KR20200061773A - Method for culturing lactobacillus for improving cognitive ability and lactobacillus cultured by the same - Google Patents

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KR20200061773A KR1020180147461A KR20180147461A KR20200061773A KR 20200061773 A KR20200061773 A KR 20200061773A KR 1020180147461 A KR1020180147461 A KR 1020180147461A KR 20180147461 A KR20180147461 A KR 20180147461A KR 20200061773 A KR20200061773 A KR 20200061773A
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허수진
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서원대학교산학협력단
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Abstract

Disclosed is a method for culturing lactobacillus for improving memory using spirulina, lactobacillus for improving memory cultivated by the cultivation method, and health functional food containing the lactobacillus. When culturing lactobacillus to the culture medium containing a spirulina powder or a spirulina extract, the amount of lactobacillus to be cultured increases, and functional activity including memory of the cultured lactobacillus is excellent.

Description

기억력 개선용 유산균의 배양방법 및 상기 배양방법으로 배양된 유산균 {METHOD FOR CULTURING LACTOBACILLUS FOR IMPROVING COGNITIVE ABILITY AND LACTOBACILLUS CULTURED BY THE SAME}Method for culturing lactic acid bacteria for improving memory and lactic acid bacteria cultured by the above culture method {METHOD FOR CULTURING LACTOBACILLUS FOR IMPROVING COGNITIVE ABILITY AND LACTOBACILLUS CULTURED BY THE SAME}

본 발명은 스피루리나를 이용한 기억력 개선용 유산균의 배양방법, 상기 배양방법으로 배양된 기억력 개선용 유산균 및 상기 유산균을 포함하는 건강기능식품에 관한 것이다.The present invention relates to a method for culturing lactic acid bacteria for improving memory using spirulina, a lactic acid bacteria for improving memory cultivated by the culture method, and a health functional food comprising the lactic acid bacteria.

프리바이오틱스(prebiotics)는 장 내 미생물을 제한하거나 유익 미생물의 생육을 선택적으로 촉진시켜 숙주에 유익한 효과를 주는 난소화성 식품첨가물로 정의되며, 그 효과는 장 내의 유익균을 증식시켜 장내 환경 개선과 숙주의 건강개선에 기여하는 것이다. Prebiotics (prebiotics) is defined as an indigestible food additive that has a beneficial effect on the host by limiting microorganisms in the intestine or selectively promoting the growth of beneficial microorganisms. It contributes to the improvement of health.

프리바이오틱스로 대표되는 성분의 공통점은 위나 소장에서는 소화 분해 흡수되지 않지만 대장에서 유익한 균주들의 좋은 먹이가 되며, 그 종류로 대표적인 것은 올리고당과 식이섬유이다. 올리고당은 다양한 형태의 올리고당을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 프럭토올리고당, 갈락토올리고당, 이소말토올리고당, 자일로올리고당, 키틴올리고당 등이 있다. 또한, 식이섬유는 덱스트린, 이눌린, 천연고무 등이 있다.Common ingredients of prebiotics are not digested and digested in the stomach or small intestine, but are good foods for beneficial strains in the large intestine, and oligosaccharides and dietary fiber are typical examples. Oligosaccharides may include various types of oligosaccharides, such as fructooligosaccharide, galactooligosaccharide, isomaltoligosaccharide, xyloligosaccharide, and chitin oligosaccharide. In addition, dietary fibers include dextrin, inulin, and natural rubber.

한편, 스피루리나의 프리바이오틱스 효과는 올리고당류가 아닌 스피루리나에 존재하는 풍부한 양의 식이섬유를 이용한 것으로서 장 내에서 올리고당에 비해 속도는 느리지만 유산균 (김치유래 유산균)에 의해 분해되고 먹이가 된다. 특히, 이와 같은 프리바이오틱스 효과로 인하여 장 내 유산균이 증식될 수 있으며, 최근에는 장 내 미생물들과 두뇌 사이의 의사소통을 조절하여 정신질환을 치료하고 기억력과 인지능력을 향상시키는 것에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. On the other hand, spirulina's prebiotic effect is that it uses abundant dietary fiber present in spirulina, not oligosaccharides, but it is slower than oligosaccharides in the intestine, but is degraded and fed by lactic acid bacteria (derived from kimchi). In particular, due to this prebiotic effect, lactic acid bacteria in the intestine may proliferate, and recently, research on treating mental diseases and improving memory and cognitive ability by controlling communication between the intestinal microbes and the brain. It is actively progressing.

구체적으로, 장 내 미생물의 증식과 기억력 또는 인지능력의 향상은 박테리아-장-두뇌의 연결이 장 신경 계통, 면역 계통, 미주 신경계를 비롯하여 장 내 호르몬과 신경전달물질에도 관련이 있다는 것이 일반적인 정설로 알려져 있으며, 신경질환, 정신질환에 영향을 주는 것을 넘어 인지기능을 향상시킬 수 있다고 알려져 있다.Specifically, it is a general premise that the growth of microbes in the intestine and the improvement of memory or cognitive ability are related to the intestinal nervous system, immune system, vagus nervous system, and hormones and neurotransmitters in the intestine, as well as the bacterial-intestinal-brain connection. It is known that it can improve cognitive function beyond affecting neurological and mental disorders.

이에 본 발명자들은 상기와 같은 연구를 진행하던 중 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물을 포함하는 배양배지에 유산균을 배양시킬 경우 배양되는 유산균의 양이 증가하고, 배양된 유산균이 기억력을 포함한 기능성 활성이 우수함을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors during the research as described above, when culturing lactic acid bacteria in a culture medium containing spirulina powder or spirulina extract, the amount of lactic acid bacteria cultured increases, and the cultured lactic acid bacteria are found to have excellent functional activity including memory. Thus, the present invention has been completed.

이와 관련하여, 대한민국 등록특허 제10-1087972호는 치매, 치매관련 질환의 예방/치료 및 인지기능장애 개선에 효과가 있는 유산균 발효 산물, 이의 제조방법 및 용도에 대하여 개시하고 있다.In this regard, Korean Patent Registration No. 10-1087972 discloses a fermentation product of lactic acid bacteria that is effective in preventing/treatment of dementia and dementia-related diseases and improving cognitive dysfunction, and a method and method of manufacturing the same.

본 발명은 전술한 문제를 해결하고자 안출된 것으로서, 본 발명의 일 실시예는 스피루리나를 이용한 기억력 개선용 유산균의 배양방법을 제공한다.The present invention has been devised to solve the aforementioned problems, and an embodiment of the present invention provides a method for culturing lactic acid bacteria for improving memory using spirulina.

또한, 본 발명의 다른 일 실시예는 상기 배양방법으로 배양된 기억력 개선용 유산균을 제공한다.In addition, another embodiment of the present invention provides a lactic acid bacteria for improving memory, cultured by the culture method.

또한, 본 발명의 또 다른 일 실시예는 상기 유산균을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. In addition, another embodiment of the present invention provides a health functional food containing the lactic acid bacteria.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 기술적 과제로 한정되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.The technical problems to be achieved by the present invention are not limited to the technical problems mentioned above, and other technical problems not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description. There will be.

전술한 기술적 과제를 달성하기 위한 기술적 수단으로서, 본 발명의 일 측면은, As a technical means for achieving the above-described technical problem, one aspect of the present invention,

유산균 배양배지를 준비하는 단계; 상기 유산균 배양배지를 멸균시키는 단계; 상기 멸균된 유산균 배양배지에 유산균을 접종시키는 단계; 및 상기 유산균이 접종된 유산균 배양배지에 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물을 첨가하여 유산균을 배양시키는 단계;를 포함하는 기억력 개선용 유산균의 배양방법을 제공한다.Preparing a lactic acid bacteria culture medium; Sterilizing the culture medium of the lactic acid bacteria; Inoculating the sterile lactic acid bacteria culture medium; And culturing the lactic acid bacteria by adding spirulina powder or spirulina extract to the lactic acid bacteria culture medium inoculated with the lactic acid bacteria; provides a method for culturing lactic acid bacteria for improving memory.

상기 유산균 배양배지는 증류수, 효모 추출물(yeast extract), 펩톤(peptone), 글루코오스(glucose), 마그네슘 설페이트(magnesium sulfate), 망가니즈 설페이트(manganese sulfate), 포타슘 포스페이트(potassium phosphate), 폴리소베이트 80(polysorbate 80) 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 물질을 포함하는 것일 수 있다.The culture medium of lactic acid bacteria, distilled water, yeast extract, peptone, glucose, magnesium sulfate, manganese sulfate, potassium phosphate, polysorbate 80 (polysorbate 80) and combinations thereof.

상기 유산균 배양배지 전체 조성물 100 중량부 대비 상기 효모 추출물의 함량은 0.1 중량부 내지 1 중량부, 상기 펩톤의 함량은 0.1 중량부 내지 2 중량부, 상기 글루코오스의 함량은 1 중량부 내지 5 중량부, 상기 마그네슘 설페이트의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부, 상기 망가니즈 설페이트의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부, 상기 포타슘 포스페이트의 함량은 0.01 중량부 내지 1 중량부, 상기 폴리소베이트 80의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부인 것일 수 있다.The content of the yeast extract compared to 100 parts by weight of the total composition of the lactic acid bacteria culture medium is 0.1 parts by weight to 1 part by weight, the content of peptone is 0.1 parts by weight to 2 parts by weight, and the content of glucose is 1 part by weight to 5 parts by weight, The content of magnesium sulfate is 0.001 part by weight to 1 part by weight, the content of manganese sulfate is 0.001 part by weight to 1 part by weight, the content of potassium phosphate is 0.01 part by weight to 1 part by weight, the content of polysorbate 80 May be 0.001 part by weight to 1 part by weight.

상기 스피루리나는 스피루리나 플랜터스(spirulina platensis) 또는 스피루리나 맥시마(spirulina maxima)인 것일 수 있다.The spirulina may be spirulina platensis or spirulina maxima.

상기 스피루리나 추출물은 스피루리나 분말을 물, C1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것일 수 있다.The spirulina extract is derived from the group consisting of water, C1-4 anhydrous or hydrous lower alcohol, acetone, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, chloroform, hexane, 1,3-butylene glycol and combinations thereof. It may be extracted with a selected solvent.

상기 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물의 첨가량은 상기 유산균 배양배지 전체 조성물 100 중량부 대비 1 중량부 내지 20 중량부인 것일 수 있다.The added amount of the spirulina powder or spirulina extract may be 1 part by weight to 20 parts by weight relative to 100 parts by weight of the total composition of the lactic acid bacteria culture medium.

상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(L.plantarum), 락토바실러스 카제이(L.casei), 락토바실러스 애시도필러스(L.acidophilus), 락토바실러스 불가리쿠스(L.bulgaricus), 비피도박테리움 롱굼(B.longum), 비피도박테리움 비피둠(B.bifidum), 액티레귤라리스(Actiregularis), 락토바실러스 람노서스(L.rhamnosus) 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 유산균을 포함하는 것일 수 있다.The lactic acid bacteria include Lactobacillus plantarum, L. casei, L. acidophilus, Lactobacillus L. bulgaricus, Bifidobacterium B. longum, B. bifidum, B. bifidum, Actiregularis, L. rhamnosus, and lactic acid bacteria selected from the group consisting of combinations thereof May be

상기 배양은 6 시간 이상 수행되는 것일 수 있다.The culture may be performed for 6 hours or more.

또한, 본 발명의 다른 일 측면은, In addition, another aspect of the present invention,

상기 배양방법으로 배양된 기억력 개선용 유산균을 제공한다.It provides a lactic acid bacteria for improving memory, cultured by the above culturing method.

또한, 본 발명의 또 다른 일 측면은, In addition, another aspect of the present invention,

상기 기억력 개선용 유산균을 포함하는 건강기능식품을 제공한다.It provides a health functional food containing lactic acid bacteria for improving the memory.

본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물을 포함하는 배양배지에 유산균을 배양시킬 경우 배양되는 유산균의 양이 증가하고, 배양된 유산균의 기억력을 포함한 기능성 활성이 우수한 효과가 있다.According to an embodiment of the present invention, when lactic acid bacteria are cultured in a culture medium containing the spirulina powder or spirulina extract, the amount of lactic acid bacteria to be cultured increases, and there is an excellent effect of functional activity including memory of the cultured lactic acid bacteria.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 특허청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.It should be understood that the effects of the present invention are not limited to the above-described effects, and include all effects that can be deduced from the configuration of the invention described in the detailed description or claims of the present invention.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 유산균을 배양하기 위한 관류배양 장치의 모식도를 나타낸 그림이다.
도 2는 본 발명의 일 실험예에 따른 유산균의 배양시간에 따른 cell growth를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실험예에 따른 수중 미로 활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실험예에 따른 수동 회피 활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
1 is a view showing a schematic diagram of a perfusion culture device for culturing lactic acid bacteria according to an embodiment of the present invention.
2 is a graph showing cell growth according to the culture time of lactic acid bacteria according to an experimental example of the present invention.
3 is a graph showing the results of measuring the maze activity in water according to an experimental example of the present invention.
Figure 4 is a graph showing the results of measuring the passive avoidance activity according to an experimental example of the present invention.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 않으며 본 발명은 후술할 청구범위의 의해 정의될 뿐이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail. However, the present invention may be implemented in various different forms, and the present invention is not limited by the examples described herein, and the present invention is only defined by the claims below.

덧붙여, 본 발명에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 발명의 명세서 전체에서 어떤 구성요소를 '포함'한다는 것은 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있다는 것을 의미한다.In addition, the terms used in the present invention are only used to describe specific embodiments, and are not intended to limit the present invention. Singular expressions include plural expressions unless the context clearly indicates otherwise. 'Including' a component throughout the specification of the present invention means that other components may be further included instead of excluding other components, unless otherwise stated.

본원의 제 1 측면은,The first aspect of the present application,

유산균 배양배지를 준비하는 단계; 상기 유산균 배양배지를 멸균시키는 단계; 상기 멸균된 유산균 배양배지에 유산균을 접종시키는 단계; 및 상기 유산균이 접종된 유산균 배양배지에 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물을 첨가하여 유산균을 배양시키는 단계;를 포함하는 기억력 개선용 유산균의 배양방법을 제공한다.Preparing a lactic acid bacteria culture medium; Sterilizing the culture medium of the lactic acid bacteria; Inoculating the sterile lactic acid bacteria culture medium; And culturing the lactic acid bacteria by adding spirulina powder or spirulina extract to the lactic acid bacteria culture medium inoculated with the lactic acid bacteria.

이하, 본원의 제 1 측면에 따른 상기 기억력 개선용 유산균의 배양방법을 단계별로 상세히 설명한다. Hereinafter, a method for culturing the lactic acid bacteria for improving memory according to the first aspect of the present application will be described in detail step by step.

우선, 본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균의 배양방법은 유산균 배양배지를 준비하는 단계;를 포함한다.First, in one embodiment of the present application, the method for culturing lactic acid bacteria for improving memory includes preparing lactic acid bacteria culture medium.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 유산균 배양배지는 통상적으로 사용되는 유산균 배양배지이면 제한이 없으며, 예를 들어, 상기 유산균 배양배지는 증류수, 효모 추출물(yeast extract), 펩톤(peptone), 글루코오스(glucose), 마그네슘 설페이트(magnesium sulfate), 망가니즈 설페이트(manganese sulfate), 포타슘 포스페이트(potassium phosphate), 폴리소베이트 80(polysorbate 80) 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 물질을 포함하는 것일 수 있다.In one embodiment of the present application, the lactic acid bacteria culture medium is not limited as long as it is a commonly used lactic acid bacteria culture medium, for example, the lactic acid bacteria culture medium is distilled water, yeast extract (yeast extract), peptone (peptone), glucose ( glucose, magnesium sulfate, manganese sulfate, potassium phosphate, polysorbate 80, and combinations thereof. have.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 유산균 배양배지 전체 조성물 100 중량부 대비 상기 효모 추출물의 함량은 0.1 중량부 내지 1 중량부일 수 있으며, 바람직하게 0.3 중량부 내지 0.7 중량부일 수 있다. 상기 펩톤의 함량은 0.1 중량부 내지 2 중량부일 수 있으며, 바람직하게 0.5 중량부 내지 1.5 중량부일 수 있다. 상기 글루코오스의 함량은 1 중량부 내지 5 중량부일 수 있으며, 바람직하게 1 중량부 내지 3 중량부일 수 있다. 상기 마그네슘 설페이트의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부일 수 있으며, 바람직하게 0.005 중량부 내지 0.015 중량부일 수 있다. 상기 망가니즈 설페이트의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부일 수 있으며, 바람직하게 0.001 중량부 내지 0.01 중량부일 수 있다. 상기 포타슘 포스페이트의 함량은 0.01 중량부 내지 1 중량부일 수 있으며, 바람직하게 0.1 중량부 내지 0.5 중량부일 수 있다. 상기 폴리소베이트 80의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부일 수 있으며, 바람직하게 0.01 중량부 내지 0.5 중량부인 것일 수 있다.In one embodiment of the present application, the content of the yeast extract relative to 100 parts by weight of the total composition of the lactic acid bacteria culture medium may be 0.1 parts by weight to 1 part by weight, and preferably 0.3 parts by weight to 0.7 parts by weight. The content of the peptone may be 0.1 parts by weight to 2 parts by weight, and preferably 0.5 parts by weight to 1.5 parts by weight. The content of glucose may be 1 part by weight to 5 parts by weight, preferably 1 part by weight to 3 parts by weight. The content of the magnesium sulfate may be 0.001 part by weight to 1 part by weight, preferably 0.005 part by weight to 0.015 part by weight. The content of the manganese sulfate may be 0.001 part by weight to 1 part by weight, preferably 0.001 part by weight to 0.01 part by weight. The content of the potassium phosphate may be 0.01 parts by weight to 1 part by weight, preferably 0.1 parts by weight to 0.5 parts by weight. The content of the polysorbate 80 may be 0.001 part by weight to 1 part by weight, preferably 0.01 part by weight to 0.5 part by weight.

다음으로, 본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균의 배양방법은 상기 유산균 배양배지를 멸균시키는 단계;를 포함한다.Next, in one embodiment of the present application, the method of culturing the lactic acid bacteria for improving memory includes sterilizing the culture medium of the lactic acid bacteria.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 유산균 배양배지의 멸균은 통상적으로 사용하는 멸균방법을 채용하는 것이면 제한이 없으며, 예를 들어, 상기 멸균은 100℃ 이상의 온도에서 5 분 이상 수행하는 것일 수 있다.In one embodiment of the present application, sterilization of the culture medium for lactic acid bacteria is not limited as long as it employs a sterilization method that is commonly used, for example, the sterilization may be performed at a temperature of 100° C. or higher for 5 minutes or longer.

다음으로, 본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균의 배양방법은 상기 멸균된 유산균 배양배지에 유산균을 접종시키는 단계;를 포함한다.Next, in one embodiment of the present application, the method for culturing the lactic acid bacteria for improving memory includes inoculating the sterile lactic acid bacteria in the culture medium.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(L.plantarum), 락토바실러스 카제이(L.casei), 락토바실러스 애시도필러스(L.acidophilus), 락토바실러스 불가리쿠스(L.bulgaricus), 비피도박테리움 롱굼(B.longum), 비피도박테리움 비피둠(B.bifidum), 액티레귤라리스(Actiregularis), 락토바실러스 람노서스(L.rhamnosus) 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 유산균을 포함하는 것일 수 있다.In one embodiment of the present application, the lactic acid bacteria are Lactobacillus plantarum (L.plantarum), Lactobacillus casei, L. acidophilus, L. acidophilus, Lactobacillus bulgaricus (L .bulgaricus, B. longum, B. bifidum, Actiregularis, L. rhamnosus and combinations thereof It may be to include lactic acid bacteria selected from the group.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 유산균을 접종시킨 후에 일정시간 상기 유산균을 배양하는 것일 수 있다. 이는 하기 후술할 유산균을 배양시키는 단계와는 별도로 수행되는 것일 수 있으며, 본 단계의 경우 상기 배양은 약 30℃ 내지 약 40℃의 온도에서 약 10 시간 내지 약 30 시간 동안 배양시키는 것일 수 있다.In one embodiment of the present application, it may be to incubate the lactic acid bacteria for a predetermined time after inoculating the lactic acid bacteria. This may be performed separately from the step of culturing lactic acid bacteria to be described below, and in the case of this step, the culture may be cultivated at a temperature of about 30°C to about 40°C for about 10 hours to about 30 hours.

다음으로, 본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균의 배양방법은 상기 유산균이 접종된 유산균 배양배지에 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물을 첨가하여 유산균을 배양시키는 단계;를 포함한다.Next, in one embodiment of the present application, the method of culturing the lactic acid bacteria for improving memory includes culturing the lactic acid bacteria by adding spirulina powder or spirulina extract to the lactic acid bacteria culture medium inoculated with the lactic acid bacteria.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 스피루리나는 청녹색의 남조류로서 나선형태를 하고 있으며 크기는 폭 10 μm, 길이 300 μm 내지 500 μm 정도로 세포 하나 하나를 육안으로도 관찰할 수 있다. 스피루리나라는 말은 나선(spiral)이라는 말과 어원을 같이 하며 두 가지 모두 꼬였다거나 나선형이라는 의미를 가진 라틴어로부터 유래되었다. 스피루리나가 알려진 것은 1967년 응용미생물 국제회의에서 이디오피아 근처의 아랑구아디 호수에서 자생하는 스피루리나에 관한 발표가 된 이후부터 였는데, 이 새로운 식물은 클로렐라와 유사하면서 단백질 함량이 훨씬 많고, 소화흡수율이 대단히 좋고 배양, 수확이 용이하며, 강알칼리성을 보이고 있다. 해조류는 주 색조에 의해 청, 녹, 적, 갈색으로 분류되는데 스피루리나는 청록의 일종으로 그 색은 세포속의 엽록소(녹색)의 피코시아닌(청색)이 발산해 내고 있는 색이다. 이러한 스피루리나는 현재 아토피 예방 효과가 있는 것으로 알려져 있고, 피부 노화 억제 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 지방질 대사를 개선시키는 효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 아직까지 다른 생리활성에 대한 연구가 미비한 실정이다.In one embodiment of the present application, the spirulina has a spiral shape as a blue-green blue-green algae, and a size of 10 μm in width and 300 μm to 500 μm in length can be observed with one naked eye. The word spirulina is synonymous with the word spiral and both are derived from Latin, meaning either twisted or spiral. Spirulina has been known since the 1967 International Conference on Applied Microorganisms, after the announcement of Spirulina native to Lake Arangua near Ethiopia. This new plant is similar to chlorella, has a much higher protein content, has a very good digestion and absorption rate. It is easy to cultivate and harvest and shows strong alkalinity. Seaweeds are classified into blue, green, red, and brown according to the main color. Spirulina is a kind of blue green, and its color is emitted by phycocyanin (blue) of chlorophyll (green) in cells. These spirulina are known to have atopic prevention effect, skin aging suppression effect, and fat metabolism improvement effect, but studies on other physiological activities are still incomplete.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 스피루리나는 스피루리나 플랜터스(spirulina platensis) 또는 스피루리나 맥시마(spirulina maxima)인 것일 수 있다. 상기 스피루리나 플랜터스(spirulina platensis) 또는 스피루리나 맥시마(spirulina maxima)를 사용함으로써 이를 포함하는 배양배지에서 배양된 상기 유산균이 기억력 개선 효능을 가지는 것일 수 있다.In one embodiment of the present application, the spirulina may be spirulina platensis or spirulina maxima. The lactic acid bacteria cultured in the culture medium containing them by using the spirulina platensis or spirulina maxima may have an effect of improving memory.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 스피루리나 추출물은 스피루리나 분말을 물, C1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것일 수 있다. 본원의 일 실시예에 따르면, 상기 추출 용매는 에탄올일 수 있으며, 이때 상기 에탄올의 농도는 50% 내지 90%일 수 있고, 보다 바람직하게 상기 농도는 70%일 수 있다. 한편, 상기 스피루리나 분말 및 용매의 중량혼합 비율은 약 1:1 내지 100일 수 있으며, 바람직하게 약 1:10일 수 있다.In one embodiment of the present application, the spirulina extract contains spirulina powder in water, anhydrous or hydrous lower alcohol of C1-4, acetone, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, chloroform, hexane, 1,3-butylene glycol and It may be extracted with a solvent selected from the group consisting of these combinations. According to one embodiment of the present application, the extraction solvent may be ethanol, wherein the concentration of the ethanol may be 50% to 90%, more preferably the concentration may be 70%. Meanwhile, the weight mixing ratio of the spirulina powder and the solvent may be about 1:1 to 100, and preferably about 1:10.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 추출물을 수득하기 위한 추출방법은 가열추출법, 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법 또는 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있으나, 바람직하게는 가열추출법 또는 초음파를 이용한 추출법을 사용할 수 있다.In one embodiment of the present application, the extraction method for obtaining the extract is any one of methods such as heating extraction method, hot water extraction method, cold extraction method, reflux cooling extraction method, solvent extraction method, water vapor distillation method, ultrasonic extraction method, elution method or compression method It may be selected and used, but preferably, a heating extraction method or an extraction method using ultrasonic waves may be used.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물의 첨가량은 상기 유산균 배양배지 전체 조성물 100 중량부 대비 1 중량부 내지 20 중량부인 것일 수 있으며, 바람직하게 10 중량부인 것일 수 있다. 상기 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물의 첨가량이 상기 유산균 배양배지 전체 조성물 100 중량부 대비 1 중량부 미만일 경우 스피루리나의 첨가량이 너무 적어 배양되는 유산균의 기억력 개선 효과가 저하될 수 있고, 20 중량부 초과일 경우 기타 배지 성분의 양이 너무 적어 유산균의 배양이 잘 이루어지지 않을 수 있다.In one embodiment of the present application, the added amount of the spirulina powder or spirulina extract may be 1 to 20 parts by weight, preferably 10 parts by weight, relative to 100 parts by weight of the total composition of the lactic acid bacteria culture medium. When the added amount of the spirulina powder or the spirulina extract is less than 1 part by weight relative to 100 parts by weight of the total composition of the lactic acid bacteria culture medium, the added amount of spirulina may be too small, and the memory improving effect of the lactic acid bacteria to be cultured may be lowered. The amount of the medium component may be too small to cultivate lactic acid bacteria well.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 배양은 6 시간 이상 수행되는 것일 수 있다. 상기 배양이 6 시간 미만으로 수행될 경우 배양되는 유산균의 양이 적을 수 있다.In one embodiment of the present application, the culture may be performed for 6 hours or more. When the culture is performed for less than 6 hours, the amount of lactic acid bacteria cultured may be small.

본원의 일 구현예에 있어서, 접종되기 전의 유산균의 세포 수 대비 배양 후 유산균의 세포 수는 60% 내지 150% 증가하는 것일 수 있으며, 바람직하게 80% 내지 150% 증가하는 것일 수 있다. 따라서, 상기 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물을 포함하는 배양배지에서 배양된 유산균은 기존의 배양배지에서 배양된 유산균보다 더 많은 양의 유산균이 배양되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present application, the number of cells of lactic acid bacteria after culturing compared to the number of cells of lactic acid bacteria before inoculation may be increased by 60% to 150%, and preferably increased by 80% to 150%. Accordingly, the lactic acid bacteria cultured in the culture medium containing the spirulina powder or the spirulina extract may be cultured in a larger amount than the lactic acid bacteria cultured in the existing culture medium.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균의 배양방법은 도 1에 나타낸 바와 같이 관류배양 장치에 의해 수행되는 것일 수 있다. 이 경우, 상기 유산균 배양배지는 도 1의 제1 베셀(1)에 준비되는 것일 수 있으며, 상기 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물은 제2 베셀(3)에 준비되는 것일 수 있다. 더욱 구체적으로, 상기 제1 베셀(1)에 준비된 유산균 배양배지에 유산균을 접종한 후, 유산균이 접종된 상기 배양배지의 일부를 제2 베셀(3)로 이동시켜 배양시키고, 다시 제2 베셀(3)로 이동된 배양배지의 일부를 제1 베셀(1)로 이동시켜 이를 반복하며 유산균의 배양을 수행하는 것일 수 있다. 이때, 상기 각각의 베셀 간에 이동시키는 배양배지의 함량은 배양배지 전체 부피 대비 약 5 내지 20% 부피 비율일 수 있으며, 바람직하게 약 10% 부피비율일 수 있다.In one embodiment of the present application, the method for culturing the lactic acid bacteria for improving memory may be performed by a perfusion culture apparatus as shown in FIG. 1. In this case, the lactic acid bacteria culture medium may be prepared in the first vessel 1 of FIG. 1, and the spirulina powder or spirulina extract may be prepared in the second vessel 3. More specifically, after inoculating the lactic acid bacteria in the culture medium prepared in the first vessel (1), a portion of the culture medium inoculated with the lactic acid bacteria is transferred to the second vessel (3) and cultured, and the second vessel ( 3) by moving a portion of the culture medium moved to the first vessel (1) it may be repeated to perform the culture of lactic acid bacteria. At this time, the content of the culture medium to be moved between the vessels may be about 5 to 20% by volume compared to the total volume of the culture medium, preferably about 10% by volume.

본원의 제 2 측면은,The second aspect of the present application,

상기 본원의 제 1 측면에 따른 배양방법으로 배양된 기억력 개선용 유산균을 제공한다.It provides a lactic acid bacteria for improving memory, cultured by the culture method according to the first aspect of the present application.

본원의 제 3 측면은,The third aspect of the present application,

상기 본원의 제 2 측면에 따른 기억력 개선용 유산균을 포함하는 건강기능식품을 제공한다.It provides a health functional food comprising lactic acid bacteria for improving memory according to the second aspect of the present application.

본원의 제 1 측면과 중복되는 부분들에 대해서는 상세한 설명을 생략하였으나, 본원의 제 1 측면에 대해 설명한 내용은 제 2 측면 및 제 3 측면에서 그 설명이 생략되었더라도 동일하게 적용될 수 있다.The detailed description of parts overlapping with the first aspect of the present application is omitted, but the description of the first aspect of the present application may be equally applied even if the description is omitted in the second and third aspects.

이하, 본원의 제 2 측면에 따른 기억력 개선용 유산균 및 본원의 제 3 측면에 따른 건강기능식품을 상세히 설명한다.Hereinafter, the lactic acid bacteria for improving memory according to the second aspect of the present application and the health functional food according to the third aspect of the present application will be described in detail.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균은 투여를 위하여 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 포함하여 약학적 조성물로 제제화될 수 있다.In one embodiment of the present application, the lactic acid bacteria for improving memory may be formulated into a pharmaceutical composition including one or more pharmaceutically acceptable carriers for administration.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 약학적 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함할 수 있다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함할 수 있다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.In one embodiment of the present application, the pharmaceutical composition may be in the form of granules, powders, tablets, coated tablets, capsules, suppositories, liquids, syrups, juices, suspensions, emulsions, drops or injectables, etc. You can. For example, for formulation in the form of tablets or capsules, the active ingredient can be combined with an oral, non-toxic pharmaceutically acceptable inert carrier such as ethanol, glycerol, water, and the like. In addition, if desired or necessary, suitable binders, lubricants, disintegrants and colorants can also be included in the mixture. Suitable binders include, but are not limited to, natural sugars such as starch, gelatin, glucose or beta-lactose, natural sweeteners such as corn sweeteners, acacia, trachocanth or sodium oleate, sodium stearate, magnesium stearate, sodium Benzoate, sodium acetate, sodium chloride, and the like. Disintegrants may include, but are not limited to, starch, methyl cellulose, agar, bentonite, xanthan gum, and the like. Acceptable pharmaceutical carriers in compositions formulated as liquid solutions include, as sterile and biocompatible, saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and One or more of these components may be mixed and used, and other conventional additives such as antioxidants, buffers and bacteriostatic agents may be added as necessary.

본원의 일 구현예에 있어서, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.In one embodiment of the present application, diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants may be additionally added to formulate into injectable formulations such as aqueous solutions, suspensions, emulsions, pills, capsules, granules, or tablets. Furthermore, it can be preferably formulated according to each disease or component using methods disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA by appropriate methods in the art.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균은 건강기능식품으로 사용되는 것일 수 있으며, 이 경우 추가적으로 식품첨가물이 첨가되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present application, the lactic acid bacteria for improving memory may be used as a health functional food, and in this case, an additional food additive may be added.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정할 수 있다.In one embodiment of the present application, the suitability as the food additive can be determined by the standards and standards for the item in accordance with the general rules and general test methods of food additives approved by the Food and Drug Administration, unless otherwise specified. have.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 “식품 첨가물 공전”에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다.In one embodiment of the present application, items listed in the "food additive revolution" include, for example, chemical compounds such as ketones, glycine, calcium citrate, nicotinic acid, and cinnamonic acid; Natural additives such as decolorant, licorice extract, crystalline cellulose, high pigment, and guar gum; And mixed preparations such as L-sodium glutamate preparations, noodle-added alkali preparations, preservative preparations, and tar colorants.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균이 건강기능식품으로 사용되는 경우 유산균을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.In one embodiment of the present application, when the lactic acid bacteria for improving memory is used as a dietary supplement, granulate a mixture of lactic acid bacteria with excipients, binders, disintegrants and other additives, and then granulate, It can be put into compression molding, or the mixture can be directly compression molded. In addition, the health functional food in the form of tablets may contain a mating agent or the like as necessary.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 기억력 개선용 유산균은 약학적 조성물 또는 건강기능식품으로 사용하기 위해 바람직하게 연질캡슐의 형태로 제조하는 것일 수 있으며, 상기 연질캡슐은 연질캡슐용 쉘 및 상기 쉘 내에 수용된 캡슐 충전재를 포함하는 것일 수 있다. 이때, 상기 캡슐 충전제가 상기 기억력 개선용 유산균일 수 있으며, 상기 연질캡슐은 물리적 강도, 붕괴능, 냄새, 맛, 색상 및 접착성 결여와 같은 탁월하고 특징적인 특성을 가질 뿐만 아니라, 탁월한 경시 안정성을 나타낼 수 있다.In one embodiment of the present application, the lactic acid bacteria for improving memory may be prepared in the form of a soft capsule for use as a pharmaceutical composition or a health functional food, wherein the soft capsule is in a shell for the soft capsule and the shell It may be to include the capsule filling material accommodated. At this time, the capsule filler may be lactic acid bacteria for improving the memory, and the soft capsule has excellent and characteristic properties such as lack of physical strength, disintegration ability, odor, taste, color, and adhesion, as well as excellent aging stability. Can be represented.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail so that those skilled in the art to which the present invention pertains can easily practice. However, the present invention can be implemented in many different forms and is not limited to the embodiments described herein.

실시예. 스피루리나를 포함하는 배양배지에서 유산균 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarumExample. Lactobacillus plantarum in a culture medium containing spirulina HY-08)의 배양HY-08)

유산균인 락토바실러스 플란타룸을 배양하기 위해 도 1과 같은 관류배양 장치를 준비하였다. 상기 관류배양 장치는 기본 배양이 되는 장소로서 초기 일반 배지를 사용하여 미생물을 배양하는 곳이다. 상기 관류배양 장치의 배양배지는 증류수에 효모 추출물(yeast extract) 0.5 wt%, 펩톤(peptone) 1 wt%, 글루코오스(glucose) 2 wt%, 마그네슘 설페이트(magnesium sulfate) 0.01 wt%, 망가니즈 설페이트(manganese sulfate) 0.005 wt%, 포타슘 포스페이트(potassium phosphate) 0.2 wt% 및 폴리소베이트 80(polysorbate 80) 0.1 wt%를 첨가하여 제조하였다. 상기 배양배지를 멸균시키고, 멸균시킨 배양배지에 유산균인 락토바실러스 플란타룸을 접종하고, 37℃의 온도에서 배양하였다.In order to cultivate Lactobacillus plantarum which is a lactic acid bacteria, a perfusion culture apparatus as shown in FIG. 1 was prepared. The perfusion culture apparatus is a place where basic culture is performed, and is a place where microorganisms are cultured using an initial general medium. The culture medium of the perfusion culture apparatus is distilled water in yeast extract (yeast extract) 0.5 wt%, peptone (peptone) 1 wt%, glucose (glucose) 2 wt%, magnesium sulfate (magnesium sulfate) 0.01 wt%, manganese sulfate ( manganese sulfate) was prepared by adding 0.005 wt%, potassium phosphate 0.2 wt% and polysorbate 80 0.1 wt%. The culture medium was sterilized, and the sterilized culture medium was inoculated with Lactobacillus plantarum which is a lactic acid bacteria, and cultured at a temperature of 37°C.

그 후, 24시간 배양된 배지의 일부분을 스피루리나 추출물 (상기 스피루리나 추출물은 다음과 같이 제조하였다: 우선, 스피루리나 분말과 70% 에탄올을 1:10 의 중량비율로 혼합한 후, 상기 혼합물을 초음파 추출기(AUG-R3-900, ASIA ULTRASONIC, Gyeonggi-do, Korea)를 이용하여 120 kHz, 상온 조건에서 8 시간 동안 전처리 하였다. 그 후, 상기 초음파 처리된 혼합물을 65℃의 온도에서 4 시간 동안 가열하여 추출물을 수득하였다. 그 후, 상기 추출물을 감압회전농축기(Rotary Vacuum Evaporator N-N series, EYELA, Rikakikai Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 농축시킨 후 동결건조기(PVTFA 10AT, ILSIN, Suwon, Korea)를 사용하여 분말로 제조하였음)이 담겨져 있는 도 1의 3번 반응기 (배양배지에 스피루리나 추출물을 상기 배양배지 전체 조성 대비 10 wt% 첨가하여 혼합하고, 멸균시킴)로 옮긴 후, 24시간 동안 배양을 진행하였다. 그후, 다시 1번 반응기로 이동시키는 것을 반복하여 배양하였다. 각각의 반응기에서 반응기로 이동하는 배양배지의 양은 전체 부피의 10% 비율로 이동시켰으며, 총 360시간동안 배양하였다.Thereafter, a portion of the cultured medium for 24 hours was extracted with spirulina (the spirulina extract was prepared as follows: first, spirulina powder and 70% ethanol were mixed at a weight ratio of 1:10, and then the mixture was subjected to an ultrasonic extractor ( AUG-R3-900, ASIA ULTRASONIC, Gyeonggi-do, Korea) was pretreated at 120 kHz for 8 hours at room temperature, after which the sonicated mixture was heated at a temperature of 65° C. for 4 hours to extract After that, the extract was concentrated using a vacuum decompressor (Rotary Vacuum Evaporator NN series, EYELA, Rikakikai Co., Tokyo, Japan) and then used a freeze dryer (PVTFA 10AT, ILSIN, Suwon, Korea). The mixture was transferred to the reactor 3 of FIG. 1 containing 10 wt% of the culture medium by adding 10 wt% of the composition to the culture medium and sterilizing), and then cultured for 24 hours. . After that, it was cultured by repeating the transfer to reactor 1 again. The amount of the culture medium moving from each reactor to the reactor was moved at a rate of 10% of the total volume, and cultured for a total of 360 hours.

비교예 1. 스피루리나를 포함하지 않는 배양배지에서 유산균 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarumComparative Example 1. Lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum) in a culture medium containing no spirulina HY-08)의 배양HY-08)

상기 실시예에서 스피루리나 추출물을 배양배지에 첨가하지 않고 일반 배양조에 배양한 것을 제외하고는 상기 실시예와 같은 방법으로 유산균을 배양하였다.The lactic acid bacteria were cultured in the same manner as in the above example, except that the spirulina extract was not added to the culture medium in the above embodiment but cultured in a general culture tank.

비교예 2. 스코폴라민(scopolamine) 준비Comparative Example 2. Preparation of scopolamine

비교예로서 시중에서 판매중인 스코폴라민(scopolamine)을 구매하여 준비하였다.As a comparative example, a commercially available scopolamine was purchased and prepared.

비교예 3. 도네페질(donepezil) 준비Comparative Example 3. Preparation of donepezil

비교예로서 시중에서 판매중인 도네페질(donepezil)을 구매하여 준비하였다.As a comparative example, a commercially available donepezil was purchased and prepared.

실험예 1. 유산균의 cell growth의 측정Experimental Example 1. Measurement of cell growth of lactic acid bacteria

본 발명의 배양방법에 따라 배양된 유산균의 시간에 따른 cell growth 를 측정하기 위해 상기 실시예 및 비교예 1에서 배양한 유산균(락토바실러스 플란타룸)을 360 시간 동안 배양하며 상기 cell growth 를 측정하였으며, 이의 결과를 도 2에 나타내었다.In order to measure cell growth over time of the lactic acid bacteria cultured according to the culture method of the present invention, the lactic acid bacteria (Lactobacillus plantarum) cultured in Example 1 and Comparative Example 1 were cultured for 360 hours and the cell growth was measured. , The results are shown in FIG. 2.

이 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 배양시간이 6 시간이 지나면서 실시예에서 배양한 유산균의 cell growth가 비교예 1에서 배양한 유산균의 cell growth보다 높게 나타남을 확인할 수 있었다. 또한, 한번 feed back 하였을 경우 유산균의 cell growth가 다시 한번 증폭되는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 2, it was confirmed that the cell growth of the lactic acid bacteria cultured in Example was higher than that of the lactic acid bacteria cultured in Comparative Example 1 as the culture time passed 6 hours. In addition, it was confirmed that the cell growth of lactic acid bacteria was amplified once again when the feed was performed once.

따라서, 본 발명의 실시예에 따라 배양된 유산균의 경우 cell growth가 월등히 높음을 확인할 수 있었다.Therefore, it was confirmed that cell growth was significantly higher in the case of lactic acid bacteria cultured according to the embodiment of the present invention.

실험예 2. 수중 미로 활성 측정Experimental Example 2. Measurement of underwater maze activity

본 발명의 기억력 개선용 유산균의 기억력 향상 정도를 측정하기 위해 아무것도 투여하지 않은 흰쥐(control)와 상기 실시예에서 배양한 유산균 200 mg/kg 또는 400 mg/kg을 투여한 흰쥐, 상기 비교예 1에서 배양한 조성물 200 mg/kg 또는 400 mg/kg을 투여한 흰쥐, 상기 비교예 2에서 준비한 스코폴라민(scopolamine)을 투여한 흰쥐 및 상기 비교예 3에서 준비한 도네페질(donepezil)을 투여한 흰쥐를 대상으로 하기와 같은 방법으로 수중 미로 활성을 실험하여 측정하였다.In order to measure the degree of memory improvement of the lactic acid bacteria for improving memory of the present invention, the rats that did not administer anything (control) and the rats administered 200 mg/kg or 400 mg/kg of lactic acid bacteria cultured in the examples, in Comparative Example 1 Rats administered with the cultured composition 200 mg/kg or 400 mg/kg, rats administered with scopolamine prepared in Comparative Example 2, and rats administered with donepezil prepared in Comparative Example 3 The maze activity in water was measured by the following method.

먼저, 본 실험에서 사용한 흰쥐는 4주령 SPF계 수컷 ICR 마우스로서, 1 주일 간 사육하며 적응기간을 거쳤다. 적응기간 중 흰쥐의 체중을 측정하고, 선택한 흰쥐들은 각 군의 평균체중에 맞도록 최대한 균일하게 분포시켜 지정된 수가 되도록 하여 온도 22±2℃, 상대습도 50±5%, 환기횟수 10~15 회/hr, 조명시간 12시간(오전 7시 30분 점등~오후 7시 30분 소등) 및 조도 150~300 Lux의 환경조건을 설정하였다. 흰쥐의 수중 미로시험은 동물인지능력측정기(EthoVision Maze test system, Noldus Information Technology, Wageningen, Netherlands)를 사용하여 실시하였다. 흰쥐가 수조주변의 표지물을 기억하여 수조 내 일정한 장소에 위치한 도피대를 찾아가 10초 이상 머무는 경우 도피대를 찾아갈 때까지 소요되는 시간을 탈출잠복기(escape latency)로 하였으며, 이를 하루 2번 실시하여 나온 평균값을 평균 탈출잠복기(mean escape latency)로 하였다. 실험은 1일 2회씩 4일간 연속적으로 실시하였고, 흰쥐가 도피대를 120초 이내에 찾지 못하면 흰쥐를 도피대에 10초간 두었다가 실험을 끝내고 탈출잠복기를 120초로 하였다. First, the rats used in this experiment were 4 week old SPF male ICR mice, reared for 1 week and subjected to an adaptation period. During the adaptation period, the weights of the rats were measured, and the selected rats were distributed as uniformly as possible to fit the average weight of each group so that the specified number was 22±2°C, relative humidity 50±5%, and ventilation was 10-15 times/ The environmental conditions of hr, lighting time 12 hours (7:30 a.m. lighting-7:30 p.m. lighting), and illuminance 150 to 300 Lux were set. The underwater labyrinth test of the rats was carried out using an animal cognitive ability tester (EthoVision Maze test system, Noldus Information Technology, Wageningen, Netherlands). When the rats remembered the markers around the tank and visited the refuge located at a certain place in the tank and stayed for more than 10 seconds, the time taken to visit the escape was set as escape latency. The average value was taken as the mean escape latency. The experiment was conducted twice a day for 4 days in a row, and if the rat did not find the escape within 120 seconds, the rat was placed in the escape for 10 seconds, and the experiment was completed and the escape latency was set to 120 seconds.

이의 결과를 도 3에 나타내었으며, 도 3에 나타낸 바와 같이, 실시예에서 배양한 기억력 개선용 유산균을 투여한 흰쥐의 경우 날짜가 지남에 따라 탈출잠복기가 현저히 감소됨을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 기억력 개선용 유산균은 기억력 개선에 효과가 있음을 알 수 있었다.The results are shown in FIG. 3, and as shown in FIG. 3, in the case of the rats administered with the lactic acid bacteria for improving memory, which were cultured in the Examples, it was confirmed that the escape latency was significantly reduced as the date passed. Therefore, it was found that the lactic acid bacteria for improving memory of the present invention is effective in improving memory.

실험예 3. 수동 회피 활성 측정Experimental Example 3. Measurement of passive avoidance activity

본 발명의 기억력 개선용 유산균의 기억력 향상 정도를 측정하기 위해 아무것도 투여하지 않은 흰쥐(control)와 상기 실시예에서 배양한 유산균 200 mg/kg 또는 400 mg/kg을 투여한 흰쥐, 상기 비교예 1에서 배양한 유산균 200 mg/kg 또는 400 mg/kg을 투여한 흰쥐, 상기 비교예 2에서 준비한 스코폴라민(scopolamine)을 투여한 흰쥐 및 상기 비교예 3에서 준비한 도네페질(donepezil)을 투여한 흰쥐를 대상으로 하기와 같은 방법으로 수동 회피 활성을 실험하여 측정하였다.In order to measure the degree of memory improvement of the lactic acid bacteria for improving memory of the present invention, the rats that did not administer anything (control) and the rats administered 200 mg/kg or 400 mg/kg of lactic acid bacteria cultured in the examples, in Comparative Example 1 Rats administered with cultured lactic acid bacteria 200 mg/kg or 400 mg/kg, rats administered with scopolamine prepared in Comparative Example 2 and rats administered with donepezil prepared in Comparative Example 3 The subject was measured by experimenting with passive avoidance activity in the following manner.

수동 회피시험을 실시하기 위해 수동회피상자(GEMINITM Avoidance System, San Diego Instrument, San Diego, CA, USA)를 사용하였으며, 어두운 방과 밝은 방으로 나누어진 수동회피상자의 밝은 방에 흰쥐를 넣고 어두운 방으로 넘어가면 2 초간 전기충격을 가하였다. 전기충격 24 시간 후에 흰쥐를 다시 밝은 방에 놓으면 어두운 방의 전기충격을 기억하여 어두운 방으로 가고 싶은 본성을 억제하게 되는데, 이때 밝은 방에서 체류하는 시간(step throughlatency)을 측정하여 기억력을 평가하였다.A manual evasion box (GEMINITM Avoidance System, San Diego Instrument, San Diego, CA, USA) was used to perform a manual evasion test. In a bright room of a passive evasion box divided into a dark room and a bright room, rats were placed in a dark room. When passed, an electric shock was applied for 2 seconds. When the rats were placed in the bright room again 24 hours after the electric shock, the nature of the dark room was suppressed and the nature of going to the dark room was suppressed. At this time, the memory was evaluated by measuring the step throughlatency.

이의 결과를 도 4에 나타내었으며, 도 4에 나타낸 바와 같이, 실시예에서 배양한 기억력 개선용 유산균을 투여한 흰쥐의 경우 밝은 방에서 체류하는 시간이 높음을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 기억력 개선용 유산균은 기억력 개선에 효과가 있음을 알 수 있었다.The results are shown in FIG. 4, and as shown in FIG. 4, it was confirmed that in the case of the rats administered with the lactic acid bacteria for improving memory, which were cultured in the Example, the residence time in the bright room was high. Therefore, it was found that the lactic acid bacteria for improving memory of the present invention is effective in improving memory.

Claims (10)

유산균 배양배지를 준비하는 단계;
상기 유산균 배양배지를 멸균시키는 단계;
상기 멸균된 유산균 배양배지에 유산균을 접종시키는 단계; 및
상기 유산균이 접종된 유산균 배양배지에 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물을 첨가하여 유산균을 배양시키는 단계;
를 포함하는 기억력 개선용 유산균의 배양방법.
Preparing a lactic acid bacteria culture medium;
Sterilizing the culture medium of the lactic acid bacteria;
Inoculating the sterile lactic acid bacteria culture medium; And
Culturing the lactic acid bacteria by adding spirulina powder or spirulina extract to the lactic acid bacteria culture medium inoculated with the lactic acid bacteria;
Method for culturing lactic acid bacteria for improving memory, including.
제1항에 있어서,
상기 유산균 배양배지는 증류수, 효모 추출물(yeast extract), 펩톤(peptone), 글루코오스(glucose), 마그네슘 설페이트(magnesium sulfate), 망가니즈 설페이트(manganese sulfate), 포타슘 포스페이트(potassium phosphate), 폴리소베이트 80(polysorbate 80) 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 물질을 포함하는 것인 기억력 개선용 유산균의 배양방법.
According to claim 1,
The culture medium of lactic acid bacteria, distilled water, yeast extract, peptone, glucose, magnesium sulfate, manganese sulfate, potassium phosphate, polysorbate 80 (polysorbate 80) and a method for culturing lactic acid bacteria for improving memory, comprising a material selected from the group consisting of combinations thereof.
제2항에 있어서,
상기 유산균 배양배지 전체 조성물 100 중량부 대비 상기 효모 추출물의 함량은 0.1 중량부 내지 1 중량부, 상기 펩톤의 함량은 0.1 중량부 내지 2 중량부, 상기 글루코오스의 함량은 1 중량부 내지 5 중량부, 상기 마그네슘 설페이트의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부, 상기 망가니즈 설페이트의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부, 상기 포타슘 포스페이트의 함량은 0.01 중량부 내지 1 중량부, 상기 폴리소베이트 80의 함량은 0.001 중량부 내지 1 중량부인 것인 기억력 개선용 유산균의 배양방법.
According to claim 2,
The content of the yeast extract relative to 100 parts by weight of the total composition of the lactic acid bacteria culture medium is 0.1 parts by weight to 1 part by weight, the content of peptone is 0.1 parts by weight to 2 parts by weight, and the content of glucose is 1 part by weight to 5 parts by weight, The content of magnesium sulfate is 0.001 part by weight to 1 part by weight, the content of manganese sulfate is 0.001 part by weight to 1 part by weight, the content of potassium phosphate is 0.01 part by weight to 1 part by weight, the content of polysorbate 80 Is 0.001 part by weight to 1 part by weight of lactic acid bacteria culture method for improving memory.
제1항에 있어서,
상기 스피루리나는 스피루리나 플랜터스(spirulina platensis) 또는 스피루리나 맥시마(spirulina maxima)인 것인 기억력 개선용 유산균의 배양방법.
According to claim 1,
The spirulina spirulina platensis (spirulina platensis) or spirulina maxima (spirulina maxima) culture method of lactic acid bacteria for improving memory.
제1항에 있어서,
상기 스피루리나 추출물은 스피루리나 분말을 물, C1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것인 기억력 개선용 유산균의 배양방법.
According to claim 1,
The spirulina extract is derived from the group consisting of water, C1-4 anhydrous or hydrous lower alcohol, acetone, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, chloroform, hexane, 1,3-butylene glycol and combinations thereof. Method for culturing lactic acid bacteria for improving memory, which is extracted with a selected solvent.
제1항에 있어서,
상기 스피루리나 분말 또는 스피루리나 추출물의 첨가량은 상기 유산균 배양배지 전체 조성물 100 중량부 대비 1 중량부 내지 20 중량부인 것인 기억력 개선용 유산균의 배양방법.
According to claim 1,
The amount of spirulina powder or spirulina extract added is 1 part by weight to 20 parts by weight compared to 100 parts by weight of the total composition of the lactic acid bacteria culture medium The method for culturing lactic acid bacteria for improving memory.
제1항에 있어서,
상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(L.plantarum), 락토바실러스 카제이(L.casei), 락토바실러스 애시도필러스(L.acidophilus), 락토바실러스 불가리쿠스(L.bulgaricus), 비피도박테리움 롱굼(B.longum), 비피도박테리움 비피둠(B.bifidum), 액티레귤라리스(Actiregularis), 락토바실러스 람노서스(L.rhamnosus) 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 유산균을 포함하는 것인 기억력 개선용 유산균의 배양방법.
According to claim 1,
The lactic acid bacteria include Lactobacillus plantarum, L. casei, L. acidophilus, Lactobacillus L. bulgaricus, Bifidobacterium B. longum, B. bifidum, B. bifidum, Actiregularis, L. rhamnosus, and lactic acid bacteria selected from the group consisting of combinations thereof Method for culturing lactic acid bacteria for improving memory.
제1항에 있어서,
상기 배양은 6 시간 이상 수행되는 것인 기억력 개선용 유산균의 배양방법.
According to claim 1,
The culture method of lactic acid bacteria for improving memory is to be performed for more than 6 hours.
제1항의 배양방법으로 배양된 기억력 개선용 유산균.
A lactic acid bacteria for improving memory, cultured by the method of claim 1.
제9항의 기억력 개선용 유산균을 포함하는 건강기능식품.A health functional food containing lactic acid bacteria for improving memory of claim 9.
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KR20220084927A (en) * 2020-12-14 2022-06-21 주식회사 이지놈 Lactobacillus paracasei with cognitive function improvement
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