KR20080004515A - Hypotensive agent produced by cultivation of lactic acid bacterium - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 특정 배양액 중에서 유산균을 배양한 배양물을 유효 성분으로 하는 혈압 저하제에 관한 것이다.The present invention relates to a blood pressure lowering agent comprising, as an active ingredient, a culture in which lactic acid bacteria are cultured in a specific culture solution.
스피루리나 또는 클로렐라를 포함하는 식품은, 종래 녹황색 채소 특유의 영양 성분이나 고유의 영양 성분을 풍부하게 포함하고 있다는 점에서, 통상의 식생활에서 부족하기 쉬운 영양 성분을 손쉽게 섭취할 수 있는 식품으로 이용되고 있다. 최근, 스피루리나 또는 클로렐라 중에서 유산균을 배양하여 스피루리나나 클로렐라 특유의 냄새나 풍미를 개선한 식품이 제안되고 있다(특허문헌 1 및 2 참조).Foods containing spirulina or chlorella have been used as foods that can easily consume nutritional ingredients that are easily lacking in normal diet, since they contain abundant nutritional ingredients and inherent nutritional ingredients unique to green and yellow vegetables. . In recent years, foods in which lactic acid bacteria are cultivated in spirulina or chlorella to improve the odor and flavor peculiar to spirulina and chlorella have been proposed (see Patent Documents 1 and 2).
또한, 특정 건강식품이 고혈압증에 유효하다고 하여 유류(乳類)에 유산균을 접종하는 방법(특허문헌 3), 유제품에 효소 이어서 유산균을 접종하는 방법(특허문헌 4), 혹은 겨, 배아를 포함하는 미강 등을 일정 조건 하에서 물에 침지하는 방법(특허문헌 5)에 의한 것이 알려져 있다.Moreover, since a specific health food is effective for hypertension, the method of inoculating lactic acid bacteria to oil (patent document 3), the method of inoculating lactic acid bacteria to an enzyme followed by an enzyme (patent document 4), or bran, an embryo It is known by the method (patent document 5) which immerses rice bran etc. in water under fixed conditions.
그러나, 스피루리나 또는 클로렐라와 유산균으로 이루어진 혼합체를 물의 존재 하에 유지하고 유산균 배양을 수행함으로써 얻어지는 배양물이 건강식품으로 이용되기는 하나, 고혈압증에 유효하다는 것에 대해서는 전혀 알려진 바가 없다.However, although a culture obtained by maintaining a mixture of spirulina or chlorella and lactic acid in the presence of water and carrying out the culture of lactic acid bacteria is used as a health food, it is not known that it is effective for hypertension.
특허문헌 1 : 일본 특개2004-081206호 광보Patent Document 1: Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-081206
특허문헌 2 : 일본 특개소63-157963호 공보Patent Document 2: Japanese Patent Application Laid-Open No. 63-157963
특허문헌 3 : 일본 특허3172150호 광보Patent Document 3: Japanese Patent No. 3172150
특허문헌 4 : 일본 특개2001-120179호 공보Patent Document 4: Japanese Patent Application Laid-Open No. 2001-120179
특허문헌 5 : 일본 특허2590423호 광보Patent Document 5: Japanese Patent No. 2590423
(발명의 개시)(Initiation of invention)
(발명이 해결하고자 하는 과제)(Tasks to be solved by the invention)
본 발명의 과제는, 미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액 중에서 유산균을 배양하여 얻어지는 유산균 배양물을 유효 성분으로 하는 혈압 저하제를 제공하는 데 있다.An object of the present invention is to provide a blood pressure reducing agent comprising, as an active ingredient, a lactic acid bacteria culture obtained by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria.
(과제를 해결하기 위한 수단)(Means to solve the task)
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위하여, 미세 조류와 유산균을 물의 존재 하에서 유지하고, 이 혼합체 중의 유산균을 여러 조건으로 배양하여 얻어진 유산균 배양물에 대하여 혈압 저하 작용에 관한 시험을 수행한 바, 이 배양물이 매우 우수한 작용을 갖는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.In order to solve the above problems, the present inventors have carried out a test regarding the blood pressure lowering action of the lactic acid bacteria culture obtained by maintaining the microalgae and lactic acid bacteria in the presence of water and culturing the lactic acid bacteria in the mixture under various conditions. It has been found that water has a very good action and has come to complete the present invention.
즉, 본 발명은 미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액 중에서 유산균을 배양하여 얻어지는 유산균 배양물을 유효 성분으로 하는 혈압 저하제를 제공하는 것이다.That is, the present invention is to provide a blood pressure reducing agent comprising a lactic acid bacteria culture obtained by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria as an active ingredient.
(발명의 효과)(Effects of the Invention)
본 발명에 따르면, 미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액 중에서 유산균을 배양하여 얻어지는 유산균 배양물을 유효 성분으로 하는 혈압 저하제를 얻을 수 있다.According to the present invention, a blood pressure lowering agent comprising a lactic acid bacteria culture obtained by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria as an active ingredient can be obtained.
도 1은 배양 시간 24시간까지의 실시예 1 및 실시예 2의 GABA량(㎎/100g)의 비교를 도시한 도면.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The figure which shows the comparison of GABA amount (mg / 100g) of Example 1 and Example 2 until the culture time of 24 hours.
도 2는 0주째의 혈압을 기준으로 한 X주째의 혈압 상승률을 도시한 도면(시험예).Fig. 2 is a diagram showing the blood pressure increase rate at Week X based on the blood pressure at Week 0 (test example).
이하에 본 발명의 내용을 상세히 설명한다.Hereinafter, the content of the present invention will be described in detail.
본원 발명에서 이용하는 미세 조류로는 스피루리나, 클로렐라 등을 들 수 있다.Examples of the microalgae used in the present invention include spirulina and chlorella.
본 발명에서 이용되는 스피루리나는, 예를 들면 이하의 것을 들 수 있다.The spirulina used in the present invention includes, for example.
스피루리나(Spirulina)란, 남조류(Cyanobacteria)에 포함되며 종래 일괄적으로 스피루리나속으로 호칭되던 아르스로스피라속(Arthrospira) 및 스피루리나속(Spirulina)에 속하는 미세한 단세포 미생물로서, 예를 들면 아르스로스피라 프라텐시스(Arthrospira platensis), 아르스로스피라 맥시머(Arthrospira maxima), 아르스로스피라 게이트래리(Arthrospira geitleri), 아르스로스피라 샴(Arthrospira siamese), 스피루리나 메이저(Spirulina major), 스피루리나 서브살사(Spirulina subsalsa) 등을 들 수 있는데, 이 중에서도 인공적으로 배양할 수 있고 입수가 용이하다는 점에서 아르스로스피라 프라텐시스, 아르스로스피라 맥시머, 아르스로스피라 게이트래리, 아르스로스피라 샴이 바람직하다.Spirulina is a microscopic single-celled microorganism belonging to the genus Arthrospira and Spirulina, which is included in Cyanobacteria and has been collectively referred to as Spirulina. Arthrospira platensis, Arthrospira maxima, Arthrospira geitleri, Arthrospira siamese, Spirulina major, Spirulina subsalsa, Spirulina subsalsa, etc. Among them, arthrospyras pratensis, arspyras maxima, arsspira gate Larry and arsspira sham are preferable in view of the fact that they can be artificially cultured and are easily available.
본 발명에서 이용되는 클로렐라로는, 예를 들면 이하의 것을 들 수 있다.As chlorella used by this invention, the following are mentioned, for example.
클로렐라(Chlorella)란, 녹조류(Chlorophyceae), 클로렐라속(Chlorella)의 조류로, 입수가 용이하고 안전성이 우수하다는 점에서, 예를 들면 클로렐라 불가리스(C. Vulgaris), 클로렐라 레굴라리스(Chlorella regularis), 클로렐라 피레노이도사(C. pyrenoidosa), 클로렐라 엘립소이데아(C. ellipsoidea) 등을 들 수 있다.Chlorella is an algae of Chlorophyceae and Chlorella, which is easy to obtain and excellent in safety, such as C. Vulgaris, Chlorella regularis. , C. pyrenoidosa, C. ellipsoidea, and the like.
이들 미세 조류는 종래 식품으로 널리 이용되어 온 것으로, 안전성에 대해서는 문제가 없다는 것이 확인되었다.These microalgae have been widely used in conventional foods, and it has been confirmed that there is no problem about safety.
이들 미세 조류로는, 생 조체, 건조 조체 및 기계적 처리 등의 방법에 의해 처리된 조체 처리물 등을 들 수 있다.As these microalgae, the crude processed material etc. which were processed by the methods, such as a live granulation, a dry granulation, and a mechanical treatment, are mentioned.
생 조체는, 예를 들면 수중에서 배양된 스피루리나, 클로렐라를 원심분리, 여과 등의 방법에 의해 수확하여 얻어진다. 생 조체는 배양조로부터 수확후 그대로의 상태로 사용할 수도 있으나, 물 혹은 생리식염수로 세정하는 것이 바람직하다.The raw microorganisms are obtained by, for example, harvesting spirulina or chlorella cultured in water by a method such as centrifugation and filtration. The raw body may be used as it is after harvest from the culture tank, but it is preferable to wash with water or physiological saline.
건조 조체는, 예를 들면 상기 방법으로 얻어진 생 조체를 동결 건조 처리하거나 스프레이 건조 처리한 것을 들 수 있다.Examples of the dry granulated product include those obtained by freeze-drying or spray drying the raw crude product obtained by the above method.
기계적 처리 방법에 의해 처리한 조체 처리물은, 예를 들면 생 조체를 초음파 조사 처리나 호모게나이즈 등의 기계 처리를 수행함으로써 얻어진다. 조체의 기계적 처리물은 그 후에 건조 처리를 실시하여도 된다.The processed product treated by the mechanical treatment method is obtained by, for example, performing a mechanical treatment such as ultrasonic irradiation treatment or homogenization of a living body. The mechanical processed material of the tank may be subjected to a drying treatment thereafter.
본 발명에서 이용되는 조체로는, 생 조체인 것이 미세 조류의 유효 성분을 더 유지하고 있다는 점에서, 또한 맛, 냄새의 점에서도 바람직하다.As the granules to be used in the present invention, the raw granules are also preferable in terms of taste and smell since they further retain the active ingredient of the microalgae.
생 조체는, 통상적으로 수확할 때의 물 제거 정도에 따라 물에 현탁되어 있는 현탁상의 것이나, 현탁상의 것에 비해 물 함유량이 적은 페이스트상의 것이나, 페이스트상의 것에 비해 물 함유량이 적은 케이크상의 상태인 것이 있는데, 어떠한 상태의 것이라도 사용할 수 있다. 스피루리나, 클로렐라는 현탁상으로 된 조체(이후 현탁액이라 하는 경우도 있다)를 이용하는 것이 바람직하다. 또한, 건조 조체나 조체 처리물을 이용하는 경우에는, 건조되어 있는 상태이어도 되고, 물을 가하여 생 조체와 같이 현탁상이나 페이스트상이나 케이크상으로 한 것이어도 된다.Raw products are usually suspended or suspended in water depending on the degree of water removal at the time of harvest, or may be in the form of a paste having a lower water content than that of the suspended or a cake in which the water content is lower than that of the paste. Any state can be used. It is preferable to use spirulina and chlorella as suspension suspensions (sometimes referred to as suspensions). In addition, when using a dry granulated body and a coarse processed material, it may be in the dried state, and may be made into the suspension form, the paste form, or the cake form like water raw material by adding water.
미세 조류는, 이들이 갖는 유효 성분을 손상시키지 않으려면 가열 살균하지 않는 편이 바람직하지만, 필요에 따라 가열 살균한 것을 이용하여도 된다.In order not to damage the active ingredient which micro algae have, it is preferable not to heat-sterilize, but you may use what was heat-sterilized as needed.
여기서, 미세 조류는 스피루리나 또는 클로렐라를 단독으로 이용하여도 스피루리나와 클로렐라의 혼합물을 이용하여도 된다.Here, the microalgae may use spirulina or chlorella alone or may use a mixture of spirulina and chlorella.
다음에는 유산균에 대하여 설명한다.Next, lactic acid bacteria will be described.
유산균은 예로부터 식품의 저장과 조미를 목적으로 발효 유제품, 주조 제품, 야채·과실 절임 등 많은 식품의 가공에 이용되어 왔다. 본 발명에서 이용하는 유산균으로는, 식품으로 이용할 수 있는 유산균이면 제한 없이 이용할 수 있다. 유산균은 유래하는 생육 환경에 따라 유류계 유산균, 식물계 유산균, 장관계 유산균이나, 조류가 생육하는 자연호에 유래하는 유산균 등으로 분류된다. 또한, 유산균은 그 생육 최적 조건에 따라 중온성 균, 고온성 균, 내염성 균 등으로도 분류되는데, 어떠한 성질을 갖는 균이어도 된다.Lactic acid bacteria have long been used for the processing of many food products, such as fermented dairy products, cast products, pickled vegetables and fruits, for the purpose of storing and seasoning foods. As lactic acid bacteria used in the present invention, any lactic acid bacteria that can be used in food can be used without limitation. The lactic acid bacteria are classified into oil-based lactic acid bacteria, plant-based lactic acid bacteria, enteric lactic acid bacteria, and lactic acid bacteria derived from natural lakes in which algae grows depending on the growth environment derived. In addition, lactic acid bacteria are classified into mesophilic bacteria, thermophilic bacteria, flame resistant bacteria and the like according to their optimum growth conditions, and may be bacteria having any properties.
본 발명에서 이용하는 유산균으로는, 분류학상 락토바실러스(Lactobacillus)속, 페디오코쿠스(Pediococcus)속, 테트라게노코쿠스(Tetragenococcus)속, 카노박테리움(Carnobacterium)속, 바고코쿠스(Vagococcus)속, 루코노스톡(Leuconostoc)속, 웨이셀라(Weissella)속, 오에노코쿠스(Oenococcus)속, 아토포비움(Atopobium)속, 스트렙토코쿠스(Streptococcus)속(정식명은 엔테로코쿠스속, 본 명세서에서는 엔테로코쿠스속에 포함시킴), 엔테로코쿠스(Enterococcus)속, 락토코쿠스(Lactococcus)속, 아에로코쿠스(Aerococcus)속, 알로이오코쿠스(Alloiococcus)속, 멜리소코쿠스(Melissococcus)속, 비피도박테리움(Bifidobacterium)속 등을 들 수 있으며, 더욱이 예를 들면 락토바실러스 델브루엑기(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 아시도피루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis), 루코노스톡 에스피(Leuconostoc sp.), 엔테로코쿠스 카셀리플라버스(Enterococcus casseliflavus) 등의 종을 들 수 있다. 본 발명에서 이용되는 유산균으로는 락토바실러스속, 락토코쿠스속, 엔테로코쿠스속에 속하는 유산균이 바람직하다.As lactic acid bacteria used in the present invention, Lactobacillus genus, Pediococcus genus, Teteragenococcus genus, Carnobacterium genus, Vagococcus genus, Genus Luconostoc, Genus Weissella, Genus Oenococcus, Genus Atopobium, Genus Streptococcus (formerly genus Enterococcus, herein) Belonging to the genus Cocous), Enterococcus genus, Lactococcus genus, Aerococcus genus, Alloiococcus genus, Melisos coccus genus, Bifidobacterium The genus Bifidobacterium, and the like, and further examples thereof include Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, and Lactobacillus acidophilus. And brevis (Lactobacillus brevis), Lactococcus lactis (Lactococcus lactis), Leuconostoc sp., Enterococcus casseliflavus and the like. As lactic acid bacteria used in the present invention, lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, Lactococcus and Enterococcus are preferable.
유산균은 단독종으로 사용하여도 되고, 2종류 이상의 균을 혼합하여 사용하여도 된다. 또한, 후술하는 배양 공정에서 같은 종류의 균을 2단계 이상으로 나누어 식균하여 배양하여도 되고, 서로 다른 균종을 2단계 이상으로 나누어 식균하여 배양하여도 된다.Lactic acid bacteria may be used as a single species, or may mix and use two or more types of bacteria. In the culture step described later, the same type of bacteria may be cultured by dividing the bacteria into two or more stages, or different bacterial species may be divided into two or more stages and cultured.
유산균은 한천 배지나 액체 배지에서 배양한 후, 냉장 보존, 동결 보존, 건조 보존 등의 보존 방법으로 보존한 것을 사용하여도 되지만, 이들 보존하여 둔 유산균을 액체 배지에 식균하여 배양한 것(이하, 종 배양액이라 생략 기재함)을 이용하는 것이 유산균의 증식 속도가 빠르고, 아세트알데히드, 디아세틸 등의 플레이버류의 생산능, 유기산 생산능 등의 활성이 높다는 점에서 바람직하다. 종 배양액을 배양하는 데 사용하는 배지로는 이용하는 유산균이 생육 가능한 배지면 되고 제한은 없지만, 일반적으로 유산균을 배양하는 액체 배지로는 예를 들면 Man, Rogosa Sharpe가 고안한 MRS 배지(메르크사 제조) 및 우유 성분을 이용한 훼이 배지, 탈지유 배지 등의 배지를 들 수 있다.The lactic acid bacteria may be cultured in an agar medium or a liquid medium, and then stored by a preservation method such as cold storage, cryopreservation, or dry preservation, but these stored lactic acid bacteria are cultured by incubating in a liquid medium (hereinafter, It is preferable to use a seed culture solution, which is omitted in view of the fact that the growth rate of the lactic acid bacteria is high and the activity of the production of flavors such as acetaldehyde, diacetyl, organic acid production ability and the like is high. The medium to be used for cultivating the species culture medium may be any medium that can be used to grow lactic acid bacteria, but there is no limitation. Generally, as a liquid medium for culturing lactic acid bacteria, for example, MRS medium (manufactured by Merck Co., Ltd.) designed by Man, Rogosa Sharpe And mediums such as whey medium and skim milk medium using milk components.
종 배양액을 제조하려면, 통상 상기의 액체 배지에 보존되어 있는 유산균을 첨가하고, 배양하는 유산균에 적응하는 호기 상태 또는 염기 상태로 유지하여 정치 또는 교반하여 배양시키면 된다.In order to prepare a seed culture liquid, the lactic acid bacteria preserve | saved in the said liquid medium are normally added, and it may make it culture | cultivate by standing or stirring, maintaining in aerobic state or a base state adapting to the lactic acid bacteria to culture | cultivate.
다음에는 본 발명에 이용되는 유산균 배양물의 조제 방법에 대하여 설명한다.Next, the preparation method of the lactic acid bacteria culture used for this invention is demonstrated.
유산균 배양물은 미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액 중에서 유산균을 배양함으로써 조제된다. 여기서, 미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액은, 미세 조류를 함유하고 유산균을 증식시킬 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 물에 미세 조류를 현탁시킨 현탁액에 유산균을 가하는 방법, 물에 미세 조류를 가한 습윤액, 페이스트, 케이크 등에 유산균을 가하는 방법, 상기 현탁액에 상기 종 배양액을 가하는 방법 등에 의해 얻을 수 있다.Lactic acid bacteria cultures are prepared by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria. Herein, the culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria is not particularly limited as long as it contains microalgae and can grow lactic acid bacteria, but for example, a method of adding lactic acid bacteria to a suspension in which microalgae is suspended in water and microalgae in water It can be obtained by the method of adding lactic acid bacteria to the added wet liquid, paste, cake, etc., the method of adding the species culture solution to the suspension.
보다 구체적으로는, 이하에 예시하는 방법에 의해 얻을 수 있다. (i) 생 조체나 건조시킨 조체의 현탁액, 페이스트에 유산균 배양액이나 건조 상태의 유산균을 첨가한다. (ii) 생 조체나 건조시킨 조체의 케이크에 유산균 배양액을 첨가한다. (iii) 건조시킨 조체에 습윤 상태가 될 양의 유산균 배양액을 첨가한다.More specifically, it can obtain by the method illustrated below. (i) Lactic acid bacteria culture medium or dried lactic acid bacteria is added to the raw or dried suspension and paste. (ii) The lactic acid bacteria culture medium is added to the raw or dried cake. (iii) Add the lactic acid bacteria culture medium in the amount to be wetted to the dried granules.
이들 중에서 (i)이 바람직하고, 더욱이 (i)에서 미세 조류로 생 조체의 현탁액을 이용하고 유산균으로 배양액, 특히 종 배양액을 이용하는 것이 유산균의 배양능과 플레이버 생산능이 높다는 점에서 바람직하다.Among these, (i) is preferable, and in (i), it is preferable to use a suspension of a living organism as a microalgae and to use a culture solution, especially a species culture solution, as lactic acid bacteria in view of high culture capacity and flavor production capacity of lactic acid bacteria.
상기 조체의 현탁액이나 페이스트나 케이크, 유산균의 배양액은 물을 함유하고 있는데, 미세 조류와 유산균을 함유한 배양액에 물이 부족한 경우에는 물을 가하여 습윤 상태나 수중에서 유지되는 상태로 하여도 된다. 물은 멸균수를 이용하는 것이 바람직하다.The crude suspension, paste, cake or lactic acid bacteria culture medium contains water, but when the culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria lacks water, water may be added and kept in a wet state or in water. It is preferable to use sterile water for water.
미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액 중의 미세 조류의 함유량은, 후술하는 유산균 배양 후의 수확 공정, 건조 공정에서의 효율을 양호하게 한다는 관점에서, 건조 균체로서 0.1~30질량%가 바람직하고, 1~20질량%가 보다 바람직하다.The content of the microalgae in the culture solution containing the microalgae and lactic acid bacteria is preferably from 0.1 to 30% by mass, and from 1 to 20, as the dry cells from the viewpoint of improving the efficiency in the harvesting step and the drying step after the lactic acid bacterium culture described later. Mass% is more preferable.
미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액 중에서의 유산균 배양은, 정치 배양이어도 되고, 이 배양액이 액체라면 프로펠러 교반에 의한 교반 배양이어도 된다. 또한, 이용하는 유산균의 생육에 적합하도록 배양하는 계를 염기 상태로 하여도 되고 호기 상태로 하여도 된다.The lactic acid bacteria culture in the culture solution containing the microalgae and lactic acid bacteria may be a stationary culture, or if the culture solution is a liquid, a stirred culture by propeller stirring may be used. In addition, the system to be cultured so as to be suitable for the growth of lactic acid bacteria to be used may be in a base state or may be in an aerobic state.
유산균의 사용량은 유산균이 증식하는 균 수면 되지만, 협잡균의 번식 억제를 양호하게 한다는 관점에서 유산균의 배양을 개시할 때의 유산균 수가 고형분 환산 조류 1g당 105~1011개인 것이 바람직하고, 106~1010개인 것이 더욱 바람직하다.The amount of lactic acid bacteria used is the number of lactic acid bacteria that grow, but the number of lactic acid bacteria at the start of cultivation of lactic acid bacteria from the viewpoint of improving the propagation of lactic acid bacteria is preferably 10 5 to 10 11 per 1 g of solid-sized algae, and 10 6 More preferably, 10 to 10 individuals.
미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액의 pH는, 유산균 배양에 의해 생성되는 유산 등의 산에 의해 배양 과정에서 변화되는데, 배양 개시시의 pH가 4.0~9.0인 것이 바람직하고, 5.0~7.0인 것이 더욱 바람직하다.The pH of the culture solution containing the microalgae and lactic acid bacteria is changed in the culture process by acids such as lactic acid produced by lactic acid bacteria culture. The pH at the start of the culture is preferably 4.0 to 9.0, more preferably 5.0 to 7.0. desirable.
배양 온도는 유산균이 증식 가능한 온도라면 무관하지만, 유산균 증식에 적합하고 미세 조류의 유효 성분이 손상되지 않는다는 점에서, 4~45℃가 바람직하고, 20~40℃가 더욱 바람직하다.The culture temperature is irrelevant as long as the lactic acid bacteria can grow, but 4 to 45 ° C is preferable, and 20 to 40 ° C is more preferable in that the lactic acid bacteria are suitable for the growth of the lactic acid bacteria and the active ingredients of the microalgae are not damaged.
배양 시간은, 유산균을 충분히 증식시키고 우수한 혈압 저하 작용을 발휘시키기 위하여, 예를 들면 9~100시간이 바람직하고, 15~72시간이 더욱 바람직하며, 18~50시간이 특히 바람직하다.The culture time is preferably 9 to 100 hours, more preferably 15 to 72 hours, and particularly preferably 18 to 50 hours in order to sufficiently propagate the lactic acid bacteria and exhibit an excellent blood pressure lowering effect.
배양 후의 유산균 수는, 우수한 혈압 저하 작용을 발휘시키고 다른 협잡균의 증가 억제가 충분하며 미세 조류 특유의 맛과 냄새를 양호하게 감소시키는 동시에 혈압 저하 작용을 발휘시키기 위하여, 배양 개시시의 유산균 수의 10~1000배로 증가되어 있는 것이 바람직하다.The number of lactic acid bacteria at the start of the culture is sufficient to exert an excellent blood pressure lowering effect, to sufficiently suppress the increase of other microorganisms, to satisfactorily reduce the taste and smell peculiar to microalgae, and to exhibit a blood pressure lowering effect. It is preferable that it is increased by 10 to 1000 times.
또한, 유산균의 증식 최적 pH를 유지하기 위하여, 배양중에 수산화칼륨, 수산화칼슘 등의 염기성 화합물을 첨가하여 pH를 조정하여도 되지만, 유산균이 생성하는 유산 등에 의해 미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액의 pH가 5.0 부근까지 저하되는 것이 협잡균을 저하시키는 동시에 혈압 저하 작용을 발휘시키기 때문에 바람직하다.In addition, in order to maintain an optimal pH for lactic acid bacteria growth, the pH may be adjusted by adding a basic compound such as potassium hydroxide or calcium hydroxide during the culturing, but the pH of the culture solution containing the microalgae and lactic acid bacteria may be changed by lactic acid produced by lactic acid bacteria. It is preferable to fall to around 5.0 because it lowers the bacteria and exhibits a blood pressure lowering action.
본 발명에서는 미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액 중에 당을 가하는 것이 협잡균의 생육을 억제시킬 수 있고, 또한 미세 조류 특유의 냄새와 맛을 보다 감소시킬 수 있으므로 바람직하다. 이 협잡균의 생육 억제 효과는, 미세 조류로서 협잡균이 번식하기 쉬운 건조 조체를 이용하였을 때 특히 현저하다.In the present invention, the addition of sugar to the culture medium containing the microalgae and lactic acid bacteria is preferable because it can suppress the growth of microorganisms and can further reduce the smell and taste peculiar to the microalgae. The growth inhibitory effect of these microorganisms is particularly remarkable when a dry coarse microorganism is easily reproduced as microalgae.
상기 당류로는, 예를 들면 단당류, 올리고당류, 다당류 등을 들 수 있다. 단당류로는, 예를 들면 글루코오스, 갈락토오스, 만노오스, 프룩토오스, 리보오스, 크실로오스 등을 들 수 있다. 올로고당류로는, 예를들면 수크로오스, 말토오스 등의 이당류나 갈락토올리고당, 프락토올리고당, 대두올리고당, 자일로올리고당, 라피노오스 등을 들 수 있다. 다당류로는, 예를 들면 아밀로오스, 아밀로펙틴, 셀룰로오스, 글리코겐, β-글루칸, 뮤고다당 등을 들 수 있다. 당류로는 올리고당이 바람직하고, 그 중에서도 갈락토올리고당, 자일로올리고당이 바람직하다.As said saccharide, monosaccharide, oligosaccharide, polysaccharide, etc. are mentioned, for example. As a monosaccharide, glucose, galactose, mannose, fructose, ribose, xylose, etc. are mentioned, for example. Examples of oligosaccharides include disaccharides such as sucrose and maltose, galactooligosaccharides, fructooligosaccharides, soy oligosaccharides, xylo oligosaccharides and raffinose. Examples of the polysaccharides include amylose, amylopectin, cellulose, glycogen, β-glucan, mucopolysaccharide and the like. As the saccharide, oligosaccharides are preferable, and galactooligosaccharide and xyloligosaccharide are particularly preferred.
당류의 첨가 방법으로는 특별히 제한은 없으며, 예를 들면 미세 조류와 유산균과 당류를 혼합하여도 되고, 미리 당류를 첨가한 미세 조류와 유산균을 혼합하여도 되며, 미리 당류를 첨가한 유산균과 미세 조류를 혼합하여도 된다. 또한, 당류는 고형의 것을 사용하여도 되지만, 미리 물 등에 용해시켜 수용액으로 한 것을 이용하는 것이 바람직하다.There is no restriction | limiting in particular as a sugar addition method, For example, you may mix microalgae, lactic acid bacteria, and saccharides, You may mix the microalgae and lactic acid bacteria which added saccharides previously, Lactic acid bacteria and microalgae which added saccharides previously You may mix. In addition, although a solid thing may be used for a saccharide, it is preferable to use what was melt | dissolved in water etc. previously and made into aqueous solution.
당류의 사용량으로는, 미세 조류와 유산균을 함유하는 배양액과 당류의 합계에 대하여 0.05~20질량%가 바람직하고, 0.1~10질량%가 더욱 바람직하다.As the usage-amount of a saccharide, 0.05-20 mass% is preferable with respect to the sum total of the culture liquid and microsaccharides containing microalgae and lactic acid bacteria, and 0.1-10 mass% is more preferable.
이러한 유산균 배양물의 조제 과정에 생성되는 유산, 초산 등의 유기산류, 박테리오신류 등의 항균 작용에 의해 다른 협잡 세균은 감소되고, 유산균이 우월종이 된다. 나아가, 유산균이 생성하는 아세트알데히드, 디아세틸 등의 플레이버류에 의해 미세 조류 특유의 냄새와 맛이 저하되어, 식품에 이용하기 쉬운 향미가 된다.Due to the antibacterial action of lactic acid, organic acids such as acetic acid, and bacteriocin produced during the preparation of such lactic acid bacteria cultures, other contaminating bacteria are reduced, and lactic acid bacteria become superior species. Furthermore, flavors such as acetaldehyde and diacetyl produced by lactic acid bacteria lower the smell and taste peculiar to microalgae, making them easy to use in food.
상기에서 얻어진 유산균 배양물을 그대로 유산균 음료, 유산균 첨가 식품으로 사용할 수도 있다.The lactic acid bacteria culture obtained above can be used as a lactic acid bacteria beverage or a lactic acid bacteria added food as it is.
상기에서 얻어진 유산균 배양물은 배양 전의 미세 조류 원말과는 다른 성분 조성을 갖는 특징이 있다.The lactic acid bacteria culture obtained above is characterized by having a different composition from the original microalgae before the culture.
예를 들면, 24시간 배양 후의 배양물의 유리아미노산 양과 관련하여 프롤린, 시스테인, 발린, 로이신, 이소로이신, γ-아미노낙산(이하, 'GABA'라고 생략 기재), 리신, 히스티딘 등이 배양 전에 비해 조체 100g당 함유량이 10배 이상이 되고, 유리아미노산 총량도 2배 이상으로 증가하는 특징을 갖는다.For example, proline, cysteine, valine, leucine, isoleucine, γ-aminobutyric acid (hereinafter abbreviated as 'GABA'), lysine, histidine, and the like are related to the amount of free amino acid in the culture after 24 hours of culture. The content per 100 g is 10 times or more, and the total amount of free amino acids is also increased by 2 times or more.
또한, 분자량 10,000분리막으로 처리를 수행한 배양 전의 원말, 및 유산균 배양물이 함유하는 단백질 양을 단백질 양의 일반적인 측정법인 BCA(Bicinchoninic Acid)법으로 측정하였다. 그 결과, 예를 들면 조체로서 스피루리나 원말을 이용한 경우, 분자량 10,000 이하의 성분이 24시간 배양 후에는 배양 개시 전에 비해 약 2배로 증가하여 고분자량의 단백이 저분자화되어 흡수성이 우수한 성분이 되었다는 것이 판명되었다.In addition, the amount of protein contained in the raw material before the culture and the lactic acid bacteria cultures treated with a molecular weight 10,000 membrane was measured by the BCA (Bicinchoninic Acid) method, which is a general measurement method of protein amount. As a result, for example, when spirulina or raw material was used as a coarse substance, it was found that after 24 hours of culture, the component having a molecular weight of 10,000 or less increased about twice as much as before the start of culture, and the high molecular weight protein became low molecular weight and became an excellent absorbent component. It became.
또한, 본 발명에 의해 얻어지는 유산 배양물은, 종래의 본 발명과 유사한 유산균 배양물과 비교하여 고농도로 GABA를 함유하는 것을 특징으로 한다. 예를 들면, 전술의 특허문헌 3에는, 유류에 L.락티스 YIT 2027을 단독으로 이용한 경우 3일간의 배양으로 15㎎/100mL이며, L.카제이 YIT 9029와 혼합 배양을 수행함으로써 38㎎/100mL까지 증가한다는 기재가 있다.In addition, the lactic acid culture obtained by the present invention is characterized by containing GABA at a high concentration as compared with the conventional lactic acid bacteria cultures of the present invention. For example, Patent Document 3 described above shows that when L. lactis YIT 2027 is used alone in oil, it is 15 mg / 100 mL in a three-day culture, and 38 mg / L is carried out by performing a mixed culture with L. casey YIT 9029. There is a description that increases to 100 mL.
그러나, 본 발명의 방법에 따르면, 24시간의 배양 시간으로 100㎎/100mL 이상의 농도의 GABA 제조가 가능하여 GABA 제조법으로서 극히 우수하다는 것이 분명하다.However, according to the method of the present invention, it is evident that GABA can be produced at a concentration of 100 mg / 100 mL or more at a culture time of 24 hours, which is extremely excellent as a GABA preparation method.
본 발명의 혈압 저하제는, 상기에서 얻어진 유산균 배양물을 유효 성분으로 하는 것이다. 본 발명의 혈압 저하제는 나정, 필름 코팅정, 당의정, 장용정, 다층정 등의 정제, 과립제, 분말제, 액제 등의 형태로 조제할 수 있다. 이들 형태로의 조제는, 각 형태에 따른 일반적인 조제법에 따라 유산균 배양물에 현탁, 건조, 분쇄, 성형 등을 수행하면 된다. 각 형태로의 조제에 있어서, 그 형태로 조제하기 위하여 일반적으로 이용되는 결착제, 계면 활성제, 증점제, 충진제, 붕괴제, 부형제 등을 이용할 수 있다. 또한, 이러한 유산균 배양물을 그대로 유산균 음료, 유산균 첨가물로 사용할 수도 있고, 유산균 배양물을 다른 식품에 첨가할 수도 있다.The blood pressure reducing agent of this invention uses the lactic acid bacteria culture obtained above as an active ingredient. The blood pressure reducing agent of the present invention can be prepared in the form of tablets, granules, powders, solutions, and the like, such as uncoated tablets, film coated tablets, dragees, enteric tablets, and multilayer tablets. Preparation in these forms may be carried out by suspending, drying, pulverizing and molding the lactic acid bacteria culture in accordance with a general preparation method according to each form. In preparation in each form, the binder, surfactant, thickener, filler, disintegrating agent, excipient, etc. which are generally used for preparation in the form can be used. In addition, such a lactic acid bacteria culture may be used as a lactic acid bacteria beverage or a lactic acid bacterium additive as it is, and a lactic acid bacteria culture may be added to other food.
예를 들면, 건조 처리를 수행하는 경우, 통상적으로 조체의 수분 함유율이 4~7질량%가 되도록 수행하는데, 유산균의 균 수를 유지할 수 있는 처리가 바람직하다. 바람직한 건조 방법으로는, 예를 들면 동결 건조법, 분무 건조법 등을 들 수 있는데, 경제적인 점에서 분무 건조법이 보다 바람직하다. 건조 처리할 때의 건조 온도는 배풍 온도가 고온일수록 생산 효율은 올라가지만, 미세 조류의 품질이 양호하고 유산균 수도 저하되지 않는다는 점에서, 품온이 30~70℃가 되는 범위에서 건조 처리하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 40~60℃가 되는 범위이다. 또한, 본 발명에서 품온이란, 건조 후의 시료 온도를 의미하는 것으로 한다.For example, when performing a drying process, although it is normally performed so that the moisture content of a crude body may be 4-7 mass%, the process which can maintain the bacteria count of lactic acid bacteria is preferable. As a preferable drying method, a freeze drying method, a spray drying method, etc. are mentioned, for example, A spray drying method is more preferable at an economic point. The drying temperature at the time of drying process improves production efficiency, so that the higher the ventilation wind temperature, but the quality of the microalgae is good and the number of lactic acid bacteria is not lowered, so that the drying temperature is preferably in the range of 30 to 70 ° C. More preferably, it is the range used as 40-60 degreeC. In addition, in this invention, product temperature shall mean the sample temperature after drying.
정제로의 조제는, 예를 들면 상기에서 얻어진 분말을 공지의 타정법으로 타정하면 된다.What is necessary is just to tablet the powder obtained above by the well-known tableting method, for example in preparation to a tablet.
액제로 하는 경우에는, 예를 들면 상기에서 얻어진 분말을 물에 분산시켜도 되고, 배양 종료된 유산균 배양물을 그대로 혹은 물 등으로 희석하여 조제할 수 있다.In the case of a liquid preparation, for example, the powder obtained above may be dispersed in water, and the cultured lactic acid bacteria culture may be prepared as it is or diluted with water or the like.
본 발명의 혈압 저하제의 환자의 섭취량은 환자의 성별, 연령, 증상 등을 고려하여 결정하는 것이 바람직하지만, 일반적으로 유산균 배양물 환산으로 0.2~10g/일, 특히 0.5~8g/일이 바람직하다. 이들을 한꺼번에 섭취하여도 되고, 하루 섭취량을 몇 번으로 나누어 섭취하여도 된다.The intake of the patient of the blood pressure lowering agent of the present invention is preferably determined in consideration of the sex, age, symptoms, etc. of the patient, but in general, 0.2 to 10 g / day, in particular 0.5 to 8 g / day in terms of lactic acid bacteria culture. These may be taken at once, or may be divided into several times a day.
다음에는 본 발명의 혈압 저하제의 혈압 저하 작용에 대하여 설명한다.Next, the blood pressure lowering effect of the blood pressure reducing agent of this invention is demonstrated.
본 발명자들은 상기에서 얻어진 유산균 배양물에 관하여 여러 생활 습관병의 주요인으로 생각되는 고혈압증에 대한 효과의 확인을 실험 동물을 이용하여 수행하였다.The present inventors carried out the verification of the effect on hypertension, which is considered to be the main cause of various lifestyle diseases, with respect to the lactic acid bacteria culture obtained above, using experimental animals.
즉, 고혈압 자연 발증 래트(SHR계)에 스피루리나 유산균 배양물, 및 클로렐라 유산균 배양물을 고형 사료에 혼합하고 자유 섭취를 수행한 후에 혈압 측정을 수행하여 혈압 저하 작용을 확인하였다. 실험군은, 대상군으로 고형 사료를 급여한 군을 설정하고, 그 이외에 피험 물질을 혼합한 군으로, 스피루리나 원말(피험 물질 1)을 고형 사료에 혼합한 군, 스피루리나 유산균 배양물(피험 물질 2)을 고형 사료에 혼합한 군, 클로렐라 원말(피험 물질 3)을 고형 사료에 혼합한 군, 클로렐라 유산균 배양물(피험 물질 4)을 고형 사료에 혼합한 군을 설정하였다. 그 결과, 스피루리나 유산균 배양물 또는 클로렐라 유산균 배양물을 혼합한 군은 모두 대조군, 스피루리나 원말 및 클로렐라 원말을 혼합한 군에 비해 강한 혈압 저하 작용을 갖는 것이 명확하였다(시험예 참조).That is, spirulina lactic acid bacteria cultures and chlorella lactic acid cultures were mixed in a solid feed, and the blood pressure measurement was performed to check the blood pressure lowering effect in spontaneously hypertensive rats (SHR system). The experimental group is a group in which a solid feed is fed to the target group, and in addition, a group in which the test substance is mixed, and a group in which spirulina raw material (test substance 1) is mixed with the solid feed, spirulina lactobacillus culture (test substance 2) The group mixed with the solid feed, the group which mixed chlorella raw material (test material 3) with the solid feed, and the group which mixed the chlorella lactic acid culture (test material 4) with the solid feed were set. As a result, it was clear that the group in which the spirulina lactic acid culture or the chlorella lactic acid culture was mixed all had a strong blood pressure lowering effect as compared with the group in which the control, the spirulina original and the chlorella original were mixed (see Test Example).
또한, 유산균 배양물의 안전성 확인을 위하여 마우스를 통해 급성 독성을 조사하였다. 마우스는 생후 5주령인 ddY-N계 마우스(체중 20~26g)를 암수 각 10마리 사용하였다. 투여 방법은 배양물을 미분쇄하고 CMC 1% 용액에 현탁하여 위존데에 의한 투여 가능 최고 농도 10질량% 현탁액을 1회, 경구 강제 투여하였다. 배양물을 투여 후 1주간 관찰하였다. 암수 모두 LD50은 6,000㎎/㎏ 이상으로, 식품으로서의 안전성이 확인되었다.In addition, acute toxicity was examined through the mouse to confirm the safety of the lactic acid bacteria culture. Mice were 10 male and female ddY-N mice (20-26 g body weight) 5 weeks old. In the administration method, the culture was pulverized and suspended in a CMC 1% solution, and a single oral forced administration of a 10 mass% suspension of the highest dose that could be administered by gastride. Cultures were observed for 1 week after administration. Both sexes LD 50 is over 6,000㎎ / ㎏, were identified as food safety.
실시예Example
다음에는 실시예를 나타내어 본 발명을 더욱 상세히 설명하는데, 본 발명은 이하의 실시예에 한정되는 것은 아니다.Next, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but the present invention is not limited to the following Examples.
(( 실시예Example 1) One) 스피루리나를Spirulina 이용한 유산균 배양물의 조제(1)와 유산균 수의 측정 Preparation of Lactic Acid Bacteria Culture (1) and Measurement of Lactic Acid Bacteria
2500L 용량 배양조에 갈락토올리고당 25㎏, 수돗물 825㎏을 넣고, 가열 살균 후 스피루리나 원말 100㎏을 넣고, 유산균 락토바실러스 브레비스의 종 배양액 50㎏을 접종하였다. 37℃, 72시간, 통기 프로펠러 교반하여 유산균을 배양하였다. 배양 시간 0, 9, 12, 15, 18, 24, 48 및 72시간에 배양액을 샘플링하여 유산균 수를 측정하였다.25 kg of galactooligosaccharide and 825 kg of tap water were added to a 2500 L culture vessel, and after heat sterilization, 100 kg of spirulina was added thereto, and 50 kg of a seed culture solution of lactic acid bacteria Lactobacillus brevis was inoculated. Lactic acid bacteria were cultured by stirring the aeration propeller at 37 ° C for 72 hours. The culture solution was sampled at
또한, 유산균 수 측정은 이하의 순서로 수행하였다. 유산균 배양액 1.0㎖를 인산 완충 생리식염수 19㎖에 현탁시켜 현탁액을 조정하였다. 현탁액을 더욱이 인산 완충 생리식염수를 통해 10배, 102배, 103배, 104배, 105배, 106배 및 107배가 되도록 희석하여 시료 희석액을 얻었다. 1000㎖의 MRS 배지(메르크사 제조 Cat. No. 10661)에 15g의 한천을 첨가하여 제작한 MRS 한천 배지에 0.1㎖의 희석액을 도말하고, 35℃, 48시간 배양시켰다. 유산균의 콜로니가 30~300개 확인할 수 있었던 한천 배지를 이용하며, 이 한천 배지의 콜로니 수를 측정하고, 이 수에 희석 배율을 곱해서 얻어진 수를 유산균의 콜로니 수로 하였다.In addition, the lactic acid bacteria number measurement was performed in the following procedures. The suspension was adjusted by suspending 1.0 ml of lactic acid bacteria culture solution in 19 ml of phosphate buffered saline. The suspension was further diluted 10 times, 10 2 times, 10 3 times, 10 4 times, 10 5 times, 10 6 times and 10 7 times through phosphate buffered saline to obtain sample dilutions. 0.1 ml of dilution was smeared on MRS agar medium prepared by adding 15 g of agar to 1000 ml of MRS medium (Merck Cat. No. 10661), and incubated for 48 hours at 35 ° C. Using the agar medium in which 30-300 colonies of lactic acid bacteria were confirmed, the number of colonies of this agar medium was measured, and the number obtained by multiplying this number by the dilution factor was made into the colony number of lactic acid bacteria.
(아미노산 양의 측정)(Measurement of Amino Acid Amount)
샘플링한 각 배양액의 일부를 분무 건조시켜 아미노산 분석에 제공하였다. 스피루리나의 유산균 배양물 각 200㎎을 5mL의 물에 첨가 후 현탁시키고 30분간 방치하였다. 원심분리기(3000rpm, 10분간)로 상청과 불용물로 분리하고, 상청 1mL를 채취하였다. 여기에 10%(w/v) 트리클로로초산 용액 1mL를 첨가하고 원심분리를 수행하였다. 얻어진 상청에 대하여 o-프탈알데히드법(포스트 칼럼 검출)을 통해 HPLC분석을 수행하여 아미노산 양을 측정하였다.A portion of each sampled culture was spray dried to provide for amino acid analysis. Each 200 mg of lactic acid bacteria culture of spirulina was added to 5 mL of water, suspended and left for 30 minutes. The mixture was separated into a supernatant and an insoluble matter by a centrifuge (3000 rpm, 10 minutes), and 1 mL of the supernatant was collected. 1 mL of 10% (w / v) trichloroacetic acid solution was added thereto, followed by centrifugation. The obtained supernatant was subjected to HPLC analysis through o-phthalaldehyde method (post column detection) to determine the amino acid amount.
(HPLC 조건)(HPLC condition)
칼럼 : 히타치 #4619(4㎜×15㎝)Column: Hitachi # 4619 (4㎜ × 15㎝)
온도 : 60℃(포스트 칼럼 반응시에도 동일 온도)Temperature: 60 ° C (same temperature even during post column reaction)
유속 : 용리액 ; 0.4mL/min. 반응액 ; 0.5mL/min.Flow rate: eluent; 0.4 mL / min. Reaction solution; 0.5 mL / min.
검출 : 형광 검출기Detection: Fluorescence Detector
각 배양 시간에서의 배양물 중의 L-글루타민산 양, GABA량, 유산균 수를 [표 1]에 나타내었다.The amount of L-glutamic acid, GABA amount, and the number of lactic acid bacteria in the culture at each incubation time are shown in [Table 1].
(( 실시예Example 2) 2) 스피루리나를Spirulina 이용한 유산균 배양물의 조제(2) Preparation of Lactic Acid Bacteria Culture (2)
본 실시예에서는 50%(w/w) 유산 용액에서 pH를 5.0으로, 배양 온도를 30℃로 유지하는 것 이외에는 실시예 1과 동일하게 하여 유산균을 배양하였다. 배양 시간 0, 9, 12, 15, 18, 21, 24시간에 배양액을 샘플링하여 GABA량(㎎/100g)을 측정하였다.In this example, lactic acid bacteria were cultured in the same manner as in Example 1 except for maintaining the pH at 5.0 and the incubation temperature at 30 ° C. in a 50% (w / w) lactic acid solution. The culture solution was sampled at
(( 실시예Example 3) 3) 스피루리나를Spirulina 이용한 유산균 배양물의 조제(3) Preparation of Lactic Acid Bacteria Culture (3)
본 실시예에서는 갈락토올리고당 대신에 자일로올리고당을 이용하는 것 이외에는 실시예 2와 동일하게 하여 GABA량(㎎/100g)을 측정하였다.In this example, the GABA amount (mg / 100g) was measured in the same manner as in Example 2 except that xyloligosaccharide was used instead of galactooligosaccharide.
배양 시간 24시간까지의 실시예 1과 실시예 2의 GABA량(㎎/100g)의 비교를 도 1에, 실시예 2와 실시예 3의 결과를 [표 2]에 나타내었다.A comparison between the GABA amounts (mg / 100g) of Example 1 and Example 2 up to 24 hours of incubation time is shown in FIG. 1 and the results of Example 2 and Example 3 are shown in [Table 2].
실시예 1~3에서, pH 및 배양 온도를 적적하게 선택함으로써 단시간에 보다 많은 GABA 생산이 가능하게 되었다.In Examples 1 to 3, more GABA production was possible in a short time by the proper selection of pH and incubation temperature.
(( 실시예Example 4) 클로렐라를 이용한 유산균 배양물의 조제와 유산균 수의 측정 4) Preparation of Lactic Acid Bacteria Culture Using Chlorella and Measurement of Lactic Acid Bacteria
실시예 1에서 스피루리나 대신에 클로렐라를 이용하는 것 이외에는 실시예 1과 동일하게 하여 유산균 배양물을 조제하고, 유산균 수, 아미노산 양을 측정하였다. 각 배양 시간에서의 배양물 중의 L-글루타민산 양, GABA량, 유산균 수를 [표 3]에 나타내었다.A lactic acid bacteria culture was prepared in the same manner as in Example 1 except that chlorella was used instead of spirulina in Example 1, and the number of lactic acid bacteria and amino acid amount were measured. The amount of L-glutamic acid, GABA amount, and the number of lactic acid bacteria in the culture at each incubation time are shown in [Table 3].
(( 시험예Test Example ) 본 발명의 혈압 A) blood pressure of the present invention 저하제에On a lowering agent 의한 혈압 저하 작용의 확인 Of blood pressure lowering action by
본 발명의 혈압 저하제의 혈압 저하 작용을 명확하게 하기 위하여, 이하의 실험 동물을 이용한 시험을 수행하였다.In order to clarify the blood pressure lowering action of the blood pressure lowering agent of the present invention, a test using the following experimental animals was performed.
(시험 물질)(Test substance)
대상군 : 고형 사료 MF(오리엔탈 효모 주식회사 제조)Target group: solid feed MF (Oriental Yeast Co., Ltd.)
피험 물질 1 : 스피루리나 원말Test substance 1: spirulina
피험 물질 2 : 유산 발효 스피루리나(실시예 1에서 얻어진 유산균 배양물)Test substance 2: Lactic acid fermentation spirulina (lactic acid bacteria culture obtained in Example 1)
피험 물질 3 : 클로렐라 원말Test Substance 3: Chlorella
피험 물질 4 : 유산 발효 클로렐라(실시예 4에서 얻어진 유산균 배양물)Test substance 4: Lactic acid fermentation chlorella (lactic acid bacteria culture obtained in Example 4)
(피험 물질의 조정 및 투여)(Adjustment and Administration of Test Substances)
조정 방법 : 고형 사료 MF에 피험 물질 1~2를 각각 15% 혼합하였다.Adjustment Method: The test materials 1 and 2 were mixed with 15% of the solid feed MF.
투여 경로 : 경구Route of administration: oral
투여 방법 : 자유 섭취Dosing method: free intake
투여 용량 : 급이량의 15%Dosage: 15% of feed
투여 기간 : 8주간Duration of administration: 8 weeks
시험 동물Test animals
동물종, 계통 : 래트, SHR(1군 8마리)Animal species, lineage: Rat, SHR (8 per group)
성별, 반입 주령 : 수컷, 6주령Gender, age: 6 weeks
훈화 기간 : 반입 후 약 1주간 훈화를 겸하여 사육하고, 그 기간의 일반 상태를 관찰하였다.Fleating period: About one week after bringing in, fleas were reared together, and the general condition of the period was observed.
(혈압 측정법)(Blood pressure measurement)
혈압의 측정은 미동맥(尾動脈)의 혈압을 비관혈적(非觀血的)으로 측정하는 Tail-cuff법을 통해 수행하였다. 측정 방법은 시험 물질의 투여 전(7주째), 투여 후 1주일마다 총 8포인트에서 실시하였다.Blood pressure was measured by the tail-cuff method, which is a non-invasive measurement of blood pressure in the arteries. The measurement method was performed at a total of 8 points before administration of the test substance (week 7) and every week after administration.
혈압의 각 포인트에서의 측정은 3번씩 실시하고, 그 평균치를 측정치로 하였다. 또한, 시험 실시에 앞서 공시 동물의 최고 혈압 평균치가 각 동물 모두 평균 160㎜Hg 이상인 것을 확인하고 시험을 수행하였다.The measurement at each point of blood pressure was performed 3 times, and the average value was made into the measured value. In addition, prior to conducting the test, the test was performed after confirming that the average blood pressure average of the animals was 160 mmHg or more.
결과를 [표 4]에 나타내었다.The results are shown in [Table 4].
[표 5] 및 도 2에는 0주째 혈압을 기준으로 한 X주째의 혈압 상승률을 이하의 식으로 평가한 결과를 나타낸다.Table 5 and FIG. 2 show the results of evaluating the blood pressure increase rate of the week X based on the blood pressure at
혈압 상승률(%) = (X주째 혈압 - 0주째 혈압)/(0주째 혈압) × 100(%)% Increase in blood pressure = (blood pressure at week X-blood pressure at week 0) / (blood pressure at week 0) × 100 (%)
본 시험예에서 명확한 바와 같이, 스피루리나 유산균 배양물 및 클로렐라 유산균 배양물은 각각 배양 전의 스피루리나 원말 및 클로렐라 원말과 비교하여 혈압 상승 억제 효과가 확인되었다.As is clear from this test example, the spirulina lactic acid bacteria culture and the chlorella lactic acid culture were confirmed to have an effect of inhibiting blood pressure increase compared to the spirulina and chlorella originals before the culture, respectively.
예를 들면, 6주 후에는 대상군에서 약 30%의 혈압 상승이 보이는 데 비하여, 스피루리나 및 클로렐라에서는 그 상승률이 20~25%로 억제되고, 나아가 본 발명의 스피루리나 및 클로렐라의 유산 발효품에서는 12~15% 정도로 억제되는 것이 명확해져, 본 발명에 관한 유산 발효품의 혈압 저하 작용이 확인되었다.For example, after 6 weeks, about 30% increase in blood pressure was observed in the subject group, whereas the rate of increase in spirulina and chlorella was suppressed to 20-25%, and in the lactic fermentation product of spirulina and chlorella of the present invention, 12 It became clear that it was suppressed to about 15%, and the blood pressure lowering effect of the lactic acid fermentation product which concerns on this invention was confirmed.
본 발명은 의약품 산업, 건강 식품, 식품 등의 분야에서 이용이 가능하다.The present invention can be used in the pharmaceutical industry, health food, food and the like.
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