KR20200097250A

KR20200097250A - 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 추출물 및 이의 제조 방법

Info

Publication number: KR20200097250A
Application number: KR1020207015314A
Authority: KR
Inventors: 끄리스텔 피오리니 퓌바레; 필립 줄리아; 로렝 쉬브라
Original assignee: 삐에르화브르데르모-코스메띠끄
Priority date: 2017-12-12
Filing date: 2018-12-12
Publication date: 2020-08-18
Also published as: TW201936171A; WO2019115651A1; AR113927A1; FR3074690B1; FR3074690A1; US20200330365A1; JP2021505643A; MA51182A; JP7458978B2; TWI805660B; CN111447918A; US11207265B2; EP3723723A1

Abstract

본 발명은 라우소니아 이너미스 (Lawsonia inermis)의 공중 부분의 추출물, 뿐만 아니라 이의 제조 방법 및 상기 방법에 의해 획득될 수 있는 추출물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 추출물을 포함하는 미용 염료 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 최종적으로 이러한 조성물의 적용을 포함하는 케라틴 섬유를 염색하는 미용 방법에 관한 것이다.

Description

라우소니아 이너미스의 공중 부분의 추출물 및 이의 제조 방법

보편적으로 헤나로 불리는 라우소니아 이너미스 (Lawsonia inermis)는 라이트라세애 (Lythraceae) 과에 속한다. 이 관목은 높이 6 미터에 도달할 수 있으며, 명확하게 아프리카 및 아시아의 열대 및 아열대 지역에서 자연적으로 자란다. 이것은 다 자란 식물 상에 회색 껍질, 조밀한 분지화 및 사각형의 가시가 있는 가지를 갖는다. 이의 잎은 서로 반대 방향으로 자라고, 단순한 일체를 이룬다. 향을 갖는 흰색 또는 적색 꽃은 길이 25 cm의 큰 피라미드 모양의 원추화로 군집을 이룬다.

헤나 (henna) 잎은 적색 및 주황색 색조를 생산하고, 5,000년 이상 동안 모발 및 피부 또는 심지어 직물 염색에 사용되어 왔다.

이들의 염료 성질은 라우손 (2-하이드록시-1,4-나프토퀴논)으로 인한 것이고, 이는 마이클 부가 반응에 의해 피부 또는 손발톱에 존재하는 케라틴과 반응한다.

일반적으로, 라우손은 단백질, 펩티드 또는 아미노산과 같은 아미노기를 포함하는 다양한 화합물과 이러한 유형의 축합을 거칠 수 있다. 이것이 시판되는 헤나 추출물이 비교적 낮은 라우손 함량을 갖으면서 시간 경과 시 신속하게 역시 감소되는 이유이기도 하다.

게다가, 라우소니아 이너미스 잎에서 유리 상태로 발견되는 라우손의 정량은 실제로 매우 적다. 사실상, 이것은 우선적으로 헤테로시드의 형태로 존재하고 있다 [Gallo et al. Rev. Bras. Pharmacogn. 2014, 23, 133-140; COLIPA no. C169, 2013].

헤노시드 A, B 및 C는 모노글리코실화된 라우손 유도체인 것으로, 명확하게 확인되어 왔다.

이들 전구체의 가수분해에 이어지는 결과로 얻은 어글리콘 자가산화는 하기에 나타낸 반응식에 따라 라우손의 형성을 유도한다.

따라서, 라우소니아 이너미스의 많은 공지된 추출 공정은 헤노시드가 가수분해되는 산성 매질에서, 전형적으로 pH 1 내지 3의 범위에서의 단계를 포함한다.

추출 공정은 명확하게 프랑스 특허 FR 2473310에 기술되어 있다.

본 발명자들은 높은 라우손 함량을 갖는 추출물이 글리코실화된 라우손 유도체의 효소적 가수분해를 실행함으로써 획득되는 라우소니아 이너미스의 추출 방법을 개발할 수 있었다. 상기 추출물은 또한 시간 경과 시 이의 안정성으로 인해 차별화되었다.

본 발명은 더 진한 녹색이고 이로써 획득된 활성 성분이 자연적임을 주장하는 합성 경로를 구축하려는 바램의 일부이다.

따라서, 본 발명에 사용된 용매(들)은 바람직하게 천연 용매 및/또는 화석 자원과는 정반대로 재생가능한 자원으로부터의 천연 기원을 갖고, 유리하게 이들 용매는 환경을 배려하는 공정에 의해 획득가능하다. 따라서 본 발명의 방법에 따라 이로써 획득된 추출물은 천연 추출물 및/또는 화석 자원과는 정반대로 재생가능한 자원으로부터의 천연 기원을 갖을 것이다.

본 발명은 따라서 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 추출물로서, 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 10 내지 60 중량%의 라우손을 포함하고, 라우손이 명확하게 헤노시드와 같은 글리코실화된 라우손 유도체의 효소적 가수분해로부터 유도되는 것을 특징으로 하는 추출물에 관한 것이다. 바람직하게, 상기 추출물은 라우손 함량이 시간 경과 시 안정한 점도 역시 특징으로 한다.

"공중 부분"은 지면 위에 위치하는 식물의 부분, 예를 들면 잎, 줄기, 꽃, 종자 및 가지, 구체적으로 잎, 가지 및 줄기 또는 이들의 혼합물, 바람직하게는 잎, 가지 또는 이들의 혼합물을 의미한다.

유리하게, 본 발명에 따른 추출물은 라우소니아 이너미스의 잎 및/또는 가지의 추출물이다.

"건조 추출물"은 본 발명의 의미 내에서, 추출 용매 또는 매질이 없거나, 단지 유의하지 않은 미량으로 이들을 포함하는 추출물을 말하도록 의도한다. 따라서 이러한 건조 추출물은 라우소니아 이너미스로부터 나온 물질만을 포함한다.

"글리코실화된 라우손 유도체"는 라우손 글리코시드 또는 헤테로시드로도 불리며, 본 발명의 틀 내에서 하기 일반식 (I)의 임의의 화합물을 의미한다:

여기서 R₁, R₂ 및 R₃는 서로 독립적으로 H 또는 포도당과 같은 당을 나타내고, R₁ 내지 R₃ 중 적어도 하나는 H와 상이하여, 글리코시드 결합(들)의 가수분해가 자가산화 반응을 거쳐서 라우손을 형성하는 어글리콘의 형성을 유도한다.

구체적으로, 헤노시드 A, B 및 C는 글리코실화된 라우손 유도체이다.

"효소적 가수분해"는 본 발명의 맥락 내에서 내인성 라우소니아 이너미스 효소이거나, 내인성 출처 바람직하게 내인성 라우소니아 이너미스 효소로부터 나올 수 있는 효소에 의해 이화되는 가수분해 반응이고, 상기 효소는 β-글루코시다제와 같은 글루코시다제 [Gallo et al.]이며, 이의 작용이 글리코실화된 라우손 유도체의 글루코시드 결합의 파괴를 유도하는 것으로 이해된다.

본 발명의 범주 내에서, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 추출물에 초기에 존재하는 라우손의 정량이 60%의 상대 습도 (RH)를 갖는 실온 (15℃ 내지 25℃)에서 광 차단되어 1개월 이후에, 40% 이상, 상세하게 30% 이상, 바람직하게 20% 이상, 명확하게 15% 이상, 유리하게 10% 이상으로 감소되지 않으면 "시간 경과 시 안정한" 것으로 고려된다. 실온 값은 유럽 약전에 정의된 것이다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 이전에 열거된 조건 하에 3개월 이후에 40% 이상, 상세하게 30% 이상, 바람직하게 20% 이상으로 감소되지 않는다.

구체적으로, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 이전에 열거된 조건 하에 3개월 이후에 10% 이상으로 감소되지 않는다.

유리하게, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 이전에 열거된 조건 하에 6개월 이후에 40% 이상, 바람직하게 30% 이상, 더욱 바람직하게 20% 이상으로 감소되지 않는다.

구체적으로, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 이전에 열거된 조건 하에 6개월 이후에 10% 이상으로 감소되지 않는다.

바람직하게, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 이전에 열거된 조건 하에 실온에서 12개월 이후에 40% 이상, 상세하게 30% 이상, 보다 상세하게 20% 이상으로 감소되지 않는다.

구체적으로, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 이전에 열거된 조건 하에 12개월 이후에 10% 이상으로 감소되지 않는다.

본 발명에 따른 추출물의 안정성은 소위 강화된 안정성 조건 하에서 또한 평가될 수 있다. 이들 조건은 온도 40℃ (± 2) 및 RH 75% (± 5)이다. 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 추출물에 초기에 존재하는 라우손의 정량이 1개월 이후에 40% 이상, 바람직하게 30% 이상, 상세하게 20% 이상, 명확하게 15% 이상, 유리하게 10% 이상으로 감소되지 않으면 강화된 안정성 조건 하에서 "시간 경과 시 안정한" 것으로서 평가된다.

유리하게, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 이전에 열거된 강화된 안정성 조건 하에서 3개월 이후에 40% 이상, 상세하게 30% 이상, 더욱 상세하게 20% 이상으로 감소되지 않는다.

구체적으로, 본 발명에 따른 추출물의 라우손 함량은 이전에 열거된 강화된 안정성 조건 하에서 6개월 이후에 40% 이상, 상세하게 30% 이상, 더욱 상세하게 20% 이상으로 감소되지 않는다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 10 중량% 내지 50 중량%, 구체적으로 15 중량% 내지 40 중량%로 포함한다.

유리하게, 본 발명에 따른 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 적어도 15 중량%, 바람직하게 적어도 20 중량%, 더욱 유리하게 적어도 25 중량%로 포함하고, 백분율은 (임의의 건조화 담체의 첨가 이전에) 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 표현된다.

라우손 함량은 명확하게 하기 실시예에 기술된 HPLC 검정 방법 (방법 1)에 따라 결정될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 단백질, 펩티드 또는 아미노산을 2 중량% 이상, 바람직하게 1.5 중량% 이상, 명확하게 1 중량% 이상 포함하지 않는다.

유리 아미노산, 펩티드 및 단백질은 명확하게 하기 실시예에 기술된 방법 (방법 2)에 따라, 닌히드린 분광분석법에 의해 검정될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 추출물은 또한 클로로필, 명확하게는 클로로필 a 및/또는 클로로필 b를 포함하고, 총 클로로필 함량은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 25 중량% 미만, 명확하게 건조 추출물을 기준으로 20 중량% 미만, 유리하게 10 중량% 미만이다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 클로로필을 5 중량% 이상, 바람직하게 2 중량% 이상으로 포함하지 않는다. 유리하게, 본 발명에 따른 추출물은 클로로필을 포함하지 않는다.

클로로필은 명확하게 하기 실시예에 기술된 방법 (방법 3)에 따라, 중량 검정법에 의해 검정될 수 있다.

본 발명에 따른 추출물은 라우소니아 이너미스의 공중 부분, 명확하게 라우소니아 이너미스의 잎 또는 가지에 자연적으로 존재하는 임의의 화합물을 또한 포함할 수 있다.

구체적으로, 본 발명에 따른 추출물은 갈산, 파라-쿠마르산, 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논 및 3,4,5-트리하이드록시아세토페논과 같은 페놀 화합물; 루테올린, 아피게닌, 카테킨, 3',4',5,7-테트라하이드록시플라바논, 3',5,7-트리하이드록시-4'-메틸플라본과 같은 플라보노이드; β-시토스테롤과 같은 스테롤; 루페올과 같은 트리테르펜; 및/또는 랄리오시드, 미르시아페논 A, 1,2-디하이드록시-4-O-글리코실옥시나프탈렌 (소위 4-O-β-D-글루코피라노시드), 루테올린-4'-O-글루코시드, 아피게닌-7-O-β-글루코시드, 루테올린-3'-O-글루코시드 및 아피게닌-4'-O-β-글루코시드와 같은 이들의 헤테로시드도 역시 포함한다.

보다 구체적으로, 본 발명에 따른 추출물은 갈산, 파라-쿠마르산, 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논 및 3,4,5-트리하이드록시아세토페논과 같은 페놀 화합물; 루테올린, 아피게닌, 카테킨, 3',4',5,7-테트라하이드록시플라바논, 3',5,7-트리하이드록시-4'-메틸플라본과 같은 플라보노이드; 및/또는 랄리오시드, 미르시아페논 A, 1,2-디하이드록시-4-O-글리코실옥시나프탈렌, 루테올린-4'-O-글루코시드, 아피게닌-7-O-β-글루코시드, 루테올린-3'-O-글루코시드 및 아피게닌-4'-O-β-글루코시드와 같은 이들의 헤테로시드도 역시 포함한다.

상기 구체적인 화합물의 화학 구조는 다음의 표 1에 나타낸다. 하기 표 1은 본 발명의 추출물에 잠재적으로 존재하는 화합물을 나타낸다.

루테올린 및 아피게닌과 같은 플라보노이드는 항염증 활성 뿐만 아니라 자유 라디칼 제거 및 항산화 효과 [Romanov et al., Neoplasma 2001, 48(2), 104-107]와 같은 많은 흥미로운 생물학적 성질을 갖으며, 이는 UV 광선을 흡수하는 이들의 성능과 조합하여 UV 조사로부터의 보호를 제공하는 이들의 능력을 부여한다 [Saewan et al., JAPS 2013, 3(9), 129-141]. 모발 광보호가 보편적으로 겨냥되지 않은 주제이더라도, UV 조사의 화학적 효과 및 모발 줄기에 미치는 이들의 영향이 무시되어서는 안된다 [Draelos, Dermatol. Clin. 2006, 24, 81-84]. 따라서, 모발 염색을 목적으로 한 미용적 조성물에서 광보호 효과를 갖는 화합물의 존재는 특히 흥미롭다.

루테올린 및 아피게닌은 모발 및 직물을 염색하는데 사용될 수 있는 잘 알려진 천연 염료이기도 하다.

또한, 아피게닌은 모발 성장 촉진제인 것으로 관찰되어 왔다 [Huh et al. Arch. Dermatol. Res., 2009, 301, 381-385].

2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논과 같은 폴리페놀 및 파라-쿠마르산과 같은 페놀산도 항산화 및 광보호 성질을 갖는다 [Nichols et al., Arch. Dermatol. Res. 2010, 302, 71-83].

따라서, 본 발명은 보다 구체적으로 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 10 내지 60 중량%으로 포함하는 라우소니아 이너미스 (Lawsonia inermis)의 공중 부분의 추출물로서, 라우손이 명확하게 헤노시드와 같은 글리코실화된 라우손 유도체의 효소적 가수분해로부터 유도되고, 상기 추출물은 루테올린, 아피게닌 및 파라-쿠마르산도 역시 포함하는, 추출물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 추출물은 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논 및 선택적으로 3,4,5-트리하이드록시아세토페논 및 1,2-디하이드록시-4-O-글리코실옥시나프탈렌을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 10 내지 60 중량%으로 포함하는, 상기에 기술된 바와 같은 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 추출물로서, 라우손이 명확하게 헤노시드와 같은 글리코실화된 라우손 유도체의 효소적 가수분해로부터 유도되고, 상기 추출물은 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논도 역시 포함하는, 추출물에 관한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 추출물은 건조 추출물 형태, 유리하게는 분말 형태일 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 추출물은 표준화된 추출물일 수 있다.

"표준화된 추출물"은 미용적 적용을 위해, 예를 들면 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 0.6 중량% 내지 1.4 중량%, 구체적으로 대략 1.3 중량%으로 포함하는 라우손 함량과 같은 선택된 라우손 함량을 갖는 추출물을 의미한다.

이러한 라우손 함량은 단백질이 없는 담체로부터 선택된 담체의 단독으로 또는 혼합물로의 첨가에 의해 획득될 수 있다.

상기 "담체"는 추출물 및 이의 성분과 비교하여 반드시 불활성이어야 하고, 추출물 또는 이의 성분과, 보다 구체적으로 라우손과 상호작용하지 않으며, 이의 보호에 기여하고, 활성을 갖는 추출물 또는 분자의 최종 함량을 표준화하도록 허용한다. 이것은 "미용적으로 허용가능한" 것이어야 하고, 이는 본 발명의 맥락에서 미용적 조성물의 제조 시 유용하며, 일반적으로 안전하고, 비독성이고, 생물학적이거나 달리 바람직하지 않은 것이 아니며, 미용적 용도에, 명확하게 국소적 적용에 의해 허용가능한 것임을 의미한다.

담체는 명확하게 프로판디올, 펜탄디올, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 메틸 THF 및 아밀 알코올로부터 선택될 수 있다.

본 발명에 따른 건조 추출물은 또한 표준화될 수 있다.

건조 추출물을 위해, 담체는 추출물의 건조화 동안 지지체로서 작용할 수 있고, 바람직하게 과당, 포도당, 슈크로스, 말토덱스트린, 셀룰로우스 유도체, 전분 명확하게 옥수수, 밀 또는 쌀 전분, 아가-아가, 검, 뮤실라지와 같은 당 및 다당류 유도체; 그리고 만니톨, 소르비톨, 자일리톨 등과 같은 폴리올로부터 선택된다. 구체적으로, 이것은 과당, 말토덱스트린 및 전분, 명확하게 쌀 전분으로부터 선택된다.

본 발명의 틀 내에서, 담체는 바람직하게 천연 담체 및/또는 화석 자원과는 정반대로 재생가능한 자원으로부터의 천연 기원을 갖고, 유리하게 이들 담체는 환경을 배려하는 공정에 의해 획득가능하다.

따라서, 본 발명은 보다 구체적으로 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 표준화된 건조 추출물로서, 0.6 내지 1.4 중량%의 라우손을 포함하고, 루테올린, 아피게닌 및 파라-쿠마르산을 추가로 포함하는, 표준화된 건조 추출물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 표준화된 건조 추출물은 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논 및 선택적으로 3,4,5-트리하이드록시아세토페논 및 1,2-디하이드록시-4-O-글리코실옥시나프탈렌을 추가로 포함할 수 있다.

이것은 표 1에 나열된 임의의 화합물도 역시 포함할 수 있다.

구체적으로, 본 발명에 따른 표준화된 건조 추출물은

- 루테올린 함량이 0.05 내지 1.0 중량%을 포함하고,

- 아피게닌 함량은 0.01 내지 0.5 중량%을 포함하고,

- 파라-쿠마르산 함량은 0.01 내지 0.5 중량%:

을 포함하는 것과 같다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 표준화된 건조 추출물은 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논을 0.05 내지 4 중량%, 명확하게 0.1 내지 2 중량%, 상세하게 0.4 내지 1.2 중량%을 포함하는 함량으로 추가로 포함한다.

또한 본 발명은 보다 구체적으로 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 표준화된 건조 추출물로서, 0.6 내지 1.4 중량%의 라우손을 포함하고, 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논을 추가로 포함하는, 표준화된 건조 추출물에 관한 것이다.

일 구현예에서, 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논 함량은 0.05 내지 4 중량%, 명확하게 0.1 내지 2 중량%, 상세하게 0.4 내지 1.2 중량%을 포함한다.

바람직하게, 표준화된 건조 추출물은 시간 경과 시 라우손의 안정성에 관하여 이전에 정의된 명세와 부합한다.

따라서, 상대 습도 (RH) 60%을 갖는 실온 (15℃ 내지 25℃)에서 광 차단되어 1개월, 3개월, 6개월 또는 12개월 이후에, 라우손 함량은 40% 이상, 바람직하게 30% 이상, 상세하게 20% 이상, 명확하게 15% 이상, 유리하게 10% 이상, 더욱 유리하게 5% 이상으로 감소되지 않는다.

본 발명에 따른 표준화된 건조 추출물의 안정성은 강화된 안정성 조건에서 또한 평가될 수 있다.

따라서, 상대 습도 (RH) 75% (± 5%)를 갖는 온도 40℃ (± 2℃)에서 1개월, 3개월 또는 6개월 이후에, 라우손 함량은 40% 이상, 바람직하게 30% 이상, 상세하게 20% 이상, 명확하게 15% 이상, 유리하게 10% 이상, 더욱 유리하게 5% 이상으로 감소되지 않는다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 표준화된 건조 추출물은 표준화된 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 담체를 적어도 80 중량%, 유리하게 적어도 90 중량%, 명확하게 적어도 92 중량%, 상세하게 적어도 95% 포함한다.

본 발명은 또한 라우손 추출물의 제조 방법으로서, 다음의

a) 물에 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 냉침 단계로서, 라우소니아 이너미스의 공중 부분에서 초기에 존재하는 헤노시드와 같은 글리코실화된 라우손 유도체가 부분적으로 또는 전체적으로 효소적 가수분해되어, 라우손을 포함하는 수용성 용액을 유도하는, 냉침 단계;

b) 단계 a)로부터 획득된 용액에 유기 용매의 첨가 단계로서, 상기 용매의 물과 혼화능이 25℃에서 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량%이고, 물에서 상기 용매의 혼화능은 25℃에서 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량%이 되어, 수용성 상 및 유기 상의 형성을 유도하는, 첨가 단계;

c) 단계 b)로부터 획득된 유기 상의 회수 단계; 및

d) 라우손-농축된 추출물을 획득하도록 허용하는, 단계 c)로부터 회수된 유기 상의 농축 단계:

를 포함하는, 제조 방법에 관한 것이다.

"라우손-농축된 추출물"은 본 발명의 맥락에서 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 10 중량% 내지 60 중량%, 명확하게 10 중량% 내지 50 중량%, 상세하게 15 중량% 내지 40 중량%으로 포함하는 추출물을 의미한다.

유리하게, 본 발명에 따른 상기 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 적어도 15 중량%, 바람직하게 적어도 20 중량%, 더욱 유리하게 적어도 25 중량%으로 포함한다 (임의의 건조화 담체의 첨가 이전에).

유리하게, 단계 d)로부터 획득된 라우손-농축된 추출물은 단계 a)에서 냉침에 적용된 라우소니아 이너미스의 공중 부분에서 유리 형태로 또는 글리코실화된 라우손 유도체의 형태로 초기에 존재하는 라우손을 50% 이상, 명확하게 60% 이상, 유리하게 70% 이상으로 포함한다.

단계 a)에서 냉침에 적용된 라우소니아 이너미스의 공중 부분에서 유리 형태로 또는 글리코실화된 라우손 유도체의 형태로 초기에 존재하는 라우손의 정량은 "식물의 라우손 잠재력"으로도 불린다.

본 발명에 따른 일 바람직한 구현예에서, 단계 d)로부터 획득된 라우손-농축된 추출물은 50% 내지 90%, 명확하게 60% 내지 90%, 상세하게 70% 내지 90%의 식물의 라우손 잠재력을 포함한다.

식물의 라우손 잠재력은 명확하게 하기 실시예에 기술된 HPLC 검정 방법 (방법 1)에 따라 결정될 수 있다.

구체적으로, 단계 a)에서 냉침에 적용된 라우소니아 이너미스의 공중 부분은 신선하거나 건조될 수 있는 바람직하게 건조된 잎, 가지 또는 이 둘의 혼합물이다.

단계 a)는 바람직하게 20℃ 내지 60℃, 명확하게 20℃ 내지 50℃, 상세하게 25℃ 내지 45℃, 더욱 상세하게 30℃ 내지 45℃를 포함하는, 전형적으로 40℃의 온도에서 시행된다.

단계 a)는 글리코실화된 라우손 유도체의 가수분해가 작용하도록 촉매하는 효소 또는 효소들을 허용하는 pH에서 시행되는 것으로 이해된다. 구체적으로, 단계 a)는 4 내지 8, 바람직하게 5 내지 7.5, 유리하게 5.5 내지 7.5를 포함하는 pH, 전형적으로 중성 pH에서 시행된다.

"중성 pH"는 pH 6.5 내지 7.5를 포함하고, 구체적으로 대략 pH 7을 의미한다.

유리하게, 단계 a)는 교반 하에 수행된다. 교반은 당업자에게 잘 알려진 임의의 방법에 의해 획득될 수 있다.

냉침의 지속 시간은 유리하게 15분 내지 2시간, 상세하게 15분 내지 1시간을 포함하고, 유리하게 이것은 대략 30분이다.

단계 a) 동안, 사용된 물의 부피는 냉침에 적용된 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 질량보다 5 내지 15배 더 많고, 유리하게 6 내지 10배 더 많고, 전형적으로 10배 더 많다. 따라서, 본 발명에 따른 방법이 라우소니아 이너미스의 공중 부분 상에서 시행될 때, 단계 a) 동안 사용된 물의 부피는 500 mL 내지 1,500 mL, 유리하게 600 mL 내지 1,000 mL, 전형적으로 1,000 mL을 포함한다.

단계 a)로부터 얻은 전체 혼합물, 즉 식물 재료 뿐만 아니라 수용성 용액이 단계 b)를 위해 보유되는 것이 언급되어야 한다.

단계 b)는 회분식 또는 연속식 방식으로 시행될 수 있다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법의 단계 b)는 다음의 3가지 하위단계

b.1) 단계 a)로부터 회득된 수용성 용액에 유기 용매의 첨가 단계로서, 상기 용매에서 물의 혼화능이 25℃에서 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량%이고, 물에서 상기 용매의 혼화능은 25℃에서 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량%인, 첨가 단계;

b.2) 단계 b.1)로부터 획득된 용액의 교반 단계로서, 교반 지속 시간은 15분 내지 2시간, 상세하게 15분 내지 1시간을 포함하고, 전형적으로 교반 지속 시간이 대략 30분인, 교반 단계; 및

b.3) 단계 b.2)로부터 획득된 혼합물을 두 개의 구분된 상이 획득될 때까지 디캔팅하는 단계:

를 포함한다.

따라서, 하위단계 b.1), b. 2) 및 b.3)의 진행은 수용성 상 및 유기 상의 형성을 유도한다.

단계 a) 동안, 구체적으로 단계 b.1) 동안 첨가된 유기 용매의 부피는 단계 a) 동안 사용된 물의 부피 대비 단계 b) 동안 첨가된 상기 유기 용매의 부피 비율이 0.25 내지 2, 명확하게 0.5 내지 2, 더욱 명확하게 0.8 내지 1.5, 상세하게 1 내지 1.3을 포함하는 것과 같다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법에서 단계 b) 동안, 구체적으로 단계 b.1) 동안 첨가된 유기 용매는 약한 극성 용매이다. "약한 극성"은 2.0 D 미만의 쌍극자 모멘트를 특징으로 하는 용매를 의미한다.

약한 극성이더라도, 상기 유기 용매는 라우손을 용해시키는 것으로 이해된다. 따라서, 단계 b)에서, 구체적으로 단계 b.1)에서 첨가된 유기 용매에서 라우손의 용해도는 상기 용매에 25℃에서, 70 중량% 이상, 명확하게 80 중량% 이상, 유리하게 90 중량% 이상이고, 백분율은 단계 a)로부터 획득된 라우손을 포함하는 수용성 용액에 존재하는 라우손의 총 중량을 기준으로 표현된다.

일 유리한 양태에 따르면, 본 발명에 따른 방법의 단계 b) 동안, 구체적으로 단계 b.1) 동안 첨가된 유기 용매는 다음의 물에서의 혼화능 및 상기 유기 용매에서 물의 혼화능의 판정기준을 입증하는 알코올, 염소화된 용매, 케톤, 에테르, 에스테르 및 이들의 혼합물로부터 선택된다:

- 상기 유기 용매에서 물의 혼화능이 25℃에서 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량% 미만이고,

- 물에서 상기 유기 용매의 혼화능이 25℃에서 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량% 미만이다.

"알코올"은 본 발명의 맥락에서 R₄-OH 화합물을 의미하고, 여기서 R₄는 (C₁-C₆) 알킬기이다.

"염소화된 용매"는 본 발명의 맥락에서, 수소 중 일부 또는 전부가 염소 원자로 치환되는, 알칸, 즉 1개 내지 6개의 탄소 원자, 명확하게 1개 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 포화 탄화수소를 의미한다.

"케톤"은 본 발명의 맥락에서 R₅-CO-R₆ 화합물을 의미하고, 여기서 R₅ 및 R₆는 동일하거나 상이한 (C₁-C₆) 알킬기이다.

"에테르"는 본 발명의 맥락에서 R₇-O-R₈ 화합물을 의미하고, 여기서 R₇ 및 R₈은 동일하거나 상이한 (C₁-C₆) 알킬기이다.

"에스테르"는 본 발명의 맥락에서 R₉-COO-R₁₀ 화합물을 의미하고, 여기서 R₉ 및 R₁₀은 동일하거나 상이한 (C₁-C₆) 알킬기이다. 에스테르는 구체적으로 아세테이트, 예로 CH₃COO-R₁₀ 화합물일 수 있다.

"(C₁-C₆) 알킬"기는 본 발명의 맥락에서 유리하게 1개 내지 6개, 바람직하게 1개 내지 4개의 탄소 원자를 포함하는 포화, 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 사슬을 의미한다. 예로는 다음의 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 세크-부틸, 터르-부틸, 펜틸 또는 헥실기:를 포함한다.

이전에 열거된 혼화능 판정기준을 충족하는 알코올은 1-펜탄올로도 불리는 n-아밀 알코올을 포함한다. 이전에 열거된 혼화능 판정기준을 충족하는 염소화된 용매는 명확하게 디클로로메탄 및 클로로포름을 포함한다.

이전에 열거된 혼화능 판정기준을 충족하는 케톤은 보편적으로 MIBK로 불리는 메틸 이소부틸 케톤을 포함한다.

이전에 열거된 혼화능 판정기준을 충족하는 에테르는 명확하게 디에틸 에테르, 디이소프로필 에테르, 디부틸 에테르 및 메틸 터르-부틸 에테르를 포함한다.

이전에 열거된 혼화능 판정기준을 충족하는 에스테르는 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 부틸 아세테이트 및 이소아밀 아세테이트와 같은 (C₁-C₆) 알킬 아세테이트를 포함한다.

본 발명의 일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법의 단계 b)에서, 구체적으로 단계 b.1) 동안 첨가된 유기 용매는 (C₁-C₆) 알킬 아세테이트 또는 (C₁-C₆) 알킬 아세테이트의 혼합물이고, 바람직하게 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 부틸 아세테이트, 이소아밀 아세테이트 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 구체적으로 바람직한 방식으로, 이것은 이소프로필 아세테이트이다.

본 발명에 따른 방법의 단계 c)는 단계 b)로부터 획득된 유기 상의 회수로 구성된다.

당업자에게 명백할 바와 같이, 상기 단계 b)의 이전의 반복에서 획득된 유기 상에서 단계 b)를 반복하는 것이 가능하다. 다음으로 이로써 획득된 새로운 유기 상은 회수되고 (단계 c)의 반복), 단계 b)의 선행하는 반복으로부터 획득된 것과 조합된다.

따라서, 본 발명에 따른 방법의 변형에서, 단계 d)는 단계 b)의 여러 번 반복과 이어지는 단계 c)로부터 회수된 유기 상의 조합을 농축시키는 단계 d')으로 구성된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 단계 a)로부터 획득된 라우손-농축된 추출물을 건조시키는 추가적인 단계 c)를 포함할 수 있다. 상기 단계 e)의 종결 시, 획득된 라우손-농축된 추출물은 건조 추출물이다.

건조화 단계 e)는 당업자에게 잘 알려진 방법에 따라 시행될 수 있다. 구체적으로, 건조화 단계는 팔레트 건조기, 분무화, 저주파, 제오드레이션 또는 동결건조에 의해 시행될 수 있다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 단계 c) 및 단계 d) 사이에 상기 정의된 바와 같은 담체를 첨가하는 추가적인 단계 c')를 포함하고, 단계 d)는 상기 건조화 단계 e)로 이어진다.

상기 단계 e)의 종결 시, 획득된 라우손-농축된 추출물은 이로써 획득된 표준화된 건조 추출물이다.

일 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 방법은 수용성 용액 또는 수용성 상의 pH를 산 또는 염기의 첨가에 의해 변경하는 임의의 단계를 포함하지 않는다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 또한 탈색 단계로도 불리는 색소를 추출하는 단계를 포함한다.

탈색 단계 동안 추출된 색소는 명확하게 클로로필이다. 그러나, 라우손이 탈색 단계가 제거하려고 하는 색소의 일부가 아닌 것으로 이해된다.

색소 추출 단계는 명확하게 유기 용매로 시행될 수 있다.

상기 유기 용매가 라우손을 잘 용해시키지 않는 것으로 이해된다. 따라서, 탈색 단계에 사용되는 유기 용매 단계에서 라우손의 용해도는 25℃에서 15 중량% 미만, 명확하게 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량% 미만이고, 백분율은 탈색 단계를 거치고 있는 추출물 또는 용액에 포함되는 라우손의 총 중량을 기준으로 표현된다.

바람직하게, 라우손은 색소 추출 단계에 사용된 유기 용매에 가용성이 아니다.

유리하게, 상기 유기 용매는 포화 또는 불포화 탄화수소이다.

"포화 또는 불포화 탄화수소"는 독특하게 수소 및 탄소 원자로 만들어진 화합물을 의미한다.

구체적으로, 상기 포화 탄화수소는 펜탄, 헥산, 헵탄, 노난, 데칸 및 고리헥산으로부터 선택될 수 있다.

상기 불포화 탄화수소는 명확하게 벤젠일 수 있다.

바람직하게, 클로로필과 같은 색소를 위한 추출 단계는 헵탄으로 시행된다.

유기 용매로 시행된 색소 추출 단계는 액체-액체 또는 액체-고체 추출로 구성될 수 있다.

이것이 액체-액체 추출일 때, 상기 단계는 본 발명에 따른 방법의 단계 a) 및 단계 b) 사이에 삽입된다.

유리하게, 유기 용매를 사용한 액체-액체 추출 탈색 단계는 다음의 4가지 하위단계

i) 단계 a)로부터 획득된 수용성 용액에 상기 유기 용매의 첨가 단계;

ii) 단계 i)로부터 획득된 용액의 교반 단계로서, 교반 지속 시간은 15분 내지 2시간, 상세하게 15분 내지 1시간을 포함하고, 전형적으로 교반 지속 시간은 대략 30분인, 교반 단계;

iii) 단계 ii)로부터 획득된 혼합물을 두 개의 구분된 상 예로 수용성 상 및 유기 상이 획득될 때까지 디캔팅하는 단계; 및

iv) 유기 상의 제거 단계:

를 포함한다. 다음으로 본 방법의 단계 b)는 단계 iii)로부터 얻은 수용성 상에서 실행된다.

이것이 액체-고체 추출의 문제일 때, 이러한 단계는 본 발명에 따른 방법의 건조화 단계 e)로 이어진다. 액체-고체 추출은 당업자에게 잘 알려진 방법에 따라 시행될 수 있다.

대안적으로, 탈색 단계는 공동-용매의 첨가가 있거나 없이, 직접적으로 건조 추출물에서 초임계 CO₂를 사용하여 시행될 수 있다. 클로로필은 초임계 CO₂에 의해 포집된다. 잔류물은 탈색된 건조 추출물이다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 또한 라우손을 포함하는 수용성 용액으로부터 라우소니아 이너미스의 공중 부분을 분리하기 위하여 단계 a) 및 단계 b) 사이에 위치하거나, 단계 c)에서 회수된 유기 상으로부터 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 잔류물을 분리하기 위하여 단계 c) 및 단계 d) 사이에 위치한 여과 단계를 포함한다.

또 다른 상세한 구현예에서, 펙티나제-유형의 효소가 단계 a)에 첨가될 수 있다.

본 발명에 따른 방법은 또한 임파티엔스 발사미나 (Impatiens balsamina)와 같은, 라우손을 포함하는 임의의 다른 식물에 적용될 수 있다. 당업자라면 본 발명의 방법을 문제가 된 식물에 적응시키는 방식을 알 것이다. 따라서, 임파티엔스 발사미나의 경우에, 당업자라면 라우손이 가장 풍부한 임파티엔스 발사미나의 부분인, 뿌리의 추출을 시행할 것이다.

본 발명은 또한 상기에 언급된 방법에 의해 획득될 수 있는 추출물에 관한 것이다. 이러한 추출물은 이전에 정의된 명세와 부합한다.

상세하게 상기 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 10 중량% 내지 60 중량%, 명확하게 10 중량% 내지 50 중량%, 상세하게 15 중량% 내지 40중량%으로 포함하고, 라우손 함량은 시간 경과 시 안정하다.

바람직하게, 상대 습도 (RH) 60%을 갖는 실온 (15℃ 내지 25℃)에서 광 차단되어 1개월, 3개월, 6개월 또는 12개월 이후에, 본 발명에 따른 방법에 의해 획득될 수 있는 상기 추출물의 라우손 함량은 40% 이상, 바람직하게 30% 이상, 상세하게 20% 이상, 명확하게 15% 이상, 유리하게 10% 이상으로 감소되지 않는다.

유리하게, 상기 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 적어도 15 중량%, 바람직하게 적어도 20 중량%, 더욱 유리하게 적어도 25 중량%으로 포함하고, 백분율은 (임의의 건조화 담체의 첨가 이전에) 상기 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 표현된다.

바람직하게, 본 발명에 따른 상기 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 단백질, 펩티드 또는 아미노산을 2 중량% 이상, 바람직하게 1.5 중량% 이상, 명확하게 1 중량% 이상으로 포함하지 않는다.

상기 추출물은 또한 클로로필, 명확하게 클로로필 a 및/또는 클로로필 b를 포함하고, 총 클로로필 함량은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 25 중량% 미만, 명확하게 건조 추출물의 중량을 기준으로 20 중량% 미만, 유리하게 10 중량% 미만이다.

유리하게, 상기 추출물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 클로로필을 5 중량% 이상, 바람직하게 2 중량% 이상으로 포함하지 않는다. 더욱 더 유리하게, 상기 추출물은 클로로필을 포함하지 않는다.

상기 추출물은 또한 라우소니아 이너미스의 공중 부분, 명확하게 라우소니아 이너미스의 잎 및/또는 가지에 자연적으로 존재하는 임의의 화합물을 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 추출물은 갈산, 파라-쿠마르산, 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논 및 3,4,5-트리하이드록시아세토페논과 같은 페놀 화합물; 루테올린, 아피게닌, 카테킨, 3',4',5,7-테트라하이드록시플라바논, 3',5,7-트리하이드록시-4'-메틸플라본과 같은 플라보노이드; β-시토스테롤과 같은 스테롤; 루페올과 같은 트리테르펜; 및/또는 랄리오시드, 미르시아페논 A, 1,2-디하이드록시-4-O-글리코실옥시나프탈렌 (소위 4-O-β-D-글루코피라노시드), 루테올린-4'-O-글루코시드, 아피게닌-7-O-β-글루코시드, 루테올린-3'-O-글루코시드 및 아피게닌-4'-O-β-글루코시드와 같은 이들의 헤테로시드도 역시 포함한다.

구체적으로, 상기 추출물은 갈산, 파라-쿠마르산, 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논 및 3,4,5-트리하이드록시아세토페논과 같은 페놀 화합물; 루테올린, 아피게닌, 카테킨, 3',4',5,7-테트라하이드록시플라바논, 3',5,7-트리하이드록시-4'-메틸플라본과 같은 플라보노이드; 및/또는 랄리오시드, 미르시아페논 A, 1,2-디하이드록시-4-O-글리코실옥시나프탈렌, 루테올린-4'-O-글루코시드, 아피게닌-7-O-β-글루코시드, 루테올린-3'-O-글루코시드 및 아피게닌-4'-O-β-글루코시드와 같은 이들의 헤테로시드도 역시 포함한다.

보다 구체적으로, 상기 추출물은 또한 루테올린, 아피게닌 및 파라-쿠마르산을 포함한다.

이것은 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논 및 선택적으로 3,4,5-트리하이드록시아세토페논 및 1,2-디하이드록시-4-O-글리코실옥시나프탈렌을 추가로 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 상기 추출물은 단백질이 없는 담체로부터 선택된 담체의 단독으로 또는 혼합물로의 첨가에 의해 표준화될 수 있다.

상기 추출물이 건조 추출물일 때, 담체는 바람직하게 과당, 포도당, 슈크로스, 말토덱스트린, 셀룰로우스 유도체, 전분 명확하게 옥수수, 밀 또는 쌀 전분, 아가-아가, 검, 뮤실라지와 같은 당 및 다당류 유도체; 그리고 만니톨, 소르비톨, 자일리톨 등과 같은 폴리올로부터 선택된다.

구체적으로, 이것은 과당, 말토덱스트린 및 전분, 명확하게 쌀 전분으로부터 선택된다. 이것은 바람직하게 천연 담체 및/또는 화석 자원과는 정반대로 재생가능한 자원으로부터의 천연 기원을 갖고, 유리하게 이들 담체는 환경을 배려하는 공정에 의해 획득가능하다.

본 발명은 따라서 상기에 언급된 방법에 의해 획득될 수 있는 표준화된 건조 추출물에 관한 것이다.

이러한 표준화된 건조 추출물은 이전에 정의된 명세와 부합한다.

구체적으로, 상기 표준화된 건조 추출물은 0.6 중량% 내지 1.4 중량%의 라우손을 포함하고, 루테올리, 아피게닌 및 파라-쿠마르산도 추가로 포함한다.

보다 구체적으로, 이것은

- 루테올린 함량이 0.05 내지 1.0 중량%을 포함하고,

- 아피게닌 함량은 0.01 내지 0.5 중량%을 포함하고,

- 파라-쿠마르산 함량은 0.01 내지 0.5 중량%을 포함하는 것과 같다.

이것은 또한 표 1에 나열된 임의의 화합물을 포함할 수 있다.

바람직하게, 상기 표준화된 건조 추출물은 시간 경과 시 라우손의 안정성에 관하여 이전에 정의된 명세와 부합한다.

따라서, 상대 습도 (RH) 60%을 갖는 실온 (15℃ 내지 25℃)에서 광 차단되어 1개월, 3개월, 6개월 또는 12개월 이후에; 또는 상대 습도 (RH) 75% (± 5%)를 갖는 온도 40℃ (± 2℃)에서 1개월, 3개월 또는 6개월 이후에, 라우손 함량은 40% 이상, 바람직하게 30% 이상, 상세하게 20% 이상, 명확하게 15% 이상, 유리하게 10% 이상, 더욱 유리하게 5% 이상으로 감소되지 않는다.

일 구현예에서, 본 발명의 방법에 의해 획득될 수 있는 표준화된 건조 추출물은 표준화된 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 담체를 적어도 80 중량%, 유리하게 적어도 90 중량%, 명확하게 적어도 92 중량%, 상세하게 적어도 95% 포함한다.

나머지 상세한 설명에서, "본 발명에 따른 추출물"은 상기에 정의된 바와 같은 추출물 또는 상기 기술된 바와 같이 본 발명에 따른 방법에 의해 획득될 수 있는 추출물을 나타낼 것이다.

마찬가지로, "본 발명에 따른 표준화된 건조 추출물"은 상기에 정의된 바와 같은 표준화된 건조 추출물 또는 상기 기술된 바와 같이 본 발명에 따른 방법에 의해 획득될 수 있는 표준화된 건조 추출물을 나타낼 것이다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 추출물 또는 표준화된 건조 추출물, 및 적용가능한 경우 적절한 부형제를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 추출물 또는 표준화된 건조 추출물은 이와 같은 추출물 및 표준화된 건조 추출물에 관한 상기 단락 및 본 발명에 따른 방법에 의해 획득될 수 있는 추출물 및 표준화된 건조 추출물에 관한 단락에서 정의된 바와 같다.

따라서, 상기 추출물 및 표준화된 건조 추출물은 루테올린, 아피게닌 및 파라-쿠마르산을 포함하고, 4,6-테트라하이드록시아세토페논 및 선택적으로 3,4,5-트리하이드록시아세토페논 및 1,2-디하이드록시-4-O-글리코실옥시나프탈렌을 추가로 포함할 수 있다.

구체적으로, 표준화된 건조 추출물은 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 0.6 중량% 내지 1.4 중량%, 상세하게 대략 1.3 중량%으로 포함하는 라우손 함량을 갖는다.

상기 조성물은 바람직하게 외부적으로 및 국소적으로 투여되도록 제형화된다.

본 발명에 따른 조성물은 국소 투여에 적합한 상이한 제조물, 명확하게 크림, 에멀전, 밀크, 연고, 로션, 오일, 수용성 또는 물-알코올 또는 글리콜 용액, 파우더, 스프레이, 샴푸, 바니쉬 또는 외부적 적용을 위한 임의의 다른 산물을 포함하는 형태로 제형화될 수 있다.

조성물은 유리하게 적어도 하나의 미용적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 미용 염료 조성물이다.

"미용적으로 허용가능한 부형제"는 본 발명의 맥락에서 미용적 조성물의 제조 시 유용하며, 일반적으로 안전하고, 비독성이고, 생물학적이거나 달리 바람직하지 않은 것이 아니며, 미용적 용도에, 명확하게 국소적 적용에 의해 허용가능한 것임을 의미한다.

명확하게, 본 발명에 따른 조성물은 또한 표면활성제, 비후제, 보존제, 방향제, 염료, 화학적 또는 미네랄 필터, 보습제, 열수 (thermal water) 등으로부터 선택되는, 당업자에게 알려진 적어도 하나의 미용적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 당업자라면 본 발명에 따른 조성물의 제형화를 이들의 일반 지식을 사용함으로써 조절하는 것을 숙지하고 있다.

그러나, 본 조성물은 라우손을 안정화하도록 보통 헤나 조성물에 존재하는 안정화제가 없다.

따라서, 본 발명에 따른 미용 염료 조성물은 디아미노톨루엔 및 디아미노벤젠, 특히 가장 많이 사용되는 PPD (파라-디페닐렌디아민)과 같은 합성 염료로 만들어진 첨가제가 없다 [Wang et al. J. environ. Anal. Toxicol. 2016, 6(3); Wang et al. J. Chromatogr. B 2011, 879, 1795-1801].

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 미용 염료 조성물은 본 발명에 따른 추출물을 0.01 중량% 내지 50 중량%, 명확하게 1 중량% 내지 40 중량%, 상세하게 2 중량% 내지 30 중량%으로 포함하고, 추출물의 중량은 조성물의 총 중량을 기준으로 건조 추출물에서 표현된다.

일 상세한 구현예에서, 본 발명에 따른 미용 염료 조성물은 본 발명에 따른 표준화된 추출물을 1 중량% 내지 20 중량%, 명확하게 5 중량% 내지 20 중량%, 상세하게 10 중량% 내지 20 중량%으로 포함하고, 표준화된 추출물의 중량은 조성물의 총 중량을 기준으로 건조 추출물에서 표현된다.

바람직하게, 본 발명에 따른 미용 염료 조성물은 조성물의 총 중량을 기준으로 라우손을 0.2 중량% 내지 2 중량% , 명확하게 0.5 중량% 내지 1.5 중량%을 포함하는 라우손 함량을 갖는다.

구체적으로, 미용 염료 조성물은 조성물의 총 중량의 관점에서 대략 1.3 중량%의 라우손 함량을 갖는다.

이러한 라우손 함량은 단백질이 없는 담체로부터 선택된 담체의 단독으로 또는 혼합물으로의 첨가에 의해 획득될 수 있다.

본 발명에 따른 미용 염료 조성물이 분말 형태일 때, 담체는 바람직하게 과당, 포도당, 슈크로스, 말토덱스트린, 셀룰로우스 유도체, 전분 명확하게 옥수수, 밀 또는 쌀 전분, 아가-아가, 검, 뮤실라지와 같은 당 및 다당류 유도체; 그리고 만니톨, 소르비톨, 자일리톨 등과 같은 폴리올로부터 선택된다.

본 발명에 따른 미용 염료 조성물이 분말 형태일 때, 당업자라면 이들에게 잘 알려진 임의의 방법에 의해 이의 입자 크기를 조절할 수 있다.

구체적으로, 본 발명에 따른 미용 염료 조성물은 250 μm 미만의 입자 크기를 갖는 분말의 형태일 수 있다.

바람직하게, 본 발명에 따른 미용 염료 조성물은 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 단백질, 펩티드 또는 아미노산을 2 중량% 이상 포함하지 않는다.

본 발명에 따른 미용 염료 조성물은 또한 하나 이상의 추가적인 염료(들) 및/또는 색소(들)을 포함할 수 있다.

바람직하게, 본 발명에 따른 조성물의 라우손 함량은 시간 경과 시 안정한 것으로 이해된다.

따라서, 상대 습도 (RH) 60%을 갖는 실온 (15℃ 내지 25℃)에서 광 차단되어 1개월, 3개월, 6개월 또는 12개월 이후에, 상기 추출물의 라우손 함량은 60% 이상, 바람직하게 50% 이상, 더욱 바람직하게 30% 이상, 상세하게 20% 이상, 명확하게 15% 이상, 유리하게 10% 이상으로 감소되지 않는다.

본 발명은 또한 케라틴 섬유 상에 본 발명에 따른 조성물의 적용, 선택적으로 이어진 헹구는 단계를 포함하는 케라틴 섬유를 염색하는 미용 방법에 관한 것이다.

"케라틴 섬유"는 모발 및 손발톱과 같은 표피 및 외피에 존재하는 케라틴을 의미한다.

본 발명은 또한 피부에 문신하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 추출물을 포함하는 직물 또는 가구 염료의 용도를 갖는다.

이러한 염료는 또한 하나 이상의 추가적인 염료(들) 및/또는 색소(들)을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 염료는 또한 당업자에게 알려진 임의의 아쥬반트를 포함할 수 있고, 당업자라면 본 발명에 따른 조성물의 제형화를 이들의 일반 지식을 사용함으로써 조절하는 방식을 숙지하고 있다.

본 발명은 또한 직물 또는 나무 섬유를 염색하기 위한 이러한 염료의 용도에 관한 것이다.

도 1은 본 발명에 따른 추출물 (시료 E2)의 UHPLC-UV 크로마토그램 (35℃에서 Vanguard^TM 프리컬럼 (5 mm × 2.1) (Waters Corporation, Milford, USA)이 장착된 ACQUITY UPLC BEH Shield RP18 컬럼 (100 mm × 2.1, 1.7 μm); 유동 속도 0.4 mL/분; 이동상: (A) 0.1% 포름산을 갖는 물, (B) 아세토니트릴 및 (C) 메탄올 (세척 용매)의 선형 구배 시스템: 0 내지 9분, 2% 내지 100% B; 9 내지 9.55분, 100% B 유지함; 9.55 내지 9.70분, 0% 내지 100% C; 9.7 내지 10.2분, 100% C 유지함; 10.20 내지 10.35분, 0% 내지 100% B; 10.35 내지 10.85분, 100% B 유지함; 10.85 내지 11분, 0% 내지 98% A; 컬럼의 평형를 위해 1분 동안 98% A 내지 2% B에서 유지됨)을 나타낸다.
도 2는 도 1과 동일한 크로마토그램을 나타낸다. 채워진 피크는 도 1에서 관찰될 수 있는 피크에 해당하는 반면, 선으로 표시된 곡선은 상기 크로마토그램의 확대에 해당한다.
도 3a, 3b, 3c, 3d 및 3e은 시료 E2로부터 분리된 라우손, 루테올린, 아피게닌, 파라-쿠마르산 및 2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논의 UV 스펙트럼을 나타낸다.
도 4a, 4b, 4c, 4d 및 4e는 시료 E2로부터 분리된 라우손의 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC 및 HMBC NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 5a, 5b, 5c, 5d 및 5는 시료 E2로부터 분리된 루테올린의 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC 및 HMBC NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 6a, 6b, 6c, 6d 및 6e는 시료 E2로부터 분리된 아피게닌의 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC 및 HMBC NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 7a, 7b, 7c, 7d 및 7e는 시료 E2로부터 분리된 파라-쿠마르산의 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC 및 HMBC NMR 스펙트럼을 나타낸다.

실시예

다음의 실시예는 본 발명을 설명한다.

I. 본 발명의 추출물, 표준화된 건조 추출물 및 제조 방법

실시예 1: 본 발명에 따른 이소프로필 아세테이트 추출물 1번

50 g의 라우소니아 이너미스의 미분쇄된 잎이 500 mL의 물에 의해 30 내지 40℃에서 30분 동안 추출된다. 600 mL의 이소프로필 아세테이트가 이 용액에 첨가된다. 이것이 30분 동안 혼합된다. 디캔팅 이후에, 상부 이소프로필 아세테이트 상 (480 mL)이 회수되고, 수용성 상은 실제적으로 라우손이 없기 때문에 분리된다. 이소프로필 아세테이트 상이 여과된 다음 로타베이퍼로 건조된다. 잔류물이 건조 헤나 추출물 (시료 E1)이다.

식물은 1.5 g의 라우손 / 100 g의 건조 식물을 포함한다.

이소프로필 아세테이트 상은 식물에 잠재적으로 존재하는 80.7%의 라우손을 포함한다.

건조 헤나 추출물 (시료 E1)은 30.2%의 라우손, 즉 식물에 존재하는 71%의 라우손을 포함한다.

안정성 연구: 25℃, 60% 상대 습도에서 보관되고, 광 차단된 시료:

T0: 라우손 함량 = 건조 추출물의 중량을 기준으로 라우손 30.2 중량%.

T1 개월: 라우손 함량 = 건조 추출물의 중량을 기준으로 라우손 29.7 중량%, 즉 본 발명의 의미 내에서 유의한 손실 전혀 없음.

실시예 2: 본 발명에 따른 이소프로필 아세테이트 추출물 2번

49.5 g의 라우소니아 이너미스의 미분쇄된 잎이 500 mL의 물에 의해 30 내지 40℃에서 30분 동안 추출된다. 600 mL의 이소프로필 아세테이트가 이 용액에 첨가된다. 이것이 30분 동안 혼합된다. 디캔팅 이후에, 상부 이소프로필 아세테이트 상이 회수되고, 부흐너 (K900) 상에서 여과되며, 잔류물을 50 mL의 이소프로필 아세테이트로 헹군다. 다음으로 결과로 얻은 용액이 로타베이퍼로 건조된다. 잔류물이 건조 헤나 추출물 (시료 E2)이다.

건조 헤나 추출물 (시료 E2)은 30.9 중량%의 라우손을 포함한다.

실시예 3: 본 발명에 따른 에틸 아세테이트 표준화된 건조 추출물

50 g의 라우소니아 이너미스의 분쇄된 잎이 500 mL의 물에 의해 30 내지 40℃에서 30분 동안 추출된다. 600 mL의 에틸 아세테이트가 이 용액에 첨가된다. 이것이 30분 동안 혼합된다. 디캔팅 이후에, 상부 에틸 아세테이트 상이 회수되고, 수용성 상이 이의 매우 낮은 라우손 함량 때문에 제거된다.

에틸 아세테이트 상의 라우손 함량이 HPLC에 의해 결정되고, 말토덱스트린이 1.3 중량%의 라우손을 포함하는 혼합물을 획득하도록 충분한 정량으로 첨가되며, 다음으로 이는 동결건조된다.

말토덱스트린으로 표준화된 건조 헤나 추출물 (시료 E3)은 1.1 중량%의 라우손, 즉 71%의 식물에서의 초기 라우손 함량을 포함한다.

비교의 목적을 위해, 비교 실시예가 이하 하기에 설명된다.

비교 실시예 1: 산성 이소프로필 아세테이트 추출물 1번

20 g의 라우소니아 이너미스 미분쇄된 잎이 인산 (1N H₃PO₄)에 의해 포화된 60 mL의 이소프로필 아세테이트에 의해 실온에서 60분 동안 추출된다. 부흐너 (K900) 상에서 고체/액체 분리 및 1N H₃PO₄에서 포화된 20 mL의 이소프로필 아세테이트에 의해 잔류물을 헹군 이후에, 획득된 액체가 수집되고 검정된다 (시료 CE1).

식물은 1.52 g의 라우손 / 100 g의 건조 식물을 포함한다.

시료 CE1은 식물에 잠재적으로 존재하는 0.9%의 라우손을 포함한다.

비교 실시예 2: 산성 메틸 에틸 케톤 추출물

20 g의 미분쇄된 라우소니아 이너미스 잎이 인산 (1N H₃PO₄)에 의해 포화된 60 mL의 메틸 에텔 케톤에 의해 실온에서 60분 동안 추출된다. 부흐너 깔대기 (K900) 상에서 고체/액체 분리 및 1N H₃PO₄에서 포화된 20 mL의 메틸 에틸 케톤에 의해 잔류물을 헹군 이후에, 획득된 액체가 수집되고 검정된다 (시료 CE2).

식물은 1.52 g의 라우손 / 100 g의 건조 식물을 포함한다.

시료 CE2는 식물에 잠재적으로 존재하는 0.9%의 라우손을 포함한다.

비교 실시예 3: 석회수 추출물 1번

20 g의 미분쇄된 라우소니아 이너미스 잎이 80 mL의 석회수에 의해 실온에서 60분 동안 추출된다. 부흐너 깔대기 (K900) 상에서 고체/액체 분리 및 20 mL의 석회수에 의해 잔류물을 헹군 이후에, 획득된 액체가 수집되고 검정된다 (시료 CE3).

식물은 1.52 g의 라우손 / 100 g의 건조 식물을 포함한다.

시료 CE3은 식물에 잠재적으로 존재하는 24%의 라우손을 포함한다.

비교 실시예 4: 석회수 추출물 2번

19.75 g의 분쇄된 라우소니아 이너미스 잎이 80 mL의 물 및 20 mL의 석회수 (CaO(OH)₂, 50 g/L)에 의해 실온에서 60분 동안 추출된다. 부흐너 깔대기 (K900) 상에서 고체/액체 분리 및 50 mL의 물에 의해 잔류물을 헹군 이후에, 획득된 액체가 수집된 다음 로타베이퍼로 건조된다. 잔류물이 건조 헤나 추출물 (시료 CE4)이다.

건조 헤나 추출물 (시료 CE4)은 1.8 중량%의 라우손을 포함한다.

비교 실시예 5: 산성 이소프로필 아세테이트 추출물 2번

20.0 g의 분쇄된 라우소니아 이너미스 잎이 인산 (1N H₃PO₄)에 의해 포화된 60 mL의 이소프로필 아세테이트에 의해 실온에서 60분 동안 추출된다. 부흐너 깔대기 (K900) 상에서 고체/액체 분리 및 20 mL의 포화된 이소프로필 아세테이트에 의해 잔류물을 헹군 이후에, 획득된 액체가 수집된 다음 로타베이퍼로 건조된다. 잔류물이 건조 헤나 추출물 (시료 CE5)이다.

건조 헤나 추출물 (시료 CE5)은 0.2 중량%의 라우손을 포함한다.

비교 실시예 6: 수용성 용액 추출물

50 g의 미분쇄된 라우소니아 이너미스 잎이 150 mL의 산성 수용성 용액 (HCl, pH = 2.5)에 의해 실온에서 30분 동안 추출된다. 획득된 즙이 부흐너 깔대기 (K900) 상에서 필터가 없이 찌꺼기 수용성 용액으로 분리된다. 찌꺼기는 1 L의 알칼리성 수용성 용액 (NaOH 0.15%)으로 50℃에서 3시간 동안 추출된다. (크기 100 메쉬의 거즈 상에서) 여과에 의해 고체/액체 분리 이후에, 획득된 액체가 진 공 하에서 1/15로 농축되고, 냉각되며, HCl로 pH = 2.5로 산성화된다. 다음으로 원심분리되고, 진공 하에 40℃에서 오븐 건조된다. 잔류물이 건조 헤나 추출물 (시료 CE6)이다.

건조 헤나 추출물 (시료 CE6)은 9.5 중량%의 라우손을 포함한다.

비교가 용이하도록, 추출물 CE2, CE4, CE5 및 CE6의 유의한 관점은 하기에 요약되어 있다. 주목할만하게, 상기 추출물의 비교는 출반 물질과 동일한 식물 로트가 사용되어 특히 적절하다.

상기 표에 나타낸 결과로부터 명백하게 나타나서, 본 발명의 방법은 다른 방법보다 식물의 라우손 잠재력의 더욱 더 중요한 부분을 추출하도록 허용한다. 이것은 명확하게 특정한 냉침 단계 a)로 인해 생기고, 냉침 단계 동안 식물에 원래 존재하는 글리코실화된 라우손 유도체가 효소적 가수분해를 거친다.

Ⅱ. 특성화 연구

A) 구조 분석

▶ 재료 및 방법

분석에 사용된 본 발명의 추출물은 시료 E2이다.

크로마토그래피 분리는 사차 펌프, 자동-시료 주입기, 온라인 탈가스기, 자동 온도조절 컬럼 오븐 및 DAD 검출기 (200 내지 500 nm)가 장착된 워터스 ACQUITY UHPLC 시스템 상에서 수행되었다. Vanguard^TM 프리컬럼 (5 mm × 2.1) (Waters Corporation, Milford, USA)이 장착된 ACQUITY UPLC BEH Shield RP18 컬럼 (100 mm × 2.1, 1.7 μm)이 35℃에서 사용되었고, 유동 속도가 0.4 mL/분으로 설정되었다. 이동상은 세척 용매로서 (A) 0.1% 포름산을 갖는 물, (B) 아세토니트릴 및 (C) 메탄올 (세척 용매)의 선형 구배 시스템으로 구성되었다: 0 내지 9분, 2% 내지 100% B; 9 내지 9.55분, 100% B 유지함; 9.55 내지 9.70분, 0% 내지 100% C; 9.7 내지 10.2분, 100% C 유지함; 10.20 내지 10.35분, 0% 내지 100% B; 10.35 내지 10.85분, 100% B 유지함; 10.85 내지 11분, 0% 내지 98% A; 컬럼의 평형를 위해 1분 동안 98% A 내지 2% B에서 유지됨.

화합물은 고해상도 질량 분광분석법, 1D- 및 2D-NMR 실험 (¹H NMR, ¹³C NMR, DEPT, COSY, HMBC, HSQC)에 의해 확인되었다.

NMR 실험은 BBO 프로디지 5 mm 프로브가 장착된 브루커 아방스 IIIHD 500 MHz 분광분석기 상에서 수행되었다 (Bruker Biospin, Karlsruhe, Baden-Wuttemberg, Germany). 중수소화된 디메틸설폭사이드가 용매로서 사용되었다. 획득 순서는 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC, HMBC이었다. 화학적 이동이 내부 표준으로서 용매로 조정되었다 (δ_H 2,52 ppm 및 δ_C 39,52 ppm).

HRMS 데이타가 Synapt G2Si 상에서 Masslynx v4.1 SCN957 소프트웨어 (Waters Q-TOF SYNAPT^TM, Waters Corp, Manchester, England)로 획득되었다. MS 소소 온도가 125℃로 설정되었고, 탈용매화 온도가 500℃로 설정되었다. 질소가 건조 가스로서 사용되었고, 탈용매화 가스 유동 속도가 1000 L/h로 설정되었고, 원추의 가스 유동은 50 L/h에서 유지되었다. 양성 및 음성 모드 둘 다에서, 말단 및 원추 전압은 각각 0.5 kV 및 50 V으로 설정되었다. 질량 스펙트럼이 100 내지 1500 Da의 범위에 걸쳐 기록되었다. 안정하고 정밀한 스캐닝을 입증하도록, 류신 엔케팔린이 기준 화합물로서 사용되었다 (양이온 모드 ([M+H] ± 556.2771 및 278.1141) 및 음이온 모드 ([M-H] ± 554.2615 및 236.1035)). 모든 데이타가 25,000의 해상력으로 연속 모드에서 획득되었다.

▶ 결과

* UHPLC-UV 크로마토그램

획득된 UHPLC-UV 크로마토그램은 도 1 및 도 2에 나타낸다. 상기 크로마토그램의 확대 (도 2의 선으로 표시된 곡선)로 관찰될 수 있는 피크가 다음의 화합물과 연관되었다.

* UV 스펙트럼

피크 15번, 20번, 22번, 10번 및 5번에 해당하는 화합물의 UV 스펙트럼이 도 3a, 3b, 3c, 3d 및 3e에 각각 나타나 있다.

* NMR 스펙트럼

● 피크 15번

피크 15번에 해당하는 화합물의 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC 및 HMBC NMR 스펙트럼이 도 4a, 4b, 4c, 4d 및 4e에 나타나 있다.

상기 화합물은 라우손으로서 확인되었다.

따라서, 다음의 결과가 ¹H 및 ¹³C NMR 스펙트럼의 관점에서 작성될 수 있다.

C₁₀H₅O₃ [M-H]^-의 경우 HRMS (ESI^-): 계산된 173.0239, 관찰된 173.0244 (0,5 mDa / 2,9 ppm)

C₁₀H₇O₃ [M+H]⁺의 경우 HRMS (ESI⁺): 계산된 175.0395, 관찰된 175.0405 (1,0 mDa / 5,7 ppm)

● 피크 20번

피크 20번에 해당하는 화합물의 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC 및 HMBC NMR 스펙트럼이 도 5a, 5b, 5c, 5d 및 5e에 나타나 있다.

상기 화합물은 루테올린으로서 확인되었다.

C₁₅H₉O₆[M-H]^-의 경우 HRMS (ESI^-): 계산된 285.0399, 관찰된 285.0398 (0,1 mDa / 0,4 ppm)

C₁₅H₁₁O₆[M+H]⁺의 경우 HRMS (ESI⁺): 계산된 287.0556, 관찰된 287.0560 (0,4 mDa / 1,4 ppm)

● 피크 22번

피크 22번에 해당하는 화합물의 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC 및 HMBC NMR 스펙트럼이 도 6a, 6b, 6c, 6d 및 6e에 나타나 있다.

상기 화합물은 아피게닌으로서 확인되었다.

C₁₅H₉O₉[M-H]^-의 경우 HRMS (ESI^-): 계산된 269,045, 관찰된 269,0462 (0,2 mDa / 4.5 ppm)

C₁₅H₁₁O₅[M+H]⁺의 경우 HRMS (ESI⁺): 계산된 271,0606, 관찰된 271,0608 (0,2 mDa / 0.7 ppm)

● 피크 10번

피크 10번에 해당하는 화합물의 ¹H, ¹³C, COSY, HSQC 및 HMBC NMR 스펙트럼이 도 7a, 7b, 7c, 7d 및 7e에 나타나 있다.

상기 화합물은 파라-쿠마르산으로서 확인되었다.

C₉H₇O₃[M-H]^-의 경우 HRMS (ESI^-): 계산된 163,0395, 관찰된 163,0403 (0,8 mDa / 4.9 ppm)

B) 정량분석

▶ 재료 및 방법

* 배치 시료

- LP110: 말토덱스트린으로 표준화된 에틸 아세테이트 추출물 - 산업적 규모.

- ES310: 말토덱스트린으로 표준화된 에틸 아세테이트 추출물 - 연구실 규모.

- JQ137A: 과당으로의 이소프로필 헤나 추출물 - 연구실 규모.

상기 표준화된 추출물 각각에서 라우손은 1.1 중량%과 동등하다.

* 실험 조건

루테올린, 아피게닌이 C18 컬럼 (XBridge 100　C18; 3,5　mm, 150　mm × 4.6　mm)으로 H₂0/트리플루오로아세트산 0,1 % (A) 및 아세토니트릴/트리플루오로아세트산 0,1 % (B)을 용출매로서 갖는 구배 조건을 사용하여 (하기 참조) 수행된 분석용 HLPC에 의해 적정되었다.

구배 조건: T 0분 A 18% B 82%; T 1분: A 18% B 82%; T 10분 A 50% B 50%; T 10.1분: A 18% B 82%

UV 검출이 아피게닌 및 310의 경우 340 nm에서 시행된다. 유동 속도가 1　mL/분이고 온도가 40℃이다. 순수한 루테올린. 아피게닌 및 p-쿠마린이 보정 측정에 사용된다.

▶ 결과

Ⅲ. 검정 방법

▶ 방법 1: HPLC에 의한 라우손 검정

본 방법은 다음에 적용될 수 있다:

A. 추출물에서 라우손의 검정

B. 산 가수분해에 의해 획득된, 라우소니아 이너미스의 공중 부분에서 유리 형태로 또는 글리코실화된 라우손 유도체의 형태로 존재하는 총 라우손의 검정, 이로서 식물에서 라우손 잠재력의 정량화.

C. 효소에 의해 형성된 라우손의 검정

* 시약

라우손 > 97% (HPLC) SIGMA- 제품번호: H46805

분석용 디클로로메탄

분석용 황산

분석용 메탄올

HPLC-등급 물

HPLC-등급 아세토니트릴

HPLC-등급 트리플루오로아세트산

* HPLC 조건

-　컬럼: XBridge C18, 3.5 μm, 4.6 × 150 mm Waters

퍼니스 40℃

-　용매: S-A: 물에서의 0.1% 트리플루오로아세트산

S-B: 아세토니트릴에서의 0.1% 트리플루오로아세트산

-　구배: T 0분 40% S-A; T 1분 40% S-A; T 10분 5% S-A; T 11분 5% S-A; T 11.1분 40% S-A

-　파장: λ = 278 nm

-　유동 속도: 1 mL/분

- 주입: 10 μL

* 시료 준비

전체 그대로 또는 거칠게 마쇄된 잎의 경우:

50 g의 잎이 마쇄된 다음 0.355 μm 체를 통해 걸러진다.

잎 분말의 경우:

50 g의 잎 분말을 이와 같이 사용한다.

* 용액의 준비

■ 대조군 용액

1/1 메탄올/에탄올에서 0.3 mg/mL의 라우손 용액. 1/1 메탄올/물로 1/10, 1/20, 1/100로 희석한다.

■ 테스트 용액

- 테스트 용액 A (추출물에 존재하는 라우손의 검정)

100 mL의 1/1 메탄올/물에 50 mg의 추출물을 용해시킨다.

초음파로 용해시킨다.

아크로디스크 GF GHP 상에서 여과.

10 μL을 주입한다.

-　테스트 용액 B (총 라우손의 검정)

80 mg의 잎 분말을 부피측정 플라스크 내로 도입한다.

50 mL의 2N H₂SO₄을 첨가한다.

97℃로 30분 동안 가열한다.

냉각시킨다.

메탄올 qs 100 mL을 첨가한다.

용액을 아크로디스크 GF GHP 0.45 μm 상에서 여과시킨다.

10 μL의 여과물을 주입한다.

-　테스트 용액 C (효소에 의해 형성된 라우손의 검정)

80 mg의 잎 분말을 부피측정 플라스크 내로 도입한다.

50 mL의 미네랄을 제거한 물을 첨가한다.

초음파 수조에 30 내지 40℃로 30분 동안 방치한다.

냉각시킨다.

메탄올 qs 100 mL을 첨가한다.

용액을 아크로디스크 GF GHP 0.45 μm 상에서 여과시킨다.

10 μL의 여과물을 주입한다.

* 결과

대조군 용액으로 계산된 회귀 곡선을 사용하여 다음을 결정한다:

A. 추출물의 라우손 함량,

B. 총 라우손 함량, 및/또는

C. 효소에 의해 형성된 라우손의 함량

▶ 방법 2: 질소 포함 화합물 (아미노산 단백질)의 검정

유리 아미노산 및 단백질이 닌히드린 분광광도법에 의해 가수분해 이전 및 이후에 검정될 수 있다. 결과는 아르기닌을 기준으로 아미노산의 백분율로서 표현된다.

* 총 단백질 및 아미노산의 검정

원리

산 가수분해 이후에 닌히드린 시약에 의한 아미노산의 비색 검정. 결과는 아스파라긴을 기준으로 총 아미노산의 백분율로 표현된다.

시약

● 시트레이트 완충액 (pH = 5)

2.1 g의 시트르산을 20 mL의 물에 용해시키고, 20 mL의 1 N 수산화나트륨을 첨가하여 물로 50 mL로 맞춘다.

● 닌히드린 시약

0.08 g의 염화 주석 (Ⅱ) (SnCl_2,2H₂O)을 50 mL의 시트레이트 완충액 (pH = 5)에 용해시킨다.

2 g의 닌히드린을 50 mL의 에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르 (EGME)에 용해시킨다.

두 가지 용액을 혼합시킨다.

● 6 N 염산

농축된 염산을 1/2로 희석시킨다 (36%).

● 희석제

100 mL의 1-프로판올을 100 mL의 물과 혼합시킨다.

* 용액의 제조

● 교정 범위의 준비

17 mg의 아스파라긴을 100 mL의 물에 용해시킨다.

● 테스트 용액의 준비

시료에 의존하여 대략 30 내지 200 mg의 추출물을 무게 측정하여 회전 바늘 튜브에서 분석하고 (pe ₁ ), 2 mL의 6N HCl을 첨가한다.

밀봉한 다음, 대략 16시간 동안 110℃에서 방치한다.

3 N 수산화나트륨으로 중성화하고 (메틸 레드가 색상을 변화시킴), 다음으로 물로 20 mL로 맞춘다.

* 검정

교반시키고, 수조에 20분 동안 100℃에 방치한다.

희석제로 10 mL로 맞춘다.

공시료와 대비하여 상이한 용액의 흡광도를 570 nm에서 측정한다.

* 계산

교정 곡선을 작성한다.

이로부터 테스트 용액에서 아스파라긴으로 표현되는 총 아미노산 농도 (Q_AAT)를 차감한다.

추출물의 총 아미노산 함량 (T_AAT)은 다음의 공식으로 주어진다.

▶ 방법 3: 클로로필의 중량 검정

추출물에서 클로로필 함량은 추출물을 헵탄으로 세척한 이후에 획득된 중량에 의해 평가될 수 있다. 추출물이 10 V의 메탄올에 의해 흡수된다. 15분 동안 교반한 이후에, 용액이 여과된다. 상청액이 건조되고, 클로로필을 포함하는 분획을 만든다.

Claims

건조 추출물의 총 중량을 기준으로 라우손을 10 중량% 내지 60 중량% 포함하는 라우소니아 이너미스 (Lawsonia inermis)의 공중 부분의 추출물로서, 상기 라우손은 명확하게 헤노시드와 같은 글리코실화된 라우손 유도체의 효소적 가수분해로부터 유도되고, 상기 추출물은 루테올린, 아피게닌 및 파라-쿠마르산도 포함하는, 추출물
제 1항에 있어서,
2,3,4,6-테트라하이드록시아세토페논을 추가로 포함하는, 추출물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 추출물은 상기 건조 추출물의 총 중량을 기준으로 단백질, 펩티드 또는 아미노산을 2 중량% 이상으로 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, 추출물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 따른 추출물 및 담체를 포함하는 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 표준화된 건조 추출물로서, 상기 표준화된 건조 추출물은 0.6 내지 1.4 중량%의 라우손을 포함하는, 표준화된 건조 추출물.
제 4항에 있어서,
- 상기 루테올린 함량은 0.05 내지 1.0 중량%을 포함하고,
- 상기 아피게닌 함량은 0.01 내지 0.5 중량%을 포함하고,
- 상기 파라-쿠마르산 함량은 0.01 내지 0.5 중량%을 포함하는, 표준화된 건조 추출물.
라우손 추출물의 제조 방법으로서, 다음의
a) 물에 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 냉침 단계로서, pH 4 내지 8에서 수행되고, 상기 라우소니아 이너미스의 공중 부분에서 초기에 존재하는 헤노시드와 같은 글리코실화된 라우손 유도체가 부분적으로 또는 전체적으로 효소적 가수분해되어, 라우손을 포함하는 수용성 용액을 유도하는, 냉침 단계;
b) 단계 a)로부터 획득된 상기 용액에 유기 용매의 첨가 단계로서, 상기 용매의 물과의 혼화능이 25℃에서 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량% 미만이고, 물에서 상기 용매의 혼화능은 25℃에서 10 중량% 미만, 유리하게 5 중량% 미만이 되어, 수용성 상 및 유기 상의 형성을 유도하는, 첨가 단계;
c) 단계 b)로부터 획득된 상기 유기 상의 회수 단계; 및
d) 라우손-농축된 추출물을 획득하도록 허용하는, 단계 c)로부터 회수된 상기 유기 상의 농축 단계:
를 포함하는, 제조 방법.
제 6항에 있어서,
단계 a) 동안 상기 물의 온도는 20℃ 내지 60℃, 명확하게 20℃ 내지 50℃, 바람직하게 25℃ 내지 45℃, 상세하게 30℃ 내지 45℃를 포함하는, 제조 방법.
제 6항 또는 제 7항에 있어서,
단계 a)는 pH 5 내지 7.5, 상세하게 5.5 내지 7.5, 명확하게 6.5 내지 7.5에서 수행되는, 제조 방법.
제 6항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 방법은 상기 수용성 용액 또는 상기 수용성 상의 pH를 산 또는 염기의 첨가에 의해 변경하는 임의의 단계를 포함하지 않는, 제조 방법.
제 6항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서,
단계 a)는 교반 하에 수행되고, 상기 냉침의 지속 시간은 15분 내지 2시간, 상세하게 15분 내지 1시간을 포함하고, 유리하게는 대략 30분인, 제조 방법.
제 6항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서,
단계 a)에서, 상기 사용된 물의 부피는 냉침에 적용된 상기 라우소니아 이너미스의 공중 부분의 질량보다 5 내지 15배 더 많고, 유리하게 6 내지 10배 더 많고, 전형적으로 10배 더 많은, 제조 방법.
제 6항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서,
단계 b) 동안 첨가된 상기 유기 용매는 2.0 D 미만의 쌍극자 모멘트를 특징으로 하고, 알코올, 염소화된 용매, 케톤, 에테르, 에스테르 및 이들의 혼합물로부터 선택되는, 제조 방법.
제 6항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 유기 용매는 (C₁-C₆) 알킬 아세테이트 또는 (C₁-C₆) 알킬 아세테이트의 혼합물이고, 바람직하게는 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 부틸 아세테이트, 이소아밀 아세테이트 및 이들의 혼합물로부터 선택되는, 제조 방법.
제 6항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서,
단계 d)로부터 획득된 상기 라우손-농축된 추출물은 단계 a)에서 냉침에 적용된 상기 라우소니아 이너미스의 공중 부분에서 유리 형태로 또는 헤노시드와 같은 글리코실화된 라우손 유도체의 형태로 초기에 존재하는 라우손을 50% 이상, 명확하게 60% 이상, 유리하게 70% 이상으로 포함하는, 제조 방법.
제 6항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서,
c') 단계 c) 및 단계 d) 사이에 담체를 추가하는 단계; 및
d) 단계 d) 이후에 표준화된 건조 추출물을 획득하도록 허용하는 건조화 단계:
를 추가적으로 포함하는, 제조 방법.
제 6항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 획득될 수 있는 추출물 또는 표준화된 건조 추출물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 따른 추출물 또는 제 4항 또는 제 5항에 따른 표준화된 건조 추출물 또는 제 6항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 획득될 수 있는 추출물 또는 표준화된 건조 추출물, 및 적어도 하나의 미용적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 미용 염료 조성물.