KR20200067195A - 완전-인간 번역후 변형된 항체 치료제 - Google Patents
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Abstract
완전 인간 번역후 변형된 치료 단클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 전달을 위한 방법 및 조성물이 제공된다. 완전 인간 번역후 변형된 치료 단클론 항체는 바람직하게는 유전자 치료 방법에 의해, 특히 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 벡터로서 적절한 조직에 전달될 수 있다. AAV 벡터, 약학 조성물의 제조 방법 및 치료 방법이 또한 제공된다. 또한, 완전 인간 번역후 변형된 "바이오베터"인 치료 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 이들 완전 인간 번역후 변형된 치료 항체는 치료 항체를 이용한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다.
Description
0. 서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출되고 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2018년 10월 17일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 명칭이 26115_105004_SL.txt이고 크기가 400,185 바이트이다.
1. 도입
치료 mAb를 이용해 치료하는 것으로 표시된 질환 또는 병태로 진단된 인간 대상체에 대한 완전 인간 번역후 변형된(HuPTM) 치료 단클론 항체("mAb") 또는 치료 mAb의 HuPTM 항원-결합 단편-예를 들어, 치료 mAb의 완전 인간-당화된(HuGly) Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다.
2. 발명의 배경
치료 mAb는 다수의 질환 및 병태를 치료하는데 효과적인 것으로 나타났다. 그러나, 이들 약제는 단기간 동안에만 효과적이기 때문에, 장기간 동안 반복된 주사가 보통 요구되어, 환자에 대해 상당한 치료 부담을 생성한다.
3. 발명의 요약
치료 mAb를 이용해 치료하는 것으로 표시된 질환 또는 병태로 진단된 환자(인간 대상체)에 대한 HuPTM mAb 또는 치료 mAb의 HuPTM 항원-결합 단편(예를 들어, 치료 mAb의 완전 인간-당화된 Fab(HuGlyFab))의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 이러한 치료 mAb의 항원-결합 단편은 Fab, F(ab')2, 또는 scFv(단일-쇄 가변 단편)(종합적으로 본원에서 "항원-결합 단편"으로서 지칭됨)를 포함한다. 본원에 사용된 "HuPTM Fab"는 mAb의 다른 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 대안적 실시양태에서, 전장(full-length) mAb가 사용될 수 있다. 전달은 mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 이의 치료 효과를 발휘하는 표적 조직에 HuPTM mAb 또는 치료 mAb의 항원-결합 단편, 즉 인간-당화된 전이유전자(transgene) 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 환자의 조직 또는 장기에 생성하기 위해 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 치료 mAb를 이용해 치료하는 것으로 표시된 병태로 진단된 환자(인간 대상체)에게 치료 mAb 또는 이의 항원-결합 단편(또는 이의 초고당화된 유도체)을 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 투여함으로써 - 유리하게 달성될 수 있다.
전이유전자에 코딩된 HuPTM mAb 또는 HuPTM 항원-결합 단편은, 비제한적으로, 하기에 결합하는 치료 항체의 전장 또는 항원-결합 단편을 포함할 수 있다:
· 비제한적으로, 알츠하이머병(Alzheimer's disease)을 치료하는 것으로 표시된, 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 및 BAN2401(도 2a-2c 및 2f 참고)을 포함한, 알츠하이머병과 관련된 아밀로이드 전구체 단백질(amyloid precursor protein)(APP)로부터 유래된 아밀로이드 베타(Aβ 또는 A베타) 펩티드; 비제한적으로, 타우병증(tauopathy)을 치료하기 위해 "aTAU"(도 2d 참고)를 포함한, 알츠하이머병, 진행성 핵상 마비, 이마관자엽 치매, 만성 외상성 뇌병증, 픽 합병증(Pick's Complex), 원발성 연령-관련 타우병증을 포함한 타우병증에 관련된 Tau 단백질; 및 비제한적으로, 편두통 및 군발성 두통을 치료하기 위해 에레누맙(AIMOVIGTM)(도 2e 참고), 엡티네주맙, 프레마네주맙, 및 갈카네주맙을 포함한 편두통 및 군발성 두통과 관련된 CGRP 수용체를 포함한, 신경계 표적;
· 비제한적으로, 아토피 피부염을 치료하는 것으로 표시된 IL4R, 예컨대 두필루맙(도 3a 참고); 판상형 건선, 건선성 관절염, 및 강직성 척추염을 치료하는 것으로 표시된 IL17A, 예컨대 익세키주맙(TALTZ®) 또는 세쿠키누맙(COSENTYX®)(도 3b 및 3c 참고); 천식을 치료하는 것으로 표시된 IL-5, 예컨대 메폴리주맙(NUCALA®)(도 3d 참고); 및 건선 및 크론병(Crohn's disease)을 치료하는 것으로 표시된 IL12/IL23, 예컨대 우스테키누맙(STELARA®)을 포함한, 인터류킨 또는 인터류킨 수용체;
· 비제한적으로, 궤양성 대장염 및 크론병을 치료하는 것으로 표시된 베돌리주맙(ENTYVIO®)(도 4a 참고) 및 다발성 경화증 및 크론병을 치료하기 위한 나탈리주맙(항-인테그린 알파 4)(도 4b 참고)을 포함한, 인테그린;
· 고콜레스테롤혈증 및 심혈관계 질환 표적, 예컨대, 비제한적으로, HeFH 및 HoFH를 치료하는 것으로 표시된 알리로쿠맙(PRALUENT®) 및 에볼로쿠맙(REPATHA®)(도 5a 및 5b 참고)을 포함한 PCSK9; 또는, 비제한적으로, HoFH 및 심각한 형태의 이상지질혈증을 치료하는 것으로 표시된 에비나쿠맙(도 5c 참고)을 포함한 ANGPTL3 및, 비제한적으로, 죽상경화증을 포함한 심혈관계 질환의 치료를 위한 E06-scFv(도 5d 참고)을 포함한, 전염증성/전죽종형성성 인지질;
· 비제한적으로, 유방암 및 전립선암 환자에서 골량(bone mass)을 증가시키고, 골 전이로 인한 골격-관련 이벤트를 예방하는, 골다공증을 치료하는 것으로 표시된 데노수맙(XGEVA® 및 PROLIA®)(도 6 참고)을 포함한, RANKL;
· 비제한적으로, 전이성 흑색종, 림프종, 및 비소세포 폐 암종을 치료하는 것으로 표시된 니볼루맙(OPDIVO®) 및 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®)(도 7a 및 도 7b 참고)을 포함한, PD-1, 또는 PD-L1 또는 PD-L2(이들 항체는 때로 본원에서 PD-1 차단제로서 지칭됨);
· 비제한적으로, 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythromatosis)(SLE)를 치료하는 것으로 표시된 벨리무맙(BENLYSTA®)(도 8e 참고)을 포함한, BLyS(B-lymphocyte stimulator(B-림프구 자극제), B-세포 활성화 인자(B-cell activating factor)(BAFF)로도 알려짐);
· 비제한적으로, 신혈관 연령-관련 황반 변성(예를 들어, "습성 AMD")을 치료하는 것으로 표시된 라니비주맙(LUCENTIS®), 베바시주맙(AVASTIN®), 및 브롤루시주맙(도 8a, 8b 및 도 8d 참고)을 포함한 VEGF(vascular endothelial growth factor(혈관 내피 성장 인자)); 비제한적으로, 건성 AMD를 치료하기 위한 람팔리주맙(도 8c 참고)을 포함한 인자 D; 및 비제한적으로, 건성 AMD를 치료하기 위한 안데칼릭시맙(도 8g 참고)을 포함한 MMP9(matrix metalloproteinase 9(기질 금속단백분해효소 9))를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 안구 표적;
· 비제한적으로, 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 건선성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 판상형 건선, 및 궤양성 대장염을 치료하는 것으로 표시된 아달리무맙(HUMIRA®) 및 인플릭시맙(REMICADE®)(아달리무맙에 대해 도 9a 및 인플릭시맙에 대해 도 9b)을 포함한, TNF-알파; 및
· 혈장 단백질 표적, 예컨대, 비제한적으로, 항-C5 및 C5a 보체 단백질, 예컨대 용혈을 감소시키기 위한 발작성 야간 혈색뇨증(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria)(PNH)을 갖는 환자의 치료, 또는 보체-매개된 혈전성 미세혈관병증을 억제하기 위한 비정상 용혈성 요독 증후군(atypical hemolytic uremic syndrome)(aHUS)의 치료를 위한 에쿨리주맙(SOLIRIS®)(도 8f)을 포함한 인간 보체 단백질; 및 비제한적으로, 유전성 혈관부종을 치료하기 위한 라나델루맙(도 8h 참고)을 포함한 혈장 칼리크레인;
또는 Fab 도메인 상에 추가 당화 부위를 함유하도록 조작된 이러한 mAb 또는 항원-결합 단편(예를 들어, 전장 항체의 Fab 도메인 상에서 초고당화되는 항체의 유도체의 기재에 대해 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고).
전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 비-복제성 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함한다. 그러나, 비제한적으로, 렌티바이러스 벡터; 백시니아 바이러스 벡터, 또는 "네이키드(naked) DNA" 구조체로 지칭되는 비-바이러스 발현 벡터를 포함하는 다른 바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 전이유전자의 발현은 구조성(constitutive) 또는 조직-특이적 발현 제어 요소에 의해 제어될 수 있다.
유전자 요법 구조체는 중쇄 및 경쇄 둘 다가 발현되도록 설계된다. 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열은 중쇄 및 경쇄가 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리되어 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 발현되는 단일 구조체로 조작될 수 있다. 특정 실시양태에서, 코딩 서열은 Fab 또는 F(ab')2 또는 scFv를 코딩한다. 다른 실시양태에서, 구조체는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 유동성(flexible), 절단 불가능한 링커를 통해 연결된 scFv를 발현한다. 특정 실시양태에서, 구조체는 N-말단으로부터 NH2-VL-링커-VH-COOH 또는 NH2-VH-링커-VL-COOH를 발현한다.
유전자 요법에 의해 유래된 치료 항체는 시간에 따라 소멸되어 최고 및 최저 수준을 야기하는 주사되거나 주입된 치료 항체에 비해 여러 이점을 갖는다. 전이유전자 생산 항체의 지속된 발현은 반복적으로 항체를 주사하는 것과 반대로, 활성 부위에 존재하는 항체의 수준을 더욱 일관된 수준이 되게 하고, 환자에 대해 덜 위험하며 더욱 편리하며, 이는 더 적은 주사가 이루어질 필요가 있기 때문이다. 또한, 전이유전자로부터 발현된 항체는 직접 주사된 것에 비해 상이한 방식으로 번역후 변형되며, 이는 상이한 미세환경이 번역 동안 및 그 후에 나타나기 때문이다. 임의의 이론에 구애됨 없이, 이는 상이한 확산, 생활성, 분포, 친화성, 약동학, 및 면역원성 특징을 갖는 항체를 야기하여, 직접 주사된 항체와 비교하여, 작용 부위에 전달된 항체가 "바이오베터(biobetter)"이도록 한다.
또한, 생체내(in vivo)에서 전이유전자로부터 발현된 항체는 단백질 응집 및 단백질 산화와 같은, 재조합 기술에 의해 생산된 항체와 연관된 분해 산물을 함유할 가능성이 적다. 응집은 높은 단백질 농도, 제조 장비 및 용기와의 표면 상호작용, 및 특정 버퍼 시스템을 이용한 정제로 인한 단백질 생산 및 저장과 연관된 문제이다. 응집을 촉진하는 이들 조건은 유전자 요법에서의 전이유전자 발현에서는 존재하지 않는다. 메티오닌, 트립토판, 및 히스티딘 산화와 같은 산화는 또한 단백질 생산 및 저장과 연관되며, 스트레스가 가해진 세포 배양 조건, 금속 및 공기 접촉, 및 버퍼와 부형제 내의 불순물에 의해 야기된다. 생체내에서 전이유전자로부터 발현된 단백질은 또한 스트레스가 가해진 조건에서 산화될 수 있다. 그러나, 인간, 및 많은 다른 유기체는 항산화 방어 시스템을 구비하여, 산화 스트레스를 감소시킬 뿐만 아니라, 때로는 또한 산화를 회복 및/또는 역전시킨다. 따라서, 생체내에서 생산된 단백질은 산화된 형태로 있을 가능성이 적다. 응집 및 산화 둘 다는 역가(potency), 약동학(소거(clearance)), 및 면역원성에 영향을 줄 수 있다.
인간 대상체에 대한 투여를 위해 적합한 약학 조성물은 생리학적으로 양립가능한 수성 버퍼, 계면활성제 및 선택적 부형제를 포함하는 제형 버퍼 중 재조합 벡터의 현탁액을 포함한다.
본 발명은 부분적으로 다음 원리를 기본으로 한다:
(i) 최근 시판중인 mAb 치료제는 면역글로불린 G(IgG) 아이소타입, 예컨대 IgG1, IgG2, 및 IgG4의 것이며, 이는 일반적으로 약동학(PK) 특징, 예컨대 느린 소거, 긴 반감기, 및 제한된 조직 분포를 갖는다. 정맥내 투여 후에, 통상적인 mAb 혈청 PK 프로파일은 신속한 분포 상 및 느린 제거 상을 갖는 이상(biphasic)이며; 따라서, 만성 병태를 치료하기 위해 요구되는 용량을 유지하기 위해 반복 투여가 필요하다. 또한, mAb의 분포는 일반적으로 이들의 큰 크기 및 친수성으로 인해 혈관 및 사이질 공간으로 제한된다. 순환으로부터 대부분의 조직으로 mAb가 분할되는 정도는 일반적으로 더 낮은 뇌를 제외하고 약 5-15%의 범위이다. (예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Kamath, 2016, Drug Discovery Today: Technologies 21-22: 75-83 참고). 그 자리(in situ)에서 HuPTMmAb 또는 HuPTM Fab의 연속 생산은 반복 투여를 회피하고 Fab를 사용하게 하며, 이는 달리 나타내지 않는 경우, 효능을 달성하기엔 지나치게 짧은 전신성 반감기를 가질 것이고; 기재된 투여 방법은 뇌와 같은 표적 조직에 직접 접속하게 하며, 이러한 조직에 대한 고용량의 전달이 달성될 수 있다.
(ii) 다수의 치료 mAb의 Fab 영역은 당화 부위를 보유한다. 예를 들어, 특정 치료 mAb의 Fab 영역 내의 당화 부위인 컨센서스 및 비-컨센서스 아스파라긴("N") 당화 부위뿐 아니라, 글루타민("Q") 잔기를 각각 청색 및 녹색으로 확인 및 강조한 도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5d, 6, 7a-7b, 8a-8h 및 9a-9b를 참고한다. (예를 들어, 항체에서 N-연결된 당화 부위의 확인에 대해 각각 그 전체가 참고로 포함되는 Valliere-Douglass et al., 2009, J. Biol. Chem. 284: 32493-32506, 및 Valliere-Douglass et al., 2010, J. Biol. Chem. 285: 16012-16022 참고). 또한, O-당화는 효소에 의한 세린 또는 트레오닌 잔기에 대한 N-아세틸-글루코사민의 첨가를 포함한다. 항체의 힌지 영역에 존재하는 아미노산 잔기는 O-당화될 수 있음이 입증되었다. O-당화의 가능성은 예를 들어, 다시 대장균(E. coli)에서 생산된 항원-결합 단편과 비교하여, 본원에 제공된 치료 항체에 다른 이점을 부여하며, 이는 대장균이 인간 O-당화에서 사용되는 것과 동등한 조직을 자연적으로 함유하지 않기 때문이다. (대신에, 대장균에서의 O-당화는 세균이 특정 O-당화 조직을 함유하도록 변형될 때에만 입증되었음. 예를 들어, Farid-Moayer et al., 2007, J. Bacteriol. 189:8088-8098 참고.) 또한, Fab 아미노산 서열은 초고당화된 변이체를 조작하도록 변형될 수 있다(예를 들어, 도 11a 및 11b에 나타낸 치료 항체의 초고당화된 Fab 영역을 조작하도록 제조될 수 있는 아미노산 치환; 및 전장 항체의 Fab 도메인 상에서 초고당화되는 항체의 유도체의 기재에 대해 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고).
(iii) 당화 부위와 함께, Fab 영역은 CDR 내부 또는 근처에 티로신("Y") 황산화 부위를 함유할 수 있다; 예를 들어, 황색으로 강조된, 특정 치료 mAb의 Fab 영역 내의 티로신-O-황산화 부위를 확인하는 도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5d, 6, 7a-7b, 8a-8h 및 9a-9b를 참고한다. (예를 들어, 단백질 티로신 황산화를 거친 티로신 잔기 주변의 아미노산의 분석에 대해 그 전체가 참고로 포함되는 Yang et al., 2015, Molecules 20:2138-2164(특히 2154) 참고). "규칙"은 다음과 같이 요약될 수 있다: Y의 +5 내지 -5 위치 이내에 E 또는 D를 가진 Y 잔기, 및 Y의 위치 -1은 중성 또는 산성 전하를 가진 아미노산이지만 - 황산화를 없애는 염기성 아미노산, 예를 들어, R, K, 또는 H는 아니다.
(iv) 인간 세포에 의한 Fab 영역의 당화, 예컨대 도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5d, 6, 7a-7b, 8a-8h 및 9a-9b에 나타낸 것은 글리칸의 첨가를 야기할 것이며, 이는 전이유전자 산물의 안정성, 반감기를 개선하고 원치 않는 응집 및/또는 면역원성을 감소시킬 수 있다. (예를 들어, Fab 당화의 알려진 중요성의 검토에 대해 Bovenkamp et al., 2016, J. Immunol. 196: 1435-1441; 및 HuGlyFab에 부착될 수 있는 글리칸을 확인하는 도 10(Bondt et al., 2014, Mol & Cell Proteomics 13.1: 3029-2029로부터 채택됨) 참고). 항체의 Fab 및 Fc 부분은 별개의 당화 패턴을 갖는 것으로 나타났으며, Fab 글리칸은 Fc 글리칸에 대해 갈락토실화, 시알산화, 및 양분(bisection)(예를 들어, 양분 GlcNAc)에서 높지만, 푸코실화에서는 낮은 것으로 나타났다. (예를 들어, Fab-연관된 N-글리칸의 개시에 대해 그전체가 본원에 참고로 포함되는 Bondt et al., 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039 참고).
(V) 중요하게는, 본 발명의 HuGlyFab에 첨가되는 글리칸은 2,6-시알산을 함유하는 고도로 처리된 복합체-형 N-글리칸이다. 이러한 글리칸은 대장균에서 생산된 치료 mAb(전혀 당화되지 않음)에서; (b) 당화 동안 2,6-시알산 첨가가 요구되는 2,6-시알릴트랜스퍼라아제를 갖지 않는 CHO 세포에서 생산된 치료 항체에서; 또는 (c) 우세한 인간 시알산인 N-아세틸뉴라민산("Neu5Ac") 대신에, 인간에게 자연적이지 않은(그리고 잠재적으로 면역원성인) N-글리콜릴뉴라민산("Neu5Gc" 또는 "NeuGc")을 첨가하는 CHO 또는 뮤린 세포주에서 생산된 치료 항체에서 존재하지 않는다. 예를 들어, 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Dumont et al., 2015, Crit. Rev. Biotechnol. 36(6):1110-1122; Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207(NeuGc는 SP2/0 및 NS0와 같이 뮤린 세포주에서 우세한 시알산임); 및 Song et al., 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666을 참고한다.
(vi) 본 발명의 HuGlyFab의 인간 당화 패턴은 전이유전자 산물의 면역원성을 감소시키고 효능을 개선해야 한다. 중요하게는, 본원에 기재된 방법에 따라 사용되는 항원-결합 단편이 인간 표적 세포에서 발현될 때, 원핵 숙주 세포(예를 들어, 대장균) 또는 진핵 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포 또는 뮤린 NS0 또는 SP2/0 세포)에서 시험관내(in vitro) 생산에 대한 필요성이 피해진다. 대신에, 본원에 기재된 방법(예를 들어, 항원-결합 단편을 발현하기 위한 인간 표적 세포의 사용)의 결과로서, 항원-결합 단편의 N-당화 부위는 인간의 치료와 관련되고 유익한 글리칸으로 유리하게 장식된다. 이러한 이점은 항체/항원-결합 단편 생산에서 CHO 세포, 뮤린 세포, 또는 대장균이 이용될 때 얻을 수 없으며, 이는 예를 들어, (a) CHO 세포가 특정 글리칸의 추가를 위해 필요한 성분(예를 들어, 2,6 시알산 및 양분 GlcNAc)이 결여되고; (b) CHO 세포 및 뮤린 세포(NS0 및 SP2/0 세포)가 Neu5Ac 대신에 인간에게 통상적이지 않은 시알산으로서 Neu5Gc를 추가하며; (c) CHO 세포가 또한 고농도에서 아나필락시스를 촉발시킬 수 있는, 대부분의 개체에 존재하는 항-α-Gal 항체와 반응하는, 면역원성 글리칸인 α-Gal 항원을 생산할 수 있고; (d) 대장균이 N-당화를 위해 필요한 성분을 자연적으로 함유하지 않기 때문이다.
(vii) 도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5d, 6, 7a-7b, 8a-8h 및 9a-9b에 나타낸 것과 같은 Fab 영역의 티로신-황산화 - 많은 인간 세포에서 왕성한 번역후 처리 - 는 이들의 분자 표적에 대해 증가된 결합활성을 갖는 전이유전자 산물을 야기할 수 있다. 사실상, 항체의 Fab의 티로신-황산화는 항원에 대한 결합활성 및 활성을 극적으로 증가시키는 것으로 나타났다(예를 들어, Loos et al., 2015, PNAS 112: 12675-12680, and Choe et al., 2003, Cell 114: 161-170 참고). 이러한 번역후 변형은 대장균(티로신-황산화를 위해 요구되는 효소를 보유하지 않는 숙주)에서 제조된 치료 항체 상에 존재하지 않고, 기껏해야 CHO 세포에서 제조된 치료 mAb에서 불충분하게 나타난다(under-represented). CHO 세포는 분비 세포가 아니며 번역후 티로신-황산화를 위해 제한된 능력을 갖는다. (예를 들어, Mikkelsen & Ezban, 1991, Biochemistry 30: 1533-1537, 특히, p. 1537에서의 논의를 참고).
전술한 이유로, HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 대상체의 형질도입된 세포에 의해 생산된 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 대상체에 생성하기 위해 치료 mAb의 전장 또는 HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 상기 mAb에 대해 표시된 질환으로 진단된 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써, 달성되는 질환의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다. HuPTMmAb 또는 HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 인간 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 전장 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, 당단백질이 환자에게 투여될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 투여가 수반되는 환자에 대한 전장 또는 HuPTM Fab의 전달을 포함하는 병용 요법이 본 발명의 방법에 의해 포함된다. 추가의 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 이러한 추가 치료는, 비제한적으로, 치료 mAb와의 공동-요법을 포함할 수 있다.
또한, 바이러스 벡터, 특히 AAV계 바이러스 벡터를 제조하는 방법이 제공된다. 구체적 실시양태에서, AAV ITR에 인접한 cis 발현 카세트(cis 발현 카세트는 인간 세포에서 전이유전자의 발현을 제어할 발현 제어 요소에 작동가능하게 연결된 치료 항체를 코딩하는 전이유전자를 포함함)를 포함하는 인공 게놈; AAV ITR이 결여된 trans 발현 카세트(trans 발현 카세트는 배양 내의 숙주 세포에서 AAV rep 및 캡시드 단백질의 발현을 추진하고 trans에서 rep 및 cap 단백질을 공급하는 발현 제어 요소에 작동가능하게 연결된 AAV rep 및 캡시드 단백질을 코딩함); AAV 캡시드 단백질에 의한 인공 게놈의 복제 및 패키징을 허용하기에 충분한 아데노바이러스 헬퍼(helper) 기능을 함유하는 숙주 세포를 배양하는 것; 및 세포 배양으로부터의 인공 게놈을 이입하는(encapsidating) 재조합 AAV를 회수하는 것을 포함하는, 재조합 AAV를 생산하는 방법이 제공된다.
3.1 예시적 실시양태
물질의 구성(Compositions of Matter)
1.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 알츠하이머병, 편두통, 군발성 두통, 또는 만성 외상성 뇌병증, 진행성 핵상 마비, 및 이마관자엽 치매를 포함한 타우병증을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV9 캡시드(서열번호 79) 또는 AAVrh10(서열번호 80)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV 역위 말단 반복부(inverted terminal repeat)(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 CNS 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-아밀로이드 베타, 항-Tau, 또는 항-CGRPR mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 갖는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 CNS에 대한 척추강내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
2.
단락 1에 있어서,
항-아밀로이드 β mAb가 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401이고 항-Tau mAb가 aTAU이며 항-CGRPR이 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 또는 갈카네주맙인 약학 조성물.
3.
단락 1 또는 2에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 단일쇄 가변 도메인(scFv)인 약학 조성물.
4.
단락 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 53의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 서열번호 55의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 56의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
5.
단락 4에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 101의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 102의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 103의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 104의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 105의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 106의 뉴클레오티드 서열; 또는 서열번호 153의 뉴클레오티드 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 154의 뉴클레오티드 서열을 갖는 경쇄; 서열번호 155의 뉴클레오티드 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 156의 뉴클레오티드 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 157의 뉴클레오티드 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 158의 뉴클레오티드 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
6.
단락 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
7.
단락 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 CNS 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시(direct)하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
8.
단락 7에 있어서,
상기 시그널 서열이 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 또는 표 1로부터의 시그널 서열인 약학 조성물.
9.
단락 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV9인 약학 조성물.
10.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 아토피 피부염을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL4R mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
11.
단락 10에 있어서,
항-IL4R mAb가 두필루맙인 약학 조성물.
12.
단락 10 또는 11에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
13.
단락 10 내지 12 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
14.
단락 13에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 107의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 108의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
15.
단락 10 내지 13 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
16.
단락 10 내지 15 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
17.
단락 16에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
18.
단락 10 내지 17 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
19.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 또는 크론병을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL17A mAb 또는 항-IL12/IL23 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
20.
단락 19에 있어서,
항-IL17A 또는 항-IL12/IL23 mAb가 익세키주맙, 세쿠키누맙 또는 우스테키누맙인 약학 조성물.
21.
단락 19 또는 20에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
22.
단락 19 내지 21 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
23.
단락 22에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 109의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 110의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 111의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 112의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 113의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 114의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
24.
단락 19 내지 22 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
25.
단락 19 내지 24 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
26.
단락 25에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
27.
단락 19 내지 26 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
28.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 천식을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL-5 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
29.
단락 28에 있어서,
항-IL-5 mAb가 메폴리주맙인 약학 조성물.
30.
단락 28 또는 29에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
31.
단락 28 내지 30 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
32.
단락 31에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 115의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 116의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
33.
단락 28 내지 31 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
34.
단락 28 내지 33 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
35.
단락 34에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
36.
단락 28 내지 35 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
37.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 다발성 경화증, 궤양성 대장염 또는 크론병을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78), AAV9 캡시드(서열번호 79), 또는 AAVrh10 캡시드(서열번호 80)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포 또는 인간 CNS 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-인테그린 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여 또는 상기 대상체의 CNS에 대한 척추강내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
38.
단락 37에 있어서,
항-인테그린 mAb가 베돌리주맙 또는 나탈리주맙인 약학 조성물.
39.
단락 37 또는 38에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
40.
단락 37 내지 39 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 19의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
41.
단락 40에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 117의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 118의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 119의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 120의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
42.
단락 37 내지 41 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
43.
단락 37 내지 42 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
44.
단락 43에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 1, 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
45.
단락 37 내지 44 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
46.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 죽상경화성 심혈관계 질환(ACD), 죽상경화성 플라크 형성, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 또는 고콜레스테롤혈증을 포함한 HeFH, HoFH, 이상지질혈증, 심혈관계 질환을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-PCSK9, 항-ANGPTL3, 또는 항-OxPL mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
47.
단락 46에 있어서,
항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 mAb가 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙 또는 에비나쿠맙이거나 항-OxPL가 E06인 약학 조성물.
48.
단락 46 또는 47에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
49.
단락 46 내지 48 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 21의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 23의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 서열번호 25의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 59의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
50.
단락 49에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 121의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 122의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 123의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 124의 뉴클레오티드 서열; 중쇄를 코딩하는 서열번호 125의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 126의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 159의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 160의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
51.
단락 44 내지 50 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
52.
단락 44 내지 51 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
53.
단락 52에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
54.
단락 44 내지 53 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
55.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 골다공증을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-RANKL mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
56.
단락 55에 있어서,
항-RANLK mAb가 데노수맙인 약학 조성물.
57.
단락 55 또는 56에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
58.
단락 55 내지 57 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 27의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
59.
단락 58에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 127의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 128의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
60.
단락 55 내지 59 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
61.
단락 55 내지 60 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
62.
단락 61에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
63.
단락 55 내지 62 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
64.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 전이성 흑색종, 림프종 또는 비소세포 폐 암종을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, PD-1 차단제 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
65.
단락 64에 있어서,
PD-1 차단제 mAb가 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙인 약학 조성물.
66.
단락 64 또는 65에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
67.
단락 64 내지 66 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 29의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 31의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
68.
단락 67에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 129의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 130의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 131의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 132의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
69.
단락 64 내지 68 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
70.
단락 64 내지 69 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
71.
단락 70에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
72.
단락 64 내지 71 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
73.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 전신 홍반성 루푸스(SLE)를 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-BLyS mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
74.
단락 73에 있어서,
항-BLyS mAb가 벨리무맙인 약학 조성물.
75.
단락 73 또는 74에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
76.
단락 73 내지 75 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 41의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 42의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
77.
단락 76에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 141의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 142의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
78.
단락 73 내지 77 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
79.
단락 73 내지 78 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
80.
단락 79에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
81.
단락 73 내지 80 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
82.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 연령-관련 황반 변성을 포함한 안구 장애를 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 망막 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-MMP9, 항-VEGF 또는 항-fD mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 눈에 대한 망막하, 유리체내 또는 맥락막상 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
83.
단락 82에 있어서,
항-VEGF mAb가 라니비주맙, 베바시주맙, 또는 브롤루시주맙이거나, 상기 항-Fd mAb가 람팔리주맙이거나 상기 항-MMP9 mAb가 안데칼릭시맙인 약학 조성물.
84.
단락 82 또는 83에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
85.
단락 82 내지 84 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 33의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 갖는 경쇄, 또는 서열번호 35의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 37의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 39의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 40의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 45의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 46의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
86.
단락 85에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 133의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 134의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 135의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 136의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 137의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 138의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 139의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 140의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 145의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 146의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
87.
단락 82 내지 85 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
88.
단락 82 내지 87 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 망막 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
89.
단락 88에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 1의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
90.
단락 82 내지 89 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
91.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 판상형 건선, 또는 궤양성 대장염을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-TNF 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
92.
단락 91에 있어서,
항-TNF-알파 mAb가 아달리무맙 또는 인플릭시맙인 약학 조성물.
93.
단락 91 또는 92에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
94.
단락 91 내지 93 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 49의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 50의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 51의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 52의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
95.
단락 94에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 149의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 150의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 151의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 152의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
96.
단락 91 내지 94 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
97.
단락 91 내지 96 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
98.
단락 97에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 2 또는 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
99.
단락 91 내지 98 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
100.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 발작성 야간 혈색뇨증(PNH) 또는 비정상 용혈성 요독 증후군(aHUS)을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-C5 또는 C5a 보체 단백질 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
101.
단락 100에 있어서,
항-C5 또는 C5a 보체 단백질 mAb가 에쿨리주맙인 약학 조성물.
102.
단락 100 또는 101에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
103.
단락 100 내지 102 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 43의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
104.
단락 103에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 143의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 144의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
105.
단락 101 내지 104 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
106.
단락 100 내지 105 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
107.
단락 106에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
108.
단락 101 내지 107 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
109.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 유전성 혈관부종을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
(a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-혈장 칼리크레인 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하되,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
110.
단락 109에 있어서,
항-혈장 칼리크레인 mAb가 라나델루맙인 약학 조성물.
111.
단락 109 또는 111에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 약학 조성물.
112.
단락 109 내지 111 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 47의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 48의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 약학 조성물.
113.
단락 112에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 147의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 148의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물.
114.
단락 110 내지 113 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 약학 조성물.
115.
단락 109 내지 114 중 어느 하나에 있어서,
전이유전자가 상기 인간 간 세포에서 분비 및 변역후 변형을 지시하는 상기 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 시그널 서열을 코딩하는 약학 조성물.
116.
단락 115에 있어서,
상기 시그널 서열이 표 3의 시그널 서열로부터 선택되는 약학 조성물.
117.
단락 110 내지 116 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드가 AAV8인 약학 조성물.
치료 방법
118.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 알츠하이머병, 편두통, 군발성 두통, 또는 만성 외상성 뇌병증, 진행성 핵상 마비, 및 이마관자엽 치매를 포함한 타우병증을 치료하는 방법으로서, 인간 중추 신경계(CNS) 세포에 의해 생산된, 항-아밀로이드 베타, 항-Tau, 또는 항-CGRPR mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 뇌척수액(cerebrospinal fluid)(CSF)에 전달하는 것을 포함하는 방법.
119.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 알츠하이머병, 편두통, 군발성 두통, 또는 만성 외상성 뇌병증, 진행성 핵상 마비, 및 이마관자엽 치매를 포함한 타우병증을 치료하는 방법으로서,
인간 CNS 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-아밀로이드 베타, 항-Tau, 또는 항-CGRPR mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 대상체의 대조(cisterna magna)에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 인간 번역후 변형된(HuPTM) 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
120.
단락 118 또는 119에 있어서,
항-아밀로이드 베타 mAb가 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401이거나 항-Tau mAb가 aTAU이거나 항-CGRPR이 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 또는 갈카네주맙인 방법.
121.
단락 118 내지 120 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
122.
단락 118 내지 121 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 53의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 서열번호 55의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 56의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
123.
단락 122에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 101의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 102의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 103의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 104의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 105의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 106의 뉴클레오티드 서열; 또는 서열번호 153의 뉴클레오티드 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 154의 뉴클레오티드 서열을 갖는 경쇄; 서열번호 155의 뉴클레오티드 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 156의 뉴클레오티드 서열을 갖는 경쇄 또는 서열번호 157의 뉴클레오티드 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 158의 뉴클레오티드 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
124.
단락 118 내지 122 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
125.
단락 118 내지 124 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
126.
단락 118 내지 125 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 및/또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
127.
단락 118 내지 126 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
128.
단락 119 내지 127 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV9 또는 AAVrh10인 방법.
129.
단락 119 내지 128 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 CNS 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
130.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 또는 크론병을 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-IL17A 또는 항-IL12/IL23 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
131.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 또는 크론병을 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL17A 또는 항-IL12/IL23 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
132.
단락 130 또는 131에 있어서,
항-IL17A 또는 항-IL12/IL23 mAb가 익세키주맙, 세쿠키누맙, 또는 우스테키누맙인 방법.
133.
단락 130 내지 132 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
134.
단락 130 내지 133 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
135.
단락 134에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 109의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 110의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 111의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 112의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 113의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 114의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
136.
단락 132 내지 134 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
137.
단락 132 내지 136 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
138.
단락 132 내지 137 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
139.
단락 132 내지 138 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
140.
단락 133 내지 139 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
141.
단락 133 내지 140 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
142.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 다발성 경화증, 궤양성 대장염 또는 크론병을 치료하는 방법으로서, 인간 CNS 세포, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-인테그린 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 CSF 또는 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
143.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 다발성 경화증, 궤양성 대장염 또는 크론병을 치료하는 방법으로서,
인간 CNS 세포, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-인테그린 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 CNS, 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
144.
단락 142 또는 143에 있어서,
항-인테그린 mAb가 나탈리주맙 또는 베돌리주맙인 방법.
145.
단락 142 내지 144 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
146.
단락 142 내지 145 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 19의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
147.
단락 146에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 117의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 118의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 119의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 120의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
148.
단락 142 내지 145 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
149.
단락 142 내지 148 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
150.
단락 142 내지 149 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
151.
단락 142 내지 150 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
152.
단락 143 내지 151 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8, AAV9, 또는 AAVrh10인 방법.
153.
단락 143 내지 152 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 CNS 세포, 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
154.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 아토피 피부염을 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-IL4R mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
155.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 아토피 피부염을 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL4R mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
156.
단락 154 또는 155에 있어서,
항-IL4R mAb가 두필루맙인 방법.
157.
단락 154 내지 156 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
158.
단락 154 내지 157 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
159.
단락 158에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 107의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 108의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
160.
단락 154 내지 158 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
161.
단락 154 내지 160 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
162.
단락 154 내지 161 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
163.
단락 154 내지 162 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
164.
단락 155 내지 163 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
165.
단락 155 내지 164 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
166.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 천식을 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-IL-5 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
167.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 천식을 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL-5 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
168.
단락 166 또는 167에 있어서,
항-IL-5 mAb가 메폴리주맙인 방법.
169.
단락 166 내지 168 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
170.
단락 166 내지 169 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
171.
단락 170에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 115의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 116의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
172.
단락 166 내지 170 중 어느 하나에 있어서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
173.
단락 166 내지 172 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
174.
단락 166 내지 173 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
175.
단락 166 내지 174 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
176.
단락 167 내지 175 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
177.
단락 167 내지 176 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
178.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 죽상경화성 심혈관계 질환(ACD), 죽상경화성 플라크 형성, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 또는 고콜레스테롤혈증 이상지질혈증을 포함하는 HeFH, HoFH, 이상지질혈증, 심혈관계 질환을 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-PCSK9, 항-ANGPTL3, 항-OxPL mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
179.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 죽상경화성 심혈관계 질환(ACD), 죽상경화성 플라크 형성, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 또는 고콜레스테롤혈증을 포함하는 HeFH, HoFH, 이상지질혈증, 심혈관계 질환을 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-PCSK9, 항-OxPL, 또는 항-ANGPTL3 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
180.
단락 178 또는 179에 있어서,
항-PCSK9이 알리로쿠맙 또는 에볼로쿠맙이거나, 항-ANGPTL3 mAb가 에비나쿠맙이거나 항-OxPL이 E06인 방법.
181.
단락 178 내지 180 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
182.
단락 178 내지 181 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 21의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 23의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 서열번호 25의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 59의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
183.
단락 182에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 121의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 122의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 123의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 124의 뉴클레오티드 서열; 중쇄를 코딩하는 서열번호 125의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 126의 뉴클레오티드 서열; 또는 서열번호 159의 뉴클레오티드 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 160의 뉴클레오티드 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
184.
단락 178 내지 182 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
185.
단락 178 내지 184 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
186.
단락 178 내지 185 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
187.
단락 178 내지 186 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
188.
단락 179 내지 187 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
189.
단락 179 내지 188 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
190.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 골다공증을 치료하거나, 유방암 또는 전립선암 환자에서 골량을 증가시키거나, 골 전이로 인한 골격계 합병증을 예방하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-RANKL mAb, 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
191.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 골다공증을 치료하거나, 유방암 또는 전립선암 환자에서 골량을 증가시키거나, 골 전이로 인한 골격계 합병증을 예방하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-RANKL mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
192.
단락 190 또는 191에 있어서,
항-RANKL mAb가 데노수맙인 방법.
193.
단락 190 내지 192 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
194.
단락 190 내지 193 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 27의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
195.
단락 194에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 128의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 127의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
196.
단락 190 내지 194 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
197.
단락 190 내지 196 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
198.
단락 190 내지 197 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
199.
단락 190 내지 198 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
200.
단락 191 내지 199 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
201.
단락 191 내지 200 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
202.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 전이성 흑색종, 림프종, 비소세포 폐 암종, 두경부 편평세포 암, 요로상피 암종, 현미부수체 고-불안정성 암, 위암, 신장 세포 암종, 미스매치 회복 결핍 전이성 결장암, 또는 간세포 암종을 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, PD-1 차단제 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
203.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 전이성 흑색종, 림프종, 비소세포 폐 암종, 두경부 편평세포 암, 요로상피 암종, 현미부수체 고-불안정성 암, 위암, 신장 세포 암종, 미스매치 회복 결핍 전이성 결장암, 또는 간세포 암종을 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, PD-1 차단제 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
204.
단락 202 또는 203에 있어서,
PD-1 차단제 mAb가 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙인 방법.
205.
단락 202 내지 204 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
206.
단락 202 내지 205 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 29의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 31의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
207.
단락 206에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 129의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 130의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 131의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 132의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
208.
단락 202 내지 206 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
209.
단락 202 내지 208 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
210.
단락 202 내지 209 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
211.
단락 202 내지 210 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
212.
단락 203 내지 211 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
213.
단락 203 내지 212 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
214.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 전신 홍반성 루푸스(SLE)를 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-BLyS mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
215.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 SLE를 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-BLyS mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
216.
단락 214 또는 215에 있어서,
항-BLyS mAb가 벨리무맙인 방법.
217.
단락 214 내지 216 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
218.
단락 214 내지 217 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 41의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 42의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
219.
단락 218에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 139의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 142의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
220.
단락 214 내지 218 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
221.
단락 214 내지 220 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
222.
단락 214 내지 221 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
223.
단락 214 내지 222 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
224.
단락 215 내지 223 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
225.
단락 215 내지 224 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
226.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 신혈관 연령-관련 황반 변성(nAMD), 건성 AMD, 당뇨 망막병증, 당뇨병성 황반부종(diabetic macular edema)(DME), 망막 정맥 폐쇄(retinal vein occlusion)(RVO), 병적 근시, 또는 결절 맥락막 혈관병증을 포함하는 안구 장애를 치료하는 방법으로서, 인간 망막 세포에 의해 생산된, 항-MMP9, 항-VEGF 또는 항-fD mAb, 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 망막에 전달하는 것을 포함하는 방법.
227.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 nAMD, 건성 AMD, 당뇨 망막병증, DME, RVO, 병적 근시, 또는 결절 맥락막 혈관병증을 포함하는 안구 장애를 치료하는 방법으로서,
인간 망막 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-MMP9, 항-VEGF 또는 항-fD mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 대상체에 망막하로, 유리체내로 또는 맥락막상으로 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
228.
단락 226 또는 227에 있어서,
항-MMP9, 항-VEGF 또는 항-fD mAb가 안데칼릭시맙, 라니비주맙, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 또는 람팔리주맙인 방법.
229.
단락 226 내지 228 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
230.
단락 226 내지 229 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 33의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 35의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 37의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 39의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 40의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 45의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 46의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
231.
단락 230에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 133의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 134의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 135의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 136의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 137의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 138의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 139의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 140의 뉴클레오티드 서열; 또는 중쇄를 코딩하는 서열번호 145의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 146의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
232.
단락 226 내지 230 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
233.
단락 226 내지 232 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
234.
단락 226 내지 233 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
235.
단락 226 내지 234 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
236.
단락 227 내지 235 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
237.
단락 227 내지 236 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 망막 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
238.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 낭포성 섬유증(cystic fibrosis)(CF), 류마티스 관절염(RA), UC, CD, 고형 종양, 췌장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평상피 세포 암종, 식도위 선암종, 위암, 대장암, 또는 유방암을 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-MMP9 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
239.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 낭포성 섬유증(CF), 류마티스 관절염(RA), UC, CD, 고형 종양, 췌장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평상피 세포 암종, 식도위 선암종, 위암, 대장암, 또는 유방암을 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-MMP9 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
240.
단락 238 또는 239에 있어서,
항-MMP9 mAb가 안데칼릭시맙인 방법.
241.
단락 238 내지 240 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
242.
단락 238 내지 241 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 45의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 46의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
243.
단락 242에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 145의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 146의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
244.
단락 238 내지 242 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
245.
단락 238 내지 244 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
246.
단락 238 내지 245 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
247.
단락 238 내지 246 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
248.
단락 239 내지 247 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
249.
단락 239 내지 248 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
250.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 유전성 혈관부종을 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-칼리크레인 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
251.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 유전성 혈관부종을 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-칼리크레인 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
252.
단락 250 또는 251에 있어서,
항-칼리크레인 mAb가 라나델루맙인 방법.
253.
단락 250 내지 252 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
254.
단락 250 내지 253 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 47의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 48의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
255.
단락 254에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 147의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 148의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
256.
단락 250 내지 255 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
257.
단락 250 내지 256 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
258.
단락 250 내지 257 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
259.
단락 250 내지 258 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
260.
단락 251 내지 259 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
261.
단락 251 내지 260 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
262.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 판상형 건선, 또는 궤양성 대장염을 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에 의해 생산된, 항-TNF-알파 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
263.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 판상형 건선, 또는 궤양성 대장염을 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-TNF-알파 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 대상체의 간 또는 근육에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
264.
단락 262 또는 263에 있어서,
항-TNF-알파 mAb가 아달리무맙 또는 인플릭시맙인 방법.
265.
단락 262 내지 264 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
266.
단락 262 내지 265 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 49의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 50의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 또는 서열번호 51의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 52의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
267.
단락 266에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 149의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 150의 뉴클레오티드 서열; 중쇄를 코딩하는 서열번호 151의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 152의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
268.
단락 262 내지 266 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
269.
단락 262 내지 268 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
270.
단락 262 내지 269 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
271.
단락 262 내지 270 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
272.
단락 263 내지 271 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
273.
단락 263 내지 272 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
274.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 PNH 또는 aHUS를 치료하는 방법으로서, 인간 간 세포에 의해 생산된, 항-C5 또는 C5a 단백질 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 상기 인간 대상체의 순환계에 전달하는 것을 포함하는 방법.
275.
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 PNH 또는 aHUS를 치료하는 방법으로서,
인간 간 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-C5 또는 C5a 단백질 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터의 치료적 유효량을 상기 대상체의 간에 투여하여, 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 HuPTM 형태를 방출하는 저장소가 형성되는 것
을 포함하는 방법.
276.
단락 274 또는 275에 있어서,
항-C5 또는 C5a 단백질 mAb, 또는 이의 항원 결합 단편이 에쿨리주맙인 방법.
277.
단락 274 내지 276 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 Fab, F(ab')2, 또는 scFv인 방법.
278.
단락 274 내지 277 중 어느 하나에 있어서,
항원-결합 단편이 서열번호 43의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인, 방법.
279.
단락 278에 있어서,
전이유전자가 중쇄를 코딩하는 서열번호 143의 뉴클레오티드 서열 및 경쇄를 코딩하는 서열번호 144의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인, 방법.
280.
단락 274 내지 279 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 초고당화된 돌연변이체인 방법.
281.
단락 274 내지 280 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 알파 2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인, 방법.
282.
단락 274 내지 281 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 당화되지만, 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않는 것인, 방법.
283.
단락 274 내지 282 중 어느 하나에 있어서,
mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 티로신 황산화를 함유하는 것인, 방법.
284.
단락 275 내지 283 중 어느 하나에 있어서,
재조합 발현 벡터가 AAV8 또는 AAV9인 방법.
285.
단락 275 내지 284 중 어느 하나에 있어서,
상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편의 상기 HuPTM 형태의 생산이 배양에서 인간 간 세포 또는 근육 세포를 상기 재조합 뉴클레오티드 발현 벡터로 형질도입하는 것 및 상기 mAb 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것에 의해 확인되는 것인, 방법.
제조 방법
286.
재조합 AAV를 생산하는 방법으로서,
(a) 다음을 함유하는 숙주 세포를 배양하는 것:
(i) AAV ITR에 인접한 cis 발현 카세트를 포함하되, cis 발현 카세트가 인간 세포에서 전이유전자의 발현을 제어할 발현 제어 요소에 작동가능하게 연결된 치료 항체를 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈;
(ii) AAV ITR이 결여된 trans 발현 카세트로서, 배양 내의 숙주 세포에서 AAV rep 및 캡시드 단백질의 발현을 추진하고 trans에서 rep 및 cap 단백질을 공급하는 발현 제어 요소에 작동가능하게 연결된 AAV rep 및 캡시드 단백질을 코딩하는 trans 발현 카세트;
(iii) AAV 캡시드 단백질에 의한 인공 게놈의 복제 및 패키징을 허용하기에 충분한 아데노바이러스 헬퍼 기능; 및
(b) 세포 배양으로부터의 인공 게놈을 이입하는 재조합 AAV를 회수하는 것
을 포함하는 방법.
287.
제286항에 있어서,
전이유전자가 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, BAN2401, aTAU, 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 또는 갈카네주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
288.
제286항 또는 제287항에 있어서,
AAV 캡시드 단백질이 AAV9 또는 AAVrh10 캡시드 단백질인 방법.
289.
제286항에 있어서,
전이유전자가 익세키주맙, 세쿠키누맙 또는 우스테키누맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
290.
제286항에 있어서,
전이유전자가 나탈리주맙 또는 베돌리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
291.
제286항에 있어서,
전이유전자가 두필루맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
292.
제286항에 있어서,
전이유전자가 메폴리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
293.
제286항에 있어서,
전이유전자가 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 에비나쿠맙 또는 E06의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
294.
제286항에 있어서,
전이유전자가 데노수맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
295.
제286항에 있어서,
전이유전자가 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
296.
제286항에 있어서,
전이유전자가 벨리무맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
297.
제286항에 있어서,
전이유전자가 라니비주맙, 베바시주맙, 또는 람팔리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
298.
제286항에 있어서,
전이유전자가 안데칼릭시맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
299.
제286항에 있어서,
전이유전자가 라나델루맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
300.
제286항에 있어서,
전이유전자가 아달리무맙 또는 인플릭시맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
301.
제286항에 있어서,
전이유전자가 에쿨리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 mAb 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 것인, 방법.
302.
제286항 또는 제289항 내지 제301항 중 어느 하나에 있어서,
AAV 캡시드 단백질이 AAV8 또는 AAV9 캡시드 단백질인 방법.
4. 도면의 간단한 설명
본 특허 또는 출원 파일은 컬러로 만들어진 적어도 하나의 도면을 함유한다. 컬러 도면(들)을 갖는 이 특허 또는 특허 출원 공개의 사본은 요청 및 필요 수수료의 지불시 관공서에 의해 제공될 것이다.
도 1. AAV ITR에 인접한, 발현 요소에 의해 제어되는 치료 mAb의 Fab 영역의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 카세트를 함유하는 rAAV 벡터 게놈 구조체의 도식.
도 2a-f. CNS 표적에 대한 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 항-Aβ, 아두카누맙 Fab(도 2a); 항-Aβ, 크레네주맙 Fab(도 2b); 항-Aβ, 간테네루맙 Fab(도 2c), 항-tau 단백질, aTAU Fab(도 2d), 및 항-CGRPR, 에레누맙 Fab(도 2e), 및 항-Aβ BAN2401(도 2f). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고; 아스파라긴(N) 당화 부위는 자홍색으로 강조되고; 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 중쇄 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 3a-e. 인터류킨에 대한 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 항-IL4R, 두필루맙(도 3a); 항-IL-17, 익세키주맙(도 3b); 세쿠키누맙(도 3c); 항-IL-12/IL-23, 우스테키누맙(도 3d); 및 항-IL5, 메폴리주맙(도 3e). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 중쇄 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 4a-4b. 인테그린에 대한 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 베돌리주맙(도 4a) 및 나탈리주맙(도 4b). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 중쇄 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 5a-d. PCSK9에 대한 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 알리로쿠맙(도 5a); 에볼로쿠맙(도 5b); ANGPTL3: 에비나쿠맙(도 5c), OxPL: E06-scFv. 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 6. RANKL에 대한 치료 항체인 데노수맙의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열. 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 7a 및 b. PD-1 차단제인 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 니볼루맙(도 7a); 및 펨브롤리주맙(도 7b). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 8a-h. 생물학적 인자에 지시된 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 항-VEGF, 라니비주맙(도 8a), 베바시주맙(도 8b), 및 브롤루시주맙(도 8d); 항-fD, 람팔리주맙(도 8c); 항-BLyS, 벨리무맙(도 8e); 항-인간 C5 보체 단백질, 에쿨리주맙(도 8f); 항-MMP 9, 안데칼릭시맙(도 8g); 및 항-칼리크레인, 라나델루맙(도 8h). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 9a 및 b. TNF-알파에 지시된 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 아달리무맙(도 9a) 및 인플릭시맙(도 9b). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 10. 전장 mAb 또는 항원-결합 도메인의 HuGlyFab 영역에 부착될 수 있는 글리칸. (Bondt et al., 2014, Mol & Cell Proteomics 13.1: 3029-3039로부터 채택됨).
도 11a 및 b. 본원에 개시된 치료 항체의 중쇄(도 11a)(등장 순서로 각각 서열번호 283-299, 59, 300-302, 313, 303, 39 및 304-310) 및 경쇄(도 11b)(등장 순서로 각각 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 60, 58, 36, 54, 311, 314, 312, 38, 234, 42, 44, 48, 247 및 235) Fab 부분의 아미노산 서열의 아미노산 서열 정렬. Fab 영역의 초고당화된 변이체를 생산하기 위해 치환될 수 있는 위치는 녹색으로 강조된다. 인간 세포에 의해 Fab 영역의 초고당화를 야기해야 하는 4 개의 치환(중쇄에서 1 개 및 경쇄에서 3 개)은 아미노산 잔기 위치 상부에 주석이 달린다. (Fab 도메인 상에 추가 당화 부위를 함유하도록 mAb 또는 항원-결합 단편을 조작하기 위함, 예를 들어 전장 항체의 Fab 도메인 상에서 초고당화되는 항체의 유도체의 기재에 대한 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고).
도 12. AAV 캡시드 1 - 9의 Clustal 다중 서열 정렬. 아미노산 치환(하부 열에서 볼드체로 나타냄)이 다른 정렬된 AAV 캡시드의 상응하는 위치로부터 아미노산 잔기를 "모집"함으로써 AAV9 및 AAV8 캡시드에 대해 이루어질 수 있다. 적색으로 나타낸 서열 = 초가변 영역. AAV 캡시드의 아미노산 서열은 다음과 같이 서열번호가 지정된다: AAV1은 서열번호 71이고; AAV2는 서열번호 72이고; AAV3-3은 서열번호 73이고; AAV4-4는 서열번호 74이고; AAV5는 서열번호 75이고; AAV6은 서열번호 76이고; AAV7은 서열번호 77이고; AAV8은 서열번호 78이고; AAV9는 서열번호 79이고; hu31은 서열번호 81이고; hu32는 서열번호 82이다.
본 특허 또는 출원 파일은 컬러로 만들어진 적어도 하나의 도면을 함유한다. 컬러 도면(들)을 갖는 이 특허 또는 특허 출원 공개의 사본은 요청 및 필요 수수료의 지불시 관공서에 의해 제공될 것이다.
도 1. AAV ITR에 인접한, 발현 요소에 의해 제어되는 치료 mAb의 Fab 영역의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 카세트를 함유하는 rAAV 벡터 게놈 구조체의 도식.
도 2a-f. CNS 표적에 대한 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 항-Aβ, 아두카누맙 Fab(도 2a); 항-Aβ, 크레네주맙 Fab(도 2b); 항-Aβ, 간테네루맙 Fab(도 2c), 항-tau 단백질, aTAU Fab(도 2d), 및 항-CGRPR, 에레누맙 Fab(도 2e), 및 항-Aβ BAN2401(도 2f). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고; 아스파라긴(N) 당화 부위는 자홍색으로 강조되고; 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 중쇄 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 3a-e. 인터류킨에 대한 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 항-IL4R, 두필루맙(도 3a); 항-IL-17, 익세키주맙(도 3b); 세쿠키누맙(도 3c); 항-IL-12/IL-23, 우스테키누맙(도 3d); 및 항-IL5, 메폴리주맙(도 3e). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 중쇄 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 4a-4b. 인테그린에 대한 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 베돌리주맙(도 4a) 및 나탈리주맙(도 4b). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 중쇄 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 5a-d. PCSK9에 대한 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 알리로쿠맙(도 5a); 에볼로쿠맙(도 5b); ANGPTL3: 에비나쿠맙(도 5c), OxPL: E06-scFv. 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 6. RANKL에 대한 치료 항체인 데노수맙의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열. 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 7a 및 b. PD-1 차단제인 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 니볼루맙(도 7a); 및 펨브롤리주맙(도 7b). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 8a-h. 생물학적 인자에 지시된 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 항-VEGF, 라니비주맙(도 8a), 베바시주맙(도 8b), 및 브롤루시주맙(도 8d); 항-fD, 람팔리주맙(도 8c); 항-BLyS, 벨리무맙(도 8e); 항-인간 C5 보체 단백질, 에쿨리주맙(도 8f); 항-MMP 9, 안데칼릭시맙(도 8g); 및 항-칼리크레인, 라나델루맙(도 8h). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 9a 및 b. TNF-알파에 지시된 치료 항체의 Fab 영역에 대한 전이유전자 구조체의 아미노산 서열: 아달리무맙(도 9a) 및 인플릭시맙(도 9b). 당화 부위는 볼드체이다. 글루타민 당화 부위는 녹색으로 강조되고 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청색으로 강조되고; 티로신-O-황산화 부위(이탤릭체)는 황색으로 강조된다. 힌지 영역은 회색으로 강조된다.
도 10. 전장 mAb 또는 항원-결합 도메인의 HuGlyFab 영역에 부착될 수 있는 글리칸. (Bondt et al., 2014, Mol & Cell Proteomics 13.1: 3029-3039로부터 채택됨).
도 11a 및 b. 본원에 개시된 치료 항체의 중쇄(도 11a)(등장 순서로 각각 서열번호 283-299, 59, 300-302, 313, 303, 39 및 304-310) 및 경쇄(도 11b)(등장 순서로 각각 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 60, 58, 36, 54, 311, 314, 312, 38, 234, 42, 44, 48, 247 및 235) Fab 부분의 아미노산 서열의 아미노산 서열 정렬. Fab 영역의 초고당화된 변이체를 생산하기 위해 치환될 수 있는 위치는 녹색으로 강조된다. 인간 세포에 의해 Fab 영역의 초고당화를 야기해야 하는 4 개의 치환(중쇄에서 1 개 및 경쇄에서 3 개)은 아미노산 잔기 위치 상부에 주석이 달린다. (Fab 도메인 상에 추가 당화 부위를 함유하도록 mAb 또는 항원-결합 단편을 조작하기 위함, 예를 들어 전장 항체의 Fab 도메인 상에서 초고당화되는 항체의 유도체의 기재에 대한 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고).
도 12. AAV 캡시드 1 - 9의 Clustal 다중 서열 정렬. 아미노산 치환(하부 열에서 볼드체로 나타냄)이 다른 정렬된 AAV 캡시드의 상응하는 위치로부터 아미노산 잔기를 "모집"함으로써 AAV9 및 AAV8 캡시드에 대해 이루어질 수 있다. 적색으로 나타낸 서열 = 초가변 영역. AAV 캡시드의 아미노산 서열은 다음과 같이 서열번호가 지정된다: AAV1은 서열번호 71이고; AAV2는 서열번호 72이고; AAV3-3은 서열번호 73이고; AAV4-4는 서열번호 74이고; AAV5는 서열번호 75이고; AAV6은 서열번호 76이고; AAV7은 서열번호 77이고; AAV8은 서열번호 78이고; AAV9는 서열번호 79이고; hu31은 서열번호 81이고; hu32는 서열번호 82이다.
5. 발명의 상세한 설명
치료 mAb를 이용해 치료하는 것으로 표시된 질환 또는 병태로 진단된 환자(인간 대상체)에 대한 완전 인간 번역후 변형된(HuPTM) 치료 단클론 항체(mAb) 또는 치료 mAb의 HuPTM 항원-결합 단편(예를 들어, 치료 mAb의 완전 인간-당화된 Fab(HuGlyFab))의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 전달은 mAb 또는 이의 항원-결합 단편이 이의 치료 효과를 발휘하는 표적 조직에 HuPTM mAb 또는 치료 mAb의 항원-결합 단편, 예를 들어 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 환자의 조직 또는 장기에 생성하기 위해 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 치료 mAb를 이용해 치료하는 것으로 표시된 병태로 진단된 환자(인간 대상체)에게 치료 mAb 또는 이의 항원-결합 단편(또는 이의 초고당화된 유도체)을 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 투여함으로써 - 유리하게 달성될 수 있다.
전이유전자에 코딩된 HuPTM mAb 또는 HuPTM 항원-결합 단편은, 비제한적으로, 하기에 결합하는 치료 항체의 전장 또는 항원-결합 단편을 포함한다:
· 아밀로이드 베타(Aβ 또는 A베타) 펩티드, Tau 단백질, 및 CGRP 수용체를 포함한, 신경계 표적,
· IL4R, IL17A, IL-5, 및 IL12/IL23을 포함한, 인터류킨 또는 인터류킨 수용체,
· 인테그린-알파-4를 포함한, 인테그린,
· PCSK9, ANGPTL3, 또는 산화된 인지질, 예컨대 OxPL,
· RANKL,
· PD-1, 또는 PD-L1 또는 PD-L2,
· BLyS(B-림프구 자극제, B-세포 활성화 인자(BAFF)로도 알려짐),
· VEGF, fD, 및 MMP9(기질 금속단백분해효소 9)을 포함한, 안구 표적;
· TNF-알파; 및
· 혈장 단백질 표적, 예컨대 C5 및 C5a 보체 단백질을 포함한 인간 보체 단백질, 및 혈장 칼리크레인;
또는 Fab 도메인 상에 추가 당화 부위를 함유하도록 조작된 이러한 mAb 또는 항원-결합 단편(예를 들어, 전장 항체의 Fab 도메인 상에서 초고당화되는 항체의 유도체의 기재에 대한 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고). 상술한 항원 결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 하기 표 4에서 제공되고, 이들 항원 결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 코돈 최적화된 뉴클레오티드 서열은 표 5에서 제공된다.
전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 비-복제성 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함한다. rAAV는 여러가지 이유로 특히 매력적인 벡터이다 - 이들은 비-복제성 세포를 형질도입할 수 있으므로, 낮은 수준에서 세포 분열이 발생하는 조직, 예컨대 CNS에 전이유전자를 전달하기 위해 사용될 수 있고; 이들은 특정 선택 장기를 우선적으로 표적화하기 위해 변형될 수 있고; 소망하는 조직 특이성을 얻고/얻거나 일부 AAV에 대해 기존의 부모 항체에 의한 중화를 회피하기 위해 선택하기 위한 수백개의 캡시드 혈청형이 있다. 이러한 rAAV는, 비제한적으로, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10 또는 AAVrh20 중 1 이상으로부터의 캡시드 성분을 포함하는 AAV계 벡터를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본원에서 제공되는 AAV계 벡터는 AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10 또는 AAVrh20 혈청형 중 1 이상으로부터의 캡시드를 포함한다.
그러나, 비제한적으로, 렌티바이러스 벡터; 백시니아 바이러스 벡터, 또는 "네이키드 DNA" 구조체로 지칭되는 비-바이러스 발현 벡터를 포함하는 다른 바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 전이유전자의 발현은 구조성 또는 조직-특이적 발현 제어 요소에 의해 제어될 수 있다.
유전자 요법 구조체는 중쇄 및 경쇄 둘 다가 발현되도록 설계된다. 더욱 구체적으로, 중쇄 및 경쇄는 대략 동일한 양으로 발현되어야 하고, 다시 말해, 중쇄 및 경쇄는 대략 1:1 비의 중쇄 대 경쇄로 발현된다. 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열은 중쇄 및 경쇄가 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리되어 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 발현되는 단일 구조체로 조작될 수 있다. 특정 실시양태에서, 코딩 서열은 Fab 또는 F(ab')2 또는 scFv를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 핵산(예를 들어, 폴리뉴클레오티드) 및 핵산 서열은 예를 들어, 당업자에게 알려진 임의의 코돈-최적화 기술을 통해 코돈-최적화될 수 있다(예를 들어, Quax et al., 2015, Mol Cell 59:149-161에 의한 리뷰 참고). 치료 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 코돈 최적화된 뉴클레오티드 서열이 표 5에 개시된다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 적절한 번역후 처리 및 분비를 보장하기 위해 리더(leader)를 요구한다(N-말단 쇄만이 리더 서열을 요구하는 scFv로서 발현되지 않는 경우). 인간 세포에서 치료 항체의 중쇄 및 경쇄의 발현을 위해 유용한 리더 서열이 본원에 개시된다. 예시적인 재조합 발현 구조체를 도 1에 나타내었다.
대상체의 형질도입된 세포에 의해 생산된 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구적 저장소를 대상체에 생성하기 위해, HuPTMmAb 또는 HuPTM Fab(HuPTM scFv를 포함함)의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 치료 mAb의 전장 또는 HuPTM Fab 또는 다른 항원 결합 단편, 예컨대 scFv를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 mAb에 대해 표시된 질환으로 진단된 환자(인간 대상체)에 투여함으로써, 달성되는 질환의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다. HuPTMmAb 또는 HuPTM Fab 또는 HuPTM scFv를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 인간 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다.
인간 대상체에 대한 투여를 위해 적합한 약학 조성물은 생리학적으로 양립가능한 수성 버퍼, 계면활성제 및 선택적 부형제를 포함하는 제형 버퍼 중 재조합 벡터의 현탁액을 포함한다. 이러한 제형 버퍼는 다당류, 계면활성제, 중합체, 또는 오일 중 1 이상을 포함할 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 전장 또는 HuPTM Fab 또는 이의 다른 항원 결합 단편이 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있고, 당단백질이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 재조합 당단백질 생산을 위해 사용될 수 있는 인간 세포주는 몇몇을 들자면, 비제한적으로, 인간 배아 신장 293 세포(HEK293), 섬유육종 HT-1080, HKB-11, CAP, HuH-7, 및 망막 세포주, PER.C6, 또는 RPE를 포함한다(예를 들어, HuPTM Fab 또는 HuPTM scFv 산물, 예를 들어 HuPTM Fab 당단백질의 재조합 생산을 위해 사용될 수 있는 인간 세포주의 리뷰에 대한 그 전체가 참고로 포함되는 Dumont et al., 2015, Crit. Rev. Biotechnol. 36(6):1110-1122 참고). 완전한 당화, 특히 시알화, 및 티로신-황산화를 보장하기 위해, 생산을 위해 사용되는 세포주는 숙주 세포가 α-2,6-시알릴트랜스퍼라아제(또는 α-2,3- 및 α-2,6-시알릴트랜스퍼라아제 둘 다) 및/또는 인간 세포에서 티로신-O-황산화를 책임지는 TPST-1 및 TPST-2 효소를 공동-발현하도록 조작함으로써 향상될 수 있다.
유전자 요법 또는 단백질 요법 접근시에 생산되는 모든 분자가 완전히 당화되고 황산화될 필요는 없다. 오히려, 생산된 당단백질 집단은 효능을 입증하기 위해 충분한 당화(2,6-시알화를 포함함) 및 황산화를 가져야 한다. 본 발명의 목표는 질환의 진행을 늦추거나 정지시키는 것이다.
다른 이용가능한 치료의 투여가 수반되는 환자에 대한 전장 또는 HuPTM Fab 또는 이의 항원 결합 단편의 전달을 포함하는 병용 요법이 본 발명의 방법에 의해 포함된다. 추가의 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 이러한 추가 치료는, 비제한적으로, 치료 mAb와의 공동-요법을 포함할 수 있다.
또한, 바이러스 벡터, 특히 AAV계 바이러스 벡터를 제조하는 방법이 제공된다. 구체적 실시양태에서, AAV ITR에 인접한 cis 발현 카세트(cis 발현 카세트는 인간 세포에서 전이유전자의 발현을 제어할 발현 제어 요소에 작동가능하게 연결된 치료 항체를 코딩하는 전이유전자를 포함함)를 포함하는 인공 게놈; AAV ITR이 결여된 trans 발현 카세트(trans 발현 카세트는 배양 내의 숙주 세포에서 AAV rep 및 캡시드 단백질의 발현을 추진하고 trans에서 rep 및 cap 단백질을 공급하는 발현 제어 요소에 작동가능하게 연결된 AAV rep 및 캡시드 단백질을 코딩함); AAV 캡시드 단백질에 의한 인공 게놈의 복제 및 패키징을 허용하기에 충분한 아데노바이러스 헬퍼 기능을 함유하는 숙주 세포를 배양하는 것; 및 세포 배양으로부터의 인공 게놈을 이입하는 재조합 AAV를 회수하는 것을 포함하는, 재조합 AAV를 생선하는 방법이 제공된다.
5.1 구조체
HuPTMmAb 또는 이의 항원-결합 단편, 특히 HuGlyFab, 또는 HuPTMmAb 항원-결합 단편의 초고당화된 유도체를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체가 본원에 제공된다. 본원에서 제공되는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체는 표적 세포에 대한 전이유전자의 전달을 위한 임의의 적합한 방법을 포함한다. 전이유전자의 전달 수단은 바이러스 벡터, 리포솜, 다른 지질-함유 복합체, 다른 거대분자 복합체, 합성 변형 mRNA, 비변형 mRNA, 소분자, 비-생물학적 활성 분자(예를 들어, 금 입자), 중합된 분자(예를 들어, 덴드리머), 네이키드 DNA, 플라스미드, 파아지, 트랜스포존, 코스미드, 또는 에피솜을 포함한다. 일부 실시양태에서, 벡터는 표적화된 벡터, 예를 들어 망막 색소 상피 세포, CNS 세포, 근육 세포, 또는 간 세포에 표적화된 벡터이다.
일부 양태에서, 본 발명은 사용을 위한 핵산을 제공하되, 핵산은 전이유전자의 발현을 위해 표적화된 조직에서의 발현을 위해 선택되는 프로모터, 예를 들어, 비제한적으로, CB7프로모터(도 1 참고), 거대세포바이러스(CMV) 프로모터, 라우스 육종 바이러스(Rous sarcoma virus)(RSV) 프로모터, GFAP 프로모터(glial fibrillary acidic protein(신경교 섬유질 산성 단백질)), MBP 프로모터(myelin basic protein(수초 염기성 단백질)), MMT 프로모터, EF-1 알파 프로모터, UB6 프로모터, 닭 베타-액틴 프로모터, CAG 프로모터, RPE65 프로모터 및 옵신 프로모터, 간-특이적 프로모터, 예컨대 TBG(Thyroxine-binding Globulin(티록신-결합 글로불린)) 프로모터, APOA2 프로모터, SERPINA1(hAAT) 프로모터, 또는 mIR122 프로모터, 또는 근육-특이적 프로모터, 예컨대 인간 데스민 프로모터 또는 Pitx3 프로모터, 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터 또는 라파마이신-유도성 프로모터에 작동가능하게 연결된, 본원에 기재된 전이유전자와 같은 HuPTMmAb 또는 HuGlyFab 또는 이의 다른 항원-결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원은 1 이상의 핵산(예를 들어, 폴리뉴클레오티드)을 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 핵산은 DNA, RNA, 또는 DNA와 RNA의 조합을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, DNA는 프로모터 서열, 관심 유전자의 서열(전이유전자, 예를 들어 HuPTMmAb 또는 HuGlyFab 또는 다른 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열), 비번역 영역, 및 종결 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열 중 1 이상을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 관심 유전자에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 핵산(예를 들어, 폴리뉴클레오티드) 및 핵산 서열은 예를 들어, 당업자에게 알려진 임의의 코돈-최적화 기술을 통해 코돈-최적화될 수 있다(예를 들어, Quax et al., 2015, Mol Cell 59:149-161에 의한 리뷰 참고). 본원에서는 표 5에서 인간 세포에서의 발현을 위한 코돈 최적화된 뉴클레오티드 서열이 HuGlyFab의 중쇄 및 경쇄에 대해 제공된다.
구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 구조체는 다음 성분을 포함한다: (1) 발현 카세트에 인접하는 AAV2 역위 말단 반복부; (2) 1 이상의 제어 요소, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 폴리 A 시그널; 및 (3) 동일한 양의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 발현을 보장하는, 자가-절단 푸린(furin)(F)/F2A 링커에 의해 분리된, 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 예시적 구조체를 도 1에 나타내었다.
5.1.1 mRNA 벡터
특정 실시양태에서, DNA 벡터에 대한 대안으로서, 본원에서 제공되는 벡터는 관심 유전자(예를 들어, 전이유전자, 예를 들어 HuPTMmAb 또는 HuGlyFab 또는 이의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 변형 mRNA이다. 망막 색소 상피 세포에 대한 전이유전자의 전달을 위한 변형 및 비변형 mRNA의 합성은 예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Hansson et al., J. Biol. Chem., 2015, 290(9):5661-5672에서 교시되어 있다. 특정 실시양태에서, 본원은 HuPTMmAb 또는 HuPTM Fab, 또는 HuPTM scFv를 코딩하는 변형 mRNA를 제공한다.
5.1.2 바이러스 벡터
바이러스 벡터는 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스(AAV, 예를 들어 AAV8, AAV9, AAVrh10), 렌티바이러스, 헬퍼-의존성 아데노바이러스, 단순 포진 바이러스, 폭스바이러스, 일본의 헤마글루티닌 바이러스(hemagglutinin virus of Japan)(HVJ), 알파바이러스, 백시니아 바이러스, 및 레트로바이러스 벡터를 포함한다. 레트로바이러스 벡터는 뮤린 백혈병 바이러스(MLV)- 및 인간 면역결핍 바이러스(HIV)-계 벡터를 포함한다. 알파바이러스 벡터는 셈리키 삼림열 바이러스(semliki forest virus)(SFV) 및 신드비스(sindbis) 바이러스(SIN)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 재조합 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 이들이 인간에서 복제-결핍성이도록 변형된다. 특정 실시양태에서, 바이러스 벡터는 하이브리드 벡터, 예를 들어 "무력한(helpless)" 아데노바이러스 벡터 내에 위치된 AAV 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원은 제1 바이러스로부터의 바이러스 캡시드 및 제2 바이러스로부터의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 바이러스 벡터를 제공한다. 구체적 실시양태에서, 제2 바이러스는 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitus virus)(VSV)이다. 더욱 구체적인 실시양태에서, 외피 단백질은 VSV-G 단백질이다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 HIV계 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 HIV-계 벡터는 적어도 2 개의 폴리뉴클레오티드를 포함하되, gag 및 pol 유전자는 HIV 게놈으로부터의 것이고 env 유전자는 다른 바이러스로부터의 것이다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 단순 포진 바이러스-계 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 단순 포진 바이러스-계 벡터는 1 이상의 즉시 초기(immediate early)(IE) 유전자를 포함하지 않도록 변형되어, 이들을 비-세포독성이 되게 한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 MLV계 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 MLV-계 벡터는 바이러스 유전자 대신 최대 8 kb의 이종 DNA를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 렌티바이러스-계 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 렌티바이러스 벡터는 인간 렌티바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 렌티바이러스 벡터는 비-인간 렌티바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 렌티바이러스 벡터는 렌티바이러스 캡시드 내로 패키징된다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 렌티바이러스 벡터는 다음 요소 중 1 이상을 포함한다: 긴 말단 반복, 프라이머 결합 부위, 폴리퓨린 트랙트(tract), att 부위, 및 이입 부위.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 알파바이러스-계 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 알파바이러스 벡터는 재조합, 복제-결함 알파바이러스이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 알파바이러스 벡터 내의 알파바이러스 레플리콘(replicon)은 이들의 비리온 표면 상에 기능성 이종 리간드를 디스플레이함으로써 특정 세포 유형에 표적화된다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 AAV계 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 AAV-계 벡터는 AAV rep 유전자(복제를 위해 필요함) 및/또는 AAV cap 유전자(캡시드 단백질의 합성을 위해 필요함)를 코딩하지 않는다(rep 및 cap 단백질은 세포를 trans로 패키징함으로써 제공될 수 있음). 다수의 AAV 혈청형이 확인되었다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 AAV-계 벡터는 AAV의 1 이상의 혈청형으로부터의 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 AAV계 벡터는 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, 또는 AAVrh10 중 1 이상으로부터의 캡시드 성분을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본원에서 제공되는 AAV계 벡터는 AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, 또는 AAVrh10 혈청형 중 1 이상으로부터의 성분을 포함한다. 캡시드 단백질이 AAV8 캡시드 단백질(서열번호 78), AAV9 캡시드 단백질(서열번호 79), 또는 AAVrh10 캡시드 단백질(서열번호 80)의 변이체이고, 특히 AAV8 캡시드 단백질(서열번호 78), AAV9 캡시드 단백질(서열번호 79), 또는 AAVrh10 캡시드 단백질(서열번호 80)과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일한 한편, 천연 캡시드의 생물학적 기능을 함유하는 바이러스 벡터가 제공된다. 특정 실시양태에서, 코딩된 AAV 캡시드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개 아미노산 치환을 갖고 AAV8 AAV9 또는 AAVrh10 캡시드의 생물학적 기능을 보유하는 서열번호 78, 79 또는 80의 서열을 갖는다. 도 12는 열 라벨링된 SUBS와의 비교를 기초로 한 정렬된 서열 내의 특정 위치에서 치환될 수 있는 잠재적 아미노산을 갖는 상이한 AAV 혈청형의 캡시드 단백질의 아미노산 서열의 비교 정렬을 제공한다. 따라서, 구체적 실시양태에서, AAV 벡터는 도 12의 SUBS 열에서 확인된 바와 같이 천연 AAV 캡시드 서열 내의 위치에 존재하지 않는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개의 아미노산 치환을 갖는 AAV8, AAV9 또는 AAVrh10 캡시드 변이체를 포함한다. AAVrh10에 대한 서열이 표 4에서 제공된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물 및 방법에서 사용되는 AAV는 그 전체가 참고로 포함되는 Zinn et al., 2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068에 기재된, Anc80 또는 Anc80L65이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용되는 AAV는 다음 아미노산 삽입 중 하나를 포함한다: 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 9,193,956호; 9,458,517호; 및 9,587,282호 및 미국 특허 출원 공개 2016/0376323호에 기재된, LGETTRP(서열번호 162) 또는 LALGETTRP(서열번호 163). 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용되는 AAV는 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 9,193,956호; 9,458,517호; 및 9,587,282호, 및 미국 특허 출원 공개 2016/0376323호, 및 국제 공개 WO 2018/075798호에 기재된, AAV.7m8(변이체를 포함함)이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용되는 AAV는 미국 특허 제9,585,971호에 개시된 임의의 AAV, 예컨대 AAV-PHP.B이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물 및 방법에서 사용되는 AAV는 AAV8 캡시드 및 이들 벡터에 대해 본원에 참고로 포함되는 Charbel Issa et al., 2013, PLoS One 8(4): e60361에 기재된 혈청형 cy5, rh20 또는 rh39의 캡시드로부터 유래된 하이브리드 캡시드 서열을 갖는 AAV2/Rec2 또는 AAV2/Rec3 벡터이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용되는 AAV는 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 다음 특허 및 특허 출원 중 임의의 것에 개시된 AAV이다: 미국 특허 7,906,111호; 8,524,446호; 8,999,678호; 8,628,966호; 8,927,514호; 8,734,809호; US 9,284,357호; 9,409,953호; 9,169,299호; 9,193,956호; 9,458,517호; 및 9,587,282호, 미국 특허 출원 공개 2015/0374803호; 2015/0126588호; 2017/0067908호; 2013/0224836호; 2016/0215024호; 2017/0051257호; 및 국제 특허 출원 PCT/US2015/034799호; PCT/EP2015/053335호.
AAV8-계, AAV9-계, 및 AAVrh10-계 바이러스 벡터는 본원에 기재된 방법 중 일부에서 사용된다. AAV계 바이러스 벡터의 핵산 서열 및 재조합 AAV 및 AAV 캡시드를 제조하는 방법은 예를 들어, 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 7,282,199 B2호, 미국 특허 7,790,449 B2호, 미국 특허 8,318,480 B2호, 미국 특허 8,962,332 B2호 및 국제 특허 출원 PCT/EP2014/076466호에서 교시되어 있다. 일 양태에서, 본원은 전이유전자(예를 들어, HuPTM Fab)를 코딩하는 AAV(예를 들어, AAV8, AAV9 또는 AAVrh10)-계 바이러스 벡터를 제공한다. AAV8, AAV9 및 AAVrh10을 포함한 AAV 캡시드의 아미노산 서열은 도 12 및 표 4에서 제공된다.
특정 실시양태에서, 단일-가닥 AAV(ssAAV)가 상기한 대로 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 자기-상보성 벡터, 예를 들어 scAAV가 사용될 수 있다(예를 들어, 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82, McCarty et al, 2001, Gene Therapy, Vol 8, Number 16, Pages 1248-1254; 및 미국 특허 6,596,535호; 7,125,717호; 및 7,456,683호 참고).
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용되는 바이러스 벡터는 아데노바이러스계 바이러스 벡터이다. 재조합 아데노바이러스 벡터가 HuPTMmAb 또는 HuGlyFab 또는 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자에서의 전달을 위해 사용될 수 있다. 재조합 아데노바이러스는 E1 결실을 가지며, E3 결실이 있거나 없으며, 결실된 영역 내로 삽입된 발현 카세트를 갖는, 제1 세대 벡터일 수 있다. 재조합 아데노바이러스는 E2 및 E4 영역의 전체 또는 부분 결실을 함유하는 제2 세대 벡터일 수 있다. 헬퍼-의존성 아데노바이러스는 아데노바이러스 역위 말단 반복부 및 패키징 시그널(phi)만을 보유한다. 전이유전자는 게놈을 대략 36 kb의 야생형 크기에 가깝게 유지하기 위한 스터퍼 서열(stuffer sequence)이 있거나 없이, 패키징 시그널과 3'ITR 사이에 삽입된다. 아데노바이러스 벡터의 생산을 위한 예시적인 프로토콜은 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Alba et al., 2005, "Gutless adenovirus: last generation adenovirus for gene therapy," Gene Therapy 12:S18-S27에서 찾을 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용되는 바이러스 벡터는 렌티바이러스계 바이러스 벡터이다. 재조합 렌티바이러스 벡터가 HuPTM mAb 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자에서의 전달을 위해 사용될 수 있다. 구조체를 제조하기 위해 4 개 플라스미드가 사용된다: Gag/pol 서열 함유 플라스미드, Rev 서열 함유 플라스미드, 외피 단백질 함유 플라스미드(즉, VSV-G), 및 패키징 요소와 항-VEGF 항원-결합 단편 유전자를 갖는 Cis 플라스미드.
렌티바이러스 벡터 생산을 위해, 4 개 플라스미드는 세포(즉, HEK293계 세포) 내로 공동-형질감염되며, 그에 의해 폴리에틸렌이민 또는 칼슘 포스페이트가 다른 것 중에서도 형질감염제로서 사용될 수 있다. 그 다음에, 렌티바이러스가 상등액에서 수집된다(렌티바이러스는 활성이 되기 위해 세포로부터 발아하는 것이 필요하여, 세포 수집이 필요하거나 이루어질 필요가 없음). 상등액이 여과되고(0.45 ㎛) 그 다음에 마그네슘 클로라이드 및 벤조나아제가 첨가된다. 추가의 다운스트림 과정은 광범위하게 변할 수 있으며, 가장 GMP 양립성인 TFF 및 칼럼 크로마토그래피를 사용할 수 있다. 다른 것은 칼럼 크로마토그래피가 있거나 없이 초원심분리를 사용한다. 렌티바이러스 벡터의 생산을 위한 예시적인 프로토콜은 둘 다 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Lesch et al., 2011, "Production and purification of lentiviral vector generated in 293T suspension cells with baculoviral vectors," Gene Therapy 18:531-538, 및 Ausubel et al., 2012, "Production of CGMP-Grade Lentiviral Vectors," Bioprocess Int. 10(2):32-43에서 찾을 수 있다.
구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 벡터는 벡터가 관련 세포 내로 도입시, HuPTM mAb 항원 결합 단편 또는 HuGlyFab의 당화되고/되거나 티로신 황산화된 변이체가 세포에 의해 발현되도록, HuPTM mAb 항원-결합 단편, 예컨대 HuGlyFab를 코딩하는 것이다.
5.1.3 프로모터 및 유전자 발현의 변형제
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 벡터는 유전자 전달 또는 유전자 발현을 조절하는 성분(예를 들어, "발현 제어 요소")을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 벡터는 유전자 발현을 조절하는 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 벡터는 세포에 대한 결합 또는 표적화에 영향을 주는 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 벡터는 흡수 후 세포 내에서 폴리뉴클레오티드(예를 들어, 전이유전자)의 국소화에 영향을 주는 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 벡터는 예를 들어, 폴리뉴클레오티드를 흡수한 세포를 검출하거나 선택하기 위해, 검출 가능하거나 선택가능한 마커로서 사용될 수 있는 성분을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 프로모터를 포함한다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 구조성 프로모터(constitutive promotor)이다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 CB7 프로모터이다(그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Dinculescu et al., 2005, Hum Gene Ther 16: 649-663 참고). 일부 실시양태에서, CB7 프로모터는 벡터에 의해 추진되는 전이유전자의 발현을 향상시키는 다른 발현 제어 요소를 포함한다. 특정 실시양태에서, 다른 발현 제어 요소는 닭 β-액틴 인트론 및/또는 토끼 β-글로빈 polA 시그널을 포함한다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 TATA 박스를 포함한다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 1 이상의 요소를 포함한다. 특정 실시양태에서, 1 이상의 프로모터 요소는 서로에 대하여 역위되거나 이동될 수 있다. 특정 실시양태에서, 프로모터의 요소는 협조적으로 기능하도록 위치된다. 특정 실시양태에서, 프로모터의 요소는 독립적으로 기능하도록 위치된다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 인간 CMV 즉시 초기 유전자 프로모터, SV40 초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스(RS) 긴 말단 반복부, 및 래트 인슐린 프로모터로 이루어지는 그룹으로부터 선택된 1 이상의 프로모터를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 벡터는 AAV, MLV, MMTV, SV40, RSV, HIV-1, 및 HIV-2 LTR로 이루어지는 그룹으로부터 선택된 1 이상의 긴 말단 반복부(LTR) 프로모터를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 벡터는 1 이상의 조직 특이적 프로모터(예를 들어, 망막 색소 상피 세포-특이적 프로모터, CNS-특이적 프로모터, 간-특이적 프로모터 또는 근육 특이적)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 RPE65 프로모터 또는 옵신 프로모터(망막 세포/CNS 특이적 프로모터)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 간 세포 특이적 프로모터, 예컨대 TBG(티록신-결합 글로불린) 프로모터, APOA2 프로모터, SERPINA1(hAAT) 프로모터, 또는 MIR122 프로모터를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 근육 특이적 프로모터, 예컨대 인간 데스민 프로모터(Jonuschies et al., 2014, Curr. Gene Ther. 14:276-288) 또는 Pitx3 프로모터(Coulon et al., 2007, JBC 282:33192)를 포함한다. 다른 실시양태에서, 바이러스 벡터는 VMD2 프로모터를 포함한다.
특정 실시양태에서, 프로모터는 유도성 프로모터이다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 저산소증-유도성 프로모터이다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 저산소증-유도성 인자(HIF) 결합 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 HIF-1α 결합 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 HIF-2α 결합 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, HIF 결합 부위는 RCGTG 모티프를 포함한다. HIF 결합 부위의 위치 및 서열에 관한 상세내용에 대해서는, 예를 들어 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 , et al., Blood, 2011, 117(23):e207-e217을 참고한다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 HIF 전사 인자 외의 저산소증 유도된 전사 인자에 대한 결합 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 저산소증에서 우선적으로 번역되는 1 이상의 IRES 부위를 포함한다. 저산소증-유도성 유전자 발현 및 이에 관련된 인자에 관한 교시에 대해서는, 예를 들어 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Kenneth and Rocha, Biochem J., 2008, 414:19-29를 참고한다. 구체적 실시양태에서, 저산소증-유도성 프로모터는 인간 N-WASP 프로모터(예를 들어 Salvi, 2017, Biochemistry and Biophysics Reports 9:13-21(N-WASP 프로모터의 교시를 위해 참고로 포함됨) 참고)이거나, 인간 Epo의 저산소증-유도된 프로모터(예를 들어, Tsuchiya et al., 1993, J. Biochem. 113:395-400(Epo 저산소증-유도성 프로모터의 개시에 대해 참고로 포함됨) 참고)이다. 다른 실시양태에서, 프로모터는 약물 유도성 프로모터, 예를 들어 라파마이신 또는 이의 유사체의 투여에 의해 유도되는 프로모터이다. 예를 들어, 약물 유도성 프로모터의 개시에 대해 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 PCT 공개 WO94/18317호, WO 96/20951호, WO 96/41865호, WO 99/10508호, WO 99/10510호, WO 99/36553호, 및 WO 99/41258호, 및 US 7,067,526호의 라파마이신 유도성 프로모터의 개시를 참고한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 프로모터 외의 1 이상의 조절 요소를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 인핸서를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 억제자(repressor)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 인트론 또는 키메라 인트론을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 폴리아데닐화 서열을 포함한다.
5.1.4 시그널 펩티드
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 벡터는 단백질 전달을 조절하는 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 1 이상의 시그널 펩티드를 포함한다. 시그널 펩티드는 또한 본원에서 "리더 서열" 또는 "리더 펩티드"로서 지칭될 수 있다. 특정 실시양태에서, 시그널 펩티드는 전이유전자 산물이 세포에서 적절한 패키징(예를 들어, 당화)을 달성하게 한다. 특정 실시양태에서, 시그널 펩티드는 전이유전자 산물이 세포에서 적절한 국소화를 달성하게 한다. 특정 실시양태에서, 시그널 펩티드는 전이유전자 산물이 세포로부터 분비되게 한다.
유전자 요법 맥락 또는 세포 배양에서 단백질 생산을 위한 시그널 서열을 선택하기 위한 2 개의 일반적인 접근법이 있다. 하나의 접근법은 발현되는 단백질과 상동성인 단백질로부터의 시그널 펩티드를 사용하는 것이다. 예를 들어, 인간 항체 시그널 펩티드는 CHO 또는 다른 세포에서 IgG를 발현하기 위해 사용될 수 있다. 다른 접근법은 발현을 위해 사용되는 특정 숙주에 대해 최적화된 시그널 펩티드를 확인하는 것이다. 시그널 펩티드는 상이한 단백질 또는 심지어 상이한 유기체의 단백질 사이에 상호교환될 수 있으나, 보통 상기 세포 유형의 가장 풍부하게 분비된 단백질의 시그널 서열이 단백질 발현을 위해 사용된다. 예를 들어, 혈장에서 가장 풍부한 단백질인 인간 알부민의 시그널 펩티드는 CHO 세포에서 단백질 생산 수율을 상당히 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 특정 시그널 펩티드는 "표적화후 기능"으로서, 발현된 단백질로부터 절단된 후에 기능을 보유하고 활성을 가할 수 있다. 따라서, 구체적 실시양태에서, 시그널 펩티드는 표적화후 기능을 회피하기 위해, 발현을 위해 사용되는 세포에 의해 분비되는 가장 풍부한 단백질의 시그널 펩티드로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 시그널 서열은 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다에 융합된다. 바람직한 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)(도 2-9 참고)이다. 대안적으로, 눈(CNS를 포함함), 근육, 또는 간에서 HuPTM mAb 또는 Fab의 발현을 위한 적절한 시그널 서열은 각각 하기의 표 1, 2, 및 3에서 제공된다.
표 1. 눈/CNS 조직에서의 발현을 위한 시그널 펩티드.
표 2. 근육 세포에서의 발현을 위한 시그널 펩티드.
표 3. 간 세포에서의 발현을 위한 시그널 펩티드.
5.1.5 폴리시스트론성(polycistronic) 메세지 - IRES 및 F2A 링커 및 scFv 구조체
내부 리보솜 유입 부위. 단일 구조체는 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리된 중쇄 및 경쇄 둘 다를 코딩하여 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 형질도입된 세포에 의해 발현되도록 조작될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 폴리시스트론성(예를 들어, 바이시스트론성(bicistronic)) 메세지를 제공한다. 예를 들어, 바이러스 구조체는 내부 리보솜 유입 부위(IRES) 요소(바이시스트론성 벡터를 생성하기 위한 IRES 요소의 사용의 예를 위하여, 예를 들어 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Gurtu et al., 1996, Biochem. Biophys. Res. Comm. 229(1):295-8 참고)에 의해 분리된 중쇄 및 경쇄를 코딩할 수 있다. IRES 요소는 리보솜 스캐닝 모델을 우회하고 내부 부위에서 번역을 시작한다. AAV에서 IRES의 사용은 예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Furling et al., 2001, Gene Ther 8(11): 854-73에 기재되어 있다. 특정 실시양태에서, 바이시스트론성 메세지는 이의 폴리뉴클레오티드(들)의 크기에 대한 제한을 가지고 바이러스 벡터 내에 함유된다. 특정 실시양태에서, 바이시스트론성 메세지는 AAV 바이러스-계 벡터(예를 들어, AAV8-계 벡터, AAV9-계 또는 AAVrh10-계 벡터) 내에 함유된다.
푸린-F2A 링커. 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 자가-절단 푸린/F2A(F/F2A) 링커와 같은 절단가능한 링커에 의해 분리된 중쇄 및 경쇄를 코딩한다(각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Fang et al., 2005, Nature Biotechnology 23: 584-590, 및 Fang, 2007, Mol Ther 15: 1153-9). 예를 들어, 푸린-F2A 링커는 중쇄 및 경쇄 코딩 서열을 분리하기 위해 발현 카세트 내에 통합되어, 다음 구조를 갖는 구조체를 야기할 수 있다:
리더 - 중쇄 - 푸린 부위 - F2A 부위 - 리더 - 경쇄 - 폴리A.
아미노산 서열 LLNFDLLKLAGDVESNPGP(서열번호 210)를 갖는 F2A 부위는 자가-처리여서, 최종 G 및 P 아미노산 잔기 사이에서 "절단"을 야기한다. 사용될 수 있는 추가의 링커는, 비제한적으로, 다음을 포함한다:
리보솜이 개방 판독 프레임 내의 F2A 서열을 만날 때, 펩티드 결합이 건너뛰어져서, 번역의 종결, 또는 다운스트림 서열(경쇄)의 계속된 번역을 야기한다. 이 자가-처리 서열은 중쇄의 C-말단의 단부에서 추가 아미노산의 스트링을 야기한다. 그러나, 이러한 추가 아미노산은 그 다음에 F2A 부위 직전에 그리고 중쇄 서열 후에 위치한 푸린 부위에서 숙주 세포 푸린에 의해 절단되고, 카르복시펩티다아제에 의해 추가로 절단된다. 생성된 중쇄는 C-말단에 포함된 1, 2, 3 개, 또는 그 이상의 추가 아미노산을 가질 수 있거나, 사용된 푸린 링커의 서열 및 생체내에서 링커를 절단하는 카르복시펩티다아제에 따라, 이러한 추가 아미노산을 갖지 않을 수 있다(예를 들어, Fang et al., 17 April 2005, Nature Biotechnol. Advance Online Publication; Fang et al., 2007, Molecular Therapy 15(6):1153-1159; Luke, 2012, Innovations in Biotechnology, Ch. 8, 161-186 참고). 사용될 수 있는 푸린 링커는 4 개 염기성 아미노산의 시리즈, 예를 들어 RKRR(서열번호 215), RRRR(서열번호 216), RRKR(서열번호 217), 또는 RKKR(서열번호 218)을 포함한다. 일단 이 링커가 카르복시펩티다아제에 의해 절단되면, 추가 아미노산이 남아서, 추가의 0, 1, 2, 3 또는 4 개 아미노산이 중쇄의 C-말단 상에 남을 수 있으며, 예를 들어 R, RR, RK, RKR, RRR, RRK, RKK, RKRR(서열번호 215), RRRR(서열번호 216), RRKR(서열번호 217), 또는 RKKR(서열번호 218)이 남을 수 있다. 특정 실시양태에서, 하나의 링커가 카르복시펩티다아제에 의해 절단되면, 추가 아미노산이 남지 않는다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 구조체에 의해 생산된 항체, 예를 들어 항원-결합 단편, 집단의 0.5% 내지 1%, 1% 내지 2%, 5%, 10%, 15%, 또는 20%가 절단 후 중쇄의 C-말단 상에 1, 2, 3, 또는 4 개의 남겨진 아미노산을 갖는다. 특정 실시양태에서, 푸린 링커는 서열 R-X-K/R-R을 가져, 중쇄의 C-말단 상의 추가 아미노산은 R, RX, RXK, RXR, RXKR, 또는 RXRR이고, 여기서 X는 임의의 아미노산, 예를 들어 알라닌(A)이다. 특정 실시양태에서, 중쇄의 C-말단 상에 추가 아미노산이 남지 않을 수 있다.
유동성 펩티드 링커. 일부 실시양태에서, 단일 구조체는 scFv를 코딩하는 것과 같이 유동성 펩티드 링커에 의해 분리된 중쇄 및 경쇄(바람직하게는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인) 둘 다를 코딩하도록 조작될 수 있다. 유동성 펩티드 링커는 글리신 및 세린과 같은 유동성 잔기로 구성되어, 인접한 중쇄 및 경쇄 도메인이 서로에 대해 자유롭게 이동할 수 있다. 구조체는 중쇄 가변 도메인이 scFv의 N-말단에 있고, 그 후에 링커 및 그 다음에 경쇄 가변 도메인이 있도록 배열될 수 있다. 대안적으로, 구조체는 경쇄 가변 도메인이 scFv의 N-말단에 있고, 그 후에 링커 및 그 다음에 중쇄 가변 도메인이 있도록 배열될 수 있다. 즉, 성분은 NH2-VL-링커-VH-COOH 또는 NH2-VH-링커-VL-COOH와 같이 배열될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 발현 카세트는 이의 폴리뉴클레오티드(들)의 크기에 대해 제한을 가지고 바이러스 벡터 내에 함유된다. 특정 실시양태에서, 발현 카세트는 AAV 바이러스-계 벡터 내에 함유된다. 특정 벡터의 크기 제한으로 인해, 벡터는 치료 항체의 전체 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열을 수용하거나 수용하지 않을 수 있으나, 항원 결합 단편의 중쇄 및 경쇄, 예컨대 Fab 또는 F(ab')2 단편 또는 scFv의 중쇄 및 경쇄의 코딩 서열을 수용할 수 있다. 특히, 본원에 기재된 AAV 벡터는 대략 4.7 킬로베이스의 전이유전자를 수용할 수 있다. CB7 프로모터, 닭 β-액틴 인트론, 토끼 β-글로빈 폴리A 시그널, 및 ITR을 함유하는 도 1의 것과 같은 구조체에 대해, 코딩된 치료 항체는 대략 752 개 아미노산일 수 있다. 적은 발현 요소의 치환은 큰 단백질 산물, 예컨대 전장 치료 항체의 발현을 허용할 것이다.
5.1.6 비번역 영역
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 1 이상의 비번역 영역(UTR), 예를 들어 3' 및/또는 5' UTR을 포함한다. 특정 실시양태에서, UTR은 소망하는 수준의 단백질 발현을 위해 최적화된다. 특정 실시양태에서, UTR은 전이유전자의 mRNA 반감기를 위해 최적화된다. 특정 실시양태에서, UTR은 전이유전자의 mRNA의 안정성을 위해 최적화된다. 특정 실시양태에서, UTR은 전이유전자의 mRNA의 이차 구조를 위해 최적화된다.
5.1.7 역위 말단 반복부
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 1 이상의 역위 말단 반복부(ITR) 서열을 포함한다. ITR 서열은 바이러스 벡터의 비리온 내로 재조합 유전자 발현 카세트를 패키징하기 위해 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, ITR은 AAV, 예를 들어 AAV8 또는 AAV2로부터의 것이다(예를 들어, 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Yan et al., 2005, J. Virol., 79(1):364-379; 미국 특허 7,282,199 B2호, 미국 특허 7,790,449 B2호, 미국 특허 8,318,480 B2호, 미국 특허 8,962,332 B2호 및 국제 특허 출원 PCT/EP2014/076466호 참고).
특정 실시양태에서, 자기-상보성 벡터, 예를 들어, scAAV를 생산하기 위해 사용되는 변형 ITR이 사용될 수 있다(예를 들어, 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82, McCarty et al, 2001, Gene Therapy, Vol 8, Number 16, Pages 1248-1254; 및 미국 특허 6,596,535호; 7,125,717호; 및 7,456,683호 참고).
5.1.8 전이유전자
전이유전자는 HuPTM mAb를, 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 바람직하게는 본원에 개시된 치료 항체를 기본으로 한 Fab 단편(HuGlyFab) 또는 F(ab')2 또는 scFv로서 코딩한다. 구체적 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편, 특히 HuGlyFab는 Fab 도메인 상에 추가 당화 부위를 함유하도록 조작된다(예를 들어, Fab 도메인 상의 초고당화 부위의 설명에 대해 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고). 도 11은 본원에 개시된 치료 항체의 Fab 중쇄 및 경쇄의 정렬을 제공하며 아스파라긴 또는 일부 경우에, 세린으로 치환되어, 초고당화를 야기할 수 있는 녹색 잔기로 강조한다.
특정 실시양태에서, 전이유전자는 중쇄 및 경쇄의 코딩 서열을 갖는 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩한다. 전장 항체를 사용할 때, 변형 mAb를 코딩하는 구조체가 사용될 수 있다. 예를 들어, 모든 인간 IgG 서브클래스의 중쇄 유전자에서 보존된 C-말단 라이신(-K)은 일반적으로 혈청에서 순환하는 항체에 존재하지 않는다 - C-말단 라이신은 순환 중 절단되어, 순환 IgG의 이종 집단을 야기한다. (van den Bremer et al., 2015, mAbs 7:672-680). 전장 mAb에 대한 벡터드(vectored) 구조체에서, Fc 말단의 C-말단 라이신(-K) 또는 글리신-라이신(-GK)을 코딩하는 DNA는 결실되어, 그 자리에 더 많은 동종 항체 산물을 생산할 수 있다. (그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Hu et al., 2017 Biotechnol. Prog. 33: 786-794 참고).
대안적으로, 항원 결합 단편이 유리하게 사용될 수 있다. 도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5d, 6, 7a, 7b, 8a-8h 및 9a-9b는 치료 항체의 Fab 단편 및 scFv의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열을 제공한다(또한, 치료 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열을 제공하는 표 4 참고). 전이유전자는 본원에 추가로 기재된 적절한 아이소타입에 대한 중쇄의 Fab 부분과 중쇄의 불변 도메인 부분 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 사용하여 중쇄 및 경쇄 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 본원에 개시된 치료 항체의 중쇄 및 경쇄의 Fab 단편 부분을 코딩하는 인간 세포 내의 발현을 위해 최적화된 코돈인 뉴클레오티드 서열이 표 5에서 제공된다. 전이유전자는 도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5c, 6, 7a, 7b, 8a-8h 및 9a-9b에 제공되는 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 사용하여 Fab 단편을 코딩할 수 있으나, 쇄간 이황화 결합을 형성하는 중쇄 상의 힌지 영역의 부분(즉, 서열 CPPCPA(서열번호 219)를 함유하는 부분)을 포함하지 않는다. C-말단에 힌지 영역의 CPPCP(서열번호 220) 서열을 함유하지 않는 중쇄 가변 도메인 서열은 쇄간 이황화 결합을 형성하지 않을 것이며, 따라서 상응하는 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 Fab 단편을 형성하는 반면, 서열 CPPCP(서열번호 220)를 함유하는 C-말단의 힌지 영역의 부분을 갖는 상기 중쇄 가변 도메인 서열은 쇄간 이황화 결합을 형성할 것이며, 따라서 Fab2 단편을 형성할 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 전이유전자는 예를 들어, 도 8d의 브롤루시주맙 및 도 5d의 E06에 대해 도시된 바와 같이 사이에 유동성 링커에 의해 연결된 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인(중쇄 가변 도메인은 scFv의 N-말단 단부 또는 C-말단 단부에 있을 수 있음)을 포함하는 scFv를 코딩할 수 있다. 대안적으로, 다른 실시양태에서, 전이유전자는 중쇄 서열의 C-말단에 포함될 수 있는 힌지 영역의 다양한 영역을 도시하는 도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5c, 6, 7a, 7b, 8a-8c, 8e-8h 및 9a-9b에 도시된 바와 같은 힌지 영역의 적어도 서열 CPPCA(서열번호 221)를 포함하는 경쇄 및 중쇄 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 F(ab')2 단편을 코딩할 수 있다. 기존의 항-힌지 항체(AHA)는 면역원성을 야기하고 효능을 감소시킬 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, IgG1 아이소타입에 대해, D221을 갖는 C-말단 단부 또는 돌연변이 T225L을 갖거나 L242를 갖는 단부는 AHA에 대한 결합을 감소시킬 수 있다. (예를 들어, Brezski, 2008, J Immunol 181: 3183-92 and Kim, 2016, 8: 1536-1547 참고). IgG2에 대해, AHA의 위험은 낮으며, 이는 IgG2의 힌지 영역이 내생 AHA를 생성하기 위해 요구되는 효소 절단에 대해 민감하지 않기 때문이다. (예를 들어, Brezski, 2011, MAbs 3: 558-567 참고).
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 a) 구조성 또는 유도성(예를 들어, 저산소증-유도성 또는 라파마이신-유도성) 프로모터 서열, 및 b) 전이유전자(예를 들어, HuGlyFab)를 코딩하는 서열의 순서로 상기 요소를 포함한다. 특정 실시양태에서, 전이유전자를 코딩하는 서열은 IRES 요소에 의해 분리된 다수의 ORF를 포함한다. 특정 실시양태에서, ORF는 HuGlyFab의 중쇄 및 경쇄 도메인을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 전이유전자를 코딩하는 서열은 F/F2A 서열에 의해 분리된 하나의 ORF 내의 다수의 서브유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 전이유전자를 포함하는 서열은 F/F2A 서열에 의해 분리된 HuGlyFab의 중쇄 및 경쇄 도메인을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 전이유전자를 포함하는 서열은 유동성 펩티드 링커에 의해 분리된 HuGlyFab의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 a) 구조성 또는 유도성 프로모터 서열, 및 b) 전이유전자(예를 들어, HuGlyFab)를 코딩하는 서열의 순서로 상기 요소를 포함하되, 전이유전자는 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, IRES에 의해 분리된 경쇄 및 중쇄 Fab 부분을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 a) 구조성 또는 저산소증-유도성 프로모터 서열, 및 b) 시그널 펩티드, 절단가능한 F/F2A 서열 또는 유동성 펩티드 링커에 의해 분리된 경쇄 및 중쇄 서열을 포함하는 전이유전자를 코딩하는 서열의 순서로 상기 요소를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 a) 제1 ITR 서열, b) 제1 링커 서열, c) 구조성 또는 유도성 프로모터 서열, d) 제2 링커 서열, e) 인트론 서열, f) 제3 링커 서열, g) 제1 UTR 서열, h) 전이유전자(예를 들어, HuGlyFab)를 코딩하는 서열, i) 제2 UTR 서열, j) 제4 링커 서열, k) 폴리 A 서열, l) 제5 링커 서열, 및 m) 제2 ITR 서열의 순서로 상기 요소를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 a) 제1 ITR 서열, b) 제1 링커 서열, c) 구조성 또는 유도성 프로모터 서열, d) 제2 링커 서열, e) 인트론 서열, f) 제3 링커 서열, g) 제1 UTR 서열, h) 전이유전자(예를 들어, HuGlyFab)를 코딩하는 서열, i) 제2 UTR 서열, j) 제4 링커 서열, k) 폴리 A 서열, l) 제5 링커 서열, 및 m) 제2 ITR 서열의 순서로 상기 요소를 포함하되, 전이유전자는 시그널을 포함하며, 전이유전자는 절단가능한 F/F2A 서열에 의해 분리된 경쇄 및 중쇄 서열을 코딩한다.
5.1.9 벡터의 제조 및 시험
본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 숙주 세포를 사용하여 제조될 수 있다. 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 포유동물 숙주 세포, 예를 들어 A549, WEHI, 10T1/2, BHK, MDCK, COS1, COS7, BSC 1, BSC 40, BMT 10, VERO, W138, HeLa, 293, Saos, C2C12, L, HT1080, HepG2, 일차 섬유아세포, 간세포, 및 근원 세포를 사용하여 제조될 수 있다. 본원에서 제공되는 바이러스 벡터는 인간, 원숭이, 마우스, 래트, 토끼, 또는 햄스터로부터의 숙주 세포를 사용하여 제조될 수 있다.
숙주 세포는 전이유전자를 코딩하는 서열 및 연관된 요소(즉, 벡터 게놈), 및 숙주 세포에서 바이러스를 생산하는 수단, 예를 들어 복제 및 캡시드 유전자(예를 들어, AAV의 rep 및 cap 유전자)로 안정하게 형질전환된다. AAV8 캡시드를 가진 재조합 AAV 벡터를 생산하는 방법에 대해서는, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 7,282,199 B2호의 상세한 설명의 섹션 IV를 참고한다. 상기 벡터의 게놈 카피 역가(titer)는 예를 들어, TAQMAN® 분석에 의해 결정될 수 있다. 비리온은 예를 들어, CsCl2 침강에 의해 회수될 수 있다.
대안적으로, 곤충 세포 내의 바큘로바이러스 발현 시스템이 AAV 벡터를 생산하기 위해 사용될 수 있다. 검토를 위해, 제조 기술에 대해 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Aponte-Ubillus et al., 2018, Appl. Microbiol. Biotechnol. 102:1045-1054를 참고한다.
시험관내 분석, 예를 들어 세포 배양 분석이 본원에 기재된 벡터로부터의 전이유전자 발현을 측정하여, 예를 들어 벡터의 역가(potency)를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 인간 배아 망막 세포로부터 유래된 세포주인 PER.C6® 세포주(Lonza), 또는 망막 색소 상피 세포, 예를 들어 망막 색소 상피 세포주 hTERT RPE-1(ATCC®로부터 이용가능함)이 전이유전자 발현을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 일단 발현되면, 발현된 산물의 특징이 확인될 수 있으며, HuGlyFab와 연관된 당화 및 티로신 황산화 패턴의 확인을 포함한다. 당화 패턴 및 이를 확인하는 방법은 섹션 5.2.1에서 논의되는 한편, 티로신 황산화 패턴 및 이를 확인하는 방법은 섹션 5.2.2에서 논의된다. 또한, 세포-발현된 HuGlyFab의 당화/황산화로부터 야기되는 이점이 당업계에 알려진 분석, 예를 들어 섹션 5.2.1 및 5.2.2에 기재된 방법을 사용하여 확인될 수 있다.
5.1.10 조성물
인간 대상체에 대한 투여를 위해 적합한 약학 조성물은 생리학적으로 양립가능한 수성 버퍼, 계면활성제 및 선택적 부형제를 포함하는 제형 버퍼 중 재조합 벡터의 현탁액을 포함한다. 이러한 제형 버퍼는 다당류, 계면활성제, 중합체, 또는 오일 중 1 이상을 포함할 수 있다.
5.2 N-당화, 티로신 황산화, 및 O-당화
본원에 개시된 HuGlyFab 및 HuPTM scFv의 아미노산 서열(일차 서열) 각각은 N-당화 또는 티로신 황산화가 발생하는 적어도 하나의 부위를 포함한다(치료 항체의 Fab 단편의 아미노산 서열 내의 당화 및/또는 황산화 위치에 대해 도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5d, 6, 7a-7b, 8a-8h 및 9a-9b 참고).
5.2.1 N-당화
역(reverse) 당화 부위
정규적인(canonical) N-당화 서열은 Asn-X-Ser(또는 Thr)인 것으로 당업계에 알려져 있고, 여기서 X는 Pro를 제외한 임의의 아미노산일 수 있다. 그러나, 최근에는 인간 항체의 아스파라긴(Asn) 잔기가 역 컨센서스 모티프, Ser(또는 Thr)-X-Asn의 맥락에서 당화될 수 있고, 여기서 X는 Pro를 제외한 임의의 아미노산일 수 있음이 입증되었다. Douglass et al., 2009, J. Biol. Chem. 284:32493-32506; 및 Valliere-Douglass et al., 2010, J. Biol. Chem. 285:16012-16022를 참고한다. 본원에 개시된 바와 같이, 본원에 개시된 특정 HuGlyFab 및 HuPTM scFv는 이러한 역 컨센서스 서열을 포함한다.
비-컨센서스 당화 부위
역 N-당화 부위에 더하여, 최근에는 인간 항체의 글루타민(Gln) 잔기가 비-컨센서스 모티프, Gln-Gly-Thr의 맥락에서 당화될 수 있음이 입증되었다. Valliere-Douglass et al., 2010, J. Biol. Chem. 285:16012-16022를 참고한다. 놀랍게도, 본원에 개시된 HuGlyFab 단편 중 일부는 이러한 비-컨센서스 서열을 포함한다. 또한, O-당화는 효소에 의한 세린 또는 트레오닌에 대한 N-아세틸-갈락토스아민의 첨가를 포함한다. 항체의 힌지 영역에 존재하는 아미노산 잔기는 O-당화될 수 있음이 입증되었다. O-당화의 가능성은 예를 들어, 대장균에 의해 다시 생산된 항원-결합 단편과 비교하여, 본원에 제공된 치료 항체에 다른 이점을 부여하며, 이는 원래 대장균이 인간 O-당화에서 사용되는 것과 동등한 조직을 함유하지 않기 때문이다. (대신에, 대장균에서의 O-당화는 세균이 특정 O-당화 조직을 함유하도록 변형될 때에만 입증되었음. 예를 들어, Farid-Moayer et al., 2007, J. Bacteriol. 189:8088-8098 참고.)
조작된 N-당화 부위
특정 실시양태에서, HuGlyFab 또는 HuTPM scFv를 코딩하는 핵산은 정상적으로 HuGlyFab 또는 HuPTM scFv와 연관되는 것보다(예를 들어, 그의 비변형 상태의 HuGlyFab 또는 HuPTM scFv와 연관된 N-당화 부위의 수에 비해) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 개, 또는 그 이상의 N-당화 부위(정규적인 N-당화 컨센서스 서열, 역 N-당화 부위, 및 비-컨센서스 N-당화 부위를 포함함)를 포함하도록 변형된다. 구체적 실시양태에서, 당화 부위의 도입은, 상기 도입이 그의 항원에 항원-결합 단편의 결합에 영향을 주지 않는 한, 항원-결합 단편의 일차 구조 내의 어느 곳이든 N-당화 부위(정규적인 N-당화 컨센서스 서열, 역 N-당화 부위, 및 비-컨센서스 N-당화 부위를 포함함)를 삽입함으로써 이루어진다. 당화 부위의 도입은 N-당화 부위를 생성하기 위해 예를 들어, 항원-결합 단편, 또는 항원-결합 단편이 유래되는 항체의 일차 구조에 새로운 아미노산을 첨가함으로써(즉, 전체적으로 또는 부분적으로 당화 부위가 첨가됨), 또는 항원-결합 단편, 또는 항원-결합 단편이 유래되는 항체 내의 기존의 아미노산을 돌연변이시킴으로써(즉, 항원-결합 단편/항체에 아미노산이 추가되지 않지만, 항원-결합 단편/항체의 선택된 아미노산이 돌연변이되어 N-당화 부위를 형성함) 이루어질 수 있다. 당업자는 단백질의 아미노산 서열이 당업계에 알려진 접근법, 예를 들어 단백질을 코딩하는 핵산 서열의 변형을 포함하는 재조합 접근법을 사용하여 용이하게 변형될 수 있음을 인식할 것이다.
구체적 실시양태에서, HuGlyMab 또는 항원-결합 단편은, 포유동물 세포, 예컨대 망막, CNS, 간 또는 근육 세포에서 발현될 때, 초고당화될 수 있도록 변형된다. 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8:99-112를 참고한다.
HuPTM 항원-결합 단편의 N-당화
소분자 약물과 달리, 생물의약품은 보통 상이한 역가, 약동학, 및/또는 안전성 프로파일을 가질 수 있는 상이한 변형 또는 형태를 갖는 많은 변이체의 혼합물을 포함한다. 유전자 요법 또는 단백질 요법 접근시에 생산되는 모든 분자가 완전히 당화되고 황산화될 필요는 없다. 오히려, 생산된 당단백질 집단은 효능을 입증하기 위해 충분한 당화(2,6-시알화를 포함함) 및 황산화를 가져야 한다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 예를 들어, 질환 또는 비정상적인 병태의 진행을 늦추거나 정지시키거나, 질환 또는 비정상적인 병태와 연관된 1 이상의 증상의 심각성을 감소시키는 것일 수 있다.
HuGlyFab 또는 HuPTM scFv가 인간 세포에서 발현될 때, 항원-결합 단편의 N-당화 부위는 다양한 상이한 글리칸으로 당화될 수 있다. 항원-결합 단편의 N-글리칸은 당업계에서 특성규명되었다. 예를 들어, Bondt et al., 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039(Fab-연관된 N-글리칸의 개시에 대해 그 전체가 본원에 참고로 포함됨; 또한 도 10 참고)는 Fab와 연관된 글리칸을 규명하며, 항체의 Fab와 Fc 부분이 별개의 당화 패턴을 포함하며, Fab 글리칸이 갈락토실화, 시알화, 및 양분(예를 들어, 양분 GlcNAc를 이용)에서 높지만 Fc 글리칸에 관하여 푸코실화에서는 낮음을 입증한다. Bondt와 같이, Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207(Fab-연관된 N-글리칸의 개시에 대해 그 전체가 본원에 참고로 포함됨)은 Fab의 대부분의 글리칸이 시알화됨을 밝혀내었다. 그러나, Huang에 의해 시험된 항체(뮤린 세포 배경에서 생산되었음)의 Fab에서는, 확인된 시알릭 잔기는 N-아세틸뉴라민산("Neu5Ac", 주된 인간 시알산) 대신에 N-글리콜릴뉴라민산("Neu5Gc" 또는 "NeuGc")(인간에게는 자연적이지 않음)이었다. 또한, Song et al., 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666(Fab-연관된 N-글리칸의 개시에 대해 그 전체가 본원에 참고로 포함됨)은 상업적으로 이용가능한 항체와 연관된 N-글리칸의 라이브러리를 기재한다.
중요하게도, HuGlyFab 또는 HuPTM scFv가 인간 세포에서 발현될 때, 원핵 숙주 세포(예를 들어, 대장균) 또는 진핵 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포 또는 NS0 세포)에서 시험관내 생산에 대한 요구가 피해진다. 대신에, 본원에 기재된 방법의 결과로서, HuGlyFab 또는 HuPTM scFv의 N-당화 부위는 인간의 치료에 관련되며 이에 유익한 글리칸으로 유리하게 장식된다. 이러한 이점은 항체/항원-결합 단편 생산에서 CHO 세포, NS0 세포, 또는 대장균이 이용될 때 얻을 수 없으며, 이는 예를 들어, CHO 세포는 (1) 2,6 시알릴트랜스퍼라제를 발현하지 않으며 따라서 N-당화 동안 2,6 시알산을 추가할 수 없으며; (2) Neu5Ac 대신에 시알산으로서 Neu5Gc를 추가할 수 있으며; (3) 또한, 고농도에서 아나팔락시스를 촉발시킬 수 있는, 대부분의 개체에 존재하는 항-α-Gal 항체와 반응하는, 면역원성 글리칸인 α-Gal 항원을 생산할 수 있기 때문에; 그리고 (4) 대장균이 N-당화를 위해 필요한 성분을 자연적으로 함유하지 않기 때문이다.
항원-결합 단편을 비롯한 항체의 당화 패턴을 결정하기 위한 분석은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 하이드라진분해가 글리칸을 분석하기 위해 사용될 수 있다. 먼저, 다당류가 하이드라진과의 항온처리에 의해 이들의 연관된 단백질로부터 방출된다(Ludger Liberate Hydrazinolysis Glycan Release Kit, Oxfordshire, UK가 사용될 수 있음). 친핵체 하이드라진은 다당류와 담체 단백질 사이의 글리코시드 결합을 공격하고 부착된 글리칸을 방출시킨다. N-아세틸기는 이 처리 동안 손실되며 재-N-아세틸화에 의해 재구성되어야 한다. 글리칸은 또한 PNGase F 및 Endo H와 같은 글리코시다아제 또는 엔도글리코시다아제와 같은 효소를 사용하여 방출될 수 있으며, 이들은 하이드라진에 비해 깨끗하게 절단하고 적은 부반응을 갖는다. 프리 글리칸은 탄소 칼럼에서 정제되고 이어서 형광단 2-아미노 벤즈아미드를 이용하여 환원 종료시 라벨링될 수 있다. 라벨링된 다당류는 Royle et al, Anal Biochem 2002, 304(1):70-90의 HPLC 프로토콜에 따라 GlycoSep-N 칼럼(GL Sciences)에서 분리될 수 있다. 생성되는 형광 크로마토그램은 다당류 길이 및 반복 단위의 수를 나타낸다. 구조적 정보는 개별 피크를 수집하고 이어서 MS/MS 분석을 수행함으로써 수집될 수 있다. 이에 의해 반복 단위의 단당류 조성 및 서열이 확인될 수 있으며 부가적으로 다당류 조성물의 균질성이 확인될 수 있다. 저 또는 고 분자량의 특이적 피크는 MALDI-MS/MS에 의해 분석될 수 있으며 그 결과는 글리칸 서열을 확인하기 위해 사용된다. 크로마토그램의 각각의 피크는 이의 특정 수의 반복 단위 및 단편, 예를 들어 당 잔기로 구성되는 중합체, 예를 들어 글리칸에 상응한다. 크로마토그램은 따라서 중합체, 예를 들어, 글리칸, 길이 분포를 측정하게 한다. 용리 시간은 중합체 길이에 대한 지표인 한편, 형광 강도는 각각의 중합체, 예를 들어 글리칸에 대한 몰 존재비와 연관된다. 항원-결합 단편과 연관된 글리칸을 평가하기 위한 다른 방법은 Bondt et al., 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039, Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207, 및/또는 Song et al., 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666에 의해 기재된 것들을 포함한다.
항체(항원-결합 단편을 포함함)와 연관된 글리칸 패턴의 균질성 또는 이질성은 글리칸 길이 또는 크기 및 당화 부위에 걸쳐서 존재하는 글리칸의 수 둘 다에 관련되므로, 당업계에 알려진 방법, 예를 들어 글리칸 길이 또는 크기 및 유체역학적 반경을 측정하는 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 크기 배제, 정상 상, 역상, 및 음이온 교환 HPLC와 같은 HPLC뿐 아니라, 모세관 전기영동은 유체역학적 반경을 측정하게 한다. 단백질에서 더 높은 수의 당화 부위는 더 적은 당화 부위를 갖는 담체와 비교하여 유체역학적 반경에서 더 높은 변화를 야기한다. 그러나, 단일 글리칸 쇄가 분석될 때, 이들은 더욱 제어된 길이로 인해 더욱 균질할 수 있다. 글리칸 길이는 하이드라진분해, SDS PAGE, 및 모세관 젤 전기영동에 의해 측정될 수 있다. 또한, 균질성은 또한 특정 당화 부위 용법 패턴이 더 넓은/좁은 범위로 변함을 의미할 수 있다. 이들 인자는 글리코펩티드 LC-MS/MS에 의해 측정될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, HuPTM mAb, 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 검출가능한 NeuGc 및/또는 α-Gal을 함유하지 않는다. "검출가능한 NeuGc" 또는 "검출가능한 α-Gal" 또는 "NeuGc 또는 α-Gal을 함유하지 않거나 갖지 않음"은 본원에서 HuPTM mAb 또는 항원-결합 단편이 당업계에 알려진 표준 분석 방법에 의해 검출가능한 NeuGc 또는 α-Gal 모이어티를 함유하지 않는다는 것을 의미한다. 예를 들어, NeuGc는 NeuGc를 검출하는 방법에 대한 참고로 본원에 포함되는 Hara et al., 1989, "Highly Sensitive Determination of N-Acetyl-and N-Glycolylneuraminic Acids in human Serum and Urine and Rat Serum by Reversed-Phase Liquid Chromatography with Fluorescence Detection." J. Chromatogr., B: Biomed. 377, 111-119에 따라 HPLC에 의해 검출될 수 있다. 대안적으로, NeuGc는 질량 분광법에 의해 검출될 수 있다. α-Gal은 ELISA를 사용하여(예를 들어, Galili et al., 1998, "A sensitive assay for measuring α-Gal epitope expression on cells by a monoclonal anti-Gal antibody." Transplantation. 65(8):1129-32 참고), 또는 질량 분광법에 의해(예를 들어, Ayoub et al., 2013, "Correct primary structure assessment and extensive glyco-profiling of cetuximab by a combination of intact, middle-up, middle-down and bottom-up ESI and MALDI mass spectrometry techniques." Landes Bioscience. 5(5):699-710 참고) 검출될 수 있다. 또한, Platts-Mills et al., 2015, "Anaphylaxis to the Carbohydrate Side-Chain Alpha-gal" Immunol Allergy Clin North Am. 35(2): 247-260에 인용된 참고문헌을 참고한다.
N-당화의 이점
N-당화는 본원에 기재된 HuGlyFab 또는 HuPTM scFv에 많은 이점을 부여한다. 이러한 이점은, 대장균이 N-당화를 위해 필요한 성분을 원래 보유하지 않으므로, 대장균 내 항원-결합 단편의 생산에 의해서는 얻어질 수 없다. 또한, CHO 세포는 특정 글리칸(예를 들어, 2,6 시알산 및 양분 GlcNAc)의 추가를 위해 필요한 성분이 결여되기 때문에 그리고 CHO 또는 뮤린 세포주는 우세한 인간 시알산인 N-아세틸뉴라민산("Neu5Ac") 대신에 인간에게 자연적이지 않은(또한 잠재적으로 면역원성인) N-N-글리콜릴뉴라민산("Neu5Gc" 또는 "NeuGc")을 추가할 수 있기 때문에, 일부 이점은, 예를 들어 CHO 세포(또는 뮤린 세포, 예컨대 NS0 세포)에서의 항체 생산을 통해 얻어질 수 없다. 예를 들어, Dumont et al., 2015, Crit. Rev. Biotechnol. 36(6):1110-1122; Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207 (NeuGc는 SP2/0 및 NS0과 같은 뮤린 세포주에서 우세한 시알산임); 및 Song et al., 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666을 참고하며, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. 또한, CHO 세포는 또한 고농도에서 아나필락시스를 촉발시킬 수 있는, 대부분의 개체에 존재하는 항-α-Gal 항체와 반응하는, 면역원성 글리칸인 α-Gal 항원을 생산할 수 있다. 예를 들어, Bosques, 2010, Nat. Biotech. 28:1153-1156을 참고한다. 본원에 기재된 HuGlyFab 또는 HuPTM scFv의 인간 당화 패턴은 전이유전자 산물의 면역원성을 감소시키고 효능을 개선해야 한다.
비-정규적인 당화 부위가 보통 항체 집단의 낮은 수준 당화(예를 들어, 1-5%)를 야기하는 한편, 기능적 이점은 상당할 수 있다(예를 들어, van de Bovenkamp et al., 2016, J. Immunol. 196:1435-1441 참고). 예를 들어, Fab 당화는 항체의 안정성, 반감기, 및 결합 특징에 영향을 줄 수 있다. 그의 표적에 대한 항체의 친화성에 대한 Fab 당화의 효과를 확인하기 위해, 당업자에게 알려진 임의의 기술, 예를 들어 효소 연결 면역흡착 분석(ELISA), 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR)이 사용될 수 있다. 항체의 반감기에 대한 Fab 당화의 효과를 확인하기 위해, 당업자에게 알려진 임의의 기술이 사용될 수 있고, 예를 들어 방사성라벨링된 항체가 투여된 대상체에서의 혈액 또는 장기 내 방사성활성 수준을 측정하는 것이다. 항체의 안정성, 예를 들어 응집 또는 단백질 풀림의 수준에 대한 Fab 당화의 효과를 확인하기 위해, 당업자에게 알려진 임의의 기술, 예를 들어 시차 주사 열량계(DSC), 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 예를 들어 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SEC-HPLC), 모세관 전기영동, 질량 분광법, 또는 탁도 측정이 사용될 수 있다.
본원에 기재된 방법에서 사용되는 HuGlyFab 또는 HuPTM scFv 상의 시알산의 존재는 HuGlyFab 또는 HuPTM scFv의 제거율에 영향을 줄 수 있다. 따라서, HuGlyFab 또는 HuPTM scFv의 시알산 패턴은 최적화된 제거율을 갖는 치료제를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 항원-결합 단편 제거율을 평가하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207을 참고한다.
다른 구체적 실시양태에서, N-당화에 의해 부여되는 이점은 감소된 응집이다. 차지된 N-당화 부위는 응집하기 쉬운 아미노산 잔기를 차단하여, 응집 감소를 야기할 수 있다. 이러한 N-당화 부위는 본원에서 사용되는 항원-결합 단편에 자연적이거나, 또는 본원에 사용되는 항원-결합 단편 내로 조작되어, 발현될 때, 예를 들어 인간 세포에서 발현될 때 응집을 덜 하는 경향이 있는 HuGlyFab 또는 HuPTM scFv를 야기할 수 있다. 항체의 응집을 평가하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8:99-112를 참고한다.
다른 구체적 실시양태에서, N-당화에 의해 부여된 이점은 감소된 면역원성이다. 이러한 N-당화 부위는 본원에서 사용되는 항원-결합 단편에 자연적이거나, 또는 본원에 사용되는 항원-결합 단편 내로 조작되어, 발현될 때, 예를 들어, 인간 망막 세포, 인간 CNS 세포, 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 발현될 때, 면역원성이 덜한 경향이 있는 HuGlyFab 또는 HuPTM scFv를 야기할 수 있다.
다른 구체적 실시양태에서, N-당화에 의해 부여된 이점은 단백질 안정성이다. 단백질의 N-당화는 이들에게 안정성을 부여하는 것으로 잘 알려져 있으며, N-당화로부터 야기되는 단백질 안정성을 평가하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, Sola and Griebenow, 2009, J Pharm Sci., 98(4): 1223-1245를 참고한다.
다른 구체적 실시양태에서, N-당화에 의해 부여된 이점은 변경된 결합 친화성이다. 항체의 가변 도메인 내의 N-당화 부위의 존재는 이의 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있음이 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, Bovenkamp et al., 2016, J. Immunol. 196:1435-1441을 참고한다. 항체 결합 친화성을 측정하기 위한 분석은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, Wright et al., 1991, EMBO J. 10:2717-2723; 및 Leibiger et al., 1999, Biochem. J. 338:529-538을 참고한다.
5.2.2 티로신 황산화
티로신 황산화는 티로신(Y)의 +5 내지 -5 위치 이내에 글루타메이트(E) 또는 아스파르테이트(D)를 가진 티로신(Y) 잔기에서 발생하며, Y의 위치 -1은 중성 또는 산성 전하를 가진 아미노산이지만, 황산화를 없애는 염기성 아미노산, 예를 들어, 아르기닌(R), 라이신(K), 또는 히스티딘(H)은 아니다. 놀랍게도, 본원에 기재된 HuGlyFab 및 HuPTM scFv는 티로신 황산화 부위를 포함한다(도 2a-2f, 3a-3e, 4a-4b, 5a-5d, 6, 7a-7b, 8a-8h, 및 9a-9b 참고).
중요하게도, 티로신-황산화된 항원-결합 단편은 자연적으로는 티로신-황산화를 위해 필요한 효소를 보유하지 않는 대장균에서는 생산될 수 없다. 또한, CHO 세포는 티로신 황산화에 대해 결함이 있으며-이들은 분비성 세포가 아니며 번역후 티로신-황산화에 대해 제한된 능력을 갖는다. 예를 들어, Mikkelsen & Ezban, 1991, Biochemistry 30: 1533-1537을 참고한다. 유리하게는, 본원에서 제공되는 방법은 분비성이며 티로신 황산화를 위한 능력을 갖는 인간 세포에서의 HuPTM Fab의 발현을 필요로 한다.
티로신 황산화는 여러가지 이유로 유리하다. 예를 들어, 표적에 대한 치료 항체의 항원-결합 단편의 티로신-황산화는 항원에 대한 결합활성 및 활성을 극적으로 증가시키는 것으로 나타났다. 예를 들어, Loos et al., 2015, PNAS 112: 12675-12680, 및 Choe et al., 2003, Cell 114: 161-170을 참고한다. 티로신 황산화 검출을 위한 분석은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, Yang et al., 2015, Molecules 20:2138-2164를 참고한다.
5.2.3 O-당화
O-당화는 효소에 의한 세린 또는 트레오닌 잔기에 대한 N-아세틸-갈락토스아민의 첨가를 포함한다. 항체의 힌지 영역에 존재하는 아미노산 잔기는 O-당화될 수 있음이 입증되었다. 특정 실시양태에서, HuGlyFab는 이들의 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하며, 따라서 인간 세포에서 발현될 때 O-당화될 수 있다. O-당화의 가능성은 예를 들어, 대장균에서 다시 생산된 항원-결합 단편과 비교하여, 본원에서 제공되는 HuGlyFab에 다른 이점을 부여하며, 이는 대장균이 자연적으로는 인간 O-당화에서 사용되는 것과 동등한 조직을 함유하지 않기 때문이다. (대신, 대장균에서의 O-당화는 세균이 특정 O-당화 조직을 함유하도록 변형될 때만 입증되었다. 예를 들어, Farid-Moayer et al., 2007, J. Bacteriol. 189:8088-8098을 참고한다.) 글리칸을 보유함으로써, O-당화된 HuGlyFab는 (상기에 논의된 바와 같이) N-당화된 HuGlyFab와 유익한 특징을 공유한다.
5.3 벡터드 치료 항체
5.3.1 알츠하이머병을 위한 항-A베타 HuPTM 구조체 및 제형
알츠하이머병(AD) 등을 치료하는데 이점을 가질 수 있는 아밀로이드 전구체 단백질로부터 유래된 아밀로이드 베타(Aβ 또는 A베타) 펩티드에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401, 또는 상기 것들 중 하나의 항원 결합 단편이다. 이들 항체의 Fab 단편의 아미노산 서열은 도 2a-2c 및 2f에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, Aβ-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를, AD로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는, Aβ에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401, 또는 이의 변이체와 같은 Aβ에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-Aβ 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, 그 전체가 본원에 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고).
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 아두카누맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 1 및 2의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 2a를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 101(아두카누맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 102(아두카누맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 CNS 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열 또는 상기 표 1에서 발견되는 서열 중 하나를 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-Aβ-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 1의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 2a에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227) 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 4에 기재된 서열(서열번호 101)을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 1의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 2에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 Aβ 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 1에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 Aβ 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 2에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, Aβ 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, Aβ 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 T119N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 1 및 2의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 아두카누맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-Aβ 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 2a의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 아두카누맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 크레네주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 3 및 4의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 2b를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 103(크레네주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 104(크레네주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 CNS 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열 또는 표 1에서 발견되는 시그널 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-Aβ-항원 결합 도메인은 C-말단 티로신(Y) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 3의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 2b에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 GPPCPPCPA(서열번호 229) 또는 GPPCPPCPAPEFLGGPSVFL(서열번호 230)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열(서열번호 103)을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 3의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 4에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 Aβ 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 3에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 Aβ 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 4에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 3에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, Aβ 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, Aβ 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 T107N(중쇄), Q165N 또는 Q165S(경쇄), 및/또는 E200N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 3 및 4의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 크레네주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-Aβ 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 2b의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 크레네주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 간테네루맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 5 및 6의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 2c를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 105(간테네루맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 106(간테네루맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 CNS 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열 또는 표 1에서 발견되는 시그널 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-Aβ-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D)에서 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 5의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 2c에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227) 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열(서열번호 105)을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 5의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 6에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 Aβ 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 5에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 Aβ 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 6에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 5에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, Aβ 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2c에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, Aβ 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2c에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 L121N(중쇄), Q161N 또는 Q161S(경쇄), 및/또는 E196N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 5 및 6의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 간테네루맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-Aβ 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 2c의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 간테네루맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 BAN2401의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 57 및 58의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 2f를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 157(BAN2401 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 158(BAN2401 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 CNS 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열 또는 상기 표 1에서 발견되는 서열 중 하나를 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-Aβ-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 57의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 2f에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222) 또는 KTHLCPPCPAPELLGG(서열번호 239), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), 또는 KTHLCPPCPA(서열번호 226)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 4에 기재된 서열(서열번호 157)을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 57의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 58에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 Aβ 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 57에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 Aβ 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 58에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 57에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, Aβ 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2f에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, Aβ 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2f에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 T119N(중쇄), Q165N 또는 Q165S(경쇄), 및/또는 E200N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 57 및 58의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 BAN2401Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-Aβ 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-Aβ 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 2f의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 BAN2401 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-Aβ 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 AD에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401일 수 있으며 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 특정 실시양태에서, 환자는 전조(prodromal) AD로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상, 즉 초기 AD 또는 사전-AD와 연관된 경도 인지 장애를 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.1에 기재되고 도 2a-c에 나타내었다. 이러한 벡터는 인간 CNS 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV9, AAVrh10, AAVrh20, AAVrh39, 또는 AAVcy5 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 재조합 벡터는 재조합 벡터가 CNS에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 뇌척수액(CSF) 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.1을 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-Aβ 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 AD로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-Aβ 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-Aβ 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401로 치료되었으며, 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401 중 1 이상에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-Aβ 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 인간 세포 배양, 바이오리액터(bioreactor) 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-Aβ HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항Aβ HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 AD로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 척추강내 투여, 특히 수조내 또는 요추 투여, 또는 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 CNS 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 CNS에 생성함으로써 달성되는 AD의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-Aβ HuPTMmAb 또는 항-Aβ HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 CNS 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, AD로 진단되거나 AD에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 2a에 기재된 아두카누맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 녹색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 청색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 1)의 아미노산 위치 N166 또는 경쇄(서열번호 2)의 N158 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 아두카누맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 1)의 Y 94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 2)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한(예를 들어, 당업계에 알려진 분석들, 예를 들어 하기 섹션 5.2에 기재된 분석들에 의해 검출되는) NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한(예를 들어, 당업계에 알려진 분석들, 예를 들어 하기 섹션 5.2에 기재된 분석들에 의해 검출되는) 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 2b에 기재된 크레네주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 녹색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 청색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 3)의 아미노산 위치 N52, Q104, N154, 및/또는 N196 또는 경쇄(서열번호 4)의 Q105, N163 및/또는 N215 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 크레네주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 3)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 4)의 Y91 및/또는 Y92에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 2c에 기재된 간테네루맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(아스파라긴(N) 당화 부위는 자홍색으로 강조되고, 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, 글루타민(Q) 당화 부위는 청색으로 강조되고, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 5)의 아미노산 위치 N52, N77, Q118 및/또는 N168 또는 경쇄(서열번호 6)의 Q101, N159 및/또는 N211 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 간테네루맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 5)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 6)의 Y87 및/또는 Y88에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 2f에 기재된 BAN2401의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 녹색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 청색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 57)의 아미노산 위치 Q116 및/또는 N166 또는 경쇄(서열번호 58)의 N163 및/또는 N215 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, BAN2401의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 57)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 58)의 Y91에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이며, 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 2,6 시알화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화된 2,6 시알화이고/이거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 AD, 특히 인지 장애의 진행을 늦추거나 정지시키는 것이다. 효능은 플라크 형성에서의 감소 및/또는 인지 기능에서의 개선 또는 인지 기능에서의 하락의 감소를 측정함으로써 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, CNS에 대한 항-Aβ HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 AD에 대한 이용가능한 치료는 몇몇을 들자면, 비제한적으로, ARICEPT®(도네페질), RAZADYNE®(갈란타민), NAMENDA®(리바스티그민), 및 NAMZARIC®(도네페질 및 메만틴), 및 비제한적으로, 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401를 포함한 항-Aβ 약제, 또는 항-Tau 약제, 예컨대 aTAU와의 투여를 포함한다.
5.3.2 알츠하이머병, 만성 외상성 뇌병증, 진행성 핵상 마비, 또는 이마관자엽 치매와 같은 타우병증을 위한 항-Tau HuPTM 구조체 및 제형
알츠하이머병(AD), 만성 외상성 뇌병증(CTE), 픽 합병증, 일차 연령-관련 타우병증, 진행성 핵상 마비(PSP), 이마관자엽 치매(FD), 및 다른 타우병증을 치료하는데 이점을 가질 수 있는 Tau 단백질(Tau), 예컨대 단량체 Tau, 올리고머 Tau, 비-인산화 Tau, 및 인산화 Tau에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 도 2d에서 제공되는 Fab 단편을 갖는 항체(본원에서는 "aTAU"로 지칭됨) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, Tau-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 AD, CTE, PSP, FD, 또는 다른 타우병증으로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여하여 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 Tau에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 aTAU, 또는 이의 변이체와 같은 Tau에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-Tau 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고).
특정 실시양태에서, 항-Tau 항원-결합 단편 전이유전자는 aTAU의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 53 및 54의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 2d를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 153(aTAU 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 154(aTAU 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 CNS 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열 또는 상기 표 1에서 발견되는 서열 중 하나를 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-Tau-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 53의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 2d에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 GPPCPPCPAPEFLGG(서열번호 231), 및 구체적으로, GPPCPPCPA(서열번호 229) 또는 GPPCPPCPAPEFLGGPSVFL(서열번호 230)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 4에 기재된 서열(서열번호 153)을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 53의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-Tau 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 54에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 Tau 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Tau 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 53에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 Tau 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-Tau 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 54에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 53에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, Tau 항원-결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2d에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, Tau 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2d에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-Tau 항원-결합 단편 전이유전자는 T110N(중쇄), Q164N 또는 Q164S(경쇄), 및/또는 E199N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 53 및 54의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 aTAU Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-Tau 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-Tau 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 2d의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 aTAU CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-Tau 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 AD, CTE, PSP, FD, 또는 다른 타우병증에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 aTAU일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 특정 실시양태에서, 환자는 전조 AD로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상, 즉 초기 AD 또는 사전-AD와 연관된 경도 인지 장애를 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.1에 기재되고 도 2d에 나타내었다. 이러한 벡터는 인간 CNS 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV9, AAVrh10, AAVrh20, AAVrh39, 또는 AAVcy5 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 재조합 벡터는 재조합 벡터가 CNS에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 뇌척수액(CSF) 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.1을 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-Tau 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 AD, PSP, 또는 FD로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-Tau 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나, 항-Tau 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 aTAU로 치료되었으며, aTAU 중 1 이상에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-Tau 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 인간 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-Tau HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-Tau HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 AD, PSP, 또는 FD로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 척추강내 투여, 특히 수조내 또는 요추 투여, 또는 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 CNS 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 CNS에 생성함으로써 달성되는 AD, PSP, 또는 FD의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-Tau HuPTMmAb 또는 항-Tau HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 CNS 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-Tau HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, AD, PSP, 또는 FD로 진단되거나 AD, PSP, 또는 FD에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-Tau HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 2d에 기재된 aTAU의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 녹색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 청색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 53)의 아미노산 위치 N57 및/또는 Q107 및/또는 N157 및/또는 N199 또는 경쇄(서열번호 54)의 N78 및/또는 Q104 및/또는 N162 및/또는 N214 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, aTAU의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 53)의 Y96 및/또는 Y97 및/또는 Y104 및/또는 경쇄(서열번호 54)의 Y90 및/또는 Y91에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-Tau HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한(예를 들어, 당업계에 알려진 분석들, 예를 들어 하기 섹션 5.2에 기재된 분석들에 의해 검출되는) NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한(예를 들어, 당업계에 알려진 분석들, 예를 들어 하기 섹션 5.2에 기재된 분석들에 의해 검출되는) 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 2,6 시알화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화된 2,6 시알화이고/이거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 AD, PSP, 또는 FD의 진행, 특히 인지 장애, 총 또는 미세 운동 기능 장애, 또는 시각 장애를 늦추거나 정지시키는 것이다. 효능은 플라크 형성에서의 감소 및/또는 운동 기능, 또는 시력을 이용한 인지 기능에서의 개선 또는 인지 기능, 운동 기능, 또는 시력에서의 하락의 감소를 측정함으로써 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, CNS에 대한 항-Tau HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 AD, PSP, 또는 FD에 대한 이용가능한 치료는 몇몇을 들자면, 비제한적으로, ARICEPT®(도네페질), RAZADYNE®(갈란타민), NAMENDA®(리바스티그민), 및 NAMZARIC®(도네페질 및 메만틴), 및 비제한적으로, aTAU를 포함한 항-Tau 약제 및 항-Aβ 약제, 예컨대, 비제한적으로, 아두카누맙, 크레네주맙, 및 간테네루맙와의 투여를 포함한다.
5.3.3 편두통 및 군발성 두통을 위한 항-CGRPR HuPTM 구조체 및 제형
편두통 및 군발성 두통(전체적으로 두통 장애로 지칭됨)을 치료하는데 이점을 가질 수 있는 CGRPR(calcitonin gene-related peptide receptor(칼시토닌 유전자-관련 펩티드 수용체))에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 갈카네주맙 또는 상술한 것 중 하나의 항원 결합 단편이다. 에레누맙의 Fab 단편에 대한 아미노산 서열은 도 2e에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, CGRPR-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 편두통 및 군발성 두통으로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 CGRPR에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화거나 본원의 상세내용에 따른 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 갈카네주맙, 또는 이의 변이체와 같은 CGRPR에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-CGRPR 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112 참고).
특정 실시양태에서, 항-CGRPR 항원-결합 단편 전이유전자는 에레누맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 55 및 56의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 2e를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 155(에레누맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 156(에레누맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 CNS 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열 또는 상기 표 1에서 발견되는 서열 중 하나를 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-CGRPR-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 55의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 2e에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 CPPCPAPPVAGG(서열번호 232), 및 구체적으로, CPPCPA(서열번호 219) 또는 CPPCPAPPVAG(서열번호 233)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 4에 기재된 서열(서열번호 155)을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 55의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-CGRPR 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 56에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 CGRPR 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-CGRPR 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 55에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 CGRPR 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-CGRPR 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 56에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 55에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, CGRPR 항원 결합-단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2e에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, Tau 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 2e에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-CGRPR 항원-결합 단편 전이유전자는 T125N(중쇄) 및/또는 Q198N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 55 및 56의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 에레누맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-CGRPR 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-Tau 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 2e의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 에레누맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-CGRPR 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 편두통 및 군발성 두통에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 또는 갈카네주맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 특정 실시양태에서, 환자는 간헐적 편두통 또는 만성 편두통으로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 특정 실시양태에서, 환자는 간헐적 군발성 두통 또는 만성 군발성 두통으로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.1에 기재되고 도 2e에 나타내었다. 이러한 벡터는 인간 CNS 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV9, AAVrh10, AAVrh20, AAVrh39, 또는 AAVcy5 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 재조합 벡터는 재조합 벡터가 CNS에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 뇌척수액(CSF) 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.1을 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-CGRPR 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 편두통 또는 군발성 두통으로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-CGRPR 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-CGRPR 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 또는 갈카네주맙으로 치료되었으며, 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 및 갈카네주맙 중 1 이상에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-CGRPR 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 인간 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-CGRPR HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-CGRPR HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 편두통 또는 군발성 두통으로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 척추강내 투여, 특히 수조내 또는 요추 투여, 또는 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 CNS 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 CNS에 생성함으로써 달성되는 편두통 또는 군발성 두통의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-CGRPR HuPTMmAb 또는 항-CGRPR HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 CNS 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-CGRPR HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, 편두통 또는 군발성 두통으로 진단되거나 편두통 또는 군발성 두통에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-CGRPR HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 2e에 기재된 에레누맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 녹색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 청색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 55)의 아미노산 위치 N77 및/또는 Q122 및/또는 N172 및/또는 N205 및/또는 N214 또는 경쇄(서열번호 56)의 N28 및/또는 N174 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 에레누맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 55)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 56)의 Y87 및/또는 Y88에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-CGRPR HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한(예를 들어, 당업계에 알려진 분석들, 예를 들어 하기 섹션 5.2에 기재된 분석들에 의해 검출되는) NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한(예를 들어, 당업계에 알려진 분석들, 예를 들어 하기 섹션 5.2에 기재된 분석들에 의해 검출되는) 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 2,6 시알화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화된 2,6 시알화이고/이거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 편두통, 군발성 두통, 또는 구역질, 광 민감성, 소리 민감성, 충혈 눈, 눈꺼풀 부종, 이마 및 얼굴 발한, 눈물(유루증), 동공의 비정상적인 작은 크기(축동), 비충혈, 콧물(비루), 및 눈꺼풀 처짐(안검하수)을 포함한 이와 연관된 증상 중 1 이상을 예방하거나 이의 강도 또는 빈도를 감소시키는 것이다. 효능은 편두통 또는 군발성 두통의 강도 또는 빈도에서의 감소, 또는 정의된 기간에 걸쳐 사용된 급성 편두통-특이적 의약의 양에서의 감소를 측정함으로써 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, CNS에 대한 항-CGRPR HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 군발성 두통 또는 편두통에 대한 이용가능한 치료는 몇몇을 들자면, 비제한적으로, 트립탄, 에르고타민 유도체 및 NSAID, 및 비제한적으로, 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 및 갈카네주맙을 포함한 항-CGRPR 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.4 자가면역 장애를 위한 항-인터류킨 및 항-인터류킨 수용체 HuPTM 구조체 및 제형
1 이상의 자가면역-관련 장애, 예컨대 아토피 피부염, 건선(예를 들어, 판상형 건선, 농포성 건선, 및 홍피성 건선), 관절염(예를 들어, 건선성 관절염, 및 알킬화 척추염), 크론병, 또는 천식(종합적으로 본원에서 "대상체 AI-D"로 지칭됨)을 치료하는 것으로 표시된 항-IL 또는 항-ILR로부터 유래된 인터류킨(IL) 또는 인터류킨 수용체(ILR)(예를 들어, IL4R, IL17A, IL12/IL23, 또는 IL-5)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 두필루맙, 익세키주맙, 세쿠키누맙, 우스테키누맙, 또는 메폴리주맙 또는 상술한 것 중 하나의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 이들 항체의 Fab 단편의 아미노산 서열은 각각 도 3a 내지 3e에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, IL/ILR-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 아토피 피부염, 건선(예를 들어, 판상형 건선), 관절염(예를 들어, 건선성 관절염, 및 알킬화 척추염), 크론병, 또는 천식으로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여하여 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 IL/ILR에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 두필루맙, 익세키주맙, 세쿠키누맙, 우스테키누맙, 메폴리주맙, 또는 이의 변이체와 같은 IL/ILR에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-IL/ILR 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-IL4R 항원-결합 단편 전이유전자는 두필루맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 7 및 8의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 3a를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 107(두필루맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 108(두필루맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 인간 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 티로신(Y) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 7의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 3a에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 GPPCPPCPAPEFLGG(서열번호 231), 및 구체적으로, GPPCPPCPA(서열번호 229) 또는 GPPCPPCPAPEFLGGPSVFL(서열번호 230)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 7의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-IL4R 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 8에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 IL4R 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL4R 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 7에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 IL4R 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL4R 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 8에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 7에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, IL4R 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, IL4R 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-IL4R 항원-결합 단편 전이유전자는 T120N(중쇄), Q165N 또는 Q165S(경쇄), 및/또는 E200N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 7 및 8의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 두필루맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-IL4R 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-IL4R 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 3a의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 두필루맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 익세키주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 3b를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 109(익세키주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 110(익세키주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 티로신(Y) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 9의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 3b에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 GPPCPPCPAPEFLGG(서열번호 231), 및 구체적으로, GPPCPPCPA(서열번호 229) 또는 GPPCPPCPAPEFLGGPSVFL(서열번호 230)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 9의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 10에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 IL17A 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 9에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 IL17A 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 10에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 9에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, IL17A 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, IL17A 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 L114N(중쇄), Q165N 또는 Q165S(경쇄), 및/또는 E200N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 9 및 10의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 익세키주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-IL17A 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 3b의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 익세키주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 세쿠키누맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 11 및 12의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 3c를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 111(세쿠키누맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 112(세쿠키누맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 11의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 3c에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHT CPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 11의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 12에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 IL17A 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 11에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 IL17A 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 12에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 11에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, IL17A 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3c에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, IL17A 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3c에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 L122N(중쇄), Q161N 또는 Q161S(경쇄), 및/또는 E196N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 11 및 12의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 세쿠키누맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-IL17A 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-IL/ILR 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 3c의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 세쿠키누맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-IL12/IL23 항원-결합 단편 전이유전자는 우스테키누맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 13 및 14의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 3d를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 113(우스테키누맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 114(우스테키누맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 13의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 3d에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHT CPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 13의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-IL12/IL23 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 14에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 IL/ILR 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL12/IL23 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 13에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 IL12/IL23 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL12/IL23 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 14에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 13에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, IL12/IL23 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3d에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, IL12/IL23 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3d에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-IL12/IL23 항원-결합 단편 전이유전자는 L114N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 13 및 14의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 우스테키누맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-IL12/IL23 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-IL12/IL23 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 3d의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 우스테키누맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-IL-5 항원-결합 단편 전이유전자는 메폴리주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 15 및 16의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 3e를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 115(메폴리주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 116(메폴리주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 15의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 3e에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHT CPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 15의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-IL-5 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 16에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 IL-5 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL-5 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 15에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 IL-5 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-IL-5 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 16에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 15에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, IL-5 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3e에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, IL-5 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 3e에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-IL-5 항원-결합 단편 전이유전자는 T114N(중쇄), Q166N 또는 Q166S(경쇄), 및/또는 E201N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 15 및 16의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 메폴리주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-IL-5 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-IL-5 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 3e의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 메폴리주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-IL/ILR 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 대상체 AI-D 중 1 이상에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 두필루맙, 익세키주맙, 세쿠키누맙, 우스테키누맙, 또는 메폴리주맙일 수 있으며 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 대상체 AI-D 중 1 이상로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 3a-3e에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에(대안적 실시양태에서, 예컨대 간 동맥을 통해 간 혈류 내에) 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-IL/ILR 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 대상체 AI-D 중 1 이상으로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-IL/ILR 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-IL/ILR 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 두필루맙, 익세키주맙, 세쿠키누맙, 우스테키누맙, 또는 메폴리주맙으로 치료되었으며, 두필루맙, 익세키주맙, 세쿠키누맙, 우스테키누맙, 또는 메폴리주맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-IL/ILR 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 인간 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-IL/ILR HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-IL/ILR HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 대상체 AI-D 중 1 이상으로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 피하, 근육내, 또는 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 또는 근육 조직에 생성함으로써 달성되는 대상체 AI-D 중 1 이상의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-IL/ILR HuPTMmAb 또는 항-IL/ILR HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-IL/ILR HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, 대상체 AI-D 중 1 이상으로 진단되거나 대상체 AI-D 중 1 이상에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-IL4R HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 3a에 기재된 두필루맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 7)의 아미노산 위치 N77, N167, 및/또는 Q117 또는 경쇄(서열번호 8)의 Q105, N163, 및/또는 N215 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 두필루맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 7)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 8)의 Y91 및/또는 Y92에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-IL4R HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-IL17A HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 3b에 기재된 익세키주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 9)의 아미노산 위치 Q111, N161, 및/또는 N203 또는 경쇄(서열번호 10)의 Q105, N163 및/또는 N215 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 익세키주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 9)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 10)의 Y91 및/또는 Y92에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-IL17A HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한 α-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-IL17A HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 3c에 기재된 세쿠키누맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 11)의 아미노산 위치 N169 또는 경쇄(서열번호 12)의 Q101, N159, 및/또는 N211 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 세쿠키누맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 11)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 Y107 및/또는 Y108 및/또는 경쇄(서열번호 12)의 Y87 및/또는 Y88에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-IL17A HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 α-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-IL12/IL23 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 3d에 기재된 우스테키누맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 13)의 아미노산 위치 Q111 및/또는 N161 또는 경쇄(서열번호 14)의 Q100, N158, 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 우스테키누맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 경쇄(서열번호 14)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-IL12/IL23 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 α-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-IL-5 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 3e에 기재된 메폴리주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 15)의 아미노산 위치 N76 및/또는 N161 또는 경쇄(서열번호 16)의 N22, N34, N164, 및/또는 N216 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 메폴리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 15)의 Y93 및/또는 Y94 및/또는 경쇄(서열번호 16)의 Y92 및/또는 Y93에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-IL-5 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 2,6 시알화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 대상체 AI-D의 진행을 늦추거나 정지시키는 것이다.
효능은 예를 들어, 피부, 결장, 또는 관절과 같은 신체의 영향을 받은 조직 또는 영역에서 증상 또는 염증의 정도를 스코어링(scoring)함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, CD에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 크론병 활동 지수(Crohn's Disease Activity Index)[CDAI]를 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, Best WR et al. (1976) Gastroenterology 70(3):439-44, "Development of a Crohn's disease activity index. National Cooperative Crohn's Disease Study." 참고). 건선 및 아토피 피부염에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 영향을 받은 피부 또는 환자의 삶의 질에서의 변화를 평가함으로써 모니터링될 수 있다. 1 이상의 표준화된 평가가 변화를 평가하기 위해 사용될 수 있다. (예를 들어, 건선 중증도 지수(Psoriasis Area and Severity Index)(PASI), 임상 의사 평가(Physician Global Assessment)(PGA), 격자계(lattice system), NPF 건선 점수(NPF Psoriasis Score)(NPF-PS), 의학 조사 결과 숏폼 36(Medical Outcome Survey Short Form 36)(SF-36), 유로(Euro) QoL, 피부 삶의 질 지수(Dermatology Life Quality Index)(DLQI), 및 Skindex를 포함한 표준화된 평가를 기재하는 Feldman & Krueger, (2005) Ann. Rheum. Dis. 64(Suppl II):ii65-ii68: "Psoriasis assessment tools in clinical trials"; 습진 중증도 평가 지수(Eczema Area and Severity Index)(EASI) 및 아토피 피부염 중증도 지수(Severity Scoring of Atopic Dermatitis Index)(SCORAD)를 포함한 표준화된 평가를 기재하는 Schram et al. (2012) Allergy; 67: 99-106: "EASI, (objective) SCORAD and POEM for atopic eczema: responsiveness and minimal clinically important difference" 참고). 관절염에 대해, 효능은 질환의 활성, 환자의 기능 수준, 또는 환자의 관절에 대한 구조적 손상의 정도 중 1 이상을 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, 강직성 척추염에 대한 표준화된 평가를 기재하는 Zockling & Braun (2005) Clin. Exp. Rheumatol 23 (Suppl. 39) S133-S141: "Assessment of ankylosing spondylitis 참고; 또한, 건선성 관절염에 대한 표준화된 평가를 기재하는 Coates et al. (2011) J. Rheumatol. 38(7):1496-1501: "Development of a disease severity and responder index for psoriatic arthritis (PsA)-report of the OMERACT 10 PsA special interest group" 참고).
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간 또는 근육에 대한 항-IL/ILR HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 대상체 AI-D에 대한 이용가능한 치료는 몇몇을 들자면, 비제한적으로, 건선에 대한 광선요법, 천식에 대한 아미노살리실레이트, 면역조절제(예를 들어, 아자티오프린(AZA), 6-메르캅토퓨린(6-MP), 메토트렉세이트(MTX)), 경구 또는 국소 코르티코스테로이드(예를 들어, 프레드니손 또는 부데소니드), 국소 칼시뉴린 억제제, 흡입성 코르티코스테로이드, 및/또는 크론병에 대한 항생제 및, 비제한적으로, 두필루맙, 익세키주맙, 세쿠키누맙, 우스테키누맙, 또는 메폴리주맙을 포함하는 항-IL/ILR 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.5 IBD 또는 다발성 경화증을 위한 항-인테그린 HuPTM 구조체 및 제형
염증성 장 질환(inflammatory bowel disease)(IBD), 예컨대 궤양성 대장염(UC) 또는 크론병(CD), 및 다발성 경화증(MS)을 치료하는 것으로 표시된 항-α4 인테그린 또는 항-α4β7 인테그린으로부터 유래된 인테그린(예를 들어, α4 또는 α4β7)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 베돌리주맙, 나탈리주맙, 또는 상술한 것 중 하나의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 베돌리주맙 및 나탈리주맙의 Fab 단편의 아미노산 서열은 각각 도 4a 및 4b에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, 인테그린-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 IBD 또는 MS로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 인테그린에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 베돌리주맙, 나탈리주맙과 같은 인테그린, 또는 이의 변이체에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-인테그린 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 베돌리주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 17 및 18의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 4a를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 117(베돌리주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 118(베돌리주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 17의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 4a에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELAGA(서열번호 236), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELAGAPSVFL(서열번호 237) 또는 KTHLCPPCPAPELAGAPSVFL(서열번호 238)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 117의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 18에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인테그린 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 17에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 인테그린 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 18에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 17에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, 인테그린 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 4a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, 인테그린 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 4a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 L116N(중쇄), Q165N 또는 Q165S(경쇄), 및/또는 E200N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 17 및 18의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 베돌리주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-인테그린 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 4a의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 베돌리주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 나탈리주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 19 및 20의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 4b를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 119(나탈리주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 120(나탈리주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 특히 MS의 치료를 위해, 중쇄 및 경쇄는 인간 CNS 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열, 예를 들어 표 1에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것을 갖는다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 19의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 4b에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 GPPCPPCPAPEFLGG(서열번호 231), 및 구체적으로, GPPCPPCPA(서열번호 229) 또는 GPPCPPCPAPEFLGGPSVFL(서열번호 230)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 119의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 20에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인테그린 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 19에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 인테그린 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 20에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 19에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, 인테그린 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 4b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, 인테그린 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 4b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 L118N(중쇄), Q159N 또는 Q159S(경쇄), 및/또는 E194N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 19 및 20의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 나탈리주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-인테그린 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-인테그린 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 4b의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 나탈리주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
구체적 실시양태에서, AAV8 캡시드(서열번호 78), AAV9 캡시드(서열번호 79) 또는 AANrh10 캡시드(서열번호80)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 또는 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-인테그린 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈을 포함하는 AAV 벡터가 제공된다.
유전자 요법 방법
항-인테그린 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 IBD 또는 MS에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 베돌리주맙 또는 나탈리주맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 IBD, 예컨대 UC 또는 CD, 또는 MS로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 특별한 실시양태에서, IBD는 적당히 내지 심각하게 활성일 수 있다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.1 및 5.4.2에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 벡터는 인간 간 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 4a 및 4b에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다. 다른 실시양태에서, 이러한 벡터는 인간 CNS 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV9, AAVrh10, AAVrh20, AAVrh39, 또는 AAVcy5 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 4b에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 CNS에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 뇌척수액(CSF) 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.1을 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-인테그린 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 IBD, MS로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-인테그린 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-인테그린 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 베돌리주맙 및/또는 나탈리주맙으로 치료되었으며, 베돌리주맙 또는 나탈리주맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-인테그린 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-인테그린 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-인테그린 HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 IBD 또는 MS로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 피하, 근육내, 또는 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간, 근육 또는 CNS 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간, 근육 또는 CNS 조직에 생성함으로써 달성되는 IBD 또는 MS의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-인테그린 HuPTMmAb 또는 항-인테그린 HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다. 대안적으로, 일부 실시양태에서, 시그널 서열은 각각 CNS 세포, 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 1, 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-인테그린 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, IBD 또는 MS로 진단되거나 IBD 또는 MS에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-인테그린 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 4a에 기재된 베돌리주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 17)의 아미노산 위치 Q113 및/또는 N163 또는 경쇄(서열번호 18)의 Q105 및/또는 N163 및/또는 N215 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 베돌리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 17)의 Y94, Y95 및/또는 Y106 및/또는 경쇄(서열번호 18)의 Y91 및/또는 Y92에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-인테그린 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-인테그린 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 4b에 기재된 나탈리주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 19)의 아미노산 위치 Q115, N165, 및/또는 N207 또는 경쇄(서열번호 20)의 Q99, N157 및/또는 N209 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 나탈리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 19)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 20)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-인테그린 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 IBD 또는 MS의 진행을 늦추거나 정지시키는 것, 특히 환자에 대한 통증 및 불편의 감소 및/또는 MS의 경우에, 이동성에서의 개선이다. 효능은 영향을 받은 조직에서 증상 또는 염증의 정도를 스코어링함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, UC에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 메이요 점수(Mayo score) 및 내시경 하위점수를 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, Lobaton et al. (2015) J. Crohns Colitis. 2015 Oct;9(10):846-52, "The Modified Mayo Endoscopic Score (MMES): A New Index for the Assessment of Extension and Severity of Endoscopic Activity in Ulcerative Colitis Patients." 참고). CD에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 크론병 활동 지수[CDAI]를 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, Best WR et al. (1976) Gastroenterology, Mar;70(3):439-44, "Development of a Crohn's disease activity index. National Cooperative Crohn's Disease Study." 참고). 예를 들어, MS에 대해, 효능은 재발 빈도(예를 들어, 연간 재발율), 신체적 장애 상태(예를 들어, 쿠르츠케 확장 장애 상태 척도(Kurtzke Expanded Disability Status Scale)(EDSS) 스코어링), 및 MRI를 사용한 뇌 스캔을 포함한 생물학적 마커(예를 들어, 자기 공명 영상을 통한 T1-가중 가돌리늄(Gd)-증진 병변 및 T2-고신호감도 병변의 평가)를 평가함으로써 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, CNS, 간, 또는 근육에 대한 항-인테그린 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 IBD에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 아미노살리실레이트, 코르티코스테로이드, 및 면역조절제(예를 들어, 아자티오프린, 6-메르캅토퓨린, 및/또는 메토트렉세이트) 및, 비제한적으로, 베돌리주맙 또는 나탈리주맙을 포함하는 항-인테그린 약제와의 투여를 포함한다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 MS에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 인터페론 베타, 인터페론 베타 1a, 글라티라머 아세테이트, 사이클로포스파미드, 코르티코스테로이드, 면역조절제(예를 들어, 아자티오프린, 6-메르캅토퓨린, 및/또는 메토트렉세이트), 및 미톡산트론 및, 비제한적으로, 나탈리주맙을 포함하는 항-인테그린 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.6 항-PCSK9 및 항-ANGPTL3 HuPTM mAb
이형접합 가족성 고콜레스테롤혈증(HeFH), 동형접합 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 또는 죽상경화성 심혈관계 질환(ACD)을 치료하는 것, 및/또는 저밀도 지질단백질 콜레스테롤(LDL-C), 트리글리세리드(TG), 및/또는 총 콜레스테롤(TC) 수준을 낮추는 것, 및/또는 죽상경화성 플라크 형성을 감소시키거나 늦추는 것으로 표시된 항-PCSK9 또는 안지오포이에틴-유사 3(ANGPTL3)으로부터 유도된 전구단백질 전환효소 서브틸리신/켁신 9 형(PCSK9)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 에비나쿠맙, 또는 상술한 것 중 하나의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 및 에비나쿠맙의 Fab 단편의 아미노산 서열은 각각 도 5a 내지 5c에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, PCSK9-결합 또는 항-ANGPTL3-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 HeFH, HoFH, 또는 ACD; 비정상적으로 높은 수준의 LDL-C, TG, 및/또는 TC; 또는 비정상적 죽상경화성 플라크로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 PCSK9 또는 ANGPTL3에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 에비나쿠맙, 또는 이의 변이체와 같은 PCSK9 또는 ANGPTL3에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 알리로쿠맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 21 및 22의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 5a를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 121(알리로쿠맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 122(알리로쿠맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 인간 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-PCSK9-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 21의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 5a에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 21의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 22에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 PCSK9 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 21에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 PCSK9 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 22에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 21에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, PCSK9 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 5a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, PCSK9 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 5a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 L113N(중쇄), Q166N 또는 Q166S(경쇄), 및/또는 E201N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 21 및 22의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 알리로쿠맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-PCSK9 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 5a의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 알리로쿠맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 에볼로쿠맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 23 및 24의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 5b를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 123(에볼로쿠맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 124(에볼로쿠맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-PCSK9-항원 결합 도메인은 C-말단 글루탐산(E) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 23의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 5b에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 23의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 24에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 PCSK9 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 23에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 PCSK9 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 24에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 23에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, PCSK9 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 5b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, PCSK9 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 5b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 T110N(중쇄) 및/또는 Q197N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 23 및 24의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 에볼로쿠맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-PCSK9 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-PCSK9 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 5b의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 에볼로쿠맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-ANGPTL3 항원-결합 단편 전이유전자는 에비나쿠맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 25 및 26의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 5c를 참고함)을 포함한다. 이들은 중쇄 C1 불변 도메인 및/또는 경쇄 불변 도메인에 융합되어, Fab 단편을 형성할 수 있다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 25(에비나쿠맙 중쇄 가변 도메인을 코딩함) 및 서열번호 26(에비나쿠맙 경쇄 가변 도메인을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-ANGPTL3-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 25의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 5c에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHT CPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 25의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-ANGPTL3 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 26에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 ANGPTL3 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-ANGPTL3 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 25에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 ANGPTL3 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-ANGPTL3 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 26에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 25에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, ANGPTL3 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 5c에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, ANGPTL3 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 5c에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-ANGPTL3 항원-결합 단편 전이유전자는 M121N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 25 및 26의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 에비나쿠맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-ANGPTL3 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-ANGPTL3 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 5c의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 에비나쿠맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 mAb, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 HeFH, HoFH, 또는 ADC에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 또는 에비나쿠맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 HeFH, HoFH, 또는 ADC로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 5a-5c에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 HeFH, HoFH, 또는 ADC로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 또는 에비나쿠맙으로 치료되었으며, 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 또는 에비나쿠맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 HeFH, HoFH, 또는 ADC로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 피하, 근육내, 또는 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 또는 근육 조직에 생성함으로써 달성되는 HeFH, HoFH, 또는 ADC의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
구체적 실시양태에서, 항-PCSK9 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 5a에 기재된 알리로쿠맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 21)의 아미노산 위치 N30, N59, 및/또는 N160 또는 경쇄(서열번호 22)의 N22, N35, Q106, N164, 및/또는 N216 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 알리로쿠맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 21)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 22)의 Y92 및/또는 Y93에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-PCSK9 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-PCSK9 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 5b에 기재된 에볼로쿠맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 23)의 아미노산 위치 Q107 및/또는 N157 및/또는 N190 및/또는 N199 또는 경쇄(서열번호 24)의 N71 및/또는 N173 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 에볼로쿠맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 23)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 24)의 Y88 및/또는 Y89에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-PCSK9 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-ANGPTL3 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 5c에 기재된 에비나쿠맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 25)의 아미노산 위치 N77, Q118, 및/또는 N168 또는 경쇄(서열번호 26)의 Q100, N158 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 에비나쿠맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 25)의 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 26)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-PCSK9 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 HeFH, HoFH, 또는 ADC의 진행을 늦추거나 정지시키는 것 및/또는 저밀도 지질단백질 콜레스테롤(LDL-C) 수준을 낮추는 것이다. 효능은 LDL-C 수준을 모니터링함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 효능은 기준선으로부터 LDL-C의 평균 % 변화를 평가함으로써 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간 또는 근육에 대한 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 HeFH, HoFH, 또는 ACD에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 식습관, 스타틴, 에제티미브, 및 LDL 성분채집 및, 비제한적으로, 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 또는 에비나쿠맙을 포함하는 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.7 항-OxPL HuPTM mAb
죽상경화성 심혈관계 질환(ACD), 죽상경화성 플라크 형성, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 또는 고콜레스테롤혈증을 포함하는 심혈관계 질환을 치료하는 것, 및/또는 감소시키는 것, 및/또는 늦추는 것으로 표시된 산화된 인지질(OxPL)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 E06-scFv, 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. E06-scFv의 아미노산 서열은 도 5d에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, OxPL-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 심혈관계 질환, ACD, 고콜레스테롤혈증, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및/또는 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 및/또는 비정상적 죽상경화성 플라크로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 OxPL에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 E06-scFv, 또는 이의 변이체와 같은 OxPL에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-OxPL 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-OxPL 항원-결합 단편 전이유전자는 E06-scFv의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 59 및 60의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 5d를 참고함)을 포함한다. E06-scFv는 scFv 분자이며, 따라서 유동성 링커에 의해 연결된 항-OxPL mAb의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 함유한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 159(E06-scFv 중쇄 가변 도메인을 코딩함) 및 서열번호 160(E06-scFv 경쇄 가변을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. E06은 scFv이며, 예컨대 scFv는 경쇄와 중쇄 사이에 링커를 갖는 하나의 단백질 쇄로서 발현된다. scFv는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예컨대, 간세포) 또는 인간 근육 세포에서 적절한 발현 및 분비를 위해 N-말단에 리더 서열을 갖는다. 다른 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄는 별도의 단백질로서 발현되고, 둘 다 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 인간 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 경쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 유동성 펩티드 링커를 포함할 수 있다. 유동성 펩티드 링커 서열은 유동성 잔기, 예컨대 글리신(G) 또는 세린(S)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유동성 펩티드 링커는 10-30 개 잔기 또는 G, S, 또는 G 및 S 둘 다를 포함할 수 있다. 하전된 잔기, 예컨대 E 및 K는 가용성을 향상시키기 위해 사용 및 배치될 수 있다. 유동성 펩티드 링커 서열은 (GGGGS)n의 아미노산 서열을 가질 수 있되, n은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일 수 있다(서열번호 243). 이 경우에, 시그널 서열은 경우에 따라, scFv, 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 서열의 N-말단에 융합된다.
특정 실시양태에서, 항-OxPL 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 60에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 OxPL 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-OxPL 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 59에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 OxPL 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-OxPL 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 60에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 59에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, OxPL 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 5d에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, OxPL 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 5d에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-OxPL 항원-결합 단편 전이유전자는 선택적으로 돌연변이 T118N(중쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)을 갖는, 각각 서열번호 59 및 60의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 E06-scFv Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-OxPL 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-OxPL 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 5d의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 E06-scFv CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-OxPL mAb, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 심혈관계 질환, ACD, 고콜레스테롤혈증, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및/또는 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 및/또는 비정상적 죽상경화성 플라크에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 E06-scFv일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 심혈관계 질환, ACD, 고콜레스테롤혈증, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및/또는 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 및/또는 비정상적 죽상경화성 플라크로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 5d에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-OxPL 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 심혈관계 질환, ACD, 고콜레스테롤혈증, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및/또는 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 및/또는 비정상적 죽상경화성 플라크로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-OxPL 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-OxPL 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 E06-scFv 또는 E06으로 치료되었으며, E06-scFv 또는 E06에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-OxPL 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-OxPL HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-OxPL HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 심혈관계 질환, ACD, 고콜레스테롤혈증, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및/또는 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 및/또는 비정상적 죽상경화성 플라크로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 피하, 근육내, 또는 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 또는 근육 조직에 생성함으로써 달성되는 심혈관계 질환, ACD, 고콜레스테롤혈증, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및/또는 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 및/또는 비정상적 죽상경화성 플라크의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
구체적 실시양태에서, 항-OxPL HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 5d에 기재된 E06-scFv의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 59)의 아미노산 위치 N53 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, E06-scFv의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM scFv 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 59)의 Y58 및/또는 Y62 및/또는 Y96 및/또는 Y97 및/또는 경쇄(서열번호 60)의 Y42에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-OxPL HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, scFv의 HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 심혈관계 질환, ACD, 고콜레스테롤혈증, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및/또는 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 및/또는 비정상적 죽상경화성 플라크를 치료하는 것, 이의 진행을 늦추는 것, 및/또는 정지시키는 것이다. 효능은 LDL 수준, 염증 마커를 모니터링함으로써, 또는 대동맥판막 협착증의 정도에서의 변화에 대해서는, 예컨대 대동맥 판막 면적, 피크 및 평균 판막통과 변화도, 및/또는 최대 대동맥 속도에서의 변화에 대해 모니터링함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 효능은 기준선으로부터 LDL의 평균 % 변화를 평가함으로써 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간 또는 근육에 대한 항-OxPL HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 심혈관계 질환, ACD, 고콜레스테롤혈증, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및/또는 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 및/또는 비정상적 죽상경화성 플라크에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 식습관, 스타틴, 에제티미브, 및 LDL 성분채집 및, 비제한적으로, E06-scFv를 포함하는 항-OxPL 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.8 골다공증을 위한 항-RANKL HuPTM 구조체 및 제형
골다공증 또는 비정상적 골 손실 또는 약화를 치료하는 것(예를 들어, 뼈의 거대 세포 종양을 치료하는 것, 치료-유도된 골 손실을 치료하는 것, 유방암 및 전립선암 환자에서 골량의 손실(또는 증가)을 늦추는 것, 골 전이로 인한 골격-관련 이벤트를 예방하는 것) 또는 골 흡수 및 교체율을 감소시키는 것으로 표시된, 데노수맙(도 6)과 같은 항-RANKL 항체로부터 유래된 핵 인자 카파-B 리간드(nuclear factor kappa-B ligand)(RANKL)의 수용체 활성인자에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 데노수맙, 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 이 항체의 Fab 단편의 아미노산 서열은 도 6에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, RANKL-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 골다공증으로 진단되거나, 골 손실로 고통받는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 RANKL에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 데노수맙, 또는 이의 변이체와 같은 RANKL에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-RANKL 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-RANKL 항원-결합 단편 전이유전자는 데노수맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 27 및 28의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 6을 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 127(데노수맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 128(데노수맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-RANKL-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 27의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 6에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227) 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 27의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-RANKL 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 28에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 RANKL 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-RANKL 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 27에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 RANKL 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-RANKL 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 28에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 27에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, RANKL 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 6에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, RANKL 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 6에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-RANKL 항원-결합 단편 전이유전자는 L117N(중쇄), Q161N 또는 Q161S(경쇄), 및/또는 E196N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 27 및 28의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 데노수맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-RANKL 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-RANKL 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 6의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 데노수맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-RANKL 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 골다공증 또는 비정상적 골 손실(예를 들어, 유방암 또는 전립선암 환자에서 또는 골 전이로 인한 것)에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 데노수맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 골다공증 또는 비정상적 골 손실로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 6에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-RANKL 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 골다공증 또는 비정상적 골 손실로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-RANKL 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-RANKL 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 데노수맙으로 치료되었으며, 데노수맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-RANKL 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-RANKL HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-RANKL HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 골다공증 또는 골 손실로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 또는 근육 조직에 생성함으로써 달성되는 골다공증 또는 골 손실의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-RANKL HuPTMmAb 또는 항-RANKL HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-RANKL HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, 골다공증 또는 골 손실로 진단되거나 골다공증 또는 골 손실에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-RANKL HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 6에 기재된 데노수맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 27)의 아미노산 위치 N77 및/또는 N164 및/또는 Q114 또는 경쇄(서열번호 28)의 N159 및/또는 N211 및/또는 Q101 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 데노수맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 27)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 28)의 Y88에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-RANKL HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 골다공증 또는 골 손실의 진행을 늦추거나 정지시키는 것이다. 효능은 골 조직 또는 골격 합병증(events) 또는 골격 합병증의 결여를 평가함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 골다공증에 대해, 효능은 골 미네랄 함량 평가, 척추 골절에 대한 방사선투과사진의 평가, 또는 임상 골절 확인을 위한 진단적 영상화에 의해 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간 또는 근육에 대한 항-RANKL HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 골다공증 또는 골 손실에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 비스포스포네이트(예를 들어, 졸레드론산), 부갑상선 호르몬(예를 들어, 테리파라타이드[PTH 1-34] 및/또는 전장 PTH 1-84), 칼슘, 비타민 D, 및 암으로 진단된 환자에서의 화학요법, 냉동요법, 또는 방사선요법, 및 비제한적으로, 데노수맙을 포함하는 항-RANKL 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.9 암 및 림프종을 위한 PD 차단제 HuPTM 구조체 및 제형
절제불가능한/전이성 흑색종, 림프종(예를 들어, 호지킨(Hodgkin) 림프종), 및 암종(예를 들어, 신장 세포 암종, 편평세포 암종, 및 비소세포 폐 암종)을 치료하는 것으로 표시된, PD-1 차단제(예를 들어, 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2)로부터 유래된 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1), 프로그램된 사멸-리간드 1(PD-L1), 또는 프로그램된 사멸-리간드 2(PD-L2)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 또는 상술한 것 중 하나의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 니볼루맙 및 펨브롤리주맙의 Fab 단편의 아미노산 서열은 각각 도 7a 및 7b에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, PD-1/PD-L1/PD-L2-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 흑색종, 암종, 또는 림프종으로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 PD-1/PD-L1/PD-L2에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 또는 이의 변이체와 같은 PD-1/PD-L1/PD-L2에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 니볼루맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 29 및 30의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 7a를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 129(니볼루맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 130(니볼루맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 인간 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 티로신(Y) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 29의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 7a에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 GPPCPPCPAPEFLG(서열번호 240), 및 구체적으로, GPPCPPCPA(서열번호 229) 또는 GPPCPPCPAPEFLGPSVFL(서열번호 241)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 29의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 30에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 PD-1 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 29에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 PD-1 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 30에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 29에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, PD-1 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 7a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, PD-1 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 7a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 L108N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 29 및 30의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 니볼루맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 7a의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 니볼루맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 펨브롤리주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 31 및 32의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 7b를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 131(펨브롤리주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 132(펨브롤리주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 티로신(Y) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 31의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 7b에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 GPPCPPCPAPEFLG(서열번호 240), 및 구체적으로, GPPCPPCPA(서열번호 229) 또는 GPPCPPCPAPEFLGPSVFL(서열번호 241)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 31의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 32에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 PD-1 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 31에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 PD-1 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 32에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 31에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, PD-1 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 7b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, PD-1 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 7b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 T115N(중쇄) Q164N 또는 Q164S(경쇄), 및/또는 E199N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 31 및 32의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 펨브롤리주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 7b의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 펨브롤리주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-PD-1, 항-PD-L1, 및 항-PD-L2 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 중 1 이상을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 흑색종, 암종, 또는 림프종에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 특히, 항-PD-1, 항-PD-L1, 및 항-PD-L2 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 중 1 이상을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 전이성 흑색종, 림프종, 비소세포 폐 암종, 두경부 편평세포 암, 요로상피 암종, 현미부수체 고-불안정성 암, 위암, 신장 세포 암종, 미스매치 회복 결핍 전이성 결장암, 또는 간세포 암종의 치료를 위한 방법이 제공된다. 항체는 니볼루맙 및 펨브롤리주맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 흑색종, 암종, 또는 림프종으로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 7a 및 7b에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 흑색종, 암종, 또는 림프종으로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙으로 치료되었으며, 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-PD-1, 항-PD-L1, 및/또는 항-PD-L2 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-PD-1, 항-PD-L1, 및/또는 항-PD-L2 HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 흑색종, 암종, 림프종, 또는 다른 암으로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 피하, 근육내, 또는 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 또는 근육 조직에 생성함으로써 달성되는 흑색종, 암종, 또는 림프종의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
HuPTMmAb 또는 HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, 전이성 흑색종, 림프종, 비소세포 폐 암종, 두경부 편평세포 암, 요로상피 암종, 현미부수체 고-불안정성 암, 위암, 신장 세포 암종, 미스매치 회복 결핍 전이성 결장암, 또는 간세포 암종으로 진단되거나 전이성 흑색종, 림프종, 비소세포 폐 암종, 두경부 편평세포 암, 요로상피 암종, 현미부수체 고-불안정성 암, 위암, 신장 세포 암종, 미스매치 회복 결핍 전이성 결장암, 또는 간세포 암종에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-PD-1 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 7a에 기재된 니볼루맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 29)의 아미노산 위치 N77, Q105, 및/또는 N155 또는 경쇄(서열번호 30)의 N93, Q100, N158, 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 니볼루맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 29)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 30)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-PD-1 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-PD-1 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 7b에 기재된 펨브롤리주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 31)의 아미노산 위치 Q112, N162, 및/또는 N204 또는 경쇄(서열번호 32)의 N162 및/또는 N214 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 펨브롤리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 31)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 32)의 Y90 및/또는 Y91에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-PD-1 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 전이성 흑색종, 림프종, 비소세포 폐 암종, 두경부 편평세포 암, 요로상피 암종, 현미부수체 고-불안정성 암, 위암, 신장 세포 암종, 미스매치 회복 결핍 전이성 결장암, 또는 간세포 암종의 진행을 늦추거나 정지시키는 것이다. 효능은 전체 생존, 무-진행 생존, 진행 시간, 치료 실패 시간, 무-사건 생존, 다음 치료까지의 시간, 객관적 반응률, 또는 반응 기간을 포함하는 1 이상의 종양학 종료점에 의해 모니터링될 수 있다(예를 들어, U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research, Center for Biologics Evaluation and Research. Guidance for industry: clinical trial endpoints for the approval of cancer drugs and biologics. https://www.fda.gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm071590.pdf. Published May 2007. Accessed October 13, 2017; Oncology Endpoints in a Changing Landscape. Manag. Care. 2016; 1(suppl):1-12 참고).
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간 또는 근육에 대한 1 이상의 항-PD-1, 항-PD-L1, 및 항-PD-L2 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 전이성 흑색종, 림프종, 비소세포 폐 암종, 두경부 편평세포 암, 요로상피 암종, 현미부수체 고-불안정성 암, 위암, 신장 세포 암종, 미스매치 회복 결핍 전이성 결장암, 또는 간세포 암종에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 화학요법(예를 들어, 시스플라틴, 젬시타빈, 페메트릭시드, 카보플라틴, 및/또는 파클리탁셀), 방사선요법, 냉동요법, 표적화된 소분자 요법, 다른 항체, 및 백신 요법, 및 비제한적으로, 니볼루맙 및 펨브롤리주맙을 포함하는 항-PD-1, 항-PD-L1, 및 항-PD-L2 약제 중 1 이상과의 투여를 포함한다.
5.3.10 안구 장애를 위한 항-VEGF 또는 항-fD HuPTM 구조체 및 제형
당뇨 망막병증, 근시성 맥락막 신혈관형성(mCNV), 황반 변성(예를 들어, 신혈관 (습성) 연령-관련 황반 변성(AMD)), 황반부종(예를 들어, 망막 정맥 폐쇄(RVO) 후 황반부종 또는 당뇨병성 황반부종(DME))을 포함하는 1 이상의 망막 장애를 치료하는 것; 혈관신생을 억제하는 것; 또는, 항-VEGF로부터 유래된 경우에, 상피 난소암, 난관암, 복막암 자궁경부암, 전이성 대장암, 전이성 HER2 음성 유방암, 전이성 신장 세포 암종, 교모세포종, 비소세포 폐암(NSCLC)을 포함하는 암 중 1 이상의 유형을 치료하는 것으로 표시된, 각각 항-VEGF 또는 항-보체(예를 들어, 항-fD)로부터 유래된 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 또는 보체(예를 들어, 인자 D(fD))에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 라니비주맙, 베바시주맙, 람팔리주맙, 브롤루시주맙, 또는 상술한 것 중 하나의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 라니비주맙, 베바시주맙, 및 람팔리주맙의 Fab 단편, 및 브롤루시주맙의 scFv의 아미노산 서열은 각각 도 8a 내지 8d에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, VEGF-결합 또는 인자 D-결합 HuPTM mAb(또는 scFv를 포함하는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 망막 장애(예를 들어, 당뇨 망막병증, mCNV, 황반 변성, 또는 황반부종) 또는 암(예를 들어, 상피 난소암, 난관암, 복막암 자궁경부암, 전이성 대장암, 전이성 HER2 음성 유방암, 전이성 신장 세포 암종, 교모세포종, 또는 NSCLC)으로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 VEGF 또는 fD에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 라니비주맙, 베바시주맙, 람팔리주맙, 브롤루시주맙, 또는 이의 변이체와 같은 VEGF 또는 fD에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-VEGF 또는 항-fD 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 라니비주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 33 및 34의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 8a를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 133(라니비주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 134(라니비주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 망막을 형성하는 1 이상의 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 망막을 형성하는 1 이상의 세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 1에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 하기 표 2 및 3에 열거된 것들과 같은 근육 또는 간 세포에서의 발현을 위해 적절할 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-VEGF 항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 33의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 8a에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 33의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 34에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 VEGF 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 33에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 VEGF 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 34에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 33에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, VEGF 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, VEGF 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 L118N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 33 및 34의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 라니비주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-VEGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 8a의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 라니비주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 베바시주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 35 및 36의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 8b를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 135(베바시주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 136(베바시주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 1 이상의 망막 세포 또는 간 세포 유형에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 망막 세포 또는 간 세포 유형에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 1 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 35의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 8b에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 35의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 36에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 VEGF 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 35에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 VEGF 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 36에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 35에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, VEGF 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, VEGF 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 L118N(중쇄) 및/또는 Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 35 및 36의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 베바시주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-VEGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 8b의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 베바시주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-fD 항원-결합 단편 전이유전자는 람팔리주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 37 및 38의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 8c를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 137(람팔리주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 138(람팔리주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 망막을 형성하는 1 이상의 인간 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 망막을 형성하는 세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 1에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-인테그린-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 37의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 8c에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHT CPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 및 구체적으로, KTHT(서열번호 224), KTHL(서열번호 223), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227), 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 37의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-fD 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 38에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 fD 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-fD 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 37에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 fD 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-fD 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 38에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 37에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, fD 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8c에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, fD 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8c에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-fD 항원-결합 단편 전이유전자는 L110N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 37 및 38의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 람팔리주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-fD 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-fD 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 8c의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 람팔리주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 브롤루시주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 39 및 40의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 8d를 참고함)을 포함한다. 브롤루시주맙은 scFv 분자이며, 따라서 유동성 링커에 의해 연결된 항-VEGF mAb의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 함유한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 139(브롤루시주맙 중쇄 가변 도메인 부분을 코딩함) 및 서열번호 142(브롤루시주맙 경쇄 가변 도메인 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 별도의 단백질로서 발현될 때에도, 중쇄 및 경쇄 서열 각각은 인간 세포, 특히 망막을 형성하는 1 이상의 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 망막을 형성하는 세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 1에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 경쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 유동성 펩티드 링커를 포함할 수 있다. 유동성 펩티드 링커 서열은 유동성 잔기, 예컨대 글리신(G) 또는 세린(S)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유동성 펩티드 링커는 10-30 개 잔기 또는 G, S, 또는 G 및 S 둘 다를 포함할 수 있다. 하전된 잔기, 예컨대 E 및 K는 가용성을 향상시키기 위해 사용 및 배치될 수 있다. 유동성 펩티드 링커 서열은 (GGGGS)n의 아미노산 서열을 가질 수 있되, n은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일 수 있다(서열번호 243). 이 경우에, 시그널 서열은 경우에 따라, scFv, 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 서열의 N-말단에 융합된다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 40에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 VEGF 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 39에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 VEGF 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 40에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 39에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, VEGF 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8d에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, VEGF 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8d에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 L115N(중쇄)(도 11a(중쇄) 참고)을 갖는, 각각 서열번호 39 및 40의 단일쇄를 포함하는 초고당화된 브롤루시주맙 scFv를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-VEGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 8d의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 브롤루시주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-VEGF 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 1 이상의 망막 장애(예컨대, 당뇨 망막병증, mCNV, 황반 변성, 또는 황반부종) 또는 암(예컨대, 상피 난소암, 난관암, 복막암 자궁경부암, 전이성 대장암, 전이성 HER2 음성 유방암, 전이성 신장 세포 암종, 교모세포종, 또는 NSCLC)에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체 또는 이의 Fab 단편은 라나비주맙 베바시주맙, 또는 브롤루시주맙일 수 있다. 실시양태에서, 환자는 상기 열거된 다양한 망막 장애 또는 암 중 1 이상으로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다.
또한, 항-fD 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 1 이상의 망막 장애(예컨대, 당뇨 망막병증, mCNV, 황반 변성, 또는 황반부종)에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 람팔리주맙일 수 있고, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 상기 열거된 다양한 망막 장애 중 1 이상으로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다.
전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.3에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 망막-형 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, AAV.7m8 캡시드를 보유하는 벡터가 안구 적응증(ocular indication)에 대해 사용될 수 있다. 도 8a-8d에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 망막에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 눈 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.3을 참고한다. 간에 대한 전달에 대해, 예를 들어 암의 치료를 위해, 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 8a-8c에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-VEGF 또는 항-fD 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 1 이상의 망막 장애 또는 암의 유형으로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-VEGF 항체 또는 항-fD 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-VEGF 항체 또는 항-fD 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 라니비주맙, 베바시주맙, 람팔리주맙, 또는 브롤루시주맙으로 치료되었으며, 라니비주맙, 베바시주맙, 람팔리주맙, 또는 브롤루시주맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-VEGF 또는 항-fD 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-VEGF 또는 항-fD HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-VEGF 또는 항-fD HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 1 이상의 망막 장애로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 망막하, 유리체내, 또는 맥락막상 투여에 의해, 또는 항-VEGF HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 암으로 진단된 인간 대상체(환자)에게 피하, 근육내, 또는 정맥내 투여에 의해, 망막 또는 간의 형질도입된 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 망막 또는 간에 생성함으로써 달성되는 1 이상의 망막 장애 또는 암의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-VEGF 또는 항-fD HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, 망막 장애 또는 암에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 망막 장애 또는 암으로 진단된 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-VEGF HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 8a에 기재된 라니비주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 33)의 아미노산 위치 Q115 및/또는 N165 또는 경쇄(서열번호 34)의 Q100, N158, 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 라니비주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 33)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 34)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-VEGF HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-VEGF HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 8b에 기재된 베바시주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 35)의 아미노산 위치 Q115, 및/또는 N165 또는 경쇄(서열번호 36)의 Q100, N158, 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 베바시주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 35)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 36)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-VEGF HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-fD HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 8c에 기재된 람팔리주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 37)의 아미노산 위치 Q107 및/또는 N157 또는 경쇄(서열번호 38)의 Q100 및/또는 N158 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 람팔리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 37)의 Y60 및/또는 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 38)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-fD HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-VEGF HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 8d에 기재된 브롤루시주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 39)의 아미노산 위치 N77 및/또는 Q112 또는 경쇄(서열번호 40)의 N97 및/또는 Q103 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 브롤루시주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 39)의 Y32 및/또는 Y33 및/또는 Y34 및/또는 Y59 및/또는 Y60 및/또는 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 40)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-VEGF HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 망막 장애 또는 암의 유형의 진행을 늦추거나 정지시키는 것, 및/또는 혈관신생을 억제하는 것이다. 망막 장애의 경우에, 효능은 시력을 모니터링함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 효능은 기준선으로부터 시력의 변화를 평가함으로써 모니터링될 수 있다. 암의 경우에, 효능은 전체 생존, 무-진행 생존, 진행 시간, 치료 실패 시간, 무-사건 생존, 다음 치료까지의 시간, 객관적 반응률, 또는 반응 기간을 포함하는 1 이상의 종양학 종료점을 평가함으로써 모니터링될 수 있다. (예를 들어, U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research, Center for Biologics Evaluation and Research. Guidance for industry: clinical trial endpoints for the approval of cancer drugs and biologics. https://www.VEGFa.gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm071590.pdf. Published May 2007. Accessed October 13, 2017; Oncology Endpoints in a Changing Landscape. Manag. Care. 2016; 1(suppl):1-12 참고).
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 망막 또는 간에 대한 항-VEGF 또는 항-fD HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 당뇨 망막병증, mCNV, 황반 변성, 또는 황반부종에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 레이저 광응고화, 베르테포르핀, 아플리베르셉트, 및/또는 유리체내 스테로이드를 이용한 광선역학적 요법, 및 비제한적으로, 라니비주맙, 베바시주맙, 람팔리주맙, 또는 브롤루시주맙을 포함하는 항-VEGF 또는 항-fD 약제와의 투여를 포함한다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 상피 난소암, 난관암, 복막암 자궁경부암, 전이성 대장암, 전이성 HER2 음성 유방암, 전이성 신장 세포 암종, 교모세포종, 또는 NSCLC에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 화학요법(예를 들어, 시스플라틴, 젬시타빈, 페메트릭시드, 5-플루오로우라실, 카보플라틴, 이리노테칸, 인터페론 알파, 옥살리플라틴, 파클리탁셀 페길화 리포솜 독소루비신, 및/또는 토포테칸), 화학요법 보호 약물(예를 들어, 류코보린), 방사선요법, 냉동요법, 표적화된 소분자 요법, 다른 항체, 아플리베르셉트, 및/또는 백신 요법, 및 비제한적으로, 라니비주맙 또는 베바시주맙을 포함하는 항-VEGF와의 투여를 포함한다.
5.3.11 전신 홍반성 루푸스(Systemic Lupus Erythematosus)를 위한 항-BLyS HuPTM 구조체 및 제형
전신 홍반성 루푸스(SLE)를 치료하는 것 및 혈장 세포를 생산하는 자가반응 B 세포 및 면역글로불린의 수준을 감소시키는 것으로 표시된, 벨리무맙(도 8e)과 같은 항-BLyS 항체로부터 유래된 B-림프구 자극제(BLyS)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 벨리무맙 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 이 항체의 Fab 단편의 아미노산 서열은 도 8e에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, BLyS-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 SLE로 진단된 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 BLyS에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 벨리무맙 또는 이의 변이체와 같은 BLyS에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-BLyS 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-BLyS 항원-결합 단편 전이유전자는 벨리무맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 41 및 42의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 8e를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 141(벨리무맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 142(벨리무맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-BLyS-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 41의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 8e에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227) 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 41의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-BLyS 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 42에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 BLyS 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-BLyS 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 41에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 BLyS 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-BLyS 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 42에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 41에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, BLyS 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8e에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, BLyS 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8e에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-BLyS 항원-결합 단편 전이유전자는 M118N(중쇄) 및/또는 Q196N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 41 및 42의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 벨리무맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-BLyS 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-BLyS 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 8e의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 벨리무맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-BLyS 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 SLE에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 벨리무맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 SLE로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 8e에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-BLyS 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 SLE로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-BLyS 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-BLyS 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 벨리무맙으로 치료되었으며, 벨리무맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-BLyS 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-BLyS HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-BLyS HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 SLE로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 또는 근육 조직에 생성함으로써 달성되는 SLE의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-BLyS HuPTMmAb 또는 항-BLyS HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-BLyS HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, SLE로 진단되거나 SLE에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-BLyS HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 8e에 기재된 벨리무맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 41)의 아미노산 위치 N30 및/또는 N63 및/또는 N165 또는 경쇄(서열번호 42)의 N68 및/또는 N95 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 벨리무맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 41)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 42)의 Y85 및/또는 Y86에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-BLyS HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 SLE의 진행을 늦추거나 정지시키는 것, 환자에 대한 통증 또는 불편의 수준을 감소시키는 것, 또는 혈장 세포를 생산하는 자가반응 B 세포 및 면역글로불린의 수준을 감소시키는 것이다. 효능은 예를 들어, 피부, 관절, 신장, 폐, 혈액 세포, 심장, 및 뇌와 같은 신체의 영향을 받은 조직 또는 영역에서 기능, 증상, 또는 염증의 정도를 스코어링함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 효능은 발작, 정신병, 기질성 뇌 증후군, 시각 장애, 다른 신경학적 문제, 탈모, 피부 발진, 근육 약화, 관절염, 혈관 염증, 점막 궤양, 심호흡과 흉막염 및/또는 심낭염의 징후를 갖는 흉통 악화 및 열을 포함하는 1 이상의 증상의 존재, 정도, 또는 비율을 모니터링함으로써 모니터링될 수 있다. SELENA-SLEDAI(Safety of Estrogens in Lupus Erythematosus National Assessment Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index); BILAG(British Isles Lupus Assessment Group) A, BILAG B, SLAM(Systemic Lupus Activity Measure), 또는 PGA 점수와 같은 표준화된 질환 지수가 사용될 수 있다. (예를 들어, Liang MH et al. (1988) "Measurement of systemic lupus erythematosus activity in clinical research," Arthritis Rheum. 31:817-25; Diaz et al. (2011) "Measures of adult systemic lupus erythematosus: updated version of British Isles Lupus Assessment Group (BILAG 2004), European Consensus Lupus Activity Measurements (ECLAM), Systemic Lupus Activity Measure, Revised (SLAM-R), Systemic Lupus Activity Questionnaire for Population Studies (SLAQ), Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index 2000 (SLEDAI-2 K), and Systemic Lupus," International Collaborating Clinics/American College of Rheumatology Damage Index (SDI) Arthritis Care Res. 63:S37-46 참고).
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간 또는 근육에 대한 항-BLyS HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 SLE에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 코르티코스테로이드, 항말라리아제, NSAID, 및 면역억제제, 및 비제한적으로, 벨리무맙을 포함하는 항-BLyS 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.12 발작성 야간 혈색뇨증 및 비정상 용혈성 요독 증후군을 위한 항-CP-C5 HuPTM 구조체 및 제형
발작성 야간 혈색뇨증(PNH)을 치료하는 것, 비정상 용혈성 요독 증후군(aHUS)을 치료하는 것, 혈액 세포의 파괴를 감소시키는 것, 및/또는 수혈에 대한 필요성을 감소시키는 것으로 표시된, 에쿨리주맙(도 8f)과 같은 항-CP-C5로부터 유래된 보체 단백질 C5(또는 C5a)(CP-C5)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 에쿨리주맙 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 이 항체의 Fab 단편의 아미노산 서열은 도 8f에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, CP-C5-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 PNH 또는 aHUS로 진단된 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 CP-C5에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 에쿨리주맙 또는 이의 변이체과 같은 CP-C5에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-CP-C5 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-CP-C5 항원-결합 단편 전이유전자는 에쿨리주맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 43 및 44의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 8f를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 143(에쿨리주맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 144(에쿨리주맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포)에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-CP-C5-항원 결합 도메인은 C-말단 글루탐산(E) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 43의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 8f에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 CPPCPAPPVAGG(서열번호 232), 및 구체적으로, CPPCPA(서열번호 219) 또는 CPPCPAPPVAG(서열번호 233)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 43의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-CP-C5 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 44에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 CP-C5 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-CP-C5 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 43에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 CP-C5 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-CP-C5 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 44에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 43에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, CP-C5 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8f에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, CP-C5 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8f에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-CP-C5 항원-결합 단편 전이유전자는 L117N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 43 및 44의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 에쿨리주맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-CP-C5 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-CP-C5 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 8f의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 에쿨리주맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-CP-C5 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 PNH 또는 aHUS에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 에쿨리주맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 PNH 또는 aHUS로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 8f에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-CP-C5 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 PNH 또는 aHUS로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-CP-C5 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-CP-C5 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 에쿨리주맙으로 치료되었으며, 에쿨리주맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-CP-C5 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-CP-C5 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-CP-C5 HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 PNH 또는 aHUS로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 조직에 생성함으로써 달성되는 PNH 또는 aHUS의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-CP-C5 HuPTMmAb 또는 항-CP-C5 HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 형질도입된 간 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-CP-C5 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, PNH 또는 aHUS로 진단되거나 PNH 또는 aHUS에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-CP-C5 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 8f에 기재된 에쿨리주맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 43)의 아미노산 위치 N63 및/또는 Q114 및/또는 N164 및/또는 N197 및/또는 N206 또는 경쇄(서열번호 44)의 N28 및/또는 Q100 및/또는 N158 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 에쿨리주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 43)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 44)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-CP-C5 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 PNH 또는 aHUS의 진행을 늦추거나 정지시키는 것, 수혈에 대한 필요성을 감소시키는 것, 또는 적혈구의 파괴를 감소시키는 것이다. 효능은 치료 과정에 걸쳐 헤모글로빈 안정화 및/또는 수혈된 RBC 단위의 수를 측정하거나 피로 수준 및/또는 건강-관련 삶의 질을 스코어링함으로써 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간에 대한 항-CP-C5 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 PNH 또는 aHUS에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 항응고제 및 스테로이드/면역억제제 치료, 및 비제한적으로, 에쿨리주맙을 포함하는 항-CP-C5 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.13 안구 장애, 낭포성 섬유증, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환, 및 암을 위한 항-MMP9 HuPTM 구조체 및 제형
황반 변성(예를 들어, 건성 연령-관련 황반 변성(AMD))을 포함하는 1 이상의 망막 장애, 낭포성 섬유증(CF), 류마티스 관절염(RA), IBD(예를 들어, UC 및 CD), 및 1 이상의 유형의 암(예를 들어, 고형 종양, 췌장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평상피 세포 암종, 식도위 선암종, 위암, 대장암, 또는 유방암)을 치료하는 것, 또는 세포외 기질 분해를 억제하는 것으로 표시된 항-MMP9로부터 유래된 MMP9(기질 금속단백분해효소 9)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 안데칼릭시맙 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 안데칼릭시맙의 Fab 단편의 아미노산 서열은 도 8g에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, MMP9-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 망막 장애(예를 들어, 황반 변성), RA, CF, IBD(예를 들어, UC 또는 CD), 또는 1 이상의 암(예컨대, 상기 열거된 것들)으로 진단되거나, 이의 1 이상의 증상을 갖는 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 MMP9에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 안데칼릭시맙 또는 이의 변이체와 같은 MMP9에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-MMP9 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-MMP9 항원-결합 단편 전이유전자는 안데칼릭시맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 45 및 46의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 8g를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 145(안데칼릭시맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 146(안데칼릭시맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 안구 질환을 치료하는 경우에, 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 망막을 형성하는 1 이상의 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 망막을 형성하는 1 이상의 세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 1에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 비-안구 질환을 치료하는 경우에, 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-MMP9-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르트산(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 45의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 8g에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 GPPCPPCPAPEFLGG(서열번호 231), 및 구체적으로, GPPCPPCPA(서열번호 229) 또는 GPPCPPCPAPEFLGGPSVFL(서열번호 230)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 45의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-MMP9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 46에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 MMP9 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-MMP9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 45에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 MMP9 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-MMP9 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 46에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 45에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, MMP9 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8g에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, MMP9 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8g에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-MMP9 항원-결합 단편 전이유전자는 L110N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 45 및 46의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 안데칼릭시맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-MMP9 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-MMP9 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 8g의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 안데칼릭시맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-MMP9 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 1 이상의 망막 장애(예컨대, 황반 변성), IBD, CF, RA, 또는 암에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 안데칼릭시맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 망막 장애, IBD, CF, RA, 또는 암 중 1 이상로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다.
전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.3에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 망막-형 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 8g에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 망막에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 눈 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.3을 참고한다. 간에 대한 전달에 대해, 예를 들어 암의 치료를 위해, 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 8g에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-MMP9 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 1 이상의 망막 장애 또는 암의 유형으로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-MMP9 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나, 항-MMP9 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 안데칼릭시맙으로 치료되었으며, 안데칼릭시맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-MMP9 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-MMP9 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-MMP9 HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 1 이상의 망막 장애로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 망막하, 유리체내 또는 맥락막상 투여에 의해, 또는 항-MMP9 HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 RA, CF, IBD, 또는 암으로 진단된 인간 대상체(환자)에게 피하, 근육내, 또는 정맥내 투여에 의해, 망막 또는 간의 형질도입된 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 망막 또는 간에 생성함으로써 달성되는 1 이상의 망막 장애, CF, RA, IBD, 또는 암의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
항-MMP9 HuPTMmAb 또는 항-MMP9 HuPTM Fab를 위한 cDNA 구조체는 망막 또는 간의 형질도입된 세포에 의한 적절한 동시 번역 및 번역후 처리(당화 및 단백질 황산화)를 보장하는 시그널 펩티드를 포함해야 한다. 예를 들어, 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)일 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 망막 또는 간의 세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 1 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
대안으로서, 또는 유전자 요법에 대한 추가 치료로서, 항-MMP9 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab가 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생산될 수 있으며, 망막 장애, IBD, CF, RA, 또는 암에 대한 요법이 적절한 것으로 고려되는 망막 장애 또는 암으로 진단된 환자에게 투여될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 항-MMP9 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 8g에 기재된 안데칼릭시맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 45)의 아미노산 위치 N58, N76, Q107, N157, 및/또는 N199 또는 경쇄(서열번호 46)의 N158 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 안데칼릭시맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 45)의 Y93 및/또는 Y94 및/또는 경쇄(서열번호 46)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-MMP9 HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 치료되는 질환의 진행을 늦추거나 정지시키는 것, 또는 이의 1 이상의 증상을 완화시키는 것이다. 망막 장애의 경우에, 효능은 시력을 모니터링함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 효능은 기준선으로부터 시력의 변화를 평가함으로써 모니터링될 수 있다. 암의 경우에, 효능은 전체 생존, 무-진행 생존, 진행 시간, 치료 실패 시간, 무-사건 생존, 다음 치료까지의 시간, 객관적 반응률, 또는 반응 기간을 포함하는 1 이상의 종양학 종료점을 평가함으로써 모니터링될 수 있다. (예를 들어, U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research, Center for Biologics Evaluation and Research. Guidance for industry: clinical trial endpoints for the approval of cancer drugs and biologics. https://www.fda.gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm071590.pdf. Published May 2007. Accessed October 13, 2017; Oncology Endpoints in a Changing Landscape. Manag. Care. 2016; 1(suppl):1-12 참고). RA의 경우에, 효능은 (1) 부종 관절 수, (2) 압통 관절 수, (3) 질환 활성에 대한 전반적 의사 평가, (4) 기능 상태에 대한 환자 자가-보고, (5) 통증의 환자 자가-보고, (6) 질환 활성에 대한 전반적 환자 평가, (7) C-반응성 단백질 및 적혈구 침강률의 실험실 측정치, 및 (8) 방사선 진행 중 1 이상을 평가함으로써 모니터링될 수 있다. (예를 들어, Smolen JS, Aletaha D. "Assessment of rheumatoid arthritis activity in clinical trials and clinical practice" UptoDate.com Wolters Kluwer Health. Accessed at: www.uptodate.com Dec. 2017 참고). 예를 들어, CD에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 크론병 활동 지수[CDAI]를 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, Best WR et al. (1976) Gastroenterology, Mar;70(3):439-44, "Development of a Crohn's disease activity index. National Cooperative Crohn's Disease Study." 참고). UC에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 메이요 점수 및 내시경 하위점수를 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, Lobaton et al., "The Modified Mayo Endoscopic Score (MMES): A New Index for the Assessment of Extension and Severity of Endoscopic Activity in Ulcerative Colitis Patients," J. Crohns Colitis. 2015 Oct:9(10):846-52 참고). CF의 경우에, 효능은 1에서의 강제 호기량(Forced Expiratory Volume)(FEV1), 폐 악화 빈도 감소, 삶의 질(QoL) 개선, 및 젊은 환자에 대해, 성장 개선을 평가함으로써 모니터링될 수 있다. (예를 들어, VanDevanter and Konstan, "Outcome measurement for clinical trials assessing treatment of cystic fibrosis lung disease," Clin. Investig. 2(2):163-175 (2012) 참고).
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 망막 또는 간에 대한 항-MMP9 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 황반 변성에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 레이저 광응고화, 베르테포르핀, 아플리베르셉트, 및/또는 유리체내 스테로이드를 이용한 광선역학적 요법, 및 비제한적으로, 안데칼릭시맙을 포함하는 항-MMP9 약제와의 투여를 포함한다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 1 이상의 상기 열거된 암에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 화학요법(예를 들어, 시스플라틴, 젬시타빈, 페메트릭시드, 5-플루오로우라실, 카보플라틴, 이리노테칸, 인터페론 알파, 옥살리플라틴, 파클리탁셀 페길화 리포솜 독소루비신, 및/또는 토포테칸), 화학요법 보호 약물(예를 들어, 류코보린), 방사선요법, 냉동요법, 표적화된 소분자 요법, 다른 항체, 아플리베르셉트, 및/또는 백신 요법, 및 비제한적으로, 안데칼릭시맙을 포함하는 항-MMP9 약제와의 투여를 포함한다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 RA에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 비스포스포네이트, 비스테로이드성 항-염증 약물(예를 들어, 셀레콕시브, 나프록센, 아스피린, 인도메타신, 술파살라진, 및 케토프로펜), 스테로이드(예를 들어, 프레드니손), 질환 변형 항-류마티스 약물 및 다른 면역억제제(예를 들어, 레플루노마이드, 메토트렉세이트, 토팍티닙, 아자티오프린, 미코페놀레이트, 사이클로포스파미드, 사이클로스포린), 하이드록시클로로퀸, 아바타셉트, 아나킨라, 아프레밀라스트, TNF 억제제, 다른 항체(예를 들어, 토실리주맙, 세쿠키니맙, 리툭시맙), 및 비제한적으로, 안데칼릭시맙을 포함하는 항-MMP9 약제와의 투여를 포함한다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 IBD에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 비스테로이드성 항-염증 약물(예를 들어, 메살라민, 술파살라진), 스테로이드(예를 들어, 하이드로코르티손, 프레드니손, 부데소니드), 면역억제제(예를 들어, 메토트렉세이트, 메르캅토퓨린, 아자티오프린), 비타민(예를 들어, 철, 콜레칼시페롤), 항생제(예를 들어, 아미노 살리실산, 메트로니다졸), 다른 항체(예를 들어, 인플릭시맙, 아달리무맙), 및 비제한적으로, 안데칼릭시맙을 포함하는 항-MMP9 약제와의 투여를 포함한다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 CF에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 항생제, 백신, 및 기침약(예를 들어, 아세틸시스테인 및 도르나사 알파), 및 비제한적으로, 안데칼릭시맙을 포함하는 항-MMP9 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.14 혈관부종을 위한 항-pKal HuPTM 구조체 및 제형
혈관부종, 예컨대 유전성 혈관부종을 치료하는 것으로 표시된 항-pKal 항체로부터 유래된 칼리크레인(pKal)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 라나델루맙 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 이 항체의 Fab 단편의 아미노산 서열은 도 8h에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, pKal-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 혈관부종으로 진단된 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 pKal에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 라나델루맙 또는 이의 변이체와 같은 pKal에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-pKal 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-pKal 항원-결합 단편 전이유전자는 라나델루맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 47 및 48의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 8h를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 147(라나델루맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 148(라나델루맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 둘 다는 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-pKal-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 47의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 8h에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227) 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 47의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-pKal 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 48에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 pKal 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-pKal 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 47에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 pKal 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-pKal 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 48에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 47에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, pKal 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8h에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, pKal 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 8h에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-pKal 항원-결합 단편 전이유전자는 M117N(중쇄) 및/또는 Q159N, Q159S, 및/또는 E194N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 47 및 48의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 라나델루맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-pKal 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-pKal 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 8h의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 라나델루맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-pKal 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 혈관부종에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 라나델루맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 혈관부종으로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 8h에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-pKal 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 혈관부종으로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-pKal 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-pKal 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 라나델루맙으로 치료되었으며, 라나델루맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 반응성을 확인하기 위해, 항-pKal 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-pKal HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-pKal HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 혈관부종으로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 또는 근육 조직에 생성함으로써 달성되는 혈관부종의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
구체적 실시양태에서, 항-pKal HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 8h에 기재된 라나델루맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 47)의 아미노산 위치 N77, Q114 및/또는 N164 또는 경쇄(서열번호 48)의 Q99, N157, 및/또는 N209 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 라나델루맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 47)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 경쇄(서열번호 48)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-pKal HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab(또는 이의 초고당화된 유도체)는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 혈관부종의 진행을 늦추거나 정지시키는 것, 환자에 대한 통증 또는 불편의 수준을 감소시키는 것, 또는 혈장 세포를 생산하는 자가반응 B 세포 및 면역글로불린의 수준을 감소시키는 것이다. 효능은 예를 들어, 피부, 관절, 신장, 폐, 혈액 세포, 심장, 및 뇌와 같은 신체의 영향을 받은 조직 또는 영역에서 기능, 증상, 또는 염증의 정도를 스코어링함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 효능은 공격 심각성 또는 빈도에서의 변화를 평가함으로써 모니터링될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간 또는 근육에 대한 항-pKal HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 혈관부종에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 다나졸, 브라디키닌 수용체 길항제(예를 들어, 이카티반트), 혈장 칼리크레인 억제제(예를 들어, 에칼란타이드), C1 에스테라아제 억제제, 코네스타트 알파, 항-피브린용해제(예를 들어, 트라넥삼산), 오말리주맙, 및 신선 동결 혈장 수혈, 항히스타민제, 및 코르티코스테로이드, 및 비제한적으로, 라나델루맙을 포함하는 항-pKal 약제와의 투여를 포함한다.
5.3.15 다양한 자가-면역 장애를 위한 항- TNFα HuPTM 구조체 및 제형 - 아달리무맙 및 인플릭시맙
1 이상의 자가면역-관련 장애, 예컨대 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa)(HS), 아토피 피부염, 건선(예를 들어, 판상형 건선, 농포성 건선, 및 홍피성 건선), 관절염(예를 들어, 소아 특발성 관절염, 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 및 알킬화 척추염), 및/또는 IBD(예를 들어, 크론병 및 궤양성 대장염)(종합적으로 본원에서 "대상체 AI-D(2)"로 지칭됨)을 치료하는 것으로 표시된 아달리무맙(도 9a) 또는 인플릭시맙(도 9b)과 같은 항-TNFα 항체로부터 유래된 종양 괴사 인자-알파(TNFα)에 결합하는 HuPTM mAb 및 이의 항원-결합 단편, 예컨대 HuPTM Fab의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특별한 실시양태에서, HuPTM mAb는 아달리무맙 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 다른 실시양태에서, HuPTM mAb는 인플릭시맙 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 갖는다. 상기 항체의 Fab 단편의 아미노산 서열은 도 9a 및 9b에서 제공된다. 전달은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 인간 PTM, 예를 들어, 인간-당화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 생성하기 위해, TNFα-결합 HuPTM mAb(또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 초고당화된 유도체 또는 다른 유도체)를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 1 이상의 대상체 AI-D(2)로 진단된 환자(인간 대상체)에게 투여함으로써 달성될 수 있다.
전이유전자
환자에서 HuPTM mAb 또는 항원 결합 단편을 전달하기 위해 투여될 수 있는 TNFα에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터가 제공된다. 전이유전자는 본원에 상세화된 아달리무맙 또는 인플릭시맙 또는 이의 변이체와 같은 TNFα에 결합하는 항체의 항원 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이다. 전이유전자는 또한 추가 당화 부위를 함유하는 항-TNFα 항원 결합 단편을 코딩할 수 있다(예를 들어, Courtois et al. 참고).
특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 아달리무맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 49 및 50의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 9a를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 149(아달리무맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 150(아달리무맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 각각은 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-TNFα-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 49의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 9a에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227) 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 49의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 50에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 TNFα 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 49에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 TNFα 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 50에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 49에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, TNFα 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 9a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, TNFα 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 9a에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 L116N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 49 및 50의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 아달리무맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-TNFα 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 9a의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 아달리무맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 인플릭시맙의 Fab 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열(각각 서열번호 51 및 52의 아미노산 서열을 가지며, 표 4 및 도 9b를 참고함)을 포함한다. 뉴클레오티드 서열은 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있고 예를 들어, 표 5에 기재된 바와 같은 서열번호 151(인플릭시맙 중쇄 Fab 부분을 코딩함) 및 서열번호 152(인플릭시맙 경쇄 Fab 부분을 코딩함)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 서열 각각은 인간 세포, 특히 인간 간 세포(예를 들어, 간세포) 또는 근육 세포에서 발현 및 분비를 위해 적절한 N-말단에 시그널 또는 리더 서열을 갖는다. 시그널 서열은 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 대안적으로, 시그널 서열은 각각 근세포 또는 간세포에 의해 분비되는 단백질에 상응하는 표 2 또는 3에 기재된 시그널 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 더하여, 전이유전자는 중쇄 가변 도메인 서열의 C-말단에서 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-TNFα-항원 결합 도메인은 C-말단 아스파르테이트(D) 후에 시작하는 추가 힌지 영역 서열을 갖는 서열번호 51의 중쇄 가변 도메인을 갖고, 도 9b에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 KTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 222), 및 구체적으로, KTHL(서열번호 223), KTHT(서열번호 224), KTHTCPPCPA(서열번호 225), KTHLCPPCPA(서열번호 226), KTHTCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 227) 또는 KTHLCPPCPAPELLGGPSVFL(서열번호 228)의 전부 또는 일부를 함유한다. 이들 힌지 영역은 표 5에 기재된 서열을 코딩하는 힌지 영역에 의해 서열번호 51의 3' 단부에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 52에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 TNFα 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 51에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 TNFα 항원-결합 단편을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 서열번호 52에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 51에 기재된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 코딩한다. 구체적 실시양태에서, TNFα 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 9b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11a의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 중쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다. 구체적 실시양태에서, TNFα 항원 결합 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 치환, 삽입 또는 결실은 바람직하게는 프레임워크 영역(즉, CDR이 도 9b에서 밑줄쳐진, CDR의 외부의 영역)에서 이루어지거나 예를 들어, 도 11b의 정렬에 의해 확인된 바와 같은 다른 치료 항체 중 1 이상의 경쇄 내의 상기 위치에 존재하는 아미노산과의 치환이다.
특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 T115N(중쇄), Q160N 또는 Q160S(경쇄), 및/또는 E195N(경쇄)(도 11a(중쇄) 및 b(경쇄) 참고)의 돌연변이 중 1 이상을 갖는, 각각 서열번호 51 및 52의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 초고당화된 인플릭시맙 Fab를 코딩한다.
특정 실시양태에서, 항-TNFα 항원-결합 단편 전이유전자는 항원-결합 단편을 코딩하고, 항-TNFα 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 형성하기 위한 것으로 당업계에 알려진 바와 같이, 프레임워크 영역, 일반적으로 인간 프레임워크 영역 사이에 공간을 두고, 항원-결합 분자의 형태에 따라 불변 도메인과 연관되는 도 9b의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에서 밑줄친 6 개의 인플릭시맙 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
유전자 요법 방법
항-TNFα 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 함유하는 바이러스 벡터의 투여에 의한 대상체 AI-D(2) 중 1 이상에 대한 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 아달리무맙 또는 인플릭시맙일 수 있으며, 바람직하게는 이의 Fab 단편, 또는 이의 다른 항원-결합 단편이다. 실시양태에서, 환자는 대상체 AI-D(2) 중 1 이상으로 진단되었고/되었거나 이와 연관된 증상(들)을 갖는다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 섹션 5.4.2에 기재되어 있다. 이러한 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가져야 하며 비-복제성 rAAV, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유한 것을 포함할 수 있다. 도 9a 및 9b에 나타낸 것과 같은 재조합 벡터는 재조합 벡터가 간 또는 근육 조직에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여될 수 있다. 치료 방법에 관한 상세내용에 대해 섹션 5.5.2를 참고한다.
이러한 유전자 요법이 투여되는 대상체는 항-TNFα 요법에 대해 반응성인 것일 수 있다. 특별한 실시양태에서, 방법은 대상체 AI-D(2) 중 1 이상으로 진단되었거나, 이와 연관된 1 이상의 증상을 갖고, 항-TNFα 항체를 이용한 치료에 대해 반응성인 것으로 확인되거나 항-TNFα 항체를 이용한 요법에 대해 양호한 후보로 고려되는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 이전에 아달리무맙 또는 인플릭시맙으로 치료되었으며, 아달리무맙 또는 인플릭시맙에 대해 반응성인 것으로 밝혀졌다. 다른 실시양태에서, 환자는 이전에 항-TNF-알파 항체 또는 융합 단백질, 예컨대 에타너셉트, 골리무맙, 또는 세르톨리주맙, 또는 다른 항-TNF-알파 약제로 치료되었다. 반응성을 확인하기 위해, 항-TNFα 항체 또는 항원-결합 단편 전이유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 바이오리액터 등에서 생산됨)이 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
인간 번역후 변형된 항체
항-TNFα HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab의 생산은 유전자 요법을 통해 - 예를 들어, 항-TNFα HuPTM Fab를 코딩하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 구조체를 1 이상의 대상체 AI-D(2)로 진단되거나 이의 1 이상의 증상을 갖는 인간 대상체(환자)에게 정맥내 투여에 의해, 형질도입된 간 또는 근육 세포에 의해 생산된 완전-인간 번역후 변형된, 예를 들어 인간-당화되고, 황산화된 전이유전자 산물을 연속적으로 공급하는 영구 저장소를 간 또는 근육 조직에 생성함으로써 달성되는 1 이상의 대상체 AI-D(2)의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 야기해야 한다.
구체적 실시양태에서, 항-TNFα HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 9a에 기재된 아달리무맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 49)의 아미노산 위치 N54 및/또는 N163 및/또는 Q113 또는 경쇄(서열번호 50)의 Q100 및/또는 N158 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 아달리무맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 49)의 Y94 및/또는 Y95 및/또는 Y32 및/또는 경쇄(서열번호 50)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-TNFα HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
구체적 실시양태에서, 항-TNFα HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 도 9b에 기재된 인플릭시맙의 중쇄 및 경쇄 Fab 부분의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖고(컨센서스 및 비-컨센서스 아스파라긴(N) 당화 부위는 청록색으로 강조되고, 글루타민(Q) 당화 부위는 녹색으로 강조되며, Y-항산화 부위는 황색으로 강조됨) 중쇄(서열번호 51)의 아미노산 위치 N57 및/또는 N101 및/또는 Q112 및/또는 N162 또는 경쇄(서열번호 52)의 N41 및/또는 N76 및/또는 N158 및/또는 N210 중 1 이상에서 당화, 특히 2,6-시알화를 갖는다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 아달리무맙의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합-단편은 중쇄(서열번호 51)의 Y96 및/또는 Y97 및/또는 경쇄(서열번호 52)의 Y86 및/또는 Y87에서 황산화기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 항-TNFα HuPTM mAb 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 검출가능한 NeuGc 모이어티를 함유하지 않고/않거나 임의의 검출가능한 알파-Gal 모이어티를 함유하지 않는다.
특정 실시양태에서, HuPTM mAb 또는 Fab는 치료적으로 효과적이고 적어도 0.5%, 1% 또는 2% 당화되고/되거나 황산화되고 적어도 5%, 10% 또는 50% 또는 100% 당화되고/되거나 황산화될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법 치료의 목표는 대상체 AI-D(2) 중 1 이상의 진행을 늦추거나 정지시키는 것 또는 이의 1 이상의 증상을 완화시키는 것, 예컨대 환자에 대한 통증 또는 불편의 수준을 감소시키는 것이다.
효능은 예를 들어, 피부, 결장, 또는 관절과 같은 신체의 영향을 받은 조직 또는 영역에서 증상 또는 염증의 정도를 스코어링함으로써 모니터링될 수 있다. 예를 들어, CD에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 크론병 활동 지수[CDAI]를 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, Best WR et al. (1976) Gastroenterology, Mar;70(3):439-44, "Development of a Crohn's disease activity index. National Cooperative Crohn's Disease Study." 참고). UC에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 메이요 점수 및 내시경 하위점수를 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, Lobaton et al. (2015) J. Crohns Colitis. 2015 Oct;9(10):846-52, "The Modified Mayo Endoscopic Score (MMES): A New Index for the Assessment of Extension and Severity of Endoscopic Activity in Ulcerative Colitis Patients." 참고). 건선, HS, 및 아토피 피부염에 대해, 효능은 치료 과정에 걸쳐 영향을 받은 피부 또는 환자의 삶의 질에서의 변화를 평가함으로써 모니터링될 수 있다. 1 이상의 표준화된 평가가 변화를 평가하기 위해 사용될 수 있다. (예를 들어, 건선 중증도 지수(PASI), 임상 의사 평가(PGA), 격자계, NPF 건선 점수(NPF-PS), 의학 조사 결과 숏폼 36(SF-36), 유로 QoL, 피부 삶의 질 지수(DLQI), 및 Skindex를 포함한 표준화된 평가를 기재하는 Feldman & Krueger, (2005) Ann. Rheum. Dis. 64(Suppl II):ii65-ii68: "Psoriasis assessment tools in clinical trials"; 습진 중증도 평가 지수(EASI) 및 아토피 피부염 중증도 지수(SCORAD)를 포함한 표준화된 평가를 기재하는 Schram et al. (2012) Allergy; 67: 99-106: "EASI, (objective) SCORAD and POEM for atopic eczema: responsiveness and minimal clinically important difference"; Sisic et al. (2017) J Cutan Med Surg. 21(2): 152-155 "Development of a Quality-of-Life Measure for Hidradenitis Suppurativa." 참고). 관절염에 대해, 효능은 질환의 활성, 환자의 기능 수준, 또는 환자의 관절에 대한 구조적 손상의 정도 중 1 이상을 평가함으로써 모니터링될 수 있다(예를 들어, 강직성 척추염에 대한 표준화된 평가를 기재하는 Zockling & Braun (2005) Clin. Exp. Rheumatol 23 (Suppl. 39) S133-S141: "Assessment of ankylosing spondylitis 참고; 또한, 건선성 관절염에 대한 표준화된 평가를 기재하는 Coates et al. (2011) J. Rheumatol. 38(7):1496-1501: "Development of a disease severity and responder index for psoriatic arthritis (PsA)-report of the OMERACT 10 PsA special interest group" 참고).
다른 이용가능한 치료의 전달에 수반되는, 간 또는 근육에 대한 항-TNFα HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 전달의 조합은 본원에서 제공되는 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 그와 동시에 또는 그에 이어서 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 유전자 요법과 조합될 수 있는 대상체 AI-D(2)에 대한 이용가능한 치료는, 비제한적으로, 건선에 대한 광선요법, IBD에 대한 아미노살리실레이트, 면역조절제(예를 들어, 아자티오프린(AZA), 6-메르캅토퓨린(6-MP), 메토트렉세이트(MTX)), 경구 또는 국소 코르티코스테로이드(예를 들어, 프레드니손 또는 부데소니드), 국소 칼시뉴린 억제제, 항생제, 및 비제한적으로, 아달리무맙 또는 인플릭시맙을 포함하는 항-TNFα 약제와의 투여를 포함한다.
5.4 유전자 요법 구조체의 전달
5.4.1 CNS에 대한 전달을 위한 구조체
섹션 5.3.1, 5.3.2, 5.3.3, 및 5.3.4는 각각 Aβ, Tau 단백질, CGRPR, 및 인테그린에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터를 기재한다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 이러한 재조합 벡터는 인간 CNS 세포, 예컨대 신경교세포 및 뉴런 세포에 대한 굴성을 가져야 한다. 이러한 벡터는 비-복제성 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV"), 특히 AAV9, AAVrh10, AAVrh20, AAVrh39, 또는 AAVcy5 캡시드를 보유하는 것을 포함할 수 있다. 그러나, 비제한적으로, "네이키드 DNA" 구조체로 지칭되는 렌티바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 또는 비-바이러스 발현 벡터를 포함하는 다른 바이러스 벡터가 사용될 수 있다.
구체적 실시양태에서, AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 특히, CNS로부터 발현되는, 본원에 개시된 바와 같은 치료적으로 적절한 방식으로 치료 항체를 발현 및 전달하는 인간 세포에서의 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 치료 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 전이유전자를 포함하는 바이러스 또는 인공 게놈을 포함하는, AAV 벡터를 포함하는, 인간 대상체에 대한 유전자 요법 투여를 위한 구조체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 코딩된 AAV9 캡시드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개 아미노산 치환, 특히 예를 들어, 캡시드 서열 내의 상이한 위치에서의 치환에 적절한 아미노산을 강조하는, 다양한 AAV의 캡시드 서열의 아미노산 서열의 비교를 제공하는 도 12의 SUBS 열에서 다른 AAV 캡시드 내의 상응하는 위치에서 발견되는 아미노산 잔기와의 치환을 갖는 서열번호 79의 서열을 갖는다.
다른 구체적 실시양태에서, AAVrh10 캡시드(서열번호 80)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 특히, CNS로부터의, 본원에 개시된 바와 같은 치료적으로 적절한 방식으로 치료 항체를 발현 및 전달하는 인간 세포에서의 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 치료 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 전이유전자를 포함하는 바이러스 또는 인공 게놈을 포함하는, AAV 벡터를 포함하는, 인간 대상체에 대한 유전자 요법 투여를 위한 구조체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 코딩된 AAVrh10 캡시드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개 아미노산 치환, 특히 예를 들어, 캡시드 서열 내의 상이한 위치에서의 치환에 적절한 아미노산을 강조하는, 다양한 AAV의 캡시드 서열의 아미노산 서열의 비교를 제공하는 도 12의 SUBS 열에서 다른 AAV 캡시드 내의 상응하는 위치에서 발견되는 아미노산 잔기와의 치환을 갖는 서열번호 80의 서열을 갖는다.
바람직하게는, HuPTM Fab 전이유전자를 포함하는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 CNS 세포에서 HuPTM Fab의 발현을 위한 적절한 발현 제어 요소, 예를 들어 CB7 프로모터(닭 β-액틴 프로모터 및 CMV 인핸서), RSV 프로모터, GFAP 프로모터(신경교 섬유질 산성 단백질), MBP 프로모터(수초 염기성 단백질), MMT 프로모터, EF-1α, U86 프로모터, RPE65 프로모터 또는 옵신 프로모터, 유도성 프로모터, 예를 들어 저산소증-유도성 프로모터 또는 약물 유도성 프로모터, 예컨대 라파마이신 및 관련 약제에 의해 유도되는 프로모터, 및 벡터(예를 들어, 인트론, 예컨대 닭 β-액틴 인트론, 미세 생쥐 바이러스(MVM) 인트론, 인간 인자 IX 인트론(예를 들어, FIX 절단 인트론 1), β-글로빈 스플라이스 공여체/면역글로불린 중쇄 스플라이스 수용체 인트론, 아데노바이러스 스플라이스 공여체/면역글로불린 스플라이스 수용체 인트론, SV40 후기 스플라이스 공여체/스플라이스 수용체(19S/16S) 인트론, 및 하이브리드 아데노바이러스 스플라이스 공여체/IgG 스플라이스 수용체 인트론 및 폴리A 시그널, 예컨대 토끼 β-글로빈 폴리A 시그널, 인간 성장 호르몬(hGH) 폴리A 시그널, SV40 후기 폴리A 시그널, 합성 폴리A(SPA) 시그널, 및 소 성장 호르몬(bGH) 폴리A 시그널)에 의해 추진되는 전이유전자의 발현을 향상시키는 다른 발현 제어 요소에 의해 제어되어야 한다. 예를 들어, Powell and Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57을 참고한다.
유전자 요법 구조체는 중쇄 및 경쇄 둘 다가 발현되도록 설계된다. 더욱 구체적으로, 중쇄 및 경쇄는 대략 동일한 양으로 발현되어야 하고, 다시 말해, 중쇄 및 경쇄는 대략 1:1 비의 중쇄 대 경쇄로 발현된다. 중쇄 및 경쇄의 코딩 서열은 중쇄 및 경쇄가 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리되어 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 발현되는 단일 구조체로 조작될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 각각에 대한 리더 서열은 바람직하게는 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)이다. 상기 섹션 5.1.5는 본원에서 제공되는 방법 및 조성물과 사용될 수 있는 구체적 IRES, 2A, 및 다른 링커 서열을 제공한다. 구체적 실시양태에서, 링커는 푸린-F2A 링커 RKRRAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(서열번호 242)이다. 구체적 실시양태에서, 전이유전자는 다음을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이다: 시그널 서열-중쇄 Fab 부분-푸린-F2A 링커-시그널 서열-경쇄 Fab 부분. 예를 들어, 각각 아두카누맙, 크레네주맙, 간테네루맙, 또는 BAN2401 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 2a-2c 및 2f; aTAU Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 2d; 에레누맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 2e; 및 나탈리주맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 4b를 참고한다.
구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 구조체는 다음 성분을 포함한다: (1) 발현 카세트에 인접한 AAV2 역위 말단 반복부; (2) a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 폴리 A 시그널을 포함하는 제어 요소; 및 (3) 동일한 양의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 발현을 보장하는, 자가-절단 푸린(F)/F2A 링커에 의해 분리된, Aβ-결합, Tau-결합, CGRPR-결합, 인테그린-결합 Fab의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 예시적 구조체가 도 1에서 제공된다.
구체적 실시양태에서, AAV9 캡시드(서열번호 79) 또는 AANrh10(서열번호80)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 CNS 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-Aβ, 항-Tau, 항-CGRPR, 또는 항-인테그린 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈을 포함하는 AAV 벡터가 제공된다.
5.4.2 간 또는 근육 세포에 대한 전달을 위한 구조체
섹션 5.3.4, 5.3.5, 5.3.6, 5.3.7, 5.3.8, 5.3.9, 5.3.10, 5.3.11, 5.3.12, 5.3.13, 5.3.14, 5.3.15는 인터류킨(IL) 또는 인터류킨 수용체(ILR), 인테그린, PCSK9, ANGPTL3, OxPL RANKL, PD-1/PD-L1/PD-L2, VEGF, 인자 D(fD), BLyS, CP-C5, MMP9, pKal, 또는 TNFα에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터를 기재한다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 이러한 재조합 벡터는 인간 간 또는 근육 세포에 대한 굴성을 가질 수 있다. 이러한 벡터는 비-복제성 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함할 수 있으며, 특히 AAV8 또는 AAV9 캡시드를 보유하는 것이 바람직하다. 그러나, 비제한적으로, "네이키드 DNA" 구조체로 지칭되는 렌티바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 또는 비-바이러스 발현 벡터를 포함하는 다른 바이러스 벡터가 사용될 수 있다.
구체적 실시양태에서, AAV8 캡시드(서열번호 78)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 본원에 개시된 바와 같은 치료적으로 적절한 방식으로 치료 항체를 발현 및 전달하는 인간 세포(예를 들어, 인간 근육 또는 간 세포)에서의 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 치료 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 전이유전자를 포함하는 바이러스 또는 인공 게놈을 포함하는, AAV 벡터를 포함하는, 인간 대상체에 대한 유전자 요법 투여를 위한 구조체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 코딩된 AAV8 캡시드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개 아미노산 치환, 특히 예를 들어, 캡시드 서열 내의 상이한 위치에서의 치환에 적절한 아미노산을 강조하는, 다양한 AAV의 캡시드 서열의 아미노산 서열의 비교를 제공하는 도 12의 SUBS 열에서 다른 AAV 캡시드 내의 상응하는 위치에서 발견되는 아미노산 잔기와의 치환을 갖는 서열번호 78의 서열을 갖는다.
구체적 실시양태에서, AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 본원에 개시된 바와 같은 치료적으로 적절한 방식으로 치료 항체를 발현 및 전달하는 인간 세포(예를 들어, 인간 근육 또는 간 세포)에서의 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 치료 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 전이유전자를 포함하는 바이러스 또는 인공 게놈을 포함하는, AAV 벡터를 포함하는, 인간 대상체에 대한 유전자 요법 투여를 위한 구조체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 코딩된 AAV9 캡시드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개 아미노산 치환, 특히 예를 들어, 캡시드 서열 내의 상이한 위치에서의 치환에 적절한 아미노산을 강조하는, 다양한 AAV의 캡시드 서열의 아미노산 서열의 비교를 제공하는 도 12의 SUBS 열에서 다른 AAV 캡시드 내의 상응하는 위치에서 발견되는 아미노산 잔기와의 치환을 갖는 서열번호 79의 서열을 갖는다.
바람직하게는, HuPTM Fab 전이유전자를 포함하는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 간 또는 근육 세포에서 HuPTM Fab의 발현을 위한 적절한 발현 제어 요소, 예를 들어 CB7 프로모터(닭 β-액틴 프로모터 및 CMV 인핸서), 간 특이적 프로모터, 예컨대 TBG(티록신-결합 글로불린) 프로모터, APOA2 프로모터, SERPINA1(hAAT) 프로모터 또는 MIR122 프로모터, 또는 근육 특이적 프로모터, 예컨대 인간 데스민 프로모터 또는 인간 Pitx3 프로모터, 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터 또는 라파마이신-유도성 프로모터에 의해 제어되어야 하며, 벡터(예를 들어, 인트론, 예컨대 닭 β-액틴 인트론, 미세 생쥐 바이러스(MVM) 인트론, 인간 인자 IX 인트론(예를 들어, FIX 절단 인트론 1), β-글로빈 스플라이스 공여체/면역글로불린 중쇄 스플라이스 수용체 인트론, 아데노바이러스 스플라이스 공여체/면역글로불린 스플라이스 수용체 인트론, SV40 후기 스플라이스 공여체/스플라이스 수용체(19S/16S) 인트론, 및 하이브리드 아데노바이러스 스플라이스 공여체/IgG 스플라이스 수용체 인트론 및 폴리A 시그널, 예컨대 토끼 β-글로빈 폴리A 시그널, 인간 성장 호르몬(hGH) 폴리A 시그널, SV40 후기 폴리A 시그널, 합성 폴리A(SPA) 시그널, 및 소 성장 호르몬(bGH) 폴리A 시그널)에 의해 추진되는 전이유전자의 발현을 향상시키는 다른 발현 제어 요소를 포함할 수 있다. 예를 들어, Powell and Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57을 참고한다.
유전자 요법 구조체는 중쇄 및 경쇄 둘 다가 발현되도록 설계된다. 더욱 구체적으로, 중쇄 및 경쇄는 대략 동일한 양으로 발현되어야 하고, 다시 말해, 중쇄 및 경쇄는 대략 1:1 비의 중쇄 대 경쇄로 발현된다. 중쇄 및 경쇄의 코딩 서열은 중쇄 및 경쇄가 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리되어 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 발현되는 단일 구조체로 조작될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 각각에 대한 리더 서열은 바람직하게는 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)이다. 상기 섹션 5.1.5는 본원에서 제공되는 방법 및 조성물과 사용될 수 있는 구체적 IRES, 2A, 및 다른 링커 서열을 제공한다. 구체적 실시양태에서, 링커는 푸린-F2A 링커 RKRRAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(서열번호 242)이다. 구체적 실시양태에서, 전이유전자는 다음을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이다: 시그널 서열-중쇄 Fab 부분-푸린-F2A 링커-시그널 서열-경쇄 Fab 부분. 예를 들어, 각각 두필루맙, 익세키주맙, 세쿠키누맙, 우스테키누맙, 및 메폴리주맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 3a 내지 3e; 각각 베돌리주맙 및 나탈리주맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 4a 및 4b; 각각 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 에비나쿠맙, 및 E06-scFv Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 5a 내지 5d; 데노수맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 6; 각각 니볼루맙 및 펨브롤리주맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 7a 및 7b; 각각 라니비주맙, 베바시주맙, 및 람팔리주맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 8a 내지 8c; 벨리무맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 8e; 에쿨리주맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 8f; 안데칼릭시맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 8g; 라나델루맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 8h; 및 각각 아달리무맙 Fab 발현 및 인플릭시맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 9a 및 9b를 참고한다.
구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 구조체는 다음 성분을 포함한다: (1) 발현 카세트에 인접한 AAV2 역위 말단 반복부; (2) a) 유도성 프로모터, 바람직하게는 저산소증-유도성 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 폴리 A 시그널을 포함하는 제어 요소; 및 (3) 동일한 양의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 발현을 보장하는, 자가-절단 푸린(F)/F2A 링커에 의해 분리된, IL/ILR-결합, 인테그린-결합, PCSK9-결합, ANGPTL3-결합, RANKL-결합, OxPL-결합, PD-1/PD-L1/PD-L2 결합, VEGF-결합 Fab, fD-결합, BLyS-결합, pKal-결합, 또는 TNFα-결합 Fab의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 예시적 구조체가 도 1에서 제공된다.
구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 구조체는 다음 성분을 포함한다: (1) 발현 카세트에 인접한 AAV2 역위 말단 반복부; (2) a) 유도성 프로모터, 바람직하게는 저산소증-유도성 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 폴리 A 시그널을 포함하는 제어 요소; 및 (3) 동일한 양의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 발현을 보장하는, 자가-절단 푸린(F)/F2A 링커에 의해 분리된, IL/ILR-결합, 인테그린-결합, PCSK9-결합, ANGPTL3-결합, OxPL-결합, RANKL-결합, PD-1/PD-L1/PD-L2 결합, VEGF-결합 Fab, fD-결합, BLyS-결합, CP-C5-결합, MMP9-결합, pKal-결합, TNFα-결합 Fab의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 예시적 구조체가 도 1에서 제공된다.
구체적 실시양태에서, AAV8 캡시드(서열번호 78)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 또는 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL/ILR, 항-인테그린, 항-PCSK9, 항-ANGPTL3, 항-OxPL, 항-RANKL, 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-PD-L2, 항-VEGF, 항-fD, 항-BLyS, 항-CP-C5, 항-MMP9, 항-pKal, 또는 항-TNFα mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈을 포함하는 AAV 벡터가 제공된다.
구체적 실시양태에서, AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL/ILR, 항-인테그린, 항-PCSK9, 항-ANGPTL3, 항-RANKL, 항-OxPL, 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-PD-L2, 항-VEGF, 항-fD, 항-BLyS, 항-pKal, 또는 항-TNFα mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈을 포함하는 AAV 벡터가 제공된다.
5.4.3 망막 세포 유형에 대한 전달을 위한 구조체
섹션 5.3.9 및 5.3.12는 VEGF, 인자 D(fD), 또는 MMP9에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터를 기재한다. 전이유전자를 전달하기 위해 사용되는 이러한 재조합 벡터는 1 이상의 인간 망막 세포 유형에 대한 굴성을 가질 수 있다. 이러한 벡터는 비-복제성 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함할 수 있으며, 특히 AAV8 캡시드를 보유하는 것이 바람직하다. 대안적으로, AAV.7m8 캡시드를 보유하는 AAV 벡터가 사용될 수 있다. 그러나, 비제한적으로, "네이키드 DNA" 구조체로 지칭되는 렌티바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 또는 비-바이러스 발현 벡터를 포함하는 다른 바이러스 벡터가 사용될 수 있다.
구체적 실시양태에서, AAV8 캡시드(서열번호 78)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 본원에 개시된 바와 같은 치료적으로 적절한 방식으로 치료 항체를 발현 및 전달하는 인간 세포(예를 들어, 망막 세포 또는 간 세포 유형)에서의 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 치료 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 전이유전자를 포함하는 바이러스 또는 인공 게놈을 포함하는, AAV 벡터를 포함하는, 인간 대상체에 대한 유전자 요법 투여를 위한 구조체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 코딩된 AAV8 캡시드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개 아미노산 치환, 특히 예를 들어, 캡시드 서열 내의 상이한 위치에서의 치환에 적절한 아미노산을 강조하는, 다양한 AAV의 캡시드 서열의 아미노산 서열의 비교를 제공하는 도 12의 SUBS 열에서 다른 AAV 캡시드 내의 상응하는 위치에서 발견되는 아미노산 잔기와의 치환을 갖는 서열번호 78의 서열을 갖는다.
바람직하게는, HuPTM Fab 전이유전자를 포함하는 HuPTM mAb 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 망막 또는 간 세포 유형에서 HuPTM Fab의 발현을 위한 적절한 발현 제어 요소, 예를 들어 CB7 프로모터(닭 β-액틴 프로모터 및 CMV 인핸서), 또는 조직-특이적 프로모터, 예컨대 RPE-특이적 프로모터, 예를 들어 RPE65 프로모터, 또는 원뿔세포-특이적 프로모터, 예를 들어 옵신 프로모터, 또는 간 특이적 프로모터, 예컨대 TBG(티록신-결합 글로불린) 프로모터, APOA2 프로모터, SERPINA1(hAAT) 프로모터 또는 MIR122 프로모터, 유도성 프로모터, 예를 들어 저산소증-유도된 프로모터 및 약물 유도성 프로모터, 예컨대 라파마이신 및 관련 약제에 의해 유도된 프로모터에 의해 제어되어야 하며, 벡터(예를 들어, 인트론, 예컨대 닭 β-액틴 인트론, 미세 생쥐 바이러스(MVM) 인트론, 인간 인자 IX 인트론(예를 들어, FIX 절단 인트론 1), β-글로빈 스플라이스 공여체/면역글로불린 중쇄 스플라이스 수용체 인트론, 아데노바이러스 스플라이스 공여체/면역글로불린 스플라이스 수용체 인트론, SV40 후기 스플라이스 공여체/스플라이스 수용체(19S/16S) 인트론, 및 하이브리드 아데노바이러스 스플라이스 공여체/IgG 스플라이스 수용체 인트론 및 폴리A 시그널, 예컨대 토끼 β-글로빈 폴리A 시그널, 인간 성장 호르몬(hGH) 폴리A 시그널, SV40 후기 폴리A 시그널, 합성 폴리A(SPA) 시그널, 및 소 성장 호르몬(bGH) 폴리A 시그널)에 의해 추진되는 전이유전자의 발현을 향상시키는 다른 발현 제어 요소를 포함할 수 있다. 예를 들어, Powell and Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57을 참고한다.
유전자 요법 구조체는 중쇄 및 경쇄 둘 다가 발현되도록 설계된다. 더욱 구체적으로, 중쇄 및 경쇄는 대략 동일한 양으로 발현되어야 하고, 다시 말해, 중쇄 및 경쇄는 대략 1:1 비의 중쇄 대 경쇄로 발현된다. 중쇄 및 경쇄의 코딩 서열은 중쇄 및 경쇄가 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리되어 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 발현되는 단일 구조체로 조작될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 각각에 대한 리더 서열은 바람직하게는 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)이다. 상기 섹션 5.1.5는 본원에서 제공되는 방법 및 조성물과 사용될 수 있는 구체적 IRES, 2A, 및 다른 링커 서열을 제공한다. 구체적 실시양태에서, 링커는 푸린-F2A 링커 RKRRAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(서열번호 242)이다. 구체적 실시양태에서, 전이유전자는 다음을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이다: 시그널 서열-중쇄 Fab 부분-푸린-F2A 링커-시그널 서열-경쇄 Fab 부분. 각각 라니비주맙, 베바시주맙, 및 람팔리주맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 8a 내지 8c, 및 안데칼릭시맙 Fab 발현을 위한 서열에 대해 도 8g를 참고한다.
구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 구조체는 다음 성분을 포함한다: (1) 발현 카세트에 인접한 AAV2 역위 말단 반복부; (2) a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 폴리 A 시그널을 포함하는 제어 요소; 및 (3) 동일한 양의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 발현을 보장하는, 자가-절단 푸린(F)/F2A 링커에 의해 분리된, VEGF-결합, fD-결합, 또는 MMP9-결합 Fab의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 예시적 구조체가 도 1에서 제공된다.
다른 실시양태에서, 본원에 기재된 구조체는 다음 성분을 포함한다: (1) 발현 카세트에 인접한 AAV2 역위 말단 반복부; (2) a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 폴리 A 시그널을 포함하는 제어 요소; 및 (3) 적절한 폴딩(folding) 및 가용성을 보장하는, 유동성 펩티드 링커에 의해 분리된, VEGF-결합, fD-결합, 또는 MMP9-결합 Fab의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열.
구체적 실시양태에서, AAV8 캡시드(서열번호 78)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및 AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 1 이상의 망막 세포 유형(예컨대, 인간 광수용기 세포(원뿔 세포, 간상 세포); 수평 세포; 양극 세포; 아마크린 세포; 망막 신경절 세포(난쟁이 세포, 양산 세포, 이중층 세포, 거대 망막 신경절 세포, 감광성 신경절 세포, 및 뮬러 교세포); 및 망막 색소 상피 세포)에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-VEGF mAb, 항-fD, 또는 항-MMP9 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 인공 게놈을 포함하는 AAV 벡터가 제공된다.
5.5 용량 투여
5.5.1 CNS에 전달하기 위한 투여
섹션 5.3.1, 5.3.2, 5.3.3, 및 5.3.4는 각각 Aβ, Tau 단백질, CGRPR, 및 인테그린에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터를 기재한다. 임의의 이러한 재조합 벡터의 치료적 유효 용량은 재조합 벡터가 CNS에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 뇌척수액(CSF) 내에 도입함으로써 투여되어야 한다. 구체적 실시양태에서, 벡터는 척추강내로, 구체적으로 수조내로(예컨대 대조로) 또는, 대안적으로 요추 전달로 투여된다. 대안적으로, 재조합 벡터는 정맥내로 투여될 수 있다. 특히, 재조합 AAV9 벡터는 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 것으로 나타났으므로, CNS에 항-Aβ, 항-Tau, 항-CGRPR, 또는 항-인테그린 항체 전이유전자 산물을 전달하기에 유용할 수 있다. 구체적으로, scAAV9는 정맥내 투여를 위해 특히 유용할 수 있다. 수조내 또는 요추 투여를 포함한 척추강내 투여, 또는 정맥내 투여는 CNS의 세포에서 가용성 전이유전자 산물의 발현을 야기해야 한다. 전이유전자 산물(예를 들어, 코딩된 항-Aβ, 항-Tau, 항-CGRPR, 또는 항-인테그린 항체)의 발현은 CNS에서 전이유전자 산물의 전달 및 유지를 야기한다. 전이유전자 산물은 연속적으로 생산되기 때문에, 저농도의 유지가 효과적일 수 있다. 전이유전자 산물의 농도는 CSF의 환자 샘플에서 측정될 수 있다.
척추강내, 수조내, 요추 또는 정맥내 투여를 위해 적합한 약학 조성물은 생리학적으로 양립가능한 수성 버퍼를 포함하는 제형 버퍼 내에 항-Aβ, 항-Tau, 항-CGRPR, 또는 항-인테그린 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 벡터의 현탁액을 포함한다. 제형 버퍼는 다당류, 계면활성제, 중합체, 또는 오일 중 1 이상을 포함할 수 있다.
5.5.2 간 또는 근육 조직에 전달하기 위한 투여
섹션 5.3.4, 5.3.5, 5.3.6, 5.3.7, 5.3.8, 5.3.9, 5.3.10, 5.3.11, 5.3.12, 5.3.13, 및 5.3.14는 인터류킨(IL) 또는 인터류킨 수용체(ILR), 인테그린, PCSK9, ANGPTL3, RANKL, PD-1/PD-L1/PD-L2, VEGF, 인자 D(fD), BLyS, CP-C5, MMP9, pKal, 또는 TNFα에 결합하는 HuPTM mAb 또는 HuPTM Fab(또는 HuPTM mAb의 다른 항원 결합 단편)를 코딩하는 전이유전자를 함유하는 재조합 벡터를 기재한다. 임의의 이러한 재조합 벡터의 치료적 유효 용량은 재조합 벡터가 간 또는 근육(예를 들어, 골격근)에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 혈류 내에 도입함으로써 투여되어야 한다. 대안적으로, 벡터는 간 혈액 순환을 통해, 예를 들어 간상부 정맥을 통해 또는 간 동맥을 통해 간에 직접 투여될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 벡터는 피하로, 근육내로 또는 정맥내로 투여된다. 근육내, 피하, 정맥내 또는 간 투여는 간 또는 근육에서 가용성 전이유전자 산물의 발현을 야기해야 한다. 대안적으로, 벡터는 간 혈액 순환을 통해, 예를 들어 간상부 정맥을 통해 또는 간 동맥을 통해 간에 직접 투여될 수 있다. 전이유전자 산물(예를 들어, 코딩된 항-IL/ILR, 항-인테그린, 항-PCSK9, 항-ANGPTL3, 항-RANKL, 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-PD-L2, 항-VEGF, 항-fD, 항-BLyS, 항-CP-C5, 항-MMP9, 항-pKal, 또는 항-TNFα 항체)의 발현은 간 또는 근육에서 전이유전자 산물의 전달 및 유지를 야기한다.
전이유전자 산물의 농도는 환자 혈액 혈청 샘플에서 측정될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-IL/ILR 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 2 ㎍/mL의 Cmin, 예컨대 사용되는 mAb에 따라 5 내지 30 ㎍/mL, 5 내지 50 ㎍/mL, 또는 5 내지 80 ㎍/mL, 또는 5 내지 100 ㎍/mL, 또는 5 내지 200 ㎍/mL의 Cmin으로 유지하는 용량이 바람직하다. 예를 들어, 대략 60 내지 90 ㎍/mL의 두필루맙(격주 투여와 유사함) 또는 170 내지 200 ㎍/mL 두필루맙(매주 투여와 유사함), 또는 대략 2 ㎍/mL 내지 12 ㎍/mL의 익세키주맙, 또는 대략 13 ㎍/mL 내지 50 ㎍/mL 세쿠키누맙의 Cmin을 달성한다.
구체적 실시양태에서, 항-TNFα 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 .5 ㎍/mL 또는 적어도 1 ㎍/mL의 Cmin(예를 들어, 1 내지 10 ㎍/mL, 3 내지 30 ㎍/mL 또는 5 내지 15 ㎍/mL 또는 5 내지 30 ㎍/mL의 Cmin)으로 유지하는 용량이 바람직하다.
구체적 실시양태에서, 항-인테그린 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 10 ㎍/mL의 Cmin(예를 들어, 10 내지 60 ㎍/mL의 Cmin)으로 유지하는 용량이 바람직하다.
구체적 실시양태에서, 항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 10 ㎍/mL의 Cmin, 예컨대 10 내지 80 ㎍/mL의 Cmin으로 유지하는 용량이 바람직하다.
구체적 실시양태에서, 항-RANKL 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 10 ㎍/mL의 Cmin(예를 들어, 10 내지 50 ㎍/mL 또는 15 내지 30 ㎍/mL의 Cmin)으로 유지하는 용량이 바람직하다.
구체적 실시양태에서, 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 10 ㎍/mL의 Cmin으로 유지하는 용량이 바람직하며, 예컨대 10 내지 100 ㎍/mL 또는 100 내지 300 ㎍/mL 또는 300 내지 600 ㎍/mL의 Cmin이 바람직하다.
구체적 실시양태에서, 항-BLyS 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 70 ㎍/mL의 Cmin(예를 들어, 70 내지 150 ㎍/mL 또는 100 내지 200 ㎍/mL 또는 200 내지 350 ㎍/mL의 Cmin)으로 유지하는 용량이 바람직하다.
구체적 실시양태에서, 항-pKal 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 70 ㎍/mL의 Cmin(예를 들어, 70 내지 150 ㎍/mL 또는 100 내지 200 ㎍/mL 또는 200 내지 350 ㎍/mL의 Cmin)으로 유지하는 용량이 바람직하다.
전이유전자 산물(예를 들어, 코딩된 항-VEGF 항체)의 발현은 간에서 전이유전자 산물의 전달 및 유지를 야기한다. 일부 실시양태에서, VEGF 전이유전자 산물의 농도를 적어도 90 ㎍/mL의 Cmin, 예컨대 90 ㎍/mL 내지 200 ㎍/mL의 Cmin으로 유지하는 용량이 바람직하다. 구체적 실시양태에서, 항-CP-C5 항체 전이유전자 산물의 농도를 적어도 30 mcg/mL의 Cmin, 예를 들어 30 내지 300 mcg/mL 또는 100 내지 200 mcg/mL의 Cmin으로 유지하는 용량이 바람직하다.
그러나, 모든 경우에, 전이유전자 산물은 연속적으로 생산되기 때문에, 저농도의 유지가 효과적일 수 있다. 그럼에도 불구하고, 전이유전자 산물은 연속적으로 생산되기 때문에, 저농도의 유지가 효과적일 수 있다. 전이유전자 산물의 농도는 환자 혈액 혈청 샘플에서 측정될 수 있다.
정맥내, 근육내, 피하 또는 간 투여를 위해 적합한 약학 조성물은 생리학적으로 양립가능한 수성 버퍼를 포함하는 제형 버퍼 내에 항-IL/ILR, 항-인테그린, 항-PCSK9, 항-ANGPTL3, 항-RANKL, 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-PD-L2, 항-VEGF, 항-fD, 항-BLyS, 항-CP-C5, 항-MMP9, 항-pKal, 또는 항-TNFα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 벡터의 현탁액을 포함한다. 제형 버퍼는 다당류, 계면활성제, 중합체, 또는 오일 중 1 이상을 포함할 수 있다.
5.5.3 망막 유형 세포에 전달하기 위한 투여
재조합 벡터의 치료적 유효 용량은 재조합 벡터가 망막에 들어가도록 임의의 방식으로, 바람직하게는 재조합 벡터를 눈 내에 직접 도입함으로써 투여되어야 한다. 구체적 실시양태에서, 벡터는 망막하로(국소 마취 하에서 대상체의 부분 유리체절제술, 및 망막 내로의 유전자 요법의 주사를 포함하는 숙달된 망막 외과의에 의해 수행되는 외과적 수술; 예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Campochiaro et al., 2016, Hum Gen Ther Sep 26 epub:doi: 10.1089/hum.2016.117 참고), 또는 유리체내로, 또는 맥락막상으로, 예컨대 현미주사 또는 미세관삽입에 의해 투여된다. (예를 들어, 각각 그 전체가 참고로 포함되는 Patel et al., 2012, Invest Ophth & Vis Sci 53:4433-4441; Patel et al., 2011, Pharm Res 28:166-176; Olsen, 2006, Am J Ophth 142:777-787 참고). 망막하, 유리체내 또는 맥락막상 투여는 다음 망막 세포 유형 중 1 이상에서 가용성 전이유전자 산물의 발현을 야기해야 한다: 인간 광수용기 세포(원뿔 세포, 간상 세포); 수평 세포; 양극 세포; 아마크린 세포; 망막 신경절 세포(난쟁이 세포, 양산 세포, 이중층 세포, 거대 망막 신경절 세포, 감광성 신경절 세포, 및 뮬러 교세포); 및 망막 색소 상피 세포. 전이유전자 산물(예를 들어, 코딩된 항-VEGF, 항-fD, 항-MMP9 항체)의 발현은 망막에서 전이유전자 산물의 전달 및 유지를 야기한다.
전이유전자 산물의 농도는 치료된 눈의 유리체 액 및/또는 전방의 환자 샘플에서 측정될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항-VEGF, 항-fD 전이유전자 산물의 농도를 유리체 액에서 적어도 0.33 ㎍/mL, 방수(눈의 전방)에서 0.11 ㎍/mL의 Cmin으로 3 개월 동안 유지하는 용량이 바람직하며; 그 후, 1.70 내지 6.60 ㎍/mL 범위의 전이유전자 산물의 유리체 액 Cmin 농도, 및/또는 0.567 내지 2.20 ㎍/mL 범위의 방수 Cmin 농도가 유지되어야 한다. 그러나, 전이유전자 산물은 연속적으로 생산되기 때문에, 저농도의 유지가 효과적일 수 있다. 대안적으로, 유리체 액 농도는 전이유전자 산물의 환자의 혈청 농도를 측정함으로써 추정 및/또는 모니터링될 수 있다 - 전이유전자 산물에 대한 전신 대 유리체 노출의 비는 약 1:90,000이다. (예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 Xu L, et al., 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624, at p. 1621 및 Table 5 at p. 1623에서 보고된 라니비주맙의 유리체 액 및 혈청 농도 참고). 그러나, 전이유전자 산물은 연속적으로 생산되기 때문에, 저농도의 유지가 효과적일 수 있다.
투여를 위해 적합한 약학 조성물은 생리학적으로 양립가능한 수성 버퍼를 포함하는 제형 버퍼 내에 항-VEGF, 항-fD, 또는 항-MMP9 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 재조합 벡터의 현탁액을 포함한다. 제형 버퍼는 다당류, 계면활성제, 중합체, 또는 오일 중 1 이상을 포함할 수 있다.
6. 실시예
6.1 실시예 1: 아두카누맙 Fab cDNA-계 벡터
아두카누맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 1과 2임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 아두카누맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 CNS 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 101 및 102의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 시그널 펩티드, 특히 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 2a를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.2 실시예 2: 크레네주맙 Fab cDNA-계 벡터
크레네주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 3과 4임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 크레네주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 CNS 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 103 및 104의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 시그널 펩티드, 특히 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 2b를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.3 실시예 3: 간테네루맙 Fab cDNA-계 벡터
간테네루맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 5와 6임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 간테네루맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 CNS 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 105 및 106의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 시그널 펩티드, 특히 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 2c를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.4 실시예 4: 두필루맙 Fab cDNA-계 벡터
두팔루맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 7과 8임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 두팔루맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 107 및 108의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 3a를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.5 실시예 5: 익세키주맙 Fab cDNA-계 벡터
익세키주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 9와 10임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 익세키주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 109 및 110의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 3b를 참고한다. 선택적으로, 벡터는 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.6 실시예 6: 세쿠키누맙 Fab cDNA-계 벡터
세쿠키누맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 11과 12임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 세쿠키누맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 111 및 112의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 표 2 또는 3에 각각 열거된 그룹으로부터 선택된 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 3c를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.7 실시예 7: 우스테키누맙 Fab cDNA-계 벡터
우스테키누맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 13과 14임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 우스테키누맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 113 및 114의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 3d를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.8 실시예 8: 메폴리주맙 Fab cDNA-계 벡터
메폴리주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 15와 16임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 메폴리주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 115 및 116의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 3e를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.9 실시예 9: 베돌리주맙 Fab cDNA-계 벡터
베돌리주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 17과 18임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 베돌리주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 117 및 118의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 4a를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.10 실시예 10: 나탈리주맙 Fab cDNA-계 벡터
나탈리주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 19와 20임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 나탈리주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 119 및 120의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 4b를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.11 실시예 11: 알리로쿠맙 Fab cDNA-계 벡터
알리로쿠맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 21과 22임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 알리로쿠맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 121 및 122의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 5a를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.12 실시예 12: 에볼로쿠맙 Fab cDNA-계 벡터
에볼로쿠맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 23과 24임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 에볼로쿠맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 123 및 124의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 5b를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.13 실시예 13: 에비나쿠맙 Fab cDNA-계 벡터
에비나쿠맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 25와 26임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 에비나쿠맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 125 및 126의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 5c를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.14 실시예 14: 데노수맙 Fab cDNA-계 벡터
데노수맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 27과 28임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 데노수맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 127 및 128의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 6을 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.15 실시예 15: 니볼루맙 Fab cDNA-계 벡터
니볼루맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 29와 30임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 니볼루맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 129 및 130의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 7a를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.16 실시예 16: 펨브롤리주맙 Fab cDNA-계 벡터
펨브롤리주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 31과 32임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 펨브롤리주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 131 및 132의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 7b를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.17 실시예 17: 라니비주맙 Fab cDNA-계 벡터
라니비주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 33과 34임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 라니비주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 망막 또는 간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 133 및 134의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 1로부터의 망막 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 간 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 8a를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.18 실시예 18: 베바시주맙 Fab cDNA-계 벡터
베바시주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 35와 36임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 베바시주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 망막 또는 간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 135 및 136의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 1로부터의 망막 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 간 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 8b를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.19 실시예 19: 람팔리주맙 Fab cDNA-계 벡터
람팔리주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 37과 38임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 람팔리주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 망막 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 137 및 138의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 1로부터의 망막 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 8c를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.20 실시예 20: 브롤루시주맙 scFv cDNA-계 벡터
브롤루시주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 39와 40임)의 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 브롤루시주맙 scFv cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 망막 또는 간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 139 및 140의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 1로부터의 망막 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 간 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 유연한 펩티드 링커에 의해 분리된다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 8d를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.21 실시예 21: 벨리무맙 Fab cDNA-계 벡터
벨리무맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 41과 42임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 벨리무맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 141 및 142의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 3으로부터의 간 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 8e를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.22 실시예 22: 에쿨리주맙 Fab cDNA-계 벡터
에쿨리주맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 43과 44임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 에쿨리주맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 143 및 144의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 3으로부터의 간 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 8f를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.23 실시예 23: 안데칼릭시맙 Fab DNA-계 벡터
안데칼릭시맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 45와 46임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 안데칼릭시맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 145 및 146의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 3으로부터의 간 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 8g를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.24 실시예 24: 라나델루맙 Fab DNA-계 벡터
라나델루맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 47과 48임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 라나델루맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 147 및 148의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 3으로부터의 간 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 8h를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.25 실시예 25: 아달리무맙 Fab cDNA-계 벡터
아달리무맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 49와 50임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 아달리무맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 149 및 150의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2 또는 표3으로부터의 간 또는 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 9a를 참고한다. 벡터는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.26 실시예 26: 인플릭시맙 Fab cDNA-계 벡터
인플릭시맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 51과 52임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 인플릭시맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 151 및 152의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 3으로부터의 간 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 9b를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.27 실시예 27: aTAU Fab cDNA-계 벡터
aTAU의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 53과 54임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 aTAU Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 CNS 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 153 및 154의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 시그널 펩티드, 특히 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 2d를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.28 실시예 28: 에레누맙 Fab cDNA-계 벡터
에레누맙의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 55와 56임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 에레누맙 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 CNS 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 155 및 156의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 시그널 펩티드, 특히 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 2e를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.29 실시예 29: BAN2401 Fab cDNA-계 벡터
BAN2401의 중쇄 및 경쇄 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 57과 58임)의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 BAN2401 Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄의 Fab 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 CNS 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 157 및 158의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 시그널 펩티드, 특히 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 IRES 요소 또는 2A 절단 부위에 의해 분리되어, 바이시스트론성 벡터를 생성한다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 2f를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
6.30 실시예 30: E06-scFv Fab cDNA-계 벡터
E06-scFv의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열(아미노산 서열은 각각 서열번호 59와 60임)을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 전이유전자를 포함하는 E06-scFv Fab cDNA-계 벡터를 구축한다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인간 간 또는 근육 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화되고, 각각 서열번호 159 및 160의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 전이유전자는 또한 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열번호 161) 일 수 있거나, 표 2로부터의 간 특이적 시그널 서열 또는 표 3으로부터의 근육 특이적 시그널 서열인 시그널 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 유연한 펩티드 링커에 의해 분리된다. 전이유전자 산물의 아미노산 서열에 대해 도 5d를 참고한다. 벡터는 구조성 프로모터, 예컨대 CB7 또는 유도성 프로모터, 예컨대 저산소증-유도성 프로모터를 추가적으로 포함한다.
표 4. Fab 단편 아미노산 서열의 표
표 5. Fab 단편 핵산 서열의 표
균등물
본 발명이 그 구체적 실시양태에 관하여 상세히 기재되지만, 기능적으로 동등한 변형이 본 발명의 범위 이내임이 이해될 것이다. 사실상, 본원에서 나타나고 기재된 것에 더하여 다양한 본 발명의 변형이 전술한 설명과 첨부의 도면으로부터 당업자에게 자명할 것이다. 이러한 변형은 첨부의 청구범위의 범위 내에 속한다. 당업자는 일상적 실험을 이용하여 본원에 기재된 본 발명의 구체적 실시양태에 대한 많은 균등물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 다음 청구범위에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 구체적으로 그리고 개별적으로 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 것으로 나타난 것과 동일한 정도로 본 명세서 내에 참고로 포함된다.
SEQUENCE LISTING
<110> REGENXBIO, INC.
<120> FULLY-HUMAN POST-TRANSLATIONALLY MODIFIED ANTIBODY THERAPEUTICS
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<151> 2017-10-18
<160> 314
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Xaa Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Phe Asp Gly Thr Lys Lys Tyr Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Arg Gly Ile Gly Ala Arg Arg Gly Pro Tyr Tyr Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
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Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
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Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
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Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
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Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
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Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
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Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
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Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
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Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
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Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
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Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
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Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
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Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
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Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
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Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
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Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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substitutions and preferred embodiments"
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
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Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
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Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
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Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
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Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
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Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
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Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
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Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
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Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
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Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu
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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Tyr Ile His Tyr Trp
100 105 110
Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Cys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile
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Gly Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
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Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr
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Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
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Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
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Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
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Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
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Ser Val Phe Leu
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Ser Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val Val Leu
65 70 75 80
Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Pro Ser Ser Leu Leu Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
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Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Xaa Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
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Val His Ser Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
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Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
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Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
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Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
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Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
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Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
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Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Asp Pro Ser Glu Ser Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Ile Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Trp Asp Tyr Ala Ile Asp Tyr Trp Gly
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Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
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Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly
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Ala Pro Ser Val Phe Leu
245
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Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Lys Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
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Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
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Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
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Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
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Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<222> (1)..(245)
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<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
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Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Tyr Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Gly Val Tyr Ala Met Asp Tyr
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Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys
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Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly
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Pro Ser Val Phe Leu
245
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Thr Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
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Met Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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His Tyr Thr Ser Ala Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
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Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
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Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
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Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
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Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
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Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 21
<211> 243
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<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
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Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Asp Ser Asn Trp Gly Asn Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
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Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
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Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
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Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
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Val Phe Leu
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<400> 22
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Arg Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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for variant positions"
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr
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Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Val Ser Phe Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
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Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
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Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
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Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
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Glu Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Tyr Thr Ser Thr
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Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
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Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
165 170 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
180 185 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ala Ile Ser Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Phe Phe Tyr Cys
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Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
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Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
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Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Ser Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Gly Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Asp Pro Gly Thr Thr Val Ile Met Ser Trp Phe Asp Pro Trp
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
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Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
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Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Gly Arg
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Phe Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
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Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
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Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
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Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
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Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
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Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
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Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
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Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
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Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
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Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
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Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
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Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
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Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
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Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
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Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
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Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
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Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
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Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
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Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
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Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
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Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
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Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
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Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr
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Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
50 55 60
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
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Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
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Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
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165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
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Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
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Asp Ile Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ile Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
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Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Asp Ser Leu Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
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Val Gly Phe Ile Asp Pro Asp Asp Asp Pro Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Gly Gly Asp His Asn Ser Gly Trp Gly Leu Asp Ile Trp Gly Gln
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ile Ile His Ser Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Tyr Leu Ala Ser Thr
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asn Asn
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Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Ala Lys Tyr Ser Gln Asn Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
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Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
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Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
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Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245
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Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Val Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
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Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His
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Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
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115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
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<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
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Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
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Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235
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<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Asn Thr Pro Leu
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
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115 120 125
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Leu Ser Tyr
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Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
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Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235
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<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Thr
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<400> 47
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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1 5 10 15
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20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr
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100 105 110
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Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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115 120 125
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
1 5 10 15
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn
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Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
50 55 60
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
65 70 75 80
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
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Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
115 120 125
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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Pro Ser Val Phe Leu
245
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Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Glu Val Lys Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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Trp Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
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Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Ser Gly Ile Tyr
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Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
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Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys
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Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
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Arg Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
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Pro Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Trp
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Glu Ile Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
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Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
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Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Val Ile Ser Phe Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Ser Val Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Arg Leu Asn Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr His Tyr
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Lys Tyr Tyr Gly Met Ala Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
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Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
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Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
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Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Pro Val Ala Gly
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Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
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Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
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Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
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Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Thr Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
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Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Arg Leu
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Ser Ala Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
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Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
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Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Arg Glu Gly Gly Tyr Tyr Tyr Gly Arg Ser Tyr Tyr Thr Met Asp
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Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
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Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
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<213> Adeno-associated virus 1
<400> 71
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<210> 72
<211> 735
<212> PRT
<213> Adeno-associated virus 2
<400> 72
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<213> Adeno-associated virus 6
<400> 76
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Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys
515 520 525
Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly
530 535 540
Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile
545 550 555 560
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser
565 570 575
Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln
580 585 590
Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln
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Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His
610 615 620
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625 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala
645 650 655
Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr
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Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln
675 680 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn
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Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Ser Thr Glu Gly Val
705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735
<210> 82
<211> 736
<212> PRT
<213> Adeno-associated virus
<400> 82
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly
145 150 155 160
Lys Ser Gly Ser Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gln Thr
165 170 175
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro
180 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly
195 200 205
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Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile
225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile
305 310 315 320
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465 470 475 480
Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn
485 490 495
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500 505 510
Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys
515 520 525
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530 535 540
Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile
545 550 555 560
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser
565 570 575
Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln
580 585 590
Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln
595 600 605
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610 615 620
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625 630 635 640
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645 650 655
Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr
660 665 670
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675 680 685
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 101
gtgcagctgg tggagagcgg cggcggcgtg gtgcagcccg gcagaagcct gagactgagc 60
tgcgccgcca gcggcttcgc cttcagcagc tacggcatgc actgggtgag acaggccccc 120
ggcaagggcc tggagtgggt ggccgtgatc tggttcgacg gcaccaagaa gtactacacc 180
gacagcgtga agggcagatt caccatcagc agagacaaca gcaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaaca ccctgagagc cgaggacacc gccgtgtact actgcgccag agacagaggc 300
atcggcgcca gaagaggccc ctactacatg gacgtgtggg gcaagggcac caccgtgacc 360
gtgagcagcg ccagcaccaa gggccccagc gtgttccccc tggcccccag cagcaagagc 420
accagcggcg gcaccgccgc cctgggctgc ctggtgaagg actacttccc cgagcccgtg 480
accgtgagct ggaacagcgg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc cgccgtgctg 540
cagagcagcg gcctgtacag cctgagcagc gtggtgaccg tgcccagcag cagcctgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaaccac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660
gtggagccca agagctgcga caagacccac acctgccccc cctgccccgc ccccgagctg 720
ctgggcggcc ccagcgtgtt cctg 744
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<211> 642
<212> DNA
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polynucleotide"
<400> 102
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgca gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtacca gcagaagccc 120
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gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agctacagca cccccctgac cttcggcggc 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 103
<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 103
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacggca tgagctgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagct ggtggccagc atcaacagca acggcggcag cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagcggcgac 300
tactggggcc agggcaccac cgtgaccgtg agcagcgcca gcaccaaggg ccccagcgtg 360
ttccccctgg ccccctgcag cagaagcacc agcgagagca ccgccgccct gggctgcctg 420
gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc gtgagctgga acagcggcgc cctgaccagc 480
ggcgtgcaca ccttccccgc cgtgctgcag agcagcggcc tgtacagcct gagcagcgtg 540
gtgaccgtgc ccagcagcag cctgggcacc aagacctaca cctgcaacgt ggaccacaag 600
cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtg gagagcaagt acggcccccc ctgccccccc 660
tgccccgccc ccgagttcct gggcggcccc agcgtgttcc tg 702
<210> 104
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
<400> 104
gacatcgtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga cccccggcga gcccgccagc 60
atcagctgca gaagcagcca gagcctggtg tacagcaacg gcgacaccta cctgcactgg 120
tacctgcaga agcccggcca gagcccccag ctgctgatct acaaggtgag caacagattc 180
agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240
agcagagtgg aggccgagga cgtgggcgtg tactactgca gccagagcac ccacgtgccc 300
tggaccttcg gccagggcac caaggtggag atcaagagaa ccgtggccgc ccccagcgtg 360
ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420
ctgaacaact tctaccccag agaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggacagcac ctacagcctg 540
agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600
gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaacagagg cgagtgc 657
<210> 105
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<222> (1)..(752)
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 105
caggtggagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtgagcgcc atcaacgcca gcggcaccag aacctactac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagaggcaag 300
ggcaacaccc acaagcccta cggctacgtg agatacttcg acgtgtgggg ccagggcacc 360
ctggtgaccg tgagcagcgc cagcaccaag ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc 420
agcaagagca ccagcggcgg caccgccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc 480
gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc 540
gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc 600
agcctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg 660
gacaagaagg tggagcccaa gagctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgccccgcc 720
ccgagctgct gggcggcccc agcgtgttcc tg 752
<210> 106
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 106
gacatcgtgc tgacccagag ccccgccacc ctgagcctga gccccggcga gagagccacc 60
ctgagctgca gagccagcca gagcgtgagc agcagctacc tggcctggta ccagcagaag 120
cccggccagg cccccagact gctgatctac ggcgccagca gcagagccac cggcgtgccc 180
gccagattca gcggcagcgg cagcggcacc gacttcaccc tgaccatcag cagcctggag 240
cccgaggact tcgccaccta ctactgcctg cagatctaca acatgcccat caccttcggc 300
cagggcacca aggtggagat caagagaacc gtggccgccc ccagcgtgtt catcttcccc 360
cccagcgacg agcagctgaa gagcggcacc gccagcgtgg tgtgcctgct gaacaacttc 420
taccccagag aggccaaggt gcagtggaag gtggacaacg ccctgcagag cggcaacagc 480
caggagagcg tgaccgagca ggacagcaag gacagcacct acagcctgag cagcaccctg 540
accctgagca aggccgacta cgagaagcac aaggtgtacg cctgcgaggt gacccaccag 600
ggcctgagca gccccgtgac caagagcttc aacagaggcg agtgc 645
<210> 107
<211> 741
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 107
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggagcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg gcagcggctt caccttcaga gactacgcca tgacctgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtgagcagc atcagcggca gcggcggcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacaga 300
ctgagcatca ccatcagacc cagatactac ggcctggacg tgtggggcca gggcaccacc 360
gtgaccgtga gcagcgccag caccaagggc cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc 420
agaagcacca gcgagagcac cgccgccctg ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag 480
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gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcagc 600
ctgggcacca agacctacac ctgcaacgtg gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagagagtgg agagcaagta cggccccccc tgccccccct gccccgcccc cgagttcctg 720
ggcggcccca gcgtgttcct g 741
<210> 108
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 108
gacatcgtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga cccccggcga gcccgccagc 60
atcagctgca gaagcagcca gagcctgctg tacagcatcg gctacaacta cctggactgg 120
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agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240
agcagagtgg aggccgagga cgtgggcttc tactactgca tgcaggccct gcagaccccc 300
tacaccttcg gccagggcac caagctggag atcaagagaa ccgtggccgc ccccagcgtg 360
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ctgaacaact tctaccccag agaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
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agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600
gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaacagagg cgagtgc 657
<210> 109
<211> 723
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<222> (691)..(723)
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 109
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc gactaccaca tccactgggt gagacaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggcgtg atcaacccca tgtacggcac caccgactac 180
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accgccgccc tgggctgcct ggtgaaggac tacttccccg agcccgtgac cgtgagctgg 480
aacagcggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540
ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgaccgtg cccagcagca gcctgggcac caagacctac 600
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tacggccccc cctgcccccc ctgccccgcc cccgagttcc tgggcggccc cagcgtgttc 720
ctg 723
<210> 110
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 110
gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtga cccccggcca gcccgccagc 60
atcagctgca gaagcagcag aagcctggtg cacagcagag gcaacaccta cctgcactgg 120
tacctgcaga agcccggcca gagcccccag ctgctgatct acaaggtgag caacagattc 180
atcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240
agcagagtgg aggccgagga cgtgggcgtg tactactgca gccagagcac ccacctgccc 300
ttcaccttcg gccagggcac caagctggag atcaagagaa ccgtggccgc ccccagcgtg 360
ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420
ctgaacaact tctaccccag agaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggacagcac ctacagcctg 540
agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600
gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaacagagg cgagtgc 657
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<211> 755
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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substitutions and preferred embodiments"
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gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc aactactgga tgaactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccgcc atcaaccagg acggcagcga gaagtactac 180
gtgggcagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agtggaggac accgccgtgt actactgcgt gagagactac 300
tacgacatcc tgaccgacta ctacatccac tactggtact tcgacctgtg gggcagaggc 360
accctggtga ccgtgagcag cgccagcacc aagggcccca gcgtgttccc cctggccccc 420
agcagcaaga gcaccagcgg cggcaccgcc gccctgggct gcctggtgaa ggactacttc 480
cccgagcccg tgaccgtgag ctggaacagc ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc 540
cccgccgtgc tgcagagcag cggcctgtac agcctgagca gcgtggtgac cgtgcccagc 600
agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag 660
gtggacaaga gagtggagcc caagagctgc gacaagaccc acacctgccc cccctgcccc 720
gccccgagct gctgggcggc cccagcgtgt tcctg 755
<210> 112
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<221> source
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polynucleotide"
<400> 112
gagatcgtgc tgacccagag ccccggcacc ctgagcctga gccccggcga gagagccacc 60
ctgagctgca gagccagcca gagcgtgagc agcagctacc tggcctggta ccagcagaag 120
cccggccagg cccccagact gctgatctac ggcgccagca gcagagccac cggcatcccc 180
gacagattca gcggcagcgg cagcggcacc gacttcaccc tgaccatcag cagactggag 240
cccgaggact tcgccgtgta ctactgccag cagtacggca gcagcccctg caccttcggc 300
cagggcacca gactggagat caagagaacc gtggccgccc ccagcgtgtt catcttcccc 360
cccagcgacg agcagctgaa gagcggcacc gccagcgtgg tgtgcctgct gaacaacttc 420
taccccagag aggccaaggt gcagtggaag gtggacaacg ccctgcagag cggcaacagc 480
caggagagcg tgaccgagca ggacagcaag gacagcacct acagcctgag cagcaccctg 540
accctgagca aggccgacta cgagaagcac aaggtgtacg cctgcgaggt gacccaccag 600
ggcctgagca gccccgtgac caagagcttc aacagaggcg agtgc 645
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<212> DNA
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 113
gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgagag cctgaagatc 60
agctgcaagg gcagcggcta cagcttcacc acctactggc tgggctgggt gagacagatg 120
cccggcaagg gcctggactg gatcggcatc atgagccccg tggacagcga catcagatac 180
agccccagct tccagggcca ggtgaccatg agcgtggaca agagcatcac caccgcctac 240
ctgcagtgga acagcctgaa ggccagcgac accgccatgt actactgcgc cagaagaaga 300
cccggccagg gctacttcga cttctggggc cagggcaccc tggtgaccgt gagcagcagc 360
agcaccaagg gccccagcgt gttccccctg gcccccagca gcaagagcac cagcggcggc 420
accgccgccc tgggctgcct ggtgaaggac tacttccccg agcccgtgac cgtgagctgg 480
aacagcggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540
ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgaccgtg cccagcagca gcctgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt ggagcccaag 660
agctgcgaca agacccacac ctgccccccc tgccccgccc ccgagctgct gggcggcccc 720
agcgtgttcc tg 732
<210> 114
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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polynucleotide"
<400> 114
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgca gagccagcca gggcatcagc agctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120
gagaaggccc ccaagagcct gatctacgcc gccagcagcc tgcagagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacaacatct acccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 115
caggtgaccc tgagagagag cggccccgcc ctggtgaagc ccacccagac cctgaccctg 60
acctgcaccg tgagcggctt cagcctgacc agctacagcg tgcactgggt gagacagccc 120
cccggcaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctgggcca gcggcggcac cgactacaac 180
agcgccctga tgagcagact gagcatcagc aaggacacca gcagaaacca ggtggtgctg 240
accatgacca acatggaccc cgtggacacc gccacctact actgcgccag agaccccccc 300
agcagcctgc tgagactgga ctactggggc agaggcaccc ccgtgaccgt gagcagcgcc 360
agcaccaagg gccccagcgt gttccccctg gcccccagca gcaagagcac cagcggcggc 420
accgccgccc tgggctgcct ggtgaaggac tacttccccg agcccgtgac cgtgagctgg 480
aacagcggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540
ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgaccgtg cccagcagca gcctgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt ggagcccaag 660
agctgcgaca agacccacac ctgccccccc tgccccgccc ccgagctgct gggcggcccc 720
agcgtgttcc tg 732
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<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
<400> 116
gacatcgtga tgacccagag ccccgacagc ctggccgtga gcctgggcga gagagccacc 60
atcaactgca agagcagcca gagcctgctg aacagcggca accagaagaa ctacctggcc 120
tggcagcaga agcccggcca gccccccaag ctgctgatct acggcgccag caccagagag 180
agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaccatc 240
agcagcctgc aggccgagga cgtggccgtg tactactgcc agaacgtgca cagcttcccc 300
ttcaccttcg gcggcggcac caagctggag atcaagagaa ccgtggccgc ccccagcgtg 360
ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420
ctgaacaact tctaccccag agaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggacagcac ctacagcctg 540
agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600
gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaacagagg cgagtgc 657
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<213> Artificial Sequence
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<222> (1)..(738)
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 117
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg gcagcggcta caccttcacc agctactgga tgcactgggt gagacaggcc 120
cccggccaga gactggagtg gatcggcgag atcgacccca gcgagagcaa caccaactac 180
aaccagaagt tcaagggcag agtgaccctg accgtggaca tcagcgccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagaggcggc 300
tacgacggct gggactacgc catcgactac tggggccagg gcaccctggt gaccgtgagc 360
agcgccagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcaccg ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ccgcccccga gctggccggc 720
gcccccagcg tgttcctg 738
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
<400> 118
gacgtggtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga cccccggcga gcccgccagc 60
atcagctgca gaagcagcca gagcctggcc aagagctacg gcaacaccta cctgagctgg 120
tacctgcaga agcccggcca gagcccccag ctgctgatct acggcatcag caacagattc 180
agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240
agcagagtgg aggccgagga cgtgggcgtg tactactgcc tgcagggcac ccaccagccc 300
tacaccttcg gccagggcac caaggtggag atcaagagaa ccgtggccgc ccccagcgtg 360
ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420
ctgaacaact tctaccccag agaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggacagcac ctacagcctg 540
agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600
gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaacagagg cgagtgc 657
<210> 119
<211> 735
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
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<222> (676)..(735)
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<221> misc_feature
<222> (703)..(735)
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<220>
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<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 119
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gagacaggcc 120
cccggccaga gactggagtg gatgggcaga atcgaccccg ccaacggcta caccaagtac 180
gaccccaagt tccagggcag agtgaccatc accgccgaca ccagcgccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
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cagagcagcg gcctgtacag cctgagcagc gtggtgaccg tgcccagcag cagcctgggc 600
accaagacct acacctgcaa cgtggaccac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660
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cccagcgtgt tcctg 735
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<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
<400> 120
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgca agaccagcca ggacatcaac aagtacatgg cctggtacca gcagaccccc 120
ggcaaggccc ccagactgct gatccactac accagcgccc tgcagcccgg catccccagc 180
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agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600
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<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<222> (667)..(729)
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<221> Variation
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<222> (679)..(729)
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<221> misc_feature
<222> (697)..(729)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(729)
<223> /note="Variant nucleotides given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 121
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
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gccgacagcg tgaagggcag attcatcatc agcagagaca gcagcaagca caccctgtac 240
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gccgccctgg gctgcctggt gaaggactac ttccccgagc ccgtgaccgt gagctggaac 480
agcggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttccccgccg tgctgcagag cagcggcctg 540
tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgccc agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600
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<213> Artificial Sequence
<220>
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polynucleotide"
<400> 122
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gaggtgaccc accagggcct gagcagcccc gtgaccaaga gcttcaacag aggcgagtgc 660
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<211> 693
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
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<222> (661)..(693)
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<221> misc_feature
<222> (679)..(693)
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 123
gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccctgacc agctacggca tcagctgggt gagacaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggctgg gtgagcttct acaacggcaa caccaactac 180
gcccagaagc tgcagggcag aggcaccatg accaccgacc ccagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gaagcctgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcgc cagaggctac 300
ggcatggacg tgtggggcca gggcaccacc gtgaccgtga gcagcgccag caccaagggc 360
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ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
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gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agagaaagtg ctgcgtggag 660
tgccccccct gccccgcccc ccccgtggcc ggc 693
<210> 124
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 124
gagagcgccc tgacccagcc cgccagcgtg agcggcagcc ccggccagag catcaccatc 60
agctgcaccg gcaccagcag cgacgtgggc ggctacaaca gcgtgagctg gtaccagcag 120
caccccggca aggcccccaa gctgatgatc tacgaggtga gcaacagacc cagcggcgtg 180
agcaacagat tcagcggcag caagagcggc aacaccgcca gcctgaccat cagcggcctg 240
caggccgagg acgaggccga ctactactgc aacagctaca ccagcaccag catggtgttc 300
ggcggcggca ccaagctgac cgtgctgggc cagcccaagg ccgcccccag cgtgaccctg 360
ttccccccca gcagcgagga gctgcaggcc aacaaggcca ccctggtgtg cctgatcagc 420
gacttctacc ccggcgccgt gaccgtggcc tggaaggccg acagcagccc cgtgaaggcc 480
ggcgtggaga ccaccacccc cagcaagcag agcaacaaca agtacgccgc cagcagctac 540
ctgagcctga cccccgagca gtggaagagc cacagaagct acagctgcca ggtgacccac 600
gagggcagca ccgtggagaa gaccgtggcc cccaccgagt gcagc 645
<210> 125
<211> 744
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<221> source
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polynucleotide"
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<220>
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<222> (712)..(744)
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<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 125
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtgatccagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgaactgggt gagacagggc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtgagcgcc atcagcggcg acggcggcag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccttct tctactgcgc caaggacctg 300
agaaacacca tcttcggcgt ggtgatcccc gacgccttcg acatctgggg ccagggcacc 360
atggtgaccg tgagcagcgc cagcaccaag ggccccagcg tgttccccct ggccccctgc 420
agcagaagca ccagcgagag caccgccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc 480
gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc 540
gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc 600
agcctgggca ccaagaccta cacctgcaac gtggaccaca agcccagcaa caccaaggtg 660
gacaagagag tggagagcaa gtacggcccc ccctgccccc cctgccccgc ccccgagttc 720
ctgggcggcc ccagcgtgtt cctg 744
<210> 126
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
<400> 126
gacatccaga tgacccagag ccccagcacc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgca gagccagcca gagcatcaga agctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaag gccagcagcc tggagagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgag ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gacgacttcg ccacctacta ctgccagcag tacaacagct acagctacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 127
<211> 741
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 127
gaggtgcagc tgctggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtgagcggc atcaccggca gcggcggcag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
ggcaccaccg tgatcatgag ctggttcgac ccctggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
agcagcgcca gcaccaaggg ccccagcgtg ttccccctgg cccccagcag caagagcacc 420
agcggcggca ccgccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 480
gtgagctgga acagcggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttccccgc cgtgctgcag 540
agcagcggcc tgtacagcct gagcagcgtg gtgaccgtgc ccagcagcag cctgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaggtg 660
gagcccaaga gctgcgacaa gacccacacc tgccccccct gccccgcccc cgagctgctg 720
ggcggcccca gcgtgttcct g 741
<210> 128
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
<400> 128
gagatcgtgc tgacccagag ccccggcacc ctgagcctga gccccggcga gagagccacc 60
ctgagctgca gagccagcca gagcgtgaga ggcagatacc tggcctggta ccagcagaag 120
cccggccagg cccccagact gctgatctac ggcgccagca gcagagccac cggcatcccc 180
gacagattca gcggcagcgg cagcggcacc gacttcaccc tgaccatcag cagactggag 240
cccgaggact tcgccgtgtt ctactgccag cagtacggca gcagccccag aaccttcggc 300
cagggcacca aggtggagat caagagaacc gtggccgccc ccagcgtgtt catcttcccc 360
cccagcgacg agcagctgaa gagcggcacc gccagcgtgg tgtgcctgct gaacaacttc 420
taccccagag aggccaaggt gcagtggaag gtggacaacg ccctgcagag cggcaacagc 480
caggagagcg tgaccgagca ggacagcaag gacagcacct acagcctgag cagcaccctg 540
accctgagca aggccgacta cgagaagcac aaggtgtacg cctgcgaggt gacccaccag 600
ggcctgagca gccccgtgac caagagcttc aacagaggcg agtgc 645
<210> 129
<211> 705
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 129
caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
gactgcaagg ccagcggcat caccttcagc aacagcggca tgcactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccgtg atctggtacg acggcagcaa gagatactac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgttc 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caccaacgac 300
gactactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcagcg ccagcaccaa gggccccagc 360
gtgttccccc tggccccctg cagcagaagc accagcgaga gcaccgccgc cctgggctgc 420
ctggtgaagg actacttccc cgagcccgtg accgtgagct ggaacagcgg cgccctgacc 480
agcggcgtgc acaccttccc cgccgtgctg cagagcagcg gcctgtacag cctgagcagc 540
gtggtgaccg tgcccagcag cagcctgggc accaagacct acacctgcaa cgtggaccac 600
aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gtggagagca agtacggccc cccctgcccc 660
ccctgccccg cccccgagtt cctgggcggc cccagcgtgt tcctg 705
<210> 130
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 130
gagatcgtgc tgacccagag ccccgccacc ctgagcctga gccccggcga gagagccacc 60
ctgagctgca gagccagcca gagcgtgagc agctacctgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggccaggccc ccagactgct gatctacgac gccagcaaca gagccaccgg catccccgcc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctggagccc 240
gaggacttcg ccgtgtacta ctgccagcag agcagcaact ggcccagaac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 131
<211> 726
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 131
caggtgcagc tggtgcagag cggcgtggag gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc aactactaca tgtactgggt gagacaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggcggc atcaacccca gcaacggcgg caccaacttc 180
aacgagaagt tcaagaacag agtgaccctg accaccgaca gcagcaccac caccgcctac 240
atggagctga agagcctgca gttcgacgac accgccgtgt actactgcgc cagaagagac 300
tacagattcg acatgggctt cgactactgg ggccagggca ccaccgtgac cgtgagcagc 360
gccagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccct gcagcagaag caccagcgag 420
agcaccgccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg caccaagacc 600
tacacctgca acgtggacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agtggagagc 660
aagtacggcc ccccctgccc cccctgcccc gcccccgagt tcctgggcgg ccccagcgtg 720
ttcctg 726
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<211> 654
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 132
gagatcgtgc tgacccagag ccccgccacc ctgagcctga gccccggcga gagagccacc 60
ctgagctgca gagccagcaa gggcgtgagc accagcggct acagctacct gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccaggc ccccagactg ctgatctacc tggccagcta cctggagagc 180
ggcgtgcccg ccagattcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatcagc 240
agcctggagc ccgaggactt cgccgtgtac tactgccagc acagcagaga cctgcccctg 300
accttcggcg gcggcaccaa ggtggagatc aagagaaccg tggccgcccc cagcgtgttc 360
atcttccccc ccagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg 420
aacaacttct accccagaga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 480
ggcaacagcc aggagagcgt gaccgagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctgagc 540
agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaggtg 600
acccaccagg gcctgagcag ccccgtgacc aagagcttca acagaggcga gtgc 654
<210> 133
<211> 744
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<222> (1)..(744)
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 133
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggcta cgacttcacc cactacggca tgaactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtgggctgg atcaacacct acaccggcga gcccacctac 180
gccgccgact tcaagagaag attcaccttc agcctggaca ccagcaagag caccgcctac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagtacccc 300
tactactacg gcaccagcca ctggtacttc gacgtgtggg gccagggcac cctggtgacc 360
gtgagcagcg ccagcaccaa gggccccagc gtgttccccc tggcccccag cagcaagagc 420
accagcggcg gcaccgccgc cctgggctgc ctggtgaagg actacttccc cgagcccgtg 480
accgtgagct ggaacagcgg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc cgccgtgctg 540
cagagcagcg gcctgtacag cctgagcagc gtggtgaccg tgcccagcag cagcctgggc 600
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ctgggcggcc ccagcgtgtt cctg 744
<210> 134
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 134
gacatccagc tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgca gcgccagcca ggacatcagc aactacctga actggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaaggtgct gatctacttc accagcagcc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacagcaccg tgccctggac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 135
<211> 744
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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<221> misc_feature
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<221> Variation
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<222> (712)..(744)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(744)
<223> /note="Variant nucleotides given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 135
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggcta caccttcacc aactacggca tgaactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtgggctgg atcaacacct acaccggcga gcccacctac 180
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
<400> 136
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
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gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 137
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
<220>
<221> misc_feature
<222> (658)..(720)
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<221> Variation
<222> (667)..(669)
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<220>
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<222> (688)..(720)
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<222> (1)..(720)
<223> /note="Variant nucleotides given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 137
gaggtgcagc tggtgcagag cggccccgag ctgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc aactacggca tgaactgggt gagacaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggctgg atcaacacct acaccggcga gaccacctac 180
gccgacgact tcaagggcag attcgtgttc agcctggaca ccagcgtgag caccgcctac 240
ctgcagatca gcagcctgaa ggccgaggac accgccgtgt actactgcga gagagagggc 300
ggcgtgaaca actggggcca gggcaccctg gtgaccgtga gcagcgccag caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc ccccagcagc aagagcacca gcggcggcac cgccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcagc ctgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaggtgg agcccaagag ctgcgacaag 660
acccacacct gccccccctg ccccgccccc gagctgctgg gcggccccag cgtgttcctg 720
<210> 138
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 138
gacatccagg tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgca tcaccagcac cgacatcgac gacgacatga actggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggtgc ccaagctgct gatcagcggc ggcaacaccc tgagacccgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacgtgg ccacctacta ctgcctgcag agcgacagcc tgccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 139
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 139
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcaccg ccagcggctt cagcctgacc gactactact acatgacctg ggtgagacag 120
gcccccggca agggcctgga gtgggtgggc ttcatcgacc ccgacgacga cccctactac 180
gccacctggg ccaagggcag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc cggcggcgac 300
cacaacagcg gctggggcct ggacatctgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
<210> 140
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 140
gagatcgtga tgacccagag ccccagcacc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgatc 60
atcacctgcc aggccagcga gatcatccac agctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacctg gccagcaccc tggccagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcgccgag ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gacgacttcg ccacctacta ctgccagaac gtgtacctgg ccagcaccaa cggcgccaac 300
ttcggccagg gcaccaagct gaccgtgctg ggc 333
<210> 141
<211> 741
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
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<221> Variation
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<222> (691)..(741)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (709)..(741)
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<221> misc_feature
<222> (1)..(741)
<223> /note="Variant nucleotides given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 141
caggtgcagc tgcagcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgcgcgtg 60
agctgcaaag cgagcggcgg cacctttaac aacaacgcga ttaactgggt gcgccaggcg 120
ccgggccagg gcctggaatg gatgggcggc attattccga tgtttggcac cgcgaaatat 180
agccagaact ttcagggccg cgtggcgatt accgcggatg aaagcaccgg caccgcgagc 240
atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgc gcgcagccgc 300
gatctgctgc tgtttccgca tcatgcgctg agcccgtggg gccgcggcac catggtgacc 360
gtgagcagcg cgagcaccaa aggcccgagc gtgtttccgc tggcgccgag cagcaaaagc 420
accagcggcg gcaccgcggc gctgggctgc ctggtgaaag attattttcc ggaaccggtg 480
accgtgagca acagcggcgc gctgaccagc ggcgtgcata cctttccggc ggtgctgcag 540
agcagcggcc tgtatagcct gagcagcgtg gtgaccgtgc cgagcagcag cctgggcacc 600
cagacctata tttgcaacgt gaaccataaa ccgagcaaca ccaaagtgga taaaaaagtg 660
gaaccgaaaa gctgcgataa aacccatacc tgcccgccgt gcccggcgcc ggaactgctg 720
ggcggcccga gcgtgtttct g 741
<210> 142
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 142
agcagcgaac tgacccagga tccggcggtg agcgtggcgc tgggccagac cgtgcgcgtg 60
acctgccagg gcgatagcct gcgcagctat tatgcgagct ggtatcagca gaaaccgggc 120
caggcgccgg tgctggtgat ttatggcaaa aacaaccgcc cgagcggcat tccggatcgc 180
tttagcggca gcagcagcgg caacaccgcg agcctgacca ttaccggcgc gcaggcggaa 240
gatgaagcgg attattattg cagcagccgc gatagcagcg gcaaccattg ggtgtttggc 300
ggcggcaccg aactgaccgt gctgggccag ccgaaagcgg cgccgagcgt gaccctgttt 360
ccgccgagca gcgaagaact gcaggcgaac aaagcgaccc tggtgtgcct gattagcgat 420
ttttatccgg gcgcggtgac cgtggcgtgg aaagcggata gcagcccggt ggcgggcgtg 480
gaaaccacca ccccgagcaa acagagcaac aacaaatatg cggcgagcag ctatctgagc 540
ctgaccccgg aacagtggaa aagccatcgc agctatagct gccaggtgac ccatgaaggc 600
agcaccgtgg aaaaaaccgt ggcgccgacc gaatgcagc 639
<210> 143
<211> 714
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
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<222> (700)..(714)
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<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 143
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta catcttcagc aactactgga tccagtgggt gagacaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggcgag atcctgcccg gcagcggcag caccgagtac 180
accgagaact tcaaggacag agtgaccatg accagagaca ccagcaccag caccgtgtac 240
atggagctga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagatacttc 300
ttcggcagca gccccaactg gtacttcgac gtgtggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
agcagcgcca gcaccaaggg ccccagcgtg ttccccctgg ccccctgcag cagaagcacc 420
agcgagagca ccgccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 480
gtgagctgga acagcggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttccccgc cgtgctgcag 540
agcagcggcc tgtacagcct gagcagcgtg gtgaccgtgc ccagcagcaa cttcggcacc 600
cagacctaca cctgcaacgt ggaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaccgtg 660
gagagaaagt gctgcgtgga gtgccccccc tgccccgccc cccccgtggc cggc 714
<210> 144
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 144
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgcg gcgccagcga gaacatctac ggcgccctga actggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacggc gccaccaacc tggccgacgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagaac gtgctgaaca cccccctgac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 145
<211> 711
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
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<221> source
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substitutions and preferred embodiments"
<400> 145
caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagcgagac cctgagcctg 60
acctgcaccg tgagcggctt cagcctgctg agctacggcg tgcactgggt gagacagccc 120
cccggcaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctggaccg gcggcaccac caactacaac 180
agcgccctga tgagcagatt caccatcagc aaggacgaca gcaagaacac cgtgtacctg 240
aagatgaaca gcctgaagac cgaggacacc gccatctact actgcgccag atactactac 300
ggcatggact actggggcca gggcaccctg gtgaccgtga gcagcgccag caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac cgccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcagc ctgggcacca agacctacac ctgcaacgtg 600
gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagagagtgg agagcaagta cggccccccc 660
tgccccccct gccccgcccc cgagttcctg ggcggcccca gcgtgttcct g 711
<210> 146
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 146
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggacgtgaga aacaccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc agcagctaca gaaacaccgg cgtgcccgac 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaggcc 240
gaggacgtgg ccgtgtacta ctgccagcag cactacatca ccccctacac cttcggcggc 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 147
<211> 741
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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polynucleotide"
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<222> (1)..(741)
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 147
gaggtgcagc tgctggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc cactacatca tgatgtgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtgagcggc atctacagca gcggcggcat caccgtgtac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc ctacagaaga 300
atcggcgtgc ccagaagaga cgagttcgac atctggggcc agggcaccat ggtgaccgtg 360
agcagcgcca gcaccaaggg ccccagcgtg ttccccctgg cccccagcag caagagcacc 420
agcggcggca ccgccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 480
gtgagctgga acagcggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttccccgc cgtgctgcag 540
agcagcggcc tgtacagcct gagcagcgtg gtgaccgtgc ccagcagcag cctgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtg 660
gagcccaaga gctgcgacaa gacccacacc tgccccccct gccccgcccc cgagctgctg 720
ggcggcccca gcgtgttcct g 741
<210> 148
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 148
gacatccaga tgacccagag ccccagcacc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgca gagccagcca gagcatcagc agctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaag gccagcaccc tggagagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgag ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gacgacttcg ccacctacta ctgccagcag tacaacacct actggacctt cggccagggc 300
accaaggtgg agatcaagag aaccgtggcc gcccccagcg tgttcatctt cccccccagc 360
gacgagcagc tgaagagcgg caccgccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420
agagaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggag 480
agcgtgaccg agcaggacag caaggacagc acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg 540
agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600
agcagccccg tgaccaagag cttcaacaga ggcgagtgc 639
<210> 149
<211> 737
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
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<222> (706)..(737)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(737)
<223> /note="Variant nucleotides given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 149
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtgagcgcc atcacctgga acagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agcagagaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggtgagc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gaccgtgagc 360
agcgccagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcaccg ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ccgccccgag ctgctgggcg 720
gccccagcgt gttcctg 737
<210> 150
<211> 462
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 150
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 60
gaggacgtgg ccacctacta ctgccagaga tacaacagag ccccctacac cttcggccag 120
ggcaccaagg tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 180
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 240
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 300
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 360
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 420
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 462
<210> 151
<211> 735
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
<220>
<221> misc_feature
<222> (673)..(735)
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<220>
<221> Variation
<222> (682)..(684)
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<222> (685)..(735)
<223> /note="This region may be absent in its entirety"
<220>
<221> misc_feature
<222> (703)..(735)
<223> /note="This region may be absent in its entirety"
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(735)
<223> /note="Variant nucleotides given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 151
gaggtgaagc tggaggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag catgaagctg 60
agctgcgtgg ccagcggctt catcttcagc aaccactgga tgaactgggt gagacagagc 120
cccgagaagg gcctggagtg ggtggccgag atcagaagca agagcatcaa cagcgccacc 180
cactacgccg agagcgtgaa gggcagattc accatcagca gagacgacag caagagcgcc 240
gtgtacctgc agatgaccga cctgagaacc gaggacaccg gcgtgtacta ctgcagcaga 300
aactactacg gcagcaccta cgactactgg ggccagggca ccaccctgac cgtgagcagc 360
gccagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcaccgccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccccg cccccgagct gctgggcggc 720
cccagcgtgt tcctg 735
<210> 152
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 152
gacatcctgc tgacccagag ccccgccatc ctgagcgtga gccccggcga gagagtgagc 60
ttcagctgca gagccagcca gttcgtgggc agcagcatcc actggtacca gcagagaacc 120
aacggcagcc ccagactgct gatcaagtac gccagcgaga gcatgagcgg catccccagc 180
agattcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga gcatcaacac cgtggagagc 240
gaggacatcg ccgactacta ctgccagcag agccacagct ggcccttcac cttcggcagc 300
ggcaccaacc tggaggtgaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 153
<211> 711
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<220>
<221> misc_feature
<222> (652)..(711)
<223> /note="This region may be absent in its entirety"
<220>
<221> misc_feature
<222> (679)..(711)
<223> /note="This region may be absent in its entirety"
<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 153
gaggtgaagg tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag catgaagctg 60
agctgcgtgg tgagcggctt caccttcagc aactactggg tgaactgggt gaggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccag atcaggctga agagcgacaa ctacgccacc 180
cactacgagg agagcgtgaa gggcaggttc accatcagca gggacgacag caagagcagc 240
gtgtacctgc agatgaacaa cctgagggcc gaggacagcg gcatctacta ctgcaccaac 300
tgggaggact actggggcca gggcaccacc gtgaccgtga gcagcgccag caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc aggagcacca gcgagagcac cgccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcagc ctgggcacca agacctacac ctgcaacgtg 600
gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagagggtgg agagcaagta cggccccccc 660
tgccccccct gccccgcccc cgagttcctg ggcggcccca gcgtgttcct g 711
<210> 154
<211> 654
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 154
gacatcgtgc tgacccagag ccccgacagc ctggccgtga gcctgggcga gagggccacc 60
atcagctgca gggccagcca gagcgtgagc accagcaggt acagctacat ccactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc ccccaagctg ctgatcaagt acgccagcaa cctggagagc 180
ggcgtgccca gcaggttcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaacatccac 240
cccctggagc ccgaggactt cgccacctac tactgccacc acagctggga gatccccctg 300
accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aagaggaccg tggccgcccc cagcgtgttc 360
atcttccccc ccagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg 420
aacaacttct accccaggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 480
ggcaacagcc aggagagcgt gaccgagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctgagc 540
agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaggtg 600
acccaccagg gcctgagcag ccccgtgacc aagagcttca acaggggcga gtgc 654
<210> 155
<211> 738
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 155
caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agcttcggca tgcactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccgtg atcagcttcg acggcagcat caagtacagc 180
gtggacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acagcaagaa caccctgttc 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacaga 300
ctgaactact acgacagcag cggctactac cactacaagt actacggcat ggccgtgtgg 360
ggccagggca ccaccgtgac cgtgagcagc gccagcacca agggccccag cgtgttcccc 420
ctggccccct gcagcagaag caccagcgag agcaccgccg ccctgggctg cctggtgaag 480
gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc tggaacagcg gcgccctgac cagcggcgtg 540
cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc 600
gtgcccagca gcaacttcgg cacccagacc tacacctgca acgtggacca caagcccagc 660
aacaccaagg tggacaagac cgtggagaga aagtgctgcg tggagtgccc cccctgcccc 720
gccccccccg tggccggc 738
<210> 156
<211> 648
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 156
cagagcgtgc tgacccagcc ccccagcgtg agcgccgccc ccggccagaa ggtgaccatc 60
agctgcagcg gcagcagcag caacatcggc aacaactacg tgagctggta ccagcagctg 120
cccggcaccg cccccaagct gctgatctac gacaacaaca agagacccag cggcatcccc 180
gacagattca gcggcagcaa gagcggcacc agcaccaccc tgggcatcac cggcctgcag 240
accggcgacg aggccgacta ctactgcggc acctgggaca gcagactgag cgccgtggtg 300
ttcggcggcg gcaccaagct gaccgtgctg ggccagccca aggccaaccc caccgtgacc 360
ctgttccccc ccagcagcga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
agcgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgacggcag ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccaa gcccagcaag cagagcaaca acaagtacgc cgccagcagc 540
tacctgagcc tgacccccga gcagtggaag agccacagaa gctacagctg ccaggtgacc 600
cacgagggca gcaccgtgga gaagaccgtg gcccccaccg agtgcagc 648
<210> 157
<211> 731
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<220>
<221> misc_feature
<222> (685)..(731)
<223> /note="This region may be absent in its entirety"
<220>
<221> Variation
<222> (694)..(696)
<223> /replace="ctg"
<220>
<221> misc_feature
<222> (697)..(731)
<223> /note="This region may be absent in its entirety"
<220>
<221> misc_feature
<222> (715)..(731)
<223> /note="This region may be absent in its entirety"
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(731)
<223> /note="Variant nucleotides given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<220>
<221> source
<223> /note="See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments"
<400> 157
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgaggctg 60
agctgcagcg ccagcggctt caccttcagc agcttcggca tgcactgggt gaggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggcctac atcagcagcg gcagcagcac catctactac 180
ggcgacaccg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgttc 240
ctgcagatga gcagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagggc 300
ggctactact acggcaggag ctactacacc atggactact ggggccaggg caccaccgtg 360
accgtgagca gcgccagcac caagggcccc agcgtgttcc ccctggcccc cagcagcaag 420
agcaccagcg gcggcaccgc cgccctgggc tgcctggtga aggactactt ccccgagccc 480
gtgaccgtga gctggaacag cggcgccctg accagcggcg tgcacacctt ccccgccgtg 540
ctgcagagca gcggcctgta cagcctgagc agcgtggtga ccgtgcccag cagcagcctg 600
ggcacccaga cctacatctg caacgtgaac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
aaggtggagc ccaagagctg cgacaagacc cacacctgcc ccccctgccc cgccccgagc 720
tgctgggcgg c 731
<210> 158
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 158
gacgtggtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga cccccggcgc ccccgccagc 60
atcagctgca ggagcagcca gagcatcgtg cacagcaacg gcaacaccta cctggagtgg 120
tacctgcaga agcccggcca gagccccaag ctgctgatct acaaggtgag caacaggttc 180
agcggcgtgc ccgacaggtt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaggatc 240
agcagggtgg aggccgagga cgtgggcatc tactactgct tccagggcag ccacgtgccc 300
cccaccttcg gccccggcac caagctggag atcaagagga ccgtggccgc ccccagcgtg 360
ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420
ctgaacaact tctaccccag ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggacagcac ctacagcctg 540
agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600
gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaacagggg cgagtgc 657
<210> 159
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 159
gaggtgaagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgaggctg 60
agctgcgcca ccagcggctt caccttcagc gacttctaca tggagtgggt gaggcaggcc 120
cccggcaaga ggctggagtg gatcgccgcc agcaggaaca aggccaacga ctacaccacc 180
gagtacgccg acagcgtgaa gggcaggttc atcgtgagca gggacaccag ccagagcatc 240
ctgtacctgc agatgaacgc cctgagggcc gaggacaccg ccatctacta ctgcgccagg 300
gactactacg gcagcagcta ctggtacttc gacgtgtggg gcgccggcac caccgtgacc 360
gtgagcagc 369
<210> 160
<211> 339
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 160
gacatcgtga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgtga gcgccggcaa gaaggtgacc 60
atcagctgca ccgccagcga gagcctgtac agcagcaagc acaaggtgca ctacctggcc 120
tggtaccaga agaagcccga gcagagcccc aagctgctga tctacggcgc cagcaacagg 180
tacatcggcg tgcccgacag gttcaccggc agcggcagcg gcaccgactt caccctgacc 240
atcagcagcg tgcaggtgga ggacctgacc cactactact gcgcccagtt ctacagctac 300
cccctgacct tcggcgccgg caccaagctg gagatcaag 339
<210> 161
<211> 20
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
signal sequence"
<400> 161
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Leu Leu Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser
20
<210> 162
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 162
Leu Gly Glu Thr Thr Arg Pro
1 5
<210> 163
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 163
Leu Ala Leu Gly Glu Thr Thr Arg Pro
1 5
<210> 164
<211> 26
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
VEGF-A signal peptide"
<400> 164
Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala
20 25
<210> 165
<211> 29
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Fibulin-1 signal peptide"
<400> 165
Met Glu Arg Ala Ala Pro Ser Arg Arg Val Pro Leu Pro Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly Leu Ala Leu Leu Ala Ala Gly Val Asp Ala
20 25
<210> 166
<211> 19
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Vitronectin signal peptide"
<400> 166
Met Ala Pro Leu Arg Pro Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Trp Val
1 5 10 15
Ala Leu Ala
<210> 167
<211> 18
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Complement Factor H signal peptide"
<400> 167
Met Arg Leu Leu Ala Lys Ile Ile Cys Leu Met Leu Trp Ala Ile Cys
1 5 10 15
Val Ala
<210> 168
<211> 19
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Opticin signal peptide"
<400> 168
Met Arg Leu Leu Ala Phe Leu Ser Leu Leu Ala Leu Val Leu Gln Glu
1 5 10 15
Thr Gly Thr
<210> 169
<211> 18
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Albumin signal peptide"
<400> 169
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser
<210> 170
<211> 18
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Chymotrypsinogen signal peptide"
<400> 170
Met Ala Phe Leu Trp Leu Leu Ser Cys Trp Ala Leu Leu Gly Thr Thr
1 5 10 15
Phe Gly
<210> 171
<211> 20
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Interleukin-2 signal peptide"
<400> 171
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ile Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser
20
<210> 172
<211> 15
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Trypsinogen-2 signal peptide"
<400> 172
Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala
1 5 10 15
<210> 173
<211> 17
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 173
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 174
<211> 22
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 174
Met Phe Ser Phe Val Asp Leu Arg Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ala Leu Leu Thr His Gly
20
<210> 175
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 175
Met Lys Leu Val Phe Leu Val Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu Gly Leu
1 5 10 15
Cys Leu Ala
<210> 176
<211> 22
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 176
Met Gly Pro Thr Ser Gly Pro Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr His
1 5 10 15
Leu Pro Leu Ala Leu Gly
20
<210> 177
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 177
Met Ser Leu Ser Ala Phe Thr Leu Phe Leu Ala Leu Ile Gly Gly Thr
1 5 10 15
Ser Gly
<210> 178
<211> 27
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 178
Met Ala Pro His Arg Pro Ala Pro Ala Leu Leu Cys Ala Leu Ser Leu
1 5 10 15
Ala Leu Cys Ala Leu Ser Leu Pro Val Arg Ala
20 25
<210> 179
<211> 22
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 179
Met Trp Ala Thr Leu Pro Leu Leu Cys Ala Gly Ala Trp Leu Leu Gly
1 5 10 15
Val Pro Val Cys Gly Ala
20
<210> 180
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 180
Met Gln Ala Leu Val Leu Leu Leu Cys Ile Gly Ala Leu Leu Gly His
1 5 10 15
Ser Ser Cys
<210> 181
<211> 23
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 181
Met Gln Met Ser Pro Ala Leu Thr Cys Leu Val Leu Gly Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Phe Gly Glu Gly Ser Ala
20
<210> 182
<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 182
Met Gln Pro Ser Ser Leu Leu Pro Leu Ala Leu Cys Leu Leu Ala Ala
1 5 10 15
Pro Ala Ser Ala
20
<210> 183
<211> 23
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 183
Met Ala Pro Phe Glu Pro Leu Ala Ser Gly Ile Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Ile Ala Pro Ser Arg Ala
20
<210> 184
<211> 31
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 184
Met Leu Arg Gly Pro Gly Pro Gly Leu Leu Leu Leu Ala Val Gln Cys
1 5 10 15
Leu Gly Thr Ala Val Pro Ser Thr Gly Ala Ser Lys Ser Lys Arg
20 25 30
<210> 185
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 185
Met Trp Cys Ile Val Leu Phe Ser Leu Leu Ala Trp Val Tyr Ala
1 5 10 15
<210> 186
<211> 17
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 186
Met Asn Pro Thr Leu Ile Leu Ala Ala Phe Cys Leu Gly Ile Ala Ser
1 5 10 15
Ala
<210> 187
<211> 17
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 187
Met Trp Gln Leu Trp Ala Ser Leu Cys Cys Leu Leu Val Leu Ala Asn
1 5 10 15
Ala
<210> 188
<211> 16
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 188
Met Leu Leu Ile Leu Leu Ser Val Ala Leu Leu Ala Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
<210> 189
<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 189
Met Trp Lys Arg Trp Leu Ala Leu Ala Leu Ala Leu Val Ala Val Ala
1 5 10 15
Trp Val Arg Ala
20
<210> 190
<211> 24
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 190
Met Pro Ser Ser Val Ser Trp Gly Ile Leu Leu Leu Ala Gly Leu Cys
1 5 10 15
Cys Leu Val Pro Val Ser Leu Ala
20
<210> 191
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 191
Met Lys Ala Ala Val Leu Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Thr Gly Ser
1 5 10 15
Gln Ala
<210> 192
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 192
Met Lys Leu Leu Ala Ala Thr Val Leu Leu Leu Thr Ile Cys Ser Leu
1 5 10 15
Glu Gly
<210> 193
<211> 27
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 193
Met Asp Pro Pro Arg Pro Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Leu Pro Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Gly Ala Arg Ala
20 25
<210> 194
<211> 28
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 194
Met Gln Arg Val Asn Met Ile Met Ala Glu Ser Pro Gly Leu Ile Thr
1 5 10 15
Ile Cys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Ala Glu Cys
20 25
<210> 195
<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 195
Met Gly Pro Leu Met Val Leu Phe Cys Leu Leu Phe Leu Tyr Pro Gly
1 5 10 15
Leu Ala Asp Ser
20
<210> 196
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 196
Met Trp Leu Leu Val Ser Val Ile Leu Ile Ser Arg Ile Ser Ser Val
1 5 10 15
Gly Gly
<210> 197
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 197
Met Leu Leu Leu Phe Ser Val Ile Leu Ile Ser Trp Val Ser Thr Val
1 5 10 15
Gly Gly
<210> 198
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 198
Met Phe Ser Met Arg Ile Val Cys Leu Val Leu Ser Val Val Gly Thr
1 5 10 15
Ala Trp Thr
<210> 199
<211> 30
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 199
Met Lys Arg Met Val Ser Trp Ser Phe His Lys Leu Lys Thr Met Lys
1 5 10 15
His Leu Leu Leu Leu Leu Leu Cys Val Phe Leu Val Lys Ser
20 25 30
<210> 200
<211> 26
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 200
Met Ser Trp Ser Leu His Pro Arg Asn Leu Ile Leu Tyr Phe Tyr Ala
1 5 10 15
Leu Leu Phe Leu Ser Ser Thr Cys Val Ala
20 25
<210> 201
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 201
Met Lys Ser Leu Val Leu Leu Leu Cys Leu Ala Gln Leu Trp Gly Cys
1 5 10 15
His Ser
<210> 202
<211> 23
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 202
Met Ala Arg Val Leu Gly Ala Pro Val Ala Leu Gly Leu Trp Ser Leu
1 5 10 15
Cys Trp Ser Leu Ala Ile Ala
20
<210> 203
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 203
Met Lys Leu Ile Thr Ile Leu Phe Leu Cys Ser Arg Leu Leu Leu Ser
1 5 10 15
Leu Thr
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<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 204
Met Ser Leu Phe Pro Ser Leu Pro Leu Leu Leu Leu Ser Met Val Ala
1 5 10 15
Ala Ser Tyr Ser
20
<210> 205
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 205
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1 5 10 15
Gly Gln Gly
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<213> Homo sapiens
<400> 206
Met Ala His Val Arg Gly Leu Gln Leu Pro Gly Cys Leu Ala Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Ser Leu Val His Ser
20
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<213> Homo sapiens
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Met Ile Ser Arg Met Glu Lys Met Thr Met Met Met Lys Ile Leu Ile
1 5 10 15
Met Phe Ala Leu Gly Met Asn Tyr Trp Ser Cys Ser Gly
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 208
Met Tyr Ser Asn Val Ile Gly Thr Val Thr Ser Gly Lys Arg Lys Val
1 5 10 15
Tyr Leu Leu Ser Leu Leu Leu Ile Gly Phe Trp Asp Cys Val Thr Cys
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<211> 19
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<213> Homo sapiens
<400> 209
Met Arg Leu Ala Val Gly Ala Leu Leu Val Cys Ala Val Leu Gly Leu
1 5 10 15
Cys Leu Ala
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Pro Gly Pro
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
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Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
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Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
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Arg Arg Arg Arg
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Arg Arg Lys Arg
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Arg Lys Lys Arg
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Cys Pro Pro Cys Pro
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Cys Pro Pro Cys Ala
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Lys Thr His Leu
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Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
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Lys Thr His Leu Cys Pro Pro Cys Pro Ala
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Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
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Pro Ser Val Phe Leu
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1 5 10 15
Pro Ser Val Phe Leu
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Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
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Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu
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Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly
1 5 10
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
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Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
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50 55 60
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35 40 45
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Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
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Lys Thr His Leu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala
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Pro Ser Val Phe Leu
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Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Pro Ser
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Arg Lys Arg Arg Ala Pro Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu
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Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
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repeating units"
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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signal sequence"
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1 5 10 15
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
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Gly
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
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Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
1 5
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Asn Trp Glu Asp Tyr Trp
1 5
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Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
1 5 10
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<211> 17
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<213> Artificial Sequence
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Asp Lys Thr His Leu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly
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peptide"
<400> 255
Glu Asp Val Gly Ile Tyr
1 5
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<211> 7
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<213> Artificial Sequence
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<400> 256
Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
1 5
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<211> 7
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<400> 257
Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr
1 5
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<211> 10
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Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Tyr Ile His Tyr
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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peptide"
<400> 259
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
1 5
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<211> 6
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<213> Artificial Sequence
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Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
1 5
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Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr
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Ala
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
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His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile
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Gly Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr
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Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
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Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
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Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Ala Ser Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Met
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Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val Val Leu
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Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Gly Glu Ile Asp Pro Ser Glu Ser Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
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Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Trp Asp Tyr Ala Ile Asp Tyr Trp Gly
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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
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Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Tyr Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
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Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
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Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
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115 120 125
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
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Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
145 150 155
Claims (26)
- (a) AAV9 캡시드(서열번호 78) 또는 AAVrh10(서열번호 80)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV 역위 말단 반복부(inverted terminal repeat)(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 CNS 세포에서 전이유전자(transgene)의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-아밀로이드 베타, 항-Tau, 또는 항-CGRPR mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 갖는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 CNS에 대한 척추강내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 편두통, 군발성 두통, 또는 만성 외상성 뇌병증, 진행성 핵상 마비, 및 이마관자엽 치매를 포함한 타우병증(tauopathy)을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
항-아밀로이드 β mAb가 아두카누맙, 크레네주맙, BAN2401, 또는 간테네루맙이고 항-Tau mAb가 aTAU이며 항-CGRPR이 에레누맙, 엡티네주맙, 프레마네주맙, 또는 갈카네주맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL17A 또는 항-IL12/IL23 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 또는 크론병(Crohn's disease)을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제3항에 있어서,
항-IL17A 또는 항 IL12/IL23 mAb가 익세키주맙, 세쿠키누맙, 또는 우스테키누맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78), AAV9 캡시드(서열번호 79), 또는 AAVrh10(서열번호 80)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포, 인간 근육 세포 또는 인간 CNS 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-인테그린 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여 또는 상기 대상체의 CNS에 대한 척추강내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 다발성 경화증, 궤양성 대장염 또는 크론병을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제5항에 있어서,
항-인테그린 mAb가 베돌리주맙 또는 나탈리주맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL4R mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 아토피 피부염을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제7항에 있어서,
항-IL-4R mAb가 두필루맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-IL-5 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 천식을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제9항에 있어서,
항-IL-5 mAb가 메폴리주맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV 역위 말단 반복부(ITR)에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-PCSK9, 항-ANGPTL3, 항-OxPL mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 죽상경화성 심혈관계 질환(ACD), 죽상경화성 플라크 형성, 비정상적으로 높은 수준의 비-HDL 콜레스테롤 및 LDL, 대동맥판막 협착증, 간 협착증, 또는 고콜레스테롤혈증을 포함하는 HeFH, HoFH, 이상지질혈증, 심혈관계 질환을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제11항에 있어서,
항-PCSK9 또는 항-ANGPTL3 mAb가 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙 또는 에비나쿠맙이거나 항-OxPL이 E06인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-RANKL mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 골다공증을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제13항에 있어서,
항-RANLK mAb가 덴소맙(densomab)인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, PD-1 차단제 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 전이성 흑색종, 림프종 또는 비소세포 폐 암종을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제15항에 있어서,
PD-1 차단제 mAb가 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-BLyS mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythromatosis)(SLE)를 치료하기 위한 약학 조성물. - 제17항에 있어서,
항-BLyS mAb가 벨리무맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 망막 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-VEGF, 항-MMP9, 또는 항-fD mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 눈에 대한 망막하, 유리체내 또는 맥락막상 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 연령-관련 황반 변성을 포함한 안구 장애를 치료하기 위한 약학 조성물. - 제19항에 있어서,
항-MMP9가 안데칼릭시맙이고, 항-VEGF가 라니비주맙, 베바시주맙, 브롤루시주맙이며, 항-fD mAb가 람팔리주맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 간 세포 또는 인간 근육 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-MMP9 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 낭포성 섬유증(cystic fibrosis)(CF), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)(RA), UC ,CD, 고형 종양, 췌장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평상피 세포 암종, 식도위 선암종, 위암, 대장암, 또는 유방암을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제21항에 있어서,
항-MMP9 mAb가 안데칼릭시맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 근육 세포 또는 인간 간 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-칼리크레인 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 유전성 혈관부종을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제23항에 있어서,
항-칼리크레인 mAb가 라나델루맙인 약학 조성물. - (a) AAV8 캡시드(서열번호 78) 또는 AAV9 캡시드(서열번호 79)의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 바이러스 캡시드; 및
(b) AAV ITR에 인접한 발현 카세트를 포함하되, 발현 카세트가 인간 근육 또는 간 세포에서 전이유전자의 발현을 제어하는 1 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된, 항-TNF-알파 mAb, 또는 이의 항원-결합 단편을 코딩하는 전이유전자를 포함하는 것인, 인공 게놈
을 포함하는 AAV 벡터를 포함하고,
상기 AAV 벡터가 상기 대상체의 간 또는 근육에 대한 정맥내 투여를 위해 제형화되는 것인
치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 판상형 건선, 또는 궤양성 대장염을 치료하기 위한 약학 조성물. - 제25항에 있어서,
항-TNF-알파 mAb가 아달리무맙 또는 인플릭시맙인 약학 조성물.
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20220110442A (ko) | 2021-01-29 | 2022-08-08 | 한국과학기술원 | 비염증성 식세포작용 유도 활성을 갖는 융합분자 |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016010927A1 (en) * | 2014-07-14 | 2016-01-21 | Amgen Inc. | Crystalline antibody formulations |
WO2019126329A1 (en) | 2017-12-19 | 2019-06-27 | Akouos Llc | Aav-mediated delivery of therapeutic antibodies to the inner ear |
BR112020016288A2 (pt) * | 2018-02-14 | 2020-12-15 | Generation Bio Co. | Vetores de dna não virais e usos dos mesmos para produção de anticorpos e proteínas de fusão |
WO2019213668A1 (en) * | 2018-05-04 | 2019-11-07 | Oregon Health & Science University | Human anti-aav2 capsid polyclonal antibody epitopes |
CN113924115A (zh) | 2019-01-31 | 2022-01-11 | 俄勒冈健康与科学大学 | 用于aav衣壳的使用转录依赖性定向进化的方法 |
US20220339270A1 (en) * | 2019-04-29 | 2022-10-27 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of tauopathy |
AR119271A1 (es) * | 2019-06-11 | 2021-12-09 | Shire Human Genetic Therapies | Administración del vector viral adenoasociado para el tratamiento de enfermedades mediadas por la calicreína plasmática desregulada |
US20220298514A1 (en) * | 2019-09-11 | 2022-09-22 | Aav Gene Therapeutics, Inc. | Aav-zyme and use for infusion replacement therapy |
WO2021169167A1 (en) * | 2020-02-29 | 2021-09-02 | Nanjing GenScript Biotech Co., Ltd. | Method for treating coronavirus infections |
SE544001C2 (en) * | 2020-03-17 | 2021-10-26 | Xbrane Biopharma Ab | Novel combination of tis sequences, signal peptide sequences and nucleic acid sequences encoding heavy and light chains of an antibody |
SE544000C2 (en) * | 2020-03-17 | 2021-10-26 | Xbrane Biopharma Ab | Novel combination of tis sequence, signal peptide sequence and nucleic acid sequence encoding a recombinant protein |
WO2022015960A2 (en) * | 2020-07-17 | 2022-01-20 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Biomarkers and classifier of psoriasis and methods of treatment |
EP4213890A1 (en) * | 2020-09-15 | 2023-07-26 | RegenxBio Inc. | Vectorized lanadelumab and administration thereof |
WO2022094157A1 (en) * | 2020-10-28 | 2022-05-05 | Regenxbio Inc. | Vectorized anti-cgrp and anti-cgrpr antibodies and administration thereof |
EP4236974A2 (en) * | 2020-10-29 | 2023-09-06 | RegenxBio Inc. | Vectorized factor xii antibodies and administration thereof |
TW202241943A (zh) * | 2020-12-29 | 2022-11-01 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | Tau特異性抗體基因療法組合物、方法及其用途 |
BR112023015303A2 (pt) | 2021-02-01 | 2023-11-14 | Regenxbio Inc | Método para tratar doença cln2 devido a deficiência de tpp1 em um sujeito |
CN113651882B (zh) * | 2021-08-04 | 2022-06-10 | 广州呼研所医药科技有限公司 | 人源化抗HAdV-B3单克隆中和抗体、制备方法及其应用 |
CN115772544B (zh) * | 2021-09-06 | 2024-04-26 | 合肥星眸生物科技有限公司 | 抗vegf-a和ang-2的aav载体 |
CN116925234B (zh) * | 2022-04-02 | 2024-05-31 | 合肥星眸生物科技有限公司 | 一种编码抗vegf-a和ang-2双特异性抗体的aav载体 |
TWI833641B (zh) | 2022-05-02 | 2024-02-21 | 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 | 適於高濃度組成物及皮下投藥之新穎抗angptl3抗體 |
WO2023215807A1 (en) * | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Regenxbio Inc. | VECTORIZED ANTI-TNF-α INHIBITORS FOR OCULAR INDICATIONS |
Family Cites Families (43)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL310327A1 (en) | 1993-02-12 | 1995-12-11 | Univ Leland Stanford Junior | Adjustable transcription of target genes and other biological processes |
WO1996020951A1 (en) | 1994-12-29 | 1996-07-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Chimeric dna-binding proteins |
WO1996041865A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-12-27 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | Rapamcycin-based regulation of biological events |
AU9036198A (en) | 1997-08-26 | 1999-03-16 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | Fusion proteins comprising a dimerization, trimerization or tetramerization domain and an additional heterologous transcription activation, transcription repression, dna binding or ligand binding domain |
JP2001514007A (ja) | 1997-08-27 | 2001-09-11 | アリアド ジーン セラピューティクス インコーポレイテッド | キメラ転写アクチベーター、ならびにそれに関連する組成物および使用 |
CA2318402A1 (en) | 1998-01-15 | 1999-07-22 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | Regulation of biological events using multimeric chimeric proteins |
EP1053241A1 (en) | 1998-02-13 | 2000-11-22 | President And Fellows Of Harvard College | Novel dimerizing agents, their production and use |
ES2308989T3 (es) | 1999-08-09 | 2008-12-16 | Targeted Genetics Corporation | Aumento de la expresion de una secuencia nucleotidica heterologa a partir de vectores viricos recombinantes que contienen una secuencia que forman pares de bases intracatenarios. |
US7067526B1 (en) | 1999-08-24 | 2006-06-27 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | 28-epirapalogs |
ATE520707T1 (de) | 2001-11-13 | 2011-09-15 | Univ Pennsylvania | Verfahren für den nachweis und/oder die identifikation von sequenzen des adeno- assoziierten virus (aav) sowie isolation von dadurch identifizierten, neuen sequenzen |
ES2526341T3 (es) * | 2001-12-17 | 2015-01-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Secuencias de serotipo 9 de virus adeno-asociado (AAV), vectores que las contienen, y usos de las mismas |
EP2359869B1 (en) | 2001-12-17 | 2018-12-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus (AAV) serotype 8 sequences, vectors containing same and uses therefor |
PL378812A1 (pl) * | 2003-02-13 | 2006-05-29 | Pfizer Products Inc. | Zastosowania przeciwciał przeciw receptorowi insulinopodobnego czynnika wzrostowego I |
EP2298926A1 (en) | 2003-09-30 | 2011-03-23 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Adeno-associated virus (AAV) clades, sequences, vectors containing same, and uses thereof |
EP3409296A1 (en) | 2005-04-07 | 2018-12-05 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Method of increasing the function of an aav vector |
US7456683B2 (en) | 2005-06-09 | 2008-11-25 | Panasonic Corporation | Amplitude error compensating device and quadrature skew error compensating device |
FI20075278A0 (fi) * | 2007-04-20 | 2007-04-20 | Biotie Therapies Corp | Uudet täysin ihmisperäiset anti-VAP-1 monoklonaaliset vasta-aineet |
US8734809B2 (en) | 2009-05-28 | 2014-05-27 | University Of Massachusetts | AAV's and uses thereof |
SG10201908848RA (en) * | 2010-03-29 | 2019-10-30 | Univ Pennsylvania | Pharmacologically induced transgene ablation system |
US8628966B2 (en) | 2010-04-30 | 2014-01-14 | City Of Hope | CD34-derived recombinant adeno-associated vectors for stem cell transduction and systemic therapeutic gene transfer |
US8927514B2 (en) | 2010-04-30 | 2015-01-06 | City Of Hope | Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment |
CN107828820B (zh) | 2010-10-27 | 2022-06-07 | 学校法人自治医科大学 | 用于向神经系统细胞导入基因的腺相关病毒粒子 |
WO2012109570A1 (en) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Viral vectors with modified transduction profiles and methods of making and using the same |
KR20220056884A (ko) | 2011-04-22 | 2022-05-06 | 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 변이체 캡시드를 지니는 아데노-관련 바이러스 및 이의 사용 방법 |
CN107519486B (zh) * | 2011-06-24 | 2021-06-11 | 台北荣民总医院 | 于感染性与恶性疾病的治疗中提升免疫反应的方法 |
US9169299B2 (en) | 2011-08-24 | 2015-10-27 | The Board Of Trustees Of The Leleand Stanford Junior University | AAV capsid proteins for nucleic acid transfer |
WO2013170078A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-14 | Oregon Health & Science University | Adeno associated virus plasmids and vectors |
WO2014160092A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Adeno-associated virus vectors and methods of use thereof |
EP3594244A1 (en) * | 2013-03-15 | 2020-01-15 | Dyax Corp. | Anti-plasma kallikrein antibodies |
US20160355573A1 (en) * | 2013-09-05 | 2016-12-08 | Cornell University | Gene therapy for alzheimer's and other neurodegenerative diseases and conditions |
ES2739288T3 (es) | 2013-09-13 | 2020-01-30 | California Inst Of Techn | Recuperación selectiva |
ES2857751T3 (es) | 2013-10-11 | 2021-09-29 | Massachusetts Eye & Ear Infirmary | Métodos para predecir secuencias de virus ancestrales y usos de los mismos |
CA2937329C (en) * | 2014-01-21 | 2022-05-31 | Dyax Corp. | Plasma kallikrein binding proteins and uses thereof in treating hereditary angioedema |
GB201403684D0 (en) * | 2014-03-03 | 2014-04-16 | King S College London | Vector |
US10780182B2 (en) * | 2014-04-25 | 2020-09-22 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and compositions for treating metastatic breast cancer and other cancers in the brain |
US10746742B2 (en) | 2014-04-25 | 2020-08-18 | Oregon Health & Science University | Methods of viral neutralizing antibody epitope mapping |
CN114316061A (zh) * | 2015-01-02 | 2022-04-12 | 武田药品工业株式会社 | 针对血浆激肽释放酶和因子xii的双特异性抗体 |
MA48852A (fr) * | 2015-05-13 | 2020-04-01 | Univ Pennsylvania | Expression médiée par aav d'anticorps anti-grippaux et leurs procédés d'utilisation |
WO2017011773A2 (en) * | 2015-07-15 | 2017-01-19 | Modernatx, Inc. | Codon-optimized nucleic acids encoding antibodies |
CA2996420A1 (en) * | 2015-09-28 | 2017-04-06 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions for antibody-evading virus vectors |
WO2017075119A1 (en) * | 2015-10-28 | 2017-05-04 | The Trustees Of The Univeresity Of Pennsylvania | Intrathecal administration of adeno-associated-viral vectors for gene therapy |
BR112018011193A2 (pt) * | 2015-12-01 | 2018-11-21 | Spark Therapeutics Inc | métodos escalonáveis para produzir vetor viral adeno-associado (aav) recombinante em sistema de cultura celular em suspensão isento de soro adequado para uso clínico |
WO2018075798A1 (en) | 2016-10-19 | 2018-04-26 | Adverum Biotechnologies, Inc. | Modified aav capsids and uses thereof |
-
2018
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-
2019
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-
2020
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-
2023
- 2023-09-29 JP JP2023170015A patent/JP2024009845A/ja active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20220110442A (ko) | 2021-01-29 | 2022-08-08 | 한국과학기술원 | 비염증성 식세포작용 유도 활성을 갖는 융합분자 |
KR20230104826A (ko) | 2021-01-29 | 2023-07-11 | 일리미스테라퓨틱스 주식회사 | 비염증성 식세포작용 유도 활성을 갖는 융합분자 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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