EA017198B1

EA017198B1 - Гидроксаматы в качестве ингибиторов гистон-деацетилазы

Info

Publication number: EA017198B1
Application number: EA200900617A
Authority: EA
Inventors: Дэвид Фестус Чарльз Моффат; Франческа Энн Дэй; Санджей Ратилал Пэтел; Эндрю Джеймс Белфилд; Элистейр Дэвид Грэм Дональд; Алан Хорнсби Дэвидсон; Алан Гастингс Драммонд
Original assignee: Хрома Терапьютикс Лтд.
Priority date: 2006-10-30
Filing date: 2006-10-30
Publication date: 2012-10-30
Also published as: KR20090087013A; US8962825B2; MX2009004279A; EA200900617A1; JP2010508255A; US20100317678A1; IL198263A0; CN101553475A; CA2668070A1; WO2008053131A1; EP2077999B1; ES2509342T3; JP5043120B2; EP2077999A1; AU2006350475A1; BRPI0622100A2; CN101553475B

Abstract

Изобретение относится к соединениям формулы (I) и их солям, где m равен 1 и n равен 0 или 1; Q, V и W независимо обозначают -N= или -С=; В обозначает двухвалентный радикал, выбранный из (В2) и (В6), где связь, отмеченная *, связана с кольцом, содержащим Q, V и W; А обозначает циклогексильное или фенильное кольцо; -[Linker]- обозначает связь, -CH-NH-CH- или -NH-CH-; Zобозначает радикал формулы RRCHNH- или RRCHNH-СН-, где Rобозначает карбоксильную группу (-СООН) или сложноэфирную группу, выбранную из группы сложноэфирных групп формулы -(C=O)OR, где Rпредставляет собой RRCH-, где Rи Rвместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют моноциклическое карбоциклическое кольцо из 3-7 атомов в кольце; Rобозначает боковую цепь природной или неприродной альфа-аминокислоты, причем боковая цепь неприродной альфа-аминокислоты выбрана из фенильной, циклогексилметильной, циклогексильной, пиридин-3-илметильной, трет-бутоксиметильной, трет-бутильной, 1-бензилтио-1-метилэтильной, 1-метилтио-1-метилэтильной, 1-меркапто-1-метилэтильной и фенилэтильной. Соединения изобретения представляют собой ингибиторы гистон-деацетилазы и пригодны для лечения болезней, связанных с пролиферацией клеток, включая рак.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение относится к соединениям, которые ингибируют членов семейства гистондеацетилаз, являющихся ферментами, и к их применению для лечения болезней, связанных с пролиферацией клеток, включая различные виды рака, полиглютаминовые болезни, например болезнь Хантингтона, нейродегенеративные болезни, например болезнь Альцгеймера, аутоиммунные болезни, например ревматоидный артрит и отторжение трансплантатов различных органов, диабет, гематологические заболевания, воспалительные болезни, сердечно-сосудистые болезни, атеросклероз и остаточные воспалительные явления, вызванные инфекцией.

Сведения о предшествующем уровне техники

В эукариотных клетках ДНК набита гистонами с образованием хроматина. Около 150 пар оснований ДНК дважды окружают октамер гистонов (каждые два гистона 2 А, 2В, 3 и 4) с образованием нуклеосомы, основной единицы хроматина. Упорядоченная структура хроматина нуждается в модификации для осуществления транскрипции ассоциированных генов. Регуляция транскрипции представляет собой ключевой момент дифференциации пролиферации и апоптоза и, следовательно, жестко контролируется. Контролирование изменений в структуре хроматина (и, следовательно, транскрипции) опосредовано ковалентной модификацией гистонов, наиболее выраженной в Ν-концевых участках. Ковалентная модификация (например, метилирование, ацетилирование, фосфорилирование и убиквинирование) боковых цепей аминокислот опосредована ферментивно (обзор ковалентной модификации гистонов и их роли в регуляции транскрипции можно найти в Вегдег 8.Ь. 2001, Опсодепе 20, 3007-3013; см. Огипкеш М. 1997, №1иге 389, 349-352; Ао1йе А.Р. 1996, 8с1епсе 272, 371-372; и Аапке Р.А. е! а1., 1997, Ттепкк Вюсйет. 8с1. 22, 128-132, там описан обзор методов ацетилирования гистонов и транскрипции).

Ацетилирование гистонов связано с такими участками хроматина, которые являются транскрипционно активными, в то время как нуклеосомы с низким уровнем ацетилирования обычно не активны в процессе транскрипции. Статус ацетилирования гистонов контролируется двумя классами ферментов с противоположными активностями: гистон-ацетилтрансферазами (НАТ§) и гистон-деацетилазами (НОАСк). Полагают, что в трансформированных клетках неподходящая экспрессия НОАСк приводит к сайленсингу опухоль-супрессорных генов (обзор возможной роли НОАСк в генезисе опухолей см. Отау 8.О. и Тей В.Т. 2001, Сшт. Мо1. Мек, 1, 401-129). Ингибиторы ферментов НОАС описаны в литературе, показано, что они индуцируют транскрипционную реактивацию некоторых генов, что приводит к ингибированию пролиферации раковых клеток, индукции апоптоза и ингибированию роста опухолей у животных (обзор см. Ке11у А.К. е! а1., 2002, Ехрег! Ορίη. 1пуе5йд Бтидк, 11, 1695-1713). Эти факторы позволяют предположить, что ингибиторы НОАС имеют терапевтический потенциал при лечении пролиферативных заболеваний, таких как рак (Кгатег О.Н. е! а1., 2001, Ттепкк Епкостшок 12, 294-300, У1ди8Йш Ό.Μ. апк Соотйез КС. 2002, Апйсапсег Бтидз 13, 1-13).

Кроме того, в других работах утверждается, что аберрантная активность НО АС или ацетилирование гистонов вовлечены в развитие следующих заболеваний и расстройств: полиглютаминовых болезней, например болезни Хантингтона (Нидйек В.Е. 2002, Сигг Вю1. 12, В141-В143; МсСатрйе11 А. е! а1., 2001, Ргос. 8ос. №!1. Асак. 8ск 98, 15179-15184; Носк1у Е. е! а1. 2003 Ргос. 8ос. №!1. Асак. 8ск 100, 20412046), других нейродегенеративных болезней, например болезни Альцгеймера (Нетреп В. апк Впоп 1.Р. 1996, 1. №игора1йо1. Ехр. №иго1. 55, 964-972), аутоиммунных болезней и отторжения трансплантатов различных органов (8коу 8. е! а1., 2003, В1оок, 101 1430-1438; МЦйта Ν. е! а1., 2003, 1. С1ш. 1пуе§! 111, 539-552), диабета (Мокеу А.Ь. Апк Охсап 8. 2003, 1. Вю1. Сйет. 278, 19660-19666) и осложнений при диабете, инфекций (включая протозоальные инфекции (Оагкш-Вайгау 8.1. е! а1., 1996, Ргос. 8ос.

Асак. 8с1. 93, 13143-13147)) и гематологических нарушений, включая талассемию (Ай! О. е! а1., 2003, В1оок, 101, 2001-2007). Наблюдения, описанные в этих источниках, позволяют предположить, что ингибирование НОАС будет приводить к терапевтическому эффекту при лечении этих и других родственных болезней.

Были предложены многие виды ингибиторов НОАС, несколько таких соединений в настоящее время проходят клинические испытания при лечении рака. Например, такие соединения описаны в следующих патентных источниках: И8 5369108 и АО 01/18171; АО 03/076400; И8 4254220; АО 03/076401; АО 01/70675; АО 03/076421; АО 01/38322; АО 03/076430; АО 02/30879; АО 03/076422; АО 02/26703; АО 03/082288; АО 02/069947; АО 03/087057; АО 02/26696; АО 03/092686; АО 03/082288;

АО 03/066579; АО 02/22577; АО 03/011851; АО 03/075929; АО 04/013130; АО 03/076395;

АО 04/110989; АО 04/092115; АО 05/007091; АО 04/0224991; АО 05/030704; АО 05/014588;

АО 05/013958; АО 05/018578; АО 05/028447; АО 05/019174; АО 05/02690; АО 05/004861.

Многие из ингибиторов НОАС, известных из уровня техники, имеют структуру шаблона, которая может быть представлена формулой (А):

К

[Цпкег]—СОМНОН где кольцо А представляет собой карбоциклическую или гетероциклическую кольцевую систему с возможными заместителями В и [Ыпкет] является линкерным радикалом различного типа. Гидроксамат

- 1 017198 ная группа, действующая как группа, связывающая металл, взаимодействующая с ионам металла в активном сайте фермента НЭЛС, который расположен в основании кармана, содержащего ион металла, причем радикал [Ыикег] простирается вглубь этого кармана, соединяя А с группой гидроксамовой кислоты, связывающей металл. В уровне техники и в некоторых случаях в данном изобретении кольцо или кольцевая система А иногда называется главной группой ингибитора.

В международной заявке РСТ/СВ 2006/001779 описан и заявлен новый класс ингибиторов НЭЛС, структура которых соответствует обобщенной формуле шаблона (А). Этот новый класс состоит из соединений формулы (В) и их солей, Ν-окисей, гидратов и сольватов:

---[1лпкег1]—В—рДпкег2]

О

где О, V и независимо обозначают -Ν= или -С=;

В обозначает двухвалентный радикал, выбранный из (В1)-(В5).

(В1) (В2)

-О ΌΟ(В4) (В5) где связь, отмеченная *, связана с кольцом, содержащим О, V и через [Ьшкег1], а связь, отмеченная **, связана с А через [Ыпкег2], А обозначает возможно замещенную моно-, би- или трициклическую карбоциклическую или гетероциклическую кольцевую систему и -[Ьшкег1]- и -[Ыикег2]- независимо обозначают связь или двухвалентный линкерный радикал.

Сущность изобретения

Данное изобретение основано на установлении того факта, что введение эфирной группы аминокислоты в молекулярный шаблон (В) ингибитора НЭЛС и некоторые структурно подобные шаблоны облегчает проникновение агента через клеточную мембрану и при этом приводит к тому, что внутриклеточная активность карбоксилэстеразы вызывает гидролиз сложного эфира с высвобождением родительской кислоты. Будучи заряженной, кислота не легко транспортируется из клетки, где она аккумулируется с увеличением внутриклеточной концентрации активного ингибитора НЭЛС. Это приводит к увеличению активности и продолжительности действия. Следовательно, изобретение предусматривает класс соединений, которые представляют собой конъюгаты альфа-аминокислот структур (В) и некоторые родственные структуры. Сложный эфир альфа-аминокислоты является субстратом для внутриклеточной карбоксилэстеразы (называемой здесь также эстеразным мотивом). Такие конъюгаты и соответствующие деэтерифицированные родительские кислоты могут применяться при лечении таких болезней, как рак, которые выигрывают от внутриклеточного ингибирования НЭЛС.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Согласно данному изобретению предусмотрено соединение формулы (I) или его соль

где т равен 1;

η равен 0 или 1;

О, V и независимо обозначают -Ν= или -С=;

В обозначает двухвалентный радикал, выбранный из (В2) и (В6)

(Β2) (^В6) где связь, отмеченная *, связана с кольцом, содержащим О, V и ^;

А обозначает циклогексильное или фенильное кольцо;

-[Ьшкег]- обозначает связь, -СН₂^Н-СН₂- или -ΝΗ-СН^;

Ζ¹ обозначает радикал формулы Β|Β₂СΗNΗ- или Κ.1Κ.₂СΗNΗ-СΗ₂-, где К.1 обозначает карбоксильную группу (-СООН) или сложноэфирную группу, выбранную из группы сложноэфирных групп формулы -(С=О)ОК₉, где К₉ представляет собой К₇К₈СН-, где К- и К₈ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют моноциклическое карбоциклическое кольцо из 3-7 атомов в кольце; и

К₂ обозначает боковую цепь природной или неприродной альфа-аминокислоты, причем боковая

- 2 017198 цепь неприродной альфа-аминокислоты выбрана из фенильной, циклогексилметильной, циклогексильной, пиридин-3-илметильной, трет-бутоксиметильной, трет-бутильной, 1-бензилтио-1-метилэтильной, 1метилтио-1-метилэтильной, 1-меркапто-1-метилэтильной и фенилэтильной.

Хотя вышеприведенное определение включает соединения с высоким молекулярным весом, предпочтительно в соответствии с общими принципами медицинской химии, чтобы соединения, которых касается данное изобретение, имели молекулярный вес не более 600.

Согласно другому аспекту данное изобретение предусматривает применение соединения формулы (I), описанного выше, или его соли для получения композиции для ингибирования активности гистондеацетилазы.

Соединения, которых касается данное изобретение, могут быть применены для ингибирования активности гистон-деацетилазы ех νίνο или ίη νίνο.

Согласно одному аспекту данного изобретения соединения по изобретению могут быть применены для получения композиции для лечения болезни, связанной с пролиферацией клеток, например пролиферацией раковых клеток, и аутоиммунных болезней.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение предусматривает способ лечения указанных выше видов болезней, который включает введение субъекту, страдающему от такой болезни, эффективного количества соединения формулы (I), определение которого дано выше.

Терминология.

Используемый в данном изобретении термин С_а-С_Ь-алкил, где а и Ь обозначают целые числа, относится к линейному или разветвленному алкильному радикалу, содержащему от а до Ь атомов углерода. Таким образом, например, когда а равен 1 и Ь равен 6, этот термин включает метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор, бутил, трет, бутил, н-пентил и н-гексил.

Применяемый термин двухвалентный С_а-С_Ь-алкиленовый радикал, где а и Ь обозначают целые числа, относится к насыщенной углеводородной цепи, содержащей от а до Ь атомов углерода и две ненасыщенные валентности.

Термин С_а-С_Ь-алкенил, где а и Ь обозначают целые числа, относится к линейной или разветвленной цепи алкенильного фрагмента, содержащего от а до Ь атомов углерода, по меньшей мере одну двойную связь Е- или Ζ-стереохимии, где это возможно. Этот термин включает, например, винил, аллил, 1- и 2-бутенил и 2-метил-2-пропенил.

Применяемый термин двухвалентный С_а-С_Ь-алкениленовый радикал обозначает углеводородную цепь, содержащую от а до Ь атомов углерода, по меньшей мере одну двойную связь и две ненасыщенные валентности.

Используемый в данном изобретении термин С_а-С_Ь-алкинил, где а и Ь обозначают целые числа, относится к линейным или разветвленным углеводородным группам, содержащим от а до Ь атомов углерода и, кроме этого, одну тройную связь. Этот термин включает, например, этинил 1-пропинил, 1- и 2бутинил, 2-метинил-2-пропинил, 2-пентинил, 3-пентинил, 4-пентинил, 2-гексинил, 3-гексинил, 4гексинил и 5-гексинил. Термин двухвалентный С_а-С_Ь-алкиниленовый радикал, где а и Ь обозначают целые числа, относится к двухвалентной углеводородной цепи, содержащей от а до Ь атомов углерода, по меньшей мере одну тройную связь.

Применяемый термин карбоциклический относится к моно-, би- или трициклическому радикалу, содержащему до 16 атомов в кольце, все из которых являются атомами углерода, этот термин включает арил и циклогексил.

Термин циклоалкил относится к моноциклическому насыщенному карбоциклическому радикалу, содержащему 3-8 атомов углерода, и включает, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил.

Не имеющий узаконенного определения термин арил относится к моно-, би- или трициклическому карбоциклическому ароматическому радикалу и включает радикалы, содержащие два моноциклических карбоциклических ароматических кольца, которые непосредственно связаны ковалентной связью. Примером таких радикалов являются фенил, бифенил и нафтил.

Не имеющий узаконенного определения термин гетероарил относится к моно-, би- или трициклическому ароматическому радикалу, содержащему один или более гетероатомов, выбранных из 8, N и О, и включает радикалы, содержащие два таких моноциклических кольца или одно такое моноциклическое кольцо и одно моноциклическое арильное кольцо, которые непосредственно соединены ковалентной связью. Примерами таких радикалов являются тиенил, бензтиенил, фурил, бензофурил, пирролил, имидазолил, бензимидазолил, тиазолил, изотиазолил, бензизотиазолил, пиразолил, оксазолили, бензоксазолил, изоксазолил, бензизоксазолил, изотиазолил, триазолил, бензтриазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, триазинил, индолил и индазолил.

Применяемый в данном изобретении, не имеющий общепринятого определения термин гетероциклил или гетероциклический включает гетероарил, определение которого дано выше, и в случае его неароматического значения относится к моно-, би- или трициклическому неароматическому радикалу, содержащему один или более гетероатомов, выбранных из 8, N и О, и к группам, состоящим из моноциклического неароматического радикала, содержащего один или более таких гетероатомов, который

- 3 017198 ковалентно соединен с другим таким радикалом или с моноциклическим карбоциклическим радикалом. Примерами таких радикалов являются пирролил, фуранил, тиенил, пиперидинил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, тиадиазолил, пиразолил, пиридинил, пирролидинил, пиримидинил, морфолинил, пиперазинил, индолил, бензфуранил, пиранил, изоксазолил, бензимидазолил, метилендиоксифенил, этилендиоксифенил, малеимидо- и сукцинимидная группы.

Если иное не оговаривается в контексте данного описания, термин замещенный в применении к любой группе означает радикал, замещенный совместимыми заместителями в количестве до четырех, каждый из которых, независимо, может представлять собой, например, С|-С₆-алкил. С₁-С₆-алкокси, гидрокси, гидрокси-С1-С₆-алкил, меркапто, меркапто-С₁-Сб-алкил, С₁-С₆-алкилтио, фенил, галоид (включая фтор, бром и хлор), трифторметил, трифторметилокси, нитро, нитрил (-СХ), оксо, -СООН, -СООН^А, -СОН^А, -8О2Н^А, -СОЫН2, -8Ο₂ΝΗ₂, -СОХНИ⁷, -8Ο2ΝΗΗ^α, -(ΌΧΗΊό -8Ο2ΝΒ^αΒ^β, -ХН2, -ХНИ⁷, -ХИ⁷И -ОСОХН, -ΟΟΟΝΗΚΑ -ОСОХН^АК^В, -ХНСОК^А, -ХНСООН^А, -νκ^βοοοκ^α, -ΝΉ8Ο2ΟΒ^α, -ΝΗ^β8Ο2ΟΗ, -ΝΚ^β8Ο2ΟΒ^α, -ХНСОХН2, -ХИ⁷СОХН, -ХНСОХНИХ -ХЧС-СОХНИХ -ХНСОХИТ или -ХК^АСОХ1К^АК^В, где Н^А и Н^В независимо обозначают С1-С₆-алкил, С₃-С₆-циклоалкил, фенил или моноциклический гетероарил, содержащий 5 или 6 атомов в кольце, или И^А и Н^В, будучи присоединенными к одному и тому же атому азота, образуют циклическую аминогруппу (например, морфолинил, пиперидинил, пиперазинил, тетрагидропирролил). Возможный заместитель может быть одной из указанных выше замещающих групп.

Используемый термин заместитель у атома азота означает заместитель у атома азота, который выбран из числа следующих:

амино-С_1-6алкил, например аминоэтил, С_1-3алкиламино-С_1-6алкил, С_1-3диалкиламино-С_1-6алкил, гидрокси-С_1-6алкил, например гидроксиэтил, С_1-3алкокси-С_1-6алкил, например метоксиэтил, меркаптоС_1-3алкил, С_1-3алкилмеркапто-С_1-6алкил, карбоксамидо-С_1-6алкил, например СН₂СОЯН₂, аминосульфонил-С_1-6алкил, например СН₂8О₂ХН₂, С_1-3алкиламиносульфонил-С_1-6алкил, например СН₂8О₂ХМе, С_1-3диалкиламиносульфонил-С_1-6алкил, например СН₂8О₂ЯМе₂, С_1-6алканоил, С_1-6алкилсульфонил, аминосульфонил (-8Ο₂ΝΗ₂), С_1-6алкиламиносульфонил, например -8О₂ХНМе, С_1-6диалкиламиносульфонил, например -8О₂ХМе₂, возможно замещенный фениламиносульфонил, карбоксамидо (-СОХН₂), С_1-6алкиламинокарбонил, С_1-6диалкиламинокарбонил, морфолинил-С_1-6алкил, имидазолил-С_1-6алкил, триазолил-С1-6алкил или моноциклический гетероциклоалкил-С1-6алкил, возможно замещенный в имидазолильном, триазолильном или гетероциклильном кольце, например пиперидинил-С1-6алкил, пиперазинил-С_1-6алкил или 4-(С_1-6алкил)пиперазинил-С_1-6алкил.

Применяемый термин соль включает соли присоединения к основанию, соли присоединения к кислоте и четвертичные соли. Соединения согласно изобретению, которые являются кислыми, могут образовывать соли, включая фармацевтически приемлемые соли, с основаниями, такими как гидроокиси ще лочных металлов, например гидроокиси натрия и калия; гидроокиси щелочно-земельных металлов, например гидроокиси кальция, бария и магния; с органическими основаниями, например Ν-метил-Эглютамином, холин-трис-(гидроксиметил)аминометаном, Ь-аргинином, Ь-лизином, Ν-этилпиперидином, дибензиламином и т.п. Те соединения (I), которые являются основаниями, могут образовывать соли, включая фармацевтически приемлемые соли, с неорганическими кислотами, например с гидрогалоидными кислотами, такими как соляная или бромисто-водородная кислоты, серная кислота, азотная кислота или фосфорная кислота и т.п., и с органическими кислотами, например с уксусной, винной, янтарной, фумаровой, малеиновой, малевой, салициловой, лимонной, метансульфокислотой, птолуолсульфокислотой, бензойной, бензолсульфокислотой, глутаминовой, молочной и миндальной ки слотами и т. п.

Соединения по изобретению, которые содержат один или более имеющихся или потенциальных хиральных центров благодаря наличию асимметричных атомов углерода, могут существовать в виде ряда энантиомеров или диастереомеров с И- или 8-стереохимией у каждого хирального центра. Изобретение охватывает все такие энантиомеры или диастереомеры и их смеси.

В соединениях по изобретению, в любой совместимой комбинации, с учетом того, что соединения предпочтительно имеют молекулярный вес менее 600.

Гидроксаматная группа -С(=О)ХНОН.

В соединениях по изобретению гидроксаматная группа действует как группа, связывающая металл, взаимодействуя с ионом металла в активном сайте фермента НО АС, который расположен у основания кармана в структуре фермента.

Кольцо, содержащее ф, V и ^.

Каждая группа из ф, V и может представлять собой -С= или по меньшей мере одна из ф, V и может быть -Х=, или О может быть -С= и V, и ^, каждая, могут быть -Х=. Предпочтительным является случай, когда О обозначает -С=, V и XV, каждая, являются -Х=, и НОХНС(=О)- присоединен в 5положении полученного пиримидин-2-ильного радикала.

- 4 017198

Кольцо А.

Кольцевые радикалы могут представлять собой циклогексильное или фенильное кольцо.

Радикал [Ьшкег].

-[Ыпкег]- служит для соединения двухвалентного радикала В с кольцом А, если оно содержится. Таким образом, он может быть выбран из следующих примеров: связь, -СН2-НН-СН₂- или -ΝΗ-ΟΗ₂-.

Группа Ζ¹.

Группа Ζ¹ обозначает радикал формулы ΚΚΧΉΝΗ- или ΚιΚ^ΗΝΗ^Η₂-, где В₁ обозначает карбоксильную группу (-СООН) или сложноэфирную группу, выбранную из группы сложноэфирных групп формулы -(С=О)ОК₉. где К₉ представляет собой Κ-Κ_χί.Ή-. где Κ- и К₈ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют моноциклическое карбоциклическое кольцо из 3-7 атомов в кольце; и обозначает боковую цепь природной или неприродной альфа-аминокислоты, причем боковая цепь неприродной альфа-аминокислоты выбрана из фенильной, циклогексилметильной, циклогексильной, пиридин-3-илметильной, трет-бутоксиметильной, трет-бутильной, 1-бензилтио-1-метилэтильной, 1метилтио-1-метилэтильной, 1-меркапто-1-метилэтильной и фенилэтильной. Эфирная группа Κ₁ может быть такой, которая в соединении по изобретению способна гидролизоваться под действием одного или нескольких внутриклеточных ферментов карбоксиэстераз с получением карбоксильной группы. Внутриклеточные ферменты карбоксиэстеразы, способные гидролизовать сложноэфирную группу соединения по изобретению до соответствующей кислоты, включают три известных изотипа ферментов человека: йСЕ-1, йСЕ-2 и Ιιί.Έ-3. Хотя они считаются основными ферментами, другие ферменты, такие как бифенилгидролаза (ВРН), также могут играть роль в гидролизе сложного эфира. В общем, если карбоксиэстераза гидролизует эфирную группу свободной аминокислоты до родительской кислоты, она вследствие Νкарбонильной зависимости йСЕ-2 и йСЕ-3, описанной выше, также гидролизует сложноэфирный мотив, ковалентно сопряженный с ингибитором ΗΌΑΟ Следовательно, данные клеточного анализа расщепившейся клетки и/или анализа изолированной карбоксиэстеразы, которые описаны в данном изобретении, представляют собой прямой, быстрый и простой первый метод сканирования для эфиров, которые обладают требуемым профилем гидролиза. Эфирные мотивы, выбранные таким образом, можно повторно подвергать анализу тем же методом анализа карбоксиэстеразы в случае сопряжения с ингибитором по выбранному методу сопряжения для того, чтобы подтвердить, что соединение все еще является карбоксиэстеразным субстратом.

Известно, что макрофаги играют ключевую роль в развитии воспалительных заболеваний вследствие высвобождения цитокинов, в частности ΤΝΕα и 1Ь-1 (уап Кооп е! а1., ΑγΙΙιπΙΝ апб Кйеита!кт, 2003, 1229-1238). В случае ревматоидного артрита они вносят основной вклад в сохранение воспаления суставов и разрушения суставов. Макрофаги вовлечены также в рост опухолей и их развитие (№16ίηί апб Саггаго, Сигг. Эгид Тагдей 1пГ1атт. А11егду, 2005, 3-8). Следовательно, агенты, которые селективно нацелены на пролиферацию клеток макрофага, могут иметь значение при лечении рака и аутоиммунных болезней. Виды конкретных клеток, как ожидается, приведут к сниженным побочным эффектам. Изобретатели обнаружили способ таргетирования ингибиторов на макрофаги, который основан на наблюдении, что путь, которым эстеразный мотив связан с ингибитором, решает, гидролизуется ли он и, следовательно, аккумулируется ли он в различных видах клеток или нет. Конкретно, было установлено, что макрофаги содержат человеческую карбоксилазу йСЕ-1, в то время как другие виды клеток ее не содержат. В общей формуле (I), когда азот эстеразного мотива Κ|ί.Ή(Κ₂)ΝΗ- не связан непосредственно с карбонилом (-С(=О)-), эфир будет гидролизоваться только йСЕ-1 и поэтому ингибиторы будут накапливаться только в макрофагах.

В случае соединений по изобретению, которые должны вводиться системно, предпочтительными являются эфиры с небольшой скоростью расщепления карбоксилэстеразы, так как они менее восприимчивы к досистемному метаболизму. Их способность достигать целевую целостность ткани поэтому увеличивается, и эфир может быть превращен внутри клеток целевой ткани в кислоту. Однако в случае локального введения, когда эфир или непосредственно наносится на целевую ткань, или направляется туда, например, путем ингаляции, часто желательно, чтобы эфир характеризовался быстрым расщеплением эстеразы для минимизации системного действия и последующих нежелательных побочных эффектов. В соединениях по изобретению, если атом углерода, смежный с альфа-атомом углерода эфира альфааминокислоты, является монозамещенным, т.е. обозначает ί.Ή₂Κ^ζ (Κ^ζ является монозаместителем), эфиры имеют тенденцию к более быстрому расщеплению, чем в случае, когда этот атом углерода является ди- или тризамещенным, как в случае, когда обозначает, например, фенил или циклогексил.

Следует также отметить, что преимущества от наличия эфирного мотива аминокислоты, описанные выше (легкое попадание в клетку, гидролиз карбоксилэстеразы внутри клетки и аккумулирование активного продукта гидролиза, карбоновой кислоты), лучше реализуются, когда связь между эфирным мотивом аминокислоты и кольцами В и/или А не является субстратом для активности пептидазы внутри клетки, что может привести к высвобождению аминокислоты из молекулы. Конечно, стабильность к внутриклеточным пептидазам легко определяется путем инкубирования соединения с компонентами разрушенных клеток и анализа такого расщепления.

Для соединений по изобретению, которые должны вводиться системно, предпочтительными явля

- 5 017198 ются сложные эфиры с небольшой скоростью расщепления эстеразой, так как они менее восприимчивы к досистемному метаболизму. Их способность достигать целевую ткань возрастает и эфир может превращаться внутри клеток целевой ткани в кислоту.

Однако в случае локального применения, когда эфир или непосредственно наносится на целевую ткань, или направляется к ней, например при ингаляции, часто бывает желательно, чтобы эфир характеризовался высокой скоростью расщепления эстеразы для минимизации системной выдержки и последующих нежелательных побочных эффектов.

Как указано выше, соединения, которых касается данное изобретение, представляют собой ингибиторы НИАС и, следовательно, могут найти применение при лечении болезней, связанных с пролиферацией клеток, таких как рак, у людей и других млекопитающих.

Следует отметить, что величины конкретной дозы для любого пациента будут зависеть от различных факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, вес, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, метод введения, скорость выделения, комбинацию лекарств и степень серьезности конкретного заболевания, подвергающегося лечению. Оптимальная величина дозы и частота приема определяются в ходе клинических испытаний.

Соединения, которых касается изобретение, могут быть приготовлены для введения любым способом в соответствии с их фармакокинетическими свойствами. Вводимые перорально композиции могут быть в виде таблеток, капсул, порошков, гранул, леденцов, жидких или гелеобразных препаратов, таких как оральные, топические или стерильные парентеральные растворы или суспензии.

Таблетки и капсулы для орального введения могут быть в виде стандартных доз и могут содержать обычные эксципиенты, такие как связующие, например сироп, смола акации, желатин, сорбит, трагакант или поливинилпирролидон; наполнители, например лактоза, сахар, маисовый крахмал, фосфат кальция, сорбит или глицин; смазочный агент для получения таблеток, например стеарат магния, тальк; полиэтиленгликоль или двуокись кремния; дезинтегранты, например картофельный крахмал или приемлемые смачивающие агенты, такие как лаурилсульфат натрия. Таблетки могут содержать покрытие, наносимое методами, хорошо известными в обычной фармацевтической практике. Жидкие оральные препараты могут быть, например, в виде водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров или могут быть представлены в виде сухого продукта для восстановления водой или другим подходящим носителем перед применением. Такие жидкие препараты могут содержать обычные добавки, такие как суспендирующие агенты, например сорбит, сироп, метилцеллюлоза, сироп глюкозы, желатин, гидрированные съедобные жиры; эмульгирующие агенты, например лецитин, моноолеат сорбитана или смола акации; неводные носители (которые могут включать съедобные масла), например миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, маслянистые эфиры, такие как глицерин, пропиленгликоль или этиловый спирт; консерванты, например метил- или пропил-п-гидроксибензоат или сорбиновая кислота, и, если желательно, ароматизирующие или красящие агенты.

Для топического применения путем ингаляции можно ввести лекарство в аэрозоль для доставки, например, при помощи струйных распылителей, работающих под давлением, или ультразвуковых распылителей либо предпочтительно при помощи дозированных ингаляторов с пропеллентами или путем введения не содержащих пропелленты микронизированных порошков, например капсул или других систем для доставки сухих порошков. В таких составах для ингаляции могут содержаться эксципиенты, такие как, например, пропелленты (например, Епдеи в случае дозируемых аэрозолей), поверхностноактивные вещества, эмульгаторы, стабилизаторы, консерванты, ароматизаторы и наполнители (например, лактоза в случае порошковых ингаляторов). Для ингаляции имеется большое количество устройств, при помощи которых можно получить аэрозоли с оптимальным размером частиц и ввести их с применением методов ингаляции, подходящих для пациента. Помимо применения адаптеров (спейсеров, экспандеров) и грушеобразных контейнеров (например, ИеЬи1а!ог®, Уо1ита!1е® и автоматических устройств, образующих спрей (Аи1ойа1ег®)) для дозируемых аэрозолей, в частности, в случае порошковых ингаляторов, доступен ряд технических растворов (например, Ищкйа1ег®, ΒοΙαάίδΚ®. ТигЬо1о1ег® или ингаляторы, описанные, например, в заявке ЕР № 0505321).

При топическом нанесении на кожу лекарство может быть в составе крема, лосьона или мази. Составы кремов или мазей, которые можно применять для введения лекарства, хорошо известны из уровня техники, например они описаны в обычных учебниках по фармацевтике, таких как Βπΐίδΐι Рйагтаеоре1а.

При топическом введении в глаз лекарство может быть введено в состав раствора или суспензии в подходящем стерильном водном или неводном носителе. В состав могут быть также включены добавки, например буферы, такие как метабисульфит натрия или динатрийэдетат; консерванты, включая бактерицидные и фунгицидные агенты, такие как фенилацетат рутин или нитратацетат ртути, бензалконийхлорид или хлоргексидин, и загущающие агенты, такие как гипромеллоза.

Активный ингредиент может быть также введен парентерально в стерильной среде. В зависимости от носителя и применяемой концентрации лекарство может быть или суспендировано, или растворено в носителе. В носителе предпочтительно также растворять адъюванты, такие как локальный анестетик, консервант и буферные агенты.

- 6 017198

Синтез.

Существуют многие подходы к синтезу соединений формулы (I), которых касается данное изобретение, но все они основаны на известных химических принципах, известных специалисту в области органической химии. Так, соединения формулы (I) могут быть синтезированы в соответствии со способами, описанными в общепринятой литературе и хорошо известными специалисту. Обычные литературные источники представляют собой Айуапссй огдашс сйст181гу, 4'¹' Εάίΐίοη (Айсу). 1. Масй, Сотргсйспыус Огдашс ТгапЦогтайоп, 2'¹ Εάίΐίοη (Айсу), К.С. Ьагоск, НапйЬоок о£ Нйсгосусйс СйстЦйу, 2'¹ Εάίίίοη (Регдатоп), А.В. Кайг/ку, обзорные статьи, такие как содержащиеся в ЗупФсщк, Асс. Сйст. Кск., Сйст. Ксу., или первичные литературные источники, обнаруживаемые в результате поиска опйпс или во вторичных источниках, таких как Сйст1са1 АЬ81гас18 или ВсЙ51сш. Способы синтеза, используемые при получении соединений в примерах, описанных ниже, могут быть адаптированы для получения аналогичных соединений.

Сокращения.

МсОН=метанол;

Е1ОН=этанол;

Е1ОАс=этилацетат;

Оос=трет-бутоксикарбонил;

ОСМ=дихлорметан;

ОМЕ=диметилформамид;

ОМ8О=диметилсульфоксид;

ТЕА=трифторуксусная кислота;

ТНЕ=тетрагидрофуран;

Ыа₂СО₃=карбонат натрия;

К₂СО₃=карбонат калия;

НС1=соляная кислота;

ас|=водный раствор;

О1РЕА=диизопропилэтиламин;

№1Н=гидрид натрия;

ЫаОН=гидроокись натрия;

№1НСО₃=кислый углекислый натрий;

Рй/С=палладий на угле;

ТВМЕ=трет-бутилметиловый эфир;

Ы₂=азот;

РуВор=бензотриазол-1 -ил-окси-трис-пирролидин-гексафторфосфат фосфония;

Ыа₂8О₄=сульфат натрия;

Е1₃Ы=триэтиламин;

ИН₃=аммиак;

ТМ8С1=триметилхлорсилан;

ИН₄С1=хлорид аммония;

Ь1А1Н₄=литийалюминий гидрид;

РуВгОР=бром-трис-пирролидин-гексафторфосфат фосфония;

Мд8О₄=сульфат магния;

ВиЬ1=н-бутиллитий;

СО2=двуокись углерода;

ЕПС1=М-(3-диметиламинопропил)-Ы'-этилкарбодиимида гидрохлорид;

Е1₂О=диэтиловый эфир;

Ь1ОН=гидроокись лития;

НОВ1= 1-гидроксибензотриазол;

ТЬС=тонкослойная хроматография;

ЬСМ8=жидкостная хроматография/масс-спектроскопия;

8ТАВ=триацетоксиборгидрид натрия;

мл=миллилитры;

г=грамм;

мг=миллиграмм; моль=моль(и); ммоль=миллимоль(и); НРЬС=высокоэффективная жидкостная хроматография (высокого разрешения); ИМЕ=ядерный магнитный резонанс;

ВТ=комнатная температура;

ч=час(ы).

Следующие ниже примеры иллюстрируют получение конкретных соединений по изобретению, а также ингибирующие свойства в отношении НЭЛС.

- 7 017198

Получение эфиров аминокислоты (промежуточные соединения Ά-Ό).

Метод I. Используют для получения промежуточного соединения Ά и промежуточного соединения В:

Стадия I, пихлопентанол

Стадия 2

Υ

Стадия 1, циклопентаноя

НСИ диоксан осм

Метод III. Используют для получения промежуточного соединения Ό:

Схема 1

Промежуточное соединение С

Промежуточное соединение о

Метод II. Используют для получения промежуточного соединения С:

Полученные соединения:

Фиг. 1

Синтез соединений, показанных на фиг. 1. Метод I (для получения промежуточного В).

Стадия 1. Образование сложного эфира.

К раствору (8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-циклогексилпропионовой кислоты (5 г, 19,4 ммоль) в ΌΜΡ (50 мл) при температуре 0°С добавляли циклопентанол (8,8 мл, 19,15 ммоль), ЕИС1 (4,09 г, 21,37 ммоль) и, наконец, ΌΜΆΡ (237 мг, 1,94 ммоль). Реакционную смесь нагревали до КТ и перемешивали в течение 18 ч.

Удаляли ΌΜΡ под вакуумом с получением прозрачного масла. Его распределяли между водой и ЕЮАс. Органическую фазу высушивали (Мд§0₄) и концентрировали под вакуумом. Сырой экстракт очищали методом хроматографии на колонке (25% ЕЮАс в гептане) с получением желаемого продукта в виде прозрачного масла (14,87 г, 55%).

Ή ΝΜΚ (300 МГц, 6₆-ΌΜ80) δ: 7,09 (1Н, б), 5,08 (1Н, I), 3,76 (1Н, I), 1,50-1,85 (10Н, Ьг т), 1,39 (9Н, 8), 1,00-1,25 (9Н, Ьг т).

- 8 017198

Стадия 2. Снятие защиты Вос с получением циклопентил-(2§)-амино(циклогексил)ацетата гидрохлорида (промежуточное соединение В).

Продукт со стадии 1 (14,87 г, 45,69 ммоль) растворяли в ЭСМ (100 мл) и обрабатывали 4 М НС1/диоксана (22,8 мл, 91,38 ммоль), реакционную смесь перемешивали при ВТ в течение 24 ч. Сырую смесь концентрировали при пониженном давлении с получением оранжевого масла. Его растирали с Е1₂О с получением белого остатка. Остаток затем промывали Е1₂О с получением целевого продукта в виде белого порошка (7,78 г, 65%).

Ή ΝΜΒ (300 МГц, й₆-ЭМ8О) δ: 8,45 (3Н, Ьг т), 5,22 (1Н, 1), 3,28 (1Н, й), 1,95-1,50 (10Н, Ьг т), 1,300,90 (9Н, Ьг т).

Метод II.

Стадия 1. Образование эфира с получением (1§)-2-(циклопентилокси)-2-оксо-1-фенилэтанаминий4-метилбензосульфоната (промежуточное соединение С).

К суспензии (§)-фенилглицина (5 г, 33,1 ммоль) в циклогексане (150 мл) добавляли циклопентанол (29,84 мл, 331 ммоль) и п-толуолсульфокислоту (6,92 г, 36,4 ммоль). Устанавливали ловушку ДинаСтарка и смесь нагревали до 135°С для полного растворения. Через 12 ч смесь охлаждали до ВТ, что приводило к осаждению белого твердого продукта. Этот продукт отфильтровывали и промывали Е1ОАс перед сушкой при пониженном давлении с получением целевого продукта в виде порошка белого цвета (11,01 г, 85%).

Ή ΝΜΒ (300 МГц, й₆-ЭМ8О) δ: 8,82 (2Н, Ьг 8), 8,73 (1Н, Ьг 8), 7,47 (7Н, т), 7,11 (2Н, й), 5,25 (1Н, Ьг 5), 5,18 (7Н, т), 2,29 (3Н, 8), 1,87-1,36 (8Н, т).

Метод III.

К раствору (8)-бензилоксикарбониламино-3-трет-бутоксипропионовой кислоты (25 г, 84,65 ммоль) в ΌΜΕ (250 мл) при температуре 0°С добавляли циклопентанол (15,36 мл, 169,3 ммоль), ЕЭС1 (17,85 г, 93,11 ммоль) и затем ЭМАР (1,03 г, 8,46 ммоль). Реакционную смесь нагревали до ВТ и перемешивали в течение 18 ч.

Удаляли ΌΜΕ под вакуумом, получая масло желтого цвета. Его распределяли между водой и Е1ОАс. Органическую фазу высушивали (Мд8О₄) и концентрировали под вакуумом. Сырой экстракт очищали методом хроматографии (25% Е1ОАс в гептане) с получением целевого продукта в виде прозрачного масла. Его использовали на следующей стадии без анализа.

Стадия 2. Снятие защиты СЬх с получением О-трет-бутил-Ь-серината (промежуточное соединение О).

Продукт со стадии 1 растворяли в Е1ОАс (150 мл) обрабатывали Рй(ОН)₂ (10 мол.%) и перемешивали в атмосфере водорода в течение 32 ч. После завершения реакции катализатор удаляли путем фильтрования через целит и концентрировали фильтрат под вакуумом, получая целевой продукт в виде прозрач

- 9 017198 ного масла (15,96 г, 82% в результате двух стадий).

Ή ΝΜΚ (300 МГц, ά₆-ΌΜ8Θ) δ: 5,17 (1Н, 1), 3,45 (1Н, т), 3,34 (2Н, ц), 1,90-1,50 (9Н, Ьг т), 1,08 (9Н, 8).

Получение О-(1-изобутоксиэтил)гидроксиламина (промежуточное соединение Е).

Схема 2

Промежуточное соединение Е было получено по методу, описанному в заявке АО 01/60785.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, й.-1)\18О) δ: 0,85 (6Н, й), 1,15 (3Н, й), 1,75 (1Н, т), 3,18 (1Н, йй), 3,42 (1Н, йй), 4,53 (1Н, ц), 5,82 (2Н, 8).

Получение этил-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксилата (промежуточное соединение Г).

Схема 3

Стадия 1. Восстановление по атому хлора.

Этил-4-хлор-2-метилтио-5-пиримидин-карбоксилат (12,5 г, 53,88 ммоль) и порошок Ζη (14,1 г, 215,52 ммоль) соединяли и добавляли бензол (60 мл) и 3 М ΝΗ₄Ο (140 мл).

Суспензию энергично перемешивали и нагревали до 80°С в течение 30 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит и промывали Е1ОАс (200 мл). Фильтрат концентрировали под вакуумом до объема, равного примерно 50 мл, и затем распределяли между Н₂О (400 мл) и Е1ОАс (400 мл). Затем водный слой экстрагировали Е1ОАс (250 мл). Объединенные органические слои высушивали (Мд§О₄) и концентрировали под вакуумом с получением темного масла. Его очищали методом хроматографии на колонке (чистый гептан и затем 1:1:1 смесь гептан/СН₂С1₂/Е1₂О). Целевой продукт получали в виде бесцветного масла (13 г, 61%); т/х=199 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, йе-ЭМЗО) δ: 1,30 (3Н, 1), 2,60 (3Н, 8), 4,35 (2Н, ф, 9,0 (2Н, 8).

Стадия 2. Окисление сульфида с получением этил-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксилата (промежуточное соединение Г).

К перемешиваемому раствору продукта со стадии 1 (13 г, 47,59 ммоль) в сухом ТНГ (250 мл) медленно в течение 30 мин добавляли раствор тСРВА (47,59 г, 275,76 ммоль) в ТНГ (150 мл) в атмосфере азота при температуре 0°С. Реакционной смеси давали нагреться до КТ и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом до объема, равного примерно 100 мл, и смесь полученный продукт/бензойная кислота абсорбировали на силикагеле. Очистку проводили методом хроматографии на колонке (вначале чистый гептан, затем смесь 1:5:3 СН₂С1₂/гептан/ Е1₂О и затем 1:1:1 смесь СН₂С1₂/гептан/Е1₂О). Целевое соединение получали в виде белого твердого вещества (10 г, 66%); ш/х=231 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, φ-ΌΜ^) δ: 1,40 (3Н, 1), 3,50 (3Н, 8), 4,40 (2Н, ф, 9,50 (2Н, 8).

Получение 3-азабицикло[3.1.0]гекс-6-илметанола (промежуточное соединение С).

- 10 017198

Стадия 1.

Сталин 2. нагревшие (20№С)

Промежуточное соединение О

Стадия 1. Реакция Дильса-Альдера.

Ν-бензилмалеимид (50 г, 267,1 ммоль) растворяли в Е1₂О (600 мл), обрабатывали этилдиазоацетатом (31 мл, 293,8 ммоль) и перемешивали при КТ в атмосфере азота в течение 36 ч. Образовавшийся белый осадок выделяли путем фильтрования, промывали ледяным ЕьО и высушивали с получением желаемого соединения в виде белого твердого вещества (72 г, 89%); ιη/ζ=302 [М+Н]⁺.

¹Н ΝΜΚ (300 МГц, ά₆-ΌΜ8Ο) δ: 1,20 (3Н, 1), 4,15 (2Н, ф, 4,55 (2Н, 8), 4,60 (1Н, ά), 5,00 (1Н, ά), 7,157,35 (5Н, т), 9,60 (1Н, 8).

Стадия 2. Конденсация.

Продукт со стадии 1 (72 г, 239,2 ммоль) нагревали до 160°С, пока он не расплавился, с получением масла желтого цвета. Затем масло нагревали до 200°С, начиналось выделение пузырьков. Масло нагревали при 200°С в течение 30 мин до прекращения выделения пузырьков. Полученное масло янтарного цвета охлаждали до КТ и растирали с ледяным Е1₂О. Полученный осадок отфильтровывали и промывали снова ледяным Е1₂О с получением продукта в виде твердого вещества кремового цвета (37,2 г, 57%).

Ή ΝΜΚ (300 МГц, Ф-ЭМ8О) δ: 1,20 (3Н, ί), 2,80 (1Н, ί), 3,00 (2Н, ά), 4,15 (2Н, φ, 4,35 (2Н, 8), 7,207,40 (5Н, т).

Стадия 3. Восстановление.

Продукт со стадии 2 (37,2 г, 136,3 ммоль) растворяли в сухом ТНГ (400 мл). Этот раствор по каплям добавляли при температуре 0°С к суспензии Ь1А1Н₄ (20,7 г, 545,3 ммоль) в сухом ТНГ (200 мл). Полученную суспензию коричневого цвета нагревали до 60°С в атмосфере азота в течение 36 ч. Затем смесь охлаждали до 0°С и обрывали реакцию осторожно насыщенным ΝΉ^Ι^. Образовавшееся твердое вещество серого цвета и дополнительное количество ТНГ добавляли при соответствующем перемешивании. К смеси добавляли твердый №1₂8О₄ и перемешивали при КТ в течение 30 мин. Затем смесь отфильтровывали через целит с получением бледно-желтого раствора. Этот раствор концентрировали под вакуумом с получением желаемого продукта в виде масла оранжевого цвета (14,1 г, 51%); ιη/ζ=204 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, ά^ΌΜ^) δ: 2,25 (2Н, ά), 2,85 (2Н, ά), 3,20 (2Н, ί), 3,55 (2Н, 8), 4,35 (1Н, ί), 7,207,40 (5Н, т).

- 11 017198

Стадия 4. Снятие защиты с атома азота с получением 3-азабицикло[3.1.0]гекс-6-илметанола (промежуточное соединение С).

нм р>——\ он

Продукт со стадии 3 (7,5 г, 37,0 ммоль) растворяли в сухом МеОН (250 мл) при КТ. К раствору добавляли Рб(ОН)₂ и присоединяли баллон с водородом. Реакционную смесь дважды дегазировали и промывали Н₂. Реакционную смесь перемешивали в течение 6 ч, промывали свежим водородом из баллона и перемешивали в течение 64 ч. Затем реакционную смесь фильтровали через целит. Растворитель удаляли под вакуумом и остаток высушивали с получением твердого вещества белого цвета (4,1 г, 98%); т/х=114 [М+Н]⁺.

¹Н ΝΜΚ (300 МГц, СССТ) δ: 0,94 (1Н, 8ер1е1, 1=3,3 Гц), 1,37 (2Н, т), 2,89 (2Н, б, 1=11,4 Гц), 3,02 (2Н, б, 1=11,4 Гц), (2Н, б), 3,54 (2Н, б, 1=8,9 Гц).

Пример 1.

Схема 5

Опщия 3. Промежуточный продуктА НаВН(ОАс)з, №Е

- 12 017198

Полученные соединения:

К. = циклопентил (9)

Фиг. 2

Синтез соединений, изображенных на фиг. 2, соединения (1) и (2). Стадия 1. Сочетание.

Суспензию соли пиперидин-4-она-НС1 (1,16 г, 8,5 ммоль) и К₂СО₃ (11,7 г, 85,0 ммоль) перемешивали в ΌΜΡ (50 мл) при ВТ в атмосфере азота в течение 10 мин. Затем реакционную смесь разбавляли водой (150 мл) и экстрагировали ЕЮАс (2x200 мл). Объединенные органические слои высушивали (Мд§О₄), удаляли под вакуумом растворитель с получением продукта желтого цвета, который применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки; т/х=250 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Гидролиз сложного эфира.

Продукт со стадии 1 перемешивали в 1 М ΝαΟΗ,,,, (30 мл) и ТНГ (30 мл) при ВТ в течение 4 дней. Затем реакционную смесь подкисляли до рН ~3 при помощи 1 М НС1_ач, полученный продукт экстрагировали Ό0Μ (2x200 мл). Объединенные органические слои высушивали (Ν;·ι₂8Ο₄) и удаляли под вакуумом растворитель с получением продукта желтого цвета (665 мг, 35% после проведения 2 стадий); ш/х=222 [М+Н]⁺.

Стадия 3. Восстановительное аминирование.

Продукт со стадии 2 (100 мг, 0,45 ммоль) перемешивали в ΌΟΕ (10 мл) с промежуточным соединением А (106 мг, 0,45 ммоль) и №1ВН(ОАс)₃ (142 мг, 0,67 ммоль) при ВТ в атмосфере азота в течение

- 13 017198 дней. Затем реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали Όί,'Μ (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (№₂80₄) и удаляли растворитель под вакуумом с получением продукта в виде твердого вещества желтого цвета, которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки; т/х=405 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Образование защищенного гидроксамата.

Продукт со стадии 3 (182 мг, 0,45 ммоль) перемешивали в ΌΜΡ (10 мл) с ЕЭС1 (103 мг, 0,54 ммоль), НОВ! (73 мг, 0,54 ммоль), Εΐ₃Ν (314 мкл, 2,25 ммоль) и с промежуточным соединением Е (310 мкл, 2,25 ммоль) в течение 16 ч при КТ в атмосфере азота. Затем реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали Όί,'Μ (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (Μ§§0₄) и удаляли под вакуумом растворитель. Остаток очищали путем хроматографии на колонке (0-15% ΜеОН в Όί.'Μ) с получением продукта в виде желтого масла (110 мг, 47%); т/х=520 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Снятие защиты с получением циклопентил-№{1-[5-(гидроксикарбамоил)пиримидин-2ил]пиперидин-4-ил}-Ь-лейцина (1).

Продукт со стадии 4 (110 мг, 0,21 ммоль) перемешивали в Όί.’Μ (20 мл) с ТЕА (0,5 мл) в течение 1 ч при КТ. Затем растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали методом препаративной НРЬС с получением продукта в виде твердого вещества пурпурного цвета (12 мг, 11%). Чистота по данным Εί.’Μ8 составила 99%; т/х=420 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, (Ό_;0Ι)) δ: 0,91 (6Н, т), 1,46-1,84 (13Н, т), 2,05 (2Н, т), 2,90 (2Н, т), 3,42 (2Н, т), 4,01 (1Н, т), 4,91 (1Н, т), 5,27 (1Н, т), 8,58 (2Н, т).

Стадия 6. Гидролиз эфира.

Продукт со стадии 4 (182 мг, 0,45 ммоль) перемешивали в ТНЕ (10 мл) с Κ0'ΓΜ8 (115 мг, 0,9 ммоль) в течение 4 дней при КТ атмосфере азота. Затем растворитель удаляли под вакуумом и остаток применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки; ш/х=452 [М+Н]⁺.

Стадия 7. Снятие защиты с гидроксамата с получением №{1-[5-(гидроксикарбамоил)пиримидин-2ил]пиперидин-4-ил}-Ь-лейцина (2).

< А .ОН

К ^н о

Продукт со стадии 6 (0,45 ммоль) перемешивали в Όί,'Μ (10 мл) с ТЕА (1 мл) в течение 30 мин при КТ. Затем растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали методом препаративной НРЬС с получением целевого продукта в виде твердого вещества розового цвета (7 мг, 5% после проведения двух стадий). Чистота по данным Εί.’Μ8 составила 95%; т/х=352 [М+Н]⁺, не растворим в ΝΜΚ растворителях.

Аналоги, показанные на фиг. 2, были получены методом, описанным для соединений (1) и (2). Для каждого аналога приведены данные.

- 14 017198 (3)

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 97%; т/х=440 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, СБзОБ) δ: 1,30-1,61 (9Н, т), 1,78-1,90 (4Н, т), 2,23 (2Н, т), 2,90 (2Н, т), 5,00 (1Н, т), 5,23 (1Н, т), 7,53 (5Н, т), 8,69 (2Н, 8).

⁽⁴⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=378 [М+Н]⁺, не растворяется в ΝΜΚ растворителях.

⁽⁵⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 97%; т/х=446 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, СБ₃ОБ) δ: 0,83-1,82 (24Н, т), 2,02 (2Н, т), 2,94 (2Н, т), 4,86 (1Н, т), 5,23 (1Н, т), 8,58 (2Н, 8).

⁽⁶⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; т/х=372 [М+Н]⁺.

Ή ММК (300 МГц, СБ₃ОБ) δ: 1,20 (2Н, т), 1,50 (2Н, т), 2,15 (2Н, т), 2,80 (3Н, т), 4,88 (1Н, т), 7,37-7,46 (5Н, т), 8,56 (2Н, 8).

⁽⁷⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=450 [М+Н]⁺.

Ή ММК (300 МГц, СБ₃ОБ) δ: 1,25 (9Н, 8), 1,58-1,77 (8Н, Ьг т), 1,96 (2Н, т), 2,22 (2Н, т), 3,02 (2Н, т), 3,55 (1Н, т), 3,87 (1Н, йй, 1=10,8, 2,7 Гц), 3,99 (1Н, йй, 1=10,8, 2,7 Гц), 4,45 (1Н, т), 5,03 (2Н, т), 5,35 (1Н, т), 8,70 (2Н, 8).

⁽⁸⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=382 [М+Н]⁺.

Ή ММК (300 МГц, СБ₃ОБ) δ: 1,25 (9Н, 8), 1,65 (2Н, т), 2,25 (2Н, т), 3,01 (2Н, ΐ, 1=13,2 Гц), 3,57 (1Н, т), 3,91 (1Н, йй, 1=10,5, 2,7 Гц), 4,00 (1Н, йй, 1=10,5, 2,7 Гц), 4,38 (1Н, т), 5,05 (2Н, т), 8,70 (2Н, 8).

⁽⁹⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; т/х=394 [М+Н]⁺.

Ή ММК (300 МГц, СБ₃ОБ) δ: 1,52-1,98 (11Н, т), 2,10 (2Н, т), 2,87 (3Н, т), 3,44 (1Н, т), 3,95 (2Н, т), 4,18 (1Н, т), 5,25 (1Н, т), 8,58 (2Н, т).

- 15 017198

Пример 2.

Схема 6

СОаВ

Промежуточный продуктЕ

Стадия 5, Промежуточный

ЕоВД1Св1еЦН, ОМР

МаЭН(ОАс), СЮ5

Стадия 4* Промежуточный продукт В НО

К = циклопентил (14)

К. = Н (15)

Фиг. 3

Синтез соединений, показанных на фиг. 3 и обозначенных (14) и (15).

- 16 017198

Стадия 1. Сочетание.

Промежуточное соединение С (0,97 г, 8,62 ммоль) перемешивали в ΌΜΓ (20 мл) и ΜеСN (20 мл) с К₂СОз (5,96 г, 43,1 ммоль) при КТ в атмосфере азота в течение 10 мин. Затем добавляли промежуточное соединение Г (2,00 г, 8,62 ммоль) и перемешивали смесь еще в течение 20 мин. Затем реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали Е1ОАс (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали ^дЗОЭ и удаляли растворитель под вакуумом с получением твердого продукта светло-желтого цвета, который применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки (1,8 г, 78%); ш/х=264 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Окисление спирта.

Продукт со стадии 1 (1,80 г, 6,84 ммоль) перемешивали в Όί’Μ (50 мл) при 0°С и добавляли периодинан Десс-Мартина (3,50 г, 8,22 ммоль). Реакционной смеси давали нагреться до КТ и перемешивали в течение 4 ч. Затем реакцию обрывали 1:1 смесью насыщенного ШНСОз·,,,,, и насыщенного №ь8₂О.₄,_|,_|, полученную смесь перемешивали в течение 20 мин. Затем смесь экстрагировали Όί'Μ (2x100 мл), объединенные органические экстракты сушили (Μд8О₄) и удаляли под вакуумом растворитель. Остаток очищали методом хроматографии на колонке (0-10% ΜеОН в Όί'Μ) с получением продукта в виде желтого масла (1,35 г, 72%); т/х=262 [М+Н]⁺.

Стадия 3. Гидролиз эфира.

Продукт со стадии 2 (1,35 г, 5,17 ммоль) перемешивали в 1 М ШОН,·,,,,, (20 мл) и ТНГ (20 мл) при КТ в течение 3 ч. Затем реакционную смесь подкисляли до рН ~3 при помощи 1 М НС1(_ач), что вызывало осаждение твердого продукта белого цвета. Этот твердый продукт отфильтровывали, высушивали и сохраняли. Затем фильтрат экстрагировали Όί'Μ (2x100 мл), объединенные органические слои высушивали (№₂8О₄), растворитель удаляли под вакуумом с получением твердого вещества светло-желтого цвета, которое соединяли с предварительно полученным твердым продуктом (900 мг, 82%); ш/х=236 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Восстановительное аминирование.

Продукт со стадии 3 (1,75 мг, 0,75 ммоль) перемешивали в ОСЕ (10 мл) с промежуточным соединением В (196 мг, 0,75 ммоль) и NаВН(ОАс)₃ (222 мг, 1,05 ммоль) при КТ в атмосфере азота в течение 16 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали Е1₂О. Объединенные органические слои высушивали (№ь8О₄) и удаляли растворитель под вакуумом с получением желаемого продукта в виде желтого масла, который применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки (171 мг, 52%); т/х=443 [М+Н]⁺.

- 17 017198

Стадия 5. Образование защищенного гидроксамата.

Продукт со стадии 4 (171 мг, 0,39 ммоль) перемешивали в ΌΜΡ (10 мл) с промежуточным соедине нием Е (539 мкл, 3,9 ммоль), ЕЭС! (90 мг, 0,47 ммоль), НОВ! (63 мг, 0,47 ммоль) и Ε!₃Ν (543 мкл, 3,9 ммоль) при КТ в атмосфере азота в течение 16 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали ЭСМ (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (Мд§О₄) и удаляли под вакуумом растворитель. Остаток очищали методом хроматографии на колонке (0-10% МеОН в ЭСМ) с получением целевого продукта в виде бесцветного масла (91 мг, 42%); ш/х=558 [М+Н]⁺.

Стадия 6. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-(28)-циклогексил-[({3-[5(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]-3-азабицикло [3.1.0]-гекс-6-ил}метил)амино]ацетата (14).

Продукт со стадии 5 (91 мг, 0,163 ммоль) перемешивали в смеси 1:1 МеОН/ЭСМ (4 мл) с ТЕЛ (2 мл) при КТ в течение 1 ч. Затем растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали методом препаративной НРЬС с получением белого твердого вещества (15 мг, 20%). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т//=588 [М+Н]⁺.

Ή \МК (300 МГц, С1);О1)) δ: 0,92-1,38 (6Н, т), 1,73-1,95 (16Н, т), 3,09 (2Н, т), 3,621 (2Н, й, 1=11,4 Гц), 3,91 (1Н, й, 1=3,6 Гц), 4,00 (2Н, й, 1=11,4 Гц), 5,11 (1Н, т), 8,67 (2Н, ₈).

Стадия 7. Гидролиз сложного эфира.

в

Продукт со стадии 5 (161 мг, 0,29 ммоль) перемешивали в среде ТНЕ (10 мл) с КОТМ8 (74 мг, 0,58 ммоль) при КТ в атмосфере азота в течение 48 ч. Затем добавляли снова КОТМ8 (112 мг, 0,87 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при температуре 50°С в течение 48 ч. Затем под вакуумом удаляли растворитель, и остаток применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки; т/х=490 [М+Н]⁺.

Стадия 8. Снятие защиты с гидроксамата с получением (28)-циклогексил-[({3-[5(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]-3-азабицикло[3.1.0]гекс-6-ил}метил)амино]уксусной кислоты (15).

НО.

он

Продукт со стадии 7 (0,29 ммоль) перемешивали в ЭСМ (10 мл) с ТЕА (1 мл) при КТ в течение 30 мин. Затем растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали методом препаративной НРЬС с получением целевого продукта в виде твердого вещества белого цвета (13 мг, 12%). Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила 99%; т/х=390 [М+Н]⁺.

Ή ЕМК (300 МГц, С1);О1)) δ: 0,96 (1Н, т), 1,10-1,47 (6Н, т), 1,72-1,87 (6Н, т), 1,99 (1Н, т), 2,99 (1Н, т), 3,18 (1Н, т), 3,63 (2Н, йй, 1=11,7, 3,3 Гц), 3,85 (1Н, й, 1=3,3 Гц), 3,99 (2Н, й, 1=11,7 Гц), 8,67 (2Н, ₈).

- 18 017198

Аналоги, показанные на фиг. 3, были получены методом, описанным для соединений (14) и (15). Ниже приведены данные для каждого аналога.

(10)

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; т/х=452 [М+Н]⁺.

Ή NΜВ (300 МГц, СО₃ОЭ) δ: 1,41-1,64 (6Н, т), 1,72-1,93 (5Н, т), 2,88 (2Н, т), 3,60 (2Н, т), 3,97 (2Н, й, 1=10,5 Гц), 5,26 (1Н, 8), 5,32 (1Н, т), 7,51 (5Н, т), 8,67 (2Н, 8).

⁽¹¹⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 97%; т/х=384 [М+Н]⁺.

Ή ММВ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 0,94 (1Н, т), 1,83 (2Н, т), 3,01 (2Н, й, 1=7,5 Гц), 3,62 (2Н, т), 3,96 (2Н, й, 1=11,7 Гц), 5,07 (1Н, 8), 7,53 (5Н, т), 8,67 (2Н, 8).

⁽¹²⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; т/х=462 [М+Н]⁺.

Ή ММВ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 0,99 (1Н, т), 1,24 (9Н, 8), 3,11 (2Н, йй, 1=7,5, 2,4 Гц), 3,63 (2Н, йй, 1=12,0, 3,1 Гц), 3,91 (2Н, ййй, 1=24,6, 10,8, 3,3 Гц), 4,01 (2Н, й, 1=11,7 Гц), 4,26 (1Н, т), 5,35 (1Н, т), 8,68 (2Н, 8).

⁽¹³⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=394 [М+Н]⁺.

Ή NΜВ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,01 (1Н, т), 1,25 (9Н, 8), 1,88 (2Н, т), 3,11 (2Н, й, 1=7,5 Гц), 3,64 (2Н, йй, 1=11,7, 3,9 Гц), 3,90 (2Н, т), 4,01 (2Н, й, 1=11,7 Гц), 4,14 (1Н, т), 8,67 (2Н, 8).

Пример 3.

- 19 017198

Полученные соединения:

К = циклопентил (16)

К Н (17)

К = циклопентил(18) К = Н (19)

К = циклопентил (20) К - Н (21)

Я = циклопентил(22) К = Н (23)

К = циклопентил (24)

Я = Н (25)

Я = циклопентил (26)

Фиг. 4

Синтез соединений, показанных на фиг. 4, методом, описанным для соединений (18) и (19). Стадия 1. Сочетание.

Пиперидин-4-илметанол (2,48 г, 21,55 ммоль) перемешивали в смеси 1:1 ^ΜГ/ΜеСN (20 мл) с К₂СОз (8,9 г, 64,65 ммоль) в течение 10 мин при КТ в атмосфере азота. Затем добавляли промежуточное соединение Г (5 г, 21,55 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 20 мин. Затем ее разбавляли Н₂О (100 мл) и экстрагировали Е1ОАс (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (Μд§Ο₄) и удаляли под вакуумом растворитель с получением желаемого продукта в виде твердого вещества оранжевого цвета, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки (5,70 г, 99%); ιη/ζ=266 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Гидролиз эфира.

Продукт со стадии 1 (5,70 г, 21,51 ммоль) перемешивали в среде 1 М №1ОН,_|1:| (20 мл) и ТНГ (20 мл) при КТ в течение 48 ч. Затем реакционную смесь подкисляли до рН ~3 при помощи 2 М НС1_ач, что вызывало осаждение продукта. Этот продукт собирали и высушивали под вакуумом с получением продукта в виде твердого вещества белого цвета (4,47 г, 89%); ιη/ζ=238 [М+Н]⁺.

- 20 017198

Стадия 3. Образование защищенного гидроксамата.

Продукт со стадии 2 (4,47 г, 18,86 ммоль) перемешивали в среде ΌΜΕ (50 мл) с промежуточным соединением Е (13,00 мл, 94,30 ммоль), ΕΌΟ1 (4,33 г, 22,60 ммоль), НОВ! (3,05 г, 22,60 ммоль) и Εΐ₃Ν (13,10 мл, 94,30 ммоль) при КТ в атмосфере азота в течение 48 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (200 мл) и экстрагировали при помощи Ό0Μ (2x200 мл). Объединенные органические слои высушивали (Мд§О₄) и удаляли под вакуумом растворитель. Остаток очищали методом хроматографии на колонке (0-15% МеОН в Ό0Μ) с получением желаемого продукта в виде масла желтого цвета (5,12 г, 77%); тЧ=353 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Окисление спирта.

Раствор (СОС1)₂ (253 мкл, 2,90 ммоль) в Ό0Μ (50 мл) перемешивали в атмосфере азота и охлаждали до внутренней температуры, равной -70°С. Затем медленно добавляли ΌΜ^ (363 мкл, 5,11 ммоль), поддерживая температуру, равной -70°С. Когда добавление было завершено, медленно добавляли раствор продукта со стадии 3 (1,00 г, 2,84 ммоль) в Όί'Μ (50 мл), опять-таки поддерживая внутреннюю температуру, равной -70°С. После окончания прибавления медленно добавляли Εΐ₃Ν (1,70 мл, 12,21 ммоль), снова поддерживая внутреннюю температуру, равной -70°С. Реакционной смеси давали нагреться до КТ и затем под вакуумом удаляли растворитель. Затем остаток очищали методом хроматографии на колонке (0-10% ΜеОН в ^СΜ) с получением конечного продукта в виде бесцветного масла (890 мг, 89%); ш/х=351 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Восстановительное аминирование.

Продукт со стадии 4 (100 мг, 0,28 ммоль) перемешивали в среде ОСЕ (10 мл) с промежуточным соединением В (73 мг, 0,28 ммоль) и NаВН₃СN (35 мг, 0,56 ммоль) при КТ в атмосфере азота в течение 16 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали Όί'Μ (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (Μ^^^ и удаляли растворитель под вакуумом. Остаток очищали методом хроматографии на колонке (0-10% ΜеОН в ^СΜ) с получением конечного продукта в виде бесцветного масла (145 мг, 92%); т/х=560 [М+Н]⁺.

Стадия 6. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-(28)-циклогексил-[({1-[5(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]пиперидин-4-ил}метил)амино]ацетата (18).

Продукт со стадии 5 (145 мг, 0,26 ммоль) перемешивали в среде Όί’Μ (10 мл) с ТЕЛ (0,5 мл) при КТ в течение 10 мин. Затем под вакуумом удаляли растворитель и остаток очищали методом препаративной НРЬС с получением желаемого продукта в виде твердого вещества светло-пурпурного цвета (11 мг, 9%). Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила >95%; т/х=460 [М+Н]⁺.

Ή МИК (300 МГц, С1УОО) δ: 1,02-1,37 (8Н, т), 1,73-1,94 (19Н, т), 3,02 (3Н, т), 3,90 (1Н, т), 5,37 (1Н, т), 8,67 (2Н, 8).

- 21 017198

Стадия 7. Гидролиз эфира и снятие защиты с гидроксамата с получением (28)-циклогексил-[({1-[5(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]пиперидин-4-ил}метил)амино]уксусной кислоты (19).

НО.

он

Продукт со стадии 5 (78 мг, 0,14 ммоль) перемешивали в среде 1 М ЫаОН_ач (10 мл) и ТНГ (10 мл) в течение 4 дней при температуре 40°С. Затем реакционную смесь охлаждали до КТ и подкисляли до рН ~3 при помощи 1 М НС1_ач. Эту смесь перемешивали в течение 10 мин и затем выпаривали досуха. Остаток очищали методом препаративной НРЬС с получением конечного продукта в виде твердого вещества белого цвета (1 мг, 2%). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=392 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, СИзОИ) δ: 1,03-1,25 (9Н, т), 1,60-1,87 (8Н, т), 2,06 (1Н, т), 2,85 (4Н, т), 3,44 (1Н, т), 8,55 (2Н, 8).

Аналоги, показанные на фиг. 4, получали методом, описанным для синтеза соединений (18) и (19). Для каждого аналога приведены данные, его характеризующие.

⁽¹⁶⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=434 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,03 (6Н, т), 1,32 (4Н, т), 1,71-1,95 (15Н, т), 2,90 (1Н, т), 3,01 (2Н, т), 4,01 (1Н, т), 5,37 (1Н, т), 8,68 (2Н, т).

⁽¹⁷⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 97%; т/х=366 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 0,92 (6Н, т), 1,19 (3Н, т), 1,58 (2Н, т), 1,75 (4Н, т), 1,98 (1Н, т), 2,89 (4Н, т), 3,70 (1Н, т), 8,55 (2Н, 8).

⁽²⁰⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=454 [М+Н]⁺.

Ή ИМК (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,19-1,62 (10Н, т), 1,79-1,92 (6Н, т), 2,09 (1Н, т), 2,84 (1Н, т), 2,97 (2Н, т), 5,32 (1Н, т), 7,54 (5Н, т), 8,67 (1Н, т).

⁽²¹⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=386 [М+Н]⁺.

Ή NΜΚ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,08-1,28 (4Н, т), 1,77 (2Н, т), 1,98 (1Н, т), 2,68-2,87 (4Н, т), 4,90 (1Н, т), 7,39 (5Н, т), 8,54 (2Н, 8).

⁽²²⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=464 [М+Н]⁺.

Ή ИМК (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,13 (9Н, 8), 1,56-1,71 (12Н, т), 1,82 (3Н, т), 2,04 (1Н, т), 2,91 (3Н, т), 3,81 (2Н, т), 4,14 (1Н, т), 5,39 (1Н, т), 8,55 (2Н, т).

⁽²³⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=396 [М+Н]⁺.

Ή ИМК (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,26 (9Н, 8), 1,31 (4Н, т), 1,94 (2Н, т), 2,14 (1Н, Ьг 8), 3,03 (4Н, т), 3,95 (2Н, т), 4,16 (1Н, т), 8,67 (2Н, 8).

⁽²⁴⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=408 [М+Н]⁺.

Ή ИМК (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,22-1,33 (3Н, т), 1,53-1,73 (11Н, т), 2,02 (1Н, т), 2,93 (4Н, т), 3,91 (2Н, т), 4,02 (1Н, т), 5,23 (1Н, т), 8,55 (2Н, 8).

⁽²⁵⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; т/х=340 [М+Н]⁺.

Ή ИМК (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,28 (2Н, т), 1,97 (2Н, т), 2,15 (1Н, т), 3,07 (4Н, т), 4,09 (4Н, т), 4,93 (1Н, т), 8,67 (2Н, т).

⁽²⁶⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 87%; т/х=504 [М+Н]⁺.

Ή ИМК (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,02-1,48 (7Н, Ьг т), 1,68-1,82 (5Н, т), 2,01 (1Н, т), 2,97 (2Н, т), 3,13 (4Н, т), 5,19 (2Н, т), 7,49 (3Н, т), 7,83 (4Н, т), 8,59 (2Н, 8).

- 22 017198

Пример 4.

Схема 8

Стадия ],

Воср.МаНСО, нуэ.тнв

Стадия 2.

ИЛЩ.ТНР дноксан

Стадия 3МпОа.ОСМ

О

ПРОДУКТЕ

Стадия 10.

Стадия 4. Прошжуточни! .продукт А

НаВНЛмск, асе

Стадия 6. МаВНГОЛсЬ

- 23 017198

Синтез соединений, показанных на фиг. 5, методом, использованным для получения соединений (27) и (28).

4-(Аминометил)бензойную кислоту (10,00 г, 65,36 ммоль) перемешивали с Вос₂О (28 г, 130,72 ммоль) в среде Н₂О (100 мл) и ТНГ (100 мл) при ВТ. Добавляли насыщенный М^НСОз,·,,,,, до достижения рН, равного ~6,0, реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч. Затем реакционную смесь подкисляли до рН ~3 при помощи 1 М НС1(_ач), происходило осаждение твердого продукта. Этот продукт отфильтровывали и сушили с получением твердого вещества белого цвета (16,1 г, 97%); ш/х=274 |М+№1|'.

Стадия 2. Восстановление кислоты.

Продукт со стадии 1 (16,1 г, 64,14 ммоль) перемешивали в ТНГ (300 мл) и диоксане (200 мл) при температуре 0°С в атмосфере азота. Затем добавляли Ь1А1Н₄, давали реакционной смеси нагреться до ВТ и перемешивали в течение 16 ч. Затем смесь охлаждали до 0°С и обрывали реакцию насыщенным МН₄С1_ач. Добавляли №ь8О₄ и перемешивали смесь в течение 30 мин. Затем смесь фильтровали через целит и концентрировали фильтрат под вакуумом с получением продукта в виде твердого вещества светложелтого цвета (13,1 г, 94%); т/х=260 |М+№1|'.

Стадия 3. Окисление спирта.

Продукт со стадии 2 (5,87 г, 24,73 ммоль) перемешивали с МпО₂ (16,71 г, 192,20 ммоль) в среде ЭСМ в течение 16 ч при ВТ. Затем реакционную смесь фильтровали через целит и удаляли растворитель под вакуумом с получением продукта в виде желтого масла, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки (4,63 г, 80%); т/х=258 |М+№1|'.

- 24 017198

Стадия 4. Восстановительное аминирование.

Продукт со стадии 3 (650 мг, 2,70 ммоль) перемешивали в среде БСЕ (20 мл) в присутствии промежуточного соединения А (634 мг, 2,70 ммоль) и NаΒН(ОΑс)₃ (918 мг, 4,33 ммоль) при ΚΤ в атмосфере азота в течение 3 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали ЕьО (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (Мд8О₄) и удаляли растворитель под вакуумом с получением желаемого продукта в виде коричневого масла, который применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки (1,1 г, 98%); т/х=419 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Снятие защиты Вос.

Продукт со стадии 4 (1,1 г, 2,63 ммоль) перемешивали в среде БСМ (5 мл) с 4 М НС1 в диоксане (2 мл) при ΚΤ в атмосфере азота в течение 3 ч. Растворитель удаляли под вакуумом, остаток высушивали с получением целевого продукта в виде твердого вещества коричневого цвета, представляющего собой соль НС1 (670 мг, 100%); μ/ζ=319 [М+Н]⁺.

Стадия 6. Восстановительное аминирование.

2-(4-Оксопиперидин-1-ил)пиримидин-5-карбоновую кислоту (полученную, как описано в примере 1 100 мг, 0,45 ммоль) перемешивали в среде БСЕ (10 мл) с продуктом со стадии 5 (159 мг, 0,45 ммоль) и NаВН(ОΑс)₃ (191 мг, 0,9 ммоль) при ΚΤ в атмосфере азота в течение 64 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали БСМ (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (№ь8О₄) и удаляли растворитель под вакуумом. Остаток применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки; ιη/ζ=524 [М+Н]⁺.

Стадия 7. Образование защищенного гидроксамата.

Продукт со стадии 6 (0,45 ммоль) перемешивали в среде БМЕ (10 мл) с промежуточным соединением Е (621 мкл, 4,50 ммоль), ЕБС1 (103 мг, 0,54 ммоль), НОВ! (73 мг, 0,54 ммоль) и Εΐ₃Ν (313 мкл, 2,25 ммоль) при ΚΤ в атмосфере азота в течение 40 ч. Реакционную смесь затем разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали БСМ (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (Мд8О₄) и удаляли под вакуумом растворитель с получением желаемого продукта в виде желтого масла, который применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки; ιη/ζ=639 [М+Н]⁺.

- 25 017198

Стадия 8. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-И-{4-[({1-[5(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]пиперидин-4-ил}амино)метил]бензил}-Ь-лейцината (27).

Продукт со стадии 7 (0,45 ммоль) перемешивали в Όί'Μ (10 мл) с ТГА (1 мкл) при КТ в течение 30 мин. Затем удаляли растворитель под вакуумом и очищали остаток методом препаративной НРЬС с получением продукта в виде твердого вещества розового цвета (15 мг, 6% после проведения двух стадий). Степень чистоты по данным БСМ8 составила 96%; ιη/ζ=639 [М+Н]⁺.

Ίΐ ΝΜΡ (300 МГц, СШО1)) δ: 1,00 (6Н, т), 1,61-1,95 (12Н, т), 2,28 (2Н, т), 3,04 (3Н, т), 4,01 (1Н, т), 4,29 (4Н, т), 5,04 (2Н, т), 5,34 (1Н, т), 7,60 (4Н, т), 8,70 (2Н, 8).

Стадия 9. Гидролиз эфира.

Продукт со стадии 7 (0,45 ммоль) перемешивали в среде ТНГ (10 мл) с ΚΌΡΜΕ! (115 мг, 0,9 ммоль) в течение 96 ч при КТ в атмосфере азота. Затем удаляли под вакуумом растворитель и применяли остаток на следующей стадии без дальнейшей очистки; ιη/ζ=571 [М+Н]⁺.

Стадия 10. Снятие защиты с гидроксамата с получением Ν-{4-[({1-[5(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]пиперидин-4-ил}амино)метил]бензил}-Ь-лейцина (28).

Продукт со стадии 9 перемешивали в среде ЭСМ (10 мл) с ТГА (1 мл) при КТ в течение 30 мин. Затем удаляли растворитель под вакуумом и остаток очищали методом препаративной НРЬС с получением желаемого продукта в виде твердого вещества белого цвета (5 мг, 3%); ιη/ζ=471 [М+Н]⁺.

Ίΐ ΝΜΡ (300 МГц, ύβ-ΌΜ^) δ: 0,9 (6Н, ά, 1=4,8 Гц), 1,51 (2Н, т), 1,71 (2Н, т), 2,19 (2Н, т), 3,00 (4Н, т), 4,42 (2Н, Ьг 8), 3,75 (1Н, т), 4,22 (4Н, т), 4,80 (2Н, т), 7,52 (4Н, т), 8,71 (2Н, 8), 8,98 (2Н, Ьг 8), 11,01 (1Н, 8).

Аналоги, показанные на фиг. 5, были получены методом, описанным для синтеза соединений (27) и (28). Для каждого аналога приведены данные, характеризующие его.

⁽²⁹⁾ ₊

Степень чистоты по данным БСМ8 составила 99%; ιη/ζ=565 [М+Н]⁺.

Ίΐ ΝΜΡ (300 МГц, ά^ΌΜ^) δ: 0,88 (2Н, т), 1,05-1,30 (5Н, т), 1,50-1,85 (18Н, т), 2,18 (2Н, т), 3,00 (2Н, т), 2,25 (2Н, т), 4,80 (2Н, т), 5,17 (2Н, т), 7,54 (4Н, т), 8,71 (2Н, 8), 8,93 (2Н, т), 9,45 (1Н, Ьг 8), 11,10 (1Н, 8).

⁽³⁰⁾ ₊

Степень чистоты по данным БСМ8 составила 95%; ιη/ζ=497 [М+Н]⁺.

Ίΐ ΝΜΡ (300 МГц, СШО1)) δ: 0,80-1,34 (6Н, т), 1,49-1,68 (5Н, т), 1,85 (1Н, т), 2,17 (2Н, т), 2,93 (4Н, т), 3,58 (1Н, т), 4,20 (4Н, т), 4,93 (2Н, т), 7,51 (4Н, т), 8,59 (2Н, т).

- 26 017198 ⁽³¹⁾ ₊Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=569 [М+Н]⁺.

Ή ММВ (300 МГц, С1ТО1)) δ: 1,22 (9Н, 8), 1,51-1,84 (11Н, т), 2,18 (2Н, т), 2,93 (3Н, т), 3,44 (1Н, т), 3,79 (2Н, дй, 1=7,8, 3,3 Гц), 4,24 (4Н, т), 4,93 (2Н, т), 5,22 (1Н, т), 7,52 (4Н, т), 8,59 (2Н, 8).

⁽³²⁾ ₊Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 96%; т/х=501 [М+Н]⁺.

Ή ММВ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,25 (9Н, 8), 1,62 (2Н, т), 2,29 (2Н, т), 3,07 (4Н, т), 3,85 (2Н, т), 4,35 (4Н, т), 5,07 (2Н, т), 7,63 (4Н, т), 8,71 (2Н, т).

⁽³³⁾ ₊Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 98%; т/х=559 [М+Н]⁺.

Ή ММВ (300 МГц, С1ТО1)) δ: 1,31-1,93 (12Н, т), 2,29 (2Н, т), 3,04 (3Н, т), 3,56 (1Н, т), 4,22 (4Н, т), 5,17 (2Н, т), 5,30 (1Н, т), 7,47-7,43 (9Н, т), 8,69 (2Н, 8).

⁽³⁴⁾ ₊Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; т/х=491 [М+Н]⁺.

Ή ММВ (300 МГц, С1ТО1)) δ: 1,63 (2Н, т), 2,29 (2Н, т), 3,06 (2Н, т), 3,29 (2Н, т), 3,56 (1Н, т),

4,20 (4Н, т), 5,07 (1Н, т), 7,54 (9Н, т), 8,70 (2Н, 8).

Пример 5.

Схема 9

Стадия ХТРА, ОСМ

^н% о

Полученные соединения:

“'Лг? Т (35) Фиг. 6

Стадия 1. Восстановительное аминирование.

Циклопентил-(28)-{[4-(аминометил)бензил]амино}(фенил)ацетат (полученный, как описано в примере 4 - 100 мг, 0,29 ммоль) перемешивали с 2-(6-формил-3-азабицикло[3.1.0]гекс-3-ил)-№(1изобутокси)пиримидин-5-карбоксамидом (полученным, как описано в примере 2 - 108 мг, 0,29 ммоль) и

- 27 017198

NаΒΗзСN (36 мг, 0,58 ммоль) в ОСЕ (10 мл) при КТ в атмосфере азота в течение 16 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали ЭСМ (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали (Мд§О₄) и удаляли под вакуумом растворитель. Остаток очищали методом хроматографии на колонке (0-10% МеОΗ в ЭСМ) с получением желаемого продукта в виде желтого масла (56 мг, 29%); ιη/ζ=671 [Μ+Η]⁺.

Стадия 2. Снятие защиты с гидроксамата с получением (28)-[(4-{[({3-[5-(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]-3-азабицикло[3.1.0]гекс-6-ил}метил)амино]метил}бензил)амино](фенил)ацетата (35).

Продукт со стадии 1 (56 мг, 0,08 ммоль) перемешивали в среде ЭСМ (10 мл) с ТЕА (1 мл) при КТ в течение 15 мин. Затем под вакуумом удаляли растворитель и очищали остаток методом препаративной ИРЕС с получением желаемого продукта в виде твердого вещества розового цвета (12 мг, 25%); ιη/ζ=571 [М+Н]⁺.

Ή ПМВ (300 МГц, СО₃ОЭ) δ: 0,98 (1Η, т), 1,31-1,64 (6Н, т), 1,76-1,93 (4Н, т), 3,09 (2Н, б, 1=7,5 Гц), 3,61 (2Н, б, 1=10,5 Гц), 3,98 (2Н, б, 1=10,5 Гц), 4,15 (2Н, т), 4,27 (3Η, т), 5,31 (1Н, т), 7,57 (9Н, т), 8,66 (2Н, 8).

Пример 6.

Схема 10

ΊΓ

Стадия Ι.ΤΕΑ, 1ЭСМ

Сталия 3. КОТМЗ, ТНЕ

- 28 017198 ^НОЛ^ у

Полученные соединения:

НСк, ^я1(?шхо4'^в

В = циклопентил (36) В = Н (37)

К. = циклопентил (38)

В = Н (39)

циклопентил (40) (41)

К = циклопентил(42)

В =11 (43)

В = циклопентил (44)

К = Н (45)

Фиг. 7

Синтез соединений, показанных на фиг. 7, определенных обозначениями (38) и (39).

Стадия 1. Восстановительное аминирование.

'^^Χχ°ν°Ίΐ ΊΓ

Циклопентил-(28)-{[4-(аминометил)бензил]амино}(4-метилциклогексил)ацетат (полученный, как описано в примере 4 - 100 мг, 0,29 ммоль) перемешивали с 2-(4-формилпиперидин-1-ил)-Ы-(1изобутоксиэтокси)пиримидин-5-карбоксамидом (полученным, как описано в примере 3 - 110 мг, 0,29 ммоль) в среде ЭСЕ (10 мл) с Ν;·ιί.’ΝΒΗ₃, (36 мг, 0,58 ммоль) при ВТ в атмосфере азота в течение 16 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали ОСМ (2x100 мл). Объединенные органические экстракты высушивали (Мд§О₄) и удаляли под вакуумом растворитель с получением желаемого продукта в виде желтого масла, который применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки; ιη/ζ=701 |М+№1|'.

Стадия 2. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-(28)-циклогексил-[(4-{[({1-[5(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]пиперидин-4-ил}метил)амино]метил}бензил)амино]ацетата (38).

Продукт со стадии 1 перемешивали в среде ЭСМ (10 мл) с ТТЛ (1 мл) при ВТ в течение 30 мин. Затем растворитель удаляли под вакуумом и очищали остаток методом препаративной НРЬС с получением желаемого продукта в виде твердого вещества пурпурного цвета (14 мг, 8% после проведения двух стадий). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила >95%; ш^=579 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΒ (300 МГц, ί.Ό₃ΟΌ) δ: 1,1-1,42 (10Н, т), 1,74-2,12 (18Н, т), 3,01 (2Н, т), 3,82 (1Н, т), 4,28 (4Н, т), 5,31 (1Н, т), 7,61 (4Н, т), 8,66 (2Н, т).

- 29 017198

Стадия 3. Гидролиз эфира.

Продукт со стадии 1 (100 мг, 0,28 ммоль) перемешивали в среде ТНГ (10 мл) с КОТΜ§ (180 мг, 1,40 ммоль) при температуре, равной 50°С, в атмосфере азота. Реакционной смеси давали охладиться до КТ, затем под вакуумом удаляли растворитель и применяли остаток на следующей стадии без дальнейшей очистки; ш/х=611 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Снятие защиты с гидроксамата с получением (28)-циклогексил-[(4-{[({1-[5(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]пиперидин-4-ил}метил)амино]метил}бензил)амино]уксусной кислоты (39).

но.

.он

Продукт со стадии 3 перемешивали в среде Όί’Μ (10 мл) с ТГА (1 мл) при КТ в течение 30 мин. Затем растворитель удаляли под вакуумом и очищали остаток методом препаративной НРЬС с получением продукта в виде твердого вещества розового цвета (19 мг, 13% после проведения двух стадий). Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила >95%; т/х=511 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,16-1,41 (9Н, т), 1,69-1,91 (8Н, т), 2,12 (1Н, т), 2,99 (4Н, т), 4,29 (4Н, т), 4,92 (1Н, т), 7,62 (4Н, т), 8,66 (2Н, 8).

Аналоги, показанные на фиг. 7, были получены методом, описанным для синтеза соединений (38) и (39). Для каждого аналога приведены характеризующие его данные.

⁽³⁶⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила 98%; т/х=553 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, ^-ΌΜ8Θ) δ: 0,90 (6Н, т), 1,12 (2Н, т), 1,28 (2Н, й, 1=6,6 Гц), 1,65 (9Н, т), 1,72 (3Н, т), 2,03 (1Н, т), 2,73 (2Н, т), 2,96 (2Н, 1, 1=12 Гц), 4,20 (4Н, т), 4,72 (2Н, й, 1=13,5 Гц), 5,20 (1Н, т), 7,54 (4Н, т), 8,66 (2Н, 8), 8,95 (2Н, Ьг 8), 9,60 (1Н, Ьг 8), 11,05 (1Н, 8).

⁽³⁷⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила 97%; т/х=485 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 0,87 (6Н, т), 1,29 (4Н, т), 1,77 (5Н, т), 2,00 (1Н, т), 2,88 (4Н, т), 3,88 (1Н, т), 4,18 (4Н, т), 7,52 (4Н, 8), 8,61 (2Н, 8).

⁽⁴⁰⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила 99%; т/х=583 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,24 (9Н, 8), 1,41 (2Н, й, 1=6,6 Гц), 1,69-1,95 (12Н, Ьг т), 2,15 (1Н, Ьг 8), 3,00 (4Н, т), 3,93 (2Н, т), 4,20 (1Н, т), 4,31 (4Н, т), 5,34 (1Н, т), 7,63 (4Н, т), 8,66 (2Н, 8).

⁽⁴¹⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила 99%; т/х=515 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,25 (9Н, 8), 1,29 (4Н, т), 1,89 (2Н, т), 2,12 (1Н, Ьг 8), 3,01 (4Н, т), 3,94 (2Н, цй, 1=9,0, 3,9 Гц), 4,12 (1Н, 1, 1=3,6 Гц), 4,33 (4Н, арр. й, 1=18,6 Гц), 7,63 (4Н, 8), 8,66 (2Н, 8).

⁽⁴²⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила 98%; т/х=573 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, ^-ΌΜ^) δ: 1,31-1,83 (12Н, Ьг т), 2,04 (1Н, т), 2,85 (2Н, т), 2,96 (2Н, 1, 1=12 Гц), 3,99 (2Н, т), 4,15 (2Н, т), 4,70 (2Н, й, 1=13,2 Гц), 5,16 (2Н, т), 7,51 (9Н, т), 8,66 (2Н, 8), 8,97 (2Н, Ьг 8), 10,13 (1Н, Ьг 8), 11,05 (1Н, 8).

⁽⁴³⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 99%; т/х=505 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 0,89 (1Н, т), 1,08 (2Н, т), 1,77 (3Н, т), 2,01 (1Н, т), 2,90 (4Н, т), 4,08 (4Н, т), 4,94 (1Н, 8), 7,45 (9Н, т), 8,55 (2Н, 8).

⁽⁴⁴⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 99%; т/х=528 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,30 (3Н, т), 1,67-1,78 (11Н, т), 2,12 (1Н, т), 3,02 (4Н, т), 4,06 (3Н, т), 4,33 (4Н, арр. й, 1=18 Гц), 5,34 (1Н, т), 7,66 (4Н, т), 8,66 (2Н, 8).

⁽⁴⁵⁾ ₊

Степень чистоты по данным ЬСМЗ составила 96%; т/х=459 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜ^ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 1,25 (4Н, т), 1,89 (2Н, т), 2,15 (1Н, т), 2,99 (4Н, т), 4,00 (1Н, т), 4,09 (2Н, т), 4,34 (4Н, арр. й, 1=21,9 Гц), 7,64 (4Н, т), 8,66 (2Н, 8).

- 30 017198

Пример 7.

Схема 11

Стадия 6.

Полученные соединения:

Стадия 1. Восстановление кислоты.

Фиг. 9

4-(Аминометил)циклогексанкарбоновую кислоту (4,00 г, 25,44 ммоль) перемешивали в среде ТНГ (100 мл) при температуре 0°С в атмосфере азота. Затем добавляли Ь1А1Н₄ (2,90 г, 76,33 ммоль), давали реакционной смеси нагреться до ВТ и перемешивали в течение 3 ч. Затем смесь охлаждали до 0°С и обрывали реакцию Н₂О. Затем добавляли №ь8О₄ и перемешивали смесь в течение 10 мин. Затем смесь фильтровали через целит и концентрировали фильтрат под вакуумом с получением желаемого продукта в виде бесцветного масла, которое отверждалось при стоянии с получением твердого продукта белого

- 31 017198 цвета (3,72 г, 100%).

Ή NΜВ (300 МГц, к₆-ЭМ8О) δ: 0,95 (4Н, т), 1,22-1,47 (5Н, т), 1,86 (4Н, т), 2,55 (2Н, к, 1=6,6 Гц), 4,66 (2Н, к, 1=6,3 Гц).

Стадия 2. Защита при помощи Вос.

ОН

Продукт со стадии 1 (3,72 г, 26,01 ммоль) перемешивали с №ОН (1,00 г, 26,01 ммоль) и ди-третбутилдикарбонатом (6,24 г, 28,61 ммоль) в среде воды (50 мл) и диоксана (50 мл) при ВТ в течение 16 ч. Затем реакционную смесь концентрировали под вакуумом. После испарения около 50% растворителя из раствора осаждался твердый продукт, его собирали и высушивали с получением желаемого продукта в виде твердого вещества белого цвета (5,5 г, 87%); ш/х=266 |М+№1|'.

Ή NΜВ (300 МГц, С1);О1)) δ: 0,82 (4Н, т), 1,28 (2Н, т), 1,37 (9Н, 8), 1,70 (4Н, т), 2,76 (2Н, !, 1=6,3 Гц), 3,19 (2Н, к, 1=6,3 Гц), 4,32 (3Н, Ьг 8), 6,75 (1Н, т).

Стадия 3. Окисление спирта.

Раствор ЭСМ (100 мл) и (СОС1)₂ (1,58 мл, 18,14 ммоль) перемешивали в атмосфере азота и охлаждали до температуры -78°С. Затем, поддерживая температуру ниже -65°С, добавляли ЭМ8О (2,27 мл, 32,02 ммоль). Затем готовили раствор продукта со стадии 2 (4,5 г, 17,79 ммоль) в ЭСМ (50 мл) и медленно добавляли его к реакционной смеси, снова поддерживая температуру ниже -65°С. После окончания добавления медленно добавляли Е!^ (9,99 мл, 71,69 ммоль), снова поддерживая температуру ниже -65°С. После окончания добавления давали реакционной смеси нагреться до ВТ и затем под вакуумом удаляли растворитель. Остаток очищали методом хроматографии на колонке (0-10% МеОН в ЭСМ) с получением желаемого продукта в виде масла светло-желтого цвета (5 г, >100% - содержит некоторое количество Е!₃Ц); т/х=264 |М+№1|'.

Ή ММВ (300 МГц, СО_;ОО) δ: 1,02 (2Н, т), 1,30 (2Н, т), 1,45 (9Н, 8), 1,90 (2Н, т), 2,03 (2Н, т), 3,01 (2Н, !, 1=6,3 Гц), 4,57 (1Н, Ьг 8), 9,63 (1Н, 8).

Стадия 4. Восстановительное аминирование.

Продукт со стадии 3 (1,00 г, 4,14 ммоль) перемешивали с промежуточным соединением В (1,08 мг, 4,14 ммоль) и триацетоксиборгидрида натрия (1,33 г, 6,21 ммоль) в ОСЕ (20 мл) при ВТ в течение 16 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали ЭСМ (2x100 мл). Объединенные органические экстракты высушивали (Мд8О4) и удаляли растворитель под вакуумом с получением желаемого продукта в виде твердого вещества серого цвета, которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки (1,74 г, 94%); ш/х=451 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Снятие защиты Вос.

на.

Продукт со стадии 4 (1,74 г, 3,87 ммоль) перемешивали в среде ЭСМ (10 мл) с 4 М НС1 в диоксане (3 мл) при ВТ в течение 16 ч. Затем под вакуумом удаляли растворитель и высушивали остаток под вакуумом с получением желаемого продукта в виде твердого вещества белого цвета (1,36 г, 98%); т/х=351 [М+Н]⁺.

Ή ММВ (300 МГц, к₆-ЭМ8О) δ: 0,90-1,20 (9Н, т), 1,50-2,00 (21Н, т), 2,65 (4Н, т), 3,85 (1Н, т), 5,25 (1Н, т), 7,83 (2Н, т).

- 32 017198

Стадия 6. Восстановительное аминирование.

Продукт со стадии 5 (216 мл, 0,56 ммоль) перемешивали с 2-(4-формилпиперидин-1-ил)-Ы-(1изобутоксиэтокси)пиримидин-5-карбоксамидом (полученным, как описано в примере 3 - 200 мг, 0,57 ммоль) и №1ВН₃С’Н (70 мг, 1,12 ммоль) в среде ОСЕ (10 мл) при ВТ в атмосфере азота в течение 48 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали ЭСМ (2x100 мл). Объединенные органические экстракты высушивали (Мд§О₄) и удаляли под вакуумом растворитель с получением желаемого продукта в виде масла желтого цвета, который применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Стадия 7. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-(28)-циклогексил-{[(4-{[({1[5-(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]пиперидин-4-ил}метил)амино]метил}циклогексил)метил]амино}ацетата (46).

СЪХПΎη

Продукт со стадии 6 (0,28 ммоль) перемешивали в среде ЭСМ (10 мл) с ТРА (0,5 мл) при ВТ в течение 30 мин. Затем под вакуумом удаляли растворитель и остаток очищали методом препаративной НРЬС с получением желаемого продукта в виде твердого вещества розового цвета (15 мг, 9% после проведения двух стадий). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила >95%; т/х=585 [М+Н]⁺.

Ή ЫМВ (300 МГц, С1)₃О1>) δ: 0,96-1,39 (13Н, т), 1,72-2,16 (23Н, т), 2,81-3,04 (7Н, т), 3,84 (2Н, ά, 1=3,9 Гц), 5,36 (1Н, т), 8,66 (2Н, 8).

Стадия 8. Гидролиз сложного эфира.

Продукт со стадии 6 (0,28 ммоль) перемешивали с КОТМ8 (180 мг, 1,4 ммоль) и ТНР (10 мл) при температуре, равной 50°С, в атмосфере азота в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до ВТ, удаляли растворитель под вакуумом и применяли остаток на следующей стадии без дальнейшей очистки; ι/ζ=617 [М+Н]⁺.

Стадия 9. Снятие защиты с гидроксамата с получением (28)-циклогексил-{[(4-{[({1-[5-(гидроксикарбамоил)пиримидин-2-ил]пиперидин-4-ил}метил)амино]метил}циклогексил)метил]амино}уксусной кислоты (47).

Продукт со стадии 8 (0,28 ммоль) перемешивали в среде ЭСМ (10 мл) с ТРА (1 мл) при ВТ в течение 30 мин. Затем растворитель удаляли под вакуумом и очищали остаток методом препаративной НРЬС с получением желаемого продукта в виде твердого вещества белого цвета (5 мг, 3% после проведения двух стадий); ι/ζ=517 [М+Н]⁺.

Ή ИМВ (300 МГц, С17₃О1>) δ: 1,13-1,44 (11Н, т), 1,75-1,94 (15Н, т), 2,82-3,09 (8Н, т), 3,39 (1Н, т), 3,65 (1Н, т), 4,94 (1Н, т), 8,67 (2Н, т).

- 33 017198

Пример 8.

Схема 12

Стадия 1. Сочетание.

Фиг. 9

Этил-4-фторбензоат (6,75 г, 40,1 ммоль) и 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан (2,73 г, 19,1 ммоль) перемешивали с К₂С0₃ (8,5 г, 61,5 ммоль) в ΜеСN (10 мл) при температуре 95°С в течение одной недели. Смесь добавляли к ЕЮАс (50 мл) и промывали водой (3x50 мл). Органическую фракцию высушивали (Μ§§0₄), отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Полученный продукт очищали методом флэш-хроматографии (2% ΜеОН в ^СΜ) с получением масла желтого цвета (5,58 г, 48%); т/х=292

- 34 017198 [М+Н].

Стадия 2. Гидролиз эфира.

ΟΕΙ

Продукт со стадии 1 (5,58 г, 19,15 ммоль) растворяли в ЕЮН (25 мл) и перемешивали с 50% №ОН_ач(25 мл) при температуре 60°С в течение 3 ч. Смесь охлаждали до ВТ и добавляли 2 М НС1_ач (50 мл). Затем смесь перемешивали в течение 3 дней при 30°С. Продукт экстрагировали ЭСМ (4x50 мл), высушивали (Мд8О₄), концентрировали под вакуумом и перекристаллизовывали из ЕЮН с получением твердого вещества белого цвета (1,459 г, 26%); т/х=294 [М+Н]⁺.

Продукт со стадии 2 (509 мг, 1,795 ммоль) перемешивали в среде 1 М НС1_ач (15 мл) при ВТ в течение 30 мин. Полученную смесь концентрировали под вакуумом, добавляли к минимальному количеству воды, отфильтровывали и высушивали в десикаторе. Получали твердое вещество белого цвета (279 мг, 73%); т/х=220 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Восстановительное аминирование.

Продукт со стадии 3 (279 мг, 1,27 ммоль) и промежуточное соединение А (303 мг, 1,28 ммоль) перемешивали в среде 1,2-дихлорэтана (10 мл) в присутствии триацетоксиборгидрида натрия (405 мг, 1,91 ммоль) при ВТ в течение ночи. Полученную смесь добавляли в ЭСМ (100 мл) и промывали водой (2x100 мл). Объединенные водные слои вновь экстрагировали при помощи ЭСМ (100 мл), затем объединенные органические фракции высушивали (№₂8О₄), отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением масла коричневого цвета (495 мг, 97%); т/х=403 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Сочетание защищенного гидроксамата.

Продукт со стадии 4 (495 мг, 1,20 ммоль) растворяли в ОМЕ и перемешивали с промежуточным соединением Е (0,84 мл, 6,12 ммоль), триэтиламином (0,84 мл, 6,03 ммоль), НОВ! (228 мг, 1,49 ммоль) и ЕЭО (295 мг, 1,54 ммоль) при ВТ в течение 2 дней. Полученную смесь добавляли к ЭСМ (100 мл) и промывали водой (2x100 мл). Объединенные водные слои вновь обрабатывали ЭСМ (100 мл), затем объединенные органические фракции высушивали (№₂8О₄), отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением масла желтого цвета (638 мг, колич. выход); т/х=518 [М+Н]⁺.

Стадия 6. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-№{1-[4(гидроксикарбамоил)фенил]пиперидин-4-ил}-Ь-лейцината (48).

Продукт со стадии 5 (309 мг, 597 мкмоль) перемешивали в среде ЭСМ (5 мл) в присутствии ТГА (0,5 мл) при ВТ в течение 1 ч. Реакционную смесь очищали методом препаративной НРЬС с получением

- 35 017198 твердого вещества белого цвета (75 мг, 30%). Степень чистоты продукта по данным ЬСМ8 составила 95%; 111//418 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, (ΊΓΟΙ)) δ: 7,67 (2Н, й, 1=8,5 Гц), 7,02 (2Н, й, 1=8,5 Гц), 5,38 (1Н, т), 4,13 (1Н, т), 4,04 (2Н, й, 1=12,4 Гц), 2,92 (2Н, т), 1,97 (2Н, т), 1,88-1,68 (13Н, т), 1,04 (6Н, йй, 1=6,2, 7,8 Гц).

Стадия 7. Гидролиз эфира и снятие защиты с гидроксамата с получением Ν-{1-[4(гидроксикарбамоил)фенил]пиперидин-4-ил}-Ь-лейцина (49).

Продукт со стадии 5 (50 мг, 120 мкмоль) перемешивали в ТНГ (5 мл) и 1 М №ОН_ач (5 мл, 5 ммоль) при КТ в течение 3 дней. Полученную смесь подкисляли до рН ~3 при помощи 2 М НС1_ач и перемешивали в течение 20 мин, затем ее концентрировали под вакуумом и очищали методом препаративной НРЬС с получением твердого продукта белого цвета (5 мг, 12%). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 90%; 111//.350 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΚ (300 МГц, й₆-ЭМ8О) δ: 10,90 (1Н, ₈), 7,63 (2Н, й, 1=8,8 Гц), 6,93 (2Н, й, 1=9,0 Гц), 3,84 (2Н, й, 1=12,9 Гц), 3,24 (1Н, 1, 1=6,9 Гц), 2,97-2,76 (3Н, т), 1,96-1,74 (3Н, т), 1,54-1,32 (4Н, т), 0,89 (6Н, 1, 1=6,4 Гц).

Пример 9.

- 36 017198

Полученные соединения:

К = циклопентил (50)

К = Н (51)

Фиг. 10

Стадия 1. Сочетание.

Этил-4-фторбензоат (2,740 г, 16,29 ммоль) и 4-пиперидинметанол (1,876 г, 16,29 ммоль) перемешивали в среде ΌΜ80 (100 мл) с К₂С0₃ (6,765 г, 48,95 ммоль) при температуре, равной 100°С, в течение ночи. Полученную смесь охлаждали до КТ и добавляли к воде (100 мл). Полученный продукт экстрагировали Όί,'Μ (2x100 мл), высушивали (Να₂80₄) и выпаривали под вакуумом с получением масла желтого цвета. Этот продукт применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки или определения свойств.

Стадия 2. Гидролиз эфира.

Продукт со стадии 1 (16,29 ммоль) перемешивали в среде 2 М №10Н,_|1:| (40 мл, 80 ммоль) и ТНЕ (40 мл) при КТ в течение 2 дней. Поскольку реакция протекала медленно, добавляли 50%-ную №0Н,_|1:|(10 мл) и перемешивали полученную смесь при температуре 55°С в течение 2 дней. Затем смесь охлаждали до КТ и полученный осадок отфильтровывали и хранили. Фильтрат подкисляли до рН ~3 при помощи 2 М НС1,,,, и перемешивали при КТ в течение 1 ч. Вторую порцию осадка отфильтровывали. Обе порции высушивали с получением твердого вещества белого цвета (общее количество составило 3,052 г, 80%); 1П//236 [М+Н]⁺.

Продукт со стадии 2 (3,031 г, 12,17 ммоль) перемешивали в среде ΌΜΕ (100 мл) с промежуточным соединением Е (8,0 мл, 58,27 ммоль), триэтиламином (8 мл, 57,39 ммоль), Н0В! (2,759 г, 18,02 ммоль) и ЕЭС1 (3,390 г, 17,72 ммоль) при КТ в течение ночи. Смесь добавляли к Όί,’Μ (100 мл). Объединенные водные слои вновь обрабатывали ΌΜΕ (100 мл), затем объединенные органические фракции высушивали (№₂80₄) и концентрировали под вакуумом. Сырой продукт очищали методом хроматографии на колонке (1-10% ΜеОН в Όί,’Μ) с получением масла желтого цвета (3,076 г, 75%); т/х=351 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Окисление по Сверну (8\усгп).

Όί,’Μ (200 мл) перемешивали с оксалилхлоридом (0,80 мл, 9,17 ммоль) при температуре -72°С. К полученной смеси добавляли по каплям ΌΜ80 (1,1 мл, 15,50 ммоль), поддерживая температуру, равной -72°С. Продукт со стадии 3 (3,08 г, 8,78 ммоль) растворяли в Όί,'Μ (100 мл) и добавляли по каплям к описанной выше смеси, поддерживая температуру, равной -72°С. Затем реакционную смесь перемешивали при указанной температуре в течение 5 мин, после чего давали ей нагреться до КТ. Затем смесь концен

- 37 017198 трировали под вакуумом и очищали методом флэш-хроматографии (1-10% МеОН в БСМ) с получением твердого вещества неправильного белого цвета (3,05 г, колич. выход); ιη/ζ=349 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Восстановительное аминирование.

Продукт со стадии 4 (206 мг, 0,591 ммоль) перемешивали с промежуточным соединением В (155 мг, 0,592 ммоль) в среде дихлорэтана (20 мл). К полученной смеси добавляли триэтиламин (0,85 мл, 6,10 ммоль) и цианборгидрид натрия (525 мг, 8,35 ммоль) и перемешивали смесь при ΚΤ в течение 2 дней. Реакцию обрывали водой (50 мл) и экстрагировали БСМ (2x50 мл). Органическую фазу высушивали (Мд8О₄) и концентрировали под вакуумом с получением масла желтого цвета (313 г, 95%); ιη/ζ=558 [М+Н]⁺.

Стадия 6. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-(28)-циклогексил-[({1-[4(гидроксикарбамоил)фенил]пиперидин-4-ил}метил)амино]ацетата (50).

Продукт со стадии 5 (180 мг, 323 ммоль) перемешивали в среде БСМ (10 мл) и ТЕЛ (0,5 мл) при ΚΤ в течение 1 ч. Полученный продукт сразу же очищали методом препаративной НРЬС с получением твердого вещества белого цвета (7,4 мг, 5%). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; ιη/ζ=458 [М+Н]⁺.

Ή ММК (300 МГц, СБ₃ОБ) δ: 7,67 (2Н, й, 1=8,3 Гц), 7,02 (2Н, й, 1=8,3 Гц), 5,40 (1Н, ΐ, 1=5,4 Гц), 3,93 (3Н, т), 3,07-2,85 (4Н, т), 2,05-1,70 (20Н, т), 1,47-1,06 (8Н, т).

Стадия 7. Гидролиз эфира.

Продукт со стадии 5 (184 мг, 330 мкмоль) перемешивали в среде ΤΉΕ (10 мл) с триметилсиланолатом калия (428 мг, 3,34 ммоль) при температуре 50°С в течение 4 дней. Полученную смесь концентрировали под вакуумом и применяли сырой остаток на следующей стадии.

Стадия 8. Снятие защиты с гидроксамата с получением (28)-циклогексил-[({1-[4(гидроксикарбамоил)фенил]пиперидин-4-ил}метил)амино]уксусной кислоты (51).

НО.

Продукт со стадии 7 перемешивали в среде БСМ (10 мл) с ΤΕΑ (0,5 мл) при ΚΤ в течение 1 ч. Полученную смесь концентрировали под вакуумом и полученный продукт очищали методом препаративной НРЬС с получением твердого вещества белого цвета (6,8 мг, 5%). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 93%; ιη/ζ=390 [М+Н]⁺.

Ή ММК (300 МГц, СБ₃ОБ) δ: 7,65 (2Н, 8), 6,99 (2Н, 8), 3,90 (2Н, й, 1=12,5 Гц), 3,84 (1Н, 8), 2,89 (4Н,

- 38 017198

т), 2,01-1,65 (10Н, т), 1,45-1,05 (8Н, т). Пример 10.

Схема 14

Стадия 3.

Полученные соединения:

Фиг. 11 Стадия 1. Восстановительное аминирование.

4-(4-Формилпиперидин-1-ил)-М-(1-изобутоксиэтокси)бензамид (полученный, как описано в примере 9 - 210 мг, 0,603 ммоль) перемешивали с циклопентил-(28)-{[4-(аминометил)бензил]амино}циклогексил)ацетатом (полученным, как описано в примере 4 - 230 мг, 0,604 ммоль) в среде 1,2дихлорэтана (20 мл). К полученной смеси добавляли триэтиламин (0,85 мл, 6,10 ммоль) и цианоборгидрид натрия (540 мг, 8,59 ммоль) и перемешивали полученную смесь при КТ в течение 2 дней. Эту смесь добавляли к воде (50 мл) и экстрагировали ΌΟΜ (2x50 мл). Органическую фазу высушивали (Μд§О₄) и

- 39 017198 концентрировали под вакуумом с получением масла коричневого цвета (408 мг, 92%); т/х=677 [М+Н]⁺. Стадия 2. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-(28)-циклогексил-[(4-[{1-[4(гидроксикарбамоил)фенил]пиперидин-4-ил}метил]бензил)амино]ацетата (52).

Продукт со стадии 1 (226 мг, 334 мкмоль) перемешивали в среде ЭСМ (10 мл) с ТЕА (0,5 мл) при КТ в течение 1 ч. Полученный продукт очищали методом препаративной НРЬС с получением твердого вещества неправильного белого цвета (33,5 мг, 17%). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; ιιι/ζ.577 [М+Н]⁺.

Ή ЕМК (300 МГц, СО₃ОЭ) δ: 7,64 (6Н, т), 7,02 (2Н, й, 1=8,2 Гц), 5,31 (1Н, !, 1=5,3 Гц), 4,30 (4Н, Ьг 8), 3,86 (3Н, т), 3,01 (1Н, з), 2,92 (2Н, !, 1=11,1 Гц), 2,05-1,68 (20Н, т), 1,48-0,95 (8Н, т).

Стадия 3. Гидролиз эфира.

Продукт со стадии 1 (218 мг, 322 мкмоль) перемешивали в среде ТНЕ (10 мл) с триметилсиланолатом калия (418 мг, 3,26 ммоль) при температуре 50°С в течение 4 дней. Полученную смесь концентрировали под вакуумом и применяли полученный сырой продукт на следующей стадии.

Стадия 4. Снятие защиты с гидроксамата с получением (28)-2-циклогексил-2-[(4-{[({1-[4(гидроксикарбамоил)фенил]пиперидин-4-ил}метил)амино]метил}бензил)амино]уксусной кислоты (53).

н

Продукт со стадии 3 перемешивали в среде ЭСМ (10 мл) с ТЕА (0,5 мл) при КТ в течение 1 ч. Смесь концентрировали под вакуумом и продукт очищали методом препаративной НРЬС с получением твердого вещества белого цвета (28,0 мг, 17%). Степень чистоты по данным ЬСМ8 составила 95%; 111/7 509 [М+Н]⁺.

Ή ЕМК (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 7,66 (6Н, т), 7,02 (2Н, й, 1=8,6 Гц), 4,30 (4Н, з), 3,89 (2Н, й, 1=12,2 Гц), 3,76 (1Н, й, 1=3,2 Гц), 3,01 (2Н, й, 1=6,4 Гц), 2,90 (2Н, !, 1=12,1 Гц), 2,03-1,68 (10Н, т), 1,46-1,05 (8Н, т).

- 40 017198

Пример 11.

Схема 15

Полученный как описано Полученный как оииеано а примере 7

Стадия I. №ΟΝΒΗ, Εί,Ν, ϋΟΕ

Сталия 2

СимхЯт)

Стадия 3.

К0ТЫ8.ТНГ

Полученные соединения:

Стадия 1. Восстановительное аминирование.

4-(4-Формилпиперидин-1-ил)-Х-(1-изобутоксиэтокси)бензамид (полученный, как описано в примере 9 - 212 мг, 0,608 ммоль) перемешивали с циклопентил-(28)-{[4-(аминометил)циклогексил]метил}амино(циклогексил)ацетатом (полученным, как описано в примере 7 - 236 мг, 0,609 ммоль) в среде 1,2-дихлорэтана (20 мл). К полученной смеси добавляли триэтиламин (0,85 мл, 6,10 ммоль) и цианоборгидрид натрия (555 мг, 8,83 ммоль) и перемешивали полученную смесь при НТ в течение 2 дней. Эту смесь добавляли к воде (50 мл) и экстрагировали ЭСМ (2x50 мл). Органическую фазу высушивали (Мд§О₄) и концентрировали под вакуумом с получением масла коричневого цвета (318 мг, 77%); т/х=683 [М+Н]⁺.

- 41 017198

Стадия 2. Снятие защиты с гидроксамата с получением циклопентил-(28)-циклогексил-{[(4-{[({1-[4-

Продукт со стадии 1 (257 мг, 376 мкмоль) перемешивали в среде ΌΕΜ (10 мл) в присутствии ТЕЛ (0,5 мл) при КТ в течение 1 ч. Полученный продукт очищали методом препаративной НРЬС с получением твердого вещества неправильного белого цвета (18,7 мг, 9%). Степень чистоты по данным ΕΕΜ8 составила 98%; ш/х=583 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΗ (300 МГц, СО₃ОЭ) δ: 7,68 (2Н, б, 1=8,5 Гц), 7,04 (2Н, б, 1=8,6 Гц), 5,36 (1Н, т), 3,04-2,81

Продукт со стадии 1 (196 мг, 287 мкмоль) перемешивали в среде ТНЕ (10 мл) в присутствии триметилсиланолата калия (399 мг, 3,11 ммоль) при температуре 50°С в течение 4 дней. Полученную смесь концентрировали под вакуумом и использовали сырой остаток на следующей стадии.

Стадия 4. Снятие защиты с гидроксамата с получением {(28)-циклогексил-{[(4-{[({1-[4(гидроксикарбамоил)фенил]пиперидин-4-ил}метил)амино]метил}циклогексил)метил]амино}уксусной кислоты (55).

Продукт со стадии 3 перемешивали в среде ΌΕΜ (10 мл) в присутствии ТЕА (0,5 мл) в течение 1 ч при КТ. Полученную смесь концентрировали под вакуумом и образовавшийся продукт очищали методом препаративной НРЬС с получением твердого вещества неправильного белого цвета (36,7 мг, 25%). Степень чистоты по данным ΕΕΜδ составила 98%; т/х=515 [М+Н]⁺.

Ή ΝΜΗ (300 МГц, С1)_;О1)) δ: 7,68 (2Н, б, 1=8,7 Гц), 7,05 (2Н, б, 1=8,5 Гц), 3,89 (2Н, б, 1=12,6 Гц), 3,79 (1Н, б, 1=3,6 Гц), 3,03-2,82 (8Н, т), 2,07-1,65 (16Н, т), 1,54-1,04 (12Н, т).

Определение карбоксилэстеразы в разрушенных клетках.

Любое конкретное соединение согласно данному изобретению, где К1 обозначает сложноэфирную группу, можно испытать с целью определения его соответствия требованию подвергаться гидролизу под действием внутриклеточных эстераз при осуществлении описанного ниже метода.

Приготовление клеточного экстракта.

Опухолевые клетки И937 или НСТ 116 (~10⁹) промывали 4-я объемами среды Дульбеко (Эи1Ьессо5 РВ8, ~1 л) и гранулировали путем центрифугирования при 525 г в течение 10 мин при температуре 4°С. Эту процедуру повторяли дважды, затем полученные гранулированные клетки снова суспендировали в 35 мл холодного гомогенизирующего буфера (Тпхша 10 мМ, №1С1 130 мМ, СаС1₂ 0,5 мМ, рН 7,0 при температуре 25°С). Гомогенаты были приготовлены при кавитации азота (700 ф/дюйм² [4826,3 кПа] в течение 50 мин при температуре 4°С. Гомогенат выдерживали на льду и дополняли его коктейлем ингибиторов с конечными концентрациями:

лейпептин 1 мкМ;

апротинин 0,1 мкМ;

Ε64 8 мкМ;

пепстатин 1,5 мкМ;

бестатин 162 мкМ;

химостатин 33 мкМ.

После осветления клеточного гомогената путем центрифугирования при 525 г в течение 10 мин полученную надосадочную жидкость использовали в качестве источника активности эстеразы и хранили при температуре -80°С до момента применения.

Определение расщепления сложного эфира.

Гидролиз сложных эфиров с получением соответствующих карбоновых кислот можно изучить, ис

- 42 017198 пользуя клеточный экстракт, приготовленный, как описано выше. Для этой цели клеточный экстракт (~30 мкг/общий объем образца 0,5 мл) инкубировали при температуре 37°С в среде ТП8-НС1 25 мМ, 125 мМ буфера №С1, рН 7,5 при температуре 25°С. В момент времени 0 добавляли эфир (субстрат) с конечной концентрацией 2,5 ИМ и инкубировали образцы при температуре 37°С в течение соответствующего времени (обычно 0 или 80 мин). Реакции останавливали путем добавления 3-х объемов ацетонитрила. В момент времени 0 ацетонитрил добавляли до эфира. После центрифугирования при 12000 г в течение 5 мин образцы анализировали на наличие эфира и соответствующей ему карбоновой кислоты при комнатной температуре методом ЬСМ8 (8с1ех АР1 3000, НР 1100 бинарный насос, СТС РАЬ).

Хроматография была проведена на колонке АсеСN (75x2, 1 мм), подвижной фазой служила смесь 5-95% ацетонитрила в воде /0,1% муравьиной кислоты.

Определение биологической активности.

Активность гистон-деацетилазы.

Способность заявленных соединений ингибировать активность гистон-деацетилазы определяли с применением доступного в промышленности флуоресцентного метода определения активности НИАС фирмы В1ото1. Вкратце, этот метод включает инкубирование субстрата Р1иог йе Ьу8™, лизина, ацетилированного по эпсилон-аминогруппам, с источником активности гистон-деацетилазы (ядерный экстракт НеЬа) в присутствии или в отсутствие ингибитора. Деацетилирование субстрата делает этот субстрат чувствительным к проявителю Р1иог йе Ьу8™, который генерирует флуорофор. Таким образом, инкубирование субстрата с источником активности НИАС приводит к увеличению сигнала, который уменьшается в присутствии ингибитора НИАС.

Результаты выражены как активность (% от контроля), измеренная в отсутствие ингибитора, при этом фоновый сигнал был получен для всех образцов по следующему уравнению:

% активность=[(8¹-В)/(8°-В)]х 100, где 8¹ обозначает величину сигнала в присутствии субстрата, фермента и ингибитора; 8° обозначает величину сигнала в присутствии субстрата, фермента и носителя, в котором растворен ингибитор; В обозначает величину фонового сигнала, измеренного в отсутствие фермента.

Величины 1С₅₀ определяли методом нелинейной регрессии после подстановки результатом восьми измерений в уравнение для сигмоидальной кривой, отражающей зависимость эффекта от дозы, с вариабельным углом наклона (активность в % в зависимости от логарифмической концентрации испытуемого соединения) с применением программы Сгарйрай Рп8т.

Величина активности гистон-деацетилазы для сырого ядерного экстракта, полученного на основе клеток НеЬа, использовали для скрининга. Препарат, приобретенный у фирмы 4С (8еиеДе, Ве1дшт), готовили на основе клеток НеЬа, собранных во время экспоненциальной фазы роста. Ядерный экстракт был приготовлен по методу, описанному Ю. П1диат, №с1. АсЮ. Ке8., 1983, 11, 1475-1489, его замораживали в жидком азоте и хранили при температуре, равной -80°С. Конечная композиция буфера содержала 20 мМ Нере8, 100 мМ КС1, 0,2 мМ ЕИТА, 0,5 мМ ИТТ, 0,2 мМ РМ8Г и 20% (об./об.) глицерина.

Величины 1С₅₀ распределяли по трем интервалам следующим образом:

интервал А: 1С₅₀<101 нМ;

интервал В: 1С₅₀ от 101 до 1000 нМ;

интервал С: 1С₅₀>1001 нМ.

Определение ингибирования в клетках И937 и НИТ.

Клеточные линии раковых клеток (И937 и НИТ), выращиваемые в логарифмической фазе роста, собирали и высеивали с концентрацией 1000-2000 кл/лунку (конечный объем 100 мкл) в 96-луночный планшет для клеточных культур. После стадии выращивания в течение 24 ч клетки обрабатывали испытуемым соединением. Затем планшеты инкубировали еще в течение 72-96 ч и затем определяли жизнеспособность клеток методом ХУ8Т-1 в соответствие с инструкциями поставщиков (Косйе Аррйей 8с1епсе).

Результаты выражали как % ингибирования в расчете на контрольную величину, измеренный в отсутствие ингибитора по следующему уравнению:

% ингибирования=100-[(8‘/8°)х 100], где 8¹ обозначает величину сигнала в присутствии ингибитора; 8° обозначает величину сигнала в присутствии ИМ8О.

Кривые зависимости ответа от дозы получали на основе 8 измерений (верхний предел конечной концентрации был равен 10 мкМ, с тремя разбавлениями), получали 6 реплик.

Величины 1С₅₀ определяли методом нелинейной регрессии после подстановки в уравнение для сигмоидальной кривой, отражающей зависимость эффекта от дозы, с вариабельным углом наклона (активность в % в зависимости от логарифмической концентрации испытуемого соединения) с применением программы Сгарйрай Рп8т.

Величины 1С₅₀ распределяли в трех интервалах следующим образом:

интервал А: 1С₅₀<330 нМ;

интервал В: 1С₅₀ от 331 до 3300 нМ;

- 43 017198 интервал С: 1С₅₀>3301 нМ;

при этом η/ά означает не определяли.

Определение ингибирования в клетках НеЬа.

Клетки НеЬа, растущие в логарифмической фазе, собирали и высевали с концентрацией 1000 кл/лунку (конечный объем 200 мкл) в 96-луночные планшеты для клеточных культур. После проведения стадии выращивания в течение 24 ч клетки обрабатывали испытуемыми соединениями (конечная концентрация составляла 20 мкМ). Планшеты инкубировали вновь еще в течение 72 ч, затем осуществляли определение жизнеспособности клеток с применением сульфородамина В (ЕКВ) в соответствии с методом, описанным Екейап е1 а1., к №111. Сапе. Ιη8ί, 1990, 82, 1107-1112.

% ингибирования=100-[(878°)х 100], где Ε¹ обозначает величину сигнала в присутствии ингибитора; Е° обозначает величину сигнала в присутствии ^Μ8Ο.

Величины 1С₅₀ определяли методом нелинейной регрессии после подстановки результатом восьми измерений в уравнение для сигмоидальной кривой, отражающей зависимость эффекта от дозы, с вариабельным углом наклона (активность в % в зависимости от логарифмической концентрации испытуемого соединения) с применением программы Οηρίιρηά Рп8т.

интервал А: 1С₅₀<330 нМ;

интервал В: 1С₅₀ от 331 до 3300 нМ;

интервал С: 1С₅₀>3301 нМ;

при этом η/ά означает не определяли.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) или его соль

ГО где т равен 1;

η равен 0 или 1;

О. V и А независимо обозначают -Ν= или -С=;

В обозначает двухвалентный радикал, выбранный из (В2) и (В6) (В2) <^В6>

где связь, отмеченная *, связана с кольцом, содержащим О, V и А;

А обозначает циклогексильное или фенильное кольцо;

-[Ыпкег]- обозначает связь, -СН₂-Ж-СН₂- или -Ж-СН₂-;

Ζ¹ обозначает радикал формулы Κ^^ΝΉ- или ^^№N4-0^-, где

Κ1 обозначает карбоксильную группу (-СООН) или сложноэфирную группу, выбранную из группы сложноэфирных групп формулы -(С=О)ОК₉, где К₉ представляет собой К₇К₈СН-, где К₇ и К₈ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют моноциклическое карбоциклическое кольцо из 3-7 атомов в кольце;

К₂ обозначает боковую цепь природной или неприродной α-аминокислоты, причем боковая цепь неприродной α-аминокислоты выбрана из фенильной, циклогексилметильной, циклогексильной, пиридин-3-илметильной, трет-бутоксиметильной, трет-бутильной, 1-бензилтио-1-метилэтильной, 1-метилтио1-метилэтильной, 1-меркапто-1-метилэтильной и фенилэтильной.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что О обозначает -С= и V и А, каждый, обозначают -Ν=.
3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что Κ9 обозначает циклопентил.
4. Соединение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что Κ2 обозначает циклогек- силметил, пиридин-3-илметил, втор-бутил, трет-бутил, 1-бензилтио-1-метилэтил, 1-метилтио-1метилэтил, 1-меркапто-1-метилэтил или фенилэтил.
5. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что Κ2 обозначает фенил, бензил, изобутил, циклогексил или трет-бутоксиметил.
6. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно имеет любую из приведенных ниже структурных формул:

в которых Κ9 представляет собой циклопентил, или его соль.
7. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно имеет любую из приведенных ниже структурных формул:

- 45 017198 в которых В9 представляет собой циклопентил, или его соль.
8. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно имеет любую из приведенных ниже структурных формул:

О X в которых В9 представляет собой циклопентил, или его соль.
9. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно имеет любую из приведенных ниже структурных формул:

- 46 017198 в которых К₉ представляет собой циклопентил, или его соль.
10. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно имеет любую из приведенных ниже структурных формул:

или его соль.
11. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно имеет любую из приведенных ниже структурных формул:

- 47 017198 или его соль.
12. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно имеет любую из приведенных ниже структурных формул:

в которых К₉ представляет собой циклопентил, или его соль.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из предыдущих пунктов вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
14. Применение соединения по любому из пп.1-13 для изготовления лекарственного средства для лечения болезни, связанной с пролиферацией клеток, полиглютаминовой болезни, нейродегенеративной болезни, аутоиммунной болезни, воспалительного заболевания, отторжения трансплантата органа, диабета, гематологических нарушений или инфекции, причем лекарственное средство включает эффективное количество указанного соединения.
15. Применение по п.14, предназначенное для лечения пролиферации раковых клеток, болезни Хантингтона или болезни Альцгеймера.
16. Применение по п.15, предназначенное для лечения ревматоидного артрита.

4^8) Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2