Zhu W, et al. Nature. 2012;492:252-5] 참조).
ARF6 억제는 사이토카인-유도 혈관 투과성을 제어하기 위한 효과적인 접근법일 수 있다. 표적 검증은 ARF6의 펩티드 억제제를 사용한 실험에 의해, 그리고 ARF6의 조건부 내피 녹아웃(knockout)을 가진 마우스를 사용한 실험에 의해 뒷받침되었다. ARF 뉴클레오티드 교환을 억제하는 것으로 알려져 있는, ARF6의 아미노산 2-13으로 구성된 미리스토일화 펩티드(MyrARF6 2-13)(문헌[Randazzo PA, et al. The Journal of biological chemistry. 1995;270:14809-15] 및 문헌[Choi W, et al. Blood. 2006;107:3145-52] 참조)는 HMVEC-D 세포에서 ARF6 활성화를 감소시켰으며, 내피 단층에 걸쳐 투과성을 감소시켰으며, 세포 접합부에서 VE-카드헤린을 증가시켰으며, 혈액으로부터 폐 및 신장 둘 모두 내로의 에반스 블루(Evans blue) 염료의 누출을 방지하였다(문헌[Davis CT, et al. Journal of immunology. 2014;192:6045-52] 참조). 또한, MyrARF6 2-13은 LPS-유도 내독소 쇼크의 마우스 모델에서 생존률을 향상시켰다(도 2 참조)(문헌[Davis CT, et al. Journal of immunology. 2014;192:6045-52] 참조). ARF6을 표적으로서 추가로 검증하기 위하여, 내피에 표적화된 ARF6의 조건부 녹아웃을 가진 마우스가 폐 내로 투여된 LPS의 효과에 저항성을 나타낸다는 것이 입증되어 있다: LPS-처리된 마우스의 기관지폐포 세척액(BALF) 내의 단백질의 농도는 야생형 마우스에서의 것과 대비하여 이들 조건부 녹아웃 마우스에서 감소된다(문헌[Davis CT, et al. Journal of immunology. 2014;192:6045-52] 참조).
실시예 2 - ARF6의 소분자 억제제의 효능
표적 검증을 뒷받침하고, 소분자 억제제에 의한 ARF6 기능 억제의 실행가능성을 입증하기 위하여, 몇몇 그러한 억제제의 생체내(in vivo) 효능을 다양한 혈관 누출 동물 모델에서 시험하였다. 첫째, 망막 눈 질병(VEGF-유도 망막 투과성, 레이저-유도 맥락막 신생혈관화, 및 산소-유도 망막병증)의 3가지 별개의 마우스 모델에서, 국제 출원 PCT/US2015/032720호의 화합물 번호 38인 ARF6 억제제의 생체내 효능을 입증하였다. 둘째, 콜라겐-유도 관절염(CIA)의 뮤린 모델에서 국제 출원 PCT/US2015/032720호의 화합물 번호 38의 효능을 입증하였다. 이 CIA 연구에서는 마우스에 14일 동안 일일 1회 복막내(IP) 주사에 의해 30 mg/㎏으로 투여하였으며; 명백한 독성의 징후 없이 관절염 점수의 유의한 감소가 관찰되었다.
몇몇 ARF6 억제제가 LPS-유도 ALI의 마우스 모델에서 혈관 투과성을 감소시킨다는 것이 입증되었다(도 3 및 표 3 참조). 마취된 마우스의 기관 내로 LPS를 점적주입(instill)하였다. ARF6 억제제를 LPS 점적주입 직후에(T=0) 또는 LPS 후 3시간째에(T=3) IP 주사에 의해 30 또는 60 mg/㎏의 용량으로 제공하였다. 효능 종점은 BALF 내의 총 세포 카운트 및 총 단백질량이었다. 모든 연구는 비히클 음성 대조군, 및 양성 대조군으로서의 덱사메타손(T=0 및 T=6에서의 5 mg/㎏ IP)을 사용하여 수행하였다. 데이터를 일원분산분석에 의해 분석한 후, 터키의 다중 비교 검정에 의해 분석하였다(GRAPHPAD PRISM® 소프트웨어, 버전 6.05). NAV-A의 효과가 도 3에 예시되어 있으며; 60 mg/㎏(T=0), 30 mg/㎏(T=3), 및 60 mg/㎏(T=3)의 NAV-A의 투여는 BALF 내의 총 세포수의 유의한 감소를 가져왔다. 추가의 실험은 이들 세포의 95% 초과가 호중구임을 보여주었다. BALF 총 단백질량의 감소가 또한 관찰되었다.
[표 3]
Figure pct00026
연구는 MDR 그람-음성 세균(GNB) 감염의 마우스 모델에서 ARF6의 소분자 억제제의 유의한 활성을 보여주었다. 간략하게 말하면, 일수 -2 및 일수 +3에 200 mg/㎏의 사이클로포스파미드 및 250 mg/㎏의 코르티손 아세테이트(0.05% Tween 80 중)를 사용하여 CD-1 수컷 마우스를 호중구감소증성이 되게 하였다. 일수 0에서, 호중구감소증성 마우스를 흡입을 통해 아시네토박터 바우만니이(AB) HUMC1(독성 균주(virulent strain); 문헌[Luo G, et al. J Antimicrob Chemother. 2012;67:1439-45] 및 문헌[Luo G, et al. PloS one. 2012;7:e29446] 참조)로 감염시켰다. "NAV-" 화합물에 의한 처리를 감염 후 3시간째에 개시하였다. 도 4에 나타낸 바와 같이, 30 mg/㎏ IP로의 NAV-A의 일일 1회 주사는 비히클에 의한 처리와 대비하여 생존률의 유의한 개선으로 이어졌다(50% 생존율, p<0.05 vs. 비히클 플라세보). 마우스는 정상적인 체중 증가를 가지면서 건강하게 보였다.
AB에 의한 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)의 감염은, 풀다운(pulldown) 검정에서 ARF6-GTP의 양에 의해 측정되는 바와 같이, ARF6의 활성화로 이어질 수 있음이 또한 입증되었다. 또한, 이러한 ARF6 활성화는 다른 소분자 ARF6 억제제인, 국제 출원 PCT/US2015/032720호의 20 μM 화합물 번호 38로 HUVEC를 처리함으로써 억제되었다(도 5 참조).
실시예 3 - NAV-A의 수용성 전구약물인 NAV-B
본 명세서에 개시된 ARF6의 소분자 억제제들 중 일부는 제한된 수용해도를 가지며, 이는 제형에 대하여 복잡한 용매, 공용매, 및/또는 부형제의 사용을 필요하게 할 수 있다. 전술된 대부분의 연구에 사용된 제형은 다이메틸아세트아미드(DMA)/PEG300(10:90 v/v)이었다. 따라서, 효과적인 ARF6 억제제의 수용성 전구약물을 합성하기 위한 노력을 개시하였다. 전구약물은 약리학적 활성제(모 약물)의 화학적으로 변형된 버전일 수 있으며, 전구약물은 생체내에서 화학적 또는 효소적 분해 시에 모 약물을 방출하도록 설계된다(문헌[Rautio J, et al. Nature reviews Drug discovery. 2008;7:255-70]; 문헌[Huttunen KM, et al. Pharmacol Rev. 2011;63:750-71]; 및 문헌[Zawilska JB, et al. Pharmacological reports : PR. 2013;65:1-14] 참조). 2000년부터 2008년까지 승인된 모든 소분자 약물의 대략 20%가 전구약물이었다. 전구약물의 사용은 불량한 수용해도를 극복하는 것으로 밝혀져 있다(문헌[Stella VJ and Nti-Addae KW. Advanced drug delivery reviews. 2007;59:677-94] 참조).
NAV-A의 라이신 전구약물인 NAV-B의 구조가 도 6에 나타나 있다. 다이하이드로클로라이드 염으로서의 NAV-B는 50 mg/mL 초과의 농도에서 산성 수성 매질 중에 가용성이다. 하기에 기재된 생체내 연구에 사용된 비히클은 물 중 0.1% Tween 80을 함유하는 물 중 5% 덱스트로스(D5W) (pH 약 4.5) 또는 0.9% 염화나트륨(생리 식염수) 중 어느 하나였다.
전구약물 NAV-B를 래트 및 마우스에 각각 정맥내(IV) 및 복막내(IP) 투여 후에 NAV-A의 PK 프로파일을 결정하였다. 도 7(좌측 패널)은 1.4 mg/㎏ 용량의 NAV-B(1 mg/㎏의 NAV-A와 등가임)의 외측 꼬리 정맥 IV 주사 후의 NAV-A의 혈장 농도 vs. 시간 프로파일을 나타낸다. 이 실험에서는, 확립된 LC/MS 방법을 사용하여, 단지 NAV-A의 출현 및 PK 프로파일만을 추적하였다. NAV-B의 투여는, 앞서 NAV-A 자체를 투여한 후에 관찰된 것과 유사하게, NAV-A의 탁월한 노출을 제공하였다. NAV-B IV를 제공받은 래트의 혈장 중 NAV-A의 매우 신속한 출현이 주목할 만하였으며; 관찰된 최고 혈장 농도는, 측정된 최초의 시점인, 투여 후 5분째에 나타났다. 도 7의 우측 패널은 43 mg/㎏의 NAV-B(30 mg/㎏의 NAV-A와 등가임)의 IP 투여 후의 NAV-A의 혈장 농도 vs. 시간 프로파일을 나타낸다. 이 실험의 시간 경과가 비교적 짧았지만, NAV-A의 높고 지속된 혈장 수준이 투여 후 6시간 기간에 걸쳐 관찰될 수 있다. NAV-A의 근피크(near peak) 혈장 수준은 30분 이내에 관찰되었다.
NAV-B의 생체내 효능을 뮤린 LPS-유도 ALI 모델에서 평가하였다. T=0에서의 43 mg/㎏ IP의 NAV-B의 투여는, T=0에서의 30 mg/㎏의 NAV-A에 의해 야기된 것과 유사하게, BALF 세포 카운트의 70% 감소를 가져왔다(표 2 참조). LPS-유도 ALI 모델에서의 효능은 생체내에서의 NAV-B의 활성 모 약물 NAV-A로의 전환을 확인시켜 준다.
실시예 4 - 수용성 ARF6 억제제인 NAV-AAR′
NAV-AAR′의 구조가 표 2에 나타나 있다. NAV-AAR′은 IC50 값이 대략 1 내지 2 μM인 ARF6 억제제이다. NAV-AAR′은 또한 알칼리성 포스파타제에 대한 기질이며, 그럼으로써 활성 대사물 NAV-AAC′로 대사된다. NAV-AAR′은 최대 50 mg/mL의 농도에서 수성 매질 중에 고도로 가용성이며, 광으로부터 보호되는 상태에서 실온에서 최대 4개월 동안 용액 상태로 안정하다.
LPS-유도 ALI의 마우스 모델에서의 NAV-AAR′의 효과가 도 12에 나타나 있다. 38 mg/㎏ 또는 64 mg/㎏의 NAV-AAR′의 정맥내 주사에 의한 투여는 BALF 내의 총 세포수 및 단백질 농도의 유의한 감소를 가져왔다. NAV-AAR′은 또한 폐렴의 다중약물-저항성 슈도모나스 아에루기노사(PA) 마우스 모델에서 활성이다. 도 13은 38 및 64 mg/㎏의 용량 수준에서 마우스의 생존율을 개선하는 NAV-AAR′의 효과를 예시한다. NAV-AAR′을 6일 동안 일일 1회 피하 주사에 의해 투여하였다. 항생제 메로페넴은 이 모델에서 MDR PA에 대해 효과적이지 않았다.
실시예 5 - NAV-A 및 다른 ARF6 억제제의 수용성 전구약물의 합성 및 특성화
NAV-A의 전구약물(즉, NAV-A′) 및 다른 ARF6 억제제의 전구약물이 합성될 수 있으며, 이에는 포스페이트 에스테르 전구약물, 몇몇 아미노산 및 다이펩티드 전구약물뿐만 아니라, 다른 작용기를 갖는 전구약물이 포함된다. 합성되는 잠재적 전구약물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염의 몇몇 예가 도 8 및 도 9에 예시되어 있다. 이들 전구약물의 하기 특성이 평가될 수 있다: 본 명세서에 개시된 바와 같은 생화학적 검정에서 측정된 내인성 ARF6 억제 활성; 비히클, 예컨대 주사용 멸균수, 생리 식염수, 인산염 완충 식염수, 및 D5W 중에서의 수용해도; pH의 함수로서의 용액에서의 안정성 및 수용해도; 및 마우스, 래트, 개, 원숭이, 및 인간 혈청 중에서의 모 NAV-A(도 8) 또는 NAV-A′(도 9)로의 전환 속도 및 전환 정도.
실시예 6 - 마우스 LPS-유도 ALI 모델에서의 생체내 효능의 설치류 PK 및 확인
실시예 5에서 합성된 NAV-A 및 다른 ARF6 억제제의 전구약물이 설치류 PK 연구에서 평가될 수 있다. 래트에서의 IV PK는 반감기, 제거율, 및 분포 부피와 같은 파라미터를 제공할 수 있다. 래트는 IV PK 연구에 바람직할 수 있는데, 그 이유는, 24 내지 48시간의 기간에 걸쳐 카테터 삽입된 래트로부터 다수의 채혈물(blood draw)을 획득할 수 있음으로써 필요한 동물의 수를 최소화할 수 있기 때문이다. 이러한 전구약물 하위세트는 또한 IP 투여에 의해 마우스에서 시험될 수 있다. IP PK는 LPS-유도 ALI 연구에 대한 적절한 용량 수준을 결정하는 데 사용될 수 있는 추가의 파라미터(최대 혈액 수준, 최대 혈액 수준에 이르기까지의 시간, 및 전체 노출)를 제공할 수 있다. 전구약물(가능한 경우) 및 모 약물의 혈장 수준은 LC/MS를 사용하여 결정될 수 있다. NAV-A를 포함한 몇몇 소분자 ARF6 억제제에 대한 고감도 생물분석 방법이 개발되어 있다. PK 데이터는 PHOENIX WINNONLIN® 소프트웨어를 사용하여 분석될 수 있다. 이어서, 전구약물을 사용하여 마우스 LPS-유도 ALI 연구를 수행할 수 있다. 이 모델에서의 효능은 활성 모 약물의 전신 노출을 확인시켜 주며, 이에 따라 PK 데이터를 보완할 수 있다.
스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 래트(300 내지 350 g)를 마취할 수 있고, 약물 주입 및 혈액 수집을 위해 정맥 카테터 및 동맥 카테터가 각각 배치될 수 있다. 전구약물을 그의 각각의 모 약물 1 mg/㎏과 등가의 용량으로 느린(60초) IV 푸시에 의해 6 마리의 래트(3 마리의 수컷/3 마리의 암컷)에 투여할 수 있다. 혈액을 약물 수준의 결정을 위하여 48시간 기간에 걸쳐 11개의 시점에서 수집할 수 있다: 5분, 10분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 24시간, 및 48시간.
IP PK 연구를 위하여, 전구약물을 그의 각각의 모 약물 10, 30, 및 60 mg/㎏과 등가의 용량으로 IP 주사에 의해 C57BL/6 마우스에 투여할 수 있다. 분석을 위하여 하기의 시점에서 혈액을 수집할 수 있다: 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 24시간, 및 48시간. 샘플 크기는 시점당 6 마리의 마우스(3 마리의 수컷/3 마리의 암컷)일 수 있다. 2개의 혈액 샘플을 개별 마우스로부터 수집할 수 있는데(이들 중 하나는 최종 희생 시점에서의 것임), 이는 필요한 동물의 수를 절반만큼 감소시키기 때문이다.
ALI 연구를 위하여, LPS를 마취된 C57BL/6 마우스의 기관 내로 투여할 수 있다. 그 직후에(T=0), 전구약물을 IP 주사할 수 있고; 각각의 전구약물의 3개의 용량을 시험할 수 있다(예를 들어, 10, 30, 및 60 mg/㎏의 모 약물과 등가의 용량). 마취된 동물로부터 LPS의 주사 후 24시간째에 BALF를 수집하고, 총 세포 카운트 및 총 단백질량에 대해 분석할 수 있다. 4 마리의 수컷 및 4 마리의 암컷(총 마리수 n = 8)을 맹검 처리군 및 대조군에 무작위 배정할 수 있다. 0.0083(6개의 처리군이기 때문에 0.5 ㆇ 6)의 유의성으로 1.5의 치료 효과 크기를 검출하기 위하여 80% 검정력(power)으로 실시된 검정력 분석(power analysis)은 83%의 실제 검정력을 사용하여 8개의 샘플 크기를 계산할 수 있다(G*POWER® 소프트웨어, 버전 3.1.9.2).
LPS-유도 ALI 실험에서는, BALF 내의 세포(도 10a 참조) 및 단백질 농도를 감소시키는 데 있어서, NAV-B(42.75 mg/㎏ IP, 이는 30 mg/㎏의 모 NAV-A와 등가임)의 유의한 효과가 모 NAV-A에 대해 관찰된 효과와 유사하게 관찰되었다.
실시예 7 - 마우스 아시네토박터 바우만니이( AB ) 폐렴
전구약물은 실시예 6으로부터 실시예 7의 연구로 진행될 수 있다. 마우스에서의 AB 독력 및 치사성은 LPS의 셰딩(shedding) 및 TLR4 경로의 활성화에 직접 기인될 수 있는 것으로 입증되어 있다(문헌[Lin L, et al. mBio. 2012;3.] 참조). 또한, ARF6 억제제, NAV-A는 AB 폐렴의 뮤린 모델에서 생존률에 있어서 유의한 개선을 나타내었음이 입증되었다(도 5 참조).
감염에 대해 일수 -2 및 일수 +3에 사이클로포스파미드(200 mg/㎏ IP) 및 코르티손 아세테이트(250 mg/㎏, 피하)를 주사함으로써 마우스를 호중구감소증성이 되게 할 수 있다. AB 폐렴을 유도하기 위하여, 이전에 기재된 바와 같이 네뷸라이저를 통해 1시간 동안 흡입 챔버 내로 AB를 에어로졸화함으로써 호중구감소증성 마우스를 감염시킬 수 있다(문헌[Luo G, et al. J Antimicrob Chemother. 2012;67:1439-45] 참조). 치료 투여 및 투여 빈도는 실시예 6에서 수행된 PK 및 ALI 연구에 의해 좌우될 수 있다. 플라세보 마우스는 비히클을 제공받을 수 있다. 감염되고 콜리스틴(일일 2회 IP 주사를 통해 2.5 mg/㎏이 제공됨)으로 처리된 마우스의 다른 군은 양성 대조군으로서의 역할을 할 수 있는데, 그 이유는, 이 항생제는 AB HUMC1로부터 보호하는 것으로 밝혀져 있기 때문이다(문헌[Luo G, et al. J Antimicrob Chemother. 2012;67:1439-45] 참조). 처리는 감염 후 3시간째에 시작하여 일수 +7을 통해 계속될 수 있으며, 감염 후 28일 동안 마우스의 생존(1차 종점)을 추적할 수 있다. 각각의 군은 10 마리의 마우스를 포함할 수 있으며, 각각의 실험을 (처리군당 총 20 마리의 마우스에 대해) 1회 반복하여 로그 순위 검정(α = 0.05)에 의해 생존율에 있어서의 3일 차이를 검출할 수 있다.
2차 종점으로서, 신장, 폐, 및 비장에서 조직 세균 부하 및 조직병리에 대한 억제제의 효과가 결정될 수 있다(문헌[Luo G, et al. J Antimicrob Chemother. 2012;67:1439-45] 참조). 억제제의 보호 용량이 상기에서와 같이 투여될 수 있으며, (생존율 연구로부터 결정된) 선택된 시간 간격에서, 마우스를 희생시키고, 정량적 배양 및 조직병리학적 검사를 위해 표적 조직을 수집할 수 있다. 또한, 감염 동안 염증성 사이토카인 프로파일에 대한 억제제의 보호 용량의 효과는 혈액에서(케타민 및 자일라진의 혼합물로 진정시킨 후 심장 천자에 의해) 그리고 전체 기관(whole organ)에서 결정될 수 있는데, 그 이유는, 이 기법은 감염 부위에 존재하는 모든 세포 유형의 사이토카인 반응을 측정하기 때문이다. 따라서, 이 기법은 개별 세포 유형에 초점을 맞추기보다는, 유기체에 대한 그리고 ARF6 억제제 처리에 대한 숙주 사이토카인 반응의 포괄적 평가를 가능하게 할 수 있다. 혈청 또는 표적 기관 내의 IFN-γ, IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, 및 KC를 포함한 사이토카인 수준은 제조자의 설명서에 따라 MSD 멀티-스폿(Multi-Spot) 검정(MESO SCALE™)을 사용하여 결정될 수 있다(문헌[Lin L, et al. mBio. 2012;3] 참조). 추가적으로, 표적 기관 내의 미엘로퍼옥시다제(MPO)가 결정될 수 있다. 마지막으로, 리물루스 변형세포 용해물, 발색성 내독소 정량화 키트(Limulus amebocyte lysate, Chromogenic Endotoxin Quantitation Kit) (CHARLES RIVER™)를 사용함으로써 혈청 LPS가 측정될 수 있다(문헌[Luo G, et al. PloS one. 2012;7:e29446] 참조). 이들 모든 연구는 사용된 동물의 수를 줄이고 마우스-대-마우스 데이터의 더 우수한 상관관계를 위한 결과를 검정하기 위하여, CFU 연구에 사용된 것과 동일한 마우스에 대해 수행될 수 있다. 상기에서와 같이, 10 마리의 마우스/군(2회 실험으로부터)을 사용하여, CFU에서의 1 로그 차이를 검출하거나 다른 파라미터(α = 0.05)의 변화를 2배로 검출하기 위하여 80% 검정력을 달성할 수 있다(문헌[Spellberg B, et al. Infection and immunity. 2003;71:5756-64] 참조).
다른 실험에서는, NAV-B(7일 동안 일일 1회 42.75 mg/㎏ IP)가 아시네토박터 바우만니이(AB) 폐렴을 가진 마우스에서 매우 유의한 90% 생존율을 가져왔다(도 10b 참조). 이러한 NAV-B의 용량은 30 mg/㎏의 NAV-A를 투여하는 것과 등가이다. NAV-B에 대해 관찰된 90% 생존율은 앞서 NAV-A 자체에 대해 기재된 50% 생존율보다 더 월등하다. 어떠한 하나의 특정 이론에 의해 구애됨이 없이, NAV-B에 대해 관찰되는 더 큰 효능은 NAV-A를 가용화하는 데 필요한 DMA/PEG300보다는 약물 비히클로서의 생리 식염수의 사용에 기인할 수 있다. 폐 손상에 특이적인 결과 측정, 예를 들어 폐 손상, 염증, 폐포 모세혈관 장벽의 변화, 또는 생리적 기능이상의 조직학적 증거는 이 연구에서 측정하지 않았으며; 단지 측정된 결과는 생존율뿐이었다.
실시예 8 - 뇌 말라리아 모델에서의 분석
뇌 말라리아(CM)의 마우스 모델에서, NAV-B는 감염 후 14일째에 사망률을 감소시킨 반면, 비히클-처리된 마우스는 일수 8을 넘어서는 생존하지 못하였다(도 11 참조). 마우스를 일수 0에 플라스모디움 베르게이(Plasmodium berghei) ANKA로 감염시켰다. 처리를 일수 3에 개시하였다. 군들은 비히클 대조군(11일 동안 매일 IP 투여됨) 및 NAV-B-처리된 마우스(11일 동안 매일 42.75 mg/㎏ IP 투여됨)로 이루어졌다. 생존하는 마우스를 일수 14일에 희생시켰다.
실시예 9 - 실시예 화합물의 화학적 합성 및 정제
모든 반응은 건조 질소 또는 건조 아르곤의 양압 하에서 화염-건조된 또는 오븐-건조된 유리제품 내에서 수행하였으며, 달리 지시되지 않는 한 자기적으로 교반하였다. 모든 용매 및 화학물질은 표준 상업적 벤더로부터 구매하였으며, 달리 언급되지 않는 한 제공받은 그대로 사용하였다. 본 명세서에 언급되지 않거나 기재되지 않은 임의의 필요한 조제물은 용이하게 입수가능하며 당업자에게 알려져 있다. 수율은 최적화되어 있지 않다. 화학명은 SYMYX® TECHNOLOGIES, Inc.(미국 캘리포니아주 산타 클라라 소재)의 디비젼인 MDL INFORMATION SYSTEMS™로부터 입수가능한 SYMYX® DRAW™ 3.1 화합식 작성 프로그램(chemical drawing program)을 사용하여 생성하였다.
EMD MILLIPORE™로부터 구매된 0.25 mm 실리카 겔 60 F254 플레이트를 사용하여 박층 크로마토그래피(TLC)에 의해 반응을 모니터링하였다. TELEDYNE ISCO™ COMBIFLASH® TLC 체류 인자(Rf)를 사용하여 정제를 수행하였다. 1H 핵자기 공명 분광법(NMR) 스펙트럼을 VARIAN MERCURY™ 400 ㎒ 기기 상에서 기록하였다. 양성자 화학적 이동은 TMS 대비 백만분율(ppm)로 표현되어 있으며, 내부 기준으로서 잔류 비중수소화 용매를 사용하여 보정되어 있다. AGILENT™ 1290 INFINITY 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 시스템과 쌍을 이룬 AGILENT™ Q-TOF 상에서 질량 스펙트럼을 기록하였다. 4.6 mm x 150 mm XTERRA® MS C18 3.5 μm 컬럼 및 UPCHURCH® 5 μm 프리컬럼(precolumn) 24 x 12 mm를 구비한 AGILENT™ HP1050 기기에 의해 화합물 순도를 결정하였다. 유량은 1.2 mL/min이었고, 주입 부피는 5 μL였다. HPLC 조건은 다음과 같았다: 이동상 A, HPLC 등급 물(0.1% 트라이플루오로아세트산(TFA)); 이동상 B, HPLC 등급 아세토니트릴(0.1% TFA); UV 검출기, 250 nm; 10분만에 95% A/5% B 내지 0% A/100% B, 10 내지 11분만에 100% B, 11 내지 13분만에 100% B 내지 95% A/5% B, 13 내지 15분만에 95% A/5% B.
실시예 10 - 합성 방법: 반응도식 I 및 반응도식 II
본 발명의 화합물의 제조를 위한, 일부 실시 형태에 따른 일반적인 방법이 이 실시예 및 하기의 다른 실시예에 제공된다.
[반응도식 I]
Figure pct00027
시약 및 조건: 다이클로로메탄(DCM), NbCl5, 실온(rt), 및 1 내지 18시간. 화합물 2는 유기 용매 중에서 촉매로서 NbCl5를 사용하여 화합물 1을 톨루엔 중 에틸 다이아조아세테이트 또는 DCM 중 에틸 다이아조아세테이트와 반응시킴으로써 합성될 수 있다.
[반응도식 II]
Figure pct00028
시약 및 조건: a) NaH(60%), R3CO2Et, 테트라하이드로푸란(THF), 2 내지 8시간, 실온; b) CH3CO2H, N2H4.H2O, 톨루엔, 120℃, 8 내지 16시간; c) 반응도식 I로부터의 화합물 2, CH3CO2H, 120℃, 8 내지 16시간; d) 보호기(PG)-아미노산, N,N-다이메틸 아미노피리딘(DMAP), N-에틸-N′-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드 하이드로클로라이드(EDCI.HCl), N-메틸-2-피롤리돈(NMP), rt, 1 내지 5시간; e) 산, DCM, 또는 에틸 아세테이트(EtOAc), 실온, 및 1 내지 6시간.
목표 화합물 8은 표준 5-단계 절차에 의해 합성될 수 있다: i) 염기, 예컨대 수소화나트륨, 소듐 에톡사이드, 또는 소듐 메톡사이드를 사용하여 화합물 3을 지방족 또는 방향족 에스테르와 반응시켜 화합물 4를 제공하는 단계; ii) 톨루엔 중에서 하이드라진 수화물 및 아세트산으로 처리함으로써 치환된 아미노피라졸을 형성하는 단계; iii) 화합물 5를 치환된 베타 케토 에스테르와 반응시킴으로써 피리미디논 고리를 형성하는 단계; iv) 표준 커플링 시약(에테르 또는 카르바메이트가 표준 조건 하에서 제조될 수 있음)을 사용하여 다양한 산, 아미노산, 또는 활성화된 산과 반응시킴으로써 에스테르를 형성하는 단계; 및 v) 알려진 방법을 사용하여 보호기를 탈보호하여 화합물 8을 생성하는 단계.
실시예 11 - 반응도식 III
[반응도식 III]
Figure pct00029
시약 및 조건: a) DCM, NbCl5, 실온, 및 16시간.
반응도식 III(중간체 1)의 상세한 절차:
중간체 1
에틸 3-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-3-옥소-프로파노에이트
다이클로로메탄(150 mL) 중 2-하이드록시-4-니트로-벤즈알데하이드(10.0 g, 59.53 mmol)의 용액에 NbCl5(0.810 g, 2.99 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 상기 혼합물에, 에틸 다이아조아세테이트(61.00 mL, 71.80 mmol; 톨루엔 중 15% 용액)를 실온에서 적가하고, 16시간 동안 교반을 계속하였다. 이 기간의 종료 시점에서, 용매를 증발시키고, 잔류물을 헥산 중 에틸 아세테이트 0 내지 50% 구배를 사용하여 실리카 겔(SiO2) 상에서 크로마토그래피를 수행하여, 호변이성질체들의 혼합물로서 에틸 3-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-3-옥소-프로파노에이트(9.50 g, 63%)를 얻었다. 1H NMR (클로로포름-d (CDCl3)): δ1.23-1.36 (m, 6H), 3.84 (d, 1H), 4.16 (d, 1H), 4.22-4.34 (m, 4H), 6.46-6.48 (m, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.66-7.68 (m, 1H), 7.84-7.87 (m, 1H).
실시예 12 - 반응도식 IV
[반응도식 IV]
Figure pct00030
시약 및 조건: a) NaH(60%), 에틸 페닐 아세테이트, THF, 16시간, 및 실온; b) CH3CO2H, N2H4.H2O, 톨루엔, 120℃, 및 16시간; c) 에틸 3-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-3-옥소-프로파노에이트, CH3CO2H, 120℃, 및 16시간; 및 d) N2,N6-비스-boc-L-라이신, DMAP, EDCI.HCl, NMP, 실온, 및 5시간; e) 다이옥산 중 4 M 염산(HCl), EtOAc, 실온, 및 4시간.
반응도식 IV의 상세한 절차:
실시예 I - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2,6-다이아미노헥사노에이트 다이하이드로클로라이드의 합성.
단계 1 - 3-벤질-4-(4-클로로페닐)-1 H-피라졸-5-아민: THF 중 2-(4-클로로페닐)아세토니트릴(15.0 g, 98.95 mmol)의 용액에 실온에서 NaH(60%) (4.73 g, 118.38 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물에, 초기에 2 mL의 에틸 2-페닐아세테이트를 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 40℃로 가온하였다. 반응 개시 후에, 반응물을 빙조(ice bath) 내에서 냉각시키고, 나머지 에틸 2-페닐아세테이트(15.35 mL)를 적가하였다(총 17.35 mL(108.84 mmol)). 빙조를 제거하고, 실온에서 4시간 동안 교반을 계속하였다. 이 기간의 종료 시점에서, 반응 혼합물을 염화암모늄(NH4Cl) 수용액(20 mL)으로 켄칭하고, 3 N HCl을 첨가함으로써 pH를 3으로 조정하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(150 mL)에 분배하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트(50 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 염수로 세척하고, 건조시키고(황산나트륨(Na2SO4)), 여과하고, 용매를 감압 하에서 증발 건조시켜, 2-(4-클로로페닐)-3-옥소-4-페닐-부탄니트릴을 정량적 수율로 얻었다. 이 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계(즉, 단계 2)에 사용하였다.
단계 2 - 조(crude) 2-(4-클로로페닐)-3-옥소-4-페닐-부탄니트릴을 톨루엔(150 mL) 중에 용해시켰다. 상기 용액에 아세트산(31.12 mL, 544.22 mmol)에 이어서 하이드라진 수화물(14.40 mL, 296.85 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 환류시켰다. 이 기간의 종료 시점에서, 이것을 실온으로 냉각시키고, 용매 및 과량의 시약을 감압 하에서 제거하였다. 잔류물을 포화 중탄산나트륨(NaHCO3) 용액으로 중화시키고, 분리된 고체를 여과하고, 물(3 x 50 mL)로 세척하고, 50℃에서 10시간 동안 진공 하에서 건조시켜 표제 생성물(22.0 g, 78%)을 얻었다. 1H NMR (다이메틸설폭사이드-d6 (DMSO-d6)): δ 3.87 (단일선 (s), 2H), 4.57 (넓은 단일선 (bs), 2H), 7.06-7.15 (m, 3H), 7.21-7.28 (m, 4H), 7.34 (d, 2H), 및 11.60 (bs, 1H).
단계 3 - 2-벤질-3-(4-클로로페닐)-7-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-온: 아세트산(80 mL) 중 3-벤질-4-(4-클로로페닐)-1 H-피라졸-5-아민(9.67 g, 34.10 mmol) 및 에틸 3-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-3-옥소-프로파노에이트(9.5 g, 37.52 mmol)의 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 분리된 고체를 수집하고, 아세트산(20 mL)에 이어서 에틸 아세테이트(50 mL)로 세척하고, 건조시켜 표제 생성물(11.70 g, 73%)을 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 4.09 (s, 2H), 7.09-7.26 (m, 5H), 7.37 (d, 2H), 7.49 (d, 2H), 7.65 (d, 1H), 7.72-7.74 (m, 2H), 7.95 (s, 1H), 10.58 (s, 1H), 및 12.55 (s, 1H). LCMS: [M+H] 473.10.
단계 4 - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2,6-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트: THF(50 mL) 중 2-벤질-3-(4-클로로페닐)-7-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-온(2.46 g, 5.20 mmol) 및 N2,N6-비스-boc-L-라이신(2.16g, 6.24 mmol)의 혼합물에 실온에서 DMAP(0.100 g) 및 EDCI.HCl(1.99 g, 10.40 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물에, NMP(15 mL)를 실온에서 적가하고, 5시간 동안 교반을 계속하였다. 이 기간의 종료 시점에서, 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. EtOAc 층을 물 및 염수로 세척하고, EtOAc 층을 건조시키고(Na2SO4), 여과하고, 용매를 증발 건조시켰다. 조 생성물을 다이클로로메탄 중 0 내지 10% 메탄올을 사용하여 SiO2 상에서 크로마토그래피를 수행하여 표제 생성물(3.24 g, 82%)을 얻었다. 1H NMR (CDCl3): δ 1.19-1.46 (m, 20H), 1.98-2.04 (m, 2H), 2.30-2.34 (m, 2H), 3.37 (t, 2H), 4.08 (s, 2H), 4.33-4.38 (m, 1H), 4.70 (bs, 1H), 5.30 (bs, 1H), 7.03-7.12 (m, 7H), 7.20-7.28 (m, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.85-7.80 (bs 1H), 8.06 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 11.70 (bs, 1H).
단계 5 - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2,6-다이아미노헥사노에이트 다이하이드로클로라이드: 에틸 아세테이트(50 mL) 중 [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2,6-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (3.20 g, 3.99 mmol)의 용액에 실온에서 다이옥산 중 4 M HCl(30 mL)을 적가하고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이 기간의 종료 시점에서, 분리된 고체를 여과하고, 다이에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에서 50℃에서 8시간 동안 건조시켜 표제 생성물(2.51 g, 93%)을 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 1.39-1.48 (m, 4H), 1.70-1.91 (m, 3H), 2.15 (t, 1H), 3.27 (t, 1H), 4.12 (s, 2H), 4.65 (bs, 2H), 7.07-7.22 (m, 5H), 7.38 (d, 2H), 7.48 (d, 2H), 7.83 (d, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.06 (bs, 2H), 8.23-8.30 (m, 2H), 8.83 (bs, 2H), 및 13.02 (s, 1H). LCMS: [M+H] 601.19.
실시예 II - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)아세테이트.
Figure pct00031
2-벤질-3-(4-클로로페닐)-7-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-온(0.246 g, 0.52 mmol) 및 N-(tert-부톡시카르보닐)글리신(0.108 g, 0.62 mmol)을 사용하여 실시예 I의 단계 4에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 표제 화합물(0.225 g, 69%)을 제조하였다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 1.23 (s, 9H), 3.84 (d, 2H), 4.09 (s, 2H), 7.10-7.32 (m, 6H), 7.41-7.47 (m, 4H), 7.84-7.86 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 8.17-8.19 (m, 1H), 및 12.65 (bs, 1H).
실시예 III - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] 2-아미노아세테이트 트라이플루오로아세테이트.
Figure pct00032
THF 중 [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)아세테이트(0.220 g, 0.350 mmol)의 용액에 실온에서 다이옥산 중 4 M HCl(5 mL)을 첨가하고, 4시간 동안 교반하였다. 이 기간의 종료 시점에서, 용매를 증발시키고, 잔류물을 다이에틸 에테르(15 mL)로 분쇄(triturate)하였다. 생성물을 분취용 HPLC로 정제하고, 트라이플루오로아세테이트 염(0.167 g, 73%)으로서 단리하였다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 3.95 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 7.07-7.28 (m, 5H), 7.37 (d, 2H), 7.49 (d, 2H), 7.85 (d, 1H), 7.97 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 8.55 (bs, 2H), 및 12.95 (s, 1H).
실시예 IV - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)프로파노에이트.
Figure pct00033
2-벤질-3-(4-클로로페닐)-7-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-온(0.246 g, 0.52 mmol) 및 (0.117 g, 0.62 mmol)을 사용하여 실시예 I의 단계 4에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 표제 화합물(0.270 g, 81%)을 제조하였다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 1.22-1.25 (m, 12H), 4.08 (s, 2H), 4.11-4.15 (m, 1H), 7.08-7.22 (m, 5H), 7.37 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.83-7.85 (m, 2H), 8.06 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 및 12.60 (s, 1H).
실시예 V - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2-아미노프로파노에이트 트라이플루오로아세테이트.
Figure pct00034
[2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)프로파노에이트(0.250 g, 0.388 mmol) 및 다이옥산 중 4 M HCl(5 mL)을 사용하여 실시예 III에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 표제 화합물(0.170 g, 67%)을 제조하였다. 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 1H NMR (메탄올-d4 (CD3OD)): δ 1.55 (d, 3H), 4.15 (s, 2H), 4.30-4.36 (m, 1H), 7.07-7.20 (m, 5H), 7.27 (d, 2H), 7.43 (d, 2H), 7.78 (d, 1H), 7.98 (s, 1H), 및 8.23-8.28 (m, 2H).
실시예 VI - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노에이트.
Figure pct00035
2-벤질-3-(4-클로로페닐)-7-(2-하이드록시-4-니트로-페닐)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-온(0.246 g, 0.52 mmol) 및 N-(tert-부톡시카르보닐)-L-발린(0.134 g, 0.62 mmol)을 사용하여 실시예 I의 단계 4에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 표제 화합물(0.310 g, 89%)을 제조하였다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 0.69 (d, 3H), 0.74 (d, 3H), 1.26 (s, 9H), 1.97-2.05 (m, 1H), 3.96 (t, 1H), 4.08 (s, 2H), 7.08-7.35 (m, 8H), 7.47 (d, 2H), 7.82-7.89 (m, 2H), 7.98 (s, 1H), 8.19-8.21 (m, 1H), 및 12.62 (s, 1H).
실시예 VII - [2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2-아미노-3-메틸-부타노에이트 트라이플루오로아세테이트.
Figure pct00036
[2-[2-벤질-3-(4-클로로페닐)-5-옥소-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]-5-니트로-페닐] (2S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노에이트(0.310 g, 0.461 mmol) 및 다이옥산 중 4 M HCl(5 mL)을 사용하여 실시예 III에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 표제 화합물(0.25 g, 79%)을 제조하였다. 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 0.73 (d, 3H), 0.77 (d, 3H), 2.11-2.16 (m, 1H), 4.07 (s, 2H), 4.09 (bs, 1H), 7.06-7.32 (m, 5H), 7.31 (d, 2H), 7.49 (d, 2H), 7.84 (d, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.66 (bs, 2H), 및 12.90 (s, 1H).
실시예 13 - NAV-AAC′, NAV-AAQ′, 및 NAV-AAR′의 합성
양성자 NMR 스펙트럼을 포함하여, NAV-AAC′, NAV-AAQ′, 및 NAV-AAR′에 대한 합성 경로가 도 14에 나타나 있다.
실시예 14 - ARF6 전구약물의 시험관내 효력 및 용해도
[표 4]
Figure pct00037
실시예 15 - [2-[3-(3,4-다이클로로페닐)-5-옥소-2 (트라이플루오로메틸)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]페닐] 이수소 포스페이트의 이나트륨 염의 합성
[반응도식 V]
Figure pct00038
시약 및 조건: a) NaH(60%), 에틸 트라이플루오로아세테이트, THF, 16시간, 실온; b) CH3CO2H, N2H4.H2O, 톨루엔, 120℃, 16시간; c) 에틸 3-(2-하이드록시페닐)-3-옥소-프로파노에이트, CH3CO2H, 120℃, 6시간; d) NaH(60%), 다이에틸 클로로포스페이트, Bu4NI, THF, 2시간; e) 브로모트라이메틸실란, DCM, 0 내지 25℃, 16시간; f) NaOMe(25%), MeOH, 실온, 3시간.
단계 1 - 2-(3,4-다이클로로페닐)-4,4,4-트라이플루오로-3-옥소-부탄니트릴의 합성. THF 중 2-(3,4-다이클로로페닐)아세토니트릴(15.0 g, 80.62 mmol)의 용액에 실온에서 NaH(60%) (3.87 g, 96.75 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물에, 초기에 2 mL의 에틸 트라이플루오로아세테이트를 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 40℃로 가온하였다. 반응 개시 후에, 반응물을 빙조(ice bath) 내에서 냉각시키고, 나머지 에틸 트라이플루오로아세테이트(9.51 mL)를 적가하였다(총 11.51 mL(96.75 mmol)). 빙조를 제거하고, 실온에서 4시간 동안 교반을 계속하였다. 이 기간의 종료 시점에서, 반응 혼합물을 염화암모늄(NH4Cl) 수용액(20 mL)으로 켄칭하고, 3 N HCl을 첨가함으로써 pH를 3으로 조정하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(150 mL)에 분배하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트(50 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 염수로 세척하고, 건조시키고(황산나트륨(Na2SO4)), 여과하고, 용매를 감압 하에서 증발 건조시켜, 2-(3,4-다이클로로페닐)-4,4,4-트라이플루오로-3-옥소-부탄니트릴을 정량적 수율로 얻었다. 이 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 2 - 4-(3,4-다이클로로페닐)-3-(트라이플루오로메틸)-1H-피라졸-5-아민의 합성. (단계 1로부터의) 조 2-(3,4-다이클로로페닐)-4,4,4-트라이플루오로-3-옥소-부탄니트릴을 톨루엔(150 mL) 중에 용해시켰다. 상기 용액에 아세트산(23.00 mL, 403.10 mmol)에 이어서 하이드라진 수화물(11.73 mL, 241.88 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 환류시켰다. 이 기간의 종료 시점에서, 이것을 실온으로 냉각시키고, 용매 및 과량의 시약을 감압 하에서 제거하였다. 잔류물을 포화 중탄산나트륨(NaHCO3) 용액으로 중화시키고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 물(3 x 50 mL)로 세척하였다. 에틸 아세테이트 층을 건조시키고(Na2SO4), 여과하고, 용매를 증발 건조시켰다. 조 생성물을 다이클로로메탄 중 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 SiO2 상에서 크로마토그래피를 수행하여 표제 생성물(10.40 g, 44%)을 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 5.47(bs, 2H), 7.23(d, 1H), 7.45(d, 1H), 7.63 (d, 1H), 12.41 (s, 1H).
단계 3 - 3-(3,4-다이클로로페닐)-7-(2-하이드록시페닐)-2-(트라이플루오로메틸)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-온: 아세트산(30 mL) 중 4-(3,4-다이클로로페닐)-3-(트라이플루오로메틸)-1H-피라졸-5-아민(4.00 g, 13.51 mmol) 및 에틸 3-(2-하이드록시페닐)-3-옥소-프로파노에이트(3.37 g, 16.21 mmol)의 혼합물의 합성을 120℃에서 6시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 분리된 고체를 수집하고, 아세트산(50 mL)에 이어서 에틸 아세테이트(50 mL)로 세척하고, 건조시켜 표제 생성물(4.60 g, 77%)을 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 6.82- 6.90 (m, 2H), 6.91-7.20 (m, 1H), 7.26-7.28 (m, 1H), 7.41-7.44 (m, 1H), 7.75-7.79 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 9.42 (bs, 1H), 12.83 (bs, 1H). LC-MS 462 [M+Na]+.
단계 4 - [2-[3-(3,4-다이클로로페닐)-5-옥소-2-(트라이플루오로메틸)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]페닐] 다이에틸 포스페이트의 합성: THF(15 mL) 중 3-(3,4-다이클로로페닐)-7-(2-하이드록시페닐)-2-(트라이플루오로메틸)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-온(0.300 g, 0.681 mmol)의 용액에 실온에서 NaH(60%) (0.060 g, 1.49 mmol)를 적가하고, 실온에서 20분 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, THF(1.0 mL) 중 다이에틸 클로로포스페이트(0.118 mL, 0.817 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물에, Bu4NI(0.125 g, 0.340 mmol)를 첨가하고, 0℃에서 추가 30분 동안 그리고 실온에서 2시간 동안 교반을 계속하였다. 이 기간의 종료 시점에서, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(30 mL)를 첨가하고, 물(2 x 20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 에틸 아세테이트 층을 건조시키고(Na2SO4), 여과하고, 용매를 증발 건조시켰다. 조 생성물을 DCM 중 0 내지 20% 메탄올을 사용하여 SiO2 상에서 크로마토그래피를 수행하여 표제 생성물(0.360 g, 92%)을 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 1.10 (t, 6H), 3.94-4.02 (m, 4H), 7.26- 7.36 (m, 2H), 7.40-7.47 (m, 3H), 7.75-7.78 (m, 2H), 8.03 (s, 1H), 13.02 (bs, 1H). 31P NMR (DMSO-d6): δ -6.91. LC-MS: m/z 576 [M+H]+.
단계 5 - [2-[3-(3,4-다이클로로페닐)-5-옥소-2-(트라이플루오로메틸)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]페닐] 이수소 포스페이트의 합성: [2-[3-(3,4-다이클로로페닐)-5-옥소-2-(트라이플루오로메틸)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]페닐] 다이에틸 포스페이트(1.5 g, 2.60 mmol)의 용액을 DCM(30 mL) 중에 제조하고, 0℃로 냉각시켰다. 상기 용액에, 브로모트라이메틸실란(5.15 mL, 39.04 mmol)을 적가하고, 실온에서 18시간 동안 교반을 계속하였다. 이 기간의 종료 시점에서, 용매 및 과량의 브로모트라이메틸실란을 감압 하에서 증발시켰다. 잔류물에 톨루엔(20 mL)을 첨가하고, 증발 건조시켰다. 조 혼합물을 DCM(10 mL) 및 메탄올(5 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, 30분 동안 교반하고, 증발 건조시켰다. 잔류물에 물(50 mL)을 첨가하고, 30분 동안 교반하고, 분리된 고체를 수집하고, 물로 세척하고, 건조시켜 표제 생성물(1.21 g, 90%)을 얻었다. 분석 샘플을 하기와 같이 제조하였다: 조 생성물(0.15 g)을 메탄올(10 mL) 및 트라이에틸 암모늄 카르보네이트(5 mL) 중에 용해시키고, 이어서 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 3 N HCl로 산성화하고, 분리된 고체를 여과하고, 물로 세척하고, 건조시켜 60 mg의 순수한 생성물을 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ 7.17-7.21 (m, 1H), 7.33-7.45 (m, 4H), 7.72-7.77 (m, 2H), 8.01 (s, 1H). 31P NMR (DMSO-d6): δ -6.18.
단계 6 - [2-[3-(3,4-다이클로로페닐)-5-옥소-2(트라이플루오로메틸)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]페닐] 이수소 포스페이트의 이나트륨 염의 합성. 메탄올(20 mL) 중 [2-[3-(3,4-다이클로로페닐)-5-옥소-2-(트라이플루오로메틸)-4H-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일]페닐] 이수소 포스페이트(0.47 g, 0.905 mmol)의 용액에 NaOMe(메탄올 중 25% 용액) (0.435 mL, 1.897 mmol)를 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 증발시키고, 잔류물을 헥산 및 에틸 아세테이트(9:1)의 혼합물로 분쇄하였다. 분리된 고체를 여과하고, 헥산으로 세척하고, 생성물을 진공 하에서 55℃에서 건조시켜 표제 생성물(0.480 g, 94%)을 얻었다. 1H NMR (D2O): δ 6.95-6.99 (m, 1H), 7.18-7.22 (m, 1H), 7.27-7.30 (m, 2H), 7.41-7.44 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 8.03 (s, 1H). 31P NMR (D2O): δ -0.33.
본 명세서 전반에 걸쳐, 예를 들어 용어 "약" 또는 "대략"의 사용에 의해, 근사(approximation)에 대한 언급이 이루어진다. 각각의 그러한 언급에 대해, 일부 실시 형태에서, 값, 특징, 또는 특성은 근사 없이 명시될 수 있음이 이해되어야 한다. 예를 들어, "약", "실질적으로", 및 "일반적으로"와 같은 수식어가 사용되는 경우, 이들 용어는, 그들의 범주 내에, 수식된 단어들을 그들의 수식어 없이 포함한다.
"실시 형태" 또는 "그 실시 형태"에 대한 본 명세서 전반에 걸친 언급은, 그러한 실시 형태와 관련하여 기재된 특정 특징, 구조 또는 특성이 적어도 하나의 실시 형태에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전반에 걸쳐 언급된 바와 같은, 인용된 어구 또는 이의 변형은 반드시 모두 동일한 실시 형태를 지칭하는 것은 아니다.
이러한 서면 개시 다음에 이어지는 청구범위는 이로써 본 서면 개시에 명백하게 포함되며, 이때 각각의 청구항은 개별적인 실시 형태로서 자체로 독립적이다. 본 개시는 독립항과 그의 종속항의 모든 순열을 포함한다. 더욱이, 이하의 독립항 및 종속항으로부터 도출될 수 있는 추가적인 실시 형태가 또한 본 서면 설명에 명백하게 포함된다.
본 발명의 기본 원리로부터 벗어남이 없이 전술된 실시 형태의 상세 사항에 대해 많은 변경이 이루어질 수 있음이 당업자에게는 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 범주는 하기 청구범위에 의해서만 결정되어야 한다.

Claims (79)

  1. 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 방법으로서,
    ADP-리보실화 인자 6(ARF6) 억제제, 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    약제학적으로 허용되는 담체
    를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하며,
    상기 유효량은 상기 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시키기에, 또는 상기 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애가 발생될 위험을 감소시키기에 유효한 양인, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애는 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 패혈증, 연령 관련 황반 변성, 류마티스성 관절염, 암, 말라리아, 또는 다발성 경화증 중 적어도 하나로부터 선택되는, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애는 에볼라(Ebola) 바이러스 감염, 마르부르크(Marburg) 바이러스 감염, 한타바이러스 감염, 또는 뎅기 바이러스 감염 중 적어도 하나로부터 선택되는 출혈성 열 바이러스 감염인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애를 갖는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함하며, 상기 환자는 증강된 ARF6 활성을 갖는, 방법.
  5. 안구 장애(ocular disorder)를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 방법으로서,
    ADP-리보실화 인자 6(ARF6) 억제제, 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    약제학적으로 허용되는 담체
    를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하며,
    상기 유효량은 상기 안구 장애의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시키기에, 또는 상기 안구 장애가 발생될 위험을 감소시키기에 유효한 양인, 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 안구 장애는 연령 관련 황반 변성, 당뇨병성 망막병증, 미숙아 망막병증, 또는 황반 부종 중 적어도 하나로부터 선택되는, 방법.
  7. 염증성 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 방법으로서,
    ADP-리보실화 인자 6(ARF6) 억제제, 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    약제학적으로 허용되는 담체
    를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하며,
    상기 유효량은 상기 염증성 장애의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시키기에, 또는 상기 염증성 장애가 발생될 위험을 감소시키기에 유효한 양인, 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 염증성 장애는 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 패혈증, 류마티스성 관절염, 또는 다발성 경화증 중 적어도 하나로부터 선택되는, 방법.
  9. ADP-리보실화 인자 6(ARF6)의 활성을 억제함으로써 치료가능한 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기 위한 방법으로서,
    ARF6 억제제, 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    약제학적으로 허용되는 담체
    를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하며,
    상기 유효량은 상기 ARF6의 활성을 억제함으로써 치료가능한 장애의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시키기에, 또는 상기 ARF6의 활성을 억제함으로써 치료가능한 장애가 발생될 위험을 감소시키기에 유효한 양인, 방법.
  10. 말라리아를 가진 환자를 치료하기 위한 방법으로서,
    ADP-리보실화 인자 6(ARF6) 억제제, 또는 ARF6 억제제의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    약제학적으로 허용되는 담체
    를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하며,
    상기 유효량은 상기 말라리아의 병리학적 효과 또는 증상을 감소시키기에 유효한 양인, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 말라리아는 뇌 말라리아인, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 인간인, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ARF6 억제제는 ARF6 억제제의 전구약물인, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ARF6 억제제는 화학식 I의 화합물 또는 화학식 II의 화합물:
    [화학식 I]
    Figure pct00039

    [화학식 II]
    Figure pct00040

    (상기 식에서,
    R1은 아릴 기 또는 사이클로알킬 기 중 적어도 하나로부터 선택되고;
    R2는 스페이서를 통해 커플링된 모르폴리노 기, 아릴 기, 스페이서를 통해 커플링된 아릴 기, 헤테로아릴 기, 불포화 사이클로알킬 기, 포화 사이클로알킬 기, 불포화 헤테로사이클릭 기, 포화 헤테로사이클릭 기, 할로겐화 알킬 기, 또는 사이클로프로필 기 중 적어도 하나로부터 선택되고;
    R3은 알킬 기, 사이클로알킬 기, 알콕시 기, 하이드록시 기, 할로 기, 니트로 기, 시아노 기, 알킨 기, 알킨 아미노 기, 포스페이트 기, 아릴 기, 헤테로아릴 기, 또는 케토 기 중 적어도 하나로부터 선택되고;
    산소를 통해 부착되어 있는 R4는 상기 산소를 함께 포함할 때, 독립적으로, 에스테르, 산소화(oxygenated) 에스테르, 옥사에스테르, 페길화(pegylated) 에스테르, 하이드록실화 에스테르, 알킬 에스테르, 카르복시알킬 에스테르, 카르복시 알케닐 에스테르, 방향족 에스테르, 헤테로방향족 에스테르, 아미노 에스테르, 아미노산 에스테르, 알킬아미노 에스테르, 카르보네이트, 알킬 카르보네이트, 카르바메이트, 알킬 카르바메이트, 아미노 카르바메이트, 알킬아미노 카르바메이트 중 적어도 하나로부터 선택되거나, 또는 R4는 설포네이트, 포스포네이트, 또는 1개, 2개, 또는 3개의 탄소 스페이서 중 하나를 통해 부착된 설포네이트 또는 포스포네이트 중 적어도 하나로부터 선택됨);
    이의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 방법.
  15. 제14항에 있어서, R1은 아릴 기이며, 상기 아릴 기는 하나 이상의 할로 기로 치환된, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 아릴 기는 하나 이상의 클로로 기로 치환된, 방법.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 할로겐화 알킬 기이며, 상기 할로겐화 알킬 기는 -CF3인, 방법.
  18. 제14항에 있어서, 상기 스페이서는 C1-C4 알킬 기인, 방법.
  19. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 알킬 기, 사이클로알킬 기, 알콕시 기, 하이드록시 기, 할로 기, 니트로 기, 시아노 기, 알킨 기, 알킨 아미노 기, 포스페이트 기, 아릴 기, 헤테로아릴 기, 또는 케토 기 중 적어도 하나인, 방법.
  20. 제19항에 있어서, R3은 수소, 하이드록시 기, 할로 기, 니트로 기, 시아노 기, 알킨, 알킨 아미노 기, 또는 포스페이트 기 중 적어도 하나인, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 할로 기는 플루오로 기, 클로로 기, 또는 브로모 기 중 적어도 하나인, 방법.
  22. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 알킨이며, 상기 알킨은 스페이서를 통해 상기 화학식 I의 화합물 또는 상기 화학식 II의 화합물에 커플링된, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 스페이서는 C1-C4 알킬 기인, 방법.
  24. 제14항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 L-글리신, L-알라닌, L-라이신 에스테르, 또는 포스페이트 기 중 적어도 하나인, 방법.
  25. 제14항에 있어서, 상기 화합물은 표 1 또는 표 2의 화합물들 중 적어도 하나를 포함하는, 방법.
  26. 약제학적 조성물로서,
    화학식 I의 화합물 또는 화학식 II의 화합물:
    [화학식 I]
    Figure pct00041

    [화학식 II]
    Figure pct00042

    (상기 식에서,
    R1은 아릴 기 또는 사이클로알킬 기 중 적어도 하나로부터 선택되고;
    R2는 스페이서를 통해 커플링된 모르폴리노 기, 아릴 기, 스페이서를 통해 커플링된 아릴 기, 헤테로아릴 기, 불포화 사이클로알킬 기, 포화 사이클로알킬 기, 불포화 헤테로사이클릭 기, 포화 헤테로사이클릭 기, 할로겐화 알킬 기, 또는 사이클로프로필 기 중 적어도 하나로부터 선택되고;
    R3은 알킬 기, 사이클로알킬 기, 알콕시 기, 하이드록시 기, 할로 기, 니트로 기, 시아노 기, 알킨 기, 알킨 아미노 기, 포스페이트 기, 아릴 기, 헤테로아릴 기, 또는 케토 기 중 적어도 하나로부터 선택되고;
    산소를 통해 부착되어 있는 R4는 상기 산소를 함께 포함할 때, 독립적으로, 에스테르, 산소화 에스테르, 옥사에스테르, 페길화 에스테르, 하이드록실화 에스테르, 알킬 에스테르, 카르복시알킬 에스테르, 카르복시 알케닐 에스테르, 방향족 에스테르, 헤테로방향족 에스테르, 아미노 에스테르, 아미노산 에스테르, 알킬아미노 에스테르, 카르보네이트, 알킬 카르보네이트, 카르바메이트, 알킬 카르바메이트, 아미노 카르바메이트, 알킬아미노 카르바메이트 중 적어도 하나로부터 선택되거나, 또는 R4는 설포네이트, 포스포네이트, 또는 1개, 2개, 또는 3개의 탄소 스페이서 중 하나를 통해 부착된 설포네이트 또는 포스포네이트 중 적어도 하나로부터 선택됨);
    이의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  27. 제26항에 있어서, R1은 아릴 기이며, 상기 아릴 기는 하나 이상의 할로 기로 치환된, 약제학적 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 상기 아릴 기는 하나 이상의 클로로 기로 치환된, 약제학적 조성물.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 할로겐화 알킬 기이며, 상기 할로겐화 알킬 기는 -CF3인, 약제학적 조성물.
  30. 제26항에 있어서, 상기 스페이서는 C1-C4 알킬 기인, 약제학적 조성물.
  31. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 알킬 기, 사이클로알킬 기, 알콕시 기, 하이드록시 기, 할로 기, 니트로 기, 시아노 기, 알킨 기, 알킨 아미노 기, 포스페이트 기, 아릴 기, 헤테로아릴 기, 또는 케토 기 중 적어도 하나인, 약제학적 조성물.
  32. 제31항에 있어서, R3은 수소, 하이드록시 기, 할로 기, 니트로 기, 시아노 기, 알킨, 알킨 아미노 기, 또는 포스페이트 기 중 적어도 하나인, 약제학적 조성물.
  33. 제32항에 있어서, 상기 할로 기는 플루오로 기, 클로로 기, 또는 브로모 기 중 적어도 하나인, 약제학적 조성물.
  34. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 알킨이며, 상기 알킨은 스페이서를 통해 상기 화학식 I의 화합물 또는 상기 화학식 II의 화합물에 커플링된, 약제학적 조성물.
  35. 제34항에 있어서, 상기 스페이서는 C1-C4 알킬 기인, 약제학적 조성물.
  36. 제26항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 L-글리신, L-알라닌, L-라이신 에스테르, 또는 포스페이트 기 중 적어도 하나인, 약제학적 조성물.
  37. 제26항에 있어서, 상기 화합물은 표 1 또는 표 2의 화합물들 중 적어도 하나를 포함하는, 약제학적 조성물.
  38. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 방법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 화학식 II의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  39. 약제학적 조성물로서,
    표 1 또는 표 2의 화합물들 중 적어도 하나를 포함하는 화합물; 또는
    이의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  40. 제26항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 혈관 누출, 혈관 염증, 또는 혈관신생에 관련된 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
  41. 제26항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 안구 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
  42. 제26항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 염증성 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
  43. 제26항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 ARF6의 활성을 억제함으로써 치료가능한 장애를 갖거나 이것이 발생될 위험이 있는 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
  44. 제26항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 말라리아를 가진 환자를 치료하기에 유효한 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
  45. 제40항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 인간인, 약제학적 조성물.
  46. 표 1 또는 표 2의 화학 구조 중 적어도 하나를 갖는 화합물.
  47. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-B 내지 NAV-AAR 또는 NAV-B′ 내지 NAV-AAR′ 중 적어도 하나인, 화합물.
  48. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-B인, 화합물.
  49. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-B′인, 화합물.
  50. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAD인, 화합물.
  51. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAD′인, 화합물.
  52. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAE인, 화합물.
  53. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAE′인, 화합물.
  54. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAF인, 화합물.
  55. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAF′인, 화합물.
  56. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAG인, 화합물.
  57. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAG′인, 화합물.
  58. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAH인, 화합물.
  59. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAH′인, 화합물.
  60. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAI인, 화합물.
  61. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAI′인, 화합물.
  62. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAJ인, 화합물.
  63. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAJ′인, 화합물.
  64. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAK인, 화합물.
  65. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAK′인, 화합물.
  66. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAL인, 화합물.
  67. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAL′인, 화합물.
  68. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAM인, 화합물.
  69. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAM′인, 화합물.
  70. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAN인, 화합물.
  71. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAN′인, 화합물.
  72. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAO인, 화합물.
  73. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAO′인, 화합물.
  74. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAP인, 화합물.
  75. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAP′인, 화합물.
  76. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAQ인, 화합물.
  77. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAQ′인, 화합물.
  78. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAR인, 화합물.
  79. 제46항에 있어서, 상기 화학 구조는 NAV-AAR′인, 화합물.
KR1020207008346A 2017-08-21 2018-08-21 Ａｒｆ6 억제제 및 관련 방법 KR20200134203A (ko)

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