KR20200093070A - 폴록사머 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법 - Google Patents

폴록사머 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20200093070A
KR20200093070A KR1020207020989A KR20207020989A KR20200093070A KR 20200093070 A KR20200093070 A KR 20200093070A KR 1020207020989 A KR1020207020989 A KR 1020207020989A KR 20207020989 A KR20207020989 A KR 20207020989A KR 20200093070 A KR20200093070 A KR 20200093070A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
mol
poloxamer
formula
molecular weight
embodiments related
Prior art date
Application number
KR1020207020989A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102544922B1 (ko
Inventor
스캇 윌슨
켈빈 켄트
찬다나 샤르마
Original Assignee
시그마-알드리치 컴퍼니., 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 시그마-알드리치 컴퍼니., 엘엘씨 filed Critical 시그마-알드리치 컴퍼니., 엘엘씨
Priority to KR1020237019910A priority Critical patent/KR102662905B1/ko
Publication of KR20200093070A publication Critical patent/KR20200093070A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102544922B1 publication Critical patent/KR102544922B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L71/00—Compositions of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L71/02—Polyalkylene oxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/04—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers only
    • C08G65/06—Cyclic ethers having no atoms other than carbon and hydrogen outside the ring
    • C08G65/08—Saturated oxiranes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L71/00—Compositions of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2650/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2650/28—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule characterised by the polymer type
    • C08G2650/58—Ethylene oxide or propylene oxide copolymers, e.g. pluronics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/0043—Medium free of human- or animal-derived components

Abstract

세포 배양에서 전단 보호제로서 사용하기 위한 폴록사머 조성물 및 그러한 조성물의 제조 및 사용 방법이 본원에 기재된다.

Description

폴록사머 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 12월 21일자로 출원된 미국 가출원 제62/608,826호의 우선권의 이익을 주장하며, 그 전체 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 세포 배양에서 전단 보호제로서 사용하기 위한 폴록사머 조성물 및 그러한 조성물 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.
발명의 배경
폴록사머, 특히 폴록사머 188은 여러 산업 응용분야, 화장품 및 제약에서 사용된다. 이들은 또한 세포 배양 배지 과정에서 사용된다. 세포 배양 배지에 폴록사머, 특히 폴록사머 188을 첨가하는 것은 세포 생존률을 상당히 개선시킨다. 높은 세포 생존률은 최적 단백질 생산에 중요하다. 폴록사머가 세포 생존률을 개선시키는 이유는 완전히 이해되지 않았다. 폴록사머가 전단 응력을 감소시키고 이러한 방식으로 세포를 손상으로부터 보호하는 것으로 생각된다. 비이온성 계면활성제인 폴록사머는 가스 버블/배지 계면에 농축될 가능성이 있으며 가스 버블에 대한 세포 부착을 방지할 수 있고 이러한 방식으로 가스 버블이 파열될 때 세포가 손상되는 것을 방지할 수 있다. 이는 또한 버블이 파열될 때 충격을 감소시킬 수 있다. 일부 간행물은 폴록사머가 가스로부터 액체상으로의 산소 전달 속도를 향상시킨다고 주장하지만, 다른 간행물은 이러한 발견을 반박한다. 폴록사머가 세포막의 작은 결함을 "수리"할 수 있다는 암시도 있다.
일반적으로, 폴록사머는 일반식 I을 갖는 CAS 번호 9003-11-6의 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)/폴리프로필렌 글리콜 (PPG) 트리-블록 공중합체이다:
I
Figure pct00001
x 및 z는 바람직하게는 독립적으로 5 내지 150이고 y는 바람직하게는 15 내지 67이다.
폴록사머 188로 알려진 통상적으로 사용되는 제품은 7680 내지 9510 g/mol의 평균 분자량을 갖는다 (약전에 따라 정의되고 결정됨). 화학식 I에서, 폴록사머 188에 대해 x 및 z는 각각 약 80이고 y는 약 27이다. 이 화합물은 폴록사머 188, Pluronic® F 68, Kolliphor® P 188, Lutrol® F 68, SYNPERONICTM PE/F 68 또는 PLONON #188P로서 상용으로 입수 가능하다. 이들은 다양한 물리적 형태로 상용으로 입수 가능하다 (Pluronics® 또는 Lutrole®, 예를 들어, Pluronic® 용액, 겔, 또는 고체, 예컨대 Pluronic® F-68). 대안으로, 폴록사머는 당해 분야에 공지된 방법에 따라 원료로부터 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 제3,579,465호 및 제3,740,421호를 참조하라). 폴록사머에 대한 추가 정보는 Hagers Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, volume 9 "Stoffe P-Z", 1994, 282 내지 284 페이지에서 확인할 수 있다.
세포 배양 배지에서 사용 시 폴록사머 188 로트와 같은 상업적으로 입수 가능한 폴록사머에서 상당한 로트-대-로트 변동성이 관찰된다. 결과적으로 일부 로트는 손상/사멸로부터 세포를 충분히 보호하지 못하므로 세포 배양에서 사용하기에 적합하지 않다. 그 이유는 아직 완전히 이해되지 않았다. 결과적으로 세포 생존률은 이러한 "불량한" 로트가 사용될 때 현저히 더 낮다.
발명의 요약
본 발명의 다양한 양태 중에서 폴록사머 188과 비교하여 더 낮은 평균 분자량을 갖는 폴록사머 조성물이 제공된다. 폴록사머 조성물 제조 방법 및 이의 용도가 또한 제공된다.
따라서, 간단히 말해서, 본 발명은 화학식 I을 갖는 폴록사머 조성물에 관한 것이다:
I
Figure pct00002
여기서 y는 약 15 내지 약 26이고; x와 z의 합은 약 81 내지 약 100이고; 조성물은 약 6,000 g/mol 내지 약 8,000 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다.
본 발명의 다른 양태는 본 명세서 및 첨부 도면에 실질적으로 개시된 바와 같은 폴록사머 조성물 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 양태는 본 명세서 및 첨부 도면에 실질적으로 개시된 폴록사머 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 다른 양태는 본 명세서 및 첨부 도면에 개시된 실질적으로 방법, 조성물, 용도에 관한 것이고 및 발명에 관한 것이다.
다른 목적 및 특징은 이후 부분적으로 명백해지고 부분적으로 지적될 것이다.
도 1은 폴록사머 188의 각각의 로트에서 프로필렌 옥사이드 분포의 모드에 대한 폴록사머 188의 19 가지 로트의 세포 배양 성능의 플롯이다. 세포 배양 성능은 실시예에 기재된 바와 같은 생물학적 분석에 의해 측정되었고, 프로필렌 옥사이드 분포는 실시예에 기재된 분석적 역상 UPLC/MS 방법에 의해 측정되었다. USP 사양은 폴록사머 188에서 21.6 내지 33 개의 평균 프로필렌 옥사이드 단위체를 허용한다 (간섭 종이 없다고 가정).
도 2는 폴록사머 188의 단일 로트의 UPLC/MS 크로마토그램의 3D 플롯이다. x-축은 고분자의 체류 시간이고, y-축은 질량 분석계에 의해 검출된 질량 대 전하 비이다. 각의 피크의 강도는 적색의 강도로 나타난다. 이는 역상 크로마토그래피이므로, 우측으로 치우친 체류 시간을 갖는 고분자가 더 소수성이며, 이러한 특정 고분자의 경우 증가하는 사슬 길이의 PPO를 가짐을 의미한다.
도 3은 여러 폴록사머 188 로트의 분자량 분포를 비교하는 SEC 크로마토그램이다. 작용성에 대한 상관관계는 피크 분자량(Mp)에 기초한다.
도 4는 피크 분자량(SEC)과 폴록사머 188의 생물학적 성능 감소 사이의 관계의 플롯이다. 이 차트에서 더 우수한 성능은 더욱 음성이므로, 이는 더 낮은 분자량의 폴록사머 188이 세포 배양 배지에서 더 우수한 성능을 가질 것임을 예측한다.
상세한 설명
본 발명의 한 양태는 폴록사머 조성물에 관한 것이다.
당업자는 세포 배양 배지 중의 성분으로서 폴록사머를 사용하는 방법을 알고 있다. 이들은 사용하기에 적절한 양과 형식을 알고 있다. 그러나 때로는, 세포 배양이 표준 절차 및 레시피에 따라 준비되었더라도, 전형적으로 그러한 것과 같이 우수하게 작용하지 않는다. 이는 폴록사머로 인한 것일 수 있음이 밝혀졌다. 그러한 경우에, 지금까지 폴록사머의 전체 로트가 폐기되어야 했다.
예상한 대로 작용하지 않는 많은 폴록사머의 확인은, 예를 들어, 세포 배양에서 수행될 수 있다. 폴록사머를 포함하는 세포 배양이 예상한 대로의 세포 생존률 및 성능을 나타내지 않을 경우 본 발명에 따른 저 평균 분자량 폴록사머를 제공하여 이를 개선하려는 시도를 할 수 있다.
예상한 대로 작용하지 않는 임의의 세포 배양이 종래의 폴록사머를 본 발명에 따른 폴록사머로 대체하는 것을 촉발시킬 수 있다. 실제 세포 배양에 앞서 세포 배양 테스트를 수행하는 것 또한 가능하다. 세포 배양의 성능을 조사하기 위한 실험 설정은 다음과 같을 수 있다:
적합한 실험 설정은 Haofan Peng et al., Biotechnol. Prog., 2014, Vol. 30 (6), 1411 - 1418에 기재된 소규모 baffled shake 플라스크 모델이다.
당업자는 다음을 잘 알고 있다:
- 상이한 농도의 폴록사머가 사용될 수 있다 (전형적으로 0.1 내지 5 g/L).
- 임의의 유형의 CHO 세포 또는 다른 세포가 사용될 수 있다
- 선택된 세포주에 적합한 임의의 유형의 세포 배양 배지가 사용될 수 있다.
- 배양은 바람직하게는 궤도 진탕기에서 이루어지며 속도 및 투척은 선택된 세포주 및 배양 조건에 따라 조정될 필요가 있을 수 있다.
- 상기 기재된 선택된 파라미터에 따라, 생존률 하락은 2 시간 내지 5 일의 적절한 시점에 측정될 수 있다.
본 발명에 따른 세포 생존률의 정의는, 예를 들어, Beckman-Coulter ViCell XR 또는 유사한 것에서 트리판 블루 분석에 의해 결정되는 바와 같이 용액 중 살아 있는 세포의 백분율이다.
놀랍게도 저 평균 분자량 폴록사머가 우수한 성능을 제공함을 발견했으므로, 본 명세서에 따른 저 평균 분자량 폴록사머의 사용 및/또는 제조에 앞서 폴록사머의 각각의 로트를 분석하는 것 또한 가능하다. 분석은 예를 들어 SEC(크기 배제 크로마토그래피)에 의해 수행될 수 있다.
폴록사머 조성물
일반적으로, 본 발명은 폴록사머 조성물은 통상적인 폴록사머 물질, 예를 들어, 폴록사머 188보다 더 낮은 평균 분자량을 가지며, 이 조성물은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 세포 배양에서 사용될 때 놀랍게도 우수한 결과를 제공한다. 본 발명에 따른 특정 폴록사머 조성물은 화학식 I을 갖는다:
I
Figure pct00003
여기서 y는 약 15 내지 약 26이고; x와 z의 합은 약 81 내지 약 100이고; 조성물은 약 6,000 g/mol 내지 약 8,000 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다.
화학식 I과 관련하여 상기 언급된 바와 같이, y는 약 15 내지 약 26이다. 화학식 I과 관련된 일부 구체예에서, 예를 들어, y는 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 또는 약 26이다.
화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 15 내지 약 25, 약 15 내지 약 24, 약 15 내지 약 23, 약 15 내지 약 22, 약 15 내지 약 21, 약 15 내지 약 20, 약 15 내지 약 19, 약 15 내지 약 18, 약 15 내지 약 17, 또는 약 15 내지 약 16이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 16 내지 약 25, 약 16 내지 약 24, 약 16 내지 약 23, 약 16 내지 약 22, 약 16 내지 약 21, 약 16 내지 약 20, 약 16 내지 약 19, 약 16 내지 약 18, 또는 약 16 내지 약 17이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 17 내지 약 25, 약 17 내지 약 24, 약 17 내지 약 23, 약 17 내지 약 22, 약 17 내지 약 21, 약 17 내지 약 20, 약 17 내지 약 19, 또는 약 17 내지 약 18이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 18 내지 약 25, 약 18 내지 약 24, 약 18 내지 약 23, 약 18 내지 약 22, 약 18 내지 약 21, 약 18 내지 약 20, 또는 약 18 내지 약 19이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 19 내지 약 25, 약 19 내지 약 24, 약 19 내지 약 23, 약 19 내지 약 22, 약 19 내지 약 21, 또는 약 19 내지 약 20이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 20 내지 약 25, 약 20 내지 약 24, 약 20 내지 약 23, 약 20 내지 약 22, 또는 약 20 내지 약 21이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 21 내지 약 25, 약 21 내지 약 24, 약 21 내지 약 23, 또는 약 21 내지 약 22이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 22 내지 약 25, 약 22 내지 약 24, 또는 약 22 내지 약 23이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 23 내지 약 25, 또는 약 23 내지 약 24이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, y는 약 24 내지 약 25이다.
화학식 I과 관련하여 상기 언급된 바와 같이, x와 z의 합은 약 81 내지 약 100이다. 화학식 I과 관련된 일부 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 81, 약 82, 약 83, 약 84, 약 85, 약 86, 약 87, 약 88, 약 89, 약 90, 약 91, 약 92, 약 93, 약 94, 약 95, 약 96, 약 97, 약 98, 약 99, 또는 약 100이다.
화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 81 내지 약 99, 약 81 내지 약 98, 약 81 내지 약 97, 약 81 내지 약 96, 약 81 내지 약 95, 약 81 내지 약 94, 약 81 내지 약 93, 약 81 내지 약 92, 약 81 내지 약 91, 약 81 내지 약 90, 약 81 내지 약 89, 약 81 내지 약 88, 약 81 내지 약 87, 약 81 내지 약 86, 약 81 내지 약 85, 약 81 내지 약 84, 약 81 내지 약 83, 또는 약 81 내지 약 82이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 82 내지 약 99, 약 82 내지 약 98, 약 82 내지 약 97, 약 82 내지 약 96, 약 82 내지 약 95, 약 82 내지 약 94, 약 82 내지 약 93, 약 82 내지 약 92, 약 82 내지 약 91, 약 82 내지 약 90, 약 82 내지 약 89, 약 82 내지 약 88, 약 82 내지 약 87, 약 82 내지 약 86, 약 82 내지 약 85, 약 82 내지 약 84, 또는 약 82 내지 약 83이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 83 내지 약 99, 약 83 내지 약 98, 약 83 내지 약 97, 약 83 내지 약 96, 약 83 내지 약 95, 약 83 내지 약 94, 약 83 내지 약 93, 약 83 내지 약 92, 약 83 내지 약 91, 약 83 내지 약 90, 약 83 내지 약 89, 약 83 내지 약 88, 약 83 내지 약 87, 약 83 내지 약 86, 약 83 내지 약 85, 또는 약 83 내지 약 84이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 84 내지 약 99, 약 84 내지 약 98, 약 84 내지 약 97, 약 84 내지 약 96, 약 84 내지 약 95, 약 84 내지 약 94, 약 84 내지 약 93, 약 84 내지 약 92, 약 84 내지 약 91, 약 84 내지 약 90, 약 84 내지 약 89, 약 84 내지 약 88, 약 84 내지 약 87, 약 84 내지 약 86, 또는 약 84 내지 약 85이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 85 내지 약 99, 약 85 내지 약 98, 약 85 내지 약 97, 약 85 내지 약 96, 약 85 내지 약 95, 약 85 내지 약 94, 약 85 내지 약 93, 약 85 내지 약 92, 약 85 내지 약 91, 약 85 내지 약 90, 약 85 내지 약 89, 약 85 내지 약 88, 약 85 내지 약 87, 또는 약 85 내지 약 86이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 86 내지 약 99, 약 86 내지 약 98, 약 86 내지 약 97, 약 86 내지 약 96, 약 86 내지 약 95, 약 86 내지 약 94, 약 86 내지 약 93, 약 86 내지 약 92, 약 86 내지 약 91, 약 86 내지 약 90, 약 86 내지 약 89, 약 86 내지 약 88, 또는 약 86 내지 약 87이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 87 내지 약 99, 약 87 내지 약 98, 약 87 내지 약 97, 약 87 내지 약 96, 약 87 내지 약 95, 약 87 내지 약 94, 약 87 내지 약 93, 약 87 내지 약 92, 약 87 내지 약 91, 약 87 내지 약 90, 약 87 내지 약 89, 또는 약 87 내지 약 88이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 88 내지 약 99, 약 88 내지 약 98, 약 88 내지 약 97, 약 88 내지 약 96, 약 88 내지 약 95, 약 88 내지 약 94, 약 88 내지 약 93, 약 88 내지 약 92, 약 88 내지 약 91, 약 88 내지 약 90, 또는 약 88 내지 약 89이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 89 내지 약 99, 약 89 내지 약 98, 약 89 내지 약 97, 약 89 내지 약 96, 약 89 내지 약 95, 약 89 내지 약 94, 약 89 내지 약 93, 약 89 내지 약 92, 약 89 내지 약 91, 또는 약 89 내지 약 90이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 90 내지 약 99, 약 90 내지 약 98, 약 90 내지 약 97, 약 90 내지 약 96, 약 90 내지 약 95, 약 90 내지 약 94, 약 90 내지 약 93, 약 90 내지 약 92, 또는 약 90 내지 약 91이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 91 내지 약 99, 약 91 내지 약 98, 약 91 내지 약 97, 약 91 내지 약 96, 약 91 내지 약 95, 약 91 내지 약 94, 약 91 내지 약 93, 또는 약 91 내지 약 92이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 92 내지 약 99, 약 92 내지 약 98, 약 92 내지 약 97, 약 92 내지 약 96, 약 92 내지 약 95, 약 92 내지 약 94, 또는 약 92 내지 약 93이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 93 내지 약 99, 약 93 내지 약 98, 약 93 내지 약 97, 약 93 내지 약 96, 약 93 내지 약 95, 또는 약 93 내지 약 94이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 94 내지 약 99, 약 94 내지 약 98, 약 94 내지 약 97, 약 94 내지 약 96, 또는 약 94 내지 약 95이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 95 내지 약 99, 약 95 내지 약 98, 약 95 내지 약 97, 또는 약 95 내지 약 96이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 96 내지 약 99, 약 96 내지 약 98, 또는 약 96 내지 약 97이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 97 내지 약 99, 또는 약 97 내지 약 98이다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, x와 z의 합은 약 98 내지 약 99이다.
화학식 I과 관련하여 상기 언급된 바와 같이, 조성물은 약 6,000 내지 약 8,000 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I과 관련된 일부 구체예에서, 예를 들어, 조성물은 약 6,000 g/mol, 약 6,200 g/mol, 약 6,400 g/mol, 약 6,600 g/mol, 약 6,800 g/mol, 약 7,000 g/mol, 약 7,200 g/mol, 약 7,400 g/mol, 약 7,600 g/mol, 약 7,800 g/mol, 또는 약 8,000 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, 조성물은 약 6,000 g/mol 내지 약 7,600 g/mol, 약 6,000 g/mol 내지 약 7,400 g/mol, 약 6,000 g/mol 내지 약 7,200 g/mol, 약 6,000 g/mol 내지 약 7,000 g/mol, 약 6,000 g/mol 내지 약 6,800 g/mol, 약 6,000 g/mol 내지 약 6,600 g/mol, 약 6,000 g/mol 내지 약 6,400 g/mol, 또는 약 6,000 g/mol 내지 약 6,200 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, 조성물은 약 6,200 g/mol 내지 약 7,600 g/mol, 약 6,200 g/mol 내지 약 7,400 g/mol, 약 6,200 g/mol 내지 약 7,200 g/mol, 약 6,200 g/mol 내지 약 7,000 g/mol, 약 6,200 g/mol 내지 약 6,800 g/mol, 약 6,200 g/mol 내지 약 6,600 g/mol, 또는 약 6,200 g/mol 내지 약 6,400 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, 조성물은 약 6,400 g/mol 내지 약 7,600 g/mol, 약 6,400 g/mol 내지 약 7,400 g/mol, 약 6,400 g/mol 내지 약 7,200 g/mol, 약 6,400 g/mol 내지 약 7,400 g/mol, 약 6,400 g/mol 내지 약 6,800 g/mol, 또는 약 6,400 g/mol 내지 약 6,600 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, 조성물은 약 6,600 g/mol 내지 약 7,600 g/mol, 약 6,600 g/mol 내지 약 7,400 g/mol, 약 6,600 g/mol 내지 약 7,200 g/mol, 약 6,600 g/mol 내지 약 7,000 g/mol, 또는 약 6,600 g/mol 내지 약 6,800 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, 조성물은 약 6,800 g/mol 내지 약 7,600 g/mol, 약 6,800 g/mol 내지 약 7,400 g/mol, 약 6,800 g/mol 내지 약 7,200 g/mol, 또는 약 6,800 g/mol 내지 약 7,000 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, 조성물은 약 7,000 g/mol 내지 약 7,600 g/mol, 약 7,000 g/mol 내지 약 7,400 g/mol, 또는 약 7,000 g/mol 내지 약 7,200 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I과 관련된 다른 구체예에서, 예를 들어, 조성물은 약 7,200 g/mol 내지 약 7,600 g/mol, 또는 약 7,200 g/mol 내지 약 7,400 g/mol 범위의 평균 분자량을 갖는다.
조합하여, 화학식 I과 관련된 일부 구체예에서, 예를 들어, y는 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 또는 약 26이고; x와 z의 합은 약 81, 약 82, 약 83, 약 84, 약 85, 약 86, 약 87, 약 88, 약 89, 약 90, 약 91, 약 92, 약 93, 약 94, 약 95, 약 96, 약 97, 약 98, 약 99, 또는 약 100이고; 약 6,000 g/mol, 약 6,200 g/mol, 약 6,400 g/mol, 약 6,600 g/mol, 약 6,800 g/mol, 약 7,000 g/mol, 약 7,200 g/mol, 약 7,400 g/mol, 또는 약 7,600 g/mol의 평균 분자량을 갖는다.
폴록사머 조성물 제조 방법
일반적으로, 임의의 통상적인 폴록사머 제조 방법이 본원에 기재된 폴록사머 조성물(예를 들어, 상기 화학식 I을 갖는 조성물) 제조에 사용될 수 있다. 전형적으로, 통상적인 공정을 사용하여, 더 짧은 반응 시간 및/또는 온도을 사용하여 상기 화학식 I을 갖는 더 낮은 분자량의 폴록사머 조성물을 생성할 수 있다.
추가로 또는 대안으로, 일부 구체예에서 국제 특허 출원 PCT/EP2017/000238(본원에 전체가 참조됨)에 개시된 방법에 따라 폴록사머 조성물을 정제하는 것이 바람직할 수 있다.
세포 배양에서 폴록사머 조성물의 용도
본원에 기재된 폴록사머 조성물은 세포 배양에서 사용될 수 있다. 이의 입자 크기가 조정되어야 할 경우, 세포 배양 배지에 첨가되기 전에 임의로 분쇄될 수 있다.
세포 배양은 세포가 배양되는 임의의 셋업이다.
세포 배양은 세포 배양에 적합한 임의의 용기, 예컨대 페트리 접시, 접촉 플레이트, 병, 튜브, 웰, 그릇, 백, 플라스크 및/또는 탱크에서 수행될 수 있다. 바람직하게는, 이는 생물반응기에서 수행된다. 전형적으로 용기는 사용 전에 멸균된다. 배양은 전형적으로 환경으로부터의 외부 미생물에 의한 오염을 제한하는 적합한 온도, 삼투질농도, 포기(aeration), 교반 등과 같은 적합한 조건 하에 수성 세포 배양 배지에서 세포의 인큐베이션에 의해 수행된다. 당업자는 세포의 성장/배양을 지지 또는 유지하기 위한 적합한 인큐베이션 조건을 인지한다.
본 발명에 따른 세포 배양 배지(동의적으로 사용됨: 배양 배지)는 세포의 시험관 내 성장을 유지 및/또는 지지 및/또는 특정한 생리학적 상태를 지지하는 성분의 임의의 혼합물이다. 이는 사전 농축 배양뿐만 아니라 유지 배지로서 사용하기에 또한 적합하다.
바람직하게는, 이는 화학적으로 정의된 배지이다. 세포 배양 배지는 세포의 시험관 내 성장을 유지 및/또는 지지하기에 필요한 모든 성분을 포함할 수 있거나 별도로 첨가되는 추가 성분(배지 보충제)와 조합으로 또는 조합하지 않고 선택된 성분의 첨가에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 세포 배양 배지는 세포의 시험관 내 성장을 유지 및/또는 지지하기에 필요한 모든 성분을 포함한다.
세포의 시험관 내 성장을 유지 및/또는 지지하기에 필요한 모든 성분을 포함하는 세포 배양 배지는 전형적으로 적어도 하나 이상의 사카라이드 성분, 하나 이상의 아미노산, 하나 이상의 비타민 또는 비타민 전구체, 하나 이상의 염, 하나 이상의 버퍼 성분, 하나 이상의 보조인자 및 하나 이상의 핵산 성분 (질소 염기) 또는 이들의 유도체를 포함한다. 이는 또한 화학적으로 정의된 생화학물질, 예컨대 재조합 단백질, 예를 들어, rInsulin, rBSA, rTransferrin, rCytokines 등을 포함할 수 있다.
세포 배양 배지는 수성 액체의 형태 또는 사용을 위해 물 또는 수성 버퍼에 용해되는 건조 분말의 형태일 수 있다.
당업자는 특정한 예상 목적에 적합한 세포 배양 배지를 선택할 수 있다.
약어 및 정의
하기 정의 및 방법은 본 발명을 보다 잘 정의하고 본 발명을 실시함에 있어 당업자에게 지침을 제공하기 위해 제공된다. 달리 언급되지 않는 한, 용어는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의한 통상적인 사용에 따라 이해되어야 한다.
명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 다르게 지시되지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다는 점에 유의해야 한다. 따라서, 예를 들어, "폴록사머"에 대한 언급은 복수의 폴록사머 등을 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 관련된 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 하기 용어는 본원에 기재된 바와 같이 본 발명의 목적을 위해 정의된다.
본원에 사용된 용어 "생물반응기"는, 생물학적 활성 환경을 지원하는 임의의 제조 또는 조작된 장치 또는 시스템을 지칭한다. 일부 예에서, 생물반응기는 유기체 또는 그러한 유기체로부터 유래한 생화학적으로 활성인 물질을 포함하는, 세포 배양 과정이 수행되는 용기이다. 그러한 공정은 호기성 또는 혐기성일 수 있다. 일반적으로 사용되는 생물반응기는 전형적으로 크기가 리터 내지 입방 미터 범위인 원통형이며, 흔히 스테인리스 강으로 만들어진다. 본원에 기재된 일부 구체예에서, 생물반응기는 강철 이외의 물질로 만들어진 일회용 구성성분을 함유할 수 있고 일회용이다. 일부 구체예에서 이는 생물학적으로 활성인 환경에서 유지되는 일회용 백이다. 생물반응기의 총 부피는 특정 공정에 따라 100 mL 내지 10,000 리터 이상 범위의 임의의 부피일 수 있는 것으로 고려된다.
약전에 따른 평균 분자량은 프탈산 무수물-피리딘 용액을 사용한 적정에 의해 결정된다.
SEC에 의해 결정된 평균 분자량은 다음과 같이 결정된다:
무게평균 분자량: Mw = Σi Ni Mi 2 / (Σi Ni Mi)
수평균 분자량: Mn = Σi Ni Mi / (Σi Ni)
피크 분자량: Mp = 최대 Ni에서의 분자량
Ni = 분획 i 중의 고분자 화학종의 수
Mi = 분획 i 중의 고분자 화학중의 분자량
SEC 조건:
보정 표준: PEG (상세한 사항은 실시예 7 참조)
용리액: THF
유량: 1 ml/min
주입 부피: 100 μl
컬럼: 입자 크기 = 5 μm, 재료= 스티렌-디비닐벤젠
온도: 40 ℃
본 발명을 상세히 설명했지만, 첨부된 청구범위에 정의된 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 수정 및 변형이 가능함이 명백할 것이다. 또한, 본 개시의 모든 실시예는 비제한적인 실시예로서 제공됨을 이해해야 한다.
실시예
다음의 비제한적 실시예가 본 발명을 추가로 설명하기 위해 제공된다. 당업자는 하기 실시예에 개시된 기술은 본 발명의 실시에서 본 발명자들이 기능을 잘 발견한 접근법을 나타내며, 따라서 이의 실시를 위한 방식의 예를 구성하는 것으로 간주될 수 있음을 인식해야 한다. 그러나, 당업자는, 본 발명에 비추어, 개시된 특정 구체예에서 많은 변경이 이루어질 수 있고 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 여전히 유사한 결과를 얻을 수 있음을 이해해야 한다.
실시예 1
폴록사머 188 성능의 결함을 조사하기 위해 포유류 세포를 고 전단 응력하에 두는 생물학적 세포 배양 분석이 개발되었다. 폴록사머 188 중 프로필렌 옥사이드(고분자 중의 두 단량체 단위 중 하나)의 상대 분포를 구별할 수 있는, 폴록사머 188의 구조를 설명하기 위한 분석 방법이 개발되었다. 조사 과정 동안 생물학적 기능 분석에서 PO 함량과 성능 사이의 음의 상관관계가 관찰되었다. 평가된 모든 샘플은 폴록사머 188에 대한 USP 사양 내에 있었지만, 사양 내의 변동성은 성능에 영향을 미친다 (도 1 참조). 프로필렌 옥사이드 분포 모드와 생물학적 기능 사이의 음의 상관관계는 더 낮은 PO 에서의 세포 배양을 위한 최적의 폴록사머 화학 구조가 존재할 수 있음을 시사한다. 10% 이상의 차이 %를 갖는 폴록사머 188의 로트가 SAFC 배지의 고객 성능에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 분석적 및 생물학적 방법은 아래에 설명된다.
실시예 2
분석 방법은 대체로 PPO 사슬 길이에 따라 고분자를 분리하는 역상 초고성능 액체 크로마토그래피 - 질량 분석법 (UPLC/MS) 방법이다. 이 방법의 대표적인 크로마토그램이 도 2에 나타난다. 크로마토그램의 수직선 각각은 프로필렌 옥사이드의 추가적인 단위체를 나타내며, 수직이 아닌 선은 분리에 작은 영향을 미치는 에틸렌 옥사이드를 나타낸다. 도 2에 나타난 데이터를 사용하여 PPO 사슬 길이 분포의 피크가 식별될 수 있으며, 도 1에서 사용된 데이터 생성에 사용되었다.
실시예 3
크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 폴록사머 188을 분석하는 추가의 데이터는 고분자 분자량 및 기능과의 상관관계를 확인했다. 분자량을 결정하기 위해 폴록사머 샘플이 고분자 표준 서비스(Polymer Standards Service, PSS) 스티렌-디비닐벤젠(SDV) 컬럼 및 PSS PEG 보정 표준(Mp: 430-44000 g/mol)을 사용하여 평가된다. 도 3은 폴록사머 188 샘플 간의 분자량 차이를 나타내는 SEC 크로마토그램이다. 주요 피크가 좌측으로 이동함에 따라, 결과는 더 작은 크기의 피크 분자량 폴록사머(Mp)이다. 폴록사머 188 분자량에 대한 현재 사양은 평균으로 보고된다. 이 데이터는 피크 폴록사머 188 분자량이 아니라 아래에 나타난 모든 피크를 포함할 것이다.
실시예 4
폴록사머 188의 피크 분자량과 폴록사머 188의 성능 사이의 강한 상관관계가 관찰되었다. 대조군과 동등할 경우 0% 및 대조군으로부터 개선된 경우 음의 백분율로, 알려진 대조군 로트와의 퍼센트 차이로 계산된 성능을 비교하여 5 가지 상이한 공급자로부터의 샘플에서 관계가 관찰된다. 관계에 대해 측정된 상관 계수는 0.82이다. 도 4의 차트는 더 낮은 피크 분자량이 더 우수한 성능을 가질 것임을 예측한다.

Claims (8)

  1. 화학식 I을 갖는 폴록사머 조성물:
    I
    Figure pct00004

    여기서 y는 약 15 내지 약 26이고; x와 z의 합은 약 81 내지 약 100이고; 조성물은 약 6,000 g/mol 내지 약 8,000 g/mol 범위의 평균 분자량을 가짐.
  2. 제1항에 있어서, y는 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 또는 약 26인 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, x와 z의 합은 약 81, 약 82, 약 83, 약 84, 약 85, 약 86, 약 87, 약 88, 약 89, 약 90, 약 91, 약 92, 약 93, 약 94, 약 95, 약 96, 약 97, 약 98, 약 99, 또는 약 100인 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 약 6,000 g/mol, 약 6,200 g/mol, 약 6,400 g/mol, 약 6,600 g/mol, 약 6,800 g/mol, 약 7,000 g/mol, 약 7,200 g/mol, 약 7,400 g/mol, 약 7,600 g/mol, 약 7,800 g/mol, 또는 약 8,000 g/mol의 평균 분자량을 갖는 조성물.
  5. 폴록사머 188보다 작은 평균 분자량을 갖는 폴록사머 조성물.
  6. 본 명세서 및 첨부 도면에 실질적으로 개시된 바와 같은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 조성물 제조 방법.
  7. 본 명세서 및 첨부 도면에 실질적으로 개시된 바와 같은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  8. 본 명세서 및 첨부 도면에 실질적으로 개시된 바와 같은 방법, 조성물, 용도 및 발명.
KR1020207020989A 2017-12-21 2018-12-06 폴록사머 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법 KR102544922B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020237019910A KR102662905B1 (ko) 2017-12-21 2018-12-06 폴록사머 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762608826P 2017-12-21 2017-12-21
US62/608,826 2017-12-21
PCT/US2018/064350 WO2019125783A1 (en) 2017-12-21 2018-12-06 Poloxamer compositions and methods of making and using same

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237019910A Division KR102662905B1 (ko) 2017-12-21 2018-12-06 폴록사머 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200093070A true KR20200093070A (ko) 2020-08-04
KR102544922B1 KR102544922B1 (ko) 2023-06-16

Family

ID=64902452

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207020989A KR102544922B1 (ko) 2017-12-21 2018-12-06 폴록사머 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법

Country Status (7)

Country Link
US (2) US11891510B2 (ko)
EP (1) EP3728471A1 (ko)
JP (1) JP7135096B2 (ko)
KR (1) KR102544922B1 (ko)
CN (1) CN111465655A (ko)
SG (1) SG11202002351SA (ko)
WO (1) WO2019125783A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11891510B2 (en) 2017-12-21 2024-02-06 Sigma-Aldrich Co. Llc Poloxamer compositions and methods of making and using same

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06506258A (ja) * 1991-03-19 1994-07-14 サイトアーレクス・コーポレーシヨン 改良された生物学的活性を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類
KR100373966B1 (ko) * 1993-09-21 2003-04-23 바스프 코포레이션 향상된 용해속도를 가지는 블럭공중합체와 음이온성 계면활성제의 혼합물
JP2006519272A (ja) * 2003-02-27 2006-08-24 ノヴァセル オーストラリア ピーティーワイ リミテッド ポロキサマーエマルジョン製剤
KR20160138161A (ko) * 2014-03-25 2016-12-02 제넨테크, 인크. 세포 배양 배지에 사용하기 위한 폴록사머를 제조하는 방법
KR20170029562A (ko) * 2014-07-07 2017-03-15 매스트 테라퓨틱스 인코포레이티드 장기 순환 물질이 없는 폴록사머 조성물 및 이의 제조 방법 및 용도

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3740421A (en) 1966-09-19 1973-06-19 Basf Wyandotte Corp Polyoxyethylene-polyoxypropylene aqueous gels
US3579465A (en) 1967-10-16 1971-05-18 Wyandotte Chemicals Corp Aqueous gels of polyoxyethylated polyoxypropylene glycol adducts of ethylene diamine
GB9625175D0 (en) * 1996-12-04 1997-01-22 Medi Cult As Serum-free cell culture media
EP1309904A4 (en) 2000-03-03 2006-03-29 Valentis Inc IMPROVED POLOXAMER AND POLYOAMINE COMPOUNDS FOR NUCLEINE SUCTION INTRODUCTION
US20160131634A1 (en) * 2013-05-29 2016-05-12 Biogen Ma Inc. Methods of evaluating cell culture additives
CN105582543A (zh) * 2015-12-30 2016-05-18 钟术光 一种供注射或口服用的辅料
JP7037495B2 (ja) * 2016-03-17 2022-03-16 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ポロキサマーを精製するための方法
US11891510B2 (en) 2017-12-21 2024-02-06 Sigma-Aldrich Co. Llc Poloxamer compositions and methods of making and using same

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06506258A (ja) * 1991-03-19 1994-07-14 サイトアーレクス・コーポレーシヨン 改良された生物学的活性を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類
KR100373966B1 (ko) * 1993-09-21 2003-04-23 바스프 코포레이션 향상된 용해속도를 가지는 블럭공중합체와 음이온성 계면활성제의 혼합물
JP2006519272A (ja) * 2003-02-27 2006-08-24 ノヴァセル オーストラリア ピーティーワイ リミテッド ポロキサマーエマルジョン製剤
KR20160138161A (ko) * 2014-03-25 2016-12-02 제넨테크, 인크. 세포 배양 배지에 사용하기 위한 폴록사머를 제조하는 방법
KR20170029562A (ko) * 2014-07-07 2017-03-15 매스트 테라퓨틱스 인코포레이티드 장기 순환 물질이 없는 폴록사머 조성물 및 이의 제조 방법 및 용도

Also Published As

Publication number Publication date
WO2019125783A1 (en) 2019-06-27
US20240067820A1 (en) 2024-02-29
US20210347987A1 (en) 2021-11-11
JP7135096B2 (ja) 2022-09-12
SG11202002351SA (en) 2020-07-29
US11891510B2 (en) 2024-02-06
KR102544922B1 (ko) 2023-06-16
JP2021507083A (ja) 2021-02-22
CN111465655A (zh) 2020-07-28
EP3728471A1 (en) 2020-10-28
KR20230088860A (ko) 2023-06-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7217765B2 (ja) 細胞培地および方法
US20240067820A1 (en) Poloxamer compositions and methods of making and using same
KR102352250B1 (ko) 세포 배양 배지에 사용하기 위한 폴록사머를 제조하는 방법
MXPA06007207A (es) Metodos para la produccion de lineas de celulas a549 estables en cultivo en suspension de medio libre de suero.
CN103298925B (zh) 用于培养人髓样白血病细胞以及由其衍生的细胞的方法
CN114317428A (zh) 一种含中药小分子的干细胞无血清培养基及其制备方法
EP3430072B1 (en) Method for purifying poloxamers
KR102662905B1 (ko) 폴록사머 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법
CN103348000A (zh) 用于稳定敏感化合物的组合物和方法
Katinger et al. Status and developments of animal cell technology using suspension culture techniques
Zhang et al. Monoclonal antibody expression in mammalian cells
Broedel Jr et al. The case for serum-free media
Thompson et al. Recombinant protein production in large-scale agitated bioreactors using the baculovirus expression vector system
CN111808822A (zh) 细胞培养用补料液及提高重组hek293细胞蛋白表达量的方法
Lao González et al. Mammalian Cell Culture as a Platform for Veterinary Vaccines
Gorfien et al. Development and optimization of serum-and protein-free culture media
Busch et al. Isolation, Ex Vivo Expansion, and Lentiviral Transduction of Alveolar Macrophages
Mukherjee et al. Troubleshooting of Mammalian Cell Culture
dos Santos et al. Mammalian cell culture technology
CN114269936A (zh) 向细胞群的病毒传递方法
Kumar Animal cells as host
Ringpfeil Acta MoMMhiia

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
A107 Divisional application of patent
GRNT Written decision to grant