KR20200086395A - 항상성 증가를 통한 피부면역개선, 외부환경에 대한 피부보호 및 피부활력증진을 위한 인삼 유래 테트라펩타이드를 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 주름 개선, 피부 장벽 개선, 피부 보습 개선, 피부 항상성 유지, 피부 염증 개선 등의 효과를 가지는 인삼 유래 테트라펩타이드 및 이를 함유하는 항노화 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

항상성 증가를 통한 피부면역개선, 외부환경에 대한 피부보호 및 피부활력증진을 위한 인삼 유래 테트라펩타이드를 함유하는 화장료 조성물 {Cosmetic Composition for Improving Skin Vitality and Skin Protection against External environment and Skin immunity through Homeostasis Increase Comprising Tetrapeptide Derived from Ginseng}

본 발명은 피부 주름 개선, 피부 장벽 개선, 피부 보습 개선, 피부 항상성 유지, 피부 염증 개선 등의 효과를 가지는 인삼 유래 테트라펩타이드 및 이를 함유하는 항상성 증가를 통한 피부면역개선, 외부환경에 대한 피부보호 및 피부활력증진을 위한 화장료 조성물 조성물에 관한 것이다.

사람들은 누구나 나이가 들어감에 따라 젊음을 유지하고자 하는 욕망을 가지고 있다. 하지만, 생물학적인 노화의 진행은 막을 수 없는 것이 현실이다. 따라서, 미리 피부노화의 진행정도를 예측하고 이를 예방하고자 하는 노력이 진행되고 있다.

일반적으로 피부 노화는 내인적 노화 (Intrinsic aging)와 외인적 노화 (Extrinsic aging)로 나눌 수 있는데, 내인적 노화는 나이가 들어감에 따라 피부의 생리적 기능이 점차 저하되어 자연적으로 나타나는 노화 현상을 말하며, 임상학적으로 피부의 탄력이 감소하고, 피부결이 거칠어지며, 깊은 주름과 색소가 침착되어지는 특징이 있다. [참고 문헌: Arch Dermatol, 1994, 130, 87~95]

한편, 외인성 노화 (Extrinsic aging)는 활성 산소종 (Reactive Oxygen Species; ROS) 및 스트레스 등의 외인적 요인에 의해 발생하는 노화현상을 말하며, 이러한 요인들에 의해 피부의 노화가 급속히 진행되고, 그 결과 피부 표면에 거친 주름이 생성되고, 탄력이 현저히 감소하게 된다.

피부 노화에 대한 일반적인 이론으로는 유전자 손상에 의한 세포의 기능 저하, 자유 유리기 (Free radical)에 의한 세포손상, 독성 물질 축적, 그리고 면역체 이상 등의 다양한 이론들이 알려져 있다. 이러한 이론들 중에서 자유 유리기 이론이 피부 노화의 주된 이론으로 받아들여지고 있다. 특히 자유 유리기 중에서 활성산소는 세포 밖으로 유출되어 주변 조직에 염증을 일으켜 세포의 노화를 촉진 시킨다. 이러한 염증은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 회복시키려는 일련의 방어목적으로 나타나는 것이며, 염증을 유발하는 원인으로 외상, 화상, 동상, 방사능 등에 의한 물리적 요인과 산이나 염기와 같은 화학물질에 의한 화학적 요인, 항체 반응에 의한 면역학적인 요인들이 있으며, 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해서도 일어난다. 최근에 이러한 잔주름, 주름살 및 피부 표면 조직의 바람직하지 않은 상태를 개선시키기 위한 여러가지 원료가 개발되어 왔다. 이러한 문제를 해결하기 위한 하나의 방법으로 천연물을 이용한 항노화 소재를 개발하는 것이다.

최근 산업발달 및 생활패턴의 변화로 인한 외인성 피부질환이 크게 증가하고 있다. 특히 최근 도시인들은 생활환경이 변화함에 따라 집안의 카펫에 서식하는 진드기, 습도와 온도에 따라 번식하는 세균 및 진균, 공공장소에서의 바이러스 등 외인성 병원균에 노출될 기회가 점차 커지고 있다. 이런 외인성 병원균에 대항하기 위해 인체의 최외각 기관인 피부에서의 면역이 중요시 되고 있는 실정이다. 피부의 방어기작 중 물리적인 방어를 제외한 생체 내 방어 기술을 담당하는 물질로서 항균 펩타이드가 있다. 항균 펩타이드는 크게 두 종류가 있는데 카델리시딘과 디펜신이 그것이다. 카델리시딘(cathelicidin)은 광범위한 항균작용을 나타내며 다양한 역조절작용 기능을 한다. 이중 LL-37은 인간에서 발현되는 유일하게 알려진 카델리시딘으로 박테리아 존재, 숙주의 사이토카인(cytokines) 분비, 체내 이용 가능한 산소량, 비타민D 등의 요인에 의해서 생산이 정해진다. LL-37은 외부 조직 상처나 감염에 대하여 생체면역반응을 일으키는 역할을 하는데, 박테리아와 진균, 바이러스 등에 대한 직접적인 항균 활성과 함께 호중구(eosinophil), 단핵세포, T 세포에 대한 주화성을 나타내며 내피세포의 증식을 유도한다. 특히 피부에 존재하는 LL-37은 외래 항원의 침투 시 즉각적인 방어 역할을 함으로써 항원 억제 기능을 담당한다.

디펜신(defensin)은 항균 펩타이드 중 가장 연구가 많이 된 것들 중 하나이며, 그 구조적 특성에 따라 크게 α-디펜신과 β-디펜신이 있다. 그 중 β-디펜신은 피부, 폐, 기관, 신장, 생식기 등의 점막 상피에서 발현되는 펩타이드 물질로서, 현재까지 인간 유래 β-디펜신으로는 6종류, 즉 인간 β-디펜신-1(hBD1), 인간 β-디펜신-2(hBD2), 인간 β-디펜신-3(hBD3), 인간 β-디펜신-4(hBD4), 인간 β-디펜신-5(hBD5) 및 인간 β-디펜신-6(hBD6)이 분리, 동정되어 있다. 특히 hBD1이 표피세포에서 항상적으로 발현이 되는데 비하여, hBD2는 감염 부위나 물리적인 손상이 나타나는 부위에서 발현이 증가되며, 전신 면역 반응과 염증 반응의 조절에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한, hBD3가 건선 질환 환자의 피부 병변 부위에서 매우 높게 발현되는 것으로 보고된바 있고 사이토카인 및 세균 산물에 의해 유도적으로 발현된다. hBD4는 hBD1, hBD2, 또는 hBD3에 비해 더욱 제한된 분포를 나타내고, 이의 발현은 세균의 감염에 의해 상향조절될 수 있으나, hBD2 및 hBD3를 상향조절하는 염증성 인자에 의해서는 상향조절되지 않는다. hBD5 및 hBD6는 가장 최근에 확인된 것으로서 상피에 주로 위치해 있는 패밀리 일원이다. 이와 함께 최근 β-디펜신은 국소 감염 방어뿐만 아니라, 수상 세포(dendritic cells), T 림프구(lymphocytes), 단핵 세포(monocytes) 등의 세포를 주화성 이동(chemotactic migration) 시킴으로써 후천성 면역에도 관여하고 있는 것으로 알려져 있다.

또, 민감한 피부는 유해환경에 노출되면 아토피, 건선 등의 피부면역질환이 나타나기 쉽다. 종래 아토피, 건선등 피부면역질환 개선은 주로 세라마이드를 이용하여 보습을 유지해주는 방법으로 해결되고 있지만 보습은 시간이 지나면 보습력이 떨어져 피부상태가 원래 상태로 돌아온다는 문제점이 있다. 외부에서 항균 펩타이드를 제작, 피부에 주입하는 방법도 생각해 볼 수 있겠으나 피부 속으로 직접적인 침투가 어렵고 자가면역반응 등의 위험이 있는 관계로 피부세포 자체적으로 항균 펩타이드의 생성을 촉진하게 하는 방법이 피부의 외부로부터의 면역력을 높이고 항균력을 갖추는 방법이 될 수 있겠다. 따라서, 인체에 적용 시에 안전하고, 유효성분이 안정하며, 무엇보다도 기존 물질보다 아토피, 건선 등 피부 면역개선 및 항균력 증진을 통한 피부방어력 증진 능력이 우수한 성분의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

또한, 일반적으로 우리가 '빛'이라고 말하는 것은 각종 전자파 중에서도, 사람의 눈으로 볼 수 있는 영역대인 가시광선(380 ~ 780nm)을 의미한다. 그 중 블루 라이트(Blue light)는 380 ~ 500nm 파장의 빛으로 사람이 볼 수 있는 가시광선, 즉, 망막까지 도달하는 빛 중에서 가장 파장이 짧고 강한 에너지를 갖고 있는 빛을 의미하며, 특히 블루 라이트 영역대 중에서 380 ~ 430nm 영역을 바이올렛 라이트(Violet light)로 구분하기도 한다. 자외선 이외의 다른 파장의 빛(예컨대 가시광선)이 인간의 피부에 미치는 영향에 대해서는 거의 알려진 바가 없으나, 최근 블루 라이트가 피부에 미치는 유해성에 대해 조사되고 있다. 논문(Journal of Investigative Dermatology (2010) 130, 259 ~ 269 "Blue-Light Irradiation Regulates Proliferation and Differentiation in Human Skin Cells")에서는 412 ~ 453nm 파장의 빛이 각질형성세포(Keratinocytes)와 피부유래 내피세포(Skin-derived endothelial cell)의 증식 및 분화를 규제한다고 보고된 바 있으며, 그 외의 또 다른 논문(PLoS One. 2013 Sep 17;8(9)e73678 "Violet Light Down-Regulates the Expression of Specific Differentiation Markers through Rhodopsin in Normal Human Epidermal Keratinocytes")에서는 블루 라이트 영역대 중에서 바이올렛 라이트(410nm)가 피부의 각질형성세포(Keratinocytes)에서 발현되는 광수용체 중 로돕신의 mRNA를 과발현시켜, CREB(cAMP responsive elementbinding protein)의 인산화를 감소시키고, 특정 각질 세포의 분화 마커인 Keratin-10(K10)과 Keratin-1(K1)의 mRNA 발현 수준을 감소시키게 되어, 인간의 각질형성세포(Keratinocytes)의 분화를 감소시키며, 손상된 피부장벽의 회복을 지연시키는 것이 보고된 바 있다. 블루 라이트는 상기 보고된 피부에의 영향 이외에도, 수면을 유도하는 멜라토닌(Melatonin)의 분비량을 억제하고, 각성을 유도하는 세로토닌(Serotonin)의 분비량을 증가시켜 수면장애를 유발할 뿐만 아니라, 망막까지 곧바 로 도달하여 멜라닌 생성을 유도함으로써 피부가 칙칙해지고, 기미가 생기는 원인이 되기도 한다. 블루 라이트는 현대인들의 필수품인 스마트폰, 노트북, 모니터 등의 LED 디스플레이 및 LED 조명에 특히 많이 포함되어 있기 때문에, 현대 사회의 생활 환경에서는 불가피하게 접촉할 수 밖에 없어서, 이를 차단하고자 하는 시도가 다방면으로 진행되고 있다.

대표적으로 한의학이나 민간요법으로 널리 알려진 천연물을 이용하는 데, 그 중 인삼(Panax Ginseng C.A. Mayer)은 한의학뿐만 아니라 민간요법으로 널리 알려져 사용되어온 대표적인 약용식물로서 오가피(Araliaceae)과에 속하는 다년생 초본류이다. 인삼은 전분 등의 탄수화물이 60~70%로 높은 구성비를 나타내며 triterpenoid saponins을 비롯한 polyacetylenes, phenolic compounds, polysaccharides,peptidoglycans등의 성분을 함유하고 있다. 또한 그 외에 단백질과 펩티드(Protein, Peptides), 알칼로이드 성분(Alkaloids), 정유성분과 식물스테롤(Essential oil, Phytosterol), 아미노산, 핵산, 비타민, 리그난 성분, 미네랄(Minerals)등이 함유되어 있다

하지만, 인삼 관련 소재로 추출물과 진세노사이드와 같은 사포닌에 대한 주름 개선효능은 잘 알려져 왔으나, 단백질이나 펩타이드 성분에 대한 피부 주름 개선효능에 대한 연구는 부족한 실정이다 (대한민국등록특허 10-1924446).

본 발명자들은, 인삼 유래 테트라펩타이드가 피부 주름 개선, 피부 장벽 개선, 피부 보습 개선, 피부 면역 개선, 외부환경에 대한 피부세포 보호, 피부에너지 활성 및 활력 증진, 피부 항상성 유지, 피부 염증 개선 등의 효과를 가진다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은, 인삼 유래 테트라펩타이드를 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 인삼 유래 테트라펩타이드를 함유하는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

상기 과제를 해결하고자, 본 발명은 인삼 유래 테트라펩타이드 및 이를 함유하는 항노화 화장료 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명은 피부 주름 개선, 피부 장벽 개선, 피부 보습 개선, 피부 면역 개선, 외부환경에 대한 피부세포 보호, 피부에너지 활성 및 활력 증진, 피부 항상성 유지, 피부 염증 개선 등의 효과를 가지는 인삼 유래 테트라펩타이드에 관한 것으로, 구체적으로, 하기 화학식 1의 구조를 가지는 테트라펩타이드이다:

[화학식 1]

본 발명의 테트라펩타이드는 GR_γEV-NH₂의 서열을 가지는 것으로 특징으로 한다.

본 명세서에서 펩타이드를 명명하는 일반적인 규칙은 구체적으로 지시된 예외사항이 없는 경우 3문자 또는 1문자 아미노산 코드 적용을 기초로 한다. 다시 말해서, 아미노산 구조의 중심부를 3문자 코드(예를 들어, Ala,Lys) 또는 1문자 코드(예를 들어, A, K)로 표시하며, 3문자 코드의 앞에 "D-"를 적음으로써 D-입체형태(예를 들어, D-Ala, D-Lys)를 구체적으로 지시하지 않은 경우에는 L-입체형태로 가정한다. 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기는 천연 또는 비-천연아미노산 잔기가 모두 가능하다.

본 발명에 따른 인삼 유래 테트라펩타이드는 목적하는 펩타이드를 합성한 다음, 강한 산을 사용하여 레진으로부터 분리 제조할 수 있다.

상기 목적하는 펩타이드는 생체 내의 단백질을 추출한 다음 단백질 분해효소로 처리하여 저분자량화하거나, 유전자 재조합과 단백질 발현시스템을 이용하여 제조할 수도 있고, 바람직하게는 펩타이드 합성기 등을 이용한 화학 합성 방법으로 제조할 수 있다.

본 발명에 따른 펩타이드는 예를 들어, (1) 통상의 고체상 펩타이드 합성법(solid phase peptide synthesis: SPPS)에 의해 NH2-보호된 펩타이드-레진을 수득하는 단계; (2) 수득된 NH2-보호된 펩타이드-레진을 제거하는 단계를 포함하여 제조할 수 있다.

목적하는 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기의 측쇄에 작용기가 존재하는 경우에는 상기 단계 (1)에서 상기 작용기가 보호된 아미노산을 사용하여 펩타이드를 합성할 수 있으며, 상기 작용기에 결합된 보호기는 상기 단계 (2)에서 제거된다.

작용기가 보호된 아미노산을 사용한 본 발명에 따른 인삼유래 펩타이드 제조과정의 한 구체예를 하기의 반응식 1에 간략히 나타내었다.

[반응식 1]

본 발명은 또 다른 관점에서, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 인삼유래 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물, 특히 피부 주름 개선, 피부 장벽 개선, 피부 보습 개선, 피부 면역 개선, 외부환경에 대한 피부세포 보호, 피부에너지 활성 및 활력 증진, 피부 항상성 유지, 피부 염증 개선 등을 위한 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 인삼유래 펩타이드는 우수한 콜라겐 생성 및 MMP-1 억제 효능을 통한 주름 개선 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 세포독성이 거의 없고 수용성이며 장시간 보관시에도 안정성이 우수하여 피부 노화 방지용 화장료 조성물에 효과적으로 사용될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 인삼 유래 테트라펩타이드를 유효성분으로 함유함으로써, 화장료 조성물로써의 피부 생기 부여, 피부 항상성 유지, 피부톤개선, 피부 활력 증진, 피부 보습, 피부 주름 개선, 염증 완화 개선 등의 기능성을 나타낼 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 피부 상태 개선용, 피부 주름 개선용, 피부 장벽 개선용, 피부 면역 개선, 피부 방어력 증진, 일상 생활에서 컴퓨터, 핸드폰, 형광등 등에 의한 블루라이트, UV와 같은 자외선, 미세먼지와 같은 외부환경에 대한 피부세포 보호, 이들 블루라이트와 같은 외부 환경의 차단, 피부 보습용, 피부 항상성 유지용, 피부 세포 에너지 활성 및 피부 활력 증진, 피부 염증 개선용인 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 따른 피부 장벽 보호 기능에 있어서, 피부장벽(skin barrier)은 표피의 최외곽 층인 각질층(stratum corneum)은 주로 무핵의 편평한 각질세포(corneocyte)로 이루어져 있다. 정상적인 표피세포의 분열 및 분화과정을 통해 유지되는 피부장벽의 각질세포가 합성하는 세라마이드, 콜레스테롤, 및 지방산과 같은 세포간 지질로 형성된 다층지질막(multi lamella lipid layer)는 피부 내의 수분이 증발하지 않도록 방어막 역할을 한다. 한편, 이들 세포간 지질 중 오메가 히드록시 세라마이드는 각질세포(corneocyte) 외곽층의 단백질인 인볼루크린(involucrin)과 화학적 공유결합으로 연결되어 각질세포지질막(corneocyte lipid envelope, CLE)을 형성함으로써 다층 지질막 형태의 세포간 지질을 물리적으로 안정화시키는 역할을 하여 장벽기능을 강화시키는 역할을 하게 된다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 화장료 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 화장료 조성물이 제조되는 후술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 유효성분인 캘러스 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 착색료, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 화장수, 에센스, 젤, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말, 또는 젤라틴 등의 피막이 있는 캅셀 (소프트 캅셀, 하드 캅셀) 제형 등의 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서의 피부는 얼굴 뿐만 아니라, 두피, 전신도 포함되는 개념으로, 이러한 두피에 적용될 수 있는 화장료 조성물로써, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 발모제 등이 있고, 전신에 적용될 수 있는 바디클렌져 등의 용도로써 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 제조할 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

또한 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 인삼 유래 테트라펩타이드의 함량은 100 내지 10,000 ppm 수용액의 중량으로서, 0.005 내지 1 중량% 인 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 인삼 유래 테트라펩타이드는 피부 주름 개선, 피부 장벽 개선, 피부 보습 개선, 피부 면역 개선, 외부환경에 대한 피부세포 보호, 피부에너지 활성 및 활력 증진, 피부 항상성 유지, 피부 염증 개선 등 다양한 기능성 화장품의 소재로 활용될 수 있다.

도 1은 본 발명에 따라 얻어진 인삼 유래 테트라펩타이드의 프로콜라겐 생합성 증가에 다른 주름 개선효과를 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명에 따라 얻어진 인삼 유래 테트라펩타이드의 MMP-1 단백질 발현량 감소에 의한 주름개선효과를 확인한 결과이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

실시예 1. 글리실-아르기닐-글루타밀-발린 아마이드 합성

일반적으로 펩타이드는 9-플루오레닐메톡시카르보닐(9-fluorenylmethoxycarbonyl: Fmoc)을 아미노산의 보호기로 사용하여 통상의 고체상 펩타이드 합성법(solid phase peptide synthesis: SPPS)에 의해 합성하였으며, N-히드록시벤조트리아졸(N-hydroxybenzotriazole: HOBt)와 N,N‘-디시클로헥실카보디이미드(N,N'-dicyclohexylcarbodiimide: DCC)을 활성제로 사용하여 아미노산 잔기를 연장하였다[참고문헌: Wang C. Chan,Perter D. White, 'Fmoc solid phase peptide synthesis', Oxford]. 반응 종료 후 레진을 DMF와 DCM으로 번갈아 수회 세척한 다음 건조시켰다.

건조된 테트라펩타이드-레진을 트리플루오로아세트산 : 페놀 : 티오아니솔 : 물 : 에탄디티올(82.5 :5 : 5 : 5 : 2.5 (v/v))의 혼합 용액으로 실온에서 2 내지 3시간 동안 반응시켜, 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기의 측쇄에 존재하는 작용기의 보호기를 제거하고 레진으로부터 테트라펩타이드를 분리시킨 다음, 차가운 디에틸에테르로 상기 펩타이드를 침전시켰다.

수득한 테트라펩타이드를 0.1% 트리플루오로아세트산이 포함된 물과 아세토니트릴을 용매로 역상 고성능액체크로마토그래피(reverse phase high performance liquid chromatography; column: Gemini, C18 110A 250×21.2mm)하여 정제하였다.

수율: 30 %

실험예 1. 피부세포배양을 이용한 무자극 실험

본 발명에 따른 인삼 유래 테트라펩타이드의 피부세포에서의 독성에 의한 자극을 알아보기 위하여, 인간 섬유아세포(Fibroblast)를 1×10⁴ cells/㎖의 농도로 하여 24웰 배양판에 접종하였다. 배지는 소태아혈청(Fetal Bovine Serum: FBS) 10 %를 함유한 DMEM(Dubelcco's Modified Eagle's Medium, BRL, USA)을 사용하였다. 10 % FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 동안 배양하여 배양용기 표면적의 25 ~ 30 %만큼 배양되면, 상기 실시예 1, 대표적인 인삼 성분 Rg2 및 양성대조군으로 TGF-β1을 처리하고, 24시간 동안 더 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸리움 브롬화물(MTT, Sigma M5655, USA) 용액(2.5 ㎎/㎖)을 50 ㎕ 첨가하고, 3시간 동안 추가로 배양한 후 상등액을 제거하고, 각 웰당 200 ㎕의 디메틸설폭시드(DMSO, Sigma D2650, USA) 용액을 가한 후 20분간 교반하여 형성된 포르마잔(formazan) 결정을 녹인 다음, 100 ㎕씩 96웰로 취하여 병소 감염 진단 테스트법(ELISA)으로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포증식 및 독성 효과는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광도를 기준으로 하기 계산식 1에 의해 백분율로 산출하였고, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

[계산식 1] 세포안정성(%) = (시험군의 흡광도/대조군의 흡광도) x 100

[표 1]

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 0.05 ~ 5.0 ppm 농도의 인삼유래펩타이드에서 세포독성을 일으키지 않는 것을 확인하였다. 따라서, 인삼유래펩타이드는 피부 자극 유발 가능성이 낮고 안전한 물질임을 의미하고, 각질형성세포에 무해함을 알 수 있었다.

실험예 2. 프로콜라겐 생합성 증가에 의한 주름개선 효과

인간 섬유아세포(Primary Cell Line, CCD-986sk)를 배양판의 바닥에 접종한 후 페니실린(100 IU/ml), 스트렙토마이신(100 ㎍/ml) 및 10 % FBS(Fetal Bovine Serum)을 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)를 넣고 37 ℃를 유지하며 5 % 이산화탄소를 포함하는 배양기에서 배양하였다. 이렇게 배양한 섬유아세포를 48웰 배양판에 웰 당 5X10⁴ 개로 분주한 다음, 세포 배양조건에서 24시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 배지를 버리고 10 % PBS(Phosphate Buffered Saline)로 세척한 다음, 적정한 농도의 인삼유래펩타이드와 Rg2 및 TGFβ-1 (5 ng/ml)을 처리하고 24시간 동안 더 배양하였다. 배양액을 취하여 프로콜라겐 타입(procollagen type) I C-펩타이드(PIP)(Takara, MK101) ELISA법에 의해 콜라겐 생성량을 측정하였다. 항체-POD 컨쥬게이트 용액 100㎕를 웰에 넣은 다음 1/5로 희석한 배양액 및 표준액 20 ㎕를 넣고 37 ℃에서 3 시간 동안 배양하였다. 웰에서 배양액을 제거한 다음 PBS 400 ㎕로 4회 세척하였다. 발색시약 100 ㎕를 넣고 상온에서 15분 동안 배양한 다음, 1N 황산 100 ㎕를 넣고 450 nm에서 ELISA 리더(reader)로 측정하였다.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물 1 ppm처리에 의하여 피부주름개선에 도움을 주는 프로콜라겐의 생합성량 증가를 확인하였다.

실험예 3. MMP-1 단백질 발현량 감소에 의한 주름개선 효과

인간섬유아세포(CCD986sk, Fibroblast)를 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), 10% Fatal bovine serum(FBS), 1% Antibiotic-Antimycotic(GIBCO, Cat.#15240-062)과 함께 100 mm/60.1cm² culture dish에서 37 ℃, 5% CO₂의 조건으로 배양한다. 인간섬유아세포가 100 %이상 confluence 될 때 100 mm/60.1cm² culture dish에 3×10cells/12 well plate 분주한 후 24시간 배양하고, 본 발명에 의한 조성물, 양성대조군 TGF-β1(5 ng/ml)을 처리한다. 단백질은 cell lysis buffer(0.1% SDS, 1% NP₄0, 150 mM NaCl, 0.5% sodium deoxycholate, 50 mM Tris-Cl(pH 7.5) and protease inhibitors [Roche,Mannheim, Germany])로 추출하고 BCA assay로 단백질을 정량한다. 정량한 단백질의 일정량을 SDS-polyacrylamide gel에 loading하여 전기영동으로 분리하고, NC membrane으로 분리된 protein을 transfer 시킨다. 이 membrane을 blocking solution(5% skim milk in TBST(Tris-buffered saline with 0.1 % Tween 20))에 담가 30분이상 blocking 시키고 TBST로 washing 후 primary antibody (Collagen I(COL-1), Abcam, Cat.# ab90395 / Elastin, Abcam, ab23747 / MMP-1, Santa Cruz, Cat.# sc-21731) solution에 담가 4℃에서 overnight으로 반응시킨다. 그 후에 TBST로 10분간 3번 washing하고 Primary antibody conjugated secondary antibody (Collagen I(COL-1) : mouse / Elastin : rabbit / MMP-1 : mouse)를 2시간동안 반응시킨다. 이렇게 완성된 blot은 ECL solution kit(amersham, UK)으로 발색하여 분석하였다.

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물 1 ppm처리에 의하여 MMP-1 단백질 감소를 확인함으로써 피부주름개선에 도움을 주는 것으로 확인되었다.

실험예 4. 항스트레스 유전자 활성화 (Activation of anti-stress genes)

인삼유래펩타이드에 의한 세포내 항스트레스 유전자 활성화를 통한 피부 항상성 유지를 확인하기위하여, 피부 항상성 유지와 관련한 유전자들 (표 2)의 발현을 확인하였다.

구체적으로는 RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^™ cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture (gDNA remover 포함)를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 추출한 mRNA 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37℃ 15분, 50℃ 5분, 95℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^™ SYBR qPCR Mix (TOYOBO, QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; QT01192646, HMOX1: QT00092645, NQO1: QT00050281, ABCA12: QT00025830, FTL: QT00055860, MT2A: QT00220199, TXNRD1: QT00055902)이며 시료의 HMOX1, NQO1, ABCA12, FTL, MT2A, TXNRD1의 mRNA 발현량은 GADPH로 정량화하여 비교되었다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95℃ 15분 반응 후, 1 사이클 당 94℃ 15초, 60℃ 30초, 72℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

[표 2]

[표 3]

그 결과, 본 발명의 조성물 1 ppm의 인삼유래펩타이드에 의하여, 피부세포의 항상성에 관련한 유전자(HMOX1, NQO1, ABCA12, FTL, MT2A, TXNRD1)의 발현을 유의하게 증가시킴을 확인하였다.

실험예 5. 피부 장벽 및 보습 개선 유전자 발현 시험

피부장벽은 피부의 가장 바깥쪽에 있는 각질층으로 피부 최초의 방어막이라고 할 수 있다. 나이가 들어감에 따라 피부의 수분 함량은 급격하게 줄어들게 되는데 이는 피부 내의 보습인자들이 감소하기 때문이다.

본 실험에서는 인삼유래펩타이드의의 피부 장벽 개선 및 보습 효능을 살펴보기 위하여, 수분/glycerol 수송체인 AQP3(Aquaporin 3)와 자연보습인자로 알려진 FLG(Filaggrin)의 발현양 변화를 조사하였다. 구체적으로는 HaCaT 세포를 96 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양한 후, 최종 농도 1 ppm이 되도록 피부세포에 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. AQP3와 FLG의 유전자 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다.

RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^™ cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture (gDNA remover 포함)를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 추출한 mRNA 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37℃ 15분, 50℃ 5분, 95℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^™ SYBR qPCR Mix (TOYOBO, QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; QT01192646, AQP3; QT00212996, FLG; QT02448138)이며 시료의 AQP3, FLG의 mRNA 발현량은 GADPH로 정량화 하여 비교되었다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95℃ 15분 반응 후, 1 사이클 당 94℃ 15초, 60℃ 30초, 72℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

[표 4]

그 결과, 본 발명에 의한 조성물 (1ppm 인삼 유래 펩타이드 함유 조성물)은 상기 피부 장벽 및 보습 개선 유전자 발현을 증가시킴을 확인하였다.

실험예 6. 피부 면역개선 및 방어력 증진

각질형성세포에서 항균 펩타이드의 발현을 증가시켜 피부면역 개선 및 항균 효과를 통해 피부 방어력을 증진을 확인하였다. 본 발명에 의한 인삼유래 펩타이드의 항균 특성을 평가하기 위하여 인간 유래의 정상 각질형성세포의 배양액에 첨가하여 세포 수준에서 항균 펩타이드, LL37 및 hBD2 mRNA의 발현에 미치는 영향을 측정하였다. 구체적으로, 인간 유래의 각질형성세포를 24-웰 시험 플레이트에 5×10⁴ cell씩 넣고 부착시킨 후 1일간 배양하여 80 % 이상 차게 되었을 때 시료를 농도로 처리하였다. 처리 후 24시간 후 세포를 회수하여 전체 RNA를 추출하고, 항균 펩타이드인 LL37 및 hBD2 mRNA 발현량을 측정하였고, 실험은 3회 반복하였다.

[표 5]

실험예 7. Blue Light에 의한 피부세포보호 효과

블루 라이트(Blue light)는 380 ~ 500 nm 파장의 빛으로 사람이 볼 수 있는 가시광선, 즉, 망막까지 도달하는 빛 중에서 가장 파장이 짧고 강한 에너지를 갖고 있는 빛을 의미한다. 구체적으로는, Blue Light 조사에 사용할 광원으로는 460 nm 파장을 방출하는 Ultraviolet Crosslinker CL-1000 (Ultra-Violet Products, CA)을 사용하였다. 피부각질형성세포인 HaCaT 세포를 1x10⁵ cells/ml 농도로 24-well plate에 넣고 배양기에서 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 인산완충액으로 세척하였다. 인산완충액을 500 μL 첨가한 다음 460 nm 파장을 10 mJ/cm²로 조사 후 FBS를 포함하지 않은 신선한 세포배양배지로 교체하고 1 ppm 인삼유래펩타이드를 처리한 다음 24시간 추가 배양하였다. 여기에, MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Sigma) 5 mg/ml를 첨가한 후 배양기에서 3시간 배양한 후 형성된 fomazan을 DMSO로 녹이고, 96well plate로 옮긴 후 595 nm에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하여 확인하였다.

[표 6]

본 발명의 인삼유래펩타이드 1 ppm은 가시광선 영역대인 블루 라이트 영역대의 빛을 특이적으로 반사시켜 차단하는 것이 가능하여 피부를 보호할 수 있음을 확인하였다.

실험예 8. 피부 에너지 활성 증진 효과 시험

인삼유래펩타이드의 피부 에너지 활성 증진 효과를 살펴보기 위하여, 세포의 에너지 (ATP)의 활성 정도를 측정하였다. Detroit551 세포를 12 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 혈청이 함유되지 않은 DMEM 배지와 함께 인삼유래펩타이드를 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. 상기 과정을 통해 배양한 세포의 용해물을 희석한 일부 50 μL를 취해 ATP assay Kit(Abcam, Cat. ab83355) 내 ATP 표준물질 50 μL와 함께 각각 96 well plate에 넣고 50 μL의 ATP reaction mix 용액을 또한 각 well에 첨가하여 차광한 상태에서 30분간 실온 반응시켰다. 이후, 570 nm에서 흡광도를 측정한 후 ATP 표준농도곡선을 작성하여 시료 내 ATP 양을 산정하였다.

[표 7]

그 결과, 1 ppm 인삼 유래 펩타이드 함유 처리시, 피부세포에서 에너지 활성 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다.

실험예 9. 피부 활력 증진 효과 시험

인삼유래펩타이드의 피부 활력 증진 효과를 살펴보기 위하여, BMI(Body Mass Index)가 21~27인 20~45세의 여성 피험자 20명에게 시험 물질을 12주 동안 하루 1회 샤워 후 마사지와 함께 사용하게 하였으며, 사용 전과 사용 12주 후를 비교한 효과 여부를 판단하였다. 평가 항목은 설문평가를 하여 피부 세포 활성화 및 피부 활력 증진에 대해 효과를 느꼈다고 응답한 피험자 수를 조사하였다.

[표 8]

본 발명의 인삼유래펩타이드 처리에 의하여 사용감 평가에서 응답자의 대부분이 대조군의 경우에는 12주 동안 사용한 후 피부 세포 활성화 및 피부 활력 증진 효과를 거의 느끼지 못했으나, 인삼유래펩타이드에 의하여 피부 세포 활성화와 피부 활력 증진을 느꼈다고 응답함을 확인하였다.

실험예 10. 자가포식 활성 발현 시험

오토파지(자가소화작용(Autophagy)　또는 Autophagocytosis)는 그리스어에서 유래한 단어로, ‘자신’을 뜻하는 ‘Auto’와 ‘먹다’를 뜻하는 ‘phagein’이 합쳐진 의미이다. 세포 내 조절과정에서 불필요하거나 기능하지 않는 자신의 소기관이나 세포 구성성분을 자연적으로 분해하는 파괴 기제이며, 기전에 이상이 생기면 암이나 신경 난치병 등이 발생한다.

인삼유래펩타이드의 자가포식 활성 효능을 살펴보기 위하여, 오토파지 형성에 관여하는 LC-3(Microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3)의 발현양 변화를 조사하였다.

구체적으로는, HaCaT 세포를 96 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 적정한 농도의 인삼유래펩타이드를 피부세포에 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. LC-3의 유전자발현 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다. RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^™ cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture (gDNA remover 포함)를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 추출한 mRNA 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37℃ 15분, 50℃ 5분, 95℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^™ SYBR qPCR Mix (TOYOBO, QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; QT01192646, LC-3; QT00055069)이며 시료의 LC-3의 mRNA 발현량은 GADPH로 정량화 하여 비교되었다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95℃ 15분 반응 후, 1 사이클 당 94℃ 15초, 60℃ 30초, 72℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

[표 9]

그 결과, 1 ppm 인삼 유래 펩타이드를 처리한 피부세포에서 LC-3 발현에 의한 자가 포식 활성이 가장 뛰어남을 확인하였다.

실험예 11. 염증 억제 효과

염증반응은 외부로부터 물리적, 화학적 자극이나 세균감염에 대한 생체 조직의 방어 반응의 하나로써 손상된 조직을 수복하거나 재생하려는 기전이나, 만성으로 진행될 경우 반대로 조직 손상을 촉진하여 신경퇴행성질환과 같은 각종 만성질환과 암 등의 질병의 요인이 되기도 한다.

인삼유래펩타이드의 피부 염증 억제 효능을 살펴보기 위하여, 염증 반응에 관여하는 COX-2 (Cyclooxygenase-2), iNOS (Inducible nitric oxide synthase)의 발현양 변화를 조사하였다. 구체적으로는, HaCaT 세포를 96 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후, UVB 조사를 통해 염증반응을 유도하고, 시험 물질인 적정한 농도의 인삼유래펩타이드를 피부세포에 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다. COX-2, iNOS의 유전자 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다. RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^™ cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, Cat. SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture (gDNA remover 포함)를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 추출한 mRNA 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37 ℃ 15분, 50 ℃ 5분, 95 ℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교·분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird™ SYBR qPCR Mix (TOYOBO, Cat. QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect®assays (GAPDH; Cat. QT01192646, COX-2; Cat. QT00040586, iNOS; Cat. QT01323189)이며 시료의 COX-2, iNOS의 mRNA 발현량은 GADPH로 정량화 되어 비교하였다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95 ℃ 15분 반응 후, 1 사이클 당 94 ℃ 15초, 60 ℃ 30초, 72 ℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

[표 10]

그 결과, 1 ppm 인삼 유래 테트라펩타이드 함유 조성물 처리시, 피부세포에서 COX-2, iNOS 발현 억제에 의한 염증 억제 효과가 있음을 확인하였다.

제형 실시예 1. 인삼유래 펩타이드를 함유하는 화장수의 제조

상기 실시예 1에서 제조된 인삼유래 펩타이드를 포함하는 화장수(스킨로션)을 하기 표 2에 기재된 조성과 함량으로 제조하였다. 구체적으로, 성분 11번에 2, 3, 4, 8번을 순서대로 투입하고 교반하여 용해시켰다(용해물 1). 한편, 성분 5번을 60℃ 정도로 가열하여 용해시킨 후, 여기에 10번을 투입하여 용해시켰다(용해물 2). 그런 다음, 상기 용해물 2를 상기 용해물 1에 투입하고, 마지막으로 성분 1, 6, 7, 9번을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시켜 화장수를 제조하였다.

[표 11]

제형 실시예 2. 인삼유래 펩타이드를 함유하는 영양로션의 제조

상기 실시예 1에서 제조된 인삼유래 펩타이드를 포함하는 영양로션을 하기 표 3에 기재된 조성과 함량으로 제조하였다. 구체적으로, 성분 10, 11, 13, 16번을 혼합 교반하면서 80~85℃에서 가열하여 제조부에 투입한 후 유화시키고, 성분 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12번을 80~85℃에서 가열 용해한 후 투입시켜 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 뒤 15번을 투입하고, 45℃까지 냉각한 뒤 14번을 투입한 다음, 35℃에서 1번을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켜 영양로션을 제조하였다.

[표 12]

Claims (11)

1. 아래의 화학식 1의 구조를 가지는 인삼 유래 테트라펩타이드:
   [화학식 1]
   

   
2. 제 1항에 따른 테트라펩타이드는 GREV 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 인삼 유래 테트라펩타이드.
3. 제1항에 따른 테트라펩타이드를 함유하는 기능성 화장료 조성물.
4. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 피부 장벽 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 피부 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
7. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 피부 항상성 유지용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
8. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 피부 염증 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
9. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 피부 면역 개선 및 방어력 증진용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
10. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 외부 환경으로부터 피부 보호용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
11. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포 에너지 활성 증진 및 피부 활력 증진용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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