MX2015004368A

MX2015004368A - N-[2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2h)-il]-3 ,5-difluorofenil}etil]-l-alaninato de terc-butilo o sal, hidrato, o solvato del mismo.

Info

Publication number: MX2015004368A
Application number: MX2015004368A
Authority: MX
Inventors: Stephen John Davies; Stéphane Pintat; David Festus Charles Moffat
Original assignee: Chroma Therapeutics Ltd
Priority date: 2012-10-17
Filing date: 2013-10-15
Publication date: 2015-06-10
Also published as: AU2013333636B2; EP3222616B1; US9388136B2; HUE035525T2; PT2909175T; CN104781235A; IN2015DN02721A; CA2888928A1; EP2909175B1; CA2888928C; DK3222616T3; CN106496106A; MX364782B; WO2014060742A1; ES2743768T3; CY1119080T1; KR20150067376A; CN106496106B; HK1211028A1; IL256560A

Abstract

La presente invención se refiere a un compuesto el cual es: N-[2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3 ,5-difluorofenil}etil)-L-alaninato de terc-butilo o una sal, hidrato o solvato del mismo. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto junto con uno o más portadores y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. El compuesto y composición son útiles para inhibir la actividad de una enzima cinasa p38 MAP. Como tal, puede ser usada en el tratamiento de una enfermedad autoinmune o inflamatoria, o una enfermedad proliferativa celular. Además, la invención proporciona un ácido producido por hidrólisis del grupo éster del compuesto de la invención. El ácido es N-[2-{4-[6-amino- 5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1( 2H)-il]-3,5- difluorofenil}etil) -L-alanina.

Description

DE O O SOLVATO DEL MISMO Campo de la Invención La invención se refiere a un compuesto de áster de aminoácido y a composiciones que comprenden el compuesto de áster de La invención también se refiere al uso del compuesto o composición en la inhibición de la enzima cinasa p38 la invención se refiere a un ácido producido por la hidrólisis del grupo áster del compuesto de la Antecedentes de la Invención La activación inapropiada de leucocitos que incluye macrófagos y neutrófilos que conduce a la producción de niveles elevados de citocinas tales como e es una característica de la patogénesis de varias enfermedades inflamatorias que incluyen artritis reu colitis enfermedad de enfermedad pulmonar obstructiva crónica por sus siglas en asma y y enfermedades proliferativas celulares con un componente La producción de citocinas por células inflamatorias es un resultado de la respuesta a una variedad de estímulos que conducen a la activación de un número de mecanismos de señalamiento Ref 255365 intracelular Prominentes entre estos está la superfamilia de la proteína cinasa activada por el mitógeno por sus siglas en que consiste de cinasas de señalización altamente conservadas que regulan en crecimiento diferenciación y respuesta al Las células de mamífero contienen al menos tres familias de la cinasa regulada por la señal extracelular por sus siglas en cinasas por sus siglas en y p38 MAPK llamada La p38 MAPK fue clonada primero después de su identificación como una cinasa que es fosforilada por tirosina después de la estimulación de monocitos por lipopolisacáridos por sus siglas en et Science Los homólogos adicionales de p38 de mamífero han sido descritos e incluyen p38b et Che r38g et y r38d et Mientras p38a y r38b son sobreexpresadas de forma r38g está restringido principalmente al músculo esqueleto y r38d es expresada predominantemente en pulmón y La liberación de citocinas por células de defensa hospedera y la respuesta de leucocitos a citocinas y otros estreses son a extensión variantes reguladas por p38 MAPK et FEBS En otros tipos de la p38 MAPK controla las respuestas de estrés tales como la producción de por células epiteliales bronquiales estimuladas por como la regulación ascendente de la molécula de adhesión celular en células endoteliales estimuladas por Después de la mediante la fosforilación dual de una porción TGY por las cinasas de especificidad dual MKK3 y la p38 MAPK ejerce sus efectos a través de la fosforilación de los factores de transcripción y otras La de la proteína activada por la cinasa MAP ha sido identificada como un objetivo para la fosforilación Se ha demostrado que los ratones et Cell carecen de niveles reducidos de de e en respuesta al choque endotóxico mediado por La regulación de los niveles de estas citocinas así como también de está al nivel del Los niveles de son regulados a través del control traduccional mediante los elementos ricos en AU del del ARNm del con señalización de incrementando la traducción de ARNm del La señalización de conduce a estabilidad del ARNm incrementada para y proteína inflamatoria del La determina la ubicación celular de p38 MAPK así como también la transducción de la señalización de p38 procesando una señal de localización nuclear en su término carboxilo y una señal de exportación nuclear como parte de su dominio autoinhibidor et EMBO En células las y p38 MAPK migran al citoplasma del esta migración ocurre solamente cuando la p38 MAPK es catalíticamente Se cree que este evento es accionado por la exposición de la señal de exportación nuclear de como un resultado de la fosforilación por p38 MAPK et la p38 MAPK ya sea directamente o conduce a la fosforilación de varios factores de transcripción que se cree median la incluyendo ATF los factores de transcripción el crecimiento y gen 153 inducible del daño al accesoria del factor de respuesta del y MEF2C potenciador del et Drug News Se ha demostrado en varios casos que la inhibición de la actividad de p38 MAPK por moléculas es útil para el tratamiento de varios estados de enfermedad mediados por la producción inapropiada de citocina que incluye artritis asma e isquemia Esta modalidad ha sido el sujeto de varias revisiones et Current Medicinal y Kumar et Nature Reviews Drug Discovery Los inhibidores de p38 MAPK han sido mostrados por ser eficaces en modelos animales de artritis tales como artritis inducida por colágeno en rata et y artritis inducida por adyuvante en ratas et En modelos murinos de lesión pulmonar inducida por el pretratamiento con un inhibidor de p38 MAPK reduce la liberación de en las vías respiratorias y edema pulmonar et Care 628 y Yang et La inhibición de p38 MAPK antes de la estimulación de ovalbúmina por sus siglas en en ratones sensibilizados con OVA disminuye la acumulación de citocinas y células inflamatorias en las vías respiratorias en un modelo alérgico de inflamación en las vías respiratorias et La actividad incrementada de cinasa p38 MAP ha sido observada en pacientes que sufren de enfermedad intestinal inflamatoria et Los inhibidores de p38 MAPK han sido mostrados por ser eficaces en modelos de rata de hipertrofia cardiaca et e isquemia focal cerebral et Los documentos WO y WO ambos describen áster de alfa aminoácido que son inhibidores de cinasa p38 En los compuestos el grupo áster es un grupo áster el cual es hidrolizable por una o más enzimas esterasas intracelulares a un grupo de ácido y los sustituyentes en carbono del áster del alfa aminoácido forman una cadena la cual es la cadena lateral de un alfa aminoácido natural o no Los compuestos descritos son declarados por ser inhibidores potentes y selectivos de p38 MAPK y y las isoformas y variantes de empalme de los mismos especialmente r38b y Los compuestos son de este modo de uso en la por en el tratamiento y profilaxis de trastornos inmunes e inflamatorios descritos en la Los compuestos son caracterizados por la presencia en la molécula de la porción de aminoácido o porción de áster de aminoácido el cual es hidrolizable por una carboxilesterasa Los compuestos tienen la porción de áster de aminoácido lipofílico a través de la membrana y son hidrolizados al ácido por las carboxilesterasas El producto de hidrólisis polar se acumula en la célula puesto que no cruza fácil la membrana las actividades de la cinasa p38 MAP de los compuestos son prolongadas y mejoradas dentro de la Los compuestos de tal invención están relacionados con los inhibidores de la cinasa p38 MAP abarcados por las descripciones en la Solicitud de Patente Internacional W003076405 pero difieren en que tienen la porción de éster de aminoácido referida El documento WO también describe que los compuestos con los cuales está relacionado incluyen aquellos los cuales se acumulan selectivamente en los Los macrófagos se conocen por jugar un papel clave en los trastornos inflamatorios a través de la liberación de citocinas en particular e Roon et Arthritis and En artritis reumatoide son contribuyentes principales al mantenimiento de la inflamación de la articulación y destrucción de la Los macrófagos también están involucrados en el crecimiento y desarrollo del tumor and Curr Drug Targets Inflamm Por lo los agentes que dirigen selectivamente la proliferación de las células de macrófago podrían ser de valor en el tratamiento del cáncer y la enfermedad autoinmune El objetivo especifico de tipos celulares podría esperarse conduzca a efectos secundarios La forma en la cual la porción de esterasa está ligada al inhibidor de cinasa p38 determina si es y por lo tanto si o no se acumula en diferentes tipos de los macrófagos contienen la carboxilesterasa humana mientras otros tipos de células no los En la fórmula general del documento WO cuando el nitrógeno de la porción esterasa no está directamente ligado a un carbonilo es cuando Y no es un radical C o el éster solamente será hidrolizado por y por lo tanto los inhibidores solamente se acumularán en los En la a menos que se especifique o el término macrófago o macrófagos será usado para denotar macrófagos incluyen macrófagos asociados con el El documento WO describe un grupo de compuestos específicos que caen dentro de las descripciones generales del documento WO pero no específica ente identificados o ejemplificados en Los compuestos presentan la propiedad de selectividad de macrófago discutida Breve Descripción de la Invención Los presentes inventores han encontrado que el compuesto de es sorprendentemente bueno en la actividad de la cinasa p38 Las pruebas han mostrado que el valor IC50 para la inhibición del éster de en sangre humana es significantemente inferior que el que podría esperarse dado los valores de IC50 para la inhibición del éster de en sangre humana observado para compuestos las pruebas llevadas a cabo por los inventores han demostrado que la biodisponibilidad del compuesto de la invención es mucho muy superior que la que podría haberse pronosticado a partir de compuestos estructuralmente Por la presente invención proporciona un compuesto el cual de o una hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto junto con uno o más portadores excipientes farmacéuticamente En otro la invención proporciona un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente para usarse en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por La presente invención también proporciona un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente para usarse en la inhibición de la actividad de una enzima cinasa p38 in vitro o in Además se proporciona un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente para usarse en la prevención o tratamiento de enfermedad o También se proporciona un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente para usarse en el tratamiento de una enfermedad proliferativa En otro la invención proporciona un método para inhibir la actividad de una enzima cinasa p38 en el cual el método comprende poner en contacto la enzima con una cantidad de un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente efectiva para tal También se proporciona un método para tratar o prevenir la enfermedad autoinmune o autoinflamatoria en un en el cual el método comprende administrar a tal sujeto una cantidad efectiva de un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define Además se proporciona un método para tratar una enfermedad proliferativa celular en un en el cual el método comprende administrar a tal sujeto una cantidad efectiva de un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define Tal tratamiento puede comprender aliviar o reducir la incidencia de la enfermedad proliferativa En aún otro la invención proporciona el uso de un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente en la manufactura de un medicamento para inhibir la actividad de una enzima cinasa p38 Además se proporciona el uso de un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente en la manufactura de un medicamento para la prevención o tratamiento de una enfermedad autoinmune o También se proporciona el uso de un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa La invención también proporciona un agente para inhibir la actividad de una enzima cinasa p38 MAP que comprende un compuesto como se define anteriormente o una composición como se define anteriormente como ingrediente El agente es típicamente para la prevención o tratamiento de enfermedad autoinmune o Alternativamente puede ser para el tratamiento de enfermedad proliferativa También proporcionado por la invención está un ácido el cual Descripción Detallada de la Invención La invención proporciona un compuesto el cual de El compuesto de la invención puede ser preparado en la forma de una hidrato o La invención de este modo también proporciona una hidrato o solvato del la sal es una sal farmacéuticamente Como se usa en la una sal farmacéuticamente aceptable es una sal con un ácido o base farmacéuticamente Los ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen tanto ácidos inorgánicos tales como ácido bromhídrico o nítrico como ácidos orgánicos tales como ácido bencensulfónico o Las bases farmacéuticamente aceptables incluyen hidróxidos de metal álcali sodio o y metal alcalino térreo bario o y bases orgánicas tales como alquilaminas y aminas Ejemplos de bases orgánicas adecuadas pero no se limitan colina Para una revisión en sales véase Handbook of Pharmaceutical and Use by Stahl and Wermuth Las sales adecuadas de los compuestos de la invención incluyen aquellas mencionadas en la presente como ejemplos de sales farmacéuticamente El término se usa la presente para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una cantidad estequiométrica de una o más moléculas de solvente farmacéuticamente por El término es empleado cuando tal solvente es Para evitar el compuesto de la invención puede ser usado en cualquier forma El compuesto de la invención incluye un centro El compuesto está típicamente en la forma del derivado de como se representa en el Ejemplo Sin el compuesto puede existir como el derivado o como una mezcla de las formas y Donde una mezcla está preferiblemente al menos o está presente como el derivado de Un esquema de reacción y proceso adecuado para la producción del compuesto de la con referencia a la sección de ejemplos la cual se discute Los materiales de partida son típicamente clorhidrato de de y El puede ser preparado usando el siguiente esquema de el cual es análogo al esquema de reacción 1 de la sección de Intermediario 2 El difluoronitrobenceno es comercialmente La etapa 1 requiere la adición de un grupo acetato de al anillo para al grupo La etapa 2 requiere la hidrólisis del grupo éster para formar el ácido El ácido es reducido a un alcohol primario en la etapa En la etapa 4 el grupo nitro es reducido a una El clorhidrato de 3 oxopropanimidotioato de puede ser preparado usando procedimientos experimentales descritos en el documento WO El de puede entonces ser sintetizado usando el siguiente esquema de el cual es análogo al esquema de reacción 2 de la sección de Ejemplo 1 En la etapa el y clorhidrato de 3 de se hacen reaccionar en conjunto para formar acetato de 2 En la etapa el ácido propiólico se agrega para formar acetato de En la etapa el grupo acetato es hidrolizado para dejar un alcohol y en la etapa 4 el grupo de alcohol resultante es oxidado a un El compuesto de la invención es entonces formado en la etapa por la adición de clorhidrato de de El clorhidrato de de es comercialmente La invención también proporciona composición farmacéutica que comprende el compuesto junto con uno o más portadores excipientes farmacéuticamente Tal composición farmacéutica contiene típicamente hasta en peso de un compuesto de la Más contiene hasta en peso de un compuesto de la Las composiciones farmacéuticas preferidas son estériles y libres de El compuesto de la invención puede ser administrado en una variedad de formas de De este puede ser administrado por ejemplo como suspensiones acuosas o polvos o gránulos Los compuestos de la invención también pueden ser administrados ya sea transdermalmente o por téenicas de Dependiendo del vehículo y concentración el fármaco puede ser ya sea suspendido o disuelto en el los adyuvantes tales como un anestésico conservador y agente pueden ser disueltos en el Los compuestos también pueden ser administrados como Los compuestos pueden ser administrados por inhalación en la forma de un aerosol mediante un inhalador o Un compuesto de la invención es formulado típicamente para administración con un portador o diluyente farmacéuticamente Por las formas orales sólidas pueden junto con el compuesto agentes por ciclodextrinas o ciclodextrinas por almidón de maíz o almidón de por ácido estearato de magnesio o agentes por gomas gomas de carboximetilcelulosa o agentes por ácido alginatos o glicolato almidón mezclas agentes tales como en sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas usadas en las formulaciones Tales preparaciones farmacéuticas pueden ser manufacturadas en una manera por por medio de recubrimiento de o procesos de recubrimiento de Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser emulsiones y Las preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de por jarabe de grasas comestibles hidrogenadas de agentes por monooleato de o vehículos no acuosas cuales pueden incluir aceites por aceite de aceite de coco ásteres aceitosos tales como o alcohol por de metilo o propilo o ácido y si se agentes saborizantes o colorantes Las soluciones pueden contener agentes por ciclodextrinas o ciclodextrinas Los jarabes pueden contener como por sacarosa o sacarosa con glicerina manitol Las suspensiones y emulsiones pueden contener como por una goma alginato de carboximetilcelulosa o alcohol Las suspensiones o soluciones para inyecciones intramusculares pueden junto con el compuesto un portador farmacéuticamente por agua aceite de oleato de por agentes por ciclodextrinas o ciclodextrinas y si se una cantidad adecuada de clorhidrato de Las soluciones para intravenosa o infusiones pueden contener como por agua estéril y agentes por ciclodextrinas o ciclodextrinas modificadas o preferiblemente pueden estar en la forma de soluciones salinas isotónicas Para aplicación tópica a la el fármaco puede ser elaborado en una loción o Las formulaciones de ungüento o crema las cuales pueden ser usadas para el fármaco son formulaciones convencionales bien conocidas en la por como se describe en los libres de texto estándares de farmacéuticos tales como la Farmacopea Para aplicación tópica por el fármaco puede ser formulado para suministro en aerosol por por atomizadores de chorro accionados por presión o atomizadores o preferiblemente por aerosoles medidos accionados por propulsores o administración libre de propulsores de polvos por cápsulas de inhalación u otros sistemas de suministro de Los tales por propulsores Frigen en el caso de aerosoles sustancias activas de la y rellenadores lactosa en el caso de inhaladores de pueden estar presentes en tales formulaciones inhaladas Para los propósitos de un gran número de aparatos están disponibles con los cuales los aerosoles del tamaño de partícula óptimo pueden ser generados y usando una téenica de inhalación la cual es apropiada para el Además del uso de adaptadores y contenedores en forma de pera y dispositivos automáticos que emiten un atomizador de humo para aerosoles en particular en el caso de los inhaladores en un número de soluciones técnicas están disponibles o los inhaladores por como se describe en la Solicitud de Patente Europea EP 0505 Para aplicación tópica al el fármaco puede ser elaborado en una solución o suspensión en un vehículo acuoso o no acuoso estéril Los por ejemplo amortiguadores tales como metabisulfito de sodio o edetato conservadores que incluyen agentes bactericidas y fungicidas tales como acetato fenilmercúrico o cloruro de benzalconio o y agentes espesantes tales como hipromelosa también pueden ser Una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención es administrado a un Se entenderá que el nivel de dosis específico para cualquier sujeto particular dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico la el peso salud tiempo de ruta de velocidad de combinación de fármaco y la severidad del tratamiento que se somete la enfermedad Los niveles de dosis óptima y la frecuencia de dosificación serán determinados usualmente por el ensayo Una dosis diaria típica es hasta 50 mg por kg de peso por desde hasta 50 mg por kg de peso de conformidad con la actividad del compuesto la peso y condiciones del sujeto a ser el tipo y severidad de la enfermedad y la frecuencia y ruta de los niveles de dosificación diarios son desde mg hasta 2 preferiblemente desde mg hasta 10 El compuesto de la invención es típicamente administrado al paciente en una cantidad no La invención también proporciona un compuesto como se define en la presente o una composición como se define en la presente para usarse en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por Los compuestos y composiciones de la invención se han encontrado por inhibir la actividad de una enzima cinasa p38 Los compuestos y composiciones son por lo tanto útiles en la prevención y tratamiento de enfermedades y condiciones moduladas por la actividad de cinasa p38 Las enfermedades y condiciones moduladas por la actividad de la cinasa p38 MAP incluyen enfermedad celular tal como cáncer y enfermedad de poliglutamina tal como enfermedad de enfermedad neurodegenerativa tal como enfermedad de enfermedades autoinmune tal co o artritis enfermedad enfermedad enfermedad y las secuelas inflamatorias de la Ejemplos particulares son enfermedad proliferativa enfermedad autoinmune y enfermedad La enfermedad autoinmune a menudo tiene un componente Tales condiciones incluyen alopecia universal diseminada enfermedades positivas enfermedad de enfermedad de síndrome de fatiga espondilitis anemia hidradenitis hepatitis ooforitis enfermedad enfermedad del intestino enfermedad de diabetes mellitus tipo síndrome de arteritis de células síndrome del Buen enfermedad de síndrome de enfermedad de enfermedad de lupus eritematosos colitis poliarteritis enfermedad del tejido conectivo esclerosis miastenia síndrome opsoclono neuritis tiroiditis de poliarteritis artritis síndrome de síndrome de arteritis granulomatosis de anemia hemolítica autoinmune cistitis enfermedad de colitis ulcerativa y Otras condiciones inflamatorias las cuales pueden ser prevenidas o tratadas con los compuestos y composiciones de la invención por hidradenitis peritonoitis prostatistis y rechazo al trasplante involucra órganos tales como páncreas células de médula intestino injertos heterólogos de homoinjertos de y xenoinjertos de la válvula enfermedad del y enfermedad de injerto contra pancreatitis pancreatitis síndrome de angustia respiratoria síndrome de hiperplasis adrenal tiroiditis no hipercalcemia asociada con dermatitis hpertetiformis eritema severo dermatitis dermatitis rinitis alérgica estacional o asma dermatitis de dermatitits reacciones de hipersensibilidad al conjuntivitis herpes zoster iritis y neuritis sarcoidosis quimioterapia por tuberculosis pulmonar fulminante o trombocitopenia púrpura idiopática en trombocitopenia secundaria en anemia hemolítica adquirida leucemia y linfomas en leucemia aguda de enteritis vasculitis esclerosis enfermedad pulmonar obstructiva rechazo al trasplante de órgano cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante Los compuestos y composiciones de la invención son útiles en la prevención y tratamiento de enfermedades y condiciones inflamatorias y Las enfermedades y condiciones inflamatorias y autoinmunes las cuales pueden ser tratadas usando los compuestos y composiciones de la invención incluyen artritis artritis diabetes tipo enfermedad intestinal lupus eritematosis e inflamación que acompaña a acondiciones infecciosas enfermedad de colitis enfermedad pulmonar obstructiva esclerosis dermatitis y enfermedad de injerto contra Los compuestos y composiciones de la invención son también útiles en el tratamiento de una enfermedad proliferat iva por Ejemplos de cánceres los cuales pueden ser tratados incluyen cáncer de cáncer de cáncer de cáncer cáncer cáncer de cáncer linfoma y Por los cánceres los cuales pueden ser tratados incluyen cáncer de cáncer de cáncer cáncer de cáncer de cáncer linfoma y Por los cánceres los cuales pueden ser tratados incluyen cáncer de cáncer de cáncer cáncer de cáncer de cáncer linfoma o melanoma La invención también se refiere a un ácido el cual El ácido puede ser preparado por hidrólisis del compuesto de la Como se discute en la el compuesto de la invención es selectivo del De este el grupo áster del compuesto de la invención es hidrolizable por células que contienen la carboxilesterasa humana y no por células que contienen o El ácido es por lo tanto producido dentro de las células que contienen en hidrólisis del grupo éster del compuesto de la invención y el ácido selectivamente se acumula dentro de tales La presente invención es además ilustrada en los Ejemplos los cuales Ejemplos El compuesto de la invención puede ser preparado de conformidad con el siguiente Abreviaturas CDI carbonildiimidazol DCM diclorometano DMF dimetilformamida EtOAc acetato de etilo HCl ácido clorhídrico LCMS cromatografía líquida de alta de masas MeOH metanol sulfato de magnesio Na2C03 carbonato de sodio NaHC03 carbonato hidrógeno de sodio NMR resonancia magnética nuclear STAB triacetoxiborohidruro de sodio THF tetrahidrofurano g mg mL mmol Los reactivos y solventes comercialmente disponibles son usados sin purificación adicional Los solventes se removieron usando un evaporador rotatorio Buchi La irradiación de microondas se llevó a cabo usando un sintetizador de microondas de Biotage La purificación de compuestos por columna de cromatografía instantánea se realizó usando gel de tamaño de partícula obtenido de Se registraron espectros de RMN en un espectrómetro AB 300 en solventes Los cambios químicos son en partes por Se realizó análisis de cromatografía de capa delgada con placas Kieselgel 60 F254 y se visualizó usando luz Se realizó HPLC MS analítico en un sistema Agilent HP 1100 LC usando columnas de fase inversa Luna C18 50 x gradiente B de ácido B de ácido durante flujo Se registraron los espectros UV a 220 y 254 nm usando un detector G1315B Se obtuvieron los espectros de masa sobre el intervalo 150 a 800 en un detector SL Los datos se integraron y reportaron usando software Browser de Datos ChemStation y Intermediarios Intermediario clorhidrato de de El Intermediario 1 puede ser preparado usando procedimientos experimentales descritos en WO Intermediario El intermediario 2 se sintetizó usando la ruta mostrada en el Esquema de reacción 1 F F 2 Esquemade Reacción1 Etapa 1 de Una solución de difluoronitrobenceno 157 y cloroacetato de 267 en D F anhidro se agregó por goteo durante una hora a una suspensión fría de potasio 549 en DMF anhidro bajo La mezcla de reacción se agitó a por se apagó con HCl 2N y se extrajo con heptanos Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua salmuera se secaron se filtraron y concentraron bajo presión reducida para dejar un aceite La purificación por cromatografía en columna de EtOAc en proporcionó un aceite amarillo Otros dos lotes g y g de proporcionaron g y g del producto Los RMN de todos los tres lotes mostraron una mezcla del compuesto deseado y cantidades pequeñas de impurezas no Los 3 lotes se combinaron y usaron en la siguiente etapa sin purificación RMN Etapa 2 ácido Se agregó ácido trifluoroacético por goteo durante 20 minutos a una solución fría de de 305 en DCM Al término de la la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó por 3 La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida para dejar un sólido marrón La trituración con heptanos proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo 67 de rendimiento durante dos RMN no Etapa 3 Complejo de dimetilo 368 se agregó por goteo durante 20 minutos a una solución fría de ácido 245 en THF anhidro bajo Después del término de la la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura se agitó por 16 se enfrió a 0 cuidadosamente se apagó con MeOH y se concentró bajo presión reducida dejar un aceite La purificación por cromatografía instantánea seca de EtOAc en proporcionó el compuesto del título como un aceite anaranjado 78 de RMN br Etapa 4 Se disolvió 191 en EtOAc El recipiente de reacción se evacuó y se rellenó con nitrógeno tres Se agregó paladio en carbono en y el recipiente se evacuó y se rellenó con nitrógeno tres el recipiente se evacuó y se rellenó con hidrógeno y se equipó con un balón que contiene se agitó a temperatura ambiente bajo hidrógeno por 15 el balón de hidrógeno se rellenó y la mezcla se agitó por unas 25 horas La mezcla de reacción se filtró a través de y lo filtrado se concentró bajo presión reducida para dejar un aceite La purificación por cromatografía instantánea seca de EtOAc en proporcionó el compuesto del título como un sólido beige 62 de RMN y no Ejemplo de El ejemplo 1 se sintetizó usando la ruta mostrada en el Esquema de reacción 2 1 Esquema de Reacción 2 Etapa 1 acetato de Se agregó 120 a una solución de clorhidrato de 114 en ácido acético glacial La mezcla de reacción se agitó a 80 por horas y se agregó anhídrido acético 228 Después uno 45 minutos adicionales a 80 la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dejar un aceite La trituración con EtOAc proporcionó un sólido el cual se lavó con éter Lo sólido se recuperó en una solución acuosa saturada de y vigorosamente se agitó por 30 Un sólido se recolectó por se lavó con agua y se dejó secar bajo presión reducida para proporcionar el compuesto del título como un sólido beige 52 de 397 Etapa 2 acetato de 2 Se agregó ácido propiólico 88 por goteo durante 5 minutos a una solución fría de CDI 88 en THF anhidro bajo Después de terminada la la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó por una Se agregó una solución de acetato de 59 en THF anhidro y la mezcla de reacción se agitó a reflujo por La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se dejó reposar por Se trataron ácido propiólico 88 CDI 88 y THF como se describe anteriormente y se agregó a la mezcla de la cual subsecuentemente se agitó a reflujo por unas 6 horas La mezcla de reacción después se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dejar un aceite La purificación por cromatografía instantánea seca en MeOH en dio un sólido marrón el cual se purificó adicionalmente por trituración con EtOAc para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo 28 de LCMS 449 y 471 Etapa 3 Se suspendió acetato de difluorofeniljetilo 17 en 6N y la mezcla de reacción se sometió a reflujo por Un sólido se recolectó por se recuperó en una solución acuosa saturada de y vigorosamente se agitó por 30 Un sólido se recolectó por se lavó con agua y se secó en un horno a vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido 407 y 429 no visible Etapa 4 Se agregó peryodinano 4 a una suspensión de en DCM La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 se apagó con una solución acuosa saturada de y una solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio y vigorosamente se agitó por 30 La capa acuosa se separó y se extrajo adicionalmente con DCM Los extractos orgánicos combinados se secaron si filtraron y se concentraron bajo presión reducida para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón pálido Esto se usó sin purificación adicional en la siguiente Etapa 5 de Se agregaron clorhidrato de de butilo y STAB a una solución de La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por se apagó con una solución acuosa saturada de y vigorosamente se agitó por 20 La capa acuosa se separó y se extrajo adicionalmente con EtOAc Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera se secaron se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para dejar un aceite La purificación por cromatografía en columna en MeOH en proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo pálido 78 de rendimiento durante dos pureza 98 534 R N y no visible Medición de actividad biológica Actividad de Cinasa MAP p38 La capacidad de los compuestos para inhibir una actividad de cinasa a MAP p38 se midió en un ensayo realizado por Upstate En un volumen de reacción final de 25 la cinasa a MAP p38 se incubó con Tris 25 mM pH EGTA de proteína básica de acetato Mg 10 mM y específica aproximada 500 concentración como al La reacción se inició por la adición de la mezcla Después de la incubación por 40 minutos a temperatura la reacción se detuvo por la adición de 5 de una solución al de ácido 10 m? de la reacción entonces se descubrió en un Filtermat P30 y se lavó tres veces por 5 minutos en ácido fosfórico 75 mM y una vez en metanol antes del secado y conteo por Se generaron puntos de datos por duplicado de unas series de diluciones log de una solución base en Se hicieron nueve etapas de diluciones desde una concentración superior de 10 y no se incluyó un Se realizó el ensayo enlace de filtro radiométrico estándar a una concentración ATP o cercana el Los datos de conteos de escintilación se recolectaron y se sometieron a análisis de ajuste libre por el software A partir de la curva se determina y reporta el de inhibición dando la Estimulación LPS de células Las células THP se colocaron en placas tratadas de cultivo de tejido con fondo en V de 96 pocilios de 100 a una densidad de 4xl04 y se incubaron a en de por 16 horas después de la adición del inhibidor en 100 del medio de cultivo de las células se estimularon con LPS de coli Sig a una concentración final de 1 y se incubó a en de CO2 por 6 Se midieron los niveles de de los sobrenadante libre de célula por ELISA de intercalado Systems Estimulación PLS de sangre completa humana Se tomó sangre completa por punción venosa usando vacutainers heparinizados y se diluyó en un volumen igual de medio de cultivo de tejido RPMI164 0 Se colocaron 100 m? en una placa tratada de medio de cultivo de 96 pocilios con fondo en forma de horas después de la adición del inhibidor en 100 m? de medio la sangre se estimuló con LPS de E coli a una concentración final de 100 y se incubó a en de CO2 por 6 Se midieron los niveles de de los sobrenadantes libre de célula por ELISA de intercalado Systems Exposición de plasma en ratones Los compuestos se formularon en de de en agua usando el siguiente los compuestos se disolvieron completamente en de DMSO y después se agregó la solución de Lo precipitado fino formado se por la adición de acuoso y el pH se ajustó a 4 con hidróxido de sodio Cada compuesto se administró oralmente a 10 en un volumen de dosis total de 5 a ratones CD1 machos Se usaron tres ratones para cada punto de Las muestras de sangre se recuperaron en los siguientes puntos de 240 y 360 por punción cardiaca bajo anestesia Las muestras de sangre se recolectaron en tubos que contienen y se Las muestras se hacen girar a x g por 2 El plasma se aspiró y se Las muestras de plasma se prepararon por precipitación de proteína usando tres volúmenes de acetonitrilo que contiene el estándar Los sobrenadantes se analizaron por LCMS API bomba binaria HP CTC La cromatografía se basó en una columna Acentis C8 y una fase móvil de de acetonitrilo en agua de ácido Se calculó la exposición de la concentración de plasma contra el perfil de tiempo usando Solutions PK Research Tabla 1 Actividad Biológica del Compuesto de la Invención y Compuestos Estructuralmente Relacionados Columnas A hasta D proporcionan datos para lo siguiente A ensayo de enzima de áster A p38 IC50 B ensayo de enzima del ácido A p38 IC50 C inhibición de IC50 y D inhibición de éster completa IC50 Tabla 2 Exposición de plasma en ratones Conclusiones La tabla 1 demuestra que el compuesto del presente inventor es un buen inhibidor de cinasa p3 los valores IC50 para inhibición de a éster en células y sangre humana son muy En la inhibición de éster en sangre humana es significativamente menor que la que se podría esperar dando los valores IC50 para inhibición de éster en sangre humana observada para compuestos Los datos AUC presentados en la Tabla 2 muestran que la biodisponibi 1idad del compuesto de la invención es mucho mayor que la de los compuestos conocidos estructuralmente Se hace constar que con relación a esta el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada es el que resulta claro de la presente descripción de la insufficientOCRQuality

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un compuesto caracterizado porque es: N-[2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenil}etil)-L-alaninato de tere-butilo, o una sal, hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable.

2. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, junto con uno o más portadores y/o excipientes farmacéuticamente aceptables.

3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una composición de conformidad con la reivindicación 2, para usarse en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por terapia.

4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una composición de conformidad con la reivindicación 2, para usarse en la inhibición de la actividad de una enzima cinasa p38 MAP in vitro o in vivo.

5. Un compuesto o composición para usarse de conformidad con la reivindicación 4, en donde el compuesto o composición es para usarse en la prevención o tratamiento de enfermedad autoinmune o inflamatoria.

6. Un compuesto o composición para usarse de conformidad con la reivindicación 4 o 5, en donde el compuesto o composición es para usarse en la prevención o tratamiento de artritis reumatoide, artritis psoriática, diabetes tipo 1, asma, enfermedad del intestino inflamatorio, lupus eritematoso sistémico, inflamación que acompaña condiciones infecciosas, psoriasis, enfermedad de Crohns, colitis ulcerativa, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, esclerosis múltiple, dermatitis atópica, o enfermedad de injerto contra hospedero.

7. Un compuesto o composición para usarse de conformidad con la reivindicación 4, en donde el compuesto o composición es para usarse en el tratamiento de una enfermedad proliferativa celular.

8. Un compuesto o composición para usarse de conformidad con la reivindicación 4 o 7, en donde el compuesto o composición es para usarse en el tratamiento de cáncer.

9. Un compuesto o composición para usarse de conformidad con la reivindicación 4, 7 u 8, en donde el compuesto o composición es para usarse en el tratamiento de cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer renal, linfoma o melanoma.

10. Un método para inhibir la actividad de una enzima cinasa p38 MAP, caracterizado porque comprende poner en contacto la enzima con una cantidad de un compuesto como se define de conformidad con la reivindicación 1 o una composición como se define de conformidad con la reivindicación 2 efectiva para tal inhibición.

11. Un método para tratar o prevenir la enfermedad autoin une o autoinflamatoria en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar a tal sujeto una cantidad efectiva de un compuesto como se define de conformidad con la reivindicación 1 o una composición como se define de conformidad con la reivindicación 2.

12. Un método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque es para el tratamiento o prevención de artritis reumatoide, artritis psoriática, diabetes tipo 1, asma, enfermedad intestinal inflamatoria, lupus eritematoso sistémico, inflamación que acompaña condiciones infecciosas, psoriasis, enfermedad de Crohns, colitis ulcerativa, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, esclerosis múltiple, dermatitis atópica, o enfermedad de injerto contra hospedero.

13. Un método para tratar, aliviar o reducir la incidencia de enfermedad proliferativa celular en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar a tal sujeto una cantidad efectiva de un compuesto como se define de conformidad con la reivindicación 1 o una composición como se define de conformidad con la reivindicación 2.

14. Un método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque es para tratar, aliviar o reducir la incidencia de cáncer.

15. Un método de conformidad con la reivindicación 13 o 14, caracterizado porque es para tratar, aliviar o reducir la incidencia de cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer renal, linfoma o melanoma.

16. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una composición de conformidad con la reivindicación 2, en la manufactura de un medicamento para inhibir la actividad de una enzima cinasa p38 MAP.

17. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una composición de conformidad con la reivindicación 2, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad autoinmune o inflamatoria.

18. El uso de conformidad con la reivindicación 17, en donde la enfermedad es artritis reumatoide, artritis psoriática, diabetes Tipo 1, asma, enfermedad del intestino inflamatorio, lupus eritematoso sistémico, inflamación que acompaña las condiciones infecciones, psoriasis, enfermedad de Crohns, colitis ulcerativa, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, esclerosis múltiple, dermatitis atópica, o enfermedad de injerto contra hospedero.

19. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una composición de conformidad con la reivindicación 2, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa celular.

20. El uso de conformidad con la reivindicación 19, en donde la enfermedad es cáncer.

21. El uso de conformidad con la reivindicación 19 o 20, en donde la enfermedad es cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer renal, linfoma o melanoma.

22. Un ácido, caracterizado porque es: N-[2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-difluorofenil}etil)-L-alanina.